WO1999048908A2 - POLYPEPTIDE IMMUNOREACTIF DU RECEPTEUR TrkA du NGF ET UTILISATIONS - Google Patents
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Definitions
- the invention relates to one of the transmembrane receptors for the neurotrophic factor NGF (nerve growth factor), the TrkA receptor which has an intracellular domain and an extracellular domain.
- NGF neurotrophic factor
- TrkA receptor which has an intracellular domain and an extracellular domain.
- the interaction of TrkA with NGF, via the extracellular domain of the receptor, causes its autophosphorylation and the activation of cellular mechanisms.
- the main function of this interaction is to stimulate or inhibit proliferation, cell differentiation, or cell death by apoptosis.
- Certain neurodegenerative diseases as well as certain neoplastic tumors are associated with an abnormal expression of the TrkA receptor by the cells, responsible for proliferation and / or excessive differentiation of the latter, and / or cell death.
- Studies have been carried out on the possibility of controlling the activity of factor NGF by an agonist or stimulating effect with respect to this activity, of ligands, such as antibodies, specific for the TrkA receptor.
- an antibody directed against the extracellular domain of the TrkA NGF receptor capable, after binding to said receptor, either of imitating or of inhibiting the NGF factor.
- the authors of this work in particular obtained an onoclonal antibody (mAB) 5C3 mimicking the NGF factor, and they observed that the binding of said antibody to the TrkA receptor led in particular to the intracellular internalization of the latter and / or its dimerization.
- mAB onoclonal antibody
- Such antibodies can be used in the search for pharmacological agents intended to regulate the activity of factor NGF.
- the Applicant has now determined a new approach to the TrkA receptor for the diagnosis, prophylaxis and therapy of neurodegenerative diseases.
- the Applicant has also observed that, according to the process of internalization of the TrkA receptor by the NGF factor, there is a perinuclear translocation and a nuclear translocation, the latter being reserved for the extracellular domain of the receptor, the only part of TrkA to be detected in. the cell nucleus, while the intracellular domain remains in the cytoplasmic region.
- the discoveries of the Applicant are the basis of the present invention, the various objects of which are presented below.
- a first object of the invention is a polypeptide having an immunoreactivity towards antibodies directed against the protein TrkA and consisting of any one of the following polypeptides: the polypeptide starting at amino acid 71 and ending at amino acid 87 of the sequence of the TrkA protein identified by SEQ ID NO: 1 and represented in the single figure, either for short the polypeptide 71-87, the polypeptide 99-118, the polypeptide 125-141, the polypeptide 265- 283, the polypeptide 379-392, the polypeptide 382-417, and the equivalent polypeptides having an immunoreactivity vis-a-vis said antibodies, identical or similar to those of the reference polypeptides defined above.
- various terms used in the present description are defined.
- a neurodegenerative disease means a disease in which a process of cell death is associated with physiological and / or clinical disorders.
- a neurodegenerative disease means a disease in which a process of cell death is associated with physiological and / or clinical disorders.
- polypeptide is meant a peptide, in the isolated state, having a sequence of a variable number of amino acids, such as an oligopeptide, a protein, a fusion protein, a peptide of fusion, a synthetic peptide.
- a fusion peptide mention may be made of the peptide obtained with penetatin (in accordance with the teaching of document FR-A-2 739 621).
- a polypeptide can be obtained by various techniques well known to those skilled in the art, and in particular by chemical synthesis or by genetic recombination techniques. Thus it can be obtained by conventional synthesis methods, for example in an automatic peptide synthesizer, or by genetic engineering techniques comprising the insertion of a DNA sequence coding for said polypeptide into an expression vector such than a plasmid or a virus.
- a polypeptide of the invention can be glycosylated.
- a polypeptide of the invention can be labeled with any conventional label, such as a radioactive, fluorescent, enzymatic label or the like.
- the immunoreactivity of a polypeptide (or immunoreactive polypeptide) with respect to antibodies defines, according to the invention, the antigenic power of the polypeptide, namely its capacity to be recognized specifically by said antibodies to form an immune complex , and / or the immunogenicity of the polypeptide, possibly after coupling with a hapten such as KLH (Keyhole limpet haemocyanin), namely its capacity to induce the production of such antibodies.
- a hapten such as KLH (Keyhole limpet haemocyanin)
- a polypeptide equivalent to a reference polypeptide differs from the latter by modifications of the amino acid sequence which nevertheless confers on it an immunoreactivity identical, similar, or even superior to that of the reference polypeptide.
- antibody directed against the TrkA protein is understood an antibody directed against all or part of the TrkA protein.
- a polypeptide of the invention as defined above has a peptide sequence which advantageously consists of any one of the sequences chosen from among SEQ ID NO: 8, identified at the end of the description, in particular SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 4 to SEQ ID NO: 8. It can also be glycosylated.
- the subject of the invention is also a polyclonal or monoclonal antibody directed against a polypeptide of the invention. From said polypeptide, it is the competence of the skilled person to obtain an antibody of the invention, using conventional techniques.
- the invention also relates to a method for detecting, in a biological sample, all or part of the TrkA protein, in a form linked or not to nervous growth factor (NGF), method according to which the sample is brought into contact with a antibody directed against at least one fragment of the TrkA protein, and the immune complex formed between said antibody and said fragment is detected, said antibody being chosen from the group consisting of antibodies causing at least any one of the following phenomena: cytoplasmic translocation, perinuclear or nuclear of all or part of the TrkA receptor, suppression of the nuclear translocation of TrkA, suppression of the proteolytic cleavage of TrkA and interference in cell signaling such as agonist or antagonist activity.
- NGF nervous growth factor
- the antibodies are chosen from those interacting specifically with at least any of the following polypeptides: the polypeptide 71-87, the polypeptide 99-118, the polypeptide 125-141, the polypeptide
- the invention also relates to a method for detecting, in a biological sample, an antibody directed against at least one immunoreactive fragment of the protein TrkA, the latter being in the form or not linked to the nerve growth factor (NGF), method according to which puts the biological sample in contact with a compound comprising at least one immunoreactive fragment, and the formation of an immune complex is detected between the compound and the antibody, said immunoreactive fragment consisting of a polypeptide of the invention.
- NGF nerve growth factor
- Detection of an antibody in accordance with the above process can reveal a deregulation of the biological functioning of the TrkA receptor, possibly associated with a neurodegenerative disease.
- the method of the invention is applied to a biological sample chosen from serum, cerebrospinal fluid, a biopsy of tissue, cells, a cell extract.
- the formation of the above complexes can be detected by various conventional bioassay formats well known to those skilled in the art, such as immunoprecipitation, immunocytochemical, immunoenzymatic (ELISA, Western) techniques.
- a polypeptide of the invention intended to detect, prevent or treat a medical condition associated with a neurodegenerative disease
- an antibody specific for a polypeptide of the invention to obtain a diagnostic, prophylactic or therapeutic composition intended to detect, prevent or treat a pathological condition associated with a neurodegenerative disease
- nucleotide fragment to obtain a diagnostic, prophylactic or therapeutic composition intended to detect, prevent or treat a pathological condition associated with a neurodegenerative disease, according to which said nucleotide fragment is chosen from the fragments which code for a polypeptide of the invention.
- Protocol for detecting is chosen from the fragments which code for a polypeptide of the invention.
- PC12 cells expressing the TrkA receptor (BB Rudkin, P. Lazarovici, BZ Levi, Y. Abe, K. Fujita, G. Guroff, 1989, Cell cycle-specific action of nerve growth factor in PC12 cells: differentiation without proliferation. EMBO J. 8: 3319-3325) were cultured.
- the PC12 cells are harvested using mechanical agitation in saline phosphate buffer (PBS), then are used as they are (that is to say without permeabilization, or fixation) or else after fixation for 15 minutes at room temperature in 1% paraformaldehyde.
- Cells are treated with blocking buffer (2% bovine serum albumin (BSA) (Sigma, St Louis, MO), fetal calf serum (Gibco / BRL), PBS free of Ca 2+ and Mg 2+ (TechGen International, France) or modified Eagle's medium from Dulbecco (DMEM) and sodium azide as a preservative), then they are exposed to appropriate dilutions of antibodies of the invention in the blocking buffer for 20 minutes on ice.
- BSA bovine serum albumin
- DMEM modified Eagle's medium from Dulbecco
- the cells are exposed to a second antibody labeled with fluorescein isocyanate or phycoerythrin, used at 1/200 dilutions in blocking buffer for 20 minutes on ice. Microscopic observations are made using an Olympus Vanox AH2 fluorescence microscope.
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Abstract
L'invention concerne un polypeptide possédant une immunoréactivité vis-à-vis des anticorps dirigés contre la protéine TrkA et consistant en l'un quelconque des polypeptides suivants: le polypeptide commençant à l'acide aminé 71 et finissant à l'acide aminé 87 de la séquence de la protéine TrkA identifiée par SEQ ID NO: 1, soit en abrégé le polypeptide 71-87, le polypeptide 125-141, le polypeptide 265-283, le polypeptide 379-392, le polypeptide 382-417, et les polypeptides équivalents possédant une immunoréactivité vis-à-vis desdits anticorps, identique ou similaire à celles des polypeptides précités; de préférence, les polypeptides sont choisis parmi SEQ ID NO: 2 à SEQ ID NO: 8. L'invention concerne aussi leurs utilisations notamment pour le diagnostic de maladies neurodégénératives.
Description
POLYPEPTIDE IMMUNOREACTIF DU RECEPTEUR TrkA DU NGF ET
UTILISATIONS L'invention concerne un des récepteurs transmembranaires du facteur neurotrophique NGF (facteur de croissance nerveux) , le récepteur TrkA qui possède un domaine intracellulaire et un domaine extracellulaire. L'interaction de TrkA avec le NGF, par l'intermédiaire du domaine extracellulaire du récepteur, provoque l'autophosphorylation de celui-ci et l'activation de mécanismes cellulaires. La fonction principale de cette interaction réside dans la stimulation ou l'inhibition de la prolifération, de la différenciation cellulaire, ou de la mort de la cellule par apoptose.
Certaines maladies neurodégénératives ainsi que certaines tumeurs néoplasiques sont associées à une expression anormale du récepteur TrkA par les cellules, responsable d'une prolifération et/ou différenciation excessive de ces dernières, et/ou la mort cellulaire. Des études ont été réalisées sur la possibilité de contrôler l'activité du facteur NGF par un effet agoniste ou stimulant vis-à-vis de cette activité, de ligands, tels qu'anticorps, spécifiques du récepteur TrkA.
Ainsi, conformément au document WO-97/21732, il est décrit un anticorps dirigé contre le domaine extracellulaire du récepteur TrkA du NGF, et susceptible après fixation sur ledit récepteur soit d'imiter, soit d'inhiber le facteur NGF. Les auteurs de ces travaux ont en particulier obtenu un anticorps onoclonal (mAB) 5C3 mimant le facteur NGF, et ils ont observé que la fixation dudit anticorps sur le récepteur TrkA entraînait notamment l' internalisation intracellulaire de ce dernier et/ou sa dimérisation. Outre l'étude de l'activité du récepteur, de tels anticorps peuvent être utilisés à la recherche d'agents pharmacologiques destinés à réguler l'activité du facteur NGF.
La Demanderesse a maintenant déterminé une nouvelle approche du récepteur TrkA, pour le diagnostic, la prophylaxie et la thérapie de maladies neurodégénératives. Elle a en effet défini des déterminants antigeniques du récepteur TrkA. A partir des polypeptides ainsi déterminés, qui constituent un premier objet de l'invention, elle a obtenu des anticorps spécifiques dont la présence et la quantification vont permettre une cytolocalisation du récepteur TrkA tout en apportant une information sur la forme dudit récepteur, et donc sur l'activité du facteur NGF.
La Demanderesse a en outre observé que selon le processus d' internalisation du récepteur TrkA par le facteur NGF, il se produit une translocation périnucléaire et une translocation nucléaire, cette dernière étant réservée au domaine extracellulaire du récepteur, seule partie de TrkA à être détectée dans le noyau de la cellule, alors que le domaine intracellulaire reste dans la région cytoplasmique. Les découvertes de la Demanderesse sont la base de l'invention présente dont les différents objets sont ci- après présentés .
Un premier objet de l'invention est un polypeptide possédant une immunoréactivité vis-à-vis des anticorps dirigés contre la protéine TrkA et consistant en l'un quelconque des polypeptides suivants : le polypeptide commençant à l'acide aminé 71 et finissant à l'acide aminé 87 de la séquence de la protéine TrkA identifiée par SEQ ID NO: 1 et représentée sur l'unique figure, soit en abrégé le polypeptide 71-87, le polypeptide 99-118, le polypeptide 125-141, le polypeptide 265-283, le polypeptide 379-392, le polypeptide 382-417, et les polypeptides équivalents possédant une immunoréactivité vis-à-vis desdits anticorps, identique ou similaire à celles des polypeptides de référence définis ci-dessus.
Avant de déterminer d'autres objets de l'invention, divers termes employés dans la présente description sont définis.
Selon l'invention, on entend par "une maladie neurodégénérative" , une maladie dans laquelle un processus de mort cellulaire est associé aux troubles physiologiques et/ou cliniques. On classe notamment dans les maladies neurodégénératives, la maladie d'Alzheimer, la maladie de Parkinson, la maladie de Huntington, la sclérose latérale amyotrophique, la GM1 gangliosidose.
Par "polypeptide" selon l'invention, on désigne un peptide, à l'état isolé, présentant un enchaînement d'un nombre variable d'acides aminés, tel qu'un oligopeptide, une protéine, une protéine de fusion, un peptide de fusion, un peptide de synthèse. A titre d'exemple de peptide de fusion, on peut citer le peptide obtenu avec la pénétratine (conformément à l'enseignement du document FR- A-2 739 621) . Un polypeptide peut être obtenu par différentes techniques bien connues de l'homme du métier, et notamment par synthèse chimique ou par des techniques de recombinaison génétique. Ainsi il peut être obtenu par des méthodes de synthèse classique, par exemple dans un synthétiseur automatique de peptides, ou par les techniques de génie génétique comprenant l'insertion d'une séquence d'ADN codant pour ledit polypeptide dans un vecteur d'expression tel qu'un plasmide ou un virus.
Un polypeptide de l'invention peut être glycosylé.
En outre un polypeptide de 1 ' invention peut être marqué par tout marqueur conventionnel, tel que marqueur radioactif, fluorescent, enzymatique ou analogue.
L' immunoréactivité d'un polypeptide (ou polypeptide immunoréactif) vis-à-vis d'anticorps, définit, selon l'invention, le pouvoir antigénique du polypeptide, à savoir sa capacité à être reconnu spécifiquement par lesdits anticorps pour former un complexe immun, et/ou le pouvoir immunogène du polypeptide, éventuellement après
couplage avec un haptène comme le KLH (Keyhole limpet haemocyanin) , à savoir sa capacité à induire la production de tels anticorps.
Un polypeptide équivalent à un polypeptide de référence diffère de ce dernier par des modifications de la séquence d'acides aminés qui lui confère néanmoins une immunoréactivité identique, similaire, voire supérieure à celle du polypeptide de référence.
Par anticorps dirigé contre la protéine TrkA, on comprend un anticorps dirigé contre tout ou partie de la protéine TrkA.
Un polypeptide de l'invention tel que défini ci- dessus a une séquence peptidique qui consiste avantageusement en l'une quelconque des séquences choisies parmi à SEQ ID NO: 8, identifiées en fin de description, en particulier SEQ ID NO: 2 et SEQ ID NO: 4 à SEQ ID NO: 8. Il peut en outre être glycosylé.
L'invention a aussi pour objet un anticorps polyclonal ou monoclonal dirigé contre un polypeptide de l'invention. A partir dudit polypeptide, il est du ressort de l'homme du métier compétent d'obtenir un anticorps de l'invention, en utilisant des techniques classiques.
L'invention concerne également un procédé pour détecter, dans un échantillon biologique, tout ou partie de la protéine TrkA, sous une forme liée ou non au facteur de croissance nerveux (NGF) , procédé selon lequel on met en contact l'échantillon avec un anticorps dirigé contre au moins un fragment de la protéine TrkA, et on détecte le complexe immun formé entre ledit anticorps et ledit fragment, ledit anticorps étant choisi dans le groupe constitué des anticorps provoquant au moins l'une quelconque des phénomènes suivants : translocation cytoplasmique, périnucléaire ou nucléaire de tout ou partie du récepteur TrkA, suppression de la translocation nucléaire de TrkA, suppression du clivage protêolytique de
TrkA et interférence dans la signalisation cellulaire telle que activité agoniste ou antagoniste.
Selon une variante préférée de ce procédé, les anticorps sont choisis parmi ceux interagissant spécifiquement avec au moins l'un quelconque des polypeptides suivants : le polypeptide 71-87, le polypeptide 99-118, le polypeptide 125-141, le polypeptide
265-283, le polypeptide 379-392 et le polypeptide 382-417.
L'invention concerne aussi un procédé pour détecter, dans un échantillon biologique, un anticorps dirigé contre au moins un fragment immunoréactif de la protéine TrkA, cette dernière étant sous forme liée ou non au facteur de croissance nerveux (NGF) , procédé selon lequel on met l'échantillon biologique en contact avec un composé comprenant au moins un fragment immunoréactif, et on détecte la formation d'un complexe immun entre le composé et l'anticorps, ledit fragment immunoréactif consistant en un polypeptide de l'invention.
La mise en évidence d'un anticorps conformément au procédé précité peut révéler une dérégulation du fonctionnement biologique du récepteur TrkA, éventuellement associé à une maladie neurodégénérative .
Avantageusement le procédé de 1 ' invention est appliqué à un échantillon biologique choisi parmi le sérum, le liquide céphalo-rachidien, une biopsie de tissu, des cellules, un extrait cellulaire.
La formation des complexes précités peut être détectée par différents formats de bio-essais classiques bien connus de l'homme du métier, tels que les techniques d' immunoprécipitation, immunocytochimiques, immuno- enzymatiques (ELISA, Western) .
Enfin l'invention concerne les utilisations suivantes :
- l'utilisation d'un polypeptide de l'invention, pour obtenir une composition diagnostique, prophylactique ou thérapeutique destinée à détecter, prévenir ou traiter
un état pathologique associé à une maladie neurodégénérative,
- l'utilisation d'un anticorps spécifique d'un polypeptide de l'invention, pour obtenir une composition diagnostique, prophylactique ou thérapeutique destinée à détecter, prévenir ou traiter un état pathologique associé à une maladie neurodégénérative,
- l'utilisation d'un fragment nucléotidique, pour obtenir une composition diagnostique, prophylactique ou thérapeutique destinée à détecter, prévenir ou traiter un état pathologique associé à une maladie neurodégénérative, selon laquelle ledit fragment nucléotidique est choisi parmi les fragments qui codent pour un polypeptide de 1 ' invention. Exemple : Protocole de détection de
1* internalisation du récepteur TrkA dans la cellule
Des cellules PC12 exprimant le récepteur TrkA (B.B. Rudkin, P. Lazarovici, B.Z. Levi, Y. Abe, K. Fujita, G. Guroff, 1989, Cell cycle-specific action of nerve growth factor in PC12 cells : differentiation without prolifération. EMBO J. 8:3319-3325) ont été mises en culture.
Les cellules PC12 sont récoltées à l'aide d'une agitation mécanique dans solution saline de tampon phosphate (PBS) , puis sont utilisées en l'état (c'est-à- dire sans perméabilisation, ni fixation) ou bien après fixation pendant 15 minutes à température ambiante dans du paraformaldéhyde 1 %. Les cellules sont traitées avec un tampon de blocage (albumine de sérum bovin à 2 % (BSA) (Sigma, St Louis, MO) , sérum de veau foetal (Gibco/BRL) , PBS exempt de Ca2+ et de Mg2+ (TechGen International, France) ou milieu d'Eagle modifié de Dulbecco (DMEM) et de l'azide de sodium comme conservateur), puis elles sont exposées à des dilutions appropriées d'anticorps de l'invention dans le tampon de blocage pendant 20 minutes sur de la glace. Après trois lavages dans du PBS, les
cellules sont exposées à un second anticorps marqué par de l'isocyanate de fluorescéine ou par de la phycoérythrine, employé à des dilutions de 1/200 dans du tampon de blocage pendant 20 minutes sur de la glace. Les observations microscopiques sont faites à l'aide d'un microscope à fluorescence Olympus Vanox AH2.
Claims
1. Polypeptide possédant une immunoréactivité vis- à-vis des anticorps dirigés contre la protéine TrkA et consistant en l'un quelconque des polypeptides suivants : le polypeptide commençant à l'acide aminé 71 et finissant à l'acide aminé 87 de la séquence de la protéine TrkA identifiée par SEQ ID NO: 1, soit en abrégé le polypeptide 71-87, le polypeptide 125-141, le polypeptide 265-283, le polypeptide 379-392, le polypeptide 382-417, et les polypeptides équivalents possédant une immunoréactivité vis-à-vis desdits anticorps, identique ou similaire à celles des polypeptides précités.
2. Polypeptide selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste en l'une quelconque des séquences peptidiques choisies parmi SEQ ID NO: 2 et SEQ ID NO :4 à SEQ ID NO: 8.
3. Polypeptide selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il est glycosylé.
4. Procédé pour détecter, dans un échantillon biologique, tout ou partie de la protéine TrkA, sous une forme liée ou non au facteur de croissance nerveux (NGF) , caractérisé en ce que : on met en contact l'échantillon avec un anticorps dirigé contre au moins un fragment de la protéine TrkA, ledit fragment étant choisi parmi le polypeptide commençant à l'acide aminé 71 et finissant à l'acide aminé 87 de la séquence de la protéine TrkA identifiée par SEQ ID NO: 1, soit en abrégé le polypeptide 71-87, le polypeptide 99-118, le polypeptide 125-141, le polypeptide 265-283, le polypeptide 379-392, le polypeptide 382-417, et les polypeptides équivalents possédant une immunoréactivité vis-à-vis desdits anticorps, identique ou similaire à celles des polypeptides précités, ledit polypeptide étant éventuellement glycosylé.
et on détecte le complexe immun formé entre ledit anticorps et ledit fragment, ledit anticorps étant choisi dans le groupe constitué des anticorps provoquant au moins l'une quelconque des phénomènes suivants : translocation cytoplasmique, périnucléaire ou nucléaire de tout ou partie du récepteur TrkA, suppression de la translocation nucléaire de TrkA, suppression du clivage protéolytique de TrkA et interférence dans la signalisation cellulaire telle que activité agoniste ou antagoniste.
5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que les anticorps sont choisis parmi ceux interagissant spécifiquement avec au moins un polypeptide choisi parmi SEQ ID NO :1 à 8.
6. Procédé pour détecter, dans un échantillon biologique, un anticorps associé à une dérégulation du fonctionnement biologique du récepteur TrkA, procédé selon lequel on met l'échantillon biologique en contact avec un composé comprenant au moins un fragment immunoréactif, et on détecte la formation d'un complexe immun entre le composé et l'anticorps, ledit fragment immunoréactif consiste en un polypeptide choisi parmi le polypeptide 71- 87, le polypeptide 99-118, le polypeptide 125-141, le polypeptide 265-283, le polypeptide 379-392, le polypeptide 382-417, et les polypeptides équivalents possédant une immunoréactivité vis-à-vis desdits anticorps, identique ou similaire à celles des polypeptides précités, ledit polypeptide étant éventuellement glycosylé.
7. Procédé selon la revendication 4 ou 6, caractérisé en ce que l'échantillon biologique est choisi parmi le sérum, le liquide céphalo-rachidien, une biopsie de tissu, des cellules, un extrait cellulaire.
8. Utilisation d'un polypeptide choisi parmi le polypeptide 71-87, le polypeptide 99-118, le polypeptide 125-141, le polypeptide 265-283, le polypeptide 379-392, le polypeptide 382-417, et les polypeptides équivalents
possédant une immunoréactivité vis-à-vis desdits anticorps, identique ou similaire à celles des polypeptides précités, ledit polypeptide étant éventuellement glycosylé, pour obtenir une composition diagnostique, prophylactique ou thérapeutique destinée à détecter, prévenir ou traiter un état pathologique associé à une maladie neurodégénérative.
9. Utilisation d'un anticorps spécifique d'un polypeptide tel que défini à la revendication 8, pour obtenir une composition diagnostique, prophylactique ou thérapeutique destinée à détecter, prévenir ou traiter un état pathologique associé à une maladie neurodégénérative.
10. Utilisation d'un fragment nucléotidique, pour obtenir une composition diagnostique, prophylactique ou thérapeutique destinée à détecter, prévenir ou traiter un état pathologique associé à une maladie neurodégénérative, selon laquelle ledit fragment nucléotidique est choisi parmi les fragments qui codent pour un polypeptide tel que défini à la revendication 8.
11. Anticoprs polyclonal ou monoclonal dirigés contre un polypeptide défini à la revendication 1.
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