+

WO2025148870A1 - Ras抑制剂 - Google Patents

Ras抑制剂

Info

Publication number
WO2025148870A1
WO2025148870A1 PCT/CN2025/071023 CN2025071023W WO2025148870A1 WO 2025148870 A1 WO2025148870 A1 WO 2025148870A1 CN 2025071023 W CN2025071023 W CN 2025071023W WO 2025148870 A1 WO2025148870 A1 WO 2025148870A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
halogen
cancer
optionally substituted
pharmaceutically acceptable
compound
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
PCT/CN2025/071023
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
尚尔昌
仲伯禹
张彦涛
郑爱军
曹曼丽
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tyligand Bioscience Shanghai Ltd
Original Assignee
Tyligand Bioscience Shanghai Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tyligand Bioscience Shanghai Ltd filed Critical Tyligand Bioscience Shanghai Ltd
Publication of WO2025148870A1 publication Critical patent/WO2025148870A1/zh
Pending legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/517—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinazoline, perimidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/553—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having at least one nitrogen and one oxygen as ring hetero atoms, e.g. loxapine, staurosporine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/10—Spiro-condensed systems
    • C07D491/107—Spiro-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00

Definitions

  • the present invention also provides a method for treating tumors or cancers, which comprises administering the compound of the present invention or its stereoisomers, tautomers, stable isotope variants, pharmaceutically acceptable salts or solvates, or a pharmaceutical composition comprising the same, to a patient in need thereof.
  • the present invention also provides a pharmaceutical combination comprising a compound of the present invention, a stereoisomer, a tautomer, a stable isotopic variant, a pharmaceutically acceptable salt or a solvate thereof, and one or more other pharmaceutically active agents.
  • the present invention also provides processes for preparing the compounds of the present invention.
  • RAS mutation or "RAS mutant protein” as used herein refers to a protein encoded and expressed by a RAS gene in which one or more codons are mutated, typically including but not limited to a RAS protein in which a glycine at codon 12, a glycine at codon 13, or a glutamine at codon 61 of RAS is mutated, such as a mutant HRAS, NRAS, or KRAS. These residues are located in the active site of RAS, and their mutations can impair the intrinsic or GAP-catalyzed GTPase activity of RAS, resulting in the continued presence of RAS bound to GTP.
  • RAS mutation or "RAS mutant protein” and “RAS” when describing inhibitory activity are used interchangeably and generally refer to mutant HRAS, NRAS or KRAS, such as but not limited to KRAS-G12C (mutation of glycine to cysteine at codon G12), KRAS-G12D (mutation of glycine to aspartic acid at codon G12), HRAS-G12D, NRAS-G12D, KRAS- G12V (mutation of glycine to valine at codon G12), KRAS-G13D (mutation of glycine to aspartic acid at codon G13); specifically refers to KRAS mutant protein, more specifically refers to KRAS-G12C mutant protein, KRAS-G12D mutant protein, KRAS-G12V mutant protein, G12A mutant protein, G12R mutant protein, G12S mutant protein, KRAS-G13D mutant protein and Q61H mutant protein.
  • KRAS mutant protein specifically refers to K
  • treatment refers to administering one or more compounds of the present invention described herein or pharmaceutically acceptable salts or solvates thereof to a subject, such as a mammal, such as a human, who suffers from the disease or has symptoms of the disease, to cure, alleviate, mitigate or affect the disease or symptoms of the disease.
  • a subject such as a mammal, such as a human
  • the treatment is curative or ameliorative.
  • prevention refers to administering one or more compounds described herein or pharmaceutically acceptable salts or solvates thereof to a subject, such as a mammal, such as a human, suspected of suffering from or susceptible to a Ras-mediated disease as defined herein, especially cancer or a tumor, so that the risk of suffering from the defined disease is reduced or the onset of the disease is prevented.
  • a subject such as a mammal, such as a human, suspected of suffering from or susceptible to a Ras-mediated disease as defined herein, especially cancer or a tumor, so that the risk of suffering from the defined disease is reduced or the onset of the disease is prevented.
  • prevention includes the use of the compounds of the present invention before the diagnosis or determination of any clinical and/or pathological symptoms.
  • the terms “inhibit” and “reduce” as used herein, or any variants of these terms refer to the ability of a bioactive agent to reduce the signaling activity of a target by interacting directly or indirectly with the target, and refer to any measurable reduction or complete inhibition of the activity of the target.
  • the activity e.g., KRAS activity
  • the activity can be reduced by about, up to about, or at least about 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% or more, or any range derivable therein.
  • RAS-mediated disease refers to a disease in which RAS promotes the occurrence and development of the disease, or in which inhibition of RAS reduces the incidence of the disease, reduces or eliminates the symptoms of the disease.
  • RAS-mediated disease preferably refers to a KRAS-mediated disease, and more preferably a cancer or tumor mediated by a KRAS mutation.
  • the term “cancer” or “tumor” refers to abnormal cell growth and proliferation, whether malignant or benign, and all precancerous and cancerous cells and tissues.
  • the cancer or tumor includes, but is not limited to, lung adenocarcinoma, lung cancer, bone cancer, pancreatic cancer, skin cancer, head and neck cancer, skin or intraocular melanoma, uterine cancer, ovarian cancer, rectal cancer, anal region cancer, stomach cancer, colon cancer, breast cancer, fallopian tube cancer, endometrial cancer, cervical cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, Hodgkin's disease, esophageal cancer, small intestine cancer, endocrine system cancer, thyroid cancer, parathyroid cancer, adrenal cancer, soft tissue sarcoma, urethral cancer, penile cancer, prostate cancer, chronic or acute leukemia, lymphocytic lymphoma, bladder cancer, kidney or ureter cancer, renal cell carcinoma, renal pelvis cancer,
  • the cancer or tumor is associated with RAS, especially KRAS mutation and amplification, including but not limited to the above tumor types and their preferred ranges.
  • Particularly preferred tumors of the present invention include lung cancer, lung adenocarcinoma, colon cancer, rectal cancer, pancreatic cancer, endometrial cancer, bile duct cancer, leukemia and ovarian cancer.
  • the terms "subject,” “individual,” or “patient” refer to a vertebrate.
  • the vertebrate is a mammal.
  • Mammals include, but are not limited to, farm animals (such as cattle), sports animals, pets (such as guinea pigs, cats, dogs, rabbits, and horses), primates, mice, and rats.
  • the mammal is a human.
  • terapéuticaally effective amount refers to an amount or dosage that is generally sufficient to produce a beneficial therapeutic effect on the "RAS-mediated disease” such as cancer or tumor patients in need of treatment.
  • RAS-mediated disease such as cancer or tumor patients in need of treatment.
  • Those skilled in the art can determine the effective amount or dosage of the active ingredient in the present invention by conventional methods and in combination with conventional influencing factors.
  • drug combination means that the compounds of the present invention can be combined with other active agents to achieve the purpose of the present invention.
  • the other active agents may be one or more additional compounds of the present invention, or may be a second or additional (e.g., a third) compound that is compatible with the compounds of the present invention, i.e., does not adversely affect each other, or has complementary activity, such as these active agents are known to regulate other biologically active pathways, or regulate different components in the biologically active pathways involved in the compounds of the present invention, or even overlap with the biological targets of the compounds of the present invention.
  • Such active agents are suitably combined in an effective amount to achieve the intended purpose.
  • the other active agents may be co-administered with the compounds of the present invention in a single pharmaceutical composition, or may be administered separately from the compounds of the present invention in different discrete units, and may be administered simultaneously or sequentially when administered separately.
  • the sequential administration may be close or distant in time.
  • pharmaceutically acceptable refers to molecular entities and compositions that do not produce adverse, allergic or other untoward reactions when administered in appropriate amounts to animals, such as humans.
  • pharmaceutically acceptable salt refers to those salts which retain the biological effectiveness and properties of the parent compound and are not biologically or otherwise undesirable, including acid addition salts and base addition salts.
  • “Pharmaceutically acceptable acid addition salts” can be formed by compounds having a basic group with inorganic acids or organic acids, such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, nitric acid, carbonic acid, phosphoric acid, etc., and organic acids can be selected from aliphatic, alicyclic, aromatic, aromatic aliphatic, heterocyclic, carboxylic and sulfonic acid organic acids, such as formic acid, acetic acid, propionic acid, glycolic acid, gluconic acid, lactic acid, pyruvic acid, oxalic acid, malic acid, maleic acid, malonic acid, succinic acid, fumaric acid, tartaric acid, citric acid, aspartic acid, ascorbic acid, glutamic acid, anthranilic acid,
  • “Pharmaceutically acceptable base addition salts” include those derived from inorganic bases such as sodium, potassium, lithium, ammonium, calcium, magnesium, iron, zinc, copper, manganese, aluminum and the like, as well as salts derived from pharmaceutically acceptable organic non-toxic bases including, but not limited to, primary, secondary, and tertiary amines, substituted ammoniums including naturally occurring substituted amines, cyclic amines, and basic ion exchange resins such as ammonia, isopropylamine, trimethylamine, diethylamine, triethylamine, tripropylamine, ethanolamine, diethanolamine, 2-dimethylaminoethanol, 2-diethylaminoethanol, tromethamine, dicyclohexylamine, lysine, arginine, histidine, caffeine, procaine, hydrazine, choline, betaine, ethylenediamine, glucosamine, methylglucamine, triethanolamine, theobro
  • isomer refers to any stereoisomer, enantiomeric mixture, including racemate, diastereomeric mixture, geometric isomer, atropisomer and/or tautomer that may exist in the structure of a compound.
  • the determination and separation methods of the stereochemistry of the isomers are well known to those skilled in the art (S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; and Eliel, E. and Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994).
  • Certain compounds of the present invention contain at least one asymmetric center and may thus give rise to stereoisomers.
  • the present invention therefore encompasses all possible isomeric forms of the compounds defined herein, and pharmaceutically acceptable salts or solvates thereof, unless otherwise indicated.
  • the compound structural formula or structural fragment used in this article Indicates the absolute configuration of a stereocenter, i.e., a chiral center. Accordingly, in the naming of the compounds or intermediates provided by the present invention, R or S is used to represent the absolute configuration of the chiral center. In the definitions of some compounds of the present invention, axial chirality may also be used to represent the configuration of the compound. These configurations are determined using the Cahn-Ingold-Prelog rules well known to those skilled in the art.
  • the structural fragments used in this article are the bonds connecting the structural fragment to the rest of the molecule.
  • Compounds of the present invention include unlabeled forms of compounds of the present invention and isotope-labeled forms thereof.
  • the isotope-labeled form of a compound is a compound in which only one or more atoms are replaced by corresponding isotope-enriched atoms.
  • isotopes that can be incorporated into the compounds of the present invention include isotopes such as hydrogen, carbon, nitrogen, oxygen, fluorine, chlorine and iodine, such as 2 H, 3 H, 11 C, 13 C, 14 C, 15 N, 18 O, 17 O, 35 S, 18 F, 37 Cl and 125 I.
  • Such isotope-labeled compounds can be used as probes, analytical tools or as therapeutic agents in, for example, bioassays.
  • compounds of the present invention are provided in unlabeled form.
  • the compounds of the invention are provided in unlabeled form.
  • the compounds of the invention are provided in isotopically labeled form, such as compounds in which one or more H atoms are replaced by deuterium atoms (D), such as fragments
  • D deuterium atoms
  • two R2 's can each independently be D, or can be each defined group substituted by D;
  • R4 can be each defined group substituted by D;
  • each group defined as R7 can each independently be optionally substituted by one or more isotopes, for example, substituted by D.
  • alkynyl refers to a straight or branched unsaturated hydrocarbon group consisting of carbon atoms and hydrogen atoms and containing at least one triple bond. Specifically, the alkynyl group has 2-8, such as 2 to 6, 2 to 5, 2 to 4 or 2 to 3 carbon atoms.
  • C 2-6 alkynyl refers to a straight or branched alkynyl group having 2 to 6 carbon atoms, and further preferably "C 2-4 alkynyl", such as ethynyl, propynyl, propargyl, butynyl, etc., and the carbon atom in the alkynyl group that is connected to the rest of the molecule can be saturated or can be an acetylenic bond carbon atom.
  • alkenyl and “alkynyl” as substituents in the compound definitions herein are optionally substituted, and the substituents may be selected from one or more of the following: D, halogen, CN, OH, -OC 1-6 alkyl, -O-CON(H or -C 1-6 alkyl optionally substituted by halogen) 2 , wherein the alkyl is further optionally substituted by halogen or D.
  • cycloalkyl means a monocyclic, fused polycyclic, bridged polycyclic or spirocyclic saturated monovalent hydrocarbon ring structure with a specified number of ring carbon atoms.
  • Cycloalkyl may have 3 to 12 carbon atoms (i.e., C 3-12 cycloalkyl), such as 3 to 10, 3 to 8, 3 to 7, 3 to 6, 3 to 4, 5 to 6 carbon atoms.
  • Suitable cycloalkyls include, but are not limited to, monocyclic structures, such as cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl or cyclooctyl; or polycyclic (e.g., bicyclic) structures, including spirocyclic, fused or bridging systems, such as bicyclo[1.1.1]pentyl, bicyclo[2.2.1]heptyl, spiro[3.4]octanyl, bicyclo[3.1.1]hexyl, bicyclo[3.1.1]heptyl or bicyclo[3.2.1]octanyl, etc.
  • monocyclic structures such as cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl or cyclooctyl
  • polycyclic (e.g., bicyclic) structures including spiro
  • C 3-6 cycloalkyl or “ C 3-4 cycloalkyl” as used in the compound definitions herein refers to a monocyclic cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl or cyclohexyl group.
  • cycloalkyl as a substituent in the compound definition herein, such as -C 3-6 cycloalkyl or spiro-C 3-4 cycloalkyl, or "cycloalkyl” as a part of a substituent, such as the cycloalkyl in -(CH 2 ) n -C 3-6 cycloalkyl, is optionally substituted, and the substituent may be selected from one or more of the following: D, OH, NH 2 , halogen, CN, -C 1-6 alkyl optionally substituted with halogen or D, -OC 1-6 alkyl optionally substituted with halogen or D, -O-CON(H or -C 1-6 alkyl optionally substituted with halogen) 2 , wherein the alkyl is further optionally substituted with halogen or D.
  • optionally substituted -C 3-6 cycloalkyl, -(CH 2 ) n -C 3-6 cycloalkyl include, but are not limited to: wherein * represents the atom in the spirocycloalkyl group that is attached to the rest of the molecule.
  • heterocycloalkyl as used herein means a monocyclic, fused polycyclic, spirocyclic or bridged polycyclic non-aromatic saturated or unsaturated ring structure comprising one or more (e.g., 1, 2, 3 or 4) heteroatoms independently selected from O, N, P, Se and S and the specified number of ring atoms, or an N-oxide thereof, or an S-oxide or S-dioxide thereof.
  • the heterocycloalkyl group may have 3 to 12 ring members (which may be referred to as a 3-12 membered heterocyclyl group), for example, 3 to 10 ring members, 3 to 8 ring members, 3 to 7 ring members, 4 to 7 ring members, 4 to 6 ring members, 5 to 7 ring members, 5 to 6 ring members, 6 to 10 ring members, 6 to 12 ring members, for example, a 4-7 membered monocyclic heterocycloalkyl group such as a 4-7 membered monocyclic saturated heterocycloalkyl group, a 4-7 membered monocyclic unsaturated heterocycloalkyl group; or a 6-12 membered polycyclic heterocycloalkyl group, such as a 6-10 membered spiroheterocycloalkyl group, a 6-10 membered fused heterocycloalkyl group, and a 6-10 membered bridged heterocycloalkyl group.
  • the heterocycloalkyl group usually contains at least 1 and at most 4 (e.g., 1, 2, 3 or 4) heteroatoms, for example, a 4-7 membered monocyclic heterocycloalkyl group such as a 4-7 membered monocyclic saturated heterocycloalkyl group or a 4-7 membered monocyclic unsaturated heterocycloalkyl group containing 1 to 3 heteroatoms independently selected from N, O, P, Se and S (preferably O, N, S), for example, a 4-7 membered monocyclic saturated heterocyclyl group or a bridged heterocycloalkyl group containing 1 or 2 N atoms, or a 6-12 membered polycyclic heterocycloalkyl group (preferably a 6-10 membered polycyclic heterocycloalkyl group) containing 1 to 4 (preferably 1 to 3, more preferably 1 to 2) heteroatoms independently selected from N, O, P, Se and S (preferably O, N, S), for example, a 6-10 membered spiro
  • heterocycloalkyl groups include, but are not limited to, azetidinyl, oxetanyl, thietanyl, dihydropyrrolyl, pyrrolidinyl (e.g., 1-pyrrolidinyl, 2-pyrrolidinyl, and 3-pyrrolidinyl), dihydropyrazolyl, pyrazolidinyl, dihydroimidazolyl, imidazolidinyl, a partially or fully hydrogenated form of a triazolyl, a partially or fully hydrogenated form of a tetrazole, a partially or fully hydrogenated form of a furanyl such as dihydrofuranyl, a tetrahydrofuranyl (e.g., 1-tetrahydrofuranyl, 2-tetrahydrofuranyl, and 3-tetrahydrofuranyl), a partially or fully hydrogenated form of a thienyl such as dihydrothienyl, a
  • the atom in the heterocycloalkyl group connected to the rest of the compound can be a carbon atom or a heteroatom, as long as it is chemically feasible.
  • the ring connected to the rest of the molecule is a non-aromatic saturated or unsaturated ring, even if the ring fused to the ring is aromatic, the fused ring is also within the scope of "heterocycloalkyl" herein.
  • the heterocycloalkyl group is saturated.
  • saturated as used herein in defining cyclic groups means a monocyclic or polycyclic saturated ring containing at least one (preferably 1 to 4, more preferably 1 to 3) heteroatom selected from N, O, S, P and Se, examples of which include aziridinyl, azetidinyl, oxetanyl, imidazolidinyl, morpholinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydro-2H-pyranyl, tetrahydrothienyl, thiazolidinyl, oxazolidinyl and the like.
  • unsaturated as used herein in defining cyclic groups means a monocyclic or polycyclic non-aromatic partially unsaturated cyclic group.
  • unsaturated rings include, but are not limited to, partially hydrogenated forms of the following aromatic rings: imidazolyl, thienyl, pyrrolyl, oxazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, isothiazolyl, thiadiazolyl, oxadiazolyl, pyrazolyl, triazolyl, tetrazolyl, pyridyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, indolyl, isoindolyl, indazolyl, triazolopyridyl, benzimidazolyl, benzoxazolyl, benzothiazolyl, benzothienyl, furanyl, benzofuranyl, purinyl, quinolyl, isoquinolyl, quina
  • hydroxy refers to an -OH group.
  • cyano refers to a -CN group.
  • amino refers to -NH2 .
  • Substituted amino groups are also present in the definitions of compounds herein, such as -NHC 1-6 alkyl, -N(C 1-6 alkyl) 2 , wherein the -C 1-6 alkyl group may be further optionally substituted as shown under the definitions of the respective groups.
  • the substituted amino group is -N(R b ) 2 in -CON(R b ) 2 , wherein R b is -C 1-6 alkyl group optionally substituted with halogen.
  • substituted amino groups include, but are not limited to , -NH2 , -NH- CH3 , -NH- CH2CH3 , -NH- CF3 , -NH- CH2CF3 , -NH- CH2CN , -NH- CH2CH2CN , -N( CH3 ) 2 , -N ( CH3 ) ( CH2CH3 ), -N( CH3 )( CF3 ) , -N( CH3 )( CH2CF3 ) , -N ( CH3 ) (CH2CN), -NHCH2 - OCH3 , N( CH3 )(CH2CH2 - OCH3 ) .
  • the term "optionally substituted”, as used herein, unless otherwise indicated, means that the group may be unsubstituted or substituted with one or more (e.g., 1, 2, 3, 4, or 5 or more, or any range derivable therein) of the substituents listed for the group, wherein when multiple substituents are present, each substituent may be the same or different.
  • the optionally substituted group has 1 substituent.
  • the optionally substituted group has 2 identical or different substituents.
  • the optionally substituted group has 3 identical or different substituents.
  • the optionally substituted group has 4 identical or different substituents.
  • the optionally substituted group has 5 identical or different substituents.
  • the H carried by the saturated carbon atom may not be shown.
  • a person skilled in the art can easily determine the number of H or non-H substituents carried by the target atom, such as the structural fragment
  • the ring carbon atom to which it is connected does not carry an H atom, and the two R 3 it carries can be respectively connected to the shown ring carbon atom by a single bond, or together form a spiro ring with the shown carbon atom.
  • the CH 2 or NH defined for the ring atoms is not limited to the unsubstituted state, and its actual existence is determined according to the overall definition of the ring group.
  • X may be CH 2 , but according to the overall definition of the fragment, it also includes, for example, the case where both R 8 and R 8 'are connected to X that is CH 2 and together form a spiro ring, for example, the case where one of R 8 and R 8 'is connected to X that is CH 2 , and the other is connected to an adjacent ring atom, and the two together form a fused ring, for example, the case where one of R 8 and R 8 'is connected to X that is CH 2 , and the other is connected to a non-adjacent ring atom, and the two together form an intra-ring bridge, and the case where the substituent is substituted by the substituent defined for the fragment.
  • each G variable is defined as
  • KRAS mutant proteins e.g., G12C mutations, G12D mutations, G12V mutations, G12A mutations, G12R mutations, G12S mutations, G13D mutations, and Q61H mutant proteins
  • KRAS wild-type amplified cells can be used to treat or prevent diseases mediated by the protein (e.g., cancer or tumors). Therefore, in this field, a variety of structural types of RAS inhibitors have been developed.
  • Embodiment 1 A compound of formula (I), a stereoisomer, a tautomer, a stable isotopic variant, a pharmaceutically acceptable salt or a solvate thereof,
  • M is selected from N or CR 9 ;
  • W is selected from N or CR 10 ;
  • R 9 is selected from H, halogen, CN, NO 2 and -C 1-6 alkyl optionally substituted by halogen;
  • R 10 is selected from H, halogen, CN, OH, -C 1-6 alkyl optionally substituted by halogen, and -OC 1-6 alkyl optionally substituted by halogen;
  • Z is selected from H, OH and NH 2 ;
  • X is selected from CH 2 and O, provided that when k is 0, X is CH 2 ;
  • R 2 is each independently selected from H, D and optionally substituted -C 1-6 alkyl, wherein the substituent is selected from halogen, D and -OC 1-6 alkyl optionally substituted by halogen or D;
  • R3 attached to the same ring carbon atom together with the carbon atom to which they are attached form a spiro C3-6 cycloalkyl or a spiro 4-7 membered heterocycloalkyl containing 1 to 3 heteroatoms independently selected from N, O, S, wherein the cycloalkyl or heterocycloalkyl is optionally substituted with halogen or -C1-6 alkyl optionally substituted with halogen;
  • R 4 is selected from H, -C 1-6 alkyl, -C 2-6 alkenyl, -C 2-6 alkynyl and -(CH 2 ) n -C 3-6 cycloalkyl, wherein -C 1-6 alkyl, -C 2-6 alkenyl and -C 2-6 alkynyl are optionally substituted, and the substituent is selected from D, halogen, CN, OH, -OC 1-6 alkyl optionally substituted by halogen or D, and -OCON(R b ) 2 , wherein the C 3-6 cycloalkyl is optionally substituted, and the substituent is selected from D, halogen, CN, OH, -C 1-6 alkyl optionally substituted by halogen or D, -OC 1-6 alkyl optionally substituted by halogen or D, and -OCON(R b ) 2 ;
  • R 5 is selected from H, halogen, -CN, -NO 2 ;
  • R 6 is selected from halogen, CN, -C 1-6 alkyl and -C 2-6 alkynyl, wherein -C 1-6 alkyl and -C 2-6 alkynyl are each independently optionally substituted by halogen;
  • R 7 is selected from H, halogen, CN, -C 1-6 alkyl optionally substituted by halogen or D, -OC 1-6 alkyl optionally substituted by halogen or D, and -C 2-6 alkynyl optionally substituted by halogen or D;
  • R 8 and R 8 ′ attached to non-adjacent ring carbon atoms together form an intracyclic bridge -(CH 2 ) 1-2 - or -CH 2 CH 2 -,
  • R 8 and R 8 ′ attached to the same ring carbon atom together with the ring carbon atom to which they are attached form a 4-6 membered spirocycloalkyl or a 4-6 membered spiroheterocycloalkyl containing 1 to 3 heteroatoms independently selected from N, O and S,
  • bridge ring, spiro ring or fused ring is each independently optionally substituted, and the substituent is selected from OH, oxo, -OC 1-6 alkyl optionally substituted by halogen, and -C 1-6 alkyl optionally substituted by halogen;
  • R a and R b are each independently selected from H and -C 1-6 alkyl optionally substituted by halogen;
  • R c are each independently selected from H, halogen and -C 1-6 alkyl optionally substituted by halogen;
  • k and n are each independently selected from integers from 0 to 3;
  • n is selected from integers of 0 to 6.
  • Embodiment 1.1 A compound of Formula (I) according to Embodiment 1, wherein M is N, a stereoisomer, a tautomer, a stable isotopic variant, a pharmaceutically acceptable salt or a solvate thereof.
  • Embodiment 1.2 A compound of Formula (I) according to Embodiment 1, a stereoisomer, a tautomer, a stable isotopic variant, a pharmaceutically acceptable salt or a solvate thereof, wherein M is CR 9 .
  • Embodiment 1.2.1 A compound of Formula (I) according to Embodiment 1.2, wherein R 9 is H, a stereoisomer, a tautomer, a stable isotopic variant, a pharmaceutically acceptable salt or a solvate thereof.
  • Embodiment 1.2.2 A compound of formula (I) according to Embodiment 1.2, wherein R 9 is halogen, such as F, Cl, Br, I, a stereoisomer, a tautomer, a stable isotopic variant, a pharmaceutically acceptable salt or a solvate thereof.
  • R 9 is halogen, such as F, Cl, Br, I, a stereoisomer, a tautomer, a stable isotopic variant, a pharmaceutically acceptable salt or a solvate thereof.
  • Embodiment 1.2.3 A compound of Formula (I) according to Embodiment 2.2, a stereoisomer, a tautomer, a stable isotopic variant, a pharmaceutically acceptable salt or a solvate thereof, wherein R 9 is CN; or R 9 is NO 2 .
  • Embodiment 4.4 A compound of formula (I) according to any one of Embodiments 1 to 3.1, a stereoisomer, a tautomer, a stable isotopic variant, a pharmaceutically acceptable salt or a solvate thereof, wherein R 7 is -OC 1-6 alkyl optionally substituted by halogen or D, preferably -OC 1-3 alkyl optionally substituted by halogen or D, such as -O-CH 3 , -O-CD 3 ; in a specific embodiment, M is N at this time.
  • Embodiment 6.2 A compound of formula (I), a stereoisomer, a tautomer, a stable isotopic variant, a pharmaceutically acceptable salt or a solvate thereof according to any one of Embodiments 1 to 5.4, wherein R6 is CN.
  • Embodiment 6.4 A compound of formula (I) according to any one of Embodiments 1 to 5.4, a stereoisomer, a tautomer, a stable isotopic variant, a pharmaceutically acceptable salt or a solvate thereof, wherein R6 is -C2-6alkynyl optionally substituted by halogen, preferably -C2-4alkynyl optionally substituted by halogen, such as ethynyl.
  • the structural fragment is the above-mentioned spiro ring or fused ring structure.
  • the ring containing N and X is azepane or azacycloheptane, and R 8 and R 8 'attached to adjacent ring carbon atoms together with the atoms to which they are attached form a C 3-6 cycloalkyl;
  • the fused rings in the above embodiments are optionally substituted at any chemically feasible position, with the substituents selected from OH, oxo, -OC 1-6 alkyl optionally substituted by halogen, and -C 1-6 alkyl optionally substituted by halogen; preferably unsubstituted.
  • Embodiment 11.1 A compound of formula (I) according to any one of Embodiments 1 to 10.4, a stereoisomer, a tautomer, a stable isotopic variant, a pharmaceutically acceptable salt or a solvate thereof, wherein the structural fragment Best More preferred
  • the ring carbon atom to which R 3 is attached may be chiral as appropriate, so that R 3 is in the R or S stereoconfiguration.
  • Embodiment 11.2 A compound of formula (I) according to Embodiment 11.1, a stereoisomer, a tautomer, a stable isotopic variant, a pharmaceutically acceptable salt or a solvate thereof, wherein R 2 is selected from H or D, for example, R 2 is both H; or R 2 is both D; or one of R 2 is H and the other is D.
  • Embodiment 11.3 A compound of formula (I) according to any one of Embodiments 11.1 to 11.2.1, a stereoisomer, a tautomer, a stable isotopic variant, a pharmaceutically acceptable salt or a solvate thereof, wherein R 1 is H; or R 1 is -C 1-6 alkyl, preferably -C 1-3 alkyl, optionally substituted with halogen, D, or -OC 1-6 alkyl optionally substituted with halogen or D; preferably R 1 is -C 1-3 alkyl or -deuterated C 1-3 alkyl, for example -CH 3 , -CH 2 D, -CHD 2 , -CD 3 .
  • Embodiment 11.4.6 A compound of formula (I) according to any one of Embodiments 11.1 to 11.3, a stereoisomer, a tautomer, a stable isotopic variant, a pharmaceutically acceptable salt or a solvate thereof, wherein R 3 is -OC 3-6 cycloalkyl, or R 3 is -(CH 2 ) 0-3 -C 3-6 cycloalkyl, preferably -(CH 2 ) 0-3 -C 3-4 cycloalkyl, wherein the C 3-6 cycloalkyl is each optionally substituted by halogen, CN, D, -C 1-6 alkyl optionally substituted by halogen and -OC 1-6 alkyl optionally substituted by halogen, for example optionally substituted by halogen.
  • Embodiment 11.5 A compound of formula (I) according to any one of Embodiments 11.4 to 11.4.9, a stereoisomer, a tautomer, a stable isotopic variant, a pharmaceutically acceptable salt or a solvate thereof, wherein m is an integer from 0 to 6, preferably an integer from 1 to 4, more preferably an integer from 1 to 2, and R 3 can be selected from any of the aforementioned R 3 embodiments or any combination thereof;
  • Embodiment 11.6.1 A compound of formula (I) according to any one of Embodiments 11.1 to 11.5, a stereoisomer, a tautomer, a stable isotopic variant, a pharmaceutically acceptable salt or a solvate thereof, wherein R 4 is -C 1-6 alkyl, preferably -C 1-3 alkyl; or R 4 is -C 2-6 alkenyl, preferably -C 2-4 alkenyl; or R 4 is -C 2-6 alkynyl, preferably -C 2-4 alkynyl; each is optionally substituted by D, halogen, CN, OH, -OC 1-6 alkyl optionally substituted by halogen or D, and -OCON(R b ) 2 , preferably optionally substituted by halogen or D.
  • Embodiment 11.6.2 A compound of formula (I) according to any one of Embodiments 11.1 to 11.5, a stereoisomer, a tautomer, a stable isotopic variant, a pharmaceutically acceptable salt or a solvate thereof, wherein R 4 is -(CH 2 ) 0-3 -C 3-6 cycloalkyl, said -C 3-6 cycloalkyl being optionally substituted with D, halogen, CN, OH, -C 1-6 alkyl optionally substituted with halogen or D, -OC 1-6 alkyl optionally substituted with halogen or D, and -OCON(R b ) 2 .
  • Embodiment 11.6.3 A compound of formula (I) according to any one of Embodiments 11.1 to 11.5, a stereoisomer, a tautomer, a stable isotopic variant, a pharmaceutically acceptable salt or a solvate thereof, wherein R 4 is selected from any one of Embodiments 11.6 to 11.6.2 or any combination thereof; for example, R 4 is selected from -C 1-6 alkyl and -C 3-6 cycloalkyl, optionally substituted with D, halogen, CN, OH, -C 1-6 alkyl optionally substituted with halogen or D, -OC 1-6 alkyl optionally substituted with halogen or D, and -OCON(R b ) 2 ; preferably, R 4 is selected from -C 1-3 alkyl and -deuterated C 1-3 alkyl, for example but not limited to -CH 3 , -CD 3 , -CH 2 CH 3 , -CD 2 CD 3 .
  • R 2 is each independently selected from H and D;
  • R 1 is selected from optionally deuterated -C 1-6 alkyl;
  • m is 1 or 2;
  • R 4 is selected from optionally deuterated -C 1-6 alkyl;
  • R2 are each independently selected from H and D;
  • n 1 or 2, for example, 1;
  • R 4 is selected from -C 1-3 alkyl optionally substituted by one or more deuterium, such as -CH 3 , -CH 2 CH 3 , -CD 3 , -CD 2 CD 3 ; wherein the para-positioned ring carbon atom of the ring N atom to which R 3 is attached is chiral as appropriate and may be in R or S configuration.
  • Embodiment 13 A compound selected from the compounds of the following Examples, stereoisomers, pharmaceutically acceptable salts or solvates thereof.
  • the compounds of the present invention cover the above independent embodiments or specific embodiments, and also cover embodiments consisting of any combination or sub-combination of the above embodiments or specific embodiments, and also cover embodiments consisting of any combination of any preferred or exemplary embodiments above.
  • RAS proteins especially KRAS mutant proteins
  • the compounds of the present invention having the above structural characteristics can strongly inhibit cell proliferation in cell lines carrying KRAS mutant proteins (such as G12C mutation, G12D mutation, G12V mutation, G12A mutation, G12R mutation, G12S mutation, G13D mutation and Q61H mutant protein) and KRAS wild-type amplification, thereby having potential value as anti-proliferation, pro-apoptosis and/or anti-invasive drugs in preventing, suppressing and/or treating related tumor diseases.
  • KRAS mutant proteins such as G12C mutation, G12D mutation, G12V mutation, G12A mutation, G12R mutation, G12S mutation, G13D mutation and Q61H mutant protein
  • the compounds of the present invention are expected to be useful for preventing or treating diseases or disorders mediated by or suppressed by RAS mutations, especially KRAS mutant proteins (e.g., G12C mutations, G12D mutations, G12V mutations, G12A mutations, G12R mutations, G12S mutations, G13D mutations and Q61H mutations) or KRAS wild-type amplifications, such as cancer or tumors as defined herein.
  • KRAS mutant proteins e.g., G12C mutations, G12D mutations, G12V mutations, G12A mutations, G12R mutations, G12S mutations, G13D mutations and Q61H mutations
  • KRAS mutant proteins e.g., G12C mutations, G12D mutations, G12V mutations, G12A mutations, G12R mutations, G12S mutations, G13D mutations and Q61H mutations
  • KRAS wild-type amplifications such as cancer or tumors as
  • High mutant protein inhibitory activity The compounds of the present invention, especially the compounds specifically exemplified herein, show proliferation inhibitory activity in RAS-related cells, especially KRAS mutant cells (e.g., G12C mutation, G12D mutation, G12V mutation, G12A mutation, G12R mutation, G12S mutation, G13D mutation and Q61H mutation) and KRAS amplified cell proliferation inhibition experiments, with IC50 values in the range of 0.0001-10 ⁇ M, preferably in the range of 0.0001-1 ⁇ M, as verified in Activity Examples 1, 2, 5-6;
  • KRAS mutant cells e.g., G12C mutation, G12D mutation, G12V mutation, G12A mutation, G12R mutation, G12S mutation, G13D mutation and Q61H mutation
  • KRAS amplified cell proliferation inhibition experiments with IC50 values in the range of 0.0001-10 ⁇ M, preferably in the range of 0.0001-1 ⁇ M, as verified in Activity Examples 1, 2, 5-6;
  • the present invention also provides the following technical solutions in various aspects.
  • the present invention provides a compound of the present invention, preferably a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, for use as a medicament.
  • the present invention provides compounds of the present invention, preferably pharmaceutically acceptable salts or solvates thereof, for use as RAS inhibitors, particularly KRAS mutant proteins (e.g., G12C mutation, G12D mutation, G12V mutation, G12A mutation, G12R mutation, G12S mutation, G13D mutation and Q61H mutant proteins) and KRAS wild-type amplified cell inhibitors.
  • KRAS mutant proteins e.g., G12C mutation, G12D mutation, G12V mutation, G12A mutation, G12R mutation, G12S mutation, G13D mutation and Q61H mutant proteins
  • the present invention provides a compound of the present invention, preferably a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, for use in treating and/or preventing diseases or disorders mediated by RAS protein, specifically KRAS mutant protein (e.g., G12C mutation, G12D mutation, G12V mutation, G12A mutation, G12R mutation, G12S mutation, G13D mutation and Q61H mutant protein) and KRAS amplification or benefiting from RAS mutation, specifically KRAS mutant protein (e.g., G12C mutation, G12D mutation, G12V mutation, G12A mutation, G12R mutation, G12S mutation, G13D mutation and Q61H mutant protein) and KRAS amplification inhibition.
  • KRAS mutant protein e.g., G12C mutation, G12D mutation, G12V mutation, G12A mutation, G12R mutation, G12S mutation, G13D mutation and Q61H mutant protein
  • KRAS mutant protein e.g., G12C mutation, G12D mutation, G12V
  • the present invention provides a method for treating and/or preventing a disease in which RAS protein, specifically KRAS mutant protein (e.g., G12C mutation, G12D mutation, G12V mutation, G12A mutation, G12R mutation, G12S mutation, G13D mutation and Q61H mutant protein) and KRAS amplification promote the occurrence and development of the disease or inhibit RAS mutant protein, specifically KRAS mutant protein (e.g., G12C mutation, G12D mutation, G12V mutation, G12A mutation, G12R mutation, G12S mutation, G13D mutation and Q61H mutant protein) and KRAS amplification will reduce the incidence of the disease, reduce or eliminate the symptoms of the disease.
  • RAS protein specifically KRAS mutant protein
  • KRAS mutant protein e.g., G12C mutation, G12D mutation, G12V mutation, G12A mutation, G12R mutation, G12S mutation, G13D mutation and Q61H mutant protein
  • KRAS mutant protein e.g., G
  • the diseases such as tumors or cancers include, but are not limited to: lung cancer, lung adenocarcinoma, bone cancer, pancreatic cancer, skin cancer, head and neck cancer, skin or intraocular melanoma, uterine cancer, ovarian cancer, rectal cancer, cancer of the anal region, stomach cancer, colon cancer, breast cancer, fallopian tube cancer, endometrial cancer, cervical cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, Hodgkin's disease, esophageal cancer, small intestine cancer, endocrine system cancer, thyroid cancer, parathyroid cancer, adrenal cancer, soft tissue sarcoma, urethral cancer, penile cancer, prostate cancer, chronic or acute leukemia, lymphocytic lymphoma, bladder cancer, kidney or ureter cancer, renal cell carcinoma, renal pelvis cancer, central nervous system tumor (CNS), primary CNS lymphoma, spinal tumor, brain stem glioma or pituitary adenoma.
  • CNS central nervous system tumor
  • the present invention particularly provides a compound of formula (I) or its isomers, their pharmaceutically acceptable salts or solvates which can be used to treat patients suffering from pancreatic cancer, colon cancer, rectal cancer, lung adenocarcinoma, lung cancer, bile duct cancer, endometrial cancer, ovarian cancer, leukemia; most preferably selected from patients suffering from pancreatic cancer, colon cancer, rectal cancer, lung adenocarcinoma, bile duct cancer.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a compound of formula (I) as defined above, preferably a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier or excipient.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be used to treat or prevent diseases mediated by RAS, especially KRAS mutations, such as KRAS G12C, KRAS G12D, KRAS G12V, G12A, G12R, G12S or KRAS G13D mutations, or KRAS Q61H mutations, and KRAS amplification-mediated diseases, such as tumors or cancers.
  • KRAS mutations such as KRAS G12C, KRAS G12D, KRAS G12V, G12A, G12R, G12S or KRAS G13D mutations, or KRAS Q61H mutations
  • KRAS amplification-mediated diseases such as tumors or cancers.
  • composition of the present invention can be formulated by techniques known to those skilled in the art, such as the techniques disclosed in Remington’s Pharmaceutical Sciences, 20th edition.
  • it can be formulated as tablets, powders, capsules, lozenges, granules, solutions, dispersions, suspensions, syrups, sprays, suppositories, gels, emulsions, patches, etc.
  • the composition may contain conventional components in pharmaceutical preparations, such as diluents (such as glucose, lactose or mannitol), carriers, pH adjusters, buffers, sweeteners, fillers, stabilizers, surfactants, wetting agents, lubricants, emulsifiers, suspending agents, preservatives, antioxidants, opacifiers, glidants, processing aids, colorants, flavoring agents, flavoring agents, other known additives and other active agents.
  • diluents such as glucose, lactose or mannitol
  • carriers pH adjusters, buffers, sweeteners, fillers, stabilizers, surfactants, wetting agents, lubricants, emulsifiers, suspending agents, preservatives, antioxidants, opacifiers, glidants, processing aids, colorants, flavoring agents, flavoring agents, other known additives and other active agents.
  • diluents such as glucose, lactose or mannitol
  • the administration and use of the pharmaceutical composition of the present invention are in accordance with good medical practice.
  • Factors to be considered in this context include the specific disorder treated, the specific mammal treated, the clinical condition of the individual patient, the cause of the disorder, the position of the agent delivery, the method of administration, the arrangement of administration, and other factors known to the physician practitioner.
  • the optimal dose level and the frequency of administration of the compounds of the present invention or the pharmaceutical composition can be determined by those skilled in the art through standard tests in the field of pharmaceutical research.
  • compositions of the present invention can be administered in any suitable manner, including oral, topical (including buccal and sublingual), rectal, vaginal, transdermal, parenteral, subcutaneous, intraperitoneal, intrapulmonary, intradermal, intrathecal, inhalation and epidural and intranasal, and for local treatment, intralesional administration can also be adopted.
  • Parenteral infusion includes intramuscular, intravenous, intraarterial, intraperitoneal or subcutaneous administration.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is administered orally.
  • the present invention provides a method for inhibiting RAS, especially KRAS mutations, preferably KRAS G12D mutations, in cells, comprising contacting cells with a compound of the present invention, preferably a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, to inhibit RAS mutations, especially KRAS mutations (e.g., G12C mutations, G12D mutations, G12V mutations, G12A mutations, G12R mutations, G12S mutations, G13D mutations and Q61H mutations) and the activity of KRAS amplification in the cells.
  • KRAS mutations e.g., G12C mutations, G12D mutations, G12V mutations, G12A mutations, G12R mutations, G12S mutations, G13D mutations and Q61H mutations
  • the present invention also provides a method for inhibiting abnormal cell growth in a mammal, comprising administering to the mammal a therapeutically effective amount of a compound of the present invention, preferably a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, or a pharmaceutical composition comprising a compound of the present invention, preferably a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof.
  • the present invention provides the use of a compound of the present invention, preferably a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, or a pharmaceutical composition comprising a compound of the present invention, preferably a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, in the preparation of a medicament for treating and/or preventing diseases mediated by RAS, especially KRAS mutations (e.g., G12C mutation, G12D mutation, G12V mutation, G12A mutation, G12R mutation, G12S mutation, G13D mutation and Q61H mutation) and KRAS amplification.
  • KRAS mutations e.g., G12C mutation, G12D mutation, G12V mutation, G12A mutation, G12R mutation, G12S mutation, G13D mutation and Q61H mutation
  • the abnormal cell growth or diseases mediated by RAS especially KRAS mutations, preferably KRAS G12C, KRAS G12D, KRAS G12V, KRASG12A, KRASG12R, KRASG12S or KRAS G13D, or KRAS Q61H mutations, and KRAS amplification, especially refers to cancer or tumors.
  • the abnormal cell growth or the disease mediated by RAS especially KRAS mutation (such as G12C mutation, G12D mutation, G12V mutation, G12A mutation, G12R mutation, G12S mutation, G13D mutation and Q61H mutation) and KRAS amplification is preferably selected from pancreatic cancer, colon cancer, rectal cancer, lung adenocarcinoma, lung cancer, bile duct cancer, endometrial cancer, ovarian cancer, leukemia; most preferably selected from pancreatic cancer, colon cancer, rectal cancer, lung adenocarcinoma, bile duct cancer.
  • KRAS mutation such as G12C mutation, G12D mutation, G12V mutation, G12A mutation, G12R mutation, G12S mutation, G13D mutation and Q61H mutation
  • KRAS amplification is preferably selected from pancreatic cancer, colon cancer, rectal cancer, lung adenocarcinoma, lung cancer, bile duct cancer, endometrial cancer, ovarian
  • the present invention also provides the use of the compounds of the present invention, preferably their pharmaceutically acceptable salts or solvates, as RAS inhibitors, especially KRAS inhibitors (e.g., G12C mutations, G12D mutations, G12V mutations, G12A mutations, G12R mutations, G12S mutations, G13D mutations, Q61H mutations and KRAS amplification inhibitors) in research. Therefore, the present invention relates to the in vitro use of the compounds of the present invention, preferably their pharmaceutically acceptable salts or solvates as RAS inhibitors, and in particular to the in vitro use of the compounds of the present invention, preferably their pharmaceutically acceptable salts or solvates as RAS inhibitors.
  • KRAS inhibitors e.g., G12C mutations, G12D mutations, G12V mutations, G12A mutations, G12R mutations, G12S mutations, G13D mutations, Q61H mutations and KRAS amplification inhibitors
  • in vitro in this particular context is used in the sense of "outside a living human or animal body", which specifically includes experiments performed with cells, cellular or subcellular extracts and/or biomolecules in an artificial environment, such as aqueous solutions or culture media that may be provided in flasks, test tubes, petri dishes, microtiter plates, etc.
  • the compounds of the present invention may be administered as the sole active ingredient or in combination with other drugs or therapies.
  • the other active agent may be one or more additional compounds of the present invention, or may be a second or additional (e.g., a third) compound that is compatible with the compounds of the present invention, i.e., does not adversely affect each other, or has complementary activity.
  • these active agents may be compounds known to regulate other biologically active pathways, or may be compounds that regulate different components in the biologically active pathways involved in the compounds of the present invention, or even compounds that overlap with the biological targets of the compounds of the present invention.
  • active agents that can be used in combination with the compounds of the invention include, but are not limited to, chemotherapeutic agents, therapeutic antibodies and radiotherapy, such as alkylating agents, antimetabolites, cell cycle inhibitors, mitotic inhibitors, topoisomerase inhibitors, anti-hormonal drugs, angiogenesis inhibitors, cytotoxic agents.
  • chemotherapeutic agents such as alkylating agents, antimetabolites, cell cycle inhibitors, mitotic inhibitors, topoisomerase inhibitors, anti-hormonal drugs, angiogenesis inhibitors, cytotoxic agents.
  • active agents used in combination with the present invention can be administered simultaneously, separately or sequentially with the compounds of the present invention by the same or different routes of administration.
  • the other active agents can be co-administered with the compounds of the present invention in a single pharmaceutical composition, or separately administered in different discrete units with the compounds of the present invention, such as a combination product, preferably in the form of a kit, which can be administered simultaneously or sequentially when administered separately, and the sequential administration can be close or distant in time.
  • a combination product preferably in the form of a kit
  • the sequential administration can be close or distant in time.
  • They can be prepared and/or formulated by the same or different manufacturers.
  • the compounds of the present invention and other active agents can be (i) before the combination product is sent to the physician (e.g., in the case of a kit containing the compounds of the present invention and other drugs); (ii) by the physician himself (or under the guidance of a physician) before administration; (iii) by the patient himself, for example, during the sequential administration of the compounds of the present invention and other active agents, added to the combination therapy.
  • the present invention also provides a kit comprising two or more separate pharmaceutical compositions, at least one of which comprises a compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, and a device for separately containing the compositions, such as a container, a sub-bottle or a separate foil package, such as a blister package for packaging tablets, capsules, etc., and instructions for use.
  • the kit of the present invention is particularly suitable for administering different dosage forms, such as oral dosage forms and parenteral dosage forms, or for administering different compositions at different dosage intervals.
  • the abnormal cell growth involved therein or the diseases mediated by RAS especially KRAS mutation, preferably KRAS G12C, KRAS G12D, KRAS G12V, KRAS G12A, KRAS G12R, KRAS G12S or KRAS G13D, or KRAS Q61H mutation, and KRAS amplification are as defined above for the methods and uses of the present invention.
  • the present invention also provides a method for preparing the compound defined in the present invention.
  • the compounds of the present invention can be prepared by a variety of methods, including the general methods given below, the methods disclosed in the examples, or methods analogous thereto.
  • the process steps for synthesizing the compounds of the invention can be carried out under reaction conditions known per se, including those specifically mentioned, in the absence or customary presence of a solvent or diluent (including, for example, a solvent or diluent which is inert toward the reagents used and in which the reagents used are soluble), in the absence or presence of a catalyst, a condensing agent or a neutralizing agent (for example an ion exchanger, such as a cation exchanger, e.g. in the H + form), depending on the nature of the reaction and/or the reactants at reduced, normal or elevated temperature (e.g.
  • from about -100°C to about 190°C including, for example, from about -78°C to about 150°C, for example from about 0°C to about 125°C, room temperature, from -20 to 40°C or reflux temperature), at atmospheric pressure or in a closed vessel, when appropriate under pressure, and/or under an inert atmosphere, for example an argon or nitrogen atmosphere.
  • the raw materials and intermediates in the synthetic reaction flow can be separated and purified using conventional techniques, including but not limited to filtration, distillation, crystallization, chromatography, etc. If the intermediates and final products are obtained in solid form, purification can also be carried out by recrystallization or aging.
  • the materials can be characterized using conventional methods including physical constants and spectral data.
  • the reaction mixture is post-processed in a conventional manner, for example by mixing with water, separating the phases, and, where appropriate, by chromatographic purification of the crude product.
  • Suitable protecting groups and methods of protection and deprotection using such suitable protecting groups are well known to those skilled in the art; examples thereof can be found in T. Greene and P. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis (3rd ed.), John Wiley & Sons, NY (1999).
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , X, Y, M, W, and t appearing in the structural formula of each intermediate compound are as defined above for the compounds of the present invention, wherein PG represents a suitable protecting group that can be determined by those skilled in the art based on knowledge of organic chemistry.
  • step A compound 1 is subjected to an aromatic nucleophilic substitution reaction to obtain compound 2.
  • Typical aromatic nucleophilic substitution conditions are well known in the art, such as DIEA/THF, etc.
  • step B compound 2 is fluorinated by a halogen exchange reaction under conditions such as KF/DMSO to obtain compound 3. The latter is introduced into a naphthalene compound by a metal-catalyzed coupling reaction in step C to obtain compound 4.
  • step D compound 4 is subjected to an aromatic nucleophilic substitution reaction to obtain compound 5.
  • step E compound 5 is freed from any protecting groups that may be present to obtain a compound of formula I.
  • the removal of the protecting group in step E can be adjusted according to the protecting group carried by the molecule, and can be a one-step reaction or a multi-step reaction.
  • the protecting group PG carried by the compound is TIPS, it can be removed by reagents such as CsF.
  • ACN acetonitrile
  • Boc tert-butoxycarbonyl
  • CDCl 3 deuterated chloroform
  • DCM diichloromethane
  • DIEA or DIPEA N,N-diisopropylethylamine
  • DMF N,N-dimethylformamide
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • DMSO-d 6 hexadeuterated dimethyl sulfoxide
  • EA ethyl acetate
  • EDTA-K2 ethylenediaminetetraacetic acid dipotassium salt
  • EtOH ethanol
  • FCC flash column chromatography
  • g gram); h (hour); HCl (hydrogen chloride); HCl-MeOH or HCl/MeOH (hydrogen chloride methanol solution); HLM (human liver microsome); H 2 O (water); H 2 SO 4 (sulfuric acid); IV (intravenous administration); K 2 CO 3 (potassium carbonate);
  • experimental materials and reagents used in the following examples can be obtained from commercial channels, prepared according to methods in the prior art, or prepared according to methods similar to those disclosed in this application.
  • Step G 7-Chloro-8-fluoro-5-methoxy-2-(methylthio)pyrido[4,3-d]pyrimidin-4(3H)-one
  • Step A Methyl 4-bromo-3,5-difluoro-2-(3-(2,2,2-trichloroacetyl)ureido)benzoate
  • Step C (R)-6-(7-chloro-8-fluoro-2-(methylthio)pyrido[4,3-d]pyrimidin-4-yl)-1-oxa-6-azaspiro[3.5]nonane and (S)-6-(7-chloro-8-fluoro-2-(methylthio)pyrido[4,3-d]pyrimidin-4-yl)-1-oxa-6-azaspiro[3.5]nonane
  • Step A 2-Oxa-6-azabicyclo[5.1.0]octane p-toluenesulfonate
  • Step B (1R,7S)-2-Oxo-6-azabicyclo[5.1.0]octane p-toluenesulfonate and (1S,7R)-2-Oxo-6-azabicyclo[5.1.0]octane p-toluenesulfonate
  • Step C 4-((1R,7S)-2-oxo-6-azabicyclo[5.1.0]oct-6-yl)-7-chloro-8-fluoro-2-(methylthio)-1,3,6-triazine and 4-((1S,7R)-2-oxo-6-azabicyclo[5.1.0]oct-6-yl)-7-chloro-8-fluoro-2-(methylthio)-1,3,6-triazine
  • intermediate B-I The synthesis of intermediate B-I is described in the synthesis of intermediate A-I, using 7-chloro-8-fluoro-5-methoxy-2-(methylthio)pyrido[4,3-d]pyrimidin-4-ol in step A.
  • Step A 4-((S)-1-oxo-6-aza-6-spiro[3.5]nonyl)-7-bromo-2-chloro-6,8-difluoroquinazoline
  • Step A (S,E)-4-(Fluoromethylene)-3-methylpiperidine-1,3-dicarboxylic acid-1-tert-butyl ester-3-methyl ester and (S,Z)-4-(Fluoromethylene)-3-methylpiperidine-1,3-dicarboxylic acid-1-tert-butyl ester-3-methyl ester
  • Step C (S,E)-4-(Fluoromethylene)-1,3-dimethylpiperidine-3-carboxylic acid methyl ester
  • Step A (S)-4-(difluoromethylene)-3-methylpiperidine-1,3-dicarboxylic acid-1-(tert-butyl)-3-methyl ester
  • Step B (3S,4S)-4-(difluoromethyl)-3-methylpiperidine-1,3-dicarboxylic acid-1-(tert-butyl)-3-methyl ester
  • Step D Methyl (3S,4S)-4-(difluoromethyl)-1,3-dimethylpiperidine-3-carboxylate
  • Step A (S,E)-methyl 4-(fluoromethylene)-3-methyl-1-(methyl-d 3 )piperidine-3-carboxylate
  • Step B (S,E)-(4-(Fluoromethylene)-3-methyl-1-(methyl-d 3 )piperidin-3-yl)methanol
  • Step A (S,E)-(4-(Fluoromethylene)-3-methyl-1-(methyl-d 3 )piperidin-3-yl)methylene-d 2 -ol
  • LiAlD 4 powder (271.28 mg, 6.46 mmol) was added to a solution of (S, E)-4-(fluoromethylene)-3-methyl-1-(methyl-d 3 )piperidine-3-carboxylic acid methyl ester (1.10 g, 5.39 mmol) in anhydrous tetrahydrofuran (15 mL). The resulting mixture was stirred at room temperature for 15 min. After the reaction was completed, the reaction solution was quenched with sodium sulfate decahydrate until no bubbles were generated. About 5 g of anhydrous sodium sulfate was added to the reaction solution to remove water.
  • TIPSCl 177 g, 920 mmol
  • a DCM (3 L) solution of 7-fluoro-8-((triisopropylsilyl)ethynyl)naphthalene-1,3-diol CAS: 2621932-34-9, 300 g, 837 mmol
  • imidazole 119 g, 1.76 mol
  • trifluoromethanesulfonic anhydride (326 g, 1.16 mol) was added dropwise to a DCM (4 L) solution of 7-fluoro-8-((triisopropylsilyl)ethynyl)-3-((triisopropylsilyl)oxy)naphthalene-1-ol (397 g, 0.77 mol) and DIPEA (298 g, 2.31 mol). After the addition was complete, the temperature was maintained and stirred for 0.5 h. The reaction was monitored by TLC to be complete. The system was added to water (800 mL), separated, and the aqueous phase was extracted with DCM (1.2 L).
  • Step C (7-Fluoro-8-((triisopropylsilyl)ethynyl)-3-((triisopropylsilyl)oxy)naphthalen-1-yl)boronic acid
  • Step A 6-(7-(8-ethyl-7-fluoro-3-(methoxymethoxy)naphthalen-1-yl)-8-fluoro-2-(methylthio)pyrido[4,3-d]pyrimidin-4-yl)-1-oxa-6-azaspiro[3.5]nonane
  • Step B 6-(7-(8-ethyl-7-fluoro-3-(methoxymethoxy)naphthalen-1-yl)-8-fluoro-2-(methylsulfinyl)pyrido[4,3-d]pyrimidin-4-yl)-1-oxa-6-azaspiro[3.5]nonane
  • Step C 6-(2-(((3S,4S)-4-(difluoromethyl)-1,3-dimethylpiperidin-3-yl)methoxy)-7-(8-ethyl-7-fluoro-3-(methoxymethoxynaphthalen-1-yl)-8-fluoropyrido[4,3-d]pyrimidin-4-yl)-1-oxa-6-azaspiro[3.5]nonane
  • Step D 4-(2-(((3S,4S)-4-(difluoromethyl)-1,3-dimethylpiperidin-3-yl)methoxy)-8-fluoro-4-(1-oxa-6-azaspiro[3.5]nonan-6-yl)pyrido[4,3-d]pyrimidin-7-yl)-5-ethyl-6-fluoronaphthalen-2-ol
  • Step A 4-((S)-1-oxo-6-aza-6-spiro[3.5]nonyl)-7-(8-ethyl-7-fluoro-3-methoxymethoxy-1-naphthyl)-2,6,8-trifluoroquinazoline
  • reaction solution was poured into 30 mL of saturated ammonium chloride solution and extracted with ethyl acetate. The organic phases were combined, washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated to dryness.
  • Step C 4-(2-(((3S,4S)-4-(difluoromethyl)-1-methyl-3-methyl-3-piperidinyl)methoxy)-4-((S)-1-oxa-6-aza-6-spiro[3.5]nonyl)-6,8-difluoro-7-quinazolinyl)-5-ethyl-6-fluoro-2-naphthol
  • Step A 6-(8-fluoro-7-(7-fluoro-8-((triisopropylsilyl)ethynyl)-3-((triisopropylsilyl)oxy)naphthalen-1-yl)-2-(methylthio)pyrido[4,3-d]pyrimidin-4-yl)-1-oxa-6-azaspiro[3.5]nonane
  • Step B 6-(8-fluoro-7-(7-fluoro-8-((triisopropylsilyl)ethynyl)-3-((triisopropylsilyl)oxy)naphthalen-1-yl)-2-(methylsulfinyl)pyrido[4,3-d]pyrimidin-4-yl)-1-oxa-6-azaspiro[3.5]nonane
  • Step C 6-(2-(((3S,4S)-4-(difluoromethyl)-1,3-dimethylpiperidin-3-yl)methoxy)-8-fluoro-7-(7-fluoro-8-((triisopropylsilyl)ethynyl)-3-((triisopropylsilyl)oxy)naphthalen-1-yl)pyrido[4,3-d]pyrimidin-4-yl)-1-oxa-6-azaspiro[3.5]nonane
  • reaction solution was continued to react at -40°C for 1 h. After the reaction was completed by LCMS monitoring, the reaction solution was poured into 20 mL of saturated ammonium chloride solution. The mixture was then extracted with ethyl acetate.
  • Step D 4-(2-(((3S,4S)-4-(difluoromethyl)-1,3-dimethylpiperidin-3-yl)methoxy)-8-fluoro-4-(1-oxa-6-azaspiro[3.5]nonan-6-yl)pyrido[4,3-d]pyrimidin-7-yl)-5-ethynyl-6-fluoronaphthalen-2-ol
  • Step A (2-(1',7-difluoro-7'-(methylthio)-5'-(2-oxa-6-azabicyclo[5.1.0]octan-6-yl)-3-[tri(isopropyl)methoxy]-3',6',8'-triaza-1,2'-binaphthyl-8- ⁇ ethynyl)tri(isopropyl)silane
  • reaction solution was poured into H 2 O (100 mL), extracted with EA (60 mL ⁇ 3), and the collected organic phase was washed with saturated NaCl (20 mL), and the organic solution was concentrated.
  • Step B (2-(1',7-difluoro-7'-(methylsulfinyl)-5'-(2-oxa-6-azabicyclo[5.1.0]octan-6-yl)-3-[tri(isopropyl)methoxy]-3',6'-,8'-triaza-1,2'-binaphthyl-8'-ethynyl)tri(isopropyl)silane
  • Step C [2-(7'-([(3S,4S)-4-(difluoromethyl)-1-methyl-3-methyl-3-piperidinyl]methoxy)-1',7-difluoro-5'-(2-oxa-6-azabicyclo[5.1.0]oct-6-yl)-3-[tri(isopropyl)methoxy]-3',6',8'-triaza-1,2'-binaphthyl-8-yl)ethynyl]tri(isopropyl)silane
  • Step D 7'- ⁇ [(3S,4S)-4-(difluoromethyl)-1-methyl-3-methyl-3-piperidinyl]methoxy ⁇ -8-ethynyl-1',7-difluoro-5'-(2-oxa-6-azabicyclo[5.1.0]octan-6-yl)-3',6',8'-triaza-[1,2'-binaphthyl]-3-ol
  • Step E 7'-([(3S,4S)-4-(difluoromethyl)-1-methyl-3-methyl-3-piperidinyl]methoxy)-8-ethyl-1',7-difluoro-5'-(2-oxa-6-azabicyclo[5.1.0]octan-6-yl)-3',6',8'-triaza-[1,2'-binaphthyl]-3-ol
  • IC50 determination drug preparation Prepare 10 times drug solution in culture medium, add 10 ⁇ L drug solution to each well of the 96-well plate seeded with cells, so that the working concentration is up to 10 ⁇ M, 3 ⁇ dilution, 9 concentrations, and 2 replicates for each drug concentration.
  • the cells in the 96-well plate with drug added are placed at 37°C and 5% CO2 for 7 days, and then CTG detection is performed ( Luminescent Cell Viability Assay (Promega, Cat#G7573)).
  • This experiment evaluated and verified the proliferation inhibitory activity of the compounds of the present invention on KRAS G12D mutant AGS cells.
  • AGS cells (Nanjing Kebai Biotechnology Co., Ltd., catalog number CBP60476, adherent, culture medium (F12K Nutrient Mixture + 10% FBS (GIBCO, Cat#10091-148)) were cultured at 37°C, 5% CO 2 , 95% humidity, 1500/well, cells in logarithmic growth phase were harvested and cell count and cell viability were detected using Countstar automatic cell counter based on the principle of classic trypan blue staining method to ensure that the cell viability was above 90%. Adjust the cell concentration; add 80 ⁇ L of cell suspension to 96-well transparent flat-bottom black wall plates (Greiner, Cat#655090) respectively, and culture the cells in the 96-well plates at 37°C and 5% CO 2 .
  • IC 50 determination drug preparation Prepare 5 times drug solution in culture medium, add 20 ⁇ L drug solution to each well of the 96-well plate seeded with cells, so that the working concentration is up to 10 ⁇ M, 3 ⁇ dilution, 9 concentrations, and 2 replicates for each drug concentration.
  • the cells in the 96-well plate with drug added are placed at 37°C and 5% CO 2 for 3 days, and then CTG detection is performed.
  • Cell survival rate (%) (Lum test drug - Lum culture medium control ) / (Lum cell control - Lum culture medium control ) ⁇ 100%.
  • the pharmacokinetic characteristics of the compounds of the present invention were evaluated by rat Cassette pharmacokinetic experiment (Nagilla R. et al., J. Pharm. Sci. 2011, 100, 3862–3874.).
  • Preparation of standard curve aspirate 20 ⁇ L of 1 mg/mL DMSO stock solution for each compound, transfer it to 900 ⁇ L of 50% methanol working solution, and dilute it step by step to obtain a standard curve working solution with a concentration of 20000, 10000, 5000, 1000, 500, 100, 50, 20, and 10 ng/mL. Then aspirate 5 ⁇ L of the standard curve working solution and mix it with 45 ⁇ L of rat blank plasma to obtain a standard curve with a concentration of 2000, 1000, 500, 100, 50, 10, 5, 2, and 1 ng/mL for quantification of unknown samples.
  • Mass spectrometry software Analyst 1.6.1 was used to draw standard curves and quantify unknown samples.
  • Winnonlin 8.2 was used to calculate pharmacokinetic parameters based on the drug concentrations of unknown samples at each time point.
  • human liver microsomes (Corning, Catalog No. 452161); reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH, MCE, Catalog No. HY-F0003/CS-4998); phenacetin, diclofenac, ⁇ -naphthoflavone, omeprazole and ketoconazole were all purchased from TCI; S-mephenytoin and testosterone were purchased from CAYMAN; midazolam was purchased from Bioreclamation IVT; quinidine was purchased from Damas-beta; sulfaphenazole was purchased from MCE; and bufuralol was purchased from TRC.
  • K-buffer 100 mM potassium phosphate buffer (K-buffer) was prepared with potassium dihydrogen phosphate and dipotassium hydrogen phosphate, and the pH was adjusted to 7.4 to prepare 0.1 M potassium phosphate buffer (K-buffer).
  • NADPH 66.7 mg NADPH was added to 10 mL 0.1 M K-buffer, pH 7.4 to prepare 4 ⁇ NADPH potassium phosphate solution.
  • Each substrate was prepared into 4 times the required concentration with 10 mL 0.1 M K-buffer according to the concentration requirements to obtain 4 ⁇ substrate potassium phosphate solution.
  • HBM human liver microsome
  • 3A4 reacts for 5 minutes; 1A2, 2C9, 2D6 react for 10 minutes; 2C19 reacts for 45 minutes.
  • Example 5 Proliferation inhibition effect of the compounds of the present invention on NCI-H358 cells with KRAS G12C mutation
  • This experiment evaluated and verified the proliferation inhibitory activity of the compounds of the present invention on KRAS G12C mutant NCI-H358 cells.
  • NCI-H358 cells (Nanjing Kebai Biotechnology Co., Ltd., catalog number CBP60136, adherent, culture medium RPMI-1640 + 10% FBS (GIBCO, Cat#10091-148)) were cultured at 37°C, 5% CO 2 , and 95% humidity.
  • 3D cell viability detection harvest cells in the logarithmic growth phase and use a platelet counter to count the cells. Use the trypan blue exclusion method to detect cell viability and ensure that the cell viability is above 90%.
  • IC50 determination drug preparation Prepare 5 times drug solution in culture medium, add 20 ⁇ L drug solution to each well of the 96-well plate inoculated with cells, so that the working concentration is up to 10 ⁇ M, 3 ⁇ dilution, 9 concentrations, and 2 replicates for each drug concentration.
  • the cells in the 96-well plate with drug added are placed at 37°C and 5% CO2 for 5 days, and then CTG detection is performed ( Luminescent Cell Viability Assay (Promega, Cat#G7573)).
  • GraphPad Prism software was used to analyze the data, and the dose-response-inhibition equation was used to fit the data to obtain the dose-effect curve, from which the IC50 value was calculated.
  • Cell survival rate (%) (Lum test drug - Lum culture medium control ) / (Lum cell control - Lum culture medium control ) ⁇ 100%.
  • the compounds of the present invention show satisfactory antiproliferative activity against NCI-H358 human lung cancer cells with KRAS G12C mutation, with an IC50 range of ⁇ 1000 nM, preferably ⁇ 100 nM. Representative activity data are shown in the table below.
  • This experiment evaluated and verified the proliferation inhibitory activity of the compounds of the present invention on the following 6 KRAS-related tumor cell lines.
  • 6 cell lines were obtained from Kangyuan Bochuang Biotechnology (Beijing) Co., Ltd. (NCI-H441, KC-0510; Capan-2, KC-0185; A549, KC-0284; HCT116, KC-0281; NCI-H460, KC-0512; EBC-1, KC-0195; A375, KC-0158); RPMI-1640 (Hyclone, SH30809.01); fetal bovine serum FBS (GIBCO, 10099-141); methylcellulose (SIGMA, 9004-67-5); phosphate buffered saline PBS (Solarbio, P1020-500); CellCounting-Lite 2.0 Luminescent Cell Viability Assay (Nanjing Novozyme, DD1101-04); 96-well transparent flat-bottom black wall plate (Thermo, 165305); multifunctional microplate reader (BMG LABTECH, Plus); CO2 incubator
  • IC 50 determination drug preparation First, prepare a 10mM DMSO stock solution of each compound. The first time, use DMSO as the solvent, dilute 3.16 times, and prepare 9 concentrations of DMSO solutions of different concentrations of each compound. The second time, dilute 1:100 to prepare 10-fold dilutions of each compound, using complete culture medium as the solvent. Finally, add 20 ⁇ L of each compound dilution to each well of the 96-well plate inoculated with cells. The final highest drug concentration is 10 ⁇ M, 9 concentrations, 3.16-fold dilution, and three replicates are set for each concentration.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

提供可用作RAS抑制剂的具有式(I)结构的化合物、包含这类化合物的药物组合物、制备这类化合物的方法以及这些化合物在治疗癌症中的用途。

Description

RAS抑制剂 技术领域
本发明涉及药物化学领域。更具体地，本发明涉及一类可用作RAS抑制剂的具有新结构的化合物、包含这类化合物的药物组合物、制备这类化合物的方法以及这些化合物在治疗癌症或肿瘤中的用途。
背景技术
RAS，即大鼠肉瘤致癌基因同系物，代表一组密切相关的单体球形蛋白，属于GTP酶蛋白家族。具体而言，在正常生理条件下，RAS接受生长因子和各种其他细胞外信号而被激活，负责调节细胞生长、存活、迁移和分化等功能。RAS的这些调节功能是通过GDP结合状态和GTP结合状态之间的转换即“分子开关”来进行(Alamgeer等人，Current Opin Pharmacol.2013,13:394-401)。与GDP结合的RAS是非活性形式，处于休眠或关闭状态，此时信号系统关闭，当其暴露于一些促生刺激时会被活化，例如其可以被鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF)诱导而释放GDP并与GTP结合，结果是RAS被由此“开启”，从而转化为RAS活性形式，其募集并活化各类下游效应子，进行信号传递，能够将细胞表面的信号传送至细胞质中，从而控制众多关键的细胞过程如分化、存活和增殖(Zhi Tan等人，Mini-Reviews in Medicinal Chemistry,2016,16,345-357)。
RAS具有GTP酶活性，其可以裂解GTP的末端磷酸而将其转化为GDP，即将其自身转化为非活性状态。但是RAS的内源性GTP酶活性非常低，将GTP-RAS转化为GDP-RAS需要外源性蛋白GAP(GTP酶激活蛋白)。GAP与RAS相互作用并促进GTP向GDP的转化。因此，任何影响RAS与GAP相互作用或者影响GTP向GDP转化的RAS基因突变，都会导致RAS长时间处于活化状态，由此向细胞持续传达生长和分裂的信号，刺激细胞不断增殖，最终导致肿瘤形成和发展。
在人类肿瘤相关的基因中，存在三种遍在表达的RAS基因H-RAS、K-RAS和N-RAS，其分别编码高度同源的、约21KDa的HRAS、NRAS、KRAS蛋白。1982年，研究人员首次发现RAS在癌细胞系中突变活化(Chang,E.H.等人，Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America,1982,79(16),4848-4852)。随后在不同癌症类型中进行的大型基因组测序研究揭示，RAS蛋白在超过30％的癌症类型中发生突变，尤其在胰腺癌(>90％)、结肠癌(45％)和肺癌(35％)中的突变率最高。转基因和基因工程小鼠模型也已经揭示，突变的RAS蛋白足以驱动并引发多种类型的癌症，且RAS致癌基因对于多种癌症类型的肿瘤的维持和进展也是至关重要的，例如在RAS突变癌症细胞系和癌症动物模型中，已经显示RNA干预能够减缓肿瘤的生长。这些研究使得RAS肿瘤蛋白成为药学领域中广为接受的非常有吸引力的抗癌药物靶点。
研究表明，RAS突变最常见于KRAS，约85％的RAS突变驱动的癌症中可以观察到KRAS突变；绝大部分RAS突变发生在密码子G12、G13和Q61上，其中约80％的KRAS突变又发生于密码子12的甘氨酸处，例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变及Q61H突变等。KRAS突变常见于胰腺癌、肺腺癌、结直肠癌、胆囊癌、甲状腺癌和胆管癌，也可见于25％的非小细胞肺癌患者中(McCormick,F.等人，Clinical Cancer Research 21(8),1797-1801,2015)。因此，KRAS突变蛋白已经成为Ras药物靶点研究中最重要的分支，对于其抑制剂的开发也被视为抗癌/肿瘤药物开发中非常具有前景的研发方向。
但是，过去几十年针对RAS的药物研发显示，由于RAS蛋白表面光滑，缺少明显的用于结合小分子抑制剂的沟状或口袋装结构，而且其对鸟嘌呤底物的亲和力非常高(皮摩尔级)，使得其小分子抑制剂的开发陷入了难以解决的困境，由此RAS在业内长久以来被认为是“不可成药的”靶点。同时，目前仍然非常需要作为KRAS抑制剂的更多结构类型或模式的化合物，提供更多的治疗选择，或者提供相对于现有KRAS抑制剂而言进一步改进的抑制活性，从而为临床提供更强效的治疗药物。
本发明解决了这些和其他需求。本发明提供了具有RAS蛋白抑制活性的新结构抑制剂化合物。这些本发明化合物因具有改进的结构模式，相比现有技术已有的RAS蛋白抑制剂，具有增强的抑制RAS蛋白的活性以及对相关肿瘤抑制活性，具有良好的药代动力学性质，从而具有良好的成药性，比如能够以方便的方式给药后更容易在体内吸收，且毒副作用减少，具有改善的耐药性和安全性，以及降低的药物相互作用风险。
发明简述
本发明提供了本文如下所定义的具有结构式(I)的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物：
其中各个基团的定义如发明详述部分所定义。
本发明还提供了包含本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物以及任选的药学可接受的赋形剂或载体的药物组合物。
本发明还提供了用作药物的本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物。
本发明还提供了本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，用作RAS蛋白、尤其是KRAS突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变及Q61H突变蛋白)及KRAS扩增型细胞的抑制剂。
本发明还提供了用于治疗和/或预防由RAS蛋白、尤其是KRAS突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变及Q61H突变蛋白)及KRAS扩增介导的疾病的本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，或包含其的药物组合物。
本发明还提供了本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物、或包含其的药物组合物用于治疗和/或预防由RAS蛋白、尤其是KRAS突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变及Q61H突变蛋白)及KRAS扩增介导的疾病的用途。
本发明还提供了本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物、或包含其的药物组合物在制备用于治疗和/或预防由RAS蛋白、尤其是KRAS突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变及Q61H突变蛋白)及KRAS扩增介导的疾病的药物中的用途。
本发明还提供了治疗和/或预防由RAS蛋白、尤其是KRAS突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变及Q61H突变蛋白)及KRAS扩增介导的疾病的方法，包括向有需要的对象施用治疗有效量的本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物、或包含其的药物组合物。
本发明还提供了一种治疗肿瘤或癌症的方法，其包括向有需要的患者施用本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物、或包含其的药物组合物。
本发明还提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物在研究中作为RAS抑制剂、特别是作为抑制KRAS突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变及Q61H突变蛋白)及KRAS扩增的研究工具化合物的用途。
本发明还提供了药物组合，其包含本发明化合物其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物和一种或多种其他药物活性剂。
本发明还提供了用于制备本发明化合物的方法。
发明详述
定义
除非另外指出，说明书和权利要求书中使用的各个术语具有以下所示含义。在特定的术语或短语没有特别定义的情况下，应该按照本领域的普通含义理解。在冲突的情况下，以本说明书(包括定义)为准。
在本文所公开的化合物的化学结构和名称发生冲突的情况下，以化学结构为准。
本文所用的术语“RAS突变”或“RAS突变蛋白”是指其中一个或多个密码子发生突变的RAS基因所编码和表达的蛋白，典型地包括但不限于RAS的密码子12位的甘氨酸、密码子13位的甘氨酸或密码子61位的谷氨酰胺发生突变的RAS蛋白，例如突变的HRAS、NRAS或KRAS。这些残基位于RAS的活性位点，其突变可损害RAS的固有的或GAP-催化的GTP酶活性，导致与GTP结合的RAS持续存在。
对本发明的目的而言，“RAS突变”或“RAS突变蛋白”以及描述抑制活性时所针对的“RAS”可互换使用，且一般地是指突变的HRAS、NRAS或KRAS，例如但不限于KRAS-G12C(密码子G12处甘氨酸向半胱氨酸的突变)、KRAS-G12D(密码子G12处甘氨酸向天冬氨酸的突变)、HRAS-G12D、NRAS-G12D、KRAS-G12V(密码子G12处甘氨酸向缬氨酸的突变)、KRAS-G13D(密码子G13处甘氨酸向天冬氨酸的突变)；特别地是指KRAS突变蛋白，更特别地是指KRAS-G12C突变蛋白、KRAS-G12D突变蛋白、KRAS-G12V突变蛋白、G12A突变蛋白、G12R突变蛋白、G12S突变蛋白、KRAS-G13D突变蛋白及Q61H突变蛋白。
本文所用的术语“治疗”是指给患有所述疾病、或者具有所述疾病的症状的受试者、例如哺乳动物、例如人施用一种或多种本文所述的本发明化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，用以治愈、缓解、减轻或影响所述疾病或所述疾病的症状。优选地，治疗是治愈性或改善性的。
本文所用的术语“预防”在本领域中是众所周知的，是给怀疑患上或易感于如本文所定义的Ras介导的疾病、尤其是癌症或肿瘤的受试者、例如哺乳动物、例如人施用一种或多种本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，使得罹患所定义疾病的风险降低，或预防疾病的发作。术语“预防”包含在诊断或确定任何临床和/或病理症状以前使用本发明的化合物。
本文所用的术语“抑制”和“降低”或这些术语的任何变体，是指生物活性剂的能力，其通过直接或间接与靶点相互作用，降低目标靶点的信号传导活性，且是指目标靶点活性的任何可以测量的减少或完全抑制。例如，与正常情况相比，可以是活性(例如KRAS活性)降低量约、至多约或至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或更多、或其中可衍生的任何范围。
本文所用的术语“RAS介导的疾病”是指RAS对所述疾病的发生和发展起到促进作用，或抑制RAS将降低疾病的发生率、减少或消除疾病病状的疾病。对于本发明而言，“RAS介导的疾病”优选指的是KRAS介导的疾病，更进一步优选KRAS突变介导的癌症或肿瘤。
本文所用的术语“癌症”或“肿瘤”是指异常的细胞生长和增殖，无论是恶性的还是良性的，和所有的癌前期细胞和癌细胞和组织。对本发明的各个方面而言，所述癌症或肿瘤包括但不限于肺腺癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区域癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾脏或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统肿瘤(CNS)、原发性CNS淋巴瘤、脊柱肿瘤、脑干神经胶质瘤或垂体腺瘤。
对于本发明的各个方面，优选地，所述癌症或肿瘤与RAS、尤其是KRAS突变及扩增相关，包括但不限于上述肿瘤类型以及其优选范围。本发明特别优选的肿瘤包括肺癌、肺腺癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、子宫内膜癌、胆管癌、白血病和卵巢癌。
本文所用的术语“受试者”、“个体”或“患者”是指脊椎动物。在某些实施方案中，脊椎动物为哺乳动物。哺乳动物包括但不限于农场动物(如牛)、运动动物、宠物(如豚鼠、猫、狗、兔子和马)、灵长类动物、小鼠和大鼠。在某些实施方案中，哺乳动物是人类。
本文所用的术语“治疗有效量”是指通常足以对需要治疗的所述“RAS介导的疾病”如癌症或肿瘤患者产生有益治疗效果的量或剂量。本领域技术人员可以通过常规方法、结合常规影响因素来确定本发明中活性成分的有效量或剂量。
本文所用的术语“药物组合”是指本发明化合物可与其它活性剂组合用于实现本发明的目的。所述其他活性剂可以是一种或多种另外的本发明化合物，或可以是与本发明化合物相容即不会相互不利影响、或具有互补活性的第二种或另外的(例如第三种)化合物，例如这些活性剂已知调节其他生物活性通路，或者调节本发明化合物所涉及生物活性通路中的不同组分，或甚至是与本发明化合物的生物靶点相重叠。这类活性剂以达到预期目的的有效量适宜地组合存在。所述其他活性剂可以与本发明化合物在单一药物组合物中共同施用，或与本发明化合物处于不同的离散单元中分别施用，当分别施用时可以同时或相继进行。所述相继施用在时间上可以是接近或隔远的。
本文所用的术语“药学上可接受的”意指当向动物例如人类适量施用时不会产生不利、过敏或其它不良反应的分子实体和组合物。
本文所用的术语“药学上可接受的盐”是指保留了母体化合物的生物学有效性和性质并且在生物学或其它方面不是不可取的那些盐，包括酸加成盐和碱加成盐。“药学上可接受的酸加成盐”可由具有碱性基团的化合物与无机酸或有机酸形成，无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸等，有机酸可以选自脂族、脂环族、芳香族、芳脂族、杂环类、羧酸类和磺酸类有机酸，如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、天冬氨酸、抗坏血酸、谷氨酸、邻氨基苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、双羟萘酸、苯乙酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。“药学上可接受的碱加成盐”包括衍生自无机碱如钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰、铝的盐等的那些，以及衍生自药学上可接受有机无毒碱的盐，包括但不限于伯胺、仲胺和叔胺、取代铵，包括天然存在的取代胺、环状胺和碱性离子交换树脂，如氨、异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、二乙醇胺、2-二甲氨基乙醇、2-二乙氨基乙醇、氨丁三醇、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、海巴明、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、三乙醇胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺树脂等。
本文所用的术语“异构体”是指化合物在结构上可能存在的任何立体异构体、对映体混合物、包括外消旋物、非对映异构体混合物、几何异构体、阻旋异构体和/或互变异构体。所述异构体立体化学的确定和分离方法为本领域技术人员所熟知(S.P.Parker,Ed.,McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York；和Eliel,E.和Wilen,S.,“Stereochemistry of Organic Compounds”,John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994)。
本发明的某些化合物包含至少一个不对称中心，且由此产生立体异构体，故本发明涵盖本文所定义化合物的所有可能的异构体形式，及其药学可接受的盐或溶剂合物，另有指示除外。
本文化合物结构式或结构片段中使用的表示立体中心即手性中心的绝对构型，相应地在本发明所提供的化合物或中间体的命名中以R或S表示关于该手性中心的绝对构型；在有些本发明化合物定义中也可以使用轴手性表示化合物构型，这些构型的确定使用本领域技术人员所熟知的Cahn-Ingold-Prelog规则。
应当理解的是，当本领域技术人员基于本文所示化合物结构能够判断该化合物存在且仅存在一对手性异构体、且判断基于本领域常规方法可以容易地拆分时，则本文对该化合物外消旋体的公开(无论是结构式还是化学名)，均应视为已经分别公开了该化合物的各个异构体。
本文所涉及结构片段中使用的指示与其交叉的键是结构片段连接于分子其余部分的键。
除非另有定义，本文所涉及环状结构片段中以横跨化学键示出的取代基，例如中的-(R3)m，是指该所定义数量的取代基可以取代在环中可行的一个或多个位点，其中m为0时意味着环上不携带非H取代基，但环原子上仍携带化学价计量的氢原子。
本发明的化合物包括本发明化合物的未标记形式及其同位素标记形式。化合物的同位素标记形式是仅在一个或多个原子被相应的同位素富集原子替换不同的化合物。可以并入本发明化合物中的同位素的实例包括例如氢、碳、氮、氧、氟、氯和碘的同位素，例如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18O、17O、35S、18F、37Cl和125I。此类同位素标记的化合物可用作例如生物测定中的探针、分析工具或用作治疗剂。在某些实施方案中，本发明的化合物以未标记的形式提供。
在一些实施方案中，本发明的化合物以未标记的形式提供。在另一些实施方案中，本发明的化合物以同位素标记的形式提供，例如以其中一个或多个H原子被氘原子(D)替代的化合物，例如片段中，两个R2各自独立地可以是D，或可以是被D取代的所定义的各个基团；R4可以是被D取代的所定义的各个基团；例如作为R7所定义的各个基团各自独立地可以任选被一个或多个同位素取代，例如被D取代。
本文所用的术语“溶剂合物”是指包含化学计量的或非化学计量的溶剂的化合物的溶剂加成形式，包括本发明化合物的任何溶剂化形式，包括例如与水的溶剂合物，例如水合物，或与有机溶剂的溶剂合物，例如甲醇、乙醇或乙腈，即分别作为甲醇化物、乙醇化物或乙腈化物；或为任何多晶型物的形式。应当理解的是，本发明化合物的这类溶剂合物还包括本发明化合物的药学上可接受盐的溶剂合物。
本文所用的术语“代谢物”意指化合物经由体内代谢生成的产物。这类产物可例如源自所施用化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、去酯化、酶促剪切等。代谢物产物的鉴定和分析以本领域技术人员熟知的方式进行。
本文所用的术语“药学上可接受的赋形剂”或“药学上可接受的载体”是指一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，适合于人使用，且具有足够的纯度和足够低的毒性，其实例包括但不限于纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、醋酸纤维素等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如吐温类)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂等。
本文所用的术语“卤素”或“卤代”意指F、Cl、Br或I。此外，本文定义基团时使用的术语“被卤素取代的”基团旨在包括单卤代或多卤代基团，其中一个或多个相同或不同的卤素取代相应基团中的一个或多个氢。
本文所用的术语“烷基”意指由碳原子和氢原子组成的直链或支链的单价饱和烃基团。一般地，烷基具有1-10个，例如1至8个、1至6个、1至5个、1至4个、1至3个或1至2个碳原子。例如，如本文中所使用，术语“C1-6烷基”指具有1至6个碳原子的直链或支链的饱和烃基团，进一步优选“C1-3烷基”；在一些实施方案中，为了定义的方便而使用的术语“C0-6烷基”指该烷基不存在或为具有1至6个碳原子的直链或支链的饱和烃基团；其实例例如甲基、乙基、丙基(包括正丙基和异丙基)、丁基(包括正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基)、戊基(包括正戊基、异戊基、新戊基)、正己基、2-甲基戊基等。
本文化合物定义中作为单独的取代基的“烷基”如-C1-6烷基或作为取代基一部分的“烷基”，例如-OC1-6烷基中的烷基，是任选被取代的，其中存在时一个或多个(例如1、2、3、4或5个)氢原子任选被所定义的取代基替代，当取代基多于一个时，各自可以相同或不同，并且可以位于相同或不同的C原子上，所述取代基选自以下一种或多种：D、OH、NH2、卤素、CN、-O-C1-6烷基、-O-CON(H或任选被卤素取代的-C1-6烷基)2，其中的-C1-6烷基进一步任选被卤素或D取代，任选取代的烷基的实例包括但不限于-CH2Cl、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CCl3、-C2F5、-C2Cl5、-CH2CH2F、-CH2CHF2、-CH2CF3、-CH2CH2CH2F、-CH2CH2CHF2、-CH2CH2CF3、-C(CH3)2CF3、-CF(CF3)2、-CH2CN、-CH2CH2CN、-CH2D、-CHD2、-CD3、-CH2CD3、-CH2-OCH3、-CH2CH2-OCH3、-CH2-OCF3、-CH2-OCD3、-CH2-OCH2CH3、-CH2CH2-O-CH3、-CH2CH2-O-CH2CH3、-CH2-OCONH2、-CH2-OCONH(CH3)、-CH2-OCON(CH3)2、-CH2-OCON(CH2CH3)(CH3)、-CH2-OCON(CH2CH3)(CF3)。
本文所用的术语“亚烷基”意指由碳原子和氢原子组成的直链或支链的二价饱和烃基团，优选直链二价饱和烃基团。一般地，亚烷基具有1至10个，例如1至8个、1至6个、1至5个、1至4个、1至3个或1至2个碳原子。例如，如本文中所使用，术语“-C1-3亚烷基-”或“-(CH2)n-，其中n为0至3的整数”指该亚烷基不存在或是具有1至3个碳原子的直链或支链的二价饱和烃基团；术语“-C1-6亚烷基-”指具有1至6个碳原子的直链或支链的二价饱和烃基团。除非特别定义，本文化合物定义中的“亚烷基”任选被取代，例如被一个或多个D、OH、NH2、卤素、CN或任选被卤素取代的-C1-6烷基或-O-C1-6烷基取代。
本文所用的术语“烷氧基”意指通过氧原子与分子其余部分相连的本文定义的烷基。具体地，烷氧基具有1-10个，例如1至8个、1至6个、1至5个、1至4个、1至3个或1至2个碳原子。例如，如本文中所使用，术语“C1-6烷氧基”或“-O-C1-6烷基”指通过氧原子与分子其余部分相连的具有1至6个碳原子的直链或支链的饱和烃基团，进一步优选“-C1-3烷氧基”或“-O-C1-3烷基”，其实例例如-O-甲基、-O-乙基、-O-丙基(包括-O-正丙基和-O-异丙基)、-O-丁基(包括-O-正丁基、-O-异丁基、-O-仲丁基或-O-叔丁基)、-O-戊基(包括-O-正戊基、-O-异戊基、-O-新戊基)、-O-正己基、2-甲基戊基-O-等。除非特别定义，本文化合物定义中作为取代基的“烷氧基”任选被取代，即其中的烷基部分任选被取代，例如被一个或多个D、OH、NH2、卤素、CN或任选被卤素或D取代的-O-C1-6烷基取代，实例包括但不限于-OCH3、-OCH2CH3、-OCD3、-OCH2CD3、-OCH2CH2CN、-OCH2CH2CH3、-OCH(CH3)(CH3)、-OCH2Cl、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、-OCH2CH2F、-OCH2CHF2、-OCH2CF3、-OCH2CH2CH2F、-OCH2CH2CHF2、-OCH2CH2CF3、-O-CH2-OCH3、-OCH2CH2-OCH3、-OCH2-OCF3、-OCH2-OCD3、-OCH2-OCH2CH3、-OCH2CH2-O-CH2CH3。
本文所用的术语“烯基”指由碳原子和氢原子组成的包含至少一个双键的直链或支链的不饱和烃基团。具体地，烯基具有2-8个，例如2至6个、2至5个、2至4个或2至3个碳原子。例如，如本文中所使用，术语“C2-6烯基”指具有2至6个碳原子的直链或支链的烯基，进一步优选“C2-4烯基”，例如乙烯基、丙烯基、烯丙基、丁烯基、戊烯基等，烯基中与分子其余部分相连的碳原子可以是饱和的，也可以是烯键碳原子。
本文所用的术语“炔基”指由碳原子和氢原子组成的包含至少一个叁键的直链或支链的不饱和烃基团。具体地，炔基具有2-8个，例如2至6个、2至5个、2至4个或2至3个碳原子。例如，如本文中所使用，术语“C2-6炔基”指具有2至6个碳原子的直链或支链的炔基，进一步优选“C2-4炔基”，例如乙炔基、丙炔基、炔丙基、丁炔基等，炔基中与分子其余部分相连的碳原子可以是饱和的，也可以是炔键碳原子。
除非特别定义，本文化合物定义中作为取代基的“烯基”和“炔基”任选被取代，取代基可选自以下一种或多种：D、卤素、CN、OH、-O-C1-6烷基、-O-CON(H或任选被卤素取代的-C1-6烷基)2，其中的烷基进一步任选被卤素或D取代。实例包括但不限于-CH＝CH2、-CH＝CHF、-CH＝CF2、-CF＝CF2、-CH＝CHCN、-CH2CH＝CH2、-CH2CH＝CHCN、-CH2CH＝CF2、-CH2CF＝CF2、-C(CH3)＝CH2、-C(CF3)＝CH2、-C(CH3)＝CF2、-CH＝CHCF3、-CH＝CHCH2O-CH3、-C(CH3)＝CHCF3、-CH2CH＝CHCF3、-C≡C(CF3)、-CH2C≡C(CF3)、
如本文中所使用的术语“环烷基”意指具有指定环碳原子数的单环、稠合多环、桥接多环或螺环饱和单价烃环结构。环烷基可具有3至12个碳原子(即C3-12环烷基)，例如3至10个、3至8个、3至7个、3至6个、3至4个、5至6个碳原子。适合的环烷基的实例包括但不限于单环结构，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基；或多环(例如双环)结构，包括螺环、稠合或桥连系统，如双环[1.1.1]戊基、双环[2.2.1]庚基、螺[3.4]辛烷基、双环[3.1.1]己烷基、双环[3.1.1]庚基或双环[3.2.1]辛基等。本文化合物定义中所使用的术语“C3- 6环烷基”或“C3-4环烷基”是指单环环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
除非特别定义，本文化合物定义中作为取代基的“环烷基”如-C3-6环烷基或螺-C3-4环烷基或作为取代基一部分的“环烷基”如-(CH2)n-C3-6环烷基中的环烷基，任选被取代，取代基可选自以下一种或多种：D、OH、NH2、卤素、CN、任选被卤素或D取代的-C1-6烷基、任选被卤素或D取代的-O-C1-6烷基、-O-CON(H或任选被卤素取代的-C1-6烷基)2，其中的烷基进一步任选被卤素或D取代。任选取代的-C3-6环烷基、-(CH2)n-C3-6环烷基的实例包括但不限于:
其中*表示螺环烷基中与分子其余部分连接的原子。
本文所用的术语“杂环烷基”意指包括一或多个(例如1、2、3或4个)独立地选自O、N、P、Se及S的杂原子及指定环原子数的单环、稠合多环、螺环或桥接多环非芳族饱和或不饱和环结构，或其N-氧化物，或其S-氧化物或S-二氧化物。杂环烷基可具有3至12个环成员(可称为3-12元杂环基)，例如3至10个环成员，3至8个环成员，3至7个环成员，4至7个环成员、4至6个环成员、5至7个环成员、5至6个环成员、6至10个环成员、6至12个环成员，例如4至7元单环杂环烷基如4-7元单环饱和杂环烷基、4-7元单环不饱和杂环烷基；或6至12元多环杂环烷基，如6-10元螺杂环烷基、6-10元稠合杂环烷基和6-10元桥接杂环烷基。杂环烷基通常含有至少1个、至多4个(例如1个、2个、3个或4个)杂原子，例如含有1至3个独立选自N、O、P、Se和S(优选O、N、S)的杂原子的4-7元单环杂环烷基如4-7元单环饱和杂环烷基或4-7元单环不饱和杂环烷基，例如含有1或2个N原子的4-7元单环饱和杂环基或桥接杂环烷基，或含有1至4个(优选1至3个、更优选1至2个)独立地选自N、O、P、Se和S(优选O、N、S)的杂原子的6-12元多环杂环烷基(优选6-10元多环杂环烷基)，例如含有1-3个N原子和0-1个O原子的6-10元螺杂环烷基、稠合杂环烷基或桥接杂环烷基，例如这些示例的杂环烷基可以是饱和的，也可以是不饱和的。适合的杂环烷基的实例包括但不限于氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁基、二氢吡咯基、吡咯烷基(例如1-吡咯烷基、2-吡咯烷基及3-吡咯烷基)、二氢吡唑基、吡唑烷基、二氢咪唑基、咪唑烷基、三氮唑基的部分或全部氢化形式、四氮唑的部分或全部氢化形式、呋喃基的部分或全部氢化形式如二氢呋喃基、四氢呋喃基(例如1-四氢呋喃基、2-四氢呋喃基及3-四氢呋喃基)、噻吩基的部分或全部氢化形式如二氢噻吩基、四氢噻吩基(例如1-四氢噻吩基、2-四氢噻吩基及3-四氢噻吩基)、噻唑基或异噻唑基的部分或全部氢化形式如二氢噻唑基、噻唑烷基、噻二唑基或其部分或全部氢化形式、噁唑基或异噁唑基的部分或全部氢化形式如二氢噁唑基、噁唑烷基、噁二唑基或二噁唑基的部分或全部氢化形式如、吡啶基的部分或全部氢化形式如二氢吡啶基、哌啶基(例如1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基及4-哌啶基)、吡喃基的部分或全部氢化形式如二氢吡喃基、四氢吡喃基(例如4-四氢吡喃基)、二氢噻喃基、四氢噻喃基(例如4-四氢噻喃基)、吗啉基(例如吗啉代)、硫吗啉基、二噁英基、二噁烯基、二噁烷基、哌嗪基、氮杂基的部分或全部氢化形式如氮杂环庚烷基、二氮杂基的部分或全部氢化形式如二氮杂环庚烷基例如1,4-二氮杂环庚基、氧氮杂基的部分或全部氢化形式如氧氮杂环庚烷、3,6-二氮杂-双环[3.1.1]庚基或3-氮杂-双环[3.2.1]辛基、吲哚基或异吲哚基的部分或全部氢化形式等。杂环烷基中与化合物其余部分连接的原子可以是碳原子，也可以是杂原子，只要化学上可行即可。只要与分子其余部分相连的环为非芳族饱和或不饱和环即可，即便与该环稠合的环为芳族，该稠合环也在本文“杂环烷基”的范畴内。在本发明优选的实施方案中，杂环烷基是饱和的。
本文在定义环状基团时所用的术语“饱和”意指含有至少一个(优选1至4个、更优选1至3个)选自N、O、S、P和Se的杂原子的单环或多环饱和环，示例包括氮丙啶基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、咪唑烷基、吗啉基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、四氢呋喃基、四氢-2H-吡喃基、四氢噻吩基、噻唑烷基、噁唑烷基等。
本文在定义环状基团时所用的术语“不饱和”意指单环或多环非芳族部分不饱和的环基团。不饱和环的示例包括但不限于以下各芳族环的部分氢化形式：咪唑基、噻吩基、吡咯基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、噁二唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、三唑并吡啶基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、亚甲二氧苯基、亚乙二氧苯基、二氢苯并呋喃基、1,2,3,4-四氢异喹啉基等。
本文所用的术语“羟基”是指-OH基团。
本文所用的术语“氰基”是指-CN基团。
本文所用的术语“氨基”是指-NH2。
本文化合物定义中还存在被取代的氨基，例如-NHC1-6烷基、-N(C1-6烷基)2，其中的-C1-6烷基可进一步任选被取代，如各个基团定义下所示。在一些实施方案中，取代的氨基为在-CON(Rb)2中的-N(Rb)2，其中的Rb为任选被卤素取代的-C1-6烷基。取代的氨基的实例包括但不限于-NH2、-NH-CH3、-NH-CH2CH3、-NH-CF3、-NH-CH2CF3、-NH-CH2CN、-NH-CH2CH2CN、-N(CH3)2、-N(CH3)(CH2CH3)、-N(CH3)(CF3)、-N(CH3)(CH2CF3)、-N(CH3)(CH2CH2CN)、-NHCH2-OCH3、N(CH3)(CH2CH2-OCH3)。
本文所用的术语“任选取代的”，除非另外指出，表示基团可以是未取代的或被一个或多个(例如1、2、3、4或5或更多，或其中可衍生的任何范围)对该基团所列的取代基取代，其中当存在多个取代基时，各个取代基可以相同或不同。在一个实施方案中，任选取代的基团具有1个取代基。在另一个实施方案中，任选取代的基团具有2个相同或不同的取代基。在另一个实施方案中，任选取代的基团具有3个相同或不同的取代基。在另一个实施方案中，任选取代的基团具有4个相同或不同的取代基。在另一个实施方案中，任选取代的基团具有5个相同或不同的取代基。
在本文化合物定义中，饱和碳原子携带的H可以是未示出的，本领域技术人员可以容易地判断目标原子所携带的H或非H取代基的数量，例如结构片段中，当m为1且R3非H时，其所连接的环碳原子存在一个未示出的H或当R3为＝C(Rc)2时不存在H；当m为2且R3非H时，其所连接的环碳原子不携带H原子，其携带的两个R3可以分别以单键连接于所示环碳原子，或一起与所示碳原子形成螺环。
在本文化合物定义中，对环原子所定义的CH2或NH并不局限于未取代状态，其实际存在形式根据对该环基团的整体定义来确定。例如结构片段中，X可为CH2，但是根据对该片段的整体定义，还包括例如R8和R8’均连接于为CH2的X并一起形成螺环的情形，例如R8和R8’之一连接于为CH2的X、另一个连接于相邻环原子且二者一起形成稠合环的情形，例如R8和R8’之一连接于为CH2的X、另一个连接于非相邻环原子且二者一起形成环内桥接的情形，以及被对该片段所定义的取代基取代的情形。再例如，结构片段中，各个G变量均定义为可CH2或NH，根据对该片段的整体定义，这包括二者未被取代的情形，也包括CH2或NH各自被所定义的取代基取代的情形，例如
本文定义的许多基团都是任选被取代的，该定义部分所给出的取代基列表仅仅是示例性的，不意欲限制本说明书和权利要求书中其他部分所定义的取代基。
除非另有规定，本发明化合物定义中的Cn-n+m或Cn-Cm包括n至n+m个碳的各种情况，例如C1-6包括C1、C2、C3、C4、C5和C6，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如C0-6包括C1、C2、C3、C4、C5、C6、C0-1、C0-2、C0-3、C0-4、C0-5、C1-2、C1-3、C1-4、C2-3等，C1-6包括C1-2、C1-3、C1-4、C2-6、C3-6等。同理，本发明化合物定义中的n元至n+m元表示环原子数为n至n+m个，例如3-12元环包括3元环、4元环、5元环、6元环、12元环等，也包括n至n+m元的任何一个范围，例如3-12元环包括3-6元环、3-8元环、3-9元环、4-10元环、4-7元环、4-5元环、5-6元环、5-7元环、5-8元环、5-9元环、6-7元环、6-8元环、6-10元环和6至12元环等。
有机合成领域普通技术人员均理解，本发明化合物结构上携带的各个基团，无论是未取代的还是被所定义的各种取代基所取代，均以使得化合物分子在化学上可行且稳定为前提，其中取代基的类型和数量由基团中原子的数量和化学价决定。
如在本说明书和随后的权利要求书中所使用的，词语“包含”和该词语的变体如“包括”和“含有”，意指“包括但不限于”，并且不意图排除例如其他添加剂、成分、整数或步骤。当将要素描述为包括多个成分、步骤或条件时，应理解的是，该要素也可以被描述为包括该多个成分、步骤或条件的任何组合，或“由多个或组合的成分、步骤或条件组成”或“基本上由多个或组合的成分、步骤或条件组成”。
应理解，当本文描述本发明化合物、包含其的药物组合物、药物组合、药盒以及相关的用途和方法时所涉及的剂量，是基于游离形式的重量，不包括其任何盐、水合物或溶剂化物，除非说明书中指出该剂量基于盐、水合物或溶剂化物的重量。
本发明解决的问题
如上所述，能够抑制RAS蛋白、尤其KRAS突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变蛋白)及KRAS野生扩增型细胞的化合物能够用于治疗或预防由所述蛋白介导的疾病(例如癌症或肿瘤)。因此，在该领域，已经开发出多种结构类型的RAS抑制剂。但是，现有的KRAS抑制剂仍然存在需要解决的问题，包括例如很多抑制剂的抗肿瘤活性不能令人满意、或具有毒副作用导致耐药性差、或药代动力学性质不足以允许通过方便的方式给药即“成药性”差，或因为对细胞色素P450酶系的抑制作用而导致不期望的药物相互作用，等等。进一方面，即便是对于具有良好抗肿瘤活性的抑制剂，人们仍期望能够通过结构优化，来进一步提高其在体内对靶蛋白的选择性抑制活性、进一步改进其耐药性(更少的毒副作用或更好的安全性)且进一步改善其药代动力学性质，以便为临床上提供更多更好的治疗选择。
解决问题的方法
本发明人通过广泛且深入的研究，已经开发出一组对RAS蛋白、尤其KRAS突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变蛋白)及KRAS扩增细胞具有明显抑制活性的化合物。本发明人通过结构改造和活性验证，发现在所述KRAS抑制剂结构的苯并嘧啶环及喹唑啉的若干特定位点，进行特定类型的取代基修饰，所实施的若干取代位点和取代基类型的特定组合，获得了相比现有技术抑制剂进一步提高的对对KRAS突变蛋白的抑制活性，而且这样修饰得到的化合物具有良好的安全性，具有减少的药物相互作用风险，还具有良好的、甚至是进一步改善的药代动力学性质，使得能够以方便的方式给药。
本发明主要提供有效的RAS抑制剂、具体地KRAS抑制剂(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变、Q61H突变及KRAS扩增型抑制剂)化合物；含有此类化合物作为活性成分的药物组合物；作为药物、用于治疗或预防由RAS、具体地KRAS(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变、Q61H突变及KRAS扩增)介导或得益于RAS、具体地KRAS(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变、Q61H突变及KRAS扩增)抑制的肿瘤或癌症的所述化合物；使用所述化合物用于治疗或预防由RAS、具体地KRAS(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变、Q61H突变及KRAS扩增)介导或得益于RAS、具体地KRAS(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变、Q61H突变及KRAS扩增)抑制的疾病如肿瘤或癌症的方法；以及所述化合物在制备用于治疗或预防由RAS、具体地KRAS(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变、Q61H突变及KRAS扩增)介导或得益于RAS、具体地KRAS(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变、Q61H突变及KRAS扩增)抑制的疾病如肿瘤或癌症的药物中的用途。
本发明由此提供以下技术方案。
本发明化合物
本申请通篇使用的术语“发明的化合物”和“本发明的化合物”等，除非另外限定，涵盖本文各个实施方案及其优选实施方案中定义的化合物或其各个具体实施方式、包括其异构体，包括阻转异构体、对映体混合物、特别是外消旋体、非对映异构体混合物、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物、前药、同位素变体和盐(例如药学上可接受的盐)。
因此，本发明化合物的上述各类异构体和衍生物由此均涵盖在本发明范围内，其各自的含义、制备及具体示例如上文“定义”部分所定义，或为本领域技术所熟知。然而，优选地为本发明化合物和/或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
本发明还涵盖本发明化合物的N-氧化物，只要这些化合物含有碱性氮原子如存在于含氮杂环中的氮原子且化学和生物学上可行。本发明的某些化合物可以以多晶型或无定形形式存在，故它们也落入本发明的范围内。
第一方面，本发明提供如下化合物实施方案。
实施方案1：式(I)的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，
其中：
M选自N或C-R9；
W选自N或C-R10；
R9选自H、卤素、CN、NO2和任选被卤素取代的-C1-6烷基；
R10选自H、卤素、CN、OH、任选被卤素取代的-C1-6烷基和任选被卤素取代的-OC1-6烷基；
Z选自H、OH和NH2；
X选自CH2和O，条件是k为0时，X为CH2；
Y选自O、S、Se和N-Ra；
R1选自H和任选取代的-C1-6烷基，其中的取代基选自卤素、D和任选被卤素或D取代的-O-C1-6烷基；
R2各自独立地选自H、D和任选取代的-C1-6烷基，其中的取代基选自卤素、D和任选被卤素或D取代的-O-C1-6烷基；
R3选自H、D、卤素、-CN、-OH、-NH2、-NHC1-6烷基、-N(C1-6烷基)2、-O-C1-6烷基、-O-C3-6环烷基、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-(CH2)n-C3-6环烷基和＝C(Rc)2，其中每次出现的C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基任选被取代，取代基选自卤素、CN、D和任选被卤素取代的-OC1-6烷基，其中的C3-6环烷基任选被取代，取代基选自卤素、CN、D、任选被卤素取代的-C1-6烷基和任选被卤素取代的-OC1-6烷基，或
连接在同一个环碳原子上的两个R3与它们所连接的碳原子一起形成螺C3-6环烷基或包含1至3个独立地选自N、O、S的杂原子的螺4-7元杂环烷基，所述环烷基或杂环烷基任选被卤素或任选被卤素取代的-C1-6烷基取代；
R4选自H、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基和-(CH2)n-C3-6环烷基，其中的-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基任选被取代，取代基选自D、卤素、CN、OH、任选被卤素或D取代的-O-C1-6烷基和-OCON(Rb)2，其中的C3-6环烷基任选被取代，取代基选自D、卤素、CN、OH、任选被卤素或D取代的-C1-6烷基、任选被卤素或D取代的-O-C1-6烷基和-OCON(Rb)2；
R5选自H、卤素、-CN、-NO2；
R6选自卤素、CN、-C1-6烷基和-C2-6炔基，其中的-C1-6烷基和-C2-6炔基各自独立地任选被卤素取代；
R7选自H、卤素、CN、任选被卤素或D取代的-C1-6烷基、任选被卤素或D取代的-OC1- 6烷基和任选被卤素或D取代的-C2-6炔基；
连接在非相邻环碳原子上的R8和R8’一起形成环内桥连-(CH2)1-2-或-CH2＝CH2-，
或连接在同一个环碳原子上的R8和R8’与它们所连接的环碳原子一起形成4-6元螺环烷基或包含1至3个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元螺杂环烷基，
或连接在相邻环碳原子上的R8和R8’与它们连接的环碳原子一起形成稠合C3-6环烷基或包含1至2个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元稠合杂环烷基，
其中所述桥环、螺环或稠合环各自独立地任选被取代，取代基选自OH、氧代、任选被卤素取代的-OC1-6烷基和任选被卤素取代的-C1-6烷基；
Ra和Rb各自独立地选自H和任选被卤素取代的-C1-6烷基；
Rc各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的-C1-6烷基；
k和n各自独立地选自0至3的整数；和
m选自0至6的整数。
实施方案1.1：实施方案1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中M为N。
实施方案1.2：实施方案1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中M为C-R9。
实施方案1.2.1：实施方案1.2的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R9为H。
实施方案1.2.2：实施方案1.2的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R9为卤素，例如F、Cl、Br、I。
实施方案1.2.3：实施方案2.2的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R9为CN；或R9为NO2。
实施方案1.2.4：实施方案2.2的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R9为-C1-6烷基，优选-C1-3烷基，任选被卤素取代，优选被卤素取代，更优选被F取代。
实施方案1.3：实施方案1的式(I)的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中M选自实施方案1.1至1.2.4中的任一项或任意组合；例如M选自N、C-卤素(例如C-F、C-Cl)、C-CN、C-NO2、C-卤素取代的C1-6烷基(例如C-CF3)；优选M为N。
实施方案2.1：实施方案1至1.3任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中W为N。
实施方案2.2：实施方案1至1.3任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中W为C-R10。
实施方案2.2.1：实施方案2.2的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R10为H。
实施方案2.2.2：实施方案2.2的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R10为卤素，例如F、Cl、Br、I，优选F；或R10为CN。
实施方案2.2.3：实施方案2.2的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R10为OH。
实施方案2.2.4：实施方案2.2的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R10为-C1-6烷基，优选-C1-3烷基，任选被卤素取代。
实施方案2.2.5：实施方案2.2的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R10为-OC1-6烷基，优选-OC1-3烷基，其中的烷基任选被卤素取代。
实施方案2.3：实施方案1至1.3任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中W选自实施方案2.1至2.2.5中的任一项或它们的任意组合；例如W选自N、C-卤素、C-CN、C-被卤素取代的-C1-6烷基、C-被卤素取代的-OC1-6烷基，例如N、C-F、C-Cl、C-CN、C-CF3；优选W为C-卤素，更优选C-F。
实施方案3.1：实施方案1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中包含M和W的稠合母环包括但不限于：
其中R9如实施方案1.2.1
至1.3任一项所定义，R10如实施方案2.2.1至2.3任一项所定义，例如但不限于：
实施方案4.1：实施方案1至3.1任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R7为H。
实施方案4.2：实施方案1至3.1任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R7为卤素；或R7为CN。
实施方案4.3：实施方案1至3.1任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R7为任选被卤素或D取代的-C1-6烷基，优选任选被卤素或D取代的-C1-3烷基，例如-CH3、-CD3。
实施方案4.4：实施方案1至3.1任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R7为任选被卤素或D取代的-OC1-6烷基，优选任选被卤素或D取代的-OC1-3烷基，例如-O-CH3、-O-CD3；在一个具体实施方案中，此时M为N。
实施方案4.5：实施方案1至3.1任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R7为任选被卤素或D取代的-C2-6炔基，优选任选被卤素或D取代的-C2-4炔基，例如但不限于乙炔基、丙-1-炔基。
实施方案4.6：实施方案1至3.1任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R7选自实施方案4.1至4.5任一项或其任何组合，例如R7选自H、任选被卤素或D取代的-OC1-6烷基和任选被卤素或D取代的-C2-6炔基，例如R7选自H和任选被卤素或D取代的-OC1-6烷基，更具体地选自H和任选被D取代的-OC1-6烷基。
实施方案5.1：实施方案1至4.6任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R5为H。
实施方案5.2：实施方案1至4.6任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R5为卤素，优选F。
实施方案5.3：实施方案1至4.6任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R5为-CN；或R5为-NO2。
实施方案5.4：实施方案1至4.6任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R5选自实施方案5.1至5.3中的任一项或它们的任意组合；例如R5选自H和卤素(优选F)，例如R5选自卤素(优选F)。
实施方案6.1：实施方案1至5.4任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R6为卤素，例如F或Cl。
实施方案6.2：实施方案1至5.4任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R6为CN。
实施方案6.3：实施方案1至5.4任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R6为任选被卤素取代的-C1-6烷基，优选任选被卤素取代的-C1-3烷基，例如-C1-3烷基，例如乙基。
实施方案6.4：实施方案1至5.4任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R6为任选被卤素取代的-C2-6炔基，优选任选被卤素取代的-C2-4炔基，例如乙炔基。
实施方案6.5：实施方案1至5.4任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R6选自实施方案6.1至6.4的任一项或其任意组合，例如R6选自卤素、任选被卤素取代的-C1-6烷基和任选被卤素取代的-C2-6炔基，例如R6选自卤素、-C1-3烷基和-C2-4炔基，例如F、Cl、乙基和乙炔基。
实施方案7.1：实施方案1至6.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Z为H；在一个具体实施方案中，Z为H，R5为H且R6为卤素，例如F或Cl。
实施方案7.2：实施方案1至6.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Z为OH，或Z为NH2；在一个具体实施方案中，Z为OH，R5选自卤素，R6选自卤素、任选被卤素取代的-C1-6烷基和任选被卤素取代的-C2-6炔基，例如R6选自卤素、-C1-3烷基和-C2-4炔基。
实施方案8：实施方案1至7.2任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中结构片段中，R5选自H和卤素，优选卤素(更优选F)；R6选自卤素、任选被卤素取代的-C1-6烷基和任选被卤素取代的-C2- 6炔基，优选R6选自卤素、-C1-3烷基和-C2-4炔基；Z选自H和OH，优选OH；具体的示例包括但不限于：
实施方案9.1：实施方案1至8任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中结构片段中，
k为0时，该片段为具有环内桥连-(CH2)1-2-或-CH2＝CH2-的氮杂环丁烷、氮杂环丁烷螺(4-6元环烷基或包含1至3个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元杂环烷基)、或氮杂环丁烷稠合(C3-6环烷基或包含1至2个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元杂环烷基)；
k为1时，该片段为具有环内桥连-(CH2)1-2-或-CH2＝CH2-的氮杂环戊烷或氮氧杂环戊烷、(氮杂环戊烷或氮氧杂环戊烷)螺(4-6元环烷基或包含1至3个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元杂环烷基)、或(氮杂环戊烷或氮氧杂环戊烷)稠合(C3-6环烷基或包含1至2个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元杂环烷基)；
k为2时，该片段为具有环内桥连-(CH2)1-2-或-CH2＝CH2-的氮杂环己烷或氮氧杂环己烷、(氮杂环己烷或氮氧杂环己烷)螺(4-6元环烷基或包含1至3个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元杂环烷基)、或(氮杂环己烷或氮氧杂环己烷)稠合(C3-6环烷基或包含1至2个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元杂环烷基)；
k为3时，该片段为具有环内桥连-(CH2)1-2-或-CH2＝CH2-的氮杂环庚烷或氮氧杂环庚烷、(氮杂环庚烷或氮氧杂环庚烷)螺(4-6元环烷基或包含1至3个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元杂环烷基)、或(氮杂环庚烷或氮氧杂环庚烷)稠合(C3-6环烷基或包含1至2个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元杂环烷基)；
其中上述螺环的共用环碳原子可以在氮杂原子的间位或对位，优选间位；
其中上述桥环、螺环或稠合环各自独立地任选被取代，取代基选自OH、氧代、任选被卤素取代的-OC1-6烷基和任选被卤素取代的-C1-6烷基，例如选自OH和氧代；
优选地，该结构片段为上述螺环或稠合环结构。
实施方案9.2：实施方案1至9.1任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中结构片段为即k为0；即k为1；即k为2或3。
实施方案9.2.1：实施方案9.1或9.2的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中结构片段为氮杂环丁烷螺(4-6元环烷基或包含1至3个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元杂环烷基)、(氮杂环戊烷或氮氧杂环戊烷)螺(4-6元环烷基或包含1至3个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元杂环烷基)、(氮杂环己烷或氮氧杂环己烷)螺(4-6元环烷基或包含1至3个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元杂环烷基)或(氮杂环庚烷或氮氧杂环庚烷)螺(4-6元环烷基或包含1至3个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元杂环烷基)；优选(氮杂环己烷)螺(4-6元环烷基或包含1至3个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元杂环烷基)；所述螺环共用的环碳原子可以酌情在与分子其余部分相连的氮杂原子的对位或间位；例如但不限于
在一个具体实施方案中，R8和R8’与氮杂环己烷的N杂原子间位的环碳原子形成螺4-6元环烷基或包含1至3个独立地选自N、O和S的杂原子的螺4-6元杂环烷基，即表示为其中G1选自CH2、NH、O和S，G2、G3、G4中至少有一个选自CH2、NH、O和S，其余各自独立地可选自不存在、CH2、NH、O和S；
在一个更具体的实施方案中，中的G3、G4不存在，即其中G1、G2均为CH2，或其中一个为CH2，另一个选自NH、O和S(优选NH和O)；其中标星号的共用环碳原子可酌情具有手性，相应地该片段可以是外消旋形式，或存在 的异构形式；
在一个更具体的实施方案中，中的G4不存在，即其中G1、G2和G3各自独立地选自CH2、NH、O和S；
上述各个实施方案中的螺环任选在任何化学可行的位置被取代，例如在R8和R8’与它们所连接的环碳原子一起形成的螺环上被取代，取代基选自OH、氧代、任选被卤素取代的-OC1- 6烷基和任选被卤素取代的-C1-6烷基，例如选自OH和氧代；
具体的示例包括但不限于
实施方案9.2.2：实施方案9.1或9.2的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中结构片段为氮杂环丁烷稠合(C3-6环烷基或包含1至2个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元杂环烷基)、(氮杂环戊烷或氮氧杂环戊烷)稠合(C3-6环烷基或包含1至2个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元杂环烷基)、(氮杂环己烷或氮氧杂环己烷)稠合(C3-6环烷基或包含1至2个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元杂环烷基)或(氮杂环庚烷或氮氧杂环庚烷)稠合(C3-6环烷基或包含1至2个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元杂环烷基)；优选(氮杂环庚烷或氮氧杂环庚烷)稠合(C3-6环烷基或包含1至2个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元杂环烷基)；更优选(氮氧杂环庚烷)稠合(C3-6环烷基)；例如但不限于
在一个具体的实施方案中，包含N和X的环为氮杂环庚烷或氮氧杂环庚烷，连接于相邻环碳原子的R8和R8’与它们连接的原子一起形成C3-6环烷基；
一种具体的实施方式为更具体地为可酌情以 存在，优选
上述各个实施方案中的稠合环任选在任何化学可行的位置被取代，取代基选自OH、氧代、任选被卤素取代的-OC1-6烷基和任选被卤素取代的-C1-6烷基；优选未被取代。
实施方案9.2.3：实施方案9.1或9.2的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中结构片段中，k为1至3的整数，优选2至3，X选自CH2和O，优选选自CH2，R8和R8’连接于非相邻碳原子且一起形成环内桥连-(CH2)1-2-或-CH2＝CH2-，优选-(CH2)1-2-；具体的示例包括但不限于 该桥环任选被OH、氧代、任选被卤素取代的-OC1-6烷基和任选被卤素取代的-C1-6烷基，例如被OH或任选被卤素取代的-OC1-6烷基取代，例如被OH取代。
实施方案9.3：实施方案1至9.1任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中结构片段如实施方案9.2至9.2.2任一项或其任意组合所定义，例如选自任选被取代的(氮杂环己烷)螺(4-6元环烷基或包含1至3个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元杂环烷基)和(氮氧杂环庚烷)稠合(C3-6环烷基)，具体地上文所定义的
或如实施方案9.2.3所定义，例如具有环内桥连-(CH2)1-2-或-CH2＝CH2-、优选-(CH2)1-2-的任选被取代的5至7元杂环烷基。
实施方案10.1：实施方案1至9.3任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Y为O。
实施方案10.2：实施方案1至9.3任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Y为S。
实施方案10.3：实施方案1至9.3任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Y为Se。
实施方案10.4：实施方案1至9.3任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Y为N-Ra，Ra为H；或Y为N-Ra，Ra为任选被卤素取代的-C1-6烷基，优选任选被卤素取代的-C1-3烷基。
实施方案11.1：实施方案1至10.4任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中结构片段优选更优选其中连接R3的环碳原子可以酌情具有手性，由此R3呈R或S立体构型。
实施方11.2：实施方案11.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R2选自H或D，例如R2均为H；或R2均为D；或R2之一为H且另一个为D。
实施方案11.2.1：实施方案11.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中一个R2为H或D，另一个R2为-C1-6烷基(优选-C1-3烷基)，任选被卤素、D、任选被卤素或D取代的-O-C1-6烷基取代，或者两个R2各自独立地为-C1-6烷基(优选-C1-3烷基)，任选被卤素、D、任选被卤素或D取代的-O-C1-6烷基取代。
实施方案11.3：实施方案11.1至11.2.1任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R1为H；或R1为-C1-6烷基，优选-C1-3烷基，任选被卤素、D、或任选被卤素或D取代的-O-C1-6烷基取代；优选R1为-C1- 3烷基或-氘代C1-3烷基，例如-CH3、-CH2D、-CHD2、-CD3。
实施方案11.4：实施方案11.1至11.3任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为H；或R3为D。
实施方案11.4.1：实施方案11.1至11.3任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为卤素，例如F、Cl、Br、I，优选F；或R3为CN。
实施方案11.4.2：实施方案11.1至11.3任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为-OH。
实施方案11.4.3：实施方案11.1至11.3任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为-NH2、-NH-C1-6烷基、-N(C1-6烷基)2，其中的-C1-6烷基任选被卤素、CN、D和任选被卤素取代的-OC1-6烷基取代。
实施方案11.4.4：实施方案11.1至11.3任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为-C1-6烷基，优选-C1-3烷基，或为-C2-6烯基，优选-C2-4烯基，或为-C2-6炔基，优选-C2-4炔基；各自任选被卤素、CN、D和任选被卤素取代的-OC1-6烷基取代，例如任选被卤素取代，例如被卤素取代、例如被F取代。
实施方案11.4.5：实施方案11.1至11.3任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为-O-C1-6烷基，优选-O-C1- 3烷基，其中的烷基任选被卤素、CN、D和任选被卤素取代的-OC1-6烷基取代，例如任选被卤素取代。
实施方案11.4.6：实施方案11.1至11.3任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为-O-C3-6环烷基，或R3为-(CH2)0-3-C3-6环烷基，优选-(CH2)0-3-C3-4环烷基，其中C3-6环烷基各自任选被卤素、CN、D、任选被卤素取代的-C1-6烷基和任选被卤素取代的-OC1-6烷基取代，例如任选被卤素取代。
实施方案11.4.7：实施方案11.1至11.3任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3为＝C(Rc)2，其中Rc各自独立地选自H、卤素、任选被卤素取代的-C1-6烷基，优选选自H和卤素(优选F)；R3例如但不限于＝CH2、＝CHF、＝CF2、＝CHCl、＝CCl2、＝C(CH3)2、＝CHCH3、＝CHCF3、＝C(CF3)2。
实施方案11.4.8：实施方案11.1至11.3任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中连接于同一个环碳原子上的两个R3与它们所连接的环碳原子一起形成螺C3-6环烷基或包含1至3个独立地选自N、O、S的杂原子的螺4-7元杂环烷基，各自任选被卤素和任选被卤素取代的-C1-6烷基取代，例如但不限于螺环丙基、螺环丁基、螺环戊基、螺氮杂环丁烷、螺氮杂环戊烷，各自任选被卤素(优选F)或任选被卤素取代的C1-6烷基(优选-CF3)取代；例如但不限于其中*表示螺环的共用碳原子。
实施方案11.4.9：实施方案11.1至11.3任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3选自实施方案11.4至11.4.8任一项或其任意组合；例如R3选自卤素(优选F)；-C1-6烷基(优选C1-3烷基)，其中的烷基任选被卤素取代，优选被卤素取代，更优选被F取代；或者＝C(Rc)2，其中Rc各自独立地选自H、卤素(优选F)、任选被卤素取代的-C1-6烷基(优选-C1-3烷基)，优选Rc选自H和卤素(优选F)；优选地，R3取代在环N原子的对位；
其中环N原子的对位环碳原子酌情具有手性，可呈R或S构型；
其中环N原子的对位环碳原子取代有＝C(Rc)2时，双键可酌情呈顺反异构体，包括E或Z型，优选E型。
实施方案11.5：实施方案11.4至11.4.9任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中m为0-6的整数，优选1-4的整数，更优选1至2的整数，R3可以选自前述任何R3实施方案或其任何组合；
更具体地，m为1，R3选自C1-3烷基，被卤素取代，优选被F取代；和＝C(Rc)2，其中Rc各自独立地选自H和卤素(优选F)。
实施方案11.6：实施方案11.1至11.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R4为H。
实施方案11.6.1：实施方案11.1至11.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R4为-C1-6烷基，优选-C1-3烷基；或R4为-C2-6烯基，优选-C2-4烯基；或R4为-C2-6炔基，优选-C2-4炔基；各自任选被D、卤素、CN、OH、任选被卤素或D取代的-O-C1-6烷基和-OCON(Rb)2取代，优选任选被卤素或D取代。
实施方案11.6.2：实施方案11.1至11.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R4为-(CH2)0-3-C3-6环烷基，所述-C3-6环烷基任选被D、卤素、CN、OH、任选被卤素或D取代的-C1-6烷基、任选被卤素或D取代的-O-C1-6烷基和-OCON(Rb)2取代。
实施方案11.6.3：实施方案11.1至11.5任一项的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R4选自实施方案11.6至11.6.2的任一项或其任何组合；例如R4选自-C1-6烷基和-C3-6环烷基，任选被D、卤素、CN、OH、任选被卤素或D取代的-C1-6烷基、任选被卤素或D取代的-O-C1-6烷基和-OCON(Rb)2取代；优选R4选自-C1-3烷基和-氘代C1-3烷基，例如但不限于-CH3、-CD3、-CH2CH3、-CD2CD3。
实施方案11.7：实施方案11.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中：
R3选自卤素(优选F)；-C1-6烷基(优选C1-3烷基)，其中的烷基任选被卤素取代，优选被卤素取代，更优选被F取代；或者＝C(Rc)2，其中Rc各自独立地选自H、卤素(优选F)、任选被卤素取代的-C1-6烷基(优选-C1-3烷基)，优选Rc选自H和卤素(优选F)；
优选地：
R2各自独立地选自H和D；R1选自任选氘代的-C1-6烷基；m为1或2；R3选自卤素、-C1-6烷基和＝C(Rc)2，其中-C1-6烷基任选被卤素取代，其中Rc各自独立地选自H、卤素、任选被卤素取代的-C1-6烷基，优选地，R3取代在环N原子的对位；R4选自任选氘代的-C1-6烷基；
更优选地：
R2各自独立地选自H和D；
R1选自任选被一个或多个氘取代的-C1-3烷基；
m为1或2，例如1；
R3取代在环N原子的对位，选自卤素、被卤素(优选F)取代-C1-3烷基和＝C(Rc)2，其中Rc各自独立地选自H、卤素、被卤素取代的-C1-3烷基，R3的具体示例包括但不限于氟、二氟、氟代甲基、二氟甲基、氟代亚甲基、二氟代亚甲基；
R4选自任选被一个或多个氘取代的-C1-3烷基，例如-CH3、-CH2CH3、-CD3、-CD2CD3；其中R3连接的环N原子的对位环碳原子酌情具有手性，可呈R或S构型。
实施方案11.8：实施方案11.1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中结构片段的示例包括但不限于
优选
更优选
实施方案12：实施方案1的式(I)化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其具有以下子通式：


其中各个子通式及其示例中的各个取代基各自具有前述相应实施方案所定义的一般或优选含义或其任意组合；其中每个子通式也涵盖其中每一个取代基的一般或优选含义与其余取代基的一般或优选含义的任意组合所形成的化合物；
在一组实施方案中，上述各个子通式及其示例中，M为N，W为C-卤素，优选C-F；
在一组实施方案中，上述各个子通式及其示例中，M选自C-卤素(例如C-F、C-Cl)、C-CN、C-NO2、C-卤素取代的C1-6烷基(例如C-CF3)，W为C-卤素，优选C-F。
实施方案13：化合物，选自下文实施例的化合物、其立体异构体、药学上可接受的盐或溶剂合物。
需要说明的是，本发明的化合物涵盖以上各个独立的实施方案或各个具体实施方案，还涵盖上述各个实施方案或具体实施方案的任何组合或亚组合构成的实施方案，也涵盖以上任何优选或例举的实施方案的任何组合所构成的实施方案。
发明的有益效果
如前文所述，已知RAS蛋白、尤其KRAS突变蛋白在肿瘤发生以及多种其它疾病中发挥作用。我们已令人惊讶地发现，具有上述结构特征的本发明化合物在携带由KRAS突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变蛋白)及KRAS野生扩增的细胞系中能够强效抑制细胞增殖，从而在预防、遏制和/或治疗相关肿瘤疾病方面具有潜在的、作为抗增殖、促凋亡和/或抗侵袭药物的价值。特别地，预期本发明化合物可用于预防或治疗那些RAS蛋白，尤其KRAS突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变蛋白)或KRAS野生扩增介导的或得益于RAS突变，尤其KRAS突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变)或KRAS野生扩增抑制的疾病或病症，例如本文所定义的癌症或肿瘤。
具体地，经研究发现，本发明的化合物能够实现以下一种或多种技术效果：
·高的突变蛋白抑制活性：本发明的化合物、尤其是本文上下文具体示例的化合物，在RAS相关细胞，特别是KRAS突变细胞(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变)及KRAS扩增细胞增殖抑制实验中显示出增殖抑制活性，IC50值在0.0001-10μM范围内，优选在0.0001-1μM范围内，如活性实施例1、2、5-6所验证；
·具有良好的药代动力学性质，例如具有较长的t1/2，从而例如可以加大给药间隔，更长的半衰期，使患者具有更好的依从性；具有安全性/活性综合效应最佳的AUC0-t数据，具有更好的成药性，更高的生物利用度，可以实现口服方便给药，如活性实施例3所验证；和/或
·具有明显令人满意的安全性，药物相互作用的风险降低，对于药物代谢关键CYP亚型没有显著抑制作用，如活性实施例4所验证。
基于以上本发明化合物的有益效果，本发明还提供以下各个方面的技术方案。
用于治疗或用作药物的本发明化合物
一方面，本发明提供了本发明化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物，用作药物。
另一方面，本发明提供了本发明化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物用作RAS抑制剂，特别是KRAS突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变蛋白)及KRAS野生扩增型细胞抑制剂。
另一方面，本发明提供本发明化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物，用于治疗和/或预防RAS蛋白、具体地KRAS突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变蛋白)及KRAS扩增介导的或得益于RAS突变、具体地KRAS突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变蛋白)及KRAS扩增抑制的疾病或病症。
在具体的实施方式中，本发明提供用于治疗和/或预防RAS蛋白、具体地KRAS突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变蛋白)及KRAS扩增对所述疾病的发生和发展起到促进作用或抑制RAS突变蛋白、具体地KRAS突变蛋白(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变蛋白)及KRAS扩增将降低疾病的发生率、减少或消除疾病病状的疾病的本发明化合物，所述疾病例如肿瘤或癌症，包括但不限于：肺癌、肺腺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区域癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾脏或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统肿瘤(CNS)、原发性CNS淋巴瘤、脊柱肿瘤、脑干神经胶质瘤或垂体腺瘤。
本发明尤其提供可用于治疗患有胰腺癌、结肠癌、直肠癌、肺腺癌、肺癌、胆管癌、子宫内膜癌、卵巢癌、白血病；最优选选自胰腺癌、结肠癌、直肠癌、肺腺癌、胆管癌的患者的式(I)化合物或其异构体、它们药学上可接受的盐或溶剂合物。
药物组合物及其施用
另一方面，本发明提供药物组合物，其包含以上定义的式(I)化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物，以及可药用载体或赋形剂。本发明的药物组合物可用于治疗或预防由RAS、尤其KRAS突变介导的疾病，例如KRAS G12C、KRAS G12D、KRAS G12V、G12A、G12R、G12S或KRAS G13D突变、或KRAS Q61H突变、及KRAS扩增介导的疾病，例如肿瘤或癌症。
上述本发明药物组合物，可以通过本领域技术人员已知的技术来配制，如在Remington’s Pharmaceutical Sciences第20版中公开的技术。例如，可配制为片剂、粉末、胶囊、锭剂、颗粒、溶液、分散剂、混悬剂、糖浆、喷雾、栓剂、凝胶、乳剂、贴剂等。所述组合物可含有药物制剂中的常规组分，例如稀释剂(例如葡萄糖、乳糖或甘露醇)、载体、pH调节剂、缓冲剂、甜味剂、填充剂、稳定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、加香剂、调味剂、其它已知添加剂以及其它活性剂。合适的载体和赋形剂为本领域技术人员熟知并详述于例如Ansel,Howard C.,等,Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2004中。
本发明药物组合物的给药和施用均符合良好的医学实践。在此背景下需要考虑的因素包括所治疗特定障碍、所治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床情况、障碍的起因、药剂递送位置、施用方法、施用安排以及医生从业者熟知的其它因素。本发明化合物或药物组合物的最佳剂量水平和给药频率可由本领域技术人员通过药学研究领域的标准试验确定。
本发明的组合物可采取任意合适方式施用，包括口服、局部(包括颊和舌下)、直肠、阴道、透皮、胃肠外、皮下、腹膜内、肺内、皮内、鞘内、吸入和硬膜外和鼻内，和如需局部治疗，也可采取病灶内施用。胃肠外输注包括肌肉、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。在一些实施方案中，本发明的药物组合物通过口服施用。
对于70kg的人类对象，本发明化合物的适合的剂量范围可由本领域技术人员常规确定，例如可以为1-1000mg/天。
当本文描述药物或其药学上可接受的盐的剂量时，应理解，该剂量基于游离碱的重量，不包括其任何水合物或溶剂化物，除非说明书中指出该剂量基于盐、水合物或溶剂合物的重量。
治疗方法和用途
如上所述，本发明的化合物及其各种具体实施方案的化合物、尤其是实施例中具体制备和表征的化合物，显示出对RAS、尤其是KRAS突变、例如KRAS G12C、KRAS G12D、KRAS G12V、G12A、G12R、G12S或KRAS G13D突变、或KRAS Q61H，及KRAS扩增型细胞的抑制作用。
因此，另一方面，本发明提供了一种抑制细胞中RAS、尤其是KRAS突变、优选KRAS G12D突变的方法，包括使细胞与本发明的化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物相接触以抑制细胞中RAS突变、尤其是KRAS突变(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变)及KRAS扩增的活性。
基于同样的性质，本发明还相应地提供一种抑制哺乳动物中异常细胞生长的方法，包括给所述哺乳动物施用治疗有效量的本发明的化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物、或包含本发明的化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物的药物组合物。
另一方面，本发明提供了用于治疗和/或预防由RAS、尤其是KRAS突变(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变)及KRAS扩增介导的疾病的方法，包括向有需要的对象施用治疗有效量的本发明化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物、或包含本发明化合物优选药学上可接受的盐或溶剂合物的药物组合物。
另一方面，本发明提供了本发明的化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物、或包含本发明的化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物的药物组合物的用途，用于抑制细胞中RAS、尤其是KRAS突变、优选KRAS G12C、KRAS G12D、KRAS G12V、KRASG12A、KRASG12R、KRASG12S或KRAS G13D、或KRAS Q61H突变，及KRAS扩增介导的疾病。
另一方面，本发明提供了本发明的化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物、或包含本发明的化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物的药物组合物在制备用于治疗和/或预防由RAS、尤其是KRAS突变(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变)及KRAS扩增介导的疾病的药物中的用途。
对上述本发明提供的各个方法和用途技术方案而言，所述异常细胞生长或由RAS、尤其KRAS突变、优选KRAS G12C、KRAS G12D、KRAS G12V、KRASG12A、KRASG12R、KRASG12S或KRAS G13D、或KRAS Q61H突变，及KRAS扩增介导的疾病尤其指的是癌症或肿瘤。示例性的所述癌症或肿瘤包括但不限于肺癌、肺腺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区域癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾脏或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统肿瘤(CNS)、原发性CNS淋巴瘤、脊柱肿瘤、脑干神经胶质瘤或垂体腺瘤。
对上述本发明提供的各个方法和用途技术方案而言，所述异常细胞生长或由RAS、尤其KRAS突变(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变)及KRAS扩增介导的疾病优选选自胰腺癌、结肠癌、直肠癌、肺腺癌、肺癌、胆管癌、子宫内膜癌、卵巢癌、白血病；最优选选自胰腺癌、结肠癌、直肠癌、肺腺癌、胆管癌。
因此，在该方面的优选实施方案中，本发明提供了用于通过抑制RAS突变或扩增而治疗或预防癌症或肿瘤的上述各项方法和用途技术方案。在更进一步优选的实施方案中，本发明提供了通过抑制RAS突变或扩增而治疗或预防胰腺癌、结肠癌、直肠癌、肺腺癌和胆管癌的上述各项方法和用途技术方案。
本发明还提供了本发明的化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物在研究中作为RAS抑制剂，尤其KRAS抑制剂(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变、Q61H突变及KRAS扩增抑制剂)的研究工具化合物的用途。因此，本发明涉及本发明化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物作为RAS抑制剂的体外用途，特别地涉及本发明化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物作为RAS抑制剂起效的研究工具化合物的体外用途。本发明同样涉及抑制RAS，尤其KRAS(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变、Q61H突变及KRAS扩增)的方法，特别是体外方法，该方法包括将本发明的化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物施用于样品(例如生物样品)。。应理解，术语“体外”在该特定上下文中以“活的人体或动物体外”的含义使用，其具体包括用细胞、细胞或亚细胞提取物和/或人工环境中的生物分子进行的实验，例如可以在烧瓶、试管、培养皿、微量滴定板等中提供的水溶液或培养基。
药物组合
本发明的化合物可以作为唯一的活性成分进行施用，也可以与另外的药物或疗法组合进行施用。
因此，另一方面，本发明提供了药物组合，其包含本发明的化合物、优选其药学上可接受的盐或溶剂合物以及其他活性剂，或由二者组成。该药物组合用于抑制哺乳动物中异常细胞生长，或用于治疗和/或预防由RAS、优选KRAS突变(例如G12C突变、G12D突变、G12V突变、G12A突变、G12R突变、G12S突变、G13D突变和Q61H突变)及KRAS扩增介导的疾病。
所述其他活性剂可以是一种或多种另外的本发明化合物，或可以是与本发明化合物相容即不会相互不利影响、或具有互补活性的第二种或另外的(例如第三种)化合物，例如这些活性剂可以是已知调节其他生物活性通路的化合物，或者可以是调节本发明化合物所涉及生物活性通路中的不同组分的化合物，或甚至是与本发明化合物的生物靶点相重叠的化合物。
在一个具体的实施方案中，可以与本发明化合物组合使用的其他活性剂包括但不限于化疗剂、治疗性抗体和放疗，例如烷化剂、抗代谢物、细胞周期抑制剂、有丝分裂抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、抗激素类药物、血管生成抑制剂、细胞毒性剂。
与本发明组合使用的其他活性剂可以与本发明的化合物通过相同或不同的施用途径同时、分别或依次地进行施用。所述其他活性剂可以与本发明化合物在单一药物组合物中共同施用，或与本发明化合物处于不同的离散单元中分别施用，例如组合产品,优选为药盒形式，当分别施用时可以同时或相继进行，所述相继施用在时间上可以是接近或隔远的。它们可以由相同或不同的制造商制备和/或配制。而且，本发明的化合物和其他活性剂可以(i)在将组合产品发送给医师之前(例如在包含本发明的化合物和另外的药物的药盒的情形中)；(ii)在临施用前由医师自身(或在医师指导下)；(iii)由患者自身、例如在本发明的化合物和其他活性剂的依次施用期间一起加入组合治疗中。
本发明的化合物还可以与抗肿瘤疗法组合，所述抗肿瘤疗法包括但不限于手术、辐射治疗、移植(例如干细胞移植、骨髓移植)、肿瘤免疫疗法和化疗等。
因此，另一方面，本发明还提供了药盒，其包含两种或多种单独的药物组合物，其中至少一种包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，以及分别容纳所述组合物的装置，如容器、分装瓶或分立的箔包装，例如用于包装片剂、胶囊等的泡罩包装，还包括使用说明书。本发明的药盒特别适用于施用不同的剂型，如口服剂型和胃肠外剂型，或者适合于以不同的剂量间隔施用不同的组合物。
对于上述本发明的药物组合物、药物组合或药盒的技术方案而言，其中所涉及的异常细胞生长或由RAS、尤其KRAS突变、优选KRAS G12C、KRAS G12D、KRAS G12V、KRAS G12A、KRAS G12R、KRAS G12S或KRAS G13D、或KRAS Q61H突变，及KRAS扩增介导的疾病如上文对于本发明方法和用途所定义。
对于上述本发明化合物、药物组合物、方法、用途、药物组合及药盒而言，优选本文实施例的化合物。
本发明化合物的制备方法
另一方面，本发明还提供了本发明所定义化合物的制备方法。
本发明的化合物可以通过多种方法、包括下文给出的通用方法、实施例中公开的方法或与之类似的方法制备。
用于制备有机化合物和官能团转化和操作的标准合成方法和操作是本领域已知的并且可以在标准教科书中找到，例如Smith M.B.,“March’s Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure”,第7版,Wiley,2013)。对于各通用合成方案的各个反应步骤而言，适当的反应条件是本领域技术人员已知的或可以常规确定的。用于合成本发明化合物的方法步骤可以在本身已知的反应条件(包括具体提及的那些条件)下、在不存在或通常在存在溶剂或稀释剂(包括例如对所用试剂而言是惰性的且可溶解所用试剂的溶剂或稀释剂)的情况下、在不存在或存在催化剂、缩合剂或中和剂(例如离子交换剂，如阳离子交换剂，例如H+形式)的情况下、根据反应和/或反应物的性质在降低的、正常的或升高的温度(例如约-100℃至约190℃，包括例如约-78℃至约150℃，例如约0℃至约125℃、室温、-20至40℃或回流温度)下、在大气压力下或在密闭容器中、当适宜时在加压下、和/或在惰性气氛例如氩气或氮气气氛下进行。
如果没有特别说明，在制备化合物中使用的原料和试剂是商购可获得的，或文献中已知的化合物，或者可以通过下文的方法、与下文给出的方法类似的方法或本领域已知的标准方法由本领域技术人员制得。除非在方法描述中另有说明，否则可以适用的溶剂是本领域技术人员熟知的适用于所涉及具体反应类型的那些常规溶剂，例如水、酯类、醚类、液体芳族烃类、醇类、腈类、卤化烃类、酰胺类、碱类、羧酸酐类、环状、直链或支链烃类，或这些溶剂的混合物。该类溶剂混合物也可用于后处理，例如通过色谱法或分配进行的后处理。
如果需要，合成反应流程中的原料和中间体可以采用常规技术进行分离和纯化，所述技术包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱法等。如果中间体和终产物以固体形式获得，则纯化也可以通过重结晶或陈化来进行。所述材料可以采用包括物理常数和波谱数据在内的常规方法表征。反应混合物以常规方式后处理，例如通过与水混合，分离各相，并在适当时通过色谱法纯化粗产物来进行。
本领域技术人员能认识到本发明化合物中是否存在立体中心。在反应的所有阶段，所形成的异构体的混合物可被分离成单个异构体，例如非对映异构体或对映异构体，或者分离成任何所需的异构体混合物，例如外消旋物或非对映异构体的混合物，参见例如E.L.Eliel,S.H.Wilen和L.N.Mander的“Stereochemistry of Organic Compounds”(Wiley-Interscience,1994)。
在制备本发明化合物的过程中产生立体异构体混合物的情况下，本发明化合物的单个立体异构体可以通过拆分获得，例如，通过从作为立体异构体混合物获得的本发明化合物开始，使用众所周知的方法，例如形成非对映体对，通过与旋光酸成盐，然后分级结晶和再生游离碱，或通过手性制备型色谱法；或者，可以使用具有既定立体化学的原料或中间体、或者可以使用任何已知的手性拆分方法获得光学纯的或对映体富集的合成中间体，然后可以在上述合成过程的各个阶段将其原样用于后续步骤。
在某些特定情况下，可能有必要使用适当的保护基团保护特定的反应基团，以避免干扰其他反应性基团的反应。适合的保护基和采用这样的适合保护基进行保护和脱保护的方法是本领域技术人员众所周知的；其实例可以见于T.Greene和P.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis(第3版),John Wiley&Sons,NY(1999)中。
下文仅举例说明合成本发明化合物的通用合成方案。本领域普通技术人员已知的其他路线以及其他反应物和中间体也可以用于得到本发明的化合物。
为了清楚起见，在以下所述的示例性合成方案中，如无特别说明，各个中间体化合物结构式中出现的R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、X、Y、M、W、和t如上文对本发明化合物所定义，其中PG代表可由本领域技术人员基于有机化学知识确定的适合保护基。
合成方案A
本发明化合物的合成可以根据以下示例性方案或其适当的变体制备。
化合物1商购可得、或可以按照本文实施例所使用的方法或与其类似的方法得到。在步骤A中，化合物1通过芳香亲核取代反应得到化合物2。典型的芳香亲核取代条件为本领域熟知，例如DIEA/THF等。在步骤B中，化合物2通过卤素交换反应、在例如KF/DMSO等条件下进行氟代，得到化合物3。后者在步骤C中通过金属催化偶联反应引入萘类化合物，得到化合物4。在步骤D中，化合物4通过芳香亲核取代反应得到化合物5。在步骤E中，将化合物5脱除可能带有的保护基，得到通式I化合物。
典型的金属催化偶联反应例如但不限于Suzuki反应，典型的反应条件为本领域技术人员所熟知的，且本领域技术人员了解用于促进这类交叉偶联反应的多种条件，例如Pd(dtbpf)Cl2/K3PO4/二氧六环/水，或者Pd(OAc)2/rac-BIDIME/K2CO3/甲苯，或者Ruphos Pd G4/K3PO4/二氧六环/水；适合的钯催化剂还包括XantPhos Pd G2、APd G3、氯化双(三苯膦)钯(II)、Pd(dppf)Cl2、Pd2(dba)3、四(三苯基)膦钯和乙酸钯(II)等；如果需要，适合的配体可以包括三环己膦和三叔丁基膦等；适合的碱还包括氟化钾、碳酸铯、碳酸钠、叔丁醇钾和磷酸钾一水合物、DIPEA等。
需要说明的是，步骤E中保护基的脱除，可以根据分子所携带的保护基进行调整，可以是一步反应，也可以是多步反应。例如，当化合物所携带保护基PG为TIPS时，可通过例如CsF等试剂进行脱除。
合成方案B
本发明化合物的合成还可以根据以下示例性方案或其适当的变体制备。
化合物6商购可得、或可以按照本文实施例所使用的方法或与其类似的方法得到。在步骤A中，化合物7可以按照合成方案A所述的方法得到。化合物7再依次经过步骤B的金属催化偶联反应、步骤C的甲硫醚氧化为亚砜(t＝1)或者砜(t＝2)、步骤D的芳香亲核取代反应及步骤E可能包含保护基的脱除反应，得到通式I化合物。此方案中涉及的金属催化偶联反应、亲核取代反应及保护基脱除反应的典型条件为本领域熟知，且可参照合成方案A中所述相关反应条件类似进行。
合成实施例
以下结合实施例对本发明作进一步的说明。需要说明的是，下述实施例是示例性的，不应视为对本发明保护范围的限制。
本文在对实施方案和随后的具体实施例的描述中，使用了以下缩写：
ACN(乙腈)；Boc(叔丁氧基羰基)；CDCl3(氘代氯仿)；DCM(二氯甲烷)；DIEA或者DIPEA(N,N-二异丙基乙胺)；DMF(N,N-二甲基甲酰胺)；DMSO(二甲亚砜)；DMSO-d6(六氘代二甲亚砜)；EA(乙酸乙酯)；EDTA-K2(乙二胺四乙酸二钾盐)；EtOH(乙醇)；FCC(快速柱层析)；g(克)；h(小时)；HCl(氯化氢)；HCl-MeOH或者HCl/MeOH(氯化氢甲醇溶液)；HLM(人肝微粒体)；H2O(水)；H2SO4(硫酸)；IV(静脉给药)；K2CO3(碳酸钾)；LCMS(液质联机)；LC-MS/MS(液谱-质谱-质谱联机)；MeOH(甲醇)；Methanol-d4(四氘代甲醇)；mg(毫克)；MHz(兆赫兹)；min(分钟)；mL(毫升)；mmol(毫摩尔)；MOM(甲氧基甲基醚)；MTBE(甲基叔丁基醚)；m/z(质荷比)；N2(氮气)；NaCl(氯化钠)；NaH(氢化钠)；NaHCO3(碳酸氢钠)；Na2SO3(亚硫酸钠)；Na2SO4(硫酸钠)；NCS(氯代丁二酰亚胺)；NH4Cl(氯化铵)；NMR(核磁共振)；PdCl2(dtbpf)或者Pd(dtbpf)Cl2(1,1'-二(二叔丁基膦)二茂铁二氯化钯)；PdCl2(dppf)或者Pd(dppf)Cl2(1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯)；Pd(OAc)(醋酸钯)；Pd(PPh3)4(四三苯基膦钯)；PE(石油醚)；PO(口服给药)；POCl3(三氯氧磷)；r.t.(室温)；SiO2(硅胶)；TEA(三乙胺)；TFA(三氟乙酸)；THF(四氢呋喃)；TIPS(三异丙基甲硅烷基)；TLC(薄层色谱)；TsOH(对甲苯磺酸)；TsOH·H2O(对甲苯磺酸一水合物)；μL(微升)；μM(微摩尔浓度)；μmol(微摩尔)。
在如下实施例中，给出了所合成目标化合物的名称及其结构。名称与结构之间出现任何偏差并非有意，在这种情况下，结构为决定性的。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照这类反应的常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。除非另外说明，否则液体的比为体积比。
以下实施例中所用的实验材料和试剂如无特别说明均可从市售渠道获得、依据现有技术的方法制得或根据与本申请公开的类似的方法制得。
在下列实施例中，1H-NMR谱是用Bruker(400MHz)记录，化学位移以相对于氘代溶剂峰(CDCl3:δ＝7.26ppm；CD3OD:δ＝3.31ppm；DMSO-d6:δ＝2.50ppm)的δ(ppm)表示；液质联用是用Aglient 1260液相色谱+Aglient G6125B质谱LCMS液质联用仪记录。气相色谱质谱联用仪使用Shimadzu GCMS-QP2010SE进行检测。
中间体A
7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮
步骤A：4,6-二氯-5-氟烟酰氯
在室温搅拌下，将氯化亚砜(2.25mL,31mmol)缓慢加入到4,6-二氯-5-氟烟酸(5.0g,23.4mmol)的DCM(100mL)溶液中，后加入DMF(175mg,2.4mmol)。将所得反应液在50℃下搅拌2h。TLC监测反应完全后，浓缩，加入少量甲苯带蒸后，得到黄色固体4,6-二氯-5-氟烟酰氯(4.5g,收率83％)，直接用于后续反应。
步骤B：(4,6-二氯-5-氟烟酰基)氨基甲酰亚胺硫代甲酯
在0℃搅拌下，将4,6-二氯-5-氟烟碱酰氯(4.5g,19.8mmol)与乙二醇二甲醚(20ml)的混合溶液缓慢滴加入2-甲基异硫脲硫酸(15g,49.5mmol)与1M NaOH水溶液(70ml)的混合溶液中，保持温度搅拌1h。将析出的固体沉淀物过滤、干燥，得到产物(4,6-二氯-5-氟烟酰基)氨基甲酰亚胺硫代甲酯(5.0g,收率90％)。LCMS(m/z):282.1(M+H)。
步骤C：7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮
将(4,6-二氯-5-氟烟酰基)氨基甲酰亚胺硫代甲酯(5.0g,17.8mmol)溶于DMF(40mL)中，加热至120℃搅拌反应3h。LCMS监测反应完全后，冷至室温，加入水(200mL)。将析出的固体过滤、干燥，得到产物(4,6-二氯-5-氟烟酰基)氨基甲酰亚胺硫代甲酯(3.6g,收率82％)。LCMS(m/z):245.6(M+H)。
中间体B
7-氯-8-氟-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮
步骤A：2,6-二氯-3-氟吡啶-4-胺
在室温下，将Selectfluor(68g,180mmol)加入到2,6-二氯吡啶-4-胺(25g,154mmol)的甲醇/水(V/V＝5:1,300mL)溶液中。所得混合物在50℃下搅拌48h，减压浓缩，乙酸乙酯稀释，依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩，所得粗品经FCC(SiO2，EA/PE＝0-10％)纯化，得到白色固体2,6-二氯-3-氟吡啶-4-胺(10g)。LCMS(m/z):180.9(M+H)。
步骤B：(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯-3-氟吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁基酯
室温搅拌下，将4-二甲氨基吡啶(307mg,2.75mmol)、二碳酸二叔丁酯(30g,138mmol)加入到2,6-二氯-3-氟吡啶-4-胺(10g,55mmol)的四氢呋喃(100mL)溶液中。所得混合物加热至60℃搅拌16h，TLC监测反应完成，浓缩，得粗品，经甲醇打浆，得到白色固体(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯-3-氟吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁基酯(16g)。LCMS(m/z):381.2(M+H)。
步骤C：4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2,6-二氯-5-氟烟酸叔丁酯
干冰乙醇浴下，将LDA(2.0M，63mL，126mmol)缓慢加入到(叔丁氧基羰基)(2,6-二氯-3-氟吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁基酯(16g,42mmol)的THF(200mL)溶液中，所得混合物保持温度搅拌1h。TLC监测反应完成，加入适量醋酸淬灭反应，用EA稀释，水洗，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩后所得粗品经FCC(SiO2,EA/PE＝0-20％)纯化，得到4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2,6-二氯-5-氟烟酸叔丁酯(13g)。
步骤D：4-氨基-2,6-二氯-5-氟烟酸·盐酸盐
室温条件下将浓盐酸(30ml)加入到4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2,6-二氯-5-氟烟酸叔丁酯(13g,34mmol)的二氧六环(90mL)溶液中。所得混合物在室温下搅拌3h。LCMS监测反应完成后，浓缩，得到4-氨基-2,6-二氯-5-氟烟酸·盐酸盐(8g)。LCMS(m/z):224.9(M+H)。
步骤E：5,7-二氯-8-氟-2-巯基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮
将4-氨基-2,6-二氯-5-氟烟酸(8g,30.8mmol)与氯化亚砜(200mL)的混合溶液在50℃下搅拌3h。然后浓缩，将残留物溶解在丙酮中(50mL)得到溶液1。在室温下将硫氰酸铵(7g,92mmol)与丙酮溶液(160mL)的混合溶液滴入溶液1中，所得反应液在室温下继续搅拌1h。LCMS监测反应完成后，将反应液倒入水中，过滤，滤饼干燥后，得到5,7-二氯-8-氟-2-巯基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(5g)。LCMS(m/z):265.9(M+H)。
步骤F：5,7-二氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮
在室温下,将5,7-二氯-8-氟-2-巯基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(5g,18.8mmol),、甲醇(380mL)、氢氧化钠水溶液(0.1M,380mL,380mmol)及碘甲烷(5.3g,380mmol)的混合溶液搅拌2h。LCMS监测反应完成后，将反应液倒入1000ml水中，用浓盐酸酸化至pH～6。将溶液过滤，滤饼干燥后，得到产物5,7-二氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(4g).LCMS(m/z):279.9(M+H)。
步骤G：7-氯-8-氟-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮
将5,7-二氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(400mg,1.4mmol)、甲醇钠(0.38g,7.5mmol)、DMA(10mL)与甲醇(2mL)的混合物在50℃搅拌16h。LCMS监测反应完成后，加水稀释，用浓盐酸调节到pH～3，过滤，收集滤饼，干燥后，得产品7-氯-8-氟-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(250mg)。LCMS(m/z):276.0(M+H)。
中间体C
7-溴-2,4-二氯-6,8-二氟喹唑啉
步骤A：4-溴-3,5-二氟-2-(3-(2,2,2-三氯乙酰基)脲基)苯甲酸甲酯
室温下，在置有搅拌子的圆底烧瓶中加入2-氨基-4-溴-3,5-二氟苯甲酸甲酯(10g,37.6mmol)和THF(100mL)。室温搅拌下向体系中滴加2,2,2-三氯乙酰异氰酸酯(8.5g,45.1mmol)。所得混合物室温搅拌2小时，减压浓缩，得到棕色固体4-溴-3,5-二氟-2-(3-(2,2,2-三氯乙酰基)脲基)苯甲酸甲酯(粗品)，直接用于下一步。LCMS(ESI,m/z):452.8(M+H)。
步骤B：7-溴-6,8-二氟喹唑啉-2,4-二醇
室温下，将上步所得4-溴-3,5-二氟-2-(3-(2,2,2-三氯乙酰基)脲基)苯甲酸甲酯加入置有搅拌子的圆底烧瓶中加入，再加入NH3(100mL,7M MeOH溶液)。将所得混合物在室温搅拌2小时，LCMS监测反应完全。减压浓缩，将所得固体用甲基叔丁基醚打浆，过滤，得到淡黄色固体7-溴-6,8-二氟喹唑啉-2,4-二醇(14g,粗品)，无需进一步纯化，直接用于下一步。LCMS(ESI,m/z):277.0(M+H)。
步骤C：7-溴-2,4-二氯-6,8-二氟喹唑啉
在置有搅拌子的圆底烧瓶中加入7-溴-6,8-二氟喹唑啉-2,4-二醇(14g,粗品)、POCl3(112mL)。室温下搅拌下，向体系中滴加DIEA(28mL)。滴加完毕后，将体系升温至110℃搅拌反应过夜。将反应液减压浓缩至约30mL，倒入水(600mL)中，析出沉淀过滤收集，干燥后，得到黄色固体7-溴-2,4-二氯-6,8-二氟喹唑啉(11g,粗品)，直接用于后续反应。LCMS(ESI,m/z):312.9(M+H)。
参照上述方法及本领域已知的适当变体，制备以下中间体：

中间体A-1
6-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷
步骤A：4,7-二氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶
在N2下，向化合物7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇(1.0g,4.1mmol)的三氯氧磷(10mL)溶液中加入DIEA(1.0mL,6.1mmol)。所得反应液在90℃条件下搅拌反应1h。LCMS监测反应结束后，反应液浓缩干，所得粗产品经过FCC(SiO2,EA/PE＝0-10％)纯化，得黄色固体产物4,7-二氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(810mg,收率75％)。LCMS(m/z):263.9(M+H)。
步骤B：6-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷
在冰浴下，向化合物1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷·草酸盐(660mg,3.1mmol)的DMF(10mL)溶液中依次加入DIEA(792mg,6.2mmol)、4,7-二氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(810mg,3.1mmol)。所得反应液在0℃条件下搅拌反应0.5h。LCMS监测反应结束后，向反应液中加入乙酸乙酯(80mL)。所得反应液经水洗涤，干燥，过滤浓缩干，所得粗产品经过FCC(SiO2,EA/PE＝0-20％)纯化，得黄色固体产物6-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷(980mg,收率90％)。LCMS(m/z):355.0(M+H)。
中间体A-I-A和中间体A-I-B
(R)-6-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷和(S)-6-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷
步骤A：(S)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬-6-羧酸苄酯和(R)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬-6-羧酸苄酯
在50℃氮气条件下，向化合物三甲基碘化亚砜(94g,428mmol)的叔丁醇(200mL)溶液中加入叔丁醇钠溶液(428mL,428mmol，1N的THF溶液)。所得反应液在50℃下搅拌反应1.5h后，将化合物3-氧代哌啶-1-甲酸苄酯(25g,107mmol)加入到上述反应液，所得反应液在50℃氮气条件下继续反应16h。LCMS监测反应结束后，冷却到室温，饱和NH4Cl溶液(200mL)加入到反应液中。EtOAc萃取，有机相合并，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩干，所得粗产品经过FCC(SiO2,EA/PE＝0-20％)纯化，得无色透明液体产物1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬-6-羧酸苄酯(10g,收率36％)。LCMS(m/z):262.1(M+H).1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.41–7.27(m,5H),5.14(s,2H),4.63–4.42(m,2H),3.82(d,J＝13.0Hz,1H),3.65–3.11(m,3H),2.49–2.25(m,2H),1.96–1.64(m,3H),1.57–1.38(m,1H)。
上述无色透明液体产物经SFC(Waters SFC 150,REGIS(S,S)WHELK-O1(250*40mm 10μm),Supercritical CO2/MeOH(0.1％ DEA in MeOH)＝80/20)拆分，得到首先洗脱出来的异构体为(R)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬-6-羧酸苄酯(4.1g，收率15％，相对保留时间较小)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.43–7.26(m,5H),5.14(s,2H),4.65–4.43(m,2H),3.82(d,J＝13.0Hz,1H),3.63–3.13(m,3H),2.49–2.22(m,2H),1.96–1.63(m,4H),1.56–1.33(m,1H).LCMS(m/z):262.1(M+H).SFC分析方法A-1-2，Rt＝2.584min。随后洗脱出来的异构体为(S)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬-6-羧酸苄酯(4.5g,收率16％，相对保留时间较大)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.43–7.27(m,5H),5.14(s,2H),4.64–4.40(m,2H),3.82(d,J＝13.0Hz,1H),3.62–3.05(m,3H),2.50–2.18(m,2H),2.01–1.65(m,3H),1.54–1.37(m,1H).LCMS(m/z):262.1(M+H).SFC分析方法A-1-2，Rt＝4.563min。
SFC分析方法A-1-2：Waters UPCC(CA-352)，分析柱：DaicelIG，100*3mm*3μm；流动相A：CO2，流动相B：MeOH(0.1％DEA)；流速：1.5mL/min；柱温：35℃；反压：1800psi；梯度：0-8.0min A/B＝80/20。
步骤B：(R)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]草酸壬酯·草酸盐和(S)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]草酸壬酯·草酸盐
将化合物(R)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬-6-羧酸苄酯(4.1g,15.6mmol)溶解在甲醇(50mL)中。在N2条件下，加入Pd/C(1.6g,1.56mmol，10％w/w)，H2(15psi)置换三次，在室温度搅拌8h。LCMS监测原料消失。反应液经硅藻土过滤，加入草酸(1g)成盐，浓缩，得到白色固体(R)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]草酸壬酯·草酸盐(3.0g)。1H NMR(400MHz,D2O)δ4.71–4.51(m,2H),3.65–3.57(m,1H),3.29–3.19(m,2H),3.08–2.95(m,1H),2.65–2.41(m,2H),2.26–2.11(m,1H),1.96–1.71(m,3H)。
将化合物(S)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬-6-羧酸苄酯(4.5g,17.2mmol)溶解在甲醇(50mL)中。在N2条件下，加入Pd/C(1.8g,1.7mmol，10％)，H2(15psi)置换三次，在室温度搅拌8h。LCMS监测原料消失。反应液经硅藻土过滤，加入草酸(1g)成盐，浓缩，得到白色固体(S)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]草酸壬酯·草酸盐(3.5g)。1H NMR(400MHz,D2O)δ4.72–4.52(m,2H),3.67–3.55(m,1H),3.30–3.18(m,2H),3.08–2.95(m,1H),2.64–2.44(m,2H),2.25–2.12(m,1H),1.95–1.74(m,3H)。
步骤C：(R)-6-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷和(S)-6-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷
实验过程参照中间体A-I所述方案进行，使用(R)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]草酸壬酯·草酸盐和(S)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]草酸壬酯·草酸盐。
中间体A-II
7-氯-8-氟-2-(甲硫基)-4-(2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛-6-基)-1,3,6-三氮杂萘
步骤A：2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛烷·对甲苯磺酸盐
在室温下，将2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛烷-6-羧酸苄酯(750mg，3.03mmol)、Pd/C(718mg，10％w/w，0.61mmol)溶于甲醇(15mL)，H2(15psi)置换两次，室温搅拌2h。LCMS检测反应结束后，反应液经过硅藻土过滤，有机相浓缩完全后，得白色固体2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛烷·对甲苯磺酸盐(750mg,收率86％)。LCMS(m/z):114.1(M+H)。
步骤B：7-氯-8-氟-2-(甲硫基)-4-(2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛-6-基)-1,3,6-三氮杂萘
室温条件下，将DIEA(1.25mL，7.57mmol)加入到2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛烷·对甲苯磺酸盐(750mg，2.63mmol)、4,7-二氯-8-氟-2-(甲硫基)-1,3,6-三氮杂萘(500mg,1.89mmol)的THF(15mL)溶液中。室温搅拌1h，LCMS监测反应结束后，反应液浓缩后，加入5mL乙腈溶解油状物，倒入H2O(100mL)中，棕黄色固体析出，过滤，滤饼经H2O(100mL)洗，烘干，得棕色固体7-氯-8-氟-2-(甲硫基)-4-(2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛-6-基)-1,3,6-三氮杂萘(640mg，收率99％)。LCMS(m/z):341.0(M+H)。
中间体A-II-A和A-II-B
4-((1S，7R)-2-氧-6-氮杂双环[5.1.0]辛-6-基)-7-氯-8-氟-2-(甲硫基)-1,3,6-三氮杂萘和4-((1R，7S)-2-氧-6-氮杂双环[5.1.0]辛-6-基)-7-氯-8-氟-2-(甲硫基)-1,3,6-三氮杂萘
步骤A：(1R,7S)-2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛烷-6-羧酸苄酯和(1S,7R)-2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛烷-6-羧酸苄酯
在0℃下，将ZnEt2(62.27mL,62.3mmol)加入到4,5,6,7-四氢-1,4-氧杂环戊烷-4-羧酸苄酯(5.8g，24.9mmol)的DCM(80mL)溶液中，所得反应液升至室温并搅拌0.5h。将二碘甲烷(8.03mL,174mmol)的DCM(30mL)溶液加入上述反应液，并在室温下继续搅拌反应3h。LCMS监测反应结束后，将反应液倒入半饱和的NH4Cl(200mL)水溶液中，DCM(50mL×3)萃取。收集有机相，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，浓缩有机相。所得粗产品经过FCC(SiO2,PE/EA＝0-40％)纯化，得到淡黄色油状产物2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛烷-6-羧酸苄酯(5g,收率81.3％)，LCMS(m/z):248.0(M+H)。
上述淡黄色油状产物经SFC(Waters SFC 150,REGIS(S,S)WHELK-O1(250*40mm 10μm),CO2/MeOH(0.1％ DEA-MeOH)＝90/10)拆分，首先洗脱出来的异构体为(1R,7S)-2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛烷-6-羧酸苄酯(2.2g，收率44％，相对保留时间较小)。SFC分析方法A-1I-2，Rt＝1.505min。随后洗脱出来的异构体为(1S,7R)-2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛烷-6-羧酸苄酯(2.1g,收率42％，相对保留时间较大)。SFC分析方法A-1I-2，Rt＝2.261min。
SFC分析方法A-1I-2：Waters UPCC(CA-415),分析柱：DaicelAD，100*3mm*3μm；流动相A：CO2，流动相B：MeOH(0.1％DEA)；流速：1.5mL/min；柱温：35℃；反压：1800psi；梯度：0-4.0min A/B＝90/10。
步骤B：(1R,7S)-2-氧-6-氮杂双环[5.1.0]辛烷·对甲苯磺酸盐和(1S,7R)-2-氧-6-氮杂双环[5.1.0]辛烷·对甲苯磺酸盐
实验过程参照中间体A-II所述方案进行，使用(1R,7S)-2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛烷-6-羧酸苄酯和(1S,7R)-2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛烷-6-羧酸苄酯。
步骤C：4-((1R,7S)-2-氧-6-氮杂双环[5.1.0]辛-6-基)-7-氯-8-氟-2-(甲硫基)-1,3,6-三氮杂萘和4-((1S,7R)-2-氧-6-氮杂双环[5.1.0]辛-6-基)-7-氯-8-氟-2-(甲硫基)-1,3,6-三氮杂萘
实验过程参照中间体A-II所述方案进行，使用(1R,7S)-2-氧-6-氮杂双环[5.1.0]辛烷·对甲苯磺酸盐和(1S,7R)-2-氧-6-氮杂双环[5.1.0]辛烷·对甲苯磺酸盐。
中间体B-1
6-(7-氯-8-氟-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷
中间体B-I的合成参照中间体A-I合成所述，在步骤A中使用7-氯-8-氟-5-甲氧基-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇。LCMS(m/z):385.1(M+H)。
中间体C-1
4-((S)-1-氧-6-氮杂-6-螺[3.5]壬基)-7-溴-2,6,8-三氟喹唑啉
步骤A：4-((S)-1-氧-6-氮杂-6-螺[3.5]壬基)-7-溴-2-氯-6,8-二氟喹唑啉
在冰浴下，向化合物(S)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]草酸壬酯·草酸盐(380mg,1.7mmol)的DMF(10mL)溶液中依次加入DIEA(617mg,4.8mmol)、7-溴-2,4-二氯-6,8-二氟喹唑啉(500mg,1.6mmol)。所得反应液在0℃条件下搅拌反应1h。LCMS监测反应结束后，向反应液中加入乙酸乙酯(80mL)。所得反应液经水洗涤，干燥，过滤浓缩干，所得粗产品经过FCC(SiO2,EA/PE＝0-25％)纯化，得黄色固体产物4-((S)-1-氧-6-氮杂-6-螺[3.5]壬基)-7-溴-2-氯-6,8-二氟喹唑啉(550mg,收率85％)。LCMS(m/z):403.9(M+H)。
步骤B：4-((S)-1-氧-6-氮杂-6-螺[3.5]壬基)-7-溴-2,6,8-三氟喹唑啉
在室温下，向化合物4-((S)-1-氧-6-氮杂-6-螺[3.5]壬基)-7-溴-2-氯-6,8-二氟喹唑啉(550mg,1.3mmol)的DMSO(10mL)溶液中加入KF(789mg,13mmol)。所得反应液在110℃条件下搅拌反应12h。LCMS监测反应结束后，向反应液中加入乙酸乙酯(50mL)。所得反应液经水洗涤，干燥，过滤浓缩干，所得粗产品经过FCC(SiO2,EA/PE＝0-20％)纯化，得黄色固体产物4-((S)-1-氧-6-氮杂-6-螺[3.5]壬基)-7-溴-2-氯-6,8-二氟喹唑啉(430mg,收率81％)。LCMS(m/z):390.0(M+H)。
中间体a
(R)-3-甲基-4-氧代哌啶-1,3-二羧酸1-(叔丁基)酯3-甲基酯
化合物3-甲基-4-氧代哌啶-1,3-二羧酸1-(叔丁基)酯3-甲基酯(120g)经SFC(SFC150,Waters)拆分(分离柱：DAICELIG,250*50mm,10μm；流动相：CO2/MeOH＝90/10；流速：120mL/min),得到首先洗脱出来的异构体1，为化合物a(52.8g,相对保留时间较小)。手性分析方法-a，Rt＝0.682min。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ4.59–4.42(m,1H),4.26–3.98(m,1H),3.73(s,3H),3.42–3.24(m,1H),3.16–3.01(m,1H),2.93–2.63(m,1H),2.58–2.40(m,1H),1.49(s,9H),1.31(s,3H)。LCMS(m/z):216.1(M-56+H)。随后洗脱出来的异构体2，为化合物a-1(52.4g,相对保留时间较大)。手性分析方法-a，Rt＝1.035min。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ4.60–4.41(m,1H),4.24–3.94(m,1H),3.73(s,3H),3.42–3.24(m,1H),3.17–3.00(m,1H),2.93–2.64(m,1H),2.56–2.40(m,1H),1.49(s,9H),1.31(s,3H)。
手性分析方法-a:(Waters UPCC,分析柱：DaicelIG，100*3mm 3μm；流动相A：CO2，流动相B：MeOH；流速：1.5mL/min；柱温：35℃；反压：1800psi；梯度：0-8.0min A/B＝90/10)。
中间体b
(S,E)–(4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇
步骤A：(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-叔丁基酯-3-甲基酯及(S,Z)-4-(氟亚甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-叔丁基酯-3-甲基酯
将(氟亚甲基)三苯基膦四氟硼酸盐(10.56g,27.64mmol)溶解到无水THF(50mL)中,氮气置换三次。在干冰乙醇条件下，把反应液的温度降至-70℃，将叔丁醇钾-四氢呋喃(27.64mL,1M,27.64mmol)溶液逐滴地滴加到反应体系中。保持温度继续搅拌1h。后将(R)-3-甲基-4-氧代哌啶-1,3-二羧酸-1-(叔丁基)-3-甲基酯(5.0g,18.43mmol)的无水四氢呋喃(15mL)溶液滴加到反应体系中。滴加完成后，所得混合物缓慢升至室温搅拌过夜。TLC监测反应结束后，将反应液缓慢倒入水(100mL)中，用乙酸乙酯萃取3次。有机相合并后，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩干，得到粗产品。粗产物通过FCC(SiO2，EA/PE＝0-15％)纯化，得到无色油状产物(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-叔丁基酯-3-甲基酯(1.98g,收率37％)。LCMS(m/z):232.1(M-56+H)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ6.55(d,J＝84.7,1H),4.35(d,J＝13.2Hz,1H),4.10–3.82(m,1H),3.69(s,3H),3.00–2.85(m,1H),2.76(d,J＝13.1Hz,1H),2.71–2.60(m,1H),2.31–2.08(m,1H),1.46(s,9H),1.29(s,3H)；及无色油状产物(S,Z)-4-(氟亚甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-叔丁基酯-3-甲基酯(600mg,收率11％)。LCMS(m/z):232.1(M-56+H)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ6.43(d,J＝83.7,1H),3.86–3.75(m,1H),3.71(s,3H),3.62–3.47(m,1H),3.42–3.29(m,2H),2.24–2.06(m,2H),1.46(s,9H),1.43–1.39(m,3H)。
步骤B：(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基哌啶-3-羧酸甲酯·盐酸盐
室温条件下，将4M HCl-二氧六环(10mL)加入到(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-叔丁基酯-3-甲基酯(600mg,2.09mmol)中，保持室温搅拌1h。浓缩除去酸溶液，得到白色固体(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基哌啶-3-羧酸甲酯·盐酸盐(572mg,收率100％)。LCMS(m/z):188.1(M+H)。
步骤C：(S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-羧酸甲酯
室温条件下，将(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基哌啶-3-羧酸甲酯·盐酸盐(370mg,1.98mmol)溶解至甲醇(5mL)中，滴加三乙胺至反应液pH～10,搅拌10分钟，后滴加冰醋酸至反应液pH～4。将甲醛水溶液(481.15mg,5.93mmol)加入反应液中，在室温下搅拌30min。将氰基硼氢化钠(136.62mg,2.17mmol)加入反应液中，在室温下搅拌2h。LCMS监测反应结束后，减压浓缩除去溶剂，无水四氢呋喃带蒸两遍后，得到白色固体(S,E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-羧酸甲酯(380mg,收率96％)。LCMS(m/z):202.1(M+H)。
步骤D：(S,E)–(4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇
在冰浴条件下，将1M的LiAlH4-THF溶液(2.83mL,107.5mg,2.83mmol)滴加到(E)-4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-羧酸甲酯(380mg,1.89mmol)的无水四氢呋喃(5mL)溶液中。所得混合物在室温下搅拌20min。LCMS监测反应结束后，反应液用十水合硫酸钠淬灭，直到没有气泡产生。加入约5g无水硫酸钠除水。反应液用硅藻土过滤，滤饼用无水四氢呋喃洗涤三遍。收集滤液，浓缩至干，得无色油状产物(S,E)–(4-(氟亚甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇(300mg,收率92％)。LCMS(m/z):174.1(M+H)。
中间体c
((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇
步骤A：(S)-4-(二氟亚甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-(叔丁基)-3-甲基酯
将(R)-3-甲基-4-氧哌啶-1,3-二羧酸-1-(叔丁基)-3-甲基酯(10.0g,36.86mmol)和2-((二氟甲基)磺酰基)吡啶(10.68g,55.29mmol)溶解到无水DMF(100mL)中,氮气置换三次。将体系用干冰乙醇浴冷却，滴加1摩尔的叔丁醇钾四氢呋喃溶液(66.34mL,66.34mmol)。所得混合液保持温度搅拌2h，后缓慢升至室温后继续搅拌3h。LCMS监测反应结束后，用饱和氯化铵水溶液(50mL)淬灭反应，加入水(200mL)、DCM/MeOH(100mL,v/v＝10/1)萃取5次。LiCl水溶液(100mL,4％w/w)洗涤3次，饱和食盐水(100mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩干。所得粗品经FCC(SiO2,EA/PE＝0-20％)纯化后，得到淡黄色油状产物(5.2g,收率46％)。LCMS(m/z):250.1(M-56+H)。
步骤B：(3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-(叔丁基)-3-甲基酯
室温条件下，将(S)-4-(二氟亚甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-(叔丁基)-3-甲基酯(6.20g,20.31mmol)溶解到甲醇(150mL)中，用氮气置换三次。加入钯碳(2.16g,10％w/w)，用氢气置换三次。在15Psi的氢气氛围下30℃搅拌4h。LCMS监测反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤饼用甲醇洗涤三遍。收集滤液，浓缩干,得到无色油状产物(3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-(叔丁基)-3-甲基酯(5.53g,收率89％)。LCMS(m/z):252.1(M-56+H)。
步骤C：(3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基哌啶-3-羧酸甲酯·盐酸盐
室温条件下，将(3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基哌啶-1,3-二羧酸-1-(叔丁基)-3-甲基酯(5.53g,17.99mmol)溶解于4M HCl/二噁烷(60mL)中，所得混合液室温搅拌1h，浓缩除去酸溶液，得到白色固体(3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基哌啶-3-羧酸甲酯·盐酸盐(4.38g,收率100％)。LCMS(m/z):208.1(M+H)。
步骤D：(3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-羧酸甲酯
室温下，将(3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基哌啶-3-羧酸甲酯·盐酸盐(3.58g,14.69mmol),溶解至甲醇(40mL)中，加入甲醛水溶液(3.58g,37％w/w，44.07mmol)。所得混合物在室温下搅拌30min。加入氰基硼氢化钠(1.11g,17.63mmol)，所得混合液在室温下搅拌1.5h。LCMS监测反应结束后，将体系浓缩干，加入乙酸乙酯溶解粗产物，硅藻土过滤。所得滤液经FCC(SiO2,MeOH/DCM(含0.3％ DIEA)＝0-4％)纯化后，得到无色油状产物(3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-羧酸甲酯(3.0g,收率92％)。LCMS(m/z):222.1(M+H)。
步骤E：(3S,4S)-(4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇
在冰浴条件下，将1M的LiAlH4-THF(17.63mL,17.63mmol)滴加到(3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-羧酸甲酯(3.0g,13.56mmol)的无水THF(30mL)溶液中。所得混合液在0℃搅拌15min。LCMS监测反应结束后，加入十水合的硫酸钠淬灭反应，直到没有气泡产生。加入约8g无水硫酸钠。硅藻土过滤，滤饼用无水四氢呋喃洗涤3次。收集滤液，浓缩干，得到无色固体产物(3S,4S)-(4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇(2.6g,收率99％)。LCMS(m/z):194.1(M+H)。
中间体b-d3
(S,E)-(4-(氟亚甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲醇
步骤A：(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-甲酸甲酯
室温下，将碳酸钾(5.55g，40.2mmol)加入到(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基哌啶-3-羧酸甲酯盐酸盐(3.00g,13.4mmol)、氘代碘甲烷(2.33g,16.1mmol)和ACN(100mL)的混合溶液中，加完后加热至90℃搅拌过夜。LCMS监测反应结束后，过滤,用EA(50mL)淋洗滤饼。收集滤液浓缩并进一步FCC(SiO2，EA/PE＝0-20％)纯化，得到无色液体(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-甲酸甲酯(1.9g,收率69％)。LC-MS(m/z):205.1(M+H)。
步骤B：(S,E)-(4-(氟亚甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲醇
冰浴下，将LiAlH4(1M-THF,9.3mmol,9.3mL)滴入(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-甲酸甲酯(1.9g,9.3mmol)和THF(50mL)的混合溶液中，加完后在0℃冰浴搅拌0.5h。LCMS监测反应结束后，用Na2SO4·10H2O淬灭反应直到没有气体产生为止，反应液通过硅藻土过滤，得到的滤液低温(35℃)浓缩，得到4-氟亚甲基-3-甲基-1-甲基-D3-哌啶-3-甲醇(1.3g,79％收率)无色液体。LC-MS(m/z):177.1(M+H)。
中间体b-d5
(S,E)-(4-(氟亚甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)亚甲基-d2-醇
步骤A：(S,E)-(4-(氟亚甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)亚甲基-d2-醇
在冰浴条件下，将LiAlD4粉末(271.28mg,6.46mmol)加入到(S,E)-4-(氟亚甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-甲酸甲酯(1.10g,5.39mmol)的无水四氢呋喃(15mL)溶液中。所得混合物在室温下搅拌15min。LCMS监测反应结束后，反应液用十水合硫酸钠淬灭，直到没有气泡产生。再向反应液中加入约5g的无水硫酸钠除水。反应液用硅藻土过滤，滤饼用无水四氢呋喃洗涤三遍。收集滤液，浓缩至干，得到无色油状产物(S,E)-(4-(氟亚甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)亚甲基-d2-醇(951mg,收率99％)。该产品没有经过纯化直接用于下一步反应。LCMS(m/z):179.1(M+H)。
中间体c-d3
((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲醇
中间体c-d3的合成参照中间体b-d3合成所述，在步骤A中使用中间体c-1-3。LCMS(m/z):197.1(M+H)。
中间体c-d5
((3S,4S)-4-(二氟甲基)-3-甲基-1-(甲基-d3)哌啶-3-基)甲-d2-醇
中间体c-d5的合成参照中间体b-d5合成所述，在步骤A中使用中间体c-1-3-d3。LCMS(m/z):199.1(M+H)。
参照上述方法合成下列中间体。
中间体L
(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)硼酸
步骤A：7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-醇
冰浴搅拌下，将TIPSCl(177g，920mmol)滴加到7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)萘-1,3-二醇(CAS：2621932-34-9，300g，837mmol)和咪唑(119g，1.76mol)的DCM(3L)溶液中。滴加完成后将体系缓慢升至室温并搅拌6h。TLC监测反应完成，加入水(900mL)，搅拌30min，分液。水相用DCM(900mL)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩至干，经硅胶Plug(PE/EA＝50:1)纯化，得到化合物7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-醇(397g,收率92％)。
步骤B：7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基三氟甲磺酸酯
在-45～-35℃条件下，将三氟甲磺酸酐(326g,1.16mol)滴加到7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-醇(397g,0.77mol)和DIPEA(298g,2.31mol)的DCM(4L)溶液中。滴加完成后，保持温度继续搅拌0.5h，TLC监测反应完成。将体系加入至水(800mL)中，分液，水相用DCM(1.2L)萃取。合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干。经硅胶Plug(PE/EA＝50:1)纯化，得到化合物7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基三氟甲磺酸酯(469g,收率94％)。
步骤C：(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)硼酸
氮气保护下，将Pd(dppf)Cl2(13.2g,18.2mmol)加入到7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基三氟甲磺酸酯(235g,0.36mol)、5,5,5',5'-四甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼烷)(164g,0.73mol)和醋酸钾(107g,1.1mol)的二氧六环(2.4L)溶液中。体系升至85℃搅拌反应20h。TLC监测反应完成，冷至室温，硅藻土过滤，EA冲洗，浓缩后经硅胶柱(EA/PE＝0-5％)纯化，得到粗品化合物。
将上述粗品化合物溶于甲醇(1.2L)，加入1N HCl(2.4L)，所得混合物室温搅拌30min。加入EA(2.4L)，继续搅拌2h。静置分液，有机相依次用水(2.4L)和饱和食盐水(2.4L×2)洗涤，浓缩后，得到(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)硼酸(183g,收率92％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.66–7.60(m,1H),7.34(d,J＝2.5Hz,1H),7.24–7.19(m,1H),7.18(d,J＝2.5Hz,1H),4.52(s,2H),1.35–1.29(m,3H),1.24–1.21(m,3H),1.20–1.17(m,18H),1.12(d,J＝7.3Hz,18H).LCMS(m/z):543.3(M+H)。
实施例1
4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-8-氟-4-(1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬-6-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7-基)-5-乙基-6-氟萘-2-醇
步骤A：6-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷
在N2下，向化合物6-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷(400mg,1.1mmol)的1,4-二氧六环(10mL)和水(2mL)溶液中加入2-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(CAS:262193248-5,406mg,1.1mmol)、磷酸钾(700mg,3.3mmol)和cata CXium A Pd-G3(240mg，0.33mmol)。所得反应液在100℃条件下搅拌反应2h。LCMS监测反应结束后，反应液经硅藻土过滤，滤液浓缩干，所得粗产品经FCC(SiO2,EA/PE＝0-35％)纯化，得黄色固体产物6-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷(420mg,收率67％)。LCMS(m/z):553.1(M+H)。
步骤B：6-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(甲基亚磺酰基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷
在室温下，向化合物6-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷(420mg,0.76mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中，加入间氯过氧苯甲酸(154mg,0.76mmol)，保持温度搅拌反应1h。LCMS监测反应结束后，将50mL饱和碳酸氢钠溶液加入反应液中，再用二氯甲烷萃取。有机相合并，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩干，得粗产品6-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(甲基亚磺酰基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷(380mg)。LCMS(m/z):569.1(M+H)。
步骤C：6-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基萘-1-基)-8-氟吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷
在-40℃下，向化合物6-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(甲基亚磺酰基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷(300mg)和((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇(132mg,0.69mol)的无水四氢呋喃(6mL)中，加入1N的双(三甲基硅基)氨基钠溶液(0.22mL,0.22mmol)。所得反应液在-40℃条件下继续反应2h。LCMS监测反应结束后，将反应液倒入30mL饱和氯化铵溶液中，乙酸乙酯萃取，有机相合并后，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩干，得黄色固体粗产品6-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基萘-1-基)-8-氟吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷(400mg)。LCMS(m/z):698.3(M+H)。
步骤D：4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-8-氟-4-(1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬-6-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7-基)-5-乙基-6-氟萘-2-醇
在室温下，向化合物6-(2-(((3S，4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基萘-1-基)-8-氟吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷(300mg)加入TFA(2mL)，保持温度搅拌反应0.5h。LCMS监测反应结束后，反应液经pre-HPLC(C18,CAN/(10mmol NH4HCO3/H2O)＝55-75％)纯化，得白色固体产品4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-8-氟-4-(1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬-6-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7-基)-5-乙基-6-氟萘-2-醇(45mg,收率14％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.94(s,1H),9.23(s,1H),7.77(dd,J＝9.1,6.0Hz,1H),7.40–7.30(m,2H),7.05(dd,J＝4.3,2.7Hz,1H),6.31(t,J＝55.7Hz,1H),4.53–4.12(m,6H),4.08–3.85(m,1H),3.61–3.41(m,1H),2.89–2.74(m,2H),2.46–2.31(m,3H),2.19–2.04(m,5H),1.93–1.58(m,8H),1.12(s,3H),0.79–0.69(m,3H).19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-119.52～-119.65,-139.08～-139.27.LCMS(m/z):654.3(M+H)。
实施例2、3
4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-8-氟-4-((R)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬-6-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7-基)-5-乙基-6-氟萘-2-醇和4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-8-氟-4-((S)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬-6-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7-基)-5-乙基-6-氟萘-2-醇
步骤A：4-(2-(((3S，4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-8-氟-4-(1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬-6-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7-基)-5-乙基-6-氟萘-2-醇(实施例1，45mg)经SFC(Waters SFC 150,REGIS(S,S)WHELK-O1(250*40mm 10μm),Supercritical CO2/EtOH(+0.1％7.0mol/l Ammonia in MeOH)＝80/20)拆分，首先洗脱出的异构体为实施例2(5mg，相对保留时间较小)。手性分析方法SFC-1，Rt＝4.409min。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.94(s,1H),9.23(s,1H),7.77(dd,J＝9.1,6.0Hz,1H),7.41–7.29(m,2H),7.12–6.99(m,1H),6.31(t,J＝56.0Hz,1H),4.49–3.88(m,7H),3.60–3.46(m,1H),2.91–2.75(m,2H),2.44–2.30(m,3H),2.15–2.03(m,5H),1.89–1.61(m,8H),1.12(s,3H),0.78–0.70(m,3H).19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-115.43～-119.39,-119.58,-139.08～-139.25.LCMS(m/z):654.3(M+H)。随后洗脱出来的异构体为实施例3(16mg，相对保留时间较大)。手性分析方法SFC-1，Rt＝5.262min。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.95(s,1H),9.22(s,1H),7.77(dd,J＝9.1,6.0Hz,1H),7.42–7.28(m,2H),7.13–6.98(m,1H),6.31(t,J＝55.6Hz,1H),4.56–3.85(m,7H),3.65–3.45(m,1H),2.88–2.78(m,2H),2.45–2.32(m,3H),2.16–2.05(m,5H),1.88–1.59(m,8H),1.12(s,3H),0.79–0.66(m,3H).19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-115.55～-119.41,-119.56～-119.60,-139.07～-139.28.LCMS(m/z):654.3(M+H)。
手性分析方法SFC-1：Waters UPCC(CA-352),分析柱：REGIS(S,S)WHELK-O1(100*3mm*3μm)；流动相A：CO2，流动相B：EtOH(+0.1％7.0mol/l Ammonia in MeOH)；流速：1.5mL/min；柱温：35℃；反压：1800psi；梯度：0-8.0min A/B＝80/20。
参照上述合成方案及适当变体制备并表征下列化合物：



实施例17
4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基)甲氧基)-4-((S)-1-氧杂-6-氮杂-6-螺[3.5]壬基)-6,8-二氟-7-喹唑啉基)-5-乙基-6-氟-2-萘酚
步骤A：4-((S)-1-氧-6-氮杂-6-螺[3.5]壬基)-7-(8-乙基-7-氟-3-甲氧基甲氧基-1-萘基)-2,6,8-三氟喹唑啉
在N2下，向化合物4-((S)-1-氧-6-氮杂-6-螺[3.5]壬基)-7-溴-2,6,8-三氟喹唑啉(200mg,0.5mmol)的1,4-二氧六环(5mL)和水(1mL)溶液中加入2-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(278mg,0.7mmol)、磷酸钾(218mg,1.0mmol)和cata CXium A Pd-G3(111mg，0.15mmol)。所得反应液在100℃条件下搅拌反应5h。LCMS监测反应结束后，反应液经硅藻土过滤，滤液浓缩干，所得粗产品经FCC(SiO2,EA/PE＝0-45％)纯化，得黄色固体产物4-((S)-1-氧-6-氮杂-6-螺[3.5]壬基)-7-(8-乙基-7-氟-3-甲氧基甲氧基-1-萘基)-2,6,8-三氟喹唑啉(190mg,收率68％)。LCMS(m/z):542.2(M+H)。
步骤B：2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基)甲氧基)-4-((S)-1-氧杂-6-氮杂[3.5]壬基)-7-(8-乙基-7-氟-3-甲氧基甲氧基-1-萘基)-6,8-二氟喹唑啉
在0℃下，向化合物4-((S)-1-氧-6-氮杂-6-螺[3.5]壬基)-7-(8-乙基-7-氟-3-甲氧基甲氧基-1-萘基)-2,6,8-三氟喹唑啉(80mg,0.15mol)和((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇(43mg,0.22mol)的无水四氢呋喃(5mL)中，加入NaH(12mg,0.30mmol)。所得反应液在0℃条件下继续反应1h。LCMS监测反应结束后，反应液倒入30mL饱和氯化铵溶液中，乙酸乙酯萃取，有机相合并后，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩干，所得粗产品经FCC(SiO2,EA/PE＝30-60％)纯化，得黄色固体2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基)甲氧基)-4-((S)-1-氧杂-6-氮杂[3.5]壬基)-7-(8-乙基-7-氟-3-甲氧基甲氧基-1-萘基)-6,8-二氟喹唑啉(70mg,收率66％)。LCMS(m/z):715.2(M+H)。
步骤C：4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基)甲氧基)-4-((S)-1-氧杂-6-氮杂-6-螺[3.5]壬基)-6,8-二氟-7-喹唑啉基)-5-乙基-6-氟-2-萘酚
在室温下，向化合物2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基)甲氧基)-4-((S)-1-氧杂-6-氮杂[3.5]壬基)-7-(8-乙基-7-氟-3-甲氧基甲氧基-1-萘基)-6,8-二氟喹唑啉(70mg,0.1mol)加入TFA(1mL)，保持温度搅拌反应0.5h。LCMS监测反应结束后，反应液经pre-HPLC(C18,CAN/(10mmol NH4HCO3/H2O)＝55-75％)纯化，得白色固体产品4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基)甲氧基)-4-((S)-1-氧杂-6-氮杂-6-螺[3.5]壬基)-6,8-二氟-7-喹唑啉基)-5-乙基-6-氟-2-萘酚(2mg,收率3％)。LCMS(m/z):671.3(M+H)。


实施例27
4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-8-氟-4-(1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬-6-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7-基)-5-乙基-6-氟萘-2-醇
步骤A：6-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅基)氧基)萘-1-基)-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷
在N2下，向化合物6-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷(500mg,1.4mmol)的1,4-二氧六环(10mL)和水(2mL)溶液中加入(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅基)氧基)萘-1-基)硼酸(1.15g,2.1mmol)、磷酸钾(897mg,4.2mmol)和cata CXium A Pd-G3(103mg，0.14mmol)。所得反应液在100℃条件下搅拌反应5h。LCMS监测反应结束后，反应液经硅藻土过滤，滤液浓缩干，所得粗产品经过FCC(SiO2,EA/PE＝0-15％)纯化，得黄色固体产物6-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅基)氧基)萘-1-基)-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷(370mg,收率32％)。LCMS(m/z):718.3(M+H)。
步骤B：6-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅基)氧基)萘-1-基)-2-(甲基亚磺酰基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷
在室温下，向化合物6-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅基)氧基)萘-1-基)-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷(370mg,0.45mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中，加入间氯过氧苯甲酸(92mg,0.45mmol)，保持温度搅拌反应1h。LCMS监测反应结束后，将20mL饱和碳酸氢钠溶液加入反应液中，再用二氯甲烷萃取。有机相合并，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩干，得粗产品6-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅基)氧基)萘-1-基)-2-(甲基亚磺酰基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷(380mg)。LCMS(m/z):833.2(M+H)。
步骤C：6-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅基)氧基)萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷
在-40℃下，向化合物6-(8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅基)氧基)萘-1-基)-2-(甲基亚磺酰基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷(180mg,0.22mol)和((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲醇(50mg,0.26mol)的无水四氢呋喃(5mL)中，加入1N的双(三甲基硅基)氨基钠溶液(0.44mL,0.44mmol)。所得反应液在-40℃条件下继续反应1h。LCMS监测反应结束后，反应液倒入20mL饱和氯化铵溶液中。再用乙酸乙酯萃取。有机相合并后，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩干，得黄色固体粗产品6-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅基)氧基)萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷(130mg)。LCMS(m/z):962.3(M+H)。
步骤D：4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-8-氟-4-(1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬-6-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7-基)-5-乙炔基-6-氟萘-2-醇
在室温下，向化合物6-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-8-氟-7-(7-氟-8-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-3-((三异丙基甲硅基)氧基)萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷(130mg,0.13mol)的DMF(2mL)溶液中加入CsF(205mg,1.3mmol)，保持50℃搅拌反应1h。LCMS监测反应结束后，反应液经pre-HPLC(C18,CAN/(10mmol NH4HCO3/H2O)＝45-75％)纯化，得白色固体产品4-(2-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1,3-二甲基哌啶-3-基)甲氧基)-8-氟-4-(1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬-6-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-7-基)-5-乙炔基-6-氟萘-2-醇(32mg,收率36％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.16(s,1H),9.29–9.06(m,1H),7.98(dd,J＝9.3,5.8Hz,1H),7.51–7.43(m,1H),7.40(d,J＝2.5Hz,1H),7.21(dd,J＝5.0,2.5Hz,1H),6.32(t,J＝55.4Hz,1H),4.52–4.10(m,6H),4.04–3.80(m,2H),3.58–3.41(m,1H),3.30(s,1H),2.91–2.76(m,2H),2.44–2.31(m,1H),2.21–2.00(m,4H),1.97–1.55(m,8H),1.13(s,3H).19FNMR(376MHz,DMSO-d6)δ-110.71,-140.03.LCMS(m/z):650.3(M+H)。





实施例57
7'-([(3S,4S)-4-(二氟甲基)-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基]甲氧基)-8-乙基-1',7-二氟-5'-(2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛-6-基)-3',6',8'-三氮杂-[1,2'-联萘]-3-醇
步骤A：(2-(1',7-二氟-7'-(甲硫基)-5'-(2-氧杂-6-氮杂二环[5.1.0]辛-6-基)-3-[三(异丙基)甲氧基]-3',6',8'-三氮杂-1,2'-联萘-8-{乙炔基)三(异丙醇)硅烷
室温条件下，将7-氯-8-氟-2-(甲硫基)-4-(2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛-6-基)-1,3,6-三氮杂萘(1.83g,3.38mmol)、cataCXium A Pd G3(274mg,376μmol)、K3PO4(980mg,5.66mmol)和1,4-dioxane/H2O＝4/1(15mL)的混合溶液N2置换三次后，升温至110℃搅拌2h。LCMS检测反应结束后，将反应液倒入H2O(100mL)中，EA(60mL×3)萃取，收集的有机相用饱和NaCl(20mL)洗涤，有机液浓缩后。得到的粗品经FCC((EtOH/EA＝1/3)/PE＝0-20％)纯化，得到黄色固体(2-{1',7-二氟-7'-(甲硫基)-5'-(2-氧杂-6-氮杂二环[5.1.0]辛-6-基)-3-[三(异丙基)甲氧基]-3',6',8'-三氮杂-1,2'-联萘-8-{乙炔基)三(异丙醇)硅烷(900mg,59％)。LCMS(m/z):804.2(M+H)。
步骤B：(2-(1',7-二氟-7'-(甲基亚磺酰基)-5'-(2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛-6-基)-3-[三(异丙基)甲氧基]-3',6'-,8'-三氮杂-1,2'-联萘-8'-乙炔基)三(异丙醇)硅烷
室温条件下，将间氯过氧苯甲酸(273mg,1.34mmol,85％含量)加入到2-(1',7-二氟-7'-(甲硫基)-5'-(2-氧杂-6-氮杂二环[5.1.0]辛-6-基)-3-[三(异丙基)甲氧基]-3',6',8'-三氮杂-1,2'-联萘-8-(乙炔基)三(异丙醇)硅烷(900mg,1.34mmol)和DCM(15mL)的溶液中，室温搅拌2h。TLC和LCMS监测反应结束后，将反应液用DCM(50mL)稀释，加入半饱和的aq.NaHCO3(20mL)洗涤，DCM(60mL×3)萃取，收集有机相，饱和NaCl(30mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，有机液浓缩后，得到黄色固体(2-{1',7-二氟-7'-(甲基亚磺酰基)-5'-(2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛-6-基)-3-[三(异丙基)甲氧基]-3',6'-,8'-三氮杂-1,2'-联萘-8'-乙炔基)三(异丙醇)硅烷(900mg，收率98％)。LCMS(m/z):819.2(M+H)。
步骤C：[2-(7'-([(3S,4S)-4-(二氟甲基)-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基]甲氧基)-1',7-二氟-5'-(2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛-6-基)-3-[三(异丙基)甲氧基]-3',6',8'-三氮杂-1,2'-联萘-8-基)乙炔基]三(异丙醇)硅烷
在-78℃条件下，将t-BuONa(0.73mL,2.0MTHF溶液,1.46mmol)滴加到[(3S,4S)-4-(二氟甲基)-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基]甲醇(85mg,440umol)的THF(3mL)溶液中，搅拌0.5h后，将(2-{1',7-二氟-7'-(甲基亚磺酰基)-5'-(2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛-6-基)-3-[三(异丙基)甲氧基]-3',6'-,8'-三氮杂-1,2'-联萘-8'-乙炔基)三(异丙醇)硅烷(300mg,366umol)加入到上述反应液中，-78℃条件下搅拌1h。LCMS监测反应结束后，将反应液倒入半饱和的NH4Cl(50mL)中，EA(50mLx3)萃取，收集有机相后，饱和NaCl(20mL)溶液洗涤，无水Na2SO4干燥，浓缩，粗产物经FCC(SiO2，(EtOH/EA＝1/3)/PE＝0-40％)纯化，得到黄色固体[2-(7'-([(3S,4S)-4-(二氟甲基)-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基]甲氧基)-1',7-二氟-5'-(2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛-6-基)-3-[三(异丙基)甲氧基]-3',6',8'-三氮杂-1,2'-联萘-8-基)乙炔基]三(异丙醇)硅烷(110mg，收率32％)。LCMS(m/z):474.8(M/2+H)。
步骤D：7'-{[(3S,4S)-4-(二氟甲基)-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基]甲氧基}-8-乙炔基-1',7-二氟-5'-(2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛-6-基)-3',6',8'-三氮杂-[1,2'-联萘基]-3-醇
室温条件下，将CsF(100mg,0.66mmol)加入到[2-(7'-([(3S,4S)-4-(二氟甲基)-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基]甲氧基)-1',7-二氟-5'-(2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛-6-基)-3-[三(异丙基)甲氧基]-3',6',8'-三氮杂-1,2'-联萘-8-基)乙炔基]三(异丙醇)硅烷(110mg,116umol)的DMF(3mL)溶液中。升温至45℃反应1h，LCMS监测反应结束后，反应液经Pre-HPLC(C18,ACN/10mM NH4HCO3＝50-80％)制备，得淡黄色固体7'-{[(3S,4S)-4-(二氟甲基)-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基]甲氧基}-8-乙炔基-1',7-二氟-5'-(2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛-6-基)-3',6',8'-三氮杂-[1,2'-联萘基]-3-醇(60mg，收率81％)。LCMS(m/z):636.3(M+H).1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ9.43–9.30(m,1H),7.91–7.80(m,1H),7.38–7.26(m,2H),7.22(d,J＝2.5Hz,1H),6.20(t,J＝55.6Hz,1H),4.80–4.50(m,3H),4.06–3.95(m,1H),3.90–3.78(m,2H),3.74–3.65(m,1H),3.55–3.49(m,0.6H),3.41–3.34(m,1H),3.27–3.25(m,0.4H),3.16–3.05(m,1H),3.01–2.92(m,1H),2.49–2.32(m,1H),2.24(s,3H),2.05–1.70(m,6H),1.47–1.38(m,1H),1.32–1.27(m,1H),1.24–1.16(m,3H),0.96–0.75(m,1H).19F NMR(376MHz,Methanol-d4)δ-110.94–-113.36,-118.79–-122.50,-139.31–-140.89。
步骤E：7'-([(3S,4S)-4-(二氟甲基)-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基]甲氧基)-8-乙基-1',7-二氟-5'-(2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛-6-基)-3',6',8'-三氮杂-[1,2'-联萘]-3-醇
室温下，将7'-([(3S,4S)-4-(二氟甲基)-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基]甲氧基)-8-乙炔基-1',7-二氟-5'-(2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛-6-基)-3',6',8'-三氮杂-[1,2'-联萘基]-3-醇(30mg，47.2umol)、Pd/C(28mg，10％w/w，23.6umol)溶于甲醇(10mL)。H2气球置换空气两次,并在H2气球条件下室温搅拌1h。LCMS监测反应结束后,反应液过滤得到澄清的有机相，浓缩完全。加入乙腈(1mL)，去离子水(2mL)，冻干，得到白色固体7'-([(3S,4S)-4-(二氟甲基)-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基]甲氧基)-8-乙基-1',7-二氟-5'-(2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛-6-基)-3',6',8'-三氮杂-[1,2'-联萘]-3-醇(20mg，收率66％)。LCMS(m/z):640.3(M+H).1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ9.46–9.33(m,1H),7.67(dd,J＝9.0,5.9Hz,1H),7.29(d,J＝2.7Hz,1H),7.27–7.19(m,1H),7.11–7.04(m,1H),6.20(t,J＝55.6Hz,1H),4.76–4.49(m,3H),4.05–3.94(m,1H),3.89–3.78(m,2H),3.75–3.63(m,1H),3.43–3.34(m,1H),3.15–3.04(m,1H),3.00–2.90(m,1H),2.53–2.33(m,2H),2.25–2.15(m,4H),1.98–1.72(m,6H),1.45–1.36(m,1H),1.25–1.17(m,3H),0.87–0.68(m,4H).19F NMR(376MHz,Methanol-d4)δ-117.86–-123.89,-136.19–-142.09。
参照上述合成方案及适当变体制备并表征下列化合物。



实施例81
7'-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基)甲氧基)-8-乙炔基-1',7-二氟-5'-(2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛-6-基)-3',6',8'-三氮杂-[1,2'-联萘]-3-醇
实施例81的合成详见实施例57合成所述相关步骤进行。LCMS(m/z):636.3(M+H).1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ9.43–9.30(m,1H),7.91–7.80(m,1H),7.38–7.26(m,2H),7.22(d,J＝2.5Hz,1H),6.20(t,J＝55.6Hz,1H),4.80–4.50(m,3H),4.06–3.95(m,1H),3.90–3.78(m,2H),3.74–3.65(m,1H),3.55–3.49(m,0.6H),3.41–3.34(m,1H),3.27–3.25(m,0.4H),3.16–3.05(m,1H),3.01–2.92(m,1H),2.49–2.32(m,1H),2.24(s,3H),2.05–1.70(m,6H),1.47–1.38(m,1H),1.32–1.27(m,1H),1.24–1.16(m,3H),0.96–0.75(m,1H).19F NMR(376MHz,Methanol-d4)δ-110.94–-113.36,-118.79–-122.50,-139.31–-140.89。
实施例82
7'-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基)甲氧基)-5'-((1S,7S)-2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛-6-基)-8-乙炔基-1',7-二氟-3',6',8'-三氮杂-(1,2'-联萘基)-3-醇
实施例82的合成参照实施例57合成所述，步骤A中使用中间体A-II-A。LCMS(m/z):636.3(M+H).1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ9.47–9.30(m,1H),7.96–7.73(m,1H),7.43–7.29(m,2H),7.26–7.16(m,1H),6.47–5.97(m,1H),4.59–4.49(m,3H),4.08–3.95(m,1H),3.90–3.78(m,2H),3.76–3.65(m,1H),3.54–3.47(m,0.5H),3.20–3.06(m,1H),3.03–2.92(m,1H),2.60–2.41(m,1H),2.24(s,3H),2.21–2.15(m,0.5H),2.07–1.96(m,2H),1.95–1.86(m,1H),1.83–1.73(m,3H),1.66–1.52(m,0.5H),1.48–1.39(m,1H),1.25–1.17(m,3H),0.96–0.87(m,1H),0.84–0.75(m,0.5H).19F NMR(376MHz,Methanol-d4)δ-111.71,-119.23,-121.69,-140.14。
实施例83
7'-(((3S,4S)-4-(二氟甲基)-1-甲基-3-甲基-3-哌啶基)甲氧基)-5'-((1S,7S)-2-氧杂-6-氮杂双环[5.1.0]辛-6-基)-8-乙炔基-1',7-二氟-3',6',8'-三氮杂-(1,2'-联萘基)-3-醇
实施例83的合成参照实施例57合成所述，步骤A中使用中间体A-II-B。LCMS(m/z):636.3(M+H).1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ9.46–9.30(m,1H),7.94–7.75(m,1H),7.44–7.27(m,2H),7.21(d,J＝2.6Hz,1H),6.43–6.00(m,1H),4.78–4.70(m,1H),4.63–4.50(m,2H),4.08–3.94(m,1H),3.90–3.79(m,2H),3.76–3.65(m,1H),3.57–3.50(m,0.5H),3.43–3.35(m,1H),3.27–3.23(m,0.5H),3.17–3.08(m,1H),3.01–2.91(m,1H),2.50–2.31(m,1H),2.29–2.16(m,3H),2.05–1.89(m,2H),1.87–1.70(m,4H),1.47–1.38(m,1H),1.24–1.17(m,3H),0.94–0.76(m,1H).19F NMR(376MHz,Methanol-d4)δ-111.77,-119.41,-121.48,-140.13。
参照上述合成方案及适当变体合成并表征下列化合物。







活性实施例
实施例1:本发明化合物对KRAS G12V突变的NCI-H727细胞的增殖抑制效果
本实验评估并验证了本发明化合物对KRAS G12V突变细胞NCI-H727细胞的增殖抑制活性。
将NCI-H727细胞(南京科佰生物科技有限公司，货号为CBP60182，贴壁，培养基RPMI-1640+10％FBS(GIBCO,Cat#10091-148))置于37℃、5％CO2、95％湿度条件下培养。
3D细胞活力检测：收获处于对数生长期的细胞并采用血小板计数器进行细胞计数。用台盼蓝排斥法检测细胞活力，确保细胞活力在90％以上。配制含1％MC(Sigma,Cat#M0512)的RPMI-1640培养基并加入10％ FBS配制成3D细胞培养基，用3D培养基调整细胞浓度为14815个细胞/mL并使MC的含量为0.65％；分别添加135μL细胞悬液至96孔透明平底黑壁板(Greiner,Cat#655096)中；将96孔板中的细胞置于37℃、5％ CO2条件下过夜培养。
IC50测定药物配制：用培养基配制10倍药物溶液，在接种有细胞的96孔板中每孔加入10μL药物溶液，使得工作浓度为最高10μM，3×稀释，9个浓度，每个药物浓度设置2个复孔。将已加药的96孔板中的细胞置于37℃、5％CO2条件下继续培养7天，然后进行CTG检测(Luminescent Cell Viability Assay(Promega,Cat#G7573))。
平衡细胞板至室温30分钟并融化CTG试剂(Luminescent Cell Viability Assay(Promega,Cat#G7573))，每孔加入75μL的CTG溶液检测，在定轨摇床上振动5分钟使细胞裂解。将细胞板放置于室温25分钟以稳定冷光信号，读取冷光值(多功能酶标仪，PerkinElmer#2105)。
使用GraphPad Prism软件分析数据，利用Dose-response-inhibition方程来拟合数据得出剂量-效应曲线，并由此计算IC50值。
细胞存活率(％)＝(Lum待测药-Lum培养液对照)/(Lum细胞对照-Lum培养液对照)×100％。
本发明化合物对KRAS G12V突变的NCI-H727人肺癌细胞显示出令人满意的抗增殖活性，IC50范围在<1000nM，优选<100nM，代表性活性数据见下表：
实施例2:本发明化合物对KRAS G12D突变的AGS细胞的增殖抑制效果
本实验评估并验证了本发明化合物对KRAS G12D突变细胞AGS细胞的增殖抑制活性。
将AGS细胞(南京科佰生物科技有限公司，货号CBP60476，贴壁，培养基(F12K Nutrient Mixture+10％FBS(GIBCO,Cat#10091-148))在37℃、5％CO2、95％湿度条件下培养，1500/孔，收获处于对数生长期的细胞并采用基于经典台盼蓝染色法原理的Countstar自动细胞计数仪进行细胞计数及检测细胞活力，确保细胞活力在90％以上。调整细胞浓度；分别添加80μL细胞悬液至96孔透明平底黑壁板(Greiner,Cat#655090)中，将96孔板中的细胞置于37℃、5％CO2条件下培养。
IC50测定药物配制：用培养基配制5倍药物溶液，在接种有细胞的96孔板中每孔加入20μL药物溶液，使得工作浓度为最高10μM，3×稀释，9个浓度，每个药物浓度设置2个复孔。将已加药的96孔板中的细胞置于37℃、5％CO2条件下继续培养3天，然后进行CTG检测。
平衡细胞板至室温30分钟并融化CTG试剂(Luminescent Cell Viability Assay(Promega,Cat#G7573))，每孔加入50μL的CTG溶液，在定轨摇床上振动2分钟使细胞裂解。将细胞板放置于室温10分钟以稳定冷光信号，读取冷光值(多功能酶标仪，PerkinElmer#2105)。
使用GraphPad Prism软件分析数据，利用Dose-response-inhibition方程来拟合数据得出剂量-效应曲线，并由此计算IC50值。
细胞存活率(％)＝(Lum待测药-Lum培养液对照)/(Lum细胞对照-Lum培养液对照)×100％。
本发明化合物对KRAS G12D突变的AGS人胃腺癌细胞显示出令人满意的抗增殖活性，IC50范围在<1000nM，优选<100nM，代表性活性数据见下表。
实施例3:本发明化合物的大鼠盒式给药(Cassette)药代动力学特性
通过大鼠Cassette药代动力学实验(Nagilla R.等人,J.Pharm.Sci.2011,100,3862–3874.)评价了本发明化合物的药代动力学特征。
该研究使用雄性SD大鼠，周龄6-8周，体重220-250g,购自昭衍(苏州)新药研究中心有限公司；并使用以下试剂：甲苯磺丁脲(Tolbutamide)(阿拉丁，货号H1401054)；磺丁基β环糊精(Captisol，山东滨州智源生物,货号20191013)；丙二醇(15)硬脂酸酯(Solutol，美仑生物，货号S0206A)；DMSO(Vetec公司，货号WXBD0293V)；乙腈(Sigma-Aldrich，货号WXBD1744V)；甲醇(Sigma-Aldrich，货号WXBD2831V)。
将化合物组合配制到5％DMSO/10％Solutol/85％(20％Captisol)的溶剂中，最终每个化合物的浓度为1mg/mL,将药物配制物按照1mL/kg的注射体积尾静脉注射给SD大鼠，分别在5min、15min、30min、1h、2h、4h、8h、24h从颈外静脉穿刺采血，低温离心20分钟，收集血浆，-20℃保存待测。
如下建立化合物LC-MS/MS分析方法：
标准曲线配制：将每个化合物吸取20μL 1mg/mL DMSO储备液，转移至900μL 50％甲醇工作液中，逐级稀释，得到一条浓度为20000、10000、5000、1000、500、100、50、20、10ng/mL的标准曲线工作液，再吸取5μL标准曲线工作液与45μL大鼠空白血浆混合，得到一条浓度为2000、1000、500、100、50、10、5、2、1ng/mL的标准曲线，用于定量未知样品。
样品前处理：50μL未知血浆样品及标准曲线样品，加入250μL含有甲苯磺丁脲为内标的乙腈作为沉淀剂，沉淀血浆蛋白，萃取血浆中的待测化合物，低温离心20分钟，取上清液，将上清液与0.1％甲酸的水溶液混合，吸取5μL进样，采用LC-MS分析药物血药浓度。
用质谱分析软件Analyst 1.6.1绘制标准曲线，定量未知样品，根据未知样品各时间点药物浓度用Winnonlin 8.2计算药物动力学参数。
实验结果显示,在盒式给药药代动力学评价中，本发明化合物显示良好的药代动力学性质。
实施例4:本发明化合物对细胞色素P450抑制试验
本实验评价发明化合物对细胞色素P450的抑制作用。
本实验使用如下试剂进行：人肝微粒体(Corning公司，货号452161)；还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH，MCE公司，货号HY-F0003/CS-4998)；非那西丁、双氯酚酸、α-萘黄酮、奥美拉唑和酮康唑均购自TCI公司；S-美芬妥英和睾酮购自CAYMAN公司；咪达唑仑购自Bioreclamation IVT；奎尼丁购自Damas-beta；磺胺苯吡唑购自MCE；丁呋洛尔购自TRC。
用磷酸二氢钾和磷酸氢二钾配制100mM磷酸钾缓冲液(K-buffer)，调节pH到7.4，配制0.1M磷酸钾缓冲液(K-buffer)。
将8μL的10mM受试化合物储备液溶于12μL乙腈中，配制400×受试化合物。将12μL1mMα-萘黄酮、10μL 40mM磺胺苯吡唑、10μL 10mM奎尼丁和8μL DMSO溶液混合，配制CYP1A2、CYP2C9和CYP2D6抑制剂的混合溶液。将8μL 2.5mM的酮康唑DMSO溶液溶于12μL乙腈中，配制CYP3A4的抑制剂溶液；将8μL100mM的奥美拉唑DMSO溶液溶于12μL乙腈中，配制CYP2C19的抑制剂溶液。
将66.7mg NADPH加入到10mL 0.1M K-buffer,pH7.4，配制4×NADPH磷酸钾溶液。将各个底物按照浓度要求用10mL 0.1M K-buffer配制成4倍浓度测定所需溶液，制得4×底物磷酸钾溶液。
将10μL 20mg/mL的人肝微粒体加入到990μL K-buffer中，配制0.2mg/mL人肝微粒体(HLM)溶液，冰浴保存待用。
将600μL的0.2mg/mL HLM加入到96孔板中，加入3μL 400倍受试化合物溶液；将200μL的0.2mg/mL HLM加入到96孔板中，加入1μL稀释后的阳性对照抑制剂溶液。分装30μL化合物与人的肝微粒体的混合溶液到96孔板中，然后再加入15μL的底物溶液。将上述获得的溶液和配制好的NADPH溶液于37℃预热5min。将15μL预热的NADPH溶液加入反应板，混匀，开始反应。37℃孵育反应板。3A4反应5分钟；1A2，2C9，2D6反应10分钟；2C19反应45分钟。反应结束时，加入120μL含内标的乙腈终止反应。样品涡旋振荡10min，采用5594g离心15分钟，制备样品送至LC-MS/MS分析。
实验结果显示，在测试浓度下，本发明化合物对于药物代谢关键CYP亚型没有显著抑制作用，表现出更好的药物-药物相互作用安全性。
实施例5：本发明化合物对KRAS G12C突变的NCI-H358细胞的增殖抑制效果
本实验评估并验证了本发明化合物对KRAS G12C突变细胞NCI-H358细胞的增殖抑制活性。
将NCI-H358细胞(南京科佰生物科技有限公司，货号为CBP60136，贴壁，培养基RPMI-1640+10％FBS(GIBCO,Cat#10091-148))置于37℃、5％CO2、95％湿度条件下培养。
3D细胞活力检测：收获处于对数生长期的细胞并采用血小板计数器进行细胞计数。用台盼蓝排斥法检测细胞活力，确保细胞活力在90％以上。配制含1％MC(Sigma,Cat#M0512)RPMI-1640培养基并加入10％ FBS配制成3D细胞完全培养基，用3D培养基调整细胞浓度为12500个细胞/mL并使MC的含量为0.65％；分别添加80μL细胞悬液至96孔透明平底黑壁板(Greiner,Cat#655096)中；将96孔板中的细胞置于37℃、5％CO2条件下过夜培养。
IC50测定药物配制：用培养基配制5倍药物溶液，在接种有细胞的96孔板中每孔加入20μL药物溶液，使得工作浓度为最高10μM，3×稀释，9个浓度，每个药物浓度设置2个复孔。将已加药的96孔板中的细胞置于37℃、5％CO2条件下继续培养5天，然后进行CTG检测(Luminescent Cell Viability Assay(Promega,Cat#G7573))。
平衡细胞板至室温30分钟并融化CTG试剂(Luminescent Cell Viability Assay(Promega,Cat#G7573))，每孔加入50μL的CTG溶液检测，在定轨摇床上振动5分钟使细胞裂解。将细胞板放置于室温25分钟以稳定冷光信号，读取冷光值(多功能酶标仪，PerkinElmer#2105)。
使用GraphPad Prism软件分析数据，利用Dose-response-inhibition方程来拟合数据得出剂量-效应曲线，并由此计算IC50值。
细胞存活率(％)＝(Lum待测药-Lum培养液对照)/(Lum细胞对照-Lum培养液对照)×100％。
本发明化合物对KRAS G12C突变的NCI-H358人肺癌细胞显示出令人满意的抗增殖活性，IC50范围在<1000nM，优选<100nM，代表性活性数据见下表。
实施例6：本发明化合物对6株肿瘤细胞的增殖抑制效果
本实验评估并验证了本发明化合物对下列6株KRAS相关肿瘤细胞的增殖抑制活性。
本实验中使用如下材料、试剂和仪器：6株细胞均来自康源博创生物科技(北京)有限公司(NCI-H441，KC-0510；Capan-2，KC-0185；A549，KC-0284；HCT116，KC-0281；NCI-H460，KC-0512；EBC-1，KC-0195；A375，KC-0158)；RPMI-1640(Hyclone,SH30809.01)；胎牛血清FBS(GIBCO,10099-141)；甲基纤维素(methylcellulose，SIGMA，9004-67-5)；磷酸盐缓冲液PBS(Solarbio,P1020-500)；CellCounting-Lite 2.0Luminescent Cell Viability Assay(南京诺唯赞，DD1101-04)；96孔透明平底黑壁板(Thermo,165305)；多功能酶标仪(BMG LABTECH，Plus)；CO2培养箱(Thermo Scientific，Model 3100Series)。
提前配置灭菌的1％甲基纤维素3D培养基。收获处于对数生长期的细胞并采用血小板计数器进行细胞计数。用台盼蓝排斥法检测细胞活力，确保细胞活力在90％以上。调整NCI-H441，A549，HCT116，NCI-H460，EBC-1及A375等细胞浓度，使得甲基纤维素终浓度为0.65％，混匀静置；待细胞悬液中无可见气后分别添加180μL细胞悬液至96孔板中，共2500个细胞。使用完全培养基调整capan-2细胞浓度，分别添加180μL细胞悬液至96孔板中，共3000个细胞。将96孔板中的细胞置于37℃、5％CO2、95％湿度条件下培养过夜。
IC50测定药物配制：首先配制各化合物10mM DMSO储存液。第一次以DMSO为溶剂，3.16倍稀释，9个浓度，制备各化合物不同浓度DMSO溶液。第二次1：100稀释配制10倍各化合物稀释液，以完全培养基为溶剂。最后，在接种有细胞的96孔板中每孔加入20μL各化合物稀释液，最终药物最高浓度为10μM，9个浓度，3.16倍稀释，每个浓度设置三个复孔。
将已加药的96孔板中的细胞置于37℃、5％ CO2条件下继续培养144小时，之后进行CTG分析。融化CTG试剂并平衡细胞板至室温30分钟。每孔加入等体积的CTG溶液。在定轨摇床上振动5分钟使细胞裂解。将细胞板放置于室温20分钟以稳定冷光信号。读取冷光值，收集数据。
使用GraphPad Prism 7.0软件分析数据，利用非线性S曲线回归来拟合数据得出剂量-效应曲线，并由此计算IC50值。
细胞存活率(％)＝(Lum待测药-Lum培养液对照)/(Lum溶剂对照-Lum培养液对照)×100％.
本发明化合物、例如实施例化合物对本实施例中KRAS突变细胞及野生扩增型细胞显示出令人满意的抗增殖活性，IC50范围在<1000nM，优选<500nM，代表性活性数据见下表。
应当理解，对本文所述的目前优选的实施方案作出的各种变化和修改对于本领域的技术人员将为显而易见的。可在不脱离本发明主题的实质和范围且不减弱其预期优点的前提下作出这些变化和修改。因此，此类变化和修改旨在由所附权利要求书涵盖。
本说明书中所引用的所有公开出版物以引用方式并入本文中。

Claims (26)

  1. 式(I)的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，
    其中：
    M选自N或C-R9；
    W选自N或C-R10；
    R9选自H、卤素、CN、NO2和任选被卤素取代的-C1-6烷基；
    R10选自H、卤素、CN、OH、任选被卤素取代的-C1-6烷基和任选被卤素取代的-OC1-6烷基；
    Z选自H、OH和NH2；
    X选自CH2和O，条件是k为0时，X为CH2；
    Y选自O、S、Se和N-Ra；
    R1选自H和任选取代的-C1-6烷基，其中的取代基选自卤素、D和任选被卤素或D取代的-O-C1-6烷基；
    R2各自独立地选自H、D和任选取代的-C1-6烷基，其中的取代基选自卤素、D和任选被卤素或D取代的-O-C1-6烷基；
    R3选自H、D、卤素、-CN、-OH、-NH2、-NHC1-6烷基、-N(C1-6烷基)2、-O-C1-6烷基、-O-C3-6环烷基、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基、-(CH2)n-C3-6环烷基和＝C(Rc)2，其中每次出现的C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基任选被取代，取代基选自卤素、CN、D和任选被卤素取代的-OC1-6烷基，其中的C3-6环烷基任选被取代，取代基选自卤素、CN、D、任选被卤素取代的-C1-6烷基和任选被卤素取代的-OC1-6烷基，或
    连接在同一个环碳原子上的两个R3与它们所连接的碳原子一起形成螺C3-6环烷基或包含1至3个独立地选自N、O、S的杂原子的螺4-7元杂环烷基，所述环烷基或杂环烷基任选被卤素或任选被卤素取代的-C1-6烷基取代；
    R4选自H、-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基和-(CH2)n-C3-6环烷基，其中的-C1-6烷基、-C2-6烯基、-C2-6炔基任选被取代，取代基选自D、卤素、CN、OH、任选被卤素或D取代的-O-C1-6烷基和-OCON(Rb)2，其中的C3-6环烷基任选被取代，取代基选自D、卤素、CN、OH、任选被卤素或D取代的-C1-6烷基、任选被卤素或D取代的-O-C1-6烷基和-OCON(Rb)2；
    R5选自H、卤素、-CN、-NO2；
    R6选自卤素、CN、-C1-6烷基和-C2-6炔基，其中的-C1-6烷基和-C2-6炔基各自独立地任选被卤素取代；
    R7选自H、卤素、CN、任选被卤素或D取代的-C1-6烷基、任选被卤素或D取代的-OC1- 6烷基和任选被卤素或D取代的-C2-6炔基；
    连接在非相邻环碳原子上的R8和R8’一起形成环内桥连-(CH2)1-2-或-CH2＝CH2-，
    或连接在同一个环碳原子上的R8和R8’与它们所连接的环碳原子一起形成4-6元螺环烷基或包含1至3个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元螺杂环烷基，
    或连接在相邻环碳原子上的R8和R8’与它们连接的环碳原子一起形成稠合C3-6环烷基或包含1至2个独立地选自N、O和S的杂原子的4-6元稠合杂环烷基，
    其中所述桥环、螺环或稠合环各自独立地任选被取代，取代基选自OH、氧代、任选被卤素取代的-OC1-6烷基和任选被卤素取代的-C1-6烷基；
    Ra和Rb各自独立地选自H和任选被卤素取代的-C1-6烷基；
    Rc各自独立地选自H、卤素和任选被卤素取代的-C1-6烷基；
    k和n各自独立地选自0至3的整数；和
    m选自0至6的整数。
  2. 权利要求1的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中M为N。
  3. 权利要求1的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中M为C-F、C-Cl、C-CN、C-NO2、C-CF3。
  4. 权利要求1至3任一项的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中W为C-卤素，优选C-F。
  5. 权利要求1至4任一项的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R7选自H、任选被卤素或D取代的-OC1-6烷基和任选被卤素或D取代的-C2-6炔基。
  6. 权利要求1至5任一项的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R5选自H和卤素，优选F。
  7. 权利要求1至6任一项的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R6选自卤素、-C1-3烷基和-C2-4炔基，优选F、Cl、乙基和乙炔基。
  8. 权利要求1至4任一项的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中Z为OH，R5选自卤素，R6选自卤素、-C1-3烷基和-C2-4炔基。
  9. 权利要求1至8任一项的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中结构片段选自
  10. 权利要求9的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中结构片段选自和具有环内桥连-(CH2)1-2-或-CH2＝CH2-、优选-(CH2)1-2-的5至7元杂环烷基，其中G1选自CH2、NH、O和S，G2、G3、G4中至少有一个选自CH2、NH、O和S，其余各自独立地可选自不存在、CH2、NH、O和S；其中螺环或桥环任选被取代，取代基选自OH、氧代、任选被卤素取代的-OC1- 6烷基和任选被卤素取代的-C1-6烷基。
  11. 权利要求10的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中为其中G1、G2均为CH2，或其中一个为CH2，另一个选自NH、O和S，优选NH和O；或为其中G1、G2和G3各自独立地选自CH2、NH、O和S；其中螺环任选被取代，取代基选自OH、氧代、任选被卤素取代的-OC1-6烷基和任选被卤素取代的-C1-6烷基。
  12. 权利要求1至11任一项的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中，其中Y为O。
  13. 权利要求1至12任一项的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中结构片段为优选
  14. 权利要求13的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R2选自H或D，例如R2均为H；或R2均为D；或R2之一为H且另一个为D。
  15. 权利要求13的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R1为-C1-3烷基或-氘代C1-3烷基。
  16. 权利要求13的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R3选自卤素，优选F；-C1-6烷基，优选C1-3烷基，被卤素取代，优选被F取代；或者＝C(Rc)2，其中Rc各自独立地选自H和卤素，优选H和F；优选地，R3取代在环N原子的对位，m为1至2的整数。
  17. 权利要求13的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R4选自-C1-3烷基和-氘代C1-3烷基，优选-CH3、-CD3、-CH2CH3。
  18. 权利要求1至11任一项的化合物、其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，其中结构片段选自
  19. 化合物，选自实施例的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
  20. 药物组合物，包含根据权利要求1-19任一项的化合物其立体异构体、互变异构体、稳定的同位素变体、药学上可接受的盐或溶剂合物，以及药学上可接受的赋形剂。
  21. 权利要求1-19任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或权利要求20的药物组合物，用作药物，用于治疗和/或预防由RAS突变及RAS扩增介导的疾病。
  22. 权利要求1-19任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或根据权利要求20的药物组合物在制备用于预防或治疗由RAS突变及RAS扩增介导的疾病的用药物中的用途。
  23. 权利要求22的用途，其中由RAS突变及RAS扩增介导的疾病选自：胰腺癌、肺癌、肺腺癌、骨癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区域癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾脏或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统肿瘤(CNS)、原发性CNS淋巴瘤、脊柱肿瘤、脑干神经胶质瘤或垂体腺瘤。
  24. 权利要求22的用途，其中由RAS突变及RAS扩增介导的疾病选自胰腺癌、结肠癌、直肠癌、肺腺癌、肺癌、胆管癌、子宫内膜癌、卵巢癌、白血病；最优选选自胰腺癌、结肠癌、直肠癌、肺腺癌、胆管癌。
  25. 治疗和/或预防由RAS蛋白、尤其是KRAS突变蛋白及KRAS扩增介导的疾病的方法，包括向有需要的对象施用治疗有效量的根据权利要求1-19任一项的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物或根据权利要求20的药物组合物。
  26. 权利要求25的方法，其中由RAS突变及RAS扩增介导的疾病选自胰腺癌、结肠癌、直肠癌、肺腺癌、肺癌、胆管癌、子宫内膜癌、卵巢癌、白血病；最优选选自胰腺癌、结肠癌、直肠癌、肺腺癌、胆管癌。
PCT/CN2025/071023 2024-01-08 2025-01-07 Ras抑制剂 Pending WO2025148870A1 (zh)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202410026865 2024-01-08
CN202410026865.9 2024-01-08
CN202410224161.2 2024-02-28
CN202410224161 2024-02-28
CN202411949048.7 2024-12-26
CN202411949048 2024-12-26

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2025148870A1 true WO2025148870A1 (zh) 2025-07-17

Family

ID=96235446

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CN2025/071023 Pending WO2025148870A1 (zh) 2024-01-08 2025-01-07 Ras抑制剂

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN120271607A (zh)
WO (1) WO2025148870A1 (zh)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022228568A1 (zh) * 2021-04-30 2022-11-03 劲方医药科技(上海)有限公司 吡啶或嘧啶并环类化合物，其制法与医药上的用途
WO2022247760A1 (zh) * 2021-05-22 2022-12-01 上海科州药物研发有限公司 作为kras抑制剂的杂环化合物，及其制备和治疗用途
WO2024008068A1 (en) * 2022-07-04 2024-01-11 Jacobio Pharmaceuticals Co., Ltd. K-ras mutant protein inhibitors
CN117624170A (zh) * 2022-08-24 2024-03-01 泰励生物科技（上海）有限公司 具有抗kras突变肿瘤活性的化合物
TW202423439A (zh) * 2022-08-16 2024-06-16 美商必治妥美雅史谷比公司 Kras抑制劑

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022228568A1 (zh) * 2021-04-30 2022-11-03 劲方医药科技(上海)有限公司 吡啶或嘧啶并环类化合物，其制法与医药上的用途
WO2022247760A1 (zh) * 2021-05-22 2022-12-01 上海科州药物研发有限公司 作为kras抑制剂的杂环化合物，及其制备和治疗用途
WO2024008068A1 (en) * 2022-07-04 2024-01-11 Jacobio Pharmaceuticals Co., Ltd. K-ras mutant protein inhibitors
TW202423439A (zh) * 2022-08-16 2024-06-16 美商必治妥美雅史谷比公司 Kras抑制劑
CN117624170A (zh) * 2022-08-24 2024-03-01 泰励生物科技（上海）有限公司 具有抗kras突变肿瘤活性的化合物

Also Published As

Publication number Publication date
CN120271607A (zh) 2025-07-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107735399B (zh) 作为蛋白质激酶的调节剂的手性二芳基大环
CN113637005A (zh) 用于癌症治疗的kras抑制剂
CN113631557B (zh) Jak激酶抑制剂及其制备方法和在医药领域的应用
CN117624170A (zh) 具有抗kras突变肿瘤活性的化合物
CN105566321B (zh) 杂芳化合物及其在药物中的应用
WO2023151621A1 (zh) 具有抗kras突变肿瘤活性的化合物
WO2024067714A1 (zh) 具有抗kras突变肿瘤活性的化合物
WO2020188467A1 (zh) 作为激酶抑制剂的稠合三环化合物
EP4242207A1 (en) Kras inhibitors for treatment of cancers
KR102559624B1 (ko) Fgfr4 억제제로서 사용된 융합된 환 유도체
CN114728938A (zh) 作为prmt5抑制剂的四氢异喹啉螺环化合物
KR20250022815A (ko) Hpk1 억제제 및 이의 의약품에서의 응용
CN114920738B (zh) 用于癌症治疗的KRas抑制剂
WO2025016432A1 (zh) 具有抗kras突变肿瘤活性的化合物
CN113493453B (zh) 稠合芳香环类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
WO2011002624A1 (en) Substituted 4-hydroxypyrimidine-5-carboxamides
CN117729921A (zh) 作为pd1/pd-l1抑制剂的化合物及其方法
WO2025148870A1 (zh) Ras抑制剂
WO2024207892A1 (zh) 具有抗kras突变肿瘤活性的化合物
WO2025051242A1 (zh) Ras抑制剂
HK40078376A (zh) 用於癌症治疗的kras抑制剂
CN120535527A (zh) 一类含氮稠环类化合物、制备方法和用途
HK40048642A (zh) 用作fgfr4抑制剂的稠环衍生物
HK40048642B (zh) 用作fgfr4抑制剂的稠环衍生物
CN120590414A (zh) 一类含氮杂环类化合物、制备方法和用途

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 25738400

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

点击 这是indexloc提供的php浏览器服务，不要输入任何密码和下载