+

WO1999042100A1 - Inhibiteurs de la mort cellulaire - Google Patents

Inhibiteurs de la mort cellulaire Download PDF

Info

Publication number
WO1999042100A1
WO1999042100A1 PCT/JP1999/000772 JP9900772W WO9942100A1 WO 1999042100 A1 WO1999042100 A1 WO 1999042100A1 JP 9900772 W JP9900772 W JP 9900772W WO 9942100 A1 WO9942100 A1 WO 9942100A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
group
substituent
cells
general formula
acceptable salt
Prior art date
Application number
PCT/JP1999/000772
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Rei Asakai
Mikiko Sodeoka
Mikako Fujita
Miho Katoh
Original Assignee
Sagami Chemical Research Center
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sagami Chemical Research Center filed Critical Sagami Chemical Research Center
Priority to AU25486/99A priority Critical patent/AU2548699A/en
Priority to EP99905260A priority patent/EP1057484A4/en
Publication of WO1999042100A1 publication Critical patent/WO1999042100A1/ja

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems

Definitions

  • the present invention relates to a cell death inhibitor capable of suppressing cell death caused by stimulation of various biological substances or external stimuli, or stimulation by temperature, radiation, and the like, and a myologic disease, circulatory disease, hepatitis, and kidney injury.
  • a cell death inhibitor capable of suppressing cell death caused by stimulation of various biological substances or external stimuli, or stimulation by temperature, radiation, and the like, and a myologic disease, circulatory disease, hepatitis, and kidney injury.
  • the present invention relates to the use of 3 ⁇ 4, im, cells as a preservative, and to the assay method for searching for inhibitors. Background art
  • Apoptosis is the death of cells using the soaring of the cells themselves, and the general fiber is (1) chromatin aggregation, (2) cell shrinkage, (3) fine blebbing (shape, ( 4) nuclear fragmentation, (5) formation of apoptotic bodies, (6) DNA fragmentation, (7) phagocytosis by neighboring cells and macrophages, etc. Or cells that cause cell swelling and melting and collapse after a short period of execution of their own suicide program due to stimulants, etc.
  • Necrosis but the type of cell, the environment in which it is placed, and cell death Depending on the type and intensity of the evoked stimulus, intracellular activity may result in cell death, but not necessarily all of the above-mentioned characteristics of apoptosis. Things in some cells In the present invention, such cell death is also included in apoptosis.
  • Cells that cause apoptosis due to apoptosis ⁇ 0 ⁇ include, for example, Alzheimer's disease (Bioscience terminology library: Apoptosis / Experimental Medicine, Supplement, 168 pages, 1996), muscular atrophy (spinal) muscular artophy, SMA) (BioScience term library: Apoptosis / Experimental medicine special volume, 173 pages, 1996), amyotrophic lateral sclerosis (ALS) (BioScience term library: Apoptosis / experiment) Medical extra volume, 176 pages, 1996), No, 0 — Kinson's disease (J. Neurochem., 69, 1612, 1997), Huntington's disease (J.
  • Neurosci., 15, 3775, 1995 Neurodegenerative diseases such as retinitis pigmentosa and glaucoma (Bio Science Terminology Library I: Apoptosis / Experimental Medicine, Supplement, 196, 1996), cerebellar degeneration, neonatal nuclear jaundice, etc. (Progress in Drug Research, 48, 55, 1997) Year), muscular dystrophy (J. Clinical
  • Ibrary Apoptosis / Experimental Medicine, Supplement, 162, 1996), »Disease (Critical Care Medicine, 25, 1298, 1997), Myeloid variant females such as ffi aplastic anemia (Leukemia, 7, 144, 199 Zen), insulin-dependent diabetes mellitus (Diabetes, 44, 733, 1995 ⁇ ), prion diseases such as Creutzfeld 'Jakov' disease (J. Neural Transmission. Supplementum, 50, 191, 1997), etc. Also, in the case of ⁇ -transplantation, the activity that occurs when the transplanted perfusate is reperfused due to the arrest caused by cardiac arrest or removal of the donor due to cardiac arrest or extirpation.
  • lit is the key to the survival rate of fiber after transplantation, and ⁇ is extracted from donors. Therefore, it is expected that the preservability of 1 & ⁇ or the like will be improved by adding the compound which suppresses cell death to these organs or the preservation solution.
  • Primary cultured cells removed from a living body are often difficult to culture, unlike cancer cells or immortalized cell lines. This means that for long-term cultivation, it is necessary to add various growth factors and the like to the medium with an appropriate key according to the type of each cell, and apoptosis can easily occur in some cases. This is because Therefore, when culturing cells for research or any other purpose, it is expected that efficient cultivation will be possible by adding a compound that suppresses cell death to the culture solution.
  • Apoptosis is caused by a variety of physiological substances depending on the cell type, such as cytokines such as interlipids, hormones such as gnorecocorticoid, glutamine, neuroexcitable amino acids such as fuji, and membranes typified by Fas ligand. It is known to be caused by proteins, etc. It is also caused by defects such as growth factors. Examples of apoptosis-inducing agents common to various cells include active acid generators such as hydrogen peroxide, NO generators such as SNPs, heat and radiation, and other agents having apoptosis-inducing activity. Have been reported.
  • apoptosis inhibitors include physiological inhibitors such as various growth factors, trophic factors, and hormones depending on the type of cells, antioxidants such as ⁇ -acetylcysteine, and the like.
  • Modified peptide-type inhibitors of caspases are known.
  • some examples of peptide-based growth factors and nourishing factors that are used for the treatment of filament cell recovery after the Zhi-Dai method and for the prevention of divine spore death due to divine disease or trauma are mentioned.
  • 2-octa-3-indolinolemaleimide is a derivative of bisindole maleimide which has protein kinase C inhibitory activity. Although it has been reported (e.g., WO95 / 30682, WO97 / 34890, WO97 / 09339, JP-A-2-174778), it is important to note that these derivatives show a cell death inhibitory action. No reports at all. It has been reported that bisindolinolemaleimide derivative has an inhibitory activity on protein kinases, particularly protein kinase C (for example, JP-A-2-306974, DE 3835842), and its use as a crane is known. However, there is no report that these names show a cell death inhibitory effect.
  • protein kinase C for example, JP-A-2-306974, DE 3835842
  • Euro-Collins solution and UW solution are generally used as Ml storage solution (Transplantation, Vol. 27, p. 172, 1992), and various antioxidants are used for the purpose of preventing the above-mentioned activity disorder. It has been reported that the addition of an agent (radical force benzene) has been attempted and the direction of preservation growth has been reported (eg, Transplantation, 27, 15, 1992: 26, 62, 1991: 25, 596). Trans Proc, 17, 1454, 1985). However, its preservation was not always enough, and higher and higher rates were required.
  • Assays for cell death inhibitors include the ability to perform extensive screening using cancer cells that are easy to culture or immortalized strain cells. In most cases, the apoptosis mechanism becomes abnormal and becomes immortalized, and in most cases, L and ⁇ have no effect in suppressing the death of normal cells. There is a need for a good and simple assay method. Disclosure of the invention
  • An object of the present invention is to provide a useful drug that suppresses cell death, which is expected as a preventive and therapeutic agent for the progression of various disease symptoms related to cell progression. is there.
  • the present inventors have conducted intensive studies to achieve the above object, and as a result, have found that the following inducers have a cell death inhibitory action, and have completed the present invention.
  • V and R 3 are each a hydrogen atom, an alkyl group which may have a substituent, an alkenyl group which may have a substituent, and an alkynyl which may have a substituent A group, an aryl group which may have a substituent, an optionally substituted C, acyl group, an alkoxy group or an aryloxy group which may have a substituent, An alkyl or aryloxy carbonyl group which may have a substituent, an aminocarbonyl group which may have a substituent, an alkyl or arylsulfonyl group which may have a substituent Represents an alkoxyl group or aryloxy group which may have a substituent, or a hydroxyl group; R 2 and R 4 each represent a substituent on an ind!
  • the types of the substituents may be the same or different, respectively, and include a ⁇ atom, an alkyl group which may have a substituent, and an alkenyl group which may have a substituent.
  • Arylthio, hydroxyl, R 5 represents a carboxyl group, a cyano group, a nitro group, an amino group which may have a substituent, or a halogen atom, and R 5 represents an alkyl group which may have a substituent, or a substituent.
  • Y 1 and Y 2 ⁇ Hi Y 3 and Y 4 are each ⁇ I, represents the two represent a hydrogen atom or a hydrogen atom and hydrate port cyclohexyl group or a turned by carbonylation group, and, R 1 And R 2 , f and R 3 , R 3 and R 4 , or R 2 and R 4 together form an optionally substituted hydrocarbon fiber or carbon containing heteroatoms to form a wisteria. You may. In the formula, a bond with a broken line represents a double bond or a single bond.
  • An effective inhibitor of indole derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof represented by the following: Alzheimer's disease, spinal muscular artophy (SMA), amyotrophic lateral sclerosis (ALS) Prevention or cure of symptomatic progression by inhibiting the death of myocyte in mycotic diseases such as Parkinson's disease, Huntington's disease, retinal dystrophy, glaucoma, or cerebellar degeneration; Prophylactic or therapeutic agent by suppressing death; prophylactic or therapeutic agent by suppressing cell death in muscular dystrophy; cerebral ischemia due to stroke, etc.
  • SMA spinal muscular artophy
  • ALS amyotrophic lateral sclerosis
  • cardiomyocyte death which is described in aortic right ventricular cardiomyopathy, or the treatment of fiber
  • suppressing the death of hepatocytes which is described in alcoholic or viral inflammation.
  • Z ′ represents a halogen atom, and R 1 , R 2 and R 5 have the same meanings as described above
  • a pharmaceutically acceptable derivative thereof or a pharmaceutically acceptable derivative thereof. It is a medicine that uses salt as an active ingredient.
  • the indole stimulus according to the present invention can be synthesized by the method described in Reference Examples, is commercially available (CALBI0CHEM; LC Laboratory, etc.), or is a known method (for example, Tetrahedron, vol. 44). J. Biol. Chem., 266, 15771, 1991; J. Med Chem., 35, 177, 994, 1992; J. Med. Chem., 36 , 21 pages, 199 Zen) or a similar method.
  • alkyl group in the alkyl which may have a substituent (s) may be any of linear, branched, or cyclic, for example, alkyl having 1 to 30 carbon atoms.
  • the alkenyl group in the “optionally substituted alkenyl group” may be any of a straight-chain, branched, or cyclic group, and is, for example, an alkenyl group having 2 to 30 carbon atoms.
  • aryl group a vinyl group, a crotyl group, a 1-pentene-1-yl group, a 2-pentene-1-ynole group and a 3-pentene group; an I-yl group, a 1-hexene-yl group, 2-hexyn-toinole, 3-hexen-tolyl, 2-cyclohexenyl, 2-cyclopentenyl, 8-heptadecen-toyl, 8,1 heptadecadiene-toyl 8,11,14-Heptadecatriene-toluyl group, 4,1,10,13-Nonadecatetraene-toluyl group, 9-octadecene-tolyl group, 9,12-year-old kutadecadiene -1-yl group, 9, 12, 15-year-old Kutadecatrien-Trinole group, 6, 9, 12-year-old Kutadecatrien-1-yl group, 5,
  • the alkynyl group in the “optionally substituted or unsubstituted alkynyl group” may be any of linear, branched and cyclic, and is, for example, an alkynyl group having 2 to 30 carbon atoms.
  • ⁇ the aryl group in the aryl group J which may have a substituent also includes a heteroaryl group, for example, a phenyl group, a naphthyl group, an anthranyl group, a pyrenyl group, a biphenyl group, 4-pyridizole group, 2-pyridinole group, pyrimidinyl group, pyrazinole group, pyridanidyl group, piperazinyl group, pyrazolyl group, Examples include a midazolyl group, a quinolinole group, a pyrrolinole group, an indolinole group, and a furinole group.
  • a heteroaryl group for example, a phenyl group, a naphthyl group, an anthranyl group, a pyrenyl group, a biphenyl group, 4-pyridizole group, 2-pyridinole group, pyrimidinyl group,
  • the acyl group in the "optionally substituted acyl group” may be any of linear, branched, cyclic, fiber, unsaturated aliphatic or aromatic, and may be, for example, An acetyl group having 2 to 30 carbon atoms, specifically, an acetyl group, a propionyl group, an isopropionyl group, a bivaloynole group, an oleoinole group, a cyclohexylcarbonyl group, an acroinole group, a crotonyl group, a benzoyl group, a naphthoyl group, And a nicotinyl group.
  • alkoxy or arylsoleoxycarbonyl group in the “optionally substituted alkoxy or aryloxycarbonyl group” may be a straight-chain, branched, cyclic, mu, non- It may be a saturated aliphatic or aromatic, such as methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, propyloxyl, isopropyloxycarbonyl, butoxycarbonyl, S-butoxycarbonyl, t-butoxycarbonyl.
  • a cyclopentyloxycarbonyl group a cyclohexyloxycarbonyl group, a pendinoleoxycarbonyl group, a benzyloxycarbonyl group, a phenyloxycarbonyl group, a pyridyloxycarbonyl group and the like.
  • alkyl or arylthiocarbonyl group in the “alkyl or arylthiocarbonyl group optionally having substituent (s)” may be a straight-chain, branched, cyclic, female, non-!
  • Mouth aliphatic or aromatic such as methylthiocarbonyl, ethylthiocarbonyl, propylthiocarbonyl, isopropylthiocarbonyl, butylthiocarbonyl, t-butylthiocarbonyl, cyclopentylo
  • groups such as a xyloxycarbonyl group, a cyclohexyloxytiocarbonyl group, a benzylthiocarbonyl group, a phenylthiocarbonyl group, and a pyridylthiocarbonyl group.
  • an optionally substituted aminocarbonyl group J is an unsubstituted rubamoyl group, or an optionally substituted alkyl group,
  • Group ethylaminocarbonyl group, propylaminocarbonyl group, isopropylaminocarbonyl group, butylaminocarbonyl group, t-butylaminocarbonyl group, cyclopentylaminocarbonyl group, cyclohexylamino
  • Examples include a carbonyl group, a benzylaminocarbonyl group, a phenylaminocarbonyl group, a pyridylaminocarbonyl group, a benzyloxyaminocarbonyl group, and the like.
  • alkyl or arylsulfonyl group in the "optionally substituted alkyl or arylsulfonyl group” is a straight-chain, branched, cyclic, It may be either aliphatic or aromatic, and examples thereof include methanesulfonyl, ethanesulfonyl, benzenesulfonyl, cyclohexanesulfonyl, and naphthalenesulfonyl.
  • the alkoxyl group or aryloxy group is a linear, branched, cyclic, fiber, non-fiber, aliphatic, Alternatively, it may be aromatic, for example, an alkoxyl group or an aryloxy group having 2 to 30 carbon atoms, specifically, a methoxy group, an ethoxy group, a propyloxy group, a t-butoxy group, an aryloxy group, or cyclopentyl. Oxy, cyclohexyloxy, pendinoleoxy, phenoxy and the like.
  • the alkyl or arylthio group in the alkyl or arylthio group J which may have a substituent (s) may be a straight-chain, branched, cyclic, open, non-cyclic, or non-!
  • an alkyl or arylthio group having 2 to 30 carbon atoms specifically, a methylthio group, an ethylthio group, a propylthio group, a t-butylthio group, an arylthio group, a cyclopentylthio group , Cyclohexylthio, benzylthio, phenylthio and the like.
  • an optionally substituted amino group means an unsubstituted amino group, Or an amino group substituted with an alkyl group or an aromatic group, for example, an ethyl amino group, a propylamino group, an isopropylamino group, a butylamino group, a t-butylamino group, a benzylamino group, a phenylamino group, a pyridylamino group, Groups such as a piperazinyl group and an indolinyl group.
  • halogen atom includes a fluorine atom, an atom, a bromine atom and an iodine atom.
  • anoalkyl group alkenyl group, alkynyl group, aryl group, acyl group, alkoxycarbonyl group, aryloxycarbonyl group, alkylthiocarbonyl group, arylthiocarbonyl group, aminocarbonyl group, alkoxyzole group, ⁇
  • substituent which the aryloxy group, alkylthio group, arylthio group, amino group, and the like may have include, for example, an alkyl group, an alkenyl group, an alkynyl group, an aryl group, an acyl group, an alkoxycarbonyl group, and an arylazo group.
  • Reoxycarbonizole alkizolethiocarbonyl, arylthiocarbonyl, aminocarbonyl, alkoxynole, aryloxy, alkylthio and arylthio groups, and specific examples thereof. Is the same as above.
  • substituents include an amino group, a halogen group, a nitro group, and an amino group (an acyl group, an alkoxycarbonyl group, an aryloxycarbonyl group, a carbamoyl group, a substituted sulfonyl group, an alkyl group, a cycloalkyl group , An aryl group and the like may be present as substituents), aralkyl groups such as a benzyl group, a phenethyl group and a naphthylmethyl group in addition to groups such as a cyano group, a hydroxyl group and a carboxyl group.
  • Pharmaceutically acceptable salts include those having an acid moiety, such as salts with fiber bases or organic bases, such as sodium salts, potassium salts such as potassium salts, calcium salts, and magnesium salts.
  • Alkali earth metal salts such as salts, ammonium salts, triethylamine salts, ethanolamine salts, lysine salts, arginine salts, quinoline salts, aliphatic or heterocyclic aromatic amine salts such as pyridine salts, tetramethylammonium salts
  • salts with citric acid or organic acids for example, hydrochloride, bromate, iodine Acid, sulfate, nitrate, phosphate, citrate, sake, apple, lactate, salicylate, malonate, fumarate, conodate, oxalic acid, ascorbate, etc. No.
  • отно ⁇ ески ⁇ can be selected as a dosage form when the compound according to the present invention is used as a medicine, for example, oral preparations such as tablets, capsules, powders, granules or liquids, anesthetics, rectal preparations, and external preparations for skin And parenteral administration agents such as inhalants.
  • Solid preparations can be prepared as is, using tablets, capsules, granules or powders as they are, using suitable additives.
  • additives include, for example, lactose or glucose, etc., starches, for example, fatty acids such as stearic acid, for example, salts such as magnesium aluminate metasilicate or anhydrous calcium phosphate, for example, polyvinylpyrrolidone or polyalkylene.
  • Glycols such as glycols, fatty acid salts such as calcium stearate or magnesium stearate, alcohols such as stearyl alcohol or benzyl alcohol, for example, methylcellulose, ethylcellulose, carboxymethylcellulose, hydroxypropyl methylcellulose, etc.
  • alcohols such as stearyl alcohol or benzyl alcohol, for example, methylcellulose, ethylcellulose, carboxymethylcellulose, hydroxypropyl methylcellulose, etc.
  • other commonly used additives such as water, gelatin, tanolek, vegetable oil, and arabia gum.
  • the liquid agent may be any suitable additive usually used in liquid preparations such as water, alcohols or plant-derived oils such as oil, peanut oil or sesame oil. Manufactured as a form of at agent.
  • suitable solvents include, for example, distilled water, an aqueous solution of lidocaine hydrochloride, physiological saline zK, an aqueous solution of glucose, ethanol, a liquid for intravenous fiffi (e.g., citric acid and sodium citrate). , Etc.), a liquid solution, etc., or a mixed solution thereof.
  • a powder which has been dissolved beforehand, or may be in the form of a powder or a solution to which an appropriate additive has been added, to be dissolved at the time of use.
  • the active ingredient cocoa butter, fatty acids Suppository base such as monoglyceride, polyethylene glycol, etc. may be heated and melted, poured into a mold, and cooled, or the activity may be dissolved in polyethylene glycol, soybean oil, etc., and then coated with a gelatin film. .
  • the active ingredient is added to petrolatum, beeswax, liquid paraffin, polyethylene glycol, etc., and if necessary, heated and kneaded to form an ointment, or rosin, alkyl acrylate After kneading with an adhesive such as coalescing, it is made into a non-woven fabric such as polyethylene and made into a fabric.
  • the active ingredient is dissolved or dispersed in a propellant such as chlorofluorocarbon gas, and the mixture is then placed in a pressure-resistant container to form an air-portable nozzle.
  • a propellant such as chlorofluorocarbon gas
  • the actual preferred dosage of the compound of the present invention varies depending on the type of the compounded fiber, the application and the treatment, and furthermore, the age, weight, and condition of the patient. Is 5 to 500 mg, and it is desirable to administer it once or several times.
  • the organ according to the present invention includes all kinds of ⁇ , such as heart, lung, liver, kidney, pancreas, and intestine.
  • the fibers according to the present invention include all fibers, for example, skin, cornea, bone marrow, blood vessels, bones and the like.
  • all the cells normally transformed cells, immortalized cell lines, cancerous cells, etc.
  • cells that have been genetically modified for therapeutic or research purposes, etc. for example, blood cells, islet cells of Langerhans, _L ⁇ cells, Kamigata cells, embryonic stem cells, and the like.
  • the compound of the present invention when used as a preservative for fibers, fibers, or cells, various forms of administration can be used, such as a culture solution or a preservation solution containing appropriate salts and nutrients.
  • a culture solution or a preservation solution containing appropriate salts and nutrients In addition to adding the present compound or its pharmaceutically acceptable salt, in the case of transplantation, it can be administered to a donor before extirpation by intracorporeal perfusion or intravenous administration.
  • the primary culture cells that can be used in the Atsey method of the present invention include all cells that can be isolated and cultured from animals, such as god vesicles, hepatocytes, kidney cells, skin cells, cardiomyocytes, vascular cells, and leukocytes.
  • ovarian cells such as erythrocytes, etc., and especially highly synchronized cells upon various apoptosis stimuli.3 ⁇ 4) Ovarian condyle fiber because it is easily observed with optical microscope fiber.
  • the apoptosis-inducing stimuli that can be used in the Atsey method of the present invention include all stimuli that can induce apoptosis in primary cells, such as deficiencies in serum, various long-term factors and hormones, hormones such as glucoconoreticoid, and the like.
  • Topical chemical mediators such as prostaglandin, cytokines such as TNF, physiological substances such as glutamic acid and pyrilrubin, or active acid generation such as Fas antibody, peroxygen benzoic acid, N0 reagent such as SNP, etoposide, etc. No. 6, staurosporine (for example, J. Cell Biol. 133, 1053, 1996), addition of various other cytotoxic drugs, and physical stimuli such as radiation and heat. .
  • Ovarian condyle cells (Porcine Ovarian Granulosa Cells, P0GC) were isolated and cultured from pig ovaries according to a known method (End ocrinology, 136, 3470, 1995). Wash the pig ovaries with PBS fir and use a syringe to withdraw P0GC from the follicles. This suspension is centrifuged to collect the cell fraction as "as", and the cell fraction is turbidized in PBS, and the operation of centrifugation is repeated three times to wash the cells. The P0GC obtained as ⁇ is made turbid in a medium (DMEM containing 10% calf serum), and the cell mass is broken by a pipetting operation.
  • DMEM containing 10% calf serum
  • a vesicle is a cell that surrounds the ovum in the follicle, proliferates and differentiates with follicle-stimulated honolemon (FSH) and luteinized honolemon (LH) according to the estrous cycle, and acquires progesterone production and secretion ability .
  • FSH follicle-stimulated honolemon
  • LH luteinized honolemon
  • Nonovulatory follicles eventually undergo apoptosis and disappear. This differentiation process can be reproduced by the following in vitro experiment according to a known method (Endocrinology, 136, 3470, 1995). Furthermore, as described below: If the culture is continued while maintaining the mn dangling ability, apoptosis occurs.
  • serum-free medium supplemented with FSH and LH (5 g / mL transfulin, 40 ng / m2, idrocortizos 4 mg / mL ⁇ serum albumin (BSA), After further culturing with ⁇ androstenedione and lOOng / mL FSH and 10ng / mL LH for 3 days, and further culturing with the same medium (replacement of the same set as above), the morphology changes from If the hormone-producing ability is activated and the cells are completely differentiated, the differentiated cells will die synchronously after about 5 days of further culturing.
  • FSH and LH 5 g / mL transfulin, 40 ng / m2, idrocortizos 4 mg / mL ⁇ serum albumin (BSA)
  • the cells were fully differentiated in the manner described ⁇ 2 and at 2 days after the final medium change adding prostaglandin F 2 flight (PGF 2 a) (50 g / mL), observation after 16 hours It was observed by light microscopy and electron II microscopy that the cells showed morphological changes apoptotic and died.
  • PGF 2 a pre-addition of the test compound 1 8 (3) was added, the culturing is continued when cells 3 ⁇ 40 Isuzu suppressed under the same conditions, and fibrillation survived more than 95 percent after 16 hours observation was.
  • Fiber example 4
  • the P0GC which had been isolated and cultured in the same manner as in Example 2, and reached subconfluence, was washed with a serum-free medium, and then a medium without serum and FSH and LH (5 / zg / mL transferrin, 40 ng / m , Idrocortisone, 4mg / mL BSA, 100nM androstenedione (Without hormone stimulation), the cells can continue to be cultured in a relatively undifferentiated state compared to cells (m 2) supplemented with FSH and LH. After culturing for a period of time (2 to 3 weeks), morphology characteristic of apoptosis and death were observed with a light microscope.
  • Murine condyle cells were infected with 40g of SV40 and cDM of steroid diene factor-1 (SF-1 / Ad4BP) to establish a 4B2 detail. These cells secrete progesterone in a protein kinase A-dependent manner.
  • the medium was replaced with DMEM containing 2% Jifil, and SNPs (0.5 m) were added, all cells showed morphological changes characteristic of apoptosis and died at 16 hours after observation.
  • cerebellar condylar cells were separated from the cerebellum of a 7-day-old rat and cultured. That is, after the separation operation described in Nigoshi Transliteration to MEM medium containing fetal calf serum (including 25 mM KC1, 2 mM glutamine), seeded in play Bok was co one shot with poly-lysine, and cultured for 48 hours ⁇ 2 Inkyube one coater according to a conventional method, cytosine - 1 - D (+)-arabinofuranoside (Ara-C) (10 ⁇ M) was added to further culture the fiber.
  • cytosine - 1 - D (+)-arabinofuranoside (Ara-C) (10 ⁇ M) was added to further culture the fiber.
  • Human blood (2 mL) was centrifuged (1000 rpm, 5 min), ⁇ containing erythrocytes was washed three times with DMM medium, and then turbidized (about 5 ⁇ 10 cells / mL) in the same medium (15 mL). 10 L of this suspension was taken, 10% FCS / DMEM (10 mL) was added, and the mixture was dispensed into a 48-well plate (500 ⁇ ⁇ 11).
  • Mouse mouse cells were separated and cultured in accordance with a known method (separation and cultivation of blastocysts, Maruzen, 1987, p. 59). That is, the mouse skin was depilated with a depilatory cream, disinfected with Hibiten, and the skin fiber was cut into small pieces. Bottom accordance from the conventional method in DMEM medium containing 10% ⁇ shea ⁇ Kiyoshi while submerged as weigh the slides so as not float _b ⁇ 'et L ⁇ C0 2 Inkyubeta one the skin piece is de-Mesh for culture And cultured. When the fibroblasts migrated, the slide glass and skin pieces were removed, and the culture was continued.
  • Kidneys removed from the mice were minced in a serum-free DMEM medium and dispersed by tribcine / EDTA treatment. Were cultured in C0 2 incubator according to a conventional method in DMEM medium containing 103 ⁇ 4 ⁇ shea womb Qing transferred discarded after standing supernatant culture dish. After the thread had adhered and cell colonies had formed, they were removed and passaged in the same medium. Addition of SNP (0.5 mM) known as N0 bioreagent to the monolayer kidney cells (morphologically not similar to fibroblasts) obtained in this way can be observed after 12 hours. Light microscopy showed that all cells died with morphological changes characteristic of apoptosis. Therefore, test compound 14 (5 M) or!
  • Lithium aluminum hydride (27 mg, 0.72 mmol) was added to a solution of compound 14 (163 mg, 0.477 benzyl) synthesized in a known method (Tetrahedron, vol. 44, p. 2887, 198) dissolved in THF (lOraL). The mixture was stirred at room temperature for 29 hours, and water (8 mL) was added to the solution, and the solution was adjusted to pH 2 with a 2N salt solution E. THF was distilled off by concentration, and the concentrate was extracted with dichloromethane and ethyl acetate.
  • the indole inducer according to the present invention suppresses cell death caused by a wide range of cell death-inducing stimuli, and thus prevents all diseases involved in the onset and exacerbation of cells ⁇ 6 ⁇ . Or it is considered useful for treatment. Therefore, Alzheimer's disease, circulating muscular fibrosis, muscular lateral sclerosis, and NO. — Neurodegenerative diseases such as Kinson's disease, Huntington's disease, retinal color degeneration, glaucoma, cerebellar degeneration, neonatal nuclear jaundice, cerebral ischemia due to muscular dystrophy, stroke, etc.
  • Neurodegenerative diseases such as Kinson's disease, Huntington's disease, retinal color degeneration, glaucoma, cerebellar degeneration, neonatal nuclear jaundice, cerebral ischemia due to muscular dystrophy, stroke, etc.
  • Cardiovascular heart disease myocardial ischemia and Sasyu's disorder
  • viral myocarditis e.g., dilated cardiomyopathy and chronic myocarditis
  • myocardial damage / cells in hypertrophic and failing hearts Death «sourced right ventricular cardiomyopathy, arcono lffiif inflammation and virus 1W inflammation, glomerulonephritis and hemolytic thighs, renal diseases such as ⁇ ⁇ syndrome, acquired myelodeficiency arts (AIDS), toxic necrosis mm (TEN), inflammatory skin diseases such as polymorphic exudates
  • 3 ⁇ 4® ⁇ (GVH), or 3 ⁇ 4 t-ray or various drugs including side effects from drugs such as 5 ⁇ agents ⁇ antiviral drugs, myelodysplasias such as sepsis, aplastic anemia, and insulin dependence It is used as a therapeutic drug for prion diseases such as diabetes mellitus, Creutzfeldt-Jakob disease, and dysfunction of transplanted organs, or as a medicament for stopping or suppressing the progression or exacerbation thereof, and as a preservative for cells and mmii.
  • the Atsey system using the primary cultured cells according to the present invention is considered to be useful for searching for a cell death inhibitor.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

明 細 細胞死抑制剤 技術分野
本発明は、各種生体物質若しくは外 «質刺激、或いは温度、放射線等の刺 激によって起こる細胞死を抑制しうる細胞死抑制剤、及びその神 性疾患、 循環器系庑患、 肝炎、 腎 害、、炎症做膚疾患、腿線障害、 ゥィルス性 5 ^害、、 プリオン病又は β等の移植時の機能不全等の治療若しくは症状の進行の予防 の為の医薬としての用途、生体から取り出した ¾、 im,細胞の保存剤とし ての用途、並びに細 «抑制物質を探索するためのァッセィ法に関する。 背景技術
近年の細 B^Eに関する研究の進展により、様々な病気の進行、増悪に、生体 にとつて必須な細胞の細！^、特にアポトーシスが関っていることが明らかと なってきた (Science, 267巻， 1456頁， 1995年)。 アポトーシスとは、細胞が自 らに備わる騰を用いて実 る細胞死であり、 その一般的纖としては (1) クロマチン凝集、 （2)細胞縮小、 （3)細 «のブレツビング ( 形 、 （4)核 の断片化、 （5)アポトーシス小体の形成、 （6)DNAの断片化、 （7)近隣の細胞やマ クロファージによる貪食などが挙げられる。 これに対し、過度の腿線、 熱、 あるいは刺激物質等により細歸自らに備わる自死プログラムを実行する間も 無く細胞の膨化および融解を起こし崩壊する細胞 ヾネクローシスと呼ばれて いる。 しかし細胞の種類や置かれた環境、細胞死誘発刺激の種類や強度により 細胞内^^働 、た結果の細胞死の場合でも必ずしも上記のアポト一シスの特 徵の全てを示さない場合もある。 また? 学的にネクローシスと呼ばれている ものには、何らかの細胞内 働いた結果起こる細胞死も含まれている。本 発明ではこのような細胞死もアポトーシスに含めるものとする。 アポトーシスによる細胞 ¾0ヾその進 悪の原因となっている疾患としては、 例えば、 ァルツハイマ一病 (Bio Science用語ラィブラリ一：アポトーシス/実験 医学別冊， 168頁， 1996年)、 籠性筋萎縮症 (spinal muscular artophy, SMA) (Bio Science用語ライブラリー：アポト一シス/実験医学別冊， 173頁， 1996年)、 筋萎縮性側索硬化症 (ALS) (Bio Science用語ライブラリー:アポ卜一シス/実験 医学別冊， 176頁， 1996年)、ノ、0—キンソン病 (J. Neurochem. , 69巻， 1612頁， 1997年)、ハンチントン病 (J. Neurosci. , 15巻， 3775頁， 1995年)、網膜色素 変性症や緑内障 (Bio Science用語ライブラリ一:アポトーシス/実験医学別冊， 196頁， 1996年)、小脳変性、新生児核黄疸などの神経変性疾患 (Progress in Drug Research, 48巻， 55頁， 1997年)、筋ジストロフィー (J. Clinical
Investigation, 99巻， 2745頁， 1997年)、脳卒中等による脳麵およびその後 の遅発性神^ ffl胞死 (DND) (Bio Science用語ライブラリー：アポトーシス/実験 医学別冊， 180, 182頁， 1996年)、心筋纏等による勉性心疾患 (心筋她と 再灌流障害)、 ウィルス性心筋炎、 自己髓性心筋炎 (拡張型心筋症や 1t¾心筋 炎等)、 S巴大心および不全心にみられる心筋障害/細胞死、 源性右室心筋 症 (Bio Science用語ライブラリー：アポトーシス/実験医学別冊， 198頁， 1996 年、血管と内皮， 7巻， 357, 364， 370頁， 1997年)、 アルコール注肝炎やウイ ルス性肝炎 (Bio Science用語ラィブラリ一:アポト一シス/実験医学別冊， 190 頁， 1996年)、糸球体腎炎や溶血 ^症 等の腎疾患 (Bio Science用語 ライブラリ—:アポト—シス/実験医学別冊， 192頁， 1996年)、後天性髓不全 症 (AIDS) (Bio Science用語ライブラリー:アポトーシス/実験医学別冊， 15 6頁， 1996年、血液 '髓'聽， 2巻， 432頁， 1997年)、 中毒性敲概醒 (TEN)、多形滲出 Iffl斑などの炎症性皮膚疾患や脱毛症ならびに移植片宿主反 応 (GVH) (Bio Science用語ライブラリー:アポトーシス/実験医学別冊， 194頁， 1996年)、 さらには腿線障害 (Bio Science用語ライブラリー:アポト一シス/ 実験医学別冊， 160頁， 1996年)ゃ抗癌剤ゃ抗ウィルス薬等による副作用の他、 アジ化ナトリゥム、青酸力リゥム等の毒性薬物による障害 (Bio Science用語ラ イブラリー:アポトーシス/実験医学別冊， 162頁， 1996年)、 »症 (Critical Care Medicine, 25巻， 1298頁， 1997年)、 ffi不良性貧血などの骨髄異形雌 (Leukemia, 7巻， 144頁， 199禅)、 インスリン依存性糖尿病 (Diabetes, 44巻， 733頁， 1995^·)、 クロイツフェルト 'ヤコフ"病などのプリオン病 (J. Neural Transmission. Supplementum, 50巻， 191頁， 1997年)等があげられる。 また、 Ιβ移植におし、ても、 ドナーの心停止あるいは摘出により瞧状態におかれた 騰に移植徹液が再灌流する際におこる活性瞧ゃ種々のケミカルメデイエ —ターによる細胞のアポトーシスが移 ¾βの機能不全の原因であることが示 唆されている (例えば、移植， 27卷， 15頁， 1992年)。 また、露、繊、細胞 移植後の拒 も宿主免疫細胞による攻撃により移植された細胞がアポトー シスを起こした結果ととらえることカヾできる。従って細胞死を抑制する化 はこれらの,の有効な治療または症状の進行、謝匕を停止もしくは抑制する 医薬となりうると考えられる。
litある 、は繊の移植にお 、ては、 ドナーから摘出した βある 、は繊 の保存忱態カヾ移植後の生着率の鍵を握る。従って細胞死を抑制する化^ ¾をこ れら臓器または,保存液に添加することにより 1&ϋや の保存性が向上す ると期待される。 また、 生体から取り出してきた初代培養細胞は、癌細胞ある 、は不死化した株化钿胞と異なりその培¾6困難なことが多 ヽ。 これは長期培 養のためにはそれぞれの細胞の種類に応じて培地に様々な成長因子などを適切 な鍵で添加培養する必要があり、 ±咅« ^件によっては容易にアポト一シスを 起こしてしまうためである。従って研究あるいは隨目的で細胞を培養する場 合に、 細胞死を抑制する化^ ¾を培養液に添加することにより、効率のよい培 養を可能にすると期待される。
アポトーシスは、細胞の種類により様々な生理的な物質、例えばインタ一口 ィキンなどのサイトカインゃグノレココルチコィドなどのホルモン、 グルタミン 藤 Αなどの神経興奮性アミノ酸や Fasリガンドに代表されるような膜蛋白 質などで引き起こされることが知られており、 また逆に細胞によつては特定の 成長因子などの欠損によっても引き起こされる。 さらに種々の細胞に共通のァ ポトーシス誘発剤としては、過酸化水素などの活性酸藤発生剤、 SNPなどの NO 発生剤、熱、放射線などがあげられ、他にもアポトーシスの誘導活性をもつ化 が数多く報告されている。 iSの研究によると、 その上流では多彩な情報 伝達系がからむアポトーシスシグナルの伝達系も下流では一連のシスティンプ 口テア一ゼであるカスパーゼ活性化漏に るらしいことが明らかになつ てきているが (Cell, 91巻, 443頁， 1997年)、 その詳細な^ ΐメカニズムの解明 は今後の飄である。
アポ卜一シス抑制剤として までに知られているものとしては、細胞の種 類に応じて各種成長因子や栄養因子、 ホルモン等の生理的な抑制剤、 Ν-ァセチ ルシスティンなどの抗酸化剤、 カスパーゼ類の修飾べプチド型の阻害剤などが 知られている。 この中で、一部のペプチド性の成長因子や神 ^養因子などが ィ匕 法後の造fil钿胞回復や神 性 患や外傷による神謹胞死を防ぐ治療 に用いられている例はあるものの (Proc. Natl. Acad. Sci. U. S.ん， 90巻， 795 1頁， 199婢， Nature, 367卷， 368頁， 1994年， Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A .， 89巻， 11249頁， 1992年)、抗酸化剤やカスパーゼ類の阻铺 Jは細胞レベル の実験に用いられるにとどまっており、 より生体内での安定性がより高く、経 口投与可能な非べプチド型低好アポト一シス阻割の開発が望まれていた。 また、 実際の疾病で個々の細胞にアポトーシスを引き起こす生理的誘導因子や 抑制因子などがすべて明らかになつて ヽる例は少なく、 それらカヾ未解明の薩 にも有効と考えられる全く新しいタイプの細胞死抑制剤、 とくにアポトーシス 抑制剤が求められていた。
一方、 2 -八口- 3-インドリノレマレイミド誘稱は、 プロテインキナーゼ C阻害 活性をもつビスィンドールマレイミ ド誘 ·ゃィンドロカゾレバゾ一ル誘導体の 合成中間体として様々な誘¾ ^の合^^報告されてしヽたが (例えば WO95/30682, WO97/34890, WO97/09339, 特開平 2- 174778)、 これらの誘導体が細胞死抑制作 用を示すことにつ 、ては一切報告がなし、。 また、 ビスインドリノレマレイミド誘^:は、 プロテインキナーゼ、特にプロ ティンキナーゼ C阻害活性があることが報告されており（例えば特開平 2- 306974、 DE 3835842)、鶴剤等としての用途は公知であるが、 これらの誘稱が細胞 死抑制作用を示すことにつしヽては一切報告がな 、。
さらに、 Ml器保存液としては一般に Euro- Collins液や UW液などが用いら れており（移植， 27巻， 172頁， 1992年)、 さらに上記の活性 障害を防ぐ目 的で種々の抗酸化剤ゃラジカルス力ベンジャ一の添加か試みられ保存成锖の向 J ^報告されている (例えば、移植， 27巻， 15頁， 1992年： 26巻， 62頁， 1991 年： 25巻， 596頁， 1990年； Trans Proc, 17巻， 1454頁， 1985年)。 しかしその 保存 «は必ずしも十分ではなく、 より高 、 率が求められて 、た。
細胞死抑制剤のァッセィ法としては、 培養の容易な癌細胞や不死化した 株ィ匕钿胞を用 ヽて広範なスクリ一ニングが行われて ヽる力^ これらの細胞はな んらかの形でそのアポト一シスの仕組みに異常をきたして不死化して t、る場合 がほとんとであり、正常細胞の細胞死を抑制する化^ ¾が効果を示さな L、¾ があり、 よりよい簡便なァッセィ法が求められて 、た。 発明の開示
本発明の目的は、細胞 その進 ii±t悪に関つてし、る種々の疾患の症状の進 行の予防および治療薬として期待される、細胞死を抑制する有用な薬剤を提供 することにある。
本発明者らは、 上記目的を達成せんと鋭意検討した結果、 下記の誘 ¾ ^が細 胞死抑制作用を有することを見いだし、本発明を完成させた。
すなわち本発明は、下記一般式 [I]
[I]
Figure imgf000007_0001
(式中、 Xは麟原子または N-R5を表し、 Zはハロゲン原子または
Figure imgf000008_0001
を表し、 （V, R3はそれぞれ に水素原子、 置換基を有していてもよいアルキ ル基、 置換基を有していてもよいアルケニル基、置換基を有していてもよいァ ルキニル基、置換基を有していてもよいァリール基、 置換基を有していてもよ C、ァシル基、置換基を有してし、てもよいアルコキシもしくはァリ一ルォキシカ ルポ二ル基、置換基を有していてもよいアルキルもしくはァリ一ノレチォカルボ ニル基、 置換基を有していてもよいァミノカルボニル基、 置換基を有していて もよ 、アルキルもしくはァリ一ルスルホニル基、置換基を有していてもよいァ ルコキシル基もしくはァリールォキシ基、 またはヒドロキシル基を表し、 R2, R4はそれぞれィンド ！^上の置換基を表し、 置換基の艱び置換位置 (ィン ドーノレ環の位置番号で 2, 4， 5， 6ある 、は 7位)ならびに置換基の種類はそれぞれ 同じでも異なっていてもよく、 τΚ素原子、 置換基を有していてもよいアルキル 基、置換基を有していてもよいアルケニル基、 置換基を有していてもよいアル キニル基、 置換基を有していてもよいァリ一ノレ基、 置換基を有していてもよい ァシル基、置換基を有していてもよしヽアルコキシもしくはァリ一ルォキシカル ボニル基、 置換基を有して tヽてもよいアルキルもしくはァリ一ルチオカルボ二 ゾレ基、 置換基を有していてもよいアミノカルボニル基、置換基を有していても よ 、アルキルもしくはァリ一ルスルホニル基、置換基を有していてもょ 、アル コキシル基もしくはァリ一ルォキシ基、 置換基を有して L、てもよいアルキルも しくはァリ一ルチオ基、 ヒドロキシル基、 カルボキシル基、 シァノ基、ニトロ 基、置換基を有していてもよいアミノ基、 またはハロゲン原子を表し、 R5は置 換基を有していてもよいアルキル基、 置換基を有していてもよいアルケニル基、 置換基を有していてもよ t、アルキニル基、 置換基を有していてもよいァリール 基、置換基を有していてもよいアルコキシル基もしくはァリールォキシ基、置 換基を有していてもよいアミノ基、 ヒドロキシル基もしくは水素原子を表す。
Y1と Y2及ひ Ύ3と Y4はそれぞれ^ Ϊに、 2個の水素原子あるいは水素原子とヒド 口キシル基を表すか、 または となってカルボ二ル基を表し、 また、 R1と R2、 f と R3、 R3と R4、 または R2と R4は となって置換基を有していてもよい炭化 水纖あるいはヘテロ原子を含む炭ィは藤を形成していてもよい。式中、破 線をともなう結合は二重結合または単結合を表す。）で表されるインド一ル誘 またはその医薬として許容されうる塩を有効 とする、細 抑制剤； アルツハイマー病、徹性筋 (spinal muscular artophy, SMA)、筋萎縮 性側索硬化症 (ALS)、パーキンソン病、ハンチントン病、網膜色 変性症、緑 内障または小脳変性などの神鍵性 患に対する神細胞死を抑制することに よる症状の進行の予防または治 «；新生児核黄疸に対する神 钿胞死を抑制 することによる予防または治療薬；筋ジストロフィーに する細胞死を抑制す ることによる症状の進行の予防または治療薬；脳卒中等による脳虚血またはそ の後の遅 神 0¾ ΕΦΝΙ))に文 る神 胞死を抑制することによる症状 の進行の予防または治療薬；心筋 等による 性心^ Β、 ウィルス性心筋 炎、 自己髓性心筋炎、 肥大心もしくは不全心にみられる心筋障害/細胞死ま たは不麵源性右室心筋症に文 る心筋細胞死を抑制することによる症状の進 行の予防または治纖；アルコ一 i 炎もしくはウィルス冊炎に文 る肝 細胞の死を抑制することによる症状の進行の予防または治纏；糸球体腎炎や 溶血性尿毒症症候群等の腎疾患に対する腎細胞の死を抑制することによる症状 の進行の予防または治療薬；後天性髓不全症鍵 (AIDS)に文 る删な T細 胞の死を抑制することによる症状の進行の予防または治 5β；中毒性 ¾^^Ε (ΤΕΝ)、多形滲出性紅斑などの炎症性皮膚疾患、脱毛症または移植片宿主 mm)に対する細胞死を抑制することによる症状の進行の予防または治療 薬；放射線による障害もしくは抗癌剤ゃ抗ウィルス薬などの薬剤による副作用 を含む種々の薬物による障害に対する細胞死を抑制することによる障害や副作 用の予防または治 «；敗血症に対する細胞死を抑制することによる症状の進 行の予防または治療薬；胜不良性貧血などの髓異形雌に財る、骨髄由 ¾9胞の死を抑制することによる症状の進行の予防または治療薬；インスリン 依存性糖尿病に文付る、細胞死を抑制することによる症状の進行の予防または 治療薬；プリオン病に対する神経細胞死を抑制することによる症状の進行の予 防または治療薬；藤、 ,観または細腿植時の移植艦、繊または細胞の 機能不全の予防または治療薬；薦、纖および細胞の保存剤；並びに初 f ¾ ■胞に I»匕合物の存在下に細胞死誘導刺激を加えるか若しくは細胞死誘導 刺激を加えた直後に試験化^ ¾を加え細胞の死滅割合を評価することを ¾と する細胞死抑制物質のアツセィ法を提供するものである。
さらに、本発明は、 下記一般式 [II] 一 [Π]
Figure imgf000010_0001
(式中、 Z'はハロゲン原子を表し、 R1 , R2と R5は前記と同じ意味を表す。）で表 される 2-ハロ- 3-インドリルマレイミド誘導体またはその医薬として許容され うる塩を有効成分とする医薬を!^するものである。
以下、本発明をさらに詳細に説明する。 発明を実施するための最良の形態
本発明に係るィンドール誘難は、参考例に示した方法によって合成するこ とができる他、 市販されているか (CALBI0CHEM社； LC Laboratory社等)、 また は公知の方法 (例えば、 Tetrahedron, 44巻, 2887頁, 1988年； J. Biol. Chem. , 266 巻， 15771頁, 1991年； J. Med Chem.， 35巻, 177頁， 994頁， 1992年； J. Med. Chem.， 36 巻, 21頁, 199禅）もしくはその類似の方法により合成することができる。
本明細書中、 「置換基を有していてもよいアルキル ¾におけるアルキル基 とは、直鎖状、 分岐状、環状いずれでもよく、例えば炭素数 1〜30のアルキル 基、 具体的にはメチル基、 ェチル基、 プロピル基、 イソプロピル基、 ブチル基、 イソブチル基、 s -プチノレ基、 t -プチノレ基、 ペンチル基、 イソペンチル基、 ネオ ペンチル基、 へキシル基、 ヘプチル基、 ォクチル基、 ノニル基、 デシル基、 シ クロプロピル基、 シクロブチル基、 シクロペンチル基、 シクロへキシル基、 シ クロへプチル基、 ゥンデシル基、 ドデシル基、 トリデシル基、 テトラデシル基、 ペンタデシル基、 へキサデシル基、 14-メチルペン夕デシル基、 6-メチルペン 夕デシル基、 ォクタデシル基、 ィコシル基、 テトラコシル基などがあげられる。 本明細書中、 「置換基を有していてもよ 、アルケニル基」におけるアルケニル 基とは、 直鎖状、 分岐状、 環状いずれでもよく、 例えば炭素数 2〜30のァルケ ニル基、 具体的にはァリル基、 ビニル基、 クロチル基、 1-ペンテン- 1-ィル基、 2 -ペンテン- 1 -ィノレ基、 3-ペンテン -； I-ィル基、 1-へキセン- ィル基、 2-へキ セン-卜ィノレ基、 3 -へキセン-卜ィル基、 2-シクロへキセニル基、 2 -シクロべ ンテニル基、 8-ヘプタデセン -トイル基、 8, 1トヘプタデカジエン-トイル基、 8 ， 11, 14 -ヘプタデカトリエン-卜ィル基、 4， 1, 10, 13 -ノナデカテトラェン -卜ィ ル基、 9-ォクタデセン - ィル基、 9， 12 -才クタデカジエン- 1-ィル基、 9, 12, 15 -才クタデカトリェン-卜ィノレ基、 6， 9, 12 -才クタデカトリェン -1 -ィル基、 5, 8， 11, 14 -ィコサテトラェン- ィノレ基、 5， 8， 11, 14， 17 -ィコサペンタエン -1 -ィル 基、 4, 7, 10, 13, 16, 19-ドコサへキサェン-トイル基などがあげられる。
本明細書中、 「置換基を有して L、てもよいアルキニル基」におけるアルキニル 基とは、 直鎖状、 分岐状、 環状いずれでもよく、 例えば炭素数 2〜30のアルキ ニル基、 具体的にはェチニル基、 プロパルギル基、 トペンチン-トイル基、 2- ペンチン- 1 -ィル基、 3-ペンチン -1-ィル基、 卜ォクチン- 1-イノレ基、 8 -へプタ デシン - 1-イノレ基などがあげられる。
本明細書中、 「置換基を有していてもよいァリール基 Jにおけるァリーノレ基と は、 ヘテロァリール基をも包含し、 例えばフエニル基、 ナフチル基、 アンスラ ニル基、 ピレニル基、 ビフエ二ノレ基、 4-ピリジゾレ基、 2-ピリジノレ基、 ピリミジ ニル基、 ピラジ二ノレ基、 ピリダニジル基、 ピペラジニル基、 ピラゾリル基、 ィ ミダゾリル基、 キニリノレ基、 ピロリノレ基、 インドリノレ基、 フリノレ基などがあげ られる。
本明細書中、 「置換基を有していてもよいァシル基」におけるァシル基とは、 直鎖状、 分岐状、 環状、 纖、 不飽和の脂肪族、 あるいは芳香族いずれでもよ く、 例えば炭素数 2〜30のァシル基、 具体的にはァセチル基、 プロピオニル基、 イソプロピオニル基、 ビバロイノレ基、 ォレオイノレ基、 シクロへキシルカルボ二 ル基、 ァクロイノレ基、 クロ卜ノィノレ基、 ベンゾィル基、 ナフトイル基、 ニコチ ノィル基などがあげられる。
本明細書中、 「置換基を有してし、てもよいアルコキシもしくはァリ一ノレォキ シカルボニル基」におけるアルコキシもしくはァリーソレオキシカルボニル基は、 直鎖状、 分岐状、 環状、 mu, 不飽和の脂肪族、 あるいは芳香族いずれでも良 く、 例えばメトキシカルボニル基、 エトキシカルボニル基、 プロピルォキシ力 ルポ二ル基、 イソプロピルォキシカルボニル基、 ブトキシカルボニル基、 S-ブ トキシカルボニル基、 t-ブトキシカルボニル基、 シクロペンチルォキシカルボ ニル基、 シクロへキシルォキシカルボニル基、 ペンジノレオキシカルボニル基、 了リノレォキシ力ルポ二ル基、 フヱニルォキシカルボニル基、 ピリジルォキシ力 ルポニル基などの基があげられる。
本明細書中、 「置換基を有して 、てもよいアルキルもしくはァリ一ルチオ力 ルポニル基」におけるアルキルもしくはァリ一ルチオカルボニル基は、 直鎖状、 分岐状、 環状、 雌、 不！^口の脂肪族、 あるいは芳香族いずれでも良く、 例え ばメチルチオカルボニル基、 ェチルチオカルボニル基、 プロピルチオカルボ二 ル基、 イソプロピルチオカルボニル基、 プチルチオカルボニル基、 t -プチルチ ォカルボニル基、 シクロペンチルォキシチォカルボニル基、 シクロへキシルォ キシチォカルボニル基、 ベンジルチオカルボニル基、 フエ二ルチオカルボニル 基、 ピリジルチオカルボニル基などの基があげられる。
本明細書中、 「置換基を有していてもよいアミノカルボニル基 Jは、 無置換力 ルバモイル基、 あるいは置換基を有していてもよいアルキル基、 置換基を有し ていてもよい芳香族基、 z 酸基、 置換基を有していてもよいアルコキシル基、 置換基を有していてもよいアミノ基なとで置換されたカル 'モイノレ基を示し、 例えばカゾレバモイノレ基、 ェチルァミノカルボニル基、 プロピルァミノカルボ二 ル基、 ィソプロピルァミノカルボニル基、 プチルァミノカルボニル基、 t -ブチ ルァミノカルボニル基、 シクロペンチルァミノカルボニル基、 シクロへキシル ァミノカルボニル基、 ベンジルァミノカルボニル基、 フェニルァミノカルボ二 ル基、 ピリジルァミノカルボニル基、 ベンジルォキシァミノカルボニル基など の基があげられる。
本明細書中、 「置換基を有していてもよし、アルキルもしくはァリ一ルスルホ ニル基」におけるアルキルもしくはァリ一ルスルホニル基は、 直鎖状、 分岐状、 環状、 I ^口、 不脑の脂肪族、 あるいは芳香族いずれでも良く、 例えばメタン スルホニル基、 エタンスルホニル基、 ベンゼンスルホニル基、 シクロへキサン スルホニル基、 ナフタレンスルホニル基などの基があげられる。
本明細書中、 「置換基を有していてもよいアルコキシル基もしくはァリール ォキシ基」における、 アルコキシル基もしくはァリールォキシ基は、 直鎖状、 分岐状、 環状、 纖、 不! ^卩の脂肪族、 あるいは芳香族いずれでもよく、 例え ば炭素数 2〜30のアルコキシル基もしくはァリ一ルォキシ基、 具体的にはメ ト キシ基、 エトキシ基、 プロピルォキシ基、 t-ブトキシ基、 ァリルォキシ基、 シ クロペンチルォキシ基、 シクロへキシルォキシ基、 ペンジノレオキシ基、 フエノ キシ基などがあげられる。
本明細書中、 「置換基を有してし、てもよいアルキルもしくはァリ一ルチオ基 J における、 アルキルもしくはァリ一ルチオ基は、 直鎖状、 分岐状、 環状、 口、 不！ ^口の脂肪族、 あるいは芳香族いずれでもよく、 例えば炭素数 2〜30のアル キルもしくはァリールチオ基、 具体的にはメチルチオ基、 ェチルチオ基、 プロ ピルチオ基、 t-プチルチオ基、 ァリルチオ基、 シクロペンチルチオ基、 シクロ へキシルチオ基、 ベンジルチオ基、 フヱニルチオ基などがあげられる。
本明細書中、 「置換基を有していてもよいアミノ基」は、 無置換アミノ基、 あ るいはアルキル基、 芳香族基なとで置換されたアミノ基を示し、 例えばェチル アミノ基、 プロピルアミノ基、 イソプロピルアミノ基、 プチルァミノ基、 t-ブ チルァミノ基、 ベンジルァミノ基、 フヱニルァミノ基、 ピリジルァミノ基、 ピ ペラジニル基、 インドリニル基などの基があげられる。
本明細書中、 「ハロゲン原子」はフッ素原子、 原子、 臭素原子およびヨウ 素原子があげられる。
上記ァノレキル基、 アルケニル基、 アルキニル基、 ァリール基、 ァシル基、 ァ ルコキシカルボニル基、 ァリールォキシカルボニル基、 アルキルチオカルボ二 ル基、 ァリールチオカルボニル基、 ァミノカルボニル基、 アルコキシゾレ基、 ァ リールォキシ基、 アルキルチォ基、 ァリ一ルチオ基、 アミノ基等が有していて もよい置換基としては、 例えばアルキル基、 アルケニル基、 アルキニル基、 ァ リール基、 ァシル基、 アルコキシカルボニル基、 ァリーゾレォキシカルボニゾレ基、 アルキゾレチォカルボニル基、 ァリ一ルチオカルボニル基、 ァミノカルボニル基、 アルコキシノレ基、 ァリールォキシ基、 アルキルチオ基、 ァリールチオ基をあげ ることができ、 これらの具体例は前記と同様である。 その他の置換基としては、 アミノ基、 ハロゲン基、 ニトロ基、 アミノ基 (アシノレ基、 アルコキシカルボ二 ル基、 ァリールォキシカルボニル基、 力ルバモイノレ基、 置換スルホニル基、 ァ ルキル基、 シクロアルキル基、 了リ一ル基等を置換基として有していてもよい ) , シァノ基、 ヒドロキシル基、 カルボキシル基などの基の他、 ベンジル基、 フエネチル基、 ナフチルメチル基等のァラルキル基があげられる。
医薬として許容されうる塩としては、 酸部位を有する化^/につ ヽては纖 塩基または有機塩基との塩、 例えばナトリゥム塩、 力リゥム塩等のアル力リ金 属塩、 カルシウム塩、 マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、 アンモニゥ厶 塩、 卜リェチルァミン塩、 エタノ一ルァミン塩、 リジン塩、 アルギニン塩、 キ ノリン塩、 ピリジン塩等の脂肪族または複素環芳香族ァミン塩、 テトラメチル ァンモニゥム塩等の四級ァンモニゥム塩など、 あるいは塩基部位を有する化合 物については、 繊酸または有機酸との塩、 例えば塩酸塩、 臭素酸塩、 ヨウ素 酸塩、 硫酸塩、 硝酸塩、 リン酸塩、 クェン酸塩、 酒 塩、 リンゴ 、 乳酸塩、 サリチル酸塩、 マロン酸塩、 フマル酸塩、 コノヽク酸塩、 シユウ酸、 ァスコルビ ン酸塩等が挙げられる。
本発明に係る化 を医薬として使用する際の投与形態としては各種の形態 を選択でき、 例えば錠剤、 カプセル剤、 散剤、 顆粒剤もしくは液剤等の経口剤、 謝剤、 直腸投与剤、 皮膚外用剤、 吸入剤などの非経口投与剤等が挙げられる。 固体の製剤は、 そのまま錠剤、 カプセル剤、 顆粒剤または粉末の形態として することもできる力 適当な添加物を使用して製造することもできる。 そ のような添加物としては、 例えば乳糖もしくはブドウ糖等の麵、 澱粉類、 例 えばステアリン酸等の脂肪酸、 例えばメタケイ酸アルミン酸マグネシウムもし くは無水リン酸カルシウム等の 塩、 例えばポリビニルピロリ ドンもしくは ポリアルキレングリコールなどの合成高^?、 例えばステアリン酸カルシウム もしくはステアリン酸マグネシウム等の脂肪酸塩、 例えばステアリルアルコー ルもしくはべンジルアルコール等のアルコ一ノレ類、 例えばメチルセルロース、 ェチルセルロース、 カルボキシメチルセルロースもしくはヒドロキシプロピル メチルセルロース等の合成セルロース誘 ·、 その他、 水、 ゼラチン、 タノレク、 植物油、 ァラビアゴム等通常用いられる添加物が挙げられる。
液機剤は、 水、 アルコール類または例えば:^油、 ピ一ナッツ油もしくは ゴマ油等の植物由来の油等液状製剤において通常用いられる適当な添加物を使 用し、 懸濁液、 シロップ剤もしくは a t剤等の形態として製造される。
特に、 謝剤として投与する場合の適当な溶剤としては、 例えば'謝用蒸留 水、 塩酸リ ドカイン水溶液、 生理食 ¾zK、 ブドウ糖水溶液、 エタノール、 静脈 内 ffi i用液体 (例えばクェン酸及びクェン酸ナトリゥム等の水溶液)、 質溶 液等、 またはこれらの混合溶液が挙げられる。 これらの注射剤は予め溶解した ものの他、 粉末のまま或いは適当な添加物を加えたものを用時溶解する形態も とりうる。
直腸投与剤を製造するには、 活性成分及びカカオ脂、 脂肪酸のトリ、 ジおよ びモノグリセリ ド、 ポリエチレングリコールなどの坐剤用基剤とを加温して溶 融し型に流し込んで冷却するか、活性 をポリエチレングリコール、大豆油 などに溶解した後ゼラチン膜で被覆すればよ 、。
皮膚外用剤を製造するには、 活性成分をワセリン、 ミツロウ、流動パラフィ ン、 ポリエチレングリコールなどに加えて、必要ならば加温して練合し軟膏剤 とするか、 ロジン、 アクリル酸アルキルエステル重合体などの粘着剤と練合し た後、 ポリエチレンなどの不織布に してテ一 とする。
吸入剤を ¾するには、 活 をフロンガスなどの噴射剤に溶解または分 散して耐圧容器に雄しエア口ゾ一ノレ剤とする。
本発明の化^/の実際に好ま 与量は、 配合された繊物の種類、適用 ¾び治療すべき 、 さらに患者の年齢、体重、病態によって異なるが、 通常 1曰約 l〜1000mg、好ましくは 5〜500mgであり、 1回ないし数回にわけて投 与することカヾ望ましい。
本発明に係る臓器としてはあらゆる βが含まれ、例えば心臓、肺、肝臓、 腎臓、 すい臓、 腸などがあげられる。
本発明に係る繊としてはあらゆる繊が含まれ、例えば皮膚、 角膜、骨髄、 血管、 骨などがあげられる。
本発明におしヽて、移植による細胞の機能維持もしくはその保存への効果が期 待される細胞としてはすべての細胞 (正常な各翻胞、不死化した株化钿胞、 癌化した細胞や、 治療あるいは研究目的で遺伝子工学的に修飾した細胞など） が含まれ、例えば血球系細胞、脬ランゲルハンス島細胞、 _L ^系細胞、神縣 細胞、胚性幹細胞などがあげられる。
また、本発明に係る化合物を薦、繊、 または細胞の保存剤として使用す る際の投与形態としては各種の形態を 尺でき、例えば適当な塩類や栄養素な どを含む培養液や保存液に本化^/もしくはその医薬として許容されうる塩を 添加することができるほか、 移植の場合は 摘出前のドナーに体内灌流、 静脈内投与などで投与することもできる。 本発明のアツセィ法で使用しうる初代培養細胞としては、動物より単離し培 養しうるあらゆる細 ヾ含まれ、例えば神翻胞、肝細胞、 腎細胞、皮膚細胞、 心筋細胞、血管細胞、 白血球や赤血球などの血球系細胞、卵巣細胞などがあげ られ、特に種々のアポト一シス刺激に して高度に同調的な細胞 ¾)ヾ光学顕 纖で容易に観察されることなどから、 卵巣顆纖钿 Γ«好まし 、。
本発明のアツセィ法で使用しうるアポトーシス誘導刺激としては、初 養 細胞にアポトーシスを誘導しうるあらゆる刺激 含まれ、例えば血清や各 長因子やホルモンの欠損、 グルココノレチコィドなどのホルモン類、 プロスタグ ランジンなどの局所ケミカルメディエーター類、 TNFなどのサイトカイン類、 グルタミン酸、 ピリルビンのような生理的物質、 あるいは Fas抗体、過酸ィヒ冰 素などの活性酸 発生 、 SNPなどの N0¾生試薬、 エトポシドなどの ¾6 ん剤、 スタウロスポリン (例えば、 J. Cell Biol. 133巻， 1053頁， 1996年)そ の他の各種細胞毒性薬剤等の添加、 さらに放射線、熱などの物理的刺激などが あげられる。
以下、 ¾M例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定され るものではないことはいうまでもない。
纖例 1
卵巣顆 钿胞 (Porcine Ovarian Granulosa Cells, P0GC)は公知の方法 (End ocrinology, 136巻， 3470頁, 1995年)に従い、 ブタ卵巣より分離培養した。すな わちブタ卵巣を PBS ファーで洗浄し、 シリンジを用いて卵胞から P0GCを吸 引撤する。 この懸濁液を遠' 離して細胞分画を asとして回収し、 さらに この細胞分画を PBSに翻濁し再び遠'!汾離する操作を 3回くりカヽぇし細胞を洗 浄する。碰として得られた P0GCを培地 (10%仔牛血清を含む DMEM)で醒濁し、 さらにピベッティング操作で細胞塊を崩す。 この細胞懸濁液をメッシュを通し て λした,纖片等をとり除き、 24 钿胞培養用ディッシュにまく。定法に従 い (37°C，5¾ C02) 2日間 C02インキュベータ一で培養したのち、 浮翻胞を除く 為に培地を交換し、細動サブコンフルェン卜（0· 7〜2χ105細胞/ well)になる までさらに 2- 3曰培養する。付着細胞を血清を含まない培地で洗浄後、血清を 含まなし、DMEM培地 (5 β g/mLトランスフヱリン, 40ng/mレ、ィド口コルチゾ 4mg /mLゥシ血清アルブミン (BSA) , ΙΟΟηΜアンドロステンジオンを含む)で培養した。 この P0GCに、 N0¾生試薬として知られる SNP (ニトロプルシドナトリゥム， Na2 [F e(CN) 5ΝΟ] , 0· 5 mM)を加えると 6時間後の観察ではすべての細歸、'アポト一シス に 的な形態変化を示して死滅する事が光学顕微鏡並びに電子顕微鏡により U され、 また ΜΤΠ^によってもその細胞死を確認した。 そこで本培養系の 培地中に、様々な離の纖化 ^を加え、 48時間後に細胞を観察した。 その 結果、 アポトーシスを完全に抑制した^ f匕合物の最小有効濃度を表 1に示す。
表 1 ブタ卵巣顆粒膨钿胞の SNP刺激によるアポト一シスの抑制効果 化^ ¾ 最小有 化^? 最 効鍵
( M) (^M)
15 化^ 6 3
10 化^ ¾ 7
3 化^ 8 7
10 化^ ¾ 9 * 15
Figure imgf000018_0001
15 化^ ¾10林 3
*SNP処理後 18時間で判定、林同 35時間で判定
表 2 麵匕^の一覧一 1
Figure imgf000019_0001
v D l
化 ^8^1番 Λ K
1 Br H H CH3
2 Br COO^u H CH3
3 Br H 5-CH3 CH3
4 Br H 7-CH3 CH3
5 Br H 5 - CI CH3
6 Br COO'Bu 5-CH3 CH3
7 Br COO^u 7-CH3 CH3
8 Br COO'Bu 5 - CI CH3
9 Br CH, H CH3
1 0 Br (CH2) 6CH3 H CH3 参考例 1
Figure imgf000019_0002
5-メチルインドール ( 0mg， 1. 15ramol)を THF(3mL)に溶かした溶液に 40°Cにて 0. 96M臭化工チルマグネシゥム（1. 20mL, 1. 15ramol)を加え、 40°Cにて 30分間撹拌 した。 液を室温まで冷却し、公知の方法 (Chem Ber.， 764頁, 1964^)に従つ て合成した 2, 3-ジブロモ- N-メチルマレイミ ド（155mg， 0. 575醒 ol)を THF(5mL)に 溶かした溶液を加え、 室温にて一晩撹拌した。氷冷下 液に 20%くえん 溶液 (0. 5inL)を加えて撹拌した後、 減圧濃縮により THFを留去し、 濃縮液からジ クロロメタンで抽出した。 抽出液を硫酸マグネシウムで!^した後、 flE濃縮 した。 残渣をシリ力ゲル力ラムクロマトグラフィー（酢酸ェチル: ri-へキサン =1 : 10〜1 :3)によって精製し、 化^ ¾ 3 (185mg, quant)を褐色固体として得た。 mp 158-159 。C
-薩 (CDC13) δ 2. 51 (s, 3Η)， 3. 18 (s, 3H)， 7. 13 (d, J=8. 4Hz, 1H)， 7. 33 (d， J=8. 4H z, 1H)， 7. 82 (s, 1H)， 7. 96 (d， J=3. 0Hz, 1H)， 8. 66 (brs， 1H) .
IR(KBr) 3360， 1690, 1590, 1420, 1370, 1150, 1090, 800， 730， 600 cm一
MS m/z 318 (M+) 参考例 2
Figure imgf000020_0001
7-メチルインドール (153mg， 1. 17mmol)を THF(3mL)に溶力、した溶液に、 40°C にて 0. 96M臭化工チルマグネシウム（1. 22mL, 1. 17mmol)を加え、 40°Cにて 30分間 撹拌した。 液を室温まで冷却し、 2, 3-ジブロモ- N-メチルマレイミ ド (158m g, 0. 588醒 ol)を THF (5mL)に溶かした溶液を加え、 室温にて 2時間撹拌した。 氷冷 下 液に 20%くえん酸水溶液 (0. 5mL)を加えて撹拌した後、 減圧濃縮により TH Fを留去し、 濃縮液からジクロロメタンで抽出した。 抽出液を硫酸マグネシゥ ムで乾燥した後、 ¾E濃縮した。 残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢酸ェチル: n-へキサン = : 10~1 :3)によって精製し、 ィ匕^ 14 (171mg， 91%)を 泰色固体として得た。
mp 153-156°C
MR (CDC13) δ 2. 54 (s, 3H) , 3. 17 (s, 3H)， 7. 1-7. 2 (m, 2H)， 7. 88 (d， J=7. 6Hz, 1H) , 7. 99 (d, J= 5. 0Hz' 1H)， 8. 69 (brs, 1H) · IR(KBr) 3320, 1690, 1430, 1380, 1150 cm—
MS m/z 318 (M+) 参考例 3
Figure imgf000021_0001
5-クロ口インドール (153mg, 1. Olmraol)を THF(3mL)に溶かした溶液に、 40°C にて 0. 96M臭化工チルマグネシゥム（1. 05mL, 1. Olmmol)を加え、 40°Cにて 30分間 撹拌した。反応液を室温まで冷却し、 2, 3-ジブロモ- N-メチルマレイミ ド a36m g, 0. 505讓 ol)を THF(5mL)に溶力、した溶液を加え、 室温にて 2時間撹拌した。氷冷 下 液に 20%くえん 溶液 (0. 5mL)を加えて灘した後、減圧濃縮により TH Fを留去し、 濃縮液からジクロロメタンで抽出した。抽出液を硫酸マグネシゥ ムで乾燥した後、 ' ffi濃縮した。残'渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ一 (酢酸ェチル: n-へキサン =1 : 10〜1 : 3)によって精製し、ィ匕^/ 5 (U6mg，85!¾)を 淡褐色固体として得た。
mp 227-229°C (decomp. )
-腿 (CDC13) δ 3. 18 (s， 3H)， 7. 2-7. 3 (m, 1H) , 7. 38 (d, J=7. 2Hz， 1H)， 8. 0-8. 1 (m, 2H) , 8. 78(brs, 1H) .
IR(KBr) 3350, 1690, 1600, 1410, 1370, 610 cm—1
MS m/z 338 (M+) 参考例 4
Figure imgf000022_0001
化^ ¾ 3 (118mg， 0. 370腿 ol)を THF(5mL)に溶かした溶液に、 4°Cにてジ- tert- プチルジカーボネート（97mg， 0. 44mmol)とジメチルァミノピリジン (2. 3mg, 0. 01 9醒 ol)を加え、 4°Cにて 1時間撹拌した。 ^液を証濃縮し、 残渣をシリカゲ ルカラムクロマトグラフィー (酢酸ェチル： n-へキサン = 1： 10)によつて精製して、 ィ½¾ 6 (75nig, 48%)を黄色固体として得た。
mp 76-79°C
1 H-NMR (CDC13) δ 1. 69 (s， 9H) , 2. 47 (s, 3H) , 3. 19 (s， 3H) , 7. 21 (d， J=8. 4Hz， 1H)， 7. 60 (s, 1H)， 8. 08 (d， J=8. 4Hz, 1H) , 8. 14 (s， 1H) .
IR(KBr) 1700， 1430, 1360， 1240, 1140, 1060 cm- 1
MS m/z 418 (M+) 参考例 5
Figure imgf000022_0002
ィ½¾ 4 (lOOmg, 0. 313薩 ol)を THF(4mL)に溶かした溶液に、 4°Cにてジ- tert- プチルジカーボネート（82rag， 0. 38mmol)とジメチルァミノピリジン (1. 9rag, 0. 01 6腿 ol)を加え、 4°Cにて 1時間撹拌、 さらに室温にて 1時間撹拌した。 液を ffi濃縮し、 残渣をシリ力ゲル力ラムクロマトグラフィー (酢酸ェチル: ri-へキ サン =1 : 10〜1 : 1)によって精製して、 化^ ¾ 7 (139mg，quant)を黄色固体として 得た。
mp 54- 57°C
1 H-NMR (CDCl 3) δ 1. 67 (s, 9H)， 2. 66 (s， 3H)， 3. 18 (s, 3H)， 7. 1-7. 3 (m, 2H) , 7. 59 (m， 1H) , 8. 05 (s, 1H) .
IR(KBr) 2960, 1710， 1610, 1430, 1380, 1210, 1140， 1040, 850, 740 cm- 1
MS m/z 418 (M+) 参考例 6
Figure imgf000023_0001
ィ匕^ ¾ 5 (88mg, 0. 259画 ol)を THF(3. 5niL)に溶かした溶液に、 4°Cにてジ- tert -ブチルジ力一ボネ一ト（68mg， 0. 31mmol)とジメチルァミノピリジン（1. 6mg， 0. 0 13醒 ol)を加え、 4°Cにて 1時間撹拌した。 液を E濃縮し、 残渣をシリカ ゲル力ラムクロマトグラフィー (酢酸ェチル: η-へキサン =1： 10)によつて精製し て、ィ匕^ 8 (89mg，78%)を黄色固体として得た。
mp 155-157°C
1 H-NMR (CDCl 3) δ 1. 72 (s， 9H) , 3. 20 (s, 3H) , 7. 36 (dd， J=l. 2, 8. 4Hz, 1H) , 7. 83 (d, J =1. 2Hz, 1H)， 8. 14 (d， J=8. 4Hz, 1H) , 8. 21 (s， 1H) .
IR(KBr) 1700, 1510, 1440, 1360, 1260, 1230， 1200， 1140, 1060, 1000， 820, 750, 700 cm—1
MS m/z 438 (M+) 参考例 7
Figure imgf000024_0001
公知の方法により合成した化^ 1 (lOOmg, 0. 327廳 ol)をァセトン（lOmL)に 溶かした溶液に、炭酸カリウム (49. 8mg， 0. 360匪 ol)、次いでジメチル硫酸 (0. 0 4mL，0. 43iMol)を加え、加熱還流下、一晩撹拌した。 液に水 (5mL)を加え、 ffi濃縮によりァセトンを留去した。 濃縮液からジクロロメタンで抽出した後、 抽出液を硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラム クロマトグラフィ一 (酢酸ェチル: n-へキサン =1： 10〜1 :3)によつて精製し、ィ匕 ^勿 9 (89mg, 85%)を淡褐色固体として得た。
m 155-158 °C
1 H-NMR (CDC13) δ 3. 17 (s， 3H)， 3. 89 (s, 3H) , 7. 2-7.4 (m， 3H)， 7. 90 (s, 1H) , 8. 06 (d， J=7. 6Hz, 1H) .
IR(KBr) 1770, 1700, 1580, 1510， 1430, 1370, 1230, 1150， 1120， 980, 800， 730 cm- 1 MS m/z 318 ( +) 参考例 8
Figure imgf000024_0002
DMF(0. 5mL)に懸濁した水素化ナトリゥム (油性, 60-72%， 34mg)に、公知の方法 により合成した化^ 1 (130mg，0. 425醒 ol)の DMF溶液 (2mL)を加え、室温で 30 分間攪拌した。 この混合物に臭化 n-ヘプチル (0. 60mL，4. 3顏 ol)を加え、 40°C で 1. 5時間攪拌した。 液を 濃縮して DMFを留去した後、 水 (50mL)を加え、 ジクロロメタン (200mL x 2)酢酸ェチル (lOOmL x 1)により抽出した。有^！を 合わせ、 7_Κ洗 (50raL X 2)後、硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を E留去した。 残渣をシリ力ゲル力ラムクロマトグラフィー (酢酸ェチル： n-へキサン =1： 10〜 1 : 1)によって精製し、ィ匕^ 1 0 (39mg, 23%)を褐色油状物質として得た。
1 H-NMR (CDC13) δ 0. 8-2. 0 (m, 13H) , 3. 16 (s， 3H) , 4. 20 (t, J=7. 2Hz, 2H) , 7. 2-7. 5 (m , 3H) , 7. 95 (s， lH)，8. 08 (m， 1H) .
IR(KBr) 2950, 2880, 1770, 1710, 1620， 1510, 1440, 1390, 1210, 1180， 1130， 1020， 98 0, 840, 810, 740 cm"1
MS m/z 402 (M+) 表 3 蘭匕^/の一覧 2 - 1
Figure imgf000025_0001
垂 Y1 V Ψ Y4 X R1 R2 R3 R4
1 1 0 0 0 H H H H
1 2 0 0 ΝΟΗ H H H H
1 3 0 0 ΝΗ H H H H
1 4 0 0 NCH3 H H H H
1 5 0 0 NCH2CH2CH3 H fl H H
1 6 0 OH Η NCH3 H H H H
1 7 0 0 ΝΗ (CH2) 3NH2 H H H
1 8 0 0 ΝΗ (CH2) 3N(CH3) 2 H H H
1 9 0 0 NCH3 (CH2) 3NH2 H H H
2 0 0 0 NCH3 (CH2) 3NHCOCH3 H H H
2 1 0 0 NCH3 (CH2) 3NHC0Ph H H H 謙化 の一覧 2-1 (続き）
1し口 1¾/ Y1 V Ψ Y i
番号
22 0 0 NCH3 COTBu H H H
23 0 0 NCH3 COO^u H COO'Bu H
24 0 0 NCH3 H H H 5- CI
25 0 0 NCH3 H 7-CH3 H 7-CH3
26 0 0 NH (CH2) 3NH2 H CH3 H
表 4 贿 の一覧 2-2
化合物 27
化合物 29
Figure imgf000026_0001
應匕 の一覧 2— 2 (続き)
化合物
Figure imgf000027_0001
表 5 化^/の一覧 2-3
Figure imgf000027_0002
蘭匕^/の一覧 2— 3 (続き）
Figure imgf000028_0001
mm
卵巣顆! i«a胞は卵胞中で卵細胞をとり囲む細胞で、 性周期にあわせて卵胞 刺激ホノレモン (FSH)並びに黄体化ホノレモン (LH)により増殖分化し、 プロゲステ ロンの生産分泌能を獲得する。排卵しない卵胞は 終的にアポトーシスをおこ して消滅する。 この分化のプロセスは公知の方法 (Endocrinology, 136巻, 3470 頁， 1995年)に従い、以下の in vitroの実験によって再現することが出来る。 さらに以下に記すように； mn匕能を維持したまま培養を続けるとアポトーシ スをおこす。すなわちブタ卵巣を PBS ッファ一で洗浄し、 シリンジを用 、て 卵！^、らブタ卵巣顆ネ 钿胞 (Porcine Ovarian Granulosa Cells, POGC)を吸引 微する。 この懸濁液を遠'！汾離して細胞分画を として回収し、 さらにこ の細胞分画を PBSに 濁し再び遠' 1 離する操作を 3回くりかえし細胞を洗 浄する。灘として得られた P0GCを培地 (10%仔牛血清を含む DMEM)で觀濁し、 さらにピベッティング操作で細 を崩す。 この細胞懸濁液をメッシュを通し て λした «片等をとり除き、 24 钿胞培養用ディッシュにまく。定法に従 い (37°C，5% C02) 2日間 C02インキュベーターで培養したのち、 浮遊細胞を除く 為に培地を交換し、細胞がサブコンフルェン卜（0. 7〜2xl05細胞/ well)になる までさらに 2- 3日培養する。 付着細胞を血清を含まない培地で洗浄後、血清を 含まない FSHと LHを添加した培地 (5 g/mLトランスフヱリン， 40ng/mレ、ィドロ コルチゾス 4mg/mLゥシ血清アルブミン（BSA)， ΙΟΟηΜアンドロステンジオンおよ び lOOng/mL FSH, 10ng/mL LHを含む)でさらに 3日間培養し、 さらに培地 (上記と 同じ組 を替えて培養を続けると形態は から± ^細胞様に変化 し、 ホルモン産生能も活発化して完全に分化 態に移 iftる。 この分化した細 胞はさらに培養を続けると、約 5日後に同調的に死滅することがトリパンブル 一の排除テス卜ならびに MTT (3- (4， 5- dimethyl thiazol- 2- yl) -2， 5-diphenyltet razolium bromide),によって示された。 この細胞死がアポトーシスに■ 的な形態 化を示すことカヾ光学顕微^ έびに電 微鏡により観察された。本 培養系の培地中に、最終的な培 ί也交換後 4日目の時点で 3 /Μの^^で 匕合 物 1 8を加えたところ、纖化^ ¾を加えた後 7日後の膝でも 95%以上の細 SS^生存していた。 纖例 3
纖例 2に述べた方法で完全に分化させた細胞に、最終培地交換後 2日でプ ロスタグランジン F 2ひ（PGF2 a) (50 g/mL)を加えると、 16時間後の観察で細 胞はアポトーシスに 的な形態変化を示して死滅する事が光学顕微鏡ならび に電子 II微鏡により観察された。 この培地に PGF2 a添加前に試験化合物 1 8 (3 )を加え、 同条件で培養を続けると細胞 ¾0ヾ抑制され、 16時間後の観察で 95 %以上の細動生存して 、た。 纖例 4
,例 2と同様な方法で単離培養しサブコンフルェン卜に達した P0GCを、無 血清培地で洗浄後、血清および FSHと LHを含まない培地 (5/zg/mLトランスフエ リン， 40ng/mレ、ィドロコルチゾン， 4mg/mL BSA，100nMアンドロステンジオンを 含む)で培養する（ホルモン刺激を行わない）と、細胞は FSHと LHを加えた細胞（ m 2 )に比べると比較的未分化のまま培養を続けることができるが、 この 無血清培地では長期間 (2〜3週間)培養すると、やはりアポトーシスに特徴的な 形態 化を示し死滅する事が光学顕微鏡により観察された。 この細胞死は非同 調的に少しずつおこり、約 1週間かかってすべての細励ヾ死滅した。 しかし本 培養系の培地中に、試験化合物 1 8 (3 z M)を加えたところ細胞死が抑制され、 纖化 を加えなし、細歸死滅して 7日後の観察でも 95%以上の細 τ^生存 して L、た。 纖例 5
纖例 2と同様な方法で単離培養しサブコンフルェン卜に達した P0GCを、無 血清培地で洗浄後、 例 2と同様に血清および FSHと LHを含む培地 (5 g/mL トランスフヱリン， 40ng/ml ヽィドロコルチゾン， 4mg/mL BSA, ΙΟΟηアンドロス テンジオンおよび 100ng/mL FSH, lOng/mL LHを含む)で培養を続けた完全に分化 した細胞にスタウロスポリン (3nM)を加えると、 44時間後の観察ではすべての 細動アポトーシスに特徴的な形態変化を示して死滅する事が光学顕微鏡によ り観察された。 この培地にスタウロスポリン添加前に試験化合物 1 8 (3 M)を 加え、 同条件で培養を続けると細胞 ¾ό，制され、 68時間後の観察でも 95%以 上の細 r«生存していた。 纖例 6
謹例 4と同様な方法で培養した未分化 P0GCに、過酸ィは素 (100 M)を加え ると、 12時間後の観察ではすべての細胞がアポトーシスに特徴的な形態変化を 示して死滅する事が光学顕微鏡により観察された。 この培地に過酸ィ bzK素添加 前に試験化^ ¾ 1 8 (3 ^ M)を加え、 同条件で培養を続けると、 24時間後の観察 でも細胞^^完全に抑制され、 95%以上の細 生存して 、た。 纖例 7
纖例 4と同様な方法で培養した未分化 P0GCに、 N晩生試薬として知られる SNP (二トロプルシドナトリウム， Na2 [Fe(CN) 5N0] , 0. 5πιΜ)を加えると 6時間後の ではすベての細 ヾアポトーシスに■的な形態変化を示して死滅する事 が光学顕微鏡並びに電子顕微鏡により観察され、 また MTm によってもその 細胞死を確認した。 そこで本培養系の培地中に、様々な の試験化^;を加 え、 48時間後に細胞を観察した。 その結果、 アポトーシスを完全に抑制した各 化^の最 /』 効 を表 6に示す。 表 6 ブタ卵巣顆 TO钿胞の SNP刺激によるアポトーシスの抑制効果 化 最 化^ 最 /J洧効纖
(^M)
Figure imgf000031_0001
NP処理後 30時間で判定、 **同 18時間で判定 膽例 1
t m 7と同様な方法でサイクリン依存性キナーゼの阻害剤として公知のォ ロムシン (olomoucine, CALBIOCHEM社より購入)のアポトーシス抑制作用を調べ た。 その結果、 30 の髓においても全くアポトーシス抑制作用を示さなか つ o
纖例 8
纖例 4と同様な方法で培養した未分化 P0GCに、 ビリルビン (30 μ g/mL)を添 加すると 2日後の観察で 50!¾、 3日後の観察で 95%の細胞が^^事が光学顕«に より観察され、 またトリパンブルー排除纖、 MTT纖によってもその細胞死 を確認した。 この培地にピリルビン添加前に難化合物 1 4 (10 M)または試 験化^ 12 5 (10 zM)を加え、 同条件で培養を続けると細胞 ヾ抑制され、 4日 後の観察でもそれぞれ 50%、 95%の細胞が生存していた。 纖例 9
マウス顆 細胞に SV40の ¾¾gとステロイドジエニックファクター- 1 (SF- l/Ad4BP)の cDMを感染させて 4B2という細賺を樹立した。 この細胞はプロテ ィンキナーゼ A依存性にプロゲステロンを分泌する。 この 4B2を 10%ゥシ胎児血 清を含む D EM培地を用い 48穴の培養用プレー卜で細 、'サブコンフルェン卜に なるまで定法に従い C02ィンキュベータ一で培養した。 培地を 2%ゥシ胎 J¾ifil清 を含む DMEMに交換し、 SNP(0. 5m )を加えると、 16時間後の観察ではすべての細 胞がァポトーシスに特徴的な形態変化を示して死滅する事が光学顕微鏡並びに 電子顕微鏡により観察された。 そこで本培養系の培地中に、 SNPを加える前に、 »化^¾ 1 3、 1 4、 1 7、 2 0、 2 4または2 5 (各々10^)*)を加ぇ、 24 時間後に細胞を観察した。 その結果、 いずれの化^ ¾を加えた場合にもアポト 一シスが完全に抑制され、 95!¾以上の細 生存して 、た。 m 1 0
公知の方法 (A Dissection and Tissue Culture Manual of the Nervous Sys tem, 211頁， 1989年, Alan R. Liss， Inc. )に従って 7日令ラッ卜の小脳より小脳顆 钿胞を分離、 培養した。すなわち上記文献記載の分離操作の後、細胞を 10% 牛胎児血清を含む MEM培地 (25mM KC1, 2mM glutamineを含む)へ翻濁し、 ポリ リジンでコ一トしたプレー卜にまき、定法に従い 48時間∞2ィンキュベ一ター で培養し、 シトシン- 1- - D (+) -ァラビノフラノシド (Ara-C) (10 ^M)を添加し てさらに培養を纖した。以下の実験には神経魏の伸長が十分完了している 培養開始日より 7日目以降 14日目までの細胞を用いた。以上のようにして培養 した小脳顆棚胞に、過酸ィは素 (10 )を加えると、 12時間後の鹏ではす ベての細 ヾ死滅してしヽる事が光学顕纖により ϋ ^された。 この培地に過酸 ィ 素添加前に纖化合物 1 9 (10 または纖化合物 2 5 (Ιθ ίΜ)を加えた 場合には、 同じく 12時間後の観察で 95%以上の細胞が生存していた。 さらに過 酸ィは素の灘を 300 に上げた実験を行った結果、纖化 ^¾ 1 8 (10 Μ) または纖化合物 1 9 (lO M)もしくは纖化^ ¾ 2 0 (10 ζΜ)を加えた場合に、 16時間後の観察でそれぞれ約 90%、 90%、 70%の細胞が生存していた。 m 1 1
纖例 1 0と同様にして培養した小脳顆ネ細胞に、 SNP(15 M)を加えると、
1 2時間後の観察ではすべての細 '死滅して ヽる事が光学顕微鏡により鶴 された。 この培地に SNP添加前に 化合物 1 4 (10 Μ)、試験化合物 1 9 (10 ΐ) , ,化^ 2 0 (10 Μ)、 または 化^ / 2 5 (lO ^M)を加えた場合に は、 同じく 12時間後の観察で 95%以上の細 r«生存してし、た。 纖例 1 2
新生児核黄疸では体内のビリルビン^^が異常に高くなることにより、重篤 な脳障害をひきおこすことが知られている。 これはビリルビンによる神 钿 胞の障害が原因と考えられるが、実際、 例 1 0と同様に培養した小脳顆粒 細胞にピリルビン
Figure imgf000033_0001
を添加すると、細胞死をおこすことが光学顕微 鏡により霞され、 18時間後の観察ではすべての細胞は死滅していた。 この際、 ピリルビン添加前に! ^化^ 2 0 (10 M)を共存させると同じ 18時間後の観 察で、 約 80%の細胞が生存していた。 纖例 1 3
ヒト血液 (2mL)を遠心分離 (1000rpm，5min)し、赤血球を含む歷を DMM培地 で 3回洗浄後、 同培地 (15mL)に濯濁 (約 5 xl08細胞/ mL)した。 この懸濁液 10 Lをとり 10% FCS/DMEM (10mL)を加え、 48穴プレー卜に分注した (500 ^Ανε11)。 この赤血^^養液に過酸ィ 素 (300 Μ)を加え 24時間培養したところ、すべて の赤血球が死滅する（へこみのある明るい円形の細胞として観察されて ヽた赤 血球が、途中何段階かの形態度化をへて 100¾喑いゴーストへと変化する）のが 光学顕微鏡で観察された。 ここに過酸ィは素を加える前に!^化 1 4 (30 Μ)、 ,化^ 1 8 (10 M)、 ^^ l 9 (20 M)、 または 化^ ¾ 2 0 (20 M)を加えて同様に 24時間後に観察したところ、死んでいる（暗いゴース トへと変化した)赤血球の割合はそれぞれ 20%, 20%, 10%, 10%と過酸ィ 素単独に 比べて大きく減少した。 纖例 1 4
公知の方法 (機翻胞の分離と培養、丸善、 1987年発行、 59頁)に従ってマウ ス紘锥 胞を分離培養した。すなわちマウス皮膚を除毛クリームで除毛後、 ヒビテンで消毒し、皮膚纖を小片に切り出した。 この皮膚小片が培養用ディ ッシュの底から浮き _b^'らない様にスライドグラスを重しとして沈めたまま 10 %ゥシ胎難清を含む DMEM培地中で定法に従 Lヽ C02ィンキュベータ一で培養した。 線維芽細 ヾ遊走してきたらスライドガラス及び皮膚片を取り除きさらに培養 を続けた。 この線維 胞に N0¾生試薬として知られる SNP (0. 5πιΜ)を加えると 12時間後の観察でもすベての細 Κτ<ァポトーシスに■的な形態度化を示して 死滅する事が光学顕 びに電 顕微鏡により観察された。 そこで本培養系 の培地中に、 SNPを加える前に試験化^ 1 4 (5 Μ)または纖化合物 1 8 (2. 5 M)を加え、細胞を した。 その結果、 いずれも 48時間後でもアポトーシ スが抑制され、 95%以上の細 ヾ生存していた 纖例 1 5
マウスより摘出した腎を無血清 DMEM培地中で細かくきざみ、 トリブシン/ EDT A処理により分散させた。 静置後上清を捨て を培養ディッシュに移し 10¾ゥ シ胎 清を含む DMEM培地中で定法に従い C02インキュベーターで培養した。 糸職が付着し、細胞のコロニーが形成された を取り除き同じ培地で継 代した。 このようにして得られた単層の腎の細胞 (形態的に纖芽細胞には似 て ヽない)に N0¾生試薬として知られる SNP (0. 5mM)を加えると 12時間後の観察 でもすベての細胞がアポト一シスに特徴的な形態変化を示して死滅する事が光 学顕微鏡により観察された。 そこで本培養系の培地中に、 SNPを加える前に試 験化合物 1 4 (5 M)または! ^化合物 1 8 (2. 5 M)を加え、細胞を観察した。 その結果、 いずれも 48時間後でもアポトーシスが抑制され、 95%以上の細 生存していた。 参考例 9
Figure imgf000035_0001
公知の方法 (Tetrahedron, 44巻, 2887頁, 1988年)により合成した化^ / 1 1 (4 6mg, 0. Ummol)を DMF (8mL)と水 (8mL)に溶かした溶液に n-プロピルァミン（0. 06m 0. 6腿01)を加ぇ、 100°Cにて 1時間撹拌した。減圧濃縮により DMFを留去し、 濃縮液から酢酸ェチルで抽出し、水洗した。 抽出液を硫酸マグネシウムで鶴 し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢酸ェチル： n -へキサン =1 :3)によって精製して、化合物 1 5
Figure imgf000035_0002
87%)を雜固体として 得た。 mp 116-119 °C
'H-NMR (CD30D) δ 0. 97 (t， J=7. 6 Hz, 3H) , 1. 71 (tq, J=7. 6， 7. 6 Hz, 2H)， 3. 61 (t， J: 7. 6Hz， 2H)， 6. 58 (m, 2H) , 6. 77 (m， 2H)， 6. 95 (m, 2H) , 7. 23 (m， 2H) , 7. 65 (s， 2H) .
IR(KBr) 3380, 1680, 1530, 1400, 1240, 740 cm" 1
MS m/z 369 (M+) 参考例 1 0
Figure imgf000036_0001
公知の方法 (Tetrahedron, 44巻, 2887頁， 198 により合成した化合物 1 4 (1 63mg, 0.477讓 ol)を THF (lOraL)に溶かした溶液に水素化リチウムアルミニウム (2 7mg，0. 72mmol)を加え、室温にて 29時間撹拌した。 液に水 (8mL)を加え、 2N 塩馳溶液により pH2とした。 E濃縮により THFを留去し、 濃縮液からジクロ ロメタン、 酢酸ェチルで抽出した。 抽出液を硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧 濃縮した。残渣をシリ力ゲル力ラムクロマトグラフィー (酢酸ェチル： n-へキサ ン =1 :2〜5: 1)によって精製して、化合物 1 6 (87mg，53%)を淡褐色固体として得 た。
mp > 280°C
1 H-NMR (CD3OD) δ 3. 12 (s, 3Η)， 5. 93 (s, 1H)， 6. 6-6. 7 (m， 2H)， 6. 9-7.4 (m, 8H) . IR(KBr) 3400, 1660, 1540， 1410， 1240, 1090, 1050, 740 cm" 1
MS m/z 343 (M+) 例 1 1
Figure imgf000037_0001
Τ素化ナトリゥム (60〜72%油性, 144rag)をペン夕ンで洗浄後 DMF (0. 8mL)に懸 濁し、 そこへ公知の方法 (Tetrahedron, 44巻, 2887頁， 198婢)に従って合成した ィ匕^ 1 1 4 (409mg, 1. 2腿 ol)の DMF溶液 (3mL)を加え、室温で 45分間攪拌した。 一方、 3-クロ口プロピルァミン塩酸塩 (159mg, 1. 2醒 ol)とペンタンで洗浄した 水素化ナトリウム (60〜72%油性， 48mg)の混^ ¾に 0°Cで F (2. OmL)を加え 5分 間攪拌後室温に昇温して静置し、上清を化合物 1 4のナトリゥム塩の溶液に加 え、 さらに残渣を DMF (lmL)で抽出しその上清を化合物 1 4のナトリウム塩の溶 液に加えた。得られた混^ ¾は 40°Cで 1時間攪拌した後、 下 D Fを留去した。 この残渣に塩化メチレンと馳食塩水を加え、有欄を分取した。 τ層はさら に塩化メチレンで 3回抽出し、得られた有機層を合わせ硫酸ナトリゥ で職 した。 溶媒を減圧留去して得られる残渣をシリ力ゲルカラムクロマトグラフィ 一 (塩化メチレン:イソプロピルァミン =20: 1)によって精製して、ィ匕^ 1 9 (2 96mg,
Figure imgf000037_0002
して得た。
rap 137-140°C
- R (DMSO-de) δ 1. 81 (tt, J=6. 1, 6. 7 Hz, 2H)， 3. 05 (s, 3H) , 3. 1-3. 5 (m, 2H)， 4. 09 (brs， 2H) , 4. 30 (t, J=6. 7Hz, 2H) , 6. 60 (t， J=7, 5Hz, IH) , 6. 67 (t, J=7. 7Hz, IH) , 6. 74 (d， J=8. 0Hz, IH)， 6. 85 (d， J=8. 0Hz, IH)， 6. 97 (t， J=7. 5Hz, IH)， 7. 03 (t, J=7. 7Hz， IH)， 7. 37 (d， J=8. 2Hz， IH)， 7. 49 (d， J=8. 2Hz, IH)， 7. 76 (s， IH)， 7. 79 (s， IH) , 11. 70 ( brs, IH) .
IR(KBr) 3350， 2910, 1750, 1680, 1530， 1430, 1380， 740 cm—1
MS m/z 398 (M+) 参考例 1 2
Figure imgf000038_0001
化^ 1 9 (4. Omg, 0. Olmmol)の塩化メチレン溶液 (300 にトリェチルァミ ン (7 L，0. 05imol)及び無水酢酸 (1. 1 zL)を加え、室温で 70分間攪拌した。反 応液に馳重曹水を加えて塩化メチレンで抽出し、 有漏を硫酸ナトリゥムで 後溶媒を減圧留去して得られる残留物を、 シリ力ゲルカラムクロマトグラ フィ一 (塩化メチレン:酢酸ェチル =1 :卜 1 :2)で精製する事により、化^ ¾ 2 0 (3. 2mg, 72%)を喑¾^固体として得た。
mp 86-89 °C
Ή-NMR (CDC13) δ 1.86 (s, 3Η)， 2. 05 (tt, J=6. 7, 6. 7Hz, 2H)， 3. 14 (dt, J=6.1, 6. 7Hz , 2H)， 3. 19 (s, 3H)， 4. 19 (t， J=6. 7Hz, 2H)， 5. 40 (brt, J=6. 7Hz, 1H)， 6. 7-6. 8 (m, 2H) , 6. 99 (d, J=8. lflz, 1H)， 7. 0-7. 1 (m， 3H)， 7. 28 (d， J=8. 3Hz， 1H)， 7. 35 (d, J=8. 2Hz, 1H) ， 7. 61 (s, 1H)， 7. 77 (d, J=2. 7Hz, 1H)， 8. 68 (brs， lfl) .
IR(KBr) 3370, 1690， 1530, 1430, 1380, 740 cm—1
MS m/z 440 (M+) 1 3
Figure imgf000038_0002
ィ匕^ ¾ 1 9 (18mg( 0. 045iMol)の塩化メチレン溶液 (lmL)にピリジン（18 L， 0. 23匪 ol)及び塩化べンゾィル (5.2βΙ, 0.045醒 ol)を加え、室温で 2時間攪拌した 。 ピリジン（18 L， 0.23mraol)及び塩化べンゾィル (2.0//L, 0.017腿 ol)を加えさ らに室温で 1時間攪拌した。 ® 液に馳重曹水を加えて塩化メチレンで抽出し 、有機層を硫酸ナトリウムで鶴後溶媒を減圧留去して得られる残留物を、 シ リ力ゲル力ラムクロマトグラフィー (へキサン:酢酸ェチル = 1： 1)で精製する事 により、化^ ¾21 (17.0111 75%)を0¾½固体として得た。
mp 130-133 °C
H-NMR (CDC13) d 2.14 (tt, J=6.6， 6.6Hz, 2H)， 3.18 (s， 3H) , 3.32 (dt, J=6.6， 6.6Hz, 2H)， 4.21 (t， J=6.6Hz， 2H) , 6.10 (brt, J=6.6Hz, IH) , 6.7-7.8 (m, 15H) , 8.71 (brs, IH ).
IR(KBr) 3350， 1750， 1680， 1530, 1420, 1380, 730 cm一1
MS m/z 502 (M+) 参考例 14
Figure imgf000039_0001
化合物 14 (82mg，0.24imol)を THF(5mL)に溶かした溶液に、 4°Cにてジ- tert- ブチルジカーボネート（52mg, 0.24mmol)とジメチルァミノピリジン（1.5mg, 0.01 2薩 ol)を加え、 さらに 4°Cにて 1時間、 室温で一晩撹拌した。 液を贩濃縮 し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢酸ェチル: n-へキサン =1:1 0〜1:1)によって精製して、ィ½¾23 (62mg, 48%)を黄色固体として得た。 rap 110-113 °C
Ή-N R (CDC13) δ 1.68 (s, 18H)， 3.22 (s， 3H)， 6.8-7.0 (m, 4H)， 7.16 (m, 2H) , 8.1-8. 2(m, 2H)，8.13(s，2H). IR(KBr) 2960, 1730， 1550, 1440, 1350, 1240, 1140， 1060, 850, 730 cm- 1
Figure imgf000040_0001
参考例 1 5
Figure imgf000040_0002
5-クロ口インドール (122mg, 0. 805醒 ol)をトルエン（3mL)に溶かした溶液に、 40°Cにて 0. 96M臭化工チルマグネシウム（0. 84mL, 0. 81mraol)を加え、 40°Cにて 45 分間撹拌した。 引き続き公知の方法 (Tetrahedron, 44巻， 2887頁， 1988^)に従つ て合成した 2-ブロモ -3- (1H-ィンドール- 3-ィル) -N-メチルマレイミ ド (70. lmg, 0. 229醒 ol)をトルエン (9mL)に溶かした溶液を加え、加熱纖下 2時間撹拌し た。氷冷下 ^液に 20%くえん^溶液 (0. 5mL)を加えて撹拌した後、減圧濃縮 によりトルエンを留去し、濃縮液からジクロロメタンで抽出した。抽出液を硫 酸マグネシウムで乾燥した後、 JE濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマ 卜ダラフィー (酢酸ェチル: n -へキサン =1： 5〜1： 1)によつて精製し、化^！ 2 4
(89nig, quant)を淡褐色固体として得た。
即 114-117 °C
-賺 (CDC13) δ 3. 20 (s， 3H)， 6. 6-7. 4 (m, 7H) , 7. 76 (m, 1H) , 7. 86 (m, 1H) , 8. 50 (br s, lH)，8. 60 (brs, 1H) .
IR(KBr) 3350， 1680, 1530, 1440, 1370, 730 cm— 1
MS m/z 375 (M+) 例 1 6
Figure imgf000041_0001
7-メチルインドール (162mg， 1. 23匪 ol)をトルエン (4mL)に溶かした溶液に、 4 0°Cにて 0. 96M臭化工チルマグネシウム（1. 28mL, 1. 23匪 ol)を加え、 40°Cにて 45 分間撹拌した。 引き続き 2, 3-ジブロモ- N-メチルマレイミ ド (70.4mg, 0. 276醒 ol )をトルエン (9mL)に溶かした溶液を加え、加熱還流下 2時間撹拌した。氷冷下 液に 20%くえん 溶液 (0. 5mL)を加えて撹拌した後、減圧濃縮によりトル ェンを留去し、 濃縮液からジクロロメタンで抽出した。 抽出液を硫酸マグネシ ゥムで乾噪した後、 ' E濃縮した。 残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ —(酢酸ェチル: n -へキサン =1 :5〜1 : 1)によって精製し、化^ ¾ 2 5 (99mg, 97%) を^ 固体として得た。
即 > 300°C
-腿 (CDC13) δ 2.48 (s， 6H) , 3. 21 (s， 3H) , 6. 6-7. 0 (m， 6H)， 7. 75 (d， J=3. 0Hz, 2H) , 8. 43(brs, 2H) .
IR(KBr) 3320, 1680， 1530， 1420, 1370, 1110， 800， 750, 670, 590 cm
MS m/z 369 (M+) 例 1 7
Figure imgf000041_0002
H H H H
の方法 (Tetrahedron, 44巻, 2887頁, 1988年)により合成した化^/ 1 4 (1 98mg， 0.580腿 ol)を D F (10mL)に溶かした溶液に 10° 、°ラジゥム炭素 (40ing)を加 え、 7_K素雰囲気下、 室温にて一日撹拌した。 ノ、。ラジウム歸を濾過により除去 し、 濾液を' E濃縮した。 残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢酸 ェチル: n-へキサン =1 :10〜2:1)によって精製して、 化合物 3 0 (191mg， 96 の 2 つの異性体の混^/ (A:B=2. 7:1. 0)を淡黄色固体として得た。
A： ^-NMR (CDC13) δ 3. 28 (s, 3H) , 4. 77 (s, 2Η)， 6. 6-7, 4 (m, 10H) , 7. 68 (brs， 2H) . B: ^-NMR (CDC13) δ 3. 26 (s， 3H) , 4.41 (s， 2H) , 6, 6-7.4 (m， 10H) , 8. 15 (brs, 2H) · MS m/z 343 (M+) 参考例 1 8
Figure imgf000042_0001
公知の方法 (Tetrahedron, 44巻, 2887頁， 1988年)により合成した 2-ブロモ -3 - ( 1H-ィンドール- 3-ィル) - N-メチルマレイミ ド (100mg， 0. 33匪 ol)を DMF (5raL)に溶 解し、 氷冷下炭酸力リゥム（140mg, 0. 98mmol)およびヨウ化メチル (0. 06mL, 0. 98 mmol)を加え、 2時間攪拌した。 反応液を室温に戻し、 飽和食 を加え酢酸ェ チルで抽出した。 抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥した後、 減圧濃縮した。 残渣 をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸ェチル： n-へキサン = 1： 1)によつ て精製することにより 2-ブロモ -3- (卜メチル -1H-ィンドール- 3-ィル) -Ν-メチ ルマレイミ ド (99mg, 95. 1%)を^ 固体として得た。
mp 155- 158°C
1 H-NMR (CDC13) δ 3. 17 (s, 3H) , 3.89 (s, 3H)， 7. 16-7.41 (m, 4H)， 8. 05-8. 11 (m， 1H) . IR(KBr) 1760, 1700, 1585， 1510， 1430, 1375, 1230， 1150， 1120, 980, 800, 730 cm-1 MS m/z 318 (M+)
ィンドール (66mg, 0. 21蘭 ol)をトルエン（lmL)に溶かした溶液に、 40°Cにて 0. 95M臭化工チルマグネシゥム（0. 5mL, 0. 47画 ol)を加え、 40°Cにて 45分間攪拌し た。 弓 Iき続き 2-ブロモ -3- (1-メチル -IH-インド一ノレ- 3-ィル) -N-メチルマレイ ミド (66mg, 0. 21iMol)をトルエン (3raL)に溶かした溶液を加え、加熱還流下 2時 間攪拌した。氷冷下 液に 20%くえん^ 7j溶液 (lmL)を加えて攪拌した後、減 圧濃縮によりトルエンを留去し、 濃縮液から酢酸ェチルで抽出した。抽出液を 硫酸ナトリゥムで乾燥した後、 ' E濃縮した。残渣をシリ力ゲルカラムクロマ トグラフィ一 (酢酸ェチル: n-へキサン =1 : 1)によって精製し、ィ匕^ ¾ 3 5 (71mg , 96. 8¾)を^ 固体として得た。
mp 168-171 °C
-醒 (DMS0-d6) δ 3. 05 (s, 3H)， 3. 35 (s, 3H)， 6. 65 (t, J=8, OHz, 2H)， 6. 75 (d, J=8. OHz, IH) , 6. 85 (d， J=8. OHz, IH)， 6. 98 (t， J=8. OHz, IH)， 7. 03 (t， J=8. OHz, IH) , 7. 38( d, J=8. IHz, IH)， 7.42 (d， J=8. 1Hz, IH)， 7. 74 (d， 3=2. 8Hz， IH)， 7. 82 (s， IH) , 11. 66 (b rs, IH) .
IR(KBr) 3450， 1700, 1540, 1440, 1380 cm—1
MS m/z 355 (M+) 参考例 1 9
Figure imgf000043_0001
公知の方法 (Tetrahedron, 44巻, 2887頁， 1988年)により合成した化^/ 1 4 (5 Omg, 0. 15mmol)を DMF(2mL)に溶解し、氷冷下炭酸力リゥム（120mg， 0. 88mmol)お よびヨウ化メチル (0. 05mL，0. 88mmol)を加え、 19時間攪拌した。 液を室温 に戻し、脑食 を加え酢酸ェチルで抽出した。抽出液を硫酸ナトリウムで ¾ ^した後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢 酸ェチル: n-へキサン =1 : 1)によって精製することにより化^ 3 6 (54mg, 99. 4 を^ 固体として得た。 即 > 290°C
^-NMR (CDC13) δ 3. 17 (s, 3H)， 3.82 (s， 6H)， 6. 72 (t， J=8. 1Hz, 2H) , 6. 91 (d, J=8. 1H z， 2H) , 7. 09 (t, J=8. 1Ηζ， 2H) , 7. 27 (d, J=8. 1Hz, 2H) , 7. 67 (s, 2H) .
IR(KBr) 3390, 1695, 1530, 1440， 1385, 740 cm— 1
MS m/z 369 ( +) 参考例 2 0
Figure imgf000044_0001
7j<素化ナトリゥム (60〜72!¾油性, 50mg)をペン夕ンで洗浄後 D F(0. 3mL)に懸濁 し、 そこへ公知の方法 (Tetrahedron, 44巻, 1887頁, 1988^)に従って合成した化
4 (150 ，0.44匪01)の1^溶液(1. 2虬)を加ぇ、 室温で 45分間攪拌した。 一方、 （3-クロ口プロピル）ジメチルァミン塩酸塩 (70mg, 0.44mmol)とペンタン で洗浄した水素化ナトリゥ厶 (60〜75%油性， 18mg)の混合物に 0°Cで DMF(1.2mL) を加え 5分間攪拌後室温に昇温して静置し、 上清を 2， 3-ビス（1H-インドール- 3- ィル) -N-メチルマレイミ ドのナトリゥム塩の溶液に加えた。 得られた混^/は 40°Cで 1時間^ f拌した後、 ETDMFを留去した。 この残渣に塩化メチレンと 颇口食塩水を加え、 有機層を分取した。 zK層はさらに塩化メチレンで抽出し、 得られた有^！を合わせ硫酸ナトリゥムで した。 溶媒を ffi留去して得ら れる残渣をシリ力ゲル力ラムクロマトグラフィー ( ¾¾ァンモニァクロ口ホル ム:メタノール =10: 1)によって精製することにより、 2- [ (3-ジメチルァミノ プロピル) - 1H-ィンド—ル- 3 -ィル] -3- (1H -ィンドール- 3 -ィル) -N-メチルマレ イミ ド (77mg, 41%)
Figure imgf000044_0002
即 86-90°C 1 H-N R (CDC13) δ 1. 95 (tt, J=6. 8, 6. 8Hz, 2H) , 2. 21 (s， 6H) , 2. 23 (t, J=6.8Hz， 2H) , 3. 19 (s, 3H) , 4. 21 (t， J=6. 8Hz, 2H)， 6. 60-6. 82 (m， 2H)， 6. 95 (d, J=8. 1 Hz, IH)， 7. 00 -7. 12 (m, 3H) , 7. 26-7. 35 (m， 2H)， 7. 67 (s， IH) , 7. 72 (d， J=2. 7Hz, IH) , 8. 60 (brs, IH) . IR(KBr) 3395, 2950, 1700, 1535, 1440， 1390， 750 cm一1
MS m/z 426 (M+)
水素化ナトリゥム (60〜72!¾油性， 4. 5 mg)をペンタンで洗浄後 DMF(0. lmL)に懸 濁し、 そこへ 2- [1- (3-ジメチルァミノプロピル) - 1H-インド一ル- 3-ィノレ]- 3- (1 H-ィンドール- 3-ィノレ) - N-メチルマレイミ ド (1. 6mg, 0. 038讓 ol)の!)職液 (0.5m L)を加え、室温で 45分間攪拌した。一方、 （3-クロ口プロピル)ジメチルァミン 塩酸塩 (8. 9rag, 0. 056匪 ol)とペン夕ンで洗浄した水素化ナトリウム（60〜75!¾油 性, 2. 2mg)の混合物に 0°Cで DMF(0. 5mL)を加え 5分間攪拌後室温に昇温して静置 し、上清を上記のナトリウム塩の溶液に加えた。得られた混合物は 40°Cで 1時 間雜拌した後、 を留去した。 この残渣に塩化メチレンと纖
7jを加え、有機層を分取した。水層はさらに塩化メチレンで抽出し、得られ た有機層を合わせ硫酸ナ卜リゥムで ¾ ^した。溶媒を' ffi留去して得られる残 渣をシリ力ゲルカラムク口マトグラフィ一 ( ロアンモニアクロロホルム：メタ ノール =10： 1)によつて精製することにより、化合物 3 7 (4.4mg， 23%)を雜固 体として得た。
!H-NMR (CDC13) δ 1. 97 (tt, J=6. 8, 6. 8Hz, 4H)， 2. 20-2. 32 (m, 16H) , 3. 18 (s， 3H)， 4. 19 (t， J=6. 8Hz, 4H)， 6. 70 (t, J=8. 1Ηζ， 2H) , 6. 97 (d, J=8. 1Hz, 2H)， 7. 12 (t， J=8. IHz, 2H) , 7. 31 (d， J=8. 1Ηζ， 2H) , 7. 68 (s, 2H) .
MS m/z 511 (M+) 参考例 2 1
Figure imgf000046_0001
6-メチルインドール (250mg， 2. 13匪 ol)をトルエン（3mL)に溶かした溶液に、 4 0°Cにて 1. 02M臭化工チルマグネシウム (2. linL, 2. 13腿 ol)を加え、 40°Cにて 45分 間攪拌した。 弓 Iき続き 2， 3-ジブロモ- N-メチルマレイミ ド (120mg，0. 47mmol)を トルエン (7mL)に溶かした溶液を力 Πえ、加熱還流下 3時間攪拌した。氷冷下反応 液に 20%くえん^ K溶液 (3mL)を加えて攪拌した後、減圧濃縮によりトルエンを 留去し、 濃縮液から酢酸ェチルで抽出した。 抽出液を硫酸ナトリウムで鶴し た後、 E濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢酸ェチ ル :n -へキサン =1 : 1)によって精製し、ィ ½¾ 3 8 (152mg，87. 5!¾)を^ 固体と して得た。
mp 139-143 °C
^-NM (DMS0-d6) δ 2. 29 (s， 6H)， 3. 03 (s， 3H)， 6. 50 (d， J=8. 2Hz, 2H) , 6. 73 (d, J=8. 2Hz, 2H)， 7. 16 (s， 2H)， 7. 64 (d， J=2. 7Hz, 2H) , 11. 49 (brs, 2H) .
IR(KBr) 3390, 1695， 1535, 1445, 1390 cm一1
MS m/z 369 (M+) 例 2 2
Figure imgf000046_0002
7-メチルインドール (190mg， 1. 63匪 ol)をトルエン（6mL)に溶かした溶液に、 4 0 にて 1. 02M臭化工チルマグネシゥム（1. 6mL, 1. 63mmol)を加え、 40°Cにて 45分 間攪拌した。 引き続き公知の方法 (Tetrahedron, 44巻， 2887頁， 1988年)に従って 合成した 2 -プロモ- 3- (ィンドール- 3 -ィノレ) - N -メチルマレイミ ド (300mg， 0. 74mm ol)をトルエン (8mL)に溶かした溶液を加え、 加熱 下3時間攪拌した。氷冷 下反応液に 20%くえん酸水溶液 (3mL)を加えて攪拌した後、減圧濃縮によりトル ェンを留去し、 濃縮液から酢酸ェチルで抽出した。抽出液を硫酸ナトリウムで 鶴した後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢 酸ェチル: n-へキサン =1 :3~2: 1)によって精製し、化^ ¾ 3 9 (220mg, 84. 1«を 固体として得た。
rap 192- 195°C
'H-NMR (DMSO-de) δ 2. 45 (s， 3H)， 3. 05 (s， 3H) , 6. 55 (t， J=7. 6Hz， 1H) , 6. 65 (d, J=7.
6Hz, 1H) , 6. 67 (t, J=7. 6Hz, 1H) , 6. 78 (d， J=7. 6Hz, 1H) , 6. 88 (d, J=7. 6Hz, 1H)， 6· 99 ( t， J=7. 6Hz, 1H)， 7. 38 (d, J=7. 6Hz, 1H) , 7. 72 (d， J=2, 7Hz, 1H)， 7. 74 (d， J=2. 4Hz, 1H)
，11. 65 (brs, 1H) , 11. 66 (brs， 1H) .
IR(KBr) 3390, 1695， 1540， 1440， 1390, 750 cm—1
MS m/z 355 (M+) 参考例 2 3
Figure imgf000047_0001
5 -メチルインドール (320mg, 2. 75ramol)をトルエン (5mL)に溶力、した溶液に、 4 0°Cにて 0. 95M臭化工チルマグネシウム (2. 8mL, 2. 75醒 ol)を加え、 40°Cにて 45分 間攪拌した。 引き続き 2, 3-ジブロモ -N-メチルマレイ ミ ド (150mg，0. 61腿 ol)を トルエン (3mL)に溶かした溶液を加え、 加熱還流下 3時間攪拌した。氷冷下 液に 20%くえん^ K溶液 (3raL)を加えて攪拌した後、減圧濃縮によりトルエンを 留去し、濃縮液から酢酸ェチルで抽出した。 抽出液を硫酸ナトリウムで鶴し た後、 E濃縮した。残澄をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢酸ェチ ル :ri-へキサン =1 :1)によって精製し、 ィ匕^ ¾4 0 (200mg, 92. 1¾)を雜固体と して得た。
rap 270-275°C
1 H-NMR (CDC13) <52. 06 (s， 6H) , 3. 20 (s, 3Η) , 6. 73 (s, 2Η)， 6. 90 (d， J=8. 3 Hz, 2H) , 7. 20 (d, J=8. 3Hz, 2H)， 7. 62 (d， J=2. 8Hz, 2H) , 8.42 (brs, 2H) .
IR(KBr) 3310, 1690， 1525, 1440， 1390， 1160， 1105, 800 cm
MS m/z 369 (M十） 例 2 4
Figure imgf000048_0001
5 -フルォロインドール (240mg, 1. 77mraol)をトルエン (4ml)に溶かした溶液に、 40°Cにて 1. 02M臭化工チルマグネシゥム（1. 7niL, 1. 77腿 ol)を加え、 40°Cにて 45 分間攪拌した。 引き続き 2， 3-ジブロモ- N-メチルマレイミ ド (100mg，0. 4匪 ol)を トルエン (6niL)に溶かした溶液を加え、 加熱還流下 3時間攪拌した。氷冷下反応 液に 20%くえん 溶液 (2mL)を加えて攪拌した後、減圧濃縮によりトルエンを 留去し、濃縮液から酢酸ェチルで抽出した。 抽出液を硫酸ナトリウムで «し た後、 濃縮した。残渣をシリ力ゲル力ラムクロマトグラフィー (酢酸ェチ ル: n-へキサン =1 : 1)によって精製し、化^ 14 1 a25mg, 84. 8%)を^ 固体と して得た。 mp > 290 °C
Ή-N R (DMS0-d6) <5 3. 03 (s, 3H) , 6. 38 (dd, J=9. 0, 2.5Hz， 2H) , 6.83 (dt, J=2.5， 9. 0 Hz, 2H)， 7. 39 (dd, J=9. 0， 4. 6Hz, 2H)， 7.89 (m, 2H) , 11. 83 (brs, 2H) .
IR(KBr) 3440, 3350, 1700, 1530, 1450, 1430 cm"1
MS m/z 377 (M+) 参考例 2 5
Figure imgf000049_0001
5 -ブロモインドール (690mg, 3.53腿 ol)をトルエン（6mL)に溶かした溶液に、 4 0 にて 0.95M臭化工チルマグネシゥム (3.7mL, 3.53匪 ol)を加え、 40°Cにて 45分 間攪拌した。 弓 Iき続き 2, 3 -ジブロモ- N-メチルマレイミ ド (200mg, 0. 78醒 ol)を トルエン (17mL)に溶かした溶液を加え、加熱 流下 3時間攪拌した。氷冷下反 応液に 20%くえん 溶液 (6mL)を加えて攪拌した後、減圧濃縮によりトルエン を留去し、濃縮液から酢酸ェチルで抽出した。 抽出液を硫酸ナトリウムで鶴 した後、服濃縮した。残渣をシリ力ゲル力ラムクロマトグラフィー (酢酸ェ チル :n-へキサン =1:1)によって精製し、ィ½¾4 2 (322mg, 82. 2%)を雜固体 として得た。
mp > 290°C
-賺 (DMSO-de) δ 3. 05 (s， 3H) , 6. 86 (d， J=l.8Hz， 2H)， 7. 12 (dd, J=8. 6， 1. 8Hz, 2H ) , 7.38 (d， J=8. 6Hz, 2fl) , 7.82 (d， J=2. 7Hz, 2H) , 11.89 (brs, 2H) .
IR(KBr) 3380， 1695， 1640, 1540， 1460, 1440, 1395 cm—1
MS m/z 499 (M+) 参考例 2 6
Figure imgf000050_0001
5-クロ口インドール (122mg， 0. 81匪 ol)をトルエン (3mL)に溶かした溶液に、 4 0°Cにて 0. 96M臭化工チルマグネシゥム（0.84mL, 0. 81mraol)を加え、 40 にて 45 分間攪拌した。 引き続き、公知の方法 (Tetrahedron, 44巻, 2887頁， 198胖)に従 つて合成した 2 -プロモ- 3- (1H-ィンドール- 3-ィル) -N-メチルマレイミ ド (70mg, 0.23匪 ol)をトルエン (9mL)に溶かした溶液を加え、 加熱還流下 2時間攪拌した。 氷冷下 液に 20%くえん J溶液 (0. 5mL)を加えて攪拌した後証濃縮により トルエンを留去し、濃縮液から酢酸ェチルで抽出した。 抽出液を硫酸ナトリウ ムで乾燥したのち、 濃縮した。 残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ —(酢酸ェチル: n-へキサン =1 :5- 1 : 1)によって精製し、化^ ¾4 3 (89mg, 100 を赤色固体として得た。
mp 114-117 。C
LH-N R (CDC13) δ 3. 20 (s, 3H)， 6. 60-7, 40 (m, 7H)， 7. 70-7. 90 (ra, 2H)， 8. 50 (brs, 1H ) , 8. 60 (brs, 1H) .
IR(KBr) 3350, 1680, 1520， 1440, 1370, 735 cm
MS m/z 375 (M+) 参考例 2 7
Figure imgf000051_0001
5 -メトキシインドール (520mg, 3. 53ramol)をトルエン (8mL)に溶かした溶液に、 40°Cにて 0. 95M臭化工チルマグネシウム (3. 7mL, 3. 53mmol)を加え、 40°Cにて 45 分間攪拌した。 引き続き 2， 3-ジブロモ- N-メチルマレイミ ド (200nig, 0. 73mmol) をトルエン (12mL)に溶かした溶液を加え、 加熱還流下 3時間攪拌した。 氷冷下 液に 20%くえん 溶液 (2mL)を加えて攪拌した後、減圧濃縮によりトルェ ンを留去し、濃縮液から酢酸ェチルで抽出した。抽出液を硫酸ナトリウムで乾 燥した後、 E濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢酸 ェチル: n-へキサン =1 :1)によって精製し、化^ ¾4 4 (136mg，86.4!¾)を^ 固 体として得た。
mp > 290°C
^-NMR (DMS0-d6) δ 3. 03 (s， 3H) , 3. 33 (s， 6H) , 6. 21 (d， J=2. 3Hz, 2H)， 6, 55 (dd， J=8 . 7, 2. 3Hz, 2H) , 7. 23 (d, J=8. 7Hz, 2H) , 7. 77 (d, J=2. 8Hz, 2H) , 11.55 (brd, J=2. 8Hz, 2 H).
IR(KBr) 3325， 1690, 1530， 1460, 1440， 1220, 1165, 805 cm一1
MS m/z 401 (M+) 参考例 2 8
Figure imgf000052_0001
4-メトキシィンドール (lOOmg, 0. 68mmol)をトルエン（lmL)に溶かした溶液に、 40°Cにて 0. 95M臭化工チルマグネシゥム (0. 72raL, 0. 68籠 ol)を加え、 40°Cにて 45 分間攪拌した。 引き続き 2， 3-ジブロモ- N-メチルマレイミ ド (40mg，0. 15蘭 ol)を トルエン (3raL)に溶かした溶液を加え、加熱還流下 3時間攪拌した。氷冷下反応 液に 20%くえん 溶液 (2mL)を加えて攪拌した後、減圧濃縮によりトルエンを 留去し、濃縮液から酢酸ェチルで抽出した。 抽出液を硫酸ナトリウムで觀し た後、 i£濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢酸ェチ ル: n -へキサン =1 :2〜2: 1)によって精製し、ィ匕^ 4 5 (57mg， 90. 5%)を！！^固 体として得た。
mp 182-186 °C
^-NMR (DMSO-de) δ 3. 04 (s 3H)， 3.45 (s, 6H)， 6. 37 (d， J=7. 9Hz, 2H) , 6. 94 (d， J=7. 9Hz, 2H) , 6. 98 (t, J=7. 9Hz， 2H)， 7. 25 (brs， 2H)， 11. 31 (brs, 2H) .
IR(KBr) 3390, 1700, 1440, 735 cm—1
MS m/z 401 (M+) 参考例 2 9
Figure imgf000052_0002
2-メチルインドール (190mg, 1. 63腿 ol)をトルエン（6mL)に溶かした溶液に、 4 0°Cにて 1. 02M臭化工チルマグネシウム（1. 6mL, 1. 63minol)を加え、 40°Cにて 45分 間攪拌した。 弓 Iき続き公知の方法 (Tetrahedron, 44巻， 2887頁， 1988年)に従って 合成した 2-ブロモ -3- (1H-ィンドール- 3-ィル) - N-メチルマレイミ ド (300mg, 0. 7 4讓 ol)をトルエン (8mL)に溶かした溶液を加え、 加熱還流下 3時間攪拌した。 氷 冷下反応液に 20%くえん 溶液 (3mL)を加えて攪拌した後、減圧濃縮によりト ルェンを留去し、濃縮液から酢酸工チルで抽出した。 抽出液を硫酸ナトリウム で乾燥した後、 E濃縮した。残 をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ 薩ェチル: n-へキサン =1 :3〜2: 1)によって精製し、ィ匕^ ¾ 4 6 (240mg, 91. 0¾) を^ &固体として得た。
mp 183-186 °C
-賺 (DMSO-de) δ 1. 91 (s, 3H)， 3. 10 (s, 3H) , 6. 47 (d， J=7. 6Hz， IH)， 6. 59 (t, J=7.
6Hz, IH) , 6. 92 (t, J=7. 6Hz, IH)， 7. 03 (t, J=7. 6Hz, IH) , 7. 07 (t， J=7. 6Hz， IH) , 7. 32 ( d， J=7. 6Hz, IH) , 7. 35 (d, J=7. 6Hz, IH)， 7. 42 (d， J=7. 6Hz， IH) , 7. 99 (m, IH) , 11. 32 (b rs, 1H) , 11. 80 (brs, IH).
IR(KBr) 3390, 1695, 1460, 1440, 1392, 740 cm" 1
MS m/z 355 (M+) 参考例 3 0
Figure imgf000053_0001
2 -メチルインドール (1. 0g, 8. 82匪 ol)を THF (lOmL)に溶かした溶液に、 40°Cに て 0. 95M臭ィ匕ェチルマグネシウム（9. 3mL, 8. 82醒 ol)を加え、 40°Cにて 45分間攪 拌した。 引き続き 2, 3-ジブロモ- N-メチルマレイミ ド (500mg，1. 96mml)を THF(4m L)に溶かした溶液を加え、 加熱還流下 3時間攪拌した。 氷冷下反応液に 20%くえ ん 溶液 (9mL)を加えて攪拌した後、減圧濃縮により THFを留去し、濃縮液か ら酢酸ェチルで抽出した。 抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥した後、 ' ffi濃縮し た。残渣をシリカゲノレカラムクロマトグラフィ一 (酢酸ェチル: n-へキサン =1 :2 )によつて精製し、化^ 4 7 (452mg, 62.4%)を 固体として得た。
mp > 290°C
lH-薩 (CDC13) δ 2. 06 (s, 6Η) , 3.22 (s， 3Η)， 6. 92 (t， J=7. 6Hz, 2H)， 7. 08 (t， J=7. 6H z， 2H)， 7. 15-7. 24 (m， 4H) , 8. 04 (brs, 2H) .
IR(KBr) 3380， 3310, 1705， 1460, 1440, 1380 cm"1
MS m/z 369 (M+) 例 3 1
Figure imgf000054_0001
公知の方法 (Tetrahedron, 44巻, 2887頁， 1988^)に従って合成した化^/ 1 1 (lOOmg, 0. 3nunol)を DMF (10mL)と水（10mL)に溶かした溶液に、 ァニリン（0. 12mL, 1.2腿 ol)を加え、 100°Cにて 2時間攪拌した。証濃縮により DMFを留去し、濃 縮液から酢酸ェチルで抽出し、水洗した。抽出液を硫酸ナトリウムで鶴し、 «濃縮した。 残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ一（酢酸ェチル: n-へ キサン =2: 1)によって精製し、化^ | 4 8 (116 ，94. 4 を雜固体として得た。 mp > 290°C
Ή-NMR (CDC13) δ 6. 77 (t， J=7. 1Ηζ， 2H)， 7. 04 (d， J=7. 1Ηζ， 2H) , 7. 10 (t, J=7. lHz， 2 H)， 7. 36 (d， J=7. lHz， 2H)， 7. 35—7.45 (m, 1H)， 7.48 - 7. 55 (m, 4H)， 7. 85 (d， J=2. 8Hz, 2 H) , 8. 54 (brs, 2H). IR(KBr) 3365, 1700, 1525, 1430, 1390, 1245， 1120, 740 cm—
MS m/z 403 (M+) 参考例 3 2
Figure imgf000055_0001
公知の方法 (Tetrahedron, 44巻, 2887頁, 1988年)に従って合成した化^ 1 1 (lOOmg, 0. 3mmol)を DMF (lOmL)と水（lOmL)に溶かした溶液に、ベンジルァミン（0 . 13raL，1. 2匪 ol)を加え、 100°Cにて 2時間攪拌した。 ffi濃縮により DMFを留去 し、濃縮液から酢酸ェチルで抽出し、 Z洗した。抽出液を硫酸ナトリウムで乾 燥し、 ffi濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢酸ェチ ル: n-へキサン =2:1)によって精製し、ィ匕^ 4 9 (110mg，86. 6!¾)を^ 固体と して得た。
mp > 290°C
^-NMR (CDC13) δ 4.86 (s, 2H)， 6. 75 (t, J=8. 0Hz, 2H) , 6. 97 (d， J=8. 0Hz, 2H) , 7. 06 ( t， J=8. 0Hz, 2H)， 7. 28-7. 38 (m, 5H) , 7. 50 (d， J=8. 0Hz, 2H)， 7. 7 (d, J=2. 8Hz, 2H) , 8. 4 9 (brs, 2H).
IR(KBr) 3400， 1695, 1530， 1430, 1405， 750 cm—1
MS m/z 417 (M+) 参考例 3 3
Figure imgf000056_0001
ィ匕^ ¾ 1 9 (48mg， 0. 12腿 ol)を DMF(lmL)に溶かした溶液に、少量の 10¾^、°ラジ ゥム炭素を加え、 ZK素雰囲気下室温にて 2日間攪拌した。 。ラジウム炭素を濾 過により除去し、 ろ液を' 濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラ フィ一 (馳ァンモニァクロ口ホルム：メタノ一ル =10： 1)によつて精製し、ィ匕合 物 3 3 (32mg, 66. 7%)を淡 固体として得た。
^-NMR (CDCl 3) δ 1.42 (brs, 2H) , 1. 90 (tt, J=6. 8, 6. 8Hz， 2H)， 2. 67 (t， J=6. 8Hz， 2H ) , 3. 26 (s, 3H) , 4. 12 (t， J=6. 8 Hz, 2H) , 4.42 (s， 2H)， 6. 82-7.45 (m， 10H)， 8. 52 (brs, 1H). 参考例 3 4
Figure imgf000056_0002
化^ 4 8 (55rag， 0. 14醒 ol)を DMF(2raL)に溶かした溶液に少量の 10¾、°ラジゥ ム炭素を加え、 7_K素雰囲気下、室温にて一日攪拌した。 、。ラジウム炭素を藝 により除去し、 ろ液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ ィ一 (酢酸ェチル： n-へキサン =2： 1)によつて精製することにより、 3, 4-ビス (1H -ィンドーノレ- 3-ィル) -トフヱニル- 2, 5-ジォキソピロリジン (36mg, 56. 1%)を淡 ^fe固体として得た。 mp 260-263°C
'H-NMR (CDC13) δ 4. 92 (s, 2H) , 6. 61-6. 70 (in, 2H)， 6. 87-7. 09 (m， 6H) , 7. 30-7. 60 (m , 7H) , 7. 64 (brs, 2H) .
IR (KBr) 3440, 3400, 1700, 1380, 1180, 750 cm" 1
MS m/z 405 (M+)
3, 4-ビス（1H-ィンドーノレ- 3-ィル) -1-フエニル- 2, 5-ジォキソピロリジン（30m g, 0. 07匪 ol)を THF (lmL)に溶解し、氷冷下 0. 94M水素化ジィソブチルアルミニゥ ム (0. 3mL， 0. 29腿 ol)をゆっくりと滴下した。 室温にて 4時間攪拌した後、脑 塩化アンモニゥム水溶液を加え 30分間攪拌した。不溶物をセライト濾過により 除去し、 ろ液を JE濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ 酢酸ェチル: n-へキサン =1： 1)によつて精製することにより、化^ ¾ 3 4 (4. ing
, 15. 8%)を^ 固体として得た。
rap 97-99°C
LH-NMR (CDC13) δ 3. 74 (dd， J=5. 4, 9. OHz, 2H)， 3. 92 (dd， J=6. 5， 9. 0Hz, 2H)， 4. 13-4 . 25 (m, 2H)， 6. 46 (d, J=2. 4Hz, 2H) , 6. 96-6. 78 (m, 3H) , 6. 91 (t， J=8. 0Hz, 2H)， 7. 07 (t ， J=8. 0Hz, 2H) , 7. 20 (d， J=8. OHz, 2H)， 7. 26-7. 37 (m, 4H) , 7. 64 (brs, 2H) .
IR(KBr) 3410, 1600, 1510, 1480, 1460， 1370, 745 cm" 1
MSm/z 377 (M+) 以上の結果から、本発明に係る化合物が様々な束嗷によっておこる様々な細 胞の細胞死を抑制すること力判明した。 また、初代培養細胞を用い、種々のァ ポト一シス刺激による細胞死を顕微鏡や ¾fe法などで調べるアツセィ法により、 簡便に細胞死抑制剤を検出できることが判明した。 産 H±の利用可
本発明に係るィンドール誘»は、 広汎な細胞死誘発刺激による細胞死を抑 制するため、細胞 ¾6ヾその発症および増悪に関与して 、るすべての疾患の予防 もしくは治療に有用と考えられる。従って、 アルツハイマー病、 循性筋纖 症、筋鍾性側索硬化症、ノヽ。—キンソン病、ハンチントン病、網膜色 変性症、 緑内障、小脳変性、新生児核黄疸などの神経変性疾患、 筋ジストロフィー、脳 卒中等による脳虚血およびその後の遅発性神経細胞死、心筋梗塞等による虚血 性心疾患 (心筋虚血と薩流障害)、 ウィルス性心筋炎、 自己鰣性心筋炎 (拡 張型心筋症や慢性心筋炎等)、肥大心および不全心にみられる心筋障害/細胞死、 «源性右室心筋症、 アルコーノ l ffiif炎やウィルス 1W炎、糸球体腎炎や溶 血腿 ¾ ^候群等の腎疾患、後天性髓不全症藝 (AIDS)、 中毒性敲壊死 mm (TEN)、多形滲出 1¾杠斑などの炎症 膚疾患や脱 ならびに移植片宿
¾®^(GVH)、 さらには ¾ t線による障害もしくは 5 ^剤ゃ抗ウィルス薬など の薬剤による副作用を含む種々の薬物による障害、敗血症、 不良性貧血な どの骨髄異形成症、 インスリン依存性糖尿病、 クロイツフェルト ·ヤコブ病な どのプリオン病、移植臓器等の機能不全の治療薬またはその進行、増悪を停止 もしくは抑制する医薬としての用途、並びに細胞、 m m¾iの保存剤として の用途を有する。 また、本発明に係る初代培養細胞を用いるアツセィ系は、細 胞死抑制剤の探索に有用と考えられる。

Claims

請 求 の 範 囲
1. 一般式 [I]
すなわち本発明は、下記一般式 [I]
Figure imgf000059_0001
(式中、 Xは隨原子または N-R5を表し、 Zはハロゲン原子または
Figure imgf000059_0002
を表し、 R R3はそれぞれ独立に水素原子、置換基を有していてもよいアルキ ル基、 置換基を有していてもよいアルケニル基、置換基を有していてもよいァ ルキニル基、置換基を有していてもよいァリール基、置換基を有していてもよ I、ァシル基、置換基を有してし、てもよいアルコキシもしくはァリールォキシカ ルポ二ル基、置換基を有して 、てもよ 、アルキルもしくはァリ一ルチオカルボ ニル基、 置換基を有していてもよいアミノカルボニル基、 置換基を有していて もよ 、アルキルもしくはァリ一ルスルホニル基、置換基を有していてもよいァ ルコキシル基もしくはァリールォキシ基、 またはヒドロキシル基を表し、 R2, R4はそれぞれィンド一ノ ½累上の置換基を表し、 置換基の Ιί汲び置換位置 (ィン ドール環の位置番号で 2, 4， 5, 6あるし、は 7位)ならびに置換基の種類はそれぞれ 同じでも異なっていてもよく、水素原子、 置換基を有していてもよし、アルキル 基、置換基を有していてもよいアルケニル基、置換基を有していてもよいアル キニノレ基、置換基を有していてもよいァリール基、 置換基を有していてもよい ァシル基、置換基を有して 、てもよいアルコキシもしくはァリ一ノレォキシカル ボニル基、 置換基を有していてもよいアルキルもしくはァリ一ルチオカルボニ ル基、 置換基を有していてもよいアミノカルボニル基、 置換基を有していても よ 、アルキルもしくはァリ一ルスルホニル基、置換基を有していてもよいアル コキシル基もしくはァリールォキシ基、 置換基を有してし、てもよいアルキルも しくはァリールチオ基、 ヒドロキシル基、 カルボキシル基、 シァノ基、ニトロ 基、置換基を有していてもよいアミノ基、 またはハロゲン原子を表し、 R5は置 換基を有していてもよいアルキル基、 置換基を有していてもよいアルケニル基、 置換基を有していてもよ ヽァルキニル基、 置換基を有していてもよいァリ一ル 基、置換基を有していてもよいアルコキシル基もしくはァリールォキシ基、置 換基を有していてもよいアミノ基、 ヒドロキシル基もしくは水素原子を表す。
Y1と Y2及び Y3と Y4はそれぞれ ί妓に、 2個の水素原子あるいは水素原子とヒド 口キシル基を表すか、 または一体となってカルボ二ル基を表し、 また、 R'と R2、 R'と R3、 R3と R4、 または R2と ま一体となって置換基を有していてもよい炭化 τ藤あるいはヘテロ原子を含む炭ィは藤を形成していてもよい。式中、破 線をともなう結合 ii^SM合または単結合を表す。）で表されるインドール誘 本またはその医薬として許容されうる塩を有効 とする細胞死抑制剤。
2. 上記一般式 [I]で表される誘導体またはその医薬として許容されうる塩 を有効 とする、神経変性疾患に文^ る神 胞死を抑制することによる症 状の進行の予防または治 。
3. 上記一般式 [I]で表される誘導体またはその医薬として許容されうる塩 を有効 とする、新生児核黄疸に対する神 胞死を抑制することによる予 防または治療薬。
4. 上記一般式 [I]で表される誘導体またはその医薬として許容されうる塩 を有効 とする、筋ジストロフィーに文 る細胞死を抑制することによる症 状の進行の予防または治療薬。
5. 上記一般式 [I]で表される誘導体またはその医薬として許容されうる塩 を有効 とする、脳 Rおよびその後の遅発性神細胞死 (DN )に财る、 神 »胞死を抑制することによる症状の進行の予防または治療薬。
6. 上記一般式 [I]で表される誘導体またはその医薬として許容されうる塩 を有効 とする麵性'疾患、 ウィルス性心筋炎、 自己髓性心筋炎、 肥大 心もしくは不全心にみられる心筋障害 z細胞死、 脈源性右室心筋症に文 る、心筋細胞死を抑制することによる症状の進行の予防または治纏。
7. 上記一般式 [I]で表される誘導体またはその医薬として許容されうる塩 を有効 とするアルコ一ソ 炎もしくはウィルス冊炎に対する、肝細胞 の死を抑制することによる症状の進行の予防または治 。
8. 上記一般式 [I]で表される誘導体またはその医薬として許容されうる塩 を有効 とする腎疾患に财る、 腎細胞の死を抑制することによる症状の進 行の予防または治療薬。
9. 上記一般式 [I]で表される誘導体またはその医薬として許容されうる塩 を有効 とする後天性搬不全症禱 (AIDS)に文 る、過剰な T細胞の死を 抑制することによる症状の進行の予防または治療薬。
10. 上記一般式 [I]で表される誘導体またはその医薬として許容されうる塩 を^ 15 ^とする炎症性皮膚；^患、脱 もしくは移植片宿 ±S応 (GVH) に対 する、細胞死を抑制することによる症状の進行の予防または治療薬。
11. 上記一般式 [I]で表される誘導体またはその医薬として許容されうる塩 を有効 とする ¾it線照 itによる障害もしくは薬物による副作用又は障害に 文 る、細胞死を抑制することによる障害や副作用の予防もしくは治,。
12. 上記一般式 [I]で表される誘導体またはその医薬として許容されうる塩 を有効成分とする敗血症に対する、 細 Eを抑制することによる症状の進行の 予防または治療薬。
13. 上記一般式 [I]で表される誘導体またはその医薬として許容されうる塩 を有効 とする 異形 5¾£に対する、骨髄由来細胞の死を抑制することに よる症状の進行の予防または治療薬。
14. 上記一般式 [I]で表される誘導体またはその医薬として許容されうる塩 を有効成分とするィンスリン依存性糖尿病に対する、細胞死を抑制することに よる症状の進行の予防または治療薬。
15. 上記一般式 [I]で表される誘導体またはその医薬として許容されうる塩 を有効 とするプリオン病に文付る、神細胞死を抑制することによる症状 の進行の予防または治療薬。
16. 上記一般式 [I]で表される誘導体またはその医薬として許容されうる塩 を有効 として含有する、露、 繊または細赚植時の移植藤、繊ま たは細胞の機能不全の予防または治 。
17. 上記一般式 [I]で表される誘導体またはその医薬として許容されうる塩 を有効 として含有する、腩 、 または細胞の保存剤。
18. 初代培養細胞に、纖化^ ¾の存在下に細胞死誘導刺激を加えるか、 も しくは細 誘導刺激を加えた直後に試験化合物を加え、細胞の死滅割合を評 価することを特徴とする細 E抑制物質のァッセィ法。
19. 下記一願 II]
Figure imgf000062_0001
(式中、 Z1はハロゲン原子を表し、 Ri , R2と R5は前記と同じ意味を表す。）で表 される 2-ハロ- 3-ィンドリルマレイミ ド誘 ·またはその医薬として許容され うる塩を有効成分とする医薬。
PCT/JP1999/000772 1998-02-23 1999-02-22 Inhibiteurs de la mort cellulaire WO1999042100A1 (fr)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AU25486/99A AU2548699A (en) 1998-02-23 1999-02-22 Cell death inhibitors
EP99905260A EP1057484A4 (en) 1998-02-23 1999-02-22 INHIBITORS OF CELL DEATH

Applications Claiming Priority (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP10/40148 1998-02-23
JP4014798 1998-02-23
JP10/40147 1998-02-23
JP4014898 1998-02-23
JP16211898 1998-06-10
JP16211998 1998-06-10
JP10/162118 1998-06-10
JP10/162119 1998-06-10

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO1999042100A1 true WO1999042100A1 (fr) 1999-08-26

Family

ID=27460858

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP1999/000772 WO1999042100A1 (fr) 1998-02-23 1999-02-22 Inhibiteurs de la mort cellulaire

Country Status (3)

Country Link
EP (1) EP1057484A4 (ja)
AU (1) AU2548699A (ja)
WO (1) WO1999042100A1 (ja)

Cited By (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000075117A1 (en) * 1999-06-04 2000-12-14 Elan Pharma International Ltd. Compositions and methods for inhibiting cell death
WO2001087887A3 (en) * 2000-05-19 2002-02-28 Aegera Therapeutics Inc Neuroprotective and anti-proliferative compounds
EP1152002A4 (en) * 1999-02-09 2002-04-17 Sagami Chem Res PYRROL DERIVATIVES AND CELL DEATH INHIBITORS
WO2003027275A1 (en) 2001-09-27 2003-04-03 Alcon, Inc. Inhibitors of glycogen synthase kinase-3 (gsk-3) for treating glaucoma
EP1275646A4 (en) * 2000-03-30 2003-05-28 Sagami Chem Res INDOLYLPYRROL DERIVATIVES AND CELL DEATH INHIBITORS
WO2004091663A1 (ja) * 2003-04-18 2004-10-28 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 神経再生薬
US7129250B2 (en) 2000-05-19 2006-10-31 Aegera Therapeutics Inc. Neuroprotective and anti-proliferative compounds
WO2008105392A1 (ja) * 2007-02-27 2008-09-04 Riken 3-アミノ-2-インドリルブチロラクタム誘導体、その製造法、及びこれを有効成分とする医薬
WO2008117935A1 (en) * 2007-03-28 2008-10-02 Industry-Academic Cooperation Foundation, Yonsei University Nk cell activating molecules, nk cells and pharmaceutical compositons comprising the same
JP2010513386A (ja) * 2006-12-19 2010-04-30 ノバルティス アーゲー キナーゼ阻害剤としてのインドリルマレイミド誘導体
WO2016008966A1 (en) 2014-07-17 2016-01-21 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for treating neuromuscular junction-related diseases
JP2016504299A (ja) * 2012-12-10 2016-02-12 セントジーン アーゲー 白血病を予防および治療するためのマレイミド誘導体の使用
JP2016508962A (ja) * 2012-12-10 2016-03-24 セントジーン アーゲー ガンを予防および治療するためのマレイミド誘導体の使用
WO2016207366A1 (en) 2015-06-26 2016-12-29 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU6593600A (en) * 1999-08-20 2001-03-19 Rei Asakai Drugs inhibiting cell death
DK1362047T3 (da) 2000-12-08 2006-09-04 Ortho Mcneil Pharm Inc Indazolylsubstituerede pyrrolinforbindelser som kinaseinhibitorer
DE10109280A1 (de) * 2001-02-26 2002-09-05 Peter Mayser Indolderivate mit inhibitorischer Wirkung auf Proteinkinasen
CA2488798A1 (en) 2002-06-05 2003-12-18 Janssen Pharmaceutica N.V. Substituted pyrrolines as kinase inhibitors
US6987110B2 (en) 2002-06-05 2006-01-17 Janssen Pharmaceutica N.V. Substituted pyrrolines as kinase inhibitors
US7166634B2 (en) 2004-01-23 2007-01-23 Nereus Pharmaceuticals, Inc. Bis-indole pyrroles useful as antimicrobials agents
EP1662259A1 (en) * 2004-11-25 2006-05-31 Cellzome Ag Use of Eph receptor inhibitors for the treatment of neurodegenerative diseases
EP2230238B1 (en) * 2008-01-04 2013-12-11 LG Life Sciences Ltd. Indole and indazole derivatives having a cell-, tissue- and organ-preserving effect
ITMI20091432A1 (it) * 2009-08-06 2011-02-07 Isagro Ricerca Srl Derivati dell'n-idrossimaleimmide ad elevata attivita' fungicida e relativo uso

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01233281A (ja) * 1988-02-10 1989-09-19 F Hoffmann La Roche Ag ピロール類
JPH02306974A (ja) * 1989-05-05 1990-12-20 Goedecke Ag マレインイミド誘導体および医薬としてのそれらの使用
WO1992017193A1 (fr) * 1991-03-27 1992-10-15 Institut Pasteur Medicament contenant un agent inhibant in vivo l'apoptose pathologique et applications
JPH07504673A (ja) * 1992-03-20 1995-05-25 ザ・ウエルカム・ファウンデーション・リミテッド 抗ウイルス活性を有するインドール誘導体
JPH07304771A (ja) * 1994-03-18 1995-11-21 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 血小板減少症治療剤及びインドロカルバゾール誘導体
WO1997004761A1 (en) * 1995-07-28 1997-02-13 Trustees Of Boston University Methods and compositions for treating cell proliferative disorders

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01233281A (ja) * 1988-02-10 1989-09-19 F Hoffmann La Roche Ag ピロール類
JPH02306974A (ja) * 1989-05-05 1990-12-20 Goedecke Ag マレインイミド誘導体および医薬としてのそれらの使用
WO1992017193A1 (fr) * 1991-03-27 1992-10-15 Institut Pasteur Medicament contenant un agent inhibant in vivo l'apoptose pathologique et applications
JPH07504673A (ja) * 1992-03-20 1995-05-25 ザ・ウエルカム・ファウンデーション・リミテッド 抗ウイルス活性を有するインドール誘導体
JPH07304771A (ja) * 1994-03-18 1995-11-21 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 血小板減少症治療剤及びインドロカルバゾール誘導体
WO1997004761A1 (en) * 1995-07-28 1997-02-13 Trustees Of Boston University Methods and compositions for treating cell proliferative disorders

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See also references of EP1057484A4 *
WEN-HUI ZHU, TATT-TUCK LOH: "DIFFERENTIAL EFFECTS OF PHORBOL ESTER ON APOPTOSIS IN HL-60 PROMYELOCYTIC LEUKEMIA CELLS", BIOCHEMICAL PHARMACOLOGY, ELSEVIER, US, vol. 51, 1 January 1996 (1996-01-01), US, pages 1229 - 1236, XP002930772, ISSN: 0006-2952, DOI: 10.1016/0006-2952(96)00096-2 *

Cited By (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1152002A4 (en) * 1999-02-09 2002-04-17 Sagami Chem Res PYRROL DERIVATIVES AND CELL DEATH INHIBITORS
US6589977B1 (en) 1999-02-09 2003-07-08 Sagami Chemical Research Center Pyrrole derivatives and cell death inhibitors
WO2000075117A1 (en) * 1999-06-04 2000-12-14 Elan Pharma International Ltd. Compositions and methods for inhibiting cell death
EP1275646A4 (en) * 2000-03-30 2003-05-28 Sagami Chem Res INDOLYLPYRROL DERIVATIVES AND CELL DEATH INHIBITORS
US7129250B2 (en) 2000-05-19 2006-10-31 Aegera Therapeutics Inc. Neuroprotective and anti-proliferative compounds
WO2001087887A3 (en) * 2000-05-19 2002-02-28 Aegera Therapeutics Inc Neuroprotective and anti-proliferative compounds
EP2281560A1 (en) 2001-09-27 2011-02-09 Alcon, Inc. Inhibitors of glycogen synthase kinase-3 (GSK-3) for treating glaucomatous optic neuropathy
US7598288B2 (en) 2001-09-27 2009-10-06 Alcon, Inc. Inhibitors of glycogen synthase kinase-3 (GSK-3) for treating glaucoma
WO2003027275A1 (en) 2001-09-27 2003-04-03 Alcon, Inc. Inhibitors of glycogen synthase kinase-3 (gsk-3) for treating glaucoma
WO2004091663A1 (ja) * 2003-04-18 2004-10-28 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 神経再生薬
JP2010513386A (ja) * 2006-12-19 2010-04-30 ノバルティス アーゲー キナーゼ阻害剤としてのインドリルマレイミド誘導体
WO2008105392A1 (ja) * 2007-02-27 2008-09-04 Riken 3-アミノ-2-インドリルブチロラクタム誘導体、その製造法、及びこれを有効成分とする医薬
WO2008117935A1 (en) * 2007-03-28 2008-10-02 Industry-Academic Cooperation Foundation, Yonsei University Nk cell activating molecules, nk cells and pharmaceutical compositons comprising the same
JP2016504299A (ja) * 2012-12-10 2016-02-12 セントジーン アーゲー 白血病を予防および治療するためのマレイミド誘導体の使用
JP2016508962A (ja) * 2012-12-10 2016-03-24 セントジーン アーゲー ガンを予防および治療するためのマレイミド誘導体の使用
US9993463B2 (en) 2012-12-10 2018-06-12 Centogene Ag Use of maleimide derivatives for preventing and treating cancer
US10420754B2 (en) 2012-12-10 2019-09-24 Centogene Ag Use of maleimide derivatives for preventing and treating cancer
WO2016008966A1 (en) 2014-07-17 2016-01-21 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for treating neuromuscular junction-related diseases
WO2016207366A1 (en) 2015-06-26 2016-12-29 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections

Also Published As

Publication number Publication date
AU2548699A (en) 1999-09-06
EP1057484A1 (en) 2000-12-06
EP1057484A4 (en) 2002-11-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO1999042100A1 (fr) Inhibiteurs de la mort cellulaire
JP7532371B2 (ja) Ｔｈｒβ受容体アゴニスト化合物、およびその製造方法および使用
EP2590647B1 (en) Pro-neurogenic compounds
CN104379579B (zh) 吡咯烷衍生物及其作为补体途径调节剂的用途
CN104754941B (zh) 前神经原性化合物
CN111295372B (zh) 硝羟喹啉前药及其用途
CN104619698A (zh) 吡咯烷衍生物及其作为补体途径调节剂的用途
KR20140094547A (ko) 1-(5,6-다이클로로-1h-벤조[d]이미다졸-2-일)-1h-피라졸-4-카르복실산의 메글루민 염 제형
WO2001013916A1 (fr) Medicaments inhibant la mort cellulaire
US20030087949A1 (en) Indolylpyrrole derivatives and cell death inhibitors
US6589977B1 (en) Pyrrole derivatives and cell death inhibitors
KR101511771B1 (ko) 세포괴사 저해제로서의 인돌 및 인다졸 화합물
MXPA06004483A (es) Colinuro de 2-(3,4-dimetilfenil)-4-{[2-hidroxi-3&#39;-(1h- tetrazol- 5- il)bifenil-3-il]hidrazono}-5 metil-2,4-dihidropirazol-3-ona.
TWI664174B (zh) 雜環化合物及其用途
CN115872930A (zh) N-取代3,4-二氢异喹啉-1(2h)-酮衍生物、其组合物及其在药物中的应用
CN115707698A (zh) 5,7-二氯-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-甲酰胺类化合物及其制备方法和应用
CN113880831A (zh) 一种吡嗪二酮衍生物及其用途
JP2008208086A (ja) ３−アミノ−２−インドリルブチロラクタム誘導体、その製造法、及びこれを有効成分とする医薬
US20030153536A1 (en) Compounds and methods of treating transplant rejection
WO2023246924A1 (zh) 苯并噻唑化合物及其应用
WO2017152570A1 (zh) 新型gvs系列化合物及其用途
WO2002041917A1 (fr) Preparations ophtalmologiques
US20180169100A1 (en) Cancer Stem Cell Targeting Compounds
US20170022215A1 (en) Compounds for Eradicating or Inhibiting Proliferation of Cancer Stem Cells
WO2018042096A1 (fr) Derives de 2-quinoline-2-one en tant que modulateurs de recepteurs nmda, compositions les comprenant et utilisation de ces composes dans le traitement de maladies impliquant le systeme nerveux central

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BY CA CH CN CU CZ DE DK EE ES FI GB GE HR HU ID IL IN IS JP KE KG KR KZ LC LK LR LS LT LU LV MD MG MK MN MW MX NO NZ PL PT RO RU SD SE SG SI SK TJ TM TR TT UA UG US UZ VN YU

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): GH GM KE LS MW SD SZ UG ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE CH CY DE DK ES FI FR GB GR IE IT LU MC NL PT SE BF BJ CF CG CI CM GA GN GW ML MR NE SN TD TG

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
DFPE Request for preliminary examination filed prior to expiration of 19th month from priority date (pct application filed before 20040101)
NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: KR

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 09622815

Country of ref document: US

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 1999905260

Country of ref document: EP

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 1999905260

Country of ref document: EP

REG Reference to national code

Ref country code: DE

Ref legal event code: 8642

WWW Wipo information: withdrawn in national office

Ref document number: 1999905260

Country of ref document: EP

点击 这是indexloc提供的php浏览器服务，不要输入任何密码和下载