WO1999053947A1

WO1999053947A1 - PROMOTEURS DE LA MIGRATION DE Th2 CONTENANT DES EMULSIONS EAU-DANS-HUILE

Info

Publication number: WO1999053947A1
Application number: PCT/JP1999/002008
Authority: WO
Inventors: Kazuyoshi Masuda; Kazutoshi Horie; Ryuji Suzuki
Original assignee: Shionogi & Co., Ltd.
Priority date: 1998-04-20
Filing date: 1999-04-15
Publication date: 1999-10-28
Also published as: JP4375773B2; AU3344299A

Description

明細書

WZ Oェマルジョンを含有する T h 2移行促進剤技術分野

本発明は、生体内の免疫反応に関与しているヘルパー T細胞（Th) のサブセットである Th l型（以下、 Th l という）と Th2型（以下、 Th2 という）のバランスにおいて、 Th l から Th2 への移行を促進させる製剤に関する。本製剤は、例えば自己免疫疾患、各種アレルギー疾患、又は臓器移植時の拒絶反応等に対する予防又は治療剤として有用である。背景技術

自己免疫疾患（例：臓器特異的自己免疫疾患等）、アレルギー疾患あるいは臓器移植拒絶反応等は、内在または外来抗原に対する過剰免疫反応であり、これらの疾患は自己あるいは非自己に対する免疫学的無反応性が破綻する現象として説明できる。これらの疾患に対する治療としては、薬物療法（免疫抑制剤、コルチコステロイド、抗アレルギー剤、抗ヒスタミン剤など）が主に行われている。しかしながら、免疫抑制剤等は非特異的な免疫抑制を引き起こすので、感染症の併発、悪性腫瘍の発現等の重篤な副作用を伴う。また抗アレルギー剤等は単に対症療法的に使用されているのが現状である。他方、減感作療法などの特異的な免疫療法も試みられているが作用機序に関して不明な部分が多く、いまだ確立された治療方法とは言い難い。

このような状況下、最近、経口免疫寛容（経口トレランス）を自己免疫病等の治療に応用する試みが注目されている。例えば、バイスタンダ一抗原と称し TGF - βなどの抑制性サイトカインを分泌する調節性細胞の増殖を誘導する物質を経口投与することにより誘導される経口免疫寛容を利用して上記疾患を治療する方法が報告されている（W093/ 1 6724、 WO96/40232 , 特表平 8- 504745等）。しかしこれらの方法では、経口投与される抗原に対して DDS製剤的な工夫はあまりなされておらず、基本的には抗原タンパク質の水溶液又は分散液を単に投与するのみである。従って、調製されるタンパク質製剤はきわめて不安定であるため投与効率が悪く、また安定した免疫寛容の効果が再現されにくいと予想される。また経口免疫寛容の誘導効率を高めるために、サイト力イン類、コレラトキシン B鎖あるいはリポ多糖体を併用する試みがなされているが、いずれも実用性の乏しいものである。

一方、ヘルパー T細胞（Th)のサブセットである Thl と Th2のバランス（TMZTh2 バランス）と各種疾患との関係も研究されおり、 Thl 優位の免疫反応に基づくと考えられている自己免疫疾患等の治療方法の一つとして、 Thl 優位の免疫応答から Th2 優位の免疫応答への変換が考えられている（日本臨牀 5 5巻 6号（6， 1997) ；医学のあゆみ Vol.182 No.9 (1997), P523等）。しかしこれまで Thlから Th2 への移行を促進して Th2偏向の状態に効率よく到らしめる試みはあまりなされていない。例えば、 WO93/00160 や ANNALS OF THE NEW YORK ACADEMY OF SCIENCES Vol. 778 (1996)等には、抗原タンパク質を W/0型ェマルジヨン又は W/O/W型の多相ェマルジヨンにして、経口免疫寛容を誘導する方法が記載されているが、実験的には totalの抗体価の変化を調べているだけである。 INFECT. AGENTS DIS. (USA), 2/2 (55-73) (1993)には、マイクロスフェアーで経口免疫化した際に Th2型優位になった旨記載されているが、ェマルジョンによる投与時および経口免疫寛容時の ThlZTh2バランスについては何ら検討されていない。 Proc. So Exp. Biol. Med. 133, 423-427 (1970) ； Enteral. Nutr. 14, 459-462 (1990) ； Clin. Immunol. Immunopat . 25, 196-202 (1982) ； Ausl. N. Z. J. Surg. 57, 323— 329 (1987)等には、非経口投与された W/0ェマルジョンが免疫系を抑制する方向に機能する旨記載されている。しかしこれらのェマルジヨンには抗原が含まれておらず、また経口投与した際の ThlZTh2バランスの変化については何ら考察されていない。このように免疫応答反応における Thlノ Th2バランスを調節し、特に Th2への移行を促進して好ましくは Th2偏向の状態に到らしめることにより、 Thl/Th2バランスが関係すると考えられる各種疾患を効率よく予防又は治療する方法は、未だ十分には検討されていなかった。発明の開示

本発明者らは鋭意検討した結果、各種抗原を油中水型ェマルジヨン（W/0 エマルジョン）に内包させて投与すれば、ヘルパー T細胞の ThlZTh2バランスが Th2 へ移行されやすくなることを見出し、以下に示す本発明を完成した。

( 1 ) 抗原を含有する W/0ェマルジヨンを含むことを特徴とする、ヘルパー T細胞の Th2への移行促進剤。

( 2 ) 抗原がタンパク質またはペプチドである、上記（ 1 ) 記載の促進剤。

( 3 ) 経粘膜投与によって免疫寛容を誘導する、上記（ 1 ) 又は（ 2) 記載の促進剤。

(4)ヘルパー T細胞の TMZTh2のバランスが関係する疾患の予防又は治療剤である、上記（ 1 ) ないし（ 3 ) のいずれかに記載の促進剤。

( 5 ) 疾患が Thl主体の免疫反応に起因する疾患、アレルギー疾患または臓器移植時の拒絶反応である、上記（4) 記載の促進剤。

( 6 ) Thl 主体の免疫反応に起因する疾患が自己免疫疾患である、上記（ 5 ) 記載の促進剤。

( 7 ) マウス経口投与時の "IgGl/IgG2a" で示される抗体価比率の値が、対照の抗原含有生理食塩水を投与した場合に比べて約 2倍以上である、上記（ 1 ) ないし（6 ) のいずれかに記載の促進剤。

( 8 ) 抗原を W/0ェマルジヨンに含有させて経口投与することを特徴とする、へルパ一 T細胞の Th2への移行を促進する方法。

( 9 ) 請求項 1〜 7のいずれかに記載の促進剤を投与することを特徴とする、へルパー T細胞の Th2への移行を促進する方法。

( 1 0 ) ヘルパー T細胞の Th2への移行を促進するために、抗原の投与剤形として W/0ェマルジヨンを使用する方法。

( 1 1 )ヘルパー T細胞の ThlZTh2のバランスが関係する疾患の予防又は治療剤を製造するために、抗原を含有する W/0ェマルジョンを使用する方法。図面の簡単な説明 (図 1 )

卵白アルブミン（OVA) 含有 W/0ェマルジョンをマウスに 5 日間連日経口投与後、 OVAで皮下免疫してから 21 日目に採取したの血清の OVAに対するトータル Ig抗体価を示すグラフである（実施例 1参照）。

(図 2 )

卵白アルブミン（OVA)含有 W/0ェマルジヨンをマウスに 5 日間連日経口投与後、 OVA で皮下免疫してから 21 日目に採取した血清の OVA に対する抗体価比率 (IgGl/IgG2a) を示すグラフである（実施例 1参照）。

(図 3 )

II型コラーゲン（CII)含有 W/0ェマルジヨンをマウスに 5日間連日経口投与後、 CII で皮下免疫してから 21 日目に採取した血清の CII に対する抗体価比率 (IgGl/IgG2a) を示すグラフである（実施例 2参照）。

(図 4 )

卵白アルブミン（OVA)含有 W/0マイクロエマルジヨンをマウスに 5日間連日経口投与後、 OVAで皮下免疫してから 21 日目に採取した血清の OVAに対する抗体価比率（IgGl/IgG2a) を示すグラフである（実施例 3参照）。

(図 5)

サイトケラチン（CK) 含有 W/0ェマルジヨン（0.01 mg/m₀ use/day) をマウスに対して 5 日間の連続経口投与を 3週間間隔で計 1回行った場合の皮膚炎スコア（5 〜6例の平均値）の推移を示すグラフである（実施例 4参照）。

(図 6)

サイトケラチン（CK) 含有 W/0ェマルジヨン（0.01 ing/raouse/day) をマウスに対して 5 日間の連続経口投与を 3週間間隔で計 2回行った場合の搔痒感（観察 5 分間における搔爬行動の積算秒数： 5〜6例の平均値）の推移を示すグラフである (実施例 4参照）。発明を実施するための最良の形態

本発明に用いる W/0ェマルジヨンとしては種々のものが使用でき、マイクロエマルジヨンであってもよい。そのサイズは通常、約 0 . 0 0 1〜 1 0 0 μ πιである。組成についても特に限定されるものではないが、水相としては、通常、水または弱酸性、中性、弱塩基性のいずれかの緩衝液等を使用でき、また安定化のためにゼラチン等で水相を固化しても良い。

油層としては通常、生理学的に受容される油類又はワックス類等を単独または組み合わせて使用すればよい。油類としては、以下に例示する植物油、動物油、脂肪酸エステル等が使用できる。

(植物油）硬化ヒマシ油、ピ一ナッツ油、ヒマヮリ種子油、アーモンド油、ホホバ油、落花生油、ヤシ油、パーム油、紅花油、ククイ油、麦芽油、葡萄種子油、ナタネ油、コーン油、オリ一ブ油、綿実油、アポガド油、ツバキ油、トウモロコシ油、小麦胚芽油、コメヌ力油、カカオ脂、ゴマ油、月見草油、サザン力油等が挙げられるが、好ましくはゴマ油等である。

(動物油）スクワレン、ラノリン、ミンク油、卵黄油、タートル油、プリスタン等が挙げられる。

(脂肪酸エステル）ステアリン酸プチル、ラウリン酸へキシル、ォレイン酸ォクチルドデシル、ォレイン酸ォレイル、オクタン酸イソステアリル、オクタン酸セチル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ォクチルドデシル、ジオクタン酸ネオペンチルグリコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、パルミチン酸イソプロピル、アジピン酸ジイソプロピル、セバチン酸ジイソプロピル等が挙げられる。

ワックス類としては、植物ロウおよび動物ロウが挙げられ、好ましくはカルナゥバロウ、ミツロウ、鯨ロウである。

上記の水相と油相との含有割合は、通常、水相：油相 = 1 ： 1〜 1 ： 5 0 (体積比）、好ましくは 1 ： 5〜 1 ： 2 0 (体積比）である。

本発明のェマルジヨンは、任意に界面活性剤、アルコール、脂肪酸、多糖類、防腐剤、 ρΗ調整剤、粘性調整剤等、製剤上許容される添加物を含有し得る。

界面活性剤としては、イオン性又は非イオン性のものを単独または組み合わせて使用できる。好ましくは、 HLB 値が 2〜 2 0のものであり、具体的には、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビ夕ン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、レシチン、力プリル酸モノグリセライド等であり、より好ましくはソルビタンセスキォレエ一卜とポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 60 の組み合わせやカブリル酸モノグリセライドとレシチンとポリォキシエチレン硬化ヒマシ油 50 の組み合わせである。

界面活性剤は、 Th2 への移行促進には必ずしも必要な成分ではないが、ェマルジョンの安定性等の点からは添加しておくのが好ましい。界面活性剤の添加量は、油相全体に対して通常、約 1〜7 5重量％、好ましくは約 1〜3 0重量％である。本発明の W/0ェマルジョンの水相に含有される抗原としては、水溶解性が高くかつ生体内において免疫反応を起こし得る物質であればよく、例えば夕ンパク質、ペプチド、糖タンパク質等を用いることができるが、好ましくはタンパク質またはべプチドである。具体的には、卵白アルブミン（OVA) 、サイトケラチン、 I型コラーゲン、 II型コラーゲン（CII) 、 IV型コラーゲン、トランスグル夕ミナ一ゼ、ミエリン塩基性タンパク質、インシュリン、グルカゴン、 S-抗原、 MHC 抗原等を使用できる。抗原の含有量は、抗原や対象疾患の種類、投与のルートや時期等によって異なり一概には規定できないが、通常、水相全量に対して約 0. 0 0 0 1〜2 0重量％、好ましくは約 0. 0 0 1〜1 0重量％でぁる。

ェマルジヨンの製造方法は特に限定されないが、例えば以下のように行う。即ち、抗原、水相成分、油相成分からなる混合物を、所望により加温下で混合し、数分〜数十分間程度、超音波処理した後、氷冷する。あるいは、該混合物を室温下で振盪混合する等の方法でもよい。

本発明において ThlZTl^バランスは、以下の試験例に示すように、 TMの活性化により生産される抗体である IgG2aおよび Th2の活性化により生産される IgGl の各抗体価の比率を求めることにより調べた。即ち、 IgGlZlGg2a の値が大きくなればヘルパー T細胞における Th2 の割合が増加し， Th2 への移行が促進されたものと判断した。その結果、本発明のェマルジヨン製剤をマウスに投与すると、対照の生理食塩水の製剤を投与した場合に比べて Th2への移行が促進されることが判明した。またその際のトータル IgG抗体価は対照製剤の場合に比べて低下していたことから、液性免疫反応も抑制されて経口免疫寛容が誘導されていたことも判明した。

この Th2への移行促進効果は、組成の異なる複数の W/0ェマルジヨンにおいて確認されたことから、 W/0 ェマルジョンに共通する製剤的効果であることが示唆される。なお、本製剤による Th2への移行促進とは、免疫反応系の Thl/Th2バランスにおいて、 Thl の割合が減少して Th2 の割合が増大する変化を意味し、好ましくは Th2の割合が Thl を上回って Th2偏向の状態に到る変化を意味する。

本製剤は、 ThlZTh2バランスが関係する疾患、特に Thl優位の免疫反応によると考えられている自己免疫疾患（例：多発性硬化症、慢性関節リウマチ、反応性関節炎、乾癬、若年性糖尿病、慢性甲状腺炎、ぶどう膜炎等）や、 T細胞が媒介するかあるいは T細胞に依存する各種アレルギー疾患（例：接触性皮膚炎等）、または臓器移植時の拒絶反応等の予防又は治療剤として有用である。またアトピ一性皮膚炎等も、病態によっては Th2優位の免疫反応が関与していることや、 Th2 細胞の活性化によって皮膚組織中の自己抗原に対して抑制性サイトカイン（ I L- 4、 I L- 1 0、 T G F- 3等）が分泌される等のことから、本製剤による予防又は治療効果が期待できる。本製剤の投与ルートについては特に限定されないが、例えば本製剤の使用による付随効果のひとつとして、粘膜関連リンパ組織 (MALT:mucosa- associated lymphoid tissue) を介して誘導される免疫寛容誘導等を期待する場合には、経口投与、経鼻投与または経肺投与等の経粘膜投与が行われ、好ましくは経口投与である。実施例 1 (卵白アルブミン含有 W/0エマルジョンの経口投与）

抗原タンパク質として卵白アルブミン（OVA)を用い、 7容積の水相 {OVA含有水溶液（0.269〜26· 9 mg/ml)}と 40 容積の油相 {6.7% (w/w) SO- 15 (日光ケミカル）、 1.7%( w/w) HCO-60 (日光ケミカル）含有ゴマ油 }を 50でにおいて混合し、超音波処理（300 W, 26 kHz, 50 :, 1 min) 後氷冷することにより 0VA含有 W/0ェマルジョンを調製した。ェマルジヨン中の OVA最終濃度は、 0.04〜4 mg/miであった。ェマルジヨンの粒度分布は GALAI CIS- 1 により測定し、 50〜60 mmの粒子径を有していた。 OVA含有 W/0ェマルジョンまたは OVA生食溶液を BALB/cマウス（6W、雄）に 5 日間連日経口投与（0〜1 mg OVA equivalent/mouse/day, day 0〜4)した後、 OVAをフロイント完全アジュバンド（FCA(H37Ra)， DIFCO社）とともに後肢足躕に皮下免疫（25 g/mouse, day 8)し、免疫後 21 日目（day 29)の OVAに対する血清抗体価（トータル IgG、 IgGK IgG2a)を酵素免疫測定法（ELISA)により調べた。 EUSA の基本操作手順は既報 { cro ' 0/. Immunol. 36, 873-884 (1992)}に準じ、第 2 抗体には peroxidase標識抗マウス IgGャギ抗体、 peroxidase標識抗マウス IgGl ゥサギ抗体および peroxidase標識抗マウス IgG2aゥサギ抗体を用いた。血清抗体価は、 ELISAにおいて 450 nmにおける吸光度が 0.1以上を示す最大希釈倍数として表した。結果を図 1及び図 2に示す。

(図 1 )

1 mg/mouse/day投与群マウスでは、 W/0ェマルジヨンおよび生食溶液ともにト —タル IgG抗体価の低下が同程度であった。これに対して 0.1 mg/mouse/day投与群マウスでは、 W/0ェマルジョンのみが 1 mg/mouse/day投与群と同程度にトータル IgG抗体価が低下しており、 W/0ェマルジョンが生食溶液に比べ OVAに対する血清トータル IgG抗体価を有意に下げることを確認できた（P く 0.05)。即ち、本製剤は、免疫寛容を誘導させた。

(図 2 )

OVA含有 W/0ェマルジョン投与群マウスでは、 0VA生食溶液投与群マウスに比べ IgG2a 抗体価（4〜5 例の平均値）に対する IgGl 抗体価（4~5 例の平均値）の比率 (IgGl/IgG2a) が約 2倍高かった。また、 W/0ェマルジヨン投与群では OVA含量の増加に伴い、 IgGlZIgG2a 比率も増大した。即ち、本製剤は、ヘルパー T細胞の Th2への移行を促進させた。実施例 2 (II型コラーゲン含有 W/0ェマルジョンの経口投与）

抗原タンパク質として II型コラーゲン（CII)を用い、 7容積の水相 {CII含有塩酸（0.001N)溶液（0.269〜 2.69 mg/ml と 40 容積の油相 {6.7% (w/w) SO- 15、 1.7¾ ( w/w) HCO-60含有ゴマ油 }を 50 において混合し、超音波処理（300 W, 26 kHz, 50 :, 1 min) 後氷冷することにより CI I含有 W/0ェマルジヨンを調製した。エマルジョン中の CII 最終濃度は、 0.04~0.4 mg/ml であった。ェマルジヨンの粒度分布は GALAI CIS- 1 により測定し、 50〜 60 mm の粒子径を有していた。 CII 含有 W/0ェマルジョンまたは CII塩酸（0.001N)溶液を BALB/cマウス（6W、雄）に 5日間連日経口投与（0〜0.1 mg CII equivalent/mouse/day, day 0~4)した後、 CII を FCA(H37Ra)とともに後肢足躕に皮下免疫（100 g/mouse, day 8)し、免疫後 21 日目（day 29)の CII に対する血清抗体価（トータル IgG、 IgGK IgG2a)を酵素免疫測定法（ELISA)により調べた。

(結果）

0.1 mg/mouse/day投与群マウスでは、 W/0ェマルジヨンおよび塩酸（0.001N)溶液ともにトータル IgG 抗体価の低下が同程度であつたが、ェマルジヨンの 0.01 mg/mouse/day投与群では、 10倍量の塩酸（0.001N)溶液投与群と同程度にトータル IgG抗体価が低下していた。また図 3に示す通り、 CII含有 W/0ェマルジョン投与群マウスでは、 CII含有塩酸（0.001N)溶液投与群マウスに比べ IgG2a抗体価（5〜6 例の平均値）に対する IgGl抗体価（5〜 6例の平均値）の比率（IgGl/IgG2a) が約 2 倍高く、 Th2型優位の傾向を示した。また、 W/0ェマルジョン投与群では CII含量の増加に伴い、 IgGlノ IgG2a比率も増大した。実施例 3 (卵白アルブミン含有 W/0マイクロエマルジョンの経口投与）

OVA含有 W/0マイクロエマルジョンの組成は、水相 {OVA生食溶液（0.755〜75.5 mg/ml)} ：油相 {PDD[68!¾(w/w)]、ホモテックス PT[8¾(w/w)]、 SLP—ホワイト SP[2¾( /w)], Cremophor EL[17%(w/w)]} = 5： 95(w/w)から成り、油層を振盪混合 (r. t. , 10 min)した後水相を添加し、さらに振盪混合（r.し， 3 min)することにより調製した。実施例 1 と同様の操作を行い、 0VA含有 W/0マイクロエマルジョンまたは 0VA生食溶液の経口投与を施した BALB/cマウスの免疫後 21 日目における 0VA に対する血清抗体価（トータル IgG、 IgGK IgG2a)を酵素免疫測定法（ELISA) により調べた。

(結果）

1 mg/mouse/day投与群マウスでは、 W/0マイクロエマルジヨンおよび生食溶液ともにトータル IgG 抗体価の低下が同程度であった。これに対して 0.1 ing/mouse/day投与群マウスでは、 W/0マイクロェマルジョンのみが 1 mg/mouse/day 投与群と同程度にトータル IgG抗体価が低下していた。また図 4に示す通り、 OVA 含有 W/0マイクロエマルジョン投与群マウスでは、 OVA生食溶液投与群マウスに比べ 5~10倍 IgGl/IgG2a比率が高く、 Th2優位の傾向を示した。この傾向は、 W/0 マイクロエマルジョン中の OVA含量の増加に伴い増強した。実施例 4 (サイトケラチン含有 W/0ェマルジョンの経口投与）

抗原タンパク質として豚皮から陰イオン交換クロマトグラフィ一により精製したサイトケラチン（CK)を用いた。この精製物中には、少なくとも No.4, 5, 7 , 8, 17, 18のサイトケラチンが含まれることをィムノブロッテイングにより確認した。

7容積の水相 {CK含有水溶液（0.269 mg/ml)}と 40容積の油相 {6.7% (w/w) SO- 15 (日光ケミカル）、 1.7S!( w/w) HCO-60 (日光ケミカル）含有ゴマ油 }を 50T:において混合し、超音波処理（ 300 W, 26 kHz, 50"C, 1 min) 後氷冷することにより CK 含有 W/0ェマルジヨンを調製した。ェマルジヨン中の CK最終濃度は、 0.04ing/ml であった。ェマルジヨンの粒度分布は GALAI CIS- 1 により測定し、 50~60 mmの粒子径を有していた。この CK含有 W/0ェマルジヨンの DS/Nhマウス (Exp. Aniw. 46, 225-229 (1997)) の自然発症皮膚炎に対する治療効果を調べた。実験は、 4 週齢 DS/Nhマウス（）を 12週間コンベンショナル環境下で飼育した後、皮膚炎スコアの偏りがないように群分けし、 2 mM トリス緩衝液（pH 8) 投与群、 CK含有トリス緩衝液投与群（0.01 mg/mouse/day) 、 W/0 空ェマルジヨン投与群及び CK 含有 W/0ェマルジヨン（0.01 mg/mouse/day) 投与群の計 4群（n=5〜6)を設けて、実験開始から 5 日間の連続経口投与を 3週間間隔で計 1回行った。投与開始から 6 週間経過した時点で実験を終了し、皮膚炎スコア（各個体の皮膚炎の重篤度により 0〜5のスコア化）および搔痒感（観察 5分間における搔爬行動の積算秒数）について評価を行った。

(結果）

結果を図 5及び図 6に示す。 CK含有 W/0ェマルジヨン投与群では、トリス緩衝液、空ェマルジヨンおよび CK含有トリス緩衝液各投与群に比べ、皮膚炎スコアの抑制ならびに皮膚炎の増悪に伴う搔痒感の増加が抑制された。産業上の利用可能性

本製剤は、ヘルパー T細胞の Th l / Th 2のバランスが関係する各種疾患、例えば自己免疫疾患やアレルギー疾患等の治療または臓器移植時の拒絶反応等の抑制に有用である。

Claims

請求の範囲

I . 抗原を含有する w/oェマルジヨンを含むことを特徴とする、ヘルパー T細胞の Th2への移行促進剤。

2. 抗原がタンパク質またはペプチドである、請求項 1記載の促進剤。

3. 経粘膜投与によって免疫寛容を誘導する、請求項 1又は 2記載の促進剤。

4. ヘルパー T細胞の ThlZThZのバランスが関係する疾患の予防又は治療剤である、請求項 1ないし 3のいずれかに記載の促進剤。

5. 疾患が Thl主体の免疫反応に起因する疾患、アレルギー疾患、又は臓器移植時の拒絶反応である、請求項 4記載の促進剤。

6. Thl 主体の免疫反応に起因する疾患が自己免疫疾患である、請求項 5記載の促進剤。

7. マウス経口投与時の "lgGlZlgG2a" で示される抗体価比率の値が、対照の抗原含有生理食塩水を投与した場合に比べて約 2倍以上である、請求項 1ないし 6のいずれかに記載の促進剤。

8. 抗原を W/0ェマルジヨンに含有させて経口投与することを特徴とする、へルバ一 T細胞の Th2への移行を促進する方法。

9. 請求項 1〜 7のいずれかに記載の促進剤を投与することを特徴とする、へルパー T細胞の Th2への移行を促進する方法。

10. ヘルパー T細胞の Th2への移行を促進するために、抗原タンパク質の投与剤形として W/0ェマルジョンを使用する方法。

II. ヘルパー T細胞の Thl/Th2のバランスが関係する疾患の予防又は治療剤を製造するために、抗原を含有する W/0ェマルジヨンを使用する方法。