ES2595364T3

ES2595364T3 - Producción de proteínas NELL recombinantes

Info

Publication number: ES2595364T3
Application number: ES09819839.3T
Authority: ES
Inventors: Kang Ting; Chia Soo
Original assignee: University of California Berkeley; University of California San Diego UCSD
Current assignee: University of California Berkeley; University of California San Diego UCSD
Priority date: 2008-10-07
Filing date: 2009-10-07
Publication date: 2016-12-29
Anticipated expiration: 2029-10-07
Also published as: CA2739608A1; US20110263835A1; EP2350286A4; EP2350286B1; WO2010042654A2; US20190248851A1; EP2350286A2; US20170190756A1; US20140336367A1; US9598480B2; WO2010042654A3

Abstract

Un procedimiento de expresión de un péptido en una célula de mamífero que comprende: proporcionar una construcción de ácido nucleico que incluye al menos un ácido nucleico que codifica al menos un péptido NELL en fase con un ácido nucleico que codifica un péptido señal que no es de insecto; transfectar una célula de mamífero con la construcción de ácido nucleico; cultivar la célula de mamífero en condiciones que permitan la expresión del péptido NELL, recoger una solución en crudo que comprende el péptido NELL secretado de la célula de mamífero; y purificar el péptido NELL, en el que el péptido señal que no es de insecto es un péptido señal de secreción que no es de insecto; y en el que la purificación comprende someter la solución en crudo a un proceso de cromatografía de intercambio catiónico para obtener un péptido NELL purificado, en el que dicho proceso de cromatografía de intercambio catiónico comprende un medio que comprende un ion metálico que tiene dos o más cargas, en el que dichos iones metálicos están incluidos en una solución tampón o solución de elución.

Description

DESCRIPCION

Produccion de protemas NELL recombinantes 5 Campo de la invencion

[0001] La presente invencion se dirige a un sistema y a un metodo de produccion de peptidos NELL.

Antecedentes de la invencion

10

[0002] Los factores de crecimiento son sustancias, tales como peptidos, que afectan al crecimiento y a la diferenciacion de poblaciones de celulas definidas in vivo o in vitro.

[0003] La formacion osea se produce durante el desarrollo de los huesos largos (formacion osea endocondral) y 15 de los huesos planos (formacion osea intramembranosa). Adicionalmente, la formacion osea se produce durante la

remodelacion osea que se produce de manera continua en la vida adulta para preservar la integridad del esqueleto. Finalmente, la formacion osea sucede durante la reparacion osea, tal como cuando se producen lesiones oseas en una fractura o situacion quirurgica, por ejemplo. Por otro lado se cree que los mecanismos de formacion osea individuales estan implicados en el desarrollo embriologico de los huesos largos y planos y se cree que la reparacion 20 implica la formacion osea intramembranosa.

[0004] La formacion osea mediante cualquier mecanismo implica la actividad de los osteoblastos, que estan regulados por factores de crecimiento. Los osteoblastos se derivan de un grupo de celulas estromales de la medula (tambien conocidas como celulas madre mesenquimales; CMM). Estas celulas estan presentes en una variedad de

25 tejidos y son frecuentes en el estroma de la medula osea. Las CMM son pluripotentes y pueden diferenciarse en una variedad de tipos celulares incluyendo osteoblastos, condrocitos, fibroblastos, miocitos y adipocitos. Se cree que los factores de crecimiento afectan a la proliferacion celular osteogenica, la diferenciacion y mineralizacion de los osteoblastos, cada uno de los cuales afecta a la formacion osea.

30 [0005] El hueso autogeno se ha usado, por ejemplo, tal como para la reparacion osea en pacientes con craneosinostosis y el injerto de la hendidura. La craneosinostosis (CS), el cierre prematuro de las suturas craneales, afecta a 1 de cada 3.000 recien nacidos y por lo tanto es una de las deformidades craneofaciales congenitas humanas mas comunes. El cierre prematuro de las suturas conlleva dimorfismo craneal, que puede necesitar la correccion quirurgica. El cierre prematuro de las suturas en seres humanos con CS posiblemente puede producirse 35 por dos procesos distintos: el crecimiento excesivo de la boveda craneal y la fusion osea. Recientemente, el factor de crecimiento de fibroblastos 2 (FGF2) y el receptor del factor de crecimiento de fibroblastos 1 (FGFR1) se han implicado en la fusion prematura de las suturas craneales a traves de vfas mediadas por CBFA1 (8). La mutacion sin sentido de la CBFA1 se vincula a la displasia cleidocraneal, manifestada como el cierre retardado de la sutura.

40 [0006] Los procedimientos de injerto oseo autologo se han realizado utilizando hueso autogeno, tal como de la cresta ilfaca o boveda craneal. Estos sitios donantes no estan exentos de morbilidad asociada incluyendo dolor, trastornos de la marcha, parestesia del muslo en el caso de los sitios donantes de cresta ilfaca, e infeccion, deficits neurologicos y hematomas en el caso de los injertos de la boveda craneal. Adicionalmente, los sitios donantes pueden tener un volumen limitado y pueden contribuir a un tiempo quirurgico y estancia hospitalaria aumentados.

45

[0007] Tambien se han utilizado materiales de injerto aloplastico, y se han ensayado factores de crecimiento en modelos animales. Por ejemplo, el bFGF ha mostrado potencial para su uso en la regeneracion y la reparacion osea. Otra familia de factores de crecimiento osteogenicos se ha descrito como la protema morfogenetica osea (BMP). En concreto, se ha demostrado que la protema BMP-2 recombinante regenera los defectos de continuidad mandibular y

50 defectos del paladar hendido con resultados iguales al o mejores que el hueso y la medula particulados autogenos. Las BMP y otros factores osteogenicos se han estudiado para su uso en aplicaciones clmicas. Sin embargo, el coste del uso de dosificaciones mmimamente eficaces de las bMp ha sido un factor limitante en su uso clmico.

[0008] La fusion espinal es una tecnica quirurgica en la que una o mas de las vertebras de la columna vertebral se 55 unen entre sf de modo que entre ellas ya no se produce movimiento. Las indicaciones incluyen: el tratamiento de

una vertebra fracturada (rota), la correccion de una deformidad, la eliminacion del dolor por el movimiento, el tratamiento de la inestabilidad y el tratamiento de algunas hernias discales cervicales. La cirugfa puede incluir la colocacion de un injerto oseo entre las vertebras para obtener una union solida entre las vertebras. El procedimiento tambien puede incluir tratamientos complementarios que incluyan la colocacion de placas, tornillos, armaduras y 60 recientemente la protema morfogenetica osea 2 y 7 para ayudar a la estabilizacion y la curacion del injerto oseo. El injerto oseo autogeno ha sido el metodo clmicamente preferido, y sin embargo tiene aproximadamente una tasa de fracaso del 30-50 %. El injerto oseo autogeno es una cirugfa individual y tambien conlleva una morbilidad significativa.

65 [0009] El cartflago es un tipo de tejido conectivo denso. Se compone de condrocitos que estan dispersos en una

matriz de tipo gel firme. El cartflago es avascular (no contiene vasos sangumeos) y los nutrientes se difunde a traves de la matriz. El cartMago se encuentra en las articulaciones, la caja toracica, el ofdo, la nariz, en la garganta y entre los discos intervertebrales. Existen tres tipos principales de cartflago: hialino (por ejemplo, cartflagos costales, los cartflagos de la nariz, traquea y bronquios y los cartflagos articulares de las articulaciones), elastico (por ejemplo, 5 ofdo externo, conducto auditivo externo, parte de la trompa de Eustaquio, epiglotis y en algunos de los cartflagos larmgeos) y fibrocartflago [por ejemplo, menisco (por ejemplo, el complejo fibrocartflago triangular de la muneca, menisco de la rodilla), los discos intervertebrales, disco de la articulacion temporomandibular, la smfisis pubica y en algunos tendones y ligamentos en su union a los huesos]. Uno de los principales propositos del cartflago es proporcionar un armazon sobre el que podna comenzar la deposicion del hueso (es decir, durante la osificacion 10 endocondral). Otro proposito importante del cartflago es proporcionar superficies lisas para el movimiento de los huesos de las articulaciones. Por ejemplo, el cartflago articular, sobre todo el que se encuentra en la articulacion de la rodilla, se caracteriza en general por una friccion muy baja, alta resistencia al desgaste y pobres cualidades regenerativas. Es responsable de gran parte de la resistencia a la compresion y las cualidades de soporte de la carga de la articulacion de la rodilla y, sin el, caminar es de doloroso a imposible. Otro fin importante mas del 15 cartflago es proporcionar, un soporte firme, pero flexible (por ejemplo, el cartflago nasal, los discos vertebrales, el cartflago traqueal, el menisco de la rodilla, el cartflago bronquial). Por ejemplo, el cartflago tal como el menisco juega un papel crucial en la estabilidad, lubricacion y transmision de la fuerza de la articulacion. Bajo un soporte del peso de la carga, el menisco mantiene la posicion equilibrada del femur sobre la tibia y distribuye las fuerzas de compresion aumentando el area superficial de contacto, disminuyendo de este modo la tension media de dos a tres 20 veces. Ademas, los meniscos interactuan con el lfquido de la articulacion para producir un coeficiente de friccion que es cinco veces tan resbaladizo como el hielo sobre hielo. En otro ejemplo, el disco intervertebral tiene varias funciones importantes, incluyendo la de funcionar como separador, como amortiguador y como unidad de movimiento. La parte central gelatinosa del disco se llama el nucleo pulposo. Se compone de 80-90 % de agua. La parte solida del nucleo es colageno tipo II y proteoglicanos no agregados. El anillo ligamentoso exterior alrededor del 25 nucleo pulposo se llama el anillo fibroso, que sella hidraulicamente el nucleo, y permite aumentar las presiones intradiscales a medida que se carga el disco. El anillo tiene bandas radiales de superposicion, no distintas a las capas de un neumatico radial, y esto permite que el esfuerzo torsional se distribuya a traves del anillo bajo la carga normal sin ruptura. El disco funciona como un cilindro hidraulico. El anillo interactua con el nucleo. A medida que el nucleo se presuriza, las fibras anulares cumplen una funcion de contencion para prevenir el abultamiento o hernia 30 del nucleo.

[0010] El cartflago puede danarse por desgaste, lesion o enfermedades. A medida que envejecemos, el contenido de agua y protemas del cartflago del cuerpo cambia. Este cambio conlleva un carttlago mas debil, mas fragil y delgado. La osteoartritis es una afeccion comun de falta de cartflago que puede conducir a un intervalo limitado de

35 movilidad, dano oseo e invariablemente, dolor. Debido a una combinacion de estres agudo y fatiga cronica, la

osteoartritis se manifiesta directamente en un desgaste de la superficie de la articulacion y, en casos extremos, puede exponerse el hueso en la articulacion. En otro ejemplo, la perdida del menisco estabilizante protector conduce a una laxitud de la articulacion o movimientos anormales aumentados que conducen a la inestabilidad de la articulacion. El movimiento excesivo y el area de contacto mas estrecha promueve cambios artrfticos tempranos. A 40 nivel celular, inicialmente existe una perdida de celulas de la capa superficial del cartflago articular seguido de la division del cartflago, se produce el posterior adelgazamiento y erosion, y finalmente la protuberancia del hueso abierto subyacente. Los cambios artnticos tempranos se han observado tres semanas despues de la perdida de la totalidad del menisco. En otro ejemplo mas, debido a que tanto los discos como las articulaciones que juntan las vertebras (articulaciones facetarias) se componen parcialmente de cartflago, estas areas estan sujetas a desgaste y

45 desgarro con el tiempo (cambios degenerativos). A medida que el nucleo interno se deshidrata, se estrecha el

espacio del disco, y los ligamentos anulares redundantes sobresalen. Con la deshidratacion nuclear progresiva, las fibras anulares pueden agrietarse y desgarrarse. La perdida de la tension del tejido blando normal puede permitir que el segmento espinal se subluxe (por ejemplo, dislocacion parcial de la articulacion), conduciendo a la formacion de osteofitos (espolones oseos), estrechamiento del agujero vertebral, inestabilidad mecanica y dolor. Si las fibras 50 anulares se estiran o rompen, permitiendo que el material nuclear presurizado sobresalga o se hernie y comprima los tejidos neuronales, puede dar como resultado dolor y debilidad. Esta es la condicion denominada nervio pellizcado, hernia discal o hernia de disco. La radiculopatfa se refiere a la irritacion de los nervios causada por el dano al disco entre las vertebras. La disfuncion mecanica tambien puede causar degeneracion del disco y dolor (por ejemplo, la enfermedad degenerativa del disco). Por ejemplo, el disco puede danarse como resultado de algun 55 trauma que sobrecarga la capacidad del disco para soportar las fuerzas aumentadas que pasa a traves de el, y las partes internas o externas de las fibras anulares pueden romperse. Estas fibras rotas pueden ser el foco para la respuesta inflamatoria cuando se someten a un estres aumentado, y pueden provocar dolor directamente, o a traves del espasmo protector compensatorio de los musculos paraespinales profundos.

60 [0011] Se ha documentado que el peptido NELL estimula la formacion osea y la formacion del cartflago. Los metodos y sistemas de produccion de peptidos NELL que existen tienen un exito limitado con los problemas. Un problema comun de los sistemas de expresion del peptido NELL existentes (por ejemplo, una celula de marnffero tal como un sistema de expresion celular CHO) es la baja productividad. En general se encuentra que la baja productividad esta provocada por, por ejemplo, una construccion inapropiada de la secuencia de acidos nucleicos 65 que expresa un peptido NELL y/u otras secuencias adicionales, por ejemplo, una secuencia del peptido senal de

secrecion, en un sistema de expresion particular, por ejemplo, una celula CHO.

[0012] Dichos metodos se divulgan, por ejemplo, en los documentos WO2008060941, WO2006089023, WO2004024893, US5831058, WO2004072100.

5

[0013] El documento WO2008060941 divulga un metodo de expresion de un peptido en una celula de mairnfero, comprendiendo dicho metodo: proporcionar una construccion de acidos nucleicos que incluye al menos un acido nucleico que codifica al menos un peptido NELL en fase con un acido nucleico que codifica un peptido senal de secrecion; transfectar una celula de mai^ero con dicha construccion de acidos nucleicos; y cultivar dicha celula de

10 mai^ero en condiciones que permitan la expresion del peptido NELL, en el que la celula de mai^ero es una celula de ovario de hamster chino (CHO), y en el que dicho peptido senal de secrecion es una secuencia senal del peptido NELL1 o NELL2.

[0014] El documento WO2006089023 divulga una construccion de acidos nucleicos para la expresion de un 15 peptido NELL, tal como el peptido NELL1 y/o NELL2 en una celula de mai^ero tal como una celula de ovario de

hamster chino (celula CHO). La secuencia de acidos nucleicos puede ser un ADNc, ADN genomico, o ARN, que codifica al menos una parte funcional de un peptido NELL, por ejemplo, el gen NELL1 o NELL2. En algunas realizaciones, para la produccion de los peptidos NELL1 y/o NELL2 en celulas de marnffero (por ejemplo, celulas CHO), el sistema de expresion para NELL1 y/o NELL2 puede incluir el acido nucleico o ADNc que expresa el peptido 20 senal endogeno.

[0015] El documento WO2004024893 describe el acido nucleico de NELL-1 que codifica una secuencia del peptido senal de secrecion, un modulo de tipo trombospondina-1 NH2 terminal, cinco repeticiones de tipo factor de von Willebrand con seis residuos de cistina, y seis dominios de tipo EGF. Tambien se divulga la transformacion de

25 las celulas para aumentar la produccion de NELL-1. Los acidos nucleicos que expresan NELL-1 (por ejemplo, el/los ADNc) pueden clonarse en vectores de terapia genica que son competentes para transfectar celulas (tales como celulas de ser humano o de otros mai^eras) in vitro y/o in vivo.

[0016] El documento US5831058 ensena un metodo de expresion de un peptido funcional en una celula de 30 mai^ero, comprendiendo dicho metodo proporcionar unas construcciones de acidos nucleicos que codifican un

peptido NELL1 en fase con el peptido senal de secrecion de NELL1, transfectar celulas CHO con el acido nucleico para formar una lmea celular, y cultivar la lmea celular en condiciones que permitan la expresion del NELL1. Aunque este documento cita la protema NRP1, esta parece ser la misma que NELL1.

35 [0017] El documento WO2004072100 divulga unos polipeptidos NELL1 y NELL2 que comprenden un peptido senal de secrecion y un peptido senal de secrecion de insecto, respectivamente, utiles para el tratamiento de un paciente para aumentar la formacion de hueso intramembranoso, y para inducir la formacion osea. Tambien se divulga un metodo para la expresion de un peptido funcional en una celula de marnffero que implica proporcionar una construccion de acidos nucleicos que incluye al menos un acido nucleico que codifica al menos un peptido 40 NELL1 en fase con un acido nucleico que codifica un peptido senal de secrecion o peptido NELL2 y un acido nucleico que codifica un peptido senal de secrecion en fase con el peptido NELL2, transfectar la celula de mamffero y la celula de insecto con una construccion de acidos nucleicos, cultivar la celula de mam^era y la celula de insecto en condiciones que permitan la expresion del peptido NELL1 y el peptido NELL2, recoger el peptido NELL1 y NELL2 secretado de la lmea celular, purificar el peptido NELL1 y NELL2 y ensayar la actividad de NELL1 para inducir la 45 formacion de hueso y del peptido NELL2 para promover la supervivencia de las celulas neuronales. En una realizacion, el peptido senal de secrecion puede ser un peptido senal de secrecion de un peptido senal de interferon- gamma equino, un peptido senal de lisozima humana y/o de pollo. Para el sistema de expresion de un mamffero, tambien puede usarse una secuencia conductora de protripsina.

50 [0018] Por lo tanto existe una necesidad continua de un metodo y un sistema para la produccion de peptidos NELL.

Resumen de la invencion

55 [0019] La presente invencion se refiere a un metodo de expresion de un peptido en una celula de mamffero que comprende:

proporcionar una construccion de acidos nucleicos que incluye al menos un acido nucleico que codifica al menos un peptido NELL en fase con un acido nucleico que codifica un peptido senal no de insecto;

60

transfectar una celula de mamffero con la construccion de acidos nucleicos;

cultivar la celula de mamffero en condiciones que permitan la expresion del peptido NELL,

65 recoger una solucion en bruto que comprende el peptido NELL secretado de la celula de mamffero; y

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10

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30

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60

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purificar el peptido NELL,

en el que el peptido senal no de insecto es un peptido senal de secrecion no de insecto; y

en el que purificar comprende someter la solucion en bruto a un proceso de cromatograffa de intercambio cationico para obtener un peptido NELL purificado, en el que dicho proceso de cromatograffa de intercambio cationico comprende un medio que comprende un ion metalico que tiene dos o mas cargas, en el que dichos iones metalicos se incluyen en una solucion tampon o solucion de elucion.

[0020] La celula de mamffero puede ser, por ejemplo, una celula de ovario de hamster chino. El acido nucleico codifica el NELL 1 o NELL 2 o ambos.

[0021] En algunas realizaciones, el metodo de las diversas realizaciones anteriores adicionalmente puede comprender el ensayo de la actividad del peptido NELL2 para inducir la formacion osea.

[0022] El acto de purificacion puede ser cualquier etapa de purificacion de una protema o peptido. En algunas realizaciones, el acto de purificacion incluye la purificacion por cromatograffa.

[0023] En algunas realizaciones, la presente invencion divulga una construccion de acidos nucleicos para la expresion de un peptido NELL en una celula de mairnfero. La construccion de acidos nucleicos comprende al menos un acido nucleico que codifica al menos un peptido NELL en fase con un acido nucleico que codifica un peptido senal de secrecion que es un peptido senal de secrecion no de insecto. El acido nucleico codifica NELL1 o NELL2. En algunas realizaciones, la celula de mamnfero puede ser una celula CHO.

[0024] En algunas realizaciones, la presente invencion divulga una lmea celular de marnffero para la expresion de un peptido NELL. La lmea celular comprende una construccion de acidos nucleicos que comprende al menos un acido nucleico que codifica al menos un peptido NELL en fase con un acido nucleico que codifica un peptido senal de secrecion que es un peptido senal de secrecion no de insecto. El acido nucleico codifica NELL 1 o NELL 2. En algunas realizaciones, la celula de mamnfero puede ser una celula CHO.

[0025] En algunas realizaciones, la presente invencion divulga un polipeptido que comprende un peptido NELL y un peptido senal de secrecion no de insecto.

[0026] En algunas realizaciones, la celula de mamffero puede ser una celula de rinon embrionario humano, tal como HEK-293.

[0027] La presente invencion divulga un metodo de purificacion de un peptido NELL, que comprende proporcionar una solucion en bruto que contiene un peptido NELL, y someter a la solucion en bruto a una cromatograffa de membrana para obtener un peptido NELL purificado.

[0028] En algunas realizaciones, la cromatograffa de membrana es una cromatograffa de membrana de intercambio anionico o cromatograffa de membrana de intercambio cationico.

[0029] La presente invencion divulga un metodo de purificacion de un peptido NELL, que comprende proporcionar una solucion en bruto que contiene un peptido NELL, y someter a la solucion en bruto a un proceso de cromatograffa para obtener un peptido NELL purificado, en el que el proceso de cromatograffa comprende un medio que comprende un ion metalico que tiene dos o mas cargas. En algunas realizaciones, el ion metalico es un ion calcio. El peptido NELL puede ser un peptido NELL-1 o un peptido NELL-2.

Breve descripcion de los dibujos

[0030]

Las Figuras 1A-1D (SEQ ID NO: 609 y 610) ilustran una construccion de acidos nucleicos de peptido senal- NELL1-FLAG. La secuencia de aminoacidos subrayada es de un peptido senal de la melitina. El peptido NELL1 es de un peptido NELL1 de rata.

La Figura 2A es una ilustracion de un gel de SDS-PAGE tenido con CBB del eluato de la UnoQ que contiene el peptido NELL1 purificado.

La Figura 2B muestra un Western blot usando un anticuerpo anti-FLAG que representa la expresion NELL1- FLAG en referencia a una escala de protemas.

La Figura 2C es una ilustracion de un gel de SDS-PAGE tenido con CBB del eluato de la UnoQ que contiene NELL1-FLAG.

La Figura 2D muestra un Western blot usando un anticuerpo anti-FLAG que representa la expresion NELL1- FLAG.

La Figura 3A (SEQ ID NO: 611 y 613) representa la secuencia de acidos nucleicos de la construccion de ADNc y

5

las secuencias de aminoacidos de tres peptidos senal diferentes que se usaron para las construcciones.

La Figura 3B es un Western blot con un anticuerpo anti-c-myc que detecta la secrecion de NELL1 de transfecciones con diferentes construcciones despues de la inmunoprecipitacion usando agarosa anti-c-myc.

La Figura 3C es un Western blot con anticuerpos anti-c-myc o anti-NELLI humano de raton que detectan la 5 secrecion de NELL1 despues de la inmunoprecipitacion usando sefarosa activada con NHS con anticuerpo anti- Nell-1 humano de conejo.

Las Figuras 4A-D muestran la secuencia de nucleotidos de NELL1 (homo sapiens) y la secuencia de aminoacidos correspondiente (SEQ ID NO: 1 y 2).

Las Figuras 5A-D muestran la secuencia de nucleotidos de NELL1 (rattus norvegicus) y la secuencia de 10 aminoacidos correspondiente (SEQ ID NO: 3 y 4).

Las Figuras 6A-F muestran la secuencia de nucleotidos de NELL1 (Mus musculs) y la secuencia de aminoacidos correspondiente (SEQ ID NO: 5 y 6).

Las Figuras 7A-D muestran la secuencia de nucleotidos de NELL2 (homo sapiens) y la secuencia de aminoacidos correspondiente (SEQ ID NO: 7 y 8).

15 Las Figuras 8A-D muestran la secuencia de nucleotidos de NELL2 (rattus norvegicus) y la secuencia de aminoacidos correspondiente (SEQ ID NO: 9 y 10).

Las Figuras 9A-D muestran la secuencia de nucleotidos de NELL2 (Mus musculs) y la secuencia de aminoacidos correspondiente (SEQ ID NO: 11 y 12).

Las Figuras 10A-D muestran la secuencia de nucleotidos de NELL2 (Gallus gallus) y la secuencia de 20 aminoacidos correspondiente (SEQ ID NO: 13 y 14).

Descripcion detallada

Definiciones

25

[0031] Tal como se utiliza en el presente documento, los terminos “polipeptido”, “peptido” y “protema” pueden usarse de manera intercambiable para referirse a un polfmero de residuos aminoacidos. Los terminos pueden aplicarse a polfmeros de aminoacidos en los que uno o mas residuos aminoacidos son un analogo qrnmico artificial de un aminoacido correspondiente de origen natural, asf como a polfmeros de aminoacidos de origen natural.

30

[0032] El termino “anticuerpo” puede incluir diversas formas de anticuerpos modificados o alterados, tales como una inmunoglobulina intacta, un fragmento Fv que contiene solo las regiones variables de la cadena ligera y pesada, un fragmento Fv unido por un enlace disulfuro, un fragmento Fab o F(ab')2 que contiene las regiones variables y partes de las regiones constantes, un anticuerpo de cadena sencilla y similares. Un anticuerpo puede incluir

35 moleculas intactas asf como fragmentos de las mismas, tales como, Fab y F(ab')2, y/o anticuerpos de cadena sencilla (por ejemplo Fvcs) que pueden unirse a un determinante epitopico. Un anticuerpo puede ser de origen animal, por ejemplo, un raton o rata, o de ser humano, o puede ser quimerico o humanizado. Los anticuerpos pueden ser anticuerpos policlonales o monoclonales (Acm), tales como anticuerpos monoclonales con especificidad para un polipeptido codificado por una protema NELL1 o NELL 2.

40

[0033] La expresion “agente de captura” se refiere a moleculas que se unen espedficamente a otras moleculas para formar un complejo de union, tal como, pero sin limitacion, un complejo anticuerpo-antfgeno, un complejo lectina-carbohidrato, un complejo acido nucleico-acido nucleico o un complejo biotina-avidina.

45 [0034] La expresion “se une espedficamente” se refiere a la propiedad de union de una biomolecula (por ejemplo, una protema, acido nucleico, anticuerpo, etc.), que es determinante de la presencia de tal biomolecula en una poblacion heterogenea de moleculas (por ejemplo, protemas y otros componentes biologicos). Por lo tanto, en condiciones espedficas (por ejemplo, condiciones de inmunoensayo en el caso de un anticuerpo o condiciones de hibridacion rigurosas en el caso de un acido nucleico), el ligando o anticuerpo especificado se une espedficamente a 50 su molecula "diana" particular y no se unira en una cantidad significativa a otras moleculas presentes en la muestra.

[0035] Las expresiones “acido nucleico” u “oligonucleotido” se refieren a al menos dos nucleotidos unidos covalentemente entre sf. Un acido nucleico de la presente invencion puede ser de cadena sencilla o de cadena doble y puede contener enlaces fosfodiester, aunque en algunos casos, pueden incluirse analogos de acidos

55 nucleicos que pueden tener cadenas principales alternativas, que comprenden, por ejemplo, enlaces fosforamida, fosforotioato, fosforoditioato, ometilfosforoamidita, y/o cadenas principales y enlaces de acidos nucleicos de peptidos. Los acidos nucleicos analogos pueden tener cadenas principales positivas y/o cadenas principales sin ribosa. Los acidos nucleicos tambien pueden incluir uno o mas azucares carbodclicos. Pueden realizarse modificaciones de la cadena principal de ribosa-fosfato para facilitar la adicion de restos adicionales, tales como 60 etiquetas, o para aumentar la estabilidad y vida media de tales moleculas en medios fisiologicos, por ejemplo.

[0036] La expresion “hibridacion espedfica” se refiere a la union, formacion de duplex o hibridacion preferente de una molecula de acido nucleico a una secuencia de nucleotidos particular en condiciones rigurosas, incluyendo condiciones en las que una sonda puede hibridarse preferentemente a su subsecuencia diana, y puede hibridarse en

65 menor medida a otras secuencias.

[0037] La expresion “ADNc de NELL1” se refiere a las SEQ ID NO: 1, 3 y 5, y “ADNc de NELL 2” puede referirse a las SEQ ID NO: 7, 9, 11 y 13.

Peptidos NELL 5

[0038] NELL 1 es un peptido de 810 aa (aminoacidos), distribuido principalmente en el hueso. En los adultos, el NELL1 se expresa a niveles elevados en los huesos craneofaciales, y a niveles mas bajos en los huesos largos. El NELL1 tiene papeles conocidos en la diferenciacion de los osteoblastos, la formacion osea y la regeneracion osea. El NELL1 tiene reglas conocidas en la formacion de tejidos de cartflago sin formar hueso.

10

[0039] NELL 2 es un peptido de 816 aa, distribuido en celulas neuronales y en el cerebro.

[0040] El gen de NELL 1 de ser humano incluye al menos 3 elementos de respuesta a Cbfa1 en la region promotora. El Cbaf1 se une espedficamente a estos elementos de respuesta.

15

[0041] La expresion del NELL1 puede estar bajo el control de estos factores de transcripcion expresados de forma endogena al menos en preosteoblastos, osteoblastos y condrocitos hipertroficos en el desarrollo y en la edad adulta. La disostosis cleidocraneal es un defecto en el desarrollo craneal que se cree que se produce al menos en parte por la alteracion del Cbfa.

20

[0042] Un peptido NELL1 puede estar codificado por el gen o el ADNc de NELL1 e incluye la SEQ ID NO: 2, 4 y 6. El peptido NELL1 puede incluir un fragmento del peptido NELL1 que conserva la capacidad de inducir la diferenciacion de celulas osteogenicas, la diferenciacion de osteoblastos o la formacion osea. En algunas realizaciones, el peptido NELL1 puede incluir un fragmento del peptido NELL 1 que conserva la capacidad de inducir

25 la formacion de cartflago sin formacion osea. Un peptido NELL2 puede estar codificado por el gen o el ADNc de NELL2 e incluye la SEQ ID NO: 8, 10, 12 y 14. El peptido NELL2 puede incluir fragmentos del peptido NELL2 que conservan una actividad similar a la secuencia del peptido NELL2 completa.

[0043] En algunas realizaciones, la secuencia de aminoacidos del peptido NELL puede seleccionarse del grupo 30 que incluye, pero sin limitacion NELL1 de ser humano (SEQ ID NO: 2), NELL1 de rata (SEQ ID NO: 4), NELL1 de

raton (SEQ ID NO: 6), o NELL2 de ser humano (SEQ ID NO: 8), NELL2 de rata (SEQ ID NO: 10), NELL2 de raton (SEQ ID NO: 12), NELL2 de pollo (SEQ ID NO: 14). La secuencia de aminoacidos tambien puede incluir secuencias tales como las que tienen una similitud sustancial, tales como secuencias que tienen al menos una similitud de secuencia de aproximadamente el 75 % con cualquier parte de las secuencias indicadas anteriormente, o que 35 contienen dominios de union activos similares a los peptidos NELL1.

[0044] El termino “derivado”, como se usa en el presente documento, se refiere a cualquier compuesto qrnmico o biologico o material derivado de un peptido NELL, equivalentes estructurales de los mismos o equivalentes conformacionales de los mismos. Por ejemplo, tal derivado puede incluir cualquier forma de profarmaco, forma

40 pegilada, o cualquier otra forma de un peptido NELL que reproduce el peptido NELL mas estable o mas osteofilo o lipofilo. En algunas realizaciones, el derivado puede ser un peptido NELL fijado a un poli(etilenglicol), un poli(aminoacido), una cadena corta de hidrocarbilo que tiene carbonos C1-C20, o un polfmero biocompatible. En algunas realizaciones, el termino “derivado” puede incluir mimeticos del peptido NELL. Tal como se usa en el presente documento, el termino “mimetico” se refiere a un peptido que tiene al menos un enlace no peptfdico en su 45 cadena principal. Un enlace peptfdico es un enlace qrnmico formado entre el grupo acido carboxflico de una molecula de aminoacido y el grupo amino de otra molecula de aminoacido. Un mimetico del peptido NELL puede ser cualquier compuesto que presenta al menos una o mas de las funciones de formacion osea, reparacion osea, formacion de cartflago y/o reparacion de cartflago de un peptido NELL.

50 [0045] Los metodos sinteticos para la fabricacion de mimeticos del peptido son bien conocidos en la tecnica. A continuacion se describe un ejemplo del procedimiento basico para la smtesis de un peptido, incluyendo unos mimeticos del peptido:

Antes de que comience la smtesis del peptido, el amino terminal del aminoacido (material de partida) puede 55 protegerse con FMOC (9-fluorometil carbamato) u otros grupos protectores, y se usa un soporte solido tal como una resina de Merrifield (aminos libres) como iniciador. Despues, se llevan a cabo las reacciones de la etapa (1) a traves de las de la etapa (3) y se repiten hasta que se obtiene el peptido deseado: (1) un amino libre se hace reaccionar con un carboxilo terminal usando la qrnmica de la carbodiimida, (2) la secuencia de aminoacidos se purifica, y (3) el grupo protector, por ejemplo, el grupo protector FMOC, se retira en condiciones ligeramente 60 acidas, para producir un amino libre. Despues el peptido puede escindirse de la resina para producir un peptido independiente o mimeticos del peptido.

Sistemas que expresan los peptidos NELL

65 [0046] En general, el metodo de la invencion incluye proporcionar una secuencia de acidos nucleicos que codifica

un peptido NELL, tal como el peptido NELL1 o NELL2, en fase con una secuencia de acidos nucleicos que codifica un peptido senal no de insecto.

[0047] En una realizacion, el metodo puede incluir la transfeccion de una lmea celular de insecto con una 5 construccion de acidos nucleicos que codifica un peptido NELL; y el cultivo de la lmea celular de insecto en

condiciones que permitan la expresion y/o secrecion del peptido NELL. Por ejemplo, la lmea celular puede transfectarse transitoria o establemente con la construccion de acidos nucleicos que codifica un peptido NELL.

[0048] En una realizacion, el metodo puede incluir proporcionar una secuencia de acidos nucleicos que codifica un 10 peptido NELL, tal como un peptido NELL1 o NELL2. La secuencia de acidos nucleicos puede ser un ADNc o ADN

genomico, que codifica al menos una parte funcional de un peptido NELL. Por ejemplo, la secuencia de acidos nucleicos puede seleccionarse del grupo que incluye, pero sin limitacion NELL1 de ser humano (SEQ ID NO: 1), NELL1 de rata (SEQ ID NO: 3), NELL1 de raton (SEQ ID NO: 5), o NELL2 de ser humano (SEQ ID NO: 7), NELL2 de rata (SEQ ID NO: 9), NELL2 de raton (SEQ ID NO: 11), NELL2 de pollo (SEQ ID NO: 13). En algunas 15 realizaciones, la secuencia de acidos nucleicos tambien puede incluir secuencias tales como las que tienen una similitud de secuencia sustancial, tales como secuencias que tienen al menos una similitud de secuencia de aproximadamente el 75 % con cualquier parte de las secuencias indicadas anteriormente.

[0049] Adicionalmente, el acido nucleico puede incluir un vector de expresion para la expresion de la secuencia de 20 acidos nucleicos que codifica un peptido NELL, tal como un peptido NELL1 o NELL2. Por ejemplo, el vector de

expresion puede ser el PLZT/V5-His (Invitrogen), y los marcadores selectivos tambien puede incluir blasticidina y neomicina.

[0050] Dichos sistemas de expresion pueden incluir un vehnculo tal como un vehnculo vmco o un vector vmco, un 25 vehnculo peptfdico o una molecula de polfmero corta.

[0051] Las construcciones de acidos nucleicos pueden comprender vectores de expresion y clonacion que debenan contener un gen de seleccion, tambien denominado marcador seleccionable, tal como un gen que codifica una protema necesaria para la supervivencia o crecimiento de una celula huesped transformada con el vector. La

30 presencia de este gen asegura que cualquier celula huesped que elimina el vector no obtendra una ventaja en el crecimiento o reproduccion sobre los huespedes transformados. Los genes de seleccion tfpicos codifican protemas que (a) confieren resistencia a antibioticos u otras toxinas, por ejemplo, ampicilina, neomicina, metotrexato o tetraciclina, (b) complementan las deficiencias auxotroficas.

35 [0052] Adicionalmente, la secuencia de acidos nucleicos tambien puede incluir acidos nucleicos adicionales que codifican productos del reportero para monitorizar los niveles de expresion de genes, o codifican las etiquetas de los peptidos que pueden visualizarse usando metodos conocidos en la tecnica para monitorizar los niveles de expresion de los peptidos. Las secuencias adicionales pueden seleccionarse para no interferir con la expresion del acido nucleico, o la funcionalidad del producto peptfdico expresado.

40

[0053] Se reconoce un promotor por el organismo huesped y se une operativamente al acido nucleico que codifica el NELL. Los promotores son secuencias no traducidas localizadas aguas arriba del codon de inicio de un gen estructural (en general dentro de aproximadamente 100 a 1000 pb) que controlan la transcripcion y traduccion del acido nucleico bajo su control, incluyendo promotores inducibles y constitutivos. Los promotores inducibles son 45 promotores que inician niveles aumentados de transcripcion del ADN bajo su control en respuesta a algun cambio en las condiciones de cultivo, por ejemplo, la presencia o ausencia de un nutriente o un cambio en la temperatura. En la actualidad son bien conocidos un gran numero de promotores reconocidos por una variedad de potenciales celulas huesped.

50 [0054] Un acido nucleico puede unirse operativamente cuando se coloca en una relacion funcional con otra secuencia de acidos nucleicos. Por ejemplo, un ADN para una presecuencia o lfder de secrecion se une operativamente a un ADN para un polipeptido si se expresa como una preprotema que participa en la secrecion del polipeptido; un promotor o potenciador se une operativamente a una secuencia codificante si afecta a la transcripcion de la secuencia; o un sitio de union al ribosoma se une operativamente a una secuencia codificante si 55 se coloca para facilitar la traduccion.

[0055] Puede expresarse un peptido NELL en cualquier sistema biologico. Por ejemplo, puede expresarse un peptido NELL en un sistema bacteriano, un sistema de levadura, un sistema de planta o un sistema animal.

60 [0056] En algunas realizaciones, puede expresarse un peptido NELL en un sistema de expresion libre de celulas bien conocido por los expertos en la materia. Por ejemplo, los sistemas de traduccion de protemas libres de celulas de E. coli o los sistemas de traduccion de protemas libres de celulas de germen de trigo.

[0057] En algunas realizaciones, puede expresarse un peptido NELL en sistemas celulares de plantas 65 transgenicas derivadas del tabaco, mafz, arroz o soja.

[0058] En algunas realizaciones, puede expresarse un peptido NELL en celulas de insecto. Los peptidos NELL1 y NELL2 expresados en un sistema de insecto son formas funcionales de la protema.

[0059] Las celulas COS7 pueden usarse para producir protemas NELL1 y NELL2 a niveles bajos, tales como 5 aproximadamente 10 microgramos por litro de medio, pero requieren un medio que contenga suero para la

expresion. Tal como para los peptidos senal, los peptidos senal endogenos de NELL1 y NELL2 permiten la expresion en las celulas COS7.

[0060] En una realizacion, la invencion incluye un metodo para la expresion de un peptido NELL funcional, tal 10 como un peptido NELL1 o NELL2, usando una lmea celular de insecto. En una realizacion, la celula de insecto

puede ser una celula High Five, Sf9 y otras celulas Sf.

[0061] En una realizacion, la invencion puede incluir una construccion de acidos nucleicos para la expresion de un peptido NELL, tal como un peptido NELLl y/o NELL2 en una celula de insecto. La secuencia de acidos nucleicos

15 puede ser un ADNc o un ADN genomico, que codifica al menos una parte funcional de un peptido NELL. Por ejemplo, la secuencia de acidos nucleicos puede seleccionarse del grupo que incluye, pero sin limitacion NELL1 de ser humano (SEQ ID NO: 1), NELL1 de rata (SEQ ID NO: 3), NELL1 de raton (SEQ ID NO: 5), o NELL2 de ser humano (SEQ ID NO: 7), NELL2 de rata (SEQ ID NO: 9), NELL2 de raton (SEQ ID NO: 11), NELL2 de pollo (SEQ ID NO: 13). La secuencia de acidos nucleicos tambien puede incluir secuencias tales como las que tienen una similitud 20 de secuencia sustancial, tales como las secuencias que tienen al menos una similitud de secuencia de aproximadamente el 75 % con cualquier parte de las secuencias indicadas anteriormente.

[0062] En una realizacion, la invencion puede incluir una construccion de acidos nucleicos para la expresion de un peptido NELL, tal como un peptido NELL1 y/o NELL2 en una celula de mairnfero tal como una celula de ovario de

25 hamster chino (celula CHO). La secuencia de acidos nucleicos puede ser un ADNc o un ADN genomico, que codifica al menos una parte funcional de un peptido NELL. Por ejemplo, la secuencia de acidos nucleicos puede seleccionarse del grupo que incluye, pero sin limitacion NELL1 de ser humano (SEQ ID NO: 1), NELL1 de rata (SEQ ID NO: 3), NELL1 de raton (SEQ ID NO: 5), o NELL2 de ser humano (SEQ ID NO: 7), NELL2 de rata (SEQ ID NO: 9), NELL2 de raton (SEQ iD NO: 11), NELL2 de pollo (SEQ ID NO: 13). En algunas realizaciones, la secuencia de 30 acidos nucleicos tambien puede incluir secuencias tales como las que tienen una similitud de secuencia sustancial, tales como las secuencias que tienen al menos una similitud de secuencia de aproximadamente el 75 % con cualquier parte de las secuencias indicadas anteriormente.

[0063] En una realizacion, la invencion puede incluir celulas que expresan peptidos NELL funcionales. Por 35 ejemplo, la celula puede ser una celula CHO. En una realizacion, la celula puede transfectarse con una construccion

de acidos nucleicos que codifica un peptido NELL. Por ejemplo, la lmea celular puede transfectarse transitoria o establemente con la construccion de acidos nucleicos que codifica un peptido NELL. En una realizacion, los acidos nucleicos que expresan NELL (por ejemplo, el/los ADNc) pueden clonarse en el vector de expresion del gen o partmulas virales que son competentes para transfectar celulas (tales como celulas de insecto o celulas de ovario de 40 hamster chino (celulas CHO)).

[0064] La construccion de acidos nucleicos tambien puede incluir una secuencia de acidos nucleicos que codifica un peptido NELL, tal como un peptido NELL1 o NELL2, en fase con una secuencia de acidos nucleicos que codifica un peptido senal no de insecto que es un peptido senal de secrecion no de insecto.

45

[0065] En una realizacion, la invencion puede incluir celulas que expresan peptidos NELL funcionales, y que pueden secretar protemas funcionales.

[0066] En una realizacion, la invencion puede incluir un polipeptido (secuencia de aminoacidos) que comprende un 50 peptido NELL, tal como un peptido NELL1 o NELL2, y puede incluir un peptido senal de secrecion no de insecto.

Peptido senal de secrecion no de insecto

[0067] Un peptido senal de secrecion no de insecto util para su uso en un sistema de expresion de peptidos NELL 55 (por ejemplo, una celula de mam^era tal como una celula CHO) puede ser cualquier peptido senal de secrecion. Tal

peptido senal de secrecion no de insecto puede ser, por ejemplo, un peptido senal de secrecion de planta, o un peptido senal de secrecion de animal, por ejemplo, un peptido senal de secrecion de mamffero tal como un peptido senal de secrecion de ser humano. Diversos peptidos senal de secrecion pueden encontrarse en diversas fuentes accesibles al publico, por ejemplo,
http://proline.bic.nus.edu.sg/spdb/download.html

60

[0068] Los peptidos senal de secrecion de ser humano estan bien documentados. Los ejemplos de peptidos senal de secrecion de ser humano incluyen, pero sin limitacion, peptido senal de secrecion de ser humano 1A02, peptido senal de secrecion de ser humano 1A11, peptido senal de secrecion de ser humano 1A25, peptido senal de secrecion de ser humano 1A26, peptido senal de secrecion de ser humano 1A30, peptido senal de secrecion de ser

65 humano 1A31, peptido senal de secrecion de ser humano 1A33, peptido senal de secrecion de ser humano 1A68,

peptido senal de secrecion de ser humano 1A80, peptido senal de secrecion de ser humano 1B07, peptido senal de secrecion de ser humano 1B15, peptido senal de secrecion de ser humano 1B37, peptido senal de secrecion de ser humano 1B40, peptido senal de secrecion de ser humano 1B47, peptido senal de secrecion de ser humano 1B48, peptido senal de secrecion de ser humano 1B57, peptido senal de secrecion de ser humano 1B59, peptido senal de 5 secrecion de ser humano 1B78, peptido senal de secrecion de ser humano 1C03, peptido senal de secrecion de ser humano 1C04, peptido senal de secrecion de ser humano 1C05, peptido senal de secrecion de ser humano 1C07, peptido senal de secrecion de ser humano 1C14, peptido senal de secrecion de ser humano 1C15, peptido senal de secrecion de ser humano 1C16, peptido senal de secrecion de ser humano 1C17, peptido senal de secrecion de ser humano 1C18, peptido senal de secrecion de ser humano 2B11, peptido senal de secrecion de ser humano 2B14, 10 peptido senal de secrecion de ser humano 2B17, peptido senal de secrecion de ser humano 2B1A, peptido senal de secrecion de ser humano 2B1B, peptido senal de secrecion de ser humano 2B32, peptido senal de secrecion de ser humano 2DOB, peptido senal de secrecion de ser humano 7B2, peptido senal de secrecion de ser humano A1AT, peptido senal de secrecion de ser humano A2GL, peptido senal de secrecion de ser humano A2MG, peptido senal de secrecion de ser humano ABP1, peptido senal de secrecion de ser humano ACET, peptido senal de secrecion de 15 ser humano ACHB, peptido senal de secrecion de ser humano ACHE, peptido senal de secrecion de ser humano ACRO, peptido senal de secrecion de ser humano ADA32, peptido senal de secrecion de ser humano ADIPO, peptido senal de secrecion de ser humano ADML, peptido senal de secrecion de ser humano AGAL, peptido senal de secrecion de ser humano AGR2, peptido senal de secrecion de ser humano AGR3, peptido senal de secrecion de ser humano AMBP, peptido senal de secrecion de ser humano AMTN, peptido senal de secrecion de ser humano 20 ANF, peptido senal de secrecion de ser humano ANGI, peptido senal de secrecion de ser humano ANGL3, peptido senal de secrecion de ser humano ANGL7, peptido senal de secrecion de ser humano ANGT, peptido senal de secrecion de ser humano ANPRA, peptido senal de secrecion de ser humano APOA2, peptido senal de secrecion de ser humano APOA4, peptido senal de secrecion de ser humano APOA, peptido senal de secrecion de ser humano APOC1, peptido senal de secrecion de ser humano APOC2, peptido senal de secrecion de ser humano APOC3, 25 peptido senal de secrecion de ser humano APOD, peptido senal de secrecion de ser humano APOE, peptido senal de secrecion de ser humano APOH, peptido senal de secrecion de ser humano APR3, peptido senal de secrecion de ser humano ASM, peptido senal de secrecion de ser humano ASPG, peptido senal de secrecion de ser humano BAMBI, peptido senal de secrecion de ser humano BASI, peptido senal de secrecion de ser humano BGAL, peptido senal de secrecion de ser humano BGLR, peptido senal de secrecion de ser humano BOC, peptido senal de 30 secrecion de ser humano BPIL1, peptido senal de secrecion de ser humano BPI, peptido senal de secrecion de ser humano BT3A3, peptido senal de secrecion de ser humano BTNL8, peptido senal de secrecion de ser humano C16L2, peptido senal de secrecion de ser humano C1QT5, peptido senal de secrecion de ser humano C1QT6, peptido senal de secrecion de ser humano C1R, peptido senal de secrecion de ser humano CIS, peptido senal de secrecion de ser humano C4BPA, peptido senal de secrecion de ser humano CA187, peptido senal de secrecion de 35 ser humano CADM3, peptido senal de secrecion de ser humano CAH9, peptido senal de secrecion de ser humano CALCR, peptido senal de secrecion de ser humano CALRL, peptido senal de secrecion de ser humano CALR, peptido senal de secrecion de ser humano CAP7, peptido senal de secrecion de ser humano CART, peptido senal de secrecion de ser humano CASA1, peptido senal de secrecion de ser humano CASB, peptido senal de secrecion de ser humano CASK, peptido senal de secrecion de ser humano CATC, peptido senal de secrecion de ser humano 40 CATE, peptido senal de secrecion de ser humano CATG, peptido senal de secrecion de ser humano CATW, peptido senal de secrecion de ser humano CBG, peptido senal de secrecion de ser humano CBLN3, peptido senal de secrecion de ser humano CBLN4, peptido senal de secrecion de ser humano CBPA1, peptido senal de secrecion de ser humano CBPA3, peptido senal de secrecion de ser humano CBPB1, peptido senal de secrecion de ser humano CBPN, peptido senal de secrecion de ser humano CCL11, peptido senal de secrecion de ser humano CCL15, 45 peptido senal de secrecion de ser humano CCL19, peptido senal de secrecion de ser humano CCL1, peptido senal de secrecion de ser humano CCL22, peptido senal de secrecion de ser humano CCL24, peptido senal de secrecion de ser humano CCL2, peptido senal de secrecion de ser humano CCL4, peptido senal de secrecion de ser humano CCL5, peptido senal de secrecion de ser humano CCL7, peptido senal de secrecion de ser humano CD180, peptido senal de secrecion de ser humano CD1A, peptido senal de secrecion de ser humano CD244, peptido senal de 50 secrecion de ser humano CD276, peptido senal de secrecion de ser humano CD27, peptido senal de secrecion de ser humano CD28, peptido senal de secrecion de ser humano CD2, peptido senal de secrecion de ser humano CD320, peptido senal de secrecion de ser humano CD34, peptido senal de secrecion de ser humano CD3E, peptido senal de secrecion de ser humano CD3G, peptido senal de secrecion de ser humano CD3Z, peptido senal de secrecion de ser humano CD45, peptido senal de secrecion de ser humano CD5L, peptido senal de secrecion de ser 55 humano CD5, peptido senal de secrecion de ser humano CD83, peptido senal de secrecion de ser humano CD8B, peptido senal de secrecion de ser humano CD99, peptido senal de secrecion de ser humano CEAM1, peptido senal de secrecion de ser humano CER1, peptido senal de secrecion de ser humano CERU, peptido senal de secrecion de ser humano CETP, peptido senal de secrecion de ser humano CF126, peptido senal de secrecion de ser humano CFAB, peptido senal de secrecion de ser humano CFAH, peptido senal de secrecion de ser humano CFAI, peptido 60 senal de secrecion de ser humano CH3L1, peptido senal de secrecion de ser humano CH3L2, peptido senal de secrecion de ser humano CHIT1, peptido senal de secrecion de ser humano CL3L1, peptido senal de secrecion de ser humano CLC11, peptido senal de secrecion de ser humano CLC14, peptido senal de secrecion de ser humano CLM1, peptido senal de secrecion de ser humano CLM9, peptido senal de secrecion de ser humano CLUS, peptido senal de secrecion de ser humano CMA1, peptido senal de secrecion de ser humano CMGA, peptido senal de 65 secrecion de ser humano CO1A1, peptido senal de secrecion de ser humano CO2, peptido senal de secrecion de

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

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65

ser humano CO3, peptido senal de secrecion de ser humano CO4A2, peptido senal de secrecion de ser humano CO5A2, peptido senal de secrecion de ser humano CO6A1, peptido senal de secrecion de ser humano CO6, peptido senal de secrecion de ser humano CO7, peptido senal de secrecion de ser humano CO9A1, peptido senal de secrecion de ser humano CO9, peptido senal de secrecion de ser humano COGA1, peptido senal de secrecion de ser humano COLI, peptido senal de secrecion de ser humano COL, peptido senal de secrecion de ser humano CR2, peptido senal de secrecion de ser humano CRDL2, peptido senal de secrecion de ser humano CREG1, peptido senal de secrecion de ser humano CRHBP, peptido senal de secrecion de ser humano CRIM1, peptido senal de secrecion de ser humano CRIS1, peptido senal de secrecion de ser humano CRLF1, peptido senal de secrecion de ser humano CRP, peptido senal de secrecion de ser humano CSF2R, peptido senal de secrecion de ser humano CSF2, peptido senal de secrecion de ser humano CSF3R, peptido senal de secrecion de ser humano CSPG2, peptido senal de secrecion de ser humano CST9L, peptido senal de secrecion de ser humano CST9, peptido senal de secrecion de ser humano CTHR1, peptido senal de secrecion de ser humano CTRB1, peptido senal de secrecion de ser humano CXCL7, peptido senal de secrecion de ser humano CXL10, peptido senal de secrecion de ser humano CYTC, peptido senal de secrecion de ser humano CYTL1, peptido senal de secrecion de ser humano CYTN, peptido senal de secrecion de ser humano CYTS, peptido senal de secrecion de ser humano CYTT, peptido senal de secrecion de ser humano D103A, peptido senal de secrecion de ser humano DB127, peptido senal de secrecion de ser humano DCD, peptido senal de secrecion de ser humano DEF1, peptido senal de secrecion de ser humano DKK1, peptido senal de secrecion de ser humano DKK3, peptido senal de secrecion de ser humano DKK4, peptido senal de secrecion de ser humano DLK, peptido senal de secrecion de ser humano DLL4, peptido senal de secrecion de ser humano DNAS1, peptido senal de secrecion de ser humano ECP, peptido senal de secrecion de ser humano EDAR, peptido senal de secrecion de ser humano EFNB1, peptido senal de secrecion de ser humano EFNB3, peptido senal de secrecion de ser humano EGFL8, peptido senal de secrecion de ser humano EGFR, peptido senal de secrecion de ser humano EGLN, peptido senal de secrecion de ser humano ELA2A, peptido senal de secrecion de ser humano ELA2B, peptido senal de secrecion de ser humano ELAF, peptido senal de secrecion de ser humano ENPL, peptido senal de secrecion de ser humano ENPP7, peptido senal de secrecion de ser humano EPGN, peptido senal de secrecion de ser humano EPHB1, peptido senal de secrecion de ser humano EPHB6, peptido senal de secrecion de ser humano EPOR, peptido senal de secrecion de ser humano EPO, peptido senal de secrecion de ser humano ESAM, peptido senal de secrecion de ser humano EST1, peptido senal de secrecion de ser humano F13B, peptido senal de secrecion de ser humano FA11, peptido senal de secrecion de ser humano FA5, peptido senal de secrecion de ser humano FA8, peptido senal de secrecion de ser humano FCGR1, peptido senal de secrecion de ser humano FCGRN, peptido senal de secrecion de ser humano FCN1, peptido senal de secrecion de ser humano FCN3, peptido senal de secrecion de ser humano FCRL2, peptido senal de secrecion de ser humano FCRLA, peptido senal de secrecion de ser humano FETUA, peptido senal de secrecion de ser humano FGF19, peptido senal de secrecion de ser humano FGF21, peptido senal de secrecion de ser humano FGF23, peptido senal de secrecion de ser humano FGFR3, peptido senal de secrecion de ser humano FGFR4, peptido senal de secrecion de ser humano FGRL1, peptido senal de secrecion de ser humano FIBA, peptido senal de secrecion de ser humano FIBG, peptido senal de secrecion de ser humano FKB14, peptido senal de secrecion de ser humano FKBP2, peptido senal de secrecion de ser humano FLRT2, peptido senal de secrecion de ser humano FSHB, peptido senal de secrecion de ser humano FSTL1, peptido senal de secrecion de ser humano FSTL3, peptido senal de secrecion de ser humano FST, peptido senal de secrecion de ser humano FZD3, peptido senal de secrecion de ser humano G6B, peptido senal de secrecion de ser humano GALC, peptido senal de secrecion de ser humano GDN, peptido senal de secrecion de ser humano GELS, peptido senal de secrecion de ser humano GI24, peptido senal de secrecion de ser humano GLHA, peptido senal de secrecion de ser humano GLPA, peptido senal de secrecion de ser humano GLPB, peptido senal de secrecion de ser humano GLPE, peptido senal de secrecion de ser humano GLUC, peptido senal de secrecion de ser humano GNS, peptido senal de secrecion de ser humano GP1BA, peptido senal de secrecion de ser humano GPI8, peptido senal de secrecion de ser humano GPIX, peptido senal de secrecion de ser humano GPR56, peptido senal de secrecion de ser humano GPR97, peptido senal de secrecion de ser humano GRAB, peptido senal de secrecion de ser humano GREM1, peptido senal de secrecion de ser humano GROA, peptido senal de secrecion de ser humano GRP78, peptido senal de secrecion de ser humano GRP, peptido senal de secrecion de ser humano HA22, peptido senal de secrecion de ser humano HA23, peptido senal de secrecion de ser humano HA25, peptido senal de secrecion de ser humano HA27, peptido senal de secrecion de ser humano HB21, peptido senal de secrecion de ser humano HB23, peptido senal de secrecion de ser humano HB24, peptido senal de secrecion de ser humano HB25, peptido senal de secrecion de ser humano HB2B, peptido senal de secrecion de ser humano HB2C, peptido senal de secrecion de ser humano HB2K, peptido senal de secrecion de ser humano HEP2, peptido senal de secrecion de ser humano HGFA, peptido senal de secrecion de ser humano HIS1, peptido senal de secrecion de ser humano HIS3, peptido senal de secrecion de ser humano HLAE, peptido senal de secrecion de ser humano HPSE, peptido senal de secrecion de ser humano HPT, peptido senal de secrecion de ser humano HV103, peptido senal de secrecion de ser humano HV303, peptido senal de secrecion de ser humano I10R1, peptido senal de secrecion de ser humano I10R2, peptido senal de secrecion de ser humano I17RA, peptido senal de secrecion de ser humano I17RB, peptido senal de secrecion de ser humano I17RC, peptido senal de secrecion de ser humano I18BP, peptido senal de secrecion de ser humano I20RA, peptido senal de secrecion de ser humano I20RB, peptido senal de secrecion de ser humano I22RA, peptido senal de secrecion de ser humano IBP1, peptido senal de secrecion de ser humano IBP2, peptido senal de secrecion de ser humano IBP3, peptido senal de secrecion de ser humano IBP7, peptido senal de secrecion de ser humano IFN16, peptido senal de secrecion de ser humano IFNA2, peptido senal de secrecion de ser humano IFNA4, peptido senal de secrecion de ser humano IFNA5, peptido senal

de secrecion de ser humano IFNA6, peptido senal de secrecion de ser humano IFNA7, peptido senal de secrecion de ser humano IFNK, peptido senal de secrecion de ser humano IFNW1, peptido senal de secrecion de ser humano IGF2, peptido senal de secrecion de ser humano IGFL1, peptido senal de secrecion de ser humano IGFL3, peptido senal de secrecion de ser humano IL10, peptido senal de secrecion de ser humano IL12A, peptido senal de 5 secrecion de ser humano IL12B, peptido senal de secrecion de ser humano IL17F, peptido senal de secrecion de ser humano IL17, peptido senal de secrecion de ser humano IL19, peptido senal de secrecion de ser humano IL1R1, peptido senal de secrecion de ser humano IL1RA, peptido senal de secrecion de ser humano IL20, peptido senal de secrecion de ser humano IL21R, peptido senal de secrecion de ser humano IL22, peptido senal de secrecion de ser humano IL24, peptido senal de secrecion de ser humano IL25, peptido senal de secrecion de ser humano IL2RA, 10 peptido senal de secrecion de ser humano IL2RB, peptido senal de secrecion de ser humano IL2RG, peptido senal de secrecion de ser humano IL2, peptido senal de secrecion de ser humano IL3, peptido senal de secrecion de ser humano IL4, peptido senal de secrecion de ser humano IL5RA, peptido senal de secrecion de ser humano IL6RA, peptido senal de secrecion de ser humano IL7RA, peptido senal de secrecion de ser humano IL7, peptido senal de secrecion de ser humano IL9, peptido senal de secrecion de ser humano ILRL1, peptido senal de secrecion de ser 15 humano INAR2, peptido senal de secrecion de ser humano INHA, peptido senal de secrecion de ser humano INSL3, peptido senal de secrecion de ser humano INSL4, peptido senal de secrecion de ser humano INSL5, peptido senal de secrecion de ser humano INS, peptido senal de secrecion de ser humano IPSP, peptido senal de secrecion de ser humano IRBP, peptido senal de secrecion de ser humano ISK6, peptido senal de secrecion de ser humano ITA2B, peptido senal de secrecion de ser humano ITA2, peptido senal de secrecion de ser humano ITA3, peptido 20 senal de secrecion de ser humano ITA4, peptido senal de secrecion de ser humano ITA6, peptido senal de secrecion de ser humano ITA7, peptido senal de secrecion de ser humano ITAE, peptido senal de secrecion de ser humano ITAL, peptido senal de secrecion de ser humano ITAV, peptido senal de secrecion de ser humano ITAX, peptido senal de secrecion de ser humano ITB2, peptido senal de secrecion de ser humano ITB4, peptido senal de secrecion de ser humano ITIH4, peptido senal de secrecion de ser humano JAM1, peptido senal de secrecion de ser humano 25 JAM2, peptido senal de secrecion de ser humano JAM3, peptido senal de secrecion de ser humano JAML1, peptido senal de secrecion de ser humano KAZD1, peptido senal de secrecion de ser humano KI2L1, peptido senal de secrecion de ser humano KIRR2, peptido senal de secrecion de ser humano KLK3, peptido senal de secrecion de ser humano KLKB1, peptido senal de secrecion de ser humano KNG1, peptido senal de secrecion de ser humano KTEL1, peptido senal de secrecion de ser humano KV403, peptido senal de secrecion de ser humano KV404, 30 peptido senal de secrecion de ser humano L1CAM, peptido senal de secrecion de ser humano LALBA, peptido senal de secrecion de ser humano LAMB1, peptido senal de secrecion de ser humano LAMC1, peptido senal de secrecion de ser humano LAMP1, peptido senal de secrecion de ser humano LAMP2, peptido senal de secrecion de ser humano LBP, peptido senal de secrecion de ser humano LCAT, peptido senal de secrecion de ser humano LCN1, peptido senal de secrecion de ser humano LCTL, peptido senal de secrecion de ser humano LEUK, peptido senal de 35 secrecion de ser humano LG3BP, peptido senal de secrecion de ser humano LIF, peptido senal de secrecion de ser humano LIPG, peptido senal de secrecion de ser humano LIPP, peptido senal de secrecion de ser humano LIRA3, peptido senal de secrecion de ser humano LMAN1, peptido senal de secrecion de ser humano LPH, peptido senal de secrecion de ser humano LRC55, peptido senal de secrecion de ser humano LRRN1, peptido senal de secrecion de ser humano LSHB, peptido senal de secrecion de ser humano LUM, peptido senal de secrecion de ser humano 40 LU, peptido senal de secrecion de ser humano LV605, peptido senal de secrecion de ser humano LY86, peptido senal de secrecion de ser humano LYAM2, peptido senal de secrecion de ser humano LYPA3, peptido senal de secrecion de ser humano LYPD6, peptido senal de secrecion de ser humano LYSC, peptido senal de secrecion de ser humano MBL2, peptido senal de secrecion de ser humano MCP, peptido senal de secrecion de ser humano MFAP4, peptido senal de secrecion de ser humano MGP, peptido senal de secrecion de ser humano MIA, peptido 45 senal de secrecion de ser humano MIME, peptido senal de secrecion de ser humano MIP2A, peptido senal de secrecion de ser humano MIP2B, peptido senal de secrecion de ser humano MK, peptido senal de secrecion de ser humano MMP1, peptido senal de secrecion de ser humano MOTI, peptido senal de secrecion de ser humano MOX2R, peptido senal de secrecion de ser humano MPRD, peptido senal de secrecion de ser humano MPRI, peptido senal de secrecion de ser humano MPZL3, peptido senal de secrecion de ser humano MSMB, peptido senal 50 de secrecion de ser humano MYP0, peptido senal de secrecion de ser humano NAGAB, peptido senal de secrecion de ser humano NELL1, peptido senal de secrecion de ser humano NELL2, peptido senal de secrecion de ser humano NETO2, peptido senal de secrecion de ser humano NEU1, peptido senal de secrecion de ser humano NEU2, peptido senal de secrecion de ser humano NGAL, peptido senal de secrecion de ser humano NID1, peptido senal de secrecion de ser humano NID2, peptido senal de secrecion de ser humano NLGNX, peptido senal de 55 secrecion de ser humano NMB, peptido senal de secrecion de ser humano NOV, peptido senal de secrecion de ser humano NPTN, peptido senal de secrecion de ser humano NPY, peptido senal de secrecion de ser humano NRP1, peptido senal de secrecion de ser humano NTRK2, peptido senal de secrecion de ser humano NXPH3, peptido senal de secrecion de ser humano OLFL1, peptido senal de secrecion de ser humano OTOR, peptido senal de secrecion de ser humano OXLA, peptido senal de secrecion de ser humano P31P1, peptido senal de secrecion de ser humano 60 PAHO, peptido senal de secrecion de ser humano PARM1, peptido senal de secrecion de ser humano PCDBA, peptido senal de secrecion de ser humano PCOC2, peptido senal de secrecion de ser humano PCYXL, peptido senal de secrecion de ser humano PDGFA, peptido senal de secrecion de ser humano PDIA1, peptido senal de secrecion de ser humano PDIA3, peptido senal de secrecion de ser humano PDYN, peptido senal de secrecion de ser humano PEBP4, peptido senal de secrecion de ser humano PECA1, peptido senal de secrecion de ser humano 65 PG12B, peptido senal de secrecion de ser humano PGFRA, peptido senal de secrecion de ser humano PGFRB,

peptido senal de secrecion de ser humano PGH1, peptido senal de secrecion de ser humano PGRP2, peptido senal de secrecion de ser humano PIGT, peptido senal de secrecion de ser humano PIP, peptido senal de secrecion de ser humano PLBL2, peptido senal de secrecion de ser humano PLF4, peptido senal de secrecion de ser humano PLOD1, peptido senal de secrecion de ser humano PORIM, peptido senal de secrecion de ser humano PPA6, 5 peptido senal de secrecion de ser humano PPAP, peptido senal de secrecion de ser humano PPGB, peptido senal de secrecion de ser humano PPIB, peptido senal de secrecion de ser humano PRB4, peptido senal de secrecion de ser humano PRLR, peptido senal de secrecion de ser humano PRL, peptido senal de secrecion de ser humano PROK1, peptido senal de secrecion de ser humano PROK2, peptido senal de secrecion de ser humano PROP, peptido senal de secrecion de ser humano PROZ, peptido senal de secrecion de ser humano PRP1, peptido senal 10 de secrecion de ser humano PRPC, peptido senal de secrecion de ser humano PRRT3, peptido senal de secrecion de ser humano PTGDS, peptido senal de secrecion de ser humano PTHY, peptido senal de secrecion de ser humano PTPRG, peptido senal de secrecion de ser humano PYY, peptido senal de secrecion de ser humano PZP, peptido senal de secrecion de ser humano REG1A, peptido senal de secrecion de ser humano REG3G, peptido senal de secrecion de ser humano RIB1, peptido senal de secrecion de ser humano RIB2, peptido senal de 15 secrecion de ser humano RISC, peptido senal de secrecion de ser humano RNAS1, peptido senal de secrecion de ser humano RNAS4, peptido senal de secrecion de ser humano S39A6, peptido senal de secrecion de ser humano SAA4, peptido senal de secrecion de ser humano SAA, peptido senal de secrecion de ser humano SAMP, peptido senal de secrecion de ser humano SCG1, peptido senal de secrecion de ser humano SCRG1, peptido senal de secrecion de ser humano SEM4B, peptido senal de secrecion de ser humano SEM6B, peptido senal de secrecion de 20 ser humano SEMG1, peptido senal de secrecion de ser humano SEMG2, peptido senal de secrecion de ser humano SEPP1, peptido senal de secrecion de ser humano SFRP2, peptido senal de secrecion de ser humano SFRP3, peptido senal de secrecion de ser humano SFTPG, peptido senal de secrecion de ser humano SG1D4, peptido senal de secrecion de ser humano SG3A1, peptido senal de secrecion de ser humano SHBG, peptido senal de secrecion de ser humano SIAL, peptido senal de secrecion de ser humano SIDT2, peptido senal de secrecion de ser humano 25 SLAF6, peptido senal de secrecion de ser humano SLAF7, peptido senal de secrecion de ser humano SLAF8, peptido senal de secrecion de ser humano SLPI, peptido senal de secrecion de ser humano SMR3B, peptido senal de secrecion de ser humano SMS, peptido senal de secrecion de ser humano SODE, peptido senal de secrecion de ser humano SOSD1, peptido senal de secrecion de ser humano SOST, peptido senal de secrecion de ser humano SPIT1, peptido senal de secrecion de ser humano SPIT2, peptido senal de secrecion de ser humano SRCH, peptido 30 senal de secrecion de ser humano SRGN, peptido senal de secrecion de ser humano STAT, peptido senal de secrecion de ser humano STC1, peptido senal de secrecion de ser humano TCO1, peptido senal de secrecion de ser humano TCO2, peptido senal de secrecion de ser humano TENA, peptido senal de secrecion de ser humano TETN, peptido senal de secrecion de ser humano TFF1, peptido senal de secrecion de ser humano TFF3, peptido senal de secrecion de ser humano TFPI1, peptido senal de secrecion de ser humano TGFR2, peptido senal de secrecion de 35 ser humano THBG, peptido senal de secrecion de ser humano THYG, peptido senal de secrecion de ser humano TICN2, peptido senal de secrecion de ser humano TIE1, peptido senal de secrecion de ser humano TIE2, peptido senal de secrecion de ser humano TIMP1, peptido senal de secrecion de ser humano TIMP2, peptido senal de secrecion de ser humano TIMP3, peptido senal de secrecion de ser humano TINAL, peptido senal de secrecion de ser humano TLR1, peptido senal de secrecion de ser humano TLR3, peptido senal de secrecion de ser humano 40 TLR4, peptido senal de secrecion de ser humano TLR5, peptido senal de secrecion de ser humano TM2D1, peptido senal de secrecion de ser humano TMIG2, peptido senal de secrecion de ser humano TMM25, peptido senal de secrecion de ser humano TMM46, peptido senal de secrecion de ser humano TMM66, peptido senal de secrecion de ser humano TMM9B, peptido senal de secrecion de ser humano TNFB, peptido senal de secrecion de ser humano TNR14, peptido senal de secrecion de ser humano TNR16, peptido senal de secrecion de ser humano TNR18, 45 peptido senal de secrecion de ser humano TNR19, peptido senal de secrecion de ser humano TNR1B, peptido senal de secrecion de ser humano TNR5, peptido senal de secrecion de ser humano TNR6B, peptido senal de secrecion de ser humano TNR8, peptido senal de secrecion de ser humano TNR9, peptido senal de secrecion de ser humano TPO, peptido senal de secrecion de ser humano TPSNR, peptido senal de secrecion de ser humano TPSN, peptido senal de secrecion de ser humano TR10D, peptido senal de secrecion de ser humano TR11B, peptido senal de 50 secrecion de ser humano TR19L, peptido senal de secrecion de ser humano TRBM, peptido senal de secrecion de ser humano TRFE, peptido senal de secrecion de ser humano TRFL, peptido senal de secrecion de ser humano TRY1, peptido senal de secrecion de ser humano TRY2, peptido senal de secrecion de ser humano TSHB, peptido senal de secrecion de ser humano TSP1, peptido senal de secrecion de ser humano TVA2, peptido senal de secrecion de ser humano TVB2, peptido senal de secrecion de ser humano TXD12, peptido senal de secrecion de 55 ser humano TXND4, peptido senal de secrecion de ser humano TYRP1, peptido senal de secrecion de ser humano UROK, peptido senal de secrecion de ser humano UTER, peptido senal de secrecion de ser humano UTS2, peptido senal de secrecion de ser humano VCAM1, peptido senal de secrecion de ser humano VEGFA, peptido senal de secrecion de ser humano VEGFC, peptido senal de secrecion de ser humano VGFR3, peptido senal de secrecion de ser humano VMO1, peptido senal de secrecion de ser humano VSIG2, peptido senal de secrecion de ser humano 60 VSIG4, peptido senal de secrecion de ser humano VSTM1, peptido senal de secrecion de ser humano VTNC, peptido senal de secrecion de ser humano VWF, peptido senal de secrecion de ser humano WISP2, peptido senal de secrecion de ser humano X3CL1, peptido senal de secrecion de ser humano XCL2, peptido senal de secrecion de ser humano YK001, peptido senal de secrecion de ser humano YQ001, peptido senal de secrecion de ser humano ZA2G, peptido senal de secrecion de ser humano ZG16, peptido senal de secrecion de ser humano ZP2.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

[0069] Las secuencias de estos peptidos senal de secrecion son las siguientes:

1A02_HUMANO SPdb195 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 15) MAVMAPRTLVLLLSGALALTQTWA 1A11_HUMANO SPdb208 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 16) MAVMAPRTLLLLLSGALALTQTWA 1A25_HUMANO SPdb276 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 17) MAVMAPRTLVLLLSGALALTQTWA 1A26_HUMANO SPdb277 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 18) MAVMAPRTLVLLLSGALALTQTWA 1A30_HUMANO SPdb279 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 19) MAVMAPRTLLLLLSGALALTHTWA 1A31_HUMANO SPdb280 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 20) MAVMAPRTLLLLLLGALALTQTWA 1A33_HUMANO SPdb282 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 21) MAVMAPRTLLLLLLGALALTQTWA 1A68_HUMANO SPdb287 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 22) MAVMAPRTLVLLLSGALALTQTWA 1A80_HUMANO SPdb290 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 23) MAVMPPRTLLLLLSGALALTQTWA 1B07_HUMANO SPdb298 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 24) MLVMAPRTVLLLLSAALALTETWA 1B15_HUMANO SPdb302 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 25) MRVTAPRTVLLLLSGALALTETWA 1B37_HUMANO SPdb306 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 26) MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWA 1B40_HUMANO SPdb309 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 27) MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWA 1B47_HUMANO SPdb315 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 28) MRVTAPRTLLLLLWGAVALTETWA 1B48_HUMANO SPdb316 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 29) MLVMAPRTVLLLLSAALALTETWA 1B57_HUMANO SPdb325 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 30) MRVTAPRTVLLLLWGAVALTETWA 1B59_HUMANO SPdb327 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 31) MRVTAPRTLLLLLWGALALTETWA 1B78_HUMANO SPdb330 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 32) MRVTAPRTVLLLLWGAVALTETWA 1C03_HUMANO SPdb340 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 33) MRVMAPRTLILLLSGALALTETWA 1C04_HUMANO SPdb342 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 34) MRVMAPRTLILLLSGALALTETWA 1C05_HUMANO SPdb343 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 35) MRVMAPRTLILLLSGALALTETWA 1C07_HUMANO SPdb345 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 36) MRVMAPRALLLLLSGGLALTETWA 1C14_HUMANO SPdb348 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 37) MRVMAPRTLILLLSGALALTETWA 1C15_HUMANO SPdb349 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 38) MRVMAPRTLLLLLSGALALTETWA 1C16_HUMANO SPdb350 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 39) MRVMAPRTLILLLSGALALTETWA 1C17_HUMANO SPdb351 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 40) MRVMAPQALLLLLSGALALIETWA 1C18_HUMANO SPdb352 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 41) MRVMAPRALLLLLSGGLALTETWA

2B11 HUMANO SPdb440 Homo: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 42)

MVCLKLPGGSCMTALTVTLMVLSSPLALA 2B14 HUMANO SPdb441 Homo: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 43)

MVCLKFPGGSCMAALTVTLMVLSSPLALA 2B17 HUMANO SPdb442 Homo: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 44)

MVCLKLPGGSCMAALTVTLMVLSSPLALA 2B1A HUMANO SPdb445 Homo: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 45)

MVCLRLPGGSCMAVLTVTLMVLSSPLALA 2B1B HUMANO SPdb446 Homo: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 46)

MVCLRLPGGSCMAVLTVTLMVLSSPLALA 2B32 HUMANO SPdb449 Homo: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 47)

MVCLKLPGGSSLAALTVTLMVLSSRLAFA 2DOB_HUMANO SPdb458 Homo: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 48)

MGSGWVPWWALLVNLTRLDSSMTQG 7B2 HUMANO SPdb1113 Homo: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 49)

MVSRMVSTMLSGLLFWLASGWTPAFA

A1AT_HUMANO SPdb1182 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 50) MPSSVSWGILLLAGLCCLVPVSLA A2GL_HUMANO SPdb1223 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 51)

MSSWSRQRPKSPGGIQPHVSRTLFLLLLLAASAWG

A2MG_HUMANO SPdb1225 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 52) MGKNKLLHPSLVLLLLVLLPTDA ABP1_HUMANO SPdb2047 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 53) MPALGWAVAAILMLQTAMA ACET_HUMANO SPdb2859 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 54)

MGQGWATAGLPSLLFLLLCYGHPLLVPSQEA

ACHB_HUMANO SPdb2984 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 55) MTPGALLMLLGALGAPLAPGVRG ACHE_HUMANO SPdb2999 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 56) MARAPLGVLLLLGLLGRGVG ACRO_HUMANO SPdb4311 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 57) MVEMLPTAILLVLAVSVVA ADA32_HUMANO SPdb5197 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 58) MFRLWLLLAGLCGLLA ADIPO_HUMANO SPdb5938 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 59) MLLLGAVLLLLALPGHDQ ADML_HUMANO SPdb5966 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 60) MKLVSVALMYLGSLAFLGADT AGAL_HUMANO SPdb6382 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 61)

MQLRNPELHLGCALALRFLALVSWDIPGARA

AGR2_HUMANO SPdb6560 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 62) MEKIPVSAFLLLVALSYTLA AGR3_HUMANO SPdb6563 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 63) MMLHSALGLCLLLVTVSSNLA AMBP_HUMANO SPdb8414 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 64) MRSLGALLLLLSACLAVSA AMTN_HUMANO SPdb9141 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 65) MRSTILLFCLLGSTRS ANF_HUMANO SPdb9494 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 66) MSSFSTTTVSFLLLLAFQLLGQTRA

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

ANGI_HUMANO SPdb9521 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 67) MVMGLGVLLLVFVLGLGLTPPTLA ANGL3_HUMANO SPdb9540 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 68) MFTIKLLLFIVPLVIS ANGL7_HUMANO SPdb9551 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 69)

MLKKPLSAVTWLCIFIVAFVSHPAWL

ANGT_HUMANO SPdb9580 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 70)

MRKRAPQSEMAPAGVSLRATILCLLAWAGLAAG

ANPRA_HUMANO SPdb9903 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 71)

MPGPRRPAGSRLRLLLLLLLPPLLLLLRGSHA

APOA2_HUMANO SPdb10884 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 72) MKLLAATVLLLTICSLEG APOA4_HUMANO SPdb10891 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 73) MFLKAWLTLALVAVAGARA APOA_HUMANO SPdb10900 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 74) MEHKEVVLLLLLFLKSAAP APOC1_HUMANO SPdb10907 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 75)

MRLFLSLPVLVVVLSIVLEGPAPAQG

APOC2_HUMANO SPdb10917 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 76) MGTRLLPALFLVLLVLGFEVQG APOC3_HUMANO SPdb10924 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 77) MQPRVLLWALLALLASARA APOD_HUMANO SPdb10936 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 78) MVMLLLLLSALAGLFGAAEG APOE_HUMANO SPdb10946 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 79) MKVLWAALLVTFLAGCQA APOH_HUMANO SPdb10966 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 80) MISPVLILFSSFLCHVAIA APR3_HUMANO SPdb11011 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 81)

MAPHGPGSLTTLVPWAAALLLALGVERALA

ASM_HUMANO SPdb16794 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 82)

MPRYGASLRQSCPRSGREQGQDGTAGAPGLLWMGLVLALALALALA

ASPG_HUMANO SPdb17050 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 83) MARKSNLPVLLVPFLLCQALVRC BAMBI_HUMANO SPdb23773 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 84) MDRHSSYIFIWLQLELCAMA BASI_HUMANO SPdb23850 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 85) MAAALFVLLGFALLGTHGASG BGAL_HUMANO SPdb24876 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 86) MPGFLVRILLLLLVLLLLGPTRG BGLR_HUMANO SPdb24971 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 87) MARGSAVAWAALGPLLWGCALG BOC_HUMANO SPdb25928 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 88)

MLRGTMTAWRGMRPEVTLACLLLATAGCFA

BPIL1_HUMANO SPdb26090 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 89) MAWASRLGLLLALLLPWGA BPI_HUMANO SPdb26097 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 90)

MRENMARGPCNAPRWVSLMVLVAIGTAVTAA

BT3A3_HUMANO SPdb26592 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 91)

MKMASSLAFLLLNFHVSLFLVQLLTPCSA

BTNL8_HUMANO SPdb26692 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 92) MALMLSLVLSLLKLGSG C16L2_HUMANO SPdb27156 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 93) M EAPG PRAL RTALCGGCCCLL LCAQLAVA

C1QT5_HUMANO SPdb27240 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 94) MRPLLVLLLLGLAAG C1QT6_HUMANO SPdb27243 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 95)

MVTAALGPVWAALLLFLLMCEIPMVEL

C1R_HUMANO SPdb27257 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 96) MWLLYLLVPALFCRAGG C1S_HUMANO SPdb27262 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 97) MWCIVLFSLLAWVYA

C4BPA HUMANO SPdb27346 Homo sapiens (Ser humano) MHPPKTPSGALHRKRKMAAWPFSRLWKVSDPILFQMTLIAALLPAVLG: (SEQ ID NO: 98)

CA187 HUMANO SPdb27946 Homo sapiens MAGPAIHTAPMLFLVLLLPLELSLA: (Ser humano) (SEQ ID NO: 99)

CADM3 HUMANO SPdb28390 Homo sapiens MGAPAASLLLLLLLFACCWAPGGA: (Ser humano) (SEQ ID NO: 100)

CAH9 HUMANO SPdb28555 Homo sapiens MAPLCPSPWLPLLIPAPAPGLTVQLLLSLLLLVPVHP: (Ser humano) (SEQ ID NO: 101)

CALCR HUMANO SPdb28726 Homo sapiens MRFTFTSRCLALFLLLNHPTPILP: (Ser humano) (SEQ ID NO: 102)

CALRL_HUMANO SPdb28899 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 103) MEKKCTLYFLVLLPFFMILVTA CALR_HUMANO SPdb28916 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 104) MLLSVPLLLGLLGLAVA

CAP7 HUMANO SPdb29157 Homo MTRLTVLALLAGLLASSRAGSSPLLD: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 105)

CART HUMANO SPdb29961 Homo MESSRVRLLPLLGAALLLMLPLLGTRA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 106)

CASA1_HUMANO

SPdb29986 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 107) MRLLILTCLVAVALA CASB_HUMANO SPdb30005 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 108) MKVLILACLVALALA CASK_HUMANO SPdb30048 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 109) MKSFLLWNALALTLPFLAV CATC_HUMANO SPdb30354 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 110)

MGAGPSLLLAALLLLLSGDGAVRC

CATE_HUMANO SPdb30381 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 111) MKTLLLLLLVLLELGEA

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

CATG_HUMANO SPdb30393 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 112) MQPLLLLLAFLLPTGAEA CATW_HUMANO SPdb30490 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 113) MALTAHPSCLLALLVAGLAQG CBG_HUMANO SPdb30913 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 114) MPLLLYTCLLWLPTSGLWTVQA CBLN3_HUMANO SPdb31375 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 115)

MLGAKPHWLPGPLHSPGLPLVLVLLALGAGWA

CBLN4_HUMANO SPdb31377 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 116)

MGSGRRALSAVPAVLLVLTLPGLPVWA

CBPA1_HUMANO SPdb31413 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 117) MRGLLVLSVLLGAVFG

CBPA3_HUMANO SPdb31420 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 118) MRLILPVGLIATTLA

CBPB1_HUMANO SPdb31459 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 119) MLALLVLVTVALASA

CBPN_HUMANO SPdb31531 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 120) MSDLLSVFLHLLLLFKLVAP CCL11_HUMANO SPdb32635 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 121) MKVSAALLWLLLIAAAFSPQGLA CCL15_HUMANO SPdb32644 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 122) MKVSVAALSCLMLVAVLGSQA CCL19_HUMANO SPdb32652 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 123) MALLLALSLLVLWTSPAPTLS CCL1_HUMANO SPdb32654 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 124) MQIITTALVCLLLAGMWPEDVDS CCL22_HUMANO SPdb32663 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 125) MARLQTALLVVLVLLAV- ALQATEA

CCL24_HUMANO SPdb32668 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 126)

MAGLMTIVTSLLFLGVCAHHIIPTGS

CCL2_HUMANO SPdb32684 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 127) MKVSAALLCLLLIAATFIPQGLA CCL4_HUMANO SPdb32700 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 128) MKLCVTVLSLLMLVAAFCSPALS CCL5_HUMANO SPdb32709 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 129) MKVSAAALAVILIATALCAPASA CCL7_HUMANO SPdb32717 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 130) MKASAALLCLLLTAAAFSPQGLA CD180_HUMANO SPdb33618 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 131)

MAFDVSCFFWVVLFSAGCKVITS

CD1A_HUMANO SPdb33624 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 132) MLFLLLPLLAVLPGDG CD244_HUMANO SPdb33672 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 133) MLGQVVTLILLLLLKVYQGKG CD276-HUMANO SPdb33680 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 134)

MLRRRGSPGMGVHVGAALGALWFCLTGA

CD27_HUMANO SPdb33684 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 135) MARPHPWWLCVLGTLVGLS CD28_HUMANO SPdb33689 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 136) MLRLLLALNLFPSIQVTG CD2_HUMANO SPdb33718 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 137) MSFPCKFVASFLLIFNVSSKGAVS

CD320_HUMANO SPdb33725 Homo sapiens MSGGWMAQVGAWRTGALGLALLLLLGLGLGLEAAA: (Ser humano) (SEQ ID NO: 138)

CD34 HUMANO SPdb33729 Homo sapiens MLVRRGARAGPRMPRGWTALCLLSLLPSGFM: (Ser humano) (SEQ ID NO: 139)

CD3E_HUMANO SPdb33763 Homo sapiens MQSGTHWRVLGLCLLSVGVWGQ: (Ser humano) (SEQ ID NO: 140)

CD3G_HUMANO SPdb33770 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 141) MEQGKGLAVLILAIILLQGTLA CD3Z_HUMANO SPdb33777 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 142) MKWKALFTAAILQAQLPITEA CD45_HUMANO SPdb33804 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 143) MYLWLKLLAFGFAFLDTEVFVTG CD5L_HUMANO SPdb33861 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 144) MALLFSLILAICTRPGFLA CD5_HUMANO SPdb33872 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 145) MPMGSLQPLATLYLLGMLVASCLG CD83_HUMANO SPdb33912 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 146) MSRGLQLLLLSCAYSLAPA CD8B_HUMANO SPdb33924 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 147) MRPRLWLLLAAQLTVLHGNSV CD99_HUMANO SPdb33932 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 148) MARGAALALLLFGLLGVLVAAP CEAM1_HUMANO SPdb34729 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 149)

MGHLSAPLHRVRVPWQGLLLTASLLTFWNPPTTA

CER1_HUMANO SPdb35232 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 150) MHLLLFQLLVLLPLGKT CERU_HUMANO SPdb35241 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 151) MKILILGIFLFLCSTPAWA CETP_HUMANO SPdb35298 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 152) MLAATVLTLALLGNAHA CF126_HUMANO SPdb35387 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 153) MAAALALVAGVLSGAVLPLWS CFAB_HUMANO SPdb35492 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 15.4)

MGSNLSPQLCLMPFILGLLSGGVTT

CFAH_HUMANO SPdb35506 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 155) MRLLAKIICLMLWAICVA CFAI_HUMANO SPdb35508 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 156) MKLLHVFLLFLCFHLRFC CH3L1_HUMANO SPdb36470 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 157) MGVKASQTGFWLVLLQCCSA CH3L2_HUMANO SPdb36476 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 158)

MGATTMDQKSLWAGVVVLLLLQGGSA

CHIT1_HUMANO SPdb37892 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 159) MVRSVAWAGFMVLLMIPWGSA CL3L1_HUMANO SPdb39759 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 160)

MQVSTAALAVLLCTMALCNQVLS

CLC11_HUMANO SPdb39795 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 161) MQAAWLLGALVVPQLLGFGHG CLC14_HUMANO SPdb39798 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 162) MRPAFALCLLWQALWPGPGGG CLM1__HUMANO SPdb40173 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 163) MPLLTLYLLLFWLSGYSIA

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

CLM9_HUMANO SPdb40190 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 164) MRLLVLLWGCLLLPGYEA CLUS_HUMANO SPdb41741 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 165) MMKTLLLFVGLLLTWESGQVLG CMA1_HUMANO SPdb41778 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 166) MLLLPLPLLLFLLCSRAEA CMGA_HUMANO SPdb41825 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 167) MRSAAVLALLLCAGQVTA CO1A1_HUMANO SPdb42643 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 168) MFSFVDLRLLLLLAATALLTHG CO2_HUMANO SPdb42671 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 169) MGPLMVLFCLLFLYPGLADS CO3_HUMANO SPdb42683 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 170) MGPTSGPSLLLLLLTHLPLALG CO4A2_HUMANO SPdb42702 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 171)

MGRDQRAVAGPALRRWLLLGTVTVG

CO5A2_HUMANO SPdb42724 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 172)

MMANWAEARPLLILIVLLGQFVSIKA

CO6A1_HUMANO SPdb42733 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 173) MRAARALLPLLLQACWTAA CO6_HUMANO SPdb42741 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 174) MARRSVLYFILLNALINKGQA CO7_HUMANO SPdb42748 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 175) MKVISLFILVGFIGEFQSFSSA CO9A1_HUMANO SPdb42770 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 176)

MKTCWKIPVFFFVCSFLEPWASA

CO9_HUMANO SPdb42781 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 177) MSACRSFAVAICILEISILTA COGA1_HUMANO SPdb44971 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 178)

MWVSWAPGLWLLGLWATFGHG

COLI_HUMANO SPdb45068 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 179)

MPRSCCSRSGALLLALLLQASMEVRG

COL_HUMANO SPdb45103 Homo sapiens (Ser humano)

CR2_HUMANO SPdb47985 Homo sapiens (Ser humano)

CRDL2-HUMANO SPdb48539 Homo sapiens

MVPEVRVLSSLLGLALLWFPLDSHA

CREG1_HUMANO SPdb48576 Homo sapiens

MAGLSRGSARALLAALLASTLLALLVSPARG

CRHBP_HUMANO SPdb48678 Homo sapiens

MSPNFKLQCHFILIFLTALRGESR

CRIM1_HUMANO SPdb48688 Homo sapiens

MYLVAGDRGLAGCGHLLVSLLGLLLLLARSGTRA

(SEQ ID NO: 180) MEKILILLLVALSVAYA (SEQ ID NO: 181) MGAAGLLGVFLALVAPGVLG

(Ser: humano) (SEQ ID NO: 182)

(Ser: humano) (SEQ ID NO: 183)

(Ser: humano) (SEQ ID NO: 184)

(Ser: humano) (SEQ ID NO: 185)

CRIS1_HUMANO SPdb48712 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 186) MEIKHLLFLVAAACLLPMLSM CRLF1_HUMANO SPdb48785 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 187)

MPAGRRGPAAQSARRPPPLLPLLLLLCVLGAPRAGSG

CRP_HUMANO SPdb48875 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 188) MEKLLCFLVLTSLSHAFG CSF2R_HUMANO SPdb49487 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 189) MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP CSF2_HUMANO SPdb49495 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 190) MWLQSLLLLGTVACSIS

CSF3R_HUMANO SPdb49500 Homo MARLGNCSLTWAALIILLLPGSLE: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 191)

CSPG2_HUMANO SPdb50031 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ: ID NO: 192) MFINIKSILWMCSTLIVTHA

CST9L HUMANO SPdb50299 Homo MLGLPWKGGLSWALLLLLLGSQILLIYA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 193)

CST9 HUMANO SPdb50302 Homo MSSPQRRKAMPWALSLLLMGFQLLVTYA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 194)

CTHR1 HUMANO SPdb50661 Homo MRPQGPAASPQRLRGLLLLLLLQLPAPSSA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 195)

CTRB1_HUMANO Pdb50822 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 196) MAFLWLLSCWALLGTTFG CXCL7_HUMANO SPdb52153 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 197)

MSLRLDTTPSCNSARPLHALQVLLLLSLLLTALA

CXL10_HUMANO SPdb52338 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 198) MNQTAILICCLIFLTLSGIQG CYTC_HUMANO SPdb56121 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 199)

MAGPLRAPLLLLAILAVALAVSPAAG

CYTL1_HUMANO SPdb56131 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 200) MRTPGPLPVLLLLLAGAPAARP CYTN_HUMANO SPdb56136 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 201) MAQHLSTLLLLLATLAVALA CYTS_HUMANO SPdb56151 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 202) MARPLCTLLLLMATLAGALA CYTT_HUMANO SPdb56153 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 203) MAWPLCTLLLLLATQAVALA D103A_HUMANO SPdb56224 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 204) MRIHYLLFALLFLFLVPVPGHG DB127_HUMANO SPdb57844 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 205) MGLFMIIAlLLFQKPTVTEQ DCD_HUMANO SPdb58564 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 206) MRFMTLLFLTALAGALVCA DEF1_HUMANO SPdb60113 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 207) MRTLAILAAILLVALQAQA DKK1_HUMANO SPdb62795 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 208)

MMALGAAGATRVFVAMVAAALGGHPLLGVSA

DKK3_HUMANO SPdb62800 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 209) MQRLGATLLCLLLAAAVPTAP DKK4_HUMANO SPdb62802 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 210) MVAAVLLGLSWLCSPLGA DLK_HUMANO SPdb62960 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 211) MTATEALLRVLLLLLAFGHSTYG

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

sapiens (Ser humano) sapiens (Ser humano) (SEQ

(SEQ ID

NO:

212)

ID NO: 213) M RG M

sapiens

(Ser

humano)

(SEQ

Homo

sapiens (Ser humano) (SEQ

ID

NO:

214)

215)

216)

NO: 217)

NO:

218)

219)

220)

DLL4_HUMANO SPdb62971 Homo

MAAASRSASGWALLLLVALWQQRAAG DNAS1_HUMANO SPdb64678 Homo KLLGALLALAALLQGAVS ECP_HUMANO SPdb69940 Homo

MVPKLFTSQICLLLLLGLMGVEGSLHA EDAR_HUMANO SPdb70101 Homo MAHVGDCTQTPWLPVLVVSLMCSARA EFNB1_HUMANO SPdb71207 Homo

MARPGQRWLGKWLVAMVVWALCRLATP EFNB3_HUMANO SPdb71214 Homo

MGPPHSGPGGVRVGALLLLGVLGLVSG EGFL8_HUMANO SPdb72652 Homo

MGSRAELCTLLGGFSFLLLLIPGEG EGFR_HUMANO SPdb72662 MRPSGTAGAALLALLAALCPASRA EGLN_HUMANO SPdb72697 MDRGTLPLAVALLLASCSLSPTSLA

ELA2A_HUMANO SPdb73024 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 221) MIRTLLLSTLVAGALS ELA2B_HUMANO SPdb73028 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 222) MIRTLLLSTLVAGALS ELAF_HUMANO SPdb73040 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 223) MRASSFLIVWFLIAGTLVLEA ENPL_HUMANO SPdb75253 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 224) MRALWVLGLCCVLLTFGSVRA ENPP7_HUMANO SPdb75282 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 225) MRGLAVLLTVALATLLAPGAG EPGN_HUMANO SPdb75639 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 226) MALGVPISVYLLFNAMTALTEE EPHB1_HUMANO SPdb75671 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 227) MALDYLLLLLLASAVAA EPHB6_HUMANO, SPdb75686 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 228) MVCSLWVLLLVSSVLA EPOR_HUMANO SPdb75734 Homo

MDHLGASLWPQVGSLCLLLAGAAW EPO_HUMANO SPdb75747 Homo MGVHECPAWLWLLLSLLSLPLGLPVLG ESAM_HUMANO SPdb76640 Homo

MISLPGPLVTNLLRFLFLGLSALAPPSRA

EST1_HUMANO SPdb76818 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 232) MWLRAFILATLSASAAWG F13B_HUMANO SPdb78523 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 233) MRLKNLTFIIILIISGELYA FA11_HUMANO SPdb78712 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 234) MIFLYQVVHFILFTSVSG FA5_HUMANO SPdb78865 Homo sapiens (Ser humano)(SEQ ID NO: MFPGCPRLWVLVVLGTSWVGWGSQGTEA

FA8_HUMANO SPdb78981 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 236) MQIELSTCFFLCLLRFCFS FCGR1_HUMANO SPdb81611 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 237) MWFLTTLLLWVPVDG FCGRN_HUMANO SPdb81622 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO:

MGVPRPQPWALGLLLFLLPGSLG

FCN1_HUMANO SPdb81643 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO:

MELSGATMARGLAVLLVLFLHIKNLPAQA

FCN3_HUMANO SPdb81652 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 240) MDLLWILPSLWLLLLGGPACLKT FCRL2_HUMANO SPdb81673 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 241) MLLWSLLVIFDAVTEQADS FCRLA_HUMANO SPdb81677 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 242)

MKLGCVLMAWALYLSLGVLWVAQMLLA

sapiens: (Ser humano) (SEQ ID NO: 229)

sapiens: (Ser humano) (SEQ ID NO: 230)

sapiens: (Ser humano) (SEQ ID NO: 231)

235)

238)

239)

FETUA_HUMANO SPdb82655 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 243) MKSLVLLLCLAQLWGCHS FGF19_HUMANO SPdb82742 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 244)

MRSGCVVVHVWILAGLWLAVAGRP

FGF21_HUMANO SPdb82761 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 245)

MDSDETGFEHSGLWVSVLAGLLLGACQA

FGF23_HUMANO SPdb82765 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 246)

MLGARLRLWVCALCSVCSMSVLRA

FGFR3_HUMANO SPdb82845 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 247) MGAPACALALCVAVAIVAGASS FGFR4_HUMANO SPdb82851 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 248) MRLLLALLGVLLSVPGPPVLS FGRL1_HUMANO SPdb82874 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 249)

MTPSPLLLLLLPPLLLGAFPPAAA

FIBA_HUMANO SPdb83006 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 250) MFSMRIVCLVLSVVGTAWT FIBG_HUMANO SPdb83075 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 251)

MSWSLHPRNLILYFYALLFLSSTCVA

FKB14_HUMANO SPdb83515 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 252) MRLFLWNAVLTLFVTSLIG FKBP2_HUMANO SPdb83570 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 253) MRLSWFRVLTVLSICLSAVAT FLRT2_HUMANO SPdb84949 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 254)

MGLQTTKWPSHGAFFLKSWLIISLGLYSQVSKLLA

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

FSHB_HUMANO SPdb87356 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 255) MKTLQFFFLFCCWKAICC FSTL1_HUMANO SPdb87403 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 256) MWKRWLALALALVAVAWVRA

FSTL3_HUMANO SPdb87408 Homo MRPGAPGPLWPLPWGALAWAVGFVSS: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 257)

FST HUMANO SPdb87422 Homo MVRARHQPGGLCLLLLLLCQFMEDRSAQA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 258)

FZD3_HUMANO SPdb88844 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 259) MAMTWIVFSLWPLTVFMGHIGG G6B_HUMANO SPdb89267 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 260) MAVFLQLLPLLLSRAQG GALC_HUMANO SPdb90251 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 261)

MTAAAGSAGRAAVPLLLCALLAPGGA

GDN_HUMANO SPdb94028 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 262) MNWHLPLFLLASVTLPSIC

GELS HUMANO SPdb94075 Homo MAPHRPAPALLCALSLALCALSLPVRA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 263)

•GI24 HUMANO SPdb94473 Homo sapiens MGVPTALEAGSWRWGSLLFALFLAASLGPVAA: (Ser humano) (SEQ ID NO: 264)

GLHA_HUMANO SPdb96435 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 265) MDYYRKYAAIFLVTLSVFLHVLHS GLPA_HUMANO SPdb98215 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 266) MYGKIIFVLLLSAIVSISA GLPB_HUMANO SPdb98238 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 267) MYGKIIFVLLLSEIVSISA GLPE_HUMANO SPdb98310 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 268) MYGKIIFVLLLSGIVSISA GLUC_HUMANO SPdb99110 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 269) MKSIYFVAGLFVMLVQGSWQ GNS_HUMANO SPdb100194 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 270)

MRLLPLAPGRLRRGSPRHLPSCSPALLLLVLGGCLG

GP1BA_HUMANO SPdb100593 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 271) MPLLLLLLLLPSPLHP GPI8_HUMANO SPdb101405 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 272)

MAVTDSLSRAATVLATVLLLSFGSVAA

GPIX_HUMANO SPdb101411 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 273) MPAWGALFLLWATAEA GPR56_HUMANO SPdb102058 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 274)

MTPQSLLQTTLFLLSLLFLVQGAHG

GPR97_HUMANO SPdb102106 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 275) MATPRGLGALLLLLLLPTSG GRAB_HUMANO SPdb102370 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 276) MQPILLLLAFLLLPRADA GREM1_HUMANO SPdb102718 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 277)

MSRTAYTVGALLLLLGTLLPAAEG

GROA_HUMANO SPdb102897 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 278)

MARAALSAAPSNPRLLRVALLLLLLVAAGRRAAG

GRP78_HUMANO SPdb102967 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 279) MKLSLVAAMLLLLSAARA GRP_HUMANO SPdb103369 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 280) MRGSELPLVLLALVLCLAPRGRA

HA22 HUMANO SPdb106653 Homo MILNKALMLGALALTTVMSPCGG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 281)

HA23 HUMANO SPdb106655 Homo MILNKALMLGALALTTVMSPCGG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 282)

HA25_HUMANO SPdb106658 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 283) MILNKALLLGALALTTVMSPCGG

HA27 HUMANO SPdb106660 Homo MILNKALMLGSLALTTVMSPCGG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 284)

HB21 HUMANO SPdb106943 Homo MSWKKALRIPGGLRAATVTLMLSMLSTPVAEG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 285)

HB23 HUMANO SPdb106948 Homo MSWKKALRIPGGLRVATVTLMLAMLSTSVAEG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 286)

HB24 HUMANO SPdb106950 Homo MSWKKALRIPGGLRVATVTLMLAMLSTPVAEG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 287)

HB25 HUMANO SPdb106952 Homo MSWKKALRIPGDLRVATVTLMLAMLSSLLAEG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 288)

HB2B HUMANO SPdb106955 Homo MVCLRLPGGSCMAVLTVTLMVLSSPLALA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 289)

HB2C HUMANO SPdb106957 Homo MVCLRLPGGSCMAVLTVTLMVLSSPLALA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 290)

HB2K HUMANO SPdb106966 Homo: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 291)

MVCLKLPGGSCMAALTVTLTVLSSPLALA

HEP2_HUMANO SPdb110024 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 292) MKHSLNALLIFLIITSAWG HGFA_HUMANO SPdb110611 Homo sapiens (Ser humano)(SEQ ID NO: 293)

MGRWAWVPSPWPPPGLGPFLLLLLLLLLLPRGFQP

HIS1_HUMANO SPdb111008 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 294) MKFFVFALVLALMISMISA HIS3_HUMANO SPdb111571 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 295) MKFFVFALILALMLSMTGA HLAE_HUMANO SPdb113899 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 296) MVDGTLLLLLSEALALTQTWA HPSE_HUMANO SPdb115516 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 297)

MLLRSKPALPPPLMLLLLGPLGPLSPGALPRPAQA

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

HPT_HUMANO SPdb115541 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 298) MSALGAVIALLLWGQLFA HV103_HUMANO SPdb118845 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 299) MDWTWRILFLVAAATGAHS HV303JHUMANO SPdb118866 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 300) MEFGLSWLFLVAILKGVQC I10R1JHUMANO SPdb119663 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 301) MLPCLVVLLAALLSLRLGSDA I10R2_HUMANO SPdb119665 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 302) MAWSLGSWLGGCLLVSALG I17RAJHUMANO SPdb119686 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 303)

MGAARSPPSAVPGPLLGLLLLLLGVLAPGGAS

I17RBJHUMANO SPdb119688 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 304) MSLVLLSLAALCRSAVP I17RCJHUMANO SPdb119690 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 305) MPVPWFLLSLALGRSPWLS I18BPJHUMANO SPdb119699 Homo

MRHNWTPDLSPLWVLLLCAHVVTLLVRA I20RAJHUMANO SPdb119707 Homo

MRAPGRPALRPLPLPPLLLLLLAAPWGRA I20RB_HUMANO SPdb119709 Homo

MQTFTMVLEEIWTSLFMWFFYALIPCLLT

I22RAJHUMANO SPdb119711 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 309) MMPKHCFLGFLISFFLTGVAG IBP1JHUMANO SPdb119979 Homo sapiens

MSEVPVARVWLVLLLLTVQVGVTAG IBP2_HUMANO SPdb119988 Homo sapiens

MLPRVGCPALPLPPPPLLPLLPLLLLLLGASGGGGGARA IBP3JHUMANO SPdb119995 Homo sapiens

MQRARPTLWAAALTLLVLLRGPPVARA IBP7_HUMANO SPdb120015Homo sapiens MERPSLRALLLGAAGLLLLLLPLSSS

IFN16_HUMANO SPdb122381 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 314) MALSFSLLMAVLVLSYKSICSLG IFNA2JHUMANO SPdb122393 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 315)

MALTFALLVALLVLSCKSSCSVG

sapiens: (Ser humano) (SEQ ID NO: 306)

sapiens: (Ser humano) (SEQ ID NO: 307)

sapiens: (Ser humano) (SEQ ID NO: 308)

(Ser: humano) (SEQ ID NO: 310)

(Ser: humano) (SEQ ID NO: 311)

(Ser: humano) (SEQ ID NO: 312)

(Ser humano) (SEQ

ID

NO: 313)

IFNA4JHUMANO SPdb122399 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO IFNA5JHUMANO SPdb122401 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO IFNA6JHUMANO SPdb122403 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO IFNA7JHUMANO SPdb122405 MARSFSLLMVVLVLSYKSICSLG IFNK_HUMANO SPdb122481 MSTKPDMIQKCLWLEILMGIFIAGTLS

316) MALSFSLLMAVLVLSYKSICSLG

317) MALPFVLLMALVVLNCKSICS

318) MALPFALLMALWLSCKSSC

Homo: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 319)

Homo: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 320)

i sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 321) Homo sapiens (Ser humano): MALLFPLLAALVMTSYSPVGS (SEQ ID NO: 322)

Homo: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 323)

Homo: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 324)

IGF2JHUMANO SPdb122603 MGIPMGKSMLVLLTFLAFASCCIA IGFL1_HUMANO SPdb122611 MAPRGCIVAVFAIFCISRLLCSHG IGFL3JHUMANO SPdb122613 MRPRCCILALVCWITVFLLQCSKG

IL10_HUMANO SPdb123103 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 325) MHSSALLCCLVLLTGVRA IL12AJHUMANO SPdb123133 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 326) MCPARSLLLVATLVLLDHLSLA IL12BJHUMANO SPdb123153 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 327) MCHQQLVISWFSLVFLASPLVA IL17FJHUMANO SPdb123200 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 328) MVKYLLLSILGLAFLSEAAA IL17JHUMANO SPdb123202 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 329) MTPGKTSLVSLLLLLSLEAIVKA IL19JHUMANO SPdb123221 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 330) MKLQCVSLWLLGTILILCSVDNHG IL1R1JHUMANO SPdb123285 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 331) MKVLLRLICFIALLISS IL1RAJHUMANO SPdb123295 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 332)

MEICRGLRSHLITLLLFLFHSETIC

IL20JHUMANO SPdb123302 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 333)

MKASSLAFSLLSAAFYLLWTPSTG

IL21RJHUMANO SPdb123304 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 334) MPRGWAAPLLLLLLQGGWG IL22JHUMANO SPdb123314 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 335)

MAALQKSVSSFLMGTLATSCLLLLALLVQGGAA

IL24JHUMANO SPdb123324 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 336)

MNFQQRLQSLWTLARPFCPPLLATASQMQMWLPCLGFTLLLWSQVSGAQG

IL25JHUMANO SPdb123327 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 337)

MRERPRLGEDSSLISLFLQWAFLAMVMGTHT

IL2RAJHUMANO SPdb123341 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 338) MDSYLLMWGLLTFIMVPGCQA IL2RBJHUMANO SPdb123348 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 339)

MAAPALSWRLPLLILLLPLATSWASA

IL2RGJHUMANO SPdb123355 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 340) MLKPSLPFTSLLFLQLPLLGVG IL2JHUMANO SPdb123376 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 341) MYRMQLLSCIALSLALVTNS IL3JHUMANO SPdb123414 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 342) MSRLPVLLLLQLLVRPGLQ

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

IL4_HUMANO SPdb123438 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 343) MGLTSQLLPPLFFLLACAGNFVHG IL5RA_HUMANO SPdb123452 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 344) MIIVAHVLLILLGATEILQA IL6RA_HUMANO SPdb123469 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 345) MLAVGCALLAALLAAPGAA IL7RA_HUMANO SPdb123503 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 346) MTILGTTFGMVFSLLQVVSG IL7_HUMANO SPdb123506 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 347) MFHVSFRYIFGLPPLILVLLPVASS IL9_HUMANO SPdb123527 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 348) MLLAMVLTSALLLCSVAG ILRL1_HUMANO SPdb123591 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 349) MGFWILAILTILMYSTAA INAR2_HUMANO SPdb124806 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 350)

MLLSQNAFIFRSLNLVLMVYISLVFG

INHA_HUMANO SPdb124863 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 351) MVLHLLLFLLLTPQGGHS INSL3_HUMANO SPdb125047 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 352) MDPRLPAWALVLLGPALVFA INSL4_HUMANO SPdb125053 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 353)

MASLFRSYLPAIWLLLSQLLRESLA

INSL5_HUMANO SPdb125056 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 354) MKGSIFTLFLFSVLFAISEVRS INS_HUMANO SPdb125119 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 355)

MALWMRLLPLLALLALWGPDPAAA

IPSP_HUMANO SPdb125761 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 356) MQLFLLLCLVLLSPQGASL IRBP_HUMANO SPdb126007 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 357) MMREWVLLMSVLLCGLA ISK6_HUMANO SPdb126513 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 358) MKLSGMFLLLSLALFCFLTGVFS

ITA2B HUMANO SPdb128319 Homo sapiens MARALCPLQALWLLEWVLLLLGPCAAPPAWA: (Ser humano) (SEQ ID NO: 359)

ITA2 HUMANO SPdb128324 Homo sapiens MGPERTGAAPLPLLLVLALSQGILNCCLA: (Ser humano) (SEQ ID NO: 360)

ITA3 HUMANO SPdb128328 Homo sapiens MGPGPSRAPRAPRLMLCALALMVAAGGCVVSA: (Ser humano) (SEQ ID NO: 361)

ITA4 HUMANO SPdb128331 Homo sapiens (Ser MFPTESAWLGKRGANPGPEAAVRETVMLLLCLGVPTGRP: humano) (SEQ ID NO: 362)

ITA6 HUMANO SPdb128340 Homo sapiens (Ser humano): (SEQ ID NO: 363) MAAAGQLCLLYLSAGLLSRLGAA

ITA7_HUMANO SPdb128342 Homo sapiens: (Ser humano) (SEQ ID NO: 364)

MAGARSRDPWGASGICYLFGSLLVELL-FSRAVA

ITAE_HUMANO SPdb128352 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 365) MWLFHTLLCIASLALLAA

ITAL HUMANO SPdb128355 Homo MKDSCITVMAMALLSGFFFFAPASS: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 366)

ITAV HUMANO SPdb128362 Homo MAFPPRRRLRLGPRGLPLLLSGLLLPLCRA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 367)

ITAX_HUMANO SPdb128364 Homo sapiens (Ser humano): (SEQ ID NO: 368) MTRTRAALLLFTALATSLG

ITB2_HUMANO SPdb128379 Homo sapiens (Ser humano): (SEQ ID NO: 369) MLGLRPPLLALVGLLSLGCVLS

ITB4 HUMANO SPdb128387 Homo MAGPRPSPWARLLLAALISVSLSGTLA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 370)

ITIH4 HUMANO SPdb128480 Homo MKPPRPVRTCSKVLVLLSLLAIHQTTTA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 371)

JAM1 HUMANO SPdb128758 Homo MGTKAQVERKLLCLFILAILLCSLALG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 372)

JAM2 HUMANO SPdb128761 Homo MARRSRHRLLLLLLRYLWALGYHKAYG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 373)

JAM3 HUMANO SPdb128763 Homo MALRRPPRLRLCARLPDFFLLLLFRGCLIGA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 374)

JAML1_HUMANO SPdb128766 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ: ID NO: 375) MFCPLKLILLPVLLDYSLG

KAZD1-HUMANO SPdb130734 Homo: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 376)

MLPPPRPAAALALPVLLLLLWLTPPPTGA

KI2L1_HUMANO SPdb132984 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 377) MSLLWSMACVGFFLLQGAWP KIRR2_HUMANO SPdb133175 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 378) MLRMRVPALLVLLFCFRGRA KLK3_HUMANO SPdb133637 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 379) MWVPWFLTLSVTWIGA KLKB1_HUMANO SPdb133654 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 380) MILFKQATYFISLFATVSC KNG1_HUMANO SPdb133744 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 381) MKLITILFLCSRLLLSLT KTEL1_HUMANO SPdb135048 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 382)

MEWWASSPLRLWLLLFLLPSAQG

KV403_HUMANO SPdb135854 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 383) MVLQTQVFISLLLWISGAYG KV404_HUMANO SPdb135855 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 384) MVLQTQVFISLLLWISGAYG L1CAM_HUMANO SPdb135937 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 385) MWALRYVWPLLLCSPCLL LALBA_HUMANO SPdb136381 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 386) MRFFVPLFLVGILFPAILA LAMB1_HUMANO SPdb136411 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 387) MGLLQLLAFSFLALCRARVRA LAMC1_HUMANO SPdb136476 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 388)

MRGSHRAAPALRPRGRLWPVLAVLAAAAAAGCA

LAMP1_HUMANO SPdb136491 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 389)

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

MAPRSARRPLLLLLPVAAARPHALSSA

LAMP2_HUMANO SPdb136496 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 390)

MVCFRLFPVPGSGLVLVCLVLGAVRSYA

LBP_HUMANO SPdb136757 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 391) MGALARALPSILLALLLTSTPEALG LCAT_HUMANO SPdb136799 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 392)

MGPPGSPWQWVTLLLGLLLPPAAP

LCN1JHUMANO SPdb136934 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 393) MKPLLLAVSLGLIAALQA LCTL_HUMANO SPdb137082 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 394) MKPVWVATLLWMLLLVPRLGA LEUKjHUMANO SPdb139543 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 395) MATLLLLLGVLVVSPDALG LG3BP_HUMANO SPdb140022 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 396) TPPRLFWVWLLVAGTQG LIFjHUMANO SPdb140701 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 397) MKVLAAGVVPLLLVLHWKHGAG LIPGjHUMANO SPdb141547 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 398) MWLLLTMASLISVLGTTHG LIPPjHUMANO SPdb141584 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 399) MLPLWTLSLLLGAVAG LIRA3_HUMANO SPdb141630 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 400) MTPILTVLICLGLSLDPRTHVQA LMAN1_HUMANO SPdb141882 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 401)

MAGSRQRGLRARVRPLFCALLLSLGRFVRG

LPHjHUMANO SPdb142734 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 402) MELSWHVVFIALLSFSCWG LRC55_HUMANO SPdb144275 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 403)

MGSLQHCCCLLPKMGDTWAQLPWPGPPHPAMLLISLLLAAGLMHSDA

LRRN1_HUMANO SPdb144478 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 404)

MARMSFVIAACQLVLGLLMTSLTES

LSHBjHUMANO SPdb144551 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 405) MEMLQGLLLLLLLSMGGAWA LUMjHUMANO SPdb145084 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 406) MSLSAFTLFLALIGGTSG LUjHUMANO SPdb145367 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 407)

MEPPDAPAQARGAPRLLLLAVLLAAHPDAQA

LV605_HUMANO SPdb145410 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 408) MAWAPLLLTLLAHCTDCWA LY86_HUMANO SPdb145461 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 409) MKGFTATLFLWTLIFPSCSG LYAM2_HUMANO SPdb145485 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 410) MIASQFLSALTLVLLIKESGA LYPA3_HUMANO SPdb145568 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 411)

MGLHLRPYRVGLLPDGLLFLLLLLMLLADPALP

LYPD6_HUMANO SPdb145583 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 412) MEPGPALAWLLLLSLLADCLKA LYSCjHUMANO SPdb145736 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 413) MKALIVLGLVLLSVTVQG MBL2_HUMANO SPdb148469 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 414) MSLFPSLPLLLLSMVAASYS MCPjHUMANO SPdb149004 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 415)

MEPPGRRECPFPSWRFPGLLLAAMVLLLYSFSDA

MFAP4_HUMANO SPdb152514 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 416) MKALLALPLLLLLSTPPCAPQ MGPjHUMANO SPdb152777 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 417) MKSLILLAILAALAVVTLC MIAjHUMANO SPdb153344 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 418) MARSLVCLGVIILLSAFSGPGVRG MIMEjHUMANO SPdb153448 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 419) MKTLQSTLLLLLLVPLIKPA MIP2A_HUMANO SPdb153896 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 420)

MARATLSAAPSNPRLLRVALLLLLLVAASRRAAG

MIP2B_HUMANO SPdb153898 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 421)

MAHATLSAAPSNPRLLRVALLLLLLVAASRRAAG

MKjHUMANO SPdb154137 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 422) MQHRGFLLLTLLALLALTSA MMP1_HUMANO SPdb154439 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 423) MHSFPPLLLLLFWGWSHS MOTIjHUMANO SPdb155899 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 424) MVSRKAVAALLWHVAAM LASQTEA MOX2R_HUMANO SPdb155983 Homo sapiens Humano) (SEQ ID NO: 425) MLCPWRTANLGLLLILTIFLVAASSSLC

MPRDjHUMANO SPdb156360 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 426)

MFPFYSCWRTGLLLLLLAVAVRESWQ

MPRIjHUMANO SPdb156380 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 427)

MGAAAGRSPHLGPAPARRPQRSLLLLQLLLLVAAPGSTQA

MPZL3_HUMANO SPdb156425 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 428)

MQQRGAAGSRGCALFPLLGVLFFQGVYIVFS

MSMBjHUMANO SPdb158422 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 429) MNVLLGSWIFATFVTLCNA MYP0_HUMA SPdb164385 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 430)

MAPGAPSSSPSPILAVLLFSSLVLSPAQA

NAGABjHUMANO SPdb165267 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 431) MLLKTVLLLGHVAQVLM NELL2_HUMANO SPdb168581 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 432) MESRVLLRTFCLIFGLGAVWG NETO2_HUMANO SPdb168760 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 433) MALERLCSVLKVLLITVLVVEG NEU1_HUMANO SPdb168777 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 434) MAGPSLACCLLGLLALTSA NEU2_HUMANO SPdb168794 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 435) MPDTMLPACFLGLLAFSSA NGALjHUMANO SPdb169201 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 436) MPLGLLWLGLALLGALHAQA NID1_HUMANO SPdb169544 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 437)

MLASSSRIRAAWTRALLLPLLLAGPVGC

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

NID2 HUMANO SPdb169547 Homo MEGDRVAGRPVLSSLPVLLLLQLLMLRAAA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 438)

NLGNX HUMANO SPdb170305 Homo sapiens MSRPQGLLWLPLLFTPVCVMLNSNVLLWLTALAIKFTLIDS: (Ser humano) (SEQ ID NO: 439)

NMB HUMANO SPdb170485 Homo MARRAGGARMFGSLLLFALLAAGV: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 440)

NOV HUMANO SPdb171434 Homo MQSVQSTSFCLRKQCLCLTFLLLHLLGQVAA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 441)

NPTN HUMANO SPdb171815 Homo MSGSSLPSALALSLLLVSGSLLPGPGAA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 442)

NPY HUMANO SPdb171875 Homo: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 443)

MLGNKRLGLSGLTLALSLLVCLGALAEA

NRP1_HUMANO SPdb172978 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 444) MERGLPLLCAVLALVLAPAGA

NTRK2 HUMANO SPdb173863 Homo MSSWIRWHGPAMARLWGFCWLVVGFWRAAFA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 445)

NXPH3 HUMANO SPdb177361 MQLTRCCFVFLVQGSLYLVICG: Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 446)

OLFL1 HUMANO SPdb178511 Homo MMVALRGASALLVLFLAAFLPPPQCTQD: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 447)

OTOR_HUMANO SPdb180733 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 448) MARILLLFLPGLVAVCA OXLA_HUMANO SPdb181241 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 449) MAPLALHLLVLVPILLSLVAS P3IP1_HUMANO SPdb181543 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 450) MLLAWVQAFLVSNMLLAEAYG

PAHO HUMANO SPdb182446 Homo MAAARLCLSLLLLSTCVALLLQPLLGAQG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 451)

PARM1_HUMANO SPdb184104 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 452) MVYKTLFALCILTAGWRVQS

PCDBA HUMANO SPdb184878 Homo MAVRELCFPRQRQVLFLFLFWGVSLA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 453)

PCOC2 HUMANO SPdb185137 Homo MRGANAWAPLCLLLAAATQLSRQ: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 454)

PCYXL HUMANO SPdb185474 Homo MARAPPLLAALTALLAAAAAGG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 455)

PDGFA_HUMANO SPdb185687 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 456) MRTLACLLLLGCGYLAHVLA

PDIA1_HUMANO SPdb185732 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 457) MLRRALLCLAVAALVRA

PDIA3 HUMANO SPdb185743 Homo MRLRRLALFPGVALLLAAARLAAA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 458)

PDYN_HUMANO SPdb186941 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 459) MAWQGLVLAACLLMFPSTTA

PEBP4 HUMANO SPdb187068 Homo MGWTMRLVTAALLLGLMMVVTG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 460)

PECA1 HUMANO SPdb187074 Homo MQPRWAQGATMWLGVLLTLLLC-SSLEG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 461)

PG12B_HUMANO SPdb188887 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 462): MKLASGFLVLWLSLGGGLA

PGFRA HUMANO SPdb189004 Homo MGTSHPAFLVLGCLLTGLSLILC: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 463)

PGFRB HUMANO SPdb189010 Homo: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 464)

MRLPGAMPALALKGELLLLSLLLLLEPQISQG

PGH1_HUMANO SPdb189021 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 465) MSRSLLLRFLLFLLLLPPLPVLL PGRP2_HUMANO SPdb189713 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 466) MAQGVLWILLGLLLWSDPGTA PIGT_HUMANO SPdb191467 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 467) MAAAMPLALLVLLLLGPGGWC

PIP HUMANOSPdb191771 Homo sapiens (Ser MRLLQLLFRASPATLLLVLCLQLGANKA: humano) (SEQ ID NO: 468)

PLBL2 HUMANO SPdb192296 Homo sapiens (Ser MVGQMYCYPGSHLARALTRALALALVLALLVGPFLSGLAGA: humano) (SEQ ID NO: 469)

PLF4 HUMANO SPdb192496 Homo sapiens (Ser MSSAAGFCASRPGLLFLGLLLLPLWAFASA: humano) (SEQ ID NO: 470)

PLOD1_HUMANO SPdb192587 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 471) MRPLLLLALLGWLLLAEA

PORIM HUMANO SPdb194575 Homo sapiens (Ser MGLGARGAWAALLLGTLQVLALLGAA: humano) (SEQ ID NO: 472)

PPA6 HUMANO SPdb195079 Homo sapiens (Ser MITGVFSMRLWTPVGVLTSLAYCLHQRRVALA: humano) (SEQ ID NO: 473)

PPAP HUMANO SPdb195174 Homo sapiens (Ser MRAAPLLLARAASLSLGFLFLLFFWLDRSVLA: humano) (SEQ ID NO: 474)

PPGB HUMANO SPdb195573 Homo sapiens (Ser MIRAAPPPLFLLLLLLLLLVSWASRGEA: humano) (SEQ ID NO: 475)

PPIB HUMANO SPdb195662 Homo sapiens (Ser MKVLLAAALIAGSVFFLLLPGPSAA: humano) (SEQ ID NO: 476)

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

PRB4_HUMANO SPdb196833 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 477) MLLILLSVALLALSSA

PRLR HUMANO SPdb197321 Homo MKENVASATVFTLLLFLNTCLLNG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 478)

PRL HUMANO SPdb197346 Homo MNIKGSPWKGSLLLLLVSNLLLCQSVAP: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 479)

PROK1_HUMANO SPdb198420 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 480) MRGATRVSIMLLLVTVSDC

PROK2 HUMANO SPdb198424 Homo MRSLCCAPLLLLLLLPPLLLTPRAGDA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 481)

PROP HUMANO SPdb198449 Homo MITEGAQAPRLLLPPLLLLLTLPATGS: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 482)

PROZ HUMANO SPdb198539 Homo MAGCVPLLQGLVLVLALHRVEPS: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 483)

PRP1 HUMANO SPdb198570 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 484) MLLILLSVALLALSSA PRPC_HUMANO SPdb198723 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 485) MLLILLSVALLAFSSA

PRRT3 HUMANO SPdb198854 Homo MASSPWGCVCGLLLLLLPLLGTGPALG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 486)

PTGDS HUMANO SPdb203865 Homo: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 487)

MATHHTLWMGLALLGVLGDLQA PTHY HUMANO SPdb203993 Homo MIPAKDMAKVMIVMLAICFLTKSDG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 488)

PTPRG HUMANO SPdb204842 Homo sapiens: (Ser humano) (SEQ ID NO: 489) MRRLLEPCWWILFLKITSS

PYY HUMANO SPdb210515 Homo MVFVRRPWPALTTVLLALLVCLGALVDA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 490)

PZP HUMANO SPdb210532 Homo MRKDRLLHLCLVLLLILLSASDSNS: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 491)

REG1A HUMANO SPdb217426 Homo MAQTSSYFMLISCLMFLSQSQG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 492)

REG3G HUMANO SPdb217443 Homo MLPPMALPSVSWMLLSCLILLCQVQG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 493)

RIB1_HUMANO SPdb220194 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 494) MEAPAAGLFLLLLLGTWAPAPGS RIB2_HUMANO SPdb220201 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 495) MAPPGSSTVFLLALTIIASTWA

RISC HUMANO SPdb221907 Homo MELALRRSPVPRWLLLLPLLLGLNAG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 496)

RNAS1 HUMANO SPdb241351 Homo MALEKSLVRLLLLVLILLVLGWVQPSLG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 497)

RNAS4 HUMANO SPdb241408 Homo MALQRTHSLLLLLLLTLLGLGLVQPSYG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 498)

S39A6_HUMANO SPdb264754 Homo MARKLSVILILTFALSVTNPLHELKAAA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 499)

SAA4_HUMANO SPdb264973 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 500) MRLFTGIVFCSLVMGVTS SAA_HUMANO SPdb264986 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 501) MKLLTGLVFCSLVLGVSS SAMP_HUMANO SPdb265378 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 502) MNKPLLWISVLTSLLEAFA SCG1_HUMANO SPdb266260 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 503) MQPTLLLSLLGAVGLAAVNS SCRG1_HUMANO SPdb266759 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 504) MKLMVLVFTIGLTLLLGVQA

SEM4B_HUMANO SPdb269059: Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 505)

MGLRSWLAAPWGALPPRPPLLLLLLLLLLLQPPPPTWA

SEM6B_HUMANO SPdb269079 MQTPRASPPRPALLLLLLLLGGAHG: Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 506)

SEMG1 HUMANO SPdb269090 MKPNIIFVLSLLLILEKQAAVMG: Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 507)

SEMG2 HUMANO SPdb269095 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 508) MKSIILFVLSLLLILEKQAAVMG SEPP1_HUMANO SPdb269196 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 509) MWRSLGLALALCLLPSGGT

SFRP2_HUMANO SPdb269743 MLQGPGSLLLLFLASHCCLGSARG: Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 510)

SFRP3_HUMANO SPdb269747: Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 511)

MVCGSPGGMLLLRAGLLALAALCLLRVPGARA

SFTPG_HUMANO SPdb269980 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 512) MGSGLPLVLLLTLLGSSHG SG1D4_HUMANO SPdb270016 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 513) MRLSVCLLMVSLALCCYQAHA SG3A1_HUMANO SPdb270025 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 514) MKLAALLGLCVALSCSSAAA SHBG_HUMANO SPdb270301 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 515)

MESRGPLATSRLLLLLLLLLLRHTRQGWA

SIAL_HUMANO SPdb270534 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 516) MKTALILLSILGMACA SIDT2_HUMANO SPdb270589 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 517) MFALGLPFLVLLVASVES SLAF6_HUMANO SPdb271065 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 518) MLWLFQSLLFVFCFGPGNVVS SLAF7_HUMANO SPdb271067 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 519) MAGSPTCLTLIYILWQLTGSAA

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

SLAF8_HUMANO SPdb271069 Homo sapiens (Ser humano)(SEQ ID NO: 520) MVMRPLWSLLLWEALLPITVTG

SLPI HUMANO SPdb271309 Homo MKSSGLFPFLVLLALGTLAPWAVEG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 521)

SMR3B_HUMANO SPdb271976 Homo MKSLTWILGLWALAACFTPGES: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 522)

SMS_HUMANO SPdb272029 Homo MLSCRLQCALAALSIVLALGCVTG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 523)

SODE_HUMANO SPdb272720 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 524) MLALLCSCLLLAAGASDA

SOSD1 HUMANO SPdb273214 Homo MLPPAIHFYLLPLACILMKSCLA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 525)

SOST HUMANO SPdb273220 Homo MQLPLALCLVCLLVHTAFRVVEG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 526)

SPIT1 HUMANO SPdb274564 Homo sapiens MAPARTMARARLAPAGIPAVALWLLCTLGLQGTQA: (Ser humano) (SEQ ID NO: 527)

SPIT2 HUMANO SPdb274566 Homo MAQLCGLRRSRAFLALLGSLLLSGVLA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 528)

SRCH_HUMANO SPdb275436 Homo MGHHRPWLHASVLWAGVASLLLPPAMTQ: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 529)

SRGN_HUMANO SPdb275551 Homo MMQKLLKCSRLVLALALILVLESSVQG: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 530)

STAT_HUMANO SPdb277447 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 531) MKFLVFAFILALMVSMIGA STC1_HUMANO SPdb277483 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 532) MLQNSAVLLVLVISASA TCO1_HUMANO SPdb290388 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 533) MRQSHQLPLVGLLLFSFIPSQLC TCO2_HUMANO SPdb290391 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 534) MRHLGAFLFLLGVLGALT TENA_HUMANO SPdb291090 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 535) MGAMTQLLAGVFLAFLALATEG TETN_HUMANO SPdb291269 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 536) MELWGAYLLLCLFSLLTQVTT TFF1_HUMANO SPdb291574 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 537)

MATMENKVICALVLVSMLALGTLA

TFF3_HUMANO SPdb291583 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 538) MAARALCMLGLVLALLSSSSA TFPI1_HUMANO SPdb291601 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 539)

MIYTMKKVHALWASVCLLLNLAPAPLNA

TGFR2_HUMANO SPdb291788 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 540) MG RGLLRGLWPLH IVLWTRIAS

THBG_HUMANO SPdb292195 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO:

THYG_HUMANO SPdb293853 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO:

TICN2_HUMANO SPdb293959 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO:

TIE1_HUMANO SPdb293968 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 544) MVWRVPPFLLPILFLASHVGA TIE2_HUMANO SPdb293972 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 545) MDSLASLVLCGVSLLLSGTVEG TIMP1_HUMANO SPdb294965 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 546) MAPFEPLASGILLLLWLIAPSRA TIMP2_HUMANO SPdb294980 MGAAARTLRLALGLLLLATLLRPADA TIMP3_HUMANO SPdb294987 MTPWLGLIVLLGSWSLGDWGAEA

TINAL_HUMANO SPdb295015 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 549) MWRCPLGLLLLLPLAGHLALG TLR1_HUMANO SPdb295471 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 550) MTSIFHFAIIFMLILQIRIQLSEE TLR3_HUMANO SPdb295485 MRQTLPCIYFWGGLLPFGMLCAS TLR4_HUMANO SPdb295493 MMSASRLAGTLIPAMAFLSCVRP

TLR5_HUMANO SPdb295500 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 553) MGDHLDLLLGWLMAGPVFG

541) MSPFLYLVLLVLGLHATIHC

542) MALVLEIFTLLASICWVSA

543) MRAPGCGRLVLPLLLLAAAALA

Homo sapiens: (Ser humano) (SEQ ID NO: 547)

Homo sapiens: (Ser humano) (SEQ ID NO: 548)

Homo: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 551)

Homo: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 552)

TM2D1_HUMANO SPdb295869 Homo sapiens

MAAAWPSGPSAPEAVTARLVGVLWFVSVTTGPWGAVA TMIG2_HUMANO SPdb296142 Homo sapiens

MGSPGMVLGLLVQIWALQEASS

TMM25_HUMANO SPdb296188 Homo sapiens

MALPPGPAALRHTLLLLPALLSSGWG TMM46_HUMANO SPdb296232 Homo sapiens

MWGARRSSVSSSWNAASLLQLLLAALLAAGARA TMM66_HUMANO SPdb296282 Homo sapiens

MAAACGPGAAGYCLLLGLHLFLLTAGPALG TMM9B_HUMANO SPdb296355 Homo sapiens

MATLWGGLLRLGSLLSLSCLALSVLLLAQLSDA TNFB_HUMANO SPdb296533 Homo sapiens MTPPERLFLPRVCGTTLHLLLLGLLLVLLPGAQG TNR14_HUMANO SPdb296702 Homo sapiens

(Ser

humano)

(SEQ

ID NO:

(Ser humano) (SEQ

ID

NO:

554)

555)

556)

557)

558)

559)

560)

561)

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

MEPPGDWGPPPWRSTPKTDVLRLV-LYLTFLGAPCYAPA

TNR16 HUMANO SPdb296704 Homo: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 562)

MGAGATGRAMDGPRLLLLLLLGVSLGGA TNR18 HUMANO SPdb296709 Homo: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 563)

MAQHGAMGAFRALCGLALLCALSLG TNR19 HUMANO SPdb296711 Homo: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 564)

MALKVLLEQEKTFFTLLVLLGYLSCKVTC TNR1B HUMANO SPdb296718 Homo: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 565)

MAPVAVWAALAVGLELWAAAHA

TNR5_HUMANO SPdb296744 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 566) MVRLPLQCVLWGCLLTAVHP TNR6B_HUMANO SPdb296751 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 567)

MRALEGPGLSLLCLVLALPALLPVPAVRG

TNR8_HUMANO SPdb296768 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 568) MRVLLAALGLLFLGALRA TNR9_HUMANO SPdb296771 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 569) MGNSCYNIVATLLLVLNFERTRS TPO_HUMANO SPdb298326 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 570) MELTELLLWMLLLTARLTLS TPSNR_HUMANO SPdb298428 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 571) MGTQEGWCLLLCLALSGA TPSN_HUMANO SPdb298434 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 572) MKSLSLLLAVALGLATAVSA TR10D_HUMANO SPdb298538 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 573)

MGLWGQSVPTASSARAGRYPGARTASGTRPWLLDPKILKFWFIVAVLLPVRVDS

TR11B_HUMANO SPdb298559 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 574) MNKLLCCALVFLDISIKWTTQ TR19L_HUMANO SPdb298594 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 575)

MKPSLLCRPLSCFLMLLPWPLATLT

TRBM_HUMANO SPdb298866 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 576) MLGVLVLGALALAGLGFP TRFE_HUMANO SPdb299004 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 577) MRLAVGALLVCAVLGLCLA TRFL_HUMANO SPdb299019 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 578) MKLVFLVLLFLGALGLCLA TRY1_HUMANO SPdb303488 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 579) MNPLLILTFVAAALA TRY2_HUMANO SPdb303496 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 580) MNLLLILTFVAAAVA TSHB_HUMANO SPdb303727 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 581) MTALFLMSMLFGLACGQAMS TSP1_HUMANO SPdb303853 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 582) MGLAWGLGVLFLMHVCGT TVA2_HUMANO SPdb304532 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 583)

MAMLLGASVLILWLQPDWVNSQQKNDD

TVB2_HUMANO SPdb304538 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 584) MGTSLLCWMALCLLGADHADT

TXD12 HUMANO SPdb304820 METRPRLGATCLLGFSFLLLVISSDG: Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 585)

TXND4 HUMANO SPdb304996 Homo MHPAVFLSLPDLRCSLLLLVTWVFTPVTT: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 586)

TYRP1_HUMANO SPdb305383 MSAPKLLSLGCIFFPLLLFQQARA: Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 587)

UROK_HUMANO SPdb311443 Homo sapiens (Ser humano)(SEQ ID NO: 588) MRALLARLLLCVLWSDSKG UTER_HUMANO SPdb311731 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 589) MKLAVTLTLVTLALCCSSASA UTS2_HUMANO SPdb311840 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 590) MYKLASCCLLFIGFLNPLLS

VCAM1 HUMANO SPdb314239 MPGKMVVILGASNILWIMFAASQA: Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 591)

VEGFA HUMANO SPdb314841 MNFLLSWVHWSLALLLYLHHAKWSQA: Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 592)

VEGFC HUMANO SPdb314852 Homo MHLLGFFSVACSLLAAALLPGPREAPAAAAA: sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 593)

VGFR3_HUMANO SPdb315610: Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 594)

MQRGAALCLRLWLCLGLLDGLVSG

VMO1_HUM SPdb317004 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 595) MERGAGAKLLPLLLLLRATGFTCA VSIG2_HUMANO SPdb318531 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 596)

MAELPGPFLCGALLGFLCLSGLA

VSIG4_HUMANO SPdb318533 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 597) MGILLGLLLLGHLTVDTYG VSTM1_HUMANO SPdb318698 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 598) MTAEFLSLLCLGLCLG VTNC_HUMANO SPdb318799 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 599) MAPLRPLLILALLAWVALA VWF_HUMANO SPdb318878 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 600) MIPARFAGVLLALALILPGTLC WISP2_HUMANO SPdb319573 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 601)

MRGTPKTHLLAFSLLCLLSKVRT

X3CL1_HUMANO SPdb320112 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 602)

MAPISLSWLLRLATFCHLTVLLAG

XCL2_HUMANO SPdb320139 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 603) MRLLILALLGICSLTAYIVEG YK001_HUMANO SPdb348747 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 604)

MDSLRKMLISVAMLGAGAGVGYA

YQ001_HUMANO SPdb352137 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 605) MGLPGLFCLAVLAASSFSKA ZA2G_HUMANO SPdb354335 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 606) MVPVLLSLLLLLGPAVP

ZG16_HUMANO SPdb354803 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 607) MLTVALLALLCASASG ZP2_HUMANO SPdb355981 Homo sapiens (Ser humano) (SEQ ID NO: 608)

MACRQRGGSWSPSGWFNAGWSTYRSISLFFALVTSGNS

5 [0070] Un sistema de expresion preferido usando cada peptido senal de secrecion de ser humano espedfico indicado anteriormente es un sistema de expresion de celulas CHO.

[0071] En algunas realizaciones, el peptido senal de secrecion de ser humano puede incluir cualquier combinacion de peptido senal de secrecion indicado anteriormente. En algunas realizaciones, el peptido senal de secrecion de

10 ser humano puede excluir espedficamente uno cualquiera o mas de los peptidos senal de secrecion indicados anteriormente. En aras de proporcionar una descripcion concisa de la invencion, el listado de los peptidos senal de secrecion humanos anterior no se repite. No obstante la presente invencion abarca la exclusion espedfica de uno cualquiera de los peptidos senal de secrecion humanos o la secuencias de acidos nucleicos que codifican cada uno de los peptidos senal de secrecion indicados anteriormente.

15

[0072] En aras de proporcionar una descripcion concisa de la invencion, se omite el listado de las secuencias de acidos nucleicos que codifican cada uno de los peptidos senal de secrecion indicados anteriormente. Sin embargo, tales secuencias de acidos nucleicos estan disponibles publicamente y pueden determinarse facilmente por los expertos en la materia. Una fuente publica de dicha informacion de la secuencia de acidos nucleicos es, por ejemplo,

20 http: //proline.bic.nus.edu.salspdbldownload.html.

[0073] En algunas realizaciones, para los sistemas de expresion de mairnferos, tambien puede usarse una secuencia conductora de protripsina.

25 [0074] En algunas realizaciones, para la produccion de los peptidos NELL1 y/o NELL2 en celulas de marnffero (por ejemplo, celulas CHO), el sistema de expresion para el NELL 1 y/o NELL2 puede incluir el acido nucleico o ADNc que expresa un peptido senal de NELL endogeno. En algunas realizaciones, el metodo y el sistema descritos en el presente documento excluye espedficamente un peptido senal de NELL endogeno.

30 Purificacion de los peptidos

[0075] En algunas realizaciones, la invencion incluye un metodo de purificacion de los peptidos NELL1 y/o NELL2 secretados en los medios de cultivo, de acuerdo con los protocolos de purificacion de peptidos convencionales, incluyendo, pero sin limitacion los que se describen a continuacion.

35

[0076] El metodo tambien puede incluir la recogida de los peptidos NELL secretados y/o la purificacion de los peptidos NELL para su uso. Los productos pepffdicos pueden ensayarse para su actividad en una variedad de ensayos funcionales o de expresion. Por ejemplo, en cualquier ensayo, si un peptido NELL tiene un efecto significativo sobre una sustancia control en un parametro dado, los peptidos NELL pueden ser funcionales para

40 efectuar el parametro medido en un ensayo funcional o de expresion.

[0077] En una realizacion, puede examinarse si una celula seleccionada expresa una secuencia de acidos nucleicos seleccionada para expresar y/o secretar un peptido NELL. En una realizacion, puede examinarse la presencia, cantidad y/o actividad de los peptidos NELL.

45

[0078] En una realizacion, los peptidos NELL se detectan y cuantifican por cualquiera de una serie de metodos bien conocidos por los expertos en la materia. Estos pueden incluir metodos bioqmmicos analfficos tales como electroforesis, electroforesis capilar, cromatograffa lfquida de alto rendimiento (HPLC), cromatograffa en capa fina (TLC), cromatograffa de hiperdifusion y similares, o diversos metodos inmunologicos tales como reacciones de la

50 precipitina en fluido o gel, inmunodifusion (simple o doble), inmunoelectroforesis, radioinmunoensayo (RIA), ensayos de inmunoabsorcion ligados a enzimas (ELISA), ensayos de inmunofluorescencia, Western Blot y similares.

[0079] En una realizacion, puede usarse el analisis de Western blot (inmunotransferencia) para detectar y cuantificar la presencia de peptido(s) NELL en una muestra seleccionada. El analisis de Western blot es bien

55 conocido en la tecnica.

[0080] Los ensayos de esta invencion pueden calificarse (como positivo o negativo o la cantidad de polipeptido diana) de acuerdo con metodos convencionales bien conocidos por los expertos en la materia. El metodo particular de calificacion puede depender del formato de ensayo y la eleccion del marcador. Por ejemplo, un ensayo de

60 Western blot puede calificarse visualizando el producto coloreado producido por un marcador enzimatico. Una banda o mancha de color claramente visible en el peso molecular correcto puede calificarse como un resultado positivo, mientras que la ausencia de una mancha o banda claramente visible puede clasificarse como negativo. La intensidad de la banda o mancha puede proporcionar una medida cuantitativa de la concentracion del polipeptido diana.

[0081] Los peptidos NELL, cuando estan en formas no monomericas pueden ser una molecula grande y muchas de las tecnicas que funcionan para la purificacion de protemas mas pequenas pueden no funcionar tan bien para los peptidos NELL. El tamano inusualmente grande de las moleculas de protema oligomerica NELL provoca que sean incompatibles con las tecnicas convencionales de la industria usadas para purificar protemas mas pequenas, tales

5 como anticuerpos monoclonales y factores de coagulacion sangumeos. En concreto, los medios convencionales de la industria se realizan mediante reticulacion de agarosa (por ejemplo, columnas de agarosa) en perlas redondas con canales ciegos. Los canales estan revestidos con un grupo funcional y la interaccion de este grupo funcional con una protema constituye la base para la purificacion. Debido a que los canales son ciegos, una molecula de protema entra en los canales mediante las fuerzas de difusion. A medida que la protema de interes aumenta de tamano, la

10 difusion en el canal se ralentiza y la purificacion disminuye de manera eficaz.

[0082] En lugar de los medios porosos tradicionales (por ejemplo, columnas de agarosa), otros medios no usados tradicionalmente para las protemas pueden usarse para purificar peptidos NELL de una manera mas eficaz tanto en terminos de velocidad como de cantidad de peptidos NELL purificados/recuperados. La presente invencion

15 proporciona un metodo para la purificacion de peptidos NELL con una productividad mas alta. Una baja productividad en la purificacion de la protema se considera en general un factor limitante de la tasa de produccion en la produccion de protemas. Por lo tanto el logro de una mayor productividad es importante en la produccion de protemas.

20 [0083] En algunas realizaciones, el metodo incluye someter los peptidos NELL en bruto a cromatograffa de membrana para obtener peptidos NELL purificados. En algunas realizaciones, el metodo incluye el uso de medios de purificacion disponibles en el mercado en formato de membrana. En algunas realizaciones, el peptido NELL es un peptido NELL-1. En algunas realizaciones, el peptido NELL es un peptido NELL-2. Mediante el empleo de medios de purificacion de membrana, se ha desarrollado un proceso de purificacion eficaz para el peptido NELL mientras que

25 los esfuerzos analogos con medios porosos han sido mucho menos eficaces.

[0084] La membrana de intercambio ionico puede ser una membrana de intercambio anionico o una membrana de intercambio cationico. No es en absoluto evidente que la cromatograffa de membrana pueda usarse para purificar peptidos NELL.

30

[0085] Adicionalmente, es especialmente sorprendente que la cromatograffa de intercambio cationico sea eficaz para la purificacion de peptidos NELL. Por ejemplo, el analisis de la secuencia de la protema primaria de NELL-1 indica que su pl teorico es 5,8. En los intervalos de pH de 7-8,5 normalmente usados para purificar protemas, se predijo que NELL-1 tendffa una carga negativa neta y por lo tanto se uniffa a los grupos funcionales de intercambio

35 anionico tales como aminas cuaternarias o secundarias y no necesariamente de intercambio cationico. Inesperadamente, sin embargo, se encontro que NELL-1 se une tanto a los grupos funcionales de intercambio cationico como anionico.

[0086] En algunas realizaciones, la purificacion del peptido/protema Nell-1 puede efectuarse a traves de un

40 proceso de cromatograffa usando un medio que incluye un cation metalico que tiene dos, tres o mas cargas, por

ejemplo, un cation de metal terreo, un cation de metal terreo raro. Los ejemplos de tales iones metalicos son, por ejemplo, Mg (++), Ca (++), Al (+++), y cualquiera de los iones terreos raros Ln (+++). Tales iones metalicos pueden incluirse en una solucion tampon o solucion de elucion.

45 [0087] En algunas realizaciones, la purificacion puede emplear secuencialmente una cromatograffa de intercambio cationico, una cromatograffa de intercambio anionico y un medio de hidroxiapatita. En otras realizaciones, tambien puede emplearse de forma secuencial una cromatograffa de intercambio anionico, una cromatograffa de intercambio cationico y un medio de hidroxiapatita. Alternativamente, pueden introducirse otras combinaciones o etapas entre las secuencias mencionadas anteriormente.

50

[0088] Los siguientes ejemplos se ofrecen para ilustrar, pero no para limitar la invencion reivindicada.

Ejemplos

55 [0089] En general, los huespedes de expresion pueden ser bacterias, levaduras y hongos, celulas de mairnferos, plantas, animales transgenicos o tambien pueden ser sistemas de expresion libres de celulas tales como los basados en extractos de germen de trigo o de E. coli. En general, los elementos de expresion pueden ser promotores de procariotas, levaduras, mamfferos y plantas o promotores virales. Las estrategias de expresion de protemas pueden ser: estrategias intra o extracelulares, de protemas de fusion y de exposicion. El procesamiento

60 aguas abajo de protemas recombinantes puede incluir: el cultivo, lisis, filtracion, ultrafiltracion, precipitacion, y/u otras estrategias de procesamiento/purificacion de protemas que abarcan la captura de protemas, la purificacion, el pulido y la optimizacion.

Ejemplo 1. Expresion de peptidos NELL

[0090] Un fragmento de ADNc se unio en el vector de expresion PiZT/V5-His (3,4 kb) (lugar EcoRV, Invitrogen) y se incluyo un peptido senal de melitina, un fragmento de ADNc BamHI-EcoRI del NELL1 de rata adulta y una

5 secuencia de etiqueta FLAG. Las figuras 1A-1B son una representacion de la secuencia de acidos nucleicos de la construccion de ADNc usada en este ejemplo, y la secuencia peptidica pronosticada correspondiente.

[0091] Las celulas High Five (BTI-TN-5B-4) se adaptaron a un medio sin suero, y las celulas se transfectaron con el vector de expresion del peptido NELL1. Las celulas se trataron con zeocina para seleccionar solo las poblaciones

10 celulares que expresaban las construcciones NELL1 FLAG. Se confirmo que las poblaciones celulares supervivientes eran transformantes estables. Se recogieron los medios extracelulares y se ensayaron para la presencia del peptido NELL1. El peptido NELL1 se purifico y se uso en los ensayos funcionales descritos a continuacion.

15 [0092] La figura 2A es una ilustracion de un gel de SDS-PAGE tenido con CBB del eluato de la UnoQ que contema el peptido NELL1 purificado. El medio se aplico en una columna UnoQ (Bio-Rad) como se describe en el presente documento. La Figura 2B muestra un Western blot usando un anticuerpo anti-FLAG que representa la expresion NELL1-FLAG en referencia a una escala de protemas. Peptido: 140 kDa (precursor intracelular), 130 kDa (forma madura; peptido de 90 kDa), 400 kDa (forma secretada, homotnmero). En el ejemplo anterior, la productividad del

20 sistema de expresion era de aproximadamente 3 mg de peptido NELL1/l de medio.

[0093] En relacion a otros sistemas de expresion que no expresaron o secretaron peptidos en absoluto (tales como la expresion bacteriana, incluyendo levadura) o cuya produccion de peptidos era extremadamente baja (por ejemplo, el sistema de peptido fusionado a E. coli, celulas CHO-dhfr, > 10 mcg/l) la produccion con los sistemas

25 descritos (celulas de mamffero y de insecto) fue sorprendente y sustancialmente mas eficaz en la produccion de grandes cantidades de protema funcional.

[0094] Expresion y purificacion de la proteina NELL 1 de rata recombinante. Para la produccion del peptido NELL1 marcado con FLAG en el C terminal por celulas de insecto, se construyo un plasmido pIZT-NELL1-FLC insertando el

30 ADNc de NELL1 de rata fusionado a una secuencia de epttopo FLAG derivada del plasmido pTB701-NELL1-FLC (Kuroda, BBRC, 265, 752-757, 1999) en el vector de expresion de insecto pIZT/v5-His (Invitrogen). Ademas, la secuencia senal de secrecion original de NELL1 se reemplazo por la secuencia senal de melitina de abeja melffera usando metodos de PCR. Las celulas High Five se adquirieron de Invitrogen, y se cultivaron en Medio sin suero High Five (Invitrogen). Las celulas High Five se transfectaron con el plasmido pIZT-NELL1-FLC usando FuGene6

35 (Roche). Cuarenta y ocho horas despues de la transfeccion, las celulas se seleccionaron con 400 mg/ml de zeocina (Invitrogen). Cada 3 a 4 dfas se reemplazo el medio selectivo hasta que se establecio la lmea celular de expresion estable. La secrecion de NELL1 se confirmo usando inmunoprecipitacion y analisis de Western blot. Se encontro que las celulas High Five expresaban los peptidos NELL1 (140 kDa) en el medio de cultivo.

40 [0095] El peptido NELL1-FLC de rata recombinante se purifico del medio de cultivo de celulas High Five resistentes a zeocina mediante cromatograffa de intercambio anionico usando una columna UNO Q-1 (Bio-Rad). El peptido NELL1 se eluyo en NaCl 500 mM. Para la produccion del peptido NELL1 marcado con FLAG en el C terminal por celulas COS7, se construyo un plasmido pcDNA3.1-NELL1-FLC insertando el ADNc de NELL1 de rata unido a una secuencia de epftopo FLAG derivada del plasmido pTB701-NELL1-FLC en el vector de expresion de

45 mairnfero pcDNA3.1 (Invitrogen). Las celulas COS7 se cultivaron en DMEM suplementado con FBS al 10 %. Las celulas COS7 se transfectaron con el pcDNA3.1-NELL1-FLC usando el plasmido del peptido senal de NELL endogeno y usando el metodo de electroporacion. Cuarenta y ocho horas despues de la transfeccion, el medio de cultivo se sometio a inmunoprecipitacion y analisis de Western blot para el peptido NELL1.

50 [0096] La Figura 2C es una ilustracion de un gel de SDS-PAGE tenido con CBB del eluato de la UnoQ que inclrna NELL1-FLAG. Estos estudios de expresion mostraron que las celulas COS no expresaron el peptido NELL funcional, sin la modificacion del N terminal del NELL para aumentar la eficacia de secrecion tal como al incluir una secuencia senal. La Figura 2D es una ilustracion de un Western blot usando un anticuerpo anti-FLAG que representa la expresion de NELL1-FLAG.

55

[0097] Expresion y purificacion de la proteina NELL 2 de rata recombinante. Para la produccion del peptido NELL2 marcado con FLAG en el C terminal por celulas de insecto, se construyo un plasmido pIZT-NELL2-FLC insertando ADNc de NELL2 de rata fusionado a una secuencia de epftopo FLAG derivada del plasmido pTB701-NELL2-FLC en el vector de expresion de insecto pIZT/V5-His (Invitrogen). Las celulas High Five se adquirieron de Invitrogen, y se

60 cultivaron en medio sin suero High Five (Invitrogen). Las celulas High Five se transfectaron con el plasmido pIZT- NELL2-FLC usando FuGene6 (Roche). Cuarenta y ocho horas despues de la transfeccion, las celulas se seleccionaron con 400 mg/ml de zeocina (Invitrogen). Los medios selectivos se reemplazaron cada 3 a 4 dfas, hasta que se establecio la lmea celular de expresion estable. La expresion de NELL2 se confirmo en el medio de cultivo usando inmunoprecipitacion y analisis de Western blot. Se encontro que las celulas High Five expresaban los

65 peptidos NELL2 (140 kDa) en el medio de cultivo.

[0098] El peptido NELL2-FLC de rata recombinante se purifico del medio de cultivo de celulas High Five resistentes a zeocina mediante cromatograffa de intercambio anionico usando una columna UNO Q-1 (Bio-Rad). El peptido NELL2-FLC se eluyo en NaCl 500 mM.

5 Ejemplo 2 Expresion de NELL 1 en sistemas de mam^fero

[0099] El sistema de expresion de mairnfero usado para la produccion de NELLIrh mediante la liberacion del ADN no vmco en la presente invencion puede incluir, pero sin limitacion estos sistemas de suspension estable usados de manera comun enumerados en la Tabla 1. Se describen a continuacion los protocolos relativamente detallados que

10 incluyen el diseno del vector, el cultivo de la lmea celular huesped, la transfeccion y la seleccion de la lmea celular estable as^ como la purificacion de Nell-1 rh en un sistema HEK 293 y CHO, pero son bien conocidos por los expertos en la materia.

Tabla 1. Sistema de expresion de mairnfero para la produccion de Nell-1rh

Sistema: Vector parental Secuencia lfder Amplificacion del gen

CHO: p3Xflag-CMV preprotripsina No/opcional

DXB11: mp19-Lp tPA humano DHFR/MTX

HEK293: pSecTag inmunoglobulina No/opcional

NS/0 o Sp2/0: pdCs-Fc-X Cadena ligera de Ig y fragmento Fc DHFR/MTX

: pEE12 n.d. GS/MSX

DHFR. dihidrofolato reductasa; MTX. metotrexato; GS. glutamina sintetasa; MSX. metionina sulfoximina.

15

A. Sistema CHO n° 1

[0100] Diseno del vector. Un fragmento de ADNc se unio en el vector de expresion p3XFlag-CMV (Sigma). La construccion de expresion resultante, pCMV-rhNELL3Xflag, incluye una secuencia conductora de preprotripsina, un

20 fragmento de ADNc de la region que codifica NELL 1 maduro de ser humano y unas secuencias 3Xflag en el C terminal.

[0101] Linea celular huesped: Las CHO-K1 eran una lmea celular adherente y pueden adaptarse a un cultivo en suspension en un medio sin suero. La construccion de pCMV-rhNell-1-3Xflag se transfecto o bien por tratamiento

25 con lipofectamina (Invitrogen) o con fosfatos de calcio. Las lmeas celulares estables se seleccionaron anadiendo de G418 (400-600 |jg/ml) en el medio de cultivo celular durante aproximadamente dos semanas. Los transformantes estables se seleccionaron adicionalmente para los clones individuales con alta productividad de NELL1rh mediante dilucion limitante. Las lmeas celulares estables seleccionadas pueden emplearse en biorreactores a escala de laboratorio o industrial para la produccion de Nell-1 rh.

30

[0102] Procedimiento de purificacion. El peptido NELL1rh que conteman los medios o el lisado celular se purifico a traves de una columna de afinidad M2 (Sigma) con anticuerpos anti-FLAG en su estado nativo y se eluyo con el peptido 3xFLAG.

35 B. Sistema CHO n° 2

[0103] Diseno del vector. La Figura 3A representa la secuencia de acidos nucleicos de la construccion de ADNc y la secuencia de aminoacidos de los tres peptidos senal diferentes que se usaron para las construcciones.

40 [0104] Linea celular huesped. Las CHO-K1 eran una lmea celular adherente y pueden adaptarse a un cultivo en suspension en un medio sin suero. La construccion de pcDNA3.1-hNELL1-c-myc/His, pIL2-hNELL1-c-myc/His o pN2-hNELL1-c-myc/His se transfecto o bien por tratamiento con lipofectamina (Invitrogen) o con fosfatos de calcio. Las lmeas celulares estables se seleccionaron anadiendo G418 (400-600 jg/ml) en el medio de cultivo celular durante aproximadamente dos semanas. Los transformantes estables se seleccionaron adicionalmente para clones 45 individuales con alta productividad de NELL1rh mediante dilucion limitante. Las lmeas celulares estables seleccionadas pueden emplearse en biorreactores a escala de laboratorio o industrial, para la produccion de NELL1rh.

[0105] Procedimiento de purificacion. El peptido NELL1rh que conteman los medios o lisado celular se purifico a 50 traves de inmunoprecipitacion a traves de agarosa anti-c-myc. La Figura 3B es un Western blot con un anticuerpo anti-c-myc que detecta la secrecion de NELL1 de transfecciones con diferentes construcciones despues de la inmunoprecipitacion usando anticuerpos agarosa anti-c-myc. La Figura 3C es un Western blot con anticuerpos anti-

30

c-myc o anti-NELLI humano de raton que detecta la secrecion de NELL1 despues de la inmunoprecipitacion usando sefarosa activada con NHS con anticuerpos anti-Nell-1 humano de conejo.

C. Sistema CHO n° 3 5

[0106] Diseno del vector: Se construyeron construcciones de ADNc registradas que expresaban un peptido NELL1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente.

[0107] Lfnea celular huesped: Las lmeas celulares CHO registradas eran de una lmea celular adherente y pueden 10 adaptarse a un cultivo en suspension en un medio sin suero. Se transfectaron las construcciones registradas. Las

lmeas celulares estables se seleccionaron anadiendo factores apropiados en el medio de cultivo celular durante aproximadamente dos semanas. Los transformantes estables se seleccionaron adicionalmente para clones individuales con alta productividad de NELLIrh mediante dilucion limitante. Las lmeas celulares estables seleccionadas pueden emplearse en biorreactores a escala de laboratorio o industrial para la produccion de 15 NELLIrh.

[0108] Procedimiento de purificacion: El peptido NELLIrh que conteman los medios o lisado celular se purifico a traves de metodos anaffticos y preparativos de purificacion de protemas bien conocidos por los expertos en la materia (por ejemplo, cromatograffa de exclusion por tamano, cromatograffa de intercambio ionico, cromatograffa de

20 afinidad, cromatograffa de inmunoafinidad, cromatograffa ffquida de alto rendimiento).

[0109] Procedimiento de concentracion: El NELLIrh se concentro usando liofilizacion o ultrafiltracion.

D. Sistema HEK293 25

[0110] Diseno del vector: Un fragmento de ADNc se unio en el vector de expresion pSecTagA (Invitrogen). La construccion de expresion resultante, pSec-hNell-1-Tag, incluye una secuencia ffder de cadena k de inmunoglobulina murina, un fragmento de ADNc de la region que codifica el NELL1 maduro humano y la etiqueta dual de las secuencias Myc y His en el C terminal.

30

[0111] Linea celular huesped: La lmea celular de rinon embrionario humano, HEK-293 que se adapto a un medio sin suero y se cultivo en un formato en suspension, se transfecto con el vector de expresion del peptido NELL1, pSec-hNell-1-Tag. Las celulas o bien se cultivaron durante un par de dfas como transfeccion transitoria antes de recoger el medio acondicionado para la purificacion de Nell-1 rh o se trataron con zeocina (250 pg/ml) para la

35 seleccion de la lmea celular de expresion estable. Los transformantes estables se seleccionaron adicionalmente para clones individuales con alta productividad de Nell-1 rh mediante dilucion limitante. Las lmeas celulares estables seleccionadas pueden emplearse en biorreactores a escala de laboratorio o industrial para la produccion de Nell-1 rh.

[0112] Procedimiento de purificacion: El peptido Nell-1 rh que conteman los medios se purifico a traves de una 40 columna de afinidad de Ni2+ en su condicion nativa y se eluyo con imidazol 1 M. El Nell-1 rh se ensayo para su

integridad, pureza y biactividad despues de una dialisis de manera extensiva frente al menos 1000 volumenes de PBS (pH 7,4) a 4 °C durante 20 h.

[0113] Ademas, las modificaciones de los vectores parentales para la sustitucion de la secuencia ffder existente 45 con una nueva tal como una secuencia ffder de albumina de suero de rata, CD33, tPA e interleucina-2 humana o la

adicion de una diana de amplificacion del gen tal como DHFR o GS en la secuencia de la cadena principal dara como resultado nuevos vectores y sistemas de expresion. En la presente invencion, el peptido senal nativo de Nell-1 humano no es suficientemente eficaz para guiar la secrecion de protemas y a veces incluso la secuencia conductora externa tampoco funcionaba bien. Por lo tanto, podna ser necesaria la construccion del vector de expresion con una 50 fusion en fase de una pequena protema secretora natural tal como el factor estimulante de colonias de granulocitos y macrofagos (GM-CSF) humano mediante un espaciador que contiene una etiqueta His intraprotema y un sitio de escision proteofftica como "MPHHHHHHGGGdDdDKDPM" (SEQ ID NO: 614). Las etiquetas de epftopos usadas para la purificacion de NELL1 pueden ser una de las siguientes: 6xHistidinas, 3xFLAG, Myc, GST (glutation S- transferasa), EGFP o CTHS (mitad C terminal de SUMO que representa una pequena protema modificadora de 55 ubiquitina), etc, pero tambien podna ser el doble de His mas Myc como el plasmido pSecTag enumerado en la Tabla 1 (anterior).

[0114] Ademas, los vectores dicistronicos o multicistronicos que usan IRES podnan construirse para la expresion reguladora o inducible de Nell-1 rh en determinadas circunstancias. Se consideraran para la mejora de la produccion

60 de Nell-1 rh las modificaciones geneticas de las lmeas celulares huesped para la obtencion de una proliferacion mas duradera y una apoptosis retrasada o compatible con los requerimientos especiales, tales como un sistema inducible por Tet (tetraciclina) y un sistema de integracion espedfica de sitio Flp-In.

[0115] Ademas de la expresion estable del sistema para la produccion de Nell-1 rh mencionado anteriormente, no 65 se excluina la posibilidad de establecer un enfoque de transfeccion transitoria a gran escala (LST) usando multiples

miligramos del vector plasmido purificado (pREP4) para transfectar las celulas en suspension HEK 293 o BHK con un polfmero cationico PEI como apoyo alternativo o complementary al sistema estable.

Ejemplo 3 Purificacion de la protema NELL2 del medio de cultivo

5

[0116] Las celulas High Five que llevan el pIZT-FLC-NELL2 se cultivaron durante aproximadamente tres dfas en un medio de cultivo sin suero (1 l). El medio de cultivo se centrifugo a 3000 x g durante 5 minutos y se recogio el sobrenadante. El PMSF se anadio a una concentracion final de 1 mM. Se anadio la solucion de sulfato de amonio saturado (saturacion al 80 % (v/v)) y la solucion se mantuvo a 4 grados durante 1 hora. La solucion se centrifugo a 10 15000 x g durante 30 min y se recogio el precipitado. El precipitado se disolvio en 50 ml de Tris-HCl 20 mM (pH 8,0), EDTA 1 mM a 4 grados y se aplico en una columna UnoQ de cromatograffa de intercambio anionico (6 ml, Bio-Rad) equilibrada en Tris-HCl 20 mM (pH 8,0), EDTA 1 mM a 4 grados (velocidad de 1 ml/min mediante FPLC (Amersham- Pharmacia)). La columna se lavo completamente con el mismo tampon.

15 [0117] Despues la proteina de union se eluyo mediante la progresion de NaCl de 0 M a 1,5 M en el mismo tampon. Las fracciones NELL2-FLAG se identificaron mediante Western blot usando un Ac anti-Flag M2 (Sigma). Las fracciones positivas se recogieron en un tubo. El producto final se dializo en el tubo de celulosa sin costura (Wako, PM del punto de corte 12000) frente a 1 l de PBS durante la noche a 4 grados. El producto se almaceno a -70 grados.

20

Ejemplo 4 Desarrollo de la lmea celular y expresion de NELL-1

[0118] Se desarrollo una serie de lmeas celulares de ovario de hamster chino (CHO) que expresaban la proteina Nell-1 recombinante humana de acuerdo con los procedimientos descritos anteriormente o los procedimientos

25 conocidos en la tecnica. Las lmeas celulares se seleccionaron de acuerdo con metodos conocidos (se ruega ver las referencias 1-8, a continuacion). Se cultivaron los 12 mejores clones en un medio para amplificar la expresion. Se subclonaron los conjuntos celulares que presentaban la expresion mas alta de Nell-1 humano mediante ELISA. Despues se sometieron a amplificacion, tras lo cual los conjuntos celulares se volvieron a seleccionar mediante ELlSA. A partir de este procedimiento, se ampliaron los diez subclones de expresion amplificada con MTX mas alta 30 desde la transfeccion.

[0119] Los seis subclones de expresion mas alta se adaptaron para crecer en un medio sin protemas. Se evaluaron todos los clones adaptados sin suero para la expresion de Nell-1 mediante ELISA y mediante gel con SDS. Los clones en los que se observo la mejor expresion en MTX 1.000 nM se identificaron como N2-

35 1.9E10.1F9.4C2, N2-1.9E10.1F9.5H6, N2-1.9E10.1 F9.5H2. Todos expresaron la proteina Nell-1 a niveles > 40 |jg/ml mediante ELISA.

(1) Urlaub, G. & Chasin, L. (1980) Isolation of Chinese Hamster Cell Mutants Deficient in Dihydrofolate Reductase Activity. Proc Natl. Acad. Sci. 77: 4216-4220

40 (2) Kao, F.-T. y Puck, T. T. (1967) Genetics of somatic mammalian cells. IV. Properties of Chinese hamster cells

with respect to the requirement for proline. Genetics 55: 513-524

(3) Wigler, M., Perucho, M., Kurtz, D., Dana, S., Pellicer, A, Axel, R., y Silverstein, S. (1980) Transformation of mammalian genes with an amplifiable dominant-acting gene. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Vol 77: 3567-3570.

(4) Bourouis, M. y Jarry, B. (1983) Vectors containing a prokaryotic dihydrofolate reductase gene transform 45 Drosophila cells to methotrexate resistance. EMBO J. 2: 1099-1104.

(5) Ringold, G., Dieckmann, B., y Lee, F. (1982) Co-expression and amplification of dihydrofolate reductase cDNA and the Escherichia coli XGPRT gene in Chinese hamster ovary cells. Journal of Molecular and Applied Genetics, Vol. 1:3: 165-175.

(6) Gasser C.S., Simonsen C.C., Schilling J.W., Schimke R.T. (1982) Expression of abbreviated mouse 50 dihydrofolate reductase genes in cultured hamster cells. Proc. Natl. Acad. Sci. V 79: 6522-6526.

(7) Kaufman, R.J., Wasley, L.C., Spiliotes, A.J., Gossels, S.D., Latt, S.A., Larsen, G.R. y Kay, R.M. (1985) Coamplification and co-expression of human tissue type plasminogen activator and murine dihydrofolate reductase sequences in Chinese hamster ovary cells. Mol. Cell. Biol. Vol 5: 1750-1759.

(8) Simonsen, C.C. y Levinson, A.D. (1983) Isolation and expression of an altered mouse dihydrofolate reductase 55 cDNA. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 80: 2495-2499.

[0120] Aunque las realizaciones particulares de la presente invencion se han mostrado y descrito, sera obvio para los expertos en la materia que se pueden hacer cambios y modificaciones sin apartarse de la presente invencion en sus aspectos mas amplios.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un procedimiento de expresion de un peptido en una celula de mamnfero que comprende:

5 proporcionar una construccion de acido nucleico que incluye al menos un acido nucleico que codifica al menos un peptido NELL en fase con un acido nucleico que codifica un peptido senal que no es de insecto; transfectar una celula de mamffero con la construccion de acido nucleico; cultivar la celula de mamffero en condiciones que permitan la expresion del peptido NELL, recoger una solucion en crudo que comprende el peptido NELL secretado de la celula de mamnfero; y 10 purificar el peptido NELL,

en el que el peptido senal que no es de insecto es un peptido senal de secrecion que no es de insecto; y en el que la purificacion comprende someter la solucion en crudo a un proceso de cromatograffa de intercambio cationico para obtener un peptido NELL purificado, en el que dicho proceso de cromatograffa de intercambio cationico comprende un medio que comprende un ion metalico que tiene dos o mas cargas, en el que dichos 15 iones metalicos estan incluidos en una solucion tampon o solucion de elucion.
2. El procedimiento de la reivindicacion 1, en el que la celula de mamffero es una celula de ovario de hamster chino (CHO).

20 3. El procedimiento de la reivindicacion 2, en el que el acido nucleico codifica NELL1 o NELL2,

en el que NELL1 se selecciona del grupo que comprende: SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 y SEQ ID NO: 6, y

en el que NELL2 se selecciona del grupo que consiste en SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13 y SEQ ID NO: 14.

25
4. El procedimiento de la reivindicacion 1, que comprende adicionalmente ensayar la actividad del peptido NELL en la inducir la formacion osea.
5. El procedimiento de la reivindicacion 1, en el que el peptido senal de secrecion que no es de insecto es un peptido

30 senal de secrecion de planta o un peptido senal de secrecion de animal, en el que el peptido senal de secrecion de

animal es un peptido senal de secrecion de mamffero.
6. El procedimiento de la reivindicacion 1, en el que el ion metalico es el ion calcio.

35 7. Un procedimiento de purificacion de un peptido NELL que comprende proporcionar una solucion en crudo que contiene un peptido NELL, y someter la solucion en crudo a un proceso de cromatograffa de intercambio cationico para obtener un peptido NELl purificado, en el que el peptido NELL es un peptido NELL-1 o NELL-2, y

en el que el proceso de cromatograffa comprende un medio que comprende un ion metalico que tiene dos o mas 40 cargas,

en el que dichos iones metalicos estan incluidos en una solucion tampon o solucion de elucion.
8. El procedimiento de la reivindicacion 7, en el que el ion metalico es el ion calcio.

45 9. El procedimiento de la reivindicacion 8, en el que la solucion en crudo que contiene el peptido NELL-1 o NELL-2 se obtiene expresando una construccion de acido nucleico en una celula de mamffero, comprendiendo la construccion de acido nucleico al menos un acido nucleico que codifica al menos un peptido NELL-1 o NELL-2 en fase con un acido nucleico que codifica un peptido senal que no es de insecto que es un peptido senal de secrecion que no es de insecto.

50
10. El procedimiento de la reivindicacion 9, en el que NELL1 se selecciona del grupo que comprende: SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 y SEQ ID NO: 6, y en el que NELL2 se selecciona del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13 y SEQ ID NO: 14.

55
11. El procedimiento de la reivindicacion 9, en el que la celula de mamffero es una celula CHO.
12. El procedimiento de la reivindicacion 9, en el que el peptido senal de secrecion que no es de insecto es un peptido senal de secrecion de planta o un peptido senal de secrecion de animal, en el que el peptido senal de

60 secrecion de animal es un peptido senal de secrecion de mamffero.
13. El procedimiento de la reivindicacion 1 o 7, en el que el proceso de cromatograffa de intercambio cationico se usa en combinacion con un proceso de cromatograffa de intercambio anionico.

65 14. El procedimiento de la reivindicacion 1 o 7, en el que el proceso de cromatograffa de intercambio cationico se