RU2327170C2 - Method of complex diagnostics of viral hepatitis type b, viral hepatitis type c, hiv and syphilis - Google Patents
Method of complex diagnostics of viral hepatitis type b, viral hepatitis type c, hiv and syphilis Download PDFInfo
- Publication number
- RU2327170C2 RU2327170C2 RU2006107142/15A RU2006107142A RU2327170C2 RU 2327170 C2 RU2327170 C2 RU 2327170C2 RU 2006107142/15 A RU2006107142/15 A RU 2006107142/15A RU 2006107142 A RU2006107142 A RU 2006107142A RU 2327170 C2 RU2327170 C2 RU 2327170C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- proteins
- type
- hepatitis
- microparticles
- virus
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 title claims abstract description 13
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 title abstract 5
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 title abstract 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 73
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 73
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 31
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 23
- 241000589884 Treponema pallidum Species 0.000 claims abstract description 14
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 claims abstract description 12
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 claims abstract description 10
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 claims abstract description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 9
- 208000010710 hepatitis C virus infection Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 claims description 49
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 claims description 44
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 37
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 37
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 37
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 32
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 21
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 21
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 21
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 19
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 claims description 18
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 claims description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 15
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 14
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 12
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 claims description 12
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 12
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 claims description 11
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 claims description 11
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 claims description 11
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 claims description 10
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 claims description 9
- 101710205625 Capsid protein p24 Proteins 0.000 claims description 9
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 claims description 9
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 claims description 9
- 101710149279 Small delta antigen Proteins 0.000 claims description 9
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 claims description 9
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 6
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 5
- 101710142246 External core antigen Proteins 0.000 claims description 3
- 101800000385 Transmembrane protein Proteins 0.000 claims description 2
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 claims description 2
- -1 or its derivatives Substances 0.000 claims description 2
- IWZSHWBGHQBIML-ZGGLMWTQSA-N (3S,8S,10R,13S,14S,17S)-17-isoquinolin-7-yl-N,N,10,13-tetramethyl-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-amine Chemical compound CN(C)[C@H]1CC[C@]2(C)C3CC[C@@]4(C)[C@@H](CC[C@@H]4c4ccc5ccncc5c4)[C@@H]3CC=C2C1 IWZSHWBGHQBIML-ZGGLMWTQSA-N 0.000 claims 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 claims 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 abstract description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 11
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 4
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 abstract 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 4
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 108010027044 HIV Core Protein p24 Proteins 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 108010058683 Immobilized Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000000295 emission spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000002861 polymer material Substances 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к способам комплексной диагностики инфекционных заболеваний, таких как вирусный гепатит В, вирусный гепатит С, ВИЧ-инфекция 1-го и 2-го типов и сифилис на основе анализа сыворотки или плазмы крови, может использоваться в медицине для выявления названых болезней.The invention relates to methods for the comprehensive diagnosis of infectious diseases, such as viral hepatitis B, viral hepatitis C, HIV infection of the 1st and 2nd types and syphilis based on the analysis of serum or plasma, can be used in medicine to detect these diseases.
Выполнение анализов на наличие инфекционных маркеров вируса гепатита В, вируса гепатита С, вируса иммунодефицита человека 1-го и 2-го типов и сифилиса является обязательным для всех доноров крови и органов в России, США и многих других странах. Кроме того, в связи с широким распространением названных инфекций такие анализы в настоящее время являются наиболее востребованными и распространенными.Testing for the presence of infectious markers of hepatitis B virus, hepatitis C virus, human immunodeficiency virus type 1 and type 2 and syphilis is mandatory for all blood donors and organs in Russia, the United States and many other countries. In addition, due to the wide spread of these infections, such tests are currently the most popular and common.
Известны способы диагностики вирусного гепатита В, вирусного гепатита С, ВИЧ-инфекции 1-го и 2-го типов и сифилиса путем выявления маркеров инфекционных агентов либо маркеров начавшегося инфекционного процесса в физиологических жидкостях пациентов. Причем исследование биологических проб для выявления этих заболеваний проводят отдельно для каждого из перечисленных заболеваний.Known methods for diagnosing viral hepatitis B, viral hepatitis C, HIV infection of the 1st and 2nd types and syphilis by identifying markers of infectious agents or markers of the onset of infection in physiological fluids of patients. Moreover, the study of biological samples to identify these diseases is carried out separately for each of the listed diseases.
Например, диагностику осуществляют путем выявления ДНК или РНК инфекционного агента в физиологических жидкостях человека, в том числе в сыворотке крови, методом полимеразной цепной реакции или методом обратной транскрипции - полимеразной цепной реакции.For example, the diagnosis is carried out by detecting the DNA or RNA of an infectious agent in human physiological fluids, including serum, by the method of polymerase chain reaction or by reverse transcription - polymerase chain reaction.
Существующая практика выявления этих заболеваний включает проведение скринингового и подтверждающего тестирования сыворотки или плазмы крови методом ИФА, а также методом иммунного блоттинга.Existing practice for the detection of these diseases includes screening and confirmatory testing of serum or plasma by ELISA, as well as by immune blotting.
При проведении скрининговых тестов определяют наличие в сыворотке или плазме крови антител, специфичных к антигенам определенного инфекционного агента. Данные о наличии или отсутствии антител к тем или иным антигенам инфекционного агента в отдельности, а также данные о присутствии специфических антигенов в сыворотке крови являются незаменимыми для дифференциальной диагностики, оценки тяжести и прогноза течения заболевания, выбора способа лечения болезни.When conducting screening tests, determine the presence in the serum or plasma of antibodies specific for the antigens of a particular infectious agent. Data on the presence or absence of antibodies to certain antigens of the infectious agent separately, as well as data on the presence of specific antigens in the blood serum, are indispensable for differential diagnosis, assessing the severity and prognosis of the course of the disease, and choosing a method for treating the disease.
В настоящее время для выявления антител к различным антигенам инфекционного агента применяют подтверждающие иммуноферментные тест-системы, в которых необходимо осуществлять отдельные анализы для каждого из исследуемых параметров.At present, confirming enzyme-linked immunosorbent assays are used to detect antibodies to various antigens of an infectious agent, in which it is necessary to carry out separate analyzes for each of the studied parameters.
Иммуноферментные тест-системы последних поколений позволяют определять наличие специфических антител и антигенов инфекционных агентов в крови одновременно, но без возможности дискриминировать полученный сигнал.Enzyme-linked immunosorbent assays of the latest generations make it possible to determine the presence of specific antibodies and antigens of infectious agents in the blood simultaneously, but without the ability to discriminate the received signal.
Метод иммунного блоттинга позволяет получить информацию о спектре антител к различным антигенам, но остается низкочувствительным, дорогим и низкопроизводительным, что резко ограничивает его использование в повседневной практике.The method of immune blotting allows you to obtain information about the spectrum of antibodies to various antigens, but remains low-sensitive, expensive and low-productivity, which severely limits its use in everyday practice.
Наиболее близким аналогом предлагаемого решения является способ диагностики, который осуществляют путем выявления в сыворотке или плазме крови специфических иммуноглобулинов против антигенов инфекционных агентов методом твердофазного иммуноферментного анализа [патент РФ № 2137138]. При этом антигены инфекционных агентов иммобилизуют на твердой поверхности в лунках планшета. В названные лунки планшета затем вносят клинический образец сыворотки или плазмы крови. После этого иммунохимически определяют антитела, связавшиеся с иммобилизованными на твердой поверхности антигенами. Этот способ принят за прототип изобретения. К его недостаткам относится невозможность одновременной диагностики всех перечисленных заболеваний, большая длительность проведения анализов и высокие трудозатраты.The closest analogue of the proposed solution is a diagnostic method, which is carried out by detecting specific serum immunoglobulins against antigens of infectious agents in serum or plasma by enzyme-linked immunosorbent assay [RF patent No. 2137138]. In this case, the antigens of infectious agents are immobilized on a solid surface in the wells of the tablet. A clinical sample of serum or plasma is then added to the named wells of the plate. After that, antibodies bound to antigens immobilized on a solid surface are immunochemically determined. This method is adopted as a prototype of the invention. Its disadvantages include the impossibility of simultaneously diagnosing all of the listed diseases, the long duration of the tests and high labor costs.
Изобретение решает задачу создания такого способа проведения комплексной диагностики вирусного гепатита В, вирусного гепатита С, ВИЧ-инфекции 1-го и 2-го типов и сифилиса, который позволял бы одновременно выявлять инфекционные маркеры всех названных заболеваний, был простым в исполнении, позволял многократно понизить общие трудозатраты на его осуществление и при этом пропорционально увеличить информационную плотность диагностики.The invention solves the problem of creating such a method for the comprehensive diagnosis of viral hepatitis B, viral hepatitis C, HIV infection of the 1st and 2nd types and syphilis, which would allow the simultaneous detection of infectious markers of all these diseases, was simple to implement, allowed to repeatedly reduce total labor costs for its implementation and at the same time proportionally increase the information density of diagnostics.
Поставленная задача решается тем, что предлагается способ комплексной диагностики вирусного гепатита В, вирусного гепатита С, ВИЧ-инфекции 1-го и 2-го типов и сифилиса, по которому на твердой поверхности микрочастиц иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты вируса гепатита С, вируса иммунодефицита человека 2-го типа и бактерии Treponema Pallidum, а также белки, несущие антигенные детерминанты вируса гепатита В, а также белки, несущие антигенные детерминанты вируса гепатита В и/или иммуноглобулины, специфичные к антигену HBsAg названного вируса гепатита В, и белки, несущие антигенные детерминанты вируса иммунодефицита человека 1-го типа и/или иммуноглобулины специфичные к антигену р24 названного вируса иммунодефицита человека 1-го типа, причем каждый из названных белков иммобилизуют на поверхности микрочастиц определенного типа, после чего названные микрочастицы смешивают между собой с образованием суспензии, в которую вводят сыворотку или плазму исследуемой крови с получением рабочей смеси, которую инкубируют при температуре 20-42°C в течение по меньшей мере 10 минут, затем вводят раствор, содержащий люминесцентные метки, способные присоединяться к белкам, связавшимся с названными иммобилизованными на поверхности микросфер белками, затем полученную смесь инкубируют при температуре 20-42°C в течение по меньшей мере 10 минут, после чего определяют тип каждой микрочастицы и люминесценцию метки, присоединившейся к белку, связавшемуся с иммобилизованным на поверхности микрочастицы белком.The problem is solved in that a method for the comprehensive diagnosis of viral hepatitis B, viral hepatitis C, type 1 and type 2 HIV infection and syphilis is proposed, according to which proteins carrying the antigenic determinants of hepatitis C virus, immunodeficiency virus are immobilized type 2 human and Treponema Pallidum bacteria, as well as proteins that carry the antigenic determinants of hepatitis B virus, as well as proteins that carry the antigenic determinants of hepatitis B virus and / or immunoglobulins specific for the HBsAg antigen called vi hepatitis B mustache, and proteins that carry antigenic determinants of type 1 human immunodeficiency virus and / or immunoglobulins specific for the p24 antigen of said type 1 human immunodeficiency virus, each of these proteins being immobilized on the surface of a particular type of microparticles, after which the named microparticles mixed with each other with the formation of a suspension into which serum or plasma of the test blood is injected to obtain a working mixture, which is incubated at a temperature of 20-42 ° C for at least 10 minutes, then a solution containing luminescent labels capable of binding to the proteins bound to the proteins immobilized on the surface of the microspheres is brought in, then the resulting mixture is incubated at a temperature of 20-42 ° C for at least 10 minutes, after which the type of each microparticle and the luminescence of the label are determined, attached to a protein bound to a protein immobilized on the surface of the microparticle.
Микрочастицы могут быть выполнены одинаковой формы, например, в виде микросфер диаметром 1-50 мкм или микроцилиндров диаметром 1-50 мкм имеющих достаточную площадь для иммобилизации на их поверхности белков. В таком случае тип микрочастицы определяется ее размером. Для иммобилизации каждого белка выбирают микрочастицы определенного размера, отличного от других микрочастиц, предназначенных для иммобилизации других белков.The microparticles can be made of the same shape, for example, in the form of microspheres with a diameter of 1-50 μm or microcylinders with a diameter of 1-50 μm having a sufficient area for immobilization of proteins on their surface. In this case, the type of microparticle is determined by its size. To immobilize each protein, microparticles of a certain size, different from other microparticles intended to immobilize other proteins, are selected.
Микрочастицы могут быть выполнены одинаковой формы и размеров, но иметь разный профиль люминесценции. Для этого их либо изготавливают из материала, изначально содержащего люминесцентные вещества с разными спектрами поглощения и испускания или включения комбинации различных люминесцентных соединений, либо подвергают отдельной обработке уже после их изготовления из вещества, изначально не обладающего люминесценцией. В этом случае тип микрочастицы определяется ее профилем люминесценции, и для иммобилизации каждого белка подбираются микрочастицы, отличающиеся от других профилем люминесценции.Microparticles can be made of the same shape and size, but have a different luminescence profile. To do this, they are either made from a material that initially contains luminescent substances with different absorption and emission spectra or the inclusion of a combination of different luminescent compounds, or they are subjected to separate processing after they are made from a substance that does not initially have luminescence. In this case, the type of microparticle is determined by its luminescence profile, and to immobilize each protein, microparticles are selected that differ from the others in the luminescence profile.
Для диагностики гепатита В на поверхности микрочастиц иммобилизуют иммуноглобулины, специфичные к антигену HBsAg названного гепатита В и/или белки, несущие антигенные детерминанты вируса гепатита В, входящие в состав его белковых структур: HBcoreAg и/или HBeAg и/или HBsAg.For the diagnosis of hepatitis B, immunoglobulins specific for the HBsAg antigen of hepatitis B and / or proteins carrying the antigenic determinants of the hepatitis B virus, which are part of its protein structures: HBcoreAg and / or HBeAg and / or HBsAg, are immobilized on the surface of the microparticles.
Для диагностики гепатита С на поверхности микрочастиц иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты вируса гепатита С, входящие в состав его белковых структур, например: Ns 3, и/или Ns 4, и/или Ns 5, и/или Core.For the diagnosis of hepatitis C, proteins carrying the antigenic determinants of the hepatitis C virus, which are part of its protein structures, for example, Ns 3, and / or Ns 4, and / or Ns 5, and / or Core are immobilized on the surface of microparticles.
Для диагностики ВИЧ-инфекции 1-го типа на поверхности микрочастиц иммобилизуют иммуноглобулины, специфичные к антигену р24 названного вируса иммунодефицита человека 1-го типа и/или белки, несущие антигенные детерминанты вируса иммунодифицита человека 1-го типа, входящие в состав его белковых структур: gp41, и/или gp120, и/или р24.To diagnose type 1 HIV infection, immunoglobulins specific to the p24 antigen of the said type 1 human immunodeficiency virus and / or proteins that carry the antigenic determinants of type 1 human immunodeficiency virus that are part of its protein structures are immobilized on the surface of the microparticles: gp41, and / or gp120, and / or p24.
Для диагностики ВИЧ-инфекции 2-го типа на поверхности микрочастиц иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты вируса иммунодифицита человека 2-го типа, входящие в состав его белковой структуры gp36.For the diagnosis of type 2 HIV infection, proteins carrying the antigenic determinants of type 2 human immunodeficiency virus, which are part of its gp36 protein structure, are immobilized on the surface of the microparticles.
Для диагностики сифилиса на поверхности микрочастиц иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты бактерии Treponema pallidum, входящие в состав ее белковых структур, например р17 и/или р47.For the diagnosis of syphilis on the surface of the microparticles, proteins carrying the antigenic determinants of the Treponema pallidum bacterium, which are part of its protein structures, for example p17 and / or p47, are immobilized.
Целесообразно сыворотку или плазму исследуемой крови разбавлять в рабочей смеси в соотношении (1:10)-(1:500).It is advisable to dilute the test blood serum or plasma in the working mixture in the ratio (1:10) - (1: 500).
Для сокращения времени инкубирования целесообразно рабочую смесь во время инкубирования постоянно перемешивать.To reduce the incubation time, it is advisable to constantly mix the working mixture during incubation.
Перед введением раствора, содержащего люминесцентные метки, способные присоединяться к белкам из исследуемого образца, связавшимся с иммобилизованными на поверхности микросфер белками, микрочастицы можно выделить из рабочей смеси фильтрованием и промыть их 2-6 раз с целью освобождения от несвязавшихся компонентов рабочей смеси.Before the introduction of a solution containing luminescent labels capable of attaching to the proteins from the test sample, bound to proteins immobilized on the surface of the microspheres, the microparticles can be isolated from the working mixture by filtration and washed 2-6 times to release the unbound components of the working mixture.
Также перед определением типа каждой микрочастицы они могут быть выделены из рабочей смеси фильтрованием и промыты 2-6 раза с целью освобождения от несвязавшихся компонентов рабочей смеси.Also, before determining the type of each microparticle, they can be isolated from the working mixture by filtration and washed 2-6 times in order to free from unbound components of the working mixture.
Люминесцентной меткой может быть смесь конъюгата антивидовых антител против иммуноглобулинов человека с люминесцентным соединением и коньюгата стрептавидина или авидина или их производных с люминесцентным соединением.The luminescent label may be a mixture of a conjugate of anti-human antibodies against human immunoglobulins with a luminescent compound and a conjugate of streptavidin or avidin or their derivatives with a luminescent compound.
Также люминесцентной меткой может быть смесь конъюгатов белков, несущих антигенные детерминанты вируса гепатита В, вируса гепатита С, вируса иммунодефицита человека 1-го типа, вируса иммунодефицита человека 2-го типа и бактерии Treponema Pallidum с люминесцентным соединением, и коньюгата стрептавидина или авидина или их производных с люминесцентным соединением.Also, the fluorescent label may be a mixture of conjugates of proteins carrying the antigenic determinants of hepatitis B virus, hepatitis C virus, human immunodeficiency virus type 1, human immunodeficiency virus type 2 and Treponema Pallidum bacteria with a luminescent compound, and streptavidin or avid conjugate derivatives with a luminescent compound.
Также люминесцентной меткой может быть смесь из конъюгатов белков, несущих антигенные детерминанты вируса гепатита В, вируса гепатита С, вируса иммунодефицита человека 1-го типа, вируса иммунодефицита человека 2-го типа и бактерии Treponema Pallidum с биотином, или его производными, и конъюгата стрептавидина или авидина или их производных с люминесцентным соединением.Also, the fluorescent label may be a mixture of protein conjugates carrying the antigenic determinants of hepatitis B virus, hepatitis C virus, human immunodeficiency virus type 1, human immunodeficiency virus type 2 and Treponema Pallidum bacteria with biotin or its derivatives, and streptavidin conjugate or avidin or their derivatives with a luminescent compound.
Также люминесцентной меткой может быть смесь конъюгата антивидовых антител против иммуноглобулинов человека с биотином или его производными, и коньюгата стрептавидина или авидина или их производных с люминесцентным соединением.Also, the luminescent label may be a mixture of a conjugate of anti-human antibodies against human immunoglobulins with biotin or its derivatives, and a conjugate of streptavidin or avidin or their derivatives with a luminescent compound.
В том случае, если на поверхность микрочастиц определенного типа иммобилизованы иммуноглобулины, специфичные к антигену HBsAg вируса гепатита В, и/или иммуноглобулины, специфичные к антигену р24 вируса иммунодефицита человека 1-го типа, люминесцентная метка содержит, например, биотинилированные иммуноглобулины против антигенов HBsAg вируса гепатита В и/или р24 вируса иммунодефицита человека 1-го типа.In the event that immunoglobulins specific for the hepatitis B virus HBsAg antigen and / or immunoglobulins specific for the human immunodeficiency virus p24 antigen type 1 are immobilized onto the surface of a particular type of microparticles, the luminescent label contains, for example, biotinylated immunoglobulins against HBs antigens hepatitis B and / or p24 human immunodeficiency virus type 1.
Люминесцентным соединением в люминесцентной метке может служить, например, R-фикоэритрин или его производные.For example, R-phycoerythrin or its derivatives can serve as a luminescent compound in a luminescent label.
При получении суспензии к перемешанным между собой микрочастицам разных типов добавляют, например, буферный раствор разведения сыворотки или плазмы крови.Upon receipt of the suspension to mixed with each other microparticles of different types add, for example, a buffer solution of dilution of serum or blood plasma.
Во время инкубации специфические антитела, содержащиеся в образце, могут связаться с соответствующими антигенами, иммобилизованными на разных микрочастицах, аналогично свободные антигены при их наличии в образце также могут связаться с соответствующими антителами, иммобилизованными на микрочастицах. После добавления люминесцентной метки из названной рабочей смеси выделяют микрочастицы и определяют тип каждой микрочастицы - ее размер, или профиль люминесценции, а также люминесценцию молекул, связавшихся на поверхности микрочастиц в иммунные комплексы. При наличии люминесценции молекул, связавшихся с поверхностью микрочастиц, выше определенного уровня, делают вывод о наличии того или иного маркера (антител и/или антигенов) в исследуемой крови.During incubation, specific antibodies contained in the sample can bind to the corresponding antigens immobilized on different microparticles, similarly free antigens, if present in the sample, can also bind to the corresponding antibodies immobilized on microparticles. After adding a luminescent label, microparticles are isolated from the said working mixture and the type of each microparticle is determined - its size, or luminescence profile, as well as the luminescence of molecules bound on the surface of the microparticles into immune complexes. In the presence of luminescence of molecules bound to the surface of the microparticles above a certain level, it is concluded that one or another marker (antibodies and / or antigens) is present in the test blood.
Возможны другие варианты детекции связавшихся антител и антигенов из клинического образца с микрочастицами, в частности, с применением системы биотин-авидин/стрептавидин и аналогичных ей. В любом случае, на этапе детекции образовавшихся иммунных комплексов должны быть использованы люминесцентные метки.Other variants of detecting bound antibodies and antigens from a clinical sample with microparticles are possible, in particular, using the biotin-avidin / streptavidin system and the like. In any case, at the stage of detection of the formed immune complexes, luminescent labels should be used.
Как правило, связанные с антигенами на поверхности микрочастиц антитела относятся к классам: IgG, и/или IgA, и/или IgM.Typically, antibodies associated with antigens on the surface of microparticles belong to the classes: IgG, and / or IgA, and / or IgM.
Микрочастицы могут быть выполнены из любого нейтрального в химическом отношении вещества, например полистирола. Микрочастицы должны иметь плотность, близкую к плотности воды для обеспечения медленного оседания в водных растворах.The microparticles can be made of any chemically neutral substance, for example polystyrene. Microparticles should have a density close to the density of water to ensure slow sedimentation in aqueous solutions.
Способ осуществляют следующим образом.The method is as follows.
Микрочастицы, выполненные, например, в форме микросфер из полимерного материала (полистирола, или модифицированного полистирола, или другого материала, пригодного для осуществления иммобилизации белков на его поверхности), выбирают разных типоразмеров, преимущественно в диапазоне 1-50 мкм, в зависимости от количества видов белков, которые должны быть иммобилизованы для выполнения анализов. Таких типоразмеров может быть не менее пяти, так как способ предназначен для одновременной диагностики четырех заболеваний, из которых ВИЧ-инфекция 2-х типов. Например, микросферы выбирают диаметром 1 мкм, 4 мкм, 8 мкм, 10 мкм и 15 мкм. Однако для диагностики каждого заболевания может использоваться несколько белков - антигенов или антител, например, для диагностики сифилиса одновременно могут использоваться два белка, несущие соответствующие антигенные детерминанты бактерии Treponema pallidum, входящие в состав ее белковых структур: р17 и/или р47. В таком случае каждому из них должен соответствовать свой типоразмер микросфер, например 15 мкм и 17 мкм.Microparticles made, for example, in the form of microspheres made of a polymer material (polystyrene, or a modified polystyrene, or other material suitable for immobilizing proteins on its surface), choose different sizes, mainly in the range of 1-50 microns, depending on the number of species proteins that must be immobilized for analysis. There can be at least five such sizes, since the method is intended for the simultaneous diagnosis of four diseases, of which HIV infection is of 2 types. For example, microspheres are selected with a diameter of 1 μm, 4 μm, 8 μm, 10 μm and 15 μm. However, for the diagnosis of each disease, several proteins can be used - antigens or antibodies, for example, for the diagnosis of syphilis, two proteins can be used simultaneously that carry the corresponding antigenic determinants of the Treponema pallidum bacteria that are part of its protein structures: p17 and / or p47. In this case, each of them must correspond to its own size of microspheres, for example 15 microns and 17 microns.
Также микрочастицы могут быть выполнены одного размера, но различаться по профилю собственной люминесценции. В этом случае микросферы либо предварительно обрабатываются специальным образом, либо изначально изготавливаются из материала, в который добавлены люминесцентные компоненты, обеспечивающие собственный люминесцентный профиль микросферы. Таким образом, при иммобилизации белков на поверхности люминесцентных микросфер каждому их типу соответствуют микросферы определенного профиля люминесценции, отличного от других.Also, microparticles can be made of the same size, but vary in the profile of their own luminescence. In this case, the microspheres are either pre-processed in a special way, or are initially made from a material into which luminescent components are added that provide their own luminescent profile of the microsphere. Thus, when immobilizing proteins on the surface of luminescent microspheres, each type corresponds to microspheres of a certain luminescence profile, different from others.
На поверхности каждой микросферы иммобилизуют известными способами белки, несущие антигенные детерминанты белковых структур инфекционных агентов ВГВ, ВГС, ВИЧ 1-2, Treponema Pallidum: HBcAg, и/или HBeAg, и/или HBsAg, Ns 3, и/или Ns 4, и/или Ns 5, и/или core, gp 41, и/или gp 120, и/или р24, и/или gp 36, р17 и/или р47, и/или иммуноглобулины, специфичные к антигену р24 вируса иммунодефицита человека 1-го типа и/или к антигену HBsAg вируса гепатита В, причем каждый из названных белков имимобилизуют на поверхность микросфер, имеющих определенный диаметр или профиль люминесценции. Названные белки могут использоваться в любом сочетании, однако в любом случае должны присутствовать белки, несущие антигенные детерминанты вируса гепатита В, вируса гепатита С, вируса иммунодефицита человека 1-го и 2-го типа и Treponema Pallidum, причем, как уже упоминалось ранее, каждый из названных белков иммобилизуют на твердую поверхность микросфер определенного диаметра или определенного профиля люминесценции.On the surface of each microsphere, proteins carrying the antigenic determinants of the protein structures of HBV, HCV, HIV 1-2, Treponema Pallidum: HBcAg and / or HBeAg and / or HBsAg, Ns 3, and / or Ns 4, are immobilized by known methods. / or Ns 5, and / or core, gp 41, and / or gp 120, and / or p24, and / or gp 36, p17 and / or p47, and / or immunoglobulins specific for the human immunodeficiency virus p24 antigen 1- type and / or to the HBsAg antigen of hepatitis B virus, each of these proteins being immobilized on the surface of microspheres having a certain diameter or luminescence profile. These proteins can be used in any combination, however, in any case, proteins must be present that carry the antigenic determinants of hepatitis B virus, hepatitis C virus, human immunodeficiency virus type 1 and type 2 and Treponema Pallidum, each of which, as mentioned earlier, of these proteins are immobilized on a solid surface of microspheres of a certain diameter or a certain luminescence profile.
Иммобилизация белков на поверхности микросфер может быть осуществлена, например, химически с образованием ковалентных связей между белком и материалом микросферы или пассивно за счет гидрофобных и/или ионных взаимодействий материала микросферы с иммобилизуемым белком.The immobilization of proteins on the surface of microspheres can be carried out, for example, chemically with the formation of covalent bonds between the protein and the material of the microsphere or passively due to hydrophobic and / or ionic interactions of the material of the microsphere with the immobilized protein.
Микросферы всех типов с иммобилизованными на их поверхности белками-антигенами и антителами смешивают, например, в равном числовом соотношении между собой и с буферным раствором разведения сыворотки или плазмы крови с образованием суспензии. Образец сыворотки либо плазмы крови человека вносят в суспензию микросфер, при этом конечное разбавление образца составляет 1:100. Полученную таким образом рабочую смесь инкубируют при температуре 20-42°C в течение 10-60 минут при непрерывном перемешивании (шейкировании), в результате чего присутствующие в исследуемом образце антитела связываются с соответствующими им антигенами, иммобилизованными на поверхности микросфер. Аналогично, свободные антигены при их наличии в образце также могут связаться с соответствующими антителами, иммобилизованными на микросферах.Microspheres of all types with antigens and antibodies immobilized on their surface are mixed, for example, in an equal numerical ratio between each other and with a buffer solution for diluting serum or blood plasma with the formation of a suspension. A sample of serum or human blood plasma is introduced into a suspension of microspheres, while the final dilution of the sample is 1: 100. The working mixture thus obtained is incubated at a temperature of 20-42 ° C for 10-60 minutes with continuous stirring (necking), as a result of which the antibodies present in the test sample bind to their corresponding antigens immobilized on the surface of the microspheres. Similarly, free antigens, if present in the sample, can also bind to the corresponding antibodies immobilized on microspheres.
Для выявления целевых молекул, связавшихся в иммунные комплексы на поверхности микросфер, используются различные схемы с использованием люминесцентных меток. Например, для выявления связавшихся антител различных классов могут применяться конъюгаты антивидовых иммуноглобулинов с люминесцентными метками либо с биотином. Во втором случае необходимо использование дополнительного конъюгата авидина (или аналогичного по функции соединения) с флуоресцентными соединениями. Для выявления связавшихся на поверхности микросфер антигенов могут использоваться конъюгаты иммуноглобулинов против этих антигенов с флуоресцентными соединениями либо с биотином. Во втором случае необходимо использование дополнительного конъюгата авидина (или аналогичного по функции соединения) с флуоресцентными соединениями.To identify the target molecules that bind to immune complexes on the surface of microspheres, various schemes using luminescent labels are used. For example, conjugates of antispecies immunoglobulins with luminescent labels or with biotin can be used to detect bound antibodies of various classes. In the second case, it is necessary to use an additional conjugate of avidin (or a compound similar in function) with fluorescent compounds. Conjugates of immunoglobulins against these antigens with fluorescent compounds or with biotin can be used to identify antigens bound on the surface of microspheres. In the second case, it is necessary to use an additional conjugate of avidin (or a compound similar in function) with fluorescent compounds.
После инкубации с образцами сывороток из рабочей смеси выделяют микросферы известными способами, например фильтрацией для отделения микросфер от несвязавшихся компонентов рабочей смеси с последующей их одно- или многократной промывкой на фильтре. Микросферы далее ресуспендируют в растворе, содержащем соответствующий люминесцентный конъюгат или смесь конъюгатов для выявления целевых молекул, связавшихся в иммунные комплексы на поверхности микросфер. Смесь инкубируют от 10 до 30 минут при постоянном перемешивании (шейкировании) при температуре 20-42°C. После этого рабочую смесь подвергают анализу, для чего используются специальные проточные цитометры или иное оборудование, способное определять размер или люминесценцию микрочастиц и люминесценцию связавшихся на поверхности конъюгатов. Полученные данные люминесценции молекул, связавшихся в иммунные комплексы на поверхности микросфер соотносят с профилем флуоресценции микросфер, либо с их размером, после чего делают выводы о наличии или отсутствии антител к тому или иному антигену (который был иммобилизован на соответствующий тип микросферы) и/или антигенов р24 ВИЧ1 и HBsAg ВГВ в исследуемом образце сыворотки крови.After incubation with serum samples, microspheres are isolated from the working mixture by known methods, for example, by filtration, to separate the microspheres from unbound components of the working mixture, followed by their single or multiple washing on the filter. The microspheres are then resuspended in a solution containing an appropriate luminescent conjugate or a mixture of conjugates to identify target molecules bound to immune complexes on the surface of the microspheres. The mixture is incubated for 10 to 30 minutes with constant stirring (shaking) at a temperature of 20-42 ° C. After that, the working mixture is subjected to analysis, which uses special flow cytometers or other equipment capable of determining the size or luminescence of microparticles and the luminescence of the conjugates bound on the surface. The obtained luminescence data of molecules bound into immune complexes on the surface of the microspheres are correlated with the fluorescence profile of the microspheres, or with their size, after which conclusions are made about the presence or absence of antibodies to a particular antigen (which was immobilized to the corresponding type of microsphere) and / or antigens p24 HIV1 and HBsAg HBV in a test serum sample.
В результате проведенного таким образом анализа сыворотки или плазмы крови определяют наличие или отсутствие в ней инфекционных маркеров вирусного гепатита В, вирусного гепатита С, ВИЧ-инфекции 1-го и 2-го типа, сифилиса.As a result of the analysis of serum or blood plasma thus performed, the presence or absence of infectious markers of viral hepatitis B, viral hepatitis C, type 1 and type 2 HIV infection, and syphilis is determined in it.
Таким образом предлагаемое изобретение позволяет одновременно выполнять комплексную диагностику гепатита В, гепатита С, ВИЧ-инфекции 1-го и 2-го типов, сифилиса, что сокращает время и трудозатраты на проведение анализов. Способ может быть полностью автоматизирован.Thus, the present invention allows for the simultaneous comprehensive diagnosis of hepatitis B, hepatitis C, HIV infection of the 1st and 2nd types, syphilis, which reduces the time and labor required for analysis. The method can be fully automated.
Пример 1Example 1
Для выполнения комплексной диагностики вирусного гепатита В, вирусного гепатита С, ВИЧ-инфекции 1-го и 2-го типа, сифилиса на поверхность микросфер, выполненных из полистирола иммобилизуют:To perform a comprehensive diagnosis of viral hepatitis B, viral hepatitis C, HIV infection of the 1st and 2nd type, syphilis on the surface of microspheres made of polystyrene, the following are immobilized:
- на микросферы диаметром 1 мкм иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты вируса гепатита В, входящие в состав ее белковой структуры HBcAg;- proteins carrying the antigenic determinants of the hepatitis B virus, which are part of its protein structure HBcAg, are immobilized onto microspheres with a diameter of 1 μm;
- на микросферы диаметром 8 мкм иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты вируса гепатита С, входящие в состав ее белковой структуры Core;- proteins carrying the antigenic determinants of the hepatitis C virus that make up its core protein structure are immobilized onto microspheres with a diameter of 8 μm;
- на микросферы диаметром 12 мкм иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты ВИЧ-1, входящие в состав его белковых структур gp 41;- on microspheres with a diameter of 12 μm immobilize proteins that carry the antigenic determinants of HIV-1, which are part of its protein structures gp 41;
- на микросферы диаметром 15 мкм иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты ВИЧ-2, входящие в состав его белковых структур gp 36;- proteins carrying the antigenic determinants of HIV-2, which are part of its protein structures gp 36, are immobilized onto microspheres with a diameter of 15 μm;
- на микросферы диаметром 20 мкм иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты бактерии Treponema pallidum, входящие в состав ее белковых структур: р17.- proteins carrying antigenic determinants of the Treponema pallidum bacterium that make up its protein structures are immobilized onto microspheres with a diameter of 20 μm: p17.
Микросферы в равном количестве смешивают между собой в буферном растворе разведения образца с получением суспензии. Сыворотку анализируемой пробы крови добавляют к суспензии в конечном разведении 1:50. Полученную таким образом смесь в течение 30 мин при непрерывном перемешивании выдерживают при 20°С. После этого рабочую смесь фильтруют, отделяя микросферы от жидкости. Далее микросферы три раза промывают на фильтре.The microspheres in equal amounts are mixed with each other in a sample dilution buffer solution to obtain a suspension. The serum of the analyzed blood sample is added to the suspension at a final dilution of 1:50. Thus obtained mixture for 30 min with continuous stirring is maintained at 20 ° C. After that, the working mixture is filtered, separating the microspheres from the liquid. Next, the microspheres are washed three times on the filter.
Промытые микросферы ресуспендируют в растворе, содержащем конъюгат антивидовых антител против иммуноглобулинов класса IgG человека с R-фикоэритрином. Полученную таким образом реакционную смесь инкубируют при 25°C в течение 20 минут при непрерывном перемешивании. Затем смесь рабочую смесь подвергают анализу.The washed microspheres are resuspended in a solution containing a conjugate of antispecies antibodies against human IgG class immunoglobulins with R-phycoerythrin. The reaction mixture thus obtained was incubated at 25 ° C. for 20 minutes with continuous stirring. Then the mixture of the working mixture is subjected to analysis.
Для проведения анализа микросферы помещают в проточный цитометр, который фиксирует размер микросферы и люминесценцию связавшегося на его поверхности конъюгата.For analysis, microspheres are placed in a flow cytometer, which records the size of the microspheres and the luminescence of the conjugate bound on its surface.
При проведении анализа выявлено, что на микросферах диаметром 20 мкм имеется уровень флуоресценции, указывающий на наличие специфических антител класса IgG против антигена р17 Treponema Pallidum в образце исследуемой сыворотки.The analysis revealed that the microspheres with a diameter of 20 μm have a fluorescence level indicating the presence of specific antibodies of the IgG class against the P17 antigen Treponema Pallidum in the sample of the test serum.
Claims (21)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006107142/15A RU2327170C2 (en) | 2006-02-27 | 2006-02-27 | Method of complex diagnostics of viral hepatitis type b, viral hepatitis type c, hiv and syphilis |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006107142/15A RU2327170C2 (en) | 2006-02-27 | 2006-02-27 | Method of complex diagnostics of viral hepatitis type b, viral hepatitis type c, hiv and syphilis |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2006107142A RU2006107142A (en) | 2007-09-20 |
| RU2327170C2 true RU2327170C2 (en) | 2008-06-20 |
Family
ID=39637566
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2006107142/15A RU2327170C2 (en) | 2006-02-27 | 2006-02-27 | Method of complex diagnostics of viral hepatitis type b, viral hepatitis type c, hiv and syphilis |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2327170C2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2488832C1 (en) * | 2012-01-13 | 2013-07-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Передовые диагностические платформы" | Complex diagnostic technique for infectious diseases by enzyme-linked immunosorbent assay |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104502594B (en) * | 2014-12-22 | 2016-08-24 | 厦门大学 | A kind of blood hepatitis B, hepatitis C and syphilis examine centrifugal chip and detection method soon |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2084527C1 (en) * | 1993-06-03 | 1997-07-20 | Биотехнологическая компания "Биосервис" | Set for assay of antibody to the human hepatitis c virus (variants) |
| RU2130969C1 (en) * | 1990-04-04 | 1999-05-27 | Чирон Корпорейшн | Composition for diagnosis of human hepatitis c (variants), method and set for detection of antibodies to human hepatitis c virus |
| RU2137138C1 (en) * | 1998-01-22 | 1999-09-10 | Товарищество с ограниченной ответственностью "Научно-производственное предприятие "АКВАПАСТ" | Diagnostic composition for identification of syphilis and test-system "akvasif" on its base |
| RU2244933C2 (en) * | 1999-06-09 | 2005-01-20 | ПРАВИТЕЛЬСТВО СОЕДИНЕННЫХ ШТАТОВ АМЕРИКИ, представляемое СЕКРЕТАРЕМ МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВОХРАНЕНИЯ И СЛУЖБЫ ДЛЯ ЛЮДЕЙ | Antigenic composition and method for detection of presence of treponema pallidum in human |
| RU2251572C2 (en) * | 1996-04-25 | 2005-05-10 | Дженикон Сайенсиз Корпорейшн, Дзе Риджентс Оф Дзе Юниверсити Оф Калифорния | Method for analysis of analytes with the use of particles as marks |
| RU2257198C2 (en) * | 2000-09-28 | 2005-07-27 | Чирон Корпорейшн | Microparticle composition and methods for their preparing |
-
2006
- 2006-02-27 RU RU2006107142/15A patent/RU2327170C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2130969C1 (en) * | 1990-04-04 | 1999-05-27 | Чирон Корпорейшн | Composition for diagnosis of human hepatitis c (variants), method and set for detection of antibodies to human hepatitis c virus |
| RU2084527C1 (en) * | 1993-06-03 | 1997-07-20 | Биотехнологическая компания "Биосервис" | Set for assay of antibody to the human hepatitis c virus (variants) |
| RU2251572C2 (en) * | 1996-04-25 | 2005-05-10 | Дженикон Сайенсиз Корпорейшн, Дзе Риджентс Оф Дзе Юниверсити Оф Калифорния | Method for analysis of analytes with the use of particles as marks |
| RU2137138C1 (en) * | 1998-01-22 | 1999-09-10 | Товарищество с ограниченной ответственностью "Научно-производственное предприятие "АКВАПАСТ" | Diagnostic composition for identification of syphilis and test-system "akvasif" on its base |
| RU2244933C2 (en) * | 1999-06-09 | 2005-01-20 | ПРАВИТЕЛЬСТВО СОЕДИНЕННЫХ ШТАТОВ АМЕРИКИ, представляемое СЕКРЕТАРЕМ МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВОХРАНЕНИЯ И СЛУЖБЫ ДЛЯ ЛЮДЕЙ | Antigenic composition and method for detection of presence of treponema pallidum in human |
| RU2257198C2 (en) * | 2000-09-28 | 2005-07-27 | Чирон Корпорейшн | Microparticle composition and methods for their preparing |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Лосев М.В. и др., Первая отечественная видоспецифическая иммуноферментная тест-система для выявления IgG к Chlamydia trachomatis «Хлами-IgG-ДС-TR», Сборник научных трудов сотрудников НИКТИ БАВ, с.101-106, г.Бердск, 1999. * |
| Реферат Manzeniuk IN et al., [Evaluation of the first domestic immunoenzyme recombinant test-system "Khlami-IGA-DS-Tr" for detection of class A antibodies to Chlamydia trachomatis], Klin Lab Diagn. 2002; (6):40-1. PMID: 12132376. Реферат Barker SD et al., An immunomagnetic-based method for the purification of ovarian cancer cells from patient-derived ascites. Gynecol Oncol. 2001; 82(1):57-63. PMID: 11426962. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2488832C1 (en) * | 2012-01-13 | 2013-07-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Передовые диагностические платформы" | Complex diagnostic technique for infectious diseases by enzyme-linked immunosorbent assay |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2006107142A (en) | 2007-09-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108051585B (en) | Homogeneous phase immunoassay kit, homogeneous phase immunoassay method and application of homogeneous phase immunoassay kit | |
| TW297094B (en) | ||
| US9766256B2 (en) | Magnetic particle tagged reagents and techniques | |
| JP2008507692A (en) | Cross-flow device for detecting large pathogens | |
| KR100209072B1 (en) | Methods for preparing biologically active reagents from succinimide-containing polymers, analytical elements, and methods of using the same | |
| JP5351896B2 (en) | How to perform an ultrasensitive immunoassay | |
| CN101076731A (en) | High efficient current immunity detecting for sample | |
| JP2000516345A (en) | Multiple flow immunoassay using magnetic particles as solid phase | |
| IL109008A (en) | Antigen density-independent immunoassay for determination of cells | |
| MXPA05005951A (en) | Reduction of the hook effect in membrane-based assay devices. | |
| CN109725153B (en) | Homogeneous phase immunoassay method and application thereof | |
| JPH10197534A (en) | Method for sensing analyte in test liquid through coagulation, reagent kit, synthetic particle carrying fixed ligand molecule, and use of the particle | |
| WO2002052245A2 (en) | Rapid particle detection | |
| JP4167491B2 (en) | Whole blood measurement method | |
| CN106415271B (en) | Controls for performing multiplex assay methods | |
| CN109142743A (en) | A kind of multinomial detection kit for exempting from liver antibody certainly | |
| RU2327170C2 (en) | Method of complex diagnostics of viral hepatitis type b, viral hepatitis type c, hiv and syphilis | |
| JPH09507577A (en) | Reaction column and method for multi-target simultaneous measurement | |
| CA1339006C (en) | Self-contained multi-immunoassay diagnostic system | |
| WO2021242178A1 (en) | A method, a system, an article, a kit and use thereof for biomolecule, bioorganelle, bioparticle, cell and microorganism detection | |
| CN113125715A (en) | Human immunodeficiency virus antibody detection kit and application thereof | |
| JP2009288069A (en) | Target substance detection method | |
| JP2716227B2 (en) | Immunological measurement method using magnetic marker particles | |
| JP2004117068A (en) | Immunoassay reagent and immunoassay method | |
| JPWO2004061452A1 (en) | Antibody measurement method |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20080228 |