RU2378017C2 - Emulsion inactivated associated vaccine against cattle rednose and coronoviral infection - Google Patents
Emulsion inactivated associated vaccine against cattle rednose and coronoviral infection Download PDFInfo
- Publication number
- RU2378017C2 RU2378017C2 RU2007148299/13A RU2007148299A RU2378017C2 RU 2378017 C2 RU2378017 C2 RU 2378017C2 RU 2007148299/13 A RU2007148299/13 A RU 2007148299/13A RU 2007148299 A RU2007148299 A RU 2007148299A RU 2378017 C2 RU2378017 C2 RU 2378017C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cattle
- strain
- arriah
- cell culture
- activity
- Prior art date
Links
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 title claims abstract description 165
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 95
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 title claims abstract description 19
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 title claims description 31
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 116
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 83
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 claims abstract description 76
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 47
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 42
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 24
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 24
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 24
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 23
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims abstract description 15
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 claims abstract description 7
- 241000700586 Herpesviridae Species 0.000 claims abstract description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 91
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 84
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 40
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 40
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 31
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 claims description 28
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 28
- 244000309466 calf Species 0.000 claims description 23
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims description 21
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 21
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 claims description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 8
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 claims description 6
- 206010051497 Rhinotracheitis Diseases 0.000 claims description 4
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 claims description 3
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 3
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 claims description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims 1
- 241000699673 Mesocricetus auratus Species 0.000 claims 1
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 claims 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 13
- 244000052769 pathogen Species 0.000 abstract description 11
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 5
- 244000144972 livestock Species 0.000 abstract description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 abstract description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 abstract description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 37
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 20
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 16
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 14
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 13
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 12
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 12
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 11
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 10
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 238000012770 revaccination Methods 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000015474 Central precocious puberty Diseases 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037064 Papilloma of choroid plexus Diseases 0.000 description 5
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 5
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 5
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 5
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 5
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 4
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 4
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 4
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 4
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 4
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 4
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 4
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 4
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 206010051511 Viral diarrhoea Diseases 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 3
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 238000000464 low-speed centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 3
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 3
- 102220240796 rs553605556 Human genes 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 208000010711 Cattle disease Diseases 0.000 description 2
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 2
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 description 2
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 description 2
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000000680 avirulence Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 244000309465 heifer Species 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 2
- 102220201851 rs143406017 Human genes 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 2
- 241000167854 Bourreria succulenta Species 0.000 description 1
- 241000711443 Bovine coronavirus Species 0.000 description 1
- 241001471959 Bovine rotavirus A unknown G-type Species 0.000 description 1
- 241000193468 Clostridium perfringens Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 241000709701 Human poliovirus 1 Species 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 101710127721 Membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 108010089430 Phosphoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007982 Phosphoproteins Human genes 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 108010020147 Protein Corona Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010046914 Vaginal infection Diseases 0.000 description 1
- 201000008100 Vaginitis Diseases 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 235000019693 cherries Nutrition 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003022 colostrum Anatomy 0.000 description 1
- 235000021277 colostrum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000004299 exfoliation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000007661 gastrointestinal function Effects 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 210000001739 intranuclear inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000633 nuclear envelope Anatomy 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается ассоциированной вакцины для специфической профилактики респираторных и желудочно-кишечных заболеваний крупного рогатого скота (КРС), обусловленных возбудителями инфекционного ринотрахеита (ИРТ) и коронавирусной инфекции КРС.The invention relates to the field of veterinary virology and biotechnology and relates to an associated vaccine for the specific prophylaxis of respiratory and gastrointestinal diseases of cattle (cattle) caused by pathogens of infectious rhinotracheitis (IRT) and coronavirus infection of cattle.
Указанные вирусы играют ведущую роль в этиологии респираторных и желудочно-кишечных заболеваний КРС, особенно в крупных животноводческих хозяйствах.These viruses play a leading role in the etiology of respiratory and gastrointestinal diseases of cattle, especially in large livestock farms.
ИРТ - остро протекающее контагиозное заболевание КРС, наносящее значительный экономический ущерб скотоводству.IRT is an acute contagious cattle disease, causing significant economic damage to livestock.
Вирус ИРТ вызывает заболевание КРС различных возрастных групп, проявляющееся пятью формами: поражением верхних дыхательных путей, вагинитами, энцефалитами, конъюнктивитами и артритами. Кроме того, у телят возможна пневмония.IRT virus causes cattle disease of various age groups, manifested in five forms: damage to the upper respiratory tract, vaginitis, encephalitis, conjunctivitis and arthritis. In addition, pneumonia is possible in calves.
Экономический ущерб, наносимый ИРТ, слагается из снижения удоев в период болезни (до 50-60%), значительного увеличения сервис-периода и яловости коров, болевших вагинальной формой, слабого развития больного молодняка и значительным процентом гибели и выбраковки телят. При хронической серозно-гнойной пневмонии погибает до 20% молодняка. Болезнь широко распространена во всем мире.The economic damage caused by ИРТ consists of a decrease in milk yield during the period of illness (up to 50-60%), a significant increase in the service period and the barrenness of cows with a vaginal form, poor development of sick young animals and a significant percentage of death and culling of calves. In chronic serous-purulent pneumonia, up to 20% of young animals die. The disease is widespread throughout the world.
Коронавирусная инфекция у КРС проявляется в виде коронавирусной диареи новорожденных телят, коронавирусной зимней дизентерии взрослого КРС и коронавирусной респираторной инфекции.Coronavirus infection in cattle is manifested in the form of coronavirus diarrhea in newborn calves, coronavirus winter dysentery of adult cattle, and coronavirus respiratory infection.
Чрезвычайно широкое распространение, тенденция вызывать длительную персистенцию, относительная устойчивость к воздействию разнообразных факторов обусловливают энзоотическое течение болезни в хозяйствах с неблагополучными условиями содержания и кормления. Стационарность болезни поддерживается за счет длительной персистенции возбудителя в организме животных-реконвалесцентов.Extremely widespread, the tendency to cause long-term persistence, and relative resistance to various factors determine the enzootic course of the disease in farms with poor living and feeding conditions. The stationarity of the disease is maintained due to the prolonged persistence of the pathogen in the body of animals-convalescents.
Важными условиями успешной борьбы с этими заболеваниями являются их своевременная и правильная диагностика и проведение мер специфической профилактики.Important conditions for the successful fight against these diseases are their timely and correct diagnosis and the implementation of specific preventive measures.
В настоящее время основным средством борьбы с респираторными и желудочно-кишечными болезнями КРС является специфическая профилактика, для которой применяются живые и инактивированные вакцины как в виде моно-, так и ассоциированных препаратов (1, 2, 3).Currently, the main means of combating respiratory and gastrointestinal diseases of cattle is specific prophylaxis, for which live and inactivated vaccines are used in the form of mono- and associated drugs (1, 2, 3).
Преимущество живых вакцин из-за технологичности в производстве и простоты при применении не вызывает сомнений. Однако иммунная реакция у животных при их введении не всегда стабильна и в ряде случаев вызывает осложнения после вакцинации: вакцина может вызвать повышенную реактогенность, иммуносупрессию, а иногда и гибель до 2% животных при вакцинации в зависимости от условий содержания и наличия коинфекций, проблемы воспроизводства, длительную персистенцию и выделение вакцинного вируса во внешнюю среду. По этой причине они не нашли широкого применения.The advantage of live vaccines due to manufacturability and ease of use is beyond doubt. However, the immune response in animals when they are introduced is not always stable and in some cases causes complications after vaccination: the vaccine can cause increased reactogenicity, immunosuppression, and sometimes death of up to 2% of animals during vaccination, depending on the conditions of detention and the presence of co-infections, reproduction problems, prolonged persistence and isolation of the vaccine virus into the environment. For this reason, they are not widely used.
Для специфической профилактики указанных заболеваний широко используют инактивированные вакцины как сорбированные, так и эмульсионные.For specific prophylaxis of these diseases, inactivated vaccines, both sorbed and emulsion, are widely used.
Известна вакцина против ИРТ КРС эмульсионная инактивированная, содержащая в качестве активного вещества авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС, полученного в культуре клеток животного происхождения, взятой из группы, состоящей из культуры клеток ВНК-21, из культуры клеток MDBK и из культуры клеток 3КГ, с инфекционной активностью не менее 6,0 lg ТЦД50/см3 и активностью в реакции диффузной преципитации (РДП) не менее 4,0 log2, и в качестве целевой добавки масляный адъювант в соотношении, мас.%:A known vaccine against cattle ИРТ inactivated emulsion containing avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle ИРТ virus as an active substance obtained in a cell culture of animal origin, taken from the group consisting of a cell culture of BHK-21, from a cell culture of MDBK and from a 3KG cell culture, with an infectious activity of at least 6.0 lg TCD 50 / cm 3 and activity in the diffuse precipitation reaction (RDP) of at least 4.0 log 2 , and as a target additive, an oil adjuvant in the ratio, wt.%:
Известна вакцина против коронавирусной инфекции КРС сорбированная инактивированная, содержащая в качестве активного вещества авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток животного происхождения, взятой из группы, состоящей из культуры клеток MDBK, из культуры клеток Таурус-1, из культуры клеток КСТ и из культуры клеток Vero, и в качестве целевой добавки адъювант-сорбент гидроокись алюминия (ГОА) в эффективном соотношении (5).A known vaccine against coronavirus infection of cattle is adsorbed inactivated, containing as an active substance an avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus obtained in animal cell culture, taken from the group consisting of MDBK cell culture, Taurus-1 cell culture, from KST cell culture and from Vero cell culture, and as the target additive adjuvant-sorbent aluminum hydroxide (GOA) in an effective ratio (5).
Недостатки моновалентных инактивированных вакцин заключаются в том, что они стимулируют образование иммунитета у животных только к одной инфекции, требуют проведения профилактических обработок против каждой инфекции в отдельности, что сказывается на затратах труда, растягивает сроки формирования иммунитета у животных, способствует возникновению стрессовых явлений и осложнений.The disadvantages of monovalent inactivated vaccines are that they stimulate the formation of immunity in animals to only one infection, require prophylactic treatments against each infection separately, which affects labor costs, stretches the formation of immunity in animals, and contributes to the occurrence of stressful phenomena and complications.
Указанные недостатки частично устранены созданием ассоциированных вакцин, содержащих отдельно или в сочетании антигены возбудителей ИРТ и коронавирусной инфекции КРС различных штаммов.These disadvantages are partially eliminated by the creation of associated vaccines containing separately or in combination antigens of pathogens of ИРТ and coronavirus infection of cattle of different strains.
В ряде случаев в состав известных вакцин, особенно предназначенных для защиты телят, включают антигены возбудителей, вызывающих вторичные инфекции.In some cases, the composition of known vaccines, especially designed to protect calves, include antigens of pathogens that cause secondary infections.
Известна ассоциированная вакцина против вирусной диареи - болезни слизистых (ВД-БС), рота- и коронавирусной инфекций и эшерихиоза КРС эмульсионная инактивированная, содержащая в качестве активного вещества смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из штамма VDV-Oregon-С24 V (САРМ V-293) вируса ВД-БС, из штамма ТМ-91 (САРМ V-279) ротавируса, из штамма BCV-9 (САРМ V-280) коронавируса и из штаммов 3935/1 (САРМ 6233), 4804 (САРМ 6234) и 6304 (САРМ 6235) бактерий Е. coli КРС. полученных в чувствительных биологических системах, и в качестве целевой добавки масляный адъювант в эффективных соотношениях (6).An associated vaccine is known for viral diarrhea — mucosal disease (VD-BS), rota- and coronavirus infections, and cattle Escherichiosis inactivated emulsion containing a mixture of avirulent purified antigenic materials from strain VDV-Oregon-C24 V (CAPM V-293) as an active substance. virus VD-BS, from strain TM-91 (CAPM V-279) rotavirus, from strain BCV-9 (CAPM V-280) coronavirus and from strains 3935/1 (CAPM 6233), 4804 (CAPM 6234) and 6304 (CAPM 6235) E. coli cattle bacteria. obtained in sensitive biological systems, and as a target additive, an oil adjuvant in effective ratios (6).
Известна ассоциированная вакцина против ИРТ, рота- и коронавирусной инфекций и эшерихиоза КРС эмульсионная инактивированная, содержащая в качестве активного вещества смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из штамма IBR-BK-5-PTOB-8 INRV №3760 вируса ИРТ, из штамма ТМ-91 (САРМ V-279) ротавируса, из штамма BCV-9 (САРМ V-280) коронавируса и из штаммов 3935/1 (САРМ 6234) и 6304 (САРМ 6235) бактерий Е. coli КРС, полученных в чувствительных биологических системах, и в качестве целевой добавки масляный адъювант в эффективных соотношениях (7).An associated vaccine against IRT, rota- and coronavirus infections and Escherichia bovine cattle is known inactivated emulsion containing a mixture of avirulent purified antigenic materials from strain IBR-BK-5-PTOB-8 INRV No. 3760 of the IRT virus, from strain TM-91 ( CAPM V-279) of rotavirus, from strain BCV-9 (CAPM V-280) of coronavirus and from strains 3935/1 (CAPM 6234) and 6304 (CAPM 6235) of E. coli cattle bacteria obtained in sensitive biological systems, and as the target additive is an oil adjuvant in effective ratios (7).
Известна ассоциированная вакцина против парагриппа-3 (ПГ-3), рота- и коронавирусной инфекций и эшерихиоза КРС эмульсионная инактивированная, содержащая в качестве активного вещества смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из штамма PI-3/T1/H V-30 вируса ПГ-3 КРС, из штамма ТМ-91 (САРМ V-279) ротавируса, из штамма BCV-9 (CAPM V-280) коронавируса и из штаммов 3935/1 (САРМ 6233), 4808 (САРМ 6234) и 6304 (САРМ 6235) бактерий Е. coli КРС, полученных в чувствительных биологических системах, и в качестве целевой добавки масляный адъювант в эффективных соотношениях (8).Known associated vaccine against parainfluenza-3 (PG-3), rota- and coronavirus infections and Escherichiosis cattle inactivated emulsion, containing as an active substance a mixture of avirulent purified antigenic materials from strain PI-3 / T 1 / H V-30 of the virus PG- 3 cattle, from the strain TM-91 (CAPM V-279) of rotavirus, from the strain BCV-9 (CAPM V-280) of coronavirus and from strains 3935/1 (CAPM 6233), 4808 (CAPM 6234) and 6304 (CAPM 6235) E. coli cattle bacteria obtained in sensitive biological systems and, as a target additive, an oil adjuvant in effective ratios (8).
Известна ассоциированная вакцина против рота-, корона-, герпесвирусной и эшерихиозной диареи новорожденных телят сорбированная инактивированная, содержащая в качестве активного вещества смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из штамма «III-1» Bovine rotavirus, из штамма «СМ-1» Bovine coronavirus, из штамма «ТКА -ВИЭВ-В-2» Bovine Herpesvirus и из штаммов бактерий Е. coli, содержащих адгезины К99 и А20, и в качестве целевой добавки адъювант-сорбент ГОА в эффективных соотношениях (9).An associated vaccine against rota-, corona-, herpesvirus and Escherichia diarrhea of newborn calves is known, inactivated adsorbed, containing as an active substance a mixture of avirulent purified antigenic materials from Bovine rotavirus strain III-1, from Bovine coronavirus strain CM-1, from strain TKA-VIIEV-B-2 "Bovine Herpesvirus and from strains of bacteria E. coli containing adhesins K 99 and A 20 , and as a target additive adjuvant-sorbent GOA in effective ratios (9).
Известна ассоциированная вакцина против рота- и коронавирусной инфекций, эшерихиоза и клостридиоза КРС эмульсионная инактивированная, содержащая в качестве активного вещества смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из штаммов Cody 81-4, 10В223 типа G и В 641 ротавируса КРС, штамма Mebus (АТСС № VR-874) коронавируса КРС, штаммов В41, В43, В44 и В141 бактерий Е. coli и штамма GL 47 (АТСС РТА-3000) бактерий Clostridium perfringens, полученных в чувствительных биологических системах, и в качестве целевой добавки масляный адъювант в эффективных соотношениях (10).An associated vaccine against rota- and coronavirus infections, Escherichiosis and Clostridiosis of cattle is known, inactivated emulsion containing a mixture of avirulent purified antigenic materials from strains Cody 81-4, 10B223 of type G and B 641 of rotavirus cattle, Mebus strain (ATCC No. VR- 874) cattle coronavirus, strains B41, B43, B44 and B141 of E. coli bacteria and strain GL 47 (ATCC PTA-3000) of bacteria Clostridium perfringens obtained in sensitive biological systems, and as the target additive, an oil adjuvant in effective ratios (10) .
Известна ассоциированная вакцина против ИРТ, ПГ-3, вирусной диареи, респираторно-синцитиальной, рота-, коронавирусной болезни телят «КОМБОВАК» сорбированная инактивированная, содержащая в качестве активного вещества смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из шести производственных штаммов вирусов - возбудителей: ИРТ, ПГ-3, ВД-БС, респираторно-синцитиальной, рота- и коронавирусной болезни КРС, - полученных в чувствительных биологических системах, и в качестве целевой добавки адъювант-сорбент ГОА в эффективных соотношениях (11).Known associated vaccine against IRT, PG-3, viral diarrhea, respiratory syncytial, rota-, coronavirus disease of calves “COMBOVAC” is inactivated adsorbed containing as an active substance a mixture of avirulent purified antigenic materials from six production strains of virus pathogens: IRT, PG -3, VD-BS, respiratory syncytial, rota- and coronavirus disease of cattle, obtained in sensitive biological systems, and as a target additive adjuvant-sorbent GOA in effective ratios (11).
Известна ассоциированная вакцина против вирусных пневмогастроэнтеритов КРС и телят сорбированная инактивированная, содержащая в качестве активного вещества смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из штаммов В-25 и ТК-А вируса ИРТ КРС, из штаммов ВД-N и ВД-R вируса ВД-БС КРС, из штаммов В-19 и ПТК-45/86 вируса ПГ-3 КРС, из штаммов КВ-90 и К-22 коронавируса КРС и из штаммов PC-89 и PC-71 возбудителя респираторно-синцитиальной инфекции КРС, полученных в чувствительных биологических системах, и в качестве целевой добавки адъювант-сорбент ГОА в эффективных соотношениях (12).Known associated vaccine against viral pneumogastroenteritis of cattle and calves is inactivated adsorbed, containing as an active substance a mixture of avirulent purified antigenic materials from strains B-25 and TK-A of the IRT virus of cattle, from strains VD-N and VD-R of the virus VD-BS cattle, from strains B-19 and PTK-45/86 of the PG-3 cattle virus, from strains KV-90 and K-22 of coronavirus cattle, and from strains PC-89 and PC-71 of the causative agent of respiratory syncytial cattle infection obtained in sensitive biological systems , and as a target additive adjuvant sorbent GOA in eff projective ratios (12).
Известен также способ количественной оценки вируссодержащих суспензий с помощью электронной микроскопии, возникший как результат многолетних опытов по электронно-микроскопическому контролю вирусных препаратов и сопоставлению его данных с показателями биологических тестов, например титром инфекционности вируса (13).There is also a method for the quantitative assessment of virus-containing suspensions using electron microscopy, which arose as a result of many years of experiments on electron microscopic control of viral preparations and comparison of its data with indicators of biological tests, for example, the virus infectivity titer (13).
Авторами данного способа установлена зависимость между титром инфекционности нативных суспензий вируса ящура и количеством физических вирусных частиц, наблюдаемых под электронным микроскопом, что послужило основанием для определения общей концентрации вирусных частиц в единице объема суспензии (степень накопления вирусных частиц в определенном объеме жидкости).The authors of this method established the relationship between the infectivity titer of native FMD virus suspensions and the number of physical virus particles observed under an electron microscope, which served as the basis for determining the total concentration of viral particles per unit volume of the suspension (the degree of accumulation of viral particles in a certain volume of liquid).
Для определения общей концентрации (N) вирусных частиц в единице объема анализируемой суспензии на экране электронного микроскопа площадью S2 подсчитывают число одновременно наблюдаемых частиц n. По известному инструментальному увеличению электронного микроскопа (М) определяют размер участка пленки-подложки S1, соответствующего полезной площади экрана:To determine the total concentration (N) of viral particles per unit volume of the analyzed suspension on the screen of an electron microscope with an area of S 2 count the number of simultaneously observed particles n. The well-known instrumental increase in the electron microscope (M) determines the size of the portion of the substrate film S 1 corresponding to the useful screen area:
При нанесении вирусных препаратов на пленки-подложки концентрация вирусных частиц (n) на данном участке S1 соответствует суммарному количеству адсорбированных частиц и частиц, осажденных на подложку при испарении остаточной жидкости. Следовательно, наблюдаемое одновременно на экране число частиц распределяется в микрообъеме, равном:When applying viral preparations to the substrate films, the concentration of viral particles (n) in this area S 1 corresponds to the total amount of adsorbed particles and particles deposited on the substrate during evaporation of the residual liquid. Therefore, the number of particles observed simultaneously on the screen is distributed in a microvolume equal to:
v=S1·I,v = S 1 · I,
где I - толщина остаточного слоя жидкости на подложке (мм).where I is the thickness of the residual liquid layer on the substrate (mm).
В определяемом объеме вируссодержащей суспензии число частиц равно:In the determined volume of the virus-containing suspension, the number of particles is equal to:
а после замены значений v и S1:and after replacing the values of v and S 1 :
где V - объем анализируемой суспензии (1 см3);where V is the volume of the analyzed suspension (1 cm 3 );
N - среднее арифметическое ряда значений числа частиц, просчитанных с экрана электронного микроскопа или экспонированных фотопластинок.N is the arithmetic average of a series of values of the number of particles calculated from the screen of an electron microscope or exposed photographic plates.
Толщину остаточного слоя I на подложке измеряют предварительно охлажденным микрометром после замораживания жидкости на подложке в парах жидкого азота. Она составляет 0,03-0,04 мм и ее принимают как постоянную величину.The thickness of the residual layer I on the substrate is measured by a pre-cooled micrometer after freezing the liquid on the substrate in liquid nitrogen vapors. It is 0.03-0.04 mm and it is taken as a constant value.
Электронно-микроскопическое определение концентрации физических вирусных частиц позволяет не только определять количественную характеристику вируса в анализируемых суспензиях, но и одновременно оценивать морфологическое состояние исследуемых вирусных частиц.Electron-microscopic determination of the concentration of physical viral particles allows not only to determine the quantitative characteristic of the virus in the analyzed suspensions, but also to assess the morphological state of the studied viral particles.
Указанный способ оказался универсальным и пригодным для определения количественной характеристики различных вирусов в исследуемых жидкостях.The specified method turned out to be universal and suitable for determining the quantitative characteristics of various viruses in the studied liquids.
Наиболее близкой к предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является ассоциированная вакцина против ИРТ и коронавирусной инфекции КРС эмульсионная инактивированная, содержащая в качестве активного вещества смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из штамма IBR-BK-5-PTOB-8 INRV №3760 вируса ИРТ КРС и из штамма BCV-9 (CAPM V-280) коронавируса КРС, полученных в чувствительных биологических системах, и в качестве целевой добавки масляный адъювант в эффективных соотношениях (7).The closest to the present invention in terms of essential features is the associated vaccine against RTI and coronavirus infection of cattle inactivated emulsion containing as a active substance a mixture of avirulent purified antigenic materials from strain IBR-BK-5-PTOB-8 INRV No. 3760 of cattle IRT virus and from strain BCV-9 (CAPM V-280) of cattle coronavirus obtained in sensitive biological systems and, as a target additive, an oil adjuvant in effective ratios (7).
Общим существенным недостатком известных ассоциированных вакцин, в том числе вакцины-прототипа, предназначенных для профилактики массовых инфекционных респираторных и желудочно-кишечных заболеваний КРС различных половозрастных групп, является их недостаточно высокая эффективность вследствие:A common significant drawback of the known associated vaccines, including the prototype vaccine, intended for the prevention of massive infectious respiratory and gastrointestinal diseases of cattle of various age and gender groups, is their insufficiently high efficiency due to:
1) неполноценности (неполноты) антигенного состава входящих в них ингредиентов и сложных взаимодействий антигенов, из которых они изготовлены;1) inferiority (incompleteness) of the antigenic composition of their constituent ingredients and complex interactions of the antigens from which they are made;
2) узости антигенного спектра действия используемых штаммов;2) the narrowness of the antigenic spectrum of action of the strains used;
3) низкой иммуногенной активности препаратов. Причиной этого явления может быть использование для инактивации вирусов формалина, вызывающего деструктивные изменения вирусных белков.3) low immunogenic activity of drugs. The reason for this phenomenon may be the use of formalin for inactivation of viruses, which causes destructive changes in viral proteins.
Поэтому проблема создания ассоциированной вакцины против основных возбудителей инфекционных респираторных и желудочно-кишечных заболеваний КРС и телят продолжает оставаться актуальной и является основным направлением исследований по их совершенствованию.Therefore, the problem of creating an associated vaccine against the main pathogens of infectious respiratory and gastrointestinal diseases of cattle and calves continues to be relevant and is the main direction of research to improve them.
Задача, на решение которой направлено настоящее изобретение, заключается в получении ассоциированной вакцины против ИРТ и коронавирусной инфекции КРС эмульсионной инактивированной, создающей эффективную защиту восприимчивых животных различных половозрастных групп против возбудителей ИРТ и коронавирусной инфекции КРС, циркулирующих на территории Российской Федерации.The problem to which the present invention is directed, is to obtain an associated vaccine against RTI and coronavirus infection of cattle emulsion inactivated, which creates effective protection of susceptible animals of various age and gender groups against pathogens of RTI and coronavirus infection of cattle circulating in the Russian Federation.
Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала высокоиммуногенных, безвредных и ареактогенных ассоциированных вакцин против ИРТ и коронавирусной инфекции КРС эмульсионных инактивированных, способных защитить поголовье КРС различных половозрастных групп от возбудителей ИРТ и коронавирусной инфекции КРС, циркулирующих на территории России.The technical result from the use of the present invention is to expand the arsenal of highly immunogenic, harmless and areactogenic associated vaccines against IRT and coronavirus infection of cattle emulsion inactivated, capable of protecting livestock of various sex and age groups from pathogens of IRT and coronavirus infection of cattle circulating in Russia.
Указанный технический результат достигнут созданием ассоциированной вакцины против ИРТ и коронавирусной инфекции КРС эмульсионной инактивированной, охарактеризованной следующей совокупностью признаков.The specified technical result was achieved by the creation of an associated vaccine against IRT and coronavirus infection of cattle with inactivated emulsion, characterized by the following set of features.
Согласно изобретению предлагаемая вакцина содержит в качестве активного вещества смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из штамма «ВНИИЗЖ» (авторское наименование) вируса ИРТ КРС и из штамма «ВНИИЗЖ» (авторское наименование) коронавируса КРС, полученных в культурах клеток животного происхождения в количествах, обеспечивающих протективную иммунную активность каждого антигена в организме животного после введения ему целевого продукта, и в качестве целевой добавки масляный адъювант в эффективном соотношении.According to the invention, the proposed vaccine contains, as an active substance, a mixture of avirulent purified antigenic materials from the strain “ARRIAH” (copyright) of the RTI virus of cattle and from the strain “ARRIAH” (copyright) of cattle coronavirus obtained in animal cell cultures in quantities that provide protective the immune activity of each antigen in the animal’s body after the introduction of the target product, and, as the target additive, an oil adjuvant in an effective ratio.
Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые испрашивается правовая охрана:The present invention includes the following set of essential features that provide a technical result in all cases for which legal protection is sought:
1. Ассоциированная вакцина против ИРТ и коронавирусной инфекции КРС эмульсионная инактивированная.1. Associated vaccine against IRT and coronavirus infection of cattle emulsion inactivated.
2. Активное вещество.2. The active substance.
3. В качестве активного вещества смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС и из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученных в культурах клеток животного происхождения в количествах, обеспечивающих протективную иммунную активность каждого антигена в организме животного после введения ему целевого продукта.3. As an active substance, a mixture of avirulent purified antigenic materials from the strain “ARRIAH” of the IRT virus of cattle and from the strain “ARRIAH” of coronavirus cattle obtained in animal cell cultures in quantities that ensure the protective immune activity of each antigen in the animal’s body after the target product.
4. Целевая добавка4. Target supplement
5. В качестве целевой добавки масляный адъювант.5. As a target additive, an oil adjuvant.
Признаками изобретения, характеризующими предлагаемую вакцину и совпадающими с признаками прототипа, в том числе родовое понятие, отражающее назначение, являются:The signs of the invention, characterizing the proposed vaccine and coinciding with the signs of the prototype, including the generic concept, reflecting the purpose, are:
1. Ассоциированная вакцина против ИРТ и коронавирусной инфекции КРС эмульсионная инактивированная,1. Associated vaccine against IRT and coronavirus infection of cattle emulsion inactivated,
2. Активное вещество.2. The active substance.
3. Целевая добавка.3. Targeted supplement.
По сравнению с вакциной-прототипом существенные отличительные признаки предлагаемой вакцины заключаются в том, что в качестве активного вещества она содержит смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ и из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученных в культурах клеток животного происхождения в количествах, обеспечивающих протективную иммунную активность каждого антигена в организме животного после введения ему целевого продукта.Compared with the prototype vaccine, the essential distinguishing features of the proposed vaccine are that it contains a mixture of avirulent purified antigenic materials from the ARRIAH strain of the IRT virus and from the ARRIAH strain of cattle coronavirus obtained in animal cell cultures in amounts that provide protective immune activity of each antigen in the animal’s body after the introduction of the target product.
Предлагаемое изобретение характеризуется другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования:The present invention is characterized by other distinctive features expressing specific forms of execution or special conditions for its use:
1. Авирулентный очищенный антитенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС, полученного в культуре клеток животного происхождения, взятой из группы, состоящей из культуры клеток ВНК-21, из культуры клеток MDBK и из культуры клеток 3КГ в эффективном количестве.1. Avirulent purified antibody material from the ARRIAH strain of cattle IRT virus obtained in a cell culture of animal origin, taken from the group consisting of a cell culture of BHK-21, from a cell culture of MDBK and from a 3KG cell culture in an effective amount.
2. Авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС, полученного в культуре клеток ВНК-21 с инфекционной активностью не менее 6,0 Ig ТЦД50/см3 и активностью в реакции диффузионной преципитации (РДП) не менее 4,0 log2, в количестве не менее 15,0 мас.%.2. Avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle IRT virus obtained in a culture of BHK-21 cells with an infectious activity of at least 6.0 Ig TCD 50 / cm 3 and activity in the diffusion precipitation reaction (RDP) of at least 4.0 log 2 , in an amount of not less than 15.0 wt.%.
3. Авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС, полученного в культуре клеток MDBK с инфекционной активностью не менее 6,0 lg ТЦД50/см3 и активностью в РДП не менее 4,0 log2, в количестве не менее 15,0 мас.%.3. Avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle IRT virus obtained in an MDBK cell culture with an infectious activity of not less than 6.0 lg TCD 50 / cm 3 and activity in the RDP of not less than 4.0 log 2 , in an amount of not less than 15.0 wt.%.
4. Авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС, полученного в культуре клеток 3КГ с инфекционной активностью не менее 6,0 Ig ТЦД50/см3 и активностью в РДП не менее 4,0 log2, в количестве не менее 15,0 мас.%.4. Avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle IRT virus obtained in a 3KG cell culture with an infectious activity of at least 6.0 Ig TCD 50 / cm 3 and an activity in RDP of at least 4.0 log 2 , in an amount of at least 15.0 wt.%.
5. Авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток животного происхождения, взятой из группы, состоящей из культуры клеток MDBK, из культуры клеток Таурус-1, из культуры клеток КСТ и из культуры клеток Vero, в эффективном количестве.5. Avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus obtained in a cell culture of animal origin, taken from the group consisting of MDBK cell culture, Taurus-1 cell culture, KST cell culture and Vero cell culture, in an effective quantity.
6. Авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток MDBK со степенью накопления не менее 108 вирусных частиц/см3 и активностью в реакции гемагглютинации (РГА) не менее 7,0 log2, в количестве не менее 15,0 мас.%.6. Avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus obtained in an MDBK cell culture with an accumulation degree of at least 10 8 virus particles / cm 3 and activity in the hemagglutination reaction (RGA) of at least 7.0 log 2 , not less than 15.0 wt.%.
7. Авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток почек теленка Таурус-1 со степенью накопления не менее 109 вирусных частиц/см3 и активностью в РГА не менее 9,0 log2, в количестве не менее 15,0 мас.%.7. Avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus obtained in Taurus-1 calf kidney cell culture with an accumulation degree of at least 10 9 viral particles / cm 3 and activity in the RGA of at least 9.0 log 2 , not less than 15.0 wt.%.
8. Авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток коронарных сосудов теленка КСТ со степенью накопления не менее 107,5 вирусных частиц/см3 и активностью в РГА не менее 6,0 log2, в количестве не менее 15,0 мас.%.8. Avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus obtained in a culture of CST calf coronary vessels cells with an accumulation degree of at least 10 7.5 viral particles / cm 3 and activity in the RGA of at least 6.0 log 2 , in the amount of not less than 15.0 wt.%.
9. Авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток почек обезьяны Vero со степенью накопления не менее 107,5 вирусных частиц/см3 и активностью в РГА не менее 6,0 log2, в количестве не менее 15,0 мас.%.9. Avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus obtained in Vero monkey kidney cell culture with an accumulation degree of at least 10 7.5 virus particles / cm 3 and activity in the RGA of at least 6.0 log 2 , not less than 15.0 wt.%.
10. Масляный адъювант в количестве не менее 70,0 мас.%10. Oil adjuvant in an amount of not less than 70.0 wt.%
11. Смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ и из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученных в культурах клеток животного происхождения, и масляный адъювант в соотношении, мас.%:11. A mixture of avirulent purified antigenic materials from the strain "ARRIAH" of the IRT virus and from the strain "ARRIAH" of cattle coronavirus obtained in animal cell cultures, and an oil adjuvant in the ratio, wt.%:
Входящие в предлагаемую вакцину штаммы вирусов известны и являются производственными при изготовлении моновакцин (14, 15).The virus strains included in the proposed vaccine are known and are industrial in the manufacture of monovaccines (14, 15).
В результате проведенных исследований авторами установлено, что между антигенами, входящими в состав предлагаемой вакцины, отсутствует конкуренция.As a result of the studies, the authors found that there is no competition between the antigens that make up the proposed vaccine.
Авторами обнаружено также явление синергизма при соединении указанных антигенов в предлагаемой вакцине, что позволило снизить их количественное содержание в препарате при сохранении такой же напряженности и длительности иммунитета у вакцинированных животных, как и при использовании для иммунизации соответствующих монопрепаратов.The authors also discovered the phenomenon of synergism when combining these antigens in the proposed vaccine, which allowed to reduce their quantitative content in the drug while maintaining the same tension and duration of immunity in vaccinated animals, as when using the corresponding monopreparations for immunization.
Дополнительный технический результат от использования предлагаемого изобретения достигается за счет того, что для инактивации вируссодержащих материалов используют аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ), что позволяет значительно снизить трудо- и энергозатраты на изготовление вакцины и повысить качество антигенных материалов.An additional technical result from the use of the present invention is achieved due to the fact that for the inactivation of virus-containing materials using aminoethylethyleneimine (AEEI), which can significantly reduce labor and energy costs for the manufacture of vaccines and improve the quality of antigenic materials.
Дополнительный технический результат от использования предлагаемого изобретения в части повышения антигенной и иммуногенной активности целевого препарата достигается также за счет использования в его составе масляного адъюванта марки Montanide ISA-70 производства фирмы «Seppic» (Франция, стандарт ИСО 9001).An additional technical result from the use of the invention in terms of increasing the antigenic and immunogenic activity of the target drug is also achieved through the use of Montanide ISA-70 oil adjuvant manufactured by Seppic (France, ISO 9001 standard) in its composition.
Вирусный изолят, послуживший источником для получения производственного штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС, выделен из патологического материала телят, павших с явлениями ИРТ во время вспышки заболевания в СПК «Миневское» Нижегородской области в 1998 году. Вакцинный штамм «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС адаптирован к культурам клеток ВНК-21, MDBK и 3КГ.The viral isolate, which served as the source for the production strain “ARRIAH” of the cattle IRT virus, was isolated from the pathological material of calves who died with the symptoms of IRT during the outbreak in the Minevskoye SEC in Nizhny Novgorod Region in 1998. The vaccine strain “ARRIAH” of cattle IRT virus is adapted to the cultures of BHK-21, MDBK and 3KG cells.
Штамм «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС депонирован 12 марта 2001 года во Всероссийскую государственную коллекцию штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, Федерального государственного учреждения «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ») под регистрационным наименованием «ВНИИЗЖ-ДЕП».The strain "ARRIAH" of the IRT virus of cattle was deposited on March 12, 2001 in the All-Russian State Collection of microorganism strains used in veterinary medicine and animal husbandry, Federal State Institution "All-Russian State Center for the Quality and Standardization of Medicines for Animals and Feed" (FGU "VGNKI") under registration the name "ARRIAH-DEPT".
Штамм «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС характеризуется следующими признаками и свойствами (14).The strain "ARRIAH" virus RTI of cattle is characterized by the following features and properties (14).
Морфологические свойстваMorphological properties
Штамм «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС относится к семейству Herpesviridae, подсемейству Alphaherpesviridae, роду Varicellavirus, группе HPV-1, обладает морфологическими признаками, характерными для данного семейства.The strain “ARRIAH” of the cattle IRT virus belongs to the family Herpesviridae, the subfamily Alphaherpesviridae, the genus Varicellavirus, the HPV-1 group, and has morphological characteristics characteristic of this family.
Штамм «ВНИИЗЖ» включает линейную 2-цепочечную ДНК с молекулярной массой 92-102 кД. Вирионы округлой формы, состоят из 4-х структурных компонентов: нуклеоида, капсида диаметром 120-150 нм, окруженного содержащей липиды оболочкой, мембраны (тегумента) и наружной оболочки. Плавучая плотность вирионов в градиенте CsCI составляет 1,27-1,29 г/см3. Нуклеоид тороидальной формы содержит ДНК и окружен икосаэдрическим капсидом диаметром 100-110 нм, содержащим 162 частично полых капсомера. Капсид окружает ядро вириона, состоящее из ДНК, покрытой белком. Мембрана из глобулярного материала окружает капсид. В составе вириона определено до 32 белков с молекулярной массой до 200 кД.The strain "ARRIAH" includes a linear 2-strand DNA with a molecular weight of 92-102 kD. The virions are round in shape, composed of 4 structural components: a nucleoid, a capsid with a diameter of 120-150 nm, surrounded by a lipid-containing membrane, a membrane (tegument) and an outer membrane. The floating density of virions in the CsCI gradient is 1.27-1.29 g / cm 3 . A toroidal nucleoid contains DNA and is surrounded by an icosahedral capsid 100-110 nm in diameter containing 162 partially hollow capsomeres. Capsid surrounds the core of the virion, consisting of DNA coated with protein. A membrane of globular material surrounds the capsid. As part of the virion, up to 32 proteins with a molecular weight of up to 200 kD are determined.
Вирионы имеют сложную четырехуровневую (от центра к периферии) организацию: нуклеоид, капсид, суперкапсидную структуру и оболочку. Наружная оболочка вирионов имеет типичное строение и содержит многочисленные выступы (шипы) длиной около 8 нм. Вирусы формируют характерные внутриядерные включения. При прохождении через внутренний листок ядерной мембраны в эндоплазматический ретикулум вирионы покрываются дополнительной оболочкой, содержащей гликопротеины и липиды.Virions have a complex four-level (from the center to the periphery) organization: nucleoid, capsid, supercapsid structure and membrane. The outer shell of virions has a typical structure and contains numerous protrusions (spikes) with a length of about 8 nm. Viruses form characteristic intranuclear inclusions. When passing through the inner sheet of the nuclear membrane into the endoplasmic reticulum, the virions are covered with an additional membrane containing glycoproteins and lipids.
Антигенные свойстваAntigenic properties
По своим антигенным свойствам штамм «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС относится к группе 1 герпесвирусов КРС.According to its antigenic properties, the strain “ARRIAH” of the cattle IRT virus belongs to group 1 of cattle herpes viruses.
Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус обладает гемагглютинирующей активностью (ГА-активностью), реагируя с антителами переболевших или иммунизированных животных в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА). При вакцинации лабораторных и естественно-восприимчивых животных вирусный антиген индуцирует образование специфических антител, выявляемых в РНГА в разведении 1:16-1:256.The virus is stably neutralized by homologous antiserum. The virus has hemagglutinating activity (GA activity), reacting with antibodies from sick or immunized animals in an indirect hemagglutination reaction (RNGA). When vaccinating laboratory and naturally susceptible animals, the viral antigen induces the formation of specific antibodies detected in RNGA at a dilution of 1: 16-1: 256.
Биотехнологические характеристикиBiotechnological characteristics
Вирус ИРТ КРС штамма «ВНИИЗЖ» репродуцируется в культурах клеток ВНК-21, MDBK и 3КГ, вызывая цитопатическое действие (ЦПД), и в течение 48-96 часов инкубирования накапливается в титрах от 6,5 до 8,0 Ig ТЦД50/см3. Результаты адаптации вируса ИРТ КРС штамма «ВНИИЗЖ» к указанным культурам клеток представлены в таблицах 1, 2 и 3. Штамм «ВНИИЗЖ» является стабильным и сохраняет свои свойства на протяжении 10 пассажей (срок наблюдения).The virus IRT of cattle of the ARRIAH strain is reproduced in VNK-21, MDBK and 3KG cell cultures, causing a cytopathic effect (CPD), and accumulates in titers from 6.5 to 8.0 Ig TCD 50 / cm during 48-96 hours of incubation 3 . The results of adaptation of the RTI virus for cattle of the strain ARRIAH to the indicated cell cultures are presented in tables 1, 2 and 3. The strain ARRIAH is stable and retains its properties for 10 passages (observation period).
Генотаксономическая характеристикаGenotaxonomic characteristic
Выделено и охарактеризовано 9 структурных белков вируса ИРТ КРС штамма «ВНИИЗЖ»: VP 105, VP 90 (гемагглютинин), VP 74, VP 64, VP 54, VP 50, VP 47, VP 40 и VP 31. Гликопротеины g I, g III, g IV участвуют в формировании гуморального и клеточного иммунитета. Наиболее эффективным в этом отношении является g IV. По данным реакции нейтрализации наибольшей иммуногенностью обладают VP 90 и VP 74. Белок, маркированный как VP 8 с мол. м. 96 кД, является одним из главных белков герпесвируса-1 КРС. Он участвует в модуляции экспрессии генов класса А, стимулирует пролиферацию Т-клеток и образование антител у телят как после заражения, так и после иммунизации животных очищенным белком. За индукцию вируснейтрализующих антител к герпесвирусу-1 КРС ответственны 4-х оболочечные гликопротеины, главными из которых являются g 70 и g 97, расположенные в шипиках вириона. В структуре g IV вируса ИРТ идентифицированы 3 нейтрализующих домена. Домен 1 содержит 2 перекрывающих эпитопа, домен 2 - один эпитоп. Домен 1 имеет отношение к проникновению вируса в клетки-мишени.9 structural proteins of the RTI virus of cattle of the cattle strain ARRIAH were isolated and characterized: VP 105, VP 90 (hemagglutinin), VP 74, VP 64, VP 54, VP 50, VP 47, VP 40 and VP 31. Glycoproteins g I, g III , g IV are involved in the formation of humoral and cellular immunity. The most effective in this regard is g IV. According to the neutralization reaction, VP 90 and VP 74 have the highest immunogenicity. Protein labeled as VP 8 with mol. m. 96 kDa, is one of the main proteins of herpes virus-1 cattle. It participates in modulation of the expression of class A genes, stimulates the proliferation of T cells and the formation of antibodies in calves both after infection and after immunization of animals with purified protein. For the induction of virus-neutralizing antibodies to herpesvirus-1 cattle, 4-membered glycoproteins are responsible, the main of which are g 70 and g 97, located in the spines of the virion. In the g IV structure of the IRT virus, 3 neutralizing domains were identified. Domain 1 contains 2 overlapping epitopes, domain 2 contains one epitope. Domain 1 is related to the penetration of the virus into target cells.
Устойчивость к внешним факторамResistance to external factors
Штамм «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС устойчив к воздействию низких температур: при минус 60-70°С вирус выживает 7-9 месяцев, при 56°С вирус инактивируется через 20 минут, при 37°С - через 4-10 суток, при 22°С - через 50 суток, при 4°С активность вируса снижается через 30-40 суток лишь на 1,0 Ig. Раствор формалина 1:500 инактивирует вирус через 24 часа. Ацетон, эфир, хлороформ и этиловый спирт инактивируют его немедленно. В кислой среде вирус быстро теряет свою активность, но длительно (до 9 месяцев) сохраняется при рН 6-9 и в условиях 4°С. Лиофилизация почти не влияет на его активность, однако многократное замораживание и оттаивание снижают вирулентность и иммуногенность вируса.The strain ARRIAH of the cattle IRT virus is resistant to low temperatures: at minus 60-70 ° C the virus survives for 7-9 months, at 56 ° C the virus is inactivated after 20 minutes, at 37 ° C - after 4-10 days, at 22 ° C - after 50 days, at 4 ° C the virus activity decreases after 30-40 days only by 1.0 Ig. A formalin solution of 1: 500 inactivates the virus after 24 hours. Acetone, ether, chloroform and ethyl alcohol inactivate it immediately. In an acidic environment, the virus quickly loses its activity, but persists for a long time (up to 9 months) at pH 6-9 and at 4 ° C. Lyophilization has almost no effect on its activity, however, repeated freezing and thawing reduce the virulence and immunogenicity of the virus.
Дополнительные признаки и свойстваAdditional features and properties
Иммуногенная активность - 100%.Immunogenic activity - 100%.
Патогенность - выражена.Pathogenicity - expressed.
Вирулентность - выражена.Virulence - expressed.
Контагиозность - выражена.Contagiousness - expressed.
Онкогенность - отсутствует.Oncogenicity is absent.
Свободен от контаминации бактериями, микоплазмами и гемагглютинирующими вирусами.Free from contamination by bacteria, mycoplasmas and hemagglutinating viruses.
Для получения антигенного материала из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС в качестве чувствительной биологической системы используют преимущественно монослойные культуры клеток MDBK и ВНК-21, выращенные в 1,5 дм3 матрасах или вращающихся сосудах объемом 3 дм3.To obtain antigenic material from the ARRIAH strain of cattle IRT virus, monolayer cell cultures of MDBK and BHK-21 grown in 1.5 dm 3 mattresses or rotating vessels of 3 dm 3 are used as a sensitive biological system.
При необходимости для получения антигенного материала из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС можно использовать культуру клеток 3КГ.If necessary, to obtain antigenic material from the strain "ARRIAH" virus IRT cattle, you can use a culture of 3KG cells.
Полученный вируссодержащий материал освобождают от клеточного детрита и других балластных примесей низкоскоростным центрифугированием и производят контроль вирусного сырья. Производственная серия вируса ИРТ КРС должна иметь инфекционную активность не менее 6,0 1g ТЦД50/см3 и активностью в РДП не менее 4,0 log2.The resulting virus-containing material is freed from cellular detritus and other ballast impurities by low-speed centrifugation and the viral raw material is monitored. The production batch of cattle IRT virus should have an infectious activity of at least 6.0 1g TCD 50 / cm 3 and activity in the RDP of at least 4.0 log 2 .
Для инактивации вируса ИРТ штамма «ВНИИЗЖ» используют АЭЭИ, который вносят в очищенную вируссодержащую суспензию до концентрации 0,1%. Инактивацию вируса проводят при температуре 36-37°С в течение 24 часов при значении рН 7,6-7,8 с периодическим перемешиванием суспензии (каждые 5-6 часов по 3-5 минут). По окончании инактивации АЭЭИ нейтрализуют внесением в антигенный материал тиосульфата натрия. Для этого в охлажденную до 2-8°С суспензию антигена добавляют 1М раствор тиосульфата натрия из расчета 10% к объему использованного АЭЭИ.For inactivation of the IRT virus strain "ARRIAH" use AEEI, which is introduced into the purified virus-containing suspension to a concentration of 0.1%. Inactivation of the virus is carried out at a temperature of 36-37 ° C for 24 hours at a pH of 7.6-7.8 with periodic stirring of the suspension (every 5-6 hours for 3-5 minutes). At the end of inactivation, AEEI is neutralized by adding sodium thiosulfate to the antigenic material. For this, a 1M sodium thiosulfate solution is added to a suspension of antigen cooled to 2-8 ° C at a rate of 10% by volume of the AEEI used.
Для изготовления эмульсионной формы предлагаемой вакцины используют антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС, полученного в чувствительной биологической системе с инфекционной активностью не менее 6,0 Ig ТЦД50/см3 и активностью в РНГА не менее 4,0 log2, в количестве не менее 15,0 мас.%.For the manufacture of the emulsion form of the proposed vaccine, antigenic material is used from the ARRIAH strain of cattle IRT virus obtained in a sensitive biological system with an infectious activity of at least 6.0 Ig TCD 50 / cm 3 and activity in RNGA of at least 4.0 log 2 , in the amount of not less than 15.0 wt.%.
Вирусный изолят, послуживший источником для получения производственного штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, выделен из фекалий новорожденного теленка с нарушением функции желудочно-кишечного тракта. Производственный штамм «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС адаптирован к культурам клеток MDBK, Таурус-1, КСТ и Vero.The viral isolate, which served as the source for the production strain “ARRIAH” of cattle coronavirus, was isolated from the feces of a newborn calf with impaired gastrointestinal function. The production strain “ARRIAH” of cattle coronavirus is adapted to cell cultures of MDBK, Taurus-1, KST and Vero.
Штамм «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС депонирован 12 марта 2001 года во Всероссийскую государственную коллекцию штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, Федерального государственного учреждения «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ») под регистрационным наименованием «ВНИИЗЖ-ДЕП».The strain “ARRIAH” of cattle coronavirus was deposited on March 12, 2001 into the All-Russian State Collection of microorganism strains used in veterinary medicine and animal husbandry, Federal State Institution “All-Russian State Center for the Quality and Standardization of Medicines for Animals and Feed” (FGU “VGNKI”) under the registration name "ARRIAH-DEPT".
Штамм «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС характеризуется следующими признаками и свойствами (15).The strain “ARRIAH” of cattle coronavirus is characterized by the following features and properties (15).
Морфологические признакиMorphological features
Штамм «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС относится к семейству Coronaviridae, роду Coronavirus и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя коронавирусной инфекции КРС: сферический или плеоморфный вирион диаметром 80-100 нм состоит из нуклеокапсида спиральной симметрии и липопротеидной оболочки, на поверхности которой имеются булавовидные выступы длиной 18-24 нм, образующие подобие солнечной короны. Плавучая плотность вирионов в градиенте сахарозе составляет 1,15-1,18 г/см3.The strain “ARRIAH” of cattle coronavirus belongs to the family Coronaviridae, the genus Coronavirus, and has morphological characteristics characteristic of the causative agent of coronavirus infection of cattle: a spherical or pleomorphic virion with a diameter of 80-100 nm consists of a nucleocapsid of helical symmetry and a lipoprotein sheath, the surface of which has buobular protrusions with a length of 18-24 nm, forming the likeness of the solar corona. The floating density of the virions in the sucrose gradient is 1.15-1.18 g / cm 3 .
В составе вирионов обнаружены три структурных белка: пепломерный гликопротеин Е2 (180-200 кД), нуклеокапсидный фосфопротеин N (50-60 кД) и матриксный гликопротеин Е1 (23-30 кД).Three structural proteins were found in the virions: asperomeric glycoprotein E2 (180-200 kD), nucleocapsid phosphoprotein N (50-60 kD) and matrix glycoprotein E1 (23-30 kD).
Антигенные свойстваAntigenic properties
Антиген коронавируса КРС штамма «ВНИИЗЖ» индуцирует в организме морских свинок и кроликов образование вирусспецифических антител, выявляемых в реакции торможения гемагглютинации (РТГА). В сыворотках крови вакцинированных кроликов уровень антител колеблется от 5,4±0,25 до 7,25±0,47 log2 (в среднем 6,32±0,39 1092), а в сыворотках крови иммунизированных морских свинок - от 5,4±0,38 до 8,2±0,8 log2 (в среднем 6,1±0,49 log2).The antigen of cattle coronavirus of the strain "ARRIAH" induces the formation of virus-specific antibodies in the body of guinea pigs and rabbits, which are detected in the inhibition of hemagglutination (RTGA). In the blood serum of vaccinated rabbits, the antibody level ranges from 5.4 ± 0.25 to 7.25 ± 0.47 log 2 (average 6.32 ± 0.39 1092), and in the blood serum of immunized guinea pigs - from 5, 4 ± 0.38 to 8.2 ± 0.8 log 2 (on average 6.1 ± 0.49 log 2 ).
В сыворотках крови проб, отобранных за 10-15 дней до отела, дважды вакцинированных коров выявляются антитела в РТГА в титрах от 7,9±0,35 до 8,9±0,47 log2. Своевременное скармливание такого молозива обеспечивает высокий уровень колостральных антител (до 8,0 log2) в организме новорожденных телят.Antibodies in rtga in titers from 7.9 ± 0.35 to 8.9 ± 0.47 log 2 are detected in blood serum of samples taken 10-15 days before calving, twice vaccinated cows. Timely feeding of such colostrum provides a high level of colostral antibodies (up to 8.0 log 2 ) in the body of newborn calves.
Биотехнологические характеристикиBiotechnological characteristics
Коронавирус КРС штамма «ВНИИЗЖ» репродуцируется в культурах клеток почек теленка (MDBK, Таурус-1), коронарных сосудов теленка (КСТ) и в гетерологичной культуре клеток почек обезьяны (Vero). При 37°°С в течение 3-4 суток инкубирования вирус накапливается в количестве до 108 частиц/см3 (данные электронно-микроскопического исследования). Результаты исследований по адаптации коронавируса КРС штамма «ВНИИЗЖ» к культурам клеток MDBK, Таурус-1, Vero и КСТ представлены в таблице 4.The cattle coronavirus of the ARRIAH strain is reproduced in calf kidney cell cultures (MDBK, Taurus-1), calf coronary vessels (CCT) and in a heterologous monkey kidney cell culture (Vero). At 37 ° C, within 3-4 days of incubation, the virus accumulates in an amount of up to 10 8 particles / cm 3 (electron microscopic data). The results of studies on the adaptation of cattle coronavirus strain "ARRIAH" to cell cultures MDBK, Taurus-1, Vero and KST are presented in table 4.
Штамм «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС обладает способностью в культуре клеток MDBK репродуцироваться с такой же степенью накопления при 34°С. Срок репродукции при этой температуре увеличивается почти на сутки, однако позволяет получать двойной урожай вируса путем смены поддерживающей среды. «Слив» обладает высокой инфекционной, антигенной и иммуногенной активностью.The strain "ARRIAH" of cattle coronavirus has the ability to reproduce in the MDBK cell culture with the same degree of accumulation at 34 ° C. The reproduction period at this temperature increases by almost a day, but allows you to get a double crop of the virus by changing the supporting environment. "Drain" has a high infectious, antigenic and immunogenic activity.
Устойчивость к внешним факторамResistance to external factors
Штамм «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС проявляет максимальную устойчивость в диапазоне рН 6,0-7,2. Кислая (рН 3,0) и щелочная (рН 11,0) среды оказывает на вирус инактивирующее действие. Возбудитель устойчив к воздействию трипсина. Вирус разрушается жирорастворителями: хлороформом, метиленхлоридом и трипсином Х-100. Инактивированный антиген коронавируса КРС штамма «ВНИИЗЖ» устойчив в процессе хранения при 4°С как в нативном состоянии, так и в составе инактивированных вакцин.The strain "ARRIAH" coronavirus cattle shows maximum stability in the pH range of 6.0-7.2. Acidic (pH 3.0) and alkaline (pH 11.0) media have an inactivating effect on the virus. The causative agent is resistant to trypsin. The virus is destroyed by fat solvents: chloroform, methylene chloride and trypsin X-100. The inactivated cattle coronavirus antigen of the ARRIAH strain is stable during storage at 4 ° C both in the native state and as part of inactivated vaccines.
Дополнительные признаки и свойстваAdditional features and properties
Антигенная активность - обладает антигенностью в составе инактивированной вакцины и препарата для гипериммунизации доноров диагностических и лечебных сывороток.Antigenic activity - has antigenicity in the composition of an inactivated vaccine and drug for hyperimmunization of donors of diagnostic and therapeutic sera.
Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.Reactogenicity - does not possess reactogenic properties.
Стабильность - сохраняет исходные биологические (антигенные) свойства при пассировании в культуре клеток MDBK в течение 30 пассажей (срок наблюдения).Stability - retains the original biological (antigenic) properties when passaged in MDBK cell culture for 30 passages (observation period).
Патогенность - выражена.Pathogenicity - expressed.
Вирулентность - выражена.Virulence - expressed.
Контагиозность - выражена.Contagiousness - expressed.
Онкогенность - отсутствует.Oncogenicity is absent.
Штамм «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС свободен от контаминации бактериями, микоплазмами и другими гемагглютинирующими вирусами.The strain "ARRIAH" cattle coronavirus is free from contamination by bacteria, mycoplasmas and other hemagglutinating viruses.
Для получения антигенного материала из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС в качестве чувствительной биологической системы используют преимущественно культуру клеток MDBK.To obtain antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus, a MDBK cell culture is mainly used as a sensitive biological system.
При необходимости для получения антигенного материала из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС можно использовать культуру клеток Таурус-1, КСТ и Vero.If necessary, Taurus-1, KST and Vero cell cultures can be used to obtain antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus.
Полученный вируссодержащий материал очищают от балластных примесей центрифугированием или любым другим известным методом.The resulting virus-containing material is purified from ballast impurities by centrifugation or any other known method.
Для инактивации вируса используют АЭЭИ, который вносят в очищенную вируссодержащую суспензию до концентрации 0,1%. Инактивацию вируса ведут при 37°С в течение 24 часов. По окончании инактивации АЭЭИ нейтрализуют внесением в суспензию антигена 1М раствора тиосульфата натрия из расчета 10% к объему использованного АЭЭИ,For inactivation of the virus, AEEI is used, which is introduced into the purified virus-containing suspension to a concentration of 0.1%. Inactivation of the virus is carried out at 37 ° C for 24 hours. At the end of inactivation, AEEI is neutralized by introducing into the antigen suspension a 1M sodium thiosulfate solution at the rate of 10% of the volume of used AEEI,
Для изготовления предлагаемой вакцины используют в качестве активного вещества авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного преимущественно в культуре клеток MDBK со степенью накопления не менее 108 вирусных частиц/см3 и активностью в РГА не менее 7,0 log2, в количестве не менее 15,0 мас.%.For the manufacture of the proposed vaccine, avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus, obtained mainly in the MDBK cell culture with an accumulation degree of at least 10 8 viral particles / cm 3 and activity in the RGA of at least 7.0 log 2, is used as an active substance. , in an amount of not less than 15.0 wt.%.
При необходимости предлагаемая ассоциированная вакцина может содержать в качестве активного вещества авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток Таурус-1 со степенью накопления не менее 109 вирусных частиц/см3 и активностью в РГА не менее 9,0 log2, в количестве не менее 15,0 мас.%.If necessary, the proposed associated vaccine may contain as an active substance an avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus obtained in Taurus-1 cell culture with a degree of accumulation of at least 10 9 viral particles / cm 3 and activity in the RGA of at least 9, 0 log 2 , in an amount of not less than 15.0 wt.%.
При необходимости предлагаемая ассоциированная вакцина может содержать в качестве активного вещества авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток КСТ со степенью накопления не менее 107,5 вирусных частиц/см3 и активностью в РГА не менее 6,0 log2, в количестве не менее 15,0 мас.%.If necessary, the proposed associated vaccine may contain as an active substance an avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus obtained in a culture of KST cells with a degree of accumulation of at least 10 7.5 viral particles / cm 3 and activity in the RGA of at least 6, 0 log 2 , in an amount of not less than 15.0 wt.%.
При необходимости предлагаемая ассоциированная вакцина может содержать в качестве активного вещества авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток Vero со степенью накопления не менее 107,5 вирусных частиц/см3 и активностью в РГА не менее 6,0 log2, в количестве не менее 15,0 мас.%.If necessary, the proposed associated vaccine may contain as an active substance an avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus obtained in Vero cell culture with an accumulation degree of at least 10 7.5 viral particles / cm 3 and activity in the RGA of at least 6, 0 log 2 , in an amount of not less than 15.0 wt.%.
Полученный таким образом антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС используют для изготовления эмульсионной формы предлагаемой вакцины.Thus obtained antigenic material from the strain "ARRIAH" cattle coronavirus is used for the manufacture of the emulsion form of the proposed vaccine.
Для получения вакцины антигенные материалы смешивают в соотношении 1:1 и смесь тщательно эмульгируют с масляным адъювантом в гомогенизаторе в соотношении, мас.%, 30,0:70,0 соответственно.To obtain a vaccine, antigenic materials are mixed in a 1: 1 ratio and the mixture is thoroughly emulsified with an oil adjuvant in a homogenizer in a ratio, wt.%, 30.0: 70.0, respectively.
Из масляных адъювантов целесообразно использовать масляный адъювант марки Montanide ISA-70 производства фирмы «Seppic» (Франция, стандарт ИСО 9001).From oil adjuvants it is advisable to use Montanide ISA-70 brand oil adjuvant manufactured by Seppic (France, ISO 9001 standard).
Содержание антигенов в предлагаемой вакцине в указанном выше соотношении является их эффективным количеством в препарате, обеспечивающим достижение технического результата.The content of antigens in the proposed vaccine in the above ratio is their effective amount in the drug, ensuring the achievement of a technical result.
Использование предлагаемого изобретения расширяет арсенал высокоиммуногенных, безвредных и ареактогенных ассоциированных вакцин против ИРТ и коронавирусной инфекции КРС эмульсионных инактивированных, способных защитить поголовье КРС различных половозрастных групп от возбудителей ИРТ и коронавирусной инфекции КРС, циркулирующих на территории России.The use of the present invention expands the arsenal of highly immunogenic, harmless and areactogenic associated vaccines against IRT and coronavirus infection of cattle emulsion inactivated, capable of protecting livestock of various sex and age groups from pathogens of IRT and coronavirus infection of cattle circulating in Russia.
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его реализации и использования.The essence of the invention is illustrated by examples of its implementation and use.
Пример 1Example 1
Для получения ассоциированной вакцины против ИРТ и коронавирусной инфекции КРС эмульсионной инактивированной используют производственные штаммы вирусов: штамм «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ и штамм «ВНИИЗЖ» коронавирусной инфекции КРС.To obtain the associated vaccine against IRT and coronavirus infection of cattle emulsion inactivated, production strains of viruses are used: strain ARRIAH virus IRT and strain ARRIAH coronavirus infection cattle.
Посевным вирусом производственного штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС заражают монослойную культуру клеток животного происхождения, взятой из группы, состоящей из культур клеток 3КГ, MDBK и ВНК-21, выращенных в 1,5 дм3 матрасах или во вращающихся сосудах объемом 3,0 дм3. Доза заражения должна составлять 0,1-0,01 ИЕ/клетку. Инфицированную культуру инкубируют при температуре 37°С в течение 48-96 часов до появления ЦПД вируса более чем в 50% клеток монослоя. Полученную вируссодержащую суспензию охлаждают до 4°С и, соблюдая условия стерильности, освобождают от клеточного детрита низкоскоростным центрифугированием. Очищенная таким образом суспензия должна иметь вид прозрачной жидкости розового или вишневого цвета. Очищенную суспензию сливают в емкость, из которой отбирают пробу для производственного контроля вирусного сырья. Производственная серия вируса ИРТ КРС должна иметь инфекционную активность не менее 6,0 Ig ТЦД50/см3 и активность в РДП не менее 4,0 log2.The seeded virus of the production strain “ARRIAH” of the IRT cattle virus infects a monolayer culture of animal cells taken from the group consisting of 3KG, MDBK and BHK-21 cell cultures grown in 1.5 dm 3 mattresses or in 3.0 dm rotating vessels 3 . The dose of infection should be 0.1-0.01 IE / cell. The infected culture is incubated at a temperature of 37 ° C for 48-96 hours until the appearance of the virus CPP in more than 50% of the monolayer cells. The resulting virus-containing suspension is cooled to 4 ° C and, subject to sterility conditions, freed from cell detritus by low-speed centrifugation. The suspension thus purified should be in the form of a clear pink or cherry liquid. The purified suspension is poured into a container from which a sample is taken for the production control of viral raw materials. The production series of cattle IRT virus should have an infectious activity of at least 6.0 Ig TCD 50 / cm 3 and activity in the RDP of at least 4.0 log 2 .
Инактивацию вируса ИРТ осуществляют с помощью 6%-ного водного раствора АЭЭИ, который вносят в подогретую до 26-28°С вируссодержащую суспензию до конечной концентрации 0,1-0,2%. Значение рН суспензии устанавливают в пределах 7,6-7,8 путем добавления в нее 5М раствора уксусной кислоты или аммиака. Инактивацию вируса проводят при температуре 36-37°С в течение 24 часов с периодическим перемешиванием суспензии (по 3-5 минут через каждые 5-6 часов). По окончании инактивации антигенный материал охлаждают до 2-8°С и отбирают пробы для проверки на остаточную инфекционность в культуре клеток MDBK. Для нейтрализации АЭЭИ в суспензию антигенного материала вносят 1М раствор тиосульфата натрия из расчета 10% к объему использованного АЭЭИ. Полученный антигенный материал используют в количестве не менее 15,0 мас.% для изготовления эмульсионной формы предлагаемой вакцины.The inactivation of the IRT virus is carried out using a 6% aqueous AEI solution, which is added to a virus-containing suspension heated to 26-28 ° C to a final concentration of 0.1-0.2%. The pH of the suspension is set between 7.6-7.8 by adding a 5M solution of acetic acid or ammonia to it. Inactivation of the virus is carried out at a temperature of 36-37 ° C for 24 hours with periodic stirring of the suspension (3-5 minutes every 5-6 hours). At the end of inactivation, the antigenic material is cooled to 2-8 ° C and samples are taken to check for residual infectivity in the MDBK cell culture. To neutralize AEEI, a 1M solution of sodium thiosulfate is added to the suspension of antigenic material at the rate of 10% of the volume of used AEEI. The resulting antigenic material is used in an amount of not less than 15.0 wt.% For the manufacture of the emulsion form of the proposed vaccine.
Посевной вирус производственного штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС хранят перед использованием при температуре -20°С. Посевной вирус должен быть свободен от бактериальной и грибковой микрофлоры, специфичным, вызывать агглютинацию эритроцитов мышей, иметь активность в РГА не ниже 1:8 и концентрацию вирусных частиц (по результатам электронной микроскопии) в пределах от 105,0 до 106,5 вирусных частиц/см3 (13). Посевной коронавирус КРС дважды замораживают-оттаивают и используют для заражения монослойной культуры клеток MDBK. Перед заражением культуру клеток MDBK с качественным монослоем дважды отмывают от ростовой сыворотки раствором Хенкса, содержащим трипсин (15-20 мкг/см3). Множественность заражения составляет 0,1-1,0 вирусных частиц/клетку. После заражения культуральные сосуды инкубируют при 37°С в течение 1,5-2 часов, периодически покачивая. Затем проводят слив вируссодержащего материала и в него вносят поддерживающую среду, содержащую трипсинThe seed virus of the production strain "ARRIAH" of cattle coronavirus is stored before use at a temperature of -20 ° C. The seed virus should be free of bacterial and fungal microflora, specific, cause agglutination of red blood cells of mice, have an activity in the RGA of not less than 1: 8 and the concentration of viral particles (according to electron microscopy) in the range from 10 5.0 to 10 6.5 viral particles / cm 3 (13). Inoculated cattle coronavirus is twice frozen, thawed and used to infect a monolayer culture of MDBK cells. Before infection, the MDBK cell culture with a high-quality monolayer is washed twice from the growth serum with a Hanks solution containing trypsin (15-20 μg / cm 3 ). The multiplicity of infection is 0.1-1.0 viral particles / cell. After infection, the culture vessels are incubated at 37 ° C for 1.5-2 hours, periodically shaking. Then the virus-containing material is drained and a trypsin-containing support medium is introduced into it.
(15-20 мкг/см3). Сосуды инкубируют при 34°С или 37°С до появления ЦПД вируса более чем в 90% клеток. После этого культуру дважды замораживают-оттаивают. Полученный вирусный материал очищают от балластных примесей низкоскоростным центрифугированием при 2500-3000 об/мин в течение 30 минут. Инактивацию вируса проводят с помощью АЭЭИ. Для этого в вируссодержащую суспензию вносят 6%-ный рабочий раствор АЭЭИ, подкисленный ледяной уксусной кислотой до значения рН 7,8-8,2. Конечная концентрация АЭЭИ в вируссодержащей суспензии должна быть не менее 0,1%. Инактивацию вируса проводят при температуре 36-37°С в течение 24 часов с периодическим перемешиванием суспензии (по 3-5 минут через каждые 5-6 часов). Остаток АЭЭИ нейтрализуют добавлением 1М раствора тиосульфата натрия из расчета 10% к объему использованного АЭЭИ. Полученный антигенный материал исследуют на стерильность, авирулентность, содержание вирусных частиц в суспензии с помощью электронного микроскопа и активность в РГА. Для изготовления предлагаемой вакцины используют авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного преимущественно в культуре клеток MDBK со степенью накопления не менее 108 вирусных частиц/см3 и активностью в РГА не менее 7,0 1оg2, в количестве не менее 15,0 мас.%,(15-20 μg / cm 3 ). The vessels are incubated at 34 ° C or 37 ° C until the appearance of the virus CPP in more than 90% of the cells. After this, the culture is twice frozen-thawed. The resulting viral material is purified from ballast impurities by low-speed centrifugation at 2500-3000 rpm for 30 minutes. Inactivation of the virus is carried out using AEEI. For this, a 6% AEI working solution, acidified with glacial acetic acid to a pH of 7.8-8.2, is added to the virus-containing suspension. The final concentration of AEEI in the virus-containing suspension should be at least 0.1%. Inactivation of the virus is carried out at a temperature of 36-37 ° C for 24 hours with periodic stirring of the suspension (3-5 minutes every 5-6 hours). The remainder of the AEEI is neutralized by adding a 1M sodium thiosulfate solution at the rate of 10% of the volume of the used AEEI. The resulting antigenic material is examined for sterility, avirulence, the content of viral particles in suspension using an electron microscope and activity in the RGA. For the manufacture of the proposed vaccine, avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus, obtained mainly in the MDBK cell culture with a degree of accumulation of at least 10 8 viral particles / cm 3 and activity in the RGA of at least 7.0 1g 2 , in the amount of not less than 15.0 wt.%,
При необходимости для изготовления предлагаемой вакцины можно использовать авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток Таурус-1 со степенью накопления не менее 109 вирусных частиц/см 3 и активностью в РГА не менее 9,0 log2, в количестве не менее 15,0 мас.%.If necessary, the avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus obtained in Taurus-1 cell culture with a degree of accumulation of at least 10 9 viral particles / cm 3 and activity in the RGA of at least 9.0 log 2 can be used for the manufacture of the proposed vaccine. , in an amount of not less than 15.0 wt.%.
При необходимости для изготовления предлагаемой вакцины можно использовать авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток КСТ со степенью накопления не менее 107,5 вирусных частиц/см3 и активностью в РГА не менее 6,0 log2, в количестве не менее 15,0 мас.%.If necessary, for the manufacture of the proposed vaccine, you can use avirulent purified antigenic material from the strain "ARRIAH" of cattle coronavirus, obtained in the culture of KST cells with a degree of accumulation of at least 10 7.5 viral particles / cm 3 and activity in the RGA of at least 6.0 log 2 , in an amount of not less than 15.0 wt.%.
При необходимости для изготовления предлагаемой вакцины можно использовать авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток Vero со степенью накопления не менее 107,5 вирусных частиц/см 3 и активностью в РГА не менее 6,0 log2, в количестве не менее 15,0 мас.%.If necessary, the avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus obtained in a Vero cell culture with an accumulation degree of at least 10 7.5 viral particles / cm 3 and activity in the RGA of at least 6.0 log 2 can be used to make the proposed vaccine. , in an amount of not less than 15.0 wt.%.
Полученные таким образом антигенные материалы используют для изготовления предлагаемой вакцины. Для этого антигенные материалы смешивают в соотношении 1:1 и смесь тщательно эиульгируют с масляным адъювантом в гомогенизаторе в соотношении, мас.%, 30,0:70,0 соответственно. Из масляных адъювантов целесообразно использовать масляный адъювант марки Montanide ISA-70 производства фирмы «Seppic» (Франция, стандарт ИСО 9001).Thus obtained antigenic materials are used for the manufacture of the proposed vaccine. For this, antigenic materials are mixed in a ratio of 1: 1 and the mixture is thoroughly eiulgated with an oil adjuvant in a homogenizer in a ratio, wt.%, 30.0: 70.0, respectively. From oil adjuvants it is advisable to use Montanide ISA-70 brand oil adjuvant manufactured by Seppic (France, ISO 9001 standard).
Предлагаемая вакцина имеет оптимальный компонентный состав, мас.%:The proposed vaccine has an optimal component composition, wt.%:
Содержание антигенных материалов в предлагаемой вакцине в указанных выше пределах является их эффективным количеством в препарате, обеспечивающим достижение технического результата от использования изобретения.The content of antigenic materials in the proposed vaccine within the above ranges is their effective amount in the preparation, ensuring the achievement of a technical result from the use of the invention.
Полученная вакцина представляет собой однородную эмульсию белого или бело-розового цвета слегка вязкой консистенции. При хранении вакцины допускается незначительное отслоение минерального масла на верхней поверхности эмульсии и водной фазы на дне флакона толщиной не более 1 см.The resulting vaccine is a homogeneous emulsion of white or white-pink color with a slightly viscous consistency. When storing the vaccine, slight exfoliation of mineral oil is allowed on the upper surface of the emulsion and the aqueous phase at the bottom of the vial with a thickness of not more than 1 cm.
Вакцину контролируют на авирулентность и стерильность, а затем фасуют в стерильные флаконы.The vaccine is monitored for avirulence and sterility, and then packaged in sterile vials.
Стерильность вакцины определяют в соответствии с ГОСТом 28085-89. Авирулентность препарата определяют методом трехкратных последовательных пассажей инактивированного антигена в культуре клеток MDBK по отсутствию ЦПД.Sterility of the vaccine is determined in accordance with GOST 28085-89. The virulence of the drug is determined by the method of three consecutive passages of the inactivated antigen in the MDBK cell culture by the absence of CPD.
Для проверки безвредности вакцину вводят внутримышечно в область бедра 10 белым мышам в дозе 0,1 см3. Вакцина считается безвредной, если белые мыши в течение 10 суток остаются клинически здоровыми: без каких-либо патологических изменений. На месте введения препарата допускается местная тканевая реакция.To test the safety, the vaccine is administered intramuscularly in the thigh area to 10 white mice at a dose of 0.1 cm 3 . The vaccine is considered harmless if white mice remain clinically healthy for 10 days: without any pathological changes. At the injection site, a local tissue reaction is allowed.
Вязкость вакцины определяют на вискозиметре ВПЖ-2 и выражают мм2/сек. Предлагаемая вакцина, содержащая в своем составе масляный адъювант марки Montanide ISA-70, образующего тип эмульсии «вода-масло», имеет вязкость 38,3±0,5 мм2/сек.The viscosity of the vaccine is determined on a viscometer VPZH-2 and expressed mm 2 / sec. The proposed vaccine containing in its composition an oil adjuvant of the brand Montanide ISA-70, forming a type of emulsion "water-oil", has a viscosity of 38.3 ± 0.5 mm 2 / sec.
Контроль вакцины на стабильность эмульсии осуществляют посредством центрифугирования при 3000 об/мин в течение 30 минут, а также в процессе хранения при 2-8°С и 37°С с последующей визуальной оценкой однородности эмульсии. Вакцина с масляным адъювантом марки Montanide ISA-70 обладает высокой стабильностью эмульсии при хранении в различных температурных условиях и при центрифугировании.The vaccine is monitored for emulsion stability by centrifugation at 3000 rpm for 30 minutes, as well as during storage at 2-8 ° C and 37 ° C, followed by a visual assessment of the uniformity of the emulsion. The vaccine with the oil adjuvant of the brand Montanide ISA-70 has a high stability of the emulsion during storage under various temperature conditions and during centrifugation.
Для проверки реактогенности препарата предлагаемую вакцину вводят внутримышечно в область бедра 3 кроликам и 5 морским свинкам в дозе 2,0 см3 и 1,0 см3 соответственно. За клиническим состоянием животных ведут наблюдение в течение 14 суток.To test the reactogenicity of the drug, the proposed vaccine is administered intramuscularly in the thigh area to 3 rabbits and 5 guinea pigs at a dose of 2.0 cm 3 and 1.0 cm 3, respectively. The clinical condition of the animals is monitored for 14 days.
После иммунизации у кроликов и морских свинок отмечено незначительное местное повышение температуры тела и образование припухлости диаметром около 1 см в месте введения. Эти признаки полностью исчезают к концу срока наблюдения.After immunization in rabbits and guinea pigs, a slight local increase in body temperature and the formation of swelling with a diameter of about 1 cm at the injection site were noted. These signs completely disappear by the end of the observation period.
Таким образом, предлагаемая вакцина относится к типу слабореактогенных препаратов.Thus, the proposed vaccine belongs to the type of weakly reactogenic drugs.
Антигенную активность проверяют на кроликах. Для этого берут 6 кроликов массой 2,0-2,5 кг. Вакцину вводят 4 кроликам подкожно в область спины по 1,0 см3. Через 14 суток после двукратного введения вакцины с интервалом 20-25 суток у кроликов берут из ушной вены по 2,0-3,0 см3 крови. Кровь выдерживают при температуре 37°С, отделяют сыворотку и исследуют на наличие антител к вирусу ИРТ КРС в реакции нейтрализации (РН) или в РНГА и к коронавирусу КРС в реакции торможения гемагглютинации (РТГА). Невакцинарованных животных (2 головы) обескровливают одновременно с вакцинированными, отделяют сыворотку и ее используют для контроля.Antigenic activity is tested in rabbits. For this, 6 rabbits weighing 2.0-2.5 kg are taken. The vaccine is administered to 4 rabbits subcutaneously in the back region of 1.0 cm 3 . 14 days after the double administration of the vaccine with an interval of 20-25 days in rabbits, 2.0-3.0 cm 3 of blood is taken from the ear vein. The blood is kept at a temperature of 37 ° C, the serum is separated and examined for the presence of antibodies to the RTI virus of cattle in the neutralization reaction (PH) or in RNGA and to coronavirus cattle in the inhibition of hemagglutination (RTHA). Unvaccinated animals (2 heads) are bled simultaneously with vaccinated animals, serum is separated and used for control.
Серию вакцины считают прошедшей контроль на антигенность, если титр вирусспецифических антител составляет к вирусу ИРТ КРС в РН не ниже 3,0 log2 или в РНГА не ниже 4,0 log2, а к коронавирусу КРС в РТГА не ниже 5,0 log2,The vaccine series is considered to have passed the antigenicity control if the titer of virus-specific antibodies is not less than 3.0 log 2 for the RTI virus of the cattle in the RN or 4.0 log 2 for the cattle coronavirus and not less than 5.0 log 2 for the coronavirus of the cattle ,
Ассоциированная вакцина против ИРТ и коронавирусной инфекции КРС эмульсионная инактивированная предназначена для иммунизации коров и телят в хозяйствах, неблагополучных по данным заболеваниям. Вакцину вводят животным внутримышечно в область средней трети шеи в объеме 2,0 см3 двукратно с интервалом 21-30 дней с последующей ревакцинацией через 6 месяцев.The associated vaccine against RTI and coronavirus infection of cattle inactivated emulsion is intended for immunization of cows and calves in farms that are disadvantaged for these diseases. The vaccine is administered to animals intramuscularly in the middle third of the neck in a volume of 2.0 cm 3 twice with an interval of 21-30 days, followed by revaccination after 6 months.
Для поддержания благополучия по данным заболеваниям следует придерживаться следующей схемы вакцинации:To maintain well-being for these diseases, the following vaccination schedule should be followed:
1. Телят вакцинируют, начиная с 1-3-дневного возраста, двукратно с интервалом 21-30 дней. Ревакцинация через 6 месяцев.1. Calves are vaccinated, starting from 1-3 days of age, twice with an interval of 21-30 days. Revaccination after 6 months.
2. Нетелей и коров вакцинируют двукратно с интервалом 21-30 дней. Ревакцинация через 6 месяцев.2. Heifers and cows are vaccinated twice with an interval of 21-30 days. Revaccination after 6 months.
3. Телок случного периода вакцинируют двукратно с интервалом 21-30 дней за 1,0-1,5 месяца до первой случки. Ревакцинация через 6 месяцев.3. Heifers of a random period are vaccinated twice with an interval of 21-30 days for 1.0-1.5 months before the first mating. Revaccination after 6 months.
Иммунитет привитых животных формируется через 10-15 суток после повторного введения вакцины и сохраняется не менее 6 месяцев.Immunity of vaccinated animals is formed 10-15 days after the repeated administration of the vaccine and lasts at least 6 months.
Пример 2Example 2
Проведены испытания антигенной активности ассоциированной вакцины против ИРТ и коронавирусной инфекции КРС эмульсионной инактивированной, изготовленной так, как описано в примере 1, и содержащей, мас.%:Tests of the antigenic activity of the associated vaccine against RTI and coronavirus infection of cattle inactivated emulsion, made as described in example 1, and containing, wt.%:
В сыворотках крови вакцинированных кроликов (n=10) антитела к коронавирусу КРС выявлялись на уровне 6,0±0,44 log2, к вирусу ИРТ КРС в РНГА на уровне 6,2±0,12 log2.In the blood serum of vaccinated rabbits (n = 10), antibodies to cattle coronavirus were detected at a level of 6.0 ± 0.44 log 2 , and to an IRT virus of cattle in RNGA at a level of 6.2 ± 0.12 log 2 .
Предлагаемой вакциной иммунизировали 15-25-дневных телят в хозяйствах Нижегородской области. В таблице 5 приведены результаты исследования сывороток крови вакцинированного молодняка. Данный препарат индуцировал образование вирусспецифических антител к возбудителю ИРТ и коронавирусу КРС в титрах 6,43±0,35 log2 и 6,68±0,44 log2 соответственно, что свидетельствует о повышении уровня антител на 1,28-1,95 log2 по сравнению с исходным. Количество иммунных животных увеличилось на 17,5-40,0%.The proposed vaccine immunized 15-25-day-old calves in the farms of the Nizhny Novgorod region. Table 5 shows the results of a study of blood serum of vaccinated young animals. This drug induced the formation of virus-specific antibodies to the causative agent of IRT and cattle coronavirus in titers of 6.43 ± 0.35 log 2 and 6.68 ± 0.44 log 2, respectively, which indicates an increase in antibody levels by 1.28-1.95 log 2 compared to the original. The number of immune animals increased by 17.5-40.0%.
Пример 3Example 3
Проведены испытания антигенной активности ассоциированной вакцины против ИРТ и коронавирусной инфекции КРС эмульсионной инактивированной, изготовленной так, как описано в примере 1, и содержащей, мас %:Tests of the antigenic activity of the associated vaccine against RTI and coronavirus infection of cattle inactivated emulsion, made as described in example 1, and containing, wt.%:
Антигенную активность испытуемого препарата и его реактогенность проверяли в хозяйствах Нижегородской области (n=5) и Владимирской области на коровах 4-8 - летнего возраста (n=33). Результаты исследований приведены в таблице 6, которые свидетельствуют о высокой антигенной активности предлагаемой вакцины. Средний уровень антител к коронавирусу КРС соответствовал 6,3±0,55 log2, к вирусу ИРТ КРС - 5,8±0,95 log2, что является достаточным для практического применения предлагаемой вакцины. При смешивании конкуренции антигенов не происходит.The antigenic activity of the test drug and its reactogenicity were tested in the farms of the Nizhny Novgorod region (n = 5) and Vladimir region on cows 4-8 years of age (n = 33). The research results are shown in table 6, which indicate a high antigenic activity of the proposed vaccine. The average level of antibodies to cattle coronavirus corresponded to 6.3 ± 0.55 log 2 , to cattle IRT virus - 5.8 ± 0.95 log 2 , which is sufficient for the practical use of the proposed vaccine. When mixing competition of antigens does not occur.
Наблюдения за вакцинированными животными, проведенные специалистами ветеринарной службы области, подтвердили данные лабораторных исследований по эффективности предложенного препарата.Observations of vaccinated animals by specialists of the veterinary service of the region confirmed the data of laboratory studies on the effectiveness of the proposed drug.
Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента РФ на изобретение «Ассоциированная вакцина против ИРТ и коронавирусной инфекции КРС эмульсионная инактивированная»Sources of information taken into account when drawing up the description of the invention to the application for the grant of a patent of the Russian Federation for the invention "Associated vaccine against RTI and coronavirus infection of cattle emulsion inactivated"
1. Инфекционные болезни животных: Справочник. Под ред. Д.Ф.Осидзе. - М.: Агропромиздат, 1987, 288 с.1. Infectious diseases of animals: a Handbook. Ed. D.F. Ozidze. - M .: Agropromizdat, 1987, 288 p.
2. Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я., Соловьев Б.В., Фомина Н.В. Вирусные болезни животных. - М., ВНИИТИБН, 1998, 928 с.2. Syurin V.N., Samuilenko A.Ya., Soloviev B.V., Fomina N.V. Viral diseases of animals. - M., VNIITIBN, 1998, 928 p.
3. Инфекционная патология животных: В 2 т. / под ред. А.Я.Самуйленко, Б.В.Соловьева, Е.А.Непоклонова, Е.С.Воронина. - М.: «Академкнига», 2006. - Т.1. - 911 с.3. Infectious pathology of animals: In 2 t. / Ed. A.Ya. Samuilenko, B.V. Soloviev, E.A. Nepoklonova, E.S. Voronin. - M.: "Academic Book", 2006. - T.1. - 911 p.
4. Пат. РФ №2271220; А61К 39/265, C12N 7/00, А61Р 31/12; 10.03.2006 г.4. Pat. RF №2271220; A61K 39/265, C12N 7/00, A61P 31/12; 03/10/2006
5. Пат. РФ №2301079; А61К 39/215, А61Р 31/12; 20.06.2007 г.5. Pat. RF №2301079; A61K 39/215, A61P 31/12; 06/20/2007
6. Пат. ЧССР №249880; А61К 39/295, 39/108; 15.03.1988 г.6. Pat. Czechoslovakia No. 249880; A61K 39/295, 39/108; 03/15/1988
7. Пат. ЧССР №250849; А61К 39/295, 39/108; 15.03.1988 г. (прототип).7. Pat. Czechoslovakia No. 250849; A61K 39/295, 39/108; 03/15/1988 (prototype).
8. Пат. ЧССР №250850; А61К 39/295, 39/108; 15.03.1988 г.8. Pat. Czechoslovakia No. 250850; A61K 39/295, 39/108; 03/15/1988
9. Пат. РФ №2145236; А61К 39/295, 39/108, 39/215, 39/245, 39/12; C12N 7/00 (C12N 7/00, C12R 1:93); 10.02.2000 г.9. Pat. RF No. 2145236; A61K 39/295, 39/108, 39/215, 39/245, 39/12; C12N 7/00 (C12N 7/00, C12R 1:93); 02/10/2000
10. WO 2002/062 382; А61К 39/15, 39/215, 39/08, 39/108; 15,08.2002 г.10. WO 2002/062 382; A61K 39/15, 39/215, 39/08, 39/108; 08/15/2002
11. Наставление по применению вакцины инактивированной комбинированной против ИРТ, ПГ-3, вирусной диареи, респираторно-синцитиальной, рота- и коронавирусной болезни телят КОМБОВАК, №13-3-04/0703 от 20.03.2003 г., утвержденное Департаментом ветеринарии МСХ РФ 20.03.2003 г.11. Guidance on the use of the inactivated combined vaccine against IRT, PG-3, viral diarrhea, respiratory syncytial, rota- and coronavirus disease of calves KOMBOVAK, No. 13-3-04 / 0703 of 03.20.2003, approved by the Department of Veterinary of the Ministry of Agriculture of the Russian Federation March 20, 2003
12. Пат. РФ №2261111; А61К 39/295, 27.09.2005 г.12. Pat. RF №2261111; A61K 39/295, 09/27/2005
13. Пономарев А.П., Молчанова А.И. и Узюмов В.Л. Определение концентрации частиц вируса ящура в суспензиях. - Ветеринария, 1983, №1, 22-24.13. Ponomarev A.P., Molchanova A.I. and Uzyumov V.L. Determination of the concentration of FMD virus particles in suspensions. - Veterinary medicine, 1983, No. 1, 22-24.
14. Пат. РФ №2221040; C12N 7/00, А61К 39/265 (C12N 7/00, C12R 1:93); 10.01.2004 г.14. Pat. RF №2221040; C12N 7/00, A61K 39/265 (C12N 7/00, C12R 1:93); January 10, 2004
15. Пат. РФ №2268937; C12N 7/00, А61К 39/215, А61Р 31/12; 27.01.2006 г.15. Pat. RF №2268937; C12N 7/00, A61K 39/215, A61P 31/12; January 27, 2006
3КГPassage 1st Suspension
3KG
3КГPassage 2nd Suspension
3KG
3КГPassage 3rd suspension
3KG
Claims (12)
культуры клеток 3КГ, с инфекционной активностью не менее 6,0 lg
культуры клеток MDBK, из культуры клеток Таурус-1, из культуры
клеток КСТ и из культуры клеток Vero, в концентрации вирусных
3KG cell culture, with infectious activity of at least 6.0 lg
MDBK cell culture, from Taurus-1 cell culture, from culture
KST cells and from Vero cell culture, in viral concentration
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007148299/13A RU2378017C2 (en) | 2007-12-24 | 2007-12-24 | Emulsion inactivated associated vaccine against cattle rednose and coronoviral infection |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007148299/13A RU2378017C2 (en) | 2007-12-24 | 2007-12-24 | Emulsion inactivated associated vaccine against cattle rednose and coronoviral infection |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2007148299A RU2007148299A (en) | 2009-06-27 |
| RU2378017C2 true RU2378017C2 (en) | 2010-01-10 |
Family
ID=41026835
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2007148299/13A RU2378017C2 (en) | 2007-12-24 | 2007-12-24 | Emulsion inactivated associated vaccine against cattle rednose and coronoviral infection |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2378017C2 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8440203B2 (en) | 2009-11-06 | 2013-05-14 | Intervet Inc. | Methods of immunizing pregnant heifers at three months of gestation |
| RU2535006C1 (en) * | 2013-09-30 | 2014-12-10 | Государственное научное учреждение Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечернозёмной зоны Российской Федерации Российской академии сельскохозяйственных наук | Method of immunoprophylaxis of mass virus diseases of calves |
| RU2768749C1 (en) * | 2021-06-07 | 2022-03-24 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Agent for specific prevention of covid-19 for carnivores |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CS250849B1 (en) * | 1985-12-29 | 1987-05-14 | Alojz Zuffa | Polyvalent inactivated oil vaccine and method of its production |
| CS250850B1 (en) * | 1985-12-29 | 1987-05-14 | Alojz Zuffa | Polyvalent inactivated oil vaccine and method of its production |
| WO2002062382A1 (en) * | 2001-02-04 | 2002-08-15 | Grand Laboratories, Inc. | Inactive bovine scours vaccines, processes and method of preventing bovine scours |
| RU2212896C2 (en) * | 2001-11-08 | 2003-09-27 | Федеральное государственное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных | Inactivated vaccine against cattle parainfluenza-3 |
-
2007
- 2007-12-24 RU RU2007148299/13A patent/RU2378017C2/en active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CS250849B1 (en) * | 1985-12-29 | 1987-05-14 | Alojz Zuffa | Polyvalent inactivated oil vaccine and method of its production |
| CS250850B1 (en) * | 1985-12-29 | 1987-05-14 | Alojz Zuffa | Polyvalent inactivated oil vaccine and method of its production |
| WO2002062382A1 (en) * | 2001-02-04 | 2002-08-15 | Grand Laboratories, Inc. | Inactive bovine scours vaccines, processes and method of preventing bovine scours |
| RU2212896C2 (en) * | 2001-11-08 | 2003-09-27 | Федеральное государственное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных | Inactivated vaccine against cattle parainfluenza-3 |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8440203B2 (en) | 2009-11-06 | 2013-05-14 | Intervet Inc. | Methods of immunizing pregnant heifers at three months of gestation |
| RU2535006C1 (en) * | 2013-09-30 | 2014-12-10 | Государственное научное учреждение Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечернозёмной зоны Российской Федерации Российской академии сельскохозяйственных наук | Method of immunoprophylaxis of mass virus diseases of calves |
| RU2768749C1 (en) * | 2021-06-07 | 2022-03-24 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Agent for specific prevention of covid-19 for carnivores |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2007148299A (en) | 2009-06-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11103572B2 (en) | Thermal inactivation of rotavirus | |
| IE53872B1 (en) | Infectious-bronchitis vaccines for poultry, combined infectious-bronchitis vaccines, process for preparing such vaccines, process for preventing infectious bronchitis and infectious-bronchitis virus strain | |
| RU2378014C2 (en) | Emulsion inactivated associated vaccine against cattle paragrippe-3, rednose and coronoviral infection | |
| RU2378017C2 (en) | Emulsion inactivated associated vaccine against cattle rednose and coronoviral infection | |
| RU2403063C1 (en) | Inactivated combined vaccine against viral diarrhea, rota-, corona-virus diseases and escherichiosis of cattle | |
| RU2145236C1 (en) | Mixed vaccine against rota-, corona-, herpesviral and escherichia diarrhea in newborn calves | |
| RU2366458C1 (en) | Combined emulsion inactivated vaccine against rotaviral and coronaviral cattle infections | |
| RU2403061C1 (en) | Inactivated combined vaccine against infectious rhinotracheitis, paraflu-3, respiratory syncytial disease, viral diarrhea and pasteurellosis of cattle | |
| RU2395298C1 (en) | Inactivated combined vaccine against cattle infectious rhinotracheitis, parainfluenza-3, virus diarrhoea, respiratory syncytial rota- and coronaviral disease | |
| RU2504400C1 (en) | Inactivated emulsion associated vaccine for cattle parainfluenza-3, infectious rhinotracheitis and viral diarrhoea | |
| RU2696007C1 (en) | Associated with parainfluenza-3 vaccine, infectious rhinotracheitis, viral diarrhea, rota- and coronaviral infections of cattle inactivated emulsion | |
| RU2452512C2 (en) | Inactivated emulsion associated vaccine for parvoviral, rheoviral, type i herpes-viral infections and viral diarrhoeia - cattle mucosal disease | |
| RU2395297C1 (en) | Inactivated combined vaccine against cattle infectious rhinotracheitis, virus diarrhoea and leptospirosis | |
| RU2268747C1 (en) | Sorbed and inactivated vaccine against cattle infectious rhinotracheitis | |
| RU2342157C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine against coronaviral infection of cattle | |
| RU2395299C1 (en) | Inactivated combined vaccine against cattle infectious rhinotracheitis, virus diarrhoea, rota-, coronavirus disease and leptospirosis | |
| RU2266328C1 (en) | Transmissible gastroenteritis of swine virus strain for production of diagnosis and vaccine preparations | |
| RU2271220C1 (en) | Emulsion inactivated vaccine against infective cattle rinotracheitis | |
| RU2301079C2 (en) | Inactivated adsorbed vaccine against cattle coronaviral infection | |
| RU2266326C1 (en) | Transmissible gastroenteritis of swine virus strain for production of diagnosis and vaccine preparations | |
| RU2266327C1 (en) | Transmissible gastroenteritis of swine virus strain for production of diagnosis and vaccine preparations | |
| RU2147609C1 (en) | Strain of virus canine parvovirus "riel" for preparing vaccine against parvoviral infection in carnivores and vaccine "vladivak" against viral diseases in carnivores based on said | |
| RU2515058C1 (en) | Associated inactivated emulsion bovine viral diarrhoea, rotavirus and coronavirus infections vaccine | |
| RU2269361C2 (en) | Associated emulsion inactivated vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome (prrs) and porcine parvovirus infection (ppvi) | |
| RU2284193C1 (en) | Dry cultural virus vaccine against plague in small ruminant animals |