WO2019066010A1 - 非アルコール性脂肪性肝炎の予防又は治療剤及びその使用 - Google Patents
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Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
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- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
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-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
Definitions
- the present invention relates to a prophylactic or therapeutic agent for non-alcoholic steatohepatitis (hereinafter sometimes referred to as "NASH") and its use. More specifically, the present invention relates to an agent for the prevention or treatment of NASH, a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of NASH, a food composition for the prevention or improvement of NASH, and a method for the prevention or improvement of NASH.
- NASH non-alcoholic steatohepatitis
- Patent Document 1 describes an agent for preventing and / or improving NASH, which comprises D-allose and / or isoleucine and / or leucine as an active ingredient.
- an object of the present invention is to provide a technique for preventing, improving or treating NASH.
- the present invention includes the following aspects.
- An agent for the prophylaxis or treatment of NASH which comprises a compound represented by the following formula (1) as an active ingredient.
- R 1 to R 5 each independently represent a hydrogen atom or a methyl group, and at least one of R 1 to R 5 is a methyl group.
- a pharmaceutical composition for the prophylaxis or treatment of NASH which comprises the prophylactic or therapeutic agent according to [1] and a pharmaceutically acceptable carrier.
- a food composition for preventing or improving NASH which comprises a compound represented by the following formula (1) as an active ingredient.
- R 1 to R 5 each independently represent a hydrogen atom or a methyl group, and at least one of R 1 to R 5 is a methyl group.
- a method for preventing or ameliorating NASH comprising the step of allowing a subject to take a compound represented by the following formula (1) (excluding medical practice for humans).
- R 1 to R 5 each independently represent a hydrogen atom or a methyl group, and at least one of R 1 to R 5 is a methyl group.
- the present invention can provide a technique for preventing, improving or treating NASH.
- FIG. 1 shows the experimental progress table of the mouse of each group in Experimental example 1.
- FIG. 1 representative photographs of livers isolated from control group, NASH group, isorhamnetin group and quercetin group mice, photomicrographs of hematoxylin and eosin stained tissue sections, and microscopes of tissue sections stained with a lipophilic structure. It is a figure which shows a photograph.
- (A)-(c) are the graphs which show the result of having quantified the expression level of SREBP gene, FAS gene, and ACC gene in the liver of each mouse of a control group, NASH group, an isorhamnetin group, and a quercetin group in Experimental example 2, respectively. It is.
- (A) is a quantitative result of the expression level of the SREBP gene
- (b) is a quantitative result of the expression level of the FAS gene
- (c) is a quantitative result of the expression level of the ACC gene.
- (A) And (b) is a graph which shows the result of having quantified the expression level of the TGF beta gene and COL1 gene in the liver of each mouse of a control group, a NASH group, an isorhamnetin group, and a quercetin group in Experimental example 3, respectively.
- (A) shows the results of quantification of the expression level of TGF ⁇ gene
- (b) shows the results of quantification of the expression level of COL1 gene.
- Experimental example 4 it is a graph which shows the result of having quantified the expression level of ApoB gene in the liver of each mouse of a control group, a NASH group, an isorhamnetin group, and a quercetin group, respectively.
- (A) and (b) is the result of analyzing the survival rate of HSC in Experimental example 5.
- (A) is the result of contacting each compound with HSC and analyzing the survival rate of HSC after 12 hours.
- (B) shows the results of analysis of HSC survival after 24 hours by contacting each compound with HSC.
- A) to (c) show the results of quantifying the expression levels of ⁇ SMA, Col1 and Timp1 in HSC in Experimental Example 6.
- (A) shows the result of quantifying the expression level of ⁇ SMA in HSC after contacting TGF ⁇ 1 with each compound
- (b) shows the result of quantifying the expression level of Col1 in HSC after contacting TGF ⁇ 1 with each compound
- (C) shows the results of quantifying the expression level of Timp1 in HSC after contacting each compound with TGF ⁇ 1.
- (A) to (c) show the results of quantifying the expression levels of ⁇ SMA, Col1 and Timp1 in HSC in Experimental Example 7.
- (A) shows the result of contacting each compound with TGF ⁇ 1 after contacting each compound and quantifying the expression amount of ⁇ SMA
- (b) shows contacting each compound with TGF ⁇ 1 after contacting each compound to express Col1 It is the result of quantifying the amount
- (c) is the result of contacting each compound with TGF ⁇ 1 after contacting each compound and quantifying the expression level of Timp1.
- the present invention provides a preventive agent for NASH or a therapeutic agent for NASH, which comprises a compound represented by the following formula (1) as an active ingredient.
- R 1 to R 5 each independently represent a hydrogen atom or a methyl group, and at least one of R 1 to R 5 is a methyl group.
- isorhamnetin a compound in which R 1 is a methyl group, and R 2 , R 3 , R 4 and R 5 are hydrogen atoms is a kind of polyphenol called isorhamnetin.
- the chemical formula of isorhamnetin is shown in the following formula (2). It is known that isorhamnetin is contained in arid land plants and the like, and in Japan it is known to be present in Ginkgo biloba leaves and Seriaceae plants.
- Quercetin is a compound represented by the formula (1) in which all of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 and R 5 are hydrogen atoms.
- the chemical formula of quercetin is shown in the following formula (3).
- azaleatine can be chemically synthesized using quercetin abundantly present in onion skins as a raw material.
- Azaleatine is a compound represented by the formula (1) in which R 4 is a methyl group, and R 1 , R 2 , R 3 and R 5 are hydrogen atoms.
- the chemical formula of azaleatine is shown in the following formula (4).
- 3-methyl quercetin can be chemically synthesized using quercetin abundantly present in onion skins as a raw material.
- 3-methyl quercetin is a compound in which R 3 is a methyl group, and R 1 , R 2 , R 4 and R 5 are hydrogen atoms.
- the chemical formula of 3-methyl quercetin is shown in the following formula (5).
- Tamarixetine can be chemically synthesized using quercetin abundantly present in onion skin of onion as a raw material.
- tamarixetine is a compound in which R 2 is a methyl group, and R 1 , R 3 , R 4 and R 5 are hydrogen atoms.
- the chemical formula of tamarixetine is shown in the following formula (6).
- rhamnetin can be chemically synthesized using quercetin abundantly present in onion skins as a raw material.
- rhamnetin is a compound in which R 5 is a methyl group, and R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are hydrogen atoms.
- the chemical formula of rhamnetin is shown in the following formula (7).
- the inventors orally administered an oil by orally administering a compound represented by the above-mentioned formula (1) except that a compound in which all of R 1 to R 5 are hydrogen atoms. It was revealed that the combined effects of droplet size reduction, liver fibrosis suppression, lipid transport suppression, etc. can suppress the progression of NASH and improve symptoms.
- quercetin has been reported to have anti-obesity activity, improvement of NASH by administration of the compound represented by the above formula (1) (except that compounds wherein all of R 1 to R 5 are hydrogen atoms) The effect was significantly higher than when quercetin was administered.
- the inventors contact the hepatic stellate cells with the compound represented by the above-mentioned formula (1) (except that a compound in which all of R 1 to R 5 are hydrogen atoms), as described later in the Examples. It was clarified that the expression of genes involved in liver fibrosis can be suppressed by
- the present invention provides a pharmaceutical composition for the prophylaxis or treatment of NASH, which comprises the agent for the prophylaxis or treatment of NASH described above and a pharmaceutically acceptable carrier.
- the pharmaceutical composition of the present embodiment can be orally administered, for example, in the form of tablets, capsules, granules, powders, solutions, etc. according to ordinary methods (for example, the method described in the Japanese Pharmacopoeia) or injections It can be administered parenterally in the form of suppositories, external preparations for skin and the like.
- those generally used for the preparation of pharmaceutical compositions can be used without particular limitation. More specifically, for example, binders such as gelatin, corn starch, tragacanth gum and gum arabic; excipients such as starch and crystalline cellulose; swelling agents such as alginic acid; solvents for injection such as water, ethanol and glycerin;
- the pressure-sensitive adhesive include rubber-based pressure-sensitive adhesives and silicone-based pressure-sensitive adhesives.
- the pharmaceutical composition may contain an additive.
- additives such as calcium stearate and magnesium stearate; sweeteners such as sucrose, lactose, saccharin and maltitol; flavoring agents such as peppermint and red mono oil; stabilizers such as benzyl alcohol and phenol; phosphoric acid Salts, buffers such as sodium acetate; solubilizers such as benzyl benzoate and benzyl alcohol; antioxidants; preservatives and the like.
- the pharmaceutical composition can be formulated by combining the above-mentioned carriers and additives as appropriate and mixing in the unit dose form required for generally accepted pharmaceutical practice.
- the pharmaceutical composition may, for example, be formulated to be orally administered once a day.
- the dose of the pharmaceutical composition varies depending on the patient's condition, body weight, age, sex, etc. and can not be generally determined, but in the case of oral administration, for example, 0.1 to 100 mg / kg body weight per dosage unit form
- the active ingredient (the compound represented by the above formula (1)) may be administered. In the case of injection, for example, 0.01 to 50 mg of the active ingredient may be administered per dosage unit form.
- the present invention provides a food composition for preventing or improving NASH, which comprises a compound represented by the following formula (1) as an active ingredient.
- NASH can be prevented, ameliorated or treated by ingesting the food composition of the present embodiment.
- R 1 to R 5 each independently represent a hydrogen atom or a methyl group, and at least one of R 1 to R 5 is a methyl group.
- the food composition of the present embodiment may be, for example, in the form of a supplement, may be in the form of semisolid such as yogurt or gel-like food, or may be in the form of a beverage. It may be in the form of any prepared food or the like.
- Examples of the form of the supplement include the forms of tablets, capsules and the like.
- the food composition of the present embodiment may be a functional display food.
- "Functionally labeled food” means a food notified to the Consumer Agency as displaying functionality on a product package based on scientific evidence.
- the food composition of the present embodiment may be a food for specific health use.
- Food for specified health use means food that is recognized based on scientific evidence to help maintain and promote health, and labeling of its effects is permitted. The State reviews the effects and safety displayed and is approved by the Secretary of the Consumer Office for each food item. As described later in the examples, the food composition of the present embodiment is confirmed to have a preventive or ameliorating effect of NASH.
- the present invention provides a method for preventing or improving NASH (excluding medical practice for humans), which comprises the step of causing a subject to ingest a compound represented by the following formula (1).
- R 1 to R 5 each independently represent a hydrogen atom or a methyl group, and at least one of R 1 to R 5 is a methyl group.
- the subject includes NASH patients or affected animals.
- medical practice means an act of a doctor (including a person who has been instructed by a doctor) performing treatment on a human.
- NASH can be prevented or improved by allowing a subject to ingest the compound represented by the above-mentioned formula (1).
- the present invention provides a method for preventing or treating NASH, which comprises administering an effective amount of a compound represented by the following formula (1) to a patient in need of treatment.
- R 1 to R 5 each independently represent a hydrogen atom or a methyl group, and at least one of R 1 to R 5 is a methyl group.
- the present invention provides a compound represented by the above formula (1) for the prevention or treatment of NASH.
- the present invention provides the use of a compound represented by the above formula (1) for producing a preventive or therapeutic agent for NASH.
- Example 1 administering isorhamnetin to NASH model mice
- the effect of isorhamnetin was administered to NASH model mice.
- a mouse is fed a high-fat diet, and carbon tetrachloride which is a liver poison is administered four times at 0.1 mL / kg body weight every 3 days from the 14th day of the high-fat diet intake From the 20th day, mice to which fatty acid synthesis promoter T0901317 (CAS number: 293754-55-9) was administered daily at 2.5 mg / kg body weight were used.
- Isoramnetin was orally administered at 5 mg / kg body weight for 11 days starting on the 14th day of the high-fat diet. Also, a group to which quercetin was administered instead of isorhamnetin was prepared for comparison. Quercetin was orally administered at 5 mg / kg body weight for 11 days from the 14th day of high fat diet intake. In addition, as a control group, a group was prepared in which a normal diet was taken and a solvent was administered instead of carbon tetrachloride and T0901317.
- Figure 1 shows a control group (indicated as “control” in the figure), a NASH model mouse group (hereinafter referred to as “NASH group” and indicated as “NASH” in Fig. 1), quercetin in NASH model mice.
- An administered group hereinafter referred to as “quercetin group”, referred to as “quercetin” in FIG. 1
- a group administered isorhamnetin to NASH model mice hereinafter referred to as “isorhamnetin group” shown in FIG. Is a chart showing the experimental progress of the group to which “.
- liver tissue was removed from each group of mice and observed with the naked eye.
- liver tissue was fixed with paraformaldehyde, embedded in paraffin, tissue sections were prepared, and hematoxylin and eosin staining was performed.
- tissue section was stained with a dye (type “SRfluor, 680-Phenyl”, Molecular Targeting Technologies, Inc.) to stain a lipid-soluble structure (vesicle, lipid droplet, etc.).
- FIG. 2 shows representative photographs of livers isolated from mice of control group, NASH group, isorhamnetin group and quercetin group, and photomicrographs of hematoxylin and eosin stained tissue sections (indicated as “HE” in FIG. 2).
- FIG. 2 is a diagram showing a photomicrograph (denoted as “SR” in FIG. 2) of a tissue section stained with a fat-soluble structure.
- the scale bar of the liver picture shows 1 cm.
- the scale bar of the micrograph shows 100 ⁇ m.
- Example 2 (Examination of gene expression related to lipogenesis) The expression of a gene related to lipogenesis was analyzed by quantitative RT-PCR in liver tissues excised from each group of mice in Experimental Example 1. As a gene for lipogenesis, Sterol regulatory element-binding protein (SREBP), fatty acid synthase (FAS) and acetyl-CoA The expression of the carboxylase (ACC) gene was examined.
- SREBP Sterol regulatory element-binding protein
- FAS fatty acid synthase
- ACC carboxylase
- FIGS. 3 (a) to 3 (c) are graphs showing the results of quantifying the expression levels of the SREBP gene, FAS gene and ACC gene in the livers of the control group, NASH group, isorhamnetin group and quercetin group mice, respectively.
- FIG. 3 (a) shows the quantification result of the expression level of SREBP gene
- FIG. 3 (b) shows the quantification result of the expression level of FAS gene
- FIG. 3 (c) shows the quantification result of the expression level of ACC gene .
- Example 3 (Examination of gene expression related to liver fibrosis) The expression of the gene related to liver fibrosis was analyzed by quantitative RT-PCR in liver tissue isolated from each group of mice in Experimental Example 1. The expression of Transforming Growth Factor- ⁇ (TGF ⁇ ) and Collagen Type 1 (COL1) genes was examined as genes for liver fibrosis. TGF ⁇ is a gene involved in liver fibrosis. In addition, COL1 is a gene involved in collagen deposition.
- TGF ⁇ Transforming Growth Factor- ⁇
- COL1 Collagen Type 1
- FIGS. 4 (a) and 4 (b) are graphs showing the results of quantification of the expression levels of the TGF ⁇ gene and COL1 gene in the livers of the control group, NASH group, isorhamnetin group and quercetin group mice, respectively.
- FIG. 4 (a) shows the results of quantification of the expression level of TGF ⁇ gene
- FIG. 4 (b) shows the results of quantification of the expression level of COL1 gene.
- Example 4 (Examination of gene expression related to lipid transport) The expression of genes related to lipid transport in liver tissues isolated from mice of each group in Experimental Example 1 was analyzed by quantitative RT-PCR. The expression of Apolipoprotein B (ApoB) gene was examined as a gene involved in lipid transport.
- Apolipoprotein B Apolipoprotein B
- FIG. 5 is a graph showing the results of quantifying the expression level of ApoB gene in the livers of control group, NASH group, isorhamnetin group and quercetin group mice, respectively.
- “***” indicates that there is a significant difference at p ⁇ 0.001 with respect to the control group
- “###” indicates a significant difference at p ⁇ 0.001 with respect to the NASH group. Indicates that it exists.
- FIG. 6 (a) shows the results of analysis of HSC viability after 12 hours by contacting the compounds represented by the above formulas (2) to (7) with HSC.
- FIG. 6 (b) shows the results of analysis of HSC survival after 24 hours by contacting the compounds represented by the above formulas (2) to (7) with HSC.
- CN indicates a negative control not contacted with the above compound
- QCT indicates quercetin
- ISO indicates isorhamnetin
- AZA indicates azaleatine
- 3MQ indicates 3-methyl quercetin
- TAM indicates tamarixetine.
- RHA indicates rhamnetin.
- the HSC was contacted with 1 ng / mL of TGF ⁇ 1 and 40 ⁇ M of the compounds represented by the above formulas (2) to (7) for 1 hour. Thereafter, RNA was separated from HSC by a conventional method, and the obtained RNA was subjected to reverse transcription to obtain cDNA. The expression level of the above-mentioned gene was analyzed by quantitative PCR using the obtained cDNA as a template.
- FIG. 7 (a) shows the results of quantifying the expression level of ⁇ SMA after contacting TGF ⁇ 1 with the above-mentioned compound
- FIG. 7 (b) shows the results of quantifying the expression level of Col1 after contacting TGF ⁇ 1 with the above-mentioned compound
- FIG. 7 (c) shows the result of quantifying the expression level of Timp1 after contacting TGF ⁇ 1 with the above-mentioned compound.
- CN represents a negative control not contacted with TGF ⁇ 1 and any of the above-mentioned compounds
- CP represents a positive control contacted with TGF ⁇ 1 and not contacted with the above-mentioned compounds
- QCT represents quercetin.
- ISO indicates isorhamnetin
- AZA indicates azaleatine
- 3MQ indicates 3-methyl quercetin
- TAM indicates tamarixetine
- RHA indicates rhamnetin.
- Fig. 8 (a) shows the results of contacting TGF ⁇ 1 with the above-mentioned compound after contacting the above-mentioned compound and quantifying the expression amount of ⁇ SMA
- Fig. 8 (b) shows TGF ⁇ 1 with the above-mentioned compound after contacting
- the results of quantifying the expression level of Col1 by contacting the compound are shown in FIG. 8 (c), and the results of quantifying the expression level of Timp1 by contacting TGF ⁇ 1 with the above-mentioned compound after contacting the above-mentioned compound.
- FIG. 8 (c) shows the results of quantifying the expression level of Timp1 by contacting TGF ⁇ 1 with the above-mentioned compound after contacting the above-mentioned compound.
- CN indicates a negative control which is not in contact with TGF ⁇ 1 and any of the above-mentioned compounds
- CP indicates a positive control which is in contact with TGF ⁇ 1 and which is not in contact with the above-mentioned compounds
- QCT indicates quercetin.
- ISO indicates isorhamnetin
- AZA indicates azaleatine
- 3MQ indicates 3-methyl quercetin
- TAM indicates tamarixetine
- RHA indicates rhamnetin.
- the present invention can provide a technique for preventing, improving or treating NASH.
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Abstract
下記式（１）（式（１）中、Ｒ１～Ｒ５は、それぞれ独立に水素原子又はメチル基を表し、Ｒ１～Ｒ５のうち少なくとも１つはメチル基である）で表される化合物を有効成分として含有する、非アルコール性脂肪性肝炎の予防又は治療剤。
Description
本発明は、非アルコール性脂肪性肝炎（ｎｏｎ－ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ、以下「ＮＡＳＨ」という場合がある。）の予防又は治療剤及びその使用に関する。より詳細には、本発明は、ＮＡＳＨの予防又は治療剤、ＮＡＳＨの予防又は治療用医薬組成物、ＮＡＳＨの予防又は改善用食品組成物及びＮＡＳＨの予防又は改善方法に関する。本願は、２０１７年９月２８日に、日本に出願された特願２０１７－１８８１４４号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
近年、食生活の欧米化と運動不足による肥満人口の増加に伴い、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の患者が増加している。ＮＡＳＨは、肝硬変、肝細胞癌へと進行するため、その対応が求められている。例えば、特許文献１には、Ｄ－アロース及び／又はイソロイシン及び／又はロイシンを有効成分とすることを特徴とするＮＡＳＨの予防剤及び／又は改善剤が記載されている。
しかしながら、ＮＡＳＨに有効な治療法は確立されているとはいえない。特に、ＮＡＳＨに由来する肝臓線維症を抑制又は改善する有効な手法は確立されていないのが現状である。そこで、本発明は、ＮＡＳＨを予防、改善又は治療する技術を提供することを目的とする。
本発明は以下の態様を含む。
［１］下記式（１）で表される化合物を有効成分として含有する、ＮＡＳＨの予防又は治療剤。
［式（１）中、Ｒ１～Ｒ５は、それぞれ独立に水素原子又はメチル基を表し、Ｒ１～Ｒ５のうち少なくとも１つはメチル基である。］
［２］［１］に記載の予防又は治療剤と薬学的に許容される担体とを含有する、ＮＡＳＨの予防又は治療用医薬組成物。
［３］下記式（１）で表される化合物を有効成分として含有する、ＮＡＳＨの予防又は改善用食品組成物。
［式（１）中、Ｒ１～Ｒ５は、それぞれ独立に水素原子又はメチル基を表し、Ｒ１～Ｒ５のうち少なくとも１つはメチル基である。］
［４］機能性表示食品である、［３］に記載のＮＡＳＨの予防又は改善用食品組成物。
［５］特定保健用食品である、［３］に記載のＮＡＳＨの予防又は改善用食品組成物。
［６］対象に下記式（１）で表される化合物を摂取させる工程を含む、ＮＡＳＨの予防又は改善方法（ヒトに対する医療行為を除く。）。
［式（１）中、Ｒ１～Ｒ５は、それぞれ独立に水素原子又はメチル基を表し、Ｒ１～Ｒ５のうち少なくとも１つはメチル基である。］
［１］下記式（１）で表される化合物を有効成分として含有する、ＮＡＳＨの予防又は治療剤。
［２］［１］に記載の予防又は治療剤と薬学的に許容される担体とを含有する、ＮＡＳＨの予防又は治療用医薬組成物。
［３］下記式（１）で表される化合物を有効成分として含有する、ＮＡＳＨの予防又は改善用食品組成物。
［４］機能性表示食品である、［３］に記載のＮＡＳＨの予防又は改善用食品組成物。
［５］特定保健用食品である、［３］に記載のＮＡＳＨの予防又は改善用食品組成物。
［６］対象に下記式（１）で表される化合物を摂取させる工程を含む、ＮＡＳＨの予防又は改善方法（ヒトに対する医療行為を除く。）。
本発明により、ＮＡＳＨを予防、改善又は治療する技術を提供することができる。
［ＮＡＳＨの予防又は治療剤］
１実施形態において、本発明は、下記式（１）で表される化合物を有効成分として含有する、ＮＡＳＨの予防剤又はＮＡＳＨの治療剤を提供する。
１実施形態において、本発明は、下記式（１）で表される化合物を有効成分として含有する、ＮＡＳＨの予防剤又はＮＡＳＨの治療剤を提供する。
上記式（１）で表される化合物のうち、Ｒ１がメチル基であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５が水素原子である化合物は、イソラムネチンと呼ばれるポリフェノールの一種である。イソラムネチンの化学式を下記式（２）に示す。イソラムネチンは乾燥地植物等に含まれることが知られており、日本ではイチョウの葉やセリ科植物中に存在することが知られている。
また、イソラムネチンは、玉ネギ外皮中に豊富に存在するケルセチンを原料として化学的に合成することができる。ケルセチンは、式（１）で表される化合物のうち、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５の全てが水素原子である化合物である。ケルセチンの化学式を下記式（３）に示す。
また、アザレアチンは、玉ネギ外皮中に豊富に存在するケルセチンを原料として化学的に合成することができる。アザレアチンは、式（１）で表される化合物のうち、Ｒ４がメチル基であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５が水素原子である化合物である。アザレアチンの化学式を下記式（４）に示す。
また、３－メチルケルセチンは、玉ネギ外皮中に豊富に存在するケルセチンを原料として化学的に合成することができる。３－メチルケルセチンは、式（１）で表される化合物のうち、Ｒ３がメチル基であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５が水素原子である化合物である。３－メチルケルセチンの化学式を下記式（５）に示す。
また、タマリキセチンは、玉ネギ外皮中に豊富に存在するケルセチンを原料として化学的に合成することができる。タマリキセチンは、式（１）で表される化合物のうち、Ｒ２がメチル基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５が水素原子である化合物である。タマリキセチンの化学式を下記式（６）に示す。
また、ラムネチンは、玉ネギ外皮中に豊富に存在するケルセチンを原料として化学的に合成することができる。ラムネチンは、式（１）で表される化合物のうち、Ｒ５がメチル基であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４が水素原子である化合物である。ラムネチンの化学式を下記式（７）に示す。
実施例において後述するように、発明者らは、上記式（１）で表わされる化合物（但し、Ｒ１～Ｒ５の全てが水素原子である化合物を除く。）を経口投与することにより、油滴の小型化、肝線維化抑制、脂質輸送抑制等の複合的効果により、ＮＡＳＨの進行を抑制し、症状を改善することができることを明らかにした。ケルセチンが抗肥満作用を有することが報告されているが、上記式（１）で表わされる化合物（但し、Ｒ１～Ｒ５の全てが水素原子である化合物を除く。）の投与によるＮＡＳＨの改善効果は、ケルセチンを投与した場合を有意に上回るものであった。
また、従来は、ＮＡＳＨモデルとして高脂肪食投与のみのモデルを用いた検討しか行われていなかったが、実施例において後述するように、今回は、四塩化炭素やＴ０９０１３１７（ＣＡＳ番号：２９３７５４－５５－９）の投与を組み合わせた、よりＮＡＳＨの多面的症状を再現したインビボモデルを用いて、上記式（１）で表わされる化合物（但し、Ｒ１～Ｒ５の全てが水素原子である化合物を除く。）の効果を検証した。
さらに、発明者らは、実施例において後述するように、上記式（１）で表わされる化合物（但し、Ｒ１～Ｒ５の全てが水素原子である化合物を除く。）を肝星細胞に接触させることにより、肝線維化に関わる遺伝子の発現を抑制することができることを明らかにした。
［ＮＡＳＨの予防又は治療用医薬組成物］
１実施形態において、本発明は、上述したＮＡＳＨの予防又は治療剤と薬学的に許容される担体とを含有する、ＮＡＳＨの予防又は治療用医薬組成物を提供する。
１実施形態において、本発明は、上述したＮＡＳＨの予防又は治療剤と薬学的に許容される担体とを含有する、ＮＡＳＨの予防又は治療用医薬組成物を提供する。
本実施形態の医薬組成物は、常法（例えば、日本薬局方記載の方法）にしたがって、例えば、タブレット剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤等の形態で経口的に、あるいは、注射剤、坐剤、皮膚外用剤等の形態で非経口的に投与することができる。
薬学的に許容される担体としては、通常医薬組成物の製剤に用いられるものを特に制限なく用いることができる。より具体的には、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガントガム、アラビアゴム等の結合剤；デンプン、結晶性セルロース等の賦形剤；アルギン酸等の膨化剤；水、エタノール、グリセリン等の注射剤用溶剤；ゴム系粘着剤、シリコーン系粘着剤等の粘着剤等が挙げられる。
医薬組成物は添加剤を含んでいてもよい。添加剤としては、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤；ショ糖、乳糖、サッカリン、マルチトール等の甘味剤；ペパーミント、アカモノ油等の香味剤；ベンジルアルコール、フェノール等の安定剤；リン酸塩、酢酸ナトリウム等の緩衝剤；安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等の溶解補助剤；酸化防止剤；防腐剤等が挙げられる。
医薬組成物は、上記の担体及び添加剤を適宜組み合わせて、一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製剤化することができる。医薬組成物は、例えば、１日当たり１回経口投与するように製剤化されていてもよい。
医薬組成物の投与量は、患者の症状、体重、年齢、性別等によって異なり、一概には決定できないが、経口投与の場合には、例えば、投与単位形態あたり０．１～１００ｍｇ／ｋｇ体重の有効成分（上記式（１）であらわされる化合物）を投与すればよい。また、注射剤の場合には、例えば、投与単位形態あたり０．０１～５０ｍｇの有効成分を投与すればよい。
［ＮＡＳＨの予防又は改善用食品組成物］
１実施形態において、本発明は、下記式（１）で表される化合物を有効成分として含有する、ＮＡＳＨの予防又は改善用食品組成物を提供する。実施例において後述するように、本実施形態の食品組成物を摂取することにより、ＮＡＳＨを予防、改善又は治療することができる。
１実施形態において、本発明は、下記式（１）で表される化合物を有効成分として含有する、ＮＡＳＨの予防又は改善用食品組成物を提供する。実施例において後述するように、本実施形態の食品組成物を摂取することにより、ＮＡＳＨを予防、改善又は治療することができる。
本実施形態の食品組成物は、例えば、サプリメントの形態であってもよいし、ヨーグルトやゲル状食品等の半固形状の形態であってもよいし、飲料の形態であってもよいし、任意の調理済み食品の形態等であってもよい。サプリメントの形状としては、例えば、タブレット剤、カプセル剤等の形状が挙げられる。
本実施形態の食品組成物は、機能性表示食品であってもよい。「機能性表示食品」とは、科学的根拠を基に商品パッケージに機能性を表示するものとして、消費者庁に届け出られた食品を意味する。
本実施形態の食品組成物は、特定保健用食品であってもよい。特定保健用食品とは、健康の維持増進に役立つことが科学的根拠に基づいて認められ、その効果の表示が許可されている食品を意味する。表示されている効果や安全性については国が審査を行い、食品ごとに消費者庁長官により許可される。実施例において後述するように、本実施形態の食品組成物は、ＮＡＳＨの予防又は改善効果を有することが確認されている。
［ＮＡＳＨの予防又は改善方法］
１実施形態において、本発明は、対象に下記式（１）で表される化合物を摂取させる工程を含む、ＮＡＳＨの予防又は改善方法（ヒトに対する医療行為を除く。）を提供する。
１実施形態において、本発明は、対象に下記式（１）で表される化合物を摂取させる工程を含む、ＮＡＳＨの予防又は改善方法（ヒトに対する医療行為を除く。）を提供する。
本実施形態の方法において、対象としてはＮＡＳＨ患者又は患畜が挙げられる。ここで、医療行為とは、医師（医師の指示を受けた者を含む。）がヒトに対して治療を実施する行為を意味する。
実施例において後述するように、対象に上記式（１）で表される化合物を摂取させることにより、ＮＡＳＨを予防又は改善することができる。
［その他の実施形態］
１実施形態において、本発明は、下記式（１）で表される化合物の有効量を、治療を必要とする患者に投与することを含む、ＮＡＳＨの予防又は治療方法を提供する。
１実施形態において、本発明は、下記式（１）で表される化合物の有効量を、治療を必要とする患者に投与することを含む、ＮＡＳＨの予防又は治療方法を提供する。
１実施形態において、本発明は、ＮＡＳＨの予防又は治療のための上記式（１）で表される化合物を提供する。
１実施形態において、本発明は、ＮＡＳＨの予防又は治療剤を製造するための上記式（１）で表される化合物の使用を提供する。
次に実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
［実験例１］
（ＮＡＳＨモデルマウスへのイソラムネチンの投与）
ＮＡＳＨモデルマウスにイソラムネチンを投与し、その影響を検討した。ＮＡＳＨモデルマウスとしては、マウスに高脂肪食を摂取させ、高脂肪食摂取１４日目から３日毎に肝臓毒である四塩化炭素を０．１ｍＬ／ｋｇ体重で４回投与し、高脂肪食摂取２０日目から脂肪酸合成促進剤であるＴ０９０１３１７（ＣＡＳ番号：２９３７５４－５５－９）を２．５ｍｇ／ｋｇ体重で毎日投与したマウスを使用した。
（ＮＡＳＨモデルマウスへのイソラムネチンの投与）
ＮＡＳＨモデルマウスにイソラムネチンを投与し、その影響を検討した。ＮＡＳＨモデルマウスとしては、マウスに高脂肪食を摂取させ、高脂肪食摂取１４日目から３日毎に肝臓毒である四塩化炭素を０．１ｍＬ／ｋｇ体重で４回投与し、高脂肪食摂取２０日目から脂肪酸合成促進剤であるＴ０９０１３１７（ＣＡＳ番号：２９３７５４－５５－９）を２．５ｍｇ／ｋｇ体重で毎日投与したマウスを使用した。
イソラムネチンは、高脂肪食摂取１４日目から５ｍｇ／ｋｇ体重で１１日間経口投与させた。また、比較のためにイソラムネチンの代わりにケルセチンを投与した群を用意した。ケルセチンは、高脂肪食摂取１４日目から５ｍｇ／ｋｇ体重で１１日間経口投与させた。また、対照群として、通常食を摂取させ、四塩化炭素及びＴ０９０１３１７の代わりに溶媒を投与した群を用意した。
図１は、対照群（図中、「対照」と示す。）、ＮＡＳＨモデルマウス群（以下、「ＮＡＳＨ群」といい、図１中、「ＮＡＳＨ」と示す。）、ＮＡＳＨモデルマウスにケルセチンを投与した群（以下、「ケルセチン群」といい、図１中、「ケルセチン」と示す。）及びＮＡＳＨモデルマウスにイソラムネチンを投与した群（以下、「イソラムネチン群」といい、図１中、「イソラムネチン」と示す。）を投与した群の実験進行表を示す図である。
実験開始から２５日目に、各群のマウスから肝臓を摘出し、肉眼で観察した。また、肝臓組織をパラホルムアルデヒドで固定してパラフィン包埋し、組織切片を作製し、ヘマトキシリン・エオシン染色を行った。また、上記の組織切片を色素（型式「ＳＲｆｌｕｏｒ，６８０－Ｐｈｅｎｙｌ」、モレキュラーターゲティングテクノロジーズ社）で染色し、脂溶性構造（小胞体、脂肪滴等）を染色した。
図２は、対照群、ＮＡＳＨ群、イソラムネチン群及びケルセチン群のマウスからそれぞれ摘出した肝臓の代表的な写真、ヘマトキシリン・エオシン染色した組織切片の顕微鏡写真（図２中、「ＨＥ」と示す。）、脂溶性構造を染色した組織切片の顕微鏡写真（図２中、「ＳＲ」と示す。）を示す図である。肝臓の写真のスケールバーは１ｃｍを示す。また、顕微鏡写真のスケールバーは１００μｍを示す。
その結果、イソラムネチン群のマウスの肝臓では、ＮＡＳＨ群のマウスの肝臓、及びケルセチン群のマウスの肝臓と比較して、脂肪の大滴化及び細胞の線維化が抑制されていることが明らかとなった。
［実験例２］
（脂質生成に関する遺伝子の発現の検討）
実験例１で各群のマウスから摘出した肝臓組織における、脂質生成に関する遺伝子の発現を定量的ＲＴ－ＰＣＲにより解析した。脂質生成に関する遺伝子として、Ｓｔｅｒｏｌ
ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｅｌｅｍｅｎｔ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＳＲＥＢＰ）、Ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ（ＦＡＳ）及びＡｃｅｔｙｌ－ＣｏＡ
ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ（ＡＣＣ）遺伝子の発現を検討した。
（脂質生成に関する遺伝子の発現の検討）
実験例１で各群のマウスから摘出した肝臓組織における、脂質生成に関する遺伝子の発現を定量的ＲＴ－ＰＣＲにより解析した。脂質生成に関する遺伝子として、Ｓｔｅｒｏｌ
ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｅｌｅｍｅｎｔ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＳＲＥＢＰ）、Ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ（ＦＡＳ）及びＡｃｅｔｙｌ－ＣｏＡ
ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ（ＡＣＣ）遺伝子の発現を検討した。
図３（ａ）～（ｃ）は、対照群、ＮＡＳＨ群、イソラムネチン群及びケルセチン群の各マウスの肝臓におけるＳＲＥＢＰ遺伝子、ＦＡＳ遺伝子及びＡＣＣ遺伝子の発現量をそれぞれ定量した結果を示すグラフである。図３（ａ）はＳＲＥＢＰ遺伝子の発現量の定量結果であり、図３（ｂ）はＦＡＳ遺伝子の発現量の定量結果であり、図３（ｃ）はＡＣＣ遺伝子の発現量の定量結果である。
図３（ａ）～（ｃ）中、「＊＊＊」は対照群に対してｐ＜０．００１で有意差が存在することを示し、「＃＃＃」はＮＡＳＨ群に対してｐ＜０．００１で有意差が存在することを示す。
その結果、ＮＡＳＨモデルマウスにイソラムネチンを投与することにより、ＳＲＥＢＰ遺伝子及びＦＡＳ遺伝子についてはケルセチン投与群と同程度に遺伝子発現量が低下し、ＡＣＣ遺伝子についてはケルセチン投与群よりも有意に遺伝子発現量が低下したことが明らかとなった。
この結果は、イソラムネチンの投与によりＮＡＳＨモデルマウスにおける脂質生成が有意に抑制されたことを示す。
［実験例３］
（肝線維化に関する遺伝子の発現の検討）
実験例１で各群のマウスから摘出した肝臓組織における、肝線維化に関する遺伝子の発現を定量的ＲＴ－ＰＣＲにより解析した。肝線維化に関する遺伝子として、Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ－β（ＴＧＦβ）及びＣｏｌｌａｇｅｎ Ｔｙｐｅ １（ＣＯＬ１）遺伝子の発現を検討した。ＴＧＦβは肝線維化に関与する遺伝子である。また、ＣＯＬ１はコラーゲンの沈着に関与する遺伝子である。
（肝線維化に関する遺伝子の発現の検討）
実験例１で各群のマウスから摘出した肝臓組織における、肝線維化に関する遺伝子の発現を定量的ＲＴ－ＰＣＲにより解析した。肝線維化に関する遺伝子として、Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ－β（ＴＧＦβ）及びＣｏｌｌａｇｅｎ Ｔｙｐｅ １（ＣＯＬ１）遺伝子の発現を検討した。ＴＧＦβは肝線維化に関与する遺伝子である。また、ＣＯＬ１はコラーゲンの沈着に関与する遺伝子である。
図４（ａ）及び（ｂ）は、対照群、ＮＡＳＨ群、イソラムネチン群及びケルセチン群の各マウスの肝臓におけるＴＧＦβ遺伝子及びＣＯＬ１遺伝子の発現量をそれぞれ定量した結果を示すグラフである。図４（ａ）はＴＧＦβ遺伝子の発現量の定量結果であり、図４（ｂ）はＣＯＬ１遺伝子の発現量の定量結果である。
図４（ａ）及び（ｂ）中、「＊」は対照群に対してｐ＜０．０５で有意差が存在することを示し、「＊＊」は対照群に対してｐ＜０．０１で有意差が存在することを示し、「＊＊＊」は対照群に対してｐ＜０．００１で有意差が存在することを示し、「＃＃＃」はＮＡＳＨ群に対してｐ＜０．００１で有意差が存在することを示す。
その結果、ＮＡＳＨモデルマウスにイソラムネチンを投与することにより、ＮＡＳＨ群に対してＴＧＦβ遺伝子発現量が有意に低下し、その度合いはケルセチン投与群よりも強いこと、またＣＯＬ１遺伝子の発現量がケルセチン投与群に比べて優位に低下していることが明らかとなった。
この結果は、イソラムネチンの投与によりＮＡＳＨモデルマウスにおける肝線維化が有意に抑制されたことを示す。
［実験例４］
（脂質輸送に関する遺伝子の発現の検討）
実験例１で各群のマウスから摘出した肝臓組織における、脂質輸送に関する遺伝子の発現を定量的ＲＴ－ＰＣＲにより解析した。脂質輸送に関する遺伝子として、Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｂ（ＡｐｏＢ）遺伝子の発現を検討した。
（脂質輸送に関する遺伝子の発現の検討）
実験例１で各群のマウスから摘出した肝臓組織における、脂質輸送に関する遺伝子の発現を定量的ＲＴ－ＰＣＲにより解析した。脂質輸送に関する遺伝子として、Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｂ（ＡｐｏＢ）遺伝子の発現を検討した。
図５は、対照群、ＮＡＳＨ群、イソラムネチン群及びケルセチン群の各マウスの肝臓におけるＡｐｏＢ遺伝子の発現量をそれぞれ定量した結果を示すグラフである。図５中、「＊＊＊」は対照群に対してｐ＜０．００１で有意差が存在することを示し、「＃＃＃」はＮＡＳＨ群に対してｐ＜０．００１で有意差が存在することを示す。
その結果、ＮＡＳＨモデルマウスにイソラムネチンを投与することにより、ケルセチン投与群と同程度にＡｐｏＢ遺伝子の発現量が低下したことが明らかとなった。この結果は、イソラムネチンの投与によりＮＡＳＨモデルマウスにおける脂質輸送抑制効果が得られたことを示す。
以上、実験例１～４の結果から、イソラムネチンはインビボにおいてＮＡＳＨの予防、改善又は治療効果を有することが明らかとなった。
［実験例５］
（細胞毒性の検討）
上記式（２）～（７）で表される化合物を、肝星細胞（ｈｅｐａｔｉｃ ｓｔｅｌｌａｔｅ ｃｅｌｌ，ＨＳＣ）に接触させ、ＨＳＣの生存率を検討した。１０μＭ～８０μＭの濃度の各化合物をＨＳＣに接触させ、１２時間後、２４時間後のＨＳＣの生存率を解析した。
（細胞毒性の検討）
上記式（２）～（７）で表される化合物を、肝星細胞（ｈｅｐａｔｉｃ ｓｔｅｌｌａｔｅ ｃｅｌｌ，ＨＳＣ）に接触させ、ＨＳＣの生存率を検討した。１０μＭ～８０μＭの濃度の各化合物をＨＳＣに接触させ、１２時間後、２４時間後のＨＳＣの生存率を解析した。
図６（ａ）は、上記式（２）～（７）で表される化合物をＨＳＣに接触させ、１２時間後にＨＳＣの生存率を解析した結果である。図６（ｂ）は、上記式（２）～（７）で表される化合物をＨＳＣに接触させ、２４時間後にＨＳＣの生存率を解析した結果である。図６中、ＣＮは上述の化合物に接触させていないネガティブコントロールを示し、ＱＣＴはケルセチンを示し、ＩＳＯはイソラムネチンを示し、ＡＺＡはアザレアチンを示し、３ＭＱは３－メチルケルセチンを示し、ＴＡＭはタマリキセチンを示し、ＲＨＡはラムネチンを示す。
その結果、上記式（２）～（７）で表される、上述の化合物を、ＨＳＣに接触させた場合、４０μＭ程度であれば、２４時間後であっても、ＨＳＣへの毒性は低いことが明らかになった。特に、ラムネチンは、８０μＭの濃度であっても、細胞毒性の効果を有さないことが明らかになった。
［実験例６］
（線維化の検討１）
上記式（２）～（７）で表される化合物について、ＴＧＦβによるＨＳＣの線維化を抑制する効果について解析した。具体的には、α－ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ａｃｔｉｎ（αＳＭＡ）、Ｃｏｌｌａｇｅｎ ｔｙｐｅ Ｉ（Ｃｏｌ１）、Ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ（Ｔｉｍｐ１）の発現量を指標として、ＨＳＣの線維化の評価を行った。
（線維化の検討１）
上記式（２）～（７）で表される化合物について、ＴＧＦβによるＨＳＣの線維化を抑制する効果について解析した。具体的には、α－ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ａｃｔｉｎ（αＳＭＡ）、Ｃｏｌｌａｇｅｎ ｔｙｐｅ Ｉ（Ｃｏｌ１）、Ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ（Ｔｉｍｐ１）の発現量を指標として、ＨＳＣの線維化の評価を行った。
１ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβ１と４０μＭの上記式（２）～（７）で表される化合物をＨＳＣに１時間接触させた。その後、定法によりＨＳＣからＲＮＡを分離し、得られたＲＮＡを逆転写反応に供してｃＤＮＡを得た。得られたｃＤＮＡを鋳型として定量ＰＣＲにより、上述の遺伝子の発現量を解析した。
図７（ａ）は、ＴＧＦβ１と上述の化合物を接触後にαＳＭＡの発現量を定量した結果であり、図７（ｂ）は、ＴＧＦβ１と上述の化合物を接触後にＣｏｌ１の発現量を定量した結果であり、図７（ｃ）は、ＴＧＦβ１と上述の化合物を接触後にＴｉｍｐ１の発現量を定量した結果である。図７中、ＣＮはＴＧＦβ１と上述の化合物のいずれにも接触させていないネガティブコントロールを示し、ＣＰはＴＧＦβ１に接触させ、上述の化合物に接触させていないポジティブコントロールを示し、ＱＣＴはケルセチンを示し、ＩＳＯはイソラムネチンを示し、ＡＺＡはアザレアチンを示し、３ＭＱは３－メチルケルセチンを示し、ＴＡＭはタマリキセチンを示し、ＲＨＡはラムネチンを示す。
図７中、「＊」はＣＮに対してｐ＜０．０５で有意差が存在することを示し、「＊＊」はＣＮに対してｐ＜０．０１で有意差が存在することを示し、「＊＊＊」はＣＮに対してｐ＜０．００１で有意差が存在することを示す。
［実験例７］
（線維化の検討２）
上記式（２）～（７）で表される化合物について、ＴＧＦβによるＨＳＣの線維化を抑制する効果について解析した。具体的には、４０μＭの上記式（２）～（７）で表される化合物をＨＳＣに１時間接触させた後、更に、１ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβ１と４０μＭの上記式（２）～（７）で表される化合物をＨＳＣに１時間接触させた。その後、定法によりＨＳＣからＲＮＡを分離し、得られたＲＮＡを逆転写反応に供してｃＤＮＡを得た。得られたｃＤＮＡを鋳型として定量ＰＣＲにより、上述の遺伝子の発現量を解析した。
（線維化の検討２）
上記式（２）～（７）で表される化合物について、ＴＧＦβによるＨＳＣの線維化を抑制する効果について解析した。具体的には、４０μＭの上記式（２）～（７）で表される化合物をＨＳＣに１時間接触させた後、更に、１ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβ１と４０μＭの上記式（２）～（７）で表される化合物をＨＳＣに１時間接触させた。その後、定法によりＨＳＣからＲＮＡを分離し、得られたＲＮＡを逆転写反応に供してｃＤＮＡを得た。得られたｃＤＮＡを鋳型として定量ＰＣＲにより、上述の遺伝子の発現量を解析した。
図８（ａ）は、上述の化合物を接触後にＴＧＦβ１と上述の化合物を接触させてαＳＭＡの発現量を定量した結果であり、図８（ｂ）は、上述の化合物を接触後にＴＧＦβ１と上述の化合物を接触させてＣｏｌ１の発現量を定量した結果であり、図８（ｃ）は、上述の化合物を接触後にＴＧＦβ１と上述の化合物を接触させてＴｉｍｐ１の発現量を定量した結果である。図８中、ＣＮはＴＧＦβ１と上述の化合物のいずれにも接触させていないネガティブコントロールを示し、ＣＰはＴＧＦβ１に接触させ、上述の化合物に接触させていないポジティブコントロールを示し、ＱＣＴはケルセチンを示し、ＩＳＯはイソラムネチンを示し、ＡＺＡはアザレアチンを示し、３ＭＱは３－メチルケルセチンを示し、ＴＡＭはタマリキセチンを示し、ＲＨＡはラムネチンを示す。
図８中、「＊」はＣＮに対してｐ＜０．０５で有意差が存在することを示し、「＊＊」はＣＮに対してｐ＜０．０１で有意差が存在することを示す。
図７と図８の結果より、いずれの化合物についても、上述の遺伝子のうちのいずれかの発現量を抑制する傾向が認められた。特に、ＨＳＣをＱＣＴ、ＩＳＯ、ＲＨＡに接触させた場合、ＨＳＣの線維化の抑制が顕著な傾向にあった。
本発明により、ＮＡＳＨを予防、改善又は治療する技術を提供することができる。
Claims (6)
- 下記式（１）で表される化合物を有効成分として含有する、非アルコール性脂肪性肝炎の予防又は治療剤。
- 請求項１に記載の予防又は治療剤と薬学的に許容される担体とを含有する、非アルコール性脂肪性肝炎の予防又は治療用医薬組成物。
- 下記式（１）で表される化合物を有効成分として含有する、非アルコール性脂肪性肝炎の予防又は改善用食品組成物。
- 機能性表示食品である、請求項３に記載の非アルコール性脂肪性肝炎の予防又は改善用食品組成物。
- 特定保健用食品である、請求項３に記載の非アルコール性脂肪性肝炎の予防又は改善用食品組成物。
- 対象に下記式（１）で表される化合物を摂取させる工程を含む、非アルコール性脂肪性肝炎の予防又は改善方法（ヒトに対する医療行為を除く。）。
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|---|---|---|---|---|
| JP2011057580A (ja) * | 2009-09-08 | 2011-03-24 | Fancl Corp | サーチュイン活性促進剤 |
| WO2013100111A1 (ja) * | 2011-12-27 | 2013-07-04 | 油田 正樹 | サーチュイン活性化剤 |
| JP2016199545A (ja) * | 2015-04-10 | 2016-12-01 | ケイティーティー貿易株式会社 | リモネン−１，２−ジオール等のスダチ成分を有効成分とする糖及び脂質の代謝改善剤 |
-
2018
- 2018-09-28 WO PCT/JP2018/036389 patent/WO2019066010A1/ja active Application Filing
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2011057580A (ja) * | 2009-09-08 | 2011-03-24 | Fancl Corp | サーチュイン活性促進剤 |
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| KIM, HWAN, JAE ET AL.: "Salicornia Extract Ameliorates Salt-Induced Aggravation of Nonalcoholic Fatty Liver Disease in Obese Mice Fed a High-Fat Diet", JOURNAL OF FOOD SCIENCE, vol. 82, no. 7, 13 June 2017 (2017-06-13) - July 2017 (2017-07-01), pages 1765 - 1774, XP055585671, ISSN: 0022-1147, DOI: 10.1111/1750-3841.13777 * |
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