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KR20250128349A - 융합체 및 이의 용도 - Google Patents

융합체 및 이의 용도

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KR20250128349A
KR20250128349A KR1020257024586A KR20257024586A KR20250128349A KR 20250128349 A KR20250128349 A KR 20250128349A KR 1020257024586 A KR1020257024586 A KR 1020257024586A KR 20257024586 A KR20257024586 A KR 20257024586A KR 20250128349 A KR20250128349 A KR 20250128349A
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KR
South Korea
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fusion
dnmt3a
dnmt3l
dcas9
Prior art date
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Pending
Application number
KR1020257024586A
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English (en)
Inventor
샤오슈아이 마오
쥔정 자오
잉 장
루이민 뤼
하오 루오
Original Assignee
에피제닉 테라퓨틱스 피티이 리미티드
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Publication date
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Abstract

융합체 및 이의 용도로서, 상기 융합체는 핵산 결합 도메인 및 하나 또는 복수의 효과기 도메인을 포함하고, 상기 효과기 도메인은 후성 유전학적 변형 도메인(epigenetic modification domain) 및/또는 전사 조절 도메인 중 하나 또는 복수를 포함하며, 상기 융합체에서 상기 후성 유전학적 변형 도메인 및/또는 상기 전사 조절 도메인의 총 수는 2가지 이상이다. 본 출원은 또한 표적 유전자 발현을 조절하는 제품을 제조하고 관련 약물을 제조하기 위한 상기 융합체의 용도를 제공한다.

Description

융합체 및 이의 용도
본 출원은 생물의약 분야에 관한 것으로, 구체적으로 유전자 편집을 위한 융합체 및 이의 용도에 관한 것이다.
유전자 후성 유전학적 변형의 이상은 생활에서 흔히 보는 대사 장애, 심혈관 질환 및 암 등과 같은 다양한 질병의 발생 및 발달과 밀접한 관련이 있으며, 우전자 후성 유전학적 편집 도구는 유전자 서열을 변경하지 않고도 해당 유전자의 전사 조절을 달성할 수 있으며, 이 과정에서 영구적인 DNA 손상이나 유해한 돌연변이 및 탈표적 효과가 발생하지 않으며, 또한 후성유전학적 치료법은 여러 유전자의 활성을 동시에 조절하여 더 나은 치료 효과를 제공할 수 있어 기존 유전자 치료의 한계를 보완하고, 이러한 질환 치료에 새로운 희망을 제공한다. 반면, 부위 지향적 유전자 변형 기술의 발전, 특히 CRISPR/Cas9 기술의 발전으로 인해 자연적인 염색질 환경에서 표적적으로 에피게놈 편집과 전사 조절을 수행할 수 있게 되었다.
현재, 후성 유전학적 변형과 전사 조절의 설계는 주로 뉴클레아제의 결합 활용을 기반으로 하며, 그중에서도 조작된 결함형 뉴클레아제(dCas9)의 결합이 가장 효과적이고, 이의 설계 원리는 다양한 후성 조절 효과기를 dCas9에 융합시키고, 상기 뉴클레아제가 표적 DNA를 표적으로 결합하는 특성을 이용하여 특정 게놈 위치에서 에피게놈을 편집하는 데에 있다. 이러한 트랜스 조절 도메인과 단백질은 프로모터 영역의 dCas9 표적 부위에 RNA 중합효소의 결합을 방해하거나 내인성 전사 융합체를 모집함으로써 기능을 발휘한다. 현재 전사 조절 및 후성 유전학적 표적 변형 기술을 이용하여 체내에서 후성 유전학적 이상으로 인한 질환을 치료하는 연구는 아직 손에 꼽을 정도이며, 기존의 편집 도구들은 전사 조절 효율의 저하 및 표적 유전자의 변형(예를 들어, 메틸화 변형) 범위의 제한 등과 같은 문제점을 가지고 있다.
본 출원은 유전자 편집을 기반으로한 융합체 및 이의 용도를 제공하며, 상기 융합체는 핵산 결합 도메인 및 효과기 도메인을 포함하고, 여기서 상기 효과기 도메인은 후성 유전학적 변형제 및 전사 조절 인자를 포함하며, 상기 효과기 도메인은 상기 핵산 결합 도메인의 N 말단, C 말단 또는 N 말단 및 C 말단 양측에 연결된다. 상기 융합체은 당업계의 동일하거나 유사한 도메인 및 조절 요소로 구성된 융합체에 비해 더 높은 표적 유전자 조절 효율을 가지며, 다양한 후성 유전학적 변형제 및 전사 조절 인자를 효과기 도메인에 융합시킴으로써 표적 유전자의 후성 유전학적 변형 범위를 풍부하게 할 수 있다. 또한 본 출원의 융합체는 표적 유전자 발현을 억제하는 제품을 제조하고 약물을 제조하는데 사용될 수 있다.
일 양태에서, 본 출원은 핵산 결합 도메인 및 하나 또는 복수의 효과기 도메인을 포함하는 융합체를 제공하며, 상기 효과기 도메인은 후성 유전학적 변형 도메인(epigenetic modification domain) 및/또는 전사 조절 도메인 중 하나 또는 복수를 포함하며, 상기 후성 유전학적 변형 도메인 및/또는 전사 조절 도메인을 포함하는 융합체를 제공한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 핵산 결합 도메인은 DNA 결합 도메인이다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 DNA 결합 도메인은 TALE 도메인, 징크 핑거(zinc finger) 도메인, tetR 도메인, 광범위 뉴클레아제(large-range nuclease), Cas 단백질, Argonaute（Ago）단백질, 및 이들의 동족체 또는 이들의 변형 형태에서 선택된다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 DNA 결합 도메인은 표적 유전자좌(locus)의 목표 서열에 결합할 수 있다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 DNA 결합 도메인은 가이드 RNA와 결합할 수 있다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 가이드 RNA는 상기 표적 유전자좌의 목표 서열을 특이적으로 인식하고 이와 혼성화할 수 있다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 DNA 결합 도메인은 Cas 단백질이며, 상기 Cas 단백질은 II클래스 Cas 뉴클레아제이다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 Cas 단백질은 II클래스 II형 Cas 뉴클레아제 및 II클래스 V형 Cas 뉴클레아제이다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 DNA 결합 도메인은 Cas9 단백질이다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 Cas9 단백질은 절단-비활성(dead) Cas 단백질(dCas9)이다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 핵산 결합 도메인은 서열번호 1 내지 7, 353 및 354 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 후성 유전학적 변형 도메인은 DNA 탈아민화 활성, DNA 메틸트랜스퍼라아제 활성, DNA 탈메틸화효소 활성, DNA 아민화 활성, DNA 산화 활성, DNA 헬리카제 활성, 히스톤 아세틸트랜스퍼라제 활성, 히스톤 탈아세틸라제 활성, 히스톤 메틸트랜스퍼라아제 활성, 히스톤 탈메틸화효소 활성, 히스톤 키나아제 활성, 히스톤 포스파타제 활성, 히스톤 유비퀴틴 리가제 활성 및 히스톤 탈유비퀴틴화 활성에서 선택된다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 후성 유전학적 변형 도메인은 DNA 메틸트랜스퍼라아제 및/또는 이의 기능적 활성 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 DNA 메틸트랜스퍼라아제는 DNMT3A, DNMT3B, Dnmt3c, DNMT1, DNMT2 및 DNMT3L에서 선택된다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 후성 유전학적 변형 도메인은 복수의 DNA 메틸트랜스퍼라아제 및/또는 이의 기능적 활성 단편을 포함하고, 상기 복수의 DNA 메틸트랜스퍼라아제 및/또는 이의 기능적 활성 단편은 링커 서열을 통해 연결된다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 후성 유전학적 변형 도메인은 적어도 하나의 DNMT3A 및 적어도 하나의 DNMT3L을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 DNA 메틸트랜스퍼라아제는 서열번호 8 내지 21 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 전사 조절 도메인은 전사 활성화 도메인 또는 전사 억제제 도메인이다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 전사 억제제 도메인은: KRAB, ZIM3, ZNF680, ZNF554, ZNF264, ZNF582, ZNF324, ZNF669, ZNF354A, ZNF82, ZNF595, ZNF419, ZNF566, ZIM2, EHMT2, SUV39H1, ZFPM1, TRIM28, EZH2, MXD1, SID, LSD1, HP1a, HDAC3, ZNF436, ZNF257, ZNF675, ZNF490, ZNF320, ZNF331, ZNF816, ZNF41, ZNF189, ZNF528, ZNF543, ZNF140, ZNF610, ZNF350, ZNF8, ZNF30, ZNF98, ZNF677, ZNF596, ZNF214, ZNF37A, ZNF34, ZNF250, ZNF547, ZNF273, ZFP82, ZNF224, ZNF33A, ZNF45, ZNF175, ZNF184, ZFP28-1, ZFP28-2, ZNF18, ZNF213, ZNF394, ZFP1, ZFP14, ZNF416, ZNF557, ZNF729, ZNF254, ZNF764, ZNF785, ZNF10, CBX5, RYBP, YAF2, MGA, CBX1, SCMH1, MPP8, SUMO3, HERC2, BIN1, PCGF2, TOX, FOXA1, FOXA2, IRF2BP1, IRF2BP2, IRF2BPL IRF-2BP1_2 N-terminal domain, HOXA13, HOXB13, HOXC13, HOXA11, HOXC11, HOXC10, HOXA10, HOXB9, HOXA9, ZFP28, ZN334, ZN568, ZN37A, ZN181, ZN510, ZN862, ZN140, ZN208, ZN248, ZN571, ZN699, ZN726, ZIK1, ZNF2, Z705F, ZNF14, ZN471, ZN624, ZNF84, ZNF7, ZN891, ZN337, Z705G, ZN529, ZN729, ZN419, Z705A, ZN302, ZN486, ZN621, ZN688, ZN33A, ZN554, ZN878, ZN772, ZN224, ZN184, ZN544, ZNF57, ZN283, ZN549, ZN211, ZN615, ZN253, ZN226, ZN730, Z585A, ZN732, ZN681, ZN667, ZN649, ZN470, ZN484, ZN431, ZN382, ZN254, ZN124, ZN607, ZN317, ZN620, ZN141, ZN584, ZN540, ZN75D, ZN555, ZN658, ZN684, RBAK, ZN829, ZN582, ZN112, ZN716, HKR1, ZN350, ZN480, ZN416, ZNF92, ZN100, ZN736, ZNF74, ZN443, ZN195, ZN530, ZN782, ZN791, ZN331, Z354C, ZN157, ZN727, ZN550, ZN793, ZN235, ZN724, ZN573, ZN577, ZN789, ZN718, ZN300, ZN383, ZN429, ZN677, ZN850, ZN454, ZN257, ZN264, ZN485, ZN737, ZNF44, ZN596, ZN565, ZN543, ZFP69, SUMO1, ZNF12, ZN169, ZN433, ZN175, ZN347, ZNF25, ZN519, Z585B, ZN517, ZN846, ZN230, ZNF66, ZN713, ZN816, ZN426, ZN674, ZN627, ZNF20, Z587B, ZN316, ZN233, ZN611, ZN556, ZN234, ZN560, ZNF77, ZN682, ZN614, ZN785, ZN445, ZFP30, ZN225, ZN551, ZN610, ZN528, ZN284, ZN418, ZN490, ZN805, Z780B, ZN763, ZN285, ZNF85, ZN223, ZNF90, ZN557, ZN425, ZN229, ZN606, ZN155, ZN222, ZN442, ZNF91, ZN135, ZN778, ZN534, ZN586, ZN567, ZN440, ZN583, ZN441, ZNF43, ZN589, ZN563, ZN561, ZN136, ZN630, ZN527, ZN333, Z324B, ZN786, ZN709, ZN792, ZN599, ZN613, ZF69B, ZN799, ZN569, ZN564, ZN546, ZFP92, ZN723, ZN439, ZFP57, ZNF19, ZN404, ZN274, CBX3, ZN250, ZN570, ZN675, ZN695, ZN548, ZN132, ZN738, ZN420, ZN626, ZN559, ZN460, ZN268, ZN304, ZN605, ZN844, SUMO5, ZN101, ZN783, ZN417, ZN182, ZN823, ZN177, ZN197, ZN717, ZN669, ZN256, ZN251, CBX4, CDY2, CDYL2, ZN562, ZN461, Z324A, ZN766, ID2, ZN214, CBX7, ID1, CREM, SCX, ASCL1, ZN764, SCML2, TWST1, CREB1, TERF1, ID3, CBX8, GSX1, NKX22, ATF1, TWST2, ZNF17, TOX3, TOX4, ZMYM3, I2BP1, RHXF1, SSX2, I2BPL, ZN680, TRI68, HXA13, PHC3, TCF24, HXB13, HEY1, PHC2, ZNF81, FIGLA, SAM11, KMT2B, HEY2, JDP2, HXC13, ASCL4, HHEX, GSX2, ETV7, ASCL3, PHC1, OTP, I2BP2, VGLL2, HXA11, PDLI4, ASCL2, CDX4, ZN860, LMBL4, PDIP3, NKX25, CEBPB, ISL1, CDX2, PROP1, SIN3B, SMBT1, HXC11, HXC10, PRS6A, VSX1, NKX23, MTG16, HMX3, HMX1, KIF22, CSTF2, CEBPE, DLX2, PPARG, PRIC1, UNC4, BARX2, ALX3, TCF15, TERA, VSX2, HXD12, CDX1, TCF23, ALX1, HXA10, RX, CXXC5, SCML1, NFIL3, DLX6, MTG8, CEBPD, SEC13, FIP1, ALX4, LHX3, PRIC2, MAGI3, NELL1, PRRX1, MTG8R, RAX2, DLX3, DLX1, NKX26, NAB1, SAMD7, PITX3, WDR5, MEOX2, NAB2, DHX8, CBX6, EMX2, CPSF6, HXC12, KDM4B, LMBL3, PHX2A, EMX1, NC2B, DLX4, SRY, ZN777, ZN398, GATA3, BSH, SF3B4, TEAD1, TEAD3, RGAP1, PHF1, GATA2, FOXO3, ZN212, IRX4, ZBED6, LHX4, SIN3A, RBBP7, NKX61, R51A1, MB3L1, DLX5, NOTC1, TERF2, ZN282, RGS12, ZN840, SPI2B, PAX7, NKX62, ASXL2, FOXO1, GATA1, ZMYM5, LRP1, MIXL1, SGT1, LMCD1, CEBPA, SOX14, WTIP, PRP19, NKX11, RBBP4, DMRT2, SMCA2, 및 이의 단편에서 선택된다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 전사 억제제 도메인은 서열번호 22 내지 46 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 핵산 결합 도메인, 상기 후성 유전학적 변형 도메인 및 상기 전사 조절 도메인 중 하나 또는 복수의 위치는 링커 서열을 통해 연결된다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 링커 서열은 적어도 16개의 아미노산을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 링커 서열은 XTEN 링커 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 링커 서열은 서열번호 59로 표시되는 아미노산 서열로부터 절취된 하나 또는 복수의 단편 서열을 포함하며, 상기 하나 또는 복수의 단편 서열은 16개 이상의 연속적인 아미노산을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 링커 서열은 GS 링커 펩타이드를 포함하며, 상기 GS 링커 펩타이드는 (GS)a(GGS)b(GGGS)c(GGGGS)d 서열을 포함하고, 여기서 G는 글리신 잔기(Gly)를 나타내며, S는 세린 잔기(Ser)를 나타내고, a, b, c 및 d는 0보다 크거나 0과 같은 정수를 나타낸다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 링커 서열은 서열번호 47 내지 58 중 하나 또는 복수로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 하나 또는 복수의 효과기 도메인은 상기 핵산 결합 도메인의 N 말단 또는 C 말단에 위치한다
일부 실시 형태에 있어서, 상기 효과기 도메인은 적어도 하나의 유형의 상기 후성 유전학적 변형 도메인 및 적어도 하나의 유형의 상기 전사 조절 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 후성 유전학적 변형 도메인은 DNMT3A 및 DNMT3L을 포함하며, 상기 DNMT3A의 C 말단은 상기 DNMT3L의 N 말단에 연결된다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 후성 유전학적 변형 도메인은 DNMT3A 및 DNMT3L을 포함하고, 상기 DNMT3L의 C 말단은 상기 DNMT3A의 N 말단에 연결된다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 전사 조절 도메인은 전사 억제제 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 전사 조절 도메인은 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자 또는 이의 기능적 활성 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자는 KRAB를 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자는 ZIM3 KRAB 및 KOX1 KRAB에서 선택된다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 전사 조절 도메인은 2개 이상의 상기 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자 또는 이의 기능적 활성 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 전사 조절 도메인은 2개 이상의 KRAB 도메인을 포함하며, 상기 2개 이상의 KRAB 도메인은 동일한 유형이거나 상이한 유형이다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 2개 이상의 KRAB 도메인은 XTEN 링커 서열을 통해 연결된다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 하나 또는 복수의 효과기 도메인은 상기 핵산 결합 도메인의 N 말단에 위치하며, 상기 효과기 도메인 중의 상기 후성 유전학적 편집 도메인은 상기 전사 조절 도메인의 N 말단 또는 C 말단에 위치한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 융합체는 N 말단에서 C 말단까지 차례로 연결된 다음 물질을 포함한다: (1) 적어도 하나의 유형의 상기 후성 유전학적 편집 도메인, 적어도 하나의 유형의 상기 전사 조절 도메인 및 상기 핵산 결합 도메인, (2) 적어도 하나의 유형의 상기 전사 조절 도메인, 적어도 하나의 유형의 상기 후성 유전학적 편집 도메인 및 상기 핵산 결합 도메인, 또는 (3) 적어도 하나의 유형의 상기 전사 조절 도메인, 적어도 하나의 유형의 상기 후성 유전학적 편집 도메인, 적어도 하나의 유형의 상기 전사 조절 도메인 및 상기 핵산 결합 도메인을 연결한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 융합체는 N 말단에서 C 말단까지 차례로 연결된 다음 물질을 포함한다: (1) 적어도 하나의 DNA 메틸트랜스퍼라아제 도메인, 적어도 하나의 전사 억제제 도메인 및 상기 핵산 결합 도메인, (2) 적어도 하나의 전사 억제제 도메인, 적어도 하나의 DNA 메틸트랜스퍼라아제 도메인 및 상기 핵산 결합 도메인, 또는 (3) 적어도 하나의 전사 억제제 도메인, 적어도 하나의 DNA 메틸트랜스퍼라아제 도메인, 적어도 하나의 전사 억제제 도메인 및 상기 핵산 결합 도메인을 연결한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 융합체는 N 말단에서 C 말단까지 차례로 연결된 다음 물질을 포함한다: (1) DNMT3A 및 DNMT3L 중 하나 또는 이의 조합; 하나 또는 복수의 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자, 및 dCas9, (2) 하나 또는 복수의 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자, DNMT3A 및 DNMT3L 중 하나 또는 이의 조합, 및 dCas9, 또는 (3) 하나 또는 복수의 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자; DNMT3A 및 DNMT3L 중 하나 또는 이의 조합; 하나 또는 복수의 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자, 및 dCas9를 연결한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 융합체는 DNMT3A-DNMT3L-KRAB-dCas9, KRAB-DNMT3A-DNMT3L-dCas9, DNMT3A-DNMT3L-ZNF582-dCas9, DNMT3A-DNMT3L-ZNF324-dCas9, DNMT3A-DNMT3L-ZNF680-dCas9, DNMT3A-DNMT3L-ZNF354a-dCas9, DNMT3A-DNMT3L-ZNF419-dCas9, KRAB-DNMT3A-DNMT3L-KRAB-dCas9, KRAB-KRAB-DNMT3A-DNMT3L-dCas9, 또는 DNMT3A-DNMT3L-KRAB-KRAB-dCas9 도메인을 포함하고, 여기서, -는, 상기 융합체의 도메인들이 직접적 및/또는 간접적으로 연결되며, 상기 도메인들은 N 말단에서 C 말단까지 차례로 배열됨을 나타낸다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 하나 이상의 효과기 도메인은 상기 핵산 결합 도메인의 C 말단에 위치하며, 상기 효과기 도메인 내의 상기 후성 유전학적 편집 도메인은 상기 전사 조절 도메인의 N 말단 또는 C 말단에 위치한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 융합체는 N 말단에서 C 말단까지 차례로 연결된 다음 물질을 포함한다: (1) 상기 핵산 결합 도메인, 적어도 하나의 유형의 상기 후성 유전학적 편집 도메인 및 적어도 하나의 유형의상기 전사 조절 도메인, (2) 상기 핵산 결합 도메인, 적어도 하나의 유형의 상기 전사 조절 도메인 및 적어도 하나의 유형의상기 후성 유전학적 편집 도메인, 또는 (3) 상기 핵산 결합 도메인, 적어도 하나의 유형의 상기 전사 조절 도메인, 적어도 하나의 유형의 상기 후성 유전학적 편집 도메인 및 적어도 하나의 유형의 상기 전사 조절 도메인을 연결한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 융합체는 N 말단에서 C 말단까지 차례로 연결된 다음 물질을 포함한다: (1) 상기 핵산 결합 도메인, 적어도 하나의 DNA 메틸트랜스퍼라아제 도메인 및 적어도 하나의 전사 억제제 도메인, (2) 상기 핵산 결합 도메인, 적어도 하나의 전사 억제제 도메인 및 적어도 하나의 DNA 메틸트랜스퍼라아제 도메인, 또는 (3) 상기 핵산 결합 도메인, 적어도 하나의 전사 억제제 도메인, 적어도 하나의 DNA 메틸트랜스퍼라아제 도메인 및 적어도 하나의 전사 억제제 도메인을 연결한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 융합체는 N 말단에서 C 말단까지 차례로: (1) dCas9, DNMT3A 및 DNMT3L 중 하나 또는 이의 조합, 및 하나 또는 복수의 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자 (2) dCas9, 하나 또는 복수의 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자, 및 DNMT3A 및 DNMT3L 중 하나 또는 이의 조합, 또는 (3) dCas9, 하나 또는 복수의 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자, DNMT3A 및 DNMT3L 중 하나 또는 이의 조합, 및 하나 또는 복수의 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자를 연결한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 융합체는: dCas9-DNMT3A-DNMT3L-KRAB, dCas9-DNMT3L-DNMT3A-KRAB, dCas9-KRAB-DNMT3A-DNMT3L, dCas9-KRAB-DNMT3L-DNMT3A, dCas9-ZNF582-DNMT3L-DNMT3A, dCas9-ZNF324-DNMT3L-DNMT3A, dCas9-DNMT3L-DNMT3A-KRAB-KRAB, dCas9-DNMT3L-DNMT3A-KRAB-KRAB-KRAB, 또는 dCas9-KRAB-DNMT3L-DNMT3A-KRAB 도메인을 포함하고, 여기서, -는, 상기 융합체의 도메인들이 직접적 및/또는 간접적으로 연결되며, 상기 도메인들은 N 말단에서 C 말단까지 차례로 배열됨을 나타낸다.
일부 실시 형태에 있어서, 서열번호 60 내지 67, 70 내지 107 및 337 내지 344 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 핵산 결합 도메인의 N 말단 및 C 말단에 위치하는 하나 이상의 효과기 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 하나 이상의 효과기 도메인은 적어도 하나의 후성 유전학적 편집 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 하나 이상의 효과기 도메인은 히스톤 변형을 제공하는 적어도 하나의 후성 유전학적 편집 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 핵산 결합 도메인의 C 말단에 있는 상기 효과기 도메인은 적어도 하나의 유형의 후성 유전학적 변형 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 핵산 결합 도메인의 C 말단에 있는 상기 효과기 도메인은 히스톤 변형을 제공하는 적어도 하나의 후성 유전학적 변형 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 핵산 결합 도메인의 N 말단에 있는 상기 효과기 도메인은 후성 유전학적 변형 도메인 및 전사 조절 도메인 중 하나 또는 복수를 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 핵산 결합 도메인의 N 말단에 있는 상기 효과기 도메인은 히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, DNA 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인 및 전사 억제제 도메인 중 하나 또는 복수를 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 핵산 결합 도메인의 N 말단에 있는 효과기 도메인은: (1) 히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, (2) 전사 억제제 도메인, (3) DNA 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, 또는 (4) 전사 억제제 도메인 및 DNA 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 핵산 결합 도메인의 N 말단에 있는 효과기 도메인은: (1) EZH2, HDAC3, HDAC1, EHMT2, PRMT1, PRMT5, SETDB1, hSIRT1, HP1a 및 LSD1에서 선택되는 하나 또는 복수의 후성 유전학적 변형 도메인, 및 이의 기능적 활성 단편, (2) KRAB 또는 이의 기능적 활성 단편, (3) DNMT3A; DNMT3L; 또는 DNMT3A 및 DNMT3L의 조합, 또는 (4) KRAB 및 DNMT3A의 조합, KRAB 및 DNMT3L의 조합, 또는 KRAB, DNMT3A 및 DNMT3L의 조합을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 융합체는 N 말단에서 C 말단까지 차례로: (1) 히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, 상기 핵산 결합 도메인 및 히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, (2) 전사 억제제 도메인, 상기 핵산 결합 도메인 및 히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, (3) DNA 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, 상기 핵산 결합 도메인 및 히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, (4) 전사 억제제 도메인, DNA 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, 상기 핵산 결합 도메인 및 히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, 또는 (5) DNA 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, 전사 억제제 도메인, 상기 핵산 결합 도메인 및 히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인을 연결한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인은 EZH2, HDAC3, HDAC1, EHMT2, PRMT1, PRMT5, SETDB1, hSIRT1, HP1a, LSD1 및 이의 기능적 활성 단편에서 선택된다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 DNA 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인은 DNMT3A, DNMT3L, DNMT3A 및 DNMT3L의 조합 또는 이의 기능적 활성 단편에서 선택된다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 전사 억제제 도메인은 KRAB 및/또는 이의 기능적 활성 단편이다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 융합체는 DNMT3A-DNMT3L-dCas9-KRAB, HDAC3-dCas9-EZH2, KRAB-dCas9-EZH2, KRAB-DNMT3A-dCas9-EZH2, KRAB-DNMT3A-dCas9-HDAC3, DNMT3A-DNMT3L-dCas9-(EZH2)n=1-11, DNMT3A-DNMT3L-dCas9-HDAC3, DNMT3A-DNMT3L-dCas9-EHMT2, DNMT3A-DNMT3L-dCas9-HDAC1, DNTM3A-DNMT3L-dCas9-PRMT1, DNMT3A-DNMT3L-dCas9-SETDB1, DNMT3A-DNMT3L-dCas9-hSIRT1, DNMT3A-DNMT3L-dCas9-PRMT5, DNMT3A-DNMT3L-dCas9-HP1a, DNMT3A-DNMT3L-dCas9-LSD1, 또는 DNMT3A-DNMT3L-TALE-KRAB를 포함하고, 여기서, -는, 상기 융합체의 도메인들이 직접적 및/또는 간접적으로 연결되며, 상기 도메인들은 N 말단에서 C 말단까지 차례로 배열된다.
일부 실시 형태에 있어서, 서열번호 68, 69, 108 내지 126, 355 및 356중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 융합체는 핵 국소화 신호 및/또는 마커 도메인을 더 포함한다.
다른 일 양태에 있어서, 본 출원은 본 출원에 따른 융합체를 코딩하는 핵산을 제공한다.
다른 일 양태에 있어서, 본 출원은 본 출원에 따른 핵산을 포함하는 재조합 벡터를 제공한다.
다른 일 양태에 있어서, 본 출원은 본 출원에 따른 융합체, 본 출원에 따른 핵산, 및/또는 본 출원에 따른 재조합 벡터를 포함하고, 선택적으로 리포좀 및/또는 지질 나노입자를 포함하는 전달 벡터를 제공한다.
다른 일 양태에 있어서, 본 출원은 본 출원에 따른 융합체, 본 출원에 따른 핵산, 본 출원에 따른 재조합 벡터, 및/또는 본 출원에 따른 전달 벡터를 포함하는 조성물을 제공한다.
다른 일 양태에 있어서, 본 출원은 본 출원에 따른 융합체, 본 출원에 따른 핵산, 본 출원에 따른 재조합 벡터, 본 출원에 따른 전달 벡터, 및/또는 본 출원에 따른 조성물을 포함하는 세포를 제공한다.
다른 일 양태에 있어서, 본 출원은 본 출원에 따른 융합체, 본 출원에 따른 핵산, 본 출원에 따른 재조합 벡터, 본 출원에 따른 전달 벡터, 본 출원에 따른 조성물, 및/또는 본 출원에 따른 세포를 포함하는 키트를 제공한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 키트는 상기 융합체, 상기 핵산, 상기 재조합 벡터, 상기 전달 벡터, 상기 조성물, 및/또는 상기 세포 중 적어도 하나를 수용하는 용기를 더 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 키트는 실물 형식 및/또는 기계 판독 가능한 전자 형식의 설명서를 더 포함한다.
다른 일 양태에 있어서, 본 출원은 본 출원에 따른 융합체, 본 출원에 따른 핵산, 본 출원에 따른 재조합 벡터, 본 출원에 따른 전달 벡터, 본 출원에 따른 조성물, 본 출원에 따른 세포 및/또는 본 출원에 따른 키트를 투여하는 것을 포함하는 표적 유전자 발현을 조절하는 방법을 제공한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 방법은 상기 융합체, 상기 핵산, 상기 재조합 벡터, 상기 전달 벡터, 상기 조성물, 상기 세포 및/또는 상기 키트를 상기 표적 유전자를 포함하는 세포에 도입하는 단계를 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 방법은 상기 융합체, 상기 핵산, 상기 재조합 벡터, 상기 전달 벡터 및/또는 상기 조성물을 상기 표적 유전자 근처 및/또는 상기 표적 유전자의 조절 요소와 접촉시키는 것을 포함한다.
일부 실시 형태에 있어서, 상기 조절 요소는 코어 프로모터, 근위 프로모터(proximal promoter), 원위 인핸서(distal enhancer), 사일렌서(silencer), 절연체 요소, 경계 요소 및/또는 유전자좌 제어 영역을 포함한다.
다른 일 양태에 있어서, 본 출원은 유효량의 본 출원에 따른 융합체, 본 출원에 따른 핵산, 본 출원에 따른 재조합 벡터, 본 출원에 따른 전달 벡터, 본 출원에 따른 조성물, 본 출원에 따른 세포 및/또는 본 출원에 따른 키트를 이를 필요로 하는 피험자에게투여하는 것을 포함하는 비정상적인 표적 유전자 발현 및/또는 비정상적인 표적 유전자 활성과 관련된 질환 또는 그 증상을 치료하거나 완화하기 위한 방법을 제공한다.
다른 일 양태에 있어서, 본 출원은 비정상적인 표적 유전자 발현 및/또는 비정상적인 표적 유전자 활성과 관련된 질환 또는 그 증상을 치료하거나 완화하기 위한 약물의 제조에 있어서의, 본 출원에 따른 융합체, 본 출원에 따른 핵산, 본 출원에 따른 재조합 벡터, 본 출원에 따른 전달 벡터, 본 출원에 따른 조성물, 본 출원에 따른 세포 및/또는 본 출원에 따른 키트의 용도를 제공한다.
다른 일 양태에 있어서, 본 출원은 비정상적인 표적 유전자 발현 및/또는 비정상적인 표적 유전자 활성과 관련된 질환 또는 그 증상을 치료하거나 완화하는 데 사용되는 본 출원에 따른 융합체, 본 출원에 따른 핵산, 본 출원에 따른 재조합 벡터, 본 출원에 따른 전달 벡터, 본 출원에 따른 조성물, 본 출원에 따른 세포 또는 본 출원에 따른 키트를 제공한다.
당업자는 아래의 상세한 설명으로부터 본 출원의 다른 측면 및 이점을 용이하게 파악할 수 있을 것이다. 아래의 상세한 설명에서는 본 출원의 예시적인 실시 형태만 나타내고 설명된다. 당업자가 인식하는 바와 같이, 본 출원의 내용은 당업자가 본 출원과 관련된 발명의 요지와 범위를 벗어나지 않는 범위에서 개시된 구체적인 실시 형태를 변경할 수 있다. 이에 따라, 본 출원의 도면과 명세서의 설명은 단지 예시적인 것일 뿐 제한적인 것이 아니다.
본 출원과 관련된 발명의 구체적인 특징은 첨부된 청구범위에 기재되어 있다. 본 출원과 관련된 발명의 특징 및 이점은 아래에 상세히 설명된 예시적인 실시 형태 및 도면을 참조하여 더 잘 이해할 수 있다. 도면의 간단한 설명은 하기와 같다:
도 1은 본 출원의 예시적인 융합체의 구성 개략도를 나타낸다.
도 2는 다양한 전사 억제제 도메인을 포함하는 본 출원의 예시적인 융합체의 구성 개략도를 나타낸다.
도 3은 VEGFA 유전자에 대한 본 출원의 예시적인 융합체의 억제 효과를 나타낸다.
도 4는 CLTA 유전자에 대한 본 출원의 예시적인 융합체의 억제 효과를 나타낸다.
도 5A 내지 5C는 CD151 유전자에 대한 본 출원의 예시적인 융합체의 억제 효과를 나타낸다.
도 6A 내지 6F는 PCSK9 유전자에 대한 본 출원의 예시적인 융합체의 억제 효과를 나타낸다.
도 7은 PCSK9 유전자에 대한 본 출원의 예시적인 융합체의 억제 효과를 나타낸다.
이하, 특정 구체적인 실시예를 통해 본 출원 발명의 실시 형태를 설명하며, 해당 기술에 익숙한 당업자는 본 명세서에 개시된 내용으로부터 본 출원 발명의 다른 이점 및 효과를 용이하게 이해할 수 있다.
[용어 정의]
본 출원에서, 용어 "후성 유전학적 변형 도메인(epigenetic modification domain)"은 일반적으로 상기 도메인이 투여 후 세포군의 유전자 발현 또는 세포 표현형을 변경할 수 있음을 지칭한다. 이러한 변화는 핵산 서열의 변경이 없는 게놈의 하나 또는 복수의 기능과 관련된 변형을 지칭한다고 이해할 수 있다. 이러한 변형의 예로는 DNA 메틸화 및 히스톤 변형이 있으며, 이 둘은 기본 DNA 서열을 변경하지 않고 유전자 발현을 조절하는 데 중요하다.
본 출원에서 용어 "DNA 결합 도메인"은 일반적으로 독립적으로 접힌 단백질 도메인을 지칭하며, 이는 이중 가닥 또는 단일 가닥 DNA를 인식하는 적어도 하나의 모티프를 포함한다. 예를 들어, 상기 DNA 결합 도메인은 특정 DNA 서열(인식 또는 조절 서열)을 인식하거나 DNA에 대한 일반적인 친화성을 가질 수 있다. 특정 상황에서 DNA 결합 도메인의 다른 구조 도메인은 일반적으로 DNA 결합 도메인의 활성을 조절하고, DNA 결합 기능은 구조적일 수도 있고 전사 조절을 포함할 수도 있으며, 때로는 이 두 가지 기능이 중첩된다. 본 출원에 제공된 방법 및 유전자 발현 조절 분자의 특정 실시 형태에 있어서, DNA 결합 도메인은 (DNA) 뉴클레아제를 포함할 수 있으며, 이는 서열 특이적 방식으로 DNA를 표적화할 수 있거나 서열 특이적 방식으로 DNA를 표적화하도록 지시되거나 유도될 수 있는 뉴클레아제, 예를 들어 CRISPR-Cas 시스템, 징크 핑거 뉴클레아제(ZFN), 전사 활성화제 유사 이펙터 뉴클레아제(TALEN) 또는 광범위 뉴클레아제와 같은 것을 포함한다. 일부 실시 형태에 있어서, DNA 결합 도메인은 CRISPR-Cas 시스템에서 유래된 DNA 뉴클레아제이다. 예를 들어, CRISPR-Cas 시스템에서 유래된 상기 DNA 뉴클레아제는 Cas 단백질이다.
본 출원에서, 용어 "TALE DNA 결합 도메인" 또는 "TALE"은 하나 또는 복수의 TALE 반복 도메인/단위를 포함하는 폴리펩타이드를 의미한다. 천연적으로 존재하는 TALE 혹은 "야생형 TALE"은 르로테아박테리아의 다양한 종이 분비하는 핵산 결합 단백질이다. TALE 펩타이드는 고도로 보존된 단량체 펩타이드의 직렬 반복으로 구성된 핵산 결합 도메인을 포함하며, 상기 단량체 펩타이드의 길이는 주로 33, 34 또는 35개의 아미노산이며, 주로 아미노산 위치 12와 13에서 서로 차이가 있다. 바람직한 실시 형태에 있어서, 상기 핵산은 DNA이다. 본문에서 사용된 TALE 폴리펩타이드 단량체는 TALE 핵산 결합 도메인 내의 고도로 보존된 반복 폴리펩타이드 서열을 지칭하는 데 사용되며, "반복 가변 이중잔기" 또는 "RVD"라는 용어는 폴리펩타이드 단량체의 12번 및 13번 위치에 존재하는 도고의 가변성을 지닌 아미노산을 의미한다. DNA 결합 도메인 내에 포함된 TALE 단량체의 일반적인 표현은 X1-11-(X12X13)-X14-33 또는 34 또는 35이며, 여기서 아래 첨자는 아미노산 위치를 나타내고 X는 임의의 아미노산을 나타낸다. X12X13은 RVD를 나타낸다. 일부 TALE 폴리펩타이드 단량체에서 13번 위치의 가변 아미노산이 결실되거나 존재하지 않고, 이러한 단량체에서 RVD는 단일 아미노산으로 구성된다. 이러한 경우에 RVD는 대체적으로 X*로 표기될 수 있으며, 여기서 X는 X12를 나타내고, (*)는 X13이 존재하지 않음을 나타낸다. DNA 결합 도메인은 TALE 단량체의 복수의 반복을 포함하며, 이는 (X1-11-(X12X13)-X14-33 또는 34 또는 35)z로 나타낼 수 있고, 여기서 바람직한 실시 형태에 있어서, z는 적어도 5 내지 40이다. 더 바람직한 실시 형태에 있어서, Z는 적어도 10 내지 26이다.
TALE 단일체는 이의 RVD 내의 아미노산 유형에 의해 결정되는 뉴클레오타이드 결합 친화도를 갖는다. 예를 들어, NI를 가진 RVD의 폴리펩타이드 단량체는 아데닌(A)과 우선적으로 결합하고, NG를 가진 RVD의 폴리펩타이드 단량체는 티민(T)과 우선적으로 결합하며, HD를 가진 RVD의 폴리펩타이드 단량체는 사이토신(C)과 우선적으로 결합하고, 또한 NN을 가진 RVD의 단량체는 아데닌(A)과 구아닌(G)에 우선적으로 결합한다. 다른 일부 실시 형태에 있어서, IG를 갖는 RVD의 단량체는 T와 우선적으로 결합한다. 따라서 TALE의 핵산 결합 도메인에 있는 폴리펩타이드 단량체 반복의 수와 순서가 이의 핵산 표적 특이성을 결정한다. 본 출원의 추가적인 실시 형태에 있어서, NS를 갖는 RVD의 단량체는 모든 네 가지 염기쌍을 인식하며 A, T, G 또는 C와 결합할 수 있다. TALE의 구조와 기능은 예를 들어 Moscou et al., Science 326:1501(2009); Boch 등, Science 326:1509-1512(2009); 및 Zhang et al., Nature Biotechnology 29:149-153(2011)에서 추가로 설명되어 있으며, 상기 각각의 참고 문헌은 전체적으로 참조로 본문에 통합된다. TALE의 반복 도메인은 TALE과 이의 상동적 표적 DNA 서열의 결합에 관여한다. 이러한 반복 유닛(또는 "반복 서열")은 자연적으로 존재하는 TALE 단백질 내의 다른 TALE 반복 서열과 적어도 일부 서열 상동성을 나타낸다. 예를 들어, 미국 특허 공개 번호 20110301073을 참조할 수 있다. 본 출원에 관련된 TALE 결합 도메인은 예를 들어 천연적으로 존재하는 TALE 단백질의 인식 나선 영역을 공학적으로 개조함으로써(하나 또는 복수의 아미노산 변경) 예정된 뉴클레오타이드 서열에 결합하도록 "조작"될 수 있다. 따라서, 조작된 DNA 결합 단백질(TALE)은 천연적으로 존재하지 않는 단백질이다. DNA 결합 단백질을 공학적으로 개조하는 방법의 비제한적 예시는 설계와 선택이다. 설계된 DNA 결합 단백질은 천연적으로 존재지 않는 단백질로, 이의 설계 및/또는 구성이 주로 합리적 기준에 기반한다. 합리적인 설계 기준에는 적용 대체 규칙과 기존 TALE의 설계 및 결합 데이터를 처리하고 저장하기 위한 정보 데이터베이스의 정보를 계산화하는 알고리즘이 포함된다. 예를 들어, 미국 특허 6,140,081; 6,453,242; 및 6,534,261을 참조할 수 있으며, 또한 WO 98/53058; WO 98/53059; WO 98/53060; WO02/016536 및 WO 03/016496과 미국 공개 번호 20110301073을 참조할 수 있다.
본 출원에서 "Cas 효소"는 "Cas 단백질", "CRISPR 단백질", "CRISPR 효소", "CRISPR-Cas 단백질", "CRISPR-Cas 효소", "Cas", "CRISPR 이펙터" 또는 "Cas 이펙터 단백질"과 상호교환적으로 사용될 수 있으며, 일반적으로 CRISPR 서열과 상보적인 효소 클래스를 지칭하고, 이는 CRISPR 서열을 가이드(guide)로 사용하여 특정 DNA 사슬을 인식하고 절단할 수 있다. Cas 단백질의 비제한적인 예로는 Casl, CaslB, Cas2, Cas3, Cas4, Cas5, Cas6, Cas7, Cas8, Cas9（Csnl 및 Csxl2라고도 함）, CaslO, Csyl, Csy2, Csy3, Csel, Cse2, Cscl, Csc2, Csa5, Csn2, Csm2, Csm3, Csm4, Csm5, Csm6, Cmrl, Cmr3, Cmr4, Cmr5, Cmr6, Csbl, Csb2, Csb3, Csxl7, Csxl4, CsxlO, Csxl6, CsaX, Csx3, Csxl, Csxl5, Csf1, Csf2, Csf3, Csf4 및/또는 이들의 동족체 또는 이들의 변형 형태가 포함된다. 이러한 단백질은 공지 되어 있으며, 예를 들어 화농성 연쇄상구균 Cas9 단백질의 아미노산 서열은 SwissProt 데이터베이스 등록번호 Q99ZW2에서 확인할 수 있다.
본 출원에서, 용어 "dCas9 효소"는 "비활성화 Cas9 단백질" 또는 "비활성화 Cas9 효소"라고도 불리운다. 비활성화된 DNA 절단 도메인을 갖는 Cas9 단백질(또는 이의 단편)을 생성하는 방법은 예를 들어, Jinek et al., Science. 337:816-821(2012); Qi et al., "Repurposing CRISPR as an RNA-Guided Platform for Sequence-Specific Control of Gene Expression", Cell. 28, 152(5):1173-83(2013)을 참조할 수 있으며, 이들 각각의 전체 내용은 본문에 참조로 통합된다. 예를 들어, Cas9의 DNA 절단 도메인은 HNH 뉴클레아제 서브도메인과 RuvC1 서브도메인이라는 두 개의 서브도메인으로 구성되어 있음이 알려져 있다. HNH 서브도메인은 gRNA와 상보적인 사슬을 절단하고, RuvC1 서브도메인은 비상보적 사슬을 절단한다. 이러한 서브도메인의 돌연변이는 Cas9의 뉴클레아제 활성을 침묵시킬 수 있다. 예를 들어, D10A 및 H840A 돌연변이는 연쇄상구균 화농균 Cas9의 뉴클레아제 활성을 완전히 비활성화시킨다(Jinek et al., Science. 337:816-821(2012); Qi 등, Cell. 28; 152(5):1173-83(2013)). 적합한 CRISPR 비활성화 또는 닉킹 DNA 결합 도메인에는, WO2015089406A1에 기재된 바와 같이, D10A, D10A/D839A/H840A 및 D10A/D839A/H840A/N863A 돌연변이 도메인을 포함하는 뉴클레아제 비활성화 변이체 Cas9 도메인을 포함하나 이에 한정되지 않는으며 이는 본문에 참조로 통합된다. 특정 상황에서, 연쇄상구균 화농균에서 유래된 엔도뉴클레아제 비활성 dCas9가 gRNA를 통해 박테리아, 효모 및 인간 세포 내 유전자를 표적화하며 공간적 장애를 통해 유전자 발현을 침묵시킨다. 본문에서 사용된 바와 같이 "dCas"는 dCas 단백질 또는 이의 단편을 지칭할 수 있다. 본문에서 사용된 바와 같이 "dCas9"는 dCas9 단백질 또는 이의 단편을 지칭할 수 있다. 본문에서 사용된 바와 같이 용어 "iCas"와 "dCas"는 촉매 활성이 없는 CRISPR 관련 단백질을 지칭하며 상호 교환적으로 사용될 수 있다. 한 실시 형태에 있어서, dCas 단백질은 DNA절단 도메인에 하나 또는 복수의 돌연변이를 포함한다. 한 실시 형태에 있어서, dCas 단백질은 RuvC 또는 도메인에 하나 또는 복수의 돌연변이를 포함한다. 한 실시 형태에 있어서, dCas 분자는 RuvC 및 HNH 도메인 모두에 하나 또는 복수의 돌연변이를 포함한다. 한 실시 형태에 있어서, dCas 단백질은 야생형 Cas 단백질의 단편이다. 한 실시 형태에 있어서, dCas 단백질은 야생형 Cas 단백질로부터 유래된 기능적 도메인을 포함하며, 여기서, 상기 기능적 도메인은 Reel 도메인, 브릿지 헬릭스 도메인 또는 PAM 상호작용 도메인 중에서 선택된다. 한 실시 형태에 있어서, 대응되는 야생형 Cas 단백질의 뉴클레아제 활성과 비교하여 dCas의 뉴클레아제 활성은 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 감소된다.
적합한 dCas는 야생형 Cas 단백질로부터 유도될 수 있다. Cas 단백질은 I형, II형 또는 III형 CRISPR-Cas 시스템에서 유래될 수 있다. 한 실시 형태에 있어서, 적합한 dCas는 Cas1, Cas2, Cas3, Cas4, Cas5, Cas6, Cas7, Cas8, Cas9 또는 Cas10으로부터 유래될 수 있다. 한 실시 형태에 있어서, dCas는 Cas9 단백질로부터 유래된다. 예를 들어, Cas9 단백질의 DNA 절단 도메인(예를 들어, 뉴클레아제 도메인, 예를 들어, RuvC 및/또는 HNH 도메인)에 점 돌연변이(예를 들어, 치환, 결실 또는 추가)를 도입함으로써 dCas9를 얻을 수 있다. 예를 들어, Jinek et al., Science (2012) 337:816-21를 참조할 수 있고, 이는 전체가 본문에 인용을 통해 통합된다. 예를 들어, RuvC 및 HNH 도메인에 2개의 점 돌연변이를 도입하면 Cas9 뉴클레아제 활성을 감소시키면서도 Cas9 sgRNA 및 DNA 결합 활성은 유지시킨다. 한 실시 형태에 있어서, RuvC 및 HNH 활성 부위 내의 2개의 점 돌연변이는 화농성 연쇄상구균 Cas9의 D10A 및 H840A 돌연변이이다. 또는, Cas9의 뉴클레아제 활성을 제거하면서 sgRNA 및 DNA 결합 활성을 유지시키기 위해 화농성 연쇄상구균 Cas9의 D10과 H840을 제거할 수 있다. 한 실시 형태에 있어서, RuvC 및 HNH 활성 부위 내의 2개의 점 돌연변이는 화농성 연쇄상구균 Cas9의 D10A 및 N580A 돌연변이다.
다양한 실시 형태에 있어서, 본 출원은 dCas 단백질 또는 이의 임의의 변이체 또는 돌연변이체에 관한 것이다. dCas9의 모든 변이체 및 돌연변이체는 본 명세서에 개시된 방법, 조성물, 융합 분자 또는 키트에 사용 될 수 있으며, 상기 변이체 및 돌연변이체는 SpCas9(화농성 연쇄상구균에서 분리된 Cas9), SaCas9(황색 포도상구균에서 분리된 Cas9), StCas9(스트렙토코쿠스 테르모필루스에서 분리된 Cas9), NmCas9(네이세리아 메닝기티디스(Neisseria meningitidis)에서 분리된 Cas9), FnCas9(프란시셀라 노비시다(Francisella novicida)에서 분리된 Cas9), CjCas9(캄필로박터 제주니에서 분리된 Cas9), ScCas9(개 연쇄상구균(Streptococcus canis)에서 분리된 Cas9) 및 상기 열거된 Cas9의 모든 변이체 및 돌연변이 형태를 포함하나 이에 제한되지 않으며, 예를 들어, 고충실도 Cas9(Kleinstiver et al., Nature, 2016년 1월 28일) 및 강화된 SpCas9(Slaymaker et al., Sciences, 2016년 1월 1일)의 변이체 및 돌연변이가 있다. 예를 들어, 본 출원의 서열번호 1162 내지 1179에 표시되는 dCas9 서열은 단지 몇 가지 예시적인 선택항을 제공하는 것으로, 배타적인 것이 아니다. 한 실시 형태에 있어서, dCas 단백질은 D10 및/또는 H840(예를 들어, 서열번호 1162에 표시됨)에 돌연변이를 포함하는 화농성 연쇄상규균 dCas9 단백질이다. 한 실시 형태에 있어서, dCas 단백질은 D10A 및/또는 H840A 돌연변이(예를 들어, 서열번호 1162에 표시됨)를 포함하는 화농성 연쇄상규균 dCas9 단백질이다. 한 실시 형태에 있어서, dCas9 단백질은 황색포도상구균 dCas9 단백질로서, 서열번호 1163 또는 1164에 표시되는 아미노산 서열, 서열번호 1163 또는 1164와 실질적으로 동일한(예를 들어, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 이상의 서열 동일성) 서열, 또는 서열번호 1163 또는 1164에 대해 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 그 이상의 변경(예를 들어, 아미노산 치환, 삽입 또는 결실)이 있는 서열 또는 이의 임의의 단편을 포함한다.
유사한 돌연변이는 다른 천연적으로 존재하는 Cas9(예를 들어, 다른 종에서 유래된 Cas9)또는 조작된 Cas9에도 적용될 수 있다. 특정 실시 형태에 있어서, dCas9는 화농성 연쇄상구균(Streptococcus pyogenes) dCas9, 황색 포도상구균(Staphylococcus aureus) dCas9, 캄필로박터 제주니(Campylobacter jejuni) dCas9, 코리네박테리움 디프테리아(Corynebacterium diphtheria) dCas9, 유박테리움 벤트리오숨(Eubacterium ventriosum) dCas9, 연쇄상구균 파스퇴리아누스(Streptococcus pasteurianus) dCas9, 락토바실러스 파시미니스(Lactobacillus farciminis) dCas9, 스파에로카에타 글로부스(Sphaerochaeta globus) dCas9, 아조스피릴룸(Azospirillum, 에를 들어, 균주 B510) dCas9, 글루코아세토박터 디아조트로피쿠스(Gluconacetobacter diazotrophicus) dCas9, 네이세리아 시네레아(Neisseria cinerea) dCas9, 로즈부리아 인테스티날리스(Roseburia intestinalis) dCas9, 파르비바쿨룸 라바멘티보란스(Parvibaculum lavamentivorans) dCas9, 니트라티프락터 살수기니스(Nitratifractor salsuginis, 예를 들면, 균주 DSM 16511) dCas9, 캄필로박터 라리(Campylobacter lari, 예를 들면, 균주 CF89-12) dCas9, 스트렙토코쿠스 테르모필루스(Streptococcus thermophilus, 예를 들면, 균주 LMD-9) dCas9 또는 상기에 기재된 단편을 포함한다. 특정 실시 형태에 있어서, 본 출원은 또한 하기 단백질 분자: 화농성 연쇄상구균 dCas9, 황색 포도상구균 dCas9, 캄필로박터 제주니 dCas9, 코리네박테리움 디프테리아 dCas9, 유박테리움 벤트리오숨 dCas9, 연쇄상구균 파스퇴리아누스 dCas9, 락토바실러스 파시미니스 dCas9, 스파에로카에타 글로부스 dCas9, 아조스피릴룸(균주 B510) dCas9, 글루코아세토박터 디아조트로피쿠스 dCas9, 네이세리아 시네레아 dCas9, 로즈부리아 인테스티날리스 dCas9, 파르비바쿨룸 라바멘티보란스 dCas9, 니트라티프락터 살수기니스(균주 DSM 16511) dCas9, 캄필로박터 라리(균주 CF89-12) dCas9, 스트렙토코쿠스 테르모필루스(균주 LMD-9) dCas9 또는 상기에 기재된 단편을 코딩하는 뉴클레오타이드를 포함하는 벡터를 제공한다.
본 출원에서, 용어 "결합할 수 있는"은 "결합하는", "특이적으로 인식하는", "표적화하는" 등과 상호교환적으로 사용될 수 있으며, 일반적으로 결합 분자(예를 들어, 본 출원의 유전자 발현 조절 분자)가 표적 유전자 또는 표적 부위의 뉴클레오타이드와 상호작용할 수 있거나, 상기 결합 분자(예를 들어, 본 출원의 유전자 발현 조절 분자)가 표적 유전자 또는 표적 부위에 대해 충분한 친화력을 가짐을 지칭하고, 이러한 상호작용은 접합, 결합, 부착, 상보성 제공, 공유 결합력 또는 비공유 결합력 제공, 결합 안정성 향상 등의 방식으로 이루어질 수 있다.
본 출원에서, 용어 "가이드 RNA", "가이드 DNA" 및 "gRNA"는 상호교환적으로 사용될 수 있으며, 일반적으로 뉴클레아제(예를 들어, Argonaute, 또는 Ago)가 표적 유전자에 결합되거나 및/또는 이를 절단하도록 유도할 수 있는 DNA 분자를 지칭한다. 일부 바람직한 실시 형태에 있어서, 가이드 DNA는 단일 가닥 DNA 분자(ssDNA), 5' 말단이 인산화된 단일 가닥 DNA 분자, 5' 말단이 하이드록실화된 단일 가닥 DNA 분자를 포함할 수 있으며, 표적 유전자와 상보적인 염기 단편을 포함하는 단편 및/또는 8 내지 35nt의 길이를 갖는다. 본 출원의 일부 실시 형태에 있어서, 용어 "가이드 RNA"는 하기를 포함하는 RNA를 지칭한다: (1) 가이드 RNA가 지시하는 엔도뉴클레아제(예를 들어: II클래스 Cas 뉴클레아제, 예를 들어, II형, V형 또는 VI형 Cas 엔도뉴클레아제)에 결합하고 RNA가 지시하는 엔도뉴클레아제를 활성화하는 "활성화" 뉴클레오타이드 서열; 및 (2) 표적 핵산과 혼성화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 "표적" 뉴클레오타이드 서열. "활성화" 뉴클레오타이드 서열과 "표적" 뉴클레오타이드 서열은 분리된 RNA 분자(예를 들어, "이중 가이드 RNA")에 존재할 수 있고, 또는 동일한 RNA 분자("단일 가이드 RNA", sgRNA라고도 함)에 존재할 수 있다.
본 출원에서 용어 "II클래스 Cas 뉴클레아제"는 일반적으로 CRISPR/Cas 유전자좌의 업데이트된 분류 체계(Makarova et al., (2015) Nat Rev Microbiol[자연 미생물학 리뷰], 13(11):722-36; Shmakov et al., (2015) Mol Cell[분자 세포], 60:385-397)에 따라 정의된, 단일 단백질 형태로 인식 및/또는 절단 기능을 수행하는 Cas 단백질 클래스를 지칭한다.
본 출원에서, 용어 "II클래스 II형 Cas 뉴클레아제 및 II클래스 V형 Cas 뉴클레아제"는 일반적으로 단일 단백질이며 RNA가 유도 엔도뉴클레아제인 II클래스 Cas 뉴클레아제를 지칭한다. 이 중에서, II형과 V형중의 V-B형 Cas 뉴클레아제는 tracrRNA(트랜스-활성화 CRISPR RNA)와 crRNA(CRISPR RNA)가 함께 작용해야 정상적으로 기능을 발휘할 수 있으며, crRNA와 tracrRNA는 인공적으로 결합되어 단일 가이드 RNA(sgRNA)로 합성되는 반면, V형의 V-A형 Cas 뉴클레아제는 crRNA만을 단독으로 사용하여 가이드 기능을 수행한다. II클래스 II형 Cas 뉴클레아제의 비제한적인 예로는 Cas9 및 이의 패밀리 관련 뉴클레아제가 포함되며, II클래스 V형 Cas 뉴클레아제의 비제한적인 예로는 Cas12a(Cpf1라고도 함), Cas12b(C2c1라고도 함), Cas12c(C2c3라고도 함), Cas12d(CasY), Cas12e(CasX), Cas12g, Cas12h, Cas12i, C2c1, C2c4, C2c5, C2c8, C2c9, C2c10, Cas14a, Cas14b, Cas14c 뉴클레아제 및/또는 TnpB가 포함된다.
본 출원에서 용어 "DNA 메틸트랜스퍼라아제"는 일반적으로 DNA에 메틸을 전이시키는 촉매 작용을 하는 효소를 지칭한다. DNA 메틸트랜스퍼라아제의 비제한적인 예로는 DNMT1, DNMT3A, DNMT3B 및 DNMT3L이 포함된다. 예를 들어, DNA 메틸화를 통해 DNA 메틸트랜스퍼라아제는 DNA 서열을 변경하지 않고도 DNA 단편의 활성(예를 들어, 유전자 발현 조절)을 변경할 수 있다. 본문에 기재된 바와 같이, 유전자 발현 조절 분자는 하나 또는 복수(예를 들어, 2개)의 DNA 메틸트랜스퍼라아제를 포함할 수 있다. DNA 메틸트랜스퍼라아제가 유전자 발현 조절 분자의 일부로 포함될 때, DNA 메틸트랜스퍼라아제는 "DNA 메틸트랜스퍼라아제 도메인"으로 불릴 수 있다. 여러 측면에서, DNA 메틸트랜스퍼라아제 도메인은 DNMT 3A와 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열의 변이체 또는 동족체를 포함한다. 여러 측면에서, DNA 메틸트랜스퍼라아제 도메인은 DNMT 3L과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열의 변이체 또는 동족체를 포함한다.
본 출원에서, 용어 "기능적 활성 단편"은 일반적으로 전장 단백질 또는 핵산의 부분 영역을 갖지만, 전장 단백질 또는 핵산의 생물학적 활성 또는 기능을 보유하거나 부분적으로 보유하는 단편을 지칭한다. 예를 들어, 기능적 활성 단편은 전장 단백질이 다른 분자와 결합하는 능력을 보유하거나 부분적으로 보유할 수 있다. 예를 들어, DNA 메틸트랜스퍼라아제의 기능적 활성 단편은 전장 DNA 메틸트랜스퍼라아제의 메틸기가 DNA로 전달되는 것을 촉매하는 생물학적 활성 기능을 보존하거나 부분적으로 보존할 수 있다.
본 출원에서, 용어 "링커"는 일반적으로 2개 이상의 부분을 연결하는 링커를 포함하는 것을 지칭한다. 각 실시예에서, 링커는 N 말단 및 C 말단에서 화합물의 나머지 부분의 아미노산 서열(예를 들어, 본문에서 제공되는 융합 단백질)에 연결된다. 예를 들어, 본문에서 사용된 용어 "XTEN", "XTEN 링커" 또는 "XTEN 폴리펩타이드"는 소수성 아미노산 잔기가 결여된 재조합 폴리펩타이드(예를 들어, 비구조화 재조합 펩타이드)를 지칭하고, XTEN의 개발 및 사용에 대해서는 Schellenberger et al., 《자연 생물학 기술(Nature Biotechnology)》 27, 1186-1190(2009)에서 확인할 수 있으며, 이는 인용을 통해 본문에 통합된다.
본 출원에서, 용어 "억제", "저애", "침묵" 등은 일반적으로 유전자 발현 및/또는 활성의 감소를 지칭한다. 예를 들어, 물질(예를 들어, 융합 단백질, 복합체, 핵산, 벡터)이 없는 경우(대조군)의 핵산 서열 활성에 비해 본 출원의 물질을 투여함으로써 핵산 서열의 활성에 부정적인 영향(예를 들어, 감소)을 미칠 수 있다. 예를 들어, 억제는 질환이나 질환 증상의 감소를 지칭할 수 있다. 예를 들어, 억제는 핵산 서열의 활성화(예를 들어, 전사)를 적어도 부분적으로, 부분적으로 또는 완전히 차단하거나, 핵산 서열의 활성화를 감소시키거나, 예방하거나 지연시키는 것을 포함한다. 예를 들어, 억제 활성은 대조군의 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% 또는 그 이하일 수 있다.
본 출원에서, 용어 "전사 억제제"는 일반적으로 표적 핵산 서열에 결합하고 표적 핵산 서열과 관련된 유전자 산물의 발현 수준을 감소시키는 물질 및/또는 시약을 지칭하며, 예를 들어 단백질(예를 들어, 전사 인자 또는 이의 단편)이다. 예를 들어, 상기 유전자 산물은 유전자로부터 전사된 RNA(예를 들어, mRNA) 또는 유전자로부터 전사된 mRNA로부터 번역된 폴리펩타이드일 수 있다. 일반적으로 mRNA 수준의 증가 또는 감소는 그로부터 번역되는 폴리펩타이드 수준의 증가 또는 감소로 이어진다. 발현 수준은 mRNA 또는 단백질을 측정하는 표준 기술을 사용하여 확인할 수 있다. 비제한적인 전사 억제제의 예로는 mSin3 상호작용 도메인(SID) 단백질, 메틸-CpG-결합 도메인 2(MBD2), MBD3, DNA 메틸트랜스퍼라아제(DNMT) 1(DNMT1), DNMT2A, DNMT3A, DNMT3B, DNMT3L, 망막모세포종 단백질(Rb), 메틸CpG 결합 단백질 2(Mecp2), GATA-1 및 이의 보조인자 Fog1, MAT2 조절제(ROM2), 아라비돕시스 HD2A 단백질(AtHD2A), 라이신 특이적 탈메틸화효소 1(LSD1) 및/또는 크루펠관련객박스(KRAB)가 포함된다.
본 출원에서, 용어 "KRAB"는 또한 "크루펠-관련 박스 도메인(-associated box domain)"이라고도 하며, 일반적으로 인간 징크 핑거 단백질의 전사 인자에 존재하는 전사 억제 도메인의 약 45개에서 약 75개 아미노산 잔기를 지칭한다. 여러 측면에서, KRAB 도메인은 ZIM3 KRAB 도메인 또는 KOX1 KRAB 도메인과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 일치성을 갖는 아미노산 서열의 변이체 또는 동족체를 포함한다.
본 출원에서 용어 "핵 국소화 서열" 또는 "핵 국소화 신호" 또는 "NLS"는 일반적으로 단백질을 세포핵으로 유도하는 펩타이드를 지칭한다. 예를 들어, NLS는 5개의 염기성 양전하를 띤 아미노산을 포함한다. 예를 들어, NLS는 펩타이드 사슬의 임의의 위치에 존재할 수 있다.
본 출원에서, 용어 "마커"는 펩티드를 지칭하며, 이를 발현 벡터에 도입함으로써 하나 또는 복수의 벡터 삽입 단편의 발현 생성물의 제거 및/또는 정제를 가능하게 할 수 있다. 이러한 마커는 당업계에 공지된 것으로, 방사성 표지된 아미노산 또는 표지된 아비딘(예를 들어, 광학적 또는 비색적 방법으로 검출할 수 있는 형광 마커 또는 효소 활성을 함유하는 스트렙타비딘)에 의해 검출될 수 있는 비오틴 부분이 연결된 폴리펩타이드를 포함한다. 친화성 마커로는 FLAG, 글루타치온-S-트랜스퍼라제, 말토스 결합 단백질, 셀룰로스 결합 도메인, 티오레독신, NusA, mistin, 키틴 결합 도메인, 큐티나제, AGT, GFP 등이 있으며, 단백질 발현 및 정제 시스템에서 널리 사용되는 기타 마커들도 포함된다. 폴리펩타이드에 대한 추가적인 비제한적 예시로는, 히스티딘 마커, 방사성 동위원소 또는 방사성 핵종(예를 들어, 3H, 14C, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 177Lu, 166Ho 또는 153Sm); 형광 마커(예를 들어, FITC, 로다민, 란타넘족 인화물); 효소 마커(예를 들어, 서양고추냉이 과산화효소, 루시페라제, 알칼리성 포스파타제); 화학발광 마커; 비오틴 기; 제2 보고자에 의해 인식되는 펜던트 폴리펩타이드 항원 결정기(예를 들어, 류신 지퍼 쌍 서열, 2차 항체 결합 부위, 금속 결합 도메인, 항원 결정기 마커); 그리고 가돌리늄 킬레이트와 같은 자기성 시약 등을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
본 출원에서, 상기 특정 단백질(예를 들어, KRAB, dCas9, Dnmt3A, Dnmt3L)은 상기 단백질의 모든 천연 형태 또는 상기 단백질 활성(예를 들어, 천연 단백질 대비 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 활성을 갖는다)을 유지하는 변이체 또는 상동체를 포함할 수 있다. 여러 측면에서, 변이체 또는 동족체는 천연적으로 존재하는 형태와 비교하여 전체 서열 또는 일부 서열(예를 들어, 50, 100, 150 또는 200개의 연속 아미노산 부분)에 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는다.
본 출원에서 용어 "핵산"은 "폴리뉴클레오타이드", "뉴클레오타이드", "뉴클레오타이드 서열" 및 "올리고뉴클레오타이드"와 상호교환적으로 사용되며, 일반적으로 뉴클레오타이드(예를 들어, 디옥시리보뉴클레오타이드 또는 리보뉴클레오타이드) 및 이의 단일가닥, 이중가닥 또는 다중가닥 형태의 중합체 또는 이의 상보체를 지칭한다. 예를 들어, 뉴클레오타이드는 리보뉴클레오타이드, 데옥시리보뉴클레오타이드 또는 이의 변형된 형태일 수 있다. 예를 들어, 뉴클레오타이드는 단일 가닥 및 이중 가닥 DNA, 단일 가닥 및 이중 가닥 RNA, 그리고 단일 가닥 및 이중 가닥 DNA와 RNA의 혼합물을 가진 하이브리드 분자일 수 있다. 예를 들어, 뉴클레오타이드는 mRNA, siRNA, miRNA, sgRNA 및 가이드 RNA와 같은 모든 유형의 RNA뿐만 아니라 모든 유형의 DNA, 게놈 DNA, 플라스미드 DNA 및 미니서클 DNA와 이의 어떤 단편도 포함할 수 있다. 상기 용어는 또한 합성된, 천연적으로 존재하는 및 비천연적으로 존재하는 알려진 뉴클레오타이드 유사체 또는 변형된 주요 사슬 잔기 또는 결합을 포함하는 핵산을 포함한다.
본 출원에서, 용어 "...을 코딩하는 서열" 또는 "...을 코딩하는 핵산"은 일반적으로 단백질을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산(RNA 또는 DNA 분자)을 지칭한다. 코딩 서열은 또한 조절 요소에 작동적으로 연결될 수 있는 시작 및 종료 신호를 포함하며, 상기 조절 요소는 핵산이 투여된 개체 또는 포유동물의 세포에서 발현을 유도할 수 있는 프로모터 및 폴리아데닐화 신호를 포함한다. 코딩 서열에 대해 코돈 최적화를 수행할 수 있다.
본 출원에서 용어 "인트론"은 일반적으로 시약(예를 들어, 핵산 분자)을 표적 세포로 전달할 수 있는 이동 매질은 지칭한다. 전달 벡터는 시약을 특정 세포 하위 유형으로 전달할 수 있다. 예를 들어, 전달 벡터의 고유한 특성을 이용하거나 벡터와 결합된 부분, 내부에 포함된 부분(또는 벡터와 결합된 부분으로서, 상기 부분과 상기 벡터가 함께 유지되도록 하여 상기 부분이 충분히 전달 벡터를 표적으로 하도록 하는 부분)을 통해 전달 벡터가 특정 유형의 세포를 표적으로 하게할 수 있다. 전달 벡터는 또한 전달될 시약의 체내 반감기 및/또는 전달될 시약의 생체 이용률을 향상시킬 수 있다. 전달 벡터는 바이러스 벡터, 바이러스 유사 입자, 폴리양이온 벡터, 펩타이드 벡터, 리포좀 및/또는 하이브리드 벡터를 포함할 수 있다. 예를 들어, 표적 세포가 간세포인 경우, 상기 전달 벡터의 특성(예를 들어, 크기, 전하 및/또는 pH)은 상기 전달 벡터 및/또는 그 안에 탑재된 분자를 표적 세포에 효과적으로 전달하고, 면역 제거를 감소시키고 및/또는 해당 표적 세포 내 체류를 촉진할 수 있다.
본 출원에서 용어 "리포솜"은 일반적으로 하나 또는 복수의 이중층 막에 의해 외부 매질과 분리된 내부 공간을 가진 소포체를 지칭한다. 일부 실시 형태에 있어서, 상기 이중층 막은 공간적으로 분리된 친수성 및 소수성 도메인을 포함하는 합성 또는 천연 유래의 지질과 같은 양친매성 분자에 의해 형성될 수 있고, 다른 실시 형태에 있어서, 상기 이중층 막은 양친매성 고분자 및 계면활성제에 의해 형성될 수 있다. 일부 실시 형태에 있어서, 상기 리포솜은 내부 수성 구획을 둘러싼 단일층 또는 다층 지질 이중층과 상대적으로 불투과성인 외부 친유성 인지질 이중층으로 구성된 구형 소포 구조이다. 일부 실시 형태에 있어서, 리포솜은 생체 적합성이 있고 독성이 없으며, 친수성 및 친유성 약물 분자를 전달할 수 있고, 혈장 효소에 의한 분해로부터 운반물을 보호하고, 생물학적 막과 혈액 뇌장벽(BBB)을 통해 탑재물을 운반할 수 있다. 리포솜은 인지질과 같은 여러 종류의 지질로 제조될 수 있다. 리포솜은 천연 인지질 및 지질(예를 들어 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DSPC), 스핑고미엘린, 포스파티딜콜린, 모노시아로실갱글리오사이드 또는 이들의 임의 조합)을 포함할 수 있다. 리포솜의 구조와 성질을 변화시키기 위해 몇 가지 다른 첨가제를 리포솜에 가할 수 있다. 예를 들어, 리포솜은 콜레스테롤, 스핑고미엘린 및/또는 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DOPE)을 더 포함할 수 있으며, 이는 안정성 증가 및/또는 리포좀 내부 탑재물의 누출 방지를 위한 것이다.
용어 "지질 나노입자(LNP)"는 일반적으로 분자 간 힘에 의해 물리적으로 결합(예를 들어, 공유 결합 또는 비공유 결합)된 복수(즉, 하나 이상)의 지질 분자로 구성된 입자를 지칭한다. LNP는 예를 들어 마이크로스피어(리포솜과 같은 단층 및 다층 소포를 포함), 에멀젼의 분산상, 미셀 또는 현탁액의 내부상일 수 있다. LNP는 핵산을 양이온성 지질 입자(예를 들어, 리포솜) 내부에 캡슐화할 수 있으며, 상대적으로 쉽게 세포에 전달될 수 있다. 일부 예에서, 지질 나노입자는 바이러스 성분을 전혀 포함하지 않아 안전성과 면역원성 문제를 최소화하는 데 도움이 된다. 상기 지질 입자는 체외, 시험관내 및 체내 전달에 사용될 수 있다. 상기 지질 입자는 다양한 규모의 세포군에도 사용될 수 있다. 본 출원의 LNP는 유기상과 수상을 혼합하는 것과 같은 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 용이하게 제조될 수 있다. 양상의 혼합은 미세유체 장치와 충돌 스트림 반응기를 통해 실현할 수 있다. 유기상과 수상이 더 철저히 혼합할수록 얻어지는 LNP의 패키징율과 입자 크기 분포가 더 우수해진다. 바람직하게는, LNP의 입자 크기는 유기상과 수상의 혼합 속도를 변경하여 조절할 수 있다. 혼합 속도가 빠를수록 제조된 LNP의 입자 크기는 더 작아진다. 패키징 효율은 LNP 시스템의 N/P(이온화 가능한 지질/핵산) 비율을 조절하여 최적화할 수 있다. 일부 예에서 LNP는 DNA 분자(예를 들어, DNA 결합 단백질 및/또는 sgRNA의 코딩 서열을 포함하는 분자) 및/또는 RNA 분자(예를 들어, Cas, sgRNA의 mRNA)를 전달하는 데 사용될 수 있다. 특정 경우에, LNP는 Cas/gRNA의 RNP 복합체의 전달에 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에 있어서, LNP는 mRNA 및 gRNA(예를 들어, DNMT3A-DNMT3L(3A-3L)-dCas9-KRAB 및 표적 유전자를 표적으로 하는 sgRNA 중 적어도 하나를 포함하는 mRNA 융합 분자)의 전달에 사용될 수 있다.
본 출원에서 용어 "재조합 벡터"는 일반적으로 이를 운반할 수 있는 핵산 분자와 이에 연결된 다른 핵산을 지칭한다. 벡터의 한 유형은 "플라스미드"로, 다른 DNA 세그먼트를 이의 내부에 연결할 수 있는 고리형 이중 가닥 DNA 루프를 지칭한다. 대안적으로, 벡터는 선형일 수 있다. 또 다른 유형의 벡터는 바이러스 벡터이고, 여기서 다른 DNA 세그먼트는 바이러스 게놈내에 연결될 수 있다. 특정 벡터는 이들이 이미 도입된 숙주 세포 내에서 자율 복제(예를 들어, 박테리아 복제 기점을 갖는 박테리아 벡터 및 에피솜 포유류 벡터)가 가능하다. 다른 벡터(예를 들어, 비에피솜 포유류 벡터)는 숙주 세포 내로 도입된 후 숙주 세포의 게놈에 통합될 수 있으며, 따라서 숙주 게놈과 함께 복제된다.
본 출원에서, 용어 "조절 요소"는 핵산 서열의 발현을 제어할 수 있는 유전적 요소를 지칭한다. 예를 들어, 스플라이싱 신호, 프로모터 서열, 폴리아데닐화 신호, 전사 종결 서열, 상류 조절 도메인, 복제 기점, 내부 리보솜 진입 부위("IRES"), 인핸서 등이며, 이들은 모두 수용체 세포 내에서의 코딩 서열의 복제, 전사 및 번역을 제공한다. 이러한 모든 제어 서열은 반드시 존재해야 하는 것은 아니다. 진핵생물에서의 전사 조절 신호는 일반적으로 "프로모터"와 "인핸서" 요소를 포함한다. 프로모터와 인핸서는 짧은 DNA 서열 배열로 구성되며, 프로모터는 작종가능하게 연결된 코딩 영역의 전사 개시를 촉진하는 조절 요소이고, 인핸서는 동일한 DNA 분자 상에 위치한 가장 가까운 프로모터의 활성을 증가시켜 유전자 전사 속도를 높이는 조절 요소이고, 상기 서열들은 전사에 관여하는 세포 단백질과 특이적으로 상호작용한다(Maniatis et al., Science 236:1237 (1987), 전체가 인용을 통해 본문에 통합됨). 프로모터와 인핸서 요소는 효모, 곤충 및 포유류 세포와 바이러스 유전자를 포함한 다양한 진핵 생물 공급원에서 분리될 수 있다(유사한 조절 서열인 프로모터는 원핵생물에서도 발견됨). 특정 프로모터와 인핸서의 선택은 수용체 세포 유형에 따라 달라진다. 일부 진핵세포 프로모터와 인핸서는 광범위한 숙주 범위를 가지는 반면, 기타 프로모터와 인핸서는 제한된 세포 유형의 하위 집단 내에서만 기능한다(자세한 내용은 예를 들어, Voss et al., Trends Biochem. Sci., 11:287 (1986); 및 Maniatis et al.(위와 동일)을 참조하며, 전체가 인용을 통해 본문에 통합됨). 예를 들어, SV40 초기 유전자 인핸서는 다양한 포유류 종에서 유래한 다양한 세포 유형에서 매우 활발하며, 다양한 포유류 세포에서 단백질을 발현하는 데 사용되어 왔다(Dijkema et al., EMBO J.4:761 (1985), 전체가 인용을 통해 본문에 통합됨). 인간 연장 인자 1-α 유전자에서 유래한 프로모터 및 인핸서 요소(Uetsuki et al., J. Biol. Chem., 264:5791 (1989); Kim et al., Gene 91:217 (1990); 및 Mizushima and Nagata, Nucl. Acids. Res., 18:5322 (1990)), 라우스 육종 바이러스의 긴 말단 반복 서열(Gorman 등, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 79:6777 (1982)), 및 인간 거대세포바이러스(Boshart et al., Cell 41:521 (1985))도 다양한 포유류 세포 유형에서 단백질을 발현하는 데 사용될 수 있으며, 상기 참고문헌은 전체적가 인용을 통해 본문에 통합된다. 프로모터와 인핸서는 단독으로 또는 함께 천연적으로 존재할 수 있다. 예를 들어, 역전사 바이러스의 긴 말단 반복 서열은 프로모터와 인핸서 요소를 포함한다. 일반적으로 프로모터와 인핸서의 기능은 전사되거나 번역되는 유전자와 독립적으로 작용한다. 따라서, 사용된 인핸서와 프로모터는 이들이 작동 가능하게 연결된 유전자에 대해 '내인성', '외인성' 또는 '이종성'일 수 있다. "내인성" 인핸서/프로모터는 게놈 내 주어진 유전자와 천연적으로 연결된 인핸서/프로모터이다. "외인성" 또는 "이종" 인핸서 또는 프로모터는 유전자 조작(즉, 분자생물학 기술)을 통해 유전자에 병치된 인핸서 또는 프로모터로, 상기 병치는 상기 유전자의 전사가연결된 인핸서/프로모터에 의해 지시되도록 한다. 발현 벡터 상의 "스플라이싱 신호" 존재는 재조합 전사체의 높은 수준 발현을 초래하는 경우가 많다. 특정 실시 형태에 있어서, "스플라이싱 신호"는 초기 RNA 전사체로부터 인트론 제거를 매개하며, 스플라이싱 공여체 및 수용체 부위로 구성된다(Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 제2판, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (1989), pp. 16.7-16.8, 전체가 인용을 통해 본문에 통합됨). 일반적으로 사용되는 스플라이싱 공여체 및 수용체 부위는 SV40의 16S RNA 스플라이싱 부위에서 유래한다. 특정 실시 형태에 있어서, "전사 종결 신호"는 일반적으로 폴리아데닐화 신호의 하류에 존재하며, 수백 개의 뉴클레오타이드 길이를 가진다. 예를 들어, 용어 "poly A 신호" 또는 "poly A 서열"은 신생 RNA 전사체의 종결과 폴리아데닐화를 지시하는 DNA 서열을 나타낸다. 재조합 전사체의 효율적인 폴리아데닐화는 종종 필수적이며, 이는 poly A 신호가 없는 전사체는 불안정하고 빠르게 분해되기 때문이다. 발현 벡터에서 사용되는 poly A 신호는 "이종성" 또는 "내인성"일 수 있다. 내인성 poly A 신호는 게놈 내 주어진 유전자의 코딩 영역의 3' 말단에 천연적으로 존재하는 신호이다. 이종 poly A 시그널은 한 유전자로부터 분리되어 다른 유전자의 3' 말단에 작동가능하게 연결된 신호이다. 일반적으로 사용되는 이종 poly A 신호는 SV40 poly A 신호이다. SV40 poly A 신호는 237bp의 BamHI/BclI 제한 효소 단편에 포함되어 있으며, 종결 및 폴리아데닐화를 유도한다(Sambrook et al., 위와 동일, 16.6-16.7, 전체가 인용을 통해 본문에 통합됨).
본 출원에서 용어 "피험자"는 일반적으로 동물을 지칭하며, 주로 포유류이고, 이에는 인간, 비인간 영장류(원숭이, 긴팔원숭이, 고릴라, 침팬지, 오랑우탄, 벵골원숭이), 가축(개와 고양이), 농장 동물(닭과 오리와 같은 가금류, 말, 소, 염소, 양, 돼지) 및 실험 동물(마우스, 랫트, 토끼, 기니피그)이 포함된다. 인간 피험자에는 태아, 신생아, 영아, 청소년 및 성인 피험자가 포함된다. 피험자에는 동물 질병 모델, 예를 들어 마우스 및 혈액 응고 질환(예를 들어, HemA)과 같은 기타 동물 모델, 그리고 당업자에게 공지된 기타 동물 모델이 포함된다.
본 출원에서, 용어 "포함"은 일반적으로 명시적으로 지정된 특징을 포함하는 것을 의미하지만 다른 요소를 배제하는 것이 아니다.
본 출원에서, 용어 "선택된"은 일반적으로 선택된 대상 및 이의 모든 조합을 포함하는 것을 지칭한다. 예를 들어, "A, B 및 C에서 선택된"은 A, B 및 C의 모든 조합을 지칭하고, 예를 들어, A, B, C, A+B, A+C, B+C 또는 A+B+C이다.
본 출원에서 용어 "약"은 일반적으로 지정된 수치의 상하로 0.5% 내지 10% 범위 내에서 변동하는 것을 지칭하며, 예를 들어 지정된 수치의 0.5%, 1%, 1.5%, 2%, 2.5%, 3%, 3.5%, 4%, 4.5%, 5%, 5.5%, 6%, 6.5%, 7%, 7.5%, 8%, 8.5%, 9%, 9.5% 또는 10% 의 범위 내에서 변동한다.
[발명의 상세한 설명]
일 양태에서, 본 출원은 핵산 결합 도메인 및 하나 또는 복수의 효과기 도메인을 포함하고, 상기 효과기 도메인은 후성 유전학적 변형 도메인 및/또는 전사 조절 도메인 중 하나 또는 복수를 포함하며, 상기 후성 유전학적 변형 도메인 및/또는 상기 전사 조절 도메인의 총 수는 2가지 이상인 융합체를 제공한다.
다른 일 양태에 있어서, 본 출원은 본 출원에 따른 융합체를 코딩하는 핵산을 제공한다. 예를 들어, 상기 핵산은 DNA 및/또는 mRNA를 포함한다. 예를 들어, 상기 핵산은 비정상적인 표적 유전자 발현 및/또는 비정상적인 표적 유전자 활성과 관련된 질환 또는 그 증상을 치료하거나 완화하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에 있어서, 상기 핵산은 mRNA이고, 더 안정적인 mRNA를 생성하기 위해 하나 또는 복수의 변형 기술이 사용될 수 있다. 공지된 mRNA 변형 기술은 크게 세 가지로 분류될 수 있다: 인공적으로 합성된 비천연 리보핵산으로 천연 리보핵산을 대체하여 mRNA를 합성하는 방법; 5' caps、3' poly（A） "테일" 및 UTR(비번역 영역) 서열을 가하는 방법; 특수한 신규 처방 기술을 사용하여 mRNA를 효과적으로 보호하는 방법. 여기서, 바람직한 mRNA 변형 기술은 인공적으로 합성된 비천연 리보핵산을 사용하여 천연 리보핵산을 대체하여 mRNA를 합성할 수 있다. 진핵 mRNA의 화학적 변형은 크게 세 가지로 분류할 수 있다: 메틸화, 슈도우리딘(Ψ) 및 하이포크산틴. 예를 들어, 상기 화학적 변형은 슈도우리딘, N1-메틸슈도우리딘, N1-에틸슈도우리딘, 2-티오유리딘, 4'-티오유리딘, 5-메틸시토신, 2-티오-1-메틸-1-데아자-슈도우리딘, 2-티오-1-메틸-슈도우리딘, 2-티오-5-아자-유리딘, 2-티오-디하이드로슈도우리딘, 2-티오-디하이드로유리딘, 2-티오-슈도우리딘, 4-메톡시-2-티오-슈도우리딘, 4-메톡시-슈도우리딘, 4-티오-1-메틸-슈도우리딘, 4-티오-슈도우리딘, 5-아자-유리딘, 디하이드로슈도우리딘, 5-메틸유리딘, 5-메톡시유리딘 및 2'-O-메틸유리딘에서 선택될 수 있다.
다른 일 양태에 있어서, 본 출원은 본 출원에 따른 핵산을 포함하는 재조합 벡터를 제공한다. 예를 들어, 재조합 벡터는 이에 연결된 다른 핵산을 운반할 수 있는 핵산 분자를 지칭할 수 있다. 재조합 벡터는 단일 가닥, 이중 가닥 또는 부분적으로 이중 가닥인 핵산 분자, 하나 또는 복수의 자유 말단을 포함하거나 유리 말단이 없는(예를 들어, 루프형) 핵산 분자, DNA, RNA 또는 둘 다를 포함하는 핵산 분자, 및 당업계에서 공지된 다른 종류의 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 예를 들어, 바이러스 벡터를 사용할 수 있다. 바이러스 벡터는 바이러스(예를 들어, 레트로바이러스, 복제 결함형 레트로바이러스, 아데노바이러스, 복제 결함형 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스 AAV)로 패키징하기 위해 바이러스 유래의 DNA 또는 RNA 서열을 포함할 수 있다. 바이러스 및 바이러스 벡터는 체외, 시험관내 및/또는 체내 전달에 사용될 수 있다.
다른 일 양태에 있어서, 본 출원은 본 출원에 따른 융합체, 본 출원에 따른 핵산, 및/또는 본 출원에 따른 재조합 벡터를 포함하고, 선택적으로 리포좀 및/또는 지질 나노입자를 포함하는 전달 벡터를 제공한다. 예를 들어, 전달 벡터는 하나 또는 복수의 Cas 단백질 및 하나 또는 복수의 가이드 RNA를 포함할 수 있으며, 예를 들어 리보핵단백질 복합체(RNP) 형태일 수 있다. 예를 들어, 리보핵단백질은 폴리펩타이드 기반 셔틀제를 통해 전달될 수 있다. 예를 들어, 리보핵단백질은 합성 펩타이드를 이용해 전달될 수 있다. 예를 들어, 물리적 전달 방법을 통해 전달 벡터를 세포 내로 도입할 수 있다. 물리적 방법의 예로는 미세주입, 전기천공 및 유체역학적 전달이 포함된다. 예를 들어, LNPs는 핵산을 양이온성 지질 입자(예를 들어, 리포솜) 내부에 패키징할 수 있으며, 상대적으로 쉽게 세포에 전달될 수 있다. 일부 예에서, 지질 나노입자는 바이러스 성분을 전혀 포함하지 않아 안전성과 면역원성 문제를 최소화하는 데 도움이 된다. 지질 입자는 체외, 시험관내 및 체내 전달에 사용될 수 있다. LNP의 성분은 양이온성 지질, 이온화 가능 지질, 폴리에틸렌글리콜화 지질 및/또는 지지 지질, 그리고 선택적으로 콜레스테롤 성분을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에 있어서, LNP는 이온화 가능 지질(20% 내지 70%, 몰비), 폴리에틸렌글리콜화 지질(0% 내지 30%, 몰비), 지지 지질(30% 내지 50%, 몰비) 및 콜레스테롤(10% 내지 50%, 몰비)을 포함할 수 있다.
다른 일 양태에 있어서, 본 출원은 본 출원에 따른 융합체, 본 출원에 따른 핵산, 본 출원에 따른 재조합 벡터, 및/또는 본 출원에 따른 전달 벡터를 포함하는 조성물을 제공한다. 예를 들어, 조성물 내의 융합체, 상기 융합체를 코딩하는 핵산, 재조합 벡터 및 전달 벡터는 하나의 조성물 내에 동시에 포함될 수도 있고, 또는 서로 다른 조성물에 각각 포함될 수도 있다. 예를 들어, 조성물 중의 융합체, 상기 융합체를 코딩하는 핵산, 재조합 벡터 및/또는 전달 벡터를 사용할 때 동시에 사용하거나 분리하여 사용할 수 있다.
다른 일 양태에 있어서, 본 출원은 본 출원에 따른 융합체, 본 출원에 따른 핵산, 본 출원에 따른 재조합 벡터, 본 출원에 따른 전달 벡터, 및/또는 본 출원에 따른 조성물을 포함하는 세포를 제공한다.
다른 일 양태에 있어서, 본 출원은 본 출원에 따른 융합체, 본 출원에 따른 핵산, 본 출원에 따른 재조합 벡터, 본 출원에 따른 전달 벡터, 본 출원에 따른 조성물, 및/또는 본 출원에 따른 세포를 포함하는 키트를 제공한다.
다른 일 양태에 있어서, 본 출원은 본 출원에 따른 융합체, 본 출원에 따른 핵산, 본 출원에 따른 재조합 벡터, 본 출원에 따른 전달 벡터, 본 출원에 따른 조성물, 본 출원에 따른 세포 및/또는 본 출원에 따른 키트를 투여하는 것을 포함하는 표적 유전자 발현을 조절하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 본 출원의 방법은 비치료 목적의 방법일 수 있다. 예를 들어, 본 출원의 방법은 인체를 직접 사용 대상으로 하지 않는 방법일 수 있다. 예를 들어, 본 출원의 방법은 체외 또는 시험관내 방법일 수 있다. 예를 들어, 본 출원의 방법은 치료 목적의 방법일 수 있다. 예를 들어, 본 출원의 방법은 체내 방법일 수 있다. 예를 들어, 상기 방법은 표적 유전자의 발현 및/또는 활성을 감소시킬 수 있다. 예를 들어, 본 출원 물질이 존재하지 않는 경우의 표적 유전자 발현 및/또는 활성에 비해, 본 출원 물질을 투여함으로써 핵산 서열의 활성에 부정적인 영향(예를 들어, 감소)을 미칠 수 있으며, 예를 들어, 핵산 서열의 활성화(예를 들어, 전사)를 적어도 부분적으로, 부분적으로 또는 완전히 차단하거나, 핵산 서열의 활성화를 감소시키거나, 예방하거나 또는 지연시키는 것을 포함할 수 있다. 예를 들어, 억제 활성은 대조군의 약 90%, 약 80%, 약 70%, 약 60%, 약 50%, 약 40%, 약 30%, 약 20%, 약 10% 또는 그 이하일 수 있다.
다른 일 양태에 있어서, 본 출원은 유효량의 본 출원에 따른 융합체, 본 출원에 따른 핵산, 본 출원에 따른 재조합 벡터, 본 출원에 따른 전달 벡터, 본 출원에 따른 조성물, 본 출원에 따른 세포 및/또는 본 출원에 따른 키트를 이를 필요로 하는 피험자에게 투여하는 것을 포함하는 비정상적인 표적 유전자 발현 및/또는 비정상적인 표적 유전자 활성과 관련된 질환 또는 그 증상을 치료하거나 완화하기 위한 방법을 제공한다. 일부 실시 형태에 있어서, 치료는 기관의 질환/증상을 대상으로 하며, 예를 들어, 간 질환, 안구 질환, 근육 질환, 심장 질환, 혈액 질환, 뇌 질환, 신장 질환을 포함하거나, 자가면역 질환, 중추 신경계 질환의 치료, 암 및 기타 증식성 질환, 신경퇴행성 질환, 염증성 질환, 대사 질환, 근골격계 질환 등을 포함할 수 있다.
융합체
일부 실시 형태에 있어서, 상기 하나 또는 복수의 효과기 도메인은 상기 핵산 결합 도메인의 N 말단 또는 C 말단에 위치한다
예를 들어, 상기 하나 또는 복수의 효과기 도메인은 모두 상기 핵산 결합 도메인의 N 말단에 위치할 수 있다. 일부 실시 형태에 있어서, 상기 효과기 도메인은 상기 후성 유전학적 변형 도메인 중 적어도 하나와 상기 전사 조절 도메인 중 적어도 하나를 포함할 수 있으며, 또한, 상기 효과기 도메인 내의 상기 후성 유전학적 편집 도메인은 상기 전사 조절 도메인의 N 말단에 위치할 수 있거나, 상기 전사 조절 도메인의 C 말단에 위치할 수 있다. 이러한 상황에서, 상기 후성 유전학적 변형 도메인은 DNMT3A 및 DNMT3L을 포함할 수 있으며, 상기 DNMT3A의 C 말단은 상기 DNMT3L의 N 말단과 연결되거나, 상기 DNMT3L의 C 말단은 상기 DNMT3A의 N 말단과 연결될 수 있다. 마찬가지로 이러한 상황에서, 상기 전사 조절 도메인은 전사 억제제 도메인을 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 전사 조절 도메인은 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자 또는 이의 기능적 활성 단편을 포함한다. 구체적으로, 상기 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자는 KRAB를 포함할 수 있으며, 예를 들어 본 출원의 일부 실시예에서 상기 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자는 ZIM3 KRAB 및 KOX1 KRAB에서 선택될 수 있다.
상기 상황의 일부 실시 형태에 있어서, 상기 전사 조절 도메인은 2개 이상의 KRAB 도메인을 포함할 수 있고, 상기 2개 이상의 KRAB 도메인은 동일한 유형이거나 서로 다른 유형이다. 예를 들어, 상기 전사 조절 도메인은 2개 이상의 ZIM3 KRAB, 2개 이상의 KOX1 KRAB, 또는 ZIM3 KRAB과 KOX1 KRAB를 동시에 포함하며, 이들의 총 수는 2개 이상이다. 이러한 상황에서, 상기 2개 이상의(동일한 종류 또는 서로 다른 종류) KRAB 도메인은 XTEN 링커 서열을 통해 연결될 수 있다.
본 출원의 예시적인 융합체는 다음과 같으며, 이의 아미노산 서열의 각 구성 요소는 하기와 같다: 볼드체―DNMT3A, 밑줄 볼드체―DNMT3L, 기울임체―링커 서열, 볼드체 이탤릭체―전사 조절 도메인, 밑줄 볼드체 이탤릭체―dCas9, *는 임의의 아미노산이다.
DNMT3A-DNMT3L-XTEN16-ZIM3-XTEN80-dCas9(V7 또는 V7' 스킴, 서열번호 60 또는 337)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL DGSGSETPGTSESATPES MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGLE*（V7스킴）.
또는 FDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDAYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKV
ZIM3-XTEN16-DNMT3A-DNMT3L-XTEN80-dCas9（V8 또는 V8'스킴, 서열번호 61 또는 338)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL SGSETPGTSESATPESMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGLE*（V8스킴）.
또는 V8' 스킴:
MPAAKRVKLDGSNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESLSGSETPGTSESATPESMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACVSSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPLGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKVMDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDAYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKV
DNMT3A-DNMT3L-XTEN16-KRAB-XTEN80-dCas9(V19 스킴, 서열번호 70)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL DGSGSETPGTSESATPES RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGLE*
DNMT3A-(인간)DNMT3L-XTEN16-ZIM3-XTEN80-dCas9（V20스킴, 서열번호 71)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS DGSGSETPGTSESATPES MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGLE*
ZIM3-XTEN16-DNMT3A-(인간)DNMT3L-XTEN80-dCas9(V21스킴, 서열번호 72)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL SGSETPGTSESATPESMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYF SGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGLE*
KRAB-XTEN16-DNMT3A-DNMT3L-XTEN80-dCas9(V22스킴, 서열번호 73)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
M RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP SGSETPGTSESATPESMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGLE*
ZIM3-BFP-DNMT3A-(인간)DNMT3L-XTEN80-dCas9(V38스킴, 서열번호 89)의 아미노산 서열은 다음과 같다(밑줄 점선 볼드체 이탤릭체-BFP, 서열번호 55):
MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL SGSETPGTSESATPES HVSELIKENMHMKLYMEGTVDNHHFKCTSEGEGKPYEGTQTMRIKVVEGGPLPFAFDILATSFLYGSKTFINHTQGIPDFFKQSFPEGFTWERVTTYEDGGVLTATQDTSLQDGCLIYNVKIRGVNFTSNGPVMQKKTLGWEAFTETLYPADGGLEGRNDMALKLVGGSHLIANIKTTYRSKKPAKNLKMPGVYYVDYRLERIKEANNETYVEQHEVAVARYCDLPSKLGHKLN SGSETPGTSESATPESMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGLE*
DNMT3A-(인간)DNMT3L-XTEN80-ZIM3-XTEN80-dCas9(V39 스킴, 서열번호 90)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MVPAAKRVKLDGSNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL SGSETPGTSEGGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE PKKKRKV GS DKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKV*
DNMT3A-(인간)DNMT3L-XTEN80-ZNF582-XTEN80-dCas9（V40스킴, 서열번호 91)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSERTL ELFRDVAIVFSQEEWQWLAPAQRDLYRDVMLETYSNLVSLGLAVSKPDVISFLEQGKEPWM SGSETPGTSESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGLE*
DNMT3A-(인간)DNMT3L-XTEN80-ZNF324-XTEN80-dCas9(V41스킴, 서열번호 92)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSERTL MAFEDVAVYFSQEEWGLLDTAQRALYRRVMLDNFALVASLGLSTSRPRVVIQLERGEEPWV SGSETPGTSEGGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGLE*
DNMT3A-(인간)DNMT3L-BFP-XTEN80-ZIM3-XTEN80-dCas9(V42스킴, 서열번호 93)의 아미노산 서열은 다음과 같다(밑줄 점선 볼드체 이탤릭체-BFP, 서열번호 55):
MPAAKRVKLDGSNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS GGPSSG SELIKENMHMKLYMEGTVDNHHFKCTSEGEGKPYEGTQTMRIKVVEGGPLPFAFDILATSFLYGSKTFINHTQGIPDFFKQSFPEGFTWERVTTYEDGGVLTATQDTSLQDGCLIYNVKIRGVNFTSNGPVMQKKTLGWEAFTETLYPADGGLEGRNDMALKLVGGSHLIANIKTTYRSKKPAKNLKMPGVYYVDYRLERIKEANNETYVEQHEVAVARYCDLPSKLGHKLN APPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL SGSETPGTSEGGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGLE*
DNMT3A-(인간)DNMT3L-Beta2-XTEN80-ZIM3-XTEN80-dCas9(V43스킴, 서열번호 94)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS GGPSSGSELIKENGLEGRNDMALKLVGGSHLIANIKTTYRSKKPAKNLKMPGVYYVDYRLERIKEANNETYVEQHEVAVARYCDLPSKLGHKLNAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL SGSETPGTSEGGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGLE*
DNMT3A-(인간)DNMT3L-beta1-XTEN80-ZIM3-XTEN80-dCas9(V44스킴, 서열번호 95)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS GGPSSGSELIKENYYVDYRLERIKEANNETYVEQHEVAVARYCDLPSKLGHKLNAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL SGSETPGTSEGGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGLE*
DNMT3A-(인간)DNMT3L-XTEN80-ZIM3-GS-XTEN80-dCas9(V45 스킴, 서열번호 96)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL SGSGSGSGGSGSGGSGSGSGGSGSGGSGSGETPGTSEGGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGLE*
DNMT3A-(인간)DNMT3L-XTEN80-xten-ZIM3-GS-xten80-dCas9(V46 스킴, 서열번호 97)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MVPAAKRVKLDGSNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKVGSGSETPGTSESATPES MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL SGSGSGSGGSGSGGSGSGSGGSGSGGSGSGETPGTSEGGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKVGS DKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKV*
DNMT3A-(인간)DNMT3L-XTEN80-ZNF680-GS-XTEN80-dCas9(V47 스킴, 서열번호 98)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSERTL LTFRDVAIEFSLEEWQCLDTAQRNLYRKVMFENYRNLVFLGIAVSKPHLITCLEQGKEPWN SGSGSGSGGSGSGGSGSGSGGSGSGGSGSGETPGTSEGGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGLE*
DNMT3A-(인간)DNMT3L-XTEN80-ZNF354a-GS-XTEN80-dCas9(V48 스킴, 서열번호 99)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSERTL LTFEDVAVLFTRDEWRKLAPSQRNLYRDVMLENYRNLVSLGLPFTKPKVISLLQQGEDPWE SGSGSGSGGSGSGGSGSGSGGSGSGGSGSGETPGTSEGGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGLE*
DNMT3A-(인간)DNMT3L-XTEN80-ZNF419-GS-XTEN80-dCas9(V49스킴, 서열번호 100)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSERTL VTFEDVAVYFSQEEWRLLDDAQRLLYRNVMLENFTLLASLGLASSKTHEITQLESWEEPFM SGSGSGSGGSGSGGSGSGSGGSGSGGSGSGETPGTSEGGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGLE*
KRAB-XTEN80-DNMT3A-(인간)DNMT3L-XTEN16-ZIM3-dCas9(V54스킴, 서열번호 105)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MV RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKVMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS DGSGSETPGTSESATPES MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGLE*
KRAB-XTEN80-ZIM3-XTEN16-DNMT3A-(인간)DNMT3L-dCas9(V55스킴, 서열번호 106)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MV RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV NNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL SGSETPGTSESATPESMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGLE*
DNMT3A-(인간)DNMT3L-XTEN80-KRAB-XTEN80-ZIM3-XTEN80-dCas9(V56 스킴, 서열번호 107)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV NNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGLE*
또 다른 예로, 상기 하나 또는 복수의 효과기 도메인은 모두 상기 핵산 결합 도메인의 C 말단에 위치할 수 있다. 일부 실시 형태에 있어서, 상기 효과기 도메인은 상기 후성 유전학적 변형 도메인 중 적어도 하나와 상기 전사 조절 도메인 중 적어도 하나를 포함할 수 있으며, 또한, 상기 효과기 도메인 내의 상기 후성 유전학적 편집 도메인은 상기 전사 조절 도메인의 N 말단에 위치할 수 있거나, 상기 전사 조절 도메인의 C 말단에 위치할 수 있다. 이러한 상황에서, 상기 후성 유전학적 변형 도메인은 DNMT3A 및 DNMT3L을 포함할 수 있으며, 상기 DNMT3A의 C 말단은 상기 DNMT3L의 N 말단과 연결되거나, 상기 DNMT3L의 C 말단은 상기 DNMT3A의 N 말단과 연결될 수 있다. 마찬가지로 이러한 상황에서, 상기 전사 조절 도메인은 전사 억제제 도메인을 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 전사 조절 도메인은 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자 또는 이의 기능적 활성 단편을 포함한다. 구체적으로, 상기 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자는 KRAB를 포함할 수 있으며, 예를 들어, 본 출원의 일부 실시예에서 상기 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자는 ZIM3 KRAB 및 KOX1 KRAB에서 선택될 수 있다.
상기 상황의 일부 실시 형태에 있어서, 상기 전사 조절 도메인은 2개 이상의 KRAB 도메인을 포함할 수 있고, 상기 2개 이상의 KRAB 도메인은 동일한 유형이거나 서로 다른 유형이다. 예를 들어, 상기 전사 조절 도메인은 2개 이상의 ZIM3 KRAB, 2개 이상의 KOX1 KRAB, 또는 ZIM3 KRAB과 KOX1 KRAB를 동시에 포함하며, 이들의 총 수는 2개 이상이다. 이러한 상황에서, 상기 2개 이상의(동일한 종류 또는 서로 다른 종류) KRAB 도메인은 XTEN 링커 서열을 통해 연결될 수 있다.
본 출원의 다른 예시적인 융합체는 다음과 같으며, 이의 아미노산 서열의 각 구성 요소는 하기와 같다: 볼드체―DNMT3A, 밑줄 볼드체―DNMT3L, 이탤릭체―링커 서열, 볼드체 이탤릭체―전사 조절 도메인, 밑줄 볼드체 이탤릭체―dCas9, *는 임의의 아미노산이다.
dCas9-XTEN80-DNMT3A-DNMT3L-XTEN16-ZIM3(V9 또는 V9' 스킴, 서열번호 62 또는 339)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MVPAAKRVKLDGS DKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL DGSGSETPGTSESATPES MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL LE*(V9 스킴).
또는 V9' 스킴:
MPAAKRVKLDGSMDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDAYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACVSSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPLDGSGSETPGTSESATPESMNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL
dCas9-XTEN80-ZIM3-XTEN16-DNMT3A-DNMT3L(V10 또는 V10' 스킴, 서열번호 63 또는 340)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL SGSETPGTSESATPESMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL LE*(V10 스킴).
또는 V10' 스킴:
MPAAKRVKLDGSMDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDAYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEMNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESLSGSETPGTSESATPESMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACVSSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL
dCas9-XTEN80-ZIM3-XTEN16-DNMT3L-DNMT3A(V11 또는 V11' 스킴, 서열번호 64 또는 341)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL SGSETPGTSESATPES MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACVLE*(V11 스킴).
또는 V11' 스킴:
MPAAKRVKLDGSMDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDAYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEMNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESLSGSETPGTSESATPESMGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPLSSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV
dCas9-XTEN80-ZIM3-XTEN80-DNMT3L-DNMT3A(V14 또는 V14' 스킴, 서열번호 65 또는 342)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL SGSETPGTSEGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSESATPES MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACVLE*(V14 스킴).
또는 V14' 스킴:
MPAAKRVKLDGSMDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDAYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEMNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESLSGSETPGTSEGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSESATPESMGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPLSSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV
dCas9-XTEN80-ZIM3-NEW XTEN-DNMT3L-DNMT3A(V15 또는 V15' 스킴, 서열번호 66 또는 343)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MVPAAKRVKLDGS DKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL SGSETPGTSESATPESGPGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGSEPATSGSETPGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGTSTEPSESATPES MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV*(V15 스킴).
또는 V15' 스킴:
MPAAKRVKLDGSMDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDAYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEMNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESLSGSETPGTSESATPESGPGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGSEPATSGSETPGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGTSTEPSESATPESMGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPLSSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV
dCas9-XTEN80-ZIM3-XTEN80-(인간)DNMT3L-DNMT3A(V16 또는 V16' 스킴, 서열번호 67 또는 344)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MVPAAKRVKLDGS DKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL SGSETPGTSEGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSESATPES MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS TELTSSLSSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV*(V16 스킴).
또는 V16' 스킴:
MPAAKRVKLDGSMDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDAYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEMNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESLSGSETPGTSESATPESGPGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGSEPATSGSETPGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGTSTEPSESATPESMFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFSSSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV
dCas9-XTEN80-DNMT3L-DNMT3A-XTEN16-ZIM3(V23 스킴, 서열번호 74)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MVPAAKRVKLDGS DKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACVDGSGSETPGTSESATPES MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL LE*
dCas9-XTEN80-DNMT3A-DNMT3L-XTEN16-KRAB(V24 스킴, 서열번호 75)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MVPAAKRVKLDGS DKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL DGSGSETPGTSESATPES RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP*
dCas9-XTEN80-DNMT3L-DNMT3A-XTEN16-KRAB(V25 스킴, 서열번호 76)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MVPAAKRVKLDGS DKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV DGSGSETPGTSESATPES RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP*
dCas9-XTEN80-KRAB-NEW XTEN-DNMT3L-DNMT3A(V26 스킴, 서열번호 77)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MVPAAKRVKLDGS DKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP SGSETPGTSESATPESGPGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGSEPATSGSETPGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGTSTEPSESATPES MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV*
dCas9-XTEN80-KRAB-NEW XTEN-DNMT3A-DNMT3L(V27 스킴, 서열번호 78)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MVPAAKRVKLDGS DKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP SGSETPGTSESATPESGPGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGSEPATSGSETPGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGTSTEPSESATPESMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL *
dCas9-XTEN80-KRAB-XTEN80-(인간)DNMT3L-DNMT3A(V28 스킴, 서열번호 79)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP SGSETPGTSEGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSESATPES MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS TELTSSLSSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACVLE*
dCas9-XTEN80-ZNF582-XTEN80-(인간)DNMT3L-DNMT3A(V29 스킴, 서열번호 80)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSERTL ELFRDVAIVFSQEEWQWLAPAQRDLYRDVMLETYSNLVSLGLAVSKPDVISFLEQGKEPWM SGSETPGTSEGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSESATPES MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS TELTSSLSSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACVLE*
dCas9-XTEN80-ZNF324-XTEN80-(인간)DNMT3L-DNMT3A(V30 스킴, 서열번호 81)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSERTL MAFEDVAVYFSQEEWGLLDTAQRALYRRVMLDNFALVASLGLSTSRPRVVIQLERGEEPWVSGS ETPGTSEGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSESATPES MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS TELTSSLSSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACVLE*
dCas9-NEW XTEN-KRAB-NEW XTEN-(인간)DNMT3L-DNMT3A(V31 스킴, 서열번호 82)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEGSGSETPGTSESATPES RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP SGSETPGTSESATPESGPGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGSEPATSGSETPGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGTSTEPSESATPES MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS TELTSSLSSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACVLE*
dCas9-NEW XTEN-(인간)DNMT3L-DNMT3A-NEW XTEN-KRAB(V32 스킴, 서열번호 83)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MVPAAKRVKLDGS DKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEGSGSETPGTSESATPES MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS TELTSSLSSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SGSETPGTSESATPESGPGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGSEPATSGSETPGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGTSTEPSESATPES RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP LE*
dCas9-XTEN80-ZIM3-XTEN80-DNMT3A-(인간)DNMT3L(V33 스킴, 서열번호 84)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL SGSETPGTSEGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSESATPESGS NHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS MH*
dCas9-BFP-ZIM3-XTEN80-DNMT3A-(인간)DNMT3L(V34 스킴, 서열번호 85)의 아미노산 서열은 다음과 같다(밑줄 점선 볼드체 이탤릭체-BFP, 서열번호 55):
MPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGT HVSELIKENMHMKLYMEGTVDNHHFKCTSEGEGKPYEGTQTMRIKVVEGGPLPFAFDILATSFLYGSKTFINHTQGIPDFFKQSFPEGFTWERVTTYEDGGVLTATQDTSLQDGCLIYNVKIRGVNFTSNGPVMQKKTLGWEAFTETLYPADGGLEGRNDMALKLVGGSHLIANIKTTYRSKKPAKNLKMPGVYYVDYRLERIKEANNETYVEQHEVAVARYCDLPSKLGHKLN GSAPGTSTEPSE MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL SGSETPGTSEGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSESATPESGS NHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS MH*
dCas9-BFP-ZIM3-XTEN80-(인간)DNMT3L-DNMT3A(V35 스킴, 서열번호 86)의 아미노산 서열은 다음과 같다(밑줄 점선 볼드체 이탤릭체-BFP, 서열번호 55):
MPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGT HVSELIKENMHMKLYMEGTVDNHHFKCTSEGEGKPYEGTQTMRIKVVEGGPLPFAFDILATSFLYGSKTFINHTQGIPDFFKQSFPEGFTWERVTTYEDGGVLTATQDTSLQDGCLIYNVKIRGVNFTSNGPVMQKKTLGWEAFTETLYPADGGLEGRNDMALKLVGGSHLIANIKTTYRSKKPAKNLKMPGVYYVDYRLERIKEANNETYVEQHEVAVARYCDLPSKLGHKLN GSAPGTSTEPSE MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL SGSETPGTSEGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSESATPES MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS TELTSSLSSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACVLE*
dCas9-BFP-ZNF582-XTEN80-(인간)DNMT3L-DNMT3A(36 스킴, 서열번호 87)의 아미노산 서열은 다음과 같다(밑줄 점선 볼드체 이탤릭체-BFP, 서열번호 55):
MPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGT HVSELIKENMHMKLYMEGTVDNHHFKCTSEGEGKPYEGTQTMRIKVVEGGPLPFAFDILATSFLYGSKTFINHTQGIPDFFKQSFPEGFTWERVTTYEDGGVLTATQDTSLQDGCLIYNVKIRGVNFTSNGPVMQKKTLGWEAFTETLYPADGGLEGRNDMALKLVGGSHLIANIKTTYRSKKPAKNLKMPGVYYVDYRLERIKEANNETYVEQHEVAVARYCDLPSKLGHKLN GSAPGTSTEPSERTL ELFRDVAIVFSQEEWQWLAPAQRDLYRDVMLETYSNLVSLGLAVSKPDVISFLEQGKEPWM SGSETPGTSEGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSESATPES MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS TELTSSLSSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACVLE*
dCas9-BFP-ZNF324-XTEN80-(인간)DNMT3L-DNMT3A(V37 스킴, 서열번호 88)의 아미노산 서열은 다음과 같다(밑줄 점선 볼드체 이탤릭체-BFP, 서열번호 55):
MPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGT HVSELIKENMHMKLYMEGTVDNHHFKCTSEGEGKPYEGTQTMRIKVVEGGPLPFAFDILATSFLYGSKTFINHTQGIPDFFKQSFPEGFTWERVTTYEDGGVLTATQDTSLQDGCLIYNVKIRGVNFTSNGPVMQKKTLGWEAFTETLYPADGGLEGRNDMALKLVGGSHLIANIKTTYRSKKPAKNLKMPGVYYVDYRLERIKEANNETYVEQHEVAVARYCDLPSKLGHKLN GSAPGTSTEPSERTL MAFEDVAVYFSQEEWGLLDTAQRALYRRVMLDNFALVASLGLSTSRPRVVIQLERGEEPWV SGSETPGTSEGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSESATPES MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS TELTSSLSSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACVLE*
dCas9-XTEN80-DNMT3L-DNMT3A-XTEN16-KRAB-XTEN16-KRAB(V50 스킴, 서열번호 101)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MVPAAKRVKLDGS DKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACVDGSGSETPGTSESATPES RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP GSGSETPGTSESATPES RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP *
dCas9-XTEN80-DNMT3L-DNMT3A-XTEN16-KRAB-XTEN16-KRAB-XTEN16-KRAB(V51 스킴, 서열번호 102)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MVPAAKRVKLDGS DKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACVDGSGSETPGTSESATPES RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP GSGSETPGTSESATPES RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP GSGSETPGTSESATPES RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP *
dCas9-XTEN80-KRAB-NEW XTEN-DNMT3L-DNMT3A-XTEN16-KRAB(V52 스킴, 서열번호 103)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MVPAAKRVKLDGS DKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP SGSETPGTSESATPESGPGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGSEPATSGSETPGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGTSTEPSESATPES MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACVDGSGSETPGTSESATPES RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP *
dCas9-XTEN80-ZIM3-NEW XTEN-DNMT3L-DNMT3A-XTEN16-KRAB(V53 스킴, 서열번호 104)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MVPAAKRVKLDGS DKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGGGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL SGSETPGTSESATPESGPGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGSEPATSGSETPGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGTSTEPSESATPES MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSHMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACVDGSGSETPGTSESATPES RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP *
다른 일부 실시 형태에 있어서, 본 출원에 기재된 융합체는 상기 핵산 결합 도메인의 N 말단 및 C 말단에 위치한 하나 이상의 효과기 도메인을 포함할 수 있다.
예를 들어, 상기 핵산 결합 도메인의 C 말단에 있는 상기 효과기 도메인은 적어도 하나의 후성 유전학적 변형 도메인을 포함한다. 구체적으로, 상기 핵산 결합 도메인의 C 말단에 있는 상기 효과기 도메인은 히스톤 변형을 제공하는 적어도 하나의 후성 유전학적 변형 도메인을 포함한다.
예를 들어, 상기 핵산 결합 도메인의 N 말단에 있는 상기 효과기 도메인은 후성 유전학적 변형 도메인 및 전사 조절 도메인 중 하나 또는 복수를 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 핵산 결합 도메인의 N 말단에 위치한 상기 효과기 도메인은 적어도 하나의 후성 유전학적 변형 도메인, 적어도 하나의 전사 조절 도메인, 또는 적어도 하나의 후성 유전학적 변형 도메인 및 적어도 하나의 전사 조절 도메인을 포함할 수 있다. 더 구체적으로, 상기 핵산 결합 도메인의 N 말단에 위치한 상기 효과기 도메인은 히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, DNA 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인 및 전사 억제제 도메인 중 하나 또는 복수를 포함할 수 있고, 예를 들어, 적어도 하나의 히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, 적어도 하나의 DNA 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, 적어도 하나의 전사 억제제 도메인, 적어도 하나의 히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인 및 적어도 하나의 DNA 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, 적어도 하나의 히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인 및 적어도 하나의 전사 조절 도메인, 그리고 적어도 하나의 DNA 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인 및 적어도 하나의 전사 조절 도메인을 포함할 수 있다.
상기 상황의 일부 실시 형태에 있어서, 상기 핵산 결합 도메인의 N 말단에 있는 효과기 도메인은: (1) 히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, (2) 전사 억제제 도메인, (3) DNA 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, 또는 (4) 전사 억제제 도메인 및 DNA 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인을 포함한다. 구체적으로, 이러한 상황의 실시 형태에 있어서, 상기 핵산 결합 도메인의 N 말단에 있는 효과기 도메인은: (1) EZH2, HDAC3, HDAC1, EHMT2, PRMT1, PRMT5, SETDB1, hSIRT1, HP1a, LSD1 및 이의 기능적 활성 단편에서 선택되는 하나 또는 복수의 후성 유전학적 변형 도메인, (2) KRAB 또는 이의 기능적 활성 단편, (3) DNMT3A, DNMT3L 또는 DNMT3A 및 DNMT3L의 조합, 또는 (4) KRAB 및 DNMT3A의 조합, KRAB 및 DNMT3L의 조합, 또는 KRAB, DNMT3A 및 DNMT3L의 조합을 포함한다.
다음은 본 출원의 일부 예시적인 융합체이며, 이의 아미노산 서열의 각 구성 요소는 하기와 같다: 볼드체―DNA 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인(예를 들어, DNMT), 밑줄 볼드체―히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인(예를 들어, HDAC), 이탤릭체―링커 서열, 볼드체 이탤릭체―전사 조절 도메인, 밑줄 볼드체 이탤릭체―dCas9 또는 TALE, *는 임의의 아미노산이다.
DNMT3A-DNMT3L-XTEN80-dCas9-XTEN16-ZIM3(V17 스킴, 서열번호 68)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGSGSETPGTSESATPES MNNSQGRVTFEDVTVNFTQGEWQRLNPEQRNLYRDVMLENYSNLVSVGQGETTKPDVILRLEQGKEPWLEEEEVLGSGRAEKNGDIGGQIWKPKDVKESL LE*
DNMT3A-(인간)DNMT3L-XTEN80-dCas9-XTEN16-KRAB(V18 스킴, 서열번호 69)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MFETVPVWRRQPVRVLSLFEDIKKELTSLGFLESGSDPGQLKHVVDVTDTVRKDVEEWGPFDLVYGATPPLGHTCDRPPSWYLFQFHRLLQYARPKPGSPRPFFWMFVDNLVLNKEDLDVASRFLEMEPVTIPDVHGGSLQNAVRVWSNIPAIRSSRHWALVSEEELSLLAQNKQSSKLAAKWPTKLVKNCFLPLREYFKYFS GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGSGSETPGTSESATPES RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP *
HDAC3-dCas9-EZH2(V57 스킴, 서열번호 108)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGS AKTVAYFYDPDVGNFHYGAGHPMKPHRLALTHSLVLHYGLYKKMIVFKPYQASQHDMCRFHSEDYIDFLQRVSPTNMQGFTKSLNAFNVGDDCPVFPGLFEFCSRYTGASLQGATQLNNKICDIAINWAGGLHHAKKFEASGFCYVNDIVIGILELLKYHPRVLYIDIDIHHGDGVQEAFYLTDRVMTVSFHKYGNYFFPGTGDMYEVGAESGRYYCLNVPLRDGIDDQSYKHLFQPVINQVVDFYQPTCIVLQCGADSLGCDRLGCFNLSIRGHGECVEYVKSFNIPLLVLGGGGYTVRNVARCWTYETSLLVEEAISEELPYSEYFEYFAPDFTLHPDVSTRIENQNSRQYLDQIRQTIFENL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGSGSETPGTSESATPESRTL GQTGKKSEKGPVCWRKRVKSEYMRLRQLKRFRRADEVKSMFSSNRQKILERTEILNQEWKQRRIQPVHILTSVSSLRGTRECSVTSDLDFPTQVIPLKTLNAVASVPIMYSWSPLQQNFMVEDETVLHNIPYMGDEVLDQDGTFIEELIKNYDGKVHGDRECGFINDEIFVELVNALGQYNDDDDDDDGDDPEEREEKQKDLEDHRDDKESRPPRKFPSDKIFEAISSMFPDKGTAEELKEKYKELTEQQLPGALPPECTPNIDGPNAKSVQREQSLHSFHTLFCRRCFKYDCFLHPFHATPNTYKRKNTETALDNKPCGPQCYQHLEGAKEFAAALTAERIKTPPKRPGGRRRGRLPNNSSRPSTPTINVLESKDTDSDREAGTETGGENNDKEEEEKKDETSSSSEANSRCQTPIKMKPNIEPPENVEWSGAEASMFRVLIGTYYDNFCAIARLIGTKTCRQVYEFRVKESSIIAPAPAEDVDTPPRKKKRKHRLWAAHCRKIQLKKDGSSNHVYNYQPCDHPRQPCDSSCPCVIAQNFCEKFCQCSSECQNRFPGCRCKAQCNTKQCPCYLAVRECDPDLCLTCGAADHWDSKNVSCKNCSIQRGSKKHLLLAPSDVAGWGIFIKDPVQKNEFISEYCGEIISQDEADRRGKVYDKYMCSFLFNLNNDFVVDATRKGNKIRFANHSVNPNCYAKVMMVNGDHRIGIFAKRAIQTGEELFFDYRYSQADALKYVGIEREMEIP EGSG*
KRAB-dCas9-EZH2(V58 스킴, 서열번호 109)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGS RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGSGSETPGTSESATPESRTL GQTGKKSEKGPVCWRKRVKSEYMRLRQLKRFRRADEVKSMFSSNRQKILERTEILNQEWKQRRIQPVHILTSVSSLRGTRECSVTSDLDFPTQVIPLKTLNAVASVPIMYSWSPLQQNFMVEDETVLHNIPYMGDEVLDQDGTFIEELIKNYDGKVHGDRECGFINDEIFVELVNALGQYNDDDDDDDGDDPEEREEKQKDLEDHRDDKESRPPRKFPSDKIFEAISSMFPDKGTAEELKEKYKELTEQQLPGALPPECTPNIDGPNAKSVQREQSLHSFHTLFCRRCFKYDCFLHPFHATPNTYKRKNTETALDNKPCGPQCYQHLEGAKEFAAALTAERIKTPPKRPGGRRRGRLPNNSSRPSTPTINVLESKDTDSDREAGTETGGENNDKEEEEKKDETSSSSEANSRCQTPIKMKPNIEPPENVEWSGAEASMFRVLIGTYYDNFCAIARLIGTKTCRQVYEFRVKESSIIAPAPAEDVDTPPRKKKRKHRLWAAHCRKIQLKKDGSSNHVYNYQPCDHPRQPCDSSCPCVIAQNFCEKFCQCSSECQNRFPGCRCKAQCNTKQCPCYLAVRECDPDLCLTCGAADHWDSKNVSCKNCSIQRGSKKHLLLAPSDVAGWGIFIKDPVQKNEFISEYCGEIISQDEADRRGKVYDKYMCSFLFNLNNDFVVDATRKGNKIRFANHSVNPNCYAKVMMVNGDHRIGIFAKRAIQTGEELFFDYRYSQADALKYVGIEREMEIP EGSG*
KRAB-DNMT3A-dCas9-EZH2(V59 스킴, 서열번호 110)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGS RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGSGSETPGTSESATPESRTL GQTGKKSEKGPVCWRKRVKSEYMRLRQLKRFRRADEVKSMFSSNRQKILERTEILNQEWKQRRIQPVHILTSVSSLRGTRECSVTSDLDFPTQVIPLKTLNAVASVPIMYSWSPLQQNFMVEDETVLHNIPYMGDEVLDQDGTFIEELIKNYDGKVHGDRECGFINDEIFVELVNALGQYNDDDDDDDGDDPEEREEKQKDLEDHRDDKESRPPRKFPSDKIFEAISSMFPDKGTAEELKEKYKELTEQQLPGALPPECTPNIDGPNAKSVQREQSLHSFHTLFCRRCFKYDCFLHPFHATPNTYKRKNTETALDNKPCGPQCYQHLEGAKEFAAALTAERIKTPPKRPGGRRRGRLPNNSSRPSTPTINVLESKDTDSDREAGTETGGENNDKEEEEKKDETSSSSEANSRCQTPIKMKPNIEPPENVEWSGAEASMFRVLIGTYYDNFCAIARLIGTKTCRQVYEFRVKESSIIAPAPAEDVDTPPRKKKRKHRLWAAHCRKIQLKKDGSSNHVYNYQPCDHPRQPCDSSCPCVIAQNFCEKFCQCSSECQNRFPGCRCKAQCNTKQCPCYLAVRECDPDLCLTCGAADHWDSKNVSCKNCSIQRGSKKHLLLAPSDVAGWGIFIKDPVQKNEFISEYCGEIISQDEADRRGKVYDKYMCSFLFNLNNDFVVDATRKGNKIRFANHSVNPNCYAKVMMVNGDHRIGIFAKRAIQTGEELFFDYRYSQADALKYVGIEREMEIP EGSG*
KRAB-DNMT3A-dCas9-HDAC3(V60 스킴, 서열번호 111)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGS RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGSGSETPGTSESATPESRTL AKTVAYFYDPDVGNFHYGAGHPMKPHRLALTHSLVLHYGLYKKMIVFKPYQASQHDMCRFHSEDYIDFLQRVSPTNMQGFTKSLNAFNVGDDCPVFPGLFEFCSRYTGASLQGATQLNNKICDIAINWAGGLHHAKKFEASGFCYVNDIVIGILELLKYHPRVLYIDIDIHHGDGVQEAFYLTDRVMTVSFHKYGNYFFPGTGDMYEVGAESGRYYCLNVPLRDGIDDQSYKHLFQPVINQVVDFYQPTCIVLQCGADSLGCDRLGCFNLSIRGHGECVEYVKSFNIPLLVLGGGGYTVRNVARCWTYETSLLVEEAISEELPYSEYFEYFAPDFTLHPDVSTRIENQNSRQYLDQIRQTIFENLKMLNHAPSVQIHDVPADLLTYDRTDEADAEERGPEENYSRPEAPNEFYDGDHDNDKESDVEI EGSG*
DNMT3A-DNMT3L-XTEN80-dCas9-XTEN16-EZH2x11(V61 스킴, 서열번호 112)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGSGSETPGTSESATPES MDQMPNLFRGSKACIHFIRSSVDDVLSMTASYIVSAVIPSMQHPTHIRGRTQKQLWTTSLVDHSVTSICHSYLGTKWVYIACWILDRRFNEWHLQKEGAKEFAAALTAERIKTPPKRPGGRRRGRLPNNSSRPSTPTISVLESKDTDSDREAGTETGGENNDKEEEEKKDETSSSSEANSRCQTPIKMKPNIEPPENVEWSGAEASMFRVLIGTYYDNFCAIARLIGTKTCRQVYEFRVKESSIIAPVPTEDVDTPPRKKKRKHRLWAAHCRKIQLKKDGSSNHVYNYQPCDHPRQPCDSSCPCVIAQNFCEKFCQCSSECQNRFPGCRCKAQCNTKQCPCYLAVRECDPDLCLTCGAADHWDSKNVSCKNCSIQRGSKKHLLLAPSDVAGWGIFIKDPVQKNEFISEYCGEIISQDEADRRGKVYDKYMCSFLFNLNNDFVVDATRKGNKIRFANHSVNPNCYAKVMMVNGDHRIGIFAKRAIQTGEELFFDYRYSQADALKYVGIEREMEIP *
DNMT3A-DNMT3L-XTEN80-dCas9-XTEN16-EZH2(V62 스킴, 서열번호 113)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGSGSETPGTSESATPESRTL GQTGKKSEKGPVCWRKRVKSEYMRLRQLKRFRRADEVKSMFSSNRQKILERTEILNQEWKQRRIQPVHILTSVSSLRGTRECSVTSDLDFPTQVIPLKTLNAVASVPIMYSWSPLQQNFMVEDETVLHNIPYMGDEVLDQDGTFIEELIKNYDGKVHGDRECGFINDEIFVELVNALGQYNDDDDDDDGDDPEEREEKQKDLEDHRDDKESRPPRKFPSDKIFEAISSMFPDKGTAEELKEKYKELTEQQLPGALPPECTPNIDGPNAKSVQREQSLHSFHTLFCRRCFKYDCFLHPFHATPNTYKRKNTETALDNKPCGPQCYQHLEGAKEFAAALTAERIKTPPKRPGGRRRGRLPNNSSRPSTPTINVLESKDTDSDREAGTETGGENNDKEEEEKKDETSSSSEANSRCQTPIKMKPNIEPPENVEWSGAEASMFRVLIGTYYDNFCAIARLIGTKTCRQVYEFRVKESSIIAPAPAEDVDTPPRKKKRKHRLWAAHCRKIQLKKDGSSNHVYNYQPCDHPRQPCDSSCPCVIAQNFCEKFCQCSSECQNRFPGCRCKAQCNTKQCPCYLAVRECDPDLCLTCGAADHWDSKNVSCKNCSIQRGSKKHLLLAPSDVAGWGIFIKDPVQKNEFISEYCGEIISQDEADRRGKVYDKYMCSFLFNLNNDFVVDATRKGNKIRFANHSVNPNCYAKVMMVNGDHRIGIFAKRAIQTGEELFFDYRYSQADALKYVGIEREMEIP EGSG*
DNMT3A-DNMT3L-XTEN80-dCas9-XTEN16-EZH2 (core)(V63 스킴, 서열번호 114)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGSGSETPGTSESATPESRTL EDVDTPPRKKKRKHRLWAAHCRKIQLKKDGSSNHVYNYQPCDHPRQPCDSSCPCVIAQNFCEKFCQCSSECQNRFPGCRCKAQCNTKQCPCYLAVRECDPDLCLTCGAADHWDSKNVSCKNCSIQRGSKKHLLLAPSDVAGWGIFIKDPVQKNEFISEYCGEIISQDEADRRGKVYDKYMCSFLFNLNNDFVVDATRKGNKIRFANHSVNPNCYAKVMMVNGDHRIGIFAKRAIQTGEELFFDYRYSQADALKYVGIEREMEIP EGSG*
DNMT3A-DNMT3L-XTEN80-dCas9-XTEN16-HDAC3(V64 스킴, 서열번호 115)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGSGSETPGTSESATPESRTL AKTVAYFYDPDVGNFHYGAGHPMKPHRLALTHSLVLHYGLYKKMIVFKPYQASQHDMCRFHSEDYIDFLQRVSPTNMQGFTKSLNAFNVGDDCPVFPGLFEFCSRYTGASLQGATQLNNKICDIAINWAGGLHHAKKFEASGFCYVNDIVIGILELLKYHPRVLYIDIDIHHGDGVQEAFYLTDRVMTVSFHKYGNYFFPGTGDMYEVGAESGRYYCLNVPLRDGIDDQSYKHLFQPVINQVVDFYQPTCIVLQCGADSLGCDRLGCFNLSIRGHGECVEYVKSFNIPLLVLGGGGYTVRNVARCWTYETSLLVEEAISEELPYSEYFEYFAPDFTLHPDVSTRIENQNSRQYLDQIRQTIFENLKMLNHAPSVQIHDVPADLLTYDRTDEADAEERGPEENYSRPEAPNEFYDGDHDNDKESDVEI EGSG*
DNMT3A-DNMT3L-XTEN80-dCas9-XTEN16-HDAC3(core 1) (V65 스킴, 서열번호 116)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
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DNMT3A-DNMT3L-XTEN80-dCas9-XTEN16-HDAC3(core2) (V66 스킴, 서열번호 117)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGSGSETPGTSESATPESRTL AKTVAYFYDPDVGNFHYGAGHPMKPHRLALTHSLVLHYGLYKKMIVFKPYQASQHDMCRFHSEDYIDFLQRVSPTNMQGFTKSLNAFNVGDDCPVFPGLFEFCSRYTGASLQGATQLNNKICDIAINWAGGLHHAKKFEASGFCYVNDIVIGILELLKYHPRVLYIDIDIHHGDGVQEAFYLTDRVMTVSFHKYGNYFFPGTGDMYEVGAESGRYYCLNVPLRDGIDDQSYKHLFQPVINQVVDFYQPTCIVLQCGADSLGCDRLGCFNLSIRGHGECVEYVKSFNIPLLVLGGGGYTVRNVARCWTYETSLLVEEAISEELPYSEYFEYFAPDFTLHPDVSTRIENQNSRQYLDQIRQTIFENL EGSG*
DNMT3A-DNMT3L-XTEN80-dCas9-XTEN16-EHMT2(V67 스킴, 서열번호 118)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGSGSETPGTSESATPESRT NRAIRTEKIICRDVARGYENVPIPCVNGVDGEPCPEDYKYISENCETSTMNIDRNITHLQHCTCVDDCSSSNCLCGQLSIRCWYDKDGRLLQEFNKIEPPLIFECNQACSCWRNCKNRVVQSGIKVRLQLYRTAKMGWGVRALQTIPQGTFICEYVGELISDAEADVREDDSYLFDLDNKDGEVYCIDARYYGNISRFINHLCDPNIIPVRVFMLHQDLRFPRIAFFSSRDIRTGEELGFDYGDRFWDIKSKYFTCQCGSEKCKHSAEAIALEQSRLARLDPHPELLPELGSLPPVNT EGSG*
DNMT3A-DNMT3L-XTEN80-dCas9-XTEN16-HDAC1(V68 스킴, 서열번호 119)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSTGPATMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGSGSETPGTSESATPESRTL EMAQTQGTRRKVCYYYDGDVGNYYYGQGHPMKPHRIRMTHNLLLNYGLYRKMEIYRPHKANAEEMTKYHSDDYIKFLRSIRPDNMSEYSKQMQRFNVGEDCPVFDGLFEFCQLSTGGSVASAVKLNKQQTDIAVNWAGGLHHAKKSEASGFCYVNDIVLAILELLKYHQRVLYIDIDIHHGDGVEEAFYTTDRVMTVSFHKYGEYFPGTGDLRDIGAGKGKYYAVNYPLRDGIDDESYEAIFKPVMSKVMEMFQPSAVVLQCGSDSLSGDRLGCFNLTIKGHAKCVEFVKSFNLPMLMLGGGGYTIRNVARCWTYETAVALDTEIPNELPYNDYFEYFGPDFKLHISPSNMTNQNTNEYLEKIKQRLFENLRMLPHAPGVQMQAIPEDAIPEESGDEDEDDPDKRISICSSDKRIACEEEFSDSEEEGEGGRKNSSNFKKAKRVKTEDEKEKDPEEKKEVTEEEKTKEEKPEAKGVKEEVKLA *
DNMT3A-DNMT3L-XTEN80-dCas9-XTEN16-PRMT1(V69 스킴, 서열번호 120)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSTGPATMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGSGSETPGTSESATPESRTL EMAAAEAANCIMENFVATLANGMSLQPPLEEVSCGQAESSEKPNAEDMTSKDYYFDSYAHFGIHEEMLKDEVRTLTYRNSMFHNRHLFKDKVVLDVGSGTGILCMFAAKAGARKVIGIECSSISDYAVKIVKANKLDHVVTIIKGKVEEVELPVEKVDIIISEWMGYCLFYESMLNTVLYARDKWLAPDGLIFPDRATLYVTAIEDRQYKDYKIHWWENVYGFDMSCIKDVAIKEPLVDVVDPKQLVTNACLIKEVDIYTVKVEDLTFTSPFCLQVKRNDYVHALVAYFNIEFTRCHKRTGFSTSPESPYTHWKQTVFYMEDYLTVKTGEEIFGTIGMRPNAKNNRDLDFTIDLDFKGQLCELSCSTDYRMR *
DNMT3A-DNMT3L-XTEN80-dCas9-XTEN16-SETDB1(V70 스킴, 서열번호 121)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSTGPATMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGSGSETPGTSESATPESRTL ETPPPQVAYSKERIPGKGVFINTGPEFLVGCDCKDGCRDKSKCACHQLTIQATACTPGGQINPNSGYQYKRLEECLPTGVYECNKRCKCDPNMCTNRLVQHGLQVRLQLFKTQNKGWGIRCLDDIAKGSFVCIYAGKILTDDFADKEGLEMGDEYFANLDHIESVENFKEGYESDAPCSSDSSGVDLKDQEDGNSGTEDPEESNDDSSDDNFCKDEDFSTSSVWRSYATRRQTRGQKENGLSETTSKDSHPPDLGPPHIPVPPSIPVGGCNPPSSEETPKNKVASWLSCNSVSEGGFADSDSHSSFKTNEGGEGRAGGSRMEAEKASTSGLGIKDEGDIKQAKKEDTDDRNKMSVVTESSRNYGYNPSPVKPEGLRRPPSKTSMHQSRRLMASAQSNPDDVLTLSSSTESEGESGTSRKPTAGQTSATAVDSDDIQTISSGSEGDDFEDKKNMTGPMKRQVAVKSTRGFALKSTHGIAIKSTNMASVDKGESAPVRKNTRQFYDGEESCYIIDAKLEGNLGRYLNHSCSPNLFVQNVFVDTHDLRFPWVAFFASKRIRAGTELTWDYNYEVGSVEGKELLCCCGAIECRGRLL *
DNMT3A-DNMT3L-XTEN80-dCas9-XTEN16-hSIRT1(V71 스킴, 서열번호 122)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSTGPATMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGSGSETPGTSESATPESRTL ETILKDLLPETIPPPELDDMTLWQIVINILSEPPKRKKRKDINTIEDAVKLLQECKKIIVLTGAGVSVSCGIPDFRSRDGIYARLAVDFPDLPDPQAMFDIEYFRKDPRPFFKFAKEIYPGQFQPSLCHKFIALSDKEGKLLRNYTQNIDTLEQVAGIQRIIQCHGSFATASCLICKYKVDCEAVRGDIFNQVVPRCPRCPADEPLAIMKPEIVFFGENLPEQFHRAMKYDKDEVDLLIVIGSSLKVRPVALIPSSIPHEVPQILINREPLPHLHFDVELLGDCDVIINELCHRLGGEYAKL *
DNMT3A-DNMT3L-XTEN80-dCas9-XTEN16-PRMT5(V72 스킴, 서열번호 123)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSTGPATMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGSGSETPGTSESATPESRTL EMAAMAVGGAGGSRVSSGRDLNCVPEIADTLGAVAKQGFDFLCMPVFHPRFKREFIQEPAKNRPGPQTRSDLLLSGRDWNTLIVGKLSPWIRPDSKVEKIRRNSEAAMLQELNFGAYLGLPAFLLPLNQEDNTNLARVLTNHIHTGHHSSMFWMRVPLVAPEDLRDDIIENAPTTHTEEYSGEEKTWMWWHNFRTLCDYSKRIAVALEIGADLPSNHVIDRWLGEPIKAAILPTSIFLTNKKGFPVLSKMHQRLIFRLLKLEVQFIITGTNHHSEKEFCSYLQYLEYLSQNRPPPNAYELFAKGYEDYLQSPLQPLMDNLESQTYEVFEKDPIKYSQYQQAIYKCLLDRVPEEEKDTNVQVLMVLGAGRGPLVNASLRAAKQADRRIKLYAVEKNPNAVVTLENWQFEEWGSQVTVVSSDMREWVAPEKADIIVSELLGSFADNELSPECLDGAQHFLKDDGVSIPGEYTSFLAPISSSKLYNEVRACREKDRDPEAQFEMPYVVRLHNFHQLSAPQPCFTFSHPNRDPMIDNNRYCTLEFPVEVNTVLHGFAGYFETVLYQDITLSIRPETHSPGMFSWFPILFPIKQPITVREGQTICVRFWRCSNSKKVWYEWAVTAPVCSAIHNPTGRSYTIGL *
DNMT3A-DNMT3L-XTEN80-dCas9-XTEN16-HP1a(V73 스킴, 서열번호 124)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSTGPATMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGSGSETPGTSESATPESRTL GKKTKRTADSSSSEDEEEYVVEKVLDRRVVKGQVEYLLKWKGFSEEHNTWEPEKNLDCPELISEFMKKYKKMKEGENNKPREKSESNKRKSNFSNSADDIKSKKKREQSNDIARGFERGLEPEKIIGATDSCGDLMFLMKWKDTDEADLVLAKEANVKCPQIVIAFYEERLTWHAYPEDAENKEKETAKS *
DNMT3A-DNMT3L-XTEN80-dCas9-XTEN16-PRMT5(short)(V74 스킴, 서열번호 125)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MPAAKRVKLDGSTGPATMNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGSGSETPGTSESATPESRTL EPPPNAYELFAKGYEDYLQSPLQPLMDNLESQTYEVFEKDPIKYSQYQQAIYKCLLDRVPEEEKDTNVQVLMVLGAGRGPLVNASLRAAKQADRRIKLYAVEKNPNAVVTLENWQFEEWGSQVTVVSSDMREWVAPEKADIIVSELLGSFADNELSPECLDGAQHFLKDDGVSIPGEYTSFLAPISSSKLYNEVRACREKDRDPEAQFEMPYVVRLHNFHQLSAPQPCFTFSHPNRDPMIDNNRYCTLEFPVEVNTVLHGFAGYFETVLYQDITLSIRPETHSPGMFSWFPILFPIKQPITVREGQTICVRFWRCSNSKKVWYEWAVTAPVCSAIHNPTGRSYTIGL *
DNMT3A-DNMT3L-XTEN80-dCas9-XTEN16-LSD1(V75 스킴, 서열번호 126)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSEPKKKRKV MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERLKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD AYPYDVPDYASLGSGSEDPKKKRKVDGSGSETPGTSESATPESRTL LSGKKAAAAAAAAAAAATGTEAGPGTAGGSENGSEVAAQPAGLSGPAEVGPGAVGERTPRKKEPPRASPPGGLAEPPGSAGPQAGPTVVPGSATPMETGIAETPEGRRTSRRKRAKVEYREMDESLANLSEDEYYSEEERNAKAEKEKKLPPPPPQAPPEEENESEPEEPSGQAGGLQDDSSGGYGDGQASGVEGAAFQSRLPHDRMTSQEAACFPDIISGPQQTQKVFLFIRNRTLQLWLDNPKIQLTFEATLQQLEAPYNSDTVLVHRVHSYLERHGLINFGIYKRIKPLPTKKTGKVIIIGSGVSGLAAARQLQSFGMDVTLLEARDRVGGRVATFRKGNYVADLGAMVVTGLGGNPMAVVSKQVNMELAKIKQKCPLYEANGQADTVKVPKEKDEMVEQEFNRLLEATSYLSHQLDFNVLNNKPVSLGQALEVVIQLQEKHVKDEQIEHWKKIVKTQEELKELLNKMVNLKEKIKELHQQYKEASEVKPPRDITAEFLVKSKHRDLTALCKEYDELAETQGKLEEKLQELEANPPSDVYLSSRDRQILDWHFANLEFANATPLSTLSLKHWDQDDDFEFTGSHLTVRNGYSCVPVALAEGLDIKLNTAVRQVRYTASGCEVIAVNTRSTSQTFIYKCDAVLCTLPLGVLKQQPPAVQFVPPLPEWKTSAVQRMGFGNLNKVVLCFDRVFWDPSVNLFGHVGSTTASRGELFLFWNLYKAPILLALVAGEAAGIMENISDDVIVGRCLAILKGIFGSSAVPQPKETVVSRWRADPWARGSYSYVAAGSSGNDYDLMAQPITPGPSIPGAPQPIPRLFFAGEHTIRNYPATVHGALLSGLREAGRIADQFLGAMYTLPRQATPGVPAQQSPSMEGSG *
DNMT3A-DNMT3L-XTEN80-TALE8-XTEN16-KRAB(V76 스킴, 서열번호 355)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MKRTADGSEFESPKKKRKVGSNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAM GVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQ RPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE VDLRTLGYSQQQQEKIKPKVRSTVAQHHEALVGHGFTHAHIVALSQHPAALGTVAVKYQDMIAALPEATHEAIVGVGKQWSGARALEALLTVAGELRGPPLQLDTGQLLKIAKRGGVTAVEAVHAWRNALTGAPLNLTPDQVVAIASNGGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASHDGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNIGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNNGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNGGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNGGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASHDGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNIGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNNGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNNGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNNGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNGGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASHDGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNGGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNNGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNIGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNNGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASHDGGKQALESIVAQLSRPDPALAALTNDHLVALACLGGRPAMDAVKKGLPHAPELIRRVNRRIGERTSHRV AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGSGSETPGTSESATPES RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP LEDGD*
DNMT3A-DNMT3L-XTEN80-TALE6-XTEN16-KRAB(V77 스킴, 서열번호 356)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
MKRTADGSEFESPKKKRKVGSNHDQEFDPPKVYPPVPAEKRKPIRVLSLFDGIATGLLVLKDLGIQVDRYIASEVCEDSITVGMVRHQGKIMYVGDVRSVTQKHIQEWGPFDLVIGGSPCNDLSIVNPARKGLYEGTGRLFFEFYRLLHDARPKEGDDRPFFWLFENVVAMGVSDKRDISRFLESNPVMIDAKEVSAAHRARYFWGNLPGMNRPLASTVNDKLELQECLEHGRIAKFSKVRTITTRSNSIKQGKDQHFPVFMNEKEDILWCTEMERVFGFPVHYTDVSNMSRLARQRLLGRSWSVPVIRHLFAPLKEYFACV SSGNSNANSRGPSFSSGLVPLSLRGSH MGPMEIYKTVSAWKRQPVRVLSLFRNIDKVLKSLGFLESGSGSGGGTLKYVEDVTNVVRRDVEKWGPFDLVYGSTQPLGSSCDRCPGWYMFQFHRILQYALPRQESQRPFFWIFMDNLLLTEDDQETTTRFLQTEAVTLQDVRGRDYQNAMRVWSNIPGLKSKHAPLTPKEEEYLQAQVRSRSKLDAPKVDLLVKNCLLPLREYFKYFSQNSLPL GGPSSGAPPPSGGSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAPGSPAGSPTSTEEGTSTEPSEGSAPGTSTEPSE VDLRTLGYSQQQQEKIKPKVRSTVAQHHEALVGHGFTHAHIVALSQHPAALGTVAVKYQDMIAALPEATHEAIVGVGKQWSGARALEALLTVAGELRGPPLQLDTGQLLKIAKRGGVTAVEAVHAWRNALTGAPLNLTPDQVVAIASNGGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNNGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNNGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNIGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNNGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNGGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASHDGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNGGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNNGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNNGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASHDGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNIGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNGGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASHDGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASHDGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASHDGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASNIGGKQALETVQRLLPVLCQDHGLTPDQVVAIASHDGGKQALESIVAQLSRPDPALAALTNDHLVALACLGGRPAMDAVKKGLPHAPELIRRVNRRIGERTSHRV AYPYDVPDYASLGSGSPKKKRKVEDPKKKRKVDGSGSETPGTSESATPES RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEP LEDGD*
어떠한 이론에 의해 제한하려는 의도 없이, 아래의 실시예는 본 출원의 융합 단백질, 제조 방법 및 용도 등을 설명하기 위한 것일 뿐, 본 출원의 발명의 범위를 제한하기 위한 것이 아니다.
[실시예]
실시예1
본 출원의 융합체를 포함하는 플라스미드의 설계 및 구축
HA 에피토프, P2A 및 BFP로 표지된 후성 유전학적 변형 편집기(Dnmt3a CD, Dnmt3l CD, dSpCas9 또는 TALE, KRAB를 포함)의 아미노산 서열은 Genscript사에서 포유류 세포에서의 발현에 적합한 핵산 서열로 최적화 및 합성한 다음, CAG 프로모터와 WPRE로 표지된 pLV-CAG 벡터에 클로닝하였으며, CAG 프로모터에 의해 완전한 후성 유전학적 편집기와 자가 절단 BFP을 발현하였다.
다양한 요소의 서열을 최적화할 때, 상동암을 가진 PCR 프라이머를 사용하여 서로 다른 단편을 각각 증폭한 후, NEBuilder 시약을 사용하여 서로 다른 단편들을 특정 순서에 따라 재구성하였다.
다양한 기능 요소를 최적화할 때, 각 기능 요소는 Genscript사에서 포유류 발현에 적합한 핵산 서열로 최적화되고 합성되었다. 교체할 요소를 제외한 벡터를 PCR로 증폭한 후, 교체가 필요한 요소를 회사에서 합성한 서열로 증폭하면서 동시에 상동암 서열을 도입하고, 최종적으로 NEBuilder 시약을 사용하여 서로 다른 요소를 벡터 내로 재조합하여 최종 발현 플라스미드를 구축하였다.
실시예2
VEGFA 유전자의 발현에 대한 본 출원의 복합체의 억제 효과
본 출원에서 제공하는 융합체(서열번호 337 내지 342로 표시되는 아미노산 서열을 포함)의 표적 유전자 발현 억제 효과를 평가하기 위해 2개의 실험군을 설계하고, 각 군은 모두 실시예 1의 방법에 따라 7개의 군의 편집기 플라스미드와 1개의 군의 대조군을 구축하였으며, 2개의 군은 각각 서로 다른 마우스 VEGFA 유전자를 표적으로하는 gRNA(서열번호 332 및 333로 표시되는 뉴클레오타이드 서열을 포함) 및 7개의 군의 서로 다른 편집기 플라스미드를 사용하여 PEI로 HEK293T 세포주(도구: 350ng 편집기, 150ng gRNA, 48웰 플레이트)에 형질전시키하고, 293T 세포주에는 마우스 VEGFA 리포터 유전자를 삽입하고, VEGFA 조절 영역으로 GFP 발현을 조절하였다.
형질전환 11일 후에 각 시료의 녹색 형광 평균 강도를 분석하여, 대조군(형질전환 대조군 NT gRNA, 이의 서열은 서열번호 364로 표시됨)의 형광 강도로 각각 나누어 상대적 억제 효율을 얻었다(도 3). 결과는 본 출원의 융합체가 대조군과 비교하여 GFP 발현에 대한 더 높거나 유사한 억제 효율을 달성하였음을 보여주었다.
실시예3
본 출원의 융합체는 CTLA-1 유전자의 발현을 억제할 수 있다.
실시예 1의 방법에 따라, 다양한 편집 도구(서열번호 337 내지 344로 표시되는 아미노산 서열을 포함)를 구축하고, 대조군 V1(핵산 결합 도메인의 N 말단과 C 말단이 각각 메틸화 인자와 전사 억제제와 융합되었으며, 서열번호 328로 표시되는 아미노산 서열을 포함)을 설정하고, 이러한 편집 도구와 인간 CLTA 유전자를 표적으로 하는 gRNA(서열번호 334로 표시되는 뉴클레오타이드 서열을 포함) 또는 대조 gRNA(NT gRNA, 서열번호 364로 표시됨)를 HEK293T 세포주(도구: 700ng 편집기, 300ng gRNA, 24웰 플레이트)에 공동 형질전환시키고, 형질전환 72시간 후 형질전환 양성 세포를 분류하고, Trizol을 사용하여 총 RNA를 추출한 후, qPCR을 통해 CLTA의 상대적 발현량을 정량화하고, 다양한 도구의 상대적 억제 효율을 계산하였다(도 4). 결과에 따르면, V1 군과 비교했을 때, 본 출원의 융합체는 CLTA 유전자로부터 전사된 mRNA에 대해 모두 유사한 억제 효율을 달성하였다.
실시예4
본 출원의 융합체는 CD151 유전자의 발현을 억제할 수 있다.
실시예 1의 방법에 따라 V15' 스킴(원래 아미노산 서열은 서열번호 343로 표시됨)의 다양한 버전의 후성 유전학적 편집 도구를 구축하고, 여기서 (1) 효과기 도메인에 다양한 유래의 DNMT3L 인자(예를 들어 서열번호 13 내지 21로 표시되는 아미노산 서열)를 포함시켜, 도 5A에 도시된 3L-1 내지 3L-9 버전을 생성시키고, (2) 효과기 도메인에 다양한 징크 핑거 단백질 기반 전사 억제제(예를 들어 서열번호 22 내지 35로 표시되는 아미노산 서열)를 포함시켜, 도 5B에 도시된 ZIM3, ZNF680 등의 각 버전을 생성시키고, 및 (3) 효과기 도메인에 다양한 종류의 전사 억제제(예를 들어 서열번호 36 내지 46로 표시되는 아미노산 서열)를 포함시켜, 도 5C에 도시된 EHMT2, SUV39H1 등의 각 버전을 생성시켰다. 상기 서로 다른 편집 도구 및 CD151을 표적으로 하는 gRNA 플라스미드 또는 대조군 gRNA(NT gRNA, 서열번호 364로 표시되는 서열)를 함께 HEK293T 세포에 형질전환(도구: 700ng, gRNA 300ng, 24웰 플레이트)시킨 후, 형질전환 48시간 후 유세포 분석기로 형질전환 양성 세포를 분류하여 계속 배양하였다. 형질전환 9일 후, 세포를 수집하여 유세포 분석기로 CD151 발현량을 측정하였다. 검출된 CD151 발현량이 비형질전환된 세포보다 낮을 경우, 이러한 세포를 억제된 세포로 정의하였다. 억제된 세포가 전체 세포에서 차지하는 비율에 따라, 다양한 버전의 후성 유전학적 편집 도구의 효과를 비교하였다(도 5A 내지 5C). 결과에 따르면, 대조군(NT gRNA 및 DNMT3L 인자 또는 전사 억제제가 융합되지 않은 군)과 비교하여, 본 출원의 융합체는 다양한 메틸화 인자를 포함하거나 다양한 전사 억제제를 포함하는 경우 더 높거나 유사한 억제 효과를 달성할 수 있었다.
실시예5
본 출원의 융합체는 PCSK9 유전자의 발현을 억제할 수 있다.
다양한 버전의 도구를 체외에서 mRNA로 전사(mRNA 서열은 서열번호 261 내지 327를 참조)시킨 후, 화학적으로 합성된 sgRNA와 1:1 질량 비율로 혼합(sgRNA 서열: 서열번호 335 및 336)하여 LNP를 제조하였다(LNP 인용 문헌: Musunuru, K., Chadwick, A.C., Mizoguchi, T. et al. In vivo CRISPR base editing of PCSK9 durably lowers cholesterol in primates. Nature 593, 429-434 (2021).）. 제조된 LNP를 4.5mg/1kg의 투여량으로 마우스 체내에 미정맥을 통하여 주사하고, 주사 후 4 내지 10일 후에 마우스의 볼에서 혈액을 채취하여 Elisa를 통해 혈액 내 PCSK9 단백질 함량을 측정하였다. PBS군은 같은 체적의 PBS를 주사한 대조군이였다. 결과는 도 6A 내지 6F 에 도시된 바와 같이, 본 출원에서 제공된 융합체는 PCSK9 유전자 발현에 유의한 억제 효과를 보여주었다.
실시예6
본 출원의 융합체는 PCSK9 유전자의 발현을 억제할 수 있다.
실시예 5의 체외 전사 mRNA(mRNA 서열은 서열번호 261 내지 327를 참조), 화학 합성된 질량비 1:1의 sgRNA/mRNA 혼합물(sgRNA 서열은 서열번호 363로 표시됨), 그리고 LNP 제조 방법에 따라 제조된 LNP를 Huh7 세포에 가하고(투여량: 1.25ug/mL), LNP 첨가 7일 후 모든 세포를 수집하여 Trizol로 총 RNA를 추출하였고, qPCR을 통해 PCSK9의 상대적 발현량을 정량화하여 다양한 도구의 상대적 억제 효율을 계산하였다. 결과는 도 7에 도시된 바와 같이, 여기서 NC군은 LNP를 가하지 않은 대조군이고,NT군은 NT gRNA(서열번호 364로 표시되는 서열)를 가한 대조군이며, 본 출원에서 제공된 융합체가 PCSK9 유전자의 발현에 유의한 억제 효과를 보임을 나타냈다.
서열목록 전자파일 첨부

Claims (75)

  1. 핵산 결합 도메인 및 하나 또는 복수의 효과기 도메인을 포함하는 융합체(fusion)로서, 상기 효과기 도메인은 후성 유전학적 변형 도메인(epigenetic modification domain) 및/또는 전사 조절 도메인 중 하나 또는 복수를 포함하며, 상기 융합체는 적어도 2가지 유형의 후성 유전학적 변형 도메인 및/또는 전사 조절 도메인을 포함하는, 융합체.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 핵산 결합 도메인은 DNA 결합 도메인인, 융합체.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 DNA 결합 도메인은 TALE 도메인, 징크 핑거(zinc finger) 도메인, tetR 도메인, 광범위 뉴클레아제(large-range nuclease), Cas 단백질, Argonaute(Ago) 단백질 및 이들의 동족체 또는 이들의 변형 형태에서 선택되는, 융합체.
  4. 제2항 또는 제3항에 있어서,
    상기 DNA 결합 도메인은 표적 유전자좌(locus)의 목표 서열에 결합할 수 있는, 융합체.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 DNA 결합 도메인은 가이드 RNA와 결합할 수 있는, 융합체.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 가이드 RNA는 상기 표적 유전자좌의 목표 서열을 특이적으로 인식하고 이와 혼성화할 수 있는, 융합체.
  7. 제2항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 DNA 결합 도메인은 Cas 단백질이며, 상기 Cas 단백질은 II클래스 Cas 뉴클레아제인, 융합체.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 Cas 단백질은 II클래스 II형 Cas 뉴클레아제 및 II클래스 V형 Cas 뉴클레아제에서 선택되는, 융합체.
  9. 제2항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 DNA 결합 도메인은 Cas9 단백질인, 융합체.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 Cas9 단백질은 절단-비활성(dead) Cas9 단백질(dCas9)인, 융합체.
  11. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 핵산 결합 도메인은 서열번호 1 내지 7, 353 및 354 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 융합체.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 후성 유전학적 변형 도메인은 DNA 탈아민화 활성, DNA 메틸트랜스퍼라아제 활성, DNA 탈메틸화효소 활성, DNA 아민화 활성, DNA 산화 활성, DNA 헬리카제 활성, 히스톤 아세틸트랜스퍼라제 활성, 히스톤 탈아세틸라제 활성, 히스톤 메틸트랜스퍼라아제 활성, 히스톤 탈메틸화효소 활성, 히스톤 키나아제 활성, 히스톤 포스파타제 활성, 히스톤 유비퀴틴 리가제 활성 및 히스톤 탈유비퀴틴화 활성에서 선택되는, 융합체.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 후성 유전학적 변형 도메인은 DNA 메틸트랜스퍼라아제 및/또는 이의 기능적 활성 단편을 포함하는, 융합체.
  14. 제13항에 있어서,
    상기 DNA 메틸트랜스퍼라아제는 DNMT3A, DNMT3B, Dnmt3c, DNMT1, DNMT2 및 DNMT3L에서 선택되는, 융합체.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 후성 유전학적 변형 도메인은 복수의 DNA 메틸트랜스퍼라아제 및/또는 이의 기능적 활성 단편을 포함하고, 상기 복수의 DNA 메틸트랜스퍼라아제 및/또는 이의 기능적 활성 단편은 링커 서열을 통해 연결된, 융합체.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 후성 유전학적 변형 도메인은 적어도 하나의 DNMT3A 및 적어도 하나의 DNMT3L을 포함하는, 융합체.
  17. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 DNA 메틸트랜스퍼라아제는 서열번호 8 내지 21 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 융합체.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 전사 조절 도메인은 전사 활성화 도메인 또는 전사 억제 도메인인, 융합체.
  19. 제18항에 있어서,
    상기 전사 억제제 도메인은, KRAB, ZIM3, ZNF680, ZNF554, ZNF264, ZNF582, ZNF324, ZNF669, ZNF354A, ZNF82, ZNF595, ZNF419, ZNF566, ZIM2, EHMT2, SUV39H1, ZFPM1, TRIM28, EZH2, MXD1, SID, LSD1, HP1a, HDAC3, ZNF436, ZNF257, ZNF675, ZNF490, ZNF320, ZNF331, ZNF816, ZNF41, ZNF189, ZNF528, ZNF543, ZNF140, ZNF610, ZNF350, ZNF8, ZNF30, ZNF98, ZNF677, ZNF596, ZNF214, ZNF37A, ZNF34, ZNF250, ZNF547, ZNF273, ZFP82, ZNF224, ZNF33A, ZNF45, ZNF175, ZNF184, ZFP28-1, ZFP28-2, ZNF18, ZNF213, ZNF394, ZFP1, ZFP14, ZNF416, ZNF557, ZNF729, ZNF254, ZNF764, ZNF785, ZNF10, CBX5, RYBP, YAF2, MGA, CBX1, SCMH1, MPP8, SUMO3, HERC2, BIN1, PCGF2, TOX, FOXA1, FOXA2, IRF2BP1, IRF2BP2, IRF2BPL IRF-2BP1_2 N-말단 도메인(N-terminal domain), HOXA13, HOXB13, HOXC13, HOXA11, HOXC11, HOXC10, HOXA10, HOXB9, HOXA9, ZFP28, ZN334, ZN568, ZN37A, ZN181, ZN510, ZN862, ZN140, ZN208, ZN248, ZN571, ZN699, ZN726, ZIK1, ZNF2, Z705F, ZNF14, ZN471, ZN624, ZNF84, ZNF7, ZN891, ZN337, Z705G, ZN529, ZN729, ZN419, Z705A, ZN302, ZN486, ZN621, ZN688, ZN33A, ZN554, ZN878, ZN772, ZN224, ZN184, ZN544, ZNF57, ZN283, ZN549, ZN211, ZN615, ZN253, ZN226, ZN730, Z585A, ZN732, ZN681, ZN667, ZN649, ZN470, ZN484, ZN431, ZN382, ZN254, ZN124, ZN607, ZN317, ZN620, ZN141, ZN584, ZN540, ZN75D, ZN555, ZN658, ZN684, RBAK, ZN829, ZN582, ZN112, ZN716, HKR1, ZN350, ZN480, ZN416, ZNF92, ZN100, ZN736, ZNF74, ZN443, ZN195, ZN530, ZN782, ZN791, ZN331, Z354C, ZN157, ZN727, ZN550, ZN793, ZN235, ZN724, ZN573, ZN577, ZN789, ZN718, ZN300, ZN383, ZN429, ZN677, ZN850, ZN454, ZN257, ZN264, ZN485, ZN737, ZNF44, ZN596, ZN565, ZN543, ZFP69, SUMO1, ZNF12, ZN169, ZN433, ZN175, ZN347, ZNF25, ZN519, Z585B, ZN517, ZN846, ZN230, ZNF66, ZN713, ZN816, ZN426, ZN674, ZN627, ZNF20, Z587B, ZN316, ZN233, ZN611, ZN556, ZN234, ZN560, ZNF77, ZN682, ZN614, ZN785, ZN445, ZFP30, ZN225, ZN551, ZN610, ZN528, ZN284, ZN418, ZN490, ZN805, Z780B, ZN763, ZN285, ZNF85, ZN223, ZNF90, ZN557, ZN425, ZN229, ZN606, ZN155, ZN222, ZN442, ZNF91, ZN135, ZN778, ZN534, ZN586, ZN567, ZN440, ZN583, ZN441, ZNF43, ZN589, ZN563, ZN561, ZN136, ZN630, ZN527, ZN333, Z324B, ZN786, ZN709, ZN792, ZN599, ZN613, ZF69B, ZN799, ZN569, ZN564, ZN546, ZFP92, ZN723, ZN439, ZFP57, ZNF19, ZN404, ZN274, CBX3, ZN250, ZN570, ZN675, ZN695, ZN548, ZN132, ZN738, ZN420, ZN626, ZN559, ZN460, ZN268, ZN304, ZN605, ZN844, SUMO5, ZN101, ZN783, ZN417, ZN182, ZN823, ZN177, ZN197, ZN717, ZN669, ZN256, ZN251, CBX4, CDY2, CDYL2, ZN562, ZN461, Z324A, ZN766, ID2, ZN214, CBX7, ID1, CREM, SCX, ASCL1, ZN764, SCML2, TWST1, CREB1, TERF1, ID3, CBX8, GSX1, NKX22, ATF1, TWST2, ZNF17, TOX3, TOX4, ZMYM3, I2BP1, RHXF1, SSX2, I2BPL, ZN680, TRI68, HXA13, PHC3, TCF24, HXB13, HEY1, PHC2, ZNF81, FIGLA, SAM11, KMT2B, HEY2, JDP2, HXC13, ASCL4, HHEX, GSX2, ETV7, ASCL3, PHC1, OTP, I2BP2, VGLL2, HXA11, PDLI4, ASCL2, CDX4, ZN860, LMBL4, PDIP3, NKX25, CEBPB, ISL1, CDX2, PROP1, SIN3B, SMBT1, HXC11, HXC10, PRS6A, VSX1, NKX23, MTG16, HMX3, HMX1, KIF22, CSTF2, CEBPE, DLX2, PPARG, PRIC1, UNC4, BARX2, ALX3, TCF15, TERA, VSX2, HXD12, CDX1, TCF23, ALX1, HXA10, RX, CXXC5, SCML1, NFIL3, DLX6, MTG8, CEBPD, SEC13, FIP1, ALX4, LHX3, PRIC2, MAGI3, NELL1, PRRX1, MTG8R, RAX2, DLX3, DLX1, NKX26, NAB1, SAMD7, PITX3, WDR5, MEOX2, NAB2, DHX8, CBX6, EMX2, CPSF6, HXC12, KDM4B, LMBL3, PHX2A, EMX1, NC2B, DLX4, SRY, ZN777, ZN398, GATA3, BSH, SF3B4, TEAD1, TEAD3, RGAP1, PHF1, GATA2, FOXO3, ZN212, IRX4, ZBED6, LHX4, SIN3A, RBBP7, NKX61, R51A1, MB3L1, DLX5, NOTC1, TERF2, ZN282, RGS12, ZN840, SPI2B, PAX7, NKX62, ASXL2, FOXO1, GATA1, ZMYM5, LRP1, MIXL1, SGT1, LMCD1, CEBPA, SOX14, WTIP, PRP19, NKX11, RBBP4, DMRT2, SMCA2, 및 이의 기능적 활성 단편에서 선택되는, 융합체.
  20. 제18항 또는 제19항에 있어서,
    상기 전사 억제제 도메인은 서열 번호 22 내지 46 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 융합체.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 핵산 결합 도메인, 상기 후성 유전학적 변형 도메인 및 상기 전사 조절 도메인 중 하나 또는 복수가 링커 서열을 통해 연결된, 융합체.
  22. 제21항에 있어서,
    상기 링커 서열은 적어도 16개의 아미노산을 포함하는, 융합체.
  23. 제21항 또는 제22항에 있어서,
    상기 링커 서열은 XTEN 링커 서열을 포함하는, 융합체.
  24. 제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 링커 서열은 서열번호 59로 표시되는 아미노산 서열로부터 절취된 하나 또는 복수의 단편 서열을 포함하며, 상기 하나 또는 복수의 단편 서열은 16개 이상의 연속적인 아미노산을 포함하는, 융합체.
  25. 제21항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 링커 서열은 GS 링커 펩타이드를 포함하며, 상기 GS 링커 펩타이드는 (GS)a(GGS)b(GGGS)c(GGGGS)d 서열을 포함하고, 여기서 G는 글리신 잔기(Gly)를 나타내며, S는 세린 잔기(Ser)를 나타내고, a, b, c 및 d는 0보다 크거나 같은 정수를 나타내는, 융합체.
  26. 제21항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 링커 서열은 서열번호 47 내지 58 중 하나 또는 복수로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는, 융합체.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 하나 또는 복수의 효과기 도메인은 상기 핵산 결합 도메인의 N 말단 또는 C 말단에 위치하는, 융합체.
  28. 제27항에 있어서,
    상기 효과기 도메인은 적어도 하나의 유형의 상기 후성 유전학적 변형 도메인 및 적어도 하나의 유형의 상기 전사 조절 도메인을 포함하는, 융합체.
  29. 제27항 또는 제28항에 있어서,
    상기 후성 유전학적 변형 도메인은 DNMT3A 및 DNMT3L을 포함하며, 상기 DNMT3A의 C 말단은 상기 DNMT3L의 N 말단에 연결된, 융합체.
  30. 제27항 또는 제28항에 있어서,
    상기 후성 유전학적 변형 도메인은 DNMT3A 및 DNMT3L을 포함하고, 상기 DNMT3L의 C 말단은 상기 DNMT3A의 N 말단에 연결된, 융합체.
  31. 제27항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 전사 조절 도메인은 전사 억제제 도메인을 포함하는, 융합체.
  32. 제27항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 전사 조절 도메인은 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자 또는 이의 기능적 활성 단편을 포함하는, 융합체.
  33. 제32항에 있어서,
    상기 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자는 KRAB를 포함하는, 융합체.
  34. 제 32항 또는 33항에 있어서,
    상기 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자는 ZIM3 KRAB 및 KOX1 KRAB에서 선택되는, 융합체.
  35. 제27항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 전사 조절 도메인은 2개 이상의 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자 또는 이의 기능적 활성 단편을 포함하는, 융합체.
  36. 제27항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 전사 조절 도메인은 2개 이상의 KRAB 도메인을 포함하며, 2개 이상의 KRAB 도메인은 동일한 유형이거나 서로 다른 유형인, 융합체.
  37. 제36항에 있어서,
    상기 2개 이상의 KRAB 도메인은 XTEN 링커 서열을 통해 연결된, 융합체.
  38. 제27항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 하나 또는 복수의 효과기 도메인은 상기 핵산 결합 도메인의 N 말단에 위치하며, 상기 효과기 도메인 중의 상기 후성 유전학적 편집 도메인은 상기 전사 조절 도메인의 N 말단 또는 C 말단에 위치하는, 융합체.
  39. 제27항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 융합체는, N 말단에서 C 말단까지 차례로 연결된 다음 물질을 포함하는, 융합체:
    (1) 적어도 하나의 유형의 상기 후성 유전학적 편집 도메인, 적어도 하나의 유형의 상기 전사 조절 도메인 및 상기 핵산 결합 도메인,
    (2) 적어도 하나의 유형의 상기 전사 조절 도메인, 적어도 하나의 유형의 상기 후성 유전학적 편집 도메인 및 상기 핵산 결합 도메인, 또는
    (3) 적어도 하나의 유형의 상기 전사 조절 도메인, 적어도 하나의 유형의 상기 후성 유전학적 편집 도메인, 적어도 하나의 유형의 상기 전사 조절 도메인 및 상기 핵산 결합 도메인.
  40. 제27항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 융합체는, N 말단에서 C 말단까지 차례로 연결된 다음 물질을 포함하는, 융합체:
    (1) 적어도 하나의 DNA 메틸트랜스퍼라아제 도메인, 적어도 하나의 전사 억제제 도메인 및 상기 핵산 결합 도메인,
    (2) 적어도 하나의 전사 억제제 도메인, 적어도 하나의 DNA 메틸트랜스퍼라아제 도메인 및 상기 핵산 결합 도메인, 또는
    (3) 적어도 하나의 전사 억제제 도메인, 적어도 하나의 DNA 메틸트랜스퍼라아제 도메인, 적어도 하나의 전사 억제제 도메인 및 상기 핵산 결합 도메인.
  41. 제27항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 융합체는, N 말단에서 C 말단까지 차례로 연결된 다음 물질을 포함하는, 융합체:
    (1) DNMT3A 및 DNMT3L 중 하나 또는 이의 조합; 하나 또는 복수의 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자; 및 dCas9,
    (2) 하나 또는 복수의 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자; DNMT3A 및 DNMT3L 중 하나 또는 이의 조합; 및 dCas9, 또는
    (3) 하나 또는 복수의 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자; DNMT3A 및 DNMT3L 중 하나 또는 이의 조합; 하나 또는 복수의 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자; 및 dCas9.
  42. 제27항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 융합체는 DNMT3A-DNMT3L-KRAB-dCas9, KRAB-DNMT3A-DNMT3L-dCas9, DNMT3A-DNMT3L-ZNF582-dCas9, DNMT3A-DNMT3L-ZNF324-dCas9, DNMT3A-DNMT3L-ZNF680-dCas9, DNMT3A-DNMT3L-ZNF354a-dCas9, DNMT3A-DNMT3L-ZNF419-dCas9, KRAB-DNMT3A-DNMT3L-KRAB-dCas9, KRAB-KRAB-DNMT3A-DNMT3L-dCas9, 또는 DNMT3A-DNMT3L-KRAB-KRAB-dCas9 도메인을 포함하고, 여기서, -는, 상기 융합체의 도메인들이 직접적 및/또는 간접적으로 연결되며 상기 도메인들은 N 말단에서 C 말단까지 차례로 배열됨을 나타내는, 융합체.
  43. 제27항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 하나 또는 복수의 효과기 도메인은 상기 핵산 결합 도메인의 C 말단에 위치하며, 상기 효과기 도메인 중의 상기 후성 유전학적 편집 도메인은 상기 전사 조절 도메인의 N 말단 또는 C 말단에 위치하는, 융합체.
  44. 제27항 내지 제37항 및 제43항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 융합체는, N 말단에서 C 말단까지 차례로 연결된 다음 물질을 포함하는, 융합체:
    (1) 상기 핵산 결합 도메인, 적어도 하나의 유형의 상기 후성 유전학적 편집 도메인 및 적어도 하나의 유형의 상기 전사 조절 도메인,
    (2) 상기 핵산 결합 도메인, 적어도 하나의 유형의 상기 전사 조절 도메인 및 적어도 하나의 유형의 상기 후성 유전학적 편집 도메인, 또는
    (3) 상기 핵산 결합 도메인, 적어도 하나의 유형의 상기 전사 조절 도메인, 적어도 하나의 유형의 상기 후성 유전학적 편집 도메인 및 적어도 하나의 유형의 상기 전사 조절 도메인.
  45. 제27항 내지 제37항 및 제43항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 융합체는, N 말단에서 C 말단까지 차례로 연결된 다음 물질을 포함하는, 융합체:
    (1) 상기 핵산 결합 도메인, 적어도 하나의 DNA 메틸트랜스퍼라아제 도메인 및 적어도 하나의 전사 억제제 도메인,
    (2) 상기 핵산 결합 도메인, 적어도 하나의 전사 억제제 도메인 및 적어도 하나의 DNA 메틸트랜스퍼라아제 도메인, 또는
    (3) 상기 핵산 결합 도메인, 적어도 하나의 전사 억제제 도메인, 적어도 하나의 DNA 메틸트랜스퍼라아제 도메인 및 적어도 하나의 전사 억제제 도메인.
  46. 제27항 내지 제37항 및 제43항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 융합체는, N 말단에서 C 말단까지 차례로 연결된 다음 물질을 포함하는, 융합체:
    (1) dCas9; DNMT3A 및 DNMT3L 중 하나 또는 이의 조합; 및 하나 또는 복수의 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자,
    (2) dCas9; 하나 또는 복수의 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자; 및 DNMT3A 및 DNMT3L 중 하나 또는 이의 조합, 또는
    (3) dCas9; 하나 또는 복수의 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자; DNMT3A 및 DNMT3L 중 하나 또는 이의 조합; 및 하나 또는 복수의 징크 핑거 단백질 기반 전사 인자.
  47. 제27항 내지 제37항 및 제43항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서,
    융합체는: dCas9-DNMT3A-DNMT3L-KRAB, dCas9-DNMT3L-DNMT3A-KRAB, dCas9-KRAB-DNMT3A-DNMT3L, dCas9-KRAB-DNMT3L-DNMT3A, dCas9-ZNF582-DNMT3L-DNMT3A, dCas9-ZNF324-DNMT3L-DNMT3A, dCas9-DNMT3L-DNMT3A-KRAB-KRAB, dCas9-DNMT3L-DNMT3A-KRAB-KRAB-KRAB, 또는 dCas9-KRAB-DNMT3L-DNMT3A-KRAB 도메인을 포함하고, 여기서, -는, 상기 융합체의 도메인들이 직접적 및/또는 간접적으로 연결되며 상기 도메인들은 N 말단에서 C 말단까지 차례로 배열됨을 나타내는, 융합체.
  48. 제27항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서,
    서열번호 60 내지 67, 70 내지 107 및 337 내지 344 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 융합체.
  49. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 핵산 결합 도메인의 N 말단 및 C 말단에 위치하는 하나 또는 복수의 효과기 도메인을 포함하는 융합체.
  50. 제49항에 있어서,
    상기 하나 또는 복수의 효과기 도메인은 적어도 하나의 후성 유전학적 편집 도메인을 포함하는, 융합체.
  51. 제50항에 있어서,
    상기 하나 또는 복수의 효과기 도메인은 히스톤 변형을 제공하는 적어도 하나의 후성 유전학적 편집 도메인을 포함하는, 융합체.
  52. 제49항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 핵산 결합 도메인의 C 말단에 있는 상기 효과기 도메인은 적어도 하나의 유형의 후성 유전학적 변형 도메인을 포함하는, 융합체.
  53. 제49항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 핵산 결합 도메인의 C 말단에 있는 상기 효과기 도메인은 히스톤 변형을 제공하는 적어도 하나의 후성 유전학적 변형 도메인을 포함하는, 융합체.
  54. 제49항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 핵산 결합 도메인의 N 말단에 있는 상기 효과기 도메인은 후성 유전학적 변형 도메인 및 전사 조절 도메인 중 하나 또는 복수를 포함하는, 융합체.
  55. 제49항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 핵산 결합 도메인의 N 말단에 있는 상기 효과기 도메인은, 히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, DNA 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, 및 전사 억제제 도메인 중 하나 또는 복수를 포함하는, 융합체.
  56. 제49항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 핵산 결합 도메인의 N 말단에 있는 상기 효과기 도메인은:
    (1) 히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인,
    (2) 전사 억제제 도메인,
    (3) DNA 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, 또는
    (4) 전사 억제제 도메인, 및 DNA 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인
    을 포함하는, 융합체.
  57. 제49항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 핵산 결합 도메인의 N 말단에 있는 상기 효과기 도메인은:
    (1) 후성 유전학적 변형 도메인 EZH2, HDAC3, HDAC1, EHMT2, PRMT1, PRMT5, SETDB1, hSIRT1, HP1a, 및 LSD1에서 선택되는 하나 또는 복수의 후성 유전학적 변형 도메인, 및 이의 기능적 활성 단편,
    (2) KRAB 또는 이의 기능적 활성 단편,
    (3) DNMT3A; DNMT3L; 또는 DNMT3A 및 DNMT3L의 조합, 또는
    (4) KRAB 및 DNMT3A의 조합, KRAB 및 DNMT3L의 조합, 또는 KRAB, DNMT3A 및 DNMT3L의 조합
    을 포함하는, 융합체.
  58. 제49항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 융합체는, N 말단에서 C 말단까지 차례로 연결된 다음 물질을 포함하는, 융합체:
    (1) 히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, 핵산 결합 도메인, 및 히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인,
    (2) 전사 억제제 도메인, 핵산 결합 도메인, 및 히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인,
    (3) DNA 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, 핵산 결합 도메인, 및 히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인,
    (4) 전사 억제제 도메인, DNA 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, 핵산 결합 도메인, 및 히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, 또는
    (5) DNA 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인, 전사 억제제 도메인, 핵산 결합 도메인, 및 히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인.
  59. 제58항에 있어서,
    상기 히스톤 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인은 EZH2, HDAC3, HDAC1, EHMT2, PRMT1, PRMT5, SETDB1, hSIRT1, HP1a, LSD1 및 이의 기능적 활성 단편에서 선택되는, 융합체.
  60. 제58항에 있어서,
    상기 DNA 변형을 제공하는 후성 유전학적 변형 도메인은 DNMT3A; DNMT3L; DNMT3A 및 DNMT3L의 조합; 또는 이의 기능적 활성 단편에서 선택되는, 융합체.
  61. 제58항에 있어서,
    상기 전사 억제제 도메인은 KRAB 및/또는 이의 기능적 활성 단편인, 융합체.
  62. 제49항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 융합체는 DNMT3A-DNMT3L-dCas9-KRAB, HDAC3-dCas9-EZH2, KRAB-dCas9-EZH2, KRAB-DNMT3A-dCas9-EZH2, KRAB-DNMT3A-dCas9-HDAC3, DNMT3A-DNMT3L-dCas9-(EZH2)n=1-11, DNMT3A-DNMT3L-dCas9-HDAC3, DNMT3A-DNMT3L-dCas9-EHMT2, DNMT3A-DNMT3L-dCas9-HDAC1, DNMT3A-DNMT3L-dCas9-PRMT1, DNMT3A-DNMT3L-dCas9-SETDB1, DNMT3A-DNMT3L-dCas9-hSIRT1, DNMT3A-DNMT3L-dCas9-PRMT5, DNMT3A-DNMT3L-dCas9-HP1a, DNMT3A-DNMT3L-dCas9-LSD1, 또는 DNMT3A-DNMT3L-TALE-KRAB 도메인을 포함하고, 여기서, -는, 상기 융합체의 도메인들이 직접적 및/또는 간접적으로 연결되며 상기 도메인들은 N 말단에서 C 말단까지 차례로 배열됨을 나타내는, 융합체.
  63. 제49항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서,
    서열번호 68, 69, 108 내지 126, 355 및 356 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 융합체.
  64. 제49항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서,
    핵 국소화 신호 및/또는 태그(tag) 도메인을 더 포함하는 융합체.
  65. 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 따른 융합체를 코딩하는 핵산.
  66. 제65항에 따른 핵산을 포함하는 재조합 벡터.
  67. 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 따른 융합체, 제65항에 따른 핵산, 및/또는 제66항에 따른 재조합 벡터, 및 선택적으로 리포좀 및/또는 지질 나노입자를 포함하는 전달 벡터.
  68. 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 따른 융합체, 제65항에 따른 핵산, 제66항에 따른 재조합 벡터, 및/또는 제67항에 따른 전달 벡터를 포함하는 조성물.
  69. 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 따른 융합체, 제65항에 따른 핵산, 제66항에 따른 재조합 벡터, 제67항에 따른 전달 벡터, 및/또는 제68항에 따른 조성물을 포함하는 세포.
  70. 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 따른 융합체, 제65항에 따른 핵산, 제66항에 따른 재조합 벡터, 제67항에 따른 전달 벡터, 제68항에 따른 조성물, 및/또는 제69항에 따른 세포를 포함하는 키트.
  71. 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 따른 융합체, 제65항에 따른 핵산, 제66항에 따른 재조합 벡터, 제67항에 따른 전달 벡터, 제68항에 따른 조성물, 제69항에 따른 세포 및/또는 제70항에 따른 키트를 투여하는 것을 포함하는, 표적 유전자 발현을 조절하는 방법.
  72. 제71항에 있어서,
    상기 융합체, 상기 핵산, 상기 재조합 벡터, 상기 전달 벡터, 상기 조성물, 상기 세포 및/또는 상기 키트를 상기 표적 유전자를 포함하는 세포에 도입하는 단계를 포함하는 방법.
  73. 제71항에 있어서,
    상기 융합체, 상기 핵산, 상기 재조합 벡터, 상기 전달 벡터 및/또는 상기 조성물을 상기 표적 유전자 근처 및/또는 상기 표적 유전자의 조절 요소와 접촉시키는 것을 포함하는 방법.
  74. 제73항에 있어서,
    상기 조절 요소는 코어 프로모터, 근위 프로모터(proximal promoter), 원위 인핸서(distal enhancer), 사일렌서(silencer), 절연체 요소, 경계 요소 및/또는 유전자좌 제어 영역을 포함하는, 방법.
  75. 유효량의 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 따른 융합체, 제65항에 따른 핵산, 제66항에 따른 재조합 벡터, 제67항에 따른 전달 벡터, 제68항에 따른 조성물, 제69항에 따른 세포 및/또는 제70항에 따른 키트를 이를 필요로 하는 피험자에게 투여하는 것을 포함하는, 비정상적인 표적 유전자 발현 및/또는 비정상적인 표적 유전자 활성과 관련된 질환 또는 그 증상을 치료하거나 완화시키는 방법.
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