JP2025523101A - ピペラジン架橋置換複素環ピリミジン系化合物 - Google Patents

Abstract

ピペラジン架橋置換複素環ピリミジン系化合物又はその薬学的に許容される塩を開示し、具体的には、式（ＩＩＩ－１）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を開示する。

Description

本発明は下記の優先権を主張する：
ＣＮ２０２２１０８２２８２８．Ｘ、出願日は２０２２年０７月１２日であり、
ＣＮ２０２２１１２６２７１１．７、出願日は２０２２年１０月１４日であり、
ＣＮ２０２２１１４０７２５３．１、出願日は２０２２年１１月１０日であり、
ＣＮ２０２３１００４１５３４．８、出願日は２０２３年０１月１１日であり、
ＣＮ２０２３１００４１７６２．５、出願日は２０２３年０１月１２日であり、
ＣＮ２０２３１００６６８６８．０、出願日は２０２３年０１月１９日であり、
ＣＮ２０２３１０８００５１６．３、出願日は２０２３年０６月３０日である。

［技術分野］

本発明は、一連のピペラジン架橋置換複素環ピリミジン系化合物又はその薬学的に許容される塩に関し、具体的には、式（ＩＩＩ－１）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩に関する。

ＲＡＳファミリーのＮＲＡＳ、ＨＲＡＳ及びＫＲＡＳ突然変異は、ヒトの癌全体のほぼ４分の１を引き起こし、癌に関連する最も一般的な遺伝子突然変異の１つとなっている。ほぼすべての種類の癌をカバーし、毎年世界で１００万人が死亡している。その中で、ＫＲＡＳは最も一般的な癌遺伝子（全ＲＡＳ突然変異の８５％）であり、膵臓癌の９０％、結腸癌の３０～４０％、肺癌の１５～２０％（ほとんどが非小細胞肺癌）に存在する。存在する特定の突然変異に基づくと、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ及びＧ１２Ｒは、患者で最も一般的なＫＲＡＳ突然変異である。その他、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖなどもある。

ＲＡＳ（Ｒａｔ Ｓａｒｃｏｍａ）ファミリータンパク質は、様々な真核生物で広く発現されており、不活性状態のＧＤＰ（グアノシン二リン酸）結合型と活性化状態のＧＴＰ（グアノシン三リン酸）結合型の２つの発現形態がある。ＲＡＳタンパク質は、２つの発現形態の切り替えを通じてＲＡＦ－ＭＥＫ－ＥＲＫ、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲなどの複数の下流経路を制御し、それによって細胞の増殖と分化、及び腫瘍の発生と発展に影響を与える。

突然変異型ＫＲＡＳはグアノシン三リン酸（ＧＴＰ）に対する親和性が高く、小さな触媒部位、滑らかなタンパク質表面などの標的化が難しい要因があるため、小分子阻害剤の開発は常に困難であり、その結果、ＫＲＡＳは「薬にならない」という伝説が生まれた。Ｍｉｒａｔｉ社のＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ非共有結合阻害剤におけるブレークスルーにより、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ突然変異腫瘍は精密医療の領域へと徐々に参入し始めている。

本発明は、式（ＩＩＩ－１）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。

ただし、
Ｘは、ＣＨ、Ｃ－Ｒｘ、Ｎ及びＮ^＋－Ｏ^－から選択され、好ましくは、Ｘは、Ｎ及びＮ^＋－Ｏ^－から選択され、Ｒｘは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、

Ｒ_３は、Ｈ及びＤから選択され、
各Ｒ_ａは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ_２、Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_１－３ハロアルキル、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、－Ｃ_１－３アルキル－シクロプロピル及びシクロプロピルから選択され、前記Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、シクロプロピル及び－Ｃ_１－３アルキル－シクロプロピルは、それぞれ独立して１、２又は３つのＲにより任意選択で置換され、
各Ｒは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２及びＣＦ_３から選択される。

本発明は、式（ＩＩＩ－１）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。

ただし、
Ｘは、ＣＮ、Ｎ及びＮ^＋－Ｏ^－から選択され、好ましくは、Ｘは、Ｎ及びＮ^＋－Ｏ^－から選択され、

Ｒ_３は、Ｈ及びＤから選択され、
各Ｒ_ａは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ_２、Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、－Ｃ_１－３アルキル－シクロプロピル及びシクロプロピルから選択され、前記Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、シクロプロピル及び－Ｃ_１－３アルキル－シクロプロピルは、それぞれ独立して１、２又は３つのＲにより任意選択で置換され、

各Ｒは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２及びＣＦ_３から選択される。

本発明は更に、式（ＩＩＩ－１）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。

ただし、
Ｘは、Ｎ及びＮ^＋－Ｏ^－から選択され、

Ｒ_３は、Ｈ及びＤから選択され、
各Ｒ_ａは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ_２、Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、－Ｃ_１－３アルキル－シクロプロピル及びシクロプロピルから選択され、前記Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、シクロプロピル及び－Ｃ_１－３アルキル－シクロプロピルは、それぞれ独立して１、２又は３つのＲにより任意選択で置換され、
各Ｒは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２及びＣＦ_３から選択される。

本発明は更に、式（ＩＩＩ－２）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。

ただし、
Ｒ_１は、フェニル、ピリジル及びナフチルから選択され、前記フェニル、ピリジル及びナフチルは、それぞれ独立して１、２、３又は４つのＲ_ａにより任意選択で置換され、

Ｒ_３は、Ｈ及びＤから選択され、
各Ｒ_ａは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ_２、Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、－Ｃ_１－３アルキル－シクロプロピル及びシクロプロピルから選択され、前記Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、シクロプロピル及び－Ｃ_１－３アルキル－シクロプロピルは、それぞれ独立して任意選択で１、２又は３つのＲにより置換され、
Ｒ_ｂは、Ｈ、ＣＮ、ＣＨ_３及びＯＣＨ_３から選択され、
各Ｒ_ｃは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２、ＣＦ_３及びＣＨ_２ＣＦ_３から選択され、
各Ｒは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２及びＣＦ_３から選択される。

本発明は更に、式（ＩＩ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。

ただし、
Ｒ_１は、フェニル、ピリジル及びナフチルから選択され、前記フェニル、ピリジル及びナフチルは、それぞれ独立して１、２、３又は４つのＲ_ａにより任意選択で置換され、

Ｒ_３は、Ｈ及びＤから選択され、
各Ｒ_ａは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ_２、Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、－Ｃ_１－３アルキル－シクロプロピル及びシクロプロピルから選択され、前記Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、シクロプロピル及び－Ｃ_１－３アルキル－シクロプロピルは、それぞれ独立して１、２又は３つのＲにより任意選択で置換され、
Ｒ_ｂは、Ｈ、ＣＮ、ＣＨ_３及びＯＣＨ_３から選択され、
各Ｒ_ｃは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２、ＣＦ_３及びＣＨ_２ＣＦ_３から選択され、
各Ｒは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２及びＣＦ_３から選択される。

本発明のいくつかの実施形態において、前記化合物又はその薬学的に許容される塩の化合物が下記の式から選択される。

ただし、Ｘ、Ｒ_１及びＲ_３は本発明に定義された通りである。

本発明のいくつかの実施形態において、前記各Ｒ_ａは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、ＯＨ、ＮＨ_２、ＣＨ_３、ＣＨ_２ＣＨ_３、ＣＨ（ＣＨ_３）_２、ＯＣＨ_３、ＯＣＨ_２ＣＨ_３、ＯＣＨ（ＣＨ_３）_２、

及びシクロプロピルから選択され、前記ＣＨ_３、ＣＨ_２ＣＨ_３、ＣＨ（ＣＨ_３）_２、ＯＣＨ_３、ＯＣＨ_２ＣＨ_３、ＯＣＨ（ＣＨ_３）_２、

及びシクロプロピルは、それぞれ独立して１、２又は３つのＲにより任意選択で置換され、他の変量は本発明に定義された通りである。

本発明のいくつかの実施形態において、前記各Ｒ_ａは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、ＯＨ、ＮＨ_２、ＣＨ_３、ＣＨＦ_２、ＣＦ_３、ＣＨ_２ＣＦ_３、ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＦ_３、ＯＣＨ_３、ＯＣＦ_３、

から選択され、他の変量は本発明に定義された通りである。

本発明のいくつかの実施形態において、前記Ｒ_１は、

から選択され、他の変量は本発明に定義された通りである。

本発明のいくつかの実施形態において、前記Ｒ_１は、

から選択され、前記

は、それぞれ独立して１、２、３又は４つのＲ_ａにより任意選択で置換され、他の変量は本発明に定義された通りである。

本発明のいくつかの実施形態において、前記Ｒ_１は、

から選択され、他の変量は本発明に定義された通りである。

本発明のいくつかの実施形態において、前記Ｒ_１は、

から選択され、他の変量は本発明に定義された通りである。

本発明のいくつかの実施形態において、前記Ｒ_１は、

から選択され、他の変量は本発明に定義された通りである。

本発明のいくつかの実施形態において、前記Ｒ_２は、

から選択され、他の変量は本発明に定義された通りである。

本発明のいくつかの実施形態において、前記Ｒ_２は、

から選択され、他の変量は本発明に定義された通りである。

本発明のいくつかの実施形態において、前記Ｒ_２は、

から選択され、他の変量は本発明に定義された通りである。

本発明のいくつかの実施形態において、前記Ｒ_３は、Ｈ及びＤから選択され、他の変量は本発明に定義された通りである。

本発明のいくつかの実施形態において、前記Ｘは、Ｎから選択され、他の変量は本発明に定義された通りである。

本発明のいくつかの実施形態において、前記化合物又はその薬学的に許容される塩の化合物が下記の式から選択される。

ただし、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３は本発明に定義された通りである。

本発明のいくつかの実施形態において、前記化合物又はその薬学的に許容される塩の化合物が下記の式から選択される。

ただし、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３は本発明に定義された通りであり、

条件は、Ｒ_２は

ではないことである。

本発明のいくつかの実施形態において、前記化合物又はその薬学的に許容される塩の化合物が下記の式から選択される。

ただし、Ｒ_１及びＲ_３は本発明に定義された通りである。

本発明のいくつかの実施形態において、前記化合物又はその薬学的に許容される塩の化合物が下記の式から選択される。

ただし、Ｒ_１及びＲ_３は本発明に定義された通りである。

本発明のいくつかの実施形態において、前記化合物又はその薬学的に許容される塩の化合物が下記の式から選択される。

ただし、Ｒ_１及びＲ_３は本発明に定義された通りである。

本発明の実施例２及び３において、化合物３は、実施例２及び３に記載のステップにより化合物２－４Ａから製造して得られ、ここで、ＴＬＣ薄層クロマトグラフィー（石油エーテル：アセトン＝５：１）により２回展開した後、より小さいＲｆ値に対応する生成物は化合物２－４Ａであり、より大きいＲｆ値に対応する生成物はその異性体である。

本発明の実施例２及び３において、化合物３は、実施例２及び３に記載のステップにより化合物２－４Ａから製造して得られ、ここで、ＴＬＣ薄層クロマトグラフィー（石油エーテル：アセトン＝５：１）により２回展開した後、化合物２－４ＡのＲｆ値は０．５であり、その異性体のＲｆ値は０．５５である。

本発明の実施例２及び３において、化合物３は、実施例２及び３に記載のステップにより化合物２－４Ａから製造して得られ、ここで、ＬＣＭＳ（クロマトグラフィーカラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ １２０ ＥＣ－Ｃ１８ ２．７ｕｍ ３．０×３０ｍｍ、移動相：Ａ：水（０．０３７％のギ酸）－Ｂ：アセトニトリル（０．０１８７％のギ酸）；Ｂ：５％～９５％）により２－４Ａの保持時間が０．７７６分であり、その異性体の保持時間が０．８０１ｍｉｎであることが示されている。

本発明の実施例３において、化合物３は、実施例３に記載のステップにより化合物３－２Ａから製造して得られ、ここで、３－２Ａは、ＳＦＣ分析（クロマトグラフィーカラム：Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ２ １００ｍｍ×４．６ｍｍ、３μｍ、移動相：［Ａ（超臨界ＣＯ_２）、Ｂ（メタノール（０．０５％のジエタノールアミン））］；Ｂ：４０％）によりの保持時間が４．９６４分であり、そのエナンチオマーの保持時間が８．３８２ｍｉｎであることが示されている。

本発明の実施例３において、化合物３は、ＳＦＣ分析（クロマトグラフィーカラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪ－３ １００×４．６ｍｍ、３μｍ；移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（エタノール、０．０５％のジエチルアミンを含む）；勾配：Ｂ％：４０％～４０％）により保持時間が３．７６１ｍｉｎであることが示されている。

本発明は更に、下記の式で表わされる化合物及その薬学的に許容される塩を提供する。

ただし、当該化合物３は、ＳＦＣ分析（クロマトグラフィーカラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪ－３ １００×４．６ｍｍ、３μｍ；移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（エタノール、０．０５％のジエチルアミンを含む）；勾配：Ｂ％：４０％～４０％）により保持時間が３．７６１ｍｉｎであることが示されている。

本発明は更に、下記の式で表わされる化合物及その薬学的に許容される塩を提供する。

ただし、当該化合物３は、キラルＨＰＬＣ分析（クロマトグラフィーカラム：ＦＬＭ Ｃｈｉｒａｌ ＮＱ、１５０×４．６ｍｍ、３μｍ；移動相：Ａ：（ｎ－ヘキサン）及びＢ：（エタノール、０．０２％のジエチルアミンを含む、ｖ／ｖ）；勾配：Ｂ％：等度３０％、溶出時間：６０ｍｉｎ、カラム温度：３５℃）により保持時間が１７．３８７ｍｉｎであることが示されている。

本発明のいくつかの実施形態において、化合物３の３つの立体異性体は、キラルＨＰＬＣ分析（クロマトグラフィーカラム：ＦＬＭ Ｃｈｉｒａｌ ＮＱ、１５０×４．６ｍｍ、３μｍ；移動相：Ａ：（ｎ－ヘキサン）及びＢ：（エタノール、０．０２％のジエチルアミンを含む、ｖ／ｖ）；勾配：Ｂ％：等濃度３０％、溶出時間：６０ｍｉｎ、カラム温度：３５℃）により保持時間が２２．５８７ｍｉｎ、２６．２０５ｍｉｎ及び４４．７６５ｍｉｎであることが示されている。

本発明の１つの実施形態において、本発明は化合物７Ａ２又はその薬学的に許容される塩を提供し、前記化合物７Ａ２は下記の構造のいずれかの化学構造を有し、その分析ＳＦＣ（カラム：ＣｈｉｒａＰａｋ ＩＧ－３、５０×４．６ｍｍ、３μｍ；移動相：Ａ：（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（イソプロパノール、０．１％のイソプロピルアミンを含む）、勾配：Ｂ％：５％～５％、３ｍｉｎ）条件下での保持時間は２．２３６ｍｉｎであることが示されている。

本発明は更に、下記の式で示される化合物及その薬学的に許容される塩を提供する。

本発明は更に、下記の式で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。

本発明のいくつかの実施形態において、前記化合物又はその薬学的に許容される塩の化合物が下記の式から選択される。

本発明は、ＫＲＡＳ^Ｇ１２Ｄ突然変異を有する固形腫瘍を治療するための医薬の製造における、前記化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。

本発明は、本発明の式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ－１、式ＩＩＩ－２のいずれか１つの一般式で表される化合物又はその薬学的に許容される塩と、任意の薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。

本発明は、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ突然変異を有する固形腫瘍を治療するための医薬の製造における、本発明の式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ－１、式ＩＩＩ－２のいずれか１つの一般式で表される前記化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を提供し、好ましくは、前記固形腫瘍は、結腸癌及び膵臓癌から選択される。

本発明は更に、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ突然変異を有する固形腫瘍を治療するための医薬の製造における、前記医薬組成物の使用を提供し、好ましくは、前記固形腫瘍は、結腸癌及び膵臓癌から選択される。

本発明は、更に下記の合成方法を提供する。

合成経路１：

合成経路２：

合成経路３：

ただし、Ｒ_３は、Ｈ、Ｆ及びＣｌから選択され、Ｒ_１ａは、

から選択され、Ｒ_１は、

から選択される。

合成経路４：

ただし、Ｒ_３は、Ｈ、Ｆ及びＣｌから選択され、Ｒ_１ａは、

から選択され、

Ｒ_１は、

から選択される。

本発明は、更に下記の試験方法を提供する。

試験方法１．ＫＲＡＳ^Ｇ１２Ｄ阻害活性試験
１．実験目的：
ＴＲ－ＦＲＥＴ法により、ＫＲＡＳ^Ｇ１２ＤとＧＴＰの結合を効果的に阻害できる化合物をスクリーニングするためである。

２．消耗品と機器：

３．試薬の準備：
ａ．保存試薬：
１）ＫＲＡＳヌクレオチド交換緩衝液

１０００ｍＭのＨＥＰＥＳ ２０ｍＬ、５００ｍＭのＥＤＴＡ ２０ｍＬ、５Ｍの塩化ナトリウム １０ｍＬ、１００％のトゥイーン２０ ０．１ｍＬ、９４９．９ｍＬの水を取り、１Ｌの溶液を製造し、濾過により滅菌し、４℃で保存した。

２）ＫＲＡＳ実験緩衝液
１０００ｍＭのＨＥＰＥＳ ２０ｍＬ、１０００ｍＭの塩化マグネシウム １０ｍＬ、５Ｍの塩化ナトリウム ３０ｍＬ、１００％のトゥイーン２０ ０．０５ｍＬ、９３９．９５ｍＬの水を取り、１Ｌの溶液を製造し、濾過により滅菌し、４℃で保存した。

３）ＫＲＡＳ／Ｂｏｄｉｐｙ ＧＤＰ／Ｔｂ－ＳＡ混合液
９．５μＬのＫＲＡＳ^Ｇ１２Ｄタンパク質 ９５μＭ、４４０．５μＬのＫＲＡＳヌクレオチド交換緩衝液を取り、混合し、室温下で１時間培養した後、１７．９μＭのＴｂ－ＳＡ ８．４μＬ、５ｍＭのＢｏｄｉｐｙ ＧＤＰ １．８μＬ、９５３９．８μＬのＫＲＡＳ実験緩衝液と１Ｌの溶液を製造し、混合した後室温下で６時間放置し、－８０℃の条件下で保管した。

ｂ．実験試薬：
１）ＫＲＡＳ酵素溶液
７３．３μＬのＫＲＡＳ／Ｂｏｄｉｐｙ ＧＤＰ／Ｔｂ－ＳＡ混合液、２１２６．７μＬのＫＲＡＳ実験緩衝液を取り、２２００μＬの溶液に製造した。

２）ＳＯＳ／ＧＴＰ混合液
１６６μＭのＳＯＳタンパク質 １．５９μＬ、１００ｍＭのＧＴＰ １９８μＬ、２０００．４１μＬのＫＲＡＳ実験緩衝液を取り、２２００μＬの溶液に製造した。

４．実験プロセス：
１）対照化合物母液の濃度は１ｍＭ、試験化合物母液の濃度は１０ｍＭである。９μＬの対照化合物と試験化合物を３８４－ＬＤＶプレートに移し、
２）Ｂｒａｖｏを使用して、ＬＤＶプレート上の化合物を１０ポイントで３倍希釈し、
３）ＥＣＨＯを使用して、ＬＤＶプレート上の９ｎＬの化合物を実験プレートに移し、
４）Ｄｒａｇｏｎｆｌｙ自動サンプラーを使用して、３ｎＭのＫｒａｓ ３μＬ／０．５ｎＭのＴＢ－ＳＡ／３０ｎＭのＢｏｄｉｐｙＧＤＰ混合液及び３μＬのＲａｓ緩衝液を実験プレートの各ウェルに順次に加え、１０００ｒｐｍ／ｍｉｎで１分間遠心分離し、
５）実験プレートを室温で１時間培養し、
６）Ｄｒａｇｏｎｆｌｙ自動サンプラーを使用して、１２０ｎＭのＳＯＳ ３μＬ／９ｍＭのＧＴＰ混合液を実験プレートの各ウェルに加え、１０００ｒｐｍ／ｍｉｎで１分間遠心分離し、
７）実験プレートを室温で１時間培養し、
８）Ｅｎｖｉｓｉｏｎを使用してプレートを読み取り、データを記録し、
９）Ｅｘｃｅｌ及びＸｌｆｉｔを使用してデータ分析を実行し、試験化合物のＩＣ_５０を計算した。

試験方法２：ＧＰ２Ｄ細胞のｐ－ＥＲＫ阻害試験
１．実験目的：
ＨＴＲＦ法により、ＧＰ２Ｄ細胞のｐ－ＥＲＫを効果的に阻害できる化合物をスクリーニングするためである。

２．実験プロセス：
１）．ＧＰ２Ｄ細胞を透明な９６ウェル細胞培養プレートに８０μＬ／ウェルの細胞懸濁液で播種し、各ウェルに８０００個の細胞が含まれ、細胞プレートを二酸化炭素インキュベーターに入れ、３７℃で一晩培養した。
２）．２μＬの化合物を取って７８μＬの細胞培地に加え、均一に混合した後、２０μＬの化合物溶液を取って対応する細胞プレートのウェルに加え、細胞プレートを二酸化炭素インキュベーターに戻せて１時間培養を続けた。
３）．培養終了後、細胞上清を捨て、各ウェルに１Ｘの細胞溶解液５０μＬを加え、室温で３０分間振盪しながら培養した。
４）．Ｐｈｏｓｐｈｏ－ＥＲＫ１／２ Ｅｕ Ｃｒｙｐｔａｔｅ抗体とＰｈｏｓｐｈｏ－ＥＲＫ１／２ ｄ２抗体を検出緩衝液で２０倍に希釈した。
５）．１６μＬ／ウェルで細胞溶解上清を取って新しい３８４白色マイクロタイタープレートに入れ、Ｐｈｏｓｐｈｏ－ＥＲＫ１／２ Ｅｕ Ｃｒｙｐｔａｔｅ抗体希釈液２μＬ及びＰｈｏｓｐｈｏ－ＥＲＫ１／２ ｄ２抗体希釈液２μＬを加え、常温で少なくとも４時間培養した。
６）．培養終了後、マルチラベルアナライザーを用いてＨＴＲＦ励起：３２０ｎｍ、発光：６１５ｎｍ、６６５ｎｍを読み取った。
７）．試験化合物のＩＣ_５０を計算した。

試験方法３：ＧＰ２Ｄ ３Ｄ ＣＴＧ実験
１．実験目的：
本実験の目的は、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ突然変異を有するＧＰ２Ｄヒト結腸癌細胞に対する本発明の化合物の増殖阻害効果を検証することである。

２．実験材料：
細胞株ＧＰ２Ｄ、ＤＭＥＭ培地、ペニシリン／ストレプトマイシン抗生物質はＷｉｓｅｎｔから購入し、ウシ胎児血清はＢｉｏｓｅｒａから購入した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標） ３Ｄ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ（３Ｄ細胞生存率の化学発光検出試薬）試薬はＰｒｏｍｅｇａから購入した。

３．実験方法：
ＧＰ２Ｄ細胞を９６ウェルＵ底細胞培養プレートに播種し、各ウェルに８０μＬの細胞懸濁液とし、その中に２０００個のＧＰ２Ｄ細胞が含まれるようにした。細胞プレートを二酸化炭素インキュベーターで一晩培養した。試験化合物をピペットで８個の濃度で５倍に希釈し、即ち、２００μＭから２．５６ｎＭに希釈し、同じ条件で２つのウェルを設置した。７８μＬの培地をミドルプレートに加え、更に対応する位置に従って、２μＬ／ウェルの勾配希釈した化合物をミドルプレートに移し、均一に混合した後２０μＬ／ウェルを細胞プレートに移した。細胞プレートに移した化合物の濃度の範囲は、１μＭ～０．０１２８ｎＭであった。細胞プレートを二酸化炭素インキュベーターに入れ、５日間培養した。化合物を加えた細胞プレートを培養した後、細胞プレートの各ウェルに１００μＬの細胞生存率化学発光検出試薬を加え、室温で１０分間培養して、発光信号を安定させた。マルチモードマイクロプレートリーダーを使用してデータを読み取った。

４．データ分析：
方程式（Ｓａｍｐｌｅ－Ｍｉｎ）／（Ｍａｘ－Ｍｉｎ）×１００％を使用してローデータを阻害率に変換し、ＩＣ_５０値は４つのパラメーターを使用したカーブフィッティングにより得られた（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍのｌｏｇ（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）ｖｓ．ｒｅｓｐｏｎｓｅ－－Ｖａｒｉａｂｌｅ ｓｌｏｐｅモーターで得られる）。

試験方法４：生体内薬物動態実験
１．実験目的：

本実験の目的は、ＳＤマウスに経口投与及び静脈内投与した本発明の化合物の薬物動態特性を調査することである。

２．実験方法：
試験化合物を１０％のジメチルスルホキシド／６０％のポリエチレングリコール４００／３０％の水溶液と混合し、ボルテックス・超音波処理して約１ｍｇ／ｍＬの透明な溶液を製造し、使用のために微多孔膜で濾過した。７～１０週齢のオスＳＤマウスを選択し、３ｍｇ／ｋｇの投与量で候補化合物溶液を静脈内投与した。約３０ｍｇ／ｋｇの投与量で候補化合物溶液を経口投与した。所定時間の全血を採取して血漿を製造し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法により薬物濃度を分析し、Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフト（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ社、米国）で薬物動態パラメータを算出した。

試験方法５：生体内薬力学実験

１．実験目的：
ヒト結腸癌ＧＰ２Ｄ細胞をヌードマウスに皮下移植したＢａｌｂ／ｃヌードマウス腫瘍モデルの生体内薬力学研究のためである。

２．実験方法：
細胞培養：ヒト結腸癌ＧＰ２Ｄ細胞を体外単層培養し、培養条件はＤＭＥＭ／Ｆ１２培地に２０％のウシ胎児血清、１％の二重抗体を加え、３７℃で、５％のＣＯ_２インキュベーターで培養した。週に２回、トリプシン－ＥＤＴＡを使用して通常の消化処理し、継代培養した。細胞飽和度が８０％～９０％になり、必要な数に達したら、細胞を集めて計数し、適量のＰＢＳに再懸濁し、マトリゲルを１：１の割合で加えて、細胞密度が２５×１０^６細胞／ｍＬの細胞懸濁液を得た。

細胞接種：０．２ｍＬ（５×１０^６細胞／マウス）のＭｉａ ＰａＣａ－２細胞（マトリックスゲルを加え、体積比は１：１である）を各マウスの右背部に皮下接種した。

実験操作：平均腫瘍体積が約１９０ｍｍ^３に達したとき、腫瘍体積に応じて、各群に６匹の動物に無作為で群を分け、ブランク群の投与量は０であり、試験群の投与量はそれぞれ３０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇであり、投与量は１０μＬ／ｇであり、１日２回、２２日間経口投与した。

３．腫瘍の測定と実験指標：
週に２回ノギスで腫瘍の直径を測定した。腫瘍体積の計算式は：Ｖ＝０．５ａ×ｂ^２であり、ａとｂは、それぞれ腫瘍の長径と短径を表す。

化合物の抗腫瘍効果は、ＴＧＩ（％）又は相対腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）によって評価される。相対腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）＝ＴＲＴＶ／ＣＲＴＶ×１００％（ＴＲＴＶ：治療群ＲＴＶ、ＣＲＴＶ：陰性対照群ＲＴＶ）。腫瘍の測定結果に従って相対腫瘍体積（ｒｅｌａｔｉｖｅ ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ、ＲＴＶ）を計算し、計算式はＲＴＶ＝Ｖ_ｔ／Ｖ_０であり、ここで、Ｖ_０は群を分けて投与する時（即ち、Ｄ０）に測定した平均腫瘍体積であり、Ｖ_ｔは特定の測定時の平均腫瘍体積であり、ＴＲＴＶはＣＲＴＶと同じ日のデータを取る。

ＴＧＩ（％）は、腫瘍増殖阻害率を反映する。ＴＧＩ（％）＝［１－（特定の処理群の投与終了時の平均腫瘍体積－当該処理群の投与開始時の平均腫瘍体積）／（溶媒対照群の治療終了時の平均腫瘍体積－溶媒対照群の治療開始時の平均腫瘍体積）］×１００％。

［技術的効果］
本発明の化合物は、ＫＲＡＳ^Ｇ１２Ｄタンパク質と良好な結合効果を有し、ＫＲＡＳ^Ｇ１２Ｄ酵素、ＧＰ２Ｄ細胞のｐ－ＥＲＫを有意に阻害することができ、本発明の化合物は、ＫＲＡＳ^Ｇ１２Ｄ突然変異細胞に対して良好な細胞増殖阻害活性を有し、優れた腫瘍阻害効果を有する。更に、本発明の化合物は、より優れた薬物動態学的特性を有する。

［定義及び説明］
別途に説明しない限り、本明細書で用いられる以下の用語及び連語は以下の意味を有する。１つの特定の用語又は連語は、特別に定義されない場合、不確定又は不明瞭ではなく、普通の定義として理解されるべきである。本明細書で商品名が出た場合、相応の商品又はその活性成分を指す。

本明細書で用いられる用語「薬学的に許容される」は、それらの化合物、材料、組成物及び／又は剤形に対するもので、これらは信頼できる医学判断の範囲内にあり、ヒト及び動物の組織との接触に適し、毒性、刺激性、アレルギー反応又はほかの問題又は合併症があまりなく、合理的な利益／リスク比に合う。

用語「薬学的に許容される塩」とは、本発明の化合物の塩で、本発明で見出された特定の置換基を有する化合物と比較的に無毒の酸又は塩基とで製造される。本発明の化合物に比較的に酸性の官能基が含まれる場合、単独の溶液又は適切な不活性溶媒において十分な量の塩基でこれらの化合物と接触させることで塩基付加塩を得ることができる。本発明の化合物に比較的塩基性の官能基が含まれる場合、単独の溶液又は、適切な不活性溶媒において十分な量の酸でこれらの化合物と接触させることで酸付加塩を得ることができる。本発明の一部の特定的の化合物は、塩基性官能基と酸性官能基とを含むため、任意の塩基付加塩又は酸付加塩に転換することができる。

本発明の薬学的に許容される塩は、酸基又は塩基性基を含む母体化合物から通常の方法で合成することができる。通常の場合、このような塩の製造方法は、水又は有機溶媒、或いは両者の混合物において、遊離酸又は塩基の形態のこれらの化合物を化学量論量の適切な塩基又は酸と反応させて製造する。

本発明の化合物は、特定の幾何異性体又は立体異性体の形態が存在してもよい。本発明は、全てのこのような化合物を想定し、シス及びトランス異性体、（－）－及び（＋）－エナンチオマー、（Ｒ）－及び（Ｓ）－エナンチオマー、ジアステレオマー、（Ｄ）－異性体、（Ｌ）－異性体、及びそのラセミ混合物並びに他の混合物、例えば、エナンチオマー又はジアステレオマーを多く含有する混合物を含み、全てのこれらの混合物は本発明の範囲内に含まれる。アルキル等の置換基に他の不斉炭素原子が存在してもよい。全てのこれらの異性体及びこれらの混合物はいずれも本発明の範囲内に含まれる。

別途に定義しない限り、キラルＨＰＬＣ（キラル高速液体クロマトグラフィー）分析及びＳＦＣ（超臨界流体クロマトグラフィー）分析では、測定機器などの要因により化合物の保持時間が異なる場合がある。いかなる特定の化合物について、化合物の保持時間に測定誤差がある可能性がある。従って、各化合物を決定する際にはこの誤差を考慮する必要があり、この誤差も本開示の範囲内にある。

本発明の化合物は、化合物を構成する１つ又は複数の原子に、非天然割合の原子同位元素が含まれてもよい。例えば、トリチウム（^３Ｈ）、ヨウ素－１２５（^１２５Ｉ）又はＣ－１４（^１４Ｃ）のような放射性同位元素で化合物を標識することができる。また、例えば、重水素に水素を置換して重水素化薬物を形成することができ、重水素と炭素で形成された結合は、通常の水素と炭素で形成された結合よりも強く、重水素化されていない薬物と比較して、重水素化薬物には、毒性の副作用が軽減され、薬物の安定性が増し、治療効果が向上され、薬物の生物学的半減期が延ばされるという利点がある。本発明の化合物の同位体組成の変換は、放射性であるか否かに関わらず、すべて本発明の範囲に含まれる。

用語「任意」また「任意に」は後記の事項又は状況によって現れる可能性はあるが必ずしも現れるわけではなく、かつ当該記述はそれに記載される事項又は状況が生じる場合によってその事項又は状況が生じない場合を含むことを意味する。

用語「置換された」は特定の原子における任意の１つ又は複数の水素原子が置換基により置換されたことを指し、特定の原子価状態が正常でかつ置換後の化合物が安定していれば、置換基は重水素及び水素の変形体を含んでもよい。置換基がケトン（即ち＝Ｏ）である場合、２つの水素原子が置換されたことを意味するケトン置換は、芳香族基で生じない。用語「任意選択で置換される」は、置換されてもよく、置換されなくてもよいことを指し、別途に定義しない限り、置換基の種類と数は化学的に実現できれば任意である。

変量（例えば、Ｒ）のいずれかが化合物の組成又は構造に１回以上現れた場合、その定義はいずれの場合においても独立である。そのため、例えば、１つの基が０～２個のＲにより置換された場合、上記基は任意に２個以下のＲにより置換され、且ついずれの場合においてもＲは独立した選択肢を有する。また、置換基及び／又はその変形体の組み合わせは、このような組み合わせであれば安定した化合物になる場合のみ許容される。

連結基の数が０の場合、例えば、－（ＣＲＲ）_０－は、当該連結基が単結合であることを意味する。

そのうち１つの変量が単結合の場合、それで連結される２つの基が直接連結し、例えば、Ａ－Ｌ－ＺにおけるＬが単結合を表す場合、この構造は実際にＡ－Ｚであることを表す。

挙げられた連結基が連結方向を明示していない場合、その連結方向は任意であり、例えば、

における連結基Ｌは－Ｍ－Ｗ－であり、この時－Ｍ－Ｗ－は左から右への読み取り順と同じ方向に環Ａと環Ｂに連結されて

を構成することができ、また、左から右への読み取り順と逆方向に環Ａと環Ｂに連結されて

を構成することもできる。上記連結基、置換基及び／又はその変形体の組み合わせは、このような組み合わせであれば安定した化合物になる場合のみ許容される。

特に明記しない限り、ある基が１つ又は複数の結合可能な部位を有する場合、当該基の任意の１つ又は複数の部位は、化学結合によって他の基に連結されてもよい。当該化学結合の連結方式が非局在であり、且つ結合可能な部位にＨ原子が存在する場合、化学結合を結合すると、当該部位のＨ原子の個数は、連結された化学結合の個数に応じて相応の価数の基に減少する。前記部位が他の基と結合する化学結合は、

で表すことができる。例えば、－ＯＣＨ_３の直線実線結合は、当該基の酸素原子を介して他の基に連結されていることを意味する。

中の直線破線結合は、当該基内の窒素原子の両端を介して他の基に結合されていることを意味する。

中の波線は、当該フェニル基の部位１と２の炭素原子を介して他の基に結合されていることを意味する。

は、当該ピペリジニル基の任意の結合可能な部位が１つの化学結合連結他の基に結合できることを意味し、少なくとも

の４つの結合形態を含み、Ｈ原子が－Ｎ－に描かれていても、

には

のような結合形態の基が含まれるが、１つの化学結合が接続されると、その部位のＨは１つ減少して対応する一価ピペリジン基になる。

別途に説明しない限り、

で１つの立体中心の絶対配置を、

で立体中心の相対配置を、

或いは

表す。

例えば、

は、

で立体中心の相対配置を表し、

との混合物を表す。

は、

との混合物を表し、

は、

との混合物を表す。

本発明の特定の化合物は、分子の他の部分との空間的相互作用により、分子内の単結合周りの回転が妨げられるか、又は大きく減速する場合に生じる立体構造異性体であるアトロプ異性体として存在する可能性がある。本発明に開示される化合物は、純粋な個々のブロック異性体、或いは１つが濃縮しているアトロプ異性体、或いはそれぞれの非特異的混合物としてのすべてのアトロプ異性体を含む。単結合周りの回転ポテンシャルエネルギーが十分に高く、立体構造間の相互変換が十分に遅い場合、異性体の分離が可能になる。例えば、

は一対のアトロプ異性体であり、ここで、フェニルの

はこの側の立体の方向が外側であることを表し、

はこの側の立体の方向が内側であることを表す。

別途に定義しない限り、化合物に炭素－炭素二重結合、炭素－窒素二重結合及び窒素－窒素二重結合などの二重結合構造が存在し、且つ二重結合における各原子に２つの異なる置換基が連結されている場合（窒素原子を含む二重結合において、窒素原子における一対の孤立電子対はそれに連結されている１つの置換基と見なされる）、当該化合物の二重結合上の原子とその置換基の間を

で表す場合、当該化合物の（Ｚ）形異性体、（Ｅ）形異性体、又は２つの異性体の混合物を意味する。

別途に定義しない限り、Ｃ_{ｎ～ｎ＋ｍ}又はＣ_ｎ～Ｃ_ｎ＋ｍはｎ～ｎ＋ｍ個の炭素の任意の１つの具体的な様態を含み、例えば、Ｃ_１－１２はＣ_１、Ｃ_２、Ｃ_３、Ｃ_４、Ｃ_５、Ｃ_６、Ｃ_７、Ｃ_８、Ｃ_９、Ｃ_１０、Ｃ_１１、及びＣ_１２を含み、ｎ～ｎ＋ｍのうちの任意の１つの範囲も含み、例えば、Ｃ_１－１２はＣ_１－３、Ｃ_１－６、Ｃ_１－９、Ｃ_３－６、Ｃ_３－９、Ｃ_３－１２、Ｃ_６－９、Ｃ_６－１２、及びＣ_９－１２等を含む。同様に、ｎ員～ｎ＋ｍ員は環における原子数がｎ～ｎ＋ｍ個であることを表し、例えば、３～１２員環は３員環、４員環、５員環、６員環、７員環、８員環、９員環、１０員環、１１員環、及び１２員環を含み、ｎ～ｎ＋ｍのうちの任意の１つの範囲も含み、例えば、３～１２員環は３～６員環、３～９員環、５～６員環、５～７員環、６～７員環、６～８員環、及び６～１０員環等を含む。

別途に定義しない限り、用語「Ｃ_１－３アルキル」は直鎖又は分枝鎖の１～３個の炭素原子で構成された飽和炭化水素基を表す。前記Ｃ_１－３アルキルにはＣ_１－２とＣ_２－３アルキルなどが含まれ、それは１価（例えば、メチル）、２価（例えば、メチレン）及び多価（例えば、メチン）であってもよい。Ｃ_１－３アルキルの実例には、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル（ｎ－プロピル及びイソプロピルを含む）などが含まれるが、これらに限定されない。

別途に定義しない限り、用語「ハロゲン化」又は「ハロ」は、それ自体又は別の置換基の一部として、フッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、臭素（Ｂｒ）又はヨウ素（Ｉ）原子を意味する。

別途に定義しない限り、用語「Ｃ_１－３アルコキシ」は酸素原子を介して分子の残り部分に連結した１～３個の炭素原子を含むアルキル基を表す。前記Ｃ_１－３アルコキシは、Ｃ_１－２、Ｃ_２－３、Ｃ_３及びＣ_２アルコキシなどが含まれる。Ｃ_１－３アルコキシの実例はメトキシ、エトキシ、プロポキシ（ｎ―プロポキシ又はイソプロポキシを含む）などを含むが、これらに限定されない。

別途に定義しない限り、「Ｃ_２－４アルケニル」は直鎖又は分枝鎖の少なくとも１つの炭素－炭素二重結合を含む２～４個の炭素原子で構成された飽和炭化水素基を表し、炭素－炭素二重結合は当該基の任意の位置にあってもよい。前記Ｃ_１－４アルケニルにはＣ_２－３、Ｃ_４、Ｃ_３及びＣ_２アルケニルなどが含まれ、前記Ｃ_２－４アルケニルは１価、２価又は多価であってもよい。Ｃ_２－４アルケニルの実例はビニル、プロペニル、ブテニル、ブタジエニルなどを含むが、これらに限定されない。

別途に定義しない限り、「Ｃ_２－４アルキニル」は直鎖又は分枝鎖の少なくとも１つの炭素－炭素三重結合を含む２～４個の炭素原子で構成された飽和炭化水素基を表し、炭素－炭素三重結合は当該基の任意の位置にあってもよい。前記Ｃ_２－４アルキニルには、Ｃ_２－３、Ｃ_４、Ｃ_３及びＣ_２アルキニルなどが含まれる。それは一価、二価又は多価であってもよい。Ｃ_２－４アルキニルの実例はエチニル、プロピニル、ブチニルなどを含むが、これらに限定されない。

別途に定義しない限り、本発明の式ＩＩＩにおいて、ＸがＮ^＋－Ｏ^－である場合、「Ｎ^＋－Ｏ^－」は「Ｎ（→Ｏ）」を表すために使用され、Ｎの酸化物を表す。

本発明の化合物は当業者に熟知の様々な合成方法によって製造することができ、以下に挙げられた具体的な実施形態、他の化学合成方法と合わせた実施形態及び当業者に熟知の同等の代替方法を含み、好適な実施形態は本発明の実施例を含むが、これらに限定されない。

本発明の化合物の構造は、当業者に周知の従来の方法によって確認することができ、本発明が化合物の絶対配置に関する場合、絶対配置は、当業者の従来の技術的手段によって確認することができる。例えば、単結晶Ｘ線回折（ＳＸＲＤ）、培養単結晶はＢｒｕｋｅｒ Ｄ８ ｖｅｎｔｕｒｅ回折計によって収集され、光源はＣｕＫα放射線、走査方法：φ／ω走査、関連データを収集した後、更に直接法は（Ｓｈｅｌｘｓ９７）結晶構造解析により、絶対配置を確認できる。

本発明に使用されたすべての溶媒は市販品から得ることができる。Ｂｏｃはｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルを表し、Ｆｍｏｃは９－フルオレニルメトキシカルボニルを表し、ＴＩＰＳはトリイソプロピルシリルを表し、ＰＭＢはｐ－メトキシベンジルを表し、Ｔｆはトリフルオロメタンスルホニルを表し、ＤＣＥはジクロロエタンを表し、ＴＨＦはテトラヒドロフランを表し、Ｈ_２Ｏは水を表し、ＦＡはギ酸を表し、ＡＣＮはアセトニトリルを表し、ＰＥは石油エーテルを表し、ＥＡは酢酸エチルを表し、ＤＥＡはジエタノールアミンを表し、ＩＰＡはイソプロパノールを表し、ＤＢＵは１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク－７－エンを表し、第２世代のＧｒｕｂｂｓ触媒はＣＡＳ番号が２４６０４７－７２－３の化合物を表し、カラムクロマトグラフィーにおける溶出液の比は体積比を表し、濃度のＭはｍｏｌ／Ｌを表す。

化合物は本分野の通常の命名原則又はＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）ソフトによって名付けられ、市販化合物はメーカーのカタログの名称が使用される。

化合物ＡとＫＲＡＳ^Ｇ１２Ｄタンパク質の結合模式図である。 化合物ＢとＫＲＡＳ^Ｇ１２Ｄタンパク質の結合模式図である。 化合物ＣとＫＲＡＳ^Ｇ１２Ｄタンパク質の結合模式図である。 化合物ＤとＫＲＡＳ^Ｇ１２Ｄタンパク質の結合模式図である。 化合物ＥとＫＲＡＳ^Ｇ１２Ｄタンパク質の結合模式図である。 化合物ＦとＫＲＡＳ^Ｇ１２Ｄタンパク質の結合模式図である。 化合物ＧとＫＲＡＳ^Ｇ１２Ｄタンパク質の結合模式図である。 化合物ＨとＫＲＡＳ^Ｇ１２Ｄタンパク質の結合模式図である。 化合物ＩとＫＲＡＳ^Ｇ１２Ｄタンパク質の結合模式図である。 化合物ＪとＫＲＡＳ^Ｇ１２Ｄタンパク質の結合模式図である。 化合物ＫとＫＲＡＳ^Ｇ１２Ｄタンパク質の結合模式図である。

以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、本発明の不利な制限を意味するものではない。本発明は本明細書で詳細に説明され、その特定の実施形態も開示されており、当業者にとって、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、本発明の特定の実施形態において様々な変更及び修正を行うことができることは明らかである。

計算例１

分子ドッキングプロセスは、Ｍａｅｓｔｒｏ（Ｓｃｈｒoｄｉｎｇｅｒバージョン２０１７－２）のＧｌｉｄｅ ＳＰ^［１］及びデフォルトオ設定を使用して実行された。ＰＤＢデータベースのＫＲＡＳ＿Ｇ１２Ｃの結晶構造ＰＤＢ：６ＵＴ０を選択し、Ｃｙｓ１２がＡｓｐ１２に突然変異するようにシミュレーションし、エネルギー最適化の後、ドッキングテンプレートとして使用された。タンパク質を製造するために、Ｍａｅｓｔｒｏ^［２］のタンパク質製造ウィザードモジュールを使用して水素原子を加え、ＯＰＬＳ３力場を使用した。リガンドの製造において、ＬｉｇＰｒｅｐを使用して分子の三次元構造を生成し、エネルギー最小化^［３］を実行し、ｃｏｎｆｇｅｎモジュールを使用して小分子のコンフォメーションをサンプリングした。６ＵＴ０のリガンドを質量中心として、２５Å×２５Å×２５Åの辺を持つ立方体のドッキング格子を製造した。分子ドッキングプロセスに参考化合物を配置した。タンパク質受容体とリガンド間の相互作用のタイプを分析し、タンパク質受容体とリガンド間の相互作用のタイプを分析し、計算されたｄｏｃｋｉｎｇ ｓｃｒｏｒｅ及び結合模式に従って、図１～図１１に示されるように合理的なドッキングコンフォメーションを選択及び保存した。

結論：本発明の化合物はＫＲＡＳ^Ｇ１２Ｄと良好な結合性を有する。

中間体Ｉｎｔ－３Ａ及びＩｎｔ－３Ｂの合成

ステップ１：
窒素ガスの保護下で、Ｉｎｔ３－１（３ｇ、９．５６ｍｍｏｌ）及び１－１Ｂ（１．８３ｇ、８．６０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３０ｍＬ）に溶解させ、－４０℃でトリエチルアミン（２．９０ｇ、２８．６７ｍｍｏｌ）を加え、－４０℃で０．５時間反応させた。反応系に水（２０ｍＬ）を加え、水相をジクロロメタン（２０ｍＬ×４）で抽出し、分離した。有機相を飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（移動相：石油エーテル：酢酸エチル＝２０：１～１．５：１）により分離・精製して中間体Ｉｎｔ３－２を得た。 ＭＳ ｍ／ｚ： ４８８．９，４９０．９［Ｍ＋１］^＋。

ステップ２：
窒素ガスの保護下で、中間体Ｉｎｔ３－２（０．８ｇ、１．６３ｍｍｏｌ）及び中間体２－７（２６９．９１ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（８ｍＬ）及びテトラヒドロフラン（８ｍＬ）に溶解させ、炭酸セシウム（１．３３ｇ、４．０８ｍｍｏｌ）及びトリエチレンジアミン（５４．９７ｍｇ、４９０．０６μｍｏｌ）を加え、２５℃で１５時間反応させた。反応系に水（１０ｍＬ）を加え、水相を酢酸エチル（１０ｍＬ×５）で抽出し、分離した。有機相を飽和食塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（移動相：石油エーテル：酢酸エチル＝２５：１～１：１）により分離・精製して中間体Ｉｎｔ３－３を得た。ＭＳ ｍ／ｚ： ６１８．０ ［Ｍ＋１］^＋。

ステップ３：
中間体Ｉｎｔ３－３を分取ＳＦＣ（クロマトグラフィーカラム：ＲＥＧＩＳ（Ｓ，Ｓ）ＷＨＥＬＫ－Ｏ１（２５０ｍｍ×２５ｍｍ、１０μｍ）；移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（イソプロパノール、０．１％のアンモニア水を含む）：勾配：Ｂ％：６０％～６０％、１０ｍｉｎ）により分離して中間体Ｉｎｔ－３Ａ及びＩｎｔ－３Ｂを得た。

中間体Ｉｎｔ－３Ａ：ＳＦＣ分析方法：クロマトグラフィーカラム ＲＥＧＩＳ（Ｓ，Ｓ）ＷＨＥＬＫ－Ｏ１（５０ｍｍ×４．６ｍｍ、３．５μｍ）、移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（イソプロパノール、０．１％のイソプロピルアミンを含む）：勾配：Ｂ％：５％～５％、保持時間は１．７８０ｍｉｎであり、ｅｅ値は９５．３７％であった。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＣＤＣ１_３） δ ＝ ７．３２ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．２， ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．０２ （ｓ， １Ｈ）， ４．９４ （ｓ， １Ｈ）， ４．３８ － ４．２５ （ｍ， ４Ｈ）， ４．２４ － ４．１７ （ｍ，１Ｈ）， ３．６６ － ３．４８ （ｍ， ３Ｈ）， ３．３４ － ３．２０ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９３ （ｄ， Ｊ ＝ １７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．７５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．８， ４．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．４７ （ｄ， Ｊ ＝１８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， １．９５ （ｔ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．８９ － １．７５ （ｍ， ３Ｈ）， １．６０ － １．５５ （ｍ， ２Ｈ）， １．５２ （ｓ， ９Ｈ）， ０．７５ （ｄ， Ｊ ＝ ３．２ Ｈｚ，１Ｈ）， ０．５２ － ０．４５ （ｍ， １Ｈ）． ＭＳ ｍ／ｚ： ６１８．０ ［Ｍ＋１］^＋。

中間体Ｉｎｔ－３Ｂ：ＳＦＣ分析方法：クロマトグラフィーカラム ＲＥＧＩＳ（Ｓ，Ｓ）ＷＨＥＬＫ－Ｏ１（５０ｍｍ×４．６ｍｍ、３．５μｍ）、移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（イソプロパノール、０．１％のイソプロピルアミンを含む）：勾配：Ｂ％：５％～５％、保持時間は１．９１４ｍｉｎであり、ｅｅ値は９６．６２％であった。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ＝ ７．３３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．２， ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．１８ － ４．８５ （ｍ， ２Ｈ）， ４．５２ － ４．０９ （ｍ， ６Ｈ）， ３．７３ － ３．４４ （ｍ， ３Ｈ），３．４３ － ３．１０ （ｍ， ２Ｈ）， ２．８８ － ２．６６ （ｍ， １Ｈ）， ２．６２ － ２．３６ （ｍ， １Ｈ）， ２．０２ － １．６７ （ｍ， ６Ｈ）， １．５２ （ｓ， ９Ｈ）， １．２７ （ｄ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ，１Ｈ）， ０．８９ － ０．６５ （ｍ， １Ｈ）， ０．６３ － ０．４０ （ｍ， １Ｈ）． ＭＳ ｍ／ｚ： ６１８．０ ［Ｍ＋１］^＋。

中間体Ｉｎｔ－４の合成

ステップ１：
Ｉｎｔ４－１（１００ｇ、３９７．６７ｍｍｏｌ）を酢酸（３００ｍＬ）に溶解させ、０℃に冷却させ、次に、濃硫酸（３９０．０３ｇ、３．９８ｍｏｌ）を加え、更に亜硝酸ナトリウム（５４．８７ｇ．７９５．３４ｍｍｏｌ）の水（５０ｍＬ）溶液を１滴ずつ加え、０℃で１時間反応させ、この時、懸濁液が透明になり、ヨウ化カリウム（１３２．０３ｇ、７９５．３４ｍｍｏｌ）の水（５０ｍＬ）溶液を１滴ずつ加え、０℃下で１時間反応させた。５０００ｍＬの水を加えて１０分間撹拌し、吸引濾過し、水で５回濯ぎ、５００ｍＬの飽和チオ硫酸ナトリウムの水溶液を加えて１晩撹拌した。次に、再び吸引濾過し、水（５００ｍＬ×４）で５回洗浄し、吸引濾過し、ケーキは中間体Ｉｎｔ４－２であった。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ＝８．３７ （ｄ，Ｊ ＝ ２．０Ｈｚ，１Ｈ）， ８．２４ （ｄ， Ｊ＝２．０ Ｈｚ，１Ｈ）。

ステップ２：
中間体Ｉｎｔ４－２（１２６．１５ｇ、３４８．１５ｍｍｏｌ）をエタノール（５００ｍＬ）と水（２００ｍＬ）に溶解させ、次に、鉄粉末（３８．８８ｇ、６９６．２９ｍｍｏｌ）及び塩化アンモニウム（３７．２５ｇ、６９６．２９ｍｍｏｌ）を加え、８０℃下で２時間反応させた。吸引濾過し、濾液を減圧濃縮し、酢酸エチル（５００ｍＬ×２）で抽出し、飽和食塩水（５００ｍＬ×６）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル／石油エーテル、酢酸エチルの比：０～２０％）に付して中間体Ｉｎｔ４－３を得た。ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ３３１．８， ３３３．８ ［Ｍ＋１］^＋。

ステップ３：
中間体Ｉｎｔ４－３（４６ｇ、１３８．４０ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３００ｍＬ）に溶解させ、０℃で水素ナトリウム（１６．６１ｇ、４１５．２１ｍｍｏｌ、６０％）を加え、０℃で０．５時間撹拌し、更に中間体Ｉｎｔ４－３Ａ（６５．０３ｇ、４１５．２１ｍｍｏｌ）を加え、２５℃にゆっくりと昇温させ、２時間反応させた。反応液に１０００ｍＬの水をゆっくりと加え、完全に析出させ、吸引濾過し、水（２５０ｍＬ×４）でケーキを濯ぎ、ケーキを５０℃下で真空乾燥させて中間体Ｉｎｔ４－４を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ＝７．０９（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ，４Ｈ），６．９４－０．９７（ｍ，１Ｈ），６．８８ （ｄ， Ｊ＝８．５３ Ｈｚ，４Ｈ）， ６．８０（ｄ， Ｊ＝２．７６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５０（Ｓ，４Ｈ）， ３．８１ （Ｓ，６Ｈ）。

ステップ４：
中間体Ｉｎｔ４－４（７８．６６ｇ、１３７．３６ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２８０ｍＬ）に溶解させ、ヨウ化銅（Ｉ）（１３０．８０ｇ、６８６．８０ｍｍｏｌ）を加え、窒素ガスで置換した後１００℃に加熱し、更に中間体５－１０Ａ（２１１．１１ｇ、１．１０ｍｏｌ）を加えて０．５時間反応させた。５００ｍＬの酢酸エチルを加え、５００ｍＬの水を加え、分離した。有機相を水（ＩＬ×５）で５回洗浄し、更に飽和食塩水（１Ｌ×３）で洗浄し、水相を１Ｌの酢酸エチルで再び抽出し、更に分離して有機相を水（ＩＬ×５）で洗浄し、飽和塩化ナトリウム溶液（ＩＬ×３）で洗浄した。すべての有機相を減圧濃縮して粗生成物を得、得られた粗生成物に３００ｍＬのメタノールを加えて撹拌し、吸引濾過し、ケーキは中間体Ｉｎｔ４－５であった。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣＩ_３） δ ＝ ７．０５－７．１３ （ｍ， ４Ｈ）， ６．９６ （ｄ， Ｊ＝３．０１ Ｈｚ， ＩＨ）， ６．８４－６．９２ （ｍ， ４Ｈ），６．８０ （ｄ， Ｊ＝２．７６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５０ （ｓ， ４Ｈ）， ３．８１ （ｓ， ６Ｈ）。

ステップ５：
中間体Ｉｎｔ４－５（０．０９８ｇ、１９０．３８μｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（４８３．４４ｍｇ、１．９０ｍｍｏｌ）及び酢酸カリウム（５６．０５ｍｇ、５７１．１４μｍｏｌ）を無水ジオキサン（２．５ｍＬ）に加え、次に窒素ガスで３回置換した。１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンジクロロパラジウム（ＩＩ）（４１．７９ｍｇ、５７．１１μｍｏｌ）を加え、再び窒素ガスで３回置換し、次に１１０℃に昇温させ、２０時間反応させた。５０ｍＬの水を加え、１５０ｍＬの酢酸エチルで抽出し、分離し、有機相を取り、飽和食塩水（５０ｍＬ×３）で洗浄し、減圧濃縮して粗生成物を得、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル：石油エーテル：０～１０％）により分離して中間体Ｉｎｔ－４を得た。ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ５６２．２ ［Ｍ＋１］^＋。

中間体Ｉｎｔ－５の合成

Ｉｎｔ５－１（３ｇ、１３．３７ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（５．０９ｇ、２０．０５ｍｍｏｌ）及び酢酸カリウム（２．６２ｇ、２６．７３ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）に溶解させ、窒素ガスで３回置換し、１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン付加物（１．０９ｇ、１．３４ｍｍｏｌ）を加え、１００℃に加熱し、６時間撹拌した。反応液を１５０ｍＬの水に注ぎ、酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水（Ｉ５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～３：１）により分離・精製してＩｎｔ－５を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣＩ_３） δ ７．０５ （ｄｄ， Ｊ＝４．０，２．８ Ｈｚ，１Ｈ）， ６．８７ （ｄｄ， Ｊ ＝ ７．６， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．１６ － ４．４６ （ｍ， ２Ｈ）， １．３８ （ｓ， １２Ｈ）。

実施例１

ステップ１：中間体１－１Ａ－２の製造
中間体１－１Ａ－１（１２０ｇ、７０９ｍｍｏｌ）をｔｅｒｔ－ブタノール（１２００ｍＬ）及び水（１２００ｍＬ）に溶解させ、次に、オスミウム（ＶＩ）酸カリウム二水和物（１０．４ｇ、２８．３ｍｍｏｌ）及び４－メチルモルホリンＮ－オキシド（２４９ｇ、２．１３ｍｏｌ）を順次に加えた。反応液を４５℃下で１６時間撹拌した。減圧濃縮し、過剰な溶媒を除去し、酢酸エチル（５００ｍＬ×２）で抽出し、飽和亜硫酸溶液（１０００ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機層を飽和食塩水（５００ｍＬ×３）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１／０～０／１）により精製して１－１Ａ－２を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ４．２３ （ｔ， Ｊ ＝ ３．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．５５－３．５８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．３５－３．３２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．８７－２．８３ （ｍ， ２Ｈ）， １．４５ （ｓ， ９Ｈ）。

ステップ２：中間体１－１Ａ－３の製造
中間体１－１Ａ－２（１０７ｇ、５２６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１７００ｍＬ）に溶解させ、０℃に冷却させ、次に、ヨードベンゼンジアセテート（２５４ｇ、７８９ｍｍｏｌ）を加えた。反応系を２５℃に移して３時間撹拌した。飽和炭酸水素ナトリウム溶液（５００ｍＬ）を加えて反応系をクエンチングさせ、更にジクロロメタン（１００ｍＬ）を加えて０．５時間撹拌し、次に、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。２５℃下でｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（２００ｍＬ）を加え、１０分間撹拌し、濾過し、減圧濃縮して粗生成物中間体１－１Ａ－３を得た。

ステップ３：中間体１－１Ａ－４の製造
中間体１－１Ａ－３（２００ｇ）をテトラヒドロフラン（６００ｍＬ）に溶解させ、－７８℃に冷却させ、次に、反応系にビニルマグネシウムブロミド（１Ｍ、１．７９Ｌ）を加えた。次に反応系を２５℃に昇温させて１６時間撹拌した。１０℃下で飽和塩化アンモニウム溶液（１０００ｍＬ）を加えて反応系をクエンチングさせ、酢酸エチル（５００ｍＬ）で抽出した。有機相を飽和食塩水（５００ｍＬ×３）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１／０～０／１）により精製して中間体１－１Ａ－４を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ５．８２－５．８９ （ｍ， ２Ｈ）， ５．３２ （ｔ， Ｊ ＝ １１．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ５．１６－５．１９ （ｍ， ２Ｈ）， ４．４５ （ｓ， ２Ｈ）， ３．６０－３．７０ （ｍ， １Ｈ）， ３．３７ （ｓ， ２Ｈ）， ３．２５ （ｓ， １Ｈ）， ２．９５ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， １．４８ （ｓ， ９Ｈ）。

ステップ４：中間体１－１Ａ－５の製造
中間体１－１Ａ－４（８０．０ｇ、３１０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０００ｍＬ）に溶解させ、次に、反応系を０℃に移してＤＢＵ（２３．６ｇ、１５５ｍｍｏｌ）及び２，２，２－トリクロロアセトニトリル（２６９ｇ、１．８７ｍｏｌ）を加え、反応系を２５℃に移して１６時間撹拌した。減圧濃縮し、残留物を酢酸エチル（５００ｍＬ×２）で抽出し、水（１００ｍＬ×２）で洗浄し、飽和食塩水（１００ｍＬ×３）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１／０～０／１）により精製して中間体１－１Ａ－５を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ８．３７ （ｓ， ２Ｈ）， ５．８１－５．８７ （ｍ， ２Ｈ）， ５．４５ （ｓ， ２Ｈ）， ５．３９－５．４３ （ｍ， ２Ｈ）， ５．２５－５．３０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．６１－３．８１ （ｍ， ４Ｈ）， １．４８ （ｓ， ９Ｈ）。

ステップ５：中間体１－１Ａ－６の製造
中間体１－１Ａ－５Ａ（３２．１ｇ、２３８ｍｍｏｌ）をＤＣＥ（８５０ｍＬ）に溶解させ、次にクロロ（１，５－シクロオクタジエン）イリジウム（Ｉ）二量体（１２．３ｇ、１８．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応系を０℃に冷却させ、次に、中間体１－１Ａ－５（１００ｇ、１８３．１ｍｍｏｌ）をＤＣＥ（１．００Ｌ）に溶解させ、上記反応系に移し、反応系を２５℃に昇温させて１６時間撹拌を続けた。減圧濃縮して過剰な溶媒を除去し、粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１／０～０／１、石油エーテル／酢酸エチル＝１０：１）により精製して中間体１－１Ａ－６を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．５２－７．５５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３０ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．２２ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．９４－６．０３ （ｍ， ２Ｈ）， ５．１０ （ｔ， Ｊ ＝ １９．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．９９ （ｄ， Ｊ ＝ １０．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．５１－３．６１ （ｍ， ４Ｈ）， ３．３３ （ｔ， Ｊ ＝ １３．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．４８ （ｓ， １５Ｈ）。

ステップ６：中間体１－１Ａ－７の製造
１－１Ａ－６（３６．０ｇ、５０．４ｍｍｏｌ）をトルエン（９００ｍＬ）に溶解させ、次に、第二世代Ｇｒｕｂｂｓ触媒（２．１４ｇ、２．５２ｍｍｏｌ）を加えた。反応系を１２５℃に昇温させ、１６時間撹拌した。濾過し、ケーキを捨て、濾液を減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１／０～０／１、石油エーテル／酢酸エチル＝１０：１）により精製して中間体１－１Ａ－７を得た。ＭＳ： ｍ／ｚ ＝ ３２９．２， ［Ｍ＋１］ ^＋。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．６０ （ｔ， Ｊ ＝ １．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３１ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．２２ （ｓ， １Ｈ）， ５．９６ （ｔ， Ｊ ＝ ９．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．６０－３．６５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４６－３．５３ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０９－３．１４ （ｍ， ２Ｈ）， １．４２ （ｓ， ９Ｈ）， １．２５ （ｄ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， ６Ｈ）。

ステップ７：中間体１－１Ａ－８の製造
中間体１－１Ａ－７（２６．８ｇ、８１．６ｍｍｏｌ）をメタノール（２０１ｍＬ）に溶解させ、次に、塩化水素／メタノール（４Ｍ、６７．３ｍＬ）を加えた。反応系を３５℃に昇温させて１６時間撹拌した。反応混合物のｐＨ値を１２に調節し、酢酸エチル（３０．０ｍＬ）で抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して１－１Ａ－８を得た。ＭＳ： ｍ／ｚ ＝ ２２９．２， ［Ｍ＋１］ ^＋。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．６２ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３１ （ｔ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．２１ （ｓ， １Ｈ）， ６．０１ （ｓ， ２Ｈ）， ３．４２ （ｓ， ２Ｈ）， ２．８９－２．９３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３０－２．３４ （ｍ， ２Ｈ）， １．２３ （ｓ， ６Ｈ）。

ステップ８：中間体１－１Ａ－９の製造
中間体１－１Ａ－８（１８．６ｇ、７９．４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１９０ｍＬ）に溶解させ、次に、９－フルオレニルメチルクロロホルメート（２０．５ｇ、７９．４ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（２５．２ｇ、２３８．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃下で１時間撹拌した。酢酸エチル（５０．０ｍＬ×２）で抽出し、水（２００．０ｍＬ）で洗浄した。有機相を合わせ、飽和食塩水（１５０．０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して中間体１－１Ａ－９を得た。ＭＳ： ｍ／ｚ ＝ ４５１．３， ［Ｍ＋１］ ^＋。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．７６ （ｄ， Ｊ ＝ １３．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．５４－７．６１ （ｍ， ４Ｈ）， ７．２４－７．４０ （ｍ， ７Ｈ）， ５．９３－６．０１ （ｍ， ２Ｈ）， ４．３４－４．４０ （ｍ， ２Ｈ）， ４．２１ （ｓ， １Ｈ）， ３．７０ （ｔ， Ｊ ＝ ２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．５５－３．５９ （ｍ， ２Ｈ）， ３．１５－３．２３ （ｍ， ２Ｈ）， １．２７ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， ６Ｈ）。

ステップ９：中間体１－１Ａ－１０の製造
中間体１－１Ａ－９（９．５２ｇ、２１．１ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（１９２ｍＬ）に溶解させ、７５℃に加熱して１６時間撹拌した。水（２０．０ｍＬ）を加え、ｐＨを９に調節し、更にジクロロメタン（２０．０ｍＬ）を加えて抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を２５℃下でｎ－ヘプタン（６ｍＬ）で２時間撹拌して１－１Ａ－１０のトリフルオロ酢酸塩を得た。ＭＳ： ｍ／ｚ ＝ ３３３．１， ［Ｍ＋１］ ^＋。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ７．７７ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．５６ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．４１ （ｔ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３３ （ｔ， Ｊ ＝ ６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ６．１８－６．２７ （ｍ， ２Ｈ）， ４．３８－４．４２ （ｍ， ２Ｈ）， ４．２３ （ｓ， １Ｈ）， ３．８８ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．８２ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７２ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．２１－３．６０ （ｍ， ２Ｈ）。

ステップ１０：中間体１－１Ａ－１１の製造
中間体１－１Ａ－１０のトリフルオロ酢酸塩（１．００ｇ、２．９２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１０．０ｍＬ）に溶解させ、次に、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（７６４ｍｇ、３．５０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（８８５ｍｇ、８．７５ｍｍｏｌ）を順次に加え、２５℃下で１時間撹拌した。酢酸エチル（１０．０ｍＬ×２）及び水（１０．０ｍＬ）を加えて抽出した。有機相を合わせ、飽和食塩水（１５．０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１／０～０／１、石油エーテル：酢酸エチル＝３：１）により精製して中間体１－１Ａ－１１を得た。ＭＳ：ｍ／ｚ ＝ ４３３．２， ［Ｍ＋１］ ^＋。

ステップ１１：中間体１－１Ａの製造
中間体１－１Ａ－１１（５．６９ｇ、１２．５９ｍｍｏｌ）をエタノール（６０．０ｍＬ）に溶解させ、次に、ジメチルアミン（３４．４ｇ、２５１．８ｍｍｏｌ）を加えた。反応系を２５℃下で３時間撹拌した。直接に減圧濃縮し、残留物を酢酸エチル（４０．０ｍＬ）及び１０％のグエン酸（４０．０ｍＬ）で抽出し、水相のｐＨ値を９に調節し、濾過し、酢酸エチル（４０．０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して中間体１－１Ａを得た。ＭＳ：ｍ／ｚ ＝ ２１１．２， ［Ｍ＋１］ ^＋。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ６．２２ （ｄ， Ｊ ＝ １０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．４０ （ｄ， Ｊ ＝ ３８．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．８９－３．０１ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４０ （ｄ， Ｊ ＝ １３．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．４９ （ｓ， ９Ｈ）。

ステップ１２：中間体１－３Ａ－２の製造
中間体１－３Ａ－１（４ｇ、１７．０２ｍｍｏｌ）をＡｃＯＨ（３０ｍＬ）に溶解させ、氷浴で０℃に冷却させ、次に、濃硫酸（１７．０３ｇ、１７０．２１ｍｍｏｌ）を加えた後、亜硝酸ナトリウム（１．７６ｇ、２５．５３ｍｍｏｌ）の水溶液（５ｍＬ）を滴加し、継続して０．２５時間撹拌し、その後、ヨウ化カリウム（４．２４ｇ、２５．５３ｍｍｏｌ）の水溶液（５ｍＬ）を滴加し、２５℃下に移して０．５時間反応させた。反応液に水（５０ｍＬ）を加え、濾過し、固体を飽和チオ硫酸ナトリウム溶液（２×４０ｍＬ）で洗浄し、水（４０ｍＬ）で洗浄し、固体をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶解させ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して中間体１－３Ａ－２を得た。

ステップ１３：中間体１－３Ａ－３の製造
中間体１－３Ａ－２（２．８５ｇ、８．２４ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）（３．１４ｇ、１６．４８ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４５ｍＬ）に溶解させ、次に、メチル２，２－ジフルオロ－２－（フルオロスルホニル）アセテート（６．３３ｇ、３２．９６ｍｍｏｌ）を加え、８０℃下で１時間反応させた。継続して０．７５時間反応させた。反応液を２５℃に冷却させ、濾過して不溶物を除去し、酢酸エチル（１００ｍＬ）で濯ぎ、水（３×２００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝３０／１～２０／１）により精製して中間体１－３Ａ－３を得た。

ステップ１４：中間体１－３Ａ－４の製造
中間体１－３Ａ－３（１．６６ｇ、５．７６ｍｍｏｌ）、鉄粉末（１．１３ｇ、２０．１７ｍｍｏｌ）、塩化アンモニウム（１．５４ｇ、２８．８２ｍｍｏｌ）をエタノール（２０ｍＬ）及び水（１０ｍＬ）に溶解させ、６０℃に昇温させて２．５時間反応させた。反応液に酢酸エチル（８０ｍＬ）を加えて希釈し、濾過して不溶物を除去し、水（２×５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して中間体１－３Ａ－４を得た。ＭＳ：ｍ／ｚ ＝２５７．９， ［Ｍ＋１］ ^＋。

ステップ１５：中間体１－３Ａの製造
中間体１－３Ａ－４（１．４ｇ、５．４３ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（２．０７ｇ、８．１４ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン錯体（４４３．１２ｍｇ、５４２．６１μｍｏｌ）、酢酸カリウム（１．６０ｇ、１６．２８ｍｍｏｌ）をジオキサン（３０ｍＬ）に溶解させ、窒素ガスの保護下で、８５℃下で１６時間反応させた。反応液を２５℃に冷却させ、濾過して不溶物を除去し、酢酸エチル（５０ｍＬ）で濯ぎ、濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝２０／１～１０／１）により精製して中間体１－３Ａを得た。ＭＳ： ｍ／ｚ ＝３０６．０， ［Ｍ＋１］ ^＋。

ステップ１６：中間体１－２の製造
中間体１－１（９００ｍｇ、３．５６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解させ、０℃に冷却させ、次に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．３８ｇ、１０．６９ｍｍｏｌ）及び１－１Ａ（７４９．６０ｍｇ、３．５６ｍｍｏｌ）を順次に加え、０℃下で１時間反応させた。直接に減圧濃縮して粗生成物１－２を得た。ＭＳ： ｍ／ｚ ＝ ４２６．０， ［Ｍ＋１］ ^＋。

ステップ１７：中間体１－３の製造
中間体１－２（２２０ｍｇ、５１６．１０μｍｏｌ）及び１－２Ａをアセトニトリル（１０ｍＬ）に溶解させ、次に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２００．１０ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ）を加え、反応系を８０℃に昇温させて１６時間撹拌した。反応液を減圧濃縮して大部分の溶媒を除去し、酢酸エチル（１０ｍＬ）を加え、水（５ｍＬ）で洗浄して抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝１／１～ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）により分離して中間体１－３を得た。ＭＳ： ｍ／ｚ ＝ ５４９．１， ［Ｍ＋１］ ^＋。

ステップ１８：中間体１－４の製造
中間体１－３Ａ（０．２ｇ、３６４．２９μｍｏｌ）、中間体１－３（２２２．２７ｍｇ、７２８．５８μｍｏｌ）、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン錯体（２９．７５ｍｇ、３６．４３μｍｏｌ）、炭酸セシウム（３５６．０８ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）をジオキサン（５ｍＬ）及び水（１．２５ｍＬ）に溶解させ、窒素ガスの保護下で、９０℃で１７時間反応させた。反応液を２５℃に冷却させ、濾過して不溶物を除去し、酢酸エチル（５０ｍＬ）で濯ぎ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝５０／１～２０／１）により分離して中間体１－４を得た。ＭＳ： ｍ／ｚ ＝ ６９２．２， ［Ｍ＋１］ ^＋。

ステップ１９：化合物１の製造
中間体１－４（９２ｍｇ、１３３．０１μｍｏｌ）をジクロロメタン（４ｍＬ）に溶解させ、２０℃下でトリフルオロ酢酸（１．５４ｇ、１３．５１ｍｍｏｌ、１ｍＬ）を加え、継続して０．５時間反応させた。反応液を濃縮して乾燥させ、ジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解させ、炭酸水素ナトリウム固体（０．５ｇ）を加えて十分に撹拌し、更に酢酸エチル（５ｍＬ）を加えて継続して５分間撹拌し、濾過して不溶物を除去し、濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｂｏｓｔｏｎ Ｇｒｅｅｎ ＯＤＳ １５０×３０ｍｍ×５μｍ；移動相：［水（ギ酸）－アセトニトリル］；アセトニトリル％：１０％～４０％、６ｍｉｎ）により分離して化合物１を得た。 ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ５９２．３［Ｍ＋１］^＋。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ_３ＯＤ） δ ９．０１ （ｓ， １Ｈ）， ６．５８ （ｄ， Ｊ ＝ １４ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．４１ （ｓ， １Ｈ）， ６．３４ （ｓ， ２Ｈ）， ５．５６ （ｄ， Ｊ ＝ ５１ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．７９ － ４．７５ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６２ － ４．６１ （ｍ， ２Ｈ）， ４．７２ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０３ － ３．８２ （ｍ， ５Ｈ）， ３．３１ － ３．３０ （ｍ， １Ｈ）， ２．５９ － ２．５４ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３８ － ２．２９ （ｍ， ４Ｈ）。

実施例２

ステップ１：中間体２－２の製造
中間体２－１（５０ｇ、４１８．０９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５００ｍＬ）に溶解させ、トリエチルアミン（８４．６１ｇ、８３６．１７ｍｍｏｌ）を加え、次に、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（１００．３７ｇ、４５９．９０ｍｍｏｌ）を加え、２５℃下で１６時間反応させた。反応液に１００ｍＬの水を加え、分離させ、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝１００／１～５０／１）により分離して中間体２－２を得た。ＭＳ： ｍ／ｚ ＝ ２０６．１， ［Ｍ＋Ｎａ］ ^＋。

ステップ２：中間体２－３の製造
中間体２－２（２５ｇ、１３６．４３ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフラン（３５０ｍＬ）に溶解させ、３，７－ジプロピル－３，７－ジアザビシクロ［３．３．１］ノナン（３７．３１ｇ、１７７．３６ｍｍｏｌ）を加え、－６５℃に冷却させ、更にｓｅｃ－ブチルリチウム（１．３Ｍ、１５７．４２ｍＬ）をゆっくりと滴加し、１時間反応させた後、クロロギ酸メチル（１５．７３ｇ、１６６．４４ｍｍｏｌ）を滴加し、－６５℃下で２時間反応させた。反応液に飽和塩化アンモニウム（２０ｍＬ）を滴加してクエンチングさせ、酢酸エチル（３００ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水（１５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝５０／１～２５／１）により分離して中間体２－３を得た。ＭＳ： ｍ／ｚ ＝ １８６．０ ［Ｍ－ｔＢｕ＋Ｈ］^＋。

ステップ３：中間体２－４Ａの製造
中間体２－３（１２ｇ、４９．７３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１２０ｍＬ）に溶解させ、更に２－クロロメチル－３－クロロプロペン（２４．８７ｇ、１９８．９４ｍｍｏｌ）を加え、－４０℃に冷却させ、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（１Ｍ、９９．４７ｍＬ）をゆっくりと滴加し、２０℃に徐々に昇温させ、２時間反応させた。反応液に飽和塩化アンモニウム（２０ｍＬ）を滴加してクエンチングさせ、酢酸エチル（１５０ｍＬ×２）で抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水（８０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝２０／１～１０／１）により分離して中間体２－４Ａを得た。ＴＬＣ薄層クロマトグラフィー（石油エーテル：アセトン＝５：１）により２回展開した後、２－４ＡのＲｆ値は０．５であり、その異性体のＲｆ値は０．５５であった。２－４ＡのＬＣＭＳ（クロマトグラフィーカラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ １２０ ＥＣ－Ｃ１８ ２．７ｕｍ ３．０×３０ｍｍ、移動相：Ａ：Ｈ_２Ｏ（０．０３７％のＦＡ）－Ｂ：ＡＣＮ（０．０１８７％のＦＡ）；Ｂ：５％～９５％）での保持時間は０．７７６ｍｉｎであり、その異性体の保持時間は０．８０１ｍｉｎであった。ＭＳ： ｍ／ｚ ＝ ２７４．０ ［Ｍ－ｔＢｕ＋Ｈ］^＋。

ステップ４：中間体２－５の製造
中間体２－４Ａ（３．６ｇ、１０．９２ｍｍｏｌ）を塩化水素／酢酸エチル（４Ｍ、２７．２９ｍＬ）に溶解させ、２０℃下で２時間反応させた。反応液を減圧濃縮して粗生成物中間体２－５を得、精製せずに次のステップに直接に投入した。ＭＳ： ｍ／ｚ ＝ ２３０．１， ［Ｍ＋Ｈ］ ^＋。

ステップ５：中間体２－６の製造
中間体２－５（２．９ｇ、１０．９０ｍｍｏｌ）をメタノール（１００ｍＬ）に溶解させ、更に炭酸カリウム（４．５２ｇ、３２．６９ｍｍｏｌ）を加え、２０℃下で２時間反応させた。反応液にジクロロメタン（８０ｍＬ）を加え、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝１０／１～５／１）により分離して中間体２－６を得た。ＭＳ： ｍ／ｚ ＝ １９４．１， ［Ｍ＋Ｈ］ ^＋。

ステップ６：中間体２－７の製造
中間体２－６（１．６ｇ、８．２８ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）に溶解させ、更にリチウムアルミニウム水素化物（６２８．５１ｍｇ、１６．５６ｍｍｏｌ）を加え、０℃下で２時間反応させた。反応液に酢酸エチル（１０ｍＬ）を滴加して希釈し、水（０．６３ｍＬ）を滴加し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して粗生成物中間体２－７を得、精製せずに次のステップに直接に投入した。ＭＳ： ｍ／ｚ ＝ １６６．１ ［Ｍ＋Ｈ］ ^＋。

ステップ７：中間体２－８の製造
中間体１－２（７００ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ）及び中間体２－７（４０７．００ｍｇ、２．４６ｍｍｏｌ）を無水トルエン（２０ｍＬ）に溶解させ、更にナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（４７３．４５ｍｇ、４．９３ｍｍｏｌ）を加え、０℃下で２時間反応させ、次に、２０℃下で２時間反応させた。反応液に酢酸エチル（５０ｍＬ）を加え、１０ｍＬの水を加えてクエンチングさせ、層を分離し、有機相を飽和食塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝５／１～２／１）により分離して中間体２－８を得た。ＭＳ： ｍ／ｚ ＝ ５５５．１， ［Ｍ＋ Ｈ］ ^＋。

ステップ８：中間体２－９Ａ及び２－９Ｂの製造
中間体２－８（０．１ｇ、１８０．１７μｍｏｌ、１ｅｑ）、中間体１－３Ａ（８２．４５ｍｇ、２７０．２６μｍｏｌ）をジオキサン（２ｍＬ）及び水（０．５ｍＬ）に溶解させ、更にメタンスルホナト（ジアダマンチル－ｎ－ブチルホスフィノ）－２’－アミノ－１，１’－ビフェニル－２－イル）パラジウム（ＩＩ）（１３．１２ｍｇ、１８．０２μｍｏｌ）、炭酸セシウム（１４６．７５ｍｇ、４５０．４２μｍｏｌ）を加え、９０℃下で１６時間反応させた。反応液に酢酸エチル（３０ｍＬ）を加えて希釈し、飽和食塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝１／５０～１／１００）に付けた後、ＳＦＣ（クロマトグラフィーカラム：ＲＥＧＩＳ（Ｓ，Ｓ）ＷＨＥＬＫ－Ｏ１（２５０ｍｍ×２５ｍｍ、１０μｍ）；移動相：Ａ：ＣＯ_２、Ｂ：［０．１％ＮＨ_３Ｈ_２Ｏ ＩＰＡ］；Ｂ％：４５％～４５％）により分離して中間体２－９Ａ及び２－９Ｂを得た。ここで、中間体２－９ＡはＳＦＣ（カラムクロマトグラフィー：（Ｓ，Ｓ）Ｗｈｅｌｋ－０１ １００×４．６ｍｍ Ｉ．Ｄ．，５．０μｍ、移動相：Ａ：超臨界ＣＯ_２、Ｂ：ＩＰＡ（０．０５％のＤＥＡ）、勾配：４０％Ｂ、流速：２．５ｍＬ／ｍｉｎ）における保持時間が３．２７６ｍｉｎであり、ｅｅ値が９８．３％であり、化合物２－９ＢはＳＦＣ（クロマトグラフィーカラム：（Ｓ，Ｓ）Ｗｈｅｌｋ－０１ １００×４．６ｍｍ Ｉ．Ｄ．，５．０μｍ、移動相：Ａ：超臨界ＣＯ_２、Ｂ：ＩＰＡ（０．０５％のＤＥＡ）、勾配：４０％Ｂ、流速：２．５ｍＬ／ｍｉｎ）における保持時間が３．８７９ｍｉｎであり、ｅｅ値が９６．４％であった。

ステップ９：化合物２Ａの製造
中間体２－９Ａ（３０ｍｇ、４３．００μｍｏｌ）をジクロロメタン（１．５ｍＬ）に溶解させ、更にトリフルオロ酢酸（１４７．０８ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ）を加え、２０℃下で２時間反応させた。反応液をジクロロメタン（２０ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム（１０ｍＬ）を加え、層を分離し、水相をジクロロメタン（１０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｏ－Ｗｅｌｃｈ Ｃ１８ １５０×３０ｍｍ×５μｍ；移動相：［Ｈ_２Ｏ（ＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１％～４１％、１０ｍｉｎ）により精製して化合物２Ａのギ酸塩を得た。 ＬＣＭＳ： ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ５９８．２ ［Ｍ＋Ｈ］^＋。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ_３ＯＤ） δ ９．０７ （ｓ， １Ｈ）， ８．５２ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ６．５９ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１４．０５ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．３８－６．４８ （ｍ， １Ｈ）， ６．３３ （ｓ， ２Ｈ）， ５．１０－５．２６ （ｍ， ２Ｈ）， ４．５９－４．７２ （ｍ， ３Ｈ）， ４．４９ （ｄ， Ｊ＝１１．０４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２７ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ４．０８ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１５．３１ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９４ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１１．０４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．６２ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１５．８１ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．５３ （ｄ， Ｊ＝１０．５４ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．００－３．１４ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７５ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１６．３１ Ｈｚ， １Ｈ）， １．８６－１．９８ （ｍ， １Ｈ）， １．７９ （ｔｄ， Ｊ＝３．６７， ６．９６ Ｈｚ， １Ｈ）， ０．６９－０．８５ （ｍ， ２Ｈ）。

ステップ１０：化合物２Ｂの製造
中間体２－９Ｂ（３１ｍｇ、４４．４３μｍｏｌ）をジクロロメタン（１．５ｍＬ）に溶解させ、更にトリフルオロ酢酸（４２．３１ｍｇ、３７１．０５μｍｏｌ）を加え、２０℃下で１時間反応させた。反応液をジクロロメタン（２０ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム（１０ｍＬ）を加え、層を分離し、水相をジクロロメタン（１０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｏ－Ｗｅｌｃｈ Ｃ１８ １５０×３０ｍｍ×５μｍ；移動相：［Ｈ_２Ｏ（ＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１％～４１％、１２ｍｉｎ）により精製して化合物２Ｂのギ酸塩を得た。ＬＣＭＳ： ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ５９８．２ ［Ｍ＋Ｈ］^＋。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ_３ＯＤ） δ ９．０６ （ｓ， １Ｈ）， ８．５２ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ６．５９ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１３．８０ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．４３ （ｓ， １Ｈ）， ６．３３ （ｓ， ２Ｈ）， ５．１６ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１０．２９ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．５８－４．７２ （ｍ， ３Ｈ）， ４．４８ （ｄ， Ｊ＝１１．２９ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２５ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ４．０７ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１５．５６ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９４ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１１．０４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．６１ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１５．８１ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．５１ （ｄ， Ｊ＝１０．５４ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．９９－３．１２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７４ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１６．０６ Ｈｚ， １Ｈ）， １．８８－１．９５ （ｍ， １Ｈ）， １．７２－１．８５ （ｍ， １Ｈ）， ０．６９－０．８１ （ｍ， ２Ｈ）。

実施例３

ステップ１：中間体３－１の製造
中間体１－１（２５ｇ、９９．０３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２００ｍＬ）に溶解させ、－３０℃に冷却させ、次に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（３８．４０ｇ、２９７．０８ｍｍｏｌ）及び１－１Ｂ（２１．０２ｇ、９９．０３ｍｍｏｌ）を順次に加え、－３０℃下で２時間反応させた。直接に減圧濃縮して粗生成物３－１を得た。ＭＳ： ｍ／ｚ ＝ ４２８．１ ［Ｍ＋１］ ^＋。

ステップ２：中間体３－２Ａの製造
中間体３－１（２３ｇ、５３．７０ｍｍｏｌ）及び中間体２－７（９．７６ｇ、５９．０７ｍｍｏｌ）を無水トルエン（３００ｍＬ）に溶解させ、０℃下でナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（１３．９３ｇ、１４５．００ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え、０℃下で０．５時間反応させ、更に２０℃下で０．５時間反応させた。反応液に２００ｍＬの酢酸エチルを加えて希釈し、飽和食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧濃縮して粗生成物３－２を得た。粗生成物をＳＦＣ（クロマトグラフィーカラム：ＤＡＩＣＥＬ ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ ＯＤ（２５０ｍｍ×５０ｍｍ、１０μｍ）；移動相：［Ａ（超臨界ＣＯ_２）、Ｂ（０．１％のアンモニウム水を含むエタノール）］；Ｂ：４０％）により精製して生成物３－２Ａ及び３－２Ｂを得た。３－２ＡはＳＦＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ２ １００ｍｍ×４．６ｍｍ、３μｍ）移動相：［Ａ（超臨界ＣＯ_２）、Ｂ（ＭｅＯＨ（０．０５％のＤＥＡ））］；Ｂ：４０％）の条件下で保持時間が４．９６４ｍｉｎであり、ｅｅ値が９５．７％であった。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤ_３ＯＤ） δ ８．７６ （ｓ， １Ｈ）， ４．９８ － ４．８７ （ｍ， ２Ｈ）， ４．５１ － ４．４８ （ｍ， ３Ｈ）， ４．３４ － ４．２９ （ｍ， １Ｈ）， ４．２７ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ４．２３ － ４．１８ （ｍ， １Ｈ）， ３．６１ － ３．５８ （ｍ， ３Ｈ）， ３．１２ （ｄ， Ｊ＝９．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．７８ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１６．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．７１ （ｄｄ， Ｊ＝４．０， ９．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．４５ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１６．８ Ｈｚ， １Ｈ）， １．８３ － １．７２ （ｍ， ２Ｈ）， １．７５ － １．６２ （ｍ， ３Ｈ）， １．５５ － １．５１ （ｍ， １Ｈ）， １．４２ （ｓ， ９Ｈ）， ０．６０ （ｑ， Ｊ＝４．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ０．４７ －０．４２ （ｍ， １Ｈ）。ＭＳ： ｍ／ｚ ＝ ５５７．２ ［Ｍ＋１］ ^＋。３－２Ｂは同じ条件下で保持時間が８．３８２ｍｉｎであり、ｅｅ値が９６．５％であった。

ステップ３：中間体３－４の合成
原料３－３（２ｇ、５．５８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４０ｍＬ）に溶解させ、氷浴下で０～１０℃でＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（４．３３ｇ、３３．４７ｍｍｏｌ）を加え、次に、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（６．３０ｇ、２２．３１ｍｍｏｌ）を滴加し、継続して１．５時間反応させた。反応液に水（２０ｍＬ）を加えて十分に撹拌し、水相を分離し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（移動相：石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１～２：１）により分離して中間体３－４を得た。

ステップ４：中間体３－５の合成
中間体３－４（３ｇ、４．８２ｍｍｏｌ）、ベンゾフェノンイミン（１．７５ｇ、９．６４ｍｍｏｌ）、４，５－ビス（ジフェニルホスフィノ）－９，９－ジメチルキサンテン（５５７．５７ｍｇ、９６３．６３μｍｏｌ）、炭酸セシウム（４．７１ｇ、１４．４５ｍｍｏｌ）をトルエン（６０ｍＬ）に溶解させ、次に、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（４４１．２１ｍｇ、４８１．８２μｍｏｌ）を加え、窒素ガスの保護下で、１００℃下で２時間反応させた。反応液を２５℃に冷却させ、濾過して不溶物を除去し、濃縮して大部分のトルエンを除去し、酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈し、水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（移動相：石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１～１：１）により分離して中間体３－５を得た。

ステップ５：中間体３－６の合成
中間体３－５（３．１ｇ、４．７４ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（２．４１ｇ、９．４８ｍｍｏｌ）、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（６９３．８８ｍｇ、９４８．３０μｍｏｌ）、酢酸カリウム（１．４０ｇ、１４．２２ｍｍｏｌ）をトルエン（６０ｍＬ）に溶解させ、窒素ガスの保護下で、１１０℃下で１８時間反応させた。反応液を２５℃に冷却させ、濾過して不溶物を除去し、酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出し、水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（移動相：石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１～２：１）により分離して中間体３－６を得た。ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ４６８．２ ［Ｍ＋Ｈ_２Ｏ－Ｐｈ_２ＣＯ＋１］^＋ 。

ステップ６：中間体３－７の合成
中間体３－２Ａ（１１．３ｇ、２０．２９ｍｍｏｌ）を水（６０ｍＬ）及び無水ジオキサン（２４０ｍＬ）に加え、更にメタンスルホナト（ジアダマンチル－ｎ－ブチルホスフィノ）－２’－アミノ－１，１’－ビフェニル－２－イル）パラジウム（ＩＩ）（１．４８ｇ、２．０３ｍｍｏｌ）及び中間体３－６（１５．３８ｇ、２４．３４ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（１３．２２ｇ、４０．５７ｍｍｏｌ）を加え、８７℃下で２時間反応させた。反応液に酢酸エチル（２００ｍＬ）を加えて希釈し、飽和食塩水（４０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（移動相：ジクロロメタン：メタノール＝５０：１～２０：１）により分離して中間体３－７を得た。ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ８６２．４ ［Ｍ＋Ｈ_２Ｏ－Ｐｈ_２ＣＯ＋１］^＋。

ステップ７：中間体３－８の合成
中間体３－７（８．４ｇ、８．１８ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（３０ｍＬ）及び水（１０ｍＬ）に加え、更に塩酸／酢酸エチル（４Ｍ、６２．３７ｍＬ）を加え、２０℃下で２時間反応させた。反応液に水（３０ｍＬ）を加え、有機相を水（３０ｍＬ×２）で洗浄し、水相を合わせ、飽和炭酸水素ナトリウムでｐＨを７～８に調節し、酢酸エチル（８０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧濃縮して粗生成物３－８を得、直接に次のステップに使用した。ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ７６２．３ ［Ｍ＋１］^＋。

ステップ８：化合物３の合成
中間体３－８（６．２ｇ、８．１４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（７０ｍＬ）に加え、更にテトラメチルアンモニウムフルオリド（２．２９ｇ、１３．８３ｍｍｏｌ）を加え、６０℃下で１時間反応させた。反応液に１００ｍＬの酢酸エチルを加えて希釈し、３０ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（移動相：ジクロロメタン（１０％アンモニアガスのメタノール溶液）：メタノール＝２０：１～１０：１）により精製して化合物３を得た。ＳＦＣ分析（クロマトグラフィーカラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪ－３ １００×４．６ｍｍ、３μｍ；移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（エタノール、０．０５％のジエチルアミン）；勾配：Ｂ％：４０％～４０％）により保持時間が３．７６１ｍｉｎであり、ｅｅ値が９７．３４％であった。キラルＨＰＬＣ分析（クロマトグラフィーカラム：ＦＬＭ Ｃｈｉｒａｌ ＮＱ， １５０×４．６ ｍｍ， ３μｍ、移動相：Ａ：（ｎ－ヘキサン）及びＢ：（エタノール、０．２％ジエチルアミンを含む、ｖ／ｖ）、勾配：Ｂ％：アイソクラティック３０％、溶出時間：６０分、カラム温度：３５℃）は、保持時間は１７．３８７分であることを示した。ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ６０６．３ ［Ｍ＋１］^＋，^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ_３ＯＤ） δ ＝ ９．０１ （ｓ， １Ｈ）， ７．７６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ５．６， ９．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２８ － ７．１９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１５ （ｄ， Ｊ＝ ２．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．０８ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ５．０１ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ４．７０ － ４．５４ （ｍ， ３Ｈ）， ４．４３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ７．３， １０．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３２ （ｄｄ， Ｊ ＝ ６．３，１０．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７８ － ３．６５ （ｍ， ５Ｈ）， ３．３９ － ３．３４ （ｍ， １Ｈ）， ３．２３ （ｄ， Ｊ ＝ ９．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．９３ （ｂｒ ｄ， Ｊ ＝ １７．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．８２（ｄｄ， Ｊ ＝ ４．０， ９．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．５６ （ｂｒ ｄ， Ｊ ＝ １７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， １．９１ － １．７６ （ｍ， ５Ｈ）， １．６４ （ｔｄ， Ｊ ＝ ３．６， ６．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ０．７２ （ｑ， Ｊ ＝４．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ０．６１ － ０．５３ （ｍ， １Ｈ）。

実施例４

ステップ１：中間体４－１の合成
中間体３－２Ａ（１５０ｍｇ、２６９．２７μｍｏｌ）、中間体１－３Ａ（８６．５８ｍｇ、２６９．２７μｍｏｌ）、メタンスルホナト（ジアダマンチル－ｎ－ブチルホスフィノ）－２’－アミノ－１，１’－ビフェニル－２－イル）パラジウム（ＩＩ）（９８．０５ｍｇ、１３４．６４μｍｏｌ）、炭酸セシウム（２６３．２０ｍｇ、８０７．８２μｍｏｌ）をジオキサン（８ｍＬ）に溶解させ、窒素ガスで３回換気し、次に、水（０．５ｍＬ）を加え、窒素ガスの保護下で、８０℃で６時間反応させた。濾過して不溶物を除去し、水（１０ｍＬ）で洗浄し、酢酸エチル（３０ｍＬ×２）で抽出し、飽和食塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮し、有機溶媒を除去して粗生成物を得、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（移動相：ジクロロメタン：メタノール＝１００：１～５０：１）により精製して中間体４－１を得た。ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ７１６．３ ［Ｍ＋１］^＋。

ステップ２：化合物４の合成
中間体４－１（２２ｍｇ、３０．１μｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解させ、次に、トリフルオロ酢酸（１．５ｍＬ）を加え、２５℃下で３時間反応させた。反応系に飽和炭酸水素ナトリウム溶液を加えてｐＨを８に調節した後、ジクロロメタン（５ｍＬ×２）を加えて抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮し、有機溶媒を除去して粗生成物を得た。粗生成物をｐｒｅｐ－ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｏ－Ｗｅｌｃｈ Ｃ１８ １５０×３０ｍｍ×５μｍ；移動相：［Ａ：水（０．５％のギ酸）－Ｂ：アセトニトリル］；Ｂ％：８％～４８％、８ｍｉｎ）により分離して化合物４のギ酸塩を得た。ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ６１６．２ ［Ｍ＋１］^＋。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ_３ＯＤ） δ ＝ ９．０６ （ｓ， １Ｈ）， ８．５１ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ６．９４ （ｓ， １Ｈ）， ６．５２ （ｓ， １Ｈ）， ５．１６ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１０．７９ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．７１－４．８０ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６７ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１０．７９ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５３ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝１１．０４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０２－４．１０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．８４－３．９０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５９－３．６３ （ｍ， １Ｈ）， ３．５０－３．５３ （ｍ， １Ｈ）， ３．０３－３．０９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７３－２．７８ （ｍ， １Ｈ）， １．９６－２．０９ （ｍ， ４Ｈ）， １．９０－１．９３ （ｍ， １Ｈ）， １．７５－１．８１ （ｍ， １Ｈ）， ０．８７－０．９７ （ｍ， １Ｈ）， ０．６８－０．８３ （ｍ， ２Ｈ）。

実施例５

ステップ１：化合物５－２の合成
窒素ガスの保護下で、化合物５－１（２１ｇ、１４３．３０ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（２１０ｍＬ）に溶解させ、Ｎ－ヨードスクシンイミド（３８．６９ｇ、１７１．９６ｍｍｏｌ）及びｐ－トルエンスルホン酸一水和物（１．３６ｇ、７．１６ｍｍｏｌ）を加え、７５℃で５時間反応させた。水（１５０ｍＬ）をゆっくりと加え、水相を酢酸エチル（１５０ｍＬ×３）で抽出し、分離した。有機相を合わせ、飽和亜硫酸ナトリウム溶液（１５ｍＬ）及び飽和食塩水（１００ｍＬ）で順次に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物５－２を得た。ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ２７２．９ ［Ｍ＋１］^＋。

ステップ２：化合物５－３の合成
化合物５－２（３９．３ｇ）をエタノール（４３５ｍＬ）に溶解させ、トリエチルアミン（４３．７９ｇ、４３２．７５ｍｍｏｌ）及びビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（１０．１２ｇ、１４．４２ｍｍｏｌ）を加え、ＣＯで３回置換し、次に、ＣＯの雰囲気（５０Ｐｓｉ）で、８０℃で４７時間反応させた。減圧濃縮し、酢酸エチル（３００ｍＬ）及び０．３Ｍの塩酸（３００ｍＬ）を加え、固体が析出し、濾過してケーキを得た。濾液を分離し、水相を酢酸エチル（２００ｍＬ×２）で抽出し、分離した。有機相を合わせ、飽和食塩水（２００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、ケーキを有機相と合わせて減圧濃縮し、粗生成物５－３を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ ８．５４ （ｓ， １Ｈ）， ４．３９ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．４１ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ３Ｈ）。

ステップ３：化合物５－４の合成
窒素ガスの保護下で、化合物５－３（４１．３ｇ、１８８．９２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２４０ｍＬ）に溶解させ、メタノール（８０ｍＬ）及び水（８０ｍＬ）を加え、水酸化リチウム一水和物（２３．７８ｇ、５６６．７６ｍｍｏｌ）をバッチで加え、次に、２０℃で５時間反応させた。反応系を減圧濃縮し、反応系に水（１００ｍＬ）を加え、水相を４Ｍの塩酸でｐＨを２に調節し、固体が析出し、濾過した。ケーキをエタノール（２００ｍＬ）に溶解させ、２０℃で１６時間撹拌し、濾過し、ケーキを減圧乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物を石油エーテル（２０ｍＬ）及び酢酸エチル（３０ｍＬ）に溶解させ、２０℃で１時間撹拌し、濾過し、ケーキを減圧乾燥させて化合物５－４を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １３．９５ － １３．０８ （ｍ， １Ｈ）， ８．３５ （ｓ， １Ｈ）， ７．６２ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）。

ステップ４：化合物５－５の合成
窒素ガスの保護下で、化合物５－４（１７．８ｇ、９３．４１ｍｍｏｌ）をオキシ塩化リン（２３４．２５ｇ、１．５３ｍｏｌ）に溶解させ、次に、９５℃で３時間反応させた。反応系を減圧濃縮し、テトラヒドロフラン（３６０ｍＬ）を加えた後、２０℃でチオシアン酸アンモニウム（２１．３３ｇ、２８０．２３ｍｍｏｌ）をバッチで加え、次に、４０℃で１６時間反応させた。反応系に水（３００ｍＬ）を加え、水相を酢酸エチル（３００ｍＬ×３）で抽出し、分離した。有機相を合わせ、飽和食塩水（３００ｍＬ）を使用して洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物に酢酸エチル（４０ｍＬ）及び石油エーテル（２０ｍＬ）を加え、２０℃で０．５時間撹拌し、濾過し、ケーキを減圧乾燥させて、化合物５－５を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １３．３３ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， １２．９１ （ｓ， １Ｈ）， ８．６４ （ｓ， １Ｈ）。

ステップ５：化合物５－６の合成
窒素ガスの保護下で、化合物５－５（８．５５ｇ、３６．９１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１４０ｍＬ）に溶解させ、２０℃でナトリウムメトキシド（２．０９ｇ、３８．７６ｍｍｏｌ）を加え、次に、２０℃でヨードメタン（４．７２ｇ、３３．２２ｍｍｏｌ）をゆっくりと滴加した後、２０℃で５時間反応させた。反応系に氷水（３００ｍＬ）を加え、固体が析出し、濾過し、ケーキを氷水（１００ｍＬ）で洗浄し、ケーキを減圧乾燥させて化合物５－６を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １３．２７ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ８．８１ （ｓ， １Ｈ）， ２．６１ （ｓ， ３Ｈ）。

ステップ６：化合物５－７の合成
窒素ガスの保護下で、化合物５－６（３．５ｇ、１４．２５ｍｍｏｌ）及び化合物５－６Ａ（３．９８ｇ、１４．６７ｍｍｏｌ）をジオキサン（７０ｍＬ）、水（７ｍＬ）及びエタノール（１４ｍＬ）に溶解させ、リン酸カリウム（９．０７ｇ、４２．７４ｍｍｏｌ）及びクロロ（２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，４’，６’－トリイソプロピル－１，１’－ビフェニル）［２－（２’－アミノ－１，１’－ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）（１．６８ｇ、２．１４ｍｍｏｌ）を加え、次に、１０５℃で１．５時間反応させた。反応系に水（２００ｍＬ）を加え、水相を酢酸エチル（２００ｍＬ×２）で抽出し、分離した。水相に酢酸エチル（２００ｍＬ）を加えて濁らせ、珪藻土で濾過し、濾液を分離した。水相を酢酸エチル（２００ｍＬ×２）で抽出し、分離した。すべての有機相を合わせ、有機相を飽和食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（展開剤：石油エーテル：酢酸エチル＝２０：１～１：５、ジクロロメタン：メタノール＝１０：１）により分離して、化合物５－７を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ １３．１９ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ９．０３ （ｓ， １Ｈ）， ６．９２ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２．６， ７．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．７０ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２．７， ４．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．７１ （ｓ， ２Ｈ）， ２．６２ （ｓ， ３Ｈ）。

ステップ７：化合物５－８の合成
窒素ガスの保護下で、化合物５－７（２．１ｇ、５．９２ｍｍｏｌ）をエタノール（６３ｍＬ）に溶解させ、０℃で硫酸銀（２．２１ｇ、７．１０ｍｍｏｌ）及びヨード（ｉｏｄｉｎ）（１．５８ｇ、６．２２ｍｍｏｌ）を加え、次に、１０℃にゆっくりと昇温させ、２時間反応させた。反応系に飽和亜硫酸ナトリウム溶液（７０ｍＬ）及び酢酸エチル（１００ｍＬ）を加え、濾過し、分離した。水相を酢酸エチル（１００ｍＬ×３）で抽出し、分離した。有機相を合わせ、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（展開剤：石油エーテル：酢酸エチル＝２０：１～１：５）により分離して化合物５－８を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ １０．４７ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ９．３４ （ｓ， １Ｈ）， ７．１０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．７８ （ｓ， ３Ｈ）。

ステップ８：化合物５－９の合成
氷水浴で、０℃の窒素ガスの保護下で、化合物５－８（０．３３ｇ、６８６．５６μｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）溶液に水素ナトリウム（９６．１１ｍｇ、２．４０ｍｍｏｌ）を加え、３０分間撹拌した後、４－メトキシベンジルクロリド（２３６．５５ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）を滴加し、得られた混合物を２５℃に自然に昇温させて１４時間撹拌した。反応液に２０ｍＬの飽和塩化アンモニウム水溶液及び酢酸エチル（２×２０ｍＬ）を加えて１０分間撹拌し、水相を除去し、有機相を減圧濃縮して、粗生成物化合物５－９を得た。

ステップ９：化合物５－１０の合成
窒素ガスの保護下で、化合物５－９（０．１１ｇ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（５９．１６ｍｇ、４５７．７３μｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２．７ｍＬ）に溶解させ、１０℃で１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリ（１－ピロリジニル）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（９５．２８ｍｇ、１８３．０９μｍｏｌ）を加え、１０℃で１時間反応させた。次に、化合物１－１Ｂ（３８．８７ｍｇ、１８３．０９μｍｏｌ）を加え、１０℃で１７時間反応させた。反応系に水（１０ｍＬ）を加え、分離した。水相をジクロロメタン（１０ｍＬ×３）で抽出し、分離させ、有機相を合わせ、飽和食塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（展開剤：酢酸エチル／石油エーテル＝４．０％～２０．０％）により分離して化合物５－１０を得た。ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ９１５．０ ［Ｍ＋１］^＋。

ステップ１０：化合物５－１１の合成
窒素ガスの保護下で、化合物５－１０（０．１５ｇ、１６３．８９μｍｏｌ）及びヨウ化銅（Ｉ）（１５６．０７ｍｇ、８１９．４７μｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３．７５ｍＬ）に溶解させ、化合物５－１０Ａ（３１４．８６ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で２時間反応させた。水（１０ｍＬ）及び酢酸エチル（２０ｍＬ）をゆっくりと加え、固体を析出し、濾過した。濾液を取って分離させ、水相を酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出し、分離した。有機相を合わせ、飽和食塩水（５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（展開剤：酢酸エチル／石油エーテル＝４．０％～２０．０％）により分離して化合物５－１１を得た。ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ８５７．１ ［Ｍ＋１］^＋。

ステップ１１：化合物５－１２の合成
窒素ガスの保護下で、化合物５－１１（０．０６ｇ、６９．９８μｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１．２ｍＬ）及び水（０．４ｍＬ）に溶解させ、０℃でペルオキソ一硫酸水素カリウム（８２．３８ｍｇ、４８９．８９μｍｏｌ）を加え、１０℃にゆっくりと昇温させて４時間反応させた。ペルオキソ一硫酸水素カリウム（３５．３１ｍｇ、２０９．９５μｍｏｌ）を追加し、１０℃で２時間反応させた。飽和亜硫酸ナトリウム溶液（５ｍＬ）をゆっくりと加え、水相を酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出し、分離した。有機相を合わせ、飽和食塩水（５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して、化合物５－１２を得た。ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ８８９．２ ［Ｍ＋１］^＋；ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ８７３．２ ［Ｍ＋１］^＋。

ステップ１２：化合物５－１３の合成
窒素ガスの保護下で、化合物５－１２（０．０５ｇ、５６．２２μｍｏｌ）及び化合物２－７（１３．９３ｍｇ、８４．３３μｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１．５ｍＬ）に溶解させ、０℃でナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（１０．８１ｍｇ、１１２．４４μｍｏｌ）を加え、１０℃にゆっくりと昇温させて３時間反応させた。反応系に水（５ｍＬ）及び酢酸エチル（５ｍＬ）を加え、濾過し、濾液を分離した。水相を酢酸エチル（５ｍＬ×３）で抽出し、分離した。有機相を合わせ、飽和食塩水（５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して化合物５－１３を得た。ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ９７４．３ ［Ｍ＋１］^＋。

ステップ１３：化合物５の合成
窒素ガスの保護下で、化合物５－１３（０．１ｇ、１０２．６２μｍｏｌ）をジクロロメタン（２．５ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（４６８．０４ｍｇ、４．１０ｍｍｏｌ）を加え、１０℃で６時間反応させた。反応系を減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を２回の分取ＨＰＬＣにより分離して化合物５を得た。ＨＰＬＣの製造方法１：クロマトグラフィーカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ７５×３０ｍｍ×３μｍ；移動相Ａ：水（０．０４％の塩酸）、移動相Ｂ：アセトニトリル；実行勾配：Ｂ％：１％～４３％、８ｍｉｎ実行した。ＨＰＬＣの製造方法２：クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ １００×３０ｍｍ×１０μｍ；移動相Ａ：水（１０ｍＭの炭酸水素アンモニウム）、移動相Ｂ：アセトニトリル；実行勾配：Ｂ％：３０％～６０％、８ｍｉｎ実行した。ＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ６３４．２ ［Ｍ＋１］^＋。

実施例６

ステップ１：
窒素ガスの保護下で、中間体Ｉｎｔ－３Ａ（０．２ｇ、３２３．３６μｍｏｌ）及びＩｎｔ－４（１８１．６７ｍｇ、３２３．３６μｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（８ｍＬ）及び水（２ｍＬ）に溶解させ、リン酸カリウム（１３７．２８ｍｇ、６４６．７１μｍｏｌ）及びクロロ（２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，６’－ジメトキシ－１，１’－ビフェニル）［２－（２’－アミノ－１，１’－ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）（２３．３０ｍｇ、３２．３４μｍｏｌ）を加え、次に、５０℃で２時間反応させた。反応系に水（５ｍＬ）を加え、水相を酢酸エチル（８ｍＬ×３）で抽出し、分離した。有機相を飽和食塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ １００×４０ｍｍ×５μｍ；移動相：Ａ（アセトニトリル）及びＢ（水、０．０４％の塩酸を含む）；勾配：Ｂ％：５０％～８０％、８ｍｉｎ）により分離・精製して化合物６－１Ａを得た。ＭＳ ｍ／ｚ：９７３．１［Ｍ＋１］^＋。

ステップ１を参照し、中間体Ｉｎｔ－３Ｂを原料として使用し、化合物６－１Ｂを得た。ＭＳ ｍ／ｚ：９７３．１［Ｍ＋１］^＋。

ステップ２：
化合物６－１Ａ（０．２ｇ、２０５．４５μｍｏｌ）を分取ＳＦＣ（クロマトグラフィーカラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＩＨ、２５０×３０ｍｍ、１０μｍ；移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（イソプロパノール、０．１％のアンモニア水を含む）；勾配：Ｂ％：６０％～６０％、１０ｍｉｎ）により分離・精製してそれぞれ化合物６－１Ａ１及び６－１Ａ２を得た。

化合物６－１Ａ１：分析ＳＦＣ（カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＩＨ－３，５０×４．６ｍｍ、３μｍ；移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（イソプロパノール、０．１％のイソプロピルアミンを含む）；勾配：Ｂ％：５％～５％、３ｍｉｎ）の条件下で、保持時間は１．４６３ｍｉｎであり、ｅｅ値は９７．４９％であった。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝７．３０（ｓ，１Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，４Ｈ），６．９４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，４Ｈ），６．５２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．２５（ｓ，２Ｈ），５．０４（ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．６９（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ），４．５５（ｓ，４Ｈ），４．５２－４．４４（ｍ，２Ｈ），４．４４－４．３２（ｍ，３Ｈ），４．１２－４．０２（ｍ，１Ｈ），３．８１（ｓ，６Ｈ），３．６３（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．５６－３．４３（ｍ，１Ｈ），３．３６（ｄ，Ｊ＝１７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．１９－３．０８（ｍ，１Ｈ），２．７７（ｄ，Ｊ＝１７．６Ｈｚ，１Ｈ），２．０７－１．８７（ｍ，４Ｈ），１．８５－１．７７（ｍ，２Ｈ），１．５１（ｓ，９Ｈ），１．２６（ｓ，１Ｈ），０．９１－０．８４（ｍ，１Ｈ）．ＭＳ ｍ／ｚ：９７３．１［Ｍ＋１］^＋。

化合物６－１Ａ２：分析ＳＦＣ（カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＩＨ－３，５０×４．６ｍｍ、３μｍ；移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（イソプロパノール、０．１％のイソプロピルアミンを含む）；勾配：Ｂ％：５％～５％、３ｍｉｎ）の条件下で、保持時間は１．９８３ｍｉｎであり、ｅｅ値は９５．６６％であった。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝７．３０（ｓ，１Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，４Ｈ），６．９４（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，４Ｈ），６．５１（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），５．２２（ｓ，２Ｈ），５．０６－４．８３（ｍ，１Ｈ），４．７７－４．６２（ｍ，１Ｈ），４．５４（ｓ，４Ｈ），４．４９－４．２４（ｍ，５Ｈ），４．１３－３．９４（ｍ，１Ｈ），３．８１（ｓ，６Ｈ），３．７０－３．４６（ｍ，３Ｈ），３．３９－３．２３（ｍ，１Ｈ），３．１８－３．０２（ｍ，１Ｈ），２．８０－２．６４（ｍ，１Ｈ），２．０９－１．８９（ｍ，４Ｈ），１．８５－１．７６（ｍ，２Ｈ），１．５２（ｓ，９Ｈ），１．３２－１．２５（ｍ，１Ｈ），０．９０－０．７５（ｍ，１Ｈ）．ＭＳ ｍ／ｚ：９７３．１［Ｍ＋１］^＋。

ステップ３：
化合物６－１Ｂ（０．２ｇ、２０５．４５μｍｏｌ）を分取ＳＦＣ（カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＩＨ、２５０×３０ｍｍ、１０μｍ；移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（メタノール、０．１％のアンモニア水を含む）；勾配：Ｂ％：４０％～４０％、１１ｍｉｎ）により分離・精製してそれぞれ化合物６－１Ｂ１及び化合物６－１Ｂ２を得た。

化合物６－１Ｂ１：分析ＳＦＣ（カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＩＨ－３、５０×４．６ｍｍ、３μｍ；移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（イソプロパノール、０．１％のイソプロピルアミンを含む）；勾配：Ｂ％：５％～５％、３ｍｉｎ）の条件下で、保持時間は１．３３０ｍｉｎであり、ｅｅ値は９４．４５％であった。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝７．２６（ｓ，１Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，４Ｈ），６．９４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，４Ｈ），６．５１（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），５．０１（ｓ，１Ｈ），４．９３（ｓ，１Ｈ），４．５４（ｓ，４Ｈ），４．４２－４．１６（ｍ，６Ｈ），３．８１（ｓ，６Ｈ），３．６５－３．５０（ｍ，３Ｈ），３．３３－３．１９（ｍ，２Ｈ），２．９４（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），２．７５（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），２．４６（ｄｄ，Ｊ＝１５．６，２．０Ｈｚ，１Ｈ），２．００－１．９２（ｍ，２Ｈ），１．９２－１．７２（ｍ，４Ｈ），１．５２（ｓ，９Ｈ），０．７８－０．６９（ｍ，１Ｈ），０．５４－０．４２（ｍ，１Ｈ）．ＭＳ ｍ／ｚ：９７３．１［Ｍ＋１］^＋。

化合物６－１Ｂ２：分析ＳＦＣ（カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＩＨ－３，５０×４．６ｍｍ、３μｍ；移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（イソプロパノール、０．１％のイソプロピルアミンを含む）；勾配：Ｂ％：５％～５％、３ｍｉｎ）の条件下で、保持時間は１．４９５ｍｉｎであり、ｅｅ値は９８．０１％であった。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝７．２５（ｓ，１Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，４Ｈ），６．９３（ｓ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，４Ｈ），６．５１（ｓ，１Ｈ），５．０１（ｓ，１Ｈ），４．９２（ｓ，１Ｈ），４．５３（ｓ，４Ｈ），４．３９－４．２４（ｍ，５Ｈ），４．１７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｓ，６Ｈ），３．６４－３．４９（ｍ，３Ｈ），３．３３－３．１９（ｍ，２Ｈ），２．９５（ｄ，Ｊ＝１８．８Ｈｚ，１Ｈ），２．７５（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），２．４６（ｄ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ，１Ｈ），１．９９－１．８９（ｍ，２Ｈ），１．８８－１．７２（ｍ，４Ｈ），１．５２（ｓ，９Ｈ），０．７４（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），０．５３－０．４３（ｍ，１Ｈ）．ＭＳ ｍ／ｚ：９７３．１［Ｍ＋１］^＋。

ステップ４：
化合物６Ａ１：
窒素ガスの保護下で、化合物６－１Ａ１（０．０７ｇ、７１．９１μｍｏｌ）をジクロロメタン（３．５ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（１．０７ｇ、９．４２ｍｍｏｌ）を加え、次に、２０℃で３時間反応させた。減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ×１０μｍ；移動相：Ａ（アセトニトリル）及びＢ（水、１０ｍＭの炭酸水素アンモニウムを含む）；勾配：Ｂ％：３５％～７０％）により分離・精製して化合物６Ａ１を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝７．３１（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｓ，１Ｈ），６．４２（ｓ，１Ｈ），５．０３（ｓ，１Ｈ），４．９４（ｓ，１Ｈ），４．４４－４．２６（ｍ，３Ｈ），４．２６－４．１１（ｍ，３Ｈ），３．６６（ｓ，２Ｈ），３．５３（ｔ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，２Ｈ），３．３７－３．２３（ｍ，２Ｈ），２．９８（ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１Ｈ），２．７７（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．８Ｈｚ，１Ｈ），２．４７（ｄ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ，１Ｈ），２．２３－２．０４（ｍ，２Ｈ），１．９１－１．８１（ｍ，４Ｈ），１．５６（ｓ，１Ｈ），１．２８（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ），０．８９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），０．５７－０．４４（ｍ，１Ｈ）．ＭＳ ｍ／ｚ：６３３．１［Ｍ＋１］^＋。

化合物６Ａ２：
窒素ガスの保護下で、化合物６－１Ａ２（０．０７ｇ、７１．９１μｍｏｌ）をジクロロメタン（３．５ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（１．０７ｇ、９．４２ｍｍｏｌ）を加え、次に、２０℃で３時間反応させた。減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ×１０μｍ；移動相：Ａ（アセトニトリル）及びＢ（水、１０ｍＭの炭酸水素アンモニウムを含む）；勾配：Ｂ％：３５％～７０％）により分離・精製して化合物６Ａ２を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３ ）δ＝７．３０（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｓ，１Ｈ），６．４２（ｓ，１Ｈ），５．０２（ｓ，１Ｈ），４．９３（ｓ，１Ｈ），４．４２（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３６－４．２６（ｍ，２Ｈ），４．２１（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，３Ｈ），３．６５（ｓ，２Ｈ），３．６１－３．５４（ｍ，１Ｈ），３．４７（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．３５－３．２３（ｍ，２Ｈ），２．９５（ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１Ｈ），２．８４－２．７２（ｍ，１Ｈ），２．４６（ｄ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ，１Ｈ），２．１１（ｂｒ ｓ，２Ｈ），１．９２－１．８０（ｍ，４Ｈ），１．６３－１．５１（ｍ，１Ｈ），１．４０－１．１９（ｍ，１Ｈ），０．８５－０．７０（ｍ，１Ｈ），０．６０－０．４２（ｍ，１Ｈ）．ＭＳ ｍ／ｚ：６３３．２［Ｍ＋１］^＋。

ステップ５：
化合物６Ｂ１：
窒素ガスの保護下で、化合物６－１Ｂ１（０．０６ｇ、６１．６４μｍｏｌ）をジクロロメタン（３ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（９２１．００ｍｇ、８．０８ｍｍｏｌ）を加え、次に、２０℃で２時間反応させた。減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｐｒｅｐ ＯＢＤ Ｃ１８ １５０×４０ｍｍ×１０μｍ；移動相：Ａ（アセトニトリル）及びＢ（水、０．０５％のアンモニア水＋１０ｍＭの炭酸水素アンモニウムを含む）；勾配：Ｂ％：３０％～７０％）により分離・精製して化合物６Ｂ１を得た。^１ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３ ）δ＝７．３１（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｓ，１Ｈ），６．４２（ｓ，１Ｈ），５．０１（ｓ，１Ｈ），４．９２（ｓ，１Ｈ），４．４２（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，１Ｈ），４．３３－４．２４（ｍ，２Ｈ），４．２２－４．１７（ｍ，１Ｈ），４．１４（ｓ，２Ｈ），３．６３（ｓ，２Ｈ），３．５８（ｓ，１Ｈ），３．５４（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．４５（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．３２－３．２１（ｍ，２Ｈ），２．９５（ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１Ｈ），２．７５（ｄｄ，Ｊ＝８．８，３．６Ｈｚ，１Ｈ），２．４６（ｄ，Ｊ＝１７．２Ｈｚ，１Ｈ），１．９２－１．８６（ｍ，２Ｈ），１．８５－１．７８（ｍ，３Ｈ），１．５８－１．５２（ｍ，１Ｈ），１．３５－１．２０（ｍ，１Ｈ），０．７４（ｑ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），０．５３－０．４４（ｍ，１Ｈ）．ＭＳ ｍ／ｚ：６３３．２［Ｍ＋１］^＋。

化合物６Ｂ２：
窒素ガスの保護下で、化合物６－１Ｂ２（０．０６ｇ、６１．６４μｍｏｌ）をジクロロメタン（３ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（９２１．００ｍｇ、８．０８ｍｍｏｌ）を加え、次に、２０℃で２時間反応させた。減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｐｒｅｐ ＯＢＤ Ｃ１８ １５０×４０ｍｍ×１０μｍ；移動相：Ａ（アセトニトリル）及びＢ（水、０．０５％のアンモニア水＋１０ｍＭの炭酸水素アンモニウム）；勾配：Ｂ％：２５％～６５％）により分離・精製して化合物６Ｂ２を得た。^１ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３ ）δ＝７．３５－７．２７（ｍ，１Ｈ），６．８８（ｓ，１Ｈ），６．４３（ｓ，１Ｈ），５．０３（ｓ，１Ｈ），４．９５（ｓ，１Ｈ），４．４６－４．２６（ｍ，３Ｈ），４．２６－４．０６（ｍ，３Ｈ），３．６６（ｓ，３Ｈ），３．５３（ｔ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，２Ｈ），３．２９（ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，２Ｈ），２．９８（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），２．７８（ｓ，１Ｈ），２．４８（ｄ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，１Ｈ），１．８５（ｓ，５Ｈ），１．５７（ｓ，１Ｈ），１．３８－１．２２（ｍ，１Ｈ），０．７９（ｓ，１Ｈ），０．５１（ｓ，１Ｈ）．ＭＳ ｍ／ｚ：６３３．２［Ｍ＋１］^＋。

実施例７

ステップ１：
窒素ガスの保護下で、中間体Ｉｎｔ－３Ａ（０．２ｇ、３２３．３６μｍｏｌ）及び中間体３－６（２６５．５４ｍｇ、４２０．３６μｍｏｌ）をトルエン（２ｍＬ）及び水（０．４ｍＬ）に溶解させ、リン酸カリウム（１３７．２８ｍｇ、６４６．７１μｍｏｌ）及びクロロ［（ジ（１－アダマンチル）－Ｎ－ブチルホスフィン）－２－（２－アミノビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）（３２．４３ｍｇ、４８．５０μｍｏｌ）を加え、次に、９０℃で６時間反応させた。反応系に水（７ｍＬ）を加え、水相を酢酸エチル（７ｍＬ×３）で抽出し、分離した。有機相を飽和食塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ ２５０×５０ｍｍ×１０μｍ；移動相：Ａ（アセトニトリル）及びＢ（水、０．０４％の塩酸を含む）；勾配：Ｂ％：６０％～８０％、１０ｍｉｎ）により分離・精製して化合物７－１Ａを得た。ＭＳ ｍ／ｚ：８７９．３［Ｍ－Ｃ_１３Ｈ_１０Ｏ］^＋。

ステップ２：
窒素ガスの保護下で、中間体Ｉｎｔ－３Ｂ（０．２ｇ、３２３．３６μｍｏｌ）及び中間体３－６（２６５．５４ｍｇ、４２０．３６μｍｏｌ）をトルエン（２ｍＬ）及び水（０．４ｍＬ）に溶解させ、リン酸カリウム（１３７．２８ｍｇ、６４６．７１μｍｏｌ）及びクロロ［（ジ（１－アダマンチル）－Ｎ－ブチルホスフィン）－２－（２－アミノビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）（３２．４３ｍｇ、４８．５０μｍｏｌ）を加え、次に、９０℃で４時間反応させた。反応系に水（７ｍＬ）を加え、水相を酢酸エチル（７ｍＬ×３）で抽出し、分離した。有機相を合わせ、有機相を飽和食塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（移動相：石油エーテル：酢酸エチル＝５０：１～１：１）により分離・精製して化合物７－１Ｂを得た。ＭＳ ｍ／ｚ：５２２．４［Ｍ／２＋１］^＋。

ステップ３：
窒素ガスの保護下で、７－１Ａ（０．１９ｇ、２１６．１２μｍｏｌ）をジクロロメタン（７．５ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（３．４６ｇ、３０．３６ｍｍｏｌ）を加え、次に、２０℃で２時間反応させた。減圧濃縮して粗生成物化合物７－２Ａを得た。ＭＳ ｍ／ｚ：７７９．６［Ｍ＋１］^＋。

ステップ３を参照し、７－１Ｂを原料として使用して、化合物７－２Ｂを得た。ＭＳ ｍ／ｚ：７７９．６［Ｍ＋１］＋。

ステップ４：
窒素ガスの保護下で、化合物７－２Ａ（０．４ｇ、１４３．５８μｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４ｍＬ）に溶解させ、フッ化セシウム（２．１８ｇ、１４．３６ｍｍｏｌ）及び炭酸ナトリウム（９１．３１ｍｇ、８６１．５０μｍｏｌ）を加え、２０℃で１５時間反応させた。反応系に水（６ｍＬ）を加え、水相を酢酸エチル（７ｍＬ×３）で抽出し、分離した。有機相を合わせ、飽和食塩水（５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ ７５×３０ｍｍ×３μｍ；移動相：Ａ（アセトニトリル）及びＢ（水、０．０４％のギ酸を含む）；勾配：Ｂ％：１５％～５５％）により分離し、更に分取ＳＦＣ（カラム：ＤＡＩＣＥＬ ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＩＧ（２５０ｍｍ×３０ｍｍ、１０μｍ）；移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（エタノール、０．１％のアンモニア水を含む）；勾配：Ｂ％：５０％～５０％、１１ｍｉｎ）により分離・精製してそれぞれ化合物７Ａ１及び化合物７Ａ２を得た。

化合物７Ａ１：分析ＳＦＣ（カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＩＧ－３、５０×４．６ｍｍ、３μｍ；移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（イソプロパノール、０．１％のイソプロピルアミンを含む）；勾配：Ｂ％：５％～５％、３ｍｉｎ）の条件下で、保持時間は１．６９３ｍｉｎであり、ｅｅ値は９７．９２％であった。^１ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３ ）δ＝７．６７（ｄｄ，Ｊ＝８．８，５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｓ，１Ｈ），７．２２（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．０３（ｓ，１Ｈ），４．９５（ｓ，１Ｈ），４．４１（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．３５（ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，２Ｈ），４．２３（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０４－３．８０（ｍ，２Ｈ），３．６６（ｓ，３Ｈ），３．５５（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．５１（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），３．３１（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），３．２８（ｓ，１Ｈ），３．０１（ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１Ｈ），２．８２－２．７４（ｍ，２Ｈ），２．４８（ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１Ｈ），１．９０－１．８６（ｍ，５Ｈ），１．６０－１．５３（ｍ，１Ｈ），１．３２－１．１９（ｍ，１Ｈ），０．８０（ｑ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），０．５６－０．４８（ｍ，１Ｈ）．ＭＳ ｍ／ｚ：６２３．２［Ｍ＋１］＋ 。化合物７Ａ２：分析ＳＦＣ（カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＩＧ－３、５０×４．６ｍｍ、３μｍ；移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（イソプロパノール、０．１％のイソプロピルアミンを含む）；勾配：Ｂ％：５％～５％、３ｍｉｎ）の条件下で、保持時間は２．２３６ｍｉｎであり、ｅｅ値は９８．２６％であった。^１ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３ ）δ＝７．６７（ｄｄ，Ｊ＝８．８，６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｓ，１Ｈ），７．２２（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２５－７．１９（ｍ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．０３（ｓ，１Ｈ），４．９５（ｓ，１Ｈ），４．４４－４．３０（ｍ，３Ｈ），４．２９－４．２３（ｍ，１Ｈ），４．０７－３．８３（ｍ，２Ｈ），３．７７－３．６５（ｍ，３Ｈ），３．５７（ｔ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，２Ｈ），３．３２（ｓ，１Ｈ），３．２９（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），２．９９（ｄ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ，１Ｈ），２．８３－２．７３（ｍ，２Ｈ），２．４９（ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１Ｈ），１．９４－１．８６（ｍ，５Ｈ），１．６３－１．５３（ｍ，１Ｈ），１．３０－１．１１（ｍ，１Ｈ），０．８２（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），０．５３（ｑ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）．ＭＳ ｍ／ｚ：６２３．２［Ｍ＋１］^＋。

ステップ５：
窒素ガスの保護下で、化合物７－２Ｂ（０．５５ｇ、１９８．２４μｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解させ、フッ化セシウム（３．０１ｇ、１９．８２ｍｍｏｌ）及び炭酸ナトリウム（１２６．０７ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）を加え、２０℃で１５時間反応させた。反応系に水（６ｍＬ）を加え、水相を酢酸エチル（７ｍＬ×３）で抽出し、分離した。有機相を合わせ、飽和食塩水（５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ ７５×３０ｍｍ×３μｍ；移動相：Ａ（アセトニトリル）及びＢ（水、０．０４％のギ酸を含む）；勾配：Ｂ％：１５％～５５％）により分離し、更に分取ＳＦＣ（カラム：ＤＡＩＣＥＬ ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＩＧ（２５０ｍｍ×３０ｍｍ、１０μｍ）；移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（エタノール、０．１％のアンモニア水を含む）；勾配：Ｂ％：５５％～５５％、７ｍｉｎ）により分離・精製してそれぞれ化合物７Ｂ１及び化合物７Ｂ２を得た。

化合物７Ｂ１：分析ＳＦＣ（カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＩＧ－３、５０×４．６ｍｍ、３μｍ；移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（イソプロパノール、０．１％のイソプロピルアミンを含む）；勾配：Ｂ％：５％～５％、３ｍｉｎ）の条件下で、保持時間は１．７４５ｍｉｎであり、ｅｅ値は９８．５６％であった。^１ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３ ）δ＝７．６７（ｄｄ，Ｊ＝９．２，６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３０－７．２５（ｍ，１Ｈ），７．２２（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），５．０３（ｓ，１Ｈ），４．９４（ｓ，１Ｈ），４．３８（ｔ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ，２Ｈ），４．３２－４．２７（ｍ，１Ｈ），４．２７－４．１９（ｍ，１Ｈ），４．１１－３．７６（ｍ，２Ｈ），３．７３－３．６１（ｍ，３Ｈ），３．５３（ｔ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，２Ｈ），３．３４－３．２３（ｍ，２Ｈ），２．９８（ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１Ｈ），２．８１－２．７３（ｍ，２Ｈ），２．４８（ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１Ｈ），１．９２－１．７９（ｍ，５Ｈ），１．６０－１．５２（ｍ，１Ｈ），１．２６（ｓ，１Ｈ），０．７９（ｑ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），０．５１（ｑ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）．ＭＳ ｍ／ｚ：６２３．２［Ｍ＋１］^＋。

化合物７Ｂ２：分析ＳＦＣ（カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＩＧ－３、５０×４．６ｍｍ、３μｍ；移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（イソプロパノール、０．１％のイソプロピルアミンを含む）；勾配：Ｂ％：５％～５％、３ｍｉｎ）の条件下で、保持時間は２．３４３ｍｉｎであり、ｅｅ値は９８．６２％であった。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝７．６７（ｄｄ，Ｊ＝８．８，５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２９－７．２５（ｍ，１Ｈ），７．２２（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．０３（ｓ，１Ｈ），４．９５（ｓ，１Ｈ），４．４１（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３６（ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，２Ｈ），４．２３（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０７－３．７８（ｍ，２Ｈ），３．７５－３．６３（ｍ，３Ｈ），３．５９（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），３．５４（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．３１（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），３．２８（ｓ，１Ｈ），３．００（ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１Ｈ），２．８２－２．７３（ｍ，２Ｈ），２．４８（ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１Ｈ），１．９３－１．８０（ｍ，５Ｈ），１．６１－１．５１（ｍ，１Ｈ），１．２６（ｓ，１Ｈ），０．８１（ｑ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），０．５５－０．４７（ｍ，１Ｈ）．ＭＳ ｍ／ｚ：６２３．２［Ｍ＋１］^＋。

実施例８

ステップ１：
化合物８－１（２ｇ、６．０５ｍｍｏｌ）及び１－１Ｂ（１．３５ｇ、６．３６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解させ、窒素ガスで３回置換し、－４０℃でトリエチルアミン（１．８４ｇ、１８．１６ｍｍｏｌ）を滴加した。滴加完了後、２５℃に昇温させ、３時間反応させた。５０ｍＬの水に注ぎ、分離した。水相をジクロロメタン（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～３：１）により分離・精製して化合物８－２を得た。ＭＳ ｍ／ｚ：５０５．０，５０７．０［Ｍ＋１］^＋。

ステップ２：
８－２（６４６ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）及びフッ化カリウム（１．４８ｇ、２５．５２ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド（１２ｍＬ）に溶解させ、窒素ガスで３回置換し、１２０℃に加熱し、１時間撹拌した。反応液を６０ｍＬの水に注ぎ、酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～５：１）により分離・精製して８－３を得た。^１ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３ ）δ７．８０（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），４．２２－４．５８（ｍ，４Ｈ），３．５１－３．８９（ｍ，２Ｈ），１．９０－２．０４（ｍ，２Ｈ），１．６６－１．８４（ｍ，２Ｈ），１．５３（ｓ，９Ｈ）。

ステップ３：
Ｉｎｔ－５（３３３．９８ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）、８－３（５０２ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）及びリン酸カリウム（４３５．１７ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）及び水（２．５ｍＬ）に溶解させ、窒素ガスで３回置換し、メタンスルホナト（２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，４’，６’－トリ－ｉ－プロピル－１，１’－ビフェニル）（２’－アミノ－１，１’－ビフェニル－２－イル）パラジウム（ＩＩ）（８６．７６ｍｇ、１０２．５０μｍｏｌ、０．１ｅｑ）を加え、窒素ガスで３回置換し、３５℃で３時間撹拌した。反応液を冷却させ、濾過し、減圧濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～４：１）により分離・精製して８－４を得た。^１ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３ ）δ７．８１（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄｄ，Ｊ＝７．２，２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．６５（ｄｄ，Ｊ＝５．２，２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２９－４．５６（ｍ，４Ｈ），３．５１－３．８７（ｍ，２Ｈ），１．９３－２．０３（ｍ，２Ｈ），１．７７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），１．５４（ｓ，９Ｈ）。

ステップ４：
８－４（３３０ｍｇ、５９５．２５μｍｏｌ）、Ｎ－ヨードスクシンイミド（２００．８８ｍｇ、８９２．８７μｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３．３ｍＬ）に溶解させ、窒素ガスで３回置換し、５０℃に加熱させ、２８時間撹拌した。反応液を５ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び５ｍＬの飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液に注ぎ、酢酸エチル（５ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～３：１）により分離・精製して化合物８－５を得た。^１ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３ ）δ７．８５（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．３０－４．６３（ｍ，４Ｈ），３．５２－３．９１（ｍ，２Ｈ），１．９４－２．０５（ｍ，２Ｈ），１．７２－１．８８（ｍ，２Ｈ），１．５４（ｓ，９Ｈ）。

ステップ５：
水素化ナトリウム（３６．６９ｍｇ、９１７．２６μｍｏｌ、６０％）をテトラヒドロフラン（１ｍＬ）に溶解させ、窒素ガスで３回置換し、０℃に冷却させ、２－７（１５１．５６ｍｇ、９１７．２６μｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１．５ｍＬ）溶液を加え、２０℃に昇温させ、１０分間撹拌した。０℃に冷却させ、８－５（２０８ｍｇ、３０５．７５μｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２．５ｍＬ）溶液を加え、２０℃に昇温させ、４時間撹拌した。反応液を１０ｍＬの飽和塩化アンモニウム水溶液に注ぎ、酢酸エチル（２ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～１：２）により分離・精製して８－６を得た。ＭＳ ｍ／ｚ：８２５．１［Ｍ＋１］^＋。

ステップ６：
８－６（１８０ｍｇ、２１８．０５μｍｏｌ）、メチルボロン酸（３９．１６ｍｇ、６５４．１４μｍｏｌ）及び炭酸カリウム（６０．２７ｍｇ、４３６．０９μｍｏｌ）をジオキサン（２ｍＬ）及び水（０．５ｍＬ）に溶解させ、窒素ガスで３回置換し、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（１５．９５ｍｇ、２１．８０μｍｏｌ、０．１ｅｑ）を加え、窒素ガスで３回置換し、８０℃に昇温させ、６０時間撹拌した。反応液を減圧濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（溶離液：石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～１：２）により分離・精製して粗生成物を得た。粗生成物を分取ＳＦＣ（クロマトグラフィーカラム：ＤＡＩＣＥＬ ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ（２５０ｍｍ×３０ｍｍ、１０μｍ）；移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（イソプロパノール、０．１％のアンモニア水を含む）；勾配：Ｂ％＝４５％～４５％）により分離・精製してそれぞれ８－７Ａと８－７Ｂとの混合物、８－７Ｃ及び８－７Ｄを得た。８－７ＣはＳＦＣ分析方法（クロマトグラフィーカラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ－３、５０×４．６ｍｍ、３μｍ；移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（イソプロパノール、０．１％のイソプロピルアミンを含む）；勾配：Ｂ％＝５％～５０％～５％、３．０ｍｉｎ）での保持時間は１．４６８ｍｉｎであり、キラル異性体の過剰率は９７．３６％であった。８－７ＤはＳＦＣ分析方法（クロマトグラフィーカラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ－３、５０×４．６ｍｍ、３μｍ；移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（イソプロパノール、０．１％のイソプロピルアミンを含む）；勾配：Ｂ％＝５％～５０％～５％、３．０ｍｉｎ）での保持時間は１．６０３ｍｉｎであり、キラル異性体の過剰率は１００％であった。

ステップ７：
８－７Ａと８－７Ｂとの混合物（３２ｍｇ、４４．８４μｍｏｌ）をジクロロメタン（０．６ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を加え、１５℃で０．５時間撹拌した。反応液にアンモニア水を滴加してｐＨを９に調節し、減圧濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １００×３０ｍｍ×３μｍ；移動相Ａ：水（０．２％のギ酸）、移動相Ｂ：アセトニトリル；実行勾配：Ｂ％：１％～３０％、８ｍｉｎ実行した）により分離・精製して粗生成物を得た。粗生成物を分取ＳＦＣ（クロマトグラフィーカラム：ＤＡＩＣＥＬ ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ（２５０ｍｍ×３０ｍｍ、１０μｍ）；移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（エタノール、０．１％のアンモニア水を含む）；勾配：Ｂ％＝５０％～５０％、１１ｍｉｎ実行した）により分離・精製して８Ａと８Ｂを得た。

８ＡはＳＦＣ分析方法（クロマトグラフィーカラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＧ－３、５０×４．６ｍｍ、３μｍ；移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（エタノール、０．１％のイソプロピルアミンを含む）；勾配：Ｂ％＝５％～５０％～５％、３．０ｍｉｎ）での保持時間は１．７２７ｍｉｎであり、キラル異性体の過剰率は１００％であった。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ ＯＤ）δ：７．９１（ｓ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．９５－５．１０（ｍ，２Ｈ），４．４７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，２Ｈ），４．２５－４．４２（ｍ，２Ｈ），３．５６－３．７５（ｍ，５Ｈ），３．２６－３．３０（ｍ，１Ｈ），３．２０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），２．９１（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ，１Ｈ），２．７９（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝９．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），２．５３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１７．２Ｈｚ，１Ｈ），１．９７（ｓ，３Ｈ），１．８１（ｂｒ ｓ，５Ｈ），１．５６－１．７０（ｍ，１Ｈ），０．７０（ｑ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），０．４９－０．５９（ｍ，１Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ：６１３．２［Ｍ＋１］^＋。

８ＢはＳＦＣ分析方法（クロマトグラフィーカラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＧ－３、５０×４．６ｍｍ、３μｍ；移動相：Ａ（超臨界ＣＯ_２）及びＢ（エタノール、０．１％のイソプロピルアミンを含む）；勾配：Ｂ％＝５％～５０％～５％、３．０ｍｉｎ）での保持時間は２．２１６ｍｉｎであり、キラル異性体の過剰率は９９．２２％であった。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ ＯＤ）δ：７．９２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．９６－５．１０（ｍ，２Ｈ），４．４７（ｂｒ ｔ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，２Ｈ），４．２５－４．４１（ｍ，２Ｈ），３．５７－３．７４（ｍ，５Ｈ），３．２６－３．３０（ｍ，１Ｈ），３．２０（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），２．９１（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１Ｈ），２．７９（ｄｄ，Ｊ＝９．６，４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．５３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ，１Ｈ），１．７６－１．９１（ｍ，８Ｈ），１．５６－１．６９（ｍ，１Ｈ），０．７０（ｑ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），０．４９－０．５９（ｍ，１Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ：６１３．２［Ｍ＋１］^＋。

ステップ８：
８－７Ｃをジクロロメタン（０．６ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を加え、１５℃で０．５時間撹拌した。反応液にアンモニア水を滴加してｐＨを９に調節し、減圧濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １００×３０ｍｍ×３μｍ；移動相Ａ：水（０．２％のギ酸）、移動相Ｂ：アセトニトリル；実行勾配：Ｂ％：１％～３０％、８ｍｉｎ実行した）により分離・精製して８Ｃのギ酸塩を得た。^１ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ ＯＤ）δ８．５１（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．９４（ｓ，１Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．０９（ｄ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ，２Ｈ），４．５０－４．６３（ｍ，３Ｈ），４．４１（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８６－４．０８（ｍ，３Ｈ），３．７６（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝１２．８，８．８Ｈｚ，２Ｈ），３．４８（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），３．３４－３．４１（ｍ，１Ｈ），２．９２－３．０３（ｍ，２Ｈ），２．６６（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ，１Ｈ），１．９３－２．０７（ｍ，７Ｈ），１．８１－１．９２（ｍ，１Ｈ），１．６６－１．７６（ｍ，１Ｈ），０．７１－０．７８（ｍ，１Ｈ），０．６０－０．６９（ｍ，１Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ：６１３．２［Ｍ＋１］^＋。

ステップ９：
８－７Ｄ（２１ｍｇ、２９．４３μｍｏｌ）をジクロロメタン（０．６ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を加え、１５℃で０．５時間撹拌した。反応液にアンモニア水を滴加してｐＨを９に調節し、減圧濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １００×３０ｍｍ×３μｍ；移動相Ａ：水（０．２％のギ酸）、移動相Ｂ：アセトニトリル；実行勾配：Ｂ％：１％～３０％、８ｍｉｎ実行した）により分離・精製して８Ｄのギ酸塩を得た。^１ Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ ＯＤ）δ８．５３（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．９３（ｓ，１Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．０７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１８．８Ｈｚ，２Ｈ），４．４２－４．６５（ｍ，３Ｈ），４．３７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８１－３．９７（ｍ，３Ｈ），３．７３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，２Ｈ），３．４３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），３．３４（ｂｒ ｓ，１Ｈ），２．８４－３．０３（ｍ，２Ｈ），２．６２（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１７．２Ｈｚ，１Ｈ），１．９７（ｓ，７Ｈ），１．８１－１．８９（ｍ，１Ｈ），１．６４－１．７３（ｍ，１Ｈ），０．６９－０．８１（ｍ，１Ｈ），０．５７－０．６６（ｍ，１Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｚ：６１３．２［Ｍ＋１］^＋。

実験例１：ＧＰ２Ｄ細胞のｐ－ＥＲＫ阻害試験
１．目的
ＨＴＲＦ法により、ＧＰ２Ｄ細胞のｐ－ＥＲＫを効果的に阻害できる化合物をスクリーニングすることである。

２．実験プロセス
１）．ＧＰ２Ｄ細胞を透明な９６ウェル細胞培養プレートに播種し、８０μＬ／ウェルの細胞懸濁液を入れ、各ウェルに８０００個の細胞が含まれ、細胞プレートを二酸化炭素インキュベーターに入れ、３７℃で一晩培養した。
２）．２μＬの化合物を７８μＬの細胞培地に加え、均一に混合した後、２０μＬの化合物溶液を対応する細胞プレートのウェルに加え、細胞プレートを二酸化炭素インキュベーターに戻せて１時間培養を続けた。
３）．培養終了後、細胞上清を捨て、各ウェルに１Ｘの細胞溶解液５０μＬを加え、室温で３０分間振盪しながら培養した。
４）．Ｐｈｏｓｐｈｏ－ＥＲＫ１／２ Ｅｕ Ｃｒｙｐｔａｔｅ抗体とＰｈｏｓｐｈｏ－ＥＲＫ１／２ ｄ２抗体を検出緩衝液で２０倍に希釈した。
５）．新しい３８４白色マイクロプレートに１６μＬ／ウェルで細胞溶解上清を取って入れ、Ｐｈｏｓｐｈｏ－ＥＲＫ１／２ Ｅｕ Ｃｒｙｐｔａｔｅ抗体希釈液２μＬ、Ｐｈｏｓｐｈｏ－ＥＲＫ１／２ ｄ２抗体希釈液２μＬを加え、室温で少なくとも４時間培養した。
６）．培養終了後、ＨＴＲＦ励起：３２０ｎｍ、発光：６１５ｎｍ、６６５ｎｍをマルチモードマイクロプレートリーダーを用いて読み取った。
７）．試験化合物のＩＣ_５０を計算した。

３．実験結果
結果は表２に示された通りである。

実験結論：本発明の化合物は有意なＧＰ２Ｄ ｐ－ＥＲＫ阻害作用を有する。

実験例２． ＧＰ２Ｄ ３Ｄ ＣＴＧ実験
１．実験目的：
本実験の目的は、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ突然変異を有するＧＰ２Ｄヒト結腸癌細胞に対する本発明の化合物の増殖阻害効果を検証することである。

２．実験材料：
細胞株ＧＰ２Ｄ、ＤＭＥＭ培地はＧＩＢＣＯから購入し、ＦＢＳはＨｙｃｌｏｎｅから購入し、Ｌ－ｇｌｕｔａｍｉｎｅはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入した。９６－ウェルプレートはＵｌｔｒａ Ｌｏｗ Ｃｌｕｓｔｅｒから購入した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標） ３Ｄ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ（３Ｄ細胞生存率の化学発光検出試薬）試薬はＰｒｏｍｅｇａから購入し、２１０４ ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダーはＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒから購入した。

３．実験方法：
ＧＰ２Ｄ細胞をＤＭＥＭ＋１０％のＦＢＳ＋２ｍＭのＬ－ｇｌｕｔａｍｉｎｅの培養条件に従って、３７℃、５％のＣＯ_２のインキュベーターで培養した。定期的に継代し、対数増殖期にある細胞をプレイティング用に採取した。ＧＰ２Ｄ細胞を９６ウェルＵ底細胞培養プレートに播種し、各ウェルに１３５μＬの細胞懸濁液とし、その中に６０００個のＧＰ２Ｄ細胞が含まれるようにした。培養プレートを３７℃、５％のＣＯ_２、及び１００％の相対湿度のインキュベーターで一晩培養した。試験化合物をピペットで８個の濃度で５倍に希釈し、即ち、２００μＭから２．５６ｎＭに希釈し、同じ条件で２つのウェルを設置した。７８μＬの培地をミドルプレートに加え、更に対応する位置に従って、２μＬ／ウェルの勾配希釈化合物をミドルプレートに移し、均一に混合した後２０μＬ／ウェルを細胞プレートに移した。細胞プレートに移した化合物の濃度の範囲は、１μＭ～０．０１２８ｎＭであった。細胞プレートを二酸化炭素インキュベーターに入れ、５日間培養した。化合物を加えた細胞プレートの培養が終わった後、細胞プレートの各ウェルに１００μＬの細胞生存率化学発光検出試薬を加え、室温で１０分間培養して、発光信号を安定させた。マルチモードマイクロプレートリーダーを使用してデータを読み取った。

４．データ分析：
方程式（Ｓａｍｐｌｅ－Ｍｉｎ）／（Ｍａｘ－Ｍｉｎ）×１００％を使用してローデータを阻害率に変換し、ＩＣ_５０値は４つのパラメーターを使用したカーブフィッティングにより得られた（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍのｌｏｇ（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）ｖｓ．ｒｅｓｐｏｎｓｅ－－Ｖａｒｉａｂｌｅ ｓｌｏｐｅモーターで得られる）。

５．実験結果：
実験結果は表３に示された通りである。

実験結論：本発明の化合物は、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ突然変異を有するＧＰ２Ｄ細胞に対して有意な抗増殖活性を有する。

実験例３．ＡｓＰＣ－１ ３Ｄ ＣＴＧ実験
１．実験目的：
本実験の目的は、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ突然変異を有するＡｓＰＣ－１ヒト膵臓癌細胞に対する本発明の化合物の増殖阻害効果を検証することである。

２．実験材料：
細胞株ＡｓＰＣ－１、ＲＰＭＩ－１６４０培地はＧＩＢＣＯから購入し、ＦＢＳはＨｙｃｌｏｎｅから購入した。９６－ウェルプレートはＵｌｔｒａ Ｌｏｗ Ｃｌｕｓｔｅｒから購入し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標） ３Ｄ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ（３Ｄ細胞生存率の化学発光検出試薬）試薬はＰｒｏｍｅｇａから購入し、２１０４ ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダーはＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒから購入した。

３．実験方法：
ＡｓＰＣ－１細胞をＲＰＭＩ－１６４０＋１０％のＦＢＳの培養条件に従って、３７℃、５％のＣＯ_２のインキュベーターで培養した。定期的に継代し、対数増殖期にある細胞をプレイティング用に採取した。ＡｓＰＣ－１細胞を９６ウェルＵ底細胞培養プレートに播種し、各ウェルに１３５μＬの細胞懸濁液とし、その中に５００個のＡｓＰＣ－１細胞が含まれるようにした。培養プレートを３７℃、５％のＣＯ_２、及び１００％の相対湿度のインキュベーターで一晩培養した。試験化合物をピペットで８個の濃度で５倍に希釈し、即ち、２００μＭから２．５６ｎＭに希釈し、同じ条件で２つのウェルを設置した。７８μＬの培地をミドルプレートに加え、更に対応する位置に従って、２μＬ／ウェルの勾配希釈化合物をミドルプレートに移し、均一に混合した後２０μＬ／ウェルを細胞プレートに移した。細胞プレートに移した化合物の濃度の範囲は、１μＭ～０．０１２８ｎＭであった。細胞プレートを二酸化炭素インキュベーターに入れ、７日間培養した。化合物を加えた細胞プレートの培養が終わった後、細胞プレートの各ウェルに１００μＬの細胞生存率化学発光検出試薬を加え、室温で１０分間培養して、発光信号を安定させた。マルチモードマイクロプレートリーダーを使用してデータを読み取った。

４．データ分析：
方程式（Ｓａｍｐｌｅ－Ｍｉｎ）／（Ｍａｘ－Ｍｉｎ）×１００％を使用してローデータを阻害率に変換し、ＩＣ_５０値は４つのパラメーターを使用したカーブフィッティングにより得られた（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍのｌｏｇ（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）ｖｓ．ｒｅｓｐｏｎｓｅ－－Ｖａｒｉａｂｌｅ ｓｌｏｐｅモーターで得られる）。

５．実験結果：
実験結果は表４に示された通りである。

実験結論：本発明の化合物は、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ突然変異を有するＡｓＰＣ－１細胞に対して有意な抗増殖活性を有する。

実験例４：ＰＡＮＣ０４．０３ ３Ｄ ＣＴＧ実験
１．実験目的：
本実験の目的は、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ突然変異を有するＰＡＮＣ０４．０３ヒト膵臓癌細胞に対する本発明の化合物の増殖阻害効果を検証することである。

２．実験材料：
細胞株ＰＡＮＣ０４．０３、ＲＰＭＩ－１６４０培地はＧＩＢＣＯから購入し、ＦＢＳはＨｙｃｌｏｎｅから購入し、ｈｕｍａｎ ｉｎｓｕｌｉｎはＹｅａｓｅｎから購入した。９６－ウェルプレートはＵｌｔｒａ Ｌｏｗ Ｃｌｕｓｔｅｒから購入し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標） ３Ｄ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ（３Ｄ細胞生存率の化学発光検出試薬）試薬はＰｒｏｍｅｇａから購入し、２１０４ ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダーはＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒから購入した。

３．実験方法：
ＰＡＮＣ０４．０３細胞をＲＰＭＩ－１６４０＋１５％のＦＢＳ＋５ｕｇ／ｍｌのヒトインスリンの培養条件に従って、３７℃、５％のＣＯ_２のインキュベーターで培養した。定期的に継代し、対数増殖期にある細胞をプレイティング用に採取した。ＰＡＮＣ０４．０３細胞を９６ウェルＵ底細胞培養プレートに播種し、各ウェルに１３５μＬの細胞懸濁液とし、その中に２０００個のＰＡＮＣ０４．０３細胞が含まれるようにした。培養プレートを３７℃、５％のＣＯ_２、及び１００％の相対湿度のインキュベーターで一晩培養した。試験化合物をピペットで８個の濃度で５倍に希釈し、即ち、２００μＭから２．５６ｎＭに希釈し、同じ条件で２つのウェルを設置した。７８μＬの培地をミドルプレートに加え、更に対応する位置に従って、２μＬ／ウェルの勾配希釈化合物をミドルプレートに移し、均一に混合した後２０μＬ／ウェルを細胞プレートに移した。細胞プレートに移した化合物の濃度の範囲は、１μＭ～０．０１２８ｎＭであった。細胞プレートを二酸化炭素インキュベーターに入れ、７日間培養した。化合物を加えた細胞プレートの培養が終わった後、細胞プレートの各ウェルに１００μＬの細胞生存率化学発光検出試薬を加え、室温で１０分間培養して、発光信号を安定させた。マルチモードマイクロプレートリーダーを使用してデータを読み取った。

４．データ分析：
方程式（Ｓａｍｐｌｅ－Ｍｉｎ）／（Ｍａｘ－Ｍｉｎ）×１００％を使用してローデータを阻害率に変換し、ＩＣ_５０値は４つのパラメーターを使用したカーブフィッティングにより得られた（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍのｌｏｇ（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）ｖｓ．ｒｅｓｐｏｎｓｅ－－Ｖａｒｉａｂｌｅ ｓｌｏｐｅモーターで得られる）。

５．実験結果：
結果は表５に示された通りである。

実験結論：本発明の化合物は、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ突然変異を有するＰＡＮＣ０４．０３細胞に対して有意な抗増殖活性を有する。

実験例５ 生体内薬物動態実験
１．実験目的：
本実験の目的は、ＣＤ－１マウスに経口投与及び静脈内注射した本発明の化合物の薬物動態特性を調査することである。

２．実験方法：
試験化合物を１０％のジメチルスルホキシド＋９０％（１０％のヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン（ＨＰ－β－ＣＤ）水溶液）と混合し、ボルテックスし、超音波処理してそれぞれ０．６、３．０及び１０．０ｍｇ／ｍＬの透明な溶液を製造した。７～１０週齢のオスＣＤ－１マウスを選択し、３ｍｇ／ｋｇ（投与濃度：０．６ｍｇ／ｍＬ）の投与量で候補化合物溶液を静脈内投与（ｉ．ｖ．）した。３０ｍｇ／ｋｇ（投与濃度：３．０ｍｇ／ｍＬ）又は１００ｍｇ／ｋｇ（投与濃度：１０．０ｍｇ／ｍＬ）の投与量で候補化合物溶液を経口投与（ｐ．ｏ．）した。所定時間の全血を採取して血漿を製造し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法により薬物濃度を分析し、Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフト（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ社、米国）で薬物動態パラメータを算出した。

３．実験結果：
結果は表６に示された通りである。

実験結論：本発明の化合物は、マウスの体内においてより優れた薬物動態学的特性を有する。

実験例６ ＧＰ２Ｄ腫瘍モデルの生体内薬力学実験
１．実験目的：
ヒト結腸癌ＧＰ２Ｄ細胞をヌードマウスに皮下移植したＢａｌｂ／ｃヌードマウスモデルの生体内薬力学研究のためである。

２．実験方法：
細胞培養：ヒト結腸癌ＧＰ２Ｄ細胞を体外で単層培養し、培養条件はＤＭＥＭ／Ｆ１２培地に２０％のウシ胎児血清を加え、３７℃で、５％ ＣＯ_２のインキュベーターで培養した。週に２回、トリプシン－ＥＤＴＡを使用して通常のな消化処理をし、継代培養した。細胞飽和度が８０％～９０％になり、必要な数に達したら、細胞を集めて計数し、適量のＰＢＳに再懸濁し、マトリゲルを１：１の割合で加えて、細胞密度が２５×１０^６細胞／ｍＬの細胞懸濁液を得た。

細胞接種：０．２ｍＬ（５×１０^６細胞／マウス）のＧＰ２Ｄ細胞（マトリックスゲル添加、体積比は１：１）を各マウスの右背部に皮下接種した。

実験操作：平均腫瘍体積が１４０ｍｍ^３に達したとき、腫瘍体積に応じて、各群に６匹の動物で無作為に群を分け、ブランク群の投与量は０であり、試験群の投与量はそれぞれ３０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇであり、投与体積は１０μＬ／ｇであり、１日２回、２８日間経口投与した。

３．腫瘍の測定と実験指標：
週に２回ノギスで腫瘍の直径を測定した。腫瘍体積の計算式は：Ｖ＝０．５ａ×ｂ^２であり、ａとｂは、それぞれ腫瘍の長径と短径を表す。

化合物の抗腫瘍効果は、ＴＧＩ（％）又は相対腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）によって評価される。相対腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）＝ＴＲＴＶ／ＣＲＴＶ×１００％（ＴＲＴＶ：治療群ＲＴＶ；ＣＲＴＶ：陰性対照群ＲＴＶ）。腫瘍の測定結果に従って相対腫瘍体積（ｒｅｌａｔｉｖｅ ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ、ＲＴＶ）を計算し、計算式はＲＴＶ＝Ｖ_ｔ／Ｖ_０であり、ここで、Ｖ_０は群を分けて投与する時（即ち、Ｄ_０）に測定した平均腫瘍体積であり、Ｖ_ｔは特定の測定時の平均腫瘍体積であり、ＴＲＴＶはＣＲＴＶと同じ日のデータを取った。

ＴＧＩ（％）は、腫瘍増殖阻害率を反映する。ＴＧＩ（％）＝［（１－（特定の処理群の投与終了時の平均腫瘍体積－当該処理群の投与開始時の平均腫瘍体積）／（溶媒対照群の治療終了時の平均腫瘍体積－溶媒対照群の治療開始時の平均腫瘍体積））×１００％。

４．実験結果：
実験結果は表７に示された通りである。

実験結論：本発明の化合物は優れた腫瘍阻害効果を有する。

実験例７ ＰＡＮＣ０４．０３腫瘍モデルの生体内薬力学実験
１．実験目的：
ヒト膵臓癌ＰＡＮＣ０４．０３細胞をヌードマウスに皮下移植したＢａｌｂ／ｃヌードマウスモデルの生体内薬力学研究のためである。

２．実験方法：
細胞培養：ヒト膵臓癌ＰＡＮＣ０４．０３細胞を体外単層培養し、培養条件はＲＰＭＩ－１６４０＋１５％のＦＢＳ＋１０ｕｎｉｔｓ／ｍＬのインスリン、３７℃で、５％のＣＯ_２のインキュベーターで培養した。週に２回、トリプシン－ＥＤＴＡを使用して通常のな消化処理をし、継代培養した。細胞飽和度が８０％～９０％になり、必要な数に達したら、細胞を集めて計数し、適量のＰＢＳに再懸濁し、細胞密度が２５×１０^６細胞／ｍＬの細胞懸濁液を得た。

細胞接種：０．２ｍＬ（５×１０^６細胞／マウス）のＰＡＮＣ０４．０３細胞を各マウスの右背部に皮下接種した。

実験操作：平均腫瘍体積が１９０ｍｍ^３に達したとき、腫瘍体積に応じて、各群に６匹の動物で無作為に群を分け、ブランク群の投与量は０であり、試験群の投与量はそれぞれ３０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇであり、投与体積は１０μＬ／ｇであり、１日２回、２８日間経口投与した。

３．腫瘍の測定と実験指標：
週に２回ノギスで腫瘍の直径を測定した。腫瘍体積の計算式は：Ｖ＝０．５ａ×ｂ^２であり、ａとｂは、それぞれ腫瘍の長径と短径を表す。

化合物の抗腫瘍効果は、ＴＧＩ（％）又は相対腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）によって評価される。相対腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）＝ＴＲＴＶ／ＣＲＴＶ×１００％（ＴＲＴＶ：治療群ＲＴＶ；ＣＲＴＶ：陰性対照群ＲＴＶ）。腫瘍の測定結果に従って相対腫瘍体積（ｒｅｌａｔｉｖｅ ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ、ＲＴＶ）を計算し、計算式はＲＴＶ＝Ｖ_ｔ／Ｖ_０であり、ここで、Ｖ_０は群を分けて投与する時（即ち、Ｄ_０）に測定した平均腫瘍体積であり、Ｖ_ｔは特定の測定時の平均腫瘍体積であり、ＴＲＴＶはＣＲＴＶと同じ日のデータを取った。

ＴＧＩ（％）は、腫瘍増殖阻害率を反映する。ＴＧＩ（％）＝［（１－（特定の処理群の投与終了時の平均腫瘍体積－当該処理群の投与開始時の平均腫瘍体積）／（溶媒対照群の治療終了時の平均腫瘍体積－溶媒対照群の治療開始時の平均腫瘍体積））×１００％。

４．実験結果：
実験結果は表８に示された通りである。

実験結論：本発明の化合物は優れた腫瘍阻害効果を有する。

Claims (19)

1. 式（ＩＩＩ－１）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩。
   
   （ただし、
   Ｘは、ＣＨ、Ｃ－Ｒｘ、Ｎ及びＮ^＋－Ｏ^－から選択され、好ましくは、Ｘは、Ｎ及びＮ^＋－Ｏ^－から選択され、Ｒｘは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒから選択され、
   Ｒ_１は、
   
   から選択され、前記
   
   は、それぞれ独立して１、２、３又は４つのＲ_ａにより任意選択で置換され、
   Ｒ_３は、Ｈ及びＤから選択され、
   各Ｒ_ａは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ_２、Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_１－３ハロアルキル、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、－Ｃ_１－３アルキル－シクロプロピル及びシクロプロピルから選択され、前記Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、シクロプロピル及び－Ｃ_１－３アルキル－シクロプロピルは、それぞれ独立して１、２又は３つのＲにより任意選択で置換され、
   各Ｒは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２及びＣＦ_３から選択される。）
2. 式（ＩＩＩ－１）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩。
   
   （ただし、
   Ｘは、ＣＮ、Ｎ及びＮ^＋－Ｏ^－から選択され、好ましくは、Ｘは、Ｎ及びＮ^＋－Ｏ^－から選択され、
   Ｒ_１は、
   
   から選択され、前記
   
   は、それぞれ独立して１、２、３又は４つのＲ_ａにより任意選択で置換され、
   Ｒ_３は、Ｈ及びＤから選択され、
   各Ｒ_ａは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ_２、Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、－Ｃ_１－３アルキル－シクロプロピル及びシクロプロピルから選択され、前記Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、シクロプロピル及び－Ｃ_１－３アルキル－シクロプロピルは、それぞれ独立して１、２又は３つのＲにより任意選択で置換され、
   各Ｒは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２及びＣＦ_３から選択される。）
3. 式（ＩＩ）及び（ＩＩＩ－２）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩。
   
   （ただし、
   Ｒ_１は、フェニル、ピリジル及びナフチルから選択され、前記フェニル、ピリジル及びナフチルは、それぞれ独立して１、２、３又は４つのＲ_ａにより任意選択で置換され、
   Ｒ_２は、
   
   から選択され、前記
   
   は、それぞれ独立して任意選択で１、２又は３つのＲ_ｃにより置換され、
   Ｒ_３は、Ｈ及びＤから選択され、
   各Ｒ_ａは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ_２、Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、－Ｃ_１－３アルキル－シクロプロピル及びシクロプロピルから選択され、前記Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_１－３アルコキシ、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、シクロプロピル及び－Ｃ_１－３アルキル－シクロプロピルは、それぞれ独立して１、２又は３つのＲにより任意選択で置換され、
   Ｒ_ｂは、Ｈ、ＣＮ、ＣＨ_３及びＯＣＨ_３から選択され、
   各Ｒ_ｃは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２、ＣＦ_３及びＣＨ_２ＣＦ_３から選択され、
   各Ｒは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２及びＣＦ_３から選択される。）
4. 各Ｒ_ａは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、ＯＨ、ＮＨ_２、ＣＨ_３、ＣＨ_２ＣＨ_３、ＣＨ（ＣＨ_３）_２、ＯＣＨ_３、ＯＣＨ_２ＣＨ_３、ＯＣＨ（ＣＨ_３）_２、
   
   及びシクロプロピルから選択され、前記ＣＨ_３、ＣＨ_２ＣＨ_３、ＣＨ（ＣＨ_３）_２、ＯＣＨ_３、ＯＣＨ_２ＣＨ_３、ＯＣＨ（ＣＨ_３）_２、
   
   及びシクロプロピルは、それぞれ独立して１、２又は３つのＲにより任意選択で置換される、請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
5. 各Ｒ_ａは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、ＯＨ、ＮＨ_２、ＣＨ_３、ＣＨＦ_２、ＣＦ_３、ＣＨ_２ＣＦ_３、ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＦ_３、ＯＣＨ_３、ＯＣＦ_３、
   
   ら選択される、請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
6. Ｒ_１は、
   
   から選択される、請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
7. Ｒ_１は、
   
   から選択され、前記
   
   は、それぞれ独立して１、２、３又は４つのＲ_ａにより任意選択で置換される、請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
8. Ｒ_１は、
   
   から選択される、請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
9. Ｒ_１は、
   
   から選択される、請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
10. Ｒ_２は、
    
    から選択される、請求項３に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
11. Ｒ_２は、
    
    から選択される、請求項３に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
12. Ｘは、Ｎから選択される、請求項１又は２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
13. 化合物が下記の式から選択される、請求項１又は２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
    
    （ただし、Ｒ_１及びＲ_３は請求項１に定義された通りである。）
14. 化合物が下記の式から選択される、請求項１又は２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
    
    （ただし、Ｘ、Ｒ_１及びＲ_３は請求項１に定義された通りである。）
15. 化合物が下記の式から選択される、請求項３に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
    
    （ただし、Ｒ_１及びＲ_３は請求項３に定義された通りである。）
16. 下記の式で表わされる化合物又はその薬学的に許容される塩。
    
    
    
    
17. 下記の式から選択される、請求項１６に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    。
18. 化合物は、下記の式から選択される、請求項１７に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
    
    
19. ＫＲＡＳ^Ｇ１２Ｄ突然変異を有する固形腫瘍を治療するための化合物の製造における、請求項１～１８のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用。