TR2023016185T2

TR2023016185T2 - Seçkin Safflower Incident

Info

Publication number: TR2023016185T2
Application number: TR2023/016185
Authority: TR
Inventors: Okada Shoko; Christopher Wood Craig; Mathew Anu; MENON Amratha
Original assignee: Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation
Filing date: 2021-05-31
Publication date: 2024-01-22

Abstract

Mevcut buluş, yüksek seviyelerde oleik asit üreten seçkin transgenik aspir olaylarıyla ilgilidir.The present invention relates to select transgenic safflower lines that produce high levels of oleic acid.

Description

TARIFNAME SEÇKIN ASPIR OLAYI BULU UN ALANI Mevcut bulus, yüksek seviyelerde oleik asit üreten seçkin transgenik aspir olaylariyla ilgilidir. BULUSUN ARKA PLANI Bitkisel yaglar insanlar için önemli bir diyet yagi kaynagidir ve gelismis ülkelerde kalori aliminin yaklasik %25'ini temsil eder (Broun ve digerleri, 1999). Bitkisel yaglarin dünya üretimi yilda en az yaklasik 110 milyon tondur ve bunun fasulyesi, kanola, aspir, ayçiçegi, pamuk tohumu ve yerfistigi gibi yagli tohum bitkilerinden veya palmiye, zeytin ve hindistan cevizi gibi plantasyon agaçlarindan elde edilmektedir (Gunstone, 2001; Oil World Annual, 2004). Gida yaglarinin bireysel yag asidi bilesenlerinin insan sagliginin çesitli yönleri üzerindeki etkisine dair bilimsel anlayis ve toplum bilinirligindeki artis, çesitli gida uygulamalari için gerekli islevselligi korurken besin degerini artiran degistirilmis bitkisel yaglarin gelistirilmesini motive etmektedir. Bu modifikasyonlar, bitki yag asidi sentezi için metabolik yollar ve bu yollar için enzimleri kodlayan genler hakkinda bilgi gerektirir (Liu ve digerleri, 2002; Thelen ve Ohlrogge, 2002). Çesitli kati ve sivi yaglarin besinsel etkisine, özellikle kati ve sivi yaglarin bilesenlerinin kardiyovasküler hastaliklar, kanser ve çesitli enIlamatuar durumlar üzerindeki etkisine büyük önem verilmektedir. Diyetteki yüksek düzeyde kolesterol ve doymus yag asitlerinin kalp hastaligi riskini artirdigi düsünülmekte ve bu durum, kolesterol açisindan zengin doymus hayvansal yaglarin tüketiminin, kolesterol içermeyen doymamis bitkisel yaglar lehine azaltilmasina yönelik beslenme tavsiyelerine yol açmistir (Liu ve digerleri, 2002). Hayvansal yaglarda bulunan kolesterolün diyetle alinmasinin kandaki toplam kolesterol seviyelerini önemli ölçüde artirabildigi, ayni zamanda kati ve sivi yaglari içeren yag asitlerinin kan serumu kolesterol seviyeleri üzerinde önemli etkilere sahip olabildigi de bulunmustur. Diyetteki yag asitlerinin kandaki istenmeyen düsük yogunluklu lipoprotein (LDL) ve arzu edilen yüksek yogunluklu lipoprotein (HDL) kolesterol formlari üzerindeki etkisi özellikle ilgi çekicidir. Genel olarak doymus yag asitleri, özellikle bitkisel yaglarda bulunan baslica doymus maddeler olan miristik asit (1420) ve palmitik asit (1620), serum LDL-kolesterol düzeylerini yükseltme ve bunun sonucunda da kardiyovasküler hastalik riskini artirma gibi istenmeyen özellige sahiptir (Zock ve digerleri, 1994; Hu ve digerleri, 1997). Bununla birlikte, bitki yaglarinda bulunan diger ana doymus asit olan stearik asidin (1820) LDL-kolesterolünü yükseltmedigi ve aslinda toplam kolesterolü düsürebildigi ortaya çikmistir (Bonanome ve Grundy, 1988; Dougheity ve digerleri, 1995). Bu nedenle stearik asidin genellikle kardiyovasküler hastalik riski açisindan en azindan nötr oldugu kabul edilir (Tholstrup ve digerleri, 1994). Öte yandan tekli doymamis oleik asit (1821) gibi doymamis yag asitleri, LDL-kolesterolünü düsürme gibi yararli bir özellige sahiptir (Roche ve Gibney, 2000), dolayisiyla kardiyovasküler hastalik riskini azaltirlar. Oleik asit orani yüksek yagin ayrica, bunlarla sinirli olmamak üzere, genellikle yag asidi esterleri formundaki kaydiricilar, biyoyakitlar, yag alkolleri için ham maddeler, plastiklestiriciler, mumlar, metal stearatlar, emülgatörler, kisisel bakim ürünleri, sabunlar ve deterjanlar, yüzey aktif maddeler, farmasötikler, metal isleme katki maddeleri, kumas yumusaticilari için hammaddeler, mürekkepler, seffaf sabunlar, PVC stabilizatörü, alkid reçineleri ve diger birçok alt oleokimyasal türev türü için ara maddeler olmasi gibi birçok endüstriyel kullanimi vardir. Yag isleyicileri ve gida üreticileri, geleneksel olarak, yaglardaki doymamis yag asitlerinin seviyesini azaltmak, böylece kizartma uygulamalarinda oksidatif stabiliteyi arttirmak ve ayrica margarin ve kati yaglarda kullanilmak üzere kati yaglar saglamak için hidrojenasyona güvenmislerdir. Hidrojenasyon, karbon-karbon çift baglarini karbon-karbon tekli baglarina dönüstürerek yaglarin doymamislik derecesini azaltan kimyasal bir islemdir. Tam hidrojenasyon, tamamen doymus bir yag üretir. Bununla birlikte, kismi hidrojenasyon islemi, hem doymus yag asitlerinin hem de tekli doymamis yag asitlerinin düzeylerinin artmasina neden olur. Kismi hidrojenasyon sirasinda olusan tekli doymamis maddelerin bazilari, dogal olarak olusan cis izomerlerden ziyade trans izomer formundadir (oleik asidin trans izomeri olan elaidik asit gibi) (Sebedio ve digerleri, 1994; Femandez San Juan, 1995). Artik, cis-doymamis yag asitlerine kiyasla trans-yag asitlerinin serum LDL kolesterol düzeylerini yükseltmede (Mensink ve Katan, 1990; Noakes ve Clifton, 1998) ve serum HDL kolesterolünü düsürmede (Zock ve Katan, 1992) palmitik asit kadar etkili oldugu bilinmektedir ve dolayisiyla kardiyovasküler hastalik riskinin artmasina katkida bulunurlar (Ascherio ve Willett, 1997). Trans yag asitlerinin beslenme karsiti etkilerine iliskin farkindaligin artmasinin bir sonucu olarak, artik gida endüstrisinde hidrojene yaglarin kullanimindan uzaklasarak, hem besin degeri yüksek hem de hidrojenasyon olmadan islevsellik saglayabilen kati ve sivi yaglarin, özellikle sivi yaglarin gerekli oldugu durumlarda oleik asit açisindan zengin olanlar veya kati veya yari kati bir yagin tercih edildigi durumlarda stearik asit açisindan zengin olanlarin tercih edilmesine yönelik büyüyen bir egilim var. Yüksek oleik asit içerigine sahip baska lipitlere ve yaglara ve bunlarin güvenilir kaynaklarina ihtiyaç vardir. BULUSUN KISA AÇIKLAMASI Mevcut bulus sahipleri, yüksek seviyelerde oleik asit içeren yagin ticari ölçekte üretimi için kullanilabilecek seçkin aspir soylarini belirlemistir. Bir yönüyle mevcut bulus, asagidakileri içeren bir aspir bitkisi hücresi saglar: (a) SEK ID NO: 13 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit ve SEK ID NO: 14 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit, (b) SEK ID NO:21 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit ve SEK ID NO:22 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit, (c) bir T-DNA molekülü, buradaki T-DNA molekülü, hücrenin bir kromozomunun bir bölgesine eklenir, buradaki bölge, SEK ID NO:11 olarak saglanan bir nükleotit dizisine sahiptir, (d) bir T-DNA molekülü, buradaki T-DNA molekülü, hücrenin bir kromozomunun bir bölgesine eklenir, buradaki bölge, SEK ID NO:18 olarak saglanan bir nükleotit dizisine sahiptir veya (e) bunlarin herhangi bir kombinasyonu. Bir düzenlemede aspir bitkisi hücresi (a) ve (c)'yi içerir, örnegin GOR73226 durumunda hem (a) hem de (c) geçerlidir. Bir düzenlemede aspir bitkisi hücresi (b) ve (d)'yi içerir, örnegin GOR73240 durumunda hem (b) hem de (d) geçerlidir. Bir düzenlemede aspir bitkisi hücresi (a) ila (d)'yi içerir, örnegin aspir hücresinin her iki T- Tercih edilen bir düzenlemede hücre (a) veya (b)'ye sahiptir ancak her ikisine birden sahip degildir. (a) veya (b), aspir genomunda heterozigot durumda veya tercihen homozigot durumda mevcut olabilir. Homozigot düzenlemelerde aspir hücresinde, T- DNA eklemesine bagli olarak bitisik diziler olarak ya SEK ID NO: 11 ((a) durumunda) yoktur ya da SEK ID NO: 18 ((b) durumunda) yoktur. Baska bir yönde mevcut bulus, asagidakilerden bir veya daha fazlasini içeren bir aspir bitkisi hücresi saglar: (a) SEK ID NO:7 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit, (b) SEK ID NO:7'nin 296 ila 8640 nükleotitleri olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit, (c) SEK ID NO:33 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit, (d) SEK ID NO:34 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit, özdeslige sahip bir polinükleotit. Tercih edilen bir düzenlemede (a), (b) ve (e)'nin tamami geçerlidir. Bir düzenlemede (a), (b), (c) ve (e), örnegin GOR73226'da geçerlidir. Bir düzenlemede (a), (b), (d) ve (e), örnegin GOR73240'ta geçerlidir. Tercih edilen bir düzenlemede hücre, tek bir T-DNA eklemesine sahiptir. Bir düzenlemede polinükleotit(ler) ve/Veya T-DNA(lar), hücrenin genomuna, tercihen hücrenin nükleer genomuna stabil bir sekilde entegre edilir. Bir düzenlemede aspir bitkisi hücresi veya bulusun bir bitkisi veya bitki kismi, polinükleotit(ler) ve/Veya T-DNA(lar) açisindan homozigottur. Alternatif olarak aspir hücresi, bitki veya bitki kismi, örnegin Fl tohumu durumunda polinükleotit(ler) ve/Veya T-DNA(lar) açisindan heterozigottur. hücresini saglar. Bir düzenlemede oleik asit, bulusa ait bir aspir bitki hücresindeki toplam yag asitlerinin agirlikça en az %90'ini olusturur. Bir düzenlemede oleik asit, bulusa ait bir aspir bitki hücresindeki toplam yag asitlerinin agirlikça %90 ila %95'ini olusturur. Bir düzenlemede oleik asit, bulusa ait bir aspir bitki hücresindeki toplam yag asitlerinin agirlikça %91 ila %93'ünü olusturur. Bir düzenlemede oleik asit, bulusa ait bir aspir bitki hücresindeki toplam yag asitlerinin agirlikça %9l,5 ila %92,5'ini olusturur. Bir düzenlemede bulusa ait bir bitki hücresindeki lipidin agirlikça en az %95'i, triasilgliseroldür (TAG). Bir düzenlemede palmitik asit, bulusa ait bir aspir bitki hücresindeki toplam yag asitlerinin agirlikça %2,7'den azini olusturur. Bir düzenlemede palmitik asit, bulusa ait bir aspir bitki hücresindeki toplam yag asitlerinin agirlikça %2,5 ila %2,7'sini olusturur. Bir düzenlemede linoleik asit, bulusa ait bir aspir bitki hücresindeki toplam yag asitlerinin agirlikça %l,7'den azini olusturur. Bir düzenlemede linoleik asit, bulusa ait bir aspir bitki hücresindeki toplam yag asitlerinin agirlikça %l,2 ila %l,6'sini olusturur. Bir düzenlemede oc-linolenik asit, bulusa ait bir aspir bitki hücresindeki toplam yag asitlerinin agirlikça %0,2'den azini olusturur. Bir düzenlemede oc-linolenik asit (ALA), bulusa ait bir aspir bitki hücresindeki toplam yag asitlerinin agirlikça %0,l'den azini veya yaklasik %0,l'ini olusturur. Bir düzenlemede bulusun aspir bitkisi hücresindeki toplam yag asitleri oc-linolenik asit içermez ve/Veya oc-linolenik asit tespit edilemez. Bir düzenlemede bulusa ait bir aspir bitkisi hücresi, bir higromisin fosfotransferaz polipeptidini ve polipeptidi kodlayan bir polinükleotidi içerir, örnegin SEK ID NO:8'de saglanan bir amino asit dizisini içeren bir higromisin fosfotransferaz polipeptidi. Bir düzenlemede hücrenin bir aspir tohumu hücresi oldugu bulusa ait bir aspir bitki hücresi, polinükleotit(ler)i ve/Veya T-DNA(lar)i içermeyen, karsilik gelen aspir hücresine kiyasla azaltilmis CtFAD2-2 protein aktivitesine ve azaltilmis CtFATB-3 protein aktivitesine sahiptir. Aspir tohumu hücresinin bir düzenlemesinde CtFAD2-2 protein aktivitesinin seviyesi, tercihen polinükleotit(ler)i ve/veya T-DNA(lar)i içermeyen karsilik gelen aspir hücresine göre %90 ila %99 arasinda azalir, tercihen protein aktivitesinin seviyesi, polinükleotit(ler)i ve/veya T-DNA(lar)i içermeyen karsilik gelen aspir hücresine göre %50 ila %95 arasinda azalir, tercihen %60 ila %95 arasinda veya %75 ile %95 arasinda azalir. Bir düzenlemede bulusa ait bir aspir bitkisi hücresi, bir miktar CtFATB-3 protein aktivitesine ve bir miktar CtFATB-3 protein aktivitesine sahiptir. Tohum hücresi disinda bir hücre olan aspir hücresinin bir düzenlemesinde CtFADi ve/veya T-DNA(lar)i içermeyen karsilik gelen aspir hücresine göre önemli ölçüde promotörün tohuma özgü özelligi ile iliskilidir. Bir düzenlemede tohum hücresi disindaki aspir hücresi yine de Hph polipeptidini üretir. Bir düzenlemede bulusa ait bir aspir bitki hücresi, CtFAD2-l geninin 01 alelini veya CtFAD2-l geninin bir 01] alelini veya her iki aleli de içerir. Tercih edilen bir düzenlemede CtFAD2-1 geninin 01 aleli veya 01] aleli homozigot durumda bulunur. Tercih edilen bir düzenlemede alel, bir 01 alelidir. Bir düzenlemede bulusa ait bir aspir bitkisi hücresi, gelismekte olan bir tohumdaki veya olgun bir tohumdaki bir tohum hücresidir. Bir düzenlemede bulusa ait bir aspir bitkisi hücresi, tarlada yetisen bir aspir bitkisinin tohumunda veya hasat edilmis bir tohumda bulunur. Baska bir yönde mevcut bulus, asagidakileri içeren bir hücre içeren bir aspir tohumu saglar: (a) SEK ID NO: 13 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit ve SEK ID NO: 14 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit, (b) SEK ID NO:21 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit ve SEK ID NO:22 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit, (c) bir T-DNA molekülü, buradaki T-DNA molekülü, hücrenin bir kromozomunun bir bölgesine eklenir, buradaki bölge, SEK ID NO:11 olarak saglanan bir nükleotit dizisine sahiptir, (d) bir T-DNA molekülü, buradaki T-DNA molekülü, hücrenin bir kromozomunun bir bölgesine eklenir, buradaki bölge, SEK ID NO:18 olarak saglanan bir nükleotit dizisine sahiptir veya (e) bunlarin herhangi bir kombinasyonu. Baska bir yönde mevcut bulus, asagidakilerden bir veya daha fazlasini içeren bir hücre içeren bir aspir tohumu saglar: (a) SEK ID NO:7 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit, (b) SEK ID NO:7'nin 296 ila 8640 nükleotitleri olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit, (c) SEK ID NO:33 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit, (d) SEK ID NO:34 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit, özdeslige sahip bir polinükleotit. tohumunu saglar. Baska bir yönde mevcut bulus, bulusun bir hücresini içeren bir aspir tohumu Bulusun bir tohumu, bulusun bir hücresine iliskin olarak yukarida özetlenen özelliklerden herhangi birine sahip olabilir. Örnegin bir düzenlemede oleik asit, bulusa ait aspir bitkisi tohumundaki toplam yag asitlerinin agirlikça en az %90'ini, tercihen Bir baska yönde mevcut bulus, tohumlarin en az %95'inin bulusa ait tohumlar oldugu bir aspir tohumlari koleksiyonu saglar. Baska bir yönde mevcut bulus, bulusun bir hücresini içeren bir aspir bitkisi veya bunun bir kismini saglar. Bir düzenlemede bitki veya bunun bir kismi sunlari içerir: (a) SEK ID NO: 13 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit ve SEK ID NO: 14 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit, (b) SEK ID NO:21 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit ve SEK ID NO:22 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit, (c) bir T-DNA molekülü, buradaki T-DNA molekülü, hücrenin bir kromozomunun bir bölgesine eklenir, buradaki bölge, SEK ID NO:11 olarak saglanan bir nükleotit dizisine sahiptir, (d) bir T-DNA molekülü, buradaki T-DNA molekülü, hücrenin bir kromozomunun bir bölgesine eklenir, buradaki bölge, SEK ID NO:18 olarak saglanan bir nükleotit dizisine sahiptir veya (e) bunlarin herhangi bir kombinasyonu. Baska bir yönde mevcut bulus, asagidakilerden bir veya daha fazlasini içeren bir hücre içeren bir aspir bitkisi veya bunun bir kismini saglar: (a) SEK ID NO:7 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit, (b) SEK ID NO:7'nin 296 ila 8640 nükleotitleri olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit, (c) SEK ID NO:33 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit, (d) SEK ID NO:34 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit, özdeslige sahip bir polinükleotit. bunlarin bir kismini saglar. Baska bir yönde mevcut bulus, bulusun bir hücresini içeren bir aspir bitkisi veya bunun bir kismini saglar. Bulusun bir bitkisi, bulusun bir hücresine iliskin olarak yukarida özetlenen özelliklerden herhangi birine sahip olabilir. Örnegin bir düzenlemede oleik asit, bulusa ait aspir bitkisinin bir kismindaki, örnegin tohumundaki toplam yag asitlerinin agirlikça en az %90'ini, tercihen %90 ila %95'ini içerir. Bir düzenlemede bitki, bulusun hücrelerini içerir. Bir düzenlemede, bitki kismi tohumdur. Bir düzenlemede bitki, bulusa ait bir tohum içerir veya bunu üretebilir. Mevcut bulus sahipleri, bulusun bitkilerinin sürekli olarak yüksek seviyelerde oleik asit içeren tohumlar ürettigini bulmuslardir. Bir düzenlemede tohumdaki oleik asit seviyesi, dokuz nesil gibi birden fazla nesil boyunca tutarlidir. Bir düzenlemede tohumdaki oleik asit seviyesi, birden fazla nesil boyunca, örnegin dokuz nesil boyunca arasinda veya %9l,5 ila %92,5 arasindadir. Bir düzenlemede toplam yag asidi içeriginin agirlikça oleik asit seviyesi, birden fazla nesil boyunca, örnegin dokuz nesil boyunca %5'ten az, %4'ten az, %2'den az veya %l'den az degisir. Mevcut bulus sahipleri ayrica bulusa ait bitkilerin, ayni kosullar altinda yetistirilen bulusun polinükleotit(ler)i ve T-DNA(lar)ini içermeyen karsilik gelen aspir bitkisi tohumunun yag içerigi ile karsilastirildiginda önemli ölçüde azalmayan bir yag içerigine sahip tohum veya tercihen transgenik olmayan tohuma göre yag içerigi arttirilan tohum ürettigini de bulmuslardir. Bir düzenlemede yag içerigi, transgenik olmayan tohuma göre mutlak bazda %1-4 oraninda, örnegin %3l'den en az %32 veya boyunca, örnegin dokuz nesil boyunca tutarlidir. Bir düzenlemede yag içerigi agirlikça arasindadir. Bir düzenlemede yag içerigi, birden fazla nesil boyunca, örnegin dokuz nesil boyunca %5'ten az, %4'ten az, %2'den az veya %l'den az degisir. Bir düzenlemede bulusa ait bir aspir bitkisi veya bunun bir kismi, bulusa ait tohumun yetistirilmesi yoluyla üretilir. Bir düzenlemede polinükleotit(ler) ve/veya T-DNA(lar), en az dokuz nesil boyunca bitkinin genomuna veya bunun bir kismina (bir tohum gibi) stabil bir sekilde entegre edilir. Bir düzenlemede asagidaki özelliklerin bir veya daha fazlasi veya tümü, ayni kosullar altinda yetistirilen polinükleotit(ler)i ve/veya T-DNA(lari) içermeyen karsilik gelen bir bitki ile aynidir: fide canliligi, bitki boyu, çiçeklenmeye kadar geçen süre, hasat yatmasi, tohum ham protein içerigi, tohum ham yag içerigi, tohum kül içerigi ve tohum karbonhidrat içerigi. Bir düzenlemede aspir bitkisi veya bunun bir kismi, polinükleotit(ler) ve/veya T- DNA(lar) disinda bir transgen içerir. Ayrica bulusun bir bitkisinin poleni de saglanmaktadir. Ayrica bulusun bir bitkisinin bir yumurtasi da saglanmaktadir. Ayni zamanda yenilenebilir hücrelerin bir doku kültürü de saglanmaktadir; buradaki hücreler, bulusun hücreleridir. Bir düzenlemede doku; yapraklar, polen, embriyolar, kökler, kök uçlari, kapsüller, çiçekler, yumurtaliklar ve gövdelerden olusan gruptan seçilir. Baska bir yönde mevcut bulus, bir aspir bitkisi veya ondan tohum üretmek için bir yöntem saglar; yöntem sunlari içerir: (a) yeni aspir tohumu elde etmek için bulusun birinci aspir bitkisinin ikinci bir aspir bitkisi ile çaprazlanmasi; ve (b) yeni bir aspir bitkisi üretmek için bitki büyüme kosullari altinda yeni aspir tohumunun yetistirilmesi ve istege bagli olarak (c) yeni nesil aspir bitkisinden tohumlarin hasat edilmesi. Bir düzenlemede ikinci aspir bitkisi, birinci aspir bitkisinde eksik olan, tarimsal açidan arzu edilen en az bir özellige sahiptir. Uygun tarimsal özelliklerin örnekleri arasinda, bunlarla sinirli olmamak üzere, herbisit direnci, böcek direnci, bakteriyel hastalik direnci, mantar hastaligi direnci, viral hastalik direnci, disi kisirligi veya erkek kisirligi yer alir. Bir düzenlemede tarimsal özellik, bir transgen tarafindan verilir. Bir düzenlemede yöntem ayrica (a) ve (b) adimlarinin bir veya daha fazla kez tekrarlanmasini içerir. Bir düzenlemede hasat edilen tohum, birinci nesil (Fl) hibrit aspir tohumudur. Bir düzenlemede ikinci aspir bitkisi, bulusun bir aspir bitkisidir. Bir düzenlemede ikinci aspir bitkisi, bulusun tohumunu üretmez. Bir düzenlemede yöntem ayrica asagidakileri içerir: (d) (b) adimindaki bir veya daha fazla bitki neslinin, ikinci aspir bitkisi gibi ayni genotipteki bitkilerle, ikinci aspir bitkisi genotipinin en az %75'i, en az %80'i veya en az %90'ina sahip bir bitki üretmek için yeterli sayida geri melezlenmesi. Ayrica saglanan bulusun bir yöntemiyle üretilen bir aspir bitkisi veya bunun bir Bir baska yönde mevcut bulus, bir aspir bitkisinin tanimlanmasina yönelik bir yöntem saglar; yöntem, bitkiden elde edilen DNA'nin, burada tanimlanan bir veya daha fazla polinükleotit(ler) ve/veya T-DNA molekül(ler)i açisindan analiz edilmesini içerir. Ilgili bir yönde mevcut bulus; bir bitkinin, bitki kisminin, tercihen bir tohumun; bu bitkiden, bitki kismindan veya tohumdan elde edilen DNA'nin burada tanimlanan bir veya daha fazla polinükleotit(ler) ve/Veya T-DNA molekül(ler)i açisindan analiz edilmesi yoluyla bulusun bir bitkisi, bitki kismi veya tohumu olup olmadiginin belirlenmesine yönelik bir yöntemi içerir. Bir düzenlemede aspir tohumlarinin bir koleksiyonu, bu koleksiyonda bulusa ait bir tohumun mevcut olup olmadigini belirlemek için test edilir. Bir düzenlemede polinükleotit(ler) ve/Veya T-DNA molekül(ler)i, kisitlama fragmani uzunlugu polimorfizmi analizi, amplifikasyon fragmani uzunlugu polimorfizmi analizi, nükleik asit dizilimi ve/Veya nükleik asit amplifikasyonundan olusan gruptan seçilen bir teknik kullanilarak tespit edilir. Bir düzenlemede yöntem asagidakileri içerir: i) aspir bitkisinden veya bunun tohum, hücre gibi bir kismindan DNA örnegi alinmasi, ii) örnegin, burada tanimlanan bir polinükleotidi ve/Veya T-DNA'yi veya bunun bir kismini amplifiye edebilen bir çift primer ve nükleik asit amplifikasyonu için reaktiflerle karistirilmasi, iii) bir amplifikasyon reaksiyonunun gerçeklestirilmesi ve iV) bir amplifikasyon ürünü için adim iii)'teki ürünün analiz edilmesi. Bir düzenlemede DNA, bulusun bir tohumunu içerebilen veya içermeyen bir tohum koleksiyonundandir. Bir düzenlemede amplifikasyon ürünü, polinükleotit ve/Veya T-DNA'nin bir entegrasyon bölgesini kapsar. Tercih edilen bir düzenlemede amplifikasyon ürünü, SEK ID NO: 14, 15, 21 veya 22'den herhangi birini içerir. Bir düzenlemede TTGGATACCGAGGGGAATTTATGGAAC (SEK ID NO: ) ve CAATCACAATAAGTCGTTGC (SEK ID NO: 36) primer çifti veya bunlardan birinin veya her ikisinin, örnegin daha kisa veya daha uzun olan ve DNA'nin ayni bölgesini hibridize eden bir varyanti, SEK ID NO: 13 olarak saglanan bir nükleotit dizisine sahip bir polinükleotidi ve 562 bç'lik bir amplikonun üretildigi GOR73226 soyunda oldugu gibi SEK ID NO: 14 olarak saglanan bir nükleotit dizisine sahip bir polinükleotidi içeren bir polinükleotidi saptamak için kullanilir. Bir düzenlemede TTGGATACCGAGGGGAATTTATGGAAC (SEK ID NO: 37) ve TGATAACGATCTTGCGCAAC (SEK ID NO: 38) primer çifti veya bunlardan birinin veya her ikisinin, örnegin daha kisa veya daha uzun olan ve DNA'nin ayni bölgesini hibridize eden bir varyanti, SEK ID NO: 21 olarak saglanan bir nükleotit dizisine sahip bir polinükleotidi ve 199 bç'lik bir amplikonun üretildigi GOR73240 soyunda oldugu gibi SEK ID NO: 22 olarak saglanan bir nükleotit dizisine sahip bir polinükleotidi içeren bir polinükleotidi saptamak için kullanilir. Bir düzenlemede AAAAGCCTGAACTCACCGC (SEK ID NO: 39) ve TCGTCCATCACAGTTTGCC (SEK ID NO: 40) primer çifti veya bunlardan birinin veya her ikisinin, örnegin daha kisa veya daha uzun olan ve DNA'nin ayni bölgesini hibridize eden bir varyanti, 689 bç'lik bir amplikonun üretildigi GOR73226 ve GOR73240 soylarindaki gibi Hph polipeptidini kodlayan bir geni saptamak için kullanilir. Bir düzenlemede yöntem asagidakileri içerir:; i) aspir bitkisinden veya bunun tohum, hücre gibi bir kismindan DNA örnegi alinmasi, ii) örnegin burada tanimlanan bir polinükleotit ve/Veya T-DNA'ya veya bunun bir kismina hibridize olabilen bir prob ve polinükleotit hibritlesmesi için reaktiIler ile karistirilmasi, iii) bir hibritlesme reaksiyonunun gerçeklestirilmesi ve iV) prob için adim iii)'teki ürünün analiz edilmesi. Bir düzenlemede DNA, bulusun bir tohumunu içerebilen veya içermeyen bir tohum koleksiyonundandir. Bir düzenlemede prob, polinükleotit ve/Veya T-DNA'nin entegrasyon bölgesini kapsayan bir bölgeye hibritlenir, ancak polinükleotit ve/Veya T-DNA, DNA'da mevcut degilse tespit edilebilir bir sinyal üretmez. Bir baska yönde mevcut bulus, aspir tohumu üretmeye yönelik bir yöntem a) bulusa ait bir bitkinin tercihen en az 1000 bitkiden olusan bir popülasyonun parçasi olarak bir tarlada yetistirilmesi ve b) tohumun toplanmasi. Bir düzenlemede yetistirme açik alanda yapilir. Bir baska yönde mevcut bulus, bulusun tohumunu elde etmeyi ve aspir yagi elde etmek için tohumun islenmesini içeren bir aspir yagi üretim yöntemi saglar. Bir baska yönde mevcut bulus; bulusa ait hücre, bulusa ait tohum, bulusa ait aspir bitkisi veya bulusun yönteminin bir veya daha fazlasindan elde edilen veya bunlar tarafindan elde edilebilen yagi saglar. Bir baska yönde mevcut bulus; bulusa ait hücre, bulusa ait tohum, bulusa ait aspir bitkisi, bulusa ait yag veya bulusun bir yöntemi ile elde edilen yagdan bir veya daha fazlasini ve bir veya daha fazla kabul edilebilir tasiyiciyi içeren bir bilesim, tercihen bir gida veya yem bilesimi saglar. Bir baska yönde mevcut bulus, endüstriyel bir ürünün üretimi için bulusa ait hücrenin, bulusa ait tohumun, bulusa ait aspir bitkisinin veya bulusun yagi, bulusun bilesimi, veya bulusun bir yöntemiyle üretilen ürüün bir veya daha fazlasinin kullanimini saglar. Bir baska yönde mevcut bulus, bir yem maddesi/besin üretmeye yönelik bir yöntem saglar; yöntem, bulusa ait hücrenin, bulusa ait tohumun, bulusa ait aspir bitkisinin, bulusun yagi, bulusun bilesimi veya bulusun bir yöntemiyle üretilen yagdan bir veya daha fazlasinin en az bir baska gida bileseniyle karistirilmasini içerir. Ilgili bir yönde mevcut bulus, bir yem maddesi/besin üretmeye yönelik bir yöntem saglar; yöntem isitmayi, örnegin gida ürününü bulusun yaginin veya bulusun bilesiminin varliginda veya bulusun bir yöntemiyle üretilen yagda kizaitmayi içerir. Bir baska yönde mevcut bulus; bulusa ait hücrenin, bulusa ait tohumun, bulusa ait aspir bitkisinin, bulusa ait yagin, bulusa ait bilesimin veya bulusun bir yöntemiyle üretilen yagin bir veya daha fazlasinin reaksiyona sokulmasini içerecek sekilde bir yem maddesi/besin, kozmetik veya kimyasal madde saglar. Bir baska yönde mevcut bulus, bulusun aspir tohumundan ekstrakte edilen tohum küspesini saglar. Tohum küspesi, örnegin eger bulusa ait tohum, tohumdan yagin büyük bir kismini serbest birakmak üzere ezilirse bulusun artik yagini içerebilir, veya tohum küspesi, yagi çikarmak için ayrica bir çözücü ile isleme tabi tutulmus olabilir ve dolayisiyla tohum yagindan yoksun olabilir. ancak yine de tohumdaki polinükleotit(ler)i ve/veya T-DNA'lari içeren DNA'yi içerir. Baska bir yönde mevcut bulus, endüstriyel bir ürünün üretilmesine yönelik bir islem saglar; islem asagidaki adimlari içerir: i) bulusa ait hücrenin, bulusa ait tohumun, bulusa ait aspir bitkisinin, bulusa ait yagin, bulusa ait bilesimin veya bulus konusu yöntemle üretilen yagin bir veya birkaçinin elde edilmesi, ii) istege bagli olarak i) adiminaki bulusa ait hücrenin, bulusa ait tohumun, bulusa ait aspir bitkisinin, bulusa ait yagin veya bulusa ait bilesimin bir veya daha fazlasinin fiziksel olarak islenmesi, iii) bulusa ait hücrenin, bulusa ait tohumun, bulusa ait aspir bitkisinin, bulusa ait yagin veya bulusa ait bilesimin veya adim ii)'nin fiziksel olarak islenmis ürününün en azindan bir kisminin lipide isi, kimyasal veya enzimatik araçlar veya bunlarin herhangi bir kombinasyonunun uygulanmasi yoluyla endüstriyel ürüne dönüstürülmesi ve iv) endüstriyel ürünün geri kazanilmasi, böylece endüstriyel ürünün elde edilmesi. Baska bir yönde mevcut bulus, biyoyakit üretmeye yönelik bir yöntem saglar; yöntem sunlari içerir: i) bulusa ait hücrenin, bulusa ait tohumun, bulusa ait aspir bitkisinin, bulusa ait yagin, bulusa ait bilesimin veya bulusa ait bir yöntemle üretilen yagin bir veya daha fazlasinin, alkil esterleri üretmek için istege bagli olarak bir katalizör varliginda bir alkol ile reaksiyona sokulmasi, ve ii) istege bagli olarak alkil esterlerin petrol bazli yakitla harmanlanmasi. Bir düzenlemede alkil esterler, metil esterlerdir. Bir baska yönde mevcut bulus, burada tanimlandigi gibi bir polinükleotit ve/veya T-DNA'nin saptanmasina yönelik primerler ve/veya problar içeren bir kit saglar. Örnegin kit, Tablo 1'de tanimlanan iki veya daha fazla primeri içerebilir. Kit ayrica, örnegin bir DNA amplifikasyon reaksiyonunun gerçeklestirilmesi ve/veya prob hibritlesmesi ve tespiti için kullanim talimatlarini ve/veya reaktifleri de içerebilir. Buradaki herhangi bir düzenleme, aksi özellikle belirtilmedigi sürece gerekli degisiklikler yapildiktan sonra herhangi bir baska düzenleme için de geçerli olarak kabul edilecektir. Mevcut bulusun kapsami, burada açiklanan ve yalnizca örnekleme amacina yönelik olan spesifik düzenlemelerle sinirli degildir. Islevsel olarak esdeger ürünler, bilesimler ve yöntemler, burada açiklandigi gibi açikça bulusun kapsami dahilindedir. Bu spesifikasyon boyunca, aksi özellikle belirtilmedikçe veya baglam aksini gerektirmedikçe, tek bir adima, maddenin bilesimine, adimlar grubuna veya madde bilesimleri grubuna yapilan atif, bu adimlar, madde bilesimleri, adim gruplari veya madde bilesimleri gruplarindan birini ve birden fazlasini (yani bir veya daha fazlasini) kapsayacak sekilde ele alinacaktir. Bulus bundan sonra asagidaki sinirlayici olmayan Örnekler yoluyla ve ekteki sekillere referansla açiklanacaktir. EKTEKI SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI Sekil 1: Transformasyon vektörü pCW732'nin T-DNA bölgesinin sematik taslagi. Özellikler sunlari içerir: RB = Sag Sinir; LB = Sol Sinir; Keten linini = keten [inin promotörü (2033bç); CtFAT B = Karthamus tinctori'us L palmitoil-ACP tioesteraz dizisi PDK intron dizisi (768bç); int2 = Katalaz 1 intron dizisi (196bç); ocs3' = oktopin sentaz transkripsiyon sonlandirici/poliA bölgesi (708bç); nos3' = nopalin sentaz transkripsiyon higromisin fosfotransferaz geni (1216bç). Sekil 3: Aspir genomuna eklendiginde pCW732'den alinan T-DNA'nin sematik genetik haritasi; Southern blot hibritlesme analizinde Pacben ve Kpn kisitlama bölgelerinin ve fragmanlarinin konumlarini gösterir. Yandaki genomik DNA'da sagdaki Pacben ve Kpn I bölgelerinin konumu, T-DNA ekleme bölgesine baglidir ve her bagimsiz transgenik soy için benzersizdir. Probun konumu gösterilir. Ölçekli olarak çizilmemistir. Sekil 4: pCW732 vektöründen T-DNA ile transforme edilmis aspirin Southern blot hibritlesme analizi. Bagimsiz transgenik aspir soylarindan elde edilen DNA'lar, Kpnben veya Pac,tan biri ile sindirildi ve higromisin fosfotransferaz geninin protein kodlama bölgesinden radyo-etiketli bir DNA fragmani ile problandi. Soldan saga dogru siralanan seritlerde bulunanlar: Kpnl enzimi ile sindirilen DNA, transgenik olmayan bir negatif kontrol olarak S-; pCW; pCW. DNA örneklerinin sirasi Pac sindiriminde, seritlerde saga dogru ayni sekilde tekrarlandi. Fragman boyutlari in siliko sindirimden tahmin edildi. Sekil 5: GOR73226'nin T-DNA eklemesinin dizi karakterizasyonu. PCR bazli genom yürütme analizinden (E26_RB Baglantisi ve E26_LB Baglantisi) tanimlanan sirali amplikonlar, pCW732 vektörünün (pCW732_LB ve pCW732_RB) ve taslak aspir genomik dizi veritabaninin (Bower16_13 860-7_8) dizilerine hizalandi. Sekil 6: GOR73240'nin T-DNA eklemesinin dizi karakterizasyonu. PCR bazli genom yürütme analizinden (E40_RB Baglantisi ve E40_LB Baglantisi) tanimlanan sirali amplikonlar, pCW732 vektörünün (pCW732_LB ve pCW732_RB) ve taslak aspir genomik dizi veritabaninin (gX_s317 Scaff097804) dizilerine hizalandi. Sekil 7: Transgenik olay GOR73226,yi üretmek için pCW732'den aspire T-DNA'nin sematik yapisi. Sematik harita, ekleme bölgesinin 1000 bç yukari ve asagi akisini, bir silmenin konumunu ve eklemeden sonra kalan T-DNA dizilerinin elemanlarinin konumunu gösterir. E26TF ve E26GR, GOR73226'ya özgü PCR için hazirlama (priming) bölgeleridir. Sematik harita, ekleme bölgesinin 1000 bç yukari ve 960 asagi akisini, duplikasyonlari, bir silmenin konumunu ve eklemeden sonra kalan T-DNA dizilerinin elemanlarinin konumunu gösterir. E40GF ve E40GR, genom yürütme analizi için hazirlama (priming) bölgeleridir. 35 bç'lik duplikasyonun oldugu yerde 34 baz silinmesinin de hazirlama (priming) bölgeleridir. Sekil 9: GOR40 ile bir linoleik yetistirme soyu arasindaki çaprazlamada linoleik ve oleik asit arasindaki negatif korelasyon, bkz. Örnek 4. Linoleik asit yüzdesi ile oleik asit arasinda negatif korelasyon vardir. regülasyonu. Her olay ve transgenik olmayan aspir kontrol bitkileri için ortalama üç transgenik olmayan aspir bitkileriyle karsilastirildiginda CtFAD2.2 Ve CtFA T 3-.? genleri için önemli ölçüde azalmis (P<0,05) transkript bollugu seviyelerine sahiptir. Ayni harfe sahip ortalama bagil mRNA ifade seviyeleri önemli ölçüde farkli degildir canlilik puani. Her bölge için parsellere, ortaya çikma ve yerlesmeyi gösteren bir canlilik puani verilmistir; burada 0 puani, hiç canlilik olmadigini ve 9 puani, en canli parseli temsil eder. Çubuklar ortalama canlilik puani ± standart hatayi temsil eder. bitkinin yüksekligi. Her bölge için, her bir parselde 10 bitkinin boyu ölçülmüs ve ortalamasi alinmistir. Çubuklar her bölgede ortalama yükseklik ± standart hatayi temsil puanlari. Her bölge için, her bir parseldeki 10 yaprakta hastalik görülme orani degerlendirildi; burada 0 puani, yüksek hastalik görülme sikligini temsil eder ve 9 puani, en saglikli yapraklari temsil eder. Çubuklar her bölgede ortalama hastalik puani Her bölge için, her bir parseldeki 10 yaprakta böcek hasari görülme orani degerlendirildi; burada 0 puani, yüksek düzeyde böcek hasari durumunu temsil ederken, 9 puani da en az zarar gören yapraklari temsil eder. Çubuklar her bölgede ortalama hastalik puani ± standart hatayi temsil eder. verim. Her bölge için, her bir parselin verimi degerlendirildi ve T/ha'ya dönüstürüldü. Çubuklar her bölgede ortalama verim ± standart hatayi temsil eder. DIZI LISTESININ ANAHTARI SEK ID NO:1 - Aspir FAD2-2 polipeptidinin amino asit dizisi (CtFAD2-2, Erisim No. KC257448). SEK ID NO:2 - Aspir FAD kodlayan mRNA'ya karsilik gelen cDNA'nin nükleotit dizisi, PoliA kuyrugu içermez. Translasyon baslangiç nükleotitlerindedir, protein kodlama bölgesi 81-1229 nükleotitlerine karsilik gelir. SEK ID NO:3 - Aspir FATB-3 polipeptidinin amino asit dizisi (CtFATB-3, Erisim No. SEK ID NO:4 - Aspir FATB-3 genini (CtFATB-3) kodlayan mRNA'ya karsilik gelen cDNA'nin nükleotit dizisi, PoliA kuyrugu içermez. Translasyon baslangiç kodonu 237- protein kodlama bölgesi 237-1319 nükleotitlerine karsilik gelir; FATB-3 hpRNA'da 373-784 nükleotiteri kullanilmistir. SEK ID NO:5 - pCW732 genetik yapisinda kullanilan aspir FAD2-2 geni için cDNA bölgesinin nükleotit dizisi; SEK ID NO:2'nin 426-1181 nükleotitlerine karsilik gelir. SEK ID NO:6 - pCW732 genetik yapisinda kullanilan aspir FATB-3 geni için cDNA bölgesinin nükleotit dizisi; SEK ID NO:4'nin 485-784 nükleotitlerine karsilik gelir. SEK ID NO:7 - T-DNA'yi kapsayan pCW732 genetik yapisinin bölgesinin nükleotit dizisi. 6-168 Nükleotitleri, Sag sinir bölgesi, T-DNA Sag siniri nükleotit 128'de baslar; oryantasyonunda CtFATB-3 bölgesi; 2816-3573 nükleotitleri, sens oryantasyonunda trinerva PDK geni; 4445-4634 nükleotitleri, Cat-1 geninden ters oryantasyonlu intron; nükleotitleri, ocs3' transkripsiyon sonlandirici/polyA bölgesi; 6673-7124 nükleotitleri, intronu içeren Hph kodlama bölgesi; 8366-8640 nükleotitleri, nos3' transkripsiyon sonlandirici/poliadenilasyon bölgesi; 8817-9266 nükleotitleri, T-DNA sol sinir bölgesi, Sol Sinir nükleotit 9222'de biter. SEK ID NO:8 - Higromisin fosfotransferaz polipeptidinin (Hph) amino asit dizisi. SEK ID NO:9 - GOR73226'ya (pCW732_RB) eklenen Sag sinir dizisinin nükleotit dizisi (bakiniz Sekil 5). SEK ID NO: 10 - GOR73226 Sag sinir baglanti dizisinin (E26_RB_junction) nükleotit dizisi; 1-81 nükleotitleri, aspirin komsu genomik DNA'sina karsilik gelir, 82-122 nükleotitleri ise T-DNA'nin Sag sinir dizisine karsilik gelir (bkz. Sekil 5). SEK ID NO:11 - GOR73226'nin T-DNA'sinin eklendigi bir Aspir iskele dizisinin islemi sirasinda 77-231 nükleotitleri silindi (bkz. Sekil 5). SEK ID NO: 12 - GOR73226 Sol sinir baglanti dizisinin (E26_LB_baglantisi) nükleotit nükleotitleri ise aspirin komsu genomik DNA'sina karsilik gelir (bkz. Sekil 5). SEK ID NO:13 - GOR73226'ya (E26_LB) eklenen Sol sinir dizisinin nükleotit dizisi (bakiniz Sekil 5). SEK ID NO: 14 - GOR73226 Sag sinir baglanti dizisinin bir kisminin nükleotit dizisi; 1-20 nükleotitleri, komsu aspir genomik DNA'sina karsilik gelir, 21-40 nükleotitleri ise Sag sinirda eklenen T-DNA dizisine karsilik gelir. SEK ID NO: 15 - GOR73226 Sol sinir baglanti dizisinin bir kisminin nükleotit dizisi; 1-20 nükleotitleri, Sol sinirda eklenen T-DNA dizisine karsilik gelir, 21-40 nükleotitleri, komsu aspir genomik DNA'sina karsilik gelir. SEK ID NO:16 - GOR73240'a eklenen Sag sinir dizisinin nükleotit dizisi (Sekil 6'da SEK ID NO: 17 - GOR73240 Sag sinir baglanti dizisinin (E40_RB_junction) nükleotit ise GOR73240,a eklenen Sag sinir dizisine karsilik gelir (bkz. Sekil 6). SEK ID NO:18 - GOR73240'in T-DNA'sinin eklendigi bir Aspir iskele dizisinin nükleotitleri kopyalanmis ve 171-204 nükleotitleri Sol sinir baglantisinda silinmistir (bkz. Sekil 6). SEK ID NO: 19 - GOR73240 Sol sinir baglanti dizisinin (E40_LB_baglantisi) nükleotit dizisi; 1-44 nükleotitleri Sol sinir dizisine karsilik gelir, 45-79 nükleotitleri transformasyon islemi sirasinda kopyalanan 35 bç'lik bir aspir genomik dizisine karsilik gelir, 80-175 nükleotitleri aspir genomik DNA'sina karsilik gelir. Transformasyon islemi sirasinda 34 bç'lik bir genomik dizi silinmistir (bkz. Sekil 6). dizisi (bkz. Sekil 6). SEK ID NO: 21 - GOR73240 Sag sinir baglanti dizisinin bir kisminin nükleotit dizisi; 1-20 nükleotitleri, komsu aspir genomik DNA'sina karsilik gelir, 21-40 nükleotitleri ise Sag sinirda eklenen T-DNA dizisine karsilik gelir. SEK ID NO: 22 - GOR73240 Sol sinir baglanti dizisinin bir kisminin nükleotit dizisi; 1-20 nükleotitleri, Sol sinirda eklenen T-DNA dizisine karsilik gelir, 21-40 nükleotitleri, komsu aspir genomik DNA'sina karsilik gelir. SEK ID NO: 23 ila 32 ve 35 ila 40 - Oligonükleotit primerleri. SEK ID NO:33 - Komsu aspir genomik dizileri de dahil olmak üzere T-DNA'nin GOR73226'ya eklendigi nükleotit dizisi. 1-996 Nükleotitleri, T-DNA'nin yukari oryantasyonunda CtFATB-3 bölgesi; 3690-4445 nükleotitleri, sens oryantasyonunda trinerva PDK geni; 5319-5514 nükleotitleri, Cat-1 geninden ters oryantasyonlu intron; nükleotitleri, ocs3' transkripsiyon sonlandirici/polyA bölgesi; 7645-7987 nükleotitleri, intronu içeren Hph kodlama bölgesi; 9239-9515 nükleotitleri, nos3' transkripsiyon sonlandirici/poliadenilasyon bölgesi; 9691-9851 nükleotitleri, T-DNA sol sinir bölgesi; asagi akisindaki aspir genomik dizisi. SEK ID NO:34 - Komsu aspir genomik dizileri de dahil olmak üzere T-DNA'nin oryantasyonunda CtFATB-3 bölgesi; 3746-4501 nükleotitleri, sens oryantasyonunda trinerva PDK geni; 5375-5570 nükleotitleri, Cat-1 geninden ters oryantasyonlu intron; nükleotitleri, ocs3' transkripsiyon sonlandirici/polyA bölgesi; 7701-8043 nükleotitleri, intronu içeren Hph kodlama bölgesi; 9295-9571 nükleotitleri, nos3' transkripsiyon sonlandirici/poliadenilasyon bölgesi; 9750-9762 nükleotitleri, T-DNA sol sinir bölgesi; 9763-10726 nükleotitleri, T-DNA'nin asagi akisindaki aspir genomik dizisi. BULUSUN AYRINTILI AÇIKLAMASI Genel Teknikler ve Tanimlar Aksi özel olarak tanimlanmadikça, burada kullanilan tüm teknik ve bilimsel terimler, teknikte (örnegin hücre kültürü, moleküler genetik, bitki islahi, yag asidi kimyasi, gen susturma, protein kimyasi ve biyokimya) siradan uzmanliga sahip kisilerce yaygin olarak bilinen anlama karsilik gelecektir. Aksi belirtilmedigi sürece mevcut bulusta kullanilan rekombinant protein, hücre kültürü ve immünolojik teknikler, teknikte uzman kisilerce iyi bilinen standart prosedürlerdir. Bu tür teknikler literatür boyunca 1. Perbal, Moleküler Klonlama Için Pratik Bir Kilavuz, John Wiley and Sons (1984), J. Sambrook ve digerleri, Molecular Cloning: Bir Laboratuar El Kitabi, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989), T.A. Brown (editör), Essential Molecular Biology: Pratik Bir Yaklasim, Cilt 1 ve 2, IRL Press (1991), D.M. Glover ve B.D. Hames (editörler), DNA Klonlama: Pratik Bir Yaklasim, Cilt , Moleküler Biyoloj ide Güncel Protokoller, Greene Pub. Associates ve Wiley- Lane (editörler) Antikorlar: Bir Laboratuar El Kitabi, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988) ve J .E. Coligan ve dig. (editörler) Immünoloj ide Güncel Protokoller, John Wiley açiklanmistir. gelecek sekilde anlasilacaktir ve her iki anlami veya her iki anlamdan birini kapsadigi kabul edilecektir. Burada kullanildigi sekliyle yaklasik terimi, aksi belirtilmedigi sürece belirlenen degerin +/- %10, daha fazla tercihen +/- %5, daha fazla tercihen +/- %4, daha fazla tercihen +/- %3, daha fazla tercihen +/- %2, daha fazla tercihen +/- %1,5, daha fazla tercihen +/- %1'i, daha da tercihen +/- %0,5'i anlamina gelir. Tarifname boyunca "içermek" sözcügü veya "içerir" veya "içeren" gibi varyasyonlar, belirtilen bir ögenin, tamsayinin veya adimin dahil edilmesini ifade etmekle birlikte diger bir ögenin, tamsayinin veya adimin veya öge, tamsayi veya adim grubunun hariç tutuldugu anlamina gelmez. Burada kullanildigi sekliyle "aspir" terimi Karthamus tinctori'us türünün üyelerini ifade etmektedir. Bir "soy", ayni tanimi paylasan bireyler arasinda çok az genel çesitlilik gösteren bir bitki grubudur. "Soy" ayni zamanda en az bir özellik için bireyler arasinda çok az genetik çesitlilik gösteren veya hiç genetik çesitlilik göstermeyen, büyük ölçüde ayni genetik materyali tasiyan bitkilerin homojen bir toplulugunu ifade eder. "Çesit" veya terim, ticari üretime uygun bir soyu ifade eder. Örnegin "ebeveyn soylarindan genetik olarak türetilmis" ifadesinde kullanildigi sekliyle "genetik olarak türetilmis", söz konusu özelligin tamamen veya kismen söz konusu bitkinin genetik yapisinin bir yönü tarafindan belirlendigi anlamina gelir. Burada kullanildigi sekliyle bir "seçkin soy", ayni dönüstürücü DNA ile transformasyon yoluyla veya bu tür bir transformasyonla elde edilen bitkilerle geri melezleme yoluyla elde edilen bir grup soydan; transgen yapisinin/yapilarinin ekspresyonuna ve stabilitesine, kendisini içeren bitkinin optimal agronomik özellikleriyle uyumluluguna ve istenen fenotipik özelligin gerçeklestirilmesine dayali olarak seçilen bir soydur. Dolayisiyla seçkin olay seçimi kriterleri asagidakilerden en az biri ve avantajli olarak hepsidir: (a) transgenin mevcudiyetinin, bitkinin tarimsal performans veya ticari deger ile ilgili olanlar gibi arzu edilen diger özelliklerinden gereginden fazla taviz vermemesi; (b) olayin, stabil bir sekilde kalitsal olan ve kimlik kontrolü için uygun teshis araçlarinin gelistirilebilecegi, iyi tanimlanmis bir moleküler konfigürasyonla karakterize edilmesi; (c) transgen kasetindeki ilgili genlerin, olayin hem heterozigot (veya hemizigot) hem de homozigot durumunda, olayi tasiyan bitkilerin normal tarimsal kullanimda maruz kalmasi muhtemel çesitli çevre kosullarinda ticari olarak kabul edilebilir bir seviyede dogru, uygun ve stabil bir mekansal ve zamansal fenotipik ifade sergilemesi. Yabanci DNA ayrica bitki genomunda arzu edilen ticari genetik geçmislere girise izin veren bir pozisyonla da iliskilendirilebilir. Burada kullanildigi sekliyle, GOR73226, SEK ID NO:13 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit, SEK ID NO:14 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit ve bir T-DNA molekülü içeren bir aspir bitkisi soyunu belirtir; T-DNA molekülü, bitkinin bir kromozomunun bir bölgesine eklenir, buradaki bölge, SEK ID NO:11 olarak saglanan bir nükleotit dizisine sahiptir. Bu soya, Erisim No'lu Budapeste Antlasmasi araciligiyla ulasilabilir. Basvuru Sahibi (Commonwealth Bilimsel ve Endüstriyel Arastirma Organizasyonu, Clunies Ross St, Acton ACT 2601, Avustralya) ve ticari ortaklari (Go Resources, 15 Sutherland Street, Brunswick VIC 3056, Avustralya), bu soyun tohumlarinin böyle bir emanetçi araciligiyla saglanamadiginda Budapeste Antlasmasi uyarinca ayni kosullar altinda bulunan bir emanetçide mevcut oldugunu garanti eder. Burada kullanildigi sekliyle, GOR73240, SEK ID NO:21 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit, SEK ID NO:22 olarak saglanan bir nükleotit dizisini içeren bir polinükleotit ve bir T-DNA molekülü içeren bir aspir bitkisi soyunu belirtir; T-DNA molekülü, bitkinin bir kromozomunun bir bölgesine eklenir, buradaki bölge, SEK ID NO:18 olarak saglanan bir nükleotit dizisine sahiptir. Bu soya, Erisim No'lu Budapeste Antlasmasi araciligiyla ulasilabilir. Basvuru Sahibi (Commonwealth Bilimsel ve Endüstriyel Arastirma Organizasyonu, Clunies Ross St, Acton ACT 2601, Avustralya) ve ticari ortaklari (Go Resources, 15 Sutherland Street, Brunswick VIC 3056, Avustralya), bu soyun tohumlarinin böyle bir emanetçi araciligiyla saglanamadiginda Budapeste Antlasmasi uyarinca ayni kosullar altinda bulunan bir emanetçide mevcut oldugunu garanti eder. terimlerdir ve örtüsen anlamlara sahiptir. "Tahil", hasat edilmis tahil veya hâlâ bir bitki üzerinde bulunan ancak hasat için hazir olan tahil gibi olgun tahili ifade eder, ancak baglama göre nem emme veya çimlenme sonrasindaki tahili da ifade edebilir. Olgun tahil genellikle agirlikça yaklasik %10-12'den daha az, örnegin %6-10'luk bir nem içerigine sahiptir. "Tohum", "gelisen tohumun" yani sira olgun tahil olan "tahili" da içerir, ancak nem emme veya çimlenmeden sonra tahili kapsamaz. Burada kullanildigi sekliyle "gelisen tohum", tipik olarak döllenme veya antez sonrasinda bitkinin üreme yapilarinda bulunan, olgunlasmadan önceki bir tohumu ifade eder, ancak ayni zamanda bir bitkiden izole edilen olgunlasmadan önce bu tür tohumlari da ifade edebilir. Tohum gelisimi planta'da Genellikle gelisimin erken, orta ve geç asamalarina ayrilir. "Bitki kismi" bitki hücrelerini, bitki organlarini, bitki protoplastlarini, bitkilerin yeniden üretilebilecegi bitki hücre doku kültürlerini, bitki kalilerini, bitki kümelerini ve bitkilerde veya embriyolar, polenler, ovüller, tohumlar, baklalar, yapraklar, çiçekler, dallar, meyveler, saplar, kökler, kök uçlari, anterler, kotiledonlar, hipokotiller, radiküller, tek hücreler, gametler, hücre kültürleri, doku kültürleri ve benzerleri gibi bitki kisimlarinda bozulmamis bitki hücrelerini içerir. Kotiledon bir tür tohum yapragi; bitki embriyosunun üzerinde bulunan küçük yapraktir. Bir kotiledon, tohumun besin depolama dokularini içerir. Embriyo, olgun bir tohumun içinde bulunan küçük bir bitkidir. "Bitki hücreleri" ayrica yenilenemeyen bitki hücrelerini de kapsar. tüm nesiller anlamina gelir ve birinci, ikinci, üçüncü ve sonraki nesilleri içerir; ve kendi kendine tozlasma veya ayni veya farkli genotiplere sahip bitkilerle melezleme yoluyla üretilebilir ve bir dizi uygun genetik mühendisligi teknigiyle modifiye edilebilir. Kültür, genel olarak insanlar tarafindan kasitli olarak degistirilen ve seçilen bitkileri ifade eder. "TO", dönüstürülmüs bitki materyalinin ilk neslini belirtir, "Tl", TO bitkileri üzerinde üretilen tohumu belirtir, Tl tohumu ise T2 tohumu vb. gibi sonraki TX neslini üreten bitkileri verir. örnegin birinci nesil hibrit El ile Fl hibritinin ebeveyn genotiplerinden birine çaprazladigi bir süreçtir. (tohum) ile ayni veya benzer genetik arka plana sahip olan ancak burada açiklandigi gibi degistirilmemis (örnegin hücre veya bitki veya bunun bir kismi, burada tanimlandigi gibi bir polinükleotit ve/veya T-DNA'dan yoksundur) bir hücreyi veya bitkiyi veya bunun bir kismini (bir tohum gibi) ifade eder. Karsilik gelen bir hücre veya bitki veya bunun bir kismi (tohum), örnegin asagidakileri karsilastirmak için bir kontrol olarak kullanilabilir: burada açiklandigi gibi degistirilmis bir hücre, bitki veya bunun bir kismina (tohum) kiyasla CtFAD2-2 protein aktivitesi ve/veya CtFATB-3 protein aktivitesi. Teknikte uzman bir kisi, böyle bir karsilastirma için uygun bir "karsilik gelen" hücreyi, bitkiyi veya bunun bir kismini (tohum) kolaylikla belirleyebilir. Burada kullanildigi sekliyle "FAD2-2" ve "CtFAD2-2" terimleri ve bunlarin varyasyonlari, amino asit dizisi SEK ID NO:l olarak saglanan bir aspir FAD2 polipeptidini, örnegin bir dizisi SEK ID NO:2 olarak saglanan nükleotitler tarafindan kodlanan bir polipeptidi ifade eder. Burada kullanildigi sekliyle, bir FAD2-2 geni böyle bir polipeptidi veya bunun mutant bir alelini kodlayan bir gendir. Bu terimler ayrica saglanan dizilerin dogal olarak olusan veya yapay olarak indüklenen veya üretilen varyantlarini da içerir. Bir düzenlemede bulusa ait FAD2-2, SEK ID NO:l olarak saglanan diziyle en az %95 özdes, daha tercihen en az %99 özdes olan bir amino asit dizisi içerir. CtFAD2-2 genleri, mutant olan, yani azaltilmis aktivite gibi degistirilmis desatüraz aktiVitesine sahip polipeptitleri kodlayan veya fonksiyonel polipeptitleri (bos aleller) kodlamayan alelleri içerir. Bu tür aleller dogal olarak meydana gelebilir veya yapay mutajenez yoluyla indüklenebilir. Bulusun aspir hücrelerinin bir CtFAD2-2 geninin aktivitesi tercihen RNAi müdahalesi yoluyla, yani endojen CtFAD2-2 genini kendi basina degistirmeden, inhibitör bir RNA molekülünü kodlayan bir genetik yapinin eklenmesiyle azaltilir. Daha tercihen, CtFAD2-2 geninin ekspresyonu, tohuma özgü bir promotör kullanilarak tercihen aspir bitkisinin gelismekte olan tohumunun hücrelerinde tohum disindaki dokularda CtFAD2-2 geninin ekspresyonu minimum düzeyde azaltilarak veya hiç azaltilmadan, azaltilir. Burada kullanildigi sekliyle "FATB-3" ve "CtFATB-3" terimleri ve bunlarin varyasyonlari, amino asit dizisi SEK ID No:3 olarak saglanan bir aspir FATB polipeptidini, örnegin bir dizisi SEK ID NO:4 olarak saglanan nükleotitler tarafindan kodlanan bir polipeptidi ifade eder. Burada kullanildigi sekliyle, bir FA T 3-.? geni böyle bir polipeptidi veya bunun mutant bir alelini kodlayan bir gendir. Bu terimler ayrica saglanan dizilerin dogal olarak olusan veya yapay olarak indüklenen veya üretilen varyantlarini da içerir. Bir düzenlemede bulusa ait FATB-3, SEK ID No:3 olarak saglanan diziyle en az %95 özdes, daha tercihen en az %99 özdes olan bir amino asit dizisi içerir. CtFATB-3 genleri, mutant olan, yani azaltilmis aktiVite gibi degistirilmis palmitoyl-ACP tiyoesteraz aktiVitesine sahip polipeptitleri kodlayan veya fonksiyonel polipeptitleri (bos aleller) kodlamayan alelleri içerir. Bu tür aleller dogal olarak meydana gelebilir veya yapay mutajenez yoluyla indüklenebilir. Bulusun aspir hücrelerinin bir CtFA T 3-.? geninin aktiVitesi tercihen RNAi müdahalesi yoluyla, yani endoj en CtFATB-3 genini kendi basina degistirmeden, inhibitör bir RNA molekülünü kodlayan bir genetik yapinin eklenmesiyle azaltilir. Daha tercihen, CtFA T 3-.? geninin ekspresyonu, tohuma özgü bir promotör kullanilarak tercihen aspir bitkisinin gelismekte olan tohumunun hücrelerinde tohum disindaki dokularda CtFA T 3-.? geninin ekspresyonu minimum düzeyde azaltilarak veya hiç azaltilmadan, azaltilir. Burada açiklandigi gibi OL lokusu CtFAD2-l genine karsilik gelir. 0101 (homozigot) genotiplerindeki tohum yaginin oleik asit içerigi, serada yetistirilen islah programina dahil etmis ve aspir çesidi Saffola , S-517 ve S-518 dahil Saffola serisi piyasaya sürülmüstür. Yüksek oleik (0101) genotipleri tarlada farkli sicakliklarda yetistirildiginde oleik asit düzeyi nispeten stabil olmustur (Bartholomew, 1971). Ayrica Knowles (1972) ayni lokusta farkli bir alel "01 1,," tanimlamistir; bu da homozigot durumda %35 ila %50 arasinda göstermistir. (Knowles, 1972). Burada belirlendigi üzere, aspir tohumunda azaltilmis FAD saglayan 01 mutasyonunun aleli, çerçeve kaymasi mutasyonunu (tek bir nükleotidin silinmesinden dolayi) içeren mutant FAD2-l genidir. Burada kullanildigi sekliyle "T-DNA", örnegin bir Agrobacteri'um tumefaciens Ti plazmidinin veya bir Agrobacteri'um rhi'zogenes Ri plazmidinin T-DNA'sini veya bunlarin T-DNA olarak islev gören insan yapimi varyantlarini ve T-DNA'nin bir aspir hücresine aktarilip nükleer genoma entegre edilmesinden sonra buradan türetilen molekülleri ifade eder. Bu nedenle T-DNA, hem sag hem de sol sinir dizileri dahil olmak üzere tam bir T-DNA içerebilir veya örnegin sag ve/veya sol T-DNA sinir dizilerinin kaybi da dahil olmak üzere entegrasyon süreci yoluyla molekülün bir veya her iki ucundaki dizilerin kaybiyla bundan türetilebilir. Bulusun T-DNA'lari, ilgili polinükleotidi sag ve sol sinir dizileri (varsa) arasinda herhangi bir yere ekler. T- DNA'nin vir genleri gibi bir bitki hücresine aktarilmasi için gerekli olan faktörleri kodlayan diziler, T-DNA'ya eklenebilir veya T-DNA ile ayni replikon üzerinde mevcut olabilir veya tercihen Agrobacteri'um konaginda uyumlu bir kopya üzerinde trans olarak bulunur. Bu tür "ikili vektör sistemleri" teknikte iyi bilinmektedir. Burada kullanildigi sekliyle "ayni" terimi - örnegin bulusa ait aspir bitkisi ile baglantili olarak "ayni" fide canliligi, bitki boyu, çiçeklenme zamani, hasat yatmasi, tohum ham protein içerigi, tohum ham yag içerigi, tohum kül içerigi veya tohum karbonhidrat içerigine sahip olan polinükleotit(ler) ve/veya T-DNA(lar) içermeyen, ayni kosullar altinnda yetistirilen karsilik gelen bitki için - p degerinin 0,05'ten ( 0,05) yüksek olmasi gibi istatistiksel olarak anlamli bir farkin olmadigini ifade eder. Burada kullanildigi sekliyle "ekstrakte edilmis yag" veya "ekstrakte edilmis lipit" terimi, en az %60 (a/a) yag içeren ve transgenik bir organizmadan veya bunun bir kismindan ekstrakte edilmis bir yag bilesimine karsilik gelir. Burada kullanildigi sekliyle "saflastirilmis" terimi, bulusa ait lipit veya yag ile baglantili olarak kullanildiginda tipik olarak ekstrakte edilen lipit veya yagin, lipit/yag bileseninin safligini arttirmaya yönelik bir veya daha fazla islem asamasina tabi tutuldugu anlamina gelir. Örnegin bir saflastirma asamasi asagidakilerden olusan grubun bir veya daha fazlasini veya tamamini içerebilir: ekstrakte edilen yagin zamkinin giderilmesi, kokunun giderilmesi, renginin giderilmesi, kurutulmasi ve/Veya fraksiyonlara ayrilmasi. Ancak burada kullanildigi sekliyle "saflastirilmis" terimi, toplam yag asidi içeriginin yüzdesi olarak oleik asit içerigini arttiracak sekilde bulus konusu lipit veya yagin yag asidi bilesimini degistiren bir transesterifikasyon islemini veya baska bir islemi içermez. Baska bir deyisle, saflastirilmis lipit veya yagin yag asidi bilesimi esas olarak saflastirilmamis lipit veya yaginkiyle aynidir. Ekstrakte edilen lipit veya yagin, örnegin oleik, linoleik ve palmitik asit içerikleri gibi yag asidi bilesimi, elde edildigi bitki tohumundaki lipit veya yagin yag asidi bilesimi ile esas itibariyle aynidir. Bu baglamda "esasen ayni" +/- %1 veya tercihen +/- %0,5 anlamina gelir. Örnegin bitki tohumundaki yag %92 oraninda oleik asit içeriyorsa, ekstrakte edilen yagda %91-93 arasinda oleik asit bulunur. Burada kullanildigi sekliyle "tohum yagi" terimi, en az %60 (a/a) lipit içeren bir bitkinin tohumundan elde edilen veya tohum yagi tohumda hala mevcutsa tohumdan elde edilebilen bir bilesime karsilik gelir. Yani bulusun tohum yagi veya bulus kullanilarak elde edilen tohum yagi, "ekstrakte edilmis tohum yagi" veya benzeri terimlerle anilmadigi sürece, tohumda veya kotiledonlar veya embriyo gibi bunun bir kisminda mevcut olan tohum yagini içerir; bu durumda, söz konusu olan tohumundan eksrakte edilen yagdir. Tohum yagi tercihen ekstrakte edilen tohum yagidir. Tohum yagi tipik olarak oda sicakliginda bir siVidir. Tercihen tohum yagindaki toplam yag asidi (TFA) içerigi %90 oleik asittir (C18:l).A9). Yag asitleri tipik olarak örnegin TAG, DAG, asil-CoA veya fosfolipit gibi esterlestirilmis bir formdadir. Aksi belirtilmedigi sürece, yag asitleri serbest yag asitleri olabilir ve/Veya esterlestirilmis formda olabilir, tercihen agirlikça %95 veya %98 esterlestirilmis formdadrr. Bir düzenlemede bulusun tohum yagindaki yag asitlerinin en az %90, daha fazla tercihen en az %91, daha fazla tercihen en az %92, daha fazla tercihen en az %93, daha fazla tercihen en az %94, daha fazla tercihen en az %95, daha fazla tercihen en az %96, daha fazla tercihen en az %97, daha fazla tercihen en az %98, daha fazla tercihen en az ham ekstraktta birlikte bulundugu bir veya daha fazla baska lipitlerden, nükleik asitlerden, polipeptitlerden veya diger kirletici moleküllerden ayrilmis "büyük ölçüde saflastirilmis" veya "saflastirilmis" bir yagdir. Büyük ölçüde saflastirilmis tohum yaginin, tohum veya ekstraktta iliskili oldugu diger bilesenlerden en az %60, daha tercihen en az %75 ve daha tercihen en az %90 oraninda serbest kalmasi tercih edilir. Bulusun tohum yagi ayrica bunlarla sinirli olmamak üzere kolesterol, kalinasterol/24- metilen kolesterol, kampesterol/24-metilkolesterol kampestanol/24-metilkolestanol, A5-stigmasterol, ergost-7-en-3ß-ol, eburikol, ß-sitosterol/24-etilkolesterol, A5- avenasterol/izofukosterol, A7-stigmasterol/stigmast-7-en-3ß-ol ve A7-avenasterol gibi yag asidi olmayan moleküller de içerebilir. Tohum yagi, teknikte bilinen herhangi bir yöntemle tohumdan ekstrakte edilebilir. Bu tipik olarak heksan, dietil eter, petrol eteri, kloroform/metanol veya bütanol karisimlari gibi polar olmayan çözücülerle ekstraksiyonu içerir ve genellikle tohumlarin ilk kez ezilmesi veya silindirden geçirilmesi ile iliskilidir. Tahildaki nisastayla iliskili lipitler suya doymus bütanol ile ekstrakte edilebilir. Polisakkaritleri ve/Veya fosfolipitleri uzaklastirmak için teknikte bilinen yöntemlerle tohum yaginin "zamki giderilebilir" veya kirletici maddeleri uzaklastirmak veya safligi, stabiliteyi veya rengi gelistirmek için baska yollarla islenebilir. Tohum yagindaki TAG'ler ve diger esterler, asit veya alkali islemiyle veya lipazlarin etkisiyle serbest yag asitlerini serbest birakmak üzere hidrolize edilebilir veya tohum yagi teknikte bilindigi gibi hidrojene edilebilir, kimyasal veya enzimatik olarak islenebilir. Bununla birlikte, tohum yagi artik TAG içermeyecek sekilde islendiginde, artik burada belirtildigi gibi tohum yagi olarak kabul edilmez. Saflastirilmis ve/Veya ekstrakte edilmis lipit veya yagdaki serbest ve esterlesmis sterol (örnegin sitosterol, kampesterol, stigmasterol, brassikasterol, A5-avenasterol, sitostanol, kampestanol ve kolesterol) konsantrasyonlari, Phillips ve dig. (2002) yaglarda steroller; serbest alkoller, yag asitli esterler (esterlestirilmis steroller), glikozitler ve sterollerin açillenmis glikozitleri halinde bulunur. Bulusun geri kazanilmis veya ekstrakte edilmis tohum yaglari tercihen yaklasik 100 ila yaklasik 1000 mg toplam sterol/100 g yag içerir. Gida veya yem olarak kullanim için, sterollerin glikosile edilmis formlardan ziyade öncelikle serbest veya esterlenmis formlarda mevcut olmasi tercih edilir. Mevcut bulusun tohum yaglarinda, yaglar içindeki sterollerin tercihen en az %50'si esterlenmis steroller halinde mevcuttur. Bulusun aspir tohumu yagi tercihen yaklasik 150 ila yaklasik 400 mg toplam sterol/100g, tipik olarak yaklasik 300mg toplam sterol/100g tohum yagi içerir ve ana sterol sitosteroldür. Burada kullanildigi sekliyle "yag asidi" terimi, doymus veya doymamis, en az 8 karbon atomu uzunlugunda uzun bir alifatik kuyruga sahip bir karboksilik asit anlamina gelir. Tipik olarak yag asitleri, en az 12 karbon uzunlugunda, karbon-karbon bagli bir zincire sahiptir. Dogal olarak olusan yag asitlerinin çogu çift sayida karbon atomuna sahiptir çünkü biyosentezleri iki karbon atomuna sahip asetati içerir. Yag asitleri serbest halde (esterlesmemis) veya TAG, DAG, MAG, açil-CoA (tiyo-ester) bagli veya baska kovalent bagli form gibi esterlestirilmis bir formda olabilir. Esterlestirilmis bir formda kovalent olarak baglandiginda, yag asidi burada bir "açil" grubu olarak anilir. Yag asidi, fosfatidilkolin (PC), fosfatidiletanolamin, fosfatidilserin, fosfatidilgliserol, fosfatidilinositol veya difosfatidilgliserol gibi bir fosfolipit olarak esterlestirilebilir. Doymus yag asitleri zincir boyunca herhangi bir çift bag veya baska fonksiyonel grup içermez. "Doymus" terimi, tüm karbonlarin (karboksilik asit [-COOH] grubu hariç) mümkün oldugu kadar çok hidrojen içermesi nedeniyle hidrojeni ifade eder. Yani omega (0)) ucu 3 hidrojen (CH3-) içerir ve zincirdeki her karbon 2 hidrojen (-CH2-) içerir. Doymamis yag asitleri, doymus yag asitlerine benzer formdadir, ancak zincir boyunca bir veya daha fazla alken fonksiyonel grubu bulunur ve her bir alken, zincirin tek bagli "-CH2-CH2-" kismini çift bagli "-CH=CH-" kismi (yani baska bir karbona çift bagli bir karbon) ile degistirir. Çift bagin her iki tarafina baglanan zincirdeki sonraki iki karbon atomu, cis veya trans konfigürasyonda bulunur. gliserittir. TAG sentezinin Kennedy yolaginda, yukarida açiklandigi gibi DAG olusturulur ve daha sonra üçüncü bir açil grubu, DGAT'nin aktivitesi ile gliserol omurgasinda esterlestirilir. TAG olusumuna yönelik alternatif yollar arasinda PDAT Burada kullanildigi sekliyle terim "agirlikça" terimi, bir maddenin (örnegin oleik asit, palmitik asit veya linoleik asit) agirligini; bilesimdeki maddeyi veya bir bileseni içeren bilesimin agirliginin yüzdesi olarak ifade eder. Örnegin oleik asit gibi belirli bir yag asidinin agirligi, lipidin veya tohum yaginin veya tohumun toplam yag asidi içeriginin agirliginin bir yüzdesi olarak belirlenebilir. Burada kullanildigi sekliyle "biyoyakit" terimi, tipik olarak otomobiller, kamyonlar veya petrolle çalisan motorlar gibi makinelere güç saglamak için kullanilan ve enerjisi fosil yakit yerine biyolojik karbon sabitlemesinden elde edilen herhangi bir yakit türünü ifade eder. Biyoyakitlar, biyokütle dönüsümünden elde edilen yakitlarin yani sira kati biyokütle, siVi yakitlar ve biyogazlari da içerir. Biyoyakit örnekleri arasinda biyoalkoller, biyodizel, sentetik dizel, bitkisel yag, biyoeterler, biyogaz, sentez gazi, kati biyoyakitlar, alglerden türetilmis yakit, biyohidrojen, biyometanol, 2,5- Dimetilfuran (DMF), biyodimetil eter (bioDME), Fischer-Tropsch dizel, biyohidrojen dizel, karisik alkoller ve odun dizeli yer alir. Burada kullanildigi sekliyle "endüstriyel ürün" terimi, agirlikli olarak karbon ve hidrojenden olusan bir hidrokarbon ürününü ifade eder, örnegin yag asidi metil ve/Veya etil esterleri veya metan gibi alkanlar, ortam sicakliklarinda tipik olarak siVi olan daha uzun zincirli alkanlarin karisimlari, bir biyoyakit, karbon monoksit ve/Veya hidrojen veya etanol, propanol veya bütanol gibi bir biyoalkol veya biyokömür. "Endüstriyel ürün" teriminin, diger endüstriyel ürünlere dönüstürülebilen ara ürünleri içermesi amaçlanmaktadir; örnegin sentez gazinin kendisi, ayni zamanda endüstriyel bir ürün olarak da kabul edilen bir hidrokarbon ürününü sentezlemek için kullanilabilen endüstriyel bir ürün olarak kabul edilmektedir. Burada kullanildigi sekliyle endüstriyel ürün terimi, yukaridaki bilesiklerin hem saf formlarini hem de daha genel olarak çesitli bilesiklerin ve bilesenlerin bir karisimini içerir; örnegin hidrokarbon ürünü, teknikte iyi anlasildigi gibi, çesitli karbon zinciri uzunluklari içerebilir. Polinükleotitler herhangi bir uzunluktaki nükleotitlerin polimerik bir formuna (deoksiribonükleotitler veya ribonükleotitler) karsilik gelir. Burada tanimlanan bir polinükleotit genomik, cDNA, yari sentetik veya sentetik kökenli, çift sarmalli veya tek sarmalli olabilir ve kökeni veya manipülasyonu nedeniyle: (1) dogada iliskili oldugu bir polinükleotidin tamami veya bir kismi ile iliskili degildir, (2) dogada bagli oldugu polinükleotitten farkli bir polinükleotide baglidir veya (3) dogada olusmaz. Bulusun tercih edilen polinükleotitleri, bitki hücrelerinde kopyalanabilen ve RNA moleküllerini susturabilen çift sarmalli DNA moleküllerini kodlar. Burada kullanildigi sekliyle "gen" terimi, en genis baglaminda ele alinacaktir ve yapisal bir genin transkripsiyon bölgesini ve translasyona ugramissa protein kodlama bölgesini içeren ve her iki uçta en az yaklasik 2 kb'lik bir mesafe boyunca hem 5' hem de 3' uçlarindaki kodlama bölgesine bitisik olarak konumlandirilan ve genin ekspresyonunda yer alan dizileri içeren deoksiribonükleotit dizilerini içerir. Bu baglamda gen, belirli bir genle dogal olarak iliskili olan promotörler, güçlendiriciler, sonlandirma ve/veya poliadenilasyon sinyalleri gibi kontrol sinyallerini veya heterolog kontrol sinyallerini içerir; bu durumda gen, "kimerik gen" olarak anilir. Protein kodlama bölgesinin 5' bölgesinde yer alan ve mRNA üzerinde mevcut olan dizilere 5' translasyona ugramamis diziler adi verilir. Protein kodlama bölgesinin 3' veya asagi akisinda yer alan ve mRNA üzerinde mevcut olan dizilere 3' translasyona ugramamis diziler adi verilir. "Gen" terimi bir genin hem cDNA'sini hem de genomik formlarini kapsar. Bir genin genomik formu veya klonu, "intronlar", "araya giren bölgeler" veya kodlama bölgesini içerir. Intronlar, nükleer RNA'ya (nRNA) kopyalanan bir genin bölümleridir. Intronlar, güçlendiriciler gibi düzenleyici unsurlar içerebilir. Intronlar nükleer veya primer transkriptten uzaklastirilir veya "uç birlestirmeyle çikarilir", bu nedenle mRNA transkriptinde intronlar yoktur. MRNA, translasyon sirasinda yeni olusan bir polipeptitteki amino asitlerin dizisini veya sirasini belirlemek için islev görür. "Gen" terimi, burada açiklanan bulusa ait proteinlerin tamamini veya bir kismini kodlayan bir sentetik veya füzyon molekülünü ve yukaridakilerden herhangi biri için tamamlayici bir nükleotit dizisini içerir. Bir "alel"; bir hücre, tek bir bitki veya bir popülasyon içindeki bir genetik dizinin (bir gen gibi) spesifik bir formunu ifade eder; spesifik form, ayni genin diger formlariyla karsilastirildiginda en az bir dizide ve siklikla gen dizisindeki birden fazla varyant bölgede farklilik gösterir. Farkli aleller arasinda farklilik gösteren bu varyant bölgelerindeki dizilere "varyanslar", "polimorfizmler" veya "mutasyonlar" adi verilir. Bir "transgen", bir transformasyon islemi yoluyla genoma dahil edilen bir gendir. Transgen, dönüstürülmüs bir bitki hücresinden rejenerasyon yoluyla üretilen bir baslangiçta dönüstürülmüs bitkide veya kendi kendine döllenmeyle veya ilk dönüstürücüden çaprazlamayla üretilen yeni nesil bitkilerde veya tohumlar gibi bitki kisimlarinda bulunabilir. "Genetigi degistirilmis" terimi ve bunun varyasyonlari, bir genin bir hücreye transformasyon veya transdüksiyon yoluyla eklenmesini, bir hücredeki bir genin mutasyona ugratilmasini ve bir hücredeki bir genin veya yukarida tarif edildigi gibi modifiye edilmis herhangi bir hücrenin yeni neslinin regülasyonunun genetik olarak degistirilmesini veya modüle edilmesini içerir. Burada kullanildigi sekliyle bir "genomik bölge", genom içindeki bir transgenin veya transgen grubunun (burada bir küme olarak da anilir) bir hücreye veya bunun öncülüne eklendigi ve mayozdan sonra yeni nesil hücrelerde ortak kalitsal olarak aktarildigi bir konumu ifade eder. Burada tanimlanan bir polinükleotit (veya T-DNA), yapay rekombinant yöntemlerle olusturulmus veya degistirilmis bir nükleik asit molekülünü ifade eden bir polinükleotit, bir hücrede degisen bir miktarda mevcut olabilir veya dogal durumuna kiyasla degisen bir oranda (örnegin mRNA durumunda) eksprese edilebilir. Eksojen bir polinükleotit, dogal olarak polinükleotidi içermeyen bir hücreye eklenen bir polinükleotittir. Tipik olarak mRNA'nin transkripsiyonu için bir sablon olarak eksoj en bir DNA kullanilir ve bu daha sonra dönüstürülmüs hücre içindeki bulusun bir polipeptidini kodlayan sürekli bir amino asit kalintisi dizisine çevrilir. Baska bir düzenlemede eksoj en polinükleotidin bir kismi, hücre için endojendir ve ekspresyonu rekombinant araçlarla degistirilir, örnegin dönüstürülmüs hücrenin polinükleotit tarafindan kodlanan polipeptidi eksprese etmesini saglamak için endojen bir polinükleotidin yukari akisina bir eksojen kontrol dizisi eklenir. Örnegin bir eksojen polinükleotit, bir antisens RNA'yi endoj en bir polinükleotide eksprese edebilir. Bulusun bir rekombinant polinükleotidi, içinde bulundugu hücre bazli veya hücresiz ekspresyon sisteminin diger bilesenlerinden ayrilmamis polinükleotitleri ve daha sonra en azindan diger bazi bilesenlerden ayrilarak saflastirilan söz konusu hücre bazli veya hücresiz sistemlerde üretilen polinükleotitleri içerir. Polinükleotit, dogada var olan nükleotitlerin bitisik bir uzantisi olabilir veya tek bir polinükleotit olusturmak üzere birlestirilen farkli kaynaklardan (dogal olarak olusan ve/veya sentetik) gelen iki veya daha fazla bitisik nükleotit dizisini içerebilir. Tipik olarak bu tür kimerik polinükleotitler, ilgili bir hücrede açik okuma çerçevesinin transkripsiyonunu yönlendirmeye uygun bir promotöre islevsel olarak baglanan en az bir açik okuma çerçevesi içerir. Tanimlanan polinükleotitlerle ilgili olarak, yukarida verilenlerden daha yüksek olan % özdeslik rakamlarinin tercih edilen düzenlemeleri kapsayacagi takdir edilecektir. Bu nedenle uygulanabildigi yerde, minimum % özdeslik rakamlari isiginda, polinükleotidin ilgili aday SEK ID NO. ile en az %50, daha tercihen en az en az %75, daha fazla tercihen en az %80, daha fazla tercihen en az %85, daha fazla tercihen en az %90, daha fazla tercihen en az %91, daha fazla tercihen en az %92, daha fazla tercihen en az %93 daha fazla tercihen en az %94, daha fazla tercihen en az %95, daha fazla tercihen en az %96, daha fazla tercihen en az %97, daha fazla tercihen en az tercihen en az %99,2, daha fazla tercihen en az %99,3, daha fazla tercihen en az %99,4, daha fazla tercihen en az %99,5, daha fazla tercihen en az %99,6, daha fazla tercihen en az %99,7, daha fazla tercihen en az %99,8 ve daha da tercihen en az %99,9 özdes olan bir polinükleotit dizisi içermesi tercih edilir. Mevcut bulus için yararli bir polinükleotit, siki kosullar altinda burada tanimlanan bir polinükleotide seçici olarak hibridize olabilir. Burada kullanildigi sekliyle siki kosullar su sekildedir: (l) hibritlesme sirasinda 42°C'de formamid gibi bir denatüre edici madde, örnegin %50 (h/h) formamid ile %0,1 (a/h) sigir serum albümini, (pH 6,8), %0,1 sodyum pirofosfat, 5 X Denhardt çözeltisi, sonike edilmis somon sperm DNA'si (50 g/ ml), % yikama için M sodyum sitrat/%0,1 SDS. RNA Susturma RNA girisimi (RNAi), burada tanimlandigi gibi CtFAD2-2 protein aktivitesi ve/veya CtFATB-3 protein aktivitesi gibi belirli bir proteinin üretimini spesifik olarak inhibe etmek için özellikle faydalidir. Bu teknoloji, ilgili genin veya bunun bir kisminin mRNA'si ile esasen ayni olan bir diziyi ve onu tamamlayici olan bir diziyi içeren dsRNA moleküllerinin varligina dayanir. Uygun bir sekilde dsRNA, bir rekombinant vektör veya konak hücredeki tek bir promotörden üretilebilir; burada sens ve anti-sens dizileri, bir diziyle, tercihen ilgisiz bir diziyle kovalent olarak birlestirilir; bu, karsilik gelen transkriptteki sens ve anti-sens dizilerinin, bir ilmek yapisi olusturan birlestirme dizisi ile dsRNA molekülünü olusturmak üzere hibridize olmasini mümkün kilar, ancak hedef RNA'ya veya onun tamamlayicisina özdes bir dizi ilmek yapisini olusturabilir. Tipik olarak dsRNA, kesintili bir palindrom olarak düzenlenmis, ters çevrilmis bir tekrar yapisinda sens ve antisens dizilerine sahip olan çift sarmalli bir DNA yapisi tarafindan kodlanir, burada tekrarlanan diziler, dsRNA molekülünde hibritlesme dizilerini üretmek için kopyalanir ve kesme dizisi (interrupt sequence), dsRNA molekülünde döngü olusturmak için kopyalanir. Uygun dsRNA moleküllerinin tasarimi ve üretimi özellikle referans dikkate alindiginda, teknikte uzman bir kisinin kapasitesi dahilindedir, bkz. Waterhouse ve dig. 01/34815. Bir örnekte, homolojiye sahip en azindan kismen çift sarmalli RNA ürününün/ürünlerinin, tercihen etkisiz hale getirilecek bir hedef RNA'nin bir bölgesine tamamlayici en az 19 ardisik nükleotidin sentezini yönlendiren bir DNA eklenir. Bu nedenle DNA, RNA'ya kopyalandiginda çift sarmalli RNA bölgesini olusturmak üzere hibritlesebilen hem sens hem de antisens dizileri içerir. Bulusun bir düzeneginde sens ve antisens dizileri, RNA'ya kopyalandiginda kesilen bir intron içeren bir aralayici bölge ile ayrilir. Bu düzenlemenin daha yüksek bir gen susturma verimliligi ile sonuçlandigi gösterilmistir. Çift sarmalli RNA bölgesi, bir veya iki DNA bölgesinden kopyalanan bir veya iki RNA molekülü içerebilir. Çift sarmalli molekülün varliginin, hem çift sarmalli RNA'yi hem de hedef genin homolog RNA transkriptini yok eden, hedef genin aktivitesini etkili bir sekilde azaltan veya ortadan kaldiran endojen bir sistemden gelen bir tepkiyi tetikledigi düsünülmektedir. Hibritlesen sens ve antisens dizilerinin her birinin uzunlugu, hedef mRNA'nin bir kismina karsilik gelen en az 19 bitisik nükleotit olmalidir. Gen transkriptinin tamamina karsilik gelen tam uzunluktaki dizi kullanilabilir. Sens ve antisens dizilerinin hedeflenen transkripte özdeslik derecesi en az %85, en az %90 veya en az %95 ila ilgisiz diziler içerebilir. RNA molekülü, bir RNA polimeraz 11 veya RNA polimeraz III promotörün kontrolü altinda eksprese edilebilir. Ikincisinin örnekleri arasinda tRNA veya snRNA promotörleri yer alir. Rekombinant Hücreler Bulus ayrica burada tanimlanan bir veya daha fazla polinükleotit veya T-DNA'yi veya bunlarin kombinasyonunu içeren bir rekombinant aspir hücresi saglar. "Rekombinant hücre" terimi burada "transgenik hücre" terimi ile birbirinin yerine kullanilmaktadir. Rekombinant hücre kültürdeki bir hücre, in vitro bir hücre veya bir aspir bitkisinde veya bunun bir tohum gibi bir kismindaki hücre olabilir. Bitkilerin Transformasyonu Transgenik bitkiler, genel olarak Slater ve digerleri, Bitki Biyoteknolojisi - Bitkilerin Genetik Manipülasyonu, Oxford University Press (2003) ve Christou ve Klee, Bitki Biyoteknolojisi El Kitabi, JohnWiley ve Ogullari (2004) kitaplarina açiklananlar gibi teknikte bilinen teknikler kullanilarak üretilebilir. Burada kullanildigi sekliyle "stabil bir sekilde transforme", "stabil bir sekilde transforme edilmis" terimleri ve bunlarin varyasyonlari, polinükleotidin hücre genomuna entegrasyonunu ifade eder, böylece bunlar, hücre bölünmesi sirasinda bunlarin mevcudiyetleri için pozitif olarak seçilmesine gerek kalmadan yeni nesil hücrelere aktarilirlar. Stabil transformantlar veya bunlarin yeni nesilleri, kromozomal DNA üzerinde Southern blotlar veya in situ genomik DNA hibritlesmesi gibi teknikte bilinen herhangi bir yöntemle seçilebilir ve/veya tanimlanabilir. Agrobacteri'um-aracili transfer, genlerin bitki hücrelerine eklenmesi için yaygin olarak uygulanabilir bir sistemdir çünkü DNA, geçici ekspresyon için veya bitki hücre genomundaki DNA'nin stabil entegrasyonu için tüm bitki dokularindaki, bitki organlarindaki veya doku kültüründeki eksplantlardaki hücrelere verilebilmektedir. Agrobacteri'um-aracili bitki entegrasyonu vektörlerinin DNA'yi bitki hücrelerine sokmak için kullanilmasi teknikte iyi bilinmektedir (bakiniz örnegin, US 5177010, US tanimlanir ve araya giren DNA (T-DNA) genellikle bitki genomuna eklenir. Ayrica T- DNA'nin entegrasyonu, birkaç yeniden düzenlemeyle sonuçlanan nispeten hassas bir süreçtir. Bu bitki çesitlerinde Agrobacteri'um-aracili transformasyon etkilidir, gen transferinin kolay ve tanimlanmis dogasi nedeniyle tercih edilen yöntemdir. Tercihli Agrobacteri'um transformasyon vektörleri, açiklandigi gibi (Klee ve digerleri, Bitki DNA Enfeksiyon Maddeleri, Hohn ve Schell, ed., Springer-Verlag, NeW York, s. 179- 203 (1985)) uygun manipülasyonlara izin verecek sekide E. koli ile birlikte A grobacteri'um için replikasyon yetenegine sahiptir. Kullanilabilecek hizlandirma yöntemleri arasinda örnegin mikroprojektil bombardimani ve benzerleri yer alir. Dönüstürücü nükleik asit moleküllerinin bitki hücrelerine verilmesine yönelik bir yöntemin bir örnegi, mikroprojektil bombardimanidir. Bu yöntem Yang ve digerleri, Gen Transferi için Parçacik Bombardimani Teknolojisi, Oxford Press, Oxford, Ingiltere (1994) belgesinde incelenmistir. Nükleik asitlerle kaplanabilen ve itici bir kuvvetle hücrelere iletilebilen biyolojik olmayan parçaciklar (mikroprojektiller). Bu tür yöntemler teknikte iyi bilinmektedir. Baska bir düzenlemede plastidler stabil bir sekilde dönüstürülebilir. Yüksek bitkilerde plastid transformasyonu için açiklanan yöntemler arasinda seçilebilir bir belirteç içeren DNA'nin parçacik tabancasiyla verilmesi ve DNA'nin homolog rekombinasyon yoluyla plastid genomuna hedeIlenmesi yer alir (US 5,451,513, US Bitki protoplastlarinin transformasyonu, kalsiyum fosfat çökeltme, polietilen glikol islemi, elektroporasyon ve bu tedavilerin kombinasyonlarina dayanan yöntemler kullanilarak gerçeklestirilebilir. Bu sistemlerin farkli bitki çesitlerine uygulanmasi, SÖZ konusu bitki susunun protoplastlardan yeniden üretilmesine baglidir. Tahillarin protoplastlardan yenilenmesine yönelik açiklayici yöntemler tarif edilmistir (Fujimura Diger hücre transformasyon yöntemleri de kullanilabilir ve bunlar arasinda, bunlarla sinirli olmamak üzere, polene dogrudan DNA transferi yoluyla, DNA'nin bir bitkinin üreme organlarina dogrudan enjeksiyonu yoluyla veya DNA'nin olgunlasmamis embriyolarin hücrelerine dogrudan enjeksiyonu ve ardindan kurutulmus embriyolarin rehidrasyonu yoluyla bitkilere DNA'nin bitkilere eklenmesi yer alir. Tek bitki protoplast transformantlarindan veya çesitli transforme edilmis eksplantlardan bitkilerin rejenerasyonu, gelistirilmesi ve yetistirilmesi teknikte iyi bilinmektedir (Weissbach ve digerleri, Bitki Moleküler Biyolojisi için Yöntemler, Academic Press, San Diego, Kaliforniya, (1988)). Bu rejenerasyon ve büyüme süreci tipik olarak, dönüstürülmüs hücrelerin seçilmesi, bu bireysellestirilmis hücrelerin, köklü bitkicik asamasina kadar embriyonik gelisimin olagan asamalari boyunca kültürlenmesi adimlarini içerir. Transgenik embriyolar ve tohumlar da benzer sekilde yeniden üretilir. Elde edilen transgenik köklü sürgünler daha sonra toprak gibi uygun bir bitki yetistirme ortamina ekilir. Yabanci, eksoj en gen içeren bitkilerin gelistirilmesi veya rejenerasyonu teknikte iyi bilinmektedir. Tercihen yeniden üretlien bitkiler, homozigot transgenik bitkiler saglamak üzere kendi kendine tozlasir. Aksi takdirde yeniden üretilen bitkilerden elde edilen polen, tarimsal açidan önemli soylarin tohumla yetistirilen bitkileriyle çapraZlanir. Bunun tersine, bu önemli soylarin bitkilerinden elde edilen polenler, yeniden üretilen bitkileri polenlemek için kullanilir. Istenilen bir polinükleotidi içeren mevcut bulusun bir transgenik bitkisi, teknikte uzman kisilerce iyi bilinen yöntemler kullanilarak yetistirilir. Transgenik hücrelerde ve bitkilerde transgenlerin varligini dogrulamak için, teknikte uzman kisilerce bilinen yöntemler kullanilarak bir polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) amplifikasyonu veya Southern blot analizi gerçeklestirilebilir. Transgenik bitkiler elde edildikten sonra istenilen fenotipe sahip bitki dokulari veya kisimlari üretilecek sekilde yetistirilebilirler. Bitki dokusu veya bitki kisimlari hasat edilebilir ve/veya tohum toplanabilir. Tohum, istenen özelliklere sahip dokulara veya kisimlara sahip ilave bitkilerin yetistirilmesi için bir kaynak görevi görebilir. Agrobacteri'um kullanilarak olusturulan transgenik bir bitki veya diger transformasyon yöntemleri tipik olarak bir kromozom üzerinde tek bir transgenik lokus içerir. Bu tür transgenik bitkiler, eklenen gen(ler) açisindan hemizigot olarak adlandirilabilir. Daha çok tercih edilen, eklenen gen(ler) için homozigot olan transgenik bir bitkidir, yani bir kromozom çiftinin her bir kromozomu üzerinde ayni lokusta bir gen olmak üzere iki ilave gen içeren bir transgenik bitkidir. Homozigot bir transgenik bitki, hemizigot bir transgenik bitkinin kendi kendine döllenmesi, üretilen tohumun bir kisminin çimlendirilmesi ve elde edilen bitkilerin ilgili gen için analiz edilmesi yoluyla elde edilebilir. Ayni zamanda bagimsiz olarak ayrilan iki eksojen gen veya lokus içeren iki farkli transgenik bitkinin, her iki gen veya lokus setini içeren yavrular üretmek için çaprazlanabilecegi (çiftlestirilebilecegi) de anlasilmalidir. Uygun Fl neslinin kendi kendine çogalmasi, hem eksojen genler hem de lokuslar açisindan homozigot olan bitkiler üretebilir. Bir ebeveyn bitkiye geri melezleme ve transgenik olmayan bir bitki ile çaprazlama da bitkisel çogaltmada oldugu gibi tasarlanmaktadir. Farkli özellikler ve ürünler için yaygin olarak kullanilan diger yetistirme yöntemlerinin açiklamalari için bakiniz: Fehr, Kültür Bitkisi Gelisimi için Islah Yöntemleri, Wilcox J. ed., American Society of Agronomy, Madison Wis. (1987). Aspirin transformasyonu için özellikle yararli yöntemler için bakiniz: Belide ve Belirteç Destekli Seçim Belirteç destekli seçim, klasik bir yetistirme programinda tekrarlayan bir ebeveynle geri melezleme yapilirken gerekli olan heterozigot bitkileri seçmenin iyi bilinen bir yöntemidir. Her bir geri melezleme neslindeki bitki popülasyonu, normalde bir geri melezleme popülasyonunda 121 oraninda mevcut olan ilgili gen için heterozigot olacaktir ve moleküler belirteç, genin iki alelini ayirt etmek için kullanilabilir. Örnegin genç sürgünlerden DNA ekstrakte edilerek ve introgresyona tabi tutulan arzu edilen özellik için spesifik bir belirteç ile test edilerek, enerji ve kaynaklar daha az bitki üzerinde yogunlasirken, daha fazla geri melezleme için bitkilerin erken seçimi yapilir. Geri melezleme programini daha da hizlandirmak için, olgunlasmamis tohumlardan elde edilen embriyo (antezden 25 gün sonra), tohumun tam olgunluguna izin vermek yerine, steril kosullar altinda besin ortamlarinda kesilip büyütülebilir. "Embriyo kurtarma" olarak adlandirilan ve üç yaprak asamasinda DNA ekstraksiyonu ve istenen genotipin analizi ile birlikte kullanilan bu süreç, daha sonra tekrarlayan ebeveyne geri melezlenecek olan, serada veya tarlada olgunlasana kadar yetistirilebilecek, arzu edilen özelligi tasiyan bitkilerin hizli seçimine olanak tanir. Bir polinükleotidi tespit edebilen, teknikte bilinen herhangi bir moleküler biyolojik teknik, mevcut bulusun yöntemlerinde kullanilabilir. Bu tür yöntemler arasinda, bunlarla sinirli olmamak üzere, nükleik asit amplifikasyonu, nükleik asit dizilimi, uygun sekilde etiketlenmis problarla nükleik asit hibritlesmesi, tek sarmalli konformasyonel analiz (SSCA), denatüre edici gradyan jel elektroforezi (DGGE), heterodubleks analiz (HET), kimyasal bölünme analizi (CCM), katalitik nükleik asit bölünmesi veya bunlarin bir kombinasyonunun kullanimi yer alir (bakiniz örnegin LemieuX, 2000; Langridge ve digerleri, 2001). primerinden olusan bir "primer çifti" veya "primer seti" ve DNA polimeraz ve tipik olarak termal olarak stabil bir polimeraz enzimi gibi bir polimerizasyon katalizörü kullanilarak bir hedef polinükleotidin kopyalarinin yapildigi bir reaksiyondur. PCR yöntemleri teknikte bilinmektedir ve örnegin "PCR" (Ed. MJ. McPherson ve S.G Moller ( belgesinde tarif edilir. Bitki hücrelerinden izole edilen mRNA'nin ters transkripsiyonundan elde edilen cDNA üzerinde PCR gerçeklestirilebilir. Ancak bir bitkiden izole edilen genomik DNA üzerinde PCR yapilmasi genel olarak daha kolay olacaktir. Primer, hedef diziye diziye özgü bir sekilde hibridize olabilen ve PCR sirasinda uzatilabilen bir oligonükleotit dizisidir. Amplikonlar veya PCR ürünleri veya PCR fragmanlari veya amplifikasyon ürünleri, hedef dizilerin primerini ve yeni sentezlenmis kopyalarini içeren uzatma ürünleridir. Multipleks PCR sistemleri, birden fazla amplikonun eszamanli üretimiyle sonuçlanan birden fazla primer seti içerir. Primerler, hedef diziyle mükemmel bir sekilde eslesebilir veya spesifik hedef dizilerde kisitlama enziminin veya katalitik nükleik asit tanima/bölünme bölgelerinin eklenmesine yol açabilen dahili uyumsuz bazlar içerebilir. Primerler ayrica amplikonlarin yakalanmasini veya saptanmasini kolaylastirmak için ek diziler içerebilir ve/Veya degistirilmis veya etiketlenmis nükleotitler içerebilir. DNA'nin tekrarlanan isi denatürasyonu döngüleri, primerlerin tamamlayici dizilere kaynasmasi (annealing) ve kaynasmis (annealed) primerlerin polimeraz ile uzatilmasi, hedef dizinin üstel amplifikasyonuyla sonuçlanir. Hedef veya hedef dizi veya sablon terimleri, amplifiye edilen nükleik asit dizilerine karsilik gelir. Nükleotit dizilerinin dogrudan dizilenmesine yönelik yöntemler, teknikte uzman kisilerce iyi bilinmektedir ve örnegin Ausubel ve dig. (yukarida) ve Sambrook ve dig. (yukarida) referanslarinda bulunabilir. Dizileme, örnegin dideoksi dizileme, kimyasal dizileme veya bunlarin varyasyonlari gibi uygun herhangi bir yöntemle gerçeklestirilebilir. Dogrudan dizileme, belirli bir dizinin herhangi bir baz çiftindeki varyasyonu belirleme avantaj ina sahiptir. Hibritlesmeye dayali tespit sistemleri arasinda, bunlarla sinirli olmamak üzere, TaqMan analizi ve moleküler isaret analizi (US 5,925,517) yer alir. TaqMan analizi (US 5,962,233), bir ucunda bir donör boya ve diger ucunda bir alici boya bulunan alele özgü (ASO) problari kullanir, böylece boya çifti, floresans rezonans enerji transferi (FRET) yoluyla etkilesime girer. Bir düzenlemede Örnek 3'te açiklanan yöntem, ol mutasyonuna sahip aspir bitkilerinin tanimlanmasi ve seçilmesi için seçim ve yetistirme programlarinda kullanilir. Örnegin yöntem, Tablo 1'de özetlenen primerler kullanilarak bitkiden elde edilen genomik DNA üzerinde bir amplifikasyon reaksiyonunun gerçeklestirilmesini Oleik Asit Orani Yüksek Lipitlerin ve/veya Yaglarin Üretimi Teknikte rutin olarak uygulanan teknikler, mevcut bulusun bitkileri, özellikle de tohumlari tarafindan üretilen lipitlerin ekstrakte edilmesi, islenmesi, saIlastirilmasi ve analiz edilmesi için kullanilabilir. Bu tür teknikler literatür boyunca asagidaki gibi kaynaklarda tanimlanmis ve açiklanmistir: Fereidoon Shahidi, Gida Analitik Perez-Vich ve dig. (1998). Tohum yagi üretimi Tipik olarak bitki tohumlari ham tohum yagi üretmek için pisirilir, preslenir ve/veya ekstrakte edilir; daha sonra bunun zamki giderilir, rafine edilir, agaitilir ve kokusu giderilir. Genel olarak tohumun ezilmesi için teknikler bilinmektedir. Örnegin aspir tohumu, nem içerigini örnegin %8,5'e yükseltmek için su püskürtülerek temperlenebilir ve 0,23 ila 0,27 mm aralik ayarina sahip pürüzsüz bir silindir kullanilarak pul pul hale getirilebilir. Tohumun cinsine göre kirmadan önce su ilavesi yapilmayabilir. Isi uygulanmasi enzimleri etkisiz hale getirir, daha fazla hücre parçalanmasini kolaylastirir, lipit damlaciklarini birlestirir ve protein parçaciklarini toplar, bunlarin hepsi ekstraksiyon islemini kolaylastirir. Bir düzenlemede tohum yaginin büyük bir kismi Vidali bir presten geçirilerek serbest birakilir. Vidali presten çikan kekler daha sonra isiyla izlenen bir kolon kullanilarak çözücüyle, örnegin heksanla ekstrakte edilebilir. Alternatif olarak presleme islemiyle üretilen ham tohum yagi, presleme islemi sirasinda tohum yagiyla birlikte eksprese edilen kati maddeleri uzaklastirmak için üstü yarikli tel drenaj li bir çökeltme tankindan geçirilebilir. Heksanin uzaklastirilmasindan sonra presleme ve ekstraksiyondan elde edilen kati kalinti, genellikle hayvan yemi olarak kullanilan tohum küspesidir. Aritilmis tohum yagi, kalan ince kati parçaciklarin uzaklastirilmasi için bir plaka ve çerçeve filtresinden geçirilebilir. Istenirse, ekstraksiyon isleminden geri kazanilan tohum yagi, aritilmis tohum yagi ile bir araya getirilerek harmanlanmis bir ham tohum yagi üretilebilir. Ham tohum yagindan çözücü uzaklastirildiktan sonra, preslenen ve ekstrakte edilen kisimlar birlestirilir ve örnegin zamk giderme, kostik rafinasyon, agaitma ve koku giderme gibi normal lipit isleme prosedürlerine tabi tutulur. Ürün yolunun niteligine bagli olarak bazi adimlar veya tüm adimlar atlanabilir; yem kalitesinde yag için sinirli aritmaya ihtiyaç duyulabilirken, oleokimyasal uygulamalar için daha fazla saflastirma adimi gerekir. Zamk giderme Zamk giderme, yaglarin rafinasyonunda erken bir adimdir ve birincil amaci, toplam ekstrakte edilen lipidin yaklasik %1-2'si kadar bulunabilen fosfolipitlerin çogunun yagdan uzaklastirilmasidir. Ham petrole 70-800C'de tipik olarak fosforik asit içeren ~%2 oraninda su eklenmesi, eser metaller ve pigmentlerle birlikte fosfolipitlerin çogunun ayrilmasiyla sonuçlanir. Uzaklastirilan çözünmeyen malzeme esas olarak fosfolipitler ve triasilgliserollerin bir karisimidir ve ayni zamanda lesitin olarak da bilinir. Zamk giderme, hidratlanamayan fosfatidleri hidratlanabilir bir forma dönüstürmek ve mevcut küçük metalleri selatlamak için ham tohum yagina konsantre fosforik asit eklenerek gerçeklestirilebilir. Sakiz, santrilüjleme yoluyla tohum yagindan ayrilir. Alkali rafînasyonu Alkali rafinasyonu, ham petrolün aritilmasina yönelik rafinasyon proseslerinden biridir ve bazen nötrlestirme olarak da anilir. Genellikle zamk gidermeyi takip eder ve agartmadan önce gelir. Zamk gidermenin ardindan tohum yagi, tüm yag asitlerini ve fosforik asitleri titre etmek için yeterli miktarda bir alkali çözeltisinin eklenmesi ve bu sekilde olusan sabunlarin çikarilmasiyla islemden geçirilebilir. Uygun alkali malzemeler arasinda sodyum hidroksit, potasyum hidroksit, sodyum karbonat, lityum hidroksit, kalsiyum hidroksit, kalsiyum karbonat ve amonyum hidroksit yer alir. Bu islem tipik olarak oda sicakliginda gerçeklestirilir ve serbest yag asidi fraksiyonu giderilir. Sabun, santrifüj yoluyla veya sabunu çözen bir çözücüyle ekstraksiyon yoluyla uzaklastirilir ve nötrlestirilmis yag, suyla yikanir. Gerektiginde yagdaki fazla alkali, hidroklorik asit veya sülfürik asit gibi uygun bir asitle nötralize edilebilir. Agartma Agartma, yaglarin agaitma topragi (%0,2-2,0) varliginda ve oksijen yoklugunda rafinasyon islemidir. Yag islemedeki bu adim, istenmeyen pigmentleri (karotenoidler, klorofil, dedikodupol vb.) uzaklastirmak için tasarlanmistir ve islem ayni zamanda oksidasyon ürünlerini, eser metalleri, kükürt bilesiklerini ve eser miktarda sabunu da uzaklastirir. Koku giderme Koku giderme, sivi ve kati yaglarin yüksek sicaklikta (200-2600C) ve düsük basinçta (0,1-1 mm Hg) islenmesidir. Bu, tipik olarak tohum yagina yaklasik 0,1 ml/dakika/ 100 ml tohum yagi oraninda buhar verilmesiyle yapilir. Yaklasik 30 dakika buhar verme isleminden sonra tohum yaginin vakum altinda sogumasina izin verilir. Tohum yagi tipik olarak bir cam kaba aktarilir ve sogutma altinda saklanmadan önce argonla yikanir. Bu islem tohum yaginin rengini iyilestirir ve kalan serbest yag asitleri, monoasilgliseroller ve oksidasyon ürünleri de dahil olmak üzere uçucu maddelerin veya kokulu bilesiklerin çogunu ortadan kaldirir. Kisa hazirlik Kisa hazirlik, sivi ve kati yaglarin ortam alti sicakliklarda kristalizasyon yoluyla kati (stearin) ve sivi (olein) fraksiyonlara ayrilmasi için bazen sivi yaglarin ticari üretiminde kullanilan bir islemdir. Baslangiçta kati içermeyen bir ürün üretmek için pamuk tohumu yagina uygulandi. Genellikle yaglarin doymus yag asidi içerigini azaltmak için kullanilir. T ransesteri'fîkasyon Transesterifikasyon, baslangiçta yag asitlerini TAG'lerden serbest yag asitleri veya yag asidi esterleri, genellikle yag asidi etil esterleri olarak serbest birakarak, TAG'ler içinde ve arasinda yag asitlerini degistiren bir islemdir. Bir fraksiyonlama prosesi ile birlestirildiginde transesterifikasyon, lipitlerin yag asidi bilesimini degistirmek için kullanilabilir (Marangoni ve digerleri, 1995). Transesterifikasyon, kimyasal veya enzimatik araçlardan birini kullanabilir; ikincisi, TAG üzerindeki yag asidi için konuma özgü olabilen veya bazi yag asitlerini digerlerine tercih eden lipazlari kullanir (sn-l/3 veya sn -2 spesifik). Bir yagdaki LC-PUFA konsantrasyonunu arttirmak için yag asidi fraksiyonlamasi, örnegin dondurarak kristallestirme, üre kullanarak kompleks olusturma, moleküler damitma, süperkritik siVi ekstraksiyonu ve gümüs iyonla kompleks olusturma gibi teknikte bilinen yöntemlerden herhangi biri ile elde edilebilir. Üre ile kompleks olusumu, yagdaki doymus ve tekli doymamis yag asitlerinin düzeyinin azaltilmasinda basitligi ve etkinligi nedeniyle tercih edilen bir yöntemdir (Gamez ve dig., 2003). Baslangiçta yagin TAG'leri, genellikle yag asidi esterleri formunda, hidroliz veya lipazlar yoluyla kendilerini olusturan yag asitlerine bölünür ve bu serbest yag asitleri veya yag asidi esterleri, daha sonra kompleks olusumu için ürenin etanolik bir çözeltisi ile karistirilir. Doymus ve tekli doymamis yag asitleri, üre ile kolayca kompleks olusturur ve sogutma sirasinda kristallenir ve daha sonra süzülerek uzaklastirilabilir. Üre olmayan komplekslestirilmis fraksiyon böylece LC-PUFA ile zenginlestirilir. Hidrojenasyon Yag asitlerinin hidrojenasyonu, tipik olarak bir katalizör varliginda hidrojen ile muameleyi içerir. Katalitik olmayan hidrojenasyon yalnizca çok yüksek sicakliklarda gerçeklesir. Bitkisel yaglarin islenmesinde hidrojenasyon yaygin olarak kullanilmaktadir. Hidroj enasyon, doymamis yag asitlerini doymus yag asitlerine ve bazi durumlarda trans yaglara dönüstürür. Hidrojenasyon, siVi bitkisel yaglarin, margarinde bulunanlar gibi kati veya yari kati yaglara dönüstürülmesiyle sonuçlanir. Yagin doyma derecesinin degismesi, erime araligi gibi bazi önemli fiziksel özelliklerin degismesine neden olur, bu nedenle siVi yaglar yari kati hale gelir. Pisirme için kati veya yari kati yaglar tercih edilir çünkü yagin unla karisma sekli, pismis üründe daha arzu edilen bir doku olusturur. Kismen hidrojenlenmis bitkisel yaglar, hayvansal kaynakli yaglardan daha ucuz oldugundan, çok çesitli kivamlarda bulunabildiginden ve diger arzu edilen özelliklere sahip oldugundan (örnegin artan oksidatif stabilite/daha uzun raf ömrü), çogu ticari firinlanmis ürünlerde kati yag olarak kullanilan baskin yaglardir. Bir düzenlemede bulusa ait lipit/yag, hidrojenlenmemistir. Bir lipit veya yagin hidrojenlenmediginin bir göstergesi, TAG'inda herhangi bir trans yag asidinin bulunmamasidir. Yaglarin Kullanim Alanlari Burada açiklanan yöntemlerle üretilen tohum yagi, tercihen aspir tohumu yagi gibi lipitler/yaglar çesitli kullanimlara sahiptir. Bazi düzenlemelerde lipitler, gida yaglari olarak kullanilir. Diger düzenlemelerde lipitler rafine edilir ve yaglayicilar olarak veya plastiklerin sentezi gibi diger endüstriyel kullanimlar için kullanilir. Kozmetik, sabun, yumusatici, elektrik yalitimi veya deterjan üretiminde kullanilabilir. Yüzey aktif maddeler veya emülgatörler gibi tarimsal kimyasallarin üretilmesi için kullanilabilir. Bazi düzenlemelerde lipitler, biyodizel üretmek için rafine edilir. Bulusun yagi avantajli bir sekilde boyalarda veya verniklerde kullanilabilir, çünkü linolenik asidin bulunmamasi renginin kolayca solmayacagi anlamina gelir. Bulusun bir yöntemi kullanilarak üretilen bir endüstriyel ürün; yag asidi esterleri, tercihen yag asidi metil esterleri ve/Veya yag asidi etil esterleri gibi bir hidrokarbon ürünü; metan, etan veya daha uzun zincirli bir alkan gibi bir alkan; daha uzun zincirli alkanlarin bir karisimi; bir alken; bir biyoyakit; karbon monoksit ve/Veya hidrojen gazi; etanol, propanol veya bütanol gibi bir biyoalkol; biyokömür veya karbon monoksit, hidrojen ve biyokömürün bir kombinasyonu olabilir. Endüstriyel ürün, alkanlarin veya alkanlarin ve alkenlerin bir karisimi, tercihen agirlikli olarak (%50) C4-C8 alkanlar veya agirlikli olarak C6 ila ClO alkanlar veya agirlikli olarak C6 ila C8 alkanlardan olusan bir karisim gibi bu bilesenlerden herhangi birinin bir karisimi olabilir. Endüstriyel ürün karbondioksit veya su degildir, ancak bu moleküller endüstriyel ürünle kombinasyon halinde üretilebilir. Endüstriyel ürün, atmosferik basinç/oda sicakliginda bir gaz veya tercihen bir siVi veya biyokömür gibi bir kati olabilir veya proses, daha sonra ayrilabilen karbon monoksit, hidrojen gazi, alkanlar ve biyokömür gibi bir gaz bileseni, bir siVi bilesen ve bir kati bilesenin bir kombinasyonunu üretebilir. Bir düzenlemede hidrokarbon ürünü agirlikli olarak yag asidi metil esterleridir. Alternatif bir düzenlemede hidrokarbon ürünü, yag asidi metil esterlerinden baska bir üründür. Proseste isi; piroliz, yanma, gazlastirma veya enzimatik sindirim (anaerobik sindirim, kompostlastirma, fermantasyon dahil) ile birlikte uygulanabilir. Daha düsük sicaklikta gazlastirma, örnegin yaklasik 700°C ila yaklasik 1000°C arasinda gerçeklesir. Daha yüksek sicaklikta gazlastirma, örnegin yaklasik l200°C ila yaklasik 1600°C arasinda gerçeklesir. Düsük sicakliktaki piroliz (daha yavas piroliz) yaklasik 400°C'de gerçeklesirken, daha yüksek sicakliktaki piroliz yaklasik 500°C'de gerçeklesir. Mezofilik sindirim yaklasik 20°C ila yaklasik 40°C arasinda gerçeklesir. Termofilik sindirim yaklasik 50°C ila yaklasik 65°C arasinda gerçeklesir. Kimyasal yöntemler arasinda, bunlarla sinirli olmamak üzere, katalitik parçalama, anaerobik sindirim, fermantasyon, kompostlastirma ve transesterifikasyon yer alir. Bir düzenlemede kimyasal bir araç, isiyla birlikte uygulanabilen bir katalizör veya katalizör karisimi kullanir. Islemde homojen bir katalizör, heterojen bir katalizör ve/veya bir enzimatik katalizör kullanilabilir. Bir düzenlemede katalizör, bir geçis metali katalizörü, bir moleküler elek tipi katalizör, bir aktiIlestirilmis alümina katalizörü veya bir katalizör olarak sodyum karbonattir. Katalizörler arasinda süllürik asit gibi asit katalizörleri veya potasyum veya sodyum hidroksit veya diger hidroksitler gibi alkali katalizörler bulunur. Kimyasal araç, lipitteki yag asitlerinin transesterifikasyonunu içerebilir; bu islemde homojen bir katalizör, heterojen bir katalizör ve/veya bir enzimatik katalizör kullanilabilir. Dönüsüm, isi uygulayan ve kimyasal araçlar uygulayabilen pirolizi içerebilir ve bir katalizör olarak bir geçis metali katalizörü, bir moleküler elek tipi katalizör, bir aktiIlestirilmis alümina katalizörü ve/veya sodyum karbonat kullanabilir. Enzimatik yöntemler arasinda, bunlarla sinirli olmamak üzere, örnegin anaerobik sindirim, fermantasyon veya kompostlama yoluyla mikroorganizmalar tarafindan sindirim veya rekombinant enzimatik proteinler yoluyla sindirim yer alir. Yem maddeleri/Besinler Bulusun lipit/yagi, çok yüksek oleik asit içerigi ve düsük seviyelerde linoleik asit ( TR TR TR TR TR TR TR TR TR TR TR TR TR TR TR DESCRIPTION ELECTIVE SAFFLOWER EVENT FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to select transgenic safflower events that produce high levels of oleic acid. BACKGROUND OF THE INVENTION Vegetable oils are an important source of dietary fat for humans, representing about 25% of caloric intake in developed countries (Broun et al., 1999). World production of vegetable oils is at least about 110 million tonnes per year, of which oilseed crops such as beans, canola, safflower, sunflower, cottonseed, and peanut, or plantation trees such as palm, olive, and coconut (Gunstone, 2001; Oil World Annual, 2004). Increasing scientific understanding and public awareness of the impact of individual fatty acid components of food oils on various aspects of human health are motivating the development of modified vegetable oils that enhance nutritional value while maintaining the functionality required for a variety of food applications. These modifications require knowledge of the metabolic pathways for plant fatty acid synthesis and the genes encoding the enzymes for these pathways (Liu et al., 2002; Thelen and Ohlrogge, 2002). Considerable attention is being paid to the nutritional effects of various fats and oils, particularly the effects of their components on cardiovascular disease, cancer, and various inflammatory conditions. High levels of cholesterol and saturated fatty acids in the diet are thought to increase the risk of heart disease, leading to dietary recommendations to reduce the intake of cholesterol-rich saturated animal fats in favor of cholesterol-free unsaturated vegetable oils (Liu et al., 2002). It has also been found that dietary cholesterol intake from animal fats can significantly increase total blood cholesterol levels, while fatty acids, including fats and oils, can have significant effects on serum cholesterol levels. Of particular interest is the effect of dietary fatty acids on the undesirable low-density lipoprotein (LDL) and desirable high-density lipoprotein (HDL) forms of cholesterol in the blood. Saturated fatty acids in general, particularly myristic acid (1420) and palmitic acid (1620), the major saturated fatty acids found in vegetable oils, have the undesirable property of elevating serum LDL-cholesterol levels and, consequently, increasing the risk of cardiovascular disease (Zock et al., 1994; Hu et al., 1997). However, stearic acid (1820), the other major saturated acid found in plant oils, has been shown not to elevate LDL-cholesterol and may actually lower total cholesterol (Bonanome and Grundy, 1988; Dougheity et al., 1995). Therefore, stearic acid is generally considered at least neutral with respect to cardiovascular disease risk (Tholstrup et al., 1994). On the other hand, unsaturated fatty acids, such as monounsaturated oleic acid (1821), have the beneficial property of lowering LDL-cholesterol (Roche and Gibney, 2000), thereby reducing the risk of cardiovascular disease. Oil high in oleic acid also has many industrial uses, including, but not limited to, lubricants, usually in the form of fatty acid esters, biofuels, raw materials for fatty alcohols, plasticizers, waxes, metal stearates, emulsifiers, personal care products, soaps and detergents, surfactants, pharmaceuticals, metalworking additives, raw materials for fabric softeners, inks, clear soaps, PVC stabilizers, alkyd resins, and intermediates for many other types of lower oleochemical derivatives. Oil processors and food manufacturers have traditionally relied on hydrogenation to reduce the level of unsaturated fatty acids in oils, thereby improving oxidative stability in frying applications, and also to provide solid fats for use in margarine and shortening. Hydrogenation is a chemical process that reduces the degree of unsaturation in oils by converting carbon-carbon double bonds to carbon-carbon single bonds. Full hydrogenation produces a fully saturated oil. However, partial hydrogenation results in increased levels of both saturated and monounsaturated fatty acids. Some of the monounsaturates formed during partial hydrogenation are in the form of trans isomers (such as elaidic acid, the trans isomer of oleic acid) rather than the naturally occurring cis isomers (Sebedio et al., 1994; Fernando San Juan, 1995). It is now known that, compared to cis-unsaturated fatty acids, trans fatty acids are as effective as palmitic acid in raising serum LDL cholesterol levels (Mensink and Katan, 1990; Noakes and Clifton, 1998) and lowering serum HDL cholesterol (Zock and Katan, 1992), thereby contributing to an increased risk of cardiovascular disease (Ascherio and Willett, 1997). As a result of increasing awareness of the anti-nutritional effects of trans fatty acids, there is now a growing trend in the food industry to move away from the use of hydrogenated oils and fats and oils that provide both nutritional value and functionality without hydrogenation, particularly those rich in oleic acid when oils are required, or those rich in stearic acid when a solid or semi-solid oil is preferred. There is a need for other lipids and oils with high oleic acid content and their reliable sources. BRIEF DESCRIPTION OF THE INVENTION The present inventors have identified select safflower strains that can be used for the commercial scale production of oil containing high levels of oleic acid. In one aspect, the present invention provides a safflower plant cell comprising: (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO: 13 and a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO: 14, (b) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO: 21 and a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO: 22, (c) a T-DNA molecule, wherein the T-DNA molecule is inserted into a region of a chromosome of the cell, wherein the region has a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO: 11, (d) a T-DNA molecule, wherein the T-DNA molecule is inserted into a region of a chromosome of the cell, wherein the region has a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO: 18, or (e) any combination thereof. In one embodiment, the safflower plant cell contains (a) and (c), for example, in the case of GOR73226, both (a) and (c) apply. In one embodiment, the safflower plant cell contains (b) and (d), for example, in the case of GOR73240, both (b) and (d) apply. In one embodiment, the safflower plant cell contains (a) to (d), for example, the safflower cell has both T- (a) and (b), but not both. (a) or (b) may be present in the safflower genome in a heterozygous state or preferably in a homozygous state. In homozygous embodiments, the safflower cell either lacks SEQ ID NO: 11 (in the case of (a)) or lacks SEQ ID NO: 18 (in the case of (b)) as adjacent sequences due to the T- DNA insertion. In another aspect, the present invention provides a safflower plant cell comprising one or more of: (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO:7, (b) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as nucleotides 296 to 8640 of SEQ ID NO:7, (c) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO:33, (d) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO:34, a polynucleotide having identity. In a preferred embodiment, all of (a), (b), and (e) apply. In one embodiment, (a), (b), (c), and (e) apply, for example, in GOR73226. In one embodiment, (a), (b), (d) and (e) apply, for example, to GOR73240. In a preferred embodiment, the cell has a single T-DNA insertion. In one embodiment, the polynucleotide(s) and/or T-DNA(s) are stably integrated into the genome of the cell, preferably the nuclear genome of the cell. In one embodiment, the safflower plant cell or a plant or plant part of the invention is homozygous for the polynucleotide(s) and/or T-DNA(s). Alternatively, the safflower cell, plant or plant part, for example, in the case of F1 seed, is heterozygous for the polynucleotide(s) and/or T-DNA(s). In one embodiment, oleic acid constitutes at least 90% by weight of the total fatty acids in a safflower plant cell of the invention. In one embodiment, oleic acid constitutes 90 to 95% by weight of the total fatty acids in a safflower plant cell of the invention. In one embodiment, oleic acid constitutes 91 to 93% by weight of the total fatty acids in a safflower plant cell of the invention. In one embodiment, oleic acid constitutes 91.5 to 92.5% by weight of the total fatty acids in a safflower plant cell of the invention. In one embodiment, at least 95% by weight of the lipid in a plant cell of the invention is triacylglycerol (TAG). In one embodiment, palmitic acid constitutes less than 2.7% by weight of the total fatty acids in a safflower plant cell of the invention. In one embodiment, palmitic acid constitutes 2.5 to 2.7% by weight of the total fatty acids in a safflower plant cell of the invention. In one embodiment, linoleic acid constitutes less than 1.7% by weight of the total fatty acids in a safflower plant cell of the invention. In one embodiment, linoleic acid constitutes 1.2% to 1.6% by weight of the total fatty acids in a safflower plant cell of the invention. In one embodiment, oc-linolenic acid constitutes less than 0.2% by weight of the total fatty acids in a safflower plant cell of the invention. In one embodiment, oc-linolenic acid (ALA) constitutes less than 0.1% or about 0.1% by weight of the total fatty acids in a safflower plant cell of the invention. In one embodiment, the total fatty acids in the safflower plant cell of the invention do not contain oc-linolenic acid and/or oc-linolenic acid is not detectable. In one embodiment, a safflower plant cell of the invention comprises a hygromycin phosphotransferase polypeptide and a polynucleotide encoding the polypeptide, e.g., a hygromycin phosphotransferase polypeptide comprising an amino acid sequence as provided in SEQ ID NO: 8. In one embodiment, a safflower plant cell of the invention, wherein the cell is a safflower seed cell, has reduced CtFAD2-2 protein activity and reduced CtFATB-3 protein activity compared to the corresponding safflower cell lacking the polynucleotide(s) and/or T-DNA(s). In one embodiment of the safflower seed cell, the level of CtFAD2-2 protein activity is preferably reduced by 90% to 99% relative to the corresponding safflower cell lacking the polynucleotide(s) and/or T-DNA(s), preferably the level of protein activity is reduced by 50% to 95%, preferably by 60% to 95%, or by 75% to 95%, relative to the corresponding safflower cell lacking the polynucleotide(s) and/or T-DNA(s). In one embodiment, a safflower plant cell of the invention has some CtFATB-3 protein activity and some CtFATB-3 protein activity. In one embodiment of the safflower cell, which is a cell other than the seed cell, the level of CtFATB-3 protein activity is significantly associated with the seed-specificity of the promoter relative to the corresponding safflower cell lacking the CtFADi and/or T-DNA(s). In one embodiment, the safflower cell outside the seed cell still produces the Hph polypeptide. In one embodiment, a safflower plant cell of the invention contains the 01 allele of the CtFAD2-1 gene, or an 01] allele of the CtFAD2-1 gene, or both alleles. In a preferred embodiment, the 01 allele or the 01] allele of the CtFAD2-1 gene is present in the homozygous state. In a preferred embodiment, the allele is an 01 allele. In one embodiment, a safflower plant cell of the invention is a seed cell in a developing seed or a mature seed. In one embodiment, a safflower plant cell of the invention is present in the seed of a field-grown safflower plant or in a harvested seed. In another aspect, the present invention provides a safflower seed comprising a cell comprising: (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO: 13 and a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO: 14, (b) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO: 21 and a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO: 22, (c) a T-DNA molecule, wherein the T-DNA molecule is inserted into a region of a chromosome of the cell, wherein the region has a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO: 11, (d) a T-DNA molecule, wherein the T-DNA molecule is inserted into a region of a chromosome of the cell, wherein the region has a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO: 18, or (e) any combination thereof. In another aspect, the present invention provides a safflower seed comprising a cell comprising one or more of the following: (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO:7, (b) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as nucleotides 296 to 8640 of SEQ ID NO:7, (c) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO:33, (d) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO:34, a polynucleotide having identity. In another aspect, the present invention provides a safflower seed comprising a cell of the invention. A seed of the invention may have any of the features outlined above with respect to a cell of the invention. For example, in one embodiment, oleic acid preferably comprises at least 90% by weight of the total fatty acids in the safflower plant seed of the invention. In another aspect, the present invention provides a collection of safflower seeds wherein at least 95% of the seeds are seeds of the invention. In another aspect, the present invention provides a safflower plant or portion thereof comprising a cell of the invention. In one embodiment, the plant or portion thereof comprises: (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO: 13 and a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO: 14, (b) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO: 21 and a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO: 22, (c) a T-DNA molecule, wherein the T-DNA molecule is inserted into a region of a chromosome of the cell, wherein the region has a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO: 11, (d) a T-DNA molecule, wherein the T-DNA molecule is inserted into a region of a chromosome of the cell, wherein the region has a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO: 18, or (e) any combination thereof. In another aspect, the present invention provides a safflower plant or a portion thereof, comprising a cell comprising one or more of: (a) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO:7, (b) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as nucleotides 296 to 8640 of SEQ ID NO:7, (c) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO:33, (d) a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO:34, a polynucleotide having identity to a portion of the foregoing. In another aspect, the present invention provides a safflower plant or a portion thereof, comprising a cell of the invention. A plant of the invention may have any of the characteristics outlined above with respect to a cell of the invention. For example, in one embodiment, oleic acid comprises at least 90%, preferably 90% to 95%, by weight, of the total fatty acids in a portion, e.g., seed, of the safflower plant of the invention. In one embodiment, the plant comprises cells of the invention. In one embodiment, the plant portion is a seed. In one embodiment, the plant comprises or may produce a seed of the invention. The present inventors have found that plants of the invention produce seeds that consistently contain high levels of oleic acid. In one embodiment, the level of oleic acid in the seed is consistent across multiple generations, such as nine generations. In one embodiment, the level of oleic acid in the seed varies between 91.5% and 92.5% across multiple generations, such as nine generations. In one embodiment, the level of oleic acid by weight of the total fatty acid content varies by less than 5%, less than 4%, less than 2%, or less than 1% across multiple generations, such as nine generations. The present inventors have also found that the plants of the invention produce seed with an oil content that is not significantly decreased when compared to the oil content of corresponding safflower plant seed lacking the polynucleotide(s) and T-DNA(s) of the invention grown under the same conditions, or preferably, seed with an increased oil content relative to non-transgenic seed. In one embodiment, the oil content is consistent on an absolute basis by 1-4%, e.g., from 31% to at least 32%, or across, e.g., nine generations. In one embodiment, the oil content is by weight. In one embodiment, the oil content varies by less than 5%, less than 4%, less than 2%, or less than 1% across multiple generations, e.g., nine generations. In one embodiment, a safflower plant or portion thereof of the invention is produced by growing the seed of the invention. In one embodiment, the polynucleotide(s) and/or T-DNA(s) are stably integrated into the genome of the plant or portion thereof (such as a seed) for at least nine generations. In one embodiment, one or more or all of the following traits are the same as a corresponding plant lacking the polynucleotide(s) and/or T-DNA(s) grown under the same conditions: seedling vigor, plant height, time to flowering, lodging, seed crude protein content, seed crude oil content, seed ash content, and seed carbohydrate content. In one embodiment, the safflower plant or portion thereof contains a transgene other than the polynucleotide(s) and/or T-DNA(s). Pollen from a plant of the invention is also provided. Also provided is an egg of a plant of the invention. Also provided is a tissue culture of renewable cells, wherein the cells are cells of the invention. In one embodiment, the tissue is selected from the group consisting of leaves, pollen, embryos, roots, root tips, capsules, flowers, ovaries, and stems. In another aspect, the present invention provides a safflower plant or a method for producing seeds therefrom, the method comprising: (a) crossing a first safflower plant of the invention with a second safflower plant to obtain new safflower seed; and (b) growing the new safflower seed under plant growth conditions to produce a new safflower plant, and optionally (c) harvesting seeds from the next generation safflower plant. In one embodiment, the second safflower plant has at least one agronomically desirable trait that is lacking in the first safflower plant. Examples of suitable agronomic traits include, but are not limited to, herbicide resistance, insect resistance, bacterial disease resistance, fungal disease resistance, viral disease resistance, female sterility, or male sterility. In one embodiment, the agronomic trait is conferred by a transgene. In one embodiment, the method further comprises repeating steps (a) and (b) one or more times. In one embodiment, the harvested seed is first generation (F1) hybrid safflower seed. In one embodiment, the second safflower plant is a safflower plant of the invention. In one embodiment, the second safflower plant does not produce seed of the invention. In one embodiment, the method further comprises: (d) backcrossing the one or more plant generations of step (b) with plants of the same genotype as the second safflower plant in sufficient numbers to produce a plant having at least 75%, at least 80%, or at least 90% of the second safflower plant genotype. In another aspect, the present invention provides a method for identifying a safflower plant, the method comprising analyzing DNA obtained from the plant for one or more polynucleotide(s) and/or T-DNA molecule(s) identified herein. In a related aspect, the present invention provides a method for identifying a plant, plant part, preferably a seed; The invention includes a method for determining whether a plant, plant part, or seed of the invention is present by analyzing DNA obtained from such plant, plant part, or seed for one or more polynucleotide(s) and/or T-DNA molecule(s) as defined herein. In one embodiment, a collection of safflower seeds is tested to determine whether a seed of the invention is present in the collection. In one embodiment, the polynucleotide(s) and/or T-DNA molecule(s) are detected using a technique selected from the group consisting of restriction fragment length polymorphism analysis, amplification fragment length polymorphism analysis, nucleic acid sequencing, and/or nucleic acid amplification. In one embodiment, the method comprises: i) obtaining a DNA sample from the safflower plant or a portion thereof, such as a seed, cell, ii) mixing the sample with a pair of primers and reagents for nucleic acid amplification capable of amplifying a polynucleotide and/or T-DNA or a portion thereof as defined herein, iii) performing an amplification reaction, and iv) analyzing the product of step iii) for an amplification product. In one embodiment, the DNA is from a seed collection, which may or may not comprise a seed of the invention. In one embodiment, the amplification product comprises an integration site of the polynucleotide and/or T-DNA. In a preferred embodiment, the amplification product comprises any one of SEQ ID NOs: 14, 15, 21, or 22. In one embodiment, the primer pair TTGGATACCGAGGGGAATTTATGGAAC (SEQ ID NO: ) and CAATCACAATAAGTCGTTGC (SEQ ID NO: 36), or a variant of one or both thereof, e.g., shorter or longer, that hybridizes to the same region of DNA, is used to detect a polynucleotide comprising a polynucleotide having a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO: 13 and a polynucleotide having a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO: 14, such as in strain GOR73226, where a 562 bp amplicon was produced. In one embodiment, the primer pair TTGGATACCGAGGGGAATTTATGGAAC (SEQ ID NO: 37) and TGATAACGATCTTGCGCAAC (SEQ ID NO: 38), or a variant of one or both thereof, e.g., shorter or longer, that hybridizes to the same region of DNA, is used to detect a polynucleotide comprising a polynucleotide having a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO: 21 and a polynucleotide having a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO: 22, such as in strain GOR73240, where a 199 bp amplicon was produced. In one embodiment, the primer pair AAAAGCCTGAACTCACCGC (SEQ ID NO: 39) and TCGTCCATCACAGTTTGCC (SEQ ID NO: 40), or a variant of one or both of them, e.g., shorter or longer, that hybridizes to the same region of DNA, is used to detect a gene encoding Hph polypeptide, such as in strains GOR73226 and GOR73240, where a 689 bp amplicon is produced. In one embodiment, the method comprises: i) obtaining a DNA sample from the safflower plant or a portion thereof, such as a seed, cell, ii) mixing the sample with a probe and reagents for polynucleotide hybridization that are capable of hybridizing to a polynucleotide and/or T-DNA or a portion thereof as defined herein, iii) performing a hybridization reaction, and iv) analyzing the product of step iii) for the probe. In one embodiment, the DNA is from a seed collection, which may or may not contain a seed of the invention. In one embodiment, the probe hybridizes to a region encompassing the integration site of the polynucleotide and/or T-DNA, but does not produce a detectable signal if the polynucleotide and/or T-DNA is not present in the DNA. In another aspect, the present invention provides a method for producing safflower seed, comprising: a) growing a plant of the invention in a field, preferably as part of a population of at least 1000 plants, and b) collecting the seed. In one embodiment, the cultivation is done in the open field. In another aspect, the present invention provides a method for producing safflower oil, comprising obtaining the seed of the invention and processing the seed to obtain safflower oil. In another aspect, the present invention provides oil obtained from or obtainable by one or more of the cell of the invention, the seed of the invention, the safflower plant of the invention, or the method of the invention. In another aspect, the present invention provides a composition, preferably a food or feed composition, comprising one or more of the cell of the invention, the seed of the invention, the safflower plant of the invention, the oil of the invention, or the oil obtained by a method of the invention, and one or more acceptable carriers. In another aspect, the present invention provides for the use of one or more of the cell of the invention, the seed of the invention, the safflower plant of the invention, or oil of the invention, the composition of the invention, or a product produced by a method of the invention, for the production of an industrial product. In another aspect, the present invention provides a method for producing a feedstuff/food, the method comprising mixing one or more of the cell of the invention, the seed of the invention, the safflower plant of the invention, the oil of the invention, the composition of the invention, or an oil produced by a method of the invention with at least one other food ingredient. In a related aspect, the present invention provides a method for producing a feedstuff/food, the method comprising heating, e.g., frying, the food product in the presence of the oil of the invention or the composition of the invention, or in oil produced by a method of the invention. In another aspect, the present invention; The present invention provides a feedstuff/nutrient, cosmetic or chemical substance, comprising reacting one or more of the cell of the invention, the seed of the invention, the safflower plant of the invention, the oil of the invention, the composition of the invention or the oil produced by a method of the invention. In another aspect, the present invention provides seed meal extracted from the safflower seed of the invention. The seed meal may contain residual oil of the invention, for example, if the seed of the invention is crushed to release a majority of the oil from the seed, or the seed meal may have been further treated with a solvent to extract the oil and thus be devoid of seed oil, but still contain DNA including polynucleotide(s) and/or T-DNAs in the seed. In another aspect, the present invention provides a process for producing an industrial product; the process comprises the following steps: i) obtaining one or more of the inventive cell, seed of the invention, safflower plant of the invention, oil of the invention, composition of the invention, or oil produced by the method of the invention; ii) optionally physically processing one or more of the inventive cell, seed of the invention, safflower plant of the invention, oil of the invention, or composition of the invention of step i); iii) converting at least a portion of the inventive cell, seed of the invention, safflower plant of the invention, oil of the invention, or composition of the invention, or the physically processed product of step ii) into an industrial product by applying heat, chemical or enzymatic means, or any combination thereof, to lipids; and iv) recovering the industrial product, thereby obtaining the industrial product. In another aspect, the present invention provides a method for producing biofuel; The method comprises: i) reacting one or more of the cell of the invention, the seed of the invention, the safflower plant of the invention, the oil of the invention, the composition of the invention, or an oil produced by a method of the invention with an alcohol, optionally in the presence of a catalyst, to produce alkyl esters, and ii) optionally blending the alkyl esters with petroleum-based fuel. In one embodiment, the alkyl esters are methyl esters. In another aspect, the present invention provides a kit comprising primers and/or probes for detecting a polynucleotide and/or T-DNA as defined herein. For example, the kit may include two or more primers identified in Table 1. The kit may also include instructions for use and/or reagents for, for example, performing a DNA amplification reaction and/or probe hybridization and detection. Any embodiment herein shall be deemed to apply mutatis mutandis to any other embodiment unless specifically stated otherwise. The scope of the present invention is not limited to the specific embodiments described herein, which are for illustrative purposes only. Functionally equivalent products, compositions, and methods as described herein are expressly within the scope of the invention. Throughout this specification, unless specifically stated otherwise or unless the context otherwise requires, reference to a single step, composition of matter, group of steps, or group of compositions of matter shall be construed to include one or more (i.e., one or more) of such steps, compositions of matter, groups of steps, or groups of compositions of matter. The invention is hereinafter illustrated by way of the following non-limiting Examples and with reference to the accompanying drawings. BRIEF DESCRIPTION OF THE APPENDED FIGURES Figure 1: Schematic sketch of the T-DNA region of the transformation vector pCW732. Features include: RB = Right Border; LB = Left Border; Flax lignin = flax [inin promoter (2033 bp); CtFATB = Carthamus tinctorius L palmitoyl-ACP thioesterase sequence PDK intron sequence (768 bp); int2 = Catalase 1 intron sequence (196 bp); ocs3' = octopine synthase transcription terminator/polyA region (708 bp); nos3' = nopaline synthase transcription hygromycin phosphotransferase gene (1216 bp). Figure 3: Schematic genetic map of the T-DNA from pCW732 when inserted into the safflower genome; Southern blot hybridization analysis shows the positions of the Pacben and Kpn restriction sites and fragments. The positions of the Pacben and KpnI sites on the right in the flanking genomic DNA depend on the T-DNA insertion site and are unique for each individual transgenic line. The position of the probe is shown. Not drawn to scale. Figure 4: Southern blot hybridization analysis of aspirin transformed with T-DNA from the pCW732 vector. DNAs from individual transgenic safflower lines were digested with either Kpnben or Pac and probed with a radiolabeled DNA fragment from the protein-coding region of the hygromycin phosphotransferase gene. Lanes from left to right: DNA digested with KpnI enzyme, S- as a non-transgenic negative control; pCW; pCW. The order of DNA samples was replicated in Pac digestion, with lanes aligned to the right. Fragment sizes were estimated from in silico digestion. Figure 5: Sequence characterization of the T-DNA insertion of GOR73226. Sequenced amplicons identified from PCR-based genome walking analysis (E26_RB Junction and E26_LB Junction) were aligned to the sequences of the pCW732 vector (pCW732_LB and pCW732_RB) and the draft safflower genomic sequence database (Bower16_13 860-7_8). Figure 6: Sequence characterization of the T-DNA insertion of GOR73240. Sequential amplicons identified from PCR-based genome walk-through analysis (E40_RB Junction and E40_LB Junction) were aligned to the sequences of the pCW732 vector (pCW732_LB and pCW732_RB) and the draft safflower genomic sequence database (gX_s317 Scaff097804). Figure 7: Schematic structure of the T-DNA aspirated from pCW732 to generate transgenic event GOR73226. The schematic map shows the 1000 bp upstream and downstream of the insertion site, the location of a deletion, and the location of elements of the T-DNA sequences remaining after the insertion. E26TF and E26GR are priming sites for GOR73226-specific PCR. The schematic map shows 1000 bp upstream and 960 bp downstream of the insertion site, duplications, the location of a deletion, and the location of elements of the T-DNA sequences remaining after the insertion. E40GF and E40GR are priming regions for genome walk-through analysis. The 34 base deletion at the site of the 35 bp duplication is also the priming region. Figure 9: Negative correlation between linoleic and oleic acid in a cross between GOR40 and a linoleic breeding line, see Example 4. There is a negative correlation between the percentage of linoleic acid and oleic acid. regulation. CtFAD2.2 and CtFA T3-.? for each event and non-transgenic safflower control plants compared to an average of three non-transgenic safflower plants. have significantly decreased (P<0.05) transcript abundance levels for genes. Mean relative mRNA expression levels with the same letter are not significantly different from the vigor score. For each region, plots were assigned a vigor score indicating emergence and establishment, where a score of 0 represents no vigor and a score of 9 represents the most vigorous plot. Bars represent the mean vigor score ± standard error of the plant height. For each region, the height of 10 plants in each plot was measured and averaged. Bars represent the mean height ± standard error of the plant height scores. For each region, disease incidence was assessed on 10 leaves in each plot, where a score of 0 represents high disease incidence and a score of 9 represents the healthiest leaves. Bars represent mean disease score at each site. For each site, the incidence of insect damage was assessed for 10 leaves in each plot, where a score of 0 represents high insect damage and a score of 9 represents the least damaged leaves. Bars represent mean disease score ± standard error of the mean yield at each site. For each site, the yield of each plot was evaluated and converted to T/ha. Bars represent mean yield ± standard error of the mean yield at each site. KEY TO SEQUENCE LISTING SEQ ID NO:1 - Amino acid sequence of safflower FAD2-2 polypeptide (CtFAD2-2, Accession No. KC257448). SEQ ID NO:2 - Nucleotide sequence of the cDNA corresponding to the mRNA encoding safflower FAD does not contain a polyA tail. Translation initiation is at nucleotides 81-1229 of the protein coding region. SEQ ID NO:3 - Amino acid sequence of the safflower FATB-3 polypeptide (CtFATB-3, Accession No. SEQ ID NO:4 - The nucleotide sequence of the cDNA corresponding to the mRNA encoding the safflower FATB-3 gene (CtFATB-3) does not contain a polyA tail. Translation start codon 237 corresponds to nucleotides 237-1319 of the protein coding region; nucleotides 373-784 were used in the FATB-3 hpRNA. SEQ ID NO:5 - The nucleotide sequence of the cDNA region for the safflower FAD2-2 gene used in the pCW732 genetic construct; corresponds to nucleotides 426-1181 of SEQ ID NO:2. SEQ ID NO:6 - The nucleotide sequence of the cDNA region for the safflower FATB-3 gene used in the pCW732 genetic construct; sequence corresponds to nucleotides 485-784 of SEQ ID NO:4. SEQ ID NO:7 - Nucleotide sequence of the region of the pCW732 genetic construct encompassing the T-DNA. Nucleotides 6-168, Right nerve region, T-DNA Right nerve starts at nucleotide 128; CtFATB-3 region in the orientation; nucleotides 2816-3573, trinerva PDK gene in the sense orientation; nucleotides 4445-4634, reverse-oriented intron from the Cat-1 gene; nucleotides ocs3' transcription terminator/polyA region; nucleotides 6673-7124, Hph coding region containing the intron; nucleotides 8366-8640, nos3' transcription terminator/polyadenylation region; Nucleotides 8817-9266, T-DNA left nerve region, Left Nerve ending at nucleotide 9222. SEQ ID NO: 8 - Amino acid sequence of hygromycin phosphotransferase polypeptide (Hph). SEQ ID NO: 9 - Nucleotide sequence of the Right nerve sequence inserted into GOR73226 (pCW732_RB) (see Figure 5). SEQ ID NO: 10 - Nucleotide sequence of the GOR73226 Right nerve junction sequence (E26_RB_junction); nucleotides 1-81 correspond to the adjacent genomic DNA of aspirin, and nucleotides 82-122 correspond to the Right nerve sequence of the T-DNA (see Figure 5). SEQ ID NO: 11 - Processing of a Safflower scaffold sequence to which the T-DNA of GOR73226 is attached nucleotides 77-231 were deleted during (see Figure 5). SEQ ID NO: 12 - GOR73226 The nucleotide sequence of the left nerve junction sequence (E26_LB_junction) corresponds to the adjacent genomic DNA of aspirin (see Figure 5). SEQ ID NO: 13 - The nucleotide sequence of the left nerve junction sequence inserted into GOR73226 (E26_LB) (see Figure 5). SEQ ID NO: 14 - GOR73226 The nucleotide sequence of a portion of the right nerve junction sequence; nucleotides 1-20 correspond to the adjacent genomic DNA of safflower, nucleotides 21-40 correspond to the T-DNA sequence inserted in the right nerve. SEQ ID NO: 15 - GOR73226 The nucleotide sequence of the left nerve junction sequence The nucleotide sequence of the part; nucleotides 1-20 correspond to the T-DNA sequence inserted in the Left nerve, nucleotides 21-40 correspond to the adjacent safflower genomic DNA. SEQ ID NO: 16 - The nucleotide sequence of the Right nerve sequence inserted into GOR73240 (see Figure 6). SEQ ID NO: 17 - The nucleotide sequence of the Right nerve junction sequence (E40_RB_junction) of GOR73240 corresponds to the Right nerve sequence inserted into GOR73240 (see Figure 6). SEQ ID NO: 18 - Nucleotides 171-204 of a Safflower scaffold sequence to which the T-DNA of GOR73240 was inserted were copied and nucleotides 171-204 were deleted in the Left nerve junction (see Figure 6). SEQ ID NO: 19 - GOR73240 The nucleotide sequence of the left nerve junction array (E40_LB_junction); nucleotides 1-44 correspond to the left nerve junction array, nucleotides 45-79 correspond to a 35 bp safflower genomic sequence copied during transformation, nucleotides 80-175 correspond to safflower genomic DNA. A 34 bp genomic sequence was deleted during transformation (see Figure 6). sequence (see Figure 6). SEQ ID NO: 21 - The nucleotide sequence of a portion of the right nerve junction array; nucleotides 1-20 correspond to adjacent safflower genomic DNA, nucleotides 21-40 correspond to the T-DNA sequence inserted in the right nerve. SEQ ID NO: 22 - Nucleotide sequence of a portion of the left nerve junction sequence; nucleotides 1-20 correspond to the T-DNA sequence inserted in the left nerve, nucleotides 21-40 correspond to adjacent safflower genomic DNA. SEQ ID NO: 23 to 32 and 35 to 40 - Oligonucleotide primers. SEQ ID NO: 33 - Nucleotide sequence of the T-DNA inserted into GOR73226, including adjacent safflower genomic sequences. Nucleotides 1-996, CtFATB-3 region in the up-orientation of the T-DNA; nucleotides 3690-4445, trinerva PDK gene in the sense orientation; nucleotides 5319-5514, intron from the Cat-1 gene in the reverse orientation; nucleotides, ocs3' transcription terminator/polyA region; nucleotides 7645-7987, Hph coding region containing the intron; nucleotides 9239-9515, nos3' transcription terminator/polyadenylation region; nucleotides 9691-9851, T-DNA left border region; downstream safflower genomic sequence. SEQ ID NO:34 - CtFATB-3 region in the T-DNA orientation including adjacent safflower genomic sequences; nucleotides 3746-4501, trinerva PDK gene in the sense orientation; nucleotides 5375-5570, reverse-oriented intron from Cat-1 gene; nucleotides, ocs3' transcription terminator/polyA region; nucleotides 7701-8043 nucleotides, the Hph coding region containing the intron; nucleotides 9295-9571, the nos3' transcription terminator/polyadenylation region; nucleotides 9750-9762, the T-DNA left border region; nucleotides 9763-10726, the safflower genomic sequence downstream of the T-DNA. DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION General Techniques and Definitions Unless specifically defined otherwise, all technical and scientific terms used herein shall have the meaning commonly known to those of ordinary skill in the art (e.g., cell culture, molecular genetics, plant breeding, fatty acid chemistry, gene silencing, protein chemistry, and biochemistry). Unless otherwise indicated, the recombinant protein, cell culture, and immunological techniques employed in the present invention are standard procedures well known to those of skill in the art. Such techniques are described throughout the literature in 1. Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning, John Wiley and Sons (1984), J. Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989), T. A. Brown (ed.), Essential Molecular Biology: A Practical Approach, Volumes 1 and 2, IRL Press (1991), D. M. Glover and B. D. Hames (eds.), DNA Cloning: A Practical Approach, Volume 1, Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates and Wiley-Lane (eds.) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988), and J. E. Coligan et al. (eds.), Current Protocols in Immunology, John Wiley. Both meanings and As used herein, the term approximately means +/- 10%, more preferably +/- 5%, more preferably +/- 4%, more preferably +/- 3%, more preferably +/- 2%, more preferably +/- 1.5%, more preferably +/- 1%, still more preferably +/- 0.5% of the specified value unless otherwise stated. Throughout the specification, the word "contains" or variations such as "contains" or "comprising" indicate the inclusion of a specified element, integer or step but not the exclusion of another element, integer or step or group of elements, integers or steps. The term "safflower" as used herein refers to members of the species Carthamus tinctori'us. A "strain" is a term that has little generality among individuals sharing the same description. A diverse group of plants. A "strain" also refers to a homogeneous population of plants carrying substantially the same genetic material, with little or no genetic variation among individuals for at least one trait. A "variety" or term refers to a strain suitable for commercial production. For example, "genetically derived" as used in "genetically derived from parental lines" means that the trait in question is determined in whole or in part by some aspect of the genetic makeup of the plant in question. An "elite strain" as used herein is a group of strains obtained by transformation with the same transforming DNA or by backcrossing with plants obtained by such transformation, with respect to the expression and stability of the transgene construct(s), compatibility with the optimal agronomic traits of the containing plant, and the desired phenotypic trait. Therefore, the criteria for selecting an elite event are at least one, and advantageously all, of the following: (a) the presence of the transgene does not unduly compromise other desirable plant characteristics, such as those related to agronomic performance or commercial value; (b) the event is characterized by a well-defined molecular configuration that is stably heritable and for which suitable diagnostic tools for identity control can be developed; (c) the genes of interest in the transgene cassette exhibit correct, appropriate and stable spatial and temporal phenotypic expression, in both the heterozygous (or hemizygous) and homozygous states, at a commercially acceptable level across the range of environmental conditions to which plants carrying the event are likely to be exposed in normal agricultural use. The foreign DNA may also be associated with a position in the plant genome that permits introduction of desirable commercial genetic backgrounds. As used herein, GOR73226 specifies a safflower plant strain comprising a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO:13, a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO:14, and a T-DNA molecule; the T-DNA molecule being inserted into a region of a chromosome of the plant, wherein the region has a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO:11. This strain is available through the Budapest Treaty Accession No. The Applicant (Commonwealth Scientific and Industrial Research Organisation, Clunies Ross St, Acton ACT 2601, Australia) and its commercial partners (Go Resources, 15 Sutherland Street, Brunswick VIC 3056, Australia) agree that when seeds of this strain are not available through such a depository, they will be subject to the same conditions under the Budapest Treaty. As used herein, GOR73240 denotes a safflower plant strain comprising a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO:21, a polynucleotide comprising a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO:22 and a T-DNA molecule, the T-DNA molecule having been inserted into a region of a chromosome of the plant, wherein the region has a nucleotide sequence provided as SEQ ID NO:18. This strain is available through the Budapest Treaty Accession No. The Applicant (Commonwealth Organisation for Scientific and Industrial Research, Clunies Ross St, Acton ACT 2601, Australia) and its commercial partners (Go Resources, 15 Sutherland Street, Brunswick VIC 3056, Australia) have confirmed that seeds of this strain are available from such a depository. When not available through a depositary, it guarantees that the goods are available at a depository under the same conditions in accordance with the Budapest Treaty. These terms have overlapping meanings. "Grain" refers to mature grain, such as harvested grain or grain still on a plant but ready for harvest, but can also refer to grain after moisture absorption or germination, depending on the context. Mature grain generally has a moisture content of less than about 10-12% by weight, such as 6-10%. "Seed" includes "developing seed" as well as "grain," which is mature grain, but does not include grain after moisture absorption or germination. As used here, "developing seed" refers to a pre-ripe seed typically found in the reproductive structures of a plant after fertilization or anthesis, but can also refer to such seed isolated from a plant before maturity. Seed In planta, development is generally divided into early, middle, and late stages of development. The "plant part" includes plant cells, plant organs, plant protoplasts, plant cell tissue cultures from which plants can be regenerated, plant calli, plant clusters, and intact plant cells in plants or plant parts such as embryos, pollen, ovules, seeds, pods, leaves, flowers, branches, fruits, stems, roots, root tips, anthers, cotyledons, hypocotyls, radicles, single cells, gametes, cell cultures, tissue cultures, and the like. A cotyledon is a type of seed leaf; it is the small leaf found on the plant embryo. A cotyledon contains the nutrient-storing tissues of the seed. An embryo is a small plant found within a mature seed. "Plant cells" also includes non-renewable plant cells. It refers to all generations and includes the first, second, third, and subsequent generations; and They can be produced by self-pollination or by crossing with plants of the same or different genotypes and can be modified by a number of suitable genetic engineering techniques. Cultivation generally refers to plants that have been deliberately modified and selected by humans. "TO" refers to the first generation of transformed plant material, "Tl" refers to the seed produced on the TO plants, the Tl seed giving rise to plants that produce subsequent generations of T1, such as T2 seed, etc. For example, a first-generation hybrid is a process in which an E1 hybrid is crossed with an F1 hybrid to one of the parent genotypes. It refers to a cell or plant or part thereof (such as a seed) that has the same or a similar genetic background as (seed) but has not been modified as described herein (e.g., the cell or plant or part thereof lacks a polynucleotide and/or T-DNA as defined herein). A corresponding cell or plant, or portion thereof (seed), can be used as a control to compare, for example, CtFAD2-2 protein activity and/or CtFATB-3 protein activity compared to a cell, plant, or portion thereof (seed) transformed as described herein. One skilled in the art can readily identify a suitable "corresponding" cell, plant, or portion thereof (seed) for such a comparison. As used herein, the terms "FAD2-2" and "CtFAD2-2" and variations thereof refer to a safflower FAD2 polypeptide having the amino acid sequence provided as SEQ ID NO:1, for example, a polypeptide encoded by the nucleotides having a sequence provided as SEQ ID NO:2. As used herein, a FAD2-2 gene is a gene that encodes such a polypeptide or a mutant allele thereof. These terms also include naturally occurring or artificially induced or produced variants of the provided sequences. In one embodiment, the FAD2-2 of the invention comprises an amino acid sequence that is at least 95% identical, more preferably at least 99% identical, to the sequence provided as SEQ ID NO:1. The CtFAD2-2 genes include alleles that are mutant, i.e., encode polypeptides with altered desaturase activity, such as reduced activity, or do not encode functional polypeptides (null alleles). Such alleles may be naturally occurring or induced by artificial mutagenesis. The activity of a CtFAD2-2 gene in safflower cells of the invention is preferably reduced via RNAi interference, i.e., by introducing a genetic construct encoding an inhibitory RNA molecule, without altering the endogenous CtFAD2-2 gene per se. More preferably, expression of the CtFAD2-2 gene is reduced using a seed-specific promoter, preferably in the cells of the developing seed of the safflower plant, with minimal or no reduction in expression of the CtFAD2-2 gene in tissues other than the seed. The terms "FATB-3" and "CtFATB-3" and variations thereof as used herein refer to a safflower FATB polypeptide having the amino acid sequence provided as SEQ ID No: 3, for example, a polypeptide a sequence of which is encoded by the nucleotides provided as SEQ ID NO: 4. As used herein, a FA T 3-.? gene is a gene that encodes such a polypeptide or a mutant allele thereof. These terms also include naturally occurring or artificially induced or produced variants of the provided sequences. In one embodiment, the FATB-3 of the invention comprises an amino acid sequence that is at least 95% identical, more preferably at least 99% identical, to the sequence provided as SEQ ID No: 3. The CtFATB-3 genes include alleles that are mutant, i.e., encode polypeptides with altered palmitoyl-ACP thioesterase activity, such as reduced activity, or do not encode functional polypeptides (null alleles). Such alleles may be naturally occurring or induced by artificial mutagenesis. Safflower cells of the invention are cultured to produce a CtFA T 3-.? The activity of the gene is preferentially reduced by RNAi intervention, i.e., by introducing a genetic construct encoding an inhibitory RNA molecule, without altering the endogenous CtFATB-3 gene itself. More preferably, the expression of the CtFA T 3-.? gene is reduced preferably in the cells of the developing seed of the safflower plant using a seed-specific promoter, with minimal or no reduction in the expression of the CtFA T 3-.? gene in tissues outside the seed. As described here, the OL locus corresponds to the CtFAD2-l gene. The oleic acid content of the seed oil in genotypes 0101 (homozygous) has been included in the greenhouse breeding program and the Saffola series, including the safflower cultivars Saffola, S-517 and S-518, has been released. When high-oleic (0101) genotypes were grown in the field at different temperatures, oleic acid levels were relatively stable (Bartholomew, 1971). Knowles (1972) also identified a different allele, "01 1," at the same locus, which showed a 35% to 50% increase in the homozygous condition (Knowles, 1972). As determined here, the allele of the 01 mutation, which confers reduced FAD in safflower seed, is the mutant FAD2-1 gene, which contains a frameshift mutation (due to the deletion of a single nucleotide). As used herein, "T-DNA" refers to the T-DNA of, for example, an Agrobacterium tumefaciens Ti plasmid or an Agrobacterium rhizogenes Ri plasmid, or man-made variants thereof that function as T-DNA, and molecules derived therefrom after the T-DNA is transferred into a safflower cell and integrated into the nuclear genome. The T-DNA may therefore comprise a complete T-DNA, including both right and left nerve sequences, or may be derived therefrom by the loss of sequences at one or both ends of the molecule through the process of integration, including, for example, the loss of right and/or left T-DNA nerve sequences. The T-DNAs of the invention insert the polynucleotide of interest anywhere between the right and left nerve sequences (if present). Sequences encoding factors necessary for the transfer of T-DNA into a plant cell, such as vir genes, may be incorporated into the T-DNA or present on the same replicon as the T-DNA or, preferentially, in trans on a compatible copy in the Agrobacterium host. Such "binary vector systems" are well known in the art. The term "same" as used herein means that there is no statistically significant difference—for example, "same" seedling vigor, plant height, flowering time, harvest lodging, seed crude protein content, seed crude oil content, seed ash content, or seed carbohydrate content—for the corresponding plant grown under the same conditions, but lacking the polynucleotide(s) and/or T-DNA(s)—within the inventive safflower plant. A p-value greater than 0.05 ( 0.05) indicates that there is no statistically significant difference. The term "extracted oil" or "extracted lipid" as used herein refers to an oil composition containing at least 60% (w/w) oil and extracted from a transgenic organism or portion thereof. The term "purified" as used herein in connection with the lipid or oil of the invention typically means that the extracted lipid or oil has been subjected to one or more processing steps designed to increase the purity of the lipid/oil component. For example, a purification step may include one or more or all of the following: degumming, deodorizing, decolorizing, drying, and/or fractionating the extracted oil. However, as used herein, the term "purified" does not include a transesterification process or any other process that alters the fatty acid composition of the lipid or oil of the invention so as to increase the oleic acid content as a percentage of the total fatty acid content. In other words, the fatty acid composition of the purified lipid or oil is substantially the same as that of the unpurified lipid or oil. The fatty acid composition of the extracted lipid or oil, such as the oleic, linoleic, and palmitic acid contents, is substantially the same as the fatty acid composition of the lipid or oil in the plant seed from which it was obtained. "Substantially the same" in this context means +/- 1% or preferably +/- 0.5%. For example, if the oil in a plant seed contains 92% oleic acid, the extracted oil will contain between 91 and 93% oleic acid. The term "seed oil" as used herein refers to a composition obtained from the seed of a plant containing at least 60% (w/w) lipids, or that can be obtained from the seed if the seed oil is still present in the seed. That is, the seed oil of the invention, or the seed oil obtained using the invention, includes the seed oil present in the seed or a portion thereof, such as the cotyledons or embryo, unless referred to as "extracted seed oil" or similar terms, in which case it is the oil extracted from the seed. Seed oil is preferably extracted seed oil. Seed oil is typically a liquid at room temperature. Preferably, the total fatty acid (TFA) content in the seed oil is 90% oleic acid (C18:1). A9). Fatty acids are typically in an esterified form, such as TAG, DAG, acyl-CoA, or phospholipid. Unless otherwise stated, the fatty acids may be free fatty acids and/or in esterified form, preferably 95% or 98% by weight in esterified form. In one embodiment, the seed oil of the invention is a "substantially purified" or "purified" oil that has been separated from at least 90%, more preferably at least 91%, more preferably at least 92%, more preferably at least 93%, more preferably at least 94%, more preferably at least 95%, more preferably at least 96%, more preferably at least 97%, more preferably at least 98%, more preferably at least one or more other lipids, nucleic acids, polypeptides or other contaminant molecules with which it is present in the crude extract. It is preferred that the substantially purified seed oil be at least 60%, more preferably at least 75% and more preferably at least 90% free of other components with which it is associated in the seed or extract. The seed oil of the invention may also contain non-fatty acid molecules such as, but not limited to, cholesterol, kalinasterol/24-methylene cholesterol, campesterol/24-methylcholesterol, campestanol/24-methylcholesterol, α5-stigmasterol, ergost-7-en-3ß-ol, eburicol, ß-sitosterol/24-ethylcholesterol, α5-avenasterol/isofucosterol, α7-stigmasterol/stigmast-7-en-3ß-ol, and α7-avenasterol. The seed oil can be extracted from the seed by any method known in the art. This typically involves extraction with non-polar solvents such as hexane, diethyl ether, petroleum ether, chloroform/methanol, or butanol mixtures, and is generally associated with initial crushing or rolling of the seeds. Starch-associated lipids in the grain can be extracted with water-saturated butanol. The seed oil can be "degummed" by methods known in the art to remove polysaccharides and/or phospholipids, or processed in other ways to remove contaminants or improve purity, stability, or color. TAGs and other esters in the seed oil can be hydrolyzed to release free fatty acids by acid or alkali treatment or by the action of lipases, or the seed oil can be hydrogenated or chemically or enzymatically treated as known in the art. However, once the seed oil is processed to no longer contain TAGs, it is no longer considered seed oil as defined herein. Concentrations of free and esterified sterols (e.g., sitosterol, campesterol, stigmasterol, brassicasterol, A5-avenasterol, sitostanol, campestanol, and cholesterol) in purified and/or extracted lipids or oils were determined by Phillips et al. (2002). Sterols in oils are present as free alcohols, esters with fatty acids (esterified sterols), glycosides, and acylated glycosides of sterols. The recovered or extracted seed oils of the invention preferably contain from about 100 to about 1000 mg total sterols/100 g oil. For use as food or feed, it is preferred that the sterols be present primarily in free or esterified forms rather than in glycosylated forms. In the seed oils of the present invention, preferably at least 50% of the sterols in the oils are present as esterified sterols. The safflower seed oil of the invention preferably contains from about 150 to about 400 mg total sterols/100 g, typically about 300 mg total sterols/100 g seed oil, with sitosterol being the major sterol. The term "fatty acid" as used herein means a carboxylic acid, saturated or unsaturated, having a long aliphatic tail of at least 8 carbon atoms in length. Typically, fatty acids have a carbon-carbon bonded chain of at least 12 carbons in length. Most naturally occurring fatty acids have an even number of carbon atoms because their biosynthesis involves acetate, which has two carbon atoms. Fatty acids may exist in the free (unesterified) state or in an esterified form such as TAG, DAG, MAG, acyl-CoA (thio-ester)-linked, or other covalently bonded form. When covalently bonded in an esterified form, the fatty acid is referred to here as an "acyl" group. The fatty acid may be esterified to a phospholipid such as phosphatidylcholine (PC), phosphatidylethanolamine, phosphatidylserine, phosphatidylglycerol, phosphatidylinositol, or diphosphatidylglycerol. Saturated fatty acids do not contain any double bonds or other functional groups along the chain. The term "saturated" refers to hydrogen because all carbons (except the carboxylic acid [-COOH] group) contain as much hydrogen as possible. Thus, the omega (0) end contains 3 hydrogens (CH3-), and each carbon in the chain contains 2 hydrogens (-CH2-). Unsaturated fatty acids are similar in form to saturated fatty acids, except that one or more alkene functional groups are present along the chain, and each alkene replaces the single-bonded "-CH2-CH2-" portion of the chain with a double-bonded "-CH=CH-" portion (i.e., a carbon double-bonded to another carbon). The next two carbon atoms in the chain, attached to either side of the double bond, exist in either a cis or trans configuration. This is the glyceride. In the Kennedy pathway of TAG synthesis, DAG is formed as described above, and then a third acyl group is esterified on the glycerol backbone by the activity of DGAT. Alternative pathways for TAG formation include PDAT. As used herein, the term "by weight" refers to the weight of a substance (e.g., oleic acid, palmitic acid, or linoleic acid); It is expressed as a percentage by weight of the substance or composition containing a component. For example, the weight of a particular fatty acid, such as oleic acid, can be determined as a percentage of the weight of the lipid or seed oil or the total fatty acid content of the seed. The term "biofuel" as used herein refers to any type of fuel that is typically used to power machinery such as cars, trucks, or petroleum-powered engines and whose energy is derived from biological carbon fixation rather than fossil fuels. Biofuels include fuels derived from biomass conversion, as well as solid biomass, liquid fuels, and biogas. Examples of biofuels include bioalcohols, biodiesel, synthetic diesel, vegetable oil, bioethers, biogas, syngas, solid biofuels, algae-derived fuel, biohydrogen, biomethanol, 2,5-Dimethylfuran (DMF), biodimethyl ether (bioDME), Fischer-Tropsch diesel, biohydrogen diesel, mixed alcohols, and wood diesel. The term "industrial product" as used herein refers to a hydrocarbon product consisting predominantly of carbon and hydrogen, such as fatty acid methyl and/or ethyl esters or alkanes such as methane, mixtures of longer-chain alkanes that are typically liquid at ambient temperatures, a biofuel, carbon monoxide and/or hydrogen, or a bioalcohol such as ethanol, propanol, or butanol, or biochar. The term "industrial product" is intended to include intermediates that can be converted into other industrial products; for example, synthesis gas itself is considered an industrial product that can be used to synthesize a hydrocarbon product, which is also considered an industrial product. The term industrial product, as used herein, includes both pure forms of the above compounds and more generally a mixture of various compounds and components; for example, a hydrocarbon product, as is well understood in the art, can contain various carbon chain lengths. Polynucleotides refer to a polymeric form of nucleotides (deoxyribonucleotides or ribonucleotides) of any length. A polynucleotide as defined herein may be of genomic, cDNA, semi-synthetic or synthetic origin, double-stranded or single-stranded, and because of its origin or manipulation: (1) is not related to all or part of a polynucleotide to which it is associated in nature, (2) is linked to a polynucleotide different from the polynucleotide to which it is associated in nature, or (3) does not occur in nature. Preferred polynucleotides of the invention encode double-stranded DNA molecules capable of being transcribed and silencing RNA molecules in plant cells. The term "gene" as used herein will be taken in its broadest context and includes deoxyribonucleotide sequences comprising the transcription region and, if translated, the protein coding region of a structural gene, and located adjacent to the coding region at both the 5' and 3' ends for a distance of at least about 2 kb on either end, and including sequences involved in the expression of the gene. In this context, the gene contains control signals, such as promoters, enhancers, termination and/or polyadenylation signals, or heterologous control signals naturally associated with a particular gene, in which case the gene is referred to as a "chimeric gene." Sequences located 5' to the protein-coding region and present on mRNA are called 5' untranslated sequences. Sequences located 3' or downstream of the protein-coding region and present on mRNA are called 3' untranslated sequences. The term "gene" encompasses both the cDNA and genomic forms of a gene. The genomic form, or clone, of a gene contains "introns," "intervening regions," or the coding region itself. Introns are sections of a gene that are transcribed into nuclear RNA (nRNA). Introns may contain regulatory elements such as enhancers. Introns are removed, or "splicing," from the nuclear or primary transcript, so introns are absent from the mRNA transcript. mRNA functions to specify the sequence, or order, of amino acids in a nascent polypeptide during translation. The term "gene" includes a synthetic or fusion molecule that encodes all or part of the proteins of the invention described herein, and a nucleotide sequence complementary to any of the foregoing. An "allele" refers to a specific form of a genetic sequence (such as a gene) within a cell, a single plant, or a population; the specific form differs in at least one sequence, and often in more than one variant region within the gene sequence, compared to other forms of the same gene. The sequences within these variant regions that differ between different alleles are called "variants," "polymorphisms," or "mutations." A "transgene" is a gene that is introduced into the genome through a transformation process. The transgene may be present in an initially transformed plant produced by regeneration from a transformed plant cell, in progeny plants produced by self-fertilization or by crossing from an initial transformant, or in plant parts such as seeds. The term "genetically modified" and its variations include the introduction of a gene into a cell by transformation or transduction, the mutating of a gene in a cell, and the genetic alteration or modulation of the regulation of a gene in a cell or the progeny of any modified cell as described above. As used herein, a "genomic region" refers to a location within the genome at which a transgene or group of transgenes (also referred to herein as a cluster) is introduced into a cell or its progenitor and is co-inherited in progeny cells after meiosis. A polynucleotide (or T-DNA), as defined herein, is a polynucleotide that represents a nucleic acid molecule created or modified by artificial recombinant methods. It may be present in a cell in varying amounts or expressed at a rate that varies from its natural state (e.g., in the case of mRNA). An exogenous polynucleotide is a polynucleotide that is introduced into a cell that does not naturally contain the polynucleotide. Typically, exogenous DNA is used as a template for transcription of the mRNA, which is then translated into a continuous sequence of amino acid residues that encodes a polypeptide of the invention within the transformed cell. In another embodiment, a portion of the exogenous polynucleotide is endogenous to the cell and its expression is altered by recombinant means, e.g., an exogenous control sequence is added upstream of an endogenous polynucleotide to ensure that the transformed cell expresses the polypeptide encoded by the polynucleotide. For example, an exogenous polynucleotide may express an antisense RNA to an endogenous polynucleotide. A recombinant polynucleotide of the invention comprises polynucleotides that are not separated from other components of the cell-based or cell-free expression system in which it is contained, and polynucleotides produced in said cell-based or cell-free systems that are subsequently separated and purified from at least some of the other components. The polynucleotide may be a contiguous stretch of nucleotides occurring in nature or may comprise two or more contiguous nucleotide sequences from different sources (naturally occurring and/or synthetic) combined to form a single polynucleotide. Typically, such chimeric polynucleotides comprise at least one open reading frame operably linked to a promoter suitable to direct transcription of the open reading frame in a respective cell. It will be appreciated that, for the polynucleotides identified, higher % identity figures than those given above will encompass preferred embodiments. Therefore, where applicable, in light of the minimum % identity figures, the polynucleotide should be selected according to the candidate SEQ ID NO. It is preferred that the polynucleotide sequence comprises a polynucleotide sequence that is at least 50%, more preferably at least 75%, more preferably at least 80%, more preferably at least 85%, more preferably at least 90%, more preferably at least 91%, more preferably at least 92%, more preferably at least 93%, more preferably at least 94%, more preferably at least 95%, more preferably at least 96%, more preferably at least 97%, more preferably at least 99.2%, more preferably at least 99.3%, more preferably at least 99.4%, more preferably at least 99.5%, more preferably at least 99.6%, more preferably at least 99.7%, more preferably at least 99.8% and even more preferably at least 99.9% identical to the polynucleotide sequence. A polynucleotide useful for the present invention can selectively hybridize to a polynucleotide as described herein under stringent conditions. As used herein, the stringent conditions are as follows: (l) a denaturing agent such as formamide at 42°C during hybridization, e.g., 0.1% (w/v) bovine serum albumin with 50% (v/v) formamide, (pH 6.8), 0.1% sodium pyrophosphate, 5 X Denhardt's solution, sonicated salmon sperm DNA (50 g/ml), 100 M sodium citrate/0.1% SDS for washing. RNA Silencing RNA interference (RNAi) is particularly useful to specifically inhibit the production of a particular protein, such as CtFAD2-2 protein activity and/or CtFATB-3 protein activity as described herein. This technology relies on the availability of dsRNA molecules that contain a sequence essentially identical to the mRNA of the gene of interest or a portion thereof, and a sequence complementary to it. Conveniently, dsRNA can be produced from a single promoter in a recombinant vector or host cell, where the sense and anti-sense sequences are covalently joined to a sequence, preferably an unrelated sequence, that allows the sense and anti-sense sequences from the corresponding transcript to hybridize to form the dsRNA molecule, with the joining sequence forming a loop structure, but not a sequence identical to the target RNA or its complement. Typically, dsRNA is encoded by a double-stranded DNA structure having sense and antisense sequences arranged as a discontinuous palindrome, inverted repeat structure. The repeated sequences are transcribed to produce hybridization sequences in the dsRNA molecule, and the interrupt sequence is transcribed to create loops in the dsRNA molecule. The design and production of suitable dsRNA molecules is within the capabilities of one skilled in the art, particularly with reference to, see Waterhouse et al. 01/34815. In one example, a DNA insertion is made that directs the synthesis of at least 19 consecutive nucleotides complementary to a region of a target RNA to which at least partially homologous double-stranded RNA product(s) are preferentially inactivated. Thus, the DNA contains both sense and antisense sequences that, when transcribed into RNA, can hybridize to form the double-stranded RNA region. In one embodiment of the invention, the sense and antisense sequences are separated by a spacer region containing an intron that is excised upon transcription into RNA. This arrangement has been shown to result in higher gene silencing efficiency. The double-stranded RNA region may comprise one or two RNA molecules transcribed from one or two DNA regions. The presence of the double-stranded molecule is thought to trigger a response from an endogenous system that destroys both the double-stranded RNA and the homologous RNA transcript of the target gene, effectively reducing or eliminating the activity of the target gene. The hybridized sense and antisense sequences should each be at least 19 contiguous nucleotides in length, corresponding to a portion of the target mRNA. The full-length sequence corresponding to the entire gene transcript may be used. The degree of identity of the sense and antisense sequences to the targeted transcript may be at least 85%, at least 90%, or at least 95% to unrelated sequences. The RNA molecule may be expressed under the control of an RNA polymerase 11 or RNA polymerase III promoter. Examples of the latter include tRNA or snRNA promoters. Recombinant Cells The invention also provides a recombinant safflower cell comprising one or more polynucleotides or T-DNAs described herein, or combinations thereof. The term "recombinant cell" is used interchangeably herein with the term "transgenic cell." The recombinant cell may be a cell in culture, a cell in vitro, or a cell in a safflower plant or a part thereof, such as a seed. Transformation of Plants Transgenic plants can be produced using techniques known in the art, such as those generally described in Slater et al., Plant Biotechnology - Genetic Manipulation of Plants, Oxford University Press (2003), and Christou and Klee, Handbook of Plant Biotechnology, John Wiley and Sons (2004). As used herein, the terms "stably transformed," "stably transformed," and variations thereof refer to the integration of a polynucleotide into the cell genome so that it is transmitted to progeny cells without the need for positive selection for its presence during cell division. Stable transformants, or their progeny, can be selected and/or identified by any method known in the art, such as Southern blots on chromosomal DNA or in situ genomic DNA hybridization. Agrobacterium-mediated transfer is a widely applicable system for introducing genes into plant cells because DNA can be delivered to cells in whole plant tissues, plant organs, or explants in tissue culture for transient expression or for stable integration of DNA into the plant cell genome. The use of Agrobacterium-mediated plant integration vectors to introduce DNA into plant cells is well known in the art (see, for example, US 5177010, where US is designated and the intervening DNA (T-DNA) is usually inserted into the plant genome. Furthermore, integration of T-DNA is a relatively delicate process that results in few rearrangements. In these plant cultivars, Agrobacterium-mediated transformation is effective and is the preferred method because of the easy and defined nature of gene transfer. Preferential Agrobacterium transformation vectors are capable of replicating for A. coli as well as for E. coli, allowing convenient manipulations, as described (Klee et al., Plant DNA Infectious Agents, Hohn and Schell, eds., Springer-Verlag, New York, pp. 179–203 (1985)). Among the acceleration methods that can be used are microprojectile bombardment, and the like. One example of a method for delivering transforming nucleic acid molecules into plant cells is microprojectile bombardment. This method is reviewed in Yang et al., Particle Bombardment Technology for Gene Transfer, Oxford Press, Oxford, England (1994). Non-biological particles (microprojectiles) that can be coated with nucleic acids and delivered to cells by a repulsive force. Such methods are well known in the art. In another embodiment, plastids can be stably transformed. Methods described for plastid transformation in higher plants include particle gun delivery of DNA containing a selectable marker and targeting the DNA to the plastid genome by homologous recombination (US 5,451,513, US 50 ... The process can be carried out using methods based on electroporation and combinations of these treatments. The application of these systems to different plant varieties depends on the regeneration of the plant strain in question from protoplasts. Illustrative methods for the regeneration of grains from protoplasts have been described (Fujimura 1988). Other cell transformation methods can also be used and include, but are not limited to, the introduction of DNA into plants by direct DNA transfer into pollen, by direct injection of DNA into the reproductive organs of a plant, or by direct injection of DNA into cells of immature embryos followed by rehydration of the dried embryos. The regeneration, development, and cultivation of plants from single-plant protoplast transformants or from several transformed explants is well known in the art (Weissbach et al., Methods for Plant Molecular Biology, Academic Press, San Diego, California, (1988)). This The regeneration and growth process typically involves selecting transformed cells and culturing these individualized cells through the normal stages of embryonic development to the rooted plantlet stage. Transgenic embryos and seeds are similarly regenerated. The resulting transgenic rooted shoots are then transplanted into a suitable plant growth medium, such as soil. The development or regeneration of plants containing foreign, exogenous genes is well known in the art. The regenerated plants are preferentially self-pollinated to provide homozygous transgenic plants. Otherwise, pollen from the regenerated plants is crossed with seed-grown plants of agriculturally important lines. Conversely, pollen from plants of these important lines is used to pollinate the regenerated plants. A transgenic plant of the present invention containing a desired polynucleotide is grown using methods well known to those skilled in the art. To confirm the presence of transgenes in transgenic cells and plants, a polymerase chain reaction (PCR) amplification or Southern blot analysis can be performed using methods known to those skilled in the art. Once transgenic plants are obtained, they can be grown to produce plant tissues or parts with the desired phenotype. The plant tissue or parts can be harvested and/or seed can be collected. Seed can serve as a source for growing additional plants with tissues or parts with the desired traits. A transgenic plant generated using Agrobacterium or other transformation methods typically contains a single transgenic locus on a chromosome. Such transgenic plants are called hemizygous for the introduced gene(s). More preferred is a transgenic plant that is homozygous for the introduced gene(s), that is, a transgenic plant containing two additional genes, one at the same locus on each chromosome of a chromosome pair. A homozygous transgenic plant can be obtained by self-fertilizing a hemizygous transgenic plant, germinating a portion of the produced seed, and analyzing the resulting plants for the gene of interest. It should also be understood that two different transgenic plants containing two independently segregating exogenous genes or loci can be crossed (mated) to produce offspring containing both sets of genes or loci. Self-propagation of suitable F1 progeny can produce plants that are homozygous for both exogenous genes and loci. Backcrossing to a parent plant and crossing with a non-transgenic plant are also contemplated, as in vegetative propagation. For descriptions of other breeding methods commonly used for different traits and crops, see Fehr, Breeding Methods for Cultivated Plant Improvement, Wilcox J. ed., American Society of Agronomy, Madison Wis. (1987). For methods particularly useful for aspirin transformation, see Belide and Marker-Assisted Selection. Marker-assisted selection is a well-established method of selecting heterozygous plants, which is necessary when backcrossing a recurrent parent in a conventional breeding program. The plant population in each backcross generation will be heterozygous for the gene of interest, which is normally present at a rate of 121 in a backcross population, and molecular markers can be used to distinguish the two alleles of the gene. For example, by extracting DNA from young shoots and testing with a specific marker for the desired trait being introgressed, plants are selected early for further backcrossing, concentrating energy and resources on fewer plants. To further accelerate the backcrossing program, embryos obtained from immature seeds (25 days after anthesis) can be dissected and grown in nutrient media under sterile conditions rather than allowing the seed to reach full maturity. This process, called "embryo rescue," combined with DNA extraction at the three-leaf stage and analysis of the desired genotype, allows for the rapid selection of plants carrying the desired trait, which can then be backcrossed to the recurrent parent and grown to maturity in the greenhouse or field. Any molecular biological technique known in the art capable of detecting a polynucleotide can be used in the methods of the present invention. Such methods include, but are not limited to, nucleic acid amplification, nucleic acid sequencing, nucleic acid hybridization with appropriately labeled probes, single-stranded conformational analysis (SSCA), denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE), heteroduplex analysis (HET), chemical cleavage analysis (CCM), catalytic nucleic acid cleavage, or the use of a combination of these (see, for example, LemieuX, 2000; Langridge et al., 2001). DNA polymerase is a reaction in which copies of a target polynucleotide are made using a "primer pair" or "primer set" consisting of a primer and a polymerization catalyst such as DNA polymerase, typically a thermally stable polymerase enzyme. PCR methods are known in the art and are described, for example, in "PCR" (Ed. M.J. McPherson and S.G. Moller (). PCR can be performed on cDNA obtained from reverse transcription of mRNA isolated from plant cells. However, it will generally be easier to perform PCR on genomic DNA isolated from a plant. A primer is an oligonucleotide sequence that can hybridize sequence-specifically to a target sequence and be extended during PCR. Amplicons, or PCR products, or PCR fragments, or amplification products, are extension products that contain the primer and newly synthesized copies of the target sequences. Multiplex PCR systems incorporate more than one primer set, resulting in the simultaneous production of multiple amplicons. Primers may match the target sequence perfectly or may contain internal mismatched bases that can lead to the insertion of restriction enzyme or catalytic nucleic acid recognition/cleavage sites in specific target sequences. Primers can also be amplicons may contain additional sequences to facilitate capture or detection and/or may contain modified or labeled nucleotides. Repeated cycles of heat denaturation of DNA, annealing of primers to complementary sequences, and extension of the annealed primers by polymerase result in exponential amplification of the target sequence. The terms target, sequence, or template refer to the nucleic acid sequences that are amplified. Methods for direct sequencing of nucleotide sequences are well known to those skilled in the art and can be found, for example, in Ausubel et al. (supra) and Sambrook et al. (supra). Sequencing can be performed by any suitable method, such as dideoxy sequencing, chemical sequencing, or variations thereof. Direct sequencing has the advantage of detecting variation within any base pair of a given sequence. Hybridization-based detection Systems include, but are not limited to, TaqMan analysis and molecular beacon analysis (US 5,925,517). TaqMan analysis (US 5,962,233) uses allele-specific (ASO) probes with a donor dye at one end and an acceptor dye at the other, such that the dye pair interact via fluorescence resonance energy transfer (FRET). In one embodiment, the method described in Example 3 is used in selection and breeding programs to identify and select safflower plants having the ?1 mutation. For example, the method includes performing an amplification reaction on genomic DNA obtained from the plant using primers summarized in Table 1. Production of Lipids and/or Oils High in Oleic Acid. Techniques routinely applied in the art are suitable for extracting, processing, purifying and analyzing lipids produced by the plants of the present invention, particularly their seeds. Such techniques are described and explained throughout the literature in sources such as: Fereidoon Shahidi, Food Analytics Perez-Vich et al. (1998). Seed oil production: Typically, plant seeds are cooked, pressed, and/or extracted to produce crude seed oil, which is then degummed, refined, bleached, and deodorized. Techniques for crushing seeds are generally known. For example, safflower seeds can be tempered by spraying water to increase the moisture content to, say, 8.5% and then flaked using a smooth roller with a gap setting of 0.23 to 0.27 mm. Depending on the type of seed, water may not be added before crushing. The application of heat inactivates enzymes, facilitates further cell disruption, consolidates lipid droplets, and aggregates protein particles, all of which facilitate extraction. In this embodiment, most of the seed oil is released by passing it through a screw press. The cakes exiting the screw press can then be extracted with a solvent, such as hexane, using a heat-monitored column. Alternatively, the crude seed oil produced by the pressing process can be passed through a settling tank with a slotted-wire drain at the top to remove solids expressed along with the seed oil during the pressing process. The solid residue from pressing and extraction after hexane removal is seed cake, which is typically used as animal feed. The refined seed oil can be passed through a plate and frame filter to remove the remaining fine solid particles. If desired, the seed oil recovered from the extraction process can be combined with the refined seed oil to produce a blended crude seed oil. After removing the solvent from the crude seed oil, the pressed and The extracted fractions are combined and subjected to normal lipid processing procedures, such as degumming, caustic refining, bleaching, and deodorization. Depending on the nature of the product route, some or all steps may be skipped; limited refining may be needed for feed-grade oil, while further purification steps are required for oleochemical applications. Degumming Degumming is an early step in the refining of oils, and its primary purpose is to remove most of the phospholipids, which can be present as approximately 1–2% of the total extracted lipid. The addition of ~2% water, typically containing phosphoric acid, to crude oil at 70–80°C results in the separation of most of the phospholipids, along with trace metals and pigments. The insoluble material removed is primarily a mixture of phospholipids and triacylglycerols, as well as Also known as lecithin. Degumming can be accomplished by adding concentrated phosphoric acid to the crude seed oil to convert non-hydratable phosphatides to a hydratable form and to chelate any minor metals present. The gum is separated from the seed oil by centrifugation. Alkali refining Alkali refining is one of the refining processes for purifying crude oil and is sometimes referred to as neutralization. It usually follows degumming and precedes bleaching. After degumming, the seed oil can be treated by adding a sufficient amount of an alkali solution to titrate all fatty acids and phosphoric acids, thus removing any soaps formed. Suitable alkaline materials include sodium hydroxide, potassium hydroxide, sodium carbonate, lithium hydroxide, calcium hydroxide, calcium carbonate, and ammonium hydroxide. This process is typically carried out at room temperature, and the free fatty acid fraction Soap is removed by centrifugation or extraction with a solvent that dissolves the soap, and the neutralized oil is washed with water. If necessary, excess alkali in the oil can be neutralized with a suitable acid such as hydrochloric acid or sulfuric acid. Bleaching Bleaching is the refining process of oils in the presence of bleaching earth (0.2-2.0%) and the absence of oxygen. This step in oil processing is designed to remove unwanted pigments (carotenoids, chlorophyll, gossypol, etc.) and also removes oxidation products, trace metals, sulfur compounds, and trace amounts of soap. Deodorization Deodorization is the processing of oils and fats at high temperature (200-2600C) and low pressure (0.1-1 mm Hg). This is typically applied to seed oil. This process is achieved by introducing steam at a rate of approximately 0.1 ml/min per 100 ml of seed oil. After approximately 30 minutes of steaming, the seed oil is allowed to cool under vacuum. The seed oil is typically transferred to a glass container and flushed with argon before being stored under refrigeration. This process improves the color of the seed oil and removes most of the volatile substances or odorous compounds, including remaining free fatty acids, monoacylglycerols, and oxidation products. Short preparation Short preparation is a process sometimes used in the commercial production of oils to separate oils and fats into solid (stearin) and liquid (olein) fractions by crystallization at subambient temperatures. It was initially applied to cottonseed oil to produce a solids-free product. It is generally used to reduce the saturated fatty acid content of the oils. Transesterification Transesterification is a process that interchanges fatty acids within and between TAGs, initially liberating fatty acids from TAGs as free fatty acids or fatty acid esters, usually fatty acid ethyl esters. When combined with a fractionation process, transesterification can be used to alter the fatty acid composition of lipids (Marangoni et al., 1995). Transesterification can use either chemical or enzymatic means; the latter utilizes lipases that can be site-specific for the fatty acid on the TAG or prefer some fatty acids over others (sn-1/3 or sn-2 specific). Fatty acid fractionation to increase the concentration of LC-PUFA in an oil can be achieved by, for example, freeze-crystallization, complexation using urea, molecular distillation, supercritical liquid extraction, and This can be achieved by any of the methods known in the art, such as complexation with silver ions. Complexation with urea is the preferred method for reducing the level of saturated and monounsaturated fatty acids in oil due to its simplicity and effectiveness (Gamez et al., 2003). Initially, the TAGs of the oil, usually in the form of fatty acid esters, are broken down into their constituent fatty acids by hydrolysis or lipases, and these free fatty acids or fatty acid esters are then mixed with an ethanolic solution of urea for complexation. Saturated and monounsaturated fatty acids readily complex with urea and crystallize upon cooling and can then be removed by filtration. The non-urea complexed fraction is thus enriched with LC-PUFA. Hydrogenation Hydrogenation of fatty acids typically involves treatment with hydrogen in the presence of a catalyst. Non-catalytic hydrogenation occurs only at very high temperatures. Hydrogenation is widely used in the processing of vegetable oils. Hydrogenation converts unsaturated fatty acids to saturated fatty acids and, in some cases, trans fats. Hydrogenation results in the conversion of liquid vegetable oils into solid or semi-solid fats, such as those found in margarine. Changing the degree of saturation of the oil causes changes in some important physical properties, such as melting point, so liquid oils become semi-solid. Solid or semi-solid oils are preferred for baking because the way the oil mixes with the flour creates a more desirable texture in the baked product. Partially hydrogenated vegetable oils are less expensive than animal fats, are available in a wide variety of consistencies, and possess other desirable properties. (e.g., increased oxidative stability/longer shelf life) are the predominant oils used as fats in most commercial baked goods. In one embodiment, the lipid/oil of the invention is not hydrogenated. An indication that a lipid or oil is not hydrogenated is the absence of any trans fatty acids in its TAG. Uses of Oils Lipids/oils, such as seed oil, preferably safflower seed oil, produced by the methods described herein have a variety of uses. In some embodiments, the lipids are used as food oils. In other embodiments, the lipids are refined and used as lubricants or for other industrial uses, such as the synthesis of plastics. They may be used in the production of cosmetics, soaps, softeners, electrical insulation, or detergents. They may be used to produce agricultural chemicals such as surfactants or emulsifiers. In some embodiments, the lipids are refined to produce biodiesel. The oil of the invention is advantageously It can be used in paints or varnishes because the absence of linolenic acid means that its color will not fade easily. An industrial product produced using a method of the invention can be a hydrocarbon product such as fatty acid esters, preferably fatty acid methyl esters and/or fatty acid ethyl esters; an alkane such as methane, ethane or a longer-chain alkane; a mixture of longer-chain alkanes; an alkene; a biofuel; carbon monoxide and/or hydrogen gas; a bioalcohol such as ethanol, propanol or butanol; biochar or a combination of carbon monoxide, hydrogen and biochar. The industrial product may be a mixture of alkanes or a mixture of alkanes and alkenes, preferably a mixture of any of these components, such as predominantly (50%) C4-C8 alkanes, or predominantly C6 to ClO alkanes, or predominantly C6 to C8 alkanes. The industrial product is not carbon dioxide or water, although these molecules may be produced in combination with the industrial product. The industrial product may be a gas at atmospheric pressure/room temperature, or preferably a liquid or a solid such as biochar, or the process may produce a combination of carbon monoxide, hydrogen gas, a gaseous component such as alkanes and biochar, a liquid component, and a solid component, which may then be separated. In one embodiment, the hydrocarbon product is predominantly fatty acid methyl esters. In an alternative embodiment, the hydrocarbon product is a product other than fatty acid methyl esters. The heat in the process; Pyrolysis can be applied in combination with combustion, gasification or enzymatic digestion (including anaerobic digestion, composting, fermentation). Lower temperature gasification occurs, for example, between about 700°C and about 1000°C. Higher temperature gasification occurs, for example, between about 1200°C and about 1600°C. Lower temperature pyrolysis (slower pyrolysis) occurs at about 400°C, while higher temperature pyrolysis occurs at about 500°C. Mesophilic digestion occurs between about 20°C and about 40°C. Thermophilic digestion occurs between about 50°C and about 65°C. Chemical methods include, but are not limited to, catalytic cracking, anaerobic digestion, fermentation, composting, and transesterification. In one embodiment, a chemical means uses a catalyst or mixture of catalysts, which can be applied in conjunction with heat. The process may use a homogeneous catalyst, a heterogeneous catalyst, and/or an enzymatic catalyst. In one embodiment, the catalyst is a transition metal catalyst, a molecular sieve-type catalyst, an activated alumina catalyst, or sodium carbonate as a catalyst. Catalysts include acid catalysts, such as sulluric acid, or alkali catalysts, such as potassium or sodium hydroxide or other hydroxides. The chemical means may include transesterification of fatty acids in the lipid; This process may employ a homogeneous catalyst, a heterogeneous catalyst, and/or an enzymatic catalyst. The conversion may involve pyrolysis, which may employ heat and chemical means, and may utilize a transition metal catalyst, a molecular sieve-type catalyst, an activated alumina catalyst, and/or sodium carbonate as a catalyst. Enzymatic methods include, but are not limited to, anaerobic digestion, digestion by microorganisms, for example, via fermentation or composting, or digestion by recombinant enzymatic proteins. Feedstuffs/Nutrients The lipid/oil of the invention has a very high oleic acid content and low levels of linoleic acid (

Claims

1.