+

WO2006051997A1 - システインジオキシゲナーゼ誘導剤 - Google Patents

システインジオキシゲナーゼ誘導剤 Download PDF

Info

Publication number
WO2006051997A1
WO2006051997A1 PCT/JP2005/020985 JP2005020985W WO2006051997A1 WO 2006051997 A1 WO2006051997 A1 WO 2006051997A1 JP 2005020985 W JP2005020985 W JP 2005020985W WO 2006051997 A1 WO2006051997 A1 WO 2006051997A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
cystine
dioxygenase
chain amino
cysteine
metabolism
Prior art date
Application number
PCT/JP2005/020985
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Makoto Shimizu
Hideo Satsu
Asami Kawakami
Kenji Takehana
Original Assignee
Toudai Tlo, Ltd.
Ajinomoto Co., Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Toudai Tlo, Ltd., Ajinomoto Co., Inc. filed Critical Toudai Tlo, Ltd.
Publication of WO2006051997A1 publication Critical patent/WO2006051997A1/ja

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/175—Amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Definitions

  • the present invention relates to an inducer of cysteine dioxygenase (CDO) containing a branched chain amino acid, a pharmaceutical composition containing the same, and a food or drink containing the branched chain amino acid.
  • CDO cysteine dioxygenase
  • Cystin dioxygenase is mainly expressed in the liver and is one of the major enzymes in cystine metabolism and plays an important role in the quantitative regulation of sulfur-containing amino acids in vivo. It is known to fulfill. Chronically elevated cysteine levels are known to function as neurotoxins that are excitable for neurons (McFadden et al., “Toxicology”, Ireland), 1 9 9 6th, 1 1 1st, P. 4 3— 6 5). On the other hand, Parkinson's disease (Steventon et al., “Neurology”, (USA), 1 9 8 9th, Vol. 39, P.
  • Tumor growth factor] 3 (TG F ⁇ ), one of the inflammatory site ins, is also associated with multiple sclerosis, Parkinson's disease, AIDS dementia, Alach It has been suggested that neurodegenerative diseases such as Imah's disease are related to the progression of the disease, but the details are not clear (Pratt et al., “Site Force In & Growth Factor Leviuse (Cytokine Growth Factor Rev.) ", (UK), 1 997, 8th (4), P. 2 6 7-2 9 2).
  • An object of the present invention is to provide an excellent cysteinoxygenase (CDO) inducer.
  • the object of the present invention is to treat a disease caused by a cystine metabolism disorder (a neurological disease such as Parkinson's disease or Hallervorden-Spatz disease) and a drug for preventing or preventing cysteine metabolism abnormalities.
  • a cystine metabolism disorder a neurological disease such as Parkinson's disease or Hallervorden-Spatz disease
  • a drug for preventing or preventing cysteine metabolism abnormalities to provide ingredients.
  • the present inventors have found that branched-chain amino acids have an excellent CDO gene expression-inducing action, and further, the pathogenesis of various diseases. It was also found that the inflammatory cytokine TGF] 3 involved in the progression suppresses the expression of CDO, and that branched-chain amino acids release the suppression, thereby completing the present invention. That is, the present invention provides a branched chain buffer. Provided is a CDO inducer comprising a mino acid.
  • the present invention also provides a pharmaceutical product for treating and / or preventing a disease caused by an abnormal cystine metabolism (a neurological disease such as Parkinson's disease or Hal lervorden-Spatz disease) characterized by containing the above-mentioned CDO inducer.
  • the present invention provides an active ingredient of a food or drink for improving metabolic disorders.
  • a therapeutic or prophylactic agent for diseases caused by abnormal cystine metabolism comprising the cystine dioxygenase inducer according to any one of [1] to [4];
  • the disease caused by abnormal cysteine metabolism is selected from the group consisting of Parkinson's disease, Al-Haima disease, and rheumatoid arthritis [5]
  • a food and drink for improving cystine metabolism disorder characterized by containing a branched chain amino acid
  • a method for inducing cysteine dioxygenase comprising administering an effective amount of a branched chain amino acid to an administration subject;
  • a method for treating or preventing a disease caused by abnormal cysteine metabolism comprising administering an effective amount of a cysteine dioxygenase-inducing agent containing a branched chain amino acid to a subject of administration;
  • FIG. 1 shows the suppression of mRNA expression of CDO gene by TGF] 3.
  • Figure 2 shows the induction of mRNA expression of CDO gene by branched chain amino acids. It is a figure.
  • FIG. 3 is a diagram showing the mRNA expression induction action of a branched chain amino acid-specific CDO gene.
  • FIG. 4 is a diagram showing (A) enhancement of CDO gene promoter activity by branched chain amino acids, (B) suppression of CDO gene promoter activity by TGF and enhancement effect by BCAA.
  • FIG. 5 is a diagram showing the mRNA expression induction effect of CDO gene by branched chain amino acids in a cirrhosis model rat.
  • the branched chain amino acid in the present invention refers to those containing at least one of isoleucine, valine, and oral isocyanic branched chain amino acids, each of which may be used alone or in combination of two or more. It may be a combination of these, or may include all three types.
  • Induction of CDO in the present invention refers to an action of increasing the amount of CDO in vivo, particularly CDO in the liver, and is not particularly limited in its mechanism, but induces the expression of CDO gene and / or It is preferably an action that enhances or activates transcription of the CD O gene promoter. Furthermore, since TGF i3 suppresses the expression of the CDO gene or suppresses transcription from the CDO gene promoter, suppression of the action of TGF / 3 is also included in the induction of CDO.
  • the CDO gene is a gene having a base sequence represented by ⁇ -001801 or its equivalent (for example, a variant including SNP and haplotype) in NCBI Reference Sequences (RefSeq) in humans, for example. Or a mammalian ortholog, etc., which encodes a protein with an Enzyme Commission Number force S, EC 1 ⁇ 13.11.20, as defined by the International Biochemical Union.
  • the branched chain amino acid which is an active ingredient of the CDO inducer of the present invention, is always used. It is not necessary to be used as a free amino acid, and it may be used in the form of a salt or an ester that can be hydrolyzed in vivo (for example, an ester with an alcohol that can be used as a prodrug of a pharmaceutical product). Good.
  • the salt form include acid addition salts and salts with bases, and it is preferable to select a salt of a branched chain amino acid that is acceptable as a pharmaceutical or a food or drink.
  • acids that are added to branched chain amino acids to form salts that are acceptable as pharmaceuticals or foods and drinks include inorganic salts such as hydrogen chloride, hydrogen bromide, sulfuric acid, and phosphate, acetic acid, lactic acid, citrate, Organic acids such as tartaric acid, maleic acid, fumaric acid or monomethyl sulfuric acid can be mentioned.
  • bases acceptable as pharmaceuticals or foods and drinks of branched chain amino acids include, for example, metal hydroxides or carbonates such as sodium, potassium and calcium, salts with inorganic bases such as ammonia, ethylenediamine And salts with organic bases such as propylenediamine, ethanolamine, monoalkyl / reethanolamine, dialkylethanolamine, diethanolamine, and triethanolamine.
  • branched chain amino acids or peptides in which a branched amino acid other than a branched chain amino acid and a branched chain amino acid are peptide-bonded (eg, dipeptide, tripeptide, oligopeptide, etc.)
  • peptides are also branched chain amino acids as referred to in the present invention.
  • the branched chain amino acid is in the form of a peptide
  • the content of the branched chain amino acid in the peptide is preferably 10% or more, more preferably 25% or more, and still more preferably 50% or more.
  • amino acids other than branched chain amino acids include glycine, alanine, serine, threonine, aspartate, glutamate, asparagine, gnoretamine, lysine, hydroxylysine, arginine, cysteine, cystine, methionine, Examples include phenylalanine, tyrosine, tryptophan, histidine, proline, and 4-hydroxyproline.
  • any of L-integral, D-form, and DL-form can be used. However, L integration is desirable from the viewpoint of natural existence.
  • the C D O inducer of the present invention may be composed only of a branched chain amino acid, but may contain a pharmaceutical carrier described later, or may be contained in a general food or drink.
  • the CDO inducer of the present invention preferably contains about 0.1 1 to 10 g of branched chain amino acids, more preferably about 0.1 to 10 g, and even more preferably 1 to 10 g. Degree.
  • the C D O inducer of the present invention can be administered orally, intravenously, subcutaneously, or intramuscularly, but oral administration is preferred because of its simplicity.
  • the dose varies depending on the subject to be administered, but is usually 0.1 to 30 g Z k g Z days.
  • parenteral administration such as infusion administration, injection administration (intravenous administration), etc.
  • the preferred dosage (ingestion amount) for oral administration is as follows. About 10 to 20 times of the range can be administered.
  • the CDO inducer of the present invention can be formulated by a conventional method.
  • the form of the preparation is tablets, granules, fine granules, powders, capsules, solids such as chupuls, solutions such as solutions and syrups, or creams, suppositories, injections, sprays , Etc.
  • Examples of the carrier for the preparation include lactose, glucose, D-mannitol, starch, crystalline cellulose, calcium carbonate, kaolin, starch, gelatin, hydroxypropyl senorelose, hydroxypropinoremethizolecenorelose, polyvinyl pyrrolopyrrole Don, Ethanol / Les, Canolepoxymethyl senorelose, Canolepoxy methinolece Norellose chanoleum salt, Magnesium stearate, Talc, Acetinole Cellulose, Sucrose, Titanium oxide, Benzoic acid, Paraoxybenzoate ester, De Sodium hydroacetate, gum arabic, tragacanth, methylsenololose, egg yolk, surfactant, sucrose, simple syrup, citrate, distilled water, ethanolate, glycerin.
  • Propyleneglycone, macrogonore, phosphate There are sodium monohydrogen, sodium dihydrogen phosphate, sodium phosphate, bud sugar, sodium chloride, phenol, thimerosal, paraoxybenzoate, sodium hydrogen sulfite, etc. Used in combination with CDO inducers.
  • the C D O inducer of the present invention is useful for mammals (eg, mice, rats, hamsters, rabbits, cats, dogs, sushi, Hedges, monkeys, humans, etc.).
  • mammals eg, mice, rats, hamsters, rabbits, cats, dogs, sushi, Hedges, monkeys, humans, etc.
  • the administration form to animals other than humans may be addition to feed.
  • the C D O inducer of the present invention can be formulated into various pharmaceutical preparations to be developed in the future. Methods that will be developed in the future can be used as appropriate.
  • the C D O inducer of the present invention in the preparation form exemplified above should contain an effective amount of the above-mentioned components to exert a medicinal effect.
  • an effective amount of the above-mentioned ingredients should be contained to have a medicinal effect is also applicable to the use in medicines and foods and drinks described below.
  • the C D O inducer of the present invention is useful for patients with diseases caused by abnormal cysteine metabolism.
  • diseases caused by abnormal cysteine metabolism include neurological diseases such as Parkinson's disease, Alzheimer's disease, Hal lervorden- Spatz disease, rheumatoid arthritis, motor neuron diseases (for example, amyotrophic lateral cords). Sclerosis) and delayed food hypersensitivity.
  • the C D O inducer of the present invention can be used as a pharmaceutical product. Since the active ingredient is an amino acid, it is excellent in safety and can be used easily. When used as a medicine, the form is not particularly limited, and the above preparation may be used as it is.
  • the present invention provides a therapeutic or prophylactic agent for diseases caused by abnormal cystine metabolism, which contains a CDO inducer.
  • the treatment and / or prevention of a disease caused by abnormal cysteine metabolism also includes suppressing the occurrence / progress of the disease caused by abnormal cysteine metabolism.
  • a therapeutic or prophylactic agent or other pharmaceutical composition for diseases caused by abnormalities in cystine metabolism such as Parkinson's disease or Hallervorden-Spatz disease
  • cystine metabolism such as Parkinson's disease or Hallervorden-Spatz disease
  • 1 preparation it is preferable to contain about 0.1 to 10 g of branched chain amino acids, more preferably about 0.1 to 10 g, and still more preferably about 1 to 10 g.
  • the therapeutic or prophylactic agent for diseases caused by cysteine metabolism abnormalities according to the present invention it can be administered orally, intravenously, subcutaneously, or intramuscularly. However, oral administration is preferred because of its simplicity.
  • the dose varies depending on the patient's symptoms, age, and method of administration, but is usually 0.1 to 3 0 ⁇ 1 ⁇ ⁇ "days.
  • parenteral administration such as infusion administration, injection administration (intravenous administration), etc.
  • the preferred dosage (ingestion amount) for oral administration is as follows. About 10 to 20 times of the range can be administered.
  • the present invention also provides a food or drink characterized by containing a branched chain amino acid.
  • the food / drink exhibits an effect of inducing cysteine dioxygenase, an effect of enhancing the expression of cysteine dioxygenase gene, and an effect of suppressing the action of TGF] 3, and is therefore effective as a food / drink for improving cystine metabolism abnormality.
  • Examples of the branched chain amino acids contained in the food / beverage products of the present invention include the same as those mentioned above for the C D O derivative.
  • the form is not particularly limited, and the food and drink may contain only the amount necessary to exert the CDO inducing effect of the branched chain amino acid.
  • the food and drink may include animal feed.
  • the intake is usually 0.1 to 30 g / kg Z days, although it varies depending on the type, age, and method of intake.
  • the food and drink of the present invention is useful for mammals (eg, mouse, rat, hamster, usagi, cat, inu, ushi, hidge, monkey, human etc.).
  • mammals eg, mouse, rat, hamster, usagi, cat, inu, ushi, hidge, monkey, human etc.
  • the active ingredient is an amino acid
  • it is excellent in safety and can be easily used in the form of food and drink.
  • foods and drinks can be mixed with juice, milk, confectionery, jelly and the like.
  • Such foods and drinks are also included.
  • These health functional foods are labeled foods and drinks that are used to improve cystine metabolism abnormalities, especially for specific health use. Foods etc. are also included.
  • the food-drinks of this invention when using the food-drinks of this invention as a food supplement etc., it can prepare in forms, such as a tablet, a capsule, a powder, a granule, a suspension agent, a chewable agent, a syrup agent, for example.
  • the expression level of CD ⁇ mRNA decreased depending on the concentration of TGF (Fig. 1).
  • Hep G 2 cells were seeded on a collagen-coated 60 mm dish and cultured overnight in DMEM medium containing 10% FBS until reaching about 70% confluence. The medium was removed, washed with PBS, replaced with serum-free DMEM medium containing 0.1% BSA, and cultured for 2 hours. Next, after removing the medium and washing with PBS, the medium was replaced with an amino acid-deficient medium in which only methionine was added to amino acid-free DMEM at a concentration of 3 O mg / L and cultured for 2 hours.
  • BCAA branched chain amino acid
  • B CAA enhances CDO mRNA expression by TGF] 3 treatment.
  • the CDO mRNA level which was also observed under physical conditions and decreased by TGF treatment, recovered to near the control level by adding BCAA (Fig. 2).
  • Example 3 Induction of mRNA expression of CD 0 gene by branched chain amino acid in human hepatoma cell line Hep G 2 cells
  • Hep G 2 cells are cultured under the same conditions as in Example 2.
  • 3 O mg / L methionine, 2 mM BCAA mixture, or any one of individual branched chain amino acids, phenylalanin, and cysteine The cells were cultured for 16 hours in an amino acid-deficient DMEM medium containing.
  • Activation of mT OR is via phosphorylation of S 6 K 1 and 4 E—B P 1: it accelerates the translation initiation stage of mRNA and enhances gene expression at the protein level. Therefore, we investigated the involvement of mT O R in the effect of B C A A observed in the regulation of CD0 gene expression.
  • Hep G 2 cells were cultured in a medium containing only methionine for 2 hours, they were treated with 25 ng / m 1 of rapamycin after 1 hour and a half, and 30 minutes later, 2 mM BCAA was added and cultured for 16 hours. As a result, the increase in the mRNA expression level of CDO by B CAA was not suppressed by rapamycin treatment (Fig. 3 (B)).
  • a genomic sequence from about 2.5 kb upstream to about 2.3 kb downstream of the transcription start site of the human CDO gene is inserted into the commercially available luciferase reporter gene pGL 3 basicvector P romeg a
  • the reporter gene pGL3-CD04 integrated into the cloning site of Madison, Wis.) was constructed and transfected into Hep G2 cells.
  • C DO specific primer sense primer sequence: 5'-GAG AACGT CAG C CACACAG-3 '(SEQ ID NO: 1)
  • antisense primer sequence 5'-TTG CT GT GGAATGT CATGG-3' (SEQ ID NO: 2)
  • the CD O mRNA expression level was quantified. Quantitative results were expressed as a percentage, with the average value of normal rat being 100%, with the value corrected using GAP DH as an internal standard (Fig. 5). In the normal diet group of the cirrhosis model rat, the CD O mRNA mRNA expression level in the liver decreased to 50% or less of the normal rat, but in the BCAA diet group, it recovered to the normal level.
  • BC AA is effective in restoring the decreased CDO gene expression level in the liver of cirrhosis model rat.
  • the inducer of cystine dioxygenase (CDO) containing a branched chain amino acid provided by the present invention is useful for the treatment and / or prevention of diseases caused by abnormal cysteine metabolism.
  • this inducer since this inducer has an amino acid as an active ingredient, it is highly safe and has few side effects, so it is advantageous not only for pharmaceuticals but also for food and drink.
  • the inducer of cysteine dioxygenase comprising a branched chain amino acid provided by the present invention has excellent cysteine dioxygenase-inducing activity.
  • the pharmaceutical composition of the present invention contains amino acid as an active ingredient, it is highly safe and has few side effects. Therefore, it can be administered for a long period of time, and is a disease caused by abnormal cysteine metabolism (Parkinson's disease). Can be advantageously used for the treatment and prevention or prevention of neurological diseases such as Hallervorden-Spatz disease.
  • the food and drink for improving cystine metabolism abnormality of the present invention also uses amino acid as an active ingredient, it is highly safe and can be consumed over a long period of time. It is effective to prevent it.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

本発明は、優れたシステインジオキシゲナーゼ誘導剤及びシステイン代謝異常を改善するための飲食品を提供する。具体的には、分岐鎖アミノ酸を含有するシステインジオキシゲナーゼ誘導剤及び該誘導剤を含有する医薬組成物、及び分岐鎖アミノ酸を含有するシステイン代謝異常を改善するための飲食品を提供する。

Description

明細書
システィンジォキシゲナーゼ誘導剤 技術分野
本発明は、 分岐鎖アミノ酸を含むシスティンジォキシゲナーゼ （CD O) の誘導剤、 これを含有する医薬組成物、 及び分岐鎖アミノ酸を含む 飲食品に関する。 背景技術
システィンジォキシゲナーゼ （CD O) は主に肝臓に発現し、 システ ィン代謝における主要な酵素のひとつであり、 生体内における含硫ァミ ノ酸の量的な調節に重要な役割を果たすことが知られている。 慢性的な システィン濃度の上昇は神経細胞に対して興奮性の神経毒として機能す ることが知られている （マクファデンら （McFadden et al.)、 「トキシコ ロジー （Toxicology)」、 （アイルランド）、 1 9 9 6年、 第 1 1 1卷、 P. 4 3— 6 5 )。 一方、 パーキンソン病 （スティーヴンソンら （Steve nton et al. )、 「ニューロロジー (Neurology)」、 （米国）、 1 9 8 9年、 第 3 9巻、 P. 8 8 3— 8 8 7 ) や小児の遺伝性ジス トニア疾患である Hallervorden— Spatz病 （ペジーら (Perry et al.)、 「アナノレス ■ ォプ - ニューロロジー（Ann. Neurol. )J、 （米国）、 1 9 8 5年、第 1 8巻（ 4 )、 P . 4 8 2 - 4 8 9) では肝臓での C D O量の低下が知られており、 こ のことから CD O量が低下したパーキンソン病患者などの精神神経疾患 患者においては、 内在性のシスティンやその他の環境中有毒物質に対す る解毒作用が低下したことによる神経毒性が疾患の原因のひとつと考え られている。
また、 炎症性のサイ ト力インのひとつである腫瘍増殖因子 ]3 (TG F β ) は、 多発性硬化症、 パーキンソン病、 A I D S性痴呆症、 アルッハ イマ一病などの神経変性疾患で病態進行に関連することが示唆されてい るがその詳細は明らかではない （プラッ トら （Pratt et al.)、 「サイ ト 力イン · アンド，グロースファクター · レビユース （Cytokine Growth Factor Rev. )」、 （英国）、 1 9 9 7年、 第 8卷 （4)、 P . 2 6 7— 2 9 2 )。
一方で、 C D O低下による解毒作用の低下が原因と考えられる疾患の 治療においては、 低下した CDOの発現を正常化することで、 疾患の治 療につながると考えられるがこれまでに、 経口が可能な医薬品及び Z又 は食品などの物質で肝細胞の C DO量を増加させるものは知られていな レ、。 C D Oの基質であるシスティンやその前駆物質であるメチォニンな どの含硫ァミノ酸は、 C D Oの発現を蛋白質レベルで増加させることが 知られているが （スティパヌク ら （Stipanuk et al. )、「ジ 'ァメ リカン ' ジャーナノレ 'ォブ ' フィジオロジー （Ara. J. Physiol. )」、 （米国）、 2 0 0 4年、 第 2 8 6卷 （ 3)、 P . E 4 3 9— E 44 8 )、 高濃度のシステ インの解毒に用いるには適切ではない。 発明の開示
本発明の目的は、 優れたシスティンジォキシゲナーゼ （CDO) の誘 導剤を提供することである。 また、 本発明の目的は、 システィン代謝異 常に起因する疾患（パーキンソン病や Hallervorden- Spatz病などの神経 疾患等） の治療及びノ又は予防用医薬品及びシスティン代謝異常を改善 するための飲食品の有効成分を提供することである。
本発明者らは、 上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、 分岐鎖 ァミノ酸が優れた CD O遺伝子発現誘導作用を有することを見出し、 さ らに、 種々の疾患の病態形成及ぴその進行に関与する炎症性サイ トカイ ン TG F ]3は CDOの発現を抑制し、 分岐鎖ァミノ酸はその抑制を解除 することも見出し、 本発明を完成した。 すなわち、 本発明は、 分岐鎖ァ ミノ酸を含むことを特徴とする C D Oの誘導剤を提供する。
本発明は、 又、 上記 C D Oの誘導剤を含有することを特徴とするシス ティン代謝異常に起因する疾患 （パーキンソン病や Hal lervorden- Spatz 病などの神経疾患等） の治療及び/又は予防用医薬品、 又はシスティン 代謝異常を改善するための飲食品の有効成分を提供する。
すなわち本発明は、
〔 1〕 分岐鎖ァミノ酸を含むことを特徴とするシスティンジォキシゲナ ーゼの誘導剤；
〔 2〕前記誘導がシスティンジォキシゲナーゼ遺伝子発現の増強である、 〔 1〕 記載のシスティンジォキシゲナーゼの誘導剤 ；
C 3〕 前記誘導がシスティンジォキシゲナーゼ遺伝子に対する T G F β の作用抑制によるものである、 〔 1〕記載のシスティンジォキシゲナーゼ の誘導剤 ；
〔4〕 T G F βの作用がシスティンジォキシゲナーゼ遺伝子の発現の抑 制である、 〔 3〕 記載のシスティンジォキシゲナーゼの誘導剤 ；
〔5〕 〔 1：] 〜 〔4〕 のいずれかに記載のシスティンジォキシゲナーゼ誘 導剤を含有することを特徴とするシスティン代謝異常に起因する疾患の 治療又は予防剤 ；
〔6〕 システィン代謝異常に起因する疾患がパーキンソン病、 アルッハ イマ一病、 慢性関節リ ウマチからなる群から選ばれる 〔5〕 記載のシス ティン代謝異常に起因する疾患の治療又は予防剤 ；
〔7〕 分岐鎖ァミノ酸を含むことを特徴とするシスティン代謝異常の改 善用飲食品 ；
〔8〕 システィン代謝異常の改善がシスティンジォキシゲナーゼの誘導 によるものである、 〔 7〕 記載の飲食品 ；
〔 9〕 システィン代謝異常の改善がシスティンジォキシゲナーゼ遺伝子 発現の増強によるものである、 〔 7〕 記載の飲食品 ； 〔 1 0〕 システィン代謝異常の改善が T G F の作用抑制によるもので ある、 〔7〕 記載の飲食品 ；
〔 1 1〕 システィ ン代謝異常を改善するために用いるものであるという 表示を付した、 〔 7〕 〜 〔 1 0〕 のいずれかに記載の飲食品 ；
〔 1 2〕 分岐鎖ァミノ酸の有効量を投与対象に投与することを含む、 シ スティンジォキシゲナーゼの誘導方法 ；
〔 1 3〕 分岐鎖アミノ酸を含むシスティンジォキシゲナーゼ誘導剤の有 効量を投与対象に投与することを含む、 システィン代謝異常に起因する 疾患の治療又は予防方法；
〔 1 4〕 システィンジォキシゲナーゼの誘導剤の製造のための、 分岐鎖 アミノ酸の使用 ；
〔 1 5〕 システィン代謝異常に起因する疾患の治療又は予防剤の製造の ための、 分岐鎖ァミノ酸の使用 ；
〔 1 6〕 システィン代謝異常の改善用飲食品の製造のための、 分岐鎖ァ ミノ酸の使用 ；
〔 1 7〕 分岐鎖アミノ酸を含有する組成物、 並びに当該組成物をシステ ィンジォキシゲナーゼの誘導に使用し得ること又は使用すべきであるこ とを記載した記載物を含む商業的パッケージ；
〔 1 8〕 分岐鎖アミノ酸を含有する組成物、 並びに当該組成物をシステ ィン代謝異常に起因する疾患の治療又は予防に使用し得ること又は使用 すべきであることを記載した記載物を含む商業的パッケージ； に関する。 図面の簡単な説明
図 1は、 TG F ]3による CDO遺伝子の mRNA発現抑制を示す図で ある。
図 2は、 分岐鎖ァミノ酸による CD O遺伝子の mRNA発現誘導を示 す図である。
図 3は、 分岐鎖ァミノ酸特異的な C D O遺伝子の mRN A発現誘導作 用を示す図である。
図 4は、 （A) 分岐鎖ァミノ酸による C DO遺伝子プロモーター活性の 増強、 （B) TG F による CD O遺伝子プロモーター活性抑制と B CA Aによる亢進効果を示す図である。
図 5は、 肝硬変モデルラッ トにおける分岐鎖ァミノ酸による CDO遺 伝子の mR N A発現誘導作用を示す図である。 発明を実施するための最良の形態
本発明における分岐鎖アミノ酸とは、 イソロイシン、 バリン、 口イシ ンの分岐鎖ァミノ酸のうちの少なく とも 1種を含むものをいい、 イソ口 イシン、 バリ ン、 ロイシンそれぞれ単独でも良く、 2種以上の組み合わ せでも良く、 また 3種全てを含むものでも良い。
本発明における CD Oの誘導とは、 生体内の CD O特に肝臓の CD O の量を増加させる作用をいい、特にその機序を限定するものではないが、 C DO遺伝子の発現を誘導及び 又は増強する作用、 或いは CD O遺伝 子プロモーターの転写を活性化する作用であることが好ましい。さらに、 TGF i3は CD O遺伝子の発現を抑制する又は CDO遺伝子プロモータ 一からの転写を抑制するので、 T G F /3の作用抑制もまた、 CDOの誘 導に含まれる。 なお、 本発明において CDO遺伝子とは、 例えばヒ トで は NCBI Reference Sequences (RefSeq)にて、 匪— 001801で表される 塩基配列を有する遺伝子又はその均等物 （例えば、 S N P、 ハプロタイ プを含むバリアントなど）、 あるいは哺乳動物オルソログなどをいい、 国 際生化学連合により定義された酵素番号 （Enzyme Commission Number) 力 S、 EC 1· 13.11.20である蛋白質をコードするものである。
本発明の CD Oの誘導剤の有効成分である分岐鎖ァミノ酸は、 必ずし も遊離アミノ酸として用いられる必要はなく、 塩の形態や、 生体内で加 水分解可能なエステル体 （例えば、 医薬品のプロ ドラッグとして使われ うるアルコール等とのエステル体） などの形態で用いてもよい。 塩の形 態には酸付加塩や塩基との塩等を挙げることもでき、 分岐鎖アミノ酸の 医薬品又は飲食品として許容される塩を選択することが好ましい。 分岐 鎖アミノ酸にそれぞれ付加して医薬品又は飲食品として許容される塩を 形成する酸としては、 例えば、 塩化水素、 臭化水素、 硫酸、 リン酸塩等 の無機塩、 酢酸、 乳酸、 クェン酸、 酒石酸、 マレイ ン酸、 フマル酸又は モノメチル硫酸等の有機酸が挙げられる。 分岐鎖アミノ酸の医薬品又は 飲食品として許容される塩基の例としては、 例えば、 ナトリウム、 カリ ゥム、 カルシウム等の金属の水酸化物あるいは炭酸化物や、 アンモニア 等の無機の塩基との塩、 エチレンジァミン、 プロピレンジァミン、 エタ ノーノレアミ ン、 モノアルキ/レエタノールァミ ン、 ジアルキルエタノール ァミ ン、 ジエタノールァミ ン、 ト リエタノールァミ ン等の有機の塩基と の塩が挙げられる。 また、 2以上の分岐鎖アミノ酸、 あるいは分岐鎖ァ ミノ酸以外のァミノ酸と分岐鎖ァミノ酸をぺプチド結合させたぺプチド 類の形態 （例えば、 ジペプチド、 トリペプチド、 オリ ゴペプチド等） で 用いてもよく、かかるぺプチド類も本発明でいう分岐鎖ァミノ酸である。 分岐鎖ァミノ酸がぺプチドの形態である場合、 該ぺプチドにおける分岐 鎖アミノ酸の含有量は、 好ましくは 1 0 %以上、 より好ましくは 2 5 % 以上、 更に好ましくは 5 0 %以上である。 なお、 分岐鎖アミノ酸以外の アミノ酸としては、 グリシン、 ァラニン、 セリン、 トレオニン、 ァスパ ラギン酸、 グルタ ミ ン酸、 ァスパラギン、 グノレタ ミ ン、 リ シン、 ヒ ドロ キシリ シン、 アルギニン、 システィン、 シスチン、 メチォニン、 フエ二 ルァラニン、 チロシン、 トリプトファン、 ヒスチジン、 プロリン、 4一 ヒ ドロキシプロリ ン等が挙げられる。 分岐鎖ァミノ酸及び分岐鎖ァミノ 酸以外のアミノ酸は、 L一体、 D—体、 及び D L—体何れも使用可能で あるが、 天然に存在するという観点から L一体が望ましい。
本発明の C D Oの誘導剤は、 分岐鎖ァミノ酸のみよりなるものであつ てもよいが、 後述の製剤用担体を含有しても良く、 あるいは一般的な飲 食品に含有させてもよい。
本発明の C D Oの誘導剤は、 分岐鎖アミノ酸を 0 . 0 1〜1 0 g程度 含有するのが好ましく、 より好ましくは 0 . l〜1 0 g程度、 さらによ り好ましくは 1〜 1 0 g程度である。 本発明の C D Oの誘導剤を使用す る場合、 経口投与、 静脈内投与、 皮下投与、 または筋肉内投与すること ができるが、 簡便性から経口投与が好ましい。 投与量は投与する対象に よって異なるが、 通常 0 . l〜3 0 g Z k g Z日である。
一方、 点滴投与、 注射投与 （経静脈投与） 等、 非経口投与 （摂取） す ることも可能であり、 その場合の投与量については、 前記経口投与につ いての好ましい投与量 （摂取量） 範囲の 1 0〜 2 0分の 1程度を投与す ることができる。
本発明の C D Oの誘導剤は常法により製剤化することができる。 製剤 の形と しては錠剤、 顆粒剤、 細粒剤、 散剤、 カプセル剤、 チュアプル剤 などの固形剤、 溶液剤、 シロップ剤などの液剤、 または、 クリーム剤、 坐剤、 注射剤、 スプレー剤、 などが挙げられる。 製剤用担体としては、 例えば、 乳糖、 ブドウ糖、 D—マンニトール、 澱粉、 結晶セルロース、 炭酸カルシウム、 カオリン、 デンプン、 ゼラチン、 ヒ ドロキシプロピル セノレロース、 ヒ ドロキシプロピノレメチゾレセノレロース、 ポリ ビニノレピロ リ ドン、 エタノー/レ、 カノレポキシメチルセノレロース、 カノレポキシメチノレセ ノレロースカノレシゥム塩、 ステアリン酸マグネシウム、 タルク、 ァセチノレ セルロース、 白糖、 酸化チタン、 安息香酸、 パラォキシ安息香酸エステ ル、 デヒ ドロ酢酸ナト リ ウム、 アラビアゴム、 トラガント、 メチルセノレ ロース、 卵黄、 界面活性剤、 白糖、 単シロップ、 クェン酸、 蒸留水、 ェ タノ一ノレ、 グリセリン. プロピレングリ コーノレ、 マクロゴーノレ、 リ ン酸 一水素ナトリ ウム、 リン酸二水素ナトリ ウム、 リン酸ナトリウム、 ブド ゥ糖、 塩化ナトリ ウム、 フエノール、 チメロサール、 パラォキシ安息香 酸エステル、 亜硫酸水素ナトリウム等があり、 製剤の形に応じて、 本発 明の C D Oの誘導剤と混合して使用される。
本発明の C D Oの誘導剤は、 哺乳動物 （例えば、 マウス、 ラッ ト、 ハ ムスター、 ゥサギ、 ネコ、 ィヌ、 ゥシ、 ヒッジ、 サル、 ヒ ト等） に対し て有用である。 ヒ ト以外の動物への投与形態としては、 飼料中への添加 であってもよい。
本発明の C D Oの誘導剤は常法以外にも、 将来開発される様々な医薬 製剤の形態によっても製剤とすることができる。 その製剤には将来開発 される方法を適宜採用することができる。
以上に例示した製剤形態にある本発明の C D Oの誘導剤には、 薬効を 奏するに有効な量の前記成分を含有すべきことは当然のことである。 薬 効を奏するに有効な量の前記成分を含有すべきことについては以下に記 す医薬、 飲食品への使用についても当てはまることである。
本発明の C D Oの誘導剤は、 システィン代謝異常に起因する疾患患者 に対して有用である。 システィン代謝異常に起因する疾患としては神経 疾患等があげられ、 該神経疾患としてはパーキンソン病、 アルッハイマ 一病、 Hal lervorden- Spatz病、 慢性関節リ ゥマチ、 運動ニューロン疾患 (例えば、筋萎縮性側索硬化症など）、 遅延性食品過敏症などが挙げられ る。
本発明の C D Oの誘導剤は、 特に医薬品等として使用することができ る。 有効成分がアミノ酸であるため、 安全性に優れており簡便に使用す ることができる。 医薬品と して使用する場合には、 その形態は特に限定 されるものではなく、 上記製剤をそのまま使用しても良い。
従って、 本発明は、 C D Oの誘導剤を含有するシスティン代謝異常に 起因する疾患の治療又は予防剤を提供する。 本発明においてシスティン代謝異常に起因する疾患の治療及び/又は 予防とは、 システィン代謝異常に起因する疾患の発生 ·進展を抑制する ことも含む。
本発明の C D Oの誘導剤を含有するシスティン代謝異常に起因する疾 患（パーキンソン病や Hal lervorden-Spatz病などの神経疾患等） の治療 又は予防剤、 或いは他の医薬組成物の場合、 1製剤あたりでは、 分岐鎖 アミノ酸を 0 . 0 1〜 1 0 g程度含有するのが好ましく、 より好ましく は 0 . l〜 1 0 g程度、 さらにより好ましくは 1〜 1 0 g程度である。 本発明のシスティン代謝異常に起因する疾患の治療又は予防剤を使用す る場合、 経口投与、 静脈内投与、 皮下投与、 または筋肉内投与すること ができるが、 簡便性から経口投与が好ましい。 投与量は投与する患者の 症状、 年齢、 投与方法によって異なるが、 通常 0 . 1〜 3 0 § 1^ § " 日である。
一方、 点滴投与、 注射投与 （経静脈投与） 等、 非経口投与 （摂取） す ることも可能であり、 その場合の投与量については、 前記経口投与につ いての好ましい投与量 （摂取量） 範囲の 1 0〜 2 0分の 1程度を投与す ることができる。
また、 本発明は分岐鎖ァミノ酸を含むことを特徴とする飲食品を提供 する。 該飲食品は、 システィンジォキシゲナーゼ誘導効果、 システィン ジォキシゲナーゼ遺伝子発現増強効果、 T G F ]3作用抑制効果を奏し、 従って、 システィン代謝異常改善用飲食品として効果的である。
本発明の飲食品に含有される分岐鎖ァミノ酸としては、 上記 C D Oの 誘導剤で挙げられたものと同様のものが挙げられる。
飲食品の場合にも、 その形態は特に限定されるものではなく、 分岐鎖 ァミノ酸の C D Oの誘導効果を発揮させるのに必要な量のみ飲食品に含 有させても良い。 なお、 本発明において飲食品とは、 動物用飼料をも含 み得る。 分岐鎖ァミノ酸を含有するシスティン代謝異常を改善する飲食品の場 合、 飲食品あたりでは、 分岐鎖ァミノ酸を 0 . 0 1 〜 1 0 g程度含有す るのが好ましく、 より好ましくは 0 . l 〜 1 0 g程度、 さらにより好ま しくは 1 〜 1 0 g程度である。 本発明の飲食品を使用する場合、 摂取す る対象の種類、 年齢、 摂取方法によって異なるが、 摂取量は通常 0 . 1 〜 3 0 g / k g Z日である。
本発明の飲食品は、 哺乳動物 （例えば、 マウス、 ラッ ト、 ハムスター、 ゥサギ、 ネコ、 ィヌ、 ゥシ、 ヒッジ、 サル、 ヒ ト等） に対して有用であ る。
本発明は有効成分がアミノ酸であるため、 安全性に優れており、 飲食 品の形態でも簡便に使用することができる。 本発明を飲食品に使用する には、 特に困難はなく、 例えばジュース、 牛乳、 菓子、 ゼリー等に混ぜ て飲食することができる。 このような飲食品を保健機能食品として提供 することも可能であり、 この保健機能食品にはシスティン代謝異常を改 善するために用いるものであるという表示を付した飲食品、 特に特定健 康用食品等も含まれる。
また、 本発明の飲食品を食品補助剤等として使用する場合、 例えば錠 剤、 カプセル、 散剤、 顆粒、 懸濁剤、 チユアブル剤、 シロップ剤等の形 態に調製することができる。
次に、 実施例により本発明をさらに詳細に述べる。 なお、 以下の実施 例は、 本発明を説明するものであって、 本発明をこれに限定するもので はない。 実施例
(実施例 1 ) ヒ ト肝癌細胞株 H e p G 2細胞における T G F ]3による C D O遺伝子の発現抑制
コラーゲンコ ートした 6 0 m mディ ッシュに H e p G 2細胞を 5 X 1 05個撒き、 1 0 %F B Sを含む DM EM培地中で約 7 0 %コンフルェ ントに達するまで一晩培養した。 培地を取り除き P B Sで洗浄し、 0. 1 %B S Aを含む無血清 DMEM培地に置き換え、 2 4時間培養した。 次に 0から 2 0 n g/m l の T G F ]3を含む無血清 D M E M培地に交換 し 1 6時間培養した。
総 RNAを抽出し、 ノーザンプロッ ト法により [ 一 3 2 P] d C T P でラベルしたヒ ト C D O遺伝子のプローブを用いて C DOの mRNA発 現を検出した。
その結果、 T G F の濃度依存的に CD Οの： mRNA発現量は減少し た （図 1 )。
(実施例 2) ヒ ト肝癌細胞株 H e p G 2細胞における C DO遺伝子の発 現誘導
コラーゲンコートした 6 0 mmディ ッシュに H e p G 2細胞を 5 X 1 05個撒き、 1 0 % F B Sを含む DMEM培地中で約 7 0 %コンフルェ ン トに達するまで一晩培養した。 培地を取り除き P B Sで洗浄し、 0. 1 %B S Aを含む無血清 DMEM培地に置き換え 2 2時間培養した。 次 に、 培地を取り除き P B Sで洗浄してから、 アミノ酸不含 DMEMに 3 O m g /Lの濃度でメチォニンのみ添加したアミノ酸不足培地に置き換 え 2時間培養した。 次いで、 メチォニンの他に 2 mMの分岐鎖アミノ酸 (B CAA) 混合物 （イ ソロイシン ： ロイシン ： ノ リ ン = 1 ： 2 ： 1. 2) を添加した培地に交換し、 1 6時間培養した。
実施例 1 と同様にしてノーザンプロット法により B C AA添加の有無 による CDOの mRNA発現量への影響を検討した。 その結果、 B CA A添加により C DO遺伝子の mRNA発現量は 1. 5倍程度に増加した (図 2)。
さらに、 B CAAによる C D Oの mRNA発現亢進作用は T G F ]3処 理条件下でも認められ、 T G F 処理により減少した CD Oの mRNA 量は B CAAを添加することでコントロールのレベル付近まで回復した (図 2)。 (実施例 3) ヒ ト肝癌細胞株 H e p G 2細胞における分岐鎖アミノ酸に よる C D 0遺伝子の mR N A発現誘導
B CAAによる C D O遺伝子の mR N A発現誘導効果について、 その 特異性を調べる目的で、 分岐鎖ァミノ酸混合物のほか複数のアミノ酸を 単独で処理した際の C D Oの mR N A発現量変化について調べた。
実施例 2と同様の条件で H e p G 2細胞を培養し、 3 O m g/Lのメチ ォニンの他に 2 mMの B C A A混合物、あるいは個々の分岐鎖ァミノ酸、 フエ二ルァラニン、 システィンのいずれかを含むァミノ酸不足 DMEM 培地で 1 6時間培養した。
実施例 1と同様にして、 ノ一ザンブロッ ト解析により各ァミノ酸の有 無による CDOの mRNA発現量への影響を検討した。 その結果、 2 m Mの分岐鎖アミノ酸混合物、 ロイシン、 イソロイシン、 ノ リ ンのいずれ も C D Oの mR N A発現量を増加させ、 特にロイシンとィソロイシンの 効果が強いことが示唆された。 また、 2 mMのフエ二ルァラニンまたは システィン処理によっては CD Oの mRNA発現量の変化が認められず、 分岐鎖アミノ酸に特異的な作用であることが示唆された （図 3 (A))。 分岐鎖アミノ酸、 その中でも特にロイシンには mT ORを活性化する ことが知られている。 mT O Rの活性化は S 6 K 1や 4 E— B P 1のリ ン酸化を介して: mRNAの翻訳開始段階を促進し遺伝子のタンパク質レ ベルでの発現を亢進する。 そこで、 C D O遺伝子の発現調節においてみ られた B C A Aの効果における mT O Rの関与について検討した。
H e p G 2細胞をメチォニンのみ含む培地で 2時間培養した際に、 1 時間半経過時点で 2 5 n g/m 1のラパマイシンで処理し、 3 0分後に 2 mMの B C A Aを添加して 1 6時間培養した。 その結果、 B CAAによ る C D Oの mR N A発現量の増加はラパマイシン処理により抑制されな かった （図 3 (B))。 (実施例 4) ヒ ト肝癌細胞株 H e p G 2細胞における CDO遺伝子プロ モーター活性化
図 1に示すように、分岐鎖アミノ酸混合物 (イソロイシン：ロイシン ： パリ ン = 1 ： 2 ： 1. 2 ) により CDO遺伝子の mRNA発現量は増加 した。 これに、 C D O遺伝子プロモーターからの転写活性の亢進が関与 しているかについて検討を行った。 ヒ ト C D O遺伝子の転写開始点より 上流約 2. 5 k bから 1 s tェク ソンを含む下流約 2. 3 k bまでのゲ ノム配列を、市販のルシフエラーゼレポーター遺伝子 p G L 3 b a s i c v e c t o r P r o m e g a.社、 M a d i s o n、 W I ) のクロー ユング部位に組み込んだレポーター遺伝子 p G L 3— CD04を構築し、 H e p G 2細胞にトランスフエクションした。分岐鎖アミノ酸混合物（ィ ソロイシン ： ロイシン ： ノ リ ン = 1 ： 2 ： 1. 2 ) の添加による C D O 遺伝子プロモーター活性の変化をルシフェラーゼァッセィにより検討し た。 その結果、 2 mM以上の分岐鎖アミノ酸存在下で CDOプロモータ 一の転写活性は 1. 5倍程度に亢進し （図 4 (A))、 分岐鎖アミノ酸は C D O遺伝子の転写を亢進して mRN A発現量を増加させる効果を持つ ことが示唆された。 また、 図 2に示したように B CAAによる C D O遺 伝子 mRN A発現亢進効果は、 T G F ]3による C D O発現抑制条件下で も認められた。 同様の条件でルシフェラーゼァッセィによる検討を行つ たところ、 C D O遺伝子のプロモーター活性は T G F β処理下で減少し、 B C A Αの添加により増加した （図 4 (B))。 この結果より、 C D O遺 伝子 mR N A発現に及ぼす T G F jS と B C A Aの効果はいずれも転写レ ベルで生じており、 両者の作用は拮抗することが示唆された。 (実施例 5 ) 肝硬変モデルラッ ト肝臓における CD O遺伝子発現の亢進 作用
ヒ ト肝癌由来 H e p G 2細胞で認められた B CAAによる CDO遺伝 子発現亢進が i n v i v oでも認められるか検討するために、四塩化炭 素反復投与により作製した肝硬変モデルラッ トを用いて、 肝臓における C D O遺伝子発現へ及ぼす B C A A投与効果を検討した。
S D ( I G S)ラッ トを用い、 C R F- 1基本食 （ォリェンタル酵母） の 自由摂取、 0. 0 5 %フエノバルビタールナトリ ウム飲水下で飼育し、 7週齢目より四塩化炭素とォリーブオイルの等量混合液 1 m l /g体重 を週 2回皮下投与し肝硬変を誘発した。 投与開始後 3ヶ月 目より B CA A食事群には 2. 5 %の B CAA (イソロイシン ： ロイシン ：バリン= 1 : 2 : 1. 2 ) 混合食を、 通常食群には 2. 5 %のカゼイン混合食を 1ヶ月間与えた。 正常ラッ トは同週齢のものを用いた。
ラッ ト肝臓より総 RNAを抽出し、 逆転写酵素を用いて c DN Aを作 製した。 C DO特異的プライマー （センスプライマー配列： 5 ' -GAG AACGT CAG C CACACAG-3 ' (配列番号 1 )、 アンチセンス プライマー配列 ： 5 ' -TTG C T GT GGAATGT CATGG-3 ' (配列番号 2)) を用いて CD O mR N Aの発現量を定量した。 定量結 果は GAP DHを内部標準として捕正した値を正常ラッ トの平均値を 1 0 0 %として百分率で示した （図 5 )。 肝硬変モデルラッ トの通常食群で は肝臓における CD O mR N A発現レベルが正常ラッ トの 5 0 %以下 に低下したが、 B C A A食群では正常レベルまで回復した。
以上の結果から、 B C AAは肝硬変モデルラッ トの肝臓において低下 した CD O遺伝子発現レベルの回復にも有効であることが示された。 産業上の利用可能性 本発明により提供される分岐鎖ァミノ酸を含有するシスティンジォキ シゲナーゼ （C D O) の誘導剤は、 システィン代謝異常に起因する疾患 の治療及び/又は予防に有用である。 また、 本誘導剤は、 アミノ酸を有 効成分とすることから、 安全性が高く、 副作用がほとんどないため、 医 薬品のみならず、 飲食品としても有利である。
本発明により提供される、 分岐鎖ァミノ酸を含有してなるシスティン ジォキシゲナーゼの誘導剤は、 優れたシスティンジォキシゲナーゼの誘 導活性を有する。 また、 本発明の医薬組成物は、 アミノ酸を有効成分と することから、 安全性が高く、 副作用がほとんどないので、 長期にわた つて投与可能であり、 システィン代謝異常に起因する疾患 （パーキンソ ン病ゃ Hallervorden- Spatz病などの神経疾患等）の治療及びノ又は予防 に有利に用いることができる。 また、 本発明のシスティン代謝異常を改 善するための飲食品も、 アミノ酸を有効成分とすることから、 安全性が 高く、 長期にわたって摂食可能であり、 システィン代謝異常に起因する 疾患の発生を未然に防止するのに有効である。
本出願は、 日本で出願された特願 2 0 0 4— 3 24 7 0 0 (出願日 ： 2 0 0 4年 1 1月 9 日） を基礎としており、 その内容は本明細書に全て 包含されるものである。

Claims

請求の範囲
I . 分岐鎖ァミノ酸を含むことを特徴とするシスティンジォキシゲナ一 ゼの誘導剤。
2 . 前記誘導がシスティンジォキシゲナーゼ遺伝子発現の増強である、 請求項 1記載のシスティンジォキシゲナーゼの誘導剤。
3 . 前記誘導がシスティンジォキシゲナーゼ遺伝子に対する T G F の 作用抑制によるものである、 請求項 1記載のシスティンジォキシゲナー ゼの誘導剤。
4 . T G F ]3の作用がシスティ ンジォキシゲナーゼ遺伝子の発現の抑制 である、 請求の範囲 3記載のシスティンジォキシゲナーゼの誘導剤。
5 . 請求の範囲 1〜 4のいずれかに記載のシスティンジォキシゲナーゼ 誘導剤を含有することを特徴とするシスティン代謝異常に起因する疾患 の治療又は予防剤。
6 . システィン代謝異常に起因する疾患がパーキンソン病、 ァルツハイ マー病、 慢性関節リゥマチからなる群から選ばれる請求の範囲 5記載の システィン代謝異常に起因する疾患の治療又は予防剤。
7 . 分岐鎖ァミノ酸を含むことを特徴とするシスティン代謝異常の改善 用飲食品。
8 . システィン代謝異常の改善がシスティ ンジォキシゲナーゼの誘導に よるものである、 請求項 7記載の飲食品。
9 . システィン代謝異常の改善がシスティンジォキシゲナーゼ遺伝子発 現の増強によるものである、 請求項 7記載の飲食品。
1 0 . システィン代謝異常の改善が T G F βの作用抑制によるものであ る、 請求項 7記載の飲食品。
I I . システィ ン代謝異常を改善するために用いるものであるという表 示を付した、 請求の範囲 7〜1 0のいずれかに記載の飲食品。
1 2. 分岐鎖アミノ酸の有効量を投与対象に投与することを含む、 シス ティンジォキシゲナーゼの誘導方法。
1 3. 分岐鎖ァミノ酸を含むシスティンジォキシゲナーゼ誘導剤の有効 量を投与対象に投与することを含む、 システィン代謝異常に起因する疾 患の治療又は予防方法。
1 4. システィ ンジォキシゲナーゼの誘導剤の製造のための、 分岐鎖ァ ミノ酸の使用。
1 5. システィン代謝異常に起因する疾患の治療又は予防剤の製造のた めの、 分岐鎖アミノ酸の使用。
1 6. システィン代謝異常の改善用飲食品の製造のための、 分岐鎖アミ ノ酸の使用。
1 7. 分岐鎖アミノ酸を含有する組成物、 並びに当該組成物をシスティ ンジォキシゲナーゼの誘導に使用し得ること又は使用すべきであること を記載した記載物を含む商業的パッケージ。
1 8. 分岐鎖アミノ酸を含有する組成物、 並びに当該組成物をシスティ ン代謝異常に起因する疾患の治療又は予防に使用し得ること又は使用す べきであることを記載した記載物を含む商業的パッケージ。
PCT/JP2005/020985 2004-11-09 2005-11-09 システインジオキシゲナーゼ誘導剤 WO2006051997A1 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2004324700 2004-11-09
JP2004-324700 2004-11-09

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2006051997A1 true WO2006051997A1 (ja) 2006-05-18

Family

ID=36336659

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2005/020985 WO2006051997A1 (ja) 2004-11-09 2005-11-09 システインジオキシゲナーゼ誘導剤

Country Status (1)

Country Link
WO (1) WO2006051997A1 (ja)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0276813A (ja) * 1988-05-06 1990-03-16 Ajinomoto Co Inc 神経変性疾患の治療薬
JPH05339148A (ja) * 1992-05-28 1993-12-21 T Knight Albert 血液脳関門を通過する物質
WO2002060431A1 (fr) * 2001-01-30 2002-08-08 Ajinomoto Co., Inc. Medicaments therapeutiques/prophylactiques contre des maladies inflammatoires
JP2004292437A (ja) * 2003-03-10 2004-10-21 Masami Moriyama 異常プリオン蛋白質の増殖の抑制方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0276813A (ja) * 1988-05-06 1990-03-16 Ajinomoto Co Inc 神経変性疾患の治療薬
JPH05339148A (ja) * 1992-05-28 1993-12-21 T Knight Albert 血液脳関門を通過する物質
WO2002060431A1 (fr) * 2001-01-30 2002-08-08 Ajinomoto Co., Inc. Medicaments therapeutiques/prophylactiques contre des maladies inflammatoires
JP2004292437A (ja) * 2003-03-10 2004-10-21 Masami Moriyama 異常プリオン蛋白質の増殖の抑制方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5812565B2 (ja) アミノ酸組成物
Prasad Discovery of zinc for human health and biomarkers of zinc deficiency
KR20130137719A (ko) 알콜대사를 완화하고 알콜유도성 질환의 위험을 감소하기 위한 조성물
JP5074661B2 (ja) 肝癌発生・進展抑制剤
US20170027897A1 (en) mTORC1 MODULATION BY AMINO ACIDS AND USES THEREOF
US20080038321A1 (en) Prophylactic/therapeutic compositions for liver diseases
US20220241259A1 (en) Compositions and methods using trigonelline and vitamins for preventing or treating conditions or disorders in skeletal muscle
US4987123A (en) Compositions useful for the treatment and/or prevention of hepatic disorders, and their pharmaceutical use
TW200924744A (en) Compositions and methods for inhibiting the activation of dsRNA-dependent protein kinase and tumor growth inhibition
US20220241266A1 (en) Compositions and methods using trigonelline and high protein for preventing or treating conditions or disorders in skeletal muscle
JPWO2002034257A1 (ja) 中枢神経系の疲労回復又は予防剤及び疲労回復又は予防のための食品
JPWO2007029730A1 (ja) 老人性貧血を防止又は治療するためのアミノ酸組成物
JP7503179B2 (ja) インスリン抵抗性改善用組成物
JP2022538584A (ja) 骨格筋における状態又は障害を予防又は治療するための、トリゴネリン及びミネラルを使用する組成物及び方法
WO2007060924A1 (ja) 膵β細胞保護剤
TW201113023A (en) Enhancer of activity of nucleic acid analogue
WO2006051997A1 (ja) システインジオキシゲナーゼ誘導剤
JP7068942B2 (ja) トリペプチド含有組成物
JP4300753B2 (ja) 貧血抑制剤及び食欲抑制剤
WO2022080249A1 (ja) 炎症性腸疾患の予防又は改善剤
EP1475090A1 (en) Drugs for mitochondrial diseases
TW202402190A (zh) 包含源自乳清蛋白的肽的生長促進用組合物
WO2024095905A1 (ja) アミロイドβ蓄積抑制用組成物
KR960016569B1 (ko) 알라닌 및 글루타민 함유 식품 조성물
JP2009084197A (ja) 内因性オピオイドペプチドの血中分泌促進用組成物

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AE AG AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BW BY BZ CA CH CN CO CR CU CZ DE DK DM DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KM KN KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV LY MA MD MG MK MN MW MX MZ NA NG NI NO NZ OM PG PH PL PT RO RU SC SD SE SG SK SL SM SY TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN YU ZA ZM ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): GM KE LS MW MZ NA SD SL SZ TZ UG ZM ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HU IE IS IT LT LU LV MC NL PL PT RO SE SI SK TR BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 05806654

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: JP

WWW Wipo information: withdrawn in national office

Country of ref document: JP

点击 这是indexloc提供的php浏览器服务，不要输入任何密码和下载