WO2004110533A1

WO2004110533A1 - 薬剤が収容された針無注射器

Info

Publication number: WO2004110533A1
Application number: PCT/JP2004/006343
Authority: WO
Inventors: Ryuichi Morishita; Naruya Tomita; Yasuo Kunugiza; Yoshiaki Taniyama; Hiromi Koike; Haruhide Udagawa; Tatsuo Kimura
Original assignee: Anges Mg, Inc.; Shimadzu Corporation
Priority date: 2003-05-09
Filing date: 2004-04-30
Publication date: 2004-12-23
Also published as: EP1647292A4; CN1784248A; JP4594233B2; TWI376245B; JPWO2004110533A1; AU2004246913A1; CN1784248B; TW200500109A; EP1647292A1; US20070066935A1; CA2525017A1

Abstract

遺伝子及び/又はその類似体を含有する医薬製剤が収容された針無注射器を提供する。1つ又は複数のノズル孔25を有し、薬剤Lが収容された薬剤チャンバ22と、前記薬剤Lを前記ノズル孔25の方向に向かって押圧して前記ノズル孔25から前記薬剤Lを噴射させるための押圧手段32を備えた注射器本体12とを含む針無注射器であって、前記薬剤Lは、遺伝子及び/又はその類似体を含有する医薬製剤である針無注射器。薬剤Lの例としては、HGF遺伝子を含む医薬製剤、及びNF-κBデコイオリゴヌクレオチドを含む医薬製剤が挙げられる。

Description

明細書薬剤が収容された針無注射器技術分野

本発明は、遺伝子及びノ又はその類似体を含有する医薬製剤をノズル孔からジェット噴射させて体内所定部位に注射する針無注射器に関する。本発明は、この針無注射器を用いて、特に遺伝子治療の分野で、肝実質細胞増殖因子をコードする H G F遺伝子や、 N F— Bデコイオリゴヌクレオチド等の遺伝子及び/ 又はその類似体を投与し、高効率に細胞移入させる技術に関する。背景技術

針無注射器は、その先端のノズル孔から所定量の薬液をジエツト噴射させることにより、薬液を患者の体内所定部位に注入する注射器である。すなわち、針無注射器による注射は注入時に注射針を使用しないので、痛みを伴わない、注射痕が極めて小さい、針刺し事故が皆無である等の利点がある。

針無注射器として種々の形態のものが知られている。例えば、特表 2 0 0 3 - 5 0 7 1 3 4号公報には、 D N Aベース注入物を皮内注入するための注射器が開示されている。この針無注射器では、アダプタによって患者の皮膚とオリフィスとは 0 . 7 6 ~ 1 . 0インチの距離に保たれる。

例えば、特開平 7— 2 9 9 1 4 0号公報には、使い捨て針無注射器-が開示されている。この針無注射器では、注射器本体をなす細長いハウジングの先端に、薬液を収容するための円筒形チャンバを持つリザ一バが一体に設けられている。

特表平 1 1一 5 1 4 2 4 2号公報 (WO 9 5 / 0 3 8 4 4 )及び特開 2 0 0 2 - 6 5 8 5 1号公報には、針無注射器が開示されている。この針無注射器は、注射器本体に、薬液が予め収容されたカートリッジを備え、カートリッジはビストンとオリフィスを含む。ァクチユエータはピストンを打撃して注射を引き起こすため、予め圧縮されたパネによって付勢されている。

一方で、特許第 2577091号公報には、遺伝子組換えによって得られた肝実質細胞増殖因子及びそれをコードするヒト HGF(h HGF)遺伝子が開示され、 h H (3 Fコードする遺伝子は常法により発現ベクターに導入することによって、これを錶型とする発現により h HG F、 h HGF様物質あるいは h HG Fを含む融合蛋白を得ることができること、得られる組換え h HG F、 h HG F 様物質あるいは h HG Fを含む融合蛋白は、肝再生促進剤、肝機能改善剤、肝炎治療剤あるいは肝硬変抑制剤等肝患者の治療薬となる可能性があることが記載されている。

WO 96/35430号公報には、 N F— ί Bデコイオリゴヌクレオチドを含有する N F— C Βに起因する疾患の治療及び予防剤が開示され、 N F— C Βに起因する疾患として、虚血性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患等が挙げられている。発明の開示

発明の目的

遺伝子及び又はその類似体を含有する医薬製剤をノズル孔からジエツト噴射させて体内所定部位に注射することにより、従来の針を用いた注射よりもより高い治療効果と無疼痛を得ることが望まれる。

本発明の目的は、遺伝子及びノ又はその類似体を含有する医薬製剤が収容された針無注射器を提供することにある。

本発明の目的は、遺伝子及びノ又はその類似体を含有する医薬製剤液及び注射器本体の適切な管理ができると共に、注射器本体に対して注射すべき医薬製剤液の種類を自由に組み合わせることのできる安全な針無注射器を提供することにある。より特別には、 1回限りの使用を意図した針無注射器を提供することにめる ₀

本発明の他の目的は、遺伝子及び Z又はその類似体を含有する医薬製剤液が収容され、圧縮されたパネによる注射器の変形が防止された安全な針無注射器を提供することにある。発明の概要

本発明には、以下の針無注射器が含まれる。

(1) 1つ又は複数のノズル孔を有し、薬剤が収容された薬剤チャンバと、前記薬剤を前記ノズル孔の方向に向かって押圧して前記ノズル孔から前記薬剤を噴射させるための押圧手段を備えた注射器本体とを含む針無注射器であつて、

前記薬剤は、遺伝子及び/又はその類似体を含有する医薬製剤である針無注射器。

押圧手段としては、パネ（コイルパネ、板パネ、皿パネ、発条、タケノコパネなどの各種パネ）、コンプレッサー (空気圧の利用）、ボンべ (例えば炭酸ガスのボンベなどの各種ボンべ）、圧電素子、爆薬（化学反応、発破-空気圧）、電磁力、油圧、水圧 "蒸気、電動機 (モータ一)、原動機 (エンジン）、磁石 (永久磁石、超伝導磁石などの各種磁石)、形状記憶合金等が挙げられる。

(2)遺伝子及び又はその類似体を含有する医薬製剤は、遺伝子及び/又はその類似体を保持した担体の形態である、（1) に記載の針無注射器。

(3) 担体は金属粒子である、（2) に記載の針無注射器。

(4) 金属粒子はコロイド金粒子である、（3) に記載の針無注射器。担体は、高密度であり生物学的■化学的に不活性であればよく、好ましくは金粒子を用いることができ、白金、タングステン、イリジウム等の粒子を用いることもできる。

(5) 1つ又は複数のノズル孔を有し、薬液が収容され且つ前記薬液を挟んで前記ノズル孔と反対側に位置するようにビストンが備えられた薬液チャンバと、前記ピストンを前記ノズル孔の方向に向かつて押圧して前記ノズル孔から前記薬液を噴射させるための押圧機構を備えた注射器本体とを含む針無注射器であって、

前記薬液は、遺伝子及び/又はその類似体を含有する医薬製剤である針無注射器。

(6)前記薬液は、血管増殖因子又は血管新生蛋白をコードする遺伝子を含む医薬製剤である、（5) に記載の針無注射器。

(7) 血管増殖因子又は血管新生蛋白が、分散因子肝細胞増殖因子 (HGF)、血管内皮増殖因子 (VEGF)、線維芽細胞増殖因子（FG F)、トランスフォーミング増殖因子（TGF)、エリスロポエチン（E PO)、アンジォゲニン (angiogenin)、プレイォトロフィン（pleiotrophin、 PTN、 H B-G AM).ミツドカイン（midkine). 胎盤増殖因子 (placental growth factor protein、 p I G F)、血小板由来増殖因子（ P DGF)、 D e I ― 1 (Developmentally Regulated Endothelial Cell Locus-1)、アンジォポェチン (angiopoietin)、フオリスタチン (folistatin)、顆粒球コロニー剌激因子 (G— CS F)、レプチン（leptin).、インスリン様増殖因子 (insulin-like growth factor、

I G F)、車云写因子 Chicken Ovalbumin Upstream Promotor-transcription factor ll(COU P— T Fll)、内皮型 NO産生酵素（_e NOS)、誘導型 NO合成酵素（ i N O S)、ヒ卜単球走化活性因子 (monocyte chemotactic protein-1、 M G P— 1 )、プ口りフェリン (proiiferin)及びエフリン (ephrin)からなる群から選ばれた 1種である、（6) に記載の針無注射器。

(8) 前記薬液は、 HGFをコードする遺伝子を含む医薬製剤である、（5) に記載の針無注射器。

(9)前記 HG Fをコードする遺伝子を含む医薬製剤は、 H G Fをコードする遺伝子を挿入した発現ベクターを含む医薬製剤である、（8) に記載の針無注射器。

(10) 前記発現ベクターが、プラスミド (plasmid) 、アデノウイルスベクタ一 (adenovirus vector) 及び HVJ— Eベクタ一 (Hemagglutinating Virus of Japan— エンベロープベクター)からなる群から選ばれた 1種である、（9) に記載の針無注射器。 H V Jはセンダイウィルス (Sendai Vims)とも呼ばれる。

(11) 前記薬液は、生物活性を有するオリゴヌクレオチドを含む医薬製剤である、（5) に記載の針無注射器。

(12) 生物活性を有するオリゴヌクレオチドが、デコイ (decoy) 、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アブタマ一又は RN A iエフェクターである、（11)に記載の針無注射器。

(13) アンチセンスオリゴヌクレオチドが、 IS - 2302 、 ISIS-2503 、 ISIS-2922 、 ISIS-3521 、 ISIS-5132 、 ISIS-14803、 ISIS-14838、 ISIS-15839、 G-3139、 IN-3001 、 GPI-2A及び EPI-2010からなる群から選ばれた 1種である、 (12)に記載の針無注射器。

(14) デコイ力転写因子 (transcription factor)阻害デコイオリゴヌクレオチド (decoy oligonucleotide)である、（12)に記載の針無注射器。

(15) 転写因子が、 N F— C B、 E 2 F、 AP— 1、 STAT— 1、 STAT 一 6、 GAT A— 3及び E t sからなる群から選ばれた 1種である、（14)に記載の針無注射器。

(16) 前記薬液は、 N F— Bデコイオリゴヌクレオチドを含む医薬製剤である、（5) に記載の針無注射器。

以上の発明による針無注射器では、薬 ¾としての遺伝子及び/又はその類似体を含有する医薬製剤をノズル孔からジェット噴射させて体内所定部位に注射することができる。 (17) 前記薬液チャンバは、前記注射器本体に対し取外し自在に取付られているノズルアンプル内部に形成されている、（5) 〜（16)のうちのいずれかに記載の針無注射器。

この発明による針無注射器では、ノズルァンプルと注射器本体とは着脱自在であるので、注射器を保管 "保存する場合は、薬液が封入されたノズルアンプルを注射器本体から取外した状態として、ノズルアンプルと注射器本体とを別々に保存することが可能である。従って、ノズルアンプルをそれに封入された薬液に最適な温度で冷蔵保存でき、注射器本体を常温保存とすることができ、適切な管理が容易である。使用に際しては、必要な薬液が封入されたノズルアンプルを選択し、これを注射器本体に取付ることができる。従って、注射器本体に対して注射すべき薬液の種類を自由に組み合わせることができる。また、所定量の薬液が予めノズルアンプル中に封入されているので、使用に際して薬液の移し替え操作が不要であリ、衛生的で正確な投与量が確保される。

(18) ノズルアンプルが、前記ピストンを露出させたアンプル開口を有しておリ、アンプル開口縁部に複数の凸状嵌合部が設けられており、

注射器本体が、押圧機構を収容している中空状ハウジングを有しており、前記ハウジングが、前記ァンプル開口に連通させられたハウジング開口を有しており、ハウジング開口縁部に、ノズルアンプルに設けられた前記凸状嵌合部に対応する凹状嵌合部が設けられており、

ノズルアンプル及びハウジングを互いに反対方向に回転させることによリ、前記凸状嵌合部及び前記凹状嵌合部が嵌め外しされるようになされている、 (17)に記載の針無注射器。

この発明による針無注射器では、ノズルァンプル及びハウジングの少なくとも一方を回転させるだけの簡単な操作によって、注射器本体に対して、ノズルアンプルを着脱することができる。

(19) 押圧機構が、前記ピストンに接近'離隔する方向に移動自在である押圧部材と、前記押圧部材を前記ピストンに接近する方向に向かって付勢している圧縮/くネと、前記/ ネを圧縮させた状態で押圧部材の前記パネによる移動を解放自在に保持している保持部材とを備えている、（17)又は (18)に記載の針無注射器。

この発明による針無注射器では、保持部材によるバネ力の解放により、ノズル孔から薬液がジヱット嘖射される。

(20) 前記ハウジング内に、一端をハウジング開口とするパネチャンバと、前記パネチャンバとは連通孔を有する隔壁によって仕切られた解放チャンバとが形成されており、

前記押圧部材が、前記パネチャンバ内に位置させられ且つ前記ピストンに当接させれたパネ受けと、前記パネ受けから前記隔壁の連通孔を通して前記解放チャンバ内に突出させられるようにのびたロッドとを備えており、前記ロッドの突出端部外面には係合突起が前記隔壁の連通孑しを通過できない大きさに形成されており、前記パネが、前記ロッドを取り囲んで前記隔壁及び前記パネ受け間に介在させられたコィルバネであリ、

前記保持部材が、前記パネを圧縮させた状態で前記ロッドの係合突起を当接させるストッパ面を有している、（19)に記載の針無注射器。

この発明による針無注射器では、ロッドの係合突起を保持部材のストツパ面に当接させることにより、パネを圧縮させた状態で保持することができる。さらに、パネを圧縮させた状態で、'押圧钾材のパネ受けがピストンに当接させられているため、保持部材による保持を解放した際に、押圧部材が衝撃を発生させることなくピストンを押圧することができる。もし仮に、ピストンと押圧部材の間に間隔を生じていると、ピストンに押圧部材が衝突したときには衝撃が発生し、大きな発射音がしたり、手に伝わる衝撃が大きい。また、ピストンが破損する恐れがある。さらに、ロッドの係合突起が隔壁の連通孔を通過できない大きさに形成されているため、保持部材による保持を解放した際に、ロッドは所定位置で停止する。このことによって、正確な量の薬液の投与と、薬液投与後の安全性が確保される。ロッドの移動距離は、薬液の投与量すなわちピストンに移動距離に応じて適宜定めるとよい。

(21 ) 前記保持部材が、前記解放チャンバ内で前記ロッドを取囲むように前記隔壁で受けられているリング部と、前記リング部に直立状に設けられ且つ先端面がストツバ面となされている筒状部とを備えており、前記筒状部を縦断するように複数のスリツ卜が形成されている、（20)に記載の針無注射器。

筒状部は、例えば、硬質樹脂等の弾性材料によって形成される。この発明による針無注射器では、筒状部の隣り合うスリツ卜で挟まれた部分を変形させることにより、保持部材による保持を解放することができる。

(22) 前記各スリツトの両縁部の一部が破断可能部によって連結されている、 (21)に記載の針無注射器。

この発明による針無注射器では、各スリツトの両縁部の一部が破断可能部によって連結されているので、圧縮された状態のパネ力に打ち勝って保持部材による保持をより確実に行うことができる。そして、薬液噴射時において、破断可能部が一旦破断されてしまうと、保持部材を再利用することができない。そのため、使い捨ての注射器として、注射器の再使用による感染等の事故を防止できる。

(23) 前記ハウジングが、前記隔壁と間隔をおいて相対する端壁を有しており、解放部材が、前記端壁に形成された保持孔を介して前記ストツバ面に接近■離隔しうるように保持されており、前記ストツバ面が、前記解放部材に近づくにしたがって拡がるテーパ凹状に形成されており、前記解放部材に、前記ストツバ面と対応するようにテーパ凸状に形成された押広げ面が設けられている、（21)又は (22)に記載の針無注射器。

この発明による針無注射器では、解放部材を押下るだけの簡単な操作により、保持部材のパネ力の保持を解放することができるため、注射そのものを簡単に行うことができる。

(24) 前記保持部材が、前記解放チャンバの周壁を.内外に貫通して前記ロッドと直交する方向にのびたロック孔に移動自在に挿入され且つ内方端部にストツバ面が設けられているストッパ片よりなる、（20)に記載の針無注射器。

この発明による針無注射器では、ス卜ッパ片を移動させることにより、保持部材のパネ力の保持を解放することができる。このため、注射そのものを簡単に行うことができる。

(25) 前記解放チャンバの周壁外面に、底面に前記ロック孔の外方端部を開口させ且つ前記ロック孔と直交する方向にのびたガイド溝が形成され、前記ガイド溝にロック部材が移動自在に嵌め入れられ、前記ロック部材の内側面に、前記ストツパ片の外方端部の挿入を許す IHI所が形成されている、（24)に記載の針無注射器。

この発明による針無注射器では、ロック部材を移動させることにより、ストッパ片を解放位置に向かってパネ力によって自動的に移動させることができる。

(26) ノズルアンプルに代わり、注射器本体に取付られる安全キャップが備えられており、前記安全キャップに、ノズルアンプルの前記凸状嵌合部に相当する凸状嵌合部が設けられており、前記安全キャップの凸状嵌合部が前記ハウジングの凹状嵌合部に嵌め入れられた状態で、前記ロッドの係合突起と前記保持部材のス卜ツバ面との間に間隙が保持されるようになされている、（20)~(25)のうちのいずれかに記載の針無注射器。

この発明による針無注射器では、注射器の保管時、ノズルアンプルを注射器本体に取リ付ける使用開始直前までの間には、注射器本体に安全キャップを取付ておくと、前記ロッドの係合突起と前記保持部材のストツバ面との間の間隙が保持される。すなわち、保持部材が、強力なパネ力を常時保持する必要がなく、使用に際してのみ、保持すればよいことになる。このため、高温多湿の環境に置かれても不用意な変形を防止することができる。従って、注射器の安全性及び正確性が確保される。

(27) 前記薬液チャンバは前記注射器本体と一体化されている、（5) 〜(16)のうちのいずれかに記載の針無注射器。前記薬液チャンバは前記注射器本体内に形成されていても良く、次のように、前記薬液チャンバは前記注射器本体と一体化されているノズルアンプル内部に形成されていても良い。

(28) 前記薬液チヤンバは前記注射器本体と一体化されているノズルァンプル内部に形成されている、（27)に記載の針無注射器。

(29) 注射器本体が、押圧機構を収容している中空状ハウジングを有しており、押圧機構が、前記ビストンに接近 ·離隔する方向に移動自在である押圧部材と、前記押圧部材を前記ピストンに接近する方向に向かって付勢している圧縮パネと、前記パネを圧縮させた状態で押圧部材の前記パネによる移動を解放自在に保持している保持部材とを備えており、

前記ハウジング内に、一端をハウジング開口とするパネチャンバと、前記パネチャンバとは連通孔を有する隔壁によつて仕切られた解放チャンバとが形成されており、

前記押圧部材が、前記パネチャンバ内に位置させられ且つ前記ピストンに当接させれたパネ受けと、前記パネ受けから前記隔壁の連通孔を通して前記解放チャンバ内に突出させられるようにのびたロッドとを備えており、前記ロッドの突出端部外面には係合突起が前記隔壁の連通孔を通過できない大きさに形成されており、前記パネが、前記ロッドを取り囲んで前記隔壁及び前記パネ受け間に介在させられたコィルバネであり、

前記保持部材が、前記解放チャンバ内で前記ロッドを取囲むように前記隔壁で受けられているリング部と、前記リング部に直立状に設けられた筒状部とを備えており、前記筒状部の先端面は、前記パネを圧縮させた状態で前記ロッドの係合突起を当接させるストツパ面となされており、前記筒状部を縦断するように複数のスリツトが形成されている、（27)又は (28)に記載の針無注射器。

この発明による針無注射器では、ノズルァンプルと注射器本体とが着脱自在であることに基づく効果を除いて、前記 (15)、（16)及び (17)による針無注射器と同様の効果が得られる。

(30) 前記各スリツトの両縁部の一部が破断可能部によって連結されている、

(29)に記載の針無注射器。

この発明による針無注射器では、ノズルァンプルと注射器本体とが着脱自在であることに基づく効果を除いて、前記 (18)による針無注射器と同様の効果が得られる。

(31) 前記ハウジングが、前記隔壁と間隔をおいて相対する端壁を有しており、解放部材が、前記端壁に形成された保持孔を介して前記ストツバ面に接近 ·離隔しうるように保持されており、前記ストツバ面が、前記解放部材に近づくにしたがって拡がるテーパ凹状に形成されており、前記解放部材に、前記ストツバ面と対応するようにテーパ凸状に形成された押広げ面が設けられている、（29)又は

(30)に記載の針無注射器。この発明による針無注射器では、ノズルァンプルと注射器本体とが着脱自在であることに基づく効果を除いて、前記 (19)による針無注射器と同様の効果が得られる。

(32) 注射器本体が、押圧機構を収容している中空状ハウジングを有しており、押圧機構が、前記ピストンに接近■離隔する方向に移動自在である押圧部材と、前記押圧部材を前記ビストンに接近する方向に向かって付勢している圧縮パネと、前記パネを圧縮させた状態で押圧部材の前記パネによる移動を解放自在に保持している保持部材とを備えており、

前記ハウジング内に、一端をハウジング開口とするパネチャンバと、前記バネチャンバとは連通孔を有する隔壁によって仕切られた解放チャンバとが形成されており、

前記押圧部材が、前記パネチャンバ内に位置させられ且つ前記ビストンに当接させれたパネ受けと、前記パネ受けから前記隔壁の連通孔を通して前記解放チャンバ内に突出させられるようにのびたロッドとを備えており、前記ロッドの突出端部外面には係合突起が前記隔壁の連通孔を通過できない大きさに形成されており、前記パネが、前記ロッドを取り囲んで前記隔壁及び前記パネ受け間に介在させられたコィルバネであリ、

前記保持部材が、前記解放チャンバの周壁を内外に貫通して前記ロッドと直交する方向にのびたロック孔に移動自在に挿入されているストツパ片よりなリ、且つ前記ストッパ片の内方端部に、前記パネを圧縮させた状態で前記ロッドの係合突起を当接させるストツバ面が設けられている、（27)又は (28)に記載の針無注射器。

この発明による針無注射器では、ノズルァンプルと注射器本体とが着脱自在であることに基づく効果を除いて、前記 (19)、（20)及び (21)による針無注射器 .と同様の効果が得られる。 (33) 前記解放チャンバの周壁外面に、底面に前記ロック孔の外方端部を開口させ且つ前記ロック孔と直交する方向にのびたガイド溝が形成され、前記ガイド溝にロック部材が移動自在に嵌め入れられ、前記ロック部材の内側面に、前記ストツパ片の外方端部の挿入を許す凹所が形成されている、（32)に記載の針無注射この発明による針無注射器では、ノズルァンプルと注射器本体とが着脱自在であることに基づく効果を除いて、前記 (25)による針無注射器と同様の効果が得られる。さらに、本発明には、以下の発明が含まれる。

前記いずれかに記載の針無注射器を用いて、遺伝子及び/又はその類似体を含有する医薬製剤液の有効量を哺乳動物に投与することからなる、疾患の治療及び予防方法。

前記いずれかに記載の針無注射器を-用いて、 H G Fをコ一ドする遺伝子を含む医薬製剤液の有効量を哺乳動物に投与することからなる、肝疾患あるいは血管新生が有効な疾患の治療，改善 ·予防方法。

前記いずれかに記載の針無注射器を用いて、 N F— A: Bデコイオリゴヌクレオチドを含む医薬製剤液の有効量を哺乳動物に投与することからなる、 N F 一 K Bに起因する疾患の治療及び予防方法。

本発明の針無注射器を用いることにより、肝実質細胞増殖因子をコードする H G F遺伝子や、 N F— K Bデコイオリゴヌクレオチド等の遺伝子及び/又はその類似体を高効率に細胞移入させることができる。しかも、患者には痛みがなく、注射痕が極めて小さい。本発明の好ましい形態によれば、薬液及び注射器本体の個別の適切な管理ができると共に、注射器本体に対して注射すべき薬液の種類を自由に組み合わせることのできる安全な針無注射器が提供される。

本発明の好ましい形態の針無注射器では、注射器本体保管時において強力なパネ力が保持部材に全く作用しない機構を有するため、保管時の高い安全性が確保されている。また、薬液注射後において狎圧部材が所定位置で停止する押圧機構を有するため、薬液注射後の高い安全性も確保されている。さらに、薬液注射後に保持部材を再利用することができないため、使い捨ての注射器として、注射器の再使用による感染等の事故を防止できる。

ノズルァンプルと注射器本体とが着脱自在ではないタイプの針無注射器では、ノズルァンプルと注射器本体とが着脱自在であることに基づく効果を除いて、上記と同様の効果が得られる。

パネ力と薬液噴射力とは、一般に相関性があるので、パネ力を適宜調整することにより、治療の目的や部位に応じた最適の針無注射器が得られる。また、ノズル孔の直径や長さその他の形状を薬液の種類に応じて適宜変更して、薬液に最適の針無注射器が得られる。本発明の針無注射器は、通常の注射に用いる他に、関節鏡、腹腔鏡、胸腔鏡等の硬性内視鏡と共に適用すること、或いは術中に適用すること、或いはカテーテル治療に適用することも容易であり、体内の治療部位に直接押し当てて用いることもできる。これにより、体内の治療部位に直接薬液を投与 (細胞移入）することができる。

図面の簡単な説明

図 1は、本発明の注射器の一例の使用時の縦断面図である。

図 2は、同注射器の保存時の縦断面図である。

図 3は、図 1の III一 III 線に沿う横断面図である。図 4は、図 1の IV— IV線に沿う横断面図である。

図 5は、同注射器の保持部材の拡大斜視図である。

図 6は、本発明の注射器の変形例による保持部材の縦断面図である。

図 7は、図 6に示す部分の側面図である。

図 8は、本発明の注射器による Venus遺伝子の表皮組織への細胞移入の結果を表す、表皮層の顕微鏡写真 (撮影倍率：（a)40倍、（b)200倍)である。

図 9は、本発明の注射器による LacZ遺伝子の表皮組織への細胞移入の結果を表す、表皮層の顕微鏡写真 (撮影倍率：（a)40倍、（b)200倍)である。

図 1 0は、，本発明の針無し注射器と従来の針付き注射器とによる HGF遺伝子の細胞移入の結果を示す図である。

発明を実施するための形態

本発明において針無注射器としては、種々の形態のものを用いることができる。例えば、前記ピストンを前記ノズル孔の方向に向かって押圧して前記ノズル孔から前記薬液を噴射させるための押圧機構としては、圧縮又は引張パネ方式、ガス圧 (炭酸ガス、窒素ガス)方式、火薬方式、電磁力方式、圧電方式等のいずれの方式によるものでもよい。ガス圧方式によるものとしては、特開昭 6 1— 2 6 5 1 4 7号公報、特表平 3— 5 0 3 3 7 4号公報 (WO 8 9 / 0 8 4 6 9 )、特表平 8— 5 0 9 6 0 4号公報 (W0 9 4ノ2 4 2 6 3 )等を参照することができ、圧縮パネ方式によるものとしては、特開 2 0 0 0— 1 2 6 2 9 3号公報、特開 2 0 0 1 - 1 8 7 1 3 9号公報、特開 2 0 0 1— 6 1 9 6 4号公報等を参照することができる。これらのうち、取扱いが容易で安全な圧縮バネ方式によるものが好ましい。

本発明において針無注射器としては、 1回限りの使用が可能なもの、及び繰り返し使用が可能なもののいずれをも用いることができる。注射器の再使用による感染等の事故を防止できるという観点からは、 1回限りの使用が可能なものが好ましい。

本発明の好ましい実施の形態を図面を参照して説明する。図 1は、本発明の注射器の一例の使用時の'縦断面図である。図 2は、同注射器の保存時の縦断面図である。図 3は、図 1の III— III 線に沿う横断面図である。図 4は、図 1の IV— IV線に沿う横断面図である。図 5は、同注射器の保持部材の拡大斜視図である。以下の説明において、上下は、図 1を基準としていうものとする。

図 1を参照すると、針無注射器は、ノズルアンプル 11 と、ノズルアンプル 11が取付られる注射器本体 12とを備えている。図 2を參照すると、注射器本体 12は、ノズルアンプル 11に代わって、注射器本体 12に取付られる安全キヤップ 13を備えている。

ノズルアンプル 11は、上端にアンプル開口 21を有し且つ内部を薬液チヤンバ 22とする有底筒体よりなるものである。ノズルアンプル 11の薬液チャンバ 22の底面は、上向き凹状円錐面に形成されている。薬液チャンバ 22内には薬液 L及びその上からピストン 23が収容されている。ノズルアンプル 11は、薬液 Lを視認するために薬液 Lに適合するような透明材料製、例えばポリカーポネー卜等の透明硬質プラスチック製又はガラス製であることが好ましい。

薬液 Lは、遺伝子及び/又はその類似体を含有する医薬製剤液である。薬液 Lについて、詳しくは、後述する。

アンプル開口 21縁部には、円環状の一部をなす形状をもつ 2つの凸状嵌合部 24が互いに反対方向側方に突き出すように設けられている。各凸状嵌合部 24の挟み角度は、 9 0度弱である（図 3参照)。ノズルアンプル 11下面中央部に薬液チヤンバ 22に連通するようにノズル孔 25が形成されている。ノズルアンプル 11の下部にはノズル保護キャップ 26が備えられている。保護キャップ 26は通常、プラスチック製であるが、ノズル孔 25と接触する中心部分には、図示しないシール用の薄いゴム材、例えばシリコーンゴムが取り付けられたものが好ましい。ゴム材によって、薬液の漏れを防止できる。

図示の例では、 1つのノズル孔 25が形成されているが、特開 2 0 0 0— 1 2 6 2 9 3号公報に記載のような複数のノズルを形成してもよい。

ピストン 23は通常、プラスチック製であり、ノズルアンプル 11の周壁に上下摺動自在に嵌め合わされた水平円板状のものである。ビストン 23の下面は、薬液チャンバ 22の底面と合致する下向き凸状円錐面に形成されている。ピストン 23の外周面に Oリング 27が取付られている。ピストン 23の上面は、ノズルアンプル 11の上端面と面一である。

注射器本体 12は、垂直筒状ハウジング 31 と、ハウジング 31内に収容され且つビストン 23を下向きに押圧するための押圧機構 32とを備えている。ハウジング 31は、強度を保持するためには金属製が好ましいが、プラスチック製であってもよい。

ハウジング 31内は、水平隔壁 33によって下部のバネチャンバ 34及び上部の解放チャンバ 35に仕切られている。隔壁 33中央部には連通孔 36が形成されている。バネチャンバ 34の下端には、アンプル開口 21 と合致させられたハウジング開口 37が形成されている。解放チャンバ 35の上端には端壁 38が設けられている。端壁 38中央部には保持孔 39が形成されている。

ハウジング開口 37縁部には、各凸状嵌合部 24を嵌め入れた 2つの凹状嵌合部 41が設けられている。各凹状嵌合部 41の挟み角度は、凸状嵌合部 24のそれにほぼ等しい。

押圧機構 32は、ハウジング 31内に上下自在に保持されている押圧部材 42と、押圧部材 42を下向きに付勢している圧縮コイルパネ 43と、パネ 43を圧縮させた状態で押圧部材 42のパネ 43による移動を解放自在に保持している保持部材 44と、保持部材 44による保持を解放する解放部材 45とを備えている。

押圧部材 42は、ビストン 23の上面に当接させられ且つバネチャンバ 34 周壁内面と摺接させられた立上り状ガイド筒 51 を外周縁部に有している水平円板状パネ受け 52と、パネ受け 52中央部に直立状に設けられ且つ上端部が連通孔 36を介して解放チャンバ 35内に突出させられている垂直ロッド 53とを備えている。ロッド 53の上端部には環状外向き係合突起 54が設けられている。係合突起 54は隔壁 33の連通孔 36を通過できない大きさに形成されている。突起 54 の下側面は、上拡がりテーパ状に形成されている。押圧部材 42は、金属製であることが好ましい。

バネ 43は、口ッド 53を取リ囲み且つ隔壁 33及びバネ受け 52間に介在させられるようにパネチャンバ 34内に圧縮された状態で収容されている。

保持部材 44は、例えば硬質プラスチックで一体成形されたもので、図 4 及び図 5に詳細に示すように、ロッド 53を取り囲んで隔壁 33で受けられているリング部 61 と、ロッド 53と同心となるようにリング部 61上面に直立状に設けられている垂直筒状部 62とよりなる。筒状部 62の内面上端部には環状内向き係合突起 63が設けられている。内向き係合突起 63の上側面には上拡がりテーパ凹状ストツバ面 64が形成されている。ストツバ面 64の内縁部は、ロッド 53の外向き係合突起 54の下側面に下側から係合させられている。筒状部 62を周方向に 4等分する位置に、内向き係合突起 63を含めて縦断するようにスリット 65が形成されている。各スリット 65の両縁部の高さの中程部において、易破断性の破断可能部 66によって部分的に連結されている。すなわち、筒状部 62は 4つの各片からなリ、各片は互いに破断可能部 66によって部分的に連結されている。保持部材 44のプラスチック材料としては、弾性質のものが選択される。図示の例では、筒状部 62はスリット 65によって周方向に 4等分されているが、複数個に分けられていればよく、必ずしも等分されている必要性もない。

解放部材 45は、保持孔 39に上下動自在に嵌め入れられているプラスチック製両端閉鎖垂直状筒体よりなる。解放部材 45の底面外周よりの部分には、ストツバ面 64と合致させられた下細リテーパ凸状押広げ面 67が形成されている。解放部材 45を包み込むようにハウジング 31の上端部には保護キヤップ 68が付けられている。

ス卜ツバ面 64に押広げ面 67が当接させられた状態で、口ッド 53上端面と解放部材 45の底面中央部の間には若干の破断間隙 C1が形成されている。安全キャップ 13は、下面中央部に半球把持部 71を一体に形成したプラスチック製円板状体よりなる。安全キャップ 13の外周縁部には、ノズルアンプル 11の凸状嵌合部 24と同形状の凸状嵌合部 72が 2つ同じように設けられている。安全キャップ 13の上面中央部には、アンプル開口 21にぴったりと嵌め入れられ且つ破断間隙 C1に相当する高さをもった円形隆起状押上部 73が設けられている。ハウジング 31の凹状嵌合部 41に安全キャップ 13の凸状嵌合部 72が嵌め入れられることにより、ハウジング 31への安全キャップ 13の取付が果たされている。この状態で、ハウジング 31にノズルアンプル 11が取付られていた状態と比較して、押圧部材 42は、押上部 73の高さに相当する高さだけ持上げられている。これにより、破断間隙 C1に代わって、安全間隙 C2が、ロッド 53の外向き係合突起 54と保持部材 44の内向き係合突起 63との間に形成される。安全間隙 C2が形成されることにより、パネ 43のパネ力は、保持部材 44に全く作用しなくなつている。注射器保管時のさらに高い安全性が確保される。

注射器を使用しない場合、すなわち通常は注射器製造から注射器使用の直前までの間には、注射器本体 12には安全キヤップ 13が取付られる。薬液が封入されたノズルアンプル 11は、別途、冷蔵庫等で保存するとよい。

注射器の使用に際しては、ハウジング 31 と安全キャップ 13を互いに反対方向に 9 0度程度回転させる。そうすると、ハウジング 31の H状嵌合部 41から安全キャップ 13の凸状嵌合部 72が抜け出て、ハウジング 31から安全キヤップ 13が取外される。そうすると、安全間隙 C2に代わり、破断間隙 C1が形成される。この状態で、パネ受け 52の下面は、ハウジング 31の下端面と面一となる。

次に、安全キャップ 13に代わり、ハウジング 31に薬液が封入されたノズルアンプル 11を取付ける。ハウジング 31の 2つの凹状嵌合部 41の間にノズルアンプル 11の 2つの凸状嵌合部 24をそれぞれ位置させて、ハウジング 31 と安全キャップ 13を互いに反対方向に 9 0度程度回転させると、双方の嵌合部 24、 41 がそれぞれに嵌合される。

上下の保護キャップ 26、68 を取外した後、噴射すべき皮膚等にノズル孔 25を押付け、解放部材 45を押下げる。解放部材 45を押下げると、抻広げ面 67 がストツバ面 64を斜め下向きに押圧することになリ、筒状部 62が上拡がリに拡げられようとする。これにより、まず、全ての破断可能部 66あるいは一部が破断される。続いて、解放部材 45を押下げると、さらに筒状部 62が上拡がりに拡げられるとともに、筒状部 62の各片が弾性変形して外向きに倒れていく。これにともない、ストツバ面 64が次第に外側に移動していき、やがて、ストッパ面 64の内向き係合突起 63とロッド 53の外向き係合突起 54との係合が解除される。そうすると、パネ 43の力によって押圧部材 42が下向きに勢いよく押下げられ、同時に、ピストン 23が押下げられることにより、薬液 Lが高圧で圧縮され、ノズル孔 25から高速で噴射され皮下注射が行われる。口ッド 53の係合突起 54は隔壁 33の連通孔 36を通過できないので、薬液噴射後、押圧部材 42は所定位置で停止され安全性が確保される。

以上、ノズルァンプルと注射器本体とが着脱自在である針無注射器について説明した。しかしながら、ノズルアンプルと注射器本体とが着脱自在となされていることを除く他の構成、特に押出機構 32、とりわけ保持部材 44、破断可能部 66、押出部材 42、解放部材 45の各構成は、ノズルアンプルが注射器本体に固定されている針無注射器にも適用される。

図 6及び図 7は、保持部材 44の変形例を示すものである。この変形例においては、ハウジング 31の解放チャンバ 35の周壁の一部には厚肉状保持部 101 が設けられると共に、ロッド 53を挟んで保持部 101 と反対側には、案内部 102 が設けられている。案内部 102 にはロッド 53が摺接させられている。保持部 101 にはこれを内外に貫通してロッド 53と直交する方向にのびたロック孔 103 が形成されている。一方、解放チャンバ 35の周壁外面には上下にのびた内部拡大ガイド溝 104 が形成されている。ガイド溝 104 の底面には、ロック孔 103の外方端部が開口している。また、ロッド 53の上端部外面には、保持部 101 に向かってのびた係合突出部 105が設けられている。係合突出部 105 の下面は傾斜面とされている。係合突出部 105 は隔壁 33の連通孔 36を通過できない大きさに形成されている。

保持部材 44は、ロック孔 103 に移動自在に挿入され且つ内方端部に上向きストッパ面 112 が設けられているストツパ片 111 よりなる。

ガイド溝 104 にはロック部材 121 が上下摺動自在に嵌め入れられている。ロック部材 121 の内側面には、ストッパ片 111 の外方端部の挿入を許す凹所 122 が形成されている。

ガイド溝 104 の上端面にロック部材 121 が当接させられた状態では、凹所 122はガイド溝 104 の底面によって塞がれている。さらに、同状態では、ガイド溝 104 の下端面と口ック部材 121 の間には間隙が生じておリ、この間隙に安全ピン 131 が抜差し自在に差し込まれている。

安全ピン 131 によってロック部材 121 の下向きの移動が規制され、同時に、ロック部材 121 によってストッパ片 111 の外向きの移動が規制されている。安全ピン 131 を抜き去ると、ロック部材 121 の移動が自由となる。ロック部材 121 を下向きに移動させ、ストッパ片 111 と凹所 122の高さが一致させられると、ストッパ片 111 の外向きの移動が自由となる。パネ 43の力によって口ッド 53が下向きに付勢させているため、ロッド 53の係合突出部 105 によってストッパ片 111 が外向きに押動される。そうすると、係合突出部 105 とストツパ片 111 の係合が解除されくネ 43の力によってロッド 53が一気に押下げられ、同時に、ゼストン 23が押下げられることにより、薬液 Lが高圧で圧縮され、ノズル孔 25から高速で噴射され皮下注射が行われる。口ッド 53の係合突出部 105 は隔壁 33の連通孔 36を通過できないので、薬液噴射後、押圧部材 42は所定位置で停止され安全性が確保される。

図 6及び図 7に示された保持部材 44の変形例は、ノズルァンプルと注射器本体とが着脱自在である針無注射器にも、ノズルァンプルが注射器本体に固定されている針無注射器にも適用される。

なお、ノズルァンプルと注射器本体とが着脱自在である針無注射器の場合、図 6の変形例は、注射器の使用時における状態を表したものであり、図 1に相当する図である。図 6の変形例に示す注射器を保存しておく場合には、図 2に示したのと同じように、注射器本体 12に安全キャップ 13が取付られる。安全キヤップ 13を取り付けることによって、ロッド 53は、キャップ 13の押上部 73 の高さに相当する高さだけ持上げられ、ロッド 53の係合突出部 105 とストッパ片 111 との間に安全間隙 (図 2における安全間隙 C2に相当する)が形成される。安全間隙により、パネ 43のパネ力は、ストッパ片 111 に全く作用しないので、保存時の注射器のより高い安全性が確保される。

以上のように、保持部材の変形例を示したが、本発明の針無注射器はこれに限定されることなく、種々の形態で実施することができる。従って、上述の実施の形態は単なる例示にすぎず、限定的に解釈してはならない。

次に、薬液チャンバに収容される薬液 Lについて説明する。薬液 Lは、遺伝子及び/又はその類似体を含有する医薬製剤液である。

遺伝子及び/又はその類似体を含有する医薬製剤は限定されないが、好ましくは血管増殖因子又は血管新生蛋白をコードする遺伝子を含む医薬製剤を挙げることができる。ここで、血管増殖因子又は血管新生蛋白としてより具体的には、例えば、分散因子肝細胞増殖因子 (H G F )、血管内皮増殖因子 (V E G F )、線維芽細胞増殖因子（F G F )、卜ランスフォーミング増殖因子 ( T G F )、エリス口ポェチン ( E P 0)、アンジォゲニン (angiogenin)、プレイオトロフィン (pleiotrophin、 P T N、 H B— G A M)、ミツドカイン (midkine)、胎盤増殖因子 (placental growth factor protein, P I G F)、血小板由来増殖因子（P D G F)、 D e I — 1

(Developmentally Regulated Endothelial Cell Locus-1)、アンジォポェチン

(angiopoietin),フオリスタチン (folistatin)、顆粒球コロニー刺激因子（G— c S F)、レプチン (leptin)、インスリン様増殖因子 (insulin-like growth factor、 I GF)、転写因子 Chicken Ovalbumin Upstream Promotor-transcription factor ll(C O U P— T Fll)、内皮型 NO産生酵素（e NOS)、誘導型 NO合成酵素（ i NOS)、ヒト単球走化活性因子 (monocyte chemotactic protein-1、 MCP— 1)、プロリフエリン (proliferin)、エフリン (ephrin)等を挙げることができ、これらの中でも HG Fがよリ好ましい。

前記薬液の好適な例として、 HG Fをコードする遺伝子を主成分として含む医薬製剤が挙げられる。 HGFをコードする遺伝子は、配列表の配列番号 1 に記載のアミノ酸配列で表される肝実質細胞増殖因子をコードする遺伝子である。また、 HG Fをコードする遺伝子は、配列表の配列番号 2に記載の塩基配列で表される、肝実質細胞増殖因子をコードする遺伝子である。

HG Fをコードする遺伝子は、常法によリ発現べクタ一に導入することができる。発現ベクターとしては、プラスミド、アデノウイルスベクター、 HV J— Eベクター等を用いることができる。

HGFをコードする遺伝子を主成分として含む医薬製剤は、血管内皮細胞の増殖による血管新生作用があり、動脈硬化症、末梢循環不全などの動脈疾患、心筋梗塞、末梢性血管閉塞症などの予防や治療に有効である。さらには、 HG F をコードする遺伝子を主成分として含む医薬製剤は、関節軟骨細胞の修復促進作用があり、骨形成異常症、変形性関節症、スポーツ外傷などの予防や治療に有効である。

本発明においては、上記の作用を損なわない範囲内で、一部の除去、変更あるいは追加等の改変を行った HGFをコードする遺伝子も用いることができる。本発明において、遺伝子の類似体を含有する医薬製剤として、生物活性を有するオリゴヌクレオチドを含む医薬製剤を挙げることができる。ここで、生物活性を有するオリゴヌクレオチドは、医薬効果活性を有するォリゴヌクレオチドであれば限定されないが、好ましくは、デコイ (decoy) 、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ァプタマ一、 RNA ί (RNA interference)エフェクター等を挙げることができる。

ここでデコイとは、転写因子 (transcription factor)阻害活性を有するオリゴヌクレオチドを意味し、転写因子として具体的には、例ぇばN F_A：B、 E 2 F、 AP— 1、 STAT— 1、 STAT— 6、 GATA— 3、 E t s等を挙げることができる。これらの中でも、 NF-/CBデコイオリゴヌクレオチド、 E2Fデコィオリゴヌクレオチドおよび STAT-6デコイオリゴヌクレオチドがより好ましく、 N F— / ί Bデコイオリゴヌクレオチドがさらに好ましい。

なお、 Ε 2 Fあるいは A Ρ— 1のデコイオリゴヌクレオチドについては、例えば WO 95 1 1 687 (S EQ I D N O： 1等）、特表 6— 5097 04号公報、 WOO 2Z66070等にその配列が具体的に記載されている。それ以外のデコイオリゴヌクレオチドについては、例えば WO 02/066070 号公報の 8頁等に記載されている。

また、本発明で用いられるアンチセンスオリゴヌクレオチド (アンチセンス核酸)は、特定遺伝子の発現に影響を与える D N Aあるいは R N Aであれば限定されないが、通常は約 1 0~30ヌクレオチド長を有する。アンチセンスオリゴヌクレオチドとして具体的には、例えば ISIS-2302 、 ISIS-2503 、 IS - 2922 、 ISIS-3521 JSIS-5132 、 ISIS-14803、 ISIS-14838、 ISIS-15839、G-3139、 IN-3001 、 GP卜 2A、 EPト 2010等を挙げることができ、好ましくは ISIS-2302 、 ISIS-14838、 ISIS-15839を挙げることができる。これらは特許第 2732546号公報、特表 2002-5261 25号公報あるいは米国特許 U S6，096,722 等にその配列が具体的に記載されている。さらに、本発明で用いられるアブタマ一とは、特定のタンパク質に特異的に結合し、その働きを制御する R N A分子であれば限定されない。 R N A iェフエクタ一についても、転写後遺伝子サイレンシングを引き起こす、小さな ds R N A (double-strand RNA) である si R N A (small interfering RNA) であれば限定されない。

前記薬液の好適な例として、 N F— Κ Bデコイオリゴヌクレオチドを主成分として含む医薬製剤が挙げられる。 N F— Bデコイオリゴヌクレオチドは、染色体上に存在する N F— K Bの核酸結合部位と特異的に拮抗するオリゴヌクレォチドであればよく、その類似体も含まれる。好ましい N F— /ί Bのデコイオリゴヌクレオチドの例として..は、塩基配列 gggatttccc (配列表の配列番号 3の 5 ' 末端から 8から 1 7番目の配列)又はその相補体を含むオリゴヌクレオチド、その変異体、又はこれらを分子内に含む化合物が挙げられる。オリゴヌクレオチドは D N Aでも R N A.でもよく、またそのオリゴヌクレオチド内に核酸修飾体及び Z 又は擬核酸を含むものであってもよい。また、これらのオリゴヌクレオチド、その変異体、又はこれらを分子内に含む化合物は 1本鎖でも 2本鎖であってもよく、線状であっても環状であってもよい。変異体とは上記配列の一部が、変異、置換、挿入、欠失しているもので、 N F— K Bが結合する核酸結合部位と特異的に拮抗するオリゴヌクレオチドを示す。本発明で用いられるオリゴヌクレオチドは、リン酸ジエステル結合部の酸素原子をィォゥ原子で置換したチオリン酸ジエステル結合をもつオリゴヌクレオチド（S—オリゴ)、又はリン酸ジエステル結合を電荷をもたないメチルホスフエ一ト基で置換したオリゴヌクレオチド等の生体内でォリゴヌクレオチドが分解を受けにくくするために改変したオリゴヌクレオチド等が含まれる。

N F— / ί Bデコイオリゴヌクレオチドを主成分として含む医薬製剤は、 N F— K Βに起因する疾患、すなわち転写調節因子 N F— /i Βが制御する遺伝子の所望しない活性化に起因する疾患の治療及び予防に有効である。具体的には、心筋梗塞、脳梗塞などの虚血性疾患、リューマチ、アトピーなどの自己免疫疾患の予防や治療、臓器移植や手術後の予後悪化防止、ガンの転移■浸潤の予防等に有効である。

本発明においては、上記の医薬製剤の他にも、遺伝子及び z又はその類似体を含有する各種医薬製剤を用いることができる。

実施例

以下に実施例により本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらにより限定されるものではない。

[実施例 1 ：ルシフェラーゼプラスミドの細胞移入]

( 1 )実験方法

ラッ卜の背部皮膚に、通常の針付き注射器 (比較)及び針無注射器シマジエツト

(ShimaJET P/N 555-15000, 島津製作所製)をそれぞれ用いて、ルシフェラーゼプラスミド (Promega社製、 pGL3 lucyf erase plasmid) を 5 0 g /匹、又は 1 0 0 匹投与し、 2 4時間後に皮膚サンプルを採取し、測定装置 (EG&G BERTHOLD社製、 Lumat LB9507)によリルシフェラ一ゼ活性をそれぞれ 3回測定し、平均値及び標準偏差を求めた。

200

27

( 2 )結果グループルシフェラー -ゼ活性 (単位: RLU)

平均 ± 標準偏差

無処置群 (Control) 21312.181 10656.090

針付き注射器 50 11836.488 4832.226 針付き注射器 100 pg 38224.267 15613.157 シマジェット 50 ig 3111827.866 1270398.406 シマジェット 100 Mg 3399258.233 1387741.362 上記のように、針無注射器シマジエツトを用いた場合には、ルシフェラーゼ活性が非常に高く、ルシフェラ一ゼプラスミドが高効率で細胞移入されたことが明らかである。このことから、他の遺伝子及び/又はその類似体を高効率に細胞移入させることができることが示された。

[実施例 2 ：改変グリーン蛍光タンパク質遺伝子 (Venus遺伝子)の細胞移入] ラットの背部皮膚に、 Venusプラスミド (Venus Plasmid)(100 i g/100 ju l 生理食塩水)を針無注射器シマジエツト (ShimaJET P/N 555-15000，島津製作所製)で噴射し、 2日後に噴射部の皮膚を採取して凍結切片を作成し、蛍光顕微鏡で観察した。

なお Venus Plasmidとは、 pCS2ベクター (pCS2 vector)に約 0.7kbの揷入遺伝子を入れたものであり、 Nature Biotechnology, 20(1 )， 87-90， 2002に詳細が記載されている。

顕微鏡による観察結果を図 8に示す。図 8 (a)の撮影倍率は 40倍、図 8 (b) は 200倍 (図 (a)の一部を拡大したもの)である。図 8から明らかなように、表皮層顆粒層にグリーン蛍光 (図 8 (b)においては矢印で示す)が認められ、 Venus遺伝子の細胞移入が確認された。 W

28

[実施例 3 ： LacZ遺伝子の細胞移入]

ラッ卜の背部皮膚に、市販の LacZプラスミド (LacZ Plasmid)(100 i g/100 I生理食塩水)を針無注射器シマジエツト (ShimaJET P/N 555-15000, 島津製作所製)で噴射した。 2曰後に噴射部の皮膚を採取し、摘出標本を液体窒素で凍結させた。その後、凍結させた皮膚を 1 %グルタールアルデヒドで 5~ 10分固定し、リン酸緩衝化生理食塩水 (PBS)で洗浄した。固定化した皮膚は、 8 gal染色液をかけて 37°Cで一晚インキュベートした後、洗浄し、 HE染色 (へマトキシリン.ェォジン染色）して顕微鏡で観察した。

顕微鏡による観察結果を図 9に示す。図 9 (a)の撮影倍率は 40倍、図 9 (b) は 200倍 (図 (a)の一部を拡大したもの)である。図 9から明らかなように、表皮層顆粒層に染色陽性部 (青色の ;8 -ガラクトシダーゼ活性陽性部；図 9 (b)においては矢印で示す)が認められ、 LacZ遺伝子の細胞移入が確認された。

なお、 gal染色液としては、 50mg/mlプロモクロロインドリル一一 D 一カラクトピラノシド (bromochloroindoly卜 beta-D-galactopyranoside; BCIG)ジメチルホルムアミド (dimethylformamide)溶液 20 ju l 、 0.1 M MgCI₂ 10 I、 0.5M K₃Fe(CN)₆ 10 ju l、 0.5M K₄Fe(CN)₆ 10 ju I、及び PBS 950 ju Iの混合溶液、あるいは、 β -Galactosidase Staining Kit(Mirus社製)を利用することができる。

[実施例 4 ： HGF遺伝子の細胞移入]

ラットの背部皮膚に、 pVAX-HGF プラスミド (pVAX-HGF plasmid)(CAS No.： 627861-07-8, 100 g/100 I生理食塩水)をシマジエツ卜で噴射した。 2日後に噴射部の皮膚を全層切離し PBSで洗浄した。その後、切離した皮膚をハサミでできるだけ細かく切り、抽出バッファー (20mM Tris-HCI buffer(pH 7.5),2M NaCI, 0.1 % Tween 80， 1 mM EDTA, 1 mM PMSF)に入れてポリトロンホモゲナイザ一で均質化した後 15，000rpm、 4°Cで 30分遠心し、上清を採取した。

この上清について、 human HGF ELISA kit iBIOSOURCE社製、 Cataloa No. KAC 2211)を使用し、 HGF濃度を測定した。

なお対照として、針付き注射器使用群とコントロール (Control)群とを設けた。針付き注射器使用群においては、シマジェットの代わりに針付き注射器を用いた以外は上述と同様に HGF濃度測定を行い、 Control群においては、 pVAX-HGF plasmidlOO g/100 I生理食塩水の代わりに生理食塩水のみを用いた以外は上述と同様に HGF濃度測定を行った。

Control _v針付き注射使用、及びシマジエツ卜噴射によって皮内注射された HGFの量を示す図を図 1 0に示す。図 1 0において縦軸は、 1 mgの組織 (tissue) 当たりの HGFの量 (pg)である。すなわち、 Control群においては 0_Pg/mg tissue、針付き注射器使用群においては 0pg/mg tissue、シマジエツト噴射群においては 11.49pg/mg tissueの HGFが確認された。このことから明らかなように、針付き注射器使用では HGFタンパク発現は認められなかったが、シマジエツト噴射では HGF遺伝子の細胞移入が確認された。上述のように、実施例においては、針無注射器シマジェットを用いて、ルシフェラーゼプラスミド、 Venusプラスミド、 LacZプラスミド、及び pVAX-HGF プラスミドを皮内投与した。しかしながら、本発明は、上記針無注射器に限られることなく、薬剤チャンバと押圧手段とを備えるいかなる針無注射器についても適用される。また本発明は、上記薬剤に限られることなく、遺伝子及ぴ又はその類似体を含有するいかなる医薬製剤についても適用される。そのため、前述の実施例はあらゆる点で単なる例示に過ぎず、限定的に解釈してはならない。さらに、特許請求の範囲の均等範囲に属する変更は、全て本発明の範囲内のものである。

Claims

2004/110533 30 請求の範囲

1. 1つ又は複数のノズル孔を有し、薬剤が収容された薬剤チャンバと、前記薬剤を前記ノズル孔の方向に向かって押圧して前記ノズル孔から前記薬剤を噴射させるための押圧手段を備えた注射器本体とを含む針無注射器であつて、

前記薬剤は、遺伝子及び又はその類似体を含有する医薬製剤である針無注射器。

2. 遺伝子及び Z又はその類似体を含有する医薬製剤は、遺伝子及び又はその類似体を保持した担体の形態である、請求の範囲第 1項に記載の針無注射器。

3. 担体は金属粒子である、請求の範囲第 2項に記載の針無注射器。

4. 金属粒子はコロイド金粒子である、請求の範囲第 3項に記載の針無注射

¾§。

5. 1つ又は複数のノズル孔を有し、薬液が収容され且つ前記薬液を挟んで前記ノズル孔と反対側に位置するようにビストンが備えられた薬液チャンバと、前記ピストンを前記ノズル孔の方向に向かって押圧して前記ノズル孔から前記薬液を噴射させるための押圧機構を備えた注射器本体とを含む針無注射器であって、

前記薬液は、遺伝子及び又はその類似体を含有する医薬製剤である針無 ¾射器。

6. 前記薬液は、血管増殖因子又は血管新生蛋白をコードする遺伝子を含む医薬製剤である、請求の範囲第 5項に記載の針無注射器。

7. 血管増殖因子又は血管新生蛋白が、分散因子/肝細胞増殖因子 (HGF)、血管内皮増殖因子 (VEGF)、線維芽細胞増殖因子（FGF)、トランスフォーミング増殖因子（TGF)、エリスロポエチン（E PO)、アンジォゲニン (angiogenin)、プレイォトロフィン (pleiotrophin、 PTN、 H B— GAM)、ミツドカイン (midkine) 2004/110533

31

胎盤増殖因子 (placental growth factor protein、 P I GF)、血小板由来増殖因子（P DGF)、 D e I― 1 (Developmentally Regulated Endothelial Ceil Locus-1)、アンジォポェチン (angiopoietin)、フオリスタチン (folistatin)、顆粒球コロニ一刺激因子 (G-C S F) レプチン (leptin)、インスリン様増殖因子 (insulin-like growth factor. I G F)、転写因子 Chicken Ovalbumin Upstream Promotor-transcription factor ll(COU P— T Fll)、内皮型 NO産生酵素（_e NOS)、誘導型 NO合成酵素（ i N OS)、ヒ卜単球走化活性因子（monocyte chemotactic protein-1、 MGP— 1 )、プロリフェリン (proliferin)及びエフリン (ephrin)からなる群から選ばれた i種である、請求の範囲第 6項に記載の針無注射器。

8. 前記薬液は、 HGFをコードする遺伝子を含む医薬製剤である、請求の範囲第 5項に記載の針無注射器。

9. 前記 HG Fをコードする遺伝子を含む医薬製剤は、 HGFをコードする遺伝子を挿入した発現べクターを含む医薬製剤である、請求の範囲第 8項に記載の針無注射器。

10. 前記発現ベクターが、プラスミド、アデノウイルスベクタ一及び H V J 一 Eベクターからなる群から選ばれた 1種である、請求の範囲第 9項に記載の針無注射器。

11. 前記薬液は、生物活性を有するオリゴヌクレオチドを含む医薬製剤である、請求の範囲第 5項に記載の針無注射器。

12. 生物活性を有するオリゴヌクレオチドが、デコイ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アブタマ一又は RN A iエフェクターである、請求の範囲第 11 項に記載の針無注射器。

13. アンチセンスオリゴヌクレオチドが、 ISIS-2302 、 ISIS-2503 、 ISIS-2922 、 ISIS-3521 、 ISIS-5132 、 ISIS-14803、 ISIS-14838、 IS - 15839、 G-3139、 IN-3001 、 GPI-2A及び EPI-2010からなる群から選ばれた 1種である、請求の範囲第 12項に記載の針無注射器。

14. デコイが、転写因子 (transcription factor)阻害デコィ才リゴヌクレオチド (decoy oligonucleotide)である、請求の範囲第 12項に記載の針無注射器。

15. 転写因子が、 N F— f B、 E 2 F、 A P— 1、 S T A T— 1、 S T A T 一 6、 G A T A— 3及び E t sからなる群から選ばれた 1種である、請求の範囲第 14項に記載の針無注射器。

16. 前記薬液は、 N F— C Bデコイオリゴヌクレオチドを含む医薬製剤である、請求の範囲第 5項に記載の針無注射器。

17. 前記薬液チャンバは、前記注射器本体に対し取外し自在に取付られているノズルアンプル内部に形成されている、請求の範囲第 5項〜第 16項のいずれか 1項に記載の針無注射器。

18. ノズルアンプルが、前記ピストンを露出させたアンプル開口を有してお y、アンプル開口縁部に複数の凸状嵌合部が設けられておリ、

注射器本体が、押圧機構を収容している中空状ハウジングを有しておリ、前記ハウジングが、前記ァンプル開口に連通させられたハウジング開口を有しており、ハウジング開口縁部に、ノズルアンプルに設けられた前記 ΰ状嵌合部に対応ずる凹状嵌合部が設けられており、

ノズルアンプル及びハウジングを互いに反対方向に回転させることによリ、前記凸状嵌合部及び前記凹状嵌合部が嵌め外しされるようになされている、請求の範囲第 17項に記載の針無注射器。

19. 押圧機構が、前記ビストンに接近■離隔する方向に移動自在である押圧部材と、前記押圧部材を前記ビストンに接近する方向に向かって付勢している圧縮パネと、前記パネを圧縮させた状態で押圧部材の前記パネによる移動を解放自在に保持している保持部材とを備えている、請求の範囲第 17項又は第 18項に記載の針無注射器。

20. 前記ハウジング内に、一端をハウジング開口とするパネチャンバと、前記パネチャンバとは連通孔を有する隔壁によって仕切られた解放チャンバとが形成されており、

前記押圧部材が、前記バネチャンバ内に位置させられ且つ前記ビストンに当接させれたパネ受けと、前記パネ受けから前記隔壁の連通孔を通して前記解放チャンバ内に突出させられるようにのびたロッドとを備えており、前記ロッドの突出端部外面には係合突起が前記隔壁の連通孔を通過できない大きさに形成されており、前記パネが、前記ロッドを取り囲んで前記隔壁及び前記パネ受け間に介在させられたコィルバネであリ、

前記保持部材が、前記パネを圧縮させた状態で前記ロッドの係合突起を当接させるストツバ面を有している、請求の範囲第 19項に記載の針無注射器。

21. 前記保持部材が、前記解放チャンバ内で前記ロッドを取囲むように前記隔壁で受けられているリング部と、前記リング部に直立状に設けられ且つ先端面がストツバ面となされている筒状部とを備えており、前記筒状部を縦断するように複数のスリツ卜が形成されている、請求の範囲第 20項に記載の針無注射器。.

22. 前記各スリツトの両縁部の一部が破断可能部によって連結されている、請求の範囲第 21項に記載の針無注射器。 .

23. 前記ハウジングが、前記隔壁と間隔をおいて相対する端壁を有しており、解放部材が、前記端壁に形成された保持孔を介して前記ストツバ面に接近離隔しうるように保持されており、前記ストツバ面が、前記解放部材に近づくにしたがって拡がるテーパ凹状に形成されており、前記解放部材に、前記ストツバ面と対応するようにテーパ凸状に形成された押広げ面が設けられている、請求の範囲第 21項又は第 22項に記載の針無注射器。

24. 俞記保持部材が、前記解放チャンバの周壁を内外に貫通して前記ロッドと直交する方向にのびたロック孔に移動自在に揷入され且つ内方端部にストツバ面が設けられているストッパ片よりなる、請求の範囲第 20項に記載の針無注射

25. 前記解放チャンバの周壁外面に、底面に前記ロック孔の外方端部を開口 2004/110533

34

させ且つ前記ロック孔と直交する方向にのびたガイド溝が形成され、前記ガイド溝にロック部材が移動自在に嵌め入れられ、前記ロック部材の内側面に、前記ストッパ片の外方端部の揷入を許す凹所が形成されている、請求の範囲第 24項に記載の針無注射器。

26. ノズルアンプルに代わり、注射器本体に取付られる安全キャップが備えられており、前記安全キャップに、ノズルアンプルの前記凸状嵌合部に相当する凸状嵌合部が設けられておリ、前記安全キヤップの凸状嵌合部が前記ハウジングの凹状嵌合部に嵌め入れられた状態で、前記ロッドの係合突起と前記保持部材のストツパ面との間に間隙が保持されるようになされている、請求の範囲第 20項〜第 25項のいずれか 1項に記載の針無注射器。

27. 前記薬液チャンバは前記注射器本体と一体化されている、請求の範囲第 5 項〜第 16項のいずれか 1項に記載の針無注射器。

28. 前記薬液チャンバは前記注射器本体と一体化されているノズルァンプル内部に形成されている、請求の範囲第 27項に記載の針無注射器。

29. 注射器本体が、押圧機構を収容している中空状ハウジングを有しており、押圧機構が、前記ビストンに接近'離隔する方向に移動自在である押圧部材と、前記押圧部材を前記ビストンに接近する方向に向かって付勢している圧縮パネと、前記パネを圧縮させた状態で押圧部材の前記パネによる移動を解放自在に保持している保持部材とを備えており、

前記ハウジング内に、一端をハウジング開口とするパネチャンバと、前記パネチャンバとは連通孔を有する隔壁によって仕切られた解放チャンバとが形成されており、

前記保持部材が、前記解放チャンバ内で前記ロッドを取囲むように前記隔壁で受けられているリング部と、前記リング部に直立状に設けられた筒状部とを備えており、前記筒状部の先端面は、前記パネを圧縮させた状態で前記ロッドの係合突起を当接させるストツバ面となされており、前記筒状部を縦断するように複数のスリッ卜が形成されている、請求の範囲第 27項又は第 28項に記載の針無注射器。

30. 前記各スリツトの両縁部の一部が破断可能部によって連結されている、請求の範囲第 29項に記載の針無注射器。

31. 前記ハウジングが、前記隔壁と間隔をおいて相対する端壁を有しており、解放部材が、前記端壁に形成された保持孔を介して前記ストツバ面に接近■離隔しうるように保持されており、前記ストツバ面が、前記解放部材に近づくにしたがって拡がる亍ーパ凹状に形成されており、前記解放部材に、前記ストツバ面と対応するように亍ーパ凸状に形成された押広げ面が設けられている、請求の範囲第 29項又は第 30項に記載の針無注射器。

32. 注射器本体が、押圧機構を収容している中空状ハウジングを有しており、押圧機構が、前記ピストンに接近'離隔する方向に移動自在である押圧部材と、前記押圧部材を前記ピストンに接近する方向に向かって付勢している圧縮パネと、前記パネを圧縮させた状態で押圧部材の前記パネによる移動を解放自在に保持している保持部材とを備えており、

前記押圧部材が、前記パネチャンバ内に位置させられ且つ前記ビストンに当接させれたパネ受けと、前記パネ受けから前記隔壁の連通孔を通して前記解放チャンバ内に突出させられるようにのびたロッドとを備えており、前記ロッドの突出端部外面には係合突起が前記隔壁の連通孔を通過できない大きさに形成されており、前記パネが、前記ロッドを取 y囲んで前記隔壁及び前記パネ受け間に介在させられたコィルバネであリ '、

前記保持部材が、前記解放チャンバの周壁を内外に貫通して前記ロッドと直交する方向にのびたロック孔に移動自在に揷入されているストツパ片よりなリ、且つ前記ストッパ片の内方端部に、前記パネを圧縮させた状態で前記ロッドの係合突起を当接させるストツパ面が設けられている、請求の範囲第 27項又は第 28項に記載の針無注射器。

33. 前記解放チャンバの周壁外面に、底面に前記ロック孔の外方端部を開口させ且つ前記ロック孔と直交する方向にのびたガイド溝が形成され、前記ガイド溝にロック部材が移動自在に嵌め入れられ、前記ロック部材の内側面に、前記ストツパ片の外方端部の挿入を許す凹所が形成されている、請求の範囲 32に記載の針無注射器。