+

WO2006016051A2 - Dispositif avec organe de prelevement pour la detection d’un analyte dans un echantillon liquide - Google Patents

Dispositif avec organe de prelevement pour la detection d’un analyte dans un echantillon liquide Download PDF

Info

Publication number
WO2006016051A2
WO2006016051A2 PCT/FR2005/001775 FR2005001775W WO2006016051A2 WO 2006016051 A2 WO2006016051 A2 WO 2006016051A2 FR 2005001775 W FR2005001775 W FR 2005001775W WO 2006016051 A2 WO2006016051 A2 WO 2006016051A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
zone
capillary diffusion
diffusion means
capillary
sample
Prior art date
Application number
PCT/FR2005/001775
Other languages
English (en)
Other versions
WO2006016051A3 (fr
Inventor
Raphael Donati
Original Assignee
Vedalab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Vedalab filed Critical Vedalab
Priority to EP05788478A priority Critical patent/EP1765500A2/fr
Publication of WO2006016051A2 publication Critical patent/WO2006016051A2/fr
Publication of WO2006016051A3 publication Critical patent/WO2006016051A3/fr

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54306—Solid-phase reaction mechanisms
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • G01N33/54386—Analytical elements
    • G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
    • G01N33/54388—Immunochromatographic test strips based on lateral flow

Definitions

  • the present invention relates to a lateral migration immunochromatographic device for the detection of an analyte in a liquid sample.
  • Lateral migration immunochromatographic devices are for example described in patent EP 0 284 232. These devices implement a capillary diffusion means in the form of a porous solid support in which the sample and the reagents migrate by capillary diffusion. . These devices thus integrate a porous solid support (or immunochromatographic) comprising a first zone carrying in lyophilized or dehydrated form, a binding reagent conjugated to a particulate marker and a detection zone on which is immobilized a capture reagent specific for the analyte. . The reagent conjugated with the particulate marker is immobile in lyophilized form but becomes mobile in the solid support in the wet state.
  • the solid support migrates by capillary diffusion in this support causing the binding reagent conjugated to the particulate marker.
  • the sample and the labeled binding reagent migrate by capillary diffusion into the solid support to the detection zone carrying the immobilized capture reagent.
  • the labeled binding reagent binds to the analyte while the analyte is immobilized on the solid support by the capture reagent. The presence or absence of the analyte in the sample is thus measured by the detection of the labeled reagent.
  • EP 0291 194, EP 0 560411 and EP 0 560410 disclose devices in which the immunochromatographic solid support is incorporated in a housing provided with an opening for depositing the sample and an observation window for reading. results.
  • these patents also disclose devices in which one end of the solid support protrudes permanently relative to the housing to facilitate the deposition of the liquid sample. This projecting end of the solid support can thus be directly brought into contact with a flow of urine for example.
  • a second diffusion means in the form of an absorbent material is salient with respect to the housing and allows the deposit of the sample. This absorbent material being arranged in capillary continuity with the porous solid support carrying the reagents to allow the deposition and then the migration of the sample.
  • the patent EP 1 091 808 describes improved devices also comprising a porous solid support integrated into a housing in which a movable capture member allows better collection of the sample.
  • This capture member comprises an absorbent material on which the sample is deposited.
  • the capture member is movable in translation relative to the housing.
  • the capture member and the absorbent material remain integral with the housing and are not removable. Since the capture member is not removable and can not be completely detached from the housing, there is a risk of flooding the device when it is placed under a stream of urine for example.
  • No. 5,900,379 discloses test devices in the form of reusable housings after replacement of the removable cassette placed in the housing.
  • This cassette consists of a rigid support on which are affixed capillary diffusion means. It is in the form of an immunochromatographic strip. The entire immunochromatographic cassette or strip including the different reagents can be replaced to allow reuse of the housing.
  • WO 98/19164 thus describes devices comprising a sampling member provided with an absorbent material on which reagents are deposited.
  • a sampling member provided with an absorbent material on which reagents are deposited.
  • absorbent material of the sample organ is placed under a flow of urine a fraction of the reagent deposited on this material is lost by a washing effect.
  • the present invention proposes devices in which the sampling member consists of a gripping support and a capillary diffusion means comprising separate and opposite sampling and sample transfer zones.
  • the binding reagent conjugated to the label is deposited downstream of the sample collection zone with respect to the direction of capillary diffusion to avoid any washing effect when sampling the sample.
  • the sampling member removably assembles with the housing comprising the immunochromatographic support to allow easy and fast domestic use without risk of flooding the device during the deposit of the sample.
  • this procedure also makes it possible to increase the sensitivity of the device with the (optional) possibility of leaving the sample and the reagent in contact for a certain time before starting the reaction.
  • the device for determining an analyte in a liquid sample comprises: a first gripping support (1),
  • the first gripping support (1) has two open ends (13) for passage on the one hand of the sampling zone (4) of the sample and on the other hand of the transfer zone (5) of the sample of the first capillary diffusion means (2)
  • the second gripping support (7) is provided with an opening (14) for applying the sample to the collection zone (10) of the second capillary diffusion means (8)
  • the first gripping support ( 1) being adapted to be detachably assembled in two inverted positions with respect to the reference direction (3) with the second gripping support (7) so that in the first position the sampling area (4) of the first means of capillary diffusion (2) is inserted in the second gripping medium (7) through the opening (14) while in the second position the transfer zone (5) of the first capillary diffusion means (2) is inserted into the second gripping support (7) through the opening (14) such that said transfer zone (5) of the first capillary diffusion means
  • the second gripping support (7) is in the form of a housing provided with an opening (14) for the insertion of the sampling zone (4) or of the transfer zone (5) of the first gripping means. capillary diffusion (2), and an observation window (15) aligned with the detection zone (11) of the second capillary diffusion means (8).
  • the second capillary diffusion means (8) is clamped and held inside the casing between ribs (16) extending parallel to the capillary diffusion direction.
  • the second gripping support (7) is provided with guiding means (17) for the insertion of the sampling zone (4) or the transfer zone (5) of the first capillary diffusion means (2).
  • the second capillary diffusion means (2) is in the form of an immunochromatographic strip.
  • the binding reagent conjugated to a visible and / or measurable marker (6) is immobilized in the dry state in the transfer zone (5) of the first capillary diffusion means (2). ).
  • the first gripping support (1) has the shape of a hollow body provided with two open ends (13) for the passage of the first capillary diffusion means (2).
  • the first capillary diffusion means (2) in the form of an absorbent material elongated in the direction of capillary diffusion.
  • the sampling zone (4) and the transfer zone (5) of the first capillary diffusion means (2) are projecting relative to the first gripping support (1).
  • the device also comprises a removable cap (18) for protecting the sampling zone (4) or the transfer zone (5) protruding with respect to the first gripping support (1). ).
  • the first capillary diffusion means (2) is movable and displaceable in translation relative to the first gripping support (1) parallel to the direction of capillary diffusion.
  • the subject of the invention is also a method for detecting an analyte in a liquid sample comprising the following steps: a) a device according to the invention is available; b) depositing a liquid sample on the sampling zone (4) of the first capillary diffusion means (2); c) assembling the first and second gripping support (1, 7) to insert the transfer zone of the first capillary diffusion means
  • step e) of the method the binding reagent conjugated to a visible and / or measurable marker (6) and the capture reagent (12) allow detection of the analyte in a sandwich test.
  • step e) of the method the binding reagent conjugated to a visible and / or measurable marker (6) and the capture reagent (12) allow detection of the analyte in a competition test.
  • the sampling zone (4) of the first capillary diffusion means (2) is placed under a stream of urine in step b) of the method for depositing the sample.
  • analyte is meant any chemical, biochemical or biological entity that it is desired to detect in a sample.
  • analytes detected by the devices and methods according to the present invention mention will in particular be made of proteins, peptides, antibodies, hormones, steroids, antigens derived from infectious agents or tumor cells, infectious agents such as bacteria, viruses or parasites, nucleic acids (DNA or RNA), therapeutic molecules, drugs or antibiotics.
  • detect is meant the determination of the presence or absence of an analyte in a sample but also the measurement and quantification of an analyte in a sample. Indeed, the performance of the devices and methods according to the invention allow the realization of quantitative or semi-quantitative measurements.
  • the analyte is hCG (choriogonadotropin hormone) or LH (luthinizing hormone).
  • liquid sample any sample in which the desired analyte is in solution or suspension.
  • This liquid sample may especially be any biological or body fluid.
  • the liquid sample may also have been obtained directly or indirectly from a biological fluid or body fluid.
  • the sample may also be a liquid extract of a solid sample.
  • the liquid sample is urine, whole blood, plasma or serum.
  • the liquid sample is urine and the sample is deposited by placing the sampling area of the sample of the first capillary diffusion means under a flow of water. 'urine.
  • the devices according to the invention are thus particularly well suited for home use since only very simple manipulations are necessary.
  • capillary diffusion means is meant a porous solid support allowing the migration of a liquid by simple capillary diffusion.
  • the porosity of this support allows the capillary diffusion (or lateral migration) of the sample and / or reagents in the liquid or wet state.
  • Such capillary diffusion means are very widely used in all lateral migration immunochromatography techniques in particular.
  • capillary diffusion means used in the immunochromatographic tests according to the invention are well known to those skilled in the art (EP 0 284232).
  • these capillary diffusion means may consist of various immunochromatographic supports, of cellulose, of nylon, of nitrocellulose, of polyethylene or of fiberglass.
  • the capillary diffusion means may consist of one or more distinct parts.
  • the different parts of the support can advantageously be made of different materials.
  • these elements are arranged in such a way as to allow continuity of the capillary flow in the capillary diffusion means.
  • the first capillary diffusion means makes it possible to capture the liquid sample and then to deposit it on the collection zone of the second capillary diffusion means.
  • the first capillary diffusion means consists of a porous solid support elongated in the direction of capillary diffusion.
  • the first capillary diffusion means consists of an absorbent material.
  • the first capillary diffusion means comprises a sample collection zone and a sample transfer zone.
  • the sampling zone and the transfer zone are two distinct zones separated from the first capillary diffusion means. These zones are arranged to allow continuity of the capillary flow from the sampling zone to the transfer zone in a reference direction. Typically, each of these areas corresponds to one of the opposite ends of the first capillary diffusion means.
  • the first capillary diffusion means is thus for example constituted of an absorbent material elongated in the direction of capillary diffusion having a proximal end and a distal end respectively constituting the sampling zone and the transfer zone of the sample.
  • the sampling zone of the first capillary diffusion means is intended to be brought into contact with a flow of urine for example. We will choose a suitable absorbent material. These materials are well known to those skilled in the art.
  • the first capillary diffusion means carries the conjugated binding reagent to a visible and / or measurable marker.
  • This labeled binding reagent is immobilized in the dry state in the first capillary diffusion means but is free to migrate by capillary diffusion in the wet state.
  • This reagent is located downstream of the sampling zone to avoid any loss of reagent by a washing effect during sampling of the sample.
  • the labeled binding reagent is immobilized in the transfer zone of the first capillary diffusion means.
  • the deposition of the labeled binding reagent on this absorbent material allows a better dosage of the reagent.
  • This dosage of the reagent is more difficult to achieve when the reagent is deposited on the second capillary diffusion means generally consisting of a chromatographic strip.
  • the sampling zone of the first capillary diffusion means is brought into contact with a liquid sample (a flow of urine for example) and then the sample migrates by capillary diffusion to the transfer zone through the first means of diffusion. capillary scattering then driving the binding reagent conjugated to a marker.
  • the second means of capillary diffusion of the devices according to the invention is a porous solid support in the form of a band or an immunochromatographic strip.
  • the second capillary diffusion means is typically in the form of an immunochromatographic strip consisting of several superimposed or overlapping strips.
  • the second capillary diffusion means comprises a sample collection zone and a detection zone carrying the capture reagent. These zones are arranged to allow continuity of the capillary flow from the collection zone to the detection zone in a reference direction.
  • the collection zone and the detection zone are two distinct zones separated from the second capillary diffusion means.
  • the sample and the labeled binding reagent migrate through the second capillary diffusion means from the collection zone to the detection zone.
  • the second capillary diffusion means is for example constituted by an immunochromatographic strip, one end of which constitutes the collection zone, the detection zone being situated near the other end of the strip.
  • These zones may for example be present in the same plane on a strip made of a single material.
  • a specific material corresponds to each zone of the second capillary diffusion means.
  • a porous absorbent material may for example be used for the collection area of the sample.
  • the detection zone of the second capillary diffusion means comprises a capture reagent for the detection and / or quantification of the analyte.
  • This capture reagent is immobilized in the detection zone of the second capillary diffusion means.
  • the detection zone of the second capillary diffusion means may also comprise a second capture reagent immobilized on the porous support downstream of the first capture reagent.
  • This second immobilized capture reagent usually makes it possible to control the smooth running of the test by checking, for example, the migration of the conjugated binding reagent to the marker in the capillary diffusion means.
  • the second capture reagent is, for example, an antibody specific for the binding reagent.
  • the first and second capillary diffusion means are respectively secured to a first and second gripping support. These gripping supports facilitate the handling of the capillary diffusion means and can also protect them including moisture.
  • the gripping support can partially or completely wrap the capillary diffusion means.
  • the gripping support may be made of various materials such as cardboard, plasticized cardboard or more preferably plastics.
  • the gripping support is made of a rigid and impermeable material.
  • the first gripping support covers only partially. the first capillary diffusion means.
  • the first gripping support has the shape of a hollow body provided with two open ends for the passage of the sampling zone and the transfer zone of the first capillary diffusion support. These zones are therefore salient with respect to the first gripping support and are directly accessible. The sampling zone can thus be directly brought into contact with the liquid sample.
  • the first gripping support and the first capillary diffusion means thus form a sample collection or collection member.
  • this sample collection member takes the form of a rectangular hollow body open at both ends in which is inserted an absorbent member having an elongated shape. Both ends of the absorbent element protrude from the hollow body. These two projecting ends respectively constitute the sampling zone and the transfer zone of the sample.
  • the device according to the invention also comprises a removable cap for protecting the projecting ends of the first capillary diffusion means.
  • This cap covers one or other of the ends of the first capillary diffusion means according to the assembly of the device in two inverted positions.
  • the second capillary diffusion means is integrated in the second support for gripping.
  • the second gripping support is in the form of a housing in which the second capillary diffusion means is fixed.
  • the device is in the form of a housing in which is immobilized an immunochromatographic strip.
  • the second holder or housing is provided with an opening for application of the sample to the collection area of the second capillary delivery means. This opening allows the insertion of the projecting ends of the first capillary diffusion means in the housing.
  • the second gripping support is also provided with at least one observation window for observing the detection zone of the second capillary diffusion means.
  • the first and second gripping supports are adapted to be removably assembled in two inverted positions.
  • the first and second gripping support can snap removably.
  • the first and second gripping support can therefore fit together to be assembled and can be separated and moved.
  • the first gripping support and the first capillary diffusion means thus form a removable sampling member which can be entirely separated from the second gripping support (or housing). This sampling member can be handled independently of the remainder of the device for sampling.
  • the removable assembly of the two gripping supports makes it possible to avoid any flooding of the entire device and in particular of the immunochromatographic strip during the application of the liquid sample.
  • the first gripping support is adapted to be removably assembled in two inverted positions relative to the direction of capillary diffusion with the second gripping support so that in the first position the sampling zone of the first diffusion means capillary is inserted into the second gripping support by the opening while in the second position the transfer zone of the first capillary diffusion means is inserted into the second gripping support by the opening such that said transfer zone of the first capillary diffusion means is in capillary continuity with the collection zone of the second capillary diffusion means.
  • This possibility of assembly in two inverted positions facilitates manipulation by the user. This characteristic also makes it possible to avoid any loss of reagent by washing during the application of the liquid sample.
  • the user has a device assembled so that the sampling area of the first capillary diffusion means is inserted into the second gripping support by the opening.
  • the sampling zone of the first capillary diffusion means is exposed and the user can apply the sample by placing the sampling zone under a flow of water. urine for example.
  • this reagent is not deposited on the sampling area.
  • this reagent is deposited on the transfer zone of the first capillary diffusion means which is protected by a cap. After the application of the liquid sample, the user moves the cap on the sampling zone of the first capillary diffusion means.
  • the displacement of the cap exposes the transfer zone of the first capillary diffusion means.
  • the user can then re-assemble the first and second gripping support in an inverted position relative to the starting position. In this position, the transfer zone of the first capillary diffusion means is inserted into the second gripping support by the opening in such a way that said transfer zone of the first capillary diffusion means is in capillary continuity with the collection zone of the second means of capillary diffusion.
  • the migration of the reagents and the sample takes place and the user only has to observe the result of the test.
  • the invention therefore also relates to a method for detecting an analyte in a liquid sample comprising the following steps: a) a device according to the invention is assembled so that the sampling zone of the first means of capillary diffusion is inserted into the second gripping support by the opening; b) separating the first and the second gripping support thus exposing the sampling zone of the first capillary diffusion means; c) depositing a liquid sample on the sampling zone of the first capillary diffusion means; d) moving the cap on the sampling zone of the first capillary diffusion means exposing the transfer zone of the first capillary diffusion means; e) assembling the first and second gripping supports to insert the transfer zone of the first capillary diffusion means into the second gripping support so that the transfer zone of the first capillary diffusion means is in flow continuity capillary with the collection zone of the second capillary diffusion means; f) a sufficiently long time is allowed to allow the sample to migrate in the first capillary diffusion means from the sampling zone to the transfer zone, resulting in the binding
  • binding reagent conjugated to a visible and / or measurable label and the capture reagent are specific for the desired analyte in the sample.
  • the binding reagent conjugated to a visible and / or measurable marker and the capture reagent immobilized in the detection zone of the second capillary diffusion means enable the analyte to be detected by a test. sandwich.
  • the binding reagent conjugated to a visible and / or measurable marker and the capture reagent specific for the immobilized analyte in the detection zone of the second capillary diffusion means make it possible to detect the analyte by a competition test.
  • Sandwich tests and competitive tests are well known to those skilled in the art.
  • the analyte-specific capture reagent and the labeled binding reagent are predetermined to bind respectively and specifically with the analyte, for example at two epitopic sites, identical to or different from the analyte.
  • the labeled binding reagent is identical or analogous to the analyte, to bind with the capture reagent, in competition with the analyte.
  • capture reagent any biochemical or biological chemical entity capable of binding specifically with the analyte.
  • the capture reagent also binds to the binding reagent.
  • the analyte and the capture reagent typically form a ligand / anti-ligand, antigen / antibody, DNA / RNA or DNA / DNA pair.
  • the capture reagent is for example an antibody specific for the analyte.
  • the capture reagent is the antigen recognized by the antibody or an antibody specifically recognizing the analyte.
  • the capture reagent is for example a complementary DNA probe.
  • the immobilized capture reagent is preferably a polyclonal or monoclonal antibody having a high affinity for the analyte and more preferentially it is a monoclonal antibody.
  • the capture reagent specific for the analyte is immobilized in the detection zone of the second capillary diffusion means according to techniques known to those skilled in the art.
  • This capture reagent is immobilized so that it is not mobile in the wet state. This immobilization can be carried out for example by absorption or by covalent coupling.
  • the capture reagent is a nucleic acid, it is for example fixed on a nitrocellulose type support by UV treatment or by any other technique known to those skilled in the art.
  • binding reagent is meant any biochemical or biological chemical entity capable of binding specifically with the analyte or with the capture reagent in competition with the analyte.
  • binding or “binding” is meant any strong binding, for example covalent or any weak binding, for example of the antigen / antibody or avidin / streptavidin type.
  • the binding reagent is for example an antibody, an antigen or a nucleic acid.
  • binding reagent any other binding reagent known to those skilled in the art may be used such as monoclonal antibody (or antibodies) to antibiotin, avidin, streptovidine, or polytroptavidin. These reagents can be native or recombinant.
  • the binding reagent is for example the analyte itself or an appropriate analogue of the analyte.
  • appropriate analogue of the analyte is meant an analogue specifically binding to the specific capture reagent of the analyte.
  • the labeled binding reagent is therefore the analyte conjugated to a visible and / or measurable marker or an analogue of the analyte conjugated to a visible and / or measurable marker.
  • the binding reagent specifically binds to the analyte.
  • the labeled binding reagent is, for example, an antibody specific for the analyte conjugated to a visible and / or measurable marker.
  • the binding reagent is conjugated to a visible and / or measurable marker allowing measurement or direct observation of the test result.
  • the marker can be observed directly to the naked eye when it is concentrated in the detection zone of the second capillary diffusion means.
  • the marker can be measured directly with the naked eye or with a measuring device. This measurement is done by direct observation that does not require additional manipulation.
  • the devices according to the present invention comprise a binding reagent conjugated to a particulate marker.
  • the particulate markers consist of small particles insoluble in water and which therefore form suspensions in the liquid phase that is to say a dispersion of solid particles in a liquid.
  • Particulate markers are well known to those skilled in the art.
  • colored or fluorescent particle markers are known.
  • the markers allowing direct observation with the naked eye are also the markers of the dextran type (Hansen TM, IVD Technology 4, 35-40, 2003).
  • the binding reagent is then conjugated to a dextran chain (polysaccharide derivative) carrying fluorophores.
  • the binding reagent is conjugated to the visible marker and / or measurable according to known techniques.
  • the invention is described in more detail with reference to the following figures:
  • Figure 1 shows in perspective a device according to a particular embodiment of the invention.
  • the first and second gripping support and the cap are not assembled.
  • Figure 2 shows the device of Figure 1.
  • the first and second gripping support and the cap are assembled.
  • Figure 3 shows a top view of the first gripping support.
  • Figure 4 shows a cross-sectional view of the first gripping support.
  • FIG. 5 represents an exploded perspective view of the device represented in FIG.
  • Figures 6-10 show the different steps of the method of use of the device of Figure 1.
  • a device according to one particular embodiment of the invention, comprises:
  • a first holding support (1) having the shape of a hollow body provided with two open ends (13) for the passage of the two projecting ends of the first capillary diffusion means (2), this hollow body is provided with means of assembly (19) for removable assembly with the cap (18) and with the second gripping support (7);
  • a first capillary diffusion means (2) having the form of a porous solid support of elongated absorbent material in the direction of capillary diffusion having a proximal end and an opposite distal end respectively forming the sampling zone of the sample (4); ) and the sample transfer zone (5); the sample transfer zone (5) is located downstream of the sampling zone (4) relative to the reference direction (3) of capillary diffusion; this first capillary diffusion means (2) is integral with the first support gripper (1) having the shape of a hollow body so that the sampling zone (4) and the transfer zone (5) are projecting;
  • a second holding support (7) in the form of a hollow housing comprising at one end an opening (14) for the passage of one or the other of the projecting ends of the first capillary diffusion means (2) , this housing being provided with an observation window (15) for the direct reading of the result of the diagnostic test, and assembly means (21) for the removable assembly with the first support (1).
  • Figure 2 shows the same assembled device.
  • the hollow body 1 holding support (1) can be assembled with the housing of the second gripping support (7) in two inverted positions.
  • the hollow body In the first position, the hollow body is assembled with the housing so that the sampling area of the sample (4) of the first capillary diffusion means (2) is inserted into the housing through the opening (14) then the removable cap (18) protects the sample transfer zone (5) from the first capillary diffusion means (2).
  • the hollow body is assembled with the housing, so that the sample transfer zone (4) of the first capillary diffusion means (2) is inserted into the housing through the opening (14). while the removable cap (18) protects the sampling area of the sample (4) from the first capillary diffusion means (2).
  • the transfer zone (5) of the first capillary diffusion means (2) is in capillary continuity with the collection zone (10) of the second capillary diffusion means (8).
  • FIG. 3 represents a view from above of the first holding support (1) having the shape of a hollow body provided with two ends open (13) and assembly means (19) for removable assembly with the cap (18) on the one hand and the housing on the other hand.
  • Figure 4 shows a cross-sectional view of the first gripping support (1) having the shape of a hollow body. Ribs (21) make it possible to hold and immobilize the first capillary diffusion means (2) by clamping.
  • the first capillary diffusion means (2) can be movable and displaceable in translation relative to the hollow body. The displacement of the first capillary diffusion means (2) takes place under the pressure exerted on the removable cap during assembly of the device.
  • the device represented in FIG. 1 also comprises:
  • a second capillary diffusion means (8) in the form of an immunochromatographic strip integrated in the casing; this strip comprises a collection area (10) of the sample accessible externally through the opening (14) in the housing for depositing the sample by means of the first capillary diffusion means (2); the detection zone (11) is located downstream of the collection zone (10) with respect to the capillary diffusion reference direction (9); the detection zone (11) is positioned in the housing so that it is aligned with the observation window (15) for the direct reading of the test result;
  • the user has an assembled device as shown in FIG. 2 so that the sampling zone of the sample (4) of the first capillary diffusion means (2) is inserted into the hollow housing, while the removable cap (18) protects the transfer zone (5) of the first capillary diffusion means (2) ( Figure 6).
  • the first gripping support (1), the hollow housing and the cap (18) are removably assembled.
  • the user separates the first gripping support (1) from the hollow casing (7).
  • the sampling zone (4) of the first capillary diffusion means (2) protruding with respect to the first gripping support (1) becomes accessible.
  • the sampling zone (4) of the first capillary diffusion means (1) made of absorbent material is then placed under a flow of urine or soaked in a liquid. Since the housing is separated from the sample collection member (hollow body and first capillary diffusion means) any risk of flooding of the housing is discarded ( Figure 7).
  • the user separates the removable cap (18) and moves it on the sampling zone (4) of the first capillary diffusion means (2).
  • the sample transfer zone (5) of the first capillary diffusion means (2) protruding with respect to the first gripping support (1) then becomes accessible (FIG. 8).
  • the user inserts the transfer zone (5) of the first capillary diffusion means (2) in the housing through the opening (14) provided for this purpose so that the transfer zone (5) of the first means capillary diffusion (2) is in capillary flow continuity with the collection zone (10) of the immunochromatographic strip (8).
  • the first gripping means (1) is then assembled with the housing (7) in the inverted position relative to the initial assembly (FIGS. 9 and 10).
  • the lateral migration immunochromatographic test then proceeds without further user intervention (Figure 10).
  • the liquid sample migrates by capillary diffusion in the reference direction (3) from the sampling zone (4) to the transfer zone (5) of the first capillary diffusion means (2) consisting of an absorbent material.
  • the sample then drives the labeled binding reagent (6) which is mobile in the wet state.
  • the sample and the labeled binding reagent (6) then migrate from the transfer zone (5) of the first capillary diffusion means (2) into the collection area (10) of the immunochromatographic strip (8) and then within from this strip in the reference direction (9) to the detection zone (11) carrying the immobilized capture reagent (12).
  • the reactions are carried out and the result is directly visible to the naked eye by the observation window (15).
  • the device being disposable it can then be discarded by the user.
  • the device consists of a pregnancy test that detects HCG hormone.
  • the transfer zone of the first capillary diffusion means then comprises 20 ⁇ l of particulate marker with concentrated colloidal gold on which is absorbed a mouse anti-HCG antibody (this marker is then dried).
  • the detection zone of the second capillary diffusion means comprises two immobilized reagents deposited along a test line and a control line.
  • the capture reagent constitutes the test line, it is typically an immobilized anti-HCG polyclonal or monoclonal antibody (approximately 1 ⁇ g / test).
  • a second immobilized reagent consisting of a polyclonal anti-mouse immunoglobulin antibody (approximately 1 ⁇ g / test) constitutes the control line.
  • This embodiment is similar to the rapid tests embodiments known housing or strip format I one skilled in the art, the difference being the positioning of the particulate label, it is no longer disposed on the inner strip itself same (second capillary diffusion means) but on the first removable capillary diffusion means.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

L'invention a pour objet un dispositif immunochromatographique à migration latérale pour la détection d'un analyte dans un échantillon liquide. Ce dispositif comprend un organe de prélèvement de l'échantillon qui porte un réactif de liaison conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable.

Description

Dispositif avec organe de prélèvement pour la détection d'un analyte dans un échantillon liquide
La présente invention concerne un dispositif immunochromatographique à migration latérale pour la détection d'un analyte dans un échantillon liquide.
Des dispositifs immunochromatographiques à migration latérale sont par exemple décrits dans le brevet EP 0 284 232. Ces dispositifs mettent en œuvre un moyen de diffusion capillaire sous la forme d'un support solide poreux au sein duquel l'échantillon et les réactifs migrent par diffusion capillaire. Ces dispositifs intègrent ainsi un support solide poreux (ou immunochromatographique) comportant une première zone portant sous forme lyophilisée ou déshydratée, un réactif de liaison conjugué à un marqueur particulaire et une zone de détection sur laquelle est immobilisé un réactif de capture spécifique de l'analyte. Le réactif conjugué avec le marqueur particulaire est immobile sous forme lyophilisée mais devient mobile dans le support solide à l'état humide. Ainsi, lorsque le support solide est mis en contact avec un échantillon liquide, ce dernier migre par diffusion capillaire dans ce support entraînant le réactif de liaison conjugué au marqueur particulaire. L'échantillon et le réactif de liaison marqué migrent par diffusion capillaire dans le support solide jusqu'à la zone de détection portant le réactif de capture immobilisé. Dans un test sandwich, le réactif de liaison marqué se lie à l'analyte alors que ce dernier est immobilisé sur le support solide par le réactif de capture. La présence ou l'absence de l'analyte dans l'échantillon est ainsi mesurée par la détection du réactif marqué. Les brevets EP 0291 194, EP 0 560411 et EP 0 560410 décrivent des dispositifs dans lesquels le support solide immunochromatographique est incorporé dans un boîtier pourvu d'une ouverture pour le dépôt de l'échantillon et d'une fenêtre d'observation pour la lecture des résultats. En outre, ces brevets décrivent également des dispositifs dans lesquels l'une des extrémités du support solide est saillante de façon permanente par rapport au boîtier pour faciliter le dépôt de l'échantillon liquide. Cette extrémité saillante du support solide peut ainsi être directement mise en contact avec un flux d'urine par exemple. Alternativement, un deuxième moyen de diffusion sous la forme d'un matériau absorbant est saillant par rapport au boîtier et permet le dépôt de l'échantillon. Ce matériau absorbant étant agencé en continuité capillaire avec le support solide poreux portant les réactifs pour permettre le dépôt puis la migration de l'échantillon. Le brevet EP 1 091 808 décrit des dispositifs améliorés comprenant également un support solide poreux intégré dans un boîtier dans lesquels un organe de captation mobile permet une meilleure collecte de l'échantillon. Cet organe de captation comprend un matériau absorbant sur lequel est déposé l'échantillon. Pour la capture de l'échantillon, l'organe de captation est mobile en translation par rapport au boîtier. Cependant, l'organe de captation et le matériau absorbant restent solidaires du boîtier et ne sont pas amovibles. Etant donné que l'organe de captation n'est pas amovible et ne peut pas être complètement détaché du boîtier, il existe un risque d'inondation du dispositif lorsque celui-ci est placé sous un flux d'urine par exemple.
US 5 900 379 décrit des dispositifs de test en forme de boîtiers réutilisables après remplacement de la cassette amovible placée dans le boîtier. Cette cassette est constituée d'un support rigide sur lequel sont apposés des moyens de diffusion capillaire. Elle a la forme d'une bandelette immunochromatographique. L'ensemble de la cassette ou de la bandelette immunochromatographique comportant les différents réactifs peut être remplacée pour permettre la réutilisation du boîtier.
Tous ces dispositifs sont particulièrement adaptés à un usage domestique. En effet, ils sont d'un usage facile et rapide, ne nécessitant que très peu de manipulations puisque tous les réactifs sont intégrés dans le dispositif.
Cependant, le dépôt d'échantillons de volume important ou un dépôt d'échantillon mal contrôlé peuvent conduire à l'inondation du dispositif rendant celui-ci inutilisable. Ce problème est par exemple fréquemment rencontré lorsque le dépôt de l'échantillon s'effectue en plaçant la partie saillante du support solide poreux sous un flux d'urine. Il est donc avantageux de disposer séparément d'organes de prélèvement ou de captation de l'échantillon tels que des bâtonnets de prélèvement par exemple. Ces bâtonnets de prélèvement comportent typiquement à l'une de leurs extrémités un matériau absorbant qui peut être directement placé sous un flux d'urine. Le dépôt de l'échantillon sur le dispositif s'effectue ensuite en mettant ce matériau absorbant en contact ou en continuité capillaire avec le support solide poreux portant les réactifs.
Un autre problème est que ces dispositifs présentent parfois une reproductibilité insuffisante. Ce manque de reproductibilité est lié aux difficultés rencontrées pour doser de façon précise la quantité de réactif de liaison conjugué à un marqueur déposé sur le support solide poreux qui se présente en général sous la forme d'une bandelette immunochromatographique. Le dosage précis du réactif de liaison conjugué au marqueur sur le support immunochromatographique est possible mais il entraîne alors des coûts de production plus élevés. Alternativement, ce dosage précis du réactif de liaison conjugué à un marqueur particulaire peut être réalisé en déposant ce réactif sur le matériau absorbant de l'organe de prélèvement.
WO 98/19164 décrit ainsi des dispositifs comprenant un organe de prélèvement pourvu d'un matériau absorbant sur lequel sont déposés des réactifs. Cependant, lorsque le matériau absorbant de l'organe de prélèvement est placé sous un flux d'urine une fraction du réactif déposé sur ce matériau est perdu par un effet de lavage.
Pour remédier à ces inconvénients la présente invention propose des dispositifs dans lesquels l'organe de prélèvement est constitué d'un support de préhension et d'un moyen de diffusion capillaire comprenant des zones de prélèvement et de transfert de l'échantillon distinctes et opposées. Le réactif de liaison conjugué au marqueur étant déposé en aval de la zone de prélèvement de l'échantillon par rapport à la direction de la diffusion capillaire pour éviter tout effet de lavage lors du prélèvement de l'échantillon. De plus, l'organe de prélèvement s'assemble de façon amovible avec le boîtier comprenant le support immunochromatographique pour permettre un usage domestique facile et rapide sans risque d'inondation du dispositif lors du dépôt de l'échantillon. Avantageusement, ce mode opératoire permet aussi d'augmenter la sensibilité du dispositif avec la possibilité (optionnelle) de laisser l'échantillon et le réactif en contact pendant un certain temps avant de débuter la réaction.
Le dispositif de détermination d'un analyte dans un échantillon liquide selon l'invention comprend : - un premier support de préhension (1 ),
- un premier moyen de diffusion capillaire (2) dans une direction de référence (3) solidaire du premier support de préhension (1), comportant d'une part une zone de prélèvement de l'échantillon (4) et d'autre part une zone de transfert (5) de l'échantillon opposée à ladite zone de prélèvement (4), - un réactif de liaison conjugué à un marqueur (6) visible et/ou mesurable, immobilisé à l'état sec en aval de la zone de prélèvement (4) du premier moyen de diffusion capillaire (2), ledit réactif de liaison conjugué à un marqueur étant libre de migrer par diffusion capillaire à l'état humide,
- un deuxième support de préhension (7),
- un deuxième moyen de diffusion capillaire (8) dans une direction de référence (9), solidaire du deuxième support de préhension (7), comportant une zone de collection dudit échantillon (10) situé en amont d'une zone de détection (11), ladite zone de détection étant accessible à une observation directe,
- un réactif de capture (12) pour la détection et/ou quantification de l'analyte immobilisé dans la zone de détection (11) du deuxième moyen de diffusion capillaire (8), dans lequel le premier support de préhension (1) possède deux extrémités ouvertes (13) pour le passage d'une part de la zone de prélèvement (4) de l'échantillon et d'autre part de la zone de transfert (5) de l'échantillon du premier moyen de diffusion capillaire (2), le deuxième support de préhension (7) est pourvu d'une ouverture (14) pour l'application de l'échantillon sur la zone de collection (10) du deuxième moyen de diffusion capillaire (8), le premier support de préhension (1) étant adapté à être assemblé de façon amovible dans deux positions inversées par rapport à la direction de référence (3) avec le deuxième support de préhension (7) de sorte que dans la première position la zone de prélèvement (4) du premier moyen de diffusion capillaire (2) est insérée dans le deuxième support de préhension (7) par l'ouverture (14) alors que dans la deuxième position la zone de transfert (5) du premier moyen de diffusion capillaire (2) est insérée dans le deuxième support de préhension (7) par l'ouverture (14) de telle manière que ladite zone de transfert (5) du premier moyen de diffusion capillaire (2) est en continuité capillaire avec la zone de collection (10) du deuxième moyen de diffusion capillaire (8).
Avantageusement, le deuxième support de préhension (7) a la forme d'un boîtier pourvu d'une ouverture (14) pour l'insertion de la zone de prélèvement (4) ou de la zone de transfert (5) du premier moyen de diffusion capillaire (2), et d'une fenêtre d'observation (15) alignée avec la zone de détection (11) du deuxième moyen de diffusion capillaire (8).
Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, le deuxième moyen de diffusion capillaire (8) est serré et maintenu à l'intérieur du boîtier entre des nervures (16) s'étendant parallèlement à la direction de diffusion capillaire. Avantageusement, dans les dispositifs selon la présente invention, le deuxième support de préhension (7) est pourvu de moyens de guidage (17) pour l'insertion de la zone de prélèvement (4) ou de la zone de transfert (5) du premier moyen de diffusion capillaire (2). Typiquement, le deuxième moyen de diffusion capillaire (2) a la forme d'une bandelette immunochromatographique.
Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, le réactif de liaison conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable (6) est immobilisé à l'état sec dans la zone de transfert (5) du premier moyen de diffusion capillaire (2).
Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, le premier support de préhension (1) a la forme d'un corps creux pourvu de deux extrémités ouvertes (13) pour le passage du premier moyen de diffusion capillaire (2). Typiquement, le premier moyen de diffusion capillaire (2) à la forme d'un matériau absorbant allongé selon la direction de diffusion capillaire.
De préférence, la zone de prélèvement (4) et la zone de transfert (5) du premier moyen de diffusion capillaire (2) sont saillantes par rapport au premier support de préhension (1). Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, le dispositif comprend également un capuchon amovible (18) de protection de la zone de prélèvement (4) ou de la zone de transfert (5) saillantes par rapport au premier support de préhension (1 ).
Avantageusement, le premier moyen de diffusion capillaire (2) est mobile et déplaçable en translation par rapport au premier support de préhension (1) parallèlement à la direction de diffusion capillaire.
L'invention a également pour objet un procédé de détection d'un analyte dans un échantillon liquide comprenant les étapes suivantes : a) on dispose d'un dispositif selon l'invention ; b) on dépose un échantillon liquide sur la zone de prélèvement (4) du premier moyen de diffusion capillaire (2) ; c) on assemble le premier et le deuxième support de préhension (1 ,7) pour insérer la zone de transfert du premier moyen de diffusion capillaire
(5) dans le deuxième support de préhension (7) de telle sorte que la zone de transfert (5) du premier moyen de diffusion capillaire (2) est en continuité d'écoulement capillaire avec la zone de collection (10) du deuxième moyen de diffusion capillaire (8) ; d) on attend un temps suffisamment long pour permettre à l'échantillon de migrer dans le premier moyen de diffusion capillaire (2) depuis la zone de prélèvement (4) jusqu'à la zone de transfert (5), entraînant le réactif de liaison conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable (6), puis de migrer dans le deuxième moyen de diffusion capillaire (8) depuis la zone de collection (10) jusqu'à la zone de détection (11) ; e) on observe la mesure dans laquelle le réactif de liaison conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable (6) se lie à la zone de détection (11 ).
Dans un premier mode de réalisation de l'invention, à l'étape e) du procédé, le réactif de liaison conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable (6) et le réactif de capture (12) permettent la détection de l'analyte dans un test sandwich. Dans un deuxième mode de réalisation de l'invention, à l'étape e) du procédé, le réactif de liaison conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable (6) et le réactif de capture (12) permettent la détection de l'analyte dans un test compétition.
Préférentiellement, on place la zone de prélèvement (4) du premier moyen de diffusion capillaire (2) sous un flux d'urine à l'étape b) du procédé pour le dépôt de l'échantillon.
Par « analyte », on entend toute entité chimique, biochimique ou biologique que l'on souhaite détecter dans un échantillon. Parmi les analytes détectés par les dispositifs et les procédés selon la présente invention, on citera notamment les protéines, les peptides, les anticorps, les hormones, les stéroïdes, les antigènes dérivés d'agents infectieux ou de cellules tumorales, les agents infectieux tels que les bactéries, les virus ou les parasites, les acides nucléiques (ADN ou ARN), les molécules thérapeutiques, les drogues ou encore les antibiotiques.
Par « détecter », on entend la détermination de la présence ou de l'absence d'un analyte dans un échantillon mais aussi la mesure et la quantification d'un analyte dans un échantillon. En effet, les performances des dispositifs et procédés selon l'invention autorisent la réalisation de mesures quantitatives ou semi quantitatives. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, l'analyte est la hCG (hormone choriogonadotropine) ou la LH (hormone luthinisante).
Par « échantillon liquide », on entend tout échantillon dans lequel l'analyte recherché est en solution ou en suspension. Cet échantillon liquide peut notamment être tout fluide biologique ou corporel. L'échantillon liquide peut également avoir été obtenu directement ou indirectement à partir d'un fluide biologique ou corporel. L'échantillon peut également être un extrait liquide d'un échantillon solide.
Typiquement, l'échantillon liquide est de l'urine, du sang total, du plasma ou du sérum.
Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, l'échantillon liquide est de l'urine et le dépôt de l'échantillon s'effectue en plaçant la zone de prélèvement de l'échantillon du premier moyen de diffusion capillaire sous un flux d'urine. Les dispositifs selon l'invention sont ainsi particulièrement bien adaptés à un usage domestique puisque seules des manipulations très simples sont nécessaires.
Par « moyen de diffusion capillaire », on entend un support solide poreux permettant la migration d'un liquide par simple diffusion capillaire. La porosité de ce support permet la diffusion capillaire (ou migration latérale) de l'échantillon et/ou des réactifs à l'état liquide ou humide. De tels moyens de diffusion capillaire sont très largement utilisés dans toutes les techniques d'immunochromatographie à migration latérale notamment.
Ainsi, les moyens de diffusion capillaire mis en œuvre dans les tests immunochromatographiques selon l'invention sont bien connus de l'homme du métier (EP 0 284232). A titre d'exemple, ces moyens de diffusion capillaire peuvent être constitués de divers supports immunochromatographiques, de cellulose, de nylon, de nitrocellulose, de polyéthylène ou de fibre de verre.
Le moyen de diffusion capillaire peut être constitué d'une ou de plusieurs parties distinctes. Les différentes parties du support pouvant être avantageusement constituées de matériaux différents. Lorsque le moyen de diffusion capillaire est constitué de différentes parties ou de différents matériaux, ces éléments sont disposés de telle façon à permettre la continuité de l'écoulement capillaire dans le moyen de diffusion capillaire. Le premier moyen de diffusion capillaire permet de capter l'échantillon liquide puis de le déposer sur la zone de collection du deuxième moyen de diffusion capillaire.
De préférence, le premier moyen de diffusion capillaire est constitué d'un support solide poreux allongé selon la direction de diffusion capillaire. Généralement, le premier moyen de diffusion capillaire est constitué d'un matériau absorbant.
Le premier moyen de diffusion capillaire comprend une zone de prélèvement de l'échantillon et une zone de transfert de l'échantillon. La zone de prélèvement et la zone de transfert sont deux zones distinctes et séparées du premier moyen de diffusion capillaire. Ces zones sont disposées de façon à permettre la continuité de l'écoulement capillaire depuis la zone de prélèvement jusqu'à la zone de transfert selon une direction de référence. Typiquement, chacune de ces zones correspond à l'une des extrémités opposées du premier moyen de diffusion capillaire. Le premier moyen de diffusion capillaire est ainsi par exemple constitué d'un matériau absorbant allongé selon la direction de diffusion capillaire présentant une extrémité proximale et une extrémité distale constituant respectivement la zone de prélèvement et la zone de transfert de l'échantillon. La zone de prélèvement du premier moyen de diffusion capillaire est destinée à être mise en contact avec un flux d'urine par exemple. On choisira donc un matériau absorbant adapté. Ces matériaux sont bien connus de l'homme du métier.
Le premier moyen de diffusion capillaire porte le réactif de liaison conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable. Ce réactif de liaison marqué est immobilisé à l'état sec dans le premier moyen de diffusion capillaire mais il est libre de migrer par diffusion capillaire à l'état humide. Ce réactif est localisé en aval de la zone de prélèvement pour éviter toute perte de réactif par un effet de lavage lors du prélèvement de l'échantillon. Dans un mode de réalisation avantageux de l'invention, le réactif de liaison marqué est immobilisé dans la zone de transfert du premier moyen de diffusion capillaire.
Le dépôt du réactif de liaison marqué sur ce matériau absorbant, adapté à l'absorption et la diffusion rapide de l'échantillon, permet un meilleur dosage du réactif. Ce dosage du réactif est plus difficile à réaliser lorsque le réactif est déposé sur le deuxième moyen de diffusion capillaire constitué en général d'une bandelette chromatographique. Ainsi, la zone de prélèvement du premier moyen de diffusion capillaire est mise en contact avec un échantillon liquide (un flux d'urine par exemple) puis l'échantillon migre par diffusion capillaire jusqu'à la zone de transfert à travers le premier moyen de diffusion capillaire entraînant alors le réactif de liaison conjugué à un marqueur.
De préférence, le deuxième moyen de diffusion capillaire des dispositifs selon l'invention est un support solide poreux en forme de bande ou de bandelette immunochromatographique.
Le deuxième moyen de diffusion capillaire se présente typiquement sous la forme d'une bandelette immunochromatographique constituée de plusieurs bandelettes superposés ou chevauchantes.
Typiquement, le deuxième moyen de diffusion capillaire comporte une zone de collection de l'échantillon et une zone de détection portant le réactif de capture. Ces zones sont disposées de façon à permettre la continuité de l'écoulement capillaire depuis la zone de collection jusqu'à la zone de détection selon une direction de référence. La zone de collection et la zone de détection sont deux zones distinctes et séparées du deuxième moyen de diffusion capillaire. L'échantillon et le réactif de liaison marqué migrent à travers le deuxième moyen de diffusion capillaire depuis la zone de collection jusqu'à la zone de détection. Le deuxième moyen de diffusion capillaire est ainsi par exemple constitué d'une bandelette immunochromatographique dont l'une des extrémités constitue la zone de collection, la zone de détection étant situé à proximité de l'autre extrémité de la bande. Ces zones peuvent par exemple être présentes dans un même plan sur une bande constitué d'un matériau unique. Avantageusement, un matériau spécifique correspond à chaque zone du deuxième moyen de diffusion capillaire. Un matériau absorbant poreux peut par exemple être utilisé pour la zone de collection de l'échantillon.
La zone de détection du deuxième moyen de diffusion capillaire comprend un réactif de capture pour la détection et/ou quantification de l'analyte. Ce réactif de capture est immobilisé dans la zone de détection du deuxième moyen de diffusion capillaire.
La zone de détection du deuxième moyen de diffusion capillaire peut également comporter un deuxième réactif de capture immobilisé sur le support poreux en aval du premier réactif de capture. Ce deuxième réactif de capture immobilisé permet habituellement de contrôler le bon déroulement du test en vérifiant par exemple la migration du réactif de liaison conjugué au marqueur dans le moyen de diffusion capillaire. Le deuxième réactif de capture est par exemple un anticorps spécifique du réactif de liaison.
Le premier et le deuxième moyen de diffusion capillaire sont solidaires respectivement d'un premier et deuxième support de préhension. Ces supports de préhension facilitent la manipulation des moyens de diffusion capillaire et peuvent également protéger ceux-ci notamment de l'humidité.
Le support de préhension peut envelopper partiellement ou totalement le moyen de diffusion capillaire.
Le support de préhension peut être constitué de matériaux divers tel que du carton, du carton plastifié ou plus préférentiellement de matières plastiques. De façon avantageuse, le support de préhension est constitué d'un matériau rigide et imperméable.
Ces supports de préhension ou boîtiers sont notamment décrits dans les brevets EP 0 291 194, EP 0 560411 , EP 0 560410 et EP 1 091 808. Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, le premier support de préhension ne recouvre que partiellement le premier moyen de diffusion capillaire. Le premier support de préhension a la forme d'un corps creux pourvu de deux extrémités ouvertes pour le passage de la zone de prélèvement et de la zone de transfert du premier support de diffusion capillaire. Ces zones sont donc saillantes par rapport au premier support de préhension et sont directement accessibles. La zone de prélèvement peut ainsi directement être mise en contact avec l'échantillon liquide.
Le premier support de préhension et le premier moyen de diffusion capillaire forment ainsi un organe de prélèvement ou de captation de l'échantillon.
De préférence, cet organe de prélèvement de l'échantillon prend la forme d'un corps creux rectangulaire ouvert à ses deux extrémités dans lequel est inséré un élément absorbant ayant une forme allongée. Les deux extrémités de l'élément absorbant sont saillantes par rapport au corps creux. Ces deux extrémités saillantes constituent respectivement la zone de prélèvement et la zone de transfert de l'échantillon.
Avantageusement, le dispositif selon l'invention comprend également un capuchon amovible pour la protection des extrémités saillantes du premier moyen de diffusion capillaire. Ce capuchon recouvre l'une ou l'autre des extrémités du premier moyen de diffusion capillaire en fonction de l'assemblage du dispositif dans deux positions inversées. Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, le deuxième moyen de diffusion capillaire est intégré dans le deuxième support de préhension. Habituellement, le deuxième support de préhension est en forme de boîtier dans lequel est fixé le deuxième moyen de diffusion capillaire. Typiquement, le dispositif se présente sous la forme d'un boîtier dans lequel est immobilisé une bandelette immunochromatographique.
Dans les dispositifs de la présente invention, le deuxième support de préhension ou boîtier est pourvu d'une ouverture pour l'application de l'échantillon sur la zone de collection du deuxième moyen de diffusion capillaire. Cette ouverture permet l'insertion des extrémités saillantes du premier moyen de diffusion capillaire dans le boîtier.
Typiquement, le deuxième support de préhension est également pourvu d'au moins une fenêtre d'observation pour observer la zone de détection du deuxième moyen de diffusion capillaire. Le premier et le deuxième support de préhension sont adaptés à être assemblés de façon amovible dans deux positions inversées. Typiquement, le premier et le deuxième support de préhension peuvent s'emboîter de façon amovible.
Par amovible, on entend des supports de préhension qui peuvent être assemblés puis démontés et déplacés indépendamment l'un de l'autre.
Le premier et le deuxième support de préhension peuvent donc s'emboîter pour être assemblés puis peuvent être séparés et déplacés.
Le premier support de préhension et le premier moyen de diffusion capillaire forment ainsi un organe de prélèvement amovible qui peut être entièrement séparé du deuxième support de préhension (ou boîtier). Cet organe de prélèvement peut être manipulé indépendamment du restant du dispositif pour le prélèvement de l'échantillon. L'assemblage amovible des deux supports de préhension permet d'éviter toute inondation de l'ensemble du dispositif et notamment de la bandelette immunochromatographique lors de l'application de l'échantillon liquide.
En outre, le premier support de préhension est adapté à être assemblé de façon amovible dans deux positions inversées par rapport à la direction de diffusion capillaire avec le deuxième support de préhension de sorte que dans la première position la zone de prélèvement du premier moyen de diffusion capillaire est insérée dans le deuxième support de préhension par l'ouverture alors que dans la deuxième position la zone de transfert du premier moyen de diffusion capillaire est insérée dans le deuxième support de préhension par l'ouverture de telle manière que ladite zone de transfert du premier moyen de diffusion capillaire est en continuité capillaire avec la zone de collection du deuxième moyen de diffusion capillaire. Cette possibilité d'assemblage dans deux positions inversées facilite la manipulation par l'utilisateur. Cette caractéristique permet aussi d'éviter toute perte de réactif par lavage lors de l'application de l'échantillon liquide.
Typiquement, l'utilisateur dispose d'un dispositif assemblé de telle façon que la zone de prélèvement du premier moyen de diffusion capillaire est insérée dans le deuxième support de préhension par l'ouverture. Lorsque l'utilisateur sépare le premier et le deuxième support de préhension, la zone de prélèvement du premier moyen de diffusion capillaire est exposée et l'utilisateur peut procéder à l'application de l'échantillon en plaçant la zone de prélèvement sous un flux d'urine par exemple. Lors de l'application de l'échantillon liquide, toute perte du réactif de liaison conjugué par un effet de lavage est évitée. En effet, ce réactif n'est pas déposé sur la zone de prélèvement. De façon avantageuse, ce réactif est déposé sur la zone de transfert du premier moyen de diffusion capillaire qui est protégée par un capuchon. Après l'application de l'échantillon liquide, l'utilisateur déplace le capuchon sur la zone de prélèvement du premier moyen de diffusion capillaire. Le déplacement du capuchon expose la zone de transfert du premier moyen de diffusion capillaire. L'utilisateur peut alors ré-assembler le premier et le deuxième support de préhension dans une position inversée par rapport à la position de départ. Dans cette position, la zone de transfert du premier moyen de diffusion capillaire est insérée dans le deuxième support de préhension par l'ouverture de telle manière que ladite zone de transfert du premier moyen de diffusion capillaire est en continuité capillaire avec la zone de collection du deuxième moyen de diffusion capillaire. La migration des réactifs et de l'échantillon s'effectue et l'utilisateur n'a plus qu'à observer le résultat du test.
L'invention a donc également pour objet un procédé de détection d'un analyte dans un échantillon liquide comprenant les étapes suivantes : a) on dispose d'un dispositif selon l'invention assemblé de telle façon que la zone de prélèvement du premier moyen de diffusion capillaire est insérée dans le deuxième support de préhension par l'ouverture ; b) on sépare le premier et le deuxième support de préhension exposant ainsi la zone de prélèvement du premier moyen de diffusion capillaire ; c) on dépose un échantillon liquide sur la zone de prélèvement du premier moyen de diffusion capillaire ; d) on déplace le capuchon sur la zone de prélèvement du premier moyen de diffusion capillaire exposant la zone de transfert du premier moyen de diffusion capillaire ; e) on assemble le premier et le deuxième support de préhension pour insérer la zone de transfert du premier moyen de diffusion capillaire dans le deuxième support de préhension de telle sorte que la zone de transfert du premier moyen de diffusion capillaire est en continuité d'écoulement capillaire avec la zone de collection du deuxième moyen de diffusion capillaire ; f) on attend un temps suffisamment long pour permettre à l'échantillon de migrer dans le premier moyen de diffusion capillaire depuis la zone de prélèvement jusqu'à la zone de transfert, entraînant le réactif de liaison conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable, puis de migrer dans le deuxième moyen de diffusion capillaire depuis la zone de collection jusqu'à la zone de détection ; g) on observe la mesure dans laquelle le réactif de liaison conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable se lie à la zone de détection.
Les réactifs mis en œuvre dans les procédés selon la présente invention sont bien connus de l'homme du métier.
Le réactif de liaison conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable et le réactif de capture sont spécifiques de l'analyte recherché dans l'échantillon.
Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, le réactif de liaison conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable et le réactif de capture immobilisé dans la zone de détection du deuxième moyen de diffusion capillaire permettent de détecter l'analyte par un test sandwich.
Dans un autre mode de réalisation particulier de l'invention, le réactif de liaison conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable et le réactif de capture spécifique de l'analyte immobilisé dans la zone de détection du deuxième moyen de diffusion capillaire permettent de détecter l'analyte par un test de compétition. Les tests sandwich et les tests par compétition sont bien connus de l'homme du métier. Dans un test sandwich, le réactif de capture spécifique de l'analyte et le réactif de liaison marqué sont prédéterminés pour se lier respectivement et spécifiquement avec l'analyte, par exemple sur deux sites épitopiques, identiques ou différents de l'analyte. Dans un test par compétition, le réactif de liaison marqué est identique ou analogue à l'analyte, pour se lier avec le réactif de capture, en compétition avec l'analyte.
Par « réactif de capture», on entend toute entité chimique biochimique ou biologique susceptible de se lier spécifiquement avec l'analyte. Dans le cas d'un test par compétition, le réactif de capture se lie également au réactif de liaison. L'analyte et le réactif de capture forment typiquement un couple ligand/anti-ligand, antigène/anticorps, ADN/ARN ou ADN/ADN. Ainsi, si l'analyte est un antigène ou un haptène, le réactif de capture est par exemple un anticorps spécifique de l'analyte. Si l'analyte est un anticorps, le réactif de capture est l'antigène reconnu par l'anticorps ou un anticorps reconnaissant spécifiquement l'analyte. Si l'analyte est un acide nucléique, le réactif de capture est par exemple une sonde ADN complémentaire.
Le réactif de capture immobilisé est préférentiellement un anticorps polyclonal ou monoclonal ayant une forte affinité pour l'analyte et plus préférentiellement il s'agit d'un anticorps monoclonal.
Le réactif de capture spécifique de l'analyte est immobilisé dans la zone de détection du deuxième moyen de diffusion capillaire selon des techniques connues de l'homme du métier. Ce réactif de capture est immobilisé de telle façon qu'il ne soit pas mobile à l'état humide. Cette immobilisation peut s'effectuer par exemple par absorption ou par un couplage covalent. Lorsque le réactif de capture est un acide nucléique, il est par exemple fixé sur un support de type nitrocellulose par un traitement UV ou par toute autre technique connue de l'homme du métier. Par « réactif de liaison », on entend toute entité chimique biochimique ou biologique susceptible de se lier spécifiquement avec l'analyte ou avec le réactif de capture en compétition avec l'analyte.
Par « lier » ou « liaison », on entend toute liaison forte, par exemple covalente ou toute liaison faible, par exemple du type antigène/anticorps ou avidine/streptavidine. Le réactif de liaison est par exemple un anticorps, un antigène ou un acide nucléique.
Tout autre réactif de liaison connu de l'homme du métier peut être utilisé tel que un (ou des anticorps) monoclonal aux antibiotine, de l'avidine, de la streptovidine, ou de la polytroptavidine. Ces réactifs peuvent être natifs ou recombinants.
Dans un test par compétition, le réactif de liaison est par exemple l'analyte lui-même ou un analogue approprié de l'analyte. Par analogue approprié de l'analyte, on entend un analogue se liant de manière spécifique au réactif de capture spécifique de l'analyte. Le réactif de liaison marqué est donc l'analyte conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable ou un analogue de l'analyte conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable.
Dans un test de type sandwich, le réactif de liaison se lie de façon spécifique à l'analyte. Le réactif de liaison marqué est donc par exemple un anticorps spécifique de l'analyte conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable.
Le réactif de liaison est conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable permettant une mesure ou une observation directe du résultat du test. Le marqueur peut être observé directement à l'œil nu lorsqu'il est concentré dans la zone de détection du deuxième moyen de diffusion capillaire. La mesure du marqueur peut s'effectuer directement à l'œil nu ou à l'aide d'un appareil de mesure. Cette mesure se fait par une observation directe ne nécessitant pas de manipulation supplémentaire.
Avantageusement, les dispositifs selon la présente invention comprennent un réactif de liaison conjugué à un marqueur particulaire.
Typiquement, les marqueurs particulaires sont constitués de particules de petite taille insolubles dans l'eau et qui forment donc des suspensions en phase liquide c'est-à-dire une dispersion de particules solides dans un liquide.
Les marqueurs particulaires sont bien connus de l'homme du métier. On connaît notamment les marqueurs particulaires colorés ou fluorescents. A titre d'exemple, on citera l'or colloïdal, les particules de latex colorées, les particules de latex fluorescentes et les particules conjugués à l'avidine ou à la streptavidine.
Parmi les marqueurs permettant une observation directe à l'œil nu on citera aussi les marqueurs de type dextran (Hansen T.M., IVD Technology 4, 35-40, 2003). Le réactif de liaison est alors conjugué à une chaîne de dextran (dérivé de polysaccharide) portant des fluorophores.
Le réactif de liaison est conjugué au marqueur visible et/ou mesurable selon des techniques connues. L'invention est décrite plus en détail par référence aux figures suivantes :
Figure 1 La figure 1 représente en perspective un dispositif selon un mode de réalisation particulier de l'invention. Le premier et le deuxième support de préhension ainsi que le capuchon ne sont pas assemblés. Figure 2 La figure 2 représente le dispositif de la figure 1. Le premier et le deuxième support de préhension ainsi que le capuchon sont assemblés.
Figure 3 La figure 3 représente une vue de dessus du premier support de préhension. Figure 4 La figure 4 représente une vue en coupe transversale du premier support de préhension.
Figure 5 La figure 5 représente une vue éclatée en perspective du dispositif représenté à la figure 1.
Figures 6-10 Les figures 6-10 représentent les différentes étapes du procédé d'utilisation du dispositif de la figure 1.
Par référence à la figure 1 , un dispositif, selon un mode de réalisation particulier de l'invention, comprend :
- un premier support de préhension (1) ayant la forme d'un corps creux pourvu de deux extrémités ouvertes (13) pour le passage des deux extrémités saillantes du premier moyen de diffusion capillaire (2), ce corps creux est pourvu de moyens d'assemblage (19) pour l'assemblage amovible avec le capuchon (18) et avec le deuxième support de préhension (7) ;
- un premier moyen de diffusion capillaire (2) ayant la forme d'un support solide poreux en matériau absorbant allongé selon la direction de diffusion capillaire présentant une extrémité proximale et une extrémité distale opposée formant respectivement la zone de prélèvement de l'échantillon (4) et la zone de transfert de l'échantillon (5) ; la zone de transfert de l'échantillon (5) est située en aval de la zone de prélèvement (4) par rapport à la direction de référence (3) de diffusion capillaire ; ce premier moyen de diffusion capillaire (2) est solidaire du premier support de préhension (1) ayant la forme d'un corps creux de telle sorte que la zone de prélèvement (4) et la zone de transfert (5) sont saillantes ;
- un réactif de liaison conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable (6) immobilisé à l'état sec dans le premier moyen de diffusion capillaire (2) en aval de la zone de prélèvement (4) par rapport à la direction de référence de diffusion capillaire (3) plus particulièrement dans la zone de transfert de l'échantillon (5) ;
- un capuchon amovible (18) de protection de l'une des extrémités saillantes du premier moyen de diffusion capillaire (2) pourvu de moyens d'assemblage (20) pour l'assemblage amovible avec le premier support de préhension (1);
- un deuxième support de préhension (7) ayant la forme d'un boîtier creux comprenant à une extrémité une ouverture (14) pour le passage de l'une ou de l'autre des extrémités saillantes du premier moyen de diffusion capillaire (2), ce boîtier étant muni d'une fenêtre d'observation (15) pour la lecture directe du résultat du test de diagnostic, et de moyens d'assemblage (21 ) pour l'assemblage amovible avec le premier support de préhension (1 ).
La figure 2 représente le même dispositif assemblé. Le corps creux du 1er support de préhension (1) peut être assemblé avec le boîtier du deuxième support de préhension (7) dans deux positions inversées. Dans la première position, le corps creux est assemblé avec le boîtier de telle sorte que la zone de prélèvement de l'échantillon (4) du premier moyen de diffusion capillaire (2) est insérée dans le boîtier par l'ouverture (14) alors que le capuchon amovible (18) protège la zone de transfert de l'échantillon (5) du premier moyen de diffusion capillaire (2). Dans la deuxième position, le corps creux est assemblé avec le boîtier, de telle sorte que la zone de transfert de l'échantillon (4) du premier moyen de diffusion capillaire (2) est insérée dans le boîtier par l'ouverture (14) alors que le capuchon amovible (18) protège la zone de prélèvement de l'échantillon (4) du premier moyen de diffusion capillaire (2).
Dans cette deuxième position, la zone de transfert (5) du premier moyen de diffusion capillaire (2) est en continuité capillaire avec la zone de collection (10) du deuxième moyen de diffusion capillaire (8).
La figure 3 représente une vue de dessus du premier support de préhension (1) ayant la forme d'un corps creux pourvu de deux extrémités ouvertes (13) et de moyens d'assemblage (19) pour l'assemblage amovible avec le capuchon (18) d'une part et le boîtier d'autre part.
La figure 4 représente une vue en coupe transversale du premier support de préhension (1) ayant la forme d'un corps creux. Des nervures (21) permettent de maintenir et d'immobiliser le premier moyen de diffusion capillaire (2) par serrage. Avantageusement, le premier moyen de diffusion capillaire (2) peut être mobile et déplaçable en translation par rapport au corps creux. Le déplacement du premier moyen de diffusion capillaire (2) s'effectue sous la pression exercée sur le capuchon amovible lors de l'assemblage du dispositif.
Par référence à la figure 5, le dispositif représenté à la figure 1 comprend également :
- un deuxième moyen de diffusion capillaire (8) sous la forme d'une bandelette immunochromatographique intégrée dans le boîtier ; cette bandelette comporte une zone de collection (10) de l'échantillon accessible à l'extérieur par l'ouverture (14) dans le boîtier pour le dépôt de l'échantillon par l'intermédiaire du premier moyen de diffusion capillaire (2) ; la zone de détection (11) est située en aval de la zone de collection (10) par rapport à la direction de référence (9) de diffusion capillaire ; la zone de détection (11) est positionné dans le boîtier de telle sorte qu'elle est alignée avec la fenêtre d'observation (15) pour la lecture directe du résultat du test ;
- un réactif de capture (12) immobilisé dans la zone de détection (11) de la bandelette immunochromatographique ; - des nervures (16) à l'intérieur du boîtier creux pour serrer et immobiliser la bandelette immunochromatographique ;
- des moyens de guidage (17) situés à l'intérieur du boîtier creux pour le passage et l'insertion de l'une des extrémités saillantes du premier moyen de diffusion capillaire (2) dans le boîtier. Le fonctionnement du dispositif selon l'invention est décrit en référence aux figures 6-10. Le mode de fonctionnement de ce dispositif convient bien à un usage domestique. Les manipulations sont simples et les possibilités d'erreurs de la part de l'utilisateur sont restreintes.
Au départ l'utilisateur dispose d'un dispositif assemblé tel que représenté à la figure 2 de telle sorte que la zone de prélèvement de l'échantillon (4) du premier moyen de diffusion capillaire (2) est insérée dans le boîtier creux, alors que le capuchon amovible (18) protège la zone de transfert (5) du premier moyen de diffusion capillaire (2) (figure 6). Le premier support de préhension (1), le boîtier creux et le capuchon (18) sont assemblés de façon amovible. Pour le prélèvement de l'échantillon, l'utilisateur sépare le premier support de préhension (1) du boîtier creux (7). La zone de prélèvement de l'échantillon (4) du premier moyen de diffusion capillaire (2) saillante par rapport au premier support de préhension (1 ) devient alors accessible. Typiquement, la zone de prélèvement (4) du premier moyen de diffusion capillaire (1 ) constituée de matériau absorbant est alors placée sous un flux d'urine ou trempée dans un liquide. Etant donné que le boîtier est séparé de l'organe de prélèvement de l'échantillon (corps creux et premier moyen de diffusion capillaire) tout risque d'inondation du boîtier est écarté (figure 7).
A l'étape suivante, l'utilisateur sépare le capuchon amovible (18) et le déplace sur la zone de prélèvement (4) du premier moyen de diffusion capillaire (2). La zone de transfert de l'échantillon (5) du premier moyen de diffusion capillaire (2) saillante par rapport au premier support de préhension (1 ) devient alors accessible (figure 8).
Ensuite l'utilisateur insère la zone de transfert (5) du premier moyen de diffusion capillaire (2) dans le boîtier à travers l'ouverture (14) prévue à cet effet de telle manière que la zone de transfert (5) du premier moyen de diffusion capillaire (2) est en continuité d'écoulement capillaire avec la zone de collection (10) de la bandelette immunochromatographique (8). Le premier moyen de préhension (1) est alors assemblé avec le boîtier (7) en position inversée par rapport à l'assemblage initial (figure 9 et 10).
Le test immunochromatographique à migration latérale se déroule alors sans autre intervention de l'utilisateur (figure 10). L'échantillon liquide migre par diffusion capillaire dans la direction de référence (3) depuis la zone de prélèvement (4) jusqu'à la zone de transfert (5) du premier moyen de diffusion capillaire (2) constitué d'un matériau absorbant. L'échantillon entraîne alors le réactif de liaison marqué (6) qui est mobile à l'état humide. L'échantillon et le réactif de liaison marqué (6) migrent ensuite depuis la zone de transfert (5) du premier moyen de diffusion capillaire (2) dans la zone de collection (10) de la bandelette immunochromatographique (8), puis au sein de cette bandelette dans la direction de référence (9) jusqu'à la zone de détection (11) portant le réactif de capture (12) immobilisé. Les réactions s'effectuent et le résultat est directement lisible à l'œil nu par la fenêtre d'observation (15).
Le dispositif étant à usage unique il peut ensuite être jeté par l'utilisateur. Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, le dispositif consiste en un test de grossesse qui permet de détecter l'hormone HCG. Typiquement, la zone de transfert du premier moyen de diffusion capillaire comprend alors 20μl de marqueur particulaire à l'or colloïdal concentré sur lequel est absorbé un anticorps de souris anti-HCG (ce marqueur est ensuite séché). La zone de détection du deuxième moyen de diffusion capillaire comprend deux réactifs immobilisés déposés selon une ligne test et une ligne contrôle. Le réactif de capture constitue la ligne test, il s'agit typiquement d'un anticorps polyclonal ou monoclonal anti-HCG immobilisé (environ 1 μg/test). Un deuxième réactif immobilisé consistant en un anticorps polyclonal anti- immunoglobulines de souris (environ 1 μg/test) constitue la ligne de contrôle.
Ce mode de réalisation est similaire aux modes de réalisation des tests rapides en format boîtier ou bandelette connus de I1 homme du métier, la différence résidant dans le positionnement du marqueur particulaire, celui-ci n'étant plus disposé sur la bandelette interne elle-même (deuxième moyen de diffusion capillaire) mais sur le premier moyen de diffusion capillaire amovible.

Claims

REVENDICATIONS
1) Dispositif de détermination d'un analyte dans un échantillon liquide, comprenant : a) un premier support de préhension (1) ; b) un premier moyen de diffusion capillaire (2) dans une direction de référence (3) solidaire du premier support de préhension (1), comportant d'une part une zone de prélèvement de l'échantillon (4) et d'autre part une zone de transfert (5) de l'échantillon opposée à ladite zone de prélèvement (4) ; c) un réactif de liaison conjugué à un marqueur (6) visible et/ou mesurable, immobilisé à l'état sec en aval de la zone de prélèvement (4) du premier moyen de diffusion capillaire (2), ledit réactif de liaison conjugué à un marqueur étant libre de migrer par diffusion capillaire à l'état humide ; d) un deuxième support de préhension (7) ; e) un deuxième moyen de diffusion capillaire (8) dans une direction de référence (9), solidaire du deuxième support de préhension (7), comportant une zone de collection dudit échantillon (10) située en amont d'une zone de détection (11), ladite zone de détection étant accessible à une observation directe ; f) un réactif de capture (12) pour la détection et/ou quantification de l'analyte immobilisé dans la zone de détection (11) du deuxième moyen de diffusion capillaire (8) ; caractérisé en ce que le premier support de préhension (1) possède deux extrémités ouvertes (13) pour le passage d'une part de la zone de prélèvement (4) de l'échantillon et d'autre part de la zone de transfert (5) de l'échantillon du premier moyen de diffusion capillaire (2), le deuxième support de préhension (7) est pourvu d'une ouverture (14) pour l'application de l'échantillon sur la zone de collection (10) du deuxième moyen de diffusion capillaire (8), le premier support de préhension (1) étant adapté à être assemblé de façon amovible dans deux positions inversées par rapport à la direction de référence (3) avec le deuxième support de préhension (7) de sorte que, dans la première position la zone de prélèvement (4) du premier moyen de diffusion capillaire (2) est insérée dans le deuxième support de préhension (7) par l'ouverture (14), alors que dans la deuxième position la zone de transfert (5) du premier moyen de diffusion capillaire (2) est insérée dans le deuxième support de préhension (7) par l'ouverture (14), de telle manière que ladite zone de transfert (5) du premier moyen de diffusion capillaire (2) est en continuité capillaire avec la zone de collection (10) du deuxième moyen de diffusion capillaire (8).
2) Dispositif selon la revendication 1 caractérisé en ce que le deuxième support de préhension (7) a la forme d'un boîtier pourvu d'une ouverture (14) pour l'insertion de la zone de prélèvement (4) ou de la zone de transfert (5) du premier moyen de diffusion capillaire (2), et d'une fenêtre d'observation (15) alignée avec la zone de détection (11) du deuxième moyen de diffusion capillaire (8).
3) Dispositif selon la revendication 2 caractérisé en ce que le deuxième moyen de diffusion capillaire (8) est serré et maintenu à l'intérieur du boîtier entre des nervures (16) s'étendant parallèlement à la direction de diffusion capillaire (9).
4) Dispositif selon l'une des revendications précédentes caractérisé en ce que le deuxième support de préhension (7) est pourvu de moyens de guidage (17) pour l'insertion de la zone de prélèvement (4) ou de la zone de transfert (5) du premier moyen de diffusion capillaire (2).
5) Dispositif selon l'une des revendications précédentes caractérisé en ce que le deuxième moyen de diffusion capillaire (8) a la forme d'une bandelette immunochromatographique.
6) Dispositif selon l'une des revendications précédentes caractérisé en ce que le réactif de liaison conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable (6) est immobilisé à l'état sec dans la zone de transfert (5) du premier moyen de diffusion capillaire (2).
7) Dispositif selon l'une des revendications précédentes caractérisé en ce que le premier support de préhension (1) a la forme d'un corps creux pourvu de deux extrémités ouvertes (13) pour le passage du premier moyen de diffusion capillaire (2).
8) Dispositif selon l'une des revendications précédentes caractérisé en ce que le premier moyen de diffusion capillaire (2) à la forme d'un matériau absorbant allongé selon la direction de diffusion capillaire (3).
9) Dispositif selon l'une des revendications précédentes caractérisé en ce que la zone de prélèvement (4) et la zone de transfert (5) du premier moyen de diffusion capillaire (2) sont saillantes par rapport au premier support de préhension (1).
10) Dispositif selon la revendication 9 caractérisé en ce qu'il comprend également un capuchon amovible (18) de protection de la zone de prélèvement (4) ou de la zone de transfert (5) saillantes par rapport au premier support de préhension (1).
11 ) Dispositif selon l'une des revendications 9 ou 10 caractérisé en ce que le premier moyen de diffusion capillaire (2) est mobile et déplaçable en translation par rapport au premier support de préhension (1 ) parallèlement à la direction de diffusion capillaire (3).
12)Procédé de détection d'un analyte dans un échantillon liquide caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) on dispose d'un dispositif selon l'une des revendications 1-11 ; b) on dépose un échantillon liquide sur la zone de prélèvement (4) du premier moyen de diffusion capillaire (2) ; c) on assemble le premier et le deuxième support de préhension (1 J) pour insérer la zone de transfert (5) du premier moyen de diffusion capillaire (2) dans le deuxième support de préhension (7), de telle sorte que la zone de transfert (5) du premier moyen de diffusion capillaire (2) est en continuité d'écoulement capillaire avec la zone de collection (10) du deuxième moyen de diffusion capillaire (8), d) on attend un temps suffisamment long pour permettre à l'échantillon de migrer dans le premier moyen de diffusion capillaire (2) depuis la zone de prélèvement (4) jusqu'à la zone de transfert (5), entraînant le réactif de liaison conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable (6), puis de migrer dans le deuxième moyen de diffusion capillaire (8) depuis la zone de collection (10) jusqu'à la zone de détection (11) ; e) on observe la mesure dans laquelle le réactif de liaison conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable (6) se lie à la zone de détection (11 ).
13) Procédé selon la revendication 12 dans lequel à l'étape e) le réactif de liaison conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable (6) et le réactif de capture (12) permettent la détection de l'analyte dans un test sandwich.
14) Procédé selon la revendication 12 dans lequel à l'étape e) le réactif de liaison conjugué à un marqueur visible et/ou mesurable (6) et le réactif de capture (12) permettent la détection de l'analyte dans un test compétition.
15) Procédé selon l'une des revendications 12 à 14 dans lequel à l'étape b) on place la zone de prélèvement (4) du premier moyen de diffusion capillaire (2) sous un flux d'urine.
PCT/FR2005/001775 2004-07-13 2005-07-08 Dispositif avec organe de prelevement pour la detection d’un analyte dans un echantillon liquide WO2006016051A2 (fr)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP05788478A EP1765500A2 (fr) 2004-07-13 2005-07-08 Dispositif avec organe de prelevement pour la detection d'un analyte dans un echantillon liquide

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR0407815 2004-07-13
FR0407815A FR2873208B1 (fr) 2004-07-13 2004-07-13 Dispositif avec organe de prelevement pour la detection d'un analyte dans un echantillon liquide

Publications (2)

Publication Number Publication Date
WO2006016051A2 true WO2006016051A2 (fr) 2006-02-16
WO2006016051A3 WO2006016051A3 (fr) 2006-08-10

Family

ID=34947443

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/FR2005/001775 WO2006016051A2 (fr) 2004-07-13 2005-07-08 Dispositif avec organe de prelevement pour la detection d’un analyte dans un echantillon liquide

Country Status (3)

Country Link
EP (1) EP1765500A2 (fr)
FR (1) FR2873208B1 (fr)
WO (1) WO2006016051A2 (fr)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022207890A1 (fr) * 2021-04-02 2022-10-06 Ng Biotech Dispositif pour l'analyse rapide d'un échantillon biologique, par exemple un échantillon biologique salivaire
FR3121515A1 (fr) * 2021-04-02 2022-10-07 Ng Biotech Dispositif pour l’analyse rapide d’un échantillon biologique, par exemple un échantillon biologique salivaire
FR3121513A1 (fr) * 2021-04-02 2022-10-07 Ng Biotech Dispositif pour l’analyse rapide d’un échantillon biologique, par exemple un échantillon biologique salivaire
WO2023222728A1 (fr) * 2022-05-20 2023-11-23 Ng Biotech Dispositif pour l'analyse rapide d'un échantillon biologique, destiné à la détection de la présence d'au moins un analyte dans ledit échantillon biologique

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2329244A4 (fr) * 2008-08-29 2012-09-19 Infusion Innovations Inc Ensemble de prélèvement à transfert de fluide sans soupape de retenue et son procédé d'utilisation

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3887771C5 (de) * 1987-04-27 2009-06-04 Inverness Medical Switzerland Gmbh Immunoassays und Vorrichtungen dafür.
WO1995008761A1 (fr) * 1993-09-20 1995-03-30 Polyfiltronics, Inc. Modeles de dispositif d'analyse et procedes pour effectuer des analyses
IT1281738B1 (it) * 1996-01-17 1998-02-27 Boehringer Mannheim Italia Dispositivo per l'esecuzione di test diagnostici rapidi su campioni di liquidi
US5900379A (en) * 1996-04-11 1999-05-04 Mizuho Usa, Inc. Analytical device
FR2780317B1 (fr) * 1998-06-30 2000-08-11 Vedalab Dispositif de determination d'un analyte dans un echantillon liquide

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022207890A1 (fr) * 2021-04-02 2022-10-06 Ng Biotech Dispositif pour l'analyse rapide d'un échantillon biologique, par exemple un échantillon biologique salivaire
FR3121515A1 (fr) * 2021-04-02 2022-10-07 Ng Biotech Dispositif pour l’analyse rapide d’un échantillon biologique, par exemple un échantillon biologique salivaire
FR3121513A1 (fr) * 2021-04-02 2022-10-07 Ng Biotech Dispositif pour l’analyse rapide d’un échantillon biologique, par exemple un échantillon biologique salivaire
WO2023222728A1 (fr) * 2022-05-20 2023-11-23 Ng Biotech Dispositif pour l'analyse rapide d'un échantillon biologique, destiné à la détection de la présence d'au moins un analyte dans ledit échantillon biologique
FR3135785A1 (fr) * 2022-05-20 2023-11-24 Ng Biotech Dispositif pour l’analyse rapide d’un échantillon biologique, destiné à la détection de la présence d’au moins un analyte dans ledit échantillon biologique

Also Published As

Publication number Publication date
WO2006016051A3 (fr) 2006-08-10
FR2873208A1 (fr) 2006-01-20
FR2873208B1 (fr) 2007-12-07
EP1765500A2 (fr) 2007-03-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1917529B1 (fr) Dosage d'un analyte par immunochromatographie avec migration laterale
US4956302A (en) Lateral flow chromatographic binding assay device
US7238538B2 (en) Chromatographic assay device and methods
US5885526A (en) Analytical device for membrane-based assays
EP0306772B1 (fr) Dispositif pour essai de fixation chromatographique à écoulement latéral
EP0965042B1 (fr) Cassette pour dosages immunologiques automatises
CH631016A5 (fr) Dispositif de separation et de reaction pour analyse immunologique.
EP1091808B1 (fr) Dispositif de determination d'un analyte dans un echantillon liquide
CA2867835A1 (fr) Dispositif pour la determination d'au moins un analyte susceptible d'etre contenu dans un echantillon liquide
JP2013174612A (ja) 凝集アッセイ
EP1608978B1 (fr) Procedes immunochromatographiques en phase solide
EP1765500A2 (fr) Dispositif avec organe de prelevement pour la detection d'un analyte dans un echantillon liquide
FR2618227A1 (fr) Procede d'essai pour la determination quantitative de la presence d'une substance dans un echantillon et dispositif pour la mise en oeuvre de ce procede.
FR2976505A1 (fr) Dispositif et procede pour immunoessais
JPH0224459B2 (fr)
WO2022029083A1 (fr) Système pour l'analyse rapide d'un échantillon biologique, destiné à la détection de la présence d'au moins un analyte dans ledit échantillon biologique
JPH1096725A (ja) 検査用デバイス
JP3713178B2 (ja) 梅毒抗体検出用免疫分析装置
FR2875910A1 (fr) Dispositifs de diagnostic immunochromatographiques pour la detection d'un analyte dans un echantillon liquide comprenant un temoin positif independant de l'analyte detecte
EP4281772A1 (fr) Système pour l'analyse rapide d'un échantillon de sang capillaire provenant d'un sujet, destiné à la détection de la présence d'au moins un analyte dans ledit échantillon de sang capillaire
WO2023222728A1 (fr) Dispositif pour l'analyse rapide d'un échantillon biologique, destiné à la détection de la présence d'au moins un analyte dans ledit échantillon biologique
FR3111430A1 (fr) Système pour l’analyse rapide d’un échantillon biologique, destiné à la détection de la présence d’au moins un analyte dans ledit échantillon biologique
BE1024067B1 (fr) Nécessaire, bande d’unités de support solides, support de maintien et procédé de détection d’au moins deux analytes
EP1101116B1 (fr) Dispositif et procede electrostatiques de detection immunologique
FR3109636A1 (fr) Système et procédé pour l’analyse rapide grande capacité d’échantillons biologiques

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A2

Designated state(s): AE AG AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BW BY BZ CA CH CN CO CR CU CZ DE DK DM DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KM KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV MA MD MG MK MN MW MX MZ NA NG NI NO NZ OM PG PH PL PT RO RU SC SD SE SG SK SL SM SY TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN YU ZA ZM ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A2

Designated state(s): GM KE LS MW MZ NA SD SL SZ TZ UG ZM ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HU IE IS IT LT LU LV MC NL PL PT RO SE SI SK TR BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
DPE1 Request for preliminary examination filed after expiration of 19th month from priority date (pct application filed from 20040101)
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2005788478

Country of ref document: EP

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWW Wipo information: withdrawn in national office

Country of ref document: DE

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 2005788478

Country of ref document: EP

点击 这是indexloc提供的php浏览器服务，不要输入任何密码和下载