WO1999009177B1

WO1999009177B1 - Papillomviren, mittel zu deren nachweis sowie zur therapie von durch sie verursachten erkrankungen

Info

Publication number: WO1999009177B1
Application number: PCT/DE1998/002379
Authority: WO
Inventors: Zur Hausen Ethel-M De Villiers; Hausen Harald Zur
Original assignee: Deutsches Krebsforsch; Villiers Zur Hausen Ethel Mich; Hausen Harald Zur
Priority date: 1997-08-13
Filing date: 1998-08-12
Publication date: 1999-09-16
Also published as: DE19735118C1; WO1999009177A2; WO1999009177A3; JP2001514895A; EP1003877A2; US6488935B1

Abstract

Die Erfindung betrifft eine DNA, die für ein Peptid eines Papillomvirus-Hauptcapsid-Proteins bzw. ein Papillomvirus-Genom codiert. Des weiteren betrifft die Erfindung durch das Papillomvirus-Genom codierte Proteine und gegen sie gerichtete Antikörper sowie deren Verwendung in Diagnose, Therapie und Vakzinierung.

Claims

14 GEÄNDERTE ANSPRÜCHE[beim Internationalen Büro am 26. Juli 1999 (26.07.99) eingegangen; ursprüngliche Ansprüche 1 und 2 geänderte; alle weiteren Ansprüche unverändert (3 Seiten)]

1. DNA, codierend für ein Peptid eines Papillomvirus- Haup t c a s i d- Pr o t e i ns , wobei das Peptid die A inosäuresequenz von Fig. 1, Fig. 2, Fig. 3, Fig. 4, Fig. 5, Fig. 6 oder Fig. 7 oder eine davon durch ein oder mehrere Aminosäuren unterschiedliche Aminosäuresequenz umfaßt, und die DNA durch folgende Verfahrensschritte erhältlich ist:

(a) Isolierung der Gesamt-DNA aus einer Biopsie epithelialen Neoplasmas,

(b) Hybridisierung der Gesamt-DNA von (a) mit einer DNA von Fig. 1, Fig. 2, Fig. 3, Fig. 4, Fig. 5, Fig. 6 oder Fig. 7, wodurch ein in der Gesamt-DNA von (a) enthaltenes Papillomvirus-Genom nachgewiesen wird, und

(c) Klonierung der das Papillomvirus-Genom enthaltenden Gesamt-DNA von (a) in einem Vektor sowie Sequenzierung des Klons,

wobei die DNA der letzteren Aminosäuresequenz zu der DNA von Fig. 1, Fig. 2, Fig. 3, Fig. 4, Fig. 5, Fig. 6 oder Fig. 7 eine Homologie von mindestens 90 % aufweist.

2. DNA nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die für das Peptid des Papillomvirus-Hauptcapsid-Proteins codierende DNA die Basensequenz von Fig. 1, Fig. 2, Fig. 3, Fig. 4, Fig. 5, Fig. 6 oder Fig. 7, oder eine davon durch ein oder mehrere Basenpaare unterschiedliche Basensequenz umfaßt, und die DNA durch folgende Verfahrensschritte erhältlich ist:

(a) Isolierung der Gesamt-DNA aus einer Biopsie epithelialen Neoplasmas,

(b) Hybridisierung der Gesamt-DNA von (a) mit einer DNA von Fig. 1, Fig. 2, Fig. 3, Fig. 4, Fig. 5, Fig. 6 oder Fig. 7, wodurch ein in der Gesamt-DNA von (a) 15 enthaltendes Papillomvirus-Genom nachgewiesen wird, und (c) Klonierung der das Papillomvirus-Genom enthaltenden Gesamt-DNA von (a) in einem Vektor sowie Sequenzierung des Klons,

wobei die DNA der letzteren Basensequenz zu der DNA von Fig. 1, Fig. 2, Fig. 3, Fig. 4, Fig. 5, Fig. 6 oder Fig. 7 eine Homologie von mindestens 90 % aufweist.

3. DNA nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß die DNA ein Papillomvirus-Genom umfaßt.

4. Protein, codiert durch das Papillomvirus-Genom nach Anspruch 3.

5. Protein nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß das Papillomvirus-Hauptcapsid-Protein als Virus-ähnliches Partikel vorliegt.

6. Protein nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß das Virus-ähnliche Partikel auch ein Papillomvirus- Nebencapsid-Protein enthält.

7. Expressionsvektor, umfassend eine für das Protein nach Anspruch 4 codierende DNA.

8. Transformante, enthaltend den Expressionsvektor nach Anspruch 7.

9. Verfahren zur Herstellung des Proteins nach Anspruch 4, umfassend die Kultivierung der Transformante nach Anspruch 8 unter geeigneten Bedingungen.

10. Antikörper, gerichtet gegen das Protein nach einem der Ansprüche 4-6.

11. Verwendung der DNA nach einem der Ansprüche 1-3 als 16

11. Verwendung der DNA nach einem der Ansprüche 1-3 als Reagens zur Diagnose.

12. Verwendung des Proteins nach einem der Ansprüche 4-6 als Reagens zur Diagnose, Therapie und/oder Vakzinierung.

13. Verwendung nach Anspruch 11 oder 12, wobei die Diagnose Papillomvirus-Infektionen bzw. -Erkrankungen betrifft.

14. Verwendung nach Anspruch 12, wobei die Therapie und/oder Vakzinierung Papillomvirus-Infektionen bzw. -Erkrankungen betrifft.

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IN ARTIKEL 19 GENANNTE ERKLÄRUNG

Als Stand der Technik werden die folgenden Entgegenhaltungen genannt:

(E1) WO 98 42847 A,

(E2) R.J. Berkhout et al., EMBL Sequence Database, 10. Juli 1995, XP002105379,

(E3) R. Hopfl et al., EMBL Sequence Database, 13. Febr. 1997, XP002105380,

(E4) WO 97 04099 A,

(E5) WO 95 30754 A,

(E6) V. Shamanin et al., J. Natl. Cancer Inst., Bd. 88, Nr. 12, 19. Juni 1996, S. 802-

811, (E7) W.E. Piercall et al., J. Invest. Dermatology, Bd. 97, Nr. 5, Nov. 1991 , S. 880-884, (E8) V. Shamanin et al., Cancer Research, Bd. 54, Nr. 17, 1. Sept. 1994, S. 4610-

4613, (E9) V. Shamanin et al., Journal of General Virology, Bd. 75, Nr. 5, Mai 1994, S.1149-

1156, (E10) Kirnbauer, R. et al., Journal of Virology, Bd. 67, Nr. 12, Dez. 1993, S. 6929- 18 (E11) Delius, H. et al., Current Topics in Microbiology and Immunology, Bd. 186, 1994,

S. 13-31 ,

(E12) S.-Y. Chan et al., J. Virology, Bd. 66, Nr. 10, Okt. 1992, S. 5714-5725,

(E13) EP 0 235 004 A,

(E14) EP 0 451 550 A,

(E15) G. Astori et al., EMBL Sequence Database, 11. Aug. 1998, XP002094683,

(E16) E.M. de Villiers et al., EMBL Sequence Database, 11. Aug. 1998, XP002105381 ,

(E17) G. Astori et al., J. Invest. Dermatology, Bd. 110, Nr. 5, Mai 1998, S. 752-755,

(E18) WO 98 23752 A,

(E19) DE 197 35 118 C.

(E1) ist ein Dokument, das nur hinsichtlich der Neuheit des Gegenstandes der vorliegenden Anmeldung herangezogen werden kann. (E1) beschreibt eine für ein Peptid eines Papillomvirus-Hauptcapsid-Proteins kodierende DNA und ein solches Peptid sowie deren Verwendung in Diagnose, Therapie und Vakzinierung (vgl. (E1), Ansprüche 1-14 und Abstract).

(E2) beschreibt die DNA- und Aminosäuresequenz eines HPV-L1 Proteins (AAA 74308.1) (vgl. (E2), gesamt).

(E3) beschreibt die DNA- und Aminosäuresequenz eines HPV-L1 Proteins (AAB 61639.1) (vgl. (E3), gesamt).

(E4) beschreibt eine für ein Peptid eines Papillomvirus-Hauptcapsid-Proteins kodierende DNA und ein solches Peptid sowie deren Verwendung in Diagnose, Therapie und Vakzinierung (vgl. (E4), Ansprüche 1-18 und Abstract).

(E5) beschreibt eine für ein Peptid eines Papillomvirus-Hauptcapsid-Proteins kodierende DNA und ein solches Peptid sowie deren Verwendung in Diagnose, Therapie und Vakzinierung (vgl. (E5), Ansprüche 1-20 und Abstract).

(E6) beschreibt die Identifizierung von HPVs in Hauttumoren mittels einer PCR-Re- aktion, in der degenerierte Primer für die HPV L1 -Region verwendet werden (vgl. (E6), 19 Background).

(E7) beschreibt die Identifizierung von HPVs in Hauttumoren mittels einer PCR-Re- aktion, in der Primer für die HPV E6-E7 Region verwendet werden (vgl. (E7), Abstract).

(E8) beschreibt die Identifizierung von HPVs in Hauttumoren mittels einer PCR-Re- aktion, in der degenerierte Primer für HPV-Sequenzen verwendet werden (vgl. (E8), Abstract).

(E9) beschreibt die Identifizierung von HPVs in Lungentumoren mittels einer PCR- Reaktion, in der degenerierte Primer für die HPV L1- bzw. E1 -Region verwendet werden (vgl. (E9), Abstract).

(E10) beschreibt die Expression eines HPV16-L1 Proteins in Insektenzellen und die Ausbildung von "virus-like particles" (VLPs) (vgl. (E10), Abstract).

(E11) beschreibt eine Primer-gerichtete Sequenzierung von HPVs und den Vergleich von Homologien zwischen HPV-Typen (vgl. (E11), gesamt).

(E12) beschreibt eine phylogenetische Analyse von 48 Papillomvirus-Typen und 28 Subtypen (vgl. (E12), Abstract).

(E13) beschreibt DNAs von HPVs und ihre Verwendung in Diagnose (vgl. (E13), Ansprüche 1-9 und Abstract).

(E14) beschreibt Serum-reaktive Epitope der HPV 16 Proteine E4, E6, E7 und L1 und solche Epitope enthaltende Peptide sowie deren Verwendung in Diagnose und Vakzinierung (vgl. (E14), Ansprüche 1-14 und Abstract).

(E15), (E16) und (E17) stellen wegen Nachveröffentlichung keinen Stand der Technik dar. 20 (E18) ist ein Dokument, das nur hinsichtlich der Neuheit des Gegenstandes der vorliegenden Anmeldung herangezogen werden kann. (E18) beschreibt eine für ein

Peptid eines Papillomvirus-Hauptcapsid-Proteins kodierende DNA und ein solches

Peptid sowie deren Verwendung in Diagnose, Therapie und Vakzinierung (vgl. (E18),

Ansprüche 1-14 und Abstract).

(E19) stellt die Priorität begründende Anmeldung der vorliegenden Anmeldung dar.

Der neue Anspruch 1 wurde gegenüber (E1)-(E14) und (E18) abgegrenzt. Er spezifiziert eine DNA, die für ein Peptid eines Papillomvirus-Hauptcapsid-Proteins kodiert, wobei das Peptid die Aminosäuresequnez von Fig. 1 , Fig. 2, Fig. 3, Fig. 4, Fig. 5, Fig. 6 oder Fig. 7 oder eine davon durch ein oder mehrere Aminosäuren unterschiedliche Aminosäuresequenz umfaßt und die DNA durch folgende Verfahrensschritte erhältlich ist:

(a) Isolierung der Gesamt-DNA aus einer Biopsie epithelialen Neoplasmas,

(b) Hybridisierung der Gesamt-DNA von (a) mit einer DNA von Fig. 1 , Fig. 2, Fig. 3, Fig. 4, Fig. 5, Fig. 6 oder Fig. 7, wodurch ein in der Gesamt- DNA von (a) enthaltenes Papillomvirus-Genom nachgewiesen wird, und

wobei die DNA der letzteren Aminosäuresequenz zu der DNA von Fig. 1 , Fig. 2, Fig. 3, Fig. 4, Fig. 5, Fig. 6 oder Fig. 7 eine Homologie von mindestens 90 % aufweist.

Eine solche DNA wird durch keine der Entgegenhaltungen (E1)-(E14) und (E18) beschrieben. Auch wird sie nicht durch die Entgegenhaltungen (E2)-(E14) nahegelegt. 21 Somit ist der Gegenstand des neuen Anspruchs 1 neu und erfinderisch gegenüber dem zitierten Stand der Technik. Gleiches gilt für die Gegenstände der neuen Ansprüche 2-14, schon wegen ihres Rückbezuges auf den neuen Anspruch 1.