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WO2006004201A1 - 神経再生促進剤 - Google Patents

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WO2006004201A1
WO2006004201A1 PCT/JP2005/012636 JP2005012636W WO2006004201A1 WO 2006004201 A1 WO2006004201 A1 WO 2006004201A1 JP 2005012636 W JP2005012636 W JP 2005012636W WO 2006004201 A1 WO2006004201 A1 WO 2006004201A1
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formula
represented
group represented
nerve regeneration
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PCT/JP2005/012636
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French (fr)
Inventor
Tetsuyuki Teramoto
Toshihiko Yamauchi
Sadaharu Kotani
Original Assignee
Eisai R & D Management Co., Ltd.
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Publication date
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Priority to US11/630,808 priority patent/US20080045500A1/en
Priority to JP2006528990A priority patent/JPWO2006004201A1/ja
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    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value

Definitions

  • the present invention relates to a nerve regeneration-promoting agent containing a compound having a cholinesterase inhibitory action and a screening method thereof.
  • Cholinesterase is a general term for enzymes that hydrolyze cholinesters such as acetylcholine, a neurotransmitter that is widely distributed in the body. Its enzyme activity is inhibited by physostigmine (10-5 mol / L). .
  • the types of cholinesterase include true cholinesterase that specifically degrades acetylcholine present in nerve tissue, erythrocytes, muscles, etc., and various esters of corrin esters present in serum, liver, rat viscera, etc. Two types of pseudocholinesterase are known.
  • the former is called acetylcholinesterase (EC3.1.1.7) and has the property of hydrolyzing acetylcholine more rapidly than other choline esters and subjecting it to substrate inhibition.
  • the latter has the property of hydrolyzing many other esters other than acetylcholine and esters not containing choline.
  • a cholinesterase inhibitor has the action of suppressing the hydrolysis of acetylcholine in vivo by cholinesterase, increasing acetylcholine in the synaptic cleft, and increasing the transmission of acetylcholine.
  • donepezil hydrochloride an acetylcholinesterase inhibitor, increases the amount of acetylcholine in the brain, and is widely used as a therapeutic agent for Alzheimer-type senile dementia (Japanese Patent No. 2 5 7 8 4 7 No. 5).
  • the hippocampus is a part of the brain that plays an important role in the formation and maintenance of memory (Eric ⁇ ,. Kandel, The Molecular Biology of Memory Storage: A Dialogue Between
  • the acetylcholine nervous system projects into the dentate gyrus and plays an important role in memory formation and maintenance (Michelle L. Gilmor, Scott E. Counts, Ronald G. Wiley, and Allan I. Levey, Coordinate Expression of the Vesicular Acetylcholine Transporter and Choline Acetyltransferase Following Septohippocampal Pathway Lesions, J Neurochem. 71: 2411-2420, 1998). It has been reported by the American Academy of Neuroscience that the destruction of the acetylenic cholinergic system reduces neuronal regeneration in the dentate gyrus (CM Cooper-Kulm, J. Winkler, H.
  • social anxiety disorder is a medical condition that impairs social life by feeling strong tension, anxiety, fear, etc. when going public. Recent research suggests that the probability of a person having a social anxiety disorder in their lifetime is almost 10%, and this probability is not different between Japan, Europe and the United States. Thus, social anxiety disorder is one of the most popular mental illnesses alongside depression.
  • Social anxiety disorders are generalized anxiety, panic disorder, post-traumatic stress disorder (PTSD), social phobia, phobia (specific phobia) ) , Obsessive-compulsive disorder
  • Symptoms of social anxiety disorder have different powers for each disorder, and the following symptoms are common. That is, unrealistic and excessive long-term anxiety, emotional anxiety, sensitivity to sleep, sleep disorder, excessive alertness, autonomy tension, disgust, fear, repetitive obsessions or acts of obsession.
  • Alcohol, barbituric acid, opiates, ⁇ -prockers, and benzodiazepine minor tranquilizers have long been used for pharmacotherapy for social anxiety disorders.
  • benzodiazepine is the most specific and has been widely used because it is effective in various anxiety disorders.
  • This drug is known to increase the activity of ⁇ -aminobutyric acid (GABA), an inhibitory transmitter in the brain.
  • GABA ⁇ -aminobutyric acid
  • SSRI choletonin-specific reuptake inhibitors
  • SSRI choletonin-specific reuptake inhibitors
  • SSRI is currently in widespread use because it lacks the habits seen with benzodiazepines.
  • SSRI may have a therapeutic effect through promoting nerve regeneration in the hippocampus of PTSD patients. Disclosure of the invention
  • An object of the present invention is to provide a drug that promotes nerve regeneration.
  • the present inventor has established a hypothesis that, based on the knowledge so far, a cholinesterase inhibitor that superimposes the acetylcholine nervous system projecting to the dentate gyrus promotes nerve regeneration of the dentate gyrus, as follows: Study was carried out. First, a new screening method using non-human mammals containing neural stem cells in order to objectively and easily evaluate the effect of promoting nerve regeneration, and in order to efficiently find a nerve regeneration promoter. was built. The screening method of the present invention enables detection of nerve regeneration immunohistochemically using 5-bi'omo-2'-deoxyui'idine (BrdU) as a wisdom marker for vascular stem cells. Yes, it is suitable for accurate screening of nerve regeneration promoters.
  • NrdU 5-bi'omo-2'-deoxyui'idine
  • the present inventor has clarified that the cholinesterase inhibitor has an effect of retaining cells regenerated from neural stem cells present in the dentate gyrus.
  • the invention has been completed. That is, the present invention is as follows.
  • a nerve regeneration promoter comprising a compound having a cholinesterase inhibitory action, a pharmacologically acceptable salt thereof, or a solvate thereof.
  • Examples of the compound having a cholinesterase inhibitory action include cyclic amine derivatives represented by the following general formula.
  • J is (a) a substituted or unsubstituted group; (1) a phenyl group, (2) a pyridyl group, (3) a birazyl group, (4) a quinolyl group, (5) a cyclohexyl group, (6 ) Quinoxalyl group or (7) furyl group,
  • R3 represents a hydrogen atom, a lower alkyl group, an acyl group, a lower alkylsulfonyl group, an optionally substituted phenyl group or a benzyl group
  • a group represented by the formula 0- C- 0- (CH) n- a group represented by the formula _0- C-NH- (CH) n- ,
  • a group represented by the formula -NH- C- (CH) n- a group represented by the formula CH 2 -C0- NH- (CH) n- ,
  • a group represented by the formula — (CH 2 ) 2 —CO—NH— (CH) n a group represented by the formula CH— (CH) n
  • n 0 or an integer of 1 to 10.
  • a hydrogen atom or a methyl group is meant.
  • a group represented by the formula GH-C-NH-CH 2 —, a formula — CH CH- C-NH- (CH 2 ) 2 —
  • ⁇ means a nitrogen atom or a carbon atom.
  • Q means a nitrogen atom, a carbon atom or a group represented by the formula:
  • K is a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted vinyl group, a phenyl group that may be substituted with a phenyl group, a cinnamyl group that may be substituted with a phenyl group, a lower alkyl group, a pyridylmethyl group, a cyclo It means an alkylalkyl group, an adamantanemethyl group, a furylmethyl group, an optionally substituted cycloalkyl group, a lower alkoxycarbonyl group or an acyl group.
  • J is a substituted or unsubstituted (1) phenyl group, (2) pyridyl group, (3) birazyl group, (4) quinolyl group, (5) cyclohexyl group, (6) quinoxalyl group And (7) It is preferably 1 to 3 groups selected from the group consisting of furyl groups.
  • J may be a monovalent group derived from a cyclic amide compound.
  • examples of the compound having a cholinesterase inhibitory action include cyclic amine derivatives represented by the following general formula.
  • J i is a monovalent or divalent group derived from a group selected from the following group which may be substituted with a phenyl group; (1) indanyl, (2) indanonyl, (3) indenyl, ( 4) Indenonyl, (5) Indandionyl, (6) Tetralonyl, (7) Benzos Veronyl, (8) Indanolyl, (9) Formula This means a group represented by CO—CH—.
  • B is a group represented by the formula (CH) n —, a group represented by the formula C- (CH) n —, and a formula N- (CH) n —
  • R 3 represents a hydrogen atom, a lower alkyl group, an acyl group, a lower alkyl sulfonyl group, an optionally substituted phenyl group or a benzyl group
  • n 0 or an integer of 1 to 10.
  • a hydrogen atom or a methyl group is meant.
  • Formula - C- CH CH-CH 2 - , a group represented by the formula one C-CH 2 - CH- CH 2 - , a group represented by
  • a group represented by the formula 0 a group represented by the formula NH—, a group represented by the formula O—, a group represented by the formula S—, a dialkylaminoalkylcarbonyl group or a lower alkoxy carbonyl group.
  • T means a nitrogen atom or a carbon atom.
  • Q means a nitrogen atom, a carbon atom or a group represented by the formula ⁇ N ⁇ 0.
  • K represents a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted phenyl group, a phenyl group which may be substituted with a phenyl group, a cinnamyl group which may be substituted with a phenyl group, a lower alkyl group, a pyridylmethyl group , A sucrose alkylalkyl group, an adamantanemethyl group, a furylmethyl group, an optionally substituted cycloalkyl group, a lower alkoxycarbonyl group or an acyl group.
  • q means an integer of 1 to 3.
  • rr ⁇ means a single bond or a double bond.
  • B is an expression
  • R 2 A hydrogen atom or a methyl group is meant.
  • examples of the compound having a cholinesterase inhibitory action include cyclic amin derivatives represented by the following general formula.
  • J 1 is a monovalent or divalent group derived from a group selected from the following group which may be substituted with a phenyl group; (1) indanyl, (2) indanonyl, (3) indenyl, ( 4) indenonyl, (5) indandionyl, (6) tetralonyl, (7) benzus veronyl, (8) indanolyl, formula (9)
  • B 1 is a formula — (CH) n — wherein n is 0 or an integer of 1 to 10.
  • R 2 is
  • R 2 means a hydrogen atom or a methyl group.
  • a group represented by the formula: CH CH_ (CH) nR 2- (wherein n represents 0 or an integer of 1 to 10, and R 2 represents a hydrogen atom or a methyl group).
  • K is a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted funil group, a phenyl group that may be substituted with a phenyl group, a cinnamyl group that may be substituted with a phenyl group, a lower alkyl group, a pyridylmethyl group, a cycloalkyl It means an alkyl group, an adamantanemethyl group, a furylmethyl group, an optionally substituted cycloalkyl group, a lower alkoxycarbonyl group or an acyl group.
  • K examples include a substituted or unsubstituted arylalkyl group or phenyl group.
  • J 1 may be one group selected from the group consisting of a monovalent group and a divalent group derived from Indanoel, indenyl and indandionyl, and J 1 has 1 carbon atom as a substituent. It may be an indanonyl group which may have a lower alkyl group of -6 or a lower alkoxy group of 1-6 carbon atoms.
  • examples of the cyclic amine derivative include 1 benzyl 1 4 1 ((5, 6-dimethoxy 1 1 indanone) 1 2 yl) methylbiperidine, 1-benzenole 1 4 1 ((5, 6-Dimethoxy 1-Indanone) —2—Iridenyl) Methinorepiperidine, 1 1 Penzinore 4 1 ((5—Methoxy 1 1 Indanone) 1 2_yl) Methylpiperidine, 1 4-((5,6-Methylenedioxy 1 1indanone) 1 2—yl) Methylbiperidine, 1 _ (m 1 2 benzyl) 1 4 1 ((5,6-Dimethoxy 1-indanone) 1 2 —Yl) Methylbiperidine, 1-cyclohexylmethyl-4— ((5, 6-Dimethoxy-1, 1 Danone) 1-2—yl) Methylbiperidine, 1— (m-
  • 6-Dimethoxy 1 indanone 1 2-Iridur) Properbiperidine
  • Benzyl _4- ((5, 6-Dimethoxy 1, 3-Indandione) 1 2 1) At least one selected from the group consisting of propenylbiperidine.
  • the cyclic amine derivative is preferably 1-benzylenoyl 4-((5,6-dimethoxy 1-indanone) 1-2-yl) methylpiperidine. .
  • the compound having a cholinesterase inhibitory action is as follows: 1 Benjirou 4-((5,6-Dimethoxy-1-1-indanone) 1-2-yl) methylbiperidine hydrochloride Preferably, it may be galantamine, tacrine, physostigmine or rivastigmine.
  • a test substance is administered to a neural stem cell, a tissue containing a neural stem cell, or a non-human mammal, and a change in nerve phenotype in the presence or absence of a candidate substance is detected or measured.
  • examples of the candidate substance include a compound having a cholinesterase inhibitory action, a pharmacologically acceptable salt thereof, or a solvate thereof.
  • the compound having a cholinesterase inhibitory action is preferably a compound having a acetylcholinesterase inhibitory action, a pharmacologically acceptable salt thereof, or a solvate thereof.
  • the phenotypic change of nerve regeneration is caused by the proliferation ability of cells derived from neural stem cells, cell differentiation ability, cell shape, cell motility, cell migration ability and migration regulation ability, Selected from the group consisting of maturity, functional protein expression, dendrite shape, axon shape, synapse shape, synapse formation ability, cell survival, cell retention and cell death suppression At least one can be used as an indicator.
  • a method for promoting nerve regeneration comprising administering an effective amount of the above-mentioned compound having a cholinesterase inhibitory action, a pharmacologically acceptable salt thereof, or a solvate thereof to a patient.
  • Figure 1 shows the granule cell layer (G C L) of the hippocampal dentate gyrus.
  • Fig. 2 shows the expression of acetylcholine receptor (muscarinic M2 receptor) (white arrow) on BrdU positive cells present in GCL of the hippocampal dentate gyrus.
  • Fig. 3 shows the increase in intracellular calcium in rat-derived cultured neural progenitor cells. It shows that the intracellular calcium concentration of neural progenitor cells is increased by stimulating cholinergic drugs such as acetylcholine or carbachol, and that this action is completely inhibited by attopine (muscarinic receptor antagonist).
  • cholinergic drugs such as acetylcholine or carbachol
  • FIG. 4 is a graph showing expression of acetylcholine receptor (muscarinic M2 receptor) (white arrow) in rat-derived cultured neural progenitor cells.
  • the present invention is completed by finding a mechanism in which a cholinesterase (ChE) inhibitor retains the number of cells regenerated from neural stem cells by suppressing the degradation of acetylcholine and increasing the concentration of acetylcholine in the synaptic cleft. It has been done. Therefore, the present invention provides a compound having an action of suppressing the degradation of acetylcholine and increasing the concentration of acetylcholine, that is, a compound having a cholinesterase inhibitory action, a pharmacologically acceptable salt thereof, or a solvate thereof as an active ingredient. And a screening method for the drug.
  • ChoE cholinesterase
  • ChE Compounds with cholinesterase (ChE) inhibitory activity
  • the nerve regeneration-promoting agent of the present invention contains a compound having a ChE inhibitory action, a pharmacologically acceptable salt thereof, or a solvate thereof as an active ingredient.
  • the compound having ChE inhibitory activity in the present invention means ChE inhibitory activity, that is, a substance that irreversibly or irreversibly inhibits the activity of ChE.
  • ChE includes acetylcholinesterase (AChE) (EC3.1.1.7), butyrylcholinesterase, and the like.
  • Preferred characteristics of the compound having a ChE inhibitory action of the present invention include a high selectivity for AChE over butyrylcholinesterase, and an ability to cross the blood-brain barrier. It can be mentioned that the dose required for treatment does not cause serious side effects.
  • Preferred compounds for use as nerve regeneration promoters in the present invention include:
  • ChE particularly a compound having AChE inhibitory activity, which includes pharmacologically acceptable salts, solvates, and prodrugs of compounds having ChE inhibitory activity as described below. It is.
  • compounds having ChE inhibitory activity include donepezil (AEICEPT (registered trademark)), galantamine (Reminyl (registered trademark)), and tacrine.
  • AEICEPT registered trademark
  • galantamine Reminyl (registered trademark)
  • tacrine tacrine
  • Cognex registered trademark
  • rivastigmine Exelon (registered trademark)
  • difrosilone US Patent No. 5 6 9 3 6 6 8
  • physostigmine synaf) Synapton
  • Nerobiology of Aging 26 (2005) 939-946 ipidacrine
  • ipidacrine US Pat. No. 4 5 5 0 1 1 3
  • quilostigmine Promem (U.S. Pat. No.
  • thiatolserine may be a derivative of the compound or a prodrug of the compound.
  • the compound, the derivative, the pharmacologically acceptable salt of the prodrug, or the solvate thereof is also included as a preferable embodiment of the compound having CliE inhibitory action.
  • examples of the compound having a ChE inhibitory action include compounds having a ChE inhibitory action described in International Publication No. WO 00/18839 1 pamphlet.
  • Galantamine and its derivatives are described in US Pat. No. 4 6 6 3 3 1 8, International Publication No. 8 8/0 8 7 0 8 Pamphlet, International Publication No. 9 7/0 3 9 8 7 Pamphlet , U.S. Pat.No. 6 3 1 6 4 3 9, U.S. Pat.No. 6 3 2 3 1 9 5, U.S. Pat.No. 6 3 2 3 1 9 6, etc. .
  • Tacrine and its derivatives are described in U.S. Pat.No. 4 6 3 1 2 8 6, U.S. Pat.No. 4 6 9 5 5 7 3, U.S. Pat.No. 4 7 5 4 0 50, International Publication No. 8 8/0 2 2 5 6 Pan Fret, U.S. Pat.No.
  • prodrug refers to “active drug substance” (meaning “drug” corresponding to prodrug) for the purpose of improving bioavailability and reducing side effects. Means a chemically modified substance, and after absorption, In the body, it is a drug that is metabolized to an active substance and exhibits an action.
  • prodrug J has a lower intrinsic activity than the corresponding “drug”, but when administered to a biological system, it undergoes a spontaneous chemical or enzyme-catalyzed reaction or metabolism. Refers to any compound that produces the “drug” substance as a result of the reaction.
  • prodrug examples include amino group, hydroxyl group, carboxyl group and the like of the above-exemplified compounds or compounds represented by the following general formulas, which are acylated, alkylated, phosphorylated, borated, carbonated, esterified, amino
  • Various prodrugs such as fluorinated or urethanized compounds can be exemplified.
  • the exemplified groups are not comprehensive, but merely exemplary, and those skilled in the art will show various other known prodrugs by the known methods in the above exemplified compounds or the following general formula. It can be prepared from a compound.
  • Prodrugs comprising the compounds exemplified above or compounds represented by the following general formula are included within the scope of the present invention.
  • more preferred examples of compounds having ChE inhibitory activity include cyclic amine derivatives represented by the following general formula (I), pharmacologically acceptable salts thereof, or those Of the solvates.
  • the compound having an inhibitory effect on ChE is preferably 1_benzyl-4 [((5,6-dimethoxy 1-indanone) 1-2-yl] methylbiperidine (donevezil) and its pharmacological And solvates thereof, particularly preferably 1-benzil 4-((5,6-dimethyoxy 1-indanone) _2-inole] methinoleviperidin hydrochloride (Donepe hydrochloride) Jill), or ARICEPT (registered trademark).
  • B is a group represented by the formula — (CH) n —, a formula — a group represented by C— (CH) n —, a formula—N— (CH) n
  • R3 represents a hydrogen atom, a lower alkyl group, a acyl group, a lower alkylsulfonyl group, an optionally substituted phenyl group or a benzyl group
  • n 0 or an integer of 1 to 10.
  • R 2 is A hydrogen atom or a methyl group is meant.
  • a group represented by the formula — C—CH ⁇ CH—CH 2 — a group represented by the formula — C—CH 2 —CH—GH 2 —,
  • a group represented by formula 0 a group represented by formula NH-, a group represented by formula 101, a group represented by formula S-, a dialkylaminoalkylcarbonyl group or a lower alkoxycarbonyl group. .
  • T means a nitrogen atom or a carbon atom.
  • Q is a nitrogen atom, a carbon atom or a group represented by the formula: N ⁇ 0.
  • K is a hydrogen atom, a substituted or unsubstituted phenyl group, an arylalkyl group that may be substituted with a phenyl group, a cinnamyl group that may be substituted with a phenyl group, a lower aryloxy group, a pyridinolemethyl group, or a cycloalkylalkyl.
  • q means an integer of 1 to 3.
  • the “lower alkyl group” means a linear or branched alkyl group having 1 to 6 carbon atoms such as a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, an isopropyl group, n-butyl group, isobutyl group: sec-butyl group, tert-butyl group, pentyl group (amyl group), isopentyl group, neopentyl group, tert-pentyl group, 1 monomethylptyl group, 2_methylbutyl group, 1, 2 —Dimethylpropyl group, hexylene group, isohexyl group, 1-methylpentyl group, 2-methylpentyl group, 3-methylpentyl group, 1,1-dimethylbutyl group, 1,2-dimethylbutyl group, 2, 2 —Di
  • methyl group examples include a methyl group, an ethyl group, a propyl group, and an isopropyl group, and the most preferred is a methyl group.
  • “Lower alkyl group” means in the above definition in the compound (I) of the present invention, for example, K,
  • the “lower alkoxy group” means a lower alkoxy group corresponding to the above lower alkyl group, such as a methoxy group or an ethoxy group.
  • lower alkoxycarbonyl group means a methoxycarbonyl group, an ethoxycarbonyl group, an isopropoxycarbonyl group, an n-propoxycarbonyl group, an n-butoxyoxycarbonyl group, etc. Corresponding lower alkoxycarbonyl group.
  • cycloalkyl group is a cyclic alkyl group having 4 to 10 carbon atoms, such as, but not limited to, a cyclobutyl group, a cyclopentyl group, a cyclohexyl group, and the like. Can be mentioned.
  • a lower alkyl group having 1 to 6 carbon atoms such as a butyl group or a te i-t-butyl group; a lower alkoxy group corresponding to the above lower alkyl group such as a methoxy group or an ethoxy group;
  • Halogens such as chlorine, bromine, fluorine
  • a lower alkoxycarbonyl group corresponding to the above-mentioned lower alcoholoxy group such as a methoxycarbonyl group, an ethoxycarbonyl group, an isopropoxycarbonyl group, an n-propoxycarbonyl group, an n-propyloxycarbonyl group;
  • a acylamino group derived from an aliphatic saturated monocarboxylic acid having 1 to 6 carbon atoms such as an acetylamino group, a propionylamino group, a butyrylamino group, an isoptryl amino group, a norylylamino group, a bivalylamino group;
  • Cycloanolequinoxyoxycarbonyl groups such as hexinolexoxycarbonyl groups
  • Lower alkylamino group such as methylaminocarbonyl group, ethylaminocarbonyl group and the like;
  • a halogenated lower alkyl group typified by a trifluoromethyl group; a hydroxyl group;
  • Lower alkoxy lower alkyl groups such as ethoxymethyl group, methoxymethyl group, and methoxetyl group And so on.
  • “lower alkyl group” and “lower alkoxy group” include all groups derived from the above definitions.
  • Groups (1;) to (7) of the group may be substituted with 1 to 3 of the same or different substituents.
  • E means a carbon atom or a nitrogen atom.
  • -D is a lower alkyl group having 1 to 6 carbon atoms such as methyl group, ethyl group, n-propyl group, isopropyl group, n-butyl group, isobutyl group, tert-butyl group; A lower alkoxy group corresponding to a lower alkyl group;
  • ⁇ halogens such as silicon, bromine, fluorine
  • Lower alkoxycarbonyl groups corresponding to the above lower alkoxy groups such as a methoxycarbonyl group, an ethoxycarbonyl group, an isopropoxycarbonyl group, an n-propoxycarbonyl group, and an n-propyloxycarbonyl group;
  • An acylamine group derived from an aliphatic saturated monocarboxylic acid having 1 to 6 carbon atoms such as an acetylamino group, a propionylamino group, a butyrylamino group, an isoptylylamino group, a valerylamino group, a bivalylamino group;
  • Cycloanoloxycarbonyl groups such as hexinoreoxycanolenyl groups
  • Lower alkylamino mino levonino groups such as methylamino carbonyl group and ethylamino carbonyl group;
  • a halogenated lower alkyl group typified by a trifluoromethyl group; a hydroxyl group;
  • Lower alkoxy lower alkyl groups such as ethoxymethyl group, methoxymethyl group, and methoxetyl group
  • lower alkyl group and “lower alkoxy group” include all groups derived from the above definitions. ).
  • preferred substituents for the phenyl group include a lower alkyl group, a lower alkoxy group, a nitro group, a halogenated lower alkyl group, a lower alkoxycarbonyl group, a formyl group, a hydroxyl group, a lower alkoxy lower alkyl group, a halogen,
  • a benzoyl group, a benzylsulfonyl group, etc. can be mentioned, and the substituents may be the same or different and two or more may be used.
  • Preferred examples of the substituent for the pyridyl group include a lower alkyl group, an amino group, and a halogen atom.
  • Preferred groups for the substituent of the virazil group include a lower alkoxycarbo group, a force Examples include a lupoxyl group, an enantiomeryl group, a strong rubermoyl group, and a cycloalkylcarbonyl group.
  • the pyridyl group as J is preferably a 2-pyridyl group, a 3-pyridyl group or a 4-pyridyl group
  • the virazyl group is preferably a 2-birazyl group
  • the quinolyl group is a 2-quinolyl group or a 3-quinolyl group.
  • the quinoxalyl group is preferably a 2-quinoxalyl group or a 3-quinoxalyl group
  • the furyl group is preferably a 2-furyl group.
  • t means 0 or an integer of 1 to 4, and indicates that the phenol group is substituted with 0 or 1 to 4 groups of the same or different S.
  • S represents one or a hydrogen atom among the same or different substituents in the definition of the J (a) group described above, preferably a hydrogen atom (unsubstituted), a lower alkyl group, or a lower alkoxy group. be able to. Further, it may be substituted with an alkylenedioxy group such as a methylenedioxy group or an ethylenedioxy group between adjacent carbons of the phenyl ring.
  • an unsubstituted or methoxy group when 1 to 3 isopropoxy groups are substituted, or a methylenedioxy group is substituted, and most preferred is an unsubstituted or methoxy group. This is the case when 1 to 3 are replaced.
  • indanolidenyl is an example of a divalent group in which the phenol group in the definition of J (b) may be substituted. That is, it is a typical divalent group derived from indanonyl of (2) of J (b).
  • the monovalent group derived from the (c) group of cyclic amide compounds is, for example, quinazolone, tetrahydride mouth isoquinoline monoone, tetrano, id mouth Examples thereof include benzodiazepine monoone and hexahydrobenzazocin monoone, but a cyclic amide may be present in the structural formula, and is not limited thereto.
  • the cyclic amide may be a single ring or a cyclic amide derived from a condensed hetero ring, and the condensed hetero ring is preferably a condensed hetero ring with a phenyl ring.
  • the phenyl ring may be substituted by a lower alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, preferably a methyl group, a lower alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms, preferably a methoxy group or a halogen atom. .
  • Y in the formulas (i) and (1) means a hydrogen atom or a lower alkyl group
  • V in the formula (k) is a hydrogen atom or a lower alkoxy group
  • W 2 represents a hydrogen atom, a lower alkyl group, a lower alkoxy group
  • W 3 represents a hydrogen atom or a lower alkyl group.
  • U in the formula (j) means a hydrogen atom, a lower alkyl group, or a lower alkoxy group.
  • the right ring is a 7-membered ring
  • the right ring is an 8-membered ring.
  • the group “lower alkyl group” is as described above.
  • preferred are (a) a group included in a group, (b) a group included in a group, (c) a group included in a group, and most preferred is (b) a group A monovalent group derived from indanone (indanonyl) which may be substituted on the phenyl ring, and (c) a -valent group derived from a group of cyclic amide compounds.
  • R 2 is a hydrogen atom, it is represented by the formula 1 (CH 2 ) n — It means that one or more methyl groups may be bonded to any carbon atom. In this case, n is preferably 1 to 3.
  • dialkylaminoalkylcarbonyl group means, for example, an N, N-dimethylaminoalkylcarbonyl group, an N, N-jetylaminoalkylcarbonyl group ⁇ , ⁇ -disisopropylaminoalkylcarbonyl, And ⁇ -methyl- ⁇ -ethylamino arylcarbonyl group.
  • a group having an amide group in the group is also a preferable group.
  • the arylalkyl group means that the funil ring is substituted with the above-mentioned substituent or an unsubstituted benzyl group or phenethyl group.
  • pyridylmethyl group examples include a 2-pyridylmethyl group, a 3-pyridinomethyl group, and a 4-pyridylmethyl group.
  • an arylalkyl group in which the phenyl group may be substituted a substituted or unsubstituted phenyl group, a cinnamyl group in which the phenyl group may be substituted, or a substituted cycloalkyl
  • the group is most preferred.
  • Preferable arylalkyl group specifically includes, for example, a benzyl group, a phenethyl group, etc., and these include a lower alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms, a lower alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, a hydroxyl group, and the like. May be substituted.
  • TM means single bond or double bond.
  • a divalent group derived from an indanone in which the above-mentioned funil ring may be substituted that is, a case of a indanolidenyl group can be mentioned.
  • a compound group (A) represented by the following general formula can be given by summing up these definitions to give a particularly preferred compound group.
  • J 1 is a monovalent or divalent group derived from a group selected from the following group which may be substituted with a phenyl group;
  • the most preferable group includes an indanonyl group, an indandionyl group, and an indanolidenyl group, which may be substituted with a phenyl group.
  • the phenyl group is not substituted, is substituted with the same or different hydroxyl group, halogen, or lower alkoxy group, or is an alkylenedioxy group between adjacent carbons of the phenyl ring. Most preferably, it is substituted.
  • the lower alkoxy group means, for example, a methoxy group having 1 to 6 carbon atoms, an ethoxy group, an isopropoxy group, an n-propoxy group, an n-butoxy group, and the like. Is preferred. Most preferred is when the methoxy group is disubstituted.
  • a more preferable compound group includes the following ⁇ general
  • the compound group (B) represented by the formula can be mentioned ]: R rrT Q— K (B)
  • B 1 represents the formula — (CH) n — (where n represents 0 or an integer of 1 to 10 R 2
  • R 2 is
  • a hydrogen atom or a methyl group is meant.
  • a group represented by the formula: CH CH— (CH) n R 2 — (wherein n represents 0 or an integer of 1 to 10, and R 2 represents a hydrogen atom or a methyl group)
  • T, Q, q, K have the same meaning as above.
  • a more preferable compound group includes a compound group (D) represented by the following general formula.
  • J 2 represents a monovalent or divalent group derived from indanonyl to which the phenyl group may be substituted (for example, indanonyl, indanolidenyl group), a group selected from indenyl and indandionyl). More preferably, J 2 represents an indanonyl group which may have a lower alkyl group having 1 to 6 carbon atoms or a lower alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms as a substituent.
  • Ki means a substituted or unsubstituted phenyl group, an arylalkyl group that may be substituted, a cinnamyl group that may be substituted, or a cycloalkyl group that may be substituted.
  • the compound having a ChE inhibitory action is preferably 1-benzyl-4-((5'6-dimethoxy-1-indanone) 1-2-yl) methinorepiperidine,
  • benzyl 1 4_ ((5, 6-dimethoxy 1, 1, 3_indanedione) 1 2- ynole) propenyl biperidine, more preferably 1 benzyl 1 4 _ ((5, 6-dimethoxy 1, 1, 3_indanedione) 1 2- ynole) propenyl biperidine, more preferably 1 benzyl 1 4 _ ((5, 6-dimethoxy 1, 1, 3_indanedione) 1 2- ynole) propenyl biperidine, more preferably 1 benzyl 1 4 _ ((5,
  • the compound having a ChE inhibitory action used in the present invention, a pharmacologically acceptable salt thereof, or a solvate thereof can be produced by a known method, and is represented by the cyclic formula represented by the general formula (I).
  • Amine derivatives for example, donepezil hydrochloride
  • Specific examples include the methods disclosed in JP-A-1-79151, Japanese Patent 2578475, Japanese Patent 2733203, Japanese Patent 3078244, or US Patent No. 4895841. Can be manufactured more easily.
  • Donepezil hydrochloride is also available as a preparation such as fine granules. Galantamine and its derivatives are described in U.S. Pat.No.
  • Tacrine and its derivatives are described in U.S. Pat.No. 4631 286, U.S. Pat.No. 4,695,573, U.S. Pat.No. 4754050, WO 88/02256, Pamphlet, U.S. Pat.No. 4,835,275, U.S. Pat. No. 4,839,364, US Pat. No. 4,999,430, International Publication No. WO 97/2 1 681, and the like.
  • Rivastigmine and its derivatives can be easily produced by the methods disclosed in EP 193926, WO 98/26775 pamphlet, WO 98/27055 pamphlet, etc. .
  • the pharmacologically acceptable salt is, for example, an inorganic acid salt such as hydrochloride, sulfate, hydrobromide, phosphate, formate, acetate, trifluoroacetate, maleate.
  • organic acid salts such as innate, tartrate, methanesulfonate, benzenesulfonate, and toluenesulfonate.
  • alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt
  • alkaline earth metal salts such as calcium salt and magnesium salt
  • trimethylamine salt such as sodium salt and potassium salt
  • alkaline earth metal salts such as calcium salt and magnesium salt
  • trimethylamine salt such as triethylamine salt
  • pyridine salt such as pyridine salt
  • picoline salt such as dicyclo Hexylamine salts
  • organic amine amines such as N, ⁇ '-dibenzylethylenediamine salt, and ammonium salts
  • the compound having a ChE inhibitory action, or a pharmacologically acceptable salt thereof which is an active ingredient of the nerve regeneration promoting agent of the present invention, may be an anhydride and hydrated.
  • a solvate such as a product may be formed.
  • the solvate is preferably a pharmacologically acceptable solvate.
  • the pharmacologically acceptable solvate may be either a hydrate or a non-hydrate, but a hydrate is preferred.
  • the solvent water, alcohol (eg, methanol, ethanol, n-propanol), dimethylformamide, dimethyl sulfoxide (DMSO) or the like can be used.
  • the above compound has an asymmetric carbon depending on the type of the substituent, and optical isomers may exist, but it goes without saying that these belong to the scope of the present invention.
  • crystal polymorphism may exist in the above-mentioned compounds such as donepezil, but the present invention is not limited to this, and any one crystal form may be a single crystal form mixture. These are well within the scope of the present invention.
  • J has an indanone skeleton
  • it since it has an asymmetric carbon, there may exist geometric isomers, optical isomers, diastereomers, etc., all of which are included in the scope of the present invention. .
  • the nerve regeneration-promoting agent refers to a stem cell derived from human or an organism other than human, such as ushi, monkey, bird, cat, mouse, rat, guinea pig, hamster, butterfly, nu, and heron.
  • Stem cells derived from non-human mammals eg, neural stem cells, embryonic stem cells, etc.
  • “nerve regeneration” means self-replication promoting action on neural stem cells, proliferation promoting action on neural stem cells, differentiation promoting action on neural progenitor cells on neural stem cells, growth promoting action on neural progenitor cells, on neural progenitor cells At least one of a maturation promoting action on nerve cells, a survival promoting action on neural stem cells or neural progenitor cells, a cell death inhibiting action on neural stem cells or neural progenitor cells, and a synapse formation promoting action on regenerated nerve cells It means nerve regeneration by the mechanism of action.
  • the compound having a ChE inhibitory action, a pharmacologically acceptable salt thereof, or a solvate thereof has an action of promoting nerve regeneration. It is also useful as an active ingredient in therapeutics for diseases that impair the nerve function of the hippocampus.
  • the present invention also provides a method for promoting nerve regeneration, comprising administering to a patient an effective amount of a compound having a ChE inhibitory activity of the present invention, a pharmacologically acceptable salt thereof, or a solvate thereof. provide.
  • the nerve regeneration-promoting agent of the present invention can be used for the treatment of social anxiety disorder due to its action of promoting nerve regeneration.
  • the cause of social anxiety disorder may be due to a decrease in nerve regeneration in the hippocampus due to stress or trauma.
  • the following items (i) to (v) suggest that SSRI may have a therapeutic effect through the action of promoting nerve regeneration in the hippocampus of PTSD patients.
  • Nerve regeneration in the hippocampus is reduced in animal models of social anxiety disorder, (iii) From the results of animal experiments in (ii), etc., (i) a decrease in nerve regeneration in the hippocampus is involved. That the possibility has been pointed out,
  • a drug having an action of promoting nerve regeneration may be a therapeutic drug for social anxiety disorder. That is, the above items (i) to (v) indicate that the nerve regeneration-promoting agent of the present invention is useful as a therapeutic agent for social anxiety disorders such as PTSD. Therefore, social anxiety disorder is appropriate as one of the indications of the nerve regeneration promoting agent of the present invention, and the nerve regeneration promoting agent of the present invention can be used for the treatment of social anxiety disorder.
  • Treatment generally means obtaining a desired pharmacological and / or physiological effect. The effect is preventive in that it completely or partially prevents the disease and / or symptoms, and is therapeutic in terms of partial or complete cure of the adverse effects caused by the disease and / or disease. .
  • treatment means any treatment of a disease in a patient mammal, particularly humans, and includes the meaning of general treatment as described above. “Treatment” includes, for example, the following items (a) to (c):
  • a compound having a ChE inhibitory action or a salt thereof, or a solvate thereof, a prodrug or a salt thereof, or a solvate thereof may be administered to humans or non-human mammals in various forms, orally or parenterally (for example, (Intravenous injection, intramuscular injection, subcutaneous administration, rectal administration, and transdermal administration).
  • a compound having a ChE inhibitory action or a salt thereof or a solvate thereof or a prodrug or a salt thereof or a solvate thereof can be used alone. It can be formulated into an appropriate dosage form using a pharmaceutical carrier.
  • Preferred dosage forms include, for example, tablets, powders, fine granules, granules, coated tablets, capsules, syrups, lozenges, oral preparations, inhalants, suppositories, injections (infusion) And ointments, eye drops, eye ointments, nasal drops, ear drops, patches, poultices, mouth lotions, liposomes and the like.
  • Carriers used for formulating these preparations include, for example, commonly used solvents, excipients, coating agents, binders, disintegrants, lubricants, colorants, flavoring agents, and if necessary, stabilizers, emulsifiers.
  • Absorption accelerator, Surfactant, pH adjuster, Preservative, Antioxidant, Bulking agent, Wetting agent, Surfactant, Dispersant, Buffer, Preservative, Solubilizer, Suspending agent, Thickeners, soothing agents, tonicity agents and the like can be used, and it is possible to formulate them by conventional methods by blending ingredients generally used as raw materials for pharmaceutical preparations.
  • Non-toxic components that can be used include, for example, animal and vegetable oils such as soybean oil, beef tallow and synthetic glycerides; hydrocarbons such as liquid paraffin, squalene, and solid paraffin; for example, otatildodecyl myristate, isopropyl myristate Ester oils such as cetostearyl alcohol, behenyl alcohol, etc .; silicone resins; silicone oils such as polyoxyethylene fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, glycerin fatty acid ester, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, poly Surfactants such as oxyethylene hydrogenated castor oil, polyoxyethylene-polyoxypropylene block copolymer; for example, hydoxychichetinolesenorerose, polyacrylic acid, carboxyoxyl polymer, Water-soluble polymers such as polyethylene glycol, polybutylpyrrolidone and methylcellulose; lower alcohols such as ethanol and isopropan
  • excipients include lactose, fructose, corn starch, sucrose, glucose, mannitol, sorbitol, crystalline cellulose, silicon dioxide, and the like
  • binders include polyvinyl alcohol, polyvinyl ether, methyl cellulose, and ethyl cellulose. , Gum arabic, tragacanth, gelatin, shellac, hydroxyp Mouth pinole methinorescenellose, hydroxypropyl cellulose, polyvinyl pyrrolidone, polypropylene glycolol 'polyoxyethylene' block copolymer, medalmin, etc.
  • disintegrants such as starch, agar, gelatin powder, crystalline cellulose Lubricants, calcium carbonate, sodium hydrogen carbonate, calcium citrate, dextrin, pectin, carboxymethylcellulose and calcium, etc., as lubricants, for example, magnesium stearate, talc, polyethylene dalycol, silica, hardened Vegetable oils, etc., are permitted to be added to pharmaceuticals as coloring agents, but flavoring agents include cocoa powder, hearth brain, fragrance powder, heart force oil, dragon brain, cinnamon powder, etc. Each is used.
  • the above component may be a salt thereof or a solvate thereof.
  • an oral preparation is a compound having a CE inhibitory action or a salt thereof or a solvate thereof or a prodrug or a salt thereof or a solvate thereof, and if necessary, for example, a binder, a disintegrant, After adding a lubricant, a coloring agent, a flavoring agent, etc., it is made into a powder, a fine granule, a granule, a tablet, a coated tablet, a capsule, etc. by a conventional method.
  • carnauba roux, hydroxypropyl methyl cellulose, macro gonole, hydroxypropino methino phthalate, senorelose phthalate, sucrose, titanium oxide, sorbitan fatty acid ester, calcium phosphate Coating may be performed by a well-known method using a coating agent such as rubber.
  • a coating agent such as rubber.
  • Specific examples of carriers used in the manufacture of syrups include sweeteners such as sucrose, glucose, and fructose, arabic gum, tragacanth, carmellose sodium, methylcellulose, sodium alginate, crystalline cellulose, and suspensions such as beef gum.
  • dispersants such as sorbitan fatty acid esters, sodium lauryl sulfate and polysorbate 80.
  • dispersants such as sorbitan fatty acid esters, sodium lauryl sulfate and polysorbate 80.
  • flavoring agents, fragrances, preservatives, solubilizers, stabilizers, etc. can be added as necessary.
  • it may be in the form of a dry mouth that dissolves or suspends during use.
  • Injections are usually prepared by, for example, dissolving a salt of a compound having a ChE inhibitory action in distilled water for injection.
  • Solubilizing agents, buffers, pH adjusting agents, isotonic agents, Soothing agents, preservatives, stabilizers, etc. can be added and formulated in a conventional manner.
  • Injectables can be sterilized by filter sterilization using a filter or by adding a bactericidal agent.
  • an injection can be manufactured as a form of preparation at the time of use. That is, it can be made into a sterile solid composition by freeze-drying or the like, and dissolved in sterile distilled water for injection or other solvent before use.
  • the production method is not particularly limited, and it can be produced by a conventional method.
  • the base material to be used it is possible to use various raw materials usually used for pharmaceuticals, quasi drugs, cosmetics, etc., for example, animal and vegetable oils, mineral oils, ester oils, waxes, higher alcohols. , Fatty acids, silicone oil, surfactants, phospholipids, alcohols, polyhydric alcohols, water-soluble polymers, clay minerals, purified water, etc.
  • Antioxidants, chelating agents, antiseptic / antifungal agents, coloring agents, fragrances and the like can be added.
  • An inhalant is a compound having a ChE inhibitory action or a salt thereof, or a solvate thereof, a prodrug or a salt thereof, or a solvate thereof for administration by inhalation.
  • it can be delivered from a pressurized pack or other convenient manner of delivering an aerosol spray.
  • the pressure pack can contain a suitable propellant.
  • a compound having a ChE inhibitory action or a salt thereof, or a solvate thereof, a prodrug or a salt thereof, or a solvate thereof is in the form of a dry powder composition or a liquid spray. It can also be administered in the form.
  • CliE-inhibiting compounds can be formulated as an ointment, cream or lotion, or as an active ingredient for a transdermal patch.
  • Ointments and creams can be formulated, for example, by adding an appropriate thickening and / or gelling agent to an aqueous or oily base.
  • Lotions can be formulated with an aqueous or oily base and, in general, one or more emulsifying agents, stabilizing agents, dispersing agents, suspending agents, thickening agents, and coloring agents or coloring agents. Can also be included.
  • Compounds with ChE inhibitory activity can also be administered by iontophoresis. Furthermore, components such as blood flow promoters, bactericides, anti-inflammatory agents, cell activators, vitamins, amino acids, humectants, keratolytic agents and the like can be blended as necessary. The ratio of the active ingredient to the carrier at this time can vary between 1 and 90% by weight.
  • the nerve regeneration-promoting agent of the present invention usually contains 0.5% by weight or more of a compound having a ChE inhibitory action or a salt thereof or a solvate thereof, a prodrug or a salt thereof or a solvate thereof as an active ingredient. , Preferably 10 to 70% by weight.
  • a compound having a ChE inhibitory action or a salt thereof or a solvate thereof or a prodrug or a salt thereof or a solvate thereof is used for the treatment, it is at least 90% or more, preferably 95% or more. It is preferable to use those purified to 98% or more, more preferably 99% or more.
  • the dose of a compound having a ChE inhibitory action or its salt, or a solvate thereof, or a prodrug, a salt thereof or a solvate thereof, for oral administration is determined by, for example, the route of administration, the type of disease, the degree of symptoms, Age, gender, body weight, type of salt, ⁇ specific type of disease, pharmacological findings such as pharmacokinetics and toxicological characteristics, whether drug delivery systems are used, and some other drug combinations However, it can be set appropriately by those skilled in the art.
  • LOO Omg / day per adult (60 kg), from about 0.001 to: LOO Omg / day, preferably about 0.01 to 500 mg / day, more preferably about 0.1 to 30 Omg / day, Can be administered once or divided into several doses. When administered to children, the dose may be less than that administered to adults.
  • the actual method of administration used may vary widely and may deviate from the preferred method of administration described herein.
  • donepezil hydrochloride it is preferably about 0.1 to 300 mg / day, more preferably about 0.1 to 10 Omg / day per adult (body weight 60 kg).
  • donepezil hydrochloride 5 mg tablet or 10 mg tablet donepezil hydrochloride marketed under the trade name Alricept Tablets (Eisai Co., Ltd.), hydrochloric acid of trade name Alisebut Fine Granules (Eisai Co., Ltd.)
  • Administration of donepezil can do.
  • tablets can be administered from 1 to about 4 times a day.
  • one 5 mg tablet or 1 Omg tablet of the trade name Alisebut Tablet (Eisai Co., Ltd.) is administered.
  • donepezil hydrochloride when administered to children, the dose may be less than that administered to adults, and in preferred embodiments, children are treated with donepezil hydrochloride. It can be administered at about 0.5 to 10 mg / day, preferably about 1.0 to 3 mg / day. In addition, in the case of tacrine, about 0.
  • ⁇ 300 mg / day preferably about 40-12 OmgZ days, in the case of rivastigmine, about 0.1-300 mg / day for adults (60 kg body weight), preferably About 3 to 12 mg / day, in the case of galantamine, about 0.1 to 300 mg per day for adults (body weight 6 O kg), preferably about 16 to 32 mg / day, for physostigmine Is about 0.:!
  • the preferred dosage is about 5-50 mg / day, more preferably about 10-20 mg / day, per adult (60 kg).
  • concentration of 0.1 ⁇ g / m 1 carrier to 10 mg / m 1 carrier in a pharmacologically acceptable carrier such as physiological saline or commercially available distilled water for injection. It can manufacture by melt
  • the dosage of the injection thus prepared is about 0.01 to 5 Omg / day, preferably about 0. 0 per adult (60 kg) per patient in need of treatment. 0 1 to 5.0 mgZ day, more preferably about ⁇ .:! To 1. Omg / day, which can be administered in 1 to 3 divided doses per day. When administered to children, the dose may be less than that administered to adults.
  • the present invention also provides a substance that promotes nerve regeneration, a pharmacologically acceptable salt thereof, Provides a screening method for these solvates.
  • the candidate substance is administered to a neural stem cell, a tissue containing a neural stem cell, or a non-human mammal containing a neural stem cell, and caused to act on the cell. This includes detecting or measuring phenotypic changes in nerve regeneration in the absence and absence.
  • candidate substances include substances having a ChE (including AChE) inhibitory action, such as compounds having the ChE inhibitory action, anti-ChE antibodies, siRNA against ChE, shRNA and the like.
  • the substance may be a salt thereof or a solvate thereof.
  • a compound having a ChE inhibitory action can be produced and obtained by referring to the above description.
  • As the anti-ChE antibody either a monoclonal antibody or a polyclonal antibody can be used. Those skilled in the art can prepare the antibody using, for example, ChE as a sensitizing antigen. SiRNA, shRNA, etc.
  • ChE gene may be any nucleic acid that can suppress the expression of the ChE gene, and those skilled in the art can appropriately design and manufacture siRNA, shRNA, etc. sequences (Elbashir, SM, et. Al "Genes Dev., 15, 188-200, 2001).
  • Neural stem cells can be prepared by the microsphere method (Cindi M Morshead and Derek van der Kooy, Cur. Opin. Neurobiol., 14, 125-131, 2004).
  • the animals were perfused and fixed with 4% paraformaldehyde-containing phosphate buffered saline (PBS) under deep anesthesia, and the excised brain was slid. This can be done by slicing to 4 O ⁇ m with a microtome (Yoshimura et al., PNAS, 98, 5874-5879, 2001, Yoshimura et al., J. Clin. Invest., 112, 1202 -1210, 2003).
  • PBS paraformaldehyde-containing phosphate buffered saline
  • Non-human mammals containing neural stem cells include, for example, rabbits, monkeys, birds, cats, mice, rats, monoremots, hamsters, pigs, dogs, and rabbits.
  • a candidate compound When a candidate compound is administered to the cells, it can be performed orally or parenterally.
  • the phenotypic changes in nerve regeneration are the proliferation ability of cells derived from neural stem cells, the differentiation ability of cells, the shape of cells, the motility of cells, the ability to move and regulate cells, the maturity of cells, the function of functional proteins Expression, dendrite shape, axon shape, synapse shape, synapse At least one of cell formation ability, cell survival, cell retention or cell death suppression can be used as an indicator. In the following cases, it can be determined that the substance has an effect of promoting nerve regeneration.
  • the cell shape, dendritic shape, axon shape, or synaptic shape is more suitable for functional expression in the presence than in the absence of the test substance.
  • a label for example, BrdU, a retrovirus vector, etc.
  • the phenotypic change of nerve regeneration can be detected or measured by observing the label by immunostaining.
  • the amount of BrdU incorporation when a test substance is allowed to act on cells in the presence of BrdU can be used as an indicator of a screening method for substances that promote nerve regeneration.
  • BrdU is 0. It can be incorporated into cells by contacting the cells at a concentration of ⁇ 1000 mg / kg for 0.5 to 24 hours:! -10 times.
  • the amount of BrdU incorporation can be detected using an antibody against BrdU (see Examples 2 and 3).
  • Examples of a method for detecting or measuring a phenotypic change in nerve regeneration include a double staining method of the above-mentioned marker of neural stem cells and a phenotypic indicator of nerve regeneration.
  • the present invention also provides a screening kit for screening a substance having an action of promoting nerve regeneration for use in the above method, a pharmacologically acceptable salt thereof, or a solvate thereof.
  • the screening kit of the present invention includes those necessary for measuring phenotypic changes in nerve regeneration.
  • the reagents used in the measurement of nerve regeneration phenotypic changes are preferably those used in Examples 2 and 3 below.
  • the screening kit of the present invention may include a kit instruction manual, a tube, a flask, and the like.
  • This reaction was performed under an argon atmosphere.
  • Diisopropylamine (2.05 ml) was added to anhydrous THF (10 ml), and 1.6 Mn monobutyllithium hexane solution (9.12 ml) was further added at 0 ° C. After stirring at 0 ° C for 10 minutes, the mixture was cooled to 78 ° C, and 5,6-dimethoxy-1-indanone 2.55 g of anhydrous THF 3 Om 1 solution and hexamethylphosphoramide 2 3 1 m 1 was added. After stirring at 78 ° C. for 15 minutes, a solution of 2.70 g of 1-benzyl-4-piperidine strength rubaldehyde obtained in (a) in 30 ml of anhydrous THF was added.
  • BrdU and donepezil BrdU (manufactured by Sigma) for labeling neural stem cells was used after being dissolved in a phosphate buffer (PBS: Sigma) containing 0.007N HC1 at a concentration of 5 mg // mL (Yoshinmi ' a et al., PNAS, 98, 5874-5879, 2001, Yosliimura et al., J. Clin. Invest., 112, 1202.1210, 2003).
  • PBS phosphate buffer
  • BrdU was administered intraperitoneally three times (4 hour intervals) at a dose of 50 mg kg per dose (0.1 ml as a BrdU solution per 10 g body weight).
  • Donepezil hydrochloride obtained in Example 1 was used as donepezil.
  • Donepezil was used after being dissolved in distilled water for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) as a medium so as to have a concentration of 0.1 mg / mL.
  • Donepezil was orally administered at a dose of lmg / kg (0.1 ml as a donepezil solution per 10 g body weight) 4 hours after the last administration of BrdU. Thereafter, donepezil was administered orally at a dose of lmg kg once a day at night for 14 days.
  • the animals in the vehicle control group were orally administered with distilled water for injection.
  • Secondary antibody is a rabbit anti-rat IgG piotinylated antibody (2 00-fold dilution, Vector Laboratories Inc.) was used.
  • SGZ sub-granular zone
  • GCL granule cell layer
  • S G Z was defined as the area of the width of G C L directly below (hylus side) 2 (2 cells).
  • GCL was defined as the granular neuronal cell layer positive for cresyl biolet staining.
  • the area of GCL in each hippocampal section was measured by using image analysis software (NIH, image ver.1.60) as a GCL region positive for cresyl biolet.
  • the volume of GCL was calculated as the volume of GCL in the left hemisphere between bre gma—1.4 mm and 2.6 mm (Cavalieri technique) 0
  • the number of BrdU positive cells in GCLV is 4
  • the number was calculated by multiplying the number of BrdU positive cells in one hippocampal section by 10. This value was defined as the number of BrdU positive cells per hippocampal dentate gyrus (Yoshimura et al., J. Clin. Invest., 112, 1202-1210, 2003).
  • S D male S PF rats (6 weeks old at the start of the experiment) purchased from Japan SLC Co., Ltd. were bred under the same conditions as the mice of Example 2. Rats were subjected to experiments after preliminary breeding for at least 5 days after purchase.
  • BrdU (manufactured by Sigma) for labeling neural stem cells was dissolved in PBS containing 0.014N HC1 at a concentration of 10 mg / mL. BrdU was administered intraperitoneally 3 times (4 hour intervals) at a dose of 5 Omg / kg per dose.
  • Donepezil used the same sample as in Example 2.
  • Donepezil was dissolved in distilled water for injection to 0.4 mg / ml (2 mg / kg group) or 0.1 mgmg (0.5 mg / kg group) and stored frozen until administration.
  • Donepezil was administered orally at 5 ml / kg body weight at doses of 0.5 and 2 mg / kg 4 hours after the last dose of BrdU. Thereafter, it was orally administered at the same dose once a day for 28 days at night.
  • the animals in the vehicle control group were orally administered with distilled water for injection at the same dose.
  • Brain tissue immunostaining was performed in the same manner as in Example 2.
  • acetylcholine receptor (muscarinic M2 receptor) in BrdU positive cells of the hippocampal dentate gyrus was examined. The same method as in Examples 2 and 3 was used until the preparation of brain slices. BrdU staining for primary antibody Mouse anti-BrdU IgG (Becton Dickinson, 200 times) was performed using RRX-labeled goat anti-mouse IgG (Vector, 200 times) as a secondary antibody.
  • muscarinic M2 receptor The detection of muscarinic M2 receptor is as follows: Usagi anti-muscular phosphorus M2 receptor IgG as primary antibody (ALOMONE Labs, 300 times), Piotin-labeled goat anti-usagi IgG as secondary antibody (Vector, 200 times) + cy2 -Performed using labeled streptavidin (Jackson, 200X).
  • Example 5 Increase in intracellular calcium concentration of rat fetal neural progenitor cells by stimulation with acetylcholine receptor
  • the cerebrum was isolated from a fetus obtained from a pregnant female SD rat (Japan SLC, Inc.) at 14.5 days of gestation. Cells were isolated by pipetting the tissue in cold L-15 medium. These cells were treated with human basic fibroblast growth factor (bFGF) 20 ng / ml in serum-free D-MEM / F-12 medium (previously supplemented with B-27, N2 (both from Invitrogen) and gentamycine). Suspension culture was performed in the presence of ml. Rat neural progenitor cells are known to form neurospheres in this medium. After 5 to 7 days, this neurosphere was collected, and rat neural progenitor cells were separated by pipetting and then subcultured using the above medium.
  • bFGF human basic fibroblast growth factor
  • Neural progenitor cells were isolated from the Neurosphere collected the day before the experiment and suspended in the above medium without bFGF. After counting the number of cells, 50,000 cells were suspended in the above medium lOO ⁇ u L and dispensed into a 96-well flat bottom culture plate. The intracellular Ca ++ concentration was measured using a commercially available kit (Calcium Kit-Fluo-3, Dojindo Laboratories, Inc.) according to the attached manual. Some tools were supplemented with a fat mouth pin (mus force phosphorus receptor antagonist) to 25 urQol / L and incubated at 37 ° C for 30 minutes in advance.
  • a fat mouth pin mus force phosphorus receptor antagonist
  • acetylcholine agonist acetylcholine or carbachol
  • the change in intracellular Ca ++ concentration depends on the fluorescence intensity of Fluo-3
  • measurement was performed at 1 second intervals using a fluorescence image measuring device (FDSS6000, Hamamatsu Photonics) (excitation filter 480nm, fluorescence filter 520-560mn).
  • the intracellular Ca ++ concentration of the rat neural progenitor cell preparation increased by stimulation with acetylcholine (25; u niol / L) and carbachol (25; u mol / L).
  • the effects of both drugs were completely antagonized by the pretreatment with Attoguchi pin, indicating that this response is mediated by the Mus force phosphorus receptor.
  • Example 6 Detection of acetylcholine receptor on rat fetal neural progenitor cells
  • Rat neural progenitor cells prepared in the same manner as in Example 5 were suspended at 200,000 cells / mL in the above medium containing no bFGF.
  • pressurized BrdU (Sigma) at a final 10 ⁇ mol / L, were incubated for 4 hours at 37 ° C, 5% C0 2 below.
  • This procedure labels neural progenitor cells that are replicating DNA present in the cell preparation.
  • the cultured cells were collected, washed, suspended in the same medium, and dispensed 200,000 pieces in a 24-well culture plate equipped with a cover glass (pre-coated with poly-L-ornithine and fibronectin). After culturing for a while, the cells were fixed with 4% paraformaldehyde.
  • the cells fixed above were treated with 0.3% Triton X-100 and then washed with PBS. Each preparation was treated with 2 N hydrochloric acid at 37 ° (:, 30 minutes, then washed twice with folate buffer. Primary antibody diluted with PBS containing 10% goat serum (GS-PBS) The muscarinic M2 receptor IgG (ALOMONE Labs, 200-fold) was left at 4 ° C. Washed with PBS containing 0.1% Triton X-100 (T-PBS) and diluted with GS-PBS.
  • the secondary antibody Alexa488-labeled goat anti-usagi IgG, Molecular Probes, 5000x
  • BrdU incorporated into the cells was treated with Alexa546-labeled anti-BrdU antibody (molecular
  • the cells were stained using a probe (250 times), and the stained cell samples were observed using a fluorescence microscope (Carl Zeiss, model Axiovert200M).
  • a nerve regeneration promoter containing a compound having a cholinesterase (ChE) inhibitory action, a pharmacologically acceptable salt thereof, or a solvate thereof as an active ingredient and a screening method thereof are provided.
  • the compound obtained by the nerve regeneration-promoting agent and the screening method thereof of the present invention is useful as a new therapeutic agent for diseases in which the hippocampal nerve function is impaired.

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Abstract

コリンエステラーゼ阻害作用を有する化合物、その薬理学的に許容できる塩、又はそれらの溶媒和物を含有する、神経再生促進剤。

Description

明 細 書 神経再生促進剤 技術分野
本発明は、 コリンエステラーゼ阻害作用を有する化合物を含有する神経再生促 進剤及びそのスクリ一ユング方法に関する。 背景技術
コリンエステラーゼとは、 生体内に広く分布し、 神経伝達物質であるァセチル コリンなどのコリンエステル類を加水分解する酵素の総称であり、 当該酵素活性 は、 フィゾスチグミン (10-5mol/L) で阻害される。 コリンエステラーゼの種類 には、 神経組織、 赤血球、 筋肉などに存在するアセチルコリンを特異的に分解す る真性 （true) コリンエステラーゼ、 及び血清、 肝臓、 藤臓などに存在するコリ ンエステルのほ力 種々のエステルも分解する偽性 （pseudo) コリンエステラー ゼの二種類が知られている。 前者は、 アセチルコリンエステラーゼ （EC3.1.1.7) と称され、 アセチルコリンを他のコリンエステルより速やかに加水分解し、 かつ 基質阻害を受ける性質を有する。 一方、 後者はアセチルコリン以外の多くのコリ ンエステルや、 コリンを含まないエステル類をも加水分解する性質を持つ。
コリンエステラーゼ阻害剤は、 コリンエステラーゼによる生体内のァセチルコ リンの加水分解を抑制し、 シナプス間隙のアセチルコリンを増加させ、 ァセチル コリン伝達を増加させる作用を有する。 特に、 アセチルコリンエステラーゼ阻害 剤である塩酸ドネぺジルは、 脳内におけるアセチルコリンの量を増加し、 ァルツ ハイマー型老年性痴呆の治療薬として広く用いられている （日本国特許第 2 5 7 8 4 7 5号公報）。
ところで、海馬は記憶の形成，維持に重要な役割を果たす脳の部位である（Eric Ε,. Kandel, The Molecular Biology of Memory Storage: A Dialogue Between
Genes and Synapses, Science, 294： 1030-1038, 2001)。 最近、 成体海馬内の神経 回路の一部である歯状回において、 神経幹細胞 （神経細胞のもとになる細胞） が 存在し、 神経細胞の再生 （Neurogenesis) が生涯にわたり維持されていることが 分かってきた （Fi'ed H. Gage, Mammalian Neural Stem Cells, Science, 287： 1433-1438, 2000、 Art ro Alvarez-Buylla, Bettina Seri and Fiona Doetsch, Identification of neural ste n cells in the adult vertebrate brain, Brain Research Bulletin, 57： 751-758, 2002) 0 し力 し、 その神経再生を調節する標的分 子は十分に解明されていない。
ァセチルコリン神経系は歯状回に投射しており、 記憶の形成 ·維持に重要な役 割を果たしている （Michelle L. Gilmor, Scott E. Counts, Ronald G. Wiley, and Allan I. Levey, Coordinate Expression of the Vesicular Acetylcholine Transporter and Choline Acetyltransferase Following Septohippocampal Pathway Lesions, J Neurochem. 71： 2411-2420, 1998)。 このァセチノレコリン神 経系を破壊すると、 歯状回の神経再生が減少することが、 米国神経科学会で報告 されている （ C. M. Cooper-Kulm, J. Winkler, H. Kuhn, ALTERED NUEROGENESIS AFTER CHOLINERGIC FOREBRAIN LESION IN THE ADULT RAT. Soc. Neurosci. Abstr., Program No.348. 9, 2003)。 しかしながら、 歯状回に投射しているァセチルコリン神経系を賦括化し、 歯状回の神経再生を促 進するような薬剤 （神経系の再生促進剤） は報告されていない。
ところで、 「社会不安障害」 とは人前に出た時などに強い緊張や不安、恐怖など を感じて社会生活に支障をきたす病状である。 最近の研究では人が一生のうちに 社会不安障害にかかる確率はほぼ 10%であると言われており、 この確率は日本、 欧米で差は無い。 この様に社会不安障害はうつと並んで最もポピュラーな精神疾 患の 1つである。
社会不安障害は全般性不安障害 (generalized anxiety), パニック障害 (panic disorder), 心的外傷後ス トレス障害 (post-traumatic stress disorder, PTSD)、 社 会恐怖（social phobia) 、 恐怖症 （ specific phobia ) 、 強迫性障害
(obsessive-compulsive disorder)等に分類される。 社会不安障害の症状は各障害 ごとに異なる力、比較的共通して見られる症状としては以下のものが挙げられる。 即ち、 非現実的で過度な長期に亘る不安、 情動不安、 神経過敏、 睡眠障害、 過度 の警戒感、 自律性緊張、 嫌悪感、 恐怖、 反復する強迫観念あるいは強迫行為等で ある。
社会不安障害の薬物療法には古くからアルコール、バルビツール酸、ァヘン剤、 β ·プロッカー及びべンゾジァゼピン系マイナートランキライザーが用いられて きた。 この内べンゾジァゼピンは最も特異性が高く、 種々の不安障害に有効であ るため広く使われてきた。この薬剤は脳内の抑制性伝達物質である γ -ァミノ酪酸 (GABA) の活性を上げることが知られている。 これにカロえ、 1980年代からはセ 口 トニン特異的再取り込み阻害剤 （SSRI) が不安障害の治療に用いられるように なった。 SSRI はべンゾジァゼピンで見られる習憒性がないため現在広く普及し ている。
社会不安障害の病因は現在でも不明であるが、 遺伝的素因及び環境的因子がそ の発症に複合的に関与する事が示唆されている。 近年の動物実験あるいは臨床的 な検討から、 ストレスあるいは心的トラウマによって海馬における神経再生が低 下することがその一因である可能性が指摘されている。 例えば、 心的外傷後スト レス障害患者では海馬の容量が健常人に比べて減少することが報告されており ( J. Douglas Bremner, et al., MRI-BASED MEASUREMENT OF
HIPPO CAMPAL VOLUME IN POSTTRAUMATIC STRESS DISORDER. Am.
J. Psychiatry 152： 973-981, 1995)、 この一因として上記に挙げた神経再生反応 の低下が示唆されている （J. Douglas Bremner, NEUROIMAGING STUDIES
IN POST-TRAUMATIC STRESS DISORDER. Curr. Psychiatry Rep. 4:
254-263, 2002.) 0
社会不安障害の治療薬である SSRIの 1つパロキセチン （paroxetine) の投与 により PTSD患者の海馬容積が増加したという報告がある（J. Douglas Bremner, NEUROIMAGING STUDIES IN POST- TRAUMATIC STRESS DISORDER.
Curr. Psychiatry Rep. 4: 254-263, 2002.) 0 また、 動物実験の結果から SSRIが 海馬における神経再生を促進する事が示されている （Jessica E. Malberg, et al.,
CHRONIC ANTIDEPRESSANT TREATMENT INCREASES NEUROGENESIS IN ADULT RAT HIPPOCAMPUS. J. Neurosci. 20： 9104-9110, 2000) 0 よって、 SSRIは PTSD患者の海馬における神経再生を促進 する作用を介して治療効果を示している可能性がある。 発明の開示
本発明は、 神経再生を促進する薬剤の提供を目的とする。
本発明者は、 これまでの知見から、 歯状回に投射しているアセチルコリン神経 系を賦括するコリンエステラーゼ阻害剤は、 歯状回の神経再生を促進するという 仮説を構築し、 以下のように検討を行った。 まず、 神経再生の促進効果を客観的 に、 かつ簡便に評価するために、 さらには、 神経再生促進剤を効率的に見出すた めに、 神経幹細胞を含む非ヒト哺乳動物を用いた新規スクリーニング方法を構築 した。 本発明のスクリーニング方法は、 5-bi'omo-2'-deoxyui'idine (BrdU) を祌 経幹細胞の檩識マーカーとして用い、 神経再生を免疫組織化学的に検出すること を可能にするものであり、 神経再生促進剤を正確にスクリーユングするのに適し ている。
本発明者は、 本発明のスクリーニング方法を用いて、 鋭意検討を行った結果、 コリンエステラーゼ阻害剤が、 歯状回に存在する神経幹細胞から再生された細胞 の保持効果を有することを明らかにし、 本発明を完成するに至った。 すなわち、 本発明は以下のとおりである。
( 1 ) コリンエステラーゼ阻害作用を有する化合物、 その薬理学的に許容できる 塩、 又はそれらの溶媒和物を含有する、 神経再生促進剤。
上記コリンエステラーゼ阻害作用を有する化合物としては、例えば下記一般式 で表される環状アミン誘導体が挙げられる。
I ~~ \ 〔式中、
Jは （a) 置換若しくは無置換の次に示す基；（1)フエニル基、 （2)ピリジ ル基、 （3)ビラジル基、 （4)キノリル基、 （5)シクロへキシル基、 （6)キノキサリ ル基又は (7)フリル基、
(b) フユニル基が置換されていてもよい次の群から選択された基から誘 導される一価又は二価の基；（1)ィンダニル、 （2)ィンダノニル、 （3)ィンデニ ル、 (4)インデノニル、 (5)インダンジォニル、 (6)テトラロニノレ、 (7)ベンズス ベロニル、 （8)インダノリル、 （9)式
Figure imgf000006_0001
(c) 環状アミ ド化合物から誘導される一価の基、
(d) 低級アルキル基、 又は
(e) 式 Ri— CH=CH_ (式中、 R1は水素原子又は低級アルコキシ カルボ二ル基を意味する）
で示される基を意味する。
Bは式 -（CH)n - で示される基、 式 - C- (CH)n— で示される基、 式一 N- (CH)n—
(式中、 R3は水素原子、 低級アルキル基、 ァシル基、 低級アルキルスルホ ニル基、 置換されてもよいフエニル基又はベンジル基を意味する） で示され る基、 0
I!
式— C- N- (CH)n—(式中、 R4は水素原子、 低級アルキル基又はフヱニル基
R4 R2
を意味する） で示される基、 式一 CH=CH- (CH)n—で示される基、
R2
0 0
II II
式一 0- C- 0- (CH)n - で示される基、 式 _0- C-NH- (CH)n -で示される基、
R2 2
0
il
式 - NH- C- (CH)n-で示される基、 式一 CH2-C0- NH- (CH)n- で示される基、
R2 R2
0H
式—（CH2) 2 - CO- NH - (CH)n一で示される基、 式一 CH- (CH)n一で示される基
R2 R2
{以上の式中、 nは 0又は 1〜10の整数を意味する。 R2は
水素原子又はメチル基を意味する。 }、 式 = (CH— CH = CH) b- (式中、 bは 1〜3の整数を意味する） で示される基、 式 =CH_ (CH2) c- (式 中、 cは 0又は 1〜9の整数を意味する） で示される基、 式 = (CH-CH) d= (式中、 dは 0又は 1〜5の整数を意味する） で示される基、
0 0 0H
II II I
式一 C- CH = CH- CH2—で示される基、 式— C- CH2-CH-CH2—で示される基、
CH3 0
1 II
式一 GH-C - NH- CH2— で示される基、 式— CH=CH- C-NH- (CH2)2—
II
0 で示される基、 式 _NH—で示される基、 式一〇一で示される基、 式一 S— で示される基、 ジアルキルアミノアルキルカルボニル基又は低級アルコキシ カルボ二ル基を意味する。
τは窒素原子又は炭素原子を意味する。
Qは窒素原子、 炭素原子又は式 で示される基を意味する。
Figure imgf000008_0001
Kは水素原子、 置換若しくは無置換のフユ二ル基、 フエニル基が置換さ れてもよぃァリールアルキル基、 フェニル基が置換されてもよいシンナミル 基、 低級アルキル基、 ピリジルメチル基、 シクロアルキルアルキル基、 ァダ マンタンメチル基、 フリルメチル基、 置換されてもよいシクロアルキル基、 低級アルコキシカルポ二ル基又はァシル基を意味する。
qは 1〜 3の整数を意味する。 式中、 は単結合若しくは二重結合を意味する。 〕 上記式において、 Jは、置換若しくは無置換の (1)フエニル基、（2)ピリジル基、 (3)ビラジル基、 （4)キノリル基、 （5)シクロへキシル基、 （6)キノキサリル基及び (7) フリル基からなる群から選択された一^ 3の基であることが好ましい。 また、 Jは 環状アミ ド化合物から誘導される一価の基であってもよい。
さらに、 本発明の神経再生促進剤において、 コリンエステラーゼ阻害作用を有 する化合物としては、 例えば下記一般式で表される環状アミン誘導体が挙げられ る。
Figure imgf000008_0002
〔式中、
J iはフヱニル基が置換されていてもよい次の群から選択された基から誘 導される一価又は二価の基；（1)ィンダニル、 （2)ィンダノニル、 （3)ィンデニ ル、 （4)ィンデノニル、 （5)ィンダンジォニル、 （6)テトラロニル、 （7)ベンズス ベロニル、 （8)インダノリル、 （9)式 CO- CH—で示される基 を意味する。
Figure imgf000009_0001
0 R3
II I
Bは式一（CH)n— で示される基、 式 C- (CH)n— で示される基、 式一 N- (CH)n—
2 R2 2
(式中、 R3は水素原子、 低級アルキル基、 ァシル基、 低級アルキルスルホ ニル基、 置換されてもよいフエニル基又はベンジル基を意味する） で示され る基、
0
II
式一 C- N- (CH)n—（式中、 1 ^は水素原子、 低級アルキル基又はフヱニル基
R4 R2
を意味する） で示される基、 式—CH = CH- (CH)n—で示される基、
R2
0 0
II II
式— 0- C- 0-(CH)n— で示される基、 式— 0- C- NH-(CH)n—で示される基、
R2 R2
0
I！
式— NH- C- (CH)n—で示される基、 式 _CH2- CO- NH- (CH)n— で示される基、
R2 R2
0H
式一（CH2) 2-C0-NH-(CH)n—で示される基、 式— CH- (CH)n一で示される基
R2 R2
{以上の式中、 nは 0又は 1〜10の整数を意味する。 は
水素原子又はメチル基を意味する。）、 式 = (CH-CH = CH) b- (式中、 bは 1〜3の整数を意味する） で示される基、 式 =CH— (CH2) c- (式 中、 cは 0又は 1〜9の整数を意味する） で示される基、 式 = ( C H - C H) d= (式中、 dは 0又は 1〜5の整数を意味する） で示される基、
0 0 0H
II I! I
式— C- CH = CH-CH2—で示される基、 式一 C-CH2- CH- CH2—で示される基、
CH3 0
1 II
式一 CH-C-NH-CH2 - で示される基、 式— CH = CH- C- NH- (CH2) 2—
0 で示される基、 式一 N H _で示される基、 式一 O—で示される基、 式— S— で示される基、 ジアルキルアミノアルキルカルボニル基又は低級アルコキシ カルボ二ル基を意味する。
Tは窒素原子又は炭素原子を意味する。
Qは窒素原子、 炭素原子又は式 ^N→0 で示される基を意味する。
Kは水素原子、 置換若しくは無置換のフ： ニル基、 フヱ-ル基が置換され てもよぃァリールアルキル基、フェニル基が置換されてもよいシンナミル基、 低級アルキル基、 ピリジルメチル基、 シク口アルキルアルキル基、 ァダマン タンメチル基、 フリルメチル基、 置換されてもよいシクロアルキル基、 低級 アルコキシカルボニル基又はァシル基を意味する。
qは 1〜3の整数を意味する。 式中、 rr^は単結合若しくは二重結合を意味する。 特に、 Bが式
— (CH)n - 〔式中、 nは 0又は 1〜10の整数を意味する。 R2は
R2 水素原子又はメチル基を意味する。〕 で示される基、 式— CH=CH— (CH) „ R2- (式中、 nは 0又は 1〜10の整数を意味し、 R2は水素原子又はメチル基 を意味する） で示される基、 式- (CH~CH=CH) b— （式中、 bは 1〜3の 整数を意味する） で示される基、 式 =CH— （CH2) c- (式中、 cは 0又は 1 〜 9の整数を意味する） で示される基又は式 = (CH-CH) d= (式中、 dは 0 又は 1〜 5の整数を意味する） で示される基であることが好ましい。
さらに、 本発明の神経再生促進剤において、 コリンエステラーゼ阻害作用を有 する化合物としては、 例えば下記一般式で表される環状ァミン誘導体を挙げるこ とができる。
Figure imgf000011_0001
〔式中、
J1はフエニル基が置換されていてもよい次の群から選択された基から誘 導される一価又は二価の基；（1)インダニル、 （2)インダノニル、 （3)インデニ ル、 （4)インデノニル、 (5)ィンダンジォニル、 (6)テトラロニル、 (7)ベンズス ベロニル、 （8)インダノリル、 （9)式
で示される基. を意味する。
Figure imgf000011_0002
B1は式—（CH)n—〔式中、 nは 0又は 1〜10の整数を意味する。 R2は
I
R2 水素原子又はメチル基を意味する。〕で示される基、式一 CH=CH_ (CH) nR2- (式中、 nは 0又は 1〜10の整数を意味し、 R2は水素原子又はメ チル基を意味する） で示される基、 式 = (CH— CH=CH) b- (式中、 b は:！〜 3の整数を意味する） で示される基、 式 =CH— (CH2) c- (式中、 cは 0又は 1〜9の整数を意味する） で示される基又は式 = (CH-CH) d = (式中、 dは 0又は 1〜 5の整数を意味する） で示される基、
Kは水素原子、 置換若しくは無置換のフユニル基、 フエニル基が置換され てもよぃァリールアルキル基、フェ -ル基が置換されてもよいシンナミル基、 低級アルキル基、 ピリジルメチル基、 シクロアルキルアルキル基、 ァダマン タンメチル基、 フリルメチル基、 置換されてもよいシクロアルキル基、 低級 アルコキシカルボ二ル基又はァシル基を意味する。〕
Kとしては、 例えば置換若しくは無置換のァリールアルキル基又はフエニル基 を挙げることができる。
また、 J 1は、 インダノエルから誘導される一価の基及び二価の基、 インデニ ル並びにィンダンジォニルからなる群から選択される一つの基であってもよく、 J 1が置換基として炭素数 1〜 6の低級アルキル基又は炭素数 1〜 6の低級アル コキシ基を有してもよいィンダノニル基であってもよい。
さらに、 本発明の神経再生促進剤において、 環状アミン誘導体としては、 例え ば、 1一ベンジル一 4一 （（5， 6—ジメ トキシー 1一インダノン） 一 2—ィル） メチルビペリジン、 1—ベンジノレ一 4一 （（5， 6—ジメ トキシー 1—ィンダノン） —2—イリデニル） メチノレピペリジン、 1一ペンジノレー 4一 （（5—メ トキシー 1 一インダノン） 一 2_ィル） メチルピペリジン、 1一べンジノレ一4— ((5， 6 - メチレンジォキシ一 1一インダノン） 一 2—ィル） メチルビペリジン、 1 _ (m 一二トロベンジル） 一 4一 （（5， 6—ジメ トキシ一 1—インダノン） 一 2—ィル） メチルビペリジン、 1ーシクロへキシルメチルー 4— ((5, 6—ジメ トキシ一 1 ンダノン） 一2—ィル） メチルビペリジン、 1— (m—フルォロベンジル） — 4一（（5, 6—ジメ トキシ一 1ーィンダノン）一 2—ィル）メチノレビペリジン、 1一ベンジル一 4一 (3 - ((5, 6—ジメ トキシ一 1—インダノン） 一 2—ィル） プロピル） ピぺリジン、 1 _ベンジルー 4一 （（5—イソプロポキシ一 6—メ トキ シ一 1ーィンダノン）一 2—ィル）メチノレビペリジン、 1—ベンジル一 4一（（5,
6—ジメ トキシー 1一インダノン） 一2—イリデュル） プロぺ-ルビペリジン、 及び 1一べンジル _4ー （（5, 6—ジメ トキシ一 1, 3—インダンジオン）一 2 一ィル） プロぺニルビペリジンからなる群から選ばれる少なくとも 1つが挙げら れる。 特に、 環状アミン誘導体は、 1一べンジノレ一 4一 （（5 , 6—ジメ トキシー 1一インダノン） 一 2—ィル） メチルピペリジンが好ましい。 .
さらに、 本発明の神経再生促進剤において、 コリンエステラーゼ阻害作用を有 する化合物は、 1一べンジルー 4― ( ( 5， 6—ジメ トキシ一 1—インダノン） 一 2—ィル） メチルビペリジン ·塩酸塩であることが好ましく、 ガランタミン、 タ クリン、 フィゾスチグミン又はリバスチグミンであってもよい。
( 2 ) 被験物質を神経幹細胞、 神経幹細胞を含む組織又は非ヒ ト哺乳動物に投与 し、 候補物質の存在下及び非存在下における神経再生の表現型の変化を検出又は 測定することを特徴とする、 神経再生を促進する物質のスクリーニング方法。 ここで、 候補物質としては、 コリンエステラーゼ阻害作用を有する化合物、 そ の薬理学的に許容できる塩、 又はそれらの溶媒和物が挙げられる。 コリンエステ ラーゼ阻害作用を有する化合物は、 ァセチルコリンエステラーゼ阻害作用を有す る化合物、 その薬理学的に許容できる塩、 又はそれらの溶媒和物であることが好 ましい。
本発明のスクリーニング方法において、 神経再生の表現型変化は、 神経幹細胞 に由来する細胞の増殖能、 細胞の分化能、 細胞の形状、 細胞の運動能、 細胞の移 動能及び移動調節能、 細胞の成熟度、 機能性タンパク質の発現度、 樹状突起の形 状、 軸索の形状、 シナプスの形状、 シナプスの形成能、 細胞の生存、 細胞の保持 並びに細胞死の抑制からなる群から選択される少なくとも一つを指標とすること ができる。
( 3 ) 上記コリンエステラーゼ阻害作用を有する化合物、 その薬理学的に許容で きる塩、 又はそれらの溶媒和物の有効量を患者に投与することを特徴とする、 神 経再生促進方法。
図面の簡単な説明
図 1は、 海馬歯状回の顆粒細胞層 （granule cell layer) (G C L ) における
BrdU 陽性細胞を示した図である。 黒い点は、 BrdU に対する免疫反応陽性の核 を示す。 ドネぺジルを投与されたマウスでは BrdU陽性細胞数が、 媒体投与マゥ スに比べて増加していた。
図 2は、 海馬歯状回の G C Lに存在する BrdU陽性細胞上のァセチルコリン 受容体 （ムスカリン M2受容体） 発現 （白矢印） を示した図である。
図 3は、 ラット由来培養神経前駆細胞の細胞内カルシウムの上昇を示した図 である。 ァセチルコリンもしくはカルバコール等のコリン作働薬刺激により神経 前駆細胞の細胞内カルシウム濃度が上昇すること、 この作用がアト口ピン （ムス カリン受容体拮抗剤） で完全に阻害されることを示す。
図 4は、 ラット由来培養神経前駆細胞のァセチルコリン受容体 （ムスカリン M2受容体） 発現 （白矢印） を示した図である。 発明を実施するための最良の形態
以下に本発明の実施の形態について説明する。 以下の実施の形態は、 本発明を 説明するための例示であり、 本発明をこの実施の形態にのみ限定する趣旨ではな レ、。 本発明は、 その要旨を逸脱しない限り、 さまざまな形態で実施をすることが できる。
なお、 本明細書において引用した文献、 及び公開公報、 特許公報その他の特許 文献は、 参照として本明細書に組み込むものとする。
本発明は、 コリンエステラーゼ (ChE)阻害剤が、 アセチルコリンの分解を抑制 し、 シナプス間隙のアセチルコリンの濃度を高めることで、 神経幹細胞から再生 された細胞の数を保持するという機序を見出すことにより完成されたものである。 従って、 本発明は、 ァセチルコリンの分解を抑制してァセチルコリンの濃度を 高める作用を有する化合物、 すなわちコリンエステラーゼ阻害作用を有する化合 物、 その薬理学的に許容できる塩、 又はそれらの溶媒和物を有効成分とする神経 再生促進剤を提供するものであり、 さらにその薬剤のスクリーニング方法を提供 するものである。
1 . コリンエステラーゼ (ChE)阻害作用を有する化合物 本発明の神経再生促進剤は、 有効成分として ChE 阻害作用を有する化合物、 その薬理学的に許容できる塩、 又はそれらの溶媒和物を含有する。 本発明におけ る ChE阻害作用を有する化合物とは、 ChE阻害作用、すなわち ChEの活性を可 逆的に又は不可逆的に阻害する物質を意味する。本発明において、 ChEにはァセ チルコリンエステラーゼ (AChE) (EC3.1.1.7) ,ブチリルコリンエステラーゼなど が含まれる。 本発明の ChE 阻害作用を有する化合物の好ましい特徴としては、 ブチリルコリンエステラーゼに対してよりも AChE に対して高い選択性を有し ていること、 血液脳関門を通過する能力を有していること、 治療に際して必要と される用量においては重篤の副作用を生じさせることはないことなどを挙げるこ とができる。
本発明において神経再生促進剤として使用するための好ましい化合物には、
ChE, 特に AChE阻害作用を有する化合物であり、 当該化合物には以下に記述さ れるような ChE 阻害作用を有する化合物の薬理学的に許容できる塩、 それらの 溶媒和物、 それらのプロドラッグが含まれる。
( 1 ) コリンエステラーゼ阻害作用を有する化合物
本発明において、 ChE 阻害作用を有する化合物と しては、 ドネぺジル (donepezil) (ァリセプト （AEICEPT) (登録商標））、 ガランタミン （レミニー ノレ （Reminyl) (登録商標））、 タクリン （Tacrine) (コグネックス （Cognex) (登 録商標））、 リバスチグミン （ェクセロン （Exelon) (登録商標））、 ジフロシロン ( zifrosilone ) (米国特許第 5 6 9 3 6 6 8号明細書）、 フィゾスチグミン (physostigmine) (シナフ トン (Synapton) ) (Neurobiology of Aging 26 (2005) 939-946)、 ィピダクリン （ipidacrine) (米国特許第 4 5 5 0 1 1 3号明細書）、 キロスチグミン （quilostigmine)、 メ トリフォネート （Metrifonate) (プロメム (Promem) ) (米国特許第 4 9 5 0 6 5 8号明細書）、 ェプタスチグミン、 ベルナ クリン、 トルセリン （tolserine)、 シムセリン （cymserine) (米国特許第 6 4 1 0 7 4 7号明細書）、 メスチノン、 ィコぺジル （icopezil) (米国特許第 5 7 5 0 5 4 2号明細書）、 T A K - 1 4 7 (J.Med. Chem., 37(15), 2292-2299， 1994、 日本 国特許第 2 6 5 0 5 3 7号公報、米国特許第 5 2 7 3 9 7 4号明細書）、 フペルジ ン A (huperzine A) (Drugs Fut. ， 24, 647-663, 1999)、 スタコフィ リン ( stacofylline ) (米国特許第 4 5 9 9 3 3 8号明細書）、 チア トルセリ ン (thiatolserine)、 ネオスチグミン （Neostigmine)、 ェセロリン （eseroline) も しくはチアシムセリン （thiacymsei'ine) などが挙げられる。 また、 前記化合物 の誘導体又は前記化合物のプロドラッグであってもよい。あるいは、前記化合物、 前記誘導体又は前記プロドラッグの薬理学的に許容できる塩又はそれらの溶媒和 物なども CliE阻害作用を有する化合物の好ましい態様として含まれる。 さらに は、 ChE阻害作用を有する化合物には、 国際公開第 0 0 / 1 8 3 9 1号パンフレ ットに記載された ChE阻害作用を有する化合物などが挙げられる。
ガランタミン及ぴその誘導体は、 米国特許第 4 6 6 3 3 1 8号明細書、 国際公 開第 8 8 / 0 8 7 0 8号パンフレツ ト、 国際公開第 9 7 / 0 3 9 8 7号パンフレ ット、米国特許第 6 3 1 6 4 3 9号明細書、米国特許第 6 3 2 3 1 9 5号明細書、 米国特許第 6 3 2 3 1 9 6号明細書などに記載されている。 タクリン及びその誘 導体は、 米国特許第 4 6 3 1 2 8 6号明細書、 米国特許第 4 6 9 5 5 7 3号明細 書、 米国特許第 4 7 5 4 0 5 0号明細書、 国際公開第 8 8 / 0 2 2 5 6号パンフ レッ ト、 米国特許第 4 8 3 5 2 7 5号明細書、 米国特許第 4 8 3 9 3 6 4号明細 書、 米国特許第 4 9 9 9 4 3 0号明細書、 国際公開第 WO 9 7ノ2 1 6 8 1号パ ンフレッ トなどに記載されている。 フィゾスチグミン及びその誘導体は、 米国特 許第 5 0 7 7 2 8 9号明細書、 米国特許第 5 1 7 7 1 0 1号明細書、 米国特許 5 3 0 2 7 2 1号明細書、 特開平 5— 3 0 6 2 8 6号公報、 米国特許第 7 1 6 6 8 2 4号明細書、 欧州特許第 2 9 8 2 0 2号明細書、 国際公開第 9 8 / 2 7 0 9 6 号パンフレッ ト、 J. Pharm. Exp. Therap., 249 (1),194〜202, 1989などに記載さ れている。リバスチグミン及びその誘導体は、欧州特許第 1 9 3 9 2 6号明細書、 国際公開第 9 8 / 2 6 7 7 5号パンフレツト、 国際公開第 9 8 2 7 0 5 5号パ ンフレッ トなどに記載されている。
ここで、 「プロドラッグ」 とは、 バイオアべィラビリティ （bioavailability) の 改善や副作用の軽減等を目的として、 「薬剤の活性本体」 （プロドラッグに対応す る 「薬剤」 を意味する） を不活性な物質に化学修飾したものを意味し、 吸収後、 体内では活性本体へ代謝され、 作用を発現する薬剤のことである。 従って、 「プロ ドラッグ J という用語は、 対応する 「薬剤」 よりも固有活性 （intrinsic activity) は低いが、 生物学的な系に投与されると、 自発的な化学反応又は酵素触媒反応又 は代謝反応の結果、 その 「薬剤」 物質を生成する任意の化合物を指す。 当該プロ ドラッグとしては、 上記例示した化合物又は下記の一般式で表される化合物のァ ミノ基、 水酸基、 カルボキシル基などがァシル化、 アルキル化、 リン酸化、 ホウ 酸化、 炭酸化、 エステル化、 アミ ド化又はウレタン化された化合物などの種々の プロドラッグを例示することができる。 但し、 例示した群は包括的なものではな く、 典型的なものに過ぎず、 当業者は他の既知の各種プロドラッグを公知の方法 によつて上記例示した化合物又は下記一般式で示される化合物から調製すること ができる。 上記例示した化合物又は下記の一般式で表される化合物からなるプロ ドラッグは、 本発明の範囲内に含まれる。
( 2 ) 環状アミン誘導体
本発明において、 ChE阻害作用、 特に AChE阻害作用を有する化合物のさら に好適な例としては、 次の一般式 （I ) で表される環状アミン誘導体、 その薬理 学的に許容できる塩、又はそれらの溶媒和物が挙げられる。本発明において、 ChE 阻害作用を有する化合物は、好ましくは 1 _ベンジルー 4一 〔（5 , 6—ジメ トキ シー 1一インダノン） 一2—ィル〕 メチルビペリジン （ドネべジル） 及びその薬 理学的に許容できる塩並びにそれらの溶媒和物であり、 特に好ましくは 1一ベン ジル一4— 〔（ 5 , 6—ジメ トキシー 1—インダノン） _ 2—ィノレ〕 メチノレビペリ ジン .塩酸塩 （塩酸ドネぺジル）、 すなわちァリセブト （ARICEPT) (登録商標） である。 く一般式 （I ) について〉
一般式 （ I )
Figure imgf000018_0001
〔式中、 Jは以下のグループ （a ) 〜 （e ) に示される基を意味する。
( a ) 置換若しくは無置換の次に示す基；
(1)フ ニル基、
(2)ピリジル基、
(3)ビラジル基、
(4)キノリル基、
(5)シク口へキシル基、
(6)キノキサリル基又は
(7)フリル基、
( b ) フエ -ル基が置換されていてもょレ、次の群から選択された基から誘導さ れるー価又は二価の基；
(1)ィンダニル、
(2)ィンダノニル、
(3)ィンデニル、
(4)ィンデノニル、
(5)ィンダンジォエル、
(6)テ 1、ラロ二ノレ、
(7)ベンズスべロニノレ、
(8)インダノ リル、
(9)式
《 ~ C0- CH—で示される基、
CH3 (c) 環状アミ ド化合物から誘導される一価の基、
(d) 低級アルキル基、 又は
(e) 式 Ri— CH=CH— （式中、 R1は水素原子又は低級アルコキシカル ボニル基を意味する）
0 R3
II I
Bは式—（CH)n— で示される基、 式— C- (CH)n— で示される基、 式— N- (CH)n
R2 R2 2
(式中、 R3は水素原子、 低級アルキル基、 ァシル基、 低級アルキルスルホニル 基、 置換されてもよいフエニル基又はベンジル基を意味する） で示される基、
0
I！
式—C- N- (CH)n—（式中、 R4は水素原子、 低級アルキル基又はフヱニル基
I I
R4 2
を意味する） で示される基、 式一 CH=CH-(CH)n—で示される基、
I
R2
0 0
II II
式一 0- C- 0 (CH)n— で示される基、 式— 0- C- NH-(CH)n—で示される基、
R2 R2
0
II
式— NH- C- (CH)n—で示される基、 式—CH2- CO- NH- (CH)n— で示される基、
I I
R2 R2
0H
I
式一（CH2 ) 2 - CO- NH- (CH)n—で示される基、 式— CH- (CH)n—で示される基
R2 R2
{以上の式中、 nは 0又は 1〜10の整数を意味する。 R2は 水素原子又はメチル基を意味する。 }、 式 = (CH— CH = CH) b— （式中、 bは 1〜3の整数を意味する） で示される基、 式 =CH— (CH2) c- (式中、 cは 0又は 1〜9の整数を意味する） で示される基、 式 = (CH-CH) d= (式中、 dは 0又は 1〜5の整数を意味する） で示される基、
0 0 0H
II II I
式— C-CH= CH-CH2—で示される基、 式— C- CH2-CH-GH2—で示される基，
CH3 0
1 II
式一 CH-C- NH- CH2— で示される基、 式一 CH=CH-C- NH-(CH2)2—
II
0 で示される基、 式一 NH—で示される基、 式一〇一で示される基、 式一 S—で示 される基、 ジアルキルァミノアルキルカルボニル基又は低級アルコキシカルボ二 ル基を意味する。
Tは窒素原子又は炭素原子を意味する。
Qは窒素原子、 炭素原子又は式 〕N→0で示される基を意味する。
Kは水素原子、 置換若しくは無置換のフエ二ル基、 フエニル基が置換されても よいァリールアルキル基、 フエニル基が置換されてもよいシンナミル基、 低級ァ ノレキル基、 ピリジノレメチル基、 シクロアルキルアルキル基、 ァダマンタンメチル' 基、 フリルメチル基、 置換されてもよいシクロアルキル基、 低級アルコキシカル ボニル基又はァシル基を意味する。
qは 1〜3の整数を意味する。 式中、 =は単結合若しくは二重結合を意味する。 〕 本明細書において、 「低級アルキル基」 とは、炭素数 1〜6の直鎖もしくは分枝 状のアルキル基、例えばメチル基、ェチル基、 n—プロピル基、ィソプロピル基、 n—ブチル基、 ィソブチル基： s e c—ブチル基、 t e r t—ブチル基、 ペンチ ル基 （ァミル基）、 イソペンチル基、 ネオペンチル基、 t e r t—ペンチル基、 1 一メチルプチル基、 2 _メチルブチル基、 1 , 2—ジメチルプロピル基、 へキシ ノレ基、 イソへキシル基、 1—メチルペンチル基、 2—メチルペンチル基、 3—メ チルペンチル基、 1， 1ージメチルプチル基、 1 , 2—ジメチルブチル基、 2， 2—ジメチルブチル基、 1 , 3—ジメチルブチル基、 2， 3—ジメチルブチル基、 3， 3—ジメチルプチル基、 1一ェチルブチル基、 2 _ェチルブチル基、 1 , 1 , 2—トリメチルプロピル基、 1， 2 , 2 _トリメチルプロピル基、 1—ェチル一 1—メチルプロピル基、 1 _ェチル一 2—メチルプロピル基などを意味する。 こ れらのうち好ましい基としては、 メチル基、 ェチル基、 プロピル基、 イソプロピ ル基などを挙げることができ、最も好ましいものはメチル基である。 「低級アルキ ル基」 は、 本発明の化合物 （I ) における上記の定義において、 例えば】， K,
R3, R4の定義中に記載されている。
本明細書において、 「低級アルコキシ基」 とは、 メ トキシ基、 エトキシ基など、 上記の低級アルキル基に対応する低級アルコキシ基を意味する。
本明細書において、 「低級アルコキシカルボ二レ基」 とは、 メ トキシカルボニル 基、 エトキシカルボニル基、 イソプロポキシカルボニル基、 n—プロポキシカル ボニル基、 n—ブチロキシカルボニル基など、 前記低級アルコキシ基に対応する 低級アルコキシカルボ二ル基を意味する。
本明細書において、 「シクロアルキル基」 とは、炭素数 4〜1 0の環状のアルキ ル基であり、 例えば、 限定するわけではないが、 シクロブチル基、 シクロペンチ ル基、 シクロへキシル基等を挙げることができる。
< Jについて〉
Jにおける（a )グループ「置換もしくは無置換の次に示す基；（1)フヱニル基、
(2)ピリジル基、 （3)ビラジル基、 （4)キノリル基、 （5)シクロへキシル基、 （6)キノキ サリル基又は (7)フリル基」 という定義において、 置換基としては、
メチル基、 ェチル基、 n—プロピル基、 イソプロピル基、 n—プチル基、 イソ ブチル基、 t e i- t—プチル基などの炭素数 1〜 6の低級アルキル基； メ トキシ基、 エトキシ基など上記の低級アルキル基に対応する低級アルコキシ 基；
二トロ基；
塩素、 臭素、 フッ素などのハロゲン；
カルボキシル基；
メ トキシカルボニル基、ェトキシカルボニル基、ィソプロポキシカルボニル基、 n—プロポキシカルボニル基、 n—プチロキシカルボニル基など、 上記の低級ァ ノレコキシ基に対応する低級アルコキシカルボニル基；
アミノ基；
モノ低級アルキルァミノ基；
ジ低級アルキルアミノ基；
カノレノ モイル基；
ァセチルァミノ基、 プロピオニルァミノ基、 ブチリルァミノ基、 イソプチリル アミノ基、 ノ レリルァミノ基、 ビバロイルァミノ基など、 炭素数 1〜6の脂肪族 飽和モノカルボン酸から誘導されるァシルァミノ基；
シク口へキシノレォキシカルボ二ノレ基などのシクロアノレキノレオキシカルボ二ノレ 基；
メチルァミノカルボニル基、 ェチルァミノカルボニル基などの低級アルキルァ ミノ力ノレボニル基；
メチルカルボニルォキシ基、 ェチルカルボニルォキシ基、 n—プロピノレカノレポ ニルォキシ基など前記に定義した低級アルキル基に対応する低級アルキルカルボ ニルォキシ基；
トリフルォロメチル基などに代表されるハロゲン化低級アルキル基； 水酸基；
ホルミル基；
エトキシメチル基、 メ トキシメチル基、 メ トキシェチル基などの低級アルコキ シ低級アルキル基 などを挙げることができる。上記の置換基の説明において、「低級アルキル基」、 「低級アルコキシ基」とは、前記の定義から派生する基をすベて含むものとする。
( a ) グループの (1；)〜 (7)の基は、 同一又は異なる 1〜 3個の上記の置換基で置換 されていてもよい。
さらにフエ二ル¾の場合は、 次の場合も置換されたフエニル基に含まれるもの とする。 すなわち、
Figure imgf000023_0001
基、 式— 0-C - で示される基、 式一 0— で示される基、 式—CH2- NH- C -で示 される基、 式一 CH2- 0— で示される基、 式一 CH2- S02— で示される基、 式
0
个
-CH—で示される基又は式 - CH2- S— で示される基を意味する。
I
0H
Eは炭素原子又は窒素原子を意味する。
- D はメチル基、 ェチル基、 n—プロピル基、 イソプロピル基、 n—プチル基、 ィソブチル基、 t e r t—プチル基などの炭素数 1〜 6の低級アルキル基； メ トキシ基、 エトキシ基など上記の低級アルキル基に対応する低級アルコキシ 基；
二トロ基；
±盒素、 臭素、 フッ素などのハロゲン；
カルボキシル基；
メ トキシカルボニル基、ェトキシカルボニル基、ィソプロポキシカルボニル基、 n—プロポキシカルボニル基、 n一プチロキシカルボニル基など、 上記の低級ァ ルコキシ基に対応する低級アルコキシカルボニル基；
アミノ基； モノ低級アルキルァミノ基；
ジ低級アルキルアミノ基；
力ルバモイル基；
ァセチルァミノ基、 プロピオニルァミノ基、 ブチリルァミノ基、 イソプチリル アミノ基、 バレリルアミノ基、 ビバロイルァミノ基など、 炭素数 1〜6の脂肪族 飽和モノカルボン酸から誘導されるァシルァミノ基；
シク口へキシノレオキシカノレボニル基などのシクロアノレキルォキシカルボニル 基；
メチルァミノカルボニル基、 ェチルァミノカルボニル基などの低級アルキルァ ミノカノレボニノレ基；
メチノレカルボニノレオキシ基、 ェチルカルボ-ルォキシ基、 n—プロピルカルボ ニルォキシ基など前記に定義した低級アルキル基に対応する低級アルキルカルボ -ルォキシ基；
トリフルォロメチル基などに代表されるハロゲン化低級アルキル基； 水酸基；
ホルミル基；
エトキシメチル基、 メ トキシメチル基、 メ トキシェチル基などの低級アルコキ シ低級アルキル基
などを挙げることができる。上記の置換基の説明において、「低級アルキル基」、 「低級アルコキシ基」とは、前記の定義から派生する基をすベて含むものとする。）。 これらのうち、 フエニル基に好ましい置換基としては、 低級アルキル基、 低級 アルコキシ基、 ニトロ基、 ハロゲン化低級アルキル基、 低級アルコキシカルボ二 ル基、 ホルミル基、 水酸基、 低級アルコキシ低級アルキル基、 ハロゲン、 ベンゾ ィル基、 ベンジルスルホニル基などを挙げることができ、 置換基は同一又は相異 なって 2つ以上でもよレヽ。
ピリジル基の置換基に好ましい基としては、 低級アルキル基、 アミノ基、 ハロ ゲン原子などを挙げることができる。
ビラジル基の置換基に好ましい基としては、 低級アルコキシカルボ-ル基、 力 ルポキシル基、 了シルァミノ基、 力ルバモイル基、 シク口アルキルォキシカルボ ニル基などを挙げることができる。
また、 Jとしてのピリジル基は、 2—ピリジル基、 3—ピリジル基又は 4ーピ リジル基が望ましく、 ビラジル基は 2—ビラジル基が望ましく、 キノリル基は 2 —キノリル基又は 3—キノリル基が望ましく、 キノキサリル基は 2 _キノキサリ ル基又は 3—キノキサリル基が望ましく、 フリル基は 2—フリル基が望ましレ、。
Jの定義において、 （b ) グループに記載されている（1)〜(9)から誘導される一 価又は二価の基について、 その代表例を示せば以下のとおりである。
ィンダニノレ
ィンダノ二ノレ
Figure imgf000026_0001
ィンデニル
ィンデノニル
ィンダンシォニノレ
アトフロニル
べンズスべロニノレ
Figure imgf000026_0002
Figure imgf000027_0001
インダノリデニル
Figure imgf000027_0002
上記一連の式において、 tは 0又は 1〜4の整数を意味し、 フエ-ル基が 0又 は 1〜 4個の同一又は相異なる Sで示した基で置換されることを示す。 Sは同一 又は相異なる前記した J ( a ) グループの定義における置換基のうち 1つ又は水 素原子を意味するが、好ましくは水素原子（無置換)、低級アルキル基又は低級ァ ルコキシ基をあげることができる。 さらに、 フエニル環の隣りあう炭素間でメチ レンジォキシ基、 エチレンジォキシ基などのアルキレンジォキシ基で置換されて いてもよい。
これらのうち、 好ましい場合は、 無置換若しくはメトキシ基、 イソプロポキシ 基が 1〜 3個置換されている場合、 メチレンジォキシ基が置換されている場合で あり、 最も好ましい場合は、 無置換若しくはメトキシ基が 1〜 3個置換されてい る場合である。
なお、 上記のインダノリデニルは J ( b ) の定義におけるフエ-ル基が置換さ れていてもよい二価の基の例である。 すなわち J ( b ) の (2)のインダノニルから 誘導される代表的な二価の基である。
Jの定義において、 （c )グループの環状アミド化合物から誘導される一価の基 とは、 例えばキナゾロン、 テトラハイド口イソキノリン一オン、 テトラノ、イド口 ベンゾジァゼピン一オン、 へキサハイ ドロベンツァゾシン一オンなどを挙げるこ とができるが、 構造式中に環状アミ ドが存在すればよく、 これらのみに限定され ない。
環状アミ ドには、 単環もしくは縮合へテロ環から誘導される環状アミ ドがあり うるが、 縮合へテロ環としては、 フヱニル環との縮合へテロ環が好ましい。 この 場合、 フエ二ル環は炭素数 1〜6の低級アルキル基、 好ましくはメチル基、 炭素 数 1〜6の低級アルコキシ基、 好ましくはメ トキシ基あるいはハロゲン原子によ つて置換されていてもよい。
好ましい例を挙げれば次の通りである。
8Z
Figure imgf000029_0001
Figure imgf000029_0002
C9ZT0/S00Zdf/X3d 10ひ 00/900Z OAV
Figure imgf000030_0001
Figure imgf000030_0002
上記の式中で、 式 （ i)， ( 1) における Yは水素原子又は低級アルキル基を意 味し、 式 （k) における Vは水素原子又は低級アルコキシ基、 式 （m)， (n) に おける Wi, W2は水素原子、 低級アルキル基、 低級アルコキシ基、 W3は水素原子 又は低級アルキル基を意味する。 式 （j ) における Uは、 水素原子、 低級アルキ ル基、 又は低級アルコキシ基を意味する。
なお、 式 （j )， （ 1 ) において、 右側の環は 7員環であり、 式 （k) において 右側の環は 8員環である。
Jの定義において、 （d)グループ「低級アルキル基」は、前記した通りである。 Jの上記の定義のうち好ましいものは、 （a) グループに含まれる基、 （b) グ ループに含まれる基、 （c) グループに含まれる基であり、 最も好ましいものは、 (b) グループに含まれる、 フエニル環が置換されてもよいインダノン （インダ ノニル） から誘導される一価の基、 （c) グループの環状アミ ド化合物から誘導さ れるー価の基である。
く Bについて〉
Bの定義において、 式 - CH)n— で示される基は、
R2
R2が水素原子である場合は式一 （CH2) n—で表され、 さらにアルキレン鎖の いずれかの炭素原子に 1つ又はそれ以上のメチル基が結合していてもよいことを 意味する。 この場合、 好ましくは nは 1〜3である。
B において、 「ジアルキルアミノアルキルカルボニル基」 は、 例えば、 N，N-ジ メチルァミノアルキルカルボニル基、 N，N-ジェチルァミノアルキルカルボ-ル基 Ν,Ν-ジィソプロピルァミノアルキルカルボニル基、 Ν-メチル -Ν-ェチルアミノア ノレキルカルボ二ル基を挙げることができる。
また、 Βの一連の基において、 基内にアミ ド基を有する場合も好ましい基の一 つである。
さらに好ましい基としては、 式一 CH=CH— (CH) nR2— （式中、 nは 0 又は 1〜10の整数を意味し、 R 2は水素原子又はメチル基を意味する） で示さ れる基、 式 = (CH— CH=CH) b- (式中、 bは:！〜 3の整数を意味する） で 示される基、 式 =CH_ (CH2) c- (式中、 cは 0又は 1〜9の整数を意味す る） で示される基、 式 = (CH-CH) d= (式中、 dは 0又は 1〜5の整数を意 味する） で示される基、 式一 NH—で示される基、 式一〇一で示される基又は式 —S—で示される基をあげることができる。
<f, Q、 qについて〉
Figure imgf000031_0001
Q=.N)で表されるピペリジンの場合である。
<K、 結合について >
Κの定義における「置換又は無置換のフエニル基」、「置換もしくは無置換の（フ ェニル基が置換されてもよい） ァリールアルキル基」、 「フエニル基が置換されて もよいシンナミル基」、 「置換されてもよいシクロアルキル基」 において、 置換基 は前記の Jの定義において （a ) グループの (1)〜(7)において定義されたものと同 一のものである。 好ましくは、 無置換であるか、 又は、 ニトロ基、 メチルなどの 低級アルキル基、 もしくはフッ素などのハロゲンで置換されてもよい。
ァリールアルキル基とは、 フユニル環が上記の置換基で置換されるか、 無置換 のべンジル基、 フエネチル基などを意味する。
ピリジルメチル基とは具体的には、 2—ピリジルメチル基、 3—ピリジノレメチ ル基、 4—ピリジルメチル基などを挙げることができる。
Kについては、 フエニル基が置換されてもよいァリールアルキル基、 置換若し くは無置換のフエ二ル基、 フエニル基が置換されてもよいシンナミル基、 置換さ れてもよぃシクロアルキル基が最も好ましレ、。
好ましいァリールアルキル基は、 具体的には例えばべンジル基、 フエネチル基 などをいい、 これらはフエニル基が炭素数 1〜6の低級アルコキシ基、 炭素数 1 〜 6の低級アルキル基、 水酸基などで置換されていてもよい。
™は単結合もしくは二重結合を意味する。 二重結合である場合の例をあげれば、 上記で述べたフュニル環が置換されても よいィンダノンから誘導される二価の基の場合、 すなわちィンダノリデニル基で ある場合をあげることができる。 く化合物群 （A) について >
これらの定義を総合して特に好ましい化合物群をあげれば次の一般式で表され る化合物群 （A) をあげることができる。
Figure imgf000032_0001
〔式中、 J 1はフエニル基が置換されていてもよい次の群から選択された基から 誘導される一価又は二価の基；
(1)ィンダニル、
(2)ィンダノニル、
(3)ィンデニル、
(4)ィンデノニル、
(5)ィンダンジォニル、
(6)テトラ口ニル、
(7)ベンズスベロ二ノレ、
(8)ィンダノリル、
次式 (9)
CO - CH—で示される基を意味する。
Figure imgf000033_0001
B， T， Q， q , K， 前記と同様の意味を有する。〕
で表される環状ァミン、 その薬理学的に許容できる塩、 又はそれらの溶媒和物。 上記の J 1の定義中、 最も好ましい基としては、 フエニル基が置換されていて もよいインダノニル基、 インダンジォニル基、 インダノリデニル基をあげること ができる。 また、 この場合、 フエ二ル基は置換されていないか、 同一又は相異な る水酸基、 ハロゲン、 低級アルコキシ基で置換されている場合か、 フエニル環の 隣り合う炭素間でアルキレンジォキシ基で置換されている場合が最も好ましい。 低級アルコキシ基とは、 炭素数 1 〜 6の例えばメ トキシ基、 エトキシ基、 イソプ 口ポキシ基、 n—プロポキシ基、 n—ブトキシ基などをいい、 1 〜 4置換をとり うる力 2置換の場合が好ましい。 最も好ましい場合はメ トキシ基が 2置換とな つている場合である。
<化合物群 （Β ) について >
(Α) 式に含まれる化合物の中でさらに好ましい化合物群としては、 次の τ般 式で表される化合物群 （B) をあげることができる
Figure imgf000034_0001
】：r rrT Q— K (B)
)ノ
〔式中、 J 1は前記と同様の意味を有する。
B1は式—（CH)n— （式中、 nは 0又は 1〜10の整数を意味 R2
する。 R2は
水素原子又はメチル基を意味する。） で示される基、 式， CH = CH— (CH) n R2— （式中、 nは 0又は 1〜10の整数を意味し、 R2は水素原子又はメチル基 を意味する） で示される基、 式 = (CH-CH=CH) b— (式中、 bは 1〜3の 整数を意味する） で示される基、 式 =CH— (CH2) c- (式中、 cは 0又は 1 〜 9の整数を意味する） で示される基又は式 == (CH-CH) d= (式中、. dは 0 又は 1〜5の整数を意味する） で示される基を意味する。 B1は、 好ましくは式 - (CH) „R2_ (式中、 nは 0又は 1〜10の整数を意味する。 R2は水素原 子又はメチル基を意味する） で示される基であり、 より好ましくは n= l、 R2 は水素原子の _CH2—、 又は ii = 3、 R2は水素原子の _CH2— CH2— CH2 一である。 また、 B1は、 好ましくは式一 CH-CH— (CH) nR2- (式中、 nは 0又は 1〜10の整数を意味し、 R2は水素原子又はメチル基を意味する） で示される基であり、 より好ましくは n = l、 R2は水素原子の一 CH=CH— CH2—である。
T， Q, q, K, は前記と同様の意味を有する。〕
<化合物群 （C) について〉
(Β) 式に含まれる化合物群の中でさらに好ましい化合物群としては、 次の をあげることができる。
Figure imgf000035_0001
(式中、 J i, B i, K , = は前記と同様の意味を有する。）
即ち、 式 一 T Q— で示される基が式 N - で示さ
I
、(CH2) , れる基、 即ちピぺリジンの場合である。 く化合物群 （D) について〉
( C) 式に含まれる化合物群の中でさらに好ましい化合物群としては、 次の一 般式で表される化合物群 （D ) をあげることができる。
Figure imgf000035_0002
(式中、 J 2はフエニル基が置換されてもよいインダノニルから誘導される一価 又は二価の基 （例えば、 インダノニル、 インダノリデニル基）、 インデニル及ぴィ ンダンジォニルから選択された基を意味する。 より好ましくは、 J 2が置換基と して炭素数 1〜 6の低級アルキル基又は炭素数 1〜 6の低級アルコキシ基を有し てもよいインダノニル基を意味する。
Kiは置換若しくは無置換のフ: rニル基、 置換されてもよいァリールアルキル 基、 置換されてもよいシンナミル基、 置換されてもよいシクロアルキル基を意味 する。
B i, --^ は前記と同様の意味を有する。） 本発明において、 ChE阻害作用を有する化合物としては、 好ましくは、 1—ベンジル一4— ((5' 6ージメ トキシー 1ーィンダノン) 一 2—ィル) メチ ノレピペリジン、
1一べンジルー 4一 ((5, 6—ジメ トキシー 1—インダノン）一 2—ィリデュル） メチルビペリジン、
1一ペンジノレー 4 - ((5—メ トキシ一 1—ィンダノン) 一 2—ィノレ） メチルピぺ リジン、
1一べンジルー 4一（（5, 6—メチレンジォキシ一 1—ィンダノン）一 2—ィル） メチルピペリジン、
1一 （πι—二トロベンジル） 一 4一 （（5， 6—ジメ トキシー 1一インダノン） 一 2一ィル) メチルピペリジン、
1—シクロへキシノレメチルー 4一 （（5'， 6—ジメ トキシ一 1—インダノン） 一 2 一ィル） メチノレビペリジン、
1— (m—フルォロベンジル） -4- ((5, 6—ジメ トキシー 1一インダノン） 一 2—ィル) メチルピペリジン、
1一べンジルー 4一 (3 - ((5, 6—ジメ トキシー 1ーィンダノン） 一 2—ィル） プロピル） ピぺリジン、
1一べンジノレ一4— ((5ーィソプロボキシー 6ーメ トキシ一 1—ィンダノン） 一 2—ィル） メチルピぺリジン、
1—ベンジル一 4 _ ((5, 6—ジメ トキシー 1—ィンダノン）一 2—イリデニル） プロぺニルビペリジン、 及び
1一ベンジル一 4_ ((5， 6—ジメ トキシ一 1, 3_インダンジオン） 一2—ィ ノレ） プロぺニルビペリジンであり、 より好ましくは、 1一ベンジル一 4 _ ((5,
6—ジメ トキシ一 1一インダノン） 一 2—ィル） メチルビペリジンである。
(3) 製造方法
本発明において用いる ChE阻害作用を有する化合物、 その薬理学的に許容で きる塩、 又はそれらの溶媒和物は、 公知の方法で製造することができ、 前記一般 式 （I ) で表される環状アミン誘導体 （例えば、 塩酸ドネぺジル） は、 その代表 的な例として、特開平 1— 791 5 1号公報、日本国特許 2578475号公報、 日本国特許 2733203号公報、 日本国特許 3078244号公報又は米国特 許第 4895841号公報などに開示されている方法により容易に製造すること ができる。 また、 塩酸ドネぺジルは、 細粒剤などの製剤としても入手できる。 ガランタミン及びその誘導体は、 米国特許第 466331 8号明細書、 国際公 開第 88Z08708号パンフレット、 国際公開第 97/0398 7号パンフレ ット、米国特許第 63 16439号明細書、米国特許第 63231 95号明細書、 米国特許第 6323196号明細書などに開示されている方法により容易に製造 することができる。
タクリン及びその誘導体は、 米国特許第 4631 286号明細書、 米国特許第 4695573号明細書、 米国特許第 4754050号明細書、 国際公開第 88 /02256号パンフレツト、 米国特許第 4835275号明細書、 米国特許第 4839364号明細書、 米国特許第 4999430号明細書、 国際公開第 WO 97/2 1 681号パンフレツトなどに開示されている方法により容易に製造す ることができる。
フィゾスチグミン及びその誘導体は、 米国特許第 5077289号明細書、 米 国特許第 5 1 77101号明細書、 米国特許 5302721号明細書、 特開平 5 - 306 286号公報、 米国特許第 71.66824号明細書、 欧州特許第 298 202号明細書、 国際公開第 98/27096号パンフレツト、 J. Pharm. Exp. Therap., 249 (1),194〜202, 1989などに開示されている方法により容易に製造す ることができる。
リバスチグミン及びその誘導体は、 欧州特許第 1 93926号明細書、 国際公 開第 98/26775号パンフレツト、 国際公開第 98/27055号パンフレ ットなどに開示されている方法により容易に製造することができる。
これらの化合物のうち商業上入手可能なものは、 化学メーカー等から容易に入 手することができる。
本発明において、 薬理学的に許容できる塩とは、 例えば塩酸塩、 硫酸塩、 臭化 水素酸塩、 燐酸塩などの無機酸塩、 蟻酸塩、 酢酸塩、 トリフルォロ酢酸塩、 マレ イン酸塩、 酒石酸塩、 メタンスルホン酸塩、 ベンゼンスルホン酸塩、 トルエンス ルホン酸塩などの有機酸塩を挙げることができる。
また、 置換基の選択によっては、 例えばナトリウム塩、 カリウム塩などのアル カリ金属塩、 カルシウム塩、 マグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、 トリ メチルァミン塩、 トリェチルァミン塩、 ピリジン塩、 ピコリン塩、 ジシクロへキ シルァミン塩、 N, Ν'—ジベンジルエチレンジァミン塩などの有機ァミン塩、 アンモニゥム塩などを形成する場合もある。
本発明の神経再生促進剤の有効成分である ChE 阻害作用を有する化合物、 又 はその薬理学的に許容できる塩 （例えば、 塩酸ドネぺジル） は、 無水物であって もよく、 水和物などの溶媒和物を形成していてもよい。 本発明において、 溶媒和 物とは薬理学的に許容できる溶媒和物が好ましい。 薬理学的に許容できる溶媒和 物は、 水和物、 非水和物のいずれであってもよいが、 水和物が好ましい。 溶媒は 水、 アルコール (例えば、 メタノール、 エタノール、 n—プロパノール）、 ジメチ ルホルムァミ ド、ジメチルスルホキシド（DMSO)などを使用することができる。 なお、本発明において上記化合物は、置換基の種類によっては不斉炭素を有し、 光学異性体が存在しうるが、 これらは本発明の範囲に属することはいうまでもな い。 また、 ドネぺジルなど、 上記化合物には結晶多型が存在することもあるがこ れに限定されず、 いずれかの結晶形が単一であってもよいし、 結晶形混合物であ つてもよく、 これらは本発明の範囲に属する。
具体的な例を一つ述べれば、 Jがインダノン骨格を有する場合、 不斉炭素を有 するので幾何異性体、 光学異性体、 ジァステレオマーなどが存在しうるが、 何れ も本発明の範囲に含まれる。
2 . 神経再生促進剤
本発明において神経再生促進剤とは、 ヒ ト由来の幹細胞又はヒ ト以外の生物、 例えばゥシ、 サル、 トリ、 ネコ、 マウス、 ラット、 モルモッ ト、 ハムスター、 ブ タ、 ィヌ、 ゥサギなどの非ヒ ト哺乳動物由来の幹細胞 （例えば神経幹細胞、 胚性 幹細胞など） が神経前駆細胞に分化し、 機能的に成熟した神経細胞として神経回 路に組み込まれるまでの過程に作用し、 神経再生を促進する作用を有する薬剤を 意味する。 本発明において、 「神経再生」 とは、 神経幹細胞に対する自己複製促進 作用、 神経幹細胞に対する増殖促進作用、 神経幹細胞に対する神経前駆細胞への 分化促進作用、 神経前駆細胞に対する増殖促進作用、 神経前駆細胞に対する神経 細胞への成熟促進作用、 神経幹細胞又は神経前駆細胞に対する生存促進作用、 神 経幹細胞又は神経前駆細胞に対する細胞死抑制作用、 及び再生した神経細胞に対 するシナプス形成促進作用のうち、 少なくとも一つの作用機序による神経再生を 意味する。
前記 ChE 阻害作用を有する化合物、 その薬理学的に許容できる塩、 又はそれ らの溶媒和物は、 神経再生を促進する作用を有する。 また、 海馬の神経機能が障 害される疾患の治療薬の有効成分として有用である。
従って、 本発明は、 本発明の ChE 阻害作用を有する化合物、 その薬理学的に 許容できる塩、 又はそれらの溶媒和物の有効量を患者に投与することを特徴とす る神経再生促進方法も提供する。
本発明の神経再生促進剤は、 神経再生を促進するその作用により、 社会不安障 害の治療に用いることができる。
社会不安障害の病因は、 ストレスあるいは心的トラウマによって海馬における 神経再生が低下することがその一因である可能性が指商されている。 そして、 以 下の (i)〜(v)の事項は、 SSRIが PTSD患者の海馬における神経再生を促進する作 用を介して治療効果を示している可能性を示唆する。
(i) 心的外傷後ストレス障害 PTSD の患者では海馬の容量が減少することが報 告されている。 そして、 この海馬容量の減少が PTSD等、 社会不安障害発症の一 因となることが指摘されていること、
(ii) 社会不安障害の動物モデルでは海馬における神経再生が減少していること、 (iii) (ii)の動物実験の結果等から (i)の一因として海馬における神経再生の低下 が関与する可能性が指摘されていること、
(iv) 社会不安障害の治療に用いられる SSR paroxetine)の投与により PTSD 患者の海馬容積が増加することが報告されていること、 及び (v) SSRIは海馬の神経再生を促進する事が報告されていること
SSRI は神経再生促進作用を介して社会不安障害への治療効果を示していると すれば、 神経再生を促進する作用を有する薬剤は、 社会不安障害の治療薬となる 可能性があるといえる。 すなわち、 上記の (i)〜(v)の事項は、 本発明の神経再生促 進剤が PTSD等の社会不安障害の治療薬として有用であることを示すものである。 従って、 本発明の神経再生促進剤の適応症の 1つとして、 社会不安障害が適当で あり、 本発明の神経再生促進剤は社会不安障害の治療に用いることができる。
「治療」 とは、 一般的に、 所望の薬理学的効果及び/又は生理学的効果を得るこ とを意味する。 効果は、 疾病及び/又は症状を完全に又は部分的に防 JJする点では 予防的であり.、疾病及び/又は疾病に起因する悪影響の部分的又は完全な治癒とい う点では治療的である。 本明細書において 「治療」 とは、 患者哺乳動物、 特にヒ トの疾病の任意の治療を意味し、上記一般的治療の意味も包含する。「治療」には、 例えば以下の （a) 〜 （c) の事項を含む：
(a) 疾病又は症状の素因を持ちうるが、 まだ持っていると診断されていない患 者において、 疾病又は症状が起こることを予防すること ；
(b) 疾病症状を阻害する、 即ち、 その進行を阻止又は遅延すること ；
(c) 疾病症状を緩和すること、 即ち、 疾病又は症状の後退、 消失、 又は症状の進 行の逆転を引き起こすこと。
ChE 阻害作用を有する化合物もしくはその塩又はそれらの溶媒和物あるいは そのプロドラッグもしくはその塩又はそれらの溶媒和物は、 ヒ ト又は非ヒ ト哺乳 動物に、 種々の形態、 経口又は非経口 （例えば静脈注射、 筋肉注射、 皮下投与、 直腸投与、 経皮投与） のいずれかの投与経路で投与することができる。 ChE阻害 作用を有する化合物もしくはその塩又はそれらの溶媒和物あるいはそのプロドラ ッグもしくはその塩又はそれらの溶媒和物は、単独で用いることも可能である力 投与経路に応じて慣用される方法により医薬用担体を用いて適当な剤形に製剤化 することが可能である。
好ましい剤形としては、 例えば錠剤、 散剤、 細粒剤、 顆粒剤、 被覆錠剤、 カブ セル剤、 シロップ剤、 トローチ剤等による経口剤、 吸入剤、 坐剤、 注射剤 （点滴 剤を含む)、 軟膏剤、 点眼剤、 眼軟膏剤、 点鼻剤、 点耳剤、 貼付剤、 パップ剤、 口 ーション剤、 リポソーム剤等による非経口剤が挙げられる。
これらの製剤の製剤化に用いる担体には、例えば通常用いられる溶剤、賦形剤、 コーティング剤、 結合剤、 崩壊剤、 滑沢剤、 着色剤、 矯味矯臭剤や、 必要により 安定化剤、 乳化剤、 吸収促進剤、 界面活性剤、 pH 調整剤、 防腐剤、 抗酸化剤、 増量剤、 湿潤化剤、 表面活性化剤、 分散剤、 緩衝剤、 保存剤、 溶解補助剤、 懸濁 化剤、 粘稠剤、 無痛化剤、 等張化剤等を使用することができ、 一般に医薬品製剤 の原料として用いられる成分を配合して常法により製剤化することが可能である。 使用可能な無毒性のこれらの成分としては、 例えば大豆油、 牛脂、 合成グリセラ イド等の動植物油；例えば流動パラフィン、 スクヮラン、 固形パラフィン等の炭 化水素；例えばミリスチン酸オタチルドデシル、 ミリスチン酸ィソプロピル等の エステル油；例えばセトステアリルアルコール、 ベへニルアルコール等の高級ァ ルコール； シリ コン樹脂； シリコン油；例えばポリオキシエチレン脂肪酸エステ ノレ、 ソルビタン脂肪酸エステル、 グリセリン脂肪酸エステル、 ポリォキシェチレ ンソルビタン脂肪酸エステル、 ポリオキシエチレン硬化ひまし油、 ポリオキシェ チレンーポリォキシプロピレンプロックコポリマー等の界面活性剤；例えばヒ ド 口キシェチノレセノレロース、 ポリアクリル酸、 カルポキシビュルポリマー、 ポリエ チレンダリコール、ポリビュルピロリ ドン、メチルセルロース等の水溶性高分子； 例えばエタノール、 ィソプロパノール等の低級アルコール；例えばグリセリン、 プロピレングリコール、 ジプロピレングリコール、 ソルビトール、 ポリエチレン グリコール等の多価アルコール（ポリオール）；例えばグルコース、ショ糖等の糖； 例えば無水ケィ酸、 ケィ酸アルミニウムマグネシウム、 ケィ酸アルミニウム等の 無機粉体；塩化ナトリゥム、 リン酸ナトリゥムなどの無機塩；精製水等が挙げら れる。
賦形剤としては、 例えば乳糖、 果糖、 コーンスターチ、 白糖、 ブドウ糖、 マン 二トール、 ソルビット、 結晶セルロース、 二酸化ケイ素等が、 結合剤としては、 例えばポリビニルァノレコール、 ポリビエルエーテル、 メチルセルロース、 ェチル セノレロース、 アラビアゴム、 トラガント、 ゼラチン、 シェラック、 ヒ ドロキシプ 口ピノレメチノレセノレロース、 ヒ ドロキシプロピルセルロース、 ポリ ビニノレピロリ ド ン、 ポリプロピレングリコーノレ ' ポリオキシエチレン 'ブロックコポリマー、 メ ダルミン等が、 崩壊剤としては、 例えば澱粉、 寒天、 ゼラチン末、 結晶セルロー ス、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリ ゥム、 クェン酸カルシウム、 デキス トリン、 ぺクチン、 カルボキシメチルセルロース ' カルシウム等が、 滑沢剤としては、 例 えばステアリン酸マグネシゥム、 タルク、 ポリエチレンダリコール、 シリカ、 硬 化植物油等が、 着色剤としては医薬品に添加することが許可されているものが、 矯眛矯臭剤としては、 ココア末、 ハツ力脳、 芳香散、 ハツ力油、 竜脳、 桂皮末等 力 ぞれぞれ用いられる。 上記の成分は、 その塩又はその溶媒和物であってもよ い。
例えば経口製剤は、 C E阻害作用を有する化合物もしくはその塩又はそれらの 溶媒和物あるいはそのプロドラッグもしくはその塩又はそれらの溶媒和物に賦形 剤、 さらに必要に応じて例えば結合剤、 崩壊剤、 滑沢剤、 着色剤、 矯味矯臭剤等 を加えた後、 常法により例えば散剤、 細粒剤、 顆粒剤、 錠剤、 被覆錠剤、 カプセ ル剤等とする。
錠剤 ·顆粒剤の場合には、 カルナウバロゥ、 ヒ ドロキシプロピルメチルセル口 ース、 マクロゴーノレ、 ヒ ドロキシプロピノレメチノレフタレート、 セノレロースァセテ ートフタレート、 白糖、 酸化チタン、 ソルビタン脂肪酸エステル、 リン酸カルシ ゥムのようなコーティング剤を用い、 周知の方法でコーティングしてもよい。 シロップ剤製造に用いられる担体の具体例としては、 白糖、 ブドウ糖、 果糖の ような甘味剤、 アラビアゴム、 トラガント、 カルメロースナトリ ウム、 メチルセ ルロース、アルギン酸ナトリゥム、結晶セルロース、ビーガムのような懸濁化剤、 ソルビタン脂肪酸エステル、 ラウリル硫酸ナトリウム、 ポリ ソルベート 8 0のよ うな分散剤が挙げられる。 シロップ剤製造にあたっては、 必要に応じて矯味剤、 芳香剤、 保存剤、 溶解補助剤、 安定化剤等を添加することができる。 また、 用時 溶解又は懸濁するドライシ口ップの形であってもよい。
注射剤は、 通常、 例えば、 ChE阻害作用を有する化合物の塩を注射用蒸留水に 溶解して調製する力 必要に応じて溶解補助剤、緩衝剤、 p H調整剤、等張化剤、 無痛化剤、 保存剤、 安定化剤等を添加し、 常法により製剤化することができる。 注射剤の無菌化は、 フィルターによる濾過滅菌、 殺菌剤の配合などにより行えば よレ、。 また、注射剤は、用時調製の形態として製造することができる。すなわち、 凍結乾燥法などによって無菌の固体組成物とし、 使用前に無菌の注射用蒸留水又 は他の溶媒に溶解して使用することができる。
外用剤の場合は、 特に製法が限定されず、 常法により製造することができる。 使用する基剤原料としては、 医薬品、 医薬部外品、 化粧品等に通常使用される各 種原料を用いることが可能であり、 例えば動植物油、 鉱物油、 エステル油、 ヮッ クス類、 高級アルコール類、 脂肪酸類、 シリコン油、 界面活性剤、 リン脂質類、 アルコール類、 多価アルコール類、 水溶性高分子類、 粘土鉱物類、 精製水等の原 料が挙げられ、 必要に応じ、 pH調整剤、 抗酸化剤、 キレート剤、 防腐防黴剤、 着色料、 香料等を添加することができる。 吸入剤は、 吸入による投与のために、 ChE 阻害作用を有する化合物もしくはその塩又はそれらの溶媒和物あるいはそ のプロドラッグもしくはその塩又はそれらの溶媒和物は、 注入器、 P賁霧器もしく は加圧パック又はエア口ゾルスプレーを送達する他の都合のよい様式から送達す ることができる。 加圧パックは、 適当な噴射剤を含むことができる。 また、 吸入 による投与のために、 ChE阻害作用を有する化合物もしくはその塩又はそれらの 溶媒和物あるいはそのプロドラッグもしくはその塩又はそれらの溶媒和物は、 乾 燥粉末組成物の形又は液体スプレーの形態で投与することもできる。 貼布剤とし て経皮吸収により投与する場合には、 塩を形成しない、 いわゆるフリー体を選択 することが好ましい。 表皮への局所投与のために、 CliE阻害作用を有する化合物 は軟膏、 クリームもしくはローションとして、 又は経皮パッチのための活性成分 として製剤化することができる。 軟膏及びクリームは、 例えば、 水性又は油性基 剤に適当な増粘及び/又はゲル化剤を加えて製剤化することができる。 ローショ ンは水性又は油性基剤を用いて製剤化することができ、 また一般には 1つ又は複 数の乳化剤、 安定化剤、 分散剤、 懸濁化剤、 増粘剤、 及びノ又は着色剤を含むこ ともできる。 ChE阻害作用を有する化合物はイオン浸透療法によって投与するこ ともできる。 さらに、必要に応じて血流促進剤、殺菌剤、 消炎剤、細胞賦活剤、 ビタミン類、 アミノ酸、 保湿剤、 角質溶解剤等の成分を配合することもできる。 この時の有効 成分の担体に対する割合は、 1〜90重量％の間で変動され得る。
本発明の神経再生促進剤は、 通常、 活性成分として ChE 阻害作用を有する化 合物もしくはその塩又はそれらの溶媒和物あるいはそのプロドラッグもしくはそ の塩又はそれらの溶媒和物を 0.5重量％以上、好ましくは 10〜 70重量％の割 合で含有することができる。
ChE 阻害作用を有する化合物もしくはその塩又はそれらの溶媒和物あるいは そのプロドラッグもしくはその塩又はそれらの溶媒和物を前記治療に使用する場 合は、 少なくとも 90 %以上、 好ましくは 95 %以上、 より好ましくは 98 %以 上、 さらに好ましくは 99%以上に精製されたものを使用するのが好ましい。 経口投与における ChE 阻害作用を有する化合物もしくはその塩又はそれらの 溶媒和物あるいはそのプロドラッグもしくはその塩又はそれらの溶媒和物の投与 量は、 例えば投与経路、 疾患の種類、 症状の程度、 患者の年齢、 性別、 体重、 塩 の種類、 ^患の具体的な種類、 薬物動態及び毒物学的特徴などの薬理学的知見、 薬物送達系が用いられるかどうカ ならびに他の薬物の組合せの一部として投与 されるかどうかを含む様々な因子に従って選択されるため変動するが、 当業者で あれば適宜設定することができる。 例えば、 成人 （60 kg) 1人あたり、 約 0. 001〜： L O O Omg /日、 好ましくは約 0. 01〜 500 m g /日、 より好ま しくは約 0. 1〜30 Omg/日であり、 1回又は数回に分けて投与することが できる。 小児に投与される場合は、 用量は成人に投与される量よりも少ない可能 性がある。 実際に用いられる投与法は、 大幅に変動することもあり、 本明細書に 記載の好ましい投与法から逸脱してもよい。 例えば、 塩酸ドネぺジルの場合は、 成人 （体重 60 k g) あたり、 好ましくは約 0. 1〜 300 m g /日であり、 よ り好ましくは約 0. 1〜10 Omg/日であり、 さらに好ましくは約 1. 0〜5 0 m g Z日である。 塩酸ドネぺジルの好ましい態様において、 商品名ァリセプト 錠 （エーザィ株式会社） として市販されている 5 m g錠又は 10 m g錠の塩酸ド ネぺジル、 商品名ァリセブト細粒 （エーザィ株式会社） の塩酸ドネぺジルを投与 することができる。 例えば、 錠剤は 1日に 1回から約 4回で投与することができ る。 好ましい態様において、 1 日に 1回、 商品名ァリセブト錠 （エーザィ株式会 社） の 5mg錠又は 1 Omg錠を 1錠投与する。 当業者であれば、 塩酸ドネぺジ ルが小児に投与される場合は、 用量は成人に投与される量よりも少ない可能性が あり、 好ましい態様において、 小児には塩酸ドネぺジルを約 0. 5〜1 0mg/ 日、 好ましくは約 1. 0〜3mg/日で投与することができる。 また、 タクリン の場合は、 成人 （体重 6 0 k g) あたり、 約 0. ：！〜 3 00 m g /日であり、 好 ましくは約 40〜1 2 OmgZ日で、 リバスチグミンの場合は、 成人 （体重 6 0 k g) あたり、 約 0. 1〜 300 m g /日であり、 好ましくは約 3〜 1 2 m g / 日で、 ガランタミンの場合は、 成人 （体重 6 O k g) あたり、 約 0. 1〜300 m gノ日であり、好ましくは約 1 6〜 32 m g /日、フィゾスチグミンの場合は、 成人 （体重 6 0 k g) あたり、 約 0. ：!〜 300 m g Z日であり、 好ましくは約 0. 6〜24 mgZ日で投与することが好ましい。 それぞれ、小児に投与される 場合は、 用量は成人に投与される量よりも少ない可能性がある。
非経口投与において、 貼布剤の場合、 好ましい投与量としては、 成人 （60kg) 1人あたり、 約 5〜50mg /日であり、 さらに好ましくは約 1 0〜20mg/ 日である。 また、 注射剤の場合には、 生理食塩水又は市販の注射用蒸留水などの 薬理学的に許容できる担体中に 0. 1 μ g /m 1担体〜 1 0 m g /m 1担体の濃 度となるように溶解又は懸濁することにより製造することができる。 このように して製造された注射剤の投与量は、 処置を必要とする患者に対し、 成人 （60kg) 1人あたり、 約 0. 0 1〜5 Omg/日であり、 好ましくは約 0. 0 1〜5. 0 mgZ日であり、 さらに好ましくは約◦. ：!〜 1. Omg/日であり、 一日あた り 1〜3回に分けて投与することができる。 小児に投与される場合は、 用量は成 人に投与される量よりも少ない可能性がある。
3. 神経再生を促進する物質、 その薬理学的に許容できる塩、 又はそれらの溶媒 和物のスクリーユング方法
また、 本発明は、 神経再生を促進する物質、 その薬理学的に許容できる塩、 又 はそれらの溶媒和物のスクリーニング方法を提供するものである。
本発明のスクリーニング方法は、 その候補となる物質を、 神経幹細胞、 神経幹 細胞を含む組織又は神経幹細胞を含む非ヒ ト哺乳動物に投与して、 前記細胞に作 用させ、 前記候補物質の存在下及び非存在下における神経再生の表現型変化を検 出又は測定することを含むものである。
本発明のスクリーニング方法において、 候補物質は ChE (AChEを含む） 阻害 作用を有する物質、例えば前記 ChE阻害作用を有する化合物、抗 ChE抗体、 ChE に対する siRNA、 shRNAなどを含む。 当該物質は、 その塩又はそれらの溶媒和 物であってもよい。 ChE阻害作用を有する化合物は、 前記の記載を参照すること で製造、 入手することができる。 抗 ChE抗体は、 モノクローナル抗体、 ポリク ローナル抗体のいずれを使用することもでき'、 当業者であれば、 例えば ChE を 感作抗原として当該抗体を作製することができる。 ChE遺伝子に対する siRNA、 shRNAなどは、 ChE遺伝子の発現を抑制することのできる核酸であればよく、 当業者であれば siRNA 、 shRNAなどの配列を適宜設計し、製造することができ る（Elbashir, S.M., et. al" Genes Dev., 15, 188-200, 2001)。
神経幹細胞を調製する方法は、 microsphere法（Cindi M Morshead and Derek van der Kooy, Cur. Opin. Neurobiol., 14, 125-131, 2004) により行なうことがで きる。 神経幹細胞を含む組織を調製する方法は、 動物を深麻酔下に 4 %パラフォ ルムアルデヒ ド含有リン酸緩衝生理食塩水 （P B S ) を用いて経心臓的に灌流固 定し、 摘出した脳を滑走式ミクロ ト一ムにより 4 O ^ mの厚さで薄切することに より行うことができる （Yoshimuraら， PNAS, 98, 5874-5879, 2001、 Yoshimura ら, J. Clin. Invest., 112, 1202-1210, 2003)。 神経幹細胞を含む非ヒ ト哺乳動物 は、 例えばゥシ、 サル、 トリ、 ネコ、 マウス、 ラット、 モノレモット、 ハムスター、 ブタ、 ィヌ、 ゥサギなどが挙げられる。 前記細胞に候補化合物を投与する場合、 経口又は非経口的に行うことができる。
神経再生の表現型変化は、神経幹細胞に由来する細胞の増殖能、細胞の分化能、 細胞の形状、 細胞の運動能、 細胞の移動能及び移動調節能、 細胞の成熟度、 機能 性タンパク質の発現度、 樹状突起の形状、 軸索の形状、 シナプスの形状、 シナプ スの形成能、 細胞の生存、 細胞の保持又は細胞死の抑制の少なくとも一つを指標 とすることができる。 以下の場合には、 当該物質は神経再生を促進する作用を有 すると判断することができる。
(a) 神経幹細胞に由来する細胞の増殖能、 細胞の分化能、 細胞の運動能、 細胞の移 動能及び移動調節能、 細胞の成熟度、 機能性タンパク質の発現度、 又はシナプ スの形成能が、 被検物質の非存在下に比べて存在下において増大している場合
(b) 細胞の形状、 樹状突起の形状、 軸索の形状、 又はシナプスの形状が、 被検物質 の非存在下に比べて存在下で機能発現により適した状態になっている場合
(c) 細胞の生存、 細胞の保持、 又は細胞死の抑制の程度が、 被検物質の非存在下に 比べて存在下において増大している場合
神経幹細胞に由来する細胞の表現型の変化を検出又は測定するために、 例えば 神経幹細胞の細胞分裂時に取り込まれる標識物 （例えば、 BrdU、 レトロウィル スベクターなど） を標識マーカーとして用いることができる。 神経再生の表現型 変化は、 当該標識物を免疫染色法によって観察することで、 検出又は測定するこ とができる。 例えば、 BrdU存在下に被検物質を細胞に作用させたときの BrdU の取り込み量を、 神経再生を促進する物質のスクリーニング方法の指標とするこ とができる。 BrdUは、 1回あたり 0.：！〜 1000 mg/kgの濃度で、 0.5〜24時間お きに、:!〜 10回細胞に接触させることで、細胞に取り込ませることができる。 BrdU の取り込み量は、 BrdU に対する抗体を用いて検出すればよい （実施例 2， 3を 参照)。神経再生の表現型変化を検出又は測定する方法としては、上記神経幹細胞 の標識物と神経再生の表現型の指標との二重染色法などが挙げられる。
本発明は、 上記方法に使用するための神経再生を促進する作用を有する物質、 その薬理学的に許容できる塩、 又はそれらの溶媒和物をスクリーニングするため のスクリーニングキットも提供する。 本発明のスクリーニングキットには、 神経 再生の表現型変化を測定するために必要なものが含まれる。 神経再生の表現型変 化の測定時に使用される試薬類は、 下記の実施例 2、 3において使用したものが 好適に用いられる。 このほかに、 本発明のスクリーニングキットには、 キットの 取扱 明書、 チューブ、 フラスコなどが含まれていてもよい。 以下、 実施例により本発明を具体的に説明するが、 本実施例により本発明は限 定されるものではない。 実施例 1
塩酸ドネぺジルの製造
( a ) 1—ベンジルー 4一ピペリジンカルバルデヒ ドの合成
Figure imgf000048_0001
メ トキシメチレントリフエニルホスホニゥムクロライド 26. 0 gを無水エー テル 200m lに懸濁させ、 1. 6M n—プチルリチウムへキサン溶液を室温に て滴下した。 室温にて 30分間撹拌した後、 0。(：に冷却し、 1—ベンジルー 4一 ピぺリ ドン 14. 35 gの無水エーテル 30m l溶液を加えた。 室温にて 3時間 撹拌した後、 不溶物を濾別し、 濾液を減圧濃縮した。 得られた残渣をエーテルに 溶解し、 1 N塩酸にて抽出した。 さらに水酸化ナトリウム水溶液で p H 12とし た後、 塩化メチレンにて抽出した。 硫酸マグネシウムで乾燥後、 減圧濃縮し、 得 られた残渣をシリカゲルカラムにて精製し、 油状物質 5. 50 g (収率 33%) を得た。
次に、 得られた油状物質をメタノール 4 Om 1に溶解し、 1N塩酸 4 Om lを 加えた。 反応溶液を 3時間加熱還流した後、 減圧濃縮し、 残渣を水に溶解した。 その後、 溶解液を水酸化ナトリゥム水溶液で p H 12とし、 塩化メチレンにて抽 出した。 飽和食塩水で抽出液を洗浄後、 硫酸マグネシウムにて乾燥し、 減圧濃縮 して得られた残渣をシリカゲルカラムにて精製し、 1一ベンジル一 4ーピペリジ ンカルバルデヒ ド 2. 77 g (収率 54%) を油状物質として得た。 .
得られた化合物の構造を NMRで確認した。
'分子式； Ci3H17NO · — NMR (CDC 13) δ ；
1. 40〜2. 40 (7Η, m)ヽ 2. 78 (2H, d t)、 3. 45 (2H, s)、 7. 20 (5H, s)、 9. 51 ( 1 H， d)
(b) 1—ベンジル一 4一 〔（5, 6—ジメ トキシー 1一インダノン） 一 2—イリ デニル〕 メチルピぺリジン '塩酸塩の合成
Figure imgf000049_0001
この反応はアルゴン雰囲気下で行った。
無水 THF 10m 1中にジイソプロピルアミン 2. 05mlを加え、 さらに 0°Cにて 1. 6M n一ブチルリチウムへキサン溶液 9. 12m lを加えた。 0°C にて 10分撹拌した後、 一 78°Cまで冷却し、 5， 6—ジメ トキシ一 1—インダ ノン 2. 55 gの無水 THF 3 Om 1溶液とへキサメチルホスホルアミ ド 2. 3 1 m 1とを加えた。 一 78 °Cにて 15分撹拌した後、 （ a ) で得た 1—ベンジルー 4—ピぺリジン力ルバルデヒ ド 2. 70 gの無水 T H F 30ml溶液を加えた。 室温まで徐々に昇温し、 さらに室温にて 2時間撹拌した後、 1%塩化アンモニゥ ム水溶液を加えて、 有機層を分離した。 続いて、 水層を酢酸ェチルにて抽出し、 先に分離した有機層と合わせた後、 さらに飽和食塩水にて洗浄した。 溶液を硫酸 マグネシウムで乾燥後、 減圧濃縮し、 得られた残渣をシリカゲルカラム （塩化メ チレン：メタノ一ル= 500 : ：！〜 100 : 1) にて精製した。 溶出液を減圧濃 縮した後、 残渣を塩化メチレンに溶解し、 10%塩酸一酢酸ェチル溶液を加え、 さらに減圧濃縮して結晶を得た。 これを塩化メチレン一 I PEから再結晶化し、 次の物性を有する 1一べンジル _ 4一 〔（5, 6—ジメ トキシ一 1一インダノン） — 2—イリデニル〕 メチルピぺリジン'塩酸塩 3. 40 g (収率 62 %) を得た。 •融点 （°C) ； 237〜 238 (分解）
•元素分析値； C24H27N03 · HC 1として、 C H N理論値 （％) : 69. 64
6. 82 3. 38、 実測値 （％) ： 69. 51 6. 78 3. 30
( c) 1—ベンジルー 4—〔（5,, 6—ジメ トキシ一 1—ィンダノン） 一 2—ィル〕 メチルビペリジン '塩酸塩
Figure imgf000050_0001
(b) で得た 1一べンジルー 4— 〔（5, 6—ジメ トキシ一 1一インダノン） ― 2—イリデニル〕メチルピぺリジン 0.40 gを THF 16mlに溶解し、 10 % パラジウム一炭素 0. 04 gを加えた。 室温常圧にて 6時間水素添加した後、 触 媒を濾別し、濾液を減圧濃縮した。 この残渣をシリカゲルカラム（塩化メチレン： メタノール =50 ： 1) にて精製し、 溶出液を減圧濃縮した。 その後、 残渣を塩 化メチレンに溶解し、 10 %塩酸一酢酸ェチル溶液を加え、 さらに減圧濃縮して 結晶を得た。 これをエタノール一 I PEから再結晶化し、 次の物性を有する 1一 ベンジルー 4一 〔（5， 6—ジメ トキシ一1—インダノン） 一 2—ィル〕 メチルピ ペリジン .塩酸塩 （塩酸ドネぺジル） 0. 36 g (収率 82%) を得た。
•融点 （°C) ； 211〜 212 (分解）
•元素分析値； C24H29N03 · HC 1として C H N 理論値 （％) : 69. 30 7. 27 3. 37、 実測値 （％) ： 69. 33 7. 15 3. 22 実施例 2 マウス海馬歯状回の神経再生に対するドネぺジルによる促進効果
(1) 動物の飼育
動物飼育は 「実験動物の管理指針」 SOP No. GHZ— 3001に従って実 施した。 日本エスエルシー （株） より購入した C57BLZ6系雄性 SPFマウ ス （実験開始時 8週齢） を使用した。 温度 （23± 1°C)、 照明 （12時間、 7 ： 00〜19 ： 00) の管理された飼育室で 5日間以上の予備飼育の後に実験に供 した。 飼育中は固形資料 MF (オリエンタル酵母工業社製） 及び水 （水道水） を 自由摂取させた。
( 2 ) BrdU及ぴドネぺジルの投与 神経幹細胞を標識するための BrdU (Sigma社製） は、 5mg//mLの濃度で 0. 007N HC 1を含有するリン酸緩衝液 （PBS： Sigma社製） に溶解して 用いた （Yoshinmi'aら， PNAS, 98， 5874-5879, 2001、 Yosliimuraら， J. Clin. Invest., 112, 1202.1210, 2003)。 BrdUは、 1回あたり 50 m g k g (体重 1 0 gあたり BrdU溶液として 0. 1m l) の用量で、 3回 （ 4時間間隔） 腹腔内 に投与した。
媒体対照群及びドネぺジル投与群の 2群を設定した。 ドネぺジルは、 実施例 1 で得た塩酸ドネぺジルを使用した。 ドネぺジルは、 0. lmg/mLの濃度とな るように、 媒体として注射用蒸留水 （大塚製薬社製） に用事溶解して用いた。 ド ネぺジルは、 BrdUの最終投与から 4時間後に、 lmg/k g (体重 10 gあた り ドネぺジル溶液として 0. 1m l) の用量で、 経口投与された。 その後、 ドネ ぺジルは、 lmg k gの用量で、 夜間に 1日 1回の割合で 14日間経口投与さ れた。 また、 媒体対照群の動物には、 注射用蒸留水を経口投与した。
( 3 ) BrdUの免疫組織化学的検出
免疫組織 学的評価のために、 ドネぺジルの最終投与の翌日に、 動物をウレタ ン （Sigma社製） による深麻酔下で、 4%パラホルムアルデヒ ド含有 PBS溶液 を用いて、 経心臓的に灌流固定した。 摘出した脳は、 凍結下で滑走式ミクロト一 ム （Leica社製、 モデル SM2000R、 Nussloch) により 40 mの厚さで薄切し た （coronal section)。 薄切した脳組織は、 10セクションおきに 1つの wellに 集まるようにアジ化ナ小リゥム含有 PBS溶液中 （1 Owellプレート） に連続的 に採取した。
脳組織の免疫染色は、 浮遊法により行った （ Yoshimura ら， PNAS, 98, 5874-5879, 2001、 Yosliimuraら， J. Clin. Invest., 112, 1202-1210, 2003)。 BrdU の免疫組織化学的検出は、 パーォキシダーゼ法 （ABC システム、. Vector Laboratories Inc.製） を用いた （Yoshimuraら， PNAS, 98, 5874-5879, 2001、 Yoshimuraら， J. Clin. Invest., 112, 1202-1210， 2003)。 BrdUに対する一次抗 体は、 ラット抗 BrdU 抗体 (400倍希釈、 Accurate Chemical & Scientific
Corporation製）を用いた。二次抗体は、 ゥサギ抗ラット IgGピオチン化抗体（2 00倍希釈、 Vector Laboratories Inc.製） を用いた。
(4) BrdU陽性細胞数の定量
定量には、 1個体あたり 4枚の海馬セクション （セクションの間隔は 400 μ mごと、 b 1- e gma— 1. 4 mmから一 2. 6 mmの間で 4枚）を用いた。 Bi'dU 陽性細胞は、海馬歯状回の sub-granular zone (SGZ)及び顆粒細胞層（granule cell layer) (GCL) に存在するものをすベて計測した。 S G Zは、. G C Lの直 下部 （hylus側） 2 (細胞 2個分） の幅の領域として定義した。 GCLは、 クレシルバイオレツト染色に陽性の顆粒神経細胞層として定義した。 各海馬セク シヨンにおける GCLの面積は、クレシルバイオレツト陽性の GCL領域として、 画像解析ソフト （NIH製、 image ver.1.60) を用いて測定した。
GCLの体積 （GCLV) は、 b r e gma— 1. 4 mmから一 2. 6 mmの 間の左側脳半球における G C Lの体積として計算した （Cavalieri technique) 0 G C L V中の BrdU陽性細胞の数は、 4枚の海馬セクシヨン中の BrdU陽性細胞 数に、 10を乗じることにより算出した。 この値を海馬歯状回あたりの BrdU陽性 細胞数とした (Yoshimuraら、 J. Clin. Invest., 112, 1202-1210, 2003)。
(5) 統計学的解析
すべての定量的数値は、 平均値士標準誤差 （各群 11 =8) で表示した。 媒体対 照群と ドネぺジル群間の統計学的有意性については、 対応のない t検定により解 析し、有意水準は両側 5%とした。結果を表 1及び図 1に示す。表 1中 「*」 は、 p < 0. 05、 媒体対照群との比較を示す。
表 1
Figure imgf000052_0001
GCLの体積は、媒体対照群と ドネぺジル投与群との間で差はなかつた（表 1 )。 このことから、 今回の投与条件において、 ドネぺジルは、 海馬の神経細胞層の体 積には影響しないことが示された。 一方、 海馬あたりの Bi'dU 陽性細胞の数は、 ドネぺジル投与群の方が媒体対照群に比べて、統計学的に有意に多かった（表 1、 図 1)。 以上のことから、 ドネぺジルは、 歯状回に存在する神経幹細胞から再生さ れた細胞 （BrdU陽性細胞） の保持効果を有することが示された。 実施例 3 ラット海馬歯状回の神経再生に対するドネぺジルによる促進効果
(1) 動物の飼育
日本エスエルシー (株） より購入した S D系雄性 S P Fラット （実験開始時 6 週齢） を実施例 2のマウスと同様の条件で飼育した。 ラットは購入後 5日間以上 の予備飼育の後に実験に供した。
(2) Bi'dU及びドネぺジルの投与
神経幹細胞を標識するための BrdU (Sigma社製） は 1 0 m g /m Lの濃度で 0. 0 14N HC 1を含有する PBSに溶解して用いた。 BrdUは 1回あたり 5 Omg/k gの用量で、 3回 （ 4時間間隔） 腹腔内に投与した。
媒体対照群及びドネぺジル投与群（0. 5及ぴ 2 m g /k g )の 3群を設定した。 ドネぺジルは実施例 2と同じ標品を用いた。 ドネぺジルを 0. 4mg/m l (2 mg/k g群） あるいは 0. lmgZm l (0. 5mg/k g群） になるよう注射 用蒸留水に溶解し、 投与時まで冷凍保存した。 ドネぺジルは、 BrdU の最終投与 から 4時間後に 0. 5及び 2 m g /k gの用量で体重 1 k gあたり 5 m 1経口投与 した。その後は夜間に 1日 1回の割合で 28日間、同用量で経口投与した。また、 媒体対照群の動物には注射用蒸留水を同用量で経口投与した。
( 3 ) BrdUの免疫組織化学的検出
免疫組織化学的評価のために、 ドネぺジルの最終投与の翌日に、 動物をネンブ タールによる深麻酔下で、 4%パラホルムアルデヒ ド含有 PBS 溶液を用いて、 経心臓的に灌流固定した。 摘出した脳から実施例 2と同様に切片を作製し、 免疫 組織化学的検討に用いた。
脳組織の免疫染色は実施例 2と同様に行った。
(4) BrdU陽性細胞数の定量
定量には、 1個体あたり 4枚の海馬セクション （厚さ 40 111、 セクションの 間隔は 400 μηιごと、 b r e gma— 3. 6 mmから一 4. 8 mmの間で 4枚） を用いた。 BrdU 陽性細胞の訐数は、 実施例 2と同様に行った。 また、 各海馬セ クションにおける G C Lの体積及び各海馬歯状回あたりの BrdU陽性細胞総数も 実施例 2と同様に算出した。
(5) 統計学的解析
すべての定量的数値は、 平均値土標準誤差 （媒体対照群 n= 1 2、 ドネぺジル 投与群 n=ll) で表示した。 媒体対照群と各ドネぺジル群間の統計学的有意性に ついては、一元配置分散分析後 Dmmett型多重比較により解析し、有意水準は両 側 5 %とした。 結果を表 2に示す。 表 2中 「*」 は、 p< 0. 05、 媒体対照群 との比較を示す。
表 2
Figure imgf000054_0001
GCLの体積は、 媒体対照群と各ドネぺジル投与群との間で有意な差はなかつ た （表 2)。 このことから、 今回の投与条件において、 ドネぺジルはラット海馬の 神経細胞層の体積には影響しないことが示された。 一方、 海馬あたりの BrdU陽 性細胞の数は、 媒体対照群に比べて、 各ドネぺジル投与群で増加しており、 この 効果は統計学的に有意であった （表 2).。 以上のことからドネぺジルは、 ラット歯 状回に存在する神経幹細胞から再生された細胞 （BrdU陽性細胞） の保持効果を 有することが示された。 実施例 4 ラット海馬歯状回の新生神経におけるァセチルコリン受容体の発 現
実施例 3で得た媒体対照群の脳切片を用いて、 海馬歯状回の BrdU陽性細胞に おけるアセチルコリン受容体 （ムスカリン M2受容体） の発現を検討した。 脳切 片の作製までは実施例 2, 3と同様の方法で行った。 BrdU の染色は一次抗体に マウス抗 BrdU IgG (Becton Dickinson社、 200倍） を、 二次抗体に RRX標識 ャギ抗マウス IgG (Vector社、 200倍)を用いて行った。 ムスカリン M2受容体の 検出は、 一次抗体にゥサギ抗ムス力リン M2受容体 IgG (ALOMONE Labs社、 300倍）を、二次抗体にピオチン標識ャギ抗ゥサギ IgG (Vector社、 200倍） + cy2- 標識ストレプトァビジン （Jackson社、 200倍） を用いて行つた。
図 2に示すように、 海馬歯状回の GCLに存在する BrdU陽性細胞 （赤色の蛍 光） 上にムスカリン M2受容体 （緑色の蛍光） が発現することが確認された。 実施例 5 ァセチルコリン受容体刺激によるラット胎児由来神経前駆細胞の 細胞内カルシウム濃度の上昇
( 1 ) 神経前駆細胞の調製
妊娠 14.5 日の妊娠雌 SDラット （日本エスエルシー （株)） より得た胎児から 大脳を単離した。 冷 L-15培地中で組織をピぺッティングすることにより細胞を 分離した。 この細胞を無血清 D-MEM/F-12 培地 （事前に B-27, N2 (何れも invitrogen社)及び gentamycine を添加した） 中、 ヒ トベーシック線維芽細胞増 殖因子 (bFGF) 20 ng/ml存在下で浮遊培養した。 ラット神経前駆細胞はこの培地 中で Neurosphere を形成することが知られている。 5〜7 日後にこの Neurosphereを回収し、 ピベッティングによりラット神経前駆細胞を分離した後、 上記の培地を用いて継代した。
( 2 ) 細胞内カルシウム (Ca++)濃度の測定
実験前日に回収した Neurosphereから神経前駆細胞を分離し、 bFGFを含まな い上記培地中に懸濁した。 細胞数を計数後、 50，000個ずつを上記培地 lOO ^u Lに 懸濁して、 96穴平底培養プレート中に分注した。 細胞内 Ca++濃度の測定は市販 のキット （Calcium Kit-Fluo-3、 ㈱同仁化学研究所） を用い、 添付のマニュアル に従って測定した。いくつかのゥヱルにはァト口ピン （ムス力リン受容体拮抗剤） を 25 u rQol/Lになるよう添カ卩し、 事前に 37°Cで 30分培養した。 その後、 ァセチ ルコリン作働薬 （アセチルコリンあるいはカルバコール） を 25 IIIO1/Lになるよ うに添加した。 細胞内 Ca++濃度の変化は、 各ゥュルにおける Fluo-3の蛍光強度 の変化として蛍光イメージ測定装置 （FDSS6000、 浜松ホトニクス社） を用いて 1秒間隔で測定した （励起フィルタ 480nm、 蛍光フィルタ 520— 560mn)。
図 3に示すように、ァセチルコリン（25 ;u niol/L)及びカルバコール（25 ;u mol/L) 刺激によりラット神経前駆細胞標品の細胞内 Ca++濃度が上昇した。いずれの薬剤 の効果もアト口ピンの前処置により完全に拮抗されたことより、 この反応はムス 力リン受容体を介したものであることが示された。 実施例 6 ラット胎児由来神経前駆細胞上のァセチルコリン受容体の検出
( 1 ) ラット神経前駆細胞の BrdU標識
実施例 5と同様に調製したラット神経前駆細胞を bFGFを含まない上記培地中 に 200,000個/ mLで懸濁した。 ここに BrdU (シグマ社） を最終 10 μ mol/Lで加 え、 37°C、 5%C02下で 4時間培養した。 この操作により細胞標品中に存在する DNA複製中の神経前駆細胞が標識される。 培養後の細胞を回収、 洗浄した後、 同じ培地に懸濁し、 カバーグラス （ポリ- L- オル二チン、 フイブロネクチンでプ レコート済み） を装着した 24穴培養プレート中に 200,000個ずつ分注した。 一 晚培養した後、 細胞を 4%パラフオルムアルデヒ ドで固定した。
( 2 ) 免疫染色によるアセチルコリン受容体の検出。
上記で固定した細胞を 0.3%トライトン X-100で処理した後、 PBSで洗浄した。 各標品を 2 N塩酸で 37° (：、 30分処理した後、ホゥ酸緩衝液で 2回洗浄した。 10% ャギ血清を含む PBS (GS-PBS) で希釈した一次抗体 （ゥサギ抗ムスカリン M2 受容体 IgG (ALOMONE Labs社、 200倍） 存在下、 4°Cでー晚静置した。 0.1% トライ トン X-100 を含む PBS(T-PBS)で洗浄後、 GS-PBS で希釈した二次抗体 (Alexa488標識ャギ抗ゥサギ IgG、モレキュラープロ一ブ社、 5000倍）を加え、 室温で一時間静置した。 さらに、 細胞中に取り込まれた BrdUを Alexa546標識 抗 BrdU抗体 （モレキュラープローブ社、 250倍） を用いて染色した。 染色後の 細胞標品は蛍光顕微鏡 （カールツァイス社、 型式 Axiovert200M) を用いて観察 した。
観察の結果、 BrdU陽性 （赤色の蛍光） の増殖中ラット神経前駆細胞上にムス カリン M2 受容体 （緑色の蛍光） の発現が確認された （図 4 )。 したがって、 ラ ットの神経前駆細胞上に、 機能的なアセチルコリン受容体が発現していることが 明らかとなった。 産業上の利用の可能性
本発明により、 コリンエステラーゼ (ChE)阻害作用を有する化合物、 その薬理 学的に許容できる塩、 又はそれらの溶媒和物を有効成分とする神経再生促進剤及 びそのスクリーユング方法が提供される。 本発明の神経再生促進剤及びそのスク リ一二ング方法によって得られる化合物は、 海馬の神経機能が障害される疾患に 対する新たな治療薬として有用である。

Claims

請 求 の 範 囲
1.コリンエステラーゼ阻害作用を有する化合物、その薬理学的に許容できる塩、 又はそれらの溶媒和物を含有する、 神経再生促進剤。
2. コリンエステラーゼ阻害作用を有する化合物が、 下記一般式で表される環状 ァミン誘導体である、 請求項 1記載の神経再生促進剤。
Figure imgf000058_0001
〔式中、
Jは （a) 置換若しくは無置換の次に示す基；（1)フエ二ル基、 （2)ピリジ ル基、 （3)ビラジル基、 （4)キノリル基、 （5)シクロへキシル基、 （6)キノキサリ ル基又は (7)フリル基、
(b) フエニル基が置換されていてもよい次の群から選択された基から誘 導される一価又は二価の基；（1)ィンダニル、 （2)ィンダノニル、 （3)ィンデニ ル、 （4)インデノニル、 (5)ィンダンジォニル、 (6)テトラロニノレ、 (7)ベンズス ベロニル、 (8)ィンダノリル、 (9)式
Figure imgf000058_0002
(c) 環状アミ ド化合物から誘導される一価の基、
(d) 低級アルキル基、 又は
(e) 式 Ri— CH=CH_ (式中、 R1は水素原子又は低級アルコキシ, カルボ二ル基を意味する）
で示される基を意味する。 0 R3
II I
Bは式一（CH)n - で示される基、 式一 C- (CH)n一 で示される基、 式一 N-(CH)n—
R2 R2 2
(式中、 R3は水素原子、 低級アルキル基、 ァシル基、 低級アルキルスルホ ニル基、 置換されてもよいフエニル基又はベンジル基を意味する） で示され る基、
0
II
式一 C- N- (CH)n -(式中、 R4は水素原子、 低級アルキル基又はフ ニル基
R4 R2
を意味する） で示される基、 式— CH=CH- (CH)n—で示される基、
R2
0 0
II II
式— 0- C- 0-(CH)n— で示される基、 式一 0- C- NH-(CH)n—で示される基、
R2 R2
0
II
式- NH- C- (CH)n -で示される基、 式一 CH2- CO- NH-(CH)n- で示される基、
R2 R2
0H
式一（CH2)2- CO- NH-(CH)n—で示される基、 式—CH- (CH)n—で示される基
R2 2
{以上の式中、 nは 0又は 1〜10の整数を意味する。 R2は
水素原子又はメチル基を意味する。 }、 式 = (CH-CH=CH) b— （式中、 bは 1〜3の整数を意味する） で示される基、 式 =CH— （CH2) c- (式 中、 cは 0又は 1〜9の整数を意味する） で示される基、 式 = (CH-CH) d= (式中、 dは 0又は 1〜5の整数を意味する） で示される基、 0 0 OH
II II I
式一 C- CH= CH-CHa—で示される基、 式一 C- CH2-CH-CH2—で示される基、 CH3 0
式一 CH- C- NH- CH2— で示される基、 式— CH=CH-C- NH- (CH2) 2—
II
0 で示される基、 式一N H—で示される基、 式一 O—で示される基、 式一 S— で示される基、 ジアルキルァミノアルキルカルボニル基又は低級アルコキシ カルボ二ル基を意味する。
Tは窒素原子又は炭素原子を意味する。
Qは窒素原子、 炭素原子又は式 →0 で示される基を意味する
Kは水素原子、 置換若しくは無置換のフエニル基、 フヱニル基が置換さ れてもよぃァリールアルキル基、 フェニル基が置換されてもよいシンナミル 基、 低級アルキル基、 ピリジルメチル基、 シクロアルキルアルキル基、 ァダ マンタンメチル基、 フリルメチル基、 置換されてもよいシクロアルキル基、 低級アルコキシカルボニル基又はァシル基を意味する。
qは:！〜 3の整数を意味する。 式中、 rr =は単結合若しくは二重結合を意味する。 〕 Jが置換若しくは無置換の (1)フェニル基、（2)ピリジル基、 (3)ピラジル基、（4) キノリル基、 （5)シクロへキシル基、 （6)キノキサリル基及び (7)フリル基から なる群から選択された一つの基である.、 請求項 2記載の神経再生促進剤。 Jが環状アミ ド化合物から誘導される一価の基である、 請求項 2記載の神経 再生促進剤。
コリンエステラーゼ阻害作用を有する化合物が、 下記一般式で表される環状 ァミン誘導体である、 請求項 1記載の神経再生促進剤。
Figure imgf000061_0001
〔式中、
J iはフエニル基が置換されていてもよい次の群から選択された基から誘 導される一価又は二価の基；（1)ィンダニル、 （2)ィンダノニル、 （3)ィンデニ ル、 （4)インデノニル、 （5)インダンジォニル、 （6)テトラロニル、 （7)ベンズス ベロ-ル、 （8)インダノリル、 （9)式
を意味する。
Figure imgf000061_0002
0 R
II I
Bは式一 (CH)n— で示される基、 式 ^C_(CH)n— で示される基、 式一 N- (CH)n
. R2
(式中、 R 3は水素原子、 低級アルキル基、 ァシル基、 低級アルキルスルホ ニル基、 置換されてもよいフエニル基又はベンジル基を意味する） で示され る基、
0
II
式一 C- N-(CH)n -(式中、 R4は水素原子、 低极アルキル基又はフヱニル基
を意味する） で示される基、 式—CH=CH- (CH)n—で示される基、
2
0 0
II II
式— 0- C- 0-(CH)n— で示される基、 式— 0- C-NH- (CH)n—で示される基、
R2 R2
' 0
I！
式一 NH- C-(CH)n—で示される基、 式—CH2- CO- NH- (CH)n— で示される基.
R2 R2
0H
I
式— (CH2)2- CO- NH- (CH)n—で示される基、 式— CH- (CH)n -で示される基
2 2
(以上の式中、 nは 0又は 1〜10の整数を意味する。 は
水素原子又はメチル基を意味する。 }、 式 = (CH-CH-CH) b- (式中、 bは 1〜3の整数を意味する） で示される基、 式 =CH— (CH2) c- (式 中、 cは 0又は 1〜9の整数を意味する） で示される基、 式 = (CH-CH) d= (式中、 dは 0又は 1〜5の整数を意味する） で示される基、
0 0 0H
II II I
式一 C - CH-CH- CH2—で示される基、 式 _C- CH2- CH-CH2—で示される基、
CH3 0
1 II
式— CH- C-NH- CH2— で示される基、 式一 CH-CH- C - NH- (CH2)2—
II
0 で示される基、 式一 NH—で示される基、 式一 0—で示される基、 式一 S— で示される基、 ジアルキルアミノアルキルカルボニル基又は低級アルコキシ カルボ二ル基を意味する。 Tは窒素原子又は炭素原子を意味する。
Qは窒素原子、 炭素原子又は式 ：Ν→0 で示される基を意味する。
Κは水素原子、 置換若しくは無置換のフ ニル基、 フエニル基が置換され てもよぃァリールアルキル基、フェニル基が置換されてもよいシンナミル基、 低級アルキル基、 ピリジルメチル基、 シクロアルキルアルキル基、 ァダマン タンメチル基、 フリルメチル基、 置換されてもよいシクロアルキル基、 低級 アルコキシカルボニル基又はァシル基を意味する。
qは:！〜 3の整数を意味する。 式中、 =は単結合若しくは二重結合を意味する。 〕 6. Bが式
— (CH)n— 〔式中、 nは 0又は 1〜10の整数を意味する。 R2は
R2
水素原子又はメチル基を意味する。〕 で示される基、 式一 CH = CH_ (C H) nR2_ (式中、 nは 0又は 1〜1 0の整数を意味し、 R2は水素原子又 はメチル基を意味する）で示される基、式 = (CH-CH = CH) b- (式中、 bは 1〜 3の整数を意味する） で示される基、 式 CH_ (CH2) c- (式 中、 cは 0又は 1〜9の整数を意味する） で示される基又は式 = (CH-C H) d= (式中、 dは 0又は 1〜5の整数を意味する） で示される基である、 請求項 5記載の神経再生促進剤。
7. コリンエステラーゼ阻害作用を有する化合物が、 下記一般式で表される環状 ァミン誘導体である、 請求項 1記載の神経再生促進剤。
Figure imgf000064_0001
〔式中、
J 1はフユニル基が置換されていてもよい次の群から選択された基から誘 導される一価又は二価の基；（1)ィンダニル、 （2)ィンダノニル、 （3)ィンデニ ル、 （4)インデノ -ル、 （5)インダンジォニル、 （6)テトラロ-ル、 （7)ベンズス ベロニル、 （8)インダノリル、 （9)式
CO- CH—で示される基. を意味する。
Figure imgf000064_0002
CH3
B1は式—（CH)n—〔式中、 nは 0又は 1〜10の整数を意味する。 R2は
R2 水素原子又はメチル基を意味する。〕で示される基、式一 CH = CH— (CH) nR2— （式中、 nは 0又は 1〜10の整数を意味し、 R2は水素原子又はメ チル基を意味する） で示される基、 式 = (CH— CH=CH) b— （式中、 b は:！〜 3の整数を意味する） で示される基、 式 =CH_ (CH2) c- (式中、 cは 0又は 1〜9の整数を意味する） で示される基又は式 = (CH-CH) d = (式中、 dは 0又は 1〜5の整数を意味する） で示される基、
Kは水素原子、 置換若しくは無置換のフ ニル基、 フエニル基が置換さ れてもよぃァリールアルキル基、 フヱニル基が置換されてもよいシンナミル 基、 低級アルキル基、 ピリジルメチル基、 シクロアルキルアルキル基、 ァダ マンタンメチル基、 フリルメチル基、 置換されてもよいシクロアルキル基、 低級アルコキシカルボニル基又はァシル基を意味する。〕
Kが置換若しくは無置換のァリールアルキル基又はフエニル基である、 請求 項 7記載の神経再生促進剤。
9. J iがィンダノニルから誘導される一価の基及び二価の基、 ィンデュル並び にインダンジォニルからなる群から選択される一つの基である、 請求項 7又 は 8記載の神経再生促進剤。
10. J 1が置換基として炭素数 1〜 6の低級アルキル基又は炭素数 1〜 6の低 級アルコキシ基を有してもよいインダノニル基である、 請求項 7又は 8記載 の神経再生促進剤。
1 1. 環状アミン誘導体が、 1一べンジルー 4一 （（5， 6—ジメ トキシー 1ーィ ンダノン） 一2—ィル） メチノレビペリジン、 1一べンジノレ一 4一 （（5, 6 - ジメ トキシー 1—インダノン） 一 2—イリデニル） メチルピペリジン、 1一 ベンジノレ一 4一 （（5—メ トキシ一 1一インダノン） 一 2—ィル） メチルピぺ リジン、 1一べンジルー 4一（（5, 6—メチレンジォキシ一 1ーィンダノン) 一 2—ィル） メチルビペリジン、 1一 （m—二トロベンジル） 一4一 ((5, 6—ジメ トキシー 1—インダノン） 一 2_ィル） メチルビペリジン、 1ーシ ク口へキシルメチル— 4一 ((5， 6—ジメ トキシー 1一インダノン） 一2— ィル） メチノレビペリジン、 1— (m—フルォロベンジル） 一 4一 （（5, 6— ジメ トキシー 1一インダノン） 一2—ィル） メチルビペリジン、 1一べンジ ルー 4一 (3 - ((5, 6—ジメ トキシー 1ーィンダノン） 一 2ーィノレ） プロ ピル） ピぺリジン、 1一べンジルー 4一 （（5—イソプロポキシ一 6—メ トキ シー 1一インダノン） 一 2—ィル） メチルピペリジン、 1一べンジルー 4— ((5, 6—ジメ トキシ一 1一インダノン） 一 2—イリデニル） プロぺニルビ ペリジン、 及び 1一べンジルー 4一 （（5， 6—ジメ トキシー 1, 3—インダ ンジオン） 一2—ィル） プロぺュルビペリジンからなる群から選ばれる少な くとも 1つである、 請求項 2記載の神経再生促進剤。
1 2. 環状アミン誘導体が、 1一べンジルー 4一 （（5, 6—ジメ トキシー 1ーィ ンダノン） 一 2—ィル） メチルビペリジンである、 請求項 2記載の神経再生 促進剤。
3.コリンエステラーゼ阻害作用を有する化合物が、 1—ベンジル— 4一（（5，
6—ジメ .トキシー 1一インダノン） 一2—ィル） メチルビペリジン '塩酸塩 である、 請求項 1記載の神経再生促進剤。
1 4 . コリンエステラーゼ阻害作用を有する化合物が、ガランタミン、タクリン、 フィゾスチグミン又はリバスチグミンである、 請求項 1記載の神経再生促進 剤。
1 5 . 被験物質を神経幹細胞、 神経幹細胞を含む組織又は非ヒ ト哺乳動物に投与 し、 候補物質の存在下及び非存在下における神経再生の表現型の変化を検出 又は測定することを特徴とする、 神経再生を促進する物質のスクリ一-ング 方法。
1 6 . 候補物質が、 コリンエステラーゼ阻害作用を有する化合物、 その薬理学的 に許容できる塩、 又はそれらの溶媒和物である、 請求項 1 5記載の方法。
1 7 . コリンエステラーゼ阻害作用を有する化合物が、 アセチルコリンエステラ ーゼ阻害作用を有する化合物、 その薬理学的に許容できる塩、 又はそれらの 溶媒和物である、 請求項 1 6記載の方法。
1 8 . 神経再生の表現型変化が、 神経幹細胞に由来する細胞の増殖能、 細胞の分 化能、 細胞の形状、 細胞の運動能、 細胞の移動能及ぴ移動調節能、 細胞の成 熟度、 機能性タンパク質の発現度、 樹状突起の形状、 軸索の形状、 シナプス の形状、 シナプスの形成能、 細胞の生存、 細胞の保持並びに細胞死の抑制か らなる群から選択される少なくとも一つを指標とするものである、 請求項 1 5〜1 7のいずれか 1項に記載のスクリーニング方法。
1 9 . 請求項 1〜1 4のいずれか 1項記載のコリンエステラーゼ阻害作用を有す る化合物、 その薬理学的に許容できる塩、 又はそれらの溶媒和物の有効量を 患者に投与することを特徴とする、 神経再生促進方法。
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