+

WO2006042861A1 - Protection d'ingrédients alimentaires bioactifs par encapsulation - Google Patents

Protection d'ingrédients alimentaires bioactifs par encapsulation Download PDF

Info

Publication number
WO2006042861A1
WO2006042861A1 PCT/EP2005/055440 EP2005055440W WO2006042861A1 WO 2006042861 A1 WO2006042861 A1 WO 2006042861A1 EP 2005055440 W EP2005055440 W EP 2005055440W WO 2006042861 A1 WO2006042861 A1 WO 2006042861A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
bioactive
food
interest
food product
ingredient
Prior art date
Application number
PCT/EP2005/055440
Other languages
English (en)
Inventor
Sophie Vaslin
Anne Le Guillou
Baya Hannoucene
Thierry Saint Denis
Original Assignee
Compagnie Gervais Danone
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Compagnie Gervais Danone filed Critical Compagnie Gervais Danone
Priority to JP2007537282A priority Critical patent/JP2008516623A/ja
Priority to CA002584621A priority patent/CA2584621A1/fr
Priority to EP05803119A priority patent/EP1811853A1/fr
Priority to MX2007004879A priority patent/MX2007004879A/es
Priority to BRPI0516996-8A priority patent/BRPI0516996A/pt
Priority to US11/577,617 priority patent/US20080050355A1/en
Publication of WO2006042861A1 publication Critical patent/WO2006042861A1/fr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING OR TREATMENT THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING OR TREATMENT THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/13—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using additives
    • A23C9/1322—Inorganic compounds; Minerals, including organic salts thereof, oligo-elements; Amino-acids, peptides, protein-hydrolysates or derivatives; Nucleic acids or derivatives; Yeast extract or autolysate; Vitamins; Antibiotics; Bacteriocins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23P—SHAPING OR WORKING OF FOODSTUFFS, NOT FULLY COVERED BY A SINGLE OTHER SUBCLASS
    • A23P10/00—Shaping or working of foodstuffs characterised by the products
    • A23P10/30—Encapsulation of particles, e.g. foodstuff additives
    • A23P10/35—Encapsulation of particles, e.g. foodstuff additives with oils, lipids, monoglycerides or diglycerides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/21—Streptococcus, lactococcus
    • A23V2400/249—Thermophilus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/51—Bifidobacterium
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/46—Streptococcus ; Enterococcus; Lactococcus

Definitions

  • the present invention relates to a food product containing one or more live microorganisms and at least one bioactive food ingredient of interest, wherein the living microorganism (s) and the bioactive food ingredient (s) of interest are used in such a way as to reduce the metabolisation of said bioactive ingredient (s) by said microorganism (s).
  • Bioactive peptides are defined sequences of amino acids that are inactive in their original protein, but which have particular properties once released by enzymatic action. They are also called functional peptides. These bioactive peptides are capable of exerting, inter alia, an effect on the digestive system, the defenses of the body (for example, an antimicrobial or immunomodulatory effect), the cardiovascular system (in particular an antithrombotic or antihypertensive effect), and or the nervous system (such as a sedative and analgesic effect of the opioid type) (see Tables 1 and 2 below). Table 1 below lists the main functional peptides released by the hydrolysis of the proteins of human milk and cow's milk. Table 1
  • Table 2 below lists the main physiological activities of functional peptides from milk known to date.
  • peptides are most often obtained by hydrolysis of plant proteins (for example soy proteins) or animal proteins (for example, caseins or serum proteins of milk), hydrolysis generated by enzymatic and / or fermentative processes, most often accompanied by a concentration of the active fraction, a step usually necessary to provide the targeted "health benefit".
  • plant proteins for example soy proteins
  • animal proteins for example, caseins or serum proteins of milk
  • hydrolysis generated by enzymatic and / or fermentative processes most often accompanied by a concentration of the active fraction, a step usually necessary to provide the targeted "health benefit”.
  • the manufacture and use of these peptides for a health benefit is the subject of an abundant literature (see in particular the Danone World Newsletter N ° 17 of September 1998).
  • fermented milk products are in a good position because of their health benefits due to the presence of ferments and fermentation products (ie the molecules resulting from the transformation , by lactic acid bacteria, substrates present in the milk).
  • PRT wall proteases which cuts proteins and large peptides to facilitate their assimilation ("extracellular metabolism system")
  • intracellular enzymatic system capable of degrading the peptides into amino acids (comprising about fifteen endo- and exopeptidases) ("intracellular metabolization system").
  • the Applicant has thus observed that the population of living lactic acid bacteria in the finished product continues to metabolize the bioactive peptide during storage of the finished product, so that after only 10 days (for fresh products with a DLC of 28 days) approximately 35-55% of the peptide ⁇ S1 [91 -100] has disappeared, which is completely unacceptable to guarantee a "health" effect in the consumer (data not shown).
  • the thermisation of a fermented milk mass involves the use of stabilizers added before the heat treatment (pectins, starches, carrageenans, etc.), which complicates the process and significantly increases the cost of the formula;
  • the Applicant provides a solution that satisfies the existing need.
  • the present invention is therefore concerned with a food product containing one or more living microorganisms and at least one bioactive food ingredient of interest, characterized in that the living microorganism (s) and the bioactive food ingredient (s) of interest are placed in to reduce metabolism of said bioactive ingredient (s) by said living microorganism (s).
  • the Applicant has been able to show that one or more bioactive food ingredients of interest could be effectively protected against metabolism by living microorganisms, provided that the conditions of implementation with each other are appropriate.
  • Such appropriate implementation conditions may involve a variety of means, including: (a) the use of live microorganisms with reduced ability to metabolize bioactive ingredients; and / or (b) the use of lure food ingredients that are deliberately “fed” to living microorganisms; and / or c) the implementation of a physical protection of the bioactive ingredients, in particular by encapsulation of the latter.
  • the Applicant therefore proposes a food product containing one or more living microorganisms and at least one bioactive food ingredient of interest, characterized in that the one or more bioactive food ingredients of interest are protected:
  • the one or more bioactive food ingredients of interest being preferably encapsulated;
  • an object of the present invention relates to a food product containing one or more living microorganisms and at least one bioactive food ingredient of interest, characterized in that the one or more bioactive food ingredients of interest are physically protected by encapsulation in a fat, so that their metabolism by the living microorganism (s) is reduced.
  • metabolized or “metabolized” is meant according to the present invention the transformation or degradation of a substance by one or more living microorganisms, aiming at its consumption as a source of nutrients, and having as a final consequence its disappearance, more or less complete, of the medium.
  • the metaboiization of an ingredient is "reduced” if it is less than the metaboiization of the same ingredient when the latter ingredient is not protected by at least one of the means provided in the context of this invention. invention.
  • this reduced metaboiization tends to, or is worth, zero, which amounts to little, almost no, or not, metaboiization of said ingredient.
  • the residual amount of bioactive food ingredient (s) of interest in said food product is, 3 weeks after its preparation, between 50 and 100% approximately relative to the amount of bioactive food ingredient (s) of interest present in the product just after preparation.
  • residual amount is between about 80 and 100%.
  • residual amount of bioactive food ingredient (s) of interest in said food product is meant according to the present invention the percentage of bioactive food ingredient (s) d interest present in said food product when the latter is maintained under suitable storage conditions (for example, of the order of 4 to 10 0 C for a fresh product) for 3 weeks, relative to the percentage of ingredient (s) ) bioactive food (s) of interest present at the start, that is to say right after manufacture of the product.
  • suitable storage conditions for example, of the order of 4 to 10 0 C for a fresh product
  • the bioactive food ingredient of interest will be chosen from:
  • the bioactive food ingredient of interest is chosen from: the peptide ⁇ S1 [91-100] (see European patent EP 0 714 910), the peptide C6- ⁇ s i 194-199 (see US Pat. 514 941), the C7- ⁇ 177-183 peptide (see US patent No.
  • Analogous is understood to mean any modified version of an initial compound, here a protein or a peptide, said modified version possibly being natural or synthetic, in which one or more atoms, such as carbon atoms, d Hydrogen, oxygen, or heteroatoms such as nitrogen, sulfur, or halogen, have been added or removed from the structure of the parent compound to obtain a new molecular compound.
  • a "derivative" within the meaning of the invention is any compound that has a resemblance or a structural unit in common with a reference compound (protein or peptide).
  • hydrolysates in particular tryptic hydrolysates, of proteins and / or peptides, the hydrolyzate fractions, as well as the mixtures of hydrolysates and / or of hydrolysate fractions.
  • analogs and derivative of a peptide or protein cover, for example, a glycosylated or phosphorylated peptide or protein or which has undergone any group grafting. chemical.
  • the bioactive food ingredient of interest may in particular be a sugar or a fatty acid.
  • the one or more bioactive food ingredient (s) of interest is (are) encapsulated; live microorganisms are not.
  • encapsulated or “encapsulation” is meant to designate according to the present invention the implementation of a method of protecting an active ingredient in a microparticle type vehicle to allow controlled release of this active ingredient.
  • the active ingredient is constituted by one or more bioactive food ingredients of interest.
  • encapsulation overcomes the drawbacks of the solutions of the state of the art, in that it prevents the metabolization of bioactive food ingredients of interest by living microorganisms.
  • encapsulation allows the bioactive food ingredients of interest to reach the level of the intestine, without being degraded, and to cross the intestinal barrier without damage in order to produce their effects.
  • the Applicant observes that the encapsulation of substances is quite original in the case of fermented food products, in particular fermented dairy products.
  • encapsulation makes it possible to obtain an organoleptically more acceptable final product, for example by masking the more or less strong bitterness of certain bioactive ingredients, in particular certain peptides. Therefore, according to a particularly preferred embodiment, the present invention relates to a food product as described above, the bitterness is reduced.
  • the bitterness of a food is "reduced” if a food is considered less bitter after a pair test (Directional Paired Comparison Method, Sensory Evaluation of Food, Harry T. Lawless, Hildegarde Heymann (1990)).
  • This test can be performed on a panel (from 10 people) bringing together different people having integrated well what is the notion of bitterness (a learning of this notion is realized by the tasting of products containing a bitter molecule (eg, caffeine), these products being made more or less bitter according to the concentration of the said molecule) .
  • the product according to the present invention is then blinded (panel members do not know which product is presented to them first) to the panel members, and they compare it with a product not in accordance with the invention.
  • the two products presented to the panel differ only in that one was made in accordance with the invention, and not the other.
  • the order of presentation of the two products from one person of the panel to another obeys the laws of chance, the number of people receiving first the product realized according to the invention being equal to the number of people receiving the other product first .
  • Each person must indicate, for each repetition of the test, which is the most bitter product among the two products tasted.
  • the one or more bioactive food ingredients of interest are encapsulated in a fat.
  • the encapsulation in a fat can in particular be carried out by dispersing the bioactive food ingredient (s) of interest in a fatty phase, where it (they) is (are) finally encapsulated (s), ( ie, emphsonné (s), retained (s)) in very fine lipid droplets.
  • s bioactive food ingredient
  • s ie, emphsonné
  • fat or “fat” means any substance containing one or more lipids. It may be, for example, an oil, a fat, a butter, etc. This fat may be natural, then existing in various forms in animals, plants, and in their products (that is, in products derived from their metabolism), or synthetic.
  • a criterion for selecting the fat that can be used in the context of the present invention is related to its melting temperature. Indeed, in order to achieve a dispersion as envisaged supra, it is appropriate to use a concrete fat, that is to say solid at room temperature.
  • Suitable oils include palm oil and its fractions, coconut oil and its fractions, palm kernel oil and its fractions, cocoa-type vegetable butter oils, margarines, hydrogenated, or partially hydrogenated vegetable oils, and the like.
  • the choice of the concrete fat will be done taking into account also its nutritional qualities.
  • fractionated fats will be preferred to hydrogenated or partially hydrogenated fats.
  • the encapsulation will preferably be implemented within a multiple water / oil / water emulsion.
  • the use of fluid fluids at room temperature (oils) may be more appropriate (rape, oleic rapeseed, soybean, sunflower, oleic sunflower, fish oils, seaweed oils, etc.).
  • the Applicant emphasizes the fact that, by the choice of a concrete fat, it takes advantage of its recrystallization after fusion, resulting in imprisonment and physical protection of the bioactive food ingredient.
  • an appropriate fat from animal fats, in particular dairy or fish fats, and vegetable fats.
  • Suitable vegetable fats include palm oil, rapeseed oil and / or fat extracted from an algae.
  • the living microorganism (s) have an intact or reduced capacity for metabolizing the one or more bioactive food ingredients of interest.
  • a "reduced metabolic capacity" is such that the amount of bioactive ingredients of interest metabolized during fermentation (which therefore disappears from the medium) is less than or equal to 40% of the initial amount of ingredients ( before fermentation).
  • the amount of residual bioactive ingredients Q r can be measured by an HPLC liquid chromatography method coupled to an MS / MS type detector.
  • An example of an experimental procedure is given in the examples below.
  • the living microorganism or microorganisms will preferably be bacteria, more preferably lactic acid bacteria, living. More particularly, living bacteria will be chosen from: Streptococcus spp., Preferably Streptococcus thermophilus; o Lactobacillus spp. o Lactococcus spp. o Bifidobacterium spp.
  • the living bacteria will be chosen from: - Streptococcus thermophilus, deposited at the CNCM (National Collection of Cultures of Microorganisms (Institut Pasteur, Paris, France)) on 24/01/02 under number I-2774;
  • Streptococcus thermophilus deposited at the CNCM on October 24, 1995 under the number 1-1630;
  • Streptococcus thermophilus deposited at the CNCM on September 16, 2004 under the number 1-3301; and Streptococcus thermophilus, deposited at the CNCM on September 16, 2004 under the number I-3302.
  • said living bacteria are S. thermophilus bacteria deposited at the CNCM on 05/201704 under the number 1-3211.
  • the food product contains at least the living bacteria S. thermophilus and Lactobacillus spp.
  • said living bacteria Streptococcus thermophilus are chosen from S. thermophilus deposited at the CNCM on 24/01/02 under the number I-2774, S. thermophilus deposited at the CNCM on October 24, 1995 under the number 1-1630, S. thermophilus deposited at the CNCM on May 10, 2004 under the number 1-3211, S. thermophilus deposited at the CNCM on September 16, 2004 under the number 1-3301, and S. thermophilus deposited at the CNCM on March 16 / 09/04 under number I-3302.
  • the content of the food product according to the invention in live microorganisms may vary and will be chosen by those skilled in the art in the light of his general knowledge in the field.
  • a food product according to the invention also contains at least one lure food ingredient.
  • the term "lure food ingredient” is intended to denote according to the present invention a food ingredient (preferably a peptide, a protein, an analogue or a derivative thereof, and combinations thereof) capable of serving as a source of nutrients (especially nitrogen source) for living microorganisms, and intended to be preferentially metabolized by said microorganisms, so as to divert the latter from the bioactive ingredients of interest that are of course intended to be preserved as a priority.
  • the lure ingredient represents a nutrient source for microorganisms, which is sacrificed deliberately to save as much bioactive ingredients of interest as possible.
  • the lure food ingredient acts as a competitive inhibitor of the transport of the bioactive ingredients of interest.
  • food product is meant here a product for animal feed and / or human, preferably human.
  • This product can be in any consumable form. It can be a drink such as water, vegetable juices (fruits and / or vegetables and / or cereals ...), milk, yoghourts to drink, mixtures of these. It can also be solid products or intermediate products, more or less wet.
  • the food product according to the invention is a water.
  • the food product according to the present invention is a fermented product. More preferably, the fermented food product is a dairy or vegetable product.
  • dairy product in addition to milk, products derived from milk, such as cream, ice cream, butter, cheese, yogurt; secondary products, such as whey, casein; and any prepared food containing, as the main ingredient, milk or milk constituents.
  • Plant product means, inter alia, products obtained from a vegetable base such as, for example, fruit juices and vegetable juices, including soya juice, oat juice or the rice juice.
  • the above definitions of “dairy product” and “plant product” each cover any product made from a mixture of dairy and vegetable products, such as a mixture of milk and fruit juice, for example.
  • the present invention also relates to a method for encapsulating at least one bioactive food ingredient of interest in a fat.
  • a food additive such as an emulsifier during the encapsulation of the bioactive food ingredient provides a more homogeneous "population" of fat globules.
  • emulsifier it has been possible to observe a majority of large fat globules (with a diameter of about 25 ⁇ m and more), and a relatively low dispersion of the peptide in the product.
  • the dispersion is higher and the smaller globules (with a maximum diameter of about 10 ⁇ m).
  • the encapsulation process comprises at least: a) the preparation of a water / fat mixture, to be maintained at a temperature close to the melting point of said fat, preferably within a range of ⁇ 10 0 C around said melting temperature; b) the gradual incorporation, with stirring, preferably gentle, of the bioactive ingredient of interest in the mixture obtained in step a), keeping the assembly at a temperature close to the melting temperature of said material fat, and preferably within a range of ⁇ 10 0 C around said melting temperature; and c) optionally, adding one or more food additives such as emulsifiers, thickeners, etc., and mixing, preferably strong, all while maintaining a temperature close to the melting temperature of said fat, and preferably within a range of ⁇ 1O 0 C around said melting temperature.
  • steps a), b) and, optionally, c) above may slightly vary from one step to another, while remaining preferably in the range of ⁇ 1 O 0 C around the melting temperature of the fat.
  • the temperature of implementation of all of these steps will advantageously be substantially the same.
  • the present invention also relates to a process for the preparation of a food product as described above, in which one or more bioactive food ingredients of interest are encapsulated, for example according to the method described above, before being added to the mixture intended to constitute said food product.
  • the encapsulated bioactive food ingredient (s) of interest are added to said mixture with stirring.
  • the encapsulated bioactive food ingredient (s) of interest can be added to the mixture before or after fermentation.
  • the preparation method according to the present invention is such that the living microorganism (s) and the encapsulated bioactive food ingredient (s) of interest are added one after the other in the mixture intended to constitute said food product.
  • the living microorganisms and encapsulated bioactive food ingredients of interest are added simultaneously to the mixture intended to constitute said food product.
  • the culture conditions of the microorganisms depend on said microorganisms and are known to those skilled in the art. For example, it will be specified that the optimum growth temperatures for S. thermophilus are generally between about 36 ° and 42 ° C. they are between 42 ° and 46 0 C for L. delbrueckii spp. bulgahcus (which is typically found in yoghurt).
  • the fermentation stoppage which depends on the desired pH, is obtained by rapid cooling, which slows down the metabolic activity of the microorganisms.
  • the present invention further relates to the use of a food product as described above as a functional food.
  • “functional food” is meant a food product that advantageously affects one or more target functions of the body, regardless of its nutritional effects. This can result in an improvement of the state of health and / or well-being and / or a reduction of the risks of occurrence of diseases in a consumer who ingests normal amounts of said product.
  • activities of a "Functional food” may include anti-cancer, immunostimulatory, bone health promoting, anti-stress, opioid, antihypertensive, calcium bioavailability enhancing, or antimicrobial (Functional Food Science in Europe) activities. , 1998).
  • Such functional foods may be intended for humans and / or animals.
  • the present invention also relates to the use of a fat to encapsulate at least one bioactive food ingredient of interest intended to be incorporated into a food product containing one or more living microorganisms.
  • FIG. 1 Chromatogram LC-MS illustrating the disappearance of the bioactive peptide ⁇ S1 [91-100] included in the ingredient Lactium® during lactic fermentation.
  • Figure 2 Identification and quantification of the main peptides of the Lactium® ingredient by LC-MS / MS before and after fermentation of the dairy "mix” with a ferment consisting of a mixture of strains I-2783 (deposited at the CNCM on 24 / 01/02), I-2774 (filed at the CNCM on 24/01/02), I-2835 (filed at the CNCM on 04/04/02) and 1-1968 (filed at the CNCM on 14/01 / 98). After fermentation, these peptides are only found in trace amounts and merge with the baseline. "? Means that the identification of the sequence was not possible or is not certain; only the mass of the peptide is then reported.
  • FIG. 4 Curves illustrating the evolution of the residual content of bioactive peptide ⁇ S1 [91-100] in a finished product constituted of 95% fermented mass by the ferment containing strains I-2783, I-2774, I-2835 and 1-1968, and 5% flavored sugar syrup containing the peptide ⁇ S1 [91-100], during storage at 10 ° C. The experiment was carried out at the rate of 4 independent tests E1, E2, E3 and E4 .
  • FIG. 5 Curves illustrating the evolution of the residual content of bioactive peptide ⁇ S1 [91-100], added after fermentation in a fermented product then thermised at 75 ° C. for 1 minute, and stored at 10 ° C. until the date consumption limit (DLC).
  • DLC date consumption limit
  • FIG. 7 Compared Peptide Profiles (LC-MS / MS Chromatograms) of a milk mix containing 1.5 g / L of Lactium® provided in emulsion form in palm oil according to the present invention, immediately after addition to the fermented mass (1) and after 14 days storage at 10 0 C (2).
  • LC-MS / MS Chromatograms LC-MS / MS Chromatograms
  • Example 1 Implementation of Bioactive Ingredients of Interest Without Applying the Claimed Invention 1.1)
  • ingredients of the peptide or protein type are simpler when they are added during the step of preparation of the dairy "mix” (powdering of the milk), before the treatment thermal sanitation (ie, 95 ° C, 8 min) and, therefore, before fermentation.
  • the risk of metabolizing the active peptide is very high.
  • a functional ingredient such as Lactium® (Ingredia, France) containing a bioactive peptide (fragment 91-100 of casein ⁇ S1).
  • the medium was prepared by hydration of a skimmed milk powder at 120 g / L, supplemented with 1.5 g / L of Lactium® ingredient (corresponding to about 30 mg / L of bioactive peptide ⁇ S1 [91-100] ), then pasteurized at 95 ° C for 8 minutes.
  • the lactic ferment was added at a rate of 0.02%, and the fermentation was conducted at the optimum temperature of the selected ferment (between 37 and 42 ° C) until a pH of 4.70 was reached.
  • the sample was prepared by dilution of the fermented medium in a mixture of water, methanol and trifluoroacetic acid (50/50 / 0.1%) in a ratio of 1 to about 6.
  • the supernatant after centrifugation constituted the representative sample of the peptide content of the fermented medium.
  • the detection was carried out using a specific MS / MS type detector, for example with an ion trap device such as I ⁇ squire3000 + (Bruker Daltonique, rue de l'Industrie, 67166
  • the Lactium® ingredient contains many other peptides, some of which potentially have biological activity (such as ⁇ S1 casein fragment 23-34, which is also commercially available in DMV International's C12 ingredient). It is interesting to note that almost all the peptides provided by the addition of Lactium® are widely consumed during fermentation.
  • Table 3 shows that all the enzymes and strains tested metabolize from 94 to 100% of the bioactive peptide ⁇ S1 [91-100] during the fermentation of a standard dairy mix. The implementation of this ingredient is therefore impossible under conventional conditions to produce food products, including dairy, containing peptides and / or bioactive proteins in amounts sufficiently stable over time to produce an effect in the consumer.
  • the C12 and CPP ingredients produced by DMV International are hydrolysates of milk proteins containing bioactive peptides targeting the control of hypertension and the assimilation of minerals respectively.
  • the active peptide (provided by the equivalent of 1.5 g of Lactium® per kg of finished product) is rapidly degraded during storage, so that leave only 30 to 40% of the initial quantity at the use-by date (DLC).
  • DLC use-by date
  • the thermization of a fermented milk mass involves the use of stabilizers added before the heat treatment (pectins, starches, carrageenans, etc.), which complicates the process and substantially increases the cost of the formula; the industrial manufacturing line is more complex and requires a higher specific investment; - the product no longer benefits from names related to products containing live ferments (yogurt type) and in fact loses the benefits associated with the consumption of lactic ferments; - the organoleptic impact (generally negative) is significant.
  • Step 1 encapsulation of the bioactive food ingredient
  • Suppliers of this type of oil are numerous (eg, Cargill). The oil was melted at 50 0 C for a total absence of crystals, and the Lactium ® containing the bioactive food ingredient ⁇ S1 [91-100] was added gradually with magnetic stirring (maintained at 50 ° c).
  • Step 2 manufacture of the aqueous medium of the syrup type
  • a kind of syrup was made from water and premix palm oil / bioactive food ingredient.
  • the bioactive food ingredient was gradually added to water (30 ° C.) with stirring with ultraturax (22,000 rpm), the palm content in the solution being arbitrarily set at 30%.
  • the emulsion obtained was easily pumpable at 30 ° C.-35 ° C., but became increasingly firm as soon as the temperature was below 25 ° C.-30 ° C. (gradual recrystallization of palm oil).
  • a food emulsifier eg, Lactem® supplied by Danisco
  • Lactem® supplied by Danisco a food emulsifier at a level of 0.5% / MG resulted in a less heterogeneous population of fat globules.
  • Step 3 addition of the emulsion in the fermented white mass.
  • the bioactive ingredient content is stable over time, indicating that a bioactive food ingredient can be effectively encapsulated in accordance with the present invention.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Dairy Products (AREA)
  • General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

La présente invention concerne un produit alimentaire contenant un ou plusieurs microorganismes vivants et au moins un ingrédient alimentaire bioactif d'intérêt, dans lequel le ou lesdits ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt sont protégés par encapsulation dans une matière grasse, de sorte que leur métabolisation par le ou lesdits microorganismes vivants est réduite.

Description

Protection d'ingrédients alimentaires bioactifs par encapsulation
La présente invention se rapporte à un produit alimentaire contenant un ou plusieurs microorganismes vivants et au moins un ingrédient alimentaire bioactif d'intérêt, dans lequel le ou lesdits microorganismes vivants et le ou lesdits ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt sont mis en œuvre de manière à réduire la métabolisation du ou desdits ingrédients bioactifs par le ou lesdits microorganismes.
Le marché des ingrédients alimentaires, en particulier des peptides, bioactifs ou fonctionnels (i.e., ayant une activité bénéfique pour le consommateur soit localement dans le tube digestif, soit à distance dans l'organisme, après être passés dans le système circulatoire) est, depuis quelques années, en plein essor.
Les peptides bioactifs sont des séquences définies d'acides aminés qui sont inactives au sein de leur protéine d'origine, mais qui présentent des propriétés particulières une fois libérées par action enzymatique. On les appelle aussi peptides fonctionnels. Ces peptides bioactifs sont capables d'exercer, entre autres, un effet sur le système digestif, les défenses de l'organisme (par exemple, un effet antimicrobien ou immunomodulateur), le système cardiovasculaire (notamment un effet antithrombotique ou antihypertenseur), et/ou le système nerveux (tel qu'un effet sédatif et analgésique de type opioïde) (voir tableaux 1 et 2 ci-après). Le tableau 1 ci-après liste les principaux peptides fonctionnels libérés par l'hydrolyse des protéines du lait humain et du lait de vache. Tableau 1
Figure imgf000003_0001
(*) les séquences des acides aminés ne sont pas exactement les mêmes
(**) H: lait humain / V: lait de vache
Le tableau 2 ci-après recense les principales activités physiologiques des peptides fonctionnels issus du lait connus à ce jour. Tableau 2
Figure imgf000004_0001
iaoieau <- (suite)
Figure imgf000005_0001
Tableau 2 (suite)
Figure imgf000006_0001
Tableau 2 (suite)
O\
Figure imgf000007_0001
Ces peptides sont le plus souvent obtenus par hydrolyse de protéines végétales (par exemple des protéines de soja) ou animales (par exemple, les caséines ou les protéines sériques du lait), hydrolyse générée par des procédés enzymatiques et/ou fermentaires, le plus souvent accompagnée d'une concentration de la fraction active, étape généralement nécessaire pour apporter le « bénéfice santé » visé. La fabrication et l'utilisation de ces peptides pour un bénéfice santé font l'objet d'une littérature abondante (voir notamment la Danone World Newsletter N°17 de septembre 1998). Parmi les vecteurs alimentaires susceptibles d'accueillir de tels ingrédients, les produits laitiers fermentes figurent en bonne position de part leur bénéfice santé dû à la présence de ferments et de produits de fermentation (c'est-à-dire les molécules issues de la transformation, par les bactéries lactiques, des substrats présents dans le lait). Jusqu'à présent, la communauté scientifique prenait surtout en compte les propriétés des ferments. Les chercheurs commencent depuis peu à s'intéresser aux produits de fermentation, parmi lesquels certains peptides occupent une place particulière, car ce sont des messagers biologiques nombreux et spécifiques. Les produits laitiers fermentes paraissent donc particulièrement appropriés comme vecteurs d'hydrolysats de peptides bioactifs obtenus, par exemple, à partir de substrats laitiers comme les caséines ou les protéines sériques. Un problème majeur se pose alors : les microorganismes et, en particulier, les bactéries lactiques utilisées dans la fabrication des produits laitiers frais (type yoghourts, spécialités laitières fermentées, boissons fermentées à base de lait, etc.), sont généralement capables de consommer les peptides pour satisfaire leurs besoins nutritionnels et, plus particulièrement leurs besoins en azote. On parlera à cet effet dans ce qui suit de « métabolisation des peptides ». Les bactéries lactiques sont en effet dotées de plusieurs systèmes de dégradation et/ou transport leur permettant de métaboliser les peptides, les faisant alors disparaître du milieu :
1/ un système protéolytique (protéases de paroi PRT) qui découpe protéines et gros peptides pour faciliter leur assimilation (« système de métabolisation extracellulaire »),
2/ des systèmes de transport vers l'intérieur de la cellule, dont l'un est spécifique des oligo-peptides d'une taille proche de 10 acides aminés, l'autre étant adapté au transport de di- et tri-peptides (les lactobacilles possèdent un système supplémentaire de perméases à tri-peptides) (« système(s) de transport vers l'intérieur de la cellule »), et
3/ un système enzymatique intracellulaire capable de dégrader les peptides en acides aminés (comprenant une quinzaine d'endo- et exopeptidases) (« système de métabolisation intracellulaire »).
Etant donné que la quantité de peptides naturellement présents dans le lait est généralement trop faible par rapport aux besoins des bactéries lactiques, il est commun d'accélérer leur croissance en fournissant un supplément de peptides. Ceux-ci sont alors totalement consommés pendant la fermentation.
En définitive, du fait : (i) du besoin en azote des bactéries lactiques, dont les peptides constituent la principale source dans le lait, (ii) de la capacité de ces bactéries à consommer efficacement les peptides, et (iii) de la survie d'une population importante de bactéries lactiques dans les produits fermentes à base de lait, jusqu'à la date limite de consommation (DLC), la mise en œuvre d'ingrédients à base de peptides fonctionnels dans les produits laitiers fermentes est difficile, voire impossible, car ces ingrédients sont le plus souvent consommés par les bactéries lactiques, pendant la fermentation, voire pendant le stockage des produits jusqu'à DLC.
En outre, non seulement ce problème de dégradation par métabolisation « intempestive » des peptides par les bactéries n'est pas spécifique à un peptide donné, mais il n'est pas non plus spécifique à un ferment (ou microorganisme, de préférence bactérie, capable de fermenter) particulier.
Il s'agit là d'un problème général, qui se pose quels que soient le ou les peptides et le ou les microorganismes considérés. On citera, à titre d'exemple, le cas du peptide bioactif αS1 [91-100] (voir le brevet européen EP 0 714 910 ; peptide aux propriétés relaxantes contenu dans l'hydrolysat de protéines de lait commercialisé notamment par la société Ingredia : 51-53, Avenue Fernand Lobbedez BP 946 62033 ARRAS Cedex, France, sous le nom Lactium®). La Demanderesse a ainsi observé que la population de bactéries lactiques vivantes dans le produit fini continue de métaboliser le peptide bioactif pendant le stockage du produit fini, si bien qu'après seulement 10 jours (pour des produits frais dont la DLC est de 28 jours), entre 35 et 55% environ du peptide αS1 [91 -100] ont disparu, ce qui est tout à fait inacceptable pour garantir un effet « santé » chez le consommateur (données non montrées).
Puisque la consommation du peptide bioactif est le fait de l'activité métabolique des ferments, on pourrait envisager de réduire ce phénomène en détruisant tout ou partie des microorganismes, par exemple à l'aide d'un traitement thermique approprié (thermisation ou pasteurisation). En ce cas, il est possible de préserver le peptide αS1 [91-100] (par exemple après chauffage à 75°C pendant environ 1 min). Toutefois, une telle solution présente de nombreux inconvénients :
- la thermisation d'une masse laitière fermentée implique l'usage de stabilisants ajoutés avant le traitement thermique (pectines, amidons, carraghénanes, etc.), ce qui complique le procédé et augmente sensiblement le coût de la formule ;
la ligne de fabrication industrielle est plus complexe et demande un investissement spécifique plus important ;
le produit ne bénéficie plus d'appellations liées aux produits contenant des ferments vivants (type yoghourt) et perd de fait les bénéfices associés à la consommation de ferments lactiques ; et
- l'impact organoleptique, généralement négatif, est significatif.
Il existe dès lors un besoin pour un produit alimentaire contenant à la fois des microorganismes vivants, par exemple un yoghourt, et un ou plusieurs ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt, dans lequel ces ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt seraient protégés contre la métabolisation par lesdits microorganismes vivants, et ce, tout en préservant les qualités organoleptiques du produit alimentaire. Par la présente invention, la Demanderesse apporte une solution qui permet de satisfaire le besoin existant.
La présente invention s'intéresse donc à un produit alimentaire contenant un ou plusieurs microorganismes vivants et au moins un ingrédient alimentaire bioactif d'intérêt, caractérisé en ce que le ou lesdits microorganismes vivants et le ou lesdits ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt sont mis en œuvre de manière à réduire la métabolisation du ou desdits ingrédients bioactifs par le ou lesdits microorganismes vivants. Ainsi, la Demanderesse a pu montrer qu'un ou plusieurs ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt pouvaient être efficacement protégés contre la métabolisation par des microorganismes vivants, dès lors que les conditions de mise en œuvre des uns avec les autres sont appropriées. De telles conditions de mise en œuvre appropriées peuvent faire appel à divers moyens, parmi lesquels : a) l'utilisation de microorganismes vivants dont la capacité à métaboliser les ingrédients bioactifs est réduite ; et/ou b) l'utilisation d'ingrédients alimentaires leurres qui sont délibérément « livrés en pâture » aux microorganismes vivants ; et/ou c) la mise en œuvre d'une protection physique des ingrédients bioactifs, notamment par encapsulation de ces derniers.
On notera à cet égard qu'un ou plusieurs de, voire tous, ces moyens peuvent être avantageusement combinés au sein d'un même produit alimentaire.
La Demanderesse propose donc un produit alimentaire contenant un ou plusieurs microorganismes vivants et au moins un ingrédient alimentaire bioactif d'intérêt, caractérisé en ce que le ou lesdits ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt sont protégés :
- physiquement, le ou lesdits ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt étant de préférence encapsulés ; et/ou
- au moyen d'au moins un ingrédient alimentaire leurre contenu dans ledit produit alimentaire, de sorte que leur métabolisation par le ou lesdits microorganismes vivants est réduite.
Plus précisément, un objet de la présente invention concerne un produit alimentaire contenant un ou plusieurs microorganismes vivants et au moins un ingrédient alimentaire bioactif d'intérêt, caractérisé en ce que le ou lesdits ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt sont protégés physiquement par encapsulation dans une matière grasse, de sorte que leur métabolisation par le ou lesdits microorganismes vivants est réduite. Comme indiqué brièvement dans la description générale qui précède, par « métabolisé » ou « métabolisation », on entend désigner selon la présente invention la transformation ou dégradation d'une substance par un ou plusieurs microorganismes vivants, visant à sa consommation à titre de source de nutriments, et ayant pour conséquence finale sa disparition, plus ou moins complète, du milieu.
Au sens de l'invention, la métaboiisation d'un ingrédient est « réduite » si elle est inférieure à la métaboiisation du même ingrédient lorsque ce dernier n'est pas protégé par au moins l'un des moyens prévus dans le cadre de la présente invention.
Avantageusement, et idéalement, cette métaboiisation réduite tend vers, voire vaut, zéro, ce qui revient à peu, quasiment pas, voire pas, de métaboiisation dudit ingrédient.
Selon un mode particulier de réalisation de la présente invention, la quantité résiduelle d'ingrédient(s) alimentaire(s) bioactif(s) d'intérêt dans ledit produit alimentaire est, 3 semaines après sa préparation, comprise entre 50 et 100 % environ par rapport à la quantité d'ingrédient(s) alimentaire(s) bioactif(s) d'intérêt présente dans le produit juste après sa préparation.
Préférentiellement, ladite quantité résiduelle est comprise entre 80 et 100% environ. Par « quantité résiduelle en ingrédient(s) alimentaire(s) bioactif(s) d'intérêt dans ledit produit alimentaire », on entend désigner selon la présente invention le pourcentage d'ingrédient(s) alimentaire(s) bioactif(s) d'intérêt présent dans ledit produit alimentaire lorsque ce dernier est maintenu dans des conditions de stockage adaptées (par exemple, de l'ordre de 4 à 100C pour un produit frais) pendant 3 semaines, par rapport au pourcentage d'ingrédient(s) alimentaire(s) bioactif(s) d'intérêt présent au départ, c'est-à-dire juste après fabrication du produit. Lors de la mise en œuvre de la présente invention, on choisira le ou lesdits ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt notamment parmi :
- des protéines, - des peptides,
- des vitamines, - des micronutriments,
- des analogues ou dérivés de ceux-ci, et
- leurs combinaisons.
Préférentiellement, l'ingrédient alimentaire bioactif d'intérêt sera choisi parmi :
- des protéines,
- des peptides,
- des analogues ou dérivés de ceux-ci, et - leurs combinaisons.
Préférentiellement, l'ingrédient alimentaire bioactif d'intérêt est choisi parmi : le peptide αS1 [91-100] (voir le brevet européen EP 0 714 910), le peptide C6-αsi 194-199 (voir le brevet américain US 6 514 941 ), le peptide C7-β177-183 (voir le brevet américain US 6 514 941 ), le peptide C12- αs-|23-34 (voir le brevet US américain 6 514 941 ), les caséinophosphopeptides, l'α-casomorphine, la caséine α exorphine, la casokinine, la β-casomorphine, les CaséinoMacroPeptides (CMP) aussi appelés GlycoMacroPeptides (GMP) ou CaséinoGlycoMacroPeptides (CGMP), la casoxine, les casoplatellines, les fragments 50-53, les β- lactorphines, la lactoferroxine, les peptides Val-Pro-Pro (voir le brevet européen EP 0 583 074), Lys-Val-Leu-Pro-Val-Pro-GIn (voir la demande EP 0 737 690), Tyr-Lys-Val-Pro-GIn-Leu (voir la demande EP 0 737 690), Tyr-Pro (voir la demande EP 1 302 207 et le brevet EP 0 821 968), He- Pro-Pro (voir Nakamura et al., 1995 ; et brevet japonais JP 6 197 786), des fragments, analogues, dérivés de ceux-ci, des protéines et/ou peptides les contenant, et leurs combinaisons (pour une revue, voir notamment la Danone World Newsletter N017 de septembre 1998). De manière encore plus préférée, l'ingrédient alimentaire bioactif d'intérêt est choisi parmi : le peptide αS1 [91-100], des fragments, analogues, dérivés de celui-ci, des protéines et/ou peptides les contenant, et leurs combinaisons.
On entend par « analogue », n'importe quelle version modifiée d'un composé initial, ici une protéine ou un peptide, ladite version modifiée pouvant être naturelle ou synthétique, dans laquelle un ou plusieurs atomes, tels que des atomes de carbone, d'hydrogène, d'oxygène, ou des hétéroatomes tels que l'azote, le soufre ou un halogène, ont été ajoutés ou supprimés de la structure du composé initial, de manière à obtenir un nouveau composé moléculaire. Un « dérivé » au sens de l'invention est n'importe quel composé qui présente une ressemblance ou un motif structurel en commun avec un composé de référence (protéine ou peptide). Entrent également dans cette définition, d'une part les composés qui, seuls ou avec d'autres composés, peuvent être des précurseurs ou des produits intermédiaires dans la synthèse d'un composé de référence, moyennant une ou plusieurs réactions chimiques, et d'autre part les composés qui peuvent être formés à partir dudit composé de référence, seul ou avec d'autres composés, via une ou plusieurs réactions chimiques. Sont ainsi couverts par la définition de « dérivés » ci-dessus au moins les hydrolysats, notamment trypsiques, de protéines et/ou peptides, les fractions d'hydrolysats, ainsi que les mélanges d'hydrolysats et/ou de fractions d'hydrolysats.
De plus, les termes « analogue » et « dérivé d'un peptide ou d'une protéine » susmentionnés couvrent par exemple un peptide ou une protéine glycosylé(e) ou phosphorylé(e) ou encore ayant subi n'importe quel greffage de groupement chimique.
Dans un autre mode de réalisation de la présente invention, l'ingrédient alimentaire bioactif d'intérêt pourra notamment être un sucre ou un acide gras. Dans le cadre de la présente invention, seul(s) le ou lesdits ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt est (sont) encapsulé(s) ; les microorganismes vivants ne le sont pas.
Par « encapsulé » ou « encapsulation », on entend désigner selon la présente invention la mise en œuvre d'un procédé de protection d'un principe actif dans un véhicule de type microparticule afin de permettre un relarguarge contrôlé de ce principe actif. En l'espèce, le principe actif est constitué par un ou plusieurs ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt. De manière fort avantageuse, l'encapsulation permet de remédier aux inconvénients des solutions de l'état de la technique, en ce qu'elle prévient la métabolisation des ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt par les microorganismes vivants.
En outre, l'encapsulation permet aux ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt de parvenir jusqu'au niveau de l'intestin, sans être dégradés, et de traverser la barrière intestinale sans dommages afin d'y produire leurs effets.
De plus, la Demanderesse fait observer que l'encapsulation de substances est tout à fait originale s'agissant de produits alimentaires fermentes, en particulier de produits laitiers fermentes. Enfin, on soulignera que, de manière tout à fait intéressante, l'encapsulation permet d'obtenir un produit final organoleptiquement plus acceptable, par exemple en masquant l'amertume plus ou moins forte de certains ingrédients bioactifs, en particulier de certains peptides. C'est pourquoi, selon un mode de réalisation particulièrement préféré, la présente invention concerne un produit alimentaire comme décrit précédemment, dont l'amertume est réduite.
Au sens de l'invention, l'amertume d'un aliment est « réduite » si un aliment est considéré comme moins amer à l'issue d'un test par paire (Directional Paired Comparison Method, Sensory Evaluation of Food, Harry T. Lawless, Hildegarde Heymann (1990)). Ce test peut être réalisé sur un panel (à partir de 10 personnes) réunissant différentes personnes ayant bien intégré ce qu'est la notion d'amertume (un apprentissage de cette notion est réalisé par la dégustation de produits contenant une molécule amère (e.g., caféine), ces produits étant rendus plus ou moins amers suivant la concentration de ladite molécule). Le produit conforme à la présente invention est alors soumis en aveugle (les membres du panel ne savent pas quel produit leur est présenté en premier) aux personnes constituant le panel, et celles-ci le comparent avec un produit non conforme à l'invention. Bien entendu, les deux produits présentés au panel ne diffèrent que en ce que l'un a été réalisé conformément à l'invention, et pas l'autre. L'ordre de présentation des deux produits d'une personne du panel à une autre obéit aux lois du hasard, le nombre de personnes recevant en premier le produit réalisé suivant l'invention étant égal au nombre de personnes recevant l'autre produit en premier. Chaque personne doit indiquer, pour chaque répétition du test, quel est le produit le plus amer parmi les deux produits goûtés.
Dans le cadre de l'invention, le ou lesdits ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt sont encapsulés dans une matière grasse. L'encapsulation dans une matière grasse peut notamment être réalisée par dispersion des ingrédient(s) alimentaire(s) bioactif(s) d'intérêt dans une phase grasse, où il(s) est (sont) finalement encapsulé(s), (i.e. , emphsonné(s), retenu(s)) dans de très fines gouttelettes lipidiques. On notera que, par différence avec les procédés de dispersion connus et utilisés notamment dans d'autres domaines techniques tels que la cosmétologie, la mise en oeuvre d'une telle dispersion ne requiert aucune étape de séchage ultérieure.
Conformément à l'acception usuelle, par « matière grasse » ou « corps gras », on entend désigner n'importe quelle substance contenant un ou plusieurs lipides. Il peut s'agir, par exemple, d'une huile, d'une graisse, d'un beurre, etc.. Cette matière grasse peut être naturelle, existant alors sous des formes diverses chez les animaux, les végétaux, et dans leurs produits (c'est-à-dire dans les produits issus de leur métabolisme), ou synthétique.
Un critère de sélection de la matière grasse utilisable dans le cadre de la présente invention est lié à sa température de fusion. En effet, afin de réaliser une dispersion comme il est envisagé supra, il convient d'utiliser une matière grasse concrète, c'est-à-dire solide à température ambiante. Parmi les huiles appropriées, on peut notamment citer l'huile de palme et ses fractions, l'huile de noix de coco et ses fractions, l'huile de palmiste et ses fractions, les huiles de beurre végétaux type cacao, les margarines, les huiles végétales hydrogénées, ou partiellement hydrogénées, et analogues.
Le choix de la matière grasse concrète se fera en tenant également compte de ses qualités nutritionnelles. A cet égard, on préférera, par exemple, les matières grasses fractionnées aux matières grasses hydrogénées ou partiellement hydrogénées.
Si l'on souhaite disperser plus efficacement, voire solubiliser, l'ingrédient alimentaire bioactif, on mettra de préférence en œuvre l'encapsulation au sein d'une émulsion multiple eau/huile/eau. Dans ce cas, l'utilisation de matières grasses fluides à température ambiante (huiles) peut être plus appropriée (colza, colza oléique, soja, tournesol, tournesol oléique, huiles de poissons, huiles d'algues, etc.). A cet égard, la Demanderesse souligne le fait que, par le choix d'une matière grasse concrète, on met à profit sa recristallisation après fusion, ce qui entraîne un emprisonnement et une protection physique de l'ingrédient alimentaire bioactif.
On pourra notamment choisir une matière grasse appropriée parmi les matières grasses animales, notamment laitières ou de poissons, et végétales.
On précisera que les matières grasses extraites de poissons sont particulièrement intéressantes pour leur teneur élevée en acides gras polyinsaturés Oméga 3. Parmi les matières grasses végétales appropriées, on choisira en particulier l'huile de palme, l'huile de colza et/ou une matière grasse extraite d'une algue.
Selon un mode particulier de réalisation de la présente invention, le ou lesdits microorganismes vivants ont une capacité intacte ou réduite de métabolisation du ou desdits ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt.
Selon la présente invention, une « capacité réduite de métabolisation » est telle que la quantité d'ingrédients bioactifs d'intérêt métabolisée pendant la fermentation (qui disparaît donc du milieu) est inférieure ou égale à 40% de la quantité d'ingrédients initiale (avant fermentation).
Ceci se traduit mathématiquement par :
Qr > 0,6 Q0 (I )
Où :
Qr : quantité d'ingrédients bioactifs résiduelle (présente dans le milieu après fermentation)
Qo : quantité d'ingrédients bioactifs initiale
La quantité d'ingrédients bioactifs résiduelle Qr peut être mesurée par une méthode de chromatographie liquide CLHP couplée à un détecteur de type MS/MS. Un exemple de procédure expérimentale est donné dans les exemples ci-dessous.
Le ou lesdits microorganismes vivants seront de préférence des bactéries, de préférence encore des bactéries lactiques, vivantes. On choisira plus particulièrement les bactéries vivantes parmi : o Streptococcus spp, de préférence Streptococcus thermophilus ; o Lactobacillus spp ; o Lactococcus spp ; o Bifidobacterium spp.
De manière préférée, on choisira les bactéries vivantes parmi : - Streptococcus thermophilus, déposée à la CNCM (Collection Nationale de Cultures des Microorganismes (Institut Pasteur, Paris, France)) le 24/01/02 sous le numéro I-2774 ;
- Streptococcus thermophilus, déposée à la CNCM le 24/10/95 sous le numéro 1-1630 ;
- Streptococcus thermophilus, déposée à la CNCM le 10/05/04 sous le numéro 1-3211 ;
- Streptococcus thermophilus, déposée à la CNCM le 16/09/04 sous le numéro 1-3301 ; et - Streptococcus thermophilus, déposée à la CNCM le 16/09/04 sous le numéro I-3302 .
De manière encore préférée, lesdites bactéries vivantes sont des bactéries S. thermophilus déposées à la CNCM le 10/05/04 sous le numéro 1-3211.
Avantageusement, le produit alimentaire contient au moins les bactéries vivantes S. thermophilus et Lactobacillus spp.
Préférentiellement, lesdites bactéries vivantes Streptococcus thermophilus sont choisies parmi S. thermophilus déposée à la CNCM le 24/01/02 sous le numéro I-2774, S. thermophilus déposée à la CNCM le 24/10/95 sous le numéro 1-1630, S. thermophilus déposée à la CNCM le 10/05/04 sous le numéro 1-3211 , S. thermophilus déposée à la CNCM le 16/09/04 sous le numéro 1-3301 , et S. thermophilus déposée à la CNCM le 16/09/04 sous le numéro I-3302. La teneur du produit alimentaire selon l'invention en microorganismes vivants peut varier et sera choisie par l'homme du métier à la lumière de ses connaissances générales dans le domaine. En pratique, on recherchera de préférence une teneur globale standard, par exemple de l'ordre de 107 à 109 bactéries par gramme de produit alimentaire. Selon un mode particulier de réalisation, un produit alimentaire conforme à l'invention contient en outre au moins un ingrédient alimentaire leurre. Par « ingrédient alimentaire leurre », on entend désigner selon la présente invention un ingrédient alimentaire (de préférence un peptide, une protéine, un analogue ou un dérivé de ceux-ci, et leurs combinaisons) capable de servir de source de nutriments (notamment de source d'azote) pour des microorganismes vivants, et destiné à être préférentiellement métabolisé par lesdits microorganismes, de manière à détourner ces derniers des ingrédients bioactifs d'intérêt que l'on entend bien entendu préserver en priorité. Ainsi, l'ingrédient leurre représente une source nutritive pour les microorganismes, que l'on sacrifie délibérément afin de sauvegarder le plus possible les ingrédients bioactifs d'intérêt. L'ingrédient alimentaire leurre agit à cet égard comme un inhibiteur compétitif du transport des ingrédients bioactifs d'intérêt.
Par « produit alimentaire », on entend ici un produit destiné à l'alimentation animale et/ou humaine, de préférence humaine. Ce produit peut se présenter sous n'importe quelle forme consommable. Ce peut être une boisson telle que de l'eau, des jus végétaux (de fruits et/ou légumes et/ou céréales...), du lait, des yoghourts à boire, des mélanges de ceux-ci. Il peut également s'agir de produits solides ou de produits intermédiaires, plus ou moins humides. Selon un mode de réalisation particulier, le produit alimentaire conforme à l'invention est une eau.
Préférentiellement, le produit alimentaire selon la présente invention est un produit fermenté. De manière encore préférée, le produit alimentaire fermenté est un produit laitier ou végétal.
Par « produit laitier », on entend désigner selon la présente invention, en plus du lait, les produits dérivés du lait, tels la crème, la crème glacée, le beurre, le fromage, le yoghourt ; les produits secondaires, comme le lactosérum, la caséine ; ainsi que n'importe quel aliment préparé contenant, comme ingrédient principal, du lait ou des constituants du lait. Par « produit végétal », on entend désigner, entre autres, des produits obtenus à partir d'une base végétale telle que, par exemple, les jus de fruits et les jus végétaux parmi lesquels le jus de soja, le jus d'avoine ou le jus de riz. En outre, les définitions ci-dessus de « produit laitier » et « produit végétal » couvrent chacune n'importe quel produit à base d'un mélange de produits laitiers et végétaux, tels qu'un mélange de lait et de jus de fruits, par exemple. La présente invention a également pour objet un procédé d'encapsulation d'au moins un ingrédient alimentaire bioactif d'intérêt dans une matière grasse.
A cet égard, dans la mesure où l'ajout d'un ingrédient alimentaire bioactif dans une matière grasse concrète fondue entraîne une accélération de la cinétique de cristallisation de celle-ci, il est important que la matière grasse soit totalement fondue avant l'ajout de l'ingrédient. Ainsi, l'ajout progressif et sous agitation d'un ingrédient dans une phase aqueuse elle-même sous agitation permet à la fois une recristallisation induite et lente autour de l'ingrédient, et la formation de gouttelettes d'huile de tailles adéquates, dont la distribution est homogène. Pour l'introduction de l'ingrédient alimentaire bioactif dans une masse blanche, de préférence fermentée, on préférera préparer un milieu aqueux intermédiaire du type sirop. Ce sirop sera ensuite introduit dans la masse blanche. L'adjonction de l'ingrédient alimentaire bioactif dans le milieu aqueux doit se faire sous certaines conditions :
(i) il convient d'éviter la recristallisation totale de la matière grasse avant de mélanger l'ingrédient alimentaire bioactif et le milieu aqueux, afin d'assurer une addition progressive et homogène ; (ii) la température du milieu aqueux doit être proche de la température de fusion de la matière grasse d'encapsulation, de manière à éviter qu'elle recristallise au contact du milieu aqueux ; et
(iii) afin d'assurer un mélange homogène de l'ingrédient alimentaire bioactif et du sirop, une agitation forte (par exemple, à l'aide d'un moteur d'agitation du type ultraturax) est nécessaire : on obtient ainsi une "émulsion" blanche ayant la texture d'une crème épaisse ; de plus, la consistance légère de ce système est facile à pomper lorsque la température reste de l'ordre de la température de fusion de la matière grasse d'encapsulation.
L'utilisation d'un additif alimentaire tel qu'un émulsifiant au cours de l'encapsulation de l'ingrédient alimentaire bioactif permet d'obtenir une "population" de globules gras plus homogène. Ainsi, en l'absence d'émulsifiant, on a pu observer une majorité de gros globules gras (d'un diamètre d'environ 25μm et plus), et une relativement faible dispersion du peptide dans le produit. En revanche, en présence d'émulsifiant, la dispersion est plus élevée et les globules plus petits (d'un diamètre maximal d'environ 10μm). Selon la présente invention, le procédé d'encapsulation comprend au moins : a) la préparation d'un mélange eau/matière grasse, à maintenir à une température proche de la température de fusion de ladite matière grasse, de préférence comprise dans un intervalle de ± 100C autour de ladite température de fusion ; b) l'incorporation progressive et sous agitation, de préférence douce, de l'ingrédient bioactif d'intérêt dans le mélange obtenu à l'étape a), en maintenant l'ensemble à une température proche de la température de fusion de ladite matière grasse, et de préférence comprise dans un intervalle de ± 100C autour de ladite température de fusion ; et c) facultativement, l'ajout d'un ou plusieurs additifs alimentaires tels que des émulsifiants, des épaississants, etc., et le mélange, de préférence fort, de l'ensemble, tout en maintenant une température proche de la température de fusion de ladite matière grasse, et de préférence comprise dans un intervalle de ± 1O0C autour de ladite température de fusion.
La température de mise en œuvre des étapes a), b) et, facultativement, c) ci-dessus pourra légèrement varier d'une étape à l'autre, tout en restant de préférence comprise dans l'intervalle de ± 1 O0C autour de la température de fusion de la matière grasse. En pratique, la température de mise en œuvre de l'ensemble de ces étapes sera avantageusement sensiblement la même.
L'homme du métier pourra, si nécessaire, adapter ce procédé en fonction de la matière grasse qu'il utilisera, à l'aide de ses connaissances générales et, le cas échéant, en mettant en œuvre des expériences simples de routine.
Ensuite, aux fins de la préparation d'un produit alimentaire conforme à l'invention, tel qu'un produit laitier, le mélange ainsi obtenu, maintenu à une température proche de la température de fusion de la matière grasse, est incorporé, de manière tout à fait classique, dans une masse blanche, notamment grâce à des systèmes de pompes et, de préférence, après les étapes de traitement thermique et de fermentation de celle-ci. La présente invention a également pour objet un procédé de préparation d'un produit alimentaire tel que décrit supra, dans lequel un ou plusieurs ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt sont encapsulés, par exemple conformément au procédé décrit ci-dessus, avant d'être ajoutés au mélange destiné à constituer ledit produit alimentaire. Selon, un mode particulier de réalisation de la présente invention, le ou lesdits ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt encapsulés sont ajoutés audit mélange sous agitation. Lorsque le produit alimentaire est fermenté, le ou lesdits ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt encapsulés peuvent être ajoutés au mélange avant ou après fermentation.
On préférera cependant ajouter les ingrédients bioactifs encapsulés après fermentation afin de préserver le plus possible l'intégrité des particules de matière grasse vis-à-vis des étapes de traitement thermique éventuelles. Selon un mode de réalisation, le procédé de préparation conforme à la présente invention est tel que le ou lesdits microorganisme(s) vivants et le ou lesdit(s) ingrédient(s) alimentaire(s) bioactif(s) d'intérêt encapsulés sont ajoutés les uns après les autres dans le mélange destiné à constituer ledit produit alimentaire.
Alternativement, les microorganismes vivants et les ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt encapsulés sont ajoutés simultanément dans le mélange destiné à constituer ledit produit alimentaire. Les conditions de culture des microorganismes dépendent desdits microorganismes et sont connues de l'homme du métier. A titre d'exemple, on précisera que les températures optimales de croissance pour S. thermophilus se situent généralement entre 36 et 42°C environ ; elles se situent entre 42° et 460C environ pour L. delbrueckii spp. bulgahcus (que l'on trouve typiquement dans les yoghourts).
En règle générale, l'arrêt de la fermentation, qui dépend du pH que l'on souhaite atteindre, est obtenu par refroidissement rapide, ce qui permet de ralentir l'activité métabolique des microorganismes. La présente invention a en outre pour objet l'utilisation d'un produit alimentaire tel que décrit supra comme aliment fonctionnel.
Par « aliment fonctionnel », on entend désigner un produit alimentaire qui affecte avantageusement une ou plusieurs fonctions cibles de l'organisme, indépendamment de ses effets nutritionnels. Il peut ainsi en résulter une amélioration de l'état de santé et/ou du bien-être et/ou une réduction des risques d'apparition de maladies chez un consommateur qui ingère des quantités normales dudit produit. A titre d'exemples d'activités d'un « aliment fonctionnel », on citera notamment des activités anti- cancéreuses, immunostimulatrices, promotrices de la santé osseuse, anti¬ stress, opiacées, anti-hypertension, amélioratrices de la biodisponibilité du calcium, ou encore anti-microbiennes (Functional Food Science in Europe, 1998).
De tels aliments fonctionnels peuvent être destinés à l'homme et/ou aux animaux.
La présente invention a également pour objet l'utilisation d'une matière grasse pour encapsuler au moins un ingrédient alimentaire bioactif d'intérêt destiné à être incorporé dans un produit alimentaire contenant un ou plusieurs microorganismes vivants.
La présente invention est illustrée, sans être limitée, par les figures suivantes :
Figure 1 : Chromatogramme LC-MS illustrant la disparition du peptide bioactif αS1 [91-100] inclus dans l'ingrédient Lactium® pendant la fermentation lactique. Le détecteur MS/MS est réglé de façon à ne faire apparaître que le signal des ions de m/z = 634.5 Da (masse du peptide αS1 [91-100] doublement chargé) qui présentent, après fragmentation, des ions fils de m/z = 991.5 Da ; 771.5 Da ; 658.3 Da (fragments caractéristiques du peptide αS1 [91-100]).
Figure 2 : Identification et quantification des principaux peptides de l'ingrédient Lactium® par LC-MS/MS avant et après fermentation du « mix » laitier par un ferment consistant en un mélange des souches I- 2783 (déposée à Ia CNCM le 24/01/02), I-2774 (déposée à la CNCM le 24/01/02), I-2835 (déposée à la CNCM le 04/04/02) et le 1-1968 (déposée à la CNCM le 14/01/98). Après fermentation, ces peptides ne sont plus retrouvés qu'à l'état de traces et se confondent avec la ligne de base. « ? » signifie que l'identification de la séquence n'a pas été possible ou n'est pas certaine ; seule la masse du peptide est alors rapportée. Figure 3 : Profils peptidiques comparés (chromatogrammes LC-MS/MS) d'un « mix » laitier contenant 1.5 g/L d'hydrolysat DMV C 12®, avant (1 ) et après fermentation (2) jusqu'à pH 4.7 par le ferment lactique Hansen YC380. La quasi-totalité des peptides de l'hydrolysat, dont le peptide bioactif C12 (fragment αS1 [23-34]), a disparu suite à la métabolisation par les souches du ferment.
Figure 4 : Courbes illustrant l'évolution de la teneur résiduelle en peptide bioactif αS1 [91-100] dans un produit fini constitué de 95% de masse fermentée par le ferment contenant les souches I-2783, I-2774, I-2835 et 1-1968, et de 5% de sirop de sucre aromatisé contenant le peptide αS1 [91-100], pendant le stockage à 10 0C. L'expérience a été réalisée à raison de 4 essais indépendants E1 , E2, E3 et E4. Figure 5 : Courbes illustrant l'évolution de la teneur résiduelle en peptide bioactif αS1 [91-100], ajouté après fermentation dans un produit fermenté puis thermisé à 75°C pendant 1 minute, et stocké à 10 0C jusqu'à la date limite de consommation (DLC).
Figure 6 : Illustration de l'évolution de la teneur en ingrédient bioactif encapsulé au cours du temps (conservation à 40C). Figure 7 : Profils peptidiques comparés (chromatogrammes LC-MS/MS) d'un mix laitier contenant 1.5 g/L de Lactium® apporté sous forme d'émulsion dans l'huile de palme conformément à la présente invention, immédiatement après ajout dans la masse fermentée (1 ) et après 14 jours de conservation à 10 0C (2). D'autres caractéristiques et avantages de la présente invention apparaîtront à la lecture des exemples suivants, donnés à titre purement illustratif.
Exemples
Exemple 1 : Mise en œuvre d'ingrédients bioactifs d'intérêt sans mettre en application l'invention revendiquée 1.1) Exemple avec le peptide bioactif αS1 [91-100] contenu dans Phydrolysat Lactium®
La mise en œuvre d'ingrédients du type peptide ou protéine, souvent apportés sous forme de poudres, est plus simple lorsque ceux-ci sont ajoutés lors de l'étape de préparation du « mix » laitier (poudrage du lait), avant le traitement thermique de sanitation (i.e., 95°C, 8 min) et, donc, avant la fermentation. En ce cas, le risque de métabolisation du peptide actif est très élevé. C'est, pour l'exemple, le cas lors de l'utilisation d'un ingrédient fonctionnel comme le Lactium ® (Ingredia, France) contenant un peptide bio-actif (fragment 91-100 de la caséine αS1 ). Protocole : le milieu a été préparé par hydratation d'une poudre de lait écrémé à 120 g/L, additionné de 1.5 g/L d'ingrédient Lactium® (correspondant à environ 30 mg/L de peptide bioactif αS1 [91-100]), puis pasteurisé à 95°C pendant 8 minutes.
Le ferment lactique a été ajouté à un taux de 0.02%, et la fermentation a été conduite à la température optimale du ferment sélectionné (entre 37 et 42°C), jusqu'à atteindre un pH de 4.70. L'analyse des peptides résiduels, et notamment celle du peptide bioactif αS1 [91-100], a été conduite avec une méthode de chromatographie liquide CLHP couplée à un détecteur de type MS/MS comme décrit ci- après :
l'échantillon a été préparé par dilution du milieu fermenté dans un mélange d'eau, de méthanol et d'acide trifluoroacétique (50/50/0.1 %), dans un rapport de 1 à 6 environ. Le surnageant après centrifugation constituait l'échantillon représentatif du contenu peptidique du milieu fermenté.
- Cet échantillon a été injecté dans un système chromatographique CLHP de type Agilent 1100 (société Agilent Technologies France, 1 rue Galvani 91745 Massy cedex, France), équipé d'une colonne adaptée à l'analyse des peptides, de type Waters Symetry® (5μm 2.1 x 150 mm, WAT056975, Waters France, 5, Rue Jacques Monod, 78280 Guyancourt) à la température de 400C, débit de 0.25 ml/min. Les peptides ont été élues de façon classique avec un gradient croissant de solvant B (Acétonitrile + 0.100% d'acide formique) dans le solvant A (Eau + 0.106% acide formique), sur une durée de 40 min à 2 heures en fonction de la résolution souhaitée.
La détection a été effectuée à l'aide d'un détecteur spécifique de type MS/MS, par exemple avec un appareil à trappe ionique comme IΕsquire3000+ (Bruker Daltonique, rue de l'Industrie, 67166
Wissembourg Cedex), réglé soit pour l'analyse globale du contenu peptidique (mode MS-MS), soit pour la quantification précise et spécifique d'un peptide à partir de ses fragments caractéristiques. Par exemple, le peptide αS1 [91-100]) a été isolé à partir de sa masse (ion doublement chargé de masse 634.5 Da) et quantifié à partir de l'intensité de ses ions fils caractéristiques après fragmentation (ions de m/z de 991.5 Da, 771.5 Da et 658.3 Da). De façon encore plus précise, un étalon interne constitué du même peptide de synthèse deutéré deux fois (fragment caractéristique de 993.5 Da) a permis de prendre en compte et de s'affranchir d'éventuelles interférences liées à la matrice.
Les résultats sont illustrés par la figure 1.
Lors de sa mise en œuvre à ce stade (avant fermentation par un ferment consistant en un mélange des souches I-2783 (déposée à la CNCM le 24/01/02), I-2774 (déposée à la CNCM le 24/01/02), I-2835 (déposée à la CNCM le 04/04/02) et 1-1968 (déposée à la CNCM le 14/01/98), ou un ferment tel que YC380 (Chr. Hansen SA, Le Moulin d'Aulnay, BP64, 91292 ARPAJON Cedex France), on a mis en évidence que plus de 95% du peptide bioactif αS1 [91-100] étaient consommés après fermentation. Ces observations montrent que l'incorporation de peptides bioactifs conformément à ce qui précède n'est pas applicable telle quelle à l'obtention de produits alimentaires, notamment laitiers, supplémentés avec des quantités de peptides et/ou protéines bioactifs suffisamment stables dans le temps pour observer l'effet recherché chez le consommateur.
1. 2) Exemples avec d'autres peptides bioactifs d'intérêt
Les résultats sont illustrés par les figures 2 et 3.
L'ingrédient Lactium® contient de nombreux autres peptides, dont certains présentent potentiellement une activité biologique (comme le fragment 23-34 de la caséine αS1 , que l'on retrouve aussi commercialisé dans l'ingrédient C12 de la société DMV International). Il est intéressant de constater que la quasi-totalité des peptides apportés par l'ajout du Lactium® sont largement consommés pendant la fermentation.
Quelle que soit leur origine (provenant des différentes caséines αS1 , αS2,
K, β) et leur taille (de 2 à 3 résidus jusqu'à 12 résidus et plus), tous les peptides sont globalement consommés pendant le processus de fermentation.
1.3) Mise en œuvre du peptide bioactif αS1 [91-100] (Lactium®) avec d'autres ferments
Afin de vérifier que ce phénomène n'était pas particulier aux deux ferments utilisés dans le paragraphe 1.1 ) ci-dessus, les principaux ferments industriels, ainsi que différentes souches pures rentrant dans la composition de ces ferments, ont été testés sur la base du même test : du lait reconstitué à partir de poudre de lait, auquel a été ajouté le Lactium® à une dose de 1 ,5 g/L, a été fermenté dans des conditions standard (température optimale du ferment entre 37 et 42°C, arrêt de la fermentation à pH 4.7, 2 répétitions). L'analyse du taux de peptide bioactif αS1 [91-100] a ensuite été réalisée sur l'échantillon avant et après fermentation. Les résultats obtenus sur les souches pures sont présentés dans le Tableau 3 ci-dessous :
Tableau 3
Figure imgf000031_0001
Dans le tableau 3 ci-dessus, qui reflète la consommation du peptide bioactif αS1 [91-100] par différents ferments et souches industrielles lors de la fermentation d'un mix laitier contenant 1.5 g/L de Lactium®, les souches pures ont été identifiées par leurs numéro et date de dépôt respectifs auprès de la CNCM (Institut Pasteur, Paris, France).
Le Tableau 3 montre que la totalité des ferments et souches testés métabolisent de 94 à 100% du peptide bioactif αS1 [91-100] pendant la fermentation d'un mix laitier standard. La mise en oeuvre de cet ingrédient est donc impossible dans des conditions classiques pour produire des produits alimentaires, notamment laitiers, contenant des peptides et/ou protéines bioactifs en quantités suffisamment stables au cours du temps pour produire un effet chez le consommateur.
En outre, afin de vérifier que ce phénomène n'était pas particulier à l'ingrédient Lactium®, plusieurs combinaisons de ferments et d'autres ingrédients à base de peptides bioactifs ont été étudiées en mettant en œuvre le même test (lait reconstitué + ingrédient à tester à une dose de 1 ,5 g/L, fermenté dans des conditions standard, arrêt de la fermentation à pH 4.7, 2 répétitions). Les diverses combinaisons testées sont rapportées dans le Tableau 4 ci-dessous. Tableau 4
Figure imgf000032_0001
Les ingrédients C12 et CPP produits par la société DMV International sont des hydrolysats de protéines de lait contenant des peptides bioactifs ciblant respectivement le contrôle de l'hypertension et l'assimilation des minéraux.
Sur l'ensemble des expérimentations, il est apparu que tous les ferments testés ont une importante capacité de métabolisation des peptides, quelles que soient leur nature et leur taille.
1.4) Ajout après fermentation
Une alternative logique à la procédure étudiée ci-dessus est d'introduire l'ingrédient fonctionnel après la fermentation (procédé de type « différentiation retardée »), par exemple avec le sirop permettant d'aromatiser la masse fermentée. La mise en œuvre de la même quantité d'ingrédient Lactium ® selon ce protocole conduit aux résultats illustrés par la figure 4.
Comme le montre la figure 4, même ajouté à froid (4°C) après fermentation, le peptide actif (apporté par l'équivalent de 1.5 g de Lactium® par kg de produit fini) est rapidement dégradé au cours du stockage, pour ne laisser que 30 à 40% de la quantité initiale à la date limite de consommation (DLC). Ainsi, la population de bactéries lactiques vivantes dans le produit fini continue de métaboliser le peptide bioactif pendant le stockage du produit fini, si bien qu'après seulement 10 jours (pour des produits frais dont la DLC est de 28 jours), entre 35 et 50% du peptide αS1 [91-100] ont disparu, ce qui reste inacceptable pour obtenir l'effet recherché chez le consommateur.
1.5) Traitement thermique du produit laitier fermenté contenant l'ingrédient bioactif d'intérêt En ce cas, il est possible d'assurer la stabilité du peptide αS1 [91-100] (Figure 5), mais au détriment de la qualité globale du produit fini. Cette solution présente en effet de nombreux inconvénients :
la thermisation d'une masse laitière fermentée implique l'usage de stabilisants ajoutés avant le traitement thermique (pectines, amidons, carraghenanes, etc.), ce qui complique le procédé et augmente sensiblement le coût de la formule ; la ligne de fabrication industrielle est plus complexe et demande un investissement spécifique plus important ; - le produit ne bénéficie plus d'appellations liées aux produits contenant des ferments vivants (type yoghourt) et perd de fait les bénéfices associés à la consommation de ferments lactiques ; - l'impact organoleptique (généralement négatif) est significatif.
Exemple 2 : Mise en œuvre d'ingrédients bioactifs d'intérêt en mettant en application l'invention revendiquée
2.1 ) Etape 1 : encapsulation de l'ingrédient alimentaire bioactif Huile d'encapsulation choisie : huile de palme (point de fusion = 37°C). Les fournisseurs de ce type d'huile sont nombreux (e.g., Cargill). L'huile a été fondue à 500C pour avoir une absence totale de cristaux, et le Lactium® contenant l'ingrédient alimentaire bioactif αS1 [91-100] a été progressivement ajouté sous agitation magnétique (maintien à 50°c).
2.2) Etape 2 : fabrication du milieu aqueux du type sirop
Une sorte de sirop a été fabriquée à partir d'eau et du premix huile de palme/ ingrédient alimentaire bioactif. L'ingrédient alimentaire bioactif a été progressivement ajouté dans l'eau (300C) sous agitation à l'ultraturax (22000t/min), la teneur en palme dans la solution étant arbitrairement fixée à 30%.
L'émulsion obtenue était facilement pompable à 3O0C - 350C, mais devenait de plus en plus ferme dès que la température était inférieure à 25°C - 30°C (recristallisation progressive de l'huile de palme). L'utilisation d'un émulsifiant alimentaire (e.g., Lactem® fourni par Danisco) à hauteur de 0.5% /MG a permis d'obtenir une population de globules gras moins hétérogène.
2.3) Etape 3 : ajout de l'émulsion dans la masse blanche fermentée.
Comme illustré par les figures 6 et 7, la teneur en ingrédient bioactif est stable au cours du temps, indiquant qu'un ingrédient alimentaire bioactif peut être efficacement protégé par encapsulation, conformément à la présente invention.
Ainsi, outre le peptide αS1 [91-100] dont la stabilité est montrée par la Fig.
6, d'autres peptides, comme le peptide bioactif αS1 [23-34] (présent dans l'ingrédient C12 de la société DMV International), sont également bien protégés (Figure 7). La disparition de peptides autres que ceux d'intérêt
(Fig.7, (1 ), symbolisés par les flèches) contribue à la diminution de la charge peptidique globale et, donc, vraisemblablement à la perte d'amertume du produit fini. REFERENCES
Kayser ef al., (1996) FEBS Letters 383, 18-20
Hâta Y. ét al., (1996) Am. J. Clin. Nutr. 64, 767-71 Nakamura Y. et al., (1995) J. Dairy Sci. 78, 1253-7
Migliore-Samour D. ét al., (1988) Experimentia 44, 188-93
Defilippi C. ét al., (1995) Nutr. 11 , 751-4
Tome D. ét al., (1987) Am. J. Physiol. 253, G737-44
Tome D. ét al., (1988) Reprod. Nutri. Dévelop. 28, 909-18 Ben Mansour A. ét al., (1988) Pediatr. Res. 24, 751-5
Mahé S. ét al., (1989) Reprod. Nutri. Dévelop. 29, 725-32
Schusdziarra V. ét al., (1983) Diabetologia 24, 113-6
Yvon M. ét al., (1994) Reprod. Nutri. Dévelop. 34, 527-37
Zucht H. D., ét al., (1995) FEBS Letters 372, 185-8 Tomita M. ét al., (1994) Acta Paed. Jap. 36, 585-91
Lahov E. ét al., (1996) Food Chem. Toxic. 34, 131-145
Migliore-Samour D. ét al., (1989) Int. Dairy Res. 56, 357-62
Jolies P. ét al., (1986) Europ. J. Biochem. 158, 379-82
Raha S. et al., (1988) Blood 772, 172-8 Chabance B. et al., (1995) Brit. J. Nut. 73, 582-90
Kohmura M. ét al., (1989) Agric. Biol. Chem. 53, 2107-14
Masuda O. ét al., (1996) J. Nutr. 126, 3063-8
Yamamoto N. ét al., (1994) Biosci. Biotech. Biochem. 58, 776-8
Ermisch A. ét al., (1983) J. Neurochem. 41, 1229 Umbach M. et al., (1985) Regul. Pept. 12, 223-30
Singh M., et al., (1989) Pediatr. Res. 26, 34-8
Svedberg J. et al., (1985) Peptides 6, 825-30
Teschemacher H., ét al., (1986) J. Dairy Res. 53, 135-8
Yoshikawa M. ét al., (1986) Agric. Biol. Chem. 50, 2419-21 Chiba H. et al., (1989) J. Dairy Sci. 72, 363
Beucher S. ét al., (1994) J. Nutr. Biochem. 5, 578-84
Parker F. ét al., (1984) Eur. J. Biochem. 45, 677-82
Otani H. ét al., (1992) Milchwiss. 47, 512-5
Otani H. ét al., (1995) J. Dairy Res. 62, 339-48 Drouet et al., (1990) Nouv. Rev. Fr. Hermatol. 32, 59-62
MuIIaIy M. et al., (1997) Int. Dairy J. 7, 299-303
Meisel H. ét al., (1986) FEBS Letters 196, 223-7
Danone World Newsletter N°17 (septembre 1998)
Functional Food Science in Europe (1998) British Journal of Nutrition 80 (1 ): S1 -S193
Directional Paired Comparison Method, Sensory Evaluation of Food, Harry
T. Lawless, Hildegarde Heymann (1990)

Claims

REVENDICATIONS
1. Produit alimentaire contenant un ou plusieurs microorganismes vivants et au moins un ingrédient alimentaire bioactif d'intérêt, caractérisé en ce que le ou lesdits ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt sont protégés physiquement par encapsulation dans une matière grasse, de sorte que leur métabolisation par le ou lesdits microorganismes vivants est réduite.
2. Produit alimentaire selon la revendication 1 , caractérisé en ce que la quantité résiduelle d'ingrédient(s) alimentaire(s) bioactif(s) d'intérêt dans ledit produit alimentaire est, 3 semaines après sa préparation, comprise entre 50 et 100 % environ par rapport à la quantité d'ingrédient(s) alimentaire(s) bioactif(s) d'intérêt présente dans le produit juste après sa préparation.
3. Produit alimentaire selon la revendication 2, caractérisé en ce que ladite quantité résiduelle est comprise entre 80 et 100% environ par rapport à ladite quantité d'ingrédient(s) alimentaire(s) bioactif(s) d'intérêt présente dans le produit juste après sa préparation.
4. Produit alimentaire selon l'une quelconque des revendications 1 à
3. caractérisé en ce que le ou lesdits ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt sont choisis parmi :
- des protéines,
- des peptides, - des vitamines, des micronutriments,
- des analogues ou dérivés de ceux-ci, et - leurs combinaisons.
5. Produit alimentaire selon la revendication 4, caractérisé en ce que le ou lesdits ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt sont choisis parmi : - des protéines,
- des peptides,
- des analogues ou dérivés de ceux-ci, et
- leurs combinaisons.
6. Produit alimentaire selon la revendication 4 ou 5, caractérisé en ce que le ou lesdits ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt sont choisis parmi : le peptide αS1 [91-100], le peptide C6-αsi 194-199, le peptide Cl- β177-183, le peptide C12-αsi 23-34, les caséinophosphopeptides, l'α- casomorphine, la caséine α exorphine, la casokinine, la β-casomorphine, les caséinomacropeptides et les glycomacropeptides, la casoxine, les casoplatellines, les fragments 50-53, les β-lactorphines, la lactoferroxine, les peptides Val-Pro-Pro, Lys-Val-Leu-Pro-Val-Pro-GIn, Tyr-Lys-Val-Pro- Gln-Leu, Tyr-Pro, Ile-Pro-Pro, des fragments, analogues, dérivés de ceux- ci, des protéines et/ou peptides les contenant, et leurs combinaisons.
7. Produit alimentaire selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu'il présente une amertume réduite.
8. Produit alimentaire selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que ladite matière grasse est choisie parmi les matières grasses animales, notamment laitières ou de poissons, et végétales.
9. Produit alimentaire selon la revendication 8, caractérisé en ce que ladite matière grasse végétale est choisie parmi l'huile de palme, l'huile de colza et une matière grasse extraite d'une algue.
10. Produit alimentaire selon l'une quelconque des revendications 1 à
9, caractérisé en ce que le ou lesdits microorganismes vivants ont une capacité intacte ou réduite de métabolisation du ou desdits ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt.
11. Produit alimentaire selon l'une quelconque des revendications 1 à
10, caractérisé en ce que le ou lesdits microorganismes vivants sont des bactéries, de préférence des bactéries lactiques, vivantes.
12. Produit alimentaire selon la revendication 11 , caractérisé en ce que lesdites bactéries vivantes sont choisies parmi :
- Streptococcus spp, de préférence Streptococcus thermophilus ; - Lactobacillus spp ;
- Lactococcus spp ;
- Bifidobacterium spp.
13. Produit alimentaire selon la revendication 12, caractérisé en ce qu'il contient au moins les bactéries vivantes S. thermophilus et Lactobacillus spp.
14. Produit alimentaire selon la revendication 12 ou 13, caractérisé en ce que lesdites bactéries vivantes S. thermophilus sont choisies parmi : - Streptococcus thermophilus, déposée à la CNCM le 24/01/02 sous le numéro I-2774 ;
- Streptococcus thermophilus, déposée à la CNCM le 24/10/95 sous le numéro 1-1630 ;
- Streptococcus thermophilus, déposée à la CNCM le 10/05/04 sous le numéro 1-3211 ; - Streptococcus thermophilus, déposée à la CNCM le 16/09/04 sous le numéro 1-3301 ;
- Streptococcus thermophilus, déposée à la CNCM le 16/09/04 sous le numéro I-3302.
15. Produit alimentaire selon la revendication 14, caractérisé en ce que lesdites bactéries vivantes sont des bactéries S. thermophilus déposées à la CNCM le 10/05/04 sous le numéro 1-3211.
16. Produit alimentaire selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, caractérisé en ce qu'il contient en outre au moins un ingrédient alimentaire leurre.
17. Produit alimentaire selon l'une quelconque des revendications 1 à 16, caractérisé en ce qu'il est une boisson, de préférence une eau.
18. Produit alimentaire selon l'une quelconque des revendications 1 à
17, caractérisé en ce qu'il est un produit fermenté.
19. Produit alimentaire selon l'une quelconque des revendications 1 à
18, caractérisé en ce qu'il est un produit laitier ou végétal.
20. Procédé d'encapsulation d'au moins un ingrédient alimentaire bioactif d'intérêt dans une matière grasse, comprenant au moins :
a) la préparation d'un mélange eau/matière grasse, à maintenir à une température proche de la température de fusion de ladite matière grasse, de préférence comprise dans un intervalle de + 100C autour de ladite température de fusion ; et b) l'incorporation progressive et sous agitation de l'ingrédient bioactif d'intérêt dans le mélange obtenu à l'étape a), en maintenant l'ensemble à une température proche de la température de fusion de ladite matière grasse, de préférence comprise dans un intervalle de ± 100C autour de ladite température de fusion.
21. Procédé selon la revendication 20, comprenant en outre l'ajout d'un ou plusieurs additifs alimentaires tels que des émulsifiants, des épaississants, etc., et le mélange de l'ensemble, tout en maintenant une température proche de la température de fusion de ladite matière grasse, de préférence comprise dans un intervalle de ± 10°C autour de ladite température de fusion.
22. Procédé de préparation d'un produit alimentaire selon l'une quelconque des revendications 1 à 19, caractérisé en ce que le ou lesdits ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt sont encapsulés avant d'être ajoutés au mélange destiné à constituer ledit produit alimentaire.
23. Procédé selon la revendication 22, caractérisé en ce que le ou lesdits ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt sont encapsulés conformément au procédé selon la revendication 19 ou 20.
24. Procédé selon la revendication 22 ou 23, caractérisé en ce que le ou lesdits ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt encapsulés sont ajoutés audit mélange sous agitation.
25. Procédé selon l'une quelconque des revendications 22 à 24, caractérisé en ce que :
- ledit produit alimentaire est fermenté ; et
- le ou lesdits ingrédients alimentaires bioactifs d'intérêt encapsulés sont ajoutés audit mélange avant ou après, de préférence après, fermentation.
26. Utilisation d'un produit alimentaire selon l'une quelconque des revendications 1 à 19 comme aliment fonctionnel.
27. Utilisation d'une matière grasse pour encapsuler au moins un ingrédient alimentaire bioactif d'intérêt destiné à être incorporé dans un produit alimentaire contenant un ou plusieurs microorganismes vivants.
PCT/EP2005/055440 2004-10-22 2005-10-21 Protection d'ingrédients alimentaires bioactifs par encapsulation WO2006042861A1 (fr)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2007537282A JP2008516623A (ja) 2004-10-22 2005-10-21 封入による生物活性食品成分の保護
CA002584621A CA2584621A1 (fr) 2004-10-22 2005-10-21 Protection d'ingredients alimentaires bioactifs par encapsulation
EP05803119A EP1811853A1 (fr) 2004-10-22 2005-10-21 Protection d'ingrédients alimentaires bioactifs par encapsulation
MX2007004879A MX2007004879A (es) 2004-10-22 2005-10-21 Proteccion de ingredientes de alimentos bioactivos por medio de encapsulacion.
BRPI0516996-8A BRPI0516996A (pt) 2004-10-22 2005-10-21 produto aliementìcio contendo um ou vários microorganismos vivos e pelo menos um ingrediente aliementìcio bioativo de interesse, processo de encapsulação de pelo menos um ingrediente alimentìcio bioativo de interesse em uma matéria graxa, e, utilizações de um produto alimentìcio e de uma matéria graxa
US11/577,617 US20080050355A1 (en) 2004-10-22 2005-10-21 Protection of bioactive food ingredients by means of encapsulation

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR0411273A FR2876875B1 (fr) 2004-10-22 2004-10-22 Protection d'ingredients alimentaires bioactifs par encapsulation
FR0411273 2004-10-22

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2006042861A1 true WO2006042861A1 (fr) 2006-04-27

Family

ID=34952498

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/EP2005/055440 WO2006042861A1 (fr) 2004-10-22 2005-10-21 Protection d'ingrédients alimentaires bioactifs par encapsulation

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20080050355A1 (fr)
EP (1) EP1811853A1 (fr)
JP (1) JP2008516623A (fr)
CN (1) CN101065018A (fr)
BR (1) BRPI0516996A (fr)
CA (1) CA2584621A1 (fr)
FR (1) FR2876875B1 (fr)
MX (1) MX2007004879A (fr)
WO (1) WO2006042861A1 (fr)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8877178B2 (en) 2003-12-19 2014-11-04 The Iams Company Methods of use of probiotic bifidobacteria for companion animals
US20050158294A1 (en) 2003-12-19 2005-07-21 The Procter & Gamble Company Canine probiotic Bifidobacteria pseudolongum
FR2876876B1 (fr) * 2004-10-22 2007-02-16 Gervais Danone Sa Protection d'ingredients alimentaires bioactifs par l'utilisation de microorganismes presentant une capacite de metabolisation reduite
WO2006130188A1 (fr) 2005-05-31 2006-12-07 The Iams Company Bifidobacteries de probiotiques felins
BRPI0611493B1 (pt) 2005-05-31 2022-04-05 Alimentary Health Ltd. Lactobacilos probióticos felinos
CN101711158A (zh) 2007-02-01 2010-05-19 爱默思公司 使用葡萄糖抗代谢物、鳄梨或鳄梨提取物减轻哺乳动物炎症和应激反应的方法
US9771199B2 (en) 2008-07-07 2017-09-26 Mars, Incorporated Probiotic supplement, process for making, and packaging
US9232813B2 (en) * 2008-07-07 2016-01-12 The Iams Company Probiotic supplement, process for making, and packaging
US10104903B2 (en) 2009-07-31 2018-10-23 Mars, Incorporated Animal food and its appearance
JP6243276B2 (ja) * 2014-03-31 2017-12-06 株式会社ファンケル 原薬の耐酸性を向上させたハードカプセル製剤
FR3079303A1 (fr) 2018-03-20 2019-09-27 Ab7 Innovation Procede pour la detection de la presence d'un traceur dans les excrements
CN118388596B (zh) * 2024-06-21 2024-08-30 云南农业大学 一种抗菌肽fgm7及其应用

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH06133735A (ja) * 1992-10-23 1994-05-17 Kanebo Ltd 腸溶性乳酸菌造粒物
WO1995034292A2 (fr) * 1994-06-14 1995-12-21 Recordati S.A. Chemical And Pharmaceutical Company Composes stabilises et biologiquement actifs contenus dans des microgranules enrobees pouvant etre mises en suspension dans des liquides alimentaires
US5756136A (en) * 1995-06-02 1998-05-26 Mccormick & Company, Inc. Controlled release encapsulation compositions
WO2003041512A1 (fr) * 2001-11-12 2003-05-22 Mars, Incorporated Denree alimentaire
WO2003053159A1 (fr) * 2001-12-20 2003-07-03 Societe Des Produits Nestle S.A. Produit alimentaire contenant des comprimes ou des capsules de gel
US20040121002A1 (en) * 2002-12-23 2004-06-24 Lee Phillip K. Controlled release encapsulated bioactive substances

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1102174A (fr) * 1978-05-31 1981-06-02 Frank Taylor Appareil et methode pour faire du yogourt
JPS6219239A (ja) * 1985-07-19 1987-01-28 Ajinomoto Co Inc 溶出が防止された油脂被覆物の製造法
US5080921A (en) * 1990-02-05 1992-01-14 Pfizer Inc. Low calorie fat substitute
JPH03285654A (ja) * 1990-03-30 1991-12-16 Snow Brand Milk Prod Co Ltd 機能性物質を高濃度に内包したカプセル体及びその製造法
JP2001128644A (ja) * 1999-11-05 2001-05-15 Takeda Chem Ind Ltd 固形状食品組成物
US6514941B1 (en) * 1999-12-10 2003-02-04 Campina Melkunie B.V. Method of preparing a casein hydrolysate enriched in anti-hypertensive peptides
US20020121002A1 (en) * 2001-03-02 2002-09-05 Yu-Chih Wu Structure of hinge for use in a computer
FR2822381B1 (fr) * 2001-03-20 2004-10-22 Bio Obtention Sc Extrait de cucumis melo enrobe et/ou microencapsule dans un agent liposoluble a base de matiere grasse
JP3941036B2 (ja) * 2001-12-07 2007-07-04 サンスター株式会社 経口投与のためのリポソーム組成物
US7118688B2 (en) * 2004-02-23 2006-10-10 The Texas A&M University System Antioxidant compositions and methods of use thereof

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH06133735A (ja) * 1992-10-23 1994-05-17 Kanebo Ltd 腸溶性乳酸菌造粒物
WO1995034292A2 (fr) * 1994-06-14 1995-12-21 Recordati S.A. Chemical And Pharmaceutical Company Composes stabilises et biologiquement actifs contenus dans des microgranules enrobees pouvant etre mises en suspension dans des liquides alimentaires
US5756136A (en) * 1995-06-02 1998-05-26 Mccormick & Company, Inc. Controlled release encapsulation compositions
WO2003041512A1 (fr) * 2001-11-12 2003-05-22 Mars, Incorporated Denree alimentaire
WO2003053159A1 (fr) * 2001-12-20 2003-07-03 Societe Des Produits Nestle S.A. Produit alimentaire contenant des comprimes ou des capsules de gel
US20040121002A1 (en) * 2002-12-23 2004-06-24 Lee Phillip K. Controlled release encapsulated bioactive substances

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PATENT ABSTRACTS OF JAPAN vol. 018, no. 433 (C - 1237) 12 August 1994 (1994-08-12) *

Also Published As

Publication number Publication date
BRPI0516996A (pt) 2008-09-30
CA2584621A1 (fr) 2006-04-27
CN101065018A (zh) 2007-10-31
FR2876875A1 (fr) 2006-04-28
EP1811853A1 (fr) 2007-08-01
JP2008516623A (ja) 2008-05-22
US20080050355A1 (en) 2008-02-28
MX2007004879A (es) 2007-06-15
FR2876875B1 (fr) 2007-02-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20070031536A1 (en) Fermented foods and process for producing the same
WO2018030505A1 (fr) Chocolat contenant du lactobacillus et son procédé de fabrication
FR2930406A1 (fr) Aliment infantile a base de matiere grasse d&#39;origine laitiere
EP2040560B1 (fr) Granules de cysteine et leurs utilisations a titre d&#39;activateurs de croissance de bifidobacterium animalis lactis
CA2551494C (fr) Produit alimentaire liquide comprenant des granules de bacteries lactiques
WO2006042861A1 (fr) Protection d&#39;ingrédients alimentaires bioactifs par encapsulation
AU2017287989B2 (en) Composition for use in improvement of nutritional state
EP3945862A1 (fr) Composition proteique de feverole
CA2209335C (fr) Ferment lactique, et son utilisation pour la preparation de produits anti-diarrheiques
CA2584615C (fr) Protection d&#39;ingredients alimentaires bioactifs par l&#39;utilisation de microorganismes presentant une capacite de metabolisation reduite
FR2877012A1 (fr) Souches de streptococcus thermophilus ami deficientes a post-acidification reduite
WO2014076432A1 (fr) Procédé pour la fabrication d&#39;une émulsion sèche en poudre contenant au moins un principe actif lipophile, destinée à améliorer la biodisponibilité dudit principe actif lipophile, et émulsion sèche obtenue par ce procédé
CA2346553C (fr) Composition alimentaire a base de matiere issue de lait comprenant des glycerides d&#39;acide linoleique conjugue
WO2006042836A1 (fr) Protection d&#39;ingrédients alimentaires bioactifs par l&#39;utilisation d&#39;ingrédients leurres
TWI874375B (zh) 乳酸菌發酵食品之製造方法
EP4470385A1 (fr) Procede d&#39;obtention d&#39;une emulsion eau-dans-huile comestible
EP4410106A1 (fr) Émulsion huile dans l&#39;eau contenant de l&#39;huile transestérifiée
FR3031009B1 (fr) Produit laitier a base de legumineuses
FR2988268A1 (fr) Poudre de blanc d&#39;oeuf

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AE AG AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BW BY BZ CA CH CN CO CR CU CZ DE DK DM DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KM KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV LY MA MD MG MK MN MW MX MZ NA NG NI NO NZ OM PG PH PL PT RO RU SC SD SE SG SK SL SM SY TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN YU ZA ZM ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): BW GH GM KE LS MW MZ NA SD SL SZ TZ UG ZM ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HU IE IS IT LT LU LV MC NL PL PT RO SE SI SK TR BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2007537282

Country of ref document: JP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2584621

Country of ref document: CA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 11577617

Country of ref document: US

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: MX/a/2007/004879

Country of ref document: MX

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2005803119

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 200580040617.5

Country of ref document: CN

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 2005803119

Country of ref document: EP

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 11577617

Country of ref document: US

ENP Entry into the national phase

Ref document number: PI0516996

Country of ref document: BR

点击 这是indexloc提供的php浏览器服务，不要输入任何密码和下载