RU2376374C2 - Вакцина против вируса лихорадки западного нила - Google Patents
Вакцина против вируса лихорадки западного нила Download PDFInfo
- Publication number
- RU2376374C2 RU2376374C2 RU2005118419/13A RU2005118419A RU2376374C2 RU 2376374 C2 RU2376374 C2 RU 2376374C2 RU 2005118419/13 A RU2005118419/13 A RU 2005118419/13A RU 2005118419 A RU2005118419 A RU 2005118419A RU 2376374 C2 RU2376374 C2 RU 2376374C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- amino acid
- virus
- west nile
- substitution
- chimeric flavivirus
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 54
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 33
- 201000006449 West Nile encephalitis Diseases 0.000 title abstract description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 23
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims abstract description 10
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 4
- 241000710886 West Nile virus Species 0.000 claims description 128
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 38
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 38
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 28
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 27
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 claims description 22
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 claims description 14
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 claims description 14
- 102100021696 Syncytin-1 Human genes 0.000 claims description 13
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 8
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 6
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 6
- 241000710772 Yellow fever virus Species 0.000 claims description 6
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 5
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 5
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 claims description 5
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 5
- 229940051021 yellow-fever virus Drugs 0.000 claims description 5
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 claims description 4
- 125000003588 lysine group Chemical class [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 4
- 125000003295 alanine group Chemical class N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 claims description 3
- 125000001909 leucine group Chemical class [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- KKAJSJJFBSOMGS-UHFFFAOYSA-N 3,6-diamino-10-methylacridinium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(N)C=C2[N+](C)=C(C=C(N)C=C3)C3=CC2=C1 KKAJSJJFBSOMGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 abstract 1
- 230000027317 positive regulation of immune response Effects 0.000 abstract 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 208000003152 Yellow Fever Diseases 0.000 description 101
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 40
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 18
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 16
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 230000034994 death Effects 0.000 description 13
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 7
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 7
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 7
- 101710204837 Envelope small membrane protein Proteins 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 6
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 6
- 101710088839 Replication initiation protein Proteins 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010076039 Polyproteins Proteins 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 3
- 206010057293 West Nile viral infection Diseases 0.000 description 3
- 229940124928 YF-Vax Drugs 0.000 description 3
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 229940125575 vaccine candidate Drugs 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 3
- LHEJDBBHZGISGW-UHFFFAOYSA-N 5-fluoro-3-(3-oxo-1h-2-benzofuran-1-yl)-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1C(F)=CNC(=O)N1C1C2=CC=CC=C2C(=O)O1 LHEJDBBHZGISGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 101150013191 E gene Proteins 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 238000009004 PCR Kit Methods 0.000 description 2
- 241000070023 Phoenicopterus roseus Species 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000710829 Dengue virus group Species 0.000 description 1
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 239000004262 Ethyl gallate Substances 0.000 description 1
- 241000710781 Flaviviridae Species 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 208000004044 Hypesthesia Diseases 0.000 description 1
- 241000710842 Japanese encephalitis virus Species 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 101710145006 Lysis protein Proteins 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 101800001030 Non-structural protein 2A Proteins 0.000 description 1
- 101800001020 Non-structural protein 4A Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 108700022715 Viral Proteases Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 229940124926 Yellow fever virus vaccine Drugs 0.000 description 1
- -1 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 210000001652 frontal lobe Anatomy 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000034783 hypoesthesia Diseases 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000007171 neuropathology Effects 0.000 description 1
- 231100000862 numbness Toxicity 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 239000001472 potassium tartrate Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 230000037432 silent mutation Effects 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 229960001515 yellow fever vaccine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
- C12N2770/24122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
- C12N2770/24134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
- C12N2770/24161—Methods of inactivation or attenuation
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области вирусологии и молекулярной биологии. Предложены генетическая конструкция для стимуляции иммунного ответа против вируса Западного Нила, а также химерный флавивирус, способ индукции иммунного ответа, способ получения химерной флавивирусной вакцины и применение химерного флавивируса для вакцинации. Изобретение может быть использовано для профилактики или лечения инфекции, вызванной вирусом Западного Нила. 5 н. и 15 з.п. ф-лы, 8 табл., 1 ил.
Description
Описание
Настоящее изобретение относится к вакцинам против вируса лихорадки Западного Нила.
Предпосылки создания изобретения
Вирус Западного Нила (WN) начиная с самого раннего его обнаружения в северном полушарии продолжал быстро распространяться по Северной Америке. Первые случаи в районе Нью-Йорка были диагностированы в 1999 г., и до 2002 г. человеческая смертность возросла до более 150 случаев, и вирус продолжал распространяться, достигнув Калифорнии. Появление инфицированных/мертвых птиц показывает, что существует большой резервуар инфицированных москитов в географических областях, где встречается данная инфекция. К настоящему времени не существует эффективного лекарственного лечения от вируса Западного Нила, и методы сдерживания заболеваемости и профилактики не оказывают значительного влияния на число случаев инфекции у людей. Таким образом, риск миграции вируса на Южно-Американский континент, а также эпидемий в слаборазвитых странах чрезвычайно велик.
Вирус Западного Нила является представителем семейства флавивирусов. Эти вирусы являются мелкими, оболочечными РНК-вирусами с положительной цепью, которые являются причиной многих случаев заболеваний у человека и животных по всему миру. Примеры флавивирусов, кроме вируса Западного Нила, включают вирус желтой лихорадки, вирус японского энцефалита и вирусы Денге.
Белки флавивирусов продуцируются трансляцией единственной длинной открытой рамкой считывания с образованием полипротеина, который подвергается сложной серии посттрансляционных протеолитических расщеплений комплексом протеаз хозяина и вирусных протеаз с образованием зрелых вирусных белков (Amberg et al., J. Virol. 73: 8083-8094, 1999; Rice, “Flaviviridae”, In Virology, Fields (ed.), Raven-Lippincott, New York, 1995, Volume I, p.937). Структурные белки вирусов собираются в полипротеин по порядку С-рrМ-Е, где «С» является капсидом, «рrМ» (или предмембранный) является предшественником вирусного, связанного с оболочкой М (мембранного) белка, и «Е» является оболочечным белком. Эти белки присутствуют в N-концевой области полипротеина, тогда как неструктурные белки (NS1, NS2А, NS2 В, NS3, NS4А, NS4 В и NS5) расположены в С-концевой области полипротеина.
Краткое изложение изобретения
Данное изобретение относится к молекулам нуклеиновой кислоты, которые включают последовательности, кодирующие предмембранные и оболочечные белки вируса Западного Нила и капсидные и неструктурные белки вируса желтой лихорадки. Предмембранные и оболочечные белки вируса Западного Нила этих химер включают одну аттенуирующую мутацию или несколько, которые могут быть, например, заменой аминокислоты в положениях 107, 316 и/или 440 оболочечного белка. В качестве конкретных примеров заменой аминокислоты в положении 107 может быть замена лейцина на фенилаланин (или его консервативную аминокислоту); заменой аминокислоты в положении 316 может быть замена аланина на валин (или его консервативную аминокислоту); и заменой аминокислоты в положении 440 может быть замена лизина на аргинин (или его консервативную аминокислоту).
Данное изобретение также относится к химерным флавивирусам, кодируемым молекулами нуклеиновых кислот, описанных здесь, а также способам индукции иммунного ответа против вируса Западного Нила у субъекта путем введения таких химерных флавивирусов. Кроме того, данное изобретение относится к использованию таких химерных флавивирусов в способах вакцинации и их применению в способах изготовления лекарственных препаратов для использования для таких способов. Способы, описанные здесь, могут применяться для субъектов, которые подвергаются риску развития, но у них нет инфекции, вызываемой вирусом Западного Нила, а также для субъектов, которые инфицированы вирусом Западного Нила. Данное изобретение также относится к способам получения химерных флавивирусов, описанных здесь.
Данное изобретение имеет несколько преимуществ. Например, как описано более детально ниже, аттенуирующие мутации вирусов данного изобретения дают в результате сниженную нейровирулентность, и, кроме того, не оказывают значительного побочного действия на способность вирусов вызывать эффективный иммунный ответ. Таким образом, вирусы по настоящему изобретению обеспечивают эффективный и безопасный подход к профилактике и лечению инфекции, вызываемой вирусом Западного Нила.
Другие признаки и преимущества данного изобретения будут очевидны из следующего далее подробного описания и формулы изобретения.
Краткое описание чертежа
На фиг.1 представлен график, показывающий титр соответствующих нейтрализующих антител (PRNT50), получаемый у мышей IСR, вакцинированных вирусом YF/WN wt или YF/WNFVR. Показаны индивидуальные титры нейтрализующих антител против вируса YF/WN wt. Белые символы обозначают мышей, которые не выжили после внутрибрюшинного заражения штаммом WNV NY-99. 100%-ное выживание было получено в группах, вакцинированных дозой 103 БОЕ (бляшкообразующая единица) YF/WN wt и дозой 105 БОЕ YF/WNFVR. В группе, вакцинированной 103 БОЕ YF/WNFVR, после заражения выжили только 40% мышей.
Подробное описание
Данное изобретение относится к вакцинам и способам их применения для профилактики и лечения инфекции, вызываемой вирусом Западного Нила (WN). Способы данного изобретения включают вакцинацию субъектов живым аттенуированным химерным флавивирусом, который состоит из вируса желтой лихорадки, у которого предмембранный и оболочечный белки были заменены белками вируса Западного Нила. Белки вируса Западного Нила у химер данного изобретения включают одну или более аттенуирующих мутаций, которые дополнительно описаны ниже.
Основные способы конструирования и применения химерных флавивирусов, которые можно использовать в данном изобретении, подробно описаны, например, в патентных заявках США с серийными номерами 09/007664, 09/121587 и 09/452638; в международных заявках РСТ/US 98/03894 (WО 98/37911) и РСТ/US00/32821 (WО 01/39802) и в Chambers et al., J. Virol. 73: 3095-3101, 1999, каждая из которых включена здесь в качестве ссылки в полном объеме. Как описано дополнительно ниже, эти способы модифицированы для использования по данному изобретению путем включения стадии введения одной или нескольких аттенуирующих мутаций во вставочные последовательности вируса Западного Нила. Методы, которые можно использовать для получения вирусов по данному изобретению, также описаны в РСТ/US03/01319 (WО 03/060088 А2), который приведен здесь в качестве ссылки.
В одном из примеров химерного вируса по данному изобретению аттенуирующая мутация расположена в положениях 107, 316 или 440 (или их сочетания) оболочечного белка вируса Западного Нила. Мутации, таким образом, могут быть, например, в одной или нескольких аминокислотах 102-112, 311-321 и/или 435-445 оболочечного белка вируса Западного Нила. В качестве конкретного примера, используя в качестве исходной последовательность штамма вируса Западного Нила NY99-flamingo-382-99 (инвентарный номер в GenBank АF196835), лизин в положении 107 можно заменить фенилаланином, аланин в положении 316 можно заменить валином и/или лизин в положении 440 можно заменить аргинином. Кроме указанных выше аминокислот можно производить замены другими аминокислотами, такими как аминокислоты, которые давали бы в результате консервативное изменение аминокислот, указанных выше.
Консервативные замены обычно включают замены в следующих группах: глицин, аланин, валин, изолейцин и лейцин; аспарагиновая кислота, глютаминовая кислота, аспарагин и глютамин; серин и треонин; лизин и аргинин и фенилаланин и тирозин. В конкретном примере химера данного изобретения включает каждую из специфических замен, указанных выше. Кроме того, как обсуждается дополнительно ниже, в химерных вирусах по данному изобретению могут быть также изменены другие остатки (например, в положениях 138, 176 и/или 280).
Вакцины по данному изобретению можно вводить в количестве и с использованием методов, которые легко могут быть определены специалистами в данной области. Вакцины могут применяться и быть получены, например, в виде жидкости, собираемой из клеточных культур, инфицированных химерным вирусом. Живой аттенуированный химерный вирус может быть получен в виде стерильного водного раствора, содержащего от 102 до 108, например от 106 до 107, инфицирующих единиц (например, бляшкообразующих единиц ( БОЕ ) или инфекционных доз тканевой культуры) в объеме дозы от 0,1 до 1,0 мл для введения, например, подкожным, внутримышечным или внутрикожным путем. Кроме того, может быть выбран путь введения через слизистые оболочки, такой как пероральный путь введения. Выбор соответствующего количества химеры для введения может быть осуществлен специалистами в данной области, и это количество может изменяться в зависимости от многих факторов, например массы и общего состояния здоровья субъекта, которому вводят эту химеру. Субъект может быть вакцинирован один раз, или, если необходимо, может иметь место дополнительная иммунизация.
Как отмечено выше, вакцины можно вводить в качестве первичных профилактических средств субъекту, который подвергается риску инфицирования вирусом Западного Нила. Вакцины можно также использовать как вторичные средства для лечения инфицированных вирусом Западного Нила субъектов путем стимуляции иммунного ответа к инфицирующему вирусу. Также, хотя и не требуется, для усиления иммуногенности химерных вакцин против вируса Западного Нила можно использовать адъюванты. Выбор соответствующих адъювантов может быть легко осуществлен специалистом в данной области.
Изобретение частично основано на следующих экспериментальных результатах.
Экспериментальные результаты
Чтобы улучшить характеристики безопасности химерной вакцины из вирусов Западного Нила/ желтой лихорадки заявители изобретения исследовали, снизят ли нейровирулентность аттенуирующие точечные мутации в оболочечном белке. Как подробно описано ниже, авторами была сконструирована химера YF/WN, у которой отсутствует нейроинвазивность вируса Западного Нила, на мышах, и которая менее нейровирулентна, чем вакцинный штамм желтой лихорадки 17D YF, на моделях с мышами и обезьянами. Ниже приведено описание мутагенеза оболочечного белка и оценка безопасности, иммуногенности и эффективности этого и родственных вирусов на моделях с мышами и макаками-резусами.
Материалы и методы
Химерные конструкции YF/WN и молекулярные методики
Химерные флавивирусы были сконструированы с использованием технологии ChimeriVax™, которая включает использование двухплазмидной системы, которая была описана ранее (смотри, например, патентные заявки США №№09/007664, 09/121587 и 09/452638; международные заявки РСТ/US98/03894 (WО 98/37911) и РСТ/US00/32821 (WО 01/39802); и Chambers et al., J. Virol. 73: 3095-3101, 1999). Двухплазмидная система обеспечивает стабильность плазмиды в E.coli и удобный способ манипулирования клонированной основной цепью вируса желтой лихорадки (YF), облегчающий замену генов желтой лихорадки (YF) рrМ и Е генами целевого флавивируса. Используемые гены рrМ и Е вируса Западного Нила (WN) клонировали из изолята 383-99 flamingo WNV, последовательность с инвентарным номером GenBank АF196835. Вирусную кДНК рrМЕ получали с помощью ОТ-ПЦР (RT-PCR) (набор XL-PCR, Perkin Elmer). 5'-конец гена рrМ WN клонировали точно на 3'-конце капсидного гена 17D YF методом удлинения перекрывающихся участков с применением ПЦР с использованием полимеразы Рwо (Roche). Эта стадия клонирования сохраняет целостность сигнала расщепления/процессинга, кодируемого на 3'-конце капсидного гена вируса YF. 3'-конец Е гена также клонировали точно на 5'-конце кодирующей последовательности NS1 YF методом удлинения перекрывающихся участков с применением ПЦР. Использование этой двухплазмидной системы для клонировании области рrМЕ вируса Западного Нила в основную цепь 17D YF описано ранее (Arroyo et al., Trends in Molecular Medicine 7(8): 350-354, 2001). Молчащие мутации вводили в последовательность рrМ и Е, чтобы создать уникальные сайты рестрикции Вsр ЕI и Еаg I. Расщепление двух плазмид этими ферментами давало фрагменты ДНК, которые очищали на геле и лигировали in vitro с получением химерной кДНК полной длины. Эту кДНК линеаризировали с помощью Хhо I, чтобы облегчить транскрипцию in vitro полимеразой SР6 (Epicentre). Продукт РНК вводили в линии клеток эукариот, что делало возможным осуществление трансляции вирусной РНК и репликации вируса.
Точечные мутации вводили в разные кодоны гена Е для получения вариантов первоначальной химеры, кодирующей рrМЕ WN дикого типа. В таблице I показаны целевые сайты мутаций и олигонуклеотидные последовательности, использованные для создания химер YF/WN, описанных ниже. Сайты мутаций подтверждали секвенированием оболочечных белков (область рrМЕ), полученных вирусов. Образцы вирусной кДНК для секвенирования получали из РНК, экстрагированной из супернатантов вирусов (Trizol LS, Invitrogen) c последующими ОТ-ПЦР (набор XL-PCR, Perkin Elmer) и секвенированием с использованием синтетических праймеров (Invitrogen) и секвенатора CEQ 2000 (Beckman).
Вирусы и клеточные линии
Химерные вирусы YF/WN (т.е. ChimeriVax™-West Nile) получали трансфекцией РНК (вирус пассажа I, РI) в клетки линии Vero E6 (ATCC, CIDVR UMASS Medical Center Worcester, MA). Основной исследуемый посевной материал (RMS) получали путем дополнительного амплифицирования (пассаж либо 2, либо 3 при 0,001 МОI (множественность заражения) в клетках Vero E6. Клетки Vero E6 поддерживали в МЕМ (Invitrogen), 10% FВS (Hyclone). Получение предварительного основного посевного материала (РМS) для производства вакцины начнали трансфекцией в бессывороточные клетки линии Vero (SF-Vero) (ATCC, Baxter/Immuno Orth, Austria) c последующим амплификационным пассажем в той же самой линии клеток SF-Vero для получения PMS Р2 или предварительного основного посевного материала. Клетки клеточной линии SF-Vero делились и их сохраняли в препарате бессывороточной, безбелковой среды VT-Media (Baxter/Immuno, Austria). Используемый вирус WN дикого типа был штаммом NY-99 (изолят NY99-35262-11 flamingo), полученным из CDC, Fort Collins, CO (инвентарное обозначение СDС В82332W) с помощью двух дополнительных пассажей в клетках Vero E6 c получением основного банка вируса. 17D YF является коммерческой вакциной (YF-VAX®, Aventis Pasteur, Swiftwater, PA), используемой здесь после восстановления лиофилизированного продукта и после одного пассажа в клетках Vero E6 (АТСС, Acambis Inc., Cambridge, MA).
Нейроинвазивность и нейровирулентность у взрослых мышей и мышат на грудном вскармливании; методы определения иммуногенности и титров заражения (методика иммунизации, анализа бляшек, PRNT)
Мышам делали внутрибрюшинную прививку (в/б) для испытания на нейроинвазию или при заражении вирусом WN дикого типа. Объемы для внутрибрюшинной прививки составляли 100-200 мкл, вводимых шприцом 25G. Взрослым мышам и мышатам на грудном вскармливании вакцину вводили внутрицеребрально для испытания на нейровирулентность. Для внутрицеребрального введения использовали объем прививки, равный 20 мкл, вводимый в правую сторону фронтальной доли мозга. Вирусы разводили в М199 буфером HEPES (Invitrogen) и 20%-ным FBS (Hyclone), если не указано иначе. Исследование бляшек в клетках Vero осуществляли для подтверждения титра иммунизиующей дозы вируса (Monath et al., J. Virol. 74(4): 1742-1751, 2000).
За мышами наблюдали в течение срока, равного 21 дню, чтобы определить нейроинвазию, нейровирулентность или выживание после заражения вирусом Западного Нила. Наблюдали/оценивали заболеваемость и смертность, и выживших подвергали эвтаназии.
Чтобы определить титры нейтрализующих антител мышей обескровливали ретроорбитальным путем, и сыворотку отделяли центрифугированием. Исследование нейтрализации по снижению числа бляшек (РRNТ) использовали для определения титров нейтрализующих антител в сыворотке.
Исследование нейровирулентности у резусов
Испытание на обезьянах-резусах для определения нейровирулентности вакцин от желтой лихорадки (YF), как описано в руководстве ВОЗ, использовали для определения безопасности химер YF/WN (Monath et al., J. Virol. 74(4): 1742-1751, 2000). Животным внуртрицеребрально вводили вакцину, и ежедневно получали образцы крови для определения уровней вирусемии, используя бляшечную методику исследования. Животных осматривали ежедневно на признаки связанных с заболеванием симптомов, таких как лихорадка или тремор. Животных подвергали эвтаназии через 30 дней после инфицирования, и ткани головного и спинного мозга затем забирали на гистопатологию. Нейропатологию оценивали по предписанной ВОЗ системе, и значения анализировали на патологию, сравнимую с патологией, связанной со стандартной вакциной 17D YF.
Иммуногенность у макак-резусов и заражение
Макак-резусов вакцинировали подкожным введением единственной 0,5-мл дозы вакцины, номинально содержащей 4 log10 БОЕ. Вирусемию определяли исследованием на бляшкообразование разбавленной сыворотки на клетках Vero с использованием образцов сыворотки, которые ежедневно собирали с 0 по 10 день (Monath et al., J. Virol. 74(4): 1742-1751, 2000). Уровни нейтрализующих антител определяли исследованием титров нейтрализации по снижению бляшек (РRNТ) (Monath et al., J. Virol. 74(4): 1742-1751, 2000). Животных заражали через 64 дня после вакцинации вирусом NY99 WN дикого типа.
Генетическая стабильность (in vivo и in vitro пассажи) и секвенирование
Конструкцию YF/WN wt (например, ChimeriVax™-WN01) без аттенуирующих мутаций в белке Е пассировали шесть раз в клетках Vero E6 с последующими шестью пассажами на мышатах на грудном вскармливании при введении внутрицеребральным путем. Конструкции предосновного посевного материала и основного исследуемого посевного материала YF/WNFVR (например, ChimeriVax™-WN02) с тремя аттенуирующими мутациями, введенными в белок Е, пассировали 12 и 10 раз, соответственно в бессывороточном, безбелковом субстрате клеток SF-Vеrо. Все пассажи выполняли первоначальными 0,01 МОI с последующим сбором на третий день, и продолжая без титрования для определения активности вируса. Титры вируса, использованные при каждом пассаже, позднее подсчитывали бляшечным исследованием. Нейровирулентность пассированных вирусов определяли внутрицеребральным введением взрослым мышам и мышатам на грудном вскармливании. Вирусную ДНК затем секвенировали.
Результаты
Фенотип вирулентности YF/WN wt по сравнению с 17D YF (YF-VАХ®)
Первоначальная химера вируса Западного Нила кодировала гены оболочечного и предмембранного белков штамма NY99 WN дикого типа (т.е. YF/WN wt или ChimeriVax™-WN01). У этого химерного вируса отсутствовала способность вызывать энцефалит после внутрицеребрального заражения при дозах 106 БОЕ на мышь IСR (таблица 2). Энцефалит оценивали ежедневным наблюдением изменений двигательного поведения, ведущего к параличу и смерти. Отсутствие нейроинвазии YF/WN wt у взрослых мышей наблюдалось также другими исследователями у мышей, которым вводили вакцину 17D YD (Ryman et al., Virology 230(2):376-380, 1997). Напротив, вирус NY99 WN дикого типа был летальным для мышей при введении внутрибрюшинным путем в таком небольшом количестве, как 1-4 БОЕ (Beaslеy et al., Virology 296:17-23, 2002). Как установлено здесь, внутрицеребральный LD50 YF/WN wt находится между 103 и 105 БОЕ. Фенотип по нейровирулентности YF/WN wt ниже фенотипа вируса 17D YF, когда внутрицеребральный LD50 для мышей IСR находится между 101 и 102 БОЕ. Однако с вирусом YF/WN wt не выявлено четкого пограничного момента у 21-дневных мышей (таблица 3).
Подходы с многосайтовым мутагенезом
Аминокислоты в оболочечном белке заменяли, чтобы определить, будут ли эти замены снижать вирулентность химер YF/WN. Изменения вирулентности оценивали на модели на мышах и сравнивали с нейровирулентностью исходной химеры YF/WN wt. Аминокислотные остатки, картируемые в положениях оболочечного гена (Е) YF/WN wt 107, 138, 176 и 280, все были изменены в единственной конструкции с шифровкой аминокислотных остатков как F, К, V и М соответственно. Новый химерный вирус определяли как YF/WNFКVМ. Затем конструировали химеры, в которых каждый аминокислотный остаток в группе FКVМ, один, изменяли, чтобы оценить его особую роль в нейровирулентности (таблица 4). Кроме того, мутации аминокислотных остатков 316 и 440 изменяли на V и R соответственно на основе предшествующих данных, показывающих, что мутации в Е-белке, которые картировали в этих областях, могут воздействовать на биологию третьего домена белка Е (Rey et al., Nature 375(6529): 291-298, 1995; Allison et al., J. Virol. 75(9):4268-4275, 2001). Наблюдения за нейровирулентностью химер, имеющих модифицированные аминокислоты в белке Е, показали, что остатки 107, 316 и 440 являются наиболее важными аминокислотами, отвечающими за нейровирулентность вируса WN. На основе этой информации была создана многосайтная конструкция YF/WNFVR и выбрана в качестве кандидата на вакцину. Все многосайтные химеры растили до титров 107 БОЕ /мл на бессывороточных клетках SF Vеrо.
Исследования нейровирулентности на мышах и макаках-резусах
Нейровирулентность вирусов с единственной или многосайтными мутациями в гене оболочечного белка YF/WN wt у мышей определяли на 21-дневных мышах, которым вводили внутрицеребрально путем дозы вируса между 104 и 105 БОЕ. Эта оценка определила остатки 107 и 280 (таблица 4) и сочетание 316/440 (таблица 5) как более доминантные аттенуирующие мутации, что определено по гибели мышей и относительному среднему времени выживания (АSТ). Химера, выбранная в качестве кандидата на данную вакцину, которая имеет комбинацию мутаций F, V и R остатков 107, 316 и 440 соответственно, была авирулентной у взрослых мышей (таблица 6). Однако некоторая нейровирулентность наблюдалась у двухдневных мышат на грудном вскармливании, подобно вакцине ChimeriVax™-JЕ, которая является безопасной для людей (Monath et al., Vaccine 20:1004-1018, 2002).
Фенотип нейровирулентности химер вируса Западного Нила для макак-резусов оценивали с конструкцией YF/WN wt и сравнивали с нейровирулентностью вакцины 17D YF. Макакам-резусам вводили внутрицеребрально YF/WN wt и сравнивали с введением доз вакцины 17D YF. Химера давала титры вирусемии и продолжительность, сходные с показателями для вакцины 17D YF. Этот вирус был не более нейровирулентен, чем вакцина YF, указывая на то, что химеры YF/WN являются такими же безопасными, как и вакцина 17D YF.
Исследование иммуногенности на мышах и макаках-резусах
Сравнивали иммуногенность химеры YF/WN wt и конструкции YF/WNFVR, которая имеет мутации остатков оболочечного белка 107, 316 и 440. Мышам подкожно вводили дозы вакцины в интервале между 2 и 5 log10 БОЕ. Сыворотку собирали четыре недели после иммунизации и титровали на нейтрализующие антитела. Данные на чертеже показывают, что сайт-нацеленное аттенуирование конструкции YF/WN wt в результате дает менее иммуногенный вирус. Внутрибрюшинное заражение иммунизированных мышей вирусом NY99 WN дикого типа выявило у конструкций корреляцию активности вакцины с эффективностью. Все мыши, иммунизированные дозой 105 БОЕ/мл любой из химер YF/WN, были защищены от заражения вирулентным вирусом.
У макак-резусов иммуногенность кандидатов в вакцины с одной, двумя или тремя аттенуирующими мутациями, YF/WN107F, YF/WN316V440R или YF/WNFVR, была одинаковой. Не было значительных различий в титрах соответствующих антител, когда животные получали дозу вакцины 104 БОЕ. Исследования эффективности, определяемой путем заражения вирусом WN NY99 дикого типа после иммунизации, ясно показали, что вероятные вакцины WN, испытанные на модели макак-резусов обладали 100%-ной эффективностью по сравнению с контрольными животными (таблица 7).
Вирусемия после вакцинации у макак-резусов была одинаковой продолжительности по сравнению с продолжительностью, вызываемой вакциной 17D YF, но более низкой по значению, с линейной корреляцией с числом аттенуирующих одиночных мутаций в химерах (таблица 8). Тем не менее оценка безопасности на основе висцеротропизма (или вирусемии после вакцинации) показывает, что любой из кандидатов в вакцины, испытанных на модели макак, является более безопасным, чем 17D YF.
Последующее внутрицеребральное заражение иммунизированных макак-резусов 5,8 log10 БОЕ WN NY99 не вызывало обнаруживаемой вирусемии, и не наблюдалось клинических признаков заболевания или гибели животных, вакцинированных конструкциями YF/WN. Значительная вирусемия в результате репликации WNV была обнаружена при вакцинации 17D YF. Уровни вирусемии, обнаруживаемые у животных в этой группе, имели средний титр log10 БОЕ, равный 2,25±0,62 со средней продолжительностью, равной 3,5 дням. Эти уровни вирусемии сходны с уровнями, наблюдаемыми в вакцинированной контрольной группе (n=2) со средним титром log10 БОЕ, равным 2,33±0,47, и средней продолжительностью 4,5 дня. Две из четырех макак-резусов, вакцинированных 17D YF, выжили после внутрицеребрального заражения штаммом WN NY99. Выжившие теряли аппетит, и у них проявлялись симптомы оцепенения с повышенной температурой после заражения. У животных, которых подвергали эвтаназии после заражения штаммом WNV NY99, были представлены симптомы, включающие лихорадку и тремор.
Генетическая стабильность
Для определения генетической стабильности конструкций при выращивании на стационарных культурах осуществляли субстрат-пассажные исследования in vitro и in vivo с химерами YF/WN wt или YF/WNFVR. После шести пассажей YF/WN wt in vitro в клетках Vero E6 с последующими шестью пассажами in vivo в головном мозге взрослых мышей IСR не обнаружено нежелательных мутаций в области гена оболочечного белка (рrМ, Е) этой химеры. Гетерозиготная мутация в белке Е в положении Е336, приводящая к замене цистеина на серин, была установлена после десяти пассажей in vitro вируса YF/WNFVR в клетках Vero E6. В отдельном исследовании пассаж YF/WNFVR в клетках SF-Vero приводил к селекции мутации в положении Е 313, которая изменяла аминокислоту в этом положении с глицина на аргинин. Во время всех серийных пассажей вируса в клетках Vero не обнаружено реверсий/мутаций целевых остатков 107F, 316V или 440R, которые участвуют в нейровирулентности вируса.
Праймеры для сайт-направленного мутагенеза для создания мутантного аттенуированного вируса желтой лихорадки/ Западного Нила. Изменения нуклеотидов, которые вводят новую аминокислоту, указаны жирным шрифтом. Введенные молчащие сайты рестрикции подчеркнуты. Праймеры, указанные *(звездочкой), являются клонирующими праймерами, использованными для субклонирования фрагмента. Один включает изменение нуклеотида, тогда как другие - нет.
| Таблица 2 Нейроинвазивность YF/WN wt (ChimeriVax™-West Nile 01) по отношению к 17D YF, реакция на дозу у мышей IСR1 |
|||
| Вирус в/б | Доза (log10 БОЕ ) | % гибели (число погибших/ число испытуемых) | СВВ2 |
| YF/WN wt | 0,89 | 0(0/5) | - |
| (Р2) | 2,23 | 0(0/5) | - |
| 3,24 | 0(0/5) | - | |
| 4,06 | 0(0/5) | - | |
| 5,45 | 0(0/5) | - | |
| 6,51 | 0(0/5) | - | |
| YF17D | 2,78 | 0(0/3) | - |
| (ATCC) | 4,48 | 0(0/3) | - |
| Имитация | N/A | 0(0/3) | - |
| 1Использовали 3-4-недельных мышей-самок линии Harlan-Sprague ICR. СВВ = Среднее время выживания. YF/WN wt Р2 указывает вирус пассажа второго поколения в клетках Vero. Штаммы вируса Западного Нила обычно являются нейроинвазивными после второго внутрибрюшинного заражения. |
|||
| Таблица 3 Нейровирулентность YF/WN wt (ChimeriVax™-West Nile 01) по отношению к 17D YF, реакция на дозу (3-4-недельные самки мышей линии Harlan-Sprague ICR) |
|||
| Вирус в/ц | Доза1 (log10 БОЕ) | % гибели (число погибших/число испытуемых) | СВВ |
| YF/WN wt | -2 | 0(0/5) | - |
| (Р2) | -0,30 | 0(0/5) | - |
| 0,89 | 20(1/5) | 11 | |
| 2,23 | 0(0/5) | - | |
| 3,24 | 20(1/5) | 10 | |
| 4,06 | 60(3/5) | 9 | |
| 5,45 | 20(1/5) | 9 | |
| YF17D | 0 | 20(1/5) | 9 |
| (ATCC) | 0 | 60(3/5) | 10,3 |
| 0,9 | 100(5/5) | 9,2 | |
| 0,98 | 100(5/5) | 8,2 | |
| 2,78 | 100(5/5) | 8 | |
| Имитация | N/A | 0(0/3) | - |
| 1Действительную дозу, доставляемую внутрицеребрально, принимали за равную 20 мкл для показанных расчетов обратного титрования. | |||
| Таблица 4 Нейровирулентность вариантов ChimeriVax™-WN 01 после сайт-направленного мутагенеза в протеиновых остатках 107, 138, 176 и 280, испытанных на взрослых мышах1 |
||||
| Вирус (пассаж в Vero) | Намеченная доза (log10 БОЕ) | Доза по обратному титрованию (log10 БОЕ) | % гибели (число погибших/ число испытуемых) | СВВ |
| YF/WN wt | 4 | 4,87 | 100(5/5) | 8,6 |
| (P3) | 5 | 6,09 | 60(3/5) | 9 |
| YF/WN107F | 4 | 4,22 | 0(0/5) | - |
| (P2) | 4 | 4,42 | 0(0/8) | - |
| 5 | 4,99 | 0(0/5) | - | |
| YF/WN138K | 4 | 4,26 | 60(3/5) | 10,33 |
| (P3) | 4 | 4,41 | 63(5/8) | 11,4 |
| 5 | 5,48 | 60(3/5) | 9,33 | |
| YF/WN176V | 4 | 4,42 | 80(4/5) | 12,5 |
| (P3) | 5 | 5,54 | 80(4/5) | 11 |
| YF/WN280M | 4 | 4,14 | 40(2/5) | 9 |
| (P3) | 4 | 4,55 | 89(7/8) | 11,86 |
| 5 | 5,14 | 0(0/5) | - | |
| YF/107F138K280M | 4 | 3,70 | 0(0/5) | - |
| (P2) | 5 | 4,81 | 0(0/5) | - |
| YF/107F138K176V280M | 4 | 4,13 | 0(0/5) | - |
| (P3) | 5 | 5,10 | 20(1/5) | 7 |
| YF-VAX | 3 | 2,77 | 100(5/5) | 9 |
| WN NY99 | 4 | 3,90 | 100(5/5) | 5 |
| 1Мыши, заражаемые внутрицеребрально, были 3-4-недельными самками Taconic ICR. P2 и P3 указывают второе и третье поколение вируса при пассажах на клетках Vero соответственно. | ||||
| Таблица 5 Нейровирулентность вариантов ChimeriVax™-WN 01 после сайт-направленного мутагенеза в протеиновых остатках 316 и 440, испытанных на взрослых мышах1 |
|||
| Вирус (пассаж в Vero) | Доза по обратному титрованию (log10 БОЕ) | % гибели (число погибших/ число испытуемых) | СВВ |
| YF/WN wt | 4,11 | 83(10/12) | |
| (P3) | 4,74 | 60(3/5) | |
| 4,83 | 100(8/8) | ||
| YF/WN316V | 4,09 | 25(3/12) | |
| (P3) | 4,67 | 38(3/8) | |
| 4,57 | 38(9/24) | ||
| YF/WN440R | 4,17 | 83(10/12) | |
| (P3) | 4,60 | 38(3/8) | |
| 4,35 | 56(14/25) | ||
| YF/WN316V440R | 3,9 | 17(2/12) | |
| (P3) | 4,12 | 40(2/5) | |
| 3,71 | 36(9/25) | ||
| 1Мыши, заражаемые внутрицеребрально, были 3-4-недельными самками Taconic ICR. Представлены результаты трех независимых экспериментов. | |||
| Таблица 6 Нейровирулентность вариантов ChimeriVax™-WN 02 (YF/WN107F316V440R) для взрослых мышей по отношению к YF/WN wt |
|||
| Вирус (пассаж в Vero) | Доза по обратному титрованию (log10 БОЕ) | % гибели (число погибших/ число испытуемых) | СВВ |
| YF/WN wt | 3,62 | 42(5/12) | 9,4 |
| (P2) | |||
| YF/WN107F136V440R | 5,54 | 0(0/12) | - |
| (P4) | |||
| YF/WN107F316V440R | 3,72 | 0(0/12) | - |
| (P4) | |||
| 1Мыши, заражаемые внутрицеребрально, были 3-4-недельными самками Taconic ICR. | |||
| Таблица 7 | |||||||
| Титры соответствующих нейтрализующих антител (TCHA50; PRNT50) против вируса YF/WN wt. Макакам-резусам вводили 17D YF или описанных кандидатов на вакцину, подкожно | |||||||
| Обезьяна | Вакцина | Доза Log10 БОЕ | День после иммунизации (дпи) | День после заражения (дпз) | |||
| 14 дпи | 30 дпи | 63 дпи | 15 дпз | 31-34 дпз | |||
| М017 | YF17D | 4,49 | NT | NT | <40 | с | - |
| BI01 | YF17D | 4,49 | NT | NT | <40 | >640 | NT |
| R286 | YF17D | 4,49 | NT | NT | <40 | - | - |
| Т081 | YF17D | 4,49 | NT | NT | <40 | >640 | NT |
| N313 | YF/WN107F (P2) | 4,19 | 160 | >640 | >640 | 2560 | 5120 |
| Р367 | YF/WN107F (P2) | 4,19 | <40 | 640 | 640 | 5120 | 2560 |
| Т087 | YF/WN107F (P2) | 4,19 | <40 | 640 | >б40 | 2560 | 1280 |
| АЕ81 | YFAVN107F (P2) | 4,19 | <40 | >640 | 160 | >10240 | >20480 |
| GMTa | 57 | 640 | 453 | 4305 | 4305 | ||
| R918 | YF/WN316V440R (P3) | 4,0 | <40 | 320 | >640 | >1280 | 2560 |
| N577 | YF/WN316V440R (P3) | 4,0 | <40 | >160 | 320 | >1280 | 2560 |
| М233 | YF/WN316V400R (P3) | 4,0 | <40 | >160 | 320 | 640 | 1280 |
| Т757 | YF/WN316V440R (P3) | 4,0 | <40 | 40 | >640 | >1280 | >5120 |
| GMT | 40 | 135 | 453 | 1076 | 2560 | ||
| J729 | YF/WNFVR (P4) | 3,92 | <40 | 320 | 80 | >5120 | >5120 |
| T445 | YF/WNFVR (P4) | 3,92 | 80 | 640 | 160 | 640 | >5120 |
| T086 | YF/WNFVR (P4) | 3,92 | 160 | >320 | >640 | 1280 | >5120 |
| T491 | YF/WNFVR (P4) | 3,92 | 80 | 320 | 160 | 2560 | >5120 |
| GMT | 80 | 381 | 190 | 1280 | 5120 | ||
| aСГЗТ (GMT), среднее геометрическое значение титра; когда конечное значение не определено, при расчете использовали ограничивающий исследование титр (например, >640 принято как 640, и <40 принимали как 40); bНО (NT) = не испытан; с - животное подвергали эвтаназии после развития симптомов, связанных с инфекцией, вызванной вирусом Западного Нила. | |||||||
Claims (20)
1. Генетическая конструкция для стимуляции иммунного ответа против вируса Западного Нила, содержащая последовательности, кодирующие предмембранные и оболочечные белки вируса Западного Нила и капсидные и неструктурные белки вируса желтой лихорадки, где указанные предмембранные или оболочечные белки содержат аттенуирующую мутацию, и где указанная аттенуирующая мутация содержит аминокислотную замену в одном или нескольких положениях, выбранных из группы, состоящей из положений 107, 316 и 440 оболочечного белка вируса Западного Нила.
2. Генетическая конструкция по п.1, где указанная аминокислотная замена находится в положении 107.
3. Генетическая конструкция по п.1, где указанная аминокислотная замена находится в положении 316 и положении 440.
4. Генетическая конструкция по п.1, где указанная аминокислотная замена находится в положениях аминокислот 107, 316 и 440.
5. Генетическая конструкция по п.1, где указанная аминокислотная замена в положении 107 представляет собой замену лейцина на фенилаланин или консервативную аминокислоту.
6. Генетическая конструкция по п.1, где указанная аминокислотная замена в положении 316 представляет собой замену аланина на валин или консервативную аминокислоту.
7. Генетическая конструкция по п.1, где указанная аминокислотная замена в положении 440 представляет собой замену лизина на аргинин или консервативную аминокислоту.
8. Химерный флавивирус, содержащий генетическую конструкцию по п.1, для применения в вакцинации и получения лекарственных средств для вакцинации.
9. Химерный флавивирус по п.8, где указанная аттенуирующая мутация включает аминокислотную замену в одном или нескольких положениях, выбранных из группы, состоящей из положений 107, 316 и 440 оболочечного белка вируса Западного Нила.
10. Химерный флавивирус по п.9, где указанная аминокислотная замена находится в положении 107.
11. Химерный флавивирус по п.9, где указанная аминокислотная замена находится в положении 316 и положении 440.
12. Химерный флавивирус по п.9, где указанная аминокислотная замена находится в положениях аминокислот 107, 316 и 440.
13. Химерный флавивирус по п.9, где указанная аминокислотная замена в положении 107 представляет собой замену лейцина на фенилаланин или консервативную аминокислоту.
14. Химерный флавивирус по п.9, где указанная аминокислотная замена в положении 316 представляет собой замену аланина на валин или консервативную аминокислоту.
15. Химерный флавивирус по п.9, где указанная аминокислотная замена в положении 440 представляет собой замену лизина на аргинин или консервативную аминокислоту.
16. Способ индукции иммунного ответа на вирус Западного Нила у пациента, где указанный способ включает введение пациенту химерного флавивируса по п.8.
17. Способ по п.16, где указанный пациент не инфицирован, но подвергается риску инфицирования вирусом Западного Нила.
18. Способ по п.16, где указанный пациент инфицирован вирусом Западного Нила.
19. Способ получения химерной флавивирусной вакцины, который включает:
(i) введение генетической конструкции по п.1 в клетки;
(ii)сбор вируса из клеток; и
(iii) получение композиции вместе с собранным вирусом для введения в виде вакцины.
(i) введение генетической конструкции по п.1 в клетки;
(ii)сбор вируса из клеток; и
(iii) получение композиции вместе с собранным вирусом для введения в виде вакцины.
20. Применение химерного флавивируса по п.8 для вакцинации против вируса Западного Нила.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US42659202P | 2002-11-15 | 2002-11-15 | |
| US60/426,592 | 2002-11-15 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2005118419A RU2005118419A (ru) | 2006-01-20 |
| RU2376374C2 true RU2376374C2 (ru) | 2009-12-20 |
Family
ID=32326380
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005118419/13A RU2376374C2 (ru) | 2002-11-15 | 2003-11-13 | Вакцина против вируса лихорадки западного нила |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7507415B2 (ru) |
| EP (1) | EP1575979B1 (ru) |
| JP (1) | JP4683926B2 (ru) |
| KR (1) | KR101150584B1 (ru) |
| AT (1) | ATE452900T1 (ru) |
| AU (1) | AU2003290985B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0316346B1 (ru) |
| CA (1) | CA2505942C (ru) |
| DE (1) | DE60330708D1 (ru) |
| ES (1) | ES2337893T3 (ru) |
| HK (1) | HK1083192A1 (ru) |
| IL (2) | IL168584A (ru) |
| MX (1) | MXPA05005140A (ru) |
| RU (1) | RU2376374C2 (ru) |
| WO (1) | WO2004045529A2 (ru) |
| ZA (1) | ZA200503871B (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2788130C2 (ru) * | 2018-04-06 | 2023-01-17 | Санофи Пастер | Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки, адаптированный к росту в клетках vero, и вакцинная композиция, содержащая его |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6962708B1 (en) * | 1997-02-28 | 2005-11-08 | Acambis, Inc. | Chimeric flavivirus vaccines |
| CN1551782A (zh) | 2001-06-01 | 2004-12-01 | ��������ķ������ | 嵌合黄病毒载体 |
| AU2003267937C1 (en) | 2002-01-15 | 2019-08-08 | Sanofi Pasteur Biologics, Llc | Flavivirus vaccines |
| US20050002968A1 (en) * | 2002-01-15 | 2005-01-06 | Monath Thomas P. | Flavivirus vaccines |
| WO2003101397A2 (en) * | 2002-05-31 | 2003-12-11 | Acambis, Inc. | Tetravalent dengue vaccines |
| AU2003263853A1 (en) * | 2002-08-16 | 2004-03-03 | Board Of Regents The University Of Texas System | Compositions and methods related to flavivirus envelope protein domain iii antigens |
| KR101150584B1 (ko) | 2002-11-15 | 2012-06-27 | 사노피 파스테르 바이오로직스 씨오 | 웨스트 나일 바이러스 백신 |
| WO2006029300A2 (en) | 2004-09-09 | 2006-03-16 | Research Development Foundation | Flavivirus variants having phenotypic variation and immunogenic compositions thereof |
| KR101501162B1 (ko) * | 2004-10-20 | 2015-03-16 | 사노피 파스테르 바이오로직스, 엘엘씨 | 일본 뇌염 바이러스 및 웨스트 나일 바이러스에 대한 백신 |
| WO2006068307A1 (ja) | 2004-12-24 | 2006-06-29 | The Research Foundation For Microbial Diseases Of Osaka University | 弱毒日本脳炎ウイルスの遺伝子をバックボーンとして有する弱毒キメラフラビウイルス |
| BRPI0609949A2 (pt) * | 2005-04-24 | 2010-05-11 | Acambis Inc | flavivìrus recombinante, seu uso na preparação de vacina, composição farmacêutica compreendendo o mesmo, molécula de ácido nucléico e método para atenuar candidato a vacina de flavivìrus |
| AU2013204985B2 (en) * | 2005-04-24 | 2016-01-28 | Sanofi Pasteur Biologics, Llc | Recombinant flavivirus vaccines |
| US8017754B2 (en) * | 2005-07-22 | 2011-09-13 | Research Development Foundation | Attenuated virus strains and uses thereof |
| WO2008057550A2 (en) | 2006-11-07 | 2008-05-15 | Sanofi Pasteur Biologics Co. | Stabilization of vaccines by lyophilization |
| CA2671934A1 (en) * | 2006-12-22 | 2008-11-27 | Dow Agrosciences Llc | Plant-made west nile virus (wnv) vaccines, vectors and plant codon optimized sequences |
| JP5689687B2 (ja) | 2008-03-05 | 2015-03-25 | サノフィ・パスツールＳａｎｏｆｉｐａｓｔｅｕｒ | アジュバント含有ワクチン組成物の安定化方法 |
| EP2143440A1 (fr) | 2008-07-09 | 2010-01-13 | Sanofi Pasteur | Agent stabilisant et composition vaccinale comprenant un ou plusieurs flavivirus vivants atténués |
| US8821889B2 (en) * | 2008-08-29 | 2014-09-02 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | West Nile Virus vaccine |
| WO2010085358A2 (en) * | 2009-01-23 | 2010-07-29 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Flaviviruses expressing the prm, e, and ns1 proteins of other flaviviruses and uses thereof |
| WO2011026139A1 (en) * | 2009-08-31 | 2011-03-03 | Gen-Probe Incorporated | Dengue virus assay |
| US10081795B2 (en) * | 2010-03-24 | 2018-09-25 | Research Development Foundation | Flavivirus host range mutations and uses thereof |
| US8889148B2 (en) | 2010-07-01 | 2014-11-18 | Research Development Foundation | Flavivirus host-range mutations and uses thereof |
| AU2012229192B2 (en) | 2011-03-14 | 2017-04-20 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Equine Rhinitis vaccine |
| WO2013138670A1 (en) * | 2012-03-15 | 2013-09-19 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Yellow fever virus ns5 mutants as flavivirus vaccine candidates |
| US9267114B2 (en) * | 2012-11-07 | 2016-02-23 | Southern Research Institute | Flavivirus envelope protein mutations affecting virion disassembly |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2209082C2 (ru) * | 1997-02-28 | 2003-07-27 | Оравакс, Инк. | Химерные флавивирусные вакцины |
Family Cites Families (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6184024B1 (en) * | 1988-07-14 | 2001-02-06 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Chimeric and/or growth-restricted flaviviruses |
| ATE186744T1 (de) | 1991-09-19 | 1999-12-15 | Us Health | Chimäre und/oder wachstumsgehemmte flaviviren |
| US6136561A (en) | 1995-05-24 | 2000-10-24 | Hawaii Biotechnology Group, Inc. | Methods of preparing carboxy-terminally truncated recombinant flavivirus envelope glycoproteins employing drosophila melanogaster expression systems |
| US6962708B1 (en) * | 1997-02-28 | 2005-11-08 | Acambis, Inc. | Chimeric flavivirus vaccines |
| BRPI9701774B8 (pt) * | 1997-04-11 | 2015-09-29 | Fundação Oswaldo Cruz Fiocruz | cdna mutante e infeccioso do vírus da febre amarela, constructo de dna, vírus recombinante de febre amarela e vacina para humanos contra infecções de febre amarela. |
| US6416763B1 (en) | 1998-08-28 | 2002-07-09 | Hawaii Biotechnology Group, Inc. | Recombinant nonstructural protein subunit vaccine against flaviviral infection |
| AU1813901A (en) | 1999-12-01 | 2001-06-12 | Oravax, Inc | Chimeric flavivirus vaccines |
| GB2372991B (en) * | 2001-03-09 | 2004-11-17 | Fiocruz Fundacao Oswaldo Cruz | Flavivirus expression vector |
| CN1551782A (zh) * | 2001-06-01 | 2004-12-01 | ��������ķ������ | 嵌合黄病毒载体 |
| US6682883B1 (en) * | 2001-07-19 | 2004-01-27 | Acambis, Inc. | Diagnosis of flavivirus infection |
| SI1441761T1 (sl) | 2001-10-19 | 2007-08-31 | Acambis Inc | Postopki za preprečevanje in zdravljenje flavivirusne infekcije pri živalih |
| DE20120256U1 (de) * | 2001-12-14 | 2002-03-07 | Häfele GmbH & Co., 72202 Nagold | Beschlag |
| AU2003267937C1 (en) | 2002-01-15 | 2019-08-08 | Sanofi Pasteur Biologics, Llc | Flavivirus vaccines |
| US20050002968A1 (en) | 2002-01-15 | 2005-01-06 | Monath Thomas P. | Flavivirus vaccines |
| WO2003101397A2 (en) | 2002-05-31 | 2003-12-11 | Acambis, Inc. | Tetravalent dengue vaccines |
| KR101150584B1 (ko) | 2002-11-15 | 2012-06-27 | 사노피 파스테르 바이오로직스 씨오 | 웨스트 나일 바이러스 백신 |
| US7189403B2 (en) * | 2003-06-30 | 2007-03-13 | Institut Pasteur | Attenuated flavivirus strains containing a mutated M-ectodomain and their applications |
| WO2005040390A1 (fr) | 2003-07-21 | 2005-05-06 | Shanghai Tengen Biomedical Co., Ltd. | Vaccin recombine utilisant le virus de la fievre jaune comme vecteur |
| WO2005049815A1 (en) | 2003-11-21 | 2005-06-02 | K.U.Leuven Research & Development | Flavivirus replication |
| KR101501162B1 (ko) | 2004-10-20 | 2015-03-16 | 사노피 파스테르 바이오로직스, 엘엘씨 | 일본 뇌염 바이러스 및 웨스트 나일 바이러스에 대한 백신 |
| BRPI0609949A2 (pt) | 2005-04-24 | 2010-05-11 | Acambis Inc | flavivìrus recombinante, seu uso na preparação de vacina, composição farmacêutica compreendendo o mesmo, molécula de ácido nucléico e método para atenuar candidato a vacina de flavivìrus |
| BRPI0504945B8 (pt) | 2005-10-31 | 2022-08-02 | Fundacao Oswaldo Cruz | Método para a produção de flavivirus recombinante contendo sequências de nucleotídeos codificantes de uma proteína heteróloga, constructo de dna, flavivirus, e, composição vacinal para imunizar contra flavivirus e/ou outros patógenos. |
-
2003
- 2003-11-13 KR KR1020057008744A patent/KR101150584B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2003-11-13 BR BRPI0316346A patent/BRPI0316346B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2003-11-13 AT AT03783570T patent/ATE452900T1/de not_active IP Right Cessation
- 2003-11-13 EP EP03783570A patent/EP1575979B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-11-13 WO PCT/US2003/036623 patent/WO2004045529A2/en active Application Filing
- 2003-11-13 AU AU2003290985A patent/AU2003290985B2/en not_active Ceased
- 2003-11-13 JP JP2004553787A patent/JP4683926B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2003-11-13 RU RU2005118419/13A patent/RU2376374C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2003-11-13 MX MXPA05005140A patent/MXPA05005140A/es active IP Right Grant
- 2003-11-13 CA CA2505942A patent/CA2505942C/en not_active Expired - Fee Related
- 2003-11-13 DE DE60330708T patent/DE60330708D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2003-11-13 ES ES03783570T patent/ES2337893T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-11-17 US US10/715,868 patent/US7507415B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2005
- 2005-05-13 ZA ZA200503871A patent/ZA200503871B/en unknown
- 2005-05-15 IL IL168584A patent/IL168584A/en active IP Right Grant
-
2006
- 2006-03-10 HK HK06103120.1A patent/HK1083192A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2009
- 2009-03-23 US US12/409,120 patent/US8088391B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2009-12-27 IL IL202978A patent/IL202978A/en active IP Right Grant
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2209082C2 (ru) * | 1997-02-28 | 2003-07-27 | Оравакс, Инк. | Химерные флавивирусные вакцины |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| MONATH TP, ARROYO J, MILLER С, GUIRAKHOO F. West Nile virus vaccine. Curr Drug Targets Infect Disord. 2001 May; 1(1): 37-50. Review. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2788130C2 (ru) * | 2018-04-06 | 2023-01-17 | Санофи Пастер | Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки, адаптированный к росту в клетках vero, и вакцинная композиция, содержащая его |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2505942A1 (en) | 2004-06-03 |
| JP4683926B2 (ja) | 2011-05-18 |
| BRPI0316346B1 (pt) | 2016-05-31 |
| MXPA05005140A (es) | 2005-08-19 |
| WO2004045529A2 (en) | 2004-06-03 |
| WO2004045529A3 (en) | 2004-08-26 |
| AU2003290985B2 (en) | 2010-04-01 |
| EP1575979A2 (en) | 2005-09-21 |
| ZA200503871B (en) | 2006-08-30 |
| KR101150584B1 (ko) | 2012-06-27 |
| ATE452900T1 (de) | 2010-01-15 |
| EP1575979A4 (en) | 2006-06-21 |
| US20070275015A9 (en) | 2007-11-29 |
| US7507415B2 (en) | 2009-03-24 |
| IL202978A (en) | 2013-11-28 |
| RU2005118419A (ru) | 2006-01-20 |
| BR0316346A (pt) | 2005-09-27 |
| HK1083192A1 (en) | 2006-06-30 |
| CA2505942C (en) | 2012-03-13 |
| ES2337893T3 (es) | 2010-04-30 |
| DE60330708D1 (de) | 2010-02-04 |
| US8088391B2 (en) | 2012-01-03 |
| IL202978A0 (en) | 2011-08-01 |
| IL168584A (en) | 2010-12-30 |
| JP2006506092A (ja) | 2006-02-23 |
| EP1575979B1 (en) | 2009-12-23 |
| AU2003290985A1 (en) | 2004-06-15 |
| KR20050072143A (ko) | 2005-07-08 |
| US20050053624A1 (en) | 2005-03-10 |
| US20100086564A1 (en) | 2010-04-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2376374C2 (ru) | Вакцина против вируса лихорадки западного нила | |
| RU2209082C2 (ru) | Химерные флавивирусные вакцины | |
| JP5227172B2 (ja) | デングウイルス感染に対するワクチン接種 | |
| JP5269796B2 (ja) | ４種のデング血清型に対する免疫付与の方法 | |
| US20180010099A1 (en) | Dengue tetravalent vaccine containing a common 30 nucleotide deletion in the 3'-utr of dengue types 1, 2, 3, and 4, or antigenic chimeric dengue viruses 1, 2, 3, and 4 | |
| EP3290050A1 (en) | Vaccines directed against human enteroviruses | |
| JP5091385B2 (ja) | 弱毒生ワクチン | |
| KR20180137514A (ko) | 어린이 및 젊은 성인에서 뎅기 바이러스에 대한 백신접종 조성물 및 방법 | |
| JPH06511150A (ja) | キメラおよび／または増殖制限されたフラビウイルス | |
| US20150265695A1 (en) | Vaccine compositions for prevention against dengue virus infection | |
| US11638750B2 (en) | Methods for generating a Zikv immune response utilizing a recombinant modified vaccina Ankara vector encoding the NS1 protein | |
| EP3426292A1 (en) | Live attenuated zika virus vaccine | |
| JP2016504315A (ja) | 三価デングウイルス製剤に関する組成物、投与方法および使用 | |
| US20080107685A1 (en) | Live Attenuated Dengue 3 Virus Strains | |
| EP2339011B1 (en) | West Nile virus and Dengue 4 virus chimeras for use in a live virus vaccine to prevent disease caused by west nile virus | |
| US7459163B2 (en) | Infectious DNA as a vaccine against west nile and other flaviviruses | |
| Tang et al. | Development of a novel virus-like particle-based vaccine for preventing tick-borne encephalitis virus infection | |
| MXPA99007949A (es) | Vacunas de flavivirus quimerico | |
| TW201002343A (en) | Flavivirus NS1 subunit vaccine |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD4A | Correction of name of patent owner | ||
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20181114 |