WO2007003768A2 - Utilisation d'un extrait de l'espece trigonella foenum graecum dans une composition cosmetique ou pharmaceutique - Google Patents
Utilisation d'un extrait de l'espece trigonella foenum graecum dans une composition cosmetique ou pharmaceutique Download PDFInfo
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Definitions
- the invention relates to the field of cosmetics and pharmaceuticals, particularly the field of dermatology.
- the subject of the present invention is the use of at least one isoleucine amino acid, mono or polyhydroxylated, and / or one of these derivatives as an active agent inducing the endogenous synthesis of SIRT proteins in the cells of the skin, in or for the preparation of a cosmetic or pharmaceutical composition.
- SIRT proteins are part of the Sirtuine family, they are nuclear proteins, NAD + dependent, playing an important role in the deacetylation of histones.
- SIR Stress Information Regulators
- SIRT1 protein is the most well-characterized human sirtuin, interacting with many transcriptional regulators.
- the human SIRT1 protein has been described as being involved in the regulation of p53 (Cheng HL et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 2003); and, more recently, as a modulator of cellular senescence (Langley E and AL, EMBO J. 2002).
- Other human SIRT proteins have been discovered (SIRT2, SIRT3, SIRT4-7).
- SIRT2 has been little studied, but some studies have demonstrated its role in the control of mitotic activity (Dryden SC and AL, Mol CeIl Biol 2003) and its involvement in the regulation of the p53 protein (Vaziri H and AL, CeIl 2001).
- histone deacetylases are considered to be an enzyme family that plays an important role in the regulation of cell cycle and death (Porcu M. and Chiarugi, Trends Pharmacol ScL, 2005).
- SIRT1 causes fat mobilization in adipocytes (Picard F. et al, Nature, 2004).
- SIRT proteins are currently considered as potential therapeutic targets for treating dysfunctions or diseases related, inter alia, to obesity, diabetes or hyperlipidemia (WO 03/061681, US 2005/0164969).
- SIRT proteins have recently been shown to be significantly expressed in the skin and play a very important role. Indeed the SIRT protein, specifically the protein SIRTl 5 is present in skin cells and that its expression is altered by various stresses that affect the skin cells. In particular, it has been demonstrated that the induction of the expression of this protein by different agents makes it possible to protect the cells and better help them to fight against stress and intrinsic aging.
- SIRT1 protein has a very important function in aging and cellular protection. Thus, an increase in its expression allows the skin to better withstand external aggressions. More generally, the induction of the expression of this protein in the cells of the skin makes the cell protection mechanisms more efficient and would increase the cell life.
- an increase in the synthesis of SIRT proteins will enable the skin to prevent the skin manifestations of aging, to be better protected against external aggressions and against the stresses to which it is subjected.
- an induction of SIRT will have anti-inflammatory and anti-irritant effects as well as a positive action on tissue regeneration and healing by an action, for example , on the increase of the synthesis of proteins constituting the extracellular matrix.
- the present invention thus relates to the use of an effective amount of at least one mono or polyhydroxylated isoleucine amino acid, and / or of one of these derivatives, as active agent inducing the endogenous synthesis of SIRT proteins in skin cells.
- This active agent may be used alone or in combination with at least one other active agent, in or for the preparation of a cosmetic and / or dermopharmaceutical and / or dermatological composition.
- these particular amino acids have specific biological activities which make them directly usable in cosmetic, dermatological or pharmaceutical preparations or compositions.
- trans-stilbene derivatives resveratrol, piceatannol
- chalcone derivatives isoliquiritigenine, butene
- flavone derivatives flavone derivatives
- the main object of the present invention relates to the use of a new active agent capable of inducing the synthesis of SIRT proteins.
- the invention relates to the use of an effective amount of at least one mono or polyhydroxylated isoleucine amino acid and / or one of these derivatives as an active agent inducing the endogenous synthesis of SIRT proteins in the cells of the skin, in or for the preparation of a cosmetic or pharmaceutical composition.
- the compounds will activate a particular class of SIRT proteins, SIRT1 proteins.
- active agent an active agent capable of inducing or activating the synthesis of SIRT proteins in the cells of the skin. That is to say, able to increase the quantity of these proteins in the cells, but more particularly, one essentially hears designate all the active agents likely to favor the endogenous production of SIRT proteins; and most particularly the molecules involved in the positive control of precursors such as DNA or RNA.
- the active agent can be defined as being a molecule or a set of molecules capable of modifying or modulating the functioning of a biological system.
- the amino acid is 4-hydroxyisoleucine of formula:
- the active agents according to the invention relate to isoleucine derivatives and 4-hydroxyisoleucine derivatives.
- isoleucine derivatives is meant both these chemical derivatives and these biological derivatives.
- derivative is meant all leucine or isoleucine amino acid derivatives to which a moiety would have been added. This group is likely to bring better properties to the active agent defined according to the invention.
- the groups may be added in order to facilitate better penetration into the skin, these derivatives being, for example, "oleyl", “stearyl” or “palmityl” type radicals.
- the amino acid is modified on its carboxylic acid functions and / or on its amine functions.
- the amino acids according to the invention can be modified by acylation or acetylation on their amine function, and / or they can be modified by amidation or esterification on their carboxylic function.
- the amino acids may be in the form of lactone.
- the amino acids according to the present invention may be in any existing isomeric forms.
- 4-hydroxyisoleucine is preferably used in the form of its isomers (2S, 3R, 4S) and / or (2R, 3R, 4S). These particular isomers are the isomers that are obtained mainly from the process for obtaining the 4-hydroxyisoleucine used to obtain the active agent according to the invention. More particularly according to the invention, the 4-hydroxyisoleucine is in the form of the (2S, 3R, 4S) isomer.
- the active agent is of plant origin.
- the active agent according to the invention is obtained from plants belonging to the genus Trigonella.
- the amino acid can be obtained from at least one of the many varieties and species belonging to the genus Trigonella.
- the active substance is obtained from at least one plant of the species Trigonella foenum graecum, commonly called fenugreek.
- Fenugreek is an annual herbaceous plant, it belongs to the sub-order of legumes, to the family of
- Papilionaceae and the genus Trigonella It is a plant grown mainly in the Mediterranean regions and known since antiquity for its therapeutic virtues.
- This plant has the particularity of having a high content of protein material in the seed and especially to have a particular free amino acid, hydroxisoleucine.
- This amino acid was identified for the first time in 1973 by Fowden et al., It accounts for more than 60% of the free amino acids present in the seed. Hydroxyisoleucine is also present but in smaller amounts in the leaves and stems of fenugreek.
- the active agents will be extracted from germinated seeds of plants of the genus Trigonella, and more particularly from seeds of the plant of the species Trigonella foenum graecum.
- 4-hydroxyisoleucine is also present in some other plant species; thus Raffholz et al. (1984) showed the presence of this particular amino acid in Quararibeafunebris, a tree of the Bombacaceae family. The presence of 4-hydroxyisoleucine has also been reported in species such as Lactarius camphoratus (Dardenne et al., 1986), Dioscorea deltoidea and Balanites aegyptia.
- the active agent according to the invention in particular 4-hydroxyisoleucine, can be obtained from any of the plant species containing it.
- the amino acids can be obtained either by conventional chemical synthesis, or by extraction or purification from natural or synthetic substance.
- the active agent is obtained by extraction and / or purification from a natural raw material, in particular plant material. Any method of extraction or purification known to those skilled in the art can be used to prepare the active agent according to the invention.
- To extract the 4-hydroxyisoleucine from the fenugreek use, for example, the method described by Hardman and Abu-Al-Futuh (Planta Medica, 36, 79-80, 1979) or any other method of amino acid extraction known to those skilled in the art.
- a plant grinder for example.
- the fenugreek seeds are then "delipidated" by extraction of the fatty substances with conventional organic solvents for this purpose, such as, for example, hexane, chloroform, an alcohol or acetone.
- An apolar or low polarity solvent is preferably used, for example hexane.
- the extract is then evaporated.
- the extraction itself is carried out with stirring, at a temperature of between 4 and 100 ° C., in an aqueous solution, that is to say composed of water, or with a solution comprising a mixture of water and water.
- an organic solvent miscible with water preferably an alcohol (methanol, ethanol or isopropanol).
- the proportion of water in the mixture may vary between 10 and 50%.
- the hydroalcoholic mixture will contain 70 to 80% of ethanol.
- the extraction can be carried out at a pH of between 4 and 10, but it is preferable to work at a pH of between 5 and 6 to prevent degradation of the 4-hydroxyisoleucine.
- the hydroalcoholic extract is a first usable form of the extract containing the active agent.
- a step of evaporation of the alcohol can easily be considered.
- the soluble fraction is subsequently recovered by centrifugation and filtration.
- the extract obtained can be further purified by fractionation, in particular by a conventional method of ion exchange resin chromatography, as for example by the Moore technique, Syein and Spackman (1958).
- a purification treatment in order to reduce the amount of undesirable compounds, such as, for example, the compounds responsible for the odor or the color. of the product.
- This treatment may consist in bringing our solution into contact with various absorbents such as activated carbon, bleaching earth or silica; then, subsequently, to perform a filtration step. Any of the more or less purified forms of the extract is then solubilized in water or in any mixture containing water, and then sterilized by ultrafiltration. It is thus possible to easily obtain an extract containing 4-hydroxyisoleucine to a high degree Purity It is thus possible to easily obtain an extract containing 4-hydroxyisoleucine to a very high degree of purity (10 to 40%).
- the use of the active agent according to the invention capable of activating the synthesis of SIRT1 proteins in the cells of the skin, will preferably be in the form of a composition suitable for external topical administration, mainly on skin, mucous membranes and / or integuments, comprising a cosmetically or dermatologically acceptable medium.
- the effective amount of active agent is the amount needed to achieve the desired result.
- the active agent mentioned above is used, in the compositions, at a concentration of between 0.00001% and
- Said active agents according to the invention are also advantageously used in order to fight in a curative and / or preventive manner against the manifestations of skin aging, but also in order to improve the appearance of the skin and / or integuments.
- care of the skin and / or integuments we mean all the actions intended to maintain or restore a good functioning of the skin and / or superficial body growths or any means which serves to preserve or improve their appearance and / or their appearance. So the care includes hydration, soothing, protection against all types of aggression, including sun protection, fight and prevention of the manifestations of aging.
- cutaneous manifestations of aging is meant any changes in the external appearance of the skin due to aging, such as, for example, wrinkles and fine lines, wilted skin, soft skin, thinned skin, lack of elasticity and / or skin tone, dull and lackluster skin but also any internal changes in the skin that do not systematically result in a modified external appearance such as, for example, all internal skin damage resulting from exposure to ultraviolet radiation.
- improved the appearance of the skin means all phenomena that are likely to result in a visual improvement of the condition of the skin. The skin will look better; it will be, for example, much more beautiful, firm and / or smooth. All small imperfections will be diminished or removed.
- the papery appearance of the skin will, for example, be attenuated.
- the active agent according to the invention may be intended to protect keratin substrates, and more particularly to protect the skin and / or integuments against all types of external aggression.
- the use of these active agents or compositions containing them, will allow the keratin substrates to be protected and better withstand the stress that produces on them the environment.
- external aggression is understood to mean the aggressions that the environment can produce. These attacks can be of chemical, physical, biological or thermal origin.
- the active agents according to the invention will advantageously be used to reduce and / or prevent inflammatory and / or skin irritant reactions.
- the active agents according to the invention intended to activate the endogenous synthesis of SIRT proteins, and more particularly SIRT1 proteins, have anti-inflammatory and anti-irritant effects.
- the use of the properties of these assets therefore makes it possible to have a skin that is more protected and much less sensitive to the various aggressions that it may encounter. The skin is soothed.
- the active agents according to the invention as defined above stimulate the metabolic functioning of the cells of the skin. They thus make it possible to increase the synthesis of proteins essential to its functioning, in particular by increasing the synthesis of proteins constituting the extracellular matrix.
- the active agents according to the invention, or the composition containing them thus have a positive action on tissue regeneration.
- the active agents according to the invention are particularly effective in treating cicatrization disorders.
- These active agents capable of activating the endogenous synthesis of SIRT proteins, may be used, more generally, to treat dermatological conditions.
- Dermatological conditions are all diseases affecting the skin and having or not visible consequences. As such, there may be mentioned, for example: disorders related to cell differentiation and proliferation problems, problems related to keratinization, inflammatory or allergic disorders, disorders related to sebaceous functions, dermal or epidermal proliferations (benign or malignant); cutaneous disorders due to U.V radiation exposure, pathologies associated with chronological or actinic aging.
- the active agents according to the invention intended to activate the endogenous synthesis of SIRT proteins in the skin cells, may be used for the manufacture of a medicament for the treatment of dermal conditions.
- the subject of the present invention is the use of active agents according to the invention, intended to activate the endogenous synthesis of SIRT proteins in skin cells, alone or in combination with at least one other active agent. , to produce a localized thinning effect after application to the skin, and more particularly to reduce, eliminate or prevent subcutaneous fat overloads.
- hypodermic adipose tissue is the largest energy reservoir in the body. If an imbalance settles in the body between the processes of lipogenesis and lipolysis, the volume and the number of the adipocytes can increase; hypertrophy and adipocyte hyperplasia, which can be accompanied by hyperviscosity of the substance and a slowing of the venous and lymphatic circulation. It is called cellulite, which is manifested by an overload of adipose tissue, especially in women, at the hips, thighs, buttocks, knees and forearms. The skin has a quilted and padded appearance and at the most advanced stage the appearance of "orange peel", which is characterized by a succession of depressions caused by excessive stretching of the connective bays and the attraction of the epidermis to the tissues deep.
- the aforesaid active agent is previously solubilized in one or more cosmetically or pharmaceutically acceptable solvents such as water, glycerol, ethanol, propanol or isopropanol, propylene glycol, butylene glycol , dipropylene glycol, ethoxylated or propoxylated diglycols or any mixture of these solvents.
- one or more cosmetically or pharmaceutically acceptable solvents such as water, glycerol, ethanol, propanol or isopropanol, propylene glycol, butylene glycol , dipropylene glycol, ethoxylated or propoxylated diglycols or any mixture of these solvents.
- the aforesaid active agent is previously solubilized in a cosmetic or pharmaceutical vector such as liposomes or adsorbed on powdery organic polymers, mineral supports such as talcs and bentonites, and more generally solubilized in or attached to any cosmetically or pharmaceutically acceptable carrier.
- the composition according to the invention can be ingested, injected or applied to the skin (on any cutaneous area of the body), hair, nails or mucous membranes.
- the composition according to the invention can be in any of the galenical forms normally used.
- the compositions according to the present invention will be in a dosage form suitable for topical administration to the skin. They cover all cosmetic or dermatological forms. These compositions must therefore contain a cosmetically acceptable medium, that is to say, compatible with the skin, hair or hair.
- the present invention relates to a cosmetic treatment method for skin care intended to increase the endogenous synthesis of SIRT proteins in the cells of the skin, characterized in that a composition is applied to the skin. containing the active agent as defined above, in order to obtain the desired action.
- the cosmetic treatment method of the invention may be implemented in particular by applying the cosmetic compositions as defined above, according to the usual technique of use of these compositions, for example: application of creams, gels, serums , lotions, milks, shampoos or sunscreen compositions, on the skin or on the hair, or application of toothpaste on the gums.
- a quantity of 100 grams of germinated seeds of the plant of the species Trigonella foenum graecum is ground in a knife mill, with a grain size of 200mm.
- the ground material is then delipidated with hexane.
- Extraction is carried out at room temperature by an acidic aqueous-alcoholic solution at pH 5 composed of an acetate buffer containing 0.1% of ascorbic acid and 80% of alcohol.
- the medium is then clarified by centrifugation. These two operations are repeated three times.
- the three clarified fractions are then combined and filtered on a plate filter.
- the extract containing free amino acids, and more particularly 4-hydroxyisoleucine is then purified by passage over a column containing a cation exchange resin so as to retain the amino acid 4-hydroxyisoleucine.
- the elution is carried out in a basic medium, for example using an ammonia solution.
- the extract is then subjected to a purification treatment using an activated carbon.
- the extract thus obtained contains 10 to 40% of 4-hydroxyisoleucine by weight of the dry extract.
- the aim of the study is to determine the influence of the extract according to Example 1 on the synthesis of SIRT1 proteins by fibroblasts, by the immunofluorescence technique and by the Western-blot technique.
- Immunofluorescence and Western blot techniques are semi-quantitative techniques that can be used to assess the level of proteins present in cells.
- Human fibroblasts are maintained in culture at 37 ° C in a humidified atmosphere containing 5% CO 2 .
- fibroblasts were grown on 8-well slides; for the western blot, the cells were grown in boxes 100 mm in diameter. The cells are then incubated for 24 or 48 hours with the extract according to Example 1 dissolved in 0.5% or 1%; a control condition containing no extract is carried out.
- the amount of SIRT1 proteins, synthesized by the cells is proportional to the intensity of the fluorescence.
- the results thus obtained demonstrate a significant increase in the expression of SIRT1 proteins at the nucleus of the cell after application of the extract according to Example 1 for 24 and 48 hours. Furthermore, the higher the concentration of extract applied at the cell level, the higher the intensity.
- the cells are washed and harvested in extraction buffer (20mM Tris, 15OmM NaCl, 10mM EDTA, 0.2% Triton X100) enriched with a protease inhibitor cocktail (Sigma).
- extraction buffer (20mM Tris, 15OmM NaCl, 10mM EDTA, 0.2% Triton X100
- the proteins thus extracted are centrifuged at 4 ° C. at 10,000 rpm for 10 minutes and the samples thus obtained are stored at -80 ° C.
- the cell lysates are electrophoretically separated on a 4-12% NuPAGE gel (Invitrogen) and transferred to a nitrocellulose membrane (PAL corporation).
- the membranes are incubated overnight with an anti-human SIRT1 rabbit antibody (Santa Cruz Biotechnology), diluted to 1/200, followed by incubation with an anti-rabbit IgG-peroxidase antibody, diluted to 1/5000, (Beckman Coulter). The revelation is carried out with a chemiluminescent substrate.
- the luminescent signals emitted by the isolated bands present in the gel are quantified using Chimilmager software (Alpha Innotech Corporation, USA).
- the quantity of proteins is expressed as a percentage of light intensity, compared to the control condition, that is to say compared to the cells which did not receive the extract according to Example 1.
- phase A and phase B are heated separately at a temperature between 65 ° C. and 70 ° C., phase C is incorporated, then phase A is emulsified in phase B.
- the Carbomer is neutralized with the phase D at a temperature around 45 ° C.
- Phase E is then added with stirring and the cooling is continued to 25 ° C.
- phase A and phase B are weighed and heated separately at 60 ° C. When phase B reaches 60 0 C, introduce phase C. Emulsify phase B in phase A.
- the Carbopol is neutralized with phase D at a temperature around 45 ° C. Cooling is continued to below 40 ° C. Phase E is then added with stirring.
- Carbopol gel is prepared at 2%. The ingredients are added in the order listed above with stirring. The mixture is then neutralized with the TEA. The perfume and the dyes are added if necessary.
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Abstract
La présente invention a pour objet l'utilisation d'au moins un acide aminé isoleucine, mono ou polyhydroxylé, et/ou d'un de ces dérivés ,en tant qu'agent actif inducteur de la synthèse endogène des protéines SIRT dans les cellules de la peau, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique ou pharmaceutique.
Description
UTILISATION D'UN ACIDE AMINE EN TANT QU'AGENT ACTIF INDUCTEUR DE LA SYNTHESE DES PROTEINES SIRT DANS LES CELLULES DE LA PEAU.
L'invention concerne le domaine de la cosmétique et de la pharmaceutique, notamment le domaine de la dermatologie. La présente invention a pour objet l'utilisation d'au moins un acide aminé isoleucine, mono ou polyhydroxylé, et/ou d'un de ces dérivés en tant qu'agent actif inducteur de la synthèse endogène des protéines SIRT dans les cellules de la peau, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique ou pharmaceutique.
Les protéines SIRT font partie de la famille des Sirtuines, ce sont des protéines nucléaires, NAD+ dépendantes, jouant un rôle important dans la désacétylation des histones. Les gènes SIR (Silent Information Régulators), codant pour les protéines SIR, ont, pour la première fois, été décrits chez S. cerevisiae en 1979 (Rine J et AL, Genetics 1979). Plus tard, il a été démontré qu'une surexpression de la protéine SIR2P, chez C. elegans, permettait d'augmenter la durée de vie de cet organisme (Tissenbaum et AL, Nature 2001), suggérant que ces protéines seraient liées à la longévité.
La protéine SIRTl est la sirtuine humaine la mieux caractérisée, interagissant avec de nombreux régulateurs de la transcription. La protéine humaine SIRTl a été décrite comme étant impliquée dans la régulation de p53 (Cheng HL et Al. Proc Natl Acad Sci U S A. 2003) ; et, plus récemment, comme un modulateur de la sénescence cellulaire (Langley E et AL, EMBO J. 2002). D'autres protéines humaines SIRT ont été découvertes (SIRT2, SIRT3, SIRT4-7). La protéine humaine SIRT2 a été peu étudiée, quelques études ont cependant démontré son rôle dans le contrôle de l'activité mitotique (Dryden SC et AL, Mol CeIl Biol. 2003) ainsi que son implication dans la régulation de la protéine p53 (Vaziri H et AL, CeIl. 2001). A ce jour, les histones désacétylases sont considérées comme une famille d'enzymes occupant un rôle important dans la régulation du cycle et de la mort cellulaire (Porcu M. and Chiarugi A., Trends Pharmacol ScL, 2005).
Plusieurs études chez des organismes aussi divers que C. Elegans ou les mammifères ont montré qu'il existait une relation entre l'apport énergétique et la durée de vie et que la protéine SIRT était responsable de ce couplage. Ainsi une réduction de l'apport calorique augmente la durée de vie de la levure {Tissenbaum et Al, Nature, 2001). Par ailleurs, des études récentes ont montré que SIRTl provoque la mobilisation des graisses dans les
adipocytes (Picard F. et al, Nature, 2004). Les protéines SIRT sont considérées à ce jour comme des cibles thérapeutiques potentielles pour traiter des dysfonctionnements ou des maladies liées, entre autres, à l'obésité, au diabète ou encore à Phyperlipidémie (WO 03/061681, US 2005/0164969).
II a récemment été démontré que les protéines SIRT sont exprimées de manière significative dans la peau et qu'elles y jouent un rôle très important. En effet la protéine SIRT, et plus précisément la protéine SIRTl5 est présente dans les cellules de la peau et que son expression est modifiée par les différents stress qui affectent les cellules cutanées. II a notamment été mis en évidence que l'induction de l'expression de cette protéine par différents agents, permettait de protéger les cellules et de mieux les aider à lutter contre le stress et le vieillissement intrinsèque.
La protéine SIRTl occupe une fonction très importante dans le vieillissement et la protection cellulaire. Ainsi, une augmentation de son expression permet à la peau de mieux résister aux agressions extérieures. Plus généralement, l'induction de l'expression de cette protéine dans les cellules de la peau rend les mécanismes de protection cellulaire plus efficients et permettrait d'augmenter la durée de vie cellulaire.
La présence de cette protéine au niveau de la peau, ainsi que les bénéfices de sa surexpression, offre la perspective de nouveaux modes d'action et de nouveaux moyens d'améliorer la survie cellulaire, notamment la survie cellulaire des cellules cutanées ; mais aussi, plus généralement des moyens d'améliorer les propriétés de la peau. Par améliorer les propriétés de la peau, on entend tous les moyens destinés à conserver ou à rétablir un bon fonctionnement de la peau ou encore tout moyen qui sert à préserver ou à améliorer son apparence et/ou son aspect.
Ainsi une augmentation de la synthèse des protéines SIRT permettra à la peau de prévenir les manifestations cutanées du vieillissement, d'être mieux protéger contre les agressions extérieures et contre les stress auxquels elle est soumise. Par ailleurs, et selon une vision plus globale de l'invention, une induction de SIRT permettra d'avoir des effets anti-inflammatoires et anti-irritants tout comme une action positive sur la régénération tissulaire et sur la cicatrisation par une action, par exemple, sur l'augmentation de la synthèse de protéines constitutives de la matrice extra-cellulaire.
La présente invention se rapporte ainsi à l'utilisation d'une quantité efficace d'au moins un acide aminé isoleucine, mono ou polyhydroxylé, et/ou d'un de ces dérivés, en tant qu'agent actif inducteur de la synthèse endogène des protéines SIRT dans les cellules de la peau. Cet actif pourra être utilisé seul ou en association avec au moins un autre agent actif, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermo-pharmaceutique et/ou dermatologique.
En effet, par leur activité inductrice de la synthèse des protéines SIRT, ces acides aminés particuliers présentent des activités biologiques spécifiques qui les rendent directement utilisables dans des préparations ou compositions cosmétiques, dermatologiques ou pharmaceutiques.
L'utilisation d'au moins un acide aminé isoleucine, mono ou polyhydroxylé, et/ou d'un de ces dérivés, dans les domaines cosmétique et pharmaceutique est connue, notamment au niveau des soins de la peau, ainsi que le décrit le brevet FR 2 852 841. Toutefois, son utilisation en tant qu'agent activateur de la synthèse des protéines SIRT n'a pas encore été exposée.
A ce jour, très peu d'utilisations d'agents inducteurs de synthèse de protéines de la famille des SIRT, dans les cellules de la peau, ont été décrites. Parmi ces agents susceptibles d'activer la synthèse des protéines SIRT de la peau, on peut citer différentes molécules dont, par exemple, les polyphénols. Plus particulièrement, on peut citer : des dérivés de trans-stilbène (resveratrol, piceatannol), des dérivés des chalcones (isoliquiritigenine, butéine), des dérivés de flavones (fisteine, luteoline, quercetine).
Ainsi, le principal objet de la présente invention concerne l'utilisation d'un nouvel agent actif capable d'induire la synthèse des protéines SIRT. L'invention concerne l'utilisation d'une quantité efficace d'au moins un acide aminé isoleucine, mono ou polyhydroxylé, et/ou d'un de ces dérivés, en tant qu'agent actif inducteur de la synthèse endogène des protéines SIRT dans les cellules de la peau, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique ou pharmaceutique. Préférentiellement selon l'invention, les composés activeront une classe de protéines SIRT particulière, les protéines SIRTl.
Par agent actif, on entend un agent actif apte à induire ou à activer la synthèse des protéines SIRT dans les cellules de la peau. C'est à dire apte à augmenter la quantité de ces protéines dans les cellules, mais plus particulièrement, on entend essentiellement
désigner tous les agents actifs susceptibles de favoriser la production endogène des protéines SIRT ; et tout particulièrement les molécules impliquées dans le contrôle positif des précurseurs tels que l' ADN ou l' ARN.
L'agent actif peut se définir comme étant une molécule ou un ensemble de molécules susceptibles d'apporter des modifications ou des modulations au fonctionnement d'un système biologique.
Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'acide aminé est la 4- hydroxyisoleucine de formule :
CH3 - CH - CH - CH - COOH
I I I
OH CH3 NH2
Par ailleurs, les agents actifs selon l'invention sont relatifs aux dérivés d'isoleucine et aux dérivés de la 4-hydroxyisoleucine. Par " dérivés d'isoleucine", on entend aussi bien ces dérivés chimiques que ces dérivés biologiques. Par "dérivé", on entend tous les dérivés d'acide aminé leucine ou isoleucine auxquels un groupement aurait été ajouté. Ce groupement étant susceptible d'apporter de meilleures propriétés à l'agent actif défini selon l'invention. Ainsi, par exemple, les groupements pourront être ajoutés en vue de faciliter une meilleure pénétration dans la peau, ces dérivés étant par exemple des radicaux de type "oléyl", "stéaryl", "palmityl"...
De plus, par exemple, il se peut, pour des motifs de résistance ou d'efficacité, que l'acide aminé soit modifié sur ses fonctions acides carboxyliques et/ou sur ses fonctions aminés. Ainsi, selon un autre aspect de l'invention, les acides aminés selon l'invention peuvent être modifiés par acylation ou acétylation sur leur fonction aminé, et/ou ils peuvent être modifiés par amidation ou estérification sur leur fonction carboxylique. Par ailleurs, selon un mode particulier de réalisation de l'invention, les acides aminés pourront se trouver sous la forme de lactone.
Les acides aminés selon la présente invention pourront se trouver sous toutes les formes isomériques existantes. Cependant on utilisera, de manière préférentielle, la 4- hydroxyisoleucine sous la forme de ses isomères (2S, 3R, 4S) et/ou (2R, 3R, 4S). Ces isomères particuliers étant les isomères que l'on obtient majoritairement à partir du procédé d'obtention de la 4-hydroxyisoleucine utilisé pour obtenir l'agent actif selon l'invention. Plus particulièrement selon l'invention, la 4-hydroxyisoleucine est sous la forme de l'isomère (2S, 3R, 4S).
Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, l'agent actif est d'origine végétale.
Préférentiellement, l'agent actif selon l'invention est obtenu à partir de végétaux appartenant au genre Trigonella. Bien entendu l'acide aminé peut être obtenu à partir d'au moins l'une quelconque des nombreuses variétés et espèces appartenant au genre Trigonella.
Plus particulièrement la substance active est obtenue à partir d'au moins un végétal de l'espèce Trigonella foenum graecum, communément appelé fenugrec. Le fenugrec est une plante herbacée annuelle, elle appartient au sous-ordre des légumineuses, à la famille des
Papilionacées et au genre Trigonella. C'est une plante cultivée essentiellement dans les régions méditerranéennes et connue depuis l'antiquité pour ses vertus thérapeutiques.
Cette plante a la particularité de posséder une teneur élevée de matière protéique dans la graine et surtout de posséder un acide aminé libre particulier, l'hydroxisoleucine. Cet acide aminé a été identifié pour la première fois en 1973 par Fowden et al., il représente plus de 60 % des acides aminés libres présents dans la graine. L'hydroxyisoleucine est aussi présente mais en plus faible quantité dans les feuilles et dans les tiges du fenugrec.
Ainsi, selon un mode de réalisation préféré de l'invention, les agents actifs seront extraits des graines germées de végétaux du genre Trigonella, et plus particulièrement à partir de graines du végétal de l'espèce Trigonella foenum graecum.
Il est à noter que la 4-hydroxyisoleucine est aussi présente dans quelques autres espèces végétales ; ainsi Raffauf et al. (1984) ont montré la présence de cet acide aminé particulier dans le Quararibeafunebris, arbre de la famille des Bombacaceae. La présence de 4-hydroxyisoleucine a aussi été signalée dans des espèces telles que Lactarius camphoratus (Dardenne et al, 1986), Dioscoreae deltoïdea et Balanites aegyptia
(Hardman et Abu-Al-Futuh, 1976). Il est bien entendu que l'agent actif selon l'invention, notamment la 4-hydroxyisoleucine, peut être obtenu à partir de l'une quelconque des espèces végétales en contenant.
Les acides aminés, objets du présent brevet, peuvent être obtenus soit par synthèse chimique classique, soit par extraction ou purification à partir de substance d'origine naturelle ou synthétique. Préférentiellement selon l'invention, l'agent actif est obtenu par extraction et/ou purification à partir d'une matière première naturelle, notamment végétale. Toute méthode d'extraction ou de purification connue de l'homme du métier peut être utilisée pour préparer l'agent actif selon l'invention. Pour extraire la 4-hydroxyisoleucine du fenugrec, on utilisera, par exemple, la méthode décrite par Hardman et Abu-Al-Futuh
(Planta Medica, 36, 79-80, 1979) ou toute autre méthode d'extraction d'acide aminé connu de l'homme du métier.
Ainsi, on peut dans une première étape, broyer les graines, à l'aide d'un broyeur à plantes par exemple. Selon une variante du procédé de l'invention, il est possible d'utiliser des graines en cours de germination, ou encore d'utiliser seulement une partie de la graine contenant l'embryon et/ou les cotylédons. Puis les graines de fenugrec sont "délipidées" par extraction des corps gras avec des solvants organiques classiques pour cet usage comme, par exemple, l'hexane, le chloroforme, un alcool ou l'acétone. On utilise préférentiellement un solvant apolaire ou de faible polarité comme, par exemple, l'hexane. L'extrait est ensuite évaporé.
L'extraction proprement dite est réalisée sous agitation, à une température comprise entre 4 et 1000C, dans une solution aqueuse, c'est-à-dire composée d'eau, ou par une solution comprenant un mélange d'eau et d'un solvant organique miscible à l'eau, préférentiellement un alcool (méthanol, éthanol ou encore isopropanol). La proportion d'eau du mélange pouvant varier entre 10 et 50 %. Préférentiellement le mélange hydroalcoolique contiendra 70 à 80 % d'éthanol. L'extraction peut être réalisée à un pH compris entre 4 et 10, mais il est préférable de travailler à un pH compris entre 5 et 6 pour prévenir une dégradation de la 4-hydroxyisoleucine.
L'extrait hydro-alcoolique est une première forme utilisable de l'extrait contenant l'agent actif. Une étape d'évaporation de l'alcool peut facilement être envisagée. La fraction soluble est, par la suite, récupérée par centrifugation et par filtration. Dans une autre étape, l'extrait obtenu peut être encore purifié par fractionnement, notamment par une méthode classique de chromatographie sur résine échangeuse d'ions, comme par exemple par la technique de Moore, Syein et Spackman (1958). Par ailleurs, après l'étape d'extraction, il est possible de faire subir à l'extrait un traitement de purification afin de réduire la quantité de composés non désirables, comme par exemple les composés responsables de l'odeur ou encore de la couleur du produit. Ce traitement peut consister à mettre en contact notre solution avec divers absorbants tels que le charbon actif, les terres décolorantes ou la silice ; puis, par la suite, à effectuer une étape de filtration. L'une quelconque des formes plus ou moins purifiées de l'extrait est alors solubilisée dans de l'eau ou dans tout mélange contenant de l'eau, puis stérilisée par ultrafiltration. Il est ainsi possible d'obtenir facilement un extrait contenant la 4-hydroxyisoleucine à un haut degré
de pureté II est ainsi possible d'obtenir facilement un extrait contenant la 4- hydroxyisoleucine à un très haut degré de pureté (10 à 40 %).
L'utilisation de l'agent actif selon l'invention, apte à activer la synthèse des protéines SIRTl dans les cellules de la peau, se fera préférentiellement sous la forme d'une composition adaptée à l'administration par voie topique externe, principalement sur la peau, les muqueuses et/ou les phanères, comprenant un milieu cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable.
La quantité efficace d'agent actif correspond à la quantité nécessaire pour obtenir le résultat désiré. Ainsi, selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'agent actif précité est utilisé, dans les compositions, à une concentration comprise entre 0,00001 % et
20 % environ, et préférentiellement à une concentration comprise entre 0,001 % et 10 % environ en poids par rapport au poids total de la composition finale.
Lesdits agents actifs selon l'invention sont aussi avantageusement utilisés afin de lutter de manière curative et/ou préventive contre les manifestations du vieillissement cutané, mais aussi afin d'améliorer l'aspect de la peau et/ou des phanères. Par les soins de la peau et/ou des phanères, on entend toutes les actions destinées à conserver ou à rétablir un bon fonctionnement de la peau et/ou des phanères ou encore tout moyen qui sert à préserver ou à améliorer leur apparence et/ou leur aspect. Ainsi le soin inclut l'hydratation, l'apaisement, la protection contre tous types d'agressions, notamment la protection solaire, la lutte et la prévention des manifestations du vieillissement. Par manifestations cutanées du vieillissement on entend toutes modifications de l'aspect extérieur de la peau dues au vieillissement comme, par exemple, les rides et ridules, la peau flétrie, la peau molle, la peau amincie, le manque d'élasticité et/ou de tonus de la peau, la peau terne et sans éclat mais également toutes modifications internes de la peau qui ne se traduisent pas systématiquement par un aspect extérieur modifié comme, par exemple, toutes dégradations internes de la peau consécutives à une exposition aux rayonnements ultraviolets. Par l'expression "améliorer l'aspect de la peau", on entend tous les phénomènes qui sont susceptibles d'avoir pour conséquence une amélioration visuelle de l'état de la peau. La peau présentera une meilleure apparence ; elle sera, par exemple, beaucoup plus belle, ferme et/ou lisse. Toutes les petites imperfections seront diminuées ou supprimées. L'aspect papyracé de la peau sera, par exemple, atténué.
De plus, l'agent actif selon l'invention, ou la composition le contenant, peut être destiné à protéger les substrats kératiniques, et plus particulièrement à protéger la peau et/ou les phanères contre tous les types d'agressions extérieures. L'utilisation de ces agents actifs ou de compositions les contenant, va permettre aux substrats kératiniques d'être protégés et de mieux résister au stress que produit sur eux l'environnement. On entend par le terme "agression extérieure" les agressions que peut produire l'environnement. Ces agressions peuvent être d'origine chimique, physique, biologique ou thermique.
Selon un autre aspect, les agents actifs selon l'invention seront avantageusement utilisés afin de diminuer et/ou de prévenir les réactions inflammatoires et/ou irritantes cutanées. En effet, les agents actifs selon l'invention, destinés à activer la synthèse endogène des protéines SIRT, et plus particulièrement des protéines SIRTl, ont des effets anti-inflammatoires et anti-irritants. L'utilisation des propriétés de ces actifs permet donc d'avoir une peau plus protégée et nettement moins sensible aux diverses agressions qu'elle peut rencontrer. La peau est ainsi apaisée. Par ailleurs, les agents actifs selon l'invention tels que définis précédemment, stimulent le fonctionnement métabolique des cellules de la peau. Ils permettent ainsi d'augmenter la synthèse de protéines essentielles à son fonctionnement, notamment en augmentant la synthèse de protéines constitutives de la matrice extra-cellulaire. Les agents actifs selon l'invention, ou la composition les contenant, possèdent ainsi une action positive sur la régénération tissulaire. Les agents actifs selon l'invention sont tout particulièrement efficaces afin de traiter les troubles de la cicatrisation.
Ces agents actifs, aptes à activer la synthèse endogène des protéines SIRT, pourront être utilisés, d'une manière plus générale afin de traiter des affections dermatologiques. Par affections dermatologiques, on entend toutes les maladies affectant la peau et ayant ou non des conséquences visibles. A ce titre, on peut citer par exemple : des désordres liés à des problèmes de différenciations et de proliférations cellulaires, des problèmes liés à la kératinisation, des troubles inflammatoires ou allergiques, des troubles liés aux fonctions sébacées, des proliférations dermiques ou épidermiques (bénignes ou malignes) ; des désordres cutanés dus à une exposition aux rayonnements U. V., des pathologies associées au vieillissement chronologique ou actinique.
Ainsi selon un autre aspect, les agents actifs selon l'invention, tels que décrit précédemment, destinés à activer la synthèse endogène des protéines SIRT dans les
cellules de la peau, pourront être utilisés pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement des affections dermiques.
Selon un autre aspect, la présente invention a pour objet l'utilisation d'agents actifs selon l'invention, destinés à activer la synthèse endogène des protéines SIRT dans les cellules de la peau, seuls ou en association avec au moins un autre agent actif, pour produire un effet amincissement localisé après application sur la peau, et plus particulièrement pour réduire, éliminer ou prévenir les surcharges graisseuses sous-cutanées.
Le tissu adipeux hypodermique constitue le plus grand réservoir énergétique de l'organisme. Si un déséquilibre s'installe dans l'organisme entre les processus de lipogénèse et de lipolyse, le volume et le nombre des adipocytes peut augmenter ; on parle d'hypertrophie et d'hyperplasie adipocytaire, qui peut s'accompagner d'une hyperviscosité de la substance fondamentale et d'un ralentissement de la circulation veineuse et lymphatique. On parle alors de cellulite, qui se manifeste par une surcharge de tissus adipeux, en particulier chez la femme, au niveau des hanches, des cuisses, des fesses, des genoux et des avants-bras. La peau prend un aspect matelassé et capitonné et au stade le plus avancé l'aspect de « peau d'orange », qui se caractérise par une succession de dépressions provoquées par un étirement excessif des travées conjonctives et l'attraction de Fépiderme vers les tissus profonds.
Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'agent actif précité est préalablement solubilisé dans un ou plusieurs solvants cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptables comme l'eau, le glycérol, Péthanol, le propanol ou Pisopropanol, le propylène glycol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés ou tout mélange de ces solvants.
Selon encore un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, l'agent actif précité est préalablement solubilisé dans un vecteur cosmétique ou pharmaceutique comme les liposomes ou adsorbés sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites, et plus généralement solubilisés dans ou fixés sur, tout vecteur cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable.
Quelle que soit la forme de l'invention, la composition selon l'invention peut être ingérée, injectée ou appliquée sur la peau (sur toute zone cutanée du corps), les cheveux, les ongles ou les muqueuses. Selon le mode d'administration, la composition selon
l'invention peut se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées. Préférentiellement, les compositions selon la présente invention se présenteront sous une forme galénique adaptée à l'administration par voie topique cutanée. Elles couvrent toutes les formes cosmétiques ou dermatologiques. Ces compositions doivent donc contenir un milieu cosmétiquement acceptable, c'est-à-dire compatible avec la peau, les poils ou les cheveux.
Selon un autre aspect, la présente invention concerne un procédé de traitement cosmétique pour les soins de la peau destiné à augmenter la synthèse endogène des protéines SIRT dans les cellules de la peau, caractérisé par le fait que l'on applique sur la peau une composition contenant l'agent actif tel que défini précédemment, afin d'obtenir l'action désirée.
Des modes de réalisation particuliers de ce procédé de traitement cosmétique résultent également de la description précédente. Le procédé de traitement cosmétique de l'invention peut être mis en œuvre notamment en appliquant les compositions cosmétiques telles que définies ci-dessus, selon la technique d'utilisation habituelle de ces compositions, par exemple : application de crèmes, de gels, de sérums, de lotions, de laits, de shampooings ou de compositions antisolaires, sur la peau ou sur les cheveux, ou encore application de dentifrice sur les gencives.
D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples donnés à titre illustratif et non limitatif.
Exemple 1 : Préparation de la 4-hydroxyisoleucine.
Une quantité de 100 grammes de graines germées du végétal de l'espèce Trigonella foenum graecum est broyée dans un broyeur à couteaux, à une granulométrie de 200mm. Le broyât est ensuite délipidé par de l'hexane. Une extraction est réalisée à température ambiante, par une solution hydro-alcoolique acide à pH 5 composée d'un tampon acétate contenant 0,1 % d'acide ascorbique et de 80% d'alcool. Le milieu est ensuite clarifié par centrifugation. Ces deux opérations sont répétées trois fois. Les trois fractions clarifiées
sont ensuite réunies et filtrées sur un filtre à plaque. L'extrait contenant les acides aminés libres, et plus particulièrement la 4-hydroxyisoleucine, est ensuite purifié par passage sur une colonne contenant une résine échangeuse de cations de façon à retenir l'acide aminé 4- hydroxyisoleucine. L'élution est réalisée en milieu basique, par exemple à l'aide d'une solution d'ammoniaque. L'extrait est ensuite soumis à un traitement de purification à l'aide d'un charbon actif. L'extrait ainsi obtenu contient 10 à 40 % de 4-hydroxyisoleucine en poids de l'extrait sec.
Exemple 2 : Mise en évidence de l'effet de l'extrait selon l'exemple 1 sur les fibroblastes.
Le but de l'étude est de déterminer l'influence de l'extrait selon l'exemple 1 sur la synthèse des protéines SIRTl par les fibroblastes, par la technique d'immunofluorescence et par la technique de western-blot. Les techniques d'immunofluorescence et de western- blot sont des techniques semi-quantitatives qui permettent d'apprécier le taux des protéines présentes dans les cellules.
Des fibroblastes humains sont maintenus en culture à 37°C dans une atmosphère humidifiée contenant 5 % de CO2. Pour les études d'immunofluorescence, les fibroblastes ont été cultivés sur des lames 8 puits ; pour le western-blot, les cellules ont été cultivées dans boîtes de 100 mm de diamètre. Les cellules sont ensuite incubées durant 24 ou 48 heures avec l'extrait selon l'exemple 1 mis en solution à 0,5 % ou à 1%; une condition contrôle ne contenant pas d'extrait est réalisée.
Etudes par immunofluorescence Après élimination des surnageants et rinçage des cultures, les cellules sont fixées avec du méthanol pendant 4 minutes à 4°C puis rincées avec du tampon PBS. Des anticorps de lapin anti-SIRTl humaine, dilués à 1/100, sont alors ajoutés (Santa Cruz Biotechnology). L'incubation dure 3 heures à température ambiante ; les surnageants sont ensuite éliminés et les cellules sont rincées au PBS. Puis un anticorps secondaire (anti-lapin, Molecular Probes), couplé à un marqueur fluorescent (Alexa 488) est additionné. Après 1 heure d'incubation à température ambiante, les surnageants sont éliminés et les cellules sont rincées au PBS. Les lames sont alors montées puis examinées au microscope à Epi- fluorescence (Nikon Eclipse E600 microscope).
La quantité de protéines SIRTl, synthétisées par les cellules, est proportionnelle à l'intensité de la fluorescence. Les résultats ainsi obtenus démontrent une augmentation significative de l'expression des protéines SIRTl au niveau du noyau de la cellule après application de l'extrait selon l'exemple 1 durant 24 et 48 heures. Par ailleurs, plus la concentration d'extrait appliquée au niveau des cellules est importante, plus l'intensité est élevée.
Etudes par Western-blot
Les cellules sont lavées et récoltées dans un tampon d'extraction (2OmM Tris, 15OmM NaCl, 1OmM EDTA, 0,2 % Triton XlOO) enrichi d'un cocktail d'inhibiteur de protéases (Sigma). Les protéines ainsi extraites sont centrifugées à 4°C à 10000 rpm durant 10 minutes et les échantillons ainsi obtenus sont stockés à -80°C.
Après standardisation des échantillons selon leur charge en protéines (kit de dosage de protéines BCA, Pierce), les lysats cellulaires sont séparés par électrophorèse sur un gel NuPAGE 4-12% (Invitrogen) et transférés sur une membrane de nitrocellulose (PAL corporation). Les membranes sont incubées toute une nuit avec un anticorps de lapin anti- SIRTl humaine (Santa Cruz Biotechnology), dilué à 1/200, suivi par une incubation avec un anticorps anti-lapin IgG-peroxydase, dilué à 1/5000, (Beckman Coulter). La révélation est effectuée avec un substrat chimioluminescent.
Afin de doser les protéines SIRTl présentes dans les cellules, les signaux luminescents émis par les bandes isolées présentes dans le gel sont quantifiés en utilisant un logiciel Chimilmager (Alpha Innotech Corporation, USA).
La quantité des protéines est exprimée en pourcentage d'intensité lumineuse, comparée à la condition contrôle, c'est-à-dire comparée aux cellules qui n'ont pas reçu l'extrait selon l'exemple 1.
Les résultats présentés dans le tableau ci-dessus montrent que lorsque les cellules sont incubées en présence de l'extrait selon l'exemple 1, on observe une augmentation
importante de l'intensité lumineuse, après 24 et 48 heures de traitement par rapport aux cellules non traitées. Les résultats permettent de conclure que l'ajout de l'extrait selon l'exemple 1 dans le milieu de culture des fibroblastes a pour effet d'augmenter la synthèse des protéines SIRTl par les cellules, de façon vraisemblablement dose-dépendante.
Exemple 3 : Mise en évidence ex vivo de l'effet selon l'extrait selon l'exemple 1.
Des études ex vivo par immunomarquage ont permis de mettre en évidence l'expression des protéines SIRTl sur des échantillons de peau. Des échantillons de peau humaine sont mis en culture à l'interface air/liquide. L'extrait selon l'exemple 1 est appliqué topiquement sur ces échantillons, au niveau de Pépithélium, puis les échantillons sont incubés durant 24 heures.
Ces échantillons de peau sont ensuite fixés avec du formaldéhyde puis inclus dans la paraffine. Des coupes de 2 à 3 μm d'épaisseur sont alors réalisées. L'immunomarquage est effectué après plusieurs étapes de déparaffinage et démasquage des sites antigéniques. L" immunomarquage proprement dit est réalisé avec un anticorps polyclonal de lapin anti- SIRTl humaine (IBL Co), dilué au 1/50, puis avec un anticorps secondaire (anti-lapin, Molecular Probes), couplé à un marqueur fluorescent. Les coupes de peau sont alors examinées au microscope à à Epi-fluorescence (Nikon Eclipse E600 microscope). Les résultats obtenus démontrent que les peaux traitées avec l'extrait selon l'exemple 1 expriment une quantité de protéines SIRTl nettement supérieure aux peaux non traitées avec l'extrait. Ainsi, l'extrait selon l'exemple 1 permet, au niveau cutané, d'augmenter l'expression des protéines SIRTl.
Exemple 4 : Préparation de compositions cosmétiques.
Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids.
1 - Crème de soin anti-rides :
Noms commerciaux Noms INCI % massique
PHASE A
Montanov 68 Cetearyl Alcohol (and) Cetearyl 6,00 Glucoside
Les constituants de la phase A et de la phase B sont chauffés séparément à une température comprise entre 65°C et 700C, la phase C est incorporée, puis la phase A est émulsionnée dans la phase B. Le Carbomer est neutralisé avec la phase D à une température aux alentours de 45 °C. La phase E est ensuite additionnée sous agitation et le refroidissement est poursuivi jusqu'à 250C.
2 -Crème apaisante :
Les ingrédients de la phase A et de la phase B sont pesés et chauffés séparément à 60°C. Lorsque la phase B atteint 600C, y introduire la phase C . Emulsionner ensuite la phase B dans la phase A. Le Carbopol est neutralisé avec la phase D à une température aux alentours de 450C. Le refroidissement est poursuivi jusqu'en dessous de 400C. La phase E est alors additionnée sous agitation.
3 - Gel Raffermissant - Amincissant - anti-cellulite :
Le gel de Carbopol est préparé à 2 %. Les ingrédients sont ajoutés dans l'ordre énuméré ci-dessus, sous agitation. Le mélange est ensuite neutralisé avec la TEA. Le parfum et les colorants sont ajoutés si nécessaire.
Claims
1. Extrait de graines de l'espèce Trigonella foenum graecum (fenugrec) délipidées, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique ou pharmaceutique destinée à une administration topique externe, ledit extrait formant agent actif inducteur de la synthèse endogène des protéines SIRT dans les cellules de la peau, caractérisé en ce qu'il contient une quantité d'acide aminé isoleucine, mono ou polyhydroxylé, et/ou d'un de ces dérivés compris entre 10% et 40% du poids total de l'extrait sec, et en ce qu'il est préparé selon un procédé comprenant des étapes, d'extraction par une solution aqueuse acide et un alcool, de purification sur colonne échangeuses d'ions, et d'élimination d'impuretés par un charbon actif.
2. Extrait selon la revendication 1, caractérisé en ce que les graines de fenugrec sont des graines germées ou encore seulement la partie de la graine contenant l'embryon ou les cotylédons.
3. Extrait selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que les protéines SIRT sont les protéines SIRTl.
4. Composition cosmétique ou pharmaceutique pour administration topique externe, caractérisée en ce qu'elle comprend une quantité efficace de 2% à 5% en poids d'un extrait selon l'une des revendications 1 à 3.
5. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un autre agent actif.
6. Utilisation d'une quantité efficace d'un extrait selon l'une des revendications 1 à 3, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique ou pharmaceutique selon l'une des revendications 4 ou 5.
7. Utilisation d'une quantité efficace d'un extrait selon l'une des revendications 1 à 3, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique ou pharmaceutique selon l'une des revendications 4 ou 5, la composition étant destinée à lutter de manière curative et/ou préventive contre les manifestations du vieillissement cutané.
8. Utilisation d'une quantité efficace d'un extrait selon l'une des revendications 1 à 3, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique ou pharmaceutique selon l'une des revendications 4 ou 5, la composition étant destinée à protéger la peau et/ou les phanères contre tous les types d'agressions extérieures.
9. Utilisation d'une quantité efficace d'un extrait selon l'une des revendications 1 à 3, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique ou pharmaceutique selon l'une des revendications 4 ou 5 pour produire un effet amincissement localisé après application sur la peau, et plus particulièrement pour réduire, éliminer ou prévenir les surcharges graisseuses sous-cutanées.
10. Procédé de traitement cosmétique de la peau destiné à augmenter la synthèse endogène de protéines SIRT dans les cellules de la peau, caractérisé par le fait que l'on applique sur la peau une composition contenant comme principe actif, au moins un extrait tel que défini selon l'une des revendications 1 à 3.
11. Procédé de soin cosmétique destiné à réduire, éliminer et/ou prévenir les surcharges graisseuses sous-cutanées ; et/ou destiné à lutter contre la cellulite ; et/ou à lutter contre le phénomène de peau d'orange, caractérisé en ce que l'on applique sur la peau une composition contenant, comme principe actif, au moins un extrait tel que défini selon l'une des revendications 1 à 3.
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