WO2006038265A1

WO2006038265A1 - 耳硬化症治療のための医薬組成物

Info

Publication number: WO2006038265A1
Application number: PCT/JP2004/014390
Authority: WO
Inventors: Yutaka Imauchi
Original assignee: Yutaka Imauchi
Priority date: 2004-09-30
Filing date: 2004-09-30
Publication date: 2006-04-13

Abstract

　本発明は、耳硬化症治療のための医薬組成物、その投与量の決定方法、その投与方法、及び耳硬化症の診断マーカーを提供することを目的とする。そこで、耳硬化症の診断マーカーとして検査対象のヒトよりＤＮＡを単離し、ＰＣＲによりアンジオテンシノーゲン遺伝子のＭ２３５Ｔ多型における対立遺伝子の遺伝子型を調べる。その結果により、耳硬化症の原因を推測し、耳硬化症がアンジオテンシノーゲン受容体の活性亢進によると推測された場合、その活性を減少させる医薬化合物を患者に投与する。

Description

明細書

耳硬化症治療のための医薬組成物

技術分野

[0001] 本発明は、耳硬化症の治療方法、耳硬化症治療のための医薬糸且成物とその投与方法、及び耳硬化症の診断マーカーに関する。

背景技術

[0002] 耳硬化症は中耳に異常な海綿状の骨増殖を起こし、アブミ骨底が固着する変性疾患である。そのため、アブミ骨が音に反応して振動することが妨げられ、進行性の伝音難聴が起きる。

[0003] 耳硬化症患者は日本人には少ないが、白色人種で多ぐ成人の 0.2 - 1%で発生する。国によっては、人口の 10%にまで影響があるとも言われている。また、罹患には男女差もあり、女性の罹患率は男性の 2倍程度である。耳硬化症の発症には、遺伝的要因があることが示唆されている力真の原因は不明である（Chole RA and McKenna M., "Pathophysiology of otosclerosis. Otol Neurotol. Vol.22,

2001:249-57)。

発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0004] このように、白色人種ではありふれた難聴の原因であるにも関わらず、現在、耳硬化症の予防法は全くなぐ治療法はアブミ骨手術だけである。

[0005] そこで、本発明は、耳硬化症の治療方法、耳硬化症治療のための医薬糸且成物とその投与方法、及び耳硬化症の診断マーカーを提供することを目的としてなされた。課題を解決するための手段

[0006] 本発明者は、耳硬化症と遺伝子多型の関係を調べた結果、従来高血圧との関連性が見出されていたアンジォテンシノーゲン遺伝子における M235T多型と耳硬化症発症の間に相関があることを見出した (実施例 1)。この M235T多型は、 235番目のアミノ酸としてメチォニンを含む野生型アンジォテンシン Πをコードする M235対立遺伝子と、トレオ-ンを含む変異型アンジォテンシン IIをコードする T235対立遺伝子と力成る。この T235対立遺伝子はアンジォテンシノーゲンの細胞質濃度を上昇させ、引いてはアンジォテンシン IIの組織濃度を増加させることにより、アンジォテンシン II受容体シグナル伝達系の活性を亢進すると考えられる。実際、本発明者は、耳硬化症患者の初代骨培養細胞にぉ、ては、 IL 6で刺激した時のアンジォテンシン I I受容体シグナル伝達系の活性が亢進して、ることを明らかにした (実施例 2)。

[0007] 従って、例えば、アンジォテンシン II及び Z又はアンジォテンシン Π受容体の活性を低下させることにより、アンジォテンシン Πの組織濃度の上昇を抑制することができ、アンジォテンシン II受容体シグナル伝達系の活性を正常に戻すことができる。このような原理に従い、高血圧治療において有効な医薬組成物が数多く見出されている力それらの医薬組成物は、耳硬化症に対しても同様に効果があると考えられる。

[0008] このような原理に基づ、てなされた本発明に力かる耳硬化症治療のための医薬組成物は、アンジォテンシン II受容体シグナル伝達系の活性低下剤を含有する。このアンジォテンシン II受容体シグナル伝達系の活性低下剤がアンジォテンシン IIの活性低下剤又はアンジォテンシン II受容体の活性低下剤を含んでもよい。特に、アンジォテンシン Πの活性低下剤力アンジォテンシン I阻害剤、アンジォテンシン II阻害剤、アンジォテンシン変換酵素（Angiotensin Converting Enzyme)阻害剤、またはアンジォテンシノーゲン遺伝子発現抑制剤を含むことが好ましい。さらに、アンジォテンシン変換酵素阻害剤が、ラミプリル、ァラセプリル、カプトプリル、キナプリル、ェナラブリル、トランドラプリル、イミダプリル、シラザプリル、ぺリンドプリルエルプミン、テモカプリル、及びそれらの塩力もなるグループ力選択される阻害剤を含むことが好ま、。また、アンジォテンシン II受容体の活性低下剤力アンジォテンシン II受容体阻害剤またはアンジォテンシン受容体遺伝子発現抑制剤を含むことが好ましい。さらに、ァンジォテンシン Π受容体阻害剤力サララシン、口サルタン、テルミサルタン、パルサルタン、カンデサルタンシレキセチル、及びそれらの塩からなるグループから選択される阻害剤を含むことが好まし、。

[0009] 本発明に力かる治療方法は、アンジォテンシン II受容体シグナル伝達系の活性を低下させることを特徴とする。具体的には、アンジォテンシン II及び Z又はアンジォテンシン II受容体の活性低下剤を投与してもよい。さら〖こ、アンジォテンシン IIの活性低下剤が、ラミプリル、ァラセプリル、カプトプリル、キナプリル、ェナラプリル、トランドラプリル、イミダプリル、シラザプリル、ぺリンドプリルエルプミン、テモカプリル、及びそれらの塩カゝらなるグループカゝら選択される活性低下剤を含んでもよぐアンジォテンシン II受容体の活性低下剤力サララシン、口サルタン、テルミサルタン、バルサルタン、カンデサルタンシレキセチル、及びそれらの塩からなるグループ力選択される活性低下剤を含んでもよい。

[0010] 本発明にカゝかるアンジォテンシン II受容体シグナル伝達系の活性低下剤を含有する耳硬化症治療のための医薬組成物の投与方法は、アンジォテンシノーゲン遺伝子の M235T多型における対立遺伝子の遺伝子型を基にして決定することを特徴とする。

[0011] 本発明にカゝかるアンジォテンシン II受容体シグナル伝達系の活性低下剤を含有する耳硬化症治療のための医薬組成物の選択方法は、アンジォテンシノーゲン遺伝子の M235T多型における対立遺伝子の遺伝子型を基にして前記医薬組成物を選択することを特徴とする。

[0012] 本発明に力かるアンジォテンシン II及び/又はアンジォテンシン II受容体の活性低下剤を含有する耳硬化症治療のための医薬組成物の投与量の決定方法は、アンジォテンシノーゲン遺伝子の M235T多型における対立遺伝子の遺伝子型を基にして前記医薬組成物の投与量を決定することを特徴とする。

[0013] 本発明にかかる耳硬化症診断マーカーは、アンジォテンシノーゲン遺伝子の M23 5T多型における対立遺伝子の遺伝子型を決定するための遺伝物質を含有する。ここで、遺伝物質とは、遺伝子を有する DNAから遺伝子の最終産物であるタンパク質が発現するまでの全ての段階で生じる物質のことを言い、例えば、 DNA、 hnRNA、 mRNA、ポリペプチド、タンパク質等を指す。従って、この遺伝物質が、アンジォテンシン IIの 235番目のアミノ酸配列を有するペプチドであっても、アンジォテンシノーゲン遺伝子の M235T多型における塩基対を有する DNAであってもよい。

[0014] 本発明にかかる耳硬化症発症可能性を推定する推定方法は、健常人において、ァンジォテンシノーゲン遺伝子の M235T多型における対立遺伝子の遺伝子型を決定することによって行う。 [0015] 本発明にかかる耳硬化症の原因を推定する推定方法は、耳硬化症患者において、アンジォテンシノーゲン遺伝子の M235T多型における対立遺伝子の遺伝子型を決定することによって行う。

[0016] 本発明に力かる耳硬化症診断キットは、アンジォテンシノーゲン遺伝子の M235T 多型における塩基対を検出するための PCR用プライマーを含む。

図面の簡単な説明

[0017] 図 1は、本発明の実施例 1において、 M235T多型における対立遺伝子の遺伝子型を調べるために行った PCRによって、増幅する DNA断片の塩基配列を示した図である。 PCRに用いたプライマーを下線で示す。（T/C)は、 M235T多型を示す塩基である。

[0018] 図 2は、本発明の実施例 2において、初代骨培養細胞を用い、アンジォテンシン II を投与した時のアンジォテンシン II受容体シグナル伝達系の活性ィ匕を、分泌される I L 6を指標として測定した結果を示す図である。

発明を実施するための最良の形態

[0019] 実施の形態及び実施例に特に説明がな!、場合には、 J. Sambrook, E. F. Fritsch &

T. Maniatis (Ed.), Molecular cloning, a laboratory manual (3rd edition), Cold bpnng Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York (2001); F. M. Ausubel, R. Brent, R. E. Kingston, D. D. Moore, J.G. Seidman, J. A. Smith, K. Struhl (Ed.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Ltd.などの標準的なプロトコール集に記載の方法、あるいはそれを修飾したり、改変した方法を用いる。また、市販の試薬キットや測定装置を用いる場合には、特に説明が無い場合、それらに添付のプロトコールを用いる。

[0020] なお、本発明の目的、特徴、利点、及びそのアイデアは、本明細書の記載により、当業者には明らかであり、本明細書の記載から、当業者であれば、容易に本発明を再現できる。以下に記載された発明の実施の形態及び具体的に実施例などは、本発明の好ま、実施態様を示すものであり、例示又は説明のために示されて、るのであって、本発明をそれらに限定するものではない。本明細書で開示されている本発明の意図並びに範囲内で、本明細書の記載に基づき、様々な改変並びに修飾ができることは、当業者にとって明らかである。

[0021] = =耳硬化症診断マーカー = =

耳硬化症患者と健常人とにお、て、アンジォテンシノーゲン遺伝子の M235T多型における対立遺伝子の遺伝子型及び各遺伝子型の頻度を調べると、耳硬化症患者と健常人との間では、有意に遺伝子型に偏りがみられ、患者には、 T235対立遺伝子を有する人が多ぐ健常人には M235対立遺伝子を有する人が多い。 T235対立遺伝子を有する耳硬化症患者にぉ、て、アンジォテンシン II力もアンジォテンシン II 受容体へと伝達されるアンジォテンシン II受容体シグナル伝達系の活性が亢進していると考えられており、これが、耳硬化症の原因となったと考えられる。

[0022] 従って、健常人において、アンジォテンシノーゲン遺伝子における M235T多型に対する対立遺伝子の遺伝子型を決定することによって、将来的な耳硬化症発症の可能性の高さを推定することができる一方、耳硬化症患者において、 M235T多型に対する対立遺伝子の遺伝子型を決定することによって、耳硬化症の原因を推定することがでさる。

[0023] このような M235T多型に対する対立遺伝子の遺伝子型を決定するための耳硬化症診断マーカーとして、アンジォテンシノーゲン遺伝子における M235T多型に対する対立遺伝子の遺伝子型を決定するための遺伝物質を用いる。例えば、その遺伝物質は、アンジォテンシン IIの 235番目のアミノ酸配列を有するペプチドであってもよく、アンジォテンシノーゲン遺伝子における M235T多型に対する塩基対を有する DN Aであってもよい。マーカーがペプチドの場合、 M235T多型のうち、特異的に一方だけを認識するモノクローナル抗体を用い、それぞれの遺伝子型を有するペプチドを識別することができる。このような特異性を有するモノクローナル抗体は、アンジォテンシン IIの 235番目のアミノ酸にお!/、て、 T235あるいは M235の一方を含むオリゴペプチドを用いれば、常法により作製することができる。また、マーカーが DNAの場合、検査対象となるヒトの細胞からゲノム DNAを抽出し、 M235Tのアミノ酸をコードする塩基配列を調べればよい。場合によっては、 PCRや RELP (restriction enzyme length polymorphism)を用ヽること力でさよつ。

[0024] このように、アンジォテンシノーゲン遺伝子の M235T多型における遺伝子型を決定するために、 PCR用プライマーを含む耳硬化症診断キットを提供すれば、容易に検査や診断をすることが可能になる。

[0025] = =アンジォテンシン II受容体シグナル伝達系の抑制方法 = =

以上のように、アンジォテンシノーゲン遺伝子における M235T多型について、耳硬化症患者と健常人との間に有意な偏りがあることから、 T235対立遺伝子を有する耳硬化症患者にぉ、て、アンジォテンシン II受容体シグナル伝達系の活性の亢進が、耳硬化症の原因となったと考えられる。従って、耳硬化症治療のためには、このシグナル伝達系の活性を、好ましくは正常レベルにまで抑制すればよい。この場合、ァンジォテンシン Π受容体シグナル伝達系を特異的に抑制するため、リガンドであるァンジォテンシン IIの活性力、レセプターであるアンジォテンシン II受容体の活性を低下させるのが好ましい。

[0026] し力しながら、 T235対立遺伝子を有していなくても、何らかの他の方法で耳硬化症の原因がアンジォテンシン II受容体シグナル伝達系の亢進にあることが明らかになれば、耳硬化症治療のために、このシグナル伝達系の活性を抑制する医薬組成物を用いることが可能である。

[0027] アンジォテンシン IIの活性を低下させるためには、例えば、アンジォテンシン Iに結合しアンジォテンシン IIへの変換を阻害するアンジォテンシン I阻害剤、アンジォテンシン IIに結合しアンジォテンシン II受容体への結合を阻害するアンジォテンシン II阻害剤、アンジォテンシン Iカゝらアンジォテンシン IIへの変換酵素を阻害するアンジォテンシン変換酵素（Angiotensin Converting Enzyme)阻害剤、またはアンジォテンシノ一ゲン遺伝子の発現を抑制するアンジォテンシノーゲン遺伝子発現抑制剤等を含むアンジォテンシン IIの活性低下剤を耳硬化症患者に投与すればよ、が、活性を低下させる方法及び投与する活性低下剤は、これらに限定されない。

[0028] アンジォテンシン I阻害剤としては、アンジォテンシン Iに結合する化合物ゃ抗アンジォテンシン I抗体などが挙げられる。アンジォテンシン II阻害剤としては、アンジォテンシン IIに結合する化合物、抗アンジォテンシン II抗体、アンジォテンシン IIに結合するがシグナルを伝達できな、変異アンジォテンシン II受容体 (例えば、アンジォテンシン II受容体の膜外ドメイン力もなる短縮アンジォテンシン II受容体など)等が挙げられる。アンジォテンシン変換酵素（Angiotensin Converting Enzyme)阻害剤としては、ラミプリル、ァラセプリル、カプトプリル、キナプリル、ェナラプリル、トランドラプリル、イミダプリル、シラザプリル、ぺリンドプリルエルプミン、テモカプリル、及びそれらの塩などが挙げられる。アンジォテンシノーゲン遺伝子発現抑制剤としては、アンジォテンシノーゲン遺伝子の発現を特異的に認識するため、アンジォテンシノーゲン遺伝子に対するアンチセンス RNAや RNAiなどが好ましい。

[0029] アンジォテンシン II受容体の活性を低下させるためには、アンジォテンシン II受容体阻害剤またはアンジォテンシン受容体遺伝子発現抑制剤を含有するアンジォテンシン II受容体の活性低下剤を耳硬化症患者に投与すればよ、が、活性を低下させる方法及び投与する活性低下剤は、これらに限定されなヽ。

[0030] アンジォテンシン II受容体阻害剤は、アンジォテンシン II受容体に結合して、アンジォテンシン II受容体の活性を阻害する化合物や、アンジォテンシン IIと拮抗してアンジォテンシン II受容体の活性を阻害するアンジォテンシン II受容体拮抗剤等が挙げられる。具体的には、サララシン、口サルタン、テルミサルタン、バルサルタン、カンデサルタンシレキセチル、及びそれらの塩が挙げられる力これらに限定されない。また、アンジォテンシン II受容体拮抗剤としては、アンジォテンシン II受容体に強固にまたは一時的に結合する力シグナルは伝達しな、変異アンジォテンシン IIが好まヽ

。アンジォテンシン受容体遺伝子発現抑制剤としては、アンジォテンシン受容体遺伝子の発現を特異的に抑制するため、アンジォテンシン受容体遺伝子に対するアンチセンス RNAまたは RNAiが好まし!/、。

[0031] = =耳硬化症治療のための医薬糸且成物の投与方法 = =

製剤中の耳硬化症治療のための医薬組成物の含有率は、 1一 90重量％の間で変動させることができる。例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤などの形態をとる場合には、有効成分を 5— 80重量％含有させるのが好ましい。シロップ剤などの液剤の場合には、有効成分を 1一 30重量％含有させるのが好ましい。さらに、非経口投与する注射剤の場合には、有効成分を 1一 10重量％含有させるのが好ましい。

[0032] 耳硬化症治療のための医薬組成物の製剤化は、賦形剤 (乳糖、白糖、ブドウ糖、マン-トールなどの糖類、バレイショ、コムギ、トウモロコシなどのデンプン、炭酸カルシゥム、硫酸カルシウム、炭酸水素ナトリウムなどの無機物、結晶セルロースなど）、結合剤（デンプンのり液、アラビアゴム、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、メチルセルロース、ェチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロースなど）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム、タルク、水素添加植物油、マクロゴール、シリコーン油）、崩壊剤（デンプン、寒天、ゼラチン末、結晶セルロース、 CMC 'Na、 CMC 'Ca、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、アルギン酸ナトリウムなど)、矯味矯臭剤 (乳糖、白糖、ブドウ糖、マン-トール、芳香性精油類など）、溶剤（注射用水、滅菌精製水、ゴマ油、ダイズ油、トウモロコシ油、ォリーブ油、綿実油など）、安定剤（窒素、二酸化炭素などの不活性ガス、 EDTA、チォグリコール酸などのキレート剤、亜硫酸水素ナトリウム、チォ硫酸ナトリウム、 L-ァスコルビン酸、ロンガリットなどの還元物質など）、保存剤 (パラォキシ安息香酸エステル、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フエノール、塩化ベンザルコ -ゥムなど）、界面活性剤 (水素添加ヒマシ油、ポリソルベート 80、 20など）、緩衝剤（タエン酸、酢酸、リン酸のナトリウム塩、ホウ酸など）、希釈剤などの製剤添加物を用いて、公知の方法で行われる。

[0033] 以上のような耳硬化症治療のための医薬組成物は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤などの製剤にして、経口投与してもよいし、注射剤、坐剤などの製剤にして、腹腔内、静脈内、動脈内、筋肉内、皮下などへの注射や、耳内への直接投与や鼓膜内注入などにより非経口投与してもよい。また、液状にして、皮膚や粘膜などに塗布したりスプレーしたりしてもよ、。

[0034] 以上のような耳硬化症治療のための医薬糸且成物やその投与量は、アンジォテンシノーゲン遺伝子の M235T多型における遺伝子型に従って、決定してもよい。実施例 1で示すように、 T235変異は不完全優性を示し、耳硬化症患者で正常体よりそのへテロ接合の割合が多ぐホモ接合の割合はさらに多い。そこで、例えば、 M235T多型における遺伝子型がヘテロ接合の耳硬化症患者より、ホモ接合の耳硬化症患者に対し、より強力な効果を有する医薬組成物を選択して投与したり、より多量の医薬組成物を投与したりすることにより、より効率の良い治療ができる。

実施例 [0035] 以上に説明した本発明の実施の形態を、実施例を挙げながらさらに詳細に説明する。

[0036] <実施例 1 >

まず、フランス Beaujon病院において 1997年から 2002年に手術した 97名の耳硬化症患者及び同時期に当該病院を訪れた 63名の正常フランス人を対象に、アンジォテンシノーゲン遺伝子の M235T多型における対立遺伝子の遺伝子型及び各遺伝子型の頻度を調べた。なお、耳硬化症の判定は、 1.正常鼓膜にともなう進行性の伝音難聴または混合難聴 2.あぶみ骨反射の消失 3. CT画像における前庭窓周囲の異常所見に基づいて行い、最終的には、手術中のあぶみ骨所見およびあぶみ骨の可動性の消失によって確定診断とした。

[0037] 各人の末梢血細胞からゲノム DNAを抽出し、以下のプライマーを用いて、 PCRを行った。条件として、ゲノム DNAに対し、 94°C、 3分処理後、 94°C15秒 60°C45秒 —72°C45秒を 38サイクル行った。

[0038] Sプライマー：5，- CCGTTTGTGCAGGGCCTGGCTCTCT - 3，（配列番号 1) ASプライマー： 5， - CAGGGTGCTGTCCACACTGGacCCC -3，（配列番号 2)

ASプライマーは、ゲノム DNAとミスマッチになる 2塩基（上記配列中小文字で示した塩基配列）を有するため、増幅した DNAが T235対立遺伝子を有すれば、ゲノム DNAにない制限酵素部位 Tthllllが生じる（Hum Mol Genet, 1993, Vol.2, No.5, 609-610)。そこで、増幅した DNA断片（図 1に M235対立遺伝子 <配列番号 3 >及び T235対立遺伝子く配列番号 4 >の各塩基配列を示す)を制限酵素 Tthl 1 IIで切断し、電気泳動すると、 M235対立遺伝子は 165bpの単一バンドで、 T235対立遺伝子は、 141bpと 24bpの 2本のバンドが検出される。このようにして、各人の遺伝子型を調べた結果を表 1に示す。

[表 1] MM MT T

TT 対立遺伝子

の頻度健常人 22 (35%) 34 (54%) 7 ( 1 1 %) 0.38

(n=63) 耳硬化症患者 20 (21 %) 49 (51 %) 28 (29%) 0.54†

(n=97)

遺伝子型分布の vs T+TT vs MT+TT

vs MT+TT

有意検定 )f=4.036, X^z=7.045,

ns

(X²検定） dx=1 , p=0.045 df=1 , p=0.008 ォッズ化 1 1.59 4.40

95%

Confidential 0.75-3.34 1.58-12.28

Interval

[0039] 得られた結果に対し、 % 2解析によって統計処理を行った。耳硬化症患者と健常人との間では、有意に遺伝子型に偏りがみられ、患者には、 T235対立遺伝子を有する人が多ぐ健常人には M235対立遺伝子を有する人が多い。各遺伝子型のォッズ比でみてみると、 M235のホモ接合体の人に比べ、 235M235Tのへテロ接合体の人は 1. 59、 T235のホモ接合体の人は 4. 40となり、 T235対立遺伝子を有する人は、かなり耳硬化症に力かりやすくなつている。このように、アンジォテンシノーゲン遺伝子の M235T多型における対立遺伝子の遺伝子型を決定することによって、耳硬化症発症の可能性の高さを推定することができるとともに、耳硬化症患者において、その原因を推定し、それに従って、治療法を選択することができる。

[0040] <実施例 2 >

実施例 1で対象とした患者及び健常人から、骨細胞を初代培養し、アンジォテンシン受容体シグナル伝達系の活性を調べた。

[0041] 骨断片を 4. 5%グルコース、 12. 5mg/レンコマイシン、 30%FCSを含有する D MEMを用いて 37°C、 5%CO条件下で培養し、コンフルェントになった細胞が、

2

1. Von Kossa 染色により nodular calcined deposits '性であること

2. osteocalcin分¾¾をすること

3.形態学的に骨細胞として矛盾しないことを指標として、単離した初代培養細胞が骨細胞であることを確認した。

[0042] 以下の実験では、 1一 3パッセージのうちに、コンフルェントな状態の培養細胞を用いて、操作を行った。

[0043] まず、 48ゥエルの培養皿に初代骨細胞を播種し、コンフルェントな状態になったところで、 FCSを含有しない培地で細胞を 3回洗浄し、 198 1の同じ培地にアンジォテンシン II (2 μ 1、最終濃度 10— ⁷Μ)または溶媒（2 μ 1)を加え、 24時間培養した。その後、培地を回収し、プロテアーゼインヒビターカクテル（ロシュ社)を加え、遠心して上清を回収し、培地中に分泌された IL 6の濃度 (pg/ 1)を、 ELISAキット（アマシャム社)で測定した。図 2にその結果を示す。

[0044] 耳硬化症患者の骨細胞では、アンジォテンシン IIに対する IL 6の分泌が有意に増加しており、アンジォテンシン II受容体シグナル伝達系の活性が亢進して、ることが明らかになった。

産業上の利用可能性

[0045] 本発明は、耳硬化症の治療方法、耳硬化症治療のための医薬糸且成物、その投与方法、その投与方法の決定方法、その投与量の決定方法、耳硬化症発症可能性を推定する推定方法、耳硬化症の原因を推定する推定方法、及び耳硬化症の診断マ一力一を提供することができる。

Claims

請求の範囲

[1] アンジォテンシン II受容体シグナル伝達系の活性低下剤を含有する耳硬化症治療のための医薬組成物。

[2] 前記アンジォテンシン II受容体シグナル伝達系の活性低下剤がアンジォテンシン I Iの活性低下剤又はアンジォテンシン Π受容体の活性低下剤を含むことを特徴とする請求項 1に記載の耳硬化症治療のための医薬組成物。

[3] 前記アンジォテンシン IIの活性低下剤力アンジォテンシン I阻害剤、アンジォテンシン II阻害剤、アンジォテンシン変換酵素（Angiotensin Converting Enzyme)阻害剤、またはアンジォテンシノーゲン遺伝子発現抑制剤を含むことを特徴とする請求項 2 に記載の医薬組成物。

[4] 前記アンジォテンシン IIの活性低下剤力ラミプリル、ァラセプリル、カプトプリル、キナプリル、ェナラプリル、トランドラプリル、イミダプリル、シラザプリル、ぺリンドプリルェルブミン、テモカプリル、及びそれらの塩力もなるグループ力選択される 1以上の活性低下剤を含むことを特徴とする請求項 2に記載の医薬組成物。

[5] 前記アンジォテンシン II受容体の活性低下剤力アンジォテンシン II受容体阻害剤またはアンジォテンシン受容体遺伝子発現抑制剤を含むことを特徴とする請求項 2 に記載の医薬組成物。

[6] 前記アンジォテンシン II受容体の活性低下剤力サララシン、口サルタン、テルミサルタン、バルサルタン、カンデサルタンシレキセチル、及びそれらの塩からなるグループから選択される 1以上の活性低下剤を含むことを特徴とする請求項 2に記載の医薬組成物。

[7] アンジォテンシン II受容体シグナル伝達系の活性を低下させることを特徴とする耳硬化症の治療方法。

[8] アンジォテンシン II及び Z又はアンジォテンシン Π受容体の活性低下剤を投与することを特徴とする請求項 7に記載の耳硬化症の治療方法。

[9] 前記アンジォテンシン IIの活性低下剤力ラミプリル、ァラセプリル、カプトプリル、キナプリル、ェナラプリル、トランドラプリル、イミダプリル、シラザプリル、ぺリンドプリルェルブミン、テモカプリル、及びそれらの塩力もなるグループ力選択される 1以上の活性低下剤を含むことを特徴とする請求項 8に記載の耳硬化症の治療方法。

[10] 前記アンジォテンシン II受容体の活性低下剤力サララシン、口サルタン、テルミサルタン、バルサルタン、カンデサルタンシレキセチル、及びそれらの塩からなるグループから選択される 1以上の活性低下剤を含むことを特徴とする請求項 8に記載の耳硬化症の治療方法。

[11] アンジォテンシン II及び Z又はアンジォテンシン Π受容体の活性低下剤を含有する耳硬化症治療のための医薬糸且成物の投与方法であって、

アンジォテンシノーゲン遺伝子の M235T多型における対立遺伝子の遺伝子型を基にして決定することを特徴とする投与方法。

[12] アンジォテンシン II受容体シグナル伝達系の活性低下剤を含有する耳硬化症治療のための医薬組成物の選択方法であって、

アンジォテンシノーゲン遺伝子の M235T多型における対立遺伝子の遺伝子型を基にして前記医薬組成物を選択することを特徴とする選択方法。

[13] アンジォテンシン II受容体シグナル伝達系の活性低下剤を含有する耳硬化症治療のための医薬組成物の投与量の決定方法であって、

アンジォテンシノーゲン遺伝子の M235T多型における対立遺伝子の遺伝子型を基にして前記医薬組成物の投与量を決定することを特徴とする決定方法。

[14] アンジォテンシノーゲン遺伝子の M235T多型における対立遺伝子の遺伝子型を決定するための遺伝物質を含有する耳硬化症診断マーカー。

[15] 前記遺伝物質が、アンジォテンシン IIの 235番目のアミノ酸配列を有するペプチドであることを特徴とする請求項 13に記載の耳硬化症診断マーカー。

[16] 前記遺伝物質が、アンジォテンシノーゲン遺伝子の M235T多型における塩基対を有する DNAであることを特徴とする請求項 13に記載の耳硬化症診断マーカー。

[17] 健常人において、アンジォテンシノーゲン遺伝子の M235T多型における対立遺伝子の遺伝子型を決定することによって耳硬化症発症可能性を推定する推定方法。

[18] 耳硬化症患者において、アンジォテンシノーゲン遺伝子の M235T多型における対立遺伝子の遺伝子型を決定することによって耳硬化症の原因を推定する推定方法。アンジォテンシノーゲン遺伝子の M235T多型における塩基対を検出するための PC R用プライマーを含む耳硬化症診断キット。