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KR20230023664A - 항-클라우딘18.2 항체 및 이의 용도 - Google Patents

항-클라우딘18.2 항체 및 이의 용도 Download PDF

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슈아이시앙 조우
리 리
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지에 왕
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이노벤트 바이오로직스 (쑤저우) 컴퍼니, 리미티드
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Abstract

본 발명은 클라우딘18.2에 특이적으로 결합하는 신규 항체 및 항체 단편, 및 상기 항체 또는 항체 단편을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 항체 또는 이의 항체 단편을 인코딩하는 핵산, 상기 핵산을 포함하는 숙주 세포, 및 관련 용도에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 항체 및 상기 항체 단편의 치료적 및 진단적 용도에 관한 것이다.

Description

항-클라우딘18.2 항체 및 이의 용도
본 출원은 2020년 6월 19일에 출원된 중국 특허 출원 번호 CN202010570517.X를 기초로 하고 이의 우선권을 주장하며, 이의 개시 내용은 전체가 참고로 본 명세서에 포함된다.
본 발명은 클라우딘18.2에 특이적으로 결합하는 신규 항체 및 항체 단편, 및 상기 항체 또는 항체 단편을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 항체 또는 이의 항체 단편을 인코딩하는 핵산, 상기 핵산을 포함하는 숙주 세포, 및 관련 용도에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 항체 및 상기 항체 단편의 치료적 및 진단적 용도에 관한 것이다.
클라우딘은 단백질 패밀리이며 세포 사이의 긴밀한 접합을 구성하는 중요한 구성 요소이다. 그들은 분자의 세포간 흐름을 제어하는 세포간 장벽을 확립하여, 이에 따라 세포 사이의 분자 흐름을 제어할 수 있다. 클라우딘 패밀리 단백질은 N-말단과 C-말단 모두 세포질에 포함되는 테트라스파닌 도메인을 가지고 있다. 다른 클라우딘은 다른 조직에서 발현되고 이들의 기능적 변화는 다양한 조직에서 암의 발전과 연관된다. 예를 들어, 클라우딘-1은 결장암에서 발현되어 예후값(prognostic value)이 있고, 클라우딘-18은 위암에서 발현되며, 클라우딘-10은 간세포암종에서 발현된다. 세포막 표면 단백질인 클라우딘은 다양한 치료 전략의 유용한 표적이다.
클라우딘-18의 아이소폼 2(클라우딘18.2 또는 CLDN18.2)는 고도로 선택적인 세포 계통 마커이다. 정상 조직에서의 발현은 위점막의 분화된 상피세포에만 국한되어 있으며 위줄기세포 영역에서는 발현되지 않는다. CLDN18.2는 원발성 위암의 상당 부분에서 발현되며, 그 발현 수준은 위 전이성 암 조직에서 유지된다. CLDN18.2의 발현은 위암 외에 췌장암에서도 발견되었으며, 이러한 암 치료에 이상적인 표적 분자이다(Singh, P., Toom, S. & Huang, Y. Anti-CLDN18.2 antibody as new targeted therapy for advanced gastric cancer. J Hematol Oncol 10, 105 (2017). https://doi.org/10.1186/s13045-017-0473-4).
종양 치료에 대한 미충족 임상 수요가 크기 때문에 클라우딘18.2를 표적으로 하는 약물의 개발이 필요하다. 클라우딘18.2에 대한 일부 모노클로날 항체가 선행 기술에서 개발되었지만, 이들 항체의 대부분은 면역원성, 낮은 친화성, 낮은 특이성 및 일반적인 ADCC 활성의 잠재적으로 높은 위험을 갖는 키메라 항체이다.
따라서, 면역원성이 낮고, 클라우딘18.2에 대한 결합 친화성이 더 강하고, 특이성이 우수하고, ADCC 및 CDC 활성이 강하고, 항종양 활성이 더 우수한 클라우딘18.2에 대한 신규 항체의 개발이 여전히 필요하다.
일부 측면에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 바와 같은 3개의 중쇄 가변 영역 CDR 및 3개의 경쇄 가변 영역 CDR을 포함하고, CLDN18.2에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다.
일부 측면에서, 본 발명의 CLDN18.2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 본 명세서에 기재된 바와 같은 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명의 CLDN18.2에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본 명세서에 기재된 바와 같은 중쇄 불변 영역 및/또는 경쇄 불변 영역을 추가로 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명은 또한 하기 실시양태에 관한 것이다.
1. 본 발명의 CLDN18.2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공되며, 여기서 항체는 항체 또는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 형태의 항원 결합 단편, 바람직하게는 항체 또는 IgG1 형태의 항원 결합 단편이다.
2. 본 발명의 CLDN18.2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공되며, 여기서 항체는 모노클로날 항체이다.
3. 본 발명의 CLDN18.2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공되며, 여기서 항체는 인간화 항체, 인간 항체 또는 키메라 항체이다.
4. 본 발명의 CLDN18.2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공되며, 여기서 항원 결합 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, Fv, 단쇄 항체(예를 들어, scFv), (Fab')2, 단일 도메인 항체(예를 들어, VHH), 도메인 항체(dAb) 및 선형 항체로부터 선택된 항체 단편이다.
5. 본 발명의 CLDN18.2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공되며, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기 특성 중 하나 이상을 갖는다.
(i) 높은 친화성으로 CLDN18.2(예를 들어, 인간 CLDN18.2)에 결합하지만 CLDN18.1(예를 들어, 인간 CLDN18.1)에는 결합하지 않음;
(ii) 약 15nM 미만, 바람직하게는 약 10nM, 9.5nM, 9nM, 8.5nM, 8nM, 7.5nM, 7nM, 6.5nM, 6nM, 5.5nM, 5nM, 4.5nM, 4nM, 3.5nM 또는 3nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간 CLDN18.2에 결합;
(iii) 세포 표면의 CLDN18.2에는 결합하지만 세포 표면의 CLDN18.1에는 결합하지 않음;
(iv) ADCC 활성 또는 CDC 활성, 예를 들어 ADCC 활성 또는 공지된 항체(예를 들어, Zmab)와 동등하거나 이보다 더 높은 CDC 활성을 가짐;
(v) 종양 세포, 예를 들어 CLDN18.2를 발현하는 종양 세포의 억제; 및
(vi) 약 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% 또는 70% 이상의 종양 성장 억제로 종양 성장을 효과적으로 억제할 수 있음.
6. 본 발명의 CLDN18.2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 경쇄 가변 영역 또는 중쇄 가변 영역, 또는 경쇄 또는 중쇄를 인코딩하는 단리된 핵산이 제공된다.
7. 본 발명의 핵산을 포함하는 벡터가 제공되며, 여기서 바람직하게는 벡터는 발현 벡터이다.
8. 본 발명의 핵산 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포가 제공되며, 여기서 바람직하게는, 숙주 세포는 원핵 또는 진핵이며, 보다 바람직하게는, 숙주 세포는 효모 세포, 포유류 세포(예를 들어, 293 세포 또는 CHO 세포, 예컨대 CHO-S 세포 또는 HEK293 세포), 혹은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 제조에 적합한 추가 세포로부터 선택된다.
9. CLDN18.2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제조하기 위한 방법이 제공되며, 본 발명의 CLDN18.2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 인코딩하는 핵산의 발현에 적합한 조건 하 본 발명의 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 선택적으로 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 단리시키는 단계를 포함하며; 선택적으로, 상기 방법은 숙주 세포로부터 CLDN18.2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 복원시키는 단계를 추가로 포함한다.
10. 본 발명의 CLDN18.2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 추가 물질, 예를 들어, 세포독성제를 포함하는 면역접합체가 제공된다.
11. 본 발명의 CLDN18.2 또는 본 발명의 면역접합체에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 선택적으로 하나 이상의 추가 치료제, 예를 들어, 화학요법제, 사이토카인, 세포독성제, 추가 항체, 소분자 약물 또는 면역조절제, 및 선택적으로 약제학적 보충 물질을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
12. 본 발명의 CLDN18.2 또는 본 발명의 면역접합체에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 하나 이상의 추가 치료제, 예를 들어 화학요법제, 사이토카인, 세포독성제, 추가 항체, 소분자 약물 또는 면역조절제를 포함하는 약제학적 조합을 제공한다.
13. 대상체에서 종양을 예방 또는 치료하기 위한 방법을 제공하며, 이는 유효량의 본 발명의 CLDN18.2, 또는 본 발명의 면역접합체, 약제학적 조성물 또는 약제학적 조합에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
14. 대상체에서 ADCC 및/또는 CDC를 유도하기 위한 방법을 제공하며, 이는 유효량의 본 발명의 CLDN18.2, 또는 본 발명의 면역접합체, 약제학적 조성물 또는 약제학적 조합에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
15. 종양을 치료 또는 예방하고 및/또는 ADCC 및/또는 CDC를 유도하기 위한 약물 또는 약제학적 조합의 제조에 있어서 본 발명의 항체 또는 면역접합체의 용도가 제공된다.
16. 본 발명의 방법 또는 용도가 제공되며, 여기서 종양은 암이고; 바람직하게는, 상기 암은 상승된 수준의 CLDN18.2를 갖는다(예를 들어, 핵산 또는 단백질 수준에서).
17. 본 발명의 방법이 제공되며, 여기서 방법은 환자에게 하나 이상의 요법, 예를 들어, 치료 양식 및/또는 추가 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함하고; 바람직하게는, 상기 치료 양식은 외과적 치료 및/또는 방사선 요법을 포함하고, 상기 추가 치료제는 화학요법제, 사이토카인, 세포독성제, 추가 항체, 소분자 약물 및 면역조절제로부터 선택된다.
18. 본 발명의 용도가 제공되며, 여기서 약물 또는 약제학적 조합이 하나 이상의 요법, 예를 들어, 치료 양식 및/또는 추가 치료제와 조합하여 대상체에게 투여될 수 있고; 바람직하게는, 상기 치료 양식은 외과적 치료 및/또는 방사선 요법을 포함하고, 상기 추가 치료제는 화학요법제, 사이토카인, 세포독성제, 추가 항체, 소분자 약물 및 면역조절제로부터 선택된다.
19. 샘플에서 CLDN18.2를 검출하기 위한 방법이 제공되며, 상기 방법은 다음을 포함한다.
(a) 샘플을 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계; 및
(b) 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 CLDN18.2에 의해 형성된 복합체를 검출하는 단계를 포함하고, 여기서, 선택적으로 항체는 검출가능하게 표지된다.
도 1은 항-CLDN18.2 항체가 세포 표면 상의 CLDN18.2에 특이적으로 결합함을 보여준다.
도 2는 항-CLDN18.2 항체는 세포 표면의 CLDN18.1에 결합하지 않음을 보여준다.
도 3은 CHO-hCLDN18.2에 대한 항-CLDN18.2 항체의 리포터 유전자 기반 ADCC 활성을 보여준다.
도 4는 CHO-hCLDN18.2에 대한 인간화 항-CLDN18.2 항체의 리포터 유전자 기반 ADCC 활성을 보여준다.
도 5는 위암 세포주 NUGC-4, 위암 세포주 KATO III-hCLDN18.2 및 췌장암 세포주 DAN-G-hCLDN18.2에 대한 항-CLDN18.2 항체의 결합을 보여준다.
도 6은 항-CLDN18.2 항체에 대한 CDC 활성 분석을 보여준다.
도 7은 항-CLDN18.2 항체에 대한 ADCC 활성 분석을 보여준다.
도 8은 췌장암의 마우스 모델에서 항-CLDN18.2 항체의 항종양 효과를 보여준다.
도 9는 위암의 마우스 모델에서 항-CLDN18.2 항체의 항종양 효과를 보여준다.
I. 정의
본 발명을 상세히 기술하기에 앞서, 본 발명은 본 출원에 기술된 특정 방법, 프로토콜 및 시약에 한정되지 않으며, 이는 달라질 수 있음을 이해해야 한다. 또한, 본 명세서에서 사용되는 용어는 단지 특정 실시양태를 기술하기 위한 것이며 본 발명의 범위를 한정하지 않는다. 첨부된 청구항만이 본 발명의 범위를 제한할 것이다. 달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 당업자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 가진다.
본 명세서를 설명하기 위해 용어를 다음과 같이 정의한다. 단수형은 복수형을 포함할 수 있으며, 이의 반대도 마찬가지이다. 본 명세서에서 사용되는 용어는 특정 실시양태를 설명하기 위한 것이며, 본 발명의 범위를 제한하기 위한 것이 아니다.
수치와 조합하여 사용되는 용어 "약"은 명시된 수치 미만의 하한 5% 내지 명시된 수치 초과의 상한 5% 범위의 수치를 포함하는 것으로 의도된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "및/또는"은 옵션 중 임의의 하나 또는 옵션 중 임의의 두 개 이상을 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "포함한다(comprise/include)"는 기재된 요소, 정수 또는 단계를 포함하되, 그 외의 다른 모든 요소, 정수 또는 단계를 배제하지 않음을 의미하는 것으로 의도된다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "포함하다(comprise/include)"는, 달리 정의하지 않는 한 기재된 요소, 정수 또는 단계가 전체를 구성되는 상황 또한 망라한다. 예를 들어, 특정 서열을 "포함하는(comprising)" 항체 가변 영역이라고 언급할 경우, 특정 서열로 구성된 항체 가변 영역도 망라하는 것으로 의도된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "클라우딘(CLAUDIN)" 또는 "CLDN"은 세포 간의 밀착접합 구조를 결정하는 가장 중요한 골격 단백질로서, 유착접합부에 관여하며, 종양세포의 전이 및 침윤에 중요한 역할을 한다. 클라우딘 단백질은 포유동물 상피 및 내피 세포, 주로 상피 세포의 측면 표면 및 기저 세포의 원형질막에 널리 존재한다. 서로 다른 클라우딘 단백질은 서로 다른 조직에서 각각의 특정 발현을 가지며, 여기서 클라우딘18(CLDN18) 유전자는 3q22.3에 위치하고, 분자량이 24kDa이고, 261개의 아미노산 잔기를 포함하고, 클라우딘 수퍼패밀리의 구성원이며, 이의 단백질 구조는 2개의 세포외 루프 및 4개의 막횡단 도메인을 포함한다. 인간 CLDN18 또는 클라우딘18 단백질의 두 하위 유형은 각각 클라우딘18.1 또는 CLDN18.1(UniProt ID: P56856-1)과 클라우딘18.2 또는 CLDN18.2(UniProt ID: P56856-2)이다. 두 단백질의 1차 구조 서열에서, N-말단 신호 펩티드에서 세포외 루프 1(Loop1) 구조까지의 일부 위치의 아미노산 잔기만 다르며, 특히 세포외 루프 1에서 CLDN18.1과 CLDN18.2는 8개 아미노산만 다르다. CLDN18 단백질의 두 하위 유형의 속간 서열 상동성도 매우 높다. CLDN18.2의 세포외 루프 1의 서열은 인간, 마우스 및 붉은털 원숭이와 같은 다른 종에서 완전히 동일하며, 반면 인간과 마우스 CLDN18.2 단백질의 상동성은 84%에 이르며, 이는 CLDN18.2 단백질의 서열이 극도로 보존되어 있음을 나타낸다(O. Tureci. 등, Gene, 481:83-92, 2011). CLDN18.2 또는 이의 임의의 변이체 및 아이소폼은 이들이 자연적으로 발현되는 세포 또는 조직으로부터 단리되거나 당업계에 널리 공지된 기술 및/또는 본 명세서에 기재된 기술을 사용하여 재조합적으로 생성될 수 있다. 한 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 CLDN18.2는 인간 CLDN18.2이다.
본 명세서에 사용된 용어 "항-CLDN18.2 항체", "항-CLDN18.2", "CLDN18.2 항체" 또는 "CLDN18.2에 결합하는 항체"는 항체가 (인간) CLDN18.2를 표적으로 하는 치료제로서 사용될 수 있도록 충분한 친화성으로 (인간) CLDN18.2에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 한 실시양태에서, (인간) CLDN18.2 항체는 체외 또는 체내에서 높은 친화성으로 (인간) CLDN18.2에 결합한다. 한 실시양태에서, (인간) CLDN18.2 항체는 CLDN18.1에 결합하지 않는다. 한 실시양태에서, (인간) CLDN18.2 항체는 CLDN18.2를 발현하는 세포에 결합하지만 CLDN18.1을 발현하는 세포에는 결합하지 않는다. 일부 실시양태에서, 결합은 예를 들어 방사선면역분석(RIA), 생물층 간섭계(BLI), MSD 분석, 표면 플라즈몬 공명(SPR) 또는 유세포분석에 의해 결정된다.
용어 "항체 단편"은 온전한 항체의 일부를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 항체 단편은 항원 결합 단편이다.
"항원 결합 단편"은 온전한 항체와 상이한 분자를 지칭하고, 이는 온전한 항체의 일부를 포함하고 온전한 항체가 결합하는 항원에 결합한다. 항체 단편의 예로는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, 도메인 항체(dAb), 선형 항체, 단쇄 항체(예를 들어, scFv), 단일 도메인 항체(예를 들어, VHH), 2가 항체 또는 이의 단편, 또는 낙타류 항체를 포함하나 이에 한정되지는 않는다.
용어 "항원"은 면역 반응을 유도하는 분자를 지칭한다. 이러한 면역 반응은 특정 면역 세포의 항체 생성 또는 활성화, 또는 이 둘을 모두 포함한다. 당업자는 본질적으로 모든 단백질 및 펩티드를 포함하는 임의의 매크로 분자를 항원으로서 사용할 수 있음을 이해할 것이다. 또한, 항원은 재조합 또는 게놈 DNA에서 유도할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "에피토프"는 항체 분자와 특이적으로 상호작용하는 항원(예를 들어, CLDN18.2)의 모이어티를 지칭한다.
기준 항체로서 "동일하거나 중복되는 에피토프에 결합하는 항체"는 경쟁 분석에서 기준 항체의 항원에 대한 결합의 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 이상을 차단하는 항체를 지칭한다. 역으로, 기준 항체는 경쟁 분석에서 항체와 이의 항원의 결합의 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 이상을 차단한다.
항원 결합에서 기준 항체와 경합하는 항체란, 경합 분석에서 기준 항체와 항원 결합의 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 이상을 차단하는 항체를 지칭한다. 역으로, 기준 항체는 경쟁 분석에서 항체와 이의 항원의 결합의 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 이상을 차단한다. 항체가 다른 항체와 경쟁하는지 여부를 결정하기 위해 다양한 유형의 경쟁적 결합 분석, 예컨대 직접 또는 간접 고상 방사면역분석(RIA), 직접 또는 간접 고상 효소 면역분석(EIA) 및 샌드위치 경쟁 분석이 사용될 수 있다.
기준 항체와 이의 항원의 결합을 억제(예를 들어, 경합적 억제)하는 항체는 기준 항체와 이의 항원의 결합의 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 이상을 억제하는 항체를 지칭한다. 역으로, 기준 항체는 항체와 이의 항원의 결합의 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95% 이상을 억제한다. 항체와 이의 항원의 결합은 친화성(예를 들어, 평형 해리상수)에 의해 측정할 수 있다. 친화성 측정법은 당업계에 공지되어 있다.
기준 항체와 동일하거나 유사한 결합 친화성 및/또는 특이성을 나타내는 항체는 기준 항체의 결합 친화성 또는 특이성의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 이상을 가질 수 있는 항체를 지칭한다. 이는 당업계에서 공지된 결합 친화성 및/또는 특이성 측정법 중 임의의 방법으로 측정할 수 있다.
"상보성 결정 영역(complementarity determining region)" 또는 "CDR 영역" 또는 "CDR"은 항체 가변 영역 내의 서열에서 가변성이 매우 높은 부분으로서, 구조적으로 정의된 루프("초가변 루프"; hypervariable loop)를 형성하고/향성하거나 항원 접촉 잔기("항원 접촉부위"; antigen contact site)를 포함한다. CDR은 주로 항원 에피토프에 대한 결합을 담당한다. 중쇄 및 경쇄의 CDR은 일반적으로 CDR1, CDR2, CDR3으로 지칭하고, N-말단으로부터 순차적으로 넘버링된다. 항체의 중쇄 가변 도메인에 위치한 CDR은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3으로 지칭하고, 반면에 항체의 경쇄 가변 도메인에 위치한 CDR은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3으로 지칭한다. 주어진 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열에서 각 CDR의 정확한 아미노산 서열의 경계는, 예를 들어, 항체의 3차원 구조와 CDR 고리의 배치에 기초한 Chothia(Chothia 등 (1989) Nature 342: 877-883; Al-Lazikani et al., "Standard conformations for the canonical structures of immunoglobulins", Journal of Molecular Biology, 273, 927-948 (1997)), 항체 서열 가변성에 기초한 Kabat(Kabat 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 제4판, U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)), AbM(University of Bath), Contact(University College London), International ImMunoGeneTics database(IMGT) (World Wide Web에 있는 imgt.cines.fr/), 다수의 결정 구조를 사용하는 친화성 전파 클러스터링에 기초한 North CDR definition을 포함하는 공지된 항체 CDR 할당 시스템(CDR assignment system) 중 하나 또는 이들의 조합을 사용하여 결정할 수 있다.
예를 들어, 서로 다른 CDR 측정 방식에 따르면, 각 CDR의 잔기는 다음과 같다.
Figure pct00001
CDR은 또한 기준 CDR 서열(예를 들어, 본 발명의 예시적인 CDR 중 임의의 것)과 Kabat 넘버링 위치가 동일한지의 여부에 기초하여 결정할 수 있다.
달리 명시되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 용어 "CDR" 또는 "CDR 서열"은 위에 기재된 임의의 방식에 의해 결정된 CDR 서열을 망라한다.
달리 명시되지 않는 한, 항체 가변 영역(중쇄 가변 영역 잔기 및 경쇄 가변 영역 잔기를 포함)의 잔기 위치는 Kabat 넘버링 시스템에 따라 넘버링된다(Kabat 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 제5판, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)).
한 실시양태에서, 본 발명의 항체의 중쇄 가변 영역 CDR은 하기 규칙에 따라 결정된다.
VH CDR1은 AbM 규칙에 따라 결정되고 VH CDR 2 및 3은 모두 Kabat 규칙에 따라 결정된다.
한 실시양태에서, 본 발명의 항체의 경쇄 가변 영역 CDR은 Kabat 규칙에 따라 결정된다.
한 실시양태에서, 본 발명의 항체의 중쇄 가변 영역 CDR은 하기 규칙에 따라 결정된다: VH CDR1은 AbM 규칙에 따라 결정되고, VH CDR 2 및 3은 모두 Kabat 규칙에 따라 결정되고; 경쇄 가변 영역 CDR은 Kabat 규칙에 따라 결정된다.
상이한 할당 시스템에 의해 결정된 항체의 가변 영역의 CDR 경계도 상이할 수 있다는 것을 주의해야 한다. 다시 말해, 상이한 할당 시스템에 의해 정의한 동일한 항체의 가변 영역의 CDR 서열은 상이하다. 따라서, 본 발명에서 정의된 특정 CDR 서열을 갖는 항체를 정의할 때, 항체의 범위는 또한 가변 영역 서열이 특이적 CDR 서열을 포함하지만 적용된 상이한 방식(예: 상이한 할당 시스템 규칙 또는 이들의 조합)으로 인해 본 발명에 의해 정의된 특이적 CDR 경계와 상이한 청구된 CDR 경계를 갖는 항체를 망라한다.
상이한 특이성(즉, 상이한 항원에 대한 상이한 결합 부위)을 갖는 항체는 (동일한 할당 시스템 하에서) 상이한 CDR을 갖는다. 그러나, CDR이 항체에 따라 다르지만, CDR 내 제한된 수의 아미노산의 위치만이 항원 결합과 직접 관련된다. 최소 중첩 영역은 Kabat, Chothia, AbM, Contact, 및 North 방법 중 적어도 2개를 사용하여 결정할 수 있으며, 이에 따라 항원 결합을 위한 "최소 결합 유닛"이 제공된다. 최소 결합 유닛은 CDR의 하위 부분일 수 있다. 당업자가 명백하게 이해할 바와 같이, 나머지 CDR 서열의 잔기는 항체의 구조 및 단백질 접힘에 의해 결정할 수 있다. 따라서, 본 명세서에 제시된 임의의 CDR 변이체 역시 고려 대상이다. 예를 들어, 한 CDR 변이체에서 최소 결합 유닛의 아미노산 잔기는 변하지 않지만, Kabat 또는 Chothia에 의해 정의한 나머지 CDR 잔기는 보존적으로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "Fc 영역"은 면역글로불린 중쇄의 CH2 및 CH3의 불변 영역을 정의하며, 천연 서열의 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한다. Fc 영역은 면역 세포 표면의 상이한 Fc 수용체에 결합하여 CDC\ADCC\ADCP 효과기 기능을 유발할 수 있다. 이러한 이펙터 기능은 일반적으로 Fc 영역이 결합 도메인(예를 들어, 항체 가변 도메인)과 연관되어야 하며, 본 명세서에 개시된 분석과 같은 다양한 분석을 사용하여 평가할 수 있다.
"IgG 형태의 항체"는 IgG 형태에 속하는 항체의 중쇄 불변 영역을 지칭한다. 동일한 유형의 항체의 중쇄 불변 영역은 동일하고, 상이한 유형의 항체의 중쇄 불변 영역은 상이하다. 예를 들어, IgG4 형태의 항체는 IgG4로부터 유래된 항체의 중쇄 불변 영역을 지칭하거나, 또는 IgG1 형태의 항체는 IgG1으로부터 유래된 항체의 중쇄 불변 영역을 지칭한다.
"인간화" 항체는 비인간 CDR로부터의 아미노산 잔기 및 인간 FR로부터의 아미노산 잔기를 포함하는 항체를 가리킨다. 일부 실시양태에서, 인간화 항체는 적어도 1개, 일반적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 전부 포함하며, CDR 전부, 또는 실질적으로 전부가 비인간 항체의 CDR에 상응하고, FR 전부 또는 실질적으로 전부가 인간 항체의 FR에 지칭한다. 인간화 항체는 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 선택적으로 포함할 수 있다. 항체(예컨대, 비인간 항체)의 "인간화 형태"는 이미 인간화된 항체를 지칭한다.
"인간 항체", "완전 인간 항체" 및 "완전 인간화 항체"는 서로 교환하여 사용될 수 있고, 인간 또는 인간 세포에 의해 생성되거나 인간 항체 라이브러리 또는 다른 인간 항체 인코딩 서열을 이용하는 비인간 공급원으로부터 유래된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 항체를 지칭한다. 인간 항체의 해당 정의에 따라 비인간 항원 결합 잔기를 포함하는 인간화 항체는 명시적으로 배제된다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "결합" 또는 "특이적 결합"은 결합 효과가 항체에 대해서 선택적이고 원하지 않거나 특이적이지 않은 상호작용과 구별할 수 있음을 의미한다. 특정한 항원에 결합하는 항원 결합 부위의 능력은 효소결합면역흡착검사(ELISA) 또는 당업계에서 공지된 일반적 결합 분석, 예컨대, 방사선면역분석(RIA), 생물층 간섭계, MSD 분석 또는 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 결정될 수 있다.
"면역접합체"는 세포독성제 또는 표지를 포함하되 이에 한정되지 않는 그 외 물질 하나 이상에 접합한 항체이다.
본 명세서에 사용된 용어 "치료제"는 화학요법제, 사이토카인, 세포독성제, 추가 항체, 소분자 약물 또는 면역억제제(예를 들어, 면역억제적 제제)를 포함하는 종양, 예를 들어 암을 예방 또는 치료하는 데 효과적인 임의의 물질을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "세포독성제"는 세포의 기능을 억제 또는 예방하고/거나 세포 사멸 또는 파괴를 야기하는 물질을 지칭한다.
"화학요법제"는 면역계 질환의 치료에 유용한 화합물을 포함한다.
용어 "소분자 약물"은 생물학적 과정을 조절할 수 있는 저분자량 유기화합물을 지칭한다. "소분자"는 분자량이 10kD 미만, 일반적으로 2kD 미만, 바람직하게는 1kD 미만인 분자로 정의한다. 소분자는 무기분자, 유기분자, 무기성분을 포함하는 유기분자, 방사성 원자를 포함하는 분자, 합성 분자, 펩티드 모방체 및 항체 모방체를 포함하되 이에 한정되지는 않는다. 치료제로서, 대분자에 비해 소분자는 세포에 보다 잘 침투하고 분해에 덜 민감하며 면역 반응을 유도할 가능성이 더 낮다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "면역조절제"는 면역 반응을 억제 또는 조절하는 천연 또는 합성 활성제 또는 약물을 지칭한다. 면역 반응은 체액 반응 또는 세포 반응일 수 있다. 면역조절제는 면역억제제를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "면역억제제", "면역억제약물" 또는 "면역억제물질"은 면역계의 활동을 억제 또는 예방하기 위해 면역억제요법에서 사용하는 치료제를 지칭한다.
용어 "유효량"은 단일 또는 다중 용량으로 환자에게 투여된 후 치료 또는 예방을 필요로 하는 환자에서 예상되는 효과를 생성하는 본 발명의 항체, 단편, 접합체, 조성물 또는 조합의 양 또는 용량을 지칭한다.
"치료학적으로 유효량"은 원하는 기간 동안 필요한 투여량으로 원하는 치료 결과를 달성하기에 효과적인 용량을 지칭한다. 치료학적으로 유효량은 또한 항체 또는 항체 단편, 또는 이의 접합체 또는 조성물 또는 조합물의 독성 또는 원하지 않은 효과가 유익한 치료 효과보다 못하는 양을 말한다. "치료학적으로 유효량"은 측정가능한 파라미터(예를 들어, 종양 부피)를 치료되지 않은 대상체에 비해 바람직하게는 적어도 약 20%, 보다 바람직하게는 적어도 약 40%, 보다 더 바람직하게는 적어도 약 50%, 60% 또는 70%를 억제한다.
"예방학적으로 유효량"은 원하는 기간 동안 필요한 투여량으로 원하는 예방 효과를 달성하기에 효과적인 용량을 지칭한다. 일반적으로 예방학적인 양은 질환의 이전 또는 초기 단계에 대상체에게 투여되기 때문에, 예방학적으로 유효량은 치료학적으로 유효량보다 적을 것이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "숙주 세포", "숙주 세포주" 및 "숙주 세포 배양물"은 서로 교환하여 사용될 수 있으며, 외인성 핵산이 도입된 세포를 지칭하며 이러한 세포의 후대를 포함한다. 숙주 세포는 "형질전환체" 및 "형질전환 세포"를 포함하며, 이는 계대 횟수와 상관없이 1차 형질전환 세포 및 이로부터 유래한 후대를 포함한다. 자손은 핵산 함량이 모세포와 완전히 동일하지 않을 수 있으며, 돌연변이를 포함할 수 있다. 본 명세서는 최초로 형질전환한 세포로부터 선별 또는 선택한 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 가지는 돌연변이 후대를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "표지"는 폴리뉴클레오티드 프로브 또는 항체와 같은 작용제에 직접 또는 간접적으로 접합 또는 축합되어 접합 또는 축합된 작용제의 검출을 용이하게 하는 화합물 또는 조성물을 지칭한다. 표지 자체가 검출할 수 있거나(예를 들어, 방사성 동위원소 표지 또는 형광 표지), 효소 표지의 경우 검출 가능한 기질 화합물 또는 조성물의 화학적 변화를 촉진할 수 있다. 상기 용어는 검출 가능한 물질을 프로브 또는 항체에 결합(즉 물리적 연결)시킴으로써 프로브 또는 항체를 직접 표지하는 것과, 직접 표지된 다른 시약과 반응시킴으로써 프로브 또는 항체를 간접적으로 표지하는 것을 망라한다.
"개체" 또는 "대상체"는 포유류를 포함한다. 포유류는 가축(예를 들어, 소, 염소, 고양이, 개, 말), 영장류(예를 들어, 인간과 원숭이와 같은 인간 이외의 영장류), 토끼류 및 설치류(예를 들어, 마우스, 래트)를 포함하되 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 개체 또는 대상체는 인간이다.
"단리"된 항체는 해당 항체의 천연 환경의 성분으로부터 분리된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 예를 들어 전기영동(예를 들어, SDS-PAGE, 등전 집속(IEF) 및 모세관 전기영동) 또는 크로마토그래피(예를 들어, 이온 교환 또는 역상 HPLC)에 의해 결정된 바와 같이, 95% 또는 99% 초과의 순도로 정제된다.
"항-CLDN18.2 항체 또는 이의 단편을 인코딩하는 단리된 핵산"은 단일 벡터 또는 개별 벡터 내의 핵산 분자, 및 숙주 세포 내의 하나 이상의 위치에 존재하는 핵산 분자를 포함하는 항체 중쇄 또는 경쇄(또는 이의 단편, 예를 들어, 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역)를 인코딩하는 하나 이상의 상기 핵산 분자를 지칭한다.
서열 간 서열 동일성에 대한 계산은 하기와 같이 수행된다.
2개의 아미노산 서열 또는 2개의 핵산 서열의 동일성 백분율을 결정하기 위해, 최적의 비교를 목적으로 해당 서열을 정렬한다(예를 들어, 최적의 정렬을 위해 갭을 제1 및 제2 아미노산 서열 또는 핵산 서열 중 하나 또는 양자 모두에 도입하거나, 비상동성 서열을 비교 시 폐기할 수 있음). 한 바람직한 실시양태에서, 비교를 목적으로, 정렬한 기준 서열의 길이는 기준 서열 길이의 적어도 30%, 바람직하게는 적어도 40%, 보다 바람직하게는 적어도 50% 또는 60%, 보다 더 바람직하게는 적어도 70%, 80%, 90% 또는 100%이다. 이어서 상응하는 아미노산 위치 또는 뉴클레오티드 위치에서의 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드를 비교한다. 제1 서열 내의 위치가 제2 서열 내의 상응하는 위치에 있는 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드에 점유될 경우, 해당 위치에 있는 분자는 동일하다.
수학 알고리즘을 사용하여 두 서열을 비교하고 서열 간의 동일성 백분율을 계산할 수 있다. 한 바람직한 실시양태에서, 2개의 아미노산 서열 간의 동일성 백분율은 Blossom 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스 및 16, 14, 12, 10, 8, 6 또는 4의 갭 가중치 및 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 길이 가중치를 사용하여 GCG 소프트웨어 패키지의 GAP 프로그램에 통합된 Needlema and Wunsch 알고리즘((1970) J. Mol. Biol., 48:444-453; http://www.gcg.com에서 사용 가능)으로 결정된다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 2개의 뉴클레오티드산 서열 간의 동일성 백분율은 NWSgapdna.CMP 매트릭스 및 40, 50, 60, 70 또는 80의 갭 가중치 및 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 길이 가중치를 사용하여 GCG 소프트웨어 패키지의 GAP 프로그램(http://www.gcg.com에서 사용 가능)으로 결정한다. 특히 바람직한 매개변수 세트(및 달리 명시되지 않는 한, 사용해야 하는 매개변수 세트)는 갭 페널티 12, 갭 연장 페널티 4, 프레임시프트 갭 페널티 5를 가지는 Blossom 62 스코어링 매트릭스이다. 또한, 2개의 아미노산 서열 또는 뉴클레오티드 서열 간의 동일성 백분율은 ALIGN 프로그램(버전 2.0)에 통합된 E. Meyers 및 W. Miller 알고리즘((1989) CABIOS, 4:11-17)을 사용하여 PAM120 가중잉여표, 갭 길이 페널티 12, 갭 페널티 4로 결정한다. 추가적으로 또는 대안적으로, 본 명세서에 기재된 핵산 서열 및 단백질 서열은 예를 들어 다른 패밀리 구성원 서열 또는 관련 서열을 확인하기 위해 공개 데이터베이스에서 검색할 수 있도록 "질의 서열"로서 추가로 사용할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "엄격도 조건(예컨대 낮은 엄격도, 중간 엄격도, 높은 엄격도 또는 극도의 엄격도) 하에서의 혼성화"는 혼성화 및 세척 조건을 설명한다. 혼성화 반응을 수행하기 위한 지시 사항은 본 명세서에 참조로 포함된 Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6에서 발견할 수 있다. 인용문헌은 수성 및 비수성 방법을 기재하고 있으며, 기타 방법을 사용할 수도 있다. 본 명세서에 언급된 바람직한 혼성화 조건은 하기와 같다: 1) 낮은 엄격성 혼성화 조건은 약 45°C의 6X 염화나트륨/시트르산나트륨(SSC)에 있고, 이어서 적어도 50°C의 0.2X SSC, 0.1% SDS에서 2회 세척하고(낮은 엄격성 조건의 경우, 세척 온도는 55°C로 증가될 수 있음); 2) 중간 엄격성 혼성화 조건은 약 45°C의 6X SSC에 있고, 이어서 약 60°C의 0.2X SSC, 0.1% SDS에서 1회 이상 세척하고; 3) 높은 엄격성 혼성화 조건은 약 45°C의 6X SSC에 있고, 이어서 65°C의 0.2X SSC, 0.1% SDS에서 1회 이상 세척되며; 바람직하게는 4) 극히 엄격성 혼성화 조건은 65°C의 0.5M 인산나트륨, 7% SDS에 있고, 이어서 65°C의 0.2X SSC, 0.1% SDS에서 1회 이상의 세척한다. 극히 엄격한 조건 (4)는 바람직한 조건이며, 달리 명시되지 않는 한 사용되어야 하는 조건이다.
"항종양 효과"는 다양한 수단으로 입증할 수 있는 생물학적 효과를 지칭하며, 예를 들어 종양 부피 감소, 종양 세포 수 감소, 종양 세포 증식 감소 또는 종양 세포 생존력 감소를 포함하되 이에 한정되지는 않는다.
용어 "종양" 및 "암"은 서로 교환해서 사용할 수 있으며 고체 및 액체의 종양을 망라한다.
용어 "암" 및 "암성"은 전형적으로 비조절 세포 성장을 특징으로 하는 포유동물에서의 생리학적 질환을 지칭 또는 기재한다. 어떤 실시양태에서는, 본 발명의 항체를 사용한 치료에 적합한 암은 이러한 암의 전이성 형태를 포함하는 위암 또는 췌장암을 포함한다.
용어 "종양"은 악성 또는 양성 여부에 상관없이 모든 신생물 세포 성장 및 증식, 모든 전암성 및 암성 세포 및 조직을 지칭한다. 본 명세서에서 언급될 때 용어 "암", "암성" 및 "종양"을 상호배타적으로 사용하지 않는다.
용어 "약제학적 보충물질"은 활성 물질과 함께 투여하는 희석제, 보조제(예를 들어, 프로인트 보조제(완전 및 불완전)), 부형제, 담체, 안정제 등을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "약제학적 조성물"은 안에 함유한 활성 성분의 생물 활성이 효과적으로 발휘되게 하는 형태로 존재하고, 조성물이 투여되는 대상체에 허용되지 않는 독성을 가지는 추가 성분을 함유하지 않는 조성물을 지칭한다.
용어 "약제학적 조합"은 키트 및 약제학적 조성물을 포함하나 이에 제한되지 않는 비고정 조합 생성물 또는 고정 조합 생성물을 지칭한다. 용어 "비고정 조합"은 활성 성분이(예를 들어, (i) 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 단편, 및 (ii) 추가 치료제) 환자에게 동시에 또는 순차적으로(특정 시간 제한 없이 또는 동일하거나 상이한 시간 간격으로) 별도의 실체로서 투여되는 것을 의미하고, 여기서 이러한 투여는 환자에게 2종 이상의 예방적 또는 치료적 유효 활성제를 제공한다. 일부 실시양태에서, 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 단편 및 약제학적 조합에 사용되는 추가 치료제는 단독으로 사용될 때 이들의 수준을 초과하지 않는 수준으로 투여된다. 용어 "고정 조합"은 2종 이상의 활성제가 단일 실체의 형태로 환자에게 동시에 투여되는 것을 의미한다. 2종 이상의 활성제의 용량 및/또는 시간 간격은 바람직하게는 성분의 조합 사용이 어느 한 성분의 단독 사용에 의해 달성되는 것보다 더 큰 질환 또는 장애에 대한 치료 효과를 초래할 수 있도록 선택된다. 성분은 각각 별도의 제제 형태를 취할 수 있고 이러한 별도의 제제 형태는 동일하거나 상이할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "조합 요법"은 본 명세서에 기재된 바와 같은 질환을 치료하기 위해 2종 이상의 치료제 또는 치료 양식(예를 들어, 방사선 요법 또는 수술)의 투여/적용을 지칭한다. 이러한 투여는 이들 치료제를, 기본상 동시에 투여하는 방식, 예를 들어 고정 비율의 활성 성분을 함유하는 단회 캡슐의 형태로 같이 투여하는 것을 포함한다. 선택적으로, 이러한 투여는 여러 개 혹은 별개의 용기(예컨대, 정제, 캡슐, 분말 및 액체)에서의 활성 성분을 같이 투여하는 것을 포함한다. 분말 및/또는 액체는 투여 전에 재구성하거나 원하는 용량으로 희석될 수 있다. 또한 이러한 투여는 또한 대략 동일한 시간에 또는 상이한 시간에 순차적 방식으로 각 유형의 치료제를 사용하는 것을 포함한다. 모든 경우에 치료 요법은 본 명세서에 기재된 장애 또는 증상의 치료에 있어서 약제학적 조합의 유용한 효과를 제공할 것이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "치료"(또는 "치료하다" 또는 "치료하는")는 기존의 증상, 장애, 병태 또는 질환의 진행 또는 중증도를 지연, 저해, 저지, 완화, 중단, 감소, 역전시키는 것을 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "예방"(또는 "예방하다" 또는 "예방하는")은 질환 또는 장애, 혹은 특정 질환 또는 장애의 증상의 발전 또는 진행을 억제하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 가족력에 암이 있는 대상체는 예방 요법의 후보자이다. 일반적으로 암의 경우, 용어 "예방"은 암의 징후 또는 증상 개시 전에, 특히 암의 위험이 있는 대상체에게 약물을 투여하는 것을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "벡터"는 연결되어 있는 기타 핵산을 증식시킬 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 상기 용어는 자가 복제 핵산 구조로서 작용하는 벡터 및 숙주 세포에 도입되었을 때 상기 숙주 세포의 게놈에 결합하는 벡터를 포함한다. 일부 벡터는 조작 가능하게 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본 명세서에서 "발현 벡터"로 칭한다.
"대상체/환자/개체 샘플"은 환자 또는 대상체로부터 얻은 세포 또는 유체를 지칭한다. 조직 또는 세포 샘플의 공급원은, 예를 들어 신선, 동결 및/또는 보존 장기 또는 조직 샘플 또는 생검 샘플 또는 천자 샘플로부터의 고체 조직; 혈액 또는 임의의 혈액 성분; 뇌척수액, 양수, 복막액, 또는 간질액과 같은 유체; 임신 또는 발달 기간 중 임의의 시점에서 대상체로부터 채취한 세포일 수 있다. 조직 샘플은 조직과 자연적으로 혼합되지 않는 화합물, 예컨대 보존제, 항응고제, 완충제, 고정제, 영양소 및 항생제를 포함할 수 있다.
II. 항체
일부 실시양태에서, 본 발명의 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CLDN18.2(예를 들어, 인간 CLDN18.2)에 높은 친화성으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항-CLDN18.2 항체는 CLDN18.2(예를 들어, 인간 CLDN18.2)에 특이적으로 결합하지만, CLDN18.1(예를 들어, 인간 CLDN18.1)에는 결합하지 않는다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 공지된 CLDN18.2 항체, 예를 들어 졸베툭시맙(Zmab으로 약칭됨) 항체보다 인간 CLDN18.2에 대해 더 높은 결합 친화성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항체의 친화성은 생물층 간섭계 또는 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항-CLDN18.2 항체는 약 15nM 미만, 바람직하게는 약 10nM, 9.5nM, 9nM, 8.5nM, 8nM, 7.5nM, 7nM, 6.5nM, 6nM, 5.5nM, 5nM, 4.5nM, 4nM, 3.5nM 또는 3nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간 CLDN18.2에 결합하고, 일부 실시양태에서는, KD는 앞서 언급한 값(종점 포함) 사이에 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 세포 표면 상의 CLDN18.2에 결합한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 세포 표면 상의 CLDN18.1에 결합하지 않는다. 일부 실시양태에서, CLDN18.2는 세포 표면에서 발현되거나 과발현된다. 일부 실시양태에서, 세포는 CLDN18.2를 발현하는 CHO 세포 또는 293 세포, 예를 들어 CHO-S 세포 또는 HEK293 세포이다. 일부 실시양태에서, 세포는 CLDN18.2를 발현하는 암세포, 예를 들어 CLDN18.2를 자연적으로 발현하거나 CLDN18.2를 발현하도록 인공적으로 형질감염되거나 CLDN18.2의 증가된 발현 수준을 갖도록 인공적으로 형질감염된 세포, 예를 들어, CLDN18.2를 발현하는 위암 세포주 또는 췌장암 세포주, 예컨대 NUGC-4, KATO III 및 DAN-G 세포주, 예를 들어 CLDN18.2를 과발현하는 KATO III 및 DAN-G 세포주이다.
일부 실시양태에서, 결합은 유세포 분석법에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체는 약 15nM, 10nM, 9nM, 8nM, 7nM, 6nM 또는 5.5nM 이하의 EC50으로 CHO 세포 상에서 과발현된 CLDN18.2에 결합한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체는 약 4nM, 3.7nM, 3.5nM, 3nM, 2.5nM, 2nM, 1.5nM, 1nM, 0.9nM, 0.8nM, 0.7nM 또는 0.6 이하의 EC50으로 CLDN18.2를 발현하는 암세포, 예를 들어, CLDN18.2를 발현하는 위암 세포주 또는 췌장암 세포주, 예컨대 NUGC-4, KATO III 및 DAN-G 세포주, 예를 들어 CLDN18.2를 과발현하는 KATO III 및 DAN-G 세포주에 결합한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체는 공지된 항체, 예를 들어 Zmab의 CLDN18.2를 발현하는 세포와 결합하는 EC50와 비교할 만하거나 그보다 작은 EC50, 또는 공지된 항체 Zmab의 Ec50의 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20% 또는 15% 미만을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 ADCC 활성 또는 CDC 활성, 예를 들어 공지된 항체(예를 들어, Zmab)의 것과 비교할 만하거나 이보다 더 높은 ADCC 활성 또는 CDC 활성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 종양 세포, 예를 들어 CLDN18.2를 발현하는 종양 세포를 억제할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 암을 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% 또는 70% 이상의 종양 성장 억제로 종양 성장을 효과적으로 억제할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역(HCDR): HCDR1, HCDR2 및 HCDR3으로부터의 3개의 상보성 결정 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 경쇄 가변 영역(LCDR): LCDR1, LCDR2 및 LCDR3으로부터 3개의 상보성 결정 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역(HCDR)으로부터의 3개의 상보성 결정 영역 및 경쇄 가변 영역(LCDR)으로부터의 3개의 상보성 결정 영역을 포함한다.
일부 측면에서, 본 발명의 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역(VH)을 포함한다. 일부 측면에서, 본 발명의 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 측면에서, 본 발명의 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역(VH) 및/또는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 중쇄 가변 영역으로부터의 3개의 상보성 결정 영역(CDR): HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 경쇄 가변 영역으로부터의 3개의 상보성 결정 영역(CDR): LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 항체 중쇄 불변 영역 HC를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 항체 경쇄 불변 영역 LC를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 불변 영역 HC 및 경쇄 불변 영역 LC를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 중쇄 가변 영역은
(i) 서열 번호 4, 15, 21, 26, 27, 36, 37, 45, 48, 53, 56, 61, 66, 72, 73, 80 및 85로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고; 또는
(ii) 서열 번호 4, 15, 21, 26, 27, 36, 37, 45, 48, 53, 56, 61, 66, 72, 73, 80 및 85로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고; 또는
(iii) 서열 번호 4, 15, 21, 26, 27, 36, 37, 45, 48, 53, 56, 61, 66, 72, 73, 80 및 85로부터 선택된 아미노산 서열과 비교하여 하나 이상(바람직하게는 10개 이하, 보다 바람직하게는 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하)의 아미노산 변화(바람직하게는 아미노산 치환, 보다 바람직하게는 아미노산 보존적 치환)를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 여기서 바람직하게는, 상기 아미노산 변화는 CDR에서 발생하지 않는다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 경쇄 가변 영역은
(i) 서열 번호 9, 19, 22, 31, 32, 40, 41, 47, 49, 55, 57, 65, 68, 75, 76, 83 및 86으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고; 또는
(ii) 서열 번호 9, 19, 22, 31, 32, 40, 41, 47, 49, 55, 57, 65, 68, 75, 76, 83 및 86으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고; 또는
(iii) 서열 번호 9, 19, 22, 31, 32, 40, 41, 47, 49, 55, 57, 65, 68, 75, 76, 83 및 86으로부터 선택된 아미노산 서열과 비교하여 하나 이상(바람직하게는 10 이하, 보다 바람직하게는 5, 4, 3, 2 또는 1 이하)의 아미노산 변화(바람직하게는 아미노산 치환, 보다 바람직하게는 아미노산 보존적 치환)를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 여기서 바람직하게는, 상기 아미노산 변화는 CDR에서 발생하지 않는다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 중쇄 가변 영역(HCDR)으로부터의 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3은
(i) 서열 번호 4에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3,
(ii) 서열 번호 15 또는 21에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3,
(iii) 서열 번호 26 또는 27에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3,
(iv) 서열 번호 36 또는 37에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3,
(v) 서열 번호 45 또는 48에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3,
(vi) 서열 번호 53 또는 56에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3,
(vii) 서열 번호 61 또는 66에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3,
(viii) 서열 번호 72 또는 73에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3,
(ix) 서열 번호 80 또는 85에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및
(x) (i)~(ix) 중 어느 하나의 서열에 비해, 3개의 HCDR에서 총계 적어도 1개, 아울러 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하의 아미노산 변화(바람직하게는 아미노산 치환, 보다 바람직하게는 보존적 치환)를 포함하는 서열로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 경쇄 가변 영역(LCDR)으로부터의 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은
(i) 서열번호 9에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3,
(ii) 서열번호 19 또는 22에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3,
(iii) 서열번호 31 또는 32에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3,
(iv) 서열번호 40 또는 41에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3,
(v) 서열번호 47 또는 49에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3,
(vi) 서열번호 55 또는 57에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3,
(vii) 서열번호 65 또는 68에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3,
(viii) 서열번호 75 또는 76에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3,
(ix) 서열번호 83 또는 86에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및
(x) (i)~(ix) 중 어느 하나의 서열에 비해, 3개의 LCDR에서 총계 적어도 1개, 아울러 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하의 아미노산 변화(바람직하게는 아미노산 치환, 보다 바람직하게는 보존적 치환)를 포함하는 서열로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 서열번호 1, 12, 23, 33, 42, 50, 58, 69 또는 77에 제시된 아미노산 서열과 비교하여, HCDR1은 서열번호 1, 12, 23, 33, 42, 50, 58, 69 또는 77에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 또는 HCDR1은 1개, 2개 또는 3개의 변화(바람직하게는 아미노산 치환, 보다 바람직하게는 보존적 치환)를 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 서열번호 2, 13, 20, 24, 34, 43, 51, 59, 70, 78, 84, 93 또는 94에 제시된 아미노산 서열과 비교하여, HCDR2는 서열번호 2, 13, 20, 24, 34, 43, 51, 59, 70, 78, 84, 93 또는 94에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 또는 HCDR2는 1개, 2개 또는 3개의 변화(바람직하게는 아미노산 치환, 보다 바람직하게는 보존적 치환)를 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 여기서
서열번호 93은 YIAPFXGDSRYNQKFKG이고, 여기서 X는 임의의 아미노산, 바람직하게는 N 또는 Q 또는 이의 보존적 아미노산 치환이고; 또는 서열번호 94는 VIWGDXSTNYHSVLIS이고, 여기서 X는 임의의 아미노산, 바람직하게는 G 또는 V 또는 이의 보존적 아미노산 치환이다.
일부 실시양태에서, 서열번호 3. 14, 25, 35, 44, 52, 60, 71 또는 79에 제시된 아미노산 서열과 비교하여, HCDR3은 서열번호 3, 14, 25, 35, 44, 52, 60, 71 또는 79에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 또는 HCDR3은 1개, 2개 또는 3개의 변화(바람직하게는 아미노산 치환, 보다 바람직하게는 보존적 치환)를 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 서열번호 6, 16, 28, 38, 62, 67 또는 11에 제시된 아미노산 서열과 비교하여, LCDR1은 서열번호 6, 16, 28, 38, 62, 67 또는 11에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 또는 LCDR1은 1개, 2개 또는 3개의 변화(바람직하게는 아미노산 치환, 보다 바람직하게는 보존적 치환)를 갖는 아미노산 서열을 포함하며;
여기서 서열번호 11은 KSSQSLLXGGNQKNYLT이고, 여기서 X는 임의의 아미노산, 바람직하게는 N 또는 Q 또는 이의 보존적 아미노산 치환이다.
일부 실시양태에서, 서열번호 7, 17, 29, 63 또는 81에 제시된 아미노산 서열과 비교하여, LCDR2는 서열번호 7, 17, 29, 63 또는 81에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 또는 LCDR2는 1개, 2개 또는 3개의 변화(바람직하게는 아미노산 치환, 보다 바람직하게는 보존적 치환)를 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 서열번호 8, 18, 30, 39, 46, 54, 64, 74 또는 82에 제시된 아미노산 서열과 비교하여, LCDR3은 서열번호 8, 18, 30, 39, 46, 54, 64, 74 또는 82에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 또는 LCDR3은 1개, 2개 또는 3개의 변화(바람직하게는 아미노산 치환, 보다 바람직하게는 보존적 치환)를 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 중쇄 불변 영역 HC는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4의 중쇄 불변 영역, 바람직하게는 IgG1의 중쇄 불변 영역이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 경쇄 불변 영역 LC는 람다 또는 카파 경쇄 불변 영역, 바람직하게는 카파 경쇄 불변 영역이다.
일부 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 항체 중쇄 불변 영역 HC는
(i) 서열번호 5로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고;
(ii) 서열번호 5로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고; 또는
(iii) 서열번호 5로 부터 선택된 아미노산 서열과 비교하여 1개 이상(바람직하게는 20개 또는 10개 이하, 보다 바람직하게는 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하)의 아미노산 변화(바람직하게는 아미노산 치환, 보다 바람직하게는 보존적 치환)를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시양태에서, 아미노산 변화는 Fc 영역에서 발생한다. 한 실시양태에서, Fc 영역의 아미노산 변화는 항체의 CDC 또는 ADCC 활성을 증가시킨다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 경쇄 불변 영역 LC는
(i) 서열번호 10으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고;
(ii) 서열번호 10으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고; 또는
(iii) 서열번호 10으로 부터 선택된 아미노산 서열과 비교하여 1개 이상(바람직하게는 20개 또는 10개 이하, 보다 바람직하게는 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하)의 아미노산 변화(바람직하게는 아미노산 치환, 보다 바람직하게는 보존적 치환)를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 일부 특정 실시양태에서, 본 발명의 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기를 포함한다.
(i) 서열번호 4에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 9에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
(ii) 서열번호 15 또는 21에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 19 또는 22에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
(iii) 서열번호 26 또는 27에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 31 또는 32에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
(iv) 서열번호 36 또는 37에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 40 또는 41에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
(v) 서열번호 45 또는 48에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 47 또는 49에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
(vi) 서열번호 53 또는 56에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 55 또는 57에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
(vii) 서열번호 61 또는 66에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 65 또는 68에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
(viii) 서열번호 72 또는 73에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 75 또는 76에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
(ix) 서열번호 80 또는 85에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 83 또는 86에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3.
본 발명의 일부 특정 실시양태에서, 본 발명의 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기를 포함한다.
(i) 서열번호 1, 2 및 3 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 6, 7 및 8 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
(ii) 서열번호 12, 13 및 14 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 16, 17 및 18 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
(iii) 서열번호 12, 20 및 14 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 16, 17 및 18 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
(iv) 서열번호 12, 93 및 14 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 16, 17 및 18 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
(v) 서열번호 23, 24 및 25 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 28, 29 및 30 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
(vi) 서열번호 33, 34 및 35 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 38, 17 및 39 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
(vii) 서열번호 42, 43 및 44 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 38, 17 및 46 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
(viii) 서열번호 50, 51 및 52 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 28, 17 및 54 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
(ix) 서열번호 58, 59 및 60 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 62, 63 및 64 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
(x) 서열번호 58, 59 및 60 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 67, 63 및 64 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
(xi) 서열번호 58, 59 및 60 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 11, 63 및 64 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
(xii) 서열번호 69, 70 및 71 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 38, 17 및 74 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
(xiii) 서열번호 77, 78 및 79 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 28, 81 및 82 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
(xiv) 서열번호 77, 84 및 79 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 28, 81 및 82 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
(xv) 서열번호 77, 94 및 79 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 28, 81 및 82 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3.
본 발명의 일부 특정 실시양태에서, 본 발명의 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기를 포함한다.
(i) 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 9에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(ii) 서열번호 15 또는 21에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 19 또는 22에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(iii) 서열번호 15에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 19에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(iv) 서열번호 21에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 22에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(v) 서열번호 26 또는 27에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 31 또는 32에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(vi) 서열번호 26에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 31에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(vii) 서열번호 27에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 32에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(viii) 서열번호 36 또는 37에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 40 또는 41에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(ix) 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 40에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(x) 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 41에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(xi) 서열번호 45 또는 48에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 47 또는 49에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(xii) 서열번호 45에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 47에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(xiii) 서열번호 48에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 49에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(xiv) 서열번호 53 또는 56에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 55 또는 57에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(xv) 서열번호 53에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 55에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(xvi) 서열번호 56에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 57에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(xvii) 서열번호 61 또는 66에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 65 또는 68에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(xviii) 서열번호 61에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 65에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(xix) 서열번호 66에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 68에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(xx) 서열번호 72 또는 73에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 75 또는 76에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(xxi) 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 75에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(xxii) 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 76에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(xxiii) 서열번호 80 또는 85에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 83 또는 86에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(xxiv) 서열번호 80에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
(xxv) 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 86에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL.
본 발명의 한 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 아미노산 변화는 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 포함한다. 바람직하게는, 본 명세서에 기재된 아미노산 변화는 아미노산 치환, 바람직하게는 보존적 치환이다.
바람직한 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 아미노산 변화는 CDR 이외의 영역(예를 들어, FR)에서 발생한다. 보다 바람직하게는, 본 명세서에 기재된 아미노산 변화는 중쇄 가변 영역 이외의 영역 및/또는 경쇄 가변 영역 이외의 영역에서 발생한다. 일부 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 아미노산 변화는 항체 중쇄 불변 영역의 Fc 영역에서 발생한다. 바람직한 실시양태에서, Fc 영역의 아미노산 변화는 항체의 ADCC 및/또는 CDC 효과를 증가시킨다.
일부 실시양태에서, 치환은 보존적 치환이다. 보존적 치환은 동일한 부류의 또 다른 아미노산으로 아미노산을 치환하는 것, 예를 들어, 또 다른 산성 아미노산으로 산성 아미노산을 치환하거나, 또 다른 염기성 아미노산으로 염기성 아미노산을 치환하거나, 혹은 또 다른 중성 아미노산으로 중성 아미노산을 치환하는 것을 지칭한다. 예시적인 치환은 하기의 표에 나타나 있다.
Figure pct00002
특정 실시양태에서, 치환은 항체의 CDR에서 발생한다. 일반적으로, 얻은 변이체는 모항체에 비하여 특정한 생물학적 특성(예를 들어, 친화성 증가)이 변형(예를 들어, 개선)되거나, 및/또는 모항체의 특정 생물학적 특성을 실질적으로 유지할 것이다. 예시적인 치환변이체는 친화성 성숙 항체이다.
특정 실시양태에서, 본 명세서에 제공된 항체는 항체가 글리코실화되는 정도를 증가 또는 감소시키도록 변경된다. 아미노산 서열을 변경하여 하나 이상의 글리코실화 부위를 생성 또는 제거함으로써 항체의 글리코실화 부위에 대한 첨가 또는 결실를 편리하게 달성할 수 있다. 항체가 Fc 영역을 포함하는 경우, 이에 부착된 탄수화물도 변경될 수 있다. 일부 응용에서, 원하지 않는 글리코실화 부위를 제거하는 변형은 예를 들어 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC) 기능을 향상시키기 위해 푸코스 모티프를 제거하는 것과 같이 유용할 수 있다(Shield 등. (2002) JBC277:26733 참고). 다른 응용에서, 갈락토실화 변형으로 보체 의존성 세포독성(CDC)을 변형할 수 있다.
특정 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 변형이 본 명세서에 제공된 항체의 Fc 영역 내로 도입될 수 있고, 이에 의해 항체의 하나 이상의 기능적 특성, 예컨대 혈청 반감기, 보체 고정, 보체 의존적 세포독성, Fc 수용체 결합 및/또는 항체 의존적 세포 매개 세포독성을 변경하기 위한 Fc 영역 변이체를 생성한다. Fc 영역 변이체는 하나 이상의 아미노산 위치에서 아미노산 변화(예를 들어, 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열(예컨대, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)을 포함할 수 있다.
본 발명의 한 실시양태에서, 항체의 ADCC 활성 또는 CDC 활성을 증가시키기 위해 변화는 본 명세서에 기재된 항체의 Fc 영역에 도입된다.
특정 실시양태에서, 시스테인 조작으로 수식한 항체, 예컨대 "술포MAb"를 생성할 필요가 생길 수 있으며, 여기서 항체의 하나 이상의 잔기는 시스테인 잔기에 치환된다.
특정 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 항체를 추가로 변형하여 당업계에서 이미 알려져 있고 용이하게 사용할 수 있는 그 외 비단백질 부분을 포함할 수 있다. 항체 유도체화에 적합한 부분은 수용성 중합체를 포함하되, 이에 한정되지는 않는다. 수용성 중합체의 비제한적 예로는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜 공중합체, 카르복시메틸 셀룰로오스, 글루칸, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐피롤리돈, 폴리-1,3-디옥산, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산(호모중합체 또는 랜덤 공중합체), 및 글루칸 또는 폴리(n-비닐피롤리돈) 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 단독중합체, 폴리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸렌화된 폴리올(예를 들어, 글리세롤), 폴리비닐 알코올 및 이들의 혼합물을 포함하되, 이에 한정되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기 특성 중 하나 이상을 갖는다.
(i) 본 발명의 항체와 동일하거나 유사한 CLDN18.2에 대한 결합 친화성 및/또는 특이성을 나타내는 것;
(ii) 본 발명의 항체의 CLDN18.2에 대한 결합을 억제(예를 들어, 경쟁적으로 억제)하는 것;
(iii) 본 발명의 항체와 동일하거나 중복되는 에피토프에 대한 결합;
(iv) CLDN18.2에 대한 결합에 대해 본 발명의 항체와 경쟁하는 것;
(v) 본 발명의 항체의 하나 이상의 생물학적 특성을 갖는 것.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항-CLDN18.2 항체는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 형태의 항체, 바람직하게는 IgG1 형태의 항체이다.
일부 실시양태에서, 항-CLDN18.2 항체는 모노클로날 항체이다.
일부 실시양태에서, 항-CLDN18.2 항체는 인간화 항체이다.
일부 실시양태에서, 항-CLDN18.2 항체는 인간 항체이다.
일부 실시양태에서, 항-CLDN18.2 항체는 키메라 항체이다.
일부 실시양태에서, 항-CLDN18.2 항체의 프레임워크 서열의 적어도 일부는 인간 컨센서스 프레임워크 서열이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 항-CLDN18.2 항체는 또한 이의 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편), 바람직하게는 Fab, Fab', Fab'-SH, Fv, 단쇄 항체(예를 들어, scFv), (Fab')2, 단일 도메인 항체(예를 들어VHH), 도메인 항체(dAb) 및 선형 항체로부터 선택된 항체 단편을 망라한다.
III. 본 발명의 핵산 및 이를 포함하는 숙주 세포
한 측면에서, 본 발명은 앞서 언급한 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 단편을 중 임의의 하나를 인코딩하는 핵산을 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 핵산을 포함하는 벡터를 제공한다. 한 실시양태에서, 벡터는 발현 벡터, 예를 들어 pcDNA3.1이다. 한 실시양태에서, 본 발명은 핵산 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 한 실시양태에서, 숙주 세포는 진핵 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 숙주 세포는 효모 세포, 포유동물 세포(예를 들어, CHO 세포(예를 들어, CHO-S) 또는 293 세포(예를 들어, 293F 또는 HEK293 세포)), 또는 항체 또는 이의 단편을 생성하기에 적합한 추가 세포로부터 선택된다. 또 다른 실시양태에서, 숙주 세포는 원핵생물이다.
한 측면에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 단편 중 어느 하나를 인코딩하는 핵산을 제공한다. 핵산은 항체의 경쇄 가변 영역 및/또는 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산, 또는 항체의 경쇄 및/또는 중쇄의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 포함할 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 핵산은 서열번호 4, 15, 21, 26, 27, 36, 37, 45, 48, 53, 56, 61, 66, 72, 73, 80 및 85 또는 서열번호 9, 19, 22, 31, 32, 40, 41, 47, 49, 55, 57, 65, 68, 75, 76, 83 및 86 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산; 또는 서열번호 4, 15, 21, 26, 27, 36, 37, 45, 48, 53, 56, 61, 66, 72, 73, 80 및 85 또는 서열번호 9, 19, 22, 31, 32, 40, 41, 47, 49, 55, 57, 65, 68, 75, 76, 83 및 86 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 포함한다.
본 발명은 또한 서열번호 4, 15, 21, 26, 27, 36, 37, 45, 48, 53, 56, 61, 66, 72, 73, 80 및 85 또는 서열번호 9, 19, 22, 31, 32, 40, 41, 47, 49, 55, 57, 65, 68, 75, 76, 83 및 86 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 핵산, 또는 서열번호 4, 15, 21, 26, 27, 36, 37, 45, 48, 53, 56, 61, 66, 72, 73, 80 및 85 또는 서열번호 9, 19, 22, 31, 32, 40, 41, 47, 49, 55, 57, 65, 68, 75, 76, 83 및 86 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 선열을 포함하는 핵산과 비교하여, 엄격한 조건하에서 하나 이상의 대체(예를 들어, 보존적 대체), 결실 또는 삽입이 되거나 갖기 위해 혼성화되는 핵산을 망라한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터를 제공한다. 한 실시양태에서, 벡터는 발현 벡터, 예컨대 진핵 발현 벡터이다. 벡터는 바이러스, 플라스미드, 코스미드, λ 파지 또는 효모 인공 염색체(YAC)를 포함하되 이에 한정되지는 않는다. 한 실시양태에서, 벡터는 pcDNA3.1이다.
한 실시양태에서, 벡터를 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 항체를 인코딩하는 벡터의 클로닝 또는 발현에 적합한 숙주 세포는 본 명세서에 기재된 원핵세포 또는 진핵세포를 포함한다. 예를 들어, 항체는, 특히 글리코실화 및 Fc 이펙터 기능이 필요하지 않을 때, 박테리아에서 생성할 수 있다. 발현 후, 항체를 가용성 분획의 박테리아 세포 페이스트로부터 단리하고 추가로 정제할 수 있다.
한 실시양태에서, 숙주 세포는 진핵 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 숙주 세포는 효모 세포, 포유동물 세포, 및 항체 또는 이의 단편을 생성하기에 적합한 추가 세포로부터 선택된다. 예를 들어, 진핵 미생물, 예컨대 사상 진균 또는 효모는 항체를 인코딩하는 벡터에 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 예를 들어, 글리코실화 경로는 "인간화"된 진균 및 효모 균주는 부분적 또는 전체적으로 인간 글리코실화 패턴을 가지는 항체를 생성할 수 있다. 글리코실화 항체 발현에 적합한 숙주 세포는 다세포 유기체(무척추동물 및 척추동물)로부터 또한 유래한다. 척추동물 세포도 숙주로서 사용할 수 있다. 예를 들어, 현탁액 성장에 적합하도록 조작한 포유류 세포주를 사용할 수 있다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 다른 예로는 SV40으로 형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포주(COS-7), 인간 배아 신장 세포주(HEK293, 293F 또는 293T 세포) 등이다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는 DHFR-CHO 세포, CHO-S 세포, ExpiCHO 등을 포함하는 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포; 및 Y0, NS0 및 Sp2/0과 같은 골수종 세포주를 포함한다. 항체 생성에 적합한 포유동물 숙주 세포주는 당업계에 공지되어 있다.
IV. 본 발명의 항체 분자의 생산 및 정제
한 실시양태에서, 본 발명은 본 발명의 항체 분자 또는 이의 단편(바람직하게는 항원 결합 단편)을 제조하기 위한 방법을 제공하며, 여기서 방법은 본 발명의 항체 단편 또는 이의 단편(바람직하게는 항원 결합 단편)을 인코딩하는 핵산을 발현하기에 적합한 조건 하에 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하고, 및 선택적으로 항체 또는 이의 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)을 단리하는 단계를 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 숙주 세포로부터 본 발명의 항체 분자 또는 이의 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)을 복원하는 단계를 추가로 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 본 발명의 항체 분자를 제조하기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 항체(예를 들어, 임의의 하나 및/또는 하나 이상의 폴리펩티드 사슬)를 인코딩하는 핵산, 또는 위에 제공된 바와 같이 핵산을 포함하는 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 항체가 발현하기 적합한 조건 하에 배양하는 단계를 포함하고, 및 선택적으로 숙주 세포(또는 숙주 세포 배지)로부터 항체를 복원하는 단계를 포함한다.
본 발명의 항체 분자의 재조합 생성을 위해, 항체(예를 들어, 위에 기재된 항체, 예를 들어 임의의 하나 및/또는 하나 이상의 폴리펩티드 사슬)를 인코딩하는 핵산을 단리하고, 숙주 세포에서의 추가적 클로닝 및/또는 발현을 위해 하나 이상의 벡터에 삽입한다. 상기 핵산을 통상적인 절차를 사용하여(예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하여) 용이하게 단리하고 시퀀싱할 수 있다.
본 명세서에 기재된 바와 같이 제조한 항체 분자는 당업계에 공지된 종래 기술, 예컨대 고성능 액체 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 겔 전기영동, 친화성 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토그래피 등으로 정제할 수 있다. 특정 단백질 정제하는 데 사용하는 실제 조건이 순전하, 소수성, 친수성과 같은 요소에 따라 달라질 수 있음은 당업자에게는 자명한 사실일 것이다. 본 발명의 항체 분자의 순도는 크기 배제 크로마토그래피, 겔 전기이동, 고성능 액체 크로마토그래피 등을 포함하는 잘 알려진 여러 분석기법 중 임의의 하나에 의해 결정될 수 있다.
V. 분석
본 명세서에 제공된 항-CLDN18.2 항체는 당업계에 공지된 다양한 검정을 통해 그의 물리적/화학적 특성 및/또는 생물활성에 대해 확인, 스크리닝 또는 특성화될 수 있다. 한 측면에서, 본 발명의 항체는, 예를 들어 ELISA 및 웨스턴 블로팅과 같은 공지된 방법으로 항원 결합 활성을 테스트한다. CLDN18.2에 대한 결합은 당업계에 공지된 방법에 의해 결정될 수 있고, 예시적인 방법이 본 명세서에 개시되어 있다. 일부 실시양태에서, 결합은 방사면역분석(RIA), 생물층 간섭계, MSD 분석, 표면 플라즈몬 공명(SPR) 또는 유세포 분석에 의해 결정된다.
또 다른 측면에서, 경쟁 검정은 CLDN18.2에 대한 결합에 대해 본 명세서에 개시된 항-CLDN18.2 항체 중 임의의 하나와 경쟁하는 항체를 확인하는 데 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 이러한 경쟁적 항체는 본 명세서에 개시된 항-CLDN18.2 항체 중 임의의 하나와 동일하거나 중복되는 에피토프(예를 들어, 선형 또는 입체형태적 에피토프)에 결합한다.
본 발명은 또한 생물활성을 갖는 항-CLDN18.2 항체를 확인하기 위한 검정을 제공한다. 생물활성은 예를 들어 CLDN18.2에 대한 결합(예를 들어, 인간 CLDN18.2에 대한 결합), CLDN18.2를 발현하는 세포에 대한 결합, 세포의 CDC 또는 ADCC에 대한 활성, 종양 세포의 억제 등을 포함할 수 있다. 본 발명은 체내 및/또는 체외에서 이러한 생물활성을 가지는 항체를 추가로 제공한다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 항체는 이러한 생물활성을 특징으로 한다.
위의 체외 검정 중 임의의 하나에 사용하기 위한 세포는 CLDN18.2를 자연적으로 발현하거나 CLDN18.2를 발현 또는 과발현하도록 조작된 세포주를 포함한다. 이러한 세포는 또한 CLDN18.2를 발현하는 세포주 및 CLDN18.2를 정상적으로는 발현하지 않지만 CLDN18.2를 인코딩하는 DNA로 형질감염된 세포주를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이러한 세포는 위암 세포 또는 췌장암 세포이다. 일부 실시양태에서, 세포는 CLDN18.2를 발현하는 CHO 세포이다. 일부 실시양태에서, 세포는 CLDN18.2를 과발현하는 KATO III 및 DAN-G 세포주와 같은 NUGC-4, KATO III 및 DAN-G 세포주이다.
위의 검정 중 임의의 하나는 항-CLDN18.2 항체 대신에 또는 이에 더하여 본 발명의 면역접합체를 사용함으로써 수행될 수 있는 것으로 이해될 것이다.
위의 검정 중 임의의 하나는 항-CLDN18.2 항체 및 다른 활성제의 조합을 사용하여 수행될 수 있는 것으로 이해될 것이다.
VI. 면역접합체
일부 실시양태에서, 본 발명은 본 명세서에 제공하는 항-CLDN18.2 항체 중 임의의 하나와, 화학요법제, 사이토카인, 세포독성제, 추가 항체, 소분자 약물 또는 면역조절제(예를 들어, 항염증제 또는 면역억제제)를 포함하는 치료제와 같은 추가 물질을 포함하는 면역접합체를 제공한다. 한 실시양태에서, 세포독성제와 같은 추가물질은 세포에 유해한 임의의 약제를 포함한다.
일부 실시양태에서, 면역접합체는 암을 예방하거나 치료하는 데 사용된다.
VII. 약제학적 조성물 및 약제학적 제제
일부 실시양태에서, 본 발명은 항-CLDN18.2 항체 중 임의의 하나 또는 이의 단편(바람직하게는 이의 항원 결합 단편) 또는 본 명세서에 기재된 이의 면역접합체를 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서 바람직하게는 조성물은 약제학적 조성물이다. 한 실시양태에서, 상기 조성물은 약제학적 보충물질을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물, 예를 들어 약제학적 조성물은, 본 발명의 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 단편, 또는 이의 면역접합체 및 1종 이상의 추가 치료제의 조합을 포함한다.
본 발명은 또한 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 면역접합체를 포함하는 조성물(약제학적 조성물 또는 약제학적 제제 포함) 또는 항-CLDN18.2 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 조성물(약제학적 조성물 또는 약제학적 제제 포함)을 포함한다. 특정 실시양태에서, 조성물은 CLDN18.2에 결합하는 하나 이상의 항체 또는 이의 단편 또는 하나 이상의 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 단편을 인코딩하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 이러한 조성물은 완충제를 포함하여 당업계에서 공지된 약제학적 담체 및 약제학적 부형제와 같은 적합한 약제학적 보충물질을 추가로 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "약제학적 담체"는 생리학적으로 양립할 수 있는 모든 용매, 분산 매개제, 등장제, 흡수지연제를 포함한다.
약제학적 보충물질의 사용 및 응용에 관해서는, Handbook of Pharmaceutical Excipients, 제8판, R. C. Rowe, P. J. Seskey 및 S. C. Owen, Pharmaceutical Press, London, Chicago를 참조한다.
본 발명의 조성물은 여러 가지 형태일 수 있다. 이들 형태는, 예를 들어 액체, 반고체, 고체 투여제형, 예컨대 용액(예를 들어, 주사용액 및 주입용액), 분말 또는 현탁액, 리포좀 및 좌약 을 포함한다. 바람직한 형태는 투여의 목적 모드 및 치료적 사용에 따라 달라진다.
본 명세서에 기재된 항체를 포함하는, 바람직하게는 동결건조 제제 또는 수용액의 형태인 약제학적 제제는 본 발명의 원하는 순도의 항체를 하나 이상의 선택적 약제학적 보조 재료와 혼합함으로써 제조될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물 또는 제제는 또한 치료 대상인 특정 적응증에 필요한 하나 넘은 활성 성분, 바람직하게는 서로에게 악영향을 미치지 않으면서 상보성 활성을 가지는 활성 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어 또한 화학요법제, 사이토카인, 세포독성제, 백신, 추가 항체, 소분자 약물 또는 면역조절제와 같은 추가 치료제를 제공하는 것이 필요할 수 있다. 활성 성분은 의도하는 목적을 위해 효과적인 양으로 적절하게 조합된다.
서방형 제제를 제조할 수 있다. 서방형 제제의 적합한 예로는 항체를 함유하는 고형 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함한다. 매트릭스는 필름 또는 마이크로캡슐과 같은 성형품의 형태이다.
VIII. 약제학적 조합 및 키트
일부 실시양태에서, 본 발명은 또한 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 단편(바람직하게는 항원 결합 단편), 또는 이의 면역접합체, 및 하나 이상의 추가 치료제(예를 들어, 화학요법제, 사이토카인, 세포독성제, 추가 항체, 소분자 약물 또는 면역조절제)를 포함하는 약제학적 조합 또는 약제학적 조합 생성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 목적은 본 발명의 약제학적 조합물을 포함하는 부품 키트를 제공하는 것이며; 바람직하게는, 키트는 약제학적 용량 단위의 형태이다. 따라서 투여량 단위는 투여 요법 또는 약물 투여 사이의 간격에 따라 제공될 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명의 부품 키트는 다음과 같이 동일한 패키지에 포함한다.
- 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 함유하는 제1 용기;
- 다른 치료제를 포함하는 약제학적 조성물을 함유하는 제2 용기.
IX. 용도 및 방법
본 발명의 한 측면은 대상체의 종양(예를 들어, 암)을 예방 또는 치료하기 위한 방법을 제공하며, 이는 유효량의 본 발명의 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 단편(바람직하게는 항원 결합 단편), 면역접합체, 약제학적 조성물, 약제학적 조합물 또는 키트를 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 종양(예를 들어, 암) 환자는 CLDN18.2를 갖는다(예를 들어, 상승된 수준에서, 예를 들어 핵산 또는 단백질 수준에서).
일부 실시양태에서, 종양, 예를 들어 암은 고형 종양 및 혈액 종양뿐만 아니라 전이성 병변을 포함한다. 한 실시양태에서, 고형 종양의 예로는 약성 종양을 포함한다. 암은 초기, 중기 또는 말기 단계 암일 수 있으며, 또는 전이성 암일 수 있다.
일부 실시양태에서, 종양 치료는 핵산 또는 단백질 수준에서 CLDN18.2의 억제로부터 이익을 얻을 것이다. 일부 실시양태에서, 종양 치료는 본 발명의 항체에 의해 유도된 ADCC 또는 CDC 효과로부터 이익을 얻는다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 항-CLDN18.2 항체는 종양 세포, 예를 들어 위암 세포 또는 췌장암 세포와 같은 CLDN18.2를 발현하는 종양 세포의 증식을 억제할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 항-CLDN18.2 항체는 강력한 ADCC 또는 CDC 활성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 종양은 종양 면역 회피이다.
일부 실시양태에서, 종양은 암, 예를 들어 위암 또는 췌장암이다.
대상체는 포유동물, 예를 들어 영장류, 바람직하게는 고등 영장류, 예를 들어 인간(예를 들어, 본 명세서에 기재된 질환이 있거나 발병할 위험이 있는 개체)일 수 있다. 한 실시양태에서, 대상체는 본 명세서에 기재된 질환(예를 들어, 암)이 있거나 발병할 위험이 있다. 특정 실시양태에서, 대상체는 추가 요법, 예를 들어 화학 요법 및/또는 방사선 요법을 받고 있거나 받은 경험이 있다. 일부 실시양태에서, 대상체는 이전에 면역요법을 받은 적 있거나 받고 있다.
다른 측면에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 용도를 위한, 예를 들어, 본 명세서에 언급된 관련 질환 또는 장애를 예방하거나 치료하는 데 사용하기 위해 약물을 생산 또는 제조하는데 있어서, 항체 분자 또는 이의 단편, 이의 면역접합체, 약제학적 조성물, 약제학적 조합물 또는 키트의 용도를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 분자 또는 이의 단편, 이의 면역접합체, 약제학적 조성물, 약제학적 조합물 또는 키트는 장애 및/또는 장애와 관련된 증상의 발병을 지연시킨다.
일부 실시양태에서, 항체 분자 또는 이의 단편, 이의 면역접합체, 또는 본 발명의 약제학적 조성물은 또한 하나 이상의 다른 요법, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 용도, 예를 들어 본 명세서에 언급된 관련 질환 또는 장애를 예방하거나 치료하는 데 사용하기 위한 치료 방식 및/또는 기타 치료제와 조합하여 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 치료 양식은 수술, 방사선 요법, 부분 조사, 집중 조사 등을 포함한다.
일부 실시양태에서, 치료제는 화학요법제, 사이토카인, 세포독성제, 백신, 추가 항체, 소분자 약물 또는 면역조절제로부터 선택된다.
면역조절제의 예로는 면역억제제 또는 소염제를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 항체 조합은 예를 들어, 별도의 항체로서 개별적으로 투여될 수 있다.
상기 조합 요법은 동시투여(예를 들어, 2종 이상의 치료제가 동일한 제제 또는 별도의 제제에 함유됨) 및 별도의 투여를 포함한다. 여기서 본 발명의 항체는 그 외 치료제 및/또는 약제를 투여하기 전에, 동시에 및/또는 투여한 후에 투여할 수 있다.
약제학적 조성물의 투여경로는 공지된 방법을 기초하여, 예를 들어, 경구, 정맥내, 복강내, 뇌내(실질내), 심 실내, 근육내, 안구내, 동맥내, 문맥내 또는 병변내 경로로 투여하거나, 지속 방출 시스템 또는 이식 장치를 통해 투여할 수 있다. 특정 실시양태에서, 조성물을 볼루스 주입, 연속 주입 또는 이식 장치에 의해 투여할 수 있다.
조성물을 도한 이식한 막, 스펀지, 혹은 원하는 분자를 흡수하거나 캡슐화하는 그 밖의 적절한 물질을 통해 국소적으로 투여할 수도 있다. 특정 실시양태에서, 이식 장치를 사용하는 경우, 해당 장치를 임의의 적합한 조직 또는 기관에 이식할 수 있으며, 원하는 분자를 확산, 서방성 볼루스 또는 연속 투여를 통해 송달할 수 있다.
X. 진단 및 검출을 위한 방법 및 조성물
특정 실시양태에서, 본 명세서에 제공된 항-CLDN18.2 항체 중 임의의 하나 또는 이의 단편(바람직하게는 항원 결합 단편)은 생물학적 샘플에서 CLDN18.2의 존재를 검출하는 데 사용될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "검출" 또는 "검출하다"는 정량적 및 정성적 검출을 포함하고, 예시적 검출은 면역조직화학 기술, 면역세포화학 기술, 유세포 분석법(예를 들어, FACS), 항체 분자와 복합체화한 자기 비드, ELISA, PCR(예를 들어, RT-PCR)를 관여한다. 특정 실시양태에서, 생물학적 샘플은 혈액, 혈청, 또는 생물학적 기원의 그 외 체액 샘플이다. 특정 실시양태에서, 생물학적 샘플은 세포 또는 조직을 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 증식성 또는 암성 병변으로부터 유래한다.
한 실시양태에서, 진단 또는 검출 방법에 사용하기 위한 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 단편이 제공된다. 다른 측면에서, 생물학적 샘플에서 CLDN18.2의 존재를 검출하기 위한 방법이 제공된다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 생물학적 샘플 중의 CLDN18.2 단백질의 존재를 검출하는 단계를 포함한다. 특정 실시양태에서, CLDN18.2는 인간 CLDN18.2이다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 CLDN18.2에 대한 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 단편의 결합을 허용하는 조건 하에 생물학적 샘플을 본 명세서에 기재된 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 단편과 접촉시키는 단계, 및 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 단편 및 CLDN18.2에 의해 복합체가 형성되는지 여부를 검출하는 단계를 포함한다. 복합체의 형성은 CLDN18.2의 존재를 지시한다. 상기 방법은 체외 또는 체내 방법일 수 있다. 한 실시양태에서, 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 단편은 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 단편으로 치료하기에 적합한 대상체를 선택하는 데 사용되며, 예를 들어, 여기서 CLDN18.2는 대상체를 선택하기 위한 바이오마커이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 종양, 예를 들어 암을 진단하는데 사용하여, 예를 들어 개체에서 본 명세서에 기재된 질환의 치료 또는 진행, 진단 및/또는 병기를 평가(예를 들어, 모니터링)할 수 있다. 특정 실시양태에서, 표지된 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 단편이 제공된다. 표지는 직접적으로 검출되는 표지 또는 모이어티(예를 들어, 형광 표지, 발색단 표지, 전자밀도 표지, 화학발광 표지 및 방사성 표지)은 물론, 효소 또는 리간드와 같이, 예를 들어 효소 반응 또는 분자 상호작용에 의해 간접적으로 검출되는 모이어티를 포함하되 이에 한정되지는 않는다.
본 명세서에 제공된 일부 실시양태에서, 샘플은 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 단편으로 치료하기 전에 얻는다. 일부 실시양태에서, 다른 치료법을 적용하기 전에 샘플을 얻는다. 일부 실시양태에서, 샘플은 다른 요법으로 치료하는 동안 또는 다른 요법으로 치료한 후에 얻는다.
일부 실시양태에서, 샘플은 포르말린 고정 파라핀 포매(FFPE) 샘플이다. 일부 실시양태에서, 샘플은 생검(예를 들어, 코어 생검) 시편, 외과용 시편(예를 들어, 외과용 절제술에서 얻은 시편) 또는 미세침 흡인물이다.
일부 실시양태에서, CLDN18.2는 치료 전에, 예를 들어 초기 치료 전에 또는 특정 치료로부터의 간격 후의 치료 전에 검출된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 질환을 치료하기 위한 방법이 제공되며, 상기 방법은: 대상체(예를 들어, 샘플)(예를 들어, 대상체의 샘플)에서 CLDN18.2의 존재를 검출하여 CLDN18.2 값을 결정하는 단계; CLDN18.2 값을 대조값과 비교하는 단계; 및 CLDN18.2 값이 대조군 값보다 큰 경우, 치료 유효량의 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 단편(예를 들어, 본 명세서에 기재된 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 단편)을 선택적으로 하나 이상의 다른 요법과 조합하여 대상체에게 투여하여 질환을 치료하는 단계를 포함한다.
본 발명의 이러한 및 다른 측면과 실시양태를 도면(하기 도면의 간단한 설명) 및 본 발명의 하기 상세한 설명에 기술하고, 하기의 실시예를 통해 설명한다. 본 발명의 여러 실시예에서 본 발명 전문에 걸쳐 위에 기재한 일부 또는 전체 특징을 다양하게 조합할 수 있다. 하기 실시예는 본 발명을 추가로 설명한다. 단 실시예는 한정이 아니라 예시에 지나지 않으며, 당업자는 다양한 변형을 가할 수 있음을 이해해야 한다.
실시예
표 A: 본 발명의 예시적인 항체 및 양성 대조군 항체의 서열에 대한 서열번호 넘버링(AbM 규칙에 의해 정의된 HCDR1 및 Kabat 규칙에 의해 정의된 HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)
Figure pct00003
실시예 1. 안정적으로 발현되는 세포주의 구축
인간 CLDN18.2를 과발현하는 세포주의 제조
제조업체의 지침에 따라 인간 클라우딘18.2(약칭 CLDN18.2, 이하 동일)를 안정적으로 발현하는 세포주를 구축하기 위해 Freedom® CHO-S® 키트(Invitrogen, A1369601)를 사용하였다. 먼저, 인간 CLDN18.2(UniProt ID: P56856-2) 전장 유전자를 벡터 pCHO1.0에 구축하고 구축된 플라스미드를 화학적 형질감염 및 전기 형질감염에 의해 CHO-S 세포(Invitrogen, A1369601) 및 HEK293 세포(Invitrogen, A14527)에 형질감염시키고, 형질감염된 세포를 2회 가압 스크리닝하여 CLDN18.2를 발현하는 세포 풀을 얻었다. 그 후, 유세포분석기(MoFlo XDP, Beckman Coulter)를 사용하여 CLDN18.2를 많이 발현하는 세포를 선별하고, CLDN18.2를 안정적으로 발현하는 모노클로날 세포주 CHO-hCLDN18.2및 HEK293-hCLDN18.2를 희석하여 얻었다.
인간 CLDN18.1를 과발현하는 세포주의 제조
제조업체의 지침에 따라 인간 클라우딘18.1(약칭 CLDN18.1, 이하 동일)을 안정적으로 발현하는 세포주를 제작하기 위해 Freedom® CHO-S® 키트(Invitrogen, A1369601)를 사용하였다. 먼저, 인간 CLDN18.1(UniProt ID: P56856-1) 전장 유전자를 벡터 pCHO1.0(Invitrogen, A1369601)에 구축하고, 구축된 플라스미드를 화학적 형질감염에 의해 CHO-S 세포(Invitrogen, A1369601)에 형질감염시키고, 형질감염된 세포를 2회 가압 스크리닝하여 CLDN18.1을 발현하는 세포 풀을 얻었다. 이어서, 유세포분석기(MoFlo XDP, Beckman Coulter)를 사용하여 CLDN18.1을 고도로 발현하는 세포를 선별하고, CLDN18.1을 안정적으로 발현하는 모노클로날 클론 세포주 CHO-hCLDN18.1을 희석하여 얻었다.
CLDN18.2를 과발현하는 종양 세포주의 구축
인간 CLDN18.2(UniProt ID: P56856-2) 전장 유전자를 내부의 GFP 서열을 치환하는 벡터 pWPT-GFP(Addgene, 12255)에 구축하였고, 구축물을 렌티바이러스의 패키징 벡터 psPAX2(Addgene, 12260) 및 pMD2.G(Addgene, 12259)와 함께 바이러스 패키징을 위해 HEK293T(ATCC, CRL-3216) 세포에 형질감염시켰다. 48시간 및 72시간 동안 배양된 배양 상청액을 각각 수집하고, 렌티바이러스를 PEG8000을 사용하여 농축하였다. 췌장암 DAN-G 세포 및 위암 KATO III 세포에 농축 바이러스를 형질감염시키고, 그런 다음 CLDN18.2를 발현하는 세포를 유세포 분석기(MoFlo XDP, Beckman Coulter)를 사용하여 선별하여 CLDN18.2로 안정적으로 형질감염된 종양 세포주 DAN-G-CLDN18.2 및 KATO III-CLDN18.2를 얻었다.
실시예 2. 항-hCLDN18.2 모노클로날 항체에 대한 하이브리도마의 스크리닝
본 발명에서는 하이브리도마 기술을 채용하였다. 실시예 1에서 얻은 세포(CHO-huClaudin18.2)를 사용하여 마우스를 면역화하였고(방법 및 과정은 표 1에 나타나 있음), 얻어진 마우스의 비장 세포를 골수종 세포와 축합하여 CLDN18.2 항체를 분비할 수 있는 하이브리도마 세포를 얻었다.
마우스의 예방접종
표 1. 실험동물 및 예방접종 안내
Figure pct00004
하이브리도마의 축합
마우스를 희생시키고, 복강을 무균적으로 열어 비장을 꺼내고, 비장 주위에 부착된 결합 조직을 제거하였다. 비장 세포 현탁액을 제조하기 위해 바늘을 사용하여 압착함으로써 비장 세포를 완전히 방출시켰다. 세포 현탁액을 70μM 세포 스크린을 통해 여과하고, RPMI-1640 배지로 1회 세척하고, 1200rpm에서 6분 동안 원심분리하였다. 상청액을 제거하고, 세포를 RBC 용해 완충액(GIBCO)으로 재현탁시킨 후, RBC를 용해시켰다. 현탁액을 원심분리하여 상청액을 제거하고, 세포를 RPMI-1640 배지에 재현탁하고 계수하였다. SP2/0 세포와 적혈구가 용해된 비장 세포를 1:2 내지 1:1의 비율로 혼합하고, 1000rpm에서 6분간 원심분리하였다. 상청액을 제거한 후, 혼합된 세포를 축합 완충액에 재현탁시켰다. 그런 다음 15mL의 축합 완충액을 첨가하고 혼합물을 1000rpm에서 5분 동안 원심분리하여 상청액을 제거하였다. 위의 단계를 한 번 반복하였다. 세포를 적절한 부피의 축합 완충액에 재현탁하고 혼합 세포 밀도를 1×107cells/mL로 조정하였다. 전기축합 장치에 의한 축합 후, 세포를 전기축합 접시에 실온에서 5분 동안 방치하였다. 세포를 원심분리 튜브로 옮기고 1×104 내지 2×104cells/mL로 희석하였다. 100μL의 세포 현탁액을 96-웰 플레이트의 각 웰에 첨가하였다. 배지는 축합 후 5일째에 교체되었다. 배양 10일(또는 그 이상, 세포 성장 상태에 따라 다름) 후, 상청액을 수집하고 유세포 분석기(FACS)로 측정하여 양성 클론을 스크리닝하였다.
하이브리도마 세포의 고처리량 스크리닝
항-CLDN18.2 항체를 특이적으로 발현하는 하이브리도마 세포를 유세포분석기(FACS)로 스크리닝하였고, 분비된 항체는 CLDN18.1에 결합하지 않았다.
실시예 1에서 얻은 검사 대상 세포(HEK293-hCLDN18.2)를 계수하여 1×106cells/mL로 희석한 후 U자형 바닥 96-웰 플레이트에 100μL/well로 첨가하였다. 세포를 500g에서 5분 동안 원심분리하여 세포 배지를 제거하였다. 96-웰 플레이트의 하이브리도마 배양 상청액을 100μL/웰로 U자형 플레이트에 첨가하고, 세포를 재현탁하고, 현탁액을 30분 동안 얼음 위에 두었다. 현탁액을 500g에서 5분간 원심분리하여 상청액을 제거하고, 세포를 PBS로 1회 세척하였다. FITC 표지된 항-마우스 Fab 2차 항체 100μL(PBS에서 1:500 희석)을 각 웰에 첨가하고, FITC 표지된 항-인간 Fab 2차 항체 100μL를 양성 대조군 항체에 첨가하였다. 혼합물을 어둠 속에서 얼음 위에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 혼합물을 500g에서 5분간 원심분리하여 상청액을 제거하고, 세포를 PBS로 1회 세척하였다. 세포를 50μL의 1x PBS로 재현탁시키고 FACS에 의해 결정하였다.
인간 CLDN18.2에는 결합하지만 인간 CLDN18.1에는 결합하지 않는 하이브리도마 세포의 9개 균주를 얻기 위해 양성 클론을 위에 기재된 것과 동일한 방식으로 CHO-hCLDN18.1에 대해 다시 스크리닝하였다. 하이브리도마 세포의 8개 균주는 Bal b/c 마우스로부터 유래되었고, 하이브리도마 세포의 1개 균주는 H2L2 완전 인간 형질전환 마우스로부터 유래되었다. 자세한 내용은 표 2를 참조한다.
표 2. 하이브리도마의 고처리량 스크리닝을 통해 얻은 후보 항체 클론
Figure pct00005
실시예 3. 항체 유전자 획득
실시예 2에서 얻은 하이브리도마 세포의 9개 균주(3G3, 14A5, 25C7, 38F8, 69H9, 46F6, 59C1, 51H10 및 HB37A6)의 항체 경쇄 및 중쇄 유전자 서열을 분자생물학 기술을 사용하여 추출하였다. 9개의 하이브리도마 세포 각각의 총 RNA를 RNA 추출 키트(Biomiga, R6311-02)로 추출한 후 PrimeScript II 제1 표준 cDNA 합성 키트(Takara, 6110A)로 역전사하여 cDNA를 얻었다. 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 각각 축퇴 프라이머로 증폭하여 pMD20-T 벡터(Takara, 6028)에 삽입하고, 라이게이션 및 형질전환 후 클론을 선별하여 시퀀싱하였다.
항체 서열은 표 A를 참조한다.
실시예 4. 재조합 CLDN18.2 항체의 제조
실시예 2에서 스크리닝된 9개의 항체(3G3, 14A5, 25C7, 38F8, 69H9, 46F6, 59C1, 51H10 및 HB37A6)와 대조군 항체인 졸베툭시맙(Zmab으로 약칭, INN117에서 유래된 서열)은 전장 모노클로날 항체로서 HEK293 세포(Invitrogen, A14527)에서 발현되었다. 발현 벡터를 먼저 구축하였다. 9쌍의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 각각 인간 IgG1의 중쇄 불변 영역(서열번호 5) 및 경쇄 카파 불변 영역(서열번호 10)의 N-말단에 각각 위치하였고, N 말단 신호 펩티드를 갖는 pcDNA3.1 발현 벡터로 구축하여 경쇄 및 중쇄 발현 벡터를 얻었다. 얻어진 경쇄 및 중쇄 발현 벡터를 각각 PEI(Polysciences Inc, 23966)로 동시 형질감염시켜 HEK293 세포를 일시적으로 형질감염시키고, 배양 7일 후 배지 상청액을 수집하였다. 상청액을 Protein A 컬럼(Hitrap Mabselect Sure, GE 11-0034-95)으로 정제한 후 한외여과 및 PBS(Gibco, 70011-044)로 완충액 교환하였다. 농도는 A280 방법으로 결정하고, 순도는 SEC-HPLC 방법으로 결정하여 95%보다 큰 순도의 항체 용액을 얻었다.
실시예 5. BLI에 의한 항원에 대한 재조합 CLDN18.2 항체의 친화성 결정
인간 CLDN18.2에 대한 본 발명의 항체의 결합에 대한 평형 해리 상수(KD)를 생물층 간섭계(BLI)에 의해 결정하였다. 기존의 방법에 따라 BLI 친화성 검정을 진행하였다(Estep, P등, High throughput solution based measurement of antibody-antigen affinity and epitope binding. MAbs, 2013.5(2): p. 270-8). AHC(18-5060, 포테바이오) 센서를 SD 완충액(1x PBS, BSA 0.1%, Tween-20 0.05%)에 담갔다. 100μL의 SD 완충액, 각 항체 및 인간 클라우딘18.2 단백질(P50251802, GenScript)을 각각 96웰 검정 폴리스티렌 반면적 마이크로플레이트(Greiner, 675076)에 첨가하였다. 검출은 Fortebio Octet Red96을 사용하여 수행하였고, KD 값은 Fortebio Octet 분석 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. 항체의 친화성 데이터는 표 3에 나타나 있다: 9개의 항체 모두 높은 친화성을 가지며, 여기서 3G3이 대조군 항체 Zmab에 대한 친화성과 비교할 만한 것을 제외하고, 다른 모든 항체는 대조군 항체 Zmab보다 우수하다.
표 3. CLDN18.2 항체의 친화성 상수
Figure pct00006
실시예 6. CLDN18 세포에 대한 CLDN18.2 항체의 결합 특이성
실시예 1에서 얻어진 인간 CLDN18.2 및 인간 CLDN18.1(즉, 실시예에 기재된 바와 같이 제조된 CHO-hCLDN18.2 및 CHO-hCLDN18.1)로 안정적으로 형질감염된 CHO-S 세포주에 대한 위의 9개의 항체 각각의 결합을 유세포 분석(FACS)에 의해 결정하였다. 실험 방법에 대해 실시예 2를 참조하였다. 실험 데이터는 GraphPad Prism 소프트웨어를 사용하여 분석되었으며, 도 1 및 도 2를 얻었다. 도 1 및 도 2에 나타난 바와 같이, 9개의 항체 모두는 인간 CLDN18.2에 특이적으로 결합하지만 인간 CLDN18.1에는 결합하지 않는다.
실시예 7. CLDN18.2 항체에 대한 리포터 유전자 기반 ADCC 활성 분석
위의 9개 항체의 ADCC 활성은 루시페라제 리포터 유전자를 함유하는 ADCC 효과기 세포(Promega, G7102)를 사용하여 결정하였다. 대수 성장기의 표적 세포 CHO-hCLDN18.2 및 ADCC 효과기 세포를 별도로 계수하고 1:6의 비율로 50μL의 총 부피, 웰당 총 1.75×105개의 세포로 96-웰 흰색 바닥 플레이트에 첨가하였다. 그런 다음 위의 각 항체를 각 웰에 첨가하고 세포를 37°C, 5% CO2에서 8 내지 10시간 동안 인큐베이션하였다. 항체 각각의 농도는 하기와 같았다: 출발점은 3nM이었고, 그 다음 3배 희석을 수행하여 총 9개의 농도점을 얻었다; 즉, 각 항체에 사용된 농도는 3nM, 1nM, 0.333nM, 0.111nM, 0.037nM, 0.123nM, 0.0041nM, 0.0014nM 및 0.00046nM이다. 제조사의 지시에 따라 Bio-GloTM 루시페라아제 시약(Promega, G7940)을 사용하여 형광검출을 수행하였다. 도 3의 결과에 나타난 바와 같이, 9개의 항체 모두는 대조군 항체 Zmab의 ADCC 활성과 유사한 ADCC 활성을 갖는다.
실시예 8. 마우스 항체의 인간화
실시예 3에서 8개의 마우스 항체(3G3, 14A5, 25C7, 38F8, 69H9, 46F6, 59C1 및 51H10)가 인간화를 위해 선택되었다. 항체의 CDR 영역은 중쇄 CDR1에 대한 Abm 명명 규칙 및 나머지 CDR에 대한 Kabat 명명 규칙으로 결정되었다. 유사성을 위한 서열 정렬을 통해, 뮤린 항체 가변 영역 서열과 비교하여 가장 유사도가 높은 인간 생식계열 유전자 서열을 인간화 항체의 프레임워크 영역 주형으로 선택하고, 그런 다음 CDR 영역을 주형에 이식하였다. Discovery Studio 소프트웨어를 이용하여 각 항체의 3차원 구조를 구축하였으며, CDR 영역에 영향을 미치는 프레임워크 영역의 아미노산을 역돌연변이시켜 인간화 항체 서열을 얻었다. 인간화 항체 Hz3G3, Hz14A5, Hz25C7, Hz38F8, Hz69H9, Hz46F6, Hz59C1 및 Hz51H10의 서열은 표 A에 나타나 있다.
이들 인간화 재조합 항체를 실시예 4에 기재된 방법에 따라 제조 및 정제하여 95%보다 큰 순도를 갖는 PBS 중 항체 용액을 수득하였다.
실시예 9. SPR에 의한 CLDN18.2 항체의 친화성 결정
인간 CLDN18.2에 대한 8개의 인간화 항체(Hz3G3, Hz14A5, Hz25C7, Hz38F8, Hz69H9, Hz46F6, Hz59C1 및 Hz51H10) 및 1개의 완전한 인간 항체(HB37A6)의 결합에 대한 평형 해리 상수(KD)를 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 결정하였다. 제조업체의 지침에 따라, 인간 클라우딘18.2(GenScrip, P50251802)를 아미노 커플링 키트(GE Healthcare, BR-1006-33)를 사용하여 CM5 칩(GE Healthcare, 29-1496-03)의 표면에 결합시켰고, 나머지 활성화 부위는 결합 후 1M 에탄올아민을 주입하여 차단되었다. 제조업체의 지침에 따라 칩 표면의 항원과 이동상의 항체 간의 결합 및 해리를 Biacore(GE Healthcare, T200)로 결정하여 친화성 및 동역학 상수를 얻었다. 구배 희석 후 항체(0 내지 100nM)는 결합 시간 180초, 해리 시간 600초로 낮은 농도에서 높은 농도의 순서로 칩 표면 위로 흘렀다. 마지막으로, 칩은 10mM 글리신 pH 1.5(GE Healthcare, BR-1003-54)를 사용하여 재생되었다. 데이터 결과의 동역학 분석 결과는 1:1 결합 모델과 함께 Biacore T200 분석 소프트웨어를 사용하여 수행되었다. 표 4에 나타난 바와 같이, Hz25C7 및 Hz3G3을 제외한 나머지 항체들은 모두 대조군 항체 Zmab보다 친화성이 더 우수하였다.
표 4. SPR에 의한 CLDN18.2 항체의 친화성 상수(평형 해리 상수)의 결정
Figure pct00007
실시예 10. 인간화 항체에 대한 리포터 유전자 기반 ADCC 활성 검정
SPR 친화성 데이터를 기반으로 리포터 유전자 기반 ADCC 활성 분석을 위해 Hz14A5, Hz38F8, Hz69H9, Hz46F6, Hz59C1 및 Hz51H10이 선택되었다. 실험 과정에 대해 실시예 7을 참조하였다. 도 4에 나타난 바와 같이, 인간화 항체 Hz14A5, Hz38F8, Hz69H9, Hz46F6, Hz59C1 및 Hz51H10은 모두 대조군 항체와 비교할 만한 ADCC 활성을 나타낸다.
실시예 11. 종양 세포주에 대한CLDN18.2 항체의 결합
위의 결과를 기초하여, 1개의 인간화 항체 Hz69H9 및 1개의 완전한 인간 항체 HB37A6이 추가 결정을 위해 선택되었다. 실시예 4를 참조하면, 위암 세포주 NUGC-4, 위암 세포주 KATO III-hCLDN18.2 및 췌장암 세포주 DAN-G-hCLDN18.2 각각에 대한 두 항체의 결합은 FACS에 의해 결정되었다. 도 5는 인간화 항체 Hz69H9 및 완전한 인간 항체 HB37A6은 둘 다 비교적 양호한 종양 세포 특이성 결합을 갖으며, 이는 대조군 항체 Zmab보다 더 나음을 나타낸다.
실시예 12. CLDN18.2 항체에 대한 CDC 활성 검정
항체 분자의 CDC 활성은 KATO III-CLDN18.2 세포주를 사용하여 결정하였다. 1×105개의 표적 세포 KATO III-hCLDN18.2를 96-웰 플레이트에 첨가한 후, 적절한 농도의 항체 분자를 첨가하였다. 반응 시스템을 37°C에서 30분 동안 인큐베이션한 다음, 새로 제조된 인간 혈청 보체(Sigma, S1764)를 첨가하였다. 항체의 농도는 다음과 같았다: 초기 농도가 150μg/mL인 연속 희석 농도, 3배 희석 후 총 9개의 농도점. 반응 시스템을 37°C의 인큐베이터에서 3시간 동안 다시 인큐베이션하고, 그런 다음 CCK-8 키트(Dojindo, CK04)를 사용하여 마이크로플레이트 판독기(ThermoFisher, MULTISKAN FC)로 데이터를 판독하였다. 결과는 도 6에 나타나 있고, 여기서 Hz69H9 및 HB37A6은 대조군 항체 Zmab와 비교할 만한 CDC 활성을 갖는다.
실시예 13. CLDN18.2 항체에 대한 ADCC 활성 검정
인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC, Allcell 또는 Saily)를 완전 배지 RPMI-1640(Hyclone, SH30809.01) +10% 소 태아 혈청(FBS, Hyclone, SH30084.03)에 재현탁시켰고, PBMC를 1×107cells/mL로 조정하였다. 클라우딘18.2를 과발현하는 NUGC-4 세포 또는 DAN-G 종양 표적 세포 DAN-G-CLDN18.2를 Far-Red(Invitrogen)로 10분 동안 표지하고, 2회 세척하고, 완전 배지 RPMI-1640(Hyclone, SH30809.01) +10% 소 태아 혈청(FBS, Hyclone, SH30084.03)에 재현탁하였다. 세포 농도를 2×105cells/mL로 조정하였다. PBMC를 각각의 항-클라우딘18.2 모노클로날 클론 항체 Hz69H9 및 HB37A6 및 대조군 항체 Zmab과 혼합하였다(각 항체에 대해 초기 농도가 30nM, 3배 연속 희석, 총 12개의 농도점). 혼합물을 37℃에서 30분 동안 인큐베이션한 다음, 50μL의 종양 표적 세포(1×104)를 50:1의 효과기 대 표적 비율로 50μL의 PBMC 효과기 세포에 첨가하였다. 혼합물을 37℃에서 8시간 동안 인큐베이션하고 원심분리하고, 세포를 10μg/mL의 최종 농도로 요오드화프로피디움(PI, Invitrogen)에 재현탁시켰고, Far-Red 및 PI 이중 양성 세포는 유세포 분석기(BD, FACSCELESTA)에 의해 검출되었다. 종양 표적 세포에 대한 사멸 비율은 FACSDiva 소프트웨어(BD, Celestsa)에 의해 계산되었다.
항-클라우딘18.2 모노클로날 항체 의존성 세포매개 NUGC-4 종양 세포독성의 결과는 도 7A 및 도 7B 에 나타나 있고, 여기서 대조군 항체 Zmab뿐만 아니라 Hz69H9 및 HB37A6은 NUGC-4 세포에 대한 NK 세포의 세포독성 사멸을 용량-의존적으로 매개할 수 있으며, 종양 세포에 대한 Hz69H9 및 HB37A6의 최대 사멸량은 대조군 항체 Zmab보다 더 크다. Hz69H9 및 HB37A6이 더 강한 세포 매개 종양 세포독성을 갖는 것으로 나타난다. 항-클라우딘18.2 모노클로날 항체 의존성 세포매개 DAN-G 종양 세포독성 결과는 도 7C 및 도 7D에 나타나 있고, 여기서 대조군 항체 Zmab뿐만 아니라 Hz69H9 및 HB37A6은 종양 세포에 대한 NK 세포의 세포독성 사멸을 용량-의존적으로 매개할 수 있으며, 2개의 상이한 기증자의 PBMC에서 HB37A6 및 Hz69H9에 의해 매개되는 최대 사멸량은 대조군 항체 Zmab보다 더 크다. 위의 결과는 Hz69H9 및 HB37A6이 대조군 항체 Zmab에 비해 더 강한 세포-매개 종양 세포독성을 갖는다는 것을 나타낸다.
실시예 14. CLDN18.2 항체의 체내 항종양 효과
1. DAN-G-CLDN18.2 종양 보유 마우스 모델에 대한 항체의 활성
인간 췌장암이 있는 NOD-SCID 마우스(베이징 바이탈 리버 실험동물기술유한회사에서 구입한 암컷 NOD-SCID 마우스(15 내 18g) 60마리)에서 항종양 효과를 테스트하기 위해 HZ69H9 및 HB37A6 항체를 선택하였다. 실시예 1에서 구축한 인간 췌장암 세포 DAN-G-CLDN18.2를 후속 체내 실험을 위해 통상적으로 계대배양하였다. 세포를 원심분리하여 수집하고, DAN-G-CLDN18.2 세포를 PBS(1x)로 분산시켜 세포 밀도가 12×105개/mL인 현탁액을 얻었다. 세포 현탁액을 마트리겔과 1:1로 혼합하여 세포 농도가 6×105개/mL인 세포 현탁액을 제조하였다. 0일째에, 0.2mL의 세포 현탁액을 NOD-SCID 마우스 각각의 우측 복부 영역에 피하 접종하여 DAN-G-CLDN18.2 종양-보유 마우스 모델을 확립하였다.
각 마우스의 종양 부피는 종양 세포 접종 5일 후 측정하였으며, 종양 부피가 43.36mm3 내지 89.47mm3 범위인 마우스를 선택하여 종양 부피의 크기에 따라 복잡한 방식으로 그룹으로 나누었다(각 그룹에 8마리의 마우스).
대조군 항체 Zmab 뿐만 아니라 hIgG(Equitech-Bio, 배치 번호 160308-02), Hz69H9 및 HB37A6을 접종 후 5일, 9일, 12일 및 16일째에 매먼 10mg/kg의 용량으로 마우스에 투여하였고, 마우스의 종양 부피를 주 2 내지 3회 모니터링하였다. 종양 부피 측정: 종양의 장축(L)의 최대 길이와 단축(W)의 최대 길이는 버니어 칼리퍼(vernier caliper)로 측정했고, 종양의 부피는 다음 공식으로 계산했다: V = L×W2/2. 마우스의 체중을 전자저울을 사용하여 측정하였다.
2. NUCG-4 종양 보유 마우스 모델에 대한 항체의 활성
인간 위암이 있는 NOG 마우스(베이징 바이탈 리버 실험동물기술유한회사에서 구입한 암컷 NOG 마우스(15 내 18g) 100마리)에서 항종양 효과를 테스트하기 위해 HZ69H9 및 HB37A6 항체를 선택하였다. PBMC 세포(Allcell)를 소생시키고 원심분리하여 세포를 수집하였다. PBMC 세포를 PBS(1x)로 분산시켜 세포 밀도가 2.5x106개/mL인 세포 현탁액을 얻었다. 0일째에, NOG 인간화 마우스 모델을 확립하기 위해 0.2mL의 세포 현탁액을 안과 정맥을 통해 각 NOG 마우스에 주사하였다.
NUGC-4 세포를 소생시키고 후속 체내 실험을 위해 통상적으로 계대배양하였다. 세포를 원심분리하여 수집하고, NUGC-4 세포를 PBS(1x)로 분산시켜 세포 밀도가 12×106개/mL인 현탁액을 얻었다. 현탁액을 마트리겔과 1:1로 혼합하여 세포 농도가 6×106개/mL인 세포 현탁액을 제조하였다. 5일째에, 0.2mL의 세포 현탁액을 NOG 인간화 마우스 각각의 우측 복부 영역에 피하 접종하여 NUCG-4 종양 보유 마우스 모델을 확립하였다.
마우스를 종양 세포 접종 후 1일째에 무작위로 그룹으로 나누었다(그룹당 7마리의 마우스). 대조군 항체 Zmab 뿐만 아니라 hIgG(Equitech-Bio, 배치 번호 160308-02), Hz69H9 및 HB37A6을 접종 후 1일, 5일, 8일 및 12일째에 매번 10mg/kg의 용량으로 마우스에 투여하였고, 마우스의 종양 부피와 체중을 주 2 내지 3회 모니터링하였다. 종양 부피 측정: 종양의 장축(L)의 최대 길이와 단축(W)의 최대 길이는 버니어 칼리퍼(vernier caliper)로 측정했고, 종양의 부피는 다음 공식으로 계산했다: V = L×W2/2. 마우스의 체중을 전자저울을 사용하여 측정하였다.
3. 결과
결과는 도 8에 나타나 있고, 여기서 대조군 항체 Zmab 뿐만 아니라 Hz69H9 및 HB37A6은 모두 인간 췌장암 DAN-G-hCLDN18.2 마우스 모델에서 종양 성장을 억제할 수 있다. 도 9에 나타난 바와 같이, 인간 위암 NUGC-4 마우스 모델에서 Hz69H9 및 HB37A6은 대조군 항체 Zmab보다 더 우수한 항종양 효과를 나타낸다.
접종 26일째에 상대적 종양 성장 억제율(TGI%)을 계산하였으며, 계산식은 하기와 같다.
TGI% = 100%×(대조군의 종양 부피-치료군의 종양 부피)/(대조군의 종양 부피-투여 전 대조군의 종양 부피).
DAN-G-CLDN18.2 종양 보유 마우스 모델에서 Hz69H9 및 HB37A6의 TGI는 각각 70% 및 28%였고 Zmab의 TGI는 24%였고;
NUGC-4 종양 보유 마우스 모델에서 Hz69H9 및 HB37A6의 TGI는 각각 46% 및 31%였고 Zmab의 TGI는 0%였다.
서열 정보:
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Figure pct00009
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Figure pct00020
SEQUENCE LISTING <110> 신달바이오제약(쑤저우) 유한회사(Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd.) <120> 항-클라우딘18.2 항체 및 이의 용도 <130> PF 210417PCT <160> 94 <170> PatentIn 버전 3.3 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 1 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Val Met Ser 1 5 10 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 2 Thr Ile Ser His Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 13 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 3 Asp Ala Pro Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Arg Tyr 1 5 10 <210> 4 <211> 122 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 4 Glu Val Gln Leu Leu Asp Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Val Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asn Trp Val 35 40 45 Ser Thr Ile Ser His Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ile Asp Ala Pro Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Arg Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 5 <211> 330 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 5 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Ala Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 6 <211> 11 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 6 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 7 Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser 1 5 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 8 Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Tyr Thr 1 5 <210> 9 <211> 107 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 9 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 10 <211> 107 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 10 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 11 <211> 17 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa는 임의의 자연 발생 아미노산일 수 있음 <400> 11 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Xaa Gly Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Thr <210> 12 <211> 10 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 12 Gly Tyr Ser Phe Ser Ser Tyr Asn Ile His 1 5 10 <210> 13 <211> 17 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 13 Tyr Ile Ala Pro Phe Asn Gly Asp Ser Arg Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 14 <211> 9 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 14 Leu Asn Arg Gly Asn Ser Leu Asp Tyr 1 5 <210> 15 <211> 118 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 15 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Ser Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asn Ile His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Ala Pro Phe Asn Gly Asp Ser Arg Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Val Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Gly Arg Leu Asn Arg Gly Asn Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Ser Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 16 <211> 17 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 16 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Thr <210> 17 <211> 7 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 17 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 18 <211> 9 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 18 Gln Asn Asn Tyr Ile Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 19 <211> 113 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 19 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Phe Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asn Tyr Ile Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu 100 105 110 Lys <210> 20 <211> 17 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 20 Tyr Ile Ala Pro Phe Gln Gly Asp Ser Arg Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 21 <211> 118 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 21 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Ala Pro Phe Gln Gly Asp Ser Arg Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Asn Arg Gly Asn Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 22 <211> 113 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 22 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asn Tyr Ile Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 23 <211> 10 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 23 Gly Phe Ser Phe Ser Asp Tyr Gly Met His 1 5 10 <210> 24 <211> 17 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 24 Tyr Ile Asn Ser Gly Ser Arg Thr Leu Tyr Tyr Ala Asp Thr Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 25 <211> 10 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 25 Asn Ala Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 26 <211> 119 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 26 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Tyr Ile Asn Ser Gly Ser Arg Thr Leu Tyr Tyr Ala Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Glu Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asn Ala Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 27 <211> 119 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 27 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Tyr Ile Asn Ser Gly Ser Arg Thr Leu Tyr Tyr Ala Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Ala Tyr Tyr Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 28 <211> 17 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 28 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Thr <210> 29 <211> 7 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 29 Trp Ser Ser Thr Arg Gly Ser 1 5 <210> 30 <211> 9 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 30 Gln Asn Val Tyr Tyr Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 31 <211> 113 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 31 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ser Ser Thr Arg Gly Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Asn 85 90 95 Val Tyr Tyr Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Arg Leu Glu Val 100 105 110 Lys <210> 32 <211> 113 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 32 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ser Ser Thr Arg Gly Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Val Tyr Tyr Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 33 <211> 11 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 33 Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly Tyr Gly Trp Asn 1 5 10 <210> 34 <211> 16 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 34 Tyr Ile His Phe Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 35 <211> 9 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 35 Ser Gly Lys Gly Asn Ala Met Asp Tyr 1 5 <210> 36 <211> 118 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 36 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Asp Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Gly Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile His Phe Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Lys Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 37 <211> 118 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 37 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Gly Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Tyr Ile His Phe Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Lys Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 38 <211> 17 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 38 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Thr <210> 39 <211> 9 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 39 Gln Asn Asp Tyr Tyr Phe Pro Phe Thr 1 5 <210> 40 <211> 113 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 40 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Val Ile Asn Met Gln Ala Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Tyr Phe Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 41 <211> 113 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 41 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Tyr Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 42 <211> 10 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 42 Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr Ile Ile Gln 1 5 10 <210> 43 <211> 17 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 43 Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 44 <211> 9 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 44 Thr Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Pro Asn 1 5 <210> 45 <211> 118 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 45 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Val Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Arg Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr 20 25 30 Ile Ile Gln Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Thr Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Pro Asn Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 46 <211> 9 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 46 Gln Asn Asp Tyr Ser Phe Pro Phe Thr 1 5 <210> 47 <211> 113 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 47 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Phe Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 48 <211> 118 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 48 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Lys Tyr 20 25 30 Ile Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Thr Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Pro Asn Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 49 <211> 113 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 49 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 50 <211> 10 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 50 Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr Gly Val Ser 1 5 10 <210> 51 <211> 16 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 51 Val Met Trp Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 52 <211> 10 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 52 Gln Arg Tyr Gly Gly Asn Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 53 <211> 118 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 53 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Met Trp Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys Gln Arg Tyr Gly Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 54 <211> 9 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 54 Gln Asn Ser Tyr Phe Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 55 <211> 113 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 55 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asn Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Ala Glu Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Thr Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Ser Tyr Phe Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu 100 105 110 Lys <210> 56 <211> 118 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 56 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Met Trp Gly Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gln Arg Tyr Gly Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 57 <211> 113 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 57 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Ser Tyr Phe Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 58 <211> 10 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 58 Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Gly Met Ala 1 5 10 <210> 59 <211> 17 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 59 Phe Ile Asn Asn Leu Ala Tyr Ser Ile Tyr Tyr Val Asp Thr Val Thr 1 5 10 15 Gly <210> 60 <211> 9 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 60 Phe Thr Thr Gly Asn Val Met Asp Tyr 1 5 <210> 61 <211> 118 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 61 Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Gly Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val 35 40 45 Ala Phe Ile Asn Asn Leu Ala Tyr Ser Ile Tyr Tyr Val Asp Thr Val 50 55 60 Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asp Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Phe Thr Thr Gly Asn Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 62 <211> 17 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 62 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Gly Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Thr <210> 63 <211> 7 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 63 Trp Ser Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 64 <211> 9 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 64 Gln Asn Ser Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 65 <211> 113 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 65 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Gly 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ser Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Thr Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Ser Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Leu 100 105 110 Lys <210> 66 <211> 118 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 66 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Gly Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Phe Ile Asn Asn Leu Ala Tyr Ser Ile Tyr Tyr Val Asp Thr Val 50 55 60 Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Phe Thr Thr Gly Asn Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 67 <211> 17 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 67 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Gln Gly Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Thr <210> 68 <211> 113 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 68 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Gln Gly 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ser Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Ser Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 69 <211> 10 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 69 Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr Trp Met His 1 5 10 <210> 70 <211> 17 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 70 Leu Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr Arg Leu Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Asp <210> 71 <211> 6 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 71 Asn Arg Trp Leu Leu Gly 1 5 <210> 72 <211> 115 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 72 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gln Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Leu Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr Arg Leu Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Arg Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Asn Arg Trp Leu Leu Gly Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 73 <211> 115 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 73 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Leu Ile Asp Pro Ser Asp Ser Glu Thr Arg Leu Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Asn Arg Trp Leu Leu Gly Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 74 <211> 9 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 74 Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 75 <211> 113 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 75 Asp Ile Gln Met Ile Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Thr Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 76 <211> 113 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 76 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 77 <211> 10 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 77 Gly Phe Ser Leu Asn Ser Tyr Gly Val Gly 1 5 10 <210> 78 <211> 16 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 78 Val Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asn Tyr His Ser Val Leu Ile Ser 1 5 10 15 <210> 79 <211> 9 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 79 Ile Thr Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr 1 5 <210> 80 <211> 117 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 80 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Ser Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Ser Tyr 20 25 30 Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asn Tyr His Ser Val Leu Ile 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Arg Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Leu Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Met Ile Thr Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 81 <211> 7 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 81 Trp Ala Ser Thr Arg Lys Ser 1 5 <210> 82 <211> 9 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 82 Gln Asn Asn Tyr Leu Phe Pro Leu Thr 1 5 <210> 83 <211> 113 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 83 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Ile Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Thr Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Lys Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Ser Cys Gln Asn 85 90 95 Asn Tyr Leu Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu 100 105 110 Lys <210> 84 <211> 16 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 84 Val Ile Trp Gly Asp Val Ser Thr Asn Tyr His Ser Val Leu Ile Ser 1 5 10 15 <210> 85 <211> 117 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 85 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Ser Tyr 20 25 30 Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Asp Val Ser Thr Asn Tyr His Ser Val Leu Ile 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Ile Thr Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 86 <211> 113 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 86 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Lys Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asn Tyr Leu Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 87 <211> 10 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 87 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Asn 1 5 10 <210> 88 <211> 16 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 88 Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 <210> 89 <211> 9 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 89 Ser Trp Arg Gly Asn Ser Phe Asp Tyr 1 5 <210> 90 <211> 118 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 90 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Ser Trp Arg Gly Asn Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 91 <211> 9 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 91 Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 92 <211> 113 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <400> 92 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 93 <211> 17 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa는 임의의 자연 발생 아미노산일 수 있음 <400> 93 Tyr Ile Ala Pro Phe Xaa Gly Asp Ser Arg Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 94 <211> 16 <212> PRT <213> 인공 <220> <223> 합성 펩티드 <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa는 임의의 자연 발생 아미노산일 수 있음 <400> 94 Val Ile Trp Gly Asp Xaa Ser Thr Asn Tyr His Ser Val Leu Ile Ser 1 5 10 15

Claims (24)

  1. 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서,
    (i) 서열번호 4에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 9에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
    (ii) 서열번호 15 또는 21에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 19 또는 22에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
    (iii) 서열번호 26 또는 27에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 31 또는 32에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
    (iv) 서열번호 36 또는 37에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 40 또는 41에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
    (v) 서열번호 45 또는 48에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 47 또는 49에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
    (vi) 서열번호 53 또는 56에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 55 또는 57에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
    (vii) 서열번호 61 또는 66에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 65 또는 68에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
    (viii) 서열번호 72 또는 73에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 75 또는 76에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
    (ix) 서열번호 80 또는 85에 제시된 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 83 또는 86에 제시된 VL에 함유된 3개의 상보성 결정 영역 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  2. 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서,
    (i) 서열번호 1, 2 및 3 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 6, 7 및 8 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
    (ii) 서열번호 12, 13 및 14 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 16, 17 및 18 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
    (iii) 서열번호 12, 20 및 14 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 16, 17 및 18 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
    (iv) 서열번호 12, 93 및 14 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 16, 17 및 18 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
    (v) 서열번호 23, 24 및 25 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 28, 29 및 30 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
    (vi) 서열번호 33, 34 및 35 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 38, 17 및 39 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
    (vii) 서열번호 42, 43 및 44 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 38, 17 및 46 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
    (viii) 서열번호 50, 51 및 52 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 28, 17 및 54 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
    (ix) 서열번호 58, 59 및 60 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 62, 63 및 64 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
    (x) 서열번호 58, 59 및 60 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 67, 63 및 64 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
    (xi) 서열번호 58, 59 및 60 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 11, 63 및 64 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
    (xii) 서열번호 69, 70 및 71 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 38, 17 및 74 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
    (xiii) 서열번호 77, 78 및 79 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 28, 81 및 82 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
    (xiv) 서열번호 77, 84 및 79 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 28, 81 및 82 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
    (xv) 서열번호 77, 94 및 79 각각의 아미노산 서열에 제시된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 서열번호 28, 81 및 82 각각의 아미노산 서열에 제시된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은
    (i) 서열 번호 4, 15, 21, 26, 27, 36, 37, 45, 48, 53, 56, 61, 66, 72, 73, 80 및 85로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고; 또는
    (ii) 서열 번호 4, 15, 21, 26, 27, 36, 37, 45, 48, 53, 56, 61, 66, 72, 73, 80 및 85로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고; 또는
    (iii) 서열 번호 4, 15, 21, 26, 27, 36, 37, 45, 48, 53, 56, 61, 66, 72, 73, 80 및 85로부터 선택된 아미노산 서열과 비교하여 하나 이상(바람직하게는 10개 이하, 보다 바람직하게는 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하)의 아미노산 변화(바람직하게는 아미노산 치환, 보다 바람직하게는 아미노산 보존적 치환)를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 여기서 바람직하게는, 상기 아미노산 변화는 CDR에서 발생하지 않고, 및/또는
    상기 경쇄 가변 영역은
    (i) 서열 번호 9, 19, 22, 31, 32, 40, 41, 47, 49, 55, 57, 65, 68, 75, 76, 83 및 86으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고; 또는
    (ii) 서열 번호 9, 19, 22, 31, 32, 40, 41, 47, 49, 55, 57, 65, 68, 75, 76, 83 및 86으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고; 또는
    (iii) 서열 번호 9, 19, 22, 31, 32, 40, 41, 47, 49, 55, 57, 65, 68, 75, 76, 83 및 86으로부터 선택된 아미노산 서열과 비교하여 하나 이상(바람직하게는 10개 이하, 보다 바람직하게는 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하)의 아미노산 변화(바람직하게는 아미노산 치환, 보다 바람직하게는 아미노산 보존적 치환)를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 여기서 바람직하게는, 상기 아미노산 변화는 CDR에서 발생하지 않는, 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    (i) 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 9에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (ii) 서열번호 15 또는 21에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 19 또는 22에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (iii) 서열번호 15에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 19에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (iv) 서열번호 21에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 22에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (v) 서열번호 26 또는 27에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 31 또는 32에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (vi) 서열번호 26에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 31에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (vii) 서열번호 27에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 32에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (viii) 서열번호 36 또는 37에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 40 또는 41에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (ix) 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 40에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (x) 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 41에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (xi) 서열번호 45 또는 48에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 47 또는 49에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (xii) 서열번호 45에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 47에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (xiii) 서열번호 48에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 49에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (xiv) 서열번호 53 또는 56에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 55 또는 57에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (xv) 서열번호 53에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 55에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (xvi) 서열번호 56에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 57에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (xvii) 서열번호 61 또는 66에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 65 또는 68에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (xviii) 서열번호 61에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 65에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (xix) 서열번호 66에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 68에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (xx) 서열번호 72 또는 73에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 75 또는 76에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (xxi) 서열번호 72에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 75에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (xxii) 서열번호 73에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 76에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (xxiii) 서열번호 80 또는 85에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 83 또는 86에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (xxiv) 서열번호 80에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 83에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VL;
    (xxv) 서열번호 85에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 VH, 및 서열번호 86에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 Vl을 포함하는, 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 불변 영역 및/또는 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하는, 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 중쇄 불변 영역 HC는
    (i) 서열번호 5로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고,
    (ii) 서열번호 5로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 또는
    (iii) 서열번호 5로 부터 선택된 아미노산 서열과 비교하여 1개 이상(바람직하게는 20개 또는 10개 이하, 보다 바람직하게는 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하)의 아미노산 변형(바람직하게는 아미노산 치환, 보다 바람직하게는 아미노산 보존적 치환)을 가지는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고; 및/또는
    상기 경쇄 불변 영역 LC는
    (i) 서열번호 10으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고;
    (ii) 서열번호 10으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고; 또는
    (iii) 서열번호 10으로부터 선택된 아미노산 서열과 비교하여 1개 이상(바람직하게는 20개 또는 10개 이하, 보다 바람직하게는 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하)의 아미노산 변형(바람직하게는 아미노산 치환, 보다 바람직하게는 아미노산 보존적 치환)을 가지는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는, 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  7. 제5항 또는 제6항에 있어서,
    상기 아미노산 변화는 상기 중쇄 불변 영역의 Fc 영역에서 발생하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는 항체 또는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 형태의 항원 결합 단편이고; 바람직하게는, 상기 항체는 항체 또는 IgG1 형태의 항원 결합 단편인, CLDN18.2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는 모노클로날 항체인, CLDN18.2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는 인간화 항체, 인간 항체 또는 키메라 항체인, CLDN18.2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항원 결합 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, Fv, 단쇄 항체(예를 들어, scFv), (Fab')2, 단일 도메인 항체(예를 들어, VHH), 도메인 항체(dAb) 및 선형 항체로부터 선택된 항체 단편인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기 특성 중 하나 이상을 갖는, 항-CLDN18.2 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    (i) 높은 친화성으로 CLDN18.2(예를 들어, 인간 CLDN18.2)에 결합하지만 CLDN18.1(예를 들어, 인간 CLDN18.1)에는 결합하지 않음;
    (ii) 약 15nM 미만, 바람직하게는 약 10nM, 9.5nM, 9nM, 8.5nM, 8nM, 7.5nM, 7nM, 6.5nM, 6nM, 5.5nM, 5nM, 4.5nM, 4nM, 3.5nM 또는 3nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간 CLDN18.2에 결합;
    (iii) 세포 표면의 CLDN18.2에는 결합하지만 세포 표면의 CLDN18.1에는 결합하지 않음;
    (iv) ADCC 활성 또는 CDC 활성, 예를 들어 공지된 항체(예를 들어, Zmab)와 동등하거나 이보다 더 높은 ADCC 활성 또는 CDC 활성을 가짐;
    (v) 종양 세포, 예를 들어 CLDN18.2를 발현하는 종양 세포의 억제; 및
    (vi) 약 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% 또는 70% 이상의 종양 성장 억제로 종양 성장을 효과적으로 억제할 수 있음.
  13. 단리된 핵산으로서, 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 CLDN18.2에 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 경쇄 가변 영역 또는 중쇄 가변 영역, 또는 경쇄 또는 중쇄를 인코딩하는, 단리된 핵산.
  14. 벡터로서, 제13항에 따른 핵산을 포함하고, 여기서 바람직하게는, 상기 벡터는 발현 벡터인, 벡터.
  15. 숙주 세포로서, 제13항에 따른 핵산 또는 제14항에 따른 벡터를 포함하고, 여기서 바람직하게는, 상기 숙주 세포는 원핵 또는 진핵이며, 보다 바람직하게는, 상기 숙주 세포는 효모 세포, 포유류 세포(예를 들어, 293 세포 또는 CHO 세포, 예컨대 CHO-S 세포 또는 HEK293 세포), 혹은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 제조에 적합한 추가 세포로부터 선택되는, 숙주 세포.
  16. CLDN18.2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제조하기 위한 방법으로서,
    제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 CLDN18.2에 결합하는 상기 항체 또는 이의 상기 항원 결합 단편을 인코딩하는 핵산의 발현에 적합한 조건 하에서 제15항에 따른 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 선택적으로 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 단리하는 단계를 포함하고; 여기서 선택적으로, 상기 방법은 상기 숙주 세포로부터 CLDN18.2에 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 복원하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  17. 면역접합체로서, 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 CLDN18.2에 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 추가 물질, 예를 들어 세포독성제를 포함하는, 면역접합체.
  18. 약제학적 조성물로서, 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 CLDN18.2에 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제17항에 따른 면역접합체, 및 선택적으로 하나 이상의 추가 치료제, 예를 들어, 화학요법제, 사이토카인, 세포독성제, 추가 항체, 소분자 약물 또는 면역조절제, 및 선택적으로 약제학적 보충 물질을 포함하는, 약제학적 조성물.
  19. 약제학적 조합으로서, 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 CLDN18.2에 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제17항에 따른 면역접합체, 및 하나 이상의 추가 치료제, 예를 들어 화학요법제, 사이토카인, 세포독성제, 추가 항체, 소분자 약물 또는 면역조절제를 포함하는, 약제학적 조합.
  20. 대상체의 종양을 예방 또는 치료하기 위한 방법으로서, 유효량의 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 CLDN18.2에 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제17항에 따른 면역접합체, 제18항에 따른 약제학적 조성물, 또는 제19항에 따른 약제학적 조합을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  21. 대상체에서 ADCC 및/또는 CDC를 유도하기 위한 방법으로서, 유효량의 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 CLDN18.2에 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제17항에 따른 면역접합체, 또는 제18항에 따른 약제학적 조성물, 또는 제19항에 따른 약제학적 조합을 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 바람직하게는, 상기 대상체는 종양을 갖는, 방법.
  22. 제20항 또는 제21항에 있어서, 상기 종양은 암이고; 바람직하게는, 상기 암은 상승된 수준의 CLDN18.2를 갖고(예를 들어, 핵산 또는 단백질 수준에서); 예를 들어, 상기 암은 췌장암 또는 위암인, 방법.
  23. 제20항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 환자에게 하나 이상의 요법, 예를 들어, 치료 양식 및/또는 추가 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함하고; 바람직하게는, 상기 치료 양식은 외과적 치료 및/또는 방사선 요법을 포함하고, 상기 추가 치료제는 화학요법제, 사이토카인, 세포독성제, 추가 항체, 소분자 약물 및 면역조절제로부터 선택되는, 방법.
  24. 샘플에서 CLDN18.2를 검출하기 위한 방법으로서,
    (a) 상기 샘플을 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 제17항에 따른 면역접합체와 접촉시키는 단계; 및
    (b) 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 CLDN18.2에 의해 형성된 복합체를 검출하는 단계를 포함하고, 여기서, 선택적으로 상기 항체는 검출가능하게 표지되는, 방법.


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