WO2005092363A1

WO2005092363A1 - オリゴペプチドを用いた糖尿病合併症の予防・治療剤

Info

Publication number: WO2005092363A1
Application number: PCT/JP2005/006432
Authority: WO
Inventors: Yoshiro Kitahara; Masayoshi Takeuchi
Original assignee: Ajinomoto Co., Inc.
Priority date: 2004-03-26
Filing date: 2005-03-25
Publication date: 2005-10-06
Also published as: JPWO2005092363A1; EP1738762A4; EP1738762A1; US20070049535A1

Abstract

新規な糖尿病合併症の予防・治療剤を提供する。具体的には、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも２残基含む、ＡＧＥ２生成阻害ならびにＡＧＥ２血中濃度低下促進作用を有するオリゴペプチドを有効成分として含有する糖尿病合併症の予防・治療剤を提供する。

Description

明細書

オリゴぺプチドを用いた糖尿病合併症の予防 ·治療剤技術分野

本発明は、新規な糖尿病合併症の予防 ·治療剤、詳しくはある種のォリゴぺプチドを有効成分として含有する糖尿病合併症の予防 ·治療剤、該オリゴぺプチドを含有する A G E 2生成阻害剤、該オリゴぺプチドを含有する A G E 2血中濃度低下促進剤、及び該オリゴぺプチドを含有する食品に関する。背景技術

' 糖尿病は、唯一の血糖降下ホルモンであるインスリンの絶対的又は相対的不足に起因する代謝異常であり、持続的な高血糖を主な特徴とする。高血糖状態の持続は、インスリン不足に起因する代謝異常をさらに増悪させるのみならず、腎臓，神経 ·網膜などにおける細小血管障害や、動脈硬化などの大血管障害を引き起こし、健康な生活を著しく損なうこととなる。

糖尿病患者の治療の基本は血糖値をコントロ一ルすることであるが、現状ではいかなる血糖降下剤による治療によっても血糖管理は十分でなく、日本国内においては糖尿病の治療を受けている患者の神経障害、網膜症、腎症、足壊疽の有病率はそれぞれ 15.6%、 13.1%、 15.²%、 1.6% とかなり高い割合である（厚生労働省健康局総務課生活習慣病対策室平成 14年糖尿病実態調査、 2003)。したがって血糖管理に加えて糖尿病合併症の発症を予防し、進行を抑制する試みは極めて重要である。

近年、糖尿病合併症の発症に、非酵素的な糖化反応によって生成される Advanced glycation endoproducts (A G E s ) (終末糖ィ匕産物）の関与力 S失口られるようになった (Stitt EXD Mol Pathol 75, 95—108, 2003)。 AG E s とは、血中のタンパク質あるいはぺプチドと、グルコースあるいはその代謝産物や自動酸化分解物が結合してできる化合物の総称であり、これら AG E sは直接的に細胞の機能障害を誘発することが知られている。特に AG E s の中でもダリセルアルデヒドから生成される A G E 2は細胞毒性が強く、糖尿病合併症の発症 ·進行促進因子として重要な物質のひとつであると考えられている（Takeuchi et al. J Neuropathol Exp Neurol 59, 1094-1105， 2000)。 A G E sによる細胞障害を軽減する試みとしては 1 ) A G E sの生成阻害、 2 ) AG E s同士の架橋構造の形成阻害、 3 ) AG E s とその受容体との相互作用阻害などが報告されてレヽる力 S (Mene P et al. Am J Cardiovasc Drugs 3， 315—20, 2003)、未だ十分な治療成績を上げられていないのが現状である。いずれの場合においても、慢性的な高血糖に起因する AG E sの生成が細胞障害の出発点となることから、 1 ) の「AG E s の生成阻害」は糖尿病合併症発症予防の手段として血糖コントロールの次に重要なアプローチのひとつと考えられるが、特に細胞毒性の強い AG E 2の生成阻害に焦点をあてた試みはこれまでにほとんどなされていない。

AG E sの生成を阻害することによって細胞障害を軽減させるァプローチとしては、アミノグァ二ジン、ピリドキサミン、リジン (Jyothirmayi GN et al. Nephron 87, 148-54, 2001)、 0PB - 9195 (Kalousova M et al. Kidney Blood Press Res 27, 18-28, 2004) などを用いる治療法が報告されているが、これらは力ルボキシメチノレリジンやグルコース由来の AGE (AGE1) の生成阻害を中心に検討がなされたものであり、臨床的にも十分な治療成績は上げられていない。発明の開示

血糖管理に加えて糖尿病合併症の発症を予防し、進行を抑制する試みは極めて重要である。これまでに、糖尿病合併症の発症原因はいくつか知られているが、上記のように、高血糖に起因した原因物質として A G E sが重要な役割を果たしていると考えられ、なかでも細胞毒性の強い AG E 2は有力な原因物質のひとつである。従って、本発明が解決しようとする課題は、 A G E 2の生成を抑制し、あるいは AG E 2の血中濃度を低下させることを特徴とする糖尿病合併症の予防 ·治療剤の提供である。

本発明者らは、上記課題に鑑み、鋭意検討を行った結果、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸からなるオリゴぺプチドに A G E 2生成阻害作用ならびに A G E 2血中濃度低下促進作用があることを見出し、本発明を完成させた。

すなわち、本発明者らは、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するテミノ酸である、リジン、アルギニン及びオル二チンを含むオリゴぺプチドを種々作成し、 AG E 2の生成阻害作用を検討した結果、これらァミノ酸を含むオリゴぺプチドは、これらのアミノ酸単独と較べてオリゴペプチドとなることで、相乗的に自身がダリセルアルデヒドと反応して AG E 2を形成し、この作用によって共存する通常の血中タンパク質とグリセルアルデヒドから生成される AG E 2の生成を阻害することを見出した。これらはリジン単体の組み合わせから予想されるよりもはるかに強い活性であり、上記ァミノ酸がオリゴぺプチドの形態をとることによって相乗的な効果を奏する。また、糖尿病モデルマウスへの投与により血清中の A G E 2濃度が用量依存的に低下することを見出した。生体内ではこれらオリゴぺプチドがグリセルアルデヒドと反応して AG E 2 となった後は、タンパク質からなる A G E 2に比して排出あるいは分解されやすい特性を有することが考えられる。従って、本発明において用いられるオリゴぺプチドは血中 A G E 2 レベルを抑制するため、糖尿病合併症の軽減及び予防に有効である。

本発明者らは、かかる知見に基づき、新規な糖尿病合併症の予防 ·治療剤に係る本発明を完成した。

本発明は以下の内容に関する；

( 1 ) 側鎖にァミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも 2残基含むオリゴぺプチドを有効成分として含有する糖尿病合併症の予防 ·治療剤；

(2) 側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸が、リジン、アルギニン及びオル二チンからなる群から選ばれる、上記（ 1 ) に記載の糖尿病合併症の予防 ·治療剤；

(3) オリゴペプチドが 2〜 4残基のアミノ酸からなるものである、上記（ 1 ) 又は（2) に記載の糖尿病合併症の予防 ·治療剤；

(4) オリゴペプチドが誘導体の形態である、上記（ 1 ) 〜（3) のいずれか 1項に記載の糖尿病合併症の予防 ·治療剤；

( 5 ) オリゴぺプチドが、 L y s - L y s、 L y s - L y s - L y s、 L y s - L y s - L y s - L y s (配列番号 1 )、及ぴ A r g - L y sからなる群から選択される 1種又は 2種以上の混合物である、上記（ 1 ) に記載の糖尿病合併症の予防 ·治療剤；

( 6 )糖尿病、糖尿病性末梢神経障害、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性大血管症及び耐糠能異常からなる群から選択される少なくとも 1種用である、上記（ 1 ) 〜（ 5) のいずれか 1項に記載の糖尿病合併症の予防 ·治療剤；

( 7) 側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも 2残基含むオリゴぺプチドを有効成分として含有する AGE 2生成阻害剤；

( 8 ) 側鎖にァミノ基又はグアジニノ基を有するァミノ酸を少なくとも 2残基含むオリゴぺプチドを有効成分として含有する AG E 2血中濃度低下促進剤；

(9) 側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも 2残基含むオリゴぺプチドを有効成分として含有する、糖尿病合併症の予防 '治療、 AGE 2生成阻害、及び/又は AGE 2血中濃度低下促進用の食品；

( 1 0) 糖尿病合併症の予防 .治療、 AGE 2生成阻害、及び Z又は A GE 2血中濃度低下促進のために用いるものであるという表示を付した、上記（9) に記載の食品；

( 1 1 ) 有効量の、側鎖にァミノ基又はグアジュノ基を有するアミノ酸を少なくとも 2残基含むオリゴぺプチドを患者に投与することを含む、糖尿病合併症の予防 ·治療方法；

( 1 2) 有効量の、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも 2残基含むオリゴぺプチドを患者に投与することを含む、 AG E 2生成の阻害方法；

( 1 3) 有効量の、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも 2残基含むオリゴぺプチドを患者に投与することを含む、 AGE 2血中濃度低下の促進方法；

( 1 4) 糖尿病合併症の予防，治療薬の製造のための、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するァミノ酸を少なくとも 2残基含むオリゴぺプチドの使用；

( 1 5) AG E 2生成阻害剤の製造のための、側鎖にアミノ基又はグァジニノ基を有するァミノ酸を少なくとも 2残基含むオリゴぺプチドの使用；

( 1 6) AG E 2血中濃度低下促進剤の製造のための、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するァミノ酸を少なくとも 2残基含むオリゴぺプチドの使用；

( 1 7) 側鎖にァミノ基又はグアジニノ基を有するァミノ酸を少なくとも 2残基含むオリゴぺプチドおよび薬理学的に許容される担体を含有してなる医薬組成物、ならびに当該組成物を糖尿病の予防または治療に使用し得るまたは使用すべきであることを記載した記載物を含む商業的パッケーシ；

( 1 8 ) 側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも 2残基含むオリゴぺプチドおよび薬理学的に許容される担体を含有してなる医薬組成物、ならびに当該組成物を A G E 2生成の阻害に使用し得るまたは使用すべきであることを記載した記載物を含む商業的パッケ —ジ；

( 1 9 ) 側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも 2残基含むオリゴぺプチドおよび薬理学的に許容される担体を含有してなる医薬組成物、ならびに当該組成物を A G E 2血中濃度低下の促進に使用し得るまたは使用すべきであることを記載した記載物を含む商業的ノッケージ。発明を実施するための最良の形態

本発明の糖尿病合併症の予防 ·治療剤は、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも 2残基含むオリゴぺプチドを有効成分として含有するものであって、薬理学的に許容されうる担体等を適宜含有するものであっても良い。本発明において側鎖にァミノ基又はグァジニノ基を有するアミノ酸としては、リジン、アルギニン、オルニチンが挙げられ、それぞれ D体、 L体又は D L体のいずれであっても良い。入手の容易性の観点からは L体が好ましい。

本発明において用いられるオリゴぺプチドは、側鎖にァミノ基又はグアジニノ基を有するァミノ酸を少なくとも 2残基含むぺプチドであって、側鎖にァミノ基もしくはグアジニノ基を有するァミノ酸のみからなるぺプチド又は側鎖にァミノ基もしくはグァジニノ基を有するァミノ酸とそれ以外のァミノ酸の両方からなるぺプチドのどちらでも良い。また、本発明において用いられるオリゴペプチドは、好ましくは 2〜 5個、更に好ましくは 2〜4個、もっとも好ましくは 2〜 3個のァミノ酸残基からなるぺプチドが挙げられる。

具体的には、本発明において用いられるオリゴペプチドは、少なくとも 2残基の側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を含み、 f列は、 L y s — L y s、 L y s — A r g、〇 r n — L y s、〇 r n — A r g、 L y s — L y s — L y s X— L y s — L y L y s — X— ； L y s、 L y s — X— A r g _N ： L y s — X— O r n、 A r g — X— O r n、 L y s - L y s - L y s - L y s (配列番号 1 )、 L y s - X - L y s 一 X (配列番号 2)、 X - L y s - L y s - X (配列番号 3 )、 A r g 一 X— A r g _ X (配列番号 4)、X— A r g — A r g - X (配列番号 5 )、 X— L y s - A r g _ X (配列番号 6 )、 L y s - X - A r g — X (配列番号 7)、 X - L y s - X - A r g (配列番号 8 )、 X— O r n— L y s - X (配列番号 9)、 O r n - X - L y s — X (配列番号 1 0)、 X— O r n - X - L y s (配列番号 l l )、 O r n — X— A r g — X (配列番号 1 2)、 X - O r n - A r g - X (配列.番号 1 3 )、 O r n — A r g — X - L y s - L y s (配列番号 1 4)、 X— A r g - X - A r g - X (配列番号 1 5)、 X— L y s — A r g — X— X (配列番号 1 6 )、 X— L y s - L y s - L y s - X (配列番号 1 7 )、 X— O r n — X— L y s - L y s (配列番号 1 8 ) (Xはすべてのァミノ酸から選ばれるァミノ酸である。また、上記配列は、 N末から C末、 C末から N末の両順を含む。) などの組み合わせが挙げられるが、特にこれらに限定されるものではない。好適なオリゴペプチドの例として、 L y s — L y s、 L y s — L y s — L y s、 L y s - L y s - L y s - L y s (配列番号 1 )、及び A r g - L y s (上記配列は、 L体のァミノ酸からなり、 N末から C末の順序である。）からなる群から選択されるオリゴぺプチドが挙げられる。また、ォリゴぺプチドは 1種又は 2種以上を混合して用いることも出来る。

本発明において用いられるオリゴぺプチドは ( 1 ) 化学的に合成する方法、又は（2 ) 酵素的な反応により合成する方法等の公知手法を適宜用いることによって取得することができる。本発明において用いられるォリゴぺプチドは、含まれるァミノ酸の残基数が 2〜 5残基と比較的短いので、化学的に合成する方法が簡便である。

化学的に合成する場合は、該オリゴペプチドをペプチド合成機を用いて合成あるいは半合成することにより行うことができる。化学的に合成する方法としては、例えばペプチド固相合成法が挙げられる。そのようにして合成したオリゴぺプチドは通常の手段、例えばイオン交換クロマトグラフィー、逆相高速液体クロマトグラフィー、ァフィ二ティーク口マトグラフィ一等によって精製することができる。このようなペプチド固相合成法、およびそれに続くぺプチド精製はこの技術分野においてよく知られたものである。

また、本発明において用いられるオリゴぺプチドがジぺプチド又はトリペプチドである場合には、当該オリゴペプチドを、酵素的な反応により生産することも出来る。例えば、国際公開パンフレット W〇 2004/011653 号に記載の方法を用いることが出来る。即ち、一方のアミノ酸又はジぺプチドの力ルボキシル末端をエステル化又はァミド化したァミノ酸又はジぺプチドと、ァミノ基がフリ一の状態であるァミノ酸（例えばカルボキシル基が保護されたアミノ酸）とを、ペプチド生成酵素の存在下において反応せしめ、生成したジぺプチド又はトリぺプチドを精製することによっても生産することもできる。ぺプチド生成酵素としては、ペプチドを生成する能力を有する微生物の培養物、該培養物より分離した微生物菌体、又は、該微生物の菌体処理物、又は、該微生物に由来するぺプチド生成酵素が挙げられる。

本発明において用いられるオリゴぺプチドを食品として含有させる場合は、上記に述べた方法で生産したオリゴペプチドを食品に添加して含有させる以外に、タンパク質の分解物として含有させることもできる。例えば、リジン、アルギニンをその構成アミノ酸として多く含有するタンパク質を、酸又はプロテアーゼによって加水分解し、上記オリゴぺプチドを生成させ、それをそのまま食品に含有させることもできる。

本発明において用いられるォリゴぺプチドには、ォリゴぺプチドの誘導体も含まれる。具体的にはオリゴペプチドを経口投与した際に吸収時の分解を抑えるべく適宜改変を加えたプロドラッグの形態にあっても良く、ぺプチドの N末端又は側鎖のアミノ基などの末端アミノ基をァシル基、アルキル基などの保護基を用いて保護したもの、又はペプチドの C 末端カルボン酸をエステル基などの保護基を用いて保護したものや、ォリゴぺプチド中の一部のァミノ酸が対応する D—ァミノ酸に置換されたもの等も含まれる。ァシル化の例としては、リジン残基側鎖に直鎖状又は分岐状の炭素原子 6〜 1 0個有するァシル基を付与したものが挙げられる。更に、これらの誘導体には、 C末端アミノ酸残基のカルボキシル基が、アルコール基に置換されたものや、 C末端アミノ酸残基がァミノ基に置換されたものも含まれる。このように誘導体型に変換することにより、体内動態が改善されることもあり、好適な場合もある。また、誘導体として、リジンには、ヒドロキシリジンも含まれる。

保護基の形成及び除去については公知の方法を適用することが出来る。代表的なァミノ保護基としては、例えば、ァシル基（ホルミル基、ァセチル基など）、アルキル基 (イソプロピル基など）、アルコキシカルボ二ル基（ブトキシカルボニル基など）、フルォレニルメトキシカルボニル基、ベンジルォキシカルボ-ル基等が挙げられ、 N末端ァミノ酸残基や塩基性アミノ酸残基側鎖中のアミノ基が好適に保護される。また、代表的な力ルボキシル保護基としては、例えばべンジルエステル、メチルエステノレ、 t 一プチノレエステノレ、 p —二トロフエ二ノレエステノレ等が挙げられ、 C末端アミノ酸残基や酸性アミノ酸残基側鎖中のカルボキシル基が好適に保護される。本発明において用いられるオリゴぺプチドは塩の形態をも包含する。本発明のオリゴぺプチドが塩の形態を成し得る場合、その塩は薬理学的に許容されるものであればよく、例えば、式中のカルボキシル基等の酸性基に対しては、アンモ-ゥム塩、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属との塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩、アルミニウム塩、亜鉛塩、トリェチルァミン、エタノールァミン、モルホリン、ピロリジン、ピぺリジン、ピぺラジン、ジシクロへキシノレアミン等の有機ァミンとの塩、アルギニン、リジン等の塩基性アミノ酸との塩を挙げることができる。式中に塩基性基が存在する場合の塩基性基に対しては、塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、臭化水素酸などの無機酸との塩、酢酸、クェン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、コハク酸、タンニン酸、酪酸、ヒベンズ酸、パモ酸、ェナント酸、デカン酸、テオクル酸、サリチル酸、乳酸、シユウ酸、マンデル酸、リンゴ酸等の有機力ノレボン酸との塩、メタンスノレホン酸、ベンゼンスノレホン酸、 p— トノレエンスルホン酸等の有機スルホン酸との塩を挙げることができる。

本発明で用いられるォリゴぺプチドは、インビトロとインビボ（血中）の両方で A G E 2生成を阻害し、またィンビボで A G E 2の血中濃度低下を促進する作用を有する。上記オリゴペプチド自身反応して、 A G E 2 となりうるが、自身が A G E 2 となることで、より分子量の大きいタンパク質ゃぺプチドから A G E 2が生成されることを阻害すると考えられる。上記オリゴペプチドは、インビボの血中で、血中タンパク質ゃぺプチドの A G E 2への生成を阻害し、自身が A G E 2 となるが、その A G E 2は速やかに体外に排出されるか、分解されることによって血中の A G E 2濃度低下を促進すると考えられる。

本発明で用いられるオリゴぺプチドは、ヒトをはじめゥシ、ゥマ、ブタ、ィヌ、ネコ、マウス、ラット等の哺乳動物に対し優れた A G E 2生成阻害作用、 A G E 2血中濃度低下促進作用を有し、従って、これらの A G E 2生成阻害及び/又は血中濃度低下促進が有効な疾患、具体的には糖尿病合併症の予防 ·治療に有用である。

本発明の糖尿病合併症の予防，治療剤の対象疾患として、糖尿病、糖尿病性末梢神経障害、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性大血管症又は耐糖能異常等が挙げられる力 S、これらに限定されるものではなレ、。本発明の糖尿病合併症の予防，治療剤の投与方法としては、経口、非経口のいずれであってもよく、投与形態としては、錠剤、散剤、丸剤、顆粒剤、糖衣剤、乳化剤、カプセル剤、シロップ剤、溶液剤、及び懸濁剤等の経口剤、並びに注射剤、エアゾール剤、及び坐剤等の非経口剤が挙げられるが、簡便性の観点からは経口投与形態が好ましい。

本発明の医薬製剤は、上記オリゴペプチドと、薬理学的に許容される担体を含有しうる。薬理学的に許容される担体として、当業者公知のように、例えば、賦形剤（例えば、乳糖、ショ糖、デンプン、 D—マンニトール等）、結合剤 (例えば、セルロース、ショ糖、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニル.ピロリドン等）、崩壊剤（例えば、デンプン、カルボキシメチルセルロース等）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム等）、界面活性剤（例えば、ラゥリル硫酸ナトリウム等）、溶剤（例えば、水、食塩水、大豆油等）、軟膏基剤（例えば、パラフィン等）、等張化剤（例えば、塩化ナトリウム等）、保存剤（例えば、 P —ヒドロキシ安息香酸エステル等）などが挙げられるが、これらに限定されない。

注射剤の場合は、安定性の点から、バイアル等に充填後、冷凍し、通常の凍結乾燥処理により水分を除き、使用直前に凍結乾燥物から液剤を再調製することもできる。

本発明の糖尿病合併症の予防■治療剤の投与量は、患者の年齢、体重、疾患の程度により異なるが、経口の場合、通常、成人 1 日当たり、上記オリゴペプチドを、 l m g〜 5 0 g、好ましくは 1 0 m g〜 2 0 g、特に好ましくは 5 0 m g〜 1 5 gを 1回から数回に分けて服用するのが適当である。上記オリゴペプチドは、製剤中に 1種であっても、複数種含有されていてもょレ、。複数種の場合、合計量が上記範囲内であればよい。本発明は、上記オリゴペプチドを含有する食品（飲料を含む）にも関する。本発明は、有効成分がアミノ酸であるため、安全性に優れており、食品の形態でも簡便に使用することができる。食品には、食品として摂取されるもの以外に、栄養を補助する目的で摂取される、健康食品、食品添加物、栄養補助食品等も含まれる。本発明を食品に使用するには、特に困難はなく、例えばジュース、牛乳、菓子、ゼリー等に混ぜて飲食することができる。また、健康食品、食品添加物、栄養捕助食品等として使用する場合、例えば錠剤、カプセル、散剤、顆粒、懸濁剤、チユアブル剤、シロップ剤等の形態に調製することができる。さらに、このような食品を保健機能食品として提供することも可能であり、この保健機能食品には、糖尿病合併症の予防 ·治療、 A G E 2生成阻害、及び/又は A G E 2血中濃度低下促進のために用いるものであるという表示を付した食品、特に特定保健用食品なども含まれる。

上記オリゴペプチドは、 1種もしくは複数種を、又はタンパク質の分解物 (加水分解産物) のまま (上記オリゴぺプチドを含有する場合）、本発明の食品に含有させても良い。本発明の食品は、上記オリゴペプチド換算で、 1 日当たり 1 0 m g〜 5 0 g程度摂取することが望ましく、特に好ましくは 5 0 m g〜 1 5 g程度である。複数種の場合、合計量が上記範囲内であればよい。

本発明の糖尿病合併症の予防 ·治療剤は通常用いられる糖尿病治療剤、糖尿病合併症の予防 ·治療剤と併用して用いることも出来る。通常用いられる糖尿病治療剤、糖尿病合併症の予防 ·治療剤とは、例えば、インスリン製剤、インスリン誘導体、インスリン様作用剤、インスリン分泌促進剤、インスリン抵抗性改善剤、ビグアナィド剤、糖新生阻害剤、糖吸収阻害剤、腎糖再吸収阻害剤、 3アドレナリン受容体ァゴニスト、グルカゴン様ぺプチド- 1 ( 7— 3 7 )、グルカゴン様ぺプチド- 1 ( 7一 3 7 ) 類縁体、グルカゴン様ペプチド- 1受容体ァゴニスト、ジぺプチジルぺプチダーゼ IV阻害剤、アルドース還元酵素阻害剤、終末糖化産物生成阻害剤、ダリコーゲン合成酵素キナーゼ- 3阻害薬、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害薬、抗高脂血症薬、食欲抑制剤、リパーゼ阻害薬、血圧降下剤、末梢循環改善薬、抗酸化剤、糖尿病性神経障害治療薬などの 1 種又は 2種以上の組み合わせや混合物が挙げられる。

組み合わせて使用される薬剤の具体的な化合物や処置すべき好適な疾患について下記の通り例示するが、本発明の内容はこれらに限定されるものではなく、具体的な化合物においてはそのフリー体、及びノ又はその他の薬理学的に許容される塩を含む。

インスリン製剤としては、 NPH、レンテ、ウルトラレンテ、経肺吸収可能なィンスリンなどが挙げられる。

インスリン誘導体とは、インスリンから誘導されるタンパク質又はぺプチドでィンスリン作用を保持しているものをいい、例えばリスプ口、 B10Asp、 glargineなど力 S挙げられる。

インスリン様作用剤とは、細胞への糖取り込み促進作用などのィンスリンの生理作用を、ある程度ィンスリンに依存せずに発揮することによつて、血糖降下作用を発揮する、インスリン誘導体以外のものをいい、例えばィンスリン受容体キナーゼ刺激薬 (例えば L- 7 8 3 2 8 1 、 TER- 1 7 4 1 1 、 CLX- 0 9 0 1 、 KRX- 6 1 3など）、バナジウムなどが挙げられる。

インスリン分泌促進剤とは、膝臓 ;3細胞に作用し、血液中へのインスリン分泌を増加させることによって、血糖降下作用を発揮するものをいレヽ、例えばスノレホニノレウレァ剤（例えば、トルプタミド、クロルプロパミド、トラザミド、ァセトへキサミド、ダリクラジド、グリメピリド、グリビジド、ダリベンクラミド（ダリプリド）など）、メグリチニド類（例えば、ナテグリニド、レパグリニド、ミチグリニドなど）、スルホニルゥレア剤 ' メグリチニド類以外の ATP感受性力リゥムチャネル阻害剤（例えば BTS- 67- 582など）などが挙げられる。

インスリン抵抗性改善剤とは、インスリンの標的組織におけるインスリンの作用を増強することによって、血糖降下作用を発揮するものをいレ、、例えば、ペルォキシソーム増殖薬活性化受容体（PPAR) γァゴニスト（例えば、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、トログリタゾン、シグリタゾンなどのチアゾリジンジオン系化合物、あるいは GI- 2 6 2 5 7 0、 GW— 1 9 2 9、 JTT- 5 0 1、 ΥΜ- 4 4 0などの非チアゾリジンジオン系化合物など）、 PPARyアンタゴニスト（例えば bisphenol A diglycidyl 0ther、 LG— 1 0 0 6 4 1など）、 PPAR αァゴェスト（クロフイブラート、ベザフイブラート、クリノフイブラートなどのフィプラート系化合物、あるいは非フイブラート系化合物など）、 PPAR a / yァゴニスト（例えば KRP- 2 9 7など）、レチノイド X受容体ァゴニスト（例えば LG - 1 0 0 2 6 8など）、レチノィド X受容体アンタゴニスト（例えば HX5 3 1など）、プロテインチロシンホスファターゼ- 1 B 阻害剤（例えば PTP- 1 1 2など）などが挙げられる。

ビグアナィド剤とは、肝臓における糖新生抑制作用や組織での嫌気的解糖促進作用あるいは末梢におけるィンスリン抵抗性改善作用などによつて、血糖降下作用を発揮するものをいい、例えば、メトホルミン、フェンホルミン、プホルミンなどが挙げられる。

糖新生阻害剤とは、主に糖新生を阻害することによって、血糖降下作用を発揮するものをいい、例えば、グルカゴン分泌抑制剤（例えば M&B 3 9 8 9 0 Aなど）、グルカゴン受容体アンタゴニスト（例えば CP- 9 9 7 1 1、 NNC- 9 2 - 1 6 8 7、 L一 1 6 8 0 4 9、 BAY 2 7 - 9 9 5 5など）、グルコース- 6 -ホスファターゼ阻害剤などが挙げられる。糖吸収阻害剤とは、食物中に含まれる炭水化物の消化管における酵素消化を阻害し、体内への糖の吸収を阻害又は遅延することによって、血糖降下作用を発揮するものをいい、例えば、 _α -ダルコシダーゼ阻害剤（例えばァカルボース、ボグリボース、ミグリトールなど）、 α -アミラーゼ阻害剤（例えば ΑΖΜ- 1 2 7など）などが挙げられる。

腎糖再吸収阻害剤とは、腎尿細管中の糖の再吸収を阻害することによつて、血糖降下作用を発揮するものをいい、例えば、ナトリウム依存性ダルコース輸送体阻害剤（例えば Τ- 1 0 9 5、フロリジンなど）などが挙げられる。

3 3アドレナリン受容体ァゴニストとは、脂肪細胞における j3 3アドレナリン受容体を刺激し、脂肪酸酸化を亢進させてエネルギーを消費させることによって、肥満症、高インスリン血症の改善作用を発揮するものをいい、例えば、 CL- 3 1 6 2 4 3、 TAK- 6 7 7などが挙げられる。

グルカゴン様ペプチド- 1 ( 7— 3 7 ) 類縁体としては、例えば、ェキセンジン- 4、 NN- 2 2 1 1などが挙げら.れ、グルカゴン様ペプチド- 1受容体ァゴニストとしては、例えば、 AZ - 1 3 4などが挙げられ、ジぺプチジルぺプチダーゼ IV阻害剤としては、例えば、 NVP- DPP- 7 2 8などが挙げられる。グルカゴン様ぺプチド- 1類縁体、グルカゴン様ぺプチド- 1受容体ァゴニスト、ジぺプチジルぺプチダ一ゼ IV阻害剤及びグルカゴン様ペプチド- 1は、細胞におけるグルカゴン様ペプチド- 1の作用を模倣又は増強することによって、糖尿病改善作用を発揮するものをいう。

アルドース還元酵素阻害剤とは、糖尿病性合併症の処置に好ましいもののうち、糖尿病性合併症を発症する組織において認められる、高血糖状態の持続に起因するポリオール代謝経路の亢進によって過剰に蓄積される細胞内ソルビトールを、アルドース還元酵素を阻害することによつて低下させるものをいい、例えば、エノヽ°ノレレスタツ卜、トノレレスタツ卜、フィダレスタツト、ゼネレスタツトなどが挙げられる。終末糖化産物生成阻害剤とは、糖尿病性合併症の処置に好ましいもののうち、糖尿病状態における高血糖状態の持続によって亢進する終末糖化産物の生成を阻害することによって細胞障害を軽減させるものをいレ、、本発明の糖尿病合併症予防 ·治療剤もこのカテゴリーに含まれるが、本発明の糖尿病合併症予防 ·治療剤と併用する場合は、本発明の糖尿病合併症予防 ·治療剤以外であって、例えば、 NNC- 3 9 - 0 0 2 8、 0PB- 9 1 9 5などが挙げられる。

ダリコーゲン合成酵素キナーゼ - 3阻害薬としては、例えば、 SB- 2 1 6 7 6 3、 CHIR- 9 8 0 1 4などが挙げられ、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害薬としては、例えば CP- 9 1 1 4 9などが挙げられる。

抗高脂血症薬としては、例えば、ヒドロキシメチルダルタリルコェンザィム A還元酵素阻害剤（例えばプラバスタチン、シンパスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチンなど）、フイブラート系薬剤（例えばクロフイブラート、ベザフイブラート、シンフイブラートなど）、胆汁酸排泄促進薬などが挙げられる。

食欲抑制薬としては、例えば、シブトラミン、マジンドールなどが挙げられ、リパーゼ阻害薬としては、例えば、オルリスタツトなどが挙げられる。

血圧降下剤としては、例えば、 Ύンジォテンシン変換酵素阻害薬 (例えば力プトプリル、ァラセプリルなど）、アンジォテンシン I I受容体拮抗薬 ( f列えば力ンデサノレタンシレキセチノレ、バルサルタンなど）、カルシゥム拮抗薬（例えばシルニジピン、アムロジピン、二カルジピンなど）、利尿薬 (例えばトリクロルメチアジド、スピロノラクトンなど）、交感神経遮断薬（例えばクロ二ジン、レセルピンなど）などが挙げられる。

末梢循環改善薬としては、例えば、ィコサペント酸ェチルなどが挙げられる α

抗酸ィ匕剤としては、例えば、リポ酸、プロブコールなどが挙げられる。糖尿病性神経障害治療薬としては、例えば、メコバラミン、塩酸メキシレチンなどが挙げられる。実施例

以下実施例を示して本発明をさらに詳しく説明するが、実施例は本発明の説明のために記載するものであり、本発明を限定するものではなレ、。尚、実施例で用いたオリゴペプチドの化学式において、アミノ酸は L体であり、配列順序は、 N末から C末の順序である。

〔実施例 1〕オリゴぺプチドとグリセルアルデヒドとの反応による A G E 2生成能

10mMの Lys、 Lys-Lys ^ Lys- Lys- Lysヽ Lys- Lys - Lys - Lys (酉 3歹' j番号 1 ) のレ、ずれかを含む 0. 1M リン酸緩衝液（pH ⁷. ⁴) に l OOm Mのダリセルァルデヒドを添加して 37°Cで 1週間反応させた。 1週間後に反応液中の A G E 2濃度を測定した。測定にはゥサギより調製した抗 A G E 2ポリクローナル抗体を用い、常法に従って E L I S A法により行った。

(結果）

(表 1 )

各ぺプチドの A G E 2生成能は Lys の数が増えるにしたがって上昇することが明らかとなつた。その生成能は Lys - Lysで Lys単独の約 10倍であり、数が増えるにしたがって相乗的に A G E 2の生成量が増加した。したがって、ァミノ基を側鎖に有するァミノ酸のオリゴぺプチドは相乗的に A G E 2の生成促進作用を発現することが確かめられた。〔実施例 2〕オリゴペプチドによるダリセルアルデヒドと血清アルプミンの A G E 2生成阻害能

10mMのグリセノレアノレデヒドと 10mg/ml の牛血清アルブミンを含むリン酸緩衝液 ( H 7.4) に Lys、 Lys-Lys Lys-Lys-Lys, Lys-Lys-Lys-Lys

(配列番号 1 )、 Arg、 Arg— Lys のいずれ力、を 0、 0.1、 0.3、 1,0又は 3. OmMになるように添加して 37°Cにて 3 日間反応させた。 3 日後に反応液中の AG E 2濃度を測定し、各ぺプチド又はァミノ酸による AG E 2 生成阻害の IC50 値を算出した。 AG E 2の測定にはゥサギより調製した抗 AGE 2ポリクローナル抗体を用い、常法に従って E L I S A法により行った。

'(結果)

(表 2 )

ダリセルアルデヒドと血清アルブミンを一定時間混合して反応させてできる AG E 2 fま Lys又は Argおよぴそれらを含むオリゴぺプチドが共存することで AG E 2化されたアルプミンの蓄積を阻害することが明らかとなつた。また、オリゴペプチドの活性は Lys単独に比べて相乗的に上昇することが確認された。

〔実施例 3〕 Lys— Lysによる糖尿病モデルマウス（db/dbマウス）の血清中 AG E 2濃度低下作用

7週齢の雄性 db/dbマウスを無作為に 4群にわけ（1群 3匹）、飲み水として蒸留水、 lOmM Lys-Lys溶液、 30mM Lys-Lys溶液、又は lOOmM Lys - Lys溶液のいずれかを 10日間自由摂取させた後心臓より採血をおこない、血清中の AG E 2濃度を測定した。なお測定にはゥサギより調製した抗 AG E 2ポリクローナル抗体を用い、常法に従って E L I S A法により行った。

(結果）

(表 3 )

血清中の AG E 2濃度は摂取させた Lys- Lys溶液の Lys- Lys濃度依存的に減少していた。

したがって、上記実施例 1および 2の結果ともあわせて判断すると Lys- Lys は自らが AG E 2化された後、蓄積することなく体外に排出されたか、分解されることによって血清中の AGE 2濃度の低下が認められたものと考えられる。産業上の利用可能性

本発明の新規な糖尿病合併症の予防 ·治療剤は、優れた AG E 2の生成阻害作用及び血中 AG E 2濃度低下促進作用を有し、糖尿病合併症の予防及び/又は治療に有用である。また、本発明により、優れた AG E 2生成阻害剤及び血中 AG E 2濃度低下促進剤が提供される。更に、本発明により、糖尿病合併症の予防 ·治療、 AGE 2生成阻害、及び/又は AGE 2血中濃度低下促進用の食品が提供される。

本発明は、新規な糖尿病合併症の予防 ·治療薬を提供することが出来るので、医薬の分野で利用可能である。配列表フリーテキスト

配列番号 1 ： A G E 2生成阻害作用を有するペプチド配列番号 2 ： A G E 2生成阻害作用を有するペプチド。 Xaaは任意のアミノ酸を示す。

配列番号 3 ： A G E 2生成阻害作用を有するペプチド。 Xaaは任意のァミノ酸を示す。

配列番号 4 ： A G E 2生成阻害作用を有するペプチド。 Xaaは任意のァミノ酸を示す。

配列番号 5 ： A G E 2生成阻害作用を有するペプチド。 Xaaは任意のァミノ酸を示す。

配列番号 6 ： A G E 2生成阻害作用を有するペプチド。 Xaaは任意のアミノ酸を示す。

配列番号 7 ： A G E 2生成阻害作用を有するペプチド。 Xaaは任意のァミノ酸を示す。

配列番号 8 ： A G E 2生成阻害作用を有するペプチド。 Xaaは任意のァミノ酸を示す。

配列番号 9 ： A G E 2生成阻害作用を有するペプチド。 1番目の Xaa は任意のアミノ酸、 2番目の Xaaはオル二チン、 4番目の Xaaは任意のァミノ酸を示す。

配列番号 1 0： A G E 2生成阻害作用を有するぺプチド。 1番目の Xaa はオル二チン、 2番目の Xaaは任意のアミノ酸、 4番目の Xaaは任意のアミノ酸を示す。

配列番号 1 1 ： A G E 2生成阻害作用を有するぺプチド。 1番目の Xaa は任意のアミノ酸、 2番目の Xaaはオル二チン、 3番目の Xaaは任意のァミノ酸を示す。

配列番号 1 2 : A G E 2生成阻害作用を有するぺプチド。 1番目の Xaa はオル二チン、 2番目の Xaaは任意のァミノ酸、 4番目の Xaaは任意のァミノ酸を示す。

配列番号 1 3 : A G E 2生成阻害作用を有するぺプチド。 1番目の Xaa は任意のアミノ酸、 2番目の Xaaはオル二チン、 4番目の Xaaは任意のァミノ酸を示す。

配列番号 1 4 :AGE 2生成阻害作用を有するぺプチド。 1番目の Xaa はオル二チン、 3番目の Xaaは任意のアミノ酸を示す。

配列番号 1 5 ： AG E 2生成阻害作用を有するペプチド。 Xaaは任意のァミノ酸を示す。

配列番号 1 6 ： AG E 2生成阻害作用を有するペプチド。 Xaaは任意のァミノ酸を示す。

配列番号 1 7 ： AG E 2生成阻害作用を有するペプチド。 Xaaは任意のァミノ酸を示す。

配列番号 1 8 :AGE 2生成阻害作用を有するぺプチド。 1番目の Xaa は任意のアミノ酸、 2番目の Xaaはオル二チン、 3番目の Xaaは任意のァミノ酸を示す。本出願は、日本で出願された特願 2 0 0 4— 0 9 1 7 6 7 (出願日： 2 004年 3月 2 6 日）を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。

Claims

請求の範囲

1. 側鎖にァミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも 2 残基含むオリゴペプチドを有効成分として含有する糖尿病合併症の予防 ·治療剤。

2. 側鎖にアミノ基又はグアジ-ノ基を有するアミノ酸が、リジン、了ルギニン及びオル-チンからなる群から選ばれる、請求の範囲 1に記載の糖尿病合併症の予防 ·治療剤。

3. オリゴペプチドが 2〜4残基のアミノ酸からなるものである、請求の範囲 1又は 2に記載の糖尿病合併症の予防 ·治療剤。

4. オリゴペプチドが誘導体の形態である、請求の範囲 1〜 3のいずれかに記載の糖尿病合併症の予防 ·治療剤。

'5. ォリゴぺプチドが、 L y s — L y s、 L y s — L y s — L y s L y s - L y s - L y s - L y s (配列番号 1 )、及ぴ _§ ー 3カらなる群から選択される 1種又は 2種以上の混合物である、請求の範囲 1 に記載の糖尿病合併症の予防 · 治療剤。.

6. 糖尿病、糖尿病性末梢神経障害、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、糖尿病性大血管症及び耐糖能異常からなる群から選択される少なくとも 1種用である、請求の範囲 1〜 5のいずれかに記載の糖尿病合併症の予防 ·治療剤。

7. 側鎖にアミノ基又はグアジエノ基を有するアミノ酸を少なくとも 2 残基含むオリゴぺプチドを有効成分として含有する AGE 2生成阻害剤。

8. 側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも 2 残基含むオリゴぺプチドを有効成分として含有する AGE 2血中濃度低下促進剤。

9. 側鎖にァミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも 2 残基含むォリゴぺプチドを有効成分として含有する、糖尿病合併症の予防 ·治療、 AGE 2生成阻害、及び Z又は AG E 2血中濃度低下促進用の食品。

1 0. 糖尿病合併症の予防 '治療、 A G E 2生成阻害、及ぴ Z又は A G E 2血中濃度低下促進のために用いるものであるという表示を付した、請求の範囲 9に記載の食品。

1 1 . 有効量の、側鎖にアミノ基又はグアジエノ基を有するアミノ酸を少なくとも 2残基含むオリゴぺプチドを患者に投与することを含む、糖尿病合併症の予防 ·治療方法。

1 2. 有効量の、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも 2残基含むオリゴぺプチドを患者に投与することを含む、 A G E 2生成の阻害方法。

1 3. 有効量の、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも 2残基含むオリゴぺプチドを患者に投与することを含む、 A G E 2血中濃度低下の促進方法。

1 4. 糖尿病合併症の予防 ·治療薬の製造のための、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも 2残基含むオリゴぺプチドの使用。

1 5. A G E 2生成阻害剤の製造のための、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも 2残基含むオリゴぺプチドの使用。

1 6. AG E 2血中濃度低下促進剤の製造のための、側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも 2残基含むオリゴぺプチドの使用。

1 7. 側鎖にァミノ基又はグアジ二ノ基を有するァミノ酸を少なくとも 2残基含むオリゴぺプチドおよび薬理学的に許容される担体を含有してなる医薬組成物、ならびに当該組成物を糖尿病の予防または治療に使用し得るまたは使用すべきであることを記載した記載物を含む商業的パッケージ。

1 8. 側鎖にァミノ基又はグアジ二ノ基を有するァミノ酸を少なくとも 2残基含むオリゴぺプチドおよび薬理学的に許容される担体を含有してなる医薬組成物、ならびに当該組成物を A G E 2生成の阻害に使用し得るまたは使用すべきであることを記載した記載物を含む商業的パッケ一ジ。

1 9 . 側鎖にアミノ基又はグアジニノ基を有するアミノ酸を少なくとも

2残基含むオリゴぺプチドおよび薬理学的に許容される担体を含有してなる医薬組成物、ならびに当該組成物を A G E 2血中濃度低下の促進に使用し得るまたは使用すべきであることを記載した記載物を含む商業的ノッケーシ。