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KR20210102274A - 헤르복시디엔 항체-약물 접합체 및 사용 방법 - Google Patents

헤르복시디엔 항체-약물 접합체 및 사용 방법 Download PDF

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KR20210102274A
KR20210102274A KR1020217018846A KR20217018846A KR20210102274A KR 20210102274 A KR20210102274 A KR 20210102274A KR 1020217018846 A KR1020217018846 A KR 1020217018846A KR 20217018846 A KR20217018846 A KR 20217018846A KR 20210102274 A KR20210102274 A KR 20210102274A
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KR
South Korea
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antibody
compound
drug conjugate
antigen
group
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KR1020217018846A
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English (en)
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네이선 피쉬킨
티완카 사마라쿤
제임스 팔라시노
겐조 아라이
요시히코 고타케
신야 오쿠보
노리오 무라이
마사유키 미야노
Original Assignee
에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤
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Publication date
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Abstract

인간 종양 표적에 결합하는 링커-약물 화합물 및 항체-약물 접합체가 개시된다. 링커-약물 화합물 및 항체-약물 접합체는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티를 포함한다. 본 개시는 또한 본원에 제공된 항체-약물 접합체의 투여에 의한 신생물성 장애의 치료에 사용하기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다.

Description

헤르복시디엔 항체-약물 접합체 및 사용 방법
본 개시는 2018년 12월 13일에 출원된, 미국 가출원 번호 62/779,400; 2018년 12월 13일에 출원된, 미국 가출원 번호 62/779,406; 및 2019년 11월 27일에 출원된, 미국 가출원 번호 62/941,220에 대한 우선권의 이익을 주장한다. 전술된 출원 모두는 그 전체가 본원에 참조로서 포함된다.
본 개시는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항체-약물 접합체(ADC), 예를 들어 인간 종양 항원 표적에 결합하는 것에 관한 것이다. 본 개시는 또한 표적 항원을 발현하고/하거나 RNA 스플라이싱 방해에 의한 치료로 치료 가능한 암의 치료 또는 진단에 유용한 방법 및 조성물뿐만 아니라 이들 조성물의 제조 방법에 관한 것이다.
인간 게놈 중 대다수의 단백질-코딩 유전자는 인트론(비-코딩 영역)에 의해 분리된 다수의 엑손(코딩 영역)으로 구성된다. 유전자 발현은 단일 전구체 메신저 RNA(전구(pre)-mRNA)를 생성한다. 인트론 서열은 그 후 스플라이싱이라는 과정에 의해 전구-mRNA로부터 제거되어, 성숙한 메신저 RNA(mRNA)를 생성한다. 엑손의 상이한 조합을 포함함으로써, 선택적 스플라이싱(alternative splicing)은 별개의 단백질 이소형을 인코딩하는 mRNA를 야기한다.
RNA 스플라이싱은 5개의 작은 핵 RNA(snRNA U1, U2, U4, U5, 및 U6) 및 관련 단백질로 구성된 동적 다중단백질-RNA 복합체인, 스플라이세오솜(spliceosome)에 의해 촉매된다. 스플라이세오솜은 전구-mRNA 상에 집결하여 인트론의 절단 및 엑손의 결찰을 촉매하는 다수의 RNA 및 단백질 상호 작용의 동적 캐스케이드를 확립한다(Matera and Wang(2014) Nat Rev Mol Cell Biol. 15(2): 108-21). 축적되는 증거는 많은 유전자에 영향을 미치는 RNA 스플라이싱에서의 조절 장애와 인간 질환을 연결시켰다(Scotti and Swanson(2016) Nat Rev Genet. 17(1): 19-32).
스플라이세오솜은 암 생물학에서 중요한 표적이다. 현재 여러 연구는 암세포의 스플라이싱 프로파일뿐만 아니라 스플라이싱 인자 그 자체에서의 유의미한 변경을 기록하였다(Agrawal et al.(2018) Curr Opin Genet Dev. 48: 67-74). 선택적 스플라이싱은 차등적 엑손 포함/제외, 인트론 보유, 또는 잠재 스플라이스 부위의 사용으로 이어질 수 있다(Seiler et al.(2018) Cell Rep. 23(1): 282-296). 전체적으로 보아, 이들 사건은 종양 발생 또는 치료법에 대한 내성에 기여할 수 있는 기능적 변화를 설명한다(Siegfried and Karni(2018) Curr Opin Genet Dev. 48: 16-21).
일정 천연 산물은 SF3b 스플라이세오솜 복합체에 결합할 수 있다. 이들 소 분자는 인트론 보유 및/또는 엑손 스키핑(skipping)을 촉진함으로써 스플라이싱을 조절한다(Teng et al.(2017) Nat Commun. 8: 15522). 예를 들어, 스트렙토마이세스 종(Streptomyces sp.) A7847로부터 단리된 자연적으로 발생하는 폴리케타이드인 헤르복시디엔(herboxidiene)(Isaac et al.(1992) J. Org. Chem. 57: 7220-26) 및 그 유도체는 스플라이싱을 조절하는 것으로 나타났다. 예를 들어, 문헌[Imaizumi et al.(2017) J. Antibiot. 70: 675-79] 참고. 생성된 전사체의 상당 부분이 넌센스 매개 mRNA 붕괴(NMD)를 유발하는 조기 정지 코돈을 함유한다. 또한, 정준 스플라이싱이 손상되기 때문에, 정준 전사체는 상당히 감소되어, 세포 기능 및 생존력에 부정적으로 영향을 미칠 수 있다. 이 이유로, 스플라이싱 조절제는 암 치료를 위한 유망한 종류의 약물이 되었다(Puthenveetil et al.(2016) Bioconjugate Chem. 27: 1880-8).
원-종양 유전자 인간 표피 성장 인자 수용체 2(HER2)는 인간 표피 성장 인자 수용체(EGFR) 패밀리에 속하는 막 관통 티로신 키나제 수용체를 인코딩한다(King et al.(1985) Science 229: 974-6). HER2의 과발현은, PI3K-AKT-mTOR 경로와 같은, 성장 인자 신호 전달 경로의 구성적 활성화를 가능하게하여, 이로써 침습성 유방 암종의 약 20%를 포함하는, 여러 유형의 암에서 종양 유전자 동인으로서 역할을 한다(Slamon et al.(1989) Science 244: 707-12; Gajria and Chandarlapaty(2011) Expert Rev Anticancer Ther. 11: 263-75). HER2 증폭이 형질 전환된 표현형을 매개함을 고려할 때, 그리고 HER2 발현은 대체로 악성 세포에 한정되기 때문에, HER2는 일정 암을 표적화 하고/하거나 새로운 암 치료를 전달하기 위한 유망한 항원이다(Parakh et al.(2017) Cancer Treat Rev. 59: 1-21). 암 치료법의 표적화된 전달을 위한 추가의 항원에는 CD138(신데칸-1로도 지칭됨) 및 에프린 A 형 수용체 2(EPHA2)가 포함되나, 이에 한정되지 않는다.
CD138은 세포 형태를 유지하는 것 및 주변 미세 환경과의 상호 작용에 필수적인 세포 표면 헤파란 설페이트 프로테오글리칸이다(Akl et al.(2015) Oncotarget 6(30): 28693-715; Szatmαri et al.(2015) Dis Markers 2015: 796052). 일반적으로, 암종 세포에서 CD138 발현의 상실은 세포외 매트릭스에 대한 세포 부착을 감소시키고 세포 운동성 및 침입을 향상시킨다(Teng et al.(2012) Matrix Biol. 31: 3-16). 증가된 간질 CD138 발현은 또한 피브로넥틴 생산 및 세포외 매트릭스 구조를 변경시킨다(Yang et al.(2011) Am J Pathol. 178: 325-35). 추가로, 간질 섬유모세포에서 증가된 CD138 발현은 혈관 신생 및 암 진행과 관련이 있다(Maeda et al.(2006) Oncogene 25: 1408-12). CD138 발현은 B 세포 발생 중에 증가하며 이의 존재가 형질 세포의 특징이다(Ribatti(2017) Immunol Lett. 188: 64-7). CD138 발현은, 형질 세포의 악성 종양인, 다발성 골수종에서 유지된다. 따라서 CD138은 여러 암 및 기타 혈액 악성 종양의 표적화된 치료를 위한 매력적인 항원이다(Sherbenou et al.(2015) Blood Rev. 29(2): 81-91; Wijdenes et al.(1996) Br J Haematol. 94(2): 318-23).
EPHA2는 여러 악성 암-유래 세포주 및 진행된 형태의 암에서 풍부하게 과발현되는 막 관통 당 단백질이다(Wykosky and Debinski(2008) Mol Cancer Ref. 6(12): 1795-1806). 예를 들어, EPHA2는 GBM 환자 종양의 약 61%(Wykosky et al.(2008) Clin Cancer Res. 14: 199-208), 난소 암의 76%(Thaker et al.(2004) Clin Cancer Res. 10: 5145-50), 및 전립선 선암종의 85%(Zeng et al.(2003) Am J Pathol. 163: 2271-6)에서 강하게 과발현된다. EPHA2 단백질은 환자 종양의 백분율 및 종양 내 세포의 백분율과 관련하여 고도로 과발현되며, 리간드 결합 시 내입될 수 있는 원형질 막-국소화된 수용체이다(Walker-Daniels et al.(2002) Mol Cancer Res. 1: 79-87). 더욱이 EPHA2의 발현은 불량한 예후, 전이 증가, 및 생존 감소와 관련이 있다. 따라서, 암 환자의 결과에서의 이의 발현 패턴, 국소화, 및 기능적 중요성으로 인해, EPHA2는 새로운 항암 치료법의 표적화된 전달을 위한 또 다른 매력적인 항원이다.
다양한 구현예에서, 본 개시는, 부분적으로, 신생물 세포에 대한 생물학적 활성을 갖는 신규한 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 제공한다. 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 포유동물에서 종양 성장을 늦추고, 저해, 및/또는 역전시키기 위해 단독으로 또는 ADC의 일부로서 사용될 수 있으며, 인간 암 환자를 치료하는 데 유용할 수 있다. 다양한 구현예에서, 본 개시는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 사용하는 신규한 항체-약물 접합체를 제공한다.
본 개시는 보다 구체적으로, 다양한 구현예에서, 신생물 세포에 결합 및 살해할 수 있는 항체-약물 접합체(ADC) 화합물에 관한 것이다. 다양한 구현예에서, 본원에 개시된 ADC 화합물은 전장 항체 또는 항원 결합 단편에 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 부착시키는 링커를 포함한다. 다양한 구현예에서, ADC 화합물은 또한 결합 후 표적 세포 내로 내입될 수 있다.
일부 구현예에서, 항체-약물 접합체는 화학식 I의 항체-약물 접합체이다: Ab-(L-H) p , 여기서 Ab는 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 항원 결합 단편이고; H는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제이고; L은 Ab를 H에 공유 결합으로 부착시키는 링커이고; p는 1 내지 15의 정수이다.
일부 구현예에서, H, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 화학식 I의 화합물:
[화학식 I]
Figure pct00001
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하며, 이는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고, 여기서:
Y는 O, S, NR6, 및 CR6R7로부터 선택되고;
R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 하이드록실, -O-(C1-C6 알킬) 기, -O-C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되고;
R4는 수소, C1-C6 알킬 기, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, 및 -C(=O)-NR6R7로부터 선택되고;
R5는 수소, 하이드록실, -CH2-OH, -CO2H, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-NR6R7, -NR6-C(=O)-R8, -O-C(=O)-NR6R7, -NR6-C(=O)-R8, 및 -NR6-C(=O)-NR6R7로부터 선택되고;
R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, -R8, -C(=O)-R8, 및 -C(=O)-O-R8로부터 선택되고;
R8은 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고,
여기서 R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, 및 R8은 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, -NR6R7, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환되며, 이들 각각은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, C1-C3 할로알킬 기, -NH-C(=O)(C1-C3 알킬), 및 -NH-C(=O)-O-(C1-C3 알킬)로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 독립적으로 치환될 수 있으며,
여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않는다.
일부 구현예에서, H, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 화학식 Ia의 화합물:
[화학식 Ia]
Figure pct00002
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하며, 이는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고, 여기서:
R9는 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고;
R10은 H 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되며,
여기서 R9 및 R10은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, -NH2, -NH-(C1-C3 알킬), 및 -N-(C1-C3 알킬)2로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환되며,
여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않는다.
일부 구현예에서, H, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 화학식 Ib의 화합물:
[화학식 Ib]
Figure pct00003
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하며, 이는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고, 여기서:
R11은
Figure pct00004
로부터 선택되며, 여기서 *는 화합물의 나머지 부분에 대한 R11의 연결 지점을 나타내고;
R12 및 R13은 H 및 메틸로부터 각각 독립적으로 선택되고;
여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않는다.
일부 구현예에서, H, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 화학식 II의 화합물:
[화학식 II]
Figure pct00005
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하며, 이는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고, 여기서:
X는 하이드록실 또는 NR6R7이고;
R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, -R8, -C(=O)-R8, -C(=O)-O-R8, -(C1-C6 알킬)-O-C(=O)-R8, 및 -(C1-C6 알킬)-NH-C(=O)-R8로부터 선택되고;
R8은 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고,
여기서 R6, R7, 및 R8은 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, -NR6R7, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환되며, 이들 각각은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, C1-C3 할로알킬 기, -NH-C(=O)(C1-C3 알킬), 및 -NH-C(=O)-O-(C1-C3 알킬)로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 독립적으로 치환될 수 있고,
여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않는다.
일부 구현예에서, H, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 화학식 IIa의 화합물:
[화학식 IIa]
Figure pct00006
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하며, 이는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고, 여기서:
Z는 NR9 및 O로부터 선택되고;
R9는 수소 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되고;
R10 및 R11은 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고;
R12는 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되며,
여기서 R9, R10, R11, 및 R12는 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, 및 C1-C3 할로알킬 기로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 각각 독립적으로 치환되고;
t는 1, 2, 3, 4, 5, 및 6으로부터 선택되는 정수이며;
여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않는다.
일부 구현예에서, H, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 화학식 IIb의 화합물:
[화학식 IIb]
Figure pct00007
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하며, 이는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고, 여기서:
R13은
Figure pct00008
로부터 선택되며, 여기서 *는 화합물의 나머지 부분에 대한 R13의 연결 지점을 나타내고;
R14 및 R15는 각각 독립적으로 수소 및 메틸로부터 선택되며;
여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않는다.
일부 구현예에서, H, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 화학식 III의 화합물:
[화학식 III]
Figure pct00009
또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하며, 이는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고, 여기서:
R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 하이드록실, -O-(C1-C6 알킬) 기, -O-C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되고;
R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, -R8, -C(=O)-R8, 및 -C(=O)-O-R8로부터 선택되고;
R8은 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고;
R9는 H,
Figure pct00010
로부터 선택되고;
여기서 R1, R2, R3, R6, R7, 및 R8은 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, -NR6R7, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환되며, 이들 각각은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, C1-C3 할로알킬 기, -NH-C(=O)(C1-C3 알킬), 및 -NH-C(=O)-O-(C1-C3 알킬)로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 독립적으로 치환될 수 있으며,
여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않고;
여기서 *는 화합물의 나머지 부분에 대한 R9의 연결 지점을 나타낸다.
일부 구현예에서, 링커는 절단 가능한 펩티드 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 펩티드 모이어티는 효소에 의해 절단 가능하다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 링커는 아미노산 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 단위는 발린-시트룰린("Val-Cit" 또는 "VC")을 포함한다. 일부 다른 구현예에서, 아미노산 단위는 발린-알라닌("Val-Ala" 또는 "VA")을 포함한다. 일부 다른 구현예에서, 아미노산 단위는 글루탐산-발린-시트룰린("Glu-Val-Cit" 또는 "EVC")을 포함한다. 일부 다른 구현예에서, 아미노산 단위는 알라닌-알라닌-아스파라긴("Ala-Ala-Asn" 또는 "AAN")을 포함한다.
일부 구현예에서, 링커는 절단 가능한 글루쿠로나이드 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 글루쿠로나이드 모이어티는 효소에 의해 절단 가능하다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 글루쿠로나이드 모이어티는 글루쿠로니다제에 의해 절단 가능하다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 글루쿠로나이드 모이어티는 β-글루쿠로니다제에 의해 절단 가능하다.
일부 구현예에서, 링커는 적어도 하나의 스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서 단위 또는 링커는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, PEG 모이어티는 -(PEG) m -을 포함하고 m은 1 내지 10의 정수이다. 일부 구현예에서, m은 2이다. 일부 다른 구현예에서, 스페이서 단위 또는 링커는 알킬 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 알킬 모이어티는 -(CH2) n -을 포함하고 n은 1 내지 10의 정수이다. 일부 구현예에서, n은 2이다. 일부 구현예에서, n은 5이다. 일부 구현예에서, n은 6이다.
일부 구현예에서, 스페이서 단위는 말레이미드(Mal) 모이어티를 통해 항체 또는 항원 결합 단편에 부착한다("Mal-스페이서 단위"). 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 항체 또는 항원 결합 단편 상의 시스테인 잔기와 반응성이다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 항체 또는 항원 결합 단편 상의 시스테인 잔기를 통해 항체 또는 항원 결합 단편에 연결된다.
일부 구현예에서, 링커는 Mal-스페이서 단위 및 절단 가능한 펩티드 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 펩티드 모이어티는 아미노산 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 아미노산 단위는 Val-Cit를 포함한다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 아미노산 단위는 Val-Ala를 포함한다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 아미노산 단위는 Glu-Val-Cit를 포함한다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 아미노산 단위는 Ala-Ala-Asn을 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 알킬 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 PEG 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 말레이미도카프로일(MC)을 포함한다.
일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 항체 또는 항원 결합 단편을 링커의 절단 가능한 모이어티에 부착한다. 일부 구현예에서, 링커의 절단 가능한 모이어티는 절단 가능한 펩티드 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 펩티드 모이어티는 아미노산 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 아미노산 단위는 Val-Cit, Val-Ala, Glu-Val-Cit, 또는 Ala-Ala-Asn을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Val-Cit를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Val-Ala를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Glu-Val-Cit를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Ala-Ala-Asn을 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 알킬 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 PEG 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 말레이미도카프로일(MC)을 포함한다.
일부 구현예에서, 링커의 절단 가능한 모이어티는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 직접 연결되거나, 스페이서 단위가 링커의 절단 가능한 모이어티를 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 부착시킨다. 일부 구현예에서, 접합체의 절단은 항체 또는 항원 결합 단편 및 링커로부터 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 방출한다. 일부 구현예에서, 링커의 절단 가능한 모이어티를 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 부착시키는 스페이서 단위는 자기-희생적(self-immolative)이다.
일부 구현예에서, 링커의 절단 가능한 모이어티를 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 부착시키는 스페이서 단위는 p-아미노벤질옥시카르보닐(pABC)을 포함한다. 일부 구현예에서, pABC는 링커의 절단 가능한 모이어티를 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 부착시킨다. 일부 구현예에서, 링커의 절단 가능한 모이어티는 절단 가능한 펩티드 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 펩티드 모이어티는 아미노산 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 아미노산 단위는 Val-Cit, Val-Ala, Glu-Val-Cit, 또는 Ala-Ala-Asn을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 Val-Cit-pABC를 포함한다. 일부 다른 구현예에서, 링커는 Val-Ala-pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 Glu-Val-Cit-pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 Ala-Ala-Asn-pABC를 포함한다.
일부 구현예에서, 링커의 절단 가능한 모이어티를 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 부착시키는 스페이서 단위는 p-아미노벤질(pAB)을 포함한다. 일부 구현예에서, pAB는 링커의 절단 가능한 모이어티를 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 부착시킨다. 일부 구현예에서, 링커의 절단 가능한 모이어티는 절단 가능한 펩티드 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 펩티드 모이어티는 아미노산 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 아미노산 단위는 Val-Cit, Val-Ala, Glu-Val-Cit, 또는 Ala-Ala-Asn을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 Val-Cit-pAB를 포함한다. 일부 다른 구현예에서, 링커는 Val-Ala-pAB를 포함한다. 일부 다른 구현예에서, 링커는 Glu-Val-Cit-pAB를 포함한다. 일부 다른 구현예에서, 링커는 Ala-Ala-Asn-pAB를 포함한다.
다양한 구현예에서, 링커는 비-절단 가능한 링커이다. 일부 구현예에서, ADC의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 항체 또는 항원 결합 단편의 분해에 의해 방출된다. 일부 구현예에서, 표적 세포에 의한 내입 및 표적 세포 내에서의 분해 시 링커는 항체 및 약물의 적어도 하나의 아미노산과 계속 공유 결합으로 결합되어 있다.
일부 구현예에서, 링커는 적어도 하나의 스페이서 단위를 포함하는 비-절단 가능한 링커이다. 일부 구현예에서, 스페이서 단위 또는 링커는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, PEG 모이어티는 -(PEG) m -을 포함하고 m은 1 내지 10의 정수이다. 일부 구현예에서, m은 2이다. 일부 다른 구현예에서, 스페이서 단위 또는 링커는 알킬 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 알킬 모이어티는 -(CH2) n - 또는 -(CH2) n -O-(CH2) n 을 포함하고 n은 1 내지 10의 정수이다. 일부 구현예에서, n은 2이다. 일부 구현예에서, n은 5이다. 일부 구현예에서, n은 6이다.
일부 구현예에서, 비-절단 가능한 링커의 스페이서 단위는 말레이미드(Mal) 모이어티를 통해 항체 또는 항원 결합 단편에 부착된다("Mal-스페이서 단위"). 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 항체 또는 항원 결합 단편 상의 시스테인 잔기와 반응성이다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 항체 또는 항원 결합 단편 상의 시스테인 잔기를 통해 항체 또는 항원 결합 단편에 연결된다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 알킬 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 PEG 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커 또는 Mal-스페이서 단위는 말레이미도카프로일(MC)을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커 또는 Mal-스페이서 단위는 말레이미도카프로일(MC) 및 적어도 하나의 추가 스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커 또는 Mal-스페이서 단위는 MC-(PEG)2를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커 또는 Mal-스페이서 단위는 MC-(PEG)2 및 적어도 하나의 추가 스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커 또는 Mal-스페이서 단위는 Mal-Hex를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커 또는 Mal-스페이서 단위는 Mal-Hex 및 적어도 하나의 추가 스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커 또는 Mal-스페이서 단위는 Mal-Et를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커 또는 Mal-스페이서 단위는 Mal-Et 및 적어도 하나의 추가 스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커 또는 Mal-스페이서 단위는 Mal-Et-O-Et를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커 또는 Mal-스페이서 단위는 Mal-Et-O-Et 및 적어도 하나의 추가 스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 항체 또는 항원 결합 단편을 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 부착시킨다.
일부 구현예에서, Ab는 본원에 개시된 항체 또는 결합 도메인 서열 중 임의의 것으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, Ab는 HER2 및/또는 HER2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 결합 도메인 서열이다. 일부 구현예에서, Ab는 CD138 및/또는 CD138-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 결합 도메인 서열이다. 일부 구현예에서, Ab는 EPHA2 및/또는 EPHA2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 결합 도메인 서열이다. 일부 구현예에서, Ab는 MSLN 및/또는 MSLN-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 결합 도메인 서열이다. 일부 구현예에서, Ab는 FOLH1 및/또는 FOLH1-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 결합 도메인 서열이다. 일부 구현예에서, Ab는 CDH6 및/또는 CDH6-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 결합 도메인 서열이다. 일부 구현예에서, Ab는 CEACAM5 및/또는 CEACAM5-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 결합 도메인 서열이다. 일부 구현예에서, Ab는 CFC1B 및/또는 CFC1B-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 결합 도메인 서열이다. 일부 구현예에서, Ab는 ENPP3 및/또는 ENPP3-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 결합 도메인 서열이다. 일부 구현예에서, Ab는 FOLR1 및/또는 FOLR1-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 결합 도메인 서열이다. 일부 구현예에서, Ab는 HAVCR1 및/또는 HAVCR1-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 결합 도메인 서열이다. 일부 구현예에서, Ab는 KIT 및/또는 KIT-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 결합 도메인 서열이다. 일부 구현예에서, Ab는 MET 및/또는 MET-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 결합 도메인 서열이다. 일부 구현예에서, Ab는 MUC16 및/또는 MUC16-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 결합 도메인 서열이다. 일부 구현예에서, Ab는 SLC39A6 및/또는 SLC39A6-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 결합 도메인 서열이다. 일부 구현예에서, Ab는 SLC44A4 및/또는 SLC44A4-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 결합 도메인 서열이다. 일부 구현예에서, Ab는 STEAP1 및/또는 STEAP1-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 결합 도메인 서열이다. 일부 구현예에서, Ab는 또 다른 암 항원을 표적화하는 항체 또는 결합 도메인 서열이다.
일부 구현예에서, L은 본원에 개시된 링커 중 임의의 것, 또는 본원에 개시된 링커 성분의 임의의 조합으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, L은 MC-Val-Cit-pABC, Mal-(PEG)2-CO, MC-Val-Ala-pAB, MC-Val-Ala-pABC, MC-Val-Cit-pAB, Mal-Hex, Mal-Et, 또는 Mal-Et-O-Et를 포함하는 링커이다. 일부 구현예에서, 링커는 또한 하나 이상의 추가 스페이서 단위를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, L은 ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL10, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21, ADL22, 또는 ADL23 링커이다. 일부 구현예에서, L은 ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21, 또는 ADL23 링커이다. 일부 구현예에서, L은 ADL12, ADL14, 또는 ADL15 링커이다. 일부 구현예에서, ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21, 또는 ADL23 링커는 또한 하나 이상의 추가 스페이서 단위를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, L은 ADL1 링커이고 선택적으로 하나 이상의 추가 스페이서 단위를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, L은 ADL2 링커이고 선택적으로 하나 이상의 추가 스페이서 단위를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, L은 ADL5 링커이고 선택적으로 하나 이상의 추가 스페이서 단위를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, L은 ADL6 링커이고 선택적으로 하나 이상의 추가 스페이서 단위를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, L은 ADL7 링커이고 선택적으로 하나 이상의 추가 스페이서 단위를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, L은 ADL12 링커이고 선택적으로 하나 이상의 추가 스페이서 단위를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, L은 ADL14 링커이고 선택적으로 하나 이상의 추가 스페이서 단위를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, L은 ADL15 링커이고 선택적으로 하나 이상의 추가 스페이서 단위를 포함할 수 있다. 본원에 기재된 ADC의 다양한 구현예에서, p는 1 내지 10이다. 다양한 구현예에서, p는 2 내지 8이다. 다양한 구현예에서, p는 4 내지 8이다. 일부 구현예에서, p는 4이다. 일부 구현예에서, p는 8이다.
일부 구현예에서, ADC 풀이 제공되어 이에 의해 무작위 접합이 발생하고, 풀에서의 평균 p는 약 2 내지 약 8이다. 일부 구현예에서, ADC 풀이 제공되어 이에 의해 무작위 접합이 발생하고, 풀에서의 평균 p는 약 4 내지 약 8이다. 일부 구현예에서, ADC 풀이 제공되어 이에 의해 무작위 접합이 발생하고, 풀에서의 평균 p는 약 4이다. 일부 구현예에서, ADC 풀이 제공되어 이에 의해 무작위 접합이 발생하고, 풀에서의 평균 p는 약 8이다. 조성물 내의 ADC의 평균 약물 로딩(평균 p)이 약 3.5 내지 약 5.5(예를 들어, 약 4), 또는 약 7 내지 약 9(예를 들어, 약 8)인, 기재된 ADC 중 임의의 것의 다수 카피(copy)를 포함하는 조성물(예를 들어, 약학 조성물)이 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, ADC의 항체 또는 항원 결합 단편(Ab)은 혈액 악성 종양 또는 고형 종양으로부터 유래된 신생물 세포를 표적화한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 혈액 악성 종양으로부터 유래된 신생물 세포를 표적화한다. 일부 구현예에서, 혈액 악성 종양은 B-세포 악성 종양, 백혈병(예를 들어, 급성 골수성 백혈병), 림프종, 및 골수종(예를 들어, 다발성 골수종)으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 혈액 악성 종양은 급성 골수성 백혈병 및 다발성 골수종으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 고형 종양으로부터 유래된 신생물 세포를 표적화한다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 유방암(예를 들어, HER2-양성 유방암), 위암(예를 들어, 위 선암종), 전립선암, 난소암, 폐암(예를 들어, 폐 선암종), 자궁암(예를 들어, 자궁 장액 자궁내막 암종), 타액 관 암종, 흑색종, 결장암, 자궁 경부암, 췌장암, 신장암, 결장직장암, 및 식도암으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 HER2-양성 유방암, 위 선암종, 전립선암, 및 골육종으로부터 선택된다.
다양한 구현예에서, ADC의 항체 또는 항원 결합 단편(Ab)은 항-HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HER2에 결합하고 HER2-발현 신생물 세포를 표적화한다(즉, ADC는 HER2-발현 신생물 세포를 표적화한다). 일부 구현예에서, ADC의 항체 또는 항원 결합 단편은 내입되는 항-HER2 항체 또는 이의 내입되는 항원 결합 단편이다.
일부 구현예에서, 항-HER2 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 1(HCDR1), SEQ ID NO: 2(HCDR2), 및 SEQ ID NO: 3(HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 SEQ ID NO: 4(LCDR1), SEQ ID NO: 5(LCDR2), 및 SEQ ID NO: 6(LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-HER2 항체 또는 항원 결합 단편은 내입되는 항체 또는 내입되는 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 항-HER2 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 프레임워크 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-HER2 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-HER2 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 IgG 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-HER2 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-HER2 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 Ig 카파 또는 람다 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-HER2 항체 또는 항원 결합은 SEQ ID NO: 19의 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 20의 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합을 위해 경쟁하고/하거나 이에 결합한다.
다양한 구현예에서, ADC의 항체 또는 항원 결합 단편(Ab)은 항-CD138 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 CD138에 결합하고 CD138-발현 신생물 세포를 표적화한다(즉, ADC는 CD138-발현 신생물 세포를 표적화한다). 일부 구현예에서, ADC의 항체 또는 항원 결합 단편은 내입되는 항-CD138 항체 또는 이의 내입되는 항원 결합 단편이다.
일부 구현예에서, 항-CD138 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 7(HCDR1), SEQ ID NO: 8(HCDR2), 및 SEQ ID NO: 9(HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 SEQ ID NO: 10(LCDR1), SEQ ID NO: 11(LCDR2), 및 SEQ ID NO: 12(LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD138 항체 또는 항원 결합 단편은 내입되는 항체 또는 내입되는 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 항-CD138 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 프레임워크 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD138 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD138 항체 또는 항원 결합 단편은 뮤린(murine) IgG2a 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD138 항체 또는 항원 결합 단편은 뮤린 Ig 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD138 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 IgG 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD138 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 IgG2a 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD138 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 Ig 카파 또는 람다 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD138 항체 또는 항원 결합은 SEQ ID NO: 21의 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 22의 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합을 위해 경쟁하고/하거나 이에 결합한다.
다양한 구현예에서, ADC의 항체 또는 항원 결합 단편(Ab)은 항-EPHA2 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 EPHA2에 결합하고 EPHA2-발현 신생물 세포를 표적화한다(즉, ADC는 EPHA2-발현 신생물 세포를 표적화한다). 일부 구현예에서, ADC의 항체 또는 항원 결합 단편은 내입되는 항-EPHA2 항체 또는 이의 내입되는 항원 결합 단편이다.
일부 구현예에서, 항-EPHA2 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 13(HCDR1), SEQ ID NO: 14(HCDR2), 및 SEQ ID NO: 15(HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 SEQ ID NO: 16(LCDR1), SEQ ID NO: 17(LCDR2), 및 SEQ ID NO: 18(LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-EPHA2 항체 또는 항원 결합 단편은 내입되는 항체 또는 내입되는 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 항-EPHA2 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 프레임워크 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-EPHA2 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-EPHA2 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 IgG 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-EPHA2 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-EPHA2 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 Ig 카파 또는 람다 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-EPHA2 항체 또는 항원 결합은 SEQ ID NO: 23의 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 24의 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합을 위해 경쟁하고/하거나 이에 결합한다
일부 구현예에서, 화학식 I의 화합물:
[화학식 I]
Figure pct00011
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공되며, 여기서:
Y는 O, S, NR6, 및 CR6R7로부터 선택되고;
R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 하이드록실, -O-(C1-C6 알킬) 기, -O-C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되고;
R4는 수소, C1-C6 알킬 기, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, 및 -C(=O)-NR6R7로부터 선택되고;
R5는 수소, 하이드록실, -CH2-OH, -CO2H, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-NR6R7, -NR6-C(=O)-R8, -O-C(=O)-NR6R7, -NR6-C(=O)-R8, 및 -NR6-C(=O)-NR6R7로부터 선택되고;
R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, -R8, -C(=O)-R8, 및 -C(=O)-O-R8로부터 선택되고;
R8은 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되며,
여기서 R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, 및 R8은 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, -NR6R7, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환되며, 이들 각각은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, C1-C3 할로알킬 기, -NH-C(=O)(C1-C3 알킬), 및 -NH-C(=O)-O-(C1-C3 알킬)로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 독립적으로 치환될 수 있다.
일부 구현예에서, 화학식 Ia 화합물:
[화학식 Ia]
Figure pct00012
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공되며, 여기서:
R9는 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고;
R10은 H 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되며,
여기서 R9 및 R10은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, -NH2, -NH-(C1-C3 알킬), 및 -N-(C1-C3 알킬)2로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환된다.
일부 구현예에서, 화학식 Ib의 화합물:
[화학식 Ib]
Figure pct00013
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공되며, 여기서:
R11은
Figure pct00014
로부터 선택되고, 여기서 *는 화합물의 나머지 부분에 대한 R11의 연결 지점을 나타내고;
R12 및 R13은 각각 독립적으로 H 및 메틸로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 화학식 II의 화합물:
[화학식 II]
Figure pct00015
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공되며, 여기서:
X는 NR6R7이고;
R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, -R8, -C(=O)-R8, -C(=O)-O-R8, -(C1-C6 알킬)-O-C(=O)-R8, 및 -(C1-C6 알킬)-NH-C(=O)-R8로부터 선택되고;
R8은 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고,
여기서 R6, R7, 및 R8은 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, -NR6R7, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환되며, 이들 각각은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, C1-C3 할로알킬 기, -NH-C(=O)(C1-C3 알킬), 및 -NH-C(=O)-O-(C1-C3 알킬)로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 독립적으로 치환될 수 있다.
일부 구현예에서, 화학식 IIa의 화합물:
[화학식 IIa]
Figure pct00016
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공되며, 여기서:
Z는 NR9 및 O로부터 선택되고;
R9는 수소 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되고;
R10 및 R11은 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고;
R12는 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되며,
여기서 R9, R10, R11, 및 R12는 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, 및 C1-C3 할로알킬 기로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 각각 독립적으로 치환되고;
t는 1, 2, 3, 4, 5, 및 6으로부터 선택되는 정수이다.
일부 구현예에서, 화학식 IIb의 화합물:
[화학식 IIb]
Figure pct00017
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공되며, 여기서:
R13은
Figure pct00018
로부터 선택되고, 여기서 *는 화합물의 나머지 부분에 대한 R13의 연결 지점을 나타내고;
R14 및 R15는 각각 독립적으로 수소 및 메틸로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 화학식 III의 화합물:
[화학식 III]
Figure pct00019
또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공되며, 여기서:
R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 하이드록실, -O-(C1-C6 알킬) 기, -O-C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되고;
R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, -R8, -C(=O)-R8, 및 -C(=O)-O-R8로부터 선택되고;
R8은 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고;
R9는 H,
Figure pct00020
로부터 선택되며;
여기서 R1, R2, R3, R6, R7, 및 R8은 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, -NR6R7, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환되며, 이들 각각은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, C1-C3 할로알킬 기, -NH-C(=O)(C1-C3 알킬), 및 -NH-C(=O)-O-(C1-C3 알킬)로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 독립적으로 치환될 수 있으며;
여기서 *는 화합물의 나머지 부분에 대한 R9의 연결 지점을 나타낸다.
일부 구현예에서, 다음으로부터 선택되는 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공되며:
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
여기서 L은 항체에 공유 결합으로 부착하는 링커이다.
또한, 다양한 구현예에서, 예를 들어 신생물성 장애, 예를 들어 암을 치료하는 데 있어서의, 기재된 ADC 화합물, 헤르복시디엔 화합물, 및 조성물의 치료적 용도가 본원에 제공된다. 특정 양태에서, 본 개시는 신생물성 장애, 예를 들어, HER2, CD138, EPHA2, MSLN, FOLH1, CDH6, CEACAM5, CFC1B, ENPP3, FOLR1, HAVCR1, KIT, MET, MUC16, SLC39A6, SLC44A4, 또는 STEAP1과 같은, ADC의 항체 또는 항원 결합 단편에 의해 표적화되는 항원을 발현하는 암을 치료하는 방법을 제공한다.
특정 양태에서, 본 개시는 기재된 ADC 또는 조성물 중 임의의 하나의 치료적 유효량 및/또는 요법을 대상체에게 투여함으로써 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 신생물성 장애는 혈액 악성 종양 또는 고형 종양이다. 일부 구현예에서, 신생물성 장애는 혈액 악성 종양이다. 일부 구현예에서, 혈액 악성 종양은 B-세포 악성 종양, 백혈병, 림프종, 및 골수종으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 혈액 악성 종양은 급성 골수성 백혈병 및 다발성 골수종으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 신생물성 장애는 고형 종양이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 유방암(예를 들어, HER2-양성 유방암), 위암(예를 들어, 위 선암종), 전립선암, 난소암, 폐암(예를 들어, 폐 선암종), 자궁암(예를 들어, 자궁 장액 자궁내막 암종), 타액 관 암종, 흑색종, 결장암, 자궁 경부암, 췌장암, 신장암, 결장직장암, 및 식도암으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 HER2-양성 유방암, 위 선암종, 전립선암, 및 골육종으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 항체-약물 접합체 또는 조성물을 사용한 치료는 표적 항원을 발현하지 않으나 표적 항원을 발현하는 신생물 세포에 인접한 신생물 세포의 방관자 살해를 유도한다. 일부 구현예에서, 대상체는 표적 항원을 발현하는 하나 이상의 신생물 세포를 갖는다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 HER2이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 HER2-발현 유방암, 난소암, 위암, 폐암(예를 들어, 폐 선암종), 자궁암(예를 들어, 자궁 장액 자궁내막 암종), 골육종, 또는 타액 관 암종에 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-HER2 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 반응하지 않거나 저조하게 반응한다. 일부 구현예에서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 불내성이거나, 반응하지 않거나, 또는 저조하게 반응한다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 CD138이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 CD138-발현 다발성 골수종에 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-CD138 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 반응하지 않거나 저조하게 반응한다. 일부 구현예에서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 불내성이거나, 반응하지 않거나, 또는 저조하게 반응한다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 EPHA2이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 EPHA2-발현 유방암, 전립선암, 난소암, 폐암, 흑색종, 결장암, 또는 식도암에 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-EPHA2 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 반응하지 않거나 저조하게 반응한다. 일부 구현예에서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 불내성이거나, 반응하지 않거나, 또는 저조하게 반응한다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 MSLN이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 MSLN-발현 난소암, 자궁 경부암, 췌장암, 또는 폐암(예를 들어, 폐 선암종)에 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-MSLN 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 반응하지 않거나 저조하게 반응한다. 일부 구현예에서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 불내성이거나, 반응하지 않거나, 또는 저조하게 반응한다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 FOLH1이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 FOLH1-발현 전립선암에 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-FOLH1 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 반응하지 않거나 저조하게 반응한다. 일부 구현예에서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 불내성이거나, 반응하지 않거나, 또는 저조하게 반응한다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 CDH6이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 CDH6-발현 신장암에 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-CDH6 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 반응하지 않거나 저조하게 반응한다. 일부 구현예에서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 불내성이거나, 반응하지 않거나, 또는 저조하게 반응한다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 CEACAM5이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 CEACAM5-발현 결장직장암에 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-CEACAM5 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 반응하지 않거나 저조하게 반응한다. 일부 구현예에서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 불내성이거나, 반응하지 않거나, 또는 저조하게 반응한다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 CFC1B이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 CFC1B-발현 췌장암에 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-CFC1B 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 반응하지 않거나 저조하게 반응한다. 일부 구현예에서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 불내성이거나, 반응하지 않거나, 또는 저조하게 반응한다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 ENPP3이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 ENPP3-발현 신장암에 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-ENPP3 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 반응하지 않거나 저조하게 반응한다. 일부 구현예에서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 불내성이거나, 반응하지 않거나, 또는 저조하게 반응한다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 FOLR1이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 FOLR1-발현 난소암에 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-FOLR1 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 반응하지 않거나 저조하게 반응한다. 일부 구현예에서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 불내성이거나, 반응하지 않거나, 또는 저조하게 반응한다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 HAVCR1이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 HAVCR1-발현 신장암 또는 식도암에 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-HAVCR1 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 반응하지 않거나 저조하게 반응한다. 일부 구현예에서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 불내성이거나, 반응하지 않거나, 또는 저조하게 반응한다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 KIT이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 KIT-발현 신장암에 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-KIT 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 반응하지 않거나 저조하게 반응한다. 일부 구현예에서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 불내성이거나, 반응하지 않거나, 또는 저조하게 반응한다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 MET이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 MET-발현 신장암 또는 식도암에 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-MET 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 반응하지 않거나 저조하게 반응한다. 일부 구현예에서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 불내성이거나, 반응하지 않거나, 또는 저조하게 반응한다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 MUC16이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 MUC16-발현 난소암, 자궁 경부암, 또는 유방암에 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-MUC16 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 반응하지 않거나 저조하게 반응한다. 일부 구현예에서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 불내성이거나, 반응하지 않거나, 또는 저조하게 반응한다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 SLC39A6이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 SLC39A6-발현 유방암 또는 전립선암에 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-SLC39A6 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 반응하지 않거나 저조하게 반응한다. 일부 구현예에서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 불내성이거나, 반응하지 않거나, 또는 저조하게 반응한다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 SLC44A4이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 SLC44A4-발현 전립선암에 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-SLC44A4 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 반응하지 않거나 저조하게 반응한다. 일부 구현예에서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 불내성이거나, 반응하지 않거나, 또는 저조하게 반응한다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 STEAP1이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 STEAP1-발현 전립선암에 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-STEAP1 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 반응하지 않거나 저조하게 반응한다. 일부 구현예에서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 불내성이거나, 반응하지 않거나, 또는 저조하게 반응한다.
특정한 다른 양태에서, 본 개시는 대상체에게 기재된 ADC 또는 조성물 중 임의의 하나의 치료적 유효량 및/또는 요법을 투여함으로써 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체에서 종양의 성장을 감소 또는 저해하는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 항체-약물 접합체 또는 조성물을 사용한 치료는 표적 항원을 발현하지 않으나 표적 항원을 발현하는 신생물 종양 세포에 인접한 신생물 종양 세포의 방관자 살해를 유도한다. 일부 구현예에서, 종양은 표적 항원을 발현하는 하나 이상의 신생물 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 HER2이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 HER2-발현 유방암, 난소암, 위암, 폐암(예를 들어, 폐 선암종), 자궁암(예를 들어, 자궁 장액 자궁내막 암종), 골육종, 또는 타액 관 암종으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 종양은 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-HER2 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 저항성이 있거나 불응성이다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 CD138이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 CD138-발현 다발성 골수종으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 종양은 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-CD138 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 저항성이 있거나 불응성이다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 EPHA2이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 EPHA2-발현 유방암, 전립선암, 난소암, 폐암, 흑색종, 결장암, 또는 식도암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 종양은 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-EPHA2 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 저항성이 있거나 불응성이다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 MSLN이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 MSLN-발현 난소암, 자궁 경부암, 췌장암, 또는 폐암(예를 들어, 폐 선암종)으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 종양은 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-MSLN 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 저항성이 있거나 불응성이다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 FOLH1이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 FOLH1-발현 전립선암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 종양은 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-FOLH1 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 저항성이 있거나 불응성이다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 CDH6이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 CDH6-발현 신장암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 종양은 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-CDH6 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 저항성이 있거나 불응성이다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 CEACAM5이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 CEACAM5-발현 결장직장암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 종양은 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-CEACAM5 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 저항성이 있거나 불응성이다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 CFC1B이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 CFC1B-발현 췌장암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 종양은 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-CFC1B 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 저항성이 있거나 불응성이다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 ENPP3이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 ENPP3-발현 신장암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 종양은 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-ENPP3 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 저항성이 있거나 불응성이다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 FOLR1이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 FOLR1-발현 난소암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 종양은 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-FOLR1 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 저항성이 있거나 불응성이다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 HAVCR1이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 HAVCR1-발현 신장암 또는 식도암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 종양은 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-HAVCR1 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 저항성이 있거나 불응성이다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 KIT이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 KIT-발현 신장암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 종양은 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-KIT 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 저항성이 있거나 불응성이다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 MET이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 MET-발현 신장암 또는 식도암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 종양은 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-MET 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 저항성이 있거나 불응성이다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 MUC16이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 MUC16-발현 난소암, 자궁 경부암, 또는 유방암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 종양은 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-MUC16 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 저항성이 있거나 불응성이다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 SLC39A6이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 SLC39A6-발현 유방암 또는 전립선암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 종양은 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-SLC39A6 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 저항성이 있거나 불응성이다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 SLC44A4이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 SLC44A4-발현 전립선암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 종양은 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-SLC44A4 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 저항성이 있거나 불응성이다.
일부 구현예에서, 표적 항원은 STEAP1이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 STEAP1-발현 전립선암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 종양은 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-STEAP1 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 저항성이 있거나 불응성이다.
또한 다른 양태에서, 본 개시는 대상체로부터의 생물학적 샘플을 제공하고 생물학적 샘플을 ADC 또는 조성물과 접촉시킴으로써 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체가 기재된 ADC 또는 조성물 중 임의의 하나를 사용한 치료에 반응할지 여부를 결정하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 생물학적 샘플은 종양 샘플이다. 일부 구현예에서, 종양 샘플은 종양 생검 또는 혈액 샘플이다. 일부 구현예에서, 혈액 샘플은 혈액, 혈액 분획, 또는 혈액 또는 혈액 분획으로부터 수득된 세포로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 대상체는 표적 항원을 발현하는 하나 이상의 신생물 세포를 갖는다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 HER2이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 HER2-발현 유방암, 난소암, 위암, 폐암(예를 들어, 폐 선암종), 자궁암(예를 들어, 자궁 장액 자궁내막 암종), 골육종, 또는 타액 관 암종으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 CD138이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 CD138-발현 다발성 골수종으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 EPHA2이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 EPHA2-발현 유방암, 전립선암, 난소암, 폐암, 흑색종, 결장암, 또는 식도암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 MSLN이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 MSLN-발현 난소암, 자궁 경부암, 췌장암, 또는 폐암(예를 들어, 폐 선암종)으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 FOLH1이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 FOLH1-발현 전립선암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 CDH6이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 CDH6-발현 신장암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 CEACAM5이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 CEACAM5-발현 결장직장암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 CFC1B이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 CFC1B-발현 췌장암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 ENPP3이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 ENPP3-발현 신장암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 FOLR1이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 FOLR1-발현 난소암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 HAVCR1이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 HAVCR1-발현 신장암 또는 식도암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 KIT이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 KIT-발현 신장암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 MET이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 MET-발현 신장암 또는 식도암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 MUC16이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 MUC16-발현 난소암, 자궁 경부암, 또는 유방암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 SLC39A6이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 SLC39A6-발현 유방암 또는 전립선암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 SLC44A4이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 SLC44A4-발현 전립선암으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 STEAP1이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생물 세포는 STEAP1-발현 전립선암으로부터 유래된다.
다양한 구현예에서, ADC 및 약학적으로 허용되는 희석제, 담체, 및/또는 부형제를 포함하는 약학 조성물이 본원에 추가로 제공된다. 기재된 ADC 화합물 및 조성물을 생산하는 방법이 또한 개시된다.
도 1a 내지 도 1d는 HER2-증폭된 유방암 세포(HCC1954) 및 위암 세포(NCI-N87)에서의 예시적인 페이로드(payload) 화합물의 생존력 용량 반응을 나타낸다. 세포를 화합물과 함께 72시간(3일) 또는 144시간(6일) 동안 인큐베이션하고 생존력을 셀타이터-글로(CellTiter-Glo)® 2.0 시약 중에서 판독하였다. 도 1a는 72시간 인큐베이션 후 HCC1954 세포에서의 생존력 용량 반응을 나타낸다. 도 1b는 72시간 인큐베이션 후 NCI-N87 세포에서의 생존력 용량 반응을 나타낸다. 도 1c는 144-시간 인큐베이션 후 HCC1954 세포에서의 생존력 용량 반응을 나타낸다. 도 1d는 144-시간 인큐베이션 후 NCI-N87 세포에서의 생존력 용량 반응을 나타낸다. 데이터는 평균±SD로 표시된다.
도 2a 및 도 2b는 HER2-증폭된 유방암 세포(HCC1954)(도 2a) 및 위암 세포(NCI-N87)(도 2b)에서의 SLC25A19 스플라이싱 분석의 결과를 나타낸다. 세포를 화합물과 함께 6시간 동안 인큐베이션하고 SLC25A19 전사체의 스플라이싱을 특정 타크만(Taqman) 프라이머-프로브 세트를 사용한 실시간 qPCR 반응으로 측정하였다. y-축은 DMSO 대조군(0.1%) 대비 반응 퍼센트(%)를 나타낸다. 데이터는 평균±SD로 표시된다.
개시된 조성물 및 방법은 다음의 상세한 설명에 대한 참조에 의해 보다 용이하게 이해될 수 있다.
이 본문 전체에서, 설명은 조성물 및 조성물을 사용하는 방법을 언급한다. 본 개시가 조성물과 관련된 특징 또는 구현예를 기재하거나 청구하는 경우, 이러한 특징 또는 구현예는 조성물을 사용하는 방법에 동일하게 적용 가능하다. 마찬가지로, 본 개시가 조성물을 사용하는 방법과 관련된 특징 또는 구현예를 기재하거나 청구하는 경우, 이러한 특징 또는 구현예는 조성물에 동일하게 적용 가능하다.
값의 범위가 표현되는 경우, 이는 범위 내의 임의의 구체적인 값을 사용하는 구현예를 포함한다. 추가로, 범위로 명시된 값의 언급은 해당 범위 내의 모든 값 각각을 포함한다. 모든 범위는 그의 종점을 포함하며 조합 가능하다. 값이 선행사 "약"의 사용에 의해, 근사치로서 표현되는 경우, 구체적인 값이 또 다른 구현예를 형성함이 이해될 것이다. 구체적인 수치의 언급은, 문맥이 달리 명확하게 지시하지 않는 한, 적어도 해당 구체적인 값을 포함한다. "또는"의 사용은 그 사용의 특정 문맥이 달리 지시하지 않는 한 "및/또는"을 의미할 것이다.
명확성을 위해, 별개의 구현예의 맥락에서 본원에 기재된, 개시된 조성물 및 방법의 일정 특징은, 또한 단일 구현예에서 조합으로 제공될 수 있음이 인식되어야 한다. 반대로, 간결성을 위해, 단일 구현예의 맥락에서 기재된 개시된 조성물 및 방법의 다양한 특징은, 또한 개별적으로 또는 임의의 하위 조합으로 제공될 수 있다.
본원에 인용된 모든 참고 문헌은 임의의 목적을 위해 참조로서 포함된다. 참고 문헌과 명세서가 충돌하는 경우, 명세서가 우선한다.
정의
명세서 및 청구 범위 전체에서 설명의 양태와 관련된 다양한 용어가 사용된다. 이러한 용어에는 달리 표시되지 않는 한 당업계에서의 이들의 통상적 의미가 주어져야 한다. 다른 구체적으로 정의된 용어는 본원에 제공된 정의와 일관된 방식으로 해석되어야 한다.
본원에 사용된 단수 형태 부정관사 "a," "an," 및 정관사 "the"는 문맥이 달리 명확하게 지시하지 않는 한 복수 형태를 포함한다.
수치 및 범위의 맥락에서 용어 "약" 또는 "대략"은 구현예가, 본원에 함유된 교시로부터 당업자에게 명백한 바대로, 반응 혼합물 중에 핵산 또는 폴리펩티드의 원하는 양을 갖는 것과 같이, 의도된 바와 같이 수행될 수 있을 만큼 열거된 값 또는 범위에 근사치이거나 가까운 값 또는 범위를 지칭한다. 일부 구현예에서, 약은 수적 양의 플러스 또는 마이너스 10%를 의미한다.
용어 "항체-약물 접합체," "항체 접합체," "접합체," "면역 접합체," 및 "ADC"는 상호 교환 가능하게 사용되며, 하나 이상의 항체 또는 항원 결합 단편에 연결된 하나 이상의 치료 화합물(예를 들어, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제)을 지칭하고 다음의 일반식에 의해 정의된다: Ab-(L-H) p (화학식 I), 여기서 Ab=항체 또는 항원 결합 단편, L=링커 모이어티, H=헤르복시디엔 스플라이싱 조절제(예를 들어, 헤르복시디엔 또는 이의 유도체), 및 p=항체 또는 항원 결합 단편 당 약물 모이어티의 수. 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 포함하는 ADC는 또한 본원에서 보다 구체적으로 "헤르복시디엔 스플라이싱 조절제-로딩된 항체" 또는 "SMLA"로 지칭될 수 있다. 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 포함하는 ADC에서, "p"는 항체 또는 항원 결합 단편에 연결된 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제의 수를 지칭한다. 일부 구현예에서, 링커 L은 항체 또는 항원 결합 단편과 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 사이에 절단 가능한 모이어티를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커 L은 스페이서 단위(들)에 의해 항체 또는 항원 결합 단편 및 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 중 하나 또는 둘 모두에 부착될 수 있는 절단 가능한 모이어티를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 스페이서 단위가 절단 가능한 모이어티를 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 부착시키는 경우, 이는 자기-희생적 스페이서 단위이다. 다른 구현예에서, 링커 L은 절단 가능한 모이어티를 포함하지 않고, 비-절단 가능한 링커이다. 일부 구현예에서, 링커 L은 항체 또는 항원 결합 단편에 및 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 직접 부착할 수 있는 적어도 하나의 스페이서 단위를 포함할 수 있다. 예시적인 절단 가능 및 비-절단 가능한 링커가 본원에 기재되고 예시된다.
용어 "항체"는 면역 글로불린 분자의 가변 영역 내의 적어도 하나의 항원 인식 부위를 통해, 단백질, 폴리펩티드, 탄수화물, 폴리뉴클레오티드, 지질, 또는 전술한 것의 조합과 같은 표적을 인식하고 이에 특이적으로 결합하는 면역 글로불린 분자를 지칭하기 위해 가장 넓은 의미로 사용된다. 항체의 중쇄는 중쇄 가변 도메인(VH) 및 중쇄 불변 영역(CH)으로 구성된다. 경쇄는 경쇄 가변 도메인(VL) 및 경쇄 불변 도메인(CL)으로 구성된다. 본 출원의 목적을 위해, 성숙한 중쇄 및 경쇄 가변 도메인은 각각 N-말단에서 C-말단으로 배열된 4개의 프레임워크 영역(FR1, FR2, FR3, 및 FR4) 내에 3개의 상보성 결정 영역(CDR1, CDR2 및 CDR3)을 포함한다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4. "항체"는 자연적으로 발생하거나, 종래의 하이브리도마 기술에 의해 생산되는 단일 클론 항체와 같이, 인공일 수 있다. 용어 "항체"는 전장 단일 클론 항체 및 전장 다 클론 항체뿐만 아니라, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 및 단일 사슬 항체와 같은 항체 단편도 포함한다. 항체는 5개 주요 면역 글로불린 클래스: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM 중 임의의 하나, 또는 이의 하위 클래스(예를 들어, 이소타입 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4)일 수 있다. 용어는, 원하는 생물학적 활성을 보여주는 한(예를 들어, 표적 항원에 결합, 표적-항원 발현 세포 내에 내입), 인간 항체, 키메라 항체, 인간화 항체 및 항원 인식 부위를 함유하는 임의의 변형된 면역 글로불린 분자를 추가로 포함한다.
본원에 사용된, 용어 "단일 클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하고, 즉, 집단을 포함하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연적으로 발생하는 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 단일 클론 항체는 고도로 특이적이며, 단일 항원성 에피토프를 겨냥한다. 대조적으로, 종래의(다 클론) 항체 조제물은 전형적으로 상이한 에피토프를 겨냥하는(또는 이에 특이적인) 다수의 항체를 포함한다. 수식어 "단일 클론"은 항체의 특성을 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득되는 것으로 나타내며, 임의의 특정 방법에 의한 항체 생산을 요하는 것으로 해석되어서는 안된다. 예를 들어, 본 개시에 따라 사용될 단일 클론 항체는 문헌[Kohler et al.(1975) Nature 256: 495]에서 처음 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 재조합 DNA 방법(예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567 참고)에 의해 제조될 수 있다. 단일 클론 항체는 또한 예를 들어 문헌[Clackson et al.(1991) Nature 352: 624-8, 및 Marks et al.(1991) J Mol Biol. 222: 581-97]에 기재된 기술을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다.
본원에 기재된 단일 클론 항체는, 표적 항원에 특이적으로 결합하고/하거나 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 구체적으로 "키메라" 항체뿐만 아니라 이러한 항체의 단편을 포함하며, 여기서 중쇄 및/또는 경쇄의 일부는 특정 종으로부터 유래되거나 특정 항체 클래스 또는 하위 클래스에 속하는 항체 내 상응하는 서열과 동일하거나 상동이면서, 사슬(들)의 나머지는 또 다른 종으로부터 유래되거나 또 다른 항체 클래스 또는 하위 클래스에 속하는 항체 내 상응하는 서열과 동일하거나 상동이다.
본원에 사용된, 용어 "인간 항체"는 인간에 의해 생산된 항체 또는 인간에 의해 생산된 항체의 아미노산 서열을 갖는 항체를 지칭한다.
본원에 사용된, 용어 "키메라 항체"는 면역 글로불린 분자의 아미노산 서열이 둘 이상의 종으로부터 유래된 항체를 지칭한다. 일부 예에서, 중쇄 및 경쇄 둘 모두의 가변 영역은 원하는 특이성, 친화성, 및 활성을 갖는 하나의 종으로부터 유래된 항체의 가변 영역에 상응하는 반면, 불변 영역은 또 다른 종(예를 들어, 인간)으로부터 유래된 항체에 상동이어서 후자의 종에서의 면역 반응을 최소화한다.
본원에 사용된, 용어 "인간화 항체"는 인간 항체뿐만 아니라 비-인간(예를 들어, 뮤린) 항체 유래의 서열을 함유하는 항체의 형태를 지칭한다. 이러한 항체는 비-인간 면역 글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 일반적으로, 인간화 항체는 실질적으로 적어도 1개, 전형적으로 2개의, 모든 가변 도메인을 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 고도가변 루프는 비-인간 면역 글로불린의 모든 또는 실질적으로 모든 고도가변 루프에 상응하고 모든 또는 실질적으로 모든 프레임워크(FR) 영역은 인간 면역 글로불린 서열의 모든 또는 실질적으로 모든 프레임워크(FR) 영역이다. 인간화 항체는 선택적으로 또한 면역 글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 면역 글로불린의 불변 영역(Fc)의 적어도 일부를 포함할 것이다. 인간화 항체는 항체 특이성, 친화성, 및/또는 활성을 개량 및 최적화하기 위해, Fv 프레임워크 영역의 및/또는 대체된 비-인간 잔기 내의, 잔기의 치환에 의해 추가로 변형될 수 있다.
본원에 사용된, 용어 "항원 결합 단편" 또는 항체의 "항원 결합 부분"은 항원(예를 들어, HER2, CD138, EPHA2, MSLN, FOLH1, CDH6, CEACAM5, CFC1B, ENPP3, FOLR1, HAVCR1, KIT, MET, MUC16, SLC39A6, SLC44A4, 또는 STEAP1)에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체 또는 단백질의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 항원 결합 단편은 또한 항원-발현 세포 내로 내입하는 능력을 보유할 수 있다. 일부 구현예에서, 항원 결합 단편은 또한 면역 이펙터 활성을 보유한다. 전장 항체의 단편이 전장 항체의 항원 결합 기능을 수행할 수 있음이 나타났다. 용어 "항원 결합 단편" 또는 항체의 "항원 결합 부분" 내에 포함되는 결합 단편의 예로는 (i) VL, VH, CL, 및 CH1 도메인으로 구성된 1가 단편인, Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 디설파이드 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인, F(ab')2 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 구성된 Fd 단편; (iv) 항체의 한쪽 팔(arm)의 VL 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 단편; (v) 단일 가변 도메인, 예를 들어 VH 도메인을 포함하는, dAb 단편(예를 들어, 문헌[Ward et al.(1989) Nature 341: 544-6]; 및 국제 공개 번호 WO 1990/005144 참고) ; 및 (vi) 단리된 상보성 결정 영역(CDR)이 포함된다. 또한, Fv 단편의 두 도메인인, VL 및 VH는 별도의 유전자에 의해 코딩되지만, 이들은, 단일 단백질 사슬로서 제조되는 것이 가능하게 하는 합성 링커에 의해, 재조합 방법을 사용하여, 연결될 수 있으며 여기서 VL 및 VH 영역은 쌍을 이루어 1가 분자(단일 사슬 Fv(scFv)로 알려짐)를 형성한다. 예를 들어, 문헌[Bird et al.(1988) Science 242: 423-6; 및 Huston et al.(1988) Proc Natl Acad Sci. USA 85: 5879-83] 참고. 이러한 단일 사슬 항체 또한 용어 "항원 결합 단편" 또는 항체의 "항원 결합 부분" 내에 포함되도록 의도되고, 결합 시 세포 내로 내입될 수 있는 결합 단편의 예시적인 유형으로서 당업계에 알려져 있다(예를 들어, 문헌[Zhu et al.(2010) 9: 2131-41; He et al.(2010) J Nucl Med. 51: 427-32; 및 Fitting et al.(2015) MAbs 7: 390-402] 참고). 특정 구현예에서, scFv 분자는 융합 단백질로 통합될 수 있다. 디아바디와 같은, 다른 형태의 단일 사슬 항체 또한 포함된다. 디아바디는 VH 및 VL 도메인이 단일 폴리펩티드 사슬 상에서 발현되지만, 동일한 사슬 상의 두 도메인 사이의 쌍 이루기가 가능하도록 하기에 너무 짧은 링커를 사용함으로써, 도메인이 또 다른 사슬의 상보적 도메인과 쌍을 이루도록 하고 2개의 항원 결합 부위를 생성하는 2가의 이중 특이적 항체이다(예를 들어, 문헌[Holliger et al.(1993) Proc Natl Acad Sci. USA 90: 6444-8; 및 Poljak et al.(1994) Structure 2: 1121-3] 참고). 항원 결합 단편은 당업자에게 알려진 종래의 기술을 사용하여 수득되고, 결합 단편은 온전한 항체와 동일한 방식으로 유용성(예를 들어, 결합 친화성, 내입)에 대해 스크리닝된다. 항원 결합 단편은 온전한 단백질의 절단, 예를 들어 프로테아제 또는 화학적 절단에 의해, 제조될 수 있다.
항체 또는 항원 결합 단편에 관하여 본원에 사용된 "내입되는"은 세포에 결합 시 세포의 지질 이중층 막을 통해 내부 구획으로, 바람직하게는 세포의 분해성 구획 내로 유입시킬 수 있는(즉, "내입된") 항체 또는 항원 결합 단편을 지칭한다. 예를 들어, 내입되는 항-HER2 항체는 세포막 상의 HER2에 결합한 후 세포 내로 유입시킬 수 있는 것이다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC에 사용되는 항체 또는 항원 결합 단편은 세포 표면 항원(예를 들어, HER2)을 표적화 하고 내입되는 항체 또는 내입되는 항원 결합 단편이다(즉, ADC는 항원 결합 후 세포막을 통해 이동함). 일부 구현예에서, 내입되는 항체 또는 항원 결합 단편은 세포 표면 상의 수용체에 결합한다. 세포막 상의 수용체를 표적화하는 내입되는 항체 또는 내입되는 항원 결합 단편은 수용체-매개 엔도사이토시스(endocytosis)를 유도할 수 있다. 일부 구현예에서, 내입되는 항체 또는 내입되는 항원 결합 단편은 수용체-매개 엔도사이토시스를 통해 세포 내로 유입된다.
항체 또는 항원 결합 단편에 관하여 본원에 사용된 "비-내입되는"은 세포에 결합 시 세포 표면에 남아있는 항체 또는 항원 결합 단편을 지칭한다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC에 사용되는 항체 또는 항원 결합 단편은 세포 표면 항원을 표적화 하고 비-내입되는 항체 또는 비-내입되는 항원 결합 단편이다(즉, ADC는 항원 결합 후 세포 표면에 남아 있고 세포막을 통해 이동하지 않음). 일부 구현예에서, 비-내입되는 항체 또는 항원 결합 단편은 비-내입되는 수용체 또는 다른 세포 표면 항원에 결합한다. 예시적인 비-내입되는 세포 표면 항원으로는 CA125 및 CEA가 포함되나 이에 한정되지 않으며, 비-내입되는 항원 표적에 결합하는 항체 또한 당업계에 알려져 있다(예를 들어, 문헌[Bast et al.(1981) J Clin Invest. 68(5): 1331-7; Scholler and Urban(2007) Biomark Med. 1(4): 513-23; 및 Boudousq et al.(2013) PLoS One 8(7): e69613] 참고).
본원에 사용된, 용어 "인간 표피 성장 인자 수용체 2," "HER2," 또는 "HER2/NEU"는 임의의 천연 형태의 인간 HER2를 지칭한다. 용어는 전장 HER2(예를 들어, UniProt 참조 서열: P04626; SEQ ID NO: 31)뿐만 아니라, 세포 처리로부터 기인할 수 있는 임의의 형태의 인간 HER2를 포함한다. 용어는 또한, 인간 HER2의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립 유전자 변이체, 및 이소형을 포함하나 이에 한정되지 않는, 인간 HER2의 기능적 변이체 또는 단편을 포함한다(즉, 용어가 야생형 단백질만을 지칭하는 데 사용된다고 문맥이 표시하지 않는 한 변이체 및 단편이 포함된다). HER2는 인간으로부터 단리될 수 있거나, 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
용어 "항-HER2 항체" 또는 "HER2에 결합하는 항체"는 HER2에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 임의의 형태의 항체 또는 이의 단편을 지칭하고, 단일 클론 항체(전장 단일 클론 항체 포함), 다 클론 항체, 및, HER2에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 한 생물학적으로 기능적인 항체 단편을 포함한다. 미국 특허 번호 5,821,337은, 예시적인 항-HER2 항체 서열을 포함하는, 예시적인 HER2-결합 서열을 제공하고 이에 대한 참조로서 본원에 포함된다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC에 사용되는 항-HER2 항체는 내입되는 항체 또는 내입되는 항체 단편이다. 트라스투주맙(미국 특허 번호 5,821,337; Molina et al.(2001) Cancer Res. 61(12): 4744-9)은 예시적인 항-인간 HER2 항체이다.
본원에 사용된, 용어 "신데칸-1," "SDC1," 또는 "CD138"은 임의의 천연 형태의 인간 CD138을 지칭한다. 용어는 전장 CD138(예를 들어, UniProt 참조 서열: P18827; SEQ ID NO: 32)뿐만 아니라, 세포 처리로부터 기인할 수 있는 임의의 형태의 인간 CD138을 포함한다. 용어는 또한, 인간 CD138의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립 유전자 변이체, 및 이소형을 포함하나 이에 한정되지 않는, 인간 CD138의 기능적 변이체 또는 단편을 포함한다(즉, 용어가 야생형 단백질만을 지칭하는 데 사용된다고 문맥이 표시하지 않는 한 변이체 및 단편이 포함된다). CD138은 인간으로부터 단리될 수 있거나, 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
용어 "항-CD138 항체" 또는 "CD138에 결합하는 항체"는 CD138에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 임의의 형태의 항체 또는 이의 단편을 지칭하고, 단일 클론 항체(전장 단일 클론 항체 포함), 다 클론 항체, 및, CD138에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 한 생물학적으로 기능적인 항체 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC에 사용되는 항-CD138 항체는 내입되는 항체 또는 내입되는 항체 단편이다. B-B4(Tassone et al.(2004) Blood 104: 3688-96)는 예시적인 항-인간 CD138 항체이다.
본원에 사용된, 용어 "에프린 A-형 수용체 2" 또는 "EPHA2"는 임의의 천연 형태의 인간 EPHA2를 지칭한다. 용어는 전장 EPHA2(예를 들어, UniProt 참조 서열: P29317; SEQ ID NO: 33)뿐만 아니라, 세포 처리로부터 기인할 수 있는 임의의 형태의 인간 EPHA2를 포함한다. 용어는 또한, 인간 EPHA2의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립 유전자 변이체, 및 이소형을 포함하나 이에 한정되지 않는, 인간 EPHA2의 기능적 변이체 또는 단편을 포함한다(즉, 용어가 야생형 단백질만을 지칭하는 데 사용된다고 문맥이 표시하지 않는 한 변이체 및 단편이 포함된다). EPHA2는 인간으로부터 단리될 수 있거나, 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
용어 "항-EPHA2 항체" 또는 "EPHA2에 결합하는 항체"는 EPHA2에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 임의의 형태의 항체 또는 이의 단편을 지칭하고, 단일 클론 항체(전장 단일 클론 항체 포함), 다 클론 항체, 및, EPHA2에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 한 생물학적으로 기능적인 항체 단편을 포함한다. WO 2007/030642는, 예시적인 항-EPHA2 항체 서열을 포함하는, 예시적인 EPHA2-결합 서열을 제공하고 이에 대한 참조로서 본원에 포함된다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC에 사용되는 항-EPHA2 항체는 내입되는 항체 또는 내입되는 항체 단편이다. 1C1(WO 2007/030642; Jackson et al.(2008) Cancer Res. 68(22): 9367-74)은 예시적인 항-인간 EPHA2 항체이다.
본원에 사용된, 용어 "메조텔린" 또는 "MSLN"은 임의의 천연 형태의 인간 MSLN을 지칭한다. 용어는 전장 MSLN(예를 들어, UniProt 참조 서열: Q13421; SEQ ID NO: 94) 뿐만 아니라, 세포 처리로부터 기인할 수 있는 임의의 형태의 인간 MSLN을 포함한다. 용어는 또한, 인간 MSLN의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립 유전자 변이체, 및 이소형을 포함하나 이에 한정되지 않는, 인간 MSLN의 기능적 변이체 또는 단편을 포함한다(즉, 용어가 야생형 단백질만을 지칭하는 데 사용된다고 문맥이 표시하지 않는 한 변이체 및 단편이 포함된다). MSLN은 인간으로부터 단리될 수 있거나, 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
용어 "항-MSLN 항체" 또는 "MSLN에 결합하는 항체"는 MSLN에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 임의의 형태의 항체 또는 이의 단편을 지칭하고, 단일 클론 항체(전장 단일 클론 항체 포함), 다 클론 항체, 및, MSLN에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 한 생물학적으로 기능적인 항체 단편을 포함한다. WO 2011/074621은, 예시적인 항-MSLN 항체 서열을 포함하는, 예시적인 MSLN-결합 서열을 제공하고 이에 대한 참조로서 본원에 포함된다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC에 사용되는 항-MSLN 항체는 내입되는 항체 또는 내입되는 항체 단편이다. 11-25, IC14-30, IC7-4, IC17-35 및 2-9는 예시적인 항-인간 MSLN 항체이다.
본원에 사용된, 용어 "글루타메이트 카르복시펩티다제 2" 또는 "FOLH1"은 임의의 천연 형태의 인간 FOLH1을 지칭한다. 용어는 전장 FOLH1(예를 들어, UniProt 참조 서열: Q04609; SEQ ID NO: 95) 뿐만 아니라, 세포 처리로부터 기인할 수 있는 임의의 형태의 인간 FOLH1을 포함한다. 용어는 또한, 인간 FOLH1의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립 유전자 변이체, 및 이소형을 포함하나 이에 한정되지 않는, 인간 FOLH1의 기능적 변이체 또는 단편을 포함한다(즉, 용어가 야생형 단백질만을 지칭하는 데 사용된다고 문맥이 표시하지 않는 한 변이체 및 단편이 포함된다). FOLH1은 인간으로부터 단리될 수 있거나, 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
용어 "항-FOLH1 항체" 또는 "FOLH1에 결합하는 항체"는 FOLH1에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 임의의 형태의 항체 또는 이의 단편을 지칭하고, 단일 클론 항체(전장 단일 클론 항체 포함), 다 클론 항체, 및, FOLH1에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 한 생물학적으로 기능적인 항체 단편을 포함한다. WO 2019/012260 및 WO 2017/212250은, 예시적인 항-FOLH1 항체 서열을 포함하는, 예시적인 FOLH1-결합 서열을 제공하고 이에 대한 참조로서 본원에 포함된다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC에 사용되는 항-FOLH1 항체는 내입되는 항체 또는 내입되는 항체 단편이다. J591(탈면역화됨)은 예시적인 항-인간 FOLH1 항체이다.
본원에 사용된, 용어 "카드헤린-6" 또는 "CDH6"은 임의의 천연 형태의 인간 CDH6을 지칭한다. 용어는 전장 CDH6(예를 들어, UniProt 참조 서열: P55285; SEQ ID NO: 96)뿐만 아니라, 세포 처리로부터 기인할 수 있는 임의의 형태의 인간 CDH6을 포함한다. 용어는 또한, 인간 CDH6의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립 유전자 변이체, 및 이소형을 포함하나 이에 한정되지 않는, 인간 CDH6의 기능적 변이체 또는 단편을 포함한다(즉, 용어가 야생형 단백질만을 지칭하는 데 사용된다고 문맥이 표시하지 않는 한 변이체 및 단편이 포함된다). CDH6은 인간으로부터 단리될 수 있거나, 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
용어 "항-CDH6 항체" 또는 "CDH6에 결합하는 항체"는 CDH6에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 임의의 형태의 항체 또는 이의 단편을 지칭하고, 단일 클론 항체(전장 단일 클론 항체 포함), 다 클론 항체, 및, CDH6에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 한 생물학적으로 기능적인 항체 단편을 포함한다. WO 2018/185618은, 예시적인 항-CDH6 항체 서열을 포함하는, 예시적인 CDH6-결합 서열을 제공하고 이에 대한 참조로서 본원에 포함된다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC에 사용되는 항-CDH6 항체는 내입되는 항체 또는 내입되는 항체 단편이다.
본원에 사용된, 용어 "암 배아 항원-관련 세포 접착 분자 5"또는 "CEACAM5"는 임의의 천연 형태의 인간 CEACAM5를 지칭한다. 용어는 전장 CEACAM5(예를 들어, UniProt 참조 서열: P06731; SEQ ID NO: 97)뿐만 아니라, 세포 처리로부터 기인할 수 있는 임의의 형태의 인간 CEACAM5를 포함한다. 용어는 또한, 인간 CEACAM5의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립 유전자 변이체, 및 이소형을 포함하나 이에 한정되지 않는, 인간 CEACAM5의 기능적 변이체 또는 단편을 포함한다(즉, 용어가 야생형 단백질만을 지칭하는 데 사용된다고 문맥이 표시하지 않는 한 변이체 및 단편이 포함된다). CEACAM5는 인간으로부터 단리될 수 있거나, 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
용어 "항-CEACAM5 항체" 또는 "CEACAM5에 결합하는 항체"는 CEACAM5에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 임의의 형태의 항체 또는 이의 단편을 지칭하고, 단일 클론 항체(전장 단일 클론 항체 포함), 다 클론 항체, 및, CEACAM5에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 한 생물학적으로 기능적인 항체 단편을 포함한다. US 2015/0125386은, 예시적인 항-CEACAM5 항체 서열을 포함하는, 예시적인 CEACAM5-결합 서열을 제공하고 이에 대한 참조로서 본원에 포함된다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC에 사용되는 항-CEACAM5 항체는 내입되는 항체 또는 내입되는 항체 단편이다. hMN14는 예시적인 항-인간 CEACAM5 항체이다.
본원에 사용된, 용어 "잠재 패밀리 단백질 1B" 또는 "CFC1B"는 임의의 천연 형태의 인간 CFC1B를 지칭한다. 용어는 전장 CFC1B(예를 들어, UniProt 참조 서열: P0CG36; SEQ ID NO: 98)뿐만 아니라, 세포 처리로부터 기인할 수 있는 임의의 형태의 인간 CFC1B를 포함한다. 용어는 또한, 인간 CFC1B의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립 유전자 변이체, 및 이소형을 포함하나 이에 한정되지 않는, 인간 CFC1B의 기능적 변이체 또는 단편을 포함한다(즉, 용어가 야생형 단백질만을 지칭하는 데 사용된다고 문맥이 표시하지 않는 한 변이체 및 단편이 포함된다). CFC1B는 인간으로부터 단리될 수 있거나, 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
용어 "항-CFC1B 항체" 또는 "CFC1B에 결합하는 항체"는 CFC1B에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 임의의 형태의 항체 또는 이의 단편을 지칭하고, 단일 클론 항체(전장 단일 클론 항체 포함), 다 클론 항체, 및, CFC1B에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 한 생물학적으로 기능적인 항체 단편을 포함한다. WO 2002/088170은, 예시적인 항-CFC1B 항체 서열을 포함하는, 예시적인 CFC1B-결합 서열을 제공하고 이에 대한 참조로서 본원에 포함된다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC에 사용되는 항-CFC1B 항체는 내입되는 항체 또는 내입되는 항체 단편이다.
본원에 사용된, 용어 "엑토뉴클레오티드 파이로포스파타제/포스포디에스테라제 패밀리 멤버 3" 또는 "ENPP3"은 임의의 천연 형태의 인간 ENPP3을 지칭한다. 용어는 전장 ENPP3(예를 들어, UniProt 참조 서열: O14638; SEQ ID NO: 99)뿐만 아니라, 세포 처리로부터 기인할 수 있는 임의의 형태의 인간 ENPP3을 포함한다. 용어는 또한, 인간 ENPP3의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립 유전자 변이체, 및 이소형을 포함하나 이에 한정되지 않는, 인간 ENPP3의 기능적 변이체 또는 단편을 포함한다(즉, 용어가 야생형 단백질만을 지칭하는 데 사용된다고 문맥이 표시하지 않는 한 변이체 및 단편이 포함된다). ENPP3은 인간으로부터 단리될 수 있거나, 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
용어 "항-ENPP3 항체" 또는 "ENPP3에 결합하는 항체"는 ENPP3에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 임의의 형태의 항체 또는 이의 단편을 지칭하고, 단일 클론 항체(전장 단일 클론 항체 포함), 다 클론 항체, 및, ENPP3에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 한 생물학적으로 기능적인 항체 단편을 포함한다. 문헌[Donate et al.((2016) Clin Cancer Res. 22(8): 1989-99)]은, 예시적인 항-ENPP3 항체 서열을 포함하는, 예시적인 ENPP3-결합 서열을 제공하고 이에 대한 참조로서 본원에 포함된다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC에 사용되는 항-ENPP3 항체는 내입되는 항체 또는 내입되는 항체 단편이다.
본원에 사용된, 용어 "폴레이트 수용체 알파" 또는 "FOLR1"은 임의의 천연 형태의 인간 FOLR1을 지칭한다. 용어는 전장 FOLR1(예를 들어, UniProt 참조 서열: P15328; SEQ ID NO: 100)뿐만 아니라, 세포 처리로부터 기인할 수 있는 임의의 형태의 인간 FOLR1을 포함한다. 용어는 또한, 인간 FOLR1의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립 유전자 변이체, 및 이소형을 포함하나 이에 한정되지 않는, 인간 FOLR1의 기능적 변이체 또는 단편을 포함한다(즉, 용어가 야생형 단백질만을 지칭하는 데 사용된다고 문맥이 표시하지 않는 한 변이체 및 단편이 포함된다). FOLR1은 인간으로부터 단리될 수 있거나, 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
용어 "항-FOLR1 항체" 또는 "FOLR1에 결합하는 항체"는 FOLR1에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 임의의 형태의 항체 또는 이의 단편을 지칭하고, 단일 클론 항체(전장 단일 클론 항체 포함), 다 클론 항체, 및, FOLR1에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 한 생물학적으로 기능적인 항체 단편을 포함한다. WO 2005/080431 및 문헌[Coney et al.((1991) Cancer Res. 51(22): 6125-32)]은, 예시적인 항-FOLR1 항체 서열을 포함하는, 예시적인 FOLR1-결합 서열을 제공하고 이에 대한 참조로서 본원에 포함된다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC에 사용되는 항-FOLR1 항체는 내입되는 항체 또는 내입되는 항체 단편이다. 파르레투주맙(Farletuzumab) 및 MOv19는 예시적인 항-인간 FOLR1 항체이다.
본원에 사용된, 용어 "A 형 간염 바이러스 세포 수용체 1" 또는 "HAVCR1"은 임의의 천연 형태의 인간 HAVCR1을 지칭한다. 용어는 전장 HAVCR1(예를 들어, UniProt 참조 서열: Q96D42; SEQ ID NO: 101)뿐만 아니라, 세포 처리로부터 기인할 수 있는 임의의 형태의 인간 HAVCR1을 포함한다. 용어는 또한, 인간 HAVCR1의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립 유전자 변이체, 및 이소형을 포함하나 이에 한정되지 않는, 인간 HAVCR1의 기능적 변이체 또는 단편을 포함한다(즉, 용어가 야생형 단백질만을 지칭하는 데 사용된다고 문맥이 표시하지 않는 한 변이체 및 단편이 포함된다). HAVCR1은 인간으로부터 단리될 수 있거나, 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
용어 "항-HAVCR1 항체" 또는 "HAVCR1에 결합하는 항체"는 HAVCR1에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 임의의 형태의 항체 또는 이의 단편을 지칭하고, 단일 클론 항체(전장 단일 클론 항체 포함), 다 클론 항체, 및, HAVCR1에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 한 생물학적으로 기능적인 항체 단편을 포함한다. 문헌[Thomas et al.((2016) Mol Cancer Ther. 15(12): 2946-54)]은, 예시적인 항-HAVCR1 항체 서열을 포함하는, 예시적인 HAVCR1-결합 서열을 제공하고 이에 대한 참조로서 본원에 포함된다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC에 사용되는 항-HAVCR1 항체는 내입되는 항체 또는 내입되는 항체 단편이다.
본원에 사용된, 용어 "비만/줄기 세포 성장 인자 수용체 키트" 또는 "KIT"는 임의의 천연 형태의 인간 KIT를 지칭한다. 용어는 전장 KIT(예를 들어, UniProt 참조 서열: P10721; SEQ ID NO: 102)뿐만 아니라, 세포 처리로부터 기인할 수 있는 임의의 형태의 인간 KIT를 포함한다. 용어는 또한, 인간 KIT의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립 유전자 변이체, 및 이소형을 포함하나 이에 한정되지 않는, 인간 KIT의 기능적 변이체 또는 단편을 포함한다(즉, 용어가 야생형 단백질만을 지칭하는 데 사용된다고 문맥이 표시하지 않는 한 변이체 및 단편이 포함된다). KIT는 인간으로부터 단리될 수 있거나, 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
용어 "항-KIT 항체" 또는 "KIT에 결합하는 항체"는 KIT에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 임의의 형태의 항체 또는 이의 단편을 지칭하고, 단일 클론 항체(전장 단일 클론 항체 포함), 다 클론 항체, 및, KIT에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 한 생물학적으로 기능적인 항체 단편을 포함한다. 문헌[Shi et al.((2016) Proc Natl Acad Sci USA 113(33): E4784-93) 및 Abrams et al.((2018) Clin Cancer Res. 24(17): 4297-308)]은, 예시적인 항-KIT 항체 서열을 포함하는 예시적인 KIT-결합 서열을 제공하고 이에 대한 참조로서 본원에 포함된다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC에 사용되는 항-KIT 항체는 내입되는 항체 또는 내입되는 항체 단편이다.
본원에 사용된, 용어 "간세포 성장 인자 수용체" 또는 "MET"는 임의의 천연 형태의 인간 MET를 지칭한다. 용어는 전장 MET(예를 들어, UniProt 참조 서열: P08581; SEQ ID NO: 103)뿐만 아니라, 세포 처리로부터 기인할 수 있는 임의의 형태의 인간 MET를 포함한다. 용어는 또한, 인간 MET의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립 유전자 변이체, 및 이소형을 포함하나 이에 한정되지 않는, 인간 MET의 기능적 변이체 또는 단편을 포함한다(즉, 용어가 야생형 단백질만을 지칭하는 데 사용된다고 문맥이 표시하지 않는 한 변이체 및 단편이 포함된다). MET는 인간으로부터 단리될 수 있거나, 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
용어 "항-MET 항체" 또는 "MET에 결합하는 항체"는 MET에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 임의의 형태의 항체 또는 이의 단편을 지칭하고, 단일 클론 항체(전장 단일 클론 항체 포함), 다 클론 항체, 및, MET에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 한 생물학적으로 기능적인 항체 단편을 포함한다. 문헌[Yang et al.((2019) Acta Pharmacol Sin.)]은, 예시적인 항-MET 항체 서열을 포함하는, 예시적인 MET-결합 서열을 제공하고 이에 대한 참조로서 본원에 포함된다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC에 사용되는 항-MET 항체는 내입되는 항체 또는 내입되는 항체 단편이다.
본원에 사용된, 용어 "뮤신-16" 또는 "MUC16"은 임의의 천연 형태의 인간 MUC16을 지칭한다. 용어는 전장 MUC16(예를 들어, UniProt 참조 서열: Q8WXI7; SEQ ID NO: 104)뿐만 아니라, 세포 처리로부터 기인할 수 있는 임의의 형태의 인간 MUC16을 포함한다. 용어는 또한, 인간 MUC16의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립 유전자 변이체, 및 이소형을 포함하나 이에 한정되지 않는, 인간 MUC16의 기능적 변이체 또는 단편을 포함한다(즉, 용어가 야생형 단백질만을 지칭하는 데 사용된다고 문맥이 표시하지 않는 한 변이체 및 단편이 포함된다). MUC16은 인간으로부터 단리될 수 있거나, 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
용어 "항-MUC16 항체" 또는 "MUC16에 결합하는 항체"는 MUC16에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 임의의 형태의 항체 또는 이의 단편을 지칭하고, 단일 클론 항체(전장 단일 클론 항체 포함), 다 클론 항체, 및, MUC16에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 한 생물학적으로 기능적인 항체 단편을 포함한다. 문헌[Liu et al.((2016) Ann Oncol. 27(11): 2124-30)]은, 예시적인 항-MUC16 항체 서열을 포함하는, 예시적인 MUC16-결합 서열을 제공하고 이에 대한 참조로서 본원에 포함된다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC에 사용되는 항-MUC16 항체는 내입되는 항체 또는 내입되는 항체 단편이다.
본원에 사용된, 용어 "아연 트랜스포터 ZIP6" 또는 "SLC39A6"은 임의의 천연 형태의 인간 SLC39A6을 지칭한다. 용어는 전장 SLC39A6(예를 들어, UniProt 참조 서열: Q13433; SEQ ID NO: 105)뿐만 아니라, 세포 처리로부터 기인할 수 있는 임의의 형태의 인간 SLC39A6을 포함한다. 용어는 또한, 인간 SLC39A6의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립 유전자 변이체, 및 이소형을 포함하나 이에 한정되지 않는, 인간 SLC39A6의 기능적 변이체 또는 단편을 포함한다(즉, 용어가 야생형 단백질만을 지칭하는 데 사용된다고 문맥이 표시하지 않는 한 변이체 및 단편이 포함된다). SLC39A6은 인간으로부터 단리될 수 있거나, 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
용어 "항-SLC39A6 항체" 또는 "SLC39A6에 결합하는 항체"는 SLC39A6에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 임의의 형태의 항체 또는 이의 단편을 지칭하고, 단일 클론 항체(전장 단일 클론 항체 포함), 다 클론 항체, 및, SLC39A6에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 한 생물학적으로 기능적인 항체 단편을 포함한다. 문헌[Sussman et al.((2014) Mol Cancer Ther. 13(12): 2991-3000)]은, 예시적인 항-SLC39A6 항체 서열을 포함하는, 예시적인 SLC39A6-결합 서열을 제공하고 이에 대한 참조로서 본원에 포함된다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC에 사용되는 항-SLC39A6 항체는 내입되는 항체 또는 내입되는 항체 단편이다.
본원에 사용된, 용어 "콜린 트랜스포터-유사 단백질 4" 또는 "SLC44A4"는 임의의 천연 형태의 인간 SLC44A4를 지칭한다. 용어는 전장 SLC44A4(예를 들어, UniProt 참조 서열: Q53GD3; SEQ ID NO: 106)뿐만 아니라, 세포 처리로부터 기인할 수 있는 임의의 형태의 인간 SLC44A4를 포함한다. 용어는 또한, 인간 SLC44A4의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립 유전자 변이체, 및 이소형을 포함하나 이에 한정되지 않는, 인간 SLC44A4의 기능적 변이체 또는 단편을 포함한다(즉, 용어가 야생형 단백질만을 지칭하는 데 사용된다고 문맥이 표시하지 않는 한 변이체 및 단편이 포함된다). SLC44A4는 인간으로부터 단리될 수 있거나, 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
용어 "항-SLC44A4 항체" 또는 "SLC44A4에 결합하는 항체"는 SLC44A4에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 임의의 형태의 항체 또는 이의 단편을 지칭하고, 단일 클론 항체(전장 단일 클론 항체 포함), 다 클론 항체, 및, SLC44A4에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 한 생물학적으로 기능적인 항체 단편을 포함한다. 문헌[Mattie et al.((2016) Mol Cancer Ther. 15(11): 2679-87)]은, 예시적인 항-SLC44A4 항체 서열을 포함하는, 예시적인 SLC44A4-결합 서열을 제공하고 이에 대한 참조로서 본원에 포함된다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC에 사용되는 항-SLC44A4 항체는 내입되는 항체 또는 내입되는 항체 단편이다.
본원에 사용된, 용어 "메탈로리덕타제 STEAP1" 또는 "STEAP1"은 임의의 천연 형태의 인간 STEAP1을 지칭한다. 용어는 전장 STEAP1(예를 들어, UniProt 참조 서열: Q9UHE8; SEQ ID NO: 107)뿐만 아니라, 세포 처리로부터 기인할 수 있는 임의의 형태의 인간 STEAP1을 포함한다. 용어는 또한, 인간 STEAP1의 하나 이상의 생물학적 기능을 보유하는 스플라이스 변이체, 대립 유전자 변이체, 및 이소형을 포함하나 이에 한정되지 않는, 인간 STEAP1의 기능적 변이체 또는 단편을 포함한다(즉, 용어가 야생형 단백질만을 지칭하는 데 사용된다고 문맥이 표시하지 않는 한 변이체 및 단편이 포함된다). STEAP1은 인간으로부터 단리될 수 있거나, 재조합적으로 또는 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
용어 "항-STEAP1 항체" 또는 "STEAP1에 결합하는 항체"는 STEAP1에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 임의의 형태의 항체 또는 이의 단편을 지칭하고, 단일 클론 항체(전장 단일 클론 항체 포함), 다 클론 항체, 및, STEAP1에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하는 한 생물학적으로 기능적인 항체 단편을 포함한다. WO 2008/052187은, 예시적인 항-STEAP1 항체 서열을 포함하는, 예시적인 STEAP1-결합 서열을 제공하고 이에 대한 참조로서 본원에 포함된다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC에 사용되는 항-STEAP1 항체는 내입되는 항체 또는 내입되는 항체 단편이다.
본원에 사용된, 용어 "특이적," "특이적으로 결합하는," 및 "특이적으로 결합한다"는 단백질 및 기타 생물 제제의 불균질 집단 내에서 항체 또는 항원 결합 단편(예를 들어, 항-HER2 항체)과 표적 항원(예를 들어, HER2) 사이의 결합 반응을 지칭한다. 주어진 조건 세트 하에서 관련없는 항원 또는 항원 혼합물에 대한 결합과 적절한 항원에 대한 결합을 비교함으로써 항체는 결합의 특이성에 대해 테스트될 수 있다. 항체가 관련 없는 항원 또는 항원 혼합물에 비해 적어도 2, 5, 7배, 및 바람직하게는 10배 이상 더 큰 친화도로 적절한 항원에 결합하면, 특이적이라고 고려된다. "특이적 항체" 또는 "표적-특이적 항체"는 표적 항원(예를 들어, HER2)에만 결합하고, 다른 항원에 결합하지 않는(또는 최소 결합을 나타내는) 것이다. 특정 구현예에서, 표적 항원(예를 들어, HER2)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편은 1x10-6 M 미만, 1x10-7 M 미만, 1x10-8 M 미만, 1x10-9 M 미만, 1x10-10 M 미만, 1x10-11 M 미만, 1x10-12 M 미만, 또는 1x10-13 M 미만의 KD를 갖는다. 특정 구현예에서, KD는 1 pM 내지 500 pM이다. 일부 구현예에서, KD는 500 pM 내지 1 μM, 1 μM 내지 100 nM, 또는 100 mM 내지 10 nM이다.
용어 "에피토프"는 항체에 의해 인식되고 특이적으로 결합될 수 있는 항원의 부분을 지칭한다. 항원이 폴리펩티드인 경우, 에피토프는 폴리펩티드의 3차 접힘에 의해 병치되는 인접 아미노산 또는 비인접 아미노산으로부터 형성될 수 있다. 항체에 의해 결합되는 에피토프는, 항원-항체 복합체의 직접 시각화에 의한 에피토프 식별을 위한 X-선 결정학뿐만 아니라, 항원의 단편 또는 돌연변이된 변이에 대한 항체의 결합을 모니터링하는 것, 또는 항체 및 항원의 상이한 부분의 용매 접근성을 모니터링하는 것을 포함하여, 당업계에 알려진 임의의 에피토프 맵핑 기술을 사용하여 식별될 수 있다. 항체 에피토프를 매핑하는 데 사용되는 예시적인 전략으로는 어레이-기반 올리고-펩티드 스캐닝, 제한된 단백질 분해, 부위-지정 돌연변이 유발, 고-처리량 돌연변이 유발 매핑, 수소-중수소 교환, 및 질량 분광분석이 포함되나 이에 한정되지 않는다(예를 들어, 문헌[Gershoni et al.(2007) 21: 145-56; 및 Hager-Braun and Tomer(2005) Expert Rev Proteomics 2: 745-56] 참고).
경쟁적 결합 및 에피토프 비닝(binning)은 또한 동일하거나 중첩되는 에피토프를 공유하는 항체를 결정하는 데 사용될 수 있다. 경쟁적 결합은, 문헌["Antibodies, A Laboratory Manual," Cold Spring Harbor Laboratory, Harlow and Lane(1st edition 1988, 2nd edition 2014)]에 기재된 분석과 같은, 교차-차단 분석을 사용하여 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 교차-차단 분석에서 적어도 약 50%만큼(예를 들어, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 99.5%, 또는 그 이상, 또는 그 사이의 임의의 백분율), 테스트 항체 또는 결합 단백질이 HER2와 같은 표적 항원에 대한 참조 항체 또는 결합 단백질의 결합을, 감소시키는 경우 (예를 들어, CDR 및/또는 표2 내지 4에서 확인된 것들로부터 선택되는 가변 도메인을 포함하는 결합 단백질), 및/또는 그 반대의 경우, 경쟁적 결합이 확인된다. 일부 구현예에서, 경쟁적 결합은 공유되거나 유사한(예를 들어, 부분적으로 중첩되는) 에피토프에 기인하거나, 항체 또는 결합 단백질이 인근의 에피토프에서 결합하는 입체 장애에 기인할 수 있다(예를 들어, 문헌[Tzartos, Methods in Molecular Biology(Morris, ed.(1998) vol.66, pp.55-66)] 참고). 일부 구현예에서, 경쟁적 결합은 유사한 에피토프를 공유하는 결합 단백질 그룹을 분류하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 결합을 위해 경쟁하는 결합 단백질은 중첩되거나 인근의 에피토프를 갖는 결합 단백질 그룹으로 "비닝"될 수 있으며, 경쟁하지 않는 것들은 중첩되거나 인근의 에피토프를 갖지 않는 별도의 결합 단백질 그룹에 배치된다.
용어 "kon" 또는 "ka"는 항원에 대한 항체의 회합으로 항체/항원 복합체를 형성하는 것에 대한 결합-속도(on-rate) 상수를 지칭한다. 속도는, 표면 플라즈몬 공명, 생물층 간섭계, 또는 ELISA 분석과 같은, 표준 분석을 사용하여 결정될 수 있다.
용어 "koff" 또는 "kd"는 항체/항원 복합체로부터의 항체의 해리에 대한 해리-속도(off-rate) 상수를 지칭한다. 속도는, 표면 플라즈몬 공명, 생물층 간섭계, 또는 ELISA 분석과 같은, 표준 분석을 사용하여 결정될 수 있다.
용어 "KD"는 특정 항체-항원 상호 작용의 평형 해리 상수를 지칭한다. KD는 ka/kd로 계산된다. 속도는, 표면 플라즈몬 공명, 생물층 간섭계, 또는 ELISA 분석과 같은, 표준 분석을 사용하여 결정될 수 있다.
용어 "p" 또는 "헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 로딩" 또는 "헤르복시디엔 스플라이싱 조절제:항체 비율" 또는 "헤르복시디엔 스플라이싱 조절제-대-항체 비율" 또는 "HAR"은 항체 또는 항원 결합 단편 당 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제의 수, 즉, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 로딩, 또는 본원에 개시된 ADC에서 항체 또는 항원 결합 단편(Ab) 당 -L-H 모이어티의 수를 지칭한다. 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 포함하는 ADC에서, "p"는 항체 또는 항원 결합 단편에 연결된 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제의 수를 지칭한다. 예를 들어, 2개의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제(예를 들어, 각각 H3의 구조를 갖는 2개의 화합물)가 항체 또는 항원 결합 단편에 연결되는 경우, p=2이다. 본원에 기재된 ADC의 다수 카피를 포함하는 조성물에서, "평균 p"는, 또한 "평균 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 로딩"으로도 지칭되는, 항체 또는 항원 결합 단편 당 -L-H 모이어티의 평균 수를 지칭한다.
"링커" 또는 "링커 모이어티"는 화합물, 통상적으로 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티와 같은 약물 모이어티를 항체 또는 항원 결합 단편과 같은 또 다른 모이어티에 공유 결합으로 연결할 수 있는 임의의 화학적 모이어티를 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 링커는 화합물 또는 항체가 계속 활성인 조건에서, 산-유도 절단, 펩티다제-유도 절단, 광-기반 절단, 에스테라제-유도 절단, 및/또는 디설파이드 결합 절단에 영향을 받기 쉽거나 실질적으로 저항성일 수 있다.
용어 "제제"는 본원에서 화학적 화합물, 화학적 화합물의 혼합물, 생물학적 거대 분자, 또는 생물학적 물질로부터 제조된 추출물을 지칭하기 위해 사용된다. 용어 "치료제" 또는 "약물"은 생물학적 과정을 조절할 수 있고/있거나 생물학적 활성을 갖는 제제를 지칭한다. 본원에 기재된 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 예시적인 치료제이다.
용어 "화학요법제" 또는 "항암제"는 작용 메커니즘에 관계없이 암 치료에 효과적인 모든 제제를 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 전이 또는 혈관 신생의 저해는 종종 화학요법제의 특성이다. 화학요법제는 항체, 생물학적 분자, 및 소분자를 포함하고, 본원에 기재된 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 화합물을 포함한다. 화학요법제는 세포 독성 또는 세포 증식 억제 제제일 수 있다. 용어 "세포 증식 억제 제제"는 세포 성장 및/또는 세포 증식을 저해 또는 억제하는 제제를 지칭한다. 용어 "세포 독성 제제"는 주로 세포의 발현 활성 및/또는 기능을 방해함으로써 세포 사멸을 유발하는 물질을 지칭한다.
본원에 사용된, 용어 "헤르복시디엔 스플라이싱 조절제," "헤르복시디엔 스플라이세오솜 조절제," 또는 "헤르복시디엔 스플라이스 조절제"는 스플라이세오솜의 성분과 상호 작용함으로써 항암 활성을 갖고 구조적으로 헤르복시디엔과 관련된 화합물을 지칭한다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 표적 세포에서 스플라이싱의 속도 또는 형태를 변경한다. 예를 들어, 저해제로 기능하는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 제어되지 않은 세포 증식을 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 SF3b 스플라이세오솜 복합체에 결합함으로써 작용할 수 있다. 이러한 조절제는 자연적으로 발생하는 것 또는 합성 유도체 또는 헤르복시디엔 유사체일 수 있다. 본원에 사용된, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 등을 언급할 때 용어 "유도체" 및 "유사체"는, 헤르복시디엔과 본질적으로 동일하거나, 유사하거나, 향상된 생물학적 기능 또는 활성을 보유하나 변경된 화학적 또는 생물학적 구조를 갖는 임의의 화합물을 의미한다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 헤르복시디엔 유도체이다.
본원에 사용된, "헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티"는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 화합물, 예를 들어 화학식 I의 ADC, 또는 -L-H를 포함하는 조성물에서 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제(H) 성분의 구조를 제공하는 ADC 또는 조성물의 성분을 지칭한다.
본원에 사용된, "스플라이세오솜"은, 전구-mRNA 세그먼트와 같은, 하나 이상의 RNA 세그먼트로부터 인트론을 제거하는 리보핵단백질 복합체를 지칭한다.
용어 "상동체"는 예를 들어 상응하는 위치에 동일하거나 유사한 화학적 잔기의 서열을 가짐으로써 또 다른 분자에 대한 상동성을 나타내는 분자를 지칭한다.
본원에 사용된, 용어 "저해하다" 또는 "저해"는 측정 가능한 양만큼 감소시키는 것을 의미하고, 완전한 방지 또는 저해를 포함할 수 있으나 이를 요하지는 않는다.
용어 "표적-음성," "표적 항원-음성," 또는 "항원-음성"은 세포 또는 조직에 의한 표적 항원 발현의 부재를 지칭한다. 용어 "표적-양성," "표적 항원-양성," 또는 "항원-양성"은 표적 항원 발현의 존재를 지칭한다. 예를 들어, 표적 항원을 발현하지 않는 세포 또는 세포주는 표적-음성으로 기재될 수 있는 반면, 표적 항원을 발현하는 세포 또는 세포주는 표적-양성으로 기재될 수 있다.
용어 "방관자 살해" 또는 "방관자 효과"는 표적-양성 세포의 존재 하의 표적-음성 세포의 살해를 지칭하며, 여기서 표적-양성 세포의 부재에서는 표적-음성 세포의 살해가 관찰되지 않는다. 세포-대-세포 접촉, 또는 적어도 표적-양성 세포와 표적-음성 세포 사이의 근접성은 방관자 살해를 가능하게 한다. 이 유형의 살해는, 표적-음성 세포에 대한 무차별적 살해를 지칭하는, "오프-타겟(off-target) 살해"와 구별 가능하다. "오프-타겟 살해"는 표적-양성 세포의 부재 하에서 관찰될 수 있다.
용어 "신생물성 장애" 및 "암"은, 제어되지 않은 증식, 불멸, 전이 잠재성, 빠른 성장 및 증식 속도, 및/또는 일정 형태학적 특징과 같은, 암-유발 세포의 전형적인 특징을 갖는 세포의 존재를 지칭하기 위해 본원에서 상호 교환적으로 사용된다. 종종, 암 세포는 종양 또는 덩어리의 형태일 수 있으나, 이러한 세포는 대상체 내에서 단독으로 존재할 수 있거나, 백혈병 또는 림프종 세포와 같이, 독립적인 세포로서 혈류에서 순환할 수 있다. 용어 "신생물성 장애" 및 "암"은, 혈액 악성 종양, 고형 종양, 육종, 암종 및 기타 고형 및 비-고형 종양 암을 포함하는, 모든 유형의 암 및 암 전이를 포함한다. 혈액 악성 종양에는 B-세포 악성 종양, 혈액 암(백혈병), 형질 세포 암(골수종, 예를 들어 다발성 골수종), 또는 림프절 암(림프종)이 포함될 수 있다. 예시적인 B-세포 악성 종양에는 만성 림프구성 백혈병(CLL), 소포 림프종, 외투 세포 림프종, 및 미만성 거대 B-세포 림프종이 포함된다. 백혈병에는 급성 림프모구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 만성 골수단핵구성 백혈병(CMML), 급성 단핵구성 백혈병(AMoL) 등이 포함될 수 있다. 림프종에는 호지킨(Hodgkin) 림프종 및 비-호지킨 림프종이 포함될 수 있다. 다른 혈액 악성 종양에는 골수이형성 증후군(MDS)이 포함될 수 있다. 고형 종양에는 선암종, 예를 들어 유방암, 췌장암, 전립선암, 결장 또는 결장직장암, 폐암, 위암, 자궁 경부암, 자궁내막암, 난소암, 담관암종, 신경교종, 흑색종 등과 같은 암종이 포함될 수 있다.
용어 "종양" 및 "신생물"은, 전암성 병변을 포함하는, 양성 또는 악성의, 과도한 세포 성장 또는 증식으로부터 기인하는 임의의 조직 덩어리를 지칭한다.
용어 "종양 세포" 및 "신생물 세포"는 상호 교환 가능하게 사용되며, 비-종양 형성 세포 및 암 줄기 세포 둘 모두를 포함하여, 종양 또는 신생물로부터 유래된 개별 세포 또는 세포의 총 집단을 지칭한다. 종양 세포를 암 줄기 세포와 구별하기 위해 재개 및 분화하는 능력이 결여된 종양 세포만을 지칭하는 경우 본원에 사용된, 용어 "종양 세포"는 용어 "비-종양 형성"에 의해 수식될 것이다.
용어 "대상체" 및 "환자"는, 인간, 비-인간 영장류, 설치류 등을 포함하나 이에 한정되지 않는 임의의 포유 동물과 같은, 임의의 동물을 지칭하기 위해 본원에서 상호 교환 가능하게 사용된다. 일부 구현예에서, 포유 동물은 마우스이다. 일부 구현예에서, 포유 동물은 인간이다. 일부 구현예에서, 대상체는 마우스이다. 일부 구현예에서, 대상체는 인간이다.
용어 "공동-투여" 또는 하나 이상의 치료제와 "조합하여" 투여하는 것은 동시 투여 및 임의의 순서로의 연속 투여를 포함한다.
"약학 조성물"은 투여를 가능하게 하고 이어서 활성 성분(들)의 의도된 생물학적 활성을 제공하고/하거나 치료 효과를 달성하기 위한 형태이고, 제형이 투여될 대상체에게 허용되지 않는 독성이 있는 추가 성분을 함유하지 않는 조제물을 지칭한다. 약학 조성물은 멸균될 수 있다.
"약학적 부형제"는 애주번트, 담체, pH 조절 및 완충제, 장성(tonicity) 조절제, 습윤제, 보존제 등과 같은 물질을 포함한다.
"약학적으로 허용되는"은 동물, 보다 구체적으로 인간에서 사용하기 위해, 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되거나 승인 가능하거나, 미국 약전 또는 기타 일반적으로 공인되는 약전에 등재된 것을 의미한다.
"약학적으로 허용되는 염"은 모 화합물의 원하는 생물학적 활성을 보유하고 원하지 않는 독성학적 효과를 부여하지 않는 염이다. 이러한 염의 예는 다음이다: (a) 무기산, 예를 들어 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 질산 등을 이용하여 형성된 산 부가 염; 및 유기산, 예를 들어 아세트산, 옥살산, 타르타르산, 숙신산, 말레산, 푸마르산, 글루콘산, 시트르산, 말산, 아스코르브산, 벤조산, 타닌산, 팔미트산, 알긴산, 폴리글루탐산, 나프탈렌설폰산, 메탄설폰산, p-톨루엔설폰산, 나프탈렌디설폰산, 폴리갈락투론산 등을 이용하여 형성된 염; 및 (b) 염소, 브롬, 및 요오드와 같은 원소 음이온으로부터 형성된 염. 예를 들어, 본원에 참조로서 포함되는, 문헌[Haynes et al. "Commentary: Occurrence of Pharmaceutically Accep표 Anions and Cations in the Cambridge Structural Database," J Pharmaceutical Sciences, vol. 94, no. 10 (2005), 및 Berge et al. "Pharmaceutical Salts," J Pharmaceutical Sciences, vol. 66, no. 1 (1977)] 참고.
본원에 사용된, 용어 "유효량"은 구체적으로 명시된 목적을 수행하기에, 예를 들어, 종양 성장 속도 또는 종양 부피의 감소, 암 증상의 감소, 또는 치료 효능의 일부 다른 징후와 같은, 투여 후 치료 효과를 생산하기에 충분한 본원에 기재된 화합물, ADC, 또는 조성물(예를 들어, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC)의 양을 지칭한다. 유효량은 명시된 목적과 관련하여 일상적인 방식으로 결정될 수 있다. 용어 "치료적 유효량"은 종양 세포의 성장 또는 확산, 종양의 크기 또는 수, 및/또는 암의 수준, 단계, 진행 및/또는 중증도의 다른 척도의 검출 가능한 살해, 감소, 및/또는 저해에 효과적인 본원에 기재된 화합물, ADC, 또는 조성물의 양을 지칭한다. 치료적 유효량은 의도된 적용(시험관내 또는 생체내), 또는 치료되는 대상체 및 질환 상태, 예를 들어 대상체의 체중 및 연령, 질환 상태의 중증도, 투여 방식 등에 따라 달라질 수 있으며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 용어는 또한 표적 세포에서 특정 반응, 예를 들어 세포 성장 저해를 유도할 용량에도 적용된다. 구체적인 용량은, 예를 들어 구체적인 약학 조성물, 대상체 및 그의 연령 및 기존 건강 상태 또는 건강 상태에 대한 위험, 뒤따를 투약 요법, 질환의 중증도, 다른 제제와 조합하여 투여될 지 여부, 투여 시기, 투여되는 조직, 및 운반되는 물리적 전달 시스템에 따라 달라질 수 있다. 암의 경우, ADC의 치료적 유효량은 암 세포의 수를 감소시키고, 종양 크기를 감소시키고, 종양 전이를 저해(예를 들어, 늦추거나 중지)시키고, 종양 성장을 저해(예를 들어, 늦추거나 중지)시키고/시키거나 하나 이상의 증상을 완화시킬 수 있다.
"예방적 유효량"은 원하는 예방적 결과를 달성하기 위해, 필요한 투여량에서 및 기간 동안, 효과적인 양을 지칭한다. 전형적으로, 예방적 용량은 질환 이전 또는 초기 단계의 대상체에서 사용되기 때문에, 예방적 유효량은 치료적 유효량보다 더 적을 것이다.
본원에 사용된, "치료하기 위한" 또는 "치료적" 및 문법적으로 관련된 용어는, 대안적 치료 양식으로부터 기인하는 연장된 생존, 더 적은 이환율, 및/또는 부작용의 감소와 같은, 질환의 임의의 결과에 대한 임의의 개선을 지칭한다. 당업계에서 용이하게 인식되는 바와 같이, 치료 행동을 위해 질환의 완전한 근절이 포함되나 이것이 요구되지는 않는다. 본원에 사용된, "치료" 또는 "치료하다"는 기재된 ADC 또는 조성물의 대상체, 예를 들어 환자에게로의 투여를 지칭한다. 치료는 장애, 장애의 증상 또는 장애, 예를 들어 암에 대한 소인을 고치거나, 치유하거나, 경감하거나, 완화하거나, 변경하거나, 바로잡거나, 개선하거나, 증상완화시키거나, 개선하거나 영향을 주는 것일 수 있다. 일부 구현예에서, 질병을 갖는 대상체를 치료하는 것에 추가하여, 본원에 개시된 조성물은 또한 그 질병을 발전시킬 가능성을 방지하거나 감소시키기 위해 예방적으로 제공될 수 있다.
일부 구현예에서, 표지된 ADC가 사용된다. 적합한 "표지"에는 방사성 핵종, 효소, 기질, 보조인자, 저해제, 형광 모이어티, 화학 발광 모이어티, 자성 입자 등이 포함된다.
본원에 사용된, "단백질"은 적어도 2개의 공유 결합으로 부착된 아미노산을 의미한다. 용어는 폴리펩티드, 올리고펩티드, 및 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 2개 이상의 공유 결합으로 부착된 아미노산은 펩티드 결합에 의해 부착된다. 예를 들어, 단백질이 발현 시스템 및 숙주 세포를 사용하여 재조합적으로 제조되는 경우, 단백질은 자연적으로 발생하는 아미노산 및 펩티드 결합으로 구성될 수 있다. 대안적으로, 단백질은 합성 아미노산(예를 들어, 호모페닐알라닌, 시트룰린, 오르니틴, 및 노르류신), 또는 펩티도미메틱 구조, 즉, 펩토이드와 같은, "펩티드 또는 단백질 유사체"를 포함할 수 있다. 펩토이드는 측쇄가, α-탄소(아미노산에서 그런 것과 같이)보다는, 펩티드 백본의 질소 원자에 붙어 있고, 펩티드와 비교하여 상이한 수소 결합 및 형태적 특징을 갖는, 펩티도미메틱의 예시적 종류이다(예를 들어, 문헌[Simon et al.(1992) Proc Natl Acad Sci. USA 89: 9367] 참고). 따라서, 펩토이드는 단백질 분해 또는 기타 생리학적 또는 보관 조건에 저항성이 있을 수 있으며, 세포막을 침투하는 데 효과적이다. 이러한 합성 아미노산은 특히 항체가 당업계에 잘 알려진 종래의 방법에 의해 시험관내에서 합성되는 경우 혼입될 수 있다. 추가로, 펩티도미메틱, 합성 및 자연적으로 발생하는 잔기/구조의 임의의 조합을 사용될 수 있다. "아미노산"은 또한, 프롤린 및 하이드록시프롤린과 같은, 이미노산 잔기를 포함한다. 아미노산 "R 기" 또는 "측쇄"는 (L)- 또는 (S)-배치로 있을 수 있다. 특정 구현예에서, 아미노산은 (L)- 또는 (S)-배치로 있다.
"재조합 단백질"은 당업계에 알려진 임의의 기술 및 방법을 사용하여 재조합 기술을 사용하여, 즉, 재조합 핵산의 발현을 통해, 제조된 단백질이다. 재조합 단백질의 생산을 위한 방법 및 기술은 당업계에 잘 알려져 있다.
"단리된" 단백질은 그것이 자연 상태에서 일반적으로 결합되는 물질의 적어도 일부가 동반되지 않으며, 예를 들어 주어진 샘플에서 총 단백질의 중량으로 적어도 약 5%, 또는 적어도 약 50%를 구성한다. 단리된 단백질은 환경에 따라 총 단백질 함량의 중량으로 5 내지 99.9%를 구성할 수 있음이 이해된다. 예를 들어, 유도성 프로모터 또는 고 발현 프로모터 사용을 통해 상당히 더 높은 농도로 단백질이 제조되어, 단백질이 증가된 농도 수준으로 제조될 수 있다. 정의는 당업계에 알려진 매우 다양한 유기체 및/또는 숙주 세포에서의 항체 생산을 포함한다.
아미노산 서열의 경우, 서열 동일성 및/또는 유사성은, 문헌[Smith and Waterman(1981) Adv Appl Math. 2: 482]의 국소 서열 동일성 알고리즘, 문헌[Needleman 및 Wunsch(1970) J Mol Biol. 48: 443]의 서열 동일성 정렬 알고리즘, 문헌[Pearson and Lipman(1988) Proc Nat Acad Sci. USA 85: 2444]의 유사성 검색 방법, 이들 알고리즘의 컴퓨터화된 구현(위스콘신 유전학 소프트웨어 패키지(Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Drive, Madison, Wis.)의 GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA), 문헌[Devereux et al.(1984) Nucl Acid Res. 12: 387-95]에 의해 기재된 베스트 핏(Best Fit) 서열 프로그램을 포함하나 이에 한정되지 않는, 당업계에 알려진 표준 기술을 사용하여, 바람직하게는 디폴트 설정을 사용하거나, 점검에 의해, 결정될 수 있다. 바람직하게는, 동일성 퍼센트는 다음의 파라미터에 기초하여 FastDB에 의해 계산된다: 미스매치 패널티 1; 갭 패널티 1; 갭 크기 패널티 0.33; 및 연결 패널티 30("Current Methods in Sequence Comparison and Analysis," Macromolecule Sequencing and Synthesis, Selected Methods and Applications, pp. 127-149 (1988), Alan R. Liss, Inc).
유용한 알고리즘의 예는 PILEUP이다. PILEUP은 점진적인, 쌍 정렬을 사용하여 관련된 서열 그룹으로부터 다수의 서열 정렬을 생성한다. 이는 또한 정렬을 생성하는 데 사용된 클러스터링 관계를 나타내는 트리를 그릴 수 있다. PILEUP은 문헌[Feng & Doolittle(1987) J Mol Evol. 35: 351-60]의 점진적 정렬 방법의 단순화를 사용하고; 방법은 문헌[Higgins and Sharp(1989) CABIOS 5: 151-3]에 의해 기재된 것과 유사하다. 유용한 PILEUP 파라미터는 디폴트 갭 가중치 3.00, 디폴트 갭 길이 가중치 0.10, 및 가중치가 적용된 엔드(end) 갭을 포함.
유용한 알고리즘의 또 다른 예는, 다음에 기재된 BLAST 알고리즘이다: 문헌[Altschul et al.(1990) J Mol Biol. 215: 403-10; Altschul et al.(1997) Nucl Acid Res. 25: 3389-402; 및 Karin et al.(1993) Proc Natl Acad Sci. USA 90: 5873-87]. 특히 유용한 BLAST 프로그램은 문헌[Altschul et al.(1996) Methods in Enzymology 266: 460-80]으로부터 얻어진 WU-BLAST-2 프로그램이다. WU-BLAST-2는 여러 검색 파라미터를 사용하며, 이들 대부분은 디폴트 값으로 설정된다. 조정 가능한 파라미터는 다음의 값을 이용하여 설정된다: 중첩 범위(overlap span) = l, 중첩 비율(overlap fraction) = 0.125, 워드 임계값(word threshold, T) = II. HSP S 및 HSP S2 파라미터는 동적 값이며 구체적인 서열의 조성 및 관심 서열이 검색될 구체적인 데이터베이스의 조성에 따라 프로그램 자체에 의해 확립되나; 감도를 증가시키기 위해 값이 조정될 수 있다.
추가의 유용한 알고리즘은 문헌[Altschul et al.(1997) Nucl Acid Res. 25: 3389-402]에 의해 보고된 갭이 있는(gapped) BLAST이다. 갭이 있는 BLAST는 BLOSUM-62 대체 점수; 9로 설정된 임계값 T 파라미터; 갭이 없는(ungapped) 연장을 촉발하는 2개-히트(two-hit) 방법을 사용하고, 갭 길이 k에 10+k 비용을 받고; Xu는 16으로 설정되고, Xg는 데이터베이스 검색 단계의 경우 40으로 알고리즘의 출력 단계의 경우 67로 설정된다. 갭이 있는 정렬은 약 22 비트에 상응하는 점수에 의해 촉발된다.
일반적으로, 본원에 개시된 단백질과, 표적 항원(예를 들어, HER2, CD138, 또는 EPHA2, MSLN, FOLH1, CDH6, CEACAM5, CFC1B, ENPP3, FOLR1, HAVCR1, KIT, MET, MUC16, SLC39A6, SLC44A4, 또는 STEAP1)의 변이체 및 항체 가변 도메인의 변이체(개별 변이체 CDR 포함)를 포함하는, 이의 변이체 사이의 아미노산 상동성, 유사성, 또는 동일성은 본원에 묘사된 서열에 대해 적어도 80%, 예를 들어, 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 거의 100%, 또는 100% 상동성 또는 동일성이다.
유사한 방식으로, 본원에서 확인된 항체 및 기타 단백질의 핵산 서열에 관한 "핵산 서열 동일성 퍼센트(%)"는 항원 결합 단백질의 코딩 서열에 있는 뉴클레오티드 잔기와 동일한 후보 서열에서의 뉴클레오티드 잔기의 백분율로 정의된다. 특정 방법은 디폴트 파라미터로 설정된 WU-BLAST-2의 BLASTN 모듈을 활용하며, 중첩 범위 및 중첩 비율은 각각 1 및 0.125로 설정된다.
아미노산 서열 변이를 도입하기 위한 부위 또는 영역은 사전 결정되어 있으나, 돌연변이 그 자체는 사전 결정될 필요는 없다. 예를 들어, 주어진 부위에서 돌연변이의 성능을 최적화하기 위해, 무작위 돌연변이 유발이 표적 코돈 또는 영역에서 수행될 수 있고 발현된 항원 결합 단백질 CDR 변이체가 원하는 활성의 최적 조합을 위해 스크리닝된다. 알려진 서열을 갖는 DNA의 사전 결정된 부위에 치환 돌연변이를 만드는 기술, 예를 들어, MI3 프라이머 돌연변이 유발 및 PCR 돌연변이 유발은 잘 알려져 있다.
본원에 사용된, "알킬" 또는 "알킬 기"는 완전히 포화된 직-쇄, 분지, 또는 사이클릭 탄화수소 사슬을 의미한다. 특정 구현예에서, 알킬 기는 1 내지 8개의 탄소 원자를 함유할 수 있다("C1-C8 알킬"). 특정 구현예에서, 알킬 기는 1 내지 6개의 탄소 원자를 함유할 수 있다("C1-C6 알킬"). 특정 구현예에서, 알킬 기는 1 내지 3개의 탄소 원자를 함유한다. 또 다른 구현예에서, 알킬 기는 2 내지 3개의 탄소 원자를 함유하고, 또 다른 구현예에서 알킬 기는 1 내지 2개의 탄소 원자를 함유한다.
본원에 사용된, "알킬알콕시"는 알콕시 기로 치환된 알킬 기를 의미한다.
본원에 사용된, "알콕시"는 산소("알콕시") 원자를 통해 주요 탄소 사슬에 부착된, 앞서 정의된 바와 같은, 알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된, "알킬하이드록시"는 하이드록실 기로 치환된 알킬 기를 의미한다.
본원에 사용된, "하이드록시" 또는 "하이드록실"은 -OH를 지칭한다.
본원에 사용된 "카르보사이클" 또는 "카르보사이클릴"은 방향족(예를 들어, 아릴) 및 비-방향족(예를 들어, 사이클로알킬) 기 둘 모두를 포함한다. 특정 구현예에서, 카르보사이클 기는 3 내지 10개의 탄소 원자를 함유한다("3 내지 10원 카르보사이클"). 특정 구현예에서, 카르보사이클 기는 3 내지 8개의 탄소 원자를 함유한다("3 내지 8원 카르보사이클"). 특정 구현예에서, 카르보사이클 기는 3 내지 6개의 탄소 원자를 함유한다("3 내지 6 원 카르보사이클"). 특정 구현예에서, 카르보사이클 기는 3 내지 5개의 탄소 원자를 함유한다("3 내지 5원 카르보사이클").
본원에 사용된, "할로알킬"은 하나 이상의 할로겐 원자로 치환된 알킬 기를 지칭한다.
"할로겐"은 임의의 할로겐의 라디칼, 예를 들어 -F, -Cl, -Br, 또는 -I를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "헤테로사이클", "헤테로사이클릴", 및 "헤테로사이클릭"은 고리에 적어도 하나의 헤테로원자를 함유하는 모노사이클릭 헤테로사이클, 바이사이클릭 헤테로사이클, 또는 트리사이클릭 헤테로사이클을 의미한다.
모노사이클릭 헤테로사이클은 O, N, 및 S로부터 독립적으로 선택되는 적어도 하나의 헤테로원자를 함유하는 3-, 4-, 5-, 6-, 7, 또는 8-원 고리이다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클은 O, N 및 S로부터 선택되는 1개의 헤테로원자를 함유하는 3- 또는 4-원 고리이다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클은 0 또는 1개의 이중 결합 및 O, N 및 S로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 헤테로원자를 함유하는 5-원 고리이다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클은 0, 1 또는 2개의 이중 결합 및 O, N 및 S로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 헤테로원자를 함유하는 6-, 7-, 또는 8-원 고리이다. 모노사이클릭 헤테로사이클의 대표적인 예로는, 아제티디닐, 아제파닐, 아지리디닐, 디아제파닐, 1,3-디옥사닐, 1,3-디옥솔라닐, 디하이드로피라닐(3,4-디하이드로-2H-피란-6-일 포함), 1,3-디티올라닐, 1,3-디티아닐, 이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 이소티아졸리닐, 이소티아졸리디닐, 이속사졸리닐, 이속사졸리디닐, 모르폴리닐, 옥사디아졸리닐, 옥사디아졸리디닐, 옥사졸리닐, 옥사졸리디닐, 피페라지닐, 피페리디닐, 피라닐, 피라졸리닐, 피라졸리디닐, 피롤리닐, 피롤리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 테트라하이드로피라닐(테트라하이드로-2H-피란-4-일 포함), 테트라하이드로티에닐, 티아디아졸리닐, 티아디아졸리디닐, 티아졸리닐, 티아졸리디닐, 티오모르폴리닐, 1,1-디옥시도티오모르폴리닐(티오모르폴린 설폰), 티오피라닐, 및 트리티아닐이 포함되나, 이에 한정되지 않는다.
본 개시의 바이사이클릭 헤테로사이클은 아릴 기에 융합된 모노사이클릭 헤테로사이클, 또는 모노사이클릭 사이클로알킬에 융합된 모노사이클릭 헤테로사이클, 또는 모노사이클릭 사이클로알케닐에 융합된 모노사이클릭 헤테로사이클, 또는 총 5 내지 12개의 고리 원자를 갖는 모노사이클릭 헤테로사이클에 융합된 모노사이클릭 헤테로사이클을 포함할 수 있다. 바이사이클릭 헤테로사이클의 예로는 3,4-디하이드로-2H-피라닐, 1,3-벤조디옥솔일, 1,3-벤조디티올일, 2,3-디하이드로-1,4-벤조디옥시닐, 2,3-디하이드로-1-벤조푸라닐, 2,3-디하이드로-1-벤조티에닐, 2,3-디하이드로-1H-인돌일, 및 1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀리닐이 포함되나, 이에 한정되지 않는다.
용어 "헤테로사이클", "헤테로사이클릴", 및 "헤테로사이클릭"은 헤테로아릴을 포함한다. "헤테로아릴"은 고리 중 적어도 하나에 하나 이상의 헤테로원자(산소, 질소 또는 황)를 갖는, 하나 이상의 닫힌 고리를 갖는 사이클릭 모이어티를 지칭하며, 여기서 고리 중 적어도 하나는 방향족이며, 여기서 고리 또는 고리들은 독립적으로 융합, 및/또는 가교될 수 있다. 예로는 제한없이 페닐, 티오페닐, 트리아졸일, 피리디닐, 피리미디닐, 피리다지닐, 및 피라지닐이 포함된다.
본원에 기재된 바와 같이, 본 개시의 화합물은 "선택적으로 치환된" 모이어티를 함유할 수 있다. 일반적으로, 용어 "선택적으로"에 의해 선행되든 안되든, 용어 "치환된"은 지정된 모이어티의 하나 이상의 수소가 적합한 치환기로 대체됨을 의미한다. 달리 표시되지 않는 한, "선택적으로 치환된" 기는 기의 각각의 치환 가능한 위치에 적합한 치환기를 가질 수 있으며, 임의의 주어진 구조에서 하나 이상의 위치가 특정된 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있는 경우, 치환기는 각각의 위치에서 동일하거나 상이할 수 있다. 본 개시 하에서 예상되는 치환기의 조합은 바람직하게는 안정하거나 화학적으로 실현 가능한 화합물의 형성을 초래하는 것이다.
"치환" 또는 "치환된" 또는 "부재"는 이러한 치환 또는 부재가 치환되는 원자 및 치환기의 허용된 원자가에 따르고, 치환 또는 부재는, 예를 들어 재배열, 고리화, 제거 등과 같은 변형을 자발적으로 겪지 않는, 안정한 화합물을 초래한다는 암시적 단서를 포함함을 당업자는 이해할 것이다. 본 개시의 목적을 위해, 질소와 같은 헤테로원자는 수소 치환기, 및/또는 헤테로원자의 원자가를 만족시키는 본원에 기재된 유기 화합물의 임의의 허용되는 치환기를 가질 수 있다.
"안정한"은 이들의 생산, 검출, 및, 특정 구현예에서, 이들의 회수, 정제, 및 본원에 개시된 목적 중 하나 이상을 위한 용도를 가능하게 하는 조건을 경험할 때 화학적으로 및/또는 물리적으로 실질적으로 변경되지 않는 화합물을 지칭한다. 일부 구현예에서, 안정한 화합물 또는 화학적으로 실현 가능한 화합물은 적어도 1주 동안, 수분 또는 기타 화학적으로 반응성 있는 조건의 부재 하에서, 40℃ 이하의 온도에서 유지될 때 실질적으로 변경되지 않는 것이다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 화합물은 안정하다.
본원에 교시된 거울상 이성질체는 실질적으로 단일 거울상 이성질체, 예를 들어, 특정 비대칭 중심 또는 중심들에서, 90%, 92%, 95%, 98%, 또는 99% 이상의, 또는 100%와 같은 단일 거울상 이성질체를 포함하는 "거울상 이성질체적으로 순수한" 이성질체를 포함할 수 있다. "비대칭 중심" 또는 "키랄 중심"은 4개의 상이한 치환기를 포함하는 사면체의 탄소 원자를 지칭한다.
본원에 기재된 화합물은 또한 이러한 화합물을 구성하는 원자 중 하나 이상에서 비 자연적인 비율의 원자 동위 원소를 함유할 수 있다. 예를 들어, 화합물은, 예를 들어 중수소(2H), 삼중수소(3H), 탄소-13(13C), 또는 탄소-14(14C)와 같은, 방사성 동위 원소를 이용하여 방사성 표지될 수 있다. 본원에 개시된 화합물의 모든 동위 원소 변이는, 방사성이든 아니든, 본 개시의 범위 내에 포함되는 것으로 의도된다. 또한, 본원에 기재된 화합물의 모든 호변이성질체 형태는 청구된 개시의 범위 내에 있는 것으로 의도된다.
항체-약물 접합체
본 개시의 항체-약물 접합체(ADC) 화합물은 항암 활성을 갖는 것을 포함한다. 구체적으로, ADC 화합물은 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 접합된(즉, 링커에 의해 공유 결합으로 부착된) 항체 또는 항원 결합 단편(이의 항원 결합 단편 포함)을 포함하며, 예를 들어, 여기서 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 항체 또는 항원 결합 단편에 접합되지 않은 경우 세포 독성 또는 세포 증식 억제 효과를 갖는다. 다양한 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 항체 또는 항원 결합 단편에 접합되지 않은 경우 SF3b 스플라이세오솜 복합체에 결합 및/또는 이와 상호 작용할 수 있다. 다양한 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 항체 또는 항원 결합 단편에 접합되지 않은 경우 시험관내 및/또는 생체내 RNA 스플라이싱을 조절할 수 있다. RNA 스플라이싱을 표적화함으로써, 다양한 구현예에서, 본원에 개시된 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 ADC는 강력한 항증식 제제이다. 다양한 구현예에서, 본원에 개시된 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 ADC는 활발히 분열하는 세포 및 무활동 세포 둘 모두를 표적화 할 수 있다.
다양한 구현예에서, 본 개시는 일정 생물학적으로 활성인 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제가 ADC에 사용되는 경우 개선된 특성을 제공할 수 있다는 발견에, 적어도 부분적으로, 기초한다. 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 그 자체로 사용되는 경우 바람직하게 개선된 특징(예를 들어, 강인한 SF3b 스플라이세오솜 복합체 결합, RNA 스플라이싱의 강력한 조절)을 나타낼 수 있지만, 다양한 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제가 항체 또는 항원 결합 단편에 접합되는 경우 상기 바람직하게 개선된 특징을 더 적게 나타낼 수 있다. 따라서, 인간 치료제로서, 예를 들어 종양 제제로서, 사용하기 위한 ADC의 개발 및 생산은 원하는 표적 또는 표적들에 결합하고 암을 치료하기 위해 그 자체로 사용되는 약물에 부착할 수 있는 항체의 확인보다 더 많은 것을 요구할 수 있다. 항체를 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 연결하는 것은 항체 및 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 중 하나 또는 둘 모두의 활성에 유의미한 영향을 가질 수 있으며, 영향은 링커의 유형 및/또는 선택된 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 따라 달라질 것이다. 따라서, 일부 구현예에서, (i) 단리된 상태의 항체 및 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 모이어티에 의해 나타나는 하나 이상의 치료 특성을 보유하고, (ii) 항체 또는 항원 결합 단편의 특이적 결합 특성을 유지하고; (iii) 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 로딩 및 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제-대-항체 비율을 최적화하고; (iv) 항체 또는 항원 결합 단편에 대한 안정적 부착을 통해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 모이어티의 전달, 예를 들어 세포내 전달을 가능하게 하고; (v) 표적 부위로의 수송 또는 전달까지 온전한 접합체로서 ADC 안정성을 보유하고; (vi) 투여 전 또는 후에 ADC의 응집을 최소화하고; (vii) 세포 환경에서의 절단 또는 다른 방출 메커니즘 후 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 모이어티의 치료 효과, 예를 들어 세포 독성 효과를 가능하게 하고; (viii) 단리된 상태의 항체 및 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 모이어티의 그것에 필적하거나 그보다 우수한 생체내 항암 치료 효능을 나타내고; (ix) 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 모이어티에 의한 오프-타겟 살해를 최소화하고/하거나; (x) 바람직한 약동학적 및 약력학적 특성, 제형화 가능성, 및 독성학적/면역학적 프로파일을 나타내기 위해 ADC의 성분이 선택된다. 이들 특성 각각은 치료 용도를 위한 개선된 ADC를 확인하기 위해 필요할 수 있다(Ab et al.(2015) Mol Cancer Ther. 14: 1605-13).
다양한 구현예에서, 본원에 개시된 ADC는 상기 나열된 카테고리 중 일부 또는 각각에서 예측할 수 없게 유리한 특성을 나타낸다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC 작제물은, 대체 링커 및/또는 약물 모이어티(예를 들어, 대체 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제)를 포함하는 ADC와 비교하여, 놀랍게 유리한 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 로딩, 응집, 및/또는 안정성 프로파일을 나타내고/내거나, 항체 결합 기능, 약물 활성, 및/또는 개선된 방관자 살해를 보존하면서, 오프-타겟 살해를 감소시킨다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC 작제물은 대체 링커 및/또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 모이어티를 사용하는 ADC와 비교하여 우수한 안정성, 활성, 효능, 또는 기타 효과(생체내 또는 시험관내에서 측정되는)를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC 작제물은 단일 용량으로 투여되는 경우 생체내 치료 효능을 나타낸다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC 작제물은 대체 링커 및/또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 모이어티를 사용하는 ADC와 비교하여 놀랍게 안정하다.
본 개시의 ADC 화합물은 유효 용량의 세포 독성 또는 세포 증식 억제 제제를 암 세포 또는 종양 조직에 선택적으로 전달할 수 있다. 개시된 ADC는 각각의 표적 항원(예를 들어, HER2, CD138, EPHA2, MSLN, FOLH1, CDH6, CEACAM5, CFC1B, ENPP3, FOLR1, HAVCR1, KIT, MET, MUC16, SLC39A6, SLC44A4, 또는 STEAP1)을 발현하는 세포에 대해 강력한 세포 독성 및/또는 세포 증식 억제 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다. 일부 구현예에서, ADC의 세포 독성 및/또는 세포 증식 억제 활성은 세포에서의 표적 항원 발현에 의존적이다. 일부 구현예에서, 개시된 ADC는 표적 항원을 발현하는 암 세포를 살해하면서 오프-타겟 살해를 최소화하는 데 특히 효과적이다. 일부 구현예에서, 개시된 ADC는 표적 항원을 발현하지 않는 암 세포에 대해 세포 독성 및/또는 세포 증식 억제 효과를 나타내지 않는다.
예시적인 HER2-발현 암으로는 유방암, 위암, 방광암, 요로 상피 세포 암종, 식도암, 폐암(예를 들어, 폐 선암종), 자궁암(예를 들어, 자궁 장액 자궁 내막 암종), 타액 관 암종, 자궁 경부암, 자궁내막암, 및 난소암이 포함되나 이에 한정되지 않는다(English et al.(2013) Mol Diagn Ther. 17: 85-99).
예시적인 CD138-발현 암으로는 흉곽내암(예를 들어, 폐암, 중피종), 피부암(예를 들어, 기저 세포 암종, 편평 세포 암종), 두경부암(예를 들어, 후두, 하인두, 비인두), 유방암, 비뇨생식기암(예를 들어, 자궁 경부암, 난소암, 자궁내막암, 전립선암, 방광암, 요로 상피암), 혈액 악성 종양(예를 들어, 다발성 골수종과 같은 골수종, B-세포 악성 종양, 호지킨 림프종), 및 갑상선암이 포함되나 이에 한정되지 않는다(Szatmαri et al.(2015) Dis Markers 2015: 796052).
예시적인 EPHA2-발현 암으로는 유방암, 뇌암, 난소암, 방광암, 췌장암, 식도암, 폐암, 전립선암, 흑색종, 식도암, 및 위암이 포함되나 이에 한정되지 않는다(Tandon et al.(2011) Expert Opin Ther Targets 15(1): 31-51).
일부 구현예에서, ADC의 절단은 항체 또는 항원 결합 단편 및 링커로부터 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 방출한다. 일부 구현예에서, 링커 및/또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 방관자 살해(이웃 세포 살해)를 용이하게 하도록 설계된다. 일부 구현예에서, 링커 및/또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 세포 내입 후 절단 및 링커-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 모이어티 및/또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 모이어티 단독의 이웃 세포로의 확산을 통한 방관자 살해를 용이하게 하도록 설계된다. 일부 구현예에서, 링커는 세포 내입을 촉진한다. 일부 구현예에서, 링커는 세포외 환경에서의 절단을 최소화함으로써 오프-타겟 조직(예를 들어, 비-암성 조직)에 대한 독성을 감소시키는 한편, 표적 조직에 대한 ADC 결합 및 ADC의 항체 또는 항원 결합 단편에 의해 표적화되는 항원을 발현하지 않지만, 그 항원을 발현하는 표적 암 조직을 둘러싸는 암성 조직의 방관자 살해를 보존하도록 설계된다. 일부 구현예에서, ADC의 절단에 의해 생산된 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 모이어티, 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 모이어티의 이화 생성물은, 표적 세포에 의한 또는 이웃 세포에 의한 흡수(즉, 세포 투과성)를 용이하게 하도록 설계된다. 이러한 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 모이어티 및 이화 생성물은 본원에서 "방관자 활성"으로 지칭될 수 있는 반면, 감소된 세포 투과성을 갖는 약물 모이어티 또는 이화 생성물은 "방관자 비활성"으로 지칭될 수 있다.
일부 구현예에서, 개시된 ADC는 또한 방관자 살해 활성을 나타내지만 오프-타겟 세포 독성은 낮다. 이론에 얽매이지 않고, ADC의 방관자 살해 활성은 고형 종양으로의 침투가 제한되고/되거나 종양 세포 사이의 표적 항원 발현이 이질적인 경우 특히 유익할 수 있다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 링커를 포함하는 ADC는 비-절단 가능한 링커를 포함하는 ADC를 사용한 유사한 치료에 비해, 방관자 살해에 특히 효과적이고/이거나 개선된 방관자 살해 활성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC는 약물 모이어티 그 자체 대비 개선된 용해도 및 표적 세포 침투를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 모이어티 그 자체 대비 개선된 세포 독성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC는, 독립형 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제로서 평가되는 경우, 더 낮은 세포 독성을 나타내는 약물 모이어티를 사용하지만, 독립형 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제로서 평가되는 경우 더 높은 세포 독성을 갖는 다른 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 모이어티를 포함하는 ADC보다 놀랍게도 더 우수하다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제의 절단 및 방출은, 비-절단 가능한 링커를 포함하는 ADC를 사용하는 유사한 치료에 비해, ADC의 세포 독성을 개선한다. 다른 구현예에서, ADC가 바람직한 생물학적 활성을 보유하기 위해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제의 절단 및 방출이 필요하지 않다. 일부 구현예에서, 증가된 스페이서 길이를 갖는 비-절단 가능한 링커(예를 들어, ADL12)를 포함하는 ADC는 절단 가능한 링커(예를 들어, ADL1, ADL5)를 포함하는 ADC를 사용하는 유사한 치료 대비 동일하거나 유사한 세포 독성 및 더 짧은 비-절단 가능한 링커를 포함하는 ADC를 사용하는 유사한 치료 대비 놀랍게도 더 우수한 세포독성을 제공한다. 일부 구현예에서, 카르보닐 기 없이 증가된 스페이서 길이를 갖는 비-절단 가능한 링커(예를 들어, ADL12)를 포함하는 ADC는 절단 가능한 링커(예를 들어, ADL1, ADL5)를 포함하는 ADC를 사용하는 유사한 치료 대비 동일하거나 유사한 세포 독성 및 카르보닐 기를 갖는 동일하거나 유사한 스페이서 길이를 갖는 비-절단 가능한 링커(예를 들어, ADL10)를 포함하는 ADC를 사용하는 유사한 치료 대비 놀랍게도 더 우수한 세포 독성을 제공한다. 일부 구현예에서, 비-절단 가능한 MC 링커(예를 들어, ADL12)로부터의 카르보닐 기의 제거는, 변형되지 않은 비-절단 가능한 MC 링커(예를 들어, ADL10)를 포함하는 ADC를 사용하는 유사한 치료 대비, 세포 독성의 50-배 초과, 75-배 초과, 100-배 초과, 150-배 초과, 또는 200-배 초과 증가를 초래할 수 있다. 일부 구현예에서, 비-절단 가능한 MC 링커(예를 들어, ADL12)로부터의 카르보닐 기의 제거 및 증가된 스페이서 길이(예를 들어, 적어도 하나의 스페이서 단위의 추가)는, 변형되지 않은 비-절단 가능한 MC 링커(예를 들어, ADL10)를 포함하는 ADC를 사용하는 유사한 치료 대비, 세포 독성의 50-배 초과, 75-배 초과, 100-배 초과, 150-배 초과, 또는 200-배 초과 증가를 초래할 수 있다.
종양 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편(Ab), 스플라이싱 조절제 약물 모이어티(D), 및 Ab를 D에 공유 결합으로 부착시키는 링커 모이어티(L)를 포함하는 ADC 화합물이 본원에서 제공된다. 특정 양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 종양-관련 항원(예를 들어, HER2, CD138, EPHA2, MSLN, FOLH1, CDH6, CEACAM5, CFC1B, ENPP3, FOLR1, HAVCR1, KIT, MET, MUC16, SLC39A6, SLC44A4, 또는 STEAP1)에 높은 특이성 및 높은 친화성으로 결합할 수 있다. 특정 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 결합시 표적 세포 내로, 예를 들어 세포의 분해성 구획 내로, 내입된다. 다양한 구현예에서, 표적 세포에 결합 시 내입되고, 분해가 되고, 암 세포를 살해하기 위해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 모이어티를 방출하는 ADC가 사용될 수 있다. 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 모이어티는 효소 작용, 가수 분해, 산화, 또는 임의의 다른 메커니즘에 의해 ADC의 항체 및/또는 링커 모이어티로부터 방출될 수 있다.
예시적인 ADC는 화학식 I을 갖는다:
[화학식 I]
Ab-(L-H) p
여기서 Ab = 항체 또는 항원 결합 단편, L = 링커 모이어티, H = 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티, 및 p = 항체 또는 항원 결합 단편 당 스플라이싱 조절제 약물 모이어티의 수.
특정 구현예에서, 기재된 ADC 및 조성물에서의 사용을 위한 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제-표적화 모이어티는 항체 또는 항원 결합 단편이다. 기재된 ADC 및 조성물에서의 사용을 위한 다른 예시적인 약물-표적화 모이어티가 또한 본원에 제공되고 기재된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제-표적화 모이어티는 다양한 세포-결합 제제 및 비-항체 스캐폴드 중 임의의 하나일 수 있다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제-표적화 모이어티는 세포-결합 제제이다. 본원에 사용된, 용어 "세포-결합 제제"는 동물(예를 들어, 인간) 세포에 결합하고 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 모이어티(예를 들어, 본원에 개시된 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티)를 전달할 수 있는 임의의 제제를 지칭한다. 용어는 본원에 개시된 예시적인 항체 및 항원 결합 단편(예를 들어, 단일 클론 항체 및 Fab 및 scFV와 같은 이의 단편)을 포함한다. 용어는 다르핀(DARPin), 듀오바디, 바이사이클릭 펩티드, 나노바디, 센티린, MSH(멜라닌 세포-자극 호르몬), 수용체-Fc 융합 분자, T-세포 수용체 구조, 안드로겐 및 에스트로겐과 같은 스테로이드 호르몬, 성장 인자, EGF와 같은 콜로니-자극 인자, 및 기타 비-항체 스캐폴드와 같은 예시적인 세포-결합 제제를 추가로 포함한다. 다양한 구현예에서, 비-항체 스캐폴드는 대략 두 가지 구조적 종류, 즉 도메인-크기 화합물(대략 6 내지 20 kDa) 및 구속된 펩티드(대략 2 내지 4 kDa)로 나뉠 수 있다. 예시적인 도메인-크기 스캐폴드로는 아피바디, 아필린, 안티칼린, 아트리머, 다르핀, FN3 스캐폴드(예를 들어, 애드넥틴 및 센티린), 피노머, 쿠니츠 도메인, 프로넥틴, O-바디, 및 수용체-Fc 융합 단백질이 포함되나 이에 한정되지 않는 반면, 예시적인 구속된 펩티드로는 아비머, 바이사이클릭 펩티드, 및 Cys-노트가 포함된다. 일부 구현예에서, 기재된 ADC 및 조성물에 사용되는 약물-표적화 모이어티는 아피바디, 아필린, 안티칼린, 아트리머, 다르핀, 애드넥틴 또는 센티린과 같은 FN3 스캐폴드, 피노머, 쿠니츠 도메인, 프로넥틴, O-바디, 아비머, 바이사이클릭 펩티드, 및 Cys-노트로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 기재된 ADC 및 조성물에 사용되는 약물-표적화 모이어티는 수용체-Fc 융합 단백질, 예를 들어 HER2-Fc 키메라 융합 단백질이다. 비-항체 스캐폴드는, 예를 들어 문헌[Vazquez-Lombardi et al.(2015) Drug Dis Today 20(10): 1271-83]에, 검토되어 있다.
항체
화학식 I의 항체 또는 항원 결합 단편(Ab)은 그 범위 내에 암 세포 상의 표적 항원에 특이적으로 결합하는 임의의 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다. 항체 또는 항원 결합 단편은, 예를 들어 비아코어(BIAcore)® 분석에 의해 측정된, 1 mM 이하, 100 nM 이하 또는 10 nM 이하, 또는 그 사이의 임의의 양의 해리 상수(KD)로 표적 항원에 결합할 수 있다. 특정 구현예에서, KD는 1 pM 내지 500 pM이다. 일부 구현예에서, KD는 500 pM 내지 1 μM, 1 μM 내지 100 nM, 또는 100 mM 내지 10 nM이다.
일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은, 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는, 4개-사슬 항체(면역 글로불린 또는 전장 또는 온전한 항체로도 지칭됨)이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 2개-사슬 반 항체(1개의 경쇄 및 1개의 중쇄), 또는 면역 글로불린의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 표적 암 항원에 결합하고/하거나 면역 글로불린의 기능을 제공하는 능력을 보유하는 면역 글로불린의 항원 결합 단편이다.
일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 내입되는 항체 또는 이의 내입되는 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 내입되는 항체 또는 이의 내입되는 항원 결합 단편은 세포 표면 상에 발현된 표적 암 항원에 결합하고 결합시 세포에 들어간다. 일부 구현예에서, ADC의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티는 ADC가 표적 암 항원을 발현하는 세포에 들어가서 그에 존재한 후(즉, ADC가 내입된 후), 예를 들어, 절단에 의해, 항체 또는 항원 결합 단편의 분해에 의해, 또는 임의의 다른 적합한 방출 메커니즘에 의해, ADC의 항체 또는 항원 결합 단편으로부터 방출된다.
본 개시의 예시적인 항체의 아미노산 서열은 표 2 내지 표 4에 제시되어 있다.
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다양한 구현예에서, 본원에 개시된 ADC는 상기 표에 나열된 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 중 임의의 세트, 또는 예를 들어 선택된 인간 공여자 항체 프레임워크 내로 6개의 CDR을 이식함으로써, 중쇄 및 경쇄 세트로부터의 6개의 CDR 서열 세트를 포함할 수 있다. 다양한 구현예에서, 본원에 개시된 ADC는, ADC가 이의 표적 암 항원에 결합하는 능력을 보유하고(예를 들어, 1x10-8 M 미만의 KD로) 본원에 개시된 ADC의 하나 이상의 기능적 특성을 보유하는 한(예를 들어, 내입되고, RNA 스플라이싱을 조절하고, 세포 성장을 저해하는 능력 등), 상기 표에 나열된 서열과 상동인 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, ADC는 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인 또는 이의 단편을 추가로 포함한다. 예를 들어, ADC는 인간 IgG 중쇄 불변 도메인(IgG1과 같은) 및 인간 카파 또는 람다 경쇄 불변 도메인을 포함할 수 있다. 다양한 구현예에서, 기재된 ADC의 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 Ig 카파 경쇄 불변 도메인을 갖는 인간 면역 글로불린 G 서브타입 1(IgG1) 중쇄 불변 도메인을 포함한다.
다양한 다른 구현예에서, ADC에 대한 표적 암 항원은 인간 표피 성장 인자 수용체 2(HER2)이다.
다양한 구현예에서, 항-HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음과 같이 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함한다: 카밧(Kabat) 번호 시스템에 의해 정의된 바와 같이, SEQ ID NO: 1로 구성된 중쇄 CDR1(HCDR1), SEQ ID NO: 2로 구성된 중쇄 CDR2(HCDR2), SEQ ID NO: 3으로 구성된 중쇄 CDR3(HCDR3); SEQ ID NO: 4로 구성된 경쇄 CDR1(LCDR1), SEQ ID NO: 5로 구성된 경쇄 CDR2(LCDR2), 및 SEQ ID NO: 6으로 구성된 경쇄 CDR3(LCDR3).
다양한 구현예에서, 항-HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 19의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 20의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 19와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및/또는 SEQ ID NO: 20과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는다.
다양한 구현예에서, 항-HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 내입되는 항체 또는 내입되는 항원 결합 단편이다. 다양한 구현예에서, 항-HER2 항체는 인간 IgG1 중쇄 불변 도메인 및 인간 Ig 카파 경쇄 불변 도메인을 포함한다.
다양한 구현예에서, 항-HER2 항체는 SEQ ID NO: 19의 중쇄 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 19와 적어도 95% 동일한 서열, 및 SEQ ID NO: 20의 경쇄 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 20과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 구체적인 구현예에서, 항-HER2 항체는 SEQ ID NO: 19의 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 20의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-HER2 항체는 SEQ ID NO: 19와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 20과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 다양한 구현예에서, 항-HER2 항체는 트라스투주맙, 또는 이의 항원 결합 단편이다.
다양한 구현예에서, 항-HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 트라스투주맙의 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함하거나 여기서 CDR은 HCDR1(SEQ ID NO: 1), HCDR2(SEQ ID NO: 2), HCDR3(SEQ ID NO: 3); LCDR1(SEQ ID NO: 4), LCDR2(SEQ ID NO: 5), 및 LCDR3(SEQ ID NO: 6)에서 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개 이하의 아미노산 첨가, 결실 또는 치환을 포함한다.
다양한 다른 구현예에서, ADC에 대한 표적 암 항원은 인간 신데칸-1(CD138)이다.
다양한 구현예에서, 항-CD138 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음과 같이 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함한다: 카밧(Kabat) 번호 시스템에 의해 정의된 바와 같이, SEQ ID NO: 7로 구성된 중쇄 CDR1(HCDR1), SEQ ID NO: 8로 구성된 중쇄 CDR2(HCDR2), SEQ ID NO: 9로 구성된 중쇄 CDR3(HCDR3); SEQ ID NO: 10으로 구성된 경쇄 CDR1(LCDR1), SEQ ID NO: 11로 구성된 경쇄 CDR2(LCDR2), 및 SEQ ID NO: 12로 구성된 경쇄 CDR3(LCDR3).
다양한 구현예에서, 항-CD138 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD138 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 21의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 22의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD138 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 21과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및/또는 SEQ ID NO: 22와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는다.
다양한 구현예에서, 항-CD138 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 내입되는 항체 또는 내입되는 항원 결합 단편이다. 다양한 구현예에서, 항-CD138 항체는 뮤린 IgG2a 중쇄 불변 도메인 및 뮤린 Ig 카파 경쇄 불변 도메인을 포함한다. 다양한 구현예에서, 항-CD138 항체는 인간 IgG2a 중쇄 불변 도메인 및 인간 Ig 카파 경쇄 불변 도메인을 포함한다.
다양한 구현예에서, 항-CD138 항체는 SEQ ID NO: 21의 중쇄 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 21과 적어도 95% 동일한 서열, 및 SEQ ID NO: 22의 경쇄 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 22와 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 구체적인 구현예에서, 항-CD138 항체는 SEQ ID NO: 21의 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 22의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD138 항체는 SEQ ID NO: 21과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 22와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 다양한 구현예에서, 항-CD138 항체는 B-B4, 또는 이의 항원 결합 단편이다.
다양한 구현예에서, 항-CD138 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 B-B4의 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함하거나 여기서 CDR은 HCDR1(SEQ ID NO: 7), HCDR2(SEQ ID NO: 8), HCDR3(SEQ ID NO: 9); LCDR1(SEQ ID NO: 10), LCDR2(SEQ ID NO: 11), 및 LCDR3(SEQ ID NO: 12)에서 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개 이하의 아미노산 첨가, 결실 또는 치환을 포함한다.
다양한 다른 구현예에서, ADC에 대한 표적 암 항원은 인간 에프린 A-형 수용체 2(EPHA2)이다.
다양한 구현예에서, 항-EPHA2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음과 같이 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함한다: 카밧(Kabat) 번호 시스템에 의해 정의된 바와 같이, SEQ ID NO: 13으로 구성된 중쇄 CDR1(HCDR1), SEQ ID NO: 14로 구성된 중쇄 CDR2(HCDR2), SEQ ID NO: 15로 구성된 중쇄 CDR3(HCDR3); SEQ ID NO: 16으로 구성된 경쇄 CDR1(LCDR1), SEQ ID NO: 17로 구성된 경쇄 CDR2(LCDR2), 및 SEQ ID NO: 18로 구성된 경쇄 CDR3(LCDR3).
다양한 구현예에서, 항-EPHA2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-EPHA2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 23의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 24의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-EPHA2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 23과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및/또는 SEQ ID NO: 24와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는다.
다양한 구현예에서, 항-EPHA2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 내입되는 항체 또는 내입되는 항원 결합 단편이다. 다양한 구현예에서, 항-EPHA2 항체는 인간 IgG1 중쇄 불변 도메인 및 인간 Ig 카파 경쇄 불변 도메인을 포함한다.
다양한 구현예에서, 항-EPHA2 항체는 SEQ ID NO: 23의 중쇄 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 23과 적어도 95% 동일한 서열, 및 SEQ ID NO: 24의 경쇄 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 24와 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 구체적인 구현예에서, 항-EPHA2 항체는 SEQ ID NO: 23의 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 24의 경쇄 아미노산 서열, 또는 개시된 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-EPHA2 항체는 SEQ ID NO: 23과 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 24와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 항-EPHA2 항체는 SEQ ID NO: 23의 핵산 서열에 의해 인코딩되는 중쇄; 및 SEQ ID NO: 24의 핵산 서열에 의해 인코딩되는 경쇄를 포함한다. 다양한 구현예에서, 항-EPHA2 항체는 1C1, 또는 이의 항원 결합 단편이다.
다양한 구현예에서, 항-EPHA2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 1C1의 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함하거나 여기서 CDR은 HCDR1(SEQ ID NO: 13), HCDR2(SEQ ID NO: 14), HCDR3(SEQ ID NO: 15); LCDR1(SEQ ID NO: 16), LCDR2(SEQ ID NO: 17), 및 LCDR3(SEQ ID NO: 18)에서 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개 이하의 아미노산 첨가, 결실 또는 치환을 포함한다.
다양한 구현예에서, 아미노산 치환은 단일 잔기에 대한 것이다. 삽입은 통상적으로 약 1 내지 약 20개의 아미노산 잔기와 비슷할 것이지만, 생물학적 기능이 보유되는 한(예를 들어, 표적 항원에 대한 결합) 상당히 더 큰 삽입이 용인될 수 있다. 결실은 통상적으로 약 1 내지 약 20개의 아미노산 잔기 범위이지만, 일부 경우에 결실은 훨씬 더 클 수 있다. 치환, 결실, 삽입, 또는 이들의 임의의 조합이 사용되어 최종 유도체 또는 변이체에 도달할 수 있다. 일반적으로, 이들 변화는 분자, 구체적으로 항원 결합 단백질의 면역원성 및 특이성의 변경을 최소화하기 위해 몇 개 아미노산 상에서 수행된다. 그러나, 일정 상황에서는 더 큰 변화가 용인될 수 있다. 보존적 치환은 일반적으로 표 6에 설명된 다음의 도표에 따라 이루어진다.
Figure pct00042
기능 또는 면역학적 동일성에서의 실질적 변화는 표 6에 나타난 것보다 덜 보존적인 치환을 선택함으로써 이루어진다. 예를 들어, 다음에 더 유의미한 영향을 미치는 치환이 이루어질 수 있다: 변경 영역에 있는 폴리펩티드 백본의 구조, 예를 들어 알파-나선 또는 베타-시트 구조; 표적 부위에서의 분자의 전하 또는 소수성; 또는 측쇄의 부피. 일반적으로 폴리펩티드의 특성에서 가장 큰 변화를 생산할 수 있는 치환은 (a) 친수성 잔기, 예를 들어, 세릴 또는 트레오닐이 소수성 잔기, 예를 들어 류실, 이소류실, 페닐알라닐, 발릴 또는 알라닐로(또는 이에 의해) 치환되는 것; (b) 시스테인 또는 프롤린이 임의의 다른 잔기로(또는 이에 의해) 치환되는 것; (c) 전기적 양성인 측쇄를 갖는 잔기, 예를 들어 리실, 아르기닐, 또는 히스티딜이 전기적 음성인 잔기, 예를 들어 글루타밀 또는 아스파르틸로(또는 이에 의해) 치환되는 것; 또는(d) 부피가 큰 측쇄를 갖는 잔기, 예를 들어 페닐알라닌이 측쇄를 갖지 않는 것, 예를 들어 글리신으로(또는 이에 의해) 치환되는 것이다.
변이체 항체 서열이 ADC에 사용되는 다양한 구현예에서, 변이체는 전형적으로 동일한 정성적 생물학적 활성을 나타내고 동일한 면역 반응을 유발할 것이지만, 변이체는 또한 필요에 따라 항원 결합 단백질의 특징을 변형하기 위해 선택될 수 있다. 대안적으로, 변이체는 항원 결합 단백질의 생물학적 활성이 변경되도록 설계될 수 있다. 예를 들어, 글리코실화 부위가 변경되거나 제거될 수 있다.
다양한 항체가 암 세포를 표적화 하기 위해 본원에 사용되는 ADC와 사용될 수 있다. 하기 나타난 바와 같이, 본원에 개시된 ADC에서의 링커-페이로드는 상이한 종양 항원-표적화 항체들에 놀랍도록 효과적이다. 종양 세포에서 발현되지만 건강한 세포에서는 발현되지 않거나, 건강한 세포에서보다 더 높은 수준으로 종양 세포에서 발현되는 적합한 항원은, 이들에 대한 항체와 마찬가지로, 당업계에 알려져 있다. 이들 항체는 본원에 개시된 링커 및 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 페이로드와 함께 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HER2를 표적화 하고, HER2-표적화 항체 또는 항원 결합 단편은 트라스투주맙이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 CD138을 표적화 하고, CD138-표적화 항체 또는 항원 결합 단편은 B-B4이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 EPHA2를 표적화 하고, EPHA2-표적화 항체 또는 항원 결합 단편은 1C1이다. 일부 구현예에서, 개시된 링커 및 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 페이로드는 여러 상이한 종양-표적화 항체들, 트라스투주맙과 같은 HER2-표적화 항체, B-B4와 같은 CD138-표적화 항체, 및 1C1과 같은 EPHA2-표적화 항체에 놀랍도록 효과적이며, 특히 개선된 약물:항체 비율, 응집 수준, 안정성(즉, 시험관내 및 생체내 안정성), 종양 표적화(즉, 세포 독성, 효능), 및/또는 치료 효능이 제공된다. 개선된 치료 효능은 시험관내 또는 생체내에서 측정될 수 있으며, 종양 성장 속도 감소 및/또는 종양 부피 감소를 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 동일한 표적에 대한 대체 항체 또는 상이한 항원 표적에 대한 항체가 사용되고 상기 기재된 유리한 기능적 특성 중 적어도 일부를 제공한다(예를 들어, 개선된 안정성, 개선된 종양 표적화, 개선된 치료 효능 등). 일부 구현예에서, 이들 유리한 기능적 특성의 일부 또는 전부는 개시된 링커 및 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 페이로드가 대체 HER2-, CD138-, 또는 EPHA2-표적화 항체 또는 항원 결합 단편에 접합될 때 관찰된다. 일부 다른 구현예에서, 이들 유리한 기능적 특성의 일부 또는 전부는 개시된 링커 및 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 페이로드가 HER2-표적화 항체 또는 항원 결합 단편에 접합될 때 관찰된다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HER2를 표적화한다. 일부 구현예에서, HER2-표적화 항체 또는 항원 결합 단편은 트라스투주맙이다. 일부 다른 구현예에서, 이들 유리한 기능적 특성의 일부 또는 전부는 개시된 링커 및 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 페이로드가 CD138-표적화 항체 또는 항원 결합 단편에 접합될 때 관찰된다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 CD138을 표적화한다. 일부 구현예에서, CD138-표적화 항체 또는 항원 결합 단편은 B-B4이다. 일부 다른 구현예에서, 이들 유리한 기능적 특성의 일부 또는 전부는 개시된 링커 및 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 페이로드가 EPHA2-표적화 항체 또는 항원 결합 단편에 접합될 때 관찰된다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 EPHA2를 표적화한다. 일부 구현예에서, EPHA2-표적화 항체 또는 항원 결합 단편은 1C1이다.
링커
다양한 구현예에서, ADC의 링커는 치료적으로 유효하기에 충분한 방식으로 세포외에서 안정하다. 일부 구현예에서, 링커는 세포 외부에서 안정하여, ADC가 세포외 조건에 존재할 때(예를 들어, 세포내로의 수송 또는 전달 전) 온전하게 남아 있다. ADC의 맥락에서 사용된, 용어 "온전한"은 항체 또는 항원 결합 단편이 약물 모이어티(예를 들어, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제)에 부착된 상태로 남아 있음을 의미한다. 링커 또는 링커를 포함하는 ADC의 맥락에서, 본원에 사용된, "안정한"은 ADC가 세포외 조건에 존재하는 경우 ADC 샘플에서 링커의 20% 이하, 약 15% 이하, 약 10% 이하, 약 5% 이하, 약 3% 이하, 또는 약 1% 이하(또는 그 사이의 임의의 백분율)가 절단됨(또는 전체 ADC가 달리 온전하지 않은 경우)을 의미한다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 링커 및/또는 ADC는 대체 링커 및/또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 페이로드를 갖는 대체 링커 및/또는 ADC와 비교하여 놀랍게도 안정하다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC는 약 48시간 초과, 60시간 초과, 약 72시간 초과, 약 84시간 초과, 또는 약 96시간 초과 동안 온전하게 남아있을 수 있다.
링커가 세포외에서 안정적인지 여부는, 예를 들어 사전 결정된 시간(예를 들어, 2, 4, 6, 8, 16, 24, 48, 또는 72시간) 동안 혈장 내에 ADC를 포함시킨 후 혈장에 존재하는 유리 약물 모이어티의 양을 정량화함으로써, 결정될 수 있다. 안정성은 ADC 시간이 표적 종양 세포에 국소화되는 것을 가능하게 하고, 정상 및 종양 조직 둘 모두를 무차별적으로 손상시킴으로써 ADC의 치료 지수를 낮출 수 있는, 약물 모이어티의 조기 방출을 방지할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 표적 세포 외부에서 안정하고, 약물이 그의 표적에(예를 들어, SF3b 스플라이세오솜 복합체에) 결합할 수 있도록, 세포 내부에서 일단 ADC로부터 약물 모이어티를 방출한다. 따라서, 효과적인 링커는: (i) 항체 또는 항원 결합 단편의 특이적 결합 특성을 유지하고; (ii) 항체 또는 항원 결합 단편에의 안정한 부착을 통해 약물 모이어티의 전달, 예를 들어 세포내 전달을 가능하게 하고; (iii) ADC가 표적 부위로 수송되거나 전달될 때까지 안정적이고 온전하게 남아 있으며, (iv) 절단 또는 대체 방출 메커니즘 후 약물 모이어티의 치료 효과, 예를 들어 세포 독성 효과를 가능하게 할 것이다.
링커는 ADC의 물리-화학적 특성에 영향을 미칠 수 있다. 많은 세포 독성 제제는 본질적으로 소수성이므로, 추가 소수성 모이어티를 사용하여 이들을 항체에 연결하는 것은 응집으로 이어질 수 있다. ADC 응집체는 불용성이며 종종 도달 가능한 항체 상으로의 약물 로딩을 제한하여, ADC의 효능에 부정적으로 영향을 미칠 수 있다. 일반적으로, 생물 제제의 단백질 응집체는 또한 면역원성 증가와 연결되어 왔다. 하기에 나타난 바와 같이, 본원에 개시된 링커는 낮은 응집 수준 및 바람직한 약물 로딩 수준을 갖는 ADC를 초래한다.
링커는 "절단 가능" 또는 "비-절단 가능"할 수 있다(Ducry and Stump(2010) Bioconjugate Chem. 21: 5-13). 절단 가능한 링커는 일정 환경 요인에 노출되는 경우, 예를 들어 표적 세포 내로 내입되는 경우 약물 모이어티(예를 들어, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제)를 방출하도록 설계되는 반면, 비-절단 가능한 링커는 일반적으로 항체 또는 항원 결합 단편 자체의 분해에 의존한다.
일부 구현예에서, 링커는 비-절단 가능한 링커이다. 일부 구현예에서, ADC의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티는 항체 또는 항원 결합 단편의 분해에 의해 방출된다. 비-절단 가능한 링커는 표적 세포에 의한 내입 및 표적 세포 내에서의 분해 시 항체의 적어도 하나의 아미노산 및 약물과 공유 결합으로 결합되어 남아 있는 경향이 있다. 다수의 예시적인 비-절단 가능한 링커가 본원에 기재되고, 다른 것들이 당업계에 알려져 있다. 예시적인 비-절단 가능한 링커는 티오에테르, 사이클로헥실, N-숙신이미딜 4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1 카르복실레이트(SMCC), 또는 N-하이드록시숙신이미드(NHS), 하나 이상의 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 모이어티, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 PEG 모이어티, 또는 하나 이상의 알킬 모이어티를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 링커는 절단 가능한 링커이다. 절단 가능한 링커는 절단 가능한 모이어티를 포함하는 임의의 링커를 지칭한다. 본원에 사용된, 용어 "절단 가능한 모이어티"는 절단될 수 있는 임의의 화학적 결합을 지칭한다. 적합한 절단 가능한 화학적 결합은 당업계에 잘 알려져 있으며 산 불안정 결합, 프로테아제/펩티다제 불안정 결합, 광불안정 결합, 디설파이드 결합, 및 에스테라제 불안정 결합이 포함되나 이에 한정되지 않는다. 절단 가능한 모이어티를 포함하는 링커는 링커의 특정 부위에서의 절단을 통해 ADC로부터의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티의 방출을 가능하게 할 수 있다.
일부 구현예에서, 링커는 세포내 조건 하에서 절단될 수 있어서, 링커의 절단은 약물을 활성화하고/하거나 약물을 치료적으로 유효하게 만드는 세포내 환경에서 항체 또는 항원 결합 단편으로부터 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티를 충분히 방출하도록 한다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티는 ADC가 ADC의 항체 또는 항원 결합 단편에 특이적인 항원을 발현하는 세포에 들어갈 때까지 항체 또는 항원 결합 단편으로부터 절단되지 않고, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티는 세포에 들어갈 때 항체 또는 항원 결합 단편으로부터 절단된다. 일부 구현예에서, 링커는 링커 또는 항체 또는 항원 결합 단편의 어떤 부분도 절단 시 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티에 결합된 채로 남아 있지 않도록 위치되는 절단 가능한 모이어티를 포함한다. 예시적인 절단 가능한 링커로는 산 불안정성 링커, 프로테아제/펩티다제-민감성 링커, 광불안정성 링커, 디메틸-, 디설파이드-, 설폰아미드-함유 링커가 포함된다.
일부 구현예에서, 링커는 pH-민감성 링커이고, 일정 pH 값에서 가수 분해에 민감하다. 전형적으로, pH-민감성 링커는 산성 조건 하에서 절단 가능하다. 이 절단 전략은 일반적으로, 시토졸(pH 약 7.4)과 비교하여, 엔도좀(pH 약 5 내지 6) 및 리소좀(pH 약 4.8) 세포내 구획의 더 낮은 pH를 이용하여, 하이드라존과 같은, 링커의 산 불안정 그룹의 가수 분해를 유발한다(Jain et al.(2015) Pharm Res 32: 3526-40). 일부 구현예에서, 링커는 산 불안정성 및/또는 가수 분해 가능 링커이다. 예를 들어, 리소좀에서 가수 분해 가능하고 산 불안정 그룹(예를 들어, 하이드라존, 세미카르바존, 티오세미카르바존, 시스-아코니틱 아미드, 오르토에스테르, 아세탈, 케탈 등)을 함유하는 산 불안정성 링커가 사용될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,122,368; 5,824,805; 5,622,929; 문헌[Dubowchik 및 Walker(1999) Pharm Therapeutics 83: 67-123; Neville et al.(1989) Biol Chem. 264: 14653-61] 참고. 이러한 링커는, 혈액의 그것과 같은, 중성 pH 조건 하에서 비교적 안정하지만 리소좀의 대략적 pH 인, pH 5.5 또는 5.0 미만에서는 불안정한다. 특정 구현예에서, 가수 분해 가능 링커는 티오에테르 링커(예를 들어, 아실하이드라존 결합을 통해 치료제에 부착된 티오에테르와 같은)이다(예를 들어, 미국 특허 번호 5,622,929 참고).
일부 구현예에서, 링커는 환원 조건 하에서 절단 가능하다. 일부 구현예에서, 링커는, 글루타티온 또는 디티오트레이톨과 같은, 환원제의 존재 하에서 절단 가능하다. 일부 구현예에서, 링커는 절단 가능한 디설파이드 링커 또는 절단 가능한 설폰아미드 링커이다.
일부 구현예에서, 링커는 절단 가능한 디설파이드 링커이다. 예를 들어, SATA(N-숙신이미딜-5-아세틸티오아세테이트), SPDP(N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트), SPDB(N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)부티레이트) 및 SMPT(N-숙신이미딜옥시카르보닐-알파-메틸-알파-(2-피리딜-디티오)톨루엔), SPDB 및 SMPT를 사용하여 형성될 수 있는 것들을 포함하는, 다양한 디설파이드 링커가 당업계에 알려져 있다. 예를 들어, 문헌[Thorpe et al.(1987) Cancer Res. 47: 5924-31; Wawrzynczak et al., In Immunoconjugates: Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer(C. W. Vogel ed., Oxford U. PresS,1987)] 참고. 또한 미국 특허 번호 4,880,935 참고. 디설파이드 링커는 전형적으로 세포내 티올의 풍부함을 활용하기 위해 사용되며, 이는 이들의 디설파이드 결합의 절단을 용이하게 할 수 있다. 가장 풍부한 세포내 티올인, 환원된 글루타티온의 세포내 농도는, 일반적으로 1 내지 10 nM 범위에 있으며, 이는 약 5 μM로 혈액 내 가장 풍부한 저-분자 티올(즉, 시스테인)의 세포내 농도보다 약 1,000-배 더 높다(Goldmacher et al., In Cancer Drug Discovery and Development: Antibody-Drug Conjugates and Immunotoxins(G.L. Phillips ed., Springer, 2013)). 단백질 디설파이드 이소메라제 패밀리의 세포내 효소는 또한 디설파이드 링커의 세포내 절단에 기여할 수 있다. 본원에 사용된, 절단 가능한 디설파이드 링커는 절단 가능한 디설파이드 모이어티를 포함하는 임의의 링커를 지칭한다. 용어 "절단 가능한 디설파이드 모이어티"는, 예를 들어 티올 또는 효소에 의해, 절단 및/또는 환원될 수 있는 디설파이드 결합을 지칭한다.
일부 구현예에서, 링커는 절단 가능한 설폰아미드 링커이다. 본원에 사용된, 절단 가능한 설폰아미드 링커는 절단 가능한 설폰아미드 모이어티를 포함하는 임의의 링커를 지칭한다. 용어 "절단 가능한 설폰아미드 모이어티"는 설폰아미드 기, 즉 아민 기에 연결된 술포닐 기를 지칭하며, 여기서 황-질소 결합이 절단될 수 있다.
일부 구현예에서, 링커는 분지형, 다기능성 링커 모이어티를 통해 항체 또는 항원 결합 단편에 하나 초과의 약물 모이어티를 공유 결합으로 부착하기 위한 수지상 유형 링커일 수 있다. 예를 들어, 문헌[Sun et al.(2002) Bioorg Med Chem Lett. 12: 2213-5; Sun et al.(2003) Bioorg Med Chem. 11: 1761-8] 참고. 수지상 링커는 약물 대 항체의 몰비, 즉 ADC의 효능과 관련되는, 약물 로딩을 증가시킬 수 있다. 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편이 오직 하나의 반응성 시스테인 티올 기만을 보유하는 경우, 예를 들어, 다수의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티가 수지상 링커를 통해 부착될 수 있다. 일부 구현예에서, 링커 모이어티 또는 링커-약물 모이어티는 환원된 디설파이드 가교 화학 또는 제한된 리신 이용 기술을 통해 항체 또는 항원 결합 단편에 부착될 수 있다. 예를 들어, 국제 공개 번호 WO 2013/173391 및 WO 2013/173393 참고.
일부 구현예에서, 링커는 세포내 환경(예를 들어, 리소좀 또는 엔도좀 또는 소포 내)에 존재하는, 절단 제제, 예를 들어 효소에 의해 절단 가능하다. 링커는, 예를 들어 리소좀 또는 엔도좀 프로테아제를 포함하나 이에 한정되지 않는, 세포내 펩티다제 또는 프로테아제 효소에 의해 절단되는 펩티드 링커일 수 있다.
일부 구현예에서, 링커는 절단 가능한 펩티드 링커이다. 본원에 사용된, 절단 가능한 펩티드 링커는 절단 가능한 펩티드 모이어티를 포함하는 임의의 링커를 지칭한다. 용어 "절단 가능한 펩티드 모이어티"는 세포내 환경에 존재하는 제제에 의해 절단될 수 있는 아미노산(천연 또는 합성 아미노산 유도체)을 연결하는 임의의 화학적 결합을 지칭한다. 예를 들어, 링커는 카텝신, 예를 들어 카텝신 B와 같은 펩티다제에 의해 절단 가능한 발린-알라닌(Val-Ala) 서열, 또는 발린-시트룰린(Val-Cit) 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 글루탐산-발린-시트룰린 서열(Glu-Val-Cit)을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 효소-절단 가능한 링커이고 링커에서 절단 가능한 펩티드 모이어티는 효소에 의해 절단 가능하다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 펩티드 모이어티는 리소좀 효소, 예를 들어 카텝신에 의해 절단 가능하다. 일부 구현예에서, 링커는 카텝신-절단 가능한 링커이다. 일부 구현예에서, 링커에서 절단 가능한 펩티드 모이어티는, 카텝신 B, C, F, H, K, L, O, S, V, X, 또는 W와 같은, 리소좀 시스테인 카텝신에 의해 절단 가능하다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 펩티드 모이어티는 카텝신 B에 의해 절단 가능하다. 카텝신 B에 의해 절단될 수 있는 예시적인 디펩티드는 발린-시트룰린(Val-Cit)이다(Dubowchik et al.(2002) Bioconjugate Chem. 13: 855-69).
일부 구현예에서, 링커 또는 링커에서의 절단 가능한 펩티드 모이어티는 아미노산 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 단위는 프로테아제에 의한 링커의 절단을 가능하게 함으로써, 하나 이상의 리소좀 효소와 같은, 하나 이상의 세포내 프로테아제에의 노출 시 ADC로부터의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티의 방출을 용이하게 한다(Doronina et al. al.(2003) Nat Biotechnol. 21: 778-84; Dubowchik and Walker(1999) Pharm Therapeutics 83: 67-123). 예시적인 아미노산 단위로는 디펩티드, 트리펩티드, 테트라펩티드, 및 펜타펩티드가 포함되나 이에 한정되지 않는다. 예시적인 디펩티드로는 발린-알라닌(Val-Ala), 발린-시트룰린(Val-Cit), 알라닌-아스파라긴(Ala-Asn), 알라닌-페닐알라닌(Ala-Phe), 페닐알라닌-리신(Phe-Lys), 알라닌-리신(Ala-Lys), 알라닌-발린(Ala-Val), 발린-리신(Val-Lys), 리신-리신(Lys-Lys), 페닐알라닌-시트룰린(Phe-Cit), 류신-시트룰린(Leu-Cit), 이소류신-시트룰린(Ile-Cit), 트립토판-시트룰린(Trp-Cit), 및 페닐알라닌-알라닌(Phe-Ala)가 포함되나, 이에 한정되지 않는다. 예시적인 트리펩티드로는 알라닌-알라닌-아스파라긴(Ala-Ala-Asn), 글리신-발린-시트룰린(Gly-Val-Cit), 글리신-글리신-글리신(Gly-Gly-Gly), 페닐알라닌-페닐알라닌-리신(Phe-Phe-Lys), 글루탐산-발린-시트룰린(Glu-Val-Cit)(문헌[Anami et al.(2018) Nat. Comm. 9: 2512] 참고) 및 글리신-페닐알라닌-리신(Gly-Phe-Lys)이 포함되나, 이에 한정되지 않는다. 다른 예시적인 아미노산 단위로는, 예를 들어 미국 특허 번호 6,214,345에 기재된, Gly-Phe-Gly-Gly(SEQ ID NO: 34), Gly-Phe-Leu-Gly(SEQ ID NO: 35), Ala-Leu-Ala-Leu(SEQ ID NO: 36), Phe-N9-토실-Arg, 및 Phe-N9-니트로-Arg가 포함되나, 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 링커의 아미노산 단위는 Val-Ala를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커의 아미노산 단위는 Val-Cit를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커의 아미노산 단위는 Glu-Val-Cit를 포함한다. 아미노산 단위는 자연적으로 발생하는 아미노산 잔기 및/또는 소량의 아미노산 및/또는, 시트룰린과 같은, 비-자연적으로 발생하는 아미노산 유사체를 포함할 수 있다. 아미노산 단위는 특정 효소, 예를 들어 종양-관련 프로테아제, 카텝신 B, C, D, 또는 S와 같은 리소좀 프로테아제, 또는 플라스민 프로테아제에 의한 효소 절단을 위해 설계되고 최적화될 수 있다.
일부 구현예에서, 링커는 절단 가능한 β-글루쿠로나이드 링커이다. 본원에 사용된, 절단 가능한 β-글루쿠로나이드 링커는 절단 가능한 β-글루쿠로나이드 모이어티를 포함하는 임의의 링커를 지칭한다. 예시적인 절단 가능한 β-글루쿠로나이드 링커는 다음의 구조를 포함한다:
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용어 "절단 가능한 β-글루쿠로나이드 모이어티"는 β-글루쿠로니다제 활성을 갖는 제제에 의해 절단될 수 있는 글리코시딕 결합을 지칭한다. 일부 구현예에서, 링커는 β-글루쿠로니다제에 의해 절단될 수 있는 글리코시딕 결합을 포함한다. β-글루쿠로니다제는 β-배치를 갖는 글루쿠로나이드의 글리코시딕 결합의 가수 분해를 촉매하는 UDP-글루쿠로노실 트랜스페라제이다.
일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC는 효소에 의해 절단 가능한 링커 내 절단 가능한 β-글루쿠로나이드 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커 내 절단 가능한 β-글루쿠로나이드 모이어티는 리소좀 효소, 예를 들어 β-글루쿠로니다제에 의해 절단 가능하다. 일부 구현예에서, 링커는 β-글루쿠로니다제-절단 가능한 링커이다. 일부 구현예에서, 링커 내 절단 가능한 β-글루쿠로나이드 모이어티는 ADC의 내입 후 β-글루쿠로니다제에 의한 링커의 절단을 가능하게 함으로써, 세포 환경에서 ADC로부터의 약물 모이어티의 방출을 용이하게 한다.
일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC 중 임의의 것의 링커는 항체 또는 항원 결합 단편을 약물 모이어티(예를 들어, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티)에 연결하는 적어도 하나의 스페이서 단위를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편과 절단 가능한 모이어티 사이의 스페이서 단위는, 존재하는 경우, 링커의 절단 부위(예를 들어, 절단 가능한 펩티드 모이어티)를 항체 또는 항원 결합 단편에 연결한다. 일부 구현예에서, 약물 모이어티와 절단 가능한 모이어티 사이의 스페이서 단위는, 존재하는 경우, 링커의 절단 부위(예를 들어, 절단 가능한 펩티드 모이어티)를 약물 모이어티에 연결한다. 일부 구현예에서, 절단 부위가 존재하지 않으며, 항체 또는 항원 결합 단편을 약물 모이어티에 연결하는 데 스페이서 단위가 사용된다.
일부 구현예에서, 링커, 및/또는 링커 내의 스페이서 단위는, 실질적으로 친수성이다. 친수성 링커가 사용되어 약물이 다중 약물 저항성(MDR) 또는 기능적으로 유사한 트랜스포터를 통해 저항성 암 세포 밖으로 펌핑될 수 있는 정도를 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 친수성 링커는 하나 이상의 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 모이어티, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 PEG 모이어티를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 2개의 PEG 모이어티를 포함한다.
일부 구현예에서, 링커의 스페이서 단위는 하나 이상의 PEG 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서 단위는 하나 이상의 -(PEG) m -을 포함하고, m은 1 내지 10의 정수이다(즉, m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10일 수 있다). 일부 구현예에서, m은 1 내지 10; 2 내지 8; 2 내지 6; 2내지 5; 2내지 4; 또는 2 내지 3의 범위이다. 일부 구현예에서, m은 2이다. 일부 구현예에서, 스페이서 단위는 (PEG)2, (PEG)3, (PEG)4, (PEG)5, (PEG)6, (PEG)7, (PEG)8, (PEG)9, 또는 (PEG)10을 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서 단위는 (PEG)2를 포함한다.
일부 구현예에서, 링커의 스페이서 단위는 알킬 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서 단위는 하나 이상의 -(CH2) n -을 포함하고, n은 1 내지 10의 정수이다(즉, n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10일 수 있다). 일부 구현예에서, n은 1 내지 10; 2 내지 8; 2 내지 6; 2 내지 5; 2 내지 4; 또는 2 내지 3의 범위이다. 일부 구현예에서, n은 2이다. 일부 구현예에서, n은 5이다. 일부 구현예에서, n은 6이다. 일부 구현예에서, 스페이서 단위는 (CH2)2, (CH2)3, (CH2)4, (CH2)5, (CH2)6, (CH2)7, (CH2)8, (CH2)9, 또는 (CH2)10을 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서 단위는 (CH2)2("Et")를 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서 단위는 (CH2)6("Hex")을 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서 단위는 (CH2)2-O-(CH2)2("Et-O-Et")를 포함한다.
스페이서 단위는, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편을 약물 모이어티에, 직접 또는 간접적으로, 연결하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 스페이서 단위는 항체 또는 항원 결합 단편을 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티에 직접적으로 연결한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편 및 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티는 하나 이상의 PEG 모이어티(예를 들어, (PEG)2), 또는 하나 이상의 알킬 모이어티(예를 들어, (CH2)2, (CH2)6, 또는 (CH2)2-O-(CH2)2)를 포함하는 스페이서 단위를 통해 부착된다. 일부 구현예에서, 스페이서 단위는 항체 또는 항원 결합 단편을 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티에 간접적으로 연결한다. 일부 구현예에서, 스페이서 단위는 절단 가능한 모이어티(예를 들어, 절단 가능한 펩티드 또는 절단 가능한 β-글루쿠로나이드) 및/또는 스페이서 단위를 항체 또는 항원 결합 단편에 연결하는 부착 모이어티, 예를 들어 말레이미드 모이어티를 통해 간접적으로 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티에 항체 또는 항원 결합 단편을 연결한다.
다양한 구현예에서, 스페이서 단위는 말레이미드(Mal) 모이어티를 통해 항체 또는 항원 결합 단편(즉, 항체 또는 항원 결합 단편)에 부착된다.
Mal을 통해 항체 또는 항원 결합 단편에 부착되는 스페이서 단위는 본원에서 "Mal-스페이서 단위"로 지칭된다. 본원에 사용된, 용어 "Mal" 또는 "말레이미드 모이어티"는 말레이미드 기를 함유하고 설프하이드릴 기, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편 상의 시스테인 잔기의 설프하이드릴 기와 반응성인 화합물을 의미한다. 설프하이드릴 기(티올)와 반응성인 다른 작용기로는 요오도아세트아미드, 브로모아세트아미드, 비닐 피리딘, 디설파이드, 피리딜 디설파이드, 이소시아네이트, 및 이소티오시아네이트가 포함되나 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 항체 또는 항원 결합 단편 상의 시스테인 잔기와 반응성이다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 시스테인 잔기를 통해 항체 또는 항원 결합 단편에 연결된다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 PEG 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 알킬 모이어티를 포함한다.
특정 구현예에서, 링커는 Mal-스페이서 단위 및 절단 가능한 펩티드 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 펩티드 모이어티는 아미노산 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 단위는 Val-Cit를 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 단위는 Val-Ala를 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 단위는 Glu-Val-Cit를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 Mal-스페이서 단위 및 Val-Cit를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 Mal-스페이서 단위 및 Val-Ala를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 Mal-스페이서 단위 및 Val-Cit를 포함하며, 여기서 Mal-스페이서 단위는 말레이미도카프로일(MC)을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 Mal-스페이서 단위 및 Val-Ala를 포함하며, 여기서 Mal-스페이서 단위는 말레이미도카프로일(MC)을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 Mal-스페이서 단위 및 절단 가능한 β-글루쿠로나이드 모이어티를 포함한다.
일부 구현예에서, 링커는 구조: Mal-스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 말레이미도카프로일(MC)을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 구조: MC를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 구조: Mal-(CH2)2("Mal-Et")를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 구조: Mal-(CH2)6("Mal-Hex")을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 구조: Mal-(CH2)2-O-(CH2)2("Mal-Et-O-Et")를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 구조: Mal-(PEG)2를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 구조: Mal-(PEG)2-CO를 포함한다.
다양한 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 항체 또는 항원 결합 단편을 절단 가능한 펩티드 모이어티에 부착한다. 일부 구현예에서, 링커는 Mal-스페이서 단위-펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 구조: Mal-스페이서 단위-Val-Cit를 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 말레이미도카프로일(MC)을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 구조: MC-Val-Cit를 포함한다.
일부 구현예에서, 링커는 구조: Mal-스페이서 단위-Val-Ala를 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 말레이미도카프로일(MC)을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 구조: MC-Val-Ala를 포함한다.
다양한 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 항체 또는 항원 결합 단편을 절단 가능한 β-글루쿠로나이드 모이어티에 부착시킨다. 일부 구현예에서, 링커는 Mal-스페이서 단위-β-글루쿠로나이드를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-β-글루쿠로나이드를 포함한다.
다양한 구현예에서, 링커의 절단 가능한 모이어티는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티에 직접적으로 연결된다. 다른 구현예에서, 스페이서 단위는 링커의 절단 가능한 모이어티를 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티에 부착시키는 데 사용된다. 다양한 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 스페이서 단위에 의해 링커의 절단 가능한 모이어티에 부착된다.
스페이서 단위는 "자기-희생적" 또는 "비-자기-희생적"일 수 있다. "비-자기-희생적" 스페이서 단위는 링커의 절단 시 스페이서 단위의 일부 또는 전부가 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티에 결합된 채로 남아있는 것이다. 비-자기-희생적 스페이서 단위의 예로는 글리신 스페이서 단위 및 글리신-글리신 스페이서 단위가 포함되나, 이에 한정되지 않는다. 비-자기-희생적 스페이서 단위는 시간이 지남에 따라 결국 분해될 수 있지만 세포 조건 하에서 연결된 천연 약물 모이어티를 완전히 용이하게 방출하지 않다. "자기-희생적" 스페이서 단위는 세포내 조건 하에서 천연 약물 모이어티의 방출을 가능하게 한다. "천연 약물" 또는 "천연 약물 모이어티"는 스페이서 단위의 절단/분해 후에 어떠한 스페이서 단위의 부분 또는 다른 화학적 변형이 남아 있지 않은 것이다.
자기-희생적 화학은 당업계에 알려져 있으며 개시된 ADC에 대해 용이하게 선택될 수 있다. 다양한 구현예에서, 링커의 절단 가능한 모이어티를 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티에 부착시키는 스페이서 단위는 자기-희생적이며, 세포내 조건 하에서 절단 가능한 모이어티의 절단과 동시에 또는 절단 직전/후에 자기-희생을 겪는다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 자기-희생적 스페이서 단위에 의해 링커의 절단 가능한 모이어티에 부착된다. 특정 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 자기-희생적 스페이서 단위에 의해 링커의 절단 가능한 모이어티에 부착되고, 절단 가능한 모이어티는 Val-Cit를 포함하고, 말레이미도카프로일(MC)은 절단 가능한 모이어티를 항체 또는 항원 결합 단편에 연결한다. 특정 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 자기-희생적 스페이서 단위에 의해 링커의 절단 가능한 모이어티에 부착되고, 절단 가능한 모이어티는 Val-Ala를 포함하고, 말레이미도카프로일(MC)은 절단 가능한 모이어티를 항체 또는 항원 결합 단편에 연결한다. 특정 구현예에서, 헤르복시디엔 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 자기-희생적 스페이서 단위에 의해 링커의 절단 가능한 모이어티에 부착되고, 절단 가능한 모이어티는 Glu-Val-Cit를 포함하고, 말레이미도카프로일(MC)은 절단 가능한 모이어티를 항체 또는 항원 결합 단편에 연결한다. 특정 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 Val-Cit 절단 가능한 모이어티 및 pABC 또는 pAB자기-희생적 스페이서 단위에 연결된 링커에서의 Mal-스페이서 단위(예를 들어, MC)를 통해 항체 또는 항원 결합 단편에 연결된다. 다른 특정 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 Val-Ala 절단 가능한 모이어티 및 pABC 또는 pAB자기-희생적 스페이서 단위에 연결된 링커에서의 Mal-스페이서 단위(예를 들어, MC)를 통해 항체 또는 항원 결합 단편에 연결된다. 다른 특정 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 Glu-Val-Cit 절단 가능한 모이어티 및 pABC 또는 pAB자기-희생적 스페이서 단위에 연결된 링커에서의 Mal-스페이서 단위(예를 들어, MC)를 통해 항체 또는 항원 결합 단편에 연결된다.
특정 구현예에서, 링커의 자기-희생적 스페이서 단위는 p-아미노벤질 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, p-아미노벤질 알코올(pABOH)은 아미드 결합을 통해 링커의 아미노산 단위 또는 다른 절단 가능한 모이어티에 부착되고, 카르바메이트, 메틸카르바메이트, 또는 카르보네이트는 pABOH와 약물 모이어티 사이에서 만들어진다(Hamann et al.(2005) Expert Opin Ther Patents 15: 1087-103). 일부 구현예에서, 자기-희생적 스페이서 단위는 p-아미노벤질옥시카르보닐(pABC)이거나 이를 포함한다. 이론에 얽매이지 않고, pABC의 자기-희생은 자발적인 1,6-제거 반응을 수반하는 것으로 생각된다(Jain et al.(2015) Pharm Res. 32: 3526-40).
다양한 구현예에서, 개시된 ADC에 사용된 p-아미노벤질옥시카르보닐(pABC)의 구조는 하기에 나타나 있다:
Figure pct00044
다양한 구현예에서, 자기-희생적 스페이서 단위는 링커의 절단 가능한 모이어티를 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 부착시킨다. 일부 구현예에서, 자기-희생적 스페이서 단위는 pABC이다. 일부 구현예에서, pABC는 링커의 절단 가능한 모이어티를 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 부착시킨다. 일부 구현예에서, pABC는 절단 가능한 모이어티의 절단 시 자기-희생을 겪고, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 천연의, 활성 형태로 ADC로부터 방출된다.
일부 구현예에서, 항-HER2 항체 또는 항원 결합 단편은 MC-Val-Cit-pABC를 포함하는 링커에 의해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 연결된다. 다른 구현예에서, 항-HER2 항체 또는 항원 결합 단편은 MC-Val-Ala-pABC를 포함하는 링커에 의해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 연결된다.
일부 구현예에서, 항-CD138 항체 또는 항원 결합 단편은 MC-Val-Cit-pABC를 포함하는 링커에 의해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 연결된다. 다른 구현예에서, 항-CD138 항체 또는 항원 결합 단편은 MC-Val-Ala-pABC를 포함하는 링커에 의해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 연결된다.
일부 구현예에서, 항-EPHA2 항체 또는 항원 결합 단편은 MC-Val-Cit-pABC를 포함하는 링커에 의해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 연결된다. 다른 구현예에서, 항-EPHA2 항체 또는 항원 결합 단편은 MC-Val-Ala-pABC를 포함하는 링커에 의해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 연결된다.
일부 구현예에서, pABC는 링커의 절단 가능한 펩티드 모이어티의 절단 시 자기-희생을 겪는다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 펩티드 모이어티는 아미노산 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 아미노산 단위-pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 단위는 Val-Cit이다. 일부 구현예에서, 링커는 Val-Cit-pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 단위는 Glu-Val-Cit이다. 일부 구현예에서, 링커는 Glu-Val-Cit-pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 단위는 Val-Ala이다. 일부 구현예에서, 링커는 Val-Ala-pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 단위는 Ala-Ala-Asn이다. 일부 구현예에서, 링커는 Ala-Ala-Asn-pABC를 포함한다.
일부 구현예에서, pABC는 링커의 절단 가능한 β-글루쿠로나이드 모이어티의 절단 시 자기-희생을 겪는다. 일부 구현예에서, 링커는 β-글루쿠로나이드-pABC를 포함한다.
특정 구현예에서, 링커의 자기-희생적 스페이서 단위는 p-아미노벤질 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커의 자기-희생적 스페이서 단위는 p-아미노벤질(pAB)을 포함한다. 일부 구현예에서, pAB의 자기-희생은 자발적인 1,6-제거 반응을 수반한다.
다양한 구현예에서, 개시된 ADC에 사용되는 p-아미노벤질(pAB)의 구조는 하기에 나타나 있다:
Figure pct00045
다양한 구현예에서, 자기-희생적 스페이서 단위는 링커의 절단 가능한 모이어티를 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 부착시킨다. 일부 구현예에서, 자기-희생적 스페이서 단위는 pAB이다. 일부 구현예에서, pAB는 링커의 절단 가능한 모이어티를 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 부착시킨다. 일부 구현예에서, pAB는 절단 가능한 모이어티의 절단 시 자기-희생을 겪고, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 천연의 활성 형태로 ADC로부터 방출된다.
일부 구현예에서, 항-HER2 항체 또는 항원 결합 단편은 MC-Val-Cit-pAB를 포함하는 링커에 의해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 연결된다. 다른 구현예에서, 항-HER2 항체 또는 항원 결합 단편은 MC-Val-Ala-pAB를 포함하는 링커에 의해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 연결된다.
일부 구현예에서, 항-CD138 항체 또는 항원 결합 단편은 MC-Val-Cit-pAB를 포함하는 링커에 의해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 연결된다. 다른 구현예에서, 항-CD138 항체 또는 항원 결합 단편은 MC-Val-Ala-pAB를 포함하는 링커에 의해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 연결된다.
일부 구현예에서, 항-EPHA2 항체 또는 항원 결합 단편은 MC-Val-Cit-pAB를 포함하는 링커에 의해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 연결된다. 다른 구현예에서, 항-EPHA2 항체 또는 항원 결합 단편은 MC-Val-Ala-pAB를 포함하는 링커에 의해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 연결된다.
일부 구현예에서, pAB는 링커의 절단 가능한 펩티드 모이어티의 절단 시 자기-희생을 겪는다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 펩티드 모이어티는 아미노산 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 아미노산 단위-pAB를 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 단위는 Val-Cit이다. 일부 구현예에서, 링커는 Val-Cit-pAB를 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 단위는 Val-Ala이다. 일부 구현예에서, 링커는 Val-Ala-pAB를 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 단위는 Glu-Val-Cit이다. 일부 구현예에서, 링커는 Glu-Val-Cit-pAB를 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 단위는 Ala-Ala-Asn이다. 일부 구현예에서, 링커는 Ala-Ala-Asn-pAB를 포함한다.
일부 구현예에서, pAB는 링커에서 절단 가능한 β-글루쿠로나이드 모이어티의 절단 시 자기-희생을 겪는다. 일부 구현예에서, 링커는 β-글루쿠로나이드-pAB를 포함한다.
일부 다른 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 비-자기-희생적 스페이서 단위에 의해 링커의 절단 가능한 모이어티에 부착된다. 특정 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 비-자기-희생적 스페이서 단위에 의해 링커의 절단 가능한 모이어티에 부착되고, 절단 가능한 모이어티는 Val-Cit를 포함하고, 말레이미도카프로일(MC)은 절단 가능한 모이어티를 항체 또는 항원 결합 단편에 연결한다. 특정 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 비-자기-희생적 스페이서 단위에 의해 링커의 절단 가능한 모이어티에 부착되고, 절단 가능한 모이어티는 Val-Ala를 포함하고, 말레이미도카프로일(MC)은 절단 가능한 모이어티를 항체 또는 항원 결합 단편에 연결한다.
다양한 양태에서, ADC의 항체 또는 항원 결합 단편은 링커를 통해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티에 접합되며, 여기서 링커는 Mal-스페이서 단위(예를 들어, MC), 절단 가능한 아미노산 단위, 및 pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서 단위는 알킬 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 말레이미도카프로일(MC)을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 Mal-스페이서 단위-아미노산 단위-pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-아미노산 단위-pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Val-Cit-pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Val-Ala-pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Glu-Val-Cit-pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Ala-Ala-Asn-pABC를 포함한다.
다양한 다른 양태에서, ADC의 항체 또는 항원 결합 단편은 링커를 통해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티에 접합되며, 여기서 링커는 Mal-스페이서 단위(예를 들어, MC), 절단 가능한 아미노산 단위, 및 pAB를 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서 단위는 알킬 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 말레이미도카프로일(MC)을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 Mal-스페이서 단위-아미노산 단위-pAB를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-아미노산 단위-pAB를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Val-Cit-pAB를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Val-Ala-pAB를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Glu-Val-Cit-pAB를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Ala-Ala-Asn-pAB를 포함한다.
다양한 다른 양태에서, ADC의 항체 또는 항원 결합 단편은 링커를 통해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티에 접합되며, 여기서 링커는 Mal-스페이서 단위(예를 들어, MC), 절단 가능한 β-글루쿠로나이드, 및 pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 Mal-스페이서 단위-β-글루쿠로나이드-pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-β-글루쿠로나이드-pABC를 포함한다.
또 다른 양태에서, ADC의 항체 또는 항원 결합 단편은 링커를 통해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티에 접합되며, 여기서 링커는 Mal-스페이서 단위(예를 들어, MC), 절단 가능한 β-글루쿠로나이드, 및 pAB를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 Mal-스페이서 단위-β-글루쿠로나이드-pAB를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-β-글루쿠로나이드-pAB를 포함한다.
다양한 구현예에서, ADC 화합물은 화학식 I을 갖는다:
[화학식 I]
Ab-(L-H) p
여기서 Ab는 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 항원 결합 단편이고;
H는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제이고;
L은 Ab를 D에 공유 결합으로 부착시키는 링커이고;
p는 1 내지 15의 정수이다.
일부 구현예에서, ADC의 항체 또는 항원 결합 단편(Ab)은 링커를 통해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티에 접합되며, 여기서 링커는 본원에 개시되거나 참조로 포함된 링커 중 임의의 것이거나, 본원에 개시되거나 참조로 포함된 링커 중 임의의 것의 하나 이상의 구성 요소를 포함한다.
일부 구현예에서, 링커는 링커 또는 항체 또는 항원 결합 단편의 어떤 부분도 절단 후 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 결합된 채로 남아 있지 않도록 위치되는 절단 가능한 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 모이어티는 절단 가능한 펩티드 모이어티, 예를 들어 Val-Cit 또는 Val-Ala와 같은 아미노산 단위이다. 일부 구현예에서, 아미노산 단위 또는 링커는 Val-Cit를 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 단위 또는 링커는 Val-Ala를 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 단위 또는 링커는 Glu-Val-Cit를 포함한다.
일부 구현예에서, 링커는 항체 또는 항원 결합 단편을 절단 가능한 모이어티에 연결하는 적어도 하나의 스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 항체 또는 항원 결합 단편을 약물 모이어티에 연결하는 적어도 하나의 스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서 단위 또는 링커는 적어도 하나의 알킬 모이어티를 포함한다.
일부 구현예에서, 링커의 스페이서 단위는 Mal 모이어티("Mal-스페이서 단위")를 통해 항체 또는 항원 결합 단편에 부착된다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 적어도 하나의 알킬 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 말레이미도카프로일(MC)을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 Mal-(CH2)2("Mal-Et")를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 Mal-(CH2)6("Mal-Hex")을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 Mal-(CH2)2-O-(CH2)2("Mal-Et-O-Et")를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 Mal-(PEG)2-CO를 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 항체 또는 항원 결합 단편을 약물 모이어티에 부착시킨다.
일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위 또는 링커는 Mal-(PEG)2, Mal-(PEG)3, Mal-(PEG)4, Mal-(PEG)5, Mal-(PEG)6, Mal-(PEG)7, 또는 Mal-(PEG)8을 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위 또는 링커는 Mal-(PEG)2를 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위 또는 링커는 Mal-(PEG)2-CO, Mal-(PEG)3-CO, Mal-(PEG)4-CO, Mal-(PEG)5-CO, Mal-(PEG)6-CO, Mal-(PEG)7-CO, 또는 Mal-(PEG)8-CO를 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위 또는 링커는 Mal-(PEG)2-CO를 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위 또는 링커는 Mal-(PEG)2-CO 및 적어도 하나의 추가 스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-(PEG)2-CO는 항체 또는 항원 결합 단편을 약물 모이어티에 부착시킨다. 일부 구현예에서, 링커는 Mal-(PEG)2-CO를 포함하거나 이로 구성된다. "Mal-(PEG)2-CO" 링커의 예는 또한 본원에서 "ADL2" 또는 "ADL2" 링커로 지칭된다.
일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위 또는 링커는 MC를 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위 또는 링커는 MC 및 적어도 하나의 추가 스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, MC는 항체 또는 항원 결합 단편을 약물 모이어티에 부착시킨다. 일부 구현예에서, 링커는 MC를 포함하거나 이로 구성된다. "MC" 링커의 예는 또한 본 명세서에서 "ADL10" 또는 "ADL10" 링커로 지칭된다.
일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위 또는 링커는 Mal-(CH2)6("Mal-Hex")을 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위 또는 링커는 Mal-Hex 및 적어도 하나의 추가 스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-Hex는 항체 또는 항원 결합 단편을 약물 모이어티에 부착시킨다. 일부 구현예에서, 링커는 Mal-Hex를 포함한다. "Mal-Hex" 링커의 예는 또한 본원에서 "ADL12" 또는 "ADL12" 링커로 지칭된다.
일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위 또는 링커는 Mal-(CH2)2("Mal-Et")를 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위 또는 링커는 Mal-Et 및 적어도 하나의 추가 스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-Et는 항체 또는 항원 결합 단편을 약물 모이어티에 부착시킨다. 일부 구현예에서, 링커는 Mal-Et를 포함한다. "Mal-Et" 링커의 예는 또한 본원에서 "ADL14" 또는 "ADL14" 링커로 지칭된다.
일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위 또는 링커는 Mal-(CH2)2-O-(CH2)2("Mal-Et-O-Et")를 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위 또는 링커는 Mal-Et-O-Et 및 적어도 하나의 추가 스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, Mal-Et-O-Et는 항체 또는 항원 결합 단편을 약물 모이어티에 부착시킨다. 일부 구현예에서, 링커는 Mal-Et-O-Et를 포함한다. "Mal-Et-O-Et" 링커의 예는 또한 본원에서 "ADL15" 또는 "ADL15" 링커로 지칭된다.
일부 다른 구현예에서, Mal-스페이서 단위는 항체 또는 항원 결합 단편을 링커의 절단 가능한 모이어티에 부착시킨다. 일부 구현예에서, 링커의 절단 가능한 모이어티는 절단 가능한 펩티드 모이어티, 예를 들어 아미노산 단위이다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 펩티드 모이어티는 Val-Cit 또는 Val-Ala이다. 일부 구현예에서, Mal-스페이서 단위 또는 링커는 MC를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Val-Cit를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Val-Ala를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Glu-Val-Cit를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Ala-Ala-Asn을 포함한다.
일부 구현예에서, 스페이서 단위는 링커의 절단 가능한 모이어티를 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 부착시킨다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 모이어티를 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 부착시키는 스페이서 단위는 자기-희생적이다.
일부 구현예에서, 스페이서 단위는 pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, pABC는 절단 가능한 모이어티를 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 부착시킨다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 모이어티는 절단 가능한 펩티드 모이어티, 예를 들어 아미노산 단위이다. 일부 구현예에서, 링커는 아미노산 단위-pABC를 포함한다.
일부 구현예에서, 링커는 Val-Cit-pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 Val-Cit-pABC 및 항체 또는 항원 결합 단편에 링커를 연결하는 MC Mal-스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Val-Cit-pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Val-Cit-pABC 및 적어도 하나의 추가 스페이서 단위를 포함한다. MC-Val-Cit-pABC 링커의 예는 또한 본원에서 "ADL1" 또는 "ADL1" 링커로 지칭된다.
일부 구현예에서, 링커는 Val-Ala-pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 Val-Ala-pABC 및 항체 또는 항원 결합 단편에 링커를 연결하는 MC Mal-스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Val-Ala-pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Val-Ala-pABC 및 적어도 하나의 추가 스페이서 단위를 포함한다. MC-Val-Ala-pABC 링커의 예는 또한 본원에서 "ADL6" 또는 "ADL6" 링커로 지칭된다.
일부 구현예에서, 링커는 Glu-Val-Cit-pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 Glu-Val-Cit-pABC 및 항체 또는 항원 결합 단편에 링커를 연결하는 MC Mal-스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Glu-Val-Cit-pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Glu-Val-Cit-pABC 및 적어도 하나의 추가 스페이서 단위를 포함한다. MC-Glu-Val-Cit-pABC 링커의 예는 또한 본원에서 "ADL23" 또는 "ADL23" 링커로 지칭된다.
일부 구현예에서, 링커는 Ala-Ala-Asn-pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 Ala-Ala-Asn-pABC 및 항체 또는 항원 결합 단편에 링커를 연결하는 MC Mal-스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Ala-Ala-Asn-pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Ala-Ala-Asn-pABC 및 적어도 하나의 추가 스페이서 단위를 포함한다. MC-Ala-Ala-Asn-pABC 링커의 예는 또한 본원에서 "ADL21" 또는 "ADL21" 링커로 지칭된다.
일부 다른 구현예에서, 스페이서 단위는 pAB를 포함한다. 일부 구현예에서, pAB는 절단 가능한 모이어티를 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 부착시킨다. 일부 구현예에서, 절단 가능한 모이어티는 절단 가능한 펩티드 모이어티, 예를 들어 아미노산 단위이다. 일부 구현예에서, 링커는 아미노산 단위-pAB를 포함한다.
일부 구현예에서, 링커는 Val-Ala-pAB를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 Val-Ala-pAB 및 항체 또는 항원 결합 단편에 링커를 연결하는 MC Mal-스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Val-Ala-pAB를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Val-Ala-pAB 및 적어도 하나의 추가 스페이서 단위를 포함한다. MC-Val-Ala-pAB 링커의 예는 또한 본원에서 "ADL5" 또는 "ADL5" 링커로 지칭된다.
일부 구현예에서, 링커는 Val-Cit-pAB를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 Val-Cit-pAB 및 항체 또는 항원 결합 단편에 링커를 연결하는 MC Mal-스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Val-Cit-pAB를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-Val-Cit-pAB 및 적어도 하나의 추가 스페이서 단위를 포함한다. MC-Val-Cit-pAB 링커의 예는 또한 본원에서 "ADL7" 또는 "ADL7" 링커로 지칭된다.
일부 구현예에서, 링커는 β-글루쿠로나이드-pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 β-글루쿠로나이드-pABC 및 항체 또는 항원 결합 단편에 링커를 연결하는 MC Mal-스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-β-글루쿠로나이드-pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-β-글루쿠로나이드-pABC 및 적어도 하나의 추가 스페이서 단위를 포함한다. MC-β-글루쿠로나이드-pABC의 예는 또한 본원에서 "ADL13" 또는 "ADL13" 링커로 지칭된다.
일부 구현예에서, 링커는 β-글루쿠로나이드-pAB를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 β-글루쿠로나이드-pAB 및 항체 또는 항원 결합 단편에 링커를 연결하는 MC Mal-스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 MC-β-글루쿠로나이드-pAB를 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21, 또는 ADL23 링커를 통해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티에 접합된다. 다양한 구현예에서, 본원에 개시된 ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21, 또는 ADL23 링커 및 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티를 포함하는 ADC는 치료적 ADC에 대한 바람직한 특성을 나타냄이 밝혀졌다. 다양한 구현예에서, 이들 특성으로는, 모두 다른 링커-페이로드를 사용하는 ADC와 비교하여, 유효한 약물 로딩 수준, 낮은 응집 수준, 보관 조건 하에서의 또는 체내 순환 중인 경우(예를 들어, 혈청 안정성) 안정성, 접합되지 않은 항체와 유사한 표적-발현 세포에 대한 친화성 보유, 표적-발현 세포에 대한 강력한 세포 독성, 낮은 수준의 오프-타겟 세포 살해, 높은 수준의 방관자 살해, 및/또는 효과적인 생체내 항암 활성이 포함되나, 이에 한정되지 않는다. 예를 들어, 다양한 구현예에서, 본원에 개시된 ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21, 또는 ADL23 링커 및 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티를 포함하는 ADC는, 다른 링커-페이로드(예를 들어, ADL10 링커 및 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티)를 사용하는 ADC와 비교하여, 표적-발현 세포에서의 성장 및/또는 증식을 저해하는 능력 증가를 나타낸다. 다양한 구현예에서, 본원에 개시된 ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21, 또는 ADL23 링커 및 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티를 포함하는 ADC는, 다른 스플라이싱 조절제-기반 ADC(예를 들어, 문헌[Puthenveetil et al. Bioconjugate Chem.(2016) 27: 1880-8]에 보고된 타일란스타틴 A-기반 ADC)와 비교하여, 놀랍게도 증가된 생체내 안정성(예를 들어, 혈장 안정성)을 나타낸다.
일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21, 또는 ADL23 링커 및 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티의 특정 조합에 의해 제공되는 양호하거나 우수한 기능적 특성은, 예를 들어, 트라스투주맙과 같은 항-HER2 항체; B-B4와 같은 항-CD138 항체; 또는 1C1과 같은 항-EPHA2 항체에 접합되는 링커-페이로드를 사용하여 관찰될 수 있다.
일부 구현예에서, ADC는 ADL1-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 신생물 세포를 표적화하고 이에서 내입되는 능력을 보유하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL2-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 신생물 세포를 표적화하고 이에서 내입되는 능력을 보유하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL5-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 신생물 세포를 표적화하고 이에서 내입되는 능력을 보유하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL6-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 신생물 세포를 표적화하고 이에서 내입되는 능력을 보유하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL7-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 신생물 세포를 표적화하고 이에서 내입되는 능력을 보유하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL12-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 신생물 세포를 표적화하고 이에서 내입되는 능력을 보유하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL13-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 신생물 세포를 표적화하고 이에서 내입되는 능력을 보유하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL14-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 신생물 세포를 표적화하고 이에서 내입되는 능력을 보유하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL15-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 신생물 세포를 표적화하고 이에서 내입되는 능력을 보유하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다.
일부 구현예에서, ADC는 ADL1-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 HER2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL2-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 HER2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL5-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 HER2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL6-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 HER2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL7-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 HER2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL12-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 HER2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL13-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 HER2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL14-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 HER2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL15-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 HER2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
일부 구현예에서, HER2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 내입되는 항체 또는 내입되는 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, HER2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 1(HCDR1), SEQ ID NO: 2(HCDR2), 및 SEQ ID NO: 3(HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR); 및 SEQ ID NO: 4(LCDR1), SEQ ID NO: 5(LCDR2), 및 SEQ ID NO: 6(LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)을 포함한다.
일부 구현예에서, ADC는 화학식 I을 갖는다:
[화학식 I]
Ab-(L-H) p
여기서:
(i) Ab는 SEQ ID NO: 1(HCDR1), SEQ ID NO: 2(HCDR2), 및 SEQ ID NO: 3(HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR); 및 SEQ ID NO: 4(LCDR1), SEQ ID NO: 5(LCDR2), 및 SEQ ID NO: 6(LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)을 포함하는 항-HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
(ii) H는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제이고;
(iii) L은 ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21, 또는 ADL23을 포함하는 링커이고;
(iv) p는 1 내지 15의 정수이다.
일부 구현예에서, HER2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, HER2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 IgG1 중쇄 불변 도메인 및 인간 Ig 카파 경쇄 불변 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 트라스투주맙이다. 일부 구현예에서, p는 1 내지 10, 2 내지 8, 또는 4 내지 8의 정수이다. 일부 구현예에서, p는 4이다. 일부 구현예에서, p는 8이다.
일부 구현예에서, ADC는 ADL1-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 CD138-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL2-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 CD138-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL5-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 CD138-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL6-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 CD138-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL7-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 CD138-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL12-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 CD138-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL13-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 CD138-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL14-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 CD138-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL15-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 CD138-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
일부 구현예에서, CD138-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 내입되는 항체 또는 내입되는 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, CD138-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 7(HCDR1), SEQ ID NO: 8(HCDR2), 및 SEQ ID NO: 9(HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR); 및 SEQ ID NO: 10(LCDR1), SEQ ID NO: 11(LCDR2), 및 SEQ ID NO: 12(LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)을 포함한다.
일부 구현예에서, ADC는 화학식 I을 갖는다:
[화학식 I]
Ab-(L-H) p
여기서:
(i) Ab는 SEQ ID NO: 7(HCDR1), SEQ ID NO: 8(HCDR2), 및 SEQ ID NO: 9(HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR); 및 SEQ ID NO: 10(LCDR1), SEQ ID NO: 11(LCDR2), 및 SEQ ID NO: 12(LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)을 포함하는 항-CD138 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
(ii) H는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제이고;
(iii) L은 ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21, 또는 ADL23을 포함하는 링커이고;
(iv) p는 1 내지 15의 정수이다.
일부 구현예에서, CD138-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, CD138-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 뮤린 IgG2a 중쇄 불변 도메인 및 뮤린 Ig 카파 경쇄 불변 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CD138-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 IgG2a 중쇄 불변 도메인 및 인간 Ig 카파 경쇄 불변 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 B-B4이다. 일부 구현예에서, p는 1 내지 10, 2 내지 8, 또는 4 내지 8의 정수이다. 일부 구현예에서, p는 4이다. 일부 구현예에서, p는 8이다.
일부 구현예에서, ADC는 ADL1-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 EPHA2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL2-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 EPHA2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL5-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 EPHA2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL6-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 EPHA2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL7-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 EPHA2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL12-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 EPHA2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL13-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 EPHA2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL14-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 EPHA2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 ADL15-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 EPHA2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
일부 구현예에서, EPHA2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 내입되는 항체 또는 내입되는 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, EPHA2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 13(HCDR1), SEQ ID NO: 14(HCDR2), 및 SEQ ID NO: 15(HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR); 및 SEQ ID NO: 16(LCDR1), SEQ ID NO: 17(LCDR2), 및 SEQ ID NO: 18(LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)을 포함한다.
일부 구현예에서, ADC는 화학식 I을 갖는다:
[화학식 I]
Ab-(L-H) p
여기서:
(i) Ab는 SEQ ID NO: 13(HCDR1), SEQ ID NO: 14(HCDR2), 및 SEQ ID NO: 15(HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR); 및 SEQ ID NO: 16(LCDR1), SEQ ID NO: 17(LCDR2), 및 SEQ ID NO: 18(LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)을 포함하는 항-EPHA2 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
(ii) H는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제이고;
(iii) L은 ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21, 또는 ADL23을 포함하는 링커이고;
(iv) p는 1 내지 15의 정수이다.
일부 구현예에서, EPHA2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, EPHA2-발현 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 IgG1 중쇄 불변 도메인 및 인간 Ig 카파 경쇄 불변 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 1C1이다. 일부 구현예에서, p는 1 내지 10, 2 내지 8, 또는 4 내지 8의 정수이다. 일부 구현예에서, p는 4이다. 일부 구현예에서, p는 8이다.
헤르복시디엔 스플라이싱 조절제
일부 구현예에서, 항체-약물 접합체는 화학식 I: Ab-(L-H) p 의 항체-약물 접합체이며, 여기서 Ab는 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 항원 결합 단편이고; H는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제이고; L은 Ab를 H에 공유 결합으로 부착시키는 링커이고; p는 1 내지 15의 정수이다.
일부 구현예에서, H, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 화학식 I의 화합물:
[화학식 I]
Figure pct00046
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하며, 이는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고, 여기서:
Y는 O, S, NR6, 및 CR6R7로부터 선택되고;
R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 하이드록실, -O-(C1-C6 알킬) 기, -O-C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되고;
R4는 수소, C1-C6 알킬 기, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, 및 -C(=O)-NR6R7로부터 선택되고;
R5는 수소, 하이드록실, -CH2-OH, -CO2H, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-NR6R7, -NR6-C(=O)-R8, -O-C(=O)-NR6R7, -NR6-C(=O)-R8, 및 -NR6-C(=O)-NR6R7로부터 선택되고;
R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, -R8, -C(=O)-R8, 및 -C(=O)-O-R8로부터 선택되고;
R8은 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고,
여기서 R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, 및 R8은 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, -NR6R7, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환되며, 이들 각각은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, C1-C3 할로알킬 기, -NH-C(=O)(C1-C3 알킬), 및 -NH-C(=O)-O-(C1-C3 알킬) 로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 독립적으로 치환될 수 있으며,
여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않는다.
일부 구현예에서, H, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 화학식 Ia 화합물:
[화학식 Ia]
Figure pct00047
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하며, 이는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고, 여기서:
R9는 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고;
R10은 H 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되고,
여기서 R9 및 R10은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, -NH2, -NH-(C1-C3 알킬), 및 -N-(C1-C3 알킬)2로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환되며,
여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않는다.
일부 구현예에서, H, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 화학식 Ib의 화합물:
[화학식 Ib]
Figure pct00048
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하며, 이는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고, 여기서:
R11은
Figure pct00049
로부터 선택되며, 여기서 *는 화합물의 나머지 부분에 대한 R11의 연결 지점을 나타내고;
R12 및 R13은 각각 독립적으로 H 및 메틸로부터 선택되며;
여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않는다.
일부 구현예에서, H, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 화학식 II의 화합물:
[화학식 II]
Figure pct00050
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하며, 이는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하며, 여기서:
X는 하이드록실 또는 NR6R7이고;
R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, -R8, -C(=O)-R8, -C(=O)-O-R8, -(C1-C6 알킬)-O-C(=O)-R8, 및 -(C1-C6 알킬)-NH-C(=O)-R8로부터 선택되고;
R8은 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고,
여기서 R6, R7, 및 R8은 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, -NR6R7, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환되며, 이들 각각은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, C1-C3 할로알킬 기, -NH-C(=O)(C1-C3 알킬), 및 -NH-C(=O)-O-(C1-C3 알킬)로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 독립적으로 치환될 수 있으며,
여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않는다.
일부 구현예에서, H, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 화학식 IIa의 화합물:
[화학식 IIa]
Figure pct00051
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하며, 이는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고, 여기서:
Z는 NR9 및 O로부터 선택되고;
R9는 수소 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되고;
R10 및 R11은 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고;
R12는 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고,
여기서 R9, R10, R11, 및 R12는 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, 및 C1-C3 할로알킬 기로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 각각 독립적으로 치환되고;
t는 1, 2, 3, 4, 5, 및 6으로부터 선택되는 정수이며;
여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않는다.
일부 구현예에서, H, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 화학식 IIb의 화합물:
[화학식 IIb]
Figure pct00052
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하며, 이는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고, 여기서:
R13은
Figure pct00053
로부터 선택되고, 여기서 *는 화합물의 나머지 부분에 대한 R13의 연결 지점을 나타내고;
R14 및 R15는 각각 독립적으로 수소 및 메틸로부터 선택되며;
여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않는다.
일부 구현예에서, H, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 화학식 III의 화합물:
[화학식 III]
Figure pct00054
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하며, 이는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고, 여기서:
R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 하이드록실, -O-(C1-C6 알킬) 기, -O-C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되고;
R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, -R8, -C(=O)-R8, 및 -C(=O)-O-R8로부터 선택되고;
R8은 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고;
R9는 H,
Figure pct00055
로부터 선택되고;
여기서 R1, R2, R3, R6, R7, 및 R8은 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, -NR6R7, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환되며, 이들 각각은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, C1-C3 할로알킬 기, -NH-C(=O)(C1-C3 알킬), 및 -NH-C(=O)-O-(C1-C3 알킬) 로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 독립적으로 치환될 수 있으며,
여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않고;
여기서 *는 화합물의 나머지 부분에 대한 R9의 연결 지점을 나타낸다.
일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HER2, CD138, EPHA2, MSLN, FOLH1, CDH6, CEACAM5, CFC1B, ENPP3, FOLR1, HAVCR1, KIT, MET, MUC16, SLC39A6, SLC44A4, 및/또는 STEAP1을 발현하는 세포를 표적화한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HER2-발현 세포를 표적화한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-HER2 항체 또는 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 1(HCDR1), SEQ ID NO: 2(HCDR2), 및 SEQ ID NO: 3(HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 SEQ ID NO: 4(LCDR1), SEQ ID NO: 5(LCDR2), 및 SEQ ID NO: 6(LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 Ig 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 다른 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 CD138-발현 세포를 표적화한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-CD138 항체 또는 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 7(HCDR1), SEQ ID NO: 8(HCDR2), 및 SEQ ID NO: 9(HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 SEQ ID NO: 10(LCDR1), SEQ ID NO: 11(LCDR2), 및 SEQ ID NO: 12(LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 뮤린 IgG2a 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 뮤린 Ig 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 IgG2a 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 Ig 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 다른 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 EPHA2-발현 세포를 표적화한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-EPHA2 항체 또는 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 13(HCDR1), SEQ ID NO: 14(HCDR2), 및 SEQ ID NO: 15(HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 SEQ ID NO: 16(LCDR1), SEQ ID NO: 17(LCDR2), 및 SEQ ID NO: 18(LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 Ig 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 다른 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 MSLN-발현 세포를 표적화한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-MSLN 항체 또는 항원 결합 단편이다.
일부 다른 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 FOLH1-발현 세포를 표적화한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-FOLH1 항체 또는 항원 결합 단편이다.
일부 다른 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 CDH6-발현 세포를 표적화한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-CDH6 항체 또는 항원 결합 단편이다.
일부 다른 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 CEACAM5-발현 세포를 표적화한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-CEACAM5 항체 또는 항원 결합 단편이다.
일부 다른 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 CFC1B-발현 세포를 표적화한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-CFC1B 항체 또는 항원 결합 단편이다.
일부 다른 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 ENPP3-발현 세포를 표적화한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-ENPP3 항체 또는 항원 결합 단편이다.
일부 다른 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 FOLR1-발현 세포를 표적화한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-FOLR1 항체 또는 항원 결합 단편이다.
일부 다른 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HAVCR1-발현 세포를 표적화한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-HAVCR1 항체 또는 항원 결합 단편이다.
일부 다른 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 KIT-발현 세포를 표적화한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-KIT 항체 또는 항원 결합 단편이다.
일부 다른 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 MET-발현 세포를 표적화한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-MET 항체 또는 항원 결합 단편이다.
일부 다른 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 MUC16-발현 세포를 표적화한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-MUC16 항체 또는 항원 결합 단편이다.
일부 다른 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 SLC39A6-발현 세포를 표적화한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-SLC39A6 항체 또는 항원 결합 단편이다.
일부 다른 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 SLC44A4-발현 세포를 표적화한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-SLC44A4 항체 또는 항원 결합 단편이다.
일부 다른 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 STEAP1-발현 세포를 표적화한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-STEAP1 항체 또는 항원 결합 단편이다.
일부 구현예에서, L은 본원에 개시된 링커 중 임의의 것, 또는 본원에 개시된 링커 성분의 임의의 조합으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, L은 MC-Val-Cit-pABC, Mal-(PEG)2-CO, MC-Val-Ala-pAB, MC-Val-Ala-pABC, MC-Val-Cit-pAB, Mal-Hex, Mal-Et, 또는 Mal-Et-O-Et를 포함하는 링커이다. 일부 구현예에서, 링커는 또한 하나 이상의 추가 스페이서 단위를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, L은 ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21, 또는 ADL23 링커이다. 일부 구현예에서, L은 ADL12, ADL14, 또는 ADL15 링커이다. 일부 구현예에서, ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21, 또는 ADL23 링커는 또한 하나 이상의 추가 스페이서 단위를 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 링커 모이어티의 전구체인, 중간체는 적절한 조건 하에서 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 모이어티와 반응된다. 특정 구현예에서, 반응성 기는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및/또는 중간체 또는 링커 상에 사용된다. 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제와 중간체 사이의 반응 산물, 또는 유도체화된 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제(헤르복시디엔 스플라이싱 조절제+링커)는 뒤이어 적절한 조건 하에서 항체 또는 항원 결합 단편과 반응된다. 대안적으로, 중간체 또는 링커는 먼저 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 유도체화된 항체 또는 항원 결합 단편과 반응된 다음, 약물 또는 유도체화된 약물과 반응될 수 있다.
헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 모이어티 및/또는 링커 모이어티를 항체 또는 항원 결합 단편에 공유 결합으로 부착하기 위해 다수의 상이한 반응이 이용 가능하다. 이것은 종종, 리신의 아민 기, 글루탐산 및 아스파르트 산의 유리 카르복실산 기, 시스테인의 설프하이드릴 기, 및 방향족 아미노산의 다양한 모이어티를 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편의 하나 이상의 아미노산 잔기의 반응에 의해 달성된다. 예를 들어, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 모이어티 상의 카르복시(또는 아미노) 기를 항체 또는 항원 결합 단편 상의 아미노(또는 카르복시) 기에 연결하기 위해 카르보디이미드 반응을 사용하여 비-특이적 공유 결합 부착이 착수될 수 있다. 추가로, 디알데히드 또는 이미도에스테르와 같은 2작용성 제제가 또한 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 모이어티 상의 아미노 기를 항체 또는 항원 결합 단편 상의 아미노 기에 연결하는 데 사용될 수 있다. 결합 제제에 약물(예를 들어, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제)을 부착하기 위해 쉬프(Schiff) 염기 반응 또한 이용 가능하다. 이 방법은 글리콜 또는 하이드록시 기를 함유하는 약물의 페리오데이트 산화를 수반하여, 결합 제제와 이후 반응되는 알데히드를 형성한다. 결합 제제의 아미노 기와 쉬프 염기 형성을 통해 부착이 발생한다. 이소티오시아네이트는 또한 약물을 결합 제제에 공유 결합으로 부착하기 위한 커플링 제제로도 사용될 수 있다. 다른 기술이 당업자에게 알려져 있고 본 개시의 범위 내에 있다. 당업계에 알려진 다양한 화학을 사용하여 항체 또는 항원 결합 단편에 생성 및 연결될 수 있는 약물 모이어티의 예로는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 예를 들어 본원에 기재되고 예시된 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제가 포함된다.
링커-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제/헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 화합물
예시적인 링커-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제(L-H) 화합물뿐만 아니라 이러한 화합물의 다수 카피를 포함하는 조성물이 본원에 추가로 개시된다. 다양한 구현예에서, 본원에 개시된 링커-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 화합물은 일반식: L-H에 의해 정의될 수 있으며, 여기서 L=링커 모이어티이고, H=헤르복시디엔 스플라이싱 조절제이다. 특정 구현예에서, 개시된 L-H 화합물은 본원에 기재된 ADC에서 사용하기에 적합하다.
일부 구현예에서, 화학식 I의 화합물:
[화학식 I]
Figure pct00056
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 개시되며, 여기서:
Y는 O, S, NR6, 및 CR6R7로부터 선택되고;
R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 하이드록실, -O-(C1-C6 알킬) 기, -O-C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되고;
R4는 수소, C1-C6 알킬 기, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, 및 -C(=O)-NR6R7로부터 선택되고;
R5는 수소, 하이드록실, -CH2-OH, -CO2H, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-NR6R7, -NR6-C(=O)-R8, -O-C(=O)-NR6R7, -NR6-C(=O)-R8, 및 -NR6-C(=O)-NR6R7로부터 선택되고;
R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, -R8, -C(=O)-R8, 및 -C(=O)-O-R8로부터 선택되고;
R8은 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고,
여기서 R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, 및 R8은 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, -NR6R7, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환되며, 이들 각각은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, C1-C3 할로알킬 기, -NH-C(=O)(C1-C3 알킬), 및 -NH-C(=O)-O-(C1-C3 알킬) 로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 독립적으로 치환될 수 있다.
일부 구현예에서, 화학식 Ia 화합물:
[화학식 Ia]
Figure pct00057
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공되며, 이는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고, 여기서:
R9는 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고;
R10은 H 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되고,
여기서 R9 및 R10은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, -NH2, -NH-(C1-C3 알킬), 및 -N-(C1-C3 알킬)2로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환된다.
일부 구현예에서, 화학식 Ib의 화합물:
[화학식 Ib]
Figure pct00058
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공되며, 여기서:
R11은
Figure pct00059
로부터 선택되고, 여기서 *는 화합물의 나머지 부분에 대한 R11의 연결 지점을 나타내고;
R12 및 R13은 각각 독립적으로 H 및 메틸로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 화학식 II의 화합물:
[화학식 II]
Figure pct00060
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공되며, 여기서:
X는 하이드록실 또는 NR6R7이고;
R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, -R8, -C(=O)-R8, -C(=O)-O-R8, -(C1-C6 알킬)-O-C(=O)-R8, 및 -(C1-C6 알킬)-NH-C(=O)-R8로부터 선택되고;
R8은 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고,
여기서 R6, R7, 및 R8은 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, -NR6R7, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환되며, 이들 각각은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, C1-C3 할로알킬 기, -NH-C(=O)(C1-C3 알킬), 및 -NH-C(=O)-O-(C1-C3 알킬)로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 독립적으로 치환될 수 있다.
일부 구현예에서, 화학식 IIa의 화합물:
[화학식 IIa]
Figure pct00061
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공되며, 여기서:
Z는 NR9 및 O로부터 선택되고;
R9는 수소 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되고;
R10 및 R11은 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고;
R12는 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고,
여기서 R9, R10, R11, 및 R12는 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, 및 C1-C3 할로알킬 기로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 각각 독립적으로 치환되고;
t는 1, 2, 3, 4, 5, 및 6으로부터 선택되는 정수이다.
일부 구현예에서, 화학식 IIb의 화합물:
[화학식 IIb]
Figure pct00062
,
또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공되며, 여기서:
R13은
Figure pct00063
로부터 선택되고, 여기서 *는 화합물의 나머지 부분에 대한 R13의 연결 지점을 나타내고;
R14 및 R15는 각각 독립적으로 수소 및 메틸로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 화학식 III의 화합물:
[화학식 III]
Figure pct00064
또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공되며, 여기서:
R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 하이드록실, -O-(C1-C6 알킬) 기, -O-C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되고;
R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, -R8, -C(=O)-R8, 및 -C(=O)-O-R8로부터 선택되고;
R8은 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고;
R9는 H,
Figure pct00065
로부터 선택되고,
여기서 R1, R2, R3, R6, R7, 및 R8은 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, -NR6R7, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환되며, 이들 각각은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, C1-C3 할로알킬 기, -NH-C(=O)(C1-C3 알킬), 및 -NH-C(=O)-O-(C1-C3 알킬)로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 독립적으로 치환될 수 있으며;
여기서 *는 화합물의 나머지 부분에 대한 R9의 연결 지점을 나타낸다.
일부 구현예에서, 화합물 H1, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 H4, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 H5, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 H6, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 H7, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 H8, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 H9, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 H10, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 H2, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 H3, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 H12, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 H13, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 H14, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 제공된 화합물 H15, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 H16, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 H17, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 H18, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 H19, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 H20, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 H21, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 H22, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 H23, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 H24, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 화합물 H25, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 다음으로부터 선택되는 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염이 본원에 제공되며:
Figure pct00066
Figure pct00067
Figure pct00068
Figure pct00069
Figure pct00070
여기서 L은 항체에 공유 결합으로 부착하는 링커이다.
일부 구현예에서, 링커는 적어도 하나의 절단 가능한 펩티드 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 절단 가능한 펩티드 모이어티는 효소에 의해 절단 가능하다. 일부 구현예에서, 링커 또는 절단 가능한 펩티드 모이어티는 적어도 하나의 아미노산 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 아미노산 단위는 아르기닌, 히스티딘, 리신, 아스파르트산, 글루탐산, 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루타민, 시스테인, 셀레노시스테인, 글리신, 프롤린, 알라닌, 발린, 이소류신, 메티오닌, 페닐알라닌, 티로신, 트립토판, 및 시트룰린으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 아미노산 단위는 알라닌, 시트룰린, 및 발린으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 링커는 시트룰린 및 발린을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 알라닌 및 발린을 포함한다.
일부 구현예에서, 링커는 설폰아미드, β-글루쿠로나이드, 디설파이드, 및 카르보닐로부터 선택되는 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 설폰아미드를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 β-글루쿠로나이드를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 디설파이드를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 카르보닐을 포함한다.
일부 구현예에서, 링커는 스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서 단위는 알킬 기 및 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 모이어티로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 알킬 기는 C1-C12 알킬 기이다. 일부 구현예에서, 알킬 기는 C1-C6 알킬 기이다. 일부 구현예에서, 알킬 기는 메틸렌이다. 일부 구현예에서, 알킬 기는 에틸렌이다. 일부 구현예에서, 알킬 기는 n-프로필렌이다. 일부 구현예에서, 알킬 기는 n-부틸렌이다. 일부 구현예에서, 알킬 기는 n-펜틸렌이다. 일부 구현예에서, 알킬 기는 n-헥실렌이다. 일부 구현예에서, PEG 모이어티는 -(PEG)m-을 포함하며, 여기서 m은 1 내지 10의 정수이다. 일부 구현예에서, m은 1이다. 일부 구현예에서, m은 2이다. 일부 구현예에서, m은 3이다. 일부 구현예에서, m은 4이다. 일부 구현예에서, m은 5이다. 일부 구현예에서, m은 6이다.
일부 구현예에서, 링커는 말레이미드(Mal) 모이어티("Mal-스페이서 단위")를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 자기-희생적 스페이서 단위를 포함한다. 일부 구현예에서, 자기-희생적 스페이서 단위는 p-아미노벤질옥시카르보닐(pABC) 및 p-아미노벤질(pAB)로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 링커는 Mal-스페이서 단위, 알킬 기, 적어도 하나의 아미노산 단위, 및 자기-희생 스페이서를 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 아미노산 단위는 알라닌, 시트룰린, 및 발린으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 아미노산 단위는 알라닌 및 발린을 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 아미노산 단위는 시트룰린 및 발린을 포함한다. 일부 구현예에서, 자기-희생적 스페이서는 pAB 및 pABC로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 자기-희생적 스페이서는 pAB를 포함한다. 일부 구현예에서, 자기-희생적 스페이서는 pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, 알킬 기는 C1-C6 알킬 기를 포함한다.
일부 구현예에서, 링커는 Mal-스페이서 단위, PEG 모이어티, 적어도 하나의 아미노산 단위, 및 자기-희생적 스페이서를 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 아미노산 단위는 알라닌, 시트룰린, 및 발린으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 아미노산 단위는 알라닌 및 발린을 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 아미노산 단위는 시트룰린 및 발린을 포함한다. 일부 구현예에서, 자기-희생적 스페이서는 pAB 및 pABC로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 자기-희생적 스페이서는 pAB를 포함한다. 일부 구현예에서, 자기-희생적 스페이서는 pABC를 포함한다. 일부 구현예에서, PEG 모이어티는 -(PEG)m-을 포함하며, 여기서 m은 1 내지 6의 정수이다.
약물 로딩
약물 로딩은 p로 나타내며, 본원에서 또한 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제-대-항체 비율(HAR)로 지칭된다. 약물 로딩은 항체 또는 항원 결합 단편 당 1 내지 10개의 약물 모이어티 범위일 수 있다. 일부 구현예에서, p는 1 내지 10의 정수이다. 일부 구현예에서, p는 1 내지 10, 1 내지 9, 1 내지 8, 1 내지 7, 1 내지 6, 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3, 또는 1 내지 2의 정수이다. 일부 구현예에서, p는 2 내지 10, 2 내지 9, 2 내지 8, 2 내지 7, 2 내지 6, 2 내지 5, 2 내지 4, 또는 2 내지 3의 정수이다. 일부 구현예에서, p는 1 내지 8의 정수이다. 일부 구현예에서, p는 2 내지 5의 정수이다. 일부 구현예에서, p는 2 내지 4의 정수이다. 일부 구현예에서, p는 3 내지 4의 정수이다. 다른 구현예에서, p는 4 내지 8의 정수이다. 다른 구현예에서, p는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8, 바람직하게는 4 또는 8이다.
약물 로딩은 항체 또는 항원 결합 단편 상의 부착 부위의 수에 의해 제한될 수 있다. 일부 구현예에서, ADC의 링커 모이어티(L)는 항체 또는 항원 결합 단편 상의 하나 이상의 아미노산 잔기 상 화학적 활성 기를 통해 항체 또는 항원 결합 단편에 부착된다. 예를 들어, 링커는 유리 아미노, 이미노, 하이드록실, 티올, 또는 카르복실 기를 통해 항체 또는 항원 결합 단편에 (예를 들어, N- 또는 C-말단에, 하나 이상의 리신 잔기의 엡실론 아미노 기에, 하나 이상의 글루탐산 또는 아스파르트산 잔기의 유리 카르복실산 기에, 또는 하나 이상의 시스테인 잔기의 설프하이드릴 기에) 부착될 수 있다. 링커가 부착되는 부위는 항체 또는 항원 결합 단편의 아미노산 서열에서 천연 잔기일 수 있거나, 예를 들어 DNA 재조합 기술에 의해(예를 들어, 아미노산 서열로의 시스테인 잔기 도입에 의해) 또는 단백질 생화학에 의해(예를 들어, 환원, pH 조정, 또는 가수 분해에 의해) 항체 또는 항원 결합 단편 내로 도입될 수 있다.
일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편에 접합될 수 있는 약물 모이어티의 수는 유리 시스테인 잔기의 수에 의해 제한된다. 예를 들어, 부착이 시스테인 티올 기인 경우, 항체는 오직 하나 또는 몇 개의 시스테인 티올 기를 가질 수 있거나, 링커가 부착될 수 있는 충분히 반응성이 있는 티올 기를 오직 하나 또는 몇 개 가질 수 있다. 일반적으로 항체는 약물 모이어티에 연결될 수 있는 유리 및 반응성 시스테인 티올 기를 많이 함유하지 않는다. 실제로, 항체에서 대부분의 시스테인 티올 잔기는 사슬 간 또는 사슬 내 디설파이드 결합에 관여되어 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 시스테인에의 접합은 항체의 적어도 부분적 환원을 필요로 할 수 있다. 항체로의 링커-독소의 과-부착은 디설파이드 결합을 형성하는 데 이용 가능한 시스테인 잔기를 환원시킴으로써 항체를 불안정화할 수 있다. 따라서, 최적의 약물:항체 비율은 항체 또는 항원 결합 단편을 불안정화하지 않고 (항체 당 부착된 약물 모이어티의 수를 증가시킴으로써) ADC의 효능을 증가시켜야 한다. 일부 구현예에서, 최적 비율은 2, 4, 6, 또는 8일 수 있다.
일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하나 이상의 유리 시스테인 잔기를 생성하기 위해 접합 전에 환원 조건에 노출된다. 일부 구현예에서, 항체는, 반응성 시스테인 티올 기를 생성하기 위해, 부분적 또는 전체 환원 조건 하에서, 디티오트레이톨(DTT) 또는 트리스(2-카르복시에틸)포스핀(TCEP)과 같은 환원제로 환원될 수 있다. TCEP의 제한된 몰 당량을 이용한 부분적 환원을 통해 쌍을 이루지 않은 시스테인이 생성될 수 있으며, 이는 사슬 내 디설파이드 결합은 온전하게 두면서 경쇄와 중쇄(H-L 쌍 당 한 쌍) 및 힌지 영역에서의 두 개의 중쇄(인간 IgG1의 경우 H-H 쌍 당 두 쌍)를 연결하는 사슬 간 디설파이드 결합을 환원시킬 수 있다(Stefano et al.(2013) Methods Mol Biol. 1045: 145-71). 구현예에서, 항체 내의 디설파이드 결합은, 예를 들어 교대로 환원 및 산화 전압을 인가하는 작업 전극을 사용함으로써, 전기 화학적으로 환원된다. 이 접근은 분석 디바이스(예를 들어, 전기 화학적 검출 디바이스, NMR 분광계, 또는 질량 분광계) 또는 화학적 분리 디바이스(예를 들어, 액체 크로마토그래프(예를 들어, HPLC) 또는 전기 영동 디바이스(예를 들어, 미국 공개 번호 20140069822 참고))에 대한 디설파이드 결합 환원의 온-라인 커플링을 가능하게 할 수 있다. 특정 구현예에서, 항체는, 시스테인과 같은, 아미노산 잔기 상의 반응성 친핵성 기를 드러내기 위해 변성 조건을 거친다.
ADC의 약물 로딩은 상이한 방식으로, 예를 들어, (i) 항체 대비 약물-링커 중간체 또는 링커 시약의 몰 과잉을 제한하는 것; (ii) 접합 반응 시간 또는 온도를 제한하는 것; (iii) 시스테인 티올 변형을 위한 부분적 또는 제한적 환원 조건; 및/또는 (iv) 링커-약물 부착의 수 및/또는 위치의 제어를 위해 시스테인 잔기의 수 및 위치가 변형되도록 항체의 아미노산 서열을 재조합 기술에 의해 조작하는 것에 의해, 제어될 수 있다.
일부 구현예에서, 유리 시스테인 잔기가 항체 또는 항원 결합 단편의 아미노산 서열 내로 도입된다. 예를 들어, 모 항체의 하나 이상의 아미노산이 시스테인 아미노산으로 대체된 시스테인 조작된 항체가 제조될 수 있다. 임의의 형태의 항체가 그렇게 조작, 즉 돌연변이될 수 있다. 예를 들어, 모 Fab 항체 단편은 "티오Fab"으로 지칭되는 시스테인 조작된 Fab를 형성하도록 조작될 수 있다. 유사하게, 모 단일 클론 항체는 "티오Mab"을 형성하도록 조작될 수 있다. 단일 부위 돌연변이는 티오Fab에서 단일의 조작된 시스테인 잔기를 생성하나, 단일 부위 돌연변이는, IgG 항체의 이량체 본성으로 인해, 티오Mab에서 2개의 조작된 시스테인 잔기를 생성한다. 모 폴리펩티드의 아미노산 서열 변이체를 인코딩하는 DNA는 당업계에 알려진 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다(예를 들어, 국제 공개 번호 WO 2006/034488에 기재된 방법 참고). 이들 방법은 폴리펩티드를 인코딩하는 이전에 제조된 DNA의 부위-지정(또는 올리고뉴클레오티드-매개) 돌연변이 유발, PCR 돌연변이 유발, 및 카세트 돌연변이 유발에 의한 제조를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 재조합 항체의 변이체는 또한 제한 단편 조작에 의해 또는 합성 올리고뉴클레오티드를 사용한 중첩 연장 PCR에 의해 구축될 수 있다. 화학식 I의 ADC는 1, 2, 3, 또는 4개의 조작된 시스테인 아미노산을 갖는 항체를 포함하나, 이에 제한되지 않는다(Lyon et al.(2012) Methods Enzymol. 502: 123-38). 일부 구현예에서, 하나 이상의 유리 시스테인 잔기가, 조작 사용 없이, 항체 또는 항원 결합 단편에 이미 존재하며, 이 경우에 항체 또는 항원 결합 단편을 약물 모이어티에 접합하는 데 기존의 유리 시스테인 잔기가 사용될 수 있다.
항체 또는 항원 결합 단편 및 링커 모이어티의 다수 카피를 포함하는 반응 혼합물에서, 하나 초과의 친핵성 기가 약물-링커 중간체 또는 링커 모이어티 시약 다음의 약물 모이어티 시약과 반응하는 경우, 생성된 생산물은 혼합물 중 항체 또는 항원 결합 단편의 각각의 카피에 부착되는 하나 이상의 약물 모이어티 분포를 갖는 ADC 화합물의 혼합물일 수 있다. 일부 구현예에서, 접합 반응으로 인한 ADC 혼합물에서의 약물 로딩은 항체 또는 항원 결합 단편 당 부착된 1 내지 10개의 약물 모이어티 범위이다. 항체 또는 항원 결합 단편 당 약물 모이어티의 평균 수(즉, 평균 약물 로딩, 또는 평균 p)는 당업계에 알려진 임의의 종래의 방법, 예를 들어, 질량 분광분석(예를 들어, 역-상 LC-MS), 및/또는 고-성능 액체 크로마토그래피(예를 들어, HIC-HPLC)에 의해 계산될 수 있다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편 당 약물 모이어티의 평균 수는 소수성 상호 작용 크로마토그래피-고 성능 액체 크로마토그래피(HIC-HPLC)에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편 당 약물 모이어티의 평균 수는 역-상 액체 크로마토그래피-질량 분광분석(LC-MS)에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편 당 약물 모이어티의 평균 수는 약 1.5 내지 약 3.5, 약 2.5 내지 약 4.5, 약 3.5 내지 약 5.5, 약 4.5 내지 약 6.5, 약 5.5 내지 약 7.5, 약 6.5내지 약 8.5, 또는 약 7.5 내지 약 9.5이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편 당 약물 모이어티의 평균 수는 약 2 내지 약 4, 약 3 내지 약 5, 약 4 내지 약 6, 약 5 내지 약 7, 약 6 내지 약 8, 약 7 내지 약 9, 약 2 내지 약 8, 또는 약 4 내지 약 8이다.
일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편 당 약물 모이어티의 평균 수는 약 2이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편 당 약물 모이어티의 평균 수는 약 1.5, 약 1.6, 약 1.7, 약 1.8, 약 1.9, 약 2, 약 2.1, 약 2.2, 약 2.3, 약 2.4, 또는 약 2.5이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편 당 약물 모이어티의 평균 수는 2이다.
일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편 당 약물 모이어티의 평균 수는 약 4이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편 당 약물 모이어티의 평균 수는 약 3.5, 약 3.6, 약 3.7, 약 3.8, 약 3.9, 약 4, 약 4.1, 약 4.2, 약 4.3, 약 4.4, 또는 약 4.5이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편 당 약물 모이어티의 평균 수는 4이다.
일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편 당 약물 모이어티의 평균 수는 약 8이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편 당 약물 모이어티의 평균 수는 약 7.5, 약 7.6, 약 7.7, 약 7.8, 약 7.9, 약 8, 약 8.1, 약 8.2, 약 8.3, 약 8.4, 또는 약 8.5이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편 당 약물 모이어티의 평균 수는 8이다.
다양한 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편 당 약물 모이어티의 평균 수와 관련하여 사용되는, 용어 "약"은 ±10%를 의미한다.
개별 ADC 화합물, 또는 "종"은 질량 분광분석에 의해 혼합물 내에서 확인되고 UPLC 또는 HPLC, 예를 들어, 소수성 상호 작용 크로마토그래피(HIC-HPLC)에 의해 분리될 수 있다. 특정 구현예에서, 단일 로딩 값을 갖는 균질하거나 거의 균질한 ADC 생산물은, 예를 들어 전기 영동 또는 크로마토그래피에 의해, 접합 혼합물로부터 단리될 수 있다.
일부 구현예에서, 더 높은 약물 로딩(예를 들어, p > 8)은 일정 항체-약물 접합체의 응집, 불용성, 독성, 또는 세포 투과성 손실을 유발할 수 있다. 더 높은 약물 로딩은 또한 일정 ADC의 약동학(예를 들어, 청소율)에 부정적으로 영향을 미칠 수 있다. 일부 구현예에서, 더 낮은 약물 로딩(예를 들어, p < 2)은 표적-발현 세포 및/또는 방관자 세포에 대한 일정 ADC의 효능을 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시의 ADC에 대한 약물 로딩은 약 2 내지 약 8; 약 2 내지 약 6; 약 2 내지 약 5; 약 3 내지 약 5; 약 2 내지 약 4; 또는 약 4 내지 약 8 범위이다.
일부 구현예에서, 약 2의 약물 로딩 및/또는 평균 약물 로딩은, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편 상의 사슬 내 디설파이드의 부분적 환원을 사용하여, 달성되고, 유익한 특성을 제공한다. 일부 구현예에서, 약 4의 약물 로딩 및/또는 평균 약물 로딩은, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편 상의 사슬 내 디설파이드의 부분적 환원을 사용하여, 달성되고, 유익한 특성을 제공한다. 일부 구현예에서, 약 8의 약물 로딩 및/또는 평균 약물 로딩은, 예를 들어 항체 또는 항원 결합 단편 상의 사슬 내 디설파이드의 부분적 환원을 사용하여, 달성되고, 유익한 특성을 제공한다. 일부 구현예에서, 약 2 미만의 약물 로딩 및/또는 평균 약물 로딩은 허용되지 않게 높은 수준의 비접합된 항체 종을 초래할 수 있으며, 이는 표적 항원에의 결합에 대해 ADC와 경쟁할 수 있고/있거나 감소된 치료 효능을 제공할 수 있다. 일부 구현예에서, 약 8 초과의 약물 로딩 및/또는 평균 약물 로딩은 허용되지 않게 높은 수준의 생산물 불균질 및/또는 ADC 응집을 초래할 수 있다. 약 8 초과의 약물 로딩 및/또는 평균 약물 로딩은 또한 항체 또는 항원 결합 단편을 안정화시키는 데 필요한 하나 이상의 화학적 결합의 손실로 인해, ADC의 안정성에 영향을 미칠 수 있다.
본 개시는 기재된 ADC를 생산하는 방법을 포함한다. 간단히, ADC는 항체 또는 항원 결합 단편으로서 항체 또는 항원 결합 단편, 약물 모이어티(예를 들어, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제), 및 약물 모이어티와 항체 또는 항원 결합 단편을 연결하는 링커를 포함한다. 일부 구현예에서, ADC는 약물 모이어티에 및 항체 또는 항원 결합 단편에 공유 결합으로 부착하기 위한 반응성 기능성을 갖는 링커를 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편의 시스테인 티올은 링커 또는 약물-링커 중간체(예를 들어, 말레이미드 모이어티)의 반응성 작용 기와 결합을 형성하여 ADC를 만들 수 있다. ADC의 생성은 당업자에게 알려진 임의의 기술에 의해 달성될 수 있다.
일부 구현예에서, ADC는 항체 또는 항원 결합 단편을 링커 및 약물 모이어티(예를 들어, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제)와 순차적 방식으로 접촉시켜, 항체 또는 항원 결합 단편이 링커에 먼저 공유 결합으로 연결된 다음, 사전-형성된 항체-링커 중간체가 약물 모이어티와 반응함으로써 생산된다. 항체-링커 중간체는 약물 모이어티와 접촉하기 전에 정제 단계를 거치거나 거치지 않을 수 있다. 다른 구현예에서, ADC는 링커를 약물 모이어티와 반응시킴으로써 사전-형성된 링커-약물 화합물과 항체 또는 항원 결합 단편을 접촉시킴으로써 생산된다. 사전-형성된 링커-약물 화합물은 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉하기 전에 정제 단계를 거치거나 거치지 않을 수 있다. 다른 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하나의 반응 혼합물 내에서 링커 및 약물 모이어티와 접촉하여, 항체 또는 항원 결합 단편과 링커 사이, 및 링커와 약물 모이어티 사이에 공유 결합의 동시 형성을 가능하게 한다. ADC를 생산하는이 방법은 반응을 포함할 수 있으며, 여기서 항체 또는 항원 결합 단편은 링커를 반응 혼합물에 첨가하기 전 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉하고, 그 반대도 같다. 특정 구현예에서, ADC는 항체 또는 항원 결합 단편을, ADL1-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제(예를 들어, ADL1-79392) 또는 ADL5-헤르복시디엔 스플라이싱 조절제(예를 들어, ADL5-0349)와 같은, 약물 모이어티에 연결된 링커와 접합을 가능하게 하는 조건 하에서 반응시킴으로써 생산된다.
상기 기재된 방법에 따라 제조된 ADC는 정제 단계를 거칠 수 있다. 정제 단계는 단백질 정제를 위한 당업계에 알려진 임의의 생화학적 방법, 또는 이들의 임의의 조합 방법을 수반할 수 있다. 이들은 접선 유동 여과(TFF), 친화성 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 임의의 전하 또는 등전점-기반 크로마토그래피, 혼합 모드 크로마토그래피, 예를 들어, CHT(세라믹 하이드록시아파타이트), 소수성 상호 작용 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토 그래피, 투석, 여과, 선택적 침전, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
치료적 용도 및 조성물
개시된 ADC 및 조성물을 장애, 예를 들어 신생물성 장애에 대해 대상체를 치료하는 데 사용하는 방법이 본원에 개시된다. ADC는 단독으로 또는 제2 치료제와 조합하여 투여될 수 있으며, 임의의 약학적으로 허용되는 제형, 투여량, 및 투약 요법으로 투여될 수 있다. ADC 치료 효능은 독성뿐만 아니라 효능 지표에 대해 평가되고 그에 따라 조정될 수 있다. 효능 측정에는 시험관내 또는 생체내에서 관찰되는 세포 증식 억제 및/또는 세포 독성 효과, 종양 부피 감소, 종양 성장 저해, 및/또는 연장된 생존이 포함되나 이에 한정되지 않는다.
ADC가 세포에 대해 세포 증식 억제 및/또는 세포 독성 효과를 발휘하는지 여부를 결정하는 방법은 알려져 있다. 예를 들어, ADC의 세포 독성 또는 세포 증식 억제 활성은 다음에 의해 측정될 수 있다: ADC의 표적 단백질을 발현하는 포유류 세포를 세포 배양 배지에 노출하는 것; 약 6시간 내지 약 6일의 기간 동안 세포를 배양하는 것; 및 세포 생존력을 측정하는 것. 세포-기반 시험관내 분석은 또한 생존력(증식), 세포 독성, 및 ADC의 아폽토시스 유도(카스파제 활성화)를 측정하는 데 사용될 수 있다.
ADC가 세포 증식 억제 효과를 발휘하는지 여부를 결정하기 위해, 티미딘 혼입 분석이 사용될 수 있다. 예를 들어, 표적 항원을 발현하는 암세포가 96-웰 플레이트의 5,000개 세포/웰 밀도로 72시간 동안 배양될 수 있으며 72시간의 마지막 8시간 동안 0.5 μCi의 3H-티미딘에 노출될 수 있다. 3H-티미딘의 배양물 중 세포로의 혼입은 ADC의 존재 및 부재 하에서 측정된다.
세포 독성을 결정하기 위해, 괴사 또는 아폽토시스(프로그램화된 세포 사멸)가 측정될 수 있다. 괴사는 전형적으로 원형질 막의 증가된 투과성을 동반한다; 세포의 팽창, 및 원형질 막의 파열. 아폽토시스는, 예를 들어, DNA 단편화를 측정함으로써 정량될 수 있다. DNA 단편화의 시험관내 정량적 결정을 위한 상업적인 측광 방법이 이용 가능하다. TUNEL(이는 단편화된 DNA에서 표지된 뉴클레오티드의 혼입을 검출함) 및 ELISA-기반 분석을 포함하는, 이러한 분석의 예는 문헌[Biochemica(1999) No. 2, pp. 34-37(Roche Molecular Biochemicals)]에 기재되어 있다.
아폽토시스는 세포의 형태학적 변화를 측정함으로써 결정될 수도 있다. 예를 들어, 괴사에서와 같이, 원형질 막 온전성의 손실은 일정 염료(예를 들어, 형광 염료, 예를 들어 아크리딘 오렌지 또는에 듐 브로마이드와 같은)의 흡수를 측정함으로써 결정될 수 있다. 아폽토시스 세포 수를 측정하는 방법은 문헌[Duke and Cohen, Current Protocols in Immunology(Coligan et al., eds.(1992) pp. 3.17.1-3.17.16)]에 의해 기술되었다. 세포는 또한 DNA 염료(예를 들어, 아크리딘 오렌지, 에티듐 브로마이드, 또는 프로피듐 요오다이드)로 표지될 수 있으며 세포는 염색질 응축 및 내부 핵막을 따른 주변화(margination)에 대해 관찰된다. 일부 구현예에서, 아폽토시스는 또한 카스파제 활성에 대한 스크리닝에 의해 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 카스파제-3 및 카스파제-7의 활성을 측정하는 데 카스파제-글로(Caspase-Glo)® 분석이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 분석은 카스파제 활성, 루시페라제 활성, 및 세포 용해에 최적화된 시약에서의 발광성 카스파제-3/7 기질을 제공한다. 일부 구현예에서, "첨가-혼합-측정" 형식으로 카스파제-글로® 3/7 시약을 첨가하는 것은 세포 용해, 이어서 기질의 카스파제 절단 및, 루시페라제에 의해 생산되는, "불빛(glow)-형" 발광 신호 생성를 초래할 수 있다. 일부 구현예에서, 발광은 존재하는 카스파제 활성의 양에 비례할 수 있고, 아폽토시스의 지표로서 작용할 수 있다. 아폽토시스를 결정하기 위해 측정될 수 있는 다른 형태학적 변화는, 예를 들어, 세포질 응축, 막 수포 증가, 및 세포 수축을 포함한다. 암 세포에 대한 이들 영향 중 임의의 것에 대한 결정은 ADC가 암 치료에 유용함을 나타낸다.
세포 생존력은, 예를 들어 뉴트럴 레드, 트리판 블루, 크리스탈 바이올렛, 또는 ALAMARTM 블루와 같은 염료의 흡수를 세포 내에서 결정함으로써, 측정될 수 있다(예를 들어, 문헌[Page et al.(1993) Intl J Oncology 3: 473-6] 참고). 이러한 분석에서, 세포는 염료를 함유하는 배지에서 인큐베이션되고, 세포가 세척되고, 염료의 세포 흡수를 반영하는, 남은 염료는 분광 광도법으로 측정된다. 세포 생존력은 또한, 예를 들어 대사적으로 활성인 세포의 지표인, ATP를 정량화함으로써, 측정될 수 있다. 특정 구현예에서, 제조된 ADC 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 화합물의 시험관내 효능 및/또는 세포 생존력은, 본원에 제공되는 실시예에 기재된 바와 같이, 셀타이터-글로(CellTiter-Glo)® 발광 세포 생존력 분석을 사용하여 평가될 수 있다. 특정 구현예에서, 이 분석에서, 단일 시약(셀타이터-글로® 시약)이 혈청-보충된 배지에서 배양된 세포에 직접적으로 첨가된다. 시약 첨가는 세포 용해 및 존재하는 ATP의 양에 비례하는 발광 신호 생성을 초래한다. ATP의 양은 배양물에 존재하는 세포의 수에 정비례한다. 단백질-결합 염료 설포로다민 B(SRB) 또한 세포 독성을 측정하는 데 사용될 수 있다(Skehan et al.(1990) J Natl Cancer Inst. 82: 1107-12).
개시된 ADC는 또한 방관자 살해 활성에 대해 평가될 수 있다. 방관자 살해 활성은, 예를 들어, 표적 항원에 대해 양성인 하나 및 표적 항원에 대해 음성인 하나인, 2개의 세포주를 사용하는 분석에 의해, 결정될 수 있다. 특정 구현예에서, 분석 설계는 표적 음성 세포만을 추적하는 것이 가능하게 한다. 특정 구현예에서, 세포는 3 가지 조건하에 플레이팅된다: (i) 표적 음성 세포 단독(태그되거나 표지됨); (ii) 표적 양성 세포 단독; 및 (iii) 표적 음성 세포 및 표적 양성 세포의 공동-배양. 그 다음 세포는 ADC로 처리된 뒤 세포 독성을 모니터링한다. 셀타이터-글로® 시약을 이용하여 플레이트가 판독되는 경우, 모든 세포 집단의 생존력이 모니터링될 수 있다. 원글로(OneGlo)® 시약을 이용하여 플레이트가 판독되는 경우, 태그되거나 표지된 표적 음성 세포 만이 신호를 생성한다. 표적-양성 세포와 혼합되는 경우 표적-음성 세포의 살해는 방관자 살해를 나타내는 반면, 표적-양성 세포의 부재에서 표적-음성 세포의 살해는 오프-타겟 살해를 나타낸다.
특정 양태에서, 본 개시는 RNA 스플라이싱을 방해함으로써 암 세포 또는 조직을 살해, 이의 성장을 저해 또는 조절, 또는 이의 대사를 간섭하는 방법을 특징으로 한다. 방법은 RNA 스플라이싱의 방해가 치료적 이익을 제공하는 임의의 대상체에 사용될 수 있다. RNA 스플라이싱을 방해함으로써 이익을 얻을 수 있는 대상체로는 혈액 악성 종양 또는 고형 종양과 같은 신생물성 장애를 갖거나 가질 위험이 있는 이들이 포함되나, 이에 한정되지 않는다. 특정 구현예에서, 혈액 악성 종양은 B-세포 악성 종양, 혈액 암(백혈병), 형질 세포 암(골수종, 예를 들어 다발성 골수종), 또는 림프절 암(림프종)이다. 특정 구현예에서, 혈액 악성 종양은 급성 골수성 백혈병 또는 다발성 골수종이다. 특정 구현예에서, 백혈병은 급성 림프모구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 만성 골수단핵구성 백혈병(CMML), 또는 급성 단핵구성 백혈병(AMoL)이다. 특정 구현예에서, 림프종은 호지킨 림프종 및 비-호지킨 림프종이다. 특정 구현예에서, 혈액 악성 종양은 골수이형성 증후군(MDS)이다. 특정 구현예에서, 고형 종양은 유방암, 췌장암, 전립선암, 결장 또는 결장직장암, 폐암, 위암, 자궁 경부암, 자궁내막암, 난소암, 담관암종, 신경교종, 또는 흑색종과 같은 암종이다. 특정 구현예에서, 고형 종양은 유방암, 위암, 전립선암, 난소암, 폐암(예를 들어, 폐 선암종), 자궁암(예를 들어, 자궁 장액 자궁 내막 암종), 타액 관 암종, 흑색종, 결장암, 자궁 경부암, 췌장암, 신장암, 결장직장암, 또는 식도암이다. 특정 구현예에서, 폐암은 폐 선암종이다. 특정 구현예에서, 자궁암은 자궁 장액 자궁 내막 암종이다
다양한 구현예에서, 개시된 ADC는, HER2-발현 신생물 세포 또는 조직과 같은, HER2를 발현하는 임의의 세포 또는 조직에 투여될 수 있다. 예시적 구현예는 HER2-매개 세포 신호 전달을 저해하는 방법 또는 세포를 살해하는 방법을 포함한다. 방법은, 암 세포 또는 전이성 병변과 같은, HER2를 발현하는 임의의 세포 또는 조직에 사용될 수 있다. HER2-발현 암의 비-제한적인 예로는 유방암, 위암, 방광암, 요로 상피 세포 암종, 식도암, 폐암(예를 들어, 폐 선암종), 자궁암(예를 들어, 자궁 장액 자궁 내막 암종), 타액 관 암종, 자궁 경부암, 자궁내막암, 및 난소암이 포함된다(English et al.(2013) Mol Diagn Ther. 17: 85-99). HER2-발현 세포의 비-제한적인 예로는 HCC1954 및 SKBR3 인간 유방 도관 암종 세포, N87 인간 위 암종 세포, 및 HER2 또는 이의 일부를 인코딩하는 재조합 핵산을 포함하는 세포가 포함된다.
다양한 구현예에서, 개시된 ADC는, CD138-발현 신생물 세포 또는 조직과 같은, CD138을 발현하는 임의의 세포 또는 조직에 투여될 수 있다. 예시적 구현예는 CD138-매개 세포 신호 전달을 저해하는 방법 또는 세포를 살해하는 방법을 포함한다. 방법은, 암 세포 또는 전이성 병변과 같은, CD138을 발현하는 임의의 세포 또는 조직에 사용될 수 있다. CD138-발현 암의 비-제한적인 예로는 흉곽내암(예를 들어, 폐암, 중피종), 피부암(예를 들어, 기저 세포 암종, 편평 세포 암종), 두경부암(예를 들어, 후두, 하인두, 비인두), 유방암, 비뇨생식기암(예를 들어, 자궁 경부암, 난소암, 자궁내막암, 전립선암, 방광암, 요로 상피암), 혈액 악성 종양(예를 들어, 다발성 골수종과 같은 골수종, 호지킨 림프종), 및 갑상선암이 포함된다(Szatmαri et al. 2015) Dis Markers 2015: 796052). CD138-발현 세포의 비-제한적인 예로는 MOLP8 인간 다발성 골수종 세포, 및 CD138 또는 이의 일부를 인코딩하는 재조합 핵산을 포함하는 세포가 포함된다.
다양한 구현예에서, 개시된 ADC는, EPHA2-발현 신생물 세포 또는 조직과 같은, EPHA2를 발현하는 임의의 세포 또는 조직에 투여될 수 있다. 예시적 구현예는 EPHA2-매개 세포 신호 전달을 저해하는 방법 또는 세포를 살해하는 방법을 포함한다. 방법은, 암 세포 또는 전이성 병변과 같은, EPHA2를 발현하는 임의의 세포 또는 조직에 사용될 수 있다. EPHA2-발현 암의 비-제한적인 예로는 유방암, 뇌암, 난소암, 방광암, 췌장암, 식도암, 폐암, 전립선암, 흑색종, 식도암, 및 위암이 포함된다(Tandon et al.(2011) Expert Opin Ther Targets 15(1): 31-51). EPHA2-발현 세포의 비-제한적인 예로는 PC3 인간 전립선 암 세포, 및 EPHA2 또는 이의 일부를 인코딩하는 재조합 핵산을 포함하는 세포가 포함된다.
예시적인 방법은 유효량, 즉 세포를 살해하기에 충분한 양으로, 본원에 기재된, ADC와 세포를 접촉시키는 단계를 포함한다. 방법은, 예를 들어 시험관내, 생체내, 생체외, 또는 원위치(in situ) 배양 중인 세포 상에 사용될 수 있다. 예를 들어, HER2를 발현하는 세포(예를 들어, 종양 또는 전이성 병변의 생검에 의해 수집된 세포; 확립된 암 세포주로부터의 세포; 또는 재조합 세포)는 배양 배지에서 시험관내 배양될 수 있으며 접촉 단계는 ADC를 배양 배지에 추가하는 것에 의해 영향을 받을 수 있다. 방법은, 특히 HER2를 발현하는 종양 세포를 포함하여, HER2를 발현하는 세포의 살해를 초래할 것이다. 대안적으로, ADC는 생체내 효과를 갖도록 임의의 적합한 투여 경로(예를 들어, 정맥내, 피하, 또는 종양 조직과의 직접 접촉)에 의해 대상체에게 투여될 수 있다. 이 접근은 다른 세포 표면 항원(예를 들어, CD138, EPHA2)을 표적화하는 항체에 대해 사용될 수 있다.
개시된 ADC 치료 조성물의 생체내 효과는 적합한 동물 모델에서 평가될 수 있다. 예를 들어, 이종발생성 암 모델이 사용될 수 있으며, 여기서 암 외식편 또는 계대 이종 이식 조직이, 누드 또는 SCID 마우스와 같은, 면역 손상 동물 내로 도입된다(Klein et al.(1997) Nature Med. 3: 402-8). 효능은 종양 형성, 종양 퇴행 또는 전이 등의 저해를 측정하는 분석을 사용하여 예측할 수 있다.
아폽토시스와 같은 메커니즘에 의한 종양 사멸의 촉진을 평가하는 생체내 분석 또한 사용될 수 있다. 일 구현예에서, 치료 조성물로 처리된 종양 보유 마우스로부터의 이종 이식은 아폽토시스 병소의 존재에 대해 조사될 수 있고 처리되지 않은 대조군 이종 이식-보유 마우스와 비교될 수 있다. 처리된 마우스의 종양에서 아폽토시스 병소가 발견되는 정도는 조성물의 치료적 효능의 지표를 제공한다.
신생물성 장애, 예를 들어 암을 치료하는 방법이 본원에 추가로 제공된다. 본원에 개시된 ADC는 치료 목적을 위해 비-인간 포유 동물 또는 인간 대상체에게 투여될 수 있다. 치료 방법은 발현된 항원에 결합하거나, 결합에 접근 가능하거나, 암 세포 표면 상에 국소화되는 표적화 항체에 연결된 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 포함하는 ADC 또는 조성물의 치료적 유효량을 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체에게 투여하는 것을 수반한다. 일부 구현예에서, 항체-약물 접합체 또는 조성물을 사용하는 치료는 표적 항원을 발현하지 않지만 표적 항원을 발현하는 신생물 세포에 인접한 신생물 세포의 방관자 살해를 유도한다.
예시적인 구현예는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 HER2 에피토프에 면역 특이적으로 결합하는 항체에 접합시키고 세포를 ADC에 노출시키는 것을 포함하는, HER2를 발현하는 세포에 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 전달하는 방법이다. 본 개시의 ADC가 지시되는 HER2를 발현하는 예시적인 종양 세포로는 위 암종 세포 및 유방 도관 암종 세포가 포함된다.
또 다른 예시적 구현예는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 CD138 에피토프에 면역 특이적으로 결합하는 항체에 접합시키고 세포를 ADC에 노출시키는 것을 포함하는, CD138을 발현하는 세포에 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 전달하는 방법이다. 본 개시의 ADC가 지시되는 CD138을 발현하는 예시적인 종양 세포로는 다발성 골수종 세포가 포함된다.
또 다른 예시적 구현예는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 EPHA2 에피토프에 면역 특이적으로 결합하는 항체에 접합시키고 세포를 ADC에 노출시키는 것을 포함하는, EPHA2를 발현하는 세포에 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 전달하는 방법이다. 본 개시의 ADC가 지시되는 EPHA2를 발현하는 예시적인 종양 세포로는 전립선 암 세포가 포함된다.
또 다른 예시적 구현예는 치료적 유효량의 ADC 또는 ADC를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 종양(예를 들어, HER2-발현 종양, CD138-발현 종양, EPHA2-발현 종양)의 성장을 감소시키거나 저해하는 방법이다. 일부 구현예에서, 치료는 환자의 종양의 성장을 감소시키거나 저해하고, 전이성 병변의 수 또는 크기를 감소시키고, 종양 총량(tumor load)을 감소시키고, 원발성 종양 총량을 감소시키고, 침입성을 감소시키고, 생존 시간을 연장하고/하거나, 삶의 질을 유지하거나 개선하기에 충분하다. 일부 구현예에서, 종양은 단독으로 투여되는 경우의 ADC의 항체 또는 항원 결합 단편(예를 들어, 항-HER2 항체, 항-CD138 항체, 항-EPHA2 항체)을 사용하는 치료에 대해 저항성 또는 불응성이고/이거나, 종양은 단독으로 투여되는 경우의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 약물 모이어티를 사용하는 치료에 대해 저항성 또는 불응성이다.
특정 양태에서, 본 개시는 HER2-발현 종양의 성장을 감소시키거나 저해하는 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, 항체-약물 접합체 또는 조성물을 사용하는 치료는 HER2를 발현하지 않지만 HER2를 발현하는 신생물 종양 세포에 인접한 종양 세포의 방관자 살해를 유도한다. 예시적인 HER2-발현 종양 유형으로는 HER2-발현 유방암, 위암, 방광암, 요로 상피 세포 암종, 식도암, 폐암(예를 들어, 폐 선암종), 자궁암(예를 들어, 자궁 장액 자궁 내막 암종), 타액 관 암종, 자궁 경부암, 자궁내막암, 및 난소암으로부터 유래되는 종양이 포함되나 이에 한정되지 않는다. 특정 구현예에서, HER2-발현 종양은 HER2-발현 유방암, 난소암, 위암, 폐암(예를 들어, 폐 선암종), 자궁암(예를 들어, 자궁 장액 자궁 내막 암종), 골육종, 또는 타액 관 암종으로부터 유래되는 종양이다. 특정 구현예에서, HER2-발현 종양은 폐 선암종 또는 자궁 장액 자궁 내막 암종이다.
특정 양태에서, 본 개시는 CD138-발현 종양의 성장을 감소시키거나 저해하는 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, 항체-약물 접합체 또는 조성물을 사용하는 치료는 CD138을 발현하지 않지만 CD138을 발현하는 신생물 종양 세포에 인접한 종양 세포의 방관자 살해를 유도한다. 예시적인 CD138-발현 종양 유형으로는 CD138-발현 흉곽내암(예를 들어, 폐암, 중피종), 피부암(예를 들어, 기저 세포 암종, 편평 세포 암종), 두경부암(예를 들어, 후두, 하인두, 비인두), 유방암, 비뇨생식기암(예를 들어, 자궁 경부암, 난소암, 자궁내막암, 전립선암, 방광암, 요로 상피암), 및 갑상선암으로부터 유래되는 종양이 포함되나 이에 한정되지 않는다.
특정 양태에서, 본 개시는 EPHA2-발현 종양의 성장을 감소시키거나 저해하는 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, 항체-약물 접합체 또는 조성물을 사용하는 치료는 EPHA2를 발현하지 않지만 EPHA2를 발현하는 신생물 종양 세포에 인접한 종양 세포의 방관자 살해를 유도한다. 예시적인 EPHA2-발현 종양 유형으로는 EPHA2-발현 유방암, 뇌암, 난소암, 방광암, 췌장암, 식도암, 폐암, 전립선암, 흑색종, 식도암, 및 위암으로부터 유래되는 종양이 포함되나 이에 한정되지 않는다. 특정 구현예에서, EPHA2-발현 종양은 EPHA2-발현 유방암, 전립선암, 난소암, 폐암, 흑색종, 결장암, 또는 식도암으로부터 유래되는 종양이다.
더욱이, 본 개시의 항체는 수의학적 목적을 위해 또는 인간 질환의 동물 모델로서 ADC가 결합할 수 있는 항원을 발현하는 비-인간 포유 동물에게 투여될 수 있다. 후자와 관련하여, 이러한 동물 모델은 개시된 ADC의 치료 효능을 평가하는 데 유용할 수 있다(예를 들어, 투여량 및 투여의 시간 경과 테스트).
개시된 ADC 및 조성물의 치료적 용도가 본원에 추가로 제공된다. 예시적인 구현예는 신생물성 장애(예를 들어, HER2-발현 암, CD138-발현 암, EPHA2-발현 암)의 치료에서의 ADC의 용도이다. 또 다른 예시적 구현예는 신생물성 장애(예를 들어, HER2-발현 암, CD138-발현 암, EPHA2-발현 암)의 치료에서의 사용을 위한 ADC이다. 표적 항원(예를 들어, HER2, CD138, EPHA2, MSLN, FOLH1, CDH6, CEACAM5, CFC1B, ENPP3, FOLR1, HAVCR1, KIT, MET, MUC16, SLC39A6, SLC44A4, 또는 STEAP1)을 발현하는 암을 갖는 대상체를 확인하는 방법은 당업계에 알려져 있고 개시된 ADC를 사용하는 치료에 적합한 환자를 확인하는 데 사용될 수 있다.
또 다른 예시적 구현예는 신생물성 장애(예를 들어, HER2-발현 암, CD138-발현 암, EPHA2-발현 암)의 치료를 위한 약제를 제조하는 방법에서의 ADC의 용도이다.
전술한 방법의 실시에 사용되는 치료 조성물은 원하는 전달 방법에 적합한 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물로 제형화될 수 있다. 예시적 구현예는 본 개시의 ADC 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물이다. 적합한 담체는, 치료 조성물과 조합되는 경우, 치료 조성물의 항-종양 기능을 유지하고 일반적으로 환자의 면역 시스템과 비-반응성인 임의의 물질을 포함한다. 약학적으로 허용되는 담체는 생리학적으로 적합한 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항박테리아 및 항진균제, 등장화 및 흡수 지연 제제 등을 포함한다. 약학적으로 허용되는 담체의 예로는 물, 염수, 포스페이트 완충 염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올, 메실레이트 염 등뿐만 아니라 이들의 조합 중 하나 이상이 포함된다. 많은 경우에, 등장화제, 예를 들어, 당, 만니톨, 소르비톨과 같은 폴리 알코올, 또는 소듐 클로라이드가 조성물 내에 포함된다. 약학적으로 허용되는 담체는 ADC의 저장 기간 또는 유효성을 향상시키는, 습윤제 또는 유화제, 보존제 또는 완충제와 같은 소량의 보조 물질을 추가로 포함할 수 있다.
치료 제형은 가용화되고 치료 조성물을 종양 부위에 전달할 수 있는 임의의 경로를 통해 투여될 수 있다. 잠재적으로 효과적인 투여 경로로는 정맥내, 비경구, 복강내, 근육내, 종양내, 피내, 기관내, 동소 등이 포함되나 이에 한정되지 않는다. 치료 단백질 조제물은 동결 건조되어 멸균 분말로서, 예를 들어 진공 상태에서 보관된 다음, 주사 전에 정균 수(예를 들어, 벤질 알코올 보존제 함유) 또는 멸균 수 중에 재구성될 수 있다. 치료 제형은 ADC 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 예를 들어 메실레이트 염을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, ADC는 환자에게 매일, 격월로, 또는 그 사이의 임의의 기간에 투여된다. 전술한 방법을 사용하는 암 치료를 위한 투여량 및 투여 프로토콜은 방법 및 표적 암에 따라 달라질 것이며, 일반적으로 당업계에서 인식되는 다수의 다른 인자에 좌우될 것이다.
다양한 전달 시스템이 알려져 있으며 본 개시의 하나 이상의 ADC를 투여하기 위해 사용될 수 있다. ADC를 투여하는 방법으로는 비경구 투여(예를 들어, 피내, 근육내, 복강내, 정맥내 및 피하), 경막외 투여, 종양내 투여, 및 점막 투여(예를 들어, 비내 및 경구 경로)가 포함되나 이에 한정되지 않는다. 추가로, 예를 들어 흡입기 또는 분무기의 사용, 및 에어로졸화 제제를 사용한 제형에 의해, 폐 투여가 사용될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 6,019,968, 5,985,320, 5,985,309, 5,934,272, 5,874,064, 5,855,913, 5,290,540, 및 4,880,078; 및 국제 공개 번호 WO 1992/019244, WO 1997/032572, WO 1997/044013, WO 1998/031346, 및 WO 1999/066903에 기재된 폐 투여를 위한 조성물 및 방법 참고. ADC는 임의의 편리한 경로, 예를 들어 주입 또는 볼루스 주사에 의해, 또는 상피 또는 점막 피부 내벽(예를 들어, 구강 점막, 직장 및 장 점막 등)을 통한 흡수에 의해 투여될 수 있다. 투여는 전신 도는 국소일 수 있다.
본원에 개시된 치료 조성물은 제조 및 보관 조건 하에서 멸균이고 안정할 수 있다. 일부 구현예에서, ADC, 또는 약학 조성물 중 하나 이상은 밀봉된 용기 내 건조 멸균 동결 건조 분말 또는 수부재 농축물로서 공급되고 투여에 대상체로의 투여를 위해 적절한 농도로 재구성될 수 있다(예를 들어, 물 또는 염수를 사용하여). 일부 구현예에서, 예방제 또는 치료제 또는 약학 조성물 중 하나 이상 은 밀봉된 용기 내 건조 멸균 동결 건조 분말로서 적어도 5 mg, 적어도 10 mg, 적어도 15 mg, 적어도 25 mg, 적어도 35 mg, 적어도 45 mg, 적어도 50 mg, 적어도 75 mg, 또는 적어도 100 mg, 또는 그 사이의 임의의 양의 단위 투여량으로 공급된다. 일부 구현예에서, 동결 건조된 ADC 또는 약학 조성물은 원래 용기에서 2℃ 내지 8℃에서 보관된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 ADC 또는 약학 조성물 중 하나 이상은 밀봉된 용기, 예를 들어 제제의 양 및 농도를 표시하는 용기 내에 액체 형태로 공급된다. 일부 구현예에서, 투여되는 조성물의 액체 형태는 적어도 0.25 mg/mL, 적어도 0.5 mg/mL, 적어도 1 mg/mL, 적어도 2.5 mg/mL, 적어도 5 mg/mL, 적어도 8 mg/mL, 적어도 10 mg/mL, 적어도 15 mg/mL, 적어도 25 mg/mL, 적어도 50 mg/mL, 적어도 75 mg/mL, 또는 적어도 100 mg/mL ADC의 밀봉된 용기로 공급된다. 액체 형태는 원래 용기에서 2℃ 내지 8℃에서 보관될 수 있다.
일부 구현예에서, 개시된 ADC는 비경구 투여에 적합한 약학 조성물 내로 포함될 수 있다. 주사 가능한 용액은 플린트(flint) 또는 앰버(amber) 바이알, 앰풀(ampule), 또는 프리-필드 시린지(pre-filled syringe), 또는 기타 알려진 전달 또는 보관 디바이스 내의 액체 또는 동결 건조된 투여 형태로 구성될 수 있다.
본원에 기재된 조성물은 다양한 형태일 수 있다. 이들에는, 예를 들어, 액체 용액(예를 들어, 주사 가능 및 주입 가능 용액), 분산액 또는 현탁액, 정제, 환약, 분말, 리포솜, 및 좌약과 같은, 액체, 반-고체, 및 고체 투여 형태가 포함된다. 바람직한 형태는 의도된 투여 방식 및 치료적 적용에 좌우된다.
다양한 구현예에서, 치료는 허용되는 투여 경로를 통한 ADC 조제물의 단일 볼루스 또는 반복 투여를 포함한다.
가장 효과적인 투약 요법 등을 결정하는 데에 도움이 되기 위해 환자는 주어진 샘플에서의 표적 항원의 수준(예를 들어, 표적 항원 발현 세포의 수준)에 대해 평가될 수 있다. 예시적인 구현예는 환자로부터 생물학적 샘플을 제공하는 것 및 생물학적 샘플을 ADC와 접촉시키는 것을 포함하는, 본 개시의 ADC를 사용하는 치료에 환자가 반응할지 여부를 결정하는 방법이다. 예시적인 생물학적 샘플에는, 염증 분비물, 혈액, 혈청, 장액, 대변 샘플, 또는 종양 생검(예를 들어, 표적 항원-발현 암, 예를 들어, HER2-발현 암, CD138-발현 암, EPHA2-발현 암을 갖거나 이의 위험에 있는 환자로부터 유래된 종양 생검)과 같은, 조직 또는 체액이 포함된다. 일부 구현예에서, 샘플(예를 들어, 조직 및/또는 체액)은 대상체로부터 수득될 수 있고, 적합한 면역학적 방법이 사용되어 표적 항원(예를 들어, HER2, CD138, EPHA2, MSLN, FOLH1, CDH6, CEACAM5, CFC1B, ENPP3, FOLR1, HAVCR1, KIT, MET, MUC16, SLC39A6, SLC44A4, 또는 STEAP1)의 단백질 발현을 검출 및/또는 측정할 수 있다. 이러한 평가는 치료 전반에 걸친 모니터링 목적을 위하여 또한 사용되고, 다른 파라미터의 평가와 조합하여 치료 성공을 판단하는 데 유용한다.
일부 구현예에서, ADC의 효능은 대상체로부터의 종양 샘플을 ADC와 접촉시키고 종양 성장 속도 또는 부피를 평가함으로써 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, ADC가 효과적인 것으로 결정된 경우, 이는 대상체에게 투여될 수 있다.
상기 치료적 접근은 광범위한 추가 수술, 화학 요법, 또는 방사선 치료 요법 중 임의의 하나와 조합될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC 또는 조성물은 하나 이상의 추가 치료제, 예를 들어 하나 이상의 화학 요법 제제와 공동-제형화 및/또는 공동-투여된다. 화학 요법 제제의 비-제한적인 예로는 알킬화제, 예를 들어 질소 머스타드, 에틸렌이민 화합물, 및 알킬 설포네이트; 항대사물질, 예를 들어 엽산, 푸린 또는 피리미딘 길항제; 항-유사분열 제제, 예를 들어, 에리불린 또는 에리불린 메실레이트(할라벤(Halaven)TM), 빈카 알칼로이드, 및 아우리스타틴과 같은, 항-투불린 제제; 세포 독성 항생제; DNA 발현 또는 복제를 손상시키거나 간섭하는 화합물, 예를 들어 DNA 작은 홈(minor groove) 결합제; 및 성장 인자 수용체 길항제가 포함된다. 일부 구현예에서, 화학 요법 제제는 세포 독성 또는 세포 증식 억제 제제일 수 있다. 세포 독성 제제의 예로는, 에리불린 또는 에리불린 메실레이트(할라벤TM), 아우리스타틴(예를 들어, 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE), 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF)), 메이탄시노이드(예를 들어, 메이탄신), 돌라스타틴, 듀오스타틴, 크립토피신, 빈카 알칼로이드(예를 들어, 빈크리스틴, 빈블라스틴), 탁산, 탁솔, 및 콜키신과 같은, 항-유사분열 제제; 안트라사이클린(예를 들어, 다우노루비신, 독소루비신, 디하이드록시안트라신디온); 세포 독성 항생제(예를 들어, 미토마이신, 악티노마이신, 듀오카르마이신(예를 들어, CC-1065), 아우로마이신, 듀오마이신, 칼리케아미신, 엔도마이신, 페노마이신); 알킬화제(예를 들어, 시스플라틴); 삽입 제제(예를 들어, 에티듐 브로마이드); 토포이소메라제 저해제(예를 들어, 에토포사이드, 테노포사이드); At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212 또는 213, P32, 및 루테튬의 방사성 동위 원소(예를 들어, Lu177)와 같은, 방사성 동위 원소; 및 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 독소(예를 들어, 리신(예를 들어, 리신 A-사슬), 디프테리아 독소, 슈도모나스(Pseudomonas) 외독소 A(예를 들어, PE40), 내독소, 미토겔린, 콤브레스타틴, 레스트릭토신(restrictocin), 겔로닌, 알파-사르신, 아브린(예를 들어, 아브린 A-사슬), 모덱신(예를 들어, 모덱신 A-사슬), 큐리신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스(Sapaonaria officinalis) 저해제, 글루코코르티코이드)가 포함되나, 이에 한정되지 않는다.
예를 들어 상기 기재된 방법에 따라, 암을 치료하기 위한 약제의 제조에서의 개시된 ADC 중 하나 이상의 용도가 또한 본원에 개시된다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC는, 예를 들어 상기 기재된 방법에 따라, 암을 치료하기 위해 사용된다.
다양한 구현예에서, 본원에 기재된 실험실 및 치료적 적용에서의 사용을 위한 키트는 본 개시의 범위 내에 있다. 이러한 키트는 바이알, 튜브 등과 같은 하나 이상의 용기를 수용하도록 구획화된 캐리어, 패키지, 또는 용기를 포함할 수 있으며, 본원에 기재된 용도와 같은, 용도를 위한 지시서를 포함하는 라벨 또는 삽입물과 함께, 용기(들) 각각은 본원에 개시된 방법에 사용되는 개별 요소 중 하나를 포함한다. 키트는 약물 모이어티를 포함하는 용기를 포함할 수 있다. 본 개시는 또한, 제제의 양을 표시하는, 앰풀 또는 봉지(sachette)와 같은, 밀봉된 용기 내에 포장된 ADC, 또는 이의 약학 조성물 중 하나 이상을 제공한다.
키트는 상기 기재된 용기, 및, 완충제, 희석제, 필터, 바늘, 시린지를 포함하는, 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 물질을 포함하는 이와 관련된 하나 이상의 다른 용기; 내용물 및/또는 사용 지시를 나열한 캐리어, 패키지, 용기, 바이알 및/또는 튜브 라벨, 및 사용 지시가 있는 패키지 삽입물을 포함할 수 있다.
조성물이, 예후, 예방, 진단, 또는 실험실 적용과 같은, 특정 요법 또는 비-치료적 적용에 사용됨을 표시하기 위해 라벨이 용기 상에 또는 용기와 함께 존재할 수 있다. 라벨은 또한, 본원에 기재된 것과 같은, 생체내 또는 시험관내 사용을 위한 지시를 나타낼 수 있다. 지시 및 또는 기타 정보는, 키트와 함께 또는 키트 상에 포함된, 삽입물(들) 또는 라벨(들) 상에도 또한 포함될 수 있다. 라벨은 용기 상에 있거나 용기와 연관될 수 있다. 라벨을 형성하는 글자, 숫자, 또는 기타 부호가 용기 자체에 성형되거나 에칭되는 경우 라벨은 용기 상에 있을 수 있다. 그것이 용기를 또한 잡고 있는 그릇 또는 캐리어 내에 존재하는 경우 라벨은, 예를 들어 패키지 삽입물로서, 용기와 연관될 수 있다. 라벨은 조성물이, 본원에 기재된 암과 같은, 상태의 진단 또는 치료에 사용됨을 지시할 수 있다.
신생항원 및 사용 방법
다양한 구현예에서, 청소를 위해 환자의 면역 시스템에 의해 표적화 될 수 있는 종양 세포에서 신생항원을 유도함으로써 환자를 치료하는 방법이 또한 본원에 개시된다. 이론에 얽매이지 않고, 다양한 구현예에서, 단독으로 및/또는 ADC 또는 조성물의 일부로서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 투여하는 것은, 예를 들어 재-발현된 인트론-상주 내인성 레트로바이러스의 결과로서, 면역 반응을 유도하고, 이중-가닥 RNA 면역 반응을 유도하는 신생항원을 생산할 수 있고/있거나, 면역원성 세포 사멸을 유도하는 신생항원을 생산할 수 있다.
본원에 사용된, 용어 "신생항원"은 하나 이상의 종양-특이적 돌연변이로부터 및/또는 종양을 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제(예를 들어, 단독으로 및/또는 ADC 또는 조성물의 일부로서, 본원에 개시된 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 중 임의의 하나 이상)에 노출시키는 것으로부터 발생하는 면역 시스템이 이전에 노출되지 않았던 임의의 항원을 지칭한다. 종양-특이적 돌연변이는 미스센스 돌연변이, 프레임시프트, 전좌, 및 mRNA 스플라이싱 변이체뿐만 아니라, 인산화 및 글리코실화와 같은, 번역 후 프로세싱에 영향을 미치는 돌연변이를 포함할 수 있다. 다양한 구현예에서, 이들 예시적인 돌연변이는 비-동의 코딩 변화 및/또는 mRNA 프로세싱(예를 들어, 스플라이싱)을 변경하는 돌연변이로부터 유래될 수 있다. 다양한 구현예에서, 이들 예시적 돌연변이의 모두는 적절한 T-세포 수용체에 의해 식별될 수 있는 분자 변화를 초래할 수 있다. 다양한 구현예에서, 예시적인 신생항원은, 단독으로 및/또는 ADC 또는 조성물의 일부로서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제의 전달에 의해 유도되는 신생항원이다. 다양한 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제(예를 들어, 본원에 개시된 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 중 임의의 하나 이상)의 전달은 면역 시스템이 이전에 노출되지 않았던 하나 이상의 신규 펩티드 도메인을 함유하는 단백질의 번역을 초래하는 신규 mRNA 스플라이싱을 유도할 수 있다. 다양한 구현예에서, 종양-특이적 돌연변이는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물의 전달 또는 투여에 기인한 mRNA 스플라이싱 변이체일 수 있다.
이론에 얽매이지 않고, 다양한 구현예에서, 단독으로 및 ADC 또는 조성물의 일부로서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제의 전달은 다양한 유전자의 오픈 리딩 프레임 및/또는 코딩 서열의 변경을 초래하는 신규한 mRNA 스플라이싱(예를 들어, 엑손 스키핑, 인트론 보유)을 유도할 수 있다. 다양한 구현예에서, 이들 변경된 유전자는 면역 시스템에 의해 외래로 인식되는 하나 이상의 신규 펩티드 도메인을 함유하는 단백질로 번역된다. 다양한 구현예에서, 하나 이상의 신규 펩티드 도메인은 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 처리의 부재 하에서 단백질 또는 인간 프로테옴의 임의의 다른 부분에 존재하지 않는다. 다양한 구현예에서, 하나 이상의 신규 펩티드 도메인을 함유하는 단백질은, 예를 들어 MHC 제시를 통해, 면역 펩티드 제시 기구에 대한 기질로 작용하는 신규 펩티드 단편을 생성하기 위해 프로테아좀에 의해 분해될 수 있다. 다양한 구현예에서, 신생항원에 해당하는 신규 펩티드 단편은 예를 들어 종양 세포 상의 MHC1-결합 펩티돔에 제시될 수 있다.
다양한 구현예에서, 단독으로 및 ADC 또는 조성물의 일부로서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제의 전달은 하나 이상의 종양 세포-고유한 사건(예를 들어, 세포 성장 정지)으로 이어질 수 있다. 다양한 구현예에서, 종양 세포-고유한 사건(들)은 (1) 식세포 관계맺음(engagement) 향상(Bracci et al.(2014) Cell Death Differ. 21(1): 15-25); (2) 종양 배출 림프절로 신규 펩티드 단편 수송하여 항원-제시 세포와 관계 맺음; (3) 항원-제시 세포가 식세포된 종양 세포 유래의 신규 펩티드 단편을 처리하고 순환하는 미접촉 T-세포 집단에 대해 신생항원으로서 단편을 제시; (4) 단편을 신생항원으로 인식하는 수용체를 발현하는 T-세포와 신규 펩티드 단편이 상호 작용; (5) 이펙터 T-세포 반응(예를 들어, CD4+ 및/또는 CD8+ T-세포의 성숙 및 활성화); 및/또는 (6) 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 치료에 노출되고 그의 표면 MHC1 복합체 상에 신생항원에 해당하는 신규 펩티드 단편을 제시하는 추가 종양 세포와 T-세포의 관계맺음으로 이어질 수 있다. 다양한 구현예에서, 종양 세포-고유한 사건(들)은 이펙터 기능의 T-세포 관계 맺음 및/또는 신생항원-제시 종양 세포의 살해를, 직접 또는 간접적으로, 초래할 수 있다.
또한, 이론에 얽매이지 않고, 다양한 구현예에서, 단독으로 및 ADC 또는 조성물의 일부로서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제의 전달은 인트론-상주 내인성 레트로바이러스의 재-발현을 유발하여, 이중-가닥 RNA 면역 반응으로 이어질 수 있다.
또한, 이론에 얽매이지 않고, 다양한 구현예에서, 단독으로 및 ADC 또는 조성물의 일부로서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제의 전달은 돌연변이로-유래된 신생항원의 스플라이스 조절제-유도된 방출에 의해 유발되는 면역원성 세포 사멸로 이어질 수 있다. 다양한 구현예에서, 단독으로 및 ADC 또는 조성물의 일부로서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제의 전달은 이중-가닥 RNA 면역 반응을 유도할 수 있다. 다양한 구현예에서, 이중-가닥 RNA 면역 반응은 인트론-상주 내인성 레트로바이러스의 재-발현으로부터 기인할 수 있다. 다양한 구현예에서, 이중-가닥 RNA 면역 반응은 종양 세포 사멸을 초래할 수 있다. 다양한 구현예에서, 단독으로 및 ADC 또는 조성물의 일부로서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제의 전달은 면역원성 세포 사멸을 유도할 수 있다. 다양한 구현예에서, 면역원성 세포 사멸은 돌연변이로-유래된 신생항원의 방출 및/또는 종양 세포에 대한 숙주 면역 반응으로부터 기인할 수 있다.
따라서, 다양한 구현예에서, 하나 이상의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및/또는 ADC 및/또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물, 예를 들어 본원에 개시된 임의의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물을 투여함으로써 신생항원을 유도하는 것을 포함하는 치료 방법이 개시된다. 다양한 구현예에서, 방법은 신생항원의 유도 없이 필요로 할 것보다 감소된 투여량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 신생항원을 생산하고 면역 반응을 유도(예를 들어, 미접촉 T-세포를 기억 세포로 전환)하기 위한 하나 이상의 초기 유도 용량 투여 후, 투여량 또는 투여 빈도 감소(즉, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물과 신생항원의 면역 표적화의 결합 효과 때문에)를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료는 신생항원-기반 면역 반응을 유도하기 위한 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 투여와 적어도 하나의 추가 요법(예를 들어, 제2 항암 요법)의 조합을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 치료는 신생항원-기반 면역 반응을 유도하기 위한 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 투여와 하나 이상의 체크포인트 저해제의 조합을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 치료는 신생항원-기반 면역 반응을 유도하기 위한 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 투여와 하나 이상의 사이토카인 또는 사이토카인 유사체의 조합을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 치료는 신생항원-기반 면역 반응을 유도하기 위한 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 투여와 하나 이상의 신생항원 백신의 조합을 포함할 수 있다. 일부 다른 구현예에서, 치료는 신생항원-기반 면역 반응을 유도하기 위한 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 투여와 하나 이상의 조작된 종양-표적화 T-세포(예를 들어, CAR-T)의 조합을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 신생항원이 사용되어 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물을 사용하는 치료의 효과를 모니터링할 수 있다. 예를 들어, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 투여 후, 환자 샘플(예를 들어, 종양 생검)이 수득되고 신생항원 또는 면역 또는 염증 반응의 식별자에 대해 스크리닝될 수 있다. 신생항원 및/또는 면역 반응이 검출되는 경우, 추가 치료가, 예를 들어 감소된 투여량으로 제공될 수 있다.
다양한 구현예에서, 하나 이상의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및/또는 ADC 및/또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물, 예를 들어 본원에 개시된 임의의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물을 투여함으로써 이중-가닥 RNA 면역 반응을 유도하는 것을 포함하는 치료 방법이 개시된다.
다양한 구현예에서, 하나 이상의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및/또는 ADC 및/또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물, 예를 들어 본원에 개시된 임의의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물을 투여함으로써 면역원성 세포 사멸을 유도하는 것을 포함하는 치료 방법이 개시된다.
다양한 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 포함하는 조성물의 투여는 임의의 알려진 항암 요법과 조합될 수 있다. 종양 치료에 사용 가능한 현재의 면역 활성화 전략의 예로는 면역 체크포인트 저해제(ICI) 분자를 사용하는 치료, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체를 사용하는 치료, 종양-관련 백신을 이용하는 백신 접종, 및 종양-표적화 T 세포 조작(예를 들어, 종양-침윤 림프구 또는 CAR-T의 확장)이 포함되나, 이에 한정되지 않는다. 이들 기술은 대부분 이미 존재하는 종양 항원(돌연변이 또는 세포-표면 단백질의 비정상적 발현)에 대한 면역 반응을 향상시키거나 유도하는 데 초점이 맞춰져 있다. 이들 전략 중 하나 이상은 항원성 T 세포 반응을 유도할 수 있는 하나 이상의 돌연변이를 수반할 수 있다. 예를 들어, 체크포인트 저해에 대한 환자의 반응은 비-동의 돌연변이 부담(non-synonymous mutational burden)과 상관 관계 있을 수 있다. 추가로, 기존 돌연변이 및 이들 돌연변이의 항원성에 따라 달라지는 암 백신 접근이 사용될 수 있다.
헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및/또는 이러한 조절제를 포함하는 ADC는 다수의 계통에서 발생하는 트랜스크립톰에서의 광범위한 변화를 유도할 수 있다. 이들 mRNA 변화의 번역은 다수의 HLA 동형(isotype)에 걸쳐 높은 친화성을 갖는 MHC1-결합 신생펩티드를 생산하는 강력하고 재생산 가능한 단백질 변화를 생산할 수 있다. 이론에 얽매이지 않고, 트랜스크립톰 및 프로테옴에 대한 다수의 변화로 인해, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및/또는 ADC를 사용하는 치료는 향상된 후천적 면역 반응 관계맺음을 위해 잠재적으로 반응성인 신생항원의 수를 강화할 수 있다.
본원에 기재된, 용어 "헤르복시디엔 스플라이싱 조절제," "스플라이싱 조절제," "스플라이세오솜 조절제," 또는 "스플라이스 조절제"는 스플라이세오솜의 성분과 상호 작용함으로써 항암 활성을 갖는 화합물을 지칭한다. 일부 구현예에서, 스플라이싱 조절제는 표적 세포에서 스플라이싱의 속도 또는 형태를 변경한다. 예를 들어, 저해제로 기능하는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 제어되지 않은 세포 증식을 감소시킬 수 있다. 구체적으로, 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 SF3b 스플라이세오솜 복합체를 저해함으로써 작용할 수 있다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 본원에 개시된 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 독립형 제제로서 사용되고, 세포로 전달되고/되거나, 대상체에게 투여된다. 일부 다른 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 ADC(예를 들어, 본원에 개시된 예시적인 ADC 중 임의의 것으로부터 선택되는 ADC)의 일부로서 사용되고, 세포로 전달되고/되거나, 대상체에게 투여된다. 일부 다른 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 다수 카피 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 보유하는 ADC 다수 카피를 포함하는 조성물의 일부로서 사용되고, 세포로 전달되고/되거나, 대상체에게 투여된다. 이러한 조성물이 본원에 개시되어 있다.
일부 구현예에서, ADC(예를 들어, 본원에 개시된 예시적인 ADC 중 임의의 것으로부터 선택되는 ADC)의 일부로서 사용, 세포로 전달, 및/또는 대상체에게 투여되는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 독립형 제제로서 사용, 세포로 전달, 및/또는 대상체에게 투여되는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 대비 추가된 치료적 이점을 제공한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, ADC의 일부로서 사용, 세포로 전달, 및/또는 대상체에게 투여되는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 표적 항원(즉, ADC의 항체 모이어티에 의해 표적화되는 항원)을 발현하는 신생물 세포로 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제의 표적화된 전달을 제공한다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제의 이러한 표적화된 전달은 오프-타겟 치료 및/또는 오프-타겟 세포 독성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 이러한 표적화된 전달은 신생물 세포 상에서 종양-선택적 신생항원 제시를 촉진하지만, 표적 항원을 발현하지 않는 건강한 세포 상에서는 그렇지 않다. 일부 구현예에서, 이러한 표적화된 전달은 오프-타겟 세포보다는 표적화된 신생물 세포에서, 예를 들어, 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 99%의, 선택적 스플라이싱 및 신규 mRNA 및 신생항원에 해당하는 MHC-연관 펩티드 유도로 이어진다. 따라서, 이론에 얽매이지 않고, 일부 구현예에서, 본원에 개시된 ADC를 사용하는 치료 후 종양 세포 상에서의 신생항원의 우선적 발현으로 인하여, 이펙터 T-세포 프라이밍 및/또는 확장(예를 들어, 신생항원 백신 사용) 후, 면역 시스템은 건강한 세포보다는 신생항원-제시 신생물 세포를 우선적으로 공격할 수 있다.
면역 유도 및 치료 요법:
다양한 구현예에서, 본 개시는 신생물 세포를 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제-기반 항체-약물 접합체(ADC), 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물과 접촉시킴으로써 적어도 하나의 신생항원을 유도하는 방법을 제공한다. 다양한 구현예에서, 본 개시는 신생물 세포를 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제-기반 항체-약물 접합체(ADC), 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물과 접촉시킴으로써 이중-가닥 RNA 면역 반응을 유도하는 방법을 제공한다. 다양한 구현예에서, 본 개시는 신생물 세포를 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제-기반 항체-약물 접합체(ADC), 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물과 접촉시킴으로써 면역원성 세포 사멸을 유도하는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 신생물 세포는 시험관내 세포 배양물에 존재한다. 일부 구현예에서, 신생물 세포는 대상체로부터 수득된다. 일부 구현예에서, 신생물 세포는 대상체 내에 존재한다. 일부 구현예에서, 신생물 세포는 혈액 악성 종양 또는 고형 종양으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 혈액 악성 종양은 B-세포 악성 종양, 백혈병, 림프종, 및 골수종으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 혈액 악성 종양은 급성 골수성 백혈병 및 다발성 골수종으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 유방암(예를 들어, HER2-양성 유방암), 위암(예를 들어, 위 선암종), 전립선암, 난소암, 폐암(예를 들어, 폐 선암종), 자궁암(예를 들어, 자궁 장액 자궁 내막 암종), 타액 관 암종, 흑색종, 결장암, 자궁 경부암, 췌장암, 신장암, 결장직장암, 및 식도암으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 HER2-양성 유방암, 위 선암종, 전립선암, 및 골육종으로부터 선택된다.
다양한 구현예에서, 본 개시는 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물을 대상체에게 투여함으로써 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체에서 적어도 하나의 신생항원 및/또는 T-세포 반응을 유도하는 방법을 추가로 제공한다. 또한, 다양한 구현예에서, 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물을 대상체에게 투여함으로써 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 적어도 하나의 신생항원 및/또는 T-세포 반응을 유도한다.
다양한 다른 구현예에서, 본 개시는 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물을 대상체에게 투여함으로써 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체에서 이중-가닥 RNA 면역 반응을 유도하는 방법을 제공한다. 또한, 다양한 구현예에서, 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물을 대상체에게 투여함으로써 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 이중-가닥 RNA 면역 반응을 유도한다.
또 다른 구현예에서, 본 개시는 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물을 대상체에게 투여함으로써 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체에서 면역원성 세포 사멸을 유도하는 방법을 제공한다. 추가로, 다양한 구현예에서, 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물을 대상체에게 투여함으로써 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법이 본원에서 제공되며, 여기서 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 면역원성 세포 사멸을 유도한다.
일부 구현예에서, 본 개시는 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물을 대상체에게 투여함으로써 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 추가로 제공하며, 여기서, 제2 제제를 포함하는 하나 이상의 추가 요법과 조합하여, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 면역원성 세포 사멸을 유도한다.
본원에 기재된 치료 방법의 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 조성물, 또는 제2 제제의 표준 투여량과 비교하여, 투여되는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 조성물, 또는 제2 제제의 양은, 적어도 하나의 신생항원 및/또는 T-세포 반응의 유도로 인해 감소된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 조성물, 또는 제2 제제의 투여되는 양은, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 조성물, 또는 제2 제제의 표준 투여량과 비교하여, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90%만큼 감소된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 조성물, 또는 제2 제제는, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 조성물, 또는 제2 제제의 표준 투약 요법과 비교하여, 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90% 덜 빈번하게 투여된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 조성물, 또는 제2 제제의 투여되는 양 및/또는 투여량은 더 낮은 전신 독성 및/또는 개선된 내약성을 초래한다.
본원에 사용된, 용어 "표준 투여량" 또는 "표준 투약 요법"은 치료제에 대한 임의의 통상적이거나 일상적인 투약 요법, 예를 들어 제조사에 의해 제안되거나, 규제 당국에 의해 승인되거나, 달리 평균 환자의 요구를 충족시키기 위해 인간 대상체에서 테스트된 요법을 지칭한다. 일부 구현예에서, 치료제는 항암 활성을 갖는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체, 또는 항체-약물 접합체이다.
예를 들어, 본원에 개시된 예시적인 항-HER2 항체인, 트라스투주맙에 대한 표준 투약 요법은 8 mg/kg이 90분에 걸쳐 정맥내로 투여(1주차)된 후 (4주차부터 치료법 주기의 종료까지) 3주마다 6 mg/kg이 30 내지 90분에 걸쳐 정맥내로 투여되는 것일 수 있다(허셉틴(Herceptin)®(트라스투주맙) FDA 라벨 증보판, 2017).
또 다른 예로서, 예시적인 항-CTLA4 체크포인트 저해제 항체인, 이필리무맙에 대한 표준 투약 요법은 4회 용량에 대해 3주마다 90분에 걸쳐 3 mg/kg이 정맥내로 투여되는 것일 수 있다(여르보이(Yervoy)®(이필리무맙) FDA 라벨 증보판, 2018). 이필리무맙에 대한 또 다른 표준 투약 요법은 4회 용량에 대해 3주마다 90분에 걸쳐 10 mg/kg이 정맥내로 투여된 후, 최대 3년 동안 12주마다 10 mg/kg이 투여되는 것일 수 있다(여르보이®(이필리무맙) FDA 라벨 증보판, 2018).
또 다른 예로서, 예시적인 항-PD1 체크포인트 저해제 항체인, 니볼루맙에 대한 표준 투약 요법은 2주마다 60분에 걸쳐 3 mg/kg이 정맥내로 투여되는 것일 수 있다(옵디보(Opdivo)®(니볼루맙) FDA 라벨, 2015).
또 다른 예로서, 예시적인 항-PDL1 체크포인트 저해제 항체인, 아테졸리주맙에 대한 표준 투약 요법은 3주마다 60분에 걸쳐 1200 mg이 정맥내로 투여되는 것일 수 있다(테센트리크(Tecentriq)®(아테졸리주맙) FDA 라벨 증보판, 2018).
또한 또 다른 예로서, 예시적인 항-HER2 항체-약물 접합체인, T-DM1에 대한 표준 투약 요법은 3주마다 90분에 걸쳐 3.6 mg/kg이 정맥내로 투여되는 것일 수 있다(카드실라(Kadcyla)®(T-DM1) FDA 라벨 증보판, 2016).
일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법은 적어도 하나의 추가 요법(예를 들어, 체크포인트 저해제, 신생항원 백신, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체, CAR-T 등)을 투여하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 조성물, 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 표준 투여량과 비교하여, 투여되는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 조성물, 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 양은, 적어도 하나의 신생항원 및/또는 T-세포 반응의 유도로 인해 감소된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 조성물, 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 표준 투여량과 비교하여, 투여되는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 조성물, 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 양은 이중-가닥 RNA 면역 반응의 유도로 인해 감소된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 조성물, 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 표준 투여량과 비교하여, 투여되는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 조성물, 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 양은 면역원성 세포 사멸의 유도로 인해 감소된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 조성물, 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 투여되는 양은, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 조성물, 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 표준 투여량과 비교하여, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90%만큼 감소된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 조성물, 및/또는 적어도 하나의 추가 요법은, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 조성물, 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 표준 투약 요법과 비교하여, 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90% 덜 빈번하게 투여된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 조성물, 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 투여되는 양 및/또는 투여량은 더 낮은 전신 독성 및/또는 개선된 내약성을 초래한다.
일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 적어도 하나의 추가 요법의 투여 전에 개시된다. 다른 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 적어도 하나의 추가 요법의 투여 후에 개시된다. 또 다른 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 적어도 하나의 추가 요법의 투여와 동시에 개시된다.
일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 초기 투여 후 적어도 1회 반복된다. 일부 구현예에서, 반복되는 투여에 사용되는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 양은 초기 투여에 사용되는 양에 비해 감소된다. 일부 구현예에서, 반복되는 투여에 사용되는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 양은 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 표준 투여량과 비교하여 감소된다. 일부 구현예에서, 반복되는 투여에 사용되는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 양은, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 표준 투여량 또는 초기 투여량과 비교하여, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90%만큼 감소된다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 추가 요법의 투여는 초기 투여 후 적어도 1회 반복된다. 일부 구현예에서, 반복되는 투여에 사용되는 적어도 하나의 추가 요법의 양은 초기 투여에 사용되는 양과 비교하여 감소된다. 일부 구현예에서, 반복되는 투여에 사용되는 적어도 하나의 추가 요법의 양은 적어도 하나의 추가 요법의 표준 투여량과 비교하여 감소된다. 일부 구현예에서, 반복되는 투여에 사용되는 적어도 하나의 추가 요법의 양은, 적어도 하나의 추가 요법의 표준 투여량 또는 초기 투여량과 비교하여, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90%만큼 감소된다.
일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 반복되는 투여는 적어도 하나의 추가 요법의 반복되는 투여와 동시에 이루어진다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 적어도 하나의 추가 요법의 반복되는 투여와 순차적이거나 시차를 둔다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 추가 요법은 체크포인트 저해제, 예를 들어 본원에 개시된 임의의 체크포인트 저해제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우의 체크포인트 저해제에 대해 불내성, 비-반응성, 또는 저 반응성이다. 일부 구현예에서, 체크포인트 저해제는 PD1/PDL1, CTLA4, OX40, CD40, LAG3, TIM3, GITR, 및/또는 KIR에 표적화된다. 일부 구현예에서, 체크포인트 저해제는 CTLA4, OX40, CD40, 및/또는 GITR에 표적화된다. 일부 구현예에서, 체크포인트 저해제는 그의 표적에 대한 저해 또는 작용제 활성을 갖는 항체이다. 일부 구현예에서, 체크포인트 저해제는 저해 항체 또는 다른 유사한 저해 분자를 사용하여 표적화된다. 다른 구현예에서, 체크포인트 저해제는 작용제 항체 또는 다른 유사한 작용제 분자를 사용하여 표적화된다.
일부 다른 구현예에서, 적어도 하나의 추가 요법은 신생항원 백신, 예를 들어 본원에 개시된 임의의 신생항원 백신을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물은 신생항원 백신의 투여 전에 투여된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물은 신생항원 백신 투여 후 투여된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물은 신생항원 백신의 투여와 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 투여는 초기 투여 후 적어도 1회 반복된다. 일부 구현예에서, 반복되는 투여에 사용되는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 양은 초기 투여에 사용되는 양과 비교하여 감소된다.
일부 구현예에서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 길이가 약 10 내지 약 50개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 길이가 약 10 내지 약 35개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 길이가 약 15 내지 약 25개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 하나 또는 하나 초과의 신생항원 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 신생항원 서열 및/또는 항원성 부분은 길이가 약 10 내지 약 50개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 길이가 약 10 내지 약 35개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열 및/또는 항원성 부분은 길이가 약 15 내지 약 25개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열 및/또는 항원성 부분은 길이가 약 10 내지 약 20개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열 및/또는 항원성 부분은 정준 펩티드 서열(예를 들어, 표 8에 밑줄 표시된 예시적 정준 펩티드 서열 중 임의의 것)에 전적으로 중첩되지 않거나 이로 구성되지 않는다.
본원에 사용된, 용어 신생항원 서열의 "항원성 부분" 또는 "항원성 단편"은 T-세포 반응(예를 들어, 이펙터 T-세포 집단(들)의 항원-특이적 확장 및/또는 성숙)을 유도하는 능력을 보유하는 신생항원 서열의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 일부 구현예에서, 항원성 부분은 또한 항원-제시 세포(예를 들어, 수지상 세포)에 의해 내입, 처리, 및/또는 제시되는 능력을 보유할 수 있다. 일부 구현예에서, 항원성 부분은 또한 T-세포 프라이밍 기능을 보유한다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열의 항원성 부분은 길이가 약 10 내지 약 50개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열의 항원성 부분은 길이가 약 10 내지 약 35개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열의 항원성 부분은 길이가 약 15 내지 약 25개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열의 항원성 부분은 길이가 약 10 내지 약 20개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열의 항원성 부분(예를 들어, SEQ ID NO: 66 내지 93 중 임의의 하나의 항원성 부분), 또는 이의 인코딩 mRNA는 신생항원 백신으로 제형화된다.
항원성 부분의 예시적 구현예는 SEQ ID NO: 66의 아미노산 45-53 옆에 있는 영역(들)이다. 항원성 부분의 또 다른 예시적 구현예는 SEQ ID NO: 66의 아미노산 82-90 옆에 있는 영역(들)이다. 일부 구현예에서, 항원성 부분은 대상체에서 발현된 적어도 하나의 HLA 대립 유전자(예를 들어, HLA-A * 02:01)에 결합할 수 있다. 일부 다른 구현예에서, 항원성 부분은 신생물성 장애를 앓는 대상체 집단에서 대상체의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 또는 적어도 45%에서 발현되는 적어도 하나의 HLA 대립 유전자에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 항원성 부분은 신생물성 장애를 앓는 대상체 집단의 적어도 1%, 적어도 5%, 또는 적어도 10%에 존재하는 종양에 대해 T-세포 반응을 끌어낼 수 있다.
일부 구현예에서, 항원성 부분은 정준 펩티드 서열에 전적으로 중첩되지 않거나 이로 구성되지 않는다. 본원에 사용된, 용어 "정준 펩티드 서열"은 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제와의 접촉 부재 하에(예를 들어, 단독으로 및/또는 ADC 또는 조성물의 일부로서 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제와의 접촉 부재 하에) 인간 프로테옴에 존재하고/하거나, 면역이 이전에 노출되었던 임의의 인접 펩티드 서열을 지칭한다. 일부 구현예에서, 정준 펩티드 서열은 정준 전사체 오픈 리딩 프레임으로부터 유래되고/되거나 이에 의해 인코딩된다. 예시적인 정준 펩티드 서열은 표 8에 밑줄 표시되어 있다.
일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제가 투여되는 경우(예를 들어, 단독으로 및/또는 ADC 또는 조성물의 일부로서), 정준 펩티드 서열은 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 의해 유도된 비정상 스플라이싱 사건의 앞에 있는 바로 5'의 인-프레임24개 뉴클레오티드로부터 유래되고/되거나 이에 의해 인코딩될 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 정준 펩티드 서열은 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 의해 유도된 신생항원 서열에 대해 바로 N-말단의 8개 아미노산을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 구현예에서, 5' 엑손 서열이 코돈의 끝 뉴클레오티드로 종결되는 경우, 정준 펩티드 서열은 엑손의 끝에서 종결된다. 일부 다른 구현예에서, 5' 엑손 서열이 코돈의 3개 뉴클레오티드 중 1개 또는 2개로 종결되는 경우, 정준 펩티드 서열은 불완전 코돈의 앞에 있는 24개 뉴클레오티드로부터 유래되고/되거나 이에 의해 인코딩된다. 일부 구현예에서, 비정상적 스플라이싱 사건의 3'의 mRNA 서열은 정지 코돈에 도달할 때까지 5' 엑손으로부터 유래된 동일한 오픈 리딩 프레임에서 번역될 수 있으며, 이에 번역이 종결될 수 있다. 일부 구현예에서, 비정상적 스플라이싱 사건(예를 들어, 엑손 스키핑)이 정준 전사체 오픈 리딩 프레임의 보존을 초래하는 경우, C-말단 서열은, 8개의 C-말단 아미노산을 인코딩하는, 추가 24개 뉴클레오티드에 대해 번역될 수 있다. 이 맥락에서, 일부 구현예에서, 비정상 엑손 이음부를 가로지르는 영역 만이 신생항원 서열을 인코딩할 수 있다. 일부 구현예에서, 오픈 리딩 프레임이 시프트되는 경우(예를 들어, 인트론 보유), (3' mRNA에 의해 인코딩되는) 완전한 C-말단 서열은 신생항원 서열을 인코딩할 수 있다.
일부 구현예에서, 신생항원 서열의 항원성 부분은 신생항원 서열을 정준 펩티드 서열과 비교하는 것; 및 정준 펩티드 서열에 전적으로 중첩되지 않거나, 이로 구성되지 않고/거나, 이와 정렬되지 않는 신생항원 서열의 일부를 선택하는 것에 의해 선택된다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열의 항원성 부분은 전장 신생항원 서열(예를 들어, 항원성 부분이 유래된 신생항원 서열)과 동일한 방식으로 항원성 및/또는 T-세포 프라이밍 기능에 대해 스크리닝될 수 있다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열의 항원성 부분은, 본원에 기재된 예시적인 T-세포 프라이밍 실험과 같은, T-세포 프라이밍 분석을 사용하여 항원성 및/또는 T-세포 프라이밍 기능에 대해 평가된다.
일부 구현예에서, 신생항원 서열은 대상체에 특이적인 신생항원 서열이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열은 대상체에 대해 개인화된 신생항원 백신이다. 일부 구현예에서, 대상체에 대해 개인화된 신생항원 백신을 생성하기 위해 사용되는 신생항원 서열은 대상체에서 발현되는 적어도 하나의 HLA 대립 유전자에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 개인화된 신생항원 백신은, 예를 들어 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC의 투여 후, 대상체의 종양에서 발현되는 신생항원을 확인하는 것, 및 환자의 종양에서 관찰된 신생항원 서열을 포함하는 백신을 선택하는 것에 의해 선택된다.
신생항원 백신을 기술하기 위해 사용되는 경우 용어 "개인화"는 환자에서 생산된 하나 이상의 신생항원, 바람직하게는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물에의 노출 후 환자에서 확인된 것을 확인하는 것, 및 그 후 동일한 환자에 대한 백신의 기초로서 이러한 신생항원 중 하나 이상을 사용하는 것에 의해 생성되는 백신을 지칭한다. 따라서, 일부 구현예에서, 환자에게 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물이 제공되고 치료에 의해 생산되는 신생항원에 대해 스크리닝된다. 일부 구현예에서, 선택된 신생항원 백신은 본원에 개시되고 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물에의 노출 후 환자에서 존재하는 것으로 확인되는 신생항원 펩티드 또는 mRNA를 포함한다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 및/또는 펩티드 또는 mRNA 백신은 환자에게 1회 또는 반복적으로 투여될 수 있다. 이어서, 일부 구현예에서, 이들 신생항원 중 하나 이상이 사용되어 환자에게 제공되는 개인화된 백신을 생성한다. 일부 구현예에서, 개인화된 백신을 생성하는 데 사용되는 하나 이상의 신생항원은 하나 이상의 환자-특이적 HLA 대립 유전자에 대한 결합 친화성을 보유한다. 일부 구현예에서, 환자는 하나 이상의 신생항원에 결합하는 하나 이상의 MHC1 대립 유전자를 발현한다. 주어진 신생항원이 특정 MHC1 대립 유전자에 결합할지 여부에 대한 예측은 당업계에 알려진 임의의 계산 예측 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 예시적인 계산 예측 방법은 예를 들어 문헌[Meydan et al.(2013) BMC Bioinformatics 14(Suppl. 2): S13]에 개시되어 있으며, 이는 이러한 방법에 대한 참조로서 본원에 포함된다.
일부 다른 구현예에서, 신생항원 서열은 범용 신생항원 서열이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열은 범용 신생항원 백신이다.
신생항원 백신을 기술하는 데 사용되는 경우 용어 "범용"은, 바람직하게는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물에의 노출 후, 다수의 환자 및/또는 환자 조직 샘플에서 생산된 신생항원을 시퀀싱함으로써 관찰되는 공통의 또는 알려진 신생항원(들)을 기반으로 하는 펩티드 또는 mRNA 서열을 갖는 백신을 지칭한다. 백신에 사용되는 펩티드 또는 mRNA 서열은 모든 환자에 존재할 필요는 없으나 적어도 여러 환자 또는 환자 조직 샘플에서 관찰될 필요가 있다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 및/또는 펩티드 또는 mRNA 백신은 환자에게 1회 또는 반복적으로 투여될 수 있다. 이어서, 일부 구현예에서, 그 펩티드 또는 mRNA 서열은 추가 환자를 백신 접종하기 위해 사용된다. 일부 구현예에서, 환자에게 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물이 제공된 후, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물에 의해 생산된 신생항원에 대한 면역 반응을 향상시키기 위해 알려진 신생항원의 펩티드 또는 mRNA 백신이 제공된다. 일부 구현예에서, 환자에게 범용 펩티드 또는 mRNA 백신이 제공된 후 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물이 1회 또는 반복적으로 제공된다. 일부 구현예에서, 범용 신생항원 백신을 생성하기 위해 사용되는 신생항원 서열(또는 서열들)은 주어진 환자 집단에서 전체 MHC1 대립 유전자 빈도를 기반으로 선택된다(Maiers et al.(2007) Hum. Immunol. 68(9): 779-88).
일부 구현예에서, 신생항원(예를 들어, 범용 신생항원) 서열은 신생물성 장애를 앓는 대상체 집단에서 대상체의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 또는 적어도 45%에서 발현되는 적어도 하나의 HLA 대립 유전자에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열은 신생물성 장애를 앓는 대상체 집단의 적어도 1%, 적어도 5%, 또는 적어도 10%에 존재하는 종양에 대해 T-세포 반응을 끌어낼 수 있다.
일부 구현예에서, 신생항원 서열은 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물을 투여함으로써 대상체에서 유도되는 적어도 하나의 신생항원 펩티드, 또는 이의 인코딩 mRNA를 시퀀싱함으로써 확인되었다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 신생물 세포를 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물과 접촉시킴으로써 유도되는 신생항원 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 신생물 세포는 시험관내 세포 배양물에 존재한다. 일부 구현예에서, 신생물 세포는 대상체로부터 수득된다. 일부 구현예에서, 신생물 세포는 대상체 내에 존재한다.
일부 구현예에서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 담체(예를 들어, 본원에 기재된 예시적인 담체 중 임의의 것)를 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 약학적으로 허용되는 담체에 연결된다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용되는 담체는 펩티드, 혈청 알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌, 면역글로불린, 티로글로불린, 난백알부민, 변성 독소 또는 약화된 변성 독소 유도체, 사이토카인, 및 케모카인으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 담체는 링커를 통해 공유 결합으로 부착된다. 일부 구현예에서, 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 담체는 융합 단백질로서 발현된다. 일부 구현예에서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 희석제를 포함한다. 일부 구현예에서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 애주번트를 포함한다.
일부 구현예에서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 mRNA를 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 mRNA는 하나 또는 하나 초과의 신생항원 서열을 인코딩한다.
일부 구현예에서, 신생항원 서열은 대상체에 특이적인 신생항원 서열이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열은 대상체에 대해 개인화된 신생항원 백신이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열은 대상체에서 발현되는 적어도 하나의 HLA 대립 유전자에 결합할 수 있다.
일부 다른 구현예에서, 신생항원 서열은 범용 신생항원 서열이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열은 범용 신생항원 백신이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열은 신생물성 장애를 앓는 대상체 집단에서 대상체의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 또는 적어도 45%에서 발현되는 적어도 하나의 HLA 대립 유전자에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열은 신생물성 장애를 앓는 대상체 집단의 적어도 1%, 적어도 5%, 또는 적어도 10%에 존재하는 종양에 대한 T-세포 반응을 끌어낼 수 있다.
일부 구현예에서, 신생항원 서열은 적어도 하나의 신생항원의 단백질 서열을 시퀀싱함으로써 확인되었다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열은 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물을 투여함으로써 대상체에서 유도되는 신생항원을 인코딩하는 적어도 하나의 mRNA를 시퀀싱함으로써 확인되었다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 mRNA는 신생물 세포를 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물과 접촉시킴으로써 유도되는 신생항원 서열을 인코딩한다. 일부 구현예에서, 신생물 세포는 시험관내 세포 배양물에 존재한다. 일부 구현예에서, 신생물 세포는 대상체로부터 수득된다. 일부 구현예에서, 신생물 세포는 대상체 내에 존재한다.
일부 구현예에서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 mRNA 및 약학적으로 허용되는 담체(예를 들어, 본원에 기재된 예시적인 담체 중 임의의 것)를 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 mRNA는 약학적으로 허용되는 담체에 연결된다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용되는 담체는 펩티드, 혈청 알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌, 면역글로불린, 티로글로불린, 난백알부민, 변성 독소 또는 약화된 변성 독소 유도체, 사이토카인, 및 케모카인으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 mRNA 및 약학적으로 허용되는 희석제를 포함한다. 일부 구현예에서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 mRNA 및 약학적으로 허용되는 애주번트를 포함한다. 일부 구현예에서, 신생항원 mRNA는 캡슐화제에 의해 캡슐화된다. 일부 구현예에서, 캡슐화제는 리포솜이다. 일부 구현예에서, 캡슐화제는 나노입자이다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 추가 요법은 사이토카인 또는 사이토카인 유사체, 예를 들어 본원에 개시된 임의의 사이토카인 또는 사이토카인 유사체를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 단독으로 투여되는 경우 대상체는 사이토카인 또는 사이토카인 유사체에 대해 불내성, 비-반응성, 또는 저 반응성이다. 일부 구현예에서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체는 T-세포 인핸서를 포함한다. 일부 구현예에서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체는 IL-2, IL-10, IL-12, IL-15, IFNγ, 및/또는 TNFα를 포함한다. 일부 구현예에서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체는 IL-2, IL-10, IL-12, 및/또는 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체를 투여하는 것은 신생항원의 유도 및 제시로 인해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여 후 T-세포 프라이밍을 향상시킨다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 추가 요법은 조작된 종양-표적화 T-세포(즉, CAR-T), 예를 들어 본원에 개시된 임의의 CAR-T 요법을 투여하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법은 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여 후 대상체에서 하나 이상의 신생항원 및/또는 T-세포 반응을 검출하는 것, 및, 선택적으로, 하나 이상의 신생항원 및/또는 T-세포 반응이 검출되는 경우 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여를 계속하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체에서 하나 이상의 신생항원 및/또는 T-세포 반응을 검출하는 것은 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물을 사용하는 치료의 효능을 나타낸다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생항원 및/또는 T-세포 반응이 검출되는 경우, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물과 함께, 추가 요법을 사용하는 치료가 계속된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생항원 및/또는 T-세포 반응이 검출되는 경우 감소된 투여량 및/또는 빈도로 치료가 계속된다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법은 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여 후 대상체에서 이중-가닥 RNA 면역 반응을 검출하는 것, 및, 선택적으로, 이중-가닥 RNA 면역 반응이 검출되는 경우 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여를 계속하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체에서 이중-가닥 RNA 면역 반응을 검출하는 것은 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물을 사용하는 치료의 효능을 나타낸다. 일부 구현예에서, 이중-가닥 RNA 면역 반응이 검출되는 경우, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물과 함께, 추가 요법을 사용하는 치료가 계속된다. 일부 구현예에서, 이중-가닥 RNA 면역 반응이 검출되는 경우 감소된 투여량 및/또는 빈도로 치료가 계속된다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법은 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여 후 대상체에서 면역원성 세포 사멸을 검출하는 것, 및, 선택적으로, 면역원성 세포 사멸이 검출되는 경우 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여를 계속하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체에서 면역원성 세포 사멸을 검출하는 것은 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물을 사용하는 치료의 효능을 나타낸다. 일부 구현예에서, 면역원성 세포 사멸이 검출되는 경우, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물과 함께, 추가 요법을 사용하는 치료가 계속된다. 일부 구현예에서, 면역원성 세포 사멸이 검출되는 경우 감소된 투여량 및/또는 빈도로 치료가 계속된다.
일부 구현예에서, 대상체는 약 150개 이하의 돌연변이의 비동의 돌연변이 부담을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 100개 이하의 돌연변이의 비-동의 돌연변이 부담을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 50개 이하의 돌연변이의 비-동의 돌연변이 부담을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 신생물성 장애, 예를 들어 혈액 악성 종양 또는 고형 종양을 갖거나 갖는 것으로 의심된다. 일부 구현예에서, 혈액 악성 종양은 B-세포 악성 종양, 백혈병, 림프종, 및 골수종으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 혈액 악성 종양은 급성 골수성 백혈병 및 다발성 골수종으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 유방암, 위암, 전립선암, 난소암, 폐암, 자궁암, 타액 관 암종, 흑색종, 결장암, 자궁 경부암, 췌장암, 신장암, 결장직장암, 및 식도암으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 HER2-양성 유방암, 위 선암종, 전립선암, 및 골육종으로부터 선택된다.
다양한 구현예에서, 본 개시는 다음을 포함하는, 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 추가로 제공한다: (a) 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물을 대상체에게 투여하는 것으로서, 여기서 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 적어도 하나의 신생항원 및/또는 T-세포 반응을 유도하는 것; (b) 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여 후 대상체에서 하나 이상의 신생항원 및/또는 T-세포 반응을 검출하는 것; 및 (c) 하나 이상의 신생항원 및/또는 T-세포 반응이 검출되는 경우 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여를 계속하는 것. 일부 구현예에서, 대상체에서 하나 이상의 신생항원 및/또는 T-세포 반응을 검출하는 것은 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물을 사용하는 치료의 효능을 나타낸다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생항원은 SEQ ID NO: 37 내지 65 중 임의의 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생항원은 SEQ ID NO: 37의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생항원은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 신생항원은 SEQ ID NO: 46 내지 49 중 임의의 하나의 아미노산 서열을 포함한다.
헤르복시디엔 스플라이싱 조절제/ADC 및 면역 체크포인트 저해의 조합:
다양한 구현예에서, 본원에 기재된 암을 갖는 환자는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 및 체크포인트 저해제 요법의 조합을 사용하여 치료될 수 있다. 면역 체크포인트는 면역 반응을 늦추거나 중지시키고 면역 세포의 제어되지 않은 활성으로 인한 과도한 조직 손상을 방지하는 저해 경로이다. 본원에 사용된, 용어 "체크포인트 저해제"는 저해 경로 중 하나 이상을 저해함으로써, 보다 광범위한 면역 활성을 가능하게 하는, 임의의 소분자 화학 화합물, 항체, 핵산 분자, 또는 폴리펩티드, 또는 이의 임의의 단편을 포함하는, 임의의 치료제를 지칭하는 것으로 여겨진다.
면역 체크포인트 저해를 사용하는 환자의 치료는 일정 임상 적응증에서 강력한 효능을 갖는 것으로 나타났다. 최근, FDA는 조직 계통에 관계없이, 높은 미소부수체 불안정성을 나타내는 종양 환자에서의 체크포인트 저해제 사용을 승인하였다. 이 승인은, 부분적으로, 반응률이 돌연변이 부담과 양의 상관 관계가 있다는 관찰을 기반으로 하였다(Rizvi et al.(2015) Science 348(6230): 124-8; Hellmann et al.(2018) Cancer Cell 33(5)): 853-861). 문헌으로부터의 추정치는 절대 수 및 계통에 따라 다르지만, 약 150 내지 250개 돌연변이의 임계값을 초과하면, 반응 확률이 높아짐을 일반적으로 지지한다. TCGA 데이터의 분석은 성인-발병 종양 계통의 대부분이 비교적 낮은 비-동의 돌연변이 부담을 가짐을 나타낸다(Vogelstein et al.(2013) Science 339: 1549-58). 대부분의 계통은 환자 당 약 30 내지 80의 비-동의 돌연변이율 중간값을 가지며, 체크포인트 저해제에 대한 개선된 반응 확률을 위한 임계값보다 훨씬 낮다.
예를 들어, HER2-양성 유방암은 환자 샘플 당 존재하는 약 60개의 비-동의 돌연변이 중앙값을 갖는 것으로 나타났다. 그러나, 상기 언급된 바와 같이, 체크포인트 저해제 치료 효능을 위한 임계값은 약 150 내지 250개의 비-동의 돌연변이 범위에 있는 것으로 추정되며, 즉, 이 임계값을 초과하는 환자는 완전한 완화, 부분적 완화, 및/또는 안정된 질환을 나타낼 가능성이 더 높은 반면, 이 임계값 미만의 환자는 진행성 질환을 나타낼 가능성이 더 높다. 따라서 종양 세포 상에 존재하는 비-동의 돌연변이 및/또는 신생항원의 겉보기 수를 향상시키는 전략이 바람직하며, 예를 들어 체크포인트 저해제 요법에 대한, 전반적 반응 확률을 향상시킬 수 있다. 사이토카인(및 이의 유사체)이 유사한 작용 메커니즘을 통해 작용하기 때문에, 이러한 전략은 사이토카인-기반 요법에 대한 전반적 반응 확률 또한 향상시킬 수 있다.
HER2-양성 유방암에서의 현재 반응률은 약 15 내지 25%이다(CTI NCT02129556). 본원에 개시된 다양한 구현예에서, 체크포인트 저해제 및/또는 사이토카인 요법과 조합된 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물을 사용하는 치료는 이러한 반응률을 개선할 수 있다. 다양한 구현예에서, 체크포인트 저해제 및/또는 사이토카인 요법과 조합된 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물을 사용하는 치료는 임의의 성인-발병 종양, 구체적으로 비-동의 돌연변이율 중간값이 추정된 약 150개 돌연변이 임계값 미만인 것에 적용될 수 있다. 다양한 구현예에서, 단독으로 또는 추가 요법(예를 들어, 체크포인트 저해제 요법, 사이토카인 요법)과 조합하여, 본 개시의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물을 사용하는 치료에 적합한 예시적인 암 유형으로는 식도암, 비-호지킨 림프종, 결장직장암, 두경부암, 위암, 자궁내막암, 췌장 선암종, 난소암, 전립선암, 간세포암, 교모세포종, 유방암(예를 들어, HER2-양성 유방암), 폐암(예를 들어, 비-소세포 폐암), 만성 림프구성 백혈병, 및 급성 골수성 백혈병이 포함되나 이에 한정되지 않는다. 다른 예시적인 적합한 암 유형은 예를 들어 문헌[Vogelstein et al.(2013) Science 339: 1549-58]에 확인되어 있으며, 이는 그 전체가 본원에 참조로서 포함된다.
많은 체크포인트 저해제 요법이 종양-관련 항원의 만성적 발현을 기반으로 하므로, 정기적인 치료 부스트(boost)가 효능 및 반응성 T-세포 집단을 "재-부스트"하기 위해 요구된다. 본원에 기재된 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC-유래 신생항원의 유도성 본성은 신생항원-반응성 T-세포의 면역 반응을 향상시키는 한편, 종종 만성적 항원 자극에 의해 야기되는 T-세포 소진을 제한하도록 설계될 수 있는 치료적 투약 요법을 제공한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 초기 용량이 대상체에게 투여되어 비정상적 스플라이싱 및 신생항원 펩티드의 생산을 유발한다. 단백질 생산 및 항원 제시를 가능하게 하는 기간 후, 일부 구현예에서, 대상체는 이펙터 T-세포 프라이밍 및 확장을 부스트 및/또는 향상시키기 위해 체크포인트 저해제의 초기 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물과 체크포인트 저해제 용량 사이의 대기 기간은 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 또는 약 7일이다. 일부 구현예에서, 대기 기간은 약 3일 내지 약 5일이다. 일부 구현예에서, 체크포인트 저해제는 CTLA4, OX40, CD40, 및/또는 GITR로 표적화된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물과 체크포인트 저해제의 조합 치료 이점은 상가적(additive) 또는 초가산적(superadditive)일 수 있다.
일부 구현예에서, T-세포 프라이밍 및 확장을 가능하게 하는 기간 후, 대상체는 제2 또는 후속 용량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물로 투여되어 신생항원 펩티드의 재-제시를 유발한다. 일부 구현예에서, 체크포인트 저해제의 초기 용량과 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 제2 또는 후속 용량 사이의 대기 기간은 약 2, 약 3, 약 4, 또는 약 5주이다. 일부 구현예에서, 대기 기간은 약 3주이다. 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 제2 또는 후속 용량 후, 일부 구현예에서, 면역 시스템은 신생항원-제시 종양 세포와 관계를 맺고/거나 종양 세포 살해를 끌어낼 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 T-세포 프라이밍 및 확장을 가능하게 한 후, 대상체는 제2 또는 후속 용량의 체크포인트 저해제로 투여되어 기억 이펙터 T-세포 집단을 추가로 확장한다.
일부 구현예에서, 이 예시적인 초기 치료 요법을 따르는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 투약은 펄스성일 수 있고, 즉, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물이 연장된 간격(예를 들어, 약 4주 마다, 약 5주마다, 약 6주마다)에 투약되어 항원 제시, T-세포 관계맺음 및/또는 종양 세포 살해, 및/또는 기억 T-세포 집단의 회복을 가능하게 할 수 있다. 이후 시점에, 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 치료는 소진된 T-세포 집단에 대한 이펙터 기능성을 회복시키기 위해 표적화되는 하나 이상의 체크포인트 저해제와 조합될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 이후 시점에, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 치료는 PD1/PDL1, LAG3, 및/또는 TIM3에 표적화 되는 하나 이상의 체크포인트 저해제와 조합될 수 있다. 일부 구현예에서, 신생항원 제시 및 프라이밍의 펄스적 본성은 체크포인트 저해제 및/또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물이 덜 빈번하게 및/또는 더 낮은 용량으로 투여되도록 할 수 있다. 일부 구현예에서, 신생항원 제시의 펄스적 본성은, 예를 들어 체크포인트 저해제의 표준 투약 요법에서 종종 관찰되는 부작용의 잠재적 위험을 낮춤으로써, 동시의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 치료 없이 투여되는 경우의 체크포인트 저해제와 비교하여, 체크포인트 저해제(예를 들어, 이필리무맙과 같은 항-CTLA4 항체)에 대한 하나 이상의 치료 이점을 제공할 수 있다.
특정 구현예에서, 체크포인트 저해제는 세포 독성 T-림프구-관련 항원(CTLA4) 경로의 저해제이다. CD152로도 알려진, CTLA4는 면역 반응을 하향 조절하는 단백질 수용체이다. CTLA4는 조절 T-세포에서 구성적으로 발현되지만, 오직 활성화 후의 종래 T-세포에서 상향 조절된다. 본원에 사용된, 용어 "CTLA4 저해제"는 CTLA4 및/또는 CTLA4 경로의 임의의 저해제를 지칭하는 것으로 여겨진다. 예시적인 CTLA4 저해제는 항-CTLA4 항체를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 인간에서의 사용을 위한 CTLA4 차단 항체는 항-종양 면역의 마우스 모델에서 보이는 전-임상 활성을 기반으로 개발되었다. 예시적인 항-CTLA4 항체로는 이필리무맙(MDX-010) 및 트레멜리무맙(CP-675,206)이 포함되나 이에 한정되지 않으며, 둘 모두 완전 인간이다. 이필리무맙은 혈장 반감기가 대략 12 내지 14일인 IgG1이고; 트레멜리무맙은 혈장 반감기가 대략 22일인 IgG2이다. 예를 들어, 문헌[Phan et al.(2003) Proc Natl Acad Sci USA. 100: 8372-7; Ribas et al.(2005) J Clin Oncol. 23: 8968-77; Weber et al.(2008) J Clin Oncol. 26: 5950-6] 참고. 일부 구현예에서, 항-CTLA4 항체는 이필리무맙이다.
특정 구현예에서, 체크포인트 저해제는 프로그래밍된 사멸-1(PD1) 경로의 저해제이다. 프로그래밍된 세포 사멸 1(PD1) 경로는 활성 T-세포 면역 감시를 극복하기 위해 종양 세포가 관계 맺을 수 있는 주요 면역 제어 스위치에 해당한다. PD1의 리간드(PDL1 및 PDL2)는 구성적으로 발현되거나 다양한 종양에서 유도될 수 있다. 종양 세포 상의 높은 PDL1 발현은(그리고 PDL2는 보다 적은 정도로) 다양한 다른 고형 종양 유형에서 불량한 예후 및 생존과 상관 관계가 있는 것으로 밝혀졌다. 또한, PD1은 악성 흑색종 환자에서 종양-특이적 T 세포 확장을 조절하는 것으로 제안되었다. 이들 관찰은 PD1/PDL1 경로가 종양 면역 회피에 중요한 역할을 하며 치료적 개입을 위한 매력적인 표적으로 고려될 수 있음을 시사한다. 본원에 사용된, 용어 "PD1 저해제"는 PD1 및/또는 PD1 경로의 임의의 저해제를 지칭하는 것으로 여겨진다. 예시적인 PD1 저해제는 항-PD1 및 항-PDL1 항체를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 특정 구현예에서, 체크포인트 저해제는 항-PD1 항체이다. 예시적인 항-PD1 항체로는 니볼루맙 및 펨브롤리주맙(MK-3475)이 포함되나 이에 한정되지 않는다. 예를 들어, 니볼루맙은 PD1 수용체와 이의 리간드 PDL1 및 PDL2의 상호 작용을 방해함으로써, 세포 면역 반응을 저해하는 완전 인간 면역글로불린 G4(IgG4) PD1 면역 체크포인트 저해제 항체이다(Guo et al.(2017) J Cancer 8(3): 410-6). 일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 니볼루맙이다. 예를 들어, 펨브롤리주맙은 PD1과 이의 리간드인 PDL1 및 PDL2 사이의 상호 작용을 직접적으로 차단하도록 설계된 IgG4/카파 이소형의 강력하고 고도로-선택적인 인간화 mAb이다. 펨브롤리주맙은 건강한 인간 공여자, 암 환자, 및 영장류 유래의 배양된 혈액 세포에서 T 림프구 면역 반응을 강하게 향상시킨다. 펨브롤리주맙은 또한 인터루킨-2(IL-2), 종양 괴사 인자 알파(TNFα), 인터페론 감마(IFNγ), 및 기타 사이토카인의 수준을 조절하는 것으로 보고되었다. 예시적인 항-PDL1 항체로는 아테졸리주맙, 아벨루맙, 및 두르발루맙이 포함되나 이에 한정되지 않는다. 예를 들어, 아테졸리주맙은, 수많은 종류의 악성 세포 상에 발현된 PDL1을 표적화 함으로써, PD1/PDL1 상호 작용을 차단하는 것으로 보고된 IgG1 인간화 mAb이다. PD1/PDL1 경로의 이 차단은 종양에 대한 면역 방어 메커니즘을 자극할 수 있다(Abdin et al.(2018) Cancers(Basel) 10(2): 32). 일부 구현예에서, 항-PDL1 항체는 아테졸리주맙이다.
특정 구현예에서, 체크포인트 저해제는 PD1/PDL1, CTLA4, OX40, CD40, LAG3, TIM3, GITR, 및/또는 KIR에 표적화된다. 특정 구현예에서, 체크포인트 저해제는 CTLA4, OX40, CD40, 및/또는 GITR에 표적화된다. 특정 구현예에서, 체크포인트 저해제는 저해 항체 또는 다른 유사한 저해 분자(예를 들어, 저해 항-CTLA4 또는 항-PD1/PDL1 항체)를 사용하여 표적화된다. 다른 특정 구현예에서, 체크포인트 저해제는 표적에 대한 작용제를 사용하여 표적화 되고; 이 부류의 예로는 자극 표적 OX40, CD40, 및/또는 GITR이 포함된다. 일부 구현예에서, OX40, CD40, 및/또는 GITR로 표적화 되는 체크포인트 저해제는 작용제 항체이다. OX40에 대해 향하는 작용제 항체는, 조절 T 세포 억제를 저해하면서, 이펙터 T-세포 기능을 향상시키는 이중 역할을 가질 수 있다. 작용제 항-GITR 항체는 또한 이펙터 T 세포가 조절 T-세포에 의해 유도되는 저해에 보다 저항성이 있도록 하는 것으로 나타났다(Karaki et al.(2016) Vaccines(Basel) 4(4): 37). 마찬가지로, 작용제 CD40 항체는 T-세포-의존성 항-종양 활성을 나타낸다. 수지상 세포 상의 CD40의 활성화는 종양 항원의 교차-제시 및 결과적으로 활성화된 종양-지향 이펙터 T-세포의 수를 증가시킨다(Ellmark et al.(2015) Oncoimmunol. 4(7): e1011484).
특정 구현예에서, 체크포인트 저해제는 CTLA4로 표적화된다(예를 들어, 항-CTLA4 항체). 특정 구현예에서, CTLA4를 표적화하는 것은 미접촉 T-세포의 프라이밍 및 활성화를 용이하게 한다. 특정 구현예에서, 체크포인트 저해제는 OX40으로 표적화된다(예를 들어, 항-OX40 항체). 특정 구현예에서, OX40을 표적화하는 것은 이펙터 T-세포의 확장을 향상시킨다. 특정 구현예에서, 체크포인트 저해제는 CD40으로 표적화된다(예를 들어, 항-CD40 항체). 특정 구현예에서, CD40을 표적화하는 것은 T 세포의 "면역 관용원성" 프라이밍 및/또는 조절 T-세포의 형성을 저해한다. 특정 구현예에서, 체크포인트 저해제는 GITR로 표적화된다(예를 들어, 항-GITR 항체). 특정 구현예에서, GITR을 표적화하는 것은 조절 T-세포의 활성을 저해한다. 특정 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 및 CTLA4-, OX40-, CD40-, 및/또는 GITR-표적화된 제제를 사용하는 조합 요법의 이점(예를 들어 적어도 하나의 증상 또는 질환 진행 위험/속도에 대한 효과)은 상가적이다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 및 CTLA4-, OX40-, CD40-, 및/또는 GITR-표적화된 제제를 사용하는 조합 요법의 이점은 초가산적(즉, 상승적)이다.
체크포인트 저해제 치료 전략은 치료가 약하거나 불량하게 항원성인 종양에 대한 T-세포 반응의 프라이밍을 용이하게 하고/하거나 향상시킨다는 가설(예를 들어, CTLA4) 또는 치료가 종양 항원에 반응하지만, 항원 제시의 만성적 본성으로 인해 "소진"된 T-세포를 회복 및/또는 재활성화한다는 가설(예를 들어, PD1, PDL1)을 기반으로 한다(Chen and Mellman(2013) Immunity 39(1): 1-10). 적합한 체크포인트 저해 요법 및 제제, 예를 들어 항-PD1, 항-PDL1, 또는 항-CTLA4 항체의 예는 당업계에 알려져 있다. 예를 들어, WO 2001/014424 WO 2013/173223, WO 2016/007235 참고.
체크포인트 저해제 요법 후의 이들 프라이밍된 T-세포 반응을 프라이밍된 면역 시스템이 반응할 수 있는 종양 세포에서 신생항원을 유도하는 치료와 조합하는 것은 유익한 상승 작용을 제공할 수 있다. 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC-유래된 신생항원은 아직 T-세포 프라이밍을 위해 제시되지 않았기 때문에, CTLA4 저해제와의 조합은 특히 유익할 수 있다. 일부 구현예에서, 치료는 하나 이상의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물을 투여하여 신생항원의 생산을 유도하고, 그 전에, 동시에, 또는 그 이후에 잇달아 CD8 T-세포 프라이밍을 자극하기 위해 CTLA4 저해제를 초기 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 예를 들어 신생항원-반응성 CD8 집단의 프라이밍 및/또는 활성화를 추가로 자극하기 위해, CTLA4 저해제의 추가 투여가 환자에게 제공된다. 일부 구현예에서, 종양에 의한 신생항원 제시를 증가시키기 위해 환자에게 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 추가 투여가 제공될 수 있다. 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 및 체크포인트 저해제 요법의 반복 투여는 동시에 또는 시차를 둔 간격으로 발생할 수 있다. 일부 구현예에서, 치료는, 예를 들어 종양 미세 환경 내에서 소진된 신생항원-표적화된 T-세포의 이펙터 기능을 회복하기 위해, PD1/PDL1 저해제 공동-치료를 투여하는 것을 추가로 포함한다.
본원에 사용된, 용어 "조합" 또는 "조합 요법"은, 투여되는 제제 중 하나 이상의 공동-작용으로부터 유익한(즉, 상가적 또는 상승적) 효과를 제공하도록 의도된 치료 요법의 일부로서, 하나 이상의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물을 추가 제제 또는 요법(예를 들어, 체크포인트 저해제, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체, 신생항원 백신, CAR-T)과 함께 투여하는 것을 지칭한다. 일부 구현예에서, 조합은 또한, 화학 요법 제제, 항-혈관 신생 제제, 및 면역-억제를 감소시키는 제제(예를 들어, 제2 체크포인트 저해제)를 포함하나 이에 한정되지 않는, 하나 이상의 추가 제제를 포함할 수 있다. 조합의 유익한 효과로는 치료제의 조합으로부터 기인하는 약동학적 또는 약력학적 공동-작용이 포함되나 이에 한정되지 않는다. 이들 치료제를 조합하여 투여하는 것은 전형적으로 정의된 기간(예를 들어, 선택된 조합에 따라, 분, 시간, 일, 또는 주)에 걸쳐 수행된다.
본원에 사용된, "조합하여" 투여되는 또는 "공동-투여"는 대상체가 의학적 상태(예를 들어, 신생물성 장애)로 고통받는 동안 대상체에게 둘 이상의 상이한 치료가 전달됨을 의미한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 대상체가 질환 또는 장애로 진단된 후, 질환 또는 장애가 치유 또는 제거되기 전, 또는 대상체가 위험에 있는 것으로 확인되었지만 질환의 증상을 발달시키기 전일 때 둘 이상의 치료가 전달된다. 일부 구현예에서, 하나의 치료의 전달은 제2 치료의 전달이 개시될 때 여전히 발생하고 있어, 중첩이 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 치료는 동시에 개시된다. 이들 유형의 전달은 때때로 본원에서 "동시(simultaneous)", "동시(concurrent)," 또는 "동시(concomitant)" 전달로 지칭된다. 다른 구현예에서, 하나의 치료의 전달은 제2 치료의 전달이 시작되기 전에 종료된다. 이 유형의 전달은 때때로 본원에서 "연속적" 또는 "순차적" 전달로 지칭된다.
일부 구현예에서, 2개의 치료(예를 들어, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 및 체크포인트 저해제)는 동일한 조성물에 포함된다. 이러한 조성물은 임의의 적절한 형태로 및 임의의 적합한 경로에 의해 투여될 수 있다. 다른 구현예에서, 2개의 치료(예를 들어, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 및 체크포인트 저해제)는, 임의의 적절한 형태로 및 임의의 적합한 경로에 의해, 별개의 조성물로 투여된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물 및 체크포인트 저해제를 포함하는 조성물은 동시에 또는, 상이한 시점에서 임의의 순서로, 순차적으로 투여될 수 있으며; 두 경우 모두에서, 이들은 원하는 치료 또는 예방 효과를 제공하기 위해 시간상 충분히 가깝게 투여되어야 한다.
동시 또는 순차적 전달의 구현예에서, 치료는 조합된 투여로 인해 보다 효과적일 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 치료가 제2 치료의 부재 하에 투여되는 경우에 보일 것보다, 제1 치료가 보다 효과적이며, 예를 들어 더 적은 제1 치료를 사용하여(예를 들어, 더 낮은 용량을 사용하여) 동등한 효과가 보여진다. 일부 구현예에서, 제1 치료는 제2 치료의 부재 하에 전달되는 제1 치료를 사용하여 관찰될 것보다 증상, 또는 질환 또는 장애와 관련된 다른 파라미터의 감소가 더 크도록 보다 효과적이다. 다른 구현예에서, 유사한 상황이 제2 치료를 사용하여 관찰된다. 일부 구현예에서, 조합 요법의 이점(예를 들어 적어도 하나의 증상 또는 질환 진행 위험/속도에 대한 효과)은 상가적이다. 일부 구현예에서, 조합 요법의 이점은 초가산적이다.
다양한 구현예에서, 본 개시는 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물; 및 적어도 하나의 추가 요법(예를 들어, 체크포인트 저해제 요법, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체, 신생항원 백신, CAR-T)을 대상체에게 투여함으로써 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 투여는 적어도 하나의 신생항원 및/또는 T-세포 반응을 유도한다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 투여는 이중-가닥 RNA 면역 반응을 유도한다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 투여는 면역원성 세포 사멸을 유도한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 추가 요법은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 또는 적어도 5개의 추가 요법을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물은 2개의 체크포인트 요법과 조합하여, 즉 2개의 상이한 체크포인트 저해제를 사용하여 투여될 수 있다. 일부 다른 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물은 체크포인트 저해제 요법 및 신생항원 백신과 조합하여 투여될 수 있다.
조합 요법의 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 투여되는 양은, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 표준 용량과 비교하여, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90%만큼 감소된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물 및/또는 적어도 하나의 추가 요법은, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 표준 투약 요법과 비교하여, 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90% 덜 빈번하게 투여된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 투여되는 양 및/또는 투여량은 더 낮은 전신 독성 및/또는 개선된 내약성을 초래한다.
일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 적어도 하나의 추가 요법의 투여 전에 개시된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 적어도 하나의 추가 요법의 투여 후에 개시된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 적어도 하나의 추가 요법의 투여와 동시에 개시된다.
일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 초기 투여 후 적어도 1회 반복된다. 일부 구현예에서, 반복되는 투여에 사용되는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 양은 초기 투여에 사용되는 양과 비교하여 감소된다. 일부 구현예에서, 반복되는 투여에 사용되는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 양은 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 표준 투여량과 비교하여 감소된다. 일부 구현예에서, 반복되는 투여에 사용되는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 양은, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 표준 투여량과 비교하여, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90%만큼 감소된다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 추가 요법의 투여는 초기 투여 후 적어도 1회 반복된다. 일부 구현예에서, 반복되는 투여에 사용되는 적어도 하나의 추가 요법의 양은 초기 투여에 사용되는 양과 비교하여 감소된다. 일부 구현예에서, 반복되는 투여에 사용되는 적어도 하나의 추가 요법의 양은 적어도 하나의 추가 요법의 표준 투여량과 비교하여 감소된다. 일부 구현예에서, 반복되는 투여에 사용되는 적어도 하나의 추가 요법의 양은, 적어도 하나의 추가 요법의 표준 투여량과 비교하여, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90%만큼 감소된다.
일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 반복되는 투여는 적어도 하나의 추가 요법의 반복되는 투여와 동시에 발생한다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 반복되는 투여는 적어도 하나의 추가 요법의 반복되는 투여와 순차적이거나 시차를 둔다.
다양한 구현예에서, 본 개시는 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물; 및 체크포인트 저해제 요법을 대상체에게 투여함으로써 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 체크포인트 저해제 요법은 적어도 하나의 체크포인트 저해제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 적어도 하나의 체크포인트 저해제에 대해 불내성, 비-반응성, 또는 저 반응성이다. 일부 구현예에서, 대상체는 예를 들어, 고형 종양에서 면역-관련 반응 기준(irRC) 및/또는 면역-관련 반응 평가 기준(irRECIST)을 사용하여 결정되어 적어도 하나의 체크포인트 저해제에 대해 비-반응성 또는 저 반응성으로 고려될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Wolchok et al.(2009) Clin Cancer Res. 15(23): 7412-20; Bohnsack et al. "Adaptation of the Immune-Related Response Criteria: irRECIST"(Abstract 4958) ESMO 2014] 참고. 예시적인 기준으로는 암 환자의 종양이 개선("반응"), 동일하게 유지("안정화"), 또는 치료 중 악화("진행")되는 경우, 평가되는 치료가 면역-종양 약물(예를 들어, 체크포인트 저해제)인 경우 정의하기 위해 당업계에서 사용되는 것이 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체가 각각의 체크포인트 저해제(예를 들어, 이필리무맙)에 대해 확인된 하나 또는 하나 초과의 부작용(등급 2+)을 나타내는 경우 대상체는 적어도 하나의 체크포인트 저해제에 대해 불내성으로 고려될 수 있다. 일부 구현예에서, 예를 들어, 대상체가 전장염, 간염, 피부염(독성 표피 괴사 용해 포함), 신경병증, 및 내분비병증으로부터 선택되는 하나 이상의 부작용을 나타내는 경우 대상체는 이필리무맙 치료에 대해 불내성인 것으로 고려될 수 있다(여르보이®(이필리무맙) FDA 라벨 증보판, 2018).
일부 구현예에서, 체크포인트 저해제는 PD1/PDL1, CTLA4, OX40, CD40, LAG3, TIM3, GITR, 및/또는 KIR에 표적화된다. 일부 구현예에서, 체크포인트 저해제는 CTLA4, OX40, CD40, 및/또는 GITR에 표적화된다. 일부 구현예에서, 체크포인트 저해제는 저해 항체 또는 다른 유사한 저해 분자를 사용하여 표적화된다. 일부 다른 구현예에서, 체크포인트 저해제는 작용제 항체 또는 다른 유사한 작용제 분자를 사용하여 표적화된다. 일부 구현예에서, 체크포인트 저해제는 세포 독성 T-림프구-관련 항원 4 경로(CTLA4) 저해제를 포함한다. 일부 구현예에서, CTLA4 저해제는 항-CTLA4 항체이다. 일부 구현예에서, 항-CTLA4 항체는 이필리무맙이다. 일부 구현예에서, 체크포인트 저해제는 프로그래밍된 사멸-1 경로(PD1) 저해제를 포함한다. 일부 구현예에서, PD1 저해제는 항-PD1 항체이다. 일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 니볼루맙이다. 일부 구현예에서, PD1 저해제는 항-PDL1 항체이다. 일부 구현예에서, 항-PDL1 항체는 아테졸리주맙이다. 일부 구현예에서, 체크포인트 저해제는 CTLA4 저해제 및 PD1 저해제를 포함한다. 일부 구현예에서, 체크포인트 저해제는 OX40에 표적화된다. 일부 구현예에서, 체크포인트 저해제는 CD40에 표적화된다. 일부 구현예에서, 체크포인트 저해제는 GITR에 표적화된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 및 체크포인트 저해제(예를 들어 CTLA4-, PD1/PDL1-, OX40-, CD40-, 및/또는 GITR-표적화된 항체 또는 분자)를 사용하는 조합 요법의 이점(예를 들어 적어도 하나의 증상 또는 질환 진행 위험/속도에 대한 효과)은 상가적이다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 및 체크포인트 저해제(예를 들어 CTLA4-, PD1/PDL1-, OX40-, CD40-, 및/또는 GITR-표적화된 항체 또는 분자)를 사용하는 조합 요법의 이점은 초가산적(즉, 상승적)이다.
다양한 구현예에서, 본 개시는 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물; 및 사이토카인 또는 사이토카인 유사체 요법을 대상체에게 투여함으로써 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체 요법은 적어도 하나의 사이토카인 또는 사이토카인 유사체를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 적어도 하나의 사이토카인 또는 사이토카인 유사체에 대해 불내성, 비-반응성, 또는 저 반응성이다.
일부 구현예에서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체는 T-세포 인핸서를 포함한다. 일부 구현예에서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체는 IL-2, IL-10, IL-12, IL-15, IFNγ, 및/또는 TNFα를 포함한다. 일부 구현예에서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체는 IL-2, IL-10, IL-12, 및/또는 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체를 투여하는 것은 신생항원의 유도 및 제시로 인해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여 후의 T-세포 프라이밍을 향상시킨다.
일부 구현예에서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체는 IL-2를 포함한다. 일부 구현예에서, IL-2는 이들의 확장을 촉진하는 이펙터 세포에 대한 신호를 부스트한다(Rosenberg(2014) J Immunol. 192(12): 5451-8). 일부 구현예에서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체는 IL-10을 포함한다. 일부 구현예에서, IL-10은 CD8+ T-세포 프라이밍 및 활성화를 부스트한다(Mumm et al.(2011) Cancer Cell 20(6): 781-96). 일부 구현예에서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체는 IL-12를 포함한다. 일부 구현예에서, IL-12는 선천 및 적응 면역 반응을 연결하여 항원-특이적 프라이밍 및 표적화를 부스트한다(Tugues et al.(2015) Cell Death Differ. 22(2): 237-46). 일부 구현예에서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체는 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, IL-15는 T-이펙터(CD8) 세포 프라이밍 및/또는 활성화를 부스트한다. 일부 구현예에서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체는 IFNγ를 포함한다. 일부 구현예에서, IFNγ는 IFNγ의 T-이펙터 세포 분비를 보충한다. 일부 구현예에서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체는 TNFα를 포함한다. 일부 구현예에서, TNFα는 TNFα의 T-이펙터 세포 분비를 보충한다.
일부 구현예에서, 비정상적 스플라이싱 및 신생항원 펩티드의 생산을 유발하기 위해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 초기 용량이 대상체에게 투여된다. 단백질 생산 및 항원 제시를 가능하게 하는 기간 후, 일부 구현예에서, 대상체는 이펙터 T-세포 프라이밍 및 확장을 부스트 및/또는 향상시키기 위해 초기 용량의 사이토카인 또는 사이토카인 유사체로 투여된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물과 사이토카인 또는 사이토카인 유사체의 용량 사이의 대기 기간은 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 또는 약 7일이다. 일부 구현예에서, 대기 기간은 약 3일 내지 약 5일이다. 일부 구현예에서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체는 IL-2, IL-10, IL-12, IL-15, IFNγ, 및/또는 TNFα이다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 및 사이토카인 또는 사이토카인 유사체의 조합 치료 이점은 상가적 또는 초가산적일 수 있다.
일부 다른 구현예에서, 이펙터 T-세포 프라이밍 및 확장을 부스트 및/또는 향상시키기 위해 초기 용량의 사이토카인 또는 사이토카인 유사체가 대상체에게 투여된다. 대기 기간 후, 일부 구현예에서, 대상체는 비정상적 스플라이싱 및 신생항원 펩티드의 생산을 유발하기 위해 초기 용량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물로 투여된다. 일부 구현예에서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체와 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 용량 사이의 대기 기간은 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 또는 약 7일이다. 일부 구현예에서, 대기 기간은 약 3일 내지 약 5일이다. 일부 구현예에서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체는 IL-2, IL-10, IL-12, IL-15, IFNγ, 및/또는 TNFα이다. 일부 구현예에서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체 및 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 조합 치료 이점은 상가적 또는 초가산적일 수 있다.
일부 구현예에서, T-세포 프라이밍 및 확장을 가능하게 하는 기간 후, 대상체는 제2 또는 후속 용량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물로 투여되어 신생항원 펩티드의 재-제시를 유발한다. 일부 구현예에서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체의 초기 용량과 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 제2 또는 후속 용량 사이의 대기 기간은 약 2, 약 3, 약 4, 또는 약 5주이다. 일부 구현예에서, 대기 기간은 약 3주이다. 일부 구현예에서, 후속 용량의 사이토카인 또는 사이토카인 유사체가 투여될 수 있으며, 예를 들어 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 후속 용량의 사이에 산재될 수 있다. 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 제2 또는 후속 용량 후, 일부 구현예에서, 면역 시스템은 신생항원-제시 종양 세포와 관계를 맺고/거나 종양 세포 살해를 끌어낼 수 있다. 일부 구현예에서, 이 예시적인 초기 치료 요법을 따르는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 투약은 펄스성일 수 있고, 즉, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물이 연장된 간격(예를 들어, 약 4주 마다, 약 5주마다, 약 6주마다)에 투약되어 항원 제시, T-세포 관계맺음 및/또는 종양 세포 살해, 및/또는 기억 T-세포 집단의 회복을 가능하게 할 수 있다.
일부 구현예에서, 대상체는 약 150개 이하 돌연변이의 비-동의 돌연변이 부담을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 100개 이하 돌연변이의 비-동의 돌연변이 부담을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 50개 이하 돌연변이의 비-동의 돌연변이 부담을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 신생물성 장애, 예를 들어 혈액 악성 종양 또는 고형 종양을 갖거나 갖는 것으로 의심된다. 일부 구현예에서, 혈액 악성 종양은 B-세포 악성 종양, 백혈병, 림프종, 및 골수종으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 혈액 악성 종양은 급성 골수성 백혈병 및 다발성 골수종으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 유방암, 위암, 전립선암, 난소암, 폐암, 자궁암, 타액 관 암종, 흑색종, 결장암, 자궁 경부암, 췌장암, 신장암, 결장직장암, 및 식도암으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 HER2-양성 유방암, 위 선암종, 전립선암, 및 골육종으로부터 선택된다.
헤르복시디엔 스플라이싱 조절제/ADC 및 신생항원 백신의 조합:
다양한 구현예에서, 본원에 기재된 암을 갖는 환자는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 및 신생항원 백신의 조합을 사용하여 치료될 수 있다. 이론에 얽매이지 않고, 단독으로 또는 면역 체크포인트 저해제(ICI) 분자와 조합하여 사용되는, 백신은 초기 시험에서 유망한 것으로 나타났으나(Ott et al.(2017) Nature 547(7662): 217-21; Sahin et al.(2017) Nature 547(7662): 222-6), 일반적으로 환자 종양 돌연변이의 시퀀싱을 필요로 한다(Ott et al.(2017) Nature 547(7662): 217-21; Aldous and Dong(2018) Bioorg. Med. Chem. 26(10): 2842-9). 따라서, 백신은 종종 항원성인 비-동의 돌연변이의 충분한 수에 따라 달라질 것이다. 일반적으로, 매우 낮은 돌연변이 부담을 갖는 종양은 후보 항원을 거의 제공하지 않으며, 빠르게 성장하는 것은 환자-특이적 백신을 확인 및 생산하기에 제한된 시간을 제공한다.
현재까지, 대부분의 환자에 걸쳐 광범위하게 면역원성인 백신을 개발하려는 시도는 빈번하게 돌연변이되거나, 이소성으로 과발현되거나, 증폭되고/거나, 생물 내에서 "자기" 단백질로 존재하는 단백질에 초점을 맞췄다. 추가로, 이들 단백질은 종종 면역학적으로 제한된 조직(예를 들어, 신경내분비 종양 유형에서 발현되는 뉴런 마커)에서 발현되는 반면, 다른 것들은 배아 발생 동안 정상적으로 발현될 수 있다(예를 들어, 종양 태아 항원). 따라서, 이러한 단백질을 항원으로 사용하는 백신의 유용성은 종종 항원 중 하나 이상이 제시되는 특정 종양 계통 또는 서브세트에 제한된다. 백신 유용성은 또한 환자 종양 샘플의 시퀀싱에 의해 확인되어야 할 것이며, 이는 시간이 소비될 수 있다.
더욱이, 이들 항원이 "자기" 단백질로서 존재하는 경우, 면역 시스템은 이들을 "자기"로 인식하여 반응하지 않도록 프라이밍될 가능성이 높을 것이다. 또는, 대안적으로, 면역 시스템이 이들 항원에 대한 이펙터 반응을 시작할 수 있는 경우, 이는 항원이 발현될 수 있는 조직에서 온-타겟(on-target) 부작용으로 이어질 수 있다. 이들 경우 둘 모두에서, 핵심 도전 중 하나는 대부분의 항원성 펩티드가 "승객" 유전자(즉, 종양 형성 과정에서 돌연변이되거나 증폭되지만, 종양 자체의 지속적 생존 또는 증식에 중요한 역할을 하지 않는 유전자)로부터 유래된다는 것이다. 따라서 이들 유전자는 종양 진행에 대한 유의미한 결과 없이 침묵될 수 있으며, 따라서 종양으로 하여금 이들 항원에 대한 면역 반응을 "탈출"하게 할 것이다. 이론에 얽매이기 원하지 않지만, 이 메커니즘은 종양 진화에서 일정한 역할을 할 수 있으며, 여기서 종양 형성 초기 단계 동안 강력하게 항원성인 무작위 돌연변이가 종종 종양에 의해 "채택된다"(Dunn et al.(2004) Annu. Immunol. 22: 329-60).
추가로, 일정 증거는 또한 만성적 항원 제시 및 면역 자극이 면역 세포 면역성 결여(anergy) 및 소진으로 이어질 수 있음을 나타낸다(Pardoll(2012) Nat. Rev. Cancer 12(4): 252-64). ICI가 소진된 면역 세포 표현형을 억제(α-PD1/PD-L1)하거나 추가 면역 세포 반응을 용이하게 하는(α-CTLA4) 것으로 나타났기 때문에, 이들 표현형은 현재의 ICI 치료에서의 치료적 근거의 기저를 이룬다. 특히, α-CTLA4 요법을 사용하면, 일정 환자 서브세트가 T-세포 활성화의 촉진 및 자기-반응성 면역을 억제하는 면역 관용 메커니즘의 손상에 의한 것으로 간주될 수 있는 심각한 면역-관련 부작용을 나타내는 것으로 보고되었다.
이들 접근(즉, 신생항원에 대한 데노보(de novo) 면역 반응을 유발 또는 향상시키는 것 또는 기존 면역 반응의 면역성 결여 또는 소진을 탈억제하는 것) 둘 모두는 만성 면역 활성화에 연결된다. 따라서, 이들 접근은 면역 관계맺음을 억제하기 위해 설계된 면역성 결여, 편집, 및 기타 종양-매개 메커니즘에 민감하다.
대조적으로, 본원에 개시된 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물을 사용하는 치료는 신생항원에 해당하는 서열에 대한 면역 반응을 유도할 수 있다. 일부 구현예에서, 신생항원의 제시는 관계맺고 활성화시킬 보다 상이한 표적을 갖는 적응 면역 시스템을 제공한다. 일부 구현예에서, 선택적 스플라이싱 및 결과로 생성되는 신생항원을 격심하게 유도하는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 능력은 돌연변이-구동된 신생항원에 대한 만성 노출로 인한 면역 시스템 피로의 위험을 감소시키고/거나 치료법을 회피하도록 적응하는 종양 세포의 능력을 제한할 수 있다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물을 신생항원 백신과 조합하여 투여하는 것은 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물에 의해 생산된 신생항원에 대한 면역 반응을 향상시킨다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물은 백신 접종 전, 도중, 또는 후에 투여된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 및/또는 백신은 치료 과정 동안 1회 이상 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 백신은 1회 투여되고 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물은 치료 과정 동안 1회 초과 투여된다. 일부 구현예에서, 백신이 1회 투여된 다음 하나 이상의 부스터가 치료 과정 동안 투여된다.
본원에 사용된, 용어 "신생항원 백신"은 하나 이상의 면역원성 신생항원 펩티드 또는 mRNA, 예를 들어 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 또는 그 이상의 신생항원 펩티드의 풀링된 샘플을 지칭한다. 용어 "백신"은 질환(예를 들어, 신생물성 장애, 예를 들어, 혈액 악성 종양 또는 고형 종양)의 예방 및/또는 치료를 위한 면역을 생성하기 위한 조성물을 지칭한다. 따라서, 백신은 면역원성 제제를 포함하고 백신 접종 후 특정 면역 방어 및 보호 물질을 생성하기 위해 인간 또는 동물에 사용하도록 의도된 약제이다. 신생항원 백신은 약학적으로 허용되는 담체, 희석제, 부형제, 및/또는 애주번트를 추가로 포함할 수 있다.
본원에 사용된, 용어 "면역원성"은 면역 반응, 예를 들어 T-세포 반응을 끌어낼 수 있는 임의의 제제 또는 조성물을 지칭한다. 면역 반응은 항체- 또는 세포-매개, 또는 둘 모두일 수 있다.
일부 구현예에서, 환자는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물을 제공받은 다음 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물에 의해 생산된 신생항원에 대한 면역 반응을 향상시키기 위해 알려진 신생항원의 펩티드 또는 mRNA 백신을 제공받는다. 일부 다른 구현예에서, 환자는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물을 제공받고 치료에 의해 생산된 신생항원에 대해 스크리닝된다. 이어서, 그들 신생항원 중 하나 이상이 사용되어 환자에게 제공되는 개인화된 백신을 생성한다. 이들 구현예 중 어느 하나에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 및/또는 펩티드 또는 mRNA 백신은 환자에게 1회 또는 반복적으로 투여될 수 있다.
다양한 구현예에서, 백신에 적합한 신생항원은 (예를 들어, 종양 생검으로부터의) 환자의 하나 이상의 조직 샘플 유래의 변경된 스플라이싱 및 강력한 발현을 갖는 전사체 패널을 스크리닝함으로써 확인될 수 있다. 일부 구현예에서, 변이체 단백질 서열은 연결 지점-포괄하는 아미노산 변화 옆에 있는 단백질 서열(12개 아미노산까지)의 일부를 보유하면서 비정상적으로 스플라이싱된 mRNA 연결 지점을 가로지르는 번역에 기초하여 스크리닝된 샘플에서 확인된다. 일부 구현예에서, 이들 연결 지점-포괄하는 펩티드 단편은, 예를 들어 NetMHC1과 같은 툴을 사용하여, MHC1 대립 유전자에 대한 고 친화성 결합에 대해 스캔된다(Nielsen et al.(2003) Protein Sci 12(5): 1007-17; Andreatta and Neilsen (2016) Bioinformatics 32(4): 511-7). 이들 결과는 고유한 환자 HLA 대립 유전자 구성에 대해 예측되는 고 친화성 결합제인 것에 대한 신생펩티드의 필터링뿐만 아니라 상이한 집단들에서 높은 빈도로 존재하는 HLA 대립 유전자에 광범위하게 결합할 것으로 예측되는 신생펩티드 풀의 집합을 가능하게 한다(Maiers et al.(2007) Hum Immunol 68(9): 779-88). 다양한 구현예에서, 확인된 신생펩티드는 그 후, 예를 들어 적합한 담체 또는 애주번트에의 접합에 의해(Ott et al.(2017) Nature 547(7662): 217-21), 또는 mRNA로서 전달을 위해(Sahin et al.(2017) Nature 547(7662): 222-6) 백신으로 제형화된다.
일부 구현예에서, 후속 백신 접종에 사용하기 위한 치료로부터 기인되는 하나 이상의 신생항원을 확인하기 위해 선택된 신생항원은 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물에 대한 개별 특허의 종양 반응 스크리닝에 기초한다. 다른 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물에 의해 생산된 다음 미래의 환자를 위한 범용 백신으로 사용되는 공통 신생항원을 확인하기 위해 신생항원은, 예를 들어 상이한 환자들 유래의 샘플 패널 스크리닝에 기초하여, 선택된다.
이론에 얽매이지 않고, 일부 구현예에서, 선택된 신생항원은 종양 돌연변이에 의존적이지 않고 오히려 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물에 의해 생산되며 일반적으로 신체에 의해 외래로 인식되는 신생항원을 모방하기 때문에 범용 신생항원 백신의 사용은 각각의 환자의 종양의 고유한 돌연변이 상태를 시퀀싱 및 분석할 필요성을 피할 것이다. 추가로, 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물에 의해 생산된 신생항원을 모방하는 것과 비교하여, 환자의 종양 세포는 종양 돌연변이에 의존적인 하나 이상의 신생항원을 생산하는 것을 피해 돌연변이될 가능성이 더 높을 수 있기 때문에 신생항원 백신의 사용은 특히 효과적일 수 있다. 이것은 대부분의 환자에 걸쳐 광범위하게 면역원성이 있을 벌크(bulk) 백신 제형을 가능하게 하여, 치료 요법의 개시를 신속화할 수 있다. 환자는 본원에 약술된 일정에 따라 백신 접종될 수 있으며, 백신 접종 완료에 뒤따르기 전, 예를 들어 신생항원 펩티드의 발현을 유도하기 위해, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물을 사용하여 추가로 치료될 수 있다. 일부 구현예에서, 환자는 백신 접종 전, 동시에, 또는 후에 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 환자는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물로 투여되고, 범용 신생항원의 패널에서 발견되는 하나 이상의 신생항원에 대해 스크리닝되고, 대상체에서 확인된 적어도 하나의 범용 신생항원을 포함하는 범용 신생항원 백신으로 백신 접종된다. 일부 구현예에서, 환자는 백신 접종 후 1회 이상 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물로 투여될 수 있다. 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC 또는 조성물 및/또는 백신은 치료 과정 동안 1회 이상 투여될 수 있다.
다양한 구현예에서, 백신은 하나 또는 하나 초과의 신생항원 펩티드 또는 mRNA를 포함할 수 있다. 다양한 구현예에서, 백신은 하나 또는 하나 초과의 긴 신생항원 펩티드를 포함할 수 있다. 이러한 "긴" 신생항원 펩티드는, 다양한 구현예에서, 수지상 세포와 같은 전문 항원-제시 세포에서 효율적인 내입, 처리, 및 교차-제시를 거친다. 유사하게, 긴 백신 펩티드는, 다른 맥락에서, 인간에서 세포 독성 T-세포를 유도하는 것으로 나타났다(Melief and van der Burg(2008) Nat Rev Cancer 8(5): 351-60). 다양한 구현예에서, 신생항원 펩티드는 옆에 있는 아미노산 서열에 추가하여 신생항원 펩티드 서열 자체를 포함하도록 연장된다. 다양한 구현예에서, 연장된 펩티드 서열은 항원-제시 세포, 예를 들어 수지상 세포에 의한 단백질의 흡수를 용이하게 한다. 다양한 구현예에서, 연장된 펩티드 서열은 상이한 HLA 이소형들을 갖는 모델에서 효율적인 항원 제시 및 T-세포 프라이밍을 가능하게 한다. 다양한 구현예에서, 보다 긴 신생항원 펩티드 및/또는 연장된 펩티드 서열은, 더 짧은 신생항원 펩티드 및/또는 더 짧은 펩티드 서열(예를 들어, 길이가 약 10개 미만 또는 약 5개 아미노산 미만인 펩티드 서열)과 비교하여, 항원-제시 세포(예를 들어, 수지상 세포)에 의한 흡수 증가, 항원 제시 증가, 및/또는 T-세포 프라이밍 증가를 나타낸다. 일부 구현예에서, 긴 신생항원 펩티드는 길이가 약 5 내지 약 50개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 긴 신생항원 펩티드는 길이가 약 10 내지 약 50개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 길이가 약 10 내지 약 35개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 긴 신생항원 펩티드는 길이가 약 15 내지 약 25개 아미노산 범위이다.
일부 구현예에서, 신생항원 서열 및/또는 항원성 부분은 길이가 약 10 내지 약 35개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열 및/또는 항원성 부분은 길이가 약 15 내지 약 25개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열 및/또는 항원성 부분은 길이가 약 10 내지 약 20개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열 및/또는 항원성 부분은 정준 펩티드 서열(예를 들어, 표 8에 밑줄 표시된 예시적인 정준 펩티드 서열 중 임의의 것)에 전적으로 중첩되지 않거나 이로 구성되지 않는다.
예시적인 긴 신생항원 펩티드의 아미노산 서열이 표 8에 제시되어 있다.
이들 예시적인 신생항원 펩티드는 플라디에놀리드 스플라이싱 조절제를 함유하는 ADC의 투여 후에 생성되지만, 유사한 작용 메커니즘(즉, 스플라이싱 조절의 유사한 메커니즘)을 고려할 때, 유사한 신생항원 펩티드가 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 의해 생산될 수 있다.
Figure pct00071
Figure pct00072
표 7에 나열된 29개의 신생펩티드의 단백질 서열은 연장될 수 있다. 연장된 단백질 서열은 옆에 있는 아미노산 서열에 추가하여 신생펩티드 서열 자체 둘 모두를 포함한다. 연장된 단백질 서열은 수지상 세포에 의한 단백질 흡수를 보다 용이하게 하고 상이한 HLA 이소형들을 갖는 모델에서 항원 제시 및 T-세포 프라이밍을 가능하게 한다. 29개의 연장된 신생펩티드의 아미노산 서열이 표 8에 제시되어 있다.
Figure pct00073
Figure pct00074
본원에 사용된, 신생항원 펩티드 또는 mRNA 백신은, 그 단편이 면역원성 잠재력을 보유하는 한, 신생항원 펩티드 또는 이의 인코딩 mRNA의 단편을 사용하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 신생항원 백신은 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 적어도 10, 적어도 12, 적어도 15, 또는 적어도 20개의 신생항원 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 신생항원 펩티드(들)는 길이가 약 5 내지 약 50개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 신생항원 펩티드(들)는 길이가 약 10 내지 약 50개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 길이가 약 10 내지 약 35개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 신생항원 펩티드(들)는 길이가 약 15 내지 약 25개 아미노산 범위이다.
다양한 구현예에서, 본 개시는 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물; 및 신생항원 백신을 대상체에게 투여함으로써 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 신생항원 백신은, 예를 들어 펩티드 또는 mRNA 신생항원 백신일 수 있다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물은 신생항원 백신 투여 전에 투여된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물은 신생항원 백신 투여 후 투여된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물은 신생항원 백신의 투여와 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 투여는 초기 투여 후 적어도 1회 반복된다. 일부 구현예에서, 반복되는 투여에 사용되는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 양은 초기 투여에 사용된 양과 비교하여 감소된다.
다양한 구현예에서, 본 개시는 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는데 사용하기 위한 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물; 및 신생항원 백신(예를 들어, 범용 신생항원 백신)의 조합을 추가로 제공한다. 일부 구현예에서, 신생항원 백신은 펩티드 또는 mRNA 신생항원 백신이다. 일부 구현예에서, 조합은 적어도 하나의 추가 요법을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 추가 요법은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 또는 적어도 5개의 추가 요법을 포함한다.
다양한 구현예에서, 본 개시는 (a) 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물을 대상체에게 투여하는 것; (b) 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 투여 후 대상체에서 하나 이상의 신생항원을 검출하는 것; (c) 하나 이상의 신생항원을 범용 신생항원 패널과 비교하는 것; 및 (d) 대상체에 존재하는 적어도 하나의 범용 신생항원을 포함하는 범용 신생항원 백신을 대상체에게 투여하는 것에 의해 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 추가로 제공한다. 일부 구현예에서, 범용 신생항원 백신은 단독으로 또는 적어도 하나의 추가 요법과 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 추가 요법은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 또는 적어도 5개의 추가 요법을 포함한다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 추가 요법은 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 반복되는 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 반복되는 투여는 범용 신생항원 백신의 투여 전에 개시된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 반복은 범용 신생항원 백신의 투여 후에 개시된다. 일부 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 반복되는 투여는 범용 신생항원 백신의 투여와 동시에 개시된다. 일부 구현예에서, 반복되는 투여에 사용되는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 양은 초기 투여에 사용되는 양과 비교하여 감소된다. 일부 구현예에서, 초기 및/또는 반복되는 투여에 사용되는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 양은 백신 치료없이 사용되는 경우의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 표준 투여량과 비교하여 감소된다. 일부 구현예에서, 초기 및/또는 반복되는 투여에 사용되는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 양은, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 표준 투여량과 비교하여, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90%만큼 감소된다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 추가 요법은 체크포인트 저해제(예를 들어, 본원에 기재된 예시적인 체크포인트 저해제 중 임의의 것)를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 체크포인트 저해제의 투여는 범용 신생항원 백신의 투여 및/또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 반복되는 투여 전에 개시된다. 일부 구현예에서, 체크포인트 저해제의 투여는 범용 신생항원 백신의 투여 및/또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 반복 후 개시된다. 일부 구현예에서, 체크포인트 저해제의 투여는 범용 신생항원 백신의 투여 및/또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물의 반복되는 투여와 동시에 개시된다. 일부 구현예에서, 체크포인트 저해제의 투여는 초기 투여 후 적어도 1회 반복된다. 일부 구현예에서, 반복되는 투여에 사용되는 체크포인트 저해제의 양은 초기 투여에 사용되는 양과 비교하여 감소된다. 일부 구현예에서, 반복되는 투여에 사용되는 체크포인트 저해제의 양은 체크포인트 저해제의 표준 투여량과 비교하여 감소된다. 일부 구현예에서, 반복되는 투여에 사용되는 체크포인트 저해제의 양은, 체크포인트 저해제의 표준 투여량과 비교하여, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90%만큼 감소된다. 일부 구현예에서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 체크포인트 저해제에 대해 불내성, 비-반응성, 또는 저 반응성이다.
다양한 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드 또는 적어도 하나의 신생항원 mRNA를 포함하는 신생항원 백신이 또한 본원에서 제공된다. 일부 구현예에서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 펩티드를 포함한다. 일부 다른 구현예에서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 mRNA를 포함한다.
다양한 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물; 및 신생항원 백신(예를 들어, 범용 신생항원 백신)을 포함하는 키트가 또한 본원에서 제공된다. 일부 구현예에서, 신생항원 백신은 펩티드 또는 mRNA 신생항원 백신이다. 일부 구현예에서, 키트는 다음을 포함하나 이에 한정되지 않는, 하나 이상의 추가 성분을 추가로 포함한다: 사용 지시서; 기타 제제, 예를 들어 하나 이상의 추가 치료제; 치료적 투여를 위한 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 조성물 및/또는 신생항원 백신을 제조하기 위한 디바이스, 용기, 또는 기타 재료; 약학적으로 허용되는 담체; 및 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 조성물, 및/또는 신생항원 백신을 환자에게 투여하기 위한 디바이스, 용기, 또는 기타 재료. 사용 지시서는, 예를 들어 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 환자에서, 제안된 투여량 및/또는 투여 방식을 포함하는 치료적 적용을 위한 지침을 포함할 수 있다. 다양한 구현예에서, 키트는 치료적 용도, 예를 들어 환자의 신생물성 장애를 치료 또는 예방하기 위한 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물, 및 신생항원 백신의 용도를 위한 지시서를 추가로 함유한다. 다양한 구현예에서, 키트는 적어도 하나의 추가 치료제(예를 들어, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물, 및 신생항원 백신과 함께 투여하기 위한, 예를 들어 체크포인트 저해제)를 추가로 함유한다. 다양한 구현예에서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 조성물, 및/또는 신생항원 백신은 약학 조성물로 제형화된다.
본원에 개시된 방법 및 조성물의 일부 구현예에서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 길이가 약 10 내지 약 50개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 길이가 약 10 내지 약 35개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 길이가 약 15 내지 약 25개 아미노산 범위이다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 본원에 개시된 하나 또는 하나 초과의 신생항원 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 신생항원 서열 및/또는 항원성 부분은 길이가 약 10 내지 약 35개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열 및/또는 항원성 부분은 길이가 약 15 내지 약 25개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열 및/또는 항원성 부분은 길이가 약 10 내지 약 20개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열 및/또는 항원성 부분은 정준 펩티드 서열(예를 들어, 표 8에 밑줄 표시된 예시적인 정준 펩티드 서열 중 임의의 것)에 전적으로 중첩되지 않거나 이로 구성되지 않는다.
일부 구현예에서, 신생항원 서열은 대상체에 특이적인 신생항원 서열이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열은 대상체를 위한 개인화된 신생항원 백신이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열은 대상체에서 발현되는 적어도 하나의 HLA 대립 유전자에 결합할 수 있다.
일부 다른 구현예에서, 신생항원 서열은 범용 신생항원 서열이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열은 범용 신생항원 백신이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열은 신생물성 장애를 앓는 대상체 집단에서 대상체의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 또는 적어도 45%에서 발현되는 적어도 하나의 HLA 대립 유전자에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열은 신생물성 장애를 앓는 대상체 집단의 적어도 1%, 적어도 5%, 또는 적어도 10%에 존재하는 종양에 대한 T-세포 반응을 끌어낼 수 있다.
일부 구현예에서, 신생항원 서열은 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물을 투여함으로써 대상체에서 유도된 적어도 하나의 신생항원 펩티드를 시퀀싱함으로써 확인되었다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 신생물 세포를 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물과 접촉시킴으로써 유도된 신생항원 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 신생물 세포는 시험관내 세포 배양물에 존재한다. 일부 구현예에서, 신생물 세포는 대상체로부터 수득된다. 일부 구현예에서, 신생물 세포는 대상체 내에 존재한다.
일부 구현예에서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 펩티드 또는 mRNA 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 다양한 구현예에서, 신생항원 펩티드 또는 mRNA는 면역 반응을 끌어내는 것을 돕기 위해 적합한 담체에 연결될 수 있다. 면역원성 제제(예를 들어, 신생항원 펩티드 또는 mRNA)에 연결하기 위한 예시적인 담체로는 혈청 알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌, 면역글로불린 분자, 티로글로불린, 난백알부민, 파상풍 변성 독소, 또는, 디프테리아, 이.콜라이(E.coli), 콜레라, 또는 에이치.파일로리(H.pylori)와 같은, 다른 병원성 박테리아 유래의 변성 독소, 또는 약화된 독소 유도체가 포함된다. 면역 반응을 자극하거나 향상시키기 위한 다른 담체로는, IL-1, IL-1α 및 β 펩티드, IL-2, γINF, IL-10, GM-CSF와 같은 사이토카인, 및, M1P1α 및 β 및 RANTES와 같은 케모카인이 포함된다. 면역원성 제제는 또한, 예를 들어 WO 97/17613 및 WO 97/17614에, 기재된 바와 같이, 조직을 가로지르는 수송을 향상시키는 펩티드에 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용되는 담체는 펩티드, 혈청 알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌, 면역글로불린, 티로글로불린, 난백알부민, 변성 독소 또는 약화된 변성 독소 유도체, 사이토카인, 및 케모카인으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 신생항원 펩티드 또는 mRNA는 약학적으로 허용되는 담체에 연결될 수 있다. 면역원성 제제는 화학적 가교결합에 의해 담체에 연결될 수 있다. 면역원성 펩티드를 담체에 연결하기 위한 기술로는 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜-티오) 프로피오네이트(SPDP) 및 숙신이미딜 4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1-카르복실레이트(SMCC)를 사용한 디설파이드 연결 형성이 포함된다(펩티드에 설프하이드릴 기가 없는 경우, 이는 시스테인 잔기의 추가에 의해 제공될 수 있다). 이들 시약은 그 자신과 하나의 단백질 상에 상주하는 펩티드 시스테인 사이에 디설파이드 연결 및 리신 상의 엡실론-아미노, 또는 다른 아미노산의 다른 유리 아미노 기를 통해 아미드 연결을 생성한다. 이러한 다양한 디설파이드/아미드-형성 제제는 문헌[Jansen et al.((1982) Immun Rev. 62: 185)]에 기재되어 있다. 다른 이작용성 커플링 제제는 디설파이드 연결보다는 티오에테르를 형성한다. 이들 티오에테르-형성 제제 중 다수는 상업적으로 이용 가능하며 6-말레이미도카프로산, 2-브로모아세트산, 및 2-요오도아세트산, 4-(N-말레이미도-메틸) 사이클로 헥산-1-카르복실산의 반응성 에스테르를 포함한다. 카르복실 기는 숙신이미드 또는 1-하이드록실-2-니트로-4-설폰산, 소듐 염과 이들을 조합함으로써 활성화될 수 있다. 일부 구현예에서, 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 담체는 링커를 통해 공유 결합으로 부착된다.
신생항원 및 기타 이러한 면역원성 펩티드는 또한 담체와의 융합 단백질로서 발현될 수 있다. 면역원성 펩티드는 아미노 말단, 카르복실 말단, 또는 펩티드 내의 임의의 부위(내부)에서 담체로 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 면역원성 펩티드의 다수 반복이 융합 단백질 내에 존재할 수 있다. 일부 구현예에서, 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 담체는 융합 단백질로서 발현된다.
일부 구현예에서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 펩티드 또는 이의 인코딩 mRNA 및 약학적으로 허용되는 희석제를 포함한다. 일부 구현예에서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 펩티드 또는 이의 인코딩 mRNA 및 약학적으로 허용되는 애주번트(예를 들어, 본원에 기재된 애주번트)를 포함한다.
본원에 개시된 방법 및 조성물의 일부 구현예에서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 mRNA를 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 mRNA는 하나 또는 하나 초과의 신생항원 서열을 인코딩한다.
일부 구현예에서, 신생항원 서열 및/또는 항원성 부분은 길이가 약 10 내지 약 50개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 길이가 약 10 내지 약 35개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열 및/또는 항원성 부분은 길이가 약 15 내지 약 25개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열 및/또는 항원성 부분은 길이가 약 10 내지 약 20개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열 및/또는 항원성 부분은 정준 펩티드 서열(예를 들어, 표 8에 밑줄 표시된 예시적인 정준 펩티드 서열 중 임의의 것)에 전적으로 중첩되지 않거나 이로 구성되지 않는다.
일부 구현예에서, 신생항원 서열은 대상체에 특이적인 신생항원 서열이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열은 대상체를 위한 개인화된 신생항원 백신이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열은 대상체에서 발현되는 적어도 하나의 HLA 대립 유전자에 결합할 수 있다.
일부 다른 구현예에서, 신생항원 서열은 범용 신생항원 서열이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열은 범용 신생항원 백신이다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열은 신생물성 장애를 앓는 대상체 집단에서 대상체의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 또는 적어도 45%에서 발현되는 적어도 하나의 HLA 대립 유전자에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 신생항원 서열은 신생물성 장애를 앓는 대상체 집단의 적어도 1%, 적어도 5%, 또는 적어도 10%에 존재하는 종양에 대한 T-세포 반응을 끌어낼 수 있다.
일부 구현예에서, 신생항원 서열은 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물을 투여함으로써 대상체에서 유도된 적어도 하나의 신생항원 mRNA를 시퀀싱함으로써 확인되었다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 mRNA는 신생물 세포를 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물과 접촉시킴으로써 유도된 신생항원 서열을 인코딩한다. 일부 구현예에서, 신생물 세포는 시험관내 세포 배양물에 존재한다. 일부 구현예에서, 신생물 세포는 대상체로부터 수득된다. 일부 구현예에서, 신생물 세포는 대상체 내에 존재한다.
일부 구현예에서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 mRNA 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 mRNA는 약학적으로 허용되는 담체에 연결된다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용되는 담체는 펩티드, 혈청 알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌, 면역글로불린, 티로글로불린, 난백알부민, 변성 독소 또는 약화된 변성 독소 유도체, 사이토카인, 및 케모카인으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 mRNA 및 약학적으로 허용되는 희석제를 포함한다. 일부 구현예에서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 mRNA 및 약학적으로 허용되는 애주번트(예를 들어, 본원에 기재된 애주번트)를 포함한다.
일부 구현예에서, 신생항원 mRNA는 캡슐화제에 의해 캡슐화된다. 일부 구현예에서, 캡슐화제는 신생항원 mRNA를 분해로부터 보호하고 백신 전달을 개선한다(McNamara et al.(2015) J Immunol Res. 2015: 794528). 일부 구현예에서, 캡슐화제는 리포솜이다. 일부 구현예에서, 리포솜은 N-[1-(2,3-디올레올옥시)프로필]-N,N,N-트리메틸 암모늄 클로라이드 1(DOTAP)과 같은 양이온성 리포솜이다. 일부 구현예에서, 캡슐화제는 나노 입자이다. 일부 구현예에서, 나노 입자는 신생항원 mRNA를 뉴클레아제 분해로부터 보호하고/하거나 세포 흡수 및/또는 전달 효율을 향상시킨다. 일부 구현예에서, 나노 입자는 완전히 분해 가능하도록 조작될 수 있다. 일부 구현예에서, 나노 입자는 인지질 쉘(shell)로 둘러싸인 pH 반응성 폴리-(b-아미노 에스테르)(PBAE) 코어를 갖는 생분해 가능한 코어-쉘 구조의 나노 입자이다(Su et al.(2011) Mol Pharm. 8(3)): 774-87). 일부 구현예에서, 이러한 나노 입자는 생체내에서 mRNA를 전달하고 항-종양 면역 반응을 끌어내는 데 특히 효율적이다.
일부 구현예에서, 대상체는 약 150개 이하 돌연변이의 비-동의 돌연변이 부담을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 100개 이하 돌연변이의 비-동의 돌연변이 부담을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 50개 이하 돌연변이의 비-동의 돌연변이 부담을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 신생물성 장애, 예를 들어 혈액 악성 종양 또는 고형 종양을 갖거나 갖는 것으로 의심된다. 일부 구현예에서, 혈액 악성 종양은 B-세포 악성 종양, 백혈병, 림프종, 및 골수종으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 혈액 악성 종양은 급성 골수성 백혈병 및 다발성 골수종으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 유방암, 위암, 전립선암, 난소암, 폐암, 자궁암, 타액 관 암종, 흑색종, 결장암, 자궁 경부암, 췌장암, 신장암, 결장직장암, 및 식도암으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 HER2-양성 유방암, 위 선암종, 전립선암, 및 골육종으로부터 선택된다.
본원에 사용된, "애주번트"는 수반하는 면역원성 제제, 예를 들어 신생항원 펩티드 또는 mRNA에 대한 면역 반응을 증가, 증폭, 또는 조절할 수 있는 물질을 지칭한다. 특정 구현예에서, 본 개시의 신생항원은 애주번트, 즉 그 자체가 적응 면역 반응을 야기하지 않지만, 수반하는 신생항원에 대한 반응을 증폭 또는 조절하는 물질과 조합하여 투여될 수 있다. 면역 반응을 끌어내기 위해, 다양한 애주번트가 개시된 신생항원과 조합하여 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 애주번트(들)는 반응의 정성적 형태에 영향을 미칠 신생항원에서의 구조형태적 변화를 야기하지 않으면서 신생항원에 대한 고유의 반응을 증가시키기 위해 선택된다. 일부 구현예에서, 애주번트(들)는 T-이펙터(예를 들어, CD8) 세포 프라이밍 및/또는 활성화를 향상시키기 위해 선택된다.
특정 구현예에서, 애주번트는 알루미늄 하이드록사이드, 알루미늄 포스페이트, 및 알루미늄 설페이트와 같은 알루미늄 염(명반)이다. 이러한 애주번트는, 3 탈-O-아실화된 모노포스포릴 지질 A(MPL) 또는 3-DMP, 폴리글루탐산 또는 폴리리신과 같은, 폴리머 또는 모노머 아미노산과 같은, 다른 특정 면역 자극 제제와 함께 또는 없이 사용될 수 있다. 이러한 애주번트는 무라밀 펩티드(예를 들어, N-아세틸무라밀-L-트레오닐-D-이소글루타민(thr-MDP), N-아세틸-노르무라밀-L-알라닐-D-이소글루타민(nor-MDP), N-아세틸무라밀-L-알라닐-D-이소글루타미닐-L-알라닌-2-(1'-2'디팔미토일-sn-글리세로-3-하이드록시포스포릴옥시)-에틸아민(MTP-PE), N-아세틸글루크사미닐-N-아세틸무라밀-L-Al-D-이소글루-L-Ala-디팔미톡시 프로필아미드(DTP-DPP)), 또는 기타 박테리아 세포벽 성분과 같은, 다른 특정 면역 자극 제제와 함께 또는 없이 사용될 수 있다. 기타 애주번트는 수-중-유 에멀션이며 (a) 5% 스쿠알렌, 0.5% 트윈(Tween) 80, 및 0.5% 스판(Span) 85를 함유하여(선택적으로 다양한 양의 MTP-PE 함유) 모델 110Y 마이크로플루이다이저(Model 110Y microfluidizer)(Microfluidics)와 같은 미세유동화기를 사용하여 서브마이크론 입자로 제형화된, MF59(WO 90/14837), (b) 10% 스쿠알렌, 0.4% 트윈 80, 5% 플루로닉-블록 폴리머 L121, 및 thr-MDP를 함유하여, 서브마이크론 에멀션으로 미세유동화되거나 볼텍스되어 더 큰 입자 크기의 에멀션을 생성하는, SAF, 및 (c) 2% 스쿠알렌, 0.2% 트윈 80, 및 모노포스포릴지질 A(MPL), 트레할로스 디미콜레이트(TDM), 및 세포벽 골격(CWS)으로 구성된 군으로부터의 하나 이상의 박테리아 세포벽 성분, 예를 들어 MPL-FCWS(데톡스(Detox)TM)를 함유하는, 리비(Ribi)TM 애주번트 시스템(RAS),(Ribi ImmunoChem)을 포함한다. 일부 구현예에서, 애주번트는, 스티뮬론(Stimulon)TM(QS21)과 같은, 사포닌 또는 ISCOM(면역 자극 복합체) 및 ISCOMATRIX와 같은 이로부터 생성된 입자이다. 기타 애주번트는 완전 프로인트 애주번트(Complete Freund 's Adjuvant, CFA) 및 불완전 프로인트 애주번트(IFA), 인터루킨(IL-1, IL-2, 및 IL-12), 대식세포 콜로니 자극 인자(M-CSF), 및 종양 괴사 인자(TNF)와 같은, 사이토카인을 포함한다.
애주번트는 단일 조성물로서 면역원성 제제(예를 들어, 신생항원 펩티드 또는 mRNA)와 함께 투여될 수 있거나, 면역원성 제제의 투여 전, 동시, 또는 후에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 면역원성 제제 및 애주번트는 동일한 바이알에 포장 및 공급될 수 있거나 별도의 바이알에 포장되고 사용 전에 혼합될 수 있다. 일부 구현예에서, 면역원성 제제 및 애주번트는 의도된 치료적 적용을 나타내는, 라벨과 함께 포장될 수 있다. 일부 구현예에서, 면역원성 제제 및 애주번트가 개별적으로 포장되는 경우, 포장은 사용 전 혼합에 대한 지시서를 포함할 수 있다. 애주번트 및/또는 담체의 선택은 애주번트를 함유하는 면역원성 제형의 안정성, 투여 경로, 투약 일정, 백신 접종되는 종에 대한 애주번트의 효능, 및, 인간에서, 약학적으로 허용되는 애주번트가 관련 규제 조직에 의해 인체 투여 용으로 승인되었거나 승인 가능한 것임에 따라 달라진다. 예를 들어, 완전 프로인트 애주번트는 인간 투여를 위해 적합하지 않다. 그러나, 명반, MPL 또는 불완전 프로인트 애주번트(Chang et al.(1998) Adv Drug Deliv Rev. 32: 173-186)는 단독으로 또는 선택적으로 명반, QS21, 및 MPL 및 이들의 모든 조합 중 임의의 것과 조합하여 인간 투여를 위해 적합하다.
다양한 구현예에서, 본 개시는 적어도 하나의 신생항원에 대해 스크리닝하고 이를 확인하는 방법을 추가로 제공한다. 보다 구체적으로, 다양한 구현예에서, 본 개시는 (a) 신생물 세포를 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물과 접촉시키는 것; (b) 신생물 세포를 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물과 접촉시킨 후 적어도 하나의 선택적으로-스플라이싱된 mRNA 전사체를 검출하는 것; (c) 적어도 하나의 선택적으로-스플라이싱된 mRNA 전사체의 적어도 하나의 펩티드로의 번역을 예측하는 것; 및 (d) 적어도 하나의 펩티드를 기준 프로테옴과 비교하며, 여기서 적어도 하나의 펩티드가 기준 프로테옴 내의 어떤 펩티드와도 매칭되지 않는 경우 적어도 하나의 신생항원이 확인되는 것에 의해 적어도 하나의 신생항원을 확인하는 방법을 제공한다. 다양한 구현예에서, 방법은 적어도 하나의 범용 신생항원을 확인하기 위해 하나 이상의 추가 신생물 세포를 접촉시키는 것을 추가로 포함한다. 다양한 구현예에서, 적합한 신생항원(예를 들어, 신생항원 백신에서의 사용을 위한)을 확정하고/하거나 하나 이상의 범용 신생항원을 확인하기 위해 하나 이상의 추가 신생물 세포 또는 샘플(예를 들어, 조직 생검) 상에서 방법이 반복된다.
다양한 다른 구현예에서, 본 개시는 (a) 신생물 세포를 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC 를 포함하는 조성물과 접촉시키는 것; (b) 신생물 세포를 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물과 접촉시킨 후 잠재적인 신생항원 서열을 포함하는 적어도 하나의 펩티드를 검출하는 것; 및 (c) 적어도 하나의 펩티드를 기준 프로테옴과 비교하며, 여기서 적어도 하나의 펩티드가 기준 프로테옴 내의 어떤 펩티드와도 매칭되지 않는 경우 적어도 하나의 신생항원이 확인되는 것에 의해 적어도 하나의 신생항원을 확인하는 방법을 제공한다. 다양한 구현예에서, 적어도 하나의 범용 신생항원을 확인하기 위해 방법은 하나 이상의 추가 신생물 세포를 접촉시키는 것을 추가로 포함한다. 다양한 구현예에서, 적합한 신생항원(예를 들어, 신생항원 백신에서의 사용을 위한)을 확정하고/하거나 하나 이상의 범용 신생항원을 확인하기 위해 하나 이상의 추가 신생물 세포 또는 샘플(예를 들어, 조직 생검) 상에서 방법이 반복된다.
본원에 기재된 신생항원 확인 방법의 일부 구현예에서, 적어도 하나의 선택적으로-스플라이싱된 mRNA 전사체를 검출하는 것은 RNAseq를 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 선택적으로-스플라이싱된 mRNA 전사체의 번역을 예측하는 것은 적어도 하나의 전사체에 대한 스플라이싱된 퍼센트(percent spliced in, dPSI) 값의 변화를 정량화하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 선택적으로-스플라이싱된 mRNA 전사체의 번역을 예측하는 것은 RiboSeq 및/또는 리보솜 프로파일링을 포함한다.
본원에 기재된 신생항원 확인 방법의 일부 구현예에서, 방법은 예측된 주요 조직적합성 복합체(MHC) 결합에 대해 적어도 하나의 펩티드를 평가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 예측된 MHC 결합은 적어도 하나의 펩티드의 미가공 친화성 예측 결합 강도를 측정함으로써 결정된다. 일부 구현예에서, 약 500 nM 이상의 미가공 친화성 예측 결합 강도는 MHC 결합을 나타낸다. 일부 구현예에서, 예측된 MHC 결합은 일련의 무작위 펩티드에 대한 예측 결합 강도의 분포를 확인하는 것; 및 적어도 하나의 펩티드의 예측 결합 강도를 분포와 비교하는 것에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, 분포의 상위 2%의 예측 결합 강도는 약한 MHC 결합을 나타낸다. 일부 구현예에서, 분포의 상위 0.5%의 예측 결합 강도는 강한 MHC 결합을 나타낸다.
본원에 기재된 신생항원 확인 방법의 일부 구현예에서, 신생물 세포는 시험관내 세포 배양물에 존재한다. 일부 구현예에서, 신생물 세포는 대상체로부터 수득된다. 일부 구현예에서, 신생물 세포는 대상체 내에 존재한다.
다양한 구현예에서, (a) 본원에 개시된 예시적인 확인 방법 중 임의의 것을 사용하여 적어도 하나의 신생항원(예를 들어, 적어도 하나의 신생항원 펩티드 또는 이의 인코딩 mRNA)을 확인하는 것; 및 (b) 적어도 하나의 신생항원을 약학적으로 허용되는 담체, 희석제, 또는 애주번트(예를 들어, 본원에 기재된 약학적으로 허용되는 담체, 희석제, 또는 애주번트 중 임의의 것)와 함께 제형화하는 것에 의해 신생항원 백신을 제조하는 방법이 또한 본원에서 제공된다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 및/또는 항원성 부분은 길이가 약 10 내지 약 50개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 길이가 약 10 내지 약 35개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 및/또는 항원성 부분은 길이가 약 15 내지 약 25개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 및/또는 항원성 부분은 길이가 약 10 내지 약 20개 아미노산 범위이다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 신생항원 및/또는 항원성 부분은 정준 펩티드 서열(예를 들어, 표 8에 밑줄 표시된 예시적인 정준 펩티드 서열 중 임의의 것)에 전적으로 중첩되지 않거나 이로 구성되지 않는다.
일부 구현예에서, 백신에 사용되는 적어도 하나의 신생항원은 약학적으로 허용되는 담체에 연결된다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용되는 담체는 펩티드, 혈청 알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌, 면역글로불린, 티로글로불린, 난백알부민, 변성 독소 또는 약화된 변성 독소 유도체, 사이토카인, 및 케모카인으로부터 선택된다.
헤르복시디엔 스플라이싱 조절제/ADC 및 조작된 T-세포(CAR-T)의 조합:
다양한 구현예에서, 본원에 기재된 암을 갖는 환자는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물 및 하나 이상의 조작된 종양-표적화 T-세포(즉, CAR-T)의 조합을 사용하여 치료될 수 있다. 따라서, 다양한 구현예에서, 본 개시는 유효량의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 또는 ADC를 포함하는 조성물; 및 조작된 종양-표적화 T-세포(즉, CAR-T)를 대상체에 투여함으로써 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 다양한 구현예에서, 키메라 T-세포 수용체는 확인된 신생항원과 반응성인 항원 인식 서열을 사용하여 조작될 수 있다.
예를 들어, 다양한 구현예에서, 세포 표면 단백질의 세포외 도메인에서의 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제- 또는 ADC-유도된 변화를 표적화 하기 위해, 세포 표면-발현된 신생항원 단백질 도메인을 인식하는 항체를 먼저 확인함으로써 키메라 항원-반응성 T-세포 수용체(CAR)가 조작될 수 있다. 그 다음 이러한 항체의 항원 인식 서열이 선택적 표적화 및 활성화를 위해 T-세포 수용체 도메인에 융합될 수 있다.
다양한 다른 구현예에서, 종양 세포의 항원 제시 기구를 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제- 또는 ADC-유래된 신생항원과 통합하는 전략이 사용된다. 일부 구현예에서, 알려지고 빈번하게 나타나는 HLA 대립 유전자(예를 들어, HLA-A*02:01)를 함유하는 세포가 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물로 처리될 수 있고 MHC1-결합된 신생항원은 리간도믹스(ligandomics)에 의해 확인된다. 일부 구현예에서, 이들 펩티드는 동일한 HLA 대립 유전자를 발현하는 건강한 공여자 유래의 T-세포를 프라이밍 및/또는 확장하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 T-세포가 단리될 수 있고 T-세포 수용체(TCR) α 및 β 사슬은 시퀀싱되어 동족성 항원 인식/가변 영역을 확인할 수 있다. 일부 구현예에서, 이어서 동족성 CAR이 조작될 수 있다.
일부 구현예에서, CAR 서열은 현재 이용 가능한 프로토콜을 사용하여 환자-유래된 T-세포 집단 내로 클로닝되고 확장된다. 일부 구현예에서, 조작된 T-세포는 이어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물을 사용하는 치료 후, 환자의 순환계로 다시 주입된다. 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제, ADC, 또는 조성물을 사용하는 치료 후, 일부 구현예에서, 종양 세포는 항원을 제시하기 시작할 수 있다. 일부 구현예에서, 조작된 T-세포 집단은 항원 제시 종양 세포와 관계 맺고 이를 살해할 수 있다.
본원에 기재된 개시의 방법의 다른 적합한 변형 및 각색이 명백하고 본 개시 또는 본원에 개시된 구현예의 범위를 벗어나지 않고 적합한 균등물을 사용하여 이루어질 수 있음이 당업자에게 용이하게 명백할 것이다. 지금 본 개시를 상세히 기술하였지만, 이는, 단지 예시의 목적으로 포함되고 제한하려고 의도되지 않은, 다음의 실시예를 참조함으로써 보다 명확하게 이해될 것이다.
실시예
실시예 1
표 9 내지 11에 나타낸 구조를 갖는, 페이로드, 링커, 및 접합 가능한 링커-페이로드(링커-약물, L-H) 화합물에 대한 합성 방법이 기술된다. 접합 가능한 링커-페이로드는 항체-약물 접합체(ADC)의 제조에 사용하였다. 예시적인 ADC는 실시예 3 내지 5에 기재되어 있다.
1.1 시약 및 재료
다음의 합성 방법에 사용되는 출발 물질은 상업적으로 이용 가능하거나 알려진 물질로부터 표준 방법에 의해 용이하게 제조될 수 있다. 개시된 접합 가능한 링커-페이로드는 본원에 기재된 반응 및 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 하기 기재된 합성 방법에 대한 기재에서, 용매 선택, 반응 분위기, 반응 온도, 실험 지속 시간, 및 워크업 절차를 포함하는, 모든 제안된 반응 조건은, 달리 표시되지 않는 한, 그 반응에 대해 표준인 조건인 것으로 선택될 수 있음이 이해되어야 한다. 분자의 다양한 부분 상에 존재하는 기능성이 제안된 시약 및 반응과 양립 가능해야 함이 유기 합성 분야의 당업자에 의해 이해된다. 반응 조건과 양립 가능하지 않은 치환체는 당업자에게 명백하며, 따라서 대체 가능한 방법이 본원에 표시된다.
워터스(Waters) 자동정제 시스템 및 산성 이동상 조건 하의 XTerra MS C18 컬럼(5 μm, 19 mm x 100 mm)을 이용하여 조제용 액체 크로마토그래피-질량 분광분석(LC/MS)을 수행하였다. 핵 자기 공명(NMR) 스펙트럼은 바리안(Varian) 기기(Agilent Technologies)를 사용하여 400 MHz에서 기록하였다. 바이오타지 엠리스(Biotage Emrys) 리버레이터(Liberator) 또는 이니시에이터(Initiator) 마이크로파를 사용하여 마이크로파 가열을 수행하였다. 컬럼 크로마토그래피는 텔레다인 이스코 콤비플래쉬 Rf200d(Teledyne Isco Combiflash Rf200d)를 사용하여 수행하였다. 뷰키(Buechi) 회전 증발기 또는 제네바크(Genevac) 원심 증발기를 사용하여 용매 제거를 수행하였다.
용어/약어: 본원에 사용된, 용어 "비활성된"은 반응기(예를 들어, 반응 용기, 플라스크, 유리 반응기) 내의 공기를, 질소 또는 아르곤과 같은, 본질적으로 수분이-없는, 비활성 기체로 대체하는 것을 지칭한다. 다음의 약어가 본원에 사용된다: DCM = 디클로로메탄, DMF = 디메틸포름아미드, HPLC = 고성능 액체 크로마토그래피, KHMDS = 포타슘 비스(트리메틸실릴)아미드, LC/MS = 액체 크로마토그래피-질량 분광분석, MeOH = 메탄올, RT = 실온, TBSCl = tert-부틸디메틸실릴 클로라이드, THF = 테트라하이드로푸란, TLC = 박층 크로마토그래피. 다중도는 다음의 약어를 사용하여 표시된다: s = 일중선, d = 이중선, t = 삼중선, q = 사중선, quint = 오중선, sxt = 육중선, m = 다중선, dd = 이중선의 이중선, ddd = 이중선의 이중선의 이중선, dt = 삼중선의 이중선, br s = 브로드 일중선.
LC/MS: 이동상 = A(H2O 중 0.1% 포름산) 및 B(아세토니트릴 중 0.1% 포름산). 구배 = 1.8분에 B 5%에서 95%. 컬럼 = 워터스 어퀴티(Waters Acquity) BEH C18 컬럼(1.7 μm, 2.1 x 50 mm).
Figure pct00075
Figure pct00076
Figure pct00077
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Figure pct00079
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Figure pct00081
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Figure pct00084
1.2 ADL1-H1, ADL1-H2, ADL1-H3, 및 ADL1-H4의 제조
1.2.1 개관-일반 절차 1
Figure pct00085
반응식 1
단계 1: 발효 및 생물전환
일본의 토양으로부터 단리된, 사카로트릭스 종(Saccharothrix sp.) EAS-AB4564의 20% 글리세롤 모액을 10 mL의 SY-32 배지(1% D-글루코스, 1% 가용성 녹말, 0.5% 박토소이톤, 0.5% 효모 추출물, 0.2% 암모늄 설페이트, 0.2% NaCl 및 2.3% TES, pH 8.0)를 함유하는 시험관 내 제1 종자 배양물 내에 접종하였다. 제1 종자 배양물을 200 rpm의 왕복 진탕기 상에서 28℃에서 2일 동안 진탕하였다. 발효 후, 제1 종자 배양물을 1% v/v로 에를렌마이어(Erlenmeyer) 플라스크 내 멸균된 제2 종자 배양물 내에 접종하였고, 각각은 100 mL의 새로운 SY-32 배지를 함유하였다. 제2 종자 배양물을 200 rpm의 회전 진탕기(Iwashiya bioscience SC-144-GR) 상에서 28℃에서 2일 동안 진탕하였다. 발효 후, 250 mL의 제2 배양물을, 10 L의 새로운 SY-32 배지 및 2 mL의 소포제 PE-M을 함유하는, 15 L 발효기(Sanki seiki MAT-15) 내에 접종하였다. 발효는 교반 및 통기(450 rpm, 10 L/분) 조건 하에서 28℃에서 수행하였다. 48시간 후, 배양액을 3000 rpm에서 10분 동안 원심 분리하였다. 상청액 제거 후, 미생물 세포 세척을 위해 10 L의 20 mM 포스페이트 완충액(pH 7.0)을 미생물 펠렛에 첨가하였다. 현탁액을 3000 rpm에서 10분 동안 원심 분리하였다. 세척 완충액 제거 후, 10 L의 반응 완충액(1% D-글루코스, 0.2% 마그네슘 클로라이드 헥사하이드레이트, 2.3% TES 및 1.3 g 헤르복시디엔, pH 8.0)을 미생물 펠렛에 첨가하고, 현탁액을 15 L 발효기로 옮겼다. 생물-전환은 교반 및 통기(450 rpm, 10 L/분) 하면서 28℃에서 6시간 동안 수행하였다.
5-하이드록시 헤르복시디엔의 단리
상기-언급된 혼합물(10 L)에 XAD-7HP(400 g)를 첨가하고, 300 rpm에서 30분 동안 혼합물을 교반하였다(EYELA MAZELA Z). 교반 후, 염색 및 테스트 체(0.25 mm 구경 및 0.16 mm 와이어 직경)를 사용하여 XAD-7HP의 분리를 결정하였다. 동일한 작동을 반복하였다. 수집된 XAD-7HP를 1 L의 아세톤으로 추출하고, 용매를 진공에서 제거하였다. 구배 용리(YMC-DispoPack AT ODS-25 120 g, 0.1% 포름산이 첨가된 물 중 25에서 55% 아세토니트릴, 15분에 걸쳐)를 이용하는 역상 MPLC(Yamazen EPCLC-W-prep 2XY)로 추출물을 정제하여, 29.5% 전환 수율로, 5-OH 헤르복시디엔(397.47 mg)을 제공하였다. 1H-NMR 및 질량 분광분석 데이터는 문헌과 일치하였다. 예를 들어, EP0781772 B1 및 문헌[Ghosh et al.(2014) Org. Lett. 16: 3154-57] 참고.
단계 2: 메틸 2-((2R,4R,5S,6S)-4-하이드록시-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)아세테이트의 합성
Figure pct00086
0℃의 THF(2 mL) 및 MeOH(0.5 mL) 중 2-((2R,4R,5S,6S)-4-하이드록시-6-((S,2E, 4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일) 아세트산(45 mg, 0.099 mmol) 용액에 트리메틸실릴디아조메탄(헥산 중 2.0 M, 0.148 mL, 0.297 mmol)을 적가하였다. 이어서 생성된 혼합물을 점차적으로 실온까지 가온하고 1시간 동안 교반 후 0℃까지 냉각하였다. 그 다음 아세트산(0.017 mL, 0.297 mmol)을 첨가하고 30분 동안 교반하였다. 이어서 혼합물을 AcOEt 및 포화 수성 소듐 바이카르보네이트를 사용하여 희석하였다. 유기층을 단리하고, 물 및 염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 단리된 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 무색 오일로서 메틸 2-((2R,4R,5S,6S)-4-하이드록시-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)아세테이트를 제공하였다(36.1 mg, 78% 수율).
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) 0.80(d, J=6.83 Hz, 3 H) 0.86(d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.03(d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.16(d, J=6.3 Hz, 3 H) 1.20-1.24(m, 1H) 1.26(S,3H) 1.31-1.34(m, 3 H) 1.40-1.59(m, 2 H) 1.63(br. s., 2 H) 1.69(S,3 H) 1.87(dd, J=13.66, 4.88 Hz, 1 H) 2.03(ddd, J=10.37, 4.02, 2.20 Hz, 1 H) 2.42(dd, J=15.61, 6.34 Hz, 2 H) 2.54(d, J=9.8 Hz, 2 H) 2.62(dd, J=15.6, 6.3 Hz, 1 H) 2.95(t, J=5.37 Hz, 1 H) 3.33-3.44(m, 2 H) 3.52(S,3 H) 3.65(S,3 H) 3.79-3.90(m, 2 H) 5.45(dd, J=15.12, 8.78 Hz, 1 H) 5.88(d, J=11.22 Hz, 1 H) 6.21(dd, J=15.12, 10.73 Hz, 1 H).
단계 3: 카르바메이트 합성
0℃의 디클로로메탄(0.04 M) 중 메틸 2-((2R,4R,5S,6S)-4-하이드록시-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)아세테이트(1.0 eq., .075 mmol), 4-니트로페닐카르보노클로리데이트(2 eq.), 후니그(Hunig) 염기(0.065 mL, 4.5 eq.)의 혼합물에 DMAP(0.05 eq.)를 첨가하였다. 그 다음 혼합물을 실온까지 가온하고 16시간 동안 교반하였다. 피페라진(10 eq.)을 혼합물에 첨가하고 생성된 혼합물을 추가 1시간 동안 교반하였다. 이어서 혼합물을 DCM을 사용하여 희석하고, 유기층을 단리하고, 물 및 염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 및 이어서 아미노-기능화된 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생산물을 제공하였다.
단계 4: 카르복실산 합성
MeOH(0.02 M ml) 중 단계 3으로부터 수득한 메틸 에스테르(1.0 eq., 0.039 mmol) 혼합물에 수성 소듐 하이드록사이드(1.0 eq., 2 N)를 첨가하였다. 혼합물을 40℃까지 가온하고 그 온도에서 4시간 동안 교반하였다. 이어서 생성된 혼합물을 0℃까지 냉각시키고 수성 염산(200 μL, 2 N)을 사용하여 중화시켰다. 이어서 혼합물을 진공에서 농축시키고 생성된 잔류물을 조제용 HPLC(H2O/MeCN/HCOOH = 80/20/0.1부터 60/40/0.1)로 정제하여 원하는 생산물을 제공하였다.
1.2.2 H1의 합성
(2S,3S,4R,6R)-2-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-6-(2-메톡시-2-옥소에틸)-3-메틸테트라하이드로-2H-피란-4-일 피페라진-1-카르복실레이트(
Figure pct00087
표제 화합물을 섹션 1.2.1의 단계 3에 따라 합성하여 옅은 노란색 오일을 제공하였다(22.3 mg, 52% 수율).
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.71(d, J=6.83 Hz, 3 H) 0.85(d, J=6.8 Hz, 3 H) 1.03(d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.16(d, J=6.8 Hz, 3 H) 1.20-1.25(m, 1H) 1.26(S,3H) 1.37(q, J=11.55 Hz, 1 H) 1.51(dt, J=8.90, 6.52 Hz, 1 H) 1.63-1.67(m, 1 H) 1.69(S,3H) 1.83-2.07(m, 10 H) 2.11-2.17(m, 1 H) 2.36-2.45(m, 2 H) 2.51-2.62(m, 2 H) 2.81(S,4 H) 2.95(t, J=5.12 Hz, 1 H) 3.40-3.49(m, 4 H) 3.52(S,3 H) 3.65(S,3 H) 3.80-3.94(m, 2 H) 4.56(td, J=10.98, 4.39 Hz, 1 H) 5.46(dd, J=15.12, 8.78 Hz, 1 H) 5.90(d, J=10.24 Hz, 1 H) 6.21(dd, J=15.12, 10.73 Hz, 1 H).
2-((2R,4R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸-4-((피페라진-1-카르보닐)옥시)테트라하이드로-2H-피란-2-일)아세트산((H1)
Figure pct00088
표제 화합물을 섹션 1.2.1의 단계 4에 따라 합성하여 무색 오일을 제공하였다(16.0 mg, 73% 수율). LC/MS(ESI, m/z), 567.77 [M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 0.72(d, J=6.3 Hz, 3 H) 0.80(d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.03(d, J=6.3 Hz, 3 H) 1.08(d, J=6.3 Hz, 3 H) 1.17(dd, J=13.2, 11.2 Hz, 1 H) 1.25(S,3H) 1.36(q, J=11.4 Hz, 1 H) 1.45-1.50(m, 2 H) 1.68(S,3 H) 1.90(dd, J=13.42, 4.15 Hz, 1 H) 2.14(dd, J=11.71, 3.90 Hz, 1 H) 2.36-2.52(m, 3 H) 2.63(d, J=9.27 Hz, 1 H) 2.95(dd, J=5.85, 4.39 Hz, 1 H) 3.17(br. S,4 H) 3.46-3.53(m, 4 H) 3.56-3.60(m, 1 H) 3.69 nr. S,4 H) 3.74-3.82(m, 2 H) 3.85-3.92(m, 1 H) 4.58(td, J=10.49, 4.39 Hz, 1 H) 5.49(dd, J=15.12, 8.78 Hz, 1 H) 5.94(d, J=10.73 Hz, 1 H) 6.28(dd, J=14.88, 10.98 Hz, 1 H).
1.2.3 H2의 합성
(2S,3S,4R,6R)-2-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-6-(2-메톡시-2-옥소에틸)-3-메틸테트라하이드로-2H-피란-4-일 1,4-디아제판-1-카르복실레이트(
Figure pct00089
표제 화합물을 섹션 1.2.1의 단계 3에 따라 합성하였다(30.3 mg, 60% 수율).
1H NMR(500 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.71(d, J=6.11 Hz, 3 H) 0.84(d, J=6.73 Hz, 3 H) 1.00-1.05(m, 4 H) 1.16(d, J=6.11 Hz, 3 H) 1.19-1.24(m, 1 H) 1.26(S,3 H) 1.32-1.40(m, 1 H) 1.51(dt, J=9.17, 6.42 Hz, 1 H) 1.63-1.67(m, 1 H) 1.69(S,3 H) 1.73-1.81(m, 3 H) 1.83-1.90(m, 2 H) 2.07-2.18(m, 1 H) 2.41(dd, J=15.28, 6.11 Hz, 2 H) 2.51-2.60(m, 2 H) 2.82 - 2.95(m, 5 H) 3.41-3.49(m, 4 H) 3.51(S,3 H) 3.64(S,3 H) 3.79-3.95(m, 2 H) 4.57(td, J=10.70, 4.28 Hz, 1 H) 5.45(dd, J=14.98, 8.86 Hz, 1 H) 5.90(d, J=11.00 Hz, 1 H) 6.20(dd, J=14.98, 10.70 Hz, 1 H).
2-((2R,4R,5S,6S)-4-((1,4-디아제판-1-카르보닐)옥시)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)아세트산((H2)
Figure pct00090
표제 화합물을 섹션 1.2.1의 단계 4에 따라 합성하여 무색 오일을 제공하였다(20.9 mg, 71% 수율). LC/MS(ESI, m/z), 581.81 [M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 0.74(d, J=6.34 Hz, 3 H) 0.80(d, J=7.32 Hz, 3 H) 1.03(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.08(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.12-1.23(m, 1 H) 1.25(S,3 H) 1.31-1.41(m, 1 H) 1.41-1.53(m, 1 H) 1.63-1.74(m, 4 H) 1.84-1.93(m, 1 H) 2.04(br. s., 2 H) 2.11-2.21(m, 1 H) 2.34-2.54(m, 3 H) 2.63(d, J=9.27 Hz, 1 H) 2.90-2.98(m, 2 H) 3.21-3.36(m, 7 H) 3.50(S,3 H) 3.53-3.66(m, 2 H) 3.69-3.79(m, 3 H) 3.83-3.95(m, 1 H) 4.57(br. s., 1 H) 5.49(dd, J=14.88, 9.03 Hz, 1 H) 5.94(d, J=10.73 Hz, 1 H) 6.24-6.36(m, 1 H).
1.2.4 H3의 합성
(2S,3S,4R,6R)-2-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-6-(2-메톡시-2-옥소에틸)-3-메틸테트라하이드로-2H-피란-4-일 3-(메틸아미노)피롤리딘-1-카르복실레이트
Figure pct00091
표제 화합물을 섹션 1.2.1의 단계 3에 따라 합성하여 무색 오일을 제공하였다(9.6 mg, 19% 수율).
1H NMR(500 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.71(d, J=6.3 Hz, 3 H) 0.85(d, J=6.73 Hz, 3 H) 0.99-1.05(m, 4 H) 1.17(d, J=6.11 Hz, 4 H) 1.27(S,3 H) 1.32-1.45(m, 1 H) 1.49-1.68(m, 6 H) 1.70(S,3 H) 1.88(dd, J=13.45, 4.89 Hz, 1 H) 2.00-2.08(m, 1 H) 2.10-2.17(m, 1 H) 2.38-2.47(m, 5 H) 2.52-2.61(m, 2 H) 2.94(t, J=5.50 Hz, 1 H) 3.17-3.26(m, 1 H) 3.43(d, J=10.4 Hz, 2 H) 3.52(S,4 H) 3.65(S,3 H) 3.78-3.86(m, 1 H) 3.87-3.95(m, 1 H) 4.51-4.57(m, 1 H) 5.45(dd, J=14.98, 8.86 Hz, 1 H) 5.90(d, J=10.39 Hz, 1 H) 6.21(dd, J=14.98, 10.70 Hz, 1 H).
2-((2R,4R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸-4-((3-(메틸아미노)피롤리딘-1-카르보닐)옥시)테트라하이드로-2H-피란-2-일)아세트산(H3)
Figure pct00092
표제 화합물을 섹션 1.2.1의 단계 4에 따라 합성하여 무색 오일을 제공하였다(9.8 mg, 정량적 수율). LC/MS(ESI, m/z), 581.81 [M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 0.71(d, J=6.34 Hz, 3 H) 0.85(d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.02(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.16(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.22-1.24(m, 1 H) 1.26(S,3 H) 1.31-1.42(m, 1 H) 1.45-1.66(m, 4 H) 1.69(S,3 H) 1.87(dd, J=13.66, 4.88 Hz, 1 H) 2.02-2.20(m, 2 H) 2.38-2.51(m, 4 H) 2.51-2.60(m, 2 H) 2.94(t, J=5.12 Hz, 1 H) 3.08-3.26(m, 2 H) 3.33-3.40(m, 1 H) 3.43(d, J=9.76 Hz, 2 H) 3.51(S,3 H) 3.64(S,3 H) 3.83-3.94(m, 1 H) 4.51-4.59(m, 1 H) 5.45(dd, J=15.12, 8.78 Hz, 1 H) 5.89(d, J=10.73 Hz, 1 H) 6.20(dd, J=15.12, 10.73 Hz, 1 H).
1.2.5 H12의 합성
Figure pct00093
표제 화합물을 섹션 1.2.1의 단계 3(13.8 mg, 91% 수율) 및 단계 4에 따라 합성하여 흰색 비결정 고체를 제공하였다(4.58 mg, 76% 수율). LC/MS(ESI, m/z), 581.55 [M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.71(d, J=6.83 Hz, 3 H) 0.85(d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.03(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.16(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.26(S,4 H) 1.48-1.57(m, 1 H) 1.61-1.68(m, 1 H) 1.89(dd, J=13.66, 4.39 Hz, 1 H) 2.20(br d, J=8.29 Hz, 1 H) 2.30(S,4 H) 2.33-2.51(m, 6 H) 2.52-2.57(m, 2 H) 2.57-2.63(m, 1 H) 2.78-3.21(m, 9 H) 3.35-3.66(m, 9 H) 3.70-3.99(m, 2 H) 4.52(br d, J=3.90 Hz, 1 H) 5.41-5.58(m, 1 H) 5.92(br d, J=11.22 Hz, 1 H) 6.13-6.29(m, 1 H).
1.2.6 H4의 합성
H4를 반응식 2에 따라 합성하였다:
Figure pct00094
반응식 2
단계 1: 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 2-((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)아세테이트
Figure pct00095
0℃의 DCM(10 ml) 중 2-((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)아세트산(헤르복시디엔, 300 mg, 0.684 mmol) 혼합물에 DCC(310 mg, 1.505 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 이어서, N-하이드록시숙신아미드(173 mg, 1.505 mmol)를 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온까지 가온하고 16시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 DCM을 사용하여 필터 케이크를 세척하였다. 여과액을 진공에서 농축시키고 생성된 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여(12 g, 헵탄/AcOEt = 50/50에서 0/100) 무색 고체로서 표제 화합물을 제공하였다(357 mg, 97% 수율).
1H NMR(500 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.66(d, J=6.73 Hz, 3 H) 0.83-0.89(m, 3 H) 1.03(d, J=6.73 Hz, 3 H) 1.17(d, J=6.1 Hz, 3 H) 1.19-1.25(m, 4 H) 1.27(S,3H) 1.39-1.56(m, 3 H) 1.59(S,3H) 1.70(S,3 H) 1.79-1.93(m, 3 H) 2.36-2.43(m, 1 H) 2.52-2.55(m, 2 H) 2.70(dd, J=15.28, 7.34 Hz, 1 H) 2.81(br. s., 3 H) 2.83-2.90(m, 1 H) 2.95(t, J=5.50 Hz, 1 H) 3.34(d, J=9.78 Hz, 1 H) 3.52(S,3 H) 3.79-3.87(m, 2 H) 5.43(dd, J=15.28, 9.17 Hz, 1 H) 5.88(d, J=11.00 Hz, 1 H) 6.21-6.26(m, 1 H).
단계 2: (S)-5-하이드록시-2-(2-((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)아세트아미도)펜탄산
Figure pct00096
DMF(2 mL) 중 단계 1에서 수득된 화합물(40 mg, 0.075 mmol) 및 (S)-2-아미노-5-하이드록시펜탄산(19.88 mg, 0.149 mmol)의 혼합물에 DIPEA(0.065 mL, 0.373 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고 이어서 AcOEt를 사용하여 희석하였다. 유기층을 단리하고, 물 및 염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 추가 정제 없이 단계 3에서 사용하였다.
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.66(d, J = 6.3 Hz, 3 H) 0.85(d, J = 6.8 Hz, 3 H) 1.03(d, J = 6.8 Hz, 3 H) 1.15(d, J = 6.3 Hz, 3 H) 1.19 - 1.23(m, 2 H) 1.27(S,3H) 1.40 - 1.61(m, 6H) 1.72(S,3H) 1.82-1.93(m, 3 H) 2.37-2.43(m, 2 H) 2.56(d, J = 9.8 Hz, 1 H) 2.99(t, J = 5.3 Hz, 1 H) 3.33(d, J = 9.8 Hz, 1 H) 3.52(S,3H) 3.54 - 3.70(m, 4 H) 3.81 - 3.87(m, 2 H) 4.56(d, J = 5.4 Hz, 1 H) 5.48(dd, J=15.12, 8.29 Hz, 1 H) 5.89(d, J=11.2 Hz, 1 H) 6.22(dd, J=15.1, 10.7 Hz, 1 H) 7.30(d, J = 7.3 Hz 1 H).
단계 3: 메틸(S)-5-하이드록시-2-(2-((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)아세트아미도)펜타노에이트
Figure pct00097
0℃의 THF(2 mL) 및 메탄올(0.5 mL) 중 단계 2로부터 수득된 화합물(35 mg, 0.063 mmol)의 혼합물에 트리메틸실릴디아조메탄(헥산 중 2.0 M, 0.095 mL, 0.19 mmol)을 첨가하였다. 그 다음 혼합물을 실온까지 가온하고 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 0℃까지 냉각시키고 아세트산을 첨가하여 ??칭하였다. 생성된 혼합물을 30분 동안 교반하고 이어서 진공에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(12 g, 헵탄/AcOEt = 90/10에서 30/70)로 정제하여 표제 화합물을 제공하였다(15.7 mg, 44% 수율).
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.66(d, J = 6.8 Hz, 3 H) 0.85(d, J = 6.8 Hz, 3 H) 1.03(d, J = 6.3 Hz, 3 H) 1.16(d, J = 6.8 Hz, 3 H) 1.19 - 1.23(m, 3 H) 1.27(S,3 H) 1.47-1.70(m, 7 H) 1.73(S,3 H) 1.77-1.94(m, 6 H) 2.34-2.59(m, 5 H) 2.96(t, J = 5.4 Hz 1 H) 3.29-3.40(m, 1 H) 3.52(S,3 H) 3.56-3.66(m, 3 H) 3.70(S,3 H) 3.77-3.89(m, 1 H) 4.61(td, J=8.05, 4.88 Hz, 1 H) 5.46(dd, J=15.12, 8.78 Hz, 1 H) 5.89(d, J=10.73 Hz, 1 H) 6.23(dd, J=15.12, 10.73 Hz, 1 H) 7.10(d, J=8.29 Hz, 1 H).
단계 4: (S)-4-(2-((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)아세트아미도)-5-메톡시-5-옥소펜틸 피페라진-1-카르복실레이트
Figure pct00098
실온의 DCM(1 mL) 중 단계 3에서 생산된 화합물(15.7 mg, 0.028 mmol), 4-니트로페닐클로로포르메이트(11.15 mg, 0.055 mmol) 및 후니그 염기(0.024 mL, 0.138 mmol)의 혼합물에 DMAP(1.689 mg, 0.014 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 그 다음, 피페라진(23.82 mg, 0.277 mmol)을 첨가하고 혼합물을 또 다른 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 DCM을 사용하여 희석하고, 유기층을 단리하고, 물 및 염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 조 잔류물을 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
단계 5: (S)-2-(2-((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)아세트아미도)-5-((피페라진-1-카르보닐)옥시)펜탄산(H4)
Figure pct00099
단계 4에서 수득된 잔류물(15 mg, 0.022 mmol) 및 MeOH(1 mL)의 혼합물에 수성 소듐 하이드록사이드(2 N, 100 μl, 0.20 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 40℃까지 가온하고 2시간 동안 교반하였다. 이어서 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 수성 염산(100 μL, 2 N)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 이어서 진공에서 농축시키고 생성된 잔류물을 조제용 HPLC(H2O/MeCN/NH3 aq. = 60/40/0.1에서 30/70/0.1)로 정제하여 무색의 오일로서 표제 화합물을 제공하였다(7.0 mg, 단계 4 및 5에 걸쳐서 48% 수율). LC/MS(ESI, m/z), 666.90 [M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 0.65(d, J=6.83 Hz, 3 H) 0.81(d, J=7.32 Hz, 3 H) 0.98-1.04(m, 3 H) 1.08(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.17(d, J=11.71 Hz, 1 H) 1.22-1.28(m, 4 H) 1.35(d, J=6.83 Hz, 1 H) 1.46-1.66(m, 10 H) 1.70(s 3 H) 1.82-1.94(m, 3 H) 2.25-2.31(m, 1 H) 2.36-2.45(m, 2 H) 2.61-2.65(m, 1 H) 2.95(dd, J=6.10, 4.15 Hz, 1 H) 3.14(br. s., 2 H) 3.50(S,3 H) 3.62 - 3.71(m, 4 H) 3.76(t, J = 6.3 Hz, 1 H) 4.03(dd, J=4.15, 1.71 Hz, 1 H) 4.29(br. s., 1 H) 5.45(d, J=6.34 Hz, 1 H) 5.87(d, J=10.73 Hz, 1 H) 6.27(dd, J=15.12, 10.73 Hz, 1 H).
1.2.7 MC-Val-Cit-pABC 링커-페이로드 합성을 위한 일반 절차
MC-Val-Cit-pABC 링커-페이로드 합성을 위한 일반 절차가 반응식 3에 약술되어 있다.
Figure pct00100
반응식 3
DMF(0.028 M) 중 페이로드(예를 들어, 전술된 단계에 따라 합성된 화합물; 1.0 eq.) 및 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질(4-니트로페닐) 카르보네이트(1.0 eq.)의 혼합물에 실온에서 DIPEA(3.03 eq.)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 16시간 동안 실온에서 교반하고, 진공에서 농축시키고, 생성된 잔류물을 역-상 조제용 HPLC(H2O/MeCN/HCOOH = 60/40/0.1에서 40/60/0.1)로 정제하여 원하는 화합물을 제공하였다.
1.2.8 ADL1-H1의 합성
Figure pct00101
ADL1-H1(2-((2R,4R,5S,6S)-4-((4-(((4-((R)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시) 카르보닐)피페라진-1-카르보닐)옥시)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)아세트산)을 섹션 1.2.7에 약술된 일반 절차에 따라 합성하여 무색 오일로서 수득하였다(12.7 mg, 39% 수율).
1H NMR(400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 0.71(d, J=5.85 Hz, 4 H) 0.80(d, J=6.34 Hz, 3 H) 0.94(dd, J= 6.1, 3.2 Hz, 6H) 1.01(d, J=6.3 Hz, 3 H) 1.08(d, J=6.6 Hz, 3 H) 1.13-1.19(m, 1H) 1.25(S,4 H) 1.29-1.36(m, 2 H) 1.46-1.65(m, 7H) 1.68(S,3H) 1.71-1.76(m, 1H) 1.84-1.93(m, 2 H) 2.02-2.15(m, 2 H) 2.25(t, J=7.32 Hz, 2 H) 2.37-2.51(m, 3 H) 2.58-2.67(m, 2 H) 2.79(S,4 H) 2.82-2.96(m, 2 H) 3.08-3.23(m, 8 H) 3.39-3.54(m, 15 H) 3.76(t, J=6.34 Hz, 1 H) 3.85-3.97(m, 2 H) 4.13(d, J=7.32 Hz, 1 H) 4.46-4.58(m, 2 H) 5.07(S,2 H) 5.48(dd, J=14.88, 9.03 Hz, 1 H) 5.93(d, J=10.73 Hz, 1 H) 6.28(dd, J=14.88, 10.98 Hz, 1 H) 7.30(d, J=7.81 Hz, 2 H) 7.57(d, J=7.81 Hz, 2 H).
1.2.9 ADL1-H4
Figure pct00102
ADL1-H4((S)-5-((4-(((4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)피페라진-1-카르보닐)옥시)-2-(2-((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)아세트아미도)펜탄산)을 섹션 1.2.7에 약술된 일반 절차에 따라 합성하여 무색 오일로서 수득하였다(2.4 mg, 44% 수율).
1H NMR(400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 0.64(d, J=6.50 Hz, 3 H) 0.80(d, J=6.80 Hz, 3 H) 0.84-0.89(m, 1 H) 0.89-0.97(m, 6 H) 0.97-1.03(m, 2 H) 1.08(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.10-1.16(m, 1 H) 1.22-1.25(m, 3 H) 1.25-1.32(m, 6 H) 1.49-1.66(m, 9 H) 1.69(S,3 H) 1.80-1.95(m, 3 H) 1.95-2.15(m, 2 H) 2.25(t, J=7.20 Hz, 2 H) 2.33-2.48(m, 1 H) 2.62(d, J=9.76 Hz, 1 H) 2.91-2.98(m, 1 H) 3.04-3.13(m, 1 H) 3.39-3.47(m, 7 H) 3.49(S,3 H) 3.63(S,1 H) 3.76(t, J=6.50 Hz, 1 H) 3.99(br. S,1 H) 4.14(d, J=7.20 Hz, 1 H) 4.44-4.51(m, 1 H) 4.44-4.51(m, 1 H) 5.07(br. S,2 H) 5.43(dd, J=15.37, 9.03 Hz, 1 H) 5.82-5.90(m, 1 H) 6.19-6.36(m, 1 H) 6.77(S,1 H) 7.30(d, J=8.29 Hz, 2 H) 7.57(d, J=8.78 Hz, 2 H).
1.2.10 ADL1-H2
Figure pct00103
ADL1-H2(2-((2R,4R,5S,6S)-4-((4-(((4-((R)-2-((R)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)-1,4-디아제판-1-카르보닐)옥시)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)아세트산)을 섹션 1.2.7에 약술된 일반 절차에 따라 합성하여 무색 오일로서 수득하였다(10.4 mg, 34% 수율).
1H NMR(400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 0.61 - 0.68(m, 3 H) 0.79(d, J=6.83 Hz, 3 H) 0.94(t, J=6.10 Hz, 6 H) 1.02(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.04-1.10(m, 3 H) 1.10-1.17(m, 1 H) 1.19-1.31(m, 8 H) 1.42-1.49(m, 2 H) 1.51-1.65(m, 8 H) 1.67(S,3 H) 1.69-1.78(br. S,3 H) 1.83-1.93(m, 2 H) 1.94(S,1 H) 2.00-2.10(m, 2 H) 2.25(t, J=7.32 Hz, 2 H) 2.30-2.38(m, 1 H) 2.38-2.49(m, 2 H) 2.63(d, J=9.27 Hz, 1 H) 2.94(t, J=5.12 Hz, 1 H) 3.05-3.21(m, 2 H) 3.39-3.48(m, 7 H) 3.49(S,3 H) 3.52-3.63(m, 5 H) 3.67-3.81(m, 2 H) 3.90(br. s., 1 H) 4.17(t, J=7.30 Hz, 1 H) 4.45-4.55(m, 2 H) 5.00-5.08(m, 2 H) 5.48(dd, J=14.88, 9.51 Hz, 1 H) 5.87-5.95(m, 1 H) 6.23-6.32(m, 1 H) 6.76(S,J=4.01 Hz, 2 H) 7.28(q, J=7.81 Hz, 2 H) 7.58(t, J=7.07 Hz, 2 H).
1.2.11 ADL1-H3
Figure pct00104
ADL1-H3(2-((2R,4R,5S,6S)-4-((3-((((4-((R)-2-((R)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)피롤리딘-1-카르보닐)옥시)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)아세트산)을 섹션 1.2.7에 약술된 일반 절차에 따라 합성하여 무색 오일로서 수득하였다(18.8 mg, 37% 수율).
1H NMR(400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 0.72(d, J=6.83 Hz, 3 H) 0.80(d, J=6.83 Hz, 3 H) 0.90-0.97(m, 6 H) 1.02(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.08(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.16(dd, J=12.93, 11.46 Hz, 1 H) 1.22-1.28(m, 4 H) 1.28-1.37(m, 2 H) 1.44-1.67(m, 8 H) 1.68(S,3 H) 1.90(dd, J=13.42, 4.15 Hz, 2 H) 2.00-2.15(m, 4 H) 2.25(t, J=7.32 Hz, 2 H) 2.38-2.52(m, 3 H) 2.63(d, J=9.27 Hz, 1 H) 2.84(S,3 H) 2.93-2.97(m, 1 H) 3.08(d, J=6.34 Hz, 1 H) 3.16(d, J=6.83 Hz, 1 H) 3.42-3.47(m, 3 H) 3.49(S,3 H) 3.51-3.57(m, 2 H) 3.76(t, J=6.34 Hz, 1 H) 3.85-3.92(m, 1 H) 4.14-4.19(m, 1 H) 4.47-4.55(m, 2 H) 4.71(d, J=7.32 Hz, 1 H) 5.06(S,2 H) 5.48(dd, J=14.88, 9.03 Hz, 1 H) 5.93(d, J=11.22 Hz, 1 H) 6.28(dd, J=14.88, 10.98 Hz, 1 H) 6.76(S,J=5.13 Hz, 2 H) 7.30(d, J=8.29 Hz, 2 H) 7.56(d, J=8.29 Hz, 2 H).
1.3 ADL1-H5, ADL1-H6, 및 ADL1-H7의 제조
1.3.1개관-일반 절차 2
Figure pct00105
반응식 3
단계 1: 2-((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)아세트아미드
Figure pct00106
THF(15 mL) 중 2-((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)아세트산(헤르복시디엔, 750 mg, 1.71 mmol) 및 트리에틸아민(1.192 mL, 8.55 mmol)의 혼합물에 0℃에서 에틸 클로로포르메이트(0.767 mL, 5.13 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 30분 동안 0℃에서 교반하고, 이어서 메탄올(7 M, 3.66 mL, 25.65 mmol) 중 암모니아를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 동일한 온도에서 추가 30분 동안 교반한 후 진공에서 농축시키고 생성된 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(헵탄/AcOEt = 50/50에서 0/100, 이어서 AcOEt = 80/20)로 정제하여 무색 고체로서 표제 화합물을 제공하였다(632 mg, 85% 수율).
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.67(d, J=6.34 Hz, 3 H) 0.85(d, J = 6.7 Hz, 3 H) 1.05(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.16(d, J=6.7 Hz, 3 H) 1.20-1.25(m, 3 H) 1.27(S,3 H) 1.34-1.45(m, 1 H) 1.49-1.65(m, 7 H) 1.71(S,3 H) 1.82-1.97(m, 2 H) 2.01-2.05(m, 1 H) 2.33-2.48(m, 3 H) 2.54(d, J=9.27 Hz, 2 H) 2.95-2.99(m, 1 H) 3.34(d, J = 10.0 Hz, 1 H) 3.52(S,3 H) 3.63-3.70(m, 1 H) 3.80-3.87(m, 1 H) 4.08-4.14(m, 1 H) 5.24-5.33(m, 1 H) 5.47(dd, J=15.12, 9.27 Hz, 1 H) 5.90(d, J=10.73 Hz, 1 H) 6.22(dd, J=14.88, 10.98 Hz, 1 H) 6.61(br. S,1 H).
단계 2: 2-((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-3-메톡시-4-((트리에틸실릴)옥시)펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)아세트아미드
Figure pct00107
0℃의 DCM(15 mL) 및 트리에틸아민(2.015 mL, 14.458 mmol) 중 단계 1로부터 단리된 화합물(719 mg, 1.446 mmol)의 혼합물에 클로로트리에틸실란(1090 mg, 7.229 mmol) 및 N,N-디메틸피리딘-4-아민(177 mg, 1.446 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 이어서 실온까지 가온하고 16시간 동안 교반하였다. 교반 후, 혼합물을 DCM(100 mL)을 사용하여 희석하고, 혼합물을 물 및 염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 AcOEt(100 mL) 및 아미노-기능화된 실리카(50 g)에서 조합하였다. 생성된 현탁액을 16시간 동안 실온에서 교반하고 이어서 여과하였다. AcOEt/MeOH(9/1, 150 mL)를 사용하여 여과액을 세척하였다. 조합된 모 리큐어를 진공에서 농축시키고 단리된 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(40 g, 헵탄/AcOEt = 70/30에서 0/100)로 정제하여 무색 고체로서 표제 화합물을 제공하였다(807 mg, quant.).
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.60(q, J = 7.8 Hz, 6 H) 0.67(d, J = 6.3 Hz, 3 H) 0.76(d, J=7.32 Hz, 3 H) 0.95(t, J = 7.8 Hz, 9 H) 1.04(td, J = 3.3, 1.7 Hz, 6 H) 1.17-1.20(m, 1 H) 1.24(S,3 H) 1.34-1.46(m, 2 H) 1.50-1.58(m, 1 H) 1.61(S,3 H) 1.70(S,3 H) 1.82-1.92(m, 2 H) 2.33-2.45(m, 3 H) 2.63(d, J=9.27 Hz, 1 H) 3.05-3.09(m, 1 H), 3.34(d, J=9.76 Hz, 1 H) 3.50(S,3 H) 3.62-3.70(m, 1 H) 3.85(t, J=6.59 Hz, 1 H) 5.29(br. s., 1 H) 5.48(dd, J=14.88, 8.54 Hz, 1 H) 5.90(d, J=10.73 Hz, 1 H) 6.21(dd, J=14.64, 11.22 Hz, 1 H) 6.63(br. s., 1 H).
단계 3: 알릴(((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-3-메톡시-4-((트리에틸실릴)옥시)펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)메틸)카르바메이트
Figure pct00108
알릴 알코올(20 mL) 중 단계 2에서 단리된 화합물(807 mg, 1.462 mmol) 및 요오도벤젠 디아세테이트(1413 mg, 4.387 mmol)의 혼합물을 60℃까지 가열하고 3시간 동안 교반하였다. 이어서 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 여기에 AcOEt 및 수성 소듐 바이카르보네이트(각각 100 mL)를 첨가하였다. 유기 상을 단리하고, 수성 상을 AcOEt를 사용하여 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 물 및 염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(40 g, 헵탄/AcOEt = 90/10에서 50/50)로 정제하여 무색 오일로서 표제 화합물을 제공하였다(663 mg, 75% 수율).
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.55-0.67(m, 9 H) 0.77(d, J = 6.7 Hz, 3 H) 0.87(t, J = 6.5 Hz, 2 H) 0.95(t, J = 7.8 Hz, 9 H) 1.04(t, J = 5.5 Hz, 6 H) 1.16-1.32(m, 9 H) 1.39-1.53(m, 2 H) 1.58(S,3 H) 1.69(S,3 H) 1.80-1.91(m, 2 H) 2.40(br. S,1 H) 2.64(d, J=9.27 Hz, 1 H) 3.01-3.10(m, 2 H) 3.26(d, J=10.24 Hz, 1 H) 3.35-3.44(m, 2 H) 3.50(S,3 H) 3.85(t, J = 6.5 Hz, 1 H) 4.54(d, J=5.37 Hz, 2 H) 5.12(br. s., 1 H) 5.19(dt, J=10.49, 1.10 Hz, 1 H) 5.25-5.33(m, 1 H) 5.45(dd, J=15.12, 8.78 Hz, 1 H) 5.85-5.97(m, 2 H) 6.22(dd, J=14.88, 10.98 Hz, 1 H).
단계 4: ((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-3-메톡시-4-((트리에틸실릴)옥시)펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)메탄아민
Figure pct00109
단계 3에서 수득된 화합물(663 mg, 1.091 mmol) 및 THF(15 mL, 183.065 mmol)의 혼합물에 보란-디메틸아민 복합체(643 mg, 10.906 mmol)를 첨가하였다. 질소를 이용하여 용기를 퍼징(purging) 후, 테트라키스(트리페닐포스핀) 팔라듐(0)(37.8 mg, 0.033 mmol)을 첨가하고 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 이어서 AcOEt 및 포화 수성 소듐 바이카르보네이트(각각 100 mL)를 사용하여 희석하고, 상을 분리하였다. 수성 층은 AcOEt(50 mL x 3)를 사용하여 추출하고 이어서 조합된 유기 분획은 물 및 염수로 세척하고 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 아미노-기능화된 실리카겔 크로마토그래피(40g, 헵탄/AcOEt = 70/30에서 0/100)로 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 제공하였다(525 mg, 92% 수율).
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.60(q, J=7.80 Hz, 6 H) 0.65(d, J = 6.8 Hz, 3 H) 0.77(d, J=6.83 Hz, 3 H) 0.95(t, J=7.8 Hz, 9 H) 1.03(dd, J = 9.0, 6.6 Hz, 6 H) 1.14-1.21(m, 1 H) 1.23(S,3 H), 1.30 - 1.34(m, 1 H) 1.42(ddd, J = 9.4, 7, 2.7 Hz, 1 H) 1.48-1.59(m, 6 H) 1.70(S,3 H) 1.81-1.91(m, 2 H) 2.34-2.44(m, 1 H) 2.62-2.74(m, 3 H) 3.06(dd, J=6.83, 2.93 Hz, 1 H) 3.25-3.31(m, 2 H) 3.50(S,3 H) 3.81-3.89(quin, J = 6.5 Hz, 1 H) 5.44(dd, J=15.12, 8.78 Hz, 1 H) 5.88(d, J=10.73 Hz, 1 H) 6.22(dd, J=15.12, 10.73 Hz, 1 H).
단계 5: 6-하이드록시-N-(((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)메틸)-N-메틸헥산아미드
Figure pct00110
THF(2 mL) 중 단계 5에서 단리된 화합물(133 mg, 0.254 mmol) 및 6-메톡시-6-옥소헥산산(0.056 ml, 0.381 mmol)의 혼합물에 HATU(145 mg, 0.381 mmol)를 첨가하고 혼합물을 이어서 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 그 다음, AcOEt를 첨가하고 생성된 혼합물을 물 및 염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 수득된 잔류물을 THF(2 mL)와 조합하고 0℃까지 냉각시켰다. 이어서, 리튬 보로하이드라이드(22.1 mg, 1.016 mmol)를 첨가하고 혼합물을 동일한 온도에서 30분 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 실온까지 가온하고 추가 1시간 동안 교반하였다. 혼합물에 포화 수성 암모늄 클로라이드, 이어서 AcOEt 및 물을 첨가하였다. 유기 상을 단리하고, 물 및 염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 이어서 THF(5 mL, 61.02 mmol)에 용해시키고 TBAF(THF 중 1 M 용액, 0.508 mL, 0.508 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 30분 동안 0℃에서 교반하고, 이어서 실온까지 가온한 후, 추가 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 이어서 AcOEt를 사용하여 혼합물을 희석하고 유기 상을 단리하고, 물 및 염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(40 g 실리카, 0-100% 헵탄/EtOAc)로 정제하여 무색 오일로서 표제 화합물을 제공하였다(113 mg, 85% 수율).
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.64(d, J = 6.3 Hz, 3 H) 0.84(d, J = 6.8 Hz, 3 H) 1.03(d, J = 6.3 H, 3 H) 1.14(d, J = 6.3 H, 3 H) 1.17-1.21(m, 3 H) 1.25(S,3 H) 1.27-1.40(m, 3 H) 1.46-1.60(m, 6 H) 1.60-1.67(m, 2 H) 1.69(S,3 H) 1.77-1.92(m, 3 H) 2.15(t, J = 7.3 Hz, 2 H) 2.40(br. S,1 H) 2.53(d, J=9.76 Hz, 2 H) 2.92-3.02(m, 2 H) 3.26(d, J=9.76 Hz, 1 H) 3.34-3.45(m, 1 H) 3.50(S,3 H) 3.52-3.62(m, 3 H) 3.80-3.83(m, 1 H) 5.45(dd, J=15.12, 8.78 Hz, 1 H) 5.89(d, J=10.73 Hz, 1 H) 5.96(br. S,1 H) 6.23(dd, J=14.88, 10.98 Hz, 1 H).
단계 6: 카르바메이트 합성의 일반 절차
DCM(0.05 M) 중 단계 5로부터 단리된 화합물(28.3 mg, 0.054 mmol), 4-니트로페닐 클로로포르메이트(2.0 eq.) 및 후니그 염기(5 eq.)의 혼합물에 DMAP(0.5 eq.)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 이어서 아민(2.0 eq.)을 첨가하고, 혼합물을 추가 1시간 동안 교반하였다. 이어서 디클로로메탄을 사용하여 혼합물을 희석하고, 유기층을 단리하고, 물 및 염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 이어서 아미노-기능화된 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물을 제공하였다.
1.3.2 ADL1-H5의 합성
1.3.2.1 H5의 합성
Figure pct00111
6-((((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)메틸)아미노)-6-옥소헥실 피페라진-1-카르복실레이트(H5)
섹션 1.3.1에 약술된 단계 1 내지 6을 사용하여 무색 오일로서 표제 화합물을 제공하였다(24.5 mg, 71% 수율). LC/MS(ESI, m/z), 636.89 [M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.65(d, J=6.34 Hz, 3 H) 0.85(d, J=6.83 Hz, 3 H) 0.95(dd, J = 16.8, 6.6 Hz, 1 H) 1.03(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.15(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.18-1.25(m, 2 H) 1.26(S,3 H) 1.29-1.40(m, 3 H) 1.47-1.69(m, 8 H) 1.70(S,3 H) 1.79-1.92(m, 2 H) 1.92-2.07(m, 4 H) 2.15(t, J=7.56 Hz, 2 H) 2.36-2.45(m, 1 H) 2.54(d, J=9.27 Hz, 1 H) 2.80(br. s., 4 H) 2.89-3.04(m, 2 H) 3.27(d, J=10.24 Hz, 1 H) 3.35-3.46(m, 5 H) 3.51(S,3 H) 3.52-3.58(m, 2 H) 3.83(t, J=6.34 Hz, 1 H) 4.05(t, J=6.34 Hz, 2 H) 5.46(dd, J=15.12, 8.78 Hz, 1 H) 5.82-5.95(m, 2 H) 6.24(dd, J=15.12, 10.73 Hz, 1 H).
1.3.2.2 ADL1-H5의 합성
Figure pct00112
1-(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질) 4-(6-((((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)메틸)아미노)-6-옥소헥실) 피페라진-1,4-디카르복실레이트(ADL1-H5)
섹션 1.2.7에 약술된 절차를 사용하여 무색 오일로서 표제 화합물을 제공하였다(25.8 mg, 54% 수율).
1H NMR(400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 0.65(d, J=6.83 Hz, 3 H) 0.80(d, J=6.83 Hz, 3 H) 0.94(dd, J=6.34, 4.39 Hz, 7 H) 1.01(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.07(d, J=6.30 Hz, 4 H) 1.11-1.38(m, 14 H) 1.45-1.66(m, 14 H) 1.69(S,3 H) 1.70-1.79(m, 1 H) 1.80-1.92(m, 3 H) 2.00-2.09(m, 1 H) 2.17(t, J=7.07 Hz, 2 H) 2.25(t, J=7.32 Hz, 3 H) 2.42(br. s., 1 H) 2.63(d, J=9.76 Hz, 1 H) 2.95(dd, J=5.85, 4.39 Hz, 1 H) 3.02-3.11(m, 2 H) 3.17(d, J=6.83 Hz, 1 H) 3.37-3.48(m, 14 H) 3.50(S,4 H) 3.53(t, J=4.50 Hz, 2 H) 3.63-3.67(m, 2 H) 3.76(t, J=6.34 Hz, 1 H) 4.05(t, J=6.34 Hz, 3 H) 4.14(d, J=7.32 Hz, 1 H) 4.48(dd, J=8.78, 4.88 Hz, 1 H) 5.06(S,2 H) 5.46(dd, J=15.12, 8.78 Hz, 1 H) 5.90(d, J=10.73 Hz, 1 H) 6.20-6.38(m, 1 H) 6.76(s 2 H) 7.30(d, J=8.29 Hz, 2 H) 7.57(d, J=8.29 Hz, 2 H).
1.3.3 ADL1-H6의 합성
1.3.3.1 H6의 합성
Figure pct00113
6-((((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)메틸)아미노)-6-옥소헥실 1,4-디아제판-1-카르복실레이트(H6)
섹션 1.3.1에 약술된 단계 1 내지 6을 사용하여 무색 오일로서 표제 화합물을 제공하였다(15.3 mg, 43% 수율). LC/MS(ESI, m/z), 650.92[M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.65(d, J=6.34 Hz, 3 H) 0.85(d, J=6.34 Hz, 3 H) 0.93-1.00(m, 1 H) 1.03(d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.16(d, J = 6.83 Hz, 3 H) 1.18-1.24(m, 2 H) 1.27(S,3 H) 1.29-1.41(m, 3 H) 1.49-1.55(m, 2 H) 1.59-1.68(m, 5 H) 1.71(S,3 H) 1.73-1.92(m, 7 H) 2.16(t, J=7.56 Hz, 2 H) 2.36-2.46(m, 1 H) 2.54(d, J=9.27 Hz, 1 H) 2.81-2.93(m, 4 H) 2.93-3.04(m, 2 H) 3.27(d, J=9.76 Hz, 1 H) 3.37-3.49(m, 4 H) 3.52(S,3 H) 3.54 - 3.59(m, 2 H) 3.79-3.88(m, 1 H) 4.05(t, J=6.34 Hz, 2 H) 5.46(dd, J=15.12, 8.78 Hz, 1 H) 5.82-5.96(m, 2 H) 6.24(dd, J=15.12, 10.73 Hz, 1 H).
1.3.3.2 ADL1-H6의 합성
Figure pct00114
1-(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질) 4-(6-((((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)메틸)아미노)-6-옥소헥실) 1,4-디아제판-1,4-디카르복실레이트(ADL-H6)
섹션 1.2.7에 약술된 절차를 사용하여 무색 오일로서 표제 화합물을 제공하였다(11.6 mg, 52% 수율).
1H NMR(400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 0.65(d, J = 6.34 Hz, 3 H) 0.80(d, J = 6.83 Hz, 2 H) 0.94(dd, J=6.83, 4.39 Hz, 6 H) 0.98-1.16(m, 9 H) 1.19-1.36(m, 9 H) 1.44-1.65(m, 14 H) 1.69(S,3 H) 1.71-1.78(m, 4 H) 1.80-1.92(m, 3 H) 2.00-2.10(m, 1 H) 2.11-2.19(m, 2 H) 2.25(t, J=7.56 Hz, 3 H) 3.03-3.21(m, 4 H) 3.36-3.49(m, 10 H) 3.49-3.51(m, 3 H) 3.51-3.57(m, 12 H) 3.62-3.67(m, 8 H) 3.70-3.82(m, 1 H) 3.97-4.05(m, 2 H) 4.14(d, J=7.32 Hz, 1 H) 4.46-4.52(m, 1 H) 5.00-5.08(m, 3 H) 5.35-5.52(m, 1 H) 5.35-5.52(m, 1 H) 5.87-5.95(m, 1 H) 6.24-6.33(m, 1 H) 6.76(S,2 H) 7.26-7.37(m, 3 H) 7.57(d, J=7.32 Hz, 3 H) 8.19-8.24(m, 1 H).
1.3.4 ADL1-H7의 합성
1.3.4.1 H7의 합성
Figure pct00115
6-((((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)메틸)아미노)-6-옥소헥실 3-(메틸아미노)피롤리딘-1-카르복실레이트(H7)
섹션 1.3.1에 약술된 단계 1 내지 6을 사용하여 무색 오일로서 표제 화합물을 제공하였다(26.6 mg, 76% 수율). LC/MS(ESI, m/z), 650.88[M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.65(d, J=6.34 Hz, 3 H) 0.85(d, J=6.34 Hz, 3 H) 0.93-0.99(m, 1 H) 1.04(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.16(dd, J=6.34, 0.98 Hz, 3 H) 1.19 - 1.22(m, 2 H) 1.27(S,3 H) 1.31-1.41(m, 3 H) 1.47-1.67(m, 8 H) 1.70(S,4 H) 1.80-1.87(m, 2 H) 1.89(d, J=3.90 Hz, 1 H) 2.03(dd, J=12.68, 6.34 Hz, 1 H) 2.15(t, J=7.32 Hz, 2 H) 2.41(m, 3 H) 2.54(d, J=9.76 Hz, 1 H) 2.94-3.13(m, 2 H) 3.20(m, 1 H) 3.27(d, J=9.76 Hz, 1 H) 3.35-3.50(m, 3 H) 3.51(S,3 H) 3.53-3.60(m, 2 H) 3.79-3.88(m, 1 H) 4.04(t, J=6.34 Hz, 2 H) 5.46(dd, J=15.12, 8.78 Hz, 1 H) 5.82-5.96(m, 2 H) 6.24(dd, J=14.88, 10.98 Hz, 1 H).
1.3.4.2 ADL1-H7의 합성
Figure pct00116
6-((((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)메틸)아미노)-6-옥소헥실 3-((((4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)피롤리딘-1-카르복실레이트(ADL1-H7)
섹션 1.2.7에 약술된 절차를 사용하여(혼합물을 2시간 대신 16시간 동안 교반하였다) 무색 오일로서 표제 화합물을 제공하였다(20.1 mg, 54% 수율).
1H NMR(400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 0.65(d, J=6.30 Hz, 3 H) 0.80(d, J=6.83 Hz, 3 H) 0.94(dd, J=6.59, 4.63 Hz, 7 H) 1.01(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.08(d, J=6.34 Hz, 4 H) 1.11-1.23(m, 4 H) 1.23-1.27(m, 6 H) 1.27-1.38(m, 5 H) 1.43-1.65(m, 14 H) 1.69(S,3 H) 1.70-1.77(m, 1 H) 1.80-1.92(m, 3 H) 2.00-2.09(m, 3 H) 2.17(t, J=7.32 Hz, 2 H) 2.25(t, J=7.30 Hz, 3 H) 2.38-2.46(m, 1 H) 2.63(d, J=9.27 Hz, 1 H) 2.83(S,3 H) 2.84(S,3 H) 2.92-2.96(m, 1 H) 2.97(S,3 H) 3.02-3.21(m, 4 H) 3.30-3.42(m, 3 H) 3.45(t, J=7.07 Hz, 3 H) 3.50(S,3 H) 3.51-3.58(m, 3 H) 3.72-3.80(m, 1 H) 4.03(t, J=6.34 Hz, 2 H) 4.15(d, J=7.32 Hz, 1 H) 4.49(dd, J=9.03, 5.12 Hz, 1 H) 5.06(S,2 H) 5.46(dd, J=14.88, 9.03 Hz, 1 H) 5.90(d, J=11.22 Hz, 1 H) 6.28(dd, J=14.88, 10.98 Hz, 1 H) 6.76(S,2 H) 7.30(d, J=5.90 Hz, 2 H) 7.57(d, J=8.29 Hz, 2 H) 7.95(S,1 H).
1.4 ADL1-H8, ADL1-H9, 및 ADL1-H10의 합성
1.4.1 개관-일반 절차 4
Figure pct00117
반응식 4
단계 1: tert-부틸 3-하이드록시프로파노에이트
Figure pct00118
DMF(30 mL) 중 소듐 하이드라이드(269 mg, 6.157 mmol) 혼합물에 0℃에서 tert-부틸 3-하이드록시프로파노에이트(0.909 mL, 6.157 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 0℃에서 교반하고 이어서 메틸 브로모아세테이트(0.624 mL, 6.157 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온까지 가온하고 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 그 다음, 포화 수성 암모늄 클로라이드를 첨가하고 AcOEt를 사용하여 혼합물을 추출하였다. 조합된 유기 추출물을 이어서 물 및 염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 단리된 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(80 g, 헵탄/AcOEt = 80/20에서 50/50)로 정제하여 무색 오일로서 표제 화합물(97 mg, 7% 수율)을 제공하였다.
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.42(S,9 H) 2.49-2.58(m, 2 H) 3.41(S,3 H) 3.69-3.79(m, 2 H) 4.05-4.13(m, 2 H).
단계 2: 3-(2-메톡시-2-옥소에톡시)프로판산
Figure pct00119
디클로로메탄(2 mL) 및 TFA(2 mL) 중 tert-부틸 3-(2-메톡시-2-옥소에톡시)프로파노에이트(66 mg, 0.302 mmol)의 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 이어서 농축하여 건조시키고 무색 오일로서 표제 화합물을 제공하였다(58 mg, 100%).
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 2.62-2.78(m, 2 H) 3.76(S,3 H) 3.78-3.85(m, 2 H) 4.14(d, J=1.95 Hz, 2 H).
단계 3: N-(((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)메틸)-3-(2-하이드록시에톡시)프로펜아미드
Figure pct00120
THF(5 mL) 중 ((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-3-메톡시-4-((트리에틸실릴)옥시)펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)메탄아민(133 mg, 0.254 mmol) 및 3-(2-메톡시-2-옥소에톡시)프로판산(61.7 mg, 0.381 mmol)의 혼합물에 실온에서 HATU(145 mg, 0.381 mmol) 및 DIPEA(221 μL, 1.27 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 16시간 동안 교반하고 이어서 AcOEt를 사용하여 희석하였다. 유기층을 단리하고, 물 및 염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다.
단리된 잔류물을 THF(5 mL) 중에 용해시키고 0℃까지 냉각시키고, 이어서 리튬 보로하이드라이드(22.12 mg, 1.016 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 동일한 온도에서 30분 동안 교반하고 이어서 실온까지 가온하고 또 다른 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, 포화 수성 암모늄 클로라이드 및 물을 첨가하고 AcOEt를 사용하여 수성 층을 추출하였다. 조합된 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 단리된 잔류물을 이어서 THF(5 mL) 중에 용해시키고 0℃에서 TBAF(THF 중 1 M 용액, 0.508 mL, 0.508 mmol)를 첨가하였다. 0℃에서 30분 동안 교반 후, 혼합물을 실온까지 가온하고 2시간 동안 교반하였다. 그 다음, AcOEt를 사용하여 혼합물을 희석하였고, 유기층을 단리하고, 물 및 염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피(24 g, 헵탄/AcOEt = 70/30에서 0/100, 이어서 AcOEt/MeOH = 80/20)로 정제하여 무색 오일로서 표제 화합물(68 mg, 51% 수율)을 제공하였다.
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.65(d, J=6.34 Hz, 3 H) 0.85(d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.04(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.16(d, J = 6.8 Hz, 4 H) 1.19-1.22(m, 2 H) 1.27(S,3 H) 1.42-1.65(m, 4 H) 1.71(S,3 H) 1.79-1.92(m, 2 H) 2.37-2.50(m, 4 H) 2.54(d, J = 9.27 Hz, 2 H) 2.89-3.05(m, 2 H) 3.28(d, J=10.24 Hz, 1 H) 3.41(td, J=8.54, 2.44 Hz, 1 H) 3.52(S,3 H) 3.54-3.59(m, 2 H) 3.61-3.68(m, 2 H) 3.69-3.76(m, 2 H) 3.78-3.91(m, 2 H) 5.43-5.52(m, 1 H) 5.92(d, J=10.73 Hz, 1 H) 6.24(dd, J=15.12, 10.73 Hz, 1 H) 6.77(m, 1 H).
단계 4: 카르바메이트의 합성
DCM(0.04 M) 중 N-(((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)메틸)-3-(2-하이드록시에톡시)프로판아미드(1.0 eq., 0.043 mmol), 4-니트로페닐 클로로포르메이트(2.0 eq., 0.086 mmol) 및 DIPEA(5.0 eq.)의 혼합물에 실온에서 DMAP(5.0 eq.)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, 이어서 피페라진(10.0 eq.) 를 첨가하고, 혼합물을 추가 1시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 이어서 디클로로메탄을 사용하여 희석하고, 유기층을 단리하고, 물 및 염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 아미노-기능화된 실리카겔 크로마토그래피(헵탄/AcOEt = 50/50에서 0/100)로 정제하여 원하는 화합물을 제공하였다.
1.4.2 ADL1-H8의 합성
1.4.2.1 H8의 합성
Figure pct00121
2-(3-((((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)메틸)아미노)-3-옥소프로폭시)에틸 피페라진-1-카르복실레이트(H8)
섹션 1.4.1에 약술된 단계1 내지 4를 사용하여 옅은 노란색 오일로서 표제 화합물을 제공하였다(19.2 mg, 70% 수율). LC/MS(ESI, m/z), 638.78[M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.65(d, J=6.83 Hz, 3 H) 0.85(d, J=6.83 Hz, 3 H) 0.96(dd, J=18.54, 6.34 Hz, 1 H) 1.03(d, J=5.85 Hz, 3 H) 1.16(d, J=5.85 Hz, 4 H) 1.18-1.25(m, 2 H) 1.27(S,3 H) 1.29-1.39(m, 1 H) 1.41-1.63(m, 4 H) 1.70(S,3 H) 1.77-1.97(m, 7 H) 2.44(t, J=5.61 Hz, 2 H) 2.47-2.57(m, 1 H) 2.80(br. s., 4 H) 2.85-2.99(m, 1 H) 2.99-3.09(m, 1 H) 3.27(d, J=9.76 Hz, 1 H) 3.36-3.48(m, 5 H) 3.52(S,3 H) 3.54-3.59(m, 1 H) 3.59-3.68(m, 2 H) 3.68-3.74(m, 2 H) 3.77-3.90(m, 1 H) 4.15-4.23(m, 2 H) 4.36(t, J=6.10 Hz, 1 H) 5.44(dd, J=14.88, 8.54 Hz, 1 H) 5.88(d, J=10.73 Hz, 1 H) 6.23(dd, J=14.88, 10.98 Hz, 1 H) 6.41(br. s., 1 H).
1.4.2.2 H8의 합성
Figure pct00122
1-(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질) 4-(2-(3-((((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)메틸)아미노)-3-옥소프로폭시)에틸) 피페라진-1,4-디카르복실레이트(ADL1-H8)
섹션 1.2.7에 약술된 것과 유사한 절차를 사용하여 무색 오일로서 표제 화합물을 제공하였다(18.3 mg, 60% 수율).
1H NMR(400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 0.65(d, J=6.30 Hz, 3 H) 0.80(d, J=6.83 Hz, 3 H) 0.94(dd, J=6.59, 4.15 Hz, 7 H) 1.01(d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.08(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.10-1.23(m, 4 H) 1.25(S,3 H) 1.26-1.32(m, 3 H) 1.44-1.65(m, 10 H) 1.68(S,3 H) 1.70-1.75(m, 1 H) 1.80-1.92(m, 3 H) 2.00-2.09(m, 1 H) 2.25(t, J=7.56 Hz, 2 H) 2.41(t, J=5.85 Hz, 2 H) 2.63(d, J=9.27 Hz, 1 H) 2.95(dd, J=6.34, 4.39 Hz, 1 H) 3.08(dt, J=13.05, 6.40 Hz, 1 H) 3.14-3.21(m, 1 H) 3.38-3.48(m, 14 H) 3.49(S,4 H) 3.58-3.65(m, 2 H) 3.69(t, J=6.10 Hz, 2 H) 3.72-3.80(m, 1 H) 4.13-4.19(m, 3 H) 4.48(dd, J=9.02, 5.12 Hz, 1 H) 5.07(S,2 H) 5.46(dd, J=15.12, 9.27 Hz, 1 H) 5.90(d, J=10.24 Hz, 1 H) 6.28(dd, J=14.88, 10.98 Hz, 1 H) 6.76(S,2 H) 7.30(d, J=8.78 Hz, 2 H) 7.57(d, J=7.25 Hz, 2 H).
1.4.3 ADL1-H9의 합성
1.4.3.1 H9의 합성
Figure pct00123
2-(3-((((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)메틸)아미노)-3-옥소프로폭시)에틸 1,4-디아제판-1-카르복실레이트(H9)
섹션 1.4.1에 약술된 단계 1 내지 4를 사용하여 무색 오일로서 표제 화합물을 제공하였다(21.1 mg, 75% 수율). LC/MS(ESI, m/z), 652.86[M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.65(d, J=6.83 Hz, 3 H) 0.85(d, J=7.32 Hz, 3 H) 0.92-1.00(m, 1 H) 1.03(d, J = 6.8 H, 3 H) 1.16(d, J = 6.8 H, 3 H) 1.20-1.24(m, 1 H) 1.27(S,4 H) 1.47-1.60(m, 4 H) 1.70(S,3 H) 1.73-1.90(m, 8 H) 2.37-2.47(m, 3 H) 2.53(d, J = 9.8 Hz, 1 H) 2.81 - 2.86(m, 2 H) 2.87 - 2.92(m, 2 H) 2.94 - 2.97(m, 1 H) 2.99 - 3.07(m, 1 H) 3.27(d, J=9.76 Hz, 1 H) 3.38-3.50(m, 4 H) 3.52(S,3 H) 3.55-3.59(m, 1 H) 3.61-3.68(m, 2 H) 3.68-3.74(m, 2 H) 3.77-3.91(m, 1 H) 4.19(br. s., 2 H) 4.37(t, J=6.10 Hz, 1 H) 5.41-5.50(m, 1 H) 5.89(d, J=11.22 Hz, 1 H) 6.23(dd, J=14.88, 10.98 Hz, 1 H) 6.46(dd, J=3.17, 1.22 Hz, 1 H).
1.4.3.2 ADL1-H9의 합성
Figure pct00124
1-(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질) 4-(2-(3-((((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)메틸)아미노)-3-옥소프로폭시)에틸) 1,4-디아제판-1,4-디카르복실레이트(ADL1-H9)
섹션 1.2.7에 약술된 것과 유사한 절차를 사용하여 표제 화합물을 제공하였다(25.2 mg, 72% 수율).
1H NMR(400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 0.65(d, J=6.30 Hz, 3 H) 0.80(d, J=6.83 Hz, 3 H) 0.93(t, J=5.85 Hz, 7 H) 1.01(d, J=6.30 Hz, 3 H) 1.08(d, J=6.30 Hz, 3 H) 1.11-1.21(m, 2 H) 1.21-1.32(m, 7 H) 1.43-1.65(m, 10 H) 1.69(S,3 H) 1.70-1.91(m, 5 H) 2.05(q, J=6.8 Hz, 1 H) 2.25(t, J=7.32 Hz, 2 H) 2.36-2.48(m, 3 H) 2.63(d, J=9.27 Hz, 1 H) 2.95(dd, J=5.85, 4.39 Hz, 1 H) 3.03-3.13(m, 2 H) 3.13-3.21(m, 1 H) 3.37-3.48(m, 7 H) 3.48-3.59(m, 8 H) 3.62-3.70(m, 2 H) 3.76(quin, J=6.46 Hz, 1 H) 4.11-4.22(m, 2 H) 4.47-4.53(m, 1 H) 5.02-5.09(m, 2 H) 5.45(dd, J=14.88, 9.03 Hz, 1 H) 5.90(d, J=10.73 Hz, 1 H) 6.28(dd, J=14.64, 11.22 Hz, 1 H) 6.76(S,2 H) 7.26-7.37(m, 2 H) 7.57(d, J=7.81 Hz, 2 H).
1.4.4 ADL1-H10의 합성
1.4.4.1 H10의 합성
Figure pct00125
2-(3-((((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)메틸)아미노)-3-옥소프로폭시)에틸 3-(메틸아미노)피롤리딘-1-카르복실레이트(H10)
섹션 1.4.1에 약술된 단계 1 내지 4를 사용하여 무색 오일로서 표제 화합물을 제공하였다(24.8 mg, 88% 수율). LC/MS(ESI, m/z), 652.91 [M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.65(d, J=6.34 Hz, 3 H) 0.85(d, J=6.83 Hz, 3 H) 0.96(dd, J=18.78, 6.59 Hz, 1 H) 1.03(d, J=6.8 Hz, 3 H) 1.16(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.18-1.25(m, 3 H) 1.27(s 3 H) 1.20-1.32(m, 5 H) 1.41-1.63(m, 4 H) 1.70(S,3 H) 1.72-1.90(m, 4 H) 2.02(dd, J=12.44, 6.10 Hz, 2 H) 2.41(s 3 H) 2.43-2.50(m, 2 H)2.54(d, J = 9.76 Hz, 1 H) 2.95(t, J=5.37 Hz, 1 H) 3.01-3.14(m, 1 H) 3.18-3.24(m, 1 H) 3.27(d, J=9.7 Hz, 1 H) 3.38-3.49(m, 2 H) 3.52(S,6 H) 3.61-3.65(m, 2 H) 3.69-3.74(m, 2 H) 3.83(quin, J=5.98 Hz, 1 H) 4.15-4.22(m, 1 H) 4.34(t, J=6.10 Hz, 1 H) 5.44(dd, J=15.12, 8.78 Hz, 1 H) 5.88(d, J=11.22 Hz, 1 H) 6.23(dd, J=14.88, 10.98 Hz, 1 H) 6.43-6.51(m, 1 H).
1.4.4.2 ADL1-H10의 합성
Figure pct00126
섹션 1.2.7에 약술된 것과 유사한 절차를 사용하여 무색 오일로서 표제 화합물을 제공하였다(22.1 mg, 57% 수율).
1H NMR(400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 0.65(d, J=6.34 Hz, 3 H) 0.80(d, J=6.83 Hz, 3 H) 0.94(dd, J=6.34, 4.88 Hz, 8 H) 1.01(dd, J=3.90, 2.93 Hz, 4 H) 1.08(d, J=6.30 Hz, 3 H) 1.11-1.22(m, 3 H) 1.22-1.31(m, 7 H) 1.44-1.65(m, 10 H) 1.68(s 3 H) 1.71-1.91(m, 4 H) 1.99-2.09(m, 3 H) 2.25(t, J=7.56 Hz, 2 H) 2.41(t, J=5.85 Hz, 2 H) 2.62(d, J=9.27 Hz, 1 H) 2.84(m, 4 H) 2.93-2.99(m, 2 H) 3.04-3.13(m, 2 H) 3.13-3.21(m, 1 H) 3.43(t, J=7.07 Hz, 2 H) 3.50(S,3 H) 3.52-3.56(m, 2 H) 3.61(t, J=4.39 Hz, 2 H) 3.69(t, J=5.37 Hz, 2 H) 3.73-3.79(m, 1 H) 4.15(d, J=7.32 Hz, 3 H) 4.49(dd, J=9.03, 5.12 Hz, 1 H) 5.06(S,2 H) 5.45(dd, J=14.88, 9.03 Hz, 1 H) 5.90(d, J=11.22 Hz, 1 H) 6.28(dd, J=14.88, 10.98 Hz, 1 H) 6.76(S,J=4.56 Hz, 2 H) 7.30(d, J=8.29 Hz, 2 H) 7.57(d, J=8.29 Hz, 2 H).
1.5 ADL2-H1의 합성
Figure pct00127
2-((2R,4R,5S,6S)-4-((4-(3-(2-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)에톡시)프로파노일)피페라진-1-카르보닐)옥시)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)아세트산(ADL2-H1)
DMF(1 mL) 중 H1(예를 들어 섹션 1.2.2 참고; 22.5 mg, 0.03 mmol)의 혼합물에 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시]에톡시}프로파노에이트(10.55 mg, 0.03 mmol) 및 DIPEA(0.016 mL, 0.089 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 이어서, 용매를 진공에서 제거하고 생성된 잔류물을 역상 크로마토그래피(ODS, 24 g, H2O/MeCN = 95/5에서 60/40)로 정제하여, 무색 오일로서 표제 화합물을 제공하였다(15.7 mg, 65% 수율).
1H NMR(400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 0.73(d, J=6.34 Hz, 4 H) 0.97-1.15(m, 13 H) 1.21(S,2 H) 1.28-1.41(m, 1 H) 1.42-1.62(m, 2 H) 1.69(d, J=4.39 Hz, 4 H) 2.08-2.20(m, 1 H) 2.33-2.39(m, 1 H) 2.42-2.58(m, 3 H) 2.63(t, J=5.30 Hz, 2 H) 2.91-2.94(m, 1 H) 3.33(d, J=3.41 Hz, 1 H) 3.36(d, J=1.95 Hz, 2 H) 3.44-3.60(m, 18 H) 3.60-3.67(m, 4 H) 3.69(t, J=5.37 Hz, 2 H) 3.75-3.78(m, 1 H) 3.81-4.00(m, 2 H) 4.22-4.31(m, 1 H) 4.52-4.60(m, 1 H) 5.58-5.72(m, 1 H) 5.89-6.00(m, 1 H) 6.13-6.31(m, 1 H) 6.71-6.89(m, 2 H).
1.6 ADL2-H11의 합성
단계 1: (2R,3R,4R)-4-((2R,3R)-3-((S,3E,5E)-6-((2S,3S,6R)-6-(아미노메틸)-3-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2-메틸헵타-3,5-디엔-1-일)-3-메틸옥시란-2-일)-3-메톡시펜탄-2-올(H11)의 합성
Figure pct00128
THF(1 mL) 중 ((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-3-메톡시-4-((트리에틸실릴)옥시)펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)메탄아민(32 mg, 0.061 mmol)의 혼합물에 TBAF(THF 중 1 M 용액, 0.183 mL, 0.183 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고 이어서 AcOEt 를 사용하여 희석하였다. 유기 상을 단리하고, 물 및 염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 단리된 잔류물을 아미노-기능화된 실리카겔 크로마토그래피(24 g, 헵탄/AcOEt = 50/50에서 0/100, 이어서 AcOEt/MeOH = 80/20)로 정제하여 무색 오일로서 표제 화합물을 제공하였다(15.1 mg, 60.4% 수율). LC/MS(ESI, m/z), 410.07 [M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.65(d, J=6.80 Hz, 3 H) 0.86(d, J=6.80 Hz, 3 H) 1.03(d, J=6.80 Hz, 3 H) 1.16(d, J=6.30 Hz, 4 H) 1.19-1.24(m, 2 H) 1.27(S,3 H) 1.29-1.38(m, 1 H) 1.44-1.57(m, 3 H) 1.62-1.66(m, 1 H) 1.71(S,5 H) 1.74-1.93(m, 3 H) 2.34-2.45(m, 1 H) 2.54(d, J=9.00 Hz, 1 H) 2.62-2.74(m, 2 H) 2.92-2.98(m, 1 H) 3.24-3.32(m, 2 H) 3.52(S,3 H) 3.79-3.88(m, 1 H) 5.39-5.48(m, 1 H) 5.88(d, J=10.73 Hz, 1 H) 6.23(ddd, J=14.64, 11.22, 3.41 Hz, 1 H).
단계 2: 3-(2-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로폭시)에톡시)-N-(((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)메틸)프로판아미드(ADL2-H11)의 합성
Figure pct00129
DMF(1 mL, 12.915 mmol) 중 단계 1로부터 수득된 화합물(15.1 mg, 0.037 mmol)의 혼합물에 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시]에톡시}프로파노에이트(13.1 mg, 0.037 mmol) 및 DIPEA(0.019 ml, 0.111 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 진공에서 농축시키고 생성된 잔류물을 역상 크로마토그래피(ODS, 24 g, H2O/MeCN = 95/5에서 60/40)로 정제하여 무색 오일로서 표제 화합물을 제공하였다(14.9 mg, 62% 수율).
1.7 H18, H20, H23, H16, H15, H24, H13, H14, H17, H19, 및 H21의 합성
H18, H20, H23, H16, H15, H24, H13, H14, H17, H19, 및 H21를 하기의 일반 절차(일반 절차 1.7)를 통해 제조하였다.
Figure pct00130
DMF(0.028 M) 중 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 2-((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-하이드록시-3-메톡시펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)아세테이트(1.0 equiv.)의 용액에 아민(16 mg, 0.056 mmol) 및 DIPEA(2.0 equiv.)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, 이어서 혼합물을 HPLC 로 정제하여 원하는 생산물을 제공하였다.
1.7.1 H20의 합성
Figure pct00131
일반 절차 1.7을 사용하여 무색 비결정 생산물로서 H20을 제공하였다(15.7 mg, 0.022 mmol, 79% 수율). LC/MS(ESI, m/z), 707.99 [M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.66(d, J=6.83 Hz, 3 H) 0.85(d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.04(d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.16(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.18-1.25(m, 2 H) 1.27(S,4 H) 1.30-1.59(m, 8 H) 1.71-1.80(m, 2 H) 1.81-1.89(m, 2 H) 2.35(br d, J=3.90 Hz, 2 H) 2.38-2.44(m, 1 H) 2.52-2.60(m, 4 H) 2.79-2.86(m, 4 H) 2.96(t, J=5.37 Hz, 1 H) 3.06-3.16(m, 1 H) 3.24-3.30(m, 1 H) 3.32(d, J=9.76 Hz, 1 H) 3.52(S,3 H) 3.64(br d, J=4.39 Hz, 5 H) 3.71(S,3 H) 3.83(t, J=5.85 Hz, 1 H) 4.30-4.42(m, 1 H) 5.40-5.53(m, 3 H) 5.89(br d, J=10.73 Hz, 1 H) 6.16-6.28(m, 1 H) 6.75(br t, J=5.85 Hz, 1 H).
1.7.2 H23의 합성
Figure pct00132
H23(6.9 mg, 37% 수율)을 일반 절차 1.7로부터 수득하였다. LC/MS(ESI, m/z), 665.96 [M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 0.66(d, J=6.34 Hz, 3 H) 0.80(d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.02(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.08(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.12-1.23(m, 2 H) 1.25(S,4 H) 1.31-1.37(m, 1 H) 1.43-1.55(m, 2 H) 1.63(br d, J=13.17 Hz, 1 H) 1.67(S,3 H) 1.81-1.93(m, 3 H) 2.21-2.40(m, 1 H) 2.63(d, J=9.76 Hz, 1 H) 2.74(S,2 H) 2.92-2.97(m, 1 H) 3.05(br S,3 H) 3.12-3.22(m, 1 H) 3.31-3.38(m, 2 H) 3.50(S,3 H) 3.63(br S,4 H) 3.68-3.78(m, 2 H) 4.23(br d, J=4.39 Hz, 1 H) 5.45(dd, J=15.12, 8.78 Hz, 1 H) 5.89(br d, J=10.73 Hz, 1 H) 6.27(dd, J=14.88, 10.98 Hz, 1 H).
1.7.3 H16의 합성
Figure pct00133
일반 절차 1.7을 사용하여 무색 비결정 생산물로서 H16을 제공하였다(6.4 mg, 34% 수율). LC/MS(ESI, m/z), 679.86[M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.67(br d, J=6.34 Hz, 3 H) 0.85(br d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.01-1.06(m, 3 H) 1.14-1.19(m, 3 H) 1.19-1.28(m, 5 H) 1.43(br dd, J=12.20, 9.76 Hz, 1 H) 1.47-1.55(m, 1 H) 1.61-1.64(m, 1 H) 1.71(br d, J=7.32 Hz, 3 H) 1.83-1.90(m, 2 H) 2.03-2.20(m, 1 H) 2.37-2.44(m, 3 H) 2.49-2.56(m, 5 H) 2.75(br S,1 H) 2.78-2.84(m, 3 H) 2.87-2.94(m, 1 H) 2.94-2.98(m, 1 H) 3.35(br dd, J=13.41, 10.00 Hz, 2 H) 3.52(S,4 H) 3.60(br S,4 H) 3.69(br S,3 H) 3.71(S,4 H) 3.83(td, J=12.56, 6.59 Hz, 2 H) 4.06-4.20(m, 1 H) 4.57-4.68(m, 1 H) 5.47(td, J=15.98, 8.54 Hz, 1 H) 5.81-5.96(m, 1 H) 6.14-6.36(m, 1 H).
1.7.4 H15의 합성
Figure pct00134
일반 절차 1.7은 H16의 합성 도중에 부산물로서 H15를 제공하였다(6.6 mg, 35% 수율). LC/MS(ESI, m/z), 665.46 [M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 0.66(br d, J=6.34 Hz, 4 H) 0.81(br d, J=5.85 Hz, 3 H) 0.99-1.04(m, 4 H) 1.07-1.10(m, 4 H) 1.17(br S,1 H) 1.19-1.27(m, 5 H) 1.46-1.55(m, 2 H) 1.65(br S,1 H) 1.68(S,4 H) 1.82-1.95(m, 2 H) 2.00-2.18(m, 1 H) 2.29-2.49(m, 4 H) 2.61-2.67(m, 4 H) 2.92-3.03(m, 5 H) 3.34(br d, J=10.24 Hz, 1 H) 3.50(S,3 H) 3.58-3.77(m, 8 H) 4.28(t, J=9.76 Hz, 1 H) 5.40-5.53(m, 1 H) 5.83-5.99(m, 1 H) 6.28(dd, J=14.63, 10.73 Hz, 1 H).
1.7.5 H24의 합성
Figure pct00135
일반 절차 1.7을 사용하여 무색 비결정 생산물로서 H24를 제공하였다(12.1 mg, 94% 수율). LC/MS(ESI, m/z), 693.72 [M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 0.66(d, J=6.34 Hz, 3 H) 0.80(d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.02(d, J=6.83 Hz, 4 H) 1.08(d, J=6.34 Hz, 4 H) 1.32-1.37(m, 8 H) 1.44-1.50(m, 4 H) 1.65-1.68(m, 5 H) 1.75-1.96(m, 4 H) 2.19-2.39(m, 3 H) 2.40-2.52(m, 2 H) 2.63(d, J=9.27 Hz, 1 H) 2.80(S,3 H) 2.95(dd, J=6.34, 4.39 Hz, 1 H) 3.06-3.15(m, 1 H) 3.31-3.40(m, 2 H) 3.50(S,3 H) 3.65-3.72(m, 7 H) 3.73-3.80(m, 2 H) 4.10-4.24(m, 1 H) 5.47(dd, J=15.12, 9.27 Hz, 1 H) 5.89(d, J=10.24 Hz, 1 H) 6.28(dd, J=15.12, 10.73 Hz, 1 H).
1.7.6 H18의 합성
Figure pct00136
일반 절차 1.7을 사용하여 무색 비결정 생산물로서 H18을 제공하였다(8.1 mg, 53% 수율). LC/MS(ESI, m/z), 678.68[M-H]+.
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.67(br d, J=6.34 Hz, 3 H) 0.87(d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.03(br d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.15-1.24(m, 5 H) 1.28(S,3 H) 1.50-1.67(m, 5 H) 1.75(br S,1 H) 1.82-1.94(m, 3 H) 2.37-2.44(m, 3 H) 2.56-2.60(m, 4 H) 2.71-2.93(m, 3 H) 3.00(br t, J=5.12 Hz, 1 H) 3.37(br d, J=10.24 Hz, 1 H) 3.53(S,3 H) 3.55-3.63(m, 1 H) 3.65-3.76(m, 3 H) 3.83-3.91(m, 1 H) 4.04(br d, J=4.39 Hz, 1 H) 4.08-4.16(m, 1 H) 4.41-4.53(m, 2 H) 5.42-5.55(m, 1 H) 5.91(br d, J=10.73 Hz, 1 H) 6.14-6.28(m, 1 H) 7.21(br d, J=7.32 Hz, 1 H).
1.7.7 H13의 합성
Figure pct00137
일반 절차 1.7을 사용하여 무색 비결정 생산물로서 H13을 제공하였다(6.7 mg, 36.7% 수율). LC/MS(ESI, m/z), 652.86 [M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 0.66(d, J=6.34 Hz, 3 H) 0.81(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.02(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.05-1.10(m, 3 H) 1.14-1.23(m, 2 H) 1.26(S,4 H) 1.34-1.52(m, 2 H) 1.52-1.59(m, 1 H) 1.65(br S,1 H) 1.70(S,4 H) 1.82-1.92(m, 2 H) 2.41(qd, J=14.39, 6.10 Hz, 3 H) 2.63(d, J=9.76 Hz, 1 H) 2.73(br d, J=4.39 Hz, 3 H) 2.95(br t, J=5.12 Hz, 2 H) 2.99-3.09(m, 3 H) 3.30-3.36(m, 1 H) 3.50(S,3 H) 3.53-3.65(m, 2 H) 3.65-3.78(m, 4 H) 4.24-4.42(m, 2 H) 4.55(br S,1 H) 5.36-5.55(m, 1 H) 5.89(br d, J=10.73 Hz, 1 H) 6.21-6.43(m, 1 H).
1.7.8 H14의 합성
Figure pct00138
일반 절차 1.7을 사용하여 무색 비결정 고체로서 H14를 제공하였다(15.5 mg, 83% 수율). LC/MS(ESI, m/z), 666.90 [M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.65(br d, J=6.34 Hz, 3 H) 0.85(br d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.02(br d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.14-1.28(m, 8 H) 1.38-1.57(m, 2 H) 1.57-1.65(m, 2 H) 1.81-1.89(m, 2 H) 2.04-2.19(m, 2 H) 2.41(br d, J=4.88 Hz, 3 H) 2.54(d, J=9.76 Hz, 1 H) 2.65(S,3 H) 2.91-3.03(m, 5 H) 3.33(br d, J=9.76 Hz, 1 H) 3.52(S,3 H) 3.70(br S,5 H) 3.81-3.87(m, 1 H) 4.08-4.18(m, 2 H) 4.52(br d, J=6.34 Hz, 1 H) 5.45(br dd, J=15.12, 8.78 Hz, 1 H) 5.89(br d, J=10.73 Hz, 1 H) 6.21(br dd, J=14.88, 10.98 Hz, 2 H) 7.15(br d, J=7.32 Hz, 1 H).
1.7.9 H17의 합성
Figure pct00139
일반 절차 1.7을 사용하여 무색 비결정 고체로서 H17을 제공하였다(12.94 mg, 68% 수율). LC/MS(ESI, m/z), 680.66 [M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 0.66(d, J=6.83 Hz, 4 H) 0.81(d, J=7.32 Hz, 3 H) 0.97-1.04(m, 5 H) 1.08(d, J=6.34 Hz, 5 H) 1.10-1.16(m, 2 H) 1.20-1.23(m, 1 H) 1.25(S,4 H) 1.69(d, J=0.98 Hz, 4 H) 1.83(br d, J=3.41 Hz, 1 H) 1.87(br d, J=4.39 Hz, 1 H) 1.90(br d, J=4.39 Hz, 1 H) 2.24-2.30(m, 1 H) 2.40(br dd, J=13.90, 9.02 Hz, 2 H) 2.58-2.62(m, 5 H) 2.64(S,1 H) 2.84(br t, J=4.88 Hz, 5 H) 2.95(dd, J=6.34, 4.39 Hz, 1 H) 3.30-3.32(m, 1 H) 3.50(S,3 H) 3.56-3.64(m, 6 H) 3.74-3.79(m, 1 H) 4.02(br t, J=5.37 Hz, 3 H) 4.32-4.35(m, 1 H) 4.35-4.37(m, 1 H) 5.45(dd, J=15.12, 8.78 Hz, 1 H) 5.85-5.91(m, 1 H) 6.27(dd, J=15.12, 10.73 Hz, 1 H).
1.7.10 H19의 합성
Figure pct00140
일반 절차 1.7을 사용하여 무색 비결정 고체로서 H19를 제공하였다(5.53 mg, 56.4% 수율). LC/MS(ESI, m/z), 694.08 [M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 0.66(d, J=6.83 Hz, 3 H) 0.81(d, J=6.83 Hz, 3 H) 0.95-0.95(m, 1 H) 1.02(d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.08(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.12-1.22(m, 2 H) 1.26(S,4 H) 1.34-1.52(m, 7 H) 1.62(br d, J=13.66 Hz, 2 H) 1.68(S,4 H) 1.81-1.93(m, 3 H) 2.08-2.08(m, 1 H) 2.20-2.39(m, 2 H) 2.39-2.50(m, 1 H) 2.61-2.68(m, 4 H) 2.90-2.97(m, 5 H) 3.11-3.15(m, 2 H) 3.30-3.34(m, 1 H) 3.50(S,3 H) 3.56-3.62(m, 4 H) 3.76(t, J=6.34 Hz, 1 H) 4.11-4.22(m, 1 H) 5.45(dd, J=15.12, 8.78 Hz, 1 H) 5.90(br d, J=11.22 Hz, 1 H) 6.29(dd, J=14.88, 10.98 Hz, 1 H).
1.7.11 H21의 합성
Figure pct00141
일반 절차 1.7을 사용하여 무색 비결정 고체로서 수득되는 H21을 제공하였다(12.3 mg, 62.1% 수율). LC/MS(ESI, m/z), 708.03 [M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.67(br d, J=6.34 Hz, 3 H) 0.85(br d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.02(br d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.15-1.29(m, 9 H) 1.29-1.42(m, 3 H) 1.47-1.63(m, 6 H) 1.74-1.79(m, 1 H) 1.86(br dd, J=13.17, 3.90 Hz, 2 H) 2.40(br d, J=5.37 Hz, 3 H) 2.51-2.55(m, 4 H) 2.78(br S,4 H) 2.96(br t, J=5.12 Hz, 1 H) 3.18(td, J=12.07, 6.10 Hz, 2 H) 3.37(br d, J=9.76 Hz, 1 H) 3.52(S,3 H) 3.57(br S,4 H) 3.69(S,4 H) 3.84(br t, J=5.85 Hz, 1 H) 4.50-4.57(m, 1 H) 4.85-4.93(m, 2 H) 5.44(br dd, J=15.12, 8.78 Hz, 1 H) 5.92(br d, J=10.24 Hz, 1 H) 6.15-6.38(m, 1 H) 7.24-7.29(m, 2 H) 8.24(br S,1 H).
1.8 H22 및 H25의 합성
하기 일반 절차를 통하여 H22 및 H25를 제조하였다.
Figure pct00142
단계 1: 디클로로메탄(2 ml) 중 ((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-3-메톡시-4-((트리에틸실릴)옥시)펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-l)메탄아민(16.6 mg, 0.027 mmol) 및 4-카르복시-1-사이클로헥산메탄올(시스 및 트랜스 혼합물, 5.11 mg, 0.032 mmol)의 용액에 실온에서 EDC(6.20 mg, 0.032 mmol) 및 HOBT(4.54 mg, 0.03 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 디클로로메탄을 사용하여 희석하고 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, 이어서 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시켰다. 고체를 여과하고, 여과액을 농축시키고 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 무색 오일로서 원하는 생산물을 수득하였다(8.3 mg, 47% 수율).
단계 2: 실온의 디클로로메탄(1 ml) 중 4-(하이드록시메틸)-N-(((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-3-메톡시-4-((트리에틸실릴)옥시)펜탄-2-일)-2-메틸옥시란-2-일)-6-메틸헵타-2,4-디엔-2-일)-5-메틸테트라하이드로-2H-피란-2-일)메틸)사이클로헥산카르복사미드(21 mg, 0.032 mmol)의 시스,트랜스 혼합물 및 DIPEA(0.028 ml, 0.158 mmol)의 용액에 4-니트로페닐 카르보노클로리데이트(12.75 mg, 0.063 mmol) 및 DMAP(1.932 mg, 0.016 mmol)를 조금씩 나누어(portion-wise) 첨가하였다. 생성된 혼합물을 동일한 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 이어서 1-메틸피페라진(31.7 mg, .316 mmol)을 첨가하고 또 다른 1시간 동안 교반하였다. 디클로로메탄을 사용하여 반응 혼합물을 희석하고 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, 이어서 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 고체를 여과하고 여과액을 농축시켜 건조하였다. 수득된 잔류물을 1.0 mL의 MeOH 및 10 mg의 p-TsOH 중에 용해시키고 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 100 uL의 DIPEA를 첨가하여 반응을 ??칭하고, 용매를 이어서 진공에서 제거하였다. 수득된 잔류물을 NH-실리카겔 크로마토그래피(Hep/AcOEt = 50/50에서 0/100)로 정제하여 H25 및 H22를 제공하였다.
1.8.1 H25의 합성
Figure pct00143
H25를 무색 비결정 생산물로서 수득하였다(7.0 mg, 32.7% 수율). LC/MS(ESI, m/z), 676.94 [M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.68(d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.02(d, J=7.32 Hz, 3 H) 1.10(d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.17(d, J=6.34 Hz, 4 H) 1.25(S,3 H) 1.47-1.62(m, 11 H) 1.71(S,3 H) 1.80-1.86(m, 4 H) 2.13(S,1 H) 2.27-2.36(m, 10 H) 2.49-2.65(m, 1 H) 2.99-3.12(m, 1 H) 3.29(d, J=10.20 Hz, 1 H) 3.32(S,4 H) 3.47(br t, J=4.88 Hz, 4 H) 3.72-3.73(m, 1 H) 3.73-3.74(m, 1 H) 3.99(d, J=6.83 Hz, 2 H) 4.21-4.36(m, 1 H) 5.56-5.71(m, 1 H) 5.92(S,1 H) 6.18-6.31(m, 1 H).
1.8.2 H22의 합성
Figure pct00144
H22를 무색 비결정 생산물로서 수득하였다(5.6 mg, 26.2% 수율). LC/MS(ESI, m/z), 676.89[M+H]+.
1H NMR(400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.68(d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.02(d, J=6.83 Hz, 3 H) 1.10(d, J=7.32 Hz, 3 H) 1.14(d, J=6.34 Hz, 3 H) 1.17(S,3 H) 1.21-1.41(m, 2 H) 1.49-1.55(m, 5 H) 1.58-1.62(m, 6 H) 1.70(S,3 H) 1.80-1.86(m, 4 H) 2.26-2.30(m, 4 H) 2.35(br S,4 H) 2.46-2.57(m, 1 H) 2.89(dd, J=3.66, 2.20 Hz, 1 H) 3.01-3.11(m, 1 H) 3.27(d, J=9.76 Hz, 1 H) 3.38(S,3 H) 3.47(br t, J=4.88 Hz, 4 H) 3.53(ddd, J=10.24, 6.83, 3.41 Hz, 1 H) 3.76(d, J=5.37 Hz, 1 H) 3.89(dd, J=6.34, 1.95 Hz, 1 H) 3.99(d, J=7.32 Hz, 2 H) 5.68-5.77(m, 1 H) 5.91(d, J=11.22 Hz, 1 H) 6.18(dd, J=14.88, 10.98 Hz, 1 H).
실시예 2
ADC의 제조에 사용된 예시적인 헤르복시디엔 스플라이세오솜 조절제 페이로드를 프로파일링하였다. 페이로드는 SF3b 복합체에 대한 결합, 시험관내 스플라이싱 활성, 및 세포 성장 저해 능력에 대해 평가하였다.
2.1 시험관내 스플라이싱(IVS)
무-세포 시스템에서 페이로드 활성을 평가하기 위해, 시험관내 스플라이싱 분석을 수행하였다. 페이로드는 핵 추출물 및 전구-mRNA 기질 소형유전자(minigene)와 함께 인큐베이션하였다.
HeLa 핵 추출물 제조: HeLa S3 세포 펠렛을 저장성 완충액(10 mM HEPES pH 7.9, 1.5 mM MgCl2, 10 mM KCl, 0.2 mM PMSF, 0.5 mM DTT)에 재현탁하고 현탁액을 총 5 농축 세포 용적(packed cell volume, PCV)으로 가져왔다. 원심 분리 후, 상청액을 버리고, 저장성 완충액을 사용하여 세포를 3 PCV로 가져오고 얼음 상에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 다운스(dounce) 균질기를 사용하여 세포를 용해한 다음 원심 분리하였다. 상층액을 버리고, ½ 농축 핵 용적(packed nuclear volume, PNV)의 저염 완충액(20 mM HEPES pH 7.9, 1.5 mM MgCl2, 20 mM KCl, 0.2 mM EDTA, 25% 글리세롤, 0.2 mM PMSF, 0.5 mM DTT), 이어서 ½ PNV의 고염 완충액(1.4 M KCl을 제외하고 저염 완충액과 동일)을 사용하여 펠렛을 재현탁하였다. 핵은 원심 분리 전에 30분 동안 부드럽게 혼합하였다. 상청액(핵 추출물)을 이어서 보관 완충액(20 mM HEPES pH 7.9, 100 mM KCl, 0.2 mM EDTA, 20% 글리세롤, 0.2 mM PMSF, 0.5 mM DTT)으로 투석하였다. 단백질 농도는 나노드롭(NanoDrop) 8000 UV-Vis 분광 광도계(ThermoFisher Scientific)를 사용하여 결정하였다.
IVS: 모든 Ad2-유래 서열(Pellizzoni et al.(1998) Cell 95(5): 615-24)을 5' EcoRI 및 3' XbaI 제한 부위를 사용하여 pcDNA3.1(+) 벡터(Promega)로 클로닝하였다. 플라스미드는 XbaI을 사용하여 선형화하였고 시험관내 전사 반응에서 DNA 주형으로 사용하였다. Ftzi 인트론-없는 플라스미드(Luo and Reed(1999) 96(26): 14937-42)는 EcoRI을 사용하여 선형화하였다. 모든 RNA는 시험관내 전사한 다음 메가스크립트 T7(MEGAScript T7)(Invitrogen) 및 메가클리어(MegaClear)(Invitrogen) 키트를 사용하여 각각 정제하였다. Ad2 변이체 전구-mRNA를 사용하는 스플라이싱 반응의 경우, HeLa S3으로부터 제조한 8 μg 핵 추출물, 2 ng 전구-mRNA, 0.2 ng FTZI, 및 다양한 농도의 화합물 또는 DMSO를 사용하여 1 μL 반응물을 제조하였다. 30℃에서 15분 사전-인큐베이션 후, 1 μL 스플라이싱 활성화 완충액(0.5 mM ATP, 20 mM 크레아틴 포스페이트, 1.6 mM MgCl2)을 첨가하고, 반응물을 30℃에서 90분 동안 인큐베이션하였다. 이어서 반응물을 13 μL DMSO를 사용하여 켄칭하고, 25 nL를 RT-qPCR에 사용하였다. 타크만 RNA-에서-CT(TaqMan RNA-to-CT) 1-단계 키트(Life Technologies), 스플라이싱 반응을 위한 RNA, Ad2(정방향: ACTCTCTTCCGCATCGCTGT; 역방향: CCGACGGGTTTCCGATCCAA; 프로브: CTGTTGGGCTCGCGGTTG) 및 Ftz (정방향: TGGCATCAGATTGCAAAGAC; 역방향: ACGCCGGGTGATGTATCTAT; 프로브: CGAAACGCACCCGTCAGACG) mRNA 프라이머-프로브 세트를 사용하여 RT-qPCR 반응물을 제조하였다. 형성된 스플라이싱된 산물의 비-선형 회귀 곡선 피팅을 위하여 프리즘 7(Prism 7)(Graphpad)을 사용하였으며 대조군(DMSO) 샘플에 대하여 정규화하였다.
테스트된 모든 페이로드가 SF3b 복합체에 특이적으로 결합하고 유사한 결합 프로파일을 보여준다는 것을 고려할 때, 모든 페이로드가 또한 유사한 정도로 스플라이싱을 조절해야한다고 가설을 세웠다. 모든 페이로드는 Ad2.2 전구-mRNA의 스플라이싱을 유의미하게 조절하였다(표 13 참고). 페이로드의 존재 하에, 스플라이싱된 산물 양의 감소를 관찰하였다.
2.2 세포 생존력
HCC1954(미국 생물자원센터, American Type Culture Collection(ATCC)) 유방 도관 암종 세포를 평평한 바닥 96-웰 조직 배양 플레이트(Corning)에 2000개 세포/웰로 10% 소 태아 혈청(ThermoFisher Scientific)으로 보충된 총 부피 90 μL 조직 배양 배지 내에 플레이팅하였다. 세포를 200 nM 내지 0.03 nM의 화합물 3-배 연속 희석으로 처리하였다. 각각의 농도는 3 반복으로 테스트하였다. 처리시, 제조업체의 권장 사항에 따라 셀타이터-글로®2.0(CellTiter-Glo®2.0) 발광 세포 생존력 분석(Promega; #G9241)을 사용하여 처리되지 않은 세포 플레이트를 평가하였다. 셀타이터-글로®2.0 시약을 배지에 첨가하고, 인큐베이션하고, 인비젼(EnVision) 다중표지 판독기(PerkinElmer) 상에서 분석하였다. 값은 시간 0(T0)에 해당한다. 144시간(T144)의 화합물 처리 후 생존 가능 세포의 수 또한 셀타이터-글로®2.0 발광 세포 생존력 분석을 사용하여 결정하였다. 시간 0(T0)에서의 발광 값, DMSO 대조군 성장(C), 및 화합물(T144) 존재 하의 테스트 성장을 이용하여, 각각의 화합물 농도 수준에서 성장 백분율을 계산하였다. 성장 저해 백분율은 다음과 같이 계산하였다: T144 >/= T0인 농도의 경우 [(T144-T0)/(C-T0)] x 100 또는 T144 < T0인 농도의 경우 [(T144-T0)/T0] x 100. 용량 반응 곡선 도표는 프리즘 7(Graphpad)을 사용하여 생성하고 비선형 회귀 분석 및 로그(저해제) 대 반응ㅡ변수 기울기(4개 파라미터)를 사용하여 피팅하였다.
HER2-증폭된 HCC1954 유방암 세포에서 모든 페이로드에 대해 세포 생존력 용량 반응을 결정하였다. 테스트된 페이로드 대부분은 낮은 나노몰 범위에서 GI50 값(즉, 세포 증식에서의 50% 감소를 유발하는 화합물의 농도)을 나타냈다(표 13 참고).
실시예 3
실시예 2에서 평가된 예시적인 페이로드 화합물을 항체 상의 시스테인 잔기를 통해 예시적인 항-HER2 항체(트라스투주맙)에 접합시켰다. 예시적인 항-HER2 ADC의 제조 및 평가는 하기에 기재되어 있다.
3.1 항체
트라스투주맙 항체("AB185")(Molina et al.(2001) Cancer Res. 61(12): 4744-9)를 항-HER2 ADC(본원에서 SMLA로도 지칭됨)의 제조에 사용하였다.
3.2 생접합(Bioconjugation)
PBS 완충액(pH 7.0) 중 10 mg/mL의 항체(트라스투주맙)를 5 mM TCEP(2 내지 4 몰 당량)(ThermoFisher Scientific; #77720)와 혼합하여 사슬간 디설파이드 결합을 끊었다. 반응물을 22℃에서 3시간 동안 부드럽게 혼합하였다. 이어서 프로필렌 글리콜(15% v/v) 후 8 몰 당량의 링커-페이로드(DMSO 중 6 mM 모액)를 첨가하고, 용액을 완전히 혼합하였다. 반응물을 22℃의 인큐베이터에서 회전 플레이트 상에 놓았다. 2시간 접합 후, 반응 혼합물을 정제하여 AKTA GE M150(HiTrapTM 26/10 탈염 컬럼; 유속: 3 mL/분)(GE Healthcare Bio-Sciences)으로 접합되지 않은 페이로드를 DPBS(pH 7.5) 내로 제거하였다. 생성된 접합체를 아미콘(Amicon) 한외여과(30 kDa, 울트라-4(Ultra-4))(EMD Millipore)를 통해 농축하고 0.22 μm PVDF 일회용 필터(EMD Millipore)를 통해 멸균 여과하였다. 최종 맑은 용액을 UV-VIS로 측정하여 비어-람베르트(Beer-Lambert) 법칙(A = E*c*l) 및 다음의 방정식에 따라 항체 농도([mAb]; 몰/L) 및 접합된 페이로드 농도([LD]; 몰/L)를 결정하였다:
A280nm = E mAb 280nm * [mAb] * l+E LD 280nm * [LD] * l
A252nm = E mAb 252nm * [mAb] * l+E LD 252nm * [LD] * l
E mAb 280nm : 트라스투주맙 = 213,380 cm-1M-1
E mAb 252nm : 트라스투주맙 = 79,112 cm-1M-1
E LD 280nm = 800 cm-1M-1
E LD 252nm = 31,000 cm-1M-1
약어 : c - 몰 농도; l - 광로 길이(나노드롭(Nanodrop): 0.1 cm); E - 몰 소광 계수; A - 흡광도.
3.3 생물물리학적 특징 확인
액체 크로마토그래피-질량 분광분석(LC/MS), 크기 배제 크로마토그래피(SEC), 및 역-상 고-성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 사용하여 예시적인 항-HER2 ADC에 대해 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제-대-항체 비율(HAR), 응집 퍼센트, 및 접합되지 않은 페이로드 퍼센트를 각각 분석하였다. 일반적으로, 접합체는 2% 미만의 유리 약물을 함유하고 10% 미만의 응집체를 함유하였다.
3.3.1 LC/MS 분석 - HAR
LC/MS 분석은 애질런트 G6224A 애큐레이트 매스(Agilent G6224A Accurate Mass) TOF 질량 분광분석계에 연결된 애질런트 1290 UPLC 시스템을 사용하여 수행하였다. 접합체를 피엔가제 에프(PNGase F)(New England Biolabs; #P0705L)를 사용하여 37℃에서 4시간 동안 탈글리코실화하고, 8 M Gdn-HCl(Sigma; #G9284)을 사용하여 변성시키고, 마지막으로 DTT(5 mM 최종 농도)(Promega; #V3151)를 사용하여 경쇄 및 중쇄 도메인으로 분리하였다. 제조된 샘플을 애질런트 PLRP-S 컬럼(2.1 x 150 mm, 8 μm) 상에 주입하고 실온(RT)에서 28분에 걸쳐 25% B에서 50% B의 구배를 사용하여 용리하였다. 이동상 A는 0.05% TFA를 갖는 물이었고, 이동상 B는 0.04% TFA를 갖는 아세토니트릴이었으며, 유속은 1 mL/분이었다. 경쇄(L0 또는 L1) 및 중쇄(H0, H1, H2, 및 H3)에 대한 접합되지 않은 및 약물 접합된 피크의 강도를 가중 평균함으로써 비권취된 질량 스펙트럼으로부터 HAR을 계산하였다. 온전한 접합체의 총 HAR은 다음 방정식을 사용하여 계산하였다: (HARLC*2) + (HARHC*2) = 총 HAR. 예시적인 항-HER2 ADC에 대한 HAR 값이 표 12에 보고되어 있다.
3.3.2 SEC 분석 - 응집
크기 배제 크로마토그래피는 0.75 mL/분 유속의 0.25 mM 포타슘 클로라이드 및 15%(v/v) IPA와 함께 0.2 M 포타슘 포스페이트(pH 7)에서 TOSON-G3000SWXL(#008541) 컬럼을 사용하여 수행하였다. 280 nm에서의 피크 면적 흡광도는 곡선 아래 면적 통합으로 고 분자량 및 단량체 접합체 성분에 대해 결정하였다. 예시적인 항-HER2 ADC에 대한 단량체 퍼센트가 표 12에 보고되어 있다.
3.3.3 HPLC 분석 - 유리 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제
관심 접합체를 얼음 위에서 2시간 동안 10 부피의 아세토니트릴을 사용하여 침전시키고 스핀다운시켰다. 잔류의 접합되지 않은 페이로드를 함유하는 상청액을 이어서 애질런트 포로쉘(Agilent Poroshell) 120 SB-C18 120A 컬럼(4.6 x 100 mm, 2.7 μm) 상에 주입하고 RT에서 10분에 걸쳐 45% B에서 70% B의 구배로 용리하였다. 이동상 A는 100% 물이어고, 이동상 B는 100% 아세토니트릴이었으며, 유속은 252 nm에서 검출 시 0.6 mL/분이었다. 잔류 유리 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제의 양은 접합되지 않은 링커-페이로드의 외부 표준 곡선과 비교하여 UV 검출을 통해 정량화하였다. 예시적인 항-HER2 ADC에 대한 유리 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 퍼센트가 표 12에 보고되어 있다.
3.4 결합 특징 확인
3.4.1 표적-양성 세포에 대한 결합 FACS
접합되지 않은 항-HER2 항체 및 항-HER2 ADC의 표적-양성 세포에 대한 결합은 간접 면역 형광을 사용하는 유-세포 분석으로 평가하였다. HER2를 내생적으로 발현하는 유방암 세포주인, JIMT1 세포(DSMZ)를 v-바닥 96-웰 플레이트(Greiner Bio-One) 내에 플레이팅하고(5x104개 세포/웰) 분석 배지(10%(w/v) 태아 소 혈청 알부민이 보충된 RPMI-1640(Thermo Fisher Scientific)) 중에 다양한 농도로 희석된 테스트 화합물과 함께 4℃에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 이어서 PBS+2% FBS(FACS 완충액)로 세척하고, 파이코에리트린-표지된(PE) 염소 항-인간 면역글로불린 G(IgG) 항체(Invitrogen)를 이용하여 4℃ 암소에서 40분 동안 염색하였다. 세포를 차가운 FACS 완충액으로 세척하고 실온에서 30분 동안 플루로픽스(FluroFix) 완충액(Biolegend)을 사용하여 고정시켰다. 고정액을 FACS 완충액으로 세척하였다. LSR포르테싸(LSRFortessa) 유세포 분석계(BD Bioscience)를 사용하여 PE 형광의 기하 평균에 대해 고정된 세포를 분석하였다. 트라스투주맙 및 T-DM1(트라스투주맙에 접합된 DM1)을 대조군으로 포함시켰다.
3.5 시험관내 분석
3.5.1 세포 생존력
여러 HER2-증폭된 세포주에서 세포 성장을 저해하는 능력에 대해 항-HER2 ADC를 테스트하였다. HCC1954(ATCC), 2000개 세포/웰), 세포주를 사용하였다. 섹션 2.3에 기재된 바와 같이 세포 생존력 분석을 수행하였다.
놀랍게도, 유사한 결합 프로파일(표 13 참고) 및 유사한 생화학적 특성을 갖는 페이로드를 가짐에도 불구하고, 모든 ADC가 HCC1954 세포에서 활성이 있는 것은 아니었다. 예를 들어, ADL2 링커를 갖는 ADC는 세포 성장을 덜 저해할 수 있었다(예를 들어 ADL1-H1 및 ADL2-H1의 활성 비교).
Figure pct00145
Figure pct00146
3.5.2 ADC 페이로드의 카코(Caco)-2 투과도
카코-2 세포를 트랜스웰 24-웰 플레이트 내에서 37℃, 95% 습도, 5% CO2에서 21일 동안 배양하였다. 세포 단층의 온전성을 TEER(경상피 전기 저항, transepithelial electrical resistance) 및 루시퍼 옐로우로 확인하였다. 세포 단층의 양측 모두에서, 개별적으로, 10 μM로 2 반복으로 페이로드를 스파이크하였다. 정단에서부터 기저 측(A-B) 방향 및 기저 측에서부터 정단(B-A) 방향으로의 투과 속도는 처리 직후(t = 0) 및 2시간 동안의 인큐베이션 후 두 챔버 모두로부터 부분표본을 샘플링함으로써 결정하였다. 샘플은 내부 표준을 포함하는 유기 용매을 이용하여 단백질 침전시키고 LC-MS/MS(SCIEX; API 5500)로 분석하였다. 투과도(cm/초) 값을 생성하기 위해 두 방향 모두에서 시간에 따른 페이로드/내부 표준의 반응 면적 비를 사용하였다. 유출 비율은 B-A/A-B 나누어 계산하였다. 낮은 및 높은 투과도와 유출에 대한 대조군 화합물은 예상대로 반응을 나타내었다. 투과도 값이 표 12에 보고되어 있다.
3.5.3 ADC 페이로드의 화학적 안정성
헤르복시디엔 스플라이싱 조절제를 최종 농도 20 μM(모액으로부터의 DMSO 0.5% 미만)로 맥일반(Mcilvane)(시트레이트-포스페이트) 완충액, pH 5.5(Boston Bioproducts; #BB-2466)에서 인큐베이션하였다. 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 용액과 내부 표준을 96-웰 플레이트 내로 피펫팅하고 UPLC(Waters Aquity H class) 상에 흘리고, 초기 크로마토그래피 신호(t = 0)에 대해 분석하였다. 컬럼은 워터스 UPLC HSS T3 1.8 μm 2.1 x 50 mm 컬럼(#186003538)이었다. 95%에서 10%의 이동상 A의 구배를 1분에 걸쳐 사용하였으며, 여기서 A는 물 중 0.1% 포름산이고 이동상 B는 아세토니트릴 중 0.1% 포름산이었다(유속 0.9 mL/분). 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 용액 나머지는 37℃의 플레이트 쉐이커(Eppendorf ThermoMixer)에 보관하였다. UPLC에 의한 샘플 분석은 37℃에서 인큐베이션-후 24, 72, 및 96시간에 반복하였다. 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제 및 내부 표준의 반응 면적 비는 3개 시점에 대해 결정하였다: 시간 0, 1일차, 및 3일차 또는 4일차. 시간 0을 100으로 설정하였다. 이후 시점의 반응 면적 비를 시간 0과 비교하였다. 잔류 퍼센트는 다음과 같이 계산하였다: (X 일차 면적 비/시간 0 면적 비) * 100 = 잔류%. 선의 기울기는 잔류%의 로그와 시점을 비교하여 엑셀(Excel)에서 계산하였다. 반감기는 엑셀에서 ln(2)/기울기로 계산하였으며 표 12에 보고되어 있다.
실시예 4
예시적인 페이로드 화합물은 하기에 기재된 바와 같이 평가하였다.
4.1 시험관내 분석
4.1.1 세포 생존력
HER2-증폭된 HCC1954 유방암 세포 및 NCI-N87 위암 세포에서 예시적인 페이로드 화합물에 대해 세포 생존력 용량 반응을 결정하였다.
10% 태아 소 혈청으로 보충된 조직 배양 배지(ThermoFisher Scientific) 총 부피 30 μL 중에 평평한 바닥 384-웰 조직 배양 플레이트(Corning)에 500개 세포/웰로 HCC1954(미국 생물자원센터(ATCC)) 유방 도관 암종 또는 NCI-N87(ATCC) 위 암종 세포를 플레이팅하였다. 10000 nM 내지 0.01 nM 화합물 4-배 연속 희석으로 세포를 처리하였다. 각각의 농도는 3 반복으로 테스트하였다. 처리 시, 제조업체의 권장 사항(Promega; #G9241)에 따라 셀타이터-글로® 2.0 발광 세포 생존력 분석을 사용하여 처리되지 않은 세포 플레이트를 평가하였다. 셀타이터-글로® 2.0 시약을 배지에 첨가하고, 인큐베이션하고, 인비젼 다중표지 판독기(PerkinElmer) 상에서 분석하였다. 값은 시간 0(T0)에 해당한다. 72(T72) 또는 144시간(T144)의 화합물 처리 후 생존 가능 세포의 수 또한 셀타이터-글로®2.0 발광 세포 생존력 분석을 사용하여 결정하였다. 시간 0(T0)에서의 발광 값, DMSO 대조군 성장(C), 및 화합물(T72 또는 T144) 존재 하의 테스트 성장을 이용하여, 각각의 화합물 농도 수준에서 성장 백분율을 계산하였다. 성장 저해 백분율은 다음과 같이(예를 들어) 계산하였다: T144>/=T0인 농도의 경우 [(T144-T0)/(C-T0)] x 100 또는 T144<T0인 농도의 경우 [(T144-T0)/T0] x 100. 용량 반응 곡선 도표는 프리즘 8(Graphpad)을 사용하여 생성하고 비선형 회귀 분석 및 로그(저해제) 대 반응ㅡ변수 기울기(4개 파라미터)를 사용하여 피팅하였다.
도 1a 내지 도 1d는 HER2-증폭된 유방암 세포(HCC1954) 및 위암 세포(NCI-N87)에서의 예시적인 페이로드 화합물의 생존력 용량 반응을 나타낸다. 도 1a는 72시간 인큐베이션 후 HCC1954 세포에서의 생존력 용량 반응을 나타낸다. 도 1b는 72시간 인큐베이션 후 NCI-N87 세포에서의 생존력 용량 반응을 나타낸다. 도 1c는 144-시간 인큐베이션 후 HCC1954 세포에서의 생존력 용량 반응을 나타낸다. 도 1d는 144-시간 인큐베이션 후 NCI-N87 세포에서의 생존력 용량 반응을 나타낸다. 표 14는 모든 테스트된 화합물에 대한 GI50, LD50, 및 Rmin 값을 나타낸다.
4.1.2 세포-내(In-Cell) 스플라이싱 PD 분석
SLC25A19 성숙 전사체의 스플라이싱을 또한 예시적인 페이로드 화합물 증가하는 농도로 처리한 HCC1954 및 NCI-N87 세포에서 조사하였다.
HCC1954 또는 NCI-N87 세포(ATCC)를 RPMI + 10% FBS 배지(ATCC) 중에 웰당 20 μL의 웰당 1000개 세포로 플레이팅하였다. 세포는 4-배 희석의 화합물 용량-반응으로 처리하였다. 6시간 후, 세포를 PBS 세척하고 25 μL/mL 알엔에이신(RNAsin)(Promega)이 함유된 30 μL의 CL 완충액(IgePal CA-630, 물 중 5 M NaCl, 1 M Tris HCl 1 M pH 7.4)을 사용하여 용해시키고 로커(rocker) 상에서 RT에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 생성된 혼합물(1 μL)을 사용하여 제조업체의 권장 사항에 따라 다음의 타크만 프라이머를 사용하는 타크만 팩스트 바이러스 1-스텝 마스터믹스(Taqman Fast Virus 1-step MasterMix)(Applied Biosystems) 역전사 PCR 반응에서 스플라이싱 조절을 평가하였다: SLC25A19(Invitrogen, Hs00222265_m1); RPLPO(Invitrogen, Hs99999902_m1).
도 2a 및 도 2b는 HER2-증폭된 유방암 세포(HCC1954)(도 2a) 및 위암 세포(NCI-N87)(도 2b)에서의 스플라이싱 분석 결과를 나타낸다. 표 14는 모든 테스트된 화합물에 대한 IC50 값을 나타낸다.
Figure pct00147

Claims (751)

  1. 화학식 I의 항체-약물 접합체로서:
    [화학식 I]
    Ab-(L-H) p ,
    여기서,
    Ab는 신생물 세포를 표적화하는 항체 또는 항원 결합 단편이고;
    H는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제이고;
    L은 Ab를 H에 공유 결합으로 부착시키는 링커이고;
    p는 1 내지 15의 정수인, 항체-약물 접합체.
  2. 제1항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 화학식 I의 화합물:
    [화학식 I]
    Figure pct00148
    ,
    또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하며, 이는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고, 여기서,
    Y는 O, S, NR6, 및 CR6R7로부터 선택되고;
    R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 하이드록실, -O-(C1-C6 알킬) 기, -O-C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되고;
    R4는 수소, C1-C6 알킬 기, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, 및 -C(=O)-NR6R7로부터 선택되고;
    R5는 수소, 하이드록실, -CH2-OH, -CO2H, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-NR6R7, -NR6-C(=O)-R8, -O-C(=O)-NR6R7, -NR6-C(=O)-R8, 및 -NR6-C(=O)-NR6R7로부터 선택되고;
    R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, -R8, -C(=O)-R8, 및 -C(=O)-O-R8로부터 선택되고;
    R8은 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고,
    여기서 R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, 및 R8은 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, -NR6R7, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환되며, 이들 각각은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, C1-C3 할로알킬 기, -NH-C(=O)(C1-C3 알킬), 및 -NH-C(=O)-O-(C1-C3 알킬)로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 독립적으로 치환될 수 있으며,
    여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않는, 항체-약물 접합체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 화학식 Ia 화합물:
    [화학식 Ia]
    Figure pct00149
    ,
    또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하며, 이는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고, 여기서,
    R9는 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고;
    R10은 H 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되며,
    여기서 R9 및 R10은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, -NH2, -NH-(C1-C3 알킬), 및 -N-(C1-C3 알킬)2로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환되며,
    여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않는, 항체-약물 접합체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 화학식 Ib의 화합물:
    [화학식 Ib]
    Figure pct00150
    ,
    또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하며, 이는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고, 여기서,
    R11은
    Figure pct00151
    로부터 선택되며, 여기서 *는 화합물의 나머지 부분에 대한 R11의 연결 지점을 나타내고;
    R12 및 R13은 H 및 메틸로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않는, 항체-약물 접합체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고
    여기서 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H1, H2, H3, 및 H12로부터 선택되고;
    여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않는, 항체-약물 접합체.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서, L은 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 공유 결합으로 부착하고("L-H"), L-H는 다음의 구조 및 이의 약학적으로 허용되는 염으로부터 선택되는 구조를 갖는, 항체-약물 접합체:
    Figure pct00152

    Figure pct00153
    .
  7. 제1항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 화학식 II의 스플라이싱 조절제:
    [화학식 II]
    Figure pct00154
    ,
    또는 이의 약학적으로 허용되는 염이며, 이는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고, 여기서,
    X는 하이드록실 또는 NR6R7이고;
    R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, -R8, -C(=O)-R8, -C(=O)-O-R8, -(C1-C6 알킬)-O-C(=O)-R8, 및 -(C1-C6 알킬)-NH-C(=O)-R8로부터 선택되고;
    R8은 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고,
    여기서 R6, R7, 및 R8은 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, -NR6R7, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환되며, 이들 각각은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, C1-C3 할로알킬 기, -NH-C(=O)(C1-C3 알킬), 및 -NH-C(=O)-O-(C1-C3 알킬)로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 독립적으로 치환될 수 있고,
    여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않는, 항체-약물 접합체.
  8. 제1항 또는 제7항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 화학식 IIa의 스플라이싱 조절제:
    [화학식 IIa]
    Figure pct00155
    ,
    또는 이의 약학적으로 허용되는 염이며, 이는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고, 여기서,
    Z는 NR9 및 O로부터 선택되고;
    R9는 수소 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되고;
    R10 및 R11은 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고;
    R12는 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되며,
    여기서 R9, R10, R11, 및 R12는 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, 및 C1-C3 할로알킬 기로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 각각 독립적으로 치환되고;
    t는 1, 2, 3, 4, 5, 및 6으로부터 선택되는 정수이며;
    여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않는, 항체-약물 접합체.
  9. 제1항, 제7항, 또는 제8항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 화학식 IIb의 스플라이싱 조절제:
    [화학식 IIb]
    Figure pct00156
    ,
    또는 이의 약학적으로 허용되는 염이며, 이는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고, 여기서,
    R13은
    Figure pct00157
    로부터 선택되며, 여기서 *는 화합물의 나머지 부분에 대한 R13의 연결 지점을 나타내고;
    R14 및 R15는 각각 독립적으로 수소 및 메틸로부터 선택되며;
    여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않는, 항체-약물 접합체.
  10. 제1항, 제7항, 제8항, 또는 제9항에 있어서,
    헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고;
    여기서 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H4, H13, H14, H15, H16, H17, H18, H19, H20, H21, H23, 및 H24로부터 선택되며;
    여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않는, 항체-약물 접합체.
  11. 제1항 또는 제7항에 있어서, L은 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 공유 결합으로 부착하고("L-H"), L-H는 다음의 구조 및 이의 약학적으로 허용되는 염으로부터 선택되는 구조를 갖는, 항체-약물 접합체:
    Figure pct00158
    .
  12. 제1항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 화학식 III의 스플라이싱 조절제:
    [화학식 III]
    Figure pct00159

    또는 이의 약학적으로 허용되는 염이며, 이는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고, 여기서,
    R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 하이드록실, -O-(C1-C6 알킬) 기, -O-C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되고;
    R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, -R8, -C(=O)-R8, 및 -C(=O)-O-R8로부터 선택되고;
    R8은 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고;
    R9는 H,
    Figure pct00160
    로부터 선택되고;
    여기서 R1, R2, R3, R6, R7, 및 R8은 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, -NR6R7, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환되며, 이들 각각은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, C1-C3 할로알킬 기, -NH-C(=O)(C1-C3 알킬), 및 -NH-C(=O)-O-(C1-C3 알킬)로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 독립적으로 치환될 수 있으며,
    여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않고;
    여기서 *는 화합물의 나머지 부분에 대한 R9의 연결 지점을 나타내는, 항체-약물 접합체.
  13. 제1항 또는 제12항에 있어서,
    헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고;
    여기서 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H22, 및 H25로부터 선택되며;
    여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않는, 항체-약물 접합체.
  14. 제1항 또는 제12항에 있어서, 링커는 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제에 공유 결합으로 부착하고("L-H"), L-H는 다음의 구조 및 이의 약학적으로 허용되는 염으로부터 선택되는 구조를 갖는, 항체-약물 접합체:
    Figure pct00161
    .
  15. 제1항에 있어서,
    헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 임의의 원자를 통해서 L에 공유 결합으로 부착하고;
    여기서 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, H16, H17, H18, H19, H20, H21, H22, H23, H24, 및 H25로부터 선택되며;
    여기서 L에 공유 결합으로 부착되는 원자의 원자가는 초과되지 않는, 항체-약물 접합체.
  16. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H1인, 항체-약물 접합체.
  17. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H2인, 항체-약물 접합체.
  18. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H3인, 항체-약물 접합체.
  19. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H4인, 항체-약물 접합체.
  20. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H5인, 항체-약물 접합체.
  21. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H6인, 항체-약물 접합체.
  22. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H7인, 항체-약물 접합체.
  23. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H8인, 항체-약물 접합체.
  24. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H9인, 항체-약물 접합체.
  25. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H10인, 항체-약물 접합체.
  26. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H11인, 항체-약물 접합체.
  27. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H12인, 항체-약물 접합체.
  28. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H13인, 항체-약물 접합체.
  29. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H14인, 항체-약물 접합체.
  30. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H15인, 항체-약물 접합체.
  31. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H16인, 항체-약물 접합체.
  32. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H17인, 항체-약물 접합체.
  33. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H18인, 항체-약물 접합체.
  34. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H19인, 항체-약물 접합체.
  35. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H20인, 항체-약물 접합체.
  36. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H21인, 항체-약물 접합체.
  37. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H22인, 항체-약물 접합체.
  38. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H23인, 항체-약물 접합체.
  39. 제15항에 있어서, 헤르복시디엔 스플라이싱 조절제는 H24인, 항체-약물 접합체.
  40. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 절단 가능한 링커인, 항체-약물 접합체.
  41. 제40항에 있어서, 링커는 절단 가능한 펩티드 모이어티를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  42. 제41항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티는 효소에 의해 절단 가능한, 항체-약물 접합체.
  43. 제40항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 링커는 아미노산 단위를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  44. 제43항에 있어서, 아미노산 단위는 발린-시트룰린(Val-Cit)을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  45. 제43항에 있어서, 아미노산 단위는 발린-알라닌(Val-Ala)을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  46. 제43항에 있어서, 아미노산 단위는 글루타민-발린-시트룰린(Glu-Val-Cit)을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  47. 제43항에 있어서, 아미노산 단위는 알라닌-알라닌-아스파라긴(Ala-Ala-Asn)을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  48. 제40항에 있어서, 링커는 절단 가능한 글루쿠로나이드 모이어티를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  49. 제48항에 있어서, 절단 가능한 글루쿠로나이드 모이어티는 효소에 의해 절단 가능한, 항체-약물 접합체.
  50. 제48항 또는 제49항에 있어서, 절단 가능한 글루쿠로나이드 모이어티는 글루쿠로니다제에 의해 절단 가능한, 항체-약물 접합체.
  51. 제48항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 절단 가능한 글루쿠로나이드 모이어티는 β-글루쿠로니다제에 의해 절단 가능한, 항체-약물 접합체.
  52. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 적어도 하나의 스페이서 단위를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  53. 제52항에 있어서, 스페이서 단위 또는 링커는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 모이어티를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  54. 제53항에 있어서, PEG 모이어티는 -(PEG) m -을 포함하고 m은 1 내지 10의 정수인, 항체-약물 접합체.
  55. 제54항에 있어서, m은 2인, 항체-약물 접합체.
  56. 제52항에 있어서, 스페이서 단위 또는 링커는 알킬 모이어티를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  57. 제56항에 있어서, 알킬 모이어티는 -(CH2) n -을 포함하고 n은 1 내지 10의 정수인, 항체-약물 접합체.
  58. 제57항에 있어서, n은 2인, 항체-약물 접합체.
  59. 제57항에 있어서, n은 5인, 항체-약물 접합체.
  60. 제57항에 있어서, n은 6인, 항체-약물 접합체.
  61. 제52항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 스페이서 단위는 말레이미드(Mal) 모이어티를 통해 항체 또는 항원 결합 단편에 부착하는("Mal-스페이서 단위"), 항체-약물 접합체.
  62. 제61항에 있어서, Mal-스페이서 단위는 항체 또는 항원 결합 단편 상의 시스테인 잔기와 반응성인, 항체-약물 접합체.
  63. 제61항 또는 제62항에 있어서, Mal-스페이서 단위는 항체 또는 항원 결합 단편 상의 시스테인 잔기를 통해 항체 또는 항원 결합 단편에 연결되는, 항체-약물 접합체.
  64. 제61항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 Mal-스페이서 단위 및 절단 가능한 펩티드 모이어티를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  65. 제64항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티는 아미노산 단위를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  66. 제64항 또는 제65항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 아미노산 단위는 Val-Cit를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  67. 제64항 또는 제65항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 아미노산 단위는 Val-Ala를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  68. 제64항 또는 제65항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 아미노산 단위는 Glu-Val-Cit를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  69. 제64항 또는 제65항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 아미노산 단위는 Ala-Ala-Asn을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  70. 제61항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, Mal-스페이서 단위는 알킬 모이어티를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  71. 제61항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, Mal-스페이서 단위는 PEG 모이어티를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  72. 제61항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, Mal-스페이서 단위는 말레이미도카프로일(MC)을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  73. 제61항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, Mal-스페이서 단위는 항체 또는 항원 결합 단편을 링커의 절단 가능한 모이어티에 부착시키는, 항체-약물 접합체.
  74. 제73항에 있어서, 링커의 절단 가능한 모이어티는 절단 가능한 펩티드 모이어티를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  75. 제74항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티는 아미노산 단위를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  76. 제74항 또는 제75항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 아미노산 단위는 Val-Cit, Val-Ala, Glu-Val-Cit, 또는 Ala-Ala-Asn을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  77. 제73항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 MC-Val-Cit를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  78. 제73항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 MC-Val-Ala를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  79. 제73항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 MC-Glu-Val-Cit를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  80. 제73항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 MC-Ala-Ala-Asn을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  81. 제73항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, Mal-스페이서 단위는 알킬 모이어티를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  82. 제73항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, Mal-스페이서 단위는 PEG 모이어티를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  83. 제73항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, Mal-스페이서 단위는 말레이미도카프로일(MC)을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  84. 제52항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 링커의 절단 가능한 모이어티는 스플라이싱 조절제에 직접 연결되거나, 스페이서 단위가 링커의 절단 가능한 모이어티를 스플라이싱 조절제에 부착시키는, 항체-약물 접합체.
  85. 제84항에 있어서, 접합체의 절단은 항체 또는 항원 결합 단편 및 링커로부터 스플라이싱 조절제를 방출하는, 항체-약물 접합체.
  86. 제84항 또는 제85항에 있어서, 링커의 절단 가능한 모이어티를 스플라이싱 조절제에 부착시키는 스페이서 단위는 자기-희생적(self-immolative)인, 항체-약물 접합체.
  87. 제84항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 링커의 절단 가능한 모이어티를 스플라이싱 조절제에 부착시키는 스페이서 단위는 p-아미노벤질옥시카르보닐(pABC)을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  88. 제87항에 있어서, pABC는 링커의 절단 가능한 모이어티를 스플라이싱 조절제에 부착시키는, 항체-약물 접합체.
  89. 제87항 또는 제88항에 있어서, 링커의 절단 가능한 모이어티는 절단 가능한 펩티드 모이어티를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  90. 제89항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티는 아미노산 단위를 포함하는 항체-약물 접합체.
  91. 제89항 또는 제90항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 아미노산 단위는 Val-Cit, Val-Ala, Glu-Val-Cit, 또는 Ala-Ala-Asn을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  92. 제87항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 Val-Cit-pABC를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  93. 제87항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 Val-Ala-pABC를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  94. 제87항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 Glu-Val-Cit-pABC를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  95. 제87항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 Ala-Ala-Asn-pABC를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  96. 제84항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 링커의 절단 가능한 모이어티를 스플라이싱 조절제에 부착시키는 스페이서 단위는 p-아미노벤질(pAB)을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  97. 제96항에 있어서, pAB는 링커의 절단 가능한 모이어티를 스플라이싱 조절제에 부착시키는, 항체-약물 접합체.
  98. 제96항 또는 제97항에 있어서, 링커의 절단 가능한 모이어티는 절단 가능한 펩티드 모이어티를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  99. 제98항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티는 아미노산 단위를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  100. 제98항 또는 제99항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 아미노산 단위는 Val-Cit, Val-Ala, Glu-Val-Cit, 또는 Ala-Ala-Asn을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  101. 제96항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 Val-Cit-pAB를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  102. 제96항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 Val-Ala-pAB를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  103. 제96항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 Glu-Val-Cit-pAB를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  104. 제96항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 Ala-Ala-Asn-pAB를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  105. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 비-절단 가능한 링커인, 항체-약물 접합체.
  106. 제105항에 있어서, 링커는 적어도 하나의 스페이서 단위를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  107. 제105항 또는 제106항에 있어서, 스페이서 단위 또는 링커는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 모이어티를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  108. 제107항에 있어서, PEG 모이어티는 -(PEG) m -을 포함하고 m은 1 내지 10의 정수인, 항체-약물 접합체.
  109. 제108항에 있어서, m은 2인, 항체-약물 접합체.
  110. 제105항 또는 제106항에 있어서, 스페이서 단위 또는 링커는 알킬 모이어티를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  111. 제110항에 있어서, 알킬 모이어티는 -(CH2) n -을 포함하고 n은 1 내지 10의 정수인, 항체-약물 접합체.
  112. 제111항에 있어서, n은 2인, 항체-약물 접합체.
  113. 제111항에 있어서, n은 5인, 항체-약물 접합체.
  114. 제111항에 있어서, n은 6인, 항체-약물 접합체.
  115. 제106항 내지 제114항 중 어느 한 항에 있어서, 스페이서 단위는 말레이미드(Mal) 모이어티를 통해 항체 또는 항원 결합 단편에 부착되는("Mal-스페이서 단위"), 항체-약물 접합체.
  116. 제115항에 있어서, Mal-스페이서 단위는 항체 또는 항원 결합 단편 상의 시스테인 잔기와 반응성인, 항체-약물 접합체.
  117. 제115항 또는 제116항에 있어서, Mal-스페이서 단위는 항체 또는 항원 결합 단편 상의 시스테인 잔기를 통해 항체 또는 항원 결합 단편에 연결되는, 항체-약물 접합체.
  118. 제115항 내지 제117항 중 어느 한 항에 있어서, Mal-스페이서 단위는 알킬 모이어티를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  119. 제115항 내지 제117항 중 어느 한 항에 있어서, Mal-스페이서 단위는 PEG 모이어티를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  120. 제115항 내지 제119항 중 어느 한 항에 있어서, 링커 또는 Mal-스페이서 단위는 말레이미도카프로일(MC)을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  121. 제120항에 있어서, 링커 또는 Mal-스페이서 단위는 말레이미도카프로일(MC) 및 적어도 하나의 추가 스페이서 단위를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  122. 제115항 내지 제119항 중 어느 한 항에 있어서, 링커 또는 Mal-스페이서 단위는 MC-(PEG)2를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  123. 제122항에 있어서, 링커 또는 Mal-스페이서 단위는 MC-(PEG)2 및 적어도 하나의 추가 스페이서 단위를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  124. 제115항 내지 제119항 중 어느 한 항에 있어서, 링커 또는 Mal-스페이서 단위는 Mal-Hex를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  125. 제124항에 있어서, 링커 또는 Mal-스페이서 단위는 Mal-Hex 및 적어도 하나의 추가 스페이서 단위를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  126. 제115항 내지 제119항 중 어느 한 항에 있어서, 링커 또는 Mal-스페이서 단위는 Mal-Et를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  127. 제126항에 있어서, 링커 또는 Mal-스페이서 단위는 Mal-Et 및 적어도 하나의 추가 스페이서 단위를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  128. 제115항 내지 제119항 중 어느 한 항에 있어서, 링커 또는 Mal-스페이서 단위는 Mal-Et-O-Et를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  129. 제128항에 있어서, 링커 또는 Mal-스페이서 단위는 Mal-Et-O-Et 및 적어도 하나의 추가 스페이서 단위를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  130. 제115항 내지 제129항 중 어느 한 항에 있어서, Mal-스페이서 단위는 항체 또는 항원 결합 단편을 스플라이싱 조절제에 부착시키는, 항체-약물 접합체.
  131. 제115항 내지 제130항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 MC-Val-Cit-pABC를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  132. 제115항 내지 제130항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 MC-(PEG)2-CO를 포함하는, 항체-약물 접합체.
  133. 제1항 내지 제132항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 혈액 악성 종양 또는 고형 종양으로부터 유래된 신생물 세포를 표적화하는, 항체-약물 접합체.
  134. 제1항 내지 제133항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 혈액 악성 종양으로부터 유래된 신생물 세포를 표적화하는, 항체-약물 접합체.
  135. 제133항 또는 제134항에 있어서, 혈액 악성 종양은 B-세포 악성 종양, 백혈병, 림프종, 및 골수종으로부터 선택되는, 항체-약물 접합체.
  136. 제133항 내지 제135항 중 어느 한 항에 있어서, 혈액 악성 종양은 급성 골수성 백혈병 및 다발성 골수종으로부터 선택되는, 항체-약물 접합체.
  137. 제1항 내지 제133항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 고형 종양으로부터 유래된 신생물 세포를 표적화하는, 항체-약물 접합체.
  138. 제133항 또는 제137항에 있어서, 고형 종양은 유방암, 위암, 전립선암, 난소암, 폐암, 자궁암, 타액 관 암종, 흑색종, 결장암, 자궁 경부암, 췌장암, 신장암, 결장직장암, 및 식도암으로부터 선택되는, 항체-약물 접합체.
  139. 제1항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HER2-발현 세포를 표적화하는, 항체-약물 접합체.
  140. 제139항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-HER2 항체 또는 항원 결합 단편인, 항체-약물 접합체.
  141. 제139항 또는 제140항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 1(HCDR1), SEQ ID NO: 2(HCDR2), 및 SEQ ID NO: 3(HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 SEQ ID NO: 4(LCDR1), SEQ ID NO: 5(LCDR2), 및 SEQ ID NO: 6(LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  142. 제139항 내지 제141항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  143. 제139항 내지 제142항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  144. 제139항 내지 제143항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 Ig 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  145. 제1항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 CD138-발현 세포를 표적화하는, 항체-약물 접합체.
  146. 제145항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-CD138 항체 또는 항원 결합 단편인, 항체-약물 접합체.
  147. 제145항 또는 제146항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 7(HCDR1), SEQ ID NO: 8(HCDR2), 및 SEQ ID NO: 9(HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 SEQ ID NO: 10(LCDR1), SEQ ID NO: 11(LCDR2), 및 SEQ ID NO: 12(LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  148. 제145항 내지 제147항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  149. 제145항 내지 제148항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 IgG2a 중쇄 불변 영역을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  150. 제145항 내지 제149항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 Ig 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  151. 제1항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 EPHA2-발현 세포를 표적화하는, 항체-약물 접합체.
  152. 제151항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-EPHA2 항체 또는 항원 결합 단편인, 항체-약물 접합체.
  153. 제151항 또는 제152항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 13(HCDR1), SEQ ID NO: 14(HCDR2), 및 SEQ ID NO: 15(HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3); 및 SEQ ID NO: 16(LCDR1), SEQ ID NO: 17(LCDR2), 및 SEQ ID NO: 18(LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  154. 제151항 내지 제153항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  155. 제151항 내지 제154항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  156. 제151항 내지 제155항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 Ig 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는, 항체-약물 접합체.
  157. 제1항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 MSLN-발현 세포를 표적화하는, 항체-약물 접합체.
  158. 제157항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-MSLN 항체 또는 항원 결합 단편인, 항체-약물 접합체.
  159. 제1항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 FOLH1-발현 세포를 표적화하는, 항체-약물 접합체.
  160. 제159항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-FOLH1 항체 또는 항원 결합 단편인, 항체-약물 접합체.
  161. 제1항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 CDH6-발현 세포를 표적화하는, 항체-약물 접합체.
  162. 제161항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-CDH6 항체 또는 항원 결합 단편인, 항체-약물 접합체.
  163. 제1항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 CEACAM5-발현 세포를 표적화하는, 항체-약물 접합체.
  164. 제163항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-CEACAM5 항체 또는 항원 결합 단편인, 항체-약물 접합체.
  165. 제1항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 CFC1B-발현 세포를 표적화하는, 항체-약물 접합체.
  166. 제165항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-CFC1B 항체 또는 항원 결합 단편인, 항체-약물 접합체.
  167. 제1항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 ENPP3-발현 세포를 표적화하는, 항체-약물 접합체.
  168. 제167항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-ENPP3 항체 또는 항원 결합 단편인, 항체-약물 접합체.
  169. 제1항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 FOLR1-발현 세포를 표적화하는, 항체-약물 접합체.
  170. 제169항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-FOLR1 항체 또는 항원 결합 단편인, 항체-약물 접합체.
  171. 제1항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 HAVCR1-발현 세포를 표적화하는, 항체-약물 접합체.
  172. 제171항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-HAVCR1 항체 또는 항원 결합 단편인, 항체-약물 접합체.
  173. 제1항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 KIT-발현 세포를 표적화하는, 항체-약물 접합체.
  174. 제173항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-KIT 항체 또는 항원 결합 단편인 항체-약물 접합체.
  175. 제1항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 MET-발현 세포를 표적화하는, 항체-약물 접합체.
  176. 제175항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-MET 항체 또는 항원 결합 단편인, 항체-약물 접합체.
  177. 제1항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 MUC16-발현 세포를 표적화하는, 항체-약물 접합체.
  178. 제177항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-MUC16 항체 또는 항원 결합 단편인, 항체-약물 접합체.
  179. 제1항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 SLC39A6-발현 세포를 표적화하는, 항체-약물 접합체.
  180. 제179항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-SLC39A6 항체 또는 항원 결합 단편인, 항체-약물 접합체.
  181. 제1항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 SLC44A4-발현 세포를 표적화하는, 항체-약물 접합체.
  182. 제181항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-SLC44A4 항체 또는 항원 결합 단편인, 항체-약물 접합체.
  183. 제1항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 STEAP1-발현 세포를 표적화하는, 항체-약물 접합체.
  184. 제183항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 항-STEAP1 항체 또는 항원 결합 단편인, 항체-약물 접합체.
  185. 제1항 내지 제184항 중 어느 한 항에 있어서, p는 1 내지 10인, 항체-약물 접합체.
  186. 제1항 내지 제185항 중 어느 한 항에 있어서, p는 2 내지 8인, 항체-약물 접합체.
  187. 제1항 내지 제186항 중 어느 한 항에 있어서, p는 4 내지 8인, 항체-약물 접합체.
  188. 제1항 내지 제187항 중 어느 한 항에 있어서, p는 4인, 항체-약물 접합체.
  189. 제1항 내지 제187항 중 어느 한 항에 있어서, p는 8인, 항체-약물 접합체.
  190. 화학식 I의 화합물:
    [화학식 I]
    Figure pct00162
    ,
    또는 이의 약학적으로 허용되는 염으로서, 여기서,
    Y는 O, S, NR6, 및 CR6R7로부터 선택되고;
    R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 하이드록실, -O-(C1-C6 알킬) 기, -O-C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되고;
    R4는 수소, C1-C6 알킬 기, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, 및 -C(=O)-NR6R7로부터 선택되고;
    R5는 수소, 하이드록실, -CH2-OH, -CO2H, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-NR6R7, -NR6-C(=O)-R8, -O-C(=O)-NR6R7, -NR6-C(=O)-R8, 및 -NR6-C(=O)-NR6R7로부터 선택되고;
    R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, -R8, -C(=O)-R8, 및 -C(=O)-O-R8로부터 선택되고;
    R8은 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되며,
    여기서 R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, 및 R8은 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, -NR6R7, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환되며, 이들 각각은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, C1-C3 할로알킬 기, -NH-C(=O)(C1-C3 알킬), 및 -NH-C(=O)-O-(C1-C3 알킬)로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 독립적으로 치환될 수 있는, 화합물.
  191. 제190항에 있어서, 화합물은 화학식 Ia의 화합물:
    [화학식 Ia]
    Figure pct00163
    ,
    또는 이의 약학적으로 허용되는 염이며, 여기서,
    R9는 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고;
    R10은 H 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되며,
    여기서 R9 및 R10은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, -NH2, -NH-(C1-C3 알킬), 및 -N-(C1-C3 알킬)2로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환되는, 화합물.
  192. 제190항 또는 제191항에 있어서, 화합물은 화학식 Ib의 화합물:
    [화학식 Ib]
    Figure pct00164
    ,
    또는 이의 약학적으로 허용되는 염이며, 여기서,
    R11은
    Figure pct00165
    로부터 선택되고, 여기서 *는 화합물의 나머지 부분에 대한 R11의 연결 지점을 나타내고;
    R12 및 R13은 각각 독립적으로 H 및 메틸로부터 선택되는, 화합물.
  193. 제190항에 있어서, 화합물은 H1, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  194. 제190항에 있어서, 화합물은 H2, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  195. 제190항에 있어서, 화합물은 H3, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  196. 제190항에 있어서, 화합물은 H12, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  197. 화학식 II의 화합물:
    [화학식 II]
    Figure pct00166
    ,
    또는 이의 약학적으로 허용되는 염으로서, 여기서,
    X는 NR6R7이고;
    R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, -R8, -C(=O)-R8, -C(=O)-O-R8, -(C1-C6 알킬)-O-C(=O)-R8, 및 -(C1-C6 알킬)-NH-C(=O)-R8로부터 선택되고;
    R8은 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고,
    여기서 R6, R7, 및 R8은 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, -NR6R7, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환되며, 이들 각각은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, C1-C3 할로알킬 기, -NH-C(=O)(C1-C3 알킬), 및 -NH-C(=O)-O-(C1-C3 알킬)로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 독립적으로 치환될 수 있는, 화합물.
  198. 제197항에 있어서, 화합물은 화학식 IIa의 화합물:
    [화학식 IIa]
    Figure pct00167
    ,
    또는 이의 약학적으로 허용되는 염이며, 여기서,
    Z는 NR9 및 O로부터 선택되고;
    R9는 수소 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되고;
    R10 및 R11은 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고;
    R12는 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되며,
    여기서 R9, R10, R11, 및 R12는 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, 및 C1-C3 할로알킬 기로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 각각 독립적으로 치환되고;
    t는 1, 2, 3, 4, 5, 및 6으로부터 선택되는 정수인, 화합물.
  199. 제197항 또는 제198항에 있어서, 화합물은 화학식 IIb의 화합물:
    [화학식 IIb]
    Figure pct00168
    ,
    또는 이의 약학적으로 허용되는 염이며, 여기서,
    R13은
    Figure pct00169
    로부터 선택되고, 여기서 *는 화합물의 나머지 부분에 대한 R13의 연결 지점을 나타내고;
    R14 및 R15는 각각 독립적으로 수소 및 메틸로부터 선택되는, 화합물.
  200. 제197항에 있어서, 화합물은 H4, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  201. 제197항에 있어서, 화합물은 H13, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  202. 제197항에 있어서, 화합물은 H14, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  203. 제197항에 있어서, 화합물은 H15, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  204. 제197항에 있어서, 화합물은 H16, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  205. 제197항에 있어서, 화합물은 H17, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  206. 제197항에 있어서, 화합물은 H18, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  207. 제197항에 있어서, 화합물은 H19, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  208. 제197항에 있어서, 화합물은 H20, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  209. 제197항에 있어서, 화합물은 H21, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  210. 제197항에 있어서, 화합물은 H23, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  211. 제197항에 있어서, 화합물은 H24, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  212. 화학식 III의 화합물:
    [화학식 III]
    Figure pct00170
    ,
    또는 이의 약학적으로 허용되는 염이며, 여기서,
    R1, R2, 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 하이드록실, -O-(C1-C6 알킬) 기, -O-C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-O-(C1-C6 알킬) 기, 및 C1-C6 알킬 기로부터 선택되고;
    R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, -R8, -C(=O)-R8, 및 -C(=O)-O-R8로부터 선택되고;
    R8은 C1-C6 알킬 기, C3-C8 카르보사이클릴 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 선택되고;
    R9는 H,
    Figure pct00171
    로부터 선택되며;
    여기서 R1, R2, R3, R6, R7, 및 R8은 할로겐, 하이드록실, C1-C6 알킬 기, -O-(C1-C6 알킬) 기, -CO2H, -C(=O)-(C1-C6 알킬) 기, -C(=O)-(C3-C8 카르보사이클릴) 기, -C(=O)-(C3-C8 헤테로사이클릴) 기, -NR6R7, C3-C8 카르보사이클릴 기, C1-C6 알킬하이드록시 기, C1-C6 알킬알콕시 기, 벤질 기, 및 C3-C8 헤테로사이클릴 기로부터 독립적으로 선택되는 0 내지 3개의 기로 각각 독립적으로 치환되며, 이들 각각은 할로겐, 하이드록실, C1-C3 알킬 기, C1-C3 알콕시 기, C1-C3 할로알킬 기, -NH-C(=O)(C1-C3 알킬), 및 -NH-C(=O)-O-(C1-C3 알킬)로부터 선택되는 0 또는 1개의 기로 독립적으로 치환될 수 있으며;
    여기서 *는 화합물의 나머지 부분에 대한 R9의 연결 지점을 나타내는, 화합물.
  213. 제212항에 있어서, 화합물은 H5, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  214. 제212항에 있어서, 화합물은 H6, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  215. 제212항에 있어서, 화합물은 H7, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  216. 제212항에 있어서, 화합물은 H8, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  217. 제212항에 있어서, 화합물은 H9, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  218. 제212항에 있어서, 화합물은 H10, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  219. 제212항에 있어서, 화합물은 H22, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  220. 제190항 내지 제219항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물.
  221. 제1항 내지 제189항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체의 다수 카피(copy)를 포함하는 조성물로서, 조성물 내의 항체-약물 접합체의 평균 p가 약 3.5 내지 약 5.5인, 조성물.
  222. 제221항에 있어서, 조성물 내의 항체-약물 접합체의 평균 p가 약 4인, 조성물.
  223. 제1항 내지 제189항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체의 다수 카피를 포함하는 조성물로서, 조성물 내의 항체-약물 접합체의 평균 p가 약 7 내지 약 9인, 조성물.
  224. 제223항에 있어서, 조성물 내의 항체-약물 접합체의 평균 p가 약 8인, 조성물.
  225. 제1항 내지 제189항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체, 제190항 내지 제219항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 제220항 내지 제224항 중 어느 한 항의 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법.
  226. 제225항에 있어서, 신생물성 장애는 혈액 악성 종양 또는 고형 종양인, 방법.
  227. 제225항 또는 제226항에 있어서, 신생물성 장애는 혈액 악성 종양인, 방법.
  228. 제227항에 있어서, 혈액 악성 종양은 급성 골수성 백혈병 및 다발성 골수종으로부터 선택되는, 방법.
  229. 제225항 또는 제226항에 있어서, 신생물성 장애는 고형 종양인, 방법.
  230. 제229항에 있어서, 고형 종양은 유방암, 위암, 전립선암, 난소암, 폐암, 자궁암, 타액 관 암종, 흑색종, 결장암, 자궁 경부암, 췌장암, 신장암, 결장직장암, 및 식도암으로부터 선택되는, 방법.
  231. 제225항 내지 제230항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 표적 항원을 발현하는 하나 이상의 신생물 세포를 갖는, 방법.
  232. 제231항에 있어서, 표적 항원은 HER2인, 방법.
  233. 제231항 또는 제232항에 있어서, 하나 이상의 신생물 세포는 HER2-발현 유방암, 난소암, 위암, 폐암, 자궁암, 골육종, 또는 타액 관 암종으로부터 유래되는, 방법.
  234. 제233항에 있어서, 폐암은 폐 선암종이고/이거나 자궁암은 자궁 장액 자궁내막 암종인, 방법.
  235. 제232항 내지 제234항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-HER2 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 반응하지 않거나 저조하게 반응하는, 방법.
  236. 제232항 내지 제235항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 불내성이거나, 반응하지 않거나, 또는 저조하게 반응하는, 방법.
  237. 제231항에 있어서, 표적 항원은 CD138인, 방법.
  238. 제231항 또는 제237항에 있어서, 하나 이상의 신생물 세포는 CD138-발현 다발성 골수종으로부터 유래되는, 방법.
  239. 제237항 또는 제238항에 있어서, 대상체는 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-CD138 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 반응하지 않거나 저조하게 반응하는, 방법.
  240. 제237항 내지 제239항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 불내성이거나, 반응하지 않거나, 또는 저조하게 반응하는, 방법.
  241. 제231항에 있어서, 표적 항원은 EPHA2인, 방법.
  242. 제231항 또는 제241항에 있어서, 하나 이상의 신생물 세포는 EPHA2-발현 유방암, 전립선암, 난소암, 폐암, 흑색종, 결장암, 또는 식도암으로부터 유래되는, 방법.
  243. 제241항 또는 제242항에 있어서, 대상체는 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-EPHA2 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 반응하지 않거나 저조하게 반응하는, 방법.
  244. 제241항 내지 제243항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 불내성이거나, 반응하지 않거나, 또는 저조하게 반응하는, 방법.
  245. 제1항 내지 제189항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체, 제190항 내지 제219항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 제220항 내지 제224항 중 어느 한 항의 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체에서 종양의 성장을 감소 또는 저해하는 방법.
  246. 제245항에 있어서, 종양은 표적 항원을 발현하는 하나 이상의 신생물 세포를 포함하는, 방법.
  247. 제246항에 있어서, 표적 항원은 HER2인, 방법.
  248. 제246항 또는 제247항에 있어서, 하나 이상의 신생물 세포는 HER2-발현 유방암, 난소암, 위암, 폐암, 자궁암, 골육종, 또는 타액 관 암종으로부터 유래되는, 방법.
  249. 제248항에 있어서, 폐암은 폐 선암종이고/이거나 자궁암은 자궁 장액 자궁내막 암종인, 방법.
  250. 제247항 내지 제249항 중 어느 한 항에 있어서, 종양은 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-HER2 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 저항성이 있거나 불응성인, 방법.
  251. 제246항에 있어서, 표적 항원은 CD138인, 방법.
  252. 제246항 또는 제251항에 있어서, 하나 이상의 신생물 세포는 CD138-발현 다발성 골수종으로부터 유래되는, 방법.
  253. 제251항 또는 제252항에 있어서, 종양은 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-CD138 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 저항성이 있거나 불응성인, 방법.
  254. 제246항에 있어서, 표적 항원은 EPHA2인, 방법.
  255. 제246항 또는 제254항에 있어서, 하나 이상의 신생물 세포는 EPHA2-발현 유방암, 전립선암, 난소암, 폐암, 흑색종, 결장암, 또는 식도암으로부터 유래되는, 방법.
  256. 제254항 또는 제255항에 있어서, 종양은 (a) 단독으로 투여되는 경우 항-EPHA2 항체 및/또는 (b) 단독으로 투여되는 경우 스플라이싱 조절제를 사용한 치료에 대해 저항성이 있거나 불응성인, 방법.
  257. 대상체로부터의 생물학적 샘플을 제공하고 생물학적 샘플을 제1항 내지 제189항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체, 제190항 내지 제219항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 제220항 내지 제224항 중 어느 한 항의 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체가 제1항 내지 제189항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체, 제190항 내지 제219항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 제220항 내지 제224항 중 어느 한 항의 조성물을 사용한 치료에 반응할지 여부를 결정하는 방법.
  258. 제257항에 있어서, 생물학적 샘플은 종양 샘플인, 방법.
  259. 제258항에 있어서, 종양 샘플은 종양 생검 또는 혈액 샘플인, 방법.
  260. 제259항에 있어서, 혈액 샘플은 혈액, 혈액 분획, 또는 혈액 또는 혈액 분획으로부터 수득된 세포로부터 선택되는, 방법.
  261. 제257항 내지 제260항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 표적 항원을 발현하는 하나 이상의 신생물 세포를 갖는, 방법.
  262. 제261항에 있어서, 표적 항원은 HER2인, 방법.
  263. 제261항 또는 제262항에 있어서, 하나 이상의 신생물 세포는 HER2-발현 유방암, 난소암, 위암, 폐암, 자궁암, 골육종, 또는 타액 관 암종으로부터 유래되는, 방법.
  264. 제263항에 있어서, 폐암은 폐 선암종이고/이거나 자궁암은 자궁 장액 자궁내막 암종인, 방법.
  265. 제261항에 있어서, 표적 항원은 CD138인, 방법.
  266. 제261항 또는 제265항에 있어서, 하나 이상의 신생물 세포는 CD138-발현 다발성 골수종으로부터 유래되는, 방법.
  267. 제261항에 있어서, 표적 항원은 EPHA2인, 방법.
  268. 제261항 또는 제267항에 있어서, 하나 이상의 신생물 세포는 EPHA2-발현 유방암, 전립선암, 난소암, 폐암, 흑색종, 결장암, 또는 식도암으로부터 유래되는, 방법.
  269. 신생물성 장애 치료에서의 사용을 위한 제1항 내지 제189항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체, 제190항 내지 제219항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 제220항 내지 제224항 중 어느 한 항의 조성물.
  270. 제269항에 있어서의 사용을 위한 항체-약물 접합체, 화합물, 또는 조성물로서, 신생물성 장애는 표적 항원을 발현하는 하나 이상의 신생물 세포를 갖는 것을 특징으로 하는, 항체-약물 접합체, 화합물, 또는 조성물.
  271. 제270항에 있어서의 사용을 위한 항체-약물 접합체, 화합물, 또는 조성물로서, 표적 항원은 HER2인, 항체-약물 접합체, 화합물, 또는 조성물.
  272. 제270항 또는 제271항에 있어서의 사용을 위한 항체-약물 접합체, 화합물, 또는 조성물로서, 신생물성 장애는 HER2-발현 유방암, 난소암, 위암, 폐암, 자궁암, 골육종, 또는 타액 관 암종인, 항체-약물 접합체, 화합물, 또는 조성물.
  273. 제272항에 있어서, 폐암은 폐 선암종이고/이거나 자궁암은 자궁 장액 자궁내막 암종인, 항체-약물 접합체, 화합물, 또는 조성물.
  274. 제270항에 있어서의 사용을 위한 항체-약물 접합체, 화합물, 또는 조성물로서, 표적 항원은 CD138인, 항체-약물 접합체, 화합물, 또는 조성물.
  275. 제270항 또는 제274항에 있어서의 사용을 위한 항체-약물 접합체, 화합물, 또는 조성물로서, 신생물성 장애는 CD138-발현 다발성 골수종인, 항체-약물 접합체, 화합물, 또는 조성물.
  276. 제270항에 있어서의 사용을 위한 항체-약물 접합체, 화합물, 또는 조성물로서, 표적 항원은 EPHA2인, 항체-약물 접합체, 화합물, 또는 조성물.
  277. 제270항 또는 제276항에 있어서의 사용을 위한 항체-약물 접합체, 화합물, 또는 조성물로서, 신생물성 장애는 EPHA2-발현 유방암, 전립선암, 난소암, 폐암, 흑색종, 결장암, 또는 식도암인, 항체-약물 접합체, 화합물, 또는 조성물.
  278. 신생물성 장애 치료에서의 제1항 내지 제189항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체, 제190항 내지 제219항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 제220항 내지 제224항 중 어느 한 항의 조성물의 용도.
  279. 제278항에 있어서, 신생물성 장애는 표적 항원을 발현하는 하나 이상의 신생물 세포를 갖는 것을 특징으로 하는, 용도.
  280. 제279항에 있어서, 표적 항원은 HER2인, 용도.
  281. 제279항 또는 제280항에 있어서, 신생물성 장애는 HER2-발현 유방암, 난소암, 위암, 폐암, 자궁암, 골육종, 또는 타액 관 암종인, 용도.
  282. 제281항에 있어서, 폐암은 폐 선암종이고/이거나 자궁암은 자궁 장액 자궁내막 암종인, 용도.
  283. 제279항에 있어서, 표적 항원은 CD138인, 용도.
  284. 제279항 또는 제283항에 있어서, 신생물성 장애는 CD138-발현 다발성 골수종인, 용도.
  285. 제279항에 있어서, 표적 항원은 EPHA2인, 용도.
  286. 제279항 또는 제285항에 있어서, 신생물성 장애는 EPHA2-발현 유방암, 전립선암, 난소암, 폐암, 흑색종, 결장암, 또는 식도암인, 용도.
  287. 신생물성 장애의 치료를 위한 약제를 제조하는 방법에서의 제1항 내지 제189항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체, 제190항 내지 제219항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 제220항 내지 제224항 중 어느 한 항의 조성물의 용도.
  288. 제287항에 있어서, 신생물성 장애는 표적 항원을 발현하는 하나 이상의 신생물 세포를 갖는 것을 특징으로 하는, 용도.
  289. 제288항에 있어서, 표적 항원은 HER2인, 용도.
  290. 제288항 또는 제289항에 있어서, 신생물성 장애는 HER2-발현 유방암, 난소암, 위암, 폐암, 자궁암, 골육종, 또는 타액 관 암종인, 용도.
  291. 제290항에 있어서, 폐암은 폐 선암종이고/이거나 자궁암은 자궁 장액 자궁내막 암종인, 용도.
  292. 제288항에 있어서, 표적 항원은 CD138인, 용도.
  293. 제288항 또는 제292항에 있어서, 신생물성 장애는 CD138-발현 다발성 골수종인, 용도.
  294. 제288항에 있어서, 표적 항원은 EPHA2인, 용도.
  295. 제288항 또는 제294항에 있어서, 신생물성 장애는 EPHA2-발현 유방암, 전립선암, 난소암, 폐암, 흑색종, 결장암, 또는 식도암인, 용도.
  296. 접합을 가능하게 하는 조건 하에서 스플라이싱 조절제에 연결된 링커와 항체 또는 항원 결합 단편을 반응시키는 단계를 포함하는, 제1항 내지 제189항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체를 생산하는 방법.
  297. 제1항 내지 제189항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체, 제190항 내지 제219항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 제220항 내지 제224항 중 어느 한 항의 조성물의 유효량과 신생물 세포를 접촉시킴으로써, 적어도 하나의 신생항원 생산을 유도하는, 적어도 하나의 신생항원을 유도하는 방법.
  298. 제297항에 있어서, 신생물 세포는 시험관내 세포 배양물에 존재하는, 방법.
  299. 제297항 또는 제298항에 있어서, 신생물 세포는 대상체로부터 수득되는, 방법.
  300. 제297항에 있어서, 신생물 세포는 대상체 내에 존재하는, 방법.
  301. 제297항 내지 제300항 중 어느 한 항에 있어서, 신생물 세포는 혈액 악성 종양 또는 고형 종양으로부터 유래되는, 방법.
  302. 제301항에 있어서, 혈액 악성 종양은 B-세포 악성 종양, 백혈병, 림프종, 및 골수종으로부터 선택되는, 방법.
  303. 제301항 또는 제302항에 있어서, 혈액 악성 종양은 급성 골수성 백혈병 및 다발성 골수종으로부터 선택되는, 방법.
  304. 제301항에 있어서, 고형 종양은 유방암, 위암, 전립선암, 난소암, 폐암, 자궁암, 타액 관 암종, 흑색종, 결장암, 자궁 경부암, 췌장암, 신장암, 결장직장암, 및 식도암으로부터 선택되는, 방법.
  305. 제1항 내지 제189항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체, 제190항 내지 제219항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 제220항 내지 제224항 중 어느 한 항의 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체에서 적어도 하나의 신생항원 및/또는 T-세포 반응을 유도하는 방법.
  306. 제1항 내지 제189항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체, 제190항 내지 제219항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 제220항 내지 제224항 중 어느 한 항의 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 적어도 하나의 신생항원 및/또는 T-세포 반응을 유도하는, 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법.
  307. 제305항 또는 제306항에 있어서, 투여되는 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 양은, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 표준 투여량과 비교하여, 적어도 하나의 신생항원 및/또는 T-세포 반응의 유도로 인해 감소되는, 방법.
  308. 제305항 내지 제307항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여되는 양은, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 표준 투여량과 비교하여, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90%만큼 감소되는, 방법.
  309. 제305항 내지 제308항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물은, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 표준 투약 요법과 비교하여, 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90% 덜 빈번하게 투여되는, 방법.
  310. 제305항 내지 제309항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여되는 양 및/또는 투여량은 더 낮은 전신 독성 및/또는 개선된 내약성을 초래하는, 방법.
  311. 제305항 내지 제310항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 추가 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  312. 제311항에 있어서, 투여되는 화합물, 항체-약물 접합체, 조성물, 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 양은, 화합물, 항체-약물 접합체, 조성물, 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 표준 투여량과 비교하여, 적어도 하나의 신생항원 및/또는 T-세포 반응의 유도로 인해 감소되는, 방법.
  313. 제311항 또는 제312항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 조성물, 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 투여되는 양은, 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 조성물, 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 표준 투여량과 비교하여, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90%만큼 감소되는, 방법.
  314. 제311항 내지 제313항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 조성물, 및/또는 적어도 하나의 추가 요법은, 화합물, 항체-약물 접합체, 조성물, 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 표준 투약 요법과 비교하여, 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90% 덜 빈번하게 투여되는, 방법.
  315. 제311항 내지 제314항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 조성물, 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 투여되는 양 및/또는 투여량은 더 낮은 전신 독성 및/또는 개선된 내약성을 초래하는, 방법.
  316. 제311항 내지 제315항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 적어도 하나의 추가 요법의 투여 전에 개시되는, 방법.
  317. 제311항 내지 제315항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 적어도 하나의 추가 요법의 투여 후에 개시되는, 방법.
  318. 제311항 내지 제315항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 적어도 하나의 추가 요법의 투여와 동시에 개시되는, 방법.
  319. 제305항 내지 제318항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 초기 투여 후 적어도 1회 반복되는, 방법.
  320. 제319항에 있어서, 반복되는 투여에 사용되는 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 양은 초기 투여에 사용되는 양에 비해 감소되는, 방법.
  321. 제319항 또는 제320항에 있어서, 반복되는 투여에 사용되는 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 양은 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 표준 투여량과 비교하여 감소되는, 방법.
  322. 제319항 내지 제321항 중 어느 한 항에 있어서, 반복되는 투여에 사용되는 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 양은, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 표준 투여량과 비교하여, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90%만큼 감소되는, 방법.
  323. 제311항 내지 제322항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 추가 요법의 투여는 초기 투여 후 적어도 1회 반복되는, 방법.
  324. 제323항에 있어서, 반복되는 투여에 사용되는 적어도 하나의 추가 요법의 양은 초기 투여에 사용되는 양과 비교하여 감소되는, 방법.
  325. 제323항 또는 제324항에 있어서, 반복되는 투여에 사용되는 적어도 하나의 추가 요법의 양은 적어도 하나의 추가 요법의 표준 투여량과 비교하여 감소되는, 방법.
  326. 제323항 내지 제325항 중 어느 한 항에 있어서, 반복되는 투여에 사용되는 적어도 하나의 추가 요법의 양은, 적어도 하나의 추가 요법의 표준 투여량과 비교하여, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90%만큼 감소되는, 방법.
  327. 제319항 내지 제326항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 반복되는 투여는 적어도 하나의 추가 요법의 반복되는 투여와 동시에 이루어지는, 방법.
  328. 제319항 내지 제326항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 반복되는 투여는 적어도 하나의 추가 요법의 반복되는 투여와 순차적이거나 시차를 두는, 방법.
  329. 제311항 내지 제328항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 추가 요법은 체크포인트 저해제를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  330. 제329항에 있어서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우의 체크포인트 저해제에 대해 불내성, 비-반응성, 또는 저 반응성인, 방법.
  331. 제329항 또는 제330항에 있어서, 체크포인트 저해제는 CTLA4, PD1, PDL1, OX40, CD40, GITR, LAG3, TIM3, 및/또는 KIR을 표적화하는, 방법.
  332. 제329항 내지 제331항 중 어느 한 항에 있어서, 체크포인트 저해제는 CTLA4, OX40, CD40, 및/또는 GITR을 표적화하는, 방법.
  333. 제329항 내지 제332항 중 어느 한 항에 있어서, 체크포인트 저해제는 세포 독성 T-림프구-관련 항원 4 경로(CTLA4) 저해제를 포함하는, 방법.
  334. 제333항에 있어서, CTLA4 저해제는 항-CTLA4 항체인, 방법.
  335. 제334항에 있어서, 항-CTLA4 항체는 이필리무맙인, 방법.
  336. 제329항 내지 제332항 중 어느 한 항에 있어서, 체크포인트 저해제는 프로그래밍된 사멸-1 경로(PD1) 저해제를 포함하는, 방법.
  337. 제336항에 있어서, PD1 저해제는 항-PD1 항체인, 방법.
  338. 제337항에 있어서, 항-PD1 항체는 니볼루맙인, 방법.
  339. 제336항에 있어서, PD1 저해제는 항-PDL1 항체인, 방법.
  340. 제339항에 있어서, 항-PDL1 항체는 아테졸리주맙인, 방법.
  341. 제329항 내지 제332항 중 어느 한 항에 있어서, 체크포인트 저해제는 CTLA4 저해제 및 PD1 저해제를 포함하는, 방법.
  342. 제341항에 있어서, CTLA4 저해제는 항-CTLA4 항체인, 방법.
  343. 제342항에 있어서, 항-CTLA4 항체는 이필리무맙인, 방법.
  344. 제341항에 있어서, PD1 저해제는 항-PD1 항체인, 방법.
  345. 제344항에 있어서, 항-PD1 항체는 니볼루맙인, 방법.
  346. 제341항에 있어서, PD1 저해제는 항-PDL1 항체인, 방법.
  347. 제346항에 있어서, 항-PDL1 항체는 아테졸리주맙인, 방법.
  348. 제311항 내지 제328항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 추가 요법은 신생항원 백신을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  349. 제348항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물은 신생항원 백신의 투여 전에 투여되는, 방법.
  350. 제348항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물은 신생항원 백신 투여 후 투여되는, 방법.
  351. 제348항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물은 신생항원 백신의 투여와 동시에 투여되는, 방법.
  352. 제348항 내지 제351항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 초기 투여 후 적어도 1회 반복되는, 방법.
  353. 제352항에 있어서, 반복되는 투여에 사용되는 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 양은 초기 투여에 사용되는 양과 비교하여 감소되는, 방법.
  354. 제348항 내지 제353항 중 어느 한 항에 있어서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 펩티드를 포함하는, 방법.
  355. 제354항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 길이가 약 10 내지 약 35개 아미노산 범위인, 방법.
  356. 제354항 또는 제355항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 길이가 약 15 내지 약 25개 아미노산 범위인, 방법.
  357. 제354항 내지 제356항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 하나 또는 하나 초과의 신생항원 서열을 포함하는, 방법.
  358. 제357항에 있어서, 신생항원 서열은 대상체에 특이적인 신생항원 서열인, 방법.
  359. 제357항에 있어서, 신생항원 서열은 범용 신생항원 서열인, 방법.
  360. 제358항에 있어서, 신생항원 서열은 대상체에 대해 개인화된 신생항원 백신인, 방법.
  361. 제360항에 있어서, 신생항원 서열은 유효량의 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물을 투여함으로써 대상체에서 유도되는 적어도 하나의 신생항원을 시퀀싱함으로써 확인되는, 방법.
  362. 제360항 또는 제361항에 있어서, 신생항원 서열은 대상체에서 발현되는 적어도 하나의 HLA 대립 유전자에 결합할 수 있는, 방법.
  363. 제359항에 있어서, 신생항원 서열은 범용 신생항원 백신인, 방법.
  364. 제363항에 있어서, 신생항원 서열은 신생물성 장애를 앓는 대상체 집단에서 대상체의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 또는 적어도 45%에서 발현되는 적어도 하나의 HLA 대립 유전자에 결합할 수 있는, 방법.
  365. 제363항 또는 제364항에 있어서, 신생항원 서열은 신생물성 장애를 앓는 대상체 집단의 적어도 1%, 적어도 5%, 또는 적어도 10%에 존재하는 종양에 대해 T-세포 반응을 끌어낼 수 있는, 방법.
  366. 제354항 내지 제365항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 신생물 세포를 유효량의 스플라이싱 조절제, 항체-약물 접합체, 또는 조성물과 접촉시킴으로써 유도되는 신생항원 서열을 포함하는, 방법.
  367. 제348항에 있어서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 방법.
  368. 제367항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 약학적으로 허용되는 담체에 연결되는, 방법.
  369. 제367항 또는 제368항에 있어서, 약학적으로 허용되는 담체는 펩티드, 혈청 알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌, 면역글로불린, 티로글로불린, 난백알부민, 변성 독소 또는 약화된 변성 독소 유도체, 사이토카인, 및 케모카인으로부터 선택되는, 방법.
  370. 제367항 내지 제369항 중 어느 한 항에 있어서, 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 담체는 링커를 통해 공유 결합으로 부착되는, 방법.
  371. 제367항 내지 제369항 중 어느 한 항에 있어서, 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 담체는 융합 단백질로서 발현되는, 방법.
  372. 제348항에 있어서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 희석제를 포함하는, 방법.
  373. 제348항에 있어서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 애주번트를 포함하는, 방법.
  374. 제366항에 있어서, 신생물 세포는 시험관내 세포 배양물에 존재하는, 방법.
  375. 제366항 또는 제374항에 있어서, 신생물 세포는 대상체로부터 수득되는, 방법.
  376. 제366항에 있어서, 신생물 세포는 대상체 내에 존재하는, 방법.
  377. 제348항 내지 제353항 중 어느 한 항에 있어서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 mRNA를 포함하는, 방법.
  378. 제377항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 mRNA는 하나 또는 하나 초과의 신생항원 서열을 인코딩하는, 방법.
  379. 제378항에 있어서, 신생항원 서열은 대상체에 특이적인 신생항원 서열인, 방법.
  380. 제378항에 있어서, 신생항원 서열은 범용 신생항원 서열인, 방법.
  381. 제379항에 있어서, 신생항원 서열은 대상체에 대해 개인화된 신생항원 백신인, 방법.
  382. 제381항에 있어서, 신생항원 서열은 유효량의 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물을 투여함으로써 대상체에서 유도되는 적어도 하나의 신생항원을 시퀀싱함으로써 확인되는, 방법.
  383. 제381항 또는 제382항에 있어서, 신생항원 서열은 대상체에서 발현되는 적어도 하나의 HLA 대립 유전자에 결합할 수 있는, 방법.
  384. 제380항에 있어서, 신생항원 서열은 범용 신생항원 백신인, 방법.
  385. 제384항에 있어서, 신생항원 서열은 신생물성 장애를 앓는 대상체 집단에서 대상체의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 또는 적어도 45%에서 발현되는 적어도 하나의 HLA 대립 유전자에 결합할 수 있는, 방법.
  386. 제384항 또는 제385항에 있어서, 신생항원 서열은 신생물성 장애를 앓는 대상체 집단의 적어도 1%, 적어도 5%, 또는 적어도 10%에 존재하는 종양에 대한 T-세포 반응을 끌어낼 수 있는, 방법.
  387. 제378항 내지 제386항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 mRNA는 신생물 세포를 유효량의 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물과 접촉시킴으로써 유도되는 신생항원 서열을 인코딩하는, 방법.
  388. 제377항에 있어서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 mRNA 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 방법.
  389. 제388항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 mRNA는 약학적으로 허용되는 담체에 연결되는, 방법.
  390. 제388항 또는 제389항에 있어서, 약학적으로 허용되는 담체는 펩티드, 혈청 알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌, 면역글로불린, 티로글로불린, 난백알부민, 변성 독소 또는 약화된 변성 독소 유도체, 사이토카인, 및 케모카인으로부터 선택되는, 방법.
  391. 제377항에 있어서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 mRNA 및 약학적으로 허용되는 희석제를 포함하는, 방법.
  392. 제377항에 있어서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 mRNA 및 약학적으로 허용되는 애주번트를 포함하는, 방법.
  393. 제377항 내지 제392항 중 어느 한 항에 있어서, 신생항원 mRNA는 캡슐화제에 의해 캡슐화되는, 방법.
  394. 제393항에 있어서, 캡슐화제는 리포솜인, 방법.
  395. 제393항에 있어서, 캡슐화제는 나노입자인, 방법.
  396. 제387항에 있어서, 신생물 세포는 시험관내 세포 배양물에 존재하는, 방법.
  397. 제387항 또는 제396항에 있어서, 신생물 세포는 대상체로부터 수득되는, 방법.
  398. 제387항에 있어서, 신생물 세포는 대상체 내에 존재하는, 방법.
  399. 제311항 내지 제328항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 추가 요법은 사이토카인 또는 사이토카인 유사체를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  400. 제399항에 있어서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우의 사이토카인 또는 사이토카인 유사체에 대해 불내성, 비-반응성, 또는 저 반응성인, 방법.
  401. 제399항 또는 제400항에 있어서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체는 T-세포 인핸서를 포함하는, 방법.
  402. 제399항 내지 제401항 중 어느 한 항에 있어서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체는 IL-2, IL-10, IL-12, IL-15, IFNγ, 및/또는 TNFα를 포함하는, 방법.
  403. 제311항 내지 제328항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 추가 요법은 조작된 종양-표적화 T-세포를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  404. 제305항 내지 제403항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여 후 대상체에서 하나 이상의 신생항원 및/또는 T-세포 반응을 검출하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  405. 제404항에 있어서, 하나 이상의 신생항원 및/또는 T-세포 반응이 검출되는 경우 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여를 계속하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  406. 제404항 또는 제405항에 있어서, 하나 이상의 신생항원 및/또는 T-세포 반응이 검출되는 경우 덜 빈번하게 및/또는 감소된 투여량으로 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여를 계속하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  407. 제404항 내지 제406항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에서 하나 이상의 신생항원 및/또는 T-세포 반응을 검출하는 단계는 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물을 사용하는 치료의 효능을 나타내는, 방법.
  408. 제305항 내지 제407항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 약 150개 이하의 돌연변이의 비-동의 돌연변이 부담(non-synonymous mutational burden)을 갖는, 방법.
  409. 제305항 내지 제408항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 약 100개 이하의 돌연변이의 비-동의 돌연변이 부담을 갖는, 방법.
  410. 제305항 내지 제409항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 약 50개 이하의 돌연변이의 비-동의 돌연변이 부담을 갖는, 방법.
  411. 제305항 내지 제410항 중 어느 한 항에 있어서, 신생물성 장애는 혈액 악성 종양 또는 고형 종양인, 방법.
  412. 제411항에 있어서, 혈액 악성 종양은 B-세포 악성 종양, 백혈병, 림프종, 및 골수종으로부터 선택되는, 방법.
  413. 제411항 또는 제412항에 있어서, 혈액 악성 종양은 급성 골수성 백혈병 및 다발성 골수종으로부터 선택되는, 방법.
  414. 제411항에 있어서, 고형 종양은 유방암, 위암, 전립선암, 난소암, 폐암, 자궁암, 타액 관 암종, 흑색종, 결장암, 자궁 경부암, 췌장암, 신장암, 결장직장암, 및 식도암으로부터 선택되는, 방법.
  415. (a) 제1항 내지 제189항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체, 제190항 내지 제219항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 제220항 내지 제224항 중 어느 한 항의 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 단계로서, 여기서 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 적어도 하나의 신생항원 및/또는 T-세포 반응을 유도하는 단계;
    (b) 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여 후 대상체에서 하나 이상의 신생항원 및/또는 T-세포 반응을 검출하는 단계; 및
    (c) 하나 이상의 신생항원 및/또는 T-세포 반응이 검출되는 경우 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여를 계속하는 단계를 포함하는, 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법.
  416. 제415항에 있어서, 대상체에서 하나 이상의 신생항원 및/또는 T-세포 반응을 검출하는 단계는 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물을 사용하는 치료의 효능을 나타내는, 방법.
  417. 제1항 내지 제189항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체, 제190항 내지 제219항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 제220항 내지 제224항 중 어느 한 항의 조성물의 유효량; 및 적어도 하나의 추가 요법을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법.
  418. 제417항에 있어서, 적어도 하나의 추가 요법은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 또는 적어도 5개의 추가 요법을 포함하는, 방법.
  419. 제417항 또는 제418항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 적어도 하나의 신생항원 및/또는 T-세포 반응을 유도하는, 방법.
  420. 제417항 내지 제419항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 투여되는 양은, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 표준 투여량과 비교하여, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90%만큼 감소되는, 방법.
  421. 제417항 내지 제420항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물 및/또는 적어도 하나의 추가 요법은, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 표준 투약 요법과 비교하여, 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90% 덜 빈번하게 투여되는, 방법.
  422. 제417항 내지 제421항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물 및/또는 적어도 하나의 추가 요법의 투여되는 양 및/또는 투여량은 더 낮은 전신 독성 및/또는 개선된 내약성을 초래하는, 방법.
  423. 제417항 내지 제422항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 적어도 하나의 추가 요법의 투여 전에 개시되는, 방법.
  424. 제417항 내지 제422항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 적어도 하나의 추가 요법의 투여 후에 개시되는, 방법.
  425. 제417항 내지 제422항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 적어도 하나의 추가 요법의 투여와 동시에 개시되는, 방법.
  426. 제417항 내지 제425항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 초기 투여 후 적어도 1회 반복되는, 방법.
  427. 제426항에 있어서, 반복되는 투여에 사용되는 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 양은 초기 투여에 사용되는 양과 비교하여 감소되는, 방법.
  428. 제426항 또는 제427항에 있어서, 반복되는 투여에 사용되는 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 양은 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 표준 투여량과 비교하여 감소되는, 방법.
  429. 제426항 내지 제428항 중 어느 한 항에 있어서, 반복되는 투여에 사용되는 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 양은, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 표준 투여량과 비교하여, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90%만큼 감소되는, 방법.
  430. 제417항 내지 제429항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 추가 요법의 투여는 초기 투여 후 적어도 1회 반복되는, 방법.
  431. 제430항에 있어서, 반복되는 투여에 사용되는 적어도 하나의 추가 요법의 양은 초기 투여에 사용되는 양과 비교하여 감소되는, 방법.
  432. 제430항 또는 제431항에 있어서, 반복되는 투여에 사용되는 적어도 하나의 추가 요법의 양은 적어도 하나의 추가 요법의 표준 투여량과 비교하여 감소되는, 방법.
  433. 제430항 내지 제432항 중 어느 한 항에 있어서, 반복되는 투여에 사용되는 적어도 하나의 추가 요법의 양은, 적어도 하나의 추가 요법의 표준 투여량과 비교하여, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90%만큼 감소되는, 방법.
  434. 제426항 내지 제433항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 반복되는 투여는 적어도 하나의 추가 요법의 반복되는 투여와 동시에 이루어지는, 방법.
  435. 제426항 내지 제433항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 반복되는 투여는 적어도 하나의 추가 요법의 반복되는 투여와 순차적이거나 시차를 두는, 방법.
  436. 제417항 내지 제435항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 추가 요법은 체크포인트 저해제를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  437. 제436항에 있어서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우의 체크포인트 저해제에 대해 불내성, 비-반응성, 또는 저 반응성인, 방법.
  438. 제436항 또는 제437항에 있어서, 체크포인트 저해제는 CTLA4, PD1, PDL1, OX40, CD40, GITR, LAG3, TIM3, 및/또는 KIR을 표적화하는, 방법.
  439. 제436항 내지 제438항 중 어느 한 항에 있어서, 체크포인트 저해제는 CTLA4, OX40, CD40, 및/또는 GITR을 표적화하는, 방법.
  440. 제436항 내지 제439항 중 어느 한 항에 있어서, 체크포인트 저해제는 세포 독성 T-림프구-관련 항원 4 경로(CTLA4) 저해제를 포함하는, 방법.
  441. 제440항에 있어서, CTLA4 저해제는 항-CTLA4 항체인, 방법.
  442. 제441항에 있어서, 항-CTLA4 항체는 이필리무맙인, 방법.
  443. 제436항 내지 제439항 중 어느 한 항에 있어서, 체크포인트 저해제는 프로그래밍된 사멸-1 경로(PD1) 저해제를 포함하는, 방법.
  444. 제443항에 있어서, PD1 저해제는 항-PD1 항체인, 방법.
  445. 제444항에 있어서, 항-PD1 항체는 니볼루맙인, 방법.
  446. 제443항에 있어서, PD1 저해제는 항-PDL1 항체인, 방법.
  447. 제446항에 있어서, 항-PDL1 항체는 아테졸리주맙인, 방법.
  448. 제436항 내지 제439항 중 어느 한 항에 있어서, 체크포인트 저해제는 CTLA4 저해제 및 PD1 저해제를 포함하는, 방법.
  449. 제448항에 있어서, CTLA4 저해제는 항-CTLA4 항체인, 방법.
  450. 제449항에 있어서, 항-CTLA4 항체는 이필리무맙인, 방법.
  451. 제448항에 있어서, PD1 저해제는 항-PD1 항체인, 방법.
  452. 제451항에 있어서, 항-PD1 항체는 니볼루맙인, 방법.
  453. 제448항에 있어서, PD1 저해제는 항-PDL1 항체인, 방법.
  454. 제453항에 있어서, 항-PDL1 항체는 아테졸리주맙인, 방법.
  455. 제417항 내지 제435항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 추가 요법은 신생항원 백신을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  456. 제455항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물은 신생항원 백신의 투여 전에 투여되는, 방법.
  457. 제455항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물은 신생항원 백신 투여 후 투여되는, 방법.
  458. 제455항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물은 신생항원 백신의 투여와 동시에 투여되는, 방법.
  459. 제455항 내지 제458항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여는 초기 투여 후 적어도 1회 반복되는, 방법.
  460. 제459항에 있어서, 반복되는 투여에 사용되는 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 양은 초기 투여에 사용되는 양과 비교하여 감소되는, 방법.
  461. 제455항 내지 제460항 중 어느 한 항에 있어서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 펩티드를 포함하는, 방법.
  462. 제461항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 길이가 약 10 내지 약 35개 아미노산 범위인, 방법.
  463. 제461항 또는 제462항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 길이가 약 15 내지 약 25개 아미노산 범위인, 방법.
  464. 제461항 내지 제463항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 하나 또는 하나 초과의 신생항원 서열을 포함하는, 방법.
  465. 제464항에 있어서, 신생항원 서열은 대상체에 특이적인 신생항원 서열인, 방법.
  466. 제464항에 있어서, 신생항원 서열은 범용 신생항원 서열인, 방법.
  467. 제465항에 있어서, 신생항원 서열은 대상체에 대해 개인화된 신생항원 백신인, 방법.
  468. 제467항에 있어서, 신생항원 서열은 유효량의 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물을 투여함으로써 대상체에서 유도되는 적어도 하나의 신생항원을 시퀀싱함으로써 확인되는, 방법.
  469. 제467항 또는 제468항에 있어서, 신생항원 서열은 대상체에서 발현되는 적어도 하나의 HLA 대립 유전자에 결합할 수 있는, 방법.
  470. 제466항에 있어서, 신생항원 서열은 범용 신생항원 백신인, 방법.
  471. 제470항에 있어서, 신생항원 서열은 신생물성 장애를 앓는 대상체 집단에서 대상체의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 또는 적어도 45%에서 발현되는 적어도 하나의 HLA 대립 유전자에 결합할 수 있는, 방법.
  472. 제470항 또는 제471항에 있어서, 신생항원 서열은 신생물성 장애를 앓는 대상체 집단의 적어도 1%, 적어도 5%, 또는 적어도 10%에 존재하는 종양에 대해 T-세포 반응을 끌어낼 수 있는, 방법.
  473. 제464항 내지 제472항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 신생물 세포를 유효량의 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물과 접촉시킴으로써 유도되는 신생항원 서열을 포함하는, 방법.
  474. 제455항에 있어서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 방법.
  475. 제474항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 약학적으로 허용되는 담체에 연결되는, 방법.
  476. 제474항 또는 제475항에 있어서, 약학적으로 허용되는 담체는 펩티드, 혈청 알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌, 면역글로불린, 티로글로불린, 난백알부민, 변성 독소 또는 약화된 변성 독소 유도체, 사이토카인, 및 케모카인으로부터 선택되는, 방법.
  477. 제474항 내지 제476항 중 어느 한 항에 있어서, 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 담체는 링커를 통해 공유 결합으로 부착되는, 방법.
  478. 제474항 내지 제476항 중 어느 한 항에 있어서, 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 담체는 융합 단백질로서 발현되는, 방법.
  479. 제455항에 있어서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 희석제를 포함하는, 방법.
  480. 제455항에 있어서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 애주번트를 포함하는, 방법.
  481. 제473항에 있어서, 신생물 세포는 시험관내 세포 배양물에 존재하는, 방법.
  482. 제473항 또는 제481항에 있어서, 신생물 세포는 대상체로부터 수득되는, 방법.
  483. 제473항에 있어서, 신생물 세포는 대상체 내에 존재하는, 방법.
  484. 제455항 내지 제460항 중 어느 한 항에 있어서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 mRNA를 포함하는, 방법.
  485. 제484항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 mRNA는 하나 또는 하나 초과의 신생항원 서열을 인코딩하는, 방법.
  486. 제485항에 있어서, 신생항원 서열은 대상체에 특이적인 신생항원 서열인, 방법.
  487. 제485항에 있어서, 신생항원 서열은 범용 신생항원 서열인, 방법.
  488. 제486항에 있어서, 신생항원 서열은 대상체에 대해 개인화된 신생항원 백신인, 방법.
  489. 제488항에 있어서, 신생항원 서열은 유효량의 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물을 투여함으로써 대상체에서 유도되는 적어도 하나의 신생항원을 시퀀싱함으로써 확인되는, 방법.
  490. 제488항 또는 제489항에 있어서, 신생항원 서열은 대상체에서 발현되는 적어도 하나의 HLA 대립 유전자에 결합할 수 있는, 방법.
  491. 제487항에 있어서, 신생항원 서열은 범용 신생항원 백신인, 방법.
  492. 제491항에 있어서, 신생항원 서열은 신생물성 장애를 앓는 대상체 집단에서 대상체의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 또는 적어도 45%에서 발현되는 적어도 하나의 HLA 대립 유전자에 결합할 수 있는, 방법.
  493. 제491항 또는 제492항에 있어서, 신생항원 서열은 신생물성 장애를 앓는 대상체 집단의 적어도 1%, 적어도 5%, 또는 적어도 10%에 존재하는 종양에 대한 T-세포 반응을 끌어낼 수 있는, 방법.
  494. 제484항 내지 제493항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 mRNA는 신생물 세포를 유효량의 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물과 접촉시킴으로써 유도되는 신생항원 서열을 인코딩하는, 방법.
  495. 제484항에 있어서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 mRNA 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 방법.
  496. 제495항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 mRNA는 약학적으로 허용되는 담체에 연결되는, 방법.
  497. 제495항 또는 제496항에 있어서, 약학적으로 허용되는 담체는 펩티드, 혈청 알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌, 면역글로불린, 티로글로불린, 난백알부민, 변성 독소 또는 약화된 변성 독소 유도체, 사이토카인, 및 케모카인으로부터 선택되는, 방법.
  498. 제484항에 있어서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 mRNA 및 약학적으로 허용되는 희석제를 포함하는, 방법.
  499. 제484항에 있어서, 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 mRNA 및 약학적으로 허용되는 애주번트를 포함하는, 방법.
  500. 제484항 내지 제499항 중 어느 한 항에 있어서, 신생항원 mRNA는 캡슐화제에 의해 캡슐화되는, 방법.
  501. 제500항에 있어서, 캡슐화제는 리포솜인, 방법.
  502. 제500항에 있어서, 캡슐화제는 나노입자인, 방법.
  503. 제494항에 있어서, 신생물 세포는 시험관내 세포 배양물에 존재하는, 방법.
  504. 제494항 또는 제503항에 있어서, 신생물 세포는 대상체로부터 수득되는, 방법.
  505. 제494항에 있어서, 신생물 세포는 대상체 내에 존재하는, 방법.
  506. 제417항 내지 제435항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 추가 요법은 사이토카인 또는 사이토카인 유사체를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  507. 제506항에 있어서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우의 사이토카인 또는 사이토카인 유사체에 대해 불내성, 비-반응성, 또는 저 반응성인, 방법.
  508. 제506항 또는 제507항에 있어서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체는 T-세포 인핸서를 포함하는, 방법.
  509. 제506항 내지 제508항 중 어느 한 항에 있어서, 사이토카인 또는 사이토카인 유사체는 IL-2, IL-10, IL-12, IL-15, IFNγ, 및/또는 TNFα를 포함하는, 방법.
  510. 제417항 내지 제435항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 추가 요법은 조작된 종양-표적화 T-세포를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  511. 제417항 내지 제510항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 약 150개 이하의 돌연변이의 비-동의 돌연변이 부담을 갖는, 방법.
  512. 제417항 내지 제511항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 약 100개 이하의 돌연변이의 비-동의 돌연변이 부담을 갖는, 방법.
  513. 제417항 내지 제512항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 약 50개 이하의 돌연변이의 비-동의 돌연변이 부담을 갖는, 방법.
  514. 제417항 내지 제513항 중 어느 한 항에 있어서, 신생물성 장애는 혈액 악성 종양 또는 고형 종양인, 방법.
  515. 제514항에 있어서, 혈액 악성 종양은 B-세포 악성 종양, 백혈병, 림프종, 및 골수종으로부터 선택되는, 방법.
  516. 제514항 또는 제515항에 있어서, 혈액 악성 종양은 급성 골수성 백혈병 및 다발성 골수종으로부터 선택되는, 방법.
  517. 제514항에 있어서, 고형 종양은 유방암, 위암, 전립선암, 난소암, 폐암, 자궁암, 타액 관 암종, 흑색종, 결장암, 자궁 경부암, 췌장암, 신장암, 결장직장암, 및 식도암으로부터 선택되는, 방법.
  518. (a) 신생물 세포를 제1항 내지 제189항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체, 제190항 내지 제219항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 제220항 내지 제224항 중 어느 한 항의 조성물의 유효량과 접촉시키는 단계;
    (b) 신생물 세포를 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물과 접촉시킨 후 적어도 하나의 선택적으로-스플라이싱된 mRNA 전사체를 검출하는 단계;
    (c) 적어도 하나의 선택적으로-스플라이싱된 mRNA 전사체의 적어도 하나의 펩티드로의 번역을 예측하는 단계; 및
    (d) 적어도 하나의 펩티드를 기준 프로테옴과 비교하며, 여기서 적어도 하나의 펩티드가 기준 프로테옴 내의 어떤 펩티드와도 매칭되지 않는 경우 적어도 하나의 신생항원이 확인되는 단계를 포함하는, 적어도 하나의 신생항원을 확인하는 방법.
  519. 제518항에 있어서, 적어도 하나의 선택적으로-스플라이싱된 mRNA 전사체를 검출하는 단계는 RNAseq를 포함하는, 방법.
  520. 제518항 또는 제519항에 있어서, 적어도 하나의 선택적으로-스플라이싱된 mRNA 전사체의 번역을 예측하는 단계는 적어도 하나의 전사체에 대한 스플라이싱된 퍼센트(percent spliced in, dPSI) 값의 변화를 정량화하는 단계를 포함하는, 방법.
  521. 제518항 내지 제520항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 선택적으로-스플라이싱된 mRNA 전사체의 번역을 예측하는 단계는 RiboSeq 및/또는 리보솜 프로파일링을 포함하는, 방법.
  522. 제518항 내지 제521항 중 어느 한 항에 있어서, 방법은 예측된 주요 조직적합성 복합체(MHC) 결합에 대해 적어도 하나의 펩티드를 평가하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  523. 제522항에 있어서, 예측된 MHC 결합은 적어도 하나의 펩티드의 미가공 친화성 예측 결합 강도를 측정함으로써 결정되는, 방법.
  524. 제523항에 있어서, 약 500 nM 이상의 미가공 친화성 예측 결합 강도는 MHC 결합을 나타내는, 방법.
  525. 제522항 내지 제524항 중 어느 한 항에 있어서, 예측된 MHC 결합은 일련의 무작위 펩티드에 대한 예측 결합 강도의 분포를 확인하는 단계; 및 적어도 하나의 펩티드의 예측 결합 강도를 상기 분포와 비교하는 단계에 의해 결정되는, 방법.
  526. 제525항에 있어서, 분포의 상위 2%의 예측 결합 강도는 약한 MHC 결합을 나타내는, 방법.
  527. 제525항에 있어서, 분포의 상위 0.5%의 예측 결합 강도는 강한 MHC 결합을 나타내는, 방법.
  528. 제518항 내지 제527항 중 어느 한 항에 있어서, 신생물 세포는 시험관내 세포 배양물에 존재하는, 방법.
  529. 제528항에 있어서, 신생물 세포는 대상체로부터 수득되는, 방법.
  530. 제518항 내지 제527항 중 어느 한 항에 있어서, 신생물 세포는 대상체 내에 존재하는, 방법.
  531. 제518항 내지 제530항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 범용 신생항원을 확인하기 위해 하나 이상의 추가 신생물 세포를 접촉시키는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  532. (a) 신생물 세포를 제1항 내지 제189항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체, 제190항 내지 제219항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 제220항 내지 제224항 중 어느 한 항의 조성물의 유효량과 접촉시키는 단계;
    (b) 신생물 세포를 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물과 접촉시킨 후 잠재적인 신생항원 서열을 포함하는 적어도 하나의 펩티드를 검출하는 단계; 및
    (c) 적어도 하나의 펩티드를 기준 프로테옴과 비교하며, 여기서 적어도 하나의 펩티드가 기준 프로테옴 내의 어떤 펩티드와도 매칭되지 않는 경우 적어도 하나의 신생항원이 확인되는 단계를 포함하는, 적어도 하나의 신생항원을 확인하는 방법.
  533. 제532항에 있어서, 방법은 예측된 주요 조직적합성 복합체(MHC) 결합에 대해 적어도 하나의 펩티드를 평가하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  534. 제533항에 있어서, 예측된 MHC 결합은 적어도 하나의 펩티드의 미가공 친화성 예측 결합 강도를 측정함으로써 결정되는, 방법.
  535. 제534항에 있어서, 약 500 nM 이상의 미가공 친화성 예측 결합 강도는 MHC 결합을 나타내는, 방법.
  536. 제533항 내지 제535항 중 어느 한 항에 있어서, 예측된 MHC 결합은 일련의 무작위 펩티드에 대한 예측 결합 강도의 분포를 확인하는 단계; 및 적어도 하나의 펩티드의 예측 결합 강도를 상기 분포와 비교하는 단계에 의해 결정되는, 방법.
  537. 제536항에 있어서, 분포의 상위 2%의 예측 결합 강도는 약한 MHC 결합을 나타내는, 방법.
  538. 제536항에 있어서, 분포의 상위 0.5%의 예측 결합 강도는 강한 MHC 결합을 나타내는, 방법.
  539. 제532항 내지 제538항 중 어느 한 항에 있어서, 신생물 세포는 시험관내 세포 배양물에 존재하는, 방법.
  540. 제539항에 있어서, 신생물 세포는 대상체로부터 수득되는, 방법.
  541. 제532항 내지 제538항 중 어느 한 항에 있어서, 신생물 세포는 대상체 내에 존재하는, 방법.
  542. 제532항 내지 제541항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 범용 신생항원을 확인하기 위해 하나 이상의 추가 신생물 세포를 접촉시키는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  543. (a) 제518항 내지 제542항 중 어느 한 항의 방법을 사용하여 적어도 하나의 신생항원을 확인하는 단계; 및
    (b) 적어도 하나의 신생항원을 약학적으로 허용되는 담체, 희석제, 또는 애주번트와 함께 제형화하는 단계를 포함하는, 신생항원 백신을 제조하는 방법.
  544. 제543항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원은 약학적으로 허용되는 담체에 연결되는, 방법.
  545. 제544항에 있어서, 약학적으로 허용되는 담체는 펩티드, 혈청 알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌, 면역글로불린, 티로글로불린, 난백알부민, 변성 독소 또는 약화된 변성 독소 유도체, 사이토카인, 및 케모카인으로부터 선택되는, 방법.
  546. (a) 제1항 내지 제189항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체, 제190항 내지 제219항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 제220항 내지 제224항 중 어느 한 항의 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 단계;
    (b) 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 투여 후 대상체에서 하나 이상의 신생항원을 검출하는 단계;
    (c) 하나 이상의 신생항원을 범용 신생항원 패널과 비교하는 단계; 및
    (d) 대상체에 존재하는 적어도 하나의 범용 신생항원을 포함하는 범용 신생항원 백신을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법.
  547. 제546항에 있어서, 범용 신생항원 백신은 단독으로 또는 적어도 하나의 추가 요법과 조합하여 투여되는, 방법.
  548. 제547항에 있어서, 적어도 하나의 추가 요법은 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 또는 적어도 5개의 추가 요법을 포함하는, 방법.
  549. 제547항 또는 제548항에 있어서, 적어도 하나의 추가 요법은 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 반복되는 투여를 포함하는, 방법.
  550. 제549항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 반복되는 투여는 범용 신생항원 백신의 투여 전에 개시되는, 방법.
  551. 제549항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 반복은 범용 신생항원 백신의 투여 후에 개시되는, 방법.
  552. 제549항에 있어서, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 반복되는 투여는 범용 신생항원 백신의 투여와 동시에 개시되는, 방법.
  553. 제549항 내지 제552항 중 어느 한 항에 있어서, 반복되는 투여에 사용되는 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 양은 초기 투여에 사용되는 양과 비교하여 감소되는, 방법.
  554. 제549항 내지 제553항 중 어느 한 항에 있어서, 반복되는 투여에 사용되는 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 양은 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 표준 투여량과 비교하여 감소되는, 방법.
  555. 제549항 내지 제554항 중 어느 한 항에 있어서, 반복되는 투여에 사용되는 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 양은, 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 표준 투여량과 비교하여, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90%만큼 감소되는, 방법.
  556. 제547항 내지 제555항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 추가 요법은 체크포인트 저해제를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  557. 제556항에 있어서, 체크포인트 저해제의 투여는 범용 신생항원 백신의 투여 및/또는 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 반복되는 투여 전에 개시되는, 방법.
  558. 제556항에 있어서, 체크포인트 저해제의 투여는 범용 신생항원 백신의 투여 및/또는 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 반복 후 개시되는, 방법.
  559. 제556항에 있어서, 체크포인트 저해제의 투여는 범용 신생항원 백신의 투여 및/또는 화합물, 항체-약물 접합체, 또는 조성물의 반복되는 투여와 동시에 개시되는, 방법.
  560. 제556항 내지 제559항 중 어느 한 항에 있어서, 체크포인트 저해제의 투여는 초기 투여 후 적어도 1회 반복되는, 방법.
  561. 제560항에 있어서, 반복되는 투여에 사용되는 체크포인트 저해제의 양은 초기 투여에 사용되는 양과 비교하여 감소되는, 방법.
  562. 제560항 또는 제561항에 있어서, 반복되는 투여에 사용되는 체크포인트 저해제의 양은 체크포인트 저해제의 표준 투여량과 비교하여 감소되는, 방법.
  563. 제560항 내지 제562항 중 어느 한 항에 있어서, 반복되는 투여에 사용되는 체크포인트 저해제의 양은, 체크포인트 저해제의 표준 투여량과 비교하여, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 또는 90%만큼 감소되는, 방법.
  564. 제556항 내지 제563항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 단독으로 투여되는 경우 체크포인트 저해제에 대해 불내성, 비-반응성, 또는 저 반응성인, 방법.
  565. 제556항 내지 제564항 중 어느 한 항에 있어서, 체크포인트 저해제는 CTLA4, PD1, PDL1, OX40, CD40, GITR, LAG3, TIM3, 및/또는 KIR을 표적화하는, 방법.
  566. 제556항 내지 제565항 중 어느 한 항에 있어서, 체크포인트 저해제는 CTLA4, OX40, CD40, 및/또는 GITR을 표적화하는, 방법.
  567. 제556항 내지 제566항 중 어느 한 항에 있어서, 체크포인트 저해제는 세포 독성 T-림프구-관련 항원 4 경로(CTLA4) 저해제를 포함하는, 방법.
  568. 제567항에 있어서, CTLA4 저해제는 항-CTLA4 항체인, 방법.
  569. 제568항에 있어서, 항-CTLA4 항체는 이필리무맙인, 방법.
  570. 제556항 내지 제566항 중 어느 한 항에 있어서, 체크포인트 저해제는 프로그래밍된 사멸-1 경로(PD1) 저해제를 포함하는, 방법.
  571. 제570항에 있어서, PD1 저해제는 항-PD1 항체인, 방법.
  572. 제571항에 있어서, 항-PD1 항체는 니볼루맙인, 방법.
  573. 제570항에 있어서, PD1 저해제는 항-PDL1 항체인, 방법.
  574. 제573항에 있어서, 항-PDL1 항체는 아테졸리주맙인, 방법.
  575. 제556항 내지 제566항 중 어느 한 항에 있어서, 체크포인트 저해제는 CTLA4 저해제 및 PD1 저해제를 포함하는, 방법.
  576. 제575항에 있어서, CTLA4 저해제는 항-CTLA4 항체인, 방법.
  577. 제576항에 있어서, 항-CTLA4 항체는 이필리무맙인, 방법.
  578. 제575항에 있어서, PD1 저해제는 항-PD1 항체인, 방법.
  579. 제578항에 있어서, 항-PD1 항체는 니볼루맙인, 방법.
  580. 제575항에 있어서, PD1 저해제는 항-PDL1 항체인, 방법.
  581. 제580항에 있어서, 항-PDL1 항체는 아테졸리주맙인, 방법.
  582. 제546항 내지 제581항 중 어느 한 항에 있어서, 범용 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 펩티드를 포함하는, 방법.
  583. 제582항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 길이가 약 10 내지 약 35개 아미노산 범위인, 방법.
  584. 제582항 또는 제583항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 길이가 약 15 내지 약 25개 아미노산 범위인, 방법.
  585. 제582항 내지 제584항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 하나 또는 하나 초과의 범용 신생항원 서열을 포함하는, 방법.
  586. 제585항에 있어서, 범용 신생항원 서열은 신생물성 장애를 앓는 대상체 집단에서 대상체의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 또는 적어도 45%에서 발현되는 적어도 하나의 HLA 대립 유전자에 결합할 수 있는, 방법.
  587. 제585항 또는 제586항에 있어서, 범용 신생항원 서열은 신생물성 장애를 앓는 대상체 집단의 적어도 1%, 적어도 5%, 또는 적어도 10%에 존재하는 종양에 대해 T-세포 반응을 끌어낼 수 있는, 방법.
  588. 제582항에 있어서, 범용 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 방법.
  589. 제588항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 약학적으로 허용되는 담체에 연결되는, 방법.
  590. 제588항 또는 제589항에 있어서, 약학적으로 허용되는 담체는 펩티드, 혈청 알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌, 면역글로불린, 티로글로불린, 난백알부민, 변성 독소 또는 약화된 변성 독소 유도체, 사이토카인, 및 케모카인으로부터 선택되는, 방법.
  591. 제588항 내지 제590항 중 어느 한 항에 있어서, 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 담체는 링커를 통해 공유 결합으로 부착되는, 방법.
  592. 제588항 내지 제590항 중 어느 한 항에 있어서, 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 담체는 융합 단백질로서 발현되는, 방법.
  593. 제582항에 있어서, 범용 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 희석제를 포함하는, 방법.
  594. 제582항에 있어서, 범용 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 애주번트를 포함하는, 방법.
  595. 제546항 내지 제581항 중 어느 한 항에 있어서, 범용 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 mRNA를 포함하는, 방법.
  596. 제595항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 mRNA는 하나 또는 하나 초과의 범용 신생항원 서열을 인코딩하는, 방법.
  597. 제596항에 있어서, 범용 신생항원 서열은 신생물성 장애를 앓는 대상체 집단에서 대상체의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 또는 적어도 45%에서 발현되는 적어도 하나의 HLA 대립 유전자에 결합할 수 있는, 방법.
  598. 제596항 또는 제597항에 있어서, 범용 신생항원 서열은 신생물성 장애를 앓는 대상체 집단의 적어도 1%, 적어도 5%, 또는 적어도 10%에 존재하는 종양에 대해 T-세포 반응을 끌어낼 수 있는, 방법.
  599. 제595항에 있어서, 범용 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 mRNA 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 방법.
  600. 제599항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 mRNA는 약학적으로 허용되는 담체에 연결되는, 방법.
  601. 제599항 또는 제600항에 있어서, 약학적으로 허용되는 담체는 펩티드, 혈청 알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌, 면역글로불린, 티로글로불린, 난백알부민, 변성 독소 또는 약화된 변성 독소 유도체, 사이토카인, 및 케모카인으로부터 선택되는, 방법.
  602. 제595항에 있어서, 범용 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 mRNA 및 약학적으로 허용되는 희석제를 포함하는, 방법.
  603. 제595항에 있어서, 범용 신생항원 백신은 적어도 하나의 신생항원 mRNA 및 약학적으로 허용되는 애주번트를 포함하는, 방법.
  604. 제595항 내지 제603항 중 어느 한 항에 있어서, 신생항원 mRNA는 캡슐화제에 의해 캡슐화되는, 방법.
  605. 제604항에 있어서, 캡슐화제는 리포솜인, 방법.
  606. 제604항에 있어서, 캡슐화제는 나노입자인, 방법.
  607. 제546항 내지 제606항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 약 150개 이하의 돌연변이의 비-동의 돌연변이 부담을 갖는, 방법.
  608. 제546항 내지 제607항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 약 100개 이하의 돌연변이의 비-동의 돌연변이 부담을 갖는, 방법.
  609. 제546항 내지 제608항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 약 50개 이하의 돌연변이의 비-동의 돌연변이 부담을 갖는, 방법.
  610. 제546항 내지 제609항 중 어느 한 항에 있어서, 신생물성 장애는 혈액 악성 종양 또는 고형 종양인, 방법.
  611. 제610항에 있어서, 혈액 악성 종양은 B-세포 악성 종양, 백혈병, 림프종, 및 골수종으로부터 선택되는, 방법.
  612. 제610항 또는 제611항에 있어서, 혈액 악성 종양은 급성 골수성 백혈병 및 다발성 골수종으로부터 선택되는, 방법.
  613. 제610항에 있어서, 고형 종양은 유방암, 위암, 전립선암, 난소암, 폐암, 자궁암, 타액 관 암종, 흑색종, 결장암, 자궁 경부암, 췌장암, 신장암, 결장직장암, 및 식도암으로부터 선택되는, 방법.
  614. 적어도 하나의 신생항원 펩티드를 포함하는 신생항원 백신으로서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 신생물 세포를 제1항 내지 제189항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체, 제190항 내지 제219항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 제220항 내지 제224항 중 어느 한 항의 조성물의 유효량과 접촉시킴으로써 유도된 신생항원 서열을 포함하는, 신생항원 백신.
  615. 제614항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 길이가 약 10 내지 약 35개 아미노산 범위인, 신생항원 백신.
  616. 제614항 또는 제615항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 길이가 약 15 내지 약 25개 아미노산 범위인, 신생항원 백신.
  617. 제614항 내지 제616항 중 어느 한 항에 있어서, 약학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함하는, 신생항원 백신.
  618. 제617항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 펩티드는 약학적으로 허용되는 담체에 연결되는, 신생항원 백신.
  619. 제617항 또는 제618항에 있어서, 약학적으로 허용되는 담체는 펩티드, 혈청 알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌, 면역글로불린, 티로글로불린, 난백알부민, 변성 독소 또는 약화된 변성 독소 유도체, 사이토카인, 및 케모카인으로부터 선택되는, 신생항원 백신.
  620. 제617항 내지 제619항 중 어느 한 항에 있어서, 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 담체는 링커를 통해 공유 결합으로 부착되는, 신생항원 백신.
  621. 제617항 내지 제619항 중 어느 한 항에 있어서, 신생항원 펩티드 및 약학적으로 허용되는 담체는 융합 단백질로서 발현되는, 신생항원 백신.
  622. 제614항 내지 제616항 중 어느 한 항에 있어서, 약학적으로 허용되는 희석제를 추가로 포함하는, 신생항원 백신.
  623. 제614항 내지 제616항 중 어느 한 항에 있어서, 약학적으로 허용되는 애주번트를 추가로 포함하는, 신생항원 백신.
  624. 제614항 내지 제623항 중 어느 한 항에 있어서, 신생물 세포는 시험관내 세포 배양물에 존재하는, 신생항원 백신.
  625. 제614항 내지 제624항 중 어느 한 항에 있어서, 신생물 세포는 대상체로부터 수득되는, 신생항원 백신.
  626. 제614항 내지 제623항 중 어느 한 항에 있어서, 신생물 세포는 대상체 내에 존재하는, 신생항원 백신.
  627. 적어도 하나의 신생항원 mRNA를 포함하는 신생항원 백신으로서, 적어도 하나의 신생항원 mRNA는 신생물 세포를 제1항 내지 제189항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체, 제190항 내지 제219항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 제220항 내지 제224항 중 어느 한 항의 조성물의 유효량과 접촉시킴으로써 유도된 신생항원 서열을 인코딩하는, 신생항원 백신.
  628. 제627항에 있어서, 약학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함하는, 신생항원 백신.
  629. 제628항에 있어서, 적어도 하나의 신생항원 mRNA는 약학적으로 허용되는 담체에 연결되는, 신생항원 백신.
  630. 제628항 또는 제629항에 있어서, 약학적으로 허용되는 담체는 펩티드, 혈청 알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌, 면역글로불린, 티로글로불린, 난백알부민, 변성 독소 또는 약화된 변성 독소 유도체, 사이토카인, 및 케모카인으로부터 선택되는, 신생항원 백신.
  631. 제627항에 있어서, 약학적으로 허용되는 희석제를 추가로 포함하는, 신생항원 백신.
  632. 제627항에 있어서, 약학적으로 허용되는 애주번트를 추가로 포함하는, 신생항원 백신.
  633. 제627항 내지 제632항 중 어느 한 항에 있어서, 신생항원 mRNA는 캡슐화제에 의해 캡슐화되는, 신생항원 백신.
  634. 제633항에 있어서, 캡슐화제는 리포솜인, 신생항원 백신.
  635. 제633항에 있어서, 캡슐화제는 나노입자인, 신생항원 백신.
  636. 제627항 내지 제635항 중 어느 한 항에 있어서, 신생물 세포는 시험관내 세포 배양물에 존재하는, 신생항원 백신.
  637. 제627항 내지 제636항 중 어느 한 항에 있어서, 신생물 세포는 대상체로부터 수득되는, 신생항원 백신.
  638. 제627항 내지 제635항 중 어느 한 항에 있어서, 신생물 세포는 대상체 내에 존재하는, 신생항원 백신.
  639. 제190항 내지 제219항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제220항의 약학 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법.
  640. 제190항 내지 제219항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제220항의 약학 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 신생물성 장애를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체에서 종양의 성장을 감소 또는 저해하는 방법.
  641. 다음으로부터 선택되는 화합물:
    Figure pct00172

    Figure pct00173

    Figure pct00174

    Figure pct00175

    Figure pct00176

    및 이의 약학적으로 허용되는 염으로서,
    여기서 L은 항체에 공유 결합으로 부착하는 링커인, 화합물.
  642. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00177
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  643. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00178
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  644. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00179
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  645. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00180
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  646. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00181
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  647. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00182
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  648. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00183
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  649. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00184
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  650. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00185
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  651. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00186
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  652. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00187
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  653. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00188
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  654. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00189
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  655. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00190
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  656. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00191
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  657. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00192
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  658. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00193
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  659. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00194
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  660. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00195
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  661. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00196
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  662. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00197
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  663. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00198
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  664. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00199
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  665. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00200
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  666. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00201
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  667. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00202
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  668. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00203
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  669. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00204
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  670. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00205
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  671. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00206
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  672. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00207
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  673. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00208
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  674. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00209
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  675. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00210
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  676. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00211
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  677. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00212
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  678. 제641항에 있어서, 화합물은
    Figure pct00213
    , 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 화합물.
  679. 제641항 내지 제678항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 절단 가능한 링커인, 화합물.
  680. 제679항에 있어서, 링커는 절단 가능한 펩티드 모이어티를 포함하는, 화합물.
  681. 제680항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티는 효소에 의해 절단 가능한, 화합물.
  682. 제679항 내지 제681항 중 어느 한 항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 링커는 아미노산 단위를 포함하는, 화합물.
  683. 제682항에 있어서, 아미노산 단위는 발린-시트룰린(Val-Cit)을 포함하는, 화합물.
  684. 제682항에 있어서, 아미노산 단위는 발린-알라닌(Val-Ala)을 포함하는, 화합물.
  685. 제682항에 있어서, 아미노산 단위는 글루타민-발린-시트룰린(Glu-Val-Cit)을 포함하는, 화합물.
  686. 제682항에 있어서, 아미노산 단위는 알라닌-알라닌-아스파라긴(Ala-Ala-Asn)을 포함하는, 화합물.
  687. 제679항에 있어서, 링커는 절단 가능한 글루쿠로나이드 모이어티를 포함하는, 화합물.
  688. 제687항에 있어서, 절단 가능한 글루쿠로나이드 모이어티는 효소에 의해 절단 가능한, 화합물.
  689. 제687항 또는 제688항에 있어서, 절단 가능한 글루쿠로나이드 모이어티는 글루쿠로니다제에 의해 절단 가능한, 화합물.
  690. 제687항 내지 제689항 중 어느 한 항에 있어서, 절단 가능한 글루쿠로나이드 모이어티는 β-글루쿠로니다제에 의해 절단 가능한, 화합물.
  691. 제641항 내지 제690항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 적어도 하나의 스페이서 단위를 포함하는, 화합물.
  692. 제691항에 있어서, 스페이서 단위 또는 링커는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 모이어티를 포함하는, 화합물.
  693. 제692항에 있어서, PEG 모이어티는 -(PEG) m -을 포함하고 m은 1 내지 10의 정수인, 화합물.
  694. 제693항에 있어서, m은 2인, 화합물.
  695. 제693항에 있어서, 스페이서 단위 또는 링커는 알킬 모이어티를 포함하는, 화합물.
  696. 제695항에 있어서, 알킬 모이어티는 -(CH2) n -을 포함하고 n은 1 내지 10의 정수인, 화합물.
  697. 제696항에 있어서, n은 2인, 화합물.
  698. 제696항에 있어서, n은 5인, 화합물.
  699. 제696항에 있어서, n은 6인, 화합물.
  700. 제691항 내지 제699항 중 어느 한 항에 있어서, 스페이서 단위는 말레이미드(Mal) 모이어티를 통해 항체 또는 항원 결합 단편에 부착하는("Mal-스페이서 단위"), 화합물.
  701. 제700항에 있어서, Mal-스페이서 단위는 항체 또는 항원 결합 단편 상의 시스테인 잔기와 반응성인, 화합물.
  702. 제700항 또는 제701항에 있어서, Mal-스페이서 단위는 항체 또는 항원 결합 단편 상의 시스테인 잔기를 통해 항체 또는 항원 결합 단편에 연결되는, 화합물.
  703. 제700항 내지 제702항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 Mal-스페이서 단위 및 절단 가능한 펩티드 모이어티를 포함하는, 화합물.
  704. 제703항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티는 아미노산 단위를 포함하는, 화합물.
  705. 제703항 또는 제704항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 아미노산 단위는 Val-Cit를 포함하는, 화합물.
  706. 제703항 또는 제704항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 아미노산 단위는 Val-Ala를 포함하는, 화합물.
  707. 제703항 또는 제704항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 아미노산 단위는 Glu-Val-Cit를 포함하는, 화합물.
  708. 제703항 또는 제704항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 아미노산 단위는 Ala-Ala-Asn을 포함하는, 화합물.
  709. 제700항 내지 제708항 중 어느 한 항에 있어서, Mal-스페이서 단위는 알킬 모이어티를 포함하는, 화합물.
  710. 제700항 내지 제708항 중 어느 한 항에 있어서, Mal-스페이서 단위는 PEG 모이어티를 포함하는, 화합물.
  711. 제700항 내지 제710항 중 어느 한 항에 있어서, Mal-스페이서 단위는 말레이미도카프로일(MC)을 포함하는, 화합물.
  712. 제700항 내지 제711항 중 어느 한 항에 있어서, Mal-스페이서 단위는 항체 또는 항원 결합 단편을 링커의 절단 가능한 모이어티에 부착시키는, 화합물.
  713. 제712항에 있어서, 링커의 절단 가능한 모이어티는 절단 가능한 펩티드 모이어티를 포함하는, 화합물.
  714. 제713항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티는 아미노산 단위를 포함하는, 화합물.
  715. 제713항 또는 제714항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 아미노산 단위는 Val-Cit, Val-Ala, Glu-Val-Cit, 또는 Ala-Ala-Asn을 포함하는, 화합물.
  716. 제712항 내지 제715항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 MC-Val-Cit를 포함하는, 화합물.
  717. 제712항 내지 제715항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 MC-Val-Ala를 포함하는, 화합물.
  718. 제712항 내지 제715항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 MC-Glu-Val-Cit를 포함하는, 화합물.
  719. 제712항 내지 제715항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 MC-Ala-Ala-Asn을 포함하는, 화합물.
  720. 제712항 내지 제719항 중 어느 한 항에 있어서, Mal-스페이서 단위는 알킬 모이어티를 포함하는, 화합물.
  721. 제7125항 내지 제719항 중 어느 한 항에 있어서, Mal-스페이서 단위는 PEG 모이어티를 포함하는, 화합물.
  722. 제712항 내지 제721항 중 어느 한 항에 있어서, Mal-스페이서 단위는 말레이미도카프로일(MC)을 포함하는, 화합물.
  723. 제691항 내지 제722항 중 어느 한 항에 있어서, 링커의 절단 가능한 모이어티는 스플라이싱 조절제에 직접 연결되거나, 스페이서 단위가 링커의 절단 가능한 모이어티를 스플라이싱 조절제에 부착시키는, 화합물.
  724. 제723항에 있어서, 접합체의 절단은 항체 또는 항원 결합 단편 및 링커로부터 스플라이싱 조절제를 방출하는, 화합물.
  725. 제723항 또는 제724항에 있어서, 링커의 절단 가능한 모이어티를 스플라이싱 조절제에 부착시키는 스페이서 단위는 자기-희생적인, 화합물.
  726. 제723항 내지 제725항 중 어느 한 항에 있어서, 링커의 절단 가능한 모이어티를 스플라이싱 조절제에 부착시키는 스페이서 단위는 p-아미노벤질옥시카르보닐(pABC)을 포함하는, 화합물.
  727. 제726항에 있어서, pABC는 링커의 절단 가능한 모이어티를 스플라이싱 조절제에 부착시키는, 화합물.
  728. 제726항 또는 제727항에 있어서, 링커의 절단 가능한 모이어티는 절단 가능한 펩티드 모이어티를 포함하는, 화합물.
  729. 제728항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티는 아미노산 단위를 포함하는 화합물.
  730. 제728항 또는 제729항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 아미노산 단위는 Val-Cit, Val-Ala, Glu-Val-Cit, 또는 Ala-Ala-Asn을 포함하는, 화합물.
  731. 제726항 내지 제730항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 Val-Cit-pABC를 포함하는, 화합물.
  732. 제726항 내지 제730항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 Val-Ala-pABC를 포함하는, 화합물.
  733. 제726항 내지 제730항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 Glu-Val-Cit-pABC를 포함하는, 화합물.
  734. 제726항 내지 제730항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 Ala-Ala-Asn-pABC를 포함하는, 화합물.
  735. 제723항 내지 제725항 중 어느 한 항에 있어서, 링커의 절단 가능한 모이어티를 스플라이싱 조절제에 부착시키는 스페이서 단위는 p-아미노벤질(pAB)을 포함하는, 화합물.
  736. 제735항에 있어서, pAB는 링커의 절단 가능한 모이어티를 스플라이싱 조절제에 부착시키는, 화합물.
  737. 제735항 또는 제736항에 있어서, 링커의 절단 가능한 모이어티는 절단 가능한 펩티드 모이어티를 포함하는, 화합물.
  738. 제737항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티는 아미노산 단위를 포함하는, 화합물.
  739. 제737항 또는 제738항에 있어서, 절단 가능한 펩티드 모이어티 또는 아미노산 단위는 Val-Cit, Val-Ala, Glu-Val-Cit, 또는 Ala-Ala-Asn을 포함하는, 화합물.
  740. 제735항 내지 제739항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 Val-Cit-pAB를 포함하는, 화합물.
  741. 제735항 내지 제739항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 Val-Ala-pAB를 포함하는, 화합물.
  742. 제735항 내지 제739항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 Glu-Val-Cit-pAB를 포함하는, 화합물.
  743. 제735항 내지 제739항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 Ala-Ala-Asn-pAB를 포함하는, 화합물.
  744. 제641항 내지 제678항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 비-절단 가능한 링커인, 화합물.
  745. 제744항에 있어서, 링커는 적어도 하나의 스페이서 단위를 포함하는, 화합물.
  746. 제744항 또는 제745항에 있어서, 스페이서 단위 또는 링커는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 모이어티를 포함하는, 화합물.
  747. 제746항에 있어서, PEG 모이어티는 -(PEG) m -을 포함하고 m은 1 내지 10의 정수인, 화합물.
  748. 제747항에 있어서, m은 2인, 화합물.
  749. 제744항 또는 제745항에 있어서, 스페이서 단위 또는 링커는 알킬 모이어티를 포함하는, 화합물.
  750. 제749항에 있어서, 알킬 모이어티는 -(CH2) n -을 포함하고 n은 1 내지 10의 정수인, 화합물.
  751. 접합을 가능하게 하는 조건 하에서 항체 또는 항원 결합 단편을 제641항 내지 제750항 중 어느 한 항의 화합물과 반응시키는 단계를 포함하는, 항체-약물 접합체를 생산하는 방법.
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