WO2005116005A1

WO2005116005A1 - リパーゼ阻害活性および／または抗酸化活性を有するエピガロカテキン二量体および三量体

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Publication number: WO2005116005A1
Application number: PCT/JP2005/009666
Authority: WO
Inventors: Masaaki Nakai; Yuko Fukui; Sumio Asami
Original assignee: Suntory Limited
Priority date: 2004-05-27
Filing date: 2005-05-26
Publication date: 2005-12-08
Also published as: KR20070023758A; HK1103406A1; EP1754702A4; JP4668553B2; PL1754702T3; EP1754702B1; CN100471850C; ES2380701T3; PT1754702E; EP1754702A1; US7989492B2; TW200538146A; CY1113005T1; TWI349548B; KR101213519B1; KR101077802B1; ATE548362T1; US20110124887A1; JP2005336117A; US8309745B2

Abstract

　本発明は、膵リパーゼに対して高い阻害活性を示し、食事由来の脂肪吸収を抑制し、および／または肥満の抑制や予防に寄与するリパーゼ活性阻害剤、およびそれを添加した飲食品を提供すること、または、茶由来の、嗜好性の高い、香味を損なうことのないリパーゼ阻害剤を提供することを課題とする。また、本発明は、当該リパーゼ阻害剤の製造法を提供することも課題とする。さらに、本発明は、抗酸化剤を提供することも課題とする。これら課題を解決する手段として、エピガロカテキンの二量体（ウーロンホモビスフラバン類）または三量体を飲食物に添加する。これにより、食事由来の脂肪吸収を抑制することができ、また、抗酸化作用が得られる。本発明化合物の製造は、エピガロカテキンガレートとホルムアルデヒドを酸の存在下で反応させることにより達成される。

Description

リパーゼ阻害活性および zまたは抗酸ィ匕活性を有するェピガロカテキン二量体および三量体

技術分野

[0001] 本発明は、リパーゼ阻害活性を有するェピガロカテキンニ量体および三量体、並びに、それを添加した飲食品に関する。また、本発明は、抗酸化剤作用を有するェピガロカテキンガレートニ量体および三量体、並びに、それを添加した飲食品にも関する。さらに、本発明は当該ェピガロカテキンニ量体および三量体の製造方法にも関する。

背景技術

[0002] リパーゼ阻害剤

近年、日本人の生活様式の欧米化に伴い、高脂肪食の摂取が増加の一途をたどつている。平成 11年国民栄養調査によると、エネルギー摂取量は年々減少しているにも拘らず、その脂質エネルギー比は適正比率である 25%を超え、中性脂肪値ゃコレステロール値が高い人の割合は 60歳以上で 5〜6割に認められたとの報告がある（厚生労働省平成 11年国民栄養調査結果の概要臨床栄養 2001、 98 (5) 577- 5 88)。

[0003] 肥満は現代社会における最も重大な疾患の一つである力その主たる要因は脂肪の過剰摂取である。また、脂肪の過剰摂取は、肥満のみならず、肥満に起因する糖尿病、高脂血症、高血圧、動脈硬化等を発症させることが知られている。この肥満に対する治療薬として、国内では、食欲抑制剤のマジンドール (登録商標）が唯一承認されているが、ロ渴、便秘、胃部不快感、悪心'嘔吐等の副作用が報告されている（臨床評価、 1985、 13 (2)、 p. 419〜459；臨床評価、 1985、 13 (2)、 p. 461〜51 5)。また、海外においては、リパーゼ阻害活性による腸管からの脂肪吸収の抑制作用を持つゼ-カル (登録商標）が肥満改善薬として市販されているが、やはり、脂肪便、排便数の増加、軟便、下痢、腹痛等の副作用が報告されている（Lancet, 1998, 3 52, p.67-172) ₀ [0004] 一方、肥満を予防するための他の方法として、食事制限により摂取カロリーを減らすことが有効であることが知られている。しかし、この手段においては厳密な栄養指導と管理が必要とされ、日常生活において実行することは困難である。したがって、安全かつ健康的に食事由来の脂肪の体内吸収を抑制することができれば、肥満及びそれに関連する疾患の治療あるいは健康増進のための現実的で有用な方策となる。

[0005] このような背景のもと、安全でかつヒトに対する有効性が証明されている特定保健用食品の開発が注目されている。これまでに、食後の血清中性脂肪値の上昇を抑える特定保健用食品として、脾リパーゼの阻害により脂肪吸収を抑制するグロビン蛋白分解物（J. Nutr. 1988, 128, p.56- 60 ;日本臨床 ·食糧学会誌、 1999、 52 (2)、 p. 71〜 77 ;健康'栄養食品研究、 2002、 5 (3) , p. 131〜144)、トリァシルグリセロールとは異なる消化吸収特性を有するジァシルグリセロール (J. Am. Coll. Nutr. 2000, 19(6), p.789- 796 ; Clin. Chim. Acta. 2001, 11(2), p.109- 117)、及び、魚油より精製されたェィコサペンタエン酸 (EPA)、ドコサへキサェン酸（DHA)などが発売されている。これら特定保健用食品を用いて食事性脂肪の吸収を抑えるためには、食事と共に摂取することが望ましぐその際には飲食物の香味や風味に影響を及ぼすことが予想される。

[0006] また、リパーゼの阻害に関して、いくつかのポリフエノールが活性を有することが知られている。例えば、植物榭皮由来のタンニン (特公昭 60— 11912)、マメ科植物カヮラケッメイに含まれるタンニン類ゃフラボノイド類およびその配糖体 (特開平 8— 2595 57)、緑茶中の主要な成分ェピガロカテキンガレートおよびェピカテキンガレートを配合した脂質吸収抑制食品（特開平 3— 228664)、ピーマン、シメジ、かぼちゃ、まいたけ、ひじき、緑茶、ウーロン茶などの水抽出物力もなるリパーゼ阻害剤 (特開平 3— 219872)、フラボンおよびフラボノール類 (特開平 7— 61927)、ヒドロキシ安息香酸類 (没食子酸）（特開平 1— 102022)、トリテルペン類ィ匕合物およびその誘導体 (特開平 9 40689)、タマリンドのプロシア-ジンを有効成分とする抗肥満剤（特開平 9 — 291039)などが報告されており、また、ブドウ種子抽出物のリパーゼ阻害作用 (Nu trition, 2003, 19, (10), p.876- 879)、サラシァ由来ポリフエノールによるリパーゼ阻害作用とラットの抗肥満作用（J. Nutr., 2002, 132, ρ.1819_1824)、ウーロン茶抽出物によるマウスの抗肥満作用 (Int. J. Obes., 1999, 23, p.98-105)なども知られている。一方、ウーロン茶に関して、脂質低下効果を示した報告がある。例えば、市販ウーロン茶を 1日 1330mlずつ 6週間飲用させ、血中中性脂肪値の有意な低下が認められたとの報告（日本栄養'食糧学会誌、 1991、 44(4)、 p.251〜259)や、単純性肥満症の男女 102名を対象にウーロン茶 (2gX4/日）を 6週間連続経口摂取させた結果、 67%の被験者に lkg以上の体重減少が認められ、さらに、血中中性脂肪値が高値を示した被験者においてウーロン茶摂取後に有意な改善効果が認められたとの報告（日本臨床栄養学会雑誌、 1998、 20(1)、 p.83〜90)がなされている。

非特許文献 1:厚生労働省平成 11年国民栄養調査結果の概要臨床栄養 2001、 9 8(5)577-588

非特許文献 2:臨床評価、 1985、 13(2)、 p.419-459

非特許文献 3:臨床評価、 1985、 13(2)、 p.461-515

非特許文献 4: Lancet, 1998, 352, p.67-172

非特許文献 5: J. Nutr.1988, 128, p.56- 60

非特許文献 6:日本臨床'食糧学会誌、 1999、 52(2)、 p.71-77

非特許文献 7:健康'栄養食品研究、 2002、 5(3), p.131〜144

非特許文献 8: J. Am. Coll. Nutr.2000, 19(6), p.789-796

非特許文献 9:Clin. Chim. Acta.2001, 11(2), p.109-117

非特許文献 10: Nutrition, 2003, 19, (10), p.876-879)

非特許文献 11 :J. Nutr., 2002, 132, p.1819-1824

非特許文献 12: Int. J. Obes., 1999, 23, p.98-105

非特許文献 13:日本栄養'食糧学会誌、 1991、 44(4)、 p.251〜259

非特許文献 14:日本臨床栄養学会雑誌、 1998、 20(1)、 p.83〜90

特許文献 1：特公昭 60 -11912

特許文献 2:特開平 8— 259557

特許文献 3：特開平 3— 228664

特許文献 4：特開平 3 -219872 特許文献 5：特開平 7 -61927

特許文献 6：特開平 1 102022

特許文献 7：特開平 9—40689

特許文献 8 :特開平 9— 291039

発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0008] 上記に示した既報のリパーゼ阻害剤は、効果が十分なものとはいえない。例えば、ある植物の抽出物で効果があつたとしても、その中に含まれる活性成分量を明確にしない限り、天然物が起源であるので、安定的にリパーゼ阻害活性を維持させることは困難である。

[0009] また、嗜好性の低い植物由来のリパーゼ阻害剤は、飲食物として利用すると香味に悪影響を及ぼすことが予想される。したがって、嗜好性の高い茶に起源を発するリバーゼ阻害剤は、有効な素材候補となり得るが、嗜好性の高いウーロン茶を飲用して脂質低下を図るとしても、大量に飲用しなければ効果が得られず、日常生活のなかで行うことは現実的でない。単純に濃縮したウーロン茶を提供したとしても、苦味'渋味が強ぐカフェイン量も増えてしまうため、やはり、この方法も現実的な方策とはなり得ない。

[0010] したがって、本発明の目的は、脾リパーゼに対して高い阻害活性を示し、食事由来の脂肪吸収を抑制し、および Zまたは肥満の抑制や予防に寄与するリパーゼ活性阻害剤を提供することである。

[0011] また、本発明の目的は、ウーロン茶由来の嗜好性の高い、香味を損なうことのないリパーゼ阻害剤を提供することである。

[0012] さらに、本発明の目的は、当該リパーゼ阻害剤の製造法を提供することである。

[0013] 本発明の目的は、本発明のリパーゼ阻害剤を添加した飲食品等を提供することでもめる。

[0014] 本発明のさらに別の目的は、活性酸素に起因する種々の疾患、例えば、高血圧、糖尿病、高脂血症等の生活習慣病、動脈硬化等の心疾患、および、老化や癌等を予防する抗酸化剤抗酸化剤を提供することである。 [0015] さらに、本発明の目的は、効果量を的確に飲食品等に添加することができるリパーゼ阻害剤および Zまたは抗酸化剤を提供することである。

課題を解決するための手段

[0016] ェピガロカテキンニ量体および二量体

上記課題を解決する手段として、ウーロン茶より、脂肪吸収に必須な脾リパーゼを阻害する成分を見出した。そこに存在する種々のポリフエノールのリパーゼ阻害活性を評価し、ェピガロカテキンがそのクロマン環の 6位または 8位でメチレン基を介して重合した以下の構造：

[0017] [化 1]

[0018] (式中、 Rおよび Rは、それぞれ独立して Hまたはガロイル基である。）を有するェピ

1 2

ガロカテキンの二量体に強い阻害活性があることを突き止めた。

[0019] 本発明の好ましい二量体は、式：

[0020] [化 2]

により表されるウーロンホモビスフラバン（oolonghomobisflavan) A (l)、ウーロンホモビスフラバン B (2)、モノデスガロイルウーロンホモビスフラバン A (5)およびジデスガロイルウーロンホモビスフラバン B (6)である。

[0022] 本発明によれば、合成された新規ェピガロカテキンガレ

ホモビスフラバン C (3)：

[0023] [化 3]

[0024] も高、リパーゼ阻害活性を有する。

[0025] また、本発明によると、ェピガロカテキンがそのクロマン環の 6位および/または 8位でメチレン基を介して重合したェピガロカテキン三量体：

[0026] [化 4]

[0027] (式中、 R、 Rおよび Rは、それぞれ独立して Hまたはガロイル基である。）も、強いリ

3 4 5

パーゼ阻害活性を有する。

[0028] 好ましいェピガロカテキン三量体は、式：

[0029] [化 5]

[0030] により表される化合物 (4)である。

ェピガロカテキンニ量体および三量体の製造

本発明のェピガロカテキンニ量体の多くは、当業者に周知の方法によって合成または精製 '取得することができる。例えば、ェピガロカテキンニ量体である、ウーロンホモビスフラバン A (1)および B (2)は Chem. Pharm. Bull 37(12), 3255-3563(1989)に記載された方法により合成することができ、モノデスガロイルウーロンホモビスフラバン A (5)およびジデスガロイルウーロンホモビスフラバン B (6)は、 Chem. Pharm. Bull 37 (12), 3255-3563(1989)の方法により茶葉から取得することができる。

[0031] 一方、本発明の三量体は以下の製造方法によって製造される。即ち、ェピガロカテキンー3— 0—ガレート（7)等のフラバンー3—オール類を、メタノール、エタノール等の溶媒、好ましくはメタノール中で、塩酸、硫酸等の酸、好ましくは、 0. 01N塩酸の存在下、ホルムアルデヒドと反応させることを含む方法によって、製造することができる。反応温度は、原料および生成物が安定である限り特に制限されないが、室温で行うことが好ましい。あるいは、ェピガロカテキンー3— 0—ガレート（7)等のフラバン- 3-オールをジメチルスルホキシド (DMSO)に溶解させ、加熱することにより製造することができる。加熱反応条件は、原料および生成物が安定である限り特に限定されないが、好ましくは 150〜200°C、より好ましくは、 180°Cで、好ましくは 1分から 30分、より好ましくは 15分間行う。反応溶液中のホルムアルデヒドの濃度は、 3〜37wZv% が好ましい。生じた生成物は、必要に応じてエステル化、加水分解等の誘導化を行うことができる。

[0032] 上記三量体の製造方法は二量体の製造にも適する。例えば、実施例 3に記載されるように、新規ホモビスフラバン C (3)を含むいくつかの二量体が上記製造方法により製造された。

リパーゼ阳.害活件

本発明の化合物は、リパーゼ阻害活性、特に、脾リパーゼ阻害活性を有する。

[0033] リパーゼ阻害活性の測定は、背景技術に示した先行出願に記載されているいずれのリパーゼ活性評価法によっても行われることができ、脾リパーゼに対する阻害活性は、例えば、蛍光性の 4ーメチルゥンベリフエロンのォレイン酸エステルを基質として使用し、リパーゼによる反応で生成した 4ーメチルゥンベリフエロンの蛍光を測定することにより実施できる。リパーゼ活性に対して 50%の阻害を与える試料量 IC で表す

50 ことも、常法により行うことができる。

[0034] 実施例 1に示すとおり、公知のリパーゼ阻害剤であるェピガロカテキン 3— O—ガレート（7)の脾リパーゼ IC に対して、本発明化合物は非常に低い値を示した。

50

[0035] 従って、本発明のリパーゼ阻害剤は、従来知られている天然物由来のリパーゼ阻害剤よりも少量で食事由来の脂肪の体内吸収を抑制し、血中中性脂肪の上昇を抑制し、および Zまたは肥満を防止することができる。本発明化合物は天然物由来の物質であるため、安全性も高ぐ日常的におよび Zまたは長期にわたって摂取してその効果を発揮させるために適している。また、ウーロン茶に由来する本発明化合物は、嗜好性の点で優れている。

杭酸化剤活件

さらに、本発明者らは、本発明の二量体および三量体が、スーパーォキシドア-ォンラジカルを消去する活性を有することも見出した。

[0036] スーパーォキシドア-オンラジカル (O ")は体内で生成される活性酸素の一種であ

2

り、生体内で殺菌作用などに利用されるが、それのみにとどまらず生体内で無差別に強い酸化反応を惹起する。この作用は、例えば、細胞膜の不飽和脂肪酸の過酸化を通じて生体の老化、癌化等の疾患を引き起こすと考えられている（例えば、南山堂、「医学大辞典第 18版」、 1998年 1月 16日発行、 p. 329参照)。また、食品中で不飽和脂肪酸の過酸ィヒ反応が生じれば食品の劣化につながり、さらに、食品の劣化臭の発生にも関与することとなる。従って、スーパーォキシドア-オンラジカルを消去することができる化合物は、活性酸素に起因する種々の疾患、例えば、高血圧、糖尿病、高脂血症等の生活習慣病、動脈硬化等の心疾患、および、老化や癌等を予防することができる等の有益な特性を有する。

[0037] スーパーォキシドア二オンラジカル消去活性は、実施例 5に示す方法により測定された。即ち、キサンチンォキシダーゼにより O—を発生させ、トラップ剤として 5, 5—ジ

2

メチル 1—ピロリン一 N—ォキシドを用い、 ESRにより測定を行った。本発明化合物の存在下または非存在下で測定が行われ、その結果は O—発生量を 50%抑制する

2

試料量 IC として表した。

50

[0038] 実施例 5によると、公知のスーパーォキシドア-オンラジカル消去剤である化合物（ 7)の IC に対して、本発明化合物は非常に低い値を示した。

50

[0039] 従って、本発明化合物は、従来の天然物由来スーパーォキシドア-オンラジカル消去剤と比較して少量で、活性酸素に起因する種々の疾患、例えば、高血圧、糖尿病、高脂血症等の生活習慣病、動脈硬化等の心疾患、および、老化や癌等を予防することができる。し力も、本発明化合物は天然物由来であるから、その安全性も高く、長期間にわたり摂取して効果を発揮させることが可能である。

'Jパーゼ阳.害および/または杭酸化剤添加飲食品

本発明のェピガロカテキンニ量体および Zまたは三量体を添加して茶ポリフエノールを増強することにより、中性脂肪の低減、脂質過酸化の防止、老化防止、肥満予防等の作用、並びに、活性酸素に起因する種々の疾患、例えば、高血圧、糖尿病、高脂血症等の生活習慣病、動脈硬化等の心疾患、および、老化や癌等を予防する作用を有する飲食品を製造することができる。

[0040] 本発明化合物を添加する飲料の例は、清涼飲料、茶飲料、液状強壮剤、健康飲料、栄養補給飲料、スポーツドリンク、炭酸飲料等 (これらの飲料の濃縮原液及び調製用粉末を含む)であり、食品の例は、ガム、キャンディ、ゼリー、錠菓、健康食品、栄養補給食品、サプリメント等である。

リパーゼ阳.害および/または杭酸化剤を含む医蓉組成物

本発明のェピガロカテキンニ量体および Zまたは三量体を用いることにより、中性脂肪の低減等の作用、並びに、活性酸素に起因する種々の疾患、例えば、高血圧、糖尿病、高脂血症等の生活習慣病、動脈硬化等の心疾患、および、老化や癌等を予防する作用を有する医薬品を製造することができる。

[0041] 本発明化合物を医薬として用いる場合には、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、液剤、注射剤、皮膚用液剤、ェマルジヨン、軟膏等の形態で提供される。

リパーゼ阳. あび/または酸化剤添力 _π 本発明のェピガロカテキンニ量体および Ζまたは三量体を用いることにより、脂質過酸化の防止、老化防止、美白作用等の作用を有する化粧品を製造することができる。

[0042] 本発明化合物が添加される化粧品は、例えば、顔用、皮膚用、頭髪用のクリーム、ローション、ゲル、ムース、シャンプー、リンス等である。

[0043] 本発明化合物は、抽出精製品や合成品を単独で飲食品、医薬組成物または化粧品に用いることもできるが、本発明の化合物の 1つ以上を含む混合物の形態で飲食品に添加することもできる。

[0044] したがって、茶葉等の原料からの抽出物に複数の本発明化合物が含まれていれば

、その抽出混合物は、各成分を分離することなぐ本願のリパーゼ阻害剤として用いることがでさる。

発明の効果

[0045] ウーロン茶のポリフエノール若しくはェピガロカテキンニ量体および Ζまたは三量体のうち、リパーゼ阻害活性が高い成分を添加することにより、香味を損なうことなぐ嗜好性の高くて、かつ肥満予防、健康増進を目的とした飲料が提供できる。

[0046] また、本発明化合物および飲食品は、抗酸化活性も有し、脂質の過酸化防止ゃ老化の予防にも役立つ。

図面の簡単な説明 [0047] [図 1]図 1は、リパーゼ阻害活性および抗酸化活性評価サンプルの化学構造式を示す。

[図 2]図 2は、ウーロンホモビスフラバン C (3)の¹ H— NMRスペクトルである。

[図 3]図 3は、ウーロンホモビスフラバン C (3)の¹³ C—NMRスペクトルである。

[図 4]図 4は、三量体（4)の¹ H— NMR ^ベクトルである。

[図 5]図 5は、三量体（4)の¹³ C— NMR ^ベクトルである。

[0048] 以下、実施例に基づいて本発明を具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されなヽことは言うまでもなヽ。

実施例 1

[0049] リパーゼ阳.害活件の測定

リパーゼ活性の測定は、基質として蛍光性の 4ーメチルゥンベリフエロンのォレイン酸エステル (4 - UMO)を使用し、酵素反応によって生成した 4—メチルゥンベリフエロンの蛍光を測定することにより実施した。

[0050] 測定にあたり、緩衝液は、 150mM NaClおよび 1. 36mM CaClを含む 13mM

2

Tris— HCl (pH8. 0)を用いた。基質である 4— UMO (Sigma- Aldrich co.社製）は、 0. 1Mの DMSO溶液として調製したものをさらに上記緩衝液で 1000倍希釈して用いた。また、リパーゼについては、ブタ脾リパーゼ (Sigma社製)を上記緩衝液を用いて 400UZml溶液とし、酵素測定に供した。

[0051] 酵素反応は、 25°C条件下において、 96穴マイクロプレートに 50 1の 4 UMO緩衝液溶液、 25 μ 1の蒸留水（ある、は試料水溶液)を添加し混合した後に、 25 μ 1のリパーゼ緩衝液を添加することにより開始させた。 30分間反応を行った後に、 100 1 の 0. 1Mクェン酸緩衝液 (ρΗ4. 2)を添加して反応を停止させ、反応によって生成した 4ーメチルゥンベリフロンの蛍光 (励起波長 355nm、蛍光波長 460nm)を蛍光プレートリーダー（Labsystems社製 Fluoroskan Asent CF)を用い測定した。

[0052] 被験試料の阻害活性は、対照 (蒸留水)の活性に対して 50%阻害を与える試料量 IC 1)として求めた。

50

実施例 2

[0053] 測定サンプルウーロンホモビスフラバン A (1)、ウーロンホモビスフラバン B (2)は論文 Chem.Phar m.Bull 37(12), 3255-3563(1989)に準じて合成した。モノデスガロイルウーロンホモビスフラバン A (5)およびジデスガロイルウーロンホモビスフラバン B (6)は、 Chem.Phar m.Bull 37(12), 3255-3563(1989)の方法により茶葉力抽出、精製した。あるいは、ゥ一ロンホモビスフラバン A (1)、ウーロンホモビスフラバン B (2)からタンナーゼにより加水分解して得ることもできる。新規ィ匕合物であるウーロンホモビスフラバン C (3)および三量体 (4)は実施例 3および 4の方法で合成して精製した後、機器分析により図 1の構造であることを確認した。（一）一ェピガロカテキン一 3— O—ガレート（EGCG、化合物 7)は、和光純薬工業株式会社より購入した。

実施例 3

ウーロンホモビスフラバン (OHBF)街の合成および精製

ァ.合成：

lOOmgの（一）—ェピガロカテキン— 3— O—ガレート (和光純薬工業株式会社)を、 0. OIN HC1と 18. 5%ホルムアルデヒドを含む 2mlのメタノールに溶解し、室温で 1時間撹拌した。反応終了後、高速液体クロマトグラフィーで精製した。

ィ.分取 HPLCの条件：

カラム： Develosil C30— UG— 5 (2cm φ X 25cm、野村化学株式会社）移動相： A: 0. 1%TFA/H 0、 B: 90%CH CN、 0. 1%TFA/H 0、 6ml/min

2 3 2

グラジェントプログラム： B10%→40% (0〜40min)、 B40%iso (40〜60min) 検出： A280nm

上記の条件下で分取 HPLCを行い、 OHBF— A、 OHBF— B、 OHBF— Cおよび 3量体を各々 24. 2mg、 17. 2mg、 5. 6mgおよび 13. 8mgずつ得た。各ィ匕合物の MSを micromass Q-TOFにより測定すると、ポジティブモードで、 OHBF— A、 OH BF— B、 OHBF— Cおよび三量体は、それぞれ、 m/z929, 929、 929、 139の [M + H]+のイオンピークが認められた。 OHBF— A、 OHBF— Bは、 Chem.Pharm.Bull 37(12), 3255-3563(1989)のスペクトルデータと一致したため、図 1の式 1および 2の構造であることを確認できた。 OHBF— Cおよび 3量体は、 — NMR、 ¹³C— NMR、 ¹ H{¹³C}— HSQCゝ {¹³じ}— HMBCゝ TOCSY、 DQF— COSYの NMR測定を D MX— 750スペクトルメーター（BRUKER BIOSPIN)で行い、図 1の式 3および 4の構造であることが明らかになつた。 OHBF— Cの¹ H— NMRおよび¹³ C - NMR^ぺクトルを図 2および図 3に示し、三量体の¹ H— NMRおよび¹³ C— NMRスペクトルを図 4 および図 5に示した。

実施例 4

[0055] ウーロンホモビスフラバン街およびその 3量体のリパーゼ阳.害活件

OHBF類の 2量体、 3量体の 6化合物およびェピガロカテキンガレート（EGCG)のリパーゼ阻害活性を実施例 1に従って測定し、その結果を表 1に示した。なお、図 1には評価に供した化合物の化学構造式を記載した。

[0056] クロマン環の 3位にガロイル基がエステル結合をして!/、るフラバン一 3—オールの 2 量体、例えば、ウーロンホモビスフラバン A、 B、 Cおよび 3量体は、 EGCGと比較して強力なリパーゼ阻害活性を示したので、 EGCGが重合した 2量体および 3量体は、リパーゼ阻害剤として有用であることが示唆された。

[0057] このうち、特にリパーゼ阻害活性の強いウーロンホモビスフラバン A、 Bはウーロン茶中に存在することが確認されて、る。

表 1.各種ポリフノールのリパーゼ阻害活性

[0058] [表 1]

実施例 5

活件酸素消去活件活性酸素の一種であるスーパーォキシドア-オンラジカルに対する消去活性を評価した。

方法：

(l) 2mMヒポキサンチン溶液（pH7. 4の 0. 1Mリン酸緩衝液に溶解）、 (2) 5. 5mM ジエチレントリアミン五酢酸溶液 (pH7. 4の 0. 1Mリン酸緩衝液に溶解）を調製後、 ( 1)の溶液 5. Oml、（2)の溶液 3. 5ml、およびラボテック社製の 5, 5—ジメチルー 1 —ピロリン— N—ォキシド（DMPO) l. 5mlを混合し、試薬 1とした。 50 1の試薬 1を 1. 5mlのマイクロチューブに取り、 37°Cで 4分間インキュベートした。これに、サンプルのメタノール溶液 20 1を添カ卩し、さらに 0. 4unitZmlキサンチンォキシダーゼ 50 1を加えて 10秒間攪拌した。反応液をへマトクリット管に注入後、 ESR装置にセットし、キサンチンォキシダーゼを添加して 60秒後に磁場掃引を開始した。 ESR測定条件は次のとおりとした。 Power :4mW、 C. Field: 335. 5mT、 SwWid ( ± ) : 5mT、 SwTime： lmin、 ModWid: 0. lmT、 Amp : 160、 TimeC : 0. lsec、 Temperatur e : 20°C。

[0060] DMPO— OOHの ESRシグナルのうち最も低磁場側のシグナルの高さの、内部標準 Mn²⁺シグナルの高さに対する比（SZM)を O—量とし、次式で表すように消去活性

2

を算出した。

O—消去活性 (%) = 100— [100 X (サンプル存在下の SZM)Z (サンプル非存在下の

2

S/M)]

結果：

ウーロンホモビスフラバン A、 B、 C (二量体）及び三量体のスーパーォキシドア-ォンラジカル (O ")に対する消去作用につ、て、 O—を 50%消去する濃度 (IC )を M

2 2 50 で算出した。比較対照として、ェピガロカテキンガレート (EGCG)を用いた。 EGCGと比較してウーロンホモビスフラバン類（二量体、三量体）は O—消去活性が強いことが

2

判明した。

表 2.スーパーォキシドラジカルの消去活性

[0061] [表 2] サンプル分子量 IC₅₀( iM) ウーロンホモヒ^フラ/ ン A(1) 928 7.9 ウーロンホモヒ "スフラハ'ン B(2) 928 8.1 ウーロンホモ fスフラハ^ C(3) 928 6.2 三量体 (4) 1398 10.1

EGCGC7) 458 14.0

Claims

請求の範囲

のェピガロカテキンガレ

式：

[化 2]

のェピガロカテキンガレート三量体。

[3] ェピガロカテキンがそのクロマン環の 6位または 8位でメチレン基を介して重合したェピガロカテキンニ量体： [化 3]

(式中、 Rおよび Rは、それぞれ独立して Hまたはガロイル基である。）、および Zま

1 2

たは、ェピガロカテキンがそのクロマン環の 6位および Zまたは 8位でメチレン基を介して重合したェピガロカテキン三量体：

[化 4]

(式中、 R、 Rおよび Rは、それぞれ独立して Hまたはガロイル基である。）を含むリ

3 4 5

パーゼ阻害剤。

ェピガロカテキンがそのクロマン環の 6位または 8位でメチレン基を介して重合したェピガロカテキンニ量体：

[化 5]

(式中、 Rおよび Rは、それぞれ独立して Hまたはガロイル基である。）、および

1 2 Zまたは、ェピガロカテキンがそのクロマン環の 6位および/または 8位でメチレン基を介して重合したェピガロカテキン三量体：

[化 6]

(式中、 R、 Rおよび Rは、それぞれ独立して Hまたはガロイル基である。）を含む抗

3 4 5

酸化剤。

[5] 請求項 3または 4に記載のェピガロカテキンニ量体および Zまたは三量体を添カロした飲 Aロロ。

[6] 請求項 3または 4に記載のェピガロカテキンニ量体および Zまたは三量体を添カロした茶飲料。

[7] 請求項 3または 4に記載のェピガロカテキンニ量体および Zまたは三量体を含む医薬組成物。酸の存在下でフラバン 3—オール類とホルムアルデヒドとを反応させることを含む、請求項 1記載のェピガロカテキンガレートニ量体の製造方法。

酸の存在下でフラバン 3—オール類とホルムアルデヒドとを反応させることを含む、請求項 2記載のェピガロカテキンガレート三量体の製造方法。