WO1995026970A1

WO1995026970A1 - Derive de moranoline

Info

Publication number: WO1995026970A1
Application number: PCT/JP1995/000610
Authority: WO
Inventors: Akira Hasegawa; Makoto Kiso; Yoshiaki Yoshikuni
Original assignee: Nippon Shinyaku Co., Ltd.
Priority date: 1994-04-01
Filing date: 1995-03-30
Publication date: 1995-10-12
Also published as: US5700918A

Description

明細耆モラノリン誘導体技術分野

本発明は、医薬の分野、例えば抗炎症剤ゃ抗ウィルス剤として有用である新規なモラノリン誘導体に関する。背景技術

シアル酸を含有する糖脂質や糖タンパク質の糖鎖は、ホルモン、細菌毒素、ウィルスその他のものに対する受能をもち、また、細胞の認識、分化、増殖、接着、ガン化、免疫、老化などの基本的で、かつ動的な生命現象に深く関与していることから、近年注目を集めている物質である。

例えば、抗ウィルス剤として、特開昭 6 3— 1 3 9 1 9 3号公報、特開平 3— 2 5 1 5 9 3号公報等があり、又、免疫調整剤として、特開昭 6 1 - 2 4 3 0 7 4号公報や特開昭 6 2 - 2 0 9 0 9 4号公報等がある。さらに、がんの診断や治療への応用として特開昭 6 1 - 6 3 7 0 0号公報等がある。

これらシアル酸誘導体は天然界に微量成分として存在しているがゆえに、これら化合物を生体から純粋な単一化合物として得ることは極めて難しかった。そのためシアル酸誘導体の医薬品としての研究は、新しい分野として、その臨床的応用が大いに期待されている。

本発明者らは、種々糖鎖抗原誘導体を鋭意研究した桔果、医薬として便れた薬理作用を有するモラノリンを含む新規なシァリルルイス型糖鎖抗原誘導体を見出し、 PCT/JP 93/00106号（国際公開 WO93/15098)特許出願に係る発明を完成した。

上記、 PCT/JP93/00106号に係る化合物である四糖性シァリルルイス型糖鎖抗原誘導体は、便れた薬理作用を有した物質ではあったが、その合成に多数の工程と^!な操作を必要としたため、経済的かつ、効率的に合成を行うことは雜しく、工業的規模で大量合成を行うには問題があった。最近の研究によれば、シアル睃を舍まない三糖性ヒドロキシスルホ-ルルイス型糖鎖抗原誘導体も、四糖性シァリルルイス型糖鎖抗原誘導体と同じく、細胞接着に関与するセレクチンに対する拮抗阻害作用を有することが報告されている（Glycobiologyvol.3. no.6 pp.633-639, 1993)。発明の開示

本発明の目的は、医薬として有用であり、既存の糖鎖抗原誘導体より構造的に単純で容易に製造できる三糖性ヒドロキシスルホ-ルルイス型モラノリン誘導体を提供することにある。

今回、本発明者らは、さらなる検討を重ね鋭意研究を行った結果、上記、 PCT/JP 3/ 00106号に係る化合物のシアル酸を硫酸エステルに置換したモラノリン誘導体である一般式〔I〕で表される化合物が上記目的に適合しうることを見出し本発明を完成した，

式中、 R¹は、水素又は低級アルキルを表し、 R²及び R³は、それぞれ異なって、ヒドロキシスルホエルもしくはその金属塩で置換されていてもよいガラクトビラノシル又はフコビラノシルを表す。

本発明と上記 FCT/JF9300106号に係る化合物の製造過程とを比較したとき、本発明に係る化合物は、シァリルの代わりにヒドロキシスルホ -ルを用いているので、その製造は、工程、時間及び経済的要素等において、これらを大幅に改善するものである。

—般式〔I〕で表される本発明に係る化合物は、文献未記載の新規化合物であるとともに、後述するような便れた薬理作用を示す。

一般式〔I〕において R¹で示される低級アルキルとして、直鎖又は分枝状の炭素数 1〜7のものが好ましく、例えば、メチル、ェチル、 n—プロピル、イソプロピル、 n ーブチル、イソブチル、 tーブチル、 n—ペンチル、イソペンチル、 n—へキシル、ィソへキシル、 n—へプチル、イソへブチル等を挙げることができる。

本発明に係る化合物のヒドロキシスルホュルのアルカリ金属塩として、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩が好ましく、アルカリ土類金属塩としは、マグネシウム塩、カルシウム塩、バリウム塩が好ましい。

本発明に係る化合物として、後記する実施例に記述する化合物に加え、以下の化合物を挙げることができるが、これらは本発明の化合物の一部を例示するものであって、本発化合物はこれらに限定されるものではない。

0- (3— 0—スルホー /3— D—ガラクトビラノシル）一（1→4) 一 0— 〔 (α 一 Lーフコピラノシル）一（1→3) 〕一 1, 5一 Τミノー D—グルシトールナトリゥム塩

O— （3 -0—スルホーー D—ガラクトビラノシル）一（1→4) 一 O— C (a 一 Lーフコピラノシル）一（1→3) 〕一 1, 5—イミノー N—ェチルー D—グルシトールナトリウム塩

O— （3— 0—スルホー 3— D—ガラクトビラノシル）一（1→4) ー0— 〔 (α 一 Lーフコピラノシル）一（1→3) 〕一 1， 5—イミノー Ν—プロピル一 D—グルシトールナトリウム塩

Ο— （3— Ο—スルホー^ー D—ガラクトビラノシル）一（1→4) 一 Ο— 〔 ( 一 Lーフコビラノシル）一（1→3) 〕一 1, 5—イミノー Ν—ブチルー D—グルシトールナトリウム塩

0- (3— 0—スルホー^ー D—ガラクトビラノシル）一（1→4) 一 Ο— 〔 (a -Lーフコビラノシル）一（ 1→3) 〕一 1， 5—イミノー N—ペンチルー D—グルシトールナトリウム塩

O— （3— O—スルホー 9一 D—ガラクトビラノシル）一（1→4) -0— 〔 (α 一 L-フコビラノシル）一（1→3) 〕一 1, 5—イミノー Ν—へキシルー D—グルシトールナトリウム塩 O— （3— O—スルホーー D—ガラクトビラノシル）一 (1→3〉 -0- C (α 一 Lーフコビラノシル）一（1→4) 〕一 1, 5—イミノー D—グルシトールナトリゥム塩

Ο— （3— 0-スルホー^ー D—ガラクトビラノシル）一（1→3) — 0— 〔 (α 一 Lーフコピラノシル）一（1→4) ] 一 1, 5—イミノー Ν—ェチルー D—グルシトールナトリウム塩

Ο— （3— Ο—スルホー 3— D—ガラクトビラノシル）一（1→3) — O— 〔 (α 一 Lーフコビラノシル）一（1→4) 〕一 1， 5—イミノー Ν—プロピル一 D-グルシトールナトリウム塩

Ο— （3— 0-スルホー; 3— D—ガラクトビラノシル）一（1→3) — Ο— 〔 (α 一 Lーフコピラノシル）一（1→4) 〕一 1, 5—イミノー Ν—ブチルー D-グルシトールナトリウム塩

0- (3— Ο—スルホー 3— D—ガラクトビラノシル）一（1→3) -0- 〔 ( 一 Lーフコビラノシル）一（1→4) 〕一 1, 5—イミノー Ν—ペンチルー D—グルシトールナトリウム塩

Ο— （3— 0—スルホ一;9 -D—ガラクトビラノシル）一（1→3) — 0— 〔 ( 一 Lーフコピラノシル）一（1→4) 〕一 1， 5—イミノー Ν—へキシルー D—グルシトールナトリウム塩

本発明に係る化合物は後記する実施例に従って製造することができる。

細胞接着阻害活性を有する本発明に係る化合物は、内皮細胞に存在するセレクチンを拮抗的に阻害することにより、白血球又はガン細胞と内皮細胞との接着を阻害すること力ら、炎症や炎症にともなう血栓形成、リウマチ、感染症、免疫疾患、エイズ及びガンの予防、治療等に有用であることが確実である。

従って、本発明に係る化合物は抗ウィルス剤、抗炎症剤、血栓形成治療剤、リウマチ治療剤、感染症、抗エイズ治療剤、免疫疾患及びガンの予防、治療剤として有用である。

本発明化合物を医薬として投与する場合、本発明化合物はそのまま又は医薬的に許容される無毒性かつ不活性の担体中に、例えば 0.1%〜99.5%、好ましくは 0.5%〜90% 舍有する医薬組成物として、人を舍む動物に投与される。

担体としては、固形、半固形、又は液状の希釈剤、充填剤、及びその他の処方用の助剤一種以上が用いられる。医薬組成物は、投与単位形態で投与することが望ましい。本発明医薬組成物は、組織内投与、局所投与（経皮投与等）又は経直腸的に投与することができる。これらの投与方法に適した剤型で投与されるのはもちろんである。例えば、組織内投与が特に好ましい。

抗ウィルス剤としての用量は、年齢、体重、等の患者の状態、投与経路、病気の性質と程度等を考慮した上で調製することが望ましいが、通常は、成人に対して本発明の有効成分量として、 1日あたり、 100mg〜3 g Z日ノヒ卜の範囲が、好ましくは、 500 mg〜l gノ日ノヒトの範囲が一般的である。場合によっては、これ以下でも足りるし、また逆にこれ以上の用量を必要とすることもある。また 1日 1〜3回に分割して投与することが望ましい。

本発明の実施例及び試験例を挙げて本発明を更に詳しく説明する。なお、比旋光度の測定温度はすべて 2 5。Cである。

〔実施例 1〕ルイス X型モラノリン誘導体の製法

0— （3— O—スルホー iS— D—ガラクトビラノシル）一 ( 1→4 ) 一 O— 〔 ( - Lーフコピラノシル）一（1→3 ) 〕一 1， 5—ジデォキシー 1 , 一イミノー N -メチルー D—グルシトールナトリウム塩の合成

(1) メチル 4， 6— O—べンジリデンー 3— O—レブロイルー 1一チォー )3— D 一ガラクトピラノシドの合成

メチル 4, 6— O—べンジリデンー 1ーチォ一; 9一 D—ガラクトピラノシド (100 mg)をジクロロメタン (10ml)とピリジン (10ml)に溶解し、 4-ジメチルァミノピリジン (41 mg,l当量）を加え、 -50。 Cに冷却後、ジクロロメタン (5ml)に溶解したレブ口イルク口ライド (179mg,2.5当量）を滴下した。 -50 ^eCで 30分攪拌し、反応終了を TLCで確認後、ジクロロメタンで抽出し、 2規定塩酸、水で洗浄した。抽出層を硫酸ナトリウムで乾燥後、涑別し、漶液、洗液を合わせて減圧浪縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（WakogelC-200、流出液 1:1;酢酸ェチル：へキサン）に供し、化合物（1 ； 85mg, 64%)を得た。

比旋光度〔a〕 _D +40.07。（c=1.682,ジクロロメタン）

元素分析値 C₁₉H₂₄0₇ Sとして〔分子量 396.46〕

計算値（％) C =57.56 H =6.10 N=0.00

実測値（％) C =57.32 H =6.02 N=0.00

(2) メチル 2— O—べンゾィルー 4, 6— O—べンジリデンー 3— 0—レブロイルー 1一チォー /3— D—ガラクトピラノシドの合成

化合物（l;104mg) をピリジン (10ml)に溶解し、ベンゾイルク口ライド (0.08ml, 2.5 当量）を加え室温で一晚撩拌した。反応終了を TLCで確認後、ジクロロメタンで抽出し、 2規定塩酸、水で洗浄した。抽出層を硫酸ナトリウムで乾燥後、逋別し、據液、洗液を合わせて減圧濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィ一（Wakogel C-200、流出液 1:2;酢酸ェチル：へキサン）に供し、化合物（2;111π¾,85%)を得た。比旋光度〔α〕 _D +55.93° (c= 1.230,ジクロロメタン）

元素分析値 C₂₆H₂₈0₈Sとして〔分子量 500.57〕

計算値（％) C =62.39 H =5.64 N=0.00

実測値（％) C =62.16 H =5.55 N=0.00

(3) 0— （2— 0—べンゾィルー 4, 6— O—べンジリデンー 3— O—レブロイル一 /3— D—ガラクトビラノシル）一（1→4) 一 O— C (2， 3, 4—トリー O—ベンジルー α— Lーフコピラノシル）一（1→3) 〕一 2— O—ァセチルー 6 -0—べンジルー N—べンジルォキシカルボエルー 1, 5—ジデォキシー 1， 5ーィミノー D—グルシトールの合成

化合物（ 2 ;154mg)と（ 2， 3， 4一トリー O—べンジルー α— L一フコピラノシル）一（1→3) — 2— Ο—ァセチルー 6— Ο—べンジルー Ν—べンジルォキシカルボ -ルー 1, 5—ジデォキシ一 1, 5—イミノー D—グルシトール (182mg, 2当量）をジクロロメタン (5ml)に溶解し乾燥剤モレキュラーシーブス 4A(300mg)を加え、室温で一晩 ¾拌した。次に、 0°Cに冷却し、 N-ョードコハク酸ィミド (164mg,4当量）とトリメチルシリルトリフルォロメタンスルホン酸 (14 μ 1,0.4当量）を加え、 0°C〜室温で一晚瑰拌した。反応終了を TLCで確認後、モレキュラーシーブスを漶別し、ジクロロメタンで抽出し、炭酸ナトリウム、チォ硫酸ナトリウム、水で洗浄した。抽出層を硫酸ナトリウムで乾燥後、漶別し、據液、洗液を合わせて減圧縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（WakogelC-200、流出液 1:2;酢酸ェチル：へキサン）に供し、化合物 ( 3 ;164mg,70%)を得た。

比旋光度〔a〕 _D— 30.28° (c= 1.334,ジクロロメタン）

元素分析値 C₇₃H₇₉N0₁₉として〔分子量 1298.445]

計算値 (%) C =69.38 H=6.13 N = 1.08

実測値（％) C =69.13 H =6.06 N = 1.03

(4) 0— （2— O—べンゾィルー 3— O—レブロイルー^ー D—ガラクトビラノシル）一（1→4) 一 O— 〔（2, 3, 4—トリー O—べンジルー α— Lーフコビラノシル）一（1→3) 〕一 2— Ο—ァセチルー 6— Ο—べンジルー Ν—べンジルォキシカルボ-ルー 1 , 5—ジデォキシー 1， 5—ィミノ一 D—グルシトールの合成

化合物（3;164mg) を 80%齚酸水溶液 (10ml)に溶解し、 45°Cで一晚視拌した。 TL Cで反応終了を確認後、減圧浪縮し得られた残渣をカラムク口マトグラフィ一（Wako gelC-200、流出液 3:1;酢酸ェチル：へキサン）に供し、化合物（ 4 ;136mg, 89%)を得た。

比旋光度〔a〕 _D— 39.13。（c=0.976,ジクロロメタン〉元素分析値 C₆₈H„N0₁₉として〔分子量 1210.337〕

計算値（9 &) C =67.48 H =6.25 N = 1.16

実測値 (%) C = 67.36 H =6.93 N =0.94

(5) 0— （2， 4， 6—トリー O—べンゾィルー 3— O—レブロイルー^ー D—ガラクトビラノシル）一 (1→4) 一 O— 〔（2， 3, 4一トリー O—べンジルー α— L ーフコピラノシル）一（1→3) 〕一 2— Ο—ァセチルー 6— Ο—べンジルー Ν—ベンジルォキシカルボ-ルー 1, 5—ジデォキシ一 1, 5一イミノー D—グルシトールの合成

化合物（4 ； 48mg) をピリジン（5ml)に溶解し、ベンゾイルク πライド (18 μ 1, 4 当量）を加え室温で一晚挽拌した。反応終了を TLCで確認後、ジクロロメタンで抽出し、 2規定塩酸、水で洗浄した。抽出層を硫酸ナトリウムで乾燥後、濾別し、滤液、洗液を合わせて減圧浪縮した。得られた残渣をカラムク口マトグラフィ一（Wakogel C-200、流出液 2:3;酢酸ェチル：へキサン）に供し、化合物（ 5； 48mg, 86%)を得た。比旋光度〔a〕 _D— 36.76。（c-0.952,ジクロロメタン）

元素分析値 C„H_e3N0₂₁として〔分子量 1418.553〕

計算値（％) C =69.43 H =5.90 N =0.99

実測値（％) C =69.13 H =5.85 N =0.95

(6) O— （2, 4, 6—トリー O—べンゾィルー 3— D—ガラク卜ビラノシル）

- (1→4) 一 O— 〔（2, 3, 4—トリー O—べンジルー α— Lーフコビラノシル）一 ( 1→3) 〕一 2— Ο—ァセチルー 6— Ο—べンジルー Ν—べンジルォキシカルボェルー 1, 5—ジデォキシー 1, 5—イミノー D—グルシトールの合成

化合物（5 ； 131mg)をエタノール (20ml)に溶解し、酢酸ヒドラジン (10mg,1.2当量）を加え室温で一晚挽拌した。反応終了を TLCで確認後、減圧浪縮して得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（Wakogel C-200、流出液 125:1;ジクロロメタン：メタノール〉に供し、化合物（6;122mg,定量的）を得た。

比旋光度〔a〕 _D— 50.16° (c=2.388,ジクロロメタン）

元素分析値 C₇₇H₇₇N0₁₉ (分子量 1320.45) 計算値（％) C =70.04 H =5.88 N-1.06

実測値（％) C =69.88 H =5.75 N=1.01

(7) O- (2， 4, 6—トリー O—べンゾィルー 3— O—スルホー /3— D—ガラクトビラノシル）一（1→4) -0- 〔（2, 3, 4一トリー O—べンジルー α— Lーフコビラノシル）一（1→3) 〕一 2— Ο—ァセチルー 6— Ο—べンジルー Ν—べンジルォキシカルボ二ルー 1, 5—ジデォキシ一 1, 5—イミノー D—グルシトールの合成化合物（6 ； 119mg)を Ν,Ν-ジメチルホルムァミド (0.5ml)に溶解し、ビリジン三酸化硫黄複合体 (115mg.8当量）を加え室温で一晚挽拌した。反応終了を T L Cで確認後、 0^eCでメタノール（1ml)を加え 30分攪拌した。反応液を減圧渙縮し得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（WakogelC-200、流出液 15:1;ジクロロメタン：メタノール）に供し、化合物（ 7 ;121mg,96%)を得た。

比旋光度〔a〕 _D— 16.55° (c=2.416,ジクロロメタン）

元素分析値 C„H„N0₂₂S (分子量 1400.51)

計算値（％) C =66.04 H =5.54 N=1.00

実測値 (%) C =65.89 H =5.54 N=0.83

(8) 0— （2， 4, 6—トリー O—べンゾィルー 3— O—スルホー /9一 D—ガラクトビラノシル）一（1→4) -0- 〔（α— Lーフコピラノシル）一（1→3) 〕一 2 一 Ο—ァセチルー 1， 5—ジデォキシ一 1， 5—イミノー Ν—メチルー D—グルシトールナトリウム塩の合成

化合物（7 ； 114mg)をイオン交換樹脂ダウエックスー Na+に供し、メタノール (5ml) に溶解し、ホルマリン (0.5ml)とあらかじめ接触水素添加を行いメタノールで洗浄した塩化パラジウム (300mg)を加え、室温で接触水素添加を行い 7日間攪拌した。反応終了を TLCで確認後、パラジウムを瀘別しメタノールで洗浄した。濂液、洗液を合わせて減圧渙縮し得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（WakogelC-200、流出液 10:1;ジクロロメタン：メタノール）に供し、化合物 ( 8 _;62mg,83 )を得た。

比旋光度〔a〕 _D— 30.49。（c=0.892，メタノール）

元素分析値 C₄₂H_4gN〇₂。SNa (分子量 941.89) 計算値（％) C =53.56 H =5.14 Ν=1·49

実測値（％) C =53.46 Η =4.97 N-1.44

(9) Ο— （3— Ο—スルホーー D—ガラクトビラノシル）一（1→4) 一 Ο—

〔（α— Lーフコビラノシル）一（1→3) 〕一 1， 5—ジデォキシー 1， 5—ィミノ一 Ν—メチルー D—グルシトールナトリウム塩の合成

化合物（8 ； 49mg) をメタノール（50ML) に溶解市、ソジゥムメトキシドを pH= 12になるまで加え、室温にて一晚携拌した。反応終了を TLCにて確認後、減圧 ¾縮し得られた残渣をゲル濾過 (SephadexLH-20, 流出液 1:1;メタノール：水）し、化合物（9; 30mg,定量的)を得た。

比旋光度〔a〕 _D— 47.21° (c=0.466,メタノール：水 = 1 ： 1)

元素分析値 C₁₉H₃₄N0₁₆SNa (分子量 587.53)

計算値（％) C =38.84 H =5.83 N=2.38

実測値（％) C =38.56 H =5.72 N=2.16

〔実施例 2〕ルイス A型糖鎖誘導体の製法

O— （3— O—スルホーー D—ガラクトビラノシル）一（1→3) -0- 〔 (α 一 Lーフコピラノシル）一（1→4) 〕一 1, 5—ジデォキシー 1, 5—イミノー Ν ーメチルー D—グルシトールナトリウム塩の合成

(1) メチル 2, 6—ジー O—べンゾィルー 3— O—レブロイルー 1—チオー^ •D—ガラクトビラノシドの合成メチル 2， 6-ジー O—^ iンゾィルー 1ーチオーー D-ガラクトビラノシド

(740mg)をジクロロメタン (20ml)とピリジン (20ml)に溶解し、 4-ジメチルァミノピリジン (220mg, 1当量）を加え、 -50°Cに冷却後、ジクロロメタン (10ml)に溶解した無水レブリン酸 (570m&1.5当量）を滴下した。 -50 °Cで" 20分攪拌し、反応終了を T L Cで確認後、ジクロロメタンで抽出し、 2規定塩酸、水で洗浄した。抽出層を硫酸ナトリウムで乾燥後、 ¾別し、濂液、洗液を合わせて滅圧渙縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（WakogelC-200、流出液 1:2；酢酸ェチル：へキサン）に供し、化合物（ 1 ； 760 mg, 84%)を得た，

比旋光度〔a〕 _D +28.61。（c=0.982,ジクロロメタン）

元素分析値 C_2eH₂₈〇₉Sとして〔分子量 516.57]

計算値（％) C -60.45 H =5.46 N=0.00

実測値 (%) C =60.33 H=5.28 N=0.00

(2) メチル 2， 4， 6—トリー O—べンゾィルー 3— O—レブロイルー 1ーチォ一^一 D—ガラクトピラノシドの合成

化合物（l;760mg) をピリジン (30ml)に溶解し、ベンゾィルクロライド (0.2ml, 1.2 当量）を加え室温で一晩攪拌した。反応終了を TLCで確認後、ジクロロメタンで抽出し、 2規定塩酸、水で洗浄した。抽出層を硫酸ナトリウムで乾燥後、漶別し、據液、洗液を合わせて減圧濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（Wakogel C-2 00、流出液 1:4;酢酸ェチル：へキサン〉に供し、化合物（2;760mg,84%)を得た。比旋光度〔a〕 _D+49.72° (c-0.736,ジクロロメタン）

元素分析値 C₃₃H₃₂0₁₍₎Sとして〔分子量 620.68〕

計算値（％) C =63.86 H =5.20 N-0.00

実測値 (%) C =63.85 H =5.04 N=0.00

(3) 0— （2, 4, 6—トリー O—べンゾィルー 3— O—レブロイルー; 3— D—ガラクトピラノシル）一（1→3) — 2— O—ァセチルー 4， 6— O—べンジリデンー N 一べンジルォキシカルボ-ルー 1, 5—ジデォキシー 1, 5—イミノー D—グルシトールの合成 2一 O—ァセチルー 4, 6—O—べンジリデンー N—べンジルォキシカルボ-ル一 1， 5—ジデォキシー 1, 5—イミノー D—グルシトール（53mg)と化合物（2 ; 92 g, 1.2当量）をジクロロメタン (4ml)に溶解し乾燥剤モレキュラーシーブス 4A(200mg) を加え、室温で一晩攪拌した。次に、 0 に冷却し、 N-ョードコハク酸イミド (67mg, 2.4当 )とトリメチルシリルトリフルォロメタンスルホン酸 (6 1, 0.24当量）を加え、 0°C〜室温で一晚攙拌した。反応終了を TLCで確認後、モレキュラーシーブスを據別し、ジクロロメタンで抽出し、炭酸ナトリウム、チォ硫酸ナトリウム、水で洗浄した。抽出層を硫酸ナトリウムで乾燥後、漶別し、涑液、洗液を合わせて減圧渙縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（Wakogel 200、流出液 500:1;ジクロロメタン：メタノール）に供し、化合物（3;108mg,87%)を得た。

比旋光度〔a〕 _D— 14.43。（c-2.166,ジクロロメタン〉

元素分析値 C₅₅H_S3N0₁₇として〔分子量 1000.02]

計算値（％) C = 66.06 H= 5.34 N=1.40

実測値（9 &) C =65.93 H =5.11 N = 1.37

(4) 0— （2， 4， 6—トリー O—べンゾィルー 3— O—レブロイルー 3— D—ガラクトピラノシル）一（1→3) — 2— O—ァセチルー N—べンジルォキシカルボ-ル一 1， 5—ジデォキシー 1， 5—イミノー D—グルシトールの合成

化合物（3;323π½) を 80%酢酸水溶液に (20ml)溶解し、 45 で一晚挽拌した。 TL Cで反応終了を確認後、減圧濃縮し得られた残渣をカラムクロマトグラフィ一（Wako gelC-200, 流出液 125:1;ジクロロメタン：メタノール）に供し、化合物（4;252mg,86 %)を得た。

比旋光度〔a〕 _D— 39.32° (c=0.656,ジクロロメタン〉

元素分析値 C₄₈H_<9NO_nとして〔分子量 911.91〕

計算値（％) C =63.22 H =5.42 N=1.54

実測値（％) C =62.92 H=5.17 N = 1.28

(5) O— （2， 4, 6—トリー O—べンゾィルー 3— O—レブロイルーー D—ガラクトピラノシル）一（1→3) — 2— O—ァセチルー 6— O— tert—ブチルジメチルシリルー N—べンジルォキシカルボエルー 1, 5—ジデォキシー 1, 5—イミノー D 一グルシトールの合成

化合物（4 ;213mg)をジクロロメタンひ 0ml)とピリジン（5mi) に溶解し、 0°Cに冷却後、 tert—プチルジメチルシリルクロライド (176ml, 3当量〉を加え室温で一晩撹拌し fto 反応終了を TLCで確認後、ジクロロメタンで抽出し、 2規定塩酸、水で洗浄した。抽出層を硫酸ナトリウムで乾燥後、濂別し濂液、洗液を合わせて滅圧渔縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（WatogelC-200、流出液 250:1;ジクロロメタン：メタノール）に供し、化合物（5;221mg,92%)を得た，

比旋光度〔a〕 _D+34.62° (c= 1.658,ジクロロメタン）

元素分析値 C₅₄H„N0₁₇S i として〔分子量 1026.17〕

計算値 (%) C =63.21 H =6.19 N = 1.36

実測値（％) C =63.17 H =6.00 N-1.21

(6) 0— (2, 4， 6—トリー O—べンゾィルー 3— O—レブロイルー^ー D—ガラクトビラノシル）一（1→3) — O— 〔 (2, 3, 4—トリー O—べンジルー α— L ーフコピラノシル）一（1→4) 〕一 2— Ο—ァセチルー 6— Ο— tert—ブチルジメチルシリル一 N—べンジルォキシカルボ-ルー 1, 5—ジデォキシー 1, 5—イミノー D 一グルシトールの合成

化合物（5 ； 47mg)とメチル 2, 3, 4一トリー O—べンジルー 1ーチォ一; 3— L ーフコビラノシド (26mg, 1.2当量）をベンゼン (5ml)に溶解し、乾燥剤モレキュラーシーブス 4A(100mg)を加え、室温で一晚攪拌した。次いで、 7 °Cにおいてジメチル（メチルチォ）スルホェゥムトリフレート（63mg,4当量）を加え、 7。Cで 1. 5時間 «拌した。反応終了を T L Cで確認後、 0 °Cでメタノール (lml)とトリェチルァミン (40ml)を加えモレキュラーシーブスを據別した。その後、濂液、洗液を合わせて減圧濃縮し、得られた残渣をジクロロメタンで抽出し、炭酸ナトリウム、水で洗浄した。抽出層を硫酸ナトリウムで乾燥後、瀘別し、瀘液、洗液を合わせて減圧渙縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（WakogelC-200、流出液 1:2;酢酸ェチル：へキサン）に供し、化合物（ 6； 36mg,55%)を得た。比旋光度〔α〕 _D— 43.03。（c-0.488,ジクロロメタン〉

元素分析値 C₈₁H₉₁N0₂₁S i として〔分子量 1442.69〕

計算値 (%) C =67.44 H =6.36 N =0.97

実測値（9 &) C =67.25 H=6.19 N=0.72

(7) 0— （2， 4, 6—トリ一 O—べンゾィルー 3— O-レブロイルーー D—ガラクトピラノシル）一（1→3) — O— 〔（2， 3, 4—トリー O—べンジルー α— L ーフコピラノシル）一（1→4) 〕一 2— Ο—ァセチルー Ν—べンジルォキシカルボ- ルー 1， 5—ジデォキシ一 1， 5—イミノー D—グルシトールの合成

化合物（6 ; 36mg)を 80%酢酸水溶液 (10ml)に溶解し、室温で 3時間 ¾拌した。反応終了を T L Cで確認後、反応液を滅圧し得られた残渣をカラムクロマトグラフィー (Wakogel C-200、流出液 125:1;ジクロロメタン：メタノール）に供し、化合物（つ； 29mg, 88%)を得た。

比旋光度〔a〕 _D— 42.88。（c=0.988,ジクロロメタン〉

元素分析值 C₇₅H„N0₂₁として〔分子量 1328.43〕

計算値（％) C =67.81 H=5.84 N=1.05

実測値 (%) C =67.71 H=5.77 N=0.97

(8) O— （2， 4, 6—トリー O—べンゾィルー 3— O—レブロイルー 3— D—ガラクトピラノシル）一（1→3〉一 O— 〔（2, 3, 4—トリー O—べンジルー α— L -フコピラノシル）一（1→4) 〕一 2— Ο—ァセチルー 6— Ο—べンゾィルー Ν—べンジルォキシカルボ-ルー 1， 5—ジデォキシ一 1， 5—ィミノ一 D—グルシトールの合成

化合物（7 ； 29mg)をピリジン (10ml)に溶解し、ベンゾイルク口ライド (3 1, 1.2当量）を加え、室温で一晚攪拌した。反応終了を TLCで確認後、ジクロロメタンで抽出し、 2規定塩酸、水で洗浄した。抽出層を硫酸ナトリウムで乾燥後、 ¾別し «液、洗液を合わせて減圧浪縮した。得られた残渣をカラムクロマ卜グラフィ一（WatogelG200、 ¾¾B液 250:1;ジクロロメタン：メタノール）に供し、化合物（8 _;31mg,定量的）を得た。比旋光度〔a〕 _D— 60.18° (c-2.366,ジクロロメタン）元素分析值 C₈₂H₈₁N0₂₂として〔分子量 1432.54〕

計算値（％) C =68.75 H =5.70 N=0.98

実測値（％) C =68.48 H =5.42 N-0.70

(9) 0- (2, 4, 6—トリー O—べンゾィルーー D—ガラタトピラノシル）一 ( 1→3) 一 O— C (2, 3， 4一トリー O—べンジルー α— Lーフコビラノシル）一 ( 1→4) ] 一 2— Ο—ァセチルー 6— Ο—べンゾィルー Ν—べンジルォキシカルボ -ルー 1， 5—ジデォキシ一 1, 5一^ f ミノー D—グルシトールの合成

化合物（8 ； 31mg)をエタノール (10ml)に溶解し、酢酸ヒドラジン (2mg, 1.2当量）を加え、室温で 1時間撩拌した。反応終了を TLCで確認後、滅圧瀵縮して得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（WakogelC-200、流出狭 125:1;ジクロロメタン：メタノール）に供し、化合物（9;27mg,93%)を得た。

比旋光度〔a〕 _D— 75.74。（c=2.020，ジクロロメタン）

元素分析値 C₇₇H„NO₂₀として〔分子量 1334.43〕

計算値（％) C =69.31 H -5.67 N =1.05

実測値（％) C =69.09 H =5.41 N=0.82

(10) 0— （2， 4， 6—トリー O—べンゾィルー 3— O—スルホー 3— D—ガラクトビラノシル）一（1→3) -0- 〔 (2, 3， 4一トリー O—べンジルー α— Lーフコビラノシル）一（1→4) 〕一 2— Ο—ァセチルー 6— Ο—べンゾィルー Ν—べンジルォキシカルボ二ルー 1, 5—ジデォキシー 1, 5一イミノー D—グルシトールの合成化合物（ 9 ； lOlmg)を Ν,Ν-ジメチルホルムァミド (0.5ml)に溶解し、ビリジン三酸化硫黄複合体 (96mg, 1.2当量）を加え、室温で 2時間攪拌した。反応終了を TLCで確認後、 0°Cでメタノール（1ml)を加え 30分閒攬拌した。反応液を減圧浪縮し得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（WakogelC-200、流出波 15:1;ジクロロメタン：メタノール）に供し、化合物（10;109mg，定量的）得た。

比旋光度〔a〕 _D— 55.56。（c=2.012，ジクロロメタン〉

元素分析値 C„H_7SN0₂₃Sとして〔分子量 1414.50〕

計算値（％) C =65.38 H -5.34 N =0.99 実測値（％) C =65.32 H =5.21 N =0.98

(11) O— （2, 4, 6—トリ一 O—べンゾィルー 3— O—スルホ一|9一 D—ガラクトビラノシル）一（1→3) -0- 〔（α— L-フコピラノシル）一（1→4) 〕一 2 一 Ο—ァセチルー 6— Ο—べンゾィルー 1, 5—ジデォキシ一 1, 5—イミノー Ν—メチルー D—グルシトールナトリゥム塩の合成

化合物（10； 99mg)をイオン交換樹脂ダウエックスー Na+に供し、メタノール (5ml) 1に溶解し、ホルマリン (0.5ml)とあらかじめ接敏水素添加を行いメタノールで洗浄した塩化パラジウム (200mg)を加え、室温で接触水素添加を行い 4日間攪拌した。反応終了を TLCで確認後、パラジウムを據別しメタノールで洗浄した。浦液、洗液を合わせて减圧浪縮し得られた残渣をカラムク口マトグラフィ一（WakogelC-200、流出液 10:1;ジクロロメタン：メタノール）に供し、化合物（ll;66mg, 2%)を得た。

比旋光度〔a〕 _D-30.49° (c-0.892,メタノール）

元素分析値 C₄₉H₅₂N0₂₁S N aとして〔分子量 1046.00〕

計算値（％) C =56.27 H =5.01 N-1.34

実測値（％) C =56.15 H=4.98 N=1.24

(12) O— （3— O—スルホー^ー D—ガラクトビラノシル） ― (1→3) — O—

〔（α— Lーフコピラノシル）一（1→4) 〕一 1， 5—ジデォキシー 1, 5—ィミノ一 Ν—メチルー D—グルシトールナトリウム塩の合成

化合物（11 ;56mg)をメタノール (5ml)に溶解し、ナトリウムメトキシドを pH=12 になるまで加え、室温で 2日間攪拌した。反応終了を TLCで確認後、滅圧遴縮し得られた残渣をゲル濾過（Sephadex LH-20、流出液 1:1;メタノール：水〉し、化合物（12; 31mg,定量的）を得た。

比旋光度〔a〕 _D— 56.14° (c=0.114,メタノール：水 = 1:1)

元素分析値 C₁₉H₃₄NO_ieSNaとして〔分子量 587.53〕

計算値（9 &) C =38.84 H =5.83 N=2.38

実測値（％) C =38,73 H =5.74 N-2.14 〔試験例〕

E— s e 1 e c t i n依存性 H L 6 0 Z H U V E C接着実験方法

常法に従って採取 ·培養した継代 5世代目のヒト血管内皮細胞（以下 HUVE Cと略す）を、 1 %ゼラチンでコートした 9 6ウェルマイクロブレートにゥエルあたり 2 X 10⁴個播種した。 37。Cの C0₂インキュベータ内で一晚培桊した後、細胞眉を 100 μ 1の RPMI/FCS/HEPES培地（RFMMI-1640, 10%FCS, 25mM HEPE S, pH7.4)で 2回洗浄し、 10U/mlの IL-1 を舍む RPMI/FCS/HEPESを 100 μ ΐ 加え、 4時間培赛した（活性化）。非活性化細胞における細胞接着を測定するために、同時に RPMI/FCS/HEFESのみ加えたゥエル（Basal)を作成した。

培奏ヒト白血病細胞 HL60を FCS を舍まない RPMI-1640(RPMI/HEPES)で 2 回洗浄した後、 10mlの 0.5%ダルタルアルデヒドを舍む RPMI/FCS/HEPES培地に魅獨し、氷中で 20分間固定した。固定後、細胞を RPMI/HEFESにより 3回洗浄し、細胞数が 2 10⁶ cells/mlになるように RPMI/FCS/HEPESを用いて希釈し、使用するまで氷中に保存した。

活性化後、 HUVECを 100 μ 1の RPMI/FCS/HEPESで 3回洗浄し、 50 μ 1の R PMI/FCS/HEPES(Control)あるいは RPMI FCS/HEFESに溶解した 50 ;* 1の化合物（300 g/ml)を添加し、室温で 30分間インキュベートした。次に固定化した HL60細胞を 1 X 10³個（50μ1) づっ各ゥエルに添加し、室温で 45分閒インキュべ一卜した。各ゥエルを RPMI/FCS/HEPESで満たし、マイクロプレート用シールを用いて気泡が入らないように密封した後、プレートを倒置し、 1時閒静匿することにより未結合の HL60細胞を取り除いた。接着細胞数測定方法

接着細胞数は、 HL60細胞内に存在する酵素であるミエ口ペルォキシダーゼ (MPO)の活性により求めた。各ゥエルに 0.5%臭化へキサデシルトリメチルアンモユウム（HTAB)を舍むリン酸緩衝液（50mM pH 6.0) を 50 μ 1加え、室温で 30 分間インキュベートすることにより、 ΜΡΟを細胞内から可溶化した。同時に同様の処理を施した既知の数の HL60細胞を標準用として 96ゥエルブレートの一列に準備した。次に 0.6mMジァ-シジン二塩酸塩、 0.4mM H₂0₂を舍むリン酸緩衝液（lOOmM pH 5.4)を 200 1加え、 20分間室温で反応させた後、 BIO-RAD 社の Model 3550 MICRO PLATE READERを用いて 450nmの吸光度を測定した。標準用の細胞から求めた吸光度より標準曲線を作成し接着細胞数を求めた。実験は各処理について 6ゥエル用いて行った。各ゥエルの接着細胞数より Contr olの値を 100%とした時の各処理における細胞接着率を求め、 6ゥエル間の平均値と標準誤差を求めた。その結果を表 1に示す。表 1

細胞接着率

Control 100.0+3.4

Basal 12.0 +0.6*

本発明実施例 2の化合物 77.0 +2.0*

:P<0.01, vs Control

〔結果〕実施例 2の化合物は細胞接着を 2 3 %阻害した（P<0.01)。このように本発明に係る化合物は強い細胞接着抑制作用を示した。この結果から、本発明の化合物は細胞接着が関与して発症する疾患、例えば、炎症や免疫疾患あるいはゥィルス感染症等を予防 ·治療する医薬品として有用であることが示された。

Claims

請求の範囲

1 . 次の一般式〔I〕で表されるモラノリン誘導体。

ί I ]

式中、 R¹は水素又は低級アルキルを表し、 R²及び R³は、それぞれ異なって、ヒド口キシスルホエルもしくはその金属塩で置換されたガラクトビラノシル又はフコピラノシルを表す。

2. ヒドロキシスルホエルの金属塩がアル力リ金属塩又はアル力リ土類金属塩である請求項 1記載のモラノリン誘導体。

3 . R²が、ヒドロキシスルホニルのナトリウム塩で置換されたガラクトビラノシルであり、 R³がフコビラノシルである請求項 1記載のモラノリン誘導体。

4. R²が、フコビラノシルであり、 R³が、ヒドロキシスルホエルのナトリウム塩で置換されたガラクトビラノシルである請求項 1記載のモラノリン誘導体。