WO2009110495A1 - インスリン様成長因子－１分泌促進剤およびそれを含む飲食品 - Google Patents

Abstract

　本発明は、安全で日常的に摂取しやすい、ポリフェノールを有効成分として含んでなることを特徴とするインスリン様成長因子－１分泌促進剤、およびそれを含む飲食品に関する。本発明はまた、ポリフェノールの有効量を、哺乳動物に摂取させることを含んでなる、哺乳動物の血中または臓器中におけるインスリン様成長因子－１分泌を促進する方法に関する。

Description

インスリン様成長因子－１分泌促進剤およびそれを含む飲食品 関連出願の参照

　本願は、先行する日本国特許出願である特願２００８－５４０４４号（出願日：２００８年３月４日）および特願２００８－２３８８５９号（出願日：２００８年９月１８日）に基づくものであって、それらの優先権の利益を主張するものであり、それらの開示内容全体は参照することによりここに組み込まれる。

発明の背景

発明の分野
　本発明は、ポリフェノールを有効成分として含んでなることを特徴とするインスリン様成長因子－１分泌促進剤、およびそれを含む飲食品に関する。

背景技術
　ポリフェノールは、抗菌、抗ウイルス、抗酸化、抗突然変異、抗癌、血小板凝集抑制、血糖上昇抑制、血中コレステロール低下、抗う蝕、抗アレルギー、腸内フローラ改善、消臭など非常に広範な生理作用を有することが知られている。中でも、カカオポリフェノールの機能については種々の作用が確認されている。

　抗酸化能に基づく作用としては、油脂の変敗抑制、ミクロゾームや赤血球膜といった生体成分の酸化抑制、スーパーオキシドディスムターゼ様作用やヒドロキシラジカル消去作用などのインビトロでの作用、胃潰瘍予防作用、低密度リポ蛋白酸化抵抗性増強作用などが知られている。

　また、抗酸化作用以外の作用としては、ヘテロサイクリックアミンに対する抗変異原性作用、血小板凝集能低下作用、血圧低下作用、および低密度リポ蛋白低下作用が知られている（文献1（チョコレート・ココアの科学と機能、第二部チョコレート・ココアの生理機能、福場博保、木村修一・板倉広重・大澤俊彦編、pp.56-179、アイ・ケイコーポレーション））。

　インスリン様成長因子－１（Insulin-like Growth Factor-1）（以下において、「ＩＧＦ－１」と略すことがある）は、インスリンに非常に似た構造および作用を持つ分子量約７５００のペプチドホルモンである（文献２（グッドマン・ギルマン薬理書［下］ 薬物治療の基礎と臨床第１０版；第６１章 インスリン、経口血糖降下薬と膵臓内分泌の薬理学 2003、p2144 監訳：高折 修二、福田 英臣、赤池 昭紀 東京廣川書店発行））。ＩＧＦ－１は細胞の分化を促し、細胞の増殖を助ける等、積極的に細胞を健康な状態に維持し（文献３（コーン・ケー・ジェイ（Conn K J）外６名，ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（J. Biol. Chem.）1996年、第２７１巻、第４６号、p.28853-28860）、文献４（ブラハム・シー（Braham C）外４名，デルマトロジー（Dermatology）、2002年、第２０巻、第４号、p.325-329））、老化の進行を阻止することが知られている（文献５（ローベノッフ・アール（Roubenoff R）外８名，ザ・アメリカン・ジャーナル・オブ・メディシン（Am. J. Med.）、2003年、第１１５巻、第６号、p.501-502））。

　ＩＧＦ－１は成長ホルモン分泌刺激によって主に肝臓で生成されることが知られているポリペプチドであり、血中ではＩＧＦ結合タンパクと結合し高分子複合体として存在している。ＩＧＦ－１の代謝、ＩＧＦ－１の受容体への親和性は、このＩＧＦ結合タンパクによって調節されており、ＩＧＦ結合タンパクの発現は成長ホルモンによって制御されることが知られている。最近では、全身に分布している知覚神経に存在するバニロイド受容体の活性化によって、カルシトニン遺伝子ペプチド（以下、「ＣＧＲＰ」と略すことがある）が放出され、種々の臓器の幼若細胞からのＩＧＦ－１産生を促すことが報告されている。（文献６（岡嶋研二ら、「マイクロバブル・ナノバブルの最新技術」, pp.131-149,（2007）））。

　実験的にはリコンビナントＩＧＦ－１の投与によってインスリン抵抗性が改善されることが報告されている（文献７（Acerini CL. et al. Randomised placebo-controlled trial of human recombinant insulin-like growth factor I plus intensive insulin therapy in adolescents with insulin-dependent diabetes mellitus. Lancet 350, 1199-204 (1997)））。臨床の現場ではリコンビナント成長ホルモンを投与し、その結果としてＩＧＦ－１を上昇させる治療法が普及している。しかしながら、リコンビナント成長ホルモンには、関節痛、過敏症、肝機能障害、皮膚の硬化、甲状腺ホルモンの低下、および頭痛などの副作用が生じることが知られており、また、その投与方法は皮下注射など侵襲を伴う方法に限られるため、治療費用が非常に高価となる。

　リコンビナント成長ホルモン以外では、非選択性β遮断薬であるカルベジロールを静脈内投与することでＩＧＦ－１の分泌が促進されることが報告されている（文献８（Okajima K, et al. J. Pharmacol Exp. Ther. 2004; 309: 684-691））。しかしながら、本薬品も侵襲を伴う方法により投与されなければならないので、その治療費用は安くはないことに加え、日常的に気軽に摂取し難かった。

　そこで、より安全かつ安価にＩＧＦ－１の分泌を促進する手段として、食品成分に注目が集まっている。これまで唐辛子に含まれるカプサイシンが、ＩＧＦ－１の分泌促進に有効であることが報告されている（特開２００６－１５１９７１号公報、および文献９（Okajima K. et al　Effect of capsaicin on plasma and tissue levels of insulin-like growth factor-I in spontaneously hypertensive rats.Growth Horm IGF Res. 18、75-81（2008）））。しかしながら、カプサイシンは唐辛子の辛味成分であるため、食品成分においては、その添加量は少なくならざるを得なかった。

発明の概要

　本発明者らは今般、ポリフェノールを含有する食品を摂取したマウスにおいて、血中および種々の臓器中のＩＧＦ－１が顕著に増加することを見出した。また、ポリフェノールを含有する食品を摂取したマウスにおいて、記憶や認知力が高まることを見出した。
　さらに、本発明者らは、ＩＧＦ－１産生機序についてさらに検討を進めたところ、カプサイシンと同様に、プロシアニジン類が、バニロイド受容体を備えるマウス脊髄後根神経節細胞（以下、「ＤＲＧ」と略すことがある）を刺激し、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）の放出を促進することを見出した。
　本発明はこれら知見に基づくものである。

　よって本発明は、安全で日常的に摂取しやすいＩＧＦ－１分泌促進剤、およびそれを含む飲食品を提供することを目的とする。また本発明の他の目的は、ＩＧＦ－１分泌を促進する方法、および、ＩＧＦ－１分泌促進作用を有する飲食品を製造するためのポリフェノールの使用の提供にある。

　本発明によるインスリン様成長因子－１分泌促進剤は、ポリフェノールを有効成分として含んでなることを特徴とする。

　本発明による飲食品は、本発明によるインスリン様成長因子－１分泌促進剤を含んでなる。好ましくはここで、プロシアニジン類の含有量は０．０１～２０重量％である。

　本発明の別の態様によれば、ポリフェノールの有効量を、哺乳動物に摂取させることを含んでなる、哺乳動物の血中または臓器中におけるインスリン様成長因子－１分泌を促進する方法が提供される。好ましくは、ここで、ポリフェノールの摂取を経口摂取により行う。より好ましくは、ここで、ポリフェノールの摂取を、ポリフェノールを含有する飲食品を摂取することにより行う。

　本発明のさらに別の態様によれば、インスリン様成長因子－１分泌促進剤を製造するための、ポリフェノールの使用が提供される。あるいは、本発明のさらに別の態様によれば、インスリン様成長因子－１分泌促進作用を有する飲食品を製造するための、ポリフェノールの使用が提供される。

　本発明の一つの好ましい態様において、本発明において使用されるポリフェノールはプロシアニジン類である。

　本発明の一つのより好ましい態様において、プロシアニジン類は、カカオ、ぶどう、リンゴ、松の樹皮のうちのいずれか１種または２種以上に由来するものである。

　本発明の一つのさらに好ましい態様において、プロシアニジン類は、プロシアニジンＢ２、プロシアニジンＢ５、プロシアニジンＣ１、シンナムタンニンＡ２から選択される１種または２種以上である。

　本発明によるＩＧＦ－１分泌促進剤およびそれを含む飲食品は、血中および臓器においてＩＧＦ－１の分泌を促進することができる。また、本発明によるＩＧＦ－１分泌促進剤およびそれを含む飲食品は、記憶や認知力を高めることができる。さらに、本発明によるＩＧＦ－１分泌促進剤は、カプサイシンと同様に、バニロイド受容体を備えるマウス脊髄後根神経節細胞（ＤＲＧ）を刺激しカルシトニン遺伝子関連ペプチドの放出を促進することができる。

　本発明によるＩＧＦ－１分泌促進剤における有効成分は、天然の植物由来とすることができるから、安全性に優れ、長期に摂取しても副作用がほとんどない。したがって、本発明のＩＧＦ－１分泌促進剤およびそれを含む飲食品は、日常的にかつ継続的に摂取しうるものとして非常に有用である。

　このように本発明によれば、血中および臓器においてＩＧＦ－１の分泌を促進することができ、これによって、体内におけるＩＧＦ－１を増加させることができる。ＩＧＦ－１の増加は、例えば、皮膚中でのコラーゲン、エラスチンおよびヒアルロン酸を増加させ、皮膚の弾力性や皮膚の張り、肌の潤いを維持することが可能となる。また、ＩＧＦ－１の増加は、皮膚の弾力性を回復し、しわを伸ばし、たるみを改善し得る。さらにＩＧＦ－１の増加は、線維芽細胞の分化、増殖および／または機能を促進するので、例えば外傷や手術後の創傷治癒を早め得る。またＩＧＦ－１の増加により、毛母、毛乳頭等毛根部の細胞が活性化され、育毛や発毛効果が期待できる。さらにＩＧＦ－１の増加により、骨密度増加、血圧低下効果、およびアルツハイマー病の発症遅延効果が得られ得る。

実施例２のＣＬＰｒをＨＰＬＣを用いて分析したクロマトグラムである。 プロシアニジン類のＣＧＲＰ放出効果測定結果を示す図である。 カカオポリフェノール摂取の、臓器および血液中のＩＧＦ－１濃度に対する影響を表すグラフである。 カカオポリフェノール摂取の空間認知機能への影響を表すグラフである。図において、上のグラフが野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスの場合（Wild-typeと標記）を示し、下のグラフがＣＧＲＰの放出能を欠損したＣＧＲＰノックアウト（－／－）マウスの場合（CGRPKOと標記）を示す。

発明の具体的説明

有効成分
　ポリフェノール
　本発明において「ポリフェノール」とは、ベンゼン環に２つ以上のヒドロキシル基がついている構造を示す化合物をいう。ポリフェノールは、シンプルフェノール類、フラボノイド類、加水分解型タンニン類、縮合型タンニン類（プロアントシアニジン類）に分けられる。シンプルフェノール類の具体例としては、ジヒドロキシル酸、ヒドロキシルカフェ酸誘導体類等が挙げられる。フラボノイド類の具体例としては、フラボン類、フラボノール類、イソフラボン類、フラバン類、フラバノール（カテキン）類、フラバノン類、フラバノノール類、カルコン類、アントシアニジン類等が挙げられる。また、カテキン類の具体例としては、カテキン、エピカテキンなどが挙げられる。加水分解型タンニン類はシンプルフェノールの重合物であり、縮合型タンニン類（プロアントシアニジン類）はフラボノイド類の重合物である。

　本発明の好ましい態様において、ポリフェノールは、カカオポリフェノール、ぶどうポリフェノール、リンゴポリフェノール、松の樹皮ポリフェノールである。

　本発明のより好ましい態様において、ポリフェノールはカカオポリフェノールであり、より好ましくはポリフェノールはプロシアニジン類である。

　本発明において使用するポリフェノールは、その入手方法や調製方法については特に限定はされない。例えば、該ポリフェノールは、ポリフェノールを含有する植物体から溶媒抽出等によって抽出し、さらに必要に応じてイオン交換樹脂等を使用して純度を高めることによって得ることができる。

　プロシアニジン類
　本発明において「プロシアニジン類」とは、例えば、下記の式（１）～（９）（式中、ｎ＝０～１）で示される、フラボノイド類の基本骨格が重合した構造を持つ物質であり、４位→６位、４位→８位、２位→５位および４位→６位の２箇所、２位→７位および４位→８位の２箇所で結合する構造が認められている。

　プロシアニジン類は、カカオ以外にも、ぶどう種子・皮、リンゴ、松の樹皮などに含まれる。したがって、本発明の好ましい態様によれば、プロシアニジン類は、カカオ、ぶどう、リンゴ、松の樹皮のうちのいずれか１種または２種以上に由来するものであることができる。

　本発明におけるプロシアニジン類の代表例としては、プロシアニジンＢ２（下記式（１）の化合物）、プロシアニジンＢ５（下記式（２）の化合物）、プロシアニジンＣ１（下記式（３）の化合物）、シンナムタンニンＡ２（下記式（４）の化合物）が挙げられる。これらは、本発明におけるプロシアニジン類の好ましい例であることができる。

　・プロシアニジンＢ２：

　・プロシアニジンＢ５：

　・プロシアニジンＣ１：

　・シンナムタンニンＡ２：

　・他のプロシアニジン類：

用途
　前記したように、本発明によるＩＧＦ－１分泌促進剤は、ポリフェノールを有効成分として含んでなるものである。
　本発明者等は後述する実施例に示したように、ポリフェノール類の例としてカカオポリフェノールを分析したところ、ここにプロシアニジン類が含まれていることを確認して、単離している（実施例１～３）。そしてプロシアニジン類がカルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）の放出を促進する作用を有していることを確認している（試験例１）。またポリフェノールが、血中および臓器中でのＩＧＦ－１の分泌を促進する作用があることを確認している（試験例２）。さらにインビボにおいてマウスを用いたポリフェノール摂取試験を行った結果、ＣＧＲＰ放出能欠損マウスに比べて、正常マウスは、空間認知機能が向上した（試験例３）。

　よって、本発明のＩＧＦ－１分泌促進剤によれば、血中および臓器においてＩＧＦ－１の分泌を促進することができ、体内におけるＩＧＦ－１を増加させることができる。

　また、本発明のＩＧＦ－１分泌促進剤は、記憶や認知力を高めることができる。よって、本発明によれば、本発明によるＩＧＦ－１分泌促進剤を含む、記憶および認知力の向上用組成物が提供され得る。

　さらに、本発明のＩＧＦ－１分泌促進剤は、バニロイド受容体を備えるマウス脊髄後根神経節細胞（ＤＲＧ）を刺激し、カルシトニン遺伝子関連ペプチドの放出を促進することができる。

　ＩＧＦ－１は、皮膚中の線維芽細胞を活性化し、該細胞の分化、増殖および／または機能を促進することが報告されている（Br J Dermatol 2006, 154, pp. 401-410）。線維芽細胞は、コラーゲン、エラスチンおよびヒアルロン酸等の体内の間質物質の産生を促進する。コラーゲンは結合組織を構成する主要タンパク質で、皮膚のコラーゲンは、皮膚の質感または弾力等の皮膚の形状形成に関与している。エラスチンはコラーゲンと同様に皮膚の結合組織に存在する繊維状のタンパク質で、コラーゲン繊維を束ね、バネのように支えて、皮膚の弾力性とハリを保つ機能を有する。ヒアルロン酸はグリコサミノグルカンの一種で、哺乳動物の結合組織に多量に分布し、肌に潤いを与え、クッションの役割を担っている。
　このため、本発明のＩＧＦ－１分泌促進剤によれば、皮膚中のＩＧＦ－１を増加させ、終局的には皮膚中でのコラーゲン、エラスチンおよびヒアルロン酸を増加させ得るので、皮膚の弾力性や皮膚の張り、肌の潤いを維持することができるといえる。よって、本発明によれば、本発明によるＩＧＦ－１分泌促進剤を含む、皮膚の弾力性や皮膚の張り、肌の潤いを維持できる、皮膚ケア用組成物が提供され得る。

　また、本発明のＩＧＦ－１分泌促進剤が、弾力性の低下した皮膚またはしわやたるみのある皮膚に適用されると、適用部位で、ＩＧＦ－１の分泌が促進されるので、該部位の皮膚の弾力性が回復し、しわが伸び、たるみが改善されうる。よって、本発明によれば、本発明によるＩＧＦ－１分泌促進剤を含む、皮膚の弾力性を回復し、しわを伸し、たるみを改善できる、皮膚ケア組成物またはシワ防止用組成物が提供され得る。

　本発明のＩＧＦ－１分泌促進剤は、皮膚中のＩＧＦ－１を増加させ、線維芽細胞の分化、増殖および／または機能を促進する。このため、例えば外傷や手術後の創傷治癒を早め得る。よって、本発明によれば、本発明によるＩＧＦ－１分泌促進剤を含む、創傷治癒用組成物が提供され得る。

　また、ＩＧＦ－１は、毛母、毛乳頭等毛根部の細胞を活性化することから（Dermatol online J 1999; 5: 1）、本発明のＩＧＦ－１分泌促進剤は、育毛や発毛を目的に頭皮に適用し得る。すなわち、本発明によれば、本発明によるＩＧＦ－１分泌促進剤を含む、育毛もしくは発毛用組成物が提供され得る。

　高齢者などでは、骨組織内ＩＧＦ－１量、血中ＩＧＦ－１濃度、および作用が低下し、骨量も低下することが知られている（Lancet Volume 355, Issue 9207, 11 March 2000, Pages 898-899;　成長科学協会指定課題研究報告　平成18年度「成長ホルモンおよびIGF-1測定の標準化に関する研究」　島津章（国立病院機構京都医療センター臨床研究センターなど）。このため、本発明のＩＧＦ－１分泌促進剤は骨密度増加に寄与しうる。すなわち、本発明によれば、本発明によるＩＧＦ－１分泌促進剤を含む、骨密度増加用または骨密度の減少抑制用組成物が提供され得る。

　ＩＧＦ－１が作用すると血管が拡張し血圧低下の効果が得られることが報告されている（Clin Endocrinol 2005; 63: 470-476）。このため、本発明のＩＧＦ－１分泌促進剤によって血圧低下効果が得られるといえる。よって、本発明によれば、本発明によるＩＧＦ－１分泌促進剤を含む、血圧降下用組成物が提供され得る。

　ＩＧＦ－１は、アルツハイマー病においてβアミロイド原線維を分解し解毒（無毒化）するＨＳＦ－１を調整することが報告されている（J Biol Chem 2007; 82: 10203-9）。このため、本発明のＩＧＦ－１分泌促進剤は、アルツハイマー病の発症を遅延させることができるといえる。よって、本発明によれば、本発明によるＩＧＦ－１分泌促進剤を含む、アルツハイマー病の発症遅延用組成物が提供され得る。

ＩＧＦ－１分泌促進剤
　本発明によるＩＧＦ－１分泌促進剤は、ポリフェノールを有効成分として含んでなる。ここで「有効成分として含んでなる」とは、本発明による促進剤が、所望のＩＧＦ－１分泌促進効果を発揮するのに充分な量（すなわち、有効量）の有効成分を含有することをいう。したがって、本発明のＩＧＦ－１分泌促進剤におけるポリフェノールの濃度は、ＩＧＦ－１の分泌が促進される濃度であれば特に制限されない。

　よって、ポリフェノール自体を、そのままＩＧＦ－１分泌促進剤として用いてもよいが、このような有効量で有効成分を含み、かつＩＧＦ－１分泌促進効果を損なわない限りにおいて、本発明による促進剤は、所望する製品形態に応じた生理学的に許容されうる担体や、他の添加剤を含んでなることができる。このような担体、および添加剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、コーティング剤、保存剤、安定剤、香料、緩衝剤、増粘剤、着色剤、乳化剤、分散剤、懸濁化剤、防腐剤等が挙げられる。本発明のＩＧＦ－１分泌促進剤は、経口または非経口投与のいずれかの投与経路で、ヒトやヒト以外の動物に投与または摂取させ、ＩＧＦ－１の分泌を促進することができる。
　経口投与する場合には、例えば、乳糖、結晶セルロース、デンプン、リン酸カルシウム等の賦形剤；例えば、デンプン、カルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース等の結合剤；例えば、カルメロースカルシウム、炭酸カルシウム等の崩壊剤；例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク等の滑沢剤；コーティング剤、保存剤、安定剤などを用いることにより、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、シロップ剤、ドライシロップ剤、散剤、丸剤、細粒剤、トローチ錠、乳濁剤や、または常法によるシロップを含む各種液剤、ドリンク剤等の形態に処方できる。そして、これらの各種製剤は、長時間にわたって作用が持続する徐放性製剤とすることもできる。

　非経口投与用の形態としては、例えば、注貼付剤、軟膏、クリーム剤、ローション剤、更にシャンプー、リンス、ボディーソープ、石鹸、洗顔料、整髪料、乳液、パック、入浴剤などの形態が挙げられる。これらは、当該技術分野で通常行われている手法により、必要に応じて担体や添加剤と共に、製剤化もしくは製品化することができる。

　本発明において、所望のＩＧＦ－１分泌促進効果を得るためには、本発明による有効成分を、有効成分であるポリフェノール量換算で、成人一人の体重１ｋｇ当たり、１日に０．５～３００ｍｇ投与もしくは摂取することが望ましく、好ましくは、投与量もしくは摂取量は２～２００ｍｇであり、より好ましくは５～１００ｍｇである。本発明においては、この量の有効成分を１日１回ないし数回に分けて、促進剤そのままの形態で、または、医薬、飲食品等の所望の形態とした上で、投与もしくは摂取すればよい。

　本発明によるＩＧＦ－１分泌促進剤は、それ単独でも使用することができるが、医薬、飲食品などの種々の組成物に添加剤として含有させることができ、ＩＧＦ－１分泌促進効果を有する組成物を得ることができる。

　本発明によるＩＧＦ－１分泌促進剤は、天然の植物由来とすることができるため、飲食品として用いることができる。よって本発明の別の態様によれば、本発明によるインスリン様成長因子－１分泌促進剤を含んでなる飲食品が提供される。

　本発明において、「飲食品」は、医薬以外のものであって、哺乳動物が経口摂取可能な形態のものであれば特に制限はなく、その形態も液状物（溶液、懸濁液、乳濁液など）、半液体状物、粉末、または固体成形物のいずれのものであってもよい。このため飲食品は、例えば飲料の形態であってもよく、また、サプリメントのような栄養補助食品の錠剤形態であってもよい。

　好ましくは、該飲食品は、インスリン様成長因子－１分泌促進剤の有効成分を有効量含んでなる。
　ここで、「有効成分を有効量含んでなる」とは、個々の飲食品を通常喫食される量摂取した結果、有効成分としての効果を発揮しうるような量で有効成分を含有することをいう。本発明による飲食品には、本発明による有効成分をそのまままたは上記のような促進剤の形態で、飲食品に配合してもよい。また、本発明による飲食品は、本発明による有効成分に安定剤等の慣用の添加成分を加えて飲食品として調製したもの、各種タンパク質、糖類、脂肪、微量元素、ビタミン類等を、それらにさらに配合して調製したもの、液状、半液体状若しくは固体状にしたもの、ペースト状にしたもの、または、一般の飲食品へ有効成分を添加したものであってもよい。

　本発明による飲食品としては、チョコレートやココアのようにカカオ豆を主原料とする飲食品はもちろんのこと、パン、ビスケット、麺類をはじめとする澱粉系食品、あるいはキャンデー、飲料、ヨーグルトなど広範な飲食品に用いることができる。使用態様としては各飲食品の特性、目的に応じ、適当な製造工程で適宜添加すればよく、例えば、チョコレート、キャンデー、パン、ココア飲料、クッキー等の飲食品には重量割合で約０．０１％～２０％添加するのが、これらの飲食品の味や物性を活かす上で好ましい。

　本発明において「飲食品」には、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、栄養補助食品、疾病リスク低減表示が付された食品、疾病リスク低減しうる食品、または、病者用食品のような分類のものも包含される。さらに「飲食品」という用語は、ヒト以外の哺乳動物を対象として使用される場合には、飼料を含む意味でここで用いてもよい。ここでいう特定保健用食品とは、体内におけるＩＧＦ－１を増加させること等を目的として食品の製造または販売等を行う場合に、保健上の観点から、各国（例えば我が国）において法上の何らかの制限を受けることがある食品をいう。このような食品は、食品が疾病リスクを低減する可能性があること表示した食品、すなわち、疾病リスク低減表示を付した食品であることもできる。ここで、疾病リスク低減表示とは、疾病リスクを低減する可能性のある食品の表示であって、ＦＡＯ／ＷＨＯ合同食品規格委員会（コーデックス委員会）の定める規格に基づいて、またはその規格を参考にして、定められた表示または認められた表示であることができる。

　本発明の飲食品においては、前記有効成分に加えて、他の機能を有する成分をさらに添加してもよい。また例えば、日常生活で摂取する食品、健康食品、機能性食品、サプリメント（例えば、カルシウム、マグネシウム等のミネラル類、ビタミンＫ等のビタミン類を１種以上含有する食品）に本発明の有効成分を配合することにより、本発明による効果に加えて、他の成分に基づく機能を併せ持つ飲食品を提供することができる。

　なお本明細書において、「約」および「程度」を用いた値の表現は、その値を設定することによる目的を達成する上で、当業者であれば許容することができる値の変動を含む意味である。

　以下の例に基づいて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。

測定法法
　・ポリフェノール総量の定量方法
　ポリフェノール総量は、プルシアンブルー法により測定した。具体的には、Martin L. Price　and Larry G. Butler, J. Agric Food Chem., Vol. 25　No.6, 1268-1273,1977に記載の方法に従い、市販のエピカテキンを標準物質として算出した値を用いた。

　・ポリフェノールの個別成分の定量方法
　ポリフェノールにおける個別成分の定量は、下記条件の逆相ＨＰＬＣを行なうことによって求めた。
　（逆相ＨＰＬＣ条件）
　・分離用カラム：　Deverosil ＯＤＳ ＨＧ－５（野村化学株式会社製、φ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、粒子径５μｍ）
　・溶離液：　下記の２液によるグラジェント：
　　　　　　Ａ）０．１％トリフルオロ酢酸水溶液と、
　　　　　　Ｂ）０．１％トリフルオロ酢酸アセトニトリル溶液
　・グラジェント条件：　０分：Ａ９０％、５分：Ａ９０％、３５分：Ａ７５％、４０分：Ａ０％、４５分：Ａ０％（溶離液の組成変化はリニアグラジェント）。
　・溶離液の流速：　０．８ｍｌ/ｍｉｎ
　・検出：　ＵＶ２８０ｎｍ
　・標準物質：　エピカテキン

実施例１
　ココアパウダーＨＰＡ１２（明治製菓株式会社製、油分１２重量％）２５０Ｋｇを、５０％エタノール水溶液１２５０Ｋｇに、攪拌しながらゆっくりと添加した。温度を５０℃にまで上げ３０分間引き続き攪拌して抽出を行った。デカンターで分離後、さらに３０００Ｇで遠心分離を行い、エキスとスラッジに分離した。

　エキスの収量は１００３．６Ｋｇであった。さらにエキスをウルトラフィルターＨタイプ（ミウラ化学装置株式会社製）で精密ろ過し、清澄ろ過液９８２．８Ｋｇを得た。続いて、エキスにデキストリン４．４Ｋｇを加えてよく攪拌した後、エバポレーターで濃縮をおこない、一次濃縮液２３４Ｋｇを得た。アルコールが若干残存していたため、水を２４０Ｋｇ加えて再度よく攪拌した後、再度エバポレーターで濃縮した。濃縮液は２３５．４Ｋｇであった。
　この濃縮液を加熱殺菌処理後、スプレードライを行い、粉末３９．２ｋｇを得た。得られた粉末を、以下カカオポリフェノール濃縮粉末と呼ぶ。

　カカオポリフェノール濃縮粉末の分析結果は表１に示されるとおりであった。

実施例２
　ココアパウダーＨＰＡ１２（明治製菓株式会社製、油分１２重量％）１．０ｋｇにｎ－ヘキサン５Ｌを加え、脱脂した。脱脂カカオ７７５ｇに７０％アセトン６Ｌを加え抽出した。次にエバポレーターで抽出液中のアセトンを除いた。続いて抽出液に９倍量の水飽和ブタノールを加え攪拌した後、静置しブタノール層を回収し濃縮した。
　濃縮液を合成吸着剤（ダイヤオン（商標）　ＨＰ２ＭＧ）（三菱化学株式会社製、１５ｃｍ×内径１０ｃｍ）に吸着させた。吸着後、１５％エタノール溶出で不要成分を除き、次いで８０％エタノール水溶液で溶出し、その８０％エタノール画分を濃縮してカカオプロシアニジン画分（ＣＬＰｒ）を得た。
　このサンプルを、前記方法に従って分析した結果、プロシアニジンＢ２（３．９％）、プロシアニジンＢ５（１．３％）、プロシアニジンＣ１（２．６％）、シンナムタンニンＡ２（３．２％）が含まれていた。

実施例３
（成分の精製・単離）
　実施例２で得られたカカオプロシアニジン画分（ＣＬＰｒ）２８４ｍｇを、メタノール２．８４ｍｌに溶解し、ＬＣ-Ｓｉカラム（Supelcosil、２５ｃｍ×φ２０ｍｍ、粒子径５μｍ）（スペルコ社製）で分離した。
　溶離液は、Ａ）ｎ－ヘキサン：メタノール：酢酸エチル＝８：３：１と、Ｂ）ｎ－ヘキサン：メタノール：酢酸エチル＝２：３：１の２液のグラジェントで溶出した。グラジェント条件は、０分Ａ１００％、２０分Ａ１００％、５０分Ａ０％であった（溶離液の組成変化はリニアグラジェント）。溶離液の流速は２０ｍｌ/ｍｉｎ、検出は、ＵＶ２８０ｎｍで行った。

　結果は、図１に示される通りであった。

　図1に示すようにプロシアニジン類が分子量毎に溶出され、それぞれピーク２から２３．１ｍｇ、ピーク３から２３．３ｍｇ、ピーク４から２４．３ｍｇのＩＧＦ－１分泌促進剤が得られた。
　ピーク２から得られたＩＧＦ－１分泌促進剤２３．１ｍｇを５０％メタノール２．３１ｍｌに溶解して、次の条件で、プロシアニジンＢ２ならびにプロシアニジンＢ５の精製・単離を行った。

　（精製・単離の条件）
　・分離用カラム：　Deverosil ＯＤＳ ＨＧ－５（野村化学株式会社製、φ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、粒子径５μｍ）
　・溶離液：　下記の２液によるグラジェント：
　　　　　　Ａ）０．１％トリフルオロ酢酸水溶液と、
　　　　　　Ｂ）０．１％トリフルオロ酢酸アセトニトリル溶液
　・グラジェント条件：　０分：Ａ９０％、５分：Ａ９０％、３５分：Ａ７５％、４０分：Ａ０％、４５分：Ａ０％（溶離液の組成変化はリニアグラジェント）。
　・溶離液の流速：　０．８ｍｌ/ｍｉｎ
　・検出：　ＵＶ２８０ｎｍ
　・標準物質：　エピカテキン

　同様にして、ピーク３から得られたＩＧＦ－１分泌促進剤からプロシアニジンＣ１を、ピーク４から得られたＩＧＦ－１分泌促進剤からシンナムタンニンＡ２を、それぞれ精製・単離した。

実施例４：　製造例（チョコレート）
　以下の配合のミルクチョコレートを定法に従って製造した。本チョコレートは５０ｇあたりプロシアニジン類を１１２．９ｍｇ含むミルクチョコレートであった。

実施例５：　製造例（錠菓）
　以下の配合の錠菓を定法に従って製造した。本品は２０ｇあたりプロシアニジン類を２７．７ｍｇ含む錠菓であった。

実施例６：　製造例（ゼリードリンク）
　以下の配合のゼリードリンクを定法に従って製造した。本品は１００ｇあたりプロシアニジン類を４２．６ｍｇ含むゼリードリンクであった。

実施例７：　製造例（チューイングガム）
　以下の配合のチューイングガムを定法に従って製造した。本品は１０gあたりプロシアニジン類を１４．９ｍｇ含むチューイングガムであった。

実施例８：　製造例（飲料）
　以下の配合の飲料を定法に従って製造した。本品は１００gあたりプロシアニジン類を１２．８ｍｇ含む飲料であった。

実施例９：　製造例（ハードキャンデー）
　以下の配合のハードキャンデーを定法に従って製造した。本品は２０gあたりプロシアニジン類を１２．８ｍｇ含むハードキャンデーであった。

実施例１０：　製造例（調整ココア）
　以下の配合の調整ココアを定法に従って製造した。本品は３０ｇあたりプロシアニジン類を３２．０ｍｇ含む調整ココアであった。

評価試験
試験例１：　プロシアニジン類によるＣＧＲＰ放出作用の確認
　６～８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（雄）（日本クレア株式会社より入手可）からマウス脊髄後根神経節細胞（ＤＲＧ）を採取し、以下の条件で７日間培養した。

（培養条件）
　・培養液：　下記成分を含有するＤ－ＭＥＭ／Ｆ１２培養液（インビトロジェン株式会社製）
　　　＜培養液の成分組成＞
　　　　１０％　ウシ胎児血清
　　　　１０ Ｕ/ｍｌ　ペニシリン
　　　　０．１ ｍｇ/ｍｌ　ストレプトマイシン
　　　　０．２５ μｇ/ｍｌ　アンフォテリシンＢ
　　　　１０ ｎｇ/ｍｌ　神経成長因子(シグマ社製)
　・培養環境：　３７℃のＣＯ２インキュベーター内で培養した。

（作用確認方法）
　培養上清中に、実施例３によって得られたプロシアニジンＢ２（procyanidin B2）、プロシアニジンＢ５（procyanidin B5）、プロシアニジンＣ１（procyanidin C1）、およびシンナムタンニンＡ２（cinnamtannin A2）を、それぞれ１または１０μＭ加えて、３０分後に培養上清を採取し、それに含まれるカルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）濃度を測定した。これによって、ＣＧＲＰ放出に対する効果を検討した。
　ＣＧＲＰ濃度は、ＥＬＩＳＡキット（ＳＰＩ-ＢＩＯ, Massey Cedex, France）を用いて測定した。陽性コントロールとして、カプサイシン（capsaicin）を用いた。

　結果は、図２に示される通りであった。

　結果から、プロシアニジンＢ２、プロシアニジンＢ５、プロシアニジンＣ１、シンナムタンニンＡ２をそれぞれ添加したいずれのケースにおいても、ＣＧＲＰ放出が見られた。中でもシンナムタンニンＡ２は、陽性コントロールであるカプサイシンと同等の結果が得られた。

試験例２：　カカオポリフェノールのＩＧＦ－１分泌作用の確認
　カカオポリフェノール（実施例２のＣＬＰｒ）０．５％含有粉餌（組成は下記のとおり）をマウスに４週間投与して、全身の臓器を採取した。得られた臓器を、１Ｎの酢酸溶液につけてホモジネートし、遠心分離後上清中のＩＧＦ－１濃度をenzyme immunoassay（ＥＩＡ） kit（Diagnostic Systems Laboratories Inc., Webster, TX）を用いて測定した。
　また、腹部大動脈から採血し血漿中のＩＧＦ－１濃度も測定した。

　結果は図３に示される通りであった。
　結果に示されるように、０．５％カカオポリフェノール含有粉餌の投与によって、各臓器および血液中のＩＧＦ－１濃度が増加した。

　＜０．５％カカオポリフェノール含有粉餌配合＞
　粉餌（CLEA　Rod ent　Diet　CE-2；日本クレア株式会社製）　９９．５重量％
　カカオポリフェノール（実施例２のＣＬＰｒ）　　　　　　　　　 ０．５重量％

試験例３：　カカオポリフェノール摂取の空間認知機能への影響
　試験例２と同様にして０．５％カカオポリフェノール含有粉餌を投与したマウスを用いて、モーリス水迷路試験を行った。
　具体的には、直径１２０ｃｍのプールに、直径１０ｃｍ、高さ１１ｃｍの透明なアクリル板のプラットホームを設置し、その１ｃｍ上まで水を満たし、プラットホームを隠した。１日１回、固定したスタート地点からプラットホームに到着するまでの時間を計測し、これを５日間繰り返した。比較としてＣＧＲＰの放出能を欠損したマウス（Neuropharmacology; Haradaら、52(2007) 1303-1311の方法に従って作成）を用いた場合も実施した。

　結果は図４に示される通りであった。

　０．５％カカオポリフェノール含有粉餌をマウスに投与することによって、スタート地点からプラットホームに到着するまでの所要時間は有意に減少した。一方、ＣＧＲＰ放出能欠損マウスの実験では０．５％カカオポリフェノール含有粉餌の投与による効果はみられなかった。このことから、０．５％カカオポリフェノール含有粉餌の投与による効果は、ＣＧＲＰを介する作用であることが確認された。

Claims (17)

1. 　ポリフェノールを有効成分として含んでなることを特徴とする、インスリン様成長因子－１分泌促進剤。
2. 　ポリフェノールがプロシアニジン類である、請求項１に記載のインスリン様成長因子－１分泌促進剤。
3. 　プロシアニジン類が、カカオ、ぶどう、リンゴ、松の樹皮のうちのいずれか１種または２種以上に由来する、請求項２に記載のインスリン様成長因子－１分泌促進剤。
4. 　プロシアニジン類が、プロシアニジンＢ２、プロシアニジンＢ５、プロシアニジンＣ１、シンナムタンニンＡ２から選択される１種または２種以上である、請求項２または３に記載のインスリン様成長因子－１分泌促進剤。
5. 　請求項１～４のいずれか一項に記載のインスリン様成長因子－１分泌促進剤を含んでなる、飲食品。
6. 　プロシアニジン類の含有量が０．０１～２０重量％である、請求項５に記載の飲食品。
7. 　ポリフェノールの有効量を、哺乳動物に摂取させることを含んでなる、哺乳動物の血中または臓器中におけるインスリン様成長因子－１分泌を促進する方法。
8. 　ポリフェノールの摂取を経口摂取により行う、請求項７に記載の方法。
9. 　ポリフェノールの摂取を、ポリフェノールを含有する飲食品を摂取することにより行う、請求項８に記載の方法。
10. 　ポリフェノールがプロシアニジン類である、請求項７～９のいずれか一項に記載の方法。
11. 　プロシアニジン類が、カカオ、ぶどう、リンゴ、松の樹皮のうちのいずれか１種または２種以上に由来する、請求項１０に記載の方法。
12. 　プロシアニジン類が、プロシアニジンＢ２、プロシアニジンＢ５、プロシアニジンＣ１、シンナムタンニンＡ２から選択される１種または２種以上である、請求項１０または１１に記載の方法。
13. 　インスリン様成長因子－１分泌促進剤を製造するための、ポリフェノールの使用。
14. 　インスリン様成長因子－１分泌促進作用を有する飲食品を製造するための、ポリフェノールの使用。
15. 　ポリフェノールがプロシアニジン類である、請求項１３または１４に記載の使用。
16. 　プロシアニジン類が、カカオ、ぶどう、リンゴ、松の樹皮のうちのいずれか１種または２種以上に由来する、請求項１５に記載の使用。
17. 　プロシアニジン類が、プロシアニジンＢ２、プロシアニジンＢ５、プロシアニジンＣ１、シンナムタンニンＡ２から選択される１種または２種以上である、請求項１５または１６に記載の使用。

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