RU2144190C1 - Method of diagnosis of staphylococcus infection - Google Patents
Method of diagnosis of staphylococcus infection Download PDFInfo
- Publication number
- RU2144190C1 RU2144190C1 RU98100715A RU98100715A RU2144190C1 RU 2144190 C1 RU2144190 C1 RU 2144190C1 RU 98100715 A RU98100715 A RU 98100715A RU 98100715 A RU98100715 A RU 98100715A RU 2144190 C1 RU2144190 C1 RU 2144190C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- diagnosis
- staphylococcus
- cells
- sensitization
- infection
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 title claims abstract description 13
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 title claims abstract description 6
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title abstract description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 15
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 claims abstract description 14
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 5
- 206010041925 Staphylococcal infections Diseases 0.000 claims description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 6
- 238000009534 blood test Methods 0.000 claims description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 abstract description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 abstract description 3
- 238000004040 coloring Methods 0.000 abstract description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract 2
- 238000004159 blood analysis Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 12
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 8
- FVFVNNKYKYZTJU-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-1,3,5-triazine-2,4-diamine Chemical compound NC1=NC(N)=NC(Cl)=N1 FVFVNNKYKYZTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 6
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 5
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 4
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 229960001506 brilliant green Drugs 0.000 description 3
- HXCILVUBKWANLN-UHFFFAOYSA-N brilliant green cation Chemical compound C1=CC(N(CC)CC)=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)=C1C=CC(=[N+](CC)CC)C=C1 HXCILVUBKWANLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N safranin Chemical compound [Cl-].C=12C=C(N)C(C)=CC2=NC2=CC(C)=C(N)C=C2[N+]=1C1=CC=CC=C1 OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010044008 tonsillitis Diseases 0.000 description 3
- 208000035357 Focal Infection Diseases 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 206010033078 Otitis media Diseases 0.000 description 2
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 2
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 2
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 2
- 201000002014 Suppurative Otitis Media Diseases 0.000 description 2
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 2
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 2
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010009152 Chronic tonsillitis Diseases 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 1
- 108010014603 Leukocidins Proteins 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 201000009053 Neurodermatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010031252 Osteomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 208000005141 Otitis Diseases 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 206010037596 Pyelonephritis Diseases 0.000 description 1
- 101710154918 Trigger factor Proteins 0.000 description 1
- 230000008578 acute process Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 208000019258 ear infection Diseases 0.000 description 1
- 210000000959 ear middle Anatomy 0.000 description 1
- 238000004836 empirical method Methods 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000002075 main ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000007193 modulation by symbiont of host erythrocyte aggregation Effects 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 201000009890 sinusitis Diseases 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000004328 sodium tetraborate Substances 0.000 description 1
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине и микробиологии и может быть использовано во всех областях, касающихся медицины при установлении диагноза и идентификации возбудителя. The invention relates to medicine and microbiology and can be used in all areas related to medicine in establishing the diagnosis and identification of the pathogen.
В течение последних десятилетий диагностика и лечение заболеваний, сопровождающихся стафилококковой инфекцией, остается нерешенной проблемой практического здравоохранения. Обусловлено это значительным распространением возбудителя в окружающей среде (94,4 - 97,3% детей при выписке из роддома являются носителями патогенных стафилококков), выраженной устойчивостью стафилококков к воздействию неблагоприятных факторов, трудностью диагностики, широким диапазоном клинических проявлений - от стертых бессимптомных до тяжелых генерализованных форм, склонностью к затяжному и хроническому течению, снижением чувствительности к антибиотикам в связи с появлением антибиотикоустойчивых штаммов стафилококков, изменением биологических свойств, усилением их патогенности и вирулентности. Стафилококковая инфекция занимает первое место в этиологии и острых и хронических форм таких заболеваний, как гайморит, отит, пневмония, тонзиллит, бронхит, инфекционно-аллергическая бронхиальная астма, менингит, сепсис, пиелонефрит, остеомиелит, гнойные поражения кожи и подкожной клетчатки. Более того, обладая выраженной антигенной активностью, стафилококк сенсибилизирует организм, являясь "пусковым фактором" для возникновения экземы, нейродермита, псориаза. Так, в патогенезе истинной экземы роль сенсибилизации к стафилококковым аллергенам, поступающим из очагов фокальной инфекции, не вызывает сомнения. Для выявления аллергии к пиококкам применяют многочисленные аллергологические и иммунологические способы диагностики как in vitro, так и in vivo. Обилие способов диагностики свидетельствует о том, что ни один из них не имеет самостоятельного значения и должен использоваться в сочетании с другими способами и с учетом клинической картины и анамнеза болезни. Over the past decades, the diagnosis and treatment of diseases associated with staphylococcal infection has remained an unresolved practical public health problem. This is due to the significant spread of the pathogen in the environment (94.4 - 97.3% of children upon discharge from the hospital are carriers of pathogenic staphylococci), pronounced resistance of staphylococci to adverse factors, difficulty in diagnosis, a wide range of clinical manifestations - from erased asymptomatic to severe generalized forms, a tendency to a protracted and chronic course, a decrease in sensitivity to antibiotics due to the appearance of antibiotic-resistant strains of staphylococci, a change biological properties, increased their pathogenicity and virulence. Staphylococcal infection takes first place in the etiology of acute and chronic forms of diseases such as sinusitis, otitis media, pneumonia, tonsillitis, bronchitis, infectious allergic bronchial asthma, meningitis, sepsis, pyelonephritis, osteomyelitis, purulent skin and subcutaneous tissue lesions. Moreover, having pronounced antigenic activity, staphylococcus sensitizes the body, being a "trigger factor" for the occurrence of eczema, neurodermatitis, psoriasis. So, in the pathogenesis of true eczema, the role of sensitization to staphylococcal allergens coming from foci of focal infection is not in doubt. To detect allergies to pyococci, numerous allergological and immunological diagnostic methods are used both in vitro and in vivo. The abundance of diagnostic methods indicates that none of them has independent significance and should be used in combination with other methods and taking into account the clinical picture and medical history.
Известен способ диагностики стафилококковой инфекции с использованием реакции пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА). (Долматов В.В. Диагностика стафилококковых заболеваний у детей и взрослых: Метод рекомендации. - М., 1989, - 3-10 с.). В основу ее положен способ непрямой гемагглютинации по Бойдену. Суть реакции заключается в том, что на эритроцитах адсорбируют стандартный стафилококковый L-токсин и в присутствии соответствующей сыворотки происходит агглютинация эритроцитов. Антигеном в РПГА могут служить антигены стафилококка, полученные путем ультразвуковой дезинтеграции, нативный стафилококковый анатоксин. A known method for the diagnosis of staphylococcal infection using the reaction of passive (indirect) hemagglutination (RPHA). (Dolmatov V.V. Diagnosis of staphylococcal diseases in children and adults: Method of recommendation. - M., 1989, - 3-10 pp.). It is based on a method of indirect Boyden’s indirect hemagglutination. The essence of the reaction is that standard staphylococcal L-toxin is adsorbed on red blood cells and red blood cells agglutinate in the presence of appropriate serum. Staphylococcus antigens obtained by ultrasonic disintegration, native staphylococcal toxoid can serve as an antigen in RPHA.
Способ обладает невысокой чувствительностью (реакция положительна в 6-40% случаев у больных стафилодермиями; в 50% - при гастроэнтероколите, в 82,5% - при сепсисе); малоинформативен при выявлении остроты и тяжести заболевания, не дает представления о сенсибилизации организма стафилококками. The method has a low sensitivity (the reaction is positive in 6-40% of cases in patients with staphyloderma; in 50% with gastroenterocolitis, in 82.5% with sepsis); uninformative in identifying the severity and severity of the disease, does not give an idea of the sensitization of the body by staphylococci.
За прототип нами принят способ диагностики стафилококковой инфекции (Силич В. А. Затяжное, рецидивирующее и хроническое течение стафилококковой инфекции и ее диагностика. - Киев.: Здоровья, 1991. - 35-39 с.), включающий выявление в сыворотке крови антител к токсинам стафилококка. Для постановки реакции берут 0,5 мл сыворотки крови больного и стандартный L-токсин стафилококка (СААТ) в количестве 0,1 мл. Отбирают 0,3 мл взвеси в другую пробирку. Инкубируют первую пробирку 1 час при 37oC в термостате, а вторую при 4oC в холодильнике. В качестве контроля используют стандартную сыворотку. Затем все пробирки фотометрируют; бактериостатическую активность сыворотки крови (БАСК) вычисляют по формуле. БАСК характеризует способность организма сопротивляться стафилококковой инфекции.For the prototype, we adopted a method for the diagnosis of staphylococcal infection (V. Silich. A protracted, recurring and chronic course of staphylococcal infection and its diagnosis. - Kiev .: Health, 1991. - 35-39 p.), Including the detection of antibodies to toxins in serum staphylococcus. To set up the reaction, 0.5 ml of the patient’s blood serum and standard staphylococcus L-toxin (CAAT) are taken in an amount of 0.1 ml. Take 0.3 ml of suspension in another tube. Incubate the first tube for 1 hour at 37 o C in a thermostat, and the second at 4 o C in the refrigerator. As control using standard serum. Then all tubes are photometric; bacteriostatic activity of blood serum (BASK) is calculated by the formula. BASK characterizes the body's ability to resist staphylococcal infection.
К недостаткам способа, кроме отмеченных в аналоге, можно отнести
- необходимость неоднократного исследования крови у одного и того же больного для установления диагноза ввиду чрезвычайно широкого предела индивидуальных норм;
- невозможность применения у детей: даже при наличии стафилококковой инфекции содержание СААТ остается в пределах нормы, т.к. организм детей обладает малой способностью к выработке этих антител;
- отчетливая зависимость от формы заболевания: при тонзиллите и риносунусите уровень СААТ повышен, а при гнойном отите титры СААТ остаются в пределах нормы, несмотря на неоднократное выделение золотистого стафилококка из отделяемого среднего уха (при отите стафилококки в меньшей степени образуют L-токсин, продуцируя больше другие токсины (лейкоцидин);
- отсутствие корреляции с периодом заболевания. При остром процессе выявляется низкое содержание СААТ (не диагностически значимое), которое повышается к моменту выздоровления. При хронических болезнях из-за истощения иммунного ответа СААТ также мал. Таким образом, способ характеризуется достоверностью и является ненадежным в диагностике.The disadvantages of the method, in addition to those noted in the analogue, include
- the need for repeated blood tests in the same patient to establish a diagnosis due to the extremely wide range of individual norms;
- the impossibility of use in children: even in the presence of staphylococcal infection, the content of CAAT remains within normal limits, because the body of children has little ability to produce these antibodies;
- a clear dependence on the form of the disease: with tonsillitis and rhinosunusitis, the level of CAAT is increased, and with purulent otitis media, the titers of CAAT remain within normal limits, despite the repeated isolation of Staphylococcus aureus from the separated middle ear (with otitis media, staphylococci form L-toxin to a lesser extent, producing more other toxins (leukocidin);
- lack of correlation with the period of the disease. In the acute process, a low content of CAAT (not diagnostically significant) is detected, which increases by the time of recovery. In chronic diseases, due to the depletion of the immune response, CAAT is also small. Thus, the method is characterized by reliability and is unreliable in the diagnosis.
Задачи изобретения: разработка щадящего экспресс способа диагностики стафилококковой инфекции у детей и взрослых, обладающего чувствительностью, достоверностью, способностью коррелировать с тяжестью заболевания, информативного в отношении сенсибилизации организма больного. Objectives of the invention: the development of a gentle express method for the diagnosis of staphylococcal infection in children and adults, with sensitivity, reliability, the ability to correlate with the severity of the disease, informative regarding the sensitization of the patient's body.
Сущностью изобретения является исследование крови in vitro, предварительное выделение лимфоцитов, введение в пробу живой суточной культуры стафилококка, инкубирование в течение 3-х часов и после окрашивания по проценту клеток, присоединившихся к своей мембране 5 и более клеток микроорганизмов, определение наличия стафилококковой инфекции и степень сенсибилизации. The essence of the invention is an in vitro blood test, preliminary isolation of lymphocytes, the introduction of a live daily culture of staphylococcus into the sample, incubation for 3 hours and after staining by the percentage of cells that have attached 5 or more cells of microorganisms to their membrane, determining the presence of staphylococcal infection and the degree sensitization.
Способ выполняют следующим образом. The method is as follows.
Берут кровь из локтевой вены пациента в пробирку in vitro с трилоном Б (5 мкг Na 2 ЭДТА на 5 мл крови. Тщательно перемешивают кровь с сухим порошком Na 2 ЭДТА путем осторожного покачивания пробирки из стороны в сторону в течение 30-60 сек для того, чтобы получить однородную (гомогенную) суспензию. Наслаивают эту кровь на 1,5-2 мл смеси фиколл-верографин (d - 1,077 г/мл). Центрифугируют эту смесь 35-40 мин при 1500 об/мин. Выделяют кольцо лимфоцитов и переносят его в пробирку Флоринского. Дважды отмывают лимфоциты средой 199 или забуференным физраствором. Осадок лимфоцитов ресуспендируют в 1 мл среды 199 или забуференного физраствора, готовят рабочую концентрацию основных ингредиентов реакции (0,5 млрд. микробных тел стафилококка и 2•106 лимфоцитов в 1 мл). К 0,1 мл лимфоцитов приливают 0,1 мл живой культуры стафилококка в рабочей концентрации. Инкубируют смесь в термостате при 37oC в течение 150 мин. Продолжают инкубацию при комнатной температуре еще в течение 30 мин. Осаждают образовавшиеся комплексы центрифугированием при 1000 об/мин в течение 5 мин. Розетки фиксируют добавлением 0,05 мл 0,6% раствора глютаральдегида на 15 мин. Фиксацию прекращают после добавления 0,5 мл дистиллированной воды. Центрифугируют суспензию в течение 5 мин при 1000 об/мин. Сливают надосадочную жидкость, к осадку приливают 0,1 мл физраствора и тщательно пипетируют. Переносят содержимое пробирки на обезжиренное стекло, делают мазок, высушивают его при комнатной температуре, фиксируют метиловым спиртом и окрашивают 0,5% раствором сафранина в 0,25% растворе буры, а ядро докрашивают 1% раствором бриллиантовой зелени. Учет результатов реакции розеткообразования производят под иммерсией, отсчитывают 200 клеток (лимфоцитов), вычисляют % клеток, присоединивших к своей мембране 5 и более клеток микроорганизма, которые считают розеткообразующими.Take the blood from the patient’s ulnar vein to an in vitro tube with Trilon B (5 μg Na 2 EDTA per 5 ml of blood. Mix the blood with dry powder of Na 2 EDTA thoroughly by gently swaying the tube from side to side for 30-60 sec. to obtain a homogeneous (homogeneous) suspension. This blood is layered on 1.5-2 ml of a mixture of ficoll-verographin (d - 1,077 g / ml). Centrifuged this mixture for 35-40 minutes at 1500 rpm, a ring of lymphocytes is isolated and transferred in a Florinsky test tube, lymphocytes are washed twice with medium 199 or buffered saline. itov resuspended in 1 ml of 199 medium or buffered saline, prepared a working concentration of the main ingredients of the reaction (0.5 billion. aureus and microbial bodies 2 • 10 June lymphocytes in 1 ml). To 0.1 ml of lymphocyte poured 0.1 ml of a live culture of staphylococcus at a working concentration Incubate the mixture in a thermostat at 37 o C for 150 minutes Continue incubation at room temperature for another 30 minutes Precipitate the resulting complexes by centrifugation at 1000 rpm for 5 minutes Rosettes are fixed by adding 0.05 ml of a 0.6% glutaraldehyde solution for 15 minutes. Fixation is stopped after adding 0.5 ml of distilled water. Centrifuge the suspension for 5 minutes at 1000 rpm. The supernatant is drained, 0.1 ml of saline solution is added to the precipitate and pipetted carefully. Transfer the contents of the test tube to fat-free glass, make a smear, dry it at room temperature, fix it with methyl alcohol and stain with a 0.5% safranin solution in a 0.25% borax solution, and the core is stained with a 1% brilliant green solution. The results of the reaction of rosette formation are taken into account under immersion, 200 cells (lymphocytes) are counted, and% of cells that attach 5 or more microorganism cells to their membrane that are considered rosette are calculated.
Эмпирическим способом выявлено, что степень сенсибилизации определяют под микроскопом путем подсчета % клеток, присоединивших к своей мембране 5 и более клеток микроорганизмов, при этом в случае, если % присоединивших клеток составлял для S. aureus 15,28±1,01%, для S. epidermidis 26,56±1,06, определяли нормальное состояние. При увеличении этого уровня для S. aureus и S. epidermidis выявляют патологию. Причем чем выше этот уровень, тем выше сенсибилизация, и инфекция более устойчива. The empirical method revealed that the degree of sensitization is determined under a microscope by counting% of cells that have attached 5 or more cells of microorganisms to their membrane, while in case of% of attached cells it was 15.28 ± 1.01% for S. aureus, for S epidermidis 26.56 ± 1.06, normal state was determined. With an increase in this level, pathology is revealed for S. aureus and S. epidermidis. Moreover, the higher this level, the higher the sensitization, and the infection is more stable.
Вся процедура выполнения данной диагностики занимает по времени 3,5 часа (табл. 1, 2). The whole procedure for performing this diagnosis takes 3.5 hours in time (tab. 1, 2).
Вывод: из таблицы 1 видно, что предлагаемый способ имеет преимущество по всем вышеперечисленным параметрам и лишен недостатков прототипа. Conclusion: from table 1 it is seen that the proposed method has an advantage in all of the above parameters and is free from the disadvantages of the prototype.
Вывод: из таблицы 2 видно, что у больных, страдающих стафилококковыми заболеваниями, повышается уровень сенсибилизации к стафилококкам, причем клинически отмечается корреляция степени сенсибилизации и тяжести заболевания. Conclusion: from table 2 it is seen that in patients suffering from staphylococcal diseases, the level of sensitization to staphylococci increases, and a correlation between the degree of sensitization and the severity of the disease is clinically observed.
Способ апробирован в стационарных условиях в краевом кожно-венерологическом диспансере г. Краснодара. The method was tested under stationary conditions in the regional dermatovenerological dispensary of Krasnodar.
Пример 1. Больной Т., 22 года, госпитализирован в феврале 1997 года в Краснодарский краевой кожно-венерологический диспансер с диагнозом истинная экзема в стадии обострения. Сопутствующее заболевание: хронический тонзиллит. При поступлении больной предъявлял жалобы на мокнутие и зуд в области верхних конечностей в течение 2-х лет. Впервые экзема проявилась после сильных переживаний на службе в Армии. Ангинами болеет с детства 2-3 раза в год. Неоднократно лечился у дерматолога по месту жительства, однако рецидивы продолжались по 2-3 раза в год. Состоит на диспансерном учете у ЛОР-врача. В день поступления взята кровь in vitro на реакцию специфического розеткообразования: суспензию лимфоцитов, выделенную на выделенную на градиенте фиколл-верографин (0,1 мл), соединили с равным объемом суточной культуры стафилококков. Инкубировали 2 ч 30 мин при температуре 37oC и 30 мин при комнатной температуре, осадили центрифугированием в течение 5 мин при 200 g. Образовавшиеся розетки зафиксировали 0,05 мл 0,6% раствора глутарового альдегида в течение 15 минут при комнатной температуре. Фиксацию прекратили добавлением в пробирку 0,5 мл дистиллированной воды, центрифугировали 5 минут, супернатант слили. В осадок добавили 0,1 мл 0,85 раствора NaCl и осторожно ресуспендировали пастеровской пипеткой. На обезжиренном предметном стекле подготовили препарат, который после подсушивания окрасили 0,5% раствором сафранина с последующим докрашиванием 1% спиртовым раствором бриллиантовой зелени. Определили процент лимфоцитов, присоединивших к себе стафилококки: средняя степень сенсибилизации составила для S. aureus - 38,28 + 1,01% (644,9 + 32,21), для S. epidermidis - 40,59 + 1,06 (1200,19 + 49,87). На двенадцатый день лечения с учетом воздействия на очаг фокальной инфекции и стафилококковую сенсибилизацию (абакталом и стафилопротектином) кожный процесс полностью регрессировал. Результаты повторных обследований демонстрировали нормализацию большинства иммунологических показателей. Реакция специфического розеткообразования со S. aureus - 15,29 + 1,02 (344,9 + 32,21), со S. epidermidis - 26,58 + 1,06 (600,19 + 49,87).Example 1. Patient T., 22 years old, was hospitalized in February 1997 in the Krasnodar Regional Dermatovenerologic Dispensary with a diagnosis of true eczema in the acute stage. Concomitant disease: chronic tonsillitis. Upon admission, the patient complained of weeping and itching in the upper limbs for 2 years. For the first time, eczema manifested itself after strong feelings while serving in the Army. Angina has been sick since childhood 2-3 times a year. He was repeatedly treated by a dermatologist at the place of residence, but relapses continued 2-3 times a year. She is registered with an ENT doctor. On the day of admission, blood was taken in vitro for a specific rosette reaction: a suspension of lymphocytes isolated on a ficoll-verographin (0.1 ml) isolated on a gradient was combined with an equal volume of daily staphylococcus culture. Incubated for 2 hours 30 minutes at 37 ° C and 30 minutes at room temperature, precipitated by centrifugation for 5 minutes at 200 g. The resulting rosettes were fixed with 0.05 ml of a 0.6% glutaraldehyde solution for 15 minutes at room temperature. Fixation was stopped by adding 0.5 ml of distilled water to the tube, centrifuged for 5 minutes, the supernatant was drained. 0.1 ml of a 0.85 NaCl solution was added to the precipitate and carefully resuspended with a Pasteur pipette. A preparation was prepared on a defatted glass slide, which, after drying, was stained with a 0.5% safranin solution, followed by coloring with a 1% alcohol solution of brilliant green. The percentage of lymphocytes adhering to staphylococci was determined: the average degree of sensitization for S. aureus was 38.28 + 1.01% (644.9 + 32.21), for S. epidermidis it was 40.59 + 1.06 (1200 , 19 + 49.87). On the twelfth day of treatment, taking into account the effect on the focus of focal infection and staphylococcal sensitization (abactal and staphyloprotectin), the skin process completely regressed. The results of repeated examinations demonstrated the normalization of most immunological parameters. The reaction of specific rosetting with S. aureus - 15.29 + 1.02 (344.9 + 32.21), with S. epidermidis - 26.58 + 1.06 (600.19 + 49.87).
Вывод: т. о. выздоровление больного сопровождалось снижением количества розеткообразующих клеток и нормализацией сенсибилизации. Conclusion: so. the patient’s recovery was accompanied by a decrease in the number of rosette-forming cells and the normalization of sensitization.
Пример 2. Больной А., 34 лет госпитализирован в ноябре 1997 года в КККВД с диагнозом истинная экзема в стадии обострения. Из сопутствующих заболеваний: рецидивирующий гнойный отит справа. При поступлении больной жаловался на мокнутие и зуд в области верхних и нижних конечностей. Более 7 лет рецидивы 1-2 раза в год. Начало заболевания ни с чем не связывает. Отит обостряется 3-4 раза в год в течение 4 лет. Не раз обращался к отоларингологу, который назначал традиционное лечение. В день поступления у больного in vitro взята венозная кровь на количество антигензависимых розеткообразующих клеток. Живую суточную культуру стафилококков соединили с равным количеством (0,1 мл) лимфоцитов. Инкубировали при 37oC 2 ч 30 мин и 30 мин при комнатной температуре, розетки осадили центрифугированием и фиксировали 0,6% раствором глутарового альдегида. Препарат перенесли на стекло и окрасили 0,5% раствором сафранина и 1% раствором бриллиантовой зелени. Подсчет розеток произвели под иммерсией. Выявлен высокий уровень сенсибилизации со S. aureus - 45,61 + 7,15%, со S. epidermidis - 51,77 + 9,13. Назначено лечение, включающее коррекцию микробной аллергии. На восемнадцатый день госпитализации имелись только гиперпигментированные пятна на месте бывших очагов Произведены контрольные исследования крови: реакция специфического розеткообразования с золотистым стафилококком - 20,17 + 1,04%, с эпидермальным стафилококком-31,22+ 1,07%.Example 2. Patient A., 34 years old, was hospitalized in November 1997 in the CCVC with a diagnosis of true eczema in the acute stage. From concomitant diseases: recurrent suppurative otitis media on the right. Upon admission, the patient complained of weeping and itching in the upper and lower extremities. More than 7 years of relapse 1-2 times a year. The onset of the disease does not associate with anything. Otitis exacerbates 3-4 times a year for 4 years. More than once I turned to the otolaryngologist, who prescribed traditional treatment. On the day of admission, the patient received in vitro venous blood for the number of antigen-dependent rosette cells. A live daily culture of staphylococci was combined with an equal amount (0.1 ml) of lymphocytes. They were incubated at 37 ° C for 2 hours and 30 minutes at room temperature, the rosettes were precipitated by centrifugation and fixed with a 0.6% glutaraldehyde solution. The drug was transferred to glass and stained with a 0.5% solution of safranin and 1% solution of brilliant green. Counting outlets produced under immersion. A high level of sensitization was detected with S. aureus - 45.61 + 7.15%, with S. epidermidis - 51.77 + 9.13. Prescribed treatment, including the correction of microbial allergies. On the eighteenth day of hospitalization, there were only hyperpigmented spots on the site of the former foci. Control blood tests were performed: the reaction of a specific rosette with Staphylococcus aureus - 20.17 + 1.04%, with epidermal staphylococcus -31.22 + 1.07%.
Вывод: нормализация количества розеткообразующих клеток сопровождалась клиническим выздоровлением. Conclusion: the normalization of the number of rosette-forming cells was accompanied by clinical recovery.
Таким образом, предлагаемый способ диагностики обеспечивает сокращение времени постановки диагноза на 87,7%, позволяя раньше начать лечение, и экономит трудочасы медперсонала. Способ обладает высокой чувствительностью, предотвращает диагностические ошибки; дает возможность осуществлять клинико-иммунологический контроль за качеством проведенных манипуляций, предупреждает возникновение возможных рецидивов, а следовательно, значительно повышает терапевтический и экономический эффект. Thus, the proposed diagnostic method provides a reduction in the time of diagnosis by 87.7%, allowing you to start treatment earlier, and saves the hours of medical staff. The method has a high sensitivity, prevents diagnostic errors; makes it possible to carry out clinical and immunological control over the quality of the performed manipulations, prevents the occurrence of possible relapses, and therefore, significantly increases the therapeutic and economic effect.
Разработанный способ диагностики прост и доступен для широкого применения в условиях стационара и амбулатории. The developed diagnostic method is simple and affordable for widespread use in a hospital and outpatient setting.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98100715A RU2144190C1 (en) | 1998-01-13 | 1998-01-13 | Method of diagnosis of staphylococcus infection |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98100715A RU2144190C1 (en) | 1998-01-13 | 1998-01-13 | Method of diagnosis of staphylococcus infection |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU98100715A RU98100715A (en) | 1999-09-27 |
| RU2144190C1 true RU2144190C1 (en) | 2000-01-10 |
Family
ID=20201220
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU98100715A RU2144190C1 (en) | 1998-01-13 | 1998-01-13 | Method of diagnosis of staphylococcus infection |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2144190C1 (en) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2267129C2 (en) * | 2004-02-03 | 2005-12-27 | Оренбургская государственная медицинская академия (ОГМА) | Method for lifelong detecting acute phase of staphylococcal otitis media in experiment |
| RU2281472C2 (en) * | 2004-06-15 | 2006-08-10 | Владимир Владимирович Дворянчиков | Method of staining biological materials for microscopic investigations |
| RU2436100C2 (en) * | 2010-03-25 | 2011-12-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научный центр "Институт иммунологии" Федерального медико-биологического агентства (ФГБУ "Институт иммунологии" ФМБА России) | METHOD OF DETECTION OF SPECIFIC STAPHYLOCOCCUS IgE-ANTIBODIES IN BLOOD SERUM OF PATIENT WITH ALLERGIC DISEASES, HYPERSENSITIVE TO STAPHYLOCOCCUS ALLERGENS, WITH USING TEST SYSTEM FOR DETECTION OF SPECIFIC STAPHYLOCOCCUS IgE-ANTIBODIES, ACTIVE ALLERGEN SUBSTANCE (AAS) RECOVERED FROM STAPHYLOCOCCUS AND DIAGNOSTIC TECHNIQUE FOR STAPHYLOCOCCUS ALLERGY |
| RU2560415C2 (en) * | 2009-05-18 | 2015-08-20 | Юлиус-Максимилианс-Универзитэт Вюрцбург | Antibodies or their fragments, aimed against staphylococcus aureus epitope |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1670606A1 (en) * | 1987-11-17 | 1991-08-15 | Институт клинической и экспериментальной медицины СО АМН СССР | Method for diagnosis of streptococcal infection exacerbation |
| SU1684682A1 (en) * | 1989-02-07 | 1991-10-15 | Саратовский государственный медицинский институт | Method for diagnosis the types of carriage of staphylococcus aureus |
-
1998
- 1998-01-13 RU RU98100715A patent/RU2144190C1/en active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1670606A1 (en) * | 1987-11-17 | 1991-08-15 | Институт клинической и экспериментальной медицины СО АМН СССР | Method for diagnosis of streptococcal infection exacerbation |
| SU1684682A1 (en) * | 1989-02-07 | 1991-10-15 | Саратовский государственный медицинский институт | Method for diagnosis the types of carriage of staphylococcus aureus |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Иммунологические методы /Под ред. Г.Фримеля. - М.: Медицина, 1987, с.294 - 302. Силич В.А. Затяжное, рецидивирующее и хроническое течение стафилококковой инфекции и ее диагностика. - Киев: Здоровья, 1991, с.35 - 39. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2267129C2 (en) * | 2004-02-03 | 2005-12-27 | Оренбургская государственная медицинская академия (ОГМА) | Method for lifelong detecting acute phase of staphylococcal otitis media in experiment |
| RU2281472C2 (en) * | 2004-06-15 | 2006-08-10 | Владимир Владимирович Дворянчиков | Method of staining biological materials for microscopic investigations |
| RU2560415C2 (en) * | 2009-05-18 | 2015-08-20 | Юлиус-Максимилианс-Универзитэт Вюрцбург | Antibodies or their fragments, aimed against staphylococcus aureus epitope |
| RU2436100C2 (en) * | 2010-03-25 | 2011-12-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научный центр "Институт иммунологии" Федерального медико-биологического агентства (ФГБУ "Институт иммунологии" ФМБА России) | METHOD OF DETECTION OF SPECIFIC STAPHYLOCOCCUS IgE-ANTIBODIES IN BLOOD SERUM OF PATIENT WITH ALLERGIC DISEASES, HYPERSENSITIVE TO STAPHYLOCOCCUS ALLERGENS, WITH USING TEST SYSTEM FOR DETECTION OF SPECIFIC STAPHYLOCOCCUS IgE-ANTIBODIES, ACTIVE ALLERGEN SUBSTANCE (AAS) RECOVERED FROM STAPHYLOCOCCUS AND DIAGNOSTIC TECHNIQUE FOR STAPHYLOCOCCUS ALLERGY |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2837846B2 (en) | Methods for exposing group A streptococcal antigens and improved diagnostic tests for identifying group A streptococci | |
| Ofek et al. | Enzyme-linked immunosorbent assay for adherence of bacteria to animal cells | |
| Edwards et al. | Diagnosis of group A streptococcal infections directly from throat secretions | |
| RU2189253C1 (en) | Diagnosticum for identification of escherichia coli 0157:h7 and method of its preparing | |
| CN111518225A (en) | Application of lipopolysaccharide extracted from Brucella sheep vaccine strain M5 in preparation of products for diagnosis of human brucellosis | |
| US4329331A (en) | Diagnostic method for detection of systemic lupus erythematosus | |
| JP7081861B1 (en) | A kit for testing urothelial cancer that identifies Neu5Gc in urine modified with UMOD based on LIP, and a method for producing the same. | |
| JP4268358B2 (en) | Antibody and immunological assay | |
| Dharakul et al. | Rapid identification of Burkholderia pseudomallei in blood cultures by latex agglutination using lipopolysaccharide-specific monoclonal antibody. | |
| DE69319240T2 (en) | IN VITRO TEST FOR HELICOBACTER PYLORI | |
| RU2144190C1 (en) | Method of diagnosis of staphylococcus infection | |
| Wilson et al. | Fluorescent-antibody test for detection of Clostridium difficile in stool specimens | |
| Inglis et al. | Erythrocyte polyagglutination showing properties of both T and Tk, probably induced by Bacteroides fragilis infection | |
| KR101894489B1 (en) | Igm semiquantitative diagnostic kit for leptospirosis | |
| CN108387745B (en) | Application of CD4+ T lymphocyte signature protein in the identification of latent tuberculosis infection and active pulmonary tuberculosis | |
| EP0233048B1 (en) | Method of detecting urinary tract infection or inflammation | |
| CN100519759C (en) | Method for preparing agglutination reagent for rapidly detecting typhoid fever | |
| Pammenter, MD & Rossouw | Serological techniques for the diagnosis of cysticercosis | |
| RU2195666C2 (en) | Method of integrated diagnostics of allergy in children with infection pathology | |
| Suzuki et al. | Hemolysis in immune rabbits of autologous erythrocytes modified with common enterobacterial antigen | |
| RU2127883C1 (en) | Method of an express-diagnosis of diphtherial infection | |
| Kim et al. | Detection of Antigens from Gram-Negative Bacilli in Urine of Children with Urinary Tract Infections: I. Common Antigen of Enterobacteriaceae | |
| SU1573428A1 (en) | Method of diagnosis of immune transformation of thyroid gland | |
| Eneroth et al. | Antibiotic concentrations in saliva of purulent parotitis | |
| SU1767435A1 (en) | Method of immunoenzymodiagnosis of yersinioses |