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WO1998034637A1 - Utilisation d'un polypeptide, pour obtenir une composition pour detecter, prevenir ou traiter une maladie degenerative et/ou auto-immune - Google Patents

Utilisation d'un polypeptide, pour obtenir une composition pour detecter, prevenir ou traiter une maladie degenerative et/ou auto-immune Download PDF

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WO1998034637A1
WO1998034637A1 PCT/FR1998/000236 FR9800236W WO9834637A1 WO 1998034637 A1 WO1998034637 A1 WO 1998034637A1 FR 9800236 W FR9800236 W FR 9800236W WO 9834637 A1 WO9834637 A1 WO 9834637A1
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WO
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protein
sequence
seq
polypeptide
degenerative
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Application number
PCT/FR1998/000236
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Bernard Mandrand
Hervé Perron
Marie-Hélène Charles
Carine Malcus-Vocanson
Glaucia Baccala
Rainer Bischoff
Hanno Kolbe
Dominique Roecklin
Original Assignee
Bio Merieux
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Publication date
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Definitions

  • the present invention relates to the use of at least one polypeptide, for obtaining a diagnostic, prophylactic or therapeutic composition intended to detect, prevent or treat a pathological condition associated with a degenerative and / or autoimmune disease.
  • a degenerative disease means a disease in which a process of cell death or cell destruction is associated with physiological and / or clinical disorders.
  • autoimmune disease means a hyperreactivity of the immune system with respect to one or more autoantigens; we classify in particular in autoimmune diseases, multiple sclerosis (MS), rheumatoid arthritis (RA) and lupus erythematosus.
  • the polypeptide comprises at least one fragment of a protein, said protein having, in the native state, a sequence which comprises SEQ ID NO: 1, identified at the end of the description.
  • polypeptide is meant a peptide, in the isolated state, having a sequence of a variable number of amino acids, such as an oligopeptide, a protein, a fusion protein, a peptide of fusion, a synthetic peptide.
  • a polypeptide can be obtained by various techniques well known to those skilled in the art, and in particular by chemical synthesis or by genetic recombination techniques.
  • a polypeptide of the invention can be glycosylated, and thus can consist of a glycoprotein.
  • protein fragment is understood according to the invention, a chain of at least 5 consecutive amino acids, or 5 non-consecutive neighboring amino acids defining an epitope, an active site or a specific interaction domain, including in the peptide sequence of said protein.
  • the polypeptide advantageously comprises at least one fragment of the protein, which has, in the native state, a sequence which comprises SEQ ID NO: 2, and preferably SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 or SEQ ID NO: 5, identified at the end of the description.
  • said protein is glycosylated, and optionally said fragment itself is glycosylated.
  • the protein can in particular be chosen from the group of proteins produced by eosinophilic granulocytes and / or that of proteins having ribonuclease activity.
  • said protein is chosen from the group which consists of the neurotoxin derived from eosinophils (EDN) (SEQ ID NO: 13), the cationic eosinophil protein (ECP) (SEQ ID NO: 14), the hepatic ribonuclease human (HLR) (SEQ ID NO: 15), and human non-secreted ribonuclease (HNSR) (SEQ ID NO: 16).
  • EDN neurotoxin derived from eosinophils
  • ECP cationic eosinophil protein
  • HLR hepatic ribonuclease human
  • HNSR human non-secreted ribonuclease
  • said polypeptide consists of said protein.
  • said polypeptide consists of the protein EDN.
  • polypeptide (s) may be used alone or as a mixture, while d others can only be used in a mixture of at least two polypeptides.
  • polypeptide consists of the cationic eosinophil protein (ECP)
  • ECP cationic eosinophil protein
  • Another object of the invention is the use of a specific ligand for the polypeptide defined above, for obtaining a diagnostic, prophylactic or therapeutic composition intended to detect, prevent or treat a pathological condition associated with a degenerative disease and / or autoimmune.
  • the present invention also relates to the use of a nucleotide fragment, for obtaining a diagnostic, prophylactic or therapeutic composition intended to detect, prevent or treat a pathological condition associated with a degenerative and / or autoimmune disease.
  • said nucleotide fragment is chosen from the group comprising first fragments which code for the peptide sequence SEQ ID NO: 1, second fragments complementary to the first fragments, and third fragments having at least 70% homology with the first or second fragments.
  • said nucleotide fragment comprises the sequence SEQ ID NO: 6 or its complementary sequence.
  • a nucleotide fragment is a chain of monomers, or a biopolymer, characterized by the informational sequence of natural nucleic acids, capable of hybridizing to any other nucleotide fragment under predetermined conditions, the chain can contain monomers of different chemical structures and be obtained from a natural nucleic acid molecule and / or by genetic recombination and / or by chemical synthesis.
  • a monomer can be a natural nucleotide of nucleic acid, the constituent elements of which are a sugar, a phosphate group and a nitrogenous base; in RNA the sugar is ribose, in DNA the sugar is dexyxy-2-ribose; depending on whether it is DNA or RNA, the nitrogen base is chosen from adenine, guanine, uracil, cytosine, thymine; or the nucleotide can be modified in at least one of the three constituent elements; by way of example, the modification can take place at the base level, generating modified bases such as inosine, methyl-5-deoxycytidine, deoxyuridine, dimethylamino-5-deoxyuridine, diamino-2, 6-purine , bromo-5-deoxyuridine and any other modified base promoting hybridization; at the sugar level, the modification may consist in the replacement of at least one deoxyribose by a polyamide, and at the phosphate group level,
  • informational sequence is meant any ordered sequence of monomers, the chemical nature and order in a reference sense or not constitute functional information of the same quality as that of natural nucleic acids.
  • hybridization is meant the process during which, under appropriate operating conditions, two nucleotide fragments, having sufficiently complementary sequences, combine to form a complex structure, in particular double or triple, preferably in the form of a helix.
  • Homology characterizes the degree of identity of two compared nucleotide fragments; it is measured by the percentage of identity which is notably determined by direct comparison of nucleoditic sequences, compared with reference nucleotide sequences,
  • a method for detecting a protein associated with a degenerative and / or autoimmune disease, in a biological sample according to which the biological sample is brought into contact with a specific ligand of a polypeptide of the invention, then it is detected forming a complex between said polypeptide and said ligand;
  • said ligand being in particular an antibody capable of recognizing said protein, or a substrate of said protein, or a receptor of said protein;
  • the biological sample is chosen from the group comprising cerebrospinal fluid, serum and urine.
  • Examples 1 to 4 below in a particular application to multiple sclerosis.
  • the study involved the urine of patients with known multiple sclerosis (MS), as well as healthy controls with no known pathology.
  • MS multiple sclerosis
  • One-dimensional electrophoresis gels were performed on both the MS urine and the control urine. Proteins with a molecular weight of less than 20,000 daltons were studied and, within this category, different proteins between MS and control urines were sought.
  • SEP crude urine sequencing was performed after SDS-PAGE gel electrotransfer on a Pora Blot membrane sold by the company PALL. Urine deposits are made in the wells of an SDS gel (15.1% T, 1.14% C, thickness 0.5 mm). After migration of the proteins, a transfer to a 0.22 ⁇ m Pora Blot membrane is carried out in a 50 inM Tris borate buffer, pH 8.3, for 16 hours. After staining with Rouge Ponceau and analysis of the bands obtained, the bands corresponding to proteins of around 10-20 kD were sequenced.
  • - SEQ ID NO: 7 having a homology with the precursor of the glycoprotein CD 59
  • - SEQ ID NO: 8 having a homology with the neurotoxin derived from eosinophile (EDN).
  • Ammonium sulphate precipitation is carried out on the urine pools.
  • the percentage of 60% of saturated ammonium sulphate for 40% of urine or 390 g of ammonium sulphate per liter of urine is that which leads to the best yield of precipitation in low molecular weight proteins.
  • the separation technique used is size exclusion chromatography based on the difference in size and shape of the proteins to be eluted. During the elution,. proteins of low molecular mass will be retained and therefore eluted more late than large molecules. Purifications are carried out on HPLC with a TosoHaas TSK column
  • Prep G 3000 S (characteristic of the column: grafted silica support, diameter 21.5 mm, length 300 mm, the exclusion limit in molecular weight is 500,000 daltons).
  • the elution buffer used contains 100 mM phosphate, 100 mM Na S0, pH 6.8. The optimal flow is 2.5 ml / min. The protein mixture is separated in 60 min. Only the fraction corresponding to a mass of 15-
  • Protein level checks are carried out at each stage.
  • SDS-PAGE gel controls allow monitoring of urine protein analysis and the degree of purification.
  • the lyophilized samples are taken up for sequencing.
  • the sequencing of purified MS and control urine was also carried out after electrotransfer of gel in two dimensions: first dimension, Immobiline (trademark) pH 3 to 10, then second dimension, SDS-PAGE (14-17%) and transfer on Pora Blot membrane (PALL).
  • first dimension Immobiline (trademark) pH 3 to 10
  • second dimension SDS-PAGE (14-17%) and transfer on Pora Blot membrane (PALL).
  • SEQ ID NO: 11 is found which has homology with EDN. This sequence is also found in 4 different pools of purified urine.
  • the sequence SEQ ID NO: 12 is found which has homology with the precursor of the spasmolitic polypeptide.
  • the sequencing of purified MS and control urine was then carried out after passage of the purified urine samples on a high performance liquid chromatography column with reverse phase polarity.
  • the polypeptides are separated according to their hydrophobicity.
  • the column used is a Brownlee C8 rp 300 column, (column characteristic: particle diameter 7 ⁇ m, pore diameter 300 ⁇ , column length 30 mm, column diameter 2.1 mm). Elution is done using a gradient.
  • Buffer A consists of an aqueous phase containing 0.1% trifluoroacetic acid (TFA) in water and buffer B of an organic phase containing acetonitrile composed of 0.09% TFA in 80% acetonitrile.
  • the gradient corresponds to 0.7% of "acetonitrile per min, a flow rate of 100 .mu.l per min, the detection wavelength is 205 nm.
  • the lyophilization product is taken up with a 0.5 M urea buffer.
  • Each protein peak obtained on the chromatogram is sequenced and checked on SDS-PAGE gel. On MS urine, the peak eluted at the retention time 42-43 min having a mass of 17,000 Daltons has been identified. Its sequence SEQ ID NO: 11 has homology with EDN. This sequence is found in 3 different purified urine pools. At the retention time 40 min, the peak is identified as having a homology with the precursor of the spasmolitic polypeptide. At the retention time 47 min, the peak is identified as corresponding to the light chain of the IgG immunoglobulins.
  • control urines have the same peaks at the retention time 40 min identified as the precursor of the spasmolitic polypeptide and 47 min identified as the light chain of IgG; only the peak at retention time
  • This protein therefore constitutes a marker which can be used to follow this pathology.
  • the protein can be cloned, expressed in a vector in a euraryotic or prokaryotic vector and used to produce antibodies allowing the development of a qualitative and / or quantitative munological test.
  • an assay method can use a combination of antibodies and lectin (s).
  • the protein can also be used to develop a serological test aimed at detecting the presence of antibodies directed against this protein.
  • Antibodies can also be produced against an immune complex, protein-antibody, for the detection of the latter in a biological sample.
  • the enzymatic activity of the protein can be used for its detection using appropriate substrate (s).
  • the RNA coding for this protein can be detected in a biological sample by the application of techniques known per se.
  • C CITY: MARCY L'ETOILE
  • E COUNTRY: FRANCE
  • F POSTAL CODE: 69280
  • Xaa represents Lys or Arg (ix) CHARACTERISTIC:
  • Xaa represents any amino acid.
  • CHARACTERISTIC
  • Xaa represents any amino acid.
  • CHARACTERISTIC
  • TYPE amino acids
  • MOLECULE protein
  • SEQ ID NO: 14 Peptide sequence of the cationic eosinophil protein (ECP) and identified in the article by HF ROSENBERG et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 86, 4460-4464 (1989).
  • HLR human hepatic ribonuclease
  • HNSR human non-secreted ribonuclease

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Abstract

Utilisation d'un polypeptide comprenant au moins un fragment d'une protéine, pour obtenir une composition diagnostique, prophylactique ou thérapeutique destinée à détecter, prévenir ou traiter un état pathologique associé à une maladie dégénérative et/ou auto-immune, ladite protéine ayant, à l'état natif, une séquence qui comprend SEQ ID NO: 1.

Description

Utilisation d'un polypeptide, pour obtenir une composition pour détecter, prévenir ou traiter une maladie dégénérative et/ou auto-immune
La présente invention concerne l'utilisation d'au moins un polypeptide, pour obtenir une composition diagnostique, prophylactique ou thérapeutique destinée à détecter, prévenir ou traiter un état pathologique associé à une maladie dégénérative et/ou auto-immune. Selon l'invention, on entend par "une maladie dégénérative" , une maladie dans laquelle un processus de mort cellulaire ou de destruction cellulaire est associé aux troubles physiologiques et/ou cliniques. On entend par "maladie auto-immune" , une hyperréactivité du système immunitaire vis-à-vis de un ou plusieurs auto-antigènes ; on classe notamment dans les maladies auto-immunes, la sclérose en plaques (SEP) , la polyarthrite rhumatoïde (PR) et le lupus érythémateu .
Selon l'invention, le polypeptide comprend au moins un fragment d'une protéine, ladite protéine ayant, à l'état natif, une séquence qui comprend SEQ ID NO: 1, identifiée en fin de description.
Par "polypeptide" selon l'invention, on désigne un peptide, à l'état isolé, présentant un enchaînement d'un nombre variable d'acides aminés, tel qu'un oligopeptide, une protéine, une protéine de fusion, un peptide de fusion, un peptide de synthèse. Un polypeptide peut être obtenu par différentes techniques bien connues de l'homme du métier, et notamment par synthèse chimique ou par des techniques de recombinaison génétique. Ainsi il peut être obtenu par des méthodes de synthèse classique, par exemple dans un synthétiseur automatique de peptides, ou par les techniques de génie génétique comprenant l'insertion d'une séquence d'ADN codant pour ledit polypeptide dans un vecteur d'expression tel qu'un plasmide ou un virus, et la transformation de cellules avec ce vecteur d'expression et culture de ces cellules eucaryotes ou procaryotes.
Un polypeptide de l'invention peut être glycosylé, et il peut ainsi consister en une glycoprotéine. Par "fragment d'une protéine", on comprend selon l'invention, un enchaînement d'au moins 5 acides aminés consécutifs, ou 5 acides aminés voisins non consécutifs définissant un épitope, un site actif ou un domaine d'interaction spécifique, compris dans la séquence peptidique de ladite protéine.
Par "séquence de la protéine à l'état natif", on comprend la succession d'acides aminés telle qu'elle est retrouvée dans la structure primaire de la protéine produite dans une cellule. Conformément à la présente invention, le polypeptide comprend avantageusement au moins un fragment de la protéine, qui présente, à l'état natif, une séquence qui comprend SEQ ID NO: 2, et de préférence SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 ou SEQ ID NO: 5, identifiées en fin de description.
Selon une utilisation préférentielle du polypeptide, ladite protéine est glycosylée, et éventuellement ledit fragment lui-même est glycosylé.
La protéine peut notamment être choisie dans le groupe des protéines produites par les granulocytes éosinophiles et/ou celui des protéines ayant une activité ribonucléasique.
En particulier, ladite protéine est choisie dans le groupe qui consiste en la neurotoxine dérivée d'éosinophile (EDN) (SEQ ID NO: 13), la protéine cationique d'éosinophile (ECP) (SEQ ID NO: 14), la ribonucléase hépatique humaine (HLR) (SEQ ID NO: 15) , et la ribonucléase non-sécrétée humaine (HNSR) (SEQ ID NO: 16) . Selon une utilisation préférée du polypeptide de l'invention, celui-ci comprend un fragment de la protéine. qui correspond à un site actif de la protéine, notamment un site enzymatique, tel que celui d'une ribonucléase, ou il comprend un fragment de la protéine, qui correspond à un ou plusieurs épitopes de la protéine. Avantageusement, ledit polypeptide consiste en ladite protéine.
Dans une application particulière à la détection ou au traitement de la sclérose en plaques, ledit polypeptide consiste en la protéine EDN.
En fonction du choix de polypeptide (s) retenu (s) , et aux fins d'une application appropriée de ce (s) polypeptide (s) conformément à l'invention, certains polypeptides pourront être utilisés seuls ou en mélange, alors que d'autres ne pourront être utilisés qu'en mélange d'au moins deux polypeptides. Ainsi lorsque le polypeptide consiste en la protéine cationique d'éosinophile (ECP) , il convient de l'utiliser en combinaison avec au moins un autre polypeptide de l'invention.
Un autre objet de l'invention est l'utilisation d'un ligand spécifique du polypeptide défini ci-dessus, pour obtenir une composition diagnostique, prophylactique ou thérapeutique destinée à détecter, prévenir ou traiter un état pathologique associé à une maladie dégénérative et/ou auto-immune.
La présente invention concerne aussi l'utilisation d'un fragment nucleotidique, pour obtenir une composition diagnostique, prophylactique ou thérapeutique destinée à détecter, prévenir ou traiter un état pathologique associé à une maladie dégénérative et/ou auto-immune. Selon l'invention, ledit fragment nucleotidique est choisi dans le groupe comprenant des premiers fragments qui codent pour la séquence peptidique SEQ ID NO: 1, des seconds fragments complémentaires des premiers fragments, et des troisièmes fragments ayant au moins 70 % d'homologie avec les premiers ou les seconds fragments. Avantageusement, ledit fragment nucleotidique comprend la séquence SEQ ID NO: 6 ou sa séquence complémentaire. Selon l'invention, un fragment nucleotidique est un enchaînement de monomères, ou un biopolymère, caractérisé par la séquence informationnelle des acides nucléiques naturels, susceptibles de s'hybrider à tout autre fragment nucleotidique dans des conditions prédéterminées, l'enchaînement pouvant contenir des monomères de structures chimiques différentes et être obtenu à partir d'une molécule d'acide nucléique naturelle et/ou par recombinaison génétique et/ou par synthèse chimique.
Ainsi un monomère peut être un nucléotide naturel d'acide nucléique, dont les éléments constitutifs sont un sucre, un groupement phosphate et une base azotée; dans l'ARN le sucre est le ribose, dans l'ADN le sucre est le dêsoxy-2-ribose; selon qu'il s'agit de l'ADN ou l'ARN, la base azotée est choisie parmi l'adénine, la guanine, l'uracile, la cytosine, la thymine; ou le nucléotide peut être modifié dans l'un au moins des trois éléments constitutifs ; à titre d'exemple, la modification peut intervenir au niveau des bases, générant des bases modifiées telles que l'inosine, la méthyl-5- désoxycytidine, la désoxyuridine, la diméthylamino-5- désoxyuridine, la diamino-2 , 6-purine, la bromo-5- désoxyuridine et toute autre base modifiée favorisant l'hybridation; au niveau du sucre, la modification peut consister dans le remplacement d'au moins un désoxyribose par un polyamide, et au niveau du groupement phosphate, la modification peut consister dans son remplacement par des esters, notamment choisis parmi les esters de diphosphate, d'alkyl et arylphosphonate et de phosphorothioate.
Par "séquence informationnelle", on entend toute suite ordonnée de monomères, dont la nature chimique et l'ordre dans un sens de référence, constituent ou non une information fonctionnelle de même qualité que celle des acides nucléiques naturels. Par hybridation, on entend le processus au cours duquel, dans des conditions opératoires appropriées, deux fragments nucléotidiques, ayant des séquences suffisamment complémentaires, s'apparient pour former une structure complexe, notamment double ou triple, de préférence sous forme d'hélice.
L'homologie caractérise le degré d'identité de deux fragments nucléotidiques comparés ; elle se mesure par le pourcentage d'identité qui est notamment déterminé par comparaison directe de séquences nucleoditiques, par rapport à des séquences nucléotidiques de référence,
D'autres objets de l'invention sont :
- un procédé pour détecter une protéine associée à une maladie dégénérative et/ou auto-immune, dans un échantillon biologique, selon lequel on met l'échantillon biologique en contact avec un ligand spécifique d'un polypeptide de l'invention, puis on détecte la formation d'un complexe entre ledit polypeptide et ledit ligand ; ledit ligand étant notamment un anticorps susceptible de reconnaître ladite protéine, ou un substrat de ladite protéine, ou un récepteur de ladite protéine ;
- un procédé pour détecter un anticorps associé à une maladie auto-immune, dans un échantillon biologique, selon lequel on met l'échantillon biologique en contact avec un polypeptide de l'invention, puis on détecte la formation d'un complexe entre ledit polypeptide et ledit anticorps.
Avantageusement pour mettre en oeuvre les procédés précités, on choisit l'échantillon biologique dans le groupe comprenant le liquide céphalo-rachidien, le sérum et l'urine.
La présente invention est illustrée par les
Exemples 1 à 4 suivants, dans une application particulière à la sclérose en plaques. L'étude a porté sur des urines de patients ayant une sclérose en plaques (SEP) avérée, ainsi que sur des témoins sains sans pathologie connue.
EXEMPLE l : Séquençage d'urine brute
Des gels d'électrophorèse en une dimension ont été effectués aussi bien sur les urines SEP que sur les urines témoins. Les protéines de poids moléculaire inférieur à 20 000 daltons ont été étudiées et, à l'intérieur de cette catégorie, des protéines différentes entre les urines SEP et témoins ont été recherchées.
Le séquençage d'urine brute SEP a été réalisé après électrotransfert de gel SDS-PAGE sur membrane Pora Blot commercialisée par la société PALL. Des dépôts d'urine sont effectués dans les puits d'un gel SDS (15,1 % T, 1,14 % C, épaisseur 0,5 mm). Après migration des protéines, un transfert sur membrane Pora Blot 0,22 μm est effectué dans un tampon Tris borate 50 inM, pH 8,3, durant 16 heures. Après coloration au Rouge Ponceau et analyse des bandes obtenues, les bandes correspondant à des protéines d'environ 10-20 kD ont été séquencées.
Parallèlement des urines de témoins sains ont été analysées de la même manière. Dans les urines positives, on a retrouvé deux séquences principales que l'on peut identifier dans les banques de données :
- SEQ ID NO: 7 présentant une homologie avec le précurseur de la glycoprotéine CD 59, et - SEQ ID NO: 8 présentant une homologie avec la neurotoxine dérivée d'éosinophile (EDN) .
Une séquence minoritaire peut bien sûr être masquée par ces séquences qui sont majoritaires, et une séquence bloquée peut également être présente. Dans les urines négatives, on a aussi retrouvé deux séquences principales que l'on peut identifier dans les banques de données :
- une séquence majoritaire SEQ ID NO: 9 présentant une homologie avec le précurseur du polypeptide spasmolitique, et
- une séquence minoritaire SEQ ID NO: 10 présentant une homologie avec le précurseur de la glycoprotéine CD 59.
EXEMPLE 2 : Purification des urines
Des pools d'urines SEP et de témoins sains ont été purifiés afin d'obtenir une concentration en protéines plus élevée et d'éliminer au maximum les protéines de haut poids moléculaire. a) Première étape : précipitation
Des précipitations au sulfate d'ammonium sont menées sur les pools d'urine. Le pourcentage de 60 % de sulfate d'ammonium saturé pour 40 % d'urine soit 390 g de sulfate d'ammonium par litre d'urine est celui qui conduit au meilleur rendement de précipitation en protéines de bas poids moléculaire.
La précipitation est effectuée durant 2 x 8 heures, à température ambiante, sous agitation. La nuit, entre les deux journées, les flacons sont laissés à +4°C. Après centrifugation de l'urine précipitée, le culot obtenu est repris dans un tampon Tris 20 mM contenant des ions divalents (CaCl2 1 mM) et de l'urée à 0,25 M (proche du taux physiologique) . Ce tampon a été déterminé après de nombreux essais en petit volume et a permis une meilleure dissolution des protéines. b) Deuxième étape : purification
La technique de séparation utilisée est une chromatographie d'exclusion stérique basée sur la différence de taille et de forme des protéines à éluer. Au cours de l'élution, . les protéines de faible masse moléculaire seront retenues et donc éluées plus tardivement que les grosses molécules. Les purifications sont effectuées sur HPLC avec une colonne TosoHaas TSK
Prep G 3000 S , (caractéristique de la colonne : support silice greffée, diamètre 21,5 mm, longueur 300 mm, la limite d'exclusion en masse moléculaire est de 500 000 daltons). Le tampon d'élution utilisé contient du phosphate 100 mM, Na S0 100 mM, à pH 6,8. Le débit optimal est 2,5 ml/min. La séparation du mélange de protéines s'effectue en 60 min. Seule la fraction correspondant à une masse de 15-
20 000 Daltons (temps de rétention 42-50 min) est conservée. Cette fraction est dialysée contre un tampon Tris 20 mM CaCl2 0,2 mM, pH 7 , 2 puis lyophilisée.
Des contrôles en taux de protéines sont effectués à chaque étape.
Des contrôles sur gel SDS-PAGE permettent de suivre l'analyse des protéines de l'urine et le degré de purification.
Les échantillons lyophilisés sont repris en vue du séquençage.
EXEMPLE 3 : Séquençage d'urines purifiées réalisé à partir de protéines obtenues dans un gel à deux dimensions
Le séquençage d'urines purifiées SEP et témoin obtenues selon l'exemple 2, a été réalisé après électrotransfert de gel SDS-PAGE une dimension sur membrane Pora Blot (PALL) de manière identique à l'urine brute. L'analyse des "blots" colorés au Noir Amido permet de voir un degré de purification important avec des bandes restantes à 43 et 60 JD.
Le séquençage d'urines purifiées SEP et témoin a été aussi réalisé après électrotransfert de gel en deux dimensions : première dimension, Immobiline (marque de commerce) pH 3 à 10, puis deuxième dimension, SDS-PAGE (14-17%) et transfert sur membrane Pora Blot (PALL) . Dans les urines SEP purifiées, on retrouve uniquement la séquence SEQ ID NO: 11 qui présente une homologie avec EDN. Cette séquence est également retrouvée sur 4 pools différents d'urine purifiés. Dans les urines purifiées SEP et témoin, on retrouve la séquence SEQ ID NO: 12 qui présente une homologie avec le précurseur du polypeptide spasmolitique.
EXEMPLE 4 : Séquençage d'urines purifiées réalisé à partir de protéines obtenues sur une colonne de phase inverse
Le séquençage d'urines purifiées SEP et témoin a été ensuite réalisé après passage des échantillons d'urines purifiées sur colonne de chromatographie liquide haute performance à polarité de phase inversée. Les polypeptides sont séparés en fonction de leur hydrophobicité. La colonne utilisée est une colonne Brownlee C8 rp 300, (caractéristique de la colonne : diamètre de particules 7 μm, diamètre des pores 300 Â, longueur de la colonne 30 mm, diamètre de la colonne 2,1 mm). L'élution se fait à l'aide d'un gradient. Le tampon A est constitué d'une phase aqueuse contenant de l'acide trifluoroacétique (TFA) à 0,1 % dans l'eau et le tampon B d'une phase organique contenant de 1 'acétonitrile composée de 0,09 % de TFA dans 80 % d' acétonitrile. Le gradient correspond à 0,7 % d» acétonitrile par min, le débit est de 100 μl par min, la longueur d'onde de détection est de 205 nm. Avant injection, le produit de lyophilisation est repris avec un tampon urée 0,5 M. Chaque pic de protéine obtenu sur le chromatogramme est séquence et contrôlé sur gel SDS-PAGE. Sur les urines SEP, le pic élue au temps de rétention 42-43 min ayant une masse de 17 000 Daltons a été identifié. Sa séquence SEQ ID NO: 11 présente une homologie avec EDN. Cette séquence est retrouvée sur 3 pools d'urines différents purifiés. Au temps de rétention 40 min, le pic est identifié comme ayant une homologie avec le précurseur du polypeptide spasmolitique. Au temps de rétention 47 min, le pic est identifié comme correspondant à la chaîne légère des immunoglobulines IgG.
Les urines témoins présentent les mêmes pics au temps de rétention 40 min identifié comme le précurseur du polypeptide spasmolitique et 47 min identifié comme la chaîne légère des IgG ; seul le pic au temps de rétention
42 min n'apparaît pas.
En conclusion seule la séquence SEQ ID NO: 1 est retrouvée dans toutes les urines testées chez les patients SEP, et non pas chez les témoins.
Cette protéine constitue donc un marqueur utilisable pour suivre cette pathologie.
A titre d'exemples, la protéine peut être clonée, exprimée dans un vecteur dans un vecteur euraryote ou procaryote et utilisée pour produire des anticorps permettant de développer un test i munologique qualitatif et/ou quantitatif. Par ailleurs, une méthode de dosage peut utiliser une combinaison d'anticorps et de lectine(s) . La protéine peut aussi être utilisée pour développer un test sérologique visant à mettre en évidence la présence d'anticorps dirigés contre cette protéine. On peut également produire des anticorps dirigés contre un complexe immun, protéine-anticorps, en vue de la détection de ce dernier dans un échantillon biologique.
Par ailleurs, l'activité enzymatique de la protéine peut être utilisée en vue de sa détection à l'aide de substrat(s) approprié (s) . De même l'ARN codant pour cette protéine peut être détecté dans un échantillon biologique par l'application de techniques connues en soi. LISTAGE DE SEQUENCES
(1) INFORMATIONS GENERALES: (i) DEPOSANT:
(A) NOM: BIOMERIEUX
(B) RUE: AUCUNE
(C) VILLE: MARCY L'ETOILE (E) PAYS: FRANCE (F) CODE POSTAL: 69280
(ii) TITRE DE L'INVENTION: Utilisation d'un polypeptide, pour obtenir une composition pour détecter, prévenir ou traiter une maladie dégénérative et/ou auto-immune. (iii) NOMBRE DE SEQUENCES: 16 (iv) FORME DECHIFFRABLE PAR ORDINATEUR:
(A) TYPE DE SUPPORT: Floppy disk
(B) ORDINATEUR: IBM PC compatible
(C) SYSTEME D' EXPLOITATION: PC-DOS/MS-DOS
(D) LOGICIEL: Patentin Release #1.0, Version #1.30 (OEB) (vi) DEMANDE ANTERIEURE:
(A) DATE: 07 Février 1997
(B) NUMERO: FR-97 01772
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO:l : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 15 résidus d'acide aminé
(B) TYPE: acides aminés (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 1 (D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente un acide aminé quelconque, (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 7 (D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente un acide aminé quelconque, (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT: 9
(D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente un acide aminé quelconque, (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT: 10
(D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente un acide aminé quelconque, (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT: 12
(D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente un acide aminé quelconque. ( ix ) CARACTERISTIQUE :
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT: 13
(D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente un acide aminé quelconque.
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO:l : Xaa Pro Pro Gin Phe Thr Xaa Ala Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Gin His 1 5 10 15
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 2 :
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 15 résidus d'acide aminé (B) TYPE: acides aminés
(ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 1 (D) AUTRES INFORMATIONS:
Xaa représente Lys ou Arg (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 7
(D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente Trp ou Arg (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 9
(D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente Gin, Lys ou Thr. (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 10
(D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente Trp ou Lys. (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 12
(D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente Glx ou Ala. (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 13
(D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente Thr ou Ile ou Arg.
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 2 : Xaa Pro Pro Gin Phe Thr Xaa Ala Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Gin His 1 5 10 15
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 3 :
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 15 résidus d'acide aminé
(B) TYPE: acides aminés (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT: 7 (D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente Trp ou Arg. (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 10 (D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente Trp ou Lys. (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 13 (D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente Thr ou Ile ou Arg.
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 3 : Lys Pro Pro Gin Phe Thr Xaa Ala Gin Xaa Phe Glu Xaa Gin His 1 5 10 15
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: :
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 16 résidus d'acide aminé
(B) TYPE: acides aminés (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT: 7
(D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente Trp ou Arg.
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 4 : Lys Pro Pro Gin Phe Thr Xaa Ala Gin Trp Phe Glu Thr Gin His Ile 1 5 10 15
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 5 :
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 16 résidus d'acide aminé (B) TYPE: acides aminés
(ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 7
(D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente Trp ou Arg.
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 5 : Lys Pro Pro Gin Phe Thr Xaa Ala Gin Lys Phe Glu Thr Gin His Ile 1 5 10 15
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 6 :
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 48 paires de bases
(B) TYPE: nucléotide
(C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 6 : AAACCTCCAC AGTTTACCTG GGCTCAATGG TTTGAAACCC AGCACATC 48
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 7 :
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 16 résidus d'acide aminé
(B) TYPE: acides aminés (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 3
(D) AUTRES INFORMATIONS:
Xaa représente un acide aminé quelconque. (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 6
(D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente un acide aminé quelconque. (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT: 13 (D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente un acide aminé quelconque, (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 14 (D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente un acide aminé quelconque, (ix) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 15 (D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente un acide aminé quelconque.
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 7 : Leu Gin Xaa Tyr Asn Xaa Pro Asn Pro Thr Ala Asp Xaa Xaa Xaa Ala 1 5 10 15
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 8 :
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 16 résidus d'acide aminé
(B) TYPE: acides aminés (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide ( ix ) CARACTERISTIQUE :
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT: 7
(D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente un acide aminé quelconque.
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 8 : Lys Pro Pro Gin Phe Thr Xaa Ala Gin Trp Phe Glu Thr Gin His Ile 1 5 10 15
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 9 :
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 13 résidus d'acide aminé (B) TYPE: acides aminés
(ii) TYPE DE MOLECULE: peptide ( ix) CARACTERISTIQUE :
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 6
(D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente un acide aminé quelconque, (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 8
(D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente un acide aminé quelconque, (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 9
(D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente un acide aminé quelconque, (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 12
(D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente un acide aminé quelconque.
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 9 : Glu Lys Pro Ser Pro Xaa Gin Xaa Xaa Arg Leu Xaa Pro 1 5 10
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 10 :
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 14 résidus d'acide aminé
(B) TYPE: acides aminés (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 3
(D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente un acide aminé quelconque. (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT: 6 (D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente un acide aminé quelconque. ( ix ) CARACTERISTIQUE: (A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 13 (D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente un acide aminé quelconque.
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 10 : Leu Gin Xaa Tyr Asn Xaa Pro Asn Pro Thr Ala Asp Xaa Lys 1 5 10
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 11 :
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 16 résidus d'acide aminé
(B) TYPE: acides aminés (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière (B) EMPLACEMENT: 7
(D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente un acide aminé quelconque.
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 11 : Lys Pro Pro Gin Phe Thr Xaa Ala Gin Trp Phe Glu Thr Gin His Ile 1 5 10 15
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 12 :
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 13 résidus d'acide aminé (B) TYPE: acides aminés
(ii) TYPE DE MOLECULE: peptide (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 6 (D) AUTRES INFORMATIONS:
Xaa représente un acide aminé quelconque. (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 8
(D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente un acide aminé quelconque, (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 9
(D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente un acide aminé quelconque, (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: caractéristique particulière
(B) EMPLACEMENT: 12
(D) AUTRES INFORMATIONS: Xaa représente un acide aminé quelconque.
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 12 : Glu Lys Pro Ser Pro Xaa Gin Xaa Xaa Arg Leu Xaa Pro 1 5 10
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 13 :
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: résidus d'acide aminé
(B) TYPE: acides aminés (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 13 :
Séquence peptidique de la neurotoxine dérivée d'éosinophile (EDN) et identifiée dans l'article de H. F. ROSENBERG et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 86, 4460-4464 (1989).
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 14 :
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: résidus d'acide aminé
(B) TYPE: acides aminés (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 14 : Séquence peptidique de la protéine cationique d'éosinophile (ECP) et identifiée dans l'article de H. F. ROSENBERG et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 86, 4460-4464 (1989).
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 15 :
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: résidus d'acide aminé
(B) TYPE: acides aminés (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 15 :
Séquence peptidique de la ribonucléase hépatique humaine (HLR) et identifiée dans l'article de H. F. ROSENBERG et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 86, 4460-4464 (1989).
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 16 :
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: résidus d'acide aminé
(B) TYPE: acides aminés (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 16 :
Séquence peptidique de la ribonucléase non sécrétée humaine (HNSR) et identifiée dans l'article de H. F. ROSENBERG et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 86, 4460-4464 (1989).

Claims

REVENDICATIONS
1. Utilisation d'un polypeptide comprenant au moins un fragment d'une protéine, pour obtenir une composition diagnostique, prophylactique ou thérapeutique destinée à détecter, prévenir ou traiter un état pathologique associé à une maladie dégénérative et/ou auto-immune, ladite protéine ayant, à l'état natif, une séquence qui comprend SEQ ID NO: 1, ledit polypeptide étant différent de la protéine cationique d'éosinophile (ECP) .
2. Utilisation d'au moins deux polypeptides en combinaison, lesdits polypeptides comprenant chacun au moins un fragment d'une protéine, pour obtenir une composition diagnostique, prophylactique ou thérapeutique destinée à détecter, prévenir ou traiter un état pathologique associé à une maladie dégénérative et/ou auto-immune, ladite protéine ayant, à l'état natif, une séquence qui comprend SEQ ID NO: 1.
3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que la séquence de ladite protéine à l'état natif, comprend SEQ ID NO: 2.
4. Utilisation selon la revendication 3, caractérisée en ce que la séquence de ladite protéine à l'état natif, comprend une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 et SEQ ID NO: 5.
5. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que ladite protéine est glycosylée.
6. Utilisation selon la revendication 5, caractérisée en ce que ledit fragment de la protéine est glycosylé.
7. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que ladite protéine est choisie dans le groupe des protéines produites par les granulocytes éosinophiles.
8. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que ladite protéine a une activité ribonucléasique .
9. Utilisation selon la revendication 7 ou 8, caractérisée en ce que ladite protéine est choisie dans le groupe qui consiste en la neurotoxine dérivée d'éosinophile (EDN) , la protéine cationique d'éosinophile (ECP) , la ribonucléase hépatique humaine (HLR) , et la ribonucléase non-sécrétée humaine (HNSR) .
10. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que ledit polypeptide consiste en ladite protéine.
11. Utilisation d'un ligand spécifique d'un polypeptide, pour obtenir une composition diagnostique, prophylactique ou thérapeutique destinée à détecter, prévenir ou traiter un état pathologique associé à une maladie dégénérative et/ou auto-immune, selon laquelle ledit polypeptide comprend au moins un fragment d'une protéine, ladite protéine ayant, à l'état natif, une séquence qui comprend SEQ ID NO: 1.
12. Utilisation d'un fragment nucleotidique, pour obtenir une composition diagnostique, prophylactique ou thérapeutique destinée à détecter, prévenir ou traiter un état pathologique associé à une maladie dégénérative et/ou auto-immune, selon laquelle ledit fragment nucleotidique est choisi dans le groupe comprenant des premiers fragments qui codent pour la séquence peptidique SEQ ID NO: 1, des seconds fragments complémentaires des premiers fragments, et des troisièmes fragments ayant au moins 70 % d' homologie avec les premiers ou les seconds fragments.
13. Utilisation selon la revendication 12, caractérisée en ce que le fragment nucleotidique comprend la séquence SEQ ID NO: 6 ou sa séquence complémentaire.
14. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la maladie dégénérative et/ou auto-immune est la sclérose en plaques .
15. Procédé pour détecter une protéine associée à une maladie dégénérative et/ou auto-immune, dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'on met l'échantillon biologique en contact avec un ligand spécifique d'un polypeptide, ledit polypeptide comprenant au moins un fragment d'une protéine et ladite protéine ayant, à l'état natif, une séquence qui comprend SEQ ID NO: 1, puis on détecte la formation d'un complexe entre ledit polypeptide et ledit ligand.
16. Procédé pour détecter un anticorps associé à une maladie dégénérative et/ou auto-immune, dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'on met l'échantillon biologique en contact avec un polypeptide, ledit polypeptide comprenant au moins un fragment d'une protéine et ladite protéine ayant, à l'état natif, une séquence qui comprend SEQ ID NO: 1, puis on détecte la formation d'un complexe entre ledit polypeptide et ledit anticorps.
17. Procédé selon la revendication 15 ou 16, caractérisé en ce que la maladie dégénérative et/ou auto- immune est la sclérose en plaques.
18. Procédé selon l'une quelconque des revendications 15 à 17, caractérisé en ce que la séquence de ladite protéine à l'état natif, comprend SEQ ID NO: 2, et de préférence SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 ou SEQ ID NO: 5.
19. Procédé selon la revendication 15 ou 16, caractérisé en ce que l'échantillon biologique est choisi dans le groupe comprenant le liquide céphalo-rachidien, le sérum et l'urine.
PCT/FR1998/000236 1997-02-07 1998-02-06 Utilisation d'un polypeptide, pour obtenir une composition pour detecter, prevenir ou traiter une maladie degenerative et/ou auto-immune WO1998034637A1 (fr)

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999001152A1 (fr) * 1997-07-02 1999-01-14 The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Procedes servant a inactiver des particules de virus a arn enveloppes et compositions associees

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EP0352146A1 (fr) * 1988-07-19 1990-01-24 Abraxas Bio Labs S.A. Régulateur biologique extrait de Gingko Biloba, actif dans diverses pathologies.

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