RU2348690C2 - Amur strain no 1987 of asia-1 type murrain virus for antigenic and immunogenic performance control of vaccines and for production of medicines for diagnostics and specific prevention of asia-1 type murrain - Google Patents
Amur strain no 1987 of asia-1 type murrain virus for antigenic and immunogenic performance control of vaccines and for production of medicines for diagnostics and specific prevention of asia-1 type murrain Download PDFInfo
- Publication number
- RU2348690C2 RU2348690C2 RU2007112591/13A RU2007112591A RU2348690C2 RU 2348690 C2 RU2348690 C2 RU 2348690C2 RU 2007112591/13 A RU2007112591/13 A RU 2007112591/13A RU 2007112591 A RU2007112591 A RU 2007112591A RU 2348690 C2 RU2348690 C2 RU 2348690C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- asia
- virus
- type
- strain
- foot
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 76
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 73
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 title claims abstract description 37
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 title claims abstract description 30
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 title abstract description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title abstract description 9
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 claims description 82
- 208000007212 Foot-and-Mouth Disease Diseases 0.000 claims description 40
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 9
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 4
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 claims description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 33
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 26
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 25
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 22
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 22
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 22
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 16
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 16
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 16
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 12
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 12
- 239000000463 material Substances 0.000 description 12
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 12
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 11
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 8
- 241000144531 Foot-and-mouth disease virus - type Asia 1 Species 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 5
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 5
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 5
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 4
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 101150024766 VP1 gene Proteins 0.000 description 3
- 208000002399 aphthous stomatitis Diseases 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 3
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 3
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 3
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 3
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 2
- 241001573881 Corolla Species 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001493546 Suina Species 0.000 description 2
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 2
- -1 freon Chemical compound 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 2
- 210000002414 leg Anatomy 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 description 2
- 101710194905 ARF GTPase-activating protein GIT1 Proteins 0.000 description 1
- 241000710189 Aphthovirus Species 0.000 description 1
- 102100031974 CMP-N-acetylneuraminate-beta-galactosamide-alpha-2,3-sialyltransferase 4 Human genes 0.000 description 1
- 241001250090 Capra ibex Species 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100035959 Cationic amino acid transporter 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100021391 Cationic amino acid transporter 3 Human genes 0.000 description 1
- 241000252254 Catostomidae Species 0.000 description 1
- 208000010711 Cattle disease Diseases 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 102100029217 High affinity cationic amino acid transporter 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710081758 High affinity cationic amino acid transporter 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000703754 Homo sapiens CMP-N-acetylneuraminate-beta-galactosamide-alpha-2,3-sialyltransferase 4 Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 108091006231 SLC7A2 Proteins 0.000 description 1
- 108091006230 SLC7A3 Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 101710140501 Sulfate adenylyltransferase subunit 2 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710173681 Sulfate adenylyltransferase subunit 2 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100030100 Sulfate anion transporter 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710144481 Sulfate anion transporter 1 Proteins 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000680 avirulence Effects 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- WMWXXXSCZVGQAR-UHFFFAOYSA-N dialuminum;oxygen(2-);hydrate Chemical compound O.[O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] WMWXXXSCZVGQAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- BTWUORFYKAZQHW-UHFFFAOYSA-L disodium;2-hydroxy-3-[4-[4-[(2-hydroxy-3-sulfonatopropyl)amino]-3-methylphenyl]-2-methylanilino]propane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].C1=C(NCC(O)CS([O-])(=O)=O)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(NCC(O)CS([O-])(=O)=O)=CC=2)=C1 BTWUORFYKAZQHW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 238000005189 flocculation Methods 0.000 description 1
- 230000016615 flocculation Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 210000004777 protein coat Anatomy 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 102220201851 rs143406017 Human genes 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 210000004761 scalp Anatomy 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 208000003265 stomatitis Diseases 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 description 1
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 208000005925 vesicular stomatitis Diseases 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, в частности к штаммам вируса ящура, которые могут быть использованы для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин и в качестве продуцентов специфических антигенов при изготовлении диагностических и вакцинных препаратов.The invention relates to the field of veterinary virology and biotechnology, in particular to foot and mouth disease virus strains that can be used to control the antigenic and immunogenic activity of vaccines and as producers of specific antigens in the manufacture of diagnostic and vaccine preparations.
Ящур - это острое контагиозное вирусное заболевание парнокопытных животных, проявляющееся лихорадкой, везикулярными (афтозными) поражениями слизистой оболочки ротовой полости, бесшерстных участков кожи головы, вымени, венчика, межкопытной щели и сопровождающееся нарушением движения. Для этого возбудителя характерна тенденция к широкому распространению и эпизоотическому течению. Болезнь сопровождается большими потерями молока, мяса и других видов животноводческой продукции, затрудняет коммерческие операции и хозяйственную деятельность. Многолетний опыт показывает, что при эндемичном ящуре снижаются доходы в молочном и мясном животноводстве на 35-40%.Foot and mouth disease is an acute contagious viral disease of artiodactyl animals, manifested by fever, vesicular (aphthous) lesions of the mucous membrane of the oral cavity, hairless areas of the scalp, udder, corolla, and inter-hoof gap and accompanied by impaired movement. This pathogen is characterized by a tendency to widespread and epizootic course. The disease is accompanied by large losses of milk, meat and other types of livestock products, complicates commercial operations and economic activity. Years of experience show that with endemic foot and mouth disease, revenues in dairy and beef cattle breeding are reduced by 35-40%.
Вирус ящура относится к роду афтовирусов, семейству пикорнавирусов. Он имеет 7 антигенных типов и значительное количество подтипов (1, 2).The foot and mouth disease virus belongs to the genus of aphthoviruses, the family of picornaviruses. It has 7 antigenic types and a significant number of subtypes (1, 2).
Возбудитель ящура обладает значительной антигенной вариабельностью штаммов в пределах одного серотипа, которая выявляется в различные временные промежутки и на разных территориях и зависит от видового состава восприимчивого поголовья, его иммунного статуса и множества других различных факторов. Антигенная изменчивость вируса ящура обусловлена заменами аминокислот в полипептидных фрагментах (антигенных эпитопах), экспонированных на поверхности капсидных белков.The causative agent of foot and mouth disease has significant antigenic variability of strains within the same serotype, which is detected at different time intervals and in different territories and depends on the species composition of the susceptible population, its immune status and many other various factors. The antigenic variability of foot and mouth disease virus is caused by amino acid substitutions in polypeptide fragments (antigenic epitopes) exposed on the surface of capsid proteins.
Сдвиги антигенного спектра, соответствующие обновлению структуры нового полевого штамма, могут варьировать от незначительных, улавливаемых моноклональными антителами, до существенных, регистрируемых с помощью традиционных поликлональных иммуноглобулинов. Существенные изменения антигенных характеристик природного штамма с большой вероятностью вызывают ослабление специфического иммунитета, индуцированного негомологичным антигеном. Они вызывают также затруднения штаммоспецифической диагностики (2, 3).The shifts of the antigenic spectrum corresponding to the renewal of the structure of a new field strain can vary from insignificant ones captured by monoclonal antibodies to significant ones recorded using traditional polyclonal immunoglobulins. Significant changes in the antigenic characteristics of a natural strain are very likely to weaken specific immunity induced by a non-homologous antigen. They also cause difficulties in strain-specific diagnosis (2, 3).
В результате возникает необходимость создания новых средств диагностики и специфической иммунопрофилактики.As a result, there is a need to create new diagnostic tools and specific immunoprophylaxis.
Известны штаммы вируса ящура типа Азия-1, которые регистрировались на территории СССР: в Армении в 1973 и 1984 г., в Таджикистане в 1974 г., в Туркмении в 1978 г. и в Грузии в 1984 и 2000 г., при этом изоляты, выделенные в этих регионах, значительно отличались от производственного штамма Азия-1 №48 вируса ящура серологического типа Азия-1 (R составляло 38-58%).There are known strains of foot and mouth disease virus of type Asia-1, which were recorded on the territory of the USSR: in Armenia in 1973 and 1984, in Tajikistan in 1974, in Turkmenistan in 1978 and in Georgia in 1984 and 2000, with isolates isolated in these regions differed significantly from the production strain of Asia-1 No. 48 virus of foot-and-mouth disease of the serological type Asia-1 (R was 38-58%).
Штамм Азия-1 №48 был выделен в феврале 1964 года на территории Московского района Таджикской ССР. Адаптирован к организму мышат-сосунов, 1-2-дневных крольчат и морских свинок, к культуре клеток СП в течение 10-12 пассажей и накапливался в титре 7,5 lg ЛД50/см3; 7,0-8,0 lg ЛД50/см3; 5,0 lg ИД50/см3 и 5,0-6,0 lg ТЦД50/см3 соответственно. По антигенному спектру этот штамм отличался от эталонных вариантов этого типа «Пакистан» 1/14 и «Израиль» 3/63. Указанный штамм используется для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа Азия-1, применяемых на территории Российской Федерации и стран СНГ (4).Strain Asia-1 No. 48 was isolated in February 1964 in the Moscow region of the Tajik SSR. Adapted to the body of mouse suckers, 1-2-day-old rabbits and guinea pigs, to the culture of SP cells for 10-12 passages and accumulated in the titer of 7.5 lg LD 50 / cm 3 ; 7.0-8.0 lg LD 50 / cm 3 ; 5.0 lg ID 50 / cm 3 and 5.0-6.0 lg TCD 50 / cm 3, respectively. According to the antigenic spectrum, this strain differed from the reference variants of this type “Pakistan” 1/14 and “Israel” 3/63. The indicated strain is used to control the antigenic and immunogenic activity of vaccines and for the manufacture of biological products for the diagnosis and specific prevention of foot and mouth disease type Asia-1, used in the Russian Federation and the CIS countries (4).
Наиболее близким предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является штамм №1737/Грузия/2000 вируса ящура типа Азия-1, выделенный в июле 2000 года в Богдановском районе Республики Грузия от больного крупного рогатого скота (КРС) и полученный в качестве производственного путем пассирования изолята на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток. Штамм Азия-1 №1737/Грузия/2000 имеет антигенные отличия от производственного штамма Азия-1 №48. В реакции связывания комплемента по 100% гемолизу R составило 32%.The closest to the invention according to the set of essential features is the strain No. 1737 / Georgia / 2000 of foot and mouth disease type Asia-1, isolated in July 2000 in the Bogdanovsky region of the Republic of Georgia from a sick cattle (cattle) and obtained as a production by passage of the isolate on sensitive hetero- and homologous cell cultures. Strain Asia-1 No. 1737 / Georgia / 2000 has antigenic differences from the production strain Asia-1 No. 48. In the complement fixation reaction, 100% hemolysis R was 32%.
Полученный штамм депонирован 26.01.2001 г. в коллекции штаммов микроорганизмов ФГУ «ВГНКИ» под регистрационным наименованием: штамм вируса ящура серологического типа Азия-1 №1737/Грузия/2000-ДЕП (5).The resulting strain was deposited on January 26, 2001 in the collection of microorganism strains of the Federal State Institution “VGNKI” under the registration name: strain of foot and mouth disease virus of serological type Asia-1 No. 1737 / Georgia / 2000-DEP (5).
Штамм №1737/Грузия/2000 вируса ящура типа Азия-1 используется для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа Азия-1.Strain No. 1737 / Georgia / 2000 of the Asia-1 foot-and-mouth disease virus is used to control the antigenic and immunogenic activity of vaccines and for the manufacture of biological products for the diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease type Asia-1.
Недостатки вышеуказанных штаммов, в том числе и прототипа, состоят в том, что приготовленные на их основе вакцины обеспечивают эффективную защиту животных только от заражения гомологичным вирусом.The disadvantages of the above strains, including the prototype, are that vaccines prepared on their basis provide effective protection of animals only from infection with a homologous virus.
В последние годы на территории некоторых государств Среднего и Ближнего Востока, Центральной и Средней Азии и Закавказья были зарегистрированы вспышки ящура, вызванные штаммами вируса, отличающимися от производственного штамма Азия-1 №48 по показателям серологического родства.In recent years, outbreaks of foot and mouth disease caused by virus strains differing from production strain Asia-1 No. 48 in terms of serological kinship have been recorded in some countries of the Middle and Near East, Central and Central Asia and the Caucasus.
В 1999 году ящур типа Азия-1 был обнаружен в Иране и Турции, в 2000-2004 г.был занесен в страны Закавказья - Грузию, Армению и Азербайджан; Средней Азии - Таджикистан и Киргизию.In 1999, foot-and-mouth disease type Asia-1 was found in Iran and Turkey; in 2000-2004, it was brought to the countries of the Caucasus - Georgia, Armenia and Azerbaijan; Central Asia - Tajikistan and Kyrgyzstan.
В июне 2005 года очаг ящура был зарегистрирован в Амурской области Российской Федерации. Лабораторными исследованиями в ФГУ «ВНИИЗЖ» в патологическом материале от КРС был выявлен вирус ящура экзотического для России типа Азия-1. В дальнейшем вспышки ящура, вызванные вирусом данного типа, возникли в Хабаровском, Приморском краях и Читинской области Российской Федерации.In June 2005, the outbreak of foot and mouth disease was recorded in the Amur Region of the Russian Federation. Laboratory studies at the Federal State Institution "ARRIAH" in pathological material from cattle revealed the foot and mouth disease virus exotic for Russia, type Asia-1. Subsequently, outbreaks of foot and mouth disease caused by a virus of this type arose in the Khabarovsk, Primorsky Territories and the Chita Region of the Russian Federation.
Вакцина из производственного штамма вируса ящура типа Азия-1 №48, применяемая на территории России в плановом порядке с профилактической и вынужденной целью, не обеспечивала удовлетворительную защиту иммунизированных животных и не предотвращала распространение ящура. Это свидетельствовало о несоответствии используемых средств специфической профилактики и диагностики ящура типа Азия-1, используемых Россией и странами СНГ, эпизоотическому вирусу, циркулирующему на территории России в 2005 году.The vaccine from the production strain of foot and mouth disease virus type Asia-1 No. 48, used in Russia in a planned manner for preventive and compulsory purposes, did not provide satisfactory protection for immunized animals and did not prevent the spread of foot and mouth disease. This testified to the inconsistency of the means used for specific prophylaxis and diagnosis of foot and mouth disease type Asia-1, used by Russia and the CIS countries, to the epizootic virus circulating in Russia in 2005.
В связи с этим возникла необходимость получить новый производственный штамм из эпизоотического вируса ящура серотипа Азия-1 для обеспечения безопасности территории России и сопредельных государств от этого возбудителя.In this regard, it became necessary to obtain a new production strain from the epizootic virus of foot and mouth disease of serotype Asia-1 to ensure the safety of the territory of Russia and neighboring states from this pathogen.
Задача, на решение которой направлено настоящее изобретение, заключается в расширении арсенала производственных штаммов вируса ящура серотипа Азия-1, обладающих высокой инфекционной, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и сохраняющих антигенную и иммуногенную активность после инактивации, пригодных для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин, изготовления чувствительных и высокоспецифичных диагностикумов и высокоиммуногенных вакцинных препаратов, гомологичных эпизоотическому вирусу, появившемуся на территории России.The problem to which the present invention is directed, is to expand the arsenal of production strains of foot and mouth disease virus serotype Asia-1, which have high infectious, antigenic and immunogenic activity in their native form and retain antigenic and immunogenic activity after inactivation, suitable for controlling antigenic and immunogenic activity of vaccines , the manufacture of sensitive and highly specific diagnostics and highly immunogenic vaccine preparations homologous to the epizootic virus that appeared on the territory of Russia.
Указанная задача решена получением штамма «Амурский» №1987 (авторское наименование) вируса ящура типа Азия-1 для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин и изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа Азия-1.This problem was solved by obtaining the Amursky strain No. 1987 (copyright) of foot and mouth disease virus of type Asia-1 to control the antigenic and immunogenic activity of vaccines and the manufacture of biological products for the diagnosis and specific prevention of foot and mouth disease type Asia-1.
Вирусный изолят, послуживший источником для получения штамма «Амурский» №1987, был выделен в июне 2005 года от больных коров села Буссе Свободненского района Амурской области (экспертиза №1987/05 «Амурский»). Производственный штамм «Амурский» №1987 вируса ящура типа Азия-1 получен путем последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток.The viral isolate, which served as the source for the Amursky strain No. 1987, was isolated in June 2005 from sick cows in the village of Busse, Svobodnensky District, Amur Region (examination No. 1987/05 Amursky). Production strain Amur No. 1987 of the Asia-1 foot and mouth disease virus was obtained by successive passages on sensitive hetero- and homologous cell cultures.
Штамм «Амурский» №1987 вируса ящура типа Азия-1 депонирован 16 мая 2006 года во Всероссийскую государственную коллекцию штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, Федерального государственного учреждения «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ») под регистрационным номером (ссылкой): производственный штамм «Амурский» №1987-ДЕП вируса ящура типа Азия-1.The Amursky strain No. 1987 of the Asia-1 foot-and-mouth disease virus was deposited on May 16, 2006 at the All-Russian State Collection of Microorganism Strains Used in Veterinary and Animal Husbandry, of the Federal State Institution All-Russian State Center for the Quality and Standardization of Medicines for Animals and Feed (FGU “ VGNKI ”) under the registration number (link): production strain Amursky No. 1987-DEPT of foot and mouth disease virus type Asia-1.
Экспериментально подтверждена возможность использования штамма «Амурский» №1987 вируса ящура типа Азия-1 для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа Азия-1.The possibility of using the Amursky strain No. 1987 of the Asia-1 foot and mouth disease virus to control the antigenic and immunogenic activity of vaccines and for the manufacture of biological products for the diagnosis and specific prevention of foot and mouth disease of type Asia-1 has been experimentally confirmed.
Штамм «Амурский» №1987 вируса ящура типа Азия-1 обеспечивает получение диагностических препаратов, позволяющих проводить серологическую диагностику изолятов вируса ящура типа Азия-1, вызывающих вспышки заболевания в последние годы в России и Монголии, и противоящурной инактивированной вакцины, создающей защиту восприимчивых животных против указанного возбудителя заболевания, а также осуществление контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин.The Amursky strain No. 1987 of the Asia-1 foot-and-mouth disease virus provides diagnostic preparations for serological diagnosis of foot-and-mouth disease isolates of the type Asia-1, causing outbreaks of the disease in recent years in Russia and Mongolia, and the FMD inactivated vaccine that protects susceptible animals against the specified pathogen, as well as monitoring the antigenic and immunogenic activity of vaccines.
Сущность изобретения пояснена на графическом изображении, на котором представлена дендрограмма, отражающая филогенетические взаимоотношения штамма «Амурский» №1987 вируса ящура типа Азия-1 с известными изолятами вируса ящура типа Азия-1 и основанная на сравнении полных последовательностей нуклеотидов гена VP1, а также в перечне последовательностей, в котором:The invention is illustrated in a graphical depiction of a dendrogram reflecting the phylogenetic relationships of Amursky strain No. 1987 of the Asia-1 foot and mouth disease virus with known Asia-1 foot and mouth disease virus isolates and based on a comparison of the complete nucleotide sequences of the VP1 gene, as well as in the list sequences in which:
SEQ ID NO:1 представляет последовательность нуклеотидов гена VP1 штамма «Амурский» №1987 вируса ящура типа Азия-1;SEQ ID NO: 1 represents the nucleotide sequence of the VP1 gene of Amursky strain No. 1987 of foot and mouth disease virus of type Asia-1;
SEQ ID NO:2 - последовательность аминокислот VP1 штамма «Амурский» №1987 вируса ящура типа Азия-1.SEQ ID NO: 2 — amino acid sequence VP1 of Amursky strain No. 1987 of foot-and-mouth disease virus of type Asia-1.
Штамм «Амурский» №1987 вируса ящура типа Азия-1 характеризуется следующими признаками и свойствами.The strain "Amur" No. 1987 virus of foot and mouth disease type Asia-1 is characterized by the following features and properties.
Морфологические свойстваMorphological properties
Штамм «Амурский» №1987 вируса ящура типа Азия-1 относится к семейству Picornaviridae, роду Aphtovirus, серотипу Азия-1 и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона икосаэдрическая, размер 23-25 нм. Вирион состоит из молекулы РНК, заключенной в белковую оболочку. Белковая оболочка состоит из 32 капсомеров, расположенных в кубической симметрии.Strain "Amur" No. 1987 of the foot and mouth disease virus of type Asia-1 belongs to the family Picornaviridae, genus Aphtovirus, serotype Asia-1 and has morphological characteristics characteristic of the causative agent of foot and mouth disease: the form of the virion is icosahedral, size 23-25 nm. Virion consists of an RNA molecule enclosed in a protein coat. The protein shell consists of 32 capsomeres arranged in cubic symmetry.
Антигенные свойстваAntigenic properties
По своим антигенным свойствам штамм «Амурский» №1987 вируса ящура относится к серотипу Азия-1. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности (ГА-активности). У переболевших животных в сыворотках крови образуются антитела, выявляемые в реакции диффузионной преципитации (РДП), иммуноферментном анализе (ИФА) и реакции нейтрализации (РН). При иммунизации КРС вакцина из инактивированного вируса штамма «Амурский» №1987 индуцирует образование специфических антител, выявляемых в ИФА, РДП и РН.According to its antigenic properties, the Amursky strain No. 1987 of the FMD virus belongs to the Asia-1 serotype. The virus is stably neutralized by homologous antiserum. The virus does not show hemagglutinating activity (GA activity). In sick animals, antibodies are formed in the blood serum that are detected in the diffusion precipitation (RDP) reaction, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and neutralization reaction (PH). When cattle are immunized, the vaccine from the inactivated virus of the Amursky strain No. 1987 induces the formation of specific antibodies detected in ELISA, RDP, and pH.
При гипериммунизации морских свинок концентрированный антиген из инактивированного вируса ящура типа Азия-1 штамма «Амурский» №1987 индуцирует образование вирусспецифических антител, выявляемых в реакции связывания комплемента (РСК) в разведениях 1:128-1:180 и в ИФА в разведениях 1:12000-1:48000.During hyperimmunization of guinea pigs, a concentrated antigen from inactivated foot-and-mouth disease virus of type Asia-1 of Amur strain No. 1987 induces the formation of virus-specific antibodies detected in the complement binding reaction (CSC) in dilutions of 1: 128-1: 180 and in ELISA in dilutions of 1: 12000 -1: 48000.
Методом нуклеотидного секвенирования была определена первичная структура гена VP1 (SEQ ID NO:1) вируса ящура типа Азия-1 штамма «Амурский» №1987 и выведена первичная структура белка VP1 (SEQ ID NO:2). Сравнительный анализ установленных последовательностей показал, что штамм «Амурский» №1987 вируса ящура типа Азия-1 наряду с выделенными в 2005 году изолятами №1993/Хабаровский, №1994/Приморский, №1991/Монголия и изолятами этого типа, вызвавшими вспышки ящура в Китае, имеет близкое филогенетическое родство со штаммами Азия-1/Индия/18/80 и Азия-1/Индия/15/81 (процент нуклеотидных различий 1,42-1,74) и значительно отличается от вакцинных штаммов Азия-1 №48 и Азия-1/Шамир3/89. Кроме того, он отличается от штаммов вируса этого типа, выделенных в 2004 г. в Таджикистане и Пакистане и в 2005 г. в Гонконге. Степень нуклеотидных отличий последовательностей штамма «Амурский» №1987 вируса ящура типа Азия-1 со штаммами вируса ящура типа Азия-1 №48 составила 11,55%, Азия-1/Шамир3/89 - 14,45%, Азия-1/Иран/58/99 - 15,38% (см. дендрограмму).Using the method of nucleotide sequencing, the primary structure of the VP1 gene (SEQ ID NO: 1) of foot and mouth disease virus of type Asia-1 of Amur strain No. 1987 was determined and the primary structure of the VP1 protein (SEQ ID NO: 2) was derived. A comparative analysis of the established sequences showed that the Amursky strain No. 1987 of the Asia-1 foot and mouth disease virus along with isolates No. 1993 / Khabarovsky, No. 1994 / Primorsky, No. 199 / Mongolia and isolates of this type, which caused outbreaks of foot and mouth disease in China, isolated in 2005 , has a close phylogenetic relationship with strains Asia-1 / India / 18/80 and Asia-1 / India / 15/81 (the percentage of nucleotide differences 1.42-1.74) and significantly differs from vaccine strains Asia-1 No. 48 and Asia-1 / Shamir 3/89. In addition, it differs from strains of the virus of this type isolated in 2004 in Tajikistan and Pakistan and in 2005 in Hong Kong. The degree of nucleotide differences in the sequences of the Amursky strain No. 1987 of the foot-and-mouth disease virus of type Asia-1 with the strains of foot-and-mouth disease type Asia-1 No. 48 was 11.55%, Asia-1 / Shamir3 / 89 - 14.45%, Asia-1 / Iran / 58/99 - 15.38% (see dendrogram).
Таким образом, филогенетический анализ показал, что штамм «Амурский» №1987 вируса ящура типа Азия-1 принадлежит к новой генетической линии вируса ящура серологического типа Азия-1.Thus, phylogenetic analysis showed that the Amursky strain No. 1987 of the foot and mouth disease virus of type Asia-1 belongs to the new genetic line of the foot and mouth disease virus of the serological type Asia-1.
Антигенное родство штамма «Амурский» №1987 с производственным штаммом вируса ящура типа Азия-1 №48 и штаммами, ранее выделенными на Азиатском континенте и в Закавказье, изучено в РСК. Результаты этих исследований представлены в таблице 1.The antigenic relationship of the Amursky strain No. 1987 with the production of the foot-and-mouth disease virus type Asia-1 No. 48 and the strains previously isolated on the Asian continent and in the Caucasus was studied in the RSK. The results of these studies are presented in table 1.
Как свидетельствуют данные, представленные в таблице 1, штамм «Амурский» №1987 вируса ящура типа Азия-1 отличается как от производственных штаммов Азия-1 №48 (R=26%), Азия-1/Шамир3/89 (R=17%), Азия-1/Иран 58/99 (R=23%), так и от ранее выделенных эпизоотических штаммов.According to the data presented in table 1, the Amursky strain No. 1987 of the foot and mouth disease virus of type Asia-1 differs from the production strains of Asia-1 No. 48 (R = 26%), Asia-1 / Shamir 3/89 (R = 17% ), Asia-1 / Iran 58/99 (R = 23%), as well as from previously isolated epizootic strains.
Биотехнологические характеристикиBiotechnological characteristics
Штамм «Амурский» №1987 репродуцируется в монослойных культурах клеток почки свиньи (СП), перевиваемых культурах клеток почки сибирского горного козерога (ПСГК-30), ВНК-21 и IB-RS-2 и в течение 18-24 часов инкубирования урожай вируса в указанных культурах клеток достигает значений от 6,0 до 7,5 lg ТЦД50/см3. При высокой множественности заражения (1-10 ТЦД/клетка) вызывает ЦПД через 5 часов. Сохраняет исходные характеристики при пассировании в клеточных культурах на протяжении 10 пассажей (срок наблюдения).Amursky strain No. 1987 is reproduced in monolayer cultures of pig kidney cells (SP), transplanted cultures of kidney cells of the Siberian mountain ibex (PSGK-30), BHK-21 and IB-RS-2, and during 18-24 hours of incubation the virus harvest in these cell cultures reaches values from 6.0 to 7.5 lg TCD 50 / cm 3 . With a high multiplicity of infection (1-10 TCD / cell), it causes CPD after 5 hours. It retains its original characteristics when passaged in cell cultures for 10 passages (observation period).
Хемо- и генотаксономическая характеристикаChemo- and genotaxonomic characterization
Штамм «Амурский» №1987 вируса ящура типа Азия-1 является РНК-содержащим вирусом с мол. массой 7×106Д.The strain "Amur" No. 1987 virus of foot and mouth disease type Asia-1 is an RNA-containing virus with mol. weighing 7 × 10 6 D.
Нуклеиновая кислота представлена одноцепочной линейной молекулой мол. массой 2,8×106Д. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую из четырех основных белков VP1, VP2, VP3 и VP4. Липопротеидная оболочка отсутствует.Nucleic acid is represented by a single-chain linear mole molecule. weighing 2.8 × 10 6 D. Virion has a protein shell consisting of four main proteins VP1, VP2, VP3 and VP4. The lipoprotein membrane is absent.
Основным антигенным белком является VP1. В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка. Вирионная РНК является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники, в свою очередь, расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса. Из 8 неструктурных полипептидов, накапливающихся в инфицированных клетках, один (VP66а) является РНК-зависимой РНК-полимеразой, участвующей в репликации РНК новых вирионов.The main antigenic protein is VP1. The virion contains approximately 31.5% RNA and 68.5% protein. Virionic RNA is infectious and is involved in the formation of precursor proteins in infected cells. The precursors, in turn, are cleaved to form more stable structural and non-structural virus polypeptides. Of the 8 non-structural polypeptides that accumulate in infected cells, one (VP 66a ) is an RNA-dependent RNA polymerase involved in RNA replication of new virions.
Физические свойстваPhysical properties
Масса вириона составляет 8,4×10-18 г. Коэффициент седиментации 146S в градиенте сахарозы. Плавучая плотность 1,45 г/см3.The virion mass is 8.4 × 10 −18 g. A sedimentation coefficient of 146S in the sucrose gradient. The floating density of 1.45 g / cm 3 .
Устойчивость к внешним факторамResistance to external factors
Штамм «Амурский» №1987 устойчив к эфиру, хлороформу, фреону, ацетону и другим органическим растворителям и детергентам. Наиболее стабилен при рН 7,2-7,6. Сдвиги рН как в кислую, так и в щелочную сторону ведут к инактивации вируса. Чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, Y-облучению, высоким температурам.Strain Amursky No. 1987 is resistant to ether, chloroform, freon, acetone and other organic solvents and detergents. Most stable at pH 7.2-7.6. PH shifts to both the acidic and alkaline sides lead to inactivation of the virus. It is sensitive to formaldehyde, UV radiation, Y-radiation, high temperatures.
Дополнительные признаки и свойстваAdditional features and properties
Иммуногенная активность - иммуноген в составе инактивированной вакцины.Immunogenic activity - an immunogen in the composition of an inactivated vaccine.
Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.Reactogenicity - does not possess reactogenic properties.
Патогенность - патогенен для парнокопытных животных, новорожденных мышат, морских свинок.Pathogenicity - pathogenic for artiodactyl animals, newborn mice, guinea pigs.
Вирулентность - вирулентен для естественно-восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.Virulence - virulence for naturally susceptible animals with contact, aerosol and parenteral infection.
Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 10 пассажей (срок наблюдения).Stability - retains the original biological properties when passaged in sensitive biological systems for 10 passages (observation period).
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.The essence of the invention is illustrated by examples of its use, which do not limit the scope of the invention.
Пример 1Example 1
Вирусный изолят, послуживший источником для получения штамма «Амурский» №1987, был выделен в ФГУ «ВНИИЗЖ» из проб афтозного материала, полученных в июне 2005 года от подозреваемого в заболевании ящуром КРС села Буссе Свободненского района Амурской области (экспертиза №1987/05 «Амурский»). Пробы афтозного материала поступили в ФГУ «ВНИИЗЖ» 12 июня 2005 года.The viral isolate, which served as the source for obtaining the Amursky strain No. 1987, was isolated at the Federal State Institution VNIIZZh from samples of aphthous material obtained in June 2005 from a cattle disease case, suspected of foot and mouth disease, in the village of Busse, Svobodnensky District, Amur Region (examination No. 1987/05 Amur "). Samples of aphthous material were received at the Federal State Institution “ARRIAH” on June 12, 2005.
При выделении вируса с целью получения его однородной популяции, обладающей оптимальными биотехнологическими свойствами, использовали комплекс биологических, вирусологических и биохимических методов, предусмотренных методическими указаниями по выявлению и идентификации штаммов вируса ящура (6).When isolating a virus in order to obtain a homogeneous population with optimal biotechnological properties, we used a complex of biological, virological, and biochemical methods provided by guidelines for identifying and identifying FMD virus strains (6).
Биологические и вирусологические методы включали инокуляцию материала полевого изолята КРС (1 пассаж) и последующую адаптацию вируса к культурам первично-трипсинизированных и перевиваемых линий клеток. Были использованы культуры клеток СП, ПСГК-30, IB-RS-2 и ВПК-21. Для постановки биопробы первичные и перевиваемые культуры клеток выращивали на соответствующих питательных средах в стационарных условиях во флаконах емкостью 50-100 см3, отмывали от ростовой среды и заражали 10% суспензией афтозного материала (множественность заражения составляла 1-10 ТЦД50 на клетку), приготовленной в растворе Хенкса с 0,5% гидролизата лактальбумина (ГЛА) и антибиотиками по стандартной рецептуре. Для удаления микрофлоры и балластных клеточных компонентов суспензию обрабатывали 10% хлороформа. После 30-минутного контакта при 37°С во флаконы вносили по 5-10 см3 поддерживающей среды и инкубировали при 37°С до появления ЦПД вируса. При наличии ЦПД (округление клеток, повышение их оптической плотности, дегенерация и отделение клеток от стекла) флаконы подвергали замораживанию-оттаиванию, очистке клеточной взвеси хлороформом и центрифугированию при 3000 g в течение 15 мин. Полученный вируссодержащий материал использовали для последующих пассажей и исследования в РСК на наличие вирусного антигена, при этом использовали набор коммерческих типоспецифических сывороток, хранящихся в музее штаммов ФГУ «ВНИИЗЖ». Вирус считался адаптированным к культурам клеток, если в течение 18-24 часов проявлялось 90-100% ЦПД в монослое. Адаптация эпизоотического изолята №1987/05 «Амурский» к различным клеточным линиям наступала на уровне 3-5 пассажа. Вирус, адаптированный к культуре клеток ПСГК-30, был использован для получения вируса для изготовления экспериментальной серии вакцины и получения гипериммунных сывороток морских свинок.Biological and virological methods included inoculation of cattle field isolate material (1 passage) and subsequent adaptation of the virus to cultures of primary trypsinized and transplanted cell lines. Cell cultures of SP, PSGK-30, IB-RS-2 and VPK-21 were used. For bioassay, primary and transplantable cell cultures were grown on appropriate nutrient media under stationary conditions in 50-100 cm 3 vials, washed from the growth medium and infected with a 10% suspension of aphthous material (infection multiplicity was 1-10 TCD 50 per cell) prepared in Hanks solution with 0.5% lactalbumin hydrolyzate (GLA) and antibiotics according to the standard formulation. To remove microflora and ballast cell components, the suspension was treated with 10% chloroform. After 30 minutes of contact at 37 ° C, 5-10 cm 3 of the supporting medium were introduced into the vials and incubated at 37 ° C until the appearance of the virus CPD. In the presence of CPD (rounding of cells, increasing their optical density, degeneration and separation of cells from glass), the bottles were subjected to freezing, thawing, purification of the cell suspension with chloroform and centrifugation at 3000 g for 15 min. The obtained virus-containing material was used for subsequent passages and studies in the CSC for the presence of a viral antigen, and a set of commercial type-specific sera stored in the museum of strains of the Federal State Institution VNIIZZh was used. The virus was considered adapted to cell cultures if 90-100% of the CPD in the monolayer appeared within 18-24 hours. Adaptation of the epizootic isolate No. 1987/05 Amursky to various cell lines occurred at the level of passage 3-5. A virus adapted to PSGK-30 cell culture was used to obtain the virus for the manufacture of an experimental vaccine series and for the production of hyperimmune guinea pig sera.
Результаты адаптации вируса к различным клеточным культурам представлены в таблице 2.The results of the adaptation of the virus to various cell cultures are presented in table 2.
Данные, приведенные в таблице 2, свидетельствуют о хорошей адаптационной активности штамма «Амурский» №1987 вируса ящура типа Азия-1 к использованным клеточным культурам.The data shown in table 2 indicate a good adaptive activity of the Amursky strain No. 1987 of foot and mouth disease virus of type Asia-1 to the used cell cultures.
Изолированный с помощью перечисленных методов вирусный препарат был исследован РСК с набором диагностикумов на все типы вируса ящура и везикулярного стоматита с целью идентификации типовой принадлежности и контроля на чистоту. Результаты типирования вируса в РСК представлены в таблице 3.An isolated viral preparation isolated using the above methods was studied by CSC with a set of diagnostics for all types of foot-and-mouth disease virus and vesicular stomatitis in order to identify the type of accessory and control for purity. The results of typing the virus in CSCs are presented in table 3.
Приведенные в таблице 3 результаты свидетельствуют о том, что в афтозном материале экспертизы №1987 выявлен комплементсвязывающий антиген вируса ящура типа Азия-1 в разведении 1:2.The results shown in table 3 indicate that in the aphthous test material No. 1987 a complement-binding antigen of foot and mouth disease virus of type Asia-1 was detected in a 1: 2 dilution.
Полученному штамму вируса ящура типа Азия-1 присвоено авторское наименование: штамм «Амурский» №1987.The resulting strain of foot and mouth disease virus of type Asia-1 is assigned the author's name: strain Amur "No. 1987.
Штамм «Амурский» №1987 депонирован 16 мая 2006 года во Всероссийскую государственную коллекцию штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, Федерального государственного учреждения «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ») под регистрационным номером (ссылкой): производственный штамм «Амурский» №1987-ДЕП вируса ящура типа Азия-1.Amursky strain No. 1987 was deposited on May 16, 2006 in the All-Russian State Collection of microorganism strains used in veterinary medicine and animal husbandry, of the Federal State Institution All-Russian State Center for Quality and Standardization of Medicines for Animals and Feed (FGU VGNKI) under registration number (reference): production strain Amursky No. 1987-DEPT of foot and mouth disease virus of type Asia-1.
Пример 2Example 2
Для гипериммунизации морских свинок используют антиген из штамма «Амурский» №1987 вируса ящура типа Азия-1, репродуцированного в монослойной культуре клеток ПСГК-30. Вируссодержащую суспензию очищают от балластных примесей добавлением 0,05% полигексаметиленгуанидина (ПГМГ). Очищенный вирус концентрируют в 100 раз добавлением 10% полиэтиленгликоля (ПЭГ) м.м. 6000 и инактивируют аминоэтилэтиленимином (АЭЭИ) в концентрации 0,025-0,05% при значении рН 8,0-8,3.For hyperimmunization of guinea pigs, the antigen from Amursky strain No. 1987 of the FMD virus of type Asia-1 reproduced in a monolayer culture of PSGK-30 cells is used. The virus-containing suspension is cleaned of ballast impurities by the addition of 0.05% polyhexamethylene guanidine (PHMG). The purified virus is concentrated 100 times by adding 10% polyethylene glycol (PEG) m.m. 6000 and inactivate aminoethylethyleneimine (AEEI) at a concentration of 0.025-0.05% at a pH of 8.0-8.3.
Инактивированный концентрат антигена в смеси с равным объемом масляного адъюванта типа неполного адъюванта Фрейнда вводят морским свинкам в объеме 1,0 см3 внутримышечно. Через 21 день иммунизацию повторяют и спустя 10 дней животных обескровливают. Индивидуальные пробы сыворотки крови проверяют на типовую специфичность и активность в РСК в соответствии с методическими указаниями по выявлению и идентификации штаммов вируса ящура (6).The inactivated antigen in the concentrate was mixed with an equal volume type oil adjuvant incomplete Freund's adjuvant are administered to guinea pigs in a volume of 1.0 cm 3 intramuscularly. After 21 days, immunization is repeated and after 10 days the animals are bled. Individual blood serum samples are checked for typical specificity and activity in CSCs in accordance with the guidelines for the identification and identification of foot and mouth disease virus strains (6).
После этого готовят серию путем смешивания типоспецифичных индивидуальных проб сыворотки одинаковой активности. Штаммовую специфичность серийного препарата определяют в одно- и двусторонних реакциях с гомо- и гетерологичными антигенами.After that, a series is prepared by mixing type-specific individual serum samples of the same activity. The strain specificity of a serial preparation is determined in one- and two-sided reactions with homo- and heterologous antigens.
После консервирования азидом натрия (1:5000) и выдерживания при 4°С в течение 30 дней полученную сыворотку фасуют в ампулы по 0,5-1,0 см3.After preservation with sodium azide (1: 5000) and holding at 4 ° C for 30 days, the resulting serum is Packed in ampoules of 0.5-1.0 cm 3 .
Способом, описанным в примере 2, была приготовлена 1 серия гипериммунной сыворотки, характеристика которой представлена в таблице 4.By the method described in example 2, was prepared 1 series of hyperimmune serum, the characteristics of which are presented in table 4.
Данные, приведенные в таблице 4, свидетельствуют о том, что получена диагностическая сыворотка, по специфической активности отвечающая требованиям ГОСТа 25384-82.The data given in table 4 indicate that a diagnostic serum has been obtained that, according to its specific activity, meets the requirements of GOST 25384-82.
Пример 3Example 3
Для получения антигена для иммунохимических реакций используют вирус ящура типа Азия-1 штамма «Амурский» №1987, адаптированный к культуре клеток перевиваемых линий ВНК-21 и IB-RS-2. Для адаптации используют вируссодержащий материал в виде 10% суспензии афт КРС. Пассирование проводят в течение 3-5 последовательных пассажей. Полученный вирус используют для наработки вирусного сырья. Заражение клеточных культур и сбор вирусного материала проводят по общепринятой методике.To obtain the antigen for immunochemical reactions, FMD virus, type Asia-1 of Amursky strain No. 1987, adapted to the cell culture of the transplantable lines BHK-21 and IB-RS-2, is used. For adaptation, virus-containing material is used in the form of a 10% suspension of cattle aft. Passaging is carried out for 3-5 consecutive passages. The resulting virus is used to produce viral raw materials. Infection of cell cultures and the collection of viral material is carried out according to standard methods.
Полученную вируссодержащую суспензию концентрируют в 100 раз добавлением 8-10% ПЕГ. Полученный концентрат инактивируют АЭЭИ, фасуют во флаконы и высушивают методом сублимации под вакуумом. Антиген, полученный на культуре клеток ВПК-21, используется для получения диагностических компонентов для ИФА. Антиген, полученный на культуре клеток IB-RS-2, используется в РСК.The resulting virus-containing suspension is concentrated 100 times by adding 8-10% PEG. The resulting concentrate is inactivated by AEEI, Packed in bottles and dried by sublimation under vacuum. The antigen obtained on the VPK-21 cell culture is used to obtain diagnostic components for ELISA. Antigen obtained from IB-RS-2 cell culture is used in CSCs.
Указанным способом было приготовлено 4 серии диагностического антигена, характеристики которых приведены в таблице 5.The specified method was prepared 4 series of diagnostic antigen, the characteristics of which are given in table 5.
Результаты исследований, приведенные в таблице 5, свидетельствуют, что получены диагностические антигены, специфическая активность которых соответствует требованиям ГОСТа 25384-82.The research results, shown in table 5, indicate that diagnostic antigens have been obtained, the specific activity of which meets the requirements of GOST 25384-82.
Пример 4Example 4
Для изготовления вакцины инактивированной сорбированной вирус ящура типа Азия-1 штамма «Амурский» №1987 репродуцируют в суспензионной культуре клеток ВПК-21. В качестве поддерживающей среды используют раствор Эрла без сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при рН 7,2-7,4. Культуру клеток заражают вирусом из расчета 0,001-0,05 ТЦД50 на клетку. Культивирование вируса ведут при температуре 36-37°С. Через 8-10 часов культивирования проводят подсчет живых и мертвых клеток путем окраски трипановым синим. Если количество живых клеток составляет 15-20%, то культивирование продолжают еще 2-3 часа. При достижении количества мертвых клеток 90-95% культивирование прекращают и вируссодержащую суспензию контролируют на стерильность и содержание 146S и 75S компонентов.For the manufacture of a vaccine inactivated adsorbed foot and mouth disease virus type Asia-1 strain "Amur" No. 1987 reproduced in suspension cell culture VPK-21. Serum without serum with the addition of FGMS, GBKS and antibiotics at a pH of 7.2-7.4 is used as a supporting medium. The cell culture is infected with a virus at the rate of 0.001-0.05 TCD 50 per cell. The cultivation of the virus is carried out at a temperature of 36-37 ° C. After 8-10 hours of cultivation, living and dead cells are counted by trypan blue staining. If the number of living cells is 15-20%, then cultivation continues for another 2-3 hours. When the number of dead cells reaches 90-95%, the cultivation is stopped and the virus-containing suspension is checked for sterility and the content of 146S and 75S components.
Количество 146S и 75S компонентов в суспензии должно составлять не менее 0,5 мкг/см3. Сразу по окончании цикла репродукции вируса, не прекращая термостатирования, в вируссодержащую суспензию добавляют 15-20%-ный раствор АЭЭИ, подкисленный ледяной уксусной кислотой до рН 8,0-8,5. Конечная концентрация АЭЭИ в вируссодержащей суспензии должна быть равной 0,025-0,05%. Инактивацию инфекционности вируса проводят в течение 12-24 часов при 36-37°С и рН 7,2-7,6 с перемешиванием через 5-6 часов в течение 3-5 минут. По окончании инактивации суспензию антигена охлаждают до 4-8°С. В охлажденную суспензию добавляют 10%-ный раствор ПГМГ до концентрации 0,005-0,007% для флокуляции балластных примесей и инактивации возможных контаминантов. Флокулированные балластные примеси подвергают седиментации с последующей декантацией. Полученный антиген контролируют на авирулентность, содержание вирусспецифического белка, 146S и 75S компонентов вируса и стерильность. Необходимую концентрацию 146S и 75S компонентов в прививной дозе адсорбированной вакцины получают путем концентрирования антигена гелем гидрата окиси алюминия (ГОА).The amount of 146S and 75S components in the suspension should be at least 0.5 μg / cm 3 . Immediately after the end of the virus reproduction cycle, without stopping thermostating, a 15–20% AEEI solution, acidified with glacial acetic acid to pH 8.0–8.5, is added to the virus-containing suspension. The final concentration of AEEI in the virus-containing suspension should be equal to 0.025-0.05%. Inactivation of the infectiousness of the virus is carried out for 12-24 hours at 36-37 ° C and a pH of 7.2-7.6 with stirring after 5-6 hours for 3-5 minutes. At the end of inactivation, the antigen suspension is cooled to 4-8 ° C. A 10% solution of PHMG is added to the cooled suspension to a concentration of 0.005-0.007% for flocculation of ballast impurities and inactivation of possible contaminants. Flocculated ballast impurities are subjected to sedimentation followed by decantation. The resulting antigen is monitored for avirulence, virus-specific protein content, 146S and 75S virus components, and sterility. The required concentration of 146S and 75S components in a graft dose of an adsorbed vaccine is obtained by concentrating the antigen with gel of aluminum oxide hydrate (GOA).
Расчетный объем геля ГОА 3%-ной концентрации добавляют в охлажденную суспензию антигена при работающей мешалке. Перемешивание ведут в течение 30 минут. После седиментации геля ГОА сливают расчетный объем оставшейся суспензии. Конечная концентрация ГОА должна быть в пределах 1,62±0,488 мг/см3 Р<0,01 n=10, a концентрация 146S и 75S компонентов вируса ящура не менее 3,0 мкг/см3. Затем в суспензию добавляют дополнительно 10%-ный раствор сапонина до конечной концентрации не менее 0,075%.The calculated volume of the GOA gel of 3% concentration is added to the cooled antigen suspension with the stirrer operating. Stirring is carried out for 30 minutes. After sedimentation of the GOA gel, the calculated volume of the remaining suspension is drained. The final concentration of GOA should be in the range of 1.62 ± 0.488 mg / cm 3 P <0.01 n = 10, and the concentration of 146S and 75S components of FMD virus is not less than 3.0 μg / cm 3 . Then an additional 10% saponin solution is added to the suspension to a final concentration of at least 0.075%.
Полученную вакцину расфасовывают в стеклянные флаконы и проводят контроль стерильности по ГОСТу 28085-89.The resulting vaccine is packaged in glass bottles and sterility control is performed according to GOST 28085-89.
Авирулентность и безвредность вакцины проверяют на 5 головах КРС, вводя вакцину сначала под слизистую языка в дозе 2 см3, затем подкожно в дозе 10 см3. Наблюдение за клиническим состоянием животных ведут в течение 10 суток. Авирулентную, безвредную и стерильную вакцину проверяют на иммуногенную активность на КРС или морских свинках.The virulence and harmlessness of the vaccine is checked on 5 heads of cattle, introducing the vaccine first under the mucous membrane of the tongue at a dose of 2 cm 3 , then subcutaneously at a dose of 10 cm 3 . Observation of the clinical condition of the animals is carried out for 10 days. Avirulent, harmless and sterile vaccine is tested for immunogenic activity in cattle or guinea pigs.
Полученная вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым белым осадком сорбента, который образуется на дне флакона при хранении и легко разбивается в гомогенную взвесь при встряхивании.The resulting vaccine is a light yellow liquid with a loose white precipitate of sorbent, which is formed at the bottom of the vial during storage and is easily broken into a homogeneous suspension with shaking.
Пример 5Example 5
Проведены испытания на КРС противоящурной вакцины инактивированной сорбированной из штамма «Амурский» №1987, изготовленной так, как описано в примере 4.Tests for cattle of FMD vaccine inactivated adsorbed from the Amursky strain No. 1987, made as described in example 4, were performed.
КРС массой 200-250 кг иммунизировали подкожно, вводя по 2 см3 цельной вакцины и в разведении 1:5. Вакцина в цельном виде уже на 10 день после вакцинации (ДПВ) индуцировала достаточный уровень вируснейтрализующих антител (4,73±0,62 лог2), а к 20 ДПВ количество вируснейтрализующих антител (ВНА) увеличилось в 2 раза до 5,65±0,20 лог2. Протективная (защитная) доза вакцины для 50% животных (ПД50) была равной 0,25 см3, т.е. в прививной дозе 2 см3 содержалось 8ПД50, что свидетельствует о высокой иммуногенной активности сорбированной вакцины.Cattle weighing 200-250 kg were immunized subcutaneously, administering 2 cm 3 of a whole vaccine and at a dilution of 1: 5. The whole vaccine already on the 10th day after vaccination (DPV) induced a sufficient level of neutralizing antibodies (4.73 ± 0.62 log 2 ), and by 20 DPV the number of neutralizing antibodies (VNA) doubled to 5.65 ± 0 , 20 log 2 . The protective (protective) dose of the vaccine for 50% of the animals (PD 50 ) was 0.25 cm 3 , i.e. in a vaccine dose of 2 cm 3 contained 8 PD 50 , which indicates a high immunogenic activity of the sorbed vaccine.
Пример 6Example 6
Проведены сравнительные испытания на морских свинках иммуногенной активности вакцины инактивированной сорбированной против ящура типа Азия-1 из штамма «Амурский» №1987 и вакцины инактивированной сорбированной против ящура типа Азия-1 из штамма №1737/Грузия/2000, изготовленных так, как описано в примере 4.Comparative tests were conducted on guinea pigs of the immunogenic activity of the vaccine inactivated adsorbed against foot and mouth disease type Asia-1 from Amursky strain No. 1987 and the inactivated sorbed vaccine against foot and mouth disease type Asia-1 from strain No. 1737 /
Для определения иммуногенной активности каждого препарата использовали по 128 морских свинок и дополнительно для контроля 4 группы морских свинок по 6 животных в каждой. Вакцины вводили в цельном виде и разбавленные фосфатным буфером в соотношении 1:3, 1:9 и 1:27. На каждое разведение вакцин брали по 8 морских свинок. Каждую группу их 8 свинок содержали в отдельном вольере, на котором закрепляли этикетку с указанием серии вакцины, ее разведения, даты начала испытаний и количества животных, привитых данным разведением.To determine the immunogenic activity of each drug, 128 guinea pigs were used, and in addition to control 4 groups of guinea pigs, 6 animals each. Vaccines were administered intact and diluted with phosphate buffer in a ratio of 1: 3, 1: 9 and 1:27. Eight guinea pigs were taken for each vaccine dilution. Each group of 8 pigs was kept in a separate enclosure, on which a label was fixed indicating the vaccine series, its breeding, the date of the start of testing and the number of animals vaccinated with this breeding.
Каждую вакцину вводили 16 группам морских свинок внутримышечно в объеме 2 см3 в область правого и левого бедра по 1 см3. Невакцинированные группы морских свинок использовали для проверки активности контрольных серотипов вируса ящура.Each vaccine was administered to 16 groups of guinea pigs intramuscularly in a volume of 2 cm 3 in the region of the right and left thigh 1 cm 3 . Unvaccinated guinea pig groups were used to test the activity of control serotypes of foot and mouth disease virus.
За вакцинированными морскими свинками вели наблюдение в течение 21 суток. После этого всех привитых и контрольных свинок заражали адаптированным к морским свинкам вирусом ящура штаммов Азия-1 №48, Азия-1/Иран/58/59, Азия-1/Шамир 3/89 и Азия-1 «Амурский» №1987. Вирусную суспензию вводили морским свинкам интрадермально в плантарную поверхность одной из задних лапок в дозе 104 ГД50/0,1 см3. Учет результатов заражения проводили через 3, 5 и 7 суток и оценивали по генерализации ящурного процесса на передних и одной из задних лапок. Генерализацией считали образование вторичных афт хотя бы на одной лапке, в которую не вводили вирус. Контроль вакцины считали действительным, если из 6 невакцинированных свинок генерализованной формой ящура заболевали 6 животных. В таблице 6 представлены результаты изучения на морских свинках иммуногенной активности моновалентных противоящурных вакцин инактивированных сорбированных из штамма Азия-1 №1737/Грузия/2000 и штамма Азия-1 «Амурский» №1987 при контрольном заражении гомологичным и гетерологичными штаммами вируса ящура Азия-1 №48, Азия-1 №1737/Грузия/2000, Азия-1/Шамир 3/89 и Азия-1 «Амурский» №1987. Вакцина, приготовленная из штамма «Амурский» №1987 вируса ящура типа Азия-1, при проверке на морских свинках оказалась высокоиммуногенным препаратом как против гомологичного вируса, так и против гетерологичного вируса штамма Азия-1/Шамир 3/99 (ИмД50 составляет 0,047 и 0,065 соответственно) и менее иммуногенна против вируса ящура штаммов Азия-1 №48 и Азия-1 №1737/Грузия/2000 (ИмД50=0,23).Vaccinated guinea pigs were monitored for 21 days. After that, all vaccinated and control pigs were infected with foot-and-mouth guinea pigs virus of strains Asia-1 No. 48, Asia-1 / Iran / 58/59, Asia-1 / Shamir 3/89 and Asia-1 Amur No. 1987. The viral suspension was injected intradermally into the plantar surface of one of the hind legs in a dose of 10 4 HD 50 / 0.1 cm 3 . The results of infection were taken into account after 3, 5, and 7 days and were assessed by generalization of the foot-and-mouth disease process on the front and one of the hind legs. The generalization was the formation of secondary aphthae on at least one paw into which the virus was not introduced. Vaccine control was considered valid if out of 6 unvaccinated pigs, 6 animals fell ill with a generalized form of foot and mouth disease. Table 6 presents the results of a study on guinea pigs of the immunogenic activity of monovalent FMD vaccines inactivated adsorbed from strain Asia-1 No. 1737 / Georgia / 2000 and strain Asia-1 Amursky No. 1987 with a control infection with homologous and heterologous strains of foot and mouth disease Asia-1 No. 48, Asia-1 No. 1737 /
Вакцина, приготовленная из производственного штамма Азия-1 №1737/Грузия/2000 при проверке на морских свинках оказалась высокоиммуногенной против всех изучаемых штаммов вируса ящура: Азия-1 №48, Азия-1 №1737/Грузия/2000, Азия-1/Шамир 3/89 и Азия-1 «Амурский» №1987. Однако ее иммуногенность в 2,3 раза выше по отношению к гомологичному вирусу (ПД50МС=37,04) по сравнению с эпизоотическим штаммом «Амурский» №1987 вируса ящура типа Азия-1 (ПД50МС=20,41).The vaccine prepared from the production strain Asia-1 No. 1737 / Georgia / 2000 when tested on guinea pigs was highly immunogenic against all the studied strains of foot-and-mouth disease virus: Asia-1 No. 48, Asia-1 No. 1737 /
Пример 7Example 7
Для изготовления вакцины инактивированной эмульсионной против ящура Азия-1 вирус штамма «Амурский» №1987 репродуцируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21, инактивируют, очищают от балластных примесей, контролируют полученный антиген на авирулентность, содержание вирусспецифического белка, 146S и 75S компонентов вируса и стерильность так, как описано в примере 4.For the manufacture of the inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease Asia-1, the Amursky strain No. 1987 virus is reproduced in a suspension culture of BHK-21 cells, inactivated, purified from ballast impurities, the antigen obtained for virulence, virus-specific protein content, 146S and 75S virus components and sterility as described in example 4.
Необходимую концентрацию 146S и 75S компонентов в прививной дозе эмульсионной вакцины получают путем концентрирования антигена проточной ультрафильтрацией. Для этого используют ультрафильтры БТУ 0,5-2. Полученный концентрат антигена хранят при 4-6°С до момента использования в вакцине.The required concentration of 146S and 75S components in the vaccine dose of the emulsion vaccine is obtained by concentration of the antigen by flow ultrafiltration. For this, BTU 0.5-2 ultrafilters are used. The resulting antigen concentrate is stored at 4-6 ° C until used in the vaccine.
Эмульсионную вакцину получают путем диспергирования на коллоидных мельницах концентрата антигена и масляного адъюванта в соотношении 3:7-1:1 соответственно. Из масляных адъювантов можно использовать масляный адъювант ВНИИЗЖ (7), а также масляный адъювант марки Montanide ISA-70 или Montanide ISA-206 производства фирмы «Seppic» (Франция).An emulsion vaccine is obtained by dispersing antigen concentrate and oil adjuvant in a ratio of 3: 7-1: 1, respectively, in colloidal mills. From oil adjuvants it is possible to use the oil adjuvant ARRIAH (7), as well as the oil adjuvant of the brand Montanide ISA-70 or Montanide ISA-206 manufactured by Seppic (France).
В результате получают вакцину инактивированную эмульсионную против вируса ящура Азия-1, которая представляет собой молокоподобную жидкость, нерастворимую в воде. Вакцина имеет жидкую консистенцию, легко рассасывается с места введения, не вызывает образования абсцессов, общей реакции в виде подъема температуры и обладает выраженной иммуногенностью для свиней в дозе 2 см3 и для КРС в дозе 5 см3 через 3-21 ДПВ. Вакцину вводят свиньям внутримышечно, а КРС подкожно. В прививном объеме должно содержаться не менее 4 мкг 146S и 75S компонентов.The result is an inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease virus Asia-1, which is a milk-like liquid insoluble in water. The vaccine has a liquid consistency, easily resolves from the injection site, does not cause abscesses, a general reaction in the form of a rise in temperature, and has pronounced immunogenicity for pigs at a dose of 2 cm 3 and for cattle at a dose of 5 cm 3 through 3-21 DPV. The vaccine is administered intramuscularly to pigs, and cattle subcutaneously. Inoculated volume should contain at least 4 μg of 146S and 75S components.
Пример 8Example 8
Проведены испытания иммуногенной активности противоящурной вакцины инактивированной эмульсионной из штамма «Амурский» №1987, изготовленной так, как описано в примере 7. Иммуногенная активность данной вакцины проверена на подсвинках массой 40-50 кг.Результаты исследований представлены в таблице 7. ПД50 вакцины составила 0,05 см3, т.е. в прививном объеме 2 см3 содержалось 40 ПД50 для свиней. Подсвинки, привитые цельной вакциной, на 21 ДПВ имели титр ВНА, равный 6,07±0,24 лог2. После контрольного заражения заболели с генерализацией процесса 2 контрольных подсвинка и 1 подсвинок, вакцинированный разведением вакцины 1:25.Tests of the immunogenic activity of the FMD vaccine inactivated emulsion from Amursky strain No. 1987, made as described in Example 7. The immunogenic activity of this vaccine was tested on gilts weighing 40-50 kg. The results of the studies are presented in table 7. PD 50 of the vaccine was 0 , 05 cm 3 , i.e. in the inoculated volume of 2 cm 3 contained 40 PD 50 for pigs. Gilts vaccinated with a whole vaccine at 21 WPV had a BHA titer of 6.07 ± 0.24 log 2 . After infection, 2 control gilts and 1 gilts vaccinated with a 1:25 dilution vaccine became ill with a generalization of the process.
Испытанная эмульсионная вакцина имела высокую иммуногенную активность на свиньях (40 ПД50/2 см3).Tested emulsion vaccine had a high immunogenic activity in pigs (40 TP 50/2 cm 3).
Пример 9Example 9
Вирус ящура типа Азия-1 штамма «Амурский» №1987, предназначенный для контроля иммуногенной активности противоящурных вакцин на КРС, готовят следующим образом. Полученный вирус предварительно освежают на КРС, заражая 1-2 животных массой 250-300 кг, доставленных из благополучных по ящуру зон страны, где в течение последних 2-х лет не проводили вакцинацию животных против ящура. Количество пассажей вируса не должно превышать 20, начиная от исходного вируса. Суспензию вируса, содержащую 10000-10000000 ИД50/см3 с антибиотиками, вводят по 0,2-0,3 см3 в 20-40 каналов интрадермолингвально по всей поверхности языка. Зараженных животных не кормят до снятия вируса. Через 20-30 часов после заражения афты снимают по мере их созревания. Лимфу собирают шприцом. На основе собранного афтозного материала готовят 20%-ную суспензию вируса, которую очищают от балластных примесей вышеописанным способом с последующим добавлением в нее антибиотиков и глицерина. Полученную суспензию вируса оценивают в РСК на типо- и штаммоспецифичность. Активность вируса должна быть не меньше 1:4. Инфекционную активность определяют на КРС. Контрольный вирус должен иметь титр инфекционности не меньше 104 ИД50/см3. Флаконы с суспензией вируса в присутствии глицерина хранят в холодильнике при (-40)-(-70)°С.FMD virus of the Asia-1 type of Amursky strain No. 1987, designed to control the immunogenic activity of FMD vaccines in cattle, is prepared as follows. The resulting virus is pre-refreshed on cattle, infecting 1-2 animals weighing 250-300 kg, delivered from the FMD-free zones of the country, where animals have not been vaccinated against FMD over the past 2 years. The number of passages of the virus should not exceed 20, starting from the original virus. A virus suspension containing 10,000-10000000 ID 50 / cm 3 with antibiotics is administered 0.2-0.3 cm 3 in 20-40 channels intradermolingually over the entire surface of the tongue. Infected animals are not fed until the virus is removed. After 20-30 hours after infection, aphthae are removed as they mature. Lymph is collected by syringe. Based on the collected aphthous material, a 20% suspension of the virus is prepared, which is purified from ballast impurities as described above, followed by the addition of antibiotics and glycerol. The resulting virus suspension is evaluated in DSC for type and strain specificity. Virus activity should be at least 1: 4. Infectious activity is determined on cattle. The control virus should have an infectivity titer of at least 10 4 ID 50 / cm 3 . Vials with a suspension of the virus in the presence of glycerol are stored in a refrigerator at (-40) - (-70) ° C.
Пример 10Example 10
Вирус ящура типа Азия-1 штамма «Амурский» №1987, предназначенный для контроля иммуногенной активности противоящурных вакцин на свиньях, готовят следующим образом. Полученный вирус предварительно освежают на свиньях, заражая 1-2 животных массой 30-50 кг, доставленных из благополучных по ящуру зон страны, где в течение 2 лет не проводили вакцинацию скота против ящура. Вируссодержащую суспензию вводят под слизистую оболочку языка или в кожу венчика конечностей. Созревшие афты снимают через 24-48 часов после заражения. Приготовление суспензии вируса и контроль его активности осуществляют так, как описано в примере 9. Титрование инфекционной активности вируса ящура проводят на свиньях и в культуре клеток СП.The foot-and-mouth disease virus of the Asia-1 type of Amursky strain No. 1987, designed to control the immunogenic activity of FMD vaccines in pigs, is prepared as follows. The resulting virus is pre-refreshed in pigs, infecting 1-2 animals weighing 30-50 kg, delivered from the FMD-safe areas of the country where cattle against foot and mouth disease have not been vaccinated for 2 years. The virus-containing suspension is injected under the mucous membrane of the tongue or into the skin of the corolla of the extremities. Mature aphthae are removed 24-48 hours after infection. The preparation of a suspension of the virus and the control of its activity is carried out as described in example 9. Titration of the infectious activity of the foot and mouth disease virus is carried out on pigs and in the culture of SP cells.
Пример 11Example 11
Контроль иммуногенной и антигенной активности вакцины инактивированной сорбированной из вируса ящура типа Азия-1 штамма «Амурский» №1987, изготовленной так, как описано в примере 4, осуществляли следующим образом. Для проверки иммуногенной активности препарата использовали 10 голов КРС массой 200-250 кг, доставленных из благополучных по ящуру зон страны. Первой группе животных из 5 голов КРС ввели вакцину подкожно в цельном виде. Второй группе животных из 5 голов КРС ввели подкожно разведение вакцины на фосфатно-буферном растворе в соотношении 1:5. Объем прививной дозы составил 2 см3. На 20 ДПВ у 10 вакцинированных и 2 контрольных голов КРС взяли пробы крови и провели контрольное заражение животных введением под слизистую языка суспензии вируса ящура типа Азия-1 штамма «Амурский» №1987 второго пассажа на КРС в дозе 104 ИД50/0,2 см3.Monitoring the immunogenic and antigenic activity of the vaccine inactivated adsorbed from foot and mouth disease virus type Asia-1 strain "Amur" No. 1987, made as described in example 4, was carried out as follows. To test the immunogenic activity of the drug, 10 cattle were used weighing 200-250 kg, delivered from the country's FMD zones. The first group of animals from 5 heads of cattle was administered the vaccine subcutaneously in their entirety. The second group of animals from 5 heads of cattle was injected subcutaneously with a vaccine dilution in phosphate-buffered saline in a ratio of 1: 5. The volume of the vaccine dose was 2 cm 3 . Blood samples were taken from 20 vaccinated animals at 10 vaccinated and 2 control heads of cattle and the animals were challenged by introducing a suspension of foot-and-mouth disease type Asia-1 of Amur strain No. 1987 of the second passage to cattle at a dose of 10 4 ID 50 / 0.2 cm 3 .
Антигенную активность вакцины контролировали по уровню ВНА в сыворотке крови в РН на монослое клеток свиной почки. На 20 ДПВ ВНА у КРС, привитых цельной вакциной, составил 5,65±0,20 лог2 р<0,001. Через 8 дней после заражения провели патологоанатомическое исследование КРС. Заболели 2 контрольных животных и 1 животное, привитое разведением вакцины 1:5. ПД50 вакцины составила 0,25 см3. Прививная доза вакцины содержала 8 ПД50, что свидетельствовало об эффективности препарата. Такая вакцина считается иммуногенной и пригодной для практического применения.The antigenic activity of the vaccine was monitored by the level of BHA in serum in the pH on the monolayer of porcine kidney cells. At 20 RPA VNA in cattle vaccinated with a whole vaccine was 5.65 ± 0.20 log 2 p <0.001. 8 days after infection, a pathological examination of cattle was performed. Sick 2 control animals and 1 animal vaccinated with a dilution of the vaccine 1: 5. PD 50 of the vaccine was 0.25 cm 3 . The graft dose of the vaccine contained 8 PD 50 , which indicated the effectiveness of the drug. Such a vaccine is considered immunogenic and suitable for practical use.
Пример 12Example 12
Контроль иммуногенной и антигенной активности вакцины инактивированной эмульсионной из вируса ящура типа Азия-1 штамма «Амурский» №1987, изготовленной так, как описано в примере 7, осуществили следующим образом.The control of the immunogenic and antigenic activity of the inactivated emulsion vaccine from foot and mouth disease virus of type Asia-1 of Amursky strain No. 1987, manufactured as described in example 7, was carried out as follows.
Для проверки иммуногенной активности препарата использовали 17 голов свиней массой 30-50 кг. Свиней разделили на 3 группы по 5 голов в каждой. Двух животных использовали в качестве контрольных. Первую группу животных иммунизировали внутримышечно цельной дозой вакцины объемом 2 см3, содержащей 6,0 мкг иммуногенных компонентов вируса ящура типа Азия-1 штамма «Амурский» №1987. Вторую группу животных иммунизировали разведением вакцины 1:5, а третью - разведением 1:25. На 21 ДПВ 15 вакцинированным и 2 контрольным свиньям под слизистую языка ввели суспензию афтозного вируса ящура Азия-1 штамма «Амурский» №1987, адаптированного к свиньям, в дозе 104 ИД50/0,2 см3. Количество ВНА у свиней, привитых цельной дозой вакцины, было равным 6,07±0,24 лог2 р<0,001. На 8 день после заражения провели патологоанатомическое исследование животных. Заболели генерализованной формой ящура 2 контрольных и 1 животное, привитое разведением вакцины 1:25. ПД50 вакцины составила 0,05 см3. Прививная доза вакцины содержала 40 ПД50 для свиней.To test the immunogenic activity of the drug, 17 pigs weighing 30-50 kg were used. Pigs were divided into 3 groups of 5 animals each. Two animals were used as controls. The first group of animals was immunized intramuscularly with a whole dose of 2 cm 3 vaccine containing 6.0 μg of immunogenic components of foot-and-mouth disease virus of type Asia-1 of Amursky strain No. 1987. The second group of animals was immunized with a dilution of the vaccine 1: 5, and the third - a dilution of 1:25. At 21 DPV, 15 vaccinated and 2 control pigs were injected under the tongue mucosa with a suspension of aphthous foot and mouth disease virus Asia-1 of Amur strain No. 1987, adapted to pigs, at a dose of 10 4 ID 50 / 0.2 cm 3 . The amount of VNA in pigs vaccinated with a whole dose of the vaccine was 6.07 ± 0.24 log 2 p <0.001. On the 8th day after infection, a pathological study of the animals was performed. 2 control and 1 animals, vaccinated with 1:25 vaccine dilution, got sick with a generalized form of foot and mouth disease. PD 50 of the vaccine was 0.05 cm 3 . The graft dose of the vaccine contained 40 PD 50 for pigs.
Таким образом, вакцина считается иммуногенной и пригодной для практического применения.Thus, the vaccine is considered immunogenic and suitable for practical use.
Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента РФ на изобретение «Штамм «Амурский» №1987 вируса ящура типа Азия-1 для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа Азия-1».Sources of information taken into account when drawing up the description of the invention to the application for the grant of a patent of the Russian Federation for the invention "Amursky strain No. 1987 for foot and mouth disease type Asia-1 for monitoring antigenic and immunogenic activity of vaccines and for the manufacture of biological products for the diagnosis and specific prevention of foot and mouth disease type Asia -one".
1. Ререр X. Ящур. Пер. с нем. Г.А.Сурковой. / Под ред. и с предисл. канд. вет. наук. П.В.Малярца. - М.: Колос, 1971, 432 с.1. Rerer X. Foot and mouth disease. Per. with him. G.A. Surkova. / Ed. and with the foreword. Cand. vet. sciences. P.V. Malaria. - M .: Kolos, 1971, 432 p.
2. Бурдов А.Н., Дудников А.И., Малярец П.В. и др. Ящур. / Под ред. А.Н. Бурдова. - М., Агропромиздат, 1990, 320 с.2. Burdov A.N., Dudnikov A.I., Malyarets P.V. and other foot and mouth disease. / Ed. A.N. Burdova. - M., Agropromizdat, 1990, 320 p.
3. Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я., Соловьев Б.В. и др. Вирусные болезни животных. - М., ВНИИТИБП, 1998, С.532-548.3. Syurin V.N., Samuilenko A.Ya., Soloviev B.V. and other viral diseases of animals. - M., VNIITIBP, 1998, S.532-548.
4. Инструкция по изготовлению и контролю вакцины моновалентной эмульсионной против ящура типа А, типа О, типа С, типа Азия-1 (из вируса, выращенного в клетках ВНК-21). Утверждена ГУВ Госкомиссии СМ СССР по продовольствию и закупкам 24.01.1991 г.4. Instructions for the manufacture and control of a monovalent emulsion vaccine against foot and mouth disease type A, type O, type C, type Asia-1 (from a virus grown in BHK-21 cells). The GUV of the State Commission of the Council of Ministers of the USSR for Food and Purchases was approved on January 24, 1991.
5. Пат. РФ №2218397, C12N 7/00, A61K 39/135 // (C12N 7/00, C12R 1/93), 10.12.2003 г.5. Pat. RF №2218397, C12N 7/00, A61K 39/135 // (C12N 7/00, C12R 1/93), 12/10/2003
6. Методические указания по выявлению и идентификации штаммов вируса ящура. Владимир, 2002, 31 с.6. Guidelines for the identification and identification of strains of foot and mouth disease virus. Vladimir, 2002, 31 p.
7. Пат. РФ №2108111, А61K 39/39 // А61K 39/00, 39/102, 39/12, 39/135, 10.04.1998 г.7. Pat. RF No. 2108111, A61K 39/39 // A61K 39/00, 39/102, 39/12, 39/135, 04/10/1998
Определение типа вируса в 33%-ной суспензии афтозного материала (экспертиза №1987/05 «Амурский»)Table 3
Determination of the type of virus in a 33% suspension of aphthous material (examination No. 1987/05 Amursky)
- полный гемолизNote: 4-100% delayed hemolysis
- complete hemolysis
Характеристика диагностической сыворотки, полученной на антиген из штамма «Амурский» №1987 вируса ящура типа Азия-1Table 4
Characterization of diagnostic serum obtained for antigen from Amursky strain No. 1987 of foot and mouth disease virus of type Asia-1
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007112591/13A RU2348690C2 (en) | 2007-04-04 | 2007-04-04 | Amur strain no 1987 of asia-1 type murrain virus for antigenic and immunogenic performance control of vaccines and for production of medicines for diagnostics and specific prevention of asia-1 type murrain |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007112591/13A RU2348690C2 (en) | 2007-04-04 | 2007-04-04 | Amur strain no 1987 of asia-1 type murrain virus for antigenic and immunogenic performance control of vaccines and for production of medicines for diagnostics and specific prevention of asia-1 type murrain |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2007112591A RU2007112591A (en) | 2008-10-10 |
| RU2348690C2 true RU2348690C2 (en) | 2009-03-10 |
Family
ID=39927526
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2007112591/13A RU2348690C2 (en) | 2007-04-04 | 2007-04-04 | Amur strain no 1987 of asia-1 type murrain virus for antigenic and immunogenic performance control of vaccines and for production of medicines for diagnostics and specific prevention of asia-1 type murrain |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2348690C2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2741639C1 (en) * | 2020-06-05 | 2021-01-28 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease of type asia-1 inactivated emulsion |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2218397C1 (en) * | 2002-07-10 | 2003-12-10 | Федеральное государственное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных | Foot-and-mouth virus strain = 1737/georgia/2000 of type asia-1 for preparing diagnostic and vaccine preparations |
-
2007
- 2007-04-04 RU RU2007112591/13A patent/RU2348690C2/en active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2218397C1 (en) * | 2002-07-10 | 2003-12-10 | Федеральное государственное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных | Foot-and-mouth virus strain = 1737/georgia/2000 of type asia-1 for preparing diagnostic and vaccine preparations |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2741639C1 (en) * | 2020-06-05 | 2021-01-28 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease of type asia-1 inactivated emulsion |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2007112591A (en) | 2008-10-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2593718C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease types a, o, asia-1 | |
| RU2451745C2 (en) | A 2045/KYRGYZSTAN/ 2007 STRAIN OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VIRUS Aphtae epizooticae TYPE A FOR ANTIGENIC AND IMMUNOGENIC PERFORMANCE CONTROL OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VACCINES AND FOR PRODUCTION OF BIOPREPARATIONS FOR DIAGNOSIS AND SPECIFIC PREVENTION OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE TYPE A | |
| RU2603003C1 (en) | Inactivated sorptive vaccine to fmd types a, o, asia-1 | |
| RU2143921C1 (en) | Vaccine against foot and mouth of type a and method of its preparing | |
| RU2699671C1 (en) | Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease of type o inactivated emulsion | |
| RU2563522C1 (en) | STRAIN O №2102/Zabaikalsky/2010 FMD VIRUS Aphtae epizooticae OF TYPE O FOR CONTROL OF ANTIGENIC AND IMMUNOGENIC ACTIVITY OF FMD VACCINES AND FOR PRODUCTION OF BIOLOGICAL PRODUCTS FOR DIAGNOSTICS AND SPECIFIC PROPHYLAXIS OF FMD OF TYPE O | |
| RU2665849C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease type o | |
| RU2140452C1 (en) | Foot and mouth virus disease type a strain n 1707 "armenia-98" used for preparing diagnostic and vaccine preparations | |
| RU2242513C1 (en) | Foot and mouth disease virus strain a(georgia)1999/ 1721 type a for preparing diagnostic and vaccine preparations | |
| RU2348690C2 (en) | Amur strain no 1987 of asia-1 type murrain virus for antigenic and immunogenic performance control of vaccines and for production of medicines for diagnostics and specific prevention of asia-1 type murrain | |
| RU2220744C1 (en) | Vaccine against foot-and-mouth asia-1 type and method for it preparing | |
| RU2603255C1 (en) | STRAIN A N2155/Baikal/2013 OF MURRAIN VIRUS Aphtae epizooticae TYPE A FOR CONTROL OF ANTIGENIC AND IMMUNOGENIC ACTIVITY AND TO PRODUCE BIOPREPARATIONS FOR DIAGNOSTICS AND SPECIFIC PREVENTION OF MURRAIN TYPE A | |
| RU2682876C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine for o-type aphthous fever | |
| RU2204599C1 (en) | Foot-and-mouth virus strain "primorsky-2000" 1734 of type o1 for diagnostic and vaccine preparation preparing | |
| RU2212895C2 (en) | Vaccine against o-type foot-and-mouth disease and method for its preparing | |
| RU2294760C2 (en) | Sorbed inactivated vaccine against foot-and-mouth disease of type a | |
| RU2297452C2 (en) | Asia-1-type foot-and-mouth disease virus strain for producing of diagnostic and/or vaccine preparations | |
| RU2218397C1 (en) | Foot-and-mouth virus strain = 1737/georgia/2000 of type asia-1 for preparing diagnostic and vaccine preparations | |
| RU2526570C2 (en) | Inactivated sorbent type a foot-and-mouth disease vaccine | |
| RU2563345C1 (en) | Inactivated sorbed vaccine against fmd of type a | |
| RU2266328C1 (en) | Transmissible gastroenteritis of swine virus strain for production of diagnosis and vaccine preparations | |
| RU2266327C1 (en) | Transmissible gastroenteritis of swine virus strain for production of diagnosis and vaccine preparations | |
| RU2650768C1 (en) | Strain o no_2212/prymorsky/2014 of aphtae epizooticae foot and mouth disease virus of o type for the control of the antigenic and immunogenic activity of foot-mouth disease vaccines and for the manufacture of biologic drugs for diagnostics and specific prevention of foot and mouth disease of o type | |
| RU2553219C1 (en) | STRAIN OF FMD VIRUS Aphtae epizooticae OF TYPE A FOR CONTROLLING ANTIGENIC AND IMMUNOGENIC ACTIVITY AND FOR PRODUCTION OF BIOLOGICAL PREPARATIONS FOR DIAGNOSTICS AND SPECIFIC PROPHYLAXIS OF FMD OF TYPE A | |
| RU2665850C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease type a |