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WO1996018627A1 - Derive tripeptidique contenant de l'ahpba - Google Patents

Derive tripeptidique contenant de l'ahpba Download PDF

Info

Publication number
WO1996018627A1
WO1996018627A1 PCT/JP1995/002546 JP9502546W WO9618627A1 WO 1996018627 A1 WO1996018627 A1 WO 1996018627A1 JP 9502546 W JP9502546 W JP 9502546W WO 9618627 A1 WO9618627 A1 WO 9618627A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
group
compound
acid
amino
carbonyl
Prior art date
Application number
PCT/JP1995/002546
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Yuichiro Yabe
Takashi Watanabe
Takashi Nishigaki
Yuji Ozawa
Tomoaki Komai
Akihiko Nakagawa
Original Assignee
Sankyo Company, Limited
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sankyo Company, Limited filed Critical Sankyo Company, Limited
Priority to AU41880/96A priority Critical patent/AU4188096A/en
Publication of WO1996018627A1 publication Critical patent/WO1996018627A1/ja

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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0202—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-X-X-C(=0)-, X being an optionally substituted carbon atom or a heteroatom, e.g. beta-amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • the present invention relates to a novel human protease having an inhibitory activity on a human derived immunodeficiency syndrome onset virus (hereinafter referred to as HIV) -derived protease (hereinafter referred to as HIV protease).
  • HIV protease a human derived immunodeficiency syndrome onset virus
  • HIV protease a human derived immunodeficiency syndrome onset virus
  • HIV protease a tripeptide derivative containing amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoic acid
  • AIDS is a disease caused by a retrovirus called HIV, one of the lentiviruses. According to WHO estimates, about 1 million people worldwide are affected by the disease today, and the number of patients is ever increasing. The disease is fatal and there is currently no effective cure for cure.
  • a general feature of retrovirus replication is that the viral protease processes the viral precursor protein to produce the viral protein required for virus composition and function. Inhibiting this processing usually prevents the production of infectious virus.
  • Kohl, NE et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 85, 4686 (1988) report that mature infectious virions when HIV-encoded proteases are genetically inactive. Has not been produced. This indicates that that force 5 to inhibit HIV protease Ichize ', prevention of HIV infection properly is effective in the treatment of treatment and AIDS Things.
  • HIV protease inhibitors are administered in vivo or parenterally to a living body, it is difficult to maintain a blood concentration sufficient to suppress virus replication in infected cells in the body. In fact, few HIV protease inhibitors are in clinical trials.
  • the present invention includes a transition-state analog that is not cleaved by HIV protease, is specific for HIV protease, has excellent enzyme inhibitory activity, is effective at low levels on infected cells, and is useful in vivo.
  • a low-molecular-weight HIV protease inhibitor that achieves a blood level that can be expected to be effective by oral or parenteral administration.
  • Rl represents a quinolin-12-carbonyl group or a quinoxaline-12-carbonyl group
  • R2 represents a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, an acetyl group, a methoxymethyl group, Represents a methylthiomethyl group, an acetyloxymethyl group, a bivaloyloxymethyl group, a HOOC (CH 2 ) n CO— group (n represents an integer of 2 to 4) or a HOOCCH 20 CH 2 CO— group And a salt thereof.
  • BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION In the above general formula (I):
  • alkyl group having 1 to 4 carbon atoms of R 2 examples include a methyl, ethyl, n- propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, s-butyl and t-butyl group. Is a methyl or t-butyl group.
  • the compound (I) of the present invention may be converted into a salt in some cases.
  • the compound (I) is an alkali metal salt such as a sodium salt or a potassium salt, or a calcium salt.
  • Metal salts such as alkaline earth metal salts such as magnesium and magnesium salts; hydrohalides such as hydrochloride, hydrobromide and hydroiodide, nitrate, perchlorate and sulfuric acid Inorganic acid salts such as salts and phosphates; lower alkane sulfonates such as methanesulfonate, trifluormethanesulfonate and ethanesulfonate, benzenesulfonate, p_toluenesulfonate Organic acid salts such as arylsulfonate, fumarate, succinate, citrate, tartrate, oxalate, maleate, etc.
  • the compounds (I) of the present invention also include stereoisomers having an asymmetric carbon in the molecule and each having an R configuration or an S configuration, and each of them or a mixture thereof of Both are included in the present invention.
  • R2 is a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, an acetyl group, a methoxymethyl group, a HO OC (C H2) ⁇ CO— group (n represents an integer of 2 to 4) or H 00
  • R2 is a hydrogen atom or an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms
  • Me represents a methyl group
  • ⁇ Bu represents a t-butyl group
  • M0M represents a methoxymethyl group
  • Ac represents an acetyl group
  • Suc represents a succinyl group (H 00 C (CH 2) 2 CO—)
  • Dig indicates a diglycolyl group (H00 CC H2 0 C H2 CO—)
  • Glt indicates a glutaryl group (H 00 C (C H2) 3 C-one).
  • M SM represents a methylthiomethyl group
  • a OM represents an acetomethyl group
  • Q xa represents a quinoxaline 12-carbonyl group
  • Q oa represents a quinolinyl 12-carbonyl group.
  • PM represents a pinoloyloxymethyl group.
  • R2 have the same meanings as above, and R3 and R4 are the same and represent a arylmethyl group which may be substituted with lower alkyl, lower alkoxy or hydroxyl group, or Represents a hydrogen atom, the other represents an amino group-protecting group other than arylmethyl group, and R5 represents a normal amino-protecting group.
  • R 3 and R 4 are substituted with lower alkyl, lower alkoxy or hydroxyl group
  • benzyl and arylmethyl groups include benzyl, 4-methylbenzyl, 4-methoxybenzyl, 4-ethylbenzyl, 4-ethoxybenzyl and 4-hydroxybenzyl. .
  • protecting group for amino groups other than arylmethyl group for R 3 or R 4 and the usual protecting group for the amino group for R 5 are not limited as long as they are commonly used.
  • said "aliphatic acyl group” benzoyl, o-naphthoyl.
  • Aryl carbonyl groups such as 1-naphthyl, 2-bromobenzoyl, halogenylarylcarbonyl groups, such as 4-cyclobenzoyl, 2,4,6—trimethylbenzoyl, 4-toluoyl
  • Lower alkylated aryls such as lower carbonyl groups, lower alkoxylated aryls such as 4-anisole, and lower alkoxylated aryls such as 4-anisole.
  • Aromatic carbonyl groups lower alkoxycarbonylated arylcarbonyl groups such as 2- (methoxycarbonyl) benzoyl, and arylated aryloxy groups such as 4-phenylbenzyl Acyl group; lower alkoxy such as methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, t-butoxycarbonyl, and isobutoxycarbonyl Lower alkoxycarbonyl substituted by halogen or tri-lower alkylsilyl groups such as cyclocarbonyl group, 2,2,21-triethoxy carbonyl, 2-trimethylsilylethoxycarbonyl An alkoxycarbonyl group such as a group; an alkenyloxycarbonyl group such as vinyloxycarbonyl and aryloxycarbonyl; benzyloxycarbonyl, 4-methoxybenzyloxycarbonyl, and 3,4-dimethoxybenzylo
  • the aryl ring is substituted with one or two lower alkoxy or nitro groups,
  • Compound (VI) used as a starting material is known or can be synthesized according to a known method.
  • the 4-chloroproline of compound (VI) can be obtained by using 4-hydroxyproline as a raw material, using hydrochloric acid, using phosphorus trichloride, or using an acid halide such as thionyl chloride or oxychlorine.
  • an acid halide such as thionyl chloride or oxychlorine.
  • AK Bose et al. [Tetrahedron Letters, 40, 3937 (1973), a method using N-chlorosuccinic acid imide and trialkyl phosphate, JG Calzada S (0rg. Syn. 634), a method of reacting carbon tetrachloride with triphenylphosphine is used.
  • Compound (V) used as a starting material is known or is easily synthesized according to a known method. For example, it is synthesized according to the method of R. Horanz et al. (Synthes is, 703, 1989) and the method of MT Reets et al. (Tetraheron Lett., 29.3295, 1988).
  • the first step is a step of reacting the compound (V) or a reactive derivative of the carboxylic acid thereof with the amino compound (VI) to produce the compound (VII).
  • the reaction is carried out according to a general peptide synthesis method, for example, an azide method, an active esterification method, a mixed acid anhydride method or a condensation method.
  • amino acid hydrazine produced by reacting an amino acid or its ester with hydrazide in an inert solvent at around room temperature was reacted with a nitrite compound to convert it to an azide compound. Later, it is carried out by treating with an amine compound.
  • a nitrite compound used include an alkali metal nitrite such as sodium nitrite or an alkyl nitrite compound such as isonitrite.
  • inert solvent used examples include amides such as dimethylformamide and dimethyl acetate, sulfoxides such as dimethyl sulfoxide, and pyrrolidone such as N-methylpyrrolidone. Can be mentioned.
  • the two reactions in this step are usually performed in one reaction solution, and the reaction temperature is 150 to 0 in the first stage, 110 to 10 in the second stage, and the reaction time is Is 5 minutes to 1 hour, and the latter is 10 hours to 5 days.
  • the active esterification method is carried out by reacting an amino acid with an active esterifying agent in a solvent to produce an active ester, and then reacting the active ester with an amide compound.
  • the solvent used is not particularly limited as long as it is inert.
  • examples thereof include halogenated hydrocarbons such as methylene chloride and chloroform, ethers, and tetrahydrofuran.
  • ethers include amides such as dimethylformamide and dimethylacetamide.
  • the active esterifying agents used include, for example, N-hydroxysuccinimide, n-hydroxybenzotriazole, N-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide.
  • N-hydroxy compounds can be mentioned, and the active esterification reaction is suitably carried out in the presence of a condensing agent such as dicyclohexylcarbodiimide (DCC).
  • DCC dicyclohexylcarbodiimide
  • the reaction temperature is between 10 and 25 c in the active esterification reaction, around room temperature in the reaction between the active ester compound and the amine, and the reaction time is between 30 min and 10 h for both reactions. is there.
  • the mixed acid anhydride method is carried out by producing a mixed acid anhydride of an amino acid and then reacting it with an amine.
  • the reaction to produce the mixed anhydride is carried out in an inert solvent (for example, ethers such as ether and tetrahydrofuran, amides such as dimethylformamide and dimethylacetamide), and ethyl ethyl carbonate.
  • an inert solvent for example, ethers such as ether and tetrahydrofuran, amides such as dimethylformamide and dimethylacetamide
  • Lower alkyl carbonates such as sodium butyl carbonate, di-lower alkyl cyanophosphoric acid such as getyl cyanophosphoric acid (DEPC), or diphenyluric acid azide (DP PA) This is achieved by reacting the acid.
  • the reaction is suitably carried out in the presence of an organic amine such as triethylamine, N-methylmorpholine, the reaction temperature is between 110 and 25 "C, and the reaction time is 3 minutes. 0 minutes to 5 hours.
  • an organic amine such as triethylamine, N-methylmorpholine
  • the reaction of the mixed anhydride with the amine is preferably carried out in an inert solvent (eg, ethers such as ether, tetrahydrofuran, amides such as dimethylformamide, dimethylacetamide).
  • an inert solvent eg, ethers such as ether, tetrahydrofuran, amides such as dimethylformamide, dimethylacetamide.
  • the reaction is carried out in the presence of the above-mentioned organic amine, the reaction temperature is from 0 to room temperature, and the reaction time is from 1 hour to 24 hours.
  • the condensation method is carried out by directly reacting an amino acid and an amine in the presence of a condensing agent such as dicyclohexylcarbodiimide or carbonyldimidazole to produce the above-mentioned active ester.
  • the reaction is performed in the same manner as in the reaction.
  • the second step is a step of removing the protecting group for the amino group of the compound (VI
  • a silyl group When a silyl group is used as a protecting group for an amino group, it is usually treated with a compound that generates fluorine anion such as tetrabutylammonium fluoride or potassium fluoride. Removed.
  • the reaction solvent is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction, but ethers such as tetrahydrofuran and dioxane are preferable.
  • the reaction temperature and reaction time are not particularly limited, but the reaction is usually carried out at room temperature for 10 to 18 hours.
  • an alkoxycarbonyl group such as t-butyloxycarbonyl group
  • it is removed by treating with an acid in an inert solvent.
  • the reaction solvent is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction.
  • Amides such as dimethylformamide and dimethylacetamide; getyl ether, diisopropyl ether, and tetrahydrofuran Ethers such as dioxane, dimethoxetane, diethylene glycol dimethyl ether; methanol, ethanol, n-prono. Nor, Isoprono ,.
  • the acid to be used is not particularly limited as long as it is an acid, but is preferably an inorganic acid such as hydrochloric acid, an organic acid such as trifluoroacetic acid, or a trifluoroboronate ester. It is such a Lewis acid.
  • the reaction temperature and reaction time are not particularly limited, but are usually 0 to 30 and the reaction is carried out by treating for 20 minutes to 1 hour.
  • the protecting group for the amino group is an aliphatic acyl group, an aromatic acyl group, or a substituted methylene group forming a Schiff base
  • treatment with an acid or a saturated group in the presence of an aqueous solvent. Can be removed.
  • the acid used is not particularly limited as long as it is usually used as an acid.
  • an inorganic acid such as hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, or hydrobromic acid is used.
  • the base used is not particularly limited as long as it does not affect the other parts of the compound, but is preferably a metal alkoxide such as sodium methoxide, or carbonate.
  • isomerization may occur in hydrolysis with a base.
  • the solvent used is not particularly limited as long as it is one used in a usual hydrolysis reaction.
  • Water alcohols such as methanol, ethanol, n-propanol, tetrahydrofuran, and dioxane;
  • Organic solvents such as ethers or mixed solvents of water and the above organic solvents are preferred.
  • the reaction temperature and reaction time vary depending on the starting material, the base used, and the like, and are not particularly limited. However, in order to suppress a side reaction, the reaction is usually performed at 0 to 150 for 1 to 10 hours.
  • the protecting group for the amino group is an aralkyloxycarbonyl group
  • it is removed by reduction in an inert solvent in the presence of a catalytic reduction catalyst.
  • the solvent to be used is not particularly limited as long as it is one used in a usual reduction reaction.
  • it is dimethyl ether, diisopropyl ether, tetrahydrofuran, dioxane, dimethoxeta.
  • Ethers such as dimethyl ether; methanol, ethanol, n -Prono, 'Nol, Isoprono ⁇ ', n-butanol, isobutanol, toluene, isoamyl alcohol, diethyl glycol, glycoline, octanol , Alcohols such as cyclohexanol and methyl sorb.
  • Examples of the catalytic reduction catalyst to be used include palladium carbon, palladium black and the like.
  • reaction temperature and reaction time vary depending on the starting materials and the like, and are not particularly limited. Usually, the reaction is carried out by reacting hydrogen at normal pressure to 10 atm near room temperature for 1 hour to 8 hours.
  • the protecting group of the amino group is an arylmethyl group
  • it is usually removed by contacting with a reducing agent in a solvent, and preferably, the catalytic reduction is carried out at room temperature under a catalyst. It is preferable to use a removing method or a removing method using an oxidizing agent.
  • the solvent used in the removal by catalytic reduction is not particularly limited as long as it does not participate in the reaction.
  • Alcohols such as ethanol, methanol, ethanol, and isopropanol; ethers such as getyl ether, tetrahydrofuran, and dioxane; and aromatics such as toluene, benzene, and xylene.
  • Aliphatic hydrocarbons such as aromatic hydrocarbons, hexane and cyclohexane, esters such as ethyl acetate and propyl acetate, fatty acids such as formic acid and acetic acid, or a mixed solvent of these organic solvents and water Alternatively, a mixed solvent of a fatty acid and an alcohol is preferable.
  • the catalyst to be used is not particularly limited as long as it is usually used in a catalytic reduction reaction, but is preferably palladium black, palladium carbon, Raney-nickel, platinum oxide, platinum oxide Black, rhodium aluminum monoxide, triphenylphosphine rhodium monochloride, no. Radium monosulfate barrier is used.
  • the pressure is not particularly limited, it is usually carried out at a pressure of 1 to 0 atm.
  • reaction temperature and reaction time vary depending on the starting material and catalyst type, etc. It is usually carried out at 0 to 100 hours for 5 minutes to 24 hours.
  • the solvent used in the removal by oxidation is not particularly limited as long as it does not participate in this reaction, but is preferably a water-containing organic solvent.
  • organic solvents include ketones such as acetone, halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, chloroform, carbon tetrachloride, and acetonitrile.
  • Ethers such as nitriles, getyl ether, tetrahydrofuran, and dioxane; and amines such as dimethylformamide, dimethylacetamide, and hexamethylphosphorotriamide
  • sulphoxides such as dimethylsulphoxide.
  • the oxidizing agent to be used is not particularly limited as long as it is a compound usually used for oxidation, but preferably, potassium persulfate, sodium persulfate, or ammonium silicate is used.
  • CAN potassium persulfate, sodium persulfate, or ammonium silicate is used.
  • CAN potassium persulfate, sodium persulfate, or ammonium silicate is used.
  • CAN 2,3-dichloro-5,6-dicyano- p- benzoquinone (DDQ) are used.
  • reaction temperature and reaction time vary depending on the starting material and the type of catalyst, etc., but are usually 0 to 150, and are usually from 10 minutes to 24 hours.
  • the protecting group of the amino group is a diarylmethyl group
  • it can be achieved by performing the treatment in the same manner as in the above-mentioned conditions for the removal reaction of the arylmethyl group.
  • the amino-protecting group is an alkenyloxycarbonyl group
  • the amino-protecting group usually forms the above-mentioned aliphatic acyl group, aromatic acyl group, alkoxycarbonyl group or Schiff base. This can be achieved by treating with a base in the same manner as the conditions for the removal reaction in the case of a substituted methylene group.
  • the method of removing it using palladium and triphenylphosphine or nickel tetrapropyl is particularly simple and can be carried out with few side reactions.
  • the third step is a step of producing the compound (X) by reacting the compound (IX) or a reactive derivative of the carboxylic acid thereof with the compound (VIII) in the same manner as in the first step.
  • the fourth step is a step of producing the compound (XI) by removing the protective period of the amino group of the compound (X) in the same manner as in the second step.
  • the fifth step is a step of reacting the compound (XII) or a reactive derivative of the carboxylic acid thereof with the compound (XI) in the same manner as in the first step to produce the compound (I) of the present invention.
  • R1, R2 , R3 , R4 and R5 have the same meanings as described above, and R6 represents a hydroxyl-protecting group.
  • the sixth step is a step of producing a compound (XIV) by protecting the hydroxyl group of the compound (VII) by a usual method.
  • the seventh step is a step of producing a compound (XV) by removing the amino group of the compound (XIV) in the same manner as in the second step of the method A.
  • the eighth step is a step of reacting the compound (XVI) or a reactive derivative of the carboxylic acid thereof with the amino compound (XV) in the same manner as in the first step of Method A to produce the compound (XVII). is there.
  • the ninth step is a step of producing a compound (XVIII) by removing the protective period of the amino group of the compound (XVIII) in the same manner as in the second step of Method A.
  • the compound (XII) or a reactive derivative of the carboxylic acid thereof and the amino compound (XVIII) are reacted in the same manner as in the first step of the method A to produce a conjugate (XIX). It is a process.
  • the first step is a step of reacting compound (X) with compound (XIX) to produce compound (XXI).
  • the 12th step is a step for producing the compound (I) of the present invention by selectively removing the hydroxyl-protecting group (R 6 ) of the compound (XXI).
  • each target compound is collected from the reaction mixture according to a conventional method.
  • the reaction mixture is appropriately neutralized, and if insolubles are present, they are removed by filtration, an organic solvent immiscible with water is added, and after washing with water, the solvent is distilled off. can get.
  • the obtained target compound can be further purified, if necessary, by a conventional method, for example, recrystallization, reprecipitation or chromatography.
  • the administration form of the compound (I) of the present invention includes, for example, oral administration by tablets, capsules, granules, powders or syrups, or parenteral administration by injections or suppositories.
  • These preparations may include excipients (eg, lactose, sucrose, dextrose, mannite, saccharides such as sorbite; corn starch, starch starch, starch, Dextrin, power Starch derivatives such as ropoxymethyl starch; cellulose derivatives such as crystalline cellulose, low-substituted hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, carboxymethylcellulose, carboxymethylcellulose calcium, and internally-carboxylated methylcarboxymethylcellulose sodium.
  • excipients eg, lactose, sucrose, dextrose, mannite, saccharides such as sorbite
  • corn starch, starch starch, starch, Dextrin power Starch derivatives such as ropoxymethyl starch
  • Arabic gum dextran
  • organic excipients such as burlan: and silicate derivatives such as light silicic anhydride, synthetic aluminum silicate, and magnesium metasilicate magnesium
  • silicate derivatives such as light silicic anhydride, synthetic aluminum silicate, and magnesium metasilicate magnesium
  • Inorganic excipients such as phosphates, carbonates such as calcium carbonate, and sulfates such as calcium sulfate.
  • Lubricants eg, stearic acid, calcium stearate, metal stearate such as magnesium stearate; talc; colloid silica; veegum; Cousins; boric acid; adipic acid; sulfates such as sodium sulfate; glycol; fumaric acid; sodium benzoate; DL leucine; sodium fatty acid salt; sodium lauryl sulfate; Lauryl sulfates such as magnesium lauryl sulfate; silicic acids such as silicic anhydride and silicic acid hydrate; and the above-mentioned starch derivatives.), Binders (for example, polyvinylpyrrolidone) Don, Macrogol, and the same compounds as the excipients can be mentioned.), Disintegrants (for example, the same compounds as the excipients, and Chemically modified starches such as croscarmellose sodium, carboxymethyl starch sodium, and cross-linked polyvinyl pyr
  • the amount used depends on the symptoms, age, administration method, etc.For example, in the case of oral administration, the lower limit is 0.1 mg / kg and the upper limit is 20 mg / kg. In the case of intravenous administration, it is preferable to administer once or less, 0.01 mg / kg as the lower limit and 2 mg / kg as the upper limit, once or several times a day depending on the symptoms.
  • the present invention will be described in more detail with reference to examples.
  • reaction mixture solvent was evaporated under reduced pressure, acetic Echiru 2 0 m 1 was added 5% Kuen acid, washed with 5 0 / oN a HC O3 solution and saturated brine, and dried over anhydrous N a 2 S 0 4 .
  • Anti ⁇ compound solvent was evaporated under reduced pressure, acetic Echiru 3 0 m 1 was added 5% Kuen acid, 5% N a HC 03 solution and saturated brine in washing ⁇ , dried over anhydrous N a 2 S 0 4 did.
  • the solvent was evaporated under reduced pressure, and the oily residue was purified by silica gel chromatography (methylene chloride-methanol-methanol-10 :). Crystallization from hexane gave 1.56 g of the title compound as a white crystalline solid.
  • reaction mixture solvent was evaporated under reduced pressure, acetic Echiru 2 0 ml was added, 5% Kuen acid, 5% N a HC 03 solution and saturated brine in washing ⁇ and Drying over anhydrous N a 2 S 0 4 .
  • the solvent is decompressed and the oily residue is purified by silica gel chromatography.
  • reaction mixture solvent was evaporated under reduced pressure, acetic Echiru 2 0 m 1 was added 596 Kuen acid, 5 6 N a HC O3 solution and a saturated saline wash ⁇ , and dried over anhydrous N a 2 S 0 4.
  • the reaction mixture was evaporated reduced pressure solvent, acetic Echiru 2 0 m 1 was added 5% Kuen acid, 5% N a HC O3 solution and a saturated saline wash ⁇ , and dried over anhydrous N a 2 S 0 4.
  • reaction mixture was washed with 5% citrate, 5% NaHCl3 aqueous solution and brine, and dried over anhydrous Na2S04.
  • each of the standard bisected hard gelatin capsules by filling each of the standard bisected hard gelatin capsules with 100 mg of the powdered compound of Example 1, 150 mg of lactose, 50 mg of cellulose and 6 mg of magnesium stearate, Manufacture unit capsules, wash and dry.
  • a mixture of the compound of Example 1 in a digestible oil for example, soybean oil, cottonseed oil, or olive oil, is prepared and injected into gelatin with a positive displacement pump to give a soft powder containing 100 mg of active ingredient.
  • a digestible oil for example, soybean oil, cottonseed oil, or olive oil
  • the HIV protease inhibitory activity of the peptide derivative of the present invention was determined using the IC 50 value as an index as follows.
  • Escherichia coli BL-21 containing the T7 polymerase gene [(DE-3) Barbar a A. Mofiatt et al., J. Mol. Biol., 189, 113-130, 1986] describes: After transfection of pT7HIV.GP (-), the resulting transformants were transformed into 600% of M9CA—10% LB medium containing 200 ⁇ gZml of ampicillin. Culture at 37 until the absorbance at nm reaches 2.
  • the obtained cells were collected and stored as pellets at 18.
  • the polyprotein synthesized from the expression vector is degraded in the cells by autolysis, and the HIV protease itself is produced.
  • DNaseI 0.1 mg
  • 10 mM magnesium chloride were added to decompose DNA in the suspension.
  • the supernatant obtained by centrifuging this suspension was applied to DEAE Sephade XA25 column (5 cm inner diameter X 20 cm) to fractionate.
  • the column is a buffer B [5 O mMHE PES (pH 7.8),] mM dithiol. Plate, lO ⁇ gZmI aprotinin, 5 mM ethylenediaminetetraacetic acid, 1 OgZml benzamide, 1 mM fluormethylsulfonic acid, 10% glycerin] Using.
  • the obtained active fraction was concentrated twice by using an ultrafiltration membrane having a molecular weight cut off of 10,000 daltons, and stored at 180 as an enzyme solution.
  • the measurement of the HIV protease inhibitory activity was carried out based on the method of E.D.Matey0shhi et al. (Science 247,954 (1990)).
  • EDAN S I-sulfonic acid
  • a reaction solution of 50 mM sodium acetate (pH 5.5) -11 M saline containing the inhibitor at each concentration was prepared.
  • a partially purified recombinant HIV protease was added thereto, the reaction was started at room temperature, and the reaction product was measured by a fluorescence spectrophotometer. The amount of reaction produced per unit time in the presence of each concentration of the inhibitor was calculated, and the 509 inhibition degree (IC 50 ) was determined.
  • the compounds of the present invention showed strong inhibitory activity.
  • Mo1t4 cells (Mo1t4ZHTLVIIIB) persistently infected cells
  • Mo1t4 cells (Mo1t4ZHTLVIIIB) were transformed twice using RPMI1640 medium (containing 1096 non-immobilized fetal calf serum). After washing, the cells were inoculated into the same medium at a concentration of ixi 05 cells, and cultured at 37 under 5% carbon dioxide gas. After 2 hours, the culture supernatant was obtained by centrifugation and used as virus stock: C ⁇ cells were grown in R ⁇ I 1640 medium (containing 10% non-immobilized fetal calf serum) for 2 hours. xi 0 was adjusted to 5 cells / / ml, were added to the virus scan bets get diluted to a suitable concentration.
  • the compounds of the present invention exhibited strong virus release inhibitory activity.
  • the compounds of the present invention exhibit pharmacodynamic properties which are expected to exert the above inhibitory effects in vivo.
  • 1 OmgZkg of the compound of the present invention is intravenously administered to a rat
  • the blood level at 1 hour after the administration is almost the same as or higher than the ED go value in the cell test.
  • the concentration detected in the blood of the rat 30 minutes after administration is higher than the ED90 value in the cell test, preferably the cell concentration. It is about 6 times the ED 90 value in the test.
  • a solution for administration as follows.
  • 1 Omg of the test compound is dissolved in 0.3 ml of dimethylacetamide (DMA), and a solution is prepared by adding 0.4 ml of PEG 400 ml and 0.3 ml of water I do.
  • DMA dimethylacetamide
  • 30 m of the test compound was dissolved in 0.6 ml of DMA, then 0.8 ml of PEG and 0.8 ml of water.
  • blood is collected over time, and the blood is centrifuged (300 rpm, 10 minutes) to obtain plasma. Analyze by HPLC using the column switching method to determine the plasma concentration.

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Description

明細書
A H P B A含有ト リべプチ ド誘導体 技術分野 本発明は、 優れたヒ ト後天性免疫不全症症候群発症ウィルス （以下、 H I V) 由来のプロテアーゼ （以下、 H I Vプロテアーゼ） 阻害活性を有す る新規な 3—ァミ ノ一 2—ヒ ドロキシ一 4—フエニルブタン酸 （以下、 A HP BA) 含有ト リペプチ ド誘導体に関する。 背景技術
A I D Sはレンチウィルスの一つである H I Vと称するレ ト ロウィルス によ り引き起こされる病気である。 WHOの見積りによれば、 今日、 世界 中で約 1 00 0万人がこの病気にかかっており、 その患者数はさらに増加 の一途をたどっている。 この病気は致死的であり、 治癒に至る有効な治療 法は現在のところまだないと考えられる。
レ トロウィルス複製の一般的な特徴は、 ウィルスの産生するプロテア一 ゼがゥィルスの前駆体たん白をプロセシングすることによって、 ウイルス の構成及び機能に必要なゥィルスたん白を生成することである。 このプロ セシングを阻害すれば、 通常は感染性のウイルス産生を防止することがで きる。 例えば、 Proc. Natl. Acad. Sci. 85, 4686 (1988) に記載さ れた Kohl, N.E.らの論文は、 H I Vでコー ドされたプロテアーゼが遺伝的 に不活性になると成熟した感染性ウィルス粒子は産生されないことを明ら かにしている。 このことは、 H I Vプロテア一ゼを阻害すること力5'、 H I V感染の予防も しく は治療および A I D Sの治療に有効であることを示す ものである。
この考えに基づき、 すでに数多く の H I Vプロテァーゼ阻害物貿が合成 され、 また、 自然界から見出され、 / v/irりで抗 H I V活性を示す物質も 報告されてレ る [Lang . , Rosel J. Arch. Pharm. 326, 921 (1993) ； Martin, J. A., Antiviral Ros.， 17, 265 (1992)；
Meek, T. D. , J. of Enzyme Inhibition, _6_, 65 (1992)； 特開平 5 -222020号、 J. Med. Chem.1993, 36, 292) ] 。
しかし、 一般に生体内にこれら H I Vプロテアーゼ阻害剤を轻ロまたは 非経口投与したと き、 体内の感染細胞におけるゥィルスの複製を抑制する のに十分な血中濃度を維持することは困難であるため、 実際に臨床試験段 階にある H I Vプロテア一ゼ阻害剤は少ない。
本発明は、 H I Vプロテアーゼによって切断されない遷移状態アナロー グを含み、 H I Vプロテア一ゼに対して特異的で、 優れた酵素阻害活性を 有し、 感染細胞に低澳度でも有効であり、 生体内での有効性が期待できる 血中澳度を経口または非経口投与によ り達成する低分子の H I Vプロテア ーゼ阻害剤を提供する。 発明の開示 本発明の新規な A H P B A含有ト リぺプチ ド誘導体は、
一般式
H / [式中、 Rl はキノ リ ン一 2—カルボニル基又はキノキサリ ン一 2—カル ボニル基を示し、 R2 は水素原子、 炭素数 1乃至 4個のアルキル基、 ァセ チル基、 メ トキシメチル基、 メチルチオメチル基、 ァセ ト キシメチル基、 ビバロイルォキシメチル基、 HOOC (C H2 ) n CO—基 （nは、 2乃 至 4の整数を示す） 又は HOOCCH2 0 C H2 CO—基を示す] で表わ される化合物及びその塩である。 発明を実施するための最良の形態 上記一般式 （ I ) において ：
R 2 の炭素数 1乃至 4個のアルキル基と しては、 メチル、 ェチル、 n — プロ ピル、 イ ソプロ ピル、 n—ブチル、 イ ソブチル、 s—ブチル及び t一 ブチル基があげられ、 好適にはメチルまたは t一ブチル基である。
本発明の化合物 （I ) は、 塩にすることができる場合があり、 そのような と しては、 好適には、 ナ ト リ ウム塩、 カリ ウム塩のようなアルカ リ金属塩、 カルシウム塩、 マグネシウム塩のよう なアル力リ土類金属塩等の金属塩 ； 塩酸塩、 臭化水素酸塩、 沃化水素酸塩のよう なハロゲン化水素酸塩、 硝酸 塩、 過塩素酸塩、 硫酸塩、 燐酸塩等の無機酸塩 ； メ タ ンスルホン酸塩、 ト リ フルォロメ タ ンスルホン酸塩、 エタ ンスルホン酸塩のよ う な低級アル力 ンスルホン酸塩、 ベンゼンスルホン酸塩、 p_トルエンスルホン酸塩のよ う なァリ ールスルホ ン酸塩、 フマール酸塩、 コハク酸塩、 クェン酸塩、 酒石 酸塩、 蓚酸塩、 マレイ ン酸塩等の有機酸塩及びグルタ ミ ン酸塩、 ァスパラ ギン酸塩のよ う なアミ ノ酸塩を挙げることができる。 又、 本発明の化合 物 （ I ) は、 大気中に放置しておく こ と によ り、 水分を吸収し、 吸着水が 付いたり、 水和物となる場合があり、 そのよ う な塩も本発明に包含される 本発明の化合物 （ I ) は、 分子内に不斉炭素を有し、 各々が R配置、 S 配置である立体異性体が存在するが、 その各々、 或いはそれらの混合物の いずれも本発明に含まれる。
本発明の化合物のうち、 好適なものと しては、
2 ) R2 が水素原子、 炭素数 1乃至 4個のアルキル基、 ァセチル基、 メ ト キシメチル基、 HO O C (C H2 ) η C O—基 （ nは、 2乃至 4の整数を 示す） 又は H 00 C C H2 0 C H2 C O—基である化合物、
3 ) R2 が水素原子又は炭素数 1乃至 4個のアルキル基である化合物、
4 ) R2 が水素原子である化合物である。
本発明の代表化合物を下記表 1 に示すが、 本発明の化合物はこれらに限 定されるものではない。
なお、 表 1 中、 M eはメチル基を示し、 丄 B uは t —ブチル基を示し、 M 0Mはメ トキシメチル基を示し、 A cはァセチル基を示し、 S u cはサク シニル基 （ H 00 C ( C H 2 ) 2 C O— ) を示し、 D i gはジグリ コリ ル 基 （H00 C C H2 0 C H2 C O—） を示し、 G l tはグルタリル基 （H 00 C (C H2 ) 3 C〇一） を示し、 M SMはメチルチオメチル基を示し A OMはァセ トキシメチル基を示し、 Q x aはキノキサリ ン一 2—カルボ 二ル基を示し、 Q o aはキノ リ ン一 2—カルボ二ル基を示し、 P〇Mはピ ノ ロ イルォキシメチル基を示す。
(表 1 )
Figure imgf000007_0001
例示番号 R2
1 Q x a H 2 Q x a M e 3 Q x a 丄 B u 4 Q x a A c 5 Q x a MOM 6 Q x a S u e 7 Q x a D i g 8 Q x a G 1 t 9 Q x a SM
1 0 Q x a A〇M 1 1 Q x a P OM 1 2 Q o a H 1 3 Q o a M e 1 4 Q o. a 丄 B u 1 5 Q o a A c 1 6 Q o a MOM 1 7 Q o a S u e 1 8 Q o a D i g 1 9 Q o a G 1 t
2 0 Q o a M S M
2 1 Q o a A OM
2 2 Q o a P OM 上記表中、 好適な化合物は、
2 ( S ) , 3 ( S ) — 3 — [N- (キノキサリ ン一 2 —カルボニル） 一 L—ス レオニル] ア ミ ノ ー 2 —ヒ ドロキシー 4一フエニルブタ ノ ィルー [
4 ( S ) —クロ口] — L一プロリ ン t e r t —ブチルアミ ド （例示番号ュ ) 及び
2 ( S ) , 3 ( S ) - 3 - [N- (キノ リ ン一 2—カルボニル） 一 L— ス レオニル] ア ミ ノー 2—ヒ ドロキシー 4一フエニルブタ ノ ィル一 [ 4 (
5 ) 一ク ロ口 ] 一 L—プロリ ン t e r t —ブチルア ミ ド （例示番号 1 2 ) め ^ ) ο
次に、 本発明の化合物の製造方法について説明する。
CT/JP95/02546
Figure imgf000009_0001
(A法）
上記工程式中、 及び R2 は前記と同意義を示し、 R3 及び R4 は同 —であって低級アルキル、 低級アルコキシ若しく は水酸基で置換されてい てもよぃァリールメチル基を示すか、 又は、 一方が水素原子、 他方がァリ —ルメチル基以外のァミ ノ基の保護基を示し、 R5 はァミ ノ基の通常の保 護基を示す。
R 3 及び R4 の 「低級アルキル、 低級アルコキシ若しく は水酸基で置換 されていても ょレ、ァ リ ールメチル基」 と しては、 ベンジル、 4一メチルベ ンジル、 4 ーメ トキシベンジル、 4一ェチルベンジル、 4一エ トキシベン ジル、 4 ー ヒ ドロキシベンジル等があげられる。
R 3 又は R 4 の 「ァリ ールメチル基以外のアミ ノ基の保護基」 及び R 5 のアミ ノ基の通常の保護基と しては、 通常使用する ものであれば限定はな いが、 好適には、 前記 「脂肪族ァシル基」 ； ベンゾィ ル、 o —ナフ ト イ ル.
^一ナフ ト イルのよ う なァリール力ルボニル基、 2 —ブロモベンゾィル、 4一クロ口ベンゾィ ルのよ うなハロゲンィヒアリールカルボニル基、 2 , 4， 6 — ト リ メチルベンゾィ ル、 4一トルオイルのよ う な低級アルキル化ァリ —ルカルボニル基、 4 ーァニソィルのよ う な低級アルコキシ化ァリ ール力 ルボニル基、 4 一二 ト ロべンゾィル、 2—二 ト ロベンゾィ ルのよ う なニ ト ロイヒアリ ールカルボニル基、 2— (メ ト キシカルボニル） ベンゾィルのよ う な低級アルコキシカルボニル化ァリールカルボニル基、 4 —フエニルべ ンゾィ ルのよ う なァリ 一ル化ァリ ール力ルポニル基等の芳香族ァシル基 ； メ ト キシカルボニル、 エ トキシカルボニル、 t一ブ トキシカルボニル、 ィ ソブ ト キシカルボニルのよ う な低級アルコキシカルボニル基、 2 , 2 , 2 一 ト リ ク ロ口エ トキシカルボニル、 2 — ト リ メチルシ リ ルエ ト キシカルボ ニルのよ う なハロゲン又は ト リ低級アルキルシリ ル基で置換された低級ァ ルコキシカルボニル基等のアルコキシカルボニル基 ； ビニルォキシカルボ ニル、 ァ リ ルォキシカルボニルのよ う なアルケニルォキシカルボニル基 ； ベンジルォキシカルボニル、 4 —メ ト キシベンジルォキシカルボニル、 3， 4 ージメ トキシベンジルォキシカルボニル、 2—二 ト ロべンジルォキシ力 ルボニル、 4 一二 ト ロべンジルォキシカルボニルのよ う な、 1 乃至 2個の 低級アルコキシ又は二 ト 口基でァ リ ール環が置換されていても よ いァラル キルォキシカルボニル基 ； ト リ メチルシリ ル、 ト リ ェチルシ リ ル、 ィ ソブ 口 ピルジメチルシ リ ル、 t一ブチルジメチルシ リ ル、 メチルジィ ソプロ ピ ルシ リ ル メ チルジー t —ブチルシ リ ル、 ト リ イ ソプ口 ピルシ リ ルのよ う な ト リ低級アルキルシリ ル基、 ジフエ二ルメチルシリ ル、 ジフエ二ルブチ ルシリ ル、 ジフエ二ルイ ソブ口 ビルシリ ル、 フエ二ルジィ ソブロ ピルシリ ルのよう な 1乃至 2個のァリール基で置換された ト リ低級アルキルシリル 基等のシリル基である。
出発物質と して使用される化合物 （VI) は、 公知であるか又は公知の方 法に従って合成できる。 化合物 （VI) の 4一クロ口プロリ ンは、 4ーヒ ド ロキシプロリ ンを原料にして塩酸による方法、 三塩化リ ンを用いる方法、 塩化チォニル又はォキシ塩化リ ン等の酸ハライ ドを用いる方法、 好ま しく は A. K. Boseらの方法 [ Tetrahedron Letters, 40, 3937 (1973)に従 つて、 N—ク ロロコハク酸イ ミ ドと ト リ アルキルホスフェー ト を用いる方 法、 J. G. Calzada S(0rg. Syn. 634)に従って、 四塩化炭素と ト リ フエニルホスフ ィ ンを作用させる方法等が用いられる。
出発物質と して使用される化合物 （V) は、 公知であるか、 又は公知の 方法に従って容易に合成される。 例えば、 R. Horanz 等の方法 （Synthes is, 703, 1989) 及び M. T. Reets 等の方法 （Tetraheron Lett. , 29. 3295, 1988) に従って合成される。
これらは既知化合物又は既知の方法に従って、 容易に合成できる化合物 であり、 本明細書に詳述していない変形法を使用すること もできる。
以下、 各工程について詳述する。
第 1工程は、 化合物 （V) 又はそのカルボン酸の反応性誘導体と、 アミ ノ化合物 （VI) を反応させて、 化合物 （VII)を製造する工程である。
反応は、 通常のペプチ ド合成法に準じて行われ、 例えば、 アジド法、 活 性エステル化法、 混合酸無水物法又は縮合法によ り行われる。
アジド法は、 アミ ノ酸又はそのエステル体をヒ ドラジドと、 不活性溶剤 中、 室温付近で反応させることによって製造されるアミ ノ酸ヒ ドラジンを、 亜硝酸化合物と反応させ、 アジド化合物に変換した後、 ァミ ン化合物と処 理することによ り行われる。 使用される亜硝酸化合物と しては、 例えば、 亜硝酸ナ ト リ ウムのような アルカリ金属亜硝酸塩又は亜硝酸ィ ソァミ ルのよう な亜硝酸アルキル化合 物を挙げることができる。
使用される不活性溶剤と しては、 例えば、 ジメチルホルムアミ ド、 ジメ チルァセ トアミ ドのよう なアミ ド類、 ジメチルスルホキシ ドのようなスル ホキシ ド類、 N—メチルピロリ ドンのようなピロリ ドン類を挙げることが できる。
本工程の 2つの反応は、 通常、 1 つの反応液中で行われ、 反応温度は、 前段が一 5 0乃至 0でであり、 後段が一 1 0乃至 1 0 であり、 反応時間 は、 前段が 5分乃至 1時間であり、 後段が 1 0時間乃至 5 日間である。 活性エステル化法は、 溶剤中、 アミ ノ酸を活性エステル化剤と反応させ、 活性エステルを製造した後、 ァミ ン化合物と反応させることによって行わ れる。
使用される溶剤と しては、 不活性であれば特に限定はないが、 例えば、 メチレンク ロ リ ド、 ク ロ口ホルムのよ う なハロゲン化炭化水素類、 ェ一テ ル、 テ トラヒ ドロフランのようなエーテル類、 ジメチルホルムアミ ド、 ジ メチルァセ トアミ ドのよう なアミ ド類を挙げることができる。
使用される活性エステル化剤と しては、 例えば、 N—ヒ ドロキシサクシ イ ミ ド、 ュ ーヒ ドロキシベンゾ ト リ アゾール、 N—ヒ ドロキシ一 5 — ノ ル ボルネンー 2， 3 —ジカルボキシィ ミ ドのよう な N—ヒ ドロキシ化合物を 挙げることができ、 活性エステル化反応は、 ジシクロへキシルカルボジィ ミ ド （D C C ) のよ う な縮合剤の存在下に好適に行われる。 又、 】 ， 】 ' 一ォキザリ ルジイ ミ ダゾ一ル、 2 , 2 ' —ジピリ ジルジサルフアイ ド、 N , N ' —ジサクシンィ ミ ジルカーボネー ト、 ジフエ二ルリ ン酸アジ ド （ D P P A ) 、 ジェチルシアノ リ ン酸 （ D E P C ) 、 N , N ' — ビス （ 2 —ォキ ソー 3 —ォキサゾリ ジニル） ホスフ ィ ニ ッ ク ク ロ ラ イ ド （ B〇 P— C I ) ， N N ' —カルボ二ルジイ ミ ダゾ一ル、 N， N ' —ジサク シ ン イ ミ ジルォ キザレー ト （D S O) 、 N, N' -ジフタ一ルイ ミ ドォキザレー ト （DP 〇） 、 N , N' 一ビス （ノルボルネニルサクシンィ ミ ジル） ォキザレー ト (B N 0) 、 1， 1 ' 一ビス （ベンゾト リアゾリル） ォキザレー ト （ B B TO) 、 1， 1 ' 一ビス （ 6—クロ口べンゾト リァゾリル） ォキザレー ト ( B C T 0 ) 、 1 , 1 ' 一ビス （ 6—ト リ フルォロメチルベンゾト リ アゾ リル） ォキザレー ト （ B丁 B 0 ) 、 ブロムー トリス一ピロリ ジノーホスホ ニゥム一へキサフルオローホスフェー ト （P y B r OP) の縮合剤の存在 下縮合することもできる。
反応温度は、 活性エステル化反応では、 一 1 0乃至 2 5匸であり、 活性 エステル化合物とァミ ンとの反応では室温付近であり、 反応時間は両反応 共に 3 0分乃至 1 0時間である。
混合酸無水物法は、 アミ ノ酸の混合酸無水物を製造した後、 ァミ ンと反 応させることによ り行われる。
混合酸無水物を製造する反応は、 不活性溶剤 （例えば、 エーテル、 テ ト ラヒ ドロフランのようなエーテル類、 ジメチルホルムアミ ド、 ジメチルァ セ トアミ ドのようなアミ ド類） 中、 クロ口炭酸ェチル、 ク口口炭酸ィ ソブ チルのよ う な炭酸低級アルキルハライ ド、 ジェチルシアノ リ ン酸 （ D E P C ) のようなジ低級アルキルシアノ リ ン酸、 又はジフエ二ルリ ン酸アジ ド (DP PA) とアミ ノ酸を反応させることによ り達成される。
反応は、 好適には、 ト リェチルァミ ン、 N—メチルモルホリ ンのよう な 有機ァミ ンの存在下に行われ、 反応温度は、 一 1 0乃至 2 5 "Cであり、 反 応時間は、 3 0分間乃至 5時間である。
混合酸無水物とァミ ンの反応は、 好適には不活性溶剤 （例えば、 エーテ ル、 テ トラヒ ドロフランのよ う なエーテル類、 ジメチルホルムアミ ド、 ジ メチルァセ トアミ ドのよ う なアミ ド類） 中、 前記の有機ァミ ンの存在下に 行われ、 反応温度は 0 乃至室温であり、 反応時間は、 】 時間乃至 2 4時 間である。 縮合法は、 アミ ノ酸とアミ ンをジシクロへキシルカルボジイ ミ ド、 カル ボニルジィ ミ ダゾ一ルのよう な縮合剤の存在下、 直接反応させるこ と によ つて行われ、 前記の活性エステルを製造する反応と同様にして行われる。 第 2工程は、 化合物 （VI I )のァミ ノ基の保護基を溶剤中で除去し、 化合 物 （VI I I ) を製造する工程である。
ァミ ノ基の保護基と して、 シリル基を使用した場合には、 通常、 弗化テ トラプチルアンモニゥム、 弗化カリ ウムのよう な弗素ァニォンを生成する 化合物で処理することによ り除去される。
反応溶剤は、 反応を阻害しないものであれば特に限定はないが、 テ ト ラ ヒ ドロフラン、 ジォキサンのよう なエーテル類が好適である。
反応温度及び反応時間は特に限定はないが、 通常室温で 1 0乃至 1 8時 間反応させる。
ァミ ノ基の保護基と して、 t一ブチルォキシカルボニル基のようなアル コキシカルボ二ル基を使用した場合には、 不活性溶剤中、 酸で処理するこ とによ り除去される。
反応溶剤は、 反応を阻害しないものであれば特に限定はない力 ジメチ ルホルムアミ ド、 ジメチルァセ ト ア ミ ドのよ う なア ミ ド類 ； ジェチルェ一 テル、 ジイ ソプロ ピルエーテル、 テ ト ラ ヒ ドロフラ ン、 ジォキサン、 ジメ ト キシェタ ン、 ジエチレングリ コールジメチルエーテルのよ う なエーテル 類 ； メ タ ノ ール、 エタ ノール、 n—プロ ノ、。ノ ール、 イ ソプロノ、。ノール、 n ーブタ ノ 一ル、 イ ソブ夕 ノ ール、 t ーブタ ノ ール、 イ ソア ミ ルアルコール、 ジエチ レングリ コール、 グリ セ リ ン、 ォク タ ノール、 シク ロへキサノ ール、 メチルセ口 ソルブのよ う なアルコール類、 ジク ロルメ タ ン、 ク ロ口ホルム、 ト リ クロロェタ ンのよ う なハロゲン化炭化水素が好適である。
使用される酸は、 酸であれば特に限定はないが、 好適には、 塩酸のよ う な無機酸、 ト リ フルォロ酢酸のよ う な有機酸、 ト リ フルォロボロ ン ' ェテ レー トのよ う なルイ ス酸である。 反応温度及び反応時間は特に限定はないが、 通常、 0乃至 3 0でで、 2 0分間乃至 1時間処理することによ り行われる。
ァミ ノ基の保護基が、 脂肪族ァシル基、 芳香族ァシル基又はシ ッ フ塩基 を形成する置換されたメチレン基である場合には、 水性溶剤の存在下に、 酸又は堪基で処理することによ り除去することができる。
使用される酸と しては、 通常酸と して使用されるものであれば特に限定 はないが、 好適には、 塩酸、 硫酸、 リ ン酸、 臭化水素酸のよう な無機酸が 用いられ、 使用される塩基と しては、 化合物の他の部分に影響を与えない ものであれば特に限定はないが、 好適には、 ナ ト リ ウムメ トキシ ドのよう な金属アルコキシ ド類、 炭酸ナ ト リ ウム、 炭酸カリ ウムのよ う なアルカ リ 金属炭酸塩、 水酸化ナ ト リ ウム、 水酸化カ リ ウムのようなアルカ リ金属水 酸化物又はァンモニァ水、 澳アンモニア一メ タ ノールのよう なアンモニア 類が用いられる。
尚、 塩基による加水分解では異性化が起こることがある。
使用される溶剤と しては、 通常の加水分解反応に使用される ものであれ ば特に限定はなく、 水 ； メ タノール、 エタノール、 n —プロパノールのよ うなアルコール類、 テ トラヒ ドロフラン、 ジォキサンのようなエーテル類 等の有機溶剤又は水と上記有機溶剤との混合溶剤が好適である。
反応温度及び反応時間は、 出発物質及び用いる塩基等によ り異なり特に 限定はないが、 副反応を抑制するために、 通常は 0乃至 1 5 0 で、 1 乃 至 1 0時間実施される。
ァミ ノ基の保護基が、 ァラルキルォキシ力ルポニル基である場合には、 不活性溶剤中、 接触還元触媒の存在下に還元することによ り除去される。 使用される溶剤と しては、 通常の還元反応に使用される ものであれば特 に限定はない力 、 好適には、 ジェチルエーテル、 ジイ ソプロピルエーテル、 テ ト ラヒ ドロフラン、 ジォキサン、 ジメ トキシェタ ン、 ジエチレングリ コ
—ルジメチルエーテルのよ う なエーテル類 ； メ タ ノ ール、 エタ ノ ール、 n ープロ ノ、'ノール、 イ ソプロノヽ'ノール、 n —ブタ ノ 一ル、 イ ソブタ ノール、 t ーブ夕 ノ ール、 イ ソア ミ ルアルコール、 ジエチレ ングリ コール、 グリ 七 リ ン、 ォク タ ノール、 シクロへキサノール、 メチルセ口 ソルブのよ う なァ ルコール類である。
使用される接触還元触媒と しては、 例えば、 パラジウム炭素、 パラジゥ ム黒等を挙げることができる。
反応温度及び反応時間は、 出発物質等によ り異なり特に限定はないが、 通常、 常圧乃至 1 0気圧の水素と室温付近で 1 時間乃至 8時間反応するこ とによ り行われる。
ァミ ノ基の保護基が、 ァリールメチル基の場合には、 通常、 溶剤中、 還 元剤と接触させることによ り除去され、 好適には、 触媒下に、 常温にて接 触還元を行ない、 除去する方法又は酸化剤を用いて除去する方法が好適で ある。
接触還元による除去において使用される溶剤と しては、 本反応に関与し ないものであれば特に限定はない力？、 メ タ ノール、 エタ ノ ール、 イ ソプロ ノヽ ·ノールのよ う なアルコール類、 ジェチルエーテル、 テ ト ラ ヒ ドロフラ ン、 ジォキサンのようなエーテル類、 トルエン、 ベンゼン、 キシレンのよ う な 芳香族炭化水素類、 へキサン、 シクロへキサンのよう な脂肪族炭化水素類、 酢酸ェチル、 酢酸プロピルのよう なエステル類、 ギ酸、 酢酸のよ うな脂肪 酸類又はこれらの有機溶剤と水との混合溶剤又は脂肪酸類とアルコ —ル類 の混合溶剤が好適である。
使用される触媒と しては、 通常、 接触還元反応に使用される ものであれ ば、 特に限定はないが、 好適には、 パラ ジウム黒、 パラジウム炭素、 ラネ —ニ ッ ケル、 酸化白金、 白金黒、 ロジウム一酸化アルミ ニウム、 ト リ フユ ニルホス フ ィ ン一塩化ロジウム、 ノ、。ラジウム一硫酸バリ ゥムが用いられる。 圧力は、 特に限定はないが、 通常〗 乃至〗 0気圧で行なわれる。
反応温度及び反応時間は、 出発物質及び触媒の種類等によ り異なる力'、 通常、 0乃至 1 0 0 で、 5分乃至 2 4時間実施される。
酸化による除去において使用される溶剤と しては、 本反応に関与しない ものであれば特に限定はないが、 好適には、 含水有機溶剤である。
このような有機溶剤と して好適には、 アセ ト ンのようなケ ト ン類、 メチ レンクロリ ド、 クロ口ホルム、 四塩化炭素のようなハロゲン化炭化水素類、 ァセ トニ ト リ ルのよ う な二 ト リ ル類、 ジェチルエーテル、 テ ト ラ ヒ ドロフ ラン、 ジォキサンのよう なエーテル類、 ジメチルホルムアミ ド、 ジメチル ァセ トアミ ド、 へキサメチルホスホロ ト リアミ ドのようなアミ ド類及びジ メチルスルホキシ ドのようなスルホキシ ド類を挙げることができる。
使用される酸化剤と しては、 通常、 酸化に使用される化合物であれば特 に限定はないが、 好適には過硫酸カリ ウム、 過硫酸ナ ト リ ウム、 アンモニ ゥムセリ ウムナイ ト レイ ト （C A N ) 、 2 , 3—ジクロロー 5 , 6 —ジシ ァノー p一べンゾキノ ン （D D Q ) が用いられる。
反応温度及び反応時間は、 出発物質及び触媒の種類等によ り異なるが、 通常、 0乃至 1 5 0 で、 1 0分乃至 2 4時間実施される。
ァミ ノ基の保護基がジァリールメチル基である場合には、 前記ァリール メチル基の除去反応の条件と同様にして処理することによ り達成される。 ァミ ノ基の保護基がアルケニルォキシカルボニル基である場合は、 通常、 ァミ ノ基の保護基が前記の脂肪族ァシル基、 芳香族ァシル基、 アルコキシ 力ルポニル基又はシッフ塩基を形成する置換されたメチレン基である場合 の除去反応の条件と同様にして、 塩基と処理することによ り達成される。 尚、 ァリルォキシカルボニルの場合は、 特にパラジウム、 及びト リ フエ ニルホスフ ィ ン若しく はニッケルテ トラ力ルポニルを使用して除去する方 法が簡便で、 副反応が少なく実施することができる。
第 3工程は、 化合物 （ I X ) 又はそのカルボン酸の反応性誘導体と、 ィ匕 合物 （V I I I ) を、 第 1工程と同様に反応させて、 化合物 （X ) を製造 する工程である。 第 4工程は、 化合物 （X) のァミ ノ基の保護期を第 2工程と同様に除去 し、 化合物 （X I ) を製造する工程である。
第 5工程は、 化合物 （X I I ) 又はそのカルボン酸の反応性誘導体と化合 物 （X I ) を、 第 1工程と同様に反応させて本発明の化合物 （ I ) を製造 する工程である。
Figure imgf000019_0001
Figure imgf000019_0002
(B法）
上記工程式中、 Rl 、 、 R3 、 R4 及び R5 は前述のものと同意義示 し、 R6 は水酸基の保護基を示す。
以下、 各工程について詳述する。 第 6工程は、 化合物 （V I I ) の水酸基を通常の方法で保護して化合物 (X I V) を製造する工程である。
第 7工程は、 化合物 （X I V) のァミ ノ基を、 A法の第 2工程と同様に して除去し、 化合物 （XV) を製造する工程である。
第 8工程は、 化合物 （XV I ) またはそのカルボン酸の反応性誘導体と アミ ノ化合物 （XV) を、 A法の第 1工程と同様に反応させて、 化合物 （ XV I I ) を製造する工程である。
第 9工程は、 化合物 （XV I I ) のアミ ノ基の保護期を A法の第 2工程 と同様にして除去し、 化合物 （XV I I I ) を製造する工程である。
第 1 0工程は、 化合物 （X I I ) またはそのカルボン酸の反応性誘導体 とアミ ノ化合物 （XV I I I ) を A法の第 1工程と同様に反応させて、 ィ匕 合物 （X I X) を製造する工程である。
第 1 1工程は、 化合物 （X) と化合物 （X I X) を反応させて、 化合物 (XX I ) を製造する工程である。
第 1 2工程は、 化合物 （XX I ) の水酸基の保護基 （R6 ) を選択的に 除去して、 本発明の化合物 （ I ) を製造する工程である。
上記各工程の反応終了後、 各目的化合物は常法に従って、 反応混合物か ら採取される。 例えば、 反応混合物を適宜中和し、 また、 不溶物が存在す る場合には濾過によ り除去した後、 水と混和しない有機溶剤を加え、 水洗 後、 溶剤を留去することによ り得られる。 得られた目的化合物は必要なら ば、 常法、 例えば、 再結晶、 再沈殿又はク ロマ ト グラフ ィ ー等によって更 に精製できる。
本発明の化合物 （ I ) の投与形態と しては、 例えば、 錠剤、 カプセル剤、 顆粒剤、 散剤若しく はシロ ップ剤等による経口投与又は注射剤若しく は坐 剤等による非経口投与を挙げることができ、 これらの製剤は、 陚形剤 （例 えば、 乳糖、 白糖、 葡萄糖、 マンニッ ト、 ソルビッ トのよう な糖誘導体 ； ト ウモロ コ シデンプン、 ノくレイ シ ョ デンプン、 ひ澱粉、 デキス ト リ ン、 力 ルポキシメチルデンプンのよ う な澱粉誘導体； 結晶セルロース、 低置換度 ヒ ドロキシプロ ピルセルロース、 ヒ ドロキシプロ ピルメチルセルロース、 カルボキシメチルセルロース、 カルボキシメチルセルロースカルシウム、 内部架槺カルボキシメチルセルロースナ ト リ ウムのよ う なセルロース誘導 体 ； アラ ビアゴム ； デキス ト ラ ン ； ブルラ ンのよ う な有機系賦形剤 ： 及び、 軽質無水珪酸、 合成珪酸アルミ ニウム、 メ タ珪酸アルミ ン酸マグネシウム のよう な珪酸塩誘導体 ； 燐酸カルシウムのよう な燐酸塩 ； 炭酸カルシウム のよ う な炭酸塩 ； 硫酸カルシウムのよ うな硫酸塩等の無機系賦形剤を挙げ る こ とができ る。 ） 、 滑沢剤 （例えば、 ステアリ ン酸、 ステア リ ン酸カル シゥム、 ステアリ ン酸マグネシウムのよ う なステア リ ン酸金属塩 ； タルク ； コロイ ドシリ カ ； ビーガム、 ゲイ蠟のよ う なワ ッ クス類 ； 硼酸 ； ァジピ ン酸 ； 硫酸ナ ト リ ウムのよ うな硫酸塩 ； グリ コール ； フマル酸 ； 安息香酸 ナ ト リ ウム ； D Lロイシン ； 脂肪酸ナ ト リ ウム塩 ； ラウリル硫酸ナ ト リ ゥ ム、 ラウ リ ル硫酸マグネシウムのよ う なラウ リ ル硫酸塩 ； 無水珪酸、 珪酸 水和物のよう な珪酸類 ； 及び、 上記澱粉誘導体を挙げるこ とができる。 ） 、 結合剤 （例えば、 ポリ ビニルピロリ ドン、 マクロゴール、 及び、 前記賦形 剤と同様の化合物を挙げることができる。 ） 、 崩壊剤 （例えば、 前記賦形 剤と同様の化合物、 及び、 ク ロスカルメ ロースナ ト リ ウム、 カルボキシメ チルスターチナ ト リ ウム、 架橋ポリ ビニルピロ リ ドンのよ う な化学修飾さ れたデンプン ' セルロース類を挙げるこ とができ る。 ） 、 安定剤 （メチル パラベン、 プロ ピルパラベンのよ う なパラォキシ安息香酸エステル類 ； ク ロロブタ ノ ール、 ベンジルアルコール、 フエニルエチルアルコールのよ う なアルコール類 ； 塩化ベンザルコニゥム ； フエ ノ ール、 ク レゾールのよ う なフエ ノ ール類 ； チメ ロサール ； デヒ ドロ酢酸 ； 及び、 ソルビン酸を挙げ ることができる。 ） 、 矯味矯臭剤 （例えば、 通常使用される、 甘味料、 酸 味料、 香料等を挙げるこ とができ る。 ） 、 希釈剤等の添加剤を用いて周知 の方法で製造される。 その使用量は症状、 年齢、 投与方法等によ り異なる力 、 例えば、 経口投 与の場合には、 1 回当り、 下限と して 0.1mg/kg、 上限と して、 20mg/kg を、 静脈内投与の場合には、 1 回当 り、 下限と して 0.01mg/kg、 上限と して、 2mg/kgを 1 日当り 1乃至数回症状に応じて投与することが望ま しい, 次に実施例を挙げて、 本発明をさらに詳しく説明する。
(実施例）
(実施例 1 )
2 ( S ) , 3 ( S ) - 3 - [N— （キノ キサリ ン一 2—カルボニル） 一 Lースレオニル 1_ ァ ミ ノ 一 2— _ヒ ドロキシ一 4一フエニルブタ ノ ィ ル一 [ 4 ( S ) 一ク ロ口] 一 L一プロ リ ン t e r t —ブチルア ミ ド
1 ) 2 ( S ) , 3 ( S ) — 3— （N— t e r t —ブチルォキシカルボ二 ルー Lース レオニル） _ァ _ミ ノー _2— ヒ ドロキシ一 4一フ_ェニルブタ ノ ィル - [ 4 ( S ) —ク ロ口"！ 一 L一プロ リ ン t e r t —ブチルア ミ ド
3 ( S ) 一ア ミ ノ ー 2 ( S ) ーヒ ドロキシー 4一フエニルブタ ノ ィルー [
4 ( S ) 一クロ口] プロリ ン t e r t —ブチルア ミ ド 200mg (0.52ミ リ モ ル） を N , N—ジメチルホルムアミ ド （以下 D M Fと略す。 ） 6 m 】 に溶 力 し、 これに、 N— t e r t 一ブチルォキシカルボニル一 L—ス レオニン 1 14mg (0.52ミ リモル） を加え水冷した。 シアノ リ ン酸ジェチル （以下 D E P Cと略す。 ） 0.1ml (0.624 ミ リモル） を加え、 次いで ト リェチルアミ ン 0.14ral (1.04 ミ リ モル） を滴下し、 3時間撹拌した。 反応混合物を減圧 下溶媒留去し、 酢酸ェチル 2 0 m 1 を加え、 5 %クェン酸、 50/oN a H C O3 水溶液および飽和食塩水で洗浄し、 無水 N a 2 S 04 で乾燥した。 溶 媒を減圧濃縮し、 油状の残さを分取薄層クロマ ト グラフ ィ ー （塩化メチレ ンノメ タノール = 8 ： 1 ) で精製した。 無色結晶性固体と して表記の化合 物】 90mg を得た。
融点 2 1 1 - 2 1 4 "Co
元素分析 ： C28H43^07C1 · 1/2H20( 分子量 592.12) と して 理論値： C, 56.79;H, 7.49;N.9.46;C1, 5.99
実測値： 56.93;H( 7.17; , 9.46;C1, 6.07.
M a s s : 584 (M+H) + .
NMR ： δ (dg-D SO, 270MHz)： 7.97 (1H, d, J = 7.9Hz) , 7.64(1H, s) , 7. 41(2H,d， J-6.6Hz), 7.28-7.18(3H,m), 6.36 (1H, d, J=8.6Hz) , 5.01(1
H, d, J = 7.3Hz), 4.71 (lH,d, J = 5.3Hz), 4.55(lH,m), 4.43(1H, t, J = 7.9 Hz) , 4.34-4.19(3H,m), 3.81-3.61 (3H, m) , 2.82-2.65 (3H, m) , 2.01-1. 96(lH,m), 1.43(9H, s), 1.30(9H, s) , 0.86(3H, d, J=5.9Hz) .
2 ) 2 ( S ) , 3 ( S ) 一 3 — [N— （キノキサリ ン一 2—カルボニル ) 一 Lース レオニル] アミ ノ ー 2—ヒ _ド_口キシ一 4 -フエニルブタ ノィル 一 [ 4 ( S ) 一ク ロ口] 一 L一プロ リ ン t e r t—ブチルアミ ド
2 ( S ) , 3 ( S ) 一 3— （N— t e r t—ブチルォキシカルボ二ルー Lース レオニル） アミ ノー 2—ヒ ドロキシー 4一フエニルブタ ノ ィルー [ 4 ( S ) —ク ロ口] 一 L一プロリ ン t e r t—ブチルアミ ド 0.33g(0.57ミ リモル） を 4 N塩酸一ジォキサン溶液 1 0 m l に加え、 t e r t—ブチル ォキシ力ルポニルを除去して、 得られた塩酸塩の全量と 2 —キノキサリ ン カルボン酸 99mg(0.57 ミ リモル） を D M F 6 m I に溶かして氷冷した。 D E P CO.11m】（0.684ミ リモル） を加え、 次いでト リェチルァミ ン 0.16m 1 (
I.14 ミ リモル） を滴下し、 3時間撹拌した。 反応混合物を減圧下溶媒留 去し、 酢酸ェチル 2 0 m 1 を加え、 5 %クェン酸、 5 %N a H C 03 水溶 液および飽和食塩水で洗浄、 無水 N a 2 S 04 で乾燥した。 溶媒を減圧濃 縮し、 油状の残さを分取薄層クロマ トグラフ ィー （塩化メチレン メ タノ ール = 8 ： 1 ) で精製した。 へキサン一ェチルエーテルで結晶化し、 白色 結晶性固体と して表記の化合物 244mg を得た。
融点 1 0 9— 1 1 8 。
元素分析 ： C32H39N606CI ( 分子量 639. I4) と して
理論値 :C, 60.13;H, 6.15:N, 13.15;C1.5.55 実測値： C, 59.91 ;H, 6.09;N, 13.04； C 1 , 5.64.
M a s s : 639 (M+H)+ .
NMR ： δ (CD3OD, 270MHz) :9.50(lH,m) , 8.23-8.16(2H, m) , 7.99-7 93(2H,m)， 7.33-7.29 (2H,m) , 7.13-7.14(2H,ra) , 7.04-7.01 (1H， m)， 4.47-4.34 (6H,m), 4.23-4.19(1H, m) , 3.78(1H, m) , 3.01 (1H, dd, J = 13. 9, 3.3Hz), 2.79-2.70(2H,m), 2.11-2.06(lH,m), 】 .36， 1.30 (9H, ss) ,
1.17(3H, d, J = 6.6Hz).
(実施例 2 )
2 ( S ) , 3 ( S ) - 3 - [N - (キノキサリ ン一 2—カルボニル） 一 0—ァセチルー Lース レオニル] _ アミ ノ ー 2—ヒ ドロキシ一 4一フエニル ブタ ノ ィ ルー [ 4 ( S ) 一ク ロ口 ] 一 ； L一プロ リ ン t e r t —ブチルア ミ _
1 ) 2 ( S ) 、 3 ( S ) - 3 - [( Ν—べンジルォキシカルボニル） 一 Lース レオニル 1_ アミ ノ ー 2— t e r t ニブチルジメチルシリ ルォキシニニ 4 -フエニルブタ ノ ィル [ 4 ( S ) 一クロ口 ] — L一プロ リ ン t e r t — ブチルア ミ ド
参考例 2で合成された化合物 0.64g(l.01ミ リ モル） をメ タ ノール 5 0 m 1 に溶かし、 5 %パラジウム一炭素触媒で水素添加しべンジルォキシカル ボニル基を除去した。 得られたアミ ノ化合物全量と N—ベンジルォキシカ ルボニルー Lース レオニル一 N—ハイ ドロキシサク シイ ミ ドエステル 0.53 g (1.52ミ リ モル） を DMF 1 2 m 1 に溶かして水冷し、 ト リ ェチルア ミ ン 0.2Sral (2.02 ミ リ モル） を滴下し、 5 時間扰拌した。 反応混合物を減 圧下溶媒留去し、 酢酸ェチル 3 0 m 1 を加え、 5 %クェン酸、 5 % N a H C〇3 水溶液および飽和食塩水で洗诤、 無水 N a 2 S 04 で乾燥した。 溶 媒を減圧で留去し、 油状の残さを分取薄層ク ロマ ト グラフ ィ ー （塩化メチ レン Zメ タ ノ ール = 】 0 ： 】 ） で精製した。 へキサンで結晶化し、 白色結 晶性固体と して表記の化合物 0.46g を得た。 NMR ： δ (CDC13, 270MHz) :7.36-7.13(10H,m), 6.49-6.42 (1H, m) , 5.47(lH.d， J = 8.3Hz) . 5.13(2H,q, J = 25.2, 12.0Hz) , 4 · 41-4 · 16 (6H, m) , 3.96(1H, dd, J=8.5, 1.7Hz) , 3.75(lH,m), 3.20(1H, dd, J = 14.0, 3.5Hz ), 3.00(1H, d, J = 3.7Hz), 2.68-2.43 (3H, m) , 1.31(9H, s), 1.10(3H, d, J-6.5Hz), 0.96(9H， s), 0.13 (6H, d, J=5.4Hz) .
2 ) 2 ( S ) , 3 ( S ) - 3 - [N - (キノ キサリ ン一 2—カルボニル ) 一 Lース レオニル] ア ミ ノー 2 — t e r t—ブチルジメチルシ リ ルォキ シー 4一フエニルブタ ノ ィルー [ 4 ( S ) 一ク ロ口 1 -_1：プ リ ン t e r t 一ブチルアミ ド
2 ( S ) 、 3 ( S ) 一 3— [ ( N—べンジルォキシカルボニル） 一 L —ス レオニル] ア ミ ノ ー 2— t e r t —ブチルジメチルシリ ルォキシ一 4 一フエニルブタ ノ ィル [ 4 ( S ) 一クロ口] プロ リ ン t e r t —ブチルァ ミ ド 0.37g(0.50ミ リ モル） をメ タ ノール 1 5 ΙΏ 1 に溶かし、 5 %パラジゥ ム一炭素触媒で水素添加しべンジルォキシカルボ二ル基を除去した。 得ら れたアミ ノ化合物全量と 2—キノキサリ ンカルボン酸 96mg(0.55 ミ リモル ) を DMF 8 m 1 に溶かして氷冷した。 D E P CO.098ml (0.6 ミ リ モル） を加え、 次いでト リェチルァ ミ ン 0, 14ml (1.00 ミ リモル） を滴下し、 3時 間撹拌した。 反応混合物を減圧下溶媒留去し、 酢酸ェチル 2 0 m 1 を加え、 5 %クェン酸、 5 %N a H C〇3 水溶液および飽和食塩水で洗净、 無水 N a 2 S 04 で乾燥した。 溶媒を減圧濃縮し、 油状の残さを分取薄層クロマ ト グラ フ ィ 一 （塩化メチレン メ タ ノ ール = 7 ： 1 ) で精製し、 表記の化 合物 306mg を得た。
NMR ： S (CDCI3, 270MHz) :9.57(1H, s) , S.46 ( 1Η. d, J = 8.5Hz). 8.2 5-8.12(2H, m) , 7.94-7.87(2H, m) , 7.08 (2H, d, J=7.5Hz) , 6. S8(2H, m) .
6.77-6.59 (3H. m) , 4.51-4.27 (7H. m) .3.81-3.78 (1H, m) , 3.63(1H, br. s) , 3.24-3.17(1H, m) . 2.75-2.67 (1H. m) , 2.60-2.51 (2H, m) .1.32(9H. s) , 1.19(3H, d, J=6.5Hz) . 0.96(9H, s) , 0.15(6H, d. J=3.9Hz) . 3 ) 2 ( S ) , 3 ( S ) 一 3— [N— （キノ キサリ ン一 2 —カルボニル ) 一〇一ァセチルー Lース レオニル] ァ ミ ノ 一 2 — t e r t ーブ千ルジメ ±ルシリ ルォキシ一 4 一フエニルブタ ノ ィルー [ 4 ( S ) ーク ロロ] 一 L —プロリ ン t e r t 一ブチルアミ ド
2 ( S ) ， 3 ( S ) 一 3— [N— （キノ キサリ ン一 2 —カルボニル） 一 Lース レオニル] ア ミ ノ ー 2— t e r t —ブチルジメチルシリ ルォキシ一 4 一フエニルブタ ノ ィルー [ 4 ( S ) 一ク ロ口] — L一プロリ ン t e r t ーブチルァ ミ ド 100mg(0.13ミ リ モル） を塩化メチレン 4 m 1 に溶かし、 無 水酢酸 0.025ml (0.26ミ リモル） を加え、 次いで 4 ージメチルァミ ノ ピリ ジ ン lmg(0.013 ミ リモル） を加えて室温で 1晚撹拌した。 反応混合物を減圧 下溶媒留去し、 酢酸ェチル 2 0 m I を加え、 5 %クェン酸、 5 6 N a H C 03 水溶液および飽和食塩水で洗浄、 無水 N a 2 S 04 で乾燥した。 溶媒 を減圧漉縮し、 表記の化合物 65mgを得た。
M a s s : 795 ( +H) +
NMR ： δ (CDCI3. 270MHz) :9.61 (1Η, s) , 8· 36 ( 1H， d， J = 9 · 2Hz) , 8.2 4-8.16(2H,ra) 7.95-7.90 (2H,m), 7.26-7.15(2H, m) , 7.12-7.01 (2H, m) .
6.85-6.73 (2H,m) , 6.61 (lH, br. s) , 5.47-5.42 (1H, m) , 4.65-4.59 (1H, m) , 4.47-4.2δ(5Η, m) , 3.71-3.70(1H, m) . 3.11-3.05(lH,m) , 2.71-2. 58(3H,m) , 1.96(3H, s) , 1.31 (9H. s) , 1.26 (3H， d， J=5.9Hz) , 0.92(9H, s) , 0.10(6H, d, J = 8.6Hz) .
4 ) 2 ( S ) , 3 ( S ) - 3 - [N— （キノ キサリ ン一 2—カルボニル ) — 0—ァセチルー Lース レオニル 1ア ミ ノ ー 2 —ヒ ドロキシー 4 —フエ ニルブタ ノ ィ ル一 [ 4 ( S ) 一ク ロ口 ] 一 L—プロ リ ン t e r t —ブチル ァ ミ ド
2 ( S ) , 3 ( S ) — 3 — [N - (キノ キサリ ン一 2 —カルボニル） 一 0—ァセチルー Lース レオニル] ア ミ ノ ー 2— t e r t ーブチルジメチル シ リ ルォキシ一 4 一フエニルブタ ノ ィ ルー [ 4 ( S ) 一 ク ロ口 ] 一 Lープ / 9 4
25
口 リ ン t e r t一ブチルアミ ド 65mg(81.7 マイ ク ロモル） をテ ト ラ ヒ ドロ フラ ン （以下 T H Fと略す。 ） 1 2 m 1 に溶かし、 テ ト ラー n—プチルァ ンモニゥムフルォ リ ド I28mg(0.49ミ リモル） を加えて室温で 1 4時間撹拌 した。 酢酸ェチル 2 0 m l を加え、 5 %N a HC 03 水溶液で洗诤、 無水 N a 2 S 04 で乾燥した。 溶媒を減圧濃縮し、 油状の残さを分取薄層クロ マ ト グラフ ィ 一 （塩化メチレン/メ タ ノール = 9 ： 1 ) で精製した。 へキ サン一ェチルエーテルで結晶化し、 白色結晶性固体と して表記の化合物 23 mgを得た。
融点 1 0 8— 1 1 2で。
元素分析 ： C34H4iN607Cl · H20 (分子量 6S1.17) と して
理論傕： C, 59.95;H, 6.07 ;N, 12.34; CI, 5.20
実測値： C, 60.28; H, 6.23; N， 12.05: CI, 5.01,
a s s ： 681 (M+H)+ .
NMR ： δ (CDCI3, 270MHz) :9.63(1H, s) , 8.60 (1H, d, J=8.5Hz) , 8.2 5-8.19(2H，m)， 7.94-7.86 (2H, m) , 7.28-7.11 (5H, m) , 7.02-6.96 (1H, m) . 6.44dH.br), 5.55-5.51 (1H, ra) , 4.88-4.83 (1H, m) , 4.58-4.52 (2 H,m)， 4.36-4.23 (2H,m)， 4.04-3.99 (1H, m) , 3.84-3.77 (lH,m), 2.88 -2.53(4H, m) , 2.05, 2.04 (3H， ss) , 1.85-1.79 ( 1H, m) . 1.32(3H, d, J = 6. 4Hz), 1, 37, 1, 28(9H, ss) .
(実施例 3 )
2 ( S ) , 3 ( S ) 一 3— [N— （キノキサリ ン一 2—カルボニル） 一 0—メチルー Lース レオニル] ア ミ ノ ー 2—ヒ ドロキシー 4一フエニルブ タ ノ ィ ルー [ 4 ( S ) 一クロ口] — L一プロ リ ン t e r t —ブチル 7ミ—ド ュ ） 2 ( S ) , 3 ( S ) - 3 - (N— t e r t —ブチルォキシカ ルボ二 ルー 0ーノチルー Lース レオニ ヒ） ア ミ ー _ 2 _— ^ キ J " 4—フエ二 ルブタ ノ ィ ヒー 4_ ( S ) —ク ロ口] — L -プロ リ ン t e r t —ブチルァ ミ ト' 3 ( S ) 一ア ミ ノ ー 2 ( S ) ーヒ ドロキシー 4 一フエニルブタ ノ ィ ルー [ 4 ( S ) 一ク ロ口] プロ リ ン t e r t —ブチルア ミ ド 190mg (0.50ミ リ モル） を塩化メチレン 6 m 1 に溶かし、 これに、 Francis M. F. Chen と Leo Benoiton の方法 (J. Org. Chem.， 1979, vol . 44， 2299) に従 つて合成した N— t e r t 一ブチルォキシカルボ二ルー〇一メチル一 L一 スレオニン 114mg (0.52ミ リモル） を加え氷冷した。 D E P C 98mg (0.56 ミ リモル） を加え、 次いでト リェチルァ ミ ン 57mg(0.56 ミ リモル） を滴 下し、 3時間撹拌した。 反応混合物を減圧下溶媒留去し、 酢酸ェチル 2 0 m 1 を加え、 5 %クェン酸、 5 % N a H C〇3 水溶液および飽和食塩水で 洗浄、 無水 N a 2 S 04 で乾燥した。 溶媒を減圧濃縮し、 油状の残さにェ チルエーテルを加えて得られた結晶をろ取した。 ェチルェ一テルから再結 晶し、 無色の細かな針状晶と して表記の化合物 280mg を得た。
融点 2 0 8— 2 1 1 で。
元素分析 ： C29H45N4O7CI · H20(分子量 615.17) と して
理論値： C, 56.62;H, 7.70;N, 9.11 ;C1, 5.76
実測値： C, 56.68;H, 7.11 ;N, 9.31 ;C1, 6.51.
M a s s .* 596M+.
NM R ： o (CD3OD, 360MHz) : 7.33-7.14(5H, m)， 4.44-4.31 (4H, m) , 3.98-3.94 (1H, m) , 3.76(1H, dd， J = 10.2, 8.0Hz), 3.66-3.60 (1H. m), 3.12(3H, s) , 2.92-2.70 (3H, m) , 2.17-2.10(1H, m) , 1.45(9H. s) , 1.32(9H, s) , 1.08-1.03(1H+3H, d(3H), J=6.3Hz).
2 ) 2 ( S ) , 3 ( S ) - 3 - [N— （キノ キサリ ン一 2 —カルボニル ) — 0 -メチル一 Lース レォニル] ア ミ ノ ー 2 — ヒ ドロキシ一 4 一フエ二 ルブタ ノ ィ ルー [ 4 ( S ) 一 ク ロ口 ] — L—プロ リ ン t e r t —プチルァ ミ ト'
2 ( S ) , 3 ( S ) — 3 — （ N— t e 1- t —ブチルォキシカルボ二ルー 0— メチル一 Lース レオニル） ア ミ ノ ー 2 — ヒ ドロキシ一 4 一 フ エニルブ タ ノ ィルー [ 4 ( S ) 一ク ロ口] 一 L一プロ リ ン t e r t —ブチルァ ミ ド 0. 24g(0.4 ミ リモル） を 4 N塩酸一ジォキサン溶液 1 0 m 1 に加え、 t e r t 一ブチルォキシカルボニルを除去して、 得られた塩酸塩の全量と 2—キ ノキサリ ンカルボン酸 77mg(0.44 ミ リモル） を D M F 6 m 1 に溶かして氷 冷した。 D E P C77mg(0.44 ミ リモル） を加え、 次いで ト リェチルァミ ン 85mg(0.84 ミ リ モル） を滴下し、 3時間扰拌した。 反応混合物を減圧下溶 媒留去し、 酢酸ェチル 2 0 m 1 を加え、 5 %クェン酸、 5 % N a H C 0つ 水溶液および飽和食塩水で洗诤、 無水 N a 2 S 04 で乾燥した。 溶媒を減 圧濃縮し、 油状の残さを分取薄層ク ロマ ト グラフィ ー （塩化メチレン メ タノ 一ル = 10 : 1 ) で精製した。 へキサン、 ェチルエーテルで結晶化し、 白色結晶性固体と して表記の化合物 194mg を得た。
融点 9 0 - 9 2 。
元素分析 ： C33H4iN606Cl ' 1/2Η20( 分子量 2.1Θ) と して
理論値： 59.86;Η, 6.39;Ν, 12.69;C1, 5.35
実測値： 59.97;H, 6.57;N, 12.20;C1, 5.03.
M a s s : 653 (M+H)+.
NM R ： δ (CD3OD, 360MHz) : 9.53(1H, m) , 8.27-8.24 (lH,m). 8.23 -8.18(1H, m) , 8.01-7.95(2H. m) , 7.31
(1H, d， J=7.7Hz) , 7.24-7.20(2H, m) , 7.11 -7.07 ( 1H, m) , 4.51 (1H, d, J=3.5Hz)， 4.47-4.34 (4H, m) , 3.91-3.85(1H, m) , 3.77(1H, dd， J=10.4, 3.8Hz), 3.26(3H, s) , 2.99-2.93(2H. m), 2.79-2.70(2H. m) , 2.15-2.08(1H, m)， 1.28(9H, s), 】.14(3H, d, J=6.1Hz) , 0.9
(1H， t, J=6.7Hz) .
(実施例 4 )
2 ( S ) ， 3 ( S ) - 3 - [N - (キノ キサリ ン一 2—カルボニル） 一 0—メ トキシメチル一 Lース レオニル] ア ミ ノ ー 2—ヒ ドロキシ一 4 —フ ェニルブタ ノ ィ ル一 [ 4 ( S ) — ク ロ口 ] 一 L一プロ リ ン t e r t —ブチ ルア ミ ド
1 ) 2 ( S ) , 3 ( S ) 一 3— （ N—べンジルォキシカルボニル） 一 0
Figure imgf000030_0001
ニルブタ ノ ィルー [ 4 ( S ) 一ク ロ口] 一 L一プロ リ ン t e r t —ブチル ア ミ ド
3 ( S ) 一ア ミ ノ ー 2 ( S ) —ヒ ドロキシ一 4—フエニルブタ ノ ィル一 [ 4 ( S ) 一ク ロ口] プロ リ ン t e r t—プチルア ミ ド 190mg (0.50ミ リ モル） を塩化メチレン 6 m 1 に溶かし、 これに、 N—べンジルォキシカル ボニル一 0—メ ト キシメチルー Lース レオニン 149mg (0.50ミ リ モル） を 加え氷冷した。 D E P C96mg(0.55 ミ リモル） を加え、 次いでト リェチル ァミ ン 56mg (0.55ミ リモル） を滴下し、 3時間撹拌した。 反応混合物を減 圧下溶媒留去し、 酢酸ェチル 2 0 m 1 を加え、 5 %クェン酸、 5 %N a H C 03 水溶液および飽和食塩水で洗浄、 無水 N a 2 S 04 で乾燥した。 溶 媒を減圧港縮し、 油状の残さを分取薄層ク ロマ ト グラフ ィ ー （塩化メチレ ン/メ タ ノ ール = 20 : 1 ) で精製した。 へキサン一ェチルエーテルで結晶 化し、 白色結晶性固体と して表記の化合物 260rag を得た。 融点 5 7. 5— 5 9 。
元素分析 ： C33H45N408C1 · H20 (分子量 679.22) と して
理論値： 58.36;H, 6.97;N.8.25;C1.5.22
実測値： C.58.33;H， 7.02:N, 8.21 :C1， 5.11.
M a s s ： 661 (M+H)+ .
N R ： δ (CDCI3, 270MHz)： 7.37- 7.01 (10H, m) , 6.3(1H, br. s) , 5.64-5.59 (1H. m) , 4.49(3H, br. s), 4.45-4.07 (6H, m) . 3.86-3.64 (2H, m), 3.24(3H, s)， 2.81-2.53 (5H, m) , 1.3K9H, s) , 1.1δ(2Η, d, J = 5.7Hz) , 0.89(1H. t, J = 5.1, 6.9Hz).
2 ) 2 ( S ) ， 3 ( S ) - 3 - [N— （キノ キサリ ン一 2 —カルボニル ) 一 0—メ ト キシメチルー L— _ス レオニル —ァ ミ ノ _— 2 — _ヒ ドロキシー J_ 一フエニルブタ ノ ィルー [ 4 ( S ) 一ク ロ口"！ _一 I 一プロ リ ン t e r _t — ブチルァミ ド
実施例 4で合成された 2 ( S ) , 3 ( S) 一 3— （N—べンジルォキシ カルボ二ルー 0—メ ト キシメチルー Lース レオニル） アミ ノ ー 2—ヒ ドロ キシー 4一フエニルブタ ノ ィルー [ 4 ( S ) 一ク ロ口】 一 L一プロ リ ン t e r t -ブチルァミ ド 210mg (0.3 ミ リモル） をメ タ ノール 1 0 m I に溶 かし、 1 0 %パラジウム一炭素触媒で水素添加しベンジルォキシカルボ二 ル基を除去した。 得られたアミ ノ化合物全量と 2—キノキサリ ンカルボン 酸 55mg(0.33 ミ リモル） を D M F 5 m 1 に溶かして氷冷した。 D E P C58 mg(0.33 ミ リ モル） を加え、 次いでト リェチルァ ミ ン 64mg(0.63 ミ リモ ル） を滴下し、 】 0時間撹拌した。 酢酸ェチル 2 0 m I を加え、 5 %クェ ン酸、 5 %N a H C 03 水溶液および飽和食塩水で洗浄、 無水 N a 2 S 0 4 で乾燥した。 溶媒を減圧で留去し、 油状の残さを分取薄層クロマ トグラ フ ィ ー （塩化メチレンノメ タ ノール =20 ： 1 ) で精製した。 ェチルェ一テ ルーへキサンで結晶化し、 白色結晶性固体と して表記の化合物 i60mg を得 た。
融点 8 2 — 8 8 。
元素分析 ： C34H43N607C1 · 1/2H20( 分子量 692, 22) と して
理論値： C, 59.00 ;H, 6.41; N, 12.14;C1, 5.12
実測値： 58.97; H， 7.02: N， 11.66: CI.5.05.
M a s s : 683 ( +H)+ .
NMR ： δ (CDC13, 360MHz)： 9.62(1H. m) , 8.7(1H, d, J=7.2Hz), 8.23-8.20(2H, m) , 7.94-7.85 (2H, m) , 7.31-7.11 (5H, m)， 6.23(1H. s). 4.74-4.66(2H, m)， 4.57(1H, d， J=2.4Hz) , 4.50-4.2 (6H, m) .
3.82(1H. dd, J = 10.7, 6.8Hz) , 3.69-3.56 (1H, m) , 3.38(1H, q, ) .
2.84-2.60 (5H, m) . 1.39(1H, s)， 1.27(9H, s), 1.04 (1H, d, J = 6. Hz), 0.9(1H， t, J=6.6, 6.1Hz) . (実施例 5 )
2 ( S ) , 3 ( S ) - 3 - [N— （キノキサリ ン一 2—カルボニル） 一 0—スクシ二ルー Lース レオニル] アミ ノー 2—ヒ ドロキシー 4一フエ二 ルブタ ノ ィルー [ 4 ( S ) 一ク ロ口 ] — L—プロ リ ン t e r t 一ブチル アミ ド
1 ) 2 ( S ) 、 3 ( S ) - 3 - [( N—べンジルォキシカルボニル） 一 L -ス レオニ^ Ί ア ミ ノ ー 2—メ トキシメチルォキシー 4ーフェニルブタ ノ ィ ル し 4 ( S ) 一ク ロ口] 一 L—プロ リ ン t e r t —ブチルア ミ ド
参考例 3で合成された化合物 1.90g(3.40ミ リモル） をメ タ ノール 5 0 m 1 に溶かし、 1 0 %パラジウム一炭素触媒で水素添加しベンジルォキシカ ルポ二ル基を除去した。 得られたァ ミ ノ化合物全量と N—べンジルォキシ カルボ二ルー ； Lースレオニルー N—ハイ ドロキシサク シイ ミ ドエステル 1. 24g (3.70ミ リモル） を塩化メチレン 6 0 m 1 に溶かして氷冷し、 ト リエ チルァミ ン 0.56ml (4.04 ミ リモル） を滴下し、 16時間撹拌した。 反応混 合物を減圧下溶媒留去し、 酢酸ェチル 3 0 m 1 を加え、 5 %クェン酸、 5 % N a H C 03 水溶液および飽和食塩水で洗诤、 無水 N a 2 S 04 で乾燥 した。 溶媒を減圧で留去し、 油状の残さをシリ カゲルク ロマ ト グラフ ィ ー (塩化メチレンノメ タ ノ ール- 1 0 : 】 ） で精製した。 へキサンで結晶 化し、 白色結晶性固体と して表記の化合物 1.56g を得た。
融点 8 3 — 8 6で。
元素分析 ： C33H45N408C1 ( 分子量 661.20) と して
理論値： 59.95;H, 6.86;N.8.47;C1.5.36
実測値： 59.75: H, 6.89; N， 8.46: C1, 5.44.
M a s s ： 661 (M+H)+ .
NMR ： δ (CDCI3, 270MHz) :7.38-7.24 (10H, m) , 6.95(1H, d, J =4. 8Hz), 6.26(1H, br. s). 5.69(1H, d, J = 4.5Hz) , 5. ll(2H. d, J = 6.1Hz ), 4.79-4.63 (3H.m) , .52-4.06 ( 7H, m) , 3.77-3.71 ( 1H. m) . 3.37(3 H，s)， 2.95(2H， d, J = 7.17Hz) , 2.56(2H, t, J = 7.1Hz)， 1.31 (9H, s) 1.12(3H， d, J=6.5Hz) .
2 ) 2 ( S ) , 3 ( S ) 一 3— [N— （キノキサリ ン一 2—カルボニル ) 一 Lースレオニル】 アミ ノー 2—メ トキシメチル才キシ一 4 -フエニル ブタノィルー [ 4 ( S ) 一クロ口] 一 L一プロリ ン t e r t —ブチルァミ 上
2 ( S ) 、 3 ( S ) 一 3 — [ ( N—べンジルォキシカルボニル） 一 Lース レオニル] アミ ノー 2—メ トキシメチルォキシー 4一フエニルブタノィル
[ 4 ( S ) 一クロ口] プロリ ン t e r t一ブチルアミ ド 1.55g(2.35ミ リモ ル） をメ タノール 40m I に溶かし、 1 0 %パラジウム一炭素触媒で水素添 加しベンジルォキシカルボ二ル基を除去した。 得られたアミ ノ化合物全量 と 2—キノキサリ ンカルボン酸 412mg(2.37ミ リモル） を DMF40m 1 に溶 かして氷冷した。 1 ーェチルー 3 — （ 3—ジメチルアミ ノブ口ピル） カル ボジィ ミ ド塩酸塩 450mg (2.35ミ リモル） 、 次いで 1 ーヒ ドロキシベンゾト リ アゾ-ルー水和物 317mg(2.35ミ リモル） を加え、 1 4時間攪拌した。 反 応混合物を減圧下溶媒留去し、 酢酸ェチル 2 0 m l を加え、 5 %クェン酸、 5 % N a H C 03 水溶液および飽和食塩水で洗诤、 無水 N a 2 S 04 で乾 燥した。 溶媒を減圧澳縮し、 油状の残さをシリ カゲルクロマ トグラフィ ー
(塩化メチレン Zメ タノール = 1 0 ： 1 ) で精製し、 表記の化合物 1. 12g を得た。
融点 8 2 — 8 7で。
元素分析 ： C34H43N607C卜 H20 (分子量ァ01.23) と して
理論値 :C, 58.24 ;H, 6.47;N, 11.98;C1, 5.06
実測値： 57.87 :H.6.73; N.11.87: CI , 4.62.
M a s s : 683 (M+H)+ .
NM R ： δ (CDC13, 270MHz) :9.65-9.55 (1H， m) , 8.31-7.83(6H, m) . 7.37-7.25 (5H, m) , 7.01 (1H, d, J = 7.4Hz) , 6.35(1H, br. s) , 4.79 -4.21 (9H, ra)， 3.79-3.73(1H, m) . 3.37(3H， s), 3.08-2.83(2H, m) , 2.72-2.51 (2H, m) , 1.31 (9H, s) . 1.21 (3H, d, J = 6.5Hz).
3 ) 2 ( S ) , 3 ( S ) - 3 - [N - (キノ キサリ ン一 2—カルボニル ) 一 0—スク シ二ルー Lース レオニル] ア ミ ノ ー 2 —メ トキシメチルォキ シー 4一フエニルブ夕 ノ ィ ルー [ 4 ( S ) 一ク ロ口 ] 一 L一プロ リ ン t e r t一ブチルア ミ ド 2 ( S ) , 3 ( S ) 一 3— [N— （キノキサリ ン一 2—カルボニル） 一 L—スレオニル] ア ミ ノ ー 2 —メ ト キシメチルォキシ 一 4一フエニルブ夕 ノ ィルー [ 4 ( S ) 一クロ口] — L一プロ リ ン t e r t一ブチルア ミ ド 1, llg(l.63ミ リ モル） を塩化メチレン 2 0 m 1 に溶かし 無水こはく酸 360mg(3.60ミ リモル） を加え、 次いで 4ージメ チルアミ ノ ビ リ ジン 3mg(0.039 ミ リモル） を加えて室温で 1晚撹拌した。 反応混合物を 減圧下溶媒留去し、 酢酸ェチル 2 0 m 1 を加え、 596クェン酸、 5 6 N a H C O3 水溶液および飽和食塩水で洗诤、 無水 N a 2 S 04 で乾燥した。 溶媒を減圧濃縮し、 残さをシリ カゲルクロマ ト グラフ ィ ー （塩化メチレン メ タノール = 1 0 ： 1 ) で精製し、 表記の化合物 756mg を得た。
融点 9 9— 1 0 1 。
元素分析 ： C38H47N60ioCl ( 分子量 783.29) と して
理論値： 58.27: H, 6.05; N, 10.73; C 1.4.53
実測値： 57.81 ;H, 6.28;N, 10.60;C1, 4.50.
M a s s ： 783 (M+H)+ .
NMR ： δ (CDCI3, 270MHz) :9.61 (1H, s) , 8.61 (1H( d, J = 7.9Hz) .
8.23-8.19(2H. m) , 7.89-7.86(2H, m) , 7.26- 7.22 (5H, m) , 6.45-6. 37(1H, br. s), 5.41-5.38(1H, m) , 4.78-4.58 ( 3H, m), 4.45-4.21 (4 H, m) , 3.71- 3.65(1H, m)， 3.47(3H, s) . 3.42(1H, d, J=8.6Hz) , 3. 36(2H, s)， 2.94-2.88(2H, m) , 2.66-2.50(6H, m) , 1.36- 1.27 ( 12H， m).
4 ) 2 ( S ) , 3 ( S ) _- 3 -_[ N - (キノ キサリ ン一 2—カルボニル ) 一◦ースク シ二ルー Lース レオ: ル"！ ア ミ ノ ー 2—ヒ ドロキシー 4 ーフ ェニルブタ ノ ィルー [ 4 ( S ) 一ク ロ口] 一 L一プロ リ ン t e r t —ブチ ルアミ ド
2 ( S ) ， 3 ( S) 一 3— [N— （キノキサリ ン一 2—カルボニル） 一〇 ースク シ二ルー Lース レオニル] ア ミ ノ ー 2—メ ト キシメチルォキシー 4 一フエニルブタ ノ ィ ルー [ 4 ( S ) 一ク ロ口] 一 Lーブロ リ ン t e r t — ブチルア ミ ド 270mg(0.35ミ リモル） を塩化メチレン 2 0 m 1 に溶かし、 ト リフルォロ酢酸 0.2ml (1.8 ミ リモル） を加えて室温で 2時間撹拌した。 酢 酸ェチル 2 O m l を加え、 5 %N a H C〇3 水溶液で洗浄、 無水 N a 2 S 04 で乾燥した。 溶媒を減圧濃縮し、 油状の残さを分取薄層クロマ トグラ フ ィ 一 （塩化メチレン ： エタノール ：酢酸 = 9 5 : 5 : 3 ) で精製し、 白 色結晶性固体として表記の化合物 130mg を得た。
融点 1 2 6— 1 2 9で。
元素分析：（：3 43 09^ '1.5 0(分子量766, 26) として
理論値： C, 56.43; H, 6.05; N, 10.97; C 1,4.63
実測値： C, 56.23; H, 6.06: N.10.23; C1, 4.36.
M a s s ! 739 (M+H)+ .
NMR ： δ (CDC13- 270MHz) :9.62 (1Η, s)， 8.70-δ.59 (1H, m) , 8.2 3-8.18(2H, m) , 7.93-7.84 (2H, m) , 7.26-7.20 (5H, m) , 7.02-6.97 ( 1H， m) , 6.30(1H, br. s), 5.54-5.50(1H, m)， 4.83-4.11 (7H, m) , 3. 97-3.68 (2H, m) , 2.97-2.51(8H, m) , 1.43- 1.22 ( 12H, m) .
(実施例 6 )
2 ( S ) , 3 ( S ) 一 3— [N - (キノ キサリ ン一 2—カルボニル） 一 Lーァロス レオニル 1アミ ノ ー _ ^一ヒ ドロキシー 4一フエニルブタ ノ ィ」レ - [ 4 ( S ) 一ク ロ口 ] — L一プロ リ ン t e r t—ブチルア ミ ド
1 ) _2_( S ) - 3 ( S ) 一 3— （ N— t e r t—ブチルォキシカルボ二 ル一 Lーァロス レオニル） ア ミ ノ ー 2—ヒ ドロキシ一 4一フエニルブタ ノ ィル— 「4 ( S ) 一ク ロ口 ] — L一プロ リ ン t e r t—ブチルア ミ ド
3 ( S ) 一ア ミ ノ ー 2 ( S ) ーヒ ドロキシ一 4一フエニルブタ ノ ィル一 [
4 ( S ) 一ク ロ口] プロ リ ン t e r t —ブチルア ミ ド 461mg (1.21ミ リモ ル） を N, N—ジメチルホルムアミ ド （以下 DM Fと略す。 ） 1 0 m 1 に 溶かし、 これに、 N— tert—ブチルォキシカルボ二ルー Lーァロス レオニ ン 285mg (1.30ミ リモル） を加え氷冷した。 シアノ リ ン酸ジェチル （以下 D E P Cと略す。 ） 0.23ml (1.31 ミ リモル） を加え、 次いでト リェチルァ ミ ン 0.18ml (1.31 ミ リ モル） を滴下し、 3時間撹拌した。 反応混合物を減 圧下溶媒留去し、 酢酸ェチル 2 0 m 1 を加え、 5 %クェン酸、 5 %N a H C O3 水溶液および飽和食塩水で洗诤、 無水 N a 2 S 04 で乾燥した。 溶 媒を減圧濃縮し、 油状の残さをシリ カゲルク ロマ ト グラフ ィ ー （塩化メチ レン メ タノール = 1 0 ： 1 ) で精製した。 無色結晶性固体と して表記の 化合物 670mg を得た。
融点 1 9 4一 1 9 6で。
a s s ： 583(M)+ .
NMR ： δ (CDCl3， 270MHz) :7.32-7.12(5H,m ), 4.43-4.04 (9H, m) , 3.96-3.73 (3H,m) , 2.95-2.67 (4H, m) , 2.18-2.07 ( 1H, m) , 1.44 (9H. m) , 1.33(9H， s) 1.01 (3H， d, J = 6.1Hz)
2 ) 2 ( S ) , 3 ( S ) 一 3— [N - (キノ キサリ ン一 2—カルボニル ) 一 L—ァロス レオニル] ア ミ ノー 2—ヒ ドロキ — 4一フエニルブタ ノ ィ ルー [ 4 ( S ) —ク H_口 ] — L一プロ リ ン t e r t —ブチルア ミ ド
2 ( S ) ， 3 ( S ) 一 3— （N— t e r t —ブチルォキシカルボニル一 L —ァロス レオニル） ア ミ ノ ー 2—ヒ ドロキシ一 4—フエニルブタ ノ ィ ルー [ 4 ( S ) 一ク ロ口 ] 一 L -プロ リ ン t e r t —ブチルア ミ ド 651mg(l.12 ミ リ モル） を 4 N塩酸一ジォキサン溶液 1 0 m l で処理し、 t e r t —ブ チルォキシカルボニルを除去して、 得られた塩酸塩の全量と 2—キノ キサ リ ンカルボン酸 193mg ( 1.11ミ リ モル） を D M F 】 0 m 1 に溶かして氷冷し た。 D E P CO.18ml (1.18 ミ リモル） を加え、 次いで ト リェチルァ ミ ン 0. 42ml (0.30 ミ リモル） を滴下し、 1 6時間撹拌した。 反応混合物を減圧下 溶媒留去し、 酢酸ェチル 0 0 m 1 を加え、 5 %クェン酸、 5 %N a H C 03 水溶液および飽和食塩水で洗诤、 無水 N a 2 S 04 で乾燥した。 溶媒を 減圧濃縮し、 油状の残さを分取薄層クロマ トグラフィー （塩化メチレン Z メ タ ノール: = 1 0 ： 1 ) で精製した。 へキサン一ェチルエーテルで結晶化 し、 白色結晶性固体と して表記の化合物 305mg を得た。
融点 1 1 7— 1 2 1 。
元素分析 ： C32H39N6O6CI · 1·5Η20( 分子量 666.18) と して
理論値： 57.70;Η, 6.35;Ν, 12.62;C1, 5.32
実測値： 57.97;H,6.11;N, 12.31;C1,5.01.
M a s s ： 639 (M+H)+ .
NMR ： δ (CDC13. 270MHz) :8.50(lH,d, J=8.5Hz), 8.24-8.12 (2H， m) , 7.95-7.85(2H(m), 7.14-7.09 (2H, m) , 6.99-6.87 (2H, m) , 6.77-6.71 (lH.m), 6.20(1H, br. s) , 4 · 54-4.42 (4H， m)， 4.38-4.22 (3H, m) , 4.11 -3.67(5H，m〉, 2.85-2.62(4H,m), 1.30-1.21 (12H, m)
(実施例 7 ) 2 ( S ) , 3 ( S) - 3 - [N- (キノ リ ン一 2—カルボ 二ル） 一 Lース レオニル 1_ ア ミ ノ ー _2— _ヒ 口 シー 4一フエニルブタ ノ ィルー 「 4 ( S ) 一ク ロ口 ] — L一プロ リ ン t e r t —ブチルア ミ ド
2 ( S ) , 3 ( S ) 一 3— （Lース レオニル） ア ミ ノ ー 2—ヒ ドロキシ一 4一フエニルブタ ノ ィルー [4 ( S ) —ク ロ口 ] 一 L—プロ リ ン t e r t 一ブチルア ミ ド 118mg(0.25ミ リモル） とキナルジン酸 55mg (0.31 ミ リ モ ル） を T H F 5 m l に溶かして水冷し、 1 ーェチルー 3— ( 3—ジメチル ァ ミ ノ プロ ピル） カルボジィ ミ ド塩酸塩 57mg (0.3ミ リ モル） 、 次いで 1 一 ヒ ドロキシベンゾ ト リ アゾールー水和物 38mg(0.28 ミ リ モル） を加え、 ュ 6時間撹拌した。 反応混合物を減圧下溶媒留去し、 塩化メチレン 2 0 m 1 を加え、 1 0 %クェン酸、 5 % N a H C〇3 水溶液および飽和食塩水で洗 净、 無水 N a 2 S 04 で乾燥した。 溶媒を減圧濃縮し、 油状の残さを分取 薄層ク ロマ ト グラ フ ィ ー （塩化メチレン/メ タ ノ ール = 1 0 ： 1 ) で精製 した。 へキサン一ェチルエーテルで結晶化し、 白色結晶性固体と して表記 の化合物 103mg を得た。
融点 1 1 5 — 1 1 8 ：。
元素分析 ： C33H40N506C1 · H20(分子量 656. 19) と して
理論値： C.60.40: H.6.45; N,〗0.67: C1, 5.40
実測値： C, 60.77 :H, 6.56 ;N.10.62; Cし 5.94.
M a s s : 638 (M+H)+ .
NM R ： δ (CDC13- 270MHz) :8.88-8.79 (1Η, m) , 8.50-8.14 (2Η, m) , 7. 94-7.64 (3Η. m) . 7.21-6.72 (6Η. m) , 6.26 (1Ή, br. s) , 4.57-4.11 (7Η, m ) . 3.93-3.68 (3Η, m) , 2.80-2.56 (5H,m)
(実施例 8〉
2 ( S ) ， 3 ( S ) 一 3 — [N— （キノ キサリ ン一 2—カルボニル） 一 0—カルボキシメ トキシァセチルー ： Lース レオニル 1 ア ミ ノ ー 2— ヒ ドロ キシー 4一フエニルブタ ノィルー [ 4 _( S ) -クロ口 !_ - L -プロ リ ン t e r t—ブチルアミ ド (例示化合物番号 7 )
1 ) 2 ( S ) , 3 ( S ) - 3 - [N— （キノキサリ ン一 2—カルボニル） - 0_—_力 ) * シ_メ _ト シァセチルー Lース レオニル ]_ ア ミ ノ ー 2—メ ト キシメチル才キシ一 4一 7ェ_二ノレブタ ノィルー し 4 ( S ) 一ク ロ口 1_一 L 一プロ リ ン t e r t—ブチルア ミ ド
実施例 5 ( 2 ) で合成された化合物 2 (S) 3 ( S ) — 3— [N— ( キノ キサリ ン一 2 —カルボニル） 一 Lースレオニル] ア ミ ノ ー 2—メ トキ シメチルォキシ一 4一フエニルブタ ノィルー [ 4 ( S ) 一ク ロ口] 一 L一 プロリ ン t e r t -ブチルァミ ド 1.20g(0.18ミ リモル） を塩化メチレン 2 m l に溶かし、 無水ジグリ コール酸 31mg(0.27 ミ リモル） を加え、 次い で 4ージメチルァ ミ ノ ピリ ジン 2mg(0.018 ミ リモル） を加えて室温で 1晚 拢はんした。 反応混合物を 5 %クェン酸、 5 %N a H C〇3 水溶液および 飽和食塩水で洗浄、 無水 N a 2 S 04で乾燥した。 溶媒を減圧濃縮し、 残 渣をシリ カゲルク ロマ ト グラフ ィ ー （塩化メチレン/メ タ ノ ール/ 酢酸 = 9 0 : 9 : 3 ) で精製し、 表記の化合物 52mgを得た。
M a s s : 799 (M+H)+ .
NMR ： δ (CDCI3. 270MHz) :9.58(1H, s), 8.64 (1Η, d, J = 7.9Hz) , 8.1 6-8.15(2H, m) , 7.89-7.84 (3H m) , 7.27-7.12(4H,m), 7.05-7.00(1H, m) , 6.62 (1H, br) , 5.49-5.45 ( 1H, m) , 4.91 -4.80 ( 1H, m) . 4.72-4.61 ( 3H m) , 4.47(1H, t, J=7.3Hz) , 4.35(1H, t, J=5.9Hz) . 4.29-4.13(3H. m )， 4.07(2H. br. s). 3.70-3.63 (lH,m), 3.38-3.29 (3H,m) ( 2.91-2.88 (2H, m) , 2.64-2.47 (2H,m) , 1.34-1.26 (12H, m) .
2 ) 2 ( S ) 3 ( S ) — 3— し N— （キノ キサリ ン一 2—カルボニル） 一 0—カルボキシメ ト キシァセチルー Lース レオニル 1_ア ミ ノ ー 2—ヒ ド 口キシ一 4 一フエニルブタ ノ ィルー [ 4 ( S ) -ク ロ口 1 一 ： L—プロ リ ン t e r t -ブチルアミ ド
2 ( S ) , 3 ( S ) 一 3 — [N— （キノ キサリ ン一 2—カルボニル） 一 0 一カルボキシメ トキシァセチル一 Lース レオニル] ア ミ ノ ー 2—メ トキシ メチルォキシ一 4—フエニルブタ ノ ィ ルー [ 4 ( S ) 一ク ロ口 ] — Lープ 口 リ ン t e r t —ブチルァ ミ ド 40mg(0.05 ミ リモル） を
2 0 % ト リ フルォロ酢酸ノ塩化メチレン 2 mlに加えて、 低温で一晚攪はん した。 反応混合物を減圧下溶媒留去し、 ベンゼンを加えて共沸によ りでき るだけ ト リ フルォロ酢酸を除去した後、 エーテルで結晶化し、 白色結晶性 固体と して表記の化合物 21ingを得た。
元素分析 ： C36H43N60l0Cl /5H20 (分子量 845.28) と して
理論値： C， 51.15;H, 6.32;Ν， 9.94;C1，4.19
実測値： 51.48; H， 5.47: N, 9.29; C 1,4.29.
M a s s : 755 ( +H) + .
NMR ： δ (CDCl3， 270MHz) :9.61 (1Η, s) , 9.59(lH， s)， 8.70-8.66 (1 H, m) , 8.27-8.19(3H, m) , 7.96-7.88 (3H. m) , 7.26-6.99 (5H.m), 6.80 -6.55 (1H, ra), 5.62(1H, br) , 5.08-5.05 (1H, br) , .68-4.57 (2H, m) . 4.41-4.15(6H, m) , 3.96-3.93 (1H, m) , 2.84(3H， br)， 2.42-2.39 (1H. m )， 1.35-1.22 (12H, m) .
(実施例 9 )
2 ( S ) ， 3 ( S ) 一 3 — [N— (キノ キサリ ン一 2 —カルボニル） 一 0 - ( 3 —さルボキシブタ ノ ィ ル） 一 L—ス レオニル] ァ ミ ノ 一 2 — ヒ ド ロキシ一 4 一フエニルブタノ ィ ル一 [ 4 ( S ) 一 ク ロ口 ] 一 L一プロ リ ン t e r t —ブチルアミ ド (例示化合物番号 8 )
1 ) 2 ( S ) , 3 ( S ) 一 3 — [N - (キノ キサリ ン一 2 —カルボニル ) — 0— ( 3 — カルボキシブタ ノ ィ ル）—一 L—ス レオニル] _ ア ミ ノ ー 2 — メ トキシメチルォキシー 4一フエニルブタ ノ ィ ルー 4 ( S ) 一ク ロ口 1 — L一プロ リ ン t e r t —ブチルア ミ ド
2 ( S ) , 3 ( S ) 一 3— [N— （キノ キサリ ン一 2—カルボニル） 一 Lース レオニル] アミ ノー 2—メ トキシメチルォキシー 4一フエ二ルブタ ノ ィルー [ 4 ( S ) 一ク ロ口] 一 L—プロリ ン t e r t一ブチルア ミ ド 1.20g(0.18ミ リ モル） を塩化メチレン 2 m 1 に溶かし、 無水グルタル酸 10 3mg(0.9 ミ リ モル） を加え、 次いで 4一ジメチルァ ミ ノ ピリ ジン 10mg(0. 09 ミ リモル） を加えて室温で 1晚搜はんした。 反応混合物を 5 %クェン 酸水溶液、 飽和食塩水で順次洗浄し、 無水 N a 2 S 04 で乾燥した。 溶媒 を減圧濃縮し、 残淹をシリ カゲルクロマ ト グラフ ィ ー （塩化メチレン メ タ ノール = 1 0 ： 1 ) で精製し、 表記の化合物 93mgを得た。
M a s s ： 797 (M+H)+ .
NMR ： δ (CDC13. 270MHz) :9.65(lH,m), 8.59-8.56 (1H, m) , 8.24- 8.19(2H,m), 7.92-7.88 (2H, m) , 7.26-7.00 (5H, m) , 6.40(lH,br. s) , 5.45-5.41(lH,m), 4.79-4.61(4H,m), 4.60- .20 (4H, m) , 3.39-3.32( 3H,m), 2.88(2H, d, J = 7.3Hz), 2.59 (2H, t , J = 7.3Hz) , 2.44-2.33 (6H, m )， 2.00-1.87 (3H,m), 1.37, 1.33 (9H, s, s)， 1.27 (3H, d, J = 6.6Hz) . 2 ) 2 ( S ) , 3 ( S ) 一 3— [N— （キノ キサリ ン一 2—カルボニル） 一〇一 （ 3—カルボキシブタ ノ ィル） 一 Lース レオニル] ァ ミ ノ 一 2—ヒ ドロキシー 4 —フエ二ルブタ ノ ィルー 「_4 ( S ) -ク ロ π ] — L—プロリ ン t e r t —ブチルア ミ ド
2 ( S ) , 3 ( S ) 一 3 — [N- (キノ キサリ ン一 2—カルボニル） 一 0— （ 3—カルボキシブタ ノ ィル） 一 Lース レオニル] ア ミ ノ ー 2—メ ト キシメチルォキシ一 4 —フエニルブ夕 ノ ィ ルー [ 4 ( S ) —ク ロ口] — L —プロ リ ン t e r t —ブチルァ ミ ド 78mg(0.098ミ リモル） を 2 0 % ト リ フルォ口酢酸 Z塩化メチレン 5mlに加えて室温でー晚攪はんした。 反応混 合物を減圧下溶媒留去し、 ベンゼンを加えて共沸によ りできるだけ ト リ フ ルォロ酢酸を除去した後エーテルで結晶化し、 白色結晶性固体と して表記 の化合物 36mgを得た。
元素分析 ： C37H45N609C1 /Η20 (分子量ァァ1.24 ) と して
理論値： 57.62;Η, 6.14;Ν, 10.90;C1, 4.60
実測値： 57.65; H, 6.30; N， 10.57; C 1,4.54.
M a s s : 753 (M+H)+ .
NMR ： δ (CDC13, 270MHz) :9.61(lH, s), 9.61 (1H, s) ,8.62-8.59 (1H, m) , 8.25-8.22 (2H, m) , 7.96-7.91 (2H, m) , 7.27-6.98 (4H, m) , 6.48-6. 41(lH，m), 5.54-5.47(lH,m), 4.90-4.85(1H, m) , 4.57-4.47(2H, m) , 4.39-4.24 (2H, m) , 3.89-3.83 (1H, m) , 2.87-2.65 (2H,m) , 2.57-2.35 (7H,m), 2.02-1.89(3H,m)( 1.36-1.28 (9H, m) .
(参考例 1 )
2 ( S ) 、 3 ( S ) 一 3—（ N—ベンジルォキシカルボニル） ア ミ ノ ー
2—ヒ ドロキシー 4一フエニルブタ ノ ィルー [ 4 ( S ) 一ク ロ口] 一 L— プロリ ン t e r t -ブチルアミ ド
3 ( S ) —ア ミ ノ ー 2 ( S ) —ヒ ドロキシー 4ーフヱニルブタ ノ ィ ル一 [
4 ( S ) —ク ロ口] - L一プロ リ ン t e r t—ブチルア ミ ド 1.5g(3.93ミ リ モル） を塩化メチレン 2 5 m 1 に溶かし、 N—カルボベンゾキシこは く 酸イ ミ ド 1.47g (5.90ミ リ モル） 、 ト リェチルァ ミ ン 0.55ml (3.93 ミ リ モ ル） を加え、 室温で 2時間拢拌した。 反応混合物を 5 %クェン酸、 5 %N a H C O3 水溶液および飽和食塩水で洗净し、 無水 N a 2 S 04 で乾燥し た。 溶媒を減圧濃縮し、 油状の残さをシ リ カゲルカ ラムクロマ トグラ フ ィ ― (塩化メチレン Zメ タ ノ ール系） で精製し、 へキサンで無色結晶性固体 と して表記の化合物 1.9gを得た。
NMR ： δ (CDC13, 270MHz) :7.33-7.18(10H, m) , 6.29(1Η, br) , 5.26 (1Η, m) , 5.02(2H,m) , 4.57-4. ll(4H,m) , 3.87- 3 , 80 ( 1Η, m) , 3.70(1Η, d, J = 6.6) , 2.71-2.58(4Η， m) , 1.29(9Η. s) . (参考例 2 )
2 ( S ) 、 3 ( S ) 一 3—（ N—べンジルォキシカルボニル） ァ ミ ノ 一 2 - t e r t -ブチルジメ千 ) シリ ルォキシ一 _4 -_7ェニルブタ ノ ィ ルー J 4 ( S ) —ク ロ口 ]_ 一 L一プロ リ ン
e t一ブチルアミ ド
参考例 1で得られた化合物 1.45g(2.81ミ リモル） を DMF 1 5 m 1 に溶 かし、 t e r t—ブチルジメチルシリ ルクロライ ド 0.85g(5.62ミ リ モル） 、 イ ミ ダゾール 0.30g(5.62ミ リモル） を加え、 室温で 1晚撹拌した。 反応混 合物を減圧下溶媒留去し、 酢酸ェチル 5 0 m 1 を加え、 5 %クェン酸、 5 % N a H C 03 水溶液および飽和食塩水で洗诤し、 無水 N a 2 S 04 で乾 燥した。 溶媒を減圧濃縮し、 表記の化合物 l. llg を得た。
NMR ： δ (CDCl3， 270MHz)：7.33-7.17(10H,m), 6.60 (1H， br. s) , 4. 96(2H,q,J=35.0, 12.5Hz), 4.87(1H, d, J=9.2Hz) , 4.37-4.27 (3H， m) , 4.10-3.99(2H,m)，
3.68(lH,m) , 3.12(1H, dd, J = 14.5, 4.0Hz) , 2.69-2.59 (2H, m) , 2.34-2. 26(lH,m), 1.30(9H, s), 0.93(9H, s), 0.09(6H, d, J=4.6Hz)
(参考例 3 )
2 ( S ) 、 3 ( S ) 一 3—（ N—べンジルォキシカルボニル） ア ミ ノ ー 2—メ ト キシメチルォキシ一 4一フエニルブタ ノ ィ ル一 [ 4 ( S ) 一ク ロ π 3 一 L -_7° πリ ン t e r t—ブチルア ミ ド
参考例】 で得られた化合物 1.95g(3.78ミ リモル） を DMF 4 O m 1 に溶 かし、 N、 N—ジイ ソプロ ピルェチルァ ミ ン 2· 62ml (15.12ミ リモル〉 、 ク 口ロメチルメチルェ一テル; 1.20m 1 ( 15.12ミ リ モル） および 4—ジメチルァ ミ ノ ピリ ジン 52mg (0.43ミ リモル） を加え、 室温で 3 日間攬拌した。 反応 混合物を減圧下溶媒留去し、 酢酸ェチル 5 0 m 1 を加え、 5 %クェン酸、 5 % N a H C 03 水溶液および飽和食塩水で洗浄、 無水 N a 2 S 0 で乾 燥した。 溶媒を減圧濃縮し、 油状の残さをシリ カゲルク ロマ ト グラ フ ィ ー (塩化メチレン メ タ ノ ール = 10 ： 1 ) で精製し、 白色結晶性固体と し て表記の化合物 1.91g を得た。
融点 7 1 — 7 3 。
元素分析 ： C29H38N306C1 ( 分子量 560.10) と して
理論値： 62.19;H,6.84;N, 7.50;C1, 6.33
実測値： 61.63;H, 6.81 ;N, 7.31 ;C1.6.28.
M a s s : 560( )+ .
NMR ： δ (CDC13, 270MHz) :7.38-7.18 (5H, s)， 6.41(1H, br. s ) , 5.39(1H, s), 5.19(2H, q, J=4.2, 8.6Hz), 4.75-4.63 (2H, m) , 4.39-
4.14(4H.m), 3.77-3.71 (1H, m) , 3.33(3H, s) , 2.92(2H, d, J=7.3Hz) , 2.72-2.65 (2H, m) , 2.50-2.44 (2H， m) , 1.61 (4H, s), 1.30(9H, s).
1.04(1H， d， J = 6.2Hz) .
(製剤例）
(製剤例 1 ) (ハー ドカプセル剤）
標準二分式ハー ドゼラチンカプセルの各々に、 100 mgの粉末状の実施例 1 の化合物、 150 mgのラク トース、 50 mg のセルロース及び 6 mgのステ アリ ン酸マグネシウムを充填することによ り、 単位カプセルを製造し、 洗 诤後、 乾燥する。
(製剤例 2 ) (ソフ ト カプセル剤）
消化性油状物、 例えば、 大豆油、 綿実油又はオリーブ油中に入れた、 実 施例 1 の化合物の混合物を調製し、 正置換ポンプでゼラチン中に注入して、 100 mgの活性成分を含有する ソフ ト カプセルを得、 洗浄後、 乾燥する。 (製剤例 3 ) (錠剤）
常法に従って、 100 mgの実施例】 の化合物、 0.2 mgのコ口ィ ド性ニ酸 化珪素、 5 mgのステア リ ン酸マグネシウム、 275 mgの微結晶性セルロース 11 mg のデンプン及び 98.8 mg のラク トースを用いて製造する。
尚、 所望によ り、 剤皮を塗布する。 (製剤例 4 ) (注射剤）
1.5 重量％ の実施例 1の化合物を、 10容量％ のプロ ピレングリ コール中で 搜拌し、 次いで、 注射用水で一定容量にした後、 滅菌して製造する。
(製剤例 5 ) (懸濁剤）
5 ml中に、 100 mgの微粉化した実施例 1の化合物、 100 mgのナ ト リ ゥ ムカルボキシメチルセルロース、 5 mgの安息香酸ナ ト リ ウム、 1.0 g のソ ルビトール溶液 （日本薬局方） 及び 0.025 mlのバニリ ンを含有するよう に 製造する。
(試験例 1 )
H I Vプロテア一ゼ阻害活性の測定
大腸菌に発現させた H I Vプロテアーゼと合成した基質を用い、 本発明 のべプチ ド誘導体の H I Vプロテアーゼ阻害活性を、 I C 50値を指標と し て次のよう にして求めた。
a ) 発現べク ターの作成
HT L V I I I Bプロウイルスの主要部分を含む B H 1 0クローン （F lossie Wong-Staal' 等、 Nature, 313 巻、 277 — 284 頁、 19S5年に記 載） よ り、 同ウィ ルス g a g領域中の C 1 a I部位及び p o 1領域中の E c 0 R I部位にはさまれる領域を切り出し、 得られたフラグメ ン トを p B R 3 22の同部位中にクローンした。
次いで、 この挿入部位の 5 ' 側上流に存在する B a mH I及び C 1 a I 部位の間に、 翻訳開始コ ドン （ATG) を含む合成フラグメ ン ト
Figure imgf000045_0001
の塩基配列よ り なるフラグメ ン トを揷入し、 更に同 B a mH I部位に T 7 Promoter 領域 [ (Bgl II〜BamHI フラグメ ン ト） Barbara A. Moffatt 等、 J. Mol. Biol. 、 189 卷、 113 -130 頁、 1986年に記載] を挿入し た。 得られたプラスミ ド中の B g 1 I I部位 （ p o 1領域最上流域） を切 断後、 ク レノウ （klenow) フラグメ ン トにて修復合成を行ない、 次いで、 T 4 DN Aリ ガ一ゼにて、 再結合させ、 H I V g a g領域及び p 0 1 領域の一部分を含む発現べクタ一 p T 7 H I V. G P (—） を構築した。 b) 大腸菌での発現
T 7ポリ メ ラーゼ遗伝子を含む大腸菌 B L - 2 1 [ (D E - 3 ) Barbar a A. Mofiatt等、 J. Mol. Biol. 、 189 卷、 113 - 130 頁、 1986年に 記載] に、 p T 7 H I V. GP (-) を導入し、 得られた ト ラ ンスフ ォー マン トを、 2 00 ^ gZm lのアンピシリ ンを含む M9 CA— 1 0 % L B 培地中で、 6 0 0 n mでの吸光度が 2に達するまで、 3 7 にて培養した。
0. 4 m Mのイ ソプロピルチオ一/?一 D—ガラク トシ ドを加え、 更に、 3時間培養を継続した。
得られた菌体を集め、 これをペレッ ト と して一 8 にて保存した。 尚、 本発現ベクターよ り合成されるポリ プロテイ ンは、 菌体中において、 自己消化によ り分解され、 H I Vプロテアーゼ自体が生成する。
c ) 精製
2リ ッ トルの培養液よ り得られた菌体を 6 0 m l のノ ッ フ ァ ー A ( 5 0 mMト リ ス塩酸 （ρ Η 7. 5) 、 I mMジチオス レィ トール、 0. 7 %リ ゾチーム、 】 0 g /m 1 ァプロチニン、 5 mMエチレンジァ ミ ン四酢酸、 1 0 / g/m lベンズア ミ ド、 】 mM弗化フエ二ルメチルスルホン酸、 1 0%グリ セリ ン） に懸濁し、 0 にて 1 0分間放置した後、 T r i t o n
X - 1 0 0 ( 0. 1 %) を加え、 更に 0でで 1 0分間放置した。
凍結融解を 4回行ない、 DN a s e I ( 0. l m g) 、 1 0 mM塩化 マグネシウムを加え、 懸濁液中の D N Aを分解した。
本懸濁液を遠心分離して得た上清を、 DEAE S e p h a d e X A 2 5カ ラム （5 c m内径 X 2 0 c m) に付し、 分画を行った。 尚、 冋カ ラ ムは、 ノ ッ フ ァ ー B [ 5 O mMHE P E S ( p H 7. 8 ) 、 】 mMジチォ ス レイ ト一ル、 l O ^ gZm l ァプロチニン、 5 mMエチレンジァ ミ ン四 酢酸、 1 O gZ m lベンズアミ ド、 1 mM弗化フエ二ルメチルスルホン 酸、 1 0%グリセリ ン] にて平衡化して用いた。
活性の認められた素通り画分を集め、 硫安沈殿 （6 0%) を行ない、 得 られた沈殿を、 2 m 1のバッフ ァー C (5 0 mMト リス塩酸 （ p H 7. 5 ) 、 I mMジチオス レイ ト一ル、 I mMエレンジァミ ン四酢酸、 2 00m M塩化ナ ト リ ウム） に溶解し、 T S K. S 2 00 0 S Wゲルろ過カラム （ 7. 5 mm内径 X 6 0 c m, 東ソー株式会社） に付し、 ノ ッ フ ァー Cを用 レ 0. 5 m 1 Z分の流速にて分画した。
得られた活性画分を、 分画分子量 1万ダル ト ンの限外濾過膜を用いて、 2倍に濃縮し、 酵素液と して一 80 にて保存した。
d ) 活性測定
H I Vプロテアーゼ阻害活性の測定は、 E. D. M a t a y 0 s h i ら の方法 （S c i e n c e 24 7, 9 54 ( 1 9 9 0 ) ) に基づいて行つ た。
すなわち、 2 0〃Mの合成基質 4一 （ 4ージメチルァ ミ ノ フエニルァゾ） 安息香酸 （DABCY L) - S e r - G l n—A s n— T y r— P r o—
I 1 e - V a 1 一 G i n— 5— [ (2—ア ミ ノエチル） ァミ ノ ] ナフタ レ ンー ： Iースルホン酸 （EDAN S) (B AC HEMよ り購入） 、 DMS O に溶解した各濃度の阻害剤を含む 5 0 mM酢酸ナ ト リ ウム （p H 5. 5 ) 一 1 M食塩水の反応液を調製した。 これに部分精製した組換え H I Vプロ テアーゼを添加し、 室温にて反応を開始し、 蛍光分光光度計にて反応生成 物の測定を行った。 各濃度の阻害剤存在下における単位時間当たり の反応 生成量を算出し、 5 09 阻害 «度 （ I C50) を決定した。
本発明の化合物は、 強い阻害活性を示した。
(試験例 2 )
H I ^染。 EM細胞からのゥィルス放出の抑制 (方法）
H I V (HT L V I I I B) 持続感染細胞 M o 1 t 4細胞 （M o 1 t 4 ZHT LV I I I B) を R PM I 1 6 4 0培地 （ 1 096非動化牛胎児血清 を含む） を用いて 2回洗浄後、 同培地に i x i 05 c e l l sノ m lの濃 度になるよう に植え込み、 3 7で、 5 %炭酸ガス下にこれを培養した。 7 2時間後にこの培養上清を遠心分離によつて得、 ウィルスス ト ック と した: C ΕΜ細胞を R ΡΜ I 1 64 0培地 （ 1 0 %非動化牛胎児血清を含む） で 2 x i 0 5 c e l l s//m l に調整し、 適当な濃度に希釈したウイルスス ト ツクを添加した。 さらに種々の濃度の化合物を添加して、 3 7 ：、 5 % 炭酸ガス下にこれを培養した。 7日後に の培養上清を採取し、 これに含 まれる H I V抗原量を E I A法 （ H I V抗原、 E I A I I、 アボッ ト） に よ り測定し、 化合物の添加によ りその放出が 9 0%抑制される澳度を I Cgoと した。
本発明の化合物は、 強いゥィルス放出抑制活性を示した。
(試験例 3 )
本発明の化合物は、 それらが生体内で上記阻害作用を発揮すると期待さ れる薬力学的性質を示す。 例えば、 本発明の化合物 1 OmgZk gをラッ トへ静脈内投与した場合、 投与 1時間後の血中レベルは細胞試験における E D go値とほぼ同じであるかまたはそれよ り も高い。 前記化合物 3 0 m g / k gの十二指腸内投与または経口投与の場合も同様に、 投与 3 0分後に ラッ トの血液中に検出される濃度は細胞試験における E D90値よ り高く 、 好ま しく は細胞試験における E D 90値の約 6倍となる。
血中レベルを測定するために、 投与液を次のよう に調製する。 静脈内投 与の場合、 被験化合物 1 Om gをジメチルァセタ ミ ド （DMA) 0. 3 m 1 に溶解し、 さらに、 P E G 4 0 0 0. 4 m l、 水 0. 3 m l を加えた 溶液を調製する。 十二指腸内投与及び経口投与の場合、 被験化合物 3 0 m を DMA 0. 6 m l に溶解し、 さらに P E G 4 0 0 0. 8 m l、 水 0. 6 m 1 を加えた溶液を調製する。 これらの溶液をラ ッ トに投与した後、 経 時的に採血し、 血液を遠心分離 （ 3 00 r p rt、 1 0分） して血漿を得る, この血漿 2 0 μ 1 を次のようなカラムスイ ツ lング法による H P L Cにて 分析し、 血漿中濃度を決定する。 カラムスイ ッチング HP L C条件は、 力 ラム 1力 f、 長さ 3 00 mm直径 4. 6 mmの T S K G e l G - 2 0 0 O SW ( ト一ソ一製） 上でア ト二 ト リルノ0. 05%リ ン酸 （1 ： 9 VZ V %) を溶離液と して用いる。 カラム 2は、 長さ 】 5 0 mm直径 6 mmの YMC A - 3 1 2 OD S (YMC製） 上でカラム 1 と同じ溶離液を用 いる。 但し、 被験化合物によ り ァセ トニ ト リルの含有量を 4 0— 7 0 %に する。 発明の効果 本発明の化合物は、 優れた、 かつ特異的に抗 H I Vプロテア一ゼ阻害活性 を示し、 また、 優れた H I V感染細胞からのウィ ルス放出の抑制作用を示 した。 さらに本発明の化合物は、 優れた経口吸収性を示し、 生物体内にお いて、 高い血中濃度を示した。

Claims

請求の範囲 一般式
Figure imgf000050_0001
[式中、 R1 はキノ リ ン一 2—カルボニル基又はキノ キサリ ン一 2—カル ボニル基を示し、 R2 は水素原子、 炭素数 1乃至 4個のアルキル基、 ァセ チル基、 メ トキシメチル基、 メチルチオメチル基、 ァセ トキシメチル基、 ビバロイ ルォキシメチル基、 H〇〇 C ( C H2 ) n Cひ一基 （ nは、 2乃 至 4の整数を示す） 又は H 00 C C H2 0 C H2 C O—基を示す] で表わ される化合物及びその塩。
2. R 2 が水素原子又は炭素数 1乃至 4個のアルキル基である請求項 1 に 記載の化合物。
3. R2 が水素原子である請求項 1 に記載の化合物。
4. 2 ( S ) , 3 ( S ) 一 3— [N - (キノ キサリ ン一 2—カ ルボニル ) 一 Lース レオニル] ア ミ ノ ー 2 — ヒ ドロキシー 4 一フエニルブタ ノ ィ ル ― [ 4 ( S ) 一ク ロ口 ] 一 L—プロ リ ン t e r t—ブチルア ミ ド。
5. 2 (S) , 3 (S) - 3 - [N- (キノ リ ン一 2—カルボニル） 一 Lースレオニル] アミ ノ ー 2—ヒ ドロキシー 4一フエニルブタ ノ ィ ルー [ 4 ( S ) 一ク ロ口 ] 一 L一プロリ ン t e r t—ブチルア ミ ド。
6. 有効量の請求項 1 よ り選択された化合物と、 薬理学的に許容しう る 担体又は賦形剤からなるプロテア一ゼ阻害剤。
7. 有効！:の請求項 1 よ り選択された化合物と、 薬理学的に許容しう る 担体又は賦形剤からなる H I V感染予防剤若しく は感染治療剤。
8. 有効量の請求項 2の化合物と、 薬理学的に許容しう る担体又は陚形 剤からなるプロテア一ゼ阻害剤。
9. 有効量の請求項 2の化合物と、 薬理学的に許容しう る担体又は賦形 剤からなる H I V感染予防剤若しく は感染治療剤。
1 0. 有効量の請求項 3の化合物と、 薬理学的に許容しう る担体又は賦 形剤からなるプロテア一ゼ阻害剤。
1 1. 有効量の請求項 3の化合物と、 薬理学的に許容しう る担体又は賦 形剤からなる H I V感染予防剤若しく は感染治療剤。
1 2. 有効量の請求項 4よ り選択された化合物と、 薬理学的に許容しう る担体又は賦形剤からなるプロテアーゼ阻害剤。
1 3. 有効量の請求項 4よ り選択された化合物と、 薬理学的に許容しう る担体又は賦形剤からなる H I V感染予防剤若しく は感染治療剤。
1 4 . 有効量の請求項 5 よ り選択された化合物と、 薬理学的に許容しう る担体又は賦形剤からなるプロテア一ゼ阻害剤。
1 5 . 有効量の請求項 5 よ り選択された化合物と、 薬理学的に許容しう る担体又は賦形剤からなる H I V感染予防剤若しく は感染治療剤。
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Citations (5)

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