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WO2006112364A1 - 乳酸菌培養により得られる血圧低下剤 - Google Patents

乳酸菌培養により得られる血圧低下剤 Download PDF

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WO2006112364A1
WO2006112364A1 PCT/JP2006/307856 JP2006307856W WO2006112364A1 WO 2006112364 A1 WO2006112364 A1 WO 2006112364A1 JP 2006307856 W JP2006307856 W JP 2006307856W WO 2006112364 A1 WO2006112364 A1 WO 2006112364A1
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WO
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lactic acid
acid bacteria
blood pressure
culture
lowering agent
Prior art date
Application number
PCT/JP2006/307856
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Inventor
Keiichi Sadoyama
Takeshi Miyagi
Keiichiro Inafuku
Masaki Sakakibara
Tomohiro Hirahashi
Noritaka Yoshikawa
Original Assignee
Dainippon Ink And Chemicals, Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dainippon Ink And Chemicals, Inc. filed Critical Dainippon Ink And Chemicals, Inc.
Priority to JP2007526843A priority Critical patent/JP4762987B2/ja
Publication of WO2006112364A1 publication Critical patent/WO2006112364A1/ja

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    • A61K2035/11—Medicinal preparations comprising living procariotic cells

Definitions

  • Antihypertensive agent obtained by lactic acid bacteria culture
  • the present invention relates to an antihypertensive agent comprising a culture obtained by culturing lactic acid bacteria in a specific culture solution as an active ingredient.
  • Patent Document 3 a method of inoculating milk with lactobacilli
  • Patent Document 4 a method of inoculating milk products with enzymes and then lactic acid bacteria
  • Patent Document 5 a method of immersing rice bran or rice bran containing germ under certain conditions in water
  • Patent Document 1 Japanese Laid-Open Patent Publication No. 2004-081206
  • Patent Document 2 Japanese Patent Laid-Open No. 63-157963
  • Patent Document 3 PR No. 3172150
  • Patent Document 4 Japanese Patent Laid-Open No. 2001-120179
  • Patent Document 5 Patent 2590423
  • An object of the present invention is to provide an antihypertensive agent comprising, as an active ingredient, a lactic acid bacteria culture obtained by culturing lactic acid bacteria in a culture solution containing microalgae and lactic acid bacteria. Means for solving the problem
  • the present inventors maintain a microalgae and lactic acid bacteria in the presence of water, and obtain a lactic acid bacteria culture obtained by culturing the lactic acid bacteria in the mixture under various conditions.
  • a blood pressure lowering effect was tested, it was found that the culture had a very excellent action, and the present invention was completed.
  • the present invention provides an antihypertensive agent comprising a lactic acid bacterium culture obtained by culturing lactic acid bacteria in a culture solution containing microalgae and lactic acid bacteria as an active ingredient.
  • a lactic acid bacterium culture obtained by culturing lactic acid bacteria in a culture solution containing microalgae and lactic acid bacteria as an active ingredient.
  • a blood pressure-lowering agent containing as an active ingredient a lactic acid bacteria culture obtained by culturing lactic acid bacteria in a culture solution containing microalgae and lactic acid bacteria.
  • FIG. 1 is a graph showing a comparison of GABA amounts (mg / 100 g) of Example 1 and Example 2 up to a culture time of 24 hours.
  • FIG. 2 is a graph showing the rate of blood pressure increase at week X with reference to blood pressure at week 0. (Examination example)
  • microalgae used in the present invention examples include spirulina and chlorella.
  • Spirulina is a fine single-celled microorganism belonging to the genus Arthrospira and Spirulina, which has been included in cyanobacteria and has been collectively referred to as the genus Spirulina.
  • Arusurosubira 'platensis Ar throspira platensis
  • Anoresurosuhifu' Ma 3 r Shima Ar throspira platensis
  • Anoresurosuhifu' Ma 3 r Shima Ar throspira platensis
  • Anoresurosuhifu' Ma 3 r Shima Ar throspira platensis
  • Anoresurosuhifu' Ma 3 r Shima (Arthrospira maxima, Anoresu Rosupira-Geitoreri (Arthrospira geitleri), Arusurosupira-Saiamize (Arthros pira Siamese)
  • Spirulina ' Mayer Spirulina major
  • Spirulina Sabusarusa Spirulina subsalsa
  • Gatorelli Alsrosvilla Siamese are preferred.
  • chlorella used in the present invention examples include the following.
  • Chlorella is a green algae (Chlorophyceae), Chlorella genus (Chlorella) algae (Chlorella) (Chlorella), is easy to obtain and excellent in safety.
  • Chlorella 'Bulgaris C. Examples include 'Chlorella regularis', chlorella 'Pyrenoidosa', and chlorella 'C. ellipsidea'.
  • microalgae examples include raw alga bodies, dried alga bodies, and processed alga bodies processed by a method such as mechanical treatment.
  • the raw algal bodies can be obtained, for example, by harvesting spirulina or chlorella cultured in water by a method such as centrifugation or filtration.
  • Raw algal cells can be used as they are after harvesting, but it is preferable to wash them with water or saline!
  • Examples of the dried alga body include those obtained by freeze-drying or spray-drying the raw alga body obtained by the above method.
  • the processed alga body treated by the mechanical treatment method can be obtained, for example, by subjecting raw alga bodies to ultrasonic treatment or mechanical treatment such as homogenization.
  • the mechanically processed alga body may be subjected to a drying treatment thereafter.
  • the algal bodies used in the present invention are preferably raw algal bodies because they retain more active ingredients of microalgae, and are also preferable in terms of taste and smell.
  • Raw alga bodies are usually suspended in water depending on the degree of water removal during harvesting, pastes with less water content than suspended ones, There is a cake-like state in which the water content is less than that in the pasty state.
  • Spirulina and chlorella are preferably used in the form of suspended alga bodies (hereinafter sometimes referred to as suspension).
  • suspension when using dried algae or processed algae, it may be in a dry state, or it may be a suspension, paste or cake like raw algae by adding water. .
  • Microalgae should not be heat sterilized so as not to impair their active ingredients. Although it is preferable, what was heat-sterilized as needed can also be used.
  • spirulina or chlorella may be used alone, or a mixture of spirulina and chlorella may be used.
  • Lactic acid bacteria have long been used to process many foods, including fermented dairy products, brewed products, vegetables, and pickles of fruits, for the purpose of storing and seasoning foods.
  • any lactic acid bacteria that can be used for food can be used without limitation.
  • Lactic acid bacteria are classified into milk-based lactic acid bacteria, plant-based lactic acid bacteria, intestinal lactic acid bacteria, and lactic acid bacteria derived from natural lakes where algae grow, depending on the growth environment.
  • Lactic acid bacteria are classified into mesophilic bacteria, thermophilic bacteria, salt-tolerant bacteria, and the like depending on the optimal growth conditions, but bacteria having any property may be used.
  • the lactic acid bacteria used in the present invention are taxonomically classified as Lactobacillus, Pediococcus, Tetragenococcus, Carnobacterium, and Vagococcus.
  • Genus Leuconostoc genus, Weissella genus, Oenococcus genus, Atopobium genus, Streptococcus genus (official name is Enterococcus genus, and in this document, Enterococcus genus) ), Enterococcus
  • the lactic acid bacteria used in the present invention are preferably lactic acid bacteria belonging to the genus Lactobacillus, Ratatococcus, or Enterococcus.
  • Lactic acid bacteria may be used alone, or two or more bacteria may be mixed and used. . In the culture process described later, the same type of bacteria may be inoculated and cultured in two or more stages, or different bacterial species may be inoculated and cultured in two or more stages. Lactic acid bacteria can be stored after culturing in an agar medium or liquid medium, and then stored by refrigeration storage, frozen storage, dry storage, or other storage methods. It is used to inoculate and culture in a liquid medium (hereinafter abbreviated as “seed culture medium”). The ability to produce flavors such as acetaldehyde and diacetyl, which have a fast growth rate of lactic acid bacteria, and the ability to produce organic acids.
  • the medium used for cultivating the seed culture is not particularly limited as long as the lactic acid bacterium to be used can grow, but in general, as a liquid medium for culturing lactic acid bacteria, for example, MRS medium devised by Man, Rogosa, Sharpe ( And a whey medium and a skim milk medium using milk components.
  • a stored lactic acid bacterium is added to the liquid medium, and maintained in an aerobic state or an anaerobic state suitable for the lactic acid bacterium to be cultured, and left or stirred. Cultivate.
  • the lactic acid bacteria culture is prepared by culturing lactic acid bacteria in a culture solution containing microalgae and lactic acid bacteria.
  • the culture solution containing microalgae and lactic acid bacteria is not particularly limited as long as it contains microalgae and can grow lactic acid bacteria.
  • a suspension in which microalgae is suspended in water It can be obtained by a method of collecting lactic acid bacteria in the liquid, a moist liquid containing fine algae in water, a method of adding lactic acid bacteria to a paste, cake, etc., a method of adding the seed culture solution to the suspension, etc. Monkey.
  • (i) is preferred. Further, in (i), using a suspension of raw algal bodies as microalgae and using a culture solution, particularly a seed culture solution as lactic acid bacteria, is a culture of lactic acid bacteria. High performance and flavor production ability!
  • the algae suspension, paste, cake, and lactic acid bacteria culture solution contain water. If the culture solution containing microalgae and lactic acid bacteria is insufficient, add water to You may make it the state maintained underwater.
  • the water is preferably sterilized water.
  • the content of the microalgae in the culture solution containing the microalgae and lactic acid bacteria is 0.1 as dry cells from the viewpoint of improving efficiency in the harvesting and drying steps after lactic acid bacterium culture described below. -30% by mass is preferred 1-20% by mass is more preferred.
  • Cultivation of lactic acid bacteria in a culture solution containing microalgae and lactic acid bacteria may be stationary culture, or may be agitation culture with propeller stirring if the culture solution is liquid. Further, the culture system may be anaerobic or aerobic so as to be suitable for the growth of the lactobacillus used.
  • the amount of lactic acid bacteria used may be the number of bacteria in which lactic acid bacteria grow, but from the viewpoint of improving the suppression of the propagation of contaminating bacteria, the number of lactic acid bacteria at the start of cultivation of lactic acid bacteria is the algae in terms of solid content. It is preferred that there are 11 lC lO per class lg, more preferably 10 6 to 10 1 G.
  • the pH of the culture solution containing microalgae and lactic acid bacteria is a force that changes during the cultivation process due to acids such as lactic acid produced by culturing lactic acid bacteria.
  • the pH force at the start of culture is preferably 4.0 to 9.0. Mashima 5.0 to 7.0 is more preferable.
  • the culture temperature may be any temperature as long as the lactic acid bacteria can grow, but 4-45 ° C is preferred because it is suitable for the growth of lactic acid bacteria and the active ingredients of microalgae are not impaired. ° C is more preferred.
  • the culture time is sufficient to proliferate lactic acid bacteria and exert an excellent blood pressure lowering effect.
  • 9 to: L00 time is preferred 15 to 72 hours is more preferred 18 to 50 hours is particularly preferred It is preferable.
  • the number of lactic acid bacteria after culturing exerts an excellent blood pressure lowering effect, is sufficient to suppress the increase of other contaminants, reduces the taste and odor peculiar to microalgae, and exerts a blood pressure lowering effect. It is preferable that the number of lactic acid bacteria at the beginning is 10 to: L000 times.
  • a basic compound such as potassium hydroxide or potassium hydroxide may be added during the cultivation to adjust the pH.
  • Milk to produce It is preferable that the pH of the culture solution containing microalgae and lactic acid bacteria is lowered to around 5.0 due to acid or the like because it reduces impurities and exerts a blood pressure lowering effect.
  • the addition of sugar to a culture solution containing microalgae and lactic acid bacteria can suppress the growth of contaminating bacteria, and the smell and taste peculiar to microalgae. Is preferable because it can be further reduced. This inhibitory effect on the growth of germs is particularly prominent when the germs are easy to propagate as microalgae / and dried algae are used.
  • Examples of the saccharide include monosaccharides, oligosaccharides, and polysaccharides.
  • monosaccharides include glucose, galactose, mannose, fructose, ribose, xylose and the like.
  • Examples of the oligosaccharide include disaccharides such as sucrose and maltose, galatato-oligosaccharide, furato-oligosaccharide, soybean oligosaccharide, xylo-oligosaccharide, and raffinose.
  • Examples of the polysaccharide include amylose, amylopectin, cellulose, dalicogen, j8-glucan, mucopolysaccharide and the like.
  • an oligosaccharide is preferable, and among them, a galato-oligosaccharide and a xylo-oligosaccharide are preferable.
  • saccharides there are no particular restrictions on the method of adding saccharides.
  • microalgae, lactic acid bacteria, and saccharides may be mixed, or microalgae added with saccharides in advance and lactic acid bacteria may be mixed. Lactic acid bacteria added with sugars and microalgae may be mixed.
  • the saccharide may be solid, but it is preferable to use a saccharide previously dissolved in water or the like to form an aqueous solution.
  • the amount of saccharide used is preferably 0.05 to 20% by mass, more preferably 0.1 to 10% by mass, based on the total of the culture solution containing microalgae and lactic acid bacteria and the saccharide.
  • the lactic acid bacteria culture obtained as described above can be used as it is as a lactic acid bacteria beverage or a food supplemented with lactic acid bacteria.
  • the lactic acid bacteria culture obtained above has a characteristic that it has a component composition different from that of the raw powder of microalgae before cultivation.
  • the content per algal body lOOg is 10 times or more compared to that before culturing, and free amino acids
  • GABA ⁇ -aminobutyric acid
  • the amount of protein contained in the bulk powder before culturing treated with a separation membrane with a molecular weight of 10,000 and lactic acid bacteria culture is measured by the BCA (Bicincho ninic Acid) method, which is a general method for measuring protein amount. did.
  • BCA Bosseto ninic Acid
  • the component with a molecular weight of 10,000 or less increases about twice as much after 24 hours of culture compared to before the start of culture, and the high molecular weight protein is low. It was turned into a molecule and found to be a component with excellent absorbability.
  • the lactic acid culture obtained by the present invention is characterized by containing GABA at a high concentration as compared with the conventional lactic acid bacteria culture similar to the present invention.
  • GABA GABA
  • the lactic acid culture obtained by the present invention is characterized by containing GABA at a high concentration as compared with the conventional lactic acid bacteria culture similar to the present invention.
  • Patent Document 3 when L. lactis YIT 2027 is used alone in milk, it is 15 mg Zl00 mL after 3 days of culture, and mixed culture with L. casei YIT 9029 There is a description that increases to 38 mgZ 1 OOmL.
  • GABA can be produced at a concentration of lOOmgZlOOmL or more in a culture time of 24 hours, which is extremely excellent as a GABA production method.
  • the antihypertensive agent of the present invention comprises the lactic acid bacteria culture obtained above as an active ingredient.
  • the blood pressure lowering agent of the present invention can be prepared in the form of tablets such as naked tablets, film-coated tablets, sugar-coated tablets, enteric tablets, multilayer tablets, granules, powders, liquids and the like. Preparation into these forms may be carried out by suspending, drying, pulverizing, molding, etc. in the lactic acid bacteria culture according to a conventional method according to each form. In preparation for each form, binders, surfactants, thickeners, fillers, disintegrants, excipients and the like that are generally used for the preparation can be used. In addition, a strong lactic acid bacteria culture can be used as it is as a lactic acid bacteria beverage or a lactic acid bacteria additive, or the lactic acid bacteria culture can be added to other foods.
  • drying treatment when the drying treatment is performed, it is usually performed so that the moisture content of the algal bodies is 4 to 7% by mass, but a treatment capable of maintaining the number of lactic acid bacteria is preferable.
  • Preferable drying methods include, for example, freeze-drying method and spray-drying method. A drying method is more preferable.
  • the drying temperature during drying treatment increases the production efficiency as the exhaust air temperature is higher, but the quality of microalgae is good and the number of lactic acid bacteria does not decrease, so the product temperature is 30-70 ° C. It is preferable that the drying treatment is performed in a range of 40 to 60 ° C.
  • the product temperature refers to the sample temperature after drying.
  • the powder obtained above may be tableted by a known tableting method.
  • the powder obtained above may be dispersed in water, or the cultured lactic acid bacteria culture can be prepared as it is or diluted with water or the like.
  • the intake of the blood pressure lowering agent of the present invention to the patient is preferably determined in consideration of the patient's sex, age, symptom, etc., but is generally 0.2 to : LOg / day, especially 0.5 to 8 g / day is preferred. These may be taken together at one time, or the daily intake may be taken in several parts.
  • the inventors of the present invention confirmed the effect on hypertension, which is considered to be a major cause of various lifestyle-related diseases, using experimental animals. That is, spontaneously hypertensive rats (SHR strain) were mixed with spirulina lactic acid bacteria culture and chlorella lactic acid bacteria culture in solid feed, and after free intake, blood pressure was measured to confirm blood pressure lowering action.
  • SHR strain spontaneously hypertensive rats
  • a group fed with solid feed was set as the target group, and in addition, as a group fed with the test substance, a group of spirulina powder (test substance 1) mixed with the solid feed, spirulina lactic acid bacteria culture
  • test substance 1 a group of spirulina powder
  • test substance 2 a group of spirulina powder
  • test substance 3 a group of chlorella bulk powder
  • test substance 4 the group in which the chlorella lactic acid bacteria culture
  • the group fed with the spirulina lactic acid bacteria culture or the chlorella lactic acid bacteria culture has a stronger blood pressure lowering effect than the control group, the spirulina bulk powder, and the group fed with the chlorella bulk powder. (See test example).
  • mice 10 male and 10 female ddY-N mice (body weight 20-26 g) were used.
  • the administration method is that the culture can be finely pulverized and suspended in a CMC 1% solution. A suspension with a concentration of 10% by mass was orally gavaged once. The culture was observed for 1 week after administration. LD for both males and females is over 6, OOOmg / kg, confirming food safety.
  • a 2500 L culture tank was charged with 25 kg of galactooligosaccharide and 825 kg of tap water. After heat sterilization, 100 kg of spirulina powder was added and inoculated with 50 kg of a seed culture solution of lactic acid bacteria Lactobacillus brevis. Lactic acid bacteria were cultured with aeration propeller stirring at 37 ° C for 72 hours. The culture solution was sampled at culture times of 0, 9, 12, 15, 18, 24, 48, and 72 hours, and the number of lactic acid bacteria was measured.
  • the number of lactic acid bacteria was measured by the following procedure. Lactic acid bacteria culture solution 1. Oml was suspended in 19ml of phosphate buffered saline to prepare a suspension. The suspension further with phosphate-buffered saline, 10x, 10 twice, 10 three times, 10 4 times, 10 5 times, 10 6 times, and sample diluent was diluted to 10 7 times Got. MRS agar medium prepared by adding 15 g of agar to 1000 ml of MRS medium (Merck Cat. No. 10661) is smeared with 0.1 ml of diluent and cultured at 35 ° C for 48 hours. did. Using an agar medium in which 30 to 300 colonies of lactic acid bacteria were confirmed, the number of colonies in the agar medium was measured, and the number obtained by multiplying this number by the dilution factor was taken as the number of lactic acid bacteria.
  • each sampled culture solution was spray-dried and subjected to amino acid analysis.
  • Each 200 mg of Spirulina lactic acid bacteria culture was added to 5 mL of water, suspended, and left for 30 minutes.
  • the supernatant and insoluble material were separated by a centrifuge (3000 rpm, 10 minutes), and 1 mL of the supernatant was collected.
  • 1 mL of 10% (w / v) triclonal acetic acid solution was added and centrifuged.
  • the obtained supernatant was subjected to HPLC analysis by the 0-phthalaldehyde method (post-column detection) to measure the amount of amino acids.
  • Table 1 shows the amounts of L-glutamic acid, GABA, and lactic acid bacteria in the culture at each culture time.
  • lactic acid bacteria were cultured in the same manner as in Example 1 except that a 50% (w / w) lactic acid solution was used to maintain the pH at 5.0 and the culture temperature at 30 ° C.
  • the culture solution was sampled at culture times of 0, 9, 12, 15, 18, 21, and 24 hours, and the amount of GABA (mg / lOOg) was measured.
  • GABA amount (mg / lOOg) was measured in the same manner as in Example 2 except that xylo-oligosaccharide was used instead of galatato-oligosaccharide.
  • Example 1 A comparison of GABA amounts (mg / lOOg) between Example 1 and Example 2 up to a culture time of 24 hours is shown in FIG. 1, and the results of Example 2 and Example 3 are shown in Table 2.
  • Example 1 except that chlorella was used instead of Spirulina, a lactic acid bacteria culture was prepared in the same manner as in Example 1, and the number of lactic acid bacteria and the amount of amino acids were measured. Table 3 shows the amounts of L-glutamic acid, GABA, and lactic acid bacteria in the culture at each culture time.
  • Target group Solid feed MF (Made by Oriental Yeast Co., Ltd.)
  • Test substance 1 Spirulina bulk powder
  • Test substance 2 Lactic acid fermented spirulina (Lactic acid bacteria culture obtained in Example 1)
  • Test substance 3 Chlorella bulk powder
  • Test substance 4 Lactic acid fermentation chlorella (Lactic acid bacteria culture obtained in Example 4) (Test substance preparation and administration) Preparation method: Solid feed MF was mixed with 15% each of test substances 1-2.
  • Blood pressure was measured by the tail-cuff method, which measures blood pressure in the tail artery noninvasively. The measurement was performed before the test substance administration (week 7) and every week after administration. The blood pressure was measured at 8 points in total, 3 times each, and the average value was taken as the measurement value. Prior to the test, it was confirmed that the average value of the maximum blood pressure of the test animals was 160 mmHg or more on average for each animal.
  • Test substance 1 7 0 1 7 5 1 9 0 2 1 0 2 1 0
  • Rate of increase in blood pressure (%) (blood pressure at week X, blood pressure at week 0) I (blood pressure at week 0) X 100 (%) [3 ⁇ 45]
  • the spirulina lactic acid bacteria culture and the chlorella lactic acid bacteria culture were confirmed to have an effect of suppressing an increase in blood pressure as compared with the spirulina bulk powder and the chlorella bulk powder before culture, respectively.
  • the blood pressure increase of about 30% is observed in the subject group, whereas in spirulina and chlorella, the increase rate is suppressed to 20 to 25%.
  • the lactic acid fermented product of Chlorella and chlorella it is apparent that the lactic acid fermented product according to the present invention is suppressed to about 12 to 15%.
  • the present invention can be used in fields such as the pharmaceutical industry, health food, and food.

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Description

明 細 書
乳酸菌培養により得られる血圧低下剤
技術分野
[0001] 本発明は、特定の培養液中で乳酸菌を培養した培養物を有効成分とする血圧低 下剤に関する。
背景技術
[0002] スピルリナ又はクロレラを含む食品は、従来、緑黄色野菜に特有の栄養成分や、固 有の栄養成分を豊富に含むことから、通常の食生活において不足しがちな栄養成分 を手軽に摂取できる食品として利用されている。最近、スピルリナ又はクロレラ中で乳 酸菌を培養してスピルリナやクロレラの特有の匂いや風味を改善した食品が提案さ れて ヽる（特許文献 1及び 2参照)。
ところで、特定の健康食品が高血圧症に有効であることがいわれており、乳類に乳 酸菌を接種する方法 (特許文献 3)、乳製品に酵素、次いで乳酸菌を接種する方法（ 特許文献 4)、或いは、糠、胚芽を含む米糠等を一定条件下で水に浸漬する方法 (特 許文献 5)によるものが知られている。
しかし、スピルリナ又はクロレラと乳酸菌とからなる混合体を、水の存在下に維持し、 乳酸菌培養を行うことにより得られる培養物が健康食品として用いられるものの、高 血圧症に有効であることにつ!/、てはまったく知られて 、な！/、。
特許文献 1：特開 2004— 081206号広報
特許文献 2：特開昭 63— 157963号公報
特許文献 3：特許 3172150号広報
特許文献 4：特開 2001— 120179公報
特許文献 5：特許 2590423号広報
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0003] 本発明の課題は、微細藻類と乳酸菌とを含有する培養液中で、乳酸菌を培養し て得られる乳酸菌培養物を有効成分とする血圧低下剤を提供することにある。 課題を解決するための手段
[0004] 本発明者らは、上記課題を解決するため、微細藻類と乳酸菌とを、水の存在下に 維持し、該混合体中の乳酸菌を種々の条件により培養して得られる乳酸菌培養物に 対して、血圧低下作用について試験を行ったところ、該培養物は、非常に優れた作 用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
[0005] すなわち、本発明は、微細藻類と乳酸菌とを含有する培養液中で、乳酸菌を培養 して得られる乳酸菌培養物を有効成分とする血圧低下剤を提供するものである。 発明の効果
[0006] 本発明によれば、微細藻類と乳酸菌とを含有する培養液中で、乳酸菌を培養して 得られる乳酸菌培養物を有効成分とする血圧低下剤を得ることができる。
図面の簡単な説明
[0007] [図 1]図 1は、培養時間 24時間までの実施例 1及び実施例 2の GABA量 (mg/100 g) の比較を示す図である。
[図 2]図 2は、 0週目の血圧を基準とした X週目の血圧上昇率を示す図である。（試験 例）
発明を実施するための最良の形態
[0008] 以下に、本発明の内容を詳細に説明する。
本願発明で用いる微細藻類としては、スピルリナ、クロレラなどが挙げられる。
本発明で用 、られるスピルリナとしては、例えば以下のものが挙げられる。 スピルリナ（Spirulina)とは、藍藻類（Cyanobacteria)に包含され、従来一括してス ピルリナ属と呼称されて ヽたァルスロスピラ属（Arthrospira)及びスピルリナ属（Spir ulina)に属する微細な単細胞微生物であり、例えばァルスロスビラ 'プラテンシス (Ar throspira platensis)、ァノレスロスヒフ'マ3 rシマ (Arthrospira maxima 、ァノレス ロスピラ ·ゲイトレリ（Arthrospira geitleri)、ァルスロスピラ ·サイアミーゼ（Arthros pira Siamese)、スピルリナ 'メイヤー（Spirulina major)、スピルリナ ·サブサルサ（ Spirulina subsalsa)、等が挙げられる力 中でも、人工的に培養でき、入手が容易 なことから、ァルスロスピラ'プラテンシス、ァルスロスピラ'マキシマ、ァルスロスピラ' ゲイトレリ、ァルスロスビラ ·サイアミーゼが好まし 、。
[0009] 本発明で用いられるクロレラとしては、例えば以下のものが挙げられる。
クロレラ（Chlorella)とは、緑藻類（Chlorophyceae)、クロレラ属 (Chlorella)の藻 類であり、入手が容易で、安全性に優れている点で、例えば、クロレラ 'ブルガリス (C. vulgaris)、クロレラ 'レギユラリス（Chlorella regularis)、クロレラ'ピレノイドーサ (C. pyrenoidosa)、クロレラ 'エリプソイデア (C. ellipsidea)等が挙げられる。
[0010] これらの微細藻類は、従来食品として広く用いられてきたものであり、安全性につい て、問題のないことが確認されている。
これらの微細藻類としては、生の藻体、乾燥藻体、及び機械的処理等の方法によ り処理した藻体処理物等が挙げられる。
生の藻体は、例えば、水中で培養されたスピルリナ、クロレラを遠心分離、濾過等の 方法により収穫して得られる。生の藻体は、培養槽力 収穫後そのままの状態で使用 することもできるが、水もしくは生理食塩水で洗浄するのが好まし!/ヽ。
乾燥藻体は、例えば、前記方法で得られた生の藻体を凍結乾燥処理やスプレー乾 燥処理したもの等が挙げられる。
機械的処理の方法により処理した藻体処理物は、例えば、生の藻体を超音波照射 処理や、ホモゲナイズ等の機械処理を行うことにより得られる。藻体の機械的処理物 は、その後に乾燥処理を施しても良い。
[0011] 本発明で用いられる藻体としては、生の藻体であることが、微細藻類の有効成分を より保持していることから、また、味、臭いの点からも、好ましい。
生の藻体は、通常、収穫する際の水の除去程度により、水に懸濁している懸濁状の ものや、懸濁状のものに比べ水の含有量が少ないペースト状のものや、ペースト状の ものに比べ水の含有量が少ないケーキ状の状態のものがある力 いずれの状態のも のでも使用できる。スピルリナ、クロレラは、懸濁状にした藻体 (以後、懸濁液という場 合がある。）を用いるのが好ましい。また、乾燥藻体や藻体処理物を用いる場合は、 乾燥している状態でも良いし、水を加えて、生の藻体のように懸濁状やペースト状や ケーキ状にしたものでも良い。
[0012] 微細藻類は、それらの有する有効成分を損なわないためには加熱殺菌しない方が 好ましいが、必要に応じて加熱殺菌したものを用いることもできる。
ここで、微細藻類は、スピルリナ、又はクロレラを単独で用いても、スピルリナとクロレ ラの混合物を用いてもどちらでもよい。
[0013] 次に、乳酸菌について説明する。
乳酸菌は、古来、食品の保蔵と調味を目的に発酵乳製品、醸造製品、野菜，果実 の漬物など多くの食品の加工に利用されている。本発明で用いる乳酸菌としては、食 用として利用できる乳酸菌であれば制限無く用いることができる。乳酸菌としては、由 来する生育環境により乳系乳酸菌、植物系乳酸菌、腸管系乳酸菌や、藻類の生育 する自然湖に由来する乳酸菌等に分類される。また乳酸菌は、その生育至適条件に より中温性菌、高温性菌、耐塩性菌等にも分類されるが、いずれの性質を有する菌 でも良い。
[0014] 本発明で用いる乳酸菌としては、分類学上、ラクトバチルス（Lactobacillus)属、ぺ ティォコッカス (Pediococcus)属、テトラゲノコッカス (Tetragenococcus)属、カノレノ ノ クテリゥム (Carnobacterium)属、ノ ゴコッカス (Vagococcus)属、ロイコノストック (Leuconostoc)属、ワイセラ (Weissella)属、ォエノコッカス (Oenococcus)属、アト ポビゥム（Atopobium)属、ストレプトコッカス（Streptococcus)属（正式名はェンテ ロコッカス属、本明細書においてはェンテロコッカス属に包含する）、ェンテロコッカス
(Enterococcus)属、フクトコッカス (Lactococcus)属、ァエロコッカス (Aerococcu s)属、ァロイォコッカス (Alloiococcus)属、メリソコッカス (Melissococcus)属、ビフ イドバタテリゥム（Bifidobacterium)属等が挙げられ、更に、例えばラクトバチルス デルブルエキ（Lactobacillus delbrueckii)、ラクトバチルス プランタルム（Lacto bacillus plantarum)、フクトノくチノレス ァシドフイノレス (Lactobacillus acidophil us)、ラタトバチルス ブレビス（Lactobacillus brevis)、ラタトコッカス ラクテイス（L actococcus lactis)、ロイコノストック エスピー (Leuconostoc sp. )、ェンァロコ ッカス カセリフラブス（Enterococcus casseliflavus)等の種が挙げられる。本発 明に用いられる乳酸菌としては、ラクトバチルス属、ラタトコッカス属、ェンテロコッカス 属に属する乳酸菌が好ましい。
[0015] 乳酸菌は、単独種で使用しても良いし、 2種類以上の菌を混合して使用しても良い 。また、後述する培養工程において、同じ種類の菌を 2段階以上に分けて植菌して 培養しても良いし、異なった菌種を 2段階以上に分けて植菌し培養しても良い。 乳酸菌は、寒天培地や液体培地で培養後、冷蔵保存、凍結保存、乾燥保存等の 保存方法により保存してぉ 、たものを用いても良 、が、これらの保存してぉ 、た乳酸 菌を液体培地に植菌して培養したもの（以下、種培養液と略記する。）を用いるのが 乳酸菌の増殖速度が速ぐァセトアルデヒド、ジァセチル等のフレーバー類の産生能 、有機酸産生能等の活性が高いことから好ましい。種培養液を培養するのに用いる 培地は、用いる乳酸菌が生育可能な培地であれば良く制限はないが、一般に乳酸 菌を培養する液体培地として例えば、 Man、 Rogosa、 Sharpeの考案した MRS培地 (メルク社製)、及び牛乳成分を利用したホエー培地、脱脂乳培地等の培地が挙げら れる。
[0016] 種培養液を調製するには通常、前記の液体培地に、保存してある乳酸菌を添加し 、培養する乳酸菌に適応する好気状態または嫌気状態に維持し、静置または攪拌し て、培養すれば良い。
[0017] 次に、本発明に用いられる乳酸菌培養物の調製方法について説明する。
乳酸菌培養物は、微細藻類と乳酸菌とを含有する培養液中で乳酸菌を培養するこ とにより調製される。ここで、微細藻類と乳酸菌とを含有する培養液は、微細藻類を含 有し、乳酸菌を増殖させ得るものであれば特に制限はないが、例えば、水に微細藻 類を懸濁した懸濁液に乳酸菌をカ卩える方法、水に微細藻類をカ卩えた湿潤液、ペース ト、ケーキ等に乳酸菌を加える方法、上記懸濁液に上記種培養液を加える方法等に より得ることがでさる。
より具体的には、以下に例示する方法により得ることができる。（i)生の藻体や乾燥 させた藻体の懸濁液、ペーストに乳酸菌の培養液や乾燥状態の乳酸菌を添加する。 (ii)生の藻体や乾燥させた藻体のケーキに、乳酸菌の培養液を添加する。（iii)乾燥 させた藻体に湿潤状態になる量の乳酸菌の培養液を添加する。
[0018] これらの中でも、 (i)が好ましぐ更に (i)において微細藻類として生の藻体の懸濁液 を用い、乳酸菌として培養液、特に種培養液を用いるのが、乳酸菌の培養能とフレー バー産生能が高!、ことから好ま 、。 前記藻体の懸濁液やペーストやケーキ、乳酸菌の培養液は、水を含有している力 微細藻類と乳酸菌とを含有する培養液が、水が足りないときは水を加え、湿潤下や 水中に維持する状態にしても良い。水は、滅菌水を用いるのが好ましい。
[0019] 微細藻類と乳酸菌とを含有する培養液中の微細藻類の含有量は、後述する乳酸 菌培養後の収穫工程、乾燥工程で効率を良好にする観点から、乾燥菌体として 0. 1 〜30質量％が好ましぐ 1〜20質量％がより好ましい。
微細藻類と乳酸菌とを含有する培養液中での乳酸菌の培養は、静置培養でも良い し、該培養液が液体であればプロペラ攪拌による攪拌培養でも良い。また、用いる乳 酸菌の生育に適するように、培養する系を嫌気状態にしても良いし、好気状態にして も良い。
[0020] 乳酸菌の使用量は、乳酸菌が増殖する菌数であれば良いが、夾雑菌の繁殖の抑 制を良好にする観点から、乳酸菌の培養を開始する際の乳酸菌数が固形分換算藻 類 lgあたり lC lO11個であるのが好ましぐ 106〜101G個であるのがより好ましい。 微細藻類と乳酸菌とを含有する培養液の pHは、乳酸菌の培養により生成する乳酸 などの酸により培養の過程で変化する力 培養開始時の pH力 4. 0〜9. 0であるの が好ましぐ 5. 0〜7. 0がより好ましい。
培養温度は、乳酸菌が増殖可能な温度ならば何れでもよいが、乳酸菌の増殖に好 適なこと、微細藻類の有効成分が損なわれないことから、 4〜45°Cが好ましぐ 20〜 40°Cがより好ましい。
[0021] 培養時間は、乳酸菌を十分増殖させ、優れた血圧低下作用を発揮させるため、例 えば、 9〜： L00時間が好ましぐ 15〜72時間がより好ましぐ 18〜50時間が特に好 ましい。
培養後の乳酸菌数は、優れた血圧低下作用を発揮させ、他の夾雑菌の増加抑制 が十分で、微細藻類に特有の味と匂いを良好に減少させるとともに血圧低下作用を 発揮させるため、培養開始時の乳酸菌の数の 10〜： L000倍に増加しているのが好ま しい。
また、乳酸菌の増殖至適 pHを維持するため、培養中に水酸ィ匕カリウム、水酸化力 ルシゥム等の塩基性ィ匕合物を添加して pHを調整してもよ 、が、乳酸菌が生成する乳 酸等により、微細藻類と乳酸菌とを含有する培養液の pHが 5. 0付近まで低下してい ることが、夾雑菌を低下させるとともに血圧低下作用を発揮させるため、好ましい。
[0022] 本発明にお 、ては、微細藻類と乳酸菌とを含有する培養液中に糖を加えておくこと 力 夾雑菌の生育を抑制することができ、また、微細藻類特有の臭いと味をより減少 させることができるので好ましい。この夾雑菌の生育の抑制効果は、微細藻類として 夾雑菌が繁殖しやす!/、乾燥藻体を用いた時に特に顕著である。
前記糖類としては、例えば、単糖類、オリゴ糖類、多糖類等が挙げられる。単糖類と しては、例えば、グルコース、ガラクトース、マンノース、フルクトース、リボース、キシロ ース等が挙げられる。オリゴ糖類としては、例えば、スクロース、マルトース等の二糖 類ゃガラタトオリゴ糖、フラタトオリゴ糖、大豆オリゴ糖、キシロオリゴ糖、ラフイノース等 が挙げられる。多糖類としては、例えば、アミロース、アミロぺクチン、セルロース、ダリ コーゲン、 j8—グルカン、ムコ多糖等が挙げられる。糖類としては、オリゴ糖が好ましく 、中でも、ガラタトオリゴ糖、キシロオリゴ糖が好ましい。
[0023] 糖類の添加方法には特に制限は無ぐ例えば、微細藻類と乳酸菌と糖類とを混合 しても良いし、予め糖類を添加した微細藻類と乳酸菌とを混合しても良いし、予め糖 類を添加した乳酸菌と微細藻類とを混合しても良い。また、糖類は固形のものを使用 しても良いが、予め、水等に溶解して水溶液としたものを用いるのが好ましい。
糖類の使用量としては、微細藻類と乳酸菌とを含有する培養液と糖類の合計に対 して 0. 05〜20質量％が好ましぐ 0. 1〜10質量％がより好ましい。
[0024] かかる乳酸菌培養物の調製過程で生成する乳酸、酢酸等の有機酸類、バクテリオ シン類等の抗菌作用により、他の夾雑細菌は減少し、乳酸菌が優越種となる。さらに 乳酸菌の生成するァセトアルデヒド、ジァセチル等のフレーバー類により、微細藻類 特有の臭 、と味が低下し、食品に利用し易 、香味となる。
[0025] 上記で得られた乳酸菌培養物は、そのまま乳酸菌飲料、乳酸菌添加食品として使 用することも出来る。
上記で得られた乳酸菌培養物は、培養前の微細藻類の原末とは異なる成分組成 を有する特徴がある。
例えば、 24時間培養後の培養物の遊離アミノ酸量に関しては、プロリン、システィ ン、パリン、ロイシン、イソロイシン、 γ—ァミノ酪酸（以下、「GABA」と略記）、リジン、 ヒスチジン等が、培養前に比べて、藻体 lOOgあたりの含有量が 10倍以上となり、遊 離アミノ酸総量も 2倍以上に増加する特徴を有する。
また、分子量 10, 000の分離膜で処理を行った培養前の原末、並びに乳酸菌培養 物の含有するタンパク質量を、タンパク質量の一般的な測定法である BCA (Bicincho ninic Acid)法により測定した。その結果、例えば、藻体としてスピルリナ原末を用いた 場合、分子量 10, 000以下の成分が、 24時間培養後では、培養開始前に比べて約 2倍に増加し、高分子量のタンパクが低分子化され、吸収性に優れた成分となってい ることが判明した。
また、本発明により得られる乳酸培養物は、従来の本発明に類似する乳酸菌培養 物に比較して、高濃度で GABAを含有することを特徴とする。例えば、前出の（特許 文献 3)には、乳類に、 L.ラクチス YIT 2027を単独で用いた場合、 3日間の培養 で 15mgZl00mLであり、 L.カゼィ YIT 9029と混合培養を行うことにより、 38m gZ 1 OOmLまで増加するとの記載がある。
しかし、本発明による方法によれば、 24時間の培養時間で、 lOOmgZlOOmL以 上の濃度での GABAの製造が可能となり、 GABA製造法として極めて優れて ヽるこ とが明らかである。
[0026] 本発明の血圧低下剤は、上記で得られた乳酸菌培養物を有効成分とするものであ る。本発明の血圧低下剤は、裸錠、フィルムコーティング錠、糖衣錠、腸溶錠、多層 錠等の錠剤、顆粒剤、粉末剤、液剤等の形態に調製することができる。これらの形態 への調製は、各形態に応じて常法に従い、乳酸菌培養物に懸濁、乾燥、粉砕、成型 等を行えばよい。各形態への調製にあたっては、その形態に調製するために一般的 に用いられる結着剤、界面活性剤、増粘剤、充填剤、崩壊剤、賦型剤等を用いること ができる。また、力かる乳酸菌培養物をそのまま乳酸菌飲料、乳酸菌添加物とするこ ともできるし、乳酸菌培養物を他の食品に添加することもできる。
[0027] 例えば、乾燥処理を行う場合、通常、藻体の水分含有率が 4〜7質量％になるよう に行うが、乳酸菌の菌数が保持できる処理が好ましい。好ましい乾燥方法としては、 例えば、凍結乾燥法、噴霧乾燥法等が挙げられるが、経済的であることから、噴霧乾 燥法がより好ましい。乾燥処理する際の乾燥温度は、排風温度が高温な程、生産効 率は上がるが、微細藻類の品質が良好で、乳酸菌数も低下しないことから、品温が 3 0〜70°Cとなる範囲で乾燥処理するのが好ましぐより好ましくは 40〜60°Cとなる範 囲である。尚、本発明において品温とは、乾燥後の試料温度をいうものとする。
[0028] 錠剤への調製は、例えば、上記で得られた粉末を、公知の打錠法によって打錠す ればよい。
液剤にする場合は、例えば上記で得られた粉末を水に分散させてもよいし、培養の 終了した乳酸菌培養物を、そのままあるいは水等で希釈して調製することができる。
[0029] 本発明の血圧低下剤の患者への摂取量は、患者の性別、年齢、症状等を考慮して 決定することが好ましいが、一般的に、乳酸菌培養物換算で、 0. 2〜： LOg/日、特に 0. 5〜8g/日が好ましい。これらは、 1度にまとめて摂取してもよいし、 1日摂取量を数 度に分けて摂取してもよい。
[0030] 次に、本発明の血圧低下剤の血圧低下作用について説明する。
本発明者らは、上記で得られた乳酸菌培養物に関して、種々の生活習慣病の主要 因と考えられている高血圧症に対する効果の確認を、実験動物を用いて行った。 即ち、高血圧自然発症ラット（SHR系）に、スピルリナ乳酸菌培養物、及びクロレラ 乳酸菌培養物を固形飼料に混餌させ、自由摂取を行った後に、血圧測定を行い、血 圧低下作用を確認した。実験群は、対象群として固形飼料を与えた群を設定し、そ の他に、被験物質を混餌した群として、スピルリナ原末 (被験物質 1)を固形飼料に混 餌した群、スピルリナ乳酸菌培養物 (被験物質 2)を固形飼料に混餌した群、クロレラ 原末 (被験物質 3)を固形飼料に混餌した群、クロレラ乳酸菌培養物 (被験物質 4)を 固形飼料に混餌した群を設定した。その結果、スピルリナ乳酸菌培養物又はクロレラ 乳酸菌培養物を混餌した群は、何れも、対照群、スピルリナ原末、及びクロレラ原末 を混餌した群に比較し、強い血圧低下作用を有することが明らかとなった (試験例参 照)。
[0031] なお、乳酸菌培養物の安全性確認のため、マウスによる急性毒性を調べた。マウス は、生後 5週令の ddY— N系マウス（体重 20〜26g)を雄、雌各 10頭使用した。投与 方法は、培養物を微粉砕し、 CMC1%溶液に懸濁して胃ゾンデによる投与可能最高 濃度 10質量％懸濁液を 1回、経口強制投与した。培養物を投与後、 1週間観察した 。雄、雌とも LD は、 6, OOOmg/kg以上であり、食品としての安全性が確認された
50
実施例
[0032] 次に実施例を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に 限定されるものではない。
[0033] (実施例 1) スピルリナを用いた乳酸菌培養物の調製（1)と乳酸菌数の測定
2500L容量培養槽にガラクトオリゴ糖 25kg、水道水 825kgを仕込み、加熱殺菌後 、スピルリナ原末 100kgを仕込み、乳酸菌ラクトバチルス ブレビスの種培養液 50kg を接種した。 37°C、 72時間、通気プロペラ撹拌して乳酸菌を培養した。培養時間 0、 9、 12、 15、 18、 24、 48、及び 72時間に培養液をサンプリングし、乳酸菌数を測定 した。
[0034] なお、乳酸菌数測定は、以下の手順で行った。乳酸菌培養液 1. Omlをリン酸緩衝 生理食塩水 19mlに懸濁し懸濁液を調整した。懸濁液をさらにリン酸緩衝生理食塩 水により、 10倍、 102倍、 103倍、 104倍、 105倍、 106倍、及び 107倍になるように希釈 して試料希釈液を得た。 1000mlの MRS培地（メルク社製 Cat.No.10661)に 15gの 寒天を添カ卩して作製した MRS寒天培地に、 0. 1mlの希釈液を塗沫し、 35°C、 48時 間培養した。乳酸菌のコロニーが 30〜300個確認できた寒天培地を用い、該寒天培 地のコロニー数を測定し、この数に希釈倍率を掛けて得られた数を乳酸菌のコ口- 一数とした。
[0035] (アミノ酸量の測定）
サンプリングした各培養液の一部を、噴霧乾燥してアミノ酸分析に供した。スピルリ ナの乳酸菌培養物各 200 mgを 5mLの水に添加後、懸濁させ、 30分間放置した。 遠心分離機 (3000rpm、 10分間）により、上清と不溶物に分離し、上清 lmLを採取 した。これに、 10% (w/v)トリクロ口酢酸溶液 lmLを添加し、遠心分離を行った。得ら れた上清について、 0-フタルアルデヒド法 (ポストカラム検出）により、 HPLC分析を行 い、アミノ酸量を測定した。
(HPLC条件） カラム：日立 # 4619 (4mm X 15cm)
温度： 60°C (ポストカラム反応時も同温度）
流速：溶離液； 0.4mL/min. 反応液； 0.5mL/min.
検出:蛍光検出器
各培養時間における培養物中の L グルタミン酸量、 GABA量、乳酸菌数を表 1に 示す。
[表 1]
Figure imgf000012_0001
(実施例 2) スピルリナを用いた乳酸菌培養物の調製 (2)
本実施例では、 50% (w/w)乳酸溶液で pHを 5. 0に、培養温度を 30°Cに保持し た以外は、実施例 1と同様にして、乳酸菌を培養した。培養時間 0、 9、 12、 15、 18、 21、 24時間に培養液をサンプリングし、 GABA量 (mg/lOOg)を測定した。
(実施例 3) スピルリナを用いた乳酸菌培養物の調製 (3)
本実施例では、ガラタトオリゴ糖の換わりにキシロオリゴ糖を用いる他は、実施例 2と 同様にして、 GABA量 (mg/lOOg)を測定した。
培養時間 24時間までの実施例 1と実施例 2の GABA量 (mg/lOOg)の比較を図 1に、実施例 2と実施例 3の結果を表 2に示す。
実施例 1〜3より、 pH及び培養温度を適宜選択することにより、短時間でより多くの GABA産生が可能となった。
[表 2] GABA量 （m g/l O O g )
Figure imgf000013_0001
[0037] (実施例 4) クロレラを用いた乳酸菌培養物の調製と乳酸菌数の測定
実施例 1において、スピルリナの代わりにクロレラを用いた以外は、実施例 1と同様 にして乳酸菌培養物を調製し、乳酸菌数、アミノ酸量を測定した。各培養時間におけ る培養物中の L グルタミン酸量、 GABA量、乳酸菌数を表 3に示す。
[0038] [表 3]
Figure imgf000013_0002
(試験例） 本発明の血圧低下剤による血圧低下作用の確認
本発明の血圧低下剤の血圧低下作用を明らかにするため、以下の実験動物を用 いた試験を行った。
(試験物質）
対象群：固形飼料 MF (オリエンタル酵母株式会社製）
被験物質 1:スピルリナ原末
被験物質 2：乳酸発酵スピルリナ (実施例 1で得られた乳酸菌培養物） 被験物質 3:クロレラ原末
被験物質 4：乳酸発酵クロレラ (実施例 4で得られた乳酸菌培養物） (被験物質の調整及び投与） 調整方法：固形飼料 MFに被験物質 1〜2をそれぞれ 15%混合した。
投与経路:経口
投与方法：自由摂取
投与容量:給餌量の 15%
投与期間: 8週間
試験動物
動物種、系統:ラット、 SHR(1群 8匹）
性別、搬入週齢:雄、 6週齢
馴化期間：搬入後約 1週間馴化を兼ねて飼育し、その期間の一般状態を観察した (血圧測定法）
血圧の測定は尾動脈の血圧を非観血的に測定する Tail-cuff法により行った。 測定方法は、試験物質の投与前 (7週目）、投与後 1週間毎の計 8ポイントで実施した 血圧の各ポイントでの測定は 3回ずつ実施し、その平均値を測定値とした。なお、試 験実施に先立ち供試動物の最高血圧の平均値が各動物とも平均160 mmHg以上 であることを確認し、試験を行った。
結果を表 4に示す。
[表 4] 被験物質 0週間 2週間後 4週間後 6週間後 8週間後 対象群 1 6 5 1 70 1 9 5 2 1 5 2 2 0 被験物質 1 6 5 1 7 0 1 9 0 2 0 0 2 0 5
1
被験物質 1 6 5 1 6 5 1 8 0 1 8 5 1 9 5
2
被験物質 1 7 0 1 7 5 1 9 0 2 1 0 2 1 0
3
被験物質 1 6 5 1 7 0 1 8 5 1 9 0 2 0 0
4 表 5及び図 2には、 0週間目の血圧を基準とした X週目の血圧上昇率を以下の式 にて評価した結果を示す。 血圧上昇率（％) = (X週目の血圧 0週目の血圧) I (0週目の血圧） X 100 (%) [¾5]
Figure imgf000015_0001
[0042] 本試験例より明らかなように、スピルリナ乳酸菌培養物及びクロレラ乳酸菌培 物 は、各々培養前のスピルリナ原末及びクロレラ原末に比較して、血圧上昇抑制効果 が確認された。
例えば、 6週間後においては、対象群では、約 30%の血圧上昇が見られるのに 対して、スピルリナ及びクロレラでは、その上昇率が 20〜25%に抑えられ、更には、 本発明のスピルリナ及びクロレラの乳酸発酵品においては、 12〜15%程度に抑制さ れることが明ら力となり、本発明に係る乳酸発酵品の血圧低下作用が確認された。 産業上の利用可能性
[0043] 本発明は、医薬品産業、健康食品、食品等の分野で利用が可能である。

Claims

請求の範囲
[I] 微細藻類と、乳酸菌とを含有する培養液中で、乳酸菌を培養して得られる乳酸菌 培養物を有効成分とすることを特徴とする血圧低下剤。
[2] 前記微細藻類が、スピルリナ、クロレラ、又はスピルリナ及びクロレラの混合物である 請求項 1記載の血圧低下剤。
[3] 前記乳酸菌が、ラクトバチルス属 に属する乳酸菌である請求項 1に記載の血圧低 下剤。
[4] 前記乳酸菌が、ラタトコッカス属に属する乳酸菌である請求項 1に記載の血圧低 下剤。
[5] 前記乳酸菌が、ェンテロコッカス属に属する乳酸菌である請求項 1に記載の血圧 低下剤。
[6] 乳酸菌の培養を、 15〜72時間行うものである請求項 1に記載の血圧低下剤。
[7] 乳酸菌の培養開始時の乳酸菌数が、固形分換算微細藻類 lgあたり 1 X ΙΟ^ΙΟ1 1個であり、乳酸菌が培養開始時の乳酸菌数の 10〜： L000倍になるまで、培養を継 続するものである請求項 1に記載の血圧低下剤。
[8] 培養液が、糖類をさらに含有するものである請求項 1に記載の血圧低下剤。
[9] 前記糖類がガラタトオリゴ糖である請求項 8記載の血圧低下剤。
[10] 前記糖類がキシロオリゴ糖である請求項 8記載の血圧低下剤。
[II] 微細藻類と、乳酸菌とを含有する培養液中で、乳酸菌を培養する工程を行い、該 工程により得られる乳酸菌培養物を有効成分とすることにより血圧低下剤を製造する 方法。
[12] 前記培養液中に含まれる微細藻類の含有量が、 0. 1〜30質量％である請求項 1 に記載の血圧低下剤。
[13] 前記乳酸菌力 ラクトバチルス デルブルエキ、ラクトバチルス プランタルム、ラクト バチノレス ァシドフィルス、ラクトバチルス ブレビス、ラタトコッカス ラクテイス、ロイコ ノストック エスピー、工ンテロコッカス カセリフラブス力 なる群力 選ばれる少なく とも一種、又は二種以上である請求項 1に記載の血圧低下剤。
[14] 高血圧症の治療への、請求項 1に記載の血圧低下剤の使用。 [15] 請求項 1に記載の血圧低下剤を用いて高血圧症を治療する方法。
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