WO1995018375A1

WO1995018375A1 - Procede et necessaire de detection de constituants sanguins

Info

Publication number: WO1995018375A1
Application number: PCT/JP1994/002241
Authority: WO
Inventors: Tetsuo Tomiyama; Tadashi Narita; Takeshi Kotsugai; Shigeo Narita
Original assignee: Ss Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 1993-12-28
Filing date: 1994-12-27
Publication date: 1995-07-06
Also published as: CA2176150A1; US5707878A; EP0737863A1; KR960706073A; CN1139484A; EP0737863A4; TW394845B

Description

明細書血液成分の検出方法およびこれに用いるキット技術分野

本発明は、ヒト由来の血液成分を特異的に検出する方法に関し、更に詳細には、例えば大腸癌のスクリーニング等を目的に消化管における微小出血を糞便検体から検出することのできる血液成分の検出方法およびこれに用いるキヅ卜に関する。

背景技術

ヒトの血液成分の検出は、諸方面で必要とされているが、特に医療分野においてその必要性が高い。例えば、消化管出血は多種多様な疾患で起こり、とりわけ消化管悪性腫瘍においては、消化管出血が初期症状として重要であることが良く知られている。

消化管出血を検出し、消化管悪性腫瘍等の疾患を診断する方法としては、現在、主に糞便中の血液成分、特にヘモグロビンを測定することにより行われている。

このような糞便中のヘモグロビンの検出方法には、例えば、逆受身血球凝集法、ラテックス凝集法、金コロイド凝集法、ェンザィムィムノアッセィ法およびラジオィムノアヅセィ法などがあり、その原理は、抗ヒトヘモグロビン抗体を調製して、へモグロビンと抗原一抗体反応を起こさせ、その結果を種々の方法で測定、検出するものである。

ところが、従来の抗ヒトヘモグロビン抗体によるヘモグロビンの免疫学的検出方法においては、被検出物質であるヘモグロビンは通常失活要因である糞便と共に検査に供されるため、温度および時間と共にへモグロビンの抗原決定基が失活し、その結果、著しく検出感度が低下するという欠点があつた。

なかんずく、夏期高温の場合に、ヘモグロビンの変性又は分解が起こり、本来陽性である試料が陰性となることが報告されている（藤好建史および小山真理子、「基礎と臨床」、免疫便潜血試薬の基礎的検討、 2 3 ( 1 5 ) 、 609 7 ~ 6 1 0 1， 1 98 9 ) ₀

そして、特にヘモグロビンが低 «度である場合は、上記失话が顕著であり、診断上意義のある、低 «度領域での検出が困難となっていた。従って、糞便等の試料であっても温度や保存時間等に影響されにくく . 正しく血液成分の存在を測定できる方法の開発が求められており、本発明はこのような方法の提供を目的とするものである。発明の開示

本発明者は、糞便等の試料中での血液あるいは血液成分の存在を、へモグロビンに代わる血液成分を用いて検出すべく、鋭意研究を行った。そしてその結果、ヒト赤血球膜バンド 3グリコプロテイン（以下、単に「バンド 3 j と略す）は糞便等の試料中においても失活しにくく、しかも特定の赤血球凝集素と結合し複合物を形成するので、容易にその存在を検出しうることを見出し、本発明を完成した。

すなわち本発明は、検体中のバンド 3とコニジオボラス属に属する微生物の産生する赤血球凝集素とを反応させ、生じた複合物を検出する検体中の血液成分の検出.方法およびこれに用いるキットを提供するものである。発明を実施するための最良の形態

本発明方法において、血液成分として検出されるバンド 3は、赤血球マーカーとして既に文献中（Beppu, M. et al.， J. Biol. Chem. 256 (6) , 3226-3233 ( 1990) , ' Binding of anti-band 3 autoantibody to oxidatively damaged erythrocytes * など) に報告され、赤血球のモニタリングに役立つとして研究されている成分である。

—方、本発明方法において用いられるコニジォポラス属に属する微生物の産生する赤血球凝集素（以下、「 CAj と記す）は、コニジオボラス属に属する、例えばコニジオボラス · ランプラウゲス（ Conidiobolus lamprauges ) ゃコニジオボラス · ナノテス ( Conidiobolus nanodes ) 等の微生物の生産するヒト特異的赤血球凝集素であり、既にパンド 3との間に相互作用のあることが報告されているが（Ishikawa, F.et al. , Agric. Biol. Chem. 45(9)， 2105-2110(1981)," Action of proteases on human erythrocyte glycoproteins in relation to hemagglutination by Conidiobolus chitin - binding agglution " ) 、これを用いた検出法は未だ知られていない。

本発明方法は、検出系中で血液成分であるバンド 3と CAとの複合体に含まれるバンド 3を検出し、検体中のヒト血液成分を検出するものであるから、これを達成することができればどのような態様であっても良い

本発明方法を実施するための方法の一例としては、 C Aを固相の表面に不溶化し、それに試料および同じバンド 3と特異的に結合する標識化した抗バンド 3抗体を加えて、試料中のバンド 3を、固相化した C Aと標識化した抗バンド 3抗体によりサンドイッチし、試料中に存在するバンド 3を介してヒ卜血液の存在またはその量を測定する、いわゆるサンドィツチ法が挙げられる。

上記方法の場合、あらかじめ、試料に次のように抗バンド 3抗体を添加することもできる。

すなわち、上記系であれば試料中のバンド 3のあるペプチド部分が、添加された抗バンド 3抗体により認識され、また、固相化 C Aによりバンド 3の糖鎖部分が別途認識捕捉され、更に標識抗バンド 3抗体により、添加した抗パンド 3抗体がはじめに認識したバンド 3のべプチド部分とは異なる箇所のぺプチド部分が認識されるように構成して、抗バンド 3 抗体、固相化 C Aおよび標識抗バンド 3抗体で決定をうける試料中のバンド 3は高度に限定されたものとなり、試料中に夾雑する多種類の糖蛋白と交差しにくくなる結果、感度および特異性が高まることになる。また、本発明方法では、このような例の他、固相化成分と標識成分を入れ代え、固相化抗バンド 3抗体と標識 C Aの組合せとしても良く、あるいは固相化成分と標識成分が C A同士の組合せであっても、特異的検出系としてなんらさしつかえない。これらの場合にも、感度と特異性の向上のために、上述と類似の方法を取るこ.とができる。

本発明方法の別の態様としては、試料中のバンド 3の固相への捕捉と同時に、予め用意された標識済みのバンド 3の固相への捕捉を競合的に行わせ、後者のバンド 3の標識を利用して試料中の血液の存在またはその量を知る、いわゆる競合反応による検出方法が挙げられる。

上記した C Aゃ抗バンド 3抗体の標識方法としては、放射性同位元素標識、酵素標識、蛍光標識、化学発光性物質標識などのいずれであってもよく、例えば、ピオチン標識して標識化アビジンにより検出する方法や、 C A、抗バンド 3抗体を直接標識せずにこれらに対する標識化第二抗体を用いる方法であっても、要は検出を可能とする標識がなされれば、特異的検出系としてなんらさしつかえない。

本発明方法においては、抗バンド 3抗体あるいは C Aを予め試料中に存在させることもでき、例えば、採便スティヅクの表面などに予め抗バンド 3抗体あるいは C Aを溶出可能に所要量コーティングするなどの方法が採用できる。

また、バンド 3を含む糞便などの試料から、バンド 3 を可溶化溶出するためのベース液としては、各種緩衝液、例えば、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、トリス —塩酸緩衝液、グリシン緩衝液、アンモニア緩衝液、硼酸緩衝液、炭酸緩衝液などが挙げられる。これらのベース液の P Hは 4〜； L 1.5、好ましくは 4.5〜 8.5の範囲である。

このベース液中には、生理食塩濃度近傍の食塩を添加することが好ましく、また、抗菌剤として、例えば 0.0 5〜 0.5重量％のアジ化ナトリウムなどを添加することが好ましい。更に、抗体など、夕ンパクの安定剤として 0.05〜 2.0重量％のゥシ血清アルブミンなどを添加することも好ましい。

本発明は、ヒ卜赤血球膜に含まれるバンド 3を検出する方法であるから、赤血球膜を溶解（可溶化）して検出をより効果的に行うために、可溶化剤として界面活性剤を利用することができる。

可溶化剤として好適な界面活性剤の代表例としては、以下のものが挙げられるが、これらのみに限定されるものではないことはもちろんである。

• ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム

· ポリオキシエチレン— iーォクチルフエ二ルエーテル（ T r i t o n X— 1 00など）

' ポリオキシエチレンノニルフエ二ルェ一テル（ N o i d e n t P 一 40など）

' ポリオキシエチレンソルビトールエーテル（ Tw e e n 20など） . 3— [ ( 3—コーラミドプロピル）ジメチルアンモニォ] — 1—プ口パンスルホネート

• 3— [ ( 3—コーラミドプロピル）ジメチルアンモニォ] — 2—ヒドロキシ— 1一プロパンスルホネ一卜

• n—ォクチルー ^ー D—ダルコビラノシド

· ォクタノィルー N—メチルグルカミド

• ノナノィルー N—メチルグルカミド

• デカノィルー N—メチルグルカミド • n—へプチルー ^ー D—チォグルコシド

• n—ォクチルー — D—チォグルコシド

• N，N— ビス（ 3— D—ダルコンアミドプロピル）デォキシコールアミド

これらの界面活性剤の添加方法は、特に限定されるものではないが、ベース液として上記緩衝液を用いる場合、 1重量％以下の濃度で効果を発揮する界面活性剤が好ましい。

本発明は、 C Aと抗バンド 3抗体を用い、糞便などの試料中からバンド 3を介して、含有されるヒ卜血液成分を検出する初めての検体中の血液成分検出方法であり、特に便潜血の検出方法として優れたものであつて、後記実施例に示すように従来の抗ヘモグロビン抗体を用いる便潜血検出法等に比較し、高感度かつ安定に便潜血を検出することができるものである。

以下に実施例を挙げ、本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれら実施例になんら制約されるものではない。

実施例 1

酵素標識抗バンド 3抗体と CAを用いる糞便中のパンド 3の検出法：

( 1 ) バンド 3の単離精製

抗凝固剤添加ヒト 0型血液 200 m 1を 320 X gで 1 0分間遠心し、血漿を分離した。沈渣を I mM E D TAおよび 5 mM 2—メルカプトエタノール、 0.03 mM フエ二ルメチルスルフォニルフルオライドを含有する 200 m lの 0.05 M リン酸緩衝液（ p H 7.3 ) に懸濁し、 1 M N a 0 Hで p H 7.5に調整後、 4 °Cで 1 8時間緩やかに攪拌した。 10， 000 X gで 1時間遠心分離し、沈渣を 1 M N a 0

Hで p H 1 2に調整した氷水に想濁し、 4 °Cで 30分間緩やかに攪拌した。再度 1 0 , 000 x gで 30分間遠心分離し、沈渣を 1 % ドデシル硫酸ナトリウム、 2 mM E D TAおよび 0.04 mM 2—メルカプトェ夕ノールを含有する 40 mM トリス塩酸緩衝液（ p H 7.4 ) に想濁し、 4°Cで 1時間放置後、室温にもどした。

この溶液を、上記緩衝液で平衡化したセファロ一ス 6 B (フアルマシァ社製）カラム（ 2 c m 0 x 98 c m ) に通し、 280 nmにおける吸光度を指標としてフラクションを集めた。ノンド 3はグリコフォリン Aの直前に溶出した。

( 2 ) バンド 3に対するポリクローナル抗体の作成

バンド 3を 4 m gZm 1に生理食塩水に溶解し、その 1 m 1をゥサギの背部皮下に 2週間間隔で 8回注射した。最終皮下注射後 3週間目に採血し、抗バンド 3抗血清を得た。

この抗バンド 3抗血清を、 0.2 M N a C lを含む 20 mM トリス塩酸緩衝液（ P H 8.3 ) で平衡化したプロテイン Aセファロース C L — 4 B (ファルマシァ社製）カラム（ I c m 0 x l 4 c m ) に加え、このカラムを同じ緩衝液で溶出し、フラクションを集めた。溶出は、 2 80 nmにおける吸光度が基準線に戻るまで続けた。

次に、このカラムを 0.1 M グリシン塩酸緩衝液（ P H 3.0 ) で溶出し、 280 n mにおける吸光度が基準線に戻るまでフラクションを集め、この吸光度からタンパクを含むと決定されたフラクションをプールし、 10 mM リン酸緩衝液（ P H 7.5 ) に対して透析した。

得られた抗体は、ォクタロニー法により、ヒト赤血球由来バンド 3に対して特異的であった（以下、本抗体を「抗バンド 3抗体」と略す）。

( 3 ) 抗バンド 3抗体の酵素標識

西洋ヮサビペルォキシダーゼ（以下、「HR P O」と略す；シグマ ' ケミカル社製）を以下の方法により抗バンド 3抗体に結合させた。

HR P Oを l O mM 酢酸緩衝液（ p H 4.5 ) 中に、 1 5 m gZm l となるように溶解し、ここに、メタ過ヨウ素酸ナトリウムを最終濃度が 33 mMとなるように加え、混合物を 25 で 1 5分間ィンキュベートした。この混合物を、上記酢酸緩衝液で平衡化したセフアデックス G 一 25 (フアルマシア社製）カラム（ I c m <z5 x l 4 c in ) に通し、茶色に溶出するフラクションを集めた。このフラクションは活性化 H R

P 0であった。

この活性化 H R P Oフラクションの最終濃度が l m gZm l となるように上記酢酸緩衝液で調整し、抗バンド 3抗体を 5 0 m M 炭酸緩衝液 ( H 9.5 ) 中に 4 m gZ m l となるように調製したものに加え、室温で 4時間インキュベートした。

この混合物へ水素化ホウ素ナトリウムを最終濃度が 2.6 mMとなるように加えることで反応を鎮静化させ、これを 4 °Cで 30分間反応させた。ここへ、アセトンを最終瀵度 0.2 % (V/V) となるように加えることで水素化ホウ素ナトリウムの反応を停止させ、 H R P O標識抗バンド 3抗体を作成した。

( 4 ) CAの調製

コニジオボラス · ランブラウゲス C B S 1 5 3 , 5 6 の菌株を、ラクトース 1 %、ペプトン 0.5 %、酵母エキス 0.3 %および麦芽ェキス 0.3 %を含む 0.05 M リン酸緩衝液（ P H 7.0 ) を 5 m lづつ分注した内径 1 6 mmの試験管に接種し、 1 20 r p mの往復式試験管振盪機上、 2 7°Cで 3日間培養した。ついで、この培養液 5 m lを、上記の組成液を 1 00 m lづっ分注した 500 m l容量の肩付振盪フラスコに接種し、 1 20 r p mの回転式振盪機上でさらに 2 7 °Cで 5日間培養した。

この培養液を濾紙で濾過して菌体を濾別し、得られた濾液 3000 m

1を水で冷却しつつ、固体硫安を 7 5 %飽和まで加えて一昼夜低温に放置した。析出する沈漉物を 1 0 , 000 x gで 20分間の遠心により集め、これを 0.05 Mリン酸緩衝液（ p H 6.0 ) に溶解し、この緩衝液に対して、一昼夜透析した。生じる不溶性物質を 1 0， 000 X gで 2 0分の遠心により除去し、上清 142 m lを得た。

この溶液を、上記緩衝液で平衡化した CM—セフアデヅクス C一 5 0 (シグマケミカル社製）カラム（ 2 c m ?5 x 9 8 c m ) に通し、上記緩衝液 0.05— 0.51^のグラジェント法で溶出するフラクションを集め、 C Aとしての赤血球凝集活性を確認した。このフラクション 6 7 m 1を、 1 M 食塩一 0.0 5 M リン酸緩衝液（ p H 6.0 ) で平衡化した^— N—ァセチルー D—ダルコサミン結合セファロ一ス 4 B (ファルマシア社製）カラム（ I c m 0 x l 4 c in ) に吸着させ、同緩衝液でカラムを洗浄後、 0 - 0.36 Mの N—ァセチルグルコサミン溶液のグラジェン卜法で溶出するフラクションの内、グラジェント開始早々の部分を C A精製標品とした。

( 5 ) CAの固相化

C A 2 gZm 1溶液（ 0.1 m o 1 トリス塩酸緩衝液； p H 8.4 ) をマイクロプレートの各ゥエルに 1 づっ分注し、 4°Cで一昼夜放置して表面に吸着させ、固相化（不溶化）した。

( 6 ) 糞便試料の作成

健常人の大便 2 gにヒト血液 8.0 1を混合したものを試料 1 とした。ここより、約 1 Z4の 0.5 gをとり、健常人便 1.5 gと混合、すなわち 4倍希釈して試料 2とした。更に、同様にして再度 4倍希釈して試料 3 ( 1 6倍希釈）とした。また、全く血液を含有しないものを試料ブランクとして、試料 4とした。

この結果、加えた血液量は糞便 l gに対し、 4、 1、 0.25 m lの 3段階および 0であった。

( 7 ) 試料溶解液の作成

1 % トリトン（ T r i t o n ) X 1 00 (シグマケミカル社製）、 0.1 % アジ化ナトリウム、 0.1 % ゥシ血清アルブミンおよび 0.9 % 塩化ナトリウムを含む 0.1 m o 1 / 1 トリス塩酸緩衝液（ p H 8. 0 ) を作成し、 2 m 1づっ試験管に分注して試料溶解液とした。

( 8 ) 試料の採取と試料液の調製

採便スティックを各試料に差し込み、約 1 0 m gづっ採取して試料を試料溶解液 2 m 1に分散、溶解し、 3 7 ^eCで 5分間反応させて便試料液とした。

( 9 ) 測定

上記（ 5 ) の固相化 C Aプレートを O . l m o l トリス塩酸緩衝液

( P H 8.4 ) で洗浄後、各ゥエルに（ 8 ) で採取した便試料液を 1 0

0 1づっ加えた。更に、 0.5 m o l酢酸緩衝液（ P H 4.5 ) を 5 0 1づっ加え、 37 °Cで 1時間反応させて、試料液中のバンド 3を捕捉させた。

各ゥエルを 0.1 m o 1 リン酸緩衝液（ p H 6.8 ) で充分に洗浄した後、 H R P 0標識抗バンド 3抗体溶液（ 2 %ゥシ血清アルブミン含有

0.1 m o 1 リン酸緩衝液（ P H 6.1 ) に H R P 0標識抗バンド 3抗体が l i gZm lで溶解しているもの）を 1 50 ^ 1づっ加え、 3 7 で 1時間反応させた。

ついで、再度 O . l m o l リン酸緩衝液（ P H 6.8 ) で充分に洗浄して、基質溶液（ 0.03 %オルトフエ二レンジァミン、 0.0 1 %過酸化水素含有 0.05 M酢酸緩衝液（ pH 4.5 ) ) を 1 50 1づっ加え、 3 7°Cで 30分間反応させた。 4 N塩酸を 5 0〃 1づっ加えて反応を停止させ、この発色を分光光度計（コロナ製マイクロプレートリーダー）を用い、 492 nmと 630 nmの 2波長で測光した。これにより、便試料 1〜 3中のバンド 3はいずれも試料ブランクに対し吸光度 0.5 以上を示し、明らかに陽性であった。比較例 1

抗ヘモグロビン抗体を用いる便潜血検出法（従来法）：

( 1 ) 抗ヒトヘモグロビン抗体感作ラテックス試薬の調製

5 %カルボキシル化ポリスチレンラテックス 1 0 m lに、 l m gZ m lの 1 ーェチルー 3— （ 3—ジメチルァミノプロピル）カルポジイミド 1 0 m lを加え、 20分間撹拌しながら反応させた。遠心分離後上清を捨てた。沈澱したラテックスに等容の 0.0 l m o 1 / 1一硼酸緩衝液を加え、均一となるよう攪拌後、遠心分離し、上清を除去する操作を 2回くり返し、最後に上記緩衝液 1 O m lを加えて再分散させた。

このラテックス（瀵度 5 % ) 1 0 m 1に精製ヒトヘモグロビン Α_βをゥサギに免疫して作成した抗ヒトヘモグロビン抗体（ゥサギ I gG、濃度 5 m gZm l ) 7 m lを添加し、 5時間ゆっくりと撹拌しながら反応させた。遠心分離後、上清を捨てた。沈漉したラテックスに 0.1 % ゥシ血清アルブミンを含む 0.0 l m o 1/ 1一硼酸緩衝液（ p H 8.0 ) 1 O m lを加えて攪拌し、遠心分離し上清を除去する操作を 2回くり返した。更に上記緩衝液 1 0 m 1を加えて攪拌し、ラテックス濃度 1 % の抗ヒトヘモグロビン抗体感作ラテックス試薬を得た。

( 2 ) 免疫学的ラテックス凝集反応

スライドグラス血清反応板上に、実施例 1 ( 8 ) で作成した便試料液を Ι Ο Ο ί Ιづっ加え、前記のラテックス試薬を 25 1加えて混合、攪拌し、 5分後の凝集像を肉眼的に観察した。その結果、試料 1および試料 2では凝集像が見られたが、試料 3および試料 4では凝集像が見られず、本発明法に比べ、感度が劣ることが明らかになった。

実施例 1 と比較例 1の結果を表 1 にまとめて示す。血液濃度従来法発明法

( n l Zg便） (比較例 1 ) (実施例 1 ) 試料 1 4 + + 試料 2 1 + + 試料 3 0.25 + 試料 4 0 但し、 - … 便潜血陰性（従来法では凝集反応陰性、発明法では試料ブランクに対し吸光度 0.4以下）

+ … 便潜血陽性（従来法では凝集反応陽性、発明法では試料ブランクに対し吸光度 0.5以上）

実施例 2

本発明法と従来法の比較：

実施例 1 ( 7 ) の試料 1、試料 2、試料 3および試料 4 (試料ブランク）を、それぞれ 3 7 °Cで 6 日間インキュベートし、毎日実施例 1の本発明法および比較例 1の従来法で血液の存在を測定、比較した。この結果を表 2に示す。

2

但し、 - … 便潜血陰性（従来法では凝集反応陰性、発明法では試料ブランクに対し吸光度 0 . 4以下）

+ … 便潜血陽性（従来法では凝集反応陽性、発明法では試料ブランクに対し吸光度 0 . 5以上）

以上の結果から、従来法では、 3 7 °Cでインキュベートした場合、へモグロビンを検出できたとしても 1 日程度しか検出できないが、本発明法によると、いずれも、バンド 3によって高感度に検出できる期間が延長され、連続して 3 7 °Cに保った場合でも、十分長期間安定に検出できることがわかった。 ,

- 1 - 産業上の利用性

以上に詳しく説明したように、本発明の検出方法によれば、バンド 3 を、 C Aを利用して特異的、高感度、安定に検出できるので、へモグロビンによってはヒト血液の存在や量が確認困難な糞便、消化器系内容物ヒト血液の存在が疑われる物品等からヒ卜血液成分を定性的または定量的に、具体的には例えば消化管出血や、便中の潜血等の存在を精度よく検出することができる。

Claims

請求の範囲

1 . 検体中のヒ卜赤血球膜バンド 3グリコプロテインとコニジオボラス属に属する微生物の産生する赤血球凝集素とを反応させ、生じた複合物に含まれる該バンド 3グリコプロテインを検出することを特徴とする検体中の血液成分検出方法。

2 . 固相化されたコニジオボラス属に属する微生物の産生する赤血球凝集素を用いるものである請求項第 1項記載の血液成分検出方法。

3 . 固相化されたヒト赤血球膜バンド 3グリコプロテインに対する抗体を用いるものである請求項第 1項記載の血液成分検出方法。

4 . 複合物に含まれる該バンド 3グリコプロテインの検出を、ヒト赤血球膜バンド 3グリコプロテインと特異的に結合する標識物質により行う請求項第 1項ないし第 3項のいずれかの項記載の血液成分検出方法,

5 . ヒト赤血球膜バンド 3グリコプロテインと特異的に結合する標識物質が標識されたヒト赤血球膜バンド 3グリコプロテインに対する抗体である請求項第 4項記載の血液成分検出方法。

6 . ヒト赤血球膜バンド 3グリコプロティンと特異的に結合する標識物質が標識されたコニジオボラス属に属する微生物の産生する赤血球凝集素である請求項第 4項記載の血液成分検出方法。

7 . 標識されたヒト赤血球膜バンド 3グリコプロテインとの競合反応によりおこなう請求項第 1項または第 2項記載の血液成分の検出方法。

8 . 次の成分（ a ) および（ b )

( a ) 固相化されたコニジオボラス属に属する微生物の産生する赤血球凝集素、

( b ) 標識されたヒト赤血球膜バンド 3グリコプロテインに対する抗体

を含む検体中の血液成分検出用キット。 · 次の成分（ a ) および（ b )

( a ) 標識されたコニジオボラス属に属する微生物の産生する赤血球凝集素、

( b ) 固相化されたヒト赤血球膜バンド 3グリコプロティンに対する ί几体

を含む検体中の血液成分検出用キット。

0. 次の成分（ a ) および（ b )

( a ) 固相化されたコニジオボラス属に属する微生物の産生す,る赤血球凝集素、

( b ) 標識されたコニジオボラス属に属する微生物の産生する赤血球凝集素

を含む検体中の血液成分検出用キット。