RU2043995C1

RU2043995C1 - Method of preparing glucane-chitosan complex

Info

Publication number: RU2043995C1
Application number: RU92016176/05A
Authority: RU
Inventors: А.Я. Тесленко; И.Н. Воеводина; А.В. Галкин; Е.Б. Львова; Т.А. Никифорова; С.В. Николаева; Б.В. Михайлов; В.П. Козлов
Original assignee: Всероссийский научно-исследовательский институт пищевых ароматизаторов, кислот и красителей
Priority date: 1992-12-29
Filing date: 1992-12-29
Publication date: 1995-09-20

Abstract

FIELD: biotechnology. SUBSTANCE: method involves deproteinization of mycelium (biomass) of chitin-containing microscopic fungi Aspergillus niger, Blakeslia, Erispora, Actinomyces roseum, P. chrysogenum by successive treatment (2-4 times) with diluted solution of sodium hydroxide at 60-90 C. Then demineralization is carried out with diluted solution of hydrochloric, nitric or ortho-phosphoric acid, washing from fats and lipids and deacetylation of prepared product with 20-29% aqueous solution of sodium hydroxide for 30-120 min at 110-125 C. Complex is used as sorbent for metal ions at water treatment, in medicine, agriculture and food industry. EFFECT: improved method of complex preparing. 2 dwg, 4 tbl

Description

Изобретение относится к процессу получения глюкан-хитозанового комплекса из биомассы (мицелия) микроскопических грибов, применяющегося для решения экологических задач, в первую очередь для создания композиционных материалов, используемых для водоочистки, в медицине, сельском хозяйстве и пищевой промышленности. The invention relates to a process for producing a glucan-chitosan complex from biomass (mycelium) of microscopic fungi, which is used to solve environmental problems, primarily to create composite materials used for water treatment, in medicine, agriculture and the food industry.

В общем объеме биотехнологической продукции значительная доля приходится на промышленную микробиологию. При этом производство большинства производимых ею продуктов антибиотики, ферменты, органические кислоты, основано на процессах культивирования микроскопических грибов. В этой связи особую остроту приобретают вопросы утилизации крупнотоннажных отходов этих производств, в первую очередь, промышленных стоков и грибного мицелия. Несмотря на солидный возраст ряда промышленных биотехнологий вопросы утилизации отходов остаются практически не решенными. В то же время известно, что клеточная стенка многих микроскопических грибов содержит значительные количества хитина и других полисахаридов, что и обуславливает их привлекательность в качестве многотоннажного источника для получения этих продуктов. Однако, в отличие от глубоко проработанных и находящих широкое практическое применение способов получения хитина и его производных из панцырей ракообразных, технологии выделения хитин-содержащих материалов из микроскопических грибов в настоящее время не применяются. A significant share in the total volume of biotechnological products is industrial microbiology. Moreover, the production of most of its products antibiotics, enzymes, organic acids, based on the cultivation of microscopic fungi. In this regard, the utilization of large-scale waste from these industries, especially industrial effluents and mushroom mycelium, is especially acute. Despite the considerable age of a number of industrial biotechnologies, waste management issues remain virtually unresolved. At the same time, it is known that the cell wall of many microscopic fungi contains significant amounts of chitin and other polysaccharides, which makes them attractive as a large-tonnage source for obtaining these products. However, unlike deeply developed and widely used methods for producing chitin and its derivatives from crustacean shells, technologies for isolating chitin-containing materials from microscopic fungi are not currently used.

Известно, что первичные аминогруппы хитозана либо его комплексов обеспечивают селективное связывание ряда ионов металлов, что послужило основанием для использования его в качестве сорбента при очистке сточных вод от ионов токсичных металлов и радионуклеидов. Кроме того, установлено, что клеточные стенки грибов Rhizophusarium. Penicillum chryzogenum являются превосходными сорбентами U (3+) и Th (3+), в десятки раз превосходящими по эффективности ионообменные смолы. Хитозан широко применяется в качестве флокулянта для очистки промышленных и муниципальных сточных вод. Так в Японии в 1976 г. на эти цели было использовано более 500 т хитозана. It is known that the primary amino groups of chitosan or its complexes provide selective binding of a number of metal ions, which served as the basis for its use as a sorbent in the treatment of wastewater from toxic metal ions and radionuclides. In addition, it was found that the cell walls of Rhizophusarium fungi. Penicillum chryzogenum are excellent sorbents U (3+) and Th (3+), tens of times superior in efficiency to ion-exchange resins. Chitosan is widely used as a flocculant for the treatment of industrial and municipal wastewater. So in Japan in 1976, more than 500 tons of chitosan was used for these purposes.

Известно, что глюкан-хитозановый грибной комплекс активно сорбирует клетки ряда микроорганизмов, что открывает пути его практического использования в медицине. It is known that the glucan-chitosan mushroom complex actively sorb the cells of a number of microorganisms, which opens the way for its practical use in medicine.

Представленные материалы указывают на ряд полезных свойств полимеров клеточной стенки микроскопических грибов, позволяющих рассчитывать на их широкое практическое применение, прежде всего при решении экологических задач, в медицине и пищевой промышленности. The materials presented indicate a number of useful properties of the polymers of the cell wall of microscopic fungi, which allow one to count on their wide practical application, primarily in solving environmental problems, in medicine and the food industry.

Клеточная стенка микроскопических грибов, актиномицетов и дрожжей формируется на основе комплекса полисахаридов у многих видов указанных микроорганизмов, в частности Neurospora crassa, Pennicillum sp. Aspergi llus sp. внутренний слой клеточной стенки представлен микрофибрилламихитина, погруженными в 1-3 глюкановую матрицу. Они являются природным композиционным полисахаридным материалом. Композиционный материал клеточной стенки обеспечивает ряд биологических функций клетки, а в выделенном виде характеризуется комплексом уникальных свойств, в частности большой удельной поверхностью высокой степенью гидрофильности, наличием ионогенных и комплексообразующих групп. Несмотря на то, что часть полисахаридов клеточной стенки может растворяться в горячей воде, феноле и щелочи, значительная их доля не растворима в щелочи. Так щелочеустойчивая фракция в ряде случаев может составлять до 50% от общей массы клеточной стенки и содержать значительные, нередко до 45% количества хитина, как правило, ассоциированного с другими глюканами. The cell wall of microscopic fungi, actinomycetes and yeast is formed on the basis of a complex of polysaccharides in many species of these microorganisms, in particular Neurospora crassa, Pennicillum sp. Aspergi llus sp. the inner layer of the cell wall is represented by microfibrilamichitin immersed in 1-3 glucan matrix. They are a natural composite polysaccharide material. The composite material of the cell wall provides a number of biological functions of the cell, and in an isolated form is characterized by a complex of unique properties, in particular, a large specific surface with a high degree of hydrophilicity, the presence of ionogenic and complexing groups. Despite the fact that part of the polysaccharides of the cell wall can dissolve in hot water, phenol and alkali, a significant proportion of them are insoluble in alkali. Thus, in some cases, the alkali-resistant fraction can comprise up to 50% of the total mass of the cell wall and contain significant, often up to 45% of the amount of chitin, usually associated with other glucans.

Известны способы выделения производных глюкан-хитина из мицелия микроскопических грибов, актиномицетов и дрожжей. Known methods for the isolation of glucan-chitin derivatives from the mycelium of microscopic fungi, actinomycetes and yeast.

Известен способ [1] выделения глюкан-хитозанового комплекса из гриба Mucor rouscii путем предварительной отмывки клеточной стенки этанолом, автоклавирования в 1 н.NaOH в течение 15 мин при 121^оС и последующего экстрагирования водорастворимого хитозана соляной, уксусной или муравьиной кислотой.Known method [1] allocation glucan-chitosan complex of the fungus Mucor rouscii cell wall by pre-washing with ethanol, autoclaving in 1 N NaOH for 15 min at 121 ^{° C} and subsequent extraction of the water-soluble chitosan salt, acetic or formic acid.

Недостатком этого метода является то, что таким путем получают водорастворимые полиэлектролиты, которые невозможно использовать в качестве сорбционных материалов без их дополнительной переработки. The disadvantage of this method is that in this way get water-soluble polyelectrolytes, which cannot be used as sorption materials without additional processing.

Известен способ получения биосорбентов для биосорбции урана (U6+) [2] путем отмывки от цитоплазмы и белков клеточной стенки Rhixopus ashizus, включающий дезинтегрирование биомассы Rhizosus grhizus, последующую обработку 4% -ным раствором додецилсульфата натрия, центрифугирование и отмывку водой. A known method of producing biosorbents for biosorption of uranium (U6 +) [2] by washing from the cytoplasm and proteins of the cell wall of Rhixopus ashizus, including disintegration of Rhizosus grhizus biomass, subsequent treatment with 4% sodium dodecyl sulfate solution, centrifugation and washing with water.

Недостатком предлагаемого способа является полная дезинтеграция мицелия, то есть разрушение исходной структуры клеточной стенки, что не позволяет обеспечивать высокие сорбционные характеристики, к примеру, биологически активных веществ. The disadvantage of the proposed method is the complete disintegration of the mycelium, that is, the destruction of the original structure of the cell wall, which does not allow for high sorption characteristics, for example, biologically active substances.

Известен способ выделения глюкан-хитинового комплекса из дрожжей Saecharomyses corevisiаe [3] путем последовательной обработки клеточных стенок 8 М раствором мочевины, 1 М раствором едкого кали и 33 мМ раствором уксусной кислоты. A known method of isolating the glucan-chitin complex from the yeast Saecharomyses corevisiae [3] by sequentially treating the cell walls with 8 M urea solution, 1 M potassium hydroxide solution and 33 mm acetic acid solution.

Недостатком этого способа является получение сорбционных материалов с низким содержанием хитина, не превышающего 5% от веса клеточной стенки, обладающих невысокими сорбционными характеристиками по ионам тяжелых металлов. The disadvantage of this method is to obtain sorption materials with a low content of chitin, not exceeding 5% by weight of the cell wall, having low sorption characteristics for heavy metal ions.

Наиболее близким к предлагаемому является способ получения глюкан-хитозанового комплекса [4] Суть его в том, что путем депротеинизации мицелия гриба Аспергиллус нигер отхода производства лимонной кислоты 2,5%-ным раствором едкого натрия в течение 30 мин и последующего деацетилирования 40% -ным раствором NaOH при 128^оС в течение 6 ч с выходом 55% получают глюкан-хитозановый комплекс клеточной стенки гриба.Closest to the proposed is a method for producing a glucan-chitosan complex [4] Its essence is that by deproteinization of the mycelium of the fungus Aspergillus niger waste production of citric acid with 2.5% sodium hydroxide solution for 30 minutes and subsequent deacetylation with 40% NaOH solution at 128 ^about C for 6 hours with a yield of 55% get glucan-chitosan complex of the cell wall of the fungus.

Получаемый глюкан-хитозановый комплекс является неплохим сорбционным материалом ряда ионов металлов. Так с его помощью удаляют на 67% ионы Сu²⁺ из раствора с концентрацией 10 мг Cu²⁺/л. Авторами также заявлено, что глюкан-хитозановый комплекс можно использовать в качестве флокулянта полианионита альгината натрия, изготавливать из него мембраны и использовать для иммобилизации на нем лизоцима.The resulting glucan-chitosan complex is a good sorption material of a number of metal ions. So with its help, 67% Cu ²⁺ ions are removed from a solution with a concentration of 10 mg Cu ²⁺ / L. The authors also stated that the glucan-chitosan complex can be used as a flocculant of sodium alginate polyanionite, to make membranes from it and to use lysozyme to immobilize it.

Недостатками известного способа получения глюкан-хитозанового комплекса являются:
невозможность получения достаточно чистого глюкан-хитозанового комплекса, поскольку в рамках предлагаемого процесса не удается полностью удалять белки, неорганические соли и пигменты клеточных стенок грибов;
длительная обработка исходного сырья при высокой температуре и концентрации щелочи приводит к деструкции клеточных стенок грибов, что существенно ухудшает сорбционные характеристики получаемых продуктов;
предлагаемые в прототипе параметры проведения процесса щелочного деацетилирования хитина клеточной стенки не позволяет регулировать степень деацетилирования, то есть получать материалы с желаемым содержанием свободных аминогрупп хитозана;
совершенно не подаются обработке по предлагаемому способу образцы актиномицетов и ряда пеницилумов в виде высокой исходной зольности мицелия, а также невысокой механической прочности клеточных стенок. В результате такой обработки происходит полная деструкция клеточных стенок.The disadvantages of the known method for producing glucan-chitosan complex are:
the impossibility of obtaining a sufficiently pure glucan-chitosan complex, since within the framework of the proposed process it is not possible to completely remove proteins, inorganic salts and pigments of the cell walls of fungi;
prolonged processing of the feedstock at high temperature and alkali concentration leads to the destruction of the cell walls of the fungi, which significantly impairs the sorption characteristics of the resulting products;
the proposed in the prototype parameters of the process of alkaline deacetylation of chitin of the cell wall does not allow you to adjust the degree of deacetylation, that is, to obtain materials with the desired content of free amino groups of chitosan;
samples of actinomycetes and a number of penicillums in the form of a high initial ash content of the mycelium, as well as low mechanical strength of the cell walls, are not processed at all by the proposed method. As a result of this treatment, complete destruction of the cell walls occurs.

Технический результат, получаемый при осуществлении предлагаемого изобретения, заключается в сокращении времени дезацетилирования глюкан-хитинового комплекса, повышении частоты получаемых продуктов, сохранении нативной структуры клеточной стенки, и как результат повышения эксплуатационных характеристик и расширении области практического применения, в том числе при решении экологических задач, в пищевой промышленности и медицине. The technical result obtained by the implementation of the present invention is to reduce the time of deacetylation of the glucan-chitin complex, increase the frequency of the products obtained, preserve the native structure of the cell wall, and as a result of increasing operational characteristics and expanding the field of practical application, including in solving environmental problems, in the food industry and medicine.

Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что в способе получения глюкан-хитозанового комплекса, включающем депротеинизацию мицелия хитинсодержащего микроскопического гриба обработкой его разбавленным раствором едкого натра и деацетилирование концентрированным раствором едкого натра при повышенной температуре, используют мицелий грибов Aspergillus niger, Blacheslia trispora, Actinomyces roseum, P.Phrysogenum, депротеинизацию осуществляют 2-4 обработками при 60-90^оС, после чего реакционную массу обрабатывают разбавленным раствором соляной, азотной или орто-фосфорной кислоты и отмывают от жиров и липидов органическим растворителем, а дезацетилирование проводят 20-29%-ным раствором едкого натра при 110-125^оС в течение 30-120 мин.The essence of the invention lies in the fact that in the method of producing a glucan-chitosan complex, including deproteinization of the mycelium of a chitin-containing microscopic fungus by treating it with a dilute sodium hydroxide solution and deacetylation with concentrated sodium hydroxide solution at elevated temperature, the fungus mycelium Aspergillus niger, Blacheslia trispora, Actinomy is used P.Phrysogenum, deproteinization treatments performed 2-4 at 60-90 ^{° C,} after which the reaction mixture was treated with dilute hydrochloric acid, nitric acid or PTO-phosphoric acid and washed free of fats and lipids with an organic solvent, and the deacetylation is carried out 20-29% sodium hydroxide solution at 110-125 ^{° C} for 30-120 min.

Заявляемый способ отличается от известного новой последовательностью операций и режимами их проведения. Совокупность предлагаемых режимов операций в их последовательности обеспечивает достижение указанного технического результата. The inventive method differs from the well-known new sequence of operations and modes of their implementation. The combination of the proposed modes of operations in their sequence ensures the achievement of the specified technical result.

В табл.1 представлены результаты депротеинизации и деминерализации мицелия Асп.нигер. Table 1 presents the results of deproteinization and demineralization of the mycelium Asp.niger.

В этой таблице образцы 1^хх, 2^хх и 3^хх получены после деминерализации образцов 1,2,3, соответственно 2н. соляной кислотой, для депротеинизации использовали 8% -ный раствор NaOH. Содержание белка определяли по методу Лоури, основанному на окрашивании белка реактивом фолина с последующим измерением поглощения раствора при 750 нм (низкие концентрации) или 500 нм (высокие концентрации). Содержание белка в растворе определяли по калибровочному графику. Количество меланинов определяли в щелочных экстрактах фотометрически при длине волны 290-300 нм. Как следует из табл.1, наиболее полная отмывка от белков и меланинов достигается лишь после 2-4-кратной отмывки 2 н. едким натром при 60-90^оС, в зависимости от качества сырья. Отмывка при температуре ниже 60^оС существенно удлиняет время обработки. Обработка при температуре выше 90^оС приводит к сильному пенообразованию и выбросу реакционной массы из реактора.In this table, samples 1 ^xx , 2 ^xx and 3 ^xx were obtained after demineralization of samples 1,2,3, respectively 2n. hydrochloric acid, 8% NaOH solution was used for deproteinization. Protein content was determined by the Lowry method, based on staining the protein with folin reagent, followed by measuring the absorption of the solution at 750 nm (low concentrations) or 500 nm (high concentrations). The protein content in the solution was determined by the calibration graph. The amount of melanin was determined photometrically in alkaline extracts at a wavelength of 290-300 nm. As follows from table 1, the most complete washing of proteins and melanins is achieved only after 2-4-fold washing of 2 N. sodium hydroxide at 60-90 ^{° C,} depending on the quality of raw materials. Washing at a temperature below 60 ° ^C considerably lengthens the processing time. Processing at temperatures above 90 ^about C leads to strong foaming and ejection of the reaction mass from the reactor.

Электронно-микроскопические исследования показали, что после щелочной обработки сохраняется целостность мицелия, однако не удается избавиться от ряда солей (технологической природы), что подтверждается высокой зольностью полученных образцов. Деминерализацию образцов проводили 2н, раствором соляной кислоты в течение 3 ч при комнатной температуре и перемешивании. Как следует из табл. 1, после такой обработки зольность образцов существенно уменьшалась. Electron microscopic studies showed that after alkaline treatment the integrity of the mycelium is preserved, however, it is not possible to get rid of a number of salts (of a technological nature), which is confirmed by the high ash content of the samples obtained. Demineralization of the samples was carried out 2n, with a solution of hydrochloric acid for 3 hours at room temperature and with stirring. As follows from the table. 1, after this treatment, the ash content of the samples decreased significantly.

В табл. 2 представлены данные по деацетилированию полученного глюкан-хитинового комплекса A.niger, P.chrysogenum. Blakeseia taspora, Actinomycea sp. In the table. 2 presents data on the deacetylation of the obtained glucan-chitin complex of A.niger, P. chrysogenum. Blakeseia taspora, Actinomycea sp.

Повышение концентрации щелочи выше 29% экономически нецелесообразно. Снижение концентрации щелочи ниже 20% значительно удлиняет процесс деацетилирования. Так же и снижение температуры ниже 110^оС значительно удлиняет процесс деацетилирования. Повышение температуры выше 125^оС приводит к вскипанию раствора и выбросу реакционной массы из реактора. Степень деацетилирования хитина определяется временем реакции деацетилирования и природой исходного сырья и может варьироваться в широком пределе от 37 до 89% в пересчете на количество хитина в образце. Как следует из данных, представленных в табл. 2, увеличение времени реакции более 120 мин приводит к заметной деструкции клеточных стенок при 180 мин и практически полному их разрушению при проведении процесса в течение 360 мин, как это предлагается в прототипе. Из табл. 2 также следует, что с увеличением степени деацетилирования хитина возрастает доля кислоторастворимой фракции глюкан-хитозанового комплекса. Из данных потенциометрического титрования и ЯМР-спектрометрических измерений следует, что этим компонентом является поли(Д-глюкозамин) хитозан.An increase in alkali concentration above 29% is not economically feasible. A decrease in alkali concentration below 20% significantly lengthens the deacetylation process. Similarly, the reduction temperatures below 110 ^{° C} greatly lengthens the process of deacetylation. Raising the temperature above 125 ^about C leads to the boiling of the solution and the release of the reaction mass from the reactor. The degree of chitin deacetylation is determined by the deacetylation reaction time and the nature of the feedstock and can vary over a wide range from 37 to 89% in terms of the amount of chitin in the sample. As follows from the data presented in table. 2, an increase in the reaction time of more than 120 minutes leads to a noticeable destruction of the cell walls at 180 minutes and their almost complete destruction during the process for 360 minutes, as proposed in the prototype. From the table. 2 also implies that with an increase in the degree of chitin deacetylation, the proportion of the acid-soluble fraction of the glucan-chitosan complex increases. From the data of potentiometric titration and NMR spectrometric measurements it follows that this component is poly (D-glucosamine) chitosan.

Строение и состав полученного глюкан-хитозанового комплекса доказано методами ЯМР- и ИК-спектроскопии, потенциометрического и кондуктометрического титрования. The structure and composition of the obtained glucan-chitosan complex has been proved by NMR and IR spectroscopy, potentiometric and conductometric titration.

На фиг. 1 и табл.3 представлены спектр ЯМР С-13 и Н-1, а также химические сдвиги ядер С-13 и Н-1 глюкозамина и глюкан-хитин-хитозанового комплекса Асп.нигер. In FIG. 1 and Table 3 show the C-13 and H-1 NMR spectrum, as well as the chemical shifts of the C-13 and H-1 nuclei of glucosamine and the glucan-chitin-chitosan complex Asp.niger.

Химические сдвиги при С-2 углеродном атоме глюкопиранозного кольца (55,54 м. д. и 58,07 м.д.). характерны для углеродного атома, связанного с аминогруппой. На фиг. 2 представлен ИК-спектр глюкан-хитин-хитозанового комплекса Асп.нигер. Колебательный спектр хитозан-глюканового образца представляет из себя наложение спектра полимера, содержащего NH- и CONH-группы, на спектр, характерный для целлюлозы. Так, область частот 3500-3200 см^-1 соответствует NH и ОН-валентным колебаниям, область 3200-3000 см^-1 колебаниям, вызванным резонансом Ферми между амид-1 и амид-II. Область 2970-2920 см^-1 соответствует валентным колебаниям СН-групп. Интенсивные полости в области 1650-1550 см^-1 амид-1, амид-II, вызваны валентными колебаниями амидных группировок. Взаимодействию амид-III с валентными СН₂-группами соответствует поглощение в области (1400-1300)см^-1. Спектр глюкан-хитин-хитозанового комплекса в области меньших частот соответствует спектру, характерному для декстрана и целлюлозы. Приведенные данные подтверждают соответствие химической природы получаемого полисахаридного комплекса данным колебательной спектроскопии.Chemical shifts at the C-2 carbon atom of the glucopyranose ring (55.54 ppm and 58.07 ppm). characteristic of a carbon atom bound to an amino group. In FIG. Figure 2 shows the IR spectrum of the glucan-chitin-chitosan complex Asp.niger. The vibrational spectrum of a chitosan-glucan sample is the superposition of the spectrum of a polymer containing NH- and CONH-groups on the spectrum characteristic of cellulose. So, the frequency range of 3500-3200 cm ^-1 corresponds to NH and OH-stretching vibrations, the region of 3200-3000 cm ^-1 vibrations caused by the Fermi resonance between amide-1 and amide-II. The region of 2970-2920 cm ^-1 corresponds to the stretching vibrations of the CH groups. Intensive cavities in the region of 1650-1550 cm ^-1 amide-1, amide-II, are caused by stretching vibrations of amide groups. The interaction of amide III with valence CH ₂ groups corresponds to absorption in the region (1400-1300) cm ^-1 . The spectrum of the glucan-chitin-chitosan complex in the region of lower frequencies corresponds to the spectrum characteristic of dextran and cellulose. The data presented confirm the correspondence of the chemical nature of the resulting polysaccharide complex to vibrational spectroscopy data.

П р и м е р 1. 150 г влажного мицелия Асп.нигер, отхода производства лимонной кислоты, загружают в химический реактор емкостью 2 л и заливают 1,5 л 8% -ного водного раствора NaOH. Нагревание при температуре 90^оС и перемешивании (60 об/мин) продолжают в течение 60 мин. После чего содержимое реактора фильтруют, а полученный на фильтре осадок вновь переносят в реактор, куда приливают 1,5 л 8%-ного водного раствора NaOH. Нагревание при 90^оС и перемешивании повторяют в течение 60 мин. Полученный продукт фильтруют, промывают на фильтре водой 3 раза при соотношении мицелий-вода 1:20.PRI me R 1. 150 g of wet mycelium Asp.niger, waste production of citric acid, is loaded into a chemical reactor with a capacity of 2 l and pour 1.5 l of 8% aqueous NaOH solution. Heating at ⁹⁰ ° C and stirring (60 rev / min) was continued for 60 min. After that, the contents of the reactor are filtered, and the precipitate obtained on the filter is again transferred to the reactor, where 1.5 l of an 8% aqueous NaOH solution are added. Heating at 90 ^{° C} and stirring is repeated for 60 minutes. The resulting product is filtered, washed on the filter with water 3 times at a ratio of mycelium-water 1:20.

Полученный продукт загружают в реактор и заливают 1,5 л 2н. соляной кислоты. Деминерализацию продукта кислотой ведут при комнатной температуре в течении 3 ч, затем полученный продукт фильтруют и промывают на фильтре дистиллированной водой до нейтральных значений рН промывных вод. Для обезжиривания полученный продукт экстрагируют в реакторе 96% этиловым спиртом при комнатной температуре и перемешивании в течение 18 ч. Соотношение мицелий-этиловый спирт 1: 5. Полученный продукт фильтруют и отправляют на деацетилирование. Выход влажного глюкан-хитинового комплекса 90-95 г (сухого 18-19 г). 95 г полученного глюкан-хитинового комплекса Асп.нигер помещают в реактор емкостью 2 л и приливают 1,0 л 29%-ного водного раствора едкого натра. Нагревание реакционной массы при 125^оС и перемешивании ведут в течение 120 мин. Затем содержимое реактора фильтруют, используя в качестве фильтрующего материала стеклоткань либо хлопчатобумажную ткань Бельтинг. Полученный осадок переносят в емкость объемом 5 л и добавляют при перемешивании 4 л дистиллированной воды. К полученной суспензии в течение 4 ч постепенно приливают 4%-ный раствор соляной кислоты, доводя значение рН раствора до 6,5-7,0. Нейтрализованный продукт фильтруют и промывают дистиллированной водой при соотношении мицелий-вода 1: 10. Выход глюкан-хитозанового комплекса 65 г (сухого 17 г). Внешний вид цельный нативный мицелий. Степень деацетилирования хитина в комплексе составляет 89%
П р и м е р 2. 150 г влажного мицелия Аспергиллус нигер, отхода производства лимонной кислоты, загружают в химический реактор емкостью 2 л и заливают 1,5 л 8%-ного водного раствора NaOH. Нагревают при температуре 60^оС при перемешивании (60 об/мин) в течение 60 мин. После чего содержимое реактора фильтруют. Данную процедуру повторяют 4 раза. Далее обработку ведут как в примере 1. Полученный продукт фильтруют, промывают на фильтре водой 3 раза при соотношении мицелий-вода 1:20. Полученный продукт загружают в реактор и заливают 1,5 л 2н. соляной кислоты. Деминерализацию продукта кислотой ведут при комнатной температуре в течение 3 ч, затем полученный продукт фильтруют и промывают на фильтре дистиллированной водой до нейтральных значений рН промывных вод. Для обезжиривания полученный продукт экстрагируют в реакторе 96%-ным этиловым спиртом при комнатной температуре и перемешивании в течение 18 ч. Соотношение мицелий-этиловый спирт 15. Полученный продукт фильтруют и отправляют на деацетилирование. Выход влажного глюкан-хитинового комплекса 100-105 г (сухого 20-21 г).The resulting product is loaded into the reactor and poured into 1.5 l of 2n. of hydrochloric acid. The product is demineralized with acid at room temperature for 3 hours, then the resulting product is filtered and washed on the filter with distilled water to neutral pH values of the wash water. For degreasing, the resulting product was extracted in the reactor with 96% ethyl alcohol at room temperature and stirring for 18 hours. The ratio of mycelium-ethyl alcohol was 1: 5. The resulting product was filtered and sent for deacetylation. The yield of wet glucan-chitin complex is 90-95 g (dry 18-19 g). 95 g of the obtained Asp-niger glucan-chitin complex are placed in a 2 L reactor and 1.0 L of a 29% aqueous sodium hydroxide solution is added. Heating the reaction mass at 125 ^about C and stirring is carried out for 120 minutes Then the contents of the reactor are filtered using fiberglass or Belting cotton fabric as filter material. The resulting precipitate was transferred to a 5 L container and 4 L of distilled water was added with stirring. A 4% hydrochloric acid solution is gradually added to the resulting suspension over 4 hours, adjusting the pH of the solution to 6.5-7.0. The neutralized product is filtered and washed with distilled water at a ratio of mycelium-water of 1: 10. The yield of the glucan-chitosan complex is 65 g (dry 17 g). Appearance of one-piece native mycelium. The degree of chitin deacetylation in the complex is 89%
PRI me R 2. 150 g of wet mycelium Aspergillus niger, waste production of citric acid, loaded into a chemical reactor with a capacity of 2 l and pour 1.5 l of an 8% aqueous solution of NaOH. Heated at a temperature of 60 ^about With stirring (60 rpm) for 60 minutes Then the contents of the reactor are filtered. This procedure is repeated 4 times. Further processing is carried out as in example 1. The resulting product is filtered, washed on the filter with water 3 times at a ratio of mycelium-water 1:20. The resulting product is loaded into the reactor and poured into 1.5 l of 2n. of hydrochloric acid. The product is demineralized with acid at room temperature for 3 hours, then the resulting product is filtered and washed on the filter with distilled water to neutral pH values of the wash water. For degreasing, the resulting product was extracted in the reactor with 96% ethyl alcohol at room temperature and stirring for 18 hours. The ratio of mycelium to ethyl alcohol was 15. The resulting product was filtered and sent for deacetylation. The yield of wet glucan-chitin complex is 100-105 g (dry 20-21 g).

92 г полученного глюкан-хитинового комплекса Аспергиллус нигер помещают в реактор емкостью 2 л и приливают 1 л 20%-ного водного раствора NaOH. Нагревание реакционной массы при 125^оС и перемешивание ведут в течение 120 мин. Затем содержимое реактора фильтруют, используя в качестве фильтрующего материала стеклоткань либо хлопчатобумажную ткань Бельтинг. Полученный осадок переносят в емкость объемом 5 л и добавляют при перемешивании 4 л дистиллированной воды. К полученной суспензии в течение 4 ч постепенно приливают 4%-ный раствор соляной кислоты, доводя значение рН раствора до 6,5-7,0. Нейтрализованный продукт фильтруют и промывают дистиллированной водой при соотношении мицелий-вода 1: 10. Выход глюкан-хитозанового комплекса 18 г. Степень деацетилирования хитина в комплексе составляет 83%
П р и м е р 3. 150 г влажного мицелия Аспергиллус нигер, отхода производства лимонной кислоты, загружают в химический реактор емкостью 2 л и заливают 1,5 л 8%-ного водного раствора NaOH. Нагревание при температуре 75^оС и перемешивание (60 об/мин) ведут в течение 60 мин. После чего содержимое реактора фильтруют. Данную процедуру повторяют 3 раза. Далее обработку ведут как в примере 1. Полученный продукт фильтруют, промывают на фильтре водой 3 раза при соотношении мицелий-вода 1:20. Полученный продукт загружают в реактор и заливают 1,5 л 2н. соляной кислоты. Деминерализацию продукта кислотой ведут при комнатной температуре в течение 3 ч, затем полученный продукт фильтруют и промывают на фильтре дистиллированной водой до нейтральных значений рН промывных вод. Для обезжиривания полученный продукт экстрагируют в реакторе 96%-ным этиловым спиртом при комнатной температуре и перемешивании в течение 18 ч. Соотношение мицелий-этиловый спирт 1:5. Полученный продукт фильтруют и отправляют на деацетилирование. Выход влажного глюкан-хитинового комплекса 95-100 г (сухого 19-20 г). 100 г полученного глюкан-хитинового комплекса Аспергиллус нигер помещают в реактор емкостью 2 л и приливают 1,0 л 29% -ного водного раствора едкого натра. Нагревание реакционной массы при 125^оС и перемешивании ведут в течение 120 мин. Затем содержимое реактора фильтруют, используя в качестве фильтрующего материала стеклоткань либо хлопчатобумажную ткань Бельтинг. Полученный осадок переносят в емкость объемом 5 л и добавляют при перемешивании 4 л дистиллированной воды. К полученной суспензии в течение 4 ч постепенно приливают 4%-ный раствор соляной кислоты, доводя значение рН раствора до 6,5-7,0. Нейтрализованный продукт фильтруют и промывают дистиллированной водой при соотношении мицелий-вода (1:10). Выход глюкан-хитозанового комплекса 17,5 г (сухого). Внешний вид цельный нативный мицелий. Степень деацетилирования хитина в комплексе 85%
П р и м е р 4. 150 г в
лажного мицелия Асп.нигер, отхода производства лимонной кислоты, загружают в химический реактор емкостью 2 л и заливают 1,5 л 8%-ного водного раствора NaOH. Далее обработку ведут как в примере 1, только вместо соляной кислоты используют 3%-ный водный раствор орто-фосфорной кислоты, а деацетилирование проводят при 110^оС. Выход глюкан-хитозанового комплекса составляет 16 г. Внешний вид-цельный нативный мицелий. Степень диацетилирования хитина в комплексе составляет 87%
П р и м е р 5. 150 г влажного мицелия гриба Асп.нигер отхода производства лимонной кислоты загружают в реактор емкостью 2 л и заливают 1,5 л 8%-ного NaOH, нагревают при температуре 90^оС в течение 1 ч. Далее обработку ведут как в примере 1, только вместо соляной кислоты используют 3%-ный раствор азотной кислоты. Выход глюкан-хитозанового комплекса составляет 16,5 г. Внешний вид цельный нативный мицелий. Степень деацетилирования хитина в комплексе составляет 89%
П р и м е р 6. Аналогичен примеру 1 до стадии деацитилирования. Далее 95 г полученного глюкан-хитинового комплекса Асп.нигер помещают в реактор емкостью 2 л и приливают 1,0 л 29%-ного водного раствора едкого натра. Нагревание реакционной массы ведут при 125^оС в течение 60 мин. Далее обработку ведут как в примере 1. Выход конечного глюкан-хитозанового комплекса составил 18,5 г. Внешний вид цельный нативный мицелий. Степень деацетилирования хитина в комплексе составляет 60%
П р и м е р 7. Процесс получения глюкан-хитин-хитозанового комплекса ведут как в примере 6, только время деацетилирования составляет 30 мин. Выход конечного сухого глюкан-хитозанового комплекса составил 20 г. Внешний вид цельный нативный мицелий. Степень деацетилирования хитина в комплексе составляет 37%
П р и м е р 8. Процесс получения глюкан-хитозанового комплекса ведут как в примере 1, только время деацетилирования составляет 180 мин. Выход конечного сухого продукта составил 14 г. Внешний вид частично разрушенный мицелий. Степень деацетилирования хитина в комплексе составляет 89%
П р и м е р 9. Процесс получения глюкан-хитозанового комплекса ведут как в примере 1, только при деацетилировании используют 20%-ный NaOH. Выход конечного сухого продукта составил 19 г. Внешний вид цельный нативный мицелий. Степень деацитилирования хитина в комплексе составляет 60%
П р и м е р 10 (прототип). 95 г глюкан-хитинового комплекса, полученного при обработке 2,5%-ным раствором NaOH мицелия в течение 30 мин, помещают в реактор емкостью 2 л и приливают 1,0 л 40%-ного водного раствора NaOH. Далее обработку в течение 360 мин ведут при температуре 128^оС. Выход глюкан-хитозанового комплекса составил 50 г. Внешний вид полностью разрушенный мицелий. Степень деацетилирования хитина в комплексе составляет 80%
П р и м е р 11. В реактор емкостью 80 л загружают 6 кг мицелия гриба Асп. нигер и приливают 60 л 8%-ного водного раствора NaOH. Нагревание при 90^оС и периодическом перемешивании проводят в течение 60 мин. Полученную биомассу фильтруют на вакуум-фильтре и промывают на фильтре 150 л воды. Осадок переносят в реактор и операцию отмывки щелочью повторяют. Полученный продукт фильтруют на вакуум-фильтре и промывают водой до значения рН промывных вод 8,8-7,5. Осадок переносят в реактор и приливают 60 л 2н. соляной кислоты. При периодическом перемешивании проводят обработку продукта в течение 120 мин при комнатной температуре. Реакционную массу фильтруют и промывают дистиллированной водой до значения промывных вод 6,5-7,0. 4,9 г полученного глюкан-хитинового комплекса Асп.нигер помещают в реактор емкостью 80 л и приливают 50 л 29%-ного водного раствора едкого натра. Нагревание реакционной массы при 125^оС и перемешивании ведут в течение 90 мин. Затем содержимое реактора фильтруют, используя в качестве фильтрующего материала стеклоткань либо хлопчатобумажную ткань Бельтинг. Полученный осадок переносят в емкость объемом 90 л и добавляют при перемешивании 75 л дистиллированной воды. К полученной суспензии в течение 4 часов постепенно приливают 4% -ный раствор соляной кислоты, доводя значение рН раствора до 6,5-7,0. Нейтрализованный продукт фильтруют и промывают дистиллированной водой при соотношении мицелий-вода 1:10. Полученный на фильтре продукт сушат методом распылительной сушки. Выход влажного глюкан-хитозанового комплекса составил 4,2 кг, сухого 0,8 кг. Внешний вид цельный нативный мицелий. Степень деацетилирования хитина в комплексе составляет 80%
П р и м е р ы 12-20 аналогичны примерам 1-9 соответственно, но в процессе используют влажный мицелий P.Chrysogenum отход производства антибиотиков. Выход влажного глюкан-хитозанового комплекса составил 63-65 г. Внешний вид цельный нативный мицелий. Степень деацетилирования хитина в комплексе составляет от 37 до 89%
П р и м е р ы 21-29 аналогичны примерам 1-9 соответственно, но в процессе используют влажный мицелий Blakeclia trispora отход производства каротина. Выход влажного глюкан-хитозного комплекса составил 65-70 г. Внешний вид цельный нативный мицелий. Степень деацетилирования хитина в комплексе составляет от 37 до 71%
П р и м е р ы 30-38 аналогичны примерам 1-9 соответственно, но в процессе используют влажный мицелий Actinomyces roseum отход производства антибиотиков. Выход влажного глюкан-хитозанового комплекса составил 65-68 г. Внешний вид цельный нативный мицелий. Степень деацетилирования хитина в комплексе составляет до 37% Характеристики сорбционной способности сорбентов на основе глюкан-хитозанового полимерных комплексов Асп.нигер, P.Chrysogenum. B.trispora, A.roseum представлены в табл. 4.92 g of the obtained Aspergillus niger glucan-chitin complex are placed in a 2 liter reactor and 1 liter of a 20% aqueous NaOH solution is added. Heating the reaction mass at ¹²⁵ ° C and stirring was conducted for 120 minutes. Then the contents of the reactor are filtered using fiberglass or Belting cotton fabric as filter material. The resulting precipitate was transferred to a 5 L container and 4 L of distilled water was added with stirring. A 4% hydrochloric acid solution is gradually added to the resulting suspension over 4 hours, adjusting the pH of the solution to 6.5-7.0. The neutralized product is filtered and washed with distilled water at a mycelium-water ratio of 1: 10. The yield of the glucan-chitosan complex is 18 g. The degree of chitin deacetylation in the complex is 83%
PRI me R 3. 150 g of wet mycelium Aspergillus niger, waste production of citric acid, is loaded into a chemical reactor with a capacity of 2 l and pour 1.5 l of an 8% aqueous solution of NaOH. Heating at a temperature of 75 ^about C and stirring (60 rpm) are carried out for 60 minutes Then the contents of the reactor are filtered. This procedure is repeated 3 times. Further processing is carried out as in example 1. The resulting product is filtered, washed on the filter with water 3 times at a ratio of mycelium-water 1:20. The resulting product is loaded into the reactor and poured into 1.5 l of 2n. of hydrochloric acid. The product is demineralized with acid at room temperature for 3 hours, then the resulting product is filtered and washed on the filter with distilled water to neutral pH values of the wash water. For degreasing, the resulting product was extracted in the reactor with 96% ethyl alcohol at room temperature and stirring for 18 hours. The ratio of mycelium to ethyl alcohol was 1: 5. The resulting product is filtered and sent for deacetylation. The yield of wet glucan-chitin complex is 95-100 g (dry 19-20 g). 100 g of the obtained Aspergillus niger glucan-chitin complex are placed in a 2 L reactor and 1.0 L of a 29% aqueous sodium hydroxide solution is added. Heating the reaction mass at 125 ^about C and stirring is carried out for 120 minutes Then the contents of the reactor are filtered using fiberglass or Belting cotton fabric as filter material. The resulting precipitate was transferred to a 5 L container and 4 L of distilled water was added with stirring. A 4% hydrochloric acid solution is gradually added to the resulting suspension over 4 hours, adjusting the pH of the solution to 6.5-7.0. The neutralized product is filtered and washed with distilled water at a ratio of mycelium-water (1:10). The output of the glucan-chitosan complex is 17.5 g (dry). Appearance of one-piece native mycelium. The degree of deacetylation of chitin in the complex 85%
PRI me R 4. 150 g in
of the mycelium Asp.niger, a waste product of citric acid, is loaded into a 2 L chemical reactor and 1.5 L of an 8% aqueous NaOH solution is poured. Further treatment is carried out as in Example 1, except that instead of hydrochloric acid was used in 3% aqueous solution of ortho-phosphoric acid and the deacetylation is carried out at 110 ° ^C. Yield chitosan-glucan complex is 16, the External view native piece mycelium. The degree of chitin diacetylation in the complex is 87%
PRI me R 5. 150 g of wet mycelium of the fungus Asp.niger waste production of citric acid is loaded into a reactor with a capacity of 2 l and pour 1.5 l of 8% NaOH, heated at a temperature of 90 ^about C for 1 h. Next processing is carried out as in example 1, only instead of hydrochloric acid using a 3% solution of nitric acid. The yield of the glucan-chitosan complex is 16.5 g. Appearance is a whole native mycelium. The degree of chitin deacetylation in the complex is 89%
PRI me R 6. Similar to example 1 to the stage of deacylation. Next, 95 g of the obtained Asp-niger glucan-chitin complex are placed in a 2 liter reactor and 1.0 liter of a 29% aqueous sodium hydroxide solution is added. Heating the reaction mass is carried out at 125 ^{° C} for 60 min. Further processing is carried out as in example 1. The yield of the final glucan-chitosan complex was 18.5 g. Appearance of whole native mycelium. The degree of deacetylation of chitin in the complex is 60%
PRI me R 7. The process of obtaining glucan-chitin-chitosan complex is carried out as in example 6, only the deacetylation time is 30 minutes The yield of the final dry glucan-chitosan complex was 20 g. Appearance is a whole native mycelium. The degree of deacetylation of chitin in the complex is 37%
PRI me R 8. The process of obtaining the glucan-chitosan complex is carried out as in example 1, only the deacetylation time is 180 minutes The yield of the final dry product was 14 g. Appearance of partially destroyed mycelium. The degree of chitin deacetylation in the complex is 89%
PRI me R 9. The process of obtaining glucan-chitosan complex is carried out as in example 1, only with deacetylation using 20% NaOH. The yield of the final dry product was 19 g. Appearance of solid native mycelium. The degree of chitin deacylation in the complex is 60%
PRI me R 10 (prototype). 95 g of the glucan-chitin complex obtained by treatment with a 2.5% solution of mycelium NaOH for 30 minutes are placed in a 2 liter reactor and 1.0 liter of a 40% aqueous NaOH solution is added. Further treatment for 360 minutes carried out at a temperature of 128 ^C. The yield chitosan-glucan complex was 50, the External appearance completely destroyed mycelium. The degree of deacetylation of chitin in the complex is 80%
PRI me R 11. In a reactor with a capacity of 80 l load 6 kg of mycelium of the fungus Asp. niger and poured 60 liters of an 8% aqueous solution of NaOH. Heating at 90 ^about C and periodic stirring is carried out for 60 minutes The resulting biomass is filtered on a vacuum filter and washed on the filter with 150 l of water. The precipitate is transferred to the reactor and the alkali washing operation is repeated. The resulting product is filtered on a vacuum filter and washed with water until the pH of the wash water is 8.8-7.5. The precipitate was transferred to a reactor and 60 L of 2N were added. of hydrochloric acid. With periodic stirring, the product is processed for 120 minutes at room temperature. The reaction mass is filtered and washed with distilled water to a wash water value of 6.5-7.0. 4.9 g of the obtained Asp-niger glucan-chitin complex are placed in an 80 L reactor and 50 L of a 29% aqueous solution of sodium hydroxide are added. Heating the reaction mass at 125 ^about C and stirring is carried out for 90 minutes Then the contents of the reactor are filtered using fiberglass or Belting cotton fabric as filter material. The resulting precipitate was transferred to a 90 L container and 75 L of distilled water was added with stirring. A 4% hydrochloric acid solution is gradually added to the resulting suspension over 4 hours, adjusting the pH of the solution to 6.5-7.0. The neutralized product is filtered and washed with distilled water at a ratio of mycelium-water 1:10. The product obtained on the filter is dried by spray drying. The yield of wet glucan-chitosan complex was 4.2 kg, dry 0.8 kg. Appearance of one-piece native mycelium. The degree of deacetylation of chitin in the complex is 80%
EXAMPLES 12-20 are similar to examples 1-9, respectively, but in the process wet P. mycelium Chrysogenum mycelium is used for waste production of antibiotics. The yield of the wet glucan-chitosan complex was 63-65 g. Appearance is a whole native mycelium. The degree of chitin deacetylation in the complex is from 37 to 89%
EXAMPLES 21-29 are similar to examples 1-9, respectively, but in the process, wet mycelium Blakeclia trispora uses carotene production waste. The yield of the wet glucan-chitose complex was 65-70 g. Appearance is a whole native mycelium. The degree of chitin deacetylation in the complex is from 37 to 71%
PRI me R s 30-38 similar to examples 1-9, respectively, but in the process using wet mycelium Actinomyces roseum waste production of antibiotics. The yield of the wet glucan-chitosan complex was 65-68 g. Appearance is a whole native mycelium. The degree of chitin deacetylation in the complex is up to 37%. Characteristics of the sorption ability of sorbents based on glucan-chitosan polymer complexes Asp.niger, P. Chrysogenum. B.trispora, A.roseum are presented in table. 4.

Примечание к табл.4. Note to table 4.

Сорбцию ионов металлов проводили из растворов солей Pb (NO₃) Hg(Ac)₂, K₂Cr₂O₇, CuSO₄, с исходной концентрацией 0,52 мг/мл, красителей 70 мг/мл, белка 1,0 мг/мл.Sorption of metal ions was carried out from solutions of salts of Pb (NO ₃ ) Hg (Ac) ₂ , K ₂ Cr ₂ O ₇ , CuSO ₄ , with an initial concentration of 0.52 mg / ml, dyes 70 mg / ml, protein 1.0 mg / ml

2) АЗ глюкан-хитозановый комплекс Асп.нигер, номер соответствует примеру. 2) AZ glucan-chitosan complex Asp.niger, number corresponds to the example.

3) ПЗ глюкан хитозановый комплекс P.chrysogenum, номер соответствует примеру;
4) БЗ глюкан-хитозановый комплекс В.trispora, номер соответствует примеру.3) PZ glucan chitosan complex P.chrysogenum, number corresponds to the example;
4) BZ glucan-chitosan complex B.trispora, number corresponds to the example.

5) СП глюкан-хитозановый комплекс А.roseum, номер соответствует примеру. 5) SP glucose-chitosan complex A.roseum, number corresponds to the example.

6) краситель активный синий и активный красный. 6) the dye is active blue and active red.

7) белок бычий сывороточный альбумин. 7) bovine serum albumin protein.

Предлагаемый способ получения глюкан-хитозанового композиционного материала позволяет сохранять нативное строение клеточной стенки, регулировать степень деацетилирования хитиновых волокон без их заметной деструкции, что позволяет получать материалы с высокими эксплуатационными характеристиками. The proposed method for producing glucan-chitosan composite material allows you to maintain the native structure of the cell wall, to regulate the degree of deacetylation of chitin fibers without noticeable destruction, which allows to obtain materials with high performance characteristics.

Получаемый по разработанному методу глюкан-хитозановый комплекс является высокоэффективным сорбционным материалом ионов металлов, органических красителей и полупродуктов, пестицидов, нуклеиновых кислот и других биологически активных веществ. Его можно использовать в качестве флокулянта, носителя для иммобилизации ферментов и клеток микроорганизмов, в качестве диэтарной пищевой добавки, при создании полимерных композиционных материалов, в медицине, в ветеринарии. The glucan-chitosan complex obtained by the developed method is a highly efficient sorption material of metal ions, organic dyes and intermediates, pesticides, nucleic acids and other biologically active substances. It can be used as a flocculant, a carrier for immobilizing enzymes and microorganism cells, as a dietary food supplement, when creating polymer composite materials, in medicine, in veterinary medicine.

Claims

METHOD FOR PRODUCING A Glucan-Chitosan Complex, comprising the steps of deproteinizing the mycelium of a chitin-containing microscopic fungus by treating it with a dilute sodium hydroxide solution and deacetylation with a concentrated sodium hydroxide solution at elevated temperature, characterized in that fungi mycelium selected from the group of Aspergillus nigris, triceps roseum, P. chrysogenum, and deproteinization was carried out by two four treatments at 60 90 ^o C, after which the reaction mixture was treated with dilute hydrochloric , Nitric or phosphoric acid and washed free of fats and lipids with an organic solvent, and the deacetylation is carried out 20 29% solution of sodium hydroxide at 110 - 125 ^o C for 30 120 minutes.