WO1997038005A1

WO1997038005A1 - Nouvel antibiotique, procede de preparation et composition medicamenteuse contenant cet antibiotique

Info

Publication number: WO1997038005A1
Application number: PCT/JP1997/001221
Authority: WO
Inventors: Kenzo Harimaya; Yoshikazu Sato; Fukio Konno; Toru Sasaki; Mina Kanda; Noriko Chiba; Takashi Mikawa
Original assignee: Meiji Seika Kaisha, Ltd.; Mitsubishi Chemical Corporation
Priority date: 1996-04-10
Filing date: 1997-04-09
Publication date: 1997-10-16

Description

明細書新規抗生物質、その製法並びにそれを有効成分とする医薬組成物技術分野本発明は、抗真菌 ·高脂血症治療作用を有する新規抗生物質 MK 6059物質ならびにその抗真菌剤 ·高脂血症治療薬としての用途およびその製造法に関する。背景技術従来、微生物が生産する種々の生理活性物質が知られており、医薬品、化粧料、動物薬、農薬等の分野で実用化されているが、これら公知の化合物よりも有用な活性を有する新規物質の出現が常に要望されている。

本発明による抗生物質 MK 6059物質は、トリテルペン類あるいはステロイド類と考えられるが、これと類似する化合物として、 PF 1032 (特開平 3— 1 19993) 、エリロシド A CCa rme l yら、 J. Na t. P r o d. 5 2, No. 1. 167〜 170, 1989 )等が知られている力ヽ'、 MK 6059 物質はこれらの既知物質とは理化学的性状が異なり明確に区別される。発明の開示本発明は、微生物が生産する種々の公知の生理活性物質よりも有用な活性を有する新規物質を提供することを課題とする。

本発明者らは、エリシォド一シス（E l l i s i odo t h i s) 属菌に属する 1菌株の培養物中に抗真菌および抗高脂血症作用を有する物質が生産されていることを見いだした。本菌株の生産する有効物質を分離し、その物理化学的性質を明かにすることにより本発明を完成させた。

第一の本発明の要旨とするところは下記式（I)で表される物質及びその塩にある。式（I) で表される物質は新規物質であり、 MK 6059物質と命名され

第 2の本発明の要旨とするところは、小房子嚢菌に属し、 MK 6 0 5 9物質を生産する能力を有する微生物を培養し、その培養物から MK 6 0 5 9物質を採取することを特徴とする MK 6 0 5 9物質の製造方法にある。

第 3の本発明の要旨とするところは、 MK 605 9物質を有効成分とする医薬組成物にある。医薬組成物の用途としては、抗真菌剤及び高脂血症治療剤が挙げられる。以下、本発明を詳細に説明する。

< 1 >本発明の MK 6 0 5 9物質

本発明による MK 6 0 5 9物質の理化学的及び生物学的性状は次の通りである c

1. MK 6 0 5 9物質の理化学的性状

( 1 ) 元素分析値：

炭素 6 5. 8 9%

水素 8. 7 8 %

( 2 ) 分子量：

64 6 (FD -MS, m/ z 64 7, H⁺ )

( 3 ) 分子式：

C 37 H 58 ^ 9

( 4 ) 比旋光度：

[al D =+ 5 8. 7 7 ( c = 1. 0, メ夕ノール） ( 5 ) 紫外部吸収スぺクトル：

末端吸収

( 6 ) 赤外部吸収スぺクトル：

臭化力リゥム錠で測定したスぺクトルは図 1に示す通りである。

( 7 ) 水素核核磁気共鳴スぺクトル：

重メタノール溶液中で測定した 4 0 0 MH z水素核核磁気共鳴スぺクトルは図 2に示す通りである。

( 8 ) 炭素核核磁気共鳴スぺクトル：

重メタノール溶液中で測定した 1 0 0 MH z炭素核核磁気共鳴スぺク卜ルは図 3に示す通りである。

( 9 ) 溶解性：

クロ口ホルム、ジェチルエーテル、アセトン、酢酸ェチル、メタノール及びエタノールに可溶。 n—へキサン及び水に不溶。

( 1 0 ) 塩基性、酸性、中性の区別：

弱酸性物質この発明者らが発見した前記式（ I ) に示される MK 6 0 5 9物質の平面構造は、当該物質のマススぺクトル、 U Vスぺクトル、 I Rスぺクトル（図 1 ) 、 N MRスぺクトル（図 2、図 3 ) より確認した。

< 2 >MK 6 0 5 9物質の製造方法

上記のような構造を有する MK 6 0 5 9物質は、小房子嚢菌に属し、 MK 6 0 5 9物質を生産する能力を有する微生物を培養し、その培養物から MK 6 0 5 9 物質を採取することによって得られる。前記小房子囊菌に属する微生物としては、エリシォドーシス属に厲する微生物が挙げられる。また、エリシォドーシス厲に属する微生物としては、エリシォド一シス ·ィンキュイナンス（E 1 1 i s i 0 d o t h i s i n q u i n a n s ) が、具体的な菌株としては、本発明者により単離されたエリシォドーシス ·インキユイナンス L 1 2 2 7株が挙げられる。以下に、 L 1 2 2 7株の菌学的性状等を示す。 1. MK 6059物質生産菌の菌学的性状

偽襄殻は、宿主植物体上に散在あるいは、群生し、表在性であり、形状は半子嚢殻形、直径 300〜600;um、高さ 50〜 80〃mであり、上蓋中央の小円形孔口が開口する。

上蓋及び周縁部は放射状に並んだ細胞から成る。

殻壁は厚さ 15〜20 m、 3〜4層の多角形状あるいは四角形状の細胞から成り、外側は黒褐色、內側は淡褐色、薄膜である。

子襄は多数生じ、偽側糸を持ち、倒こん棒形〜円筒状倒こん棒形であり、大きさは 58. 5〜66. 0 x 26. 4〜33. 0 ^ mであり、基部に短柄を有し、厚膜で二重壁構造であり、 8胞子性である。

偽側糸は糸状、隔壁を有し、無色である。

子嚢胞子は子嚢上方で 1列、下方部で 2列に配列する。形状はだ円形であり、大きさは 15. 6〜18. 4 9. 3〜10. O^mであり、 1細胞性、無色、平滑である。

2. 各種培地上における培養上の特徴

ィ）ジャガイモ .ブドウ糖寒天培地（PDA)上、 27 、 10日間培養コロニーは 10日間で直径 5〜7 cmに拡がる。色調は、はじめ白色〜灰白色、しだいに茶灰色に変色する。コロニー裏面は黄褐色を呈する。基底菌糸は放射状に伸長し、分枝し、巾 6^mに至り、無色である。気生菌糸は豊富に形成される。 P D A上ではアナモルフ及びテレオモルフの生殖器官は観察されなかった。

口）麦芽寒天培地（MA)上、 27 、 10日間の培養

本培地上での培養上の特徴は上記 P D A上での性質とほぼ合致した。

3. 生理的性質

ィ）最適生育条件

最適 pH : 6〜7 (LCA液体培地中、 14日間培養で生産培地に移植可能になる）

最適温度： 25〜 27 (PD A寒天培地上、 10日間培養で生産培地に移植可能になる）口）許容生育条件

pH : 4〜9 (LC A液体培地中、 14日間培養で生産培地に移植可能になる）

温度： 20〜 30 (PD A寒天培地上、 10日間培養で生産培地に移植可能になる）

4. 分類学的考察

ィ）高次の分類学上の位置

本菌株（L 1 227株）は双子葉植物体上の表面に着生して、上蓋状の偽襄殻を形成する、上蓋中央に小円形状の孔ロを持つ、上蓋部及びその周縁部は放射状に配列した細胞から成る、永続性の偽嚢殻の間に子嚢を形成する。子嚢は厚膜で 2重壁構造である。これらの特徴に基づいて、 E. S. Lu t t r e 1 1 , L o c u l o a s c omy c e t e s, Th e Fu n g i , v o l . 4 A ( e d . G. C. A i n swo r t h e t a l . ) , 135〜 219 (1 973) の分類システムに従って検索したところ、本菌（L 1227) は、小房子嚢菌綱 (L o c u l o a s c omy c e t e s) 、へミスフエリア目（Hem i s p h a e r i a l e s) のミクロチリァ科 (M i c r o t h y r i a c e a e) に帰属することが判明した。口）属及び種レベルの同定

E. S . Lu t t r e l l , L o c u l o a s c omy c e t e s, i、h e Fun g i , v o l . 4 A ( e d. G. C. A i n swo r t h e t a l . ) 203〜 205 (1973) の M i c r o t hy r i a c e a eの分類によれば、本科には 23属が含まれている。 23属中、子襄胞子が単室な厲に My i o c o p r o n属と E 1 1 i s i o d o t h i s属がある。この 2属は偽囊殻形成菌糸の宿主細胞への侵入様式によって識別されている。すなわち、クサビ状の菌糸によって宿主細胞に感染する厲を My i 0 c 0 p r 0 n属、通常の菌糸が宿主細胞に侵入している属を E 1 〗 i s i o d o t h i sと各々区別している。本菌株の横断切片を作製して、宿主細胞への菌糸の侵入状態を観察したところ、本菌は M y i o c 0 p r o nタイプのクサビ状菌糸形態は観察されなかった。従って、本菌株は E 〗】 i s i o d o t h i s属に所属する菌種と判断した。 v o n A r xと E. M i i l l e r (1 954) の D i e G a t t u n g e n d e r ame r o s p o r e n Py r e n omy c e t e n, B e i t r , K r y p t og ame n f 1. S c h w e i z 1 1 (1) ； 95 ~ 98 によれば、 E l 1 i s i o d o t h i s属には 7種が知られている（E. i n q u i n a n s, E. sm i 】 a c i s， E . m i c r o d i s c a, E . p i t t i e r i , E . g r a mm a t o p h y 1 1 i , E. p a n d a n i , E. r e hm i a n a) 。各種は主として子嚢及び子囊胞子の形状と大きさによって区別されている。本菌の性状について、これら各種の性状と対比したところ、本菌の子囊は 58. 5-66. 0 x 26. 4〜33. 0 m、子嚢胞子は 1 5. 6〜 1 8. 4 x 9. 3〜： 1 0. 0 mの大きさを有し、 E. i n q u i n a n s (子襄 40〜 55 x 18〜 25 m, 子橐胞子 14〜： L 7 x 6〜8〃m) にほぼ一致した。従って、本菌株は E 1 1 i s i o d o t h i s i n q u i n a n s (ェリシォド一シス，インキユイナンス）に属する菌株であると同定し、エリシォド一シス ·インキユイナンス L 1227と命名した。なお、エリシォドーシス ·ィンキュイナンス L 1227は、平成 8年 2月 2 7日に通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所（郵便番号 305 日本国茨城県つくば市東一丁目 1番 3号）に FERM P - 15479の受託番号で寄託され、平成 9年 3月 28日にブダペスト条約に基づく国際寄託に移管されて、 F ERM B P— 5889の受託番号で寄託されている。

L 1227株は、他のカビに見られるようにその性状が変化し易い。例えば、 L 1227株の、またはこの株に由来する突然変異株（自然発生または誘発性）、形質接合体または遺伝子組換え体であっても、 MK6059物質を生産するものは全て本発明に使用できる。

CMK6059物質生産菌の培養法〕

本発明においては、前記の菌を通常の微生物が利用しうる栄養物を含有する培地で培養する。栄養源としてはグルコース、水ァメ、デキストリン、シュクロース、デンプン、糖類、動 ·植物油等を使用できる。また窒素源として大豆粉、小麦胚芽、コーンスティープ' リカー、綿実柏、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、硫酸アンモニゥム、硝酸ソ一ダ、尿素等を使用できる。その他必要に応じて、ナトリウム、力リウム、カルシウム、マグネシウム、コノくノレ卜、塩素、リン酸、硫酸及びその他のイオンを生成することのできる無機塩類を添加することは有効である。また菌の生育を助け MK 6059物質の生産を促進するような有機及び無機物を適当に添加することができる。

培養法としては、好気的条件下での培養法、特に深部培養法が最も適している。培養に適当な温度は 10〜30 である力、'、多くの場合 20〜27 で培養する _c MK 6059物質の生産は培地や培養条件により異なるが、振とう培養、タンク培養とも通常 3〜10日の間でその蓄積が最高に達する。

培養物中の蓄積量が最高になつた時に培養を停止し、培養液から目的物質を単離精製する。

CMK6059物質の精製法〕

本発明によって得られる MK 6059物質は脂溶性物質であるので、培養物から MK 6059物質の単離、精製にあたっては、その特性を利用して行うことが出来る。すなわち、ダイヤイオン HP— 20 (三菱化学社製）等の合成吸着剤、セフアデックス LH— 20 (フアルマシア社製）、トヨパール HW— 40 (東ソ一社）等のゲル濾過剤、酢酸ェチル、クロ口ホルム等による溶媒抽出法、シリカゲル、アルミナ等によるカラムクロマトグラフィー、さらにシリカゲルを担体とした分取薄層ク口マトグラフィ一等が有効である。

以上のような方法により、或いはこれらを適宜組み合わせることにより、前述の理化学的性質を有する高純度の MK 6059物質が得られる。

なお、各種精製工程における MK 6059物質の検定にあたっては、検定菌として、力ンジダ ·シュウドトロピカリス（C a n d i d a p s e u d o t r o p i c a l i s M9035) を用い、化学療法学会より提出されている方法に準じ、ペーパーディスク法によって行う。ペーパーディスグ法による寒天培地上の生育阻止円は 1 0〜2 5 0 // g /m l濃度の対数と直線関係を示し、 1 5〜2 5 mmの阻止円を与える。

< 3〉本発明の医薬組成物

本発明の医薬組成物は、 MK 6 0 5 9物質を有効成分とするものである。医薬組成物の用途としては、抗真菌剤及び高脂血症治療剤が挙げられる。

MK 6 0 5 9物質を医薬として用いるに当たり、通常の製剤担体とともに投与経路に応じた製剤とする事が出来る。例えば、経口投与では錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤等の形態に調剤される。経口投与用固形製剤に調製するに当たり、慣用の賦形剤、結合剤、滑沢剤、その他着色剤、崩壊剤等を用いることができる。

賦形剤としては、例えば、乳糖、デンプン、タルク、ステアリン酸マグネシゥム、結晶セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、グリセリン、アルギン酸ナトリウム、アラビアゴム等が挙げられ、結合剤としてはポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ェチルセルロース、アラビアゴム、シェラック、白糖等が挙げられ、滑沢剤としてはステアリン酸マグネシウム、タルク等が挙げられる。

その他、着色剤、崩壊剤も通常公知のものを用いることができる。なお錠剤は周知の方法によりコーティングしてもよい。また液状製剂は、水性または油性の懸濁液、溶液、シロップ、エリキシル剤、その他であってもよく、通常用いられる方法にて調製される。注射剤を調製する場合は本発明化合物に P H調整剤、緩衝剤、安定化剤、等張剤、局所麻酔剤等を添加し、常法により皮下、筋肉内、静脈内用注射剤を製造することができる。坐剤を製造する際の基剤としては、例えばカカオ脂、ポリエチレングリコール、ラノリン、脂肪酸トリグリセリド、ウイテブゾール（登録商標ダイナマイトノーベル社）等の油脂性基剤を用いることができる。

力、くして調製される製剤の投与量は患者の症状、体重、年齢等によって異なり、一様に服用することは出来ないが、通常成人 1日当たり本発明化合物を約 1〜 2 0 0 O m gの範囲となる量とするのがよく、これは通常 1日 1〜4回に分けて投与されるのが好ましい。図面の簡単な説明図 1は、 MK 6059物質の KB r法による I Rスぺクトラムを示す図である。図 2は、 MK6059物質の重メタノール中での 40 ΟΜΗζ Ή NMRスぺクトルを示す図である。

図 3は、 MK 6059物質の重メタノール中での 100 MHz ¹³ C NMRスぺクトルを示す図である。発明を実施するための最良の形態以下に本発明の実施例を示すが、 MK 6059物質の性状が本発明によって明らかにされたので、それらの性状に基づき MK 6059物質の製造法を種々考案することができる。従って本発明は実施例に限定されるものではなく、実施例の修飾手段は勿論、本発明によって明らかにされた MK 6059物質の性状に基づいて公知の手段を施して MK 6059物質を生産、濃縮、抽出、精製する方法をすべて包括する。実施例 1 エリシォドーシス ·インキユイナンス L 1227株の培養グルコース 5. 0%、大豆粉 1. 0%、肉エキス 0. 4%、ペプトン 0. 4%、酵母粉末 0. l%、 NaC l 0. 25%, C a C0₃ 0. 5 %を含有する種培地 (pH7. 0) を 4 Om 1ずつ 20 Om 1三角フラスコ 10本に分注して、 12 1 、 20分間高圧滅菌した。

次いで L 1227株を 1白金耳ずっ植菌し、 26 で 4日間、 210 r pmにて振とう培養した。

別に、水ァメ 2. 0%、大豆粉 1. 0%、大豆油 0. 15%、サングレイン 0. 25%、綿実粕0. 5%、硫酸鉄 · 7水塩 0. 0005%、塩化ニッケル · 6水塩 0. 00005%、塩化コバルト · 6水塩 0. 00005%及び炭酸カルシゥム 0. 196を含有する主発酵培地（ρΗ 6. 0)を調製し、その 8 Om Iずつを 500m〗三角フラスコ 100本に分注し、 121 において 20分間高圧滅菌した。この主発酵培地に前記種培養液を 4 m 1ずつ接種し、 26てにおいて 4日間、 210 r pmにて振とう培養した。得られた培養物を遠心分離して、培養上清液と培養菌体を得た。実施例 2 MK 6059物暂の精製実施例 1で得られた培養上清液 6. 0Lと、菌体を 70%アセトン水 6. 6 L で室温 1時間抽出し、濂過して菌体を除いた菌体抽出液を濃縮して得られる菌体抽出濃縮液 1. 5 Lとを合わせ、 7. 5 Lとし、同量の酢酸ェチルにて抽出した。抽出液は、水洗後、無水硫酸ナトリゥムで脱水し、減圧下濃縮し、 4. 47 gの油状物質を得た。

得られた油状物質をけい藻土 4. 5 gにまぶし、一夜減圧下乾燥後、クロロホルムで充填したシリカゲル C一 200 (和光純薬工業社製） 200m lの塔の上にのせ、クロ口ホルム、ついでクロ口ホルム—メタノール混液（100 : 1) 、クロ口ホルム一メタノール混液（50 : 1) で洗浄後、クロ口ホルム一メタノール混液（20 : 1) 、クロ口ホルム一メタノール混液（10 : 1) にて展開するクロマトグラフィ一を行った。

活性画分を集め、減圧下濃縮乾固し、 304mgの油状物質を得た。この油状物質を少量のメ夕ノールに溶解し、メタノールにて充填したセフアデックス LH —20 (フアルマシア社製） 800m lの塔にのせ、メタノールにて展開した。

14mlフラクションでフラクション No. 30 - 34に有効物質が溶出した。この活性フラクションを集め、減圧下濃縮乾固すると 246 mgの油状物質が得られた。

この油状物質を少量のメタノールに溶解し、メタノールにて充填した卜ョパ一ル^1\^ー40？ (東ソ一社製） 1 Lの塔にのせ、メタノールにて展開した。 10 m 1フラクションでフラクション No. 45— 48に有効物質が溶出した。この活性フラクションを集め、減圧下濃縮乾固し、粗 MK 6059物質とした。この粗 MK 6059物質 162 mgを少量のメタノールに溶解し、 60%メタノールにて充填したコスモシール 75 C 18— 0PN (ナカライテスク製） 20m lの塔にのせ、 60%メタノール 250m 1 - 100%メタノール 250mlにてグラジェント溶出を行った。 5 gフラクションでフラクション No. 37— 42に有効物質が溶出した。

この油性フラクションを集め、減圧下濃縮乾固すると、精製された MK605 9物質 89 mgが無色粉末として得られた。本物質の理化学的性状は前記の通りである。

なお、各精製工程において活性画分は、前述のカンジダ*シュウドトロピカリス (Cand i da P s e udo t r op i c a l i s ) M 9035を検定菌として用いたペーパーディスク法によって測定した。試験例 1 抗真菌作用

MK6059物質の各種真菌に対する抗真菌スぺクトラムは表 1に示す通りである。 MK6059物質の各濃度のメタノール溶液をペーパーディスクに 20 u 1ずつしみこませ、寒天平板法で測定した阻止円の直径で示した。尚、表 1中の検定菌は以下に示すとおりである。

1. サッカロミセス，セレピシェ S HY 3

(Saccharomyces cerevisiae SHY3)

2. カンジダ《アルビカンス M9001

(Candida albicans M9001)

3. カンジダ ·シユードトロピカリス M9035

(Candida pseudotropical is M9035) 表 1 MK 6059物質の抗真菌スぺクトル濃度阻止円直径（mm)

(fi g/m 1 ) 菌 1 菌 2 菌 3

1000 24.6 27.8 25.8

250 21.7 25.5 25.0

62.5 18.9 22.8 20.6

12.6 15.3 16.4 16.5 以上のように MK 6059物質は抗真菌活性を示し、抗真菌剤としての応用が期待される。薬理試験例 1 コレステロール低下作用（ 1 ) 一週間予備飼育した体重 1 9 g前後のマウス（一群 6匹）に、 0. 5%CMC に懸濁した被検薬物を、 0. lm 1ノ10 g体重宛 1日 1回夕方、 5日間、連続経口投与した。 5日目の投与終了後、マウスを一晩絶食し、翌朝被検薬物を経口投与し、その 3時間後に断頭放血にて採血し、血清を分離した。血清中全コレステロール（Tch) はコレステロール C—テストヮコー（和光純薬工業社製）、トリグリセライド（TG) はトリグリセライド G—テストヮコー（和光純薬工業社製）のキッ卜を用いてそれぞれ定量した。薬物投与量は MK 6059物質が 1 0 Omg/k g、クロフイブレー卜が 30 Omg/k gとし、対照群には 0. 5 % CMCを投与した。結果を表 2に示す。表 2 正常マウス血清脂質に及ぼす MK 6059物質の影響体重増加血清脂質 (mg¾i)

処理 (g) Tch TG 対照 4.5 ± 0.5 137.4 土 6.6 89.6 ± 7.8 K6059 100mg/kg. p. o. 4.7 ± 0.5 102.4 土 3.4* 95.0 ± 7.8 ク Dフィフ 'レ-ト 300mg/kg. p. o. 4.2 ± 0.6 118.8 ± 13.3 92.4 ± 9.9

* N= 6, P< 0. 01

MK6059物質は、 10 OmgZk gの 5日間の経口による連続投与で正常マウスの血清中の全コレステロール値を対照群に比較して有意に減少させた。クロフイブレート 300mg/k gの 5日間連続投与では有意な改善効果は認められなかった。薬理試験例 2 トリグリセリド低下作用—肝重量への影響被検薬は 0. 5%CMCに懸濁し、 1日 1回 10 Omgノ k gを経口投与した。

4日後の経口投与終了後、マウスを絶食し、翌日被検薬を再び経口投与し、その 4時間後に採血を行い、血清を分離後、血清脂質を定量した。肝は採血後直ちに取り出し重量を測定しマウス体重 10 g当たりの値として表 3に示した。表 3 正常マウス血清脂質に及ぼす MK 6059物質の連続投与（ 5日間）の影響血清脂質 (mgl¾) 肝の重量処理 Tch TG g/10g b. w. 対照 131.6±10.6 159.6 土 4.5 0.45 土 0.01 ΜΚ605Θ 117.2土 6.1 120.1 ±11. Γ 0.43 土 0.02 lOOrag/kg. p. o. , 5days

ク nフィフ 'レト 140.1土 6.3 102.0 土 3.6' 0.54 土 0.01

400mg/kg. p. o.， 5days

Ν= 5, * Ρ < 0. 05, * * Ρ < 0. 01

ΜΚ6059物質は、正常マウスに対し、 1 0 Omg/k g 5日連続投与で血清中のトリグリセリドを有意に低下させた。この際、肝重量への影響は認められなかった。

対照薬のクロフイブレートは、 8_ 400mg/k g 5日連続投与で、卜リグリセリドを有意に低下させたが、肝重量も有意に増加し、肝臓への悪影響が示唆された。薬理試験例 3 コレステロール低下作用（2) ddY系マウスに 0. 5% CMCに懸濁した被検薬を、トライトン（T r i t o n) WR 1 339 400mg/k g静脈内投与 1時間前および投与 5時間後、 20時間後の計 3回経口投与し、トライトン WR 1339投与 24時間後に断頭放血採血を行い血清を分離した。血清中全コレステロールおよびトリグリセライドはコレステロール C一テストヮコ一および卜リグリセライド G—テストヮコ一を用いて行った。結果を表 4に示す。表 4 T r i t o n高脂血症マウス血清脂質に及ぼす MK 6059物質の影響血清脂質 (mg%)

処理 TG 丁 ch 対照 2551.9 土 188.4 563.7 ± 25.5

M 6059 100mg/kg. p. o. , tid 2310.1 土 144.3 416.8土 12.0 ** ニコチン酸 1000mg/kg. ρ.0.， tid 1610.4 土 342.9' 438.6土 35.4 *

N= 6, *P < 0. 05 **P < 0. 01 卜ライトン処理による高脂血症マウスに対し、 MK6059物質 10 OmgZ k g投与群は、ニコチン酸 1000mg/k g投与群よりも有意に血清中のコレステロールを減少させた。薬理試験例 4 コレステロール食荷ノヽムスターに対する脂質低下作用体重 140 g前後のハムスター（1群 7匹）に 1 %コレステロール及び 0. 5 %コール酸を含むエサを負荷と同時に 0. 5% CMCに懸濁した被検薬を、 lm 1ノ 100 g体重宛 1日 1回夕方、 10日間、連続経口投与した。

10日目の投与終了後、 4時間後に腹部大静脈より採血し、測定試料とした。血清中全コレステロール（Tch) はコレステロール C—テストヮコー（和光純薬工業社製）、トリグリセライド（TG) はトリグリセライド G—テス卜ヮコー (和光純薬工業社製）のキットを用いてそれぞれ定量した。薬物投与量は MK 6 059物質が 1 Omg/k g、 3 Omg/k _N 10 Omg/k コレスチラミンが 400mg/k g、 80 OmgZk gであり、対照群には 0. 5%CMC を投与した。結果を表 5に示す。表 5 コレステロール負荷ハムスター血清脂質に及ぼす MK 6059物質の影響血清脂質 (mg/dl)

処理 Tch TG 正常動物 146.9±4.3" 220.0±25.5 対照（0.5% chol- diet) 277.3± 11.0 270.3 ±18.0

MK 6059 10mg/kg p. o. 268.3± 10.3 299.8±28.3

30mg/kg p. o. 228.5 ± 3.5" 275.0±17.0 lOOnig/kg p. o. 169.6± 6.3** 259.3± 13.5 コレスチラミン 400mg/kg p. o. 184.9± 4.5" 205.9±26.3

800mg/kg p. o. 204.1±13.9" 196.5±31.6

"*p<0.01

MK 6059物質については、 30mgZk g、 1 00 m g k gの投与で全コレステロール値を対照群に比較して有意に減少させた。また、コレスチラミンについても、 400mg/k g投与で対照群に比較して全コレステロール値を有意に減少させたが、 MK6059物質に比し、多薬量を必要とした。薬理試験例 5 ッ卜におけるコレステロール吸収阻害試験上記薬理試験結果に示される通り、 MK 6059物質は各種の動物において顕著なコレステロール低下作用を有しており、この薬理作用の作用点を明確にすべく、ラッ卜におけるコレステロール吸収阻害試験を行った。

1 %コレステロールを含む飼料にて予備飼育した体重 240 g前後のラット ( 1群 6匹）に、被検物質を 0. 5%CMCに懸濁し、 0. 5m l Z1 00 g体重宛 1日 1回夕方、 10日間、連続経口投与した。 10日間の連続経口投与終了後 1晚絶食させた試験開始 1 1日目のラッ卜に、被検物質を投与しその後 30分にトレ一サ一として [³H] -cholesterol (第 1化学薬品） 0. 5 m 1ノ匹を尾静脈に単回静脈内投与、さらに [¹⁴C] -cholesterol (第 1化学薬品） 2 m Iノ匹を胃内に単回強制経口投与した。トレーサー投与後 24時間及び 48時間に血漿及び肝臓を採取し、放射能を測定した。血漿中放射濃度より Zilversmit dual isot ope ratio method (Proc. Soc. Med., 140, 862-865, 1972) を用いて腸管からのコレステロールの吸収率を求めることにより、被検物質がコレステロールの消化管吸収に与える薬理効果を調べた。薬物投与量は MK 6059物質が 1 Omg/ k g、 3 Omg/k 10 OmgZk gであり、対照群には 0. 5%CMCを投与した。結果を表 6および表 7に示す。表 6 ットの腸管コレステロール吸収に及ぼす MK 6059物質の影響コレステロール吸収率（％) 処理 24時間後 48時間後対照 56.9±4.9 68.4±9.5

MK 6059 10mg/kg 31.4±5.4"* 36.1±6.5'

30mg/kg 26.8±7, Γ·* 28.7 ±8.9" lOOmg/kg 26.7±2.4*** 25.7 ±2.5'

*·*Ρ<0.001 **Ρ <0.01 ット肝臓中へのトレーサーの取り込みに対する MK 6059物質の影響トレーサー回収率 (%)

24時間後

処理 [³H] -cholesterol [¹ C] -cholesterol 対照 37.0 ±2.2 25.9±2.0

MK 6059 lOmg/kg 35.2±3.4 13.3±2.8

30mg/kg 35.3 ±2.5 9.9±2.1

lOOmg/kg 30.0±2.9 7.7±0.3

48時間後

処 [³H] -cholesterol [ C] -cholesterol 対照 32.7 ±6.9 27.0±6.7

MK 6059 lOmg/kg 34.4±2.8 14.4 ±3.4

30mg/kg 33.2 ±4.9 10.6±4.0

lOOmg/kg 28.3 ±5.4 7.4±2.1

表 6から明らかなように MK6059物質は、最低投薬量の 1 OmgZk gであっても顕著なコレステロール吸収阻害作用を示した。また、静脈内投与したトレーサーの肝臓への取り込みと、経口投与したトレーサーの肝臓への取り込みを測定した結果（表 7) から明らかなように、静脈内投与されたトレーサーはほとんどが肝臓へ取り込まれていたのに対し、経口投与されたトレーサーの肝臓への取り込み率は対照群の凡そ 50%以下であった。このことより、 MK 6059物質のコレステロール低下活性は、腸管からのコレステロール吸収阻害によるものと考えられる。

レジンを除けばコレステロール吸収阻害に基づく脂質低下剤は、これまでに既存薬はなく、 MK 6 0 5 9物質は新しいタイプの脂質低下剤として有用である。以上の薬理試験例に示すように、 M K 6 0 5 9物質は血清中のコレステロールあるいは卜リグリセリドを低下させる作用があり、高脂血症治療薬としての応用が期待される。産業上の利用性本発明の M K 6 0 5 9物質は、実施例に示したごとく抗真菌剤および高脂血症薬としての用途が期待される。

Claims

請求の範囲下記式（ I ) で示される MK 6 0 5 9物質 _c

2 . 小房子嚢菌に属し、請求項 1記載の MK 6 0 5 9物質を生産する能力を有する微生物を培養し、その培養物から MK 6 0 5 9物質を採取することを特徴とする MK 6 0 5 9物質の製造方法。

3 . 小房子嚢菌がエリシォドーシス属に属する微生物であることを特徴とする請求項 2記載の製造方法。

4 . エリシォドーシス属に属する微生物がエリシォドーシス .インキユイナンスであることを特徴とする請求項 3記載の製造方法。

5 . 請求項 1記載の MK 6 0 5 9物質を有効成分とする医薬組成物。

6 . 抗真菌剤である請求項 5記載の医薬組成物。

7 . 高脂血症治療剤である請求項 5記載の医薬組成物。