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WO1998039291A1 - Compounds - Google Patents

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WO1998039291A1
WO1998039291A1 PCT/JP1998/000815 JP9800815W WO9839291A1 WO 1998039291 A1 WO1998039291 A1 WO 1998039291A1 JP 9800815 W JP9800815 W JP 9800815W WO 9839291 A1 WO9839291 A1 WO 9839291A1
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WO
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compound
group
salt
optically active
agent
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Application number
PCT/JP1998/000815
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English (en)
French (fr)
Inventor
Nobuto Koyama
Tatsuji Enoki
Katsushige Ikai
Hua-Kang Wu
Hiromu Ohnogi
Takanari Tominaga
Eiji Nishiyama
Michio Hagiya
Hiroaki Sagawa
Hideto Chono
Ikunoshin Kato
Original Assignee
Takara Shuzo Co., Ltd.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
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Priority to US09/341,768 priority patent/US6177592B1/en
Priority to EP98905688A priority patent/EP0984001B1/en
Priority to JP53835198A priority patent/JP3753438B2/ja
Priority to AU61175/98A priority patent/AU739628B2/en
Priority to EA199900798A priority patent/EA001888B1/ru
Priority to CA002278938A priority patent/CA2278938A1/en
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    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Definitions

  • the present invention relates to a compound having a physiological activity such as an anticancer effect, which is useful in the field of medicine, and further relates to a method for producing the compound.
  • prostaglandins ⁇ and J having ⁇ , ⁇ monounsaturated carbonyl in the 5-membered ring suppress DN DN synthesis, resulting in high safety.
  • Possibility as an anticancer agent has been reported, and various derivatives thereof have been synthesized (see JP-A-62-96438).
  • An object of the present invention is to develop a compound having a physiological action such as an anticancer action, and to provide a method for producing the compound and a drug containing the compound.
  • a compound represented by the general formula [I] (hereinafter, simply referred to as the compound of the present invention) and a compound represented by the formula [IV] 4, 5 —Dihydroxy-1-2-cyclopentene—one (hereinafter simply referred to as “cyclopentene”) is formed by the reaction with an SH group-containing compound, and the compound of the present invention has various strong physiological activities.
  • cyclopentene a compound represented by the general formula [I]
  • cyclopentene 5 —Dihydroxy-1-2-cyclopentene—one
  • the present invention relates to a compound represented by the following general formula [I], an optically active form thereof, or a salt thereof. [I]
  • a bond indicated by a dotted line in the 5-membered ring means that the 5-membered ring may be either a cyclopentene ring having a double bond or a cyclopentane ring in which it is saturated.
  • X is OH
  • Y OH
  • Z is OH
  • R is SH This is the residue obtained by removing the SH group from the group-containing compound.
  • Embodiments of the first invention of the present invention include a compound represented by the following general formula [ ⁇ ], an optically active form thereof, or a salt thereof.
  • R is the residue obtained by removing the S ⁇ group from the compound containing the S ⁇ group
  • Another aspect of the first invention of the present invention is a compound represented by the following general formula [m], an optically active form thereof, or a salt thereof.
  • R is a residue obtained by removing the SH group from the SH group-containing compound
  • the second invention of the present invention is selected from 4,5-dihydroxy-2-cyclopentene-one-one represented by the following formula [IV] or an optically active form thereof, or a salt thereof.
  • the present invention also relates to a method for producing a compound represented by the general formula [I], an optically active form thereof, or a salt thereof, wherein the compound is reacted with an SH group-containing compound.
  • the SH group-containing compound is an SH group-containing amino acid or a derivative thereof.
  • the third invention of the present invention provides, as an active ingredient, at least one compound selected from the compound represented by the general formula [I] of the first invention of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof. It relates to a medicine characterized by containing.
  • the medicament is a biological defense agent (for example, an immunoregulatory anticancer agent, an antiallergic agent, an antirheumatic agent), an antidiabetic agent, an anticancer agent, an apoptosis inducing agent, or an antidisease.
  • a biological defense agent for example, an immunoregulatory anticancer agent, an antiallergic agent, an antirheumatic agent
  • an antidiabetic agent for example, an anticancer agent, an anticancer agent, an apoptosis inducing agent, or an antidisease.
  • Protomicrobial agents eg antivirals, antibacterials.
  • FIG. 1 is a diagram showing a mask spectrum of CM1.
  • FIG. 2 is a diagram showing an 'H-NMR spectrum of CM1.
  • FIG. 3 is a diagram showing the UV absorption spectrum of CM1.
  • FIG. 4 is a diagram showing an 'H-NMR spectrum of CM2.
  • FIG. 5 is a diagram showing a 13 C-NMR spectrum of CM1.
  • FIG. 6 is a diagram showing an IR absorption spectrum of CM.
  • FIG. 7 is a diagram showing the relationship between retention time and absorbance.
  • FIG. 8 is a diagram showing the 'H-NMR spectrum of GM.
  • FIG. 9 is a diagram showing a 13 C-NMR spectrum of GM.
  • FIG. 10 is a diagram showing mass spectacles of GM.
  • FIG. 11 is a diagram showing a GM UV absorption spectrum.
  • FIG. 12 is a diagram showing the GM IR absorption spectrum.
  • FIG. 13 is a diagram showing an elution pattern of one example of a pentanonethio derivative having a mouth.
  • FIG. 14 is a diagram showing the relationship between the reaction time and the absorbance at 215 nm in the case of using cysteine.
  • FIG. 15 is a diagram showing the relationship between the reaction time when daltathione was used and the absorbance at 215 nm.
  • FIG. 16 is a diagram showing a mouth matogram of a reaction product of one example of the present invention.
  • FIG. 17 is a diagram showing the mass spectrum of the peak at 2.99 minutes in FIG.
  • FIG. 18 is a diagram showing an ultraviolet absorption spectrum of the reaction solution immediately after dissolution.
  • FIG. 19 is a diagram showing an ultraviolet absorption spectrum of the reaction solution after the reaction for 50 minutes.
  • FIG. 20 is a diagram showing an ultraviolet absorption spectrum of a reaction solution immediately after dissolution using glutathione.
  • FIG. 21 is a diagram showing an ultraviolet absorption spectrum of a reaction solution after a reaction for 50 minutes using daltathione.
  • FIG. 22 is a diagram showing a ' 3 C-NMR spectrum of the reaction product.
  • FIG. 23 is a diagram showing the relationship between the retention time and the absorbance.
  • FIG. 24 is a diagram showing an 'H-NMR spectrum of GD.
  • FIG. 25 is a diagram showing a 13 C-NMR spectrum of GD.
  • FIG. 26 is a diagram showing a mass spectrum of the GD.
  • FIG. 27 is a diagram showing an IR absorption spectrum of GD.
  • FIG. 28 is a view showing the cancer cell growth inhibitory activity of CM.
  • FIG. 29 is a view showing the cancer cell growth inhibitory activity of CM.
  • FIG. 30 is a graph showing the relationship between the amount of GM and the amount of tumor necrosis factor produced.
  • FIG. 31 is a graph showing the relationship between the amount of GM and the rate of increase in paw edema.
  • FIG. 32 is a diagram showing the relationship between the GM concentration and the NO 2 — concentration in the culture solution.
  • FIG. 33 shows the relationship between the culture time and the number of living cells.
  • FIG. 34 shows the effect of GM on the proliferation of Jurkat cells.
  • FIG. 35 shows the effect of GM on the growth of Mo1t-13 cells.
  • FIG. 36 is a view showing expression of Fas antigen in Mo1t-3 cells.
  • FIG. 37 is a diagram showing expression of kraft antigen in Jurkat cells.
  • FIG. 38 is a view showing a change in the ratio of fas antigen-expressing cells.
  • FIG. 39 is a graph showing the relationship between the GM dose and the blood glucose level.
  • FIG. 40 is a diagram showing the relationship between GM [dose and serum insulin level.
  • FIG. 41 shows the relationship between the GM dose and serum total cholesterol level.
  • FIG. 42 is a graph showing the relationship between the GM dose and serum triglyceride level.
  • FIG. 43 is a graph showing the relationship between the GM dose and the serum free fatty acid level.
  • FIG. 44 shows the relationship between GM concentration and cell viability.
  • FIG. 45 is a graph showing the relationship between GM concentration and p24 production.
  • FIG. 46 is a graph showing the inhibitory action of GM on delayed type hypersensitivity reaction.
  • FIG. 47 is a diagram showing the stereostructure of the CD of the (1-) cyclopentenone p-dimethylaminobenzoyl derivative and the (1) cyclopentenone.
  • FIG. 48 is a diagram showing the three-dimensional structures of the CD of the (+)-form cyclopentenone p-dimethylaminobenzoyl derivative and the (+)-form cyclopentenone.
  • the cyclopentenone represented by the formula [IV] used in the present invention includes both a cis isomer and a trans isomer in the configuration of the hydroxyl group at the 4-position and the 5-position.
  • cis-cyclopentenone may be used
  • trans-cyclopentenone may be used
  • a mixture of cis-cyclopentenone and trans-cyclopentenone may be used.
  • These optically active isomers may be used.
  • the cis-cyclopentenone can be obtained by a chemical synthesis method [Helvetica Chimica Acta, Vol. 55, pp. 2838-2844]. (1 972)].
  • Trans cyclopentenone can also be obtained by a chemical synthesis method (Carbohydrate Res., Vol.
  • cyclopentenone is generated in the heat-treated product.
  • the cyclopentenone in this heat-treated product is extracted with a solvent, and the extract is concentrated.
  • this concentrate is separated by silica gel column chromatography, the eluted pentenone fraction is concentrated, the pentenone is extracted from the concentrate with chloroform, and the extracted concentrate is subjected to normal phase column chromatography.
  • the cyclopentenone in the heat-treated product is isolated.
  • the physical properties of cyclopentenone are shown below.
  • the mass spectrometry of pentenone was carried out using a DX302 mass spectrometer (manufactured by JEOL Ltd.).
  • the NMR spectrum was measured using a heavy-mouthed form solvent, and JNM_A500 (manufactured by JEOL Ltd.) was used.
  • Specific rotation is DIP-370 type polarimeter (manufactured by JASCO Corporation)
  • UV absorption spectrum is UV-250 spectrophotometer (manufactured by Shimadzu Corporation)
  • infrared absorption spectrum (IR) was measured using an FTIR-800 infrared spectrophotometer (manufactured by Shimadzu Corporation).
  • IR (KB r method): 3400, 1715, 1630, 1115, 106, 1 It has absorption at 025 cm- '.
  • cyclopentenone is dissolved in ethanol.
  • Hexane / ethanol (94/6) is further added to this ethanol solution to prepare a cyclopentenone solution.
  • This sample solution was subjected to HP LC using, for example, a Kiralpak AS (Daicel Chemical Industries) column with a column temperature of 40 ° C and a mobile phase of hexane / ethanol (94/6) to give cyclopentenone.
  • Optical splitting is possible.
  • the optical rotation of the separated (1) trans-1,4,5-dihydroxy-1-2-cyclopentene-one [hereinafter referred to as (1-) cyclopentenone] is [ct] 0 2 °-105 ° (0.30, ethanol), and the optical rotation of (+)-trans-4,5-dihydroxy-l-oxy-2-cyclopenten-1-one (hereinafter referred to as (+)-cyclopentenone) is ]. 2 . + 104 ° (0.53, ethanol).
  • the optical rotation was measured using the aforementioned DIP-370 polarimeter (manufactured by JASCO Corporation).
  • FIG. 47 shows the stereostructures of the p-dimethylaminobenzoyl derivative of (1) -body pentenone and (1-)-cyclopentenone.
  • the vertical axis in the figure is the molar circular dichroism
  • the horizontal axis indicates the wavelength (nm).
  • the above three-dimensional structure is shown below as formula [V]:
  • FIG. 48 shows the CD of the p-dimethylaminobenzoyl derivative of the (+)-form pentenone and the steric structure of the (+)-form cyclopentenone.
  • the vertical axis indicates the molar circular dichroism
  • the horizontal axis indicates the wavelength (nm).
  • the above three-dimensional structure is shown below as formula [VI]:
  • the (1) -cyclopentenone is (1)-(4R, 5S) -trans-1,4,5-dihydroxy-2-
  • the cyclopenteneone and the (+)-cyclopentenone are (+)-(4S, 5R) -trans-4,5-dihydroxy-1-2-cyclopentene-one.
  • the cyclopentenone or its optically active substance used in the present invention may be produced by any method, may be produced by the method disclosed in the specification, may be synthesized by a chemical synthesis method, and may be cyclopentene.
  • the trans form, the cis form, a mixture thereof and the optically active forms thereof of tenone are also used in the present invention.
  • cyclopentenone or an optically active form thereof there is a pharmaceutically acceptable salt, which can be converted by a known method.
  • the compound represented by the general formula [I] of the present invention is produced in a reaction solution by reacting a cyclopentenone, its optically active substance and / or a salt thereof, and a compound containing an SH group.
  • cyclopentenone thio derivative by reacting cyclopentenone, its optically active substance, Z or a salt thereof, and an SH group-containing compound, for example, an SH group-containing amino acid or a derivative thereof under an acidic condition, the compound represented by the general formula
  • the compound represented by [ ⁇ ] (hereinafter referred to as cyclopentenone thio derivative) is produced.
  • the S group-containing compound is not limited at all, and examples thereof include methanethiol, butanethiol, mercaptoethanol, SH group-containing amino acids, and SH group-containing amino acid derivatives.
  • S-group-containing amino acids include cysteine and homocystin.
  • SH group-containing amino acid derivative examples include derivatives of the above amino acids, for example, cystine derivatives, cysteine-containing peptides, and cysteine derivative-containing peptides.
  • the cysteine-containing peptide is not particularly limited as long as cysteine is a constituent component in the peptide.
  • the cysteine-containing peptides of the present invention include oligopeptides, for example, from low molecular weight substances such as daltathione to high molecular weight substances such as proteins.
  • Cystine or homocystine-containing peptides may also be used as cystine or homocystine-containing peptides of the present invention under conditions that result in cysteine or homocystine-containing peptides during the reaction, for example, by a combination of reduction treatments. Can be.
  • the cysteine-containing peptide also includes a cysteine-containing peptide containing a carbohydrate, a lunar substance, and the like. Further, salts, acid anhydrides, esters and the like of the above-mentioned various substances may be used.
  • cyclopentenone reacts with the SH group-containing compound under acidic conditions to form a pentopentenonethio derivative.
  • the cyclopentenone, its optically active form and / or a salt thereof is reacted with an SH group-containing compound, for example, an SH group-containing amino acid, or a derivative thereof, to produce a cyclopentenonethio derivative or an optically active form thereof
  • an SH group-containing compound for example, an SH group-containing amino acid, or a derivative thereof
  • known purification means such as a chemical method and a physical method may be used. Gel filtration, fractionation using a molecular weight fractionation membrane, solvent extraction, fractionation, ion exchange resin, etc. Chromatodara using The cyclopentenonethio derivative, its optically active form, or a salt thereof in the reaction product can be purified and isolated by combining a conventionally known purification method such as the Fi method.
  • a cyclopentenone thio derivative represented by the following formula [ ⁇ ] is formed in the reaction solution, and this derivative is contained.
  • the cyclopentenonethio derivative can be purified and isolated by normal phase column chromatography of the resulting reaction product.
  • a cyclopentenonethio derivative represented by the following formula [ ⁇ ] is formed in the reaction solution, and the reverse phase of the reaction product containing this derivative is obtained.
  • the cyclopentenonethio derivative can be purified and isolated by performing column chromatography or the like.
  • the reaction solution has the general formula [m]
  • the compound represented by the formula (hereinafter referred to as cyclopentanonethio derivative) is produced.
  • the SH group-containing compound is not particularly limited, and examples thereof include the above-described SH group-containing compounds.
  • the above-mentioned reaction of cyclopentenone, its optically active substance and / or a salt thereof, and the SH group-containing compound is preferably carried out at pH neutral.
  • Cyclopentenone, its optically active substance, Z or a salt thereof, and an SH group-containing compound react with each other to produce a cyclopentanothio derivative, an optically active substance, or a salt thereof.
  • Well-known purification methods such as chemical, physical, and other methods may be used, including gel filtration, fractionation using a molecular weight fractionation membrane, solvent extraction, fractionation, and various methods using ion-exchange resin.
  • a conventionally known purification method such as a chromatographic method, the cyclopentanonethio derivative or its optically active substance or a salt thereof in the reaction product can be purified and isolated.
  • a cyclopentanonethio derivative represented by the following formula [IX] is formed in the reaction solution, and this derivative is contained.
  • the cyclopentanonethio derivative can be purified and isolated by subjecting the resulting reaction product to reverse phase column chromatography.
  • a cyclopentanonethio derivative represented by the following formula [X] is formed in the reaction solution, and the reaction product containing this derivative is reversed.
  • the cyclopentanonethio derivative can be purified and isolated by performing phase column chromatography or the like.
  • optically active form of the compound of the present invention can be separated by mechanical resolution of a racemic mixture, preferential crystallization, resolution by crystallization as a diastereomer salt or an inclusion compound, kinetic resolution by enzymes / microorganisms, resolution by chromatography. Etc.
  • optical resolution by liquid chromatography a method using a chiral stationary phase, a method using a chiral eluent, separation as a diastereomer, and the like can be used.
  • amide-based stationary phases As chiral stationary phases, amide-based stationary phases, urea-based stationary phases, ligand-exchange-type stationary phases, polysaccharide / polysaccharide derivative stationary phases, protein stationary phases, polymethacrylic acid ester stationary phases, polymethacrylamide stationary phases, etc. are used. it can.
  • Hexanes, alcohols, water (buffer) systems and the like can be used as the eluent, and they can be used as appropriate in combination with the stationary phase described above.
  • the salt of the compound of the present invention or an optically active form thereof includes a pharmaceutically acceptable salt, which can be converted by a known method.
  • the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof has an anticancer activity, a cancer cell growth inhibitory activity, an apoptosis inducing activity, a topoisomerase ⁇ inhibitory activity, a cancer cell differentiation inducing activity, an antirheumatic activity, Rheumatoid arthritis inhibitory activity, Fas antigen production inducing activity, Antibacterial activity, Antiviral activity, Liver function improving activity, Induction of heat shock protein Induction activity, blood component normalization activity, cancer immunopotentiating activity, anti-inflammatory activity, tumor necrosis factor production inhibitory activity, nitric oxide production inhibitory activity, immunomodulatory activity, for example, delayed-type hypersensitivity inhibitory activity, lymphocyte lymphocyte activity It has a physiological activity such as a rejuvenation reaction inhibitory activity, a mixed lymphocyte reaction inhibitory activity, an IgE production inhibitory activity, and an inhibitory activity of lagenanin edema, and by these activities, the compound of the present invention or its optically active substance
  • the medicament obtained by the present invention can be used as a medicament for diseases showing sensitivity to the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof, for example, cancer, viral disease, rheumatism, diabetes, allergy, autoimmune disease. It is extremely useful as a medicament for treating or preventing diseases such as inflammation.
  • the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof may be, for example, human promyelocytic leukemia cell HL-60, human acute lymphoblastic leukemia cell MOLT-3, lung cancer cell A-549 , SV40 transformed lung cells WI-38VA13, hepatoma cells HepG2, colon cancer cells HCT116, human colon cancer cells SW480, human colon cancer Cell W i Dr, gastric cancer cells AGS, and cancer cells such as midroma cells have a cell growth inhibitory activity and an anticancer activity, and the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof is used as an anticancer agent. It can be used as an active ingredient.
  • these compounds have an apoptosis-inducing effect on cancer cells.
  • the mechanism by which the compound of the present invention or its optically active substance or a salt thereof suppresses the growth of cancer cells does not limit the present invention in any way. It is included in the anticancer action of the present invention.
  • the compound of the present invention having an anticancer effect or at least one compound selected from optically active forms or salts thereof as an active ingredient is formulated as an active ingredient in combination with a known pharmaceutical carrier to form a pharmaceutical preparation.
  • the production of an anticancer agent is generally selected from the compound of the present invention, its optically active form, or a salt thereof.
  • solid preparations such as tablets, granules, powders, powders and capsules, and liquid preparations such as ordinary liquid preparations, suspensions and emulsions can be used. Before use, it can be made into a dried product which can be made into a liquid form by adding an appropriate carrier.
  • Pharmaceutical carriers can be selected according to the above administration forms and dosage forms.
  • oral preparations for example, starch, lactose, sucrose, mannitol, carboxymethyl cellulose, corn starch, inorganic salts, etc. are used.
  • a binder, a disintegrant, a surfactant, a lubricant, a fluidity promoter, a flavoring agent, a coloring agent, a fragrance, and the like can be further added.
  • At least one compound selected from the compound of the present invention or its optically active substance or a salt thereof, which is an active ingredient of the present invention is prepared as a diluent according to a conventional method. Dissolve or suspend in water, physiological saline, aqueous glucose solution, vegetable oil for injection, sesame oil, laccase oil, soybean oil, corn oil, propylene glycol, polyethylene glycol, etc., and if necessary, disinfectant, stabilizer, isotonic It is prepared by adding an agent, soothing agent and the like.
  • the anticancer agent of the present invention is administered by an appropriate administration route depending on the formulation.
  • the method of administration is not particularly limited, and can be internal, external, or by injection.
  • Injectables can be administered, for example, intravenously, intramuscularly, subcutaneously, intradermally, etc., and external preparations include suppositories and the like.
  • the dose of the anticancer drug is appropriately determined depending on the formulation, administration method, purpose of use, and the age, weight, and symptoms of the patient to which the drug is applied, and is not fixed but is generally included in the drug product
  • the amount of cyclopentenone and / or its optically active form is 0.1 l / zg to 200 mg / kg per adult per day.
  • the dose varies depending on various conditions, so that a dose smaller than the above-mentioned dose may be sufficient, or may be required beyond the range.
  • the drug of the present invention can be administered orally as it is, or can be added to any food or drink and taken daily.
  • the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof has an anticancer activity, and at low concentrations, has the ability to induce cancer cell differentiation.
  • the active form or a salt thereof is also useful as a cancer cell differentiation inducer (cancer remover).
  • the cancer cell differentiation inducer comprising at least one compound selected from the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof as an active ingredient can be formulated according to the above-mentioned anticancer agent. It can be administered in the same manner as anticancer drugs.
  • the dose of the cancer cell differentiation inducer is appropriately determined depending on the dosage form, administration method, purpose of use, and the age, weight, and symptoms of the patient to which it is applied, and is not fixed but is generally included in the drug product.
  • the amount of at least one compound selected from the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof is 0.1 ⁇ g to 100 mg Z kg per day for an adult.
  • a dose smaller than the above-mentioned dose may be sufficient, or may be necessary beyond the range.
  • the drug of the present invention can be orally administered as it is, or can be taken daily by adding it to any food or drink.
  • the above agent for inducing cancer cell differentiation can be used in a method for inducing cancer cell differentiation. That is, cancer cells can be differentiated by using at least one compound selected from the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof as an active ingredient. It is useful for elucidating the mechanism of differentiation induction of cancer cells and for screening differentiation inducers.
  • the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof has an antibacterial effect. At least one compound selected from these compounds is used as an active ingredient, and is formulated in combination with a known pharmaceutical carrier. Then, an antibacterial agent can be manufactured.
  • the drug can be formulated according to the above-mentioned anticancer drug, and can be administered by a method according to the anticancer drug.
  • the dosage of the antibacterial agent is appropriately set depending on the form of the preparation, the administration method, the purpose of use, and the age, weight, and symptoms of the patient to which the preparation is applied.
  • the amount of at least one compound selected from the compound, its optically active form, or a salt thereof is 10 / zg to 20 mg / kg per adult per day.
  • the drug of the present invention can be orally administered as it is, or can be added to any food or drink to be taken on a daily basis.
  • the compound of the present invention may be used as a raw material for an antibacterial food or drink. It may be used in combination with other antibacterial substances such as ethanol, glycine, sodium acetate, ascorbic acid, glycerin fatty acid ester, salt, and EDTA.
  • the antibacterial agent of the present invention contains at least one compound selected from the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof as an active ingredient, and can be used as a preservative for improving the preservability of food or beverage. . Further, a compound selected from these compounds can be added to a food or beverage and used for a method of preserving food or beverage.
  • the amount of the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof to be added to a food or a drink varies depending on the type of the food or the drink, and may be added according to the purpose.
  • a method of adding the antibacterial agent to food or beverage by an appropriate method is used.
  • the usual method is to add during the production process of food or beverage, but a method of immersing food for a certain time in a solution containing the compound of the present invention or its optically active substance or a salt thereof can also be used.
  • the method of adding to food and the dipping method can be used in combination.
  • the antibacterial agent of the present invention as a preservative, the preservability of food or beverage can be further improved.
  • the growth of contaminated microorganisms can be suppressed in the processing step before freezing, and extremely favorable results in terms of hygiene can be obtained.
  • the antibacterial agent of the present invention has an effect on both gram-positive bacteria and gram-negative bacteria.
  • drug-resistant bacteria such as methicillin-resistant Staphylococcus aureus, Salmonella, enterotoxin-producing Staphylococcus aureus, and vomiting Bacillus cellus It is extremely effective against food poisoning bacteria such as diarrhea-type Bacillus cereus and enterohemorrhagic E. coli O-157.
  • bacteria causing bacterial diseases such as Legionellapne umo phi 1a, causative agents of Legionnaires' disease, Vibrioparahae mo lyticus, food poisoning bacteria, and ulcer-causing bacteria Rico Helicobacter pylori (He1 icobacterpylori), campylobacter jejuni, a gastroenteritis-causing bacterium, such as Legionellapne umo phila (ATCC 331553), V ibrioparahae mo lyticus (ATCC 178) 0 2) has an antibacterial activity against Helicobacter pylori (NCTC 1 16 3 7) x Campylobacter jejuni (ATCC 294 288), and is also effective against microorganisms such as yeast and mold.
  • bacteria causing bacterial diseases such as Legionellapne umo phi 1a, causative agents of Legionnaires' disease, Vibrioparahae mo lyticus, food poisoning bacteria, and ulcer-causing bacteria Rico Helicobacter pylori (He1
  • the antibacterial agent of the present invention can be used to sterilize clothing, cloth, etc., and can be sprayed with the antibacterial agent of the present invention. Sterilization can be performed. For example, it can be added to the cooling water of buildings to prevent military personnel illness.
  • the antibacterial agent of the present invention exhibits antibacterial activity against dental caries and periodontal disease bacteria, and can provide an oral preparation containing the antibacterial agent of the present invention.
  • the shape of the oral agent can be a known shape such as a liquid or a paste.
  • Examples of the oral preparation include dentifrices.
  • the dentifrice may be in the form of a liquid, a paste, or a powder, and may be in the form of a known dentifrice.
  • the content of the compound of the present invention or its optically active substance or a salt thereof in the dentifrice is not particularly limited, as long as it contains an effective concentration against caries and periodontal bacteria.
  • Known additives such as wetting agents, surfactants, binders, flavors, and sweeteners may be added to the dentifrice.
  • An antibacterial cosmetic can be provided by using the antibacterial agent of the present invention.
  • an antibacterial cosmetic the basis of a cream, an emulsion, a mouthwash, a face wash, a face wash, a pack, etc., containing an effective amount of at least one compound selected from the compound of the present invention or an optically active substance thereof or a salt thereof. It can be prepared in the form of makeup cosmetics such as cosmetics, lipsticks, foundations, body soaps, stone stones, etc. It is also effective for hair, and hair products such as hair tonic, hair liquid, hair set lotion, hair blowing agent, hair cream, hair coat, etc. Hair products such as shampoo, rinse and hair treatment Hair care such as toiletries for toiletries It can be in the form of one product.
  • Antibacterial cosmetics also effectively act on the causative bacteria of atopic dermatitis and have a remarkable effect on amelioration and prevention of atopic dermatitis.
  • a bath agent can be provided by using the antibacterial agent of the present invention.
  • the bath preparation of the present invention effectively acts on the causative bacterium of aatby dermatitis, and has a remarkable effect on improvement and prevention of atopic dermatitis. It is also effective in eliminating pathogenic bacteria from baths.
  • Foods or beverages containing at least one compound selected from the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof can be used for improving food poisoning, gastroenteritis and the like.
  • the apoptosis-inducing agent of the present invention comprises, as an active ingredient, at least one compound selected from the compound of the present invention having an apoptosis-inducing property, an optically active form thereof or a salt thereof, and comprising It can be formulated according to the drug and administered in the same manner as the anticancer drug.
  • the dose of the apoptosis-inducing agent is appropriately determined depending on the form of the preparation, the administration method, the purpose of use, and the age, weight, and symptoms of the patient to which the apoptosis-inducing agent is applied.
  • the amount of at least one compound selected from the above compound or an optically active form thereof or a salt thereof is 0.1 ⁇ g to 100 mg Z kg per day for an adult.
  • a dose smaller than the above-mentioned dose may be sufficient, or may be necessary beyond the range.
  • the drug of the present invention can be orally administered as it is, or can be taken daily by adding it to any food or drink.
  • Apoptosis unlike necrosis, which is a pathological cell death, is considered to be death that is originally integrated into the cell's own gene. That is, some external or An internal factor triggers the activation of a gene that programs apoptosis.Based on this gene, a programmed death gene protein is biosynthesized, and the resulting program death protein degrades the cell itself, leading to death. It is considered.
  • the apoptosis-inducing agent of the present invention can express such apoptosis in desired tissues and cells, and can eliminate unnecessary or pathogenic cells from living organisms in a natural form, and is extremely useful.
  • the apoptosis-inducing agent of the present invention can be used in an apoptosis-inducing method. That is, apoptosis can be induced by using as an active ingredient at least one compound selected from the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof, and the method can elucidate the mechanism of apoptosis induction, It is useful for screening apoptosis inducers and apoptosis induction inhibitors.
  • the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof has an anti-rheumatic effect.
  • at least one compound selected from these compounds is used as an active ingredient, it can be formulated in combination with a known pharmaceutical carrier.
  • an antirheumatic drug can be manufactured.
  • the medicament can be formulated according to the above-mentioned anticancer agent, and can be administered by a method according to the anticancer agent.
  • the dose of the antirheumatic drug of the present invention is appropriately set depending on the indication, its formulation, administration method, purpose of use and the age, weight, and symptoms of the patient to which it is applied.
  • the amount of the compound of the present invention or one or more compounds selected from the optically active forms or salts thereof contained in the preparation is 0.1 l / g to 2 OO mg / kg per day for an adult.
  • the dosage varies depending on various conditions, so that a dosage smaller than the above-mentioned dosage may be sufficient, or may be required beyond the range.
  • the drug of the present invention can be administered orally as it is, or can be added to any food or drink and taken daily. Further, the compound of the present invention, an optically active form thereof, or a salt thereof may be used as a raw material of the medicament of the present invention.
  • the compound of the present invention or an optically active form thereof, or a salt thereof has an anti-inflammatory effect on arthritis, an inhibitory effect on carrageenan edema, an inhibitory effect on tumor necrosis factor production, an interleukin-10 production enhancement effect, and a nitric oxide production inhibition effect.
  • Fas antigen production induction action Immunity
  • the compound of the present invention or its optical compound has various physiological activities such as a regulatory action, for example, an action of inhibiting delayed type hypersensitivity reaction, an action of inhibiting lymphocyte blastogenesis, an action of inhibiting a mixed lymphocyte reaction, an action of inhibiting IgE production, etc.
  • An anti-inflammatory agent or an anti-inflammatory agent, a tumor necrosis factor production inhibitor or a tumor necrosis factor production preventive agent, and an interleukin-10 production enhancer comprising at least one compound selected from active substances or salts thereof as an active ingredient
  • Drugs, immunomodulators, nitric oxide production inhibitors, fas antigen production inducers, immunomodulators, IgE production inhibitors, delayed ⁇ i responsiveness inhibitors, antiallergic agents and other antirheumatic agents It can be prepared according to the above-mentioned method, and can be administered according to the above-mentioned method.
  • the dosage of these preparations is appropriately determined depending on the indication, the form of the preparation, the administration method, the purpose of use, and the age, weight, and symptoms of the patient to which the preparation is applied, and is not constant, but is generally contained in the preparation
  • the amount of one or more compounds selected from the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof is 0.1 l / ig to 200 mg Zkg per day for an adult.
  • a smaller amount than the above-mentioned dosage may be sufficient, or may be required beyond the range.
  • the amount of one or more compounds selected from the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof contained in the preparation is preferably 1 per adult per day. 0 pg to 50 mg Z kg, and as a nitric oxide production inhibitor, at least one compound selected from the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof contained in the preparation.
  • the amount is preferably from 0.1 // g to 20 mg kg per adult per day, and the amount of the active ingredient in the preparation can be adjusted according to the purpose of use.
  • the drug of the present invention can be orally administered as it is, or can be added to any food or drink to be taken on a daily basis.
  • Rheumatism is an autoimmune disease in which periosteal cells and chondrocytes are damaged, and the antiallergic agent of the present invention is also useful as a therapeutic agent for autoimmune diseases.
  • the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof suppresses the production of tumor necrosis factor, which is considered to directly induce inflammation in organ-specific autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis and inflammatory diseases.
  • organ-specific autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis and inflammatory diseases.
  • Is a Thl inhibitory cytokine Enhances the production of leukin-10. Therefore, the symptoms of inflammation, for example, rheumatism, an organ-specific autoimmune disease, especially rheumatoid arthritis, are improved, and C-reactive protein (CRP) and rheumatoid factor (RF) levels, which are markers of inflammation, are improved.
  • CRP C-reactive protein
  • RF rheumatoid factor
  • Tumor necrosis factor was discovered as a factor that induces hemorrhagic necrosis at tumor sites, but is now recognized as a cytokine that is widely involved in inflammation-based defense and immune mechanisms. Disruption of the regulation mechanism of tumor necrosis factor production causes various inconveniences mainly, and excessive or unregulated production of tumor necrosis factor causes rheumatoid arthritis, rheumatic myelitis, osteoarthritis, gouty arthritis , Sepsis, septic shock, endotoxin shock, gram-negative sepsis, toxic shock syndrome, cerebral malaria, chronic pneumonia, graft-versus-host reaction, allograft rejection, fever and muscle from infectious diseases such as influenza Secondary cachexia for pain, infection or malignancy, secondary cachexia for human acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), AIDS, AIDS-related syndrome, keloid formation Are associated with many of these diseases, including autoimmune diseases such as ulcerative colitis, multiple sclerosis, autoimmune diabetes and systemic lupus erythe
  • the tumor necrosis factor production inhibitor of the present invention is useful for treating a condition mediated or worsened by tumor necrosis factor.
  • the present invention provides a method for regulating the production of tumor necrosis factor using at least one compound selected from the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof as an active ingredient. Further, according to the present invention, it comprises at least one compound selected from the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof, and comprises a disease state mediated or worsened by tumor necrosis factor.
  • a food or beverage for improvement or a food or beverage for disease prevention is provided.
  • Nitric oxide (hereinafter abbreviated as NO) is the main body of endothelial cell-derived vascular smooth muscle relaxing factor (EDR F) [Nature, Vol. 327, pp. 524-526 (11987)]. ].
  • EDR F endothelial cell-derived vascular smooth muscle relaxing factor
  • the compound of the present invention or an optically active form thereof or there is provided a medicament for treating or preventing a disease which requires suppression of NO production comprising at least one compound selected from the salts thereof as an active ingredient.
  • the disease that requires suppression of N ⁇ production is not particularly limited.
  • toxic shock ⁇ systemic blood pressure decrease by treatment with certain cytokines, blood pressure response decrease, autoimmune disease, Inflammation, arthritis, rheumatoid arthritis, diabetes, inflammatory bowel disease, vascular dysfunction, pathogenic vasodilation, tissue damage, cardiovascular ischemia, hyperalgesia, cerebral ischemia, diseases associated with angiogenesis, cancer Special table 9-504524, Special table 9-505 288, Special table 8-8 50 1 069, Special table 8-5 1 23 18 and Special table 6-508849 And the diseases described in each of the above publications.
  • a NO production inhibitor containing at least one compound selected from the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof as an active ingredient is useful for NO production mechanism studies, NO action mechanism studies, and the like. It can also be used for scrubbing substances involved in the NO production mechanism.
  • the compound of the present invention, an optically active form thereof, or a salt thereof exhibits an NO production inhibitory action on NO producing cells.
  • endotoxin lipopolysaccharide: LPS
  • NOS inducible NO synthase
  • LPS lipopolysaccharide
  • NO production is suppressed.
  • NO production is induced by LPS treatment, the cell viability decreases due to the cytotoxic activity of NO, but when the compound of the present invention or its optically active substance or a salt thereof is added during LPS treatment, NO production decreases. Damage to cells is also reduced.
  • Angiogenesis is essential for the growth of solid tumors, but defective endothelial growth factor / vascular permeability factor (VEGF) plays an important role in this process.
  • VEGF is induced by NO in various cancer cells.
  • the compound of the present invention, the optically active form thereof, or a salt thereof also suppresses VEGF production of cancer cells by suppressing NO production, and as a result, angiogenesis around cancer tissues is inhibited.
  • the compound of the present invention or its optically active substance or a salt thereof is administered to a mouse in which a solid tumor is formed by transplanting cancer cells subcutaneously, formation of blood vessels around the cancer tissue becomes insufficient, Falls off.
  • Nitrosamines are a group of compounds in which a nitro group is added to a secondary amine, and several hundred are known. Many of them are carcinogenic to animals by damaging DNA. Nitrosamines are also thought to be deeply involved in human carcinogenesis and are usually produced by the reaction of nitrites and amines in the stomach. NO reacts with amines to produce nitrosamines even under pH neutral physiological conditions. Also, NO production is increased in patients with liver fluke infection and cirrhosis, which are epidemiologically highly associated with cancer. Therefore, carcinogenesis in a high-risk group can be particularly prevented by administering the compound of the present invention, an optically active form thereof, or a salt thereof to prevent an increase in NO production. As described above, the compound of the present invention, the optically active form thereof, or a salt thereof exhibits a carcinostatic action in two stages: suppression of carcinogenesis and inhibition of angiogenesis in cancer tissues.
  • NO also induces edema characteristic of inflammatory lesions, ie, vascular hyperpermeability [Ma eda et al., Japanese Journal of Cancer Research ⁇ Ancer Research ), Vol. 85, pp. 31-334 (1994)], and enhances the biosynthesis of prostaglandins, which are inflammatory mediators (Salvemini et al., Proc. Prodingsof Nationala 1 Academy of Sciences (USA), 90%, pp. 724 0-724 4 (1993) ].
  • NO reacts quickly with superdoxyradical to generate peroxynite, which is also thought to cause inflammatory cell and tissue damage.
  • NO production is induced when activated immune cells enter the organs and release cytokines.
  • Insulin-dependent diabetes mellitus is a disease caused by the specific destruction of the knee island] 3 cells, and is said to be destruction by NO.
  • the synovial fluid in the affected area of patients with rheumatoid arthritis, rheumatoid arthritis, gouty arthritis, and arthritis associated with Behcet's disease is associated with the joints of the patient's normal joints and healthy people. It contains a higher concentration of NO compared to saving fluid.
  • NO production in the affected area is suppressed and symptoms are improved.
  • NO production is increased during cerebral ischemia and after re-harvesting, resulting in damage to brain tissue.
  • administering the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof to a patient at the time of cerebral ischemia damage to brain tissue is reduced and the prognosis is improved.
  • a cell surface antigen called fas antigen (APO-1 antigen, CD95) has been attracting attention as a molecule that induces apoptosis [Cell (Ce11), Vol. 66, pp. 23-243 (1) 99 1), Journal of Experimental Medicine (J. Exp. Med.), Vol. 169, pp. 747-1756 (1 1989), Journal of Biological Chemistry J. Biol. Chem., Vol. 267, pp. 110709-10715 (1992), J. Immunology, Vol. 184, Vol. 1 274 ⁇ 1279 (1992)].
  • Fas antigens are expressed on immune system cells such as thymocytes, T cells, cytotoxic T cells, B cells, and NK cells.
  • immune system cells such as thymocytes, T cells, cytotoxic T cells, B cells, and NK cells.
  • T cells When the immune system invades foreign non-self antigens, it elicits an immune response to eliminate non-self antigens. However, it does not show an immune response to self-antigens and self-tolerance is established. This is due to the fact that self-reactive lymphoid stem cells undergo a negative selection of clone removal and are eliminated by apoptotic cell death.
  • autoreactive T cells accumulate in the periphery.
  • B cells which are immunocompetent cells, are also self-tolerant, and these self-reactive B cells usually die by apoptosis. If apoptosis does not occur due to abnormalities such as genetic defects, autoreactive B cells accumulate in the periphery. Furthermore, in the case of rheumatoid arthritis, the above-mentioned abnormalities of autoreactive lymphocytes and abnormal turnover of synovial cells are part of the etiology.
  • a fas antigen production inducer containing at least one compound selected from the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof as an active ingredient can be eliminated from a living body due to abnormal autoreactive lymphocytes or turnover.
  • the disease associated with abnormal Fas antigen production is not particularly limited, and examples thereof include autoreactive T cells, autoimmune diseases caused by autoreactive B cells, rheumatoid arthritis, and the like.
  • the disease includes the diseases described in Japanese Patent Publication No. 096565.
  • the compound of the present invention or an optically active form thereof, or a salt thereof enhances interleukin-10 production, suppresses delayed type hypersensitivity reaction, suppresses lymphocyte blastogenesis reaction, inhibits mixed lymphocyte reaction, g It has an immunomodulatory effect such as an E production inhibitory effect, a carrageenan edema inhibitory effect, etc., and an immunomodulatory agent comprising as an active ingredient at least one compound selected from the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof.
  • the agent is useful as a therapeutic or prophylactic agent for diseases caused by abnormalities of these immune systems and immune factors. That is, the decrease in production of interleukin-10 activates Thl, thereby causing Thl-dominant autoimmune inflammation.
  • the immunomodulator of the present invention is useful for treating or preventing these diseases by enhancing the production of interleukin-10 and suppressing the activity of Thl.
  • the lymphocyte blastogenesis reaction is a reaction in which mitogen binds to a receptor on the surface of a lymphocyte, activates the lymphocyte, and promotes its division and proliferation.
  • the mixed lymphocyte reaction is a mixed culture of lymphocytes obtained from allogeneic animals, which induces lymphocyte activation due to a mismatch between major tissue-compatible antigens and promotes lymphocyte division and proliferation. This is the reaction that takes place.
  • the immunomodulator suppresses these reactions, and treats autoimmune diseases caused by abnormally increased lymphocytes, for example, treatment of chronic diseases such as chronic nephritis, chronic colitis, type I diabetes, and rheumatoid arthritis. It is particularly useful for prevention and It is also useful in suppressing plant rejection.
  • inflammatory cells such as macrophages and neutrophils are induced by subcutaneously injecting force-lagenan, which is an inflammatory agent, into the foot, and inflammatory factors produced from these cells This is a reaction that increases vascular permeability and causes edema.
  • force-lagenan which is an inflammatory agent
  • the edema-suppressing action of the immunomodulator is useful for treating or preventing diseases requiring control of enhanced vascular permeability, for example, rheumatoid arthritis.
  • allergic diseases such as asthmatic dermatitis
  • the release of chemical mediators from mast cells plays a major role in the allergic reaction.
  • This reaction is triggered by the binding and cross-linking of IgE to receptors on the cell membrane, and the immunomodulator of the present invention suppresses IgE production and is mediated or exacerbated by IgE production.
  • IgE allergic diseases caused by IgE, such as bronchial asthma, allergic rhinitis, atopic dermatitis, allergic conjunctivitis, urticaria, anaphylactic shock, etc. You.
  • the immunomodulator of the present invention suppresses delayed-type hypersensitivity reactions, and causes diseases associated with delayed-type hypersensitivity reactions, such as contact hypersensitivity, allergic contact dermatitis, bacterial allergy, fungal allergy, virus allergy, drug allergy, and thyroid gland. It is useful in treating and preventing inflammation and allergic encephalitis.
  • the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof has an ability to induce differentiation of preadipocytes, for example, fibroblast precursor cells, and induces the differentiation of the cells into adipocytes.
  • preadipocytes for example, fibroblast precursor cells
  • the active substance or a salt thereof has a hypoglycemic effect, and is selected from the compound of the present invention or an optically active substance thereof or a salt thereof.
  • a therapeutic or preventive agent for diabetes containing at least one compound as an active ingredient can be prepared.
  • a therapeutic or prophylactic agent for diabetes can be obtained.
  • the preparation can be prepared according to the above-mentioned anticancer agent, and can be administered by a method similar to the above-mentioned medicine.
  • the dosage as a therapeutic or prophylactic agent for diabetes is appropriately determined depending on the form, administration method, purpose of use, and the age, weight, and symptoms of the patient to which it is applied.
  • the amount of at least one compound selected from the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof contained therein is 10 pg to 20 Omg Z kg per day for an adult.
  • the dose varies depending on various conditions, so that a dose smaller than the above-mentioned dose may be sufficient, or may be necessary beyond the range.
  • the drug of the present invention can be administered orally as it is, or can be added to any food or drink to be taken on a daily basis.
  • the compound of the present invention may be used as a raw material for a food or drink for improving or preventing diabetes.
  • Ingestion of the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt-containing substance thereof improves diabetes and drastically reduces urinary glucose. Complication symptoms such as sexual dysfunction are also remarkably improved. In addition, hyperlipidemia is improved.
  • the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof has a hyperlipidemia-improving effect, that is, a serum total cholesterol lowering effect, a serum triglyceride lowering effect, and a serum free fatty acid lowering effect.
  • a hyperlipidemia-improving effect that is, a serum total cholesterol lowering effect, a serum triglyceride lowering effect, and a serum free fatty acid lowering effect.
  • Agents can be manufactured.
  • the preparation of the preparation may be carried out according to the above-mentioned agent for treating or preventing diabetes, and may be administered by a method according to the agent for treating or preventing diabetes.
  • the compound of the present invention, an optically active form thereof, or a salt thereof is highly purified. It may be used as a raw material for foods and drinks for improving or
  • the preparation of preadipocytes can be performed.
  • An agent for inducing differentiation into fat cells can be produced.
  • the preparation of the preparation may be carried out according to the above-mentioned agent for treating or preventing diabetes, and may be administered by a method according to the agent for treating or preventing diabetes.
  • the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof exhibits an inhibitory effect on tumor necrosis factor production, and insulin-independent diabetes caused by tumor necrosis factor [Nature, 389 Vol., Pp. 6 10-6 (1997)] is useful for the treatment and prevention.
  • the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof has an antiviral effect. At least one compound selected from these compounds is used as an active ingredient, and is formulated in combination with a known pharmaceutical carrier. Then, an antiviral agent can be manufactured.
  • the antiviral agent can be prepared into a formulation according to the above-mentioned anticancer agent and administered by a method according to the above-mentioned medicine.
  • the dosage of the antiviral agent is appropriately determined depending on the dosage form, administration method, purpose of use, and the age, weight, and symptoms of the patient to which it is applied, and is not fixed but is generally included in the pharmaceutical preparation
  • the amount of one or more compounds selected from the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof is 0.1 to 20 mg / kg per day for an adult.
  • the drug of the present invention can be orally administered as it is, or can be added to any food or drink and taken daily.
  • the compound of the present invention, an optically active form thereof, or a salt thereof may be used as a raw material for an antiviral food or drink.
  • the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof exhibits antiviral activity against DNA viruses, RNA viruses, retroinoles, and viroids. You.
  • antiviral agents for humans antiviral agents for non-human animals, such as livestock, poultry, aquaculture animals, for example, antiviral agents effective against viral diseases such as fish and shrimp, and plant antiviral agents, for example, It can be used as an antiviral agent for useful organisms, such as an antiviral agent effective against viral diseases of agricultural and horticultural crops such as flowers and vegetables.
  • DNA viruses that infect animals include, for example, box virus, herpes virus, adenovirus, hepatitis B virus, papilloma virus, poliovirus, Epstein-Bano les innoles, and baculoinoles, and infect plants.
  • Examples of the DNA virus that can be used include the force reflower mosaic virus.
  • RNA viruses that infect animals include, for example, rotavirus, rubella virus, Japanese encephalitis virus, dengue virus, Newcastle disease virus, measles innores, mumps innores, distemper innores, influenza virus, vesicular stomatitis virus, and human poliovirus.
  • Viruses, hepatitis A virus and hepatitis C virus; and RNA viruses that infect plants include, for example, tobacco mosaic virus, barley dwarf virus, rice stripe virus, and tobacco ring spot virus.
  • Retroviruses include, for example, adult T-cell leukemia virus and human acquired immunodeficiency virus, and viroids include, for example, potato spindle tuber viroid.
  • the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof is effective for the treatment and prevention of viral diseases in non-human mammals, birds, for example, chickens and turkeys, cold-blooded animals, for example, fish. Shows antiviral activity against human virus.
  • Sinoreid herpesvirus 1 Caprid herpes virus 1, Lagamo Norref herpesvirus 1, Fascianide herpesvirus 1, Fasianide herpes virus 2, Turkey herpes virus 1 , Anatide virus 1, catfish herpes virus 1, etide virus 3, bovid herpes virus 1, bovid herpes virus 3, bovid herenovirus Type 4, Big Health Virus Type 1, Pig Health Winores Type 2, Milid Herpes Winoreles Type 1, Sepid Henoles Innores Type 1, Sepido Henoles Innores Type 2, Knoll Eid Henoles Winores 1, Type Ninh Henoles Virus Type 1, Helin Henoles Innores Type 1, Equid Health Virus type 1 and Equine virus Norevirus type 2.
  • Avian viral diseases such as Marek's disease are used in the present invention by methods well known in veterinary and breeding techniques, such as injecting the antiviral agent of the present invention into birds or adding it to feed or drinking water. It is prevented and / or treated by the compound.
  • the compounds used in the present invention may be added directly to water, seawater, etc.
  • the compounds used in the present invention may be mixed in feeds to produce Viral diseases of fish inhabiting pools, aquariums, holding tanks, or small areas of breeding areas due to viral infections such as the catfish virus, the herpes virus Solomons, and the nauru virus, such as the transmission of salmonids Hematopoietic necrosis, Herpesvirus infection or infectious knee necrosis, Rainbow trout virus Hemorrhagic sepsis, Koi spring virus disease, Lymphocystis disease of various fishes, Marine fish Disease, rhabdovirus disease such as flounder, viral knee hepatic necrosis such as juvenile yellowtail, and white rot disease such as troughfish can be similarly prevented and / or treated.
  • the precise regulation of the administration of the compound used in the present invention and the antiviral agent of the present invention is inevitably based on the necessity of the individual subject being treated, the type of treatment and the judgment of the breeder. It depends.
  • a non-human animal to which the antiviral agent of the present invention has been administered has remarkable improvements in survival rate, growth rate, egg production rate, etc. due to its health maintenance.
  • the compound of the present invention, its optically active form, or a salt thereof used in the present invention suppresses the synthesis of these viral proteins and also suppresses the synthesis of the virus genome, thereby exhibiting a strong antiviral effect. It also selectively kills these virus-infected cells.
  • HIV human acquired immunodeficiency virus
  • the antiviral agent of the present invention selectively kills infected cells while suppressing HIV proliferation of the infected cells, induces virus resistance to uninfected cells, HIV can be removed from the environment.
  • the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof has a liver function improving effect, a heat shock protein inducing action, and one or more compounds selected from the compound of the present invention or the optically active form thereof or a salt thereof.
  • a liver function improving agent and a heat shock protein inducer as an active ingredient can be formulated according to the above antiviral agent, and can be administered by a method similar to the antiviral agent.
  • the dosage as a hepatic function improver or heat shock protein inducer is appropriately determined depending on the dosage form, administration method, purpose of use and the age, weight, and symptoms of the patient to which it is applied.
  • the amount of one or more compounds selected from the compound of the present invention, its optically active form, or a salt thereof contained therein is 0.1 l ⁇ ug SO mg Z kg per day for an adult.
  • a dosage lower than the above-mentioned dosage may be sufficient, or may be necessary beyond the range.
  • the drug of the present invention can be orally administered as it is, or can be added to any food or drink to be taken on a daily basis.
  • one or more compounds selected from the compound of the present invention, its optically active substance, or a salt thereof may be used as a raw material for a food or drink for improving liver function or a food or drink for inducing heat shock protein.
  • Ingestion of the compound of the present invention, its optically active form, or a salt thereof also improves liver dysfunction and normalizes G ⁇ T and GPT values.
  • the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof has a heat shock protein-inducing activity such as 70 kDalton (HSP70), and is capable of inducing hepatitis virus, AIDS Pinoles, Innoleenza Pinores, and vesicularity. It has antiviral activity against RNA viruses such as stomatitis, inores and herpes virus, and DNA viruses.
  • heat shock proteins are involved in cancer immunity, and these compounds are also effective in cancer immunity.
  • it also has a biological defense effect such as anti-inflammatory.
  • Heat shock protein is a generic term for proteins whose synthesis is induced when cells or individuals undergo a rapid temperature change of about 5 to 10 ° C higher than normal temperature. It is widely distributed from objects to higher eukaryotes.
  • HSP90, HSP70, ubiquitin, HSP26 and the like are known.
  • HSP 70 is a kind of molecular protein, and binds to unfolded or incompletely folded protein to help form a three-dimensional structure.
  • the amino acid sequence of the heat shock protein is well conserved during evolution, and HSP70 is homologous to the Escherichia coli DnaK protein.
  • the ability of the compounds of the present invention to induce HS P70 is seen at 10 M and is maximal at 20-30 ⁇ , which is several hundred ⁇ for 2-cyclopenten-1-one to induce HS ⁇ 70. It can be said that the compound of the present invention, its optically active substance, or a salt thereof has an extremely high heat-shock protein inducing activity as compared with the case where a concentration is required. Shows antiviral activity against torovirus and viroid. Examples of these viruses and viroids include the above viruses and viroids.
  • the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof also has a growth inhibitory activity against cancer cells transformed with an oncogene, and has an effect of preventing carcinogenesis by an oncogene.
  • papillomavirus is a DNA virus of the genus papovaviridae or papillo mawinores (papil lomavirus), and as a human virus (HPV), for example, HPV16, which causes cervical cancer and the like, is used.
  • HPV human virus
  • the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof has a growth inhibitory effect on cells that have become cancerous with the HPV16 type cancer gene E7, and the compound of the present invention or an optically active form thereof
  • a virus carcinogenesis cell growth inhibitor can be provided using at least one compound selected from salts thereof as an active ingredient, and carcinogenesis by a cancer gene can be prevented.
  • the compound of the present invention has an inhibitory action of two-step carcinogenesis by an initiator and a promoter, and contains at least one compound selected from these compounds as an active ingredient. It can provide a carcinogenesis inhibitor.
  • a food for preventing carcinogenesis or a beverage for preventing carcinogenesis comprising at least one compound selected from the compound of the present invention or an optically active substance thereof or a salt thereof can be provided.
  • the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof has an inhibitory action on IgE production and an inhibitory action on delayed hypersensitivity reaction. At least one compound selected from these compounds is used as an active ingredient and is known.
  • an antiallergic agent By preparing a pharmaceutical preparation in combination with the above pharmaceutical carrier, an antiallergic agent can be produced.
  • the preparation can be prepared according to the above anticancer agent.
  • the antiallergic agent of the present invention is administered by an appropriate administration route according to the formulation.
  • the administration method is also not particularly limited, and can be for internal use, external use, and injection. For example, tablets, pills, granules, powders, solutions, suspensions, syrups, and capsules can be administered orally.
  • the injection can be administered, for example, intravenously, intramuscularly, subcutaneously, intradermally, and the like.
  • Ointments, creams and the like can be administered transdermally.
  • Suppositories can be administered rectally.
  • Aqueous or non-aqueous Eye drops can be prepared, and examples of dosage forms to be administered to the eyes with eye drops include ointments, coating solutions, sprays, inserts and the like.
  • solutions or suspensions of the active ingredient with conventional pharmaceutical excipients are used, for example as aerosol sprays for inhalation.
  • the active ingredient in dry powder form can also be administered by an inhaler or other device that allows direct contact with the lungs.
  • the dose of the antiallergic agent is appropriately set depending on the form, administration method, purpose of use, and the age, weight, and symptoms of the patient to which the antiallergic agent is applied.
  • the amount of at least one compound selected from the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof is 10 pg to 50 mg Z kg per day for an adult.
  • a dosage smaller than the above-mentioned dosage may be sufficient, or may be required beyond the range.
  • the drug of the present invention can be orally administered as it is, or can be added to any food or drink to be taken daily.
  • An inhibitor of IgE production and an inhibitor of delayed hypersensitivity reaction can be produced using at least one compound selected from the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof as an active ingredient.
  • These preparations can be prepared according to the above-mentioned anti-allergic agents, and can be administered by the method according to the above-mentioned anti-allergy.
  • the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof may be used as a raw material for a food for antiallergic use or a beverage for antiallergic use.
  • the symptoms of a disease caused by IgE production and a delayed hypersensitivity reaction are remarkably improved, and the preventive effect of the disease is also improved. Is also excellent.
  • the anti-allergic agent of the present invention suppresses IgE production and symptoms mediated or worsened by IgE production, such as allergic diseases caused by IgE, such as bronchial asthma, allergic rhinitis, It is extremely useful for improving symptoms and / or preventing diseases such as atopic dermatitis, allergic conjunctivitis, urticaria, and anaphylactic shock. It also suppresses delayed-type hypersensitivity reactions and diseases associated with delayed-type hypersensitivity reactions, such as contact hypersensitivity, allergic contact dermatitis, bacterial allergy, fungal allergy, and viral infection. It is useful in the treatment and prevention of lugi, drug allergy, thyroiditis, allergic encephalitis, etc.
  • the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof has an anticancer activity, a cancer cell growth inhibitory activity, an apoptosis inducing activity, a topoisomerase ⁇ inhibitory activity, a cancer cell differentiation inducing activity, an anti-rheumatic activity, a chronic joint.
  • Rheumatoid inhibitory activity Fas antigen production inducing activity, antibacterial activity, antiviral activity, liver function improving activity, heat shock protein inducing activity, blood component normalizing activity, cancer immunity enhancing activity, anti-inflammatory activity, tumor necrosis factor production Inhibitory activity, nitric oxide production inhibitory activity, immunomodulatory activity, e.g., delayed hypersensitivity reaction inhibitory activity, lymphocyte blastogenesis reaction inhibitory activity, mixed lymphocyte response inhibitory activity, IgE production inhibitory activity, ligagenan It has a physiological activity such as an edema-inhibiting activity, and by these activities, at least one selected from the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof. Foods or beverages containing at least one compound are also useful as functional foods or functional beverages having the various physiological activities described above.
  • the heat-treated product containing pentenone in the mouth and partially purified cyclopentenone, purified cyclopentenone and an SH group-containing compound from the heat-treated product are used to produce during the production process.
  • the compounds of the present invention may also be used.
  • the heat-treated product containing pentopenenone, a raw material selected from partially purified cyclopentenone and purified cyclopentenone from the heat-treated product, and the compound of the present invention which is a reaction product of the SH group-containing compound or a compound thereof.
  • a food or beverage containing, diluted and / or added with at least one compound selected from optically active substances or salts thereof is included in the food or beverage of the present invention.
  • the method for producing a food or beverage of the present invention is not particularly limited, and examples thereof include cooking, processing, and production by a commonly used method of producing a food or beverage, and an effective amount of the produced food or beverage. It is sufficient that at least one compound selected from the compound of the present invention having the above physiological action, the optically active substance thereof, or a salt thereof is contained.
  • the food or beverage of the present invention which can easily produce a food or beverage having a new physiological action, includes a carcinostatic action, an antibacterial action, an apoptosis-inducing property, an antiviral action, and a liver function improving action. If at least one compound selected from the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof having a physiological function such as at least one compound is contained, added, Z- or diluted, its shape is not particularly limited. No, tablet-like
  • Orally ingestible forms such as granules, capsules, gels, and sols are also included.
  • the food or beverage of the present invention contains the compound of the present invention having a physiological activity, an optically active substance thereof or a salt thereof, and has various physiological activities, anti-cancer effects, antibacterial effects, and apoptosis-inducing effects of these compounds.
  • Ingestion of these compounds due to their antiviral, antiviral and hepatic function-improving effects, leads to the prevention of carcinogenesis, cancer-suppressing effects, viral diseases, diabetes, rheumatism, allergies, autoimmune diseases and other compounds of the present invention.
  • the compound of the present invention or an optically active form thereof or a salt thereof has no toxicity even when administered in an effective amount of these physiological activities.
  • the formula [ ⁇ ] the formula [ ⁇ ]
  • the compound of the present invention As described above, the compound of the present invention, its optically active form, or a salt thereof is an extremely useful compound in a wide range of fields such as medicines, foods, and drinks due to its various physiological functions. is there.
  • the compound of the present invention is also produced in foods and beverages as a reaction product of cyclopentenone and an SH group-containing compound, for example, an SH group-containing amino acid, or a derivative thereof, for example, a cysteine-containing amino acid derivative, and is artificially produced. Use of these compounds is also included in the present invention.
  • This fraction was separated by normal-phase HPLC using a Palpack type S column (manufactured by Takara Shuzo Co., Ltd.), and the purity was 98% when detected by ultraviolet absorption at 21.5 nm.
  • 113.9 mg of the above cyclopentenone was dissolved in 2.85 ml of ethanol.
  • 3.85 ml of hexane ethanol (94/6) was further added to prepare a 17 mg / ml penpentone solution having a round-mouth. This solution was filtered through a 0.5 ⁇ filter to obtain an optically resolved HPLC sample solution.
  • Both the obtained (1) -cyclopentenone and (+)-cyclopentenone contained about 1% of enantiomer, so that they were optically resolved again under the above conditions.
  • 30.0 mg to 19.7 mg of (1) -cyclopentenone containing no enantiomer of (1) -cyclopentenone in the front peak was converted from 37.4 mg to 27.7 mg of (+)-cyclopentenone in the rear peak.
  • (+)-Cyclobentenone containing no enantiomer was obtained.
  • the elution times of optical resolution HPLC of (1) -form cyclopentenone and (+)-form cyclopentenone were 33 minutes and 40 minutes, respectively.
  • Example 11 Mass spectrometry of CM1 and CM2 isolated in (1) was performed using a DX302 mass spectrometer (manufactured by JEOL Ltd.). In addition, it was dissolved in a 0.1 N aqueous solution of DC and analyzed by nuclear magnetic resonance (NMR). The nuclear magnetic resonance apparatus used was JNM-A500 (manufactured by JEOL Ltd.). The ultraviolet (UV) absorption spectrum was measured using a UV-2500 spectrophotometer (manufactured by Shimadzu Corporation). The results are shown below
  • Glycerol was used as the matrix.
  • Glycerol was used as the matrix.
  • CM infrared absorption
  • the CM1 13 C- Fig. 6 shows the NMR spectrum of the NMR spectrum.
  • the horizontal axis shows the mZz value and the vertical axis shows the relative intensity (%).
  • the horizontal axis represents the chemical shift value (ppm) and the vertical axis represents the signal intensity.
  • the horizontal axis indicates wavelength (nm)
  • the vertical axis indicates absorbance.
  • the horizontal axis is the wave number.
  • FIG. 7 is a diagram showing the relationship between the retention time and the absorbance, where the horizontal axis represents the retention time (minutes) and the vertical axis represents the absorbance at 220 nm.
  • Glycerol was used in the matrix.
  • FIG. 8 is a diagram showing the 'H-NMR spectrum of GM, in which the horizontal axis shows the chemical shift value (ppm) and the vertical axis shows the signal intensity.
  • FIG. 9 is a diagram showing a ' 3 C-NMR spectrum of GM, in which the horizontal axis indicates the chemical shift value (ppm) and the vertical axis indicates the signal intensity.
  • Figure 10 shows the GM mass spectrum. The horizontal axis shows the m / z value and the vertical axis shows the relative intensity (%).
  • FIG. 11 is a diagram showing a UV absorption spectrum of GM, in which the horizontal axis represents wavelength (nm) and the vertical axis represents absorbance.
  • Fig. 12 is a diagram showing the IR absorption spectrum of GM, where the horizontal axis shows the wave number (cm- ') and the vertical axis shows the transmittance (%).
  • GM1 and GM2 are 2-hydroxy-1-4-gnoletathion-S-inole-2-cyclopentene-ten-one (2-hydroxy-4- 4-glutathion-S-yto2-cyclopententen-1- one) diastereomer, one of which has the structure shown in formula [XI] and the other has the structure shown in formula [ ⁇ ].
  • HP LC was performed using TSK-Gel ODS 80 T s (4.6 mm X 250 mm; manufactured by Tosoh I) at a flow rate of 1 ml / min. Pentenone and one cysteine peaks decreased, and major new peaks appeared at 4.0 and 4.3 minutes.
  • FIG. 13 shows the results. That is, FIG. 13 is a diagram showing the relationship between the elution time and the absorbance at 210 nm.
  • the horizontal axis shows the elution time (minutes), and the vertical axis shows the absorbance at 210 nm.
  • 3.1 minutes is the elution position of one cysteine and 4.9 minutes is the elution position of cyclopentenone.
  • FIG. 14 is a diagram showing the relationship between the reaction time and the absorbance at 215 nm when cysteine was used.
  • the horizontal axis shows the reaction time (seconds), and the vertical axis shows the absorbance at 215 nm.
  • FIG. 15 is a diagram showing the relationship between the reaction time when daltathione was used and the absorbance at 215 nm.
  • the horizontal axis shows the reaction time (seconds), and the vertical axis shows the absorbance at 215 nm.
  • FIG. 16 is a chromatogram of the reaction product of one example of the present invention described above, in which the horizontal axis shows the retention time (minutes) and the vertical axis shows the total ionic strength (relative value).
  • FIG. 17 is a diagram showing the mass spectrum of the fraction eluted at 2.99 minutes in FIG. 16. The horizontal axis represents 01-2, and the vertical axis represents ionic strength (relative value).
  • FIG. 18 is a diagram showing an ultraviolet absorption spectrum of the reaction solution immediately after dissolution
  • FIG. 19 is a diagram showing an ultraviolet absorption spectrum of the reaction solution after 50 minutes of reaction. 18 and 19, the horizontal axis represents wavelength (nm), and the vertical axis represents absorbance.
  • FIGS. 20 and 21 show the UV absorption spectrum of the reaction solution immediately after dissolution when glutathione was used
  • Fig. 21 shows the UV absorption spectrum of the reaction solution after 50 minutes of reaction using glutathione. It is a figure which shows a spectrum. 20 and 21, the horizontal axis represents wavelength (nm), and the vertical axis represents absorbance.
  • the reaction was performed at C for 1 hour. 700 ⁇ l of this reaction mixture was filtered through a 0.5 m coskinase filter, and the reaction product of pentenone and glutathione was prepared under the following conditions.
  • FIG. 23 is a diagram showing the relationship between the retention time and the absorbance, where the horizontal axis is the retention time (minutes) and the vertical axis is the absorbance at 220 nm.
  • Example 4 The structure of GD1 prepared in (1) was analyzed. Nuclear magnetic resonance (NMR) spectrum is J NM-A500 (manufactured by JEOL), mass spectrum (MS) is DX302 mass spectrometer (manufactured by JEOL), ultraviolet (UV) absorption The spectrum was measured using a UV-2500 spectrophotometer (manufactured by Shimadzu Corporation), and the infrared absorption (IR) spectrum was measured using an FT IR-8000 PC infrared spectrophotometer (manufactured by Shimadzu Corporation). The results are shown below.
  • the sample was dissolved in heavy water, and the chemical shift value of dioxane was expressed as 67.4 ppm.
  • Glycerol was used for the matrix.
  • Figures 24 to 27 show the results.
  • Figure 24 shows the 'H-NMR spectrum of GD.
  • FIG. 4 is a diagram showing vectors, in which the horizontal axis represents the chemical shift value (ppm) and the vertical axis represents the signal intensity.
  • FIG. 25 is a diagram showing a ' 3 C-NMR spectrum of GD, in which the horizontal axis indicates the chemical shift value (ppm) and the vertical axis indicates the signal intensity.
  • Fig. 26 is a diagram showing the mass spectrum of GD.
  • the horizontal axis shows the mZz value, and the vertical axis shows the relative intensity (%).
  • Fig. 27 is a diagram showing the IR absorption spectrum of GD.
  • the horizontal axis shows the wave number (cm- 1 ), and the vertical axis shows the transmittance (%).
  • GD is 2,3-dihydroxy-4-glutathione-S-inole-cyclopentanone (2,3-dihydroxy-4-glutathion-S-yl-cyclopentanone) represented by the formula [X]. It turned out that there was. GD is a mixture of four diastereomers, and each diastereomer was separated from GD.
  • CM showed strong cancer cell growth inhibitory activity.
  • apoptotic bodies were formed in the cells at each cell growth inhibitory concentration.
  • Fig. 28 shows the relationship between the concentration of the added sample, that is, CM in the culture solution and the number of viable cells.
  • the horizontal axis shows the CM concentration ( ⁇ ), and the vertical axis shows the concentration in 5 ml of culture solution. shows the number of viable cells (X 1 0 5 / 5m l ) contained.
  • a white square mark (mouth) indicates CM addition and culture for 24 hours
  • a black square mark (garden) indicates CM addition and culture for 48 hours.
  • White triangles ( ⁇ ) indicate 24-hour culture without sample addition
  • black triangles indicate 48-hour culture without sample addition.
  • the cultured cells were stained with trypan blue to count the number of live cells and the number of dead cells.
  • the number of viable cells and the survival rate of cells in the 1 ⁇ GM-added section were significantly lower than those in the control water-added section.
  • the cultured cells were observed under an optical microscope to confirm nucleus condensation, cell shrinkage, and formation of apoptotic bodies.
  • DNA was extracted from the cells and subjected to agarose gel electrophoresis, fragmentation of DNA in chromatin units was observed. These phenomena were not observed in the control water addition category.
  • Figure 29 shows the results. That is, Fig. 29 is a diagram showing the relationship between the culture time when 10 // M GM is added to the culture solution of HL-60 and the number of viable cells in the culture solution, where the horizontal axis indicates the culture time (hour) and the vertical axis The axis indicates the number of living cells in the culture solution (X105 5 ml).
  • a white square mark (mouth) indicates ⁇ ⁇ ⁇ GM addition
  • a white circle mark ( ⁇ ) indicates water addition control.
  • each well of a 96-well microtiter plate was added.
  • the mixture was dispensed into a well and cultured at 37 ° C. for 48 hours in the presence of 5% CO 2 .
  • Example 5 the cancer cell proliferation inhibitory activity of 100, 200, or 400 ⁇ M GD or CD aqueous solution, respectively, was measured.
  • the degree of cell proliferation was expressed as a ratio (%) of the absorbance at 590 nm in the sample addition section to the absorbance at 590 nm in the control water addition section.
  • GD and CD exhibited cancer cell growth inhibitory activity.
  • apoptotic bodies were formed in the cells at each cell growth inhibitory concentration.
  • each compound exhibited a cancer cell growth inhibitory activity and an apoptosis-inducing activity.
  • Various diastereomers also showed the same effect.
  • GM was diluted to a predetermined concentration with physiological saline, and the following test was performed.
  • Meth A cells (2 ⁇ 10 6 cells / mouse) were injected subcutaneously into the abdomen of 8-week-old female BAL BZc mice (body weight: about 20 g). Then, in the same place Were injected subcutaneously with GM (5 mgZk gZ days) for 5 consecutive days.
  • the control group was similarly injected subcutaneously with physiological saline. Two weeks later, the cancer tissue formed on the abdomen of the mouse was excised and its weight was measured. Compared with the control group, a remarkable tumor growth inhibitory effect was observed in the GM administration group. Similar results were obtained for CM, CD and GD.
  • Mouse leukemia P-388 (1.1 ⁇ 10 6 cells Z mouse) was intraperitoneally injected into a 7-week-old female DB AZ2 mouse (body weight: about 20 g). Thereafter, GM, CM, GD or CD (10 mg / kg day) was intraperitoneally injected for 5 consecutive days.
  • the control group was similarly intraperitoneally injected with physiological saline. The number of surviving mice, the average number of surviving days, and the survival rate were calculated in two groups of eight mice each. The average survival time was prolonged in the group to which each sample was administered compared to the control group, and a remarkable life-prolonging effect was observed. In addition, a similar life-prolonging effect was exhibited in strains using Sarcoma-180 ICR mice, IMCZCDF1 mice, and EA CZDDY mice.
  • GM, CM, GD, or CD showed an anticancer effect. Similar results were obtained for each diastereomer.
  • Bacillus subtilis IFO 3021 was cultured in a sensitive broth medium (Nissi) for 1 ⁇ (seed culture). The absorbance at 600 nm was measured, and the number of viable bacteria was calculated from a previously prepared calibration curve showing the relationship between the number of viable bacteria and the absorbance at 600 nm.
  • the seed culture was diluted to 1 ⁇ 10 ⁇ Zm 1 with fresh sensitive broth medium, and 180 M 1 was dispensed into each well of a 96-well microtiter plate.
  • An aqueous solution of 4 mgZm1 and 2 mg of GM or water of GM was added in an amount of 20 ⁇ l / well to each well, and cultured at 37 ° C. for 1 hour (main culture).
  • a part of the seed culture was diluted with sterile water, applied to a susceptible Bouillon agar plate medium, cultured at 37 ° C for 1 mm, and the number of colonies was counted to determine an accurate viable cell count.
  • the culture solution of each well was diluted with sterile water, applied to a susceptible Bouillon agar plate medium, cultured at 37 ° C for 1 ⁇ , and colonies were counted to determine the number of viable cells.
  • 4 mgZm l GM added segment viable count in (final concentration 4 0 0 ⁇ g 1) is 4. a 4 X 1 0 7 or Zm 1, 1. 3 X 1 0 8 pieces of water added segment It was smaller than Zm1. Therefore, GM showed a growth inhibitory effect on the test bacteria at 400 ⁇ g Zm1. Similar results were obtained for CM, GD, CD or their respective diastereomers and GM diastereomer. These compounds also showed similar antibacterial activity against other bacteria.
  • LPS lipopolysaccharide: Sigma
  • 8-week-old female CDF1 mouse purchased from Japan SLC, 7 weeks old, weighing 20 g and bred for 1 week
  • GM was administered orally at a dose of 100, lOOOOmgZkg, respectively, 30 minutes before LPS administration.
  • blood was collected from the mice, the serum was separated, and the amount of tumor necrosis factor- ⁇ in the serum was measured using a commercially available ELISA kit (manufactured by Endogen).
  • Table 3 shows the results. That is, the production of tumor necrosis factor was significantly suppressed in the GMlOOOOmgZkg administration group as compared to the control group administered with distilled water.
  • the peritoneal cells were washed twice with RPMI-1640 medium, suspended in RPMI-1640 medium containing 10% fetal calf serum (FCS: Hyclone), and the cell concentration was adjusted to 1 x 10 e cells / ml. It was adjusted.
  • the prepared cell was 1 m 1 were seeded in 24-well plates, incubated for 2 hours at 37 ° C C0 2 in Kyubeta scratch. After the culture, non-adherent cells contained in the supernatant were removed, and the adherent cells were used as peritoneal cavity.
  • FIG. 30 is a diagram showing the relationship between the amount of GM and the amount of tumor necrosis factor production, in which the vertical axis indicates the tumor necrosis factor production amount (pgZml), and the horizontal axis indicates the GM concentration ( ⁇ ).
  • the bar graph shows the control without GM added.
  • GM significantly inhibited LPS-induced tumor necrosis factor production from mouse peritoneal macrophages at concentrations of 10 and above.
  • GM exhibited an inhibitory effect on tumor necrosis factor production. Similar results were obtained for CM, GD, CD, or their diastereomers and GM diastereomers.
  • GM prepared with distilled water (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) at a dose of 10 and 10 Omg / m 1 at a dose of 1 Om 1 Zkg to rats fasted 18 hours before the start of the experiment did.
  • the cells were suspended in physiological saline (Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) and the concentration was 1%.
  • the adjusted force lagenan (manufactured by Kokosha Co., Ltd.) was injected into the right foot and foot of 100 ⁇ l norat to induce foot edema.
  • the right foot volume of the rat was measured with a rat foot volume measuring device (manufactured by Gobazil Co.). The measured values were calculated and calculated from the right foot volume of each rat measured before the administration of ligamentan.
  • FIG. 31 is a diagram showing the relationship between the GM amount and the rate of increase in foot edema, wherein the vertical axis indicates the increase rate (%), and the horizontal axis indicates the GM dose (mgZkg).
  • GM showed a significant inhibitory effect from the dose of 10 OmgZkg.
  • the GM NO-suppressing activity and cytotoxicity-suppressing activity of GM were measured as follows using mouse macrophage cell line RAW264.7 cells (ATCC TIB 71) and LPS.
  • N0 2 the measurement of separating 100 mu 1 of culture supernatant from each Ueru, 10 / zl 50.mu. of 8 / ml 2, 3 - di ⁇ amino naphthalene (Dojin Chemical Laboratory Co., Ltd., 341 - 07021) solution (0.62 N hydrochloric acid solution), leave at room temperature for 15 minutes, add 5 ⁇ l of 2.82.8 sodium hydroxide aqueous solution, and measure the fluorescence of the generated naphthalenetriazole by Titertec Fluoroscyan II (available from Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.). ) was measured at an excitation wavelength of 355 ⁇ and a measurement wavelength of 460 nm.
  • FIGS. Figure 32 is GM concentration and N0 2 in culture - is a chart showing the relationship between concentrations and the vertical axis represents N0 2 _ concentration relative value (%).
  • Figure 33 is a diagram showing the incubation time and viable cell numbers in relation presence GM, the horizontal axis represents incubation time (hours), viable cell numbers and the vertical axis contained in the culture solution 5ml a (X10 5 / 5ml) Show.
  • a white square (mouth) shows no addition of LPS
  • a white diamond ( ⁇ ) shows addition of LPS
  • a white circle ( ⁇ ) shows addition of 2.5 ⁇ GM
  • a white triangle ( ⁇ ) shows addition of 2.5 ⁇ GM + LPS.
  • Black square ( ⁇ ) indicates 1 ⁇ GM + LPS addition.
  • GM showed an inhibitory effect on NO production. Similar results were obtained for CM, GD, CD, or their diastereomers and GM diastereomers.
  • DS EK cells a fibroblast cell line established from the synovium of patients with rheumatoid arthritis (Saitama Medical University General Medical Center Second Internal Medicine conserveed Cell Line), are 10% fetal serum (FBS, Gibco, 26%). 1-40—079) in a modified iscove-containing Dulbecco's medium (IMDM, Gibco, 12440-053) in the presence of 5% carbon dioxide, and with 37 at 37 until confluent, and trypsin-EDTA ( The cells were peeled and collected with Gibco, 253 00-054). The cells were suspended in the above medium at 25,000 cells / ml, and 100 ⁇ l was dispensed into each well of a 96-well microtiter plate.
  • IMDM modified iscove-containing Dulbecco's medium
  • Table 4 shows the results. Table 4 Concentration (H ⁇ ) A 450 ⁇ ⁇ ⁇ 50
  • GM exhibited an apoptotic rust-inhibiting effect on synovial cells and an inhibitory effect on proliferation. Similar results were obtained for CM, GD, CD, or their diastereomers and GM diastereomers.
  • FIGS. 34 and 35 The results are shown in FIGS. 34 and 35. That is, FIG. 34 is a diagram showing the effect of GM on the proliferation of Jurkat cells, and FIG. 35 is a diagram showing the effect of GM on the proliferation of Mo1t-3 cells. 34 and 35, the horizontal axis represents the concentration of GM ( ⁇ ), and the vertical axis represents the absorbance at 560 nm.
  • FIGS. 36 and 37 show the expression of Fas antigen in Mo1t-3 and FIG. 37 shows the expression of Fas antigen in Jurkat cells.
  • the horizontal axis represents the concentration of GM ( ⁇ ), and the vertical axis represents the percentage of cells expressing the fas antigen (%).
  • the effect of inducing fus antigen production by GM was observed.
  • the M o 1t-13 cells were cultured for 1, 3, 6, 12, or 24 hours under the same conditions as in Example 1 2— (2), and 2—The ratio of cells expressing the fas antigen was measured in the same manner as in (2).
  • FIG. 38 shows the results. That is, FIG. 38 shows the change in the ratio of fas antigen-expressing cells when the cells were cultured with 10 ⁇ M M 0 added to Mo1t-3 cells.
  • the horizontal axis represents the culture time (hours), and the vertical axis represents the time. Indicates the percentage (%) of cells expressing the fas antigen.
  • mice Ay mice (os, 4 weeks old) were purchased from CLEA Japan, bred up to 10 weeks old, and orally administered with GM for 21 days to determine the effects on blood glucose, blood insulin and lipids. investigated.
  • GM used doses of 30, 100, and 30 OmgZkg.
  • Blood glucose levels decreased in each group receiving GM ( Figure 39).
  • Serum insulin levels decreased in each group receiving GM ( Figure 40).
  • serum lipids serum total cholesterol decreased in the GM group (Fig. 41), serum triglyceride decreased in the GM group (Fig. 42), and serum free fatty acid decreased in the GM group. (Fig. 43).
  • FIG. 39 is a diagram showing the relationship between the GM dose and the blood glucose level.
  • the vertical axis shows the serum glucose level (mgZdl)
  • the horizontal axis shows the GM dose (mgZkg).
  • FIG. 40 is a graph showing the relationship between the GM dose and the serum insulin level.
  • the vertical axis shows the serum insulin level ( ⁇ UZm 1)
  • the horizontal axis shows the GM dose (mg, kg).
  • 4 1 is a diagram showing the relationship between GM dosage and serum total cholesterol value and the vertical axis is serum total cholesterol value in FIG. (M GZD 1)
  • the horizontal axis represents the GM dose (mgZk g).
  • GM dose is a graph showing the relationship between the GM dose and serum triglyceride value.
  • the vertical axis shows the serum triglyceride value (mg / d 1), and the horizontal axis shows the GM dose (mgZkg).
  • Fig. 4 3 is a graph showing the relationship between the GM dose and the serum free fatty acid value.
  • the vertical axis shows the serum free fatty acid value ( ⁇ liter), and the horizontal axis shows the GM dose (mgZkg).
  • * indicates a significant difference p ⁇ 0.05 from the GM non-administration group, and ** indicates p ⁇ 0.01, according to the Turkey's multiple comparison test.
  • the animals were saline (5 m 1 Zkg), GM's 30, 100, 300 mg /
  • Serum insulin was measured by an enzyme-immunization method (commercial kit: Glyzam insulin-I ATE ST, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.). Serum sugar, triglycerides and free fatty acids are determined by the hexokinase-G6PDH method and GPO, respectively.
  • Serum total cholesterol level is cholesterol-oxidase
  • GM-treated cells After completion of the culture, the number of cells was counted, and the cells were collected by centrifugation and washed with PBS to prepare GM-treated cells. After heat treatment at 45 ° C for 10 minutes, cells cultured similarly were also prepared.
  • SDS-PAGE was carried out according to the method described in Molecular Cloning (Cold Spring Harbor or Laboratory Press (1989)).
  • Treated cells 2. suspended in 5 X 1 0 6 eel Is / ml so that the SDS-PAGE Sample buffer After treating the cell suspension at 100 ° C. for 10 minutes, 5 ⁇ l of each was applied to two SDS-PAGE gels (5% stacking gel, 10% separation gel), and electrophoresis was performed.
  • HSP 72/73 (Ab-l) [Oncogene Research Products Cat. # HSP01], which specifically reacts with a 70 kDa heat shock protein thermally induced on the blocked membrane, was used. After the reaction, the plate was washed with TBS containing 0.05% Tween20, and further washed with TBS. Next, the peroxidase-conjugated secondary antibody HRP-RabbitAnti Mouse IgG (H + L) [Cat.it 61-6520 manufactured by ZYMED Laboratories, Inc.] was reacted, and the same procedure was followed. Washed.
  • the membrane After reacting the membrane reacted with the primary antibody and the secondary antibody with the chemiluminol reagent RENAISSANCE TM (Cat.U NEL-100 manufactured by Dupont NEN), the membrane was exposed to X-ray film. The induction of a 70 kDa heat shock protein was detected.
  • Table 5 shows the strength of the induction.
  • + indicates the strength of the induction, and the larger the value of +, the stronger the induction.
  • CM was added to the cultured cells so that the final concentration was 0, 10, 20, 30, 40, and 50 ⁇ M, and the expression of HSP70 was measured by the method described in Example 14- (1).
  • Table 6 shows the strength of the induction.
  • + indicates the strength of the induction, and the more +, the stronger the induction. One means no induction was observed, and the soil means little induction.
  • GM and CM exhibited a heat shock protein-inducing effect. Similar results were obtained for GD, CD, and their diastereomers, GM, and CM.
  • Fig. 44 shows the relationship between the added GM concentration and the cell viability.
  • the horizontal axis is the added GM concentration (//), and the vertical axis is the value after 1 day of culture.
  • the cell viability (%) is shown.
  • the open squares show the results when CEM-SS was used, and the closed circles show the results when CEM-3B cells were used.
  • Example 15 The concentration of P24 antigen contained in the culture supernatant after culturing the CEM-3B cells described in 5- (1) for one day was measured. As a result, the p24 concentration was reduced according to the added GM concentration, and an anti-HIV effect was observed.
  • Figure 45 shows the results. That is, Fig. 45 shows the relationship between the added GM concentration and the amount of p24 produced in the culture supernatant. The horizontal axis represents the amount of GM added (/ M), and the vertical axis represents the amount of p24 produced (ngZm1). Is shown.
  • GM selectively exhibited a cell killing effect on HIV-infected cells and exhibited an antiviral effect on HIV. Similar results were obtained for CM, GD, CD, or their diastereomers, and GM diastereomers.
  • Control plasmid pcD2-Y expressing the G418 resistance gene [Mol. Cell. Biol. Vol. 7, pp. 745-2752 (1987)], and both the HPV16 type E7 and G418 resistance genes
  • the transformable plasmid pcD2-16E7 [Jpn. J. Cancer Res. Vol. 82, pp. 1340-1343 (1991)] was transformed into E. coli HB101 and cultured in a broth medium. Then, a plasmid was extracted from the collected cells, and purified by cesium chloride density gradient ultracentrifugation to obtain a gene transfer vector plasmid.
  • NIH3T3 cells were cultured in Dulbecco's modified Eagle's medium containing 10% pup serum at 37 ° C. and 5% CO 2 .
  • NIH3T3 cells the cell line into which the control vector was introduced, and the cell line into which E7 had been introduced were placed in a 100-fold tissue culture plate in a Dulbecco's modified medium containing 10% pup serum and 50-70 cells. After washing with PBS, the cells were detached with 0.25% trypsin-EDTA solution and suspended in 5 ml of Dulbecco's modified Eagle's medium containing 10% pup serum.
  • a part of the suspension was taken and the cell density was calculated using a Neubauer type hemocytometer. Based on the obtained numbers, dilute the cells with Dulbecco's modified Eagle's medium containing 10% pup serum and inoculate them at a density of 200 cells / plate on a tissue culture plate with a diameter of 60 mm, and culture them in 3 ml of medium. Started. Twenty-four hours after the start of the culture, GM was added to 5 ⁇ . After another 24 hours, the medium was replaced with a fresh medium and GM was added to a concentration of 5 ⁇ .
  • a plate without GM was prepared and cultured in the same manner. Culture was performed in triplicate. After culturing for 9 days, the cells were fixed with methanol and stained with Giemsa's solution (GIBC0).
  • Table 7 shows the results of counting the stained colonies. Cells transfected with ⁇ 7 were more sensitive to GM than control cells, and GM selectively acted on cancer-transformed cells. Similar results were obtained for CM, GD, CD, or their diastereomers and GM diastereomers. Table 7
  • Topoisomerase ⁇ [Topo GEN Co., Ltd., 2 units 1] 2 ⁇ 1, 10 times concentration buffer [0.50 Tris — HC 1 (pH 8.0), 1.2 M KC 1, 0.1 MM g C 1 5 mM adenosine triphosphate, 5 mM dithiothreitol] 2 ⁇ 1, 0.1% ⁇ Serum albumin (Takara Shuzo) 21, distilled water 1 1 and control distilled water or sample (50, 100, 200, 500, 100, or 250 ⁇ GM) 2 ⁇ l mixed with 0.2 ⁇ l 5 ⁇ g / ⁇ 1 p BR 3 2 2 DN ⁇ (Takara Shuzo) ⁇ ⁇ ⁇ was added and reacted at 37 ° C. After reacting for 30 minutes, the reaction was stopped by adding 2 ⁇ l of 1% sodium dodecyl sulfate, 50% glycerol, and 0.02% bromophenol blue aqueous solution.
  • Example 17 The GM topoisomerase I inhibitory activity was measured in the same manner as in 7- (1). However, instead of topoisomerase ⁇ , topoisomerase I [manufactured by Topogen, 0.01 unit 1], 10-fold concentration buffer 10 OmM Tris-HC 1 (pH 7.9), 1 OmM EDTA, 1 mM sunoremidine, and 50% glycerol were used. GM was added as a sample to a final concentration of 1 mM.
  • topoisomerase I was inhibited by 1 mM GM.
  • topoisomerase ⁇ ⁇ ⁇ is transiently expressed only in the mitotic phase in normal cells, but is highly expressed throughout the entire cell cycle due to canceration, and topoisomerase whose expression level and activity increase due to canceration In contrast to I, GM showed inhibitory activity. Similar results were obtained for CM, GD, CD, or their diastereomers and GM diastereomers.
  • mice Male, 5 weeks old, weighing about 20 g were purchased from Japan SLC and used for experiments after one week of preliminary rearing.
  • Hidge erythrocytes (Shimizu experimental material), the antigen that induces delayed-type hypersensitivity reaction, are washed three times with physiological saline (Otsuka Pharmaceutical), adjusted to 1 ⁇ 10 9 cells / ml, and 200 ⁇ l is injected intraperitoneally into mice. And sensitized with antigen.
  • GM was intraperitoneally administered with 3 OmgZkg or 300 mgZkg once a day from the day of antigen sensitization to 5 mice per group for 3 days.
  • the right paw volume of the mouse was measured with a paw edema measuring device ( ⁇ Gobasil) and used as an index of delayed type hypersensitivity reaction. The measured value was calculated by calculating the rate of increase from the right paw volume of the mouse measured before the antigen induction.
  • FIG. 46 is a graph showing the inhibitory action of GM on the delayed type hypersensitivity reaction, in which the vertical axis indicates the rate of increase (%), and the horizontal axis indicates the GM dose (mg / kg).
  • GM showed a significant inhibitory effect on delayed type hypersensitivity at doses of 30, 300 mg / kg. Similar results were obtained for CM, GD, CD, or their diastereomers and GM diastereomers.
  • PCA passive cutaneous anaphylaxis
  • the rat Thirty minutes after injection from the tail vein, the rat was decapitated, exsanguinated, and blue spots appearing on the back were observed.A spot with a diameter of 5 mm or more was defined as positive, and the highest dilution was expressed as IgE titer.
  • CM was added to physiological saline solution (listed in the Japanese Pharmacopoeia) at a concentration of 1% to prepare an injection.
  • GM was sufficiently kneaded with a small amount of water-absorbing ointment, and then the remaining water-absorbing ointment was gradually added and kneaded until uniform, to prepare an ointment.
  • This ointment is applied to the affected area 4 to 5 times a day.
  • an anti-cancer effect an inhibitory effect on cancer cell proliferation, an effect of inducing cancer cell differentiation, an effect of inducing apoptosis, an antibacterial effect, an antiviral effect, an effect of improving liver function, an effect of suppressing tumor necrosis factor production, and an effect of suppressing NO production.
  • the compound of the present invention having various physiological activities such as anti-rheumatic activity, anti-rheumatic activity and the like, an optically active form thereof or a salt thereof are provided, and at least one compound selected from these compounds is effectively used.
  • a medicament containing as an ingredient is provided.
  • the medicament is useful as a therapeutic or prophylactic agent for diseases sensitive to these compounds, and in particular, a biological protective agent, for example, an antiallergic agent, an antirheumatic agent, a therapeutic agent for diabetes, an anticancer agent, an antipathogenic microbial agent
  • a biological protective agent for example, an antiallergic agent, an antirheumatic agent, a therapeutic agent for diabetes, an anticancer agent, an antipathogenic microbial agent
  • it is useful as an antiviral agent, an antibacterial agent, an immunomodulator and the like.
  • the present invention it becomes possible to incorporate an appropriate amount of the compound of the present invention having a physiological activity or an optically active substance thereof or a salt thereof into a food or beverage.
  • the food or beverage provided by the present invention has a carcinogenesis-preventing effect, a cancer-controlling effect, a viral disease-preventing effect, an antibacterial effect, an apoptosis-inducing effect. It is a health food or beverage having a function of maintaining homeostasis (homeostasis) of a living body such as for use, and the present invention provides a food or beverage containing a functional substance useful for maintaining gastrointestinal health.

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Description

明 細 書
化合物
発明の属する技術分野
本発明は、 医薬の分野で有用な、 制がん作用等の生理活性を有する化合物に関 し、 更に当該化合物の製造方法に関する。
従来の技術
従来、 臨床上の療法に用いられている薬物はアルキル化剤、 代謝阻害剤、 植物 アル力ロイ ド等の制がん剤、 抗生物質、 免疫促進剤、 免疫調節剤など多岐にわた つているが、 これらの薬物療法はいまだ完成したとはいいがたい。
これらのうち、 天然物由来であるプロスタグランジンの中で、 5員環に α , β 一不飽和カルボニルを有するプロスタグランジン Α及び J類が D N Α合成を抑制 することにより、 安全性の高い制がん剤としての可能性が報告され、 それらの各 種誘導体が合成されている （特開昭 6 2— 9 6 4 3 8号公報参照） 。
発明が解決しようとする課題
本発明の目的は、 制がん作用等の生理作用を有する化合物を開発し、 該化合物 の製造方法及び当該化合物を含有する医薬を提供することにある。
課題を解決するための手段
本発明者らはかかる目的を達成するために鋭意検討した結果、 一般式 【 I】 で 表される化合物 （以下、 単に本発明の化合物と称す） 、 式 【IV】 で表される 4 ， 5—ジヒ ドロキシ一 2—シク口ペンテン一 1 一オン （以下、 単にシク口ペンテ ノンと称す） と、 S H基含有化合物との反応により生成し、 この本発明の化合物 が種々の強い生理活性を有し、 該化合物に感受性を示す疾患の治療及び 又は予 防に有用であることを見出し、 本発明を完成した。
本発明を概説すれば、 本発明の第 1の発明は、 下記一般式 【 I】 で表される化 合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩に関する。 【 I】
Figure imgf000004_0001
(式中、 5員環内の点線で示した結合子は、 当該 5員環が、 二重結合を有するシ ク口ペンテン環、 或いはそれが飽和されたシクロペンタン環のいずれでもよいこ とを意味する。 そして、 シクロペンテン環の場合、 Xは O H、 Yは = 0、 Zは H であり、 他方シクロペンタン環の場合、 Xは =〇、 Yは O H、 Zは O Hである。 また Rは S H基含有化合物から S H基を除いた残基である）
本発明の第 1の発明の態様としては、 下記一般式 【Π】 で表される化合物若し くはその光学活性体又はそれらの塩がある。
【Π】
Figure imgf000004_0002
(但し、 Rは S Η基含有化合物から S Η基を除いた残基である）
本発明の第 1の発明の別の態様としては、 下記一般式 【m】 で表される化合物 若しくはその光学活性体又はそれらの塩がある。
【m】
Figure imgf000004_0003
(但し、 Rは S H基含有化合物から S H基を除いた残基である）
本発明の第 2の発明は、 下記式 【IV】 で表される 4， 5—ジヒ ドロキシ— 2— シク口ペンテン一 1一オン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択され る化合物と、 SH基含有化合物を反応させることを特徴とする本発明の第 1の発 明の一般式 【 I】 で表される化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩の製 造方法に関する。
【IV】
Figure imgf000005_0001
本発明の第 1、 2の発明の好ましい態様では、 SH基含有化合物は SH基含有 ァミノ酸又はその誘導体である。
本発明の第 3の発明は本発明の第 1の発明の一般式 【 I】 で表される化合物若 しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なく とも一つの化合物を 有効成分として含有することを特徴とする医薬に関する。
本発明の第 3の発明の好ましい態様では、 前記医薬は生体防御剤 （例えば免疫 調節剞、 抗アレルギー剤、 抗リウマチ剤） 、 糖尿病治療剤、 制がん剤、 アポトー シス誘発剤、 又は抗病原微生物剤 （例えば抗ウィルス剤、 抗菌剤） である。 図面の簡単な説明
図 1は CM 1のマスクスぺク トルを示す図である。
図 2は CM1の 'H— NMRスペク トルを示す図である。
図 3は CM 1の UV吸収スぺク トルを示す図である。
図 4は CM2の 'H— NMRスペク トルを示す図である。
図 5は CM 1の13 C— NMRスぺク トルを示す図である。
図 6は CMの I R吸収スぺク トルを示す図である。
図 7は保持時間と吸光度の関係を示す図である。
図 8は GMの 'H— NMRスぺク トノレを示す図である。
図 9は GMの13 C— NMRスぺク トルを示す図である。
図 1 0は GMのマススぺク トノレを示す図である。
図 1 1は GMの UV吸収スぺク トルを示す図である。 図 1 2は GMの I R吸収スぺク トルを示す図である。
図 1 3はシク口ペンタノンチォ誘導体の 1例の溶出パターンを示す図である。 図 1 4はし一システィンを用いた場合の反応時間と 2 1 5 nmにおける吸光度 の関係を示す図である。
図 1 5はダルタチオンを用いた場合の反応時間と 2 1 5 nmにおける吸光度の 関係を示す図である。
図 1 6は本発明の 1例の反応物のク口マトグラムを示す図である。
図 1 7は図 4の 2. 99分のピークの質量スぺク トルを示す図である。
図 1 8は溶解直後の反応液の紫外吸収スぺク トルを示す図である。
図 1 9は 50分間反応後の反応液の紫外吸収スぺク トルを示す図である。 図 20はグルタチオンを用いた場合の溶解直後の反応液の紫外吸収スぺク トル を示す図である。
図 2 1はダルタチオンを用いた場合の 50分間反応後の反応液の紫外吸収スぺ ク トルを示す図である。
図 22は反応物の'3 C— NMRスぺク トル示す図である。
図 23は保持時間と吸光度の関係を示す図である。
図 24は GDの 'H— NMRスペク トルを示す図である。
図 25は GDの13 C— NMRスぺク トルを示す図である。
図 26は GDのマススぺク トルを示す図である。
図 27は GDの I R吸収スぺク トルを示す図である。
図 28は CMのがん細胞増殖抑制活性を示す図である。
図 29は CMのがん細胞増殖抑制活性を示す図である。
図 30は GM量と腫瘍壊死因子産生量の関係を示す図である。
図 3 1は GM量と足浮腫増加率の関係を示す図である。
図 32は培養液中の GM濃度と NO 2—濃度の関係を示す図である。
図 33は培養時間と生細胞数の関係を示す図である。
図 34は J u r k a t細胞の増殖に対する GMの影響を示す図である。
図 35は Mo 1 t一 3細胞の増殖に対する GMの影響を示す図である。 CT/JP98/0
図 36は Mo 1 t— 3細胞におけるファス抗原の発現を示す図である。
図 37は J u r k a t細胞におけるファス抗原の発現を示す図である。
図 38はファス抗原発現細胞の比率の変化を示す図である。
図 39は GM投与量と血糖値の関係を示す図である。
図 40は GM [投与量と血清ィンスリン値の関係を示す図である。
図 4 1は GM投与量と血清総コレステロール値の関係を示す図である。
図 42は GM投与量と血清トリグリセリ ド値の関係を示す図である。
図 43は GM投与量と血清遊離脂肪酸値の関係を示す図である。
図 44は GM濃度と細胞生存率の関係を示す図である。
図 45は GM濃度と p 24生産量の関係を示す図である。
図 46は GMの遅延型過敏反応抑制作用を示す図である。
図 4 7は （一） 体シクロペンテノンの p—ジメチルァミノベンゾィル誘導体の CD及び （一） 体シクロペンテノンの立体構造を示す図である。
図 48は （+ ) 体シクロペンテノンの p—ジメチルァミノベンゾィル誘導体の CD及び （+ ) 体シクロペンテノンの立体構造を示す図である。
発明の実施の形態
以下、 本発明を具体的に説明する。
本発明において使用する式 【IV】 で表されるシクロペンテノンは、 4位と 5位 のヒ ドロキシル基の立体配置がシスの異性体と トランスの異性体の双方を包含す る。 本発明においてはシス体シクロペンテノンを用いてもよいし、 トランス体シ クロペンテノンを用いてもよいし、 シス体シクロペンテノンと トランス体シクロ ペンテノンの混合物を用いてもよい。 また、 これらの光学活性体を用いてもよい シス体シクロペンテノンは化学合成法によって得られる 〔ヘルべチカ キミ力 ァクタ （He l v e t i c a Ch i m i c a Ac t a) 、 第 55卷、 第 2 838〜 2844頁 （ 1 9 72) 〕 。 トランス体シクロペンテノンは化学合成法 によっても得られるし 〔カーボハイ ドレート リサーチ （C a r b o h y d r a t e R e s . ) 、 第 247卷、 第 2 1 7〜 222頁 （1 993) 〕 、 またゥロ ン酸、 例えばグルクロン酸、 ゥロン酸誘導体、 例えばダルクロノラク トン、 又は これらの含有物等を加熱処理することによつても得られる （P CTZJ P 9 7/ 0 30 5 2号明細書参照） 。 本発明ではシクロペンテノンを含有するこれらの加 熱処理物、 その部分精製物及び精製物も使用できる。
例えば、 ゥロン酸として D—グルクロン酸を使用し、 その 1 %溶液を 1 2 1 °C で 4時間加熱処理することにより、 加熱処理物中にシクロペンテノンが生成され る。 この加熱処理物中のシクロペンテノンを溶媒で抽出し、 抽出物を濃縮する。 次にこの濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ一で分離し、 溶出するシク 口ペンテノン画分を濃縮し、 濃縮物からシク口ペンテノンをクロロホルムで抽出 し、 抽出濃縮物の順相カラムクロマトグラフィーを行うことにより、 加熱処理物 中のシクロペンテノンが単離される。
シクロペンテノンの物性を下記に示す。 なおシク口ペンテノンの質量分析は D X 3 0 2質量分析計 （日本電子社製） を用いて行った。 また、 重クロ口ホルム溶 媒を用いた NMRスペク トルの測定は J NM_ A 5 00 (日本電子社製） を用い た。 比旋光度は D I P- 3 7 0型旋光計 （日本分光社製） 、 UV吸収スぺク トル は UV— 2 5 0 0分光光度計 （島津製作所社製） 、 赤外吸収スぺク トル （ I R) は F T I R— 8 0 0 0赤外分光光度計 （島津製作所社製） をそれぞれ用い測定し た。
MS m/ z 1 1 5 〔M+H〕 +
Ή-NMR (CDC 1 a )
δ 4. 20 ( 1 H, d， J = 2. 4 H z , 5— H) 、 4. 8 3 ( 1 H， m， 4 — H) 、 6. 3 0 ( 1 H, d d， J = 1. 2 , 6. 1 H z , 2— H) 、 7. 4 8 ( 1 H, d d， J = 2. 1， 6. 1 H z , 3 -H)
但し、 'Η— NMRの化学シフ ト値は CHC 1 3 の化学シフ ト値を 7. 2 6 p p mとして表した。
旋光度： 〔c 〕 D 2° 0° ( 1. 3、 水）
UV ： ma x 2 1 5 n m (水）
I R (KB r法） ： 340 0、 1 7 1 5、 1 6 3 0、 1 1 1 5、 1 06 0、 1 025 cm— 'に吸収を有する。
単離されたシクロペンテノンを光学分割することにより、 （一） 一 4， 5—ジ ヒ ドロキシー 2—シクロペンテン一 1一オン及び （+ ) - 4 , 5—ジヒ ドロキシ 一 2—シクロペンテン一 1—オンを得ることができる。 当然、 合成方法により得 られたシク口ペンテノンも光学分割することができる。
例えば、 シクロペンテノンをエタノールに溶かす。 このエタノール溶液にへキ サン/エタノール （94/6) を更に加え、 シクロペンテノン溶液を調製する。 この 試料溶液を、 例えばキラールパック AS (ダイセル化学工業） カラムを用いカラ ム温度： 40°C、 移動相：へキサン/エタノール （94/6) で HP L Cを行うこと により、 シクロペンテノンを光学分割することができる。
分割された （一） 一 トランス一 4， 5—ジヒ ドロキシ一 2—シクロペンテン一 1一オン [以下、 （一） 体シクロペンテノンと称する] の旋光度は 〔ct〕 0 2°— 1 05° ( 0.30 、 ェタノール） であり、 （+ ) — トランス一 4， 5—ジヒ ド 口キシ一 2—シクロペンテン一 1—オン 〔以下、 （+ ) 体シクロペンテノンと称 する〕 の旋光度は 〔ひ〕 。 2。 + 1 04° ( 0.53 、 エタノール） である。 な お旋光度は前記の D I P— 3 70型旋光計 （日本分光社製） を用いて測定した。 次に （一） 体シクロペンテノン及び （+ ) 体シクロペンテノンのそれぞれの質 量分析、 核磁気共鳴法 （NMR) による構造解析、 UV吸収スぺク トルの測定、 赤外吸収スぺク トルの測定を上記記載の方法に準じ行う。 その結果、 両光学活性 体は光学分割前のシク口ペンテノンと同一の結果を示す。
光学分割された （一） 体シクロペンテノン及び （+ ) 体シクロペンテノンをそ れぞれ P—ジメチルァミノベンゾィル誘導体とし、 J— 720型円二色性分散計 (日本分光社製） を用い、 円二色性スペク トル （CD) を測定し、 その結果をジ ベンゾェ一トキラリティルールに適用し [ジャーナル ォブ アメリカン ケミ カル ソサイエティ （J. Am. Chem. So ) 、 第 9 1卷、 第 3989〜 399 1 頁 （ 1 969) ] 、 その立体配置を決定した。
(一） 体シク口ペンテノンの p—ジメチルアミノベンゾィル誘導体の CD及び (一） 体シクロペンテノンの立体構造を図 47に示す。 図中縦軸はモル円二色性 、 横軸は波長 （n m) を示す。 なお、 上記立体構造を、 式 【V】 として下記に示 す：
【V】
Figure imgf000010_0001
( + ) 体シク口ペンテノンの p—ジメチルァミノベンゾィル誘導体の C D及び ( + ) 体シクロペンテノンの立体構造を図 4 8に示す。 図中縦軸はモル円二色性 、 横軸は波長 （n m) を示す。 なお、 上記立体構造を、 式 【VI】 として下記に示 す：
【VI】
Figure imgf000010_0002
図 4 7、 4 8及び式 【V】 、 式 【VI】 に示すように （一） 体シクロペンテノン は （一） 一 （4 R， 5 S ) 一 トランス一 4， 5—ジヒ ドロキシー 2—シクロペン テン一 1 一オン、 （+ ) 体シクロペンテノンは （+ ) — ( 4 S , 5 R ) ー トラン スー 4 , 5—ジヒ ドロキシ一 2—シク口ペンテン一 1 —オンである。
以上、 本発明に使用するシク口ペンテノン又はその光学活性体はいかなる方法 で製造しても良く、 明細書で開示の方法で製造しても良く、 化学合成方法で合成 しても良く、 シクロペンテノンのトランス体、 シス体、 それらの混合物及びそれ らの光学活性体も本発明に使用される。
シクロペンテノン又はその光学活性体の塩としては、 医薬として許容される塩 があり、 公知の方法にて変換することができる。 シクロペンテノン、 その光学活性体及び/又はそれらの塩と、 S H基含有化合 物とを反応させることにより、 反応液中に本発明の一般式 【 I】 で表される化合 物が生成する。
また、 シクロペンテノン、 その光学活性体及び Z又はそれらの塩と、 S H基含 有化合物、 例えば S H基含有ァミノ酸又はその誘導体とを酸性下で反応させるこ とにより、 反応液中に一般式 【Π】 で表される化合物 （以下、 シクロペンテノン チォ誘導体と称す） が生成する。
S Η基含有化合物は何ら限定はなく、 例としてはメタンチオール、 ブタンチォ ール、 メルカプトエタノール、 S H基含有アミノ酸、 S H基含有アミノ酸誘導体 等が挙げられる。 S Η基含有アミノ酸の例としては、 システィン、 ホモシスティ ン等が挙げられる。
S H基含有アミノ酸誘導体としては、 上記アミノ酸の誘導体、 例えばシスティ ン誘導体、 システィン含有べプチド、 システィン誘導体含有べプチドが例示され る。 システィン含有べプチドとしてはぺプチド中にシスティンが構成成分となつ ていれば良く、 特に限定はない。 本発明のシスティン含有ペプチドとしては、 ォ リゴぺプチド、 例えばダルタチオンのような低分子物からタンパク質のような高 分子物までを包含する。 またシスチン又はホモシスチンを含有するぺプチドも反 応中にシスティン又はホモシスティン含有べプチドとなる条件下、 例えば還元処 理を組合せることにより、 本発明のシスティン又はホモシスティン含有べプチド として使用することができる。 なおシスティン含有ペプチドとしては、 糖質、 月旨 質等を含有するシスティン含有ペプチドも包含される。 また、 上記した各種の物 の塩、 酸無水物、 エステル等であってもよい。 以上、 シクロペンテノンは S H基 含有化合物と酸性下で反応し、 シク口ペンテノンチォ誘導体が形成される。
シクロペンテノン、 その光学活性体及び/又はそれらの塩と、 S H基含有化合 物、 例えば S H基含有アミノ酸、 又はその誘導体とが反応し、 生成したシクロべ ンテノンチォ誘導体又はその光学活性体の精製、 単離手段としては、 化学的方法 、 物理的方法等の公知の精製手段を用いれば良く、 ゲルろ過法、 分子量分画膜に よる分画法、 溶媒抽出法、 分留法、 イオン交換樹脂等を用いた各種クロマトダラ フィ一法等の従来公知の精製方法を組合せ、 反応生成物中のシクロペンテノンチ ォ誘導体若しくはその光学活性体又はそれらの塩を精製、 単離することができる 。 例えばシクロペンテノンとシスティンを p H 4、 6 0 °Cで 1 6時間反応させる ことにより、 反応液中に下記式 【νπ】 で表されるシクロペンテノンチォ誘導体が 生成し、 この誘導体を含有する反応生成物の順相カラムクロマトグラフィーを行 うことにより、 シクロペンテノンチォ誘導体を精製、 単離することができる。
【W】
Figure imgf000012_0001
また例えばシクロペンテノンとダルタチオンを酸性下で反応させることにより 、 反応液中に下記式 【νπι】 で表されるシクロペンテノンチォ誘導体が生成し、 こ の誘導体を含有する反応生成物の逆相カラムクロマトグラフィ一等を行うことに より、 該シクロペンテノンチォ誘導体を精製、 単離することができる。
【 】
Figure imgf000012_0002
シクロペンテノン、 その光学活性体及び Z又はそれらの塩と、 S H基含有化合 物、 例えば S H基含有アミノ酸又はその誘導体とを中性で反応させることにより 、 反応液中に一般式 【m】 で表される化合物 （以下、 シクロペンタノンチォ誘導 体と称す） が生成する。 上記 S H基含有化合物は何ら限定はなく、 前記の S H基含有化合物が挙げられ る。 シクロペンテノン、 その光学活性体及び/又はそれらの塩と、 S H基含有化 合物との上記の反応は p H中性で行うのが良い。
シクロペンテノン、 その光学活性体及び Z又はそれらの塩と、 S H基含有化合 物とが反応し、 生成したシク口ペンタノンチォ誘導体若しくはその光学活性体又 はそれらの塩の精製、 単離手段としては、 化学的方法、 物理的方法等の公知の精 製手段を用いれば良く、 ゲルろ過法、 分子量分画膜による分画法、 溶媒抽出法、 分留法、 イオン交換榭脂等を用いた各種クロマトグラフィ一法等の従来公知の精 製方法を組合せ、 反応生成物中のシクロペンタノンチォ誘導体若しくはその光学 活性体又はそれらの塩を精製、 単離することができる。
例えばシクロペンテノンとシスティンを p H 7、 3 7 °Cで 3 0分間反応させる ことにより、 反応液中に下記式 【IX】 で表されるシクロペンタノンチォ誘導体が 生成し、 この誘導体を含有する反応生成物の逆相カラムクロマトグラフィーを行 うことにより、 シクロペンタノンチォ誘導体を精製、 単離することができる。
【K】
Figure imgf000013_0001
また例えばシクロペンテノンとグルタチオンを中性下で反応させることにより 、 反応液中に下記式 【X】 で表されるシクロペンタノンチォ誘導体が生成し、 こ の誘導体を含有する反応生成物の逆相カラムクロマトグラフィ一等を行うことに より、 該シクロペンタノンチォ誘導体を精製し、 単離することができる。 H 2 N - - C O O H
Figure imgf000014_0001
【X】
本発明の化合物の光学活性体の分離はラセミ混合物の機械的分割、 優先晶出法 、 ジァステレオマー塩あるいは包接化合物としての結晶化による分割、 酵素 ·微 生物による動力学的分割、 クロマトグラフィ一による分割等により行うことがで さる。
クロマトグラフィーによる分離としては、 ガスクロマトグラフィー、 液体クロ マトグラフィー、 薄層クロマトグラフィー等を用いることができ、 それぞれに適 したキラル固定相を使用すればよい。
液体クロマトグラフィ一による光学分割としては、 キラルな固定相を用いる方 法、 キラルな溶離液を用いる方法、 ジァステレオマーとしての分離等を用いるこ とができる。
キラル固定相としてはアミ ド系固定相、 尿素系固定相、 配位子交換型固定相、 多糖 '多糖誘導体固定相、 タンパク質固定相、 ポリメタクリル酸エステル固定相 、 ポリメタクリルアミ ド固定相等が使用できる。
溶離液としてはへキサン系、 アルコール系、 水 （緩衝液） 系等が使用でき、 上 記固定相との組合せにおいて適宜使用することができる。
本発明の化合物又はその光学活性体の塩としては、 医薬として許容される塩が あり、 公知の方法にて変換することができる。
本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩は制がん活性、 がん細 胞増殖抑制活性、 アポトーシス誘発活性、 トポイソメラ一ゼ π阻害活性、 がん細 胞分化誘導活性、 抗リウマチ活性、 慢性関節リウマチ抑制作用、 ファス抗原産生 誘導活性、 抗菌活性、 抗ウィルス活性、 肝機能改善活性、 熱ショ ックタンパク誘 導活性、 血液成分正常化活性、 がん免疫増強活性、 抗炎症活性、 腫瘍壊死因子産 生抑制活性、 一酸化窒素産生抑制活性、 免疫調節活性、 例えば遅延型過敏反応抑 制活性、 リンパ球幼若化反応抑制活性、 混合リンパ球反応抑制活性、 I g E産生 抑制活性、 力ラゲ一ナン浮腫抑制活性等の生理活性を有し、 これらの活性により 、 本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なく とも 1以上の化合物を有効成分として含有する医薬は、 例えば生体防御機構に作 用する医薬、 例えば抗体産生機構に作用する製剤、 抗炎症剤、 抗アレルギー剤、 抗リウマチ剤、 インターフェロン誘発剤等、 糖質代謝に作用する医薬、 例えば糖 尿病治療剤、 病原生物に作用する医薬、 例えば、 抗菌剤、 抗ウィルス剤等として 有用である。 従って本発明で得られる医薬は、 本発明の化合物若しくはその光学 活性体又はそれらの塩に感受性を示す疾病用の医薬として、 例えばがん、 ウィル ス性疾患、 リウマチ、 糖尿病、 アレルギー、 自己免疫疾患、 炎症等の疾病の治療 用医薬又は予防用医薬として極めて有用である。
本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩は、 例えばヒ ト前骨髄 性白血病細胞 H L— 6 0、 ヒ ト急性リンパ芽球性白血病細胞 M O L T— 3、 肺が ん細胞 A— 5 4 9、 S V 4 0形質転換肺細胞 W I - 3 8 V A 1 3、 肝がん細胞 H e p G 2、 結腸がん細胞 H C T 1 1 6、 ヒ ト結腸がん細胞 S W 4 8 0、 ヒ ト 結腸がん細胞 W i D r、 胃がん細胞 A G S、 ミヱローマ細胞等のがん細胞に細胞 増殖抑制作用、 制がん活性を有し、 本発明の化合物若しくはその光学活性体又は それらの塩は制がん剤の有効成分として使用することができる。 また、 これらの 化合物はがん細胞にアポトーシス誘発作用を有する。 本発明の化合物若しくはそ の光学活性体又はそれらの塩のがん細胞増殖抑制作用機作は本発明をなんら制限 するものではないが、 例えばがん細胞に対するアポトーシス誘発作用、 トポイソ メラーゼ Π阻害作用も本発明の制がん作用に包含される。
制がん作用を有する本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩か ら選択される少なくとも 1以上の化合物を有効成分とし、 これを公知の医薬用担 体と組合せ製剤化すれば制がん剤を製造することができる。 制がん剤の製造は一 般的には、 本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択され る少なくとも 1以上の化合物を薬学的に許容できる液状又は固体状の担体と配合 し、 かつ必要に応じて溶剤、 分散剤、 乳化剤、 緩衝剤、 安定剤、 賦形剤、 結合剤 、 崩壊剤、 滑沢剤等を加えて、 錠剤、 顆粒剤、 散剤、 粉末剤、 カプセル剤等の固 形剤、 通常液剤、 懸濁剤、 乳剤等の液剤であることができる。 またこれを使用前 に適当な担体の添加によって液状となし得る乾燥品とすることができる。
医薬用担体は、 上記投与形態及び剤型に応じて選択することができ、 経口剤の 場合は、 例えばデンプン、 乳糖、 白糖、 マンニット、 カルボキシメチルセルロー ス、 コーンスターチ、 無機塩等が利用される。 また経口剤の調製に当っては、 更 に結合剤、 崩壊剤、 界面活性剤、 潤沢剤、 流動性促進剤、 矯味剤、 着色剤、 香料 等を配合することもできる。
一方、 非経口剤の場合は、 常法に従い本発明の有効成分である本発明の化合物 若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも 1以上の化合 物を希釈剤としての注射用蒸留水、 生理食塩水、 ブドウ糖水溶液、 注射用植物油 、 ゴマ油、 ラッカセィ油、 ダイズ油、 トウモロコシ油、 プロピレングリコール、 ポリエチレングリ コール等に溶解ないし懸濁させ、 必要に応じ、 殺菌剤、 安定剤 、 等張化剤、 無痛化剤等を加えることにより調製される。
本発明の制がん剤は、 製剤形態に応じた適当な投与経路で投与される。 投与方 法も特に限定はなく、 内用、 外用及び注射によることができる。 注射剤は、 例え ば静脈内、 筋肉内、 皮下、 皮内等に投与し得、 外用剤には座剤等も包含される。 制がん剤としての投与量は、 その製剤形態、 投与方法、 使用目的及びこれに適 用される患者の年齢、 体重、 症状によって適宜設定され、 一定ではないが一般に は製剤中に含有されるシクロペンテノン及びノ又はその光学活性体の量が成人 1 日当り 0 . l /z g〜 2 0 0 m g / k gである。 もちろん投与量は、 種々の条件に よって変動するので、 上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、 あるいは 範囲を超えて必要な場合もある。 本発明の薬剤はそのまま経口投与するほか、 任 意の飲食品に添加して日常的に摂取させることもできる。
本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩は制がん作用を有する 力'、 低濃度ではがん細胞の分化誘導能を有し、 本発明の化合物若しくはその光学 活性体又はそれらの塩はがん細胞の分化誘導剤 （脱がん剤） としても有用である 。 本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なく とも 1以上の化合物を有効成分とするがん細胞分化誘導剤は、 上記制がん剤に準 じ、 製剤化することができ、 制がん剤に準じた方法で投与することができる。 がん細胞分化誘導剤としての投与量は、 その製剤形態、 投与方法、 使用目的及 びこれに適用される患者の年齢、 体重、 症状によって適宜設定され、 一定ではな いが一般には製剤中に含有される本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそ れらの塩から選択される少なく とも 1以上の化合物の量が成人 1 日当り 0 . 1 μ g〜l 0 O m g Z k gである。 もちろん投与量は、 種々の条件によって変動する ので、 上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、 あるいは範囲を超えて必 要な場合もある。 本発明の薬剤はそのまま経口投与するほか、 任意の飲食品に添 加して日常的に摂取させることもできる。
上記がん細胞分化誘導剤はがん細胞分化誘導方法に使用することができる。 す なわち本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少 なくとも 1以上の化合物を有効成分として使用することによりがん細胞を分化さ せることができ、 該方法はがん細胞の分化誘導機構の解明、 分化誘導剤のスクリ 一二ング等に有用である。
本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩は抗菌作用を有し、 こ れらの化合物から選択される少なくとも 1以上の化合物を有効成分とし、 これを 公知の医薬用担体と組合せ製剤化すれば抗菌剤を製造することができる。 当該製 剤は上記制がん剤に準じ、 製剤化することができ、 制がん剤に準じた方法で投与 することができる。
抗菌剤としての投与量は、 その製剤形態、 投与方法、 使用目的及びこれに適用 される患者の年齢、 体重、 症状によって適宜設定され、 一定ではないが一般には 製剤中に含有される本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩から 選択される少なくとも 1以上の化合物の量が成人 1 日当り 1 0 /z g〜2 0 m g / k gである。 もちろん投与量は、 種々の条件によって変動するので、 上記投与量 より少ない量で十分な場合もあるし、 あるいは範囲を超えて必要な場合もある。 本発明の薬剤はそのまま経口投与するほか、 任意の飲食品に添加して日常的に摂 取させることもできる。 また本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれら の塩を抗菌用飲食品の原料として用いても良い。 またエタノール、 グリシン、 酢 酸ナトリウム、 ァスコルビン酸、 グリセリン脂肪酸エステル、 食塩、 EDTA等 の他の抗菌性物質と組合せて使用しても良い。
本発明の抗菌剤は本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩から 選択される少なくとも 1以上の化合物を有効成分とし、 食品又は飲料の保存性を 向上させる防腐剤として使用することができる。 また、 これらの化合物から選択 される化合物を食品又は飲料に添加し、 食品又は飲料を防腐する方法に使用する ことができる。 本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩の食品又 は飲料への添加量は食品又は飲料の種類により異なり、 その目的に応じた量を添 加すれば良い。
本発明の抗菌剤の使用方法として、 食品又は飲料に適当な方法で添加する方法 が行われる。 通常の方法は食品又は飲料の製造工程中に添加するが、 本発明の化 合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩を含有する溶液に食品を一定時間浸 漬する方法も用いることができる。 更にまた、 食品中に添加する方法と浸漬方法 を併用することもできる。
本発明の抗菌剤を防腐剤として用いることにより、 食品又は飲料の保存性を一 段と向上させることができる。 また冷凍食品や冷菓等においては、 冷凍前の加工 工程において、 汚染した微生物の増殖を抑制することができ、 衛生上極めて好ま しい結果を得ることができる。 本発明の抗菌剤はグラム陽性細菌、 グラム陰性細 菌の両方に効果を有し、 例えばメチシリン耐性黄色ブドウ球菌等の薬剤耐性菌、 サルモネラ菌、 ェンテロ トキシン生産性黄色ブドウ球菌、 嘔吐型のバシルス セ レウス、 下痢型のバシルス セレウス、 腸出血性大腸菌 O— 1 5 7等の食中毒菌 に極めて有効である。 更に火落菌にも有効である。 また細菌起因性疾病の起因菌 、 例えば在郷軍人病の起因菌のレジオネラ ニュ一モフイラ （L e g i o n e l l a p n e umo p h i 1 a) 、 食中毒起因菌のビブリオ パラハエモリチカ ス （V i b r i o p a r a h a e mo l y t i c u s ) , 潰瘍起因菌のへリコ パクター ピロリ （H e 1 i c o b a c t e r p y l o r i ) , 胃腸炎起因菌 のキャンピロノくクタ一 ジェジュニ （C a mp y l o b a c t e r j e j u n i ) 等、 例えば L e g i o n e l l a p n e umo p h i l a (ATCC 3 3 1 5 3) 、 V i b r i o p a r a h a e mo l y t i c u s (ATCC 1 7 8 0 2) 、 H e l i c o b a c t e r p y l o r i (NCTC 1 1 6 3 7) x C a mp y l o b a c t e r j e j u n i ( A T C C 2 94 2 8 ) 等に抗菌作用 を有し、 また、 酵母、 カビ等の微生物にも有効である。 なお本発明の抗菌剤を用 レ、、 衣服、 敷布等の殺菌を行うことができ、 本発明の抗菌剤を散布すること、 本 発明の抗菌剤での拭き取り等により、 目的物の除菌、 殺菌を行うことができる。 例えばビルの冷房用水に添加することにより、 在郷軍人病の予防を行うことがで さる。
本発明の抗菌剤は虫歯菌ゃ歯周病菌にも抗菌活性を示し、 本発明の抗菌剤を含 有する口内用剤を提供することができる。 口内用剤の形状は液状、 ペースト状等 の公知の形状とすることができる。 口内用剤としては歯磨剤が例示される。 歯磨 剤としては液状でもよく、 またペースト状、 粉末状でもよく、 公知の歯磨剤の形 状とすることができる。 歯磨剤中の本発明の化合物若しくはその光学活性体又は それらの塩の歯磨剤中の含有量は特に制限されず、 虫歯菌ゃ歯周病菌に対する有 効濃度が含有されていればよい。 歯磨剤中には公知の添加剤、 例えば湿潤剤、 界 面活性剤、 結合剤、 香料、 甘味料等を添加すればよい。
本発明の抗菌剤を使用することにより抗菌性化粧料を提供することができる。 抗菌性化粧料としては有効量の本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれ らの塩から選択される少なくとも 1以上の化合物を含有するクリーム、 乳液、 口 —シヨン、 洗顔料、 パック等の基礎化粧料、 口紅、 ファンデーション等のメイク アップ化粧料、 ボディソープ、 石験等の形態に調製することができる。 また、 頭 髮に対しても有効であり、 ヘアートニック、 へアーリキッ ド、 ヘアーセッ トロー シヨン、 ヘアーブロー剤、 ヘアークリーム、 ヘアーコート等のヘアー製品ゃシャ ンプ一、 リ ンス、 ヘア一トリートメント等の頭髮用トイレタリー等のヘア一ケア 一製品の形態にすることができる。 化粧料への配合量はその抗菌力により、 適宜 決定すればよい。 化粧料の他の成分は通常化粧料に配合されるものが使用できる 。 抗菌性化粧料はァトピー性皮膚炎の起因菌にも有効に作用し、 アトピー性皮膚 炎の改善、 予防にも著効を有する。
本発明の抗菌剤を使用することにより浴用剤を提供することができる。 本発明 の浴用剤としては有効量の本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの 塩から選択される少なくとも 1以上の化合物を含有する粉末浴用剤、 顆粒浴用剤
、 固形浴用剤、 液状浴用剤等の形態に調製することができる。 浴用剤への配合量 はその所望される抗菌力により適宜決定することができる。 浴用剤の他の成分は 通常浴用剤に配合されるものが使用できる。 本発明の浴用剤はァトビー性皮膚炎 の起因菌にも有効に作用し、 アトピー性皮膚炎の改善、 予防にも著効を有する。 また浴場からの病因菌の駆除にも有効である。
また本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少 なくとも 1以上の化合物を含有する食品又は飲料は食中毒、 胃腸炎等の改善及び
/又は予防に極めて有用である。
本発明のアポト一シス誘発剤は、 アポトーシス誘発性を有する本発明の化合物 若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なく とも 1以上の化合 物を有効成分とし、 これを上記制がん剤に準じ、 製剤化することができ、 制がん 剤に準じた方法で投与することができる。
アポトーシス誘発剤としての投与量は、 その製剤形態、 投与方法、 使用目的及 びこれに適用される患者の年齢、 体重、 症状によって適宜設定され、 一定ではな いが一般には製剤中に含有される本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそ れらの塩から選択される少なくとも 1以上の化合物の量が成人 1 日当り 0 . 1 μ g〜 l 0 O m g Z k gである。 もちろん投与量は、 種々の条件によって変動する ので、 上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、 あるいは範囲を超えて必 要な場合もある。 本発明の薬剤はそのまま経口投与するほか、 任意の飲食品に添 加して日常的に摂取させることもできる。
なおアポトーシスは、 病理的細胞死である壊死と異なり、 細胞自身の遺伝子に 最初から組込まれている死であると考えられている。 すなわち何らかの外部的又 は内部的要因が引き金となってアポトーシスをプログラムする遺伝子が活性化さ れ、 この遺伝子を基にプログラム死遺伝子タンパク質が生合成され、 生成したプ ログラム死タンパク質により細胞自体が分解され、 死に至ると考えられている。 本発明のアポトーシス誘発剤は、 このようなアポトーシスを所望の組織、 細胞 で発現させることができ、 不要若しくは病原細胞を自然の形で生体から排除する ことが可能となり、 極めて有用なものである。
本発明のアポトーシス誘発剤はアポトーシス誘発方法に使用することができる 。 すなわち本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択され る少なくとも 1以上の化合物を有効成分として使用することによりアポトーシス を誘発させることができ、 該方法はアポト一シス誘発機構の解明、 アポトーシス 誘発剤、 アポトーシス誘発阻害剤のスクリーニング等に有用である。
本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩は抗リゥマチ作用を有 し、 これらの化合物から選択される少なくとも 1以上の化合物を有効成分とし、 これを公知の医薬用担体と組合せ製剤化すれば抗リゥマチ剤を製造することがで きる。 該医薬は上記制がん剤に準じ、 製剤化することができ、 制がん剤に準じた 方法で投与することができる。
本発明の抗リ ウマチ剤の投与量は、 適応症、 その製剤形態、 投与方法、 使用目 的及びこれに適用される患者の年齢、 体重、 症状によって適宜設定され、 一定で はないが一般には製剤中に含有される本発明の化合物若しくはその光学活性体又 はそれらの塩から選択される 1以上の化合物の量が成人 1 日当り 0 . l // g〜2 O O m g / k gである。 もちろん投与量は、 種々の条件によって変動するので、 上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、 あるいは範囲を超えて必要な場 合もある。 本発明の薬剤はそのまま経口投与するほか、 任意の飲食品に添加して 日常的に摂取させることもできる。 また本発明の化合物若しくはその光学活性体 又はそれらの塩を本発明の医薬の原料として用いても良い。
本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩は関節炎等への抗炎症 作用、 力ラゲナン浮腫抑制作用、 腫瘍壊死因子産生抑制作用、 インターロイキン — 1 0産生増強作用、 一酸化窒素産生抑制作用、 ファス抗原産生誘導作用、 免疫 調節作用、 例えば遅延型過敏反応抑制作用、 リンパ球幼若化反応抑制作用、 混合 リンパ球反応抑制作用、 I g E産生抑制作用等の多様な生理活性を有し、 本発明 の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも一つ の化合物を有効成分とする抗炎症剤又は炎症予防剤、 腫瘍壊死因子産生抑制剤又 は腫瘍壊死因子産生予防剤、 インターロイキン一 1 0産生増強剤、 免疫調節剤、 一酸化窒素産生抑制剤、 ファス抗原産生誘導剤、 免疫調節剤、 I g E産生抑制剤 、 遅延型^ i敏反応抑制剤、 抗アレルギー剤等の医薬を上記抗リウマチ剤に準じ製 剤化することができ、 上記医薬に準じた方法で投与することができる。
これら製剤の投与量は、 適応症、 その製剤形態、 投与方法、 使用目的及びこれ に適用される患者の年齢、 体重、 症状によって適宜設定され、 一定ではないがー 般には製剤中に含有される本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの 塩から選択される 1以上の化合物の量が成人 1 日当り 0 . l /i g〜2 0 0 m g Z k gである。 もちろん投与量は、 種々の条件によって変動するので、 上記投与量 より少ない量で十分な場合もあるし、 あるいは範囲を超えて必要な場合もある。 例えば抗炎症剤、 腫瘍壊死因子産生抑制剤としては製剤中に含有される本発明の 化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される 1以上の化合物の 量は好適には成人 1 日当り 1 0 p g〜5 0 m g Z k gであり、 一酸化窒素産生抑 制剤としては製剤中に含有される本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそ れらの塩から選択される 1以上の化合物の量は好適には成人 1 日当り 0 . 1 // g 〜 2 0 m g k gであり、 使用目的により製剤中の有効成分量を調節することが できる。
本発明の薬剤はそのまま経口投与するほか、 任意の飲食品に添加して日常的に 摂取させることもできる。
リゥマチは骨膜細胞や軟骨細胞に障害が起こる自己免疫疾患であり、 本発明の 抗ァレルギ一剤は自己免疫疾患治療剤としても有用である。
本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩は慢性関節リゥマチな どの臓器特異自己免疫疾患や炎症性疾患において、 炎症を直接惹起していると考 えられる、 腫瘍壊死因子の産生を抑制し、 Thl 抑制サイ トカインであるインター ロイキン一 1 0の産生を増強する。 したがって炎症、 例えば臓器特異自己免疫疾 患であるリ ウマチ、 特に慢性関節リウマチの症状が改善され、 炎症マーカーであ る C反応タンパク （CRP) 値、 リウマトイ ド因子 （r h e uma t o i d f a c t o r ·· RF) 値、 赤血球沈降速度 （血沈） 値が激減し、 歩行困難等の合併 症状も顕著に改善される。
腫瘍壊死因子は、 腫瘍部位に出血性壊死を誘導する因子として発見されたが、 現在では炎症を基本とした生体防御 ·免疫機構に広くかかわるサイ トカインとし て認識されている。 この腫瘍壊死因子の産生調節機構の破綻は様々な不都合を宿 主にもたらし、 腫瘍壊死因子の過度又は未調節の産生は、 慢性関節性リウマチ、 リウマチ性脊髄炎、 変形性関節症、 痛風性関節炎、 敗血症、 敗血性ショ ック、 内 毒素ショック、 グラム陰性菌敗血症、 毒性ショック症候群、 脳性マラリア、 慢性 肺炎、 移植片対宿主反応、 同種移植片拒絶反応、 インフルエンザのような感染症 による発熱及び筋肉痛、 感染又は悪性腫瘍に対して二次的な悪液質、 ヒ ト後天性 免疫不全症候群 （A I DS) に対して二次的な悪液質、 A I DS、 A I DS関連 症候群、 ケロイ ド形成、 潰瘍性大腸炎、 多発性硬化症、 自己免疫糖尿病及び全身 エリテマトーデス等の自己免疫疾患を含む、 これらの多くの疾患に関連している
〔モレキュラー メデイシン （Molecular Medicine) 、 第 33卷、 第 1 0 1 0〜 1 020頁、 第 1 1 82〜 1 1 89頁 （ 1 996) 〕 。 本発明の腫瘍壊死因子産 生抑制剤は、 腫瘍壊死因子により媒介されるか又は悪化する病状の治療に有用で ある。 また本発明により、 本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの 塩から選択される少なく とも 1以上の化合物を有効成分として使用する腫瘍壊死 因子の産生の調節方法が提供される。 また本発明により、 本発明の化合物若しく はその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なく とも 1以上の化合物を含 有し、 腫瘍壊死因子により媒介されるか又は悪化する疾病の病状の改善用食品又 は飲料、 又は疾病予防用食品又は飲料が提供される。
一酸化窒素 （以下、 NOと略す） は内皮細胞由来血管平滑筋弛緩因子 （EDR F) の本体である 〔ネーチヤ一 （Na t u r e) 、 第 327卷、 第 524〜 52 6頁 （1 98 7) 〕 。 本発明により本発明の化合物若しくはその光学活性体又は それらの塩から選択される少なく とも 1以上の化合物を有効成分として含有する NO産生の抑制を必要とする疾病治療用医薬又は疾病予防用医薬が提供される。 本発明において、 N〇産生の抑制を必要とする疾病とは、 特に限定はないが、 例 えば毒性ショックゃある種のサイ トカインによる治療等による全身性血圧低下、 血圧応答低下、 自己免疫疾患、 炎症、 関節炎、 リウマチ性関節炎、 糖尿病、 炎症 性腸疾患、 血管機能不全、 病因性血管拡張、 組織損傷、 心臓血管系虚血、 痛感過 敏症、 脳虚血、 血管新生を伴う疾病、 がん等があり、 特表平 9— 504524号 、 特表平 9一 505 288号、 特表平 8— 50 1 069号、 特表平 8— 5 1 23 1 8号、 特表平 6— 508849号の各公報に記載の疾病を含むものである。 本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なく とも 1以上の化合物を有効成分として含有する NO産生抑制剤は NO産生機構研 究、 NO作用機作研究に有用であり、 また NO産生機構に関与する物質のスク リ —ユングに使用することもできる。
本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩は NO産生細胞に対し て NO産生抑制作用を示す。 例えば、 マクロファージ細胞株にエンドトキシン （ リポポリサッカライ ド： L P S) を添加すれば誘導型 NO合成酵素 （NOS) が 発現して NOが培地中に分泌されるが、 本発明の化合物若しくはその光学活性体 又はそれらの塩の共存下で L P Sを作用させると NO産生は抑えられる。 L P S 処理で NO産生を誘導した場合、 NOの細胞障害活性によって細胞生存率は低下 するが、 L P S処理時に本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩 を添加すると NOの産生が低下し、 細胞に対する障害も減少する。
固形がんの増大に血管新生は必須であるが、 欠陥内皮増殖因子/血管透過性亢 進因子 （VEGF) はこの過程に重要な役割を演じている。 様々ながん細胞にお いて VEG Fが NOによって誘導される。 本発明の化合物若しくはその光学活性 体又はそれらの塩は NO産生を抑制することによってがん細胞の V EG F産生も 抑制し、 その結果、 がん組織周辺での血管新生が阻害される。 がん細胞を皮下に 移植して固形腫瘍を形成させたマゥスに本発明の化合物若しくはその光学活性体 又はそれらの塩を投与するとがん組織の周辺の血管の形成が不十分となり、 がん は脱落する。
ニトロソァミンは 2級アミンにニト口ソ基が付加した一群の化合物で数百種類 が知られており、 その多くが DNAに損傷を加えることにより動物に対して発が ん性を示す。 ニトロソアミンはヒ トの発がんにも深く関わっているとされており 、 通常胃の中で亜硝酸塩とァミンが反応することによって生成する。 NOは p H 中性の生理的条件下でもァミンと反応してニトロソァミンを生成する。 また、 疫 学的にがんとの関係が高い肝吸虫感染患者や肝硬変患者において N O産生は亢進 している。 したがって本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩を 投与して NO産生の亢進を防ぐことによって特にハイリスクグループの発がんを 予防することができる。 以上のように、 本発明の化合物若しくはその光学活性体 又はそれらの塩は発がんの抑制とがん組織における血管新生阻害という 2段階で 制がん作用を示す。
NOはまた、 炎症性病変に特徴的に認められる浮腫、 すなわち血管透過性亢進 作用を誘発し 〔マエダ （Ma e d a) ら、 ジャパニーズ ジャーナル ォブ 力 ンサー リサーチ ^ J a p a n e s e J o u r n a l ο ι し a n c e r R e s e a r c h) 、 第 8 5卷、 第 3 3 1〜 3 34頁 （1 9 94) 〕 、 また、 炎 症性メディエーターであるプロスタグランジン類の生合成を亢進させる 〔サルベ ミニ （S a l v e m i n i ) ら、 プロシーディングズ ォブ ナショナノレ ァカ デミ一 ォブ サイェンシズ U SA (P r o c e e d i n g s o f N a t i o n a 1 A c a d e my o f S c i e n c e s , U SA) 、 第 90% 、 第 7 24 0〜 7 24 4頁 （1 9 9 3) 〕 。 一方、 NOはスーパ一ォキシドラジ カルと速やかに反応してパーォキシナイ トライ トを生じ、 パーォキシナイ トライ 卜が炎症性の細胞、 組織障害を引き起こすとも考えられている。
活性化された免疫細胞が臓器に入り込みサイ トカインを放出すると NOの産生 が誘導される。 インスリン依存型糖尿病は膝島 ]3細胞が特異的に破壊されること によって引き起こされる疾患であり、 NOによる破壊であるとされている。 また 、 慢性関節性リゥマチ、 変形性関節リゥマチ、 痛風性関節炎、 ベーチュッ ト病に 伴う関節炎の患者の病変部の関節液には同患者の正常な関節や健常人の関節の関 節液に比べて高濃度の NOが含まれている。 これらの患者に本発明の化合物若し くはその光学活性体又はそれらの塩を投与すると病変部における NO産生を抑制 し、 症状が改善する。
脳虚血中及び再港流後には NO産生が増大し、 それに伴って脳組織が損傷を受 ける。 脳虚血時に患者に本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩 を投与することにより脳組織の損傷が軽減され、 予後が改善される。
ファス抗原 （APO— 1抗原、 CD 95) と呼ばれる細胞表面抗原はアポトー シスを誘導する分子として注目されている 〔セル （C e 1 1 ) 、 第 66卷、 第 2 3 3〜 243頁 （ 1 99 1 ) 、 ジャーナル ォブ ェクスペリメンタル メディ スン （J . E x p. Me d. ) 、 第 1 69卷、 第 1 747〜 1 756頁 （1 98 9) 、 ジャーナル ォブ バイオロジカルケミス トリ一 （J . B i o l . Ch e m. ) 第 267卷、 第 1 0709〜 1 07 1 5頁 （ 1 992) 、 ジャーナル ォ ブ ィムノロジー （ J . I mm u n o l o g y) 、 第 1 84卷、 第 1 274〜1 2 79頁 ( 1 992) 〕 。
ファス抗原は、 胸腺細胞、 T細胞、 細胞傷害性 T細胞、 B細胞あるいは NK細 胞等の免疫系細胞に発現している。 免疫系は外来の非自己抗原の侵入に際しては 、 免疫反応を惹起して非自己抗原を排除する。 しかしながら、 自己抗原に対して は免疫反応を示さず自己寛容が成立している。 これは自己反応性を有するリンパ 球系幹細胞が、 クローン除去というネガティブセレクションを受けアポトーシス による細胞死により排除されることによる。 しかしながらファス抗原の遺伝子的 欠陥等の生体の何らかの異常によりこれらの細胞がアポトーシスを受けなかった 場合には、 例えば自己反応性 T細胞が末梢に蓄積される。 また正常な生体におい ては、 免疫担当細胞である B細胞についても自己寛容が成立しており、 この自己 反応性 B細胞も通常、 アポトーシスにより死に至るが、 自己反応性 B細胞がファ ス抗原の遺伝子的な欠陥等の異常によりアポトーシスを受けなかった場合には、 自己反応性 B細胞が末梢に蓄積される。 更に、 関節リウマチの場合には、 上記の 自己反応性リンパ球の異常、 滑膜細胞のターンオーバーの異常が病因の一端とな つている。 本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なく とも 1以上の化合物を有効成分とするファス抗原産生誘導剤は自己反応性リンパ 球、 ターンオーバーの異常により生体から排除され得なかつた不用の生体構成細 胞のアポトーシス誘導に有用であり、 ファス抗原産生誘導方法に使用することが できる。 また本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択さ れる少なくとも 1以上の化合物を有効成分として含有するファス抗原産生異常を 伴う疾病の予防剤又は治療剤として有用である。 本発明においてファス抗原産生 異常を伴う疾病とは、 特に限定は無いが、 例えば自己反応性 T細胞、 自己反応性 B細胞により惹起される自己免疫疾患、 関節リウマチ等が例示され、 W0 9 7 Z 0 9 6 5公報に記載の疾病を含むものである。
本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩はィンターロイキン一 1 0産生増強作用、 遅延型過敏反応抑制作用、 リンパ球幼若化反応抑制作用、 混 合リ ンパ球反応抑制作用、 I g E産生抑制作用、 力ラゲナン浮腫抑制作用等の免 疫調節作用を有し、 本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩から 選択される少なくとも 1以上の化合物を有効成分とする免疫調節剤はこれらの免 疫系、 免疫因子の異常が起因となる疾病の治療剤又は予防剤として有用である。 すなわちインターロイキン一 1 0の産生低下により Thlが活性化され、 Thl優位 な自己免疫の炎症が惹起される。 この炎症は腎炎、 肝炎等臓器特異的自己免疫疾 患、 及び移植片拒絶反応やアレルギー性接触性皮膚炎等の疾患に関与している。 本発明の免疫調節剤はインターロイキン一 1 0の産生を増強させ、 Thlの活性を 抑制することにより、 これらの疾患の治療又は予防に有用である。
またリンパ球幼若化反応とは、 マイ トジェンがリ ンパ球表面の受容体に結合し 、 リンパ球を活性化させ、 その分裂、 増殖を促す反応である。 混合リンパ球反応 とは、 同種異系の動物より得られたリンパ球を混合培養することにより、 主要組 織適合抗原の不一致によるリンパ球の活性化が誘導され、 リンパ球の分裂、 増殖 が促進される反応である。 上記免疫調節剤はこれらの反応を抑制し、 リンパ球の 異常亢進が起因となる自己免疫性疾患、 例えば慢性腎炎、 慢性大腸炎、 I型糖尿 病、 慢性関節リウマチ等の慢性の疾患の治療又は予防に特に有用であり、 また移 植片拒絶反応の抑制においても有用である。
力ラゲナン足浮腫モデルは、 起炎剤である力ラゲナンを足踱部に皮下注射する ことにより、 マクロファージ、 好中球等の炎症細胞が誘導され、 これらの細胞か ら産生された炎症性の因子により血管透過性が亢進し、 浮腫が惹起される反応で ある。 上記免疫調節剤の浮腫抑制作用は、 血管透過性の亢進の制御を必要とする 疾患、 例えば慢性関節リゥマチの治療又は予防に有用である。
喘息ゃァトビ一性皮膚炎に代表されるアレルギー疾患においてはマスト細胞か らのケミカルメディエーターの放出がァレルギ一反応において大きな役割を果た す。 この反応は I g Eが細胞膜上のレセプターに結合し、 架橋することによって 惹起され、 本発明の免疫調節剤は I g Eの産生を抑制し、 I g E産生により媒介 されるか悪化する症状、 例えば I g Eが起因となるアレルギー疾患、 例えば気管 支喘息、 アレルギー性鼻炎、 ア トピー性皮膚炎、 アレルギー性結膜炎、 じん麻疹 、 アナフィラキシーショック等の症状改善及びノ又は疾患予防に極めて有用であ る。 また本発明の免疫調節剤は遅延型過敏反応を抑制し、 遅延型過敏反応を伴う 疾病、 例えば接触性過敏症、 アレルギー性接触性皮膚炎、 細菌アレルギー、 真菌 アレルギー、 ウィルスアレルギー、 薬物アレルギー、 甲状腺炎、 アレルギー性脳 炎等の治療、 予防において有用である。
近年、 糖尿病の病理研究結果より、 正常な脂肪細胞は全身でのィンスリン作用 が正常に行われるための重要な役割を果たし、 糖代謝を円滑に進めるためには、 正常な脂肪細胞が必要とされる 〔実験医学、 第 1 4巻、 第 6 1〜 6 8頁 （1 9 9 6 ) 〕 。
本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩は前駆脂肪細胞、 例え ば線維芽前駆細胞の分化誘導能を有し、 該細胞を脂肪細胞へ分化誘導する。 そこ で、 本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される化合 物を摂取することにより、 正常な脂肪細胞が増加し、 糖尿病の症状が改善される 本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩は血糖低下作用を有し 、 本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なく T JP98/0
とも 1以上の化合物を有効成分とする糖尿病治療剤又は予防剤を作製することが できる。
すなわち、 本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択さ れる少なく とも 1以上の化合物を有効成分とし、 これを公知の医薬用担体と組合 せ製剤化すれば糖尿病治療剤又は予防剤を製造することができる。 当該製剤は上 記制がん剤に準じ製剤化することができ、 上記医薬に準じた方法で投与すること ができる。
糖尿病治療剤又は予防剤としての投与量は、 その製剤形態、 投与方法、 使用目 的及びこれに適用される患者の年齢、 体重、 症状によって適宜設定され、 一定で はないが一般には製剤中に含有される本発明の化合物若しくはその光学活性体又 はそれらの塩から選択される少なくとも 1以上の化合物の量が成人 1 日当り 1 0 p g〜2 0 O m g Z k gである。 もちろん投与量は、 種々の条件によって変動す るので、 上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、 あるいは範囲を超えて 必要な場合もある。 本発明の薬剤はそのまま経口投与するほか、 任意の飲食品に 添加して日常的に摂取させることもできる。
また本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩を糖尿病改善又は 予防用飲食品の原料として用いても良い。 本発明の化合物若しくはその光学活性 体又はそれらの塩含有物を摂取することにより、 糖尿病が改善され、 尿糖量が激 減する。 また性機能低下等の合併症状も顕著に改善される。 更に高脂血症が改善 される。
本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩は高脂血症改善作用、 すなわち血清トータルコレステロール低下作用、 血清トリグリセリ ド低下作用、 血清遊離脂肪酸低下作用を有し、 これらの作用を有する本発明の化合物若しくは その光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも 1以上の化合物を有効 成分とし、 これを公知の医薬用担体と組合せ製剤化すれば高脂血症治療剤又は高 脂血症予防剤を製造することができる。 当該製剤の製造は上記糖尿病治療剤又は 予防剤に準じ行えば良く、 また糖尿病治療剤又は予防剤に準じた方法で投与する ことができる。 また本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩を高 脂血症改善又は予防用飲食品の原料として用いても良い。 本発明の化合物若しく はその光学活性体又はそれらの塩の含有物を摂取することにより、 高脂血症が改 善され、 血中脂質量が激減する。
また前駆脂肪細胞の脂肪細胞への分化誘導能を有する本発明の化合物若しくは その光学活性体又はそれらの塩を有効成分とし、 これを公知の医薬用担体と組合 せ製剤化すれば前駆脂肪細胞の脂肪細胞への分化誘導剤を製造することができる 。 当該製剤の製造は上記糖尿病治療剤又は予防剤に準じ行えば良く、 また糖尿病 治療剤又は予防剤に準じた方法で投与することができる。
また本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩は腫瘍壊死因子産 生抑制作用を示し、 腫瘍壊死因子が原因となるインスリ ン非依存型糖尿病 [ネー チヤ一 （Nature) 、 第 3 8 9卷、 第 6 1 0〜 6 1 4頁 （1 9 9 7) ] の治療、 予 防に有用である。
本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩は抗ウィルス作用を有 し、 これらの化合物から選択される少なく とも 1以上の化合物を有効成分とし、 これを公知の医薬用担体と組合せ製剤化すれば抗ウィルス剤を製造することがで きる。 抗ウィルス剤の製造は上記制がん剤に準じ製剤化することができ、 上記医 薬に準じた方法で投与することができる。
抗ウィルス剤としての投与量は、 その製剤形態、 投与方法、 使用目的及びこれ に適用される患者の年齢、 体重、 症状によって適宜設定され、 一定ではないが一 般には製剤中に含有される本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの 塩から選択される 1以上の物の量が成人 1 日当り 0. l / g〜20mgZk gで ある。 もちろん投与量は、 種々の条件によって変動するので、 上記投与量より少 ない量で十分な場合もあるし、 あるいは範囲を超えて必要な場合もある。 本発明 の薬剤はそのまま経口投与するほか、 任意の飲食品に添加して日常的に摂取させ ることもできる。 また本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩を 抗ウィルス用飲食品の原料として用いても良い。
本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩は、 DNAウィルス、 RNAウィルス、 レトロゥイノレス、 及びウイロイ ドに対して抗ウィルス活性を示 す。
従って、 ヒ ト用抗ウィルス剤、 非ヒ ト動物用抗ウィルス剤、 例えば家畜、 家禽 、 養殖動物、 例えば魚類、 ェビ類等のウィルス病に有効な抗ウィルス剤、 植物用 抗ウィルス剤、 例えば花卉類、 野菜類等の農園芸作物のウィルス病に有効な抗ゥ ィルス剤等、 有用生物用の抗ウィルス剤として使用することができる。
動物に感染する D N Aウィルスとしては例えばボックスウィルス、 ヘルぺスゥ ィルス、 アデノウイルス、 B型肝炎ウィルス、 パピローマウィルス、 ポリオ一マ ウィルス、 ェプスタイン一バーノレゥイノレス、 バキュロウイノレスが挙げられ、 植物 に感染する D N Aウィルスとしては例えば力リフラワーモザィクウィルスが挙げ られる。 動物に感染する R N Aウィルスとしては例えばロタウィルス、 風疹ウイ ルス、 日本脳炎ウィルス、 デング熱ウィルス、 ニューカッスル病ウィルス、 麻疹 ゥイノレス、 おたふくかぜゥイノレス、 ジステンパーゥイノレス、 インフルエンザウイ ルス、 水疱性口内炎ウィルス、 ヒ トポリオウイルス、 A型肝炎ウィルス、 C型肝 炎ウィルスが挙げられ、 植物に感染する R N Aウィルスとしては例えばタバコモ ザイクウィルス、 麦類矮小ウィルス、 イネ縞葉枯ウィルス、 タバコ輪点ウィルス が挙げられる。 レトロウイルスと しては例えば成人 T細胞白血病ウィルス、 ヒ ト 後天性免疫不全ウィルスが挙げられ、 ウイロイ ドとしては例えばジャガイモスピ ンドルチユーバーウイロイ ドが挙げられる。
本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩は非ヒ ト哺乳動物、 鳥 、 例えばニヮトリ及び七面鳥、 冷血動物、 例えば魚のウィルス病の治療及び予防 に有効であり、 これらの化合物は下記の非ヒ トウィルスに対して抗ウィルス活性 を示す。 サイノレィ ド ヘルぺスウィルス 1型、 カプリ ド ヘルぺス 1型、 ラガモ ノレフ ヘルぺスウィルス 1型、 ファシアニド ヘルぺスウィルス 1型、 ファシァ ニド ヘルぺスウィルス 2型、 ターキー ヘルぺスウィルス 1型、 アナチド へ ルぺスウィルス 1型、 キャッ ト フィッシュ ヘルぺスウィルス 1型、 エタイ ド ヘルぺスウィルス 3型、 ボビド ヘルぺスウィルス 1型、 ボビド ヘルぺスゥ ィルス 3型、 ボビド へノレぺスゥイノレス 4型、 ビッグ ヘルぺスウィルス 1型、 ピッグ ヘルぺスウイノレス 2型、 ミユリッド ヘルぺスウイノレス 1型、 セピド へノレぺスゥイノレス 1型、 セピド へノレぺスゥイノレス 2型、 ッノ イー ド へノレぺス ウイノレス 1型、 力ニン へノレぺスウィルス 1型、 ヒライン へノレぺスゥイノレス 1 型、 ェクイ ド ヘルぺスウィルス 1型、 ェクイ ド へノレぺスウィルス 2型。
本発明の抗ウィルス剤を鳥類に注射するか又は飼料若しくは飲料水に添加する 等の獣医術、 飼育術において周知の方法によって、 マーレック氏病等の鳥類のゥ ィルス性疾患が本発明に使用する化合物によって、 予防及び 又は治療される。 またプール、 水槽、 保持タンク又は飼育領域の水、 海水等に直接、 本発明に使用 する化合物を添加するか、 又は飼料中に本発明に使用する化合物を混合して、 へ ノレぺス類ゥイノレス、 例えばプチナマズウィルス、 ヘルぺス一ウィルス ソロモン ス、 ナ一力 ウィルス等のウィルス感染によるプール、 水槽、 保持タンク又は飼 育領域中の狭い区域に棲息する魚のウィルス病、 例えばサケ科魚類の伝染性造血 器壊死病、 ヘルぺスウィルス感染症又は伝染性膝臓壊死病、 ニジマスのウィルス 性出血性敗血症、 コィの春ウィルス病、 種々の魚のリンホシスチス病、 海産魚 · 遡河魚のウィルス性赤血球壊死病、 ヒラメ等のラブドウィルス病、 ブリ稚魚等の ウィルス性膝肝壊死病、 トラフグ等の口白病等を同様に予防及び/又は治療し得 る。 なお本発明に使用する化合物、 本発明の抗ウィルス剤を投与するに当っての 正確な規制は、 必然的に治療されている個々の被検体に関する必要性、 治療の種 類及び飼育者の判断次第である。
本発明の抗ウィルス剤が投与された非ヒ ト動物はその健康保持により、 生存率 、 成長率、 産卵率等の改善が顕著である。
本発明で使用する本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩はこ れらのウィルスタンパクの合成を抑制し、 ウィルスゲノムの合成も抑制すること により、 強い抗ウィルス作用を示す。 またこれらのウィルス感染細胞を選択的に 死滅させる。
例えばヒ ト後天性免疫不全ウィルス （以下 HIV と略記する） の感染患者におい ても、 すべての CD4 陽性細胞に HIV が感染しているのではなく、 一部の細胞にの み感染している。 本発明の抗ウィルス剤は、 この感染細胞の HIV 増殖を抑制しな がら選択的に感染細胞を死滅させ、 未感染細胞にウィルス抵抗能を誘導し、 細胞 からの HIV の除去が可能となる。
本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩は肝機能改善作用、 熱 ショックタンパク誘導作用を有し、 本発明の化合物若しくはその光学活性体又は それらの塩から選択される 1以上の化合物を有効成分とする肝機能改善剤ゃ熱シ ョックタンパク誘導剤を、 上記抗ウィルス剤に準じ、 製剤化することができ、 抗 ウィルス剤に準じた方法で投与することができる。
肝機能改善剤や熱ショックタンパク誘導剤としての投与量は、 その製剤形態、 投与方法、 使用目的及びこれに適用される患者の年齢、 体重、 症状によって適宜 設定され、 一定ではないが一般には製剤中に含有される本発明の化合物若しくは その光学活性体又はそれらの塩から選択される 1以上の化合物の量が成人 1 日当 り 0 . l ^u g S O m g Z k gである。 もちろん投与量は、 種々の条件によって 変動するので、 上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、 あるいは範囲を 超えて必要な場合もある。 本発明の薬剤はそのまま経口投与するほか、 任意の飲 食品に添加して日常的に摂取させることもできる。 また本発明の化合物若しくは その光学活性体又はそれらの塩から選択される 1以上の化合物を肝機能改善用飲 食品、 熱ショックタンパク誘導用飲食品の原料として用いても良い。
本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩を摂取することにより 、 肝機能障害も改善され、 G〇T、 G P T値が正常化する。
また本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩は 7 0 kダルトン ( H S P 7 0 ) 等の熱ショックタンパク誘導活性を有し、 肝炎ウィルス、 エイズ ゥイノレス、 インフノレエンザゥイノレス、 水疱性口内炎ゥイノレス、 ヘルぺスウィルス 等の R N Aウィルス、 D N Aウィルスに対する抗ウィルス作用を有する。 また、 熱ショックタンパクはがん免疫に関与しており、 これらの化合物はがん免疫にも 有効である。 更に抗炎症等生体防御作用をも有する。 本発明の化合物若しくはそ の光学活性体又はそれらの塩を摂取することにより、 ィンフルェンザウィルスに よる風邪疾患等のウィルス性疾患が予防、 治療できる。
なお熱ショックタンパクは細胞や個体が平常の温度よりも 5〜 1 0 °C程度高い 温度変化を急激に受けたときに合成が誘導されるタンパクの総称であり、 原核生 物から高等真核生物まで幅広く分布している。 真核生物の熱ショックタンパクと しては HS P 90、 HS P 70、 ュビキチン、 H S P 26等が知られている。 そ の中で H S P 70は分子シャぺ口ンの一種であり、 フォールディングが完了して いない、 または不完全にフォールデイングしたタンパクに結合して立体構造の形 成を助ける。 熱ショックタンパクのアミノ酸配列は進化の過程でよく保存されて おり、 HS P 70は大腸菌の Dn a Kタンパクと相同である。 ヒ 卜には約 1 0個 の HS Ρ 70遺伝子が存在しているが、 これらのあるものは構成的に発現してお り、 あるものは様々な刺激によって誘導される。 熱ショックタンパクの合成は熱 ショックのほかに様々な化学物質、 酸化ストレス等の細胞障害によっても誘導さ れる。
C. ァミチら （C. Amici) ら 〔ジャーナル ォブ ビロロジー （Journal of V irology)、 第 68卷、 第 6890〜6899頁 （1994) 〕 は、 α , /3—不飽和カルボニル を持つプロスタグランジン A , の存在下でセンダイウィルスを感染させた動物細 胞を培養すると HS P 70と HS P 90の合成が誘導され、 HS P 70の合成が 誘導されている間はウィルスタンパクの合成が抑制されることを報告している。 また、 A. ロッシ （A. Rossi) ら 〔ザ ジャーナル ォブ バイオロジカル ケ ミス トリー （ The Journal of Biological Chemistry) 、 第 27 1卷、 第 32192 〜32196 頁 （1996) 〕 は、 2—シクロペンテン一 1—オンがプロスタグランジン A, と同様に H S P 70の合成を誘導し、 水疱性口内炎ウィルスタンパクの合成 を抑制することを報告している。
本発明の化合物による HS P 70誘導能は 1 0 Mでみられ、 20〜30 μΜ で最大となるが、 これは 2—シクロペンテン一 1—オンが HS Ρ 70を誘導する には数百 μΜの濃度を要することと比較すると極めて高い誘導能であるといえる 本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩はこのように高い熱シ ョックタンパク誘導作用を持つことから、 DNAウィルス、 RNAウィルス、 レ トロウィルス、 及びウイロイ ドに対して抗ウィルス活性を示す。 これらのウィル ス、 ウイロイ ドには上記の各ウィルス、 ウイロイ ドが例示される。 本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩はがん遺伝子で形質転 換されたがん細胞に対しても増殖抑制活性を有し、 がん遺伝子による発がんを防 止する作用を有する。
例えばパピローマウィルスはパポバウィルス科 （papovavir idae) 、 パピロー マウイノレス属 （pap i l lomavirus) の DNAウィルスであり、 ヒ トノ ピローマウイノレ ス （HPV) としては、 例えば子宮頸がんなどの原因となる HPV16型が知られている 。 本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩は HPV16型のがん遺 伝子 E7によってがん化した細胞に対し、 増殖抑制効果を有し、 本発明の化合物若 しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも一つの化合物を 有効成分として、 ウィルス発がん細胞増殖抑制剤を提供することができ、 がん遺 伝子による発がんを防止することができる。
また本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩はイニシエータ一 とプロモーターによる 2段階発がんの抑制作用を有し、 これらの化合物から選択 される少なく とも一^ 3の化合物を有効成分として、 化学発がん抑制剤を提供する ことができる。
したがつて本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択さ れる少なく とも一つの化合物を含有する発がん予防用食品又は発がん予防用飲料 を提供することができる。
本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩は I g E産生抑制作用 、 遅延型過敏反応抑制作用を有し、 これらの化合物から選択される少なくとも一 つの化合物を有効成分とし、 これを公知の医薬用担体と組合せ製剤化すれば抗ァ レルギ一剤を製造することができる。 当該製剤の製造は、 上記抗制がん剤に準じ 、 製剤化することができる。 また、 本発明の抗アレルギー剤は、 製剤形態に応じ た適当な投与経路で投与される。 投与方法も特に限定はなく、 内用、 外用及び注 射によることができる。 例えば錠剤、'丸剤、 顆粒剤、 散剤、 液剤、 懸濁剤、 シロ ップ剤、 カプセル剤は経口投与することができる。 注射剤は、 例えば静脈内、 筋 肉内、 皮下、 皮内等に投与することができる。 軟膏剤、 クリーム剤等は経皮投与 することができる。 座剤は直腸投与することができる。 また水性あるいは非水性 点眼剤を調製することができ、 点眼剤で眼に投与する剤型としては眼軟膏剤、 塗 布液剤、 散布剤、 インサート剤等がある。 更に吸入のためには、 有効成分と慣用 の製薬賦形剤との溶液又は懸濁液が用いられ、 例えば吸入用エアゾールスプレー として使用される。 なお乾燥粉末状の有効成分を肺と直接接触できるようにする 吸入器又は他の装置によっても投与することができる。
抗アレルギー剤としての投与量は、 その製剤形態、 投与方法、 使用目的及びこ れに適用される患者の年齢、 体重、 症状によって適宜設定され、 一定ではないが 一般には製剤中に含有される本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれら の塩から選択される少なくとも一つの化合物の量が成人 1 日当り 1 0 p g〜5 0 m g Z k gである。 もちろん投与量は、 種々の条件によって変動するので、 上記 投与量より少ない量で十分な場合もあるし、 あるいは範囲を超えて必要な場合も ある。 本発明の薬剤はそのまま経口投与するほか、 任意の飲食品に添加して日常 的に摂取させることもできる。
本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なく とも一つの化合物を有効成分として I g E産生抑制剤、 遅延型過敏反応抑制剤を 製造することができる。 これらの製剤は上記抗アレルギー剤に準じ製剤化するこ とができ、 上記抗ァレルギ一に準じた方法で投与することができる。
また本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩は抗ァレルギ一用 食品又は抗アレルギー用飲料の原料として用いても良い。 本発明の化合物若しく はその光学活性体又はそれらの塩を摂取することにより、 I g E産生、 遅延性過 敏反応が起因となる疾病の症状が顕著に改善され、 また該疾病の予防効果も優れ ている。
本発明の抗アレルギ一剤は I g Eの産生を抑制し、 I g E産生により媒介され るか悪化する症状、 例えば I g Eが起因となるアレルギー疾患、 例えば気管支喘 息、 アレルギー性鼻炎、 アトピー性皮膚炎、 アレルギー性結膜炎、 じん麻疹、 ァ ナフイラキシーショック等の症状改善及び/又は疾患予防に極めて有用である。 また遅延型過敏反応を抑制し、 遅延型過敏反応を伴う疾病、 例えば接触性過敏症 、 アレルギー性接触性皮膚炎、 細菌アレルギー、 真菌アレルギー、 ウィルスァレ ルギ一、 薬物アレルギー、 甲状腺炎、 アレルギー性脳炎等の治療、 予防において 有用である。
本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩は制がん活性、 がん細 胞增殖抑制活性、 アポトーシス誘発活性、 トポイソメラーゼ π阻害活性、 がん細 胞分化誘導活性、 抗リウマチ活性、 慢性関節リウマチ抑制活性、 ファス抗原産生 誘導活性、 抗菌活性、 抗ウィルス活性、 肝機能改善活性、 熱ショックタンパク誘 導活性、 血液成分正常化活性、 がん免疫増強活性、 抗炎症活性、 腫瘍壊死因子産 生抑制活性、 一酸化窒素産生抑制活性、 免疫調節活性、 例えば遅延型過敏反応抑 制活性、 リ ンパ球幼若化反応抑制活性、 混合リ ンパ球反応抑制活性、 I g E産生 抑制活性、 力ラゲナン浮腫抑制活性等の生理活性を有し、 これらの活性により、 本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なく と も 1以上の化合物を含有する食品又は飲料は、 上記種々の生理活性を'有する機能 性食品又は機能性飲料として有用である。
なお本発明の食品又は飲料の製造においてはシク口ペンテノンを含有する加熱 処理物、 該加熱処理物からの部分精製シクロペンテノン及び精製シクロペンテノ ン及び S H基含有化合物を使用し、 製造工程中において生成する本発明の化合物 も使用することができる。
すなわちシク口ペンテノンを含有する加熱処理物、 該加熱処理物からの部分精 製シクロペンテノン及び精製シクロペンテノンから選択される原料及び S H基含 有化合物の反応物である本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩 から選択される少なくとも 1以上の化合物を含有、 希釈及び/又は添加してなる 食品又は飲料は本発明の食品又は飲料に包含される。
本発明の-食品又は飲料の製造法は、 特に限定はないが、 調理、 加工及び一般に 用いられている食品又は飲料の製造法による製造を挙げることができ、 製造され た食品又は飲料に有効量の生理作用を有する本発明の化合物若しくはその光学活 性体又はそれらの塩から選択される少なくとも 1以上の化合物が含有されていれ ば良い。
食品又は飲料の製造においては、 任意の工程で、 加熱処理を行い、 加熱処理物 中にシクロペンテノンを含有させ、 S H基含有化合物と反応させれば良く、 本発 明の化合物を含有する加熱処理物を添加してもよい。 また食品又は飲料やその原 料を本発明の化合物を含有する加熱処理物へ添加し、 該加熱処理物中の本発明の 化合物を希釈してもよい。 また、 添加は 1回又は数回に渡って行ってもよい。 し たがって、 簡便に新規な生理作用を有する食品又は飲料を製造することができる 本発明の食品又は飲料としては、 制がん作用、 抗菌作用、 アポトーシス誘発性 、 抗ウィルス作用、 肝機能改善作用等の生理機能を有する本発明の化合物若しく はその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なく とも 1以上の化合物が含 有、 添加及び Z又は希釈されていれば特にその形状に限定は無く、 タブレット状
、 顆粒状、 カプセル状、 ゲル状、 ゾル状等の形状の経口的に摂取可能な形状物も 包含する。
本発明の食品又は飲料は生理活性を有する本発明の化合物若しくはその光学活 性体又はそれらの塩を含有し、 これらの化合物の有する種々の生理活性、 制がん 作用、 抗菌作用、 アポトーシス誘発作用、 抗ウィルス作用、 肝機能改善作用等に よって、 これらを摂取することにより発がん予防、 がん抑制効果、 ウィルス性疾 患、 糖尿病、 リウマチ、 アレルギー、 自己免疫性疾患等の本発明の化合物若しく はその光学活性体又はそれらの塩に感受性を示す疾患の症状改善効果、 予防効果 また肝機能改善効果等を有する健康食品又は飲料であり、 生体の恒常性の維持、 特に胃腸健康保持に有用な食品又は飲料である。 まだその抗菌力により、 極めて 保存性の良い、 食品又は飲料である。
本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩はこれらの生理活性の 有効量を投与しても毒性は認められない。 例えば経口投与の場合、 式 【νπ】 、 式
【VI】 、 式 【IX】 、 式 【X】 でそれぞれ表される化合物、 若しくはそれらの光学 活性体又はそれらの塩のいずれかを 1 0 0 O m g Z k gでラッ トに単回経口投与 しても死亡例は認められない。
以上、 本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩はその種々の生 理的機能により、 医薬、 食品、 飲料等の広い分野において極めて有用な化合物で ある。 この本発明の化合物はシクロペンテノンと、 SH基含有化合物、 例えば S H基含有アミノ酸、 又はその誘導体、 例えばシスティン含有アミノ酸誘導体との 反応物として、 食品、 飲料中でも生成し、 人為的に生成されたこれらの化合物の 使用も本発明に包含されるものである。
実施例
以下、 実施例を挙げて、 本発明を更に具体的に説明するが、 本発明はこれらの 実施例に何ら限定されるものではない。 なお、 実施例における％は重量％を意味 する。
参考例 1
1 0 gの D—グノレクロン酸 （シグマ社製 G 526 9) を 1 リッ トノレの水に 溶解し、 1 2 1°Cで 4時間加熱した後約 1 Om 1になるまで減圧下濃縮した。 こ れに酢酸ブチル：酢酸：水 = 3 ： 2 ： 2混合液の上層 40 m 1を加えて混合後、 遠心によって得た上清を減圧下約 1 Om 1まで濃縮した。
上記抽出液をカラムクロマトグラフィー用シリカゲル BW— 300 S P (2 X 28 cm, 富士シリシァ化学社製） にアプライし、 酢酸ブチル：酢酸：水 =3 ： 2 ： 2の上層を溶離液としてコンプレッサーで 0. 2 k gZc m2 に加圧し、 毎 分 5m 1の流速で分離を行った。 1画分当り 1 Om 1になるようにフラクシヨネ ーシヨンを行い、 各画分の一部をとつて薄層クロマ卜グラフィ一で分析したとこ ろ 6 1番から 80番までの画分に高純度のシク口ペンテノンが含まれていた。 こ れらの画分を集めて減圧下濃縮した後 4 Om 1のクロロホルムで抽出し、 抽出液 を減圧下濃縮することによって 1 0 Omgのシクロペンテノンを得た。
この画分をパルパックタイプ Sカラム （宝酒造社製） を用いた順相 H P LCで 分離し、 2 1 5 nmの紫外線吸収で検出したところ、 純度は 98%であった。 上記シクロペンテノン 113.9 mgをエタノール 2.85 ml に溶かした。 このエタノ ール溶液にへキサン エタノ—ル （94/6) 3.85 ml を更に加え、 17 mg/mlのシク 口ペンテノン溶液を調製した。 この液を 0.5μπι のフィルターでろ過し、 光学分 割 HPLC試料溶液とした。
この試料溶液を以下の条件で光学分割 HPLC を行い、 前ピークの （一） 体シク 口ペンテノン及び後ピークの （+ ) 体シクロペンテノンのフラクションをそれぞ れ集め、 減圧乾固し、 （一） 体シクロペンテノン 43.2 mg、 （ + ) 体シクロペン テノン 43.0 mgをそれぞれ得た。
光学分割 HPLC 条件
カラム ： キラールパック AS (ダイセル化学工業） 2.0 cmX 25.0 cm カラム温度： 40°C
移動相 ：へキサン エタノール （94/6)
流速： 14.0 ml/min
検出： UV 210 nm
試料注入量： 150 μ 1 (2.55 mg)
得られた （一） 体シクロペンテノン及び （+ ) 体シクロペンテノンは両者共に 約 1 %のェナンチォマーを含有していたため再度上記の条件で光学分割した。 そ の結果、 前ピークの （一） 体シクロペンテノン 30.0 mg から 19.7 mg のェナンチ ォマーを含有しない （一） 体シクロペンテノンを、 後ピークの （+ ) 体シクロべ ンテノン 37.4 mg から 27.7 mgのェナンチォマーを含有しない （+ ) 体シクロべ ンテノンをそれぞれ得た。 なお （一） 体シクロペンテノン、 （+ ) 体シクロペン テノンの光学分割 H P L Cの溶出時間はそれぞれ 3 3分、 40分であった。 実施例 1
( 1 ) 1 M シクロペンテノン水溶液 1 00 μ 1 と、 N a OHでp H4に調整 した 1M 一システィン塩酸塩 （ナカライテスク社製、 1 0 3— 1 3) 1 00 μ 1を混合して 6 0°Cで 1 6時間反応させた。 本反応物を 0. 5 μ πιコスモナイ スフィルター （ナカライテスク社製、 44 0— 84) によりろ過した後、 0. 1 %トリフルォロ酢酸 （ナカライテスク社製、 3 4 9— 0 1 ) 水溶液を移動相とし て毎分 0. 5m 1の流速で、 カプセルパックカラム C,8S G 1 2 0 (6 mmX 2 5 0mm :資生堂社製） を用いて H P LCを行い、 2 1 0 nmの吸光度で検出 したところ、 1 9. 1分と 1 9. 5分に主要なピークが見られたので分取し、 減 圧下濃縮乾固して 2種のジァステレオマー、 CM 1 (1 9. 1分） と CM2 (1 9. 5分） を単離した。 (2) シクロペンテノンと し一システィンとの反応物の構造
実施例 1一 （1) で単離した CM 1 と CM2の質量分析を DX 3 0 2質量分析 計 （日本電子社製） を用いて行った。 また、 0. 1 Nの DC 1重水溶液に溶解し 、 核磁気共鳴法 （NMR) によってその構造を解析した。 核磁気共鳴装置は J N M- A 50 0 (日本電子社製） を用いた。 紫外 （UV) 吸収スペク トルを UV— 2 5 00分光光度計 （島津製作所製） を用いて測定した。 その結果を以下に示す
CM 1
FAB-MS ./ z 2 1 8 [Μ + Η] +
マトリックスとしてグリセロールを用いた。
Ή-NMR
δ 2. 3 2 ( 1 Η, d d， J = 2 0. 0， 1. 5 H z , 5—H) 、 2. 8 9 ( 1 H, d d， J = 20. 0， 6. 0 H z , 5— H) 、 3. 0 1 ( 1 H， d d， J = 1 5. 0， 7. 0H z , 1 ' — H) 、 3. 0 9 ( 1 H, d d , J = 1 5. 0, 4. 5H z , 1 ' -H) 、 4. 0 1 ( 1 H， m, 4—H) 、 4. 1 6 ( 1 H, d d， J = 7. 0， 4. 5 H z , 2 ' -H) 、 6. 4 9 ( 1 H， d， J = 3. OH z , 3 -H)
V ： nm n m (水）
CM 2
FAB— MS m/ z 2 1 8 [M+H] +
マトリックスとしてグリセロールを用いた。
Ή-NMR
δ 2. 3 1 ( 1 Η, d d， J = 2 0. 0， 1. 5 H z 5— H) 、 2. 8 7 ( 1 H, d d， J = 2 0. 0， 6. 0 H z , 5— H) 、 3 0 1 ( 1 H, d d， J = 1 5. 0， 6. 5 H z , l ' —H) 、 3. 1 1 ( 1 H, d d, J = 1 5. 0， 4. 5 H z , 1 ' — H) 、 4. 0 0 ( 1 H, m, 4—H) 、 4. 2 0 ( 1 H, d d， J = 6. 5， 4. 5 H z， 2， 一 H) 、 6. 4 6 ( 1 H， d， J = 3. OH z， 3 -H) JP
但し、 'Η— NMRの化学シフ ト値は HODの化学シフ ト値を 4. 65 p p m として表した。
また CM1を 0. I N DC 1重水溶液に溶解し、 J NM— A500を用いて '3C— NMRスぺク トルを測定した。
13C-NMR
6 30. 3 ( 1 ' 一 C) ， 39. 4 (4— C) ， 42. 0 (5— C) ， 53. 4 (2' — C) ， 1 32. 8 (3— C) ， 1 54. 6 (2— C) , 1 7 1. 1 ( 3， — C) ， 205. 5 (1— C)
但し、 13C— NMRの化学シフト値はジォキサンの化学シフト値を 67. 4 p pmとして表した。
なお、 'H_NMR、 '3C— NMRのピークの帰属の番号は下記式 【W】 のと おりである。
【w】
Figure imgf000042_0001
また CM 1 と CM2の等量混合物 （CMと呼ぶことにする） の赤外吸収 （ I R ) スペク トルを FT I R— 8000 PC赤外分光光度計 （島津製作所製） を用い て測定した。 その結果を示す。
I R
vKOr cm-' 3000， 1 705， 1 625, 1 20 1
拡散反射法によって行つた。
これらの値から、 CM 1 と CM 2のどちらか一方が式 【VIII】 で示される構造、 他方が式 【K】 で示される構造であることが明らかになった。 【
HOOCli'"" vin】
Figure imgf000043_0001
【K】
HOOCI'" ■
Figure imgf000043_0002
図 に CM 1のマススペク トル、 図 2にその 'H— NMRスペク トル、 図 3に CM 1の UV吸収スペク トル、 図 4に CM2の 'H— NMRスペク トル、 図 5に CM1の13 C— NMRスぺク トル、 図 6に CMの I R吸収スぺク トルを示す。 図 1において横軸は mZz値、 縦軸は相対強度 （％) を示す。 図 2、 図 4及び図 5 において横軸は化学シフ ト値 （p pm) 、 縦軸はシグナルの強度を示す。 図 3に おいて横軸は波長 （nm) 、 縦軸は吸光度を示す。 また図 6において横軸は波数
(cm ') 、 縦軸は透過率 （％) を示す。
実施例 2
( 1 ) シク口ペンテノンの 1 M水溶液 1 00 /Z 1 と 200 mMグルタチオン （ 還元型：ナカライテスク社販売： 1 70— 1 0) 水溶液 （pH3. 0) 500 μ Iを混合し、 60°Cで 5時間反応させた。 この反応液を 0. 5 μπコスモナイス フィルターでろ過し、 以下の条件で HP LCで分離した。
カラム： TSKg e l ODS-80T s ( 5 μ m) 、 20 mm X 25 c m 移動相： A 0. 1 % T F A水溶液 B 0. 1 % T F A/ 50%ァセトニトリノレ水溶液 流速： 7. 5 m 1 /分
グラジェント ： 1 0分間移動相 A→55分かけて移動相 Aから A： B= 1 ： 1
→ 1 5分かけて移動相 A： B= 1 ： 1から移動相 B
検出： 220 nmにおける吸光度
上記反応液 200 μ 1 を H P L Cにかけ、 保持時間 35. 7分と 36. 1分の ピークを分取し、 それぞれ減圧下濃縮乾固して 2種のジァステレオマー、 GM1 と GM 2を単離した。 GM1の収量は 2. 5mg、 GM 2の収量は 3. Omgで めった。
このクロマトグラムを図 7に示す。 すなわち、 図 7は保持時間と吸光度の関係 を示す図であり、 横軸は保持時間 （分） 、 縦軸は 2 20 nmにおける吸光度であ る。
(2) 実施例 2— （1) で調製した GM1、 GM 2の等量混合物 （GMと略称す る） の構造を解析した。 核磁気共鳴 （NMR) スペク トルは J NM— A500 ( 日本電子社製） 、 質量スぺク トル （MS) は DX 302質量分析計 （日本電子社 製） 、 紫外 （UV) 吸収スぺク トルは UV— 2500分光光度計 （島津製作所製 ) 、 赤外吸収 （ I R) スぺク トルは F T I R— 8000 P C赤外分光光度計 （島 津製作所製） を用いて測定した。 その結果を以下に示す。
Ή-NMR
δ 2. 09 ( 2 Η, m, 5 ' _H) ， 2. 28 ( 1 H, d d， J = 1 3. 0， 20. 0 H z , 5— H) , 2. 44 ( 2 H, m, 4 ' -H) ， 2. 78 ( 1 H, d d， J = 8. 5 , 1 4. 0， 1 ' -H) ， 2. 85又は 2. 89 (1 H， d d ， J = 3. 0， 6. OH z， 5 -H) , 2. 92又は 2. 95 ( 1 H, d d, J = 1. 0， 5. 5 H z , 1 ' -H) ， 3. 86 (2 H, S， 9 ' — H) ， 3. 9 5 (2 H, m， 4_H， 6 ' —H) , 4. 46 ( 1 H, m, 2 ' 一 H) ， 6. 4 7又は 6. 49 (1 H， d, J = 3. OH z， 3— H)
試料は 0. I N DC 1重水溶液に溶解し、 HODの化学シフ ト値を 4. 65 p p mとして表した。 13C-NMR
6 2 6. 3 ( 5 ' - C) ， 3 1. 7 (4， 一 C) ， 3 1. 9又は 3 2. 1 ( 1 ' — C) ， 3 9. 3 (4 -C) , 4 1. 9 (9， - C) , 4 2. 2又は 4 2. 3 (5 -C) ， 5 3. 3 (6 ' — C) ， 54. 1 (2 ' 一 C) ， 1 3 3. 5 (3 - C) , 1 5 4. 4 (2 -C) , 1 7 3付近 （3 ' — C， 7 ' — C， 8 ' 一 C， 1 0 ' — C) ， 2 0 5. 8 ( 1 — C)
試料は 0. I N DC I重水溶液に溶解し、 ジォキサンの化学シフ ト値を 6 7 . 4 p p mとして表した。
なお、 'H— NMR、 13C— NMRのピークの帰属の番号は下記式 【X】 のと おりである。
Figure imgf000045_0001
【X】
F AB— MS
m/ z 4 0 4 (M + H) + ， 4 2 6 (M+N a ) +
グリセロールをマトリツクスに用いた。
UV え… 2 5 1 nm (水）
I R v KUr c m一' 2 9 4 9, 1 7 1 0, 1 6 6 0， 1 5 3 9， 1 40 4， 1 2 0 3
拡散反射法によって行った。
図 8〜図 1 2にその結果を示す。 すなわち、 図 8は GMの 'H— NMRスぺク トルを示す図であり、 横軸は化学シフト値 （p pm) 、 縦軸はシグナルの強度を 示す。 図 9は GMの'3 C— NMRスペク トルを示す図であり、 横軸は化学シフト 値 （p pm) 、 縦軸はシグナルの強度を示す。 図 1 0は GMのマススぺク トルを 示す図であり、 横軸は m/z値、 縦軸は相対強度 （％) を示す。 図 1 1は GMの UV吸収スぺク トルを示す図であり、 横軸は波長 （nm) 、 縦軸は吸光度を示す 。 図 1 2は GMの I R吸収スぺク トルを示す図であり、 横軸は波数 （ c m— ') 、 縦軸は透過率 （％) を示す。
以上の結果から、 GM1、 GM2は 2—ヒ ドロキシ一 4—グノレタチオン一S_ ィノレ— 2—シク口ペンテン— 1一オン (2 - hydroxy - 4- glutathion- S - yト 2 - cyclop enten-1-one ) ジァステレオマーであり、 その一方は式 【X I】 に示す構造、 他 方は式 【ΧΠ】 に示す構造であることが明らかになった。
【X I】
Figure imgf000046_0001
(
H2 N- 2 -COOH
【xn】
Figure imgf000046_0002
実施例 3
(1) シクロペンテノンと し一システィン塩酸塩 （ナカライテスク社製、 1 0 3- 1 3) を各々の濃度が 1 OmMになるようにリン酸緩衝食塩水 （pH 7. 2 ) に溶解して 3 7。Cで 30分間反応させた。 本反応物を 0. 5 /xmコスモナイス フィルター （ナカライテスク社製、 440— 84) によりろ過した後、 0. 1 % トリフルォロ酢酸 （ナカライテスク社製、 349— 0 1 ) 水溶液を移動相として 毎分 l m lの流速で、 TSK— G e l ODS 80 T s (4. 6 mmX 250 mm ;東ソ一社製） を用いて HP LCを行い、 2 1 0 n mの吸光度で検出したと ころ、 シクロペンテノンと 一システィンのピークが減少し、 4. 0分と 4. 3 分に主要なピークが新たに出現した。
その結果を図 1 3に示す。 すなわち図 1 3は溶出時間と 2 1 0 nmにおける吸 光度の関係を示す図であり、 横軸は溶出時間 （分） 、 縦軸は 2 1 0 nmにおける 吸光度を示す。
なお図 1 3中 3. 1分が 一システィンの溶出位置、 4. 9分がシクロペンテ ノンの溶出位置である。
(2) シクロペンテノンと 一システィン塩酸塩を各々の濃度が 1 00 μ Mに なるようにリン酸緩衝食塩水 （ρ Η7. 2) に溶解して 37°Cでの 2 1 5 nmに おける吸光度の経時変化を UV— 2200分光光度計 （島津製作所製） を用いて 測定した。 その結果、 反応時間と共に吸光度は低下し、 500秒後からはほぼ一 定になった。 その結果を図 1 4に示す。 すなわち図 1 4は システィンを用い た場合の反応時間と 2 1 5 nmにおける吸光度の関係を示す図であり、 横軸は反 応時間 （秒） 、 縦軸は 2 1 5 nmにおける吸光度を示す。
次に 一システィン塩酸塩の代りにグルタチオン （還元型、 ナカライテスタ社 販売、 1 70— 1 0) を用いて同様の操作を行ったところ、 反応時間と共に 2 1 5 nmにおける吸光度は低下し、 2000秒からはほぼ一定になった。 その結果 を図 1 5に示す。 すなわち図 1 5はダルタチオンを用いた場合の反応時間と 2 1 5 nmにおける吸光度の関係を示す図であり、 横軸は反応時間 （秒） 、 縦軸は 2 1 5 nmにおける吸光度を示す。
(3) シクロペンテノンと 一システィン塩酸塩を各々の濃度が 1 OmMにな るようにリン酸緩衝食塩水 （PH 7. 2) に溶解して 3 7 °Cで 30分間反応させ た。 本反応物を 0. 5 μ mコスモナイスフィルターによりろ過した後、 0. 1 % 酢酸水溶液を移動相として毎分 1 m 1の流速で、 T S K— G e 1 ODS 80 T s (4. 6 mmX 250 mm；東ソ一社製） と AP I 300 (サイエックス 社製） を用いて高速液体クロマトグラフィ一質量分析を行った。 質量分析はポジ ティブイオンモードで行った。 その結果、 mZz = 236. 1 [M + H] + のシ グナルが観測され、 反応により新たに生じた物質の分子量は 235であった。 その結果を図 1 6と図 1 7に示す。 すなわち図 1 6は上記した本発明の 1例の 反応物のクロマトグラムであり、 横軸は保持時間 （分） 、 縦軸は全イオン強度 （ 相対値） を示す。 また、 図 1 7は図 1 6の 2. 99分に溶出する画分の質量スぺ ク トルを示す図であり、 横軸は 01ノ2、 縦軸はイオン強度 （相対値） を示す。 な お、 図 1 6の 3. 1 5分と 3. 24分にそれぞれ溶出する画分の質量スペク トル においても、 mZz = 236. 1 [M+H] + のシグナルが観測された。
(4) シクロペンテノンと し一システィン塩酸塩を各々の濃度が 1 00 μ Mに なるようにリン酸緩衝食塩水 （ρ Η 7. 2) に溶解して 3 7 °Cで 50分間反応さ せた。 反応前と反応後の紫外吸収スぺク トルを UV— 2200分光光度計 （島津 製作所製） を用いて測定した。
その結果を図 1 8と図 1 9に示す。 すなわち、 図 1 8は溶解直後の反応液の紫 外吸収スぺク トルを示す図であり、 図 1 9は 50分間反応後の反応液の紫外吸収 スペク トルを示す図である。 図 1 8と図 1 9において横軸は波長 （nm) 、 縦軸 は吸光度を示す。
i__システィン塩酸塩の代りにグルタチオンを用いて同様の操作を行った。 その結果を図 20と図 2 1に示す。 すなわち、 図 20はグルタチオンを用いた 場合の溶解直後の反応液の紫外吸収スぺク トルを示す図であり、 図 2 1はグルタ チオンを用いた場合の 50分間反応後の反応液の紫外吸収スぺク トルを示す図で ある。 図 20と図 2 1において横軸は波長 （nm) 、 縦軸は吸光度を示す。
(5) 60 1の1. 4 Mシクロペンテノン重水溶液、 80 z lのlM >. - システィン重水溶液、 及び 1 60 μ 1の重水で調製したリン酸緩衝食塩水 （ρΗ 7. 2) を混合し、 37 °Cで 3時間反応させた。 この反応液の'3 C—核磁気共鳴
(NMR) スペク トルを J NM— A 500 (日本電子社製） を用いて測定した。 その結果を以下に示す。
13C-NMR
δ 33付近 （ 1 ' 一 C) ， 43付近 （4一 Cと 5— C) ， 55付近 （2' — C ) , 75付近と 78付近 （3—C) ， 80付近と 8 1付近 （2— C) ， 1 73付 近 （3 ' — C) ， 2 1 5付近と 2 1 7付近 （ 1— C)
なお、 ' 3 c— NMRにおけるピークの帰属の番号は下記式 【xm】 のとおりで ある。
【
HOOC- xm】
Figure imgf000049_0001
この反応物の'3 C— NMRスぺク トルを図 22に示す。 図 22において横軸は 化学シフ ト値 （p pm) 、 縦軸はシグナルの強度を示す。
この反応での生成物は 4種類のジァステレオマーの混合物であるので各炭素原 子につき最大 4個のシグナルが見られ、 この反応液中に生成した反応物の化学構 造は前記式 【K】 で表されるシクロペンタノンチォ誘導体である。
以上の結果より、 シクロペンテノンとシスティンとの反応により生成する図 1 3の溶出時間 4. 0〜4. 3分をピークとする反応物の化学構造は前記式 【Κ】 で表されるシクロペンタノンチォ誘導体であり、 この溶出時間 4. 0〜4. 3分 をピークとする反応物を分取し、 前記式 【IX】 で表されるシクロペンタノンチォ 誘導体 （以下、 CDと称す） を得た。
実施例 4
( 1 ) シク口ペンテノンの 1. 4 M水溶液 60 μ 1、 20 OmMグルタチオン （ 還元型、 ナカライテスク社販売、 1 70— 1 0) 水溶液 （Na OHで pH 7. 0 に調整） 6◦ 0 1、 及びリン酸緩衝食塩水 （pH 7. 2) 1 340 μ 1を混合 し、 3 7。Cで 1時間反応させた。 この反応液 700 μ 1 を 0. 5 mコスキナイ スフィルターでろ過し、 以下の条件でシク口ペンテノンとグルタチオンの反応物
(以下、 GD I と称す） を H P LCで分離した。 カラム ： TSKg e l ODS— 80 T s ( 5 μ m) 、 20 mm X 25 cm (東ソ一社製）
移動相 ： A 0. 1 %トリフルォロ酢酸 （T FA、 メルク社製、 8262) 水 溶液
B 0. 1 %TF AZ50%ァセトニトリル （ナカライテスク社製、 004 - 30) 水溶液
流速： 9m l /分
グラジェント ： 40分間移動相 A→40分かけて移動相 Aから B→
以後移動相 B
検出： 220 nmにおける吸光度
上記反応液 500 μ 1を HP LCにかけ、 保持時間 27. 7分のピークを分取 し、 凍結乾燥して 5 m gの GDを単離した。
このクロマトグラムを図 23に示す。 すなわち、 図 23は保持時間と吸光度の 関係を示す図であり、 横軸は保持時間 （分） 、 縦軸は 220 nmにおける吸光度 である。
(2) 実施例 4— (1) で調製した GD 1の構造を解析した。 核磁気共鳴 （NM R) スぺク トルは J NM— A 500 (日本電子社製） 、 質量スぺク トル （MS) は DX 302質量分析計 （日本電子社製） 、 紫外 （UV) 吸収スぺク トルは UV - 2500分光光度計 （島津製作所製） 、 赤外吸収 （ I R) スぺク トルは FT I R— 8000 P C赤外分光光度計 （島津製作所製） を用いて測定した。 その結果 を以下に示す。
Ή-NMR
δ 2. 0 7 ( 2 Η, m， 5 ' — H) ， 2. 1 7 (1 H， d— t， J = 20. 0， 1 1. 0 H z , 5— H) ， 2. 4 5 ( 2 H, m, 4' -H) , 2. 88 ( 1 H, m， 1 ' — H) ， 2. 95 ( 1 H， m, 5 _H) ， 3. 08 ( 1 H, m, 1 ' ― H) , 3. 1 9 (1 H， m, 4 -H) ， 3. 76 ( 1 H， m, 3— H) ， 3. 8 6 ( 3 H, m， 6 ' — H， 9 ' -H) ， 4. 09 ( 1 H, d， J - 1 0. 5 H z ， 2 -H) ， 4. 49 ( 1 H， m， 2 ' — H) 試料は重水に溶解し、 HODの化学シフ トを 4. 65 p pmとして表した。 13C-NMR
6 26. 4 ( 5 ' — C) ， 3 1. 7 (4 ' 一 C) ， 33. 3 ( 1 ' 一 C) ， 41 . 9 (9 ' 一 C) ， 42. 4又は 42. 6 (4一 C) ， 42. 8 (5— C) ， 5 3. 4 ( 6 ' - C) ， 54, 1 ( 2 ' — C) ， 79. 4又は 79. 6 (3— C) ， 8 1. 1 (2 -C) , 1 73付近 （3 ' — C, 7 ' 一 C， 8， — C， 1 0' - C) ， 2 1 4. 9 ( 1一 C)
試料は重水に溶解し、 ジォキサンの化学シフト値を 67. 4 p pmとして表し た。
なお、 'H— NMR、 13C— NMRにおけるピークの帰属の番号は下記式 【X IV】 のとおりである。
IV】
Figure imgf000051_0001
FAB -MS
m/ z 422 [M + H] +
グリセロールをマトリ ックスに用いた。
U V
末端吸収
I R
vKDr cm一1 3 275, 1 749， 1 654, 1 54 1， 1 203, 1 1 45
拡散反射法によって行つた。
図 24〜図 27にその結果を示す。 すなわち、 図 24は GDの 'H— NMRス ぺク トルを示す図であり、 横軸は化学シフ ト値 （p pm) 、 縦軸はシグナルの強 度を示す。 図 25は GDの'3 C— NMRスペク トルを示す図であり、 横軸は化学 シフ ト値 （p pm) 、 縦軸はシグナルの強度を示す。 図 26は GDのマススぺク トルを示す図であり、 横軸は mZz値、 縦軸は相対強度 （％) を示す。 図 27は GDの I R吸収スペク トルを示す図であり、 横軸は波数 （cm—1) 、 縦軸は透過 率 （％) を示す。
以上の結果から GDは前記式 【X】 に示す 2, 3-ジヒ ドロキシ- 4- グルタチオン - S - イノレ- シクロペンタノン (2, 3-dihydroxy-4-glutathion-S-yl-cyclopentano ne) であることが明らかになった。 なお GDは 4種のジァステレオマーの混合物 であり、 GDよりそれぞれのジァステレオマーを分離した。
実施例 5
(1) 2. 5 X 1 05 個の前骨髄性白血病細胞 HL— 60細胞 （ATCC CCL— 240) を含む 4. 5m 1の 1 0 %ゥシ胎児血清含有 R PM 1 1 640 培地に、 各々 0. 5111 1の0. 2mM CM、 0. 8 mM CM, 又は 1. 6 m M CMを添加し、 5 %炭酸ガス存在下 37°Cで 24時間又は 48時間培養した 後、 生細胞数を測定した。
その結果、 CMは強いがん細胞増殖抑制活性を示した。 また各細胞増殖抑制濃 度において細胞にアポトーシス小体が形成された。
その結果を図 28に示す。 すなわち図 28は添加した試料、 すなわち CMの培 養液中の濃度と生細胞数の関係を示す図であり、 横軸は CMの濃度 （μΜ) を、 縦軸は培養液 5 m 1中に含まれる生細胞数 （X 1 05 /5m l ) を示す。 図 28 中において白四角印 （口） は CM添加、 24時間培養を、 黒四角印 （園） は CM 添加、 48時間培養をそれぞれ示す。 また白三角印 （△) は試料無添加時の 24 時間培養、 黒三角印は試料無添加での 48時間培養をそれぞれ示す。
(2) 8、 40、 200、 又は 1 000 μ M GM水溶液、 あるいは対照とし て水 1 0 1を 96穴マイクロタイタープレートの各ウエノレに添加した。 H L— 60 (AT C C CCL一 240) を 1 0 %ゥシ胎児血清を含む R P M 1 1 64 0培地に 5 X 1 04 個 1 となるように懸濁し、 90 μ 1ずつ上記マイクロタ イタ一プレートの各ゥエルに分注し、 5 % C02 存在下 3 7°Cで 4 8時間培養 した。 5 m g/m l の 3— （4， 5—ジメチノレチアゾーノレ一 2—ィル） 一 2， 5 —ジフエニルテトラゾリゥムブロミ ド （MTT ；シグマ社製） リン酸緩衝食塩水 溶液 1 0 / 1を加えて更に 4時間培養を続けた後、 顕微鏡で細胞の生育状態を観 察した。 また、 0. 0 4 N HC 1含有 2—プロパノ一ル 1 0 0 μ 1 を加えてよ く撹拌し、 5 9 0 nmにおける吸光度を測定した。
その結果、 4 0 μ Μ GM添加区分 （終濃度 4. 0 β Μ) において細胞の増殖 が見られなかった。 よって、 GMは 4. 0 / M濃度で H L— 6 0細胞の増殖を完 全に抑制することが明らかになった。 また各細胞増殖抑制濃度において細胞にァ ポトーシス小体が形成された。
( 3) 1 0 0、 2 0 0、 又は 4 0 0 の GM又は CM水溶液、 あるいは対照 として水 1 0 μ 1 を 9 6穴マイクロタイタ一プレー卜の各ゥエルに添加し、 実施 例 5— ( 2) と同様の方法で、 H L— 6 0増殖抑制活性を測定した。 但し、 細胞 増殖の度合いを、 試料添加区分の 5 9 0 nmにおける吸光度の、 対照の水添加区 分の 5 9 0 nmにおける吸光度に対する比率 （％) で表した。 その結果を表 1に 示す。
表 1
Figure imgf000053_0001
(4 ) 5 6°C、 3 0分間処理したゥシ胎児血清 （ギブコ社製） を 1 0%含む R PM I 1 6 4 0培地 （日水社製） にて 3 7 °Cで培養した H L— 6 0細胞 （A T C C C C L 2 4 0) を上記培地で 2. 5 X 1 05個/ 4. 5 m l となるように懸 濁した。 この懸濁液に対して 1 0 0 GM水溶液 0. 5 m lを添加し （終 濃度 Ι Ο μΜ) 、 5%炭酸ガス存在下、 37 °Cで 24時間、 48時間及び 72時 間培養した。
培養細胞をトリパンブルーで染色して生細胞数と死細胞数を計数したところ、 1 Ο μΜ GM添加区分では対照の水添加区分に比べて生細胞数及び細胞生残率 が顕著に減少していた。 また、 培養細胞を光学顕微鏡で観察し、 核の凝縮、 細胞 の縮小、 アポトーシス小体の形成を確認した。 更に、 細胞から DN Αを抽出して ァガロースゲル電気泳動を行ったところ、 クロマチン単位での DN Aの断片化が 認められた。 なお、 対照の水添加区分においてはこれらの現象は観察されなかつ た。
その結果を図 29に示す。 すなわち図 29は H L— 60の培養液に 1 0 // M GMを添加したときの培養時間と培養液中の生細胞数の関係を示す図であり、 横 軸は培養時間 （時間） 、 縦軸は培養液中の生細胞数 （X 1 05個 5m l ) を示 す。 図 29中において白四角印 （口） は Ι Ο μΜ GM添加を、 白丸印 （〇） は 水添加の対照を示す。
(5) 4. 1 2、 1 2. 3、 37. 0、 1 1 1、 333、 又は Ι Ο Ο Ο ^Μ GD水溶液、 あるいは対照として水 1 0 1を 96穴マイクロタイタ一プレート の各ゥエルに添加した。 HL— 60 (ATCC C C L - 240) を 1 0%ゥシ 胎児血清を含む R ΡΜ 1 1 640培地に 5 X 1 04 個 1 となるように懸濁し 、 90 μ 1ずつ上記マイクロタイタープレートの各ゥエルに分注し、 5% CO 2 存在下 37 °Cで 48時間培養した。 SmgZm lの 3— （4， 5—ジメチルチ ァゾール一 2—ィル） 一 2， 5—ジフエニノレテトラゾリゥムブロミ ド （MTT ； シグマ社製） リン酸緩衝食塩水溶液 1 0 μ 1を加えて更に 4時間培養を続けた後 、 顕微鏡で細胞の生育状態を観察した。 また、 0. 04 NHC 1含有 2—プロパ ノール 1 00 μ 1を加えてよくかくはんし、 590 n mにおける吸光度を測定し た。
その結果、 3 7. 0 μΜ GD添加区分 （終濃度 3. 70 μ M) において細胞 の増殖が見られなかった。 よって、 GDは 3. 70 μΜ濃度で HL— 60細胞の 増殖を完全に抑制することが明らかになった。 また各細胞増殖抑制濃度において 細胞にアポトーシス小体が形成された。
( 6) リン酸緩衝食塩水 （p H 7. 2) にシクロペンテノンが 5 5 mM、 L ーシ スティン塩酸塩が 8 O mMになるように溶解し、 p H 7. 2で 3 7°C、 1 5分間 反応させた。 この反応液の一部を 0. 1 %トリフルォロ酢酸水溶液を移動相とし 、 毎分 1 m 1の流速で、 T S K g e l OD S— 8 0 T s (4. 6 mm X 2 5 0 mm、 東ソ一社製） カラムを用いた逆相 H P L Cで分析したところ、 シクロペン テノンは見られなかった。 この反応溶液は 5 5 mM CD含有溶液である。 実施例 5— （4) と同様に、 各々 1 0 0、 2 0 0、 又は 4 0 0 μΜ GD又は CD水溶液のがん細胞増殖抑制活性を測定した。 但し、 細胞増殖の度合いを、 試 料添加区分の 5 9 0 n mにおける吸光度の、 対照の水添加区分の 5 9 0 n mにお ける吸光度に対する比率 （％) で表した。
その結果を表 2に示す。
表 2
Figure imgf000055_0001
表 2に示すように GD、 CDはがん細胞増殖抑制活性を示した。 また各細胞増 殖抑制濃度において細胞にアポトーシス小体が形成された。
以上、 実施例 5に示すように、 各化合物はがん細胞増殖抑制活性、 アポトーシ ス誘発活性を示した。 また各種ジァステレオマーも同様の効果を示した。
実施例 6
GMを生理的食塩水で所定の濃度に希釈し、 以下の試験を行った。
( 1 ) Me t h A細胞 （2 X 1 06 細胞 /マウス） を 8週齢の雌性 B AL BZ cマウス （体重約 2 0 g) の腹部に皮下注射した。 その後、 引き続いて同じ箇所 に 5日間連続して GM (5mgZk gZ日） を皮下注射した。 一方コントロール 群には生理的食塩水を同様に皮下注射した。 2週間後にマウス腹部に形成された がん組織を摘出して、 その重量を測定した。 コントロール群と比較し、 GM投与 群では顕著ながん増殖抑制作用が認められた。 また CM、 CD、 GDについても 同様な結果を得た。
(2) マウス白血病 P— 388 (1. 1 X 1 06 c e l l s Zマウス） を 7週 齢の雌性 DB AZ2マウス （体重約 20 g) に腹腔内注射した。 その後、 5日間 連続して GM、 CM, GD又は CD ( l OmgZk gZ日） を腹腔内注射した。 一方コントロール群には生理的食塩水を同様に腹腔内注射した。 それぞれ 8匹ず つの 2群において、 マウスの生存数、 平均生存日数、 延命率を算定した。 各試料 投与群においてコントロール群と比べ平均生存日数が延長し、 顕著な延命効果が 認められた。 また S a r c oma— 1 80 I CR系マウス、 I MCZCDF 1 マウス、 E A CZDDYマウスをそれぞれを用いた系においても同様な延命効果 を示した。
以上、 実施例 6に示すように GM、 CM、 GD又は CDは制がん効果を示した 。 また各ジァステレオマ一についても同様の結果を得た。
実施例 7
B a c i l l u s s u b t i l i s I F O 302 1を感受性ブイョン培地 (二ッスィ社製） で 1晚培養した （種培養） 。 600 nmにおける吸光度を測定 し、 あらかじめ作成した、 生菌数と 600 nmにおける吸光度の関係を示す検量 線から生菌数を計算した。 新鮮な感受性ブイヨン培地で 1 X 1 0β個 Zm 1 とな るように種培養液を希釈し、 96穴マイクロタイタ一プレー卜の各ゥエルに 1 8 0 M 1ずつ分注した。 GMの 4mgZm 1及ぴ 2m gノ m 1水溶液又は水を各ゥ エルに 20 μ 1ずつ加え、 37°Cで 1晚静置培養した （本培養） 。 一方、 種培養 液の一部を滅菌水で希釈し、 感受性ブイョン寒天平板培地に塗布して 37°Cで 1 晚培養後、 コロニーを計数して正確な生菌数を測定した。
各ゥ ルの培養液を滅菌水で希釈して感受性ブイョン寒天平板培地に塗布し、 37°Cで 1晚培養後、 コロニーを計数して生菌数を測定した。 その結果、 4 mgZm l GM添加区分 （終濃度 4 0 0 μ g 1 ) での生菌 数は 4. 4 X 1 07個 Zm 1であり、 水添加区分の 1 . 3 X 1 08個 Zm 1に比べ て減少していた。 よって、 GMは 4 0 0 μ gZm 1において上記被検菌に対して 増殖抑制作用を示した。 CM、 GD、 CD又はこれらの各ジァステレオマー、 G Mのジァステレオマーについても同様の結果を得た。 また、 これらの化合物は他 の細菌に対しても同様の抗菌活性を示した。
実施例 8
( 1 ) 8週齢の雌性 CD F 1系マウス （日本エスエルシー社より 7週齢、 体重 2 0 gで購入し、 1週間予備飼育） を用い L P S (リポポリサッカライ ド： シグ マ社） を腹腔内投与 （l O gZマウス） し、 エンドトキシンショ ックモデルを 作製した。 GMは L P S投与の 3 0分前に、 それぞれ 1 0 0、 l O O O m gZk gの用量で経口投与した。 L P S投与 1時間後にマウスより採血し、 血清を分離 し、 血清中腫瘍壊死因子一 α量を市販の E L I S Aキッ ト （エンドジェン社製） にて測定した。 結果を表 3に示す。 すなわち、 蒸留水を投与したコントロール 群に対し、 GM l O O O m gZk g投与群で有意に腫瘍壊死因子産生が抑制され た。
表 3
Figure imgf000057_0001
( 2) 8週齢の雌性 CD F 1系マウスの腹腔内にパラフィンオイル （コスモ バイオ社） 2 m lを投与し、 腹腔マクロファ一ジ （M0) を誘導した。 パラブイ ンオイル投与 1週間後にマウスの腹腔内に RPMI- 1640 培地 （ギブコ社） 4 m lを 注入し、 よくマッサージした後、 回収し、 腹腔細胞を得た。
腹腔細胞は RPMI-1640 培地で 2回洗浄した後、 1 0%牛胎児血清 （FCS ：ハイ クローン社） を含んだ RPMI- 1640 培地に懸濁し、 細胞濃度を 1 X 1 0 ecells/ml に調整した。 調製した細胞液 1 m 1を 24穴プレートに播種し、 37°C C02イン キュベータ一で 2時間培養した。 培養後上清に含まれる非接着細胞を除去し、 接 着細胞を腹腔 として用いた。
プレートの各穴に 1 0%FCS を含んだ RPMI- 1640 培地 800 μ 1 を加え、 次い で生理食塩水 （大塚製薬社製） に溶解した 1、 1 0、 1 00、 Ι Ο Ο Ο μΜの G Μを 1 00 μ 1添加し 3 7°C C02ィンキュベータ一で 1時間培養した。
培養後 1 00 n gZm 1の L P S (シグマ社製） を 1 00 // 1添加し、 更に 2 4時間培養した。 培養終了後、 培養上清を回収し産生された腫瘍壊死因子一 α量 を市販の E L I S Αキッ ト （エンドジェン社製） を用いて定量した。
結果を図 30に示す。 すなわち図 30は GM量と腫瘍壊死因子産生量の関係を 示す図であり、 縦軸は腫瘍壊死因子産生量 （p gZm l ) 、 横軸は GM濃度 ( μ Μ) を示す。 また棒グラフは GM非添加の対照を示す。
GMは 1 0 以上の濃度において L P Sが誘発するマウス腹腔マクロファー ジからの腫瘍壊死因子産生を著明に抑制した。
以上、 実施例 8に示すように GMは腫瘍壊死因子産生抑制作用を示した。 また CM、 GD、 CD、 又はこれらの各ジァステレオマー、 GMの各ジァステレオマ —についても同様の結果を得た。
実施例 9
6週齢の雄性ルイスラッ ト （セアツク吉富社より 5週齢、 体重約 1 30 gで購 入し、 1週間の予備飼育） を用い、 慢性関節リウマチ動物モデルであるカラゲナ ン誘発足浮腫モデルを次のように作製し、 被験薬を評価した。
実験開始 1 8時間前から絶食したラットに蒸留水 （大塚製薬社製） で 1 0、 1 0 Omg/m 1 となるように調製した GMを、 1 Om 1 Zk gの投与量で経口投 与した。
被験薬投与 0. 5時間後に生理食塩水 （大塚製薬社製） に懸濁して 1 %の濃度 に調整した力ラゲナン （ヮコ一社製） を 1 00 μ 1ノラットで右足足躕に注射し 、 足浮腫を惹起した。 力ラゲナン注射 3時間後にラッ トの右足容積をラッ ト足容 積測定装置 （ゥゴバジ一ル社製） で測定した。 なお測定値は力ラゲナン投与前に 測定した各ラッ トの右足容積から増加率を算定して表示した。
結果を図 3 1に示す。 すなわち図 3 1は GM量と足浮腫増加率の関係を示す図 であり、 縦軸は増加率 （％) 、 横軸は GM投与量 （mgZk g) を示す。
GMは 1 0 OmgZk gの投与量から有意な抑制作用を認めた。
また CM、 GD、 CD、 またはこれらの各ジァステレオマー、 GMの各ジァス テレオマーについても同様の結果を得た。
実施例 1 0
GMの N O産生抑制活性及び細胞障害抑制活性をマウスマクロファージ細胞株 RAW264.7細胞 （ATCC TIB 71) 及び L P Sを用い、 以下のように測定した。
1.5 X106 個の RAW264.7細胞を含む 5ml の 10%ゥシ胎児血清 （ギブコ社製） 含 有フエノールレッド不含 2mMいグルタミン （ライフテックオリエンタル社製、 25 030-149 ) 含有ダルベッコ改良イーグル培地 （ライフテックオリエンタル社製、 11054-020 ) を、 6穴の組織培養プレートにおいて 5%炭酸ガス存在下 37°Cで 12 時間培養した後、 50 1 の 50^g/ml LP S (シグマ社製、 L - 2012) を加え、 各 々のウエノレに各々 50μ 1 の 250 μΜ GM又は 100 μΜ GMを加えて、 更に 12時間 培養した後、 NOが培地中で酸化されることによって生ずる N02— 及び生細胞数の 測定を行った。 なお、 対照として L P Sを加えない区及び GMを加えない区を設 定した。
N02— の測定には各ゥエルから 100 μ 1 の培養上清を分離し、 10/zl の 50μ8/ ml 2， 3 —ジァミノナフタレン （同仁化学研究所社製、 341 - 07021 ) 溶液 （0.62 N 塩酸溶液） を加え室温で 15分間放置し、 5 μ 1 の 2.8 Ν水酸化ナトリゥム水溶 液を加え、 生じたナフタレントリアゾールの蛍光をタイターテックフルォロスキ ヤン II (大日本製薬社販売） を用いて励起波長 355ηπι 、 測定波長 460nm にて蛍光 測定した。 実験はすべて 2連で行い、 この平均値から L P S非添加の対照値を控 除して、 L P S添加区分の値に対する各区分の相対値で比較した。 その結果、 GMは L P Sにより RAW264.7細胞に誘導される NO産生を抑制し、 更 に、 LP Sによる RAW264.7細胞に対する細胞障害を抑制した。
その結果を図 32、 図 33に示す。 図 32は培養液中の GM濃度と N02— 濃度 の関係を示す図であり、 縦軸は N02_ 濃度の相対値 （％) を示す。 図 33は GM 存在下の培養時間と生細胞数の関係を示す図であり、 横軸は培養時間 （時間） 、 縦軸は培養液 5ml中に含まれる生細胞数 （X105/5ml ) を示す。 図 33において 、 白四角 （口） は L P S非添加を、 白ひし形 （◊) は L P S添加を、 白丸 （〇） は 2.5 μΜ GM添加を、 白三角 （△) は 2.5 μΜ GM+LP S添加を、 黒四角 （ ■) は 1 μΜ GM+ L P S添加を表す。
以上、 GMは NO産生抑制作用を示した。 また CM、 GD、 CD、 またはこれ らの各ジァステレオマー、 GMの各ジァステレオマーについても同様の結果を得 た。
実施例 1 1
慢性関節リゥマチ患者の滑膜から樹立された線維芽細胞株である DS EK細胞 (埼玉医科大学総合医療センター第 2内科保存細胞株） を 1 0%ゥシ胎児血清 （ F B S、 ギブコ社製、 26 1 40— 079) 含有ィスコブ改変ダルべッコ培地 （ I MDM、 ギブコ社製、 1 2440— 053) で 5%炭酸ガス存在下、 3 7でで コンフルェントになるまで培養し、 トリプシン一 EDT A (ギブコ社製、 253 00— 054) で細胞をはがして集めた。 この細胞を 25000個/ m 1 となる ように上記培地に懸濁し、 96穴マイクロタイタ一プレートの各ゥヱルに 100 μ 1ずつ分注した。 培養 5日後、 ほぼコンフルェントになった時点で培地を捨て 、 2. 5、 5、 1 0、 20又は 3◦ μΜの GMを含有する上記培地を加えた。 2 4時間、 48時間又は 72時間培養後、 1 0 μ 1のプレミックス WS Τ— 1 (宝 酒造社製、 ΜΚ400) を加えて 37°Cで 4時間反応させ、 450 nmにおける 吸光度 （A45。） から 650 nmにおける吸光度 （Aes。） を差し引いた値を細胞 増殖度とした。
その結果は表 4の通りであった。 表 4 濃度 ( H Μ) A 450 ― Α β 5 0
2 4時間 4 8時間
0 0 . 8 4 6 1 . 2 7 0
2. 5 0 . 7 6 8 1. 1 3 3
5 0 . 6 2 1 0. 9 4 2
1 0 0 . 4 2 0 0. 4 8 6
2 0 0 . 2 3 8 0. 1 8 5
3 0 0 . 2 4 1 0. 1 9 6
2 4時間培養、 4 8時間培養ともに 5 以上の GMを添加した区分で水添加 の対照に比べて細胞増殖が抑制されており、 1 0 /ζ Μの GMを添加した区分でァ ポトーシスの小体の形成が見られた。 2 0 μ Μ以上の GMを添加した区分では生 細胞はほとんど見られなかった。
以上、 GMは滑膜細胞にアポトーシス銹発作用、 増殖抑制作用を示した。 また CM、 GD、 CD、 またはこれらの各ジァステレオマー、 GMの各ジァステレオ マーについても同様の結果を得た。
実施例 1 2
( 1 ) ヒ ト T細胞性白血病細胞株である J u r k a t細胞 （AT C C T I B - 1 5 2) 及び M o 1 t - 3細胞 （AT C C CR L— 1 5 5 2) を 1 0 %ゥシ 胎児血清 （F C S、 バイオウイタカ一社製） を含む R PM I 1 6 4 0培地 （ギブ コ B R L社製） にて、 5 % C02 存在下、 3 7°Cで培養し、 0、 5、 1 0又は 2 0 M の GMを含む上記培地に 5 X 1 05 個/ m 1になるように細胞を懸濁し 、 2 4時間培養した。 細胞増殖は MTT法 〔モスマン （Mo s m a n n) ら、 ジ ヤーナノレ ォブ ィムノロジカノレ メソッズ ( J . I mm u n o 1 . M e t h o d s ) 、 第 65卷、 第 55〜 63頁 （1 983) 〕 を用い、 細胞増殖度を 560 n mにおける吸光度で測定した。
その結果、 水添加の対照に比べて両細胞株とも 1 Ο μΜ GM添加区分では約 5 0%、 20 μΜ GM添加区分では 75 %以上、 細胞増殖が抑えられた。 5 Μ以 下の GMを添加しても細胞の増殖に有意な影響はなかった。
以上のように、 GMは Τ細胞性白血病細胞株である J u r k a t細胞及び Mo 1 t一 3細胞の増殖を濃度依存的に抑制した。
その結果を図 34と図 35に示す。 すなわち、 図 34は J u r k a t細胞の増 殖に対する GMの影響を示す図であり、 図 35は Mo 1 t— 3細胞の増殖に対す る GMの影響を示す図である。 図 34と図 35において、 横軸は GMの濃度 （ μ Μ ) を、 縦軸は 560 nm における吸光度を示す。
(2) J u r k a t細胞及び Mo 1 t— 3細胞におけるファス抗原発現 （産生 誘導） に対する GMの影響を以下のようにして測定した。 0、 1、 5、 1 0又は 20 / M のシク口ペンテノン又は GMを含む 1 0 %F C S含有 R PM 1 1 640 培地で 5 X 1 05 個 Zm Iの J u r k a t細胞又は M o 1 t— 3細胞を 5 % C 02 存在下、 3 7。Cで 24時間培養し、 ムンカー （Mu n k e r , R. ) の方法 〔アナルズ ォブ へマト口ジー （An n. H e m a t o 1. ) 第 70卷、 第 1 5〜1 7頁 （1 995) 〕 に従って抗ファス抗体 （ベーリンガー ·インゲルハイ ム社製） を用いて、 2ステップ免疫染色した。
染色した細胞 1 X 1 04 個の蛍光強度をフローサイ トメ一ター （ォーソサイ ト ロン ： ォ一ソ · ダイァグノティック · システムズ社製） を用いて測定し、 一定値 以上の蛍光強度を示す細胞をファス抗原発現細胞としてその比率を計算した。 その結果、 両細胞株において、 GMを添加した場合には 1〜 1 0 Μの範囲で ファス抗原発現細胞の比率が濃度依存的に上昇し、 20 μΜ添加では 1 Ο μΜと 同程度であった。
その結果を図 36と図 3 7に示す。 すなわち図 36は Mo 1 t— 3、 図 37は J u r k a t細胞におけるファス抗原の発現を示す図である。 図 36と図 37に おいて横軸は GMの濃度 （μΜ) 、 縦軸はファス抗原発現細胞の比率 （％) を示 し、 GMによるファス抗原産生誘導作用が認められた。
(3) 1 0 μ M GMを添加して実施例 1 2— (2) と同様の条件で M o 1 t 一 3細胞を 1、 3、 6、 1 2又は 24時間培養し、 実施例 1 2— (2) と同様の 方法でファス抗原発現細胞の比率を測定した。
その結果、 1 0 /iM GMを添加した場合、 ファス抗原発現細胞の比率は培養 1 2時間後に上昇し、 24時間では更に上昇した。
その結果を図 38に示す。 すなわち図 38は M o 1 t - 3細胞に 1 0 μ M G Μを添加して培養したときのファス抗原発現細胞の比率の変化を示す図であり、 横軸は培養時間 （時間） 、 縦軸はファス抗原発現細胞の比率 （％) を示す。
以上、 実施例 1 2に記載のように GMによるファス抗原産生誘導作用が確認さ れた。 また CM、 GD、 CD、 またはこれらの各ジァステレオマー、 GMの各ジ ァステレオマーについても同様の結果を得た。
実施例 1 3
KK— Ay マウス （ォス、 4週令） を日本クレア社より購入し、 10週令まで 飼育後、 GMを 2 1 日間経口投与して、 血糖、 血中インスリ ン及び脂質に及ぼす 影響を検討した。 GMは 30、 100、 30 OmgZk gの用量を用いた。 血糖 値は GM投与の各群で低下した （図 39) 。 血清インスリ ン値は GM投与の各群 で低下した （図 40) 。 血清脂質に対して、 血清総コレステロール値は GM投与 群で低下し （図 4 1 ) 、 血清トリグリセリ ド値は GM投与群で低下し （図 4 2) 、 血清遊離脂肪酸値は GM投与群で低下した （図 43) 。
すなわち図 39は GM投与量と血糖値の関係を示す図であり、 図中縦軸は血清 グルコース値 （mgZd l) 、 横軸は GM投与量 （mgZk g) を示す。 図 40 は GM投与量と血清インスリン値の関係を示す図であり、 図中縦軸は血清インス リン値 （μ UZm 1 ) 、 横軸は GM投与量 （m g,k g) を示す。 図 4 1は GM 投与量と血清総コレステロール値の関係を示す図であり、 図中縦軸は血清総コレ ステロール値 （mgZd 1 ) 、 横軸は GM投与量 （mgZk g) を示す。 図 42 は GM投与量と血清トリグリセリ ド値の関係を示す図であり、 図中縦軸は血清ト リグリセリ ド値 （mg/d 1 ) 、 横軸は GM投与量 （mgZk g) を示す。 図 4 3は GM投与量と血清遊離脂肪酸値の関係を示す図であり、 図中縦軸は血清遊離 脂肪酸値 （μ Ε ςΖリットル） 、 横軸は GM投与量 （m gZk g) を示す。 なお 図中 * はターキーズ マルチプル 比較試験により、 GM無投与群に対する有意 差 p < 0. 0 5を、 **は pく 0. 0 1を意味する。
なお動物は生理食塩水 （5 m 1 Zk g) 、 GMの 3 0、 1 0 0、 3 0 0 m g /
5 m 1 / k gの 4群構成で、 各群 1 0例とした。 各試験物質は 1 日 1回 2 1 日間 経口投与し、 最終投与日に、 試験物質投与 4時間後にエーテル麻酔し、 下腹部大 静脈より採血した。 血清インスリ ンは、 酵素—免疫法 （市販キット ： グライザム インスリン一 E I AT E S T、 和光純薬社製） にて測定した。 血清中の糖、 トリ グリセリ ド及ぴ遊離脂肪酸は、 それぞれへキソキナーゼー G 6 P DH法、 G P O
- DAO S法及び A C S · A C O D法で自動分析装置 （ 7 0 7 0形： 日立製作所 製） を用い測定した。 血清総コレステロール値はコレステロール—ォキシダ一ゼ
• D AO S法で自動分析装置 （7 0 7 0形： 日立製作所製） を用い測定した。 以上の結果より GMに血糖、 インスリ ン及び脂質低下効果が認められた。 また CM、 GD、 CD、 またはこれらの各ジァステレオマー、 GMの各ジァステレオ マーについても同様の結果を得た。
実施例 1 4
( 1 ) 2 X 1 05 cells/mlの HL-60 (ATCC CCL-240) を含む 10%牛胎児血清含 有 RPMI1640培地 5ml を 6穴プレートの各ゥエルに入れ、 37°C、 5%C02 存在下で 24 時間培養した後、 最終濃度が、 0、 0.5、 1.0、 3.0、 5.0、 10.0、 20.0 μ Μ になる ように GMを添加し、 更に 8時間培養を続けた。
培養終了後、 細胞数を計測した後、 細胞を遠心分離で回収し、 P B Sで洗浄し て、 GM処理細胞を調製した。 また、 45°C、 10分間熱処理を行った後、 同様に培 養した細胞も調製した。
これらの処理細胞を用い、 モレキュラー クローニング （Molecular Cloning) 〔コーノレド スプリング ハーバ一 ラボラ トリー プレス （Cold Spring Harb or Laboratory Press) ( 1989 ) 〕 記載の方法に従って SDS- PAGEを行った。 処理 細胞は、 2. 5 X 1 06 eel Is/mlになるように SDS- PAGE Sample bufferに懸濁し 、 この細胞懸濁液を 100 °Cで 10分間処理した後、 5μ 1 ずつを 2枚の SDS-PAGEゲ ル （5%スタツキングゲル、 10%セパレーシヨンゲル） にアプライし、 電気泳動を 行った。 一方のゲノレは、 クマシ一ブリ リアントブノレー R 2 5 0で染色し、 他方の ケノレ a、 Polyvinyl idene aif luoride transfer membrane し丄 mraobi lonTM ： リ ポア （MILLIPORE ) 社製 Cat. IPVH000 - 10 〕 にブロッテイングした。 このメン ブレンを Block Ace (大日本製薬株式会社 Cat.# UK-B25 ) で 4°Cー晚ブロッキ ングした。
このブロッキングしたメンブレンに熱誘導される 70kDa の熱ショックタンパク と特異的に反応するモノクローナル抗体 HSP 72/73(Ab-l) 〔オンコジーン リサ ーチ プロダクツ （Oncogene Research Products) 社製 Cat. # HSP01] を反応さ せた後、 0.05% Tween20 を含む T B Sで洗浄し、 更に、 T B Sで洗浄した。 次い で、 Peroxidase複合二次抗体 HRP-RabbitAnti Mouse IgG (H+L) [ZYMED ラボラト リース社 (ZYMED Laboratories, Inc. ) 製 Cat. it 61-6520〕 を反応させ、 先の操 作と同様に洗浄した。 このように一次抗体、 二次抗体と反応させたメンブレンに 、 ケミルミノール試薬 RENAISSANCETM 〔デュポン NEN (Dupont NEN ) 社製 C at.U NEL-100] を反応させた後、 X線フィルムで感光して 70kDa の熱ショックタ ンパクの誘導を検出した。
その結果、 GMの添加により 70kDa の熱ショックタンパクの誘導が認められた 。 その誘導の強弱は表 5に示した。 なお表 5中、 +は誘導の強さを表し、 +が多 いほど誘導が強いことを意味する。 また一は誘導が認められなかったこと、 土は 誘導がわずかであることを意味する。
表 5
Figure imgf000066_0001
表 5に示すように GMに HSP70 の誘導能があることが明らかになった。
(2) 最終濃度が、 0 、 10、 20、 30、 40、 50μΜ になるように CMを培養細胞 に添加し、 実施例 1 4一 ( 1 ) 記載の方法で H S P 70の発現を測定した。 その結果、 CMによる 70kDa の熱ショ ックタンパクの誘導が確認された。 その 誘導の強弱は表 6に示した。 なお表 6中、 +は誘導の強さを表し、 +が多いほど 誘導が強いことを意味する。 また一は誘導が認められなかったこと、 土は誘導が わずかであることを意味する。
表 6
Figure imgf000067_0001
以上、 実施例 1 4に示す様に、 GM、 CMは熱ショックタンパク誘導作用を示 した。 また GD、 CD、 またこれらの各ジァステレオマー、 GM、 CMの各ジ ァステレオマーについても同様の結果を得た。
実施例 1 5
2 X 1 05 個 1の C EM— S S細胞 （ATCC CCL— 1 1 9) と H I V - 1 I , , B に感染した C EM— S S細胞 （細胞の 90%以上が H I V- 1 , , .
B に感染している ： C EM— 3 Bと略称する） に 0、 4、 8、 1 6 μΜの GM を添加して 1 日間培養し、 生細胞数と死細胞数を計数して細胞生存率を算出した 。 その結果、 0、 4、 8 μ Μになるように GM [を添加した場合、 CEM—S S 細胞は生存率が低下していないのに対し、 CEM— 3 Β細胞は添加した GMの濃 度に依存して生存率が顕著に低下した。 更に、 1 6 Μの添加では、 CEM— S S細胞の生存率も低下したが、 それ以上に、 C ΕΜ— 3 Β細胞の生存率は、 著しく低下していた。 すなわち GMは抗 H I V作用を示した。
その結果を図 44に示す。 すなわち、 図 44は添加した GM濃度と細胞生存率 の関係を示す図であり、 横軸は添加した GM濃度 （/ Μ) 、 縦軸は 1 日間培養後 の細胞生存率 （％) を示す。 白四角は CEM— S Sを用いた場合の結果であり、 黒丸は CEM— 3 B細胞を用いた場合の結果である。
(2) 実施例 1 5— (1) 記載の CEM— 3 B細胞を 1 日間培養した後の培養 上清中に含まれる P 24抗原の濃度を測定した。 その結果、 添加した GM濃度に 応じて p 24濃度が減少し、 抗 H I V作用が認められた。 その結果を図 45に示 す。 すなわち図 45は添加した GM濃度と培養上清中の p 24生産量の関係を示 す図であり、 横軸は GM添加量 （/ M) 、 縦軸は p 24生産量 （n gZm 1 ) を 示す。
以上、 実施例 1 5に示すように GMは H I V感染細胞に対して選択的に殺細胞 効果を示し、 H I Vに対して抗ウィルス作用を示した。 また CM、 GD、 CD、 またはこれらの各ジァステレオマー、 GMの各ジァステレオマーについても同様 の結果を得た。
実施例 1 6
(1) G418耐性遺伝子を発現するコントロールプラスミ ド pcD2- Y [Mol. Cell. Biol. 第 7卷、 第 2 745〜 2752頁 （1 987) ] 、 および HPV16型 E7と G4 18耐性遺伝子の両方を発現できるプラスミ ド pcD2- 16E7 [Jpn. J. Cancer Res. 第 82卷、 第 1 340〜 1 343頁 （1 99 1) ] で大腸菌 E. coli HB101 に形 質転換し、 し-ブロス培地で培養し、 集めた菌体よりプラスミ ドを抽出し、 塩化セ シゥム密度勾配超遠心にて精製し、 遺伝子導入用ベクタープラスミ ドとした。
NIH3T3細胞は 37°C、 5%C02条件下、 10%仔ゥシ血清含ダルベッコ改変イーグル 培地中にて培養した。
精製したプラスミ ド lOj gを NIH3T3細胞にカチォニックリボソーム （TransIT L T - 1, 宝酒造社製） を用いて導入し、 細胞を 3 7°C、 5%C02条件下、 G418 (GIBC0 ) を 0.4mg/ml含む 10%仔ゥシ血清含ダルべッコ改変ィーダル培地で 2週間選択し 、 得られたコロニーをクローニングして、 コントロールベクタ一を導入した NIH3 T3細胞、 及び HPV16型 E7によってがん化させた NIH3T3細胞をそれぞれ 9株ずっ樹 立した。
コントロールベクターを導入した細胞株を NIH3T3/Y-1、 NIH3T3/Y - 2、 NIH3T3/Y -3、 NIH3T3/Y- 4、 NIH3T3/Y- 5、 NIH3T3/Y- 6、 NIH3T3/Y- 7、 NIH3T3/Y- 8および NIH3 T3/Y - 9とした。
E7を導入した細胞株を NIH3T3/E7-1、 NIH3T3/E7 - 2、 NIH3T3/E7- 3、 NIH3T3/E7-4 、 NIH3T3/E7- 5、 NIH3T3/E7-6, NIH3T3/E7- 7、 NIH3T3/E7 - 8および NIH3T3/E7 - 9と した。
( 2 ) NIH3T3細胞、 コントロールベクターを導入した細胞株、 および E7を導入 した細胞株を 100隱の組織培養プレートにて 10%仔ゥシ血清含ダルべッコ改変ィ一 ダル培地で 50〜70%コンフルェントにまで增やし、 PBSで洗浄後、 0. 25%トリプ シン- EDTA溶液で細胞を剥がし、 10%仔ゥシ血清含ダルベッコ改変イーグル培地 5m 1に懸濁した。
懸濁液の一部をとり、 ノィバウエル型血球計算板にて細胞密度を計算した。 得 られた数字を元に 10%仔ゥシ血清含ダルベッコ改変イーグル培地にて希釈し、 直 径 60mmの組織培養プレートに 200細胞/プレ一トになるように播き、 3mlの培地中 で培養を開始した。 培養開始から 24時間後、 G Mを 5 μ Μになるように添加した。 さらに 24時間後、 新しい培地と交換し G Mを 5 μ Μになるように添加した。
以後は 2〜 3日毎に培地を交換し G Μを 5 μ Μになるように添加した。 対照実験区 として、 G Mを添加しないプレートを用意し、 同じように培養した。 培養はそ れぞれ 3連で行った。 9日間培養後、 メタノールで固定してギムザ液 （GIBC0) で コロニーを染色した。
なお ΝΙΗ3Τ3、 ΝΙΗ3Τ3/Υ- 1および ΝΙΗ3Τ3/Ε7-2を用いて評価した。
染色したコロニーを計数した結果を表 7に示す。 Ε7を導入した細胞は、 コント ロール細胞に比べて G Mへの感受性が高く、 G Mはがん遺伝子形質転換細胞に選 択的に作用した。 また C M、 G D、 C D、 またはこれらの各ジァステレオマー、 G Mの各ジァステレオマーについても同様の結果を得た。 表 7
Figure imgf000070_0001
実施例 1 7
( 1 ) トポイソメラーゼ Π [トポジ工ン （T o p o G EN) 社製、 2単位 1 ] 2 μ 1 、 1 0倍濃度緩衝液 [0. 5 Μ T r i s — HC 1 (p H 8. 0) 、 1 . 2 M KC 1 、 0. 1 M M g C 1 5 mM アデノシン三リン酸、 5 m M ジチオスレィ トール] 2 μ 1、 0. 1 % ゥシ血清アルブミン （宝酒造社 製） 2 1、 蒸留水 1 1 1及び対照の蒸留水又は試料 （5 0、 1 0 0、 2 0 0、 5 0 0、 1 0 0 0又は 2 5 0 0 Μの GM) 2 μ 1を混合したものに、 0. 2 5 μ g/ μ 1 p B R 3 2 2 DN Α (宝酒造社製） Ι μ ΐを添加して 3 7°Cで反応させた。 3 0分間反応後、 1 % ドデシル硫酸ナトリゥム、 5 0 % グリセ口ール、 0. 0 2 % ブロモフヱノールブルー水溶液 2 μ 1を添加し て反応を停止した。
ァガロース L 0 3 (宝酒造社製） と ΤΑΕ緩衝液 [4 0mM T r i s , 5 m M 酢酸ナトリウム、 1 mM エチレンジァミン四酢酸ニナトリウム （EDTA ) 、 酢酸で ρ Η 7 · 8に調整] を用いて作製した 1 % ァガロースゲルに上記反 応液 2 0 μ 1 をアプライし、 ΤΑΕ緩衝液中で電気泳動を行った。 泳動後、 ゲ ルを 1 μ g/ 1 ェチジゥムブ口ミ ド水溶液に浸潰し、 紫外線を照射して DN A電気泳動パターンを観察した。 なお、 水添加の対照では DN Aが超らせん型か ら弛緩型に完全に変化するが、 トポイソメラ一ゼ π活性が阻害されると超らせん 型から弛緩型への変化が一部又は完全に阻害される。
その結果を表 8に示す。
表 8
Figure imgf000071_0001
水添加の対照では DNAが超らせん型から弛緩型に完全に変化したが、 1 Ο μ Μ以上の GM濃度で DN Αの超らせん型から弛緩型への変化が一部又は完全に阻 害され、 GMのトポイソメラーゼ Π阻害活性が確認された。 表 8において、 一は 超らせん型から弛緩型に完全に変化していることを、 +は中程度の、 + +は大半 の超らせん型が残っていることを、 + + +は超らせん型が全く減少していないこ とを示す。
(2) 実施例 1 7— （1) と同様の方法で GMのトポイソメラ一ゼ I阻害活性を 測定した。 但し、 トポイソメラーゼ Πの代わりにトポイソメラ一ゼ I [トポジェ ン社製、 0. 0 1単位 1 ] 、 1 0倍濃度緩衝液として 1 0 OmM T r i s -HC 1 ( p H 7. 9) 、 1 OmM EDTA、 1 mM スぺノレミジン、 50% グリセロールを用いた。 また、 試料として最終濃度 1 mMとなるよう GMを添 加した。
その結果、 1 mM GMでトポイソメラーゼ Iは阻害された。 以上、 正常細胞では分裂期のみに一過的に発現しているが、 がん化により全細 胞周期を通じて高発現するようになる トポイソメラーゼ Πや、 がん化により発現 量や活性が増大するトポィソメラーゼ Iに対し、 GMは阻害活性を示した。 また CM, GD、 CD、 またはこれらの各ジァステレオマー、 GMの各ジァステレオ マ一についても同様の結果を得た。
実施例 1 8
C57BL/6 マウス （メス、 5週齢、 体重約 20 g) は日本 S LCより購入し、 1 週間の予備飼育の後、 実験に用いた。 遅延型過敏反応の惹起抗原であるヒッジ赤 血球 （清水実験材料） を生理食塩水 （大塚製薬） で 3回洗い 1 X 109cells/ml に調製し、 200 μ 1 をマウスの腹腔内に注射して抗原感作した。
感作から 5日後に同様に調製した抗原 40 μ 1を右足足躕に注射して抗原誘発 し、 足浮腫を惹起した。 GMは 1群 5匹のマウスに抗原感作日から 1 日 1回、 3 日間腹腔内に 3 OmgZk g又は 300mgZk gを投与した。
抗原誘発から 2日後にマウスの右足容積を足浮腫測定装置 （ゥゴバジル社） で 測定し、 遅延型過敏反応の指標とした。 測定値は抗原誘発前に測定したマウスの 右足容積からの増加率を算定して表示した。
結果を図 46に示す。 すなわち図 46は GMの遅延型過敏反応抑制作用を示す 図であり、 縦軸は増加率 （％) 、 横軸は GM投与量 （mg/k g) を示す。
GMは 30、 300 m g/k gの投与で有意な遅延型過敏反応抑制作用を示し た。 また CM、 GD、 CD、 またはこれらの各ジァステレオマー、 GMの各ジァ ステレオマ一についても同様の結果を得た。
実施例 1 9
1群 5匹の 5週令の W i s t e r系雄性ラット （日本エスエルシ一社） に、 卵 白アルブミン （シグマ社） の 0. 0 1 %生理食塩水溶液 ΙΟΟμ 1及びァラム（Alum ) [商品名ィムジェク ト ァラム（Imject Alum) ； ピアス社] 100 μ 1を腹腔内投 与して感作し、 その 1 4日後に腹大静脈より血液を採取した。
採取した血液は遠心分離 （2000rPm， 5分） 後、 血漿を分離し、 48時間ラッ ト受身皮膚アナフィラキシー （PCA) 反応で抗原特異的 IgE量を測定した。 すなわち血漿の倍々希釈系列を 4倍から 64倍まで、 生理食塩水を用いて作製 し、 毛刈り した 7週令の W i s t e r系雄性ラッ トの背部に皮内に◦. 1 m 1ず つ注射した。 皮内注射の 48時間後、 0. 05 %卵白アルブミン及び 0. 5%ェ バンスブルー （ナカライテスク社製） の混液 1 m 1尾静脈より注射した。 尾静脈 注射 30分後、 ラッ トを断頭、 放血死させ、 背部に現れた青色スポッ トを観察し 、 直径 5mm以上のスポットを陽性とし、 最高希釈度を I g E力価として表した
GM投与群は抗原感作日から 3日間、 3mg //k gあるいは 3 Omg/k gの GMを 1 日 1回腹腔内投与した。 また対照群では蒸留水を同様に腹腔内投与した 。 その結果を表 9に示す。
9
I g E力価 対照群 64
GM 3 m g / k gZ日 32
GM 30m g/k 日 8 卵白アルブミン感作による抗原特異的 IgE量の上昇は用量依存的に GMの投与 により抑制された。 CM、 GD、 CD、 またはこれらの各ジァステレオマー、 G Mの各ジァステレオマーについても同様の I g E産生抑制活性が認められた。 実施例 20
注射剤
(1) 生理食塩液 （日本薬局方収載品） に CMを 1 %濃度で加え注射剤を作製 した。
(2) 生理食塩水 （前記と同じ） に、 GM及びグリシルリチン酸をそれぞれ 0 • 5%及び0 1 %濃度で加え、 注射剤を作製した。
実施例 2 1 錠剤
( 1 ) C Dの 1 0 O m gと微結晶性セルロースの適量とを含有する錠剤を調製 し、 糖衣を施し、 錠剤を作製した。
( 2 ) G Dの 0 . l m g、 グリシルリチン酸ジカリウム 1 O m g及び微結晶セ ルロースの適量を含有する錠剤を調製し、 糖衣を施し、 錠剤を作製した。
実施例 2 2
軟膏
G M 1 g
吸水軟膏 （日本薬局方収載） 9 9 g
G Mをまず少量の吸水軟膏と十分に練り合せ、 次いで残った吸水軟膏を徐々に 加えて均一になるまで練り合せて軟膏を作製した。
この軟膏は 1 日 4〜5回患部に塗布される。
発明の効果
本発明により制がん作用、 がん細胞増殖抑制作用、 がん細胞分化誘導作用、 ァ ポトーシス誘発作用、 抗菌作用、 抗ウィルス作用、 肝機能改善作用、 腫瘍壊死因 子産生抑制作用、 N O産生抑制作用、 抗リウマチ作用等の種々の生理活性を有す る本発明の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩が提供され、 かつ、 こ れらの化合物から選択される少なくとも 1以上の化合物を有効成分として含有す る医薬が提供される。 該医薬はこれらの化合物に感受性を示す疾患の治療剤又は 予防剤として有用であり、 特に生体防御剤、 例えば抗アレルギー剤、 抗リウマチ 剤、 糖尿病治療剤、 制がん剤、 抗病原微生物剤、 例えば抗ウィルス剤、 抗菌剤、 免疫調節剤等として有用である。
また本発明により、 食品又は飲料中に生理活性を有する本発明の化合物若しく はその光学活性体又はそれらの塩の適量を含有させることが可能となった。 これ らの化合物が有する種々の生理活性、 制がん作用、 分化誘導作用、 異常細胞の増 殖抑制作用、 アポトーシス誘発作用、 抗ウィルス作用、 抗菌作用、 肝機能改善作 用、 免疫調節作用等によって、 本発明により提供される食品又は飲料は発がん予 防効果、 制がん効果、 ウィルス性疾患予防効果、 抗菌効果、 アポトーシス誘発作 用等の生体の恒常性 （ホメォスタシス） 維持機能を有する健康食品又は飲料であ り、 本発明により、 胃腸健康保持に有用な機能性物質入りの食品又は飲料が提供 される。

Claims

請 求 の 範 囲
1. 下記一般式 【 I】 で表される化合物若しくはその光学活性体又はそれらの 塩。
【 I 3
R
Figure imgf000076_0001
(式中、 5員環内の点線で示した結合子は、 当該 5員環が、 二重結合を有するシ ク口ペンテン環、 或いはそれが飽和されたシク口ペンタン環のいずれでもよいこ とを意味する。 そして、 シクロペンテン環の場合、 Xは O H、 Yは =〇、 Zは H であり、 他方シクロペンタン環の場合、 Xは =〇、 Yは O H、 Zは O Hである。 また Rは S H基含有化合物から S H基を除いた残基である）
2. 下記一般式 【Π】 で表される請求の範囲 1記載の化合物若しくはその光学 活性体又はそれらの塩。
【Π】
Figure imgf000076_0002
(但し、 Rは S Η基含有化合物から S Η基を除いた残基である）
3. 下記一般式 【m】 で表される請求の範囲 1記載の化合物若しくはその光学 活性体又はそれらの塩。
【m】
Figure imgf000076_0003
(但し、 Rは S H基含有化合物から S H基を除いた残基である）
4. S H基含有化合物が S H基含有アミノ酸又はその誘導体である請求の範囲 1〜3のいずれか 1項に記載の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩。
5. S H基含有化合物がシスティン又はダルタチオンである請求の範囲 4に記 載の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩。
6. 下記式 【IV】 で表される 4， 5—ジヒ ドロキシ一 2—シクロペンテン一 1 一オン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される化合物と、 S H基 含有化合物を反応させることを特徴とする下記一般式 【 I】 で表される化合物若 しくはその光学活性体又はそれらの塩の製造方法。
【 I】
Figure imgf000077_0001
(式中、 5員環内の点線で示した結合子は、 当該 5員環が、 二重結合を有するシ クロペンテン環、 或いはそれが飽和されたシクロペンタン環のいずれでもよいこ とを意味する。 そして、 シクロペンテン環の場合、 Xは O H、 Yは = 0、 Zは H であり、 他方シクロペンタン環の場合、 Xは =〇、 Yは O H、 Zは O Hである。 また Rは S H基含有化合物から S H基を除いた残基である）
【IV】
Figure imgf000077_0002
7. 一般式 【 I】 で表される化合物が下記一般式 【Π】 で表される化合物であ る請求の範囲 6記載の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩の製造方法 【n】
Figure imgf000078_0001
(但し、 Rは S H基含有化合物から S H基を除いた残基である）
8. 酸性下で反応させることを特徴とする請求の範囲 7記載の製造方法。
9. 一般式 【 I】 で表される化合物が下記一般式 【m】 で表される化合物であ る請求の範囲 6記載の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩の製造方法
【III】
Figure imgf000078_0002
(但し、 Rは S H基含有化合物から S H基を除いた残基である）
10. 中性下で反応させることを特徴とする請求の範囲 9記載の製造方法。
11. S H基含有化合物が S H基含有アミノ酸又はその誘導体である請求の範囲
6〜1 0のいずれか 1項に記載の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩 の製造方法。
12. S H基含有化合物がシスティン又はグルタチオンである請求の範囲 1 1に 記載の化合物若しくはその光学活性体又はそれらの塩の製造方法。
13. 下記一般式 【 I】 で表される化合物若しくはその光学活性体又はそれらの 塩から選択される少なく とも一つの化合物を有効成分として含有することを特徴 とする医薬。 【 I】
Figure imgf000079_0001
(式中、 5員環内の点線で示した結合子は、 当該 5員環が、 二重結合を有するシ クロペンテン環、 或いはそれが飽和されたシク口ペンタン環のいずれでもよいこ とを意味する。 そして、 シクロペンテン環の場合、 Xは O H、 Yは =〇、 Zは H であり、 他方シクロペンタン環の場合、 Xは = 0、 Yは O H、 Zは O Hである。 また Rは S H基含有化合物から S H基を除いた残基である）
14. 下記一般式 【Π】 で表される化合物若しくはその光学活性体又はそれらの 塩から選択される少なくとも一つの化合物を有効成分として含有することを特徴 とする請求の範囲 1 3記載の医薬。
【Π】
R
Figure imgf000079_0002
(但し、 Rは S Η基含有化合物から S Η基を除いた残基である）
15. 下記一般式 【m】 で表される化合物若しくはその光学活性体又はそれらの 塩から選択される少なく とも一つの化合物を有効成分として含有することを特徴 とする請求の範囲 1 3記載の医薬。
【m】
R
Figure imgf000079_0003
(但し、 Rは S H基含有化合物から S H基を除いた残基である）
16. S H基含有化合物が S H基含有アミノ酸又はその誘導体である請求の範囲 1 3〜 1 5のいずれか 1項に記載の医薬。
17. S H基含有化合物がシスティン又はグルタチオンである請求の範囲 1 6に 記載の医薬。
18. 医薬が生体防御剤である請求の範囲 1 3〜 1 7のいずれか 1項に記載の医
19. 生体防御剤が抗アレルギー剤である請求の範囲 1 8記載の医薬。
20. 生体防御剤が抗リゥマチ剤である請求の範囲 1 8記載の医薬。
21. 医薬が糖尿病治療剤である請求の範囲 1 3〜 1 7のいずれか 1項に記載の
22. 医薬が制がん剤である請求の範囲 1 3〜 1 7のいずれか 1項に記載の医薬
23. 医薬がアポトーシス誘発剤である請求の範囲 1 3〜 1 7のいずれか 1項に 記載の医薬。
24. 医薬が抗病原微生物剤である請求の範囲 1 3〜 1 7のいずれか 1項に記載 の医薬。
25. 抗病原微生物剤が抗菌剤である請求の範囲 2 4記載の医薬。
26. 抗病原微生物剤が抗ウィルス剤である請求の範囲 2 4記載の医薬。
27. ウィルスがヒ ト後天性免疫不全ウィルス、 又は C型肝炎ウィルスである請 求の範囲 2 6記載の医薬。
28. 抗ウィルス剤がヒ ト用抗ウィルス剤、 非ヒ ト動物用抗ウィルス剤又は植物 用抗ウィルス剤である請求の範囲 2 6記載の医薬。
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