WO1999006065A1 - Preparation aqueuse de lactoferrine a stabilite amelioree - Google Patents

Description

明細書 安定性を向上させたラ ク ト フ エ リ ンの水性製剤 技術分野

本発明は、 水溶液中でのラ ク ト フ リ ンの安定性を向上さ せたラ ク ト フ ヱ リ ンの水性製剤、 および、 水溶液中でのラ ク ト フ 二 リ ンの安定化方法に関する。 背景技術

ラ ク ト フ エ リ ンは、 ヒ トゃ牛などの乳や涙液に含まれてい る タ ンパク質であ り、 抗菌作用や リ ンパ球の増殖作用などの 薬理作用を有する こ とが知られている （特開平 2 — 4 8 5 3 4号公報） 。 また、 優れた角膜実質細胞増殖促進作用を有し 角膜障害治療剤と して有用である こ と （W O 9 2 Z 0 8 4 7 7号公報） 、 創接着強度の強化作用を有し術後乱視予防剤と して有用である こ と （特開平 8 — 3 0 1 7 8 5号公報） およ びムチ ンを含んだ夕 ンパク質の産生に対し優れた促進作用を 有しムチ ン産生促進剤と して有用である こ と （特開平 9 一 1 2 4 7 3号公報） がそれぞれ報告されている。

また、 ラ ク ト フ ヱ リ ンの様なタ ンパク性生理活性物質は、 製造技術等の進歩によ り量産が可能とな り、 医薬と して利用 する こ とが盛んに研究されるよ う になっ た物質である。 しか しながら、 一般的にタ ンパク性生理活性物質は、 通常 の低分子合成化合物と比較する と不安定であり、 水中の溶解 性も悪く 、 水性製剤への応用が非常に困難な物質である。

特に、 安定性においては、 化学的要因による分解、 脱ア ミ ド化、 二量体化、 酸化等や物理的要因による相転移、 非共有 結合的凝集、 吸着等の問題点があり、 水性製剤における安定 性を保持する こ とは難しいとされている。 ラク トフヱ リ ンの 場合においても、 これを水溶液と して長期保存したとき、 分 解や凝集等により ラク トフュ リ ンの含有量が著し く 低下する という問題点がある。 このよ う に医薬と して有用なラク ト フ X リ ンを水溶液中で安定化させ、 長期間保存可能な水性製剤 を開発するこ とは非常に意義のあるこ とである。 発明の開示

本発明者等は、 長期間保存可能なラ ク ト フ二 リ ンの水性製 剤を開発するため、 種々の添加剤の配合について検討した結 果、 添加剤と して多価の無機酸も し く は有機酸またはそれら の塩を配合する こ とで水溶液中でのラ ク ト フ エ リ ンの安定性 が向上するこ とを見いだし、 本発明を完成するに至った。

すなわち、 本発明は、 多価の無機酸も し く は有機酸または それらの塩を含有するこ とを特徴とする、 安定性を向上させ たラク トフエ リ ンの水性製剤に関するものである。 本発明は、 また、 ラク ト フヱ リ ンの水溶液に 0 . 0 0 5 %以上 （w Z v ) の多価の無機酸も し く は有機酸またはそれらの塩を添加する こ とによるラク トフヱ リ ンの安定化方法に関するものである。 より具体的にいえば、 本発明による水性製剤は、 0 . 0 0 5 %以上 （w Z v ) の多価の無機酸も し く は有機酸またはそ れらの塩を含有するこ とを特徴とする ものである。

本発明における多価の無機酸とは、 二価以上の多価ァニォ ンを生成可能な無機酸、 すなわち多塩基酸を示す。 このよ う な無機酸の例と しては、 リ ン酸、 硫酸等が挙げられ、 その塩 と しては、 ナ ト リ ウム塩、 カ リ ウム塩等のアルカ リ金属塩、 カルシウム塩等のアルカ リ土類金属塩、 アンモニゥム塩等が 挙げられる。 好ま しい例と して、 リ ン酸や硫酸のナ ト リ ウム 塩が挙げられ、 特に好ま しい例と して、 リ ン酸ナ ト リ ウム、 リ ン酸一水素ナ ト リ ウムま たは リ ン酸ニ水素ナ ト リ ゥムが挙 げられる。 多価の無機酸は単独で用いてもよい し、 2以上の 組合せで用いてもよい。

本発明における多価の有機酸とは、 二価以上の多価ァニォ ンを生成可能な有機酸を示す。 有機酸の例と しては、 クェン 酸、 マ レイ ン酸、 フマル酸、 酒石酸、 コ ヽク酸、 エチ レ ンジ ア ミ ン四酢酸、 コ ン ドロイ チ ン硫酸等が挙げられ、 その塩と しては、 ナ ト リ ウム塩、 カ リ ウム塩等のアルカ リ金属塩、 力 ルシゥム塩等のアルカ リ土類金属塩、 ア ンモニゥム塩等が挙 げられる。 好ま しい例と して、 クェン酸やマ レイ ン酸のナ ト リ ウム塩が挙げられ、 特に好ま しい例と して、 クェン酸ナ ト リ ウム、 クェン酸一水素ナ ト リ ウム、 クェン酸二水素ナ ト リ ゥム、 マ レイ ン酸ナ ト リ ゥムまたはマ レイ ン酸一水素ナ ト リ ゥムが挙げられる。

多価の有機酸も単独で用いてもよい し、 2以上の組合せで 用いてもよ く 、 また上記多価の無機酸との組合せで用いても よい。

本発明の効果は、 後述の安定性試験で詳細に説明するが、 0 . 0 0 5 %以上 （w Z v ) の多価の無機酸も し く は有機酸 またはそれらの塩を配合する こ とによ り、 ラ ク ト フ エ リ ンの 水溶液中での安定性が顕著に向上した。 上記酸またはその塩 の配合量を増加させるに連れラ ク ト フ ェ リ ンの安定性も向上 するので、 配合量の上限は特に規定する必要はな く 、 上記酸 またはその塩は通常水性製剤と して許容される範囲まで配合 する こ とができ る。 無機酸も し く は有機酸またはそれらの塩 は水性製剤の浸透圧に影響を与える。 浸透圧があま り高く な りすぎる水性製剤は医薬と して好ま し く ない。 例えば、 点眼 剤の場合には、 浸透圧が高く なる と点眼時の刺激性が強く な るので、 通常許容される浸透圧比の上限は 2程度である。 配 合する無機酸も し く は有機酸またはそれらの塩の種類により、 それらの配合量が異なって く るので、 一概に配合濃度の上限 を規定するのは困難であるが、 例えば、 リ ン酸二水素ナ ト リ ゥム · 二水和物の場合 9. 0 % (wZ v ) 程度である。

本発明における無機酸も し く は有機酸またはそれらの塩の 配合量は、 安定化効果および浸透圧比の適正範囲を総合的に 勘案する と、 点眼剤の場合には、 好ま しい範囲は 0. 0 1〜 3. 0 % (w/ v ) で、 特に好ま しい範囲は 0. 1〜 1. 0

% ( W / V ) である。

本発明における ラ ク ト フ エ リ ンの配合量は、 用途によ り適 宜選択でき るが、 例えば、 点眼剤であれば 0. 0 1〜 3. 0 % (w/ v ) 、 好ま し く は 0. 1〜 1. 0 % (wZ v ) であ o

本発明における水性製剤は、 医薬品、 食品、 化粧品等のラ ィ フサイエンス分野で広範囲に使用する こ とができ、 特に医 薬品と して使用する場合、 剤形と して注射剤、 点眼剤、 点鼻 剤等が挙げられ、 これらは汎用されている技術を用いて製剤 化する こ とができ る。 例えば、 点眼剤は、 通常点眼剤に用い られる諸成分、 例えば、 塩化ナ ト リ ウム、 濃グ リ セ リ ン等の 等張化剤、 酢酸ナ ト リ ゥム等の緩衝化剤、 ポ リ オキシェチ レ ンソルビ夕 ンモノォ レ一 ト、 ステア リ ン酸ポリオキシル 4 0、 ポ リ オキシエチ レン硬化ヒマシ油等の非ィォン性界面活性剤、 塩化ベンザルコニゥム、 パラベン等の防腐剤などを用いて製 剤化する こ とができ、 p Hは眼科製剤に許容される範囲内に あればよいが、 4〜 8 の範囲が好ま しい。 図面の簡単な説明

図 1 は、 マ レイ ン酸ニナ ト リ ウムの各濃度によるラ ク ト フ エ リ ンの安定化効果を示す、 保存期間と ラ ク ト フ リ ン残存 率の関係のグラ フである。

図 2 は、 リ ン酸ニ水素ナ ト リ ゥム · 二水和物による ラ ク ト フ リ ンの安定化効果を示す、 保存期間とラ ク ト フェ リ ン残 存率の関係のグラ フである。

図 3 は、 クェン酸二水素ナ ト リ ウムによるラ ク ト フ ヱ リ ン の安定化効果を示す、 保存期間と ラ ク ト フ - リ ン残存率の関 係のグラ フである。 発明を実施するための最良の形態

以下に、 本発明の安定性試験の結果を示す実施例を挙げる が、 これらの例は本発明をよ り よ く 理解するためのものであ り、 本発明の範囲を限定する ものではない。

[製剤例]

1 ) 点眼剤

処方例 a

ラ ク 卜 フ リ ン 0 3 % w V ) 塩化ナ ト リ ウム 0 9 % (, w v ) マ レイ ン酸ニナ ト リ ウム 0 0 0 5 % ( w V ) 塩化ベンザルコニゥム 0 0 0 5 % ( w V ) 水酸化ナ ト リ ウム

塩酸

滅菌精製水 処方例 b

ラ ク ト フ エ リ ン 0. 3 % w Z Vゾ 塩化ナ ト リ ウ ム 0. 9 % 7 / V ) リ ン酸ニ水素ナ ト リ ウム 水和物

0. 0 8 % (wZ V ) 塩化ベ ンザルコニゥ ム 0. 0 0 5 % (wZ V ) 水酸化ナ ト リ ウム

塩酸

滅菌精製水

P H 6

2 ) 注射剤

処方例 c

ラ ク 卜 フ ェ リ ン 0. 3 % w Z Vリ 塩化ナ ト リ ウ ム 0. 5 8 % (, W / V； リ ン酸ニ水素ナ ト リ ゥム · 二水和物

1 . 5 6 % ( w / V ) 水酸化ナ ト リ ウム

塩酸

滅菌精製水

P H 上記処方例 a〜 c の多価の無機酸も し く は有機酸またはそ れらの塩、 ラ ク ト フ ヱ リ ンおよびその他の添加物の量を適宜 変える こ とによ り、 多価の無機酸または有機酸も し く はそれ らの塩の濃度が、 ◦ . 0 0 5 %、 0. 0 1 %、 0. 0 3 %、

6 0. 0 5 %、 0. 1 %, 0. 3 %、 0. 5 %、 1. 0 %、 1.

5 %、 2. 0 %、 3. 0 % (wZ v ) で、 ラ ク ト フヱ リ ンの 濃度が、 0. 0 1 %、 0. 0 3 %、 0. 0 5 %. 0. 1 %、 0. 3 %、 0. 5 %、 1. 0 %、 1. 5 %、 2. 0 %、 3.

0 % ( w / V ) である点眼剤または注射剤を調製でき る。

[サンプルの調製]

表 1 に示す 7種の水溶液 （水酸化ナ ト リ ウムまたは塩酸で p Hを 7 とする） を安定性試験用サンプルと した。

表 1 配合成分 3 ン 卜

参考処方 1 参考処方 2 処方 1 処方 2 処方 3 処方 4

(wZ V) ロ ー ル

ラク卜フニリ ン 0. 3% 0. 3% 0. 3% 0. 3% 0. 3% 0. 3% 0. 3%

00

マレイン酸ニナトリウム 0 0. 0001% 0. 001% 0. 005% 0. 01%

リ ン酸ニ水素ナトリウム 0. 08% クェン酸ニ水素ナトリウム 0. 02% 滅菌精製水 適 量 適 量 適 量 適 量 適 量 適 量 適 量

[実験方法および結果]

上記の各サンプルを 5 0 °Cでィ ンキュベー ト し、 経時的に

サンプ リ ングを行い、 ラ ク ト フ ヱ リ ン （以下、 L F と略記す

る） を H P L Cで測定した。 式 1 に従い L Fの残存率を算出

5 した。 結果を図 1〜 3 に示す。

L F残存率 (%) =保存後の L F含量 Z調製直後の L F含量 X 100

[実験評価の基準および考察]

図 1 に示すよ う に、 多価の有機酸またはそれらの塩の一例

10 と して、 マ レイ ン酸ニナ ト リ ウムを用い、 その各濃度による

ラ ク ト フ ヱ リ ンの安定化効果について検討を行ったと こ ろ、

濃度の増大に伴いラ ク ト フ リ ンの安定化効果が増大する こ

とが明 らかとなっ た。 マ レイ ン酸ニナ ト リ ウムの濃度 0. 0

0 5 %未満の製剤 （参考処方 1、 2 ) では、 2 0 日保存時の

15 ラ ク ト フ リ ンの残存率が約 6 0 %でしかな く 、 目的とする

安定な水性製剤は得られなかっ た。 これに対し、 本発明処方

すなわちマ レイ ン酸ニナ ト リ ウムの濃度 0. 0 0 5 %以上の

製剤 （処方 1、 2 ) においては、 これらを 2 0 日保存しても

ラ ク ト フ エ リ ンの残存率は 9 5 %以上とな り、 非常に高い安

20 定化効果が得られる こ とが認め られた。 また、 多価の無機酸

の塩である リ ン酸ニ水素ナ ト リ ゥム · 二水和物を配合した処

でのラク トフヱ リ ンの安定性を向上させるこ とができる。 本 発明の安定性を向上したラ ク ト フエ リ ンの水性製剤は、 医薬

□ 食品、 化粧品等のラ イ フサイ エ ンス分野で広範囲に使用 する こ とができ、 特に、 長期間安定な注射剤、 点眼剤、 点鼻 剤等の医薬用途の水性製剤の提供を可能とする ものである。 産業上の利用可能性

本発明は、 水溶液中でのラク ト フ リ ンの安定性を向上さ せたラク ト フ 二 リ ンの水性製剤、 および、 水溶液中でのラク ト フ エ リ ンの安定化方法に関する。

0

Claims

請求の範囲

1. 多価の無機酸も しく は有機酸またはそれらの塩 を含有するこ とを特徵とする、 安定性を向上させたラク トフ ェ リ ンの水性製剤。

2. 多価の無機酸も し く は有機酸またはそれらの塩 の濃度が 0. 0 0 5 %以上 （wZ v ) である請求項 1記載の 水性製剤。

3. 無機酸が、 リ ン酸または硫酸である請求項 1 ま たは 2記載の水性製剤。

4. 有機酸が、 ク ェ ン酸、 マ レイ ン酸、 フマル酸、 酒石酸、 コハ ク酸、 エチ レ ン ジァ ミ ン四酢酸ま たはコ ン ドロ ィチ ン硫酸である請求項 1 または 2記載の水性製剤。

5. ラク ト フヱ リ ンの濃度が、 0. 0 1 ~ 3. 0 % ( w/ V ) である請求項 1記載の水性製剤。

6. ラ ク ト フ ユ リ ン の水溶液に 0. 0 0 5 %以上 (wZ v ) の多価の無機酸も し く は有機酸またはそれらの塩 を添加するこ とによるラク ト フヱ リ ンの安定化方法。