WO2001093871A1

WO2001093871A1 - Medicaments pour la prevention de la reangiostenose

Info

Publication number: WO2001093871A1
Application number: PCT/JP2001/001859
Authority: WO
Inventors: Yasumi Uchida
Original assignee: Cardiovascular Institute, Ltd.
Priority date: 2000-06-07
Filing date: 2001-03-09
Publication date: 2001-12-13
Also published as: WO2001093870A1

Description

明細書血管再狭窄防止薬技術分野

本発明は、血管平滑筋増殖抑制剤及び血管形成術後の血管再狭窄防止剤に関する。背景技術

. 近年、狭心症や心筋梗塞に代表される虚血性疾患の治療法の一つとして、これまでの外科的なバイパス術に代わり、先端にバルーンの付いた特殊なカテーテルを経皮的に末梢動脈から冠動脈の狭窄部に挿入し、バルーンを膨らませることにより狭窄部位を拡張する経皮的冠動脈形成術（P T C A) が広く採用されている。また、金属製等のステント挿入も盛んに行われている。

ところが、斯かる形成術においては、 3 0〜4 0 %の患者で施行により拡張された血管の再狭窄が起こることが大きな問題となっている。このことほバイパス術においても同様である。

斯かる再狭窄は、血管障害部における細胞増殖性サイトカインなどによる中膜平滑筋細胞の内膜への遊走と増殖による血管内膜肥厚や血栓の形成がその主因と考えられ、これまでに細胞増殖抑制剤、抗血液凝固剤、血小板凝集抑制剤等の薬剤が臨床で検討されてきているが、いずれも十分な効果が得られていないのが現状である。

従つて、本発明は、 P T C A等の血管形成術や血管バイパス術施行後の血管再狭窄を有効に防止できる医薬を提供することを目的とする。発明の開示本発明者らは、血管形成術施行後の血管再狭窄の要因について更に検討した結果、血管平滑筋細胞の増殖抑制を図る一方で、内皮細胞を早期に再生させて血管障害部を覆うことにより、血管再狭窄を効率的に抑制できることを見出すと共に、特定の生体適合性色素に血管平滑筋細胞増殖を抑制する作用があり、血管再狭窄の防止のための血管平滑筋増殖抑制剤及び血管再狭窄防止剤となり得ること、更に該血管平滑筋増殖抑制剤と内皮細胞のみを増殖させるィンジゴカルミンを併用することことにより内皮細胞増殖を抑制することなく優れた血管再狭窄防止効果が得られることを見出し、本発明を完成した。

すなわち本発明は、スルホン酸系ァゾ色素、フタレイン系色素、トリフエニルメタン系色素、フエナントリジニゥム系色素、ァクリジン系色素、キサンテン系色素、フエノチアジン系色素及びシァニン系色素から選ばれる 1種又は 2種以上の生体適合性色素を含有する血管平滑筋増殖抑制剤及び血管再狭窄防止剤を提供するものである。

また本発明は、上記生体適合性色素並びにィンジゴカルミンを含有する血管再狭窄防止剤を提供するものである。

また本発明は、血管平滑筋増殖抑制剤又は血管再狭窄防止剤製造のための上記生体適合性色素の使用を提供するものである。

更に本発明は、上記生体適合性色素を投与することを特徴とする血管平滑筋増殖に起因する疾患の処置方法又は血管再狭窄防止のための処置方法を提供するものである。図面の簡単な説明

図 1は、ヒト大動脈平滑筋細胞周期に対するエバンスカレ一の停止効果を示す図である。

図 2は、ィヌ冠動脈ステント挿入部の変化を示す図である〔（1 ) 対照群、（ 2 ) ェチジゥムブロマイド群、矢印はステント部を示す〕。図 3は、エバンスブルー局所投与の P T C Aによる再狭窄部位への効果を示す図である〔（1 ) 対照群、（2 ) エバンスブルー群〕。

図 4は、虚血性心疾患患者のステント揷入部再狭窄に対するエバンスブル一局所投与の効果を示す図である。

図 5は、虚血性心疾患患者の P T C A部位へのエバンスプル一投与の効果を示す図である。

図 6は、エバンスブルーとバトロキソビン混合後のクロマトグラムを示す図である。発明を実施するための最良の形態

本発明の血管平滑筋増殖抑制剤及び血管再狭窄防止剤の有効成分である生体適合性色素とは、医薬、生体若しくは生体物質の染色、臨床検査等の医用又は食用として用いられている色素であつて、人体を含む哺乳動物に投与可能なものをいい、具体的にはスルホン酸系ァゾ色素、フタレイン系色素、トリフエニルメタン系色素、フエナントリジニゥム系色素、ァクリジン系色素、キサンテン系色素、フエノチアジン系色素及びシァニン系色素から選ばれる色素をいう。

ここで、スルホン酸系ァゾ色素としては、分子内に基— S〇₃ _を有するァゾ色素をいい、例えばエバンスブルー、トリパンブル一、トリパンレッド、オレンジ B等のナフタレンスルホン酸系ァゾ色素、ポーラルイエロー、オレンジ I又はオレンジ I I等が挙げられ、フタレイン系色素としては、例えばフエノ一ルフタレィン又はフエノールスルホフタレイン等が挙げられ、トリフエニルメタン系色素としては、例えばゲンチアナバイオレット又はフクシン（マジェンタ）等が挙げられ、フエナントリジニゥム系色素としては、例えばェチジゥムブロマイド又はプロピジゥムアイオダイド等が挙げられ、ァクリジン系色素としては、例えばァクリジンオレンジ、ァクリジンイェロー、 9一アミノアクリジン、ァクリフラビン又はプロフラビン等が挙げられ、キサンテン系色素としては、例えばローダミン：6、スルホローダミン、フルォレセイン又はェォシン等が挙げられ、フエノチアジン系色素としては、例えばメチレンブル一、トルイジンブルー又はァズ一ル (A， B) 等が挙げられる。

上記色素は、後記実施例に示すように優れた血管平滑筋細胞増殖抑制作用を有するが、これらに当該作用があることは全く知られていなかつたことは言うまでもない。そして、斯かる効果の点から、上記色素のうち、スルホン酸系ァゾ色素、特にナフ夕レンスルホン酸系ァゾ色素、フエナントリジニゥム系色素、ァクリジン系色素及びフェノチアジン系色素が好ましく、中でも血管平滑筋細胞の増殖抑制を図りつつ早期に内皮細胞を再生する効果を有するエバンスブルー、ェチジゥムブロマイド、ァクリジンオレンジ、メチレンブル一又はトルイジンブルーが特に好ましい。

このように優れた血管平滑筋細胞増殖抑制作用を有する本発明の生体適合性色素を用いれば、血管障害部を早期に覆い、血栓形成やサイト力インや動脈硬化の原因となる単核球などの浸入を防止することができ、血管形成術後或いはバイパス術後の血管再狭窄や急性、亜急性、慢性血栓性閉塞を効果的に防止することができる。

本発明の血管平滑筋増殖抑制剤及び血管再狭窄防止剤は、斯かる色素を単独で又は二種以上を併用して用いることができる。二種以上を併用して用いる場合には、単一の製剤中に含まれるように調製されてもよく、それぞれを別個の製剤として調製し、それらを併用するものでもよい。

本発明色素の好ましい併用例としては、血管再狭窄の防止効果の点から、エバンスブルー等のナフタレンスルホン酸系ァゾ色素と、ェチジゥムブ口マイド等のフエナントリジニゥム系色素又はァクリジンオレンジ等のァクリジン系色素とを組み合わせて用いる場合が挙げられる。

一方、インジゴカルミンは腎機能検査や食品着色料等として広く用いられている色素であるが、インジゴカルミン自体には、本発明でいう血管平滑筋増殖抑制作用はない。しかしながら内皮細胞の増殖再生促進作用を発揮することから（実施例 2 ) 、インジゴカルミンを血管平滑筋増殖抑制作用を有する上記色素、特にエバンスブルー等のナフ夕レンスルホン酸系ァゾ色素、ェチジゥムブ口マイド等のフエナントリジニゥム系色素又はァクリジンオレンジ等のァクリジン系色素と組み合わせて使用すれば早期に内皮細胞が再生され、障害部位が修復されるのでより理想的な血管再狭窄防止効果が期待できる。

また、本発明の再狭窄防止剤には、従来公知の抗血小板剤、抗血液凝固剤、血栓溶解剤及び Z又は血管拡張剤を配合することができる。ここで用いられる抗血小板剤としてはアスピリン、スルフィンピラゾン、チクロピジン、アブキシマブ、クロビドグレル、 G P I I b/I I I a阻害剤、トロンポキサン A2拮抗剤、ロイトコリエン拮抗剤等が挙げられ、抗血液凝固剤としてはへパリン、アルガトロバン、バトロキソビン等の抗トロンビン剤、ヮルファリン等の合成抗血液凝固剤等が挙げられ、血栓溶解剤としてはゥロキナーゼ、プラスミノーゲンァクチべ一夕等が挙げられ、血管拡張剤としてはニトログリセリン、硝酸イソソルピド等の硝酸剤；ニコランジル、トラピジル、ジピリダモール；ジルチアゼム、ジヒドロピリジン誘導体 (二フエジピン、二カルジピン等) 等のカルシウム拮抗剤、アンギオテンシン変換酵素拮抗剤（カプトプリルなど）、アンギオテンシン受容体阻害剤等が挙げられる。

本発明において前記色素成分と上記の抗血栓剤とを組み合せて用いると、再狭窄防止作用が更に増強される。従って、従来の抗血栓剤の投与量を減じることができる。

前記色素成分と公知の抗血栓剤との配合比は、重量比で 1 ： 1 0 0 0〜1 0 0 0 ： 1、特に 1 ： 1 0 0〜1 0 0 ： 1が好ましい。尚、本発明で用いる色素成分と公知の抗血栓剤とは、水溶液中で容易に結合して付力口体を形成するが、斯かる付カロ体として効果を奏しているものと考えられる。

本発明の医薬を使用する場合には、製薬上許容し得る担体と共に注射若しくは経直腸等の非経口投与又は固形若しくは液体形態での経口投与のための製薬組成物として処方することができる。

注射剤は、液剤（無菌水又は非水溶液）、乳剤及び懸濁剤の形態とすることができ、これらに用いられる非水担体、希釈剤、溶媒又はビヒクルとしては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ォリーブ油等の植物油、ォレイン酸ェチル等の注射可能な有機酸エステルが挙げられる。また、該組成物には防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤等の補助剤を適宜配合することができる。また、経口投与製剤としては、例えば錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤等の固形製剤、溶液剤、シロップ剤、エリキシル剤、油性若しくは水性懸濁剤等の液剤を例示できる。

本発明の医薬は、これらの投与形態のうち、注射剤として用いるのが好ましぐ静脈内投与、動脈内投与、グラフト内局所投与、ポーラスバル一ンカテーテルによる加圧局所投与等が更に好ましい。

本発明の医薬の投与量は、投与される成分の性状、投与経路、所望の処置期間及びその他の要因によって左右されるが、一般に色素成分として一日当り約 0 . 1〜； L 0 0 mgZkg、特に約 0 . 5〜5 O mg/kgが好ましい。また、所望によりこの一日量を 2〜4回に分割して投与することもできる。実施例

実施例 1

( 1 ) エバンスブルー注射剤の調製

エバンスブルー（6 , 6， _ 〔（3， 3，一ジメチル〔1 , 1，一ビフエ二ル〕一4 , 4，ージィル）ビス (ァゾ) 〕ビス〔4一アミノー 5—ヒドロキシ一 1 , 3—ナフタレンジスルホン酸〕四ナトリウム塩）結晶を滅菌し、無菌状態で 2、 5、 1 0又は 2 0重量％の濃度になるように注射用蒸留水に溶解し、ガラス又は合成樹脂アンプルに封入し、室温保存した。 (2) ェチジゥムブロマイド注射剤の調製

ェチジゥムブロマイド（2, 7—ジァミノ一 10—ェチルー 9—フエニルフエナントリヂゥムブロマイド）結晶を滅菌し、無菌状態で、 1、 2、 5、 10、 20重量％濃度になるよう注射用蒸留水に溶解し、ガラス又は合成樹脂アンプルに封入し、室温保存した。

実施例 2 ヒト血管平滑筋細胞増殖抑制作用

ヒト冠動脈平滑筋細胞（CASMC- 2； 28.7PDL) 2X 10⁶個を、各種濃度のエバンスブル一又はェチジゥムブ口マイドを加えた MCDB— 104、 10%FBS 及ぴ EGF 10 Ong/mLの混合培地にて培養し、 72時間後の細胞数を数え、対照のそれと比較し、増殖率 (%) を算出した。次いで、ヒト臍帯内皮細胞 (HUVE C, KT-T, 8.3PDL) 2 X 10⁶個を各種濃度のエバンスブルー又はェチジゥムブ口マイドを加えた MCDB— 104, 10%FB S及び EGF 10 Ong/mLの混合培地で培養し、 72時間後の数を数えた。

増殖率は、エバンスブルー又はェチジゥムブ口マイドを加えた群の細胞数を加えなかった群のそれで除して算出した。また、平滑筋細胞の増殖率を内皮細胞のそれで除し、血管平滑筋細胞増殖抑制の相対的選択性を判断した。メチレンブル一、トルイジンブルー、ァクリジンオレンジ、インジゴカルミンについても同様に検討した。結果を表 1に示す。

増殖率 ( )

化合物名（濃度）平滑筋細胞/内皮細胞平滑筋細胞内皮細胞

7 M 88.8±14.8 72.2 + 10.3* 1.25±0.32

： mンスカト 10"¾ 66.6±8.1* 44.4±8.0* 1.50±0.33

10"⁵M 10.3士 2.5** 0.53±0.11*

10, 100.5±17.0 106.8±19.9 0.94±0.18

10— ¾ 98.0±12·8 117.5±20.1 0.83±0.11 メチレンフ Ί

10"⁶M 88.5±15.3 109.1±19.0 0.80±0.13

5.5±0.3** 7.1±0.8** 0.77±0.08

10—⁸M 103.1±14·8 130.7±21.3 0.79±0.16 トリジンカレ 10~⁷M 98.8±13.3 143.1±22.1 0.68±0.10

10"⁶ 80.5±12.5 123.8±19.0 0.65±0.11

15.5±1.2" 20.5±3.1* 0.77±0.16

81.5±10.3 85.2±11.1 0.92±0.25 ァクリジン才レ

,：、 10"⁷M 85.3±7.7 70.3±10.4* 1.31±0.20

10, 50.0±10·(Τ 10.0±0.3** 3.28±0.43*

10"⁸M 62.2±11.1* 77.0±0.3* 0.93±0.18 工チジゥムブ口

10"⁷M 37.0±5.6* 37.0±6.7** 1.26±0.22 マ、イド

10~⁶M 5.6±0.8** 11.1±4.4** 0.50±0.08*

10~⁷M 59.2土 10.3 107.4±16.6 0.82±0.17 インジコカルミ

1CT⁶M 100.0±7.0 177.0±32.1* 0.57±0.18* ン

10~⁵M 101.8±7.0 180.5±36.0* 0.55±0.11* インジコカル各 10一 ¾ 59.2±10·3 107.4±16.6 0.55±0.08*

5ン + Aンス各 1(Γ⁶Μ 37.0±9.6* 96.2±14.1 0.34±0.07* ブ Jト各 10一 ¾ 4.8±1.4** 77.7±11.1 0.06±0.01**

* ： Ρく 0.05； **:Ρく 0.01

表 1より、エバンスブル一、ェチジゥムブロマイド、メチレンブル一、トルイジンブル一、ァクリジンオレンジに平滑筋細胞増殖抑制作用が見られ、特にェチジゥムブロマイドでは極めて強い（10— ⁸モル濃度）増殖抑制作用が見られた。また、平滑筋細胞増殖抑制作用は血管内皮細胞に対するそれよりも強かった。一方、インジゴカルミンには、平滑筋細胞増殖抑制作用は見られなかったが、内皮細胞増殖促進作用が見られた。また、インジゴカルミンとエバンスブルー混合液では内皮細胞増殖は影響を受けず平滑筋の増殖のみ選択的に抑制された。実施例 3 細胞周期停止作用

ヒト大動脈平滑筋細胞の細胞周期に対するエバンスブル一及びェチジゥムブ口マイドの作用を検討した。

(方法）

1. ヒト大動脈平滑筋細胞 1 X 10⁶個を 35腿の大きさの CS— C無血清培地で 24時間培養する。

2. 24時間後、培地を以下のものに交換する。

ィ）コントロール群：。3_じ無血清培地+10% 83

口）〇3—〇無血清培地+10%?53 + 0. 05%エバンスブルーハ）じ3—〇無血清培地+10%?83 + 0. 005%ェチジゥムブ口マイドヽ

3. 24時間後細胞を P B Sで洗浄し、トリプシンで細胞分離、遠沈（ 100 0 r pm、 5分）し、細胞ペレットを作成する。

4. ペレットを PBSに浮遊、 100%エタノールで固定し、洗浄する。

5. RNa s e (最終濃度 0. 5%) を加える。

6. プロピジゥムブロマイド（最終濃度 25— 50 g/mL) を加える。

7. 蛍光サイトメトリーにより測定する。

(結果）

図 1にコントロールとエバンスブルー群の蛍光サイトメトリ一のチヤ一トを示す。エバンスブルー群では、

S, G₂ZM相がほとんど見られない。

定量的には、表 2に示すように、エバンスブル一及びェチジゥムブロマイドとも、 GcZGiが増加し、ほぼ 100 %となっている。これは、 DNA合成期 (S期）以前、すなわち G。かで細胞周期が停止することを示している。表 2

:Pく 0.001

実施例 4 短期ステント部再狭窄防止効果

ネンブタール麻酔ビーグル犬を用い、人工呼吸下、レントゲン透視下で右総類動脈を介し、誘導カテーテルを左冠動脈に挿入した。次いで、径 3匪の PTCA 用カテーテルを挿入し、 9気圧で拡張せしめた。次いで、径 2. 5mmの PTCA 用ステントを挿入し、 9気圧で拡張せしめ留置した。

1) 7頭では、そのまま 1ヶ月間飼育し、 1ヶ月目に冠動脈を摘出した。

2) 6頭では、バルーンに多数の微小孔の開いたいわゆるポーラスバルーンを拡張直後に挿入し、それを介し、エバンスブルー（10%溶液 0.5mL) を 3気圧で局所投与した。 1ヶ月目に冠動脈を摘出した。

3) 6頭では、ェチジゥムブロマイド（10%溶液 0.5mL) を同様にして投与し、 1ヶ月目に冠動脈を摘出した。

4) 6頭では、ェチジゥムブロマイド（10%溶液 0.5mL) 投与に続いて、エバンスブルー（10%溶液 0.5mL) を局所投与した。同様にして、 1ヶ月後に冠動脈を摘出した。

(狭窄率の比較）

冠動脈を 3腿間隔で輪切りにし、ァザン染色したのち、顕微鏡写真を撮り、中膜で囲まれた面積（A) と線維性増殖をした内膜の面積（B) をブラ二メーターで計測し、それぞれの（B/A) X I 00を求め、その最大値をもって、狭窄率（％) とした。結果を図 2及び表 3に示す。表 3

n： pく 0. 01

これより、エバンスブル一群及びェチジゥムブ口マイド群では有意な再狭窄率の減少が見られ、エバンスブル一とェチジゥムブロマイド併用群では、更に再狭窄率が減少する傾向が見られた。

実施例 5 短期 P C T A部再狭窄防止効果

ネンブ夕一ル麻酔ビーグル犬を用い、人工呼吸下、レントゲン透視下で右総穎動脈を介し、誘導カテーテルを左冠動脈に挿入した。次いで、径 3麵の P T C A 用カテーテルを挿入し、 9気圧で拡張せしめた。

1 ) 7頭では、そのまま 1ヶ月間飼育し、 1ヶ月目に冠動脈を摘出した。

2 ) 7頭では、ポーラスバルーンを拡張直後に挿入し、それを介し、エバンスブルー（10%溶液 0. 5mL) を 3気圧で局所投与した。 1ヶ月目に冠動脈を摘出した。

3 ) 7頭では、ェチジゥムブロマイド（10 %溶液 0. 5mL) を同様にして投与し、 1ヶ月目に冠動脈を摘出した。

実施例 3と同様にして、狭窄率（％) を計測した。エバンスブル一投与群の実例を図 3に、再狭窄率を表 4に示す。

表 4に示す如く、 P T C Aのみの群でも再狭窄の防止効果がみられた。表 4

* ： ρく 0.05； η： ρ<0.01

実施例 6 長期再狭窄防止効果

ネンブタール麻酔ビーグル犬を用い、人工呼吸下及びレントゲン透視下で、右総頸動脈を介し、誘導カテーテルを左冠動脈に挿入した。ついで、 3匪 PTCA 用パル一ンカテーテルを左前下降枝に挿入し、 9気圧で拡張せしめた。ついで、回旋枝にバルーンを挿入し、同様に拡張せしめ、 2. 5腿のステントを揷入し、 9気圧で拡張せしめた。

1) 対照群 7頭では、そのまま 3ヶ月間飼育し、 3ヶ月目に冠動脈を摘出した。

2) エバンスブルー直後のみ局所投与群。 6頭。前下降枝及び回旋枝処置部にバル一ンに微小穴がある、ポラスバルーンを挿入し、 2〜 3気圧で 10%エバンスブルー 0. 5mLを壁に注入し、 3ヶ月後、冠動脈を摘出した。

3) エバンスブルー直後及び 2週間後局所投与群。 7頭。長期再狭窄防止を期待し、直後及び 2週間後に同様にエバンスブルーを局所投与し、 3ヶ月後、冠動脈を摘出した。

4) エバンスブルー直後静注群。 6頭。直後にエバンスブル一 20% 1 OmL静注し、 3ヶ月後、冠動脈を摘出した。

(狭窄度の比較）

同様にして摘出した冠動脈を 3腿間隔で輪切りにし、ァザン染色を行つた。中膜より内部にある線維化組織の面積（A) と中膜が囲む面積（B) をブラ二メーターで測定した。 A/BX 1 00を算出し、各々の冠動脈における最大値を再狭窄率とし、群間比較した。結果を表 5に示す。

これより、表 5に示すごとくエバンスブル一局所投与、静脈投与のいずれでも有意に狭窄を抑制した。ステント揷入による狭窄においても、同様に抑制した。すなわち、 3ヶ月という比較的長期に渡って再狭窄を防止できることが明らかとなった。

表 5

実施例 7 再狭窄防止効果の臨床的検討

狭心症又は急性心筋梗塞で、冠動脈形成術が必要であった症例を対照とした。

1) PTCA対照群。 30例。通常の PTCAを行い、 6ヶ月後、冠動脈造影を行い、治療部位の変化を検討した。

2) PTCAエバンスブル一群。 10例 PTCA直後、拡張部位に 5%エバンスブルー ImLをポーラスバルーンを用いて注入し、 4週間目に、再度同量を注入し、 6ヶ月後、冠動脈造影を行った。

3) ステント対照群。 20例。通常のステント留置術を行い、 6ヶ月後、冠動脈造影を行った。

4) ステント、エバンスブルー群。 12例。ステント留置術直後及び 4週間目に同量のエバンスブルーを局所投与し、 6ヶ月後、冠動脈造影を行った。結果を図 4及び図 5に示す。

図 4及び 5に示すように、 PTCA、ステント留置術群とも、エバンスブルー投与群で再狭窄は全例で防止された。エバンスブルーには臨床的にも、強い再狭窄防止作用があることが判明した。

実施例 8 エバンスブルーとバトロキソビン付加体の証明と注射剤の作製法セフアデックス G— 15 (フアルマシア製）をカラム（3cmx65cm) に充填し、蒸留水を一昼夜流した後、エバンスブルー（0. 1重量％溶液）とバトロキソビン（20BU単位 ZmL) とを 1 ： 1で混合し、フラクションコレクタ一で 3 mLずつ分画し、各フラクションについて、波長 28 Onm及び 62 Onmにおける吸光度を測定した。次いで、牛フイブリノ一ゲン溶液を反応器に入れ、 37°Cで保温した後各フラクションを入れ、凝固時間を測定した。その結果、図 6に示したごとく、エバンスブル一とは異なる吸光を有する物質が見出され、それにも、バトロキソビンと同様の凝固抑制作用、すなわちフィプリン産生抑制作用が見出された。この物質は付加体と判断された。

そこで、フラクション 210〜24 OmLを凍結乾燥せしめ、 lmg/mL (水溶液）のアンプルに入れ冷所保存し、使用した。

斯かる付加体は、エバンスブル一溶液とバトロキソビン溶液（いずれもアンプル入り）を注射当に入れ混合すると直ちに形成されるので、両者を用時混合して用いればよい。

実施例 9 エバンスブルー ·バトロキソビン付加体（併用投与）の再狭窄防止効果の基礎的検討

ネンブタール麻酔ビーグル犬を用い、人工呼吸及びレントゲン透視下で、右総頸動脈を介し、誘導カテーテルを左冠動脈に挿入した。次いで 3mmPTCA用バルーンカテーテルを左前下降枝に挿入し、 9気圧で拡張せしめた。 19頭では P TCA群とし、他の 19頭ではステントを挿入し、ステント群とした。 P T C A群及びステント群それぞれについて下記のごとくグループ分けし検討した。すなわち、

1 ) 対照群 7頭では、そのまま 3ヶ月間飼育し、 3ヶ月目に冠動脈を摘出した。

2 ) 付加体直後及び 2週間後局所投与群。 6頭。付加体 1アンプルを直後及び 2週間後局所投与し、 3ヶ月後、冠動脈を摘出した。

3 ) 付加体直後及び 2週間後静注群 6頭。付加体 3アンプルを、直後及び 2週間後静注し、 3ヶ月後冠動脈を摘出した。

(狭窄度の比較）

摘出した冠動脈を 3丽間隔で輪切りにし、ァザン染色を行った。

中膜平滑より内部にある線維化組織の面積（A) と中膜が囲む面積（B) をプラニメーターで測定し、 AZ B X 1 0 0を算出し、各々の冠動脈における最大値を再狭窄率とみなし、群間比較した。結果を表 6に示す。

表 6

*Ρ<0. 05 ; **Ρ<0. 01 ( aと bの比較) ； #P<0. 05 ( bと cの比較)

局所投与、静脈投与の'いずれでも有意に狭窄を抑制した。ステント挿入による狭窄においても、同様に抑制した。以上、エバンスブルーとバトロキソビン付カロ体の局所投与と静脈内投与のいずれにも、強い冠動脈の再狭窄防止効果があることを確認した。明らかな副作用は見られなかつた。産業上の利用可能性

本発明の血管平滑筋増殖抑制剤及び血管再狭窄防止剤は、血管平滑筋細胞の増殖抑制を図りつつ内皮細胞を早期に再生する効果を有するものであり、冠動脈、脳動脈、末梢動脈等における血管形成術後又はバイパス術後の血管再狭窄等の血管平滑筋増殖に起因する疾患の予防 ·治療のための医薬として有用である。

Claims

請求の範囲

1 . スルホン酸系ァゾ色素、フタレイン系色素、トリフエニルメタン系色素、フエナントリジニゥム系色素、ァクリジン系色素、キサンテン系色素、フエノチアジン系色素及びシァニン系色素から選ばれる 1種又は 2種以上の生体適合性色素を含有する血管平滑筋増殖抑制剤。

2 . スルホン酸系ァゾ色素、フタレイン系色素、トリフエニルメタン系色素、フエナントリジニゥム系色素、ァクリジン系色素、キサンテン系色素、フエノチアジン系色素及びシァニン系色素から選ばれる 1種又は 2種以上の生体適合性色素を含有する血管再狭窄防止剤。

3 . スルホン酸系ァゾ色素、フタレイン系色素、トリフエニルメタン系色素、フエナントリジニゥム系色素、ァクリジン系色素、キサンテン系色素、フエノチアジン系色素及びシァニン系色素から選ばれる 1種又は 2種以上の生体適合性色素並びにィンジゴカルミンを含有する血管再狭窄防止剤。

4 . 生体適合性色素が、ナフタレンスルホン酸系ァゾ色素、フエナントリジニゥム系色素、ァクリジン系色素又はフヱノチアジン系色素である請求項 1記載の血管平滑筋増殖抑制剤又は請求項 2若しくは 3記載の血管再狭窄防止剤。

5 . 生体適合性色素が、エバンスブルー、トリパンブルー、ェチジゥムブロマイド、ァクリジンオレンジ、メチレンブルー又はトルイジンブルーである請求項 1記載の血管平滑筋増殖抑制剤又は請求項 2若しくは 3記載の血管再狭窄防止剤。

6 . 血管平滑筋増殖抑制剤又は血管再狭窄防止剤製造のためのスルホン酸系ァゾ色素、フタレイン系色素、トリフエニルメタン系色素、フエナントリジニゥム系色素、ァクリジン系色素、キサンテン系色素、フエノチアジン系色素及びシァニン系色素から選ばれる 1種又は 2種以上の生体適合性色素の使用。

7 . スルホン酸系ァゾ色素、フタレイン系色素、トリフエニルメタン系色素、フエナントリジニゥム系色素、ァクリジン系色素、キサンテン系色素、フエノチアジン系色素及びシァニン系色素から選ばれる 1種又は 2種以上の生体適合性色素を投与することを特徴とする血管平滑筋増殖に起因する疾患の処置方法又は血管再狭窄防止のための処置方法。