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WO1997002807A1 - Composition dermocosmetique depigmentante et son utilisation - Google Patents

Composition dermocosmetique depigmentante et son utilisation Download PDF

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WO1997002807A1
WO1997002807A1 PCT/FR1996/001051 FR9601051W WO9702807A1 WO 1997002807 A1 WO1997002807 A1 WO 1997002807A1 FR 9601051 W FR9601051 W FR 9601051W WO 9702807 A1 WO9702807 A1 WO 9702807A1
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plant
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PCT/FR1996/001051
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Inventor
Christian Dampeirou
Original Assignee
C 3 D
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Publication date
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    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/16—Emollients or protectives, e.g. against radiation

Definitions

  • the present invention relates to compositions having depigmenting activity and to their applications.
  • hyperpigmentations are classified into two main groups:
  • Ephelids Commonly known as freckles, they appear during childhood, particularly on fair skin and are preferably found on the exposed parts of the epidermis. They intensify after sun exposure.
  • the subject of the present invention is a dermo-cosmetic composition, characterized in that it contains, as active principle, an association with depigmenting activity:
  • ascorbic acid will be excluded from the usable acids mentioned in (a).
  • the salts in particular the alkaline or alkaline earth salts and in particular the ammonium salts.
  • esters in particular esters with polyols, for example sugars.
  • Acids (ii) giving particularly advantageous results according to the invention are kojic acid, caffeic acid or 5-hydroxy 2- hy droxymethyl- ⁇ -pyridone, the latter compound being more particularly preferred. These compounds or their salts will therefore preferably be used, alone or as a mixture, to constitute the non- ⁇ -hydroxylated acid part of the depigmenting compositions.
  • Particularly advantageous combinations are those comprising a mixture of kojic acid, burnet and EcArchitect alba. This can be combined with ⁇ -hydroxylated acids and possibly other components of plant extracts.
  • the active component of a plant extract can be obtained by extraction from the plant or part of the plant, but it may also be possible to obtain this component by chemical synthesis when it has been identified. This synthesis can be total or be a hemisynthesis.
  • the active component is preferably provided by a plant extract, obtained from white mulberry, licorice, scutelaria, grapefruit, birch, heather, arbutus, bearberry, lettuce, soy, aloe ferox, yukinoshita, rose fruit, burnet, and / or Alba eclipsed.
  • the active principles of plant extracts can be obtained by an extraction step in hydroalcoholic medium from the stems, leaves and / or roots of plants.
  • the hydroalcoholic extract containing the active ingredient and other components can be used as it is, but it is of course possible to remove from this extract the unnecessary or harmful components if they exist and by known methods such as selective precipitation, solvent extraction and / or chromatography.
  • the composition of the active principle can vary widely depending on the activity of the two fractions in particular depending on the activity of the plant active component, thus the acid mixture can constitute from 0.1 to 99% by weight of the active principle, the plant extract constituting the complement.
  • the weight ratio between the acid part and the active component of a plant extract is between 50/50 and 70/30.
  • compositions according to the present invention may contain other active ingredients which are not taken into account in the above percentages.
  • the composition can also contain at least one compound chosen from ceramides, vectorizing macromolecules or component improving penetration.
  • the acid mixture can at least be partially grafted onto sucroesters.
  • the concentration of active ingredients in the final composition will preferably be between 1 and 20%
  • a composition in accordance with the invention has in particular the following formula: Kojic acid from 1 to 15%
  • Glycolic acid from 20 to 30% and from 20 to 35% of plant extracts from Tanlex VB, Yukinoshita, Naringin, Sohakuhi Bg, White Mulberry, Lemon Bg, and the supplement as an acceptable excipient for this composition. Finally, melanin protects the skin from the harmful effects of UV rays.
  • compositions according to the invention reduce the production of melanin, it is advantageous to add very effective sun protection agents to the cosmetic formulation in order to avoid the damage incurred by skin exposed to the sun without protection.
  • sun protection agents can be organic and / or mineral filters known to those skilled in the art. Among the latter, mention may be made of metal oxide particles, in particular of titanium, iron, cerium, aluminum, etc., or of talc.
  • compositions according to the invention may be in the form in particular of a lotion, gel, emulsion, cream, ointment and contain suitable pharmaceutically and / or cosmetologically acceptable excipients.
  • suitable pharmaceutically and / or cosmetologically acceptable excipients mention may be made of preservatives, antioxidants, colorants, perfumes, surfactants, thickeners known to those skilled in the art. They may also contain activity adjuvants and / or another active ingredient.
  • Figure 1 Macroscopic appreciation of the depigmenting effects of different composi ⁇ ons.
  • Figure 2 Influence of treatments on the pigmentary appearance of the area of application on histological examination.
  • Figure 3 Comparative effectiveness of various depigmenting treatments.
  • Example 1 Preparation of a composition according to the invention
  • Example 1 The composition of Example 1 will be called Bruni Clear in the following examples.
  • composition according to the invention behaves like a multi-functional inhibitor of tyrosinase, thanks to a synergy between its different constituents.
  • the first two stages of melanin synthesis consist in the action of tyrosinase on tyrosine then L-Dopa.
  • the inhibition of the activity of tyrosinase therefore blocks the formation of melanin.
  • composition according to the invention acts as a competitive inhibitor, which reversibly blocks the enzymatic reaction, since it does not modify the structure of the enzyme but is only in competition with the substrates natural tyrosinase or dopa.
  • the reaction is carried out at 25 ° C. in phosphate buffer pH 7.
  • the tyrosinase is placed in the presence of its substrate L-Dopa; to the reaction medium, the molecule to be studied can be added.
  • the variation in optical density per minute of the test is then compared to that of the control (without molecule).
  • Creams were prepared according to Example 3, and by replacing in the formula of Example 3 the active with respectively 5% hydroquinone and 1.5% kojic acid, only the percentage d varying water.
  • Bruni clear R cream was found to be as active as control + and significantly superior to AK 1.5% cream and the reference product.
  • the Bruni clear R cream has a depigmenting activity at least equivalent to that of the control + and, in any case, superior to the other formulation tested and to the reference product.
  • Lot 1 or control lot ® consisting of 6 animals treated with an oil / water emulsion containing 5% hydroquinone,
  • Lot 2 consisting of 6 animals treated with the CD 1 product, i.e. Bruni clear ®,
  • Lot 3 consisting of 6 animals treated with the CD 2 product, that is to say 1% kojic acid,
  • Lot 4 consisting of 6 animals treated with a reference specialty taken directly from the market (Dépigmenten ®, lot n ° 10405).
  • a fifth batch consisting of 4 animals treated with a placebo preparation based on petrolatum, served as a normal pigmentation control for assessing the effects of the various treatments.
  • the animals were treated 6 days a week for 12 consecutive weeks by applying a suitable quantity of the preparations to be tested on the skin of the tail, followed by a gentle massage intended to ensure the penetration of the active ingredients.
  • mice having received no active treatment the presence of ring structures bordered by hair formations was noted at 40 ⁇ magnification. Between 52 and 106 of these rings were counted per section examined.
  • Apigmentation has been defined by the complete absence of melanocytes and pigments in an epithelial ring or crest
  • hypopigmentation proved to be variable but could be characterized by a clear rarefaction of the melanocytes in the basal layers, by the absence of migration of pigments through the horny layers and by a pigmentary recovery sometimes more abundant in the dermis jacent.
  • the interpretation method consisted in assessing, for each of the preparations, the percentages of peaks exhibiting: 1. normal pigmentation, 2. partial pigmentation,
  • a depigmentation index was then calculated for each preparation, corresponding to the sum of the quotations divided by the number of peaks observed.
  • the values obtained were compared by an analysis of variance supplemented by a Duncan's test in order to determine the degree of significance of the differences between the mean values.
  • FIG. 2 shows the influence of the treatments on the pigmentary appearance of the application area. It can be seen that the preparations of the control group ⁇ and of the group treated with the CD 1 cream exhibit a greater number of apigmented and hypopigmented epithelial ridges compared to the preparations of the other two groups of animals.
  • the objective of this study was to assess the efficacy of two new depigmenting creams referenced CD 1 and CD 2 in pigmented mice compared to a control ⁇ consisting of 5% hydroquinone and a reference cream taken from the market. .
  • CD 1 cream presented the best depigmenting efficiency in front of the witness ⁇ , the reference product and CD 2 cream.
  • the CD 1 cream was found to be as active as the control ⁇ and significantly superior to the CD 2 cream and to the reference product.
  • the CD 1 cream has a depigmenting activity at least equivalent to that of the control ⁇ and, in any case, superior to the other formulation tested (CD 2) and to the product of reference.
  • CD 1 cream also appeared to be good since no significant skin lesion was recorded after 12 weeks of application.
  • Inclusion criteria Patients aged 18 to 75 years, who have cloasma, senile lentigo, pigment spots acquired on the face or other exposed areas.
  • Placebo CMP versus CD1-MS1 cream with the same distribution (9 patients in each group), same tube.
  • the evaluation criteria were based on clinical observations and the patient's opinion and on medical follow-up with the opinion of the investigator.
  • Each bar represents the average of the individual values affected by the standard deviation for 6 animals.

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Abstract

La présente invention concerne une composition dermocosmétique, caractérisée en ce qu'elle contient à titre de principe actif une association à activité dépigmentante: (a) d'un mélange acide comprenant (i) au moins un acide α-hydroxylé ou un de ses dérivés, à l'exclusion de l'acide ascorbique; (ii) au moins un composé choisi dans le groupe comprenant: acide kojique, acide caféique, acide azélaïque, acide aminobutyrique, acide fusarique, 5-hydroxy 2-hydroxymethyl-η-pyridone, et leurs dérivés; (b) d'au moins un composant actif d'un extrait végétal d'au moins une plante choisie parmi: murier blanc, réglisse, scutelaria, pamplemousse, bouleau, bruyère, arbousier, busserole, citron, laitue, laminaire, concombre, ginseng, houblon, maïs, matricaire, sauge, soja, sureau, spiruline, tilleul, aloe ferox, yukinoshita, sanguisorba, hoelen, rose fruit, α-orizanol, burnet, gingko biloba, tanlex VB, eclipsa Alba, à la condition que lorsque la composition contient de l'acide kojique et un extrait de réglisse, elle contient au moins un autre composant d'extrait végétal. L'invention concerne également l'utilisation de la composition pour la préparation d'un médicament ou d'une méthode cosmétique.

Description

COMPOSITION DERMOCOSMETIQUE DEPIOVIENTANTE ET SON UTILISATION
La présente invention se rapporte à des compositions présentant une activité dépigmentante et à leurs applications.
Les taches brunes sont des hyperpigmentations localisées provoquées par un excès de mélanine. Les taches mélaniques cutanées qui s'accentuent ou apparaissent avec l'âge sont ressenties comme un désagrément esthétique, toujours mal supporté sur le plan psychologique.
Selon leur origine, les hyperpigmentations sont classées en deux grands groupes :
- Hyperpigmentation liée à une hyperactivité ou à une prolifération mélanocytaire
a) Les Ephelides Communément appelées taches de rousseurs, elles apparaissent durant l'enfance, particulièrement sur les peaux claires et se trouvent préférentiellement sur les parties découvertes de l'épiderme. Elles s'intensifient après les expositions solaires.
Histologiquement, le nombre de mélanocytes est normal mais la quantité de mélanine est augmentée.
b) Lentigine ou lentigo solaire
Ce sont des taches arrondies et planes de très petite taille de teinte allant du jaune brun au noir apparaissant durant l'enfance. Il est pratiquement impossible de les différencier des ephelides lorsqu'elles ne sont pas de couleur très foncée.
c) Lentigo sénile
Ce sont des taches brunes apparaissant sur le dos des mains, les avant-bras et sur le visage après la cinquantaine. Histologiquement, on note une hyperpigmentation mélanique de la couche basale de l'épiderme avec accroissement du nombre des mélanocytes.
d) Mélasma C'est une nappe pigmentée s'étendant de façon presque toujours symétrique sur le front et les joues apparaissant plus volontiers chez les femmes brunes. Il peut apparaître dans trois cas :
- durant la grossesse, c'est le chloasma,
- durant la prise d'oestroprogestatifs,
- de manière idiopathique.
- Hyperpigmentation par incontinence pigmentaire :
Hyperpigmentation consécutive à une photo sensibilisation
C'est la classique dermatose en "breloque" ou dermite des parfums.
Ce sont des taches brunes plus ou moins foncées disposées en traînées ou en coulées aux endroits où sont appliqués les parfums et les cosmétiques avant une exposition solaire. Elles disparaissent progressivement et spontanément en plusieurs mois.
Il existe donc un besoin pour une composition ayant une activité dépigmentante à faible concentration, présentant une bonne tolérance cutanée.
C'est pourquoi la présente invention a pour objet, une composition dermo-cosmétique, caractérisée en ce qu'elle contient à titre de principe actif une association à activité dépigmentante :
- (a) d'un mélange acide comprenant (i) au moins un acide α-hydroxylé ou un de ses dérivés,
(ii) au moins un composé choisi dans le groupe comprenant : acide kojique, acide caféique, acide azélaïque, acide aminobutyrique, acide fusarique, 5-hydroxy 2-hydroxyméthyl-γ- pyridone, et leurs dérivés ; - (b) d'au moins un composant actif d'un extrait végétal d'au moins une plante choisie parmi : mûrier blanc, réglisse, scutelaria, pamplemousse, bouleau, bruyère, arbousier, busserole, citron, laitue, laminaire, concombre, ginseng, houblon, maïs, matricaire, sauge, soja, sureau, spiruline, tilleul, aloe ferox, yukinoshita, sanguisorba, hoelen, rose fruit, α-orizanol, burnet, gingko biloba, tanlex VB, éclipsa Alba, à la condition que lorsque la composition contient de l'acide kojique et un extrait de réglisse, elle contient au moins un autre composant d'extrait végétal.
De préférence, l'acide ascorbique sera exclu des acides utilisables mentionnés en (a). Parmi les dérivés des acides (i)et (ii) il faut citer les sels notamment les sels alcalins ou alcalino terreux et en particulier les sels d'ammonium. Parmi les dérivés on peut également citer les esters notamment les esters avec les polyols par exemple les sucres. On peut notamment envisager des co-esters de deux dérivés acide sur un même polyol.
Parmi les acides α-hydroxylés utilisables il faut citer l'acide malique, l'acide citrique, l'acide lactique et l'acide glycolique ; la concentation est avantageusement comprise entre 0,1 et 45% par rapport au poids total de la composition.
Des acides (ii) donnant des résultats particulièrement avantageux selon l'invention sont l'acide kojique, l'acide caféique ou la 5-hydroxy 2- hy droxym é thyl-γ-pyridone, ce dernier composé étant plus particulièrement préféré. On emploiera donc de préférence ces composés ou leurs sels, seuls ou en mélange, pour constituer la partie acide non α- hydroxylée des compositions dépigmentantes.
Des associations particulièrement avantageuses sont celles comprenant un mélange d'acide kojique, burnet et Eclipsa alba. Celui-ci peut être combiné avec des acides α-hydroxylés et éventuellement d'autres composants d'extraits végétaux.
Le composant actif d'un extrait végétal peut être obtenu par extraction à partir de la plante ou d'une partie de la plante mais il peut être possible également d'obtenir ce composant par synthèse chimique lorsque celui-ci a été identifié. Cette synthèse peut être totale ou être une hémisynthèse.
Le composant actif est de préférence apporté par un extrait végétal, obtenu à partir de mûrier blanc, réglisse, scutelaria, pamplemousse, bouleau, bruyère, arbousier, busserole, laitue, soja, aloe ferox, yukinoshita, rose fruit, burnet, et/ou éclipsa Alba. Lorsqu'ils sont obtenus par extraction, les principes actifs d' extraits végétaux peuvent être obtenus par une étape d'extraction en milieu hydroalcoolique à partir des tiges, des feuilles et/ou des racines de plantes. Dans la plupart des cas, l'extrait hydroalcoolique contenant le principe actif et d'autres composants pourra être utilisé tel quel, mais il est bien entendu possible de supprimer de cet extrait les composants inutiles ou néfastes s'il en existe et ce par des méthodes connues telles que précipitation sélective, extraction par solvant et/ou chromatographie. La composition du principe actif peut varier très largement en fonction de l'activité des deux fractions en particulier en fonction de l'activité du composant actif végétal, c'est ainsi que le mélange acide peut constituer de 0,1 à 99% en poids du principe actif, l'extrait végétal en constituant le complément.
De préférence, le rapport en poids entre la partie acide et le composant actif d'un extrait végétal est compris entre 50/50 et 70/30.
Les compositions selon la présente invention peuvent contenir d'autres principes actifs dont il n'est pas tenu compte dans les pourcentages précédents.
Ainsi, selon l'un des aspects de l'invention, la composition peut contenir en outre au moins un composé choisi parmi les ceramides, les macromolécules vectorisantes ou composant améliorant la pénétration.
Comme cela a été mentionné précédemment, le mélange acide peut au moins être partiellement greffé sur des sucroesters.
La concentration en actifs dans la composition finale sera de préférence comprise entre 1 et 20%
Une composition conforme à l'invention présente notamment la formule suivante : Acide kojique de 1 à 15%
Acide glycolique de 20 à 30% et de 20 à 35% d'extraits végétaux provenant de Tanlex VB, Yukinoshita, Naringine, Sohakuhi Bg, Mûrier blanc, Citron Bg, et le complément en excipient acceptable pour cette composition. Enfin, la mélanine protège la peau des effets nocifs des rayons UV.
Compte tenu du fait que les compositions selon l'invention réduisent la production de mélanine, il est intéressant d'ajouter dans la formulation cosmétique des agents de protection solaire très efficaces afin d'éviter les dommages encourus par une peau exposée au soleil sans protection. Ces agents de protection solaire peuvent être des filtres organiques et/ou minéraux connus de l'homme du métier. Parmi ces derniers on peut citer les particules d'oxyde métallique, notamment de titane, fer, cérium, aluminium, ete, ou de talc.
Le choix du type de filtre retenu, sa teneur et le cas échéant sa granulométrie seront déterminés par la consistance finale désirée de la composition. Les compositions selon l'invention peuvent se présenter sous forme notamment de lotion, gel, emulsion, crème, onguent et contiennent des excipients pharmaceutiquement et/ou cosmetologiquement acceptables appropriés. Parmi ces excipients, on peut citer les conservateurs, anti¬ oxydants, colorants, parfums, tensio-actifs, épaississants connus de l'homme du métier. Elles peuvent également contenir des adjuvants d'activité et/ou un autre principe actif.
Les exemples qui suivent sont destinés à illustrer l'invention sans aucunement en limiicr la portée.
Dans ces exemples on se référera aux figures suivantes :
Figure 1 : Appréciation macroscopique des effets dépigmentants de différentes composiϋons.
Figure 2 : Influence des traitements sur l'aspect pigmentaire de la zone d'application à l'examen histologique.
Figure 3 : Efficacité comparée des divers traitements dépigmentants.
Exemple 1 : Préparation d'une composition selon l'invention
Le principe actif à la composition suivante :
%
Acide kojique 10 Partie acide
EDTA 0,5
Sulfite de Na 0,3 ( i ) 38,5
Métabisulfite de Na 0,3
Acide glycoliquc 28,5
Tanlex VB 2
Yukinoshita 1 Extraits
Naringine (ext du pamplemousse) 0,75 végétaux
Sohakuhi Bg 7,5 ( i i ) 26,75
Mûrier blanc 13
Citron Bg 2,5
H20 0,5 Mode opératoire
Dans une part d'eau dissoudre les conservateurs et l'acide glycolique puis l'acide kojique, chauffer à 75° et ajouter lentement la partie (ii).
La composition de l'exemple 1 sera appelée Bruni Clear dans la suite des exemples.
Exemple 2: Etude comparative in vitro de l'action de différents produits sur l'activité de la tyrosinase
Etude des actifs en absence d'UV et d'oxygène singulet
1. Principe du test La tyrosinase est capable de catalyser les réactions suivantes :
L-Tyrosine
Tyrosinase
L-Dopa
Tvrosinase
Dopaquinone -> Dopachrome (475 nm) Or, l'une des hypothèses par lesquelles on n'entend nullement limiter l'invention, est que la composition selon l'invention se comporte comme un inhibiteur pluri-fonctionnel de la tyrosinase, grâce à une synergie entre ses différents constituants. En effet, les deux premières étapes de la synthèse de mélanine consistent en l'action de la tyrosinase sur la tyrosine puis la L-Dopa. L'inhibition de l'activité de la tyrosinase bloque donc la formation de la mélanine.
L'un des intérêts de la composition selon l'invention est qu'elle agit comme un inhibiteur compétitif, qui bloque la réaction enzymatique de façon réversible, car elle ne modifie pas la structure de l'enzyme mais est seulement en concurrence avec les substrats naturels tyrosinase ou dopa.
Le test suivant permet donc de mesurer l'inhibition de la tyrosinase en dosant le dopachrome qui est un composé coloré que l'on peut doser en spectroscopie à 475 nm. Afin d'étudier l'influence de certains composés sur l'activité enzymatique de la tyrosinase, on réalise une cinétique enzymatique.
La réaction est réalisée à 25° C en tampon phosphate pH 7. La tyrosinase est mise en présence de son substrat L-Dopa ; au milieu réactionnel on peut ajouter la molécule à étudier. On compare ensuite la variation de densité optique par minute de l'essai (en présence de la molécule à étudier) à celle du témoin (sans molécule).
On en déduit l'influence de la molécule sur l'activité de la tyrosinase. Les résultats sont alors exprimés en pourcentage d'activité, sachant que le témoin représente 100% d'activité.
2. Protocole
Figure imgf000009_0001
On suit l'apparition du dopachrome à 475 nm pendant trois minutes.
3. Résultats d'inhibition de la tyrosinase in-vitro.
Echantillon Concentration % % testée d'activité d'inhibition
Témoin 100 0
Santoline 3,33 mg/ml 252 0
tt tt 6,66 mg/ml 299 0
bergamote 3,33 mg/ml 115 0
<t u 6,66 mg/ml 105 0
Acide kojique 10 mg/ml 20 80
u tt 1 mg/ml 29 71
Palmitate 1 mg/ml 34 66
Hydroquinone 4 mg/ml 241,9 0
8 mg/ml 229,41 0
16 mg/ml 112,53 0 Produit de 50 mg/ml 36,68 63,32 référence M
25 mg/ml 69,94 30,06
17 mg/ml 76,21 23,79
Bruni clear R 0,10 mg/ml 36 64
0,20 mg/ml 24 76
0,5 mg/ml 98
1 mg/ml 0,6 99,4
5 mg/ml 100
25 mg/ml 0 100
50 mg/ml 100
M : Mélawhite actif de Pentapharm, composition non divulguée.
Exemple 3
Formule d'une crème Bruni clear à 10%
%
Actif (selon l'exemple 1) 10
Stabilisant antioxydant 0,25
Gamma orizanol 0,8 Lécitine 1
Avocadine 4
Squalène 2
H Paraffine 4,25
Acide stéarique 2,5 Propylène glycol 5
Phénonique 0,25
Norgel 5
H20 QSP
Exemple 4: Etude de l'activité dépigmentante d'une crème contenant Bruni clear à 10% versus hydroquinone à 5 %
Des crèmes ont été préparées selon l'exemple 3, et en remplaçant dans la formule de l'exemple 3 l'actif par respectivement de l'hydroquinone à 5% et de l'acide kojique à 1,5%, seul le pourcentage d'eau variant.
L'étude réalisée par la Cecma (Centre d'Etude et d'Exploitation de Cosmétiques, de Médicaments et d'Aliments) a eu pour objectif d'apprécier chez la souris pigmentée l'efficacité de deux nouvelles crèmes dépigmentantes référencées Bruni clear R et AK 1,5% comparativement à un témoin + constitué d'hydroquinone à 5% et à une crème de référence prélevée sur le marché. D'un point de vue macroscopique, la crème Bruni clear R a présenté la meilleure efficacité dépigmentante devant le témoin +, le produit de référence et la crème AK 1,5.
Par ailleurs, sur le plan histologique, la crème Bruni clear R s'est avérée aussi active que le témoin + et significativement supérieure à la crème AK 1,5% et au produit de référence.
Au vu de ces résultats, on peut considérer que la crème Bruni clear R est dotée d'une activité dépigmentante au moins équivalente à celle du témoin + et, en tout cas, supérieure à l'autre formulation testée et au produit de référence.
Il est à noter que la tolérance de la crème Bruni clear R est en outre apparue bonne puisqu'aucune lésion cutanée importante n'a été enregistrée après 12 semaines d'application.
Il est également à noter que la législation interdit l'usage de l'hydroquinone à des doses supérieures à 2%.
Exemple 5 : Etude de l'activité dépigmentante chez la souris
1. Matériels et Méthodes
1.1. Animaux
L'étude a été réalisée chez des souris pigmentées mâles de souche C3H provenant du Centre de Recherche et d'Elevage des Oncins IFFA CREDO,
B.P. 0109, 69592 l'Arbresle CEDEX. Ces animaux n'avaient fait l'objet d'aucun autre essai auparavant et leur poids moyen était d'environ 20 g au début de l'expérimentation.
1.2. Conditions d'encagement et d'alimentation
Une semaine avant l'essai, les animaux ont été placés dans des cages en polypropylène pourvues de sciures dépoussiérées, dans des conditions d'habitat standardisées (température de 20 ± 2° C, lumière 12 heures sur 24), et ont reçu nourriture (aliment spécifique pour rongeurs sous forme de granulés n° 404, U.A.R., 7, rue Galliéni, 91360 Villemoison-sur-Orge) et eau du réseau de distribution publique a satiété. 1.3. Mode opératoire
Préparation et constitution des lots d'animaux
Les animaux ont été répartis par randomisation en quatre lots de 6, de la façon suivante :
. Lot 1 ou lot témoin ® : constitué de 6 animaux traités par une emulsion huile/eau contenant 5% d'hydroquinone,
. Lot 2 : constitué de 6 animaux traités par le produit CD 1, c'est-à-dire Bruni clear ® ,
. Lot 3 : constitué de 6 animaux traités par le produit CD 2, c'est-à-dire de l'acide kojique à 1 %,
. Lot 4 : constitué de 6 animaux traités par une spécialité de référence prélevée directement sur le marché (Dépigmenten ®, lot n° 10405).
Un cinquième lot, constitué de 4 animaux traités par une préparation placebo à base de vaseline, a servi de témoin de pigmentation normale pour l'appréciation des effets des différents traitements.
Traitements
Les animaux ont été traités 6 jours par semaine durant 12 semaines consécutives par une application d'une quantité convenable des préparations à tester sur la peau de la queue, suivie d'un massage doux destiné à assurer la pénétration des principes actifs.
Examens pratiqués
a) Appréciation macroscopique de l'intensité de la dépigmentation
Régulièrement au cours de l'étude ( 1 fois par semaine) et au terme de celle-ci, les zones d'application ont été observées et l'intensité de la pigmentation appréciée en aveugle à l'aide de l'échelle d'évaluation numérique suivante : Evaluation numérique de l'intensité de la dépigmentation à l'examen macroscopique :
. Aucune dépigmentation 0 . Dépigmentation incertaine 1
. Présence de petites taches de dépigmentation bien nettes 2
. Dépigmentation moyenne avec persistance de foyers de 3 coloration normale . Dépigmentation modérément forte avec perte uniforme de la 4 coloration de la peau
. Dépigmentation totale (peau blanche) 5
b) Appréciation de la tolérance locale :
Parallèlement aux examens précédents, l'état de la peau au niveau des zones d'application a été observé afin d'estimer la tolérance cutanée des produits expérimentés.
c) Examen histologique :
A l'issue de l'essai, après les observations macroscopiques, les animaux ont été sacrifiés puis une biopsie cutanée a été réalisée au niveau des sites d'application.
L'examen des préparations histologiques a été pratiqué en aveugle par un expérimentateur ignorant l'ordre d'attribution des traitements aux animaux.
1.4. Expression des résultats et analyses statistiques
Appréciation macroscopique
Les cotations macroscopiques effectuées à chaque examen ont été analysées globalement au moyen du test non paramétrique de Kruskal- Wallis. Lecture des résultats histologiques
Chez des souris n'ayant reçu aucun traitement actif, il a été noté, au grossissement x 40, la présence de structures en anneaux bordées par des formations pilaires. Il a été dénombré entre 52 et 106 de ces anneaux par coupe examinée.
Pour l'interprétation des résultats, il a été considéré que l'aspect pigmenté normal d'un anneau était formé d'une accumulation de mélanocytes dans les couches basales de l'épithélium, avec une migration de pigments mélaniques à travers la couche cornée et une reprise pigmentaire modérée, sous forme de rares mélanophages dans le derme sous-jacent.
Pour évaluer la pigmentation, il a été procédé à :
1. la comptabilisation du nombre total d'anneaux à étudier ;
2. la comptabilisation du nombre d'anneaux présentant une pigmentation normale sur la base des critères susmentionnés ;
3. la comptabilisation du nombre d'anneaux ne présentant, à l'inverse, aucune pigmentation ;
4. la déduction, dans un dernier temps, du nombre d'anneaux hypopigmentés. L'apigmentation a été définie par l'absence complète de mélanocytes et de pigments dans un anneau ou crête épithéliale
L'hypopigmentation s'est avérée variable mais a pu être caractérisée par une nette raréfaction des mélanocytes dans les couches basales, par l'absence de migration de pigments à travers les couches cornées et par une reprise pigmentaire parfois plus abondante dans le derme sous-jacent.
La méthode d'interprétation a consisté à apprécier, pour chacune des préparations les pourcentages de crêtes présentant : 1. une pigmentation normale, 2. une pigmentation partielle,
3. une pigmentation nulle.
Des cotations (C) ont ensuite été attribuées aux crêtes en fonction des modifications de pigmentation observées à l'aide de l'échelle numérique ci-dessous : Evaluation numérique de la pigmentation des crêtes cutanées à l'examen histologique :
. Pigmentation normale 0 . Pigmentation partielle 1
. Pigmentation nulle 2
Un indice de dépigmentation a alors été calculé pour chaque préparation, correspondant à la somme des cotations divisée par le nombre de crêtes observé.
Σ Ci
ID =
N
Ci = cotation individuelle des anneaux N = nombre total d'anneaux
Après avoir vérifié la normalité de la distribution au sein de chaque groupe de traitement, les valeurs obtenues ont été comparées par une analyse de variance complétée par un test de Duncan afin de déterminer le degré de significativité des écarts entre les valeurs moyennes.
Significativité
La signification des différents tests statistiques mis en oeuvre a été retenue pour p < 0,05.
2. Résultats
2.1. Observations macroscopiques
L'évolution au cours du temps des valeurs moyennes de chaque groupe d'animaux a été représentée sur la figure 1. L'examen de celle-ci montre que l'effet dépigmentant se manifeste, de façon plus ou moins nette, au bout de 3 semaines, quel que soit le traitement. On observe ensuite la persistance d'une dépigmentation faible voire incertaine durant environ 6 semaines. C'est à partir de ce moment que les effets dépigmentants apparaissent plus significatifs, en particulier pour la crème CD 1 et le témoins ©, qui se différencient alors des deux autres traitements d'un point de vue statistique. Les effets s'intensifient encore entre la lOème et la llème semaine (pour tous les traitements). Au cours de la dermière semaine de traitement, seule la crème CD 1 a amélioré la dépigmentation cutanée.
2.2. Analyse histologique
La figure 2 montre l'influence des traitements sur l'aspect pigmentaire de la zone d'application. On peut constater que les préparations du groupe témoin © et du groupe traité par la crème CD 1 présentent un plus grand nombre de crêtes épithéliales apigmentées et hypopigmentées par rapport aux préparations des deux autres groupes d'animaux.
La comparaison des indices moyens de dépigmentation (figure 3) révèle une efficacité nettement supérieure (+ 70 à 80 %) pour la crème CD1 et le témoin ©, comparativement à la crème CD 2 et au produit de référence testé simultanément. Ces résultats corroborent parfaitement les observations macroscopiques.
2.3. Tolérance locale Lors des examens macroscopiques, aucun signe d'intolérance n'a été enregistré tout au long de l'essai.
Toutefois, à l'examen histologique, il a été noté, chez une souris du groupe témoin Θ et une souris du groupe CD 1 une parakératose en surface, avec une accumulation de polynucléaires. Il a également été constaté une hyperacanthose importante avec une parakératose chez deux animaux traités par le produit de référence. Un de ces deux animaux présentait, de surcroît, un effacement des plis et des anneaux cutanés. 3. Conclusions
La présente étude a eu pour objectif d'apprécier chez la souris pigmentée l'efficacité de deux nouvelles crèmes dépigmentantes référencées CD 1 et CD 2 comparativement à un témoin © constitué d'hydroquinone à 5% et à une crème de référence prélevée sur le marché.
D'un point de vue macroscopique, la crème CD 1 a présenté la meilleure efficacité dépigmentante devant le témoin ©, le produit de référence et la crème CD 2.
Par ailleurs, sur le plan histologique, la crème CD 1 s'est avérée aussi active que le témoin © et significativement supérieure à la crème CD 2 et au produit de référence.
Au vu de ces résultats, on peut considérer que la crème CD 1 est dotée d'une activité dépigmentante au moins équivalente à celle du témoin © et, en tout cas, supérieure à l'autre formulation testée (CD 2) et au produit de référence.
Il est à noter que la tolérance de la crème CD 1 est en outre apparue bonne puisqu'aucune lésion cutanée importante n'a été enregistrée après 12 semaines d'applications.
Exemple 6 : Etude chez l'homme
1. Critères de sélection
Critères d'inclusion Patients âgés de 18 à 75 ans, porteurs de cloasma, de lentigo sénile, de taches pigmentaires acquises au visage ou à d'autres parties découvertes.
Critères d'exclusion
- taches pigmentées congénitales
- exposition solaire concomitante
- exposition sous appareil UV
- prise de médicaments photosensibilisants, tels que : tétracycline, phénothiazines. Modalité du traitement
Placebo CMP versus crème CD1-MS1, avec une même répartition (9 patients dans chaque groupe), même tube.
Deux applications par jour sur les taches pendant 60 jours. Le rythme des examens a été JO, J21 , J45, J60.
Les critères d'avaluation ont été basés sur des observations cliniques et avis du patient et sur un suivi médical avec avis de l'investigateur.
Evaluation de l'efficacité
Contrôles au moyen d'une échalle analogique graduée comme suit :
Cotation à JO (état de base) Cotation à J21, J45, J60
6 = +++++ = très forte pigmentation 6 = dépigmentation nulle
5 = ++++ = forte pigmentation 5 = dépigmentation incertaine
4 ≈ +++ = pigmentation moyenne 4 = dépigmentation moyenne
3 = ++ = pigmentation faible 3 = dépigmentation bonne
2 = + = très faible pigmentation 2 = dépigmentation très bonne 1 = ± = pigmentation à peine visible 1 = dépigmentation excellente
O = 0 = pigmentation nulle 0 = dépigmentation excellente sans aucune tache visible
Evaluation de la tolérance Contrôles au moyen de feuilles d'observations cliniques sur certains phénomènes (irritation, rougeurs, brûlures, picotements, desquamation, allergies).
0 = tolérance excellente
1 = tolérance bonne 2 = tolérance faible
3 = tolérance mauvaise Expression des résultats et analyses statistiques
Les cotations enregistrées pour l'efficacité à chaque examen ont été analysées globalement au moyen du test non paramétrique de Wilcoxon.
2. Résultats
Analyse de l'efficacité du traitement
Les résultats chiffrés de l'évaluation de l'intensité de la dépigmentation sont consignés dans le tableau ci-dessous. L'examen de celui-ci montre que l'effet dépigmentant se manifeste, de façon nette, au bout de 21 jours de traitement. On observe ensuite une augmentation de l'intensité de la dépigmentation jusqu'au 45ème jour. C'est à partir de ce moment que les effets dépigmentants apparaissent le plus significatif par rapport à J0 (p < 0,01).
CΛ
I
Q U
Figure imgf000022_0001
D'une façon générale, la majorité des patients ne sont pas revenus à la dernière consultation (J = 60 jours), car dans tous les cas, les lésions initiales avaient quasiment disparues dès le 45ème jour du traitement.
Dans le groupe placebo, tous les patients ont interrompu leur traitement dès les premiers jours de traitement par manque total d'efficacité. La grande différence d'efficacité entre le groupe traité et le groupe placebo a eu pour conséquence de lever le double aveugle par la connaissance quasi-immédiate du groupe actif et du groupe placebo.
Analyse de la tolérance locale
Les résultats de la tolérance du traitement au niveau de la zone d'application ainsi obtenus ont été dans l'ensemble excellents. L'absence d'irritation, de rougeur, de picotements, d'allergie, de douleur, du brûlure et de desquamation durant toute la durée du traitement atteste de la très bonne tolérance à long terme de la crème Bruni clear ®.
LEGENDE DES FIGURES
Figure 1
Les astérisques indiquent les différences statistiquement significatives. Chaque point correspond à la moyenne des cotations individuelles pour 6 animaux.
Figure2
Les subdivisions à l'intérieur de chaque barre représentent les proportions de crêtes cutanées de pigmentation différente.
Figure 3
Chaque barre représente la moyenne des valeurs individuelles affectée de l'écart type pour 6 animaux.

Claims

REVENDICATIONS
1. Composition dermo-cosmétique, caractérisée en ce qu'elle contient à titre de principe actif une association à activité dépigmentante :
- (a) d'un mélange acide comprenant (i) au moins un acide α-hydroxylé ou un de ses dérivés, à l'exclusion de l'acide ascorbique,
(ii) au moins un composé choisi dans le groupe comprenant : acide kojique, acide caféique, acide azélaïque, acide aminobutyrique, acide fusarique, 5-hydroxy 2-hydroxyméthyl-γ- pyridone, et leurs dérivés ;
- (b) d'au moins un composant actif d'un extrait végétal d'au moins une plante choisie parmi : mûrier blanc, réglisse, scutelaria, pamplemousse, bouleau, bruyère, arbousier, busserole, citron, laitue, laminaire, concombre, ginseng, houblon, maïs, matricaire, sauge, soja, sureau, spiruline, tilleul, aloe ferox, yukinoshita, sanguisorba, hoelen, rose fruit, α-orizanol, burnet, gingko biloba, tanlex VB, éclipsa Alba, à la condition que lorsque la composition contient de l'acide kojique et un extrait de réglisse, elle contient au moins un autre composant d'extrait végétal.
2. Composition selon la revendication 1 , caractérisée en ce que l'acide α-hydroxylé est choisi dans le groupe comprenant : acide malique, acide citrique, acide lactique et acide glycolique et leurs sels.
3. Composition selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que la concentration en acide α-hydroxylé est comprise entre 0, 1 et 45% par rapport au poids total de la composition.
4. Composition selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que le composant actif d'un extrait végétal est obtenu par une étape d'extraction en milieu hydroalcoolique à partir des tiges, des feuilles et/ou des racines de plantes.
5. Composition selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que le mélange acide constitue 0,1 à 99% en poids du principe actif.
6. Composition selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que le rapport en poids entre le mélange acide et les composants actifs d'un extrait végétal est compris entre 50/50 et 70/30.
7. Composition selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que le mélange acide, pour sa partie (ii) est constitué d'un produit choisi parmi l'acide kojique, l'acide caféique, la 5- hydroxy 2-hydroxyméthyl- γ-pyridone, leurs sels et/ou leurs mélanges.
8. Composition selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce qu'elle contient en outre au moins un composé choisi parmi les ceramides, les macromolécules vectorisantes.
9. Composition selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que le mélange acide est au moins partiellement greffé sur des sucroesters.
10. Composition selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce qu'elle a la formule suivante :
Acide kojique de l à 15%
Acide glycolique de 20 à 30% et de 20 à 35% d'extraits végétaux provenant de Tanlex VB, Yukinoshita, Naringine, Sohakuhi Bg, Mûrier blanc, Citron Bg, et le complément en excipient acceptable pour cette composition.
11. Utilisation d'une composition selon l'une des revendications 1 à 10, pour la préparation d'un médicament utile pour le traitement des hyperpigmentations.
12. Utilisation d'une composition selon la revendication 1 1 , caractérisée en ce que le médicament est utile pour le traitement des ephelides, lentigines, lentigo, mélasma et des dermatoses pigmentées dues au soleil.
13. Méthode de traitement cosmétique pour améliorer l'aspect des peaux présentant une pigmentation irrégulière, caractérisée en ce qu'on applique localement une composition selon l'une des revendications 1 à 10.
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