WO2006028164A1 - 乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に対する安定化方法、安定化組成物、及び飲食品。 - Google Patents
乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に対する安定化方法、安定化組成物、及び飲食品。 Download PDFInfo
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Definitions
- the present invention relates to a method for stabilizing lactic acid bacteria antiallergic activity against high temperature treatment, a stabilizing composition against high temperature treatment of lactic acid bacteria antiallergic activity, and beverages having a stabilized lactic acid bacteria antiallergic activity.
- Product and its manufacturing method are provided.
- Allergic mechanisms are usually classified into four types, type I and type IV, and type I, type II and type IV are considered to be involved in the development of food allergies.
- environmental allergies such as hay fever, atopic dermatitis, bronchial asthma, allergic rhinitis, and allergic conjunctivitis have a type I onset mechanism.
- Type I allergy is characterized by the induction of allergen-specific IgE and the release of chemical mediators such as histamine and leukotrien.
- 13 ⁇ 4 2 cytokines such as IL-4, IL-5, and 1-13 are required.
- allergic lymphocytes have an increased Th2 cell content.
- allergens that have invaded external forces are presented to T cells in a state in which they are bound to MHC class II molecules by antigen-presenting cells such as rod-shaped cells' macrophages, and Th2 cells are activated. .
- the Th2 cell force-in released by Th2 cells induces a B-cell class switch, and IgE antibodies are produced.
- IgE antibodies bind to Fc′R on the surface of mast cells in the tissue and basophils in the blood.
- the allergen binds to the surface of mast cells and basophils at the next invasion and is recognized by the IgE antibody, and a bridge is formed between the IgE antibodies.
- mast cells and basophils explode chemical mediators, causing allergic symptoms.
- peripheral nerve force signals by binding histamine antagonistically to histamine receptors.
- Antihistamines that inhibit transmission, antiallergic agents that try to alleviate symptoms by weakening the activity of producing cells of chemical mediators, steroids that reduce inflammation by weakening immune responsiveness, and tolerance by regularly injecting allergens themselves
- desensitization therapies, etc. that all induce side effects, but there is no definitive effect.
- lactic acid bacteria are useful materials that are easy to apply to foods and the like that are safe and safe.
- it is indispensable to select useful strains although not all lactic acid bacteria have the strong effect of enhancing Thl immunity.
- L. rhamnosus LGG strain is known as an antiallergic lactobacillus, and it has been shown that the occurrence of atopic dermatitis in children is suppressed by ingesting it in pregnant women (Lancet, 2001, No. 357). ( ⁇ , page 1076).
- the use of lactic acid bacteria as an antiallergic agent is also disclosed in several patent publications. For example, in Japanese Patent Laid-Open No.
- Bifud Batterium 'Infantis Bifidobacteria' Brebe, Bifido Batterium 'Longam and Bifido Batteri
- bifidobacteria such as hum bifidum as an anti-allergic agent to treat food allergies in particular
- JP 2000-95697 A include lactic acid bacteria such as Enterococcus fuecharis and Lactobacillus reuteri.
- About use as an inhibitor of type I allergies such as allergic bronchial asthma, allergic rhinitis and atopic dermatitis , It has been disclosed, respectively.
- the enhancement of Thl immunity by lactic acid bacteria, etc. means the activation of cellular immunity of macrophage killer T cells and NK cells through the production of IL12 and IFN. In other words, it has become a major factor in resisting virus, bacterial infections, and cancer. Specifically, IL-12 produced by macrophages gains resistance to foreign enemies through the differentiation of undifferentiated helper T cells into Thi cells and the activity of monocytes 'macrophages and sputum cells' .
- a lactic acid strain capable of inducing strong IL-12 production can be used as an immunostimulant (Cancer 'Immunoguchi Giichi' Imnotherapy, 2000, 49th, 157; Kaihei 7-228536; Japanese Patent Laid-Open No. 2002-80364).
- lactic acid bacteria to foods include yogurt, cheese, fermented milk, etc., and can also be used in foods and drinks other than dairy products! It was limited to the application to foods and drinks that do not need.
- Lactobacillus plantum separated from green tea is added to cold tea leaves, fermented and used for beverages, etc. (JP-A-11-276072), lactic acid bacteria culture cultured in medium containing tea extracts, etc.
- Patent Document 1 Japanese Patent Laid-Open No. 60-156614.
- Patent Document 2 JP-A-7-228536.
- Patent Document 3 JP-A-9 2959.
- Patent Document 4 Japanese Patent Laid-Open No. 10-309178
- Patent Document 5 JP-A-11-276072.
- Patent Document 6 Japanese Patent Laid-Open No. 2000-95697.
- Patent Document 7 JP-A-2001-190272.
- Patent Document 8 JP 2002-330725 A.
- Patent Document 9 JP-A-3-133928.
- Patent Document 10 JP 2002-80364 A.
- Patent Document 11 Japanese Patent Application Laid-Open No. 2003-138258.
- Patent Document 12 Japanese Patent Application Laid-Open No. 2003-333990.
- Patent Document 13 Japanese Patent Application Laid-Open No. 2004-26729.
- Patent Document 14 Japanese Patent Application Laid-Open No. 2004-155727.
- Patent Document 15 Japanese Patent Application Laid-Open No. 2004-166671.
- Non-Patent Document 1 Clinical Immunization, 1999, 32, 454; International 'Archives' Ob' Allergic 'and' Imology, 1998, 115, 278.
- Non-Patent Document 2 Lancet, 2001, 357, 1076.
- Non-Patent Document 3 Cancer 'Imology' Imnotherapy, 2000, 49th, 157. Disclosure of the invention
- the subject of the present invention can also be applied to the production process, distribution process, food and drink that are subjected to high-temperature heat treatment during eating and drinking, and food and drink that are stored at room temperature after high-temperature treatment.
- a method for stabilizing lactic acid bacteria antiallergic activity against high temperature treatment which can maintain the antiallergic activity of lactic acid bacteria against high temperature treatment, a stable composition for high temperature treatment of lactic acid bacteria antiallergic activity, And it is providing the food / beverage products, such as a drink which has the stable lactic-acid-bacteria antiallergic activity, and its manufacturing method.
- the present inventor added a lactic acid bacterium having anti-allergic activity to green tea and sterilized UHT, and the polyphenol of green tea component was sterilized by UHT, anti-allergic activity under high temperature storage,
- the present invention has also been found to contribute to the stability of the antiallergic activity of foods and drinks under normal temperature storage after high temperature treatment.
- the method for stabilizing the anti-allergic activity of lactic acid bacteria of the present invention against high temperature treatment is a wide range of foods and beverages that are subjected to high temperature heat treatment at the time of production, distribution process, and eating and drinking, particularly for beverages and the like. It is possible to apply to.
- the method for stabilizing lactic acid bacteria antiallergic activity against high temperature treatment of the present invention can be provided as a stabilizing composition against high temperature treatment of lactic acid bacteria antiallergic activity.
- the present invention includes a stabilized composition against high temperature treatment of such lactic acid bacteria antiallergic activity.
- plant-extracted polyphenols such as green tea-extracted polyphenols can be used.
- polyphenols are contained in food and drink itself such as teas.
- the present invention can be carried out by using the polyphenols or, if necessary, supplementing the polyphenols with additional polyphenols.
- the high-temperature treatment is performed under specific pH conditions. That is, in the range of pH 4.6 to 6.6, and particularly preferably in the range of pH 5.5 to 6.5. It is possible to produce a beverage having one activity, and in addition, when producing a beverage having anti-allergic activity against lactic acid bacteria that has been stabilized against high-temperature treatment using the stability method of the present invention, It was found that a beverage having a more stable lactic acid bacterium anti-allergic activity can be produced by adjusting the beverage prepared in this way to a specific pH range and then filling and sealing the container.
- the present invention Made.
- the method of stabilizing the lactic acid bacteria antiallergic activity of the present invention against high temperature treatment can be applied to various foods and beverages subjected to high temperature treatment, in particular, green tea, fermented tea, or
- the present invention can be applied to tea beverages such as semi-fermented tea, and the present invention can provide a beverage having anti-allergic activity against lactic acid bacteria that is stabilized against high-temperature treatment.
- the present invention can use a lactic acid bacterium having high anti-allergic activity as a lactic acid bacterium, and the present invention uses the lactic acid bacterium having such a high anti-allergic activity to stabilize the lactic acid bacterium anti-allergic activity against high temperature treatment, It includes a stabilizing composition for high temperature treatment of lactic acid bacteria antiallergic activity, and a beverage having lactic acid bacteria antiallergic activity stabilized against high temperature treatment.
- AIST National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
- the method for stabilizing anti-allergic activity of lactic acid bacteria according to the present invention is effective even when heat-killed lactic acid bacteria are used to impart anti-allergic activity by lactic acid bacteria.
- the present invention relates to (1) a method for stabilizing anti-allergic activity of lactic acid bacteria against high temperature treatment characterized by coexisting lactic acid bacteria and polyphenols, and (2) the ability of polyphenols to extract plants.
- a method for stabilizing anti-allergic activity against high temperature treatment of lactic acid bacteria described in (1) above, characterized by being polyphenols, and (3) plant-extracted polyphenols, characterized by being green tea-extracted polyphenols (2) The method for stabilizing lactic acid bacteria anti-allergic activity described in (2) above, or (4) the lactic acid bacteria having high antiallergic activity, (1) to (3) (5) Lactobacillus paracasei KW3110 strain, Lactobacillus plantarum KW4110 strain, Lactobacillus strain KW3110, Lactobacillus paracasei KW3110 strain, Lactobacillus paracasei KW3110 strain Parastati KW3925 strain, Lactobacillus paracasei KW 3926 strain, Streptococcus salivarius KW3210 or a
- the present invention is characterized in that (7) the lactic acid bacteria described in any one of (1) to (6) above and the polyphenols described in any one of (1) to (6) coexist.
- the stabilizing composition against high temperature treatment of lactic acid bacteria anti-allergic activity and (8) Stable composition against high temperature treatment of lactic acid bacteria anti-allergic activity coexisting with lactic acid bacteria and polyphenols should be for beverage addition (6) characterized in that the composition for stabilizing lactic acid bacteria antiallergic activity against high temperature treatment is provided.
- the present invention is characterized in that (9) the lactic acid bacteria described in any one of (1) to (6) above and the polyphenols described in any one of (1) to (6) above coexist. (10) the lactic acid bacteria described in any one of (1) to (6) above, and the lactic acid bacteria described in (1) to (6) above.
- beverage having the anti-allergic activity stabilized against high-temperature treatment as described in (10) above, or (12) the beverage is a fruit juice-containing soft drink or tea drink in a sealed container Antiallergic activity of lactic acid bacteria stabilized against high-temperature treatment as described in (10) or (11) Or a beverage having (13) a beverage by adding lactic acid bacteria and polyphenols to a tea beverage or by adding lactic acid bacteria to the lactic acid bacterium according to any one of the above (1) to (6) (1) to (6) above, wherein the polyphenols according to any one of the above are coexisted, and the anti-lactic acid bacterium stable against high-temperature treatment according to any one of (10) to (12) above Beverages having allergic activity, (14) beverages having antiallergic activity against lactic acid bacteria stabilized against high-temperature treatment as described
- the present invention provides (17) a high temperature treatment of a beverage at a pH of 4.6 to 6. when producing a beverage having anti-allergic activity against lactic acid bacteria according to any one of (10) to (16) above.
- a method for producing a beverage having anti-allergic activity that is stable against high-temperature treatment characterized by being performed in the range of 6, and (18) high-temperature treatment of beverages at a pH of 5.5 to 6.5
- the method for producing a beverage having anti-allergic activity against lactic acid bacteria that is stable against the high-temperature treatment described in (17) above, and (19) the high-temperature treatment of the beverage is a UHT sterilization treatment
- a method for producing a beverage having anti-allergic activity against lactic acid bacteria stabilized against high-temperature treatment as described in (17) or (18) above, or (20) any one of (10) to (16) above When producing beverages with anti-allergic activity of lactic acid bacteria, drinks prepared by high-temperature treatment were treated with a pH of 5.5. 6.
- a method for producing a beverage having anti-allergic activity against lactic acid bacteria that is stabilized against high-temperature treatment characterized by filling the container and sealing it after adjusting to the range of (5) and (21) the beverage is green tea
- FIG. 1 is a diagram showing lactic acid bacteria that can be used in the present invention and their sources (No. 1).
- FIG. 2 is a diagram showing lactic acid bacteria that can be used in the present invention and their sources (No. 2).
- FIG. 3 is a diagram showing lactic acid bacteria that can be used in the present invention and their sources (No. 3).
- FIG. 4 is a graph showing changes in antiallergic activity by UHT sterilization when lactic acid bacteria are mixed with green tea in Examples of the present invention.
- FIG. 5 shows the antiallergic activity of lactic acid bacteria in green tea in Examples of the present invention.
- FIG. 6 is a graph showing the results of measuring the relative activity of lactic acid bacteria antiallergic residual activity with respect to heat treatment under various pH conditions in the examples of the present invention.
- FIG. 7 is a diagram showing the results of evaluating the anti-allergic ability of lactic acid bacteria in green tea when green tea after sterilization with UHT is adjusted to various pHs, filled into containers, and sealed in the examples of the present invention. is there.
- the present invention relates to a method of stabilizing the antiallergic activity of lactobacilli against high temperature treatment by coexisting lactic acid bacteria and polyphenols, and to high temperature treatment of lactic acid bacteria antiallergic activity using the method. It consists of a stabilized composition and a food or drink having anti-allergic activity stabilized against high-temperature treatment.
- the “high temperature treatment” in the present invention includes, for example, a sterilization operation performed at a temperature of 50 ° C.
- a product display in a hot bender includes a temperature treatment that reduces the antiallergic activity of lactic acid bacteria by a temperature treatment above room temperature that is added to the product.
- the high temperature treatment is preferably carried out under the condition of ⁇ 4.6 to 6.6. More preferably, it is carried out in the range of pH 5.5 to 6.5.
- the polyphenols used in the present invention include plant-extracted polyphenols such as green tea-extracted polyphenols.
- plant-extracted polyphenols such as green tea-extracted polyphenols.
- the polyphenols can be used to coexist lactic acid bacteria and polyphenols, and if necessary, the polyphenol contained in the food and drink itself. It is possible to supplement the phenols with polyphenols or increase the concentration of the polyphenols by concentration or the like so that the necessary amount can coexist.
- Plant raw material strength Polyphenols can be suitably prepared by hot water extraction from a plant body. Green tea extraction is used as one of the methods for obtaining polyphenol of the present invention.
- the term “green tea extraction” as used herein refers to further purification of a concentrate obtained by extracting tea leaves with hot water or a water-soluble organic solvent, or directly purifying the extract.
- commercially available concentrates of green tea extracts such as Mitsui Norin “Polyphenon”, ITO EN “Theafranc”, Taiyo Kagaku “Sanphenon” and the like can also be used.
- lactic acid bacteria and polyphenols coexist in food and drink.
- the concentration of polyphenols is in the range of 50 to 130 mg / l OOml even if the total polyphenol concentration is at least. In addition, the one in the range of 60-130mgZlOOml is preferred.
- the lactic acid bacteria used in the present invention are not particularly limited as long as they have anti-allergic activity, and the genus Lactobacillus, Streptococcus, Ratatococcus, Leuconostoc, Any lactic acid bacterium such as Enterococcus can be used.
- lactic acid bacteria for the present invention include: Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus brevis, Lactobacillus' casei, Lactobacillus' Delbruecki, Lactobacillus' Fermentum, Lactobacillus' Helveticas, Lactobacillus' Kefir, Lactobacillus' Paracasey, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus' Ramnosus, Lactobacillus' Sarivarius, Streptococcus' Samofoinoles, Ratatococcus' Lactis, Ratatococcus' Plantalum, Ratatococcus' Nostock 'Lacteis, Leucono Stock. Mecenteroides, etc.
- FIG. 1 No. 1
- FIG. 1 No. 1
- lactic acid bacteria having high antiallergic activity can be used as lactic acid bacteria having antiallergic activity.
- examples of the lactic acid bacterium having high antiallergic activity include Lactobacillus paracasei KW3110, Lactobacillus plantarum KW4110 strain, Lactobacillus paracasei KW3925 strain, Lactobacillus paracasei KW3926 strain, Streptococcus salivarius KW3210, or derivatives thereof.
- the lactic acid bacteria can be obtained, for example, from the Japan Dairy Industry Association as L. casei L14 strain as L. paracasei KW3110 strain.
- the L14 strain is described as L. casei, but the present inventors use QUALICON's riboprinter 7 RFLP (Restriction Flagment Length Polymorphism)!
- the strain was determined to be L. paracasei, and therefore referred to as L. paracasei in the present invention.
- L. paracasei KW3110 used as an active ingredient in the composition for anti-allergy in the present invention is as described above.
- L. plantarum used as a lactic acid bacterium having high antiallergic activity in the present invention.
- the KW4110 strain is available as L. plantarum JCM1149 strain
- the L. paracasei KW3926 strain is available as L. paracasei JCM8132 strain from JCM (RIKEN Microbial System Storage Facility)
- the L. paracasei KW3925 strain is available from L. It can be obtained from NRIC (Tokyo University of Agriculture) as paracasei NRIC1917.
- the lactic acid bacteria having antiallergic activity used in the present invention can be prepared by culturing the lactic acid bacteria in a medium. Any culture medium can be used so long as the lactic acid bacteria can grow. Animal milk, skim milk, milk whey, MRS medium, GAM medium, BL medium, Briggs Liver Broth, synthetic A medium or the like can be used.
- the culture temperature can be 20 ° C to 50 ° C, preferably 25 ° C and 42 ° C.
- the culture time can be 3 to 96 hours.
- the lactic acid bacteria of the present invention can be obtained by further processing the culture medium after completion of the culture as it is or as necessary. For example, the culture medium after centrifugation is collected by centrifugation, filtration, etc.
- the lactic acid bacterium of the present invention can contain other components in addition to the lactic acid bacterium. Examples of other components include additives such as excipients, and media components described later.
- the culture medium (glucose 1%, yeast extract S (Takeda Kirin Foods) 1%, MgSO ⁇ 7 ⁇ O 50ppm, MnSO ⁇ 5 ⁇ O 50ppm) was used for culturing lactic acid bacteria.
- Pre-culture is milk
- the acid bacteria KW3110 strain was inoculated into 10 ml of the culture medium and allowed to stand at 37 ° C for 20 to 24 hours.
- 0.6 ml of the pre-culture solution is inoculated into 120 ml of culture medium, and 200 ml Incubation was performed at 28 ° C using one (model BMJ-25, Able).
- the aeration rate was 0.12 L Zmin, and the stirring speed was 500 rpm.
- the pH was controlled using a 25% NaOH solution so that it was not below pH 4.5. Incubation was performed for 48 hours.
- the cells were collected by centrifugation at 8500Xg for 10 minutes.
- the cells were suspended in 30 ml of sterilized distilled water and collected by centrifugation at 8500Xg for 10 minutes. This washing operation was repeated three times to remove the medium-derived components.
- the washed cells were suspended in 10 ml of sterilized water, treated with an autoclave at 100 ° C for 30 minutes, and then lyophilized. Finally, 50 to 70 mg of dried lactic acid bacteria was obtained. The antiallergic activity of the obtained lactic acid bacteria was confirmed.
- the method for stabilizing lactic acid bacterium anti-allergic activity of lactic acid bacteria and polyphenols according to the present invention against high temperature treatment is applicable to a wide range of foods and drinks in which the production process and distribution process, or high temperature caloric heat treatment is performed during eating and drinking. On the other hand, it can be applied.
- the present invention is a stable composition for high-temperature treatment of lactic acid bacteria antiallergic activity in which lactic acid bacteria and polyphenols coexist, and has anti-allergic activity stabilized in foods and drinks added to various foods and drinks. Can be granted.
- the method for stabilizing anti-allergic activity of lactic acid bacteria that coexists lactic acid bacteria and polyphenols of the present invention against high-temperature treatment can be advantageously applied particularly to the application of stabilized anti-allergic activity in beverages.
- the beverage include tea-based beverages and non-tea-based beverages.
- Particularly preferred polyphenols to be blended in the case of force are plant-extracted polyphenols such as green tea-extracted polyphenols.
- the green tea extraction polyphenols can be listed as blending targets, especially green phenols, semi-fermented teas, and tea extracts in which fermented tea power is also selected; and particularly preferred polyphenols to be blended in non-tea beverages.
- it is particularly preferable to use a green tea beverage in which the green tea extract is blended with the green tea extract which is preferable for a beverage in which the green tea extract is blended with the tea extract.
- Examples of semi-fermented tea include oolong tea, and examples of fermented tea include black tea.
- Examples of non-tea beverages include soft drinks such as carbonated drinks, drinks containing fruit extracts, juices containing vegetable juice, your water, sports drinks and diet drinks.
- a beverage with a stable anti-allergic activity is provided as a sealed container beverage.
- it is preferable to adjust so that the lactic acid bacteria to be added is in the range of ⁇ 9 ⁇ ) 11 per lOOg of beverage.
- the beverages containing the lactic acid bacteria having high antiallergic activity of the present invention can include various types of beverages as described above.
- Any sugars, flavors, fruit juices, food additives, etc., used in the usual beverage formulation design can be used.
- the drink particularly suitable for blending does not contain a milk component from the viewpoint of antiallergic action and product storage and stability, that is, for example, a soft drink containing fruit juice or Especially preferred are non-dairy beverages such as the above tea beverages.
- the stabilized beverage having anti-allergic activity of lactic acid bacteria of the present invention can be commercialized as a “sealed container-packed beverage” by filling the container and sealing it. At that time, it is preferable to fill the beverage prepared by high-temperature treatment after adjusting the pH within the range of 5.5 to 6.5.
- This green tea liquid is the basic green tea (1), 8 g of polyphenone 70A (Mitsui Norin Co., Ltd.) is added to the basic green tea + polyphenone 70A (2), and the supernatant of the extract after centrifugation is (1) ) Used for tea leaf extract 2 times green tea (3) Add 18 g of PVPP to the extract before centrifugation in (1) and stir and use the centrifuged supernatant for PVPP treatment Green tea (4).
- the pH of (1) to (4) is 6.0 to 7.0, and the total amount of polyphenols of (1) to (4) is tartaric acid using ethyl gallate as the standard solution. Quantified by the iron method. (Reference: Tea Industry Research Report No. 71 (1990) Tea colorimetric method for tannin colorimetric determination). The results of quantification are shown in Table 1. [0043] [Table 1] Total polyphenol ⁇ (mg / 100ml) Basic green tea (1) 57.5 Basic green tea Boliphenone ⁇ ⁇ (2) 1 22
- Lactobacillus paracasei KW31 10 strain dry cells (heated killed bacteria: obtained from Kirin Brewery Co., Ltd. Functional Food Company 1) was added to the above green tea (1) to (4), 0.02%, and UHT It was killed.
- the sterilization conditions were 135 ° C for 30 seconds and 137 ° C for 30 seconds, and a 500 ml PET bottle was hot-packed.
- lactic acid bacteria precipitates were obtained by centrifugal separation for 10 minutes at 8000 rpm for 25 mU of green tea. The precipitate was washed with PBS (—) and then centrifuged again, and the precipitate was suspended in 5 ml of PBS (—).
- the in vitro antiallergic activity of lactic acid bacteria was measured by measuring the amount of IL-12 released into the medium when mixed culture with mouse spleen lymphocytes was performed.
- 7-10 week old BALBZc mice (Charles River 1) were injected intraperitoneally on dayO and day6 with 1 mg of ovalbumin (OVA) together with 2 mg of aluminum hydroxide as an adjuvant.
- OVA ovalbumin
- Spleen lymphocytes were suspended in RPM11640 (SIGMA) medium supplemented with FCS (Roche) and OVA to a final concentration of 10% and lmgZml, respectively, to a cell concentration of 2.5 X 10 6 cells Zml. did.
- Lactic acid bacteria were added to the above medium to a concentration of 0.25 ⁇ g Zml, and cultured for 1 week at 37 ° C. and CO concentration of 5%. Cultivated by centrifugation
- the culture supernatant was collected, and IL-12 production was measured using Opt EIA ELISA Set (Betaton's Dickinson).
- Fig. 4 shows changes in antiallergic activity by UHT sterilization when mixed with each green tea.
- Example (1) The four types of green tea prepared in Example (1) were stored at 5 ° C and 50 ° C for 1 week, and the antiallergic activity of lactic acid bacteria in the green tea after storage was evaluated. The experiment was performed in the same procedure as in Example (1).
- Figure 5 shows the relative antiallergic activity after 1 week of storage at 50 ° C versus 5 ° C.
- the green teas (1) to (4) were sterilized by UHT and then hot-packed into 350 ml PET bottles. Lactic acid bacteria precipitates were obtained from green tea after sterilization by centrifugation, and the antiallergic ability of lactic acid bacteria in green tea was evaluated.
- the experiment was performed in the same procedure as in Example (1).
- Figure 7 shows the changes in antiallergic performance due to UHT sterilization when mixed with each green tea. At pH 5.5, 6.0 and 6.5, the residual activity by UHT sterilization was similar, whereas at pH 7.0, the result was about 50% lower. It was confirmed that the residual antiallergic activity was correlated with the pH.
- the present invention provides a method for stabilizing lactic acid bacteria antiallergic activity against high temperature treatment.
- the stability by lactic acid bacteria can be improved for a wide range of foods and beverages that are subjected to high-temperature heat treatment during food production and distribution, or for food and beverages that are stored at room temperature after high-temperature treatment. It is possible to impart a dull antiallergic activity, which can be stabilized and maintained.
- the present invention can be advantageously applied to beverages such as teas that originally contain a large amount of polyphenol, and according to the present invention, beverages having stable antiallergic activity due to lactic acid bacteria can be provided.
- a lactic acid bacterium having high antiallergic activity can be used as the lactic acid bacterium to be used, and the lactic acid bacterium can provide a stable and active food or drink having a high antiallergic function. Monkey.
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Abstract
高温処理に対して乳酸菌の抗アレルギー活性を維持することが可能な、乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に対する安定化方法、該安定化組成物、及び、安定化した乳酸菌抗アレルギー活性を有する飲料等の飲食品及びその製造法を提供するものである。乳酸菌とポリフェノール類を併存させることにより、乳酸菌の抗アレルギー活性が高温処理を行った場合でも、その活性を安定的に維持することができる。本発明で用いるポリフェノール類としては、緑茶抽出ポリフェノール類のような植物抽出ポリフェノール類を用いることができる。本発明では、抗アレルギー活性を有する種々の乳酸菌を用いることができるが、特に、有利には、乳酸菌として高抗アレルギー活性を有する乳酸菌を用いることができる。本発明の方法は、製造過程や流通過程、或いは、飲食時に高温加熱処理が行われる飲食品に対して適用可能である。
Description
明 細 書
乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に対する安定化方法、安定化組成 物、及び飲食品。
技術分野
[0001] 本発明は、乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に対する安定ィヒ方法、乳酸菌抗 アレルギー活性の高温処理に対する安定化組成物、及び、安定化した乳酸菌抗ァ レルギ一活性を有する飲料等の飲食品及びその製造方法に関する。
背景技術
[0002] 先進国においてアレルギーは最も頻度が高い疾患のひとつである。アレルギー発 症機構は通常 I型カゝら IV型の 4つに分類され、 I型、 II型及び IV型が食物アレルギー の発症に関与するとされている。一方、花粉症、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、ァ レルギ一性鼻炎、アレルギー性結膜炎などの環境アレルギーは I型の発症機構を持 つ。
[0003] I型アレルギーはアレルゲン特異的 IgEの誘導とヒスタミンやロイコトリェン等のケミカ ルメディエーターの放出をその特徴とする。 B細胞にぉ 、て抗体のクラススィッチが起 こり、 IgE抗体が産生されるようになるには、 IL— 4、 IL— 5、 1しー13等の1¾2サィトカ インを必要とする。実際、アレルギー患者のリンパ球には Th2細胞が増加しているこ とが分力つている。つまり、外界力 侵入したアレルゲンは榭状細胞'マクロファージ 等の抗原提示細胞によってその一部を MHC class II分子に結合した状態で T細胞 に対して提示され、 Th2細胞が活性化'分ィ匕する。 Th2細胞が放出した Th2サイト力 インは B細胞のクラススィッチを誘導し、 IgE抗体が産生され、 IgE抗体は組織内のマ スト細胞や血中の好塩基球表面の Fc 'Rに結合する。アレルゲンは次回の侵入時に マスト細胞や好塩基球表面に結合して 、る IgE抗体に認識され、 IgE抗体間に架橋 が形成される。この刺激を引き金としてマスト細胞や好塩基球がケミカルメディエータ 一を爆発的に遊離することによって、アレルギーの諸症状が現れる。
[0004] IgEやケミカルメディエーターを介するアレルギーの予防'治療においては、例えば ヒスタミンレセプターにヒスタミンと拮抗的に結合することによって末梢神経力 の信号
伝達を阻害する抗ヒスタミン剤、ケミカルメディエーターの産生細胞の活性を弱めて 症状の軽減を試みる抗アレルギー剤、免疫応答性を弱めることによって炎症を軽減 するステロイド剤、アレルゲンそのものを定期的に注射することにより寛容を誘導する 減感作療法などがあるが、そのいずれも副作用が問題視されており、効果について も決定的なものがない。
[0005] 近年 IgEを抑制するために、 Th2サイト力インの産生を調節する方法に注目が集ま つている。結核菌や溶連菌、乳酸菌などのある種の細菌は Thl免疫を増強すること により、 Th2免疫を抑制し、その結果 IgEを低下させることが報告されている（臨床免 疫、 1999年、第 32卷、 454頁；インターナショナル'アーカイブス 'ォブ 'アレルギ一' アンド.ィムノロジー、 1998年、第 115卷、 278頁；特開平 9— 2959号公報）。
[0006] 中でも乳酸菌は安全性の面力 食品などへの応用が容易であり、有用な素材であ る。し力 一概に乳酸菌といっても全ての乳酸菌に Thl免疫を増強させる強い効果 があるわけではなぐ有用な株の選択をすることが必須となってくる。抗アレルギー乳 酸菌としては、 L. rhamnosus LGG株が公知であり妊婦に摂取させることにより、子 供のアトピー性皮膚炎発症が抑制されることが示されている（ランセット、 2001年、第 357卷、 1076頁）。乳酸菌を抗アレルギー剤として用いることについては、いくつか の特許公報でも開示されている。例えば、特開平 9— 2959号公報には、 L.ァシドフ ィルス、 L.ブレビス、 L.ブフネリ、及び L.カゼィ等の乳酸菌を添加してマウスリンパ 球を培養した際の IgE産生量が 30ng/ml以下のものを抗アレルギー剤として用いる ことについて、特開平 10— 309178号公報には、ビフイドバタテリゥム 'インファンティ ス、ビフイドバクテリウム'ブレーべ、ビフイドバタテリゥム 'ロンガム及びビフイドバタテリ ゥム ·ビフィダム等のビフィズス菌を特に食物アレルギーを治療するための抗アレルギ 一剤として用いることについて、及び、特開 2000— 95697号公報には、ェンテロコッ カス'フエカリス、ラクトバシルス 'ロイテリーなどの乳酸菌をアレルギ性気管支喘息、ァ レルギ性鼻炎及びアトピー性皮膚炎等の I型アレルギーの抑制剤として用いることに ついて、それぞれ開示されている。
[0007] 一方で、乳酸菌等が、 Thl免疫を増強することは IL12や IFN.ガンマ一などの産 生を介してマクロファージゃキラー T細胞、 NK細胞の細胞性免疫の活性ィ匕を意味し
、ウィルスや細菌感染、ガンの発生に対して抵抗することにつながることが分力つて いる。具体的にはマクロファージが産生する IL— 12は未分化のヘルパー T細胞の T hi細胞への分化、単球 'マクロファージ ·ΝΚ細胞の活性ィ匕を通して、外敵'ガンに対 する抵抗性を獲得させる。従って強い IL 12産生を誘導することのできる乳酸菌株 は免疫賦活剤として使用することができることが示唆されて 、る（キャンサー'ィムノ口 ジ一'ィムノセラピー、 2000年、第 49卷、 157頁；特開平 7— 228536号公報；特開 2 002— 80364号公報）。
[0008] 近年、アトピー性皮膚炎や花粉症など、アレルギーに起因すると考えられる体質変 化をおこした人が多く見受けられ、社会問題ィ匕している。その中でも特に症状が重い 患者に対しては、各種薬剤を使用しての治療行為が行われている。しかし、大部分 の対象者は本格治療を行うにまでは至っておらず、 日常生活をおこなっていく上で、 民間療法を含め、対処療法を行って対処しているのが実情である。そのような状況に 鑑みて、最近になって食餌によってアレルギーを抑えようとする研究が活発に行われ ている。その結果、例えば、シソ油や魚油、特定の茶ポリフエノール等、種々の飲食 品の成分に抗アレルギー効果を見い出して、それらを用いた対処が行われて 、る。
[0009] 抗アレルギー効果を有する飲食品の成分として、上述のように特定の乳酸菌にも同 様な効果が知られてきており、この乳酸菌を用いたヨーグルトや乳酸菌飲料が、抗ァ レルギ一効果を有する飲食物として一部実用化されて!/、る。乳酸菌は安全性の面か ら食品などへの応用が容易であり、有用な素材として着目されてきた。例えば、乳酸 菌を、 I型アレルギーの発症に関わる IgE抗体量を減少させてアレルギーの治療と予 防を容易にする抗アレルギー剤として、各種乳酸菌を有効成分とする抗アレルギー 剤が開示されている（特開平 9— 2959号公報、特開 2004— 26729号公報)。この 種の抗アレルギー用飲食品による予防或いは治療では、安全で、かつマイルドな条 件で摂取することが可能である代わり、毎日 «続摂取することが必要であり、尚かつ 該継続摂取することが可能な量で効能が発揮されることが必要である。
[0010] 乳酸菌の食品への応用として、ヨーグルト、チーズ、発酵乳等が挙げられ、また、乳 製品以外の飲食品にも利用が図られて!/、たが、 V、ずれも高温加熱処理が必要でな い飲食品への応用に限られていた。例えば、茶成分との利用を図るものとしては、放
冷した茶葉湯に、緑茶より分離したラクトバチルス 'プランタムを添加、発酵して飲料 用等に用いるもの (特開平 11— 276072号公報)、茶類エキス等を含む培地で培養 した乳酸菌培養物^食品として用いるもの (特開 2001— 190272号公報）、茶葉 等の植物資源を細カゝく粉砕したものを培養基として、ラクトバチルス 'プランタリウムの ような乳酸菌を添加'培養して、発酵食材として利用するもの（特開 2002— 330725 号公報）、茶葉抽出液力もポリフエノールを除去したものに、乳酸菌を添加培養して、 甘い花香を有する γ アミノ酸香含有茶飲料として利用するもの（特開 2003— 333 990号公報）、などが開示されている。
[0011] し力しながら、最近流通している容器詰飲料等、多くの飲食品においては、その製 造過程や流通過程、或いは、飲食時に高温加熱処理が行われるため、その際に乳 酸菌菌体の物性に変化が生じて、抗アレルギー活性が影響を受けるとの問題がある 。したがって、従来においては、高温加熱処理が行われる飲食品に対しては、乳酸 菌の抗アレルギー活性の利用が制約を受けるとの問題があった。しかし、従来にお いては、高温加熱処理が行われる飲食品に対しては、そのような問題があるということ のみならず、乳酸菌の抗アレルギー能に対する高温加熱処理の影響につ!、ての検 討もなされな 、まま、利用されな 、できた。
[0012] 一方、植物や飲食品中に含まれるポリフエノール類の生理活性が注目され、多くの 研究や報告がなされている。例えば、緑茶抽出物中のポリフエノール類の効果として は抗菌作用、抗酸化作用、コレステロール上昇抑制作用、 αアミラーゼ活性阻害作 用などが開示されている（特開 2003— 138258号公報、特開昭 60— 156614号公 報、特開平 3— 133928号公報、特開 2004— 166671号公報)。乳酸菌とポリフヱノ ールの同時摂取による便通改善効 (特開 2004— 155727号公報）、茶抽出中液で の培養（特開 2003— 333990号公報）。これらの開示は、いずれもポリフエノール類 の生理活性に注目するもので、乳酸菌との抗アレルギー能に関する相互作用に触れ るようなものはなかった。
[0013] 特許文献 1 :特開昭 60— 156614号公報。
特許文献 2：特開平 7— 228536号公報。
特許文献 3：特開平 9 2959号公報。
特許文献 4:特開平 10— 309178号公報
特許文献 5：特開平 11― 276072号公報。
特許文献 6：特開 2000— 95697号公報。
特許文献 7：特開 2001— 190272号公報。
特許文献 8：特開 2002— 330725号公報。
特許文献 9：特開平 3— 133928号公報。
特許文献 10：特開 2002— 80364号公報。
特許文献 11：特開 2003 - 138258号公報。
特許文献 12：特開 2003 - 333990号公報。
特許文献 13：特開 2004— 26729号公報。
特許文献 14:特開 2004— 155727号公報。
特許文献 15 :特開 2004— 166671号公報。
非特許文献 1 :臨床免疫、 1999年、第 32卷、 454頁;インターナショナル'アーカイブ ス 'ォブ 'アレルギ一'アンド'ィムノロジー、 1998年、第 115卷、 278頁。
非特許文献 2 :ランセット、 2001年、第 357卷、 1076頁。
非特許文献 3 :キャンサ一'ィムノロジ一'ィムノセラピー、 2000年、第 49卷、 157頁。 発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0014] 本発明の課題は、その製造過程や流通過程、或いは、飲食時に高温加熱処理が 行われる飲食品、更には高温処理後の常温保存下での飲食品に対しても適用が可 能な、すなわち、高温処理に対して乳酸菌の抗アレルギー活性を維持することが可 能な、乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に対する安定化方法、乳酸菌抗アレル ギー活性の高温処理に対する安定ィヒ組成物、及び、安定ィヒした乳酸菌抗アレルギ 一活性を有する飲料等の飲食品及びその製造方法を提供することにある。
課題を解決するための手段
[0015] 本発明者は、高温処理を行う飲食品における乳酸菌の抗アレルギー活性について 鋭意研究する中で、乳酸菌とポリフエノール類を併存させることにより、乳酸菌の抗ァ レルギ一活性が高温処理を行った場合でも、その活性を安定的に維持することがで
きることを見い出し、発明を完成するに至った。
[0016] すなわち、本発明者は、緑茶に抗アレルギー能を有する乳酸菌を添加し、 UHT殺 菌を施す検討の中で、緑茶成分のポリフ ノールが UHT殺菌、高温保存下での抗 アレルギー活性、及び高温処理後の常温保存下での飲食品の抗アレルギー活性の 安定ィ匕に寄与することを見い出し、本発明をなすに至った。本発明の乳酸菌抗ァレ ルギー活性の高温処理に対する安定ィ匕方法は、特に、飲料等を始めとして、その製 造過程や流通過程、或いは、飲食時に高温加熱処理が行われる広い範囲の飲食品 に対して適用することが可能なものである。本発明の乳酸菌抗アレルギー活性の高 温処理に対する安定化方法は、乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に対する安定 化組成物として提供することができ、該組成物によって、高温処理の行われる飲食品 に乳酸菌の安定ィ匕した抗アレルギー活性を付与することができ、本発明はそのような 乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に対する安定化組成物を包含する。本発明で 用いるポリフエノール類としては、好ましくは、緑茶抽出ポリフエノール類のような植物 抽出ポリフエノール類を用いることができる力 茶類のように飲食品自体にポリフエノ ール類が含まれる場合には、該ポリフエノール類を利用して、或いは、必要により該 ポリフエノール類に更にポリフエノール類を補充して、本発明を実施することができる
[0017] また、本発明においては、本発明の安定ィ匕方法を用いて、高温処理に対して安定 化した乳酸菌抗アレルギー活性を有する飲料等を製造するに際して、高温処理を特 定の pH条件で行うことにより、すなわち、 pH4. 6〜6. 6の範囲、特に好ましくは、 p H5. 5〜6. 5の範囲で行うことにより、高温処理に対して更に安定ィ匕した乳酸菌抗ァ レルギ一活性を有する飲料等を製造することができることを、更に、本発明の安定ィ匕 方法を用いて、高温処理に対して安定化した乳酸菌抗アレルギー活性を有する飲料 等を製造するに際して、高温処理して調製した飲料等を、特定の pH範囲に調整した 後、容器に充填して密封することにより、更に安定ィ匕した乳酸菌抗アレルギー活性を 有する飲料等を製造することができることを、見い出し、本発明をなした。
[0018] 本発明の乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に対する安定ィ匕方法は、高温処理 の行われる種々の飲食品に適用することができるが、特に、緑茶や発酵茶、或いは
半発酵茶のような茶飲料に適用することができ、本発明により高温処理に対して安定 化した乳酸菌抗アレルギー活性を有する飲料を提供することができる。更に、本発明 は、乳酸菌として高抗アレルギー活性を有する乳酸菌を用いることができ、本発明は そのような高抗アレルギー活性を有する乳酸菌を用いた、乳酸菌抗アレルギー活性 の高温処理に対する安定化方法、乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に対する安 定化組成物、及び、高温処理に対して安定化した乳酸菌抗アレルギー活性を有する 飲料等を包含する。かかる、高抗アレルギー活性を有する乳酸菌の例示として、特許 微生物の寄託のためのブダペスト条約に基く国際寄託当局である、独立行政法人産 業技術総合研究所特許生物寄託センター (あて名：〒 305— 8566 日本国茨城県 つくば巿東 1丁目 1番地 1 中央第 6 ;寄託日： 2004年 2月 20日）に、 FERM BP— 08634、及び、 FERM BP— 08635として寄託された L. paracasei KW3110及び その派生株を挙げることができる。本発明の乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に 対する安定化方法は、乳酸菌による抗アレルギー活性の付与に、乳酸菌の加熱死 菌を用いた場合にもその効果を奏する。
すなわち具体的には本発明は、（1)乳酸菌とポリフエノール類を併存させることを特 徴とする乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に対する安定化方法や、 (2)ポリフ ノ ール類力 植物抽出ポリフ ノール類であることを特徴とする上記（1)記載の乳酸菌 抗アレルギー活性の高温処理に対する安定化方法や、（3)植物抽出ポリフ ノール 類力 緑茶抽出ポリフエノール類であることを特徴とする上記（2)記載の乳酸菌抗ァ レルギ一活性の高温処理に対する安定化方法や、（4)乳酸菌が、高抗アレルギー活 性を有する乳酸菌であることを特徴とする上記（1)〜（3)の 、ずれか記載の乳酸菌 抗アレルギー活性の高温処理に対する安定化方法や、 (5)高抗アレルギー活性を する孚し酸 |ίί力、 Lactobacillus paracasei KW3110株、 Lactobacillus plantarum KW4110株、 Lactobacillus paracasei KW3925株、 Lactobacillus paracasei KW 3926株、又は Streptococcus salivarius KW3210又はこれらの派生株であることを 特徴とする上記 (4)記載の乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に対する安定ィ匕方 法や、（6)高抗アレルギー活性を有する乳酸菌が、 L. paracasei KW3110 (FERM BP— 08634)、又は、その派生株（FERM BP— 08635)であることを特徴とする
上記 (4)又は（5)記載の乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に対する安定化方法 からなる。
[0020] また本発明は、（7)上記（1)〜（6)のいずれか記載の乳酸菌と、上記（1)〜（6)の いずれか記載のポリフエノール類を併存させたことを特徴とする乳酸菌抗アレルギー 活性の高温処理に対する安定化組成物や、 (8)乳酸菌とポリフエノール類を併存さ せた乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に対する安定ィ匕組成物が、飲料添加用で あることを特徴とする上記（7)記載の乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に対する 安定化組成物からなる。
[0021] さらに本発明は、（9)上記（1)〜（6)のいずれか記載の乳酸菌と、上記（1)〜（6) のいずれか記載のポリフエノール類を併存させたことを特徴とする高温処理に対して 安定化した乳酸菌抗アレルギー活性を有する食品や、 (10)上記（1)〜（6)の 、ず れか記載の乳酸菌と、上記（1)〜（6)の ヽずれか記載のポリフエノール類を併存させ たことを特徴とする高温処理に対して安定化した乳酸菌抗アレルギー活性を有する 飲料や、（11)飲料が、乳成分非配合密封容器入り飲料であることを特徴とする上記 (10)記載の高温処理に対して安定化した乳酸菌抗アレルギー活性を有する飲料や 、（12)飲料が密封容器入り果汁含有清涼飲料又は茶飲料であることを特徴とする上 記（10)又は（11)記載の高温処理に対して安定ィ匕した乳酸菌抗アレルギー活性を 有する飲料や、（13)飲料が、茶飲料に乳酸菌とポリフ ノール類を添加するか、或 いは、乳酸菌を添加する力して、上記（1)〜（6)のいずれか記載の乳酸菌と上記（1) 〜（6)の 、ずれか記載のポリフエノール類を併存させたことを特徴とする上記（10)〜 (12)のいずれか記載の高温処理に対して安定ィ匕した乳酸菌抗アレルギー活性を有 する飲料や、（14)茶飲料が、緑茶飲料であることを特徴とする上記（13)記載の高温 処理に対して安定化した乳酸菌抗アレルギー活性を有する飲料や、（15)茶飲料が 、発酵茶又は半発酵茶であることを特徴とする上記（13)記載の高温処理に対して安 定ィ匕した乳酸菌抗アレルギー活性を有する飲料や、（16)密封容器入り飲料におい て、添加する乳酸菌が、飲料 lOOgあたり 109〜： L011個の範囲であることを特徴とする 上記（10)〜（15)のいずれか記載の高温処理に対して安定ィヒした乳酸菌抗アレル ギー活性を有する飲料力 なる。
[0022] また、本発明は、（17)上記（10)〜（16)のいずれか記載の乳酸菌抗アレルギー活 性を有する飲料を製造するに際して、飲料の高温処理を、 pH4. 6〜6. 6の範囲で 行うことを特徴とする高温処理に対して安定ィ匕した乳酸菌抗アレルギー活性を有す る飲料の製造方法や、（18)飲料の高温処理を、 pH5. 5〜6. 5の範囲で行うことを 特徴とする上記（17)記載の高温処理に対して安定ィヒした乳酸菌抗アレルギー活性 を有する飲料の製造方法や、（19)飲料の高温処理が、 UHT殺菌処理であることを 特徴とする上記（17)又は（18)記載の高温処理に対して安定化した乳酸菌抗アレル ギー活性を有する飲料の製造方法や、 (20)上記（10)〜（16)のいずれか記載の乳 酸菌抗アレルギー活性を有する飲料を製造するに際して、高温処理して調製した飲 料を、 pH5. 5〜6. 5の範囲に調整した後、容器に充填して密封することを特徴とす る高温処理に対して安定化した乳酸菌抗アレルギー活性を有する飲料の製造方法 や、（21)飲料が、緑茶飲料であることを特徴とする上記（17)〜（20)のいずれか記 載の高温処理に対して安定化した乳酸菌抗アレルギー活性を有する飲料の製造方 法からなる。
図面の簡単な説明
[0023] [図 1]本発明で用いることができる乳酸菌及びその入手先 (No. 1)を示す図である。
[図 2]本発明で用いることができる乳酸菌及びその入手先 (No. 2)を示す図である。
[図 3]本発明で用いることができる乳酸菌及びその入手先 (No. 3)を示す図である。
[図 4]本発明の実施例において、乳酸菌を各緑茶に混合した際の、 UHT殺菌による 抗アレルギー活性の変化を示す図である。
[図 5]本発明のの実施例において、緑茶中乳酸菌の抗アレルギー活性について、 5
°C及び 50°C保存 1週間後の相対抗アレルギー活性を示す図である。
[図 6]本発明の実施例において、各種 pH条件における、加熱処理について、乳酸菌 抗アレルギー残存活性についての相対活性を測定した結果を示す図である。
[図 7]本発明の実施例において、 UHT殺菌後の緑茶を、各種 pHに調整後、容器に 充填し、密封した場合の、緑茶中の乳酸菌の抗アレルギー能を評価した結果を示す 図である。
発明を実施するための最良の形態
[0024] 本発明は、乳酸菌とポリフエノール類を併存させることにより、高温処理に対して乳 酸菌の持つ抗アレルギー活性を安定化する方法、該方法を用いる乳酸菌抗アレル ギー活性の高温処理に対する安定化組成物及び高温処理に対して安定化した乳酸 菌抗アレルギー活性を有する飲食品よりなる。本発明における「高温処理」には、例 えば、 50°C以上の温度で行われる殺菌操作、ホットベンダーにおける商品展示， U HT殺菌等、飲食品の製造過程や流通過程、或いは、飲食時に飲食品に加えられる 常温以上の温度処理で、乳酸菌の抗アレルギー活性を低下させるような温度処理が 含まれる。本発明の安定化した乳酸菌抗アレルギー活性を有する飲料等の製造に おいて、高温処理を行うに際しては、 ρΗ4. 6〜6. 6の条件で行うことが好ましい。 p H5. 5〜6. 5の範囲で行うことが更に好ましい。
[0025] 本発明で用いるポリフエノール類としては、好ましくは、緑茶抽出ポリフエノール類の ような植物抽出ポリフエノール類を挙げることができる。茶類のように飲食品自体にポ リフエノール類が含まれる場合には、該ポリフエノール類を利用して、乳酸菌とポリフ エノール類を併存させることができ、必要により飲食品自体に含まれる該ポリフエノー ル類に更にポリフエノール類を補充して、或いは、濃縮等によりポリフエノール類の濃 度を増して、必要量を併存させることができる。
[0026] 植物原料力 ポリフ ノール類を調製するには、植物体からの熱水抽出等により適 宜調製することができる。本発明のポリフエノールの取得方法のひとつとして緑茶抽 出が用いられる。ここでいう緑茶抽出とは、茶葉から熱水若しくは水溶性有機溶媒に より抽出された抽出液を濃縮したものをさらに精製する、或いは、抽出液を直接精製 することである。また市販の三井農林 (株）「ポリフエノン」、伊藤園 (株）「テアフラン」、 太陽化学 (株）「サンフエノン」などの緑茶抽出液の濃縮物を用いることもできる。本発 明にお 、て、飲食品中に乳酸菌とポリフエノール類を併存させる場合の好ま 、ポリ フエノール類の濃度としては、総ポリフエノール類濃度が少なくても 50〜130mg/l OOmlの範囲のものが好ましぐ更には、 60〜130mgZlOOmlの範囲のものが好ま しい。
[0027] 本発明で用いられる乳酸菌は、抗アレルギー活性を有するものであれば特に限定 されず、ラクトバチルス属、ストレプトコッカス属、ラタトコッカス属、ロイコノストック属、
ェンテロコッカス属等のいずれの乳酸菌をも使用することができる。本発明のための 乳酸菌として具体例を挙げると：ラクトバチルス ·ァシドフィルス、ラクトバチルス ·ブレ ビス、ラクトバチルス 'カゼィ、ラクトバチルス 'デルプリュッキイ、ラクトバチルス 'ファー メンタム、ラクトバチルス 'ヘルべティカス、ラクトバチルス'ケフィァ、ラクトバチルス'パ ラカゼィ、ラクトバチルス ·プランタラム、ラクトバチルス 'ラムノーサス、ラクトバチルス' サリバリウス、ストレプトコッカス 'サ一モフイノレス、ラタトコッカス'ラクテイス、ラタトコッカ ス'プランタラム、ラタトコッカス'ラフイノラクテイス、ロイコノストック'ラクテイス、ロイコノ ストック.メセンテロイデス、等が挙げられる。
[0028] 本発明で用いることができる乳酸菌の例及びその入手先を、図 1 (No. 1)及び図 2
(No. 2)に示す。本発明においては、全ての菌株を KWで始まる番号にて識別して いるが、これら試験株は独自で単離したもの、市販乳製品で使用されているもの、公 的機関等力 入手したもの等があるために便宜上統一した識別名を付したものであり 、それぞれの KW株と入手由来との関係は図 1 (No. 1)、図 2 (No. 2)及び図 3 (No . 3)の通りである。なお、該図 1及び図 2の「入手先」において、「JCM」は理ィ匕学研 究所微生物系統保存施設を、「IFO」は前財団法人発酵研究所 (現在は、独立行政 法人製品評価技術基盤機構 生物資源センター (NBRC) )を表す。
[0029] 本発明にお 、ては、抗アレルギー活性を有する乳酸菌として、高抗アレルギー活 性を有する乳酸菌を用いることができる。該高抗アレルギー活性を有する乳酸菌とし ては、 Lactobacillus paracasei KW3110 、 Lactobacillus plantarum KW4110 株、 Lactobacillus paracasei KW3925株、 Lactobacillus paracasei KW3926株、 又は Streptococcus salivarius KW3210又はこれらの派生株を挙げることができる。
[0030] 該乳酸菌は、例えば L. paracasei KW3110株は、 L.casei L14株として、日本乳 業技術協会から入手することができる。なお、日本乳業技術協会の記載によれば、 L 14株は L. caseiとの記載があるが、本発明者らが QUALICON社製リボプリンターを用 い 7こ RFLP (Restriction Flagment Length Polymorphism)及！ AFLP、 mplined Flag ment Length Polymorphism)を用いて解析したところ、当該株は L. paracaseiと判断さ れたため、本発明においては L. paracaseiと記載した。本発明で抗アレルギー用組 成物の有効成分として使用される L. paracasei KW3110は、上記のとおり日本乳業
技術協会から入手することができる力 更に、特許微生物の寄託のためのブダペスト 条約に基く国際寄託当局である、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託 センターに、 FERM BP— 08634として寄託されている。また、 L. paracasei KW3 110の派生株は、 FERM BP— 08635として同特許生物寄託センターに寄託され ている。
[0031] また、本発明で高抗アレルギー活性を有する乳酸菌として使用される L. plantarum
KW4110株は L. plantarum JCM1149株として、 L. paracasei KW3926株は L. paracasei JCM8132株として、 JCM (理化学研究所微生物系統保存施設)から入手 することができ、及び、 L. paracasei KW3925株は L. paracasei NRIC1917株とし て、 NRIC (東京農業大学)から入手することができる。
[0032] 本発明で用いる抗アレルギー活性を有する乳酸菌は、前記乳酸菌を培地にぉ 、て 培養することにより調製することができる。培養に用いる培地は、前記乳酸菌が生育 可能な培地であればどのようなものでも利用可能であり、獣乳、脱脂乳、乳性ホエー 、 MRS培地、 GAM培地、 BL培地、 Briggs Liver Brothや合成培地などを用いること ができる。培養温度は 20°Cから 50°C、好ましくは 25°C力も 42°Cとすることができる。 また、培養時間は 3時間から 96時間とすることができる。培養終了後の培地をそのま ま、又は必要に応じてさらに処理することにより本発明の乳酸菌とすることができる。 例えば、培養終了後の培地力 遠心分離、ろ過等により集菌して菌体のみとしたもの 、これをスプレイドライ乾燥菌体としたもの、凍結乾燥菌体としたものも本発明の乳酸 菌とすることができる。本発明の乳酸菌は、前記乳酸菌菌体に加え、他の成分を含 むことができる。他の成分としては、賦形剤等の添加剤、及び後述する培地の成分等 を挙げることができる。
[0033] 本発明で用いる高抗アレルギー活性を有する乳酸菌の具体的調製例を示すと：
(乳酸菌 KW3110株菌体の調製）
乳酸菌の培養には、培養用培地 (グルコース 1%、酵母エキス S (武田キリン食品社) 1%、 MgSO · 7Η O 50ppm、 MnSO · 5Η O 50ppm)を使用した。前培養は乳
4 2 4 2
酸菌 KW3110株を培養用培地 10mlに接種し、 37°Cで 20〜24hr静置し、行った。 本培養は、前培養液 0. 6mlを 120mlの培養用培地に接種し、 200ml容フアーメンタ
一（モデル BMJ— 25、エイブル社）を用いて、 28°Cにて培養した。通気量は 0. 12L Zmin、攪拌速度は 500rpmとした。 pHは 25% NaOH溶液を用いて pH 4. 5以 下にならな 、ように制御した。培養は 48時間行った。
[0034] 培養終了後、 8500Xg、 10分間の遠心分離により、菌体を集菌した。 30mlの滅菌 蒸留水に懸濁し、 8500Xg、 10分間の遠心分離により、菌体を集菌した。この洗浄操 作を 3回繰り返し、培地由来成分を除去した。洗浄菌体を、 10mlの滅菌水に懸濁し 、オートクレープにて 100°C、 30分間処理した後、凍結乾燥した。最終的に乳酸菌 乾燥菌体 50〜70mgが得られた。得られた乳酸菌菌体の抗アレルギー活性を確認 した。
[0035] 本発明の乳酸菌とポリフエノール類を併存させる乳酸菌抗アレルギー活性の高温 処理に対する安定化方法は、その製造過程や流通過程、或いは、飲食時に高温カロ 熱処理が行われる広い範囲の飲食品に対して、適用することができる。本発明のもの は、乳酸菌とポリフエノール類を併存させた乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に 対する安定ィ匕組成物として、各種飲食品に添加して、飲食品に安定化した抗アレル ギー活性を付与することができる。
[0036] 本発明の乳酸菌とポリフエノール類を併存させる乳酸菌抗アレルギー活性の高温 処理に対する安定化方法は、特に、飲料における安定化した抗アレルギー活性の付 与に有利に適用することができる。該飲料としては、茶系飲料或いは非茶系飲料を 挙げることができる。力かる場合に配合する特に好ましいポリフエノール類としては、 緑茶抽出ポリフエノール類のような植物抽出ポリフエノール類が挙げられる。緑茶抽 出ポリフ ノール類は、配合対象として、緑茶、半発酵茶及び発酵茶力も選ばれた茶 の抽出液;及び非茶系飲料に配合する特に好ましいポリフエノール類として挙げるこ とができる。このうち、茶の抽出液に前記緑茶抽出物を配合した飲料が好ましぐ緑 茶の抽出液に前記緑茶抽出物を配合した緑茶飲料とするのが特に好ましい。
[0037] 半発酵茶としては烏龍茶が挙げられ、発酵茶としては紅茶が挙げられる。また非茶 系飲料としては例えばソフトドリンクである炭酸飲料、果実エキス入り飲料、野菜ェキ ス入りジュース、ユアウォーター、スポーツ飲料、ダイエット飲料などが挙げられる。本 発明により、安定ィ匕した抗アレルギー活性の付与した飲料を密封容器入り飲料として
製品化する場合においては、添加する乳酸菌が、飲料 lOOgあたり ιο9 ^)11個の 範囲であるように調整することが好ま 、。
[0038] 本発明にお 、て、本発明の高抗アレルギー活性を有する乳酸菌を配合する飲料と しては、上記のとおり各種のものを挙げることができる力 それらの飲料の製造に際し ては、通常の飲料の処方設計に用いられる糖類、香料、果汁、食品添加物などいず れも使用することが出来る。飲料の製造に関しては、既存の参考書、例えば「改訂新 版ソフトドリンクス」（株式会社光琳)等を参考にすることができる。
[0039] 本発明にお 、て、特に、配合に適した飲料としては、抗アレルギー作用及び製品の 保存、安定ィ匕の観点から、乳成分を含まない、すなわち、例えば、果汁入り清涼飲料 或いは上記茶飲料のような乳成分非配合の形の飲料が特に好ま 、。本発明の安 定化した乳酸菌抗アレルギー活性を有する飲料等は、容器に充填して密封すること により、「密封容器詰飲料」として製品化することができる。その際に、高温処理して 調製した飲料を、 pH5. 5〜6. 5の範囲に調整した後、充填することが好ましい。
[0040] 以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこ れらの例示に限定されるものではない。
実施例 1
[0041] ァスコルビン酸 3gを溶解させた 80°Cの温水 3. 5kgで緑茶葉（かぶせ茶'玉露を主 とする） 100gを約 6分間抽出した。抽出液をメッシュに通して茶葉を取り除き、遠心分 離した。その上清に重曹を 5g、ァスコルビン酸を 3gカ卩え、水を加えて 12kgにした。 本緑茶液を基本緑茶（1)とし、 (1)にポリフエノン 70A (三井農林株式会社)を 8g添 カロしたものを基本緑茶 +ポリフエノン 70A(2)、遠心分離後の抽出液上清を（1)の 2 倍量使用したものを茶葉抽出液 2倍緑茶 (3)、 (1)における遠心分離前の抽出液に PVPPを 18g添加'攪拌し、遠心分離した上清を使用したものを PVPP処理緑茶 (4) とした。
[0042] (1)〜（4)の pHは 6. 0〜7. 0であり、また、（1)〜（4)の総ポリフエノール量を、標 準液に没食子酸ェチルを用いた酒石酸鉄法にて定量した。（参考文献:茶業研究報 告第 71号（1990)茶の分析法 タンニン値の比色定量法)。定量した結果を表 1に示 す。
[0043] [表 1]
総ポリフ丄ノール鳳 (mg/ 100m l ) 基本緑茶（1 ) 57. 5 基本緑茶 ボリフエノン ι ΟΑ ( 2 ) 1 22
茶葉抽出液 2倍緑茶 (3) 1 1 1
PVPP処理緑茶（4) 9. 93
[0044] 上記緑茶（1)〜（4)に乳酸菌 Lactobacillus paracasei KW31 10株乾燥菌体 (加熱 死菌：キリンビール (株)機能食品カンパ-一より入手)を、 0. 02%添加し、 UHT殺 菌を行った。殺菌条件は、 135°C、 30秒と、 137°C、 30秒の条件で行い、 500ml容 ペットボトルにホットパック充填した。殺菌後の緑茶 25mUり 8000回転、 10分間の遠 心分離で乳酸菌の沈殿物を取得した。沈殿物を PBS (—）で洗浄後、再度遠心分離 し、沈殿物を 5mlの PBS (—）に懸濁した。
[0045] 乳酸菌の in vitroにおける抗アレルギー活性はマウス脾臓リンパ球と混合培養を行 つた際に、培地中に放出される IL— 12量を測定することによって行った。 7— 10週 齢 BALBZcマウス（チャールズリバ一）に dayOと day6に卵白アルブミン（OVA) lmg をアジュバントである水酸ィ匕アルミニウム 2mgと共に腹腔内注射した。 Dayl 3に解剖 し、脾臓を単離'リンパ球を調製した。脾臓リンパ球を FCS (ロシュ）と OVAをそれぞ れ終濃度 10%及び lmgZmlになるように添加した RPM11640 (SIGMA)培地で細 胞濃度が 2. 5 X 106cells Zmlになるように懸濁した。乳酸菌を上記培地に 0. 25 μ gZmlになるように添加し、 1週間 37°C、 CO濃度 5%で培養した。遠心分離にて培
2
養上清を回収し、 Opt EIA ELISA Set (ベタトン'ディッキンソン）を用いて IL— 1 2生産量を測定した。
[0046] 図 4に各緑茶に混合した際の、 UHT殺菌による抗アレルギー活性の変化を示す。
殺菌前に対する UHT殺菌後の相対抗アレルギー活性を示す。両殺菌条件にお!ヽ て、基本緑茶（1)と比較して基本緑茶 +ポリフエノン 70A (2)及び、茶葉抽出液 2倍 緑茶の UHT殺菌後の残存活性は 10〜20%高いい結果となった。 PVPP処理緑茶 (4)において残存抗アレルギー活性は基本緑茶（1)と比較して 10〜20%低い結果
となった。残存抗アレルギー活性の高さと表 1に示すポリフエノール含量 (タンニン含 量）に相関があると考えられた。
実施例 2
[0047] 実施例（1)で調製した 4種類の緑茶を 5°C及び、 50°Cで 1週間保存し、保存後の緑 茶中乳酸菌の抗アレルギー活性を評価した。実験は実施例（1)と同様の手順で行つ た。図 5に 5°Cに対する 50°C保存 1週間後の相対抗アレルギー活性を示す。
[0048] 両殺菌条件において、基本緑茶 +ポリフエノン 70A (2)、及び茶葉抽出液 2倍緑茶
(3)は保存温度で抗アレルギー活性はほとんど変わらなカゝつたのに対し、基本緑茶（ 1)では抗アレルギー活性の低下が見られ、 PVPP処理緑茶（4)においては大幅な 抗アレルギー活性の低下が見られた。実施例（1)の UHT殺菌直後の抗アレルギー 活性と同様に、 50°C保存における安定性においてもポリフエノール含量が高いことの 優位性が確認された。 50°C保存における優位性が確認されたことから，常温保存下 での長期安定性も高!ヽと考えられる。
実施例 3
[0049] pH4. 0、 4. 3、 4. 6、 5. 0、 5. 3、 5. 6、 6. 0、 6. 3、 6. 6、 7. 0の 50mM クェン 酸 Zクェン酸ナトリウムバッファーに乳酸菌 Lactobacillus paracasei KW3110株乾燥 菌体を、 0. 025%添加し、 95°C180分間加熱処理を行った。加熱後、遠心分離で 乳酸菌沈殿物を取得し、乳酸菌の抗アレルギー能を評価した。実験は実施例（1)と 同様の手順で行った。図 6にそれぞれの pHのバッファーに混合した際の、加熱処理 による抗アレルギー能の変化を示す。加熱処理による残存活性は pHに依存して ヽ た。 pH6. 0と比較して pH7. 0では 40%程度低い結果となった。この事は、実施例 4 の緑茶混合時の結果と同様の結果であった。
実施例 4
[0050] ァスコルビン酸 3gを溶解させた 80°Cの温水 3. 5kgで緑茶葉（かぶせ茶'茎茶を主 とする） 100gを約 6分間抽出した。抽出液をメッシュに通して茶葉を取り除き、遠心分 離した。その上清に重曹'ァスコルビン酸'緑茶エキスをそれぞれ 3g、乳酸菌 Lactoba cillus paracaseiKW3110株乾燥菌体を 2g加え、水で 12kgにメスアップした。これを 緑茶（1)： pH = 6. 0とした。上記緑茶（1)の重曹添加量を変更し、 pHをそれぞれ、 5
. 5、 6. 5、 7. 0に調整したものを緑茶（2)、（3)、（4)とした。該緑茶（1)〜 (4)を UH T殺菌後、 350ml容ペットボトルにホットパック充填した。殺菌後の緑茶より遠心分離 で乳酸菌沈殿物を取得し、緑茶中乳酸菌の抗アレルギー能を評価した。実験は実施 例（1)と同様の手順で行った。図 7に各緑茶に混合した際の、 UHT殺菌による抗ァ レルギ一能の変化を示す。 pH5. 5、 6. 0、 6. 5は UHT殺菌による残存活性は同程 度であったのに対し、 pH7. 0では 50%程度低い結果となった。残存抗アレルギー 能の高さと pHに相関があることが確認された。
産業上の利用可能性
本発明は、乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に対する安定化方法を提供する。 本発明により、その製造過程や流通過程、或いは、飲食時に高温加熱処理が行わ れる広い範囲の飲食品、及び高温処理後、常温で保存される広い範囲の飲食品に 対して、乳酸菌による安定ィ匕した抗アレルギー活性を付与することができ、該活性を 安定化して、維持することができる。本発明は、本来ポリフエノールを多く含む、茶類 等の飲料に有利に適用することができ、本発明により乳酸菌による安定した抗アレル ギー活性を有する飲料を提供することができる。本発明において、好ましい態様とし て、用いる乳酸菌として高抗アレルギー活性を有する乳酸菌を用いることができ、該 乳酸菌により、高抗アレルギー機能を有する安定ィ匕した活性の飲食品を提供するこ とがでさる。
Claims
[1] 乳酸菌とポリフエノール類を併存させることを特徴とする乳酸菌抗アレルギー活性の 高温処理に対する安定化方法。
[2] ポリフエノール類力 植物抽出ポリフエノール類であることを特徴とする請求項 1記載 の乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に対する安定ィヒ方法。
[3] 植物抽出ポリフエノール類力 緑茶抽出ポリフエノール類であることを特徴とする請求 項 2記載の乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に対する安定化方法。
[4] 乳酸菌が、高抗アレルギー活性を有する乳酸菌であることを特徴とする請求項 1〜3 のいずれか記載の乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に対する安定化方法。
[5] 高抗アレルギー活性を有する乳酸菌が、 Lactobacillus paracasei KW3110株、 La ctobacillus plantarum KW4110 、 Lactobacillus paracasei W d 925株、 Lacto bacillus paracasei KW3926株、又 ίま Streptococcus salivarius KW3210又 ίまこ れらの派生株であることを特徴とする請求項 4記載の乳酸菌抗アレルギー活性の高 温処理に対する安定化方法。
[6] 高抗アレルギー活性を有する乳酸菌が、 L. paracasei KW3110 (FERM BP— 08 634)、又は、その派生株 (FERM BP— 08635)であることを特徴とする請求項 4又 は 5記載の乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に対する安定ィヒ方法。
[7] 請求項 1〜6のいずれか記載の乳酸菌と、請求項 1〜6のいずれか記載のポリフエノ 一ル類を併存させたことを特徴とする乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に対する 安定化組成物。
[8] 乳酸菌とポリフエノール類を併存させた乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に対す る安定ィ匕組成物力 飲料添加用であることを特徴とする請求項 7記載の乳酸菌抗ァ レルギ一活性の高温処理に対する安定化組成物。
[9] 請求項 1〜6のいずれか記載の乳酸菌と、請求項 1〜6のいずれか記載のポリフエノ 一ル類を併存させたことを特徴とする高温処理に対して安定ィ匕した乳酸菌抗アレル ギー活性を有する食品。
[10] 請求項 1〜6のいずれか記載の乳酸菌と、請求項 1〜6のいずれか記載のポリフエノ 一ル類を併存させたことを特徴とする高温処理に対して安定ィ匕した乳酸菌抗アレル
ギー活性を有する飲料。
[11] 飲料が、乳成分非配合密封容器入り飲料であることを特徴とする請求項 10記載の高 温処理に対して安定化した乳酸菌抗アレルギー活性を有する飲料。
[12] 飲料が密封容器入り果汁含有清涼飲料又は茶飲料であることを特徴とする請求項 1 0又は 11記載の高温処理に対して安定化した乳酸菌抗アレルギー活性を有する飲 料。
[13] 飲料が、茶飲料に乳酸菌とポリフ ノール類を添加するか、或いは、乳酸菌を添加す る力して、請求項 1〜6のいずれか記載の乳酸菌と請求項 1〜6のいずれか記載のポ リフエノール類を併存させたことを特徴とする請求項 10〜 12のいずれか記載の高温 処理に対して安定ィヒした乳酸菌抗アレルギー活性を有する飲料。
[14] 茶飲料が、緑茶飲料であることを特徴とする請求項 13記載の高温処理に対して安定 ィ匕した乳酸菌抗アレルギー活性を有する飲料。
[15] 茶飲料が、発酵茶又は半発酵茶であることを特徴とする請求項 13記載の高温処理 に対して安定ィ匕した乳酸菌抗アレルギー活性を有する飲料。
[16] 密封容器入り飲料において、添加する乳酸菌が、飲料 lOOgあたり lC lO11個の範 囲であることを特徴とする請求項 10〜 15のいずれか記載の高温処理に対して安定 ィ匕した乳酸菌抗アレルギー活性を有する飲料。
[17] 請求項 10〜16の ヽずれか記載の乳酸菌抗アレルギー活性を有する飲料を製造す るに際して、飲料の高温処理を、 pH4. 6〜6. 6の範囲で行うことを特徴とする高温 処理に対して安定化した乳酸菌抗アレルギー活性を有する飲料の製造方法。
[18] 飲料の高温処理を、 pH5. 5〜6. 5の範囲で行うことを特徴とする請求項 17記載の 高温処理に対して安定化した乳酸菌抗アレルギー活性を有する飲料の製造方法。
[19] 飲料の高温処理が、 UHT殺菌処理であることを特徴とする請求項 17又は 18記載の 高温処理に対して安定化した乳酸菌抗アレルギー活性を有する飲料の製造方法。
[20] 請求項 10〜16の 、ずれか記載の乳酸菌抗アレルギー活性を有する飲料を製造す るに際して、高温処理して調製した飲料を、 pH5. 5〜6. 5の範囲に調整した後、容 器に充填して密封することを特徴とする高温処理に対して安定化した乳酸菌抗ァレ ルギー活性を有する飲料の製造方法。
[21] 飲料が、緑茶飲料であることを特徴とする請求項 17〜20のいずれか記載の高温処 理に対して安定化した乳酸菌抗アレルギー活性を有する飲料の製造方法。
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