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WO2004080993A1 - プロアントシアニジン高含有物の製造方法 - Google Patents

プロアントシアニジン高含有物の製造方法 Download PDF

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WO2004080993A1
WO2004080993A1 PCT/JP2003/002877 JP0302877W WO2004080993A1 WO 2004080993 A1 WO2004080993 A1 WO 2004080993A1 JP 0302877 W JP0302877 W JP 0302877W WO 2004080993 A1 WO2004080993 A1 WO 2004080993A1
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proanthocyanidin
extract
extraction
weight
opc
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PCT/JP2003/002877
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Kinya Takagaki
Takeshi Mitsui
Original Assignee
Toyo Shinyaku Co., Ltd.
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    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/58—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4
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    • C07D311/62—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4 with aryl radicals attached in position 2 with oxygen atoms directly attached in position 3, e.g. anthocyanidins
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    • A61K36/87—Vitaceae or Ampelidaceae (Vine or Grape family), e.g. wine grapes, muscadine or peppervine

Definitions

  • the present invention relates to a method for efficiently producing a proanthocyanidin-containing substance containing a large amount of OPC having high physiological activity.
  • Proanthocyanidins are polymerized or condensed tannins present in various plants, and are formed by condensation or polymerization (hereinafter, referred to as condensation polymerization) using flavan-1-ol or flavan-1,4-diol as a structural unit. It is a group of bound compounds. These are given their names because they produce anthocyanidins such as cyanidin, delphinidin and pelargonidin by acid treatment.
  • proanthocyanins having a low degree of polymerization are suitably used.
  • a polycondensate having a degree of polymerization of 2 to 30 (2 to 30 mer) is preferable, a polycondensate having a degree of polymerization of 2 to 10 (2 to 10 mer) is more preferable, and a degree of polymerization of 2 to 30 is preferred.
  • Condensed polymers of (4) to (4 to 4) are more preferably used.
  • condensed polymers of proanthocyanidins a condensed polymer having a degree of polymerization of 2 to 4 containing flavan-1-3-ol-Z or flavan-1,3,4-diol as a constitutional unit, OPC (oligomeric proanthocyanidin);
  • Proanthocyanidins a type of polyphenol, are potent antioxidants produced by plants and are concentrated in plant leaves, bark, fruit bark or seed parts.
  • Proanthocyanidins, especially OPC specifically It is found in dough seeds, pine bark, peanut skin, ginkgo biloba, false acacia fruit and lingonberry.
  • OPCs are also known to be present in cola nuts in West Africa, the roots of ratania in Peru, and green tea in Japan. OPC is a substance that cannot be produced in the human body.
  • OPC In addition to its antioxidant effect, OPC also has the effect of suppressing bacterial growth in the oral cavity and reducing plaque (gum); the effect of restoring the elasticity of blood vessels; the lipoproteins in blood are damaged by active oxygen Effect of preventing injured fat from agglutinating on the inner wall of blood vessels and adhering cholesterol; effect of regenerating vitamin E decomposed by active oxygen; as an enhancer of vitamin E It is known to have effects and the like.
  • tannin which is a polymer of flavan-1-ol and / or flavan-1,3-diol, and chitin, chitosan, and derivatives thereof are used in staphylococcus aureus, salmonella, typhoid, cholera, and the like. Its antibacterial and bactericidal effects are remarkable. In particular, it has been reported that MRSA (methicillin-resistant staphylococci), which has been talked about because most antibiotics do not work, is also effective.
  • MRSA methicillin-resistant staphylococci
  • Proanthocyanidins are generally obtained by extraction from plants.
  • the solvent used for the extraction include water; organic solvents such as methanol, ethanol, acetone, hexane, and ethyl acetate; and mixtures thereof (Japanese Patent Application Laid-Open No. 11-180488).
  • simply extracting with a solvent results in low recovery and low purity of oral anthocyanidins. Therefore, in order to use it as a raw material for health foods, cosmetics, and pharmaceuticals, further concentration and purification steps are required to increase the purity, which is costly and time consuming.
  • Japanese Patent Application Laid-Open No. Hei 5-279694 and Japanese Patent Application Laid-Open No. Hei 6-56689 describe a method for recovering polyphenols containing proanthocyanin.
  • polyphenols are adsorbed to chitin, and polyphenols are The chitin adsorbed with phenols is used as a polyphenol product.
  • the adsorbed and absorbed polyphenols are polyphenols with a high degree of polymerization, and the content of the above-mentioned highly active dimer to tetramer OPC is extremely low. Low activity.
  • the present inventors have intensively studied a method for efficiently obtaining a bronthocyanidin-containing substance having a useful physiological activity and having a high OPC content.
  • proanthocyanidins containing a large amount of highly bioactive OPCs are extracted by extracting proanthocyanidins from plants, adding salts to the resulting extracts, and treating them with a synthetic resin-based adsorbent.
  • the present invention was completed by finding that a product can be obtained efficiently.
  • the present invention provides a method for producing a proanthocyanidin-containing substance
  • the extraction is a hot water extraction.
  • the metal salt is a monovalent gold salt.
  • the present invention also provides a proanthocyanidin-containing substance containing an oligomeric proanthocyanidin (OPC) and a phytotechin, which is contained in the port anthocyanidin-containing substance in terms of a dry weight in terms of an oligomeric substance. It contains more than 20% by weight of proanthocyanin (OPC) and 5 to 15% by weight of techin.
  • OPC oligomeric proanthocyanidin
  • the present invention also provides a method for producing a proanthocyanidin-containing product containing 20% by weight or more of oligomeric proanthocyanin in terms of dry weight, comprising the steps of: It includes a step of treating with a salt of a monovalent or divalent metal.
  • the plant used in the present invention is a plant containing proanthocyanin, and its type is not particularly limited. Bark of cedar, cypress, pine, etc., rich in proanthocyanidins; grape, blueberry, strawberry, apogado, -secacia, lingonberry, elderberry fruit, peel or seed; barley; wheat; soybeans; black soybeans; cacao Red beans; Conker shells; Peanut shells; Ginkgo biloba leaves; Tea leaves and tea extracts; Sorghum cane; Apple fruit; Kumazasa; Fucoidan; , Peru-Latania) roots.
  • pine bark, grape seeds and pericarp, peanut skins and the like are particularly preferably used.
  • Step of obtaining extract or juice from plant by extraction or pressing proanthocyanidin is extracted from the plant or juice is obtained from the plant.
  • the plant is preferably crushed to an appropriate size from the viewpoint of extraction efficiency, and the surface area per volume is increased.
  • the crushing method is not particularly limited. For example, a crushed material processed by a cutter, a slicer, or the like; a crushed material processed by a mixer, a juicer, a blender, a masscopper, or the like may be used.
  • the size of the crushed material or the powder frame is a small piece of 0.1 to 10 cm, preferably 0:! To 5 cm.
  • Water or an organic solvent such as ethanol, methanol or ethyl acetate may be added during the crushing to increase the crushing efficiency.
  • Water or an organic solvent is used as an extraction solvent.
  • the organic solvent include methanol, ethanol, 1-propanol, 2-propanol, 1-butanol, 2-butanol, acetone, hexane, cyclohexane, propylene glycol, aqueous ethanol, aqueous propylene glycol, and ethyl methyl ketone.
  • Glycerin methinole acetate, ethyl acetate, ethynole ether, dichloromethane, edible fats and oils, 1,1,1,2-tetrafluoroethane, and 1,1,2-trichloroethene.
  • a mixed solvent of water and an organic solvent is also preferably used. These organic solvents may be used alone or in combination. Water is preferably used from the viewpoint of waste liquid treatment at the time of production and from the viewpoint of adding metal or metal salt to be described later.
  • the amount of the extraction solvent to be added to the plant can be set in consideration of the desired proanthocyanin concentration and the extraction efficiency.
  • the weight ratio of plant: water is 1: 5 to 1: 100, preferably 1:10 to 1:50.
  • the amount of extraction solvent to be added may be adjusted in consideration of the amount used for mashing.
  • extract with hot water at 50 to 120 ° C, preferably 7 ° to 100 ° C. Plant You may add hot water to the plant, then add water to the plant and heat it.
  • the extraction time is generally from 10 minutes to 24 hours, but can be appropriately determined depending on the extraction temperature.
  • an extraction method using an organic solvent warm extraction or supercritical fluid extraction may be used.
  • a method of adding a heated solvent to a plant or a method of adding a solvent to a plant and heating is used.
  • a 5: 1 volume water-ethanol mixture solvent with a water: ethanol ratio of 1: 1 by weight to the ground plant is used as an extraction solvent and refluxed at 70-75 ° C. And stirring for 3 hours.
  • the extraction temperature must be set to a value equal to or lower than the boiling point of the organic solvent.
  • the supercritical fluid extraction method is a method of extracting a target component using a supercritical fluid, which is a fluid that has exceeded the critical point (critical temperature, critical pressure) of a substance's gas-liquid.
  • a supercritical fluid a fluid that has exceeded the critical point (critical temperature, critical pressure) of a substance's gas-liquid.
  • the supercritical fluid carbon dioxide, ethylene, propane, nitrous oxide (laugh gas) and the like are used, and carbon dioxide is preferably used.
  • the supercritical fluid extraction method comprises an extraction step of extracting a target component with a supercritical fluid, and a separation step of separating the target component from a supercritical fluid. In the separation process, either extraction separation by pressure change, extraction separation by temperature change, or extraction separation using adsorbent / absorbent may be performed.
  • supercritical fluid extraction by an entrainer addition method may be performed.
  • ethanol, propanol, n-hexane, acetone, toluene, other aliphatic lower alcohols, aliphatic hydrocarbons, aromatic hydrocarbons, or ketones are added to a supercritical fluid.
  • any of a batch type, a semi-continuous type, and a continuous type may be used.
  • the plant When juice is obtained from the plant, the plant is directly squeezed or, after being appropriately cut or crushed, squeezed.
  • This method is suitably adopted when a plant having a high water content is used.
  • a plant having a high water content For example, in the case of grape berries, squeezing produces a juice containing pulp anthocyanidins.
  • a crushed plant body containing solid matter derived from the plant body obtained by crushing the plant body (for example, the above-mentioned crushed grape fruit) is also used in the same manner as the squeezed juice.
  • a crushed plant containing a solid content of is also included in the juice.
  • extracts a monovalent or divalent metal salt
  • extract a monovalent or divalent metal salt
  • extracts a monovalent or divalent metal salt
  • proanthocyanidins having a high degree of polymerization are precipitated and removed as precipitates.
  • organic solvent it is preferable to remove the organic solvent by dialysis, concentration under reduced pressure, or the like, and replace the water with water. By substituting with water, ionization of the salt solution in the solution is improved, and proanthocyanin having a high degree of polymerization can be efficiently removed.
  • the temperature of the extract when adding the salts is not particularly limited. However, when the extraction is performed under a heating condition, it is preferable to add the salts after the temperature of the extract has dropped to 1 to 40 ° C.
  • the salts to be added to the extract or the like may be those that ionize in the solution. However, weak to strongly alkaline salts that affect the stability of proanthocyanin are not suitable.
  • Monovalent metals are the alkali metals lithium, sodium, potassium, rubidium, cesium, and francium. Are preferably used as salts.
  • the divalent metals are beryllium, magnesium, and alkaline earth metals (calcium, strontium, barium, and radium), and these metal salts are used.
  • the salts include halide salts (such as chloride salts and bromide salts), phosphate salts, carbonate salts, and organic acid salts (such as carboxylate salts such as acetate salts and sulfonate salts).
  • halide salts such as chloride salts and bromide salts
  • phosphate salts such as calcium salts and calcium phosphate
  • organic acid salts such as carboxylate salts such as acetate salts and sulfonate salts.
  • Specific examples thereof include sodium salt sodium, sodium salt sodium, sodium phosphate, potassium phosphate, sodium acetate and the like.
  • a monovalent alkali metal salt is used because purification efficiency can be increased without adding an auxiliary agent for stabilizing proanthocyanidin (for example, ascorbic acid or a pH adjusting agent). .
  • the above salts are added to the extract or the like so that the total weight of the obtained extract or the like is 10% by weight to a saturated amount, preferably 20% by weight to a saturated amount. After adding the salts, the mixture is allowed to stand at 1 ° C to 40 ° C for 30 minutes to 48 hours to precipitate a precipitate.
  • a divalent metal for example, potassium magnesium
  • a divalent metal When a divalent metal is used, it has a strong adsorptivity to proanthocyanidin and its pH is likely to be 6 or more, so that it binds to not only proanthocyanidin having a high degree of polymerization but also OPC to form a precipitate.
  • a solution having a concentration of 2 to 3 times the predetermined final concentration adjust the pH to 4 to 6 in advance, and then add this to an extract or the like.
  • the time for depositing the precipitate may be 48 hours or more, but it is preferable to shift to the next step before the OPC is automatically oxidized and the reddish brown is turned into a dark brown.
  • Methods for removing insolubles include methods commonly used by those skilled in the art, for example, filtration and centrifugation.
  • Filtration is preferably used in terms of processing time. Filtration may preferably be performed at 1-40 ° C. The lower the temperature, the more Proanthocyanidins having a high degree of polymerization can be removed, and the reaction is preferably performed at 30 ° C or lower, more preferably at 25 ° C or lower.
  • This filtration treatment may be performed before adding the salt, but in this case, it is necessary to perform the filtration after the addition of the salt in order to remove the precipitate.
  • the content of proanthocyanidin of pentamer or more in the crude anthocyanidin-containing liquid obtained here is ⁇ or less, preferably 1 Z 3 or less, more preferably less than the case where no salts were added. Is less than 1/5. Further, in the method of the present invention, it is not necessary to remove salts dissolved in the crude proanthocyanidin-containing solution before the next step of treating with the synthetic resin adsorbent. it can.
  • Step of treating the crude proanthocyanidin-containing liquid with a synthetic resin-based adsorbent treating the obtained crude proanthocyanidin-containing liquid with a synthetic resin-based adsorbent, the sugar-containing and organic acids Contaminants are removed and further purified.
  • the crude proanthocyanin-containing liquid is brought into contact with a synthetic resin-based adsorbent, and the proanthocyanidins are adsorbed on the synthetic resin-based adsorbent, and then eluted with a predetermined solvent, so that more OPC is obtained.
  • a proanthocyanidin-containing substance can be obtained.
  • Examples of the synthetic resin-based adsorbent used for the above purification include an organic resin, an ion exchange resin, silica gel, and reversed-phase silica gel.
  • an aromatic resin such as a styrene-dibutylbenzene-based resin, an methallyl acrylate-based resin, and an aliphatic attarylonitrile resin
  • it is an aromatic resin.
  • the aromatic resin include an aromatic resin having a hydrophobic substituent, an unsubstituted aromatic resin, and an aromatic resin obtained by subjecting a non-substituted group to a special treatment. An aromatic resin which has been subjected to a special treatment is more preferable. These resins are preferably porous.
  • Such synthetic resins are commercially available, for example: Examples: Acrylic methacrylic resin: Diaion (registered trademark) HP 1MG, HP 2MG (all manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation); Aromatic resin: SP-900 (Mitsubishi Chemical Corporation) , Amberlite (registered trademark) XAD-2, XAD-4, XAD-16, XAD-2000 (all manufactured by Organo Co., Ltd.); As an aromatic resin having a hydrophobic substituent, DIAION (registered trademark) ) SP-205, SP-206, SP-207, HP-2MG, EX-0021 (Mitsubishi Chemical Corporation), Amberlite (registered trademark) XAD-7, XAD-8 (Mall, Inc.) Unsubstituted aromatic resins include DIAION (registered trademark) HP-10, HP-20, HP-21, HP-30, HP-40, HP-50 (all Mitsubishi Chemical Corporation) SP-82 is an aromatic resin obtained by specially treating unsubstituted groups.
  • any of a cation exchange resin and an anion exchange resin can be used.
  • Commercially available cation exchange resins include, for example, resins having a sulfonate group as a functional group, such as Amberlite (registered trademark) CG-4000, CG-5000, CG-6000, CG-8000, IR — 116, IR—118, IR—120 B, IR—122, IR—124, XT-1007, XT-1009, XT-1002 (all manufactured by Olgano Corporation).
  • the weakly basic anion exchange resin examples include, for example, resins having a quaternary amine as a functional group, OPT I PORE-XUS 40285.00, OPT I PORE-XUS 40390.00 (all manufactured by D-Chemical Co., Ltd.) ) And the like. Dissolution when using ion exchange resin
  • the solvent is preferably water, the column temperature is 10 to 120 ° C., and the inside of the column is preferably at normal pressure or pressurized state.
  • the amount of the synthetic resin-based adsorbent may be appropriately set depending on the type of the solvent, the type of the synthetic resin-based adsorbent, and the like. For example, it is preferable to use 0.01 to 5 times the weight of the synthetic resin adsorbent based on the dry weight of the solution.
  • a synthetic resin-based adsorbent is packed in a column, and the proanthocyanin-containing substance is passed through the column. Then, 5 to 10 times the weight of water relative to the weight of the synthetic resin adsorbent is passed. As a result, saccharides and organic acids as impurities are removed. Then, the proanthocyanin is dissolved with an appropriate solvent.
  • the solvent include water, methanol, ethanol, ethyl acetate, chloroform, and a mixed solvent thereof.
  • a mixed solvent of water and ethanol is used.
  • the mixing ratio of water and ethanol depends on the synthetic resin adsorbent used.
  • synthetic resin adsorbent used for example, in the case of an acrylic metharyl resin such as Diaion HP-20, it is 5 to 50% by weight, preferably 10 to 10% by weight.
  • An aqueous solution of about 40% by weight of ethanol is used.
  • the proanthocyanidin-containing substance may be treated with the synthetic adsorbent by a batch method.
  • the synthetic adsorbent is added to the crude proanthocyanin solution at the same weight ratio as the above column method, and the mixture is brought into contact for 1 to 3 hours with stirring, and then the adsorbent is recovered by filtration or centrifugation.
  • the collected synthetic adsorbent is further washed with the same solvent as in the column method described above, the adsorbed broantocyanidin is stirred with the extraction solvent for 1 to 3 hours, and then OPC is removed by filtration or centrifugation. A more proanthocyanin-containing material is obtained.
  • proanthocyanidin-containing substance having an extremely high OPC content is obtained. can get.
  • the proanthocyanidin-containing substance also includes a concentrate, a diluent, a powder, and the like obtained by a method usually used by those skilled in the art.
  • the resulting proanthocyanin-containing material may further contain techinols in terms of dry weight, preferably 5 to 15% by weight, more preferably 10 to 15% by weight.
  • Catechins are poorly water-soluble by themselves and have low physiological activity, but when combined with catechins, OPCs increase the water solubility of catechins and activate the action of catechins Has properties. Therefore, proanthocyanidin-containing materials containing OPCs and catechins are particularly useful:
  • Catechins are a general term for polyhydroxyflavan-1-ol.
  • the power techins include (+) one strength techin, (-1) eppicatechin, (+)-gallocatechin, (_) epigallocatechin, epigallocatechin gallate, and epiki tekin gallate.
  • it includes afzelequin derived from natural products, and 3-galloyl derivatives of (+)-catechin or gallocatechin.
  • catechins include carcinogenesis suppression, arteriosclerosis prevention, fat metabolism abnormality suppression, blood pressure increase suppression, platelet aggregation suppression, antiallergic, antiviral, antibacterial, caries prevention, bad breath It has a preventive effect, a normalizing effect on the intestinal microflora, a scavenging effect of active oxygen and free radicals, an antioxidant effect, and an antidiabetic effect for suppressing an increase in blood sugar.
  • the proanthocyanidin-containing substance produced by the above method can be concentrated to produce a food material.
  • Various methods such as membrane concentration, heat concentration, vacuum (reduced pressure) concentration, and freeze concentration are used for concentration.
  • these proanthocyanidin-containing substances are sterilized. And save. Sterilization is performed by a method commonly used by those skilled in the art, such as airflow sterilization, high-pressure sterilization, and heat sterilization.
  • these proanthocyanin-containing substances may be sterilized, concentrated, dried, and powdered. Drying is performed by a method commonly used by those skilled in the art. Of these, freeze drying, vacuum drying, and spray drying are preferred.
  • the proanthocyanidin-containing material thus obtained can be used as a raw material for food, cosmetics, or pharmaceuticals.
  • the resulting proanthocyanin-containing substance can also be used as a drink, a gelled food or the like.
  • the proanthocyanin-containing material is not only used for eating and drinking as it is, but also mixed with excipients, bulking agents, binders, thickeners, emulsifiers, fragrances, food additives, seasonings, etc.
  • it can be formed into granules, tablets and the like.
  • it can be mixed with royal jelly, vitamins, protein, calcium, chitosan, lecithin, caffeine, etc., and then tasted with a sugar solution and seasonings.
  • They are also made into capsules, such as hard capsules and soft capsules, pills, or tea bags. These may be eaten as they are, or may be dissolved in water, hot water, milk, or the like, depending on their shape or preference.
  • the ingredients may be leached before drinking.
  • the amount of pentamer or more proanthocyanidin contained in the obtained crude proanthocyanidin-containing solution A was compared with that of the pine bark extract before the salt treatment as follows.
  • the TLC deployment conditions and the detection method are as follows.
  • the amount of proanthocyanidin was determined by comparing the degree of coloring of proanthocyanidins of pentamer or more (R f value: 0.1 or less). Table 1 shows the results.
  • Example 2 In the same manner as in Example 1 except that the final concentration of sodium chloride to be added was 25% by weight, 90 mL of crude proanthocyanin-containing solution B was obtained, and the amount of proanthocyanin was determined by TLC. Was. The results are shown in Table 1.
  • a crude proanthocyanin-containing solution C of 92 OmL was obtained in the same manner as in Example 1 except that the final concentration of salt chickadium to be added was 10% by weight, and the amount of proanthocyanin was determined by TLC. Was. The results are shown in Table 1.
  • Example 4 The crude proanthocyanin-containing solution A was further purified as follows. First, 90 OmL of crude proanthocyanidin-containing solution A was passed through a column filled with 25 g of an aromatic synthetic resin (Diaion HP-20: manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation), and proanthocyanidin was added. Was adsorbed to the column. The column was washed with 1 L of purified water, and then eluted from the column with a 15% (V / V) mixed solvent of ethanol and water to obtain 20 OmL of solution A containing purified proanthocyanidin. The dry weight was measured.
  • an aromatic synthetic resin Diaion HP-20: manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation
  • the obtained purified proanthocyanin-containing solution A is mixed with a component containing OPC, a component containing catechins, a component other than catechins, and other components including a polymer (hereinafter, referred to as other components). Then, it was separated as follows. First, 25 mL of Sephadex LH-20 (manufactured by Pharmacia Biotech) swollen with water was packed in a 15 ⁇ 30 OmL column, and washed with 25 mL of ethanol. Dissolve 100 mg of the above dry powder in 2 mL of ethanol, pass it through a column and allow it to adsorb, then gradient with 100-80% (V / V) ethanol / water mixed solvent.
  • TLC TLC was performed on the fractions other than OPC using catechin as an index (R f value: 0.8), and the fraction was separated into a fraction containing phytotechins and a fraction of other components. Released.
  • the TLC development conditions and detection method were the same as described above.
  • the fraction containing phytotechins was further separated into catechins and components other than phytotechins as follows. First, the fraction containing phytotechins was freeze-dried, the obtained powder was dissolved in 3 mL of water, and this was swelled with water to obtain 2 OmL of MCI gel (manufactured by Mitsubishi Eigaku Corporation). The liquid was adsorbed by passing through a column packed in a 15 X 30 OmL column. After the column was washed with water, the column was eluted with a mixed solvent of 10 to 100% (V / V) ethanol / aqueous solution, and fractionated in 10 mL portions. After the elution was completed, catechins in each fraction were detected by TLC using catechin as an index, and separated into tetekins fractions and fractions of components other than tetekins.
  • MCI gel manufactured by Mitsubishi Eigaku Corporation
  • the OPC fraction, phytotechin fraction, fractions other than catechins, and fractions of other components obtained as described above were each powdered by freeze-drying, and the dry weight was measured.
  • the sum of the OPC fraction, the phytotechin fraction, the fractions of components other than catechins, and the fractions of other components is 99.2 to 100 mg per 100 mg of dry powder of purified proanthocyanidin-containing solution A 99.6 mg, almost all of which had been recovered.
  • Table 2 shows the dry weight of the purified proanthocyanidin-containing solution A, and the content and content of OPC, catechins, and proanthocyanidins of pentamer or more in terms of dry weight.
  • the purified proanthocyanidin-containing liquids B and C were obtained in the same manner as in Example 4 above, and the crude protoanthocyanidin-containing liquids B and C were separated into fractions. The results are shown in Table 2.
  • each of the purified proanthocyanin-containing liquids A to C had an OPC content of 20% by weight or more on a dry weight basis.
  • proanthocyanidin-containing solution A obtained by adding sodium chloride to the pine bark extract to a final concentration of 20% by weight or more, contains 30% by weight or more of OPC.
  • a monovalent alkali metal proanthocyanidins having a high OPC content can be obtained from plants without adding an auxiliary agent for stabilizing the proanthocyanidins. It was found that it could be extracted.
  • the method of the present invention by simply treating an extract from a plant with a synthetic resin-based adsorbent, it is possible to easily obtain a proanthocyanidin-containing substance containing a high proportion of OPC having high physiological activity. it can.
  • This protocyanidin-containing substance having a high OPC content also contains phytotechins. Therefore, OPC has a synergistic effect of activating the action of catechins.
  • These proanthocyanidin-containing substances are effective in improving vascular enhancement, hypertension, coldness, etc., and are very useful as raw materials for producing foods, cosmetics, and pharmaceuticals.

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Abstract

植物体からプロアントシアニジンを抽出し、得られた抽出物に所定量の一価または二価の金属の塩を添加し、合成吸着剤で処理することによって、生理活性の高いＯＰＣを多く含むプロアントシアニジン含有物を容易に得ることができる。

Description

明 細 書 プロアントシァ-ジン高含有物の製造方法 技術分野
本発明は、 生理活性の高い O P Cを多く含むプロアントシァニジン含有物 を、 効率よく製造する方法に関する。 背景技術
プロアントシァニジンは、 各種植物中に存在する重合または縮合したタン ニンであり、 フラバン一 3—オールまたはフラバン一 3， 4ージオールを構 成単位として縮合または重合 (以下、 縮重合という) により、 結合した化合 物群である。 これらは、 酸処理によりシァニジン、 デルフィ二ジン、 ペラル ゴニジンなどのアントシァニジンを生成することから、 その名称が与えられ ている。
プロアントシァニジンの中でも、 重合度が低いプロアントシァ-ジンが好 適に用いられている。 重合度が 2〜 3 0の縮重合体 （2〜3 0量体） が好ま しく、 重合度が 2〜 1 0の縮重合体 （2〜1 0量体） がより好ましく、 重合 度が 2〜 4の縮重合体 ( 2〜 4量体) がさらに好ましく用いられる。
本明細書では、 プロアントシァニジンの縮重合体のうち、 フラバン一 3— オールおょぴ Zまたはフラバン一 3， 4 -ジオールを構成単位とする重合度 が 2〜4の縮重合体を、 O P C (オリゴメリック 'プロアントシァニジン； oligomeric proanthocyani dm) とレヽフ。
プロアントシァニジンは、 ポリフエノール類の一種で、 植物が作り出す強 力な抗酸化物質であり、 植物の葉、 樹皮、 果物の皮もしくは種の部分に集中 的に含まれている。 プロアントシァニジン、 特に O P Cは、 具体的には、 ブ ドウの種、 松の樹皮、 ピーナッツの皮、 イチヨウ葉、 ニセアカシアの果実、 コケモモの果実などに含まれている。 また、 西アフリカのコーラナッツ、 ぺ ルーのラタニアの根、 日本の緑茶にも、 O P Cが含まれることが知られてい る。 O P Cは、 ヒトの体内では、 生成することのできない物質である。
さらに O P Cは、 抗酸化作用のほか、 口腔内のバクテリア増殖を抑制して プラーク （歯こう） を減少させる効果；血管の弾力性を回復させる効果；血 液中でのリポタンパク質が活性酸素によりダメージを受けるのを防止して、 損傷した脂肪が血管の内壁に凝集し、 コレステロールが付着することを防止 する効果；活性酸素によって分解されたビタミン Eを再生させる効果； ビタ ミン Eの増強剤としての効果などを有することが知られている。
さらに、 フラバン一 3—オールおよび/またはフラバン一 3， 4一ジォー ルの重合体であるタンニン、 ならびにキチン、 キトサン、 およびこれらの誘 導体は、 黄色ブドウ球菌、 サルモネラ菌、 腸チフス菌、 コレラ菌などに対す る抗菌作用や殺菌作用が顕著である。 特にほとんどの抗生物質が効かないた めに話題となった MR S A (メチシリン耐性ブドウ球菌） にも効果があるこ とが報告されている。
プロアントシァニジンは、 一般的には植物体からの抽出によって得られる。 抽出に用いる溶媒としては、 水；メタノール、 エタノール、 ァセトン、 へキ サン、 酢酸ェチルなどの有機溶媒；またはこれらの混合物が挙げられる （特 開平 1 1一 8 0 1 4 8号公報） 。 しかし、 単に溶媒による抽出のみでは、 プ 口アントシァニジンの回収量は低く、 純度も低い。 したがって、 健康食品、 化粧品および医薬品原料として使用するためには、 純度を上げるためのさら なる濃縮、 精製などの工程が必要であり、 コストおよび時間がかかる。
特開平 5— 2 7 9 2 6 4号公報おょぴ特開平 6— 5 6 6 8 9号公報には、 プロアントシァ-ジンを含むポリフエノール類を回収する方法が記載されて いる。 この方法では、 ポリフエノール類をキチンに吸着させ、 ポリフエノー ル類が吸着したキチンをポリフエノール製品として利用する。 し力 し、 吸着 されたポリフエノール類は、 重合度の高いポリフエノール類であり、 上記生 理活性が高い 2〜 4量体の O P Cの含有量は極めて低く、 そのため抗酸化作 用などの生理活性が低い。
特開平 4 - 190774号公報、 特開平 10— 218769号公報、 特開 2001-131027号公幸 およひ、Eberhard Scholzら， Proanthocyani dins from Kramer i a triandra Root, Planta Medica, 5D (1989) , 379-384 頁には、 植物体から OP Cを抽出する方法および/または OP Cを合成する 方法が記載されている。 しかし、 抽出方法においては、 O PCを得るために、 植物体の抽出液を合成樹脂系吸着剤に吸着，溶出させ、 得られた画分を回収 する工程、 さらにこの工程を繰り返さなければ O PCの含有量を高めること ができず、 効率的ではない。 合成方法についても、 工程数が多く、 コストお よび時間もかかるなどの問題がある。 発明の開示
本発明者らは、 有用な生理活性を有する O P C含量の多いブロアントシァ 二ジン含有物を効率よく得る方法について、 鋭意検討した。 その結果、 植物 体からプロアントシァニジンを抽出し、 得られた抽出物へ塩類を添加し、 合 成樹脂系吸着剤で処理することによって、 生理活性の高い O P Cを多く含む プロアントシァニジン含有物が効率良く得られることを見出して本発明を完 成させた。
本発明は、 プロアントシァニジン含有物の製造方法を提供し、 この方法は、
(a) 植物体から抽出または圧搾により抽出物または搾汁を得る工程；
(b) 該抽出物または搾汁に一価または二価の金属の塩を添カ卩して、 不溶物 を除去し、 粗プロアントシァニジン含有液を得る工程；および （c) 該粗プ 口アントシァニジン含有液を合成樹脂系吸着剤で処理する工程、 を包含する。 好ましい実施態様においては、 上記抽出は、 熱水抽出である。
さらに好ましい実施態様においては、 上記金属の塩は一価のアル力リ金塩 塩である。
本発明はまた、 オリゴメリック ·プロアントシァニジン （O P C) および 力テキン類を含有するプロアントシァニジン含有物を提供し、 これは、 該プ 口アントシァニジン含有物中に乾燥重量換算でオリゴメリック 'プロアント シァ-ジン （O P C ) を 2 0重量％以上、 そして力テキン類を 5〜 1 5重 量％の割合で含有する。
本発明はまた、 乾燥重量換算でオリゴメリック ·プロアントシァ-ジンを 2 0重量％以上含有するプロアントシァニジン含有物の製造方法を提供し、 この方法は、 植物体の抽出物または搾汁を、 一価または二価の金属の塩で処 理する工程を含む。 発明を実施するための最良の形態
本発明に用いられる植物体は、 プロアントシァ-ジンを含有する植物体で あり、 その種類には特に制限はない。 プロアントシァニジンを多く含む杉、 檜、 松などの樹皮；ブドウ、 ブルーベリー、 イチゴ、 アポガド、 -セァカシ ァ、 コケモモ、 エルダーベリーの果実、 果皮、 もしくは種子；大麦；小麦； 大豆；黒大豆；カカオ；小豆； トチの実の殻； ピーナッツの薄皮；ィチョウ 葉；茶葉および茶抽出液；モロコシキビ； リンゴ果実；クマザサ； フコイダ ン；ヤーコン葉；コーラナッツ (例えば、 西アフリカのコーラナッツ) ；ラ タニア （例えば、 ペルーのラタニア） の根；などが挙げられる。 これらの中 で、 特に松樹皮、 ブドウ種子おょぴ果皮、 ピーナッツの薄皮などが好適に用 レヽられる。
以下、 本発明のプロアントシァニジン含有物の製造方法について説明する。 ( a ) 植物体から抽出または圧搾により抽出物または搾汁を得る工程 まず、 植物体からプロアントシァニジンを抽出し、 あるいは植物体から搾 汁を得る。 抽出を行う場合には、 抽出効率の点から、 好ましくは植物体を適 当な大きさに破砕し、 体積当たりの表面積を大きくする。 破碎方法は、 特に 限定されない。 例えば、 カッター、 スライサーなどで処理した破碎物； ミキ サー、 ジューサー、 ブレンダー、 マスコ口イダーなどで処理した粉砕物など でもよい。 破砕物または粉枠物の大 — は、 0 . 1〜 1 0 c m、 好ましくは 0 . ：!〜 5 c mの細片である。 破碎効率を上げるために、 破碎時に水、 ある いはエタノール、 メタノール、 酢酸ェチルなどの有機溶媒を加えてもよい。 抽出溶媒としては、 水または有機溶媒が用いられる。 有機溶媒としては、 例えば、 メタノール、 エタノール、 1 -プロパノール、 2-プロパノール、 1-ブ タノール、 2-ブタノール、 アセトン、 へキサン、 シクロへキサン、 プロピレ ングリコール、 含水エタノール、 含水プロピレングリコール、 ェチルメチル ケトン、 グリセリン、 酢酸メチノレ、 酢酸ェチル、 ジェチノレエーテル、 ジクロ ロメタン、 食用油脂、 1 , 1 , 1， 2—テトラフルォロェタン、 および 1， 1， 2—トリクロロェテンが挙げられる。 さらに、 水一有機溶媒の混合溶媒 も好ましく用いられる。 これらの有機溶媒は単独で用いてもよいし、 組合わ せて用いてもよい。 なお、 製造時の廃液処理の観点や後述する金属または金 属塩の添カ卩を行う観点から、 水が好適に用いられる。
植物体に添加する抽出溶媒の量は、 目的とするプロアントシァ-ジン濃度 および抽出効率を考慮して設定し得る。 例えば、 水を抽出溶媒として使用す る場合、 植物体：水の比が重量比で 1 ： 5〜 1 ： 1 0 0、 好ましくは 1 ： 1 0〜： 1 ： 5 0である。 水おょぴ Zまたは有機溶媒を添カ卩して破枠した場合は、 破枠に使用した量を考慮し、 添加する抽出溶媒の量を調整すればよい。
抽出温度は、 抽出効率を高めるためには高い方が好ましい。 水を用いる場 合、 5 0〜 1 2 0 °C、 好ましくは 7◦〜 1 0 0 °Cの熱水で抽出する。 植物体 に熱水を加えてもよく、 植物体に水を加えた後、 加熱してもよレ、。 抽出時間 は、 一般的には 1 0分〜 2 4時間であるが、 抽出温度により適宜決定され得 る。
また、 有機溶媒を用いた抽出方法として、 加温抽出または超臨界流体抽出 法による抽出を行ってもよい。 有機溶媒を用いた加温抽出法としては、 植物 体に加温した溶媒を加える方法、 または植物体に溶媒を添加して加温する方 法が用いられる。 例えば、 粉砕した植物体に対して、 水：エタノールの比が、 重量比で 1 ： 1である水一エタノール混合溶媒を抽出溶媒として 5倍量使用 して、 7 0〜7 5 °Cで還流させながら、 3時間攪拌する方法が挙げられる。 なお、 有機溶媒を使用する場合の抽出温度は、 その有機溶媒の沸点以下に設 定する必要がある。
超臨界流体抽出法は、 物質の気液の臨界点 （臨界温度、 臨界圧力） を超え た状態の流体である超臨界流体を用いて目的成分を抽出する方法である。 超 臨界流体としては、 二酸化炭素、 エチレン、 プロパン、 亜酸化窒素 （笑気ガ ス） などが用いられ、 二酸ィヒ炭素が好ましく用いられる。 超臨界流体抽出法 は、 目的成分を超臨界流体によって抽出する抽出工程おょぴ目的成分と超臨 界流体とを分離する分離工程からなる。 分離工程では、 圧力変化による抽出 分離、 温度変化による抽出分離、 または吸着剤 ·吸収剤を用いた抽出分離の いずれを行ってもよレ、。
また、 ェントレーナー添加法による超臨界流体抽出を行ってもよい。 この 方法は、 超臨界流体に、 例えば、 エタノール、 プロパノール、 n -へキサン、 アセトン、 トルエン、 その他の脂肪族低級アルコール類、 脂肪族炭化水素類、 芳香族炭化水素類、 またはケトン類を 2〜2 O W/V°/0程度添カ卩し、 得られ た抽出流体で超臨界流体抽出を行うことによって、 O P C、 カテキン類 （後 述） などの目的とする被抽出物の抽出流体に対する溶解度を飛躍的に上昇さ せる、 あるいは分離の選択性を増強させ、 プロアントシァニジンの効率的な 抽出を可能にする。
抽出には、 例えば、 回分式、 半連続式、 または連続式などのいずれの抽出 装置を用いてもよい。
植物体から搾汁を得る場合には、 植物体を直接圧搾し、 あるいは適宜切断 または破碎した後に圧搾する。 この方法は、 水分含量の高い植物体を使用す る場合に好適に採用される。 例えば、 ブドウ果実の場合には、 圧搾によりプ 口アントシァニジンを含む搾汁が得られる。 植物体を破砕して得られる植物 体由来の固形分を含む植物体破砕物 （例えば、 上記ブドウ果実破碎物） もま た搾汁と同様に用いられ、 本明細書中では、 この植物体由来の固形分を含む 植物体破砕物も搾汁に包含される。
( b ) 抽出物または搾汁に一価または二価の金属の塩を添加して、 不溶物を 除去し、 粗プロアントシァ-ジン含有液を得る工程
次に、 得られた抽出物または搾汁 (以下、 抽出物等という) に、 一価また は二価の金属の塩 （以下、 塩類という） を添加する。 この塩類によって重合 度の高いプロアントシァニジンを沈殿物として析出させて除去する。 抽出物 等に有機溶媒が含まれる場合は、 透析や減圧濃縮などにより有機溶媒を除去 し、 水に置換することが好ましい。 水に置換すると、 塩類の溶液中の電離が よくなり、 重合度の高いプロアントシァ-ジンを効率よく除去できる。
塩類を加える時の抽出物の温度は特に制限はないが、 加熱条#下で抽出し た場合は、 抽出物の温度が 1〜4 0 °Cに低下した後に、 塩類を加えることが 好ましい。
抽出物等へ添加する塩類は、 溶液中で電離するものであればよい。 ただし、 プロアントシァ-ジンの安定性に影響を及ぼすような弱〜強アルカリ性の塩 類は好適ではない。 一価の金属は、 アルカリ金属であるリチウム、 ナトリウ ム、 カリウム、 ルビジウム、 セシウム、 およびフランシウムであり、 これら の金属の塩が塩類として好適に用いられる。 二価の金属は、 ベリリウム、 マ グネシゥム、 アルカリ土類金属 （カルシウム、 ストロンチウム、 バリウム、 ラジウム） であり、 これらの金属塩が用いられる。 塩類としては、 例えば、 ハロゲン化物塩 （塩化物塩、 臭化物塩など） 、 リン酸塩、 炭酸塩、 有機酸塩 (酢酸塩などのカルボン酸塩、 スルホン酸塩など） などが挙げられる。 具体 的には、 塩ィ匕ナトリゥム、 塩ィ匕カリゥム、 リン酸ナトリゥム、 リン酸カリゥ ム、 酢酸ナトリウムなどが挙げられる。 プロアントシァニジンを安定化する ための助剤 （例えば、 ァスコルビン酸、 p H調整剤） を加えることなく精製 効率を高めることが可能な点で、 好ましくは、 一価のアルカリ金属塩が用い られる。
上記塩類は、 得られた抽出物等の全体の重量の 1 0重量％〜飽和量、 好ま しくは 2 0重量％〜飽和量となるように抽出物等に添加する。 塩類を添加後、 1 °C〜4 0 °Cで 3 0分〜 4 8時間静置し、 沈殿物を析出させる。 二価の金属、 例えば力ルシゥムゃマグネシウムを用いる場合は、 0 . 1重量％〜1 0重 量％となるように添加すればよい。 二価の金属を用いる場合は、 プロアント シァニジンに対する吸着力が強く、 p Hが 6以上になりやすレ、ため、 重合度 の高いプロアントシァニジンだけでなく O P Cにも結合して沈殿を生ずる。 そのため、 所定の最終濃度の 2〜 3倍濃度の溶液を調製して、 予め p Hを 4 〜 6に調整した後、 これを抽出物等に添加することが好ましい。 なお、 沈殿 物を析出させる時間は、 4 8時間以上行ってもよいが、 O P Cが自動酸ィ匕し、 赤褐色が濃い褐色に変色する前に次工程に移ることが好ましい。
次いで、 上記工程の後、 析出した沈殿物などの不溶物を除去し、 粗ブロア ントシァニジン含有液を得る。
不溶物を除去する方法としては、 当業者が通常用いる方法、 例えば、 濾過 や遠心分離などが挙げられる。 処理時間の点から、 濾過が好適に用いられる。 濾過は、 好ましくは 1〜 4 0 °Cで行われ得る。 低温であるほど、 より多くの 重合度の高いプロアントシァニジンを除去することができ、 好ましくは 3 0 °C以下、 より好ましくは 2 5 °C以下で行われる。 この濾過処理は塩類を添 加する前に行ってもよいが、 この場合は、 塩類添加後にも沈殿物を除去する ために濾過をする必要がある。 ここで得られた粗プ口アントシァニジン含有 液中の 5量体以上のプロアントシァニジンの含有量は、 塩類を添加しなかつ た場合に比べ 1 / 2以下、 好ましくは 1 Z 3以下、 より好ましくは 1/ 5以 下になる。 また本発明の方法は、 次工程である合成樹脂吸着剤で処理するェ 程の前に、 粗プロアントシァニジン含有液中に溶解する塩類を除去する必要 はないため、 工程を少なくすることができる。
( c ) 粗プロアントシァニジン含有液を合成樹脂系吸着剤で処理する工程 次いで、 得られた粗プロアントシァ-ジン含有液を合成樹脂系吸着剤で処 理することにより、 糖類や有機酸などの夾雑物が除去され、 さらに精製され る。 すなわち、 上記粗プロアントシァ-ジン含有液を合成樹脂系吸着剤と接 触させて、 プロアントシァニジンを合成樹脂系吸着剤に吸着させた後、 所定 の溶媒で溶出することにより、 O P Cをより多く含有するプロアントシァニ ジン含有物を得ることができる。
上記精製に用いられる合成樹脂系吸着剤としては、 有機系樹脂、 イオン交 換樹脂、 シリカゲル、 逆相シリカゲルなどが挙げられる。
有機系樹脂としては、 例えば、 スチレンージビュルベンゼン系樹脂などの 芳香族系樹脂、 アタリル酸系メタタリル樹脂、 アタリロニトリル脂肪族系榭 脂などが使用できる。 好ましくは、 芳香族系樹脂である。 芳香族樹脂として は、 疎水性置換基を有する芳香族系樹脂、 無置換基型の芳香族系樹脂、 無置 換基型に特殊処理を施した芳香族系樹脂が挙げられ、 無置換基型に特殊処理 を施した芳香族系樹脂がより好適である。 これらの樹脂は、 多孔性であるこ とが好ましい。 このような合成樹脂は市販されており、 例えば、 次のものが 挙げられる ：アクリル酸系メタクリル樹脂としては、 ダイアイオン （登録商 標） HP 1MG、 HP 2MG (以上、 三菱化学株式会社製） ；芳香族系樹脂 としては、 SP—900 (三菱化学株式会社製） 、 アンバーライト （登録商 標） XAD— 2 、 XAD-4 、 XAD- 16 、 XAD—2000 (以上、 株式会社オルガノ製) ；疎水性置換基を有する芳香族系樹脂としては、 ダイ アイオン （登録商標） SP— 205 、 S P- 206 、 SP— 207、 HP -2MG 、 EX— 0021 (以上、 三菱化学株式会社製） 、 アンバーライ ト （登録商標） XAD— 7 、 XAD- 8 (以上、 株式会社オルガノ製） ； 無置換基型の芳香族系樹脂としては、 ダイアイオン （登録商標） HP— 10 、 HP— 20 、 HP— 21 、 HP— 30 、 HP— 40 、 HP— 50 (以上、 三菱化学株式会社製） ；無置換基型に特殊処理を施した芳香族系樹 脂としては、 SP— 825 、 SP— 800 、 SP— 850 、 SP— 87 5 (以上、 三菱化学株式会社製） ；架橋デキストランの誘導体としては、 セ フアデックス (登録商標) LH20 、 LH60 (以上、 フアルマシアバイ ォテク株式会社製） など。 中でもダイアイオン HP— 20またはセフアデッ クス LH20が好ましい。
イオン交換樹脂としては、 陽イオン交換樹脂および陰イオン交換樹脂のい ずれも使用できる。 市販されている陽イオン交換樹脂としては、 例えば、 官 能基としてスルホン酸塩基を有する樹脂である、 アンバーライト (登録商 標） CG—4000、 CG— 5000、 CG— 6000、 CG— 8000、 I R— 116、 I R— 118、 I R— 120 B、 I R— 122、 I R— 12 4、 XT— 1007、 XT— 1009、 XT- 1002 (以上、 株式会社ォ ルガノ製） などが挙げられる。 弱塩基性陰イオン交換樹脂としては、 例えば、 官能基として 4級ァミンを有する樹脂である、 OPT I PORE-XUS 4 0285. 00、 OPT I PORE-XUS 40390. 00 (以上、 ダ ゥケミカル株式会社製） などが挙げられる。 イオン交換樹脂を用いる際の溶 出溶媒は、 水が好ましく、 カラム温度は 1 0〜1 2 0 °C、 カラム内は常圧ま たは加圧された状態であることが好ましい。
合成樹脂系吸着剤の量は、 溶媒の種類、 合成樹脂系吸着剤の種類等によつ て適宜設定すればよい。 例えば、 上記溶液の乾燥重量に対して、 0 . 0 1〜 5倍重量の合成樹脂系吸着剤を使用することが好ましい。
プロアントシァェジン含有物を合成樹脂系吸着剤を用いて精製するには、 例えば、 まず、 合成樹脂系吸着剤をカラムに充填し、 そのカラムにプロアン トシァ-ジン含有物を通液し、 次いで合成樹脂系吸着剤の重量に対し、 5倍 から 1 0倍の重量の水を通液させる。 これにより、 不純物である糖類おょぴ 有機酸が除去される。 その後、 適切な溶媒によりプロアントシァュジンを溶 出する。 溶媒としては、 水、 メタノール、 エタノール、 酢酸ェチル、 クロ口 ホルム、 およびこれらの混合溶媒が挙げられる。 好ましくは水とエタノール との混合溶媒が用いられる。 水とエタノールとの混合比は、 用いる合成樹脂 系吸着剤によつて異なるが、 例えば、 ダイアイオン H P— 2 0等のアクリル 酸系メタタリル樹脂の場合、 5〜 5 0重量％、 好ましくは 1 0〜 4 0重量％ のェタノール水溶液を用いる。
また、 プロアントシァニジン含有物を、 バッチ法によって上記合成吸着剤 で処理してもよレ、。 バッチ法の場合は、 上記カラム法と同様の重量比で合成 吸着剤を粗プロアントシァ-ジン溶液に加え、 攪拌しながら 1〜3時間接触 させた後に、 濾過または遠心分離により吸着剤を回収する。 回収した合成吸 着剤を、 さらに上記カラム法の場合と同様の溶媒で洗浄し、 吸着したブロア ントシァニジンを抽出溶媒とともに 1時間〜 3時間攪拌し、 次いで濾過また は遠心分離することによって、 O P Cをより多く含むプロアントシァ-ジン 含有物が得られる。 このようにして、 O P C含量が極めて高いプロアントシァニジン含有物が 得られる。 このプロアントシァニジン含有物は、 乾燥重量換算で O P C (ォ リゴメリック .プロアントシァニジン） を 2 0重量0 /0以上、 より好ましくは 4 0重量％以上を含有する。
ここで、 プロアントシァニジン含有物とは、 その後、 当業者が通常用いる 方法によって得られる濃縮物、 希釈物、 粉末なども含む。
得られたプロアントシァ-ジン含有物は、 さらに、 乾燥重量換算で力テキ ン類を好ましくは 5〜 1 5重量％、 より好ましくは 1 0〜 1 5重量％含有し 得る。 カテキン （catechin) 類は、 単独では水溶性が乏しく、 その生理活性 が低いが、 O P Cは、 カテキン類と共存すると、 力テキン類の水溶性を增加 させると同時に、 カテキン類の作用を活性化する性質を有する。 したがって、 O P Cとカテキン類とを含有するプロアントシァニジン含有物は、 特に有用 ：'ある。
カテキン類とは、 ポリヒドロキシフラバン一 3—オールの総称である。 力 テキン類としては、 (+ ) 一力テキン、 (一) ーェピカテキン、 （+) —ガ ロカテキン、 (_) ーェピガロカテキン、 ェピガロカテキンガレート、 ェピ 力テキンガレートなどが挙げられる。 さらに、 天然物由来のァフゼレキン、 ならびに (+) —カテキンまたはガロカテキンの 3—ガロイル誘導体も含む。 カテキン類の作用としては、 発癌抑制作用、 動脈硬化予防作用、 脂肪代謝 異常の抑制作用、 血圧上昇抑制作用、 血小板凝集抑制作用、 抗アレルギー作 用、 抗ウィルス作用、 抗菌作用、 虫歯予防作用、 口臭防止作用、 腸内細菌叢 正常化作用、 活性酸素やフリーラジカルの消去作用、 抗酸化作用、 血糖の上 昇を抑制する抗糖尿病作用などが挙げられる。
上記方法によって製造されるプロアントシァニジン含有物は、 濃縮して食 品素材とすることもできる。 濃縮には、 膜濃縮、 加熱濃縮、 真空 （減圧） 濃 縮、 凍結濃縮などの種々の方法が用いられる。
さらに必要に応じて、 これらのプロアントシァニジン含有物を殺菌処理し て保存する。 殺菌は、 気流殺菌、 高圧殺菌、 加熱殺菌などの当業者が通常用 いる方法により行われる。
また、 これらのプロアントシァ ジン含有物は、 殺菌後、 濃縮、 乾燥、 お よび粉末ィ匕してもよい。 乾燥は、 当業者が通常用いる方法によって行われる。 中でも、 凍結乾燥、 真空乾燥、 および噴霧乾燥が好ましい。
このようにして得られたプロアントシァニジン含有物は、 食品、 化粧品、 または医薬品の原料として使用することができる。
得られたプロアントシァェジン含有物は、 ドリンク剤およびゲル化した飲 食物などとしても利用できる。 さらに、 プロアントシァ-ジン含有物は、 そ のまま飲食に供するだけでなく、 賦形剤、 増量剤、 結合剤、 増粘剤、 乳化剤、 香料、 食品添加物、 調味料などと混合し、 用途に応じて、 顆粒、 錠剤などの 形態に成形することもできる。 例えば、 ローヤルゼリー、 ビタミン類、 プロ ティン、 カルシウム、 キトサン、 レシチン、 カフェインなどと混合し、 さら に糖液およぴ調味料により味が整えられる。 さらにこれらは、 ハードカプセ ルぉよびソフト力プセルなどのカプセル剤、 丸剤、 またはティーバッグ状な どにされる。 これらは、 これらの形状または好みに応じて、 そのまま食して もよく、 あるいは水、 湯、 牛乳などに溶いて飲んでもよい。 またティーバッ グ状などの場合、 成分を浸出させてから飲んでもよい。 実施例
以下、 実施例に基づいて本発明を説明するが、 この実施例は本発明を制限 するものではない。 実施例に示す単位 (V/V) は （容量/容量） を、 （W /W) は （重量 /重量） を示す。 (実施例 1 )
松樹皮 9 0 0 gに精製水 7 . 2 Lを加え、 ブレンダー （Waring Blender) で破碎した後、 100°Cで 10分間加熱した。 次いで、 直ちに濾過し、 濾過 後の不涛物を精製水 1. 8 Lで洗浄し、 濾液と洗浄液を合わせて 9 Lの松樹 皮抽出液を得た。
この抽出液 ImLを凍結乾燥したところ、 乾燥重量は 8mgであった。 上 記抽出液 1 L (抽出物粉末乾燥重量 8 g ) を 25 °Cまで放冷し、 塩化ナトリ ゥムを飽和濃度となるまで添加し、 よく攪拌した後、 4 °Cで 24時間静置し た。 静置後、 この溶液を濾過し、 91 OmLの粗プロアントシァ-ジン含有 液 Aを得た。
得られた粗プロアントシァニジン含有液 Aに含まれる 5量体以上のプロア ントシァニジン量を、 以下のようにして、 塩類処理前の松樹皮抽出物と比較 した。
まず、 松樹皮抽出液 100 /i Lを、 精製水を用いて 2、 4、 6、 および 8 倍に希釈した溶液を調製した。 次いで、 松樹皮抽出液の原液、 2〜 8倍希釈 溶液、 および粗プ口アントシァニジン含有液 Aについて、 シリカゲル薄層ク 口マトグラフィー （TLC) により、 各溶液中に含まれる 5量体以上のプロ アントシァ-ジンを検出した。
T L Cの展開条件おょぴ検出方法は下記の通りである。
TLC：シリ力ゲルプレート (Merck & CO. , Inc.製）
展開溶媒：ベンゼン /蟻酸ェチル /蟻酸 (2/7/1)
検出試薬：硫酸おょぴァニスアルデヒド硫酸
サンプル量：各 10 L
検出試薬にて発色後、 5量体以上のプロアントシァニジン （R f値： 0. 1以下） の発色度合いを比較して、 プロアントシァニジン量を求めた。 結果 を表 1に示す。
(実施例 2) 添加する塩化ナトリウムを最終濃度 2 5重量％としたこと以外は、 実施例 1と同様にして、 9 0 O m Lの粗プロアントシァ-ジン含有液 Bを得、 T L Cにてプロアントシァ-ジン量を求めた。 結果を表 1に併せて示す。
(実施例 3 )
添加する塩ィヒナトリゥムを最終濃度 1 0重量％としたこと以外は、 実施例 1と同様にして、 9 2 O m Lの粗プロアントシァ-ジン含有液 Cを得、 T L Cにてプロアントシァ-ジン量を求めた。 結果を表 1に併せて示す。
Figure imgf000016_0001
+は濃い、および一は薄いことを示す。 粗プロアントシァニジン含有液 A〜Cはいずれも、 松樹皮抽出液の 2倍希 釈液より発色が弱かった。 このことから、 粗プロアントシァニジン含有液 A 〜Cにおいては、 5量体以上のプロアントシァニジンが、 松樹皮抽出液中に 含まれる量の半分以上が除去されていることがわかる。 特に粗プロアントシ ァニジン含有液 Aおよび Bは、 抽出液に対し、 5量体以上のプロアントシァ 二ジン含量が 1 / 4〜 1 / 8に減少していることがわかる。
(実施例 4 ) 粗プロアントシァ-ジン含有液 Aを、 以下のようにしてさらに精製した。 まず、 90 OmLの粗プロアントシァニジン含有液 Aを、 25 gの芳香族系 合成樹脂 （ダイアイオン HP— 20 ：三菱化学株式会社製） を充填したカラ ムに通液し、 プロアントシァニジンをカラムに吸着させた。 このカラムを 1 Lの精製水で洗浄し、 次いでカラムから 15% (V/V) のエタノール一水 混合溶媒で溶出し、 20 OmLの精製プロアントシァニジン含有液 Aを得、 それぞれ凍結乾燥し、 乾燥重量を測定した。
得られた精製プロアントシァ-ジン含有液 Aを、 OPCを含む成分と、 力 テキン類を含む成分と、 カテキン類以外の成分と、 ポリマーなどを含むその 他の成分 （以下、 その他の成分という) とに、 以下のようにして分離した。 まず、 水で膨潤させたセフアデックス LH— 20 (フアルマシアバイオテク 株式会社製) 25mLを 1 5 X 30 OmLのカラムに充填し、 25mLのェ タノールで洗浄した。 100 m gの上記乾燥粉末を 2 m Lのェタノ一ルに溶 解し、 これをカラムに通液して吸着させた後、 100-80% (V/V) ェ タノール一水混合溶媒でグラジェント溶出し、 1 OmLずつ分取した。 分取 すると同時に、 2〜 4量体の O P Cの標品 （ 2量体：プロアントシァ-ジン B-2 (R f値： 0. 6) 、 3量体：プロアントシァニジン C_l (R f値： 0. 4) 、 および 4量体：シンナムタンニン A2 (R f値： 0. 2) ) を指標とし て、 各画分中の O PCを上記実施例 1と同様に TLCにより検出した。
TLCにより OPCが含まれることを確認した溶出画分を合わせて、 OP c画分を得た。
次いで、 OP Cが検出されなくなった時点で、 l O OmLの 50% (V/ V) 水一アセトン混合溶媒を通液し、 カラムに吸着した残りの O PC以外の 画分を溶出させた。
次いで、 O PC以外の画分について、 カテキンを指標として、 TLCを行 い （R f値： 0. 8) 、 力テキン類を含む画分とその他の成分の画分とに分 離した。 T L Cの展開条件おょぴ検出方法は上記と同様に行った。
力テキン類を含む画分については、 さらに、 以下のようにカテキン類と力 テキン類以外の成分とに分離した。 まず、 力テキン類を含む画分を凍結乾燥 し、 得られた粉末を 3 mLの水に溶解し、 これを水で膨潤させた 2 OmLの MC Iゲル （三菱ィヒ学株式会社製） を 15 X 30 OmLのカラムに充填した カラムに通液して吸着させた。 このカラムを水で洗浄した後、 10〜10 0% (V/V) エタノール一水混合溶媒でグラジェント溶出し、 10mLず つ分取した。 溶出終了後、 カテキンを指標として、 各画分中の力テキン類を TLCにより検出し、 力テキン類画分と力テキン類以外の成分の画分とに分 離した。
上記のようにして得た O PC画分、 力テキン類画分、 カテキン類以外の成 分の画分、 およびその他の成分の画分をそれぞれ凍結乾燥により粉末化し、 乾燥重量を測定した。 なお、 OPC画分、 力テキン類画分、 カテキン類以外 の成分の画分、 およびその他の成分の画分の総和は、 精製プロアントシァニ ジン含有液 Aの乾燥粉末 100 m gに対して 99. 2〜99. 6 m gであり、 ほぼ全量回収されていた。
表 2に、 精製プロアントシァニジン含有液 Aの乾燥重量、 ならびに OPC、 カテキン類、 5量体以上のプロアントシァニジンの乾燥重量換算での含有率 および含有量を示す。
(実施例 5および 6)
粗プ口アントシァニジン含有液 Bおよび Cについて、 上記実施例 4と同様 にして、 それぞれ精製プロアントシァニジン含有液 Bおよび Cを得、 各画分 に分離した。 結果を表 2に併せて示す。
(比較例 1 ) 松樹皮抽出物について、 上記実施例 4と同様にして、 それぞれ精製松樹皮 抽出液を得、 各画分に分離した。 結果を表 2に併せて示す。 表 2
Figure imgf000019_0001
表 2からわかるように、 精製プロアントシァュジン含有液 A〜 Cはいずれ も、 乾燥重量換算で 2 0重量％以上の O P C含有量であった。 特に、 松樹皮 抽出液へ最終濃度が 2 0重量％以上になるように塩化ナトリゥムを添加して 得られたプロアントシァニジン含有液 Aおょぴ Bは、 3 0重量％以上の O P Cを含有していた。 このことから、 一価のアルカリ金属を添加することによ り、 プロアントシァニジンを安定化するための補助剤などを添加することな く、 植物体から O P C含有量の多いプロアントシァニジンを抽出することが できることがわかった。
(実施例 7 )
松樹皮 1 0 0 gに 1 Lの精製水を加え、 破碎し、 1 0 0 °Cで 1 0分間加熱 した。 次いで、 直ちに濾過し、 濾過後の不溶物を精製水 2 0 O m Lで洗浄し、 濾液と洗浄液とを合わせて 1 . 2 Lの抽出液を得た。 この抽出液の一部 （5 mL) を減圧濃縮し、 得られた抽出物粉末の重量を測定した （39mg) 。 次いで、 上記抽出物粉末を残りの抽出液に加え、 湯で全量 1. 2Lに調整 した後、 25°Cまで放冷し、 次いで塩ィヒナトリウムを飽和量 （34 g) 添加 して攪拌した後、 4 °Cにて 24時間静置した。 静置後、 この溶液を濾過し、 粗プロアントシァ-ジン含有液 Dを得た。 この粗プロアントシァニジン含有 液 Dへ 30 gのダイアイオン HP— 20を加え、 3時間攪拌した後に、 濾過 し、 プロアントシァュジンが吸着した固形分を回収した。 この固形分を 25 ◦ mLの精製水で洗浄し、 150mLの 20% (V/V) エタノール水溶液 を加え、 1時間攪拌した後に濾過し、 濾液を回収し、 精製プロアントシァニ ジン含有液 Dとした。 この精製プロアントシァニジン含有液 Dを減圧濃縮乾 固して、 1. 6 gのプロアントシァ-ジン含有乾燥粉末を得た。
100 m gのプロアントシァニジン含有乾燥粉末を用いて、 上記実施例 4 と同様に O P Cおよび力テキン類の含有率を測定したところ、 乾燥重量換算 で OPCを 46重量％以上およぴカテキン類を 11. 1重量％含有していた。 産業上の利用可能性
本発明の方法によれば、 植物からの抽出物を単に合成樹脂系吸着剤で処理 することによって、 生理活性の高い O PCを高い割合で含有するプロアント シァ二ジン含有物を容易に得ることができる。 この O P C含量が高いプロァ ントシァニジン含有物は、 力テキン類も含有する。 そのため、 O PCがカテ キン類の作用を活性化させるという相乗効果を有する。 これらのプロアント シァニジン含有物は、 血管増強、 高血圧、 冷え性などの改善に効果があり、 食品、 化粧品、 医薬品の製造原料として非常に有用である。

Claims

請求の範囲
1 . ( a ) 植物体から抽出または圧搾により抽出物または搾汁を得るェ 程； （b ) 該抽出物または搾汁に一価または二価の金属の塩を添加して、 不 溶物を除去し、 粗プロアントシァニジン含有液を得る工程；および （c ) 該 粗プロアントシァ-ジン含有液を合成樹脂系吸着剤で処理する工程を包含す る、 プロアントシァニジン含有物の製造方法。
2 . 前記抽出が、 熱水抽出である、 請求項 1に記載の方法。
3 . さらに、 前記金属の塩が一価のアル力リ金属塩である、 請求項 1また は 2に記載の方法。
4 . オリゴメリック ·プロアントシァ-ジンおよぴカテキン類を含有する プロアントシァニジン含有物であって、 該プロアントシァ-ジン含有物中に 乾燥重量換算でオリゴメリック 'プロアントシァニジンを 2 0重量0 /0以上、 そして力テキン類を 5〜1 5重量％の割合で含有する、 プロアントシァニジ ン含有物。
5 . 乾燥重量換算でォリゴメリック 'プロアントシァニジンを 2 0重量0 /0 以上含有するプロアントシァニジン含有物の製造方法であって、 植物体の抽 出物または搾汁を、 一価または二価の金属の塩で処理する工程を含む、 方法。
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