SE508799C2 - Somatostatinpeptid, förfarande för dess framställning och dess användning - Google Patents

Description

508 799 10 15 20 25 30 35 2 peptiden genom en kovalent bindning.

Den kelatiserande gruppen är företrädesvis bunden till den terminala N-aminogruppen i somatostatinpeptiden.

Enligt uppfinningen kan den kelatiserande gruppen vara bunden antingen direkt eller indirekt, t.ex. med hjälp av en spacergrupp, till aminogruppen i somatostatinpeptiden.

En grupp av LIGANDER är den där den kelatiserande grup- pen är bunden direkt till aminogruppen i somatostatinpep- tiden.

En annan grupp av LIGANDER är där den kelatiserande gruppen är bunden indirekt till aminogruppen i somatostatin- peptiden genom en brygg- eller spacergrupp.

Den kelatiserande gruppen är företrädesvis bunden till peptiden genom en amidbindning.

Uttrycket somatostatinpeptider inbegriper det naturligt förekommande somatostatinet (tetradekapeptid) och dess analo- ger eller derivat.

Som uttrycket derivat eller analoger används här menas varje rakkedjig eller cyklisk polypeptid härledd från den- samma i den naturligt förekommande tetradekapeptiden somato- statin, vari en eller flera aminosyraenheter har utelämnats och/eller ersatts med en eller flera andra aminosyragrupper och/eller vari en eller flera funktionella grupper har er- satts med en eller flera andra funktionella grupper och/eller en eller flera grupper har ersatts med en eller flera andra isostera grupper. Generellt sett täcker uttrycket alla modi- fierade derivat av en biologiskt aktiv peptid, som uppvisar en kvalitativt liknande effekt som den omodifierade somato- att de binder till somatostatinrecep- statinpeptiden t.ex. torer och minskar hormonsekretionen.

Cykliska, brygg-cykliska analoger är kända föreningar. och rakkedjiga somatostatin- Sådana föreningar och deras framställning beskrivs t.ex. i europapatentbeskrivningarna EP-A-1295, 29 579, 215 171, 203 031, 214 872, 298 732, 277 419.

Föredragna LIGANDER ENLIGT UPPFINNINGEN är de SOm är härledda från följande somatostatinanaloger: A. Analoger med formeln I 10 15 20 25 vari A I Y1 508 799 A' CH;-S-Y; 72-5-C52 I N-ca-co-B-c-0-a-Na-ca-G är C1_12alkyl, C7_l0fenylalkyl eller en grupp med for- meln RCO-, varvid i) R är väte, C1_1lalkyl, fenyl eller C7-lofenylalkyl, eller RCO- är a) en L- ii) eller D-fenylalaninrest som eventuellt är ringsubstituerad med F, Cl, Br, N02, NH2, OH, C1_3alkyl och/eller C1_3alkoxi, b) resten av en naturlig eller syntetisk a-amino- syra annan än enligt definitionen under a) ovan eller av en motsvarande D-aminosyra, eller c) en dipeptidrest i vilken de enskilda amino- syraresterna är desamma eller olika och är valda bland de och/eller b) definierade, under a) Ovan varvid a-aminogruppen i aminosyraresterna a) och b) och den N-terminala aminogruppen i dipeptidresterna c) di-Cl_12alkylerade eller eventuellt är mono- eller substituerade med Cl_8alkanoyl, är Vätêf C1_12alkyl eller C7_10fenylalkyl, och Y2 tillsammans betecknar en direkt bindning eller varje Y1 och Y2 oberoende är väte eller en grupp med formeln (1) till (5) R. ca, | //// -co_c-.-B -co-ca -co-Nan, | Ra (C5z)n (1) (2) (3) 508 799 10 15 20 25 30 4 11.' | R' -co-Nu-cH-coon. -CO-(Nflh- fl? 4011:). R 9 n, Rb' <1 (4) (5) Ra är metyl eller etyl Rb är väte, metyl eller etyl, är ett heltal från l till 4 n är ett heltal från 1 till 5 RC är (C1_6)alkyl Rd betecknar den substituent som är bunden till a- kolatomen i en naturlig eller syntetisk a-aminosyra (inklusive väte) Re är (Cl_5)alkyl Ra' och Rb' oberoende är väte, metyl eller etyl R3 och R9 oberoende är väte, halogen, (C1,3)alkYl eller (C1_3)alkoxi p är O eller 1 q är 0 eller l, och r är 0, 1 eller 2, är -Phe- som eventuellt är ringsubstituerad med halogen, N02, NH2, OH, C1_3alkyl och/eller C1_3alkoxi (inklusive pentafluoralanin) eller B-naftyl-Ala, är (L)-Trp- eller (D)-Trp- som eventuellt är a-N-metyle- rad och eventuellt bensenringsubstituerad med halogen, N02, NH2, OH, C1_3alkyl och/eller Cl_3alkoxi, är Lys, Lys vari sidokedjan innehåller O eller S i ß- ställning, XF-Lys eller ÖF-Lys, eventuellt a-N-metyle- rad, eller en 4-aminocyklohexyl-Ala- eller 4-aminocyklo- hexyl-Gly-rest, är Thr, Ser, Val, Phe, Ile eller en aminoisosmörsyra- eller aminosmörsyrarest, R är en grupp med formeln *G /Rll -coonh -cmoalh -coN eller _C°_ X1 \R12 10 15 20 25 30 35 508 799 vari R7 är väte eller Cl_3alkyl, R10 är väte eller resten av en fysiologiskt godtagbar, fysiologiskt hydrolyserbar ester, R11 är väte, Cl_3alkyl, fenyl eller C7_10fenylalkyl, R12 är väte, C1_3alkyl eller en grupp med formeln -CH(R13)-X1, R13 är cflzon, -(cH2)2-on, -(cH2)3-OH eller -cH(cH3)0H eller betecknar den substituent som är bunden till a-kolatomen i en naturlig eller syntetisk a-amino- syra (inklusive väte), och X1 är en grupp med formeln -COOR7, -CH2OR10 eller ,R14 -CO-N\ _ Rls Vârl R7 och R10 har de ovan angivna betydelserna, R14 är väte eller C1_3alkyl och R15 är väte, fenyl eller C7_l0fenyl- alkyl, och R16, är väte eller hydroxi, med förbehållet att Cl_3älkyl, R11 är väte eller metyl när R12 är -CH(R13)-X1, varvid grupperna B, D och E har L-konfiguration och grupperna i 2- och 7-ställning och eventuella grupper Y1 4) och YZ 4) (L)- (D)- konfiguration. vardera oberoende har eller Betydelserna av A och A' i formeln I är företrädesvis så valda, att föreningen innehåller en terminal-NH-grupp som kan länkas till ett kelatiseringsmedel.

I föreningarna med formeln I är följande betydelser föredragna, antingen var för sig eller i godtycklig kombina- tion eller underkombination: 1. A är C7_l0fenylalkyl, speciellt fenetyl, eller en grupp med formeln RCO. Företrädesvis är A en grupp med formeln RCO. 1.1. R är företrädesvis Cl_1lalkyl eller C7_10fenylalkyl, speciellt C7_10fenylalkyl, mera speciellt fenetyl, eller RCO har de ovan angivna betydelserna a), b) eller c). 508 799 10 15 20 25 30 35 6 1.2. När RCO har betydelserna a), b) eller c) är a-aminogrup- pen i aminosyraresterna a) och b) och den N-terminala amino- gruppen i dipeptidresterna c) företrädesvis oalkylerade eller mono-Cl_l2-alkylerade, ciellt oalkylerad. speciellt -C1_8-alkylerade, mera spe- -metylerade. Mest föredraget är att N-terminalen är 1.3. När RCO har betydelsen a) är den företrädesvis a') en L- eller D-fenylalanin- eller -tyrosinrest, som eventuellt är mono-N-C1_12-alkylerad. Mera föredraget är att a') är en L- eller D-fenylalaninrest. 1.4. När RCO har betydelsen b) är den definierade resten företrädesvis lipofil. Föredragna rester b) är sålunda eller c) b') a-aminosyrarester som har en kolvätesidokedja, t.ex. alkyl med 3, företrädesvis 4, eller flera C-atomer, t.ex. upp till 7 C-atomer, 3-(2- eller eller tryptofanrest, naftyl-metyl eller heteroaryl, t.ex. 1-naftyl)-alanin, pyridyl-metyl varvid nämnda rester har L- eller D-konfiguration, och före- dragna rester c) är dipeptidrester i vilka de enskilda amino- syraresterna är desamma eller olika och är valda bland de ovan under a') och b') definierade.

Exempel på en rest c) är t.ex. 3-(2-naftyl)-alaninres- ten . 1.5. Mest föredraget är att RCO har betydelsen a), speciellt betydelsen a'). 2. B är B' där B' är Phe eller Tyr. 3. C är C' där C' är (D)Trp. 4. D är D' där D' är Lys, MeLys eller Lys(E-Me), speciellt Lys 5. E är E', där E' är Val eller Thr, speciellt Thr.

/,R11 6. G är G', där G' är en grupp med formeln -CO-N\\ , Riz R11 speciellt en grupp med formeln -CO-N<: CH(Rl3)-X1 (i vilket fall R11=H eller CH3). I det senare fallet har gruppen -CH(Rl3)-X1 företrädesvis L-konfiguration. 10 15 20 25 30 35 40 508 799 6.1. R11 är företrädesvis väte. 6.2. Som substituent bunden till a-kolatomen i en naturlig aminosyra (dvs. med formeln HZN-CH(R13)-COOH), är RI3 före- trädesvis -CHZOH, -CH(CH3)-OH, isobutyl eller butyl eller R13 är -(CH2)2-OH eller -(CH2)3-OH. Den är speciellt -CHZOH eller -cH(cH3)-on.

. //R14 6.3. X1 är företrädesvis en grupp med formeln -CO-N\\ Ris eller -CH2-ORl0, speciellt med formeln -CH2-ORl0, och R10 är företrädesvis väte eller har den ovan under 7 angivna bety- delsen. Mest föredraget är att Rlo är väte.

De följande enskilda föreningarna är illustrativa för föreningarna med formeln I: H-(D)Phe-C§s-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cvs-Thr-ol även känd som oktreotid I | (D)Phe-Cys-Phr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-ThrNH2 I | (D)Phe-Cys-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-TrpNH2 F* 1 (D)Trp-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-ThrNH2 F I (D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-ThrNH2 | 3-(2-Naftyl)-(D)Ala-C;s-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-ThrNH2 I 3-(2-Naftyl)-(D)Ala-C§s-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-ß-Nal-NH2 1 3-(2-Naftyl)-(D)Ala-C§s-ß-Nal-(D)Trp-Lys-Val-Cys-ThrNH2 r 1 (D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-ß-Nal-NH2 B. Analoger med formeln II H-C§s-Phe-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Phe-Cvs-ol II [se Vale et al., Metabolism, 27, Supp. I, 139, (l978)] rt I H-Cys-His-His-Phe-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH III (se EP-A-200 188) 508 799 10 15 20 25 Innehållet i alla de ovanstående publikationerna, in- klusive de speciella föreningarna, intas specifikt häri genom hänvisning.

Särskilt föredragna LIGANDER är de som är härledda från I H-(D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Ö;s-Thr-ol.

Lämpliga kelatiserande grupper är fysiologiskt godtag- bara kelatiserande grupper med förmåga att komplexbinda ett detekterbart element. Den kelatiserande gruppen har företrä- desvis huvudsakligen hydrofil karaktär. Exempel på kelatise- iminodikarboxylsyragrupper, rande grupper inbegriper t.ex. polyaminopolykarboxylsyragrupper, t.ex. de som är härledda från icke-cykliska ligander, t.ex. etylendiamintetraättiksyra (EDTA), dietylentriaminpentaättiksyra (DTPA), 0,0'-bis(2-aminoetyl)-N,N,N',N'-tetraättiksyra (EGTA), N,N'- bis(hydroxibensyl)etylendiamin-N,N'-diättiksyra (HBED) och trietylentetraminhexaättiksyra (TTHA), de som är härledda från substituerad EDTA eller -DTPA, t.ex. p-isotiocyanatoben- syl-EDTA eller -DTPA, de som är härledda från makrocykliska etylenglykol- ligander, t.ex. l,4,7,10-tetraazacyklododekan-N,N',N",N"'- tetraättiksyra (DOTA) och l,4,8,11-tetraazacyklotetradekan- N,N',N",N"'-tetraättiksyra (TETA), de som är härledda från N-substituerade eller C-substituerade makrocykliska aminer, även inklusive cyklamer, t.ex. såsom beskrivs i EP-Al-304 780 och i WO 89/01476-A, grupper med formeln IV eller V o o o V' II ll R1-C-5-(CHz)n'-C-(TT)1-C- IV o o f. II arc-s-(cn, ),, , -c-Na-cs, ø II ca-c- v R;-C-S-(CH;)n--C-NH n n 0 O 10 15 20 508 799 9 där var och en av R1, R2 och R3 oberoende är Cl_5alkyl, C6_8aryl eller C7_9arylalkyl, var och en eventuellt substituerad med OH, Cl_4alkoxi, COOH eller S03H, n' är 1 eller 2, i är ett heltal från 2 till 6, och TT oberoende är a- eller ß-aminosyror länkade till varandra via amidbindningar, grupper härledda från bis-aminotiolderivat, t.ex. föreningar med formeln VI a/xz Ecuz m, HN NH “mf län w Q /I SH HS R23 20 vari var och en av R20, R21, R22 och R23 oberoende är väte eller Cl_4alkyl, X2 är en grupp som har förmåga att reagera med N-aminogrup- pen i peptiden, och m' är 2 eller 3, grupper härledda från ditiasemikarbazonderivat, t.ex. före- ningar med formeln VII ïz N N\ vn HN/ F' HNÄSPI HS NH vari X2 är såsom definierats ovan, grupper härledda från propylenaminoximderivat, t.ex. före- ningar med formeln VIII 508 799 10 15 20 10 HN NH Q R26*\ š27 VIII Rzs 28 Raa T R29 OH OH vari var och en av R24, R25, R26, R27, R28 och R29 oberoende är väte eller C1_4alkyl, och X2 och m' är såsom definierats ovan, grupper härledda från diamid-dimerkaptider, t.ex. föreningar med formeln IX f' 3 O HN NH O J” H *ïï ï gsçsçg COCSHS vari X3 är en tvåvärd grupp som eventuellt är substituerad och uppbär en grupp som har förmåga att reagera med N-amino- gruppen i peptiden, t.ex. C1_4alkylen eller fenylen som uppbär en grupp X2, och Y5 är väte eller CO2R3O, vari R30 är Cl_4alkyl, eller grupper härledda från porfyriner, t.ex. N-bensyl-5,lO,- l5,20-tetrakis-(4-karboxifenyl)porfin eller TTP som uppbär en grupp X2, enligt definitionen ovan.

Aryl är företrädesvis fenyl. Arylalkyl är företrädesvis bensyl.

Exempel på X2 inbegriper grupper med formeln -(X4)n~-X5, vari X4 är C1_6alkylen, bunden till kolatomen genom en syreatom eller -NH-, n" är 0 eller 1 och X5 är -NCS, eller C1_6alkylen som eventuellt är en karboxigrupp eller ett funktio- nellt derivat därav, t.ex. syrahalid, anhydrid eller hydra- zid. Det skall förstås att X2 är bunden till en av kolatomer- 10 15 20 25 30 35 508 799 ll na i -[CH2]m-- eller =CH-CH= som ersättning för en väteatom.

Den kelatiserande gruppen kan vara bunden antingen direkt eller indirekt till N-aminogruppen i somatostatinpep- tiden. När den är indirekt bunden, är den företräd@SVíS länkad genom en brygg- eller spacergrupp, t.ex. en grupp med formeln (al) z-R35-co- (al) R35 är c1_1la1ky1en, c2_11a1keny1en eller -cH(R'>-, vari R' är den rest som är bunden till a i en naturlig eller syntetisk a-aminosyra, t.ex. väte, C1_l1alkyl, bensyl, eventuellt substituerad bensyl, naftylmetyl, pyridyl- metyl, Z är en funktionell grupp med förmåga att kovalent reagera med kelatiseringsmedlet.

Z kan exempelvis vara en grupp som kan bilda en eter-, ester- eller amidbindning med den kelatiserande gruppen. Z är företrädesvis amino.

De kelatiserande grupperna kan, när de innefattar kar- -SO3H och/eller eller i saltform. boxi, aminogrupper, föreligga i fri form Föredragna kelatiserande grupper är de som är härledda från polyamino-polykarboxylsyragrupper, t.ex. de som är härledda från EDTA, DTPA, DOTA, TETA eller substituerad EDTA eller DTPA. Kelatiserande grupper härledda från DTPA är mest föredragna. I LIGANDERNA ENLIGT UPPFINNINGEN kan den kelati- serande gruppen, när den är polyfunktionell, vara länkad an- tingen till en enda somatostatinpeptidmolekyl eller till mer än en somatostatinpeptidmolekyl, t.ex. till två somatostatin- peptidmolekyler.

LIGANDERNA ENLIGT UPPFINNINGEN kan föreligga i t.ex. fri form eller i saltform. Salter inbegriper syraadditionssalter med t.ex. organiska syror, polymera syror eller oorganiska syror, exempelvis hydroklorider och acetater, och saltformer som kan erhållas med de i den kelatiserande gruppen förekom- alkali- eller substitue- mande karboxyl- eller sulfonsyragrupperna, t.ex. metallsalter såsom natrium- eller kalium-, rade eller osubstituerade ammoniumsalter.

Föreliggande uppfinning inbegriper även ett förfarande 508 799 10 15 20 25 30 35 12 för framställning av LIGANDERNA ENLIGT UPPFINNINGEN. De kan framställas analogt med kända metoder.

LIGANDERNA ENLIGT UPPFINNINGEN kan framställas exempel- vis som följer: a) avlägsnande av minst en skyddsgrupp som finns i en somatostatinpeptid vilken uppbär en kelatiserande grupp, eller b) hoplänkning genom en amidbindning av två peptidfragment, som vart och ett innehåller minst en aminosyra eller aminoalkohol i skyddad eller oskyddad form och en av dem innehåller den kelatiserande gruppen, varvid amidbind- att den och steget a) vid förfarandet sedan eventuellt ningen är sådan önskade aminosyrasekvensen erhålls, utförs, eller c) hoplänkning av' ett kelatiseringsmedel och den önskade somatostatinpeptiden i. skyddad eller oskyddad form på sådant sätt, att den kelatiserande gruppen fästs på den önskade N-aminogruppen i peptiden, och steget a) sedan eventuellt utförs, eller d) avlägsnande av en funktionell grupp i en oskyddad eller en skyddad peptid, som uppbär en kelatiserande grupp, eller omvandlar den till en annan funktionell grupp, så att man får en annan oskyddad eller skyddad peptid, som uppbär en kelatiserande grupp, och i det senare fallet utför steget a) i förfarandet, eller e) oxidation av en somatostatinpeptid modifierad med en kelatiserande grupp, vari merkaptogrupperna i Cys-res- terna föreligger i fri form så att en analog produceras, vari två Cys-rester är förenade genom en S-S-brygga, och utvinning av den sålunda erhållna LIGANDEN i fri form eller i saltform. reaktionerna kan utföras analogt med såsom beskrivs i de följande exemlen, kelatiserande De ovanstående kända metoder, t.ex. speciellt förfarandena a) och c). När den gruppen är bunden via en amidbindning, kan detta utföras analogt med de för amidbildningen använda metoderna. När så önskas kan man vid dessa reaktioner använda skyddsgrupper, vilka är lämpliga att använda i peptider eller för de önskade 10 15 20 25 508 799 13 kelatiserande grupperna, för funktionella grupper som inte deltar i reaktionen. Uttrycket skyddsgrupp kan även inbegripa ett polymerharts, som har funktionella grupper.

När det är önskvärt att binda den kelatiserande gruppen till den terminala N-aminogruppen i en peptid eller SCC peptidfragment som används som utgångsmaterial och som inne- fattar en eller flera sidokedje-aminogrupper, skyddas dessa sidokedjeaminogrupper lämpligen med en skyddsgrupp, t.ex. såsom används inom peptidkemin.

När det är önskvärt att binda den kelatiserande gruppen till en sidokedje-aminogrupp i en som utgångsmaterial använd peptid eller peptidfragment, och peptiden innefattar en fri terminal N-aminogrupp, skyddas företrädesvis den senare med en skyddsgrupp.

Det peptidfragment, som uppbär den kelatiserande gruppen och används i steg b), kan framställas genom att peptidfrag- mentet innefattande minst en aminosyra eller aminoalkohol i skyddad eller oskyddad form får reagera med kelatiseringsmed- let. Reaktionen kan utföras analogt med steg c).

De kelatiserande grupperna med formlerna IV eller V kan länkas till en peptid genom reaktion med ett kelatiseringsme- del med formeln IV' eller V' 0 O O n n n R;-C-S-(CH:)n'-C-(TT)1~C-X IV' 0 0 p' II a, -c-s-(cn, ),. . -C-NH-CH; 2 cH-c-x V' a, -c-s-(cu, ),, . -c-Nn u f' 0 0 där X är en aktiverande grupp med förmåga att bilda en amid- bindning med peptidens N-aminogrupp. Reaktionen kan utföras såsom beskrivs i EP-A1-247 866.

Det vid förfarandesteget c) använda kelatiseringsmedlet kan vara känt eller framställas analogt med kända metoder. 508 799 10 15 20 25 30 35 14 Den använda föreningen är sådan att den medger införande av den önskade kelatiserande gruppen på somatostatinpeptiden, t.ex. en beskriven polyaminopolykarboxylsyra, ett salt eller en anhydrid därav.

När vid ovanstående förfarande den kelatiserande gruppen i de som utgångsmaterial använda aminosyrorna, peptidfrag- menten eller peptiderna är bunden till peptiden via en brygg- (G1) peptidfragment eller spacergrupp, t.ex. en grupp lned formeln enligt definitionen ovan, kan sådana aminosyror, eller peptider framställas genom att motsvarande aminosyror eller peptider fria från brygg- eller spacergrupp på konven- tionellt sätt får reagera med en motsvarande brygg- eller spacerbildande förening, exempelvis en syra eller reaktivt syraderivat innefattande brygg- eller spacergruppen, t.ex. en syra med formeln Z-R35-COOH eller ett reaktivt derivat därav såsom enl aktiv esteru Exempel på aktiva estergrupper eller karboxiaktiverande grupper är t.ex. 4-nitrofenyl, pennan- :- fenyl, pentafluorfenyl, succinimidyl eller 1-hydroxibenss' azolyl.

Alternativt kan kelatiseringsmedlet först få reagefi “-1 en förening, så az: :-- uppbär brygg- nellt sätt få reagera med peptiden, som ger en brygg- eller spacergrupp, eller spacergruppen, och sedan på konventm peptidfragmentet e;;e: aminosyran.

LIGANDERNA ENLIGT UPPFINNINGEN kan renas tionellt sätt, t.ex. LIGANDERNA ENLIGT UPPFINNINGEN innehåller företrädesvis mindre än 5 vikt-% av på konven- genom kromatografi. peptider som saknar kelatiserande grupper.

LIGANDERNA ENLIGT UPPFINNINGEN i fri form eller i form av farmaceutiskt godtagbara salter är värdefulla föreningar.

Enligt en ytterligare utföringsform kan LIGANDERNA ENLIGT UPPFINNINGEN komplexbindas med ett detekterbart element.

I enlighet därmed erbjuder föreliggande uppfinning även LIGANDER ENLIGT UPPFINNINGEN enligt definitionen ovan, som är komplexbundna med ett detekterbart element (i det följande betecknade som KELATER ENLIGT UPPFINNINGEN), i fri form eller i saltform, deras framställning och deras användning för diagnos in vivo och terapeutisk behandling. 10 15 20 25 30 35 508 799 15 Med detekterbart element avses varje element, företrä- desvis en metalljon, som uppvisar en egenskap som kan detek- teras vid terapeutiska eller in vivo-diagnostiska tekniker, t.ex. en metalljon som avger detekterbar strålning eller en metalljon som har förmåga att påverka NMR-relaxationsegen- skaper.

Lämpliga detekterbara metalljoner inbegriper exempelvis joner av tungmetaller eller sällsynta jordartsmetaller, t.ex.

(Computer Axial Tomograhy), Fe3+, Mn2+ och Cr2+, Eu3+ och radionuklider, t.ex. X-emitterande radionuklider, ß-emitterande radionukli- såsom används vid CAT-scanning Gd3+, t.ex. paramagnetiska joner, t.ex. fluorescenta metalljoner, der, a-emitterande radionuklider, positron-emitterande radio- nuklider, t.ex. 58Ga.

Lämpliga 1-emitterande radionuklider inbegriper sådana som är användbara vid diagnostiska tekniker. De X-emitterande radionukliderna har med fördel en halveringstid från lh till mera föredraget 40 dygn, företrädesvis från 5h till 4 dygn, från 12h till 3 dygn. Exempel är radionuklider härledda från Gallium, Indium, Teknetium, Ytterbium, Rhenium och Thallium, t.ex. 67Ga, lllln, 99mTc, 159Yb och 185Re. K-radionukliden väljs med fördel i beroende av lnetabolismen för LIGANDEN ENLIGT UPPFINNINGEN eller somatostatinpeptiden som används.

Mera föredraget är att LIGANDEN ENLIGT UPPFINNINGEN kelatise- ras med en 3-radionuklid, som har en halveringstid som är längre än halveringstiden för somatostatinpeptiden på tumö- ren.

Andra radionuklider lämpade för användning vid avbild- ning är positronemitterande radionuklider, t.ex. såsom ovan nämnts.

Lämpliga B-emitterande radionuklider inbgriper de som är användbara vid terapeutiska applikationer, exempelvis 9OY, 67Cu, l86Re' l88Re, l69Er, l2lSn, l27Te, l43Pr, l98Au, l09Pd, l65Dy, 32P, 142Pr. ß-radionukliden har med fördel en halve- ringstid från 2,3h till 14,3 dygn, företrädesvis från 2,3 till 100h. Den ß-emitterande radionukliden väljs företrädes- vis så att den har längre halveringstid än halveringstiden för somatostatinpeptiden på tumören. 508 799 10 15 20 25 30 35 16 Lämpliga a-emitterande radionuklider är de som används vid terapeutisk behandling, t.ex. 2l1At, 212Bi.

KELATEN ENLIGT UPPFINNINGEN kan framställas LIGANDEN får reagera med en förening som ger ett motsvarande genom att detekterbart element, t.ex. ett metallsalt, företrädesvis ett salt. kända metoder, t.ex. såsom beskrivs i Perrin, Organic Ligand, (l982); Biophys. 11:58l och i Wagner och Welch, J. Nucl. Med. ;Q:428 (1979).

Komplexbildningen av LIGANDEN utförs vid sådant pH, att LIGANDEN ENLIGT UPPFINNINGEN är fysiologiskt stabil.

Alternativt kan det detekterbara elementet också tillfö- vattenlösligt Reaktionen kan utföras i analogi med i Krej- (1977) Chemical Data Series 22. NY Pergamon Press carit och Tucker, Biochem. Res. Com. ras lösningen som ett komplex med ett mellanprodukts-kelati- seringsmedel, t.ex. ett kelatiseringsmedel som bildar ett lösligt vid LIGANDENS stabilt än kelatkomplex, vilket gör elementet fysiologiska pH, men är mindre termodynamiskt KELATET. Exempel på ett sådant mellanproduktskelatiseringsme- del är 4,5-dihydroxi-1,3-bensendisulfonsyra (Tiron). Vid ett sådant förfarande byter det detekterbara elementet ut ligan- den.

KELATEN ENLIGT UPPFINNINGEN kan också framställas genom hopkoppling av ett kelatiserande medel komplexbundet med det detekterbara elementet och en somatostatinpeptid j. skyddad eller oskyddad form och, vid behov, avlägsnande av minst en förekommande skyddsgrupp. Samma reaktion kan utföras med ett kelatiseringsmedel, som är komplexbundet med en icke-detek- terbar metalljon, varefter metalljonen i den bildade komplex- bundna peptiden kan utbytas mot det önskade detekterbara elementet.

KELATEN ENLIGT UPPFINNINGEN kan också framställas genom hopkoppling av ett kelatiseringsmedel komplexbundet med det elementet och ett detekterbara somatostatinpeptidfragment skyddad eller oskyddad följt av fortsatt peptidsyntes stegvis tills man får innefattande minst en aminosyra i form, om så önskas, avlägsnande Istället för det detek- den slutliga peptidsekvensen och, av minst en förekommande skyddsgrupp. terbara elementet kan kelatiseringsmedlet komplexbindas med 10 15 20 25 30 35 508 799 17 en icke-detekterbar metall och denna metall sedan ersättas av det detekterbara elementet i den bildade komplexbundna soma- tostatinpeptiden.

När den kelatiserande gruppen är bunden till somatosta- tinpeptiden genom en brygg- eller spacergrupp, t.ex. genom en rest med formeln (al) enligt definitionen ovan, kan antingen somatostatinpeptiden eller peptidfragmentet eller kelatise- ringsmedlet uppbära nämnda brygg- eller spacergrupp. analogt med kända Ovannämnda reaktioner kan utföras Beroende på den förekommande kelatiserande gruppen så att rening metoder. kan lnärkningseffektiviteten närma sig 100%, Sådana radionuklider som t.ex. Teknetium-99m Tc-99m-perteknetat, som inte erfordras. kan användas i oxiderad form, t.ex. kan komplexbindas under reducerande betingelser.

Ovannämnda reaktioner utförs lämpligen under sådana betingelser att spårmetallkontaminering undviks. Företrädes- ultrarena rea- för att vis används destillerat avjoniserat vatten, gens, radioaktivitet av kelatiseringskvalitet etc. minska inverkan av spårmetall.

KELATEN ENLIGT UPPFINNINGEN kan t.ex. form eller som salt. föreligga i fri Salter inbegriper syraadditionssalter med t.ex. organiska syror, polymersyror eller oorganiska syror, t.ex. hydroklorider och acetater, och saltformer som kan erhållas med i molekylen förekommande karboxylsyragrup- per, som inte deltar i kelatbildningen, t.ex. alkalimetall- salter såsom natrium- eller kaliumsalter eller substituerade eller osubstituerade ammoniumsalter.

KELATEN ENLIGT UPPFINNINGEN godtagbara och deras farmaceutiskt salter uppvisar farmaceutisk aktivitet och är därför användbara antingen som avbildningsmedel, t.ex. för visualisering av somatostatinreceptorpositiva tumörer och metastaser, vid komplexbindning med en paramagnetisk, en X-emitterande metalljon eller en positron-emitterande radio- nuklid, av somatostatinreceptorpositiva tumörer och. metastaser vid komplexbindning med en a- eller ß-radionuklid, vilket påvisas med standardtester.

Speciellt har KELATEN ENLIGT UPPFINNINGEN afflnitêt för eller som radiofarmaceutikum för behandling in vivo 508 799 10 15 20 25 30 35 18 somatostatinreceptorer uttryckta eller överuttryckta genom tumörer och metastaser, såsom påvisas vid standardbindnings- tester in vitro.

En somatostatinreceptorpositiv tumör härrörande från magtarmkanalen på människa tas ut från en patient och sätts omedelbart på is och fryses till -80°C inom maximalt 30 min.

För ytterligare autoradiografi skärs detta frusna material på (Leitz 1720) förväg rengjorda mikroskopslider och förvaras vid -20°C under en kryostat i 10 um sektioner, monteras på i minst 3 dygn för att förbättra vävnadens vidhäftning vid (50 mM, under 10 sliden. Sektionerna förinkuberas i tris-HCl-buffert PH 7,4) (2 mm) och Kci (5 mM) minuter vid rumstemperatur och tvättas sedan två gånger 2 innehållande CaCl2 minuter i samma buffert utan tillsats av ytterligare salter.

Sektionerna inkuberas sedan med ett KELAT ENLIGT UPPFINNINGEN (170 mM, pH 7,4), som innehåller bovint serumalbumin (10 g/l), bacitracin (40 mg/l) 0Ch MgCl2 (5 mM) Ospecifik bindning bestäms genom att man tillsätter motsva- under 2h vid rumstemperatur i tris-HCl-buffert för att hämma endogena proteaser. rande omärkta, ej modifierade somatostatinpeptid i en kon- Inkuberade sektioner tvättas två gånger 5 0,25 g/1 BsA. centration av 1 um. kall Efter en kort doppning i destillerat vatten för att avlägsna min. i inkuberingsbuffert innehållande överskott av salter torkas sektionerna snabbt och appliceras på [3H]-LKB-filmer. Efter en exponeringstid av ca 1 vecka i observeras att KELATERNA ENLIGT UPPFIN- NINGEN, t.ex. ett radionuklid-KELAT, ger mycket goda resultat vad gäller märkning av tumörvävnaden utan märkning av om- röntgenkassetter givande frisk vävnad när det tillsätts i en koncentration av ca lO'l0 till l0"3 M.

Affiniteten hos KELATEN ENLIGT UPPFINNINGEN för soma- tostatinreceptorer kan även påvisas genom testning in vivo.

Råttor som bär transplanterbara exokrina pankreatiska somatostatinreceptorpositiva-tumörer behandlas med en intra- venös injektion av ett KELAT ENLIGT UPPFINNINGEN. stället är Omedelbart placeras djuren på kollimatorn till en gammakamera och radio- Injektions- penisvenen. efter administreringen aktivitetsfördelningen övervakas vid olika tidsintervall. 10 15 20 25 30 35 508 799 l9 Radioaktivitetens biofördelning kan även bestämmas genom att efter varandra offra ett antal sålunda behandlade råttor och bestämmas organets radioaktivitet.

Efter administrering av ett KELAT ENLIGT UPPFINNINGEN, t.ex. ett radionuklid-KELAT, t.ex. ett K-emitterande KELAT, i en dos från 1 till 5 ug/kg av en LIGAND märkt med 0,1 till 2 mCi radionuklid blir tumörstället pàvisbart tillsammans med de organ, där exkretionen väsentligen äger rum.

I en serie speciella eller alternativa uföringsformer tillhandahåller följaktligen föreliggande uppfinning även: 1. Ett förfarande för in vivo-detektering av somatostatin- tumörer eller metastaser i en individ, vilket omfattar a) administrering av ett KELAT ENLIGT UPPFIN- NINGEN till nämnda individ och b) registrering av läget för de receptorer, som uppsöks av nämnda KELAT.

KELATEN ENLIGT UPPFINNINGEN för användning vid in vivo- detekteringsförfarandet enligt uppfinningen är de KELATER, receptorpositiva som är komplexbundna med en X-emitterande radionuklid, en positronemitterande radionuklid eller en paramegnetisk metalljon, t.ex. såsom angivits ovan.

KELATEN ENLIGT UPPFINNINGEN för användning som avbild- ningsmedel vid förfarandet (I) kan administreras parenteralt, företrädesvis intravenöst, t.ex. i form av injicerbara lös- ningar eller suspensioner, företrädesvis i en enda injektion.

Den tillämpliga doseringen kommer givetvis att bero på exem- pelvis LIGANDEN och typen av detekterbart element som an- vänds, t.ex. radionukliden. En lämplig dos att injicera ligger i det intervall, som medger avbildning genom fotoscan- ningprocedurer som är kända på teknikområdet. När ett radio- märkt KELAT ENLIGT UPPFINNINGEN används, kan det med fördel administreras i. en dos som har en radioaktivitet från 0,1 till 50 mCi, företrädesvis 0,1 till 30 mCi, mera föredraget från 0,1 till 20 mCi. vara från l till 200 ng LIGAND märkt med 0,1 till 50 mCi, företrädesvis 0,1 till 30 mCi, t.ex. 3 till 15 mCi X-emit- terande radionuklid, beroende på vilken X-emitterande radio- Ett indicerat doseringsintervall kan nuklid som används. Exempelvis är det med In föredraget att använda en radioaktivitet i det lägre dosintervallet, medan 508 799 10 15 20 25 30 35 20 det med Tc är föredraget att använda en radioaktivitet i det övre intervallet. I De tumörogena ställenas anrikning med KEDATEN kan följas med motsvarande avbildningstekniker, t.ex. med användning av kärnmedicinska avbildningsinstrument, exempelvis en scanner, X-kamera, roterande K-kamera var och en företrädesvis dator- stödd, MRI-ut- rustning eller CAT-scanningutrustning.

KELATEN ENLIGT UPPFINNINGEN, X-emitterande KELATEN, och ackumuleras inte nämnvärt i levern.

PET-scanner (Positron Emission Tomography); t.ex. en huvuddel av de utsöndras i huvudsak genom njurarna 2. Ett förfarande för in vivo-behandling av somatostatin- och metastaser hos en individ i att man till receptorpositiva tumörer behov av vilket omfattar sådan behandling, nämnda individ administrerar en terapeutiskt verksam mängd av ett KELATEN ENLIGT UPPFINNINGEN.

KELATEN ENLIGT UPPFINNINGEN för användning vid behand- lingsförfarandet in enligt KELATEN eller ß-radionuklid enligt defini- vivo uppfinningen är komplexbundna med en a- tionen ovan. De doseringar, som används vid tillämpningen av det terapeutiska förfarandet enligt föreliggande uppfinning, kommer givetvis att bero på t.ex. det speciella tillstànd som skall behandlas, exempelvis tumörvolymen, det speciella KELAT som används, exempelvis KELATETS halveringstid i tumören och den önskade terapin. I allmänhet beräknas dosen på grundval av radioaktivitetsfördelningen till varje organ och obser- verad upptagning i målet. Exempelvis kan KELATET administre- som har en radioaktivitet l till 3 mCi, Ett indicerat dags- ras i ett dagligt dosintervall, från 0,1 till 3 mCi/kg kroppsvikt, t.ex. före- trädesvis 1 till 1,5 mCi/kg kroppsvikt. dosintervall är från 1 till 200 ng LIGAND märkt med 0,1 till 3 mCi/kg kroppsvikt, 0,1 till 1,5 mCi/kg kroppsvikt av G- eller ß-emitterande radionuklid, lämpligen administrerad i t.6X. deldoser upp till 4 gånger dagligen. eller ß-emitterande KELATEN ENLIGT UPPFINNINGEN speciellt De a- kan administreras på godtycklig konventionell väg, injicerbara lösningar eller t.ex. i form av De kan också med fördel administreras genom parenteralt, suspensioner. 10 15 20 25 30 35 508 799 21 infusion, t.ex. infusion under 30 till 60 min. Beroende på tumörens placering kan de administreras så nära tumörstället som möjligt, t.ex. med hjälp av en kateter. Det valda admi- nistreringssättet kan bero på dissociationshastigheten för det använda KELATET och utsöndringshastigheten.

KELATEN ENLIGT UPPFINNINGEN kan administreras i fri form eller i farmaceutiskt godtagbar saltform. kan framställas på konventionellt sätt och uppvisar samma storleksordning av aktivitet som de fria föreningarna.

KELATEN ENLIGT UPPFINNINGEN för användning vid förfaran- det enligt föreliggande uppfinning kan med fördel framställas Sådana salter kort före administreringen till en individ, dvs. radiomärk- ningen med den önskade detekterbara metalljonen, särskilt ß- eller X-radionukliden, kan utföras kort före administreringen.

KELATEN ENLIGT UPPFINNINGEN kan vara lämpliga för av- bildning eller behandling av sådana tumörer som tumörer i den önskade a-, hypofys, gastroenteropankreas, centrala nervsystemet, bröst, prostata, äggstocks- eller kolontumörer, småcellig lungcan- cer, paragangliom, neuroblastom, feokromocytom, medullära tyroidkarcinom, myelom, etc. och metastaser från dessa.

I en ytterligare utföringsform av uppfinningen kan de X-emitterande KELATEN ENLIGT UPPFINNINGEN också användas som avbildningsmedel för utvärdering av njurfunktionen.

Grupper om 5 möss används. Varje mus injiceras intra- venöst genom en svansven med 0,1 ml innehållande 1 mCi av ett KELAT ENLIGT UPPFINNINGEN. Mössen placeras sedan i metabolis- 10 eller 120 minuter efter injektionen ligeras urinrören och mössen anes- ka burar för uppsamling av utsöndrad urin. tetiseras med kloroform. Avbildning av det uropoetiska sys- temet utförs med användning av vanlig avbildningsteknik. vid detta X-emitterande KELATEN ENLIGT UPPFINNINGEN avbildningen av renal utsöndring vid administre- ring i en dosering från 0,3 till 30 mCi.

Föreliggande uppfinning erbjuder följaktligen även ett försök förbättrar de förfarande för in vivo-utvärdering av njurfunktionen hos en individ, vilket omfattar att man till nämnda individ admi- nistrerar en verksam mängd av ett X-emitterande KELAT och 508 799 10 15 20 25 30 35 22 registrerar njurfunktionen.

Enligt en ytterligare aspekt av uppfinningen tillhanda- hålles: i. en farmaceutisk komposition innefattande en LIGAND ENLIGT UPPFINNINGEN i fri form eller i form av farmaceu- tiskt godtagbart salt, tillsammans med en eller flera farmaceutiskt godtagbara bärare eller spädningsmedel därför, ii. en farmaceutisk komposition innefattande ett KELAT enligt uppfinningen i fri form eller i form av farmaceu- tiskt godtagbart syraadditionssalt, tillsammans med en eller flera farmaceutiskt godtagbara bärare eller späd- ningsmedel därför.

Sådana kompositioner kan framställas på konventionellt sätt.

En komposition enligt uppfinningen kan också presenteras i en separat förpackning med instruktioner för blandning av LIGANDEN med metalljonen och för administrering av det bil- dade KELATET. Den kan också presenteras i tvillingförpack- ningsform, dvs; som en enda förpackning innehållande separata enhetsdoser av LIGANDEN och den detekterbara metalljonen med instruktioner för blandning av dessa och för administrering av KELATET. Ett spädningsmedel eller en bärare kan finnas i enhetsdosformerna.

I de följande exemplen är alla temperaturer i °C och Följande förkortningar an- [a]§°-värden är okorrigerade. vänds: Boc tert.-butoxikarbonyl TFA trifluorättiksyra DTPA dietylentriamin-pentaättiksyra | I EXEMPEL 1: DTPA-DPhe-Cvs-Phe-DTrn-Lvs-Thr-Cvs-Thr-ol [ I 1,1 g DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys(8-Boc)-Thr-Cys-Thr-ol som fri bas (1 mM) löses i 5 liter dioxan/H20 1/1 (V01-/V01-) 0Ch får reagera med 5 g NaHCO3-.52O mg DTPA-dianhydrid tillsätts 10 15 20 25 30 35 40 í-l Thr-Cys-Thr-ol och 500 mg 508 799 23 långsamt med omrörning. Reaktionsblandningen omrörs i ytter- ligare 30 minuter och frystorkas. Återstoden löses i 250 ml vatten och pH justeras till pH 2,5 med koncentrerad HCl. Den utfällda produkten filtreras, tvättas och torkas över fosfor- isoleras pentoxid. Efter kromatografi på en silikagelkolonn F* följande produkter: 230 mg DTPA-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys(6-Boc)- av motsvarande dimer DTPA-(DPhe- Cvs-Phe-DTrp-Lys(E-Boc)-Thr-Cvs-Thr-ol)2. 3 ml TFA blandas med 200 mg DTPA-DPhe-Cys-Phe-DTrp- Lys(5-Boc)-Thr-Cys-Thr-ol. Efter 5 minuter vid rumstemperatur fälls blandningen med diisopropyleter, filtreras och torkas. Återstoden avsaltas över Duolite och lyofiliseras till att ge 150 mg av titelföreningen: [a1§° = -26,6° (c = 1 95% AcoH).

Utgångsmaterialet kan framställas på följande sätt: I I a) H-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys(ßoc)-Thr-Cys-Thr-ol 2,25 g di-tert.butyl-pyrokarbonat, löst i 30 ml DMF, sätts långsamt droppvis vid rumstemperatur till en lösning av 10 g H-DPhe-Cvs-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cvs-Thr-ol-acetat i 100 ml DMF, Efter 2h vid rumstemperatur avlägsnas lösningsmedlet under vakuum och 200 ml diisopropyleter tillsätts till åter- bildade tvättas med diisopropyleter och torkas. Råprodukten renas genom kromato- CH2Cl2/MeOH 9/l) och isoleras sedan som ett vitt amorft pulver. [a]§° = 29,80 (c = 1,28 i DMF). stoden. Den fällningen avfiltreras, grafi över silikagel (elueringsmedel: | EXEMQEL 2: DTPA-(DPhe-Cvs-Phe-DTro-Lvs-Thr-Cvs-Thr-ollg Fraktionen som innehåller mellanprodukten DTPA-(DPhe- Cvs-Phe-DTrp-Lys(¿-Boc)-Thr-Cvs-Thr-ol)2, erhållen som i Exempel 1, behandlas enligt beskrivningen ovan för motsva- rande monomera form, varvid Boc-skyddsgrupperna avlägsnas för att ge titelföreningen: [a]§° = -24,5° (c = 0,55 95% Acon). 508 799 10 15 20 25 30 35 24 | 1 fizn-(CH2l5-CO-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys- Thr-ol EXEMPEL 3: a. 0,56 g H-DPhe-Cvs-Phe-DTrp-Lys(BOC)-Thr-Cvs-Thr-ol, 0,5 mmol Fmoc-E-aminokapronsyra och 115 mg hydroxibensotriazol löses i 10 ml DMF och kyls till -30°C. Till denna lösning sätts en lösning av 115 mg dicyklohexylkarbodiimid i 5 ml DMF (kyld till -1o°c).

Efter en reaktionstid av 24h, varunder blandningen värms avfiltreras den bildade dicyklohexyl- karbamiden och filtratet späds med vatten till tio gånger sin volymf Den fällda reaktionsprodukten avfiltreras, tvättas och Råprodukten används utan ytter- till rumstemperatur, torkas över fosforpentoxid. ligare rening för nästa steg. b. Fmoc-klyvning 0,5 g råprodukt från kopplingsreaktion (a) behandlas 10 minuter vid rumstemperatur med 5 nd. DMF/piperic;: 4:; (vol./vol.) (klar och blandas sedan med li» r. utfällda Denna råprodukt anvancs lösning) diisopropyleter. Den sålunda reaktionspro¿_ku- avfiltreras, tvättas och torkas. nästa steg utan ytterligare rening. c. Boc-klyvning 300 mg av den i (l.b) erhållna råprodukten behandlas under 5 minuter vid rumstemperatur med 5 ml 100% TFA (helt löst) och blandas därefter med 50 ml diisopropyleter. Efter tillsats av 2 ml HCl/dietyleter avfiltreras den bildade fäll- ningen, tvättas och torkas i högvakuum.

Slutprodukten renas kromatografi på silikagel (CHCl3/MeOH/H20/ACOH 7:3:0,5:O,5) ning över Duolite (gradient: H20/ACOH 95:5)---H20/dioxan/ACOH 45:5o:5).

Titelföreningen erhålls genom med efterföljande avsalt- som ett acetat (vitt lyofili- sat). [a1§° = -320 (c = o,s 95% Aeon).

Den bildade föreningen kan användas för reaktion med DTPA i enlighet med proceduren enligt Exemplen l och 2. 10 15 20 25 30 35 40 508 799 25 P L : Genom att följa den i Exemplen 1 och 3 beskrivna proce- duren kan följande LIGAND framställas: I DTPA-ßAla-DPhe-Cvs-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol. [a]§° = -14,s° (C = 0,5 95% Aeon).

| I EÄEMPEL 5: 111;n-märkt DTPA-Drhe-cys-Phe-nwgp-Lys-Thr-cys- r-ol 1 mg DTPA-DPhe-Cvs-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cvs-Thr-ol löses i 5 ml 0,0lM ättiksyra. ett 0,22 u Millex-GV-filter och dispenseras tioner och förvaras vid -20°C. 111InCl3 (Amersham, 1 mCi/100 Den bildade lösningen får passera genom i 0,1 ml-por- ul) späds i. en lika volym O,5M natriumacetat och märkning sker genom blandning av liganden med InCl3-lösningen och försiktig homogenisering vid rumstemperatur.

HEPES-buffert, pH 7,4, l0"6 M lösning tillsätts sedan för att ge en | l XEMPE 6: 99Y-märkt DTPA-nPhe-cys-Pne-DTrp-Lys-Thr-gyn; Thr-ol 90Y erhålls Generatorns konstruktion, från en 90Sr-9OY-radionuklidgenerazo:. dess eluering och omvandlingen av [90Y]EDTA till acetatkomplexet utförs enligt den metod som beskrivs av M. Chinol. och D.J. Hnatowich i J. Nucl. Med. gå, 1465-1470 (1987). l mg DTPA-DPhe-Cvs-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cvs- Thr-ol löst i 5 ml 0,0lM ättiksyra får värmas till rumstem- peratur och 1,0 mCi 90Y i 50 ul sterilt 0,5M acetat till- sätts. Blandningen får sedan stå i 30 minuter till lh för att maximera kelatiseringen.

En grupp av LIGANDER ENLIGT UPPFINNINGEN är somatosta- tinpeptider, t.ex. somatostatinanaloger, som på minst en av aminosyraenheterna innehåller en kelatiserande grupp, som är bunden till nämnda aminogrupp genom en amidbindning, i fri form eller i saltform.

En grupp av KELATER ENLIGT UPPFINNINGEN är nyssnämnda LIGANDER komplexbundna med ett detekterbart element, t.ex. en metalljon, i fri form eller i saltform.

Claims (14)

508 799 Pans. 8904087-7 PATENTKRAV

1. Somatostatinoktapeptid, kåinnetecknad av att den uppbär minst en kelatiserande grupp med förmåga att komplexbincla ett detekterbart element, som är valt bland paramagnetiska joner, UI fluorescerande metalljoner och radionuklider, varvid den kelatiserande gruppen är kovalent länkad antingen direkt eller indirekt till den ändstående amino- gruppen i nämnda peptid och varvid den på så sätt modifierade somatostatinpepti- den har bindningsaffinitet med avseende på somatostatinreceptorer. 10 2. Somatostatinoktapeptid enligt patentkrav 1, kännetecknad av att somatostatinpeptiden är härledd från en förening med formeln l i' ca, -s-'rl Yrsa, \1 _! P1 Tl-CH-COHB-C-C-n-Éïš-CE-G A vari A är Cmgalkyl, Cnofenylalkyl eller en grupp med formeln RCO-. varvid 15 i) R är väte, Cmalkyl, fenyl eller C-Ä-wfenylalkyl, eller ii) RCO- är a) en L- eller D-fenylalaninrest som eventuellt är ringsubstitu- erad med F, Cl, Br, N02, NHZ, OH, Cmalkyl och/eller Cm- alkoxi; eller' 20 b) resten av en annan naturlig eller syntetisk oc-aminosyra än enligt definitionen under a) ovan eller av en motsvarande D- aniinosyra, A' är väte, Y] och Y: tillsammans betecknar en direkt bindning eller 25 varje Y, och Y2 oberoende är väte, B är -Phe- som eventuellt är ringsubstituerad med halogen, N02, NHZ, OH, Cmalkyl och/eller Cmalkoxi (inklusive pentafluoralanin) eller ß-naftyl-Ala, 20 25 30 vari - 508 799 är (L)-Trp- eller (D)-Trp- som eventuellt är a-N-metylerad och eventuellt bensenringsubstituerad med halogen, N02, NHZ, OH, Cmalkyl och/eller Cmalkoxi, är Lys, Lys vari sidokedjan innehåller O eller S i ß-ställning, F -Lys eller ÖF- Lys, eventuellt a-N-metylerad, eller en fll-aminocyklohexyl-Ala- eller 4- aminocyklohexyl-Gly-rest, är Thr, Ser, Val, Phe, Ile eller en aminoisosmörsyra- eller amínosmör- syrarest, är en grupp med formeln

2. 31.1 moon” 43,021” , -cszx/Ru eller Ca t, X \3i z _ _' i R, _ är väte eller C malkyl, Ru, är väte eller resten av en fysiologiskt godtagbar, fysiologiskt hydro- lyserbar ester, Ru är väte, Cmalkyl, fenyl eller Cnofenylalkyl, Ru är väte, Cmalkyl eller en grupp med formeln -CH(R1:Ö~X,, Ru, CHZOH, (CI-Igg-OH, (CI-lgß-OH eller -CH(CH3)OH eller betecknar den substituent som är bunden till oc-kolatomen i en naturlig eller syntetisk oz-aminosyra (inklusive väte), och X1 är en grupp med formeln -COORW -CHZORN eller -CO-N/RH \ Rlå vari R; och RK, har de ovan angivna betydelserna, RH är väte eller Cmalkyl och B15 är väte, Cmalkyl, fenyl eller Cmofenylalkyl, och RU; är väte eller hydroxi, med förbehållet att RH är väte eller metyl när Ru är -CHflïwl-Xl, varvid grupperna B, D och E har L-konfiguration och grupperna i 2- och 7- 508 799 10 15 ställning vardera oberoende har (L)- eller (D)-konfiguration.

3. Somatostatinoktapeptid enligt något av föregående krav, kännetecknad av att somatostatinpeptíden är härledd från , f fi fi-(D) Phe-cys-Pheq oyrrp-Lys-rnr-cys-rhr-ol även känd som oktreotíd.

4. Somatostatinoktapeptid enligt något av föregående patentkrav, kännetecknad av att den kelatiserande gruppen är vald bland imínodjkar- boxylsyragrupper, polyamínopolykarboxylsyragrupper, grupper härledda från makrocyklíska amíner, grupper med formeln IV eller V 0 0 0 n n ,, Rr-C-S-(Cäzhv-C-(Tïh-C- IV 0 0 'V n rn-c-s-(cz, ),, . -c-:ra-c3,\ o n CE-C- V / Rs -C-5-(CH; ),, - -C-NH H n 0 O där var och en av RU RZ och R, oberoende är Cwalkyl, Cwaryl eller Cwarylalkyl, var och en eventuellt substituerad med OH, Cwalkoxi, COOH eller SOQH, n' är 1 eller 2, i är ett heltal från 2 till G, och TT oberoende är oe- eller ß~aminosyror hoplänkade genom amidbindningar, grupper härledda från bis-aminotiolderivat, från ditíasemikarbazonderivat, från propylenaminoximderívat, från diamiddimerkaptíder eller från porfyriner, i fri form eller i saltform. 10 15 20 25 508 799

5. Somatostatinoktapeptid enligt krav 4, kännetecknad av att den kelatiserande gruppen är härledd från etylendi- amintetraättiksyra (EDTA), dietylentriaminpentaättiksyra (DTPA), etylenglykol- 0,0'-bis(2-aminoetyl)-N,N,N',N'-tetraättiksyra (EGTA), N,N'-bís(hydroxiben- SyDetylendiamin-N,N'-diättiksyra (HBED), (TTHA), substituerad EDTA eller DTPA, 1,4,7,10-tetifaazacyklododekan- N ,N ',N",N "'-tetraättiksyra (DOTA) eller 1,4,8,11-tetraazacyklotetradekan- N ,N ',N ",N "'-tetraättiksyra (TETA), i fri form eller i saltform. trietylentetraminhexaättíksyra

6. Somatostatinoktapeptid enligt krav 5, kännetecknad av att den kelatiserande gruppen är härledd från dietylentri- aminpentaättiksyra (DTPA), i fri form eller i saltform.

7. Somatostatinoktapeptid enligt något av föregående krav, kännetecknad av att den kelatiserande gruppen är bunden till nämnda peptid via en spacergrupp med formeln oc, Z'R35'CO' (al) vari _1135 Cmalkylen, Cmlalkenylen eller -CH(R')-, där R' är den rest som bunden i o: till en naturlig eller syntetisk a-aminosyra, och Z är en funktionell grupp med förmåga att kovalent reagera med kelatise- ringsmedlet.

8. Somatostatinoktapeptid enligt något av föregående krav, kännetecknar! av att det detekterbara elementet är en positron-, 0:-, ß- eller y- emitterande radionuklid. 'T-íí-'Ü

9. DTPA-(D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol i fri form, i saltform, eller komplexbunden med 111m eller 90Y. 508 799 10 15 20 25 30

10. F örfarande för framställning av en somatostatinoktapeptid enligt krav 1, i fri form, i saltform eller i komplexbunden form, kännetecknat av att det omfattar a) avlägsnande av minst en skyddsgrupp som finns i en somatostatinpeptid vilken uppbär en kelatíserande grupp, eller b) hoplänkning genom en amidbindning av två peptidfragment, som vart och ett innehåller minst en aminosyra eller aminoalkohol i skyddad eller oskyddad form och en av dem innehåller den kelatíserande gruppen, varvid amidbindningen är sådan att den önskade aminosyrasekvensen erhålls, och steget a) vid förfarandet sedan eventuellt utförs, eller _ c) hoplänkning av ett kelatiseringsmedel och den önskade somatostatin- pep tiden i skyddad eller oskyddad form på sådant sätt, att den kelatíse- rande gruppen fästes på den önskade N-aminogruppen i peptiden, och steget a) sedan eventuellt utförs, eller d) avlägsnande av en funktionell grupp i en oskyddad eller en skyddad peptid, som uppbär en kelatíserande grupp, eller omvandling därav till en annan funktionell grupp, så att man får en annan oskyddad eller skyddad peptid, som uppbär en kelatiserande grupp, och i det senare fallet utför steget a) av förfarandet, eller e) oxidation av en somatostatinpeptid modifierad med en kelatíserande grupp, van' merkaptagriipperna i Cys-resterna föreligger i fri form så att en analog bildas, vari två Cys-rester är förenade genom en S-S-brygga, och utvinning av den sålunda erhållna föreningen i fri form eller i saltform eller i med ett defekterbart element komplexbunden form.

11. Somatostatinoktapeptid enligt något av kraven 1-9, i fri form eller i farma- ceutiskt godtagbar saltform, för användning som läkemedel.

12. Somatostatinoktapeptid enligt krav 11 för användning som bildåtergiv- ningsmedel när den är komplexbunden med en positron- eller y-emitterande radionuklid eller som ett terapeutiskt medel när den är komplexbunden med en a- eller ß-emitterande radionuklid.

13. Farmaceutisk komposition, vilken som aktiv komponent innefattar en somatostatinoktapeptid enligt något av kraven 1-9, i fri form eller i farmaceutiskt 508 799 godtagbar saltform, tillsammans med en farmaceutiskt godtagbar bärare eller u tsp ädnin gsmedel.

14. Föipackníng innehållande enhetsdoser av en somatostatinoktapeptid enligt något av kraven 1-9 i ej komplexbunden form ooh av ett detekterbart element, med instruktioner for blandning därav och fór användning som bildåtergivningsmedel eller terapeutiskt medel.