WO2018155613A1 - バチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物を含むエビ目急性肝膵臓壊死病予防及び／又は治療用組成物 - Google Patents
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Definitions
- the present invention relates to a composition for preventing, controlling, suppressing, reducing, alleviating and / or treating shrimp acute hepatopancreatic necrosis, comprising a Bacillus amyloliquefaciens strain and / or a processed product of the strain, and the composition
- the present invention relates to a method for treating shrimp eye acute hepatopancreatic necrosis.
- Patent Document 1 discloses a “Bacillus amyloliquefaciens strain with deposit number NITE ABP-01844”. However, Patent Document 1 does not disclose or suggest that the Bacillus amyloliquefaciens strain is effective for shrimp acute hepatopancreatic necrosis.
- An object of the present invention is to provide a composition effective for shrimp acute hepatopancreatic necrosis and a method for treating shrimp acute hepatopancreatic necrosis.
- the Bacillus amyloliquefaciens strain has an effect on Vibrio parahemolyticus which is a causative bacterium of shrimp Acute hepatopancreatic necrosis.
- the present invention has been completed. That is, the present invention is as follows.
- a composition for preventing, controlling, suppressing, reducing, alleviating, and / or treating shrimp acute hepatopancreatic necrosis comprising a Bacillus amyloliquefaciens strain and / or a processed product of the strain.
- the shrimp is a shrimp family, a shrimp, a black tiger, a shrimp, or a white shrimp.
- the composition according to item 1 or 2 wherein the Bacillus amyloliquefaciens strain is a strain having the deposit number NITE ABP-01844. 4).
- a marine medicinal product, feed, feed additive, or drinking water comprising the composition according to any one of items 1 to 3. 5).
- Acute shrimp characterized by administering the aquatic drug, feed, feed additive or drinking water according to item 4 above and / or the composition according to any one of items 1 to 3 above
- a method for breeding shrimp eyes while preventing, controlling, suppressing, reducing, alleviating, and / or treating hepatopancreatic necrosis. 6).
- Vibrio parahemolyticus control agent containing a Bacillus amyloliquefaciens strain and / or a processed product of the strain. 7).
- the pesticide according to item 6, wherein the Bacillus amyloliquefaciens strain is a strain having the deposit number NITE ABP-01844. 8).
- a shrimp that prevents, controls, suppresses, reduces, alleviates, and / or treats a shrimp acute hepatopancreatic necrosis including a step of administering a Bacillus amyloliquefaciens strain and / or a processed product of the strain to the shrimp How to breed.
- a method for preventing, controlling, suppressing, reducing, alleviating, and / or treating shrimp acute hepatopancreatic necrosis comprising a step of administering a Bacillus amyloliquefaciens strain and / or a processed product of the strain to the shrimp. 10.
- Bacillus amyloliquefaciens strain is a strain having the deposit number NITE ABP-01844.
- a method for controlling Vibrio parahemolyticus comprising a step of adding a Bacillus amyloliquefaciens strain and / or a processed product of the strain to a place where Vibrio parahemolyticus is propagated or propagated. 12 12. The method according to item 11 above, wherein the Bacillus amyloliquefaciens strain is a strain having the deposit number NITE ABP-01844.
- composition, breeding method or treatment method of the present invention had at least one of the following effects.
- the comparison result of the organic acid production ability of the strain based on this invention and a well-known strain The EMS / AHPND infection test result 14 days after the start of feed feeding containing the composition of the present invention.
- the vertical axis indicates the survival rate (%), and the horizontal axis indicates the number of days after the start of infection.
- ⁇ shows the results of the test plot, and ⁇ shows the results of the control plot.
- the composition for preventing, controlling, suppressing, reducing, alleviating and / or treating shrimp acute hepatopancreatic necrosis of the present invention is at least Bacillus amyloriki.
- the method for preventing, controlling, suppressing, reducing, alleviating and / or treating shrimp acute hepatopancreatic necrosis of the present invention preferably uses at least a Bacillus amyloliquefaciens strain and / or a processed product of the strain for shrimp. Is administered orally or sprayed to shrimp farms (eg, culture ponds).
- Bacillus amyloliquefaciens strain Bacillus amyloliquefaciens according to the present invention (Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus amyloliquefaciens) strains, can utilize known strains, particularly preferred strains, deposited as accession number NITEABP-01844 Is TOA5001 stock.
- the mycological properties of the strain (bacteria) according to the present invention are as follows. Gram-positive, Neisseria gonorrhoeae, aerobic, spore-forming ability, motility. It is low in auxotrophy and can grow on various media such as gravy medium, SCD medium, brain heart infusion medium. On the agar plate medium, the periphery is rough and yellowish white. Furthermore, depending on the type of the medium (Brain Heart Infusion Medium), a raised colony having viscosity inside is formed.
- the strain according to the present invention is not limited to the strain deposited under the deposit number NITE ABP-01844, as long as it belongs to Bacillus amyloliquefaciens and has an effect on Vibrio parahemolyticus, It can be used as a strain according to the present invention. That is, the Bacillus amyloliquefaciens strain of the present invention is intended to include not only the deposited strain itself but also mutants and progeny that are strains having the above-mentioned mycological properties.
- the mutant preparation method can be obtained by conventionally known irradiation and chemical substance treatment such as nitrosoguanidine, ethylmethanesulfonic acid, methylmethanesulfonic acid and the like.
- the strain according to the present invention is not toxic even when administered in vivo (particularly in the body of a shrimp), as shown in the Examples below.
- the strain according to the present invention is obtained by inoculating a nutrient medium containing a carbon source and a nitrogen source and, if necessary, inorganic salts, followed by culturing under aerobic conditions (for example, shaking culture, aeration and agitation culture), Can be obtained.
- aerobic conditions for example, shaking culture, aeration and agitation culture
- a culture solution it has an effect on the causative bacteria of acute hepatopancreatic necrosis disease (for example, Vibrio parahemolyticus) as it is in an unconcentrated culture solution, It has the same activity even after freeze-drying or spray-drying.
- acute liver can be obtained by using a solid itself or a mixture thereof (for example, a contact or mixture with another solid, or a liquid in which a strain-growing solid according to the present invention is immersed). It can have an effect on the causative bacteria of pancreatic necrosis.
- the solid may be any material as long as the strain according to the present invention can grow, and means, for example, a plant body that is a raw material for agar medium, silage, natto and the like, and curd represented by yogurt.
- Any carbon source may be used as long as the strain according to the present invention can be used.
- Glucose, sucrose, starches, cellulose mixtures, and other carbohydrates are preferably used.
- the nitrogen source may be any as long as the strain according to the present invention can be used, but preferably peptone, yeast extract, gravy extract and the like are used.
- the strain according to the present invention can be grown in a liquid medium or a plate culture inoculated on a commercially available medium, for example, tryptosy medium, brain heart infusion medium, or gravy medium.
- the culture When culturing in a small amount in liquid culture, shaking culture using a test tube or flask is preferred. When culturing in large quantities, it is preferable to culture with aeration and agitation as in the case of other fermentation products.
- culture When culture is performed in a large tank, it is preferable to first inoculate and culture the strain according to the present invention in a relatively small amount of medium as a preculture, and then transfer the culture to a large production tank for production culture.
- the composition of the medium used for the preculture and the medium used for the production culture may be the same, or may be changed if necessary.
- the culture conditions can be appropriately changed within the range in which the strain according to the present invention grows. Usually, the culture is performed at 15 to 45 ° C., preferably 25 to 37 ° C. under aerobic conditions.
- the culture time varies depending on the culture conditions and the culture volume, but is usually about 1 day to 1 week.
- the strain according to the present invention can be recovered from the culture solution obtained by the above culture by centrifugation and / or membrane concentration.
- the collected bacterial cells may be used as they are, or dried bacterial cells that have been subjected to freeze-drying or spray-drying as necessary.
- the treated product of the strain according to the present invention is various treatments on the cultured strain (washing, far-dehydration, heating, gamma ray or neutron irradiation, spray drying, freeze drying, sterilization, enzyme, surface activity Agent, grinding, grinding, etc.).
- composition of the present invention includes at least the strain (including cells) of the present invention and / or a processed product of the strain, and prevents, controls, suppresses, reduces, alleviates, and / or shrimps acute hepatopancreatic necrosis. Or have a therapeutic effect, and in some cases, a control, elimination, and / or cure effect.
- Acute hepatopancreatic necrosis is a cerebral microbial infection caused by Vibrio parahaemolyticus infection, particularly causing serious damage in cultured shrimp.
- the shrimp of the present invention can be exemplified by, for example, lobster family, vaname shrimp, black tiger (bovine shrimp), tiger shrimp, tiger shrimp and white shrimp.
- the bacterial cell according to the present invention When the bacterial cell according to the present invention is used, any concentration may be used as long as the desired effect can be exhibited.
- the bacterial strain according to the present invention when administered to shrimp, is 10 2 to 10 2 per kilogram. It is preferable to feed the feed added to 10 10 cfu (Colony forming unit), preferably 10 4 to 10 8 cfu per kilogram.
- the administration time, administration method, and dose of the composition of the present invention are not particularly limited, but it may be usually added to a commercial feed or mixed diet.
- the dose of the composition for acute hepatopancreatic necrosis of the present invention is not particularly limited. For example, it is desirable to add 0.01% to 10%, preferably 0.05% to 5% to a commercial feed and administer it. .
- composition of this invention is as follows, for example.
- Composition for prevention, control, suppression, reduction, alleviation, and / or treatment of acute hepatopancreatic necrosis (2)
- Micromp feed, feed additive, and breeding water Prevention of shrimp acute hepatopancreatic necrosis (particularly acute hepatopancreatic necrosis), characterized in that the feed, feed additive or drinking water and / or the composition of the present invention is administered to the shrimp.
- methods of breeding shrimp eyes while controlling, controlling, reducing, mitigating, and / or treating.
- the present invention is also directed to a method for combating Vibrio parahemolyticus.
- the vibrio parahemolyticus control agent of the present invention contains at least a Bacillus amyloliquefaciens strain and / or a processed product of the strain.
- the pesticide of the present invention prevents the occurrence of acute hepatopancreatic necrosis by adding it to a place (particularly a breeding facility, aquarium, etc.) where Vibrio parahemolyticus is breeding or expected to breed It is possible to suppress, reduce, etc.
- the Vibrio parahemolyticus extermination method of the present invention is a place (particularly a breeding facility) where Vibrio parahemolyticus breeds or breeds at least a Bacillus amyloliquefaciens strain and / or a processed product of the strain. , A water tank, etc.).
- the composition of the present invention includes a wide range of marine medicines, foods and drinks, feed additives, feeds (formulated feeds, mixed feeds), and breeding water having the above-mentioned uses.
- the composition of the present invention is blended with additives such as starch, potato starch, lactose, soybean protein and the like, excipients, binders, disintegrants, lubricants, stabilizers, suspending agents and the like. These can be formulated into powders, tablets, granules, capsules, ointments, liquids and the like by known methods.
- the organic acid producing ability of the strain according to the present invention was compared with the known strain organic acid producing ability. Details are as follows.
- the strain according to the present invention and a known strain, B. subtilis standard strain were cultured under the same culture conditions. Specifically, each strain was inoculated into a separate brain heart infusion liquid medium (manufactured by BBL) and cultured with shaking at 37 ° C. for 24 hours. After the culture, the liquid phase and the solid phase cells were separated from the culture solution by cooling centrifugation (10000 ⁇ g, 10 minutes).
- the obtained liquid phase part was sterilized and filtered through a 0.45 ⁇ m membrane filter.
- the filtered liquid was used as a culture supernatant for organic acid measurement by the following HPLC.
- About 0.2 ml of the culture supernatant of each strain was collected in a 1.5 mL tube, and 50 ⁇ L of 500 mM trans-crotonic acid was added as an internal standard substance. Then, it extracted twice with 0.6 mL of 0.25% ammonia as an extract.
- To the obtained supernatant 0.3 times the amount of 10% HClO 4 was added to precipitate and remove the protein.
- the obtained supernatant was filtered through a 0.45 ⁇ m membrane filter to obtain an HPLC sample.
- HPLC was performed under the following conditions.
- HPLC system manufactured by Waters Column: Organic Acid Column (7.8 ⁇ 300 mm) and guard column (6.0 ⁇ 50 mm) Column temperature and post-column reaction temperature: 60 ° C Flow rate: 0.8mL / min Mobile phase: 0.08% HClO 4 Reaction phase: 0.2 mM BTB, 5.2 mM NaOH, 15 mM Na 2 HPO 4 Detection wavelength: 445 nm
- the comparison result of the organic acid production ability computed from the result of HPLC is shown in FIG.
- the acetic acid producing ability of the strain according to the present invention is at least 2.7 times (48.7 / 4) higher than the acetic acid producing ability of the known Bacillus subtilis reference strain. 17.9). From the above results, the strain according to the present invention has higher organic acid producing ability than known strains. More specifically, since organic acids including acetic acid have antibacterial action, it was confirmed that the strain according to the present invention has higher antibacterial activity than known strains.
- the strain according to the present invention was cultured. Details are as follows.
- the strain according to the present invention Bacillus amyloliquefaciens TOA5001 strain, is inoculated into a pre-culture medium in which 2% peptone and yeast extract are added to brain heart infusion medium, and cultured with shaking at 30 ° C. for 16 hours. Thus, a culture solution after pre-culture was obtained.
- the culture solution after the pre-culture is inoculated into a main culture medium containing 4% glucose, 3% peptone and 2% yeast extract, and cultured with shaking at 30 ° C. to 37 ° C. for 2 to 3 days.
- a culture solution after the main culture was obtained. From the culture solution after the main culture, cells and a culture supernatant were obtained by centrifugation at 14000 ⁇ g for 20 minutes. The cells were freeze-dried and used in the following examples as a dry powder.
- EMS / AHPND infection test It was evaluated whether acute hepatopancreatic necrosis (EMS / AHPND) can be controlled by adding and feeding the strain according to the present invention to vaname prawn diet.
- Vaname shrimp obtained from IMT Engineering was used for the test. The average body weight of shrimp was 1.1 g at the start, 2.25 g after 2 weeks, and 3.3 g after 4 weeks.
- the breeding aquarium used for the feeding test was a 100 L tank, and the filtration system was a circulation type using TOTTO (Biolaboto Co., Ltd.).
- the breeding water temperature was controlled by an air conditioner, and the water temperature was 26 degrees.
- a powder feed obtained by pulverizing a general commercial feed used in Thailand in both the test group and the control group was used.
- powder feed supplemented with 0.5% of the strain according to the present invention was used as the test plot feed.
- the powdered feed was prepared by mixing 0.5 parts by weight of the dry powder prepared in Example 2 with 100 parts by weight of commercially available feed, adding an equal amount of distilled water and mixing well.
- a 50 mL syringe was filled with the kneaded bait and extruded to make a spaghetti shaped bait. This was dried at 60 to 65 ° C. for about 2 hours, and after drying, stored in a refrigerator.
- the daily feeding amount was about 5% by weight / body weight. Feeding was divided into four times a day and an automatic feeder was used. Feeding continued during the infection test.
- a bacterial infection test by immersion infection was carried out 2 weeks (14 days) after feeding.
- the bacterial solution was added to 3 ⁇ 10 4 cells or cfu / mL, and the cells were continuously raised. Survival was assessed 2 weeks after infection.
- compositions, breeding method or treatment method of the present invention had the following effects.
- the present invention can provide a composition for preventing and / or treating shrimp acute hepatopancreatic necrosis comprising a Bacillus amyloliquefaciens strain and / or a processed product of the strain.
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Abstract
エビ目急性肝膵臓壊死病に効果のある組成物を提供する。 バチルス・アミロリキファシエンス菌株がエビ目急性肝膵臓壊死病の原因菌であるビブリオ・パラヘモリティカスに対して効果を有することを見出した。
Description
本発明は、バチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物を含むエビ目急性肝膵臓壊死病予防、防除、抑制、軽減、緩和、及び／又は治療用組成物、並びに該組成物を使用したエビ目急性肝膵臓壊死病の治療方法に関する。
本出願は、参照によりここに援用されるところの日本出願特願2017-034084号優先権を請求する。
本出願は、参照によりここに援用されるところの日本出願特願2017-034084号優先権を請求する。
（現在のエビ目養殖業の問題）
現在のエビ目養殖業において、感染による問題は深刻である。
特に、エビ養殖業は、早期死亡症候群｛ＥＭＳ（Ｅａｒｌｙ Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）｝と呼ばれる感染症により危機的な状況に直面している。早期死亡症候群は、稚エビに発生し、死亡率はほぼ１００％である。
また、肝膵臓に変色等の症状が現れ、壊死を起こすＥＭＳは、急性肝膵臓壊死症｛ＥＭＳ／ＡＨＰＮＤ（Ａｃｕｔｅ Ｈｅｐａｔｏｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｄｉｓｅａｓｅ）｝と呼ばれている。
エビ目急性肝膵臓壊死病は、東南アジア、中国、中南米で発生し、経済的に多大な被害を関連企業に与えている。
現在のエビ目養殖業において、感染による問題は深刻である。
特に、エビ養殖業は、早期死亡症候群｛ＥＭＳ（Ｅａｒｌｙ Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）｝と呼ばれる感染症により危機的な状況に直面している。早期死亡症候群は、稚エビに発生し、死亡率はほぼ１００％である。
また、肝膵臓に変色等の症状が現れ、壊死を起こすＥＭＳは、急性肝膵臓壊死症｛ＥＭＳ／ＡＨＰＮＤ（Ａｃｕｔｅ Ｈｅｐａｔｏｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｄｉｓｅａｓｅ）｝と呼ばれている。
エビ目急性肝膵臓壊死病は、東南アジア、中国、中南米で発生し、経済的に多大な被害を関連企業に与えている。
（先行技術）
特許文献１では、「寄託番号NITE ABP-01844のバチルス・アミロリキファシエンス菌株」を開示している。しかしながら、特許文献１では、バチルス・アミロリキファシエンス菌株がエビ目急性肝膵臓壊死病に効果があることを開示又は示唆をしていない。
特許文献１では、「寄託番号NITE ABP-01844のバチルス・アミロリキファシエンス菌株」を開示している。しかしながら、特許文献１では、バチルス・アミロリキファシエンス菌株がエビ目急性肝膵臓壊死病に効果があることを開示又は示唆をしていない。
本発明は、エビ目急性肝膵臓壊死病に効果のある組成物並びにエビ目急性肝膵臓壊死病の治療方法を提供することを課題とする。
本発明者らは、上記課題に鑑み鋭意検討した結果、バチルス・アミロリキファシエンス菌株がエビ目急性肝膵臓壊死病の原因菌であるビブリオ・パラヘモリティカスに対して効果を有することを見出して、本発明を完成した。
すなわち、本発明は以下の通りである。
すなわち、本発明は以下の通りである。
１．バチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物を含むエビ目急性肝膵臓壊死病予防、防除、抑制、軽減、緩和、及び／又は治療用組成物。
２．前記エビ目は、クルマエビ科、バナメイエビ、ブラックタイガー、クルマエビ、又は、ホワイトシュリンプである前項１に記載の組成物。
３．前記バチルス・アミロリキファシエンス菌株は、寄託番号ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０１８４４を有する菌株である前項１又は２に記載の組成物。
４．前項１～３のいずれか１に記載の組成物を含む水産用医薬品、飼料、飼料添加物、又は飲料水。
５．前項４に記載の水産用医薬品、飼料、飼料添加物又は飲料水、並びに／又は、前項１～３のいずれか１に記載の組成物を、エビ目に投与することを特徴とするエビ目急性肝膵臓壊死病を予防、防除、抑制、軽減、緩和、及び／又は治療しながらエビ目を飼育する方法。
６．バチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物を含むビブリオ・パラヘモリティカス駆除剤。
７．前記バチルス・アミロリキファシエンス菌株は、寄託番号ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０１８４４を有する菌株である前項６に記載の駆除剤。
８．バチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物をエビ目に投与する工程を含むエビ目急性肝膵臓壊死病を予防、防除、抑制、軽減、緩和、及び／又は治療しながらエビ目を飼育する方法。
９．バチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物をエビ目に投与する工程を含むエビ目急性肝膵臓壊死病を予防、防除、抑制、軽減、緩和、及び／又は治療する方法。
１０．前記バチルス・アミロリキファシエンス菌株は、寄託番号ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０１８４４を有する菌株である前項８又は９に記載の方法。
１１．バチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物をビブリオ・パラヘモリティカスが繁殖している又は繁殖する場所に添加する工程を含むビブリオ・パラヘモリティカス駆除方法。
１２．前記バチルス・アミロリキファシエンス菌株は、寄託番号ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０１８４４を有する菌株である前項１１に記載の方法。
２．前記エビ目は、クルマエビ科、バナメイエビ、ブラックタイガー、クルマエビ、又は、ホワイトシュリンプである前項１に記載の組成物。
３．前記バチルス・アミロリキファシエンス菌株は、寄託番号ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０１８４４を有する菌株である前項１又は２に記載の組成物。
４．前項１～３のいずれか１に記載の組成物を含む水産用医薬品、飼料、飼料添加物、又は飲料水。
５．前項４に記載の水産用医薬品、飼料、飼料添加物又は飲料水、並びに／又は、前項１～３のいずれか１に記載の組成物を、エビ目に投与することを特徴とするエビ目急性肝膵臓壊死病を予防、防除、抑制、軽減、緩和、及び／又は治療しながらエビ目を飼育する方法。
６．バチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物を含むビブリオ・パラヘモリティカス駆除剤。
７．前記バチルス・アミロリキファシエンス菌株は、寄託番号ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０１８４４を有する菌株である前項６に記載の駆除剤。
８．バチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物をエビ目に投与する工程を含むエビ目急性肝膵臓壊死病を予防、防除、抑制、軽減、緩和、及び／又は治療しながらエビ目を飼育する方法。
９．バチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物をエビ目に投与する工程を含むエビ目急性肝膵臓壊死病を予防、防除、抑制、軽減、緩和、及び／又は治療する方法。
１０．前記バチルス・アミロリキファシエンス菌株は、寄託番号ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０１８４４を有する菌株である前項８又は９に記載の方法。
１１．バチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物をビブリオ・パラヘモリティカスが繁殖している又は繁殖する場所に添加する工程を含むビブリオ・パラヘモリティカス駆除方法。
１２．前記バチルス・アミロリキファシエンス菌株は、寄託番号ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０１８４４を有する菌株である前項１１に記載の方法。
本発明の組成物、飼育方法又は治療方法は、少なくとも以下のいずれか１以上の効果を有することを確認した。
（１）エビ目の生体内に投与しても毒性がない。
（２）エビ目急性肝膵臓壊死症に対する効果。
（３）ビブリオ・パラヘモリティカス接触（感染）後の生存率維持又は向上効果。
（１）エビ目の生体内に投与しても毒性がない。
（２）エビ目急性肝膵臓壊死症に対する効果。
（３）ビブリオ・パラヘモリティカス接触（感染）後の生存率維持又は向上効果。
以下、本発明をさらに詳細に説明する。
本発明のエビ目急性肝膵臓壊死病予防、防除、抑制、軽減、緩和、及び／又は治療用組成物（以後、「本発明の組成物」と称する場合がある）は、少なくともバチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物を含む。
本発明のエビ目急性肝膵臓壊死病を予防、防除、抑制、軽減、緩和、及び／又は治療する方法は、少なくともバチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物をエビ目に好ましくは経口投与又はエビ目の養殖施設（例、養殖池等）に散布する。なお、散布する場合には、バチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物を水、海水等で溶いだ溶液を使用することが好ましい。
本発明のエビ目急性肝膵臓壊死病予防、防除、抑制、軽減、緩和、及び／又は治療用組成物（以後、「本発明の組成物」と称する場合がある）は、少なくともバチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物を含む。
本発明のエビ目急性肝膵臓壊死病を予防、防除、抑制、軽減、緩和、及び／又は治療する方法は、少なくともバチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物をエビ目に好ましくは経口投与又はエビ目の養殖施設（例、養殖池等）に散布する。なお、散布する場合には、バチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物を水、海水等で溶いだ溶液を使用することが好ましい。
（バチルス・アミロリキファシエンス菌株）
本発明に係るバチルス・アミロリキファシエンス（バチルス・アミロリケファシエンス、Bacillus amyloliquefaciens）菌株は、自体公知の菌株を利用することができるが、特に好ましい菌株は、寄託番号ＮＩＴＥＡＢＰ－０１８４４として寄託されているＴＯＡ５００１株である。
本発明に係るバチルス・アミロリキファシエンス（バチルス・アミロリケファシエンス、Bacillus amyloliquefaciens）菌株は、自体公知の菌株を利用することができるが、特に好ましい菌株は、寄託番号ＮＩＴＥＡＢＰ－０１８４４として寄託されているＴＯＡ５００１株である。
本発明に係る菌株（細菌）の菌学的性質は、以下の通りである。
グラム陽性、桿菌、好気性、芽胞形成能、運動性あり。
栄養要求性は低く、肉汁培地、SCD 培地、ブレインハートインフュジョン培地等の多様な培地に生育できる。
寒天平板培地上においては、周辺がラフの円形、黄白色を呈する。さらに、培地の種類（ブレインハートインフュジョン培地）によっては内部に粘性を持つ隆起したコロニーを形成する。
グラム陽性、桿菌、好気性、芽胞形成能、運動性あり。
栄養要求性は低く、肉汁培地、SCD 培地、ブレインハートインフュジョン培地等の多様な培地に生育できる。
寒天平板培地上においては、周辺がラフの円形、黄白色を呈する。さらに、培地の種類（ブレインハートインフュジョン培地）によっては内部に粘性を持つ隆起したコロニーを形成する。
本発明に係る菌株は、寄託番号ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０１８４４として寄託されている菌株に限定されるものではなく、バチルス・アミロリキファシエンスに属し、ビブリオ・パラヘモリティカスに対して効果を有する限り、本発明に係る菌株として利用可能である。
すなわち、本発明のバチルス・アミロリキファシエンス菌株は、寄託菌株自体はもちろん、上記した菌学的性質を有する菌株である変異体及び子孫まで意図する。なお、変異体作成方法は、従来公知の放射線照射及びニトロソグアニジン、エチルメタンスルホン酸、メチルメタンスルホン酸などの化学物質処理によって得ることができる。
さらに、本発明に係る菌株は、下記の実施例で示されたように、生体内（特に、エビ目の体内）に投与されても毒性がない。
すなわち、本発明のバチルス・アミロリキファシエンス菌株は、寄託菌株自体はもちろん、上記した菌学的性質を有する菌株である変異体及び子孫まで意図する。なお、変異体作成方法は、従来公知の放射線照射及びニトロソグアニジン、エチルメタンスルホン酸、メチルメタンスルホン酸などの化学物質処理によって得ることができる。
さらに、本発明に係る菌株は、下記の実施例で示されたように、生体内（特に、エビ目の体内）に投与されても毒性がない。
（本発明に係る菌株の培養）
本発明に係る菌株は、炭素源及び窒素源、さらに必要に応じて無機塩類を含む栄養培地に接種後、好気条件下で培養（例えば、振盪培養、通気撹拌培養）することにより、菌体を得ることができる。
培養液の場合は、濃縮させていない培養液のままで急性肝膵臓壊死病の原因菌（例えば、ビブリオ・パラヘモリティカス）に対して効果を有し、フィルター除菌後の培養液又はこれらの凍結乾燥若しくは噴霧乾燥後においても同等の活性を有する。
固体培養の場合は、本発明に係る菌株が生育した固体そのもの又はその混合物（例えば、別の固体との接触又は混合物、又は本発明に係る菌株生育固体を浸漬した液体）を用いることで急性肝膵臓壊死病の原因菌に対して効果を有することができる。ここで、固体とは、本発明に係る菌株が生育できるものならばいずれでもよいが、例えば、寒天培地、サイレージ、納豆等の原料となる植物体、ヨーグルトに代表される凝乳を意味する。
本発明に係る菌株は、炭素源及び窒素源、さらに必要に応じて無機塩類を含む栄養培地に接種後、好気条件下で培養（例えば、振盪培養、通気撹拌培養）することにより、菌体を得ることができる。
培養液の場合は、濃縮させていない培養液のままで急性肝膵臓壊死病の原因菌（例えば、ビブリオ・パラヘモリティカス）に対して効果を有し、フィルター除菌後の培養液又はこれらの凍結乾燥若しくは噴霧乾燥後においても同等の活性を有する。
固体培養の場合は、本発明に係る菌株が生育した固体そのもの又はその混合物（例えば、別の固体との接触又は混合物、又は本発明に係る菌株生育固体を浸漬した液体）を用いることで急性肝膵臓壊死病の原因菌に対して効果を有することができる。ここで、固体とは、本発明に係る菌株が生育できるものならばいずれでもよいが、例えば、寒天培地、サイレージ、納豆等の原料となる植物体、ヨーグルトに代表される凝乳を意味する。
炭素源としては、本発明に係る菌株が利用できるものならばいずれでもよく、好ましくはグルコース、シュークロース、デンプン類、セルロース混合物、その他の炭水化物を使用するのがよい。
窒素源としては、本発明に係る菌株が利用できるものならばいずれでもよいが、好ましくはペプトン、酵母エキス、肉汁エキスなどを使用するのがよい。
さらに、必要に応じて、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機塩類を培地に添加してもよい。
なお、本発明に係る菌株は、市販培地、例えばトリプトソイ培地、ブレインハートインフュジョン培地、肉汁培地に接種しての液体又は平板培養で生育可能である。
液体培養において少量で培養する場合は、試験管又はフラスコを用いる振盪培養が好ましい。大量に培養する場合は、他の発酵生産物の場合と同様に、通気撹拌培養するのが好適である。また、培養を大きなタンクで行う場合、はじめに前培養として比較的少量の培地に本発明に係る菌株を接種培養した後、次に培養物を大きな生産タンクに移してそこで生産培養するのが好ましい。この場合、前培養に使用する培地及び生産培養に使用する培地の組成は、両者同一であってもよいし、必要ならば両者を変えてもよい。
培養条件としては、本発明に係る菌株が生育する範囲内で適宜変更しうるが、通常は好気条件下にて１５～４５℃、好ましくは２５℃～３７℃で培養するのがよい。培養時間は、培養条件や培養量によっても異なるが、通常は約１日～１週間である。
窒素源としては、本発明に係る菌株が利用できるものならばいずれでもよいが、好ましくはペプトン、酵母エキス、肉汁エキスなどを使用するのがよい。
さらに、必要に応じて、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機塩類を培地に添加してもよい。
なお、本発明に係る菌株は、市販培地、例えばトリプトソイ培地、ブレインハートインフュジョン培地、肉汁培地に接種しての液体又は平板培養で生育可能である。
液体培養において少量で培養する場合は、試験管又はフラスコを用いる振盪培養が好ましい。大量に培養する場合は、他の発酵生産物の場合と同様に、通気撹拌培養するのが好適である。また、培養を大きなタンクで行う場合、はじめに前培養として比較的少量の培地に本発明に係る菌株を接種培養した後、次に培養物を大きな生産タンクに移してそこで生産培養するのが好ましい。この場合、前培養に使用する培地及び生産培養に使用する培地の組成は、両者同一であってもよいし、必要ならば両者を変えてもよい。
培養条件としては、本発明に係る菌株が生育する範囲内で適宜変更しうるが、通常は好気条件下にて１５～４５℃、好ましくは２５℃～３７℃で培養するのがよい。培養時間は、培養条件や培養量によっても異なるが、通常は約１日～１週間である。
（本発明に係る菌株の回収方法）
本発明に係る菌株を、上記培養によって得た培養液からは遠心分離及び／又は膜濃縮によって回収できる。回収した菌体をそのまま用いても良いし、必要に応じて凍結乾燥又は噴霧乾燥にかけた乾燥菌体を用いても良い。
本発明に係る菌株を、上記培養によって得た培養液からは遠心分離及び／又は膜濃縮によって回収できる。回収した菌体をそのまま用いても良いし、必要に応じて凍結乾燥又は噴霧乾燥にかけた乾燥菌体を用いても良い。
（本発明に係る菌株の処理物）
本発明に係る菌株の処理物とは、上記記載のように、培養した菌株に各種の処理（洗浄、遠脱水、加熱、ガンマ線や中性子線照射、噴霧乾燥、凍結乾燥、滅菌、酵素、界面活性剤、磨砕、粉砕等）をした物を意味する。
本発明に係る菌株の処理物とは、上記記載のように、培養した菌株に各種の処理（洗浄、遠脱水、加熱、ガンマ線や中性子線照射、噴霧乾燥、凍結乾燥、滅菌、酵素、界面活性剤、磨砕、粉砕等）をした物を意味する。
（本発明の組成物）
本発明の組成物は、少なくとも、本発明に係る菌株（菌体も含む）及び／又は該菌株の処理物を含み、エビ目急性肝膵臓壊死病予防、防除、抑制、軽減、緩和、及び／又は治療効果、さらには、場合によっては、駆除、排除、及び／又は完治効果を有する。
本発明の組成物は、少なくとも、本発明に係る菌株（菌体も含む）及び／又は該菌株の処理物を含み、エビ目急性肝膵臓壊死病予防、防除、抑制、軽減、緩和、及び／又は治療効果、さらには、場合によっては、駆除、排除、及び／又は完治効果を有する。
（エビ目急性肝膵臓壊死病）
急性肝膵臓壊死症とは、ビブリオ・パラヘモリティカス（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）感染を原因とする、エビ目の微生物感染症であり、特に、養殖エビで重大な被害を起こしている。
本発明のエビ目とは、例えば、クルマエビ科、バナメイエビ、ブラックタイガー（ウシエビ）、クルマエビ、タイショウエビ、ホワイトシュリンプ等を例示することができる。
急性肝膵臓壊死症とは、ビブリオ・パラヘモリティカス（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）感染を原因とする、エビ目の微生物感染症であり、特に、養殖エビで重大な被害を起こしている。
本発明のエビ目とは、例えば、クルマエビ科、バナメイエビ、ブラックタイガー（ウシエビ）、クルマエビ、タイショウエビ、ホワイトシュリンプ等を例示することができる。
（本発明の組成物の投与方法）
本発明に係る菌体を使用する場合は、所望の効果が発揮できる範囲内の濃度ならばいずれでもよいが、例えば、エビ目への投与において、本発明に係る菌株が１キログラムあたり１０２～１０１０ｃｆｕ（Ｃｏｌｏｎｙ ｆｏｒｍｉｎｇ ｕｎｉｔ）、好ましくは１キログラムあたり１０４～１０８ｃｆｕとなるよう添加した飼料の給餌が好ましい。
本発明の組成物の投与時期、投与方法及び投与量は特に限定されないが、通常、市販餌に配合するか、混餌で投与すればよい。
本発明の急性肝膵臓壊死病用組成物の投与量は、特に限定されないが、例えば、市販餌へ０．０１％～１０％、好ましくは０．０５％～５％添加し投与することが望ましい。
本発明に係る菌体を使用する場合は、所望の効果が発揮できる範囲内の濃度ならばいずれでもよいが、例えば、エビ目への投与において、本発明に係る菌株が１キログラムあたり１０２～１０１０ｃｆｕ（Ｃｏｌｏｎｙ ｆｏｒｍｉｎｇ ｕｎｉｔ）、好ましくは１キログラムあたり１０４～１０８ｃｆｕとなるよう添加した飼料の給餌が好ましい。
本発明の組成物の投与時期、投与方法及び投与量は特に限定されないが、通常、市販餌に配合するか、混餌で投与すればよい。
本発明の急性肝膵臓壊死病用組成物の投与量は、特に限定されないが、例えば、市販餌へ０．０１％～１０％、好ましくは０．０５％～５％添加し投与することが望ましい。
（本発明の組成物の用途）
本発明の組成物の用途は、例えば、以下の通りである。
（１）急性肝膵臓壊死病の予防、防除、抑制、軽減、緩和、及び／又は治療用組成物
（２）エビ目用飼料、飼料添加物及び飼育水
加えて、本発明は、水産用医薬品、飼料、飼料添加物又は飲料水、並びに／又は、本発明の組成物を、エビ目に投与することを特徴とするエビ目急性肝膵臓壊死病（特に、急性肝膵臓壊死症）を予防、防除、抑制、軽減、緩和、及び／又は治療しながらエビ目を飼育する方法も対象とする。
さらに、本発明はビブリオ・パラヘモリティカスを駆除する方法も対象とする。
本発明の組成物の用途は、例えば、以下の通りである。
（１）急性肝膵臓壊死病の予防、防除、抑制、軽減、緩和、及び／又は治療用組成物
（２）エビ目用飼料、飼料添加物及び飼育水
加えて、本発明は、水産用医薬品、飼料、飼料添加物又は飲料水、並びに／又は、本発明の組成物を、エビ目に投与することを特徴とするエビ目急性肝膵臓壊死病（特に、急性肝膵臓壊死症）を予防、防除、抑制、軽減、緩和、及び／又は治療しながらエビ目を飼育する方法も対象とする。
さらに、本発明はビブリオ・パラヘモリティカスを駆除する方法も対象とする。
（本発明のビブリオ・パラヘモリティカス駆除剤）
本発明のビブリオ・パラヘモリティカス駆除剤は、少なくともバチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物を含む。本発明の駆除剤は、ビブリオ・パラヘモリティカスが繁殖している又は繁殖が予想される場所（特に、飼育施設、水槽等）に添加等することにより、急性肝膵臓壊死症の発生を予防、抑制、軽減等をすることができる。
本発明のビブリオ・パラヘモリティカス駆除剤は、少なくともバチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物を含む。本発明の駆除剤は、ビブリオ・パラヘモリティカスが繁殖している又は繁殖が予想される場所（特に、飼育施設、水槽等）に添加等することにより、急性肝膵臓壊死症の発生を予防、抑制、軽減等をすることができる。
（本発明のビブリオ・パラヘモリティカス駆除方法）
本発明のビブリオ・パラヘモリティカス駆除方法は、少なくともバチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物をビブリオ・パラヘモリティカスが繁殖している又は繁殖する場所（特に、飼育施設、水槽等）に添加する工程を含む。
本発明のビブリオ・パラヘモリティカス駆除方法は、少なくともバチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物をビブリオ・パラヘモリティカスが繁殖している又は繁殖する場所（特に、飼育施設、水槽等）に添加する工程を含む。
本発明の組成物には、上記用途を有する水産用医薬品、飲食品、飼料添加物、飼料（配合飼料、混合飼料）、飼育水が広く包含される。
また、本発明の組成物を、デンプン、馬鈴薯澱粉、乳糖、大豆蛋白等の担体、賦形剤、結合材、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、懸濁剤等の添加剤を配合して、周知の方法で粉剤、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、軟膏、液剤等に製剤化することができる。
また、本発明の組成物を、デンプン、馬鈴薯澱粉、乳糖、大豆蛋白等の担体、賦形剤、結合材、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、懸濁剤等の添加剤を配合して、周知の方法で粉剤、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、軟膏、液剤等に製剤化することができる。
以下に具体例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの例に限定されない。
（本発明に係る菌株と公知の菌株との有機酸産生能の比較）
本発明に係る菌株（バチルス・アミノリキファシエンス ＴＯＡ－５００１株：寄託番号ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０１８４４を有する菌株）の有機酸産生能を、公知の菌株有機酸産生能と比較した。詳細は、以下の通りである。
本発明に係る菌株及び公知の菌株であるバチルス・サブティリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）基準株を同一の培養条件で培養した。
具体的には、各菌株をそれぞれ別個のブレインハートインフュージョン液体培地（ＢＢＬ社製）に接種し、３７℃にて２４時間振盪培養した。
培養後、培養液を冷却遠心分離（１００００×ｇ、１０分間）により、液相と固相菌体を分離した。得られた液相部分を、０．４５μｍのメンブランフィルターにより除菌濾過した。濾過した液体を培養上清として以下のＨＰＬＣによる有機酸測定に供した。
各菌株の培養上清０．２ｍｌ前後を１．５ｍＬチューブに採取し、内部標準物質として５００ｍＭ trans-クロトン酸５０μＬを添加した。その後、抽出液として０．２５％アンモニア０．６ ｍＬにて２回抽出した。得られた上清に０．３倍量の１０％ＨＣｌＯ４を添加し、タンパク質を沈殿除去した。得られた上清を０．４５μｍのメンブランフィルターにて濾過し、ＨＰＬＣサンプルとした。
以下の条件でＨＰＬＣを行った。
ＨＰＬＣシステム：Ｗａｔｅｒｓ社製
カラム：Ｏｒｇａｎｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｏｌｕｍｕｎ（７．８×３００ ｍｍ）及びガードカラム（６．０×５０ ｍｍ）
カラム温度及びポストカラム反応温度：６０℃
流量：０．８ｍＬ／ｍｉｎ
移動相：０．０８％ＨＣｌＯ４
反応相：０．２ ｍＭ ＢＴＢ、５．２ｍＭ ＮａＯＨ、１５ ｍＭＮａ２ＨＰＯ４
検出波長：４４５ ｎｍ
本発明に係る菌株（バチルス・アミノリキファシエンス ＴＯＡ－５００１株：寄託番号ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０１８４４を有する菌株）の有機酸産生能を、公知の菌株有機酸産生能と比較した。詳細は、以下の通りである。
本発明に係る菌株及び公知の菌株であるバチルス・サブティリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）基準株を同一の培養条件で培養した。
具体的には、各菌株をそれぞれ別個のブレインハートインフュージョン液体培地（ＢＢＬ社製）に接種し、３７℃にて２４時間振盪培養した。
培養後、培養液を冷却遠心分離（１００００×ｇ、１０分間）により、液相と固相菌体を分離した。得られた液相部分を、０．４５μｍのメンブランフィルターにより除菌濾過した。濾過した液体を培養上清として以下のＨＰＬＣによる有機酸測定に供した。
各菌株の培養上清０．２ｍｌ前後を１．５ｍＬチューブに採取し、内部標準物質として５００ｍＭ trans-クロトン酸５０μＬを添加した。その後、抽出液として０．２５％アンモニア０．６ ｍＬにて２回抽出した。得られた上清に０．３倍量の１０％ＨＣｌＯ４を添加し、タンパク質を沈殿除去した。得られた上清を０．４５μｍのメンブランフィルターにて濾過し、ＨＰＬＣサンプルとした。
以下の条件でＨＰＬＣを行った。
ＨＰＬＣシステム：Ｗａｔｅｒｓ社製
カラム：Ｏｒｇａｎｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｏｌｕｍｕｎ（７．８×３００ ｍｍ）及びガードカラム（６．０×５０ ｍｍ）
カラム温度及びポストカラム反応温度：６０℃
流量：０．８ｍＬ／ｍｉｎ
移動相：０．０８％ＨＣｌＯ４
反応相：０．２ ｍＭ ＢＴＢ、５．２ｍＭ ＮａＯＨ、１５ ｍＭＮａ２ＨＰＯ４
検出波長：４４５ ｎｍ
ＨＰＬＣの結果から算出された有機酸産生能の比較結果を図１に示す。
図１から明らかなように、本発明に係る菌株の酢酸（ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）産生能は、公知のバチルス・サブティリス基準株の酢酸産生能と比較して、少なくとも２．７倍（４８．７／１７．９）であることを確認した。
上記結果より、本発明に係る菌株は、公知菌株よりも高い有機酸産生能を有する。より詳しくは、酢酸を初めとする有機酸は抗菌作用を有していることから、本発明に係る菌株は、公知菌株よりも高い抗菌活性を有することを確認した。
図１から明らかなように、本発明に係る菌株の酢酸（ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）産生能は、公知のバチルス・サブティリス基準株の酢酸産生能と比較して、少なくとも２．７倍（４８．７／１７．９）であることを確認した。
上記結果より、本発明に係る菌株は、公知菌株よりも高い有機酸産生能を有する。より詳しくは、酢酸を初めとする有機酸は抗菌作用を有していることから、本発明に係る菌株は、公知菌株よりも高い抗菌活性を有することを確認した。
（本発明に係る菌株の培養）
本発明に係る菌株を培養した。詳細は、以下の通りである。
本発明に係る菌株であるバチルス・アミロリキファシエンスＴＯＡ５００１株を、ブレインハートインフュジョン培地に２％のペプトン及び酵母エキスを添加した前培養用培地に、接種し、３０℃にて１６時間振盪培養して、前培養後の培養液を得た。
次に、該前培養後の培養液を、４％のグルコース、３％のペプトン及び２％の酵母エキスを含む本培養培地に、接種し、３０℃～３７℃にて２～３日間振盪培養して、本培養後の培養液を得た。該本培養後の培養液から、１４０００×ｇ、２０分間の遠心分離にて菌体及び培養上清を得た。
該菌体は、凍結乾燥にかけ、乾燥粉末として、以下の実施例に使用した。
本発明に係る菌株を培養した。詳細は、以下の通りである。
本発明に係る菌株であるバチルス・アミロリキファシエンスＴＯＡ５００１株を、ブレインハートインフュジョン培地に２％のペプトン及び酵母エキスを添加した前培養用培地に、接種し、３０℃にて１６時間振盪培養して、前培養後の培養液を得た。
次に、該前培養後の培養液を、４％のグルコース、３％のペプトン及び２％の酵母エキスを含む本培養培地に、接種し、３０℃～３７℃にて２～３日間振盪培養して、本培養後の培養液を得た。該本培養後の培養液から、１４０００×ｇ、２０分間の遠心分離にて菌体及び培養上清を得た。
該菌体は、凍結乾燥にかけ、乾燥粉末として、以下の実施例に使用した。
（ＥＭＳ／ＡＨＰＮＤ感染試験）
本発明に係る菌株をバナメイエビ餌に添加し、給餌することにより、急性肝膵臓壊死症（ＥＭＳ／ＡＨＰＮＤ）を防除できるかを評価した。
ＩＭＴエンジニアリングより入手したバナメイエビを試験に供した。エビの平均体重は開始時が１．１ｇ、２週間後に２．２５ｇ、４週間後に３．３ｇであった。給餌試験の飼育水槽は１００Ｌのタンクを用い、ろ過システムはＴＯＴＴＯ（バイオラボトット株式会社）を用いた循環式とした。飼育水温は部屋の温度をエアコンで管理し、水温は２６度であった。
試験区・対照区ともにタイで使用されている一般的な市販餌を粉末化した粉末飼料を用いた。試験区飼料には、本発明に係る菌株を０．５％添加した粉末飼料を用いた。粉末飼料の調製方法は、市販餌１００重量部に対し、実施例２で作製した乾燥粉末０．５重量部を良く混合し、等量の蒸留水を添加し良く混ぜた。次いで、５０ｍＬのシリンジに練った餌を詰め、押し出すことによりスパゲッティー状の成型餌を作った。これを６０～６５℃で２時間程度乾燥し、乾燥後は冷蔵庫で保管した。１日あたりの給餌量は、約５重量％／体重とした。給餌は１日に４回に分けて、自動給餌器を使用した。感染試験期間中も給餌を継続した。
上記の条件の下、給餌開始２週間（１４日）後に、浸漬感染による細菌感染試験を実施した。
１５Ｌ水槽に人工海水を入れ、水作Ｍサイズ（水作株式会社）を用いてエアレーションし、エビ１５尾を入れ、すぐにビブリオ・パラヘモリティカスＡＨＰＮＤ－ＴＵＭＳＡＴ株（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ ＡＨＰＮＤ－ＴＵＭＳＡＴ株）菌液を３ｘ１０４個又はｃｆｕ／ｍＬになるように添加し、継続して飼育した。感染後２週間の生存率を評価した。
本発明に係る菌株をバナメイエビ餌に添加し、給餌することにより、急性肝膵臓壊死症（ＥＭＳ／ＡＨＰＮＤ）を防除できるかを評価した。
ＩＭＴエンジニアリングより入手したバナメイエビを試験に供した。エビの平均体重は開始時が１．１ｇ、２週間後に２．２５ｇ、４週間後に３．３ｇであった。給餌試験の飼育水槽は１００Ｌのタンクを用い、ろ過システムはＴＯＴＴＯ（バイオラボトット株式会社）を用いた循環式とした。飼育水温は部屋の温度をエアコンで管理し、水温は２６度であった。
試験区・対照区ともにタイで使用されている一般的な市販餌を粉末化した粉末飼料を用いた。試験区飼料には、本発明に係る菌株を０．５％添加した粉末飼料を用いた。粉末飼料の調製方法は、市販餌１００重量部に対し、実施例２で作製した乾燥粉末０．５重量部を良く混合し、等量の蒸留水を添加し良く混ぜた。次いで、５０ｍＬのシリンジに練った餌を詰め、押し出すことによりスパゲッティー状の成型餌を作った。これを６０～６５℃で２時間程度乾燥し、乾燥後は冷蔵庫で保管した。１日あたりの給餌量は、約５重量％／体重とした。給餌は１日に４回に分けて、自動給餌器を使用した。感染試験期間中も給餌を継続した。
上記の条件の下、給餌開始２週間（１４日）後に、浸漬感染による細菌感染試験を実施した。
１５Ｌ水槽に人工海水を入れ、水作Ｍサイズ（水作株式会社）を用いてエアレーションし、エビ１５尾を入れ、すぐにビブリオ・パラヘモリティカスＡＨＰＮＤ－ＴＵＭＳＡＴ株（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ ＡＨＰＮＤ－ＴＵＭＳＡＴ株）菌液を３ｘ１０４個又はｃｆｕ／ｍＬになるように添加し、継続して飼育した。感染後２週間の生存率を評価した。
給餌開始２週間後に実施した細菌感染試験の結果を図２に示す。
図２から明らかなように、対照区（Ｃｏｎｔｒｏｌ）では、感染後６日目以降に生存率（％）が急激に低下し、１４日目には０％であったのに対し、試験区（ＴＯＡ）では、６日目以降も生存率が低下せず、１４日目にも１００％であった。
以上の結果から、本発明に係る菌株は、エビ目の生体内では毒性がなく、エビ目急性肝膵臓壊死病であるエビの急性肝膵臓壊死症に対する効果（例えば、防除効果）、さらに生存率維持又は向上効果を有することを確認した。
図２から明らかなように、対照区（Ｃｏｎｔｒｏｌ）では、感染後６日目以降に生存率（％）が急激に低下し、１４日目には０％であったのに対し、試験区（ＴＯＡ）では、６日目以降も生存率が低下せず、１４日目にも１００％であった。
以上の結果から、本発明に係る菌株は、エビ目の生体内では毒性がなく、エビ目急性肝膵臓壊死病であるエビの急性肝膵臓壊死症に対する効果（例えば、防除効果）、さらに生存率維持又は向上効果を有することを確認した。
（結論）
以上の実施例から、本発明の組成物、飼育方法又は治療方法は、以下の効果を有することを確認した。
（１）エビ目の生体内に投与しても毒性がない。
（２）急性肝膵臓壊死症に対する効果
（３）ビブリオ・パラヘモリティカス接触（感染）後の生存率維持又は向上効果。
以上の実施例から、本発明の組成物、飼育方法又は治療方法は、以下の効果を有することを確認した。
（１）エビ目の生体内に投与しても毒性がない。
（２）急性肝膵臓壊死症に対する効果
（３）ビブリオ・パラヘモリティカス接触（感染）後の生存率維持又は向上効果。
本発明は、バチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物を含むエビ目急性肝膵臓壊死病予防及び／又は治療用組成物を提供することができる。
Claims (12)
- バチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物を含むエビ目急性肝膵臓壊死病予防、防除、抑制、軽減、緩和、及び／又は治療用組成物。
- 前記エビ目は、クルマエビ科、バナメイエビ、ブラックタイガー、クルマエビ、又は、ホワイトシュリンプである請求項１に記載の組成物。
- 前記バチルス・アミロリキファシエンス菌株は、寄託番号ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０１８４４を有する菌株である請求項１又は２に記載の組成物。
- 請求項１～３のいずれか１に記載の組成物を含む水産用医薬品、飼料、飼料添加物、又は飲料水。
- 請求項４に記載の水産用医薬品、飼料、飼料添加物又は飲料水、並びに／又は、請求項１～３のいずれか１に記載の組成物を、エビ目に投与することを特徴とするエビ目急性肝膵臓壊死病を予防、防除、抑制、軽減、緩和、及び／又は治療しながらエビ目を飼育する方法。
- バチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物を含むビブリオ・パラヘモリティカス駆除剤。
- 前記バチルス・アミロリキファシエンス菌株は、寄託番号ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０１８４４を有する菌株である請求項６に記載の駆除剤。
- バチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物をエビ目に投与する工程を含むエビ目急性肝膵臓壊死病を予防、防除、抑制、軽減、緩和、及び／又は治療しながらエビ目を飼育する方法。
- バチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物をエビ目に投与する工程を含むエビ目急性肝膵臓壊死病を予防、防除、抑制、軽減、緩和、及び／又は治療する方法。
- 前記バチルス・アミロリキファシエンス菌株は、寄託番号ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０１８４４を有する菌株である請求項８又は９に記載の方法。
- バチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物をビブリオ・パラヘモリティカスが繁殖している又は繁殖する場所に添加する工程を含むビブリオ・パラヘモリティカス駆除方法。
- 前記バチルス・アミロリキファシエンス菌株は、寄託番号ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０１８４４を有する菌株である請求項１１に記載の方法。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2017034084 | 2017-02-24 | ||
| JP2017-034084 | 2017-02-24 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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|---|---|---|---|
| PCT/JP2018/006628 WO2018155613A1 (ja) | 2017-02-24 | 2018-02-23 | バチルス・アミロリキファシエンス菌株及び／又は該菌株の処理物を含むエビ目急性肝膵臓壊死病予防及び／又は治療用組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| WO (1) | WO2018155613A1 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020165057A1 (en) * | 2019-02-11 | 2020-08-20 | Evonik Operations Gmbh | Compositions containing bacillaene producing bacteria or preparations thereof |
| CN111763644A (zh) * | 2020-07-24 | 2020-10-13 | 天津开发区坤禾生物技术有限公司 | 一种防治鱼类肝胆综合症的复合菌剂及其制备方法和应用 |
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| CN104974950A (zh) * | 2015-05-11 | 2015-10-14 | 山东大学（威海） | 一种海洋解淀粉芽孢杆菌及其用途 |
| JP2016116466A (ja) * | 2014-12-19 | 2016-06-30 | 東亜薬品工業株式会社 | バチルスアミロリキファシエンス菌株及び該菌株を含む抗菌組成物 |
-
2018
- 2018-02-23 WO PCT/JP2018/006628 patent/WO2018155613A1/ja active Application Filing
Patent Citations (2)
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