WO1998045700A3 - Procede de sequençage de biopolymeres par spectrometrie de masse - Google Patents
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Abstract
L'invention concerne un nouveau procédé de séquençage de biopolymères par spectrométrie de masse. Le séquençage des biopolymères, ou bien demande du temps, ou bien nécessite une détermination précise des fragments, ce qui est difficile, principalement pour de longs polymères. La vitesse de l'hydrolyse des liaisons phosphodiester, peptide ou glycoside avec les exo/endo-nucléases, -peptidases, -glycosidases ou autres substances agissant par hydrolyse est utilisée, dans le procédé selon l'invention, pour l'analyse des séquences des acides nucléiques ou d'autres biopolymères. La séparation et la détection des fragments produits s'effectuent au moyen de la spectrométrie de masse, par détermination de la masse et des différentes intensités des pics. Le principal avantage du procédé réside dans le fait qu'il n'est plus nécessaire d'effectuer une détermination exacte de la masse et qu'on peut utiliser des spectromètres de masse à faible résolution; en outre, l'analyse et la séparation des fragments sont extrêmement rapides, du fait qu'il n'y a pas d'électrophorèse et que la séquence des acides nucléiques modifiés peut être déterminée. Comme autres avantages, il convient de mentionner que des acides nucléiques non marqués peuvent être utilisés et qu'aucune radioactivité n'est requise. Le procédé peut être conduit en parallèle avec une analyse de séquence concomitante de plusieurs acides nucléiques, ce qui accroît la vitesse de séquençage. Le procédé peut être en outre utilisé pour la détection et la détermination d'organismes (empreinte digitale, empreinte du pied), les empreintes digitales et du pied étant plus précises que dans les procédés antérieurs: les deux fragments scindés sont détectés après hydrolyse d'une liaison phosphodiester, tandis que dans les procédés antérieurs, on ne pouvait détecter qu'un fragment marqué. Enfin, le procédé peut contribuer à l'interprétation de la structure secondaire des acides nucléiques par spectrométrie de masse. Ces principes peuvent également s'appliquer au séquençage ou à la détermination de la structure secondaire d'autres biopolymères, par exemple, des peptides et des oligosaccharides.
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