+

WO1994026695A1 - Nouveaux derives du lupane, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent - Google Patents

Nouveaux derives du lupane, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent Download PDF

Info

Publication number
WO1994026695A1
WO1994026695A1 PCT/FR1994/000532 FR9400532W WO9426695A1 WO 1994026695 A1 WO1994026695 A1 WO 1994026695A1 FR 9400532 W FR9400532 W FR 9400532W WO 9426695 A1 WO9426695 A1 WO 9426695A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
acid
oyl
temperature
region
general formula
Prior art date
Application number
PCT/FR1994/000532
Other languages
English (en)
Inventor
Norbert Dereu
Michel Evers
Christèle Poujade
Françoise Soler
Original Assignee
Rhone-Poulenc Rorer S.A.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Rhone-Poulenc Rorer S.A. filed Critical Rhone-Poulenc Rorer S.A.
Priority to JP6525050A priority Critical patent/JPH08509968A/ja
Priority to EP94916260A priority patent/EP0698008A1/fr
Priority to AU67879/94A priority patent/AU6787994A/en
Publication of WO1994026695A1 publication Critical patent/WO1994026695A1/fr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C237/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups
    • C07C237/02—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C237/22—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton having nitrogen atoms of amino groups bound to the carbon skeleton of the acid part, further acylated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C235/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms
    • C07C235/40—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C235/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms
    • C07C235/42—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C07C235/44—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton with carbon atoms of carboxamide groups and singly-bound oxygen atoms bound to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring
    • C07C235/50—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton with carbon atoms of carboxamide groups and singly-bound oxygen atoms bound to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to an acyclic carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C235/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms
    • C07C235/42—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C07C235/44—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton with carbon atoms of carboxamide groups and singly-bound oxygen atoms bound to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring
    • C07C235/58—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton with carbon atoms of carboxamide groups and singly-bound oxygen atoms bound to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring with carbon atoms of carboxamide groups and singly-bound oxygen atoms, bound in ortho-position to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring
    • C07C235/60—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton with carbon atoms of carboxamide groups and singly-bound oxygen atoms bound to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring with carbon atoms of carboxamide groups and singly-bound oxygen atoms, bound in ortho-position to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring having the nitrogen atoms of the carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/06—Esters of carbamic acids
    • C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C271/26—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atom of at least one of the carbamate groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
    • C07C271/28—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atom of at least one of the carbamate groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring to a carbon atom of a non-condensed six-membered aromatic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2603/00—Systems containing at least three condensed rings
    • C07C2603/56—Ring systems containing bridged rings
    • C07C2603/90—Ring systems containing bridged rings containing more than four rings

Definitions

  • the present invention relates to lupane derivatives, of general formula:
  • R 1 and R 2 are hydroxy or acyloxy and R 3 is in particular methyl. These derivatives are useful in the field of anticancer agents.
  • R ' is a hydrogen atom or an alkyl radical
  • X represents a carbamoyl, N-methyl carbamoyl, aminocarbonyl or N-methylaminocarbonyl radical
  • y is a substituted phenylene radical of general formula:
  • R 1 and R 2 which are identical or different, represent hydrogen or halogen atoms or alkyl, alkyloxy or nitro radicals, at least one being other than hydrogen,
  • R ° and R °° identical or different are hydrogen atoms or alkyl radicals (it being understood that each unit -CRoR °° is not necessarily identical to the previous one) and, n is an integer from 6 to 12, m is an integer from 0 to 2 and p is an integer from 0 to 2 and are such that m + n + p is between 6 and 12, as well as their pharmaceutically acceptable salts when they exist, exhibit a cytoprotective effect cells infected with an HIV virus (Human Immunodeficiency Virus) as well as an activity inhibiting the production of reverse transcriptase of an HIV virus.
  • HIV virus Human Immunodeficiency Virus
  • the alkyl radicals are straight or branched and contain 1 to 4 carbon atoms and that the halogen atoms can be chosen from fluorine, chlorine, bromine and iodine .
  • the products of general formula (I) have stereoisomeric forms, it is also understood that the stereoisomeric forms and their mixtures also come within the scope of the present invention.
  • the lupane derivative of general formula (I) can be obtained from a lupane derivative of general formula:
  • R °, R °°, m and p are defined as above and R "'is defined as above.
  • the hydroxy radicals of the lupane derivative of general formula (IV) are preferably protected by radicals compatible which can be set up and removed without touching the rest of the molecule.
  • R ' is a hydrogen atom
  • the protective groups can be chosen from the radicals described by TW GREENE, Protective Groups in Organic Synthesis, J. WILEY-Interscience Publication (1991) or by Me OMIE, Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press (1973) . It is in particular advantageous to use protective radicals which can be eliminated simultaneously. We will choose radicals which can be eliminated in neutral, basic or acidic medium.
  • the hydroxy radicals can be protected in the ester state (formyloxy, acetoxy, isbutbut, trichloroacetyloxy, phenoxyacetyloxy, benzyloxy); in this case, the elimination is carried out by hydrolysis in a basic medium, in particular in the presence of soda at a temperature of between 10 and 50 ° C.
  • Protection can also be carried out in the ketone state, in the form of carbonate by a radical —COOR a in which R a is an alkyl or benzyl radical optionally substituted or else by a trialkylsilyl radical; the acid protective rafts can be chosen from alkyl (methyl, ethyl, t.butyl), substituted alkyl (trichlorethyl, haloethyl, p.
  • toluenesulfonyl-ethyl benzyl, benzyl substituted by a nitro radical, benzhydryl, triphenylmethyl, benzyloxymethyl ...), alkyloxyalkyl (methoxymethyl), tetrahydropyranyl or trimethylsilyl.
  • the reaction is carried out according to the usual methods of condensation of an amine on an acid.
  • an acid acceptor such as an organic nitrogenous base (trialcoylamine, pyridine, N-methyl-morpholine, d ⁇ aza-1,8 b ⁇ cyclo [5.4.0] undecene-7, diaza1,5 bicyclo [4.3.0] nonene-5 for example) in an organic solvent such as a chlorinated solvent (dichloromethane, dichlorethane, chloroform for example) or an amide (dimethylformamide for example).
  • a condensing agent such as a carbodiimide (dicyclohexylcarbodnmide, 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodnmide hydrochloride for example) and optionally ment in the presence of a catalyst such as N-hydroxybenzotriazole or N-hydroxysuccinimide, at a temperature between -20 and 40 ° C.
  • a condensing agent such as a carbodiimide (dicyclohexylcarbodnmide, 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodnmide hydrochloride for example)
  • a catalyst such as N-hydroxybenzotriazole or N-hydroxysuccinimide
  • the condensation of the drain of general formula (Va) is preferably carried out from the hydrochloride of the amine. It is generally carried out on the acid chloride or on an activated ester.
  • the acid derived from lupane, of general formula (IVa) can be prepared by the action of an amino acid of general formula:
  • the reaction of the amino acid on the chloride of lupen-20 (29) oic-28 acid of general formula (VII) is carried out according to the usual methods which do not alter the rest of the molecule.
  • the operation is carried out in particular in the presence of an organic nitrogenous base such as a trialkylamine (triethylamine for example) in an organic solvent such as a chlorinated solvent (chloroform, 1,2-dichloroethane, dichloromethane) or in tetrahydrofuran or in a mixture of these solvents, at a temperature between 15 and 30 ° C.
  • the acid chloride of the lupane derivative of general formula (VII) can be prepared according to known methods. For example, the reaction is carried out by the action of oxalyl chloride or thionyl chloride, in a chlorinated solvent such as chloroform, dichloroethane or dichloromethane.
  • the amino acid of general formula (VI) can be prepared as described below in the examples.
  • the amine derived from lupane, of general formula (IVb), for which R '' 'is a hydrogen atom, can be prepared from a lupane derivative of general formula (VII), by the action of a diamine of general formula:
  • the derivatives (IVb) for which R '' 'is a methyl radical can be obtained by N-methylation of the product of general formula (IVb) for which R' '' is a hydrogen atom, according to the method of A. KATRITSKY , J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, 2539 (1987).
  • the products of general formula (Va) or (Vb) can be prepared according to or by analogy with the methods described below in the examples.
  • the new lupane derivatives of general formula (I) can be purified if necessary by physical methods such as crystallization or chromatography.
  • the preparation is carried out by means of chiral derivatives of general formula (Va) or (Vb). It is understood that when it is desired to obtain a chiral intermediate, the separation is carried out according to the usual methods which do not affect the rest of the molecule, such as for example chromatography on a chiral phase, or by conversion of the racemic mixture into diastereoisomers and separation by crystallization or chromatography.
  • the products according to the invention can be converted into metal salts or into addition salts with a nitrogenous base according to the methods known per se.
  • These salts can be obtained by the action of a metal base (for example alkaline or alkaline earth), ammonia or an amine on a product according to the invention, in an appropriate solvent.
  • the salt formed precipitates after optional concentration of the solution; it is separated by filtration.
  • salts with alkali metals sodium, potassium, lithium
  • alkaline earth metals magnesium, calcium
  • the ammonium salt the salts of nitrogenous bases (ethanolamine, diethanolamine, trimethylamine , triethylamine, methylamine, propylamine, dusopropylamine, NN-dimethylethanolamine, benzylamine, dicyclohexylamine, N-benzylphenethylamine, NN'-dibenzylethylenediamine, diphenylenediamine, benzhydrylamine, quinine, choline, argiinne, lysine, leucine).
  • nitrogenous bases ethanolamine, diethanolamine, trimethylamine , triethylamine, methylamine, propylamine, dusopropylamine, NN-dimethylethanolamine, benzylamine, dicyclohexylamine, N-benzylphenethylamine, NN'-dibenzylethylenediamine,
  • the new lupane derivatives according to the present invention are particularly useful for the prophylaxis and treatment of AIDS (acquired immunodeficiency syndrome) and associated syndromes [ARC (AIDS related complex)].
  • prophylaxis we mean the treatment of subjects who have been exposed to HIV viruses, in particular asymptomatic HIV-positive people who are at risk of developing the disease in the months or years to come after primary infection.
  • the products according to the invention which are inhibitors of the cytopathogenic effect of HIV and inhibitors of the production of reverse transcriptase in cell culture at concentrations devoid of cytotoxic or cytostatic effect, are of particular interest. It has also been demonstrated that the products according to the invention are active for the treatment of conditions in which viruses of the herpes family are involved.
  • Herpes family is indeed the cause of many ailments, some of which can be very serious. It includes Herpes simplex, varicella-zoster, cytomegalovirus and Epstein-Barr virus. Herpes simplex can range from mild forms like cold sores to more serious forms like genital herpes and can even cause life-threatening encephalitis. Varicella zoster is the virus responsible for chickenpox and shingles, it can also cause more serious conditions including encephalitis.
  • Cytomegalovirus infections are generally asymptomatic in healthy subjects, but can become the cause of serious ophthalmic infections (retinitis) which can lead to blindness, morbidity and mortality in immunocompromised subjects (patients with AIDS or any other immunodeficiency, for example after organ transplantation or after cancer chemotherapy). Cytomegalovirus is also responsible for severe clinical manifestations for the fetus or the newborn in the case of a primary infection during pregnancy or during the transfusion of seropositive blood to a seronegative newborn.
  • 125 ⁇ l of a suspension of CEM cells (8 ⁇ 10 4 cells per ml) are then added to RPMI medium containing 10% fetal calf serum, 100 IU / ml of penicillin, 100 ⁇ g / ml of streptomycin and 2 ⁇ moles / ml of glutamine and the microplates are incubated for one hour at 37 ° C., under an atmosphere containing 5% carbon dioxide. For each concentration, the test is divided into two parts: one part (3 wells) on infected cells, for determining the antiviral activity and the other part (3 wells) on non-infected cells, to determine the cytotoxicity of the products.
  • the first series is then infected with HIV-1 (100 ⁇ l per well of a suspension of LAV-1-BRU virus containing 200-300 TCID50) while the other series receives 100 ⁇ l of RPMI medium as defined above. After 5 days of incubation, 100 ⁇ l of cells are removed to measure cell viability [determined according to a modification of the technique described by R. PAUWELS et al., J. VIROL. Meth., 20, 309-321 (1988)]. 10 ⁇ l of a solution containing 7 mg of MTT [3- (4, 5-dimethyl 2-thiazolyl bromide) -2,5-phenyltetrazolium bromide] per ml of isotonic phosphate buffer are added to this sample.
  • the protection rate (in%) of a given product is determined from the optical densities (OD) by the formula:
  • the inhibitory concentration 50% is determined.
  • the protection rate provided by the products according to the invention is between 20 and 100%.
  • the 50% inhibitory concentration of the products according to the invention is between 0.05 and 50 ⁇ g / ml when it can be determined.
  • the technique used consists in measuring the cytopathogenic effect of the virus and its protection by using products of general formula (I).
  • the antiviral activity is assessed by measuring the EC 50 (concentration necessary to inhibit 50% of the cytopathogenic effect induced by the virus).
  • the reaction mixture is concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 45 ° C.
  • 25 cm 3 of ethyl acetate are added.
  • the insoluble material is filtered and rinsed with a total of 25 cm of ethyl acetate.
  • the filtrate is concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 45 ° C.
  • the solid obtained (1.06 g) is chromatographed on a column 4 cm in diameter and 40 cm high in silica (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of dichloromethane and ethyl acetate 95: 5 (in volumes), collecting 25 cm 3 fractions.
  • the first 35 fractions are eliminated, and the eluent is replaced by a mixture of dichloromethane and ethyl acetate 90:10 (by volume), collecting fractions of 25 cm 3 .
  • the fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • reaction mixture is stirred for 15 hours at a temperature in the region of 20 ° C.
  • the reaction mixture is acidified to a pH close to 2 using 5N hydrochloric acid and then 50 cm of distilled water are added.
  • the solid is separated by filtration and rinsed with 50 cm 3 in total of distilled water and then air dried.
  • the solid is suspended in 20 cm 3 of distilled water, filtered and rinsed with 50 cm 3 in total of distilled water and then dried under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • N- (3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-am ⁇ nooctano ⁇ que acid can be prepared as follows:
  • the residue is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of cyclohexane and ethyl acetate (60-40 by volume).
  • the fractions containing the product are combined and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C.
  • the methyl 5-amino-2-chlorobenzoate can be obtained in the following way: To 100 cm 3 of methanol cooled to a temperature close to -20 ° C., add in 1 minute, 1.5 cm 3 of thionyl chloride. Stirring is continued for 5 minutes at a temperature in the region of -20 ° C., then added
  • Ethyl 2-am ⁇ no-5-fluorobenzoate can be obtained in the following manner:
  • the reaction mixture is concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 45 ° C.
  • 50 cm 3 of ethyl acetate are added.
  • the insoluble material is filtered and rinsed with a total of 50 cm 3 of ethyl acetate.
  • the filtrate is concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 45 ° C.
  • the solid obtained (2.07 g) is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with a mixture of dichloromethane and ethyl acetate 93: 7 (by volume).
  • Methyl 3-amino-4-chlorob nzoate can be obtained in the following manner:
  • the mixture is brought to a temperature in the region of 20 ° C. and then concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature close to 20 ° C.
  • the solid obtained (2.25 g) is taken up in 50 cm 3 of diethyl ether, filtered, rinsed with 40 cm total of diethyether and then dried under atmospheric pressure. 2.09 g of methyl 3-amino-4-chlorobenzoate hydrochloride are thus obtained in the form of a white solid.
  • the hydrochloride is dissolved in a mixture of 50 cm 3 of distilled water, 5 cm 3 of 2N sodium hydroxide and 50 cm 3 of ethyl acetate.
  • the aqueous phase is decanted, the aqueous phase is extracted by 25 cm 3 of ethyl acetate.
  • the combined organic phases are dried over magnesium sulfate and then concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 35 ° C. 1.71 g of methyl 3-amino-4-chlorobenzoate are thus obtained.
  • the solution is stirred for 12 hours at a temperature in the region of 20 ° C and then the solvent is removed under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the residue obtained (4.5 g) is chromatographed on a column 6 cm in diameter containing 240 g of silica (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of methylene chloride, ethyl acetate and methanol 9-9-1 by volume, collecting 75 cm fractions.
  • the first 7 fractions are eliminated; the following 43 are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the residue obtained (650 mg) is chromatographed on a column 3.5 cm in diameter containing 115 g of silica (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of methanol and ethyl acetate 1-19 in volumes by collecting 50 cm 3 fractions.
  • the first 3 fractions are eliminated; the next 4 are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • 570 mg are thus obtained which are purified again by chromatography (column 3.5 cm in diameter, 100 g of silica (0.02-0.045 mm), eluent: ethyl acetate, volume of the fractions: 75 cm 3 ).
  • the first 19 fractions are eliminated; the following 31 are combined and concentrated under reduced pressure
  • the solution is stirred for 12 hours at a temperature in the region of 20 ° C and then the solvent is removed under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • 50 cm 3 of distilled water and 50 cm 3 of ethyl acetate are added.
  • the organic phase is extracted and the aqueous phase is exhausted with 75 cm 3 in total of ethyl acetate.
  • the organic extracts are combined, dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the residue obtained (1.6 g) is chromatographed on a column 5 cm in diameter containing 210 g of silica (0.02-0.045 mm), eluted with a mixture of methylene chloride and ethyl acetate 19-1 in volumes by collecting fractions of 75 cm3.
  • the first 67 fractions are eliminated; the following 63 are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the organic phase is then dried over sodium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the residue obtained is chromatographed on a silica column (0.02-0.045 mm) eluted with dichloromethane.
  • the 120 fractions of 2 cm 3 are eliminated and the eluent is replaced by a mixture of dichloromethane and ethyl acetate (8: 2) (by volume).
  • the fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • reaction mixture is acidified to a fold close to 2 using 4 cm 3 of hydrochloric acid
  • N- (3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7-diaminoheptane can be obtained in the following manner: 1000 cm 3 of a solution in dichloromethane of 3 ⁇ -acetoxylup chloride 20 (29) -en-28-oyl (prepared from 30 g of 3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oic acid) are added dropwise in approximately 10 hours to a solution of 46, 8 g of 1,7-diaminoheptane in
  • 3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl chloride is prepared according to J. PROVITA and A. VYSTRCIL, Collect. Czech. Chem. Commun., 41, 1200 (1976).
  • 3 ⁇ -acetoxylu ⁇ -20 (29) -èn-28-oyl] -8-aminooctanoic acid can be obtained as described in Example 1.
  • Methyl 4-amino-2-hydroyybenzoate can be prepared according to DJ Drain, DD Martin, BW Mitchell, DE Seymour and FS Spnng, J. Chem. Soc, 1498-1503 (1949).
  • Methyl 4-amino-2-chlorobenzoate can be prepared according to M. Rubin, U.C. Marks, II.Wishinsky and A. Lanzilotti, J. Am.Chem. Soc., 68, 623-24 (1946).
  • Example 12
  • Methyl 3-amino-2-hydroxybenzoate can be prepared according to A. Einborn and B. Pfyl J. Liebig's Ann. Chem., 311, 34-73 (1900).
  • 3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -en-28-oyl] -8-aminooctanoic acid can be obtained as described in Example 1.
  • Methyl 5-amino-2-hydroyybenzoate can be prepared according to F. Wessely, K. Benedikt and II. Benger, Monat. Chem., 80, 197-201 (1949).
  • Example 14
  • the organic phase is then dried over magnesium sulfate and concentrated to dryness under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the residue obtained (1.1 g) is chromatographed on a silica column (0.02 - 0.045 mm) eluted with a mixture of chloroform, methanol and ammonia 24-6-1 (by volume). The fractions containing the product are combined and concentrated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • N- (3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7-d ⁇ aminoheptane can be obtained as described in Example 9.
  • N- (3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7-d ⁇ aminoheptane can be obtained as described in Example 9.
  • 3-Bromo-5-methoxycarbonylbenzoic acid can be prepared in the manner below.
  • a suspension of 5 g of methyl 3-bromo ⁇ sophthalate in 20 cm 3 of a 0.50 N solution of barium hydroxide is stirred for 20 hours at a temperature in the region of 20 ° C.
  • the solid is filtered, washed with 5 cm 3 of methanol and then treated with 20 cm 3 of 4N hydrochloric acid.
  • the aqueous phase is extracted with 40 cm 3 of diethyl ether.
  • the combined organic phases are washed with 40 cm 3 of distilled water, dried over magnesium sulfate, then evaporated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • N- (3 ⁇ -acetoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1,7-diaminoheptane can be obtained as described in Example 9.
  • 3-fluoro-4-methoxycarbonylbenzoic acid can be prepared in the following manner:
  • a solution of 2.5 g of dimethyl fluoro terephthalate and 11.8 cm 3 of 1N sodium hydroxide in 30 cm 3 of methanol is carried for 90 min. at a temperature close to reflux.
  • the reaction medium cooled to a temperature in the region of 25 ° C, is acidified with 12 cm 3 of 1N hydrochloric acid.
  • the white solid formed is filtered, washed with 100 cm 3 of distilled water and then dissolved in 100 cm 5 of ethyl acetate.
  • the organic phase is dried over magnesium sulphate, then evaporated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the residue obtained (520 mg) is recrystallized successively from 1,2-d ⁇ chloroethane and from water.
  • 3- (t-butyloxycarbonylamino) -5-methoxycarbonylbenzoic acid can be prepared as follows: A solution of 2 g of methyl 3- (t-butyloxycarbonylamino) -5-methoxycarbonylbenzoate and 428 mg of potassium hydroxide in a mixture of 40 cm 3 of methanol and 5 cm 3 of dimethylformamide is stirred for 20 hours at a temperature in the region of 25 ° C and then for 20 hours at a temperature in the region of 50 ° C.
  • the suspension obtained is extracted using 200 cm 3 of ethyl acetate.
  • the organic phase is washed with 200 cm 3 of distilled water.
  • the organic phase is dried over magnesium sulfate, then evaporated under reduced pressure (2.7 kPa) at a temperature in the region of 40 ° C.
  • the residue obtained (3.4 g) is chromatographed on a silica column (0.02 - 0.045 mm) eluted with a mixture of dichloromethane and methanol 9: 1 (by volume).
  • the present invention also relates to pharmaceutical compositions containing at least one product of general formula (I) optionally in the form of a salt, in the pure state or in the form of a combination with one or more compatible and pharmaceutically acceptable diluents or adjuvants , or with another agent intended for the treatment of AIDS, an antiviral, immunomodulatory or antimicrobial agent.
  • a product of general formula (I) optionally in the form of a salt, in the pure state or in the form of a combination with one or more compatible and pharmaceutically acceptable diluents or adjuvants , or with another agent intended for the treatment of AIDS, an antiviral, immunomodulatory or antimicrobial agent.
  • composition according to the invention is capable of keeping cells infected with an IIIV virus alive and therefore of reducing the progression to AIDS or of reducing its severity in subjects already infected by reducing the mortality of the infected cells.
  • the compositions can be used orally, parenterally or rectally.
  • compositions can be used for curative or preventive purposes in subjects having an immunodeficiency and / or infected with an HIV virus.
  • constitution of these compositions will be adapted to the particular case of the digestive tract of the immunocompromised.
  • compositions for oral administration tablets, pills, capsules, powders or granules can be used.
  • the active product according to the invention is mixed with one or more inert diluents or adjuvants, such as sucrose, lactose or starch.
  • compositions can include substances other than diluents, for example a lubricant such as magnesium stearate or a coating intended for controlled release.
  • a lubricant such as magnesium stearate or a coating intended for controlled release.
  • compositions for oral administration pharmaceutically acceptable solutions, suspensions, emulsions, syrups and elixirs containing inert diluents such as water or paraffin oil can be used.
  • inert diluents such as water or paraffin oil
  • These compositions can also include substances other than diluents, for example wetting, sweetening or flavoring products.
  • compositions for parenteral administration can be sterile solutions or emulsions.
  • solvent or vehicle propylene glycol, a polyethylene glycol, vegetable oils, in particular olive oil, injectable organic esters, for example ethyl oleate, can be used.
  • compositions can also contain adjuvants, in particular wetting agents, isotonizers, emulsifiers, dispersants and stabilizers.
  • Sterilization can be done in several ways, for example using a bacteriological filter, by irradiation or by heating. They can also be prepared in the form of sterile solid compositions which can be dissolved at the time of use in sterile water or any other sterile injectable medium.
  • compositions for rectal administration are suppositories or rectal capsules, which contain, in addition to the active principle, excipients such as cocoa butter, semi-synthetic glycerides or polyethylene glycols.
  • excipients such as cocoa butter, semi-synthetic glycerides or polyethylene glycols.
  • the doctor will determine the dosage he considers most appropriate based on preventive or curative treatment, depending on age, weight, degree of infection and other factors specific to the subject to be addressed. Generally, the doses are between 10 and 100 mg / kg orally for an adult.
  • the present invention also relates to combinations consisting of one or more lupane derivatives of general formula (I), and / or where appropriate their salts, and of another active principle known for its anti-retrovirus activity, optionally in the presence pharmaceutically acceptable excipients.
  • the anti-retrovirus agents which can be combined are chosen from agents which are compatible and inert with respect to the lupane derivative of general formula (I). Without limitation, these agents are chosen from reverse transcriptase inhibitors [zidovudine (AZT), didanosine (DDI), dideoxycytidine (DDC), TIBO, nevirapine, PMEA, D4T, pyridones, ⁇ -APA, HEPT ...] , among protease inhibitors [such as RO 31-8959 or A 77003], or among tat protein inhibitors [such as RO 24-7429, for example).
  • reverse transcriptase inhibitors zidovudine (AZT), didanosine (DDI), dideoxycytidine (DDC), TIBO, nevirapine, PMEA, D4T, pyridones, ⁇ -APA, HEPT ...
  • protease inhibitors such as RO 31-8959 or A 77003
  • Active product tablets having the following composition are prepared according to the usual technique:

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)

Abstract

Dérivés du lupane de formule générale (I) dans laquelle R est un radical de formule générale (II) pour lequel R' est un atome d'hydrogène ou de radical alcoyle, X est carbamoyle, N-méthylcarbamoyle, aminocarbonyle ou N-méthylaminocarbonyle, Y est phénylène substitué de formule générale (III), dans laquelle R1 et R2 sont H, halogène, alcoyle, alcoyloxy ou nitro, à l'exception d'être identiques lorsqu'ils représentent H, R° et R°° identiques ou différents sont des atomes d'hydrogène ou des radicaux alcoyle et, n est 6 à 12, m est 0 à 2 et p est 0 à 2, avec: 6 < m+n+p < 12, les radicaux alcoyle (1 à 4C) étant droits ou ramifiés, ainsi que leurs sels lorsqu'ils existent et leur preparation. Les produits selon l'invention sont particulièrement intéressants dans le domaine du SIDA et dans les affections médiés par les virus de la famille des herpès.

Description

NOUVEAUV DÉRIVES DU LUPANE, LEUR PREPARATION ET LES COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES OUI LES CONTIENNENT
La présente invention concerne des dérivés du lupane, de formule générale :
Figure imgf000003_0001
leurs sels, leur préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
Dans la demande de brevet japonais J 01 143 832 ont été décrits des dérivés de la bétuline de formule générale :
Figure imgf000003_0002
dans laquelle R1 et R2 sont hydroxy ou acyloxy et R3 est notamment méthyle. Ces dérivés sont utiles dans le domaine des anticancéreux.
Il a été maintenant trouvé que les dérivés du lupane de formule générale (I) dans laquelle : R représente un radical de formule générale :
Figure imgf000004_0001
dans laquelle R' est un atome d'hydrogène ou de radical alcoyle,
X représente un radical carbamoyle, N-méthyl carbamoyle, aminocarbonyle ou N-méthylaminocarbonyle, y est un radical phénylène substitué de formule générale :
Figure imgf000004_0002
dans laquelle R1 et R2 identiques ou différents représentent des atomes d'hydrogène ou d'halogène ou des radicaux alcoyle, alcoyloxy ou nitro, l'un au moins étant autre que l'hydrogène,
R° et R°° identiques ou différents sont des atomes d'hydrogène ou des radicaux alcoyle (étant entendu que chaque motif -CRºR°° n'est pas nécessairement identique au précédent) et, n est un nombre entier de 6 à 12, m est un nombre entier de 0 à 2 et p est un nombre entier de 0 à 2 et sont tels que m + n + p soit compris entre 6 et 12, ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables lorsqu'ils existent, manifestent un effet cytoprotecteur de cellules infectées par un virus HIV (Human Immunodefîciency Virus) ainsi qu'une activité inhibitrice de la production de transcriptase inverse d'un virus HIV.
Dans la formule générale ci-dessus, il est entendu que les radicaux alcoyle sont droits ou ramifiés et contiennent 1 à 4 atomes de carbone et que les atomes d'halogène peuvent être choisis parmi le fluor, le chlore, le brome et l'iode. Dans les cas où R° et Rºº sont différents, les produits de formule générale (I) présentent des formes stéréoisomères, il est également entendu que les formes stéréoisomères ainsi que leurs mélanges entrent aussi dans le cadre de la présente invention.
Selon l'invention le dérivé du lupane de formule générale (I) peut être obtenu à partir d'un dérivé du lupane de formule générale :
Figure imgf000005_0001
dans laquelle R" représente un radical de formule générale
— (CH2)n—COOH (IVa)
ou
— (CH2)n-NH—R'" (IVb) dans lesquelles n est défini comme précédemment et R" ' est un atome d'hydrogène ou un radical méthyle, par action respectivement d'une aminé ou d'un acide de formules générales :
Figure imgf000005_0002
ou
Figure imgf000005_0003
dans lesquelles R° , R°°, m et p sont définis comme précédemment et R" ' est défini comme ci-dessus.
Il est entendu que les radicaux hydroxy du dérivé du lupane de formule générale (IV) sont de préférence protégés par des radicaux compatibles qui peuvent être mis en place et éliminés sans toucher au reste de la molécule. De même lorsque R' est un atome d'hydrogène il est nécessaire de protéger préalablement la fonction acide du produit de formule générale (Va) ou (Vb). A titre d'exemple les groupements protecteurs peuvent être choisis parmi les radicaux décrits par T.W. GREENE, Protective Groups in Organic Synthesis, J. WILEY-Interscience Publication (1991) ou par Me OMIE, Protective Groups in Organic Chemistry, Plénum Press (1973). Il est notamment avantageux d'utiliser des radicaux protecteurs pouvant être éliminés simultanément. On choisira des radicaux pouvant être éliminés en milieu neutre, basique ou acide.
Notamment, les radicaux hydroxy peuvent être protégés à l'état d'ester (formyloxy, acétoxy, î.butoxy, trichloracétyloxy, phénoxyacétyloxy, benzyloxy); dans ce cas, l'élimination s'effectue par hydrolyse en milieu basique, notamment en présence de soude à une température comprise entre 10 et 50°C. La protection peut également être effectuée à l'état de cétone, sous forme de carbonate par un radical -COORa dans lequel Ra est un radical alcoyle ou benzyle éventuellement substitués ou encore par un radical trialcoylsilyle; les radieaux protecteurs d'acide peuvent être choisis parmi les radicaux alcoyle (méthyle, éthyle, t.butyle), alcoyle substitué (trichloréthyle, haloéthyle, p. toluenesulfonyl-éthyle, benzyle, benzyle substitué par un radical nitro, benzhydryle, triphénylméthyle, benzyloxyméthyle...), alcoyloxyalcoyle (méthoxyméthyle), tétrahydropyranyle ou triméthylsilyle.
La réaction s'effectue selon les méthodes habituelles de condensation d'une amine sur un acide. Notamment, on opère en présence d'un accepteur d'acide tel qu'une base organique azotée (trialcoylamine, pyridine, N-méthyl-morpholine, dιaza-1,8 bιcyclo[5.4.0] undécène-7, diaza1,5 bicyclo [4.3.0] nonène-5 par exemple) dans un solvant organique comme un solvant chloré (dichloromethane, dichloréthane, chloroforme par exemple) ou un amide (diméthylformamide par exemple). Il est également possible d ' opérer en présence d ' un agent de condensation tel qu'un carbodiimide (dicyclohexylcarbodnmide, chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodnmιde par exemple) et éventuelle ment en présence d'un catalyseur tel que le N-hydroxybenzotriazole ou le N-hydroxysuccinimide, à une température comprise entre -20 et 40°C.
La condensation de l'draine de formule générale (Va) s'effectue de préférence à partir du chlorhydrate de l'aminé. On opère généralement sur le chlorure de l'acide ou sur un ester activé.
L'acide dérivé du lupane, de formule générale (IVa) peut être préparé par action d'un amino acide de formule générale :
H2N-(CH2)n-COOH (VI) dans laquelle n est défini comme précédemment et dont la fonction acide a été préalablement protégée, sur le chlorure de l'acide de formule :
Figure imgf000007_0001
suivie de l'élimination des radicaux protecteurs. La réaction de l'amino acide sur le chlorure de l'acide lupèn-20(29)oïque-28 de formule générale (VII) s'effectue selon les méthodes habituelles qui n'altèrent pas le reste de la molécule. On opère notamment en présence d'une base organique azotée telle qu'une trialcoylamine (triéthylamine par exemple) dans un solvant organique tel qu'un solvant chloré (chloroforme, dιchloro-1,2 éthane, dichloromethane) ou dans le tetrahydrofurane ou dans un mélange de ces solvants, à une température comprise entre 15 et 30°C. Le chlorure d'acide- du dérivé du lupane de formule générale (VII) peut être préparé selon les méthodes connues. A titre d'exemple, on opère par action du chlorure d'oxalyle ou du chlorure de thionyle, dans un solvant chloré comme le chloroforme, le dichloroéthane ou le dichloromethane.
La protection et la libération des radicaux protecteurs s'effectuent comme décrit précédemment
L'amino acide de formule générale (VI) peut être préparé comme décrit ci-après dans les exemples. L'aminé dérivée du lupane, de formule générale (IVb), pour laquelle R' ' ' est un atome d'hydrogène, peut être préparée à partir d'un dérivé du lupane de formule générale (VII), par action d'une diamine de formule générale :
H2N-(CH2)n-NH2 (VIII) dans laquelle n est défini comme précédemment.
Les dérivés (IVb) pour lesquels R''' est un radical méthyle peuvent être obtenus par N-méthylation du produit de formule générale (IVb) pour lequel R''' est un atome d'hydrogène, selon la méthode de A. KATRITSKY, J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, 2539 (1987). Les produits de formule générale (Va) ou (Vb) peuvent être préparés selon ou par analogie avec les méthodes décrites ci-après dans les exemples.
Les nouveaux dérivés du lupane de formule générale (I) peuvent être purifiés le cas échéant par des méthodes physiques telles que la cristallisation ou la chromatographie.
Lorsque le dérivé du lupane de formule générale (I) présente des formes stéréoisomères, la préparation s'effectue au moyen de dérivés chiraux de formule générale (Va) ou (Vb). Il est entendu que lorsque l'on veut obtenir un intermédiaire chiral, la séparation s'effectue selon les méthodes habituelles qui n'affectent pas le reste de la molécule, telles que par exemple la chromatographie sur phase chirale, ou par conversion du mélange racémique en diastéréoisomères et séparation par cristallisation ou chromatographie.
Lorsque le radical R' (dans R) est un atome d'hydrogène, les produits selon l'invention peuvent être transformés en sels métalliques ou en sels d'addition avec une base azotée selon les méthodes connues en soi. Ces sels peuvent être obtenus par action d'une base métallique (par exemple alcaline ou alcalino terreuse), de l'ammoniaque ou d'une amine sur un produit selon l'invention, dans un solvant approprié. Le sel formé précipite après concentration éventuelle de la solution ; il est séparé par filtration.
Comme exemples de sels pharmaceutiquement acceptables peuvent être cités les sels avec les métaux alcalins (sodium, potassium, lithium) ou avec les métaux alcalinoterreux (magnésium, calcium), le sel d'ammonium, les sels de bases azotées (éthanolamine, diéthanolamine, triméthylamine, triéthylamine, méthylamine, propylamine, dusopropylamine, NN-diméthyléthanolamine, benzylamine, dicyclohexylamine, N-benzylphénéthylamine, NN'-dibenzyléthylènediamine, diphénylènediamine, benzhydrylamine, quinine, choline, argiinne, lysine, leucine, dibenzylamine).
Les nouveaux dérivés du lupane selon la présente invention sont particulièrement utiles pour la prophylaxie et le traitement du SIDA (syndrome d'immunodéfîcience acquise) et de syndromes associés [ARC (AIDS related complex)]. Par prophylaxie nous sous-entendons le traitement des sujets qui ont été exposés aux virus HIVs, en particulier les séropositifs asymptomatiques qui présentent le risque de développer la maladie dans les mois ou les années à venir après la primoinfection.
Les produits selon l'invention, qui sont inhibiteurs de l'effet cytopathogene du HIV et inhibiteurs de la production de transcriptase inverse en culture cellulaire à des concentrations dépourvues d'effet cytotoxique ou cytostatique, sont particulièrement intéressants. Il a été également démontré que les produits selon l'invention sont actifs pour le traitement des affections dans lesquelles interviennent des virus de la famille des herpès.
La famille des herpès est en effet à l'origine de nombreuses affections dont certaines peuvent être très graves. Elle comprend l'Herpès simplex, le varicella-zoster, le cytomégalovirus et le virus d'Epstein-Barr. L'Herpès simplex peut varier de formes bénignes comme l'herpès labial aux formes plus sérieuses comme l'herpès génital et peut même être responsable d'encéphalites mettant la vie du patient en danger. Le varicella zoster est le virus responsable de la varicelle et du zona, il peut également être à l'origine d'affections plus graves parmi lesquelles des encéphalites. Les infections à cytomégalovirus sont en général asymptomatiques chez les sujets sains, mais peuvent devenir la cause d'infections ophtalmiques graves (retinites) pouvant conduire à la cécité, de morbidité et de mortalité chez des sujets immunodéprimés (malades atteints du SIDA ou de toute autre immunodéfîcience, par exemple après transplantation d'organes ou après chimiothérapie anticancéreuse). Le cytomégalovirus est également responsable de manifestations cliniques sévères pour le foetus ou le nouveau-né dans le cas d'une primo-infection pendant la grossesse ou lors de la transfusion de sang séropositif à un nouveauné séronégatif.
Les activités ont été mises en évidence dans les tests suivants :
Activité vis-à-vis de l'effet cytopathogene du virus HIV Les produits en poudre ont été mis en solution à raison de 2 mg de produit par 2 ml (environ 4 × 10 M) dans du diméthylformamide (DMF) pour obtenir une solution stock de produit à 100 % de DMF. Le test est réalisé sur la lignée lymphoblastoide CEM 4. Dans une microplaque de 96 puits on dépose 25 μl/puits d'une solution de produit à tester dans du tampon phosphate isotonique (TPI) ou de TPI seul dans le cas des contrôles. Les produits sont étudiés à 8 concentrations, à raison de 6 puits par concentration. On ajoute alors 125 μl d'une suspension de cellules CEM (8 × 104 cellules par ml) dans le milieu RPMI contenant 10 % de sérum de veau foetal, 100 Ul/ml de pénicilline, 100 μg/ml de streptomycine et 2 μmoles/ml de glutamine et les microplaques sont incubées une heure à 37°C, sous une atmosphère contenant 5 % de gaz carbonique. Pour chaque concentration, l'essai est partagé en deux parties : une partie (3 puits) sur cellules infectées, pour la détermination de l'activité antivirale et l'autre partie (3 puits) sur cellules non infectées, pour déterminer la cytotoxicité des produits. On infecte alors la première série avec HIV-1 (100 μl par puits d'une suspension de virus LAV-1-BRU contenant 200-300 TCID50) tandis que l'autre série reçoit 100 μl de milieu RPMI tel que défini précédemment. Au bout de 5 jours d'incubation, 100 μl de cellules sont prélevés pour mesurer la viabilité cellulaire [déterminée selon une modification de la technique décrite par R. PAUWELS et coll., J. VIROL. Meth., 20, 309-321 (1988)]. On ajoute à ce prélèvement 10 μl d'une solution contenant 7 mg de MTT [bromure de 3- (4 , 5-dιméthyl 2-thiazolyl)-2,5-dιphényltétrazolium] par ml de tampon phosphate îsotonique. Après 3 heures d'incubation à 37°C le surnageant est enlevé. Le MTT est converti en un sel de formazan (bleu) uniquement à l'intérieur des cellules vivantes. On ajoute alors 100 μl d'isopropanol (contenant 0,04 mole/l d'acide chlorhydrique) et les microplaques sont agitées jusqu'à la solubilisation du bleu de formazan. L'absorbance à 540 nm est lue avec un lecteur automatique de réactions ELISA en microplaques. Cette absorbance est proportionnelle à la quantité de cellules vivantes.
Le taux de protection (en %) d'un produit donné est déterminé à partir des densités optiques (DO) par la formule :
DO (cell. traitées et inf.)-DO (cell. non traitées et inf.)
DO (cell. traitées et non inf.)-DO(cell. non traitées et inf .)
Le cas échéant la concentration inhibitrice 50 % est déterminée.
Les résultats démontrent que pour des concentrations de produit testé comprises entre 0,01 et 10 μg/ml, on obtient une diminution significative de l'effet cytopathogene.
Le taux de protection procuré par les produits selon l'invention est compris entre 20 et 100 %. La concentration inhibitrice 50 % des produits selon l'invention est comprise entre 0,05 et 50 μg/ml lorsqu'elle peut être déterminée.
Détermination multiplication virale par dosage de la transcriptase inverse du virus HIV L'activité de la transcriptase inverse est mesurée dans 10 μl de surnageant de cultuie. A l'aide du kit de dosage poly r (A) reverse transcriptase [3H]-SPA enzyme assay (RPQN 0100, Amersham, GB) selon la procédure piéconisée par le fabricant. Le temps de réaction est de 6 heures et la radioactivité comptée à l'aide d'un compteur microbeta [TOPCOUNT® PACKARD].
On observe des inhibitions de la production de transcriptase inverse associée au virus, comprises entre 20 et 100 % aux concentrations testées (0,01 à 10 μg/ml).
Action sur les virus de la famille des herpès : L'action des dérivés de formule générale (I) sur les virus de la famille des herpès a été mise en évidence dans la technique décrite par NEYTS et coll., Virology, 179, 41-50 (1990).
La technique employée consiste dans la mesure de l'effet cytopathogene du virus et de sa protection par utilisation des produits de formule générale (I). L'activité antivirale est appréciée par la mesure de la CE50 (concentration nécessaire pour inhiber 50 % de l'effet cytopathogéne induit par le virus).
Les exemples suivants donnés à titre non limitatif illustrent la présente invention. Exemple 1
A une solution de 1 g d'acide N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoique dans 30 cm3 de dichloromethane, on ajoute 1, 15 cm3 de chlorure de thionyle. La solution est agitée 15 heures à une température voisine de 20°C puis le mélange reactionnel est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu obtenu (1,05 g) et 695 mg de chlorhydrate de 5-amιno-2-chloro- benzoate de méthyle sont mis en suspension dans 50 cm3 de dichloromethane puis on ajoute 0,44 cm3 de triéthylamine. Après 15 heures d'agitation à une température voisine de 20°C, le mélange reactionnel est concentré sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 45°C. Au solide résiduel, on ajoute 25 cm3 d'acétate d'éthyle. L'insoluble est filtré et rincé par au total 25 cm d'acétate d'éthyle. Le filtrat est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 45°C. Le solide obtenu (1,06 g) est chromatographie sur une colonne de 4 cm de diamètre et 40 cm de haut de silice (0,02-0,045 mm) éluée par un mélange de dichloromethane et d'acétate d'éthyle 95:5 (en volumes), en recueillant des fractions de 25 cm3. Les 35 premières fractions sont éliminées, et l'éluant est remplacé par un mélange de dichloromethane et d'acétate d'éthyle 90:10 (en volumes) en recueillant des fractions de 25 cm3. Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient 380 mg de N'-[N-(3β-acétoxy-20(29)-lupèn-28-oyl)- 8-amιnooctanoyl]-3-amιno-6-chloro benzoate de méthyle sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,10 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichloromethane - acétate d'éthyle 95:5 en volumes). 0,45 cm3 de soude 5N sont ajoutés en 5 minutes environ à une solution de 370 mg de N'-[N-(3β-acétoxy-20(29)-lupèn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-amιno-6-chloro benzoate de méthyle dans 4,6 cm3 de méthanol et
2,3 cm de tetrahydrofurane et le mélange reactionnel est agité pendant 15 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange reactionnel est acidifié à un pH voisin de 2 à l'aide d'acide chlorhydrique 5N puis on ajoute 50 cm d'eau distillée. Après 1 heure d'agitation, le solide est séparé par filtration et rincé par 50 cm3 au total d'eau distillée puis séché à l'air. Le solide est rais en suspension dans 20 cm3 d'eau distillée, filtré et rincé par 50 cm3 au total d'eau distillée puis séché sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 285 mg d'acide N'- [N-(3β-hydroxy-20(29)-lupèn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-amino-6-chloro benzoïque fondant à une température voisine de 135-40°C (pâteux). L'acide N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-amιnooctanoιque peut être préparé de la manière suivante :
Après avoir chauffé au reflux pendant 3 heures un mélange de 330 mg d'acide 8-aminooctanoïque et 410 mg de chlorotriméthylsilane dans 50 cm3 de dichloromethane, la solution est refroidie vers 20°C et on ajoute 1 g de chlorure de 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle (préparé à partir d'acide 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oιque) puis 0,81 cm3 de triéthylamine. L'agitation est maintenue pendant 15 heures à une température voisine de 20°C et le solvant est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35ºC. Le résidu est chromatographie sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle (60-40 en volumes). Les fractions contenant le produit sont rassemblées et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 1,1 g d'acide N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoιque sous la forme d'un meringue blanche (Rf = 0,4 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cyclohexane, acétate d'éthyle (60-40 en volumes)).
Le 5-amino-2-chlorobenzoate de méthyle peut être obtenu de la manière suivante : A 100 cm3 de méthanol refroidis a une température voisine de -20°C, ajouter en 1 minute, 1, 5 cm3 de chlorure de thionyle. L'agitation est maintenue 5 minutes à une température voisine de -20°C puis on ajoute
1,72 g d'acide 5-amιno-2-chlorobenzoιque. On laisse revenir à une température voisine de 20°C en 30 minutes et maintient l'agitation
15 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange reactionnel est chauffé 6 heures à une température voisine du reflux. Le mélange est ramené à une température voisine de 20°C puis concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 20°C. Le solide obtenu est repris par 50 cm3 de diéthyléther, filtré, rincé par 60 cm au total de diéthyéther puis séché à pression atmosphérique. On obtient ainsi 2,6 g de chlorhydrate de 5-amino-2-chlorobenzoate de méthyle sous la forme d'un solide blanc. Exemple 2
A une solution de 1,3 g d'acide N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl) 8-aminooctanoique dans 6 cm3 de tetrahydrofurane et 0,282 cm3 de triéthylamine refroidie à une température voisine de -10°C, on ajoute en 10 minutes 0,273 cm de chloroformiate d'isobutyle. Le mélange reactionnel est agité 30 minutes à une température voisine de -10°C puis on ajoute goutte à goutte en 15 minutes une solution de 440 mg de chlorhydrate de 2-amino-5-fluorobenzoate d'éthyle dans 6 cm de dioxane et 2 cm3 d'eau distillée maintenant la température voisine de -10°C. Le mélange reactionnel est agité 48 heures à une température voisine de 20°C puis concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine dp 40"C. Le résidu obtenu est repris par
20 cm3 de dichloromethane et lavé successivement par 20 cm3 d'eau distillée, une solution aqueuse d'acide méthanesulfonique 1N puis 3 fois par 20 cm3 d'eau distillée. La phase organique est sechée sur sulfate de sodium puis concentrée à sec sous pression réduite
(2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le solide résiduel (1,6 g) est chromatographie sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de dichloromethane et d'acétate d'éthyle 97-3 (en volumes), les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 550 mg de N'-[N-(3β-acétoxy-20(29)-lupèn- 28-oyl)-8-aminooctanoyl]-2-amino-5-fluorobenzoate d'éthyle sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,20 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichloromethane - acétate d'éthyle 97:3 en volumes). 1,75 cm3 de soude 4N sont ajoutes en 5 minutes environ à une solution de 370 mg de N '-[N-(3β-acétoxy-20(29)-lupèn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]- 2-amιno-5-fluorobenzoate d'éthyle dans 3 cm3 de méthanol et 6 cm3 de tetrahydrofurane et le mélange reactionnel est agité pendant
15 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange reactionnel est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. Le résidu est repris par 30 cm3 d'eau distillée est acidifié à un pH voisin de 2 à l'aide de 2,2 cm3 d'acide chlorhydrique 5N . Après 1 heure d'agitation, le solide est séparé par filtra tion et rincé par 30 cm3 au total d'eau distillée puis séché sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 465 mg d'acide N'-[N-(3β-acétoxy-20(29)-lupèn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-2-amino-5-fluorobenzoïque fondant à une température voisine de 145°C.
Le 2-amιno-5-fluorobenzoate d'éthyle peut être obtenu de la manière suivante :
Dans une solution de 3 , 1 g d'acide 2-amino-5-fluoro benzoïque dans 50 cm d'éthanol à une température voisine de 40°C, on fait passer durant approximativement 20 minutes un courant d'acide chlorhydrique gazeux de manière à obtenir une solution saturée, puis on chauffe 3 heures à une température voisine du reflux. Le mélange reactionnel est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le solide pâteux obtenu est repris par un mélange de 20 cm3 d'éthanol et de 100 cm3 d'oxyde d' îsopropyle, puis refroidi à une température voisine de 5°C. Le solide est séparé par filtration, lavé par 60 cm au total d'oxyde d'isopropyle et séché sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. On obtient ainsi
3,54 g de chlorhydrate de 2-amιno-5-fluorobenzoate d'éthyle sous la forme d'un solide blanc fondant à une température voisine de 120°C.
Exemple 3
A une solution de 2 g d'acide N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoique dans 60 cm3 de dichloromethane, on ajoute 2,30 cm3 de chlorure de thionyle. La solution est agitée 15 heures à une température voisine de 20 °C puis le mélange reactionnel est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu obtenu (2,10 g) et mis en suspension dans 60 cm de dichloromethane, puis 1,16 g de 3-amιno-4-chlorobenzoate de méthyle sont ajoutés. Après 15 heures d'agitation à une température voisine de 20°C, le mélange reactionnel est concentré sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 45°C. Au solide résiduel, on ajoute 50 cm3 d'acétate d'éthyle. L'insoluble est filtré et rincé par au total 50 cm3 d'acétate d'éthyle. Le filtrat est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 45°C. Le solide obtenu (2,07 g) est chromatographie sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée par un mélange de dichloromethane et d'acétate d'éthyle 93:7 (en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient 540 mg de N'-[N-(3β-acétoxy-20(29)-lupèn-28-oyl)-8-amιnooctanoyl]-3-amino-4-chlorobenzoate de méthyle sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,22 ; chromatographie sur couche mince silice , éluant dichloromethane - acétate d'éthyle 93:7 en volumes). 0,66 cm3 de soude 5N sont ajoutés en 5 minutes environ à une solution de 370 mg de N'-[N-(3β-acétoxy-20(29)-lupèn-28-oyl)-8-aminooctanoyl)-3-amino-4-chlorobenzoate de méthyle dans 6,6 cm de méthanol et 3,3 cm de tetrahydrofurane et le mélange reactionnel est agité pendant 15 heures à une température voisine de 20°C, acidifié à un pH voisin de 2 à l'aide d'acide chlorhydrique 5N puis concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu est repris par 20 cm d'eau distillée après 1 heure d'agitation à une température voisine de 20°C. Le solide est séparé par fil- tration et rincé par 50 cm au total d'eau distillée puis séché sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 450 mg d'acide N'-[N-(3β-hydroxy-20(29)-lupèn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-amino-4-chlorobenzoïque fondant à une température voisine de 135-140°C (pâteux).
Le 3-amino-4-chlorob nzoate de méthyle peut être obtenu de la manière suivante :
A 100 cm de méthanol refroidis à une température voisine de -20°C, on ajoute en 1 minute, 1,5 cm3 de chlorure de thionyle. L'agitation est maintenue 5 minutes à une température voisine de -20°C puis on ajoute 1,72 g d'acide 3-amino-4-chlorobenzoïque. On laisse revenir à une température voisine de 20°C en 30 minutes et on maintient l'agitation 15 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange reactionnel est chauffé 3 heures à une température voisine du reflux.
Le mélange est ramené à une température voisine de 20°C puis concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 20°C. Le solide obtenu (2,25 g) est repris par 50 cm3 de diéthyléther, filtre, rince par 40 cm au total de diethyether puis séché sous pression atmosphérique. On obtient ainsi 2,09 g de chlorhydrate de 3-amino-4-chlorobenzoate de méthyle sous la forme d'un solide blanc. Le chlorhydrate est mis en solution dans un mélange de 50 cm3 d'eau distillée, 5 cm3 d'hydroxyde de sodium 2N et 50 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase aqueuse est décantée, la phase aqueuse est extraite pai 25 cm3 d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont séchées sur sulfate de magnésium puis concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 1,71 g de 3-amino-4-chlorobenzoate de méthyle.
Exemple 4
A une solution de 1 g de N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoique, dans 100 cm3 de dichloromethane, on ajoute 300 mg de 3-amino-4-méthylbenzoate de méthyle, 240 mg d'hydrate de 1 -hydroxybenzotriazole, 610 mg de chlorhydrate de 1-(3-dιméthylamιnopropyl)-3-éthylcarbodumide et 0,67 cm de triéthylamine. La solution est agitée pendant 12 heures à une température voisine de 20°C puis le solvant est éliminé sous presssion réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40ºC. On ajoute 50 cm3 d'eau distillée et 50 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase organique est extraite et la phase aqueuse est épuisée par 75 cm au total d'acétate d'éthyle. Les extraits organiques sont rassemblés, séchés sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrés à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (1,8 g) est chromatographie sur une colonne de 5,5 cm de diamètre contenant 240 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de chlorure de méthylène et d'acétate d'éthyle 9-1 en volumes en recueillant des fractions de 75 cm3. Les 43 premières fractions sont éliminées; les 37 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 950 mg de N'-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-amιnooctanoyl)-3-amino-4-méthylbenzoate de méthyle, sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,18 ; chromato graphie sur couche mince de silice ; éluant : chlorure de méthylène-acétate d'éthyle (9-1 en volumes)).
Une solution de 950 mg de N'-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-amino-4-méthylbenzoate de méthyle, 1,4 cm3 de soude 5N, 6 cm3 de tetrahydrofurane et 12 cm3 de méthanol est agitée 24 heures à une température voisine de 25°C puis 1,5 cm3 d'acide chlorhydrique 5N et 10 cm3 d'eau distillée sont ajoutés. Après 30 minutes sous agitation, le solide est séparé par filtration, lavé par 50 cm3 au total d'eau distillée et séché à l'air. On obtient ainsi 720 mg d'acide N'-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-amino-4-méthylbenzoïque, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 155°C.
Exemple 5
Une solution de 420 mg d'acide 3-amino-2-méthylbenzoique et 0,71 cm3 de chlorotriméthylsilane dans 30 cm3 de dichloromethane est chauffée au reflux pendant 3 heures, puis refroidie à une température voisine de 25°C. A cette solution, on ajoute successivement 30 cm3 de dichloromethane, 1,5 g d'acide N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoique, 360 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole, 900 mg de chlorhydrate de 1-(3-dιméthylamιnopropyl)-3-éthylcarbodnmιde et 1,47 cm3 de triéthylamine. La solution est agitée pendant 12 heures à une température voisine de 20°C puis le solvant est éliminé sous presssion réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (4,5 g) est chromatographie sur une colonne de 6 cm de diamètre contenant 240 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de chlorure de méthylène, d'acétate d'éthyle et de méthanol 9-9-1 en volumes en recueillant des fractions de 75 cm . Les 7 premières fractions sont éliminées; les 43 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 780 mg d'acide N'-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-amιnooctanoyl]-3-amino-2-méthylbenzoïque, sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,1 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chlorure de méthylène-acétate d'éthyle-méthanol (9-9-1 en volumes)). Une solution de 780 mg d'acide N '-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-amιno-2-méthylbenzoïque, 0,7 cm3 de soude 5N, 5 cm3 de tétrahydrofuiane et 10 cm de méthanol est agitée 24 heures à une température voisine de 25°C puis 1,0 cm3 d'acide chlorhydrique 5N et 10 cm3 d'eau distillée sont ajoutés. Apres 30 minutes sous agitation, le solide est séparé par filtration, lavé par 50 cm3 au total d'eau distillée et séché à l'air. Le résidu obtenu (650 mg) est chromatographie sur une colonne de 3,5 cm de diamètre contenant 115 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de méthanol et d'acétate d'éthyle 1-19 en volumes en recueillant des fractions de 50 cm3. Les 3 premières fractions sont éliminées ; les 4 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 570 mg qui sont purifiés une nouvelle fois par chromatographie (colonne de 3,5 cm de diamètre, 100 g de silice (0,02-0,045 mm), éluant : acétate d'éthyle, volume des fractions : 75 cm3). Les 19 premières fractions sont éliminées ; les 31 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite
(2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Les 190 mg obtenus sont dissous dans 1 cm3 de méthanol et additionnés de 20 cm3 d'eau distillée. Le solide obtenu est séparé par filtration et lavé par 100 cm3 d'eau distillée. On obtient ainsi 330 mg d'acide N'-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-amino-2-méthylbenzoïque, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 152°C.
Exemple 6 A une solution de 1 g d'acide N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoïque, dans 100 cm3 de dichloromethane, on ajoute 330 mg de 3-amιno-4-méthoxybenzoate de méthyle, 240 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole, 610 mg de chlorhydrate de 1-(3-dιméthylamιnopropyl)-3-éthylcarbodiimide et 0,67 cm3 de triéthylamine. La solution est agitée pendant 12 heures à une température voisine de 20°C puis le solvant est éliminé sous presssion réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On ajoute 50 cm3 d'eau distillée et 50 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase organique est extraite et la phase aqueuse est épuisée par 75 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les extraits organiques sont rassemblés, séchés sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrés à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (1,6 g) est chromatographie sur une colonne de 5 cm de diamètre contenant 210 g de silice (0,02- 0,045 mm), éluée avec un mélange de chlorure de méthylène et d'acé- tate d'éthyle 19-1 en volumes en recueillant des fractions de 75 cm3. Les 67 premières fractions sont éliminées; les 63 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 780 mg de N'-[N-(3β-acétoxy-lup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-amino-4-méthoxybenzoate de méthyle, sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,18 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chlorure de méthylène-acétate d'éthyle (19-1 en volumes)).
Une solution de 780 mg de N'-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl)-3-amino-4-méthoxybenzoate de méthyle, 1,4 cm3 de soude 5N, 5 cm3 de tetrahydrofurane et 10 cm3 de méthanol est agitée 24 heures à une température voisine de 25ºC et on ajoute 2,0 cm3 d'acide chlorhydrique 5N et 10 cm3 d'eau distillée. Après 30 minutes sous agitation, le solide est séparé par filtration, lavé par 50 cm3 au total d'eau distillée et séché à l'air. On obtient ainsi 650 mg d'acide N'-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-amino-4-méthoxybenzoique, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 138°C.
Exemple 7
A une solution, refroidie à -10°C, de 1,96 g de N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoïque, dans 9 cm3 de tétrahydrofuranne et 0,45 cm3 de triethylamine, on ajoute 0,3 cm3 de chloroformiate d'isobutyle. L'agitation est maintenue pendant 30 minutes et on ajoute goutte a goutte une solution de 597 mg de 4-amino-3-méthoxybenzoate de méthyle dans 9 cm3 de dioxane et 3 cm3 d'eau distillée. La solution est agitée pendant 12 heures à une température voisine de
20°C puis on ajoute 80 cm3 d'eau distillée et 20 cm3 de chlorure de méthylène. La phase organique est extraite et la phase aqueuse est épuisée par 40 cm au total de chlorure de méthylène. Les extraits organiques sont rassemblés, séchés sur du sulfate de magnésium an hydre et concentrés à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (1,74 g) est chromatographie sur une colonne de 2,5 cm de diamètre contenant 50 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de chlorure de méthylène et d'acétate d'éthyle 19-1 en volumes en recueillant des fractions de 5 cm3. Les 73 premières fractions sont éliminées ; les 80 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (20 mm de mercure;
2,7 kPa) a une tempeiature voisine de 40°C. On obtient ainsi 1,18 g de N'-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-4-amιno-3-méthoxybenzoate de méthyle, sous la forme d'une meringue blanche
(Rf = 0,41 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chlorure de méthylène-acétate d'éthyle (19-1 en volumes)).
Une solution de 420 mg de N'-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-4-amino-3-methoxybenzoate de méthyle, 1,3 cm3 de soude 4N, 3,5 cm3 de tetrahydrofurane et 2 cm3 de méthanol est agitée
24 heures à une température voisine de 25°C puis le solvant est évaporé à sec, sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu est dilué dans 20 cm3 d'eau distillée et on ajoute 2 cm3 d'acide chlorhydrique 4N. Après 1 heure sous agitation, le solide obtenu est séparé par filtration, lavé par 50 cm3 au total d'eau distillée et séché sous pression réduite (15,5 Pa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 172 mg d'acide N'-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-4-amιno-3-méthoxybenzoïque, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 133°C. Exemple 8
A une solution de 2 g de N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-amι-nooctanoique, dans 100 cm3 de dichloromethane, on ajoute 2,13 cm3 de chlorure de thionyle. L'agitation est maintenue pendant 15 heures puis le solvant est évaporé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On ajoute au résidu une solution de 1,51 g de 4-amino-5-chloro-2-methoxybenzoate de méthyle et 0,84 cm3 de triethylamine dans 100 cm de dichloromethane. La solution est agitée pendant 15 heures à une température voisine de 20°C puis on ajoute 100 cm d'eau distillée. La phase organique est extraite, la vée 2 fois par 100 cm3 d'eau distillée, séchée sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40ºC. Le résidu obtenu (3,2 g) est chromatographie sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 70-30 en volumes. Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 1,7 g de N '-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-amιnooctanoyl]-4-amιno-5-chloro-2-méthoxybenzoate de méthyle, sous la forme d'une poudre blanche fondant vers 156°C.
Une solution de 1,7 g de N'-[N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-4-amιno-5-chloro-2-méthoxybenzoate de méthyle,
25,5 cm3 de soude 5N, 25,5 cm3 de tetrahydrofurane et 51 cm3 de méthanol est agitée 15 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange reactionnel est dilué par 20 cm3 de méthanol puis acidifié par de l'acide chlorhydrique 2N. On ajoute 200 cm3 d'eau distillée et après 2 heures sous agitation, le solide obtenu est séparé par filtration, lavé jusqu'à neutralité par de l'eau distillée et séché sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. La poudre obtenue est chromatographiée sur une colonne de silice (0,02- 0,045 mm) éluée avec de l'acétate d'éthyle. Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite
(2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu est repris par
10 cm3 d'éther éthylique, filtré, lavé par 5 cm3 d'éther éthylique et séché sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de
20°C. On obtient ainsi 120 mg d'acide N'-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn- 28-oyl)-8-aminooctanoyl]-4-amino-5-chloro-2-méthoxybenzoïque, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 164°C.
Exemple 9 A une suspension de 383 mg d'acide 3-méthoxycarbonyl-5-nitro ben- zoïque dans 20 cm3 de dichloromethane, on ajoute 260 mg d'hydrate de
1-hydroxybenzotriazole et 916 mg de N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-diaminoheptane dans 20 cm3 de dichloromethane. A la solutior obtenue, on ajoute successivement 844 mg de chlorhydrate de 1-(3- diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodnmιde puis 0,87 cm3 de triethylamine en solution dans 20 cm3 de dichloromethane. La solution est agitée à une température voisine de 20°C durant 15 heures puis le mélange reactionnel est lavé 3 fois avec 20 cm d'eau distillée. La phase organique est ensuite séchée sur du sulfate de sodium est concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu est chromatographie sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec du dichloromethane. Les 120 fractions de 2 cm3 sont éliminées et l'éluant est remplacé par un mélange de dichloromethane et d'acétate d'éthyle (8:2) (en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 740 mg de N-[(3β-acétoxy-20(29)-lupèn-28-oyl)-7-aminoheptylcarbamoyl]-5-nιtrobenzoate de méthyle sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,80 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichloromethane - acétate d'éthyle 8:2 en volumes). 9 cm3 de soude N sont ajoutes en 5 minutes environ a une solution de
740 mg de 3-[N-(3β-acétoxy-20(29)-lupèn-28-oyl)-7-aminoheptylcarbamoyl]-5-nιtrobenzoate de méthyle dans 4 cm3 de méthanol et 9 cm3 de tetrahydrofurane et le mélange reactionnel est agité pendant
15 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange reactionnel est acidifié à un pli voisin de 2 à l'aide 4 cm3 d'acide chlorhydrique
4N. Après 1 heure d'agitation, on ajoute 100 cm3 d'eau distillée et
50 cm de dichloromethane. La phase organique est décantée, la phase aqueuse est extraite par 50 cm3 de dichloromethane. Les phases organiques réunies sont séchée sur sulfate de sodium, puis concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le solide obtenu (360 mg) est chromatographie sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée par un mélange de chloroforme, de méthanol et d'ammoniaque 24:6:1 (en volumes), en recueillant des fractions de 5 cm Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient 170 mg d'acide 3-[N-(3β-hydroxy-20(29)-lupèn-28-oyl)-7-aminoheptylcarbamoyl]-5-nιtrobenzoïque fondant à une température voisine de 118°C. Le N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-diaminoheptane peut être obtenu de la manière suivante : 1000 cm3 d'une solution dans le dichloromethane de chlorure de 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle (préparée à partir de 30 g d'acide 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oïque) sont ajoutés goutte à goutte en environ 10 heures à une solution de 46,8 g de 1 , 7-diaminoheptane dans
120 cm 3 de dichloromethane. Le mé ,lange re ,actionnel est agite durant
15 heures à une température voisine de 20°C puis concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40ºC. Le résidu est repris par 2000 cm3 d'eau distillée. Le solide est filtré, lavé par 3 fois 200 cm3 d'eau distillée, puis mis en solution dans
500 cm d'éthanol. La solution est filtrée, le solide est lavé 2 fois avec 50 cm d'éthanol et les filtrats sont évaporés à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 50°C. Le résidu obtenu est chromatographie sur colonne de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de chloroforme, méthanol et ammoniaque à 20 % (24-6-1 en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 28 g de N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-diaminoheptane sous la forme d'une meringue jaune. (Rf = 0,25 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chloroforme-méthanol-ammoniaque à 20 % (24-6-1 en volumes)).
Le chlorure de 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyle est préparé d'après J. PROVITA et A. VYSTRCIL, Collect. Czech. Chem. Commun., 41, 1200 (1976).
Exemple 10
En opérant par analogie avec l'exemple 1, l'acide N-{N-[3β-hydroxylup-20(29)-en-28-oyl]-8-aminooctanoyl}-4-amino-2-hydroxybenzoïque a été préparé à partir de l'acide 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoïque et de 4-amino-2-hydroxybenzoate de méthyle, pF=206°C, (28%).
L'acide 3β-acétoxyluρ-20 (29) -èn-28-oyl] -8-aminooctanoïque peut être obtenu comme décrit dans l'exemple 1 . Le 4-amino-2-hydroyybenzoate de méthyle peut être préparé selon D.J. Drain, D.D. Martin, B.W. Mitchell, D.E. Seymour et F. S. Spnng, J. Chem. Soc, 1498-1503 (1949).
Exemple 11 En opérant par analogie avec l'exemple 1, l'acide N-{N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-amιnooctanoyl)-4-amιno-2-chlorobenzoïque a été préparé à partir de l'acide 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoïque et de 4-amino-2-chlorobenzoate de méthyle, pF=165°C, (54%). L'acide 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoique peut être obtenu comme décrit dans l'exemple 1 .
Le 4-amino-2-chlorobenzoate de méthyle peut être préparé selon M. Rubin, U.C. Marks, II.Wishinsky et A. Lanzilotti, J. Am.Chem. Soc., 68, 623-24 (1946). Exemple 12
En opérant par analogie avec l'exemple 1, l'acide N-{N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl}-3-amιno-2-hydroxybenzoïque a été préparé à partir de l'acide 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoιque et de 3-amino-2-hydroxybenzoate de méthyle, pF=132°C, (22%).
L'acide 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoique peut être obtenu comme décrit dans l'exemple 1 .
Le 3-amino-2-hydroxybenzoate de méthyle peut être préparé selon A. Einborn et B. Pfyl J. Liebig's Ann. Chem., 311, 34-73 (1900). Exemple 13
En opérant par analogie avec l'exemple 1, l'acide N-{N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl}-5-amino-2-hydroxybenzoïque a été préparé à partir de l'acide 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoïque et de 5-amino-2-hydroxybenzoate de méthyle, pr=218°C, (6%). L'acide 3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoïque peut être obtenu comme décrit dans l'exemple 1 .
Le 5-amino-2-hydroyybenzoate de méthyle peut être préparé selon F. Wessely, K. Benedikt et II. Benger, Monat. Chem., 80, 197-201 (1949). Exemple 14
A une solution de 310 mg d'acide 5-méthylιsophtalιque dans 55 cm3 de dichloromethane, on ajoute 0,50 cm3 de triethylamine et 0,15 cm-3 de chlorure d'oxalyle. Après 20 minutes d'agitation à une température voisine de 25°C, on ajoute une solution de 910 mg de N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-dιamιnoheptane dans 10 cm3 de dichloromethane. La solution est agitée à une température voisine de 20°C durant 5 heures puis le mélange reactionnel est lavé avec 20 cm3 d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 0,5N et 60 cm3 d'eau distillée. La phase organique est ensuite séchée sur du sulfate de magnésium et concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (1,1 g) est chromatographie sur une colonne de silice (0,02 - 0,045 mm) éluée avec un mélange de chloroforme, de méthanol et d'ammoniaque 24-6-1 (en volumes) . Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 400 mg d'acide N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-3-(7-aminoheptylcarbamoyl)-5-méthylbenzoïque sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,37; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichloromethane - méthanol 19:1 en volumes). 1 cm3 de soude 5N sont ajoutés à une solution de 400mg d'acide N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)- . -(7-aminoheptylcarbamoyl)-5-méthyl- benzoïque dans 40 cm3 de méthanol et 20 cm3 de tetrahydrofurane et le mélange reactionnel est agité 38 heures à une température voisine de
20°C. Le mélange reactionnel est acidifié à un pH voisin de 2 par de l'acide chlorhydrique concentré. Après une heure d'agitation, on ajoute 150 cm3 d'eau distillée. Le solide est filtré et rincé par 25 cm3 d'eau distillée. Le solide est dissout dans 30 cm3 de chloroforme, séché sur du sulfate de magnésium, puis évaporé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 250 mg d'acide N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-3-(7-aminoheptylcarbamoyl)-5-méthylbenzoique sous la forme d'un solide blanc fondant à une température voisine de 180°C.
Le N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-dιaminoheptane peut être obtenu comme décrit à l'exemple 9.
Exemple 15
En opérant par analogie avec l'exemple du RPR107926 (Exemple 9 de ST93023), l'acide N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-3-(7-aminoheptylcarbamoyl)-5-bromobenzoïque a été préparé à partir de N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-dιaminoheptane et d'acide 3-bromo-5-méthoxycarbonylbenzoique, pF=121°C, (31%).
Le N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-dιaminoheptane peut être obtenu comme décrit à l'exemple 9.
L'acide 3-bromo-5-méthoxycarbonylbenzoïque peut être préparé de la manière ci-dessous. Une suspension de 5 g de 3-bromoιsophtalate de méthyle dans 20 cm3 d'une solution 0,50 N d'hydroxyde de baryum est agitée 20 heures à une température voisine de 20°C. Le solide est filtré, lavé avec 5 cm3 de méthanol puis traité par 20 cm3 d'acide chlorhydrique 4N. La phase aqueuse est extraite par 40 cm3 de diéthylether. Les phases organiques réunies sont lavées par 40 cm3 d'eau distillée, séchée sur du sulfate de magnésium, puis évaporées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le solide obtenu (2,19 g) est chromatographie sur une colonne de silice (0,02 - 0,045 mm) éluée avec un mélange de chloroforme, de méthanol et d'ammoniaque 24-6-1 (en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 1,65 g d'acide 3-bromo-5-méthoxycarbonylbenzoique sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,80; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant: chloroforme, méthanol et ammoniaque 24-6-1 (en volumes). Exempl e 16
En opérant par analogie avec l'exemple 9, l'acide N- (3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-4-(7-aminoheptylcarbamoyl)-2-fluorobenzoïque a été préparé à partir de N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-di-aminoheptane et d'acide 3-fluoro-4-méthoxycarbonylbenzoιque, pF=150°C, (32%).
Le N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-diaminoheptane peut être obtenu comme décrit à l'exemple 9.
L'acide 3-fluoro-4-méthoxycarbonylbenzoïque peut être préparé de la manière suivante:
Une solution de 2,5 g de fluoro téréphtalate de diméthyle et de 11,8 cm3 d'hydroxyde de sodium 1N dans 30 cm3 de méthanol est portée durant 90 min. à une température voisine du reflux. Le milieu reactionnel refroidi à une température voisine de 25°C est acidifié par 12 cm3 d'acide chlorhydrique 1N. Le solide blanc formé est filtré, lavé par moyen de 100 cm3 d'eau distillée puis mis en solution dans 100 cm5 d'acétate d'éthyle. La phase organique est séchée sur sulfate de- magnésium, puis évaporée sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (520 mg) est recristallise successivement dans le 1,2-dιchloroéthane et dans l'eau. On obtient ainsi 230 mg d'acide 3-fluoro-4-éthoxycarbonylbenzoïque sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,49; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichloromethane - méthanol 17:3 en volumes). Exemple 17
En opérant par analogie avec l'exemple 9, l'acide 5-(t-butyloxycarbonylamino)-3-{N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-7-aminoheptylcarbamoyl)benzoïque a été préparé à partir de N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-diaminoheptane et d'acide 5-(t-butyloxycarbonylamino)-3-méthoxycarbonylbenzoïque, pF=180-90 °C, (38%). Le N-(3β-acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl)-1,7-dιaminoheptane peut être obtenu comme décrit à l'exemple 9.
L'acide 3-(t-butyloxycarbonylamino)-5-méthoxycarbonylbenzoïque peut être préparé de la manière suivante: Une solution de 2 g de 3-(t-butyloxycarbonylamino)-5-méthoxycarbonylbenzoate de méthyle et de 428 mg d'hydroxyde de potassium dans un mélange de 40 cm3 de méthanol et de 5 cm3 de diméthylformamide est agitée 20 heures à une température voisine de 25°C puis 20 heures à une température voisine de 50°C. Le millieu reactionnel est évaporé à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C puis repris par 150 cm3 d'eau distillée et acidifié à pH = 2 au moyen d'acide chlorhydrique 4N. La suspension obtenue est extraite au moyen de 200 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée par 200 cm3 d'eau distillée. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium, puis évaporée sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (3,4 g) est chromatographie sur une colonne de silice (0,02 - 0,045 mm) éluée avec un mélange de dichloromethane et de méthanol 9:1 (en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 2,4 g acide 3-(t-butyloxycarbonylamino)-5-méthoxycarbonylbenzoïque sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,34; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichloromethane - méthanol 9:1 en volumes).
A une solution de 5 g de 5-amιnoιsophtalate de diméthyle et de 24 cm3 d'hydroxyde de sodium 2N, refroidie à 5°C, on ajoute goutte à goutte en approximativement 30 min. une solution de 6,27 g de carbonate de di tert-butyle dans 12 cm-3 de tetrahydrofurane. Après
5heures de chauffage à une température voisine de 50°C, 6,27 g de carbonate de di tert-butyle dans 12 cm3 de tetrahydrofurane sont ajoutés et le milieu reactionnel est chauffé 8 heures à une température voisine de 50°C. Le mélange reactionnel est ensuite refroidi à une température voisine de 25°C puis concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Au résidu obtenu, 100 cm3 d'eau distillée sont additionnés. La phase aqueuse est extraite par 200 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée successivement par 200 cm3 d'eau distillée, 200 cm*3 d'une solution saturée en acide citrique, 200 cm3 d'une solution saturée en chlorure de sodium et finalement par 100 cm3 d'eau distillée. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium, puis évaporée sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (5,0 g) est chromatographie sur une colonne de silice (0,02 - 0,045 mm) éluée avec du dichlorométhane. Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 3,52 g de 3-(t-butyloxycarbonylamino)-5-méthoxycarbonylbenzoate de méthyle sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,25; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichloromethane).
La présente invention concerne également les compositions pharmaceu- tiques contenant au moins un produit de formule générale (I) éventuellement sous forme de sel, à l'état pur ou sous forme d'une association avec un ou plusieurs diluants ou adjuvants compatibles et pharmaceutiquement acceptables, ou avec un autre agent destiné au traitement du SIDA, un agent antiviral, immunomodulateur ou antimicrobien.
La composition selon l'invention est capable de maintenir en vie les cellules infectées par un virus IIIV et donc de réduire la progression vers le SIDA ou de diminuer sa gravité chez les sujets déjà infectés en réduisant la mortalité des cellules infectées. Les compositions peuvent être utilisées par voie orale, parentérale ou rectale.
Les compositions peuvent être utilisées à titre curatif ou à titre préventif chez des sujets présentant une immunodéfîcience et/ou infectés par un virus HIV. Bien entendu, la constitution de ces compositions sera adaptée au cas particulier du tractus digestif des îmmunodéprimés.
Comme compositions solides pour administration orale peuvent être utilisés des comprimés, des pilules, des gélules, des poudres ou des granulés. Dans ces compositions, le produit actif selon l'invention est mélangé à un ou plusieurs diluants ou adjuvants inertes, tels que saccharose, lactose ou amidon.
Ces compositions peuvent comprendre des substances autres que les diluants, par exemple un lubrifiant tel que le stéarate de magnésium ou un enrobage destiné à une libération contrôlée.
Comme compositions liquides pour administration orale, on peut utiliser des solutions pharmaceutiquement acceptables, des suspensions, des émulsions, des sirops et des élixirs contenant des diluants inertes tels que l'eau ou l'huile de paraffine. Ces compositions peuvent également comprendre des substances autres que les diluants, par exemple des produits mouillants, édulcorants ou aromatisants.
Les compositions pour administration parentérale, peuvent être des solutions stériles ou des émulsions. Comme solvant ou véhicule, on peut employer le propylèneglycol, un polyéthylèneglycol, des huiles végétales, en particulier l'huile d'olive, des esters organiques injectables, par exemple l'oléate d'éthyle.
Ces compositions peuvent également contenir des adjuvants, en particulier des agents mouillants, îsotonisants, émulsifiants, dispersants et stabilisants.
La stérilisation peut se faire de plusieurs façons, par exemple à l'aide d'un filtre bactériologique, par irradiation ou par chauffage. Elles peuvent également être préparées sous forme de compositions solides stériles qui peuvent être dissoutes au moment de l'emploi dans de l'eau stérile ou tout autre milieu stérile injectable.
Les compositions par administration rectale sont les suppositoires ou les capsules rectales, qui contiennent outre le principe actif, des excipients tels que le beurre de cacao, des glycérides semi-synthétiques ou des polyéthylèneglycols . En thérapeutique humaine, le médecin déterminera la posologie qu'il estime la plus appropriée en fonction d'un traitement préventif ou curatif, en fonction de l'âge, du poids, du degré de l'infection et des autre facteurs propres au sujet à traiter. Généralement, les doses sont comprises entre 10 et 100 mg/kg par voie orale pour un adulte.
La présente invention concerne également les associations constituées d'un ou plusieurs dérivés du lupane de formule générale (I), et/ou le cas échéant leurs sels, et d'un autre principe actif connu pour son activité anti-rétrovirus, éventuellement en présence d'excipients pharmaceutiquement acceptables.
Les agents anti-rétrovirus pouvant être associés sont choisis parmi des agents compatibles et inertes vis-à-vis du dérivé du lupane de formule générale (I). A titre non limitatif ces agents sont choisis parmi des inhibiteurs de la reverse transcriptase [zidovudine (AZT), didanosine (DDI), didéoxycytidine (DDC), TIBO, névirapine, PMEA, D4T, pyridones, α-APA, HEPT... ], parmi des inhibiteurs de la protéase [comme par exemple le RO 31-8959 ou le A 77003], ou parmi des inhibiteurs de la protéine tat [comme par exemple le RO 24-7429].
L'exemple suivant illustre une composition selon l'invention.
Exemple
On prépare selon la technique habituelle des comprimés de produit actif ayant la composition suivante :
- acide N'-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl]-3- amιno-2-méthylbenzoιque 100 mg
- amidon 332 mg
- silice 120 mg - stéarate de magnésium 12 mg

Claims

REVENDICATIONS
1 - Un dérivé du lupane de formule générale :
Figure imgf000034_0001
dans laquelle R représente un radical de formule générale :
Figure imgf000034_0002
dans laquelle R' est un atome d'hydrogène ou de radical alcoyle,
X représente un radical carbamoyle, N-méthyl carbamoyle, aminocarbonyle ou N-méthylaminocarbonyle, Y est un radical phénylène substitué de formule générale :
Figure imgf000034_0003
dans laquelle R1 et R2 identiques ou différents représentent des atomes d'hydrogène ou d'halogène ou des radicaux alcoyle, alcoyloxy ou nitro, l'un au moins étant autre que l'hydrogène, R° et R°° identiques ou différents sont des atomes d'hydrogène ou des radicaux alcoyle et, n est un nombre entier de 6 à 12, m est un nombre entier de 0 à 2 et p est un nombre entier de 0 à 2 et sont tels que m + n + p soit compris entre 6 et 12, étant entendu que les radicaux alcoyle sont droits ou ramifiés et contiennent 1 à 4 atomes de carbone, ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables lorsqu'ils existent et le cas échéant leurs formes stéréoisomères et leurs mélanges.
2 - Un dérivé du lupane selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit rie l'acide N'-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-amιno-4-méthylbenzoïque.
3 - Un dérivé du lupane selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit de l'acide N'-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-3-aιnino-2-méthylbenzoïque.
4 - Un dérivé du lupane selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit de l'acide N'-[N-(3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-aminooctanoyl]-4-amιno-3-méthoxybenzoïque.
5 - Un dérivé du lupane selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit de l'acide N-{N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl)-4-amino-2-chlorobenzoïque. 6 - Un dérivé du lupane selon la revendication 1 , caractérisé en ce qu'il s'agit ri<- l'acide M-[N-[3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl]-8-aminooctanoyl)-5-amino-2-hydroxybenzoïque.
7 - Procédé de préparation d'un dérivé du lupane selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on fait agir une amine ou un acide de formules générales :
Figure imgf000035_0001
ou
Figure imgf000035_0002
dans lesquelle- Rº , Rº°, m et p sont définis comme dans la revendication 1 et R" ' est un atome d'hydrogène ou un radical méthyle, sur un dérivé du lupane de formule générale :
Figure imgf000036_0001
dans laquelle R" représente un radical de formule générale :
— (CH2)n—COOH
ou
— (CH2)n-NH-R"' dans lesquelles n est défini comme dans la revendication 1 et R" ' est défini comme ci-dessus, puis élimine le cas échéant des radicaux protecteurs et transforme éventuellement le produit obtenu en un sel, lorsqu'ils existent.
8 - Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient au moins un produit selon la revendication 1, à l'état pur ou en association avec tout diluant ou adjuvant compatible et pharmaceutiquement acceptable et/ou en association avec un autre principe actif antiviral, immunomodulateur ou antimicrobien.
PCT/FR1994/000532 1993-05-11 1994-05-06 Nouveaux derives du lupane, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent WO1994026695A1 (fr)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP6525050A JPH08509968A (ja) 1993-05-11 1994-05-06 新規ルパン誘導体、その製造およびそれを含む医薬組成物
EP94916260A EP0698008A1 (fr) 1993-05-11 1994-05-06 Nouveaux derives du lupane, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
AU67879/94A AU6787994A (en) 1993-05-11 1994-05-06 Novel lupane derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions containing same

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9305619A FR2705094B1 (fr) 1993-05-11 1993-05-11 Nouveaux dérivés du lupane, leur préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
FR93/05619 1993-05-11

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO1994026695A1 true WO1994026695A1 (fr) 1994-11-24

Family

ID=9446985

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/FR1994/000532 WO1994026695A1 (fr) 1993-05-11 1994-05-06 Nouveaux derives du lupane, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent

Country Status (7)

Country Link
EP (1) EP0698008A1 (fr)
JP (1) JPH08509968A (fr)
AU (1) AU6787994A (fr)
CA (1) CA2162702A1 (fr)
FR (1) FR2705094B1 (fr)
WO (1) WO1994026695A1 (fr)
ZA (1) ZA943201B (fr)

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998034603A1 (fr) * 1997-02-11 1998-08-13 Regents Of The University Of Minnesota Utilisation de la betuline et d'analogues dans le traitement de l'infection par herpesvirus
EP0943620A2 (fr) * 1998-03-18 1999-09-22 Dabur Research Foundation Dérivés de l'acide bétulinique pour inhibition de la croissance des cancers
US6048847A (en) * 1997-09-30 2000-04-11 Dabur Research Foundation Use of betulinic acid and its derivatives for inhibiting cancer growth and a method of monitoring this
US6214814B1 (en) 1998-03-18 2001-04-10 Dabur Research Foundation Use of betulinic acid derivatives for inhibiting cancer growth
US6228850B1 (en) 1997-09-30 2001-05-08 Dabur Research Foundation Antiangiogenic activity of betulinic acid and its derivatives
US6369101B1 (en) 1999-02-26 2002-04-09 Regents Of The University Of Minnesota Therapeutic method to treat herpes virus infection
WO2003059883A1 (fr) * 2002-01-11 2003-07-24 Meiji Seika Kaisha, Ltd. Derives d'acide (4-oxopiperidine-1-yl) et leur procede de preparation
US6670345B1 (en) 1997-09-30 2003-12-30 Dabur Research Foundation Betulinic acid derivatives for inhabiting cancer growth and process for the manufacture of betulinic acid

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6124362A (en) * 1998-07-17 2000-09-26 The Procter & Gamble Company Method for regulating hair growth
US6482857B1 (en) 1998-07-17 2002-11-19 The University Of Texas Southwestern Medical Center Compositions which contain triterpenes for regulating hair growth

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01143832A (ja) * 1987-12-01 1989-06-06 Toa Nenryo Kogyo Kk 制癌剤

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01143832A (ja) * 1987-12-01 1989-06-06 Toa Nenryo Kogyo Kk 制癌剤

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DATABASE WPI Week 8929, Derwent World Patents Index; AN 89-204083 *
SUSAN BUDAVARI ET. AL.: "The Merck Index", 1989, MERCK & CO, RAHWAY., U.S.A. *

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998034603A1 (fr) * 1997-02-11 1998-08-13 Regents Of The University Of Minnesota Utilisation de la betuline et d'analogues dans le traitement de l'infection par herpesvirus
US6048847A (en) * 1997-09-30 2000-04-11 Dabur Research Foundation Use of betulinic acid and its derivatives for inhibiting cancer growth and a method of monitoring this
US6228850B1 (en) 1997-09-30 2001-05-08 Dabur Research Foundation Antiangiogenic activity of betulinic acid and its derivatives
US6670345B1 (en) 1997-09-30 2003-12-30 Dabur Research Foundation Betulinic acid derivatives for inhabiting cancer growth and process for the manufacture of betulinic acid
EP0943620A2 (fr) * 1998-03-18 1999-09-22 Dabur Research Foundation Dérivés de l'acide bétulinique pour inhibition de la croissance des cancers
EP0943620A3 (fr) * 1998-03-18 2001-02-07 Dabur Research Foundation Dérivés de l'acide bétulinique pour inhibition de la croissance des cancers
US6214814B1 (en) 1998-03-18 2001-04-10 Dabur Research Foundation Use of betulinic acid derivatives for inhibiting cancer growth
US6369101B1 (en) 1999-02-26 2002-04-09 Regents Of The University Of Minnesota Therapeutic method to treat herpes virus infection
WO2003059883A1 (fr) * 2002-01-11 2003-07-24 Meiji Seika Kaisha, Ltd. Derives d'acide (4-oxopiperidine-1-yl) et leur procede de preparation

Also Published As

Publication number Publication date
JPH08509968A (ja) 1996-10-22
FR2705094A1 (fr) 1994-11-18
ZA943201B (en) 1995-01-16
FR2705094B1 (fr) 1995-08-04
EP0698008A1 (fr) 1996-02-28
AU6787994A (en) 1994-12-12
CA2162702A1 (fr) 1994-11-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0542622A1 (fr) Nouveaux dérivés du lupane, leur préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
EP0951473B1 (fr) Derive de cyclosporine, sa preparation et les compositions pharmaceutiques qui le contiennent
FR2757521A1 (fr) Nouveaux derives de cyclosporine, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
FR2757522A1 (fr) Derives de cyclosporine, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
EP0202157B1 (fr) Amino-2 thiazoles N-substitués, leur procédé de préparation et leur application en thérapeutique
FR2840302A1 (fr) Derives d&#39;isoindolones, procede de preparation et intermediaire de ce procede a titre de medicaments et compositions pharmaceutiques les renfermant
WO1999064419A1 (fr) Derives du pyrrole, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
WO1994026695A1 (fr) Nouveaux derives du lupane, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
EP0946555A1 (fr) Derives du pyrrole, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
EP1355887A1 (fr) Derives d&#39;acyclonucleosides pyrimidiniques, leur procede de preparation et leur utilisation
EP1701974A2 (fr) Nouveaux derives du 2-hydroxytetrahydrofuranne et leur application a titre de medicaments
FR2705097A1 (fr) Nouveaux dérivés du lupane, leur préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
EP0520016B1 (fr) Derives de l&#39;uree, leur preparation et les medicaments les contenant
EP0533827B1 (fr) Nouveaux derives de l&#39;oxazole, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
FR2757059A1 (fr) Nouvelle application therapeutique des derives du pyrrole
FR2539417A1 (fr) Nouveaux pyrrolo-1, 2 heterocycles, leur preparation et les medicaments qui les contiennent
WO2007045761A1 (fr) Derives d&#39;amidine et leurs applications a titre de medicament
FR2677477A1 (fr) Nouveaux derives de l&#39;oxazole leur preparation, leur utilisation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
FR2677355A1 (fr) Nouveaux derives de l&#39;oxazole, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
FR2508040A1 (fr) Derives de proline, leur procede de preparation et medicament les contenant
WO1982003860A1 (fr) Derives de l&#39;acide 1,4-thiazane-carboxylique, leurs preparation et utilisation ainsi que les compositions contenant ces derives
EP0233801A1 (fr) Nouveaux amides substitués, leur préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
WO2007101937A1 (fr) Composition contenant des derives d&#39;amidine ou de carboxamide et des steroides a titre de medicament
FR2818641A1 (fr) Nouveaux derives de 1,1-dioxo-2h-1,2-benzothiazine 3-carboxamides, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques que les contiennent
EP0437382A1 (fr) Nouveaux dérivés de la thymidine leur préparation et les compositions qui les contiennent

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AU BB BG BR BY CA CN CZ FI HU JP KP KR KZ LK LV MG MN MW NO NZ PL RO RU SD SK UA US UZ VN

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AT BE CH DE DK ES FR GB GR IE IT LU MC NL PT SE BF BJ CF CG CI CM GA GN ML MR NE SN TD TG

DFPE Request for preliminary examination filed prior to expiration of 19th month from priority date (pct application filed before 20040101)
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 1994916260

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2162702

Country of ref document: CA

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 1995 545836

Country of ref document: US

Date of ref document: 19951113

Kind code of ref document: A

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 1994916260

Country of ref document: EP

WWW Wipo information: withdrawn in national office

Ref document number: 1994916260

Country of ref document: EP

点击 这是indexloc提供的php浏览器服务，不要输入任何密码和下载