WO1999051627A1

WO1999051627A1 - Methode de recherche de substances physiologiquement actives, procede de production de ces substances et medicaments decouverts par la methode de recherche

Info

Publication number: WO1999051627A1
Application number: PCT/JP1999/001796
Authority: WO
Inventors: Kenji Sakamoto
Original assignee: Nakoshi, Hideo
Priority date: 1998-04-04
Filing date: 1999-04-05
Publication date: 1999-10-14
Also published as: AU3056099A; CN1295577A; EP1083180A4; EP1083180A1; KR20010042449A

Description

明細書

生理活性物質の探索方法及び製造方法並びに該探索方法により見出された医薬

技術分野

本発明は、新規な各種生理活性物質の探索方法及び製造方法並びに該探索方法により見出された医薬に関する。

背景技術

従来、未知の生理活性物質の探索は、体液や組織中に存在する成分を分析し、新規な物質を同定及び単離し、発見された新規な物質の生理活性を調べることにより行なわれている。

上記した従来の方法は、生体中の成分を分析し、新たな物質を見つけ出してその生理活性を調べることから成る。しかしながら、生体中には極めて多くの成分が存在するし、生理活性物質はしばしば低濃度でしか存在しないから新規な物質を見つけることは困難な仕事である。しかも、生体は非常に多くの生理反応を行なっているので、新たに見つかった物質がどのような生理活性を有しているかを見つけることも困難である。このように、従来の方法では、新規な生理活性物質を見つけだすのは困難な作業である。

発明の開示

従って、本発明の目的は、一定の予測性をもってより効率的に新規な生理活性物質を探索する方法を提供することである。さらにまた、本発明の目的は、上記方法により探索された生理活性物質の製造方法を提供することである。さらに本発明の目的は、上記本発明の方法により探索された、新規な糖尿病治療薬、インシュリン産生調節剤、胃酸分泌調節剤及び成長ホルモン分泌調節剤を提供することである。

本願発明者は、先に、一定の予測性をもってより効率的に新規な生理活性物質を探索する方法を発明し、特許出願した（特開平 1 0—1 0 9 9 9 7号公報)。この方法は、拮抗作用を有する物質若しくは細胞が生体中に存在する物質のレセプター、又はある物質 Aが作用する細胞に対して拮抗作用を有する細胞若しくは物質が生体中に存在する該物質 Aのレセプターであって、同一のレセプターにつき 2種類以上のサイズのものが存在する場合に、その欠失部分、つまリスプライスされた部分のァミノ酸配列が該レセプターに関係する生理活性を有するという知見に基づくものである。

本願発明者は、上記先願の探索方法を行うに際し、現実に存在することがわかつているレセプターのアミノ酸配列に基づくもののみならず、該レセプターの c D N Aが 2種類以上存在する場合に、その c D N Aの塩基配列に基づいてレセプターのアミノ酸配列を推定する方法も有効であることを現実に確認して本発明を完成した。

すなわち、本発明は、生体内の物質に拮抗作用を示す物質を産生する細胞のレセプター、又は該細胞自体に対して拮抗作用を有する物質を生産する細胞のレセプタ一において、同一のレセプターのァミノ酸配列について 2種類以上のサイズのものが存在するものを、該レセプターの c D N Aの配列を比較することにより調べ、かつ長いレセプタ一のどの領域が短いレセプタ一において欠失しているかを上記 c D N Aの配列を比較することにより調べることを含む、生理活性物質の探索方法を提供する。また、本発明は、上記本発明の方法により判明した欠失領域又はその誘導体を作製することから成る、生理活性べプチドの製造方法を提供する。さらに、本発明は、上記本発明の方法により探索に成功したペプチドである、配列表の配列番号 1又は 5で示されるアミノ酸配列を有するぺプチド又は該配列中の 1又は複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有するペプチドであって、インシュリン産生細胞によるインシュリン生産を増大させる効果を有するぺプチドを有効成分として含有する糖尿病治療薬を提供する。さらに、本発明は、配列表の配列番号 2で示されるアミノ酸配列を有するぺプチド又は該配列中の 1又は複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有するぺプチドであって、インシユリン産生細胞によるインシュリン生産を調節できる効果を有するペプチドを有効成分として含有する、インシユリン産生調節剤を提供する。さらに、本発明は、配列表の配列番号 3又は 4で示されるアミノ酸配列を有するぺプチド又は該配列中の 1又は複数のァミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有するペプチドであって、胃酸分泌を調節できる効果を有するぺプチドを有効成分として含有する、胃酸分泌調節剤を提供する。配列表の配列番号 6で示されるアミノ酸配列を有するぺプチド又は該配列中の 1又は複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたァミノ酸配列を有するぺプチドであって、成長ホルモンの生産を調節できる効果を有するペプチドを有効成分として含有する、成長ホルモン生産調節剤を提供する。本発明により、レセプターの c D N Aの塩基配列に基づき、一定の予測性をもつて効率的に新規な生理活性物質を探索する方法が提供された。本発明の方法では、拮抗作用に関与する物質のレセプターを調べることにより新規な生理活性物質を見つけることができるので、従来のように極めて多様な成分を含む生体試料中に微量含まれる生理活性物質を単離する必要がない。また、探索された生理活性物質の生理活性は、上記拮抗作用に関与するものであるから、その生理活性を探索することも従来に比べてはるかに容易である。よって、本発明の方法によれば、従来よりもはるかに高効率に新規な生理活性物質を探索することができる。また、本発明により、優れたインシュリン生産増大効果を有する新規な糖尿病治療薬が提供された。さらに、新規なインシュリン産生調節剤、胃酸分泌調節剤及び成長ホルモン生産促進剤が提供された。

発明を実施するための最良の形態

本発明の生理活性物質の探索方法では、生体内の物質に拮抗作用を示す物質を産生する細胞のレセプター、又は該細胞自体に対して拮抗作用を有する物質を生産する細胞のレセプターにおいて、同一のレセプターのアミノ酸配列について 2 種類以上のサイズのものが存在するものを、該レセプターの c D N Aの配列を比較することにより調べ、かつ長いレセプタ一のどの領域が短いレセプターにおいて欠失しているかを上記 c D N A又は成熟 m R N Aの配列を比較することにより調べる。

すなわち、本発明の方法では、成熟 m R N Aの塩基配列の相違に基づいてサイズの異なる 2種類以上のレセプターが生じる場合を対象とする。換言すると、本発明の方法では、 m R N Aレベルでのスプライシングの変化を探索する。 m R N Aレベルのスプライシングの変化によって生じる、通常起こらないスプライシングは遺伝子発現を不活化する以外の働きは良くわかっていない。ケースとしては、本来翻訳されるべき配列が結果的にされなかったり、また逆に翻訳されるべきでないものが発現されたりする場合がある。その大部分は、正しくスプライシングされないために、アミノ酸すら発現できなくなるが、それ以外の場合、スプライシングの変化に対応して生じる、あるいは欠失するアミノ酸配列が、有効に機能している場合が実際にあり、本発明の方法ではこのような、 m R N Aレベルでのスプライシングの変化を探索する。

本発明の方法では、上記レセプターの c D N Aの塩基配列を調べ、同じレセプターでありながら、サイズが異なる c D N Aが存在するものを見つけ出す。この作業は、当該レセプターの c D N Aの塩基配列又はサイズを複数回決定することにより行なってもよいし、文献に報告されている場合にはその報告を利用してもよい。同一のレセプタ一であリながらサイズが異なる 2種類以上の c D N Aが存在するレセプターの例として、グルカゴンレセプター、 F G Fレセプター、 G I Pレセプタ一等を挙げることができる。

上記方法により生理活性を有することが認められた欠失領域と同一のぺプチドは、これを製造することにより生理活性物質が得られる。多くの場合、欠失領域は比較的短いぺプチドから成るので、このような場合には市販のぺプチド合成機を用いて、化学合成により容易に当該生理活性物質を作製することができる。あるいは、常法により遺伝子工学的手法を用いて作製することもできる。

得られた生理活性物質の生理活性は、上記拮抗作用に関与するものであるから、それぞれの拮抗作用に応じた適宜の方法により容易に確認することができる。なお、一般に生理活性を有するペプチドにおいて、その少数のアミノ酸が他のアミノ酸に置換し、少数のアミノ酸が付加され、又は少数のアミノ酸が欠失した場合でも、その生理活性が維持される場合があることは当業者に周知の事実である。従って、上記の欠失領域を構成するアミノ酸のうち、少数のアミノ酸が他のアミノ酸に置換し、少数のアミノ酸が付加され、又は少数のアミノ酸が欠失したものであって、上記欠失領域から成る生理活性物質が持つ生理活性を有する物質 (本願発明においてこのような物質を上記欠失領域の「誘導体」という）を製造することも本発明の範囲に含まれる。このような誘導体は上記欠失領域に対し、 7 0 %以上、さらに好ましくは 9 0 %以上の相同性を有することが好ましい。本願発明者は、上記した本発明の探索方法により、インシュリン産生細胞によるインシュリン生産を増大させる効果を有するぺプチドを見出した。このべプチドは、インシュリン産生細胞によるインシュリン生産を増大させる効果を有するので、糖尿病治療薬として有効である。すなわち、下記実施例において具体的に記載するように、グルカゴンレセプターの c D N Aにサイズの異なる複数の種類のものが存在することが公知の文献に記載されており、これらの c D N Aの塩基配列を比較することにより、長い方のアミノ酸配列をコードする塩基配列中のどの領域が、短い方のアミノ酸配列をコードする塩基配列中で欠失しているかを調ベ、その欠失している塩基配列がコードするアミノ酸配列を推定した（配列番号 1 )。そして、配列番号 1に示すアミノ酸配列を有するペプチドを化学合成し、インシユリン産生細胞に投与したところ、該細胞によるィンシユリン生産量が有意に増大した。このことから、配列番号 1に示されるアミノ酸配列を有するぺプチドが糖尿病治療薬として有効であることがわかった。

なお、配列番号 1で示されるアミノ酸配列中の 1又は複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有するペプチドであって、インシユリン産生細胞によるィンシュリン生産を増大させる効果を有するぺプチドも本発明の範囲に含まれる。このようなペプチドの具体例として、ラットのグルカゴンレセプターの c D N Aを比較することにより本願発明の方法に基づいて見出された、配列番号 5に記載されたアミノ酸配列を有するぺプチドを挙げることができる。なお、インシュリン生産を増大させる効果を有する、配列番号 1又は 5に記載されたアミノ酸配列を持つペプチド以外のペプチドは、配列番号 1又は⁵で示されるァミノ酸配列と 7 0 %以上、さらに好ましくは 9 0 %以上の相同性を有していることが好ましい。また、これらのペプチドのアミノ酸数は特に限定されないが、合成の容易性や抗原性等の観点から、 7個〜 2 0個程度が好ましく、さらに好ましくは 7個〜 1 0個程度である。

上記した本発明の糖尿病治療薬の投与経路は、静脈内注射、筋肉内注射、経腸投与などの非経口投与が好ましい。また、投与量は、患者の状態や有効成分の分子量等に基づき適宜決定されるが、通常、体重 1 k g、 1日当たり 0. 01 mg 〜 1 mg程度が好ましい。また、治療薬は、常法により適宜製剤することができ、例えば、生理食塩水に 3 OmgZ I 〜300 OmgZ Iの濃度範囲で溶解したものを用いることができる。

本願発明者は、上記と同様にして、インシュリンの産生を調節する（産生抑制又は促進)ぺプチドを見出した。そのァミノ酸配列を配列表の配列番号 2に示す。この配列は、上記本発明の探索方法に基づき、 Glucose-dependent insul inotrop ic polypeptide receptorの c D N A配列を比較することにより見出されたものである。インシュリンの産生を促進する場合には、上記と同様、糖尿病治療薬として有用であり、インシュリンの産生を抑制する場合には低血糖症等の治療薬として有用である。インシュリン産生調節剤として有用なペプチドは、配列番号 2 に示すアミノ酸配列を有するぺプチドのみならず、配列番号 2で示されるァミノ酸配列中の 1又は複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有するペプチドであって、インシュリン産生細胞によるインシュリン生産を調節する効果を有するペプチドも本発明の範囲に含まれる。この場合、これらのペプチドは、配列番号 2で示されるアミノ酸配列と 70%以上、さらに好ましくは 90<½以上の相同性を有していることが好ましい。また、これらのペプチドのアミノ酸数は特に限定されないが、合成の容易性や抗原性等の観点から、 28個〜 50個程度が好ましく、さらに好ましくは 28個〜 35個程度である。

上記した本発明のインシュリン産生調節剤の投与経路は、静脈内注射、筋肉内注射、経腸投与などの非経口投与が好ましい。また、投与量は、患者の状態や有効成分の分子量等に基づき適宜決定されるが、通常、体重 1 k g：、 1日当たり 0. 01 mg〜1 mg程度が好ましい。また、治療薬は、常法により適宜製剤することができ、例えば、生理食塩水に 3 OmgZ I 〜300 OmgZ Iの濃度範囲で溶解したものを用いることができる。

さらにまた、本願発明者は、上記と同様にして、胃酸分泌を調節（分泌抑制又は分泌促進）するペプチドを見出した。そのアミノ酸配列を配列表の配列番号 3 及び 4に示す。これらの配列は、上記本発明の探索方法に基づき、ガストリンレセプターの c D N A配列を比較することにより見出されたものである。このぺプチドは、胃酸の分泌を調節するので、胃潰瘍及び十二指腸潰瘍治療薬等（分泌抑制の場合）として、又は胃酸分泌過小症治療薬（分泌促進の場合）として有用である。胃酸分泌調節剤として有用なペプチドは、配列番号 3又は 4に示すアミノ酸配列を有するぺプチドのみならず、配列番号 3又は 4で示されるアミノ酸配列中の 1又は複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有するぺプチドであって、胃酸分泌を調節する効果を有するぺプチドも本発明の範囲に含まれる。この場合、これらのペプチドは、配列番号 3又は 4で示されるァミノ酸配列と 7 θ ο/ο以上、さらに好ましくは 9 0 %以上の相同性を有していることが好ましい。また、これらのペプチドのアミノ酸数は特に限定されないが、合成の容易性や抗原性等の観点から、配列番号 3で示されるものについては 5個〜 2 0個程度が好ましく、さらに好ましくは 5個〜 8個程度であり、配列番号 4で示されるものについては 1 1個〜 3 0個程度が好ましく、さらに好ましくは 1 1 個〜 2 0個程度である。

上記した本発明の胃酸分泌調節剤の投与経路は、静脈内注射、筋肉内注射、経腸投与などの非経口投与が好ましい。また、投与量は、患者の状態や有効成分の分子量等に基づき適宜決定されるが、通常、体重 1 k g、 1 日当たり 0 . 0 1 m g〜1 m g程度が好ましい。また、胃酸分泌調節剤は、常法により適宜製剤することができ、例えば、生理食塩水に 3 0 m g Z I ~ 3 0 0 0 m g Z Iの濃度範囲で溶解したものを用いることができる。

さらにまた、本願発明者は、成長ホルモン生産を調節（生産促進又は生産抑制 ) するペプチドを見出した。そのアミノ酸配列を配列表の配列番号 6に示す。このペプチドは、成長ホルモンの生産を調節するので小人症の治療薬等（生産促進の場合）又は巨人症治療薬（生産抑制の場合）として有用である。成長ホルモン生産調節剤として有用なぺプチドは、配列番号 6に示すアミノ酸配列を有するぺプチドのみならず、配列番号 6で示されるアミノ酸配列中の 1又は複数のァミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有するペプチドであって、成長ホルモン分泌を促進する効果を有するぺプチドも本発明の範囲に含まれる。この場合、これらのペプチドは、配列番号 6で示されるアミノ酸配列と 7 O O/o以上、さらに好ましくは 9 0 0/0以上の相同性を有していることが好ましい。また、これらのぺプチドのアミノ酸数は特に限定されないが、合成の容易性や抗原性等の観点から、配列番号 6で示されるものについては 1 2個〜 3 0個程度が好ましく、さらに好ましくは 1 2個〜 2 0個程度である。

上記した本発明の成長ホルモン生産調節剤の投与経路は、静脈内注射、筋肉内注射、経腸投与などの非経口投与が好ましい。また、投与量は、患者の状態や有効成分の分子量等に基づき適宜決定されるが、通常、体重 1 k g、 1 日当たり 0 . 0 1 m g〜1 m g程度が好ましい。また、成長ホルモン生産調節剤は、常法によリ適宜製剤することができ、例えば、生理食塩水に 3 0 m g Z I〜3 0 0 0 m g Z Iの濃度範囲で溶解したものを用いることができる。実施例

以下、実施例により本発明をより具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。

実施例 1 グルカゴンレセプターの生理活性ペプチドの予測

FEBS Letters 351 (1994) 271 - 275に記載されたラットグルカゴンレセプターのァミノ酸配列を検討した。グルカゴンレセプタ一は c D N Aの塩基配列から 4 つの長さの種類の c D N Aが報告され、この中でアミノ酸に翻訳可能なものとして、 2つが明らかにされている。これは転写後のスプライシングが異なっているものであり、カルシ卜ニンレセプターの場合のような翻訳後のスプライシングとは様式が異なっている。しかしながら、本願発明者はこのように転写後の異なるスプライシングによって生じるアミノ酸部分も何らかの活性を有していると予測した。このアミノ酸配列を配列表の配列番号 1に示す。

実施例 2 ペプチドの製造

市販のぺプチド合成機を用い、配列番号 2に示されるアミノ酸配列を有するぺプチドを合成した。

実施例 3 インシユリン分泌促進作用インシュリン産生細胞である、ヒト膝臓由来の B x PC— 3細胞（入手先：大日本製薬）を 1 0%牛胎児血清を含む RPM 11640培地 (入手先：大日本製薬）にて培養し、 5%炭酸ガス加湿 37 °C恒温器内にて育成した。卜リプシン処理によリ、 1 X 1 0⁵ノ wel l蒔種し、コンフル一ェントになったところで実施例 2で合成した本発明のぺプチド、本発明に無関係であり活性が明らかではないぺプチド八、 B、及びコントロール（生理食塩水）を 0. O l mgZwe I I加え 24時間培養した。その後、上清に含まれるインシュリン濃度をインシュリン測定キット（入手先：シバヤギ)にて比色定量した。結果を下記表 1に示す。

表 1

表 1から明らかなように、本発明の方法により探索された上記ペプチドは、ィンシュリン産生細胞 BxPC-3細胞に対して、ィンシュリン産生を促進することが確認された。従って、本ペプチドはインシュリンの合成の作用により、糖尿病患者に対して有効に働くことがわかった。

実施例 4 ペプチドの製造

市販のペプチド合成機を用い、ヒトのグルカゴンレセプターの c DN A配列を基に予測された配列番号 1及び 5に示されるァミノ配列を有するぺプチドを合成した。

実施例 5 インシュリン産生細胞のインシュリン生産促進

インシュリンを産生するハムスター膝臓細胞である HIT細胞、ヒト膝臓細胞である BxPG- 3細胞（入手先：大日本製薬）を 1 0%牛胎児血清を含む RPMI1640培地（入手先：大日本製薬）にて培養し、 5%炭酸ガス加湿 37 °C恒温器内にて育成した。トリプシン処理により 96穴培養プレートに¹ x10⁴個穴（wel l) 蒔種し、コンフルーェントになったところで培地を無血清 F12培地に交換し、 8時間培養した。その後、実施例 4で製造した本発明のペプチドを無血清 RPMI1640 培地に溶解し、配列番号 1で示されるアミノ酸配列を有するペプチドを H 細胞に、配列番号 5で示されるアミノ酸配列を有するぺプチドを BxPG-3細胞に用量変化をさせながら we l lに加えてさらに 1 2時間培養を継続した。培養後、本べプチドによる細胞のィンシュリン産生促進効果をィンシュリンのィムノアッセィにより測定し、非処理群に対する産生促進効果を求めた。なお、インシュリンのィムノアッセィ及びィンシュリン産生促進率の算出は具体的には次のように行つた。シバヤギ（株）より市販されているインシュリン測定キットの手順に従い、細胞培養液上清を容量変化させながら抗インシユリン抗体が固定されたゥエルに加え抗インシュリン抗体溶液と反応させた。検出は、抗体に標識されたビォチンをストレプトアビジン結合ペルォキシダーゼと反応させ、ペルォキシダーゼによる発色を測定した。インシュリン濃度は、インシュリンの標準曲線から算出した。ィンシュリン産生促進率は本物質を加えない対照群を 1 0 O o/oとし用量を変化させて加えた群のィンシュリン生産促進率を求めると次のようになった。結果を下記表 2に示す。

表 2

表 2から明らかなように、本発明の方法により探索された上記ペプチドは、ハムスター、ヒト由来インシュリン産生細胞に対しインシュリン産生促進的に作用することが確認された。従って、本ペプチドは血糖値低下に結びつくものと考えられ、糖尿病等の治療に対し有用である。

実施例 6 ペプチドの製造

市販のぺプチド合成機を用い、ガストリンレセプターの c D N A配列を比較することにより予測された配列番号 3及び 4に示されるァミノ酸配列を有するぺプチドを合成した。

実施例 7 ラットにおける胃酸分泌抑制効果

胃酸分泌抑制効果は、ラット（ウィスター種）を用い、実施例 6で合成したぺプチドと胃酸分泌を促進するガストリンを生理食塩水に溶解した溶液を皮下注射し、 1 0分後の胃酸分泌を測定することで評価した。ガストリンは 4 g /kgになるよう、本発明のペプチドは 1 0 g /kgとなるよう投与した。胃酸分泌は、ラットを固定器に固定し口よりゾンデを胃に入れ胃液を採取し、その _PHを測定することで評価した。胃酸分泌抑制は本物質を投与しない対照群と、投与群の胃酸分泌を比べると次のようになった。結果を下記表 3に示す。

表 3

表 3から明らかなように、本発明の方法により探索された上記ペプチドは、ラットに対し胃酸分泌抑制的に作用することが確認された。従って、本ペプチドは胃酸分泌を抑制する胃潰瘍及び十二指腸潰瘍治療薬として有用である。

実施例 8 ペプチドの合成

ソマトスタチンレセプターのアミノ酸配列を比較することにより予測された配列番号 6に示すアミノ酸配列を有するぺプチドを市販のぺプチド合成機により合成した。

実施例 9 成長ホルモン産生細胞の成長ホルモン生産促進

成長ホルモンを産生する脳下垂体細胞であるハムスター由来 G H 3細胞（入手先： I F O (受託番号 50105) を 1 5 %牛胎児血清を含む F 1 2培地（入手先：大日本製薬）にて培養し、 5 %炭酸ガス加湿 3 7 °C恒温器内にて育成した。トリプシン処理により 9 6穴培養プレートに 1 X 10⁴個穴 (we l I )蒔種し、コンフル一ェントになったところで培地を 1 5 %血清 F 1 2培地に交換し、 1 2時間培養した。その後、実施例 7で製造した本発明のペプチドを 1 5 %血清「 1 2培地に溶解し、用量変化をさせながら we l lに加えてさらに 3日間培養を継続した。培養後、本べプチドによる細胞の成長ホルモン産生促進効果を成長ホルモンのィムノアツセィにより測定し、非処理群に対する産生促進効果を求めた。なお、成長ホルモンのィムノアッセィは、常法であるサンドイッチ E L I S Aにより行った。すなわち、抗成長ホルモン抗体が固定されたゥエルに、細胞培養液上清を用量変化させながら加え、室温で 1 8 0分間反応させ、洗浄後、さらにペルォキシダーゼ標識した抗成長ホルモン抗体を加え、室温で 6 0分間反応させた。洗浄後、ぺルォキシダーゼによる発色反応を吸光度測定により測定した。成長ホルモン濃度は、既知濃度の成長ホルモンを用いて同じサンドイッチ E L I S Aを行って得られた標準曲線に基づき求めた。成長ホルモン産生促進率は、ペプチドを加えない対照群を 1 0 0 %年、用量を変化させて加えた群の成長ホルモン生産促進率を求めると次のようになった。結果を下記表 4に示す。

表 4

表 4から明らかなように、実施例 8で作製されたペプチドは、成長ホルモン産生細胞に対し成長ホルモン産生促進的に作用することが確認された。従って、本ぺプチドは成長促進に結びつくものと考えられ、小人病等の治療に有用である。

Claims

請求の範囲

1 . 生体内の物質に拮抗作用を示す物質を産生する細胞のレセプター、又は該細胞自体に対して拮抗作用を有する物質を生産する細胞のレセプターにおいて、同一のレセプターのァミノ酸配列について 2種類以上のサイズのものが存在するものを、該レセプターの c D N Aの配列を比較することにより調べ、かつ長いレセプタ一のどの領域が短いレセプターにおいて欠失しているかを上記 c D N Aの配列を比較することにより調べることを含む、生理活性物質の探索方法。

2 . 請求項 1記載の方法により判明した欠失領域又はその誘導体を作製することから成る、生理活性ペプチドの製造方法。

3 . 上記欠失領域を作製することから成る、請求項 2記載の方法。

4 . 前記欠失領域を化学合成により合成する請求項 3記載の方法。

5 . 配列表の配列番号 1又は 5で示されるアミノ酸配列を有するぺプチド又は該配列中の 1又は複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有するぺプチドであって、ィンシュリン産生細胞によるインシュリン生産を増大させる効果を有するぺプチドを有効成分として含有する糖尿病治療薬。

6 . 配列表の配列番号 1で示されるアミノ酸配列を有するペプチドを有効成分として含有する請求項 5記載の糖尿病治療薬。

7 . 配列表の配列番号 5で示されるアミノ酸配列を有するぺプチドを有効成分として含有する請求項 5記載の糖尿病治療薬。

8 . 配列表の配列番号 2で示されるアミノ酸配列を有するペプチド又は該配列中の 1又は複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有するぺプチドであって、インシュリン産生細胞によるインシュリン生産を調節できる効果を有するぺプチドを有効成分として含有する、ィンシュリン産生調節剤。

9 . 配列表の配列番号 2で示されるアミノ酸配列を有するぺプチドを有効成分として含有する請求項 8記載のインシユリン産生調節剤。

1 0 . インシュリン産生抑制剤である請求項 8又は 9記載のインシュリン産生調節剤。

1 1 . 糖尿病治療薬である請求項 8又は 9記載のインシュリン産生調節剤。

1 2 . 配列表の配列番号 3又は 4で示されるアミノ酸配列を有するペプチド又は該配列中の 1又は複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有するぺプチドであって、胃酸分泌を調節できる効果を有するぺプチドを有効成分として含有する、胃酸分泌調節剤。

1 3 . 配列表の配列番号 3又は 4で示されるアミノ酸配列を有するペプチドを有効成分として含有する請求項 1 2記載の胃酸分泌調節剤。

1 4 . 胃酸分泌抑制剤である請求項 1 2又は 1 3記載の胃酸分泌調節剤。

1 5 . 配列表の配列番号 6で示されるアミノ酸配列を有するペプチド又は該配列中の 1又は複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入又は付加されたアミノ酸配列を有するぺプチドであって、成長ホルモンの生産を調節できる効果を有するぺプチドを有効成分として含有する、成長ホルモン生産調節剤。

1 6 . 配列表の配列番号 6で示されるアミノ酸配列を有するペプチドを有効成分として含有する請求項 1 5記載の成長ホルモン生産調節剤。

1 7 . 成長ホルモン生産促進剤である請求項 1 5又は 1 6記載の成長ホルモン生産調節剤。