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WO2006016062A1 - Pluritherapie contre le cancer - Google Patents

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WO2006016062A1
WO2006016062A1 PCT/FR2005/001797 FR2005001797W WO2006016062A1 WO 2006016062 A1 WO2006016062 A1 WO 2006016062A1 FR 2005001797 W FR2005001797 W FR 2005001797W WO 2006016062 A1 WO2006016062 A1 WO 2006016062A1
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WO
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inhibitor
pharmaceutical composition
composition according
cancer
pyruvate
Prior art date
Application number
PCT/FR2005/001797
Other languages
English (en)
Inventor
Laurent Schwartz
Maurice Israel
Original Assignee
Laurent Schwartz
Maurice Israel
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Laurent Schwartz, Maurice Israel filed Critical Laurent Schwartz
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Priority to US11/572,068 priority patent/US20070280918A1/en
Priority to EP05790826A priority patent/EP1771164A1/fr
Publication of WO2006016062A1 publication Critical patent/WO2006016062A1/fr

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Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Definitions

  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for the treatment of cancer characterized in that it comprises the combination of at least several active ingredients selected from the following: a PP2A methylating agent, a PP1 phosphatase inhibitor, an inhibitor histone deacetylase, a direct or indirect activator of pyruvate kinase, a PTEN agonist, a tyrosine kinase inhibitor, a PI3 kinase inhibitor, a glucose competitor, an inhibitor of phosphoenol pyruvate carboxykinase. citrate synthase and an inhibitor of lactate dehydrogenase.
  • active ingredients selected from the following: a PP2A methylating agent, a PP1 phosphatase inhibitor, an inhibitor histone deacetylase, a direct or indirect activator of pyruvate kinase, a PTEN agonist, a tyrosine kinase inhibitor, a PI3 kinas
  • Cancer is usually defined as a set of diseases that have the symptom of developing tumors. These tumors are composed of atypical cells, having an autonomous capacity of growth, an imprecise delimitation, a capacity of invasion of the neighboring tissues and vessels and a tendency to disseminate by the production of metastases.
  • compositions used in chemotherapy essentially aim to eliminate tumor cells from the body, in particular when they are disseminated in the form of metastases. These compositions are more or less selective depending on the type of cancer to be treated and often poorly tolerated by the body.
  • compositions can not therefore be prescribed for a long time without having an aggravating effect on the state of health of the patients. They also have the disadvantage of not completely preventing the recurrence of cancer since the origin of the cancer at the cell scale is not treated.
  • the therapeutic treatment of cancer is hampered by the absence of obvious, well-characterized therapeutic targets that are common to different types of cancer. If such targets had been identified, probably effective compounds with real remission power on the patients would have already been identified.
  • Glycolysis is defined as a series of reactions consisting of degrading glucose-6-phosphate to form pyruvate and providing the cell with energy (two molecules of ATP) and a certain reducing potential (by reduction NAD).
  • This series of reactions involves the action of various enzymes [LEHNINGER A. et al. Principles of biochemistry, FLAMMARION. 1994], in particular pyruvate kinase, which is the only enzyme allowing the transformation of Phosphoenol pyruvate (PEP) into pyruvate ( Figure 1).
  • the pyruvate kinase When the pyruvate kinase is present in its inactive form M2, the formation of pyruvate by the Embden-Meyerhof pathway is interrupted.
  • the cell under these circumstances must cope with the accumulation in the cytoplasm of the degradation products of glucose-6-P, such as fructosel-6P, fructose 6P, phosphoenolpyruvate, Gly-2,3-biphosphate ( 2-3 DPG) as well as other glucose metabolites, and a pyruvate deficiency.
  • the pyruvate deficiency forces the cell to mobilize malic acid and alanine so as to form pyruvate by another metabolic pathway than that of Ebden-Meyerhof, which results in a significant production of lactate. transforming into lactic acid.
  • lactic acid has negative effects on the cell because it tends to acidify the cell environment, which, by the destruction of certain tissues, promotes the spread of cancer [Stern R. et al., Lactate stimulates fibroblast expression of hyaluronan and CD44: the warburg effect revisited].
  • the MAP-kinases have the particularity of being able to activate the PP1 phosphatase, which is one of the main activators of the MPF (Maturation Promoting Factor)
  • MPF is a complex associating kinases and cyclins and which allows the passage of the cell from one phase of the cell cycle to another and thus to cause a mitosis.
  • a mitosis is analyzed as the division of a mother cell into two daughter cells.
  • the cells When the cells are in mitosis, they are forced to cope with significant energetic needs, which forces them to increase their carbohydrate-type metabolism. In the case of a dysfunction of glycolysis, such as the one just mentioned, the production of lactate and free radicals is systematically increased, while the cell fails to provide the necessary amounts of acetyl-CoA to the Krebs cycle. The cell is therefore forced to bring more and more glucose, which has the dual effect of stimulating cell division and increasing metabolic disorder within the cell.
  • compositions comprising active principles intended to reduce the accumulation of glycolytic products in the cell, in particular with the aim of restoring the enzymatic activity of pyruvate kinase.
  • compositions having the dual function of regulating glycolysis, but also of limiting the entry of glucose into the cell.
  • the invention more particularly relates to compositions comprising the combination of a PP2A phosphatase methylating agent with one or more of the above-mentioned active ingredients such as a PTEN agonist, a lactate dehydrogenase inhibitor, or an inhibitor of phosphoenol pyruvate carboxykinase.
  • active ingredients such as a PTEN agonist, a lactate dehydrogenase inhibitor, or an inhibitor of phosphoenol pyruvate carboxykinase.
  • the present compositions seek, above all, to inhibit the process of transformation of tumor cells.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition intended for the treatment of cancer, characterized in that it comprises one or more active ingredients having the direct or indirect effect of regulating glycolysis or reducing the entry of glucose into the body. the cell.
  • the active principles targeted by the invention consist of the following: a PP2A methylating agent, a PP1 phosphatase inhibitor, a histone deacetylase inhibitor, a direct or indirect activator of pyruvate kinase, a PTEN agonist, a tyrosine kinase, an inhibitor of PI3 kinase, a competitor of glucose, an inhibitor of phosphoenol pyruvate carboxykinase, a citrate synthase inhibitor and a lactate dehydrogenase inhibitor.
  • Said active ingredients can be administered simultaneously or successively over time.
  • a pharmaceutical composition according to the invention more particularly provides for the combination of at least two of these active ingredients.
  • the combination of these active principles comprises, on the one hand, at least one PP2A methylating agent, and on the other hand, at least one active ingredient chosen from the group comprising an inhibitor of PP1 phosphatase, a histone deacetylase inhibitor, a direct or indirect activator of pyruvate kinase, a PTEN agonist, a tyrosine kinase inhibitor, a PI3 kinase inhibitor, a glucose competitor, a phosphoenol pyruvate inhibitor carboxykinase, a citrate synthase inhibitor and a lactate dehydrogenase inhibitor.
  • an inhibitor of PP1 phosphatase a histone deacetylase inhibitor
  • a direct or indirect activator of pyruvate kinase a PTEN agonist
  • a tyrosine kinase inhibitor a PI3 kinase inhibitor
  • glucose competitor a phosphoenol pyruv
  • Such a composition is intended to act on the essential step of glycolysis (Ebden-Meyerhof pathway) which consists of the transformation of PEP (Phosphoenol pyruvate) into pyruvate with the formation of ATP.
  • This step which has no alternative biochemical pathway, is catalyzed by an enzyme, pyruvate kinase, which occurs naturally in two forms: a tetrameric form.
  • M4 which corresponds to its active form and a dimeric form (M2) corresponding to the inactive form (FIG. 2). Studies have shown that the active form (M4) corresponds to the dephosphorylated form of the enzyme.
  • phosphatase capable of converting pyruvate kinase from the M2 form to the M4 form is required for this essential step of glycolysis, which consists of converting the PEP into pyruvate.
  • phosphatase is meant an enzyme capable of releasing phosphoric acid to activate pyruvate kinase.
  • the inventors have identified the phosphatase in question as PP2A phosphatase or an equivalent function protein.
  • PP2A phosphatase is described by Vafai and Stock [2002, Protein phosphatase 2A methylation: a link between elevated plasma homocysteine and
  • the work of Vafai and Stock showed that the activation of PP2A required the intervention of a carboxymethylase with the function of methylating PP2A.
  • a methyl deficiency thus renders PP2A unfit to suppress Tau proteins.
  • the Tau proteins are hyperphosphorylated, which results in an abnormal polymerization of the tubulin inside the neurons.
  • the polymerized tubulin then forms plaques inside the neurons, which causes the dysfunction of the neurons.
  • PP2A phosphatase is described to have different functions, one of which is to maintain the MPF (Maturation Promoting Factor) in an inactive form.
  • MPF is a cell cycle regulator associating kinases and cyclins in the form of a complex.
  • PP2A When PP2A is in its active, i.e., methylated form, it represses the activation of MPF by dephosphorylating one of the proteins of the complex called CDC25.
  • CDC25 proteins of the complex
  • PP2A must be suitably methylated to effectively repress CDC25 [Karaiskou A. et al.
  • PP2A phosphatase thus exerts a regulating power both on the regulation of glycolysis, on the formation of the mitotic spindle (via Tau proteins), and on the cell cycle (via CDC25).
  • PP2A phosphatase is also known to have activity in the phosphorylation of tumor suppressor genes such as rb or p53 [Li X. et al., 2001, Protein Phosphatase 2A and its B56 regulatory subunit inhibit Wnt signaling in Xenopus, EMBO J. 20: 4122-31]. This activity is another reason to maintain PP2A at a high level of expression (or enzymatic activity) in cancer patients.
  • a preferred aspect of the invention therefore consists in providing a pharmaceutical composition for the treatment of cancer comprising at least one active ingredient whose function is to maintain or restore the activity of PP2A.
  • PP2A phosphatase naturally has many isomorphs [Lechward K. et al., 2001, Protein phosphatase 2A: Acta. Biochim. PoI., 48: 921-33] and a genetic polymorphism likely to explain certain variations that are observed in the development of cancer. Such a polymorphism is of great interest for the diagnosis of cancer, the identification of new therapeutic targets and the determination of the active sites of the PP2A enzyme. This is why a particular aspect of the invention consists in using the nucleotide sequences of the genes coding for PP2A or one of its isoforms, for the purpose of carrying out genotyping or diagnosing cancer.
  • the peptide sequences corresponding to the aforementioned nucleotide sequences may be used for diagnostic purposes, in particular to produce immunological tests.
  • Antibodies specifically recognizing the peptide sequences of PP2A may, in addition, be obtained, not only for the purpose of producing these immunological tests, but also for therapeutic purposes.
  • Another particular aspect of the invention consists in analyzing the way in which PP2A is methylated or de-methylated in contact with different substances, in order to determine the carcinogenic activity of a real or potential toxic.
  • a more preferred aspect of the invention is a pharmaceutical composition for the treatment of cancer comprising at least one PP2A methylating agent.
  • methylating agent is intended to mean any compound which makes it possible to transfer a methyl group to PP2A.
  • the preferred methylating agents of the invention are serine, folate, methionine, S-adenosyl methionine, vitamin B12, tetrahydrofolate, choline, acetylcholine manganochloride and betaine.
  • a particularly preferred PP2A methylating agent of the invention is betaine (betaine hydrate or else trimethylammono-2-acetate) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, especially betaine citrate.
  • methylating agents are described in the literature as compounds having a positive influence with regard to the Cancer prevention Epidemiological studies have shown that the consumption of methyl-rich products tends to reduce the risk of cancer [Pascale RM et al., 2002, Chemoprevention of hepatocarcinogenesis: S-adenosyl-L-methionine, Alcohol 27: 193 -8] ..
  • compositions associating a methylating agent with at least one other active ingredient among those mentioned above to limit the side effects of an excess of methyl in the cell, such as in particular a histone deacetylase inhibitor.
  • Histone deacetylases are the enzymes that bind methyl groups to gene promoter sequences to prevent transcription. The use of inhibitors of these enzymes is intended to limit the
  • inhibitor is meant herein a molecular effector capable of decreasing the activity of a given enzyme.
  • the preferred deacetylase historia inhibitors of the invention are butyrate, phenylbutyrate, trichostatin and valproate, or a combination thereof.
  • PTEN proteins By agonist is meant PTEN proteins, a natural or drug substance having, at least in part, the same effects as PTEN proteins.
  • these proteins are described to negatively regulate PI3-like kinases involved in glucose transport. It is therefore useful to maintain a high level of PTEN protein activity to limit glucose entry into the cell or to employ an agonist to achieve the same effects.
  • a preferred PTEN protein agonist of the invention is rosiglitazone [Patel L. et al., 2001, tumor suppressor and anti-inflammatory actions of PPARgamma agonists are mediated via upregulation of PTEN, Current. Biol. 11: 764-8].
  • a preferred aspect of the invention is a composition comprising the combination of a PTEN protein agonist such as rosiglitazone, and a PP2A methylating agent such as betaine citrate.
  • the effect of decreasing glucose entry into cells can be achieved by other products than those mentioned above.
  • products known to be useful in the treatment of diabetes can be used. These products, to the extent that their association with the other active ingredients of the invention is not toxic to the patients, are considered as being able to enter a pharmaceutical composition according to the invention.
  • a preferred aspect of the invention therefore consists in associating at least one methylating agent with at least one product that is useful for treating diabetes in order to treat cancer.
  • glucose analogues or competitors such as 5-mannoheptulose or 2-deoxyglucose.
  • analogue means a molecule of similar structure that can be substituted for another molecule.
  • competitor an analogue capable of competing with said molecule at its site of action.
  • Kinases are the enzymes that transfer a phosphate from adenosine triphosphate (ATP) to an acceptor that is activated.
  • ATP adenosine triphosphate
  • Inhibitors of tyrosine kinase inhibit the action of tyrosine kinase insulin receptors. In particular, they make it possible to suppress the activity of tyrosine kinases, so as to inhibit the MAP kinase signaling pathway on which the activity of PP1 phosphatase depends.
  • Tyrosine kinase inhibitors of the invention are preferred the PD 9805G, adenosine or current anti-cancer drugs such as Glivec or Iressa I 1.
  • PI3-kinase phosphatidyl-inositol 3-kinase is an enzyme through which insulin receptors control the entry of glucose into the cell.
  • PI3-kinase inhibitors in a composition according to the invention aims to limit the entry of sugars into the cellular cytoplasm, in particular that of glucose.
  • PI3-kinase inhibitors in the context of the invention are wortmannin, LY294002, quercetin, myricetin and staurosporine.
  • Phosphatase PP1 is an enzyme which, unlike PP2A, has the power to activate CDC25.
  • the activation of CDC25 results in the activation of MPF, which as described above is one of the main triggering factors for mitosis.
  • MPF which as described above is one of the main triggering factors for mitosis.
  • PP1 therefore acts in the opposite direction of PP2A.
  • PP2A is deficient, the cell cycle is activated and the cell is in a situation where the cell cycle is no longer controlled.
  • the pharmaceutical compositions of the invention comprise the combination of at least one of the active principles described above with a PP1 inhibitor in order to reduce the effects of PP1 on the cell cycle.
  • PP1 inhibitors may be specific or non-specific inhibitors [Yan Y et al., 1999, separate roles for PP1 and PP2A in phosphorylation of the retinoblastoma protein.
  • PP2A regulates the activity of G (1) dependent cyclin kinases. J. Biol. Chem., 274 (3): 1917-24].
  • PP1 The preferred inhibitors of PP1 according to the invention are chosen from cantharidine, tautomycin and rapamycin [Mc Clusey A. et al., 2001, The inhibition of protein phosphatases 1 and 2A: a new target for rational anti ⁇ cancer drug design ?, Anticancer Drug. Des., 16: 291-303] which are rather broad spectrum phosphatase inhibitors, or the combination of one of these inhibitors.
  • PP1 can also be inhibited via its natural antagonist DARP 32, which is activated by D1 agonists such as dopamine. It is, of course, necessary to assay this inhibitor so as to inhibit PP1 while preserving the functionality of PP2A.
  • a PP1 inhibitor may be used solely for the purpose of making a drug to limit cell cycle progression.
  • a direct or indirect activator of pyruvate kinase such as fructose 1-6 biphosphate or xylulose-5P [Nishimura M. et al., 1995, Purification and characterization of a novel xylulose 5- phosphate activated protein phosphatase catalyzing dephosphorylation of fructose-6-phosphate, 2-kinase: fructose-2,6-biphosphatase, J. Biol. Chem., 270: 26341-6] is used to activate the conversion reaction of PEP to pyruvate during glycolysis.
  • An activator of the pyruvate kinase according to the invention makes it possible to increase the yield of the reaction catalyzed by pyruvate kinase, in particular when PP2A is deficient in its role of activating pyruvate kinase.
  • An activator is direct when it acts as an activator directly on the pyruvate kinase, it is indirect when it acts on the pyruvate kinase via an intermediate activator, for example PP2A.
  • the activator of the pyruvate kinase used for the manufacture of a medicament for the treatment of cancer is, optionally, a 5-P xylulose, a ceramide, an A1 receptor agonist of adenosine such as N- 6-cyclopentyladenosine, a manganese salt such as acetylcholine manganochloride or a combination of these products.
  • a 5-P xylulose a ceramide
  • an A1 receptor agonist of adenosine such as N- 6-cyclopentyladenosine
  • a manganese salt such as acetylcholine manganochloride or a combination of these products.
  • a composition according to the invention may further comprise one or more inhibitors of phosphoenol pyruvate carboxykinase and one or more inhibitors of citrate synthase.
  • Phosphoenol pyruvate carboxykinase is an enzyme that is involved in cancer in the conversion of phosphoenol to oxaloacetate. Through the action of citrate synthase, this oxaloacetate is converted with acetyl-coA to citrate in the first stage of the Krebs cycle. Inhibition of phosphoenol pyruvate carboxykinase and citrate synthase thus reduces the catabolism, in particular of fatty acids and amino acids.
  • Preferred inhibitors of phosphoenol pyruvate carboxykinase are aspartate, metformin, chlorophosphoenol pyruvate and tryptophan derivatives.
  • An inhibitor of citrate synthase may consist of fluoro acetyl co-A.
  • a preferred aspect of the invention is a composition comprising the combination of a phosphoenol pyruvate carboxykinase inhibitor such as metformin or chloro phosphoenol pyruvate, and a PP2A methylating agent such as betaine citrate.
  • a phosphoenol pyruvate carboxykinase inhibitor such as metformin or chloro phosphoenol pyruvate
  • a PP2A methylating agent such as betaine citrate
  • Another aspect of the invention is the use of chloro phosphoenol pyruvate as a therapeutic agent for the treatment of cancer. This use makes it possible, in particular, to inhibit the activity of phosphoenol pyruvate carboxykinase.
  • chloro phosphoenol pyruvate and carnitine a substance that targets mitochondria, is beneficial for the treatment of cancer.
  • a molecule consisting of a chlorophosphoenol pyruvate and carnitine ester, in which carnitine and chlorophosphoenol pyruvate are covalently bound, has been shown to be particularly effective in inhibiting the growth of cancer cell lines.
  • the present invention therefore covers a pharmaceutical composition for treating cancer comprising chlorophosphoenol pyruvate and, optionally, carnitine, as well as any molecule consisting of chloro phosphoenol pyruvate and carnitine can enter such a composition.
  • composition according to the invention may also comprise as active principle an inhibitor of lactate dehydrogenase.
  • Lactate dehydrogenase is an enzyme that is involved in cellular metabolism in the degradation of pyruvate to lactate. It therefore contributes to a decrease in the pyruvate stock in the cell and an increase in lactate.
  • Alanine which represents 20 to 30% of the amino acids present in the muscles can be mobilized to form pyruvate and therefore, if necessary, lactate.
  • a preferred inhibitor of lactate dehydrogenase is a derivative of alanine, more particularly bromoalanine, or a derivative thereof or the like.
  • the inhibition can be done, for example, by putting one of these compounds in competition with alanine at the catalytic site of alanine dehydrogenase, the enzyme that allows the conversion of alanine to pyruvate. There is then a reduction in the conversion of alanine to pyruvate and thus a reduction in the amount of substrate available for lactate dehydrogenase.
  • bromo-alanine is defined as a compound whose structure is close to that of bromo-alanine, to the point that it allows to inhibit alanine dehydrogenase in the same way as bromo-alanine.
  • compositions according to the invention are useful for the preparation of a medicament for the treatment of cancer. They can be used in a method of treating abnormal cell growth in a mammal, particularly when abnormal cell growth is cancer, more particularly in the group consisting of lung cancer, bone cancer, cancer pancreatic cancer, skin cancer, head and neck cancer, cutaneous and intraocular melanoma, uterine cancer, ovarian cancer, rectal cancer, anal cancer, cancer of the stomach, colon cancer, breast cancer, carcinoma of the fallopian tubes Fallopian carcinoma of the endometrium, carcinoma of the cervix, carcinoma of the vagina, carcinoma of the vulva, Hodgkin's disease, esophageal cancer, small intestine cancer, cancer of the endocrine system , thyroid cancer, parathyroid gland cancer, adrenal gland cancer, soft tissue sarcoma, urethral cancer, penile cancer, prostate cancer, chronic leukemia or acute, lymphocytic lymphoma, bladder cancer, kidney or ureter cancer, renal cell carcinoma
  • the pharmaceutical compositions according to the invention may take various forms, for example solid or liquid, and may be in the pharmaceutical forms commonly used in human medicine, for example simple or coated tablets, capsules, granules, caramels, suppositories, injectables; they are prepared according to the usual methods.
  • the active ingredient (s) can be incorporated into excipients usually employed in these pharmaceutical compositions, such as talc, gum arabic, lactose, starch, magnesium stearate, cocoa butter, aqueous or non aqueous vehicles.
  • excipients usually employed in these pharmaceutical compositions such as talc, gum arabic, lactose, starch, magnesium stearate, cocoa butter, aqueous or non aqueous vehicles.
  • the subject of the present invention is also a process for the preparation of a composition described above, characterized in that, by methods known per se, the active principle (s) are mixed with acceptable excipients, in particular pharmaceutically acceptable excipients. .
  • the invention also consists of a product containing at least one PP2A-methylating agent and, secondly, at least one active ingredient chosen from the group comprising a PP1 phosphatase inhibitor, a histone deacetylase inhibitor, a direct activator or pyruvate kinase, a PTEN agonist, a tyrosine kinase inhibitor, a PTEN agonist, an inhibitor of tyrosine kinase, a PI3-kinase inhibitor a glucose competitor, a phosphoenol pyruvate carboxykinase inhibitor and a citrate synthase inhibitor, as a combination product for simultaneous, separate or time-course use in cytostatic or antineoplastic therapy. cancerous.
  • a particularly preferred aspect of the invention is the use of xylulose 5-P for the manufacture of a medicament for the treatment of cancer.
  • Figure 1 Simplified diagram of glucose metabolism in the cell, showing the main stages of glycolysis. The prominent role of pyruvate kinase in the process leading to the production of pyruvate and acetyl CoA, which are essential for the Krebs cycle, will be noted.
  • Figure 2 Activation of pyruvate kinase by PP2A.
  • This figure shows how the PP2A phosphatase, in the form of a trimer, is activated by the action of a methylase using as methyl donors compounds such as vitamin B12, folate and serine and as adjunctive activators of other compounds such as xylulose-5P and ceramide.
  • This methylation makes PP2A active against pyruvate kinase.
  • PP2A allows activation of pyruvate kinase from its inactive phosphorylated M2 form to its dephosphorylated active M4 form. This reaction consumes Fructose 1-6 bis P.
  • Figure 3 Incidence of various factors (virus, physical or chemical and nutritional action) on the integrity of PP2A and involvement of a PP2A deficiency in the cancer process.
  • This figure reconstructs the process by which a deficiency of PP2A is at the origin of a process of cancerization taking the form of a "vicious circle".
  • the inventors reconstructed the sequence of the different stages of this process from scattered bibliographic data. It is from this overall scheme that the pharmaceutical compositions according to the invention have been defined.
  • the starting point of this scheme is an alteration by exogenous factors of the enzymatic activity of PP2A phosphatase. This alteration as a consequence the inactivation of pyruvate kinase and therefore a decrease in the yield of glycolysis.
  • the cell compensates for this drop in the yield of glucose degradation by an additional supply of glucose.
  • MAP kinases activate PP1 phosphatase, which acts positively on certain cell cycle regulators, favoring mitosis.
  • the MAP kinases increase the permeability of the nuclear membrane, which allows a methyl entry into the nucleus, resulting in hypermethylation of genes, in particular those encoding PTEN phosphatases.
  • PTEN phosphatase activity is decreased, the PI3-kinase signaling pathway is increased and glucose entry into the cell becomes even more important.
  • the cell knows a metabolic disorder such that its development becomes totally anarchic.
  • Figure 4 Diagram giving the different fields of intervention of PP2A and PP1 and their respective modes of regulation.
  • Example 1 Association betaine citrate / rosiglitazone.
  • compositions comprising different concentrations of a methylating agent of PP2A (betaine citrate) and a known PTEN agonist (rosiglitazone) were tested in-vitro in parallel on the following 3 lung cancer cell lines: Calu-6 and NCI-H460.
  • a methylating agent of PP2A betaine citrate
  • PTEN agonist rosiglitazone
  • Rosiglitazone used is marketed by GlaxoSmithKline society in the preparation sold as Avandia ®.
  • Table 1 mean and standard deviation (SD) of IC 5 o recorded for betaine citrate on Calu-6 and NCI-H460 cell lines.
  • Table 1 Mean and standard deviation (SD) of IC ⁇ o recorded for Avandia ® on cell lines Calu-6 and NCI-H460.
  • cell lines tested are less sensitive to betaine citrate (IC 50 of the order of one millimolar) than they are to rosiglitazone (IC 50 of the order of about ten micromolar ).
  • Example 2 The same protocol was applied as in Example 1 to test the synergy between a methylating agent of PP2A (betaine citrate) and a known inhibitor of phosphoenol pyruvate carboxykinase which is metformin.
  • the cell line chosen to carry out the experiment is the CaIu- 6 line.
  • the protocol used is that described by Chou and Talalay mentioned above, which requires here a determination of the affected fraction (Fa), for each of the products betaine citrate and metformin, taken separately and in combination.
  • Fa values are used in the calculation of the synergy index (Cl) which makes it possible to account for the presence or the absence of synergy between the products.
  • Table 5 Individual determination of the affected fraction (Fa) for betaine citrate (NaBt) and metformin (Met) products on the Calu-6 lung cell line.
  • Table 7 Average Fa for single products and standard deviation (SD) calculated for all three experiments shown in Table 5.
  • Table 8 Average Fa for the products in combination, standard deviation (SD), and corresponding C1, calculated for all three experiments shown in Table 6.
  • Example 4 Effect of a Treatment Based on Chloro Phosphoenol Pyruvate (Phosphoenol Pyruvate Carboxycinase Inhibitor) on Mouse Cancer Induced Mortality.
  • mice carrying an L1210 type intra-peritoneal lymphoma were treated for 7 days in parallel with the following preparations:
  • BCNU carmustine Vehicle: witness
  • Chloro phosphoenol pyruvate and chloro phosphoenol pyruvate and carnitine ester were synthesized by Synthéval (Caen - France).
  • Carmustine is a drug commonly used in chemotherapy. It is used here as a positive control.
  • mice in the control (vehicle) group all died, with a mean survival of 7.50 ⁇ 0.67 days (median at 7 days); • 4 out of 10 mice in the chloro phosphoenol pyruvate treated group (SYN857) at 136 mg / kg died at 9 days (T / C%>128%);
  • mice died following the development of haemorrhagic ascites.
  • the parameter T / C% is calculated with the ratio of the median survival time of the animals of the group considered to the median survival time of the animals in the control group, all multiplied by 100. It is significant here because it is greater than 125% (> 128% since not all mice are dead yet). It demonstrates the anti-tumor efficacy of the two preparations SYN857 (A) and SYN856 (B).

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Abstract

Composition pharmaceutique destinée au traitement du cancer caractérisée en ce qu'elle comprend l'association, d'une part, d'un agent méthylant de PP2A, et d'autre part, d'un principe actif choisi parmi le groupe comprenant un inhibiteur de phosphatase PP1 , un inhibiteur d'histone déacétylase, un activateur direct ou indirect de la pyruvate kinase, un agoniste de PTEN, un inhibiteur de la tyrosine kinase, un inhibiteur de PI3 kinase, un compétiteur du glucose, un inhibiteur de la phosphoenol pyruvate carboxykinase, un inhibiteur de la citrate synthase et un inhibiteur de la lactate deshydrogénase.

Description

PLURITHERAPIECONTRELECANCER
La présente invention a pour objet une composition pharmaceutique destinée au traitement du cancer caractérisée en ce qu'elle comprend l'association d'au moins plusieurs principes actifs choisi parmi les suivants : un agent méthylant de PP2A, un inhibiteur de phosphatase PP1, un inhibiteur d'histone déacétylase, un activateur direct ou indirect de la pyruvate kinase, un agoniste de PTEN, un inhibiteur de la tyrosine kinase, un inhibiteur de PI3 kinase, un compétiteur du glucose, un inhibiteur de la phosphoenol pyruvate carboxykinase.un inhibiteur de la citrate synthase et un inhibiteur de la lactate déshydrogénase.
On désigne habituellement par "cancer" un ensemble de maladies ayant pour symptôme l'apparition de tumeurs. Ces tumeurs sont composées de cellules atypiques, ayant un pouvoir d'accroissement autonome, une délimitation imprécise, une capacité d'envahissement des tissus et vaisseaux voisins et une tendance à disséminer par la production de métastases.
Bien que la plupart des facteurs favorisant l'apparition de tumeurs (prédispositions génétiques, exposition à des radiations, substances, infections, âge des patients...) soient connus et qu'un grand nombre de gènes impliqués dans le développement du cancer soient aujourd'hui identifiés, il n'existe pas réellement de médicament à l'heure actuelle permettant de reverser la transformation d'une cellule tumorale et de rétablir sa normalité.
Les compositions utilisées en chimiothérapie visent essentiellement à éliminer de l'organisme les cellules tumorales, en particulier lorsqu'elles sont disséminées sous forme de métastases. Ces compositions sont plus ou moins sélectives selon le type de cancer à traiter et souvent mal tolérées par l'organisme.
Ces compositions ne peuvent donc pas être prescrites sur une longue durée sans avoir des conséquences aggravantes sur l'état de santé des patients. Elles ont en outre l'inconvénient de ne pas empêcher totalement la récidive du cancer puisque l'origine du cancer à l'échelle de la cellule n'est pas traitée. En réalité le traitement thérapeutique du cancer se heurte à l'absence de cibles thérapeutiques évidentes, bien caractérisées, et communes aux différents types de cancer. Si de telles cibles avaient été identifiées, sans doute des composés efficaces, ayant un réel pouvoir de rémission sur les malades auraient déjà été identifiés.
De nombreux composés sont cités dans la littérature pour avoir des effets cytostatiques. Cependant ces composés, pris isolément, n'ont pas permis à ce jour de soigner de manière définitive les malades atteints de cancer.
Il résulte de cette situation que la chirurgie, complétée parfois par la chimiothérapie, reste la manière la plus efficace de traiter le cancer.
Face à ce constat, les inventeurs ont eu l'idée de concevoir une plurithérapie fondée sur une approche phénoménologique du cancer, qui pourrait venir compléter ou remplacer les thérapeutiques actuelles du cancer (chirurgie, radiothérapie, chimiothérapie...).
Les inventeurs se sont basés sur les observations faites par Otto
Warburg (1883-1970), avant la deuxième guerre mondiale, selon lesquelles les cellules tumorales produisent davantage d'acide lactique que les cellules saines, et consomment des quantités accrues de glucose [Watson J. D., Molecular biology of the gène, 3d Ed., W.A. Benjamin Inc Menolo Park California ,1976].
Ils ont interprété la surproduction d'acide lactique et la consommation accrue de glucose comme étant la conséquence d'un dérèglement de la glycolyse (voie d'Embden-Meyerhof).
La glycolyse se définit comme une série de réaction consistant à dégrader du glucose-6-phosphate pour former du pyruvate et permettant de fournir à la cellule de l'énergie (deux molécules d'ATP) ainsi qu'un certain potentiel réducteur (par réduction du NAD). Cette série de réaction fait appel à l'action de diverses enzymes [LEHNINGER A. et al. Principes de biochimie, FLAMMARION. 1994], en particulier la pyruvate kinase, qui est l'unique enzyme permettant la transformation du Phosphoenol pyruvate (PEP) en pyruvate (figure 1 ). II a été démontré dans le cas de certains cancers, que la pyruvate kinase pouvait être maintenue inactive sous une forme dimérique (M2) phosphorylé, alors que la forme active de cette enzyme est tétramérique (M4) déphosphorylée (figure 2).
Lorsque la pyruvate kinase est présente sous sa forme inactive M2, la formation de pyruvate par la voie d'Embden-Meyerhof est interrompue. La cellule dans ces circonstances doit faire face, à la fois, à l'accumulation dans le cytoplasme des produits de dégradation du gIucose-6-P, tels que le fructosel- 6P, fructose 6P, phosphoenolpyruvate, Gly-2,3 biphosphate (2-3 DPG) ainsi que d'autres métabolites du glucose, et à un déficit en pyruvate.
L'accumulation de 2-3 DPG dans Ie cytoplasme est néfaste pour la cellule car le 2-3 DPG majore la libération d'oxygène par l'hémoglobine, ce qui forme du super oxyde tissulaire. Une telle production de radicaux libres a un effet destructeur sur de nombreux constituants cellulaires, en particulier l'ADN, ce qui provoquer des mutations dans les gènes.
Le déficit en pyruvate, pour sa part, oblige la cellule à mobiliser l'acide malique et l'alanine de sorte à former du pyruvate par une autre voie métabolique que celle d'Ebden-Meyerhof, dont il résulte une production importante de lactate se transformant en acide lactique.
L'accumulation d'acide lactique a des effets négatifs sur la cellule car elle tend à acidifier le milieu cellulaire, ce qui, par la destruction de certains tissus, favorise la diffusion du cancer [Stern R. et al., Lactate stimulâtes fibroblast expression of hyaluronan and CD44: the Warburg effect revisited].
Parallèlement, la beta-oxydation des acides gras résulte en la production d'acetyl coA. Cependant cette production est consommatrice d'énergie et insuffisante pour satisfaire les besoins de la cellule.
La diminution de la quantité de pyruvate disponible dans la cellule entraîne un déficit en acetyl-CoA, qui est le principal substrat du cycle de Krebs.
Or, le moyen principal de compenser ce déficit en acetyl-CoA pour la cellule est de favoriser l'entrée de glucose dans le cytoplasme. L'augmentation du taux de glucose que l'on observe dans les cellules cancéreuses trouve son explication dans ce phénomène paradoxal de compensation.
Il est, en outre, bien connu que l'entrée du glucose dans la cellule est modulée positivement par les récepteurs à insuline qui sont couplés à l'activation de certains effecteurs, en particulier les PI3 kinases, qui ont le pouvoir d'inhiber la phosphatase PTEN (voir plus loin) et les MAP kinases.
Les MAP-kinases ont la particularité de pouvoir activer la phosphatase PP1 , qui est un des principaux activateurs du MPF (Maturation Promoting Factor)
Le MPF est un complexe associant des kinases et des cyclines et qui autorise le passage de la cellule d'une phase du cycle cellulaire dans une autre et ainsi de provoquer une mitose.
Une mitose s'analyse comme la division d'une cellule mère en deux cellules filles.
Lorsque les cellules se retrouvent en mitose, elles sont amenées à faire face à des besoins énergiques importants, ce qui les oblige à accentuer leur métabolisme de type glucidique. Dans le cas d'un dysfonctionnement de la glycolyse, tel celui qui vient d'être évoqué, la production de lactate et de radicaux libres se trouve systématiquement augmentée, alors que la cellule ne parvient pas à fournir les quantités d'acétyl-CoA nécessaires au cycle de Krebs. La cellule est donc contrainte de faire entrer toujours plus de glucose, ce qui a pour double conséquence de stimuler Ia division cellulaire et augmenter le désordre métabolique au sein de la cellule.
Dans de telles conditions, après plusieurs cycles cellulaires, les divisions cellulaires deviennent de plus en plus anarchiques. Les cellules perdent leur caractère de cellules différenciées pour se transformer en cellules tumorales peu différenciées ayant la capacité de migrer vers d'autres parties du corps et susceptibles de devenir le foyer de nouvelles tumeurs.
Ayant ainsi observé que le processus de cancérisation pouvait s'expliquer par une déficience de la glycolyse, en particulier une déficience de l'enzyme pyruvate kinase, les inventeurs ont cherché le moyen de rétablir, par différents moyens, le fonctionnement normal de la voie d'Ebden-Meyerhof dans les cellules cancéreuses.
Ils ont mis au point des compositions pharmaceutiques comprenant des principes actifs destinés à diminuer l'accumulation des produits glycolytiques dans la cellule, en particulier dans le but de rétablir l'activité enzymatique de la pyruvate kinase.
L'association de plusieurs de ces principes actifs permet l'obtention de compositions pharmaceutiques ayant la double fonction de réguler la glycolyse, mais également de limiter l'entrée du glucose dans Ia cellule.
L'invention a plus particulièrement pour objet des compositions comprenant l'association d'un agent méthylant de la phosphatase PP2A avec un ou plusieurs des principes actifs précités tels qu'un agoniste de PTEN, un inhibiteur de la lactate deshydragénase, ou un inhibiteur de la phosphoenol pyruvate carboxykinase.
Contrairement aux thérapies de l'art antérieur, les présentes compositions visent, avant tout, à inhiber le processus de transformation des cellules tumorales.
DESCRIPTION
De manière générale, la présente invention se rapporte à une composition pharmaceutique destinée au traitement du cancer caractérisée en ce qu'elle comprend un ou plusieurs principes actifs ayant l'effet direct ou indirect de réguler la glycolyse ou de diminuer l'entrée du glucose dans la cellule.
Les principes actifs visés par l'invention consiste en les suivants: un agent méthylant de PP2A, un inhibiteur de phosphatase PP1 , un inhibiteur d'histone déacétylase, un activateur direct ou indirect de la pyruvate kinase, un agoniste de PTEN, un inhibiteur de la tyrosine kinase, un inhibiteur de PI3 kinase, un compétiteur du glucose, un inhibiteur de la phosphoenol pyruvate carboxykinase, un inhibiteur de la citrate synthase et un inhibiteur de la lactate deshydrogénase.
Lesdits principes actifs peuvent être administrés simultanément ou successivement dans le temps.
Une composition pharmaceutique selon l'invention prévoit plus particulièrement l'association d'au mois deux de ces principes actifs.
Selon un aspect préféré de l'invention, l'association de ces principes actifs comprend, d'une part, au moins en un agent méthylant de PP2A, et d'autre part, au moins un principe actif choisi dans le groupe comprenant un inhibiteur de phosphatase PP1 , un inhibiteur d'histone déacétylase, un activateur direct ou indirect de la pyruvate kinase, un agoniste de PTEN, un inhibiteur de la tyrosine kinase, un inhibiteur de PI3 kinase, un compétiteur du glucose, un inhibiteur de la phosphoenol pyruvate carboxykinase, un inhibiteur de la citrate synthase et un inhibiteur de la lactate deshydrogénase.
Une telle composition vise à agir sur l'étape essentielle de la glycolyse (voie d'Ebden-Meyerhof) qui consiste en la transformation du PEP (Phosphoenol pyruvate) en pyruvate avec formation d'ATP. Cette étape qui ne connaît pas de voie biochimique de remplacement, est catalysée par une enzyme, la pyruvate kinase, qui est présente naturellement sous deux formes : une forme tétramérique
(M4) qui correspond à sa forme active et une forme dimérique (M2) correspondant à la forme inactive (figure 2). Des études ont montré que la forme active (M4) correspondait à la forme déphosphorylée de l'enzyme.
Dans certains cas de cancer, la transformation du PEP (Phosphoenol pyruvate) en pyruvate par la pyruvate kinase ne s'opère pas convenablement. Cette transformation défectueuse se traduit par une accumulation de produits glycolytiques dans le cytoplasme de la cellule, ayant pour conséquence les effets sur le métabolisme décrits par Warburg. Les études [Mazurek S. et al., 2002, pyruvate linase type M2: a crossroad in the tumor metabolome, Br. J .Nutr., 87suppH :S23-9] ont montré que le faible rendement de transformation du PEP en pyruvate, dans le cas de ces cancers, était corrélé à une quantité insuffisante d'enzyme de forme active déphosphorylée M4 par rapport à celles de forme M2 phosphorylée.
II est donc apparu qu'une phosphatase capable de convertir la pyruvate kinase de la forme M2 en la forme M4 était requise pour cette étape essentielle de la glycolyse, consistant à transformer le PEP en pyruvate. Par phosphatase, on entend une enzyme capable de libérer l'acide phosphorique afin d'activer la pyruvate kinase.
Les inventeurs ont identifié la phosphatase en question comme étant la phosphatase PP2A ou une protéine de fonction équivalente.
La phosphatase PP2A est décrite par Vafai et Stock [2002, Protein phosphatase 2A méthylation: a link between elevated plasma homocysteine and
Alzheimer's disease, FEBS Lett, 8: 518: 1-4] comme étant impliquée dans la déphosphorylation les protéines Tau, qui sont des protéines qui participent à la formation du fuseau mitotique. Les protéines Tau ont le pouvoir de précipiter la tubuline des microtubules qui constituent le fuseau mitotique. Les travaux de Vafai et Stock ont montré que l'activation de PP2A nécessitait l'intervention d'une carboxy-méthylase ayant pour fonction de méthyler PP2A.
Dans la maladie d'Alzheimer, un déficit en méthyle rend ainsi PP2A inapte à réprimer les protéines Tau. En l'absence de PP2A méthylée, les protéines Tau sont hyper-phosphorylées ce qui a pour conséquence une polymérisation anormale de la tubuline à l'intérieur des neurones. La tubuline polymérisée forme alors des plaques à l'intérieur des neurones, ce qui provoque le dysfonctionnement des neurones.
La phosphatase PP2A est décrite pour avoir différentes fonctions, dont l'une d'entre elles consiste à maintenir le MPF (Maturation Promoting Factor) dans une forme inactive. Le MPF est un régulateur du cycle cellulaire associant des kinases et des cyclines sous la forme d'un complexe. Lorsque PP2A se trouve dans sa forme active, c'est-à-dire méthylée, elle réprime l'activation du MPF en déphosphorylant une des protéines du complexe appelée CDC25. Comme dans le cas des protéines Tau, PP2A doit être convenablement méthylée pour pouvoir réprimer efficacement CDC25 [Karaiskou A. et al. 1999, Phosphatase 2A and polo kinase, two antagonist regulators of cdc25 activation and MPF auto amplification, J. cell. ScL, 112:3747-56]. Ainsi, lorsque PP2A n'est pas convenablement activée ou défaillante, CDC25 se trouve phosphorylée via l'action d'une autre enzyme : la CDC25 phosphorylase. En pareil cas, la phosphorylation de CDC25 conduit à l'activation du MPF et au déclanchement d'une nouvelle phase du cycle cellulaire aboutissant à la mitose.
La phosphatase PP2A exerce donc un pouvoir de régulation à la fois sur la régulation de la glycolyse, sur la formation du fuseau mitotique (via les protéines Tau), et sur le cycle cellulaire (via CDC25).
La phosphatase PP2A est également connue pour avoir une activité dans la phosphorylation de gènes suppresseurs de tumeurs tels que rb ou p53 [Li X. et al., 2001 , Protein Phosphatase 2A and its B56 regulatory subunit inhibit Wnt signaling in Xenopus, EMBO J. 20:4122-31]. Cette activité constitue une raison supplémentaire de maintenir PP2A à un niveau d'expression (ou d'activité enzymatique) élevé chez les patients atteints de cancer.
Un aspect préféré de l'invention consiste donc à proposer une composition pharmaceutique pour le traitement du cancer comprenant au moins un principe actif ayant pour fonction de maintenir ou restaurer l'activité de PP2A.
La phosphatase PP2A présente, à l'état naturel, de nombreux isomorphes [Lechward K. et al., 2001 , Protein phosphatase 2A: variety of forms and diversity of functions, Acta. Biochim. PoI., 48:921-33] et un polymorphisme génétique susceptible d'expliquer certaines variations que l'on observe dans le développement de cancer. Un tel polymorphisme est d'un grand intérêt pour le diagnostique du cancer, l'identification de nouvelles cibles thérapeutiques et la détermination des sites actifs de l'enzyme PP2A. C'est pourquoi un aspect particulier de l'invention consiste à utiliser les séquences nucléotidiques des gènes codant pour PP2A ou l'un de ses isoformes, aux fins de réaliser du génotypage ou pratiquer le diagnostique du cancer.
Les séquences peptidiques correspondant aux séquences nucléotidiques susmentionnées, obtenues par voie recombinante ou extraites d'échantillons prélevés sur un patient, peuvent être utilisées dans un but diagnostique, notamment en vue de produire des tests immunologiques.
Des anticorps reconnaissant spécifiquement les séquences peptidiques de PP2A peuvent, en outre, être obtenus, non seulement aux fins de produire ces tests immunologiques, mais encore dans un but thérapeutique.
Un autre aspect particulier de l'invention consiste à analyser la manière dont PP2A est méthylée ou dé-méthylée au contact de différentes substances, afin de déterminer l'activité cancérigène d'un toxique réelle ou potentielle.
Un aspect plus préféré de l'invention consiste en une composition pharmaceutique pour le traitement du cancer, comprenant au moins un agent méthylant de PP2A.
On entend par agent méthylant, tout composé permettant de transférer un groupe méthyle à PP2A.
Les agents méthylant préférés de l'invention sont la serine, le folate, la méthionine, la S-adénosyl méthionine, la vitamine B12, le tétrahydrofolate, la choline, le manganochlorure d'acétylcholine et la bétaïne.
Un agent méthylant de PP2A particulièrement préféré de l'invention est la bétaïne (hydrate de bétaïne ou encore triméthylammonio-2 acétate) ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptable, notamment le citrate de bétaïne.
Plus généralement, les agents méthylants sont décrits dans la littérature comme des composés ayant une influence positive au regard de la prévention du cancer Des études épidémiologiques ont ainsi montré que la consommation de produits riches en méthyle avait tendance à diminuer les risques de cancer [Pascale R. M. et al., 2002, Chemoprevention of hepatocarcinogenesis: S-adenosyl-L-methionine, Alcohol 27:193-8]..
Cependant certains auteurs considèrent qu'un excès de donneur de méthyle peut augmenter les risques de cancer du poumon, de lymphomes et de leucémies. Ils ont montré, en effet, que l'excès de méthyle au niveau du noyau pouvait entraîner une hyperméthylation des séquences promotrices de gènes codant pour des protéines essentielles, en particulier les phosphatases PTEN (voir plus loin) qui sont considérées comme des protéines ayant des effets anti¬ tumoraux [Soria J. C. et al., 2002, Lack of PTEN expression in non small cell lung cancer could be related to promoter methylation, Clin. Cancer. Res., 8:1178-84]. En outre, certains traitements contre le cancer utilisent comme principes actifs le methotrexate et l'aminopterine, qui ont tous deux pour effet d'inhiber les réactions de methylation.
Aussi, est-il proposé au titre de l'invention, des compositions pharmaceutiques associant un agent méthylant avec au moins un autre principe actif parmi ceux cités précédemment permettant de limiter les effets secondaires d'un excès de méthyle dans la cellule, tel qu'en particulier un inhibiteur d'histone déacétylase.
Les histone-déacétylases sont les enzymes qui fixent les groupements méthyles aux séquences promotrices des gènes afin d'en empêcher la transcription. L'utilisation d'inhibiteurs de ces enzymes a pour but de limiter le
"silençage" excessif des gènes, occasionné par un apport trop important au niveau du noyau de groupements méthyles.
Par "inhibiteur", on désigne dans le présent mémoire, un effecteur moléculaire capable de diminuer l'activité d'une enzyme donnée. Les inhibiteurs d'historié déacétylase préférés de l'invention sont le butyrate, le phenylbutyrate, la trichostatine et le valproate, ou une combinaison de ces derniers.
II est également prévu d'ajouter aux compositions pharmaceutiques selon l'invention un agoniste des protéines PTEN.
On entend par agoniste des protéines PTEN, une substance naturelle ou médicamenteuse ayant, au moins en partie, les mêmes effets que les protéines PTEN.
Des études ont montré que les protéines PTEN étaient réprimées dans certaines lignées cellulaires cancéreuses.
Or, ces protéines sont décrites pour réguler négativement les kinases de type PI3 impliquées dans le transport du glucose. Il est donc utile de maintenir un niveau élevé d'activité des protéines PTEN afin de limiter l'entrée de glucose dans la cellule ou bien d'employer un agoniste permettant d'obtenir les mêmes effets.
Un agoniste des protéines PTEN préféré de l'invention est le rosiglitazone [Patel L. et al., 2001 , tumor suppressor and anti-inflammatory actions of PPARgamma agonists are mediated via upregulation of PTEN, Current. Biol. 11 :764-8].
Un aspect préféré de l'invention consiste en une composition comprenant l'association d'un agoniste des protéine PTEN tel que le rosiglitazone, et d'un agent méthylant de PP2A tel que le citrate de betaïne.
L'effet d'une diminution de l'entrée du glucose dans les cellules peut être obtenu par d'autres produits que ceux cités plus haut. On peut utiliser en particulier des produits connus pour être utile dans le traitement du diabète. Ces produits, dans la mesure où leur association avec les autres principes actifs de l'invention n'est pas toxique pour les malades, sont considérés comme pouvant entrer dans une composition pharmaceutique selon l'invention.
Un aspect préféré de l'invention consiste donc à associer au moins un agent méthylant avec au moins un produit utile au traitement du diabète dans le but de traiter le cancer.
Une possibilité consiste, par exemple, à ajouter aux compositions pharmaceutiques selon l'invention un ou plusieurs analogues ou compétiteurs du glucose, tel que le 5-mannoheptulose ou la 2-deoxy-glucose.
On entend par analogue, une molécule de structure voisine pouvant se substituer à une autre molécule.
Par compétiteur, on entend un analogue capable de concurrencer ladite molécule sur son site d'action.
Il est également possible d'associer aux principes actifs décrits précédemment des inhibiteurs de la tyrosine kinase.
Les kinases sont les enzymes qui assurent le transfert d'un phosphate provenant de l'adénosine triphosphate (ATP) sur un accepteur qui est ainsi activé.
Les inhibiteurs de la tyrosine kinase permettent d'inhiber l'action des récepteurs à insuline à tyrosine kinase. Ils permettent notamment de réprimer l'activité des tyrosines kinases, de manière à inhiber la voie de signalisation des MAPkinases, dont dépend l'activité de la phosphatase PP1.
Les inhibiteurs de la tyrosine kinase préférés de l'invention sont le PD 9805G, l'adénosine ou des médicaments anti-cancéreux actuels tels que le GLIVEC ou I1IRESSA. La PI3-kinase (phosphatidyl-inositol 3-kinase) est une enzyme grâce à laquelle les récepteurs à insuline commandent l'entrée du glucose dans la cellule.
L'utilisation d'inhibiteurs de la PI3-kinase dans une composition selon l'invention vise à limiter l'entrée des sucres dans le cytoplasme cellulaire, en particulier celle du glucose.
Les inhibiteurs de la PI3-kinase préférés dans le cadre de l'invention sont la wortmannine, le LY294002, la quercetine, la myricetine et la staurosporine.
La phosphatase PP1 est une enzyme qui, à l'inverse de PP2A, a le pouvoir d'activer CDC25. L'activation de CDC25 a pour conséquence l'activation du MPF, qui comme décrit précédemment est un des principaux facteurs de déclanchement de la mitose. PP1 agit donc en sens contraire de PP2A. Lorsque PP2A est déficiente, le cycle cellulaire est activé et la cellule se trouve dans une situation où le cycle cellulaire n'est plus contrôlé.
Selon un aspect préféré de l'invention, les compositions pharmaceutiques de l'invention comprennent l'association d'au moins un des principes actifs décrits précédemment avec un inhibiteurs de PP1 dans le but de diminuer les effets de PP1 sur le cycle cellulaire. Ces inhibiteurs peuvent être des inhibiteurs spécifiques ou non spécifiques [Yan Y et al., 1999, distinct rôles for PP1 and PP2A in phosphorylation of the retinoblastoma protein. PP2A régulâtes the activity of G(1) cyclin dépendant kinases. J. Biol. Chem., 274(3):1917-24].
Les inhibiteurs préférés de PP1 , au titre de l'invention sont choisis parmi la cantharidine, la tautomycine et la rapamycine [Mc Clusey A. et al., 2001 , The inhibition of protein phosphatases 1 and 2A: a new target for rational anti¬ cancer drug design ?, Anticancer Drug. Des., 16:291-303] qui sont des inhibiteurs de phosphatase à spectre assez large, ou la combinaison d'un de ces inhibiteurs. On peut aussi inhiber PP1 via son antagoniste naturel DARP 32, lequel est activé par les agonistes D1 tels que la dopamine. Il convient, bien entendu, de doser cet inhibiteur de sorte à inhiber PP1 tout en préservant la fonctionnalité de PP2A. Selon un aspect particulier de l'invention, un inhibiteur de PP1 peut être utilisé uniquement aux fins de fabriquer un médicament pour limiter la progression du cycle cellulaire.
Selon un autre aspect de l'invention, un activateur direct ou indirect de la pyruvate kinase tel que le fructose 1-6 biphosphate ou le xylulose-5P [Nishimura M. et al., 1995, Purification and characterization of a novel xylulose 5- phosphate activated protein phosphatase catalyzing dephosphorylation of fructose-6-phosphate, 2-kinase:fructose-2,6-biphosphatase, J. Biol. Chem., 270:26341-6] est utilisé pour activer la réaction de transformation du PEP en pyruvate au cours de la glycolyse.
Un activateur de la pyruvate kinase selon l'invention permet d'augmenter le rendement de la réaction catalysée par la pyruvate kinase, notamment lorsque PP2A est déficiente dans son rôle d'activation de la pyruvate kinase. Un activateur est direct lorsqu'il joue son rôle d'activateur directement sur la pyruvate kinase, il est indirect lorsqu'il agit sur la pyruvate kinase via un activateur intermédiaire, par exemple PP2A.
De préférence, l'activateur de la pyruvate kinase utilisé pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement du cancer est, au choix, un xylulose 5-P, un céramide, un agoniste des récepteurs A1 de l'adénosine tel le N- 6-cyclopentyladénosine, un sel de manganèse tel que le manganochlorure d'acétylcholine ou une combinaison de ces produits. Ces activateurs ont pour but d'éviter le phénomène de saturation de la glycolyse qui est observé dans l'effet Warburg.
Une composition selon l'invention peut comprendre, en outre, un ou plusieurs inhibiteurs de la phosphoenol pyruvate carboxykinase et un ou plusieurs inhibiteurs de la citrate synthase.
Dans le cas du cancer, il est supposé que ces deux enzymes, citrate synthase et phosphoenol pyruvate carboxykinase demeurent actives. La phosphoenol pyruvate carboxykinase est une enzyme qui intervient dans la cancer dans la transformation de phosphoenol en oxalo- acétate. Grâce à l'action de la citrate synthase, cet oxaloacétate est transformé avec de l'acétyl-coA en citrate dans la première étape du cycle de Krebs. L'inhibition de la phosphoenol pyruvate carboxykinase et de la citrate synthase minorent ainsi le catabolisme en particulier des acides gras et des acides aminés.
Des inhibiteurs préférés de la phosphoenol pyruvate carboxykinase sont l'aspartate, la metformine, le chloro phosphoenol pyruvate et les dérivés du tryptophane. Un inhibiteur de la citrate synthase peut consister en du fluoro acétyl co-A.
Un aspect préféré de l'invention consiste en une composition comprenant l'association d'un inhibiteur de la phosphoenol pyruvate carboxykinase tel que la metformine ou le chloro phosphoenol pyruvate, et d'un agent méthylant de PP2A tel que le citrate de betaïne.
Un autre aspect de l'invention consiste en l'utilisation de chloro phosphoenol pyruvate en tant qu'agent thérapeutique pour le traitement du cancer. Cette utilisation permet, notamment, d'inhiber l'activité de la phosphoenol pyruvate carboxykinase.
L'association de la chloro phosphoenol pyruvate et de la camitine, substance qui permet de cibler les mitochondries, est avantageuse pour le traitement du cancer.
Une molécule consistant en un ester de chloro phosphoenol pyruvate et de carnitine, dans laquelle la carnitine et chloro phosphoenol pyruvate sont liées de manière covalente, s'est montrée particulièrement efficace pour inhiber la croissance de lignées cellulaires cancéreuses.
La présente invention couvre donc une composition pharmaceutique permettant de traiter le cancer comprenant de la chloro phosphoenol pyruvate et, optionellement, de la carnitine, ainsi que toute molécule consistant en un ester de chloro phosphoenol pyruvate et de carnitine pouvant entrer dans une telle composition.
Une composition selon l'invention peut également comprendre comme principe actif un inhibiteur de la lactate déshydrogénase.
La lactate déshydrogénase est une enzyme qui intervient dans le métabolisme cellulaire dans la dégradation du pyruvate en lactate. Elle participe donc à une diminution du stock de pyruvate dans la cellule et à une augmentation de lactate. L'alanine, qui représente 20 à 30 % des acides aminés présents au niveau des muscles peut être mobilisé pour former du pyruvate et donc, le cas échéant, du lactate.
Un inhibiteur préféré de la lactate déshydrogénase est un dérivé de l'alanine, plus particulièrement la bromoalanine, ou l'un de ses dérivés ou analogues. L'inhibition peut se faire, par exemple, en mettant un de ces composés en compétition avec l'alanine au niveau du site catalytique de l'alanine déshydrogénase, l'enzyme qui permet la conversion de l'alanine en pyruvate. Il y a alors diminution de la transformation d'alanine en pyruvate et donc diminution de la quantité de substrat disponible pour la lactate déshydrogénase.
Un analogue de la bromo-alanine est défini comme étant un composé dont la structure est proche de celle de la bromo-alanine, au point qu'il permet d'inhiber l'alanine déshydrogénase de la même façon que le bromo-alanine.
Les compositions pharmaceutiques selon l'invention sont utiles pour la préparation d'un médicament destiné au traitement du cancer. Elles peuvent être utilisées dans une méthode de traitement d'une croissance cellulaire anormale chez un mammifère, en particulier lorsque la croissance cellulaire anormale est un cancer, faisant plus particulièrement partie du groupe comprenant le cancer du poumon, le cancer des os, le cancer du pancréas, le cancer de la peau, le cancer de la tête et du cou, un mélanome cutané ou intraoculaire, le cancer de l'utérus, le cancer des ovaires, le cancer du rectum, le cancer de la région anale, le cancer de l'estomac, le cancer du côlon, le cancer du sein, un carcinome des trompes de Fallope, un carcinome de l'endomètre, un carcinome du col, un carcinome du vagin, un carcinome de la vulve, la maladie de Hodgkin, le cancer de l'œsophage, le cancer de l'intestin grêle, le cancer du système endocrinien, le cancer de la thyroïde, le cancer de Ia glande parathyroïde, le cancer de la glande surrénale, un sarcome d'un tissu mou, le cancer de l'urètre, le cancer du pénis, le cancer de la prostate, une leucémie chronique ou aiguë, des lymphomes lymphocytaires, le cancer de la vessie, le cancer du rein ou de l'uretère, un carcinome des cellules rénales, un carcinome du bassinet, des néoplasies du systèmes nerveux central (SNC), un lymphome primaire du SNC, des tumeurs de l'axe rachidien, un gliome du tronc cérébral, un adénome hypophysaire ou une association de plusieurs des cancers précités.
Les compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent prendre différentes formes, par exemple, solides ou liquides et se présenter sous les formes pharmaceutiques couramment utilisées en médecine humaine, comme par exemple les comprimés simples ou dragéifiés, les gélules, les granulés, les caramels, les suppositoires, les préparations injectables ; elles sont préparées selon les méthodes usuelles. Le ou les principes actifs peuvent y être incorporés à des excipients habituellement employés dans ces compositions pharmaceutiques, tels que le talc, la gomme arabique, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le beurre de cacao, les véhicules aqueux ou non, les corps gras d'origine animale ou végétale, les dérivés paraffiniques, les glycols, les divers agents mouillants, dispersants ou émulsifiants, les conservateurs.
La présente invention a encore pour objet un procédé de préparation d'une composition ci-dessus décrite, caractérisé en ce que l'on mélange, selon des méthodes connues en elles mêmes, le ou les principes actifs avec des excipients acceptables, notamment pharmaceutiquement acceptables.
L'invention consiste également en un produit contenant au moins un agent méthylant de PP2A, et d'autre part, au moins un principe actif choisi dans le groupe comprenant un inhibiteur de phosphatase PP1 , un inhibiteur d'histone déacétylase, un activateur direct ou indirect de la pyruvate kinase, un agoniste de PTEN, un inhibiteur de la tyrosine kinase, un agoniste de PTEN, un inhibiteur de la tyrosine kinase, un inhibiteur de PI3-kinase un compétiteur du glucose, un inhibiteur de la phosphoenol pyruvate carboxykinase et un inhibiteur de la citrate synthase, comme produit de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps en thérapie cytostatique ou anti-cancéreuse.
Un aspect particulièrement préféré de l'invention consiste en l'utilisation du xylulose 5-P pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement du cancer.
Figure 1: Schéma simplifié du métabolisme du glucose dans la cellule, montrant les principales étapes de la glycolyse. On notera la place prépondérante qu'occupe la pyruvate kinase dans le processus conduisant à la production de pyruvate et d'acétyl CoA, qui sont essentiels au cycle de Krebs.
Figure 2 : Activation de la pyruvate kinase par PP2A.
Cette figure montre comment la phosphatase PP2A, sous la forme d'un trimère, est activée par l'action d'une méthylase utilisant comme donneurs de méthyle des composés tels que la vitamine B12, le folate et la serine et comme activateurs annexes d'autres composés comme le xylulose-5P et du céramide. Cette méthylation rend PP2A active vis-à-vis de la pyruvate kinase. Une fois méthylée, PP2A permet l'activation de la pyruvate kinase en la faisant passer de sa forme M2 phosphorylée inactive à sa forme M4 active déphosphorylée. Cette réaction consomme du Fructose 1-6 bis P.
Figure 3 : Incidence de différents facteurs (virus, action physique ou chimique et nutritionnels) sur l'intégrité de PP2A et implication d'une déficience de PP2A dans le processus de cancérisation.
Cette figure reconstitue le processus par lequel une déficience de PP2A est à l'origine d'un processus de cancérisation prenant la forme d'un "cercle vicieux". Les inventeurs ont reconstitué l'enchaînement des différentes étapes de ce processus à partir de données bibliographiques éparses. C'est à partir de ce schéma global qu'ont été définies les compositions pharmaceutiques selon l'invention. Le point de départ de ce schéma est une altération par des facteurs exogènes de l'activité enzymatique de la phosphatase PP2A. Cette altération a pour conséquence l'inactivation de la pyruvate kinase et donc une baisse de rendement de la glycolyse. La cellule compense cette baisse de rendement de la dégradation du glucose par un apport supplémentaire de glucose. Cette entrée de glucose entraîne, d'une part, l'activation des MAP-kinases et PI3-kinase, lesquelles sont liées aux récépeteurs à insuline à tyrosine kinase, et d'autre part, à une saturation de la glycolyse. Les MAP-kinases activent la phosphatase PP1 qui agit positivement sur certains régulateurs du cycle cellulaire, favorisant la mitose. En parallèle, les MAP-kinases augmentent la perméabilité de la membrane nucléaire, ce qui permet une entrée de méthyle dans le noyau, ayant pour effet une hyperméthylation des gènes, en particulier ceux codant les phosphatases PTEN. Lorsque l'activité des phosphatases PTEN est diminuée, la voie de signalisation des PI3-kinase est augmentée et l'entrée de glucose dans la cellule devient d'autant plus importante. Au final, la cellule connaît un désordre métabolique tel, que son développement devient totalement anarchique.
Figure 4: Schéma donnant les différents domaines d'intervention de PP2A et PP1 et leurs modes de régulation respectifs.
Ce schéma, réalisé par les inventeurs, permet de visualiser le rapport de force existant entre les phosphatases PP2A et PP1. Leur action est globalement opposée, ce qui explique qu'il est nécessaire de soutenir l'activité de PP2A tout en réprimant celle de PP1. PP2A agit à la fois sur la glycolyse via l'activation de la pyruvate kinase et inhibe le cycle cellulaire en réprimant CDC25. Il s'agit donc d'un facteur tendant au maintien de la cellule dans une phase de différentiation. A l'inverse PP1 agit positivement sur CDC25 et agit en tant qu'agent mitogène. PP1 est activé par les MAP-kinases et donc réagit positivement à l'entrée de glucose dans la cellule.
Les exemples de réalisation qui suivent visent à illustrer l'invention. Ils ne présentent aucun caractère limitatif.
Exemple 1 : Association citrate de bétaïne/rosiglitazone.
Des compositions comprenant différentes concentrations d'un agent méthylant de PP2A (citrate de bétaïne) et d'un agoniste connu de PTEN (rosiglitazone) ont été testée in-vitro en parallèle sur les 3 lignées cellulaires pulmonaires cancéreuses suivantes : Calu-6 et NCI-H460.
Le rosiglitazone utilisé est celui commercialisé par la société GlaxoSmithKIine dans la préparation vendue sous le nom d'Avandia®.
1) Détermination préalable de l'IC50 des produits pris isolément sur les lignées cellulaires.
Le résultat des tests préliminaires visant à déterminer séparément l'effet du citrate de betaïne et du rosiglitazone sur les différentes lignées de cellules, sont reportés dans le tableau I ci-après.
Tableau 1 : moyenne et déviation standard (SD) d'IC5o enregistrées pour le citrate de betaïne sur les lignées cellulaires Calu-6 et NCI-H460.
Figure imgf000021_0001
Tableau 1 : moyenne et déviation standard (SD) d'ICβo enregistrées pour Avandia® sur les lignées cellulaires Calu-6 et NCI-H460.
Figure imgf000021_0002
On note que les lignées cellulaires testées sont moins sensibles au citrate de betaïne (IC50 de l'ordre du millimolaire), qu'elles ne le sont vis-à-vis du rosiglitazone (IC50 de l'ordre de la dizaine de micromolaire).
2) Combinaison du citrate de betaïne (NaBt) et du rosiglitazone:
Différents rapports de concentrations ont été établis, lesquels ont été testés sur les différentes lignées cellulaires.
Les résultats de ces expériences sont présentés dans les tableaux II, III et IV suivants. L'indice de synergie (Cl) qui est représenté par les lettres Cl (combination index) dans la colonne de droite des différents tableaux a été calculé suivant la méthodologie décrite par Chou et Talalay [Chou, T.C. et al. in Encyclopaedia of Human Biology, Académie Press (1991) 2 :371-379]. Lorsque Cl > 1 , il doit être considéré que les produits qui sont associés ont un effet antagoniste ;
Lorsque Cl = 1 , il doit être considéré que les produits qui sont associés ont un simple effet d'additivité ;
Lorsque Cl < 1 , il doit être considéré que les produits qui sont associés ont un effet de synergie ;
Pour chaque lignée cellulaire trois essais ont été réalisés.
Tableau 3: Effet constaté de NaBt and Avandia® sur la croissance des cellules Calu-6.
Figure imgf000022_0001
Tableau 4: Effet constaté de NaBt and Avandia® sur la croissance des cellules NCI-H460.
Figure imgf000023_0001
Ces résultats montrent qu'on obtient une meilleure inhibition de la croissance des lignées cellulaires cancéreuses Calu-6 et NCI-H460 lorsque les deux produits sont utilisés en combinaison, que lorsqu'ils sont utilisés séparément.
En parallèle une étude de la toxicité des produits sur souris a été réalisée. Aucune mortalité, ni perte de poids n'ont été observés pour le traitement associant le citrate de betaïne et Avandia®.
Exemple 2: Association citrate de bétaïne/Metformine.
Le même protocole a été appliqué qu'à l'exemple 1 pour tester la synergie entre un agent méthylant de PP2A (citrate de bétaïne) et un inhibiteur connu de la phosphoenol pyruvate carboxykinase qui est la metformine.
La lignée cellulaire retenue pour réaliser l'expérience est la lignée CaIu- 6.
Le protocole utilisé est celui décrit par Chou et Talalay mentionné plus haut, lequel nécessite ici une détermination de la fraction affectée (Fa), pour chacun des produits citrate de bétaïne et metformine, pris isolément puis en association. Ces valeurs Fa sont utilisées dans le calcul de l'indice de synergie (Cl) qui permet de rendre compte de la présence ou de l'absence de synergie entre les produits.
Tableau 5: Détermination individuelle de la fraction affectée (Fa) pour les produits citrate de bétaïne (NaBt) et metformine (Met) sur lignée cellulaire pulmonaire Calu-6.
Figure imgf000024_0001
Tableau 6: Détermination de la fraction affectée (Fa) et de l'indice de synergie correspondant (Cl) pour les produits citrate de bétaïne (NaBt) et metformine (Met) en association sur lignée cellulaire pulmonaire Calu-6. Différents rapports de concentrations ont été appliqués (1 :1, 1 :2, 2 :1).
Figure imgf000025_0001
Tableau 7: Moyenne de Fa pour les produits seuls et déviation standard (SD) calculés pour l'ensemble des trois expériences représentées dans le tableau 5.
Figure imgf000026_0001
Tableau 8: Moyenne de Fa pour les produits en association, déviation standard (SD), et Cl correspondant, calculés pour l'ensemble des trois expériences représentées dans le tableau 6.
Figure imgf000027_0001
Les résultats ci-dessus indiquent qu'une synergie peut être obtenue sur lignée cellulaire Calu-6 lorsqu'on associe les produits citrate de bétaïne et metformine à des concentrations comprises entre 0,5 et 1 ,5 mM de chacun des produits.
Exemple 3: Effet de la bromo-alanine sur lignée cellulaire cancéreuse résistantes au taxol (U87-MG) en test MTT.
Des cellules d'une lignée (U87 -MG) intrinsèquement résistantes à de nombreuses drogues, notamment au taxol, ont été incubées en présence d'une concentration de bromo-alanine pure de l'ordre de 1mM sur une période de 72 heures.
Ces cultures ont aboutit à une inhibition de la croissance de ces cellules de 40 % par rapport au témoin comprenant un milieu de culture standard.
Exemple 4 : Effet d'un traitement à base de chloro phosphoenol pyruvate (inhibiteur de la phosphoenol pyruvate carboxykinase) sur la mortalité induite par cancer sur souris.
Des souris porteuses d'un lymphome intra péritonial de type L1210 ont été traitées pendant 7 jours en parallèle avec les préparations suivantes :
SYN857 (A) : chloro phosphoenol pyruvate - SYN856 (B) : ester de chloro phosphoenol pyruvate et de camitine
BCNU : carmustine Vehicle : témoin
La chloro phosphoenol pyruvate et l'ester de chloro phosphoenol pyruvate et de camitine ont été synthétisées par Synthéval (Caen - France).
La carmustine est une drogue utilisée couramment en chimiothérapie. Elle est utilisée ici en tant que témoin positif.
Le poids des animaux pour chaque groupe ainsi que les courbes de poids individuelles en fonction du temps ont été relevées et un suivi de la mortalité des animaux a été effectuée.
Comme on peut le constater sur le tableau 9 ci-après :
• les souris du groupe contrôle (véhicule) sont toutes mortes, avec une moyenne de survie de 7.50 ± 0.67 jours (médianne à 7 jours); • 4 souris sur 10 du groupe traité par la chloro phosphoenol pyruvate (SYN857) à 136 mg/kg sont mortes à 9 jours (T/C%>128%);
• 9 souris sur 10 du groupe traité par la chloro phosphoenol pyruvate (SYN857) à 70 mg/kg sont mortes à 9 jours (T/C%>128%);
• 6 souris sur 10 du groupe traité par l'ester de chloro phosphoenol pyruvate et de carnitine (SYN856) à 60 mg/kg sont mortes à 9 jours (T/C%>128%),
• 7 souris sur 10 du groupe traité par le SYN856 à 30 mg/kg sont mortes à 9 jours, (T/C%>128%),
• toutes les souris du groupe contrôle traité par la carmustine (BCNU) à 15 mg/kg sont restées vivantes, ce qui est normal.
Les souris sont mortes suite au développement d'ascites hémorragique.
Tableau 9 : Mortalité observée dans les différents groupes de souris.
Figure imgf000029_0001
Le paramètre T/C% est calculé avec le ratio du temps médian de survie des animaux du groupe considéré sur le temps médian de survie des animaux du groupe contrôle, le tout multiplié par 100. Il est ici significatif car il est supérieur à 125% (>128% puisque toutes les souris ne sont pas encore mortes). II atteste de l'efficacité anti-tumorale des deux préparations SYN857 (A) et SYN856 (B).
Il est notable que la préparation SYN856 (B), qui comprend l'ester de chloro phosphoenol pyruvate et de carnitine sous la forme d'une seule molécule est efficace à une concentration moindre que le chloro phosphoenol pyruvate seul.

Claims

REVENDICATIONS
1. Composition pharmaceutique destinée au traitement du cancer, caractérisée en ce qu'elle comprend l'association entre: d'une part, au moins un agent méthylant de PP2A, et d'autre part, au moins un principe actif choisi dans le groupe comprenant un inhibiteur de phosphatase PP1 , un inhibiteur d'histone déacétylase, un activateur direct ou indirect de la pyruvate kinase, un agoniste de PTEN, un inhibiteur de la tyrosine kinase, un inhibiteur de PI3 kinase, un compétiteur du glucose, un inhibiteur de la phosphoenol pyruvate carboxykinase, un inhibiteur de la citrate synthase et un inhibiteur de la lactate déshydrogénase.
2. Composition pharmaceutique selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'agent méthylant de PP2A est choisi dans le groupe comprenant la serine, Ie folate, la méthionine, la S-adenosyl méthionine, la vitamine B 12, la choline, le manganochlorure d'acétylcholine et Ia bétaïne et ses sels pharrnaceutiquement accpetables, notamment le citrate de bétaïne.
3. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisée en-ce que l'inhibiteur de phosphatase PP1 est choisi dans le groupe comprenant la cantharidine, la tautomycine, la rapamycine et le DARP 32.
4. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revend-ications 1 à 3, caractérisée en ce que l'inhibiteur d'histone déacétyiase est choisi dans le groupe comprenant le butyrate, le phénylbutyrate, la trichostatine et le valproate.
5. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que l'activateur direct ou indirect de la pyruvate kinase est choisi dans le groupe comprenant le xylulose 5-P, un céramide, le N-6-cyclopentyladénosine et le manganochlorure d'acétylcholine.
6. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que l'agoniste de PTEN est le rosiglitazone.
7. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que l'inhibiteur de la tyrosine kinase est le PD 9805 G ou l'adénosine.
8. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que le compétiteur du glucose est le 5- mannhoseheptulose ou le 2-déoxy-glucose.
9. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que l'inhibiteur de PI3 kinase est choisi dans le groupe comprenant la wortmannine, le LY294002, la quercetine, la myricetine et la staurosporine.
10. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 1 et 9, caractérisée en ce que l'inhibiteur de la phosphoenol pyruvate carboxykinase est choisi parmi le chloro phosphoenol pyruvate, l'aspartate, la metformine ou les dérivés du tryptophane.
11. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisée en ce que l'inhibiteur de la citrate synthase est le fluoro acétyl co-A.
12. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 1 à 11 , caractérisée en ce que l'inhibiteur de la lactate deshydrogénase est un dérivé de l'alanine tel que la bromoalanine.
13. Composition pharmaceutique selon la revendication 1 ou la revendication 6, caractérisée en ce qu'elle comprend l'association d'un agent méthylant de PP2A et d'un agoniste de PTEN.
14. Composition pharmaceutique selon la revendication 13, caractérisée en ce qu'elle comprend l'association de citrate de bétaïne et de rosiglitazone.
15. Composition pharmaceutique selon la revendication 1 ou la revendication 9, caractérisée en ce qu'elle comprend l'association d'un agent méthylant et d'un inhibiteur de la phosphoenol pyruvate carboxykinase.
16. Composition pharmaceutique selon la revendication 15, caractérisée en ce qu'elle comprend l'association de citrate de bétaïne et de metformine.
17. Utilisation d'une composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 1 à 16 pour la préparation d'un médicament destiné au traitement du cancer.
18. Produit contenant au moins un agent méthylant de PP2A, et d'autre part, au moins un principe actif choisi dans le groupe comprenant un inhibiteur de phosphatase, un inhibiteur d'histone déacétylase, un activateur direct ou indirect de la pyruvate kinase, un agoniste de PTEN, un inhibiteur de la tyrosine kinase, un agoniste de PTEN, un inhibiteur de la tyrosine kinase, un inhibiteur de PI3 kinase, un compétiteur du glucose, un inhibiteur de la phosphoenol pyruvate carboxykinase, un inhibiteur de la citrate synthase et un inhibiteur de la lactate deshydrogénase, comme produit de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps en thérapie cytostatique ou anti-cancéreuse.
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