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WO1991008242A1 - Procede d'obtention de copolymeres par greffage de motifs vinyliques et copolymeres greffes resultants - Google Patents

Procede d'obtention de copolymeres par greffage de motifs vinyliques et copolymeres greffes resultants Download PDF

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WO1991008242A1
WO1991008242A1 PCT/FR1990/000858 FR9000858W WO9108242A1 WO 1991008242 A1 WO1991008242 A1 WO 1991008242A1 FR 9000858 W FR9000858 W FR 9000858W WO 9108242 A1 WO9108242 A1 WO 9108242A1
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WO
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protein
copolymers
vinyl
compound
peptide
Prior art date
Application number
PCT/FR1990/000858
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English (en)
Inventor
Charles Baquey
Marie Yolande Bernasconi
Thierry Darnis
Original Assignee
Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale
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Filing date
Publication date
Application filed by Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale filed Critical Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale
Publication of WO1991008242A1 publication Critical patent/WO1991008242A1/fr

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F289/00—Macromolecular compounds obtained by polymerising monomers on to macromolecular compounds not provided for in groups C08F251/00 - C08F287/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
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    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A61L27/24—Collagen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
    • C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
    • C07K17/06—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier attached to the carrier via a bridging agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
    • A61F2310/00—Prostheses classified in A61F2/28 or A61F2/30 - A61F2/44 being constructed from or coated with a particular material
    • A61F2310/00005—The prosthesis being constructed from a particular material
    • A61F2310/00365—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof

Definitions

  • the invention relates to a process for obtaining copolymers by grafting vinyl units and the resulting bioactive copolymers.
  • copolymers comprising at least one molecule having a biological activity, associated by irreversible bond to a macromolecular material, by means of grafted units of one or more vinyl monomers.
  • copolymer has been studied to develop, for example, vascular prostheses or even active phases usable in affinity chromatography.
  • some of the co-inventors of the present application have attempted to combine heparin by radiochemical grafting, using vinyl monomers on a polymer material constituted by a polyester, to form a vascular prosthesis (Baquey et al. Innov. Tech. Biol. Med. vol 2, n ° 4 1981, 379-389).
  • the object of the invention is therefore to provide a process for obtaining bioactive copolymers ensuring better maintenance of the conformational freedom of the biological molecule and, thereby, of its biological activity.
  • the invention further relates to the biological applications of these copolymers for the preparation, for example, of vascular prostheses or of active phases usable in affinity chromatography.
  • the process for obtaining the bioactive copolymers of the invention is characterized in that at least one compound A chosen from a protein, a peptide, a protein or peptide derivative and a synthetic or natural material B is subjected simultaneously to radiochemical, chemical or photochemical treatment, in the presence of one or more vinyl monomers, of at least one homopolymerization inhibitor and of a crosslinking agent, so as to obtain the grafting of the units of vinyl origin, by irreversible association on A and B and the crosslinking of the vinyl motifs.
  • at least one compound A chosen from a protein, a peptide, a protein or peptide derivative and a synthetic or natural material B is subjected simultaneously to radiochemical, chemical or photochemical treatment, in the presence of one or more vinyl monomers, of at least one homopolymerization inhibitor and of a crosslinking agent, so as to obtain the grafting of the units of vinyl origin, by irreversible association on A and B and the crosslinking of the vinyl motifs.
  • a protein In general, use is made of a protein, a peptide or one of their derivatives endowed with a biological activity having a particular affinity for a given molecular or cellular ligand, for example a cellular receptor.
  • collagen is advantageously used as protein A.
  • collagen of bovine origin containing a preponderant proportion of type I collagen is used.
  • coagulation proteases such as antithrombin III (AT III), or pro-activator of fibrinolysis, an inhibitory action on platelet adhesion such as albumin, or alternatively a mediating action of fibrinolysis or a mediating action of cell adhesion and growth.
  • urokinase tissue plasminogen activator (tpA) streptokinase.
  • tpA tissue plasminogen activator
  • Proteins promoting cell attachment and / or intervening in the organization of the extracellular matrix of tissues such as fibronectin or laminin, used where appropriate in conjunction with other proteins, for example collagen, make it possible to have copolymers which promote cell attachment.
  • proteins include elastin or growth factors.
  • the proteins used according to the invention can be in admixture with other compounds, for example with proteoglycans and / or glycosaminoglycans.
  • the protein derivatives are for example glycoproteins or else lipoproteins.
  • proteins which can be used in affinity chromatography techniques such as specific immunoglobulins or even antithrombin III.
  • affinity chromatography techniques such as specific immunoglobulins or even antithrombin III.
  • peptides suitable for implementing the invention mention will be made of those of interest in controlling cell adhesion and having or corresponding to particular sequences playing a role in the adhesion of cells to the extracellular matrix. In view of their properties, such peptides are advantageously incorporated into the structure of surfaces intended to be colonized by cells.
  • One such peptide sequence recognized by cell adhesion receptors is of the arg-gly-asp type.
  • This tripeptide sequence can be used alone, in a synthetic peptide or in a repeating sequence.
  • the macromolecular material B is of synthetic or natural origin.
  • REPLACEMENT SHEET Synthetic materials which are particularly advantageous for the biological applications of these copolymers include polymers such as polyesters, polyurethanes, fiber-forming polymers.
  • the material B linked to A constitutes a coating on the surface of another type of material. The covalent bond therefore only involves the macromolecular network of the surface coating.
  • Natural macromolecular materials include, for example, cellulose, agarose, dextran, starch.
  • the vinyl monomer is chosen from acrylic or methacrylic acid or acrylates and methacrylates of alkyl and hydroxyalkyl, in particular from C 1 to C 4, in particular methyl, derivatives of these compounds such as acrylamide or acrylonitrile .
  • the vinyl monomer can be formed by multivinyl compounds.
  • the grafting is carried out by any suitable radiochemical, chemical or photochemical means.
  • the grafting is carried out according to a radiochemical process.
  • radioactive sources emitting gamma rays allows easy grafting.
  • the dose delivered is at least 1 kilogray.
  • the dose rate is approximately 3 kilograys / hour.
  • the grafting rates can be limited, which makes it possible to better maintain the conformational freedom of A and therefore its biological activity.
  • the crosslinking agent allows the branching and crosslinking of growing homopolymer chains. The probability of bridging between compounds A and B is thereby increased.
  • crosslinking agents As suitable crosslinking agents, mention will be made of agents comprising at least two vinyl double bonds such as ethylene dimethacrylate or bis-acrylamide.
  • the grafting is preferably carried out in the liquid phase.
  • the macromolecular material B is immersed in an aqueous solution containing the compound A, a vinyl or multivinyl monomer, the homopolymerization inhibitor and the crosslinking agent.
  • the proportions of reagents making it possible to obtain the satisfactory mechanical properties of the macromolecular material and an unchanged macroscopic appearance correspond to the use, as a percentage by weight, of the vinyl derivative at a rate of 15 to 25%, of the homopolymerization inhibitor to from 5 to 10% approximately, of the crosslinking agent at 0.001% to 0.25%, compound A representing approximately 30%, the remainder being water.
  • the homopolymerization inhibitor is a salt, for example a copper or iron salt, such as CuSO4 or Fe SO4.
  • the grafting can be carried out photochemically or alternatively chemically, for example using redox systems such as the Ce III + / Ce IV + pair.
  • the invention also relates, as new products, to the graft copolymers as obtained by implementing the process defined above.
  • copolymers are characterized in that they comprise a compound A chosen from a protein, a peptide, a protein derivative or a peptide derivative, associated by covalent bond to a macromolecular material B via polymeric links such as resulting grafting of vinyl type monomers or of a mixture of such monomers, forming a network by means of a vinyl crosslinking agent.
  • copolymers of the invention are ternary copolymers of protein A type / links of crosslinked vinyl origin / macromolecular material B.
  • Protein A is formed by a protein of a given type or comprises several proteins chosen according to the applications envisaged.
  • the macromolecular material can be formed of a single type of material or of composite materials or of complex structure in which only the surface serves as a support for protein A.
  • compound A is a protein derivative, a peptide or a protein or peptide derivative as already defined.
  • copoly ⁇ mers of the invention are specially suitable for the development of vascular prosthesis substitutes.
  • copolymers of the invention include the development of active phases which can be used in affinity chromatography, in particular for the purification of biological molecules or for carrying out cell sorting and including heparin Sepharose® and Protein A Sepharose represent particularly well-known examples.
  • active phases which can be used in affinity chromatography, in particular for the purification of biological molecules or for carrying out cell sorting and including heparin Sepharose® and Protein A Sepharose represent particularly well-known examples.
  • heparin Sepharose® and Protein A Sepharose represent particularly well-known examples.
  • REPLACEMENT SHEET Similarly, the fixing of ATIII on a support B. makes it possible to have a material for separating heparin or heparin fragments from a given medium or products having an activity modeled on that of heparin.
  • the ability of compound A to be recognized by the molecules of the medium to be analyzed makes it possible to carry out separations with high yields.
  • the molecules of A linked to the support B to which they bring a specific affinity for a given molecule, or a given cell type retain their functional integrity better than when they are linked according to the chemical processes of the prior art.
  • polyester samples Preparation of polyester samples The prostheses are cut into samples, weighed, washed with boiling distilled water in a soxhlet apparatus until constant mass.
  • the acrylic acid supplied by MERCK contains 200 ppm of hydroquinone as a polymerization inhibitor. This inhibitor can be removed by distillation of the monomer which is then stored under vacuum in ampoules at -80 ° C.
  • Collagen of bovine origin is presented in lyophilized form, supplied by ORGANOTECHNICS.
  • a 10-2 mol / l aqueous solution of copper sulphate is produced. Added to the reaction medium, it makes it possible to avoid excessive homopolymerization of the monomer (s) in solution during the irradiation.
  • the crosslinking agent is stored at + 4 ° C. and used as it is at very low concentration. .
  • a grafting solution containing 15 to 30% of acrylic acid, 5 to 10% of a 10 ⁇ 2M solution of CuSO 4, 5H20, 40% of collagen solution, 0.01% to 0.25% of is used.
  • crosslinking agent with 100% water is used.
  • the polyester samples are placed in a glass enclosure containing the homogenized grafting solution.
  • the contents of the cell are degassed by 4 successive cycles of freezing - pumping - thawing.
  • Freezing is carried out by immersion of the enclosure in liquid nitrogen (-196 ° C).
  • the vacuum is achieved using a vane pump.
  • the cell is thawed in a water bath at • 37 ° C.
  • the number of cycles performed depends on the amount of solution to be degassed.
  • the quality of degassing is assessed visually.
  • Cellophane 1 / acrylic acid / albumin or collagen.
  • the affinity of the treated material, for the platelets on the one hand, and for fibrinogen on the other hand is modified compared to that of the starting polyester.
  • a first series of samples (series A) is rinsed with the solvent buffer until a constant value of their residual radioactivity is obtained; then, the rinsing is continued with an albumin solution of the same concentration as the solution used during the incubation, but free of radioactive tracer. There is then a decrease in the residual radioactivity of the samples, proving an exchange of pre-adsorbed albumin molecules, and possibly labeled, with cold albumin molecules.
  • Example 2 The samples are then rinsed with water and then with an albumin solution without radioactive tracer like the samples of series A. There is practically no reduction in their residual radioactivity, which leads to the conclusion that the irreversible association of
  • EXAMPLE 4 BIOLOGICAL CHARACTERIZATION. Culture of human endothelial cells (CEH) in the presence of extracts of copolymers of the invention (collagen / acrylic acid / Dacron®).
  • grafted samples according to the invention and ungrafted samples are sterilized with 25 kilogray gamma rays.
  • the extracts of tested materials are prepared from samples immersed for 120 hours at 37 ° C in physiological saline (0.9% NaCl).
  • the volume of serum used is such that the ratio of the surface area of the sample to this volume is equal to 5 cm2 / ml.
  • the final concentration of the extract in the culture medium is 10% (vol / vol).
  • the CEH are isolated from umbilical cord veins according to the method described by Jaffe in Transplantation proceedings 1980 (Sept) XII, n ° 3 Suppl-1, 49-53.
  • the cells are inoculated into containers containing several wells at a starting density of 7.5 ⁇ 10 3 cells / cm 2.
  • the cells are maintained at 37 "C under 5% C02 and the culture medium is renewed every day.
  • 37 ° C under 5% CO 2 and the culture medium is renewed every day e.
  • the biocompatibility of the copolymer is evaluated by cell attachment (after 3 to 6 hours), proliferation and the protein content of the cells.
  • the cells are rinsed and then lysed in distilled water using five freeze-thaw cycles.
  • the total protein content (in ug / 105 cells) is determined according to the technique known as Pierce BCA protein assay (Interchim, Paris). For specific biocompatibility, the intracellular presence of factor VIII (FVIII) is revealed by immunofluorescence in the controls and the series tested on the 6th day of proliferation.
  • FVIII factor VIII
  • the CEH express and maintain their characteristics, namely the synthesis of FVIII antigen, even in the presence of extracts of copolymer materials according to the invention.
  • phase chosen is SEPHADEX ® G 25 (crosslinked Dextran) and the protein albumin.
  • Sephadéx ® (1 g) is swelled in an albumin solution (7.0 mg / ml) accompanied by albumin labeled with iodine 125 in physiological phosphate buffer (PBS)
  • the final suspension is degassed under a vacuum of 5.102 torr, then irradiated until absorption of 1 Mrad at a dose rate of 0.3 Mrad.h-1 approximately.
  • the Sephadex® gel is recovered by decantation and then extracted with a soxhlet using a 1: 1 mixture (methanol / water) for 5 days.
  • the radioactivity measurements make it possible to calculate a retention rate of 1.03 mg / g of dry Sephadex®, which is 8 times more than the quantity retained when the Sephadex® exposed to the albumin solution is not irradiated and rinsed with 100 ml of water only (no hot extraction).
  • the invention therefore provides graft copolymers of high stability, the structure of which makes it possible to take full advantage of the biological activity of the compound of protein or peptide type, which is of major interest in the various biological applications where these copolymers are found. appropriate.

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Abstract

On prépare des copolymères bioactifs en soumettant simultanément au moins un composé A choisi parmi une protéine, un peptide, un dérivé de protéine ou de peptide et un matériau synthétique ou naturel B à un traitement radiochimique, chimique ou photochimique, en présence d'un ou plusieurs monomères vinyliques, d'au moins un inhibiteur d'homopolymérisation et d'un agent réticulant, de manière à obtenir le greffage des motifs d'origine vinylique sur A et B, et l'association covalente de ces derniers.

Description

I
PROCEDE D'OBTENTION DE COPOLYMERES PAR GREFFAGE DE MOTIFS VINYLIQUES ET COPOLYMERES GREFFES RESULTANTS
L'invention concerne un procédé d'obtention de copolymeres par greffage de motifs vinyliques et les copolymeres bioactifs résultants.
Elle vise plus particulièrement l'obtention de copolymeres comportant au moins une molécule présentant une activité biologique, associée par liaison irréversible à un matériau macromoléculaire, par l'intermédiaire de motifs greffés d'un ou plusieurs monomères vinyliques.
Ce type de copolymeres a été étudié pour élaborer par exemple des prothèses vasculaires ou encore des phases actives utilisables en chromatographie d'affinité.
Dans ces applications, il s'agit de disposer, à la surface d'un matériau, d'une molécule bioactive capable d'interagir avec le milieu dans lequel se trouve le matériau. Selon l'art antérieur, l'association covalente de la molécule bioactive au matériau macromoléculaire support, est généralement obtenue par 1'intermédiaire d'agents de couplage. Ces agents sollicitent le plus souvent la capacité réactionnelle des groupes -OH ou -NH2 de la molécule à lier. La probabilité pour un grand nombre de ces sites appartenant à une même molécule de participer aux processus d'association demeure importante, avec pour conséquence une réduction parallèle de la liberté conformationnelle de la molécule et une diminution de son activité biologique. Suivant une autre voie, certains des co-inventeurs de la présente demande ont tenté d'associer de 1'héparine par greffage radiochimique, à l'aide de monomères vinyliques sur un matériau polymère constitué par un polyester, pour former une prothèse vasculaire (Baquey et al. Innov. Tech. Biol. Med. vol 2, n° 4 1981, 379-389).
Les conditions opératoires utilisées ont bien permis de conférer au polyester des propriétés anticoagulantes, mais celles-ci, associées à son défaut d'imperméabilité intrinsèque, n'ont pas conduit à des produits industriellement utilisables.
Les développements des travaux des inventeurs sur la technique de greffage mettant en oeuvre des monomères vinyliques ont à présent permis de définir des conditions opératoires assurant l'établissement, entre des molécules bioactives et des matériaux macromoléculaires, de liaisons covalentes, et permettant de munir le matériau macro¬ moléculaire de propriétés biologiques d'intérêt. L'invention a donc pour but de fournir un procédé d'obtention de copolymeres bioactifs assurant un meilleur maintien de la liberté conformationnelle de la molécule biologique et, par là, de son activité biologique.
Elle vise également à fournir des copolymeres permettant notamment de moduler les interactions de matériaux macromoléculaires avec les milieux biologiques avec lesquels ils sont mis en contact.
L'invention vise en outre les applications biologiques de ces copolymeres pour 1'élaboration par exemple de prothèses vasculaires ou de phases actives utilisables en chromatographie d'affinité.
Le procédé d'obtention des copolymeres bioactifs de l'invention est caractérisé en ce qu'on soumet simultanément au moins un composé A choisi parmi une protéine, un peptide, un dérivé de protéine ou de peptide et un matériau B synthétique ou naturel, à un traitement radiochimique, chimique ou photochimique, en présence d'un ou plusieurs monomères vinyliques, d'au moins un inhibiteur d'homopolymerisation et d'un agent reticulant, de manière à obtenir le greffage des motifs d'origine vinylique, par association irréversible sur A et B et la reticulation des motifs d'origine vinylique.
Ces dispositions permettent de fixer le produit A sur un matériau macromoléculaire B par 1'intermédiaire de chaînes polymeriques d'origine vinylique établissant des ponts de longueur variable entre A et B et par reticulation entre ces ponts. Il en résulte d'une part une fixation solide de A sur le matériau macromoléσulâire B et une grande
FEUILLE DE REMPLACEMENT souplesse au niveau de la liaison entre A et B, la reticulation augmentant la probabilité d'établissement de ponts polymères entre les deux partenaires A et B.
Le choix de la protéine, du peptide ou du dérivé de protéine ou de peptide est effectué en fonction de l'application spécifique envisagée.
D'une manière générale, on a recours à une protéine, un peptide ou à un de leurs dérivés doté d'une activité biologique possédant une affinité particulière pour un ligand donné moléculaire ou cellulaire, par exemple un récepteur cellulaire.
Pour réaliser des revêtements étanches de textiles macromoléculaires, en vue notamment de l'élaboration de prothèses vasculaires, on utilise avec avantage comme protéine A du collagene.
On met plus particulièrement en oeuvre du collagene d'origine bovine contenant une proportion prépondérante de collagene de type I.
D'autres protéines avantageuses possèdent une action pro-inhibitrice des protéases de la coagulation, telle 1'antithrombine III (AT III), ou pro-activatrice de la fibrinolyse, une action inhibitrice de l'adhésion plaquettaire telle l'albumine, ou encore une action médiatrice de la fibrinolyse ou une action médiatrice de l'adhésion et de la croissance cellulaires.
Comme facteurs pro-fibrinolytiques, on citera l'urokinase, l'activateur tissulaire du plasminogène (tpA) la streptokinase.
On notera que l'association de l'AT III à un matériau macromoléculaire permet une inhibition in situ de la thrombine générée au cours de 1'interaction entre le matériau et le sang.
Des protéines favorisant 1'attachement cellulaire et/ou intervenant dans , 1'organisation de la matrice extracellulaire des tissus telles que la fibronectine ou la laminine, utilisées le cas échéant conjointement avec d'autres protéines, par exemple le collagene, permettent de disposer de copolymeres favorisant 1'attachement de cellules.
D'autres protéines encore comprennent l'élastine ou des facteurs de croissance. Les protéines utilisées selon 1'invention peuvent être en mélange avec d'autres composés, par exemple avec des protéoglycanes et/ou des glycosaminoglycanes.
Les dérivés de protéines sont par exemple des glycoprotéines ou encore des lipoprotéines. Pour disposer de systèmes de purification, il est également avantageux de mettre en oeuvre des protéines utilisables dans les techniques de chromatographie d'affinité telles que des immunoglobulines spécifiques ou encore de 1'antithrombine III. Parmi les peptides appropriés pour la mise en oeuvre de 1'invention, on citera ceux présentant un intérêt dans la maîtrise de 1'adhésion cellulaire et possédant ou correspondant à des séquences particulières jouant un rôle dans l'adhésion des cellules à la matrice extracellulaire. Au vu de leurs propriétés de tels peptides sont avantageusement incorporés dans la structure de surfaces destinées à être colonisées par les cellules.
Une séquence peptidique de ce type reconnue par les récepteurs d'adhésion des cellules est du type arg-gly- asp.
Cette séquence tripeptidique peut être utilisée seule, dans un peptide de synthèse ou dans une séquence répétitive.
Cette séquence ou toute autre séquence d'intérêt peut être également présente dans des chaînons polymères.
L'utilisation selon l'invention d'un peptide ou d'un polypeptide, ou de toute macromolécule contenant une séquence peptidique renfermant un ou plusieurs motifs tripeptidiques tels qu'évoqués plus haut permet notamment d'améliorer le comportement du matériau macromoléσulaire B vis-à-vis des tissus.
Le matériau macromoléculaire B est d'origine synthétique ou naturelle.
FEUILLE DE REMPLACEMENT Des matériaux synthétiques particulièrement intéressants pour les applications biologiques de ces copolymeres, comprennent les polymères tels que polyesters, polyuréthannes, polymères formant des fibres. Dans une variante le matériau B lié à A constitue un revêtement à la surface d'un autre type de matériau. La liaison covalente ne met donc en jeu que le réseau macromoléculaire du revêtement superficiel.
Les matériaux macromoléculaires naturels comprennent par exemple la cellulose, l'agarose, le dextrane, 1'amidon.
Préférentiellement, le monomère vinylique est choisi parmi 1'acide acrylique ou méthacrylique ou les acrylates ou méthacrylates d'alcoyle et d'hydroxyalcoyle, en particulier de Ci à C4 notamment de méthyle, des dérivés de ces composés tels l'acrylamide ou 1'acrylonitrile. Le monomère vinylique peut être formé par des composés multivinyliques.
Le greffage est réalisé par tout moyen radiochimique, chimique ou photochimique approprié.
Selon un mode préféré de réalisation de 1'invention le greffage est effectué selon un procédé radiochimique.
L'utilisation de sources radioactives émettant des rayonnements gamma permet une réalisation aisée du greffage.
La dose délivrée est d'au moins 1 kilogray. Le débit de dose est de 3 kilograys/heure environ.
Grâce à 1'addition d'un agent reticulant au milieu réactionnel, les taux de greffage peuvent être limités, ce qui permet de mieux maintenir la liberté conformationnelle de A et donc son activité biologique.
L'agent reticulant permet la ramification et la reticulation des chaînes d'homopolymère en croissance. La probabilité d'établissement de ponts entre les composés A et B se trouve par là-même augmentée.
Comme agents réticulants appropriés, on citera des agents comportant au moins deux doubles liaisons vinyliques tels que le diméthacrylate d'éthylène ou le bis-acrylamide.
FEUILLE DE REMPLACEMENT Le greffage est de préférence réalisé en phase liquide.
Dans une disposition de ce mode de réalisation le matériau macromoléculaire B est immergé dans une solution aqueuse renfermant le composé A, un monomère vinylique ou multivinylique, l'inhibiteur d'homopolymerisation et l'agent reticulant.
Les proportions de réactifs permettant d'obtenir les propriétés mécaniques satisfaisantes du matériau macromoléculaire et un aspect macroscopique inchangé correspondent à l'utilisation, en pourcentage en poids, du dérivé vinylique à raison de 15 à 25 %, de l'inhibiteur d'homopolymerisation à raison de 5 à 10 % environ, de l'agent de reticulation à raison de 0,001 % à 0,25 %, le composé A représentant environ 30 %, le restant étant de 1'eau.
L'inhibiteur d'homopolymerisation est un sel, par exemple un sel de cuivre ou de fer, tel CuS04 ou Fe SO4.
Selon une variante, on opère en phase vapeur. Le greffage peut être réalisé par voie photochimique ou encore par voie chimique par exemple à l'aide de systèmes rédox tels que le couple CeIII+/CeIV+
L'invention vise également en tant que produits nouveaux les copolymeres greffés tels qu'obtenus par mise en oeuvre du procédé défini ci-dessus.
Ces copolymeres sont caractérisés en ce qu'ils comportent un composé A choisi parmi une protéine, un peptide, un dérivé de protéine ou un dérivé de peptide, associé par liaison covalente à un matériau macromoléculaire B par 1'intermédiaire de chaînons polymères tels que résultant du greffage de monomères de type vinylique ou d'un mélange de tels monomères, formant réseau par l'intermédiaire d'un agent de reticulation vinylique.
Dans ces copolymeres, A et B sont tels que définis ci-dessus. Les chaînons polymères proviennent des monomères vinyliques ou multivinyliques et de leurs dérivés, comme indiqué plus haut. Des copolymeres de 1'invention sont des copolymeres ternaires de type protéine A/chaînons d'origine vinylique réticulés/matériau macromoléculaire B.
La protéine A est formée par une protéine d'un type donné ou comprend plusieurs protéines choisies en fonction des applications envisagées.
Le matériau macromoléculaire peut être formé d'un seul type de matériau ou de matériaux composites ou de structure complexe dans lesquels seule la surface sert de support à la protéine A.
Dans d'autres copolymeres, le composé A est un dérivé de protéine, un peptide ou un dérivé de protéine ou de peptide comme déjà défini.
Compte tenu de leurs propriétés mécaniques et d'étanchêité particulièrement satisfaisantes, les copoly¬ meres de 1'invention sont spécialement appropriés pour 1'élaboration de substituts de prothèse vasculaires.
L'établissement de liaisons réticulées entre elles, entre le réticulum protéique et, par exemple, un polyester constitutif d'un substitut vasculaire assure le maintien en place de la composante protéique in vivo. La solidité des liens établis entre la matrice protéique, par exemple du collagene et le polyester, et la morphologie alvéolaire, apparaissant sur la figure unique, de cette matrice favorise l'installation pérenne d'un endothelium consécutive à une implantation, ou à la culture in vitro de cellules endothéliales.
D'autres applications des copolymeres de 1'invention comprennent 1'élaboration de phases actives utilisables en chromatographie d'affinité, en particulier pour la purification de molécules biologiques ou pour effectuer un tri cellulaire et dont l'héparine Sepharose ® et le Protéine A Sepharose représentent des exemples particulièrement connus. Ainsi, la fixation d'immunoglobulines sur un matériau B approprié permet de fixer sélectivement les antigènes d'un milieu biologique, spécifiquement reconnus par ces immunoglobulines. •
FEUILLE DE REMPLACEMENT De même la fixation d'ATIII sur un support B. permet de disposer d'un matériau pour séparer de l'héparine ou des fragments d'héparine d'un milieu donné ou des produits ayant une activité calquée sur celle de l'héparine. La capacité du composé A à être reconnu par les molécules du milieu à analyser permet d'effectuer des séparations avec des rendements élevés.
En effet, les molécules de A liées au support B auquel elles apportent une affinité spécifique pour une molécule donnée, ou un type cellulaire donné, conservent mieux leur intégrité fonctionnelle que lorsqu'elles sont liées selon les procédés chimiques de l'art antérieur.
Pour illustrer l'invention,, on rapporte ci-après des exemples de préparation de copolymeres greffés (1) polytérephtalate d'éthylène/chaînons d'origine vinylique/collagène ou
(2) Cellophane ® /chaînons d'origine vinylique /collagene ou albumine. Dans ces exemples, il est fait référence à la figure unique qui représente une photo d'une vue en microscopie électronique à balayage d'un échantillon de tricot de polytérephtalate d'éthylène associé à du collagene et de l'acide acrylique selon le procédé de l'invention. EXEMPLE 1 - Etude de l'imperméabilisation d'une prothèse en polyester greffé (copolymère polytérephtalate d'éthylène/acide acrylique/collagène) .
- Protocole de greffage
. Préparation des échantillons de polyester Les prothèses sont découpées en échantillons, pesées, lavées à l'eau distillée bouillante dans un appareil de soxhlet jusqu'à masse constante.
• Préparation des réactifs
- Acide acrylique. L'acide acrylique fourni par MERCK contient 200 ppm d'hydroquinone comme inhibiteur de polymérisation. On peut éliminer cet inhibiteur par distillation du monomère qui est ensuite stocké sous vide dans des ampoules à -80°C.
FEUILLE DE REMPLACEMENT _g_
- Collagene
Le collagene d'origine bovine se présente sous forme lyophilisée, fourni par ORGANOTECHNICS.
Il est dissous dans une solution d'acide acétique glacial à 0,5 mol/1 à une concentration de 1,7 %, puis stocké à +4βC.
- Sulfate de cuivre
Une solution aqueuse de sulfate de cuivre à 10-2 mol/1 est réalisée. Additionnée au milieu reactionnel, elle permet d'éviter 1'homopolymerisation excessive du ou des monomères en solution au cours de l'irradiation.
- Diméthacrylate d'éthylène
L'agent reticulant est stocké à +4°C et utilisé tel quel à très faible concentration. . Mode opératoire
On utilise une solution de greffage renfermant 15 à 30 % d'acide acrylique, 5 à 10 % d'une solution 10~2M de CuS04, 5H20, 40 % de solution de collagene, 0,01 % à 0,25 % d'agent de reticulation avec qsp 100 % d'eau. Les échantillons de polyester sont placés dans une enceinte de verre contenant la solution de greffage homogénéisée. Le contenu de la cellule est dégazé par 4 cycles successifs de congélation - pompage - décongélation.
La congélation est réalisée par immersion de l'enceinte dans l'azote liquide (-196°C).
Le vide est réalisé à 1'aide d'une pompe à palettes.
La cellule est décongelée dans un bain-marie à • 37°C. Le nombre de cycles réalisé dépend de la quantité de solution à dégazer. La qualité du dégazage est appréciée de façon visuelle.
La cellule contenant la solution dégazée et les échantillons, est placée dans un irradiateur pour subir 1'irradiation gamme nécessaire à la polymérisation des différents réactifs. Les' échantillons sont ensuite récupérés, lavés dans une solution aqueuse d'acide acétique au 1/500, pendant lh, sous agitation, à température ambiante. Ils sont lavés à l'eau distillée pendant 3 jours de manière à éliminer le copolymère insuffisamment lié à la paroi. Lorsque' l'excédent de copolymère est éliminé, les prothèses sont congelées, lyophilisées et pesées. EXEMPLE 2 - Préparation d'un copolymère
Cellophane1 /acide acrylique/albumine ou collagene.
Par irradiation gamma jusqu'à absorption de 2 kilograys (gamma de 661 keV du 137cesium), sous un débit de dose de 300.000 rad.h-1, de Cellophane ® préimprégnée par une solution d'albumine ou de collagene et exposée en l'absence d'oxygène à la vapeur saturante d'acide acrylique, on obtient solution d'albumine ou de colla ene et exposéeen l'absence d'oxygène à la vapeur saturante d'acide acrylique^, on obtient l'association irréversible de la protéine à la Cellophane ® . Le matériau obtenu manifeste une biocompatibilité différente de celle de la cellophane de départ, la différence observée dépendant de la protéine utilisée.
EXEMPLE 3 - Préparation d'un copolymère Dacron ®/ acide acrylique / collagene.
Par irradiation gamma jusqu'à absorption de 10 à 15 kilograys (gamma de 661 keV du 137cesium) sous débit de dose de 300.000 rad.h-!, de tricots de polytérephtalate d'éthylène (DACRON^) préimprégnés d'une solution aqueuse de collagene et exposés en l'absence d'oxygène à la vapeur saturante d'acide acrylique, on obtient l'association irréversible du collagene au polyester et 1'étanchéité pariétale immédiate des prothèses confectionnées à partir de ces tricots modifiés.
En outre, d'une manière avantageuse, l'affinité du matériau traité, pour les plaquettes d'une part, et pour le fibrinogène d'autre part, se trouve modifiée par rapport à celle du polyester de départ.
ETUDE DE LA STABILITE DES COPOLYMERES GREFFES
On rapporte les résultats d'une étude effectuée avec de l'albumine de sérum humain (ASH) marquée à 125ι greffée à de la Cellophane ©• . Des échantillons de Cellophane ® sont mis à incuber en présence d'une solution d'albumine (200 mg/ml) contenant de l'albumine marquée à l'iode 125.
Une première série d'échantillons (série A) est rincée par le tampon solvant jusqu'à obtention d'une valeur constante de leur radioactivité résiduelle ; puis, le rinçage est poursuivi par une solution d'albumine de même concentration que la solution utilisée lors de l'incubation, mais exempte de traceur radioactif. On constate alors une décroissance de la radioactivité résiduelle des échantillons, prouvant un échange de molécules d'albumine préadsorbées, et éventuellement marquées, par des molécules d'albumine froide.
traitement décrit par 1 'invention (Exemple 2 ) . Les échantillons sont ensuite rincés à 1 'eau puis par une solution d'albumine sans traceur radioactif comme les échantillons de la série A. On ne constate pratiquement aucune diminution de leur radioactivité résiduelle ce qui permet de conclure à l'association irréversible de
1 ' albumine à la Cellophane ®.
Le même type d'expérience a été réalisé avec le système Cellophane ® - collagene, et le système polyester - albumine, les résultats obtenus chaque fois confirmant l'établissement d'une liaison irréversible entre le composé
A et le matériau B.
EXEMPLE 4 : CARACTERISATION BIOLOGIQUE. Culture de cellules endothéliales humaines (CEH) en présence d'extraits de copolymeres de 1 'invention (collagène/acide acrylique/Dacron ® ).
Des échantillons greffés selon 1'invention et des échantillons non greffés sont stérilisés avec des rayons gamma 25 kilograys. Les extraits de matériaux testés sont préparés à partir d'échantillons immergés pendant 120 heures à 37°C dans du sérum physiologique (NaCl 0,9 %). Le volume de sérum utilisé est tel que le rapport entre la surface de l'échantillon à ce volume soit égal à 5 cm2/ml. La concentration finale de l'extrait dans le milieu- de culture est de 10 % (vol/vol).
Les CEH sont isolées à partir de veines de cordon ombilical selon la méthode décrite par Jaffe dans Transplantation proceedings 1980 (Sept) XII, n° 3 Suppl-1, 49-53.
Au troisième passage, on inocule les cellules dans des récipients contenant plusieurs puits à une densité de départ de 7,5 x 103 cellules/cm2. Les cellules sont maintenues à 37"C sous 5 % de C02 et le milieu de culture est renouvelé chaque jour. à 37°C sous 5 % de CO2 et le milieu de culture est renouvelé chaque jour.
On rapporte les résultats obtenus sur 4 séries :
- un témoin cultivé avec un milieu complet composé de M 199, de 20 % de sérum de veau foetal, Endothelial Cell Growth Supplément*, à raison de 20 ug/ml et d'héparine à raison de 90 ug/ml,
- un contrôle positif mis en culture avec le même milieu contenant 6,4 ug de phénol/ml (ce qui provoque une cytotoxicité constante et reproductible),
- un essai témoin, contenant le même milieu et un extrait de matériau non greffé,
- un essai contenant le même milieu et un extrait de copolymère greffé.
La biocompatibilité du copolymère est évaluée par 1'attachement cellulaire (au bout de 3 à 6 heures), la prolifération et la teneur des cellules en protéines.
FEUILLE DE REMPLACEMENT A la fin de la période d'incubation choisie, le milieu est éliminé, les cellules sont détachées avec de la trypsine et dénombrées.
Pour effectuer une détermination quantitative des protéines cellulaires, les cellules sont rincées, puis lysées dans de l'eau distillée en utilisant cinq cycles de congélation-décongélation.
La teneur totale en protéines (en ug/105 cellules) est déterminée selon la technique dite Pierce BCA protein assay (Interchim, Paris). Pour une biocompatibilité- spécifique, la présence intracellulaire de facteur VIII (FVIII) est révélée par immunofluorescence dans les témoins et les séries testées au 6ème jour de prolifération.
On observe un attachement complet des cellules pour toutes les séries en 3 heures. Au 6ème jour, les cellules sont homogènes. Les séries testées sont morphologiquement semblables au témoin.
L'étude des cinétiques de prolifération a montré que la présence d'extraits de copolymeres greffés ne conduit pas à une inhibition.
Les CEH expriment et maintiennent leurs caractéristiques, à savoir la synthèse d'antigène FVIII, même en présence d'extraits de matériaux copolymeres selon 1'invention.
EXEMPLE 5 : Application du procédé de 1'invention à 1'association d'une protéine à une phase de chromatographie.
La phase choisie est le SEPHADEX ® G 25 (Dextran réticulé) et la protéine de l'albumine.
Le Sephadéx ® (1 g) est mis à gonfler dans une solution d'albumine (7,0 mg/ml) accompagnée d'albumine marquée à l'iode 125 en tampon phosphate physiologique (PBS
- pH = 7,4), pendant 10 heures.. On ajoute 1 ml d'acide acrylique, 1 ml de solution de sulfate de cuivre (5.10-2 M).
La suspension finale est dégazée sous un vide de 5.102 torr, puis irradiée jusqu'à absorption de 1 Mrad sous un débit de dose de 0,3 Mrad.h-1 environ.. Le gel de Sephadex ® est récupéré par décantation puis extrait au soxhlet par un mélange 1:1 (méthanol/eau) pendant 5 jours.
Il est ensuite rincé sur colonne avec 1000 ml d'eau bidistillee sous un débit de 0,5 ml/min. Il est enfin lyophilisé.
Les mesures de radioactivité permettent de calculer un taux de rétention de 1,03 mg/g de Sephadex ® sec, ce qui est 8 fois plus que la quantité retenue lorsque le Sephadex ® exposé à la solution d'albumine, n'est pas irradié et rincé par 100 ml d'eau seulement (pas d'extraction à chaud).
L'irradiation en présence d'acide acrylique conduit donc à une stabilisation de 1'albumine au sein du gel de Sephadex ® .
L'invention fournit donc des copolymeres greffés de grande stabilité, dont la structure permet de mettre pleinement a profit 1'activité biologique du composé de type protéine ou peptide, ce qui présente un intérêt majeur dans les diverses applications biologiques où ces copolymeres s'avèrent appropriés.

Claims

REVENDICATIONS
1/ Procédé d'obtention de copolymeres bioactifs, caractérisé en ce qu'on soumet simultanément au moins un composé A choisi parmi une protéine, un peptide, un dérivé de protéine ou de peptide, et un matériau synthétique ou naturel B à un traitement radiochimique, chimique ou photochimique, en présence d'un ou plusieurs monomères vinyliques, d'au moins un inhibiteur d'homopolymerisation et d'un agent reticulant, de manière à obtenir le greffage des motifs d'origine vinylique, par association irréversible sur
A et B.
2/ Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le composé A possède une affinité spécifique pour un ligand donné moléculaire ou cellulaire. 3/ Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le composé A est du collagene.
4/ Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que la protéine A possède une action pro- inhibitrice des protéases de la coagulation, ou proactivatrice de la fibrinolyse, une action inhibitrice de 1 'adhésion plaquettaire ou encore une action médiatrice de la fibrinolyse ou une action médiatrice de 1 'adhésion et de la croissance cellulaire.
5/ Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que la protéine A est choisie parmi les protéines favorisant 1 'attachement cellulaire telles que la fibronectine ou la laminine et' est utilisée le cas échéant avec d'autres protéines telles que le collagene, parmi l'élastine ou des facteurs de croissance, ladite protéine A étant utilisée le cas échéant en mélange avec d'autres composés tels que les protéoglycanes et/ou les glycosaminoglycanes.
6/ Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que la protéine A est une protéine utilisable dans les techniques de chromatographie d'affinité, telle que des immunoglobulines spécifiques et
1'antithrombine III. 7/ Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que le composé A est un peptide ou un dérivé de peptide constitué par ou comprenant une séquence intervenant dans 1'adhésion cellulaire, en particulier une séquence tripeptidique du type arg-gly-asp.
8/ Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que le matériau macromoléculaire B est un matériau synthétique, en particulier constitué par un polymère tel qu'un polyester, un polyuréthanne ou un polymère formant des fibres ou un matériau naturel tel que la cellulose, l'agarose, le dextrane ou 1'amidon.
9/ Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce qu'on soumet le milieu reactionnel à un traitement radiochimique, plus particulièrement en irradiant à 1'aide de rayons émis par des rayons radioactifs.
10/ Procédé selon 1'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que le greffage est réalisé en phase liquide, le matériau macromoléculaire B étant avantageusement immergé dans une solution aqueuse renfermant le composé A, un monomère vinylique ou multivinylique, l'inhibiteur d'homopolymerisation et l'agent reticulant. 11/ Copolymeres bioactifs, caractérisés en ce qu'ils comportent au moins un composé A choisi parmi une protéine, un peptide, un dérivé de protéine ou de peptide, associé par liaison covalente à un matériau macromoléculaire
B, par l'intermédiaire de chaînons polymères tels que résultant du greffage de monomères vinyliques ou d'un mélange de tels monomères, formant réseau par l'intermédiaire d'un agent de reticulation vinylique.
12/ Copolymeres selon la revendication 11, caractérisés en ce que A et B sont tels que définis dans l'une quelconque des revendications 1 à 8.
13/ Copolymeres selon la revendication 12, caractérisés en ce qu'il s'agit de copolymeres ternaires comprenant du collagene et un polyester reliés par des ponts
FEUILLE DE REMPLACEMENT vinyliques réticulés entre eux par 1'intermédiaire d'un agent de reticulation.
14/ Copolymeres bioactifs tels qu'obtenus par mise en oeuvre du procédé selon l'une des revendications 1 à 10. 15/ Substituts vasculaires, caractérisés en ce qu'ils sont élaborés à partir des copolymeres selon 1'une des revendications 11, 12 et 13.
16/ Substituts vasculaires, caractérisés en ce qu'ils sont élaborés à partir des copolymeres selon la revendication 13.
17/ Phases actives utilisables en chromatographie d'affinité, caractérisées en ce qu'elles sont élaborées à partir de copolymeres selon l'une des revendications 11 à 14.
FEUILLE DE REMPLACEMENT
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0488258A3 (en) * 1990-11-27 1993-05-05 Fuji Photo Film Co., Ltd. Propenamide derivatives, polymers, copolymers and use thereof
FR2713488A1 (fr) * 1993-11-24 1995-06-16 Aspid Sa De Cv Composition présentant un effet anti-fibrotique, à base de collagène polymérisé.
ES2079311A1 (es) * 1993-11-30 1996-01-01 Aspid S A De C V Una composicion anti-fibrotica a base de la colagena polimerizada
WO1999054729A3 (fr) * 1998-04-22 2000-02-17 Biotechnolog Forschung Gmbh Substrats immobilises, gels de separation produits au moyen de ces derniers et procede de detection d'activites enzymatiques apres separation de proteines par electrophorese
WO2001080921A3 (fr) * 2000-04-20 2002-02-28 Univ Emory Fibres mimetiques de proteines natives, reseaux de fibres et tissus a usage medical
US6506895B2 (en) 1997-08-15 2003-01-14 Surmodics, Inc. Photoactivatable nucleic acids

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7105724B2 (en) 1997-04-04 2006-09-12 Board Of Regents Of University Of Nebraska Methods and materials for making and using transgenic dicamba-degrading organisms
US6121027A (en) * 1997-08-15 2000-09-19 Surmodics, Inc. Polybifunctional reagent having a polymeric backbone and photoreactive moieties and bioactive groups
WO2005039641A2 (fr) * 2003-10-15 2005-05-06 The Regents Of The University Of California Conjugues polymeres biomacromoleculaires

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2211507A1 (fr) * 1972-12-22 1974-07-19 Unisearch Ltd

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU883052A1 (ru) * 1979-11-14 1981-11-23 Всесоюзный кардиологический научный центр АМН СССР Иммуносорбент

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2211507A1 (fr) * 1972-12-22 1974-07-19 Unisearch Ltd

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Chemical Abstracts, vol. 109, no. 8, 22 août 1988, (Columbus, Ohio, US), Y. Imanishi et al.: "Design and synthesis of biocompatible polymeric materials", voir page 435 *
Chemical Abstracts, vol. 75, no. 16, 18 octobre 1971, (Columbus, Ohio, US), voir page 21 *
Chemical Abstracts, vol. 84, no. 4, 26 janvier 1976, (Columbus, Ohio, US), N.G. Gaylord et al.: "Donor-acceptor complexes in copolymerization. LII. Alternating copolymer graft copolymers. IX. Grafting of poly(styrene-alt-acrylonitrile) onto starch, casein, and collagen", voir page 22 *
Chemical Abstracts, vol. 96, no. 21, 24 mai 1982, (Columbus, Ohio, US), voir pages 375-376 *
Polymer Science, U.S.S.R., vol. 2, no. 3, 1961, L. Kiss et al.: "Graft copolymerization of methzl methacrylate and styrene on to gelatin induced by ionizing radiation", pages 308-309 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0488258A3 (en) * 1990-11-27 1993-05-05 Fuji Photo Film Co., Ltd. Propenamide derivatives, polymers, copolymers and use thereof
FR2713488A1 (fr) * 1993-11-24 1995-06-16 Aspid Sa De Cv Composition présentant un effet anti-fibrotique, à base de collagène polymérisé.
ES2079311A1 (es) * 1993-11-30 1996-01-01 Aspid S A De C V Una composicion anti-fibrotica a base de la colagena polimerizada
US6506895B2 (en) 1997-08-15 2003-01-14 Surmodics, Inc. Photoactivatable nucleic acids
WO1999054729A3 (fr) * 1998-04-22 2000-02-17 Biotechnolog Forschung Gmbh Substrats immobilises, gels de separation produits au moyen de ces derniers et procede de detection d'activites enzymatiques apres separation de proteines par electrophorese
WO2001080921A3 (fr) * 2000-04-20 2002-02-28 Univ Emory Fibres mimetiques de proteines natives, reseaux de fibres et tissus a usage medical

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