ES2337999T3 - Esfeniscinas y peptidos analogos antimicrobianos para la conservacion de los alimentos. - Google Patents
Esfeniscinas y peptidos analogos antimicrobianos para la conservacion de los alimentos. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2337999T3 ES2337999T3 ES03761672T ES03761672T ES2337999T3 ES 2337999 T3 ES2337999 T3 ES 2337999T3 ES 03761672 T ES03761672 T ES 03761672T ES 03761672 T ES03761672 T ES 03761672T ES 2337999 T3 ES2337999 T3 ES 2337999T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- baselineskip
- amino acids
- arg
- hydrophobic
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 86
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 title claims abstract description 39
- 238000009920 food preservation Methods 0.000 title claims description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title description 42
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims abstract description 369
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 18
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 8
- 230000009418 agronomic effect Effects 0.000 claims description 7
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 6
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 6
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 6
- -1 sulfur amino acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 3
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 claims 1
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 claims 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 claims 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 claims 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 abstract description 12
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 12
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 abstract 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 abstract 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 368
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 368
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 94
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 38
- 210000003736 gastrointestinal content Anatomy 0.000 description 35
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 28
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 25
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 241000578502 Eudyptes schlegeli Species 0.000 description 23
- 101710138586 Spheniscin-2 Proteins 0.000 description 23
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 18
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 18
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 description 17
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 17
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 16
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 14
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 12
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 12
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 12
- 241000287486 Spheniscidae Species 0.000 description 12
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 102000044503 Antimicrobial Peptides Human genes 0.000 description 11
- 108700042778 Antimicrobial Peptides Proteins 0.000 description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 11
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 10
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 10
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 10
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 10
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 9
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 9
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 241000221961 Neurospora crassa Species 0.000 description 8
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 8
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 8
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 6
- 241000191938 Micrococcus luteus Species 0.000 description 6
- 101150036993 XAB2 gene Proteins 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 6
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 5
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 5
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 5
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 5
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 5
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 5
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 4
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 4
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 4
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001225321 Aspergillus fumigatus Species 0.000 description 3
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004696 Poly ether ether ketone Substances 0.000 description 3
- 101710138584 Spheniscin-1 Proteins 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 3
- 238000013475 authorization Methods 0.000 description 3
- JUPQTSLXMOCDHR-UHFFFAOYSA-N benzene-1,4-diol;bis(4-fluorophenyl)methanone Chemical compound OC1=CC=C(O)C=C1.C1=CC(F)=CC=C1C(=O)C1=CC=C(F)C=C1 JUPQTSLXMOCDHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000012265 beta-defensin Human genes 0.000 description 3
- 108050002883 beta-defensin Proteins 0.000 description 3
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 3
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 229920002530 polyetherether ketone Polymers 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000000541 Defensins Human genes 0.000 description 2
- 108010002069 Defensins Proteins 0.000 description 2
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003100 Magainin Proteins 0.000 description 2
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 2
- 241000219995 Wisteria Species 0.000 description 2
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 2
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 2
- 229940091771 aspergillus fumigatus Drugs 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 2
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 description 2
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000012447 hatching Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- KFDVPJUYSDEJTH-UHFFFAOYSA-N 4-ethenylpyridine Chemical compound C=CC1=CC=NC=C1 KFDVPJUYSDEJTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 241000588813 Alcaligenes faecalis Species 0.000 description 1
- 101710120040 Antifungal peptide Proteins 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 description 1
- 241001115832 Batrachium Species 0.000 description 1
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 1
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 1
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000222178 Candida tropicalis Species 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 101710164770 Drosomycin Proteins 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N L-Homoarginine Natural products OC(=O)C(N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N L-homoarginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229910025794 LaB6 Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000288147 Meleagris gallopavo Species 0.000 description 1
- 241000192041 Micrococcus Species 0.000 description 1
- 241000588621 Moraxella Species 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 241000187654 Nocardia Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 241001157801 Podisus maculiventris Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000191984 Staphylococcus haemolyticus Species 0.000 description 1
- 241001147691 Staphylococcus saprophyticus Species 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 241000544286 Vibrio anguillarum Species 0.000 description 1
- 241000269368 Xenopus laevis Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 229940005347 alcaligenes faecalis Drugs 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 238000002802 antimicrobial activity assay Methods 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 210000005178 buccal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000000663 chemotropic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- DNTVNGJSMLPWQF-CVJDLQKLSA-N cytolex Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 DNTVNGJSMLPWQF-CVJDLQKLSA-N 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- ICZZXLGKHXWNSU-ULVOZOJHSA-N drosocin Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)CC)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H]1N(C(=O)[C@H](CC=2N=CNC=2)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CN)C(C)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)CCC1 ICZZXLGKHXWNSU-ULVOZOJHSA-N 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000006353 environmental stress Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000030135 gastric motility Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007902 hard capsule Substances 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 239000011505 plaster Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000001965 potato dextrose agar Substances 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 210000005000 reproductive tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002105 tongue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 1
- 238000002627 tracheal intubation Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- AFVLVVWMAFSXCK-UHFFFAOYSA-N α-cyano-4-hydroxycinnamic acid Chemical compound OC(=O)C(C#N)=CC1=CC=C(O)C=C1 AFVLVVWMAFSXCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/465—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from birds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Virology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Péptido o un análogo de esfeniscina que presenta una actividad antimicrobiana y que comprende tres enlaces intramoleculares, y que responde a la fórmula (II) siguiente: **(Ver fórmula)** En la que: - Xaa responde a la fórmula siguiente: -Xaa1-Xaa2-(SEQ ID NO.2), en la que Xaa1 representa un grupo -NH2 o un resto peptídico de 1 a 13 aminoácidos, y Xaa2 es Ser-Phe-Gly-Leu; - Xab responde a la fórmula siguiente: -Xab1-Xab2-Xab3-Xab4-Xab5- (SEQ ID NO.3), y Xab3 representa un resto peptídico que responde a la fórmula siguiente: -Xab3.1-Xab3.2-(SEQ ID NO.4), - Xac responde a la fórmula siguiente: -Xac1-Xac2-Xac3-Xac4- (SEQ ID NO.5), en la que Xac2 es His o Arg - Xad con la secuencia siguiente: -Xad1-Xad2-Xad3-xad4-xad5-xad6-Xad7-Xad8-Xad9- (SEQ ID NO.6), en la que Xad2 es Pro o Phe y Xad3 es Pro - Xae responde a la secuencia siguiente: -Xae1-Xae2-Xae3-Xae4-Xae5- (SEQ ID NO.7), en la que Xae2 es Gln o Arg y Xae5 es Gln; - Xaf responde a la secuencia siguiente: -Xaf1-Xaf2-Xaf3-Xaf4- (SEQ ID NO.8) y Xaf2 y/o Xaf3 es Val; y - Ca1, Ca2, Ca3, Ca4, Ca5 y Ca6, son aminoácidos azufrados.
Description
Esfeniscinas y péptidos análogos antimicrobianos
para la conservación de los alimentos.
La presente invención se refiere al campo de la
conservación de los alimentos y de la lucha contra las infecciones
microbianas, bacterianas y/o fúngicas en el ser humano, el animal o
las plantas. Está dirigida a péptidos antimicrobianos que poseen
una estructura de beta-defensina, en particular las
esfeniscinas y sus análogos, así como a las composiciones que las
contienen para prevenir y/o tratar las infecciones por agentes
patógenos como los microbios, las bacterias y los hongos así como
para la conservación de los alimentos.
Se ha publicado en la técnica anterior que el
macho de Pingüino Real es capaz, durante su estancia en tierra para
asegurar la última parte de la incubación, de guardar el alimento en
su estómago durante más de dos semanas
(Gauthier-Clerc et al., 2000). Él mismo ayuna
y vive de sus reservas corporales.
No existe actualmente una situación similar
conocida de almacenamiento de alimento durante varias semanas en un
vertebrado superior. El estado de conservación de este alimento es
notable, no modificándose su masa ni su valor energético
(Gauthier-Clerc et al., 2002). Estas
observaciones sobre el estado de conservación del alimento sugieren
fuertemente un control de la flora bacteriana presente en el
contenido estomacal. Este control de la flora bacteriana permitiría
reducir las degradaciones de la alimentación almacenada. Este
control podría hacerse a través de la producción de sustancias con
actividad antimicrobiana.
En efecto, la bibliografía relata la existencia
de sustancias con actividad antimicrobiana en el tracto
gastro-intestinal de los Vertebrados. Una gran
parte de estas sustancias tienen naturaleza peptídica,
principalmente magaininas, brevininas y buforinas en los anfibios
(Moore et al., 1991; Minn et al., 1998; Wang et
al., 1998), lactoferricinas y defensinas (\alpha, \beta) en
los mamíferos, entre ellos el ser humano (Jones & Bevins, 1992;
Zhao et al., 1999; O'Neil et al., 2000). En las aves,
las defensinas se han encontrado en otras partes del tracto
digestivo, principalmente la lengua, el esófago y el intestino (Zhao
et al. 2001). Además, numerosos péptidos antimicrobianos
están igualmente presentes en el epitelio de superficie (para
revisión véase Schröder 1999).
Los inventores han puesto de manifiesto ahora la
presencia de péptidos antimicrobianos en el contenido estomacal de
los Pingüinos Reales y han mostrado la implicación de estos péptidos
con actividad antimicrobiana en el fenómeno de conservación del
bolo alimenticio durante el ayuno de incubación en el macho de
Pingüino Real. Estos trabajos de investigación han permitido
definir nuevos péptidos que se designarán de aquí en adelante
"esfeniscinas" según la familia de las Esfeniscidas a la que
pertenece el Pingüino Real.
La invención tiene por lo tanto por objeto un
péptido o un análogo de esfeniscina que presenta una actividad
anti-bacteriana y que comprende tres enlaces
intra-moleculares, y que responde a la fórmula (II)
siguiente:
En la
que:
\bullet Xaa responde a la fórmula siguiente:
-Xaa1-Xaa2-(SEQ ID NO.2), en la que Xaa1 representa
un grupo -NH_{2} o un resto peptídico de 1 a 13 aminoácidos, y
Xaa2 es
Ser-Phe-Gly-Leu;
\bullet Xab responde a la fórmula siguiente:
-Xab1-Xab2-Xab3-Xab4-Xab5-
(SEQ ID NO.3), y Xab3 representa un resto peptídico que responde a
la fórmula siguiente: -Xab3.1-Xab3.2-(SEQ ID
NO.4),
\bullet Xac responde a la fórmula siguiente:
-Xac1-Xac2-Xac3-Xac4-
(SEQ ID NO.5), en la que Xac2 es His o Arg
\bullet Xad con la secuencia siguiente:
-Xad1-Xad2-Xad3-xad4-xad5-xad6-Xad7-Xad8-Xad9-
(SEQ ID NO.6), en la que Xad2 es Pro o Phe y Xad3 es Pro;
\bullet Xae responde a la secuencia siguiente:
-Xae1-Xae2-Xae3-Xae4-Xae5-
(SEQ ID NO.7), en la que Xae2 es Gln o Arg y Xae5 es Gln;
\bullet Xaf responde a la secuencia siguiente:
-Xaf1-Xaf2-Xaf3-Xaf4-
(SEQ ID NO.8) y Xaf2 y/o Xaf3 es Val; y - Cal, Ca2, Ca3, Ca4, Ca5 y
Ca6, son aminoácidos azufrados.
\bullet Xab representa un resto peptídico de 6
aminoácidos Xab responde a la fórmula siguiente:
-Xab1-Xab2-Xab3-Xab4-Xab5-
(SEQ ID NO.3), en la que estos Xab1, Xab2, Xab4 y Xab5 presentes,
idénticos o diferentes, se eligen del grupo que comprende
aminoácidos básicos, aminoácidos polares cargados negativamente,
aminoácidos polares pequeños no cargados, aminoácidos polares
grandes no cargados y aminoácidos hidrófobos o apolares, y Xab3
representa un resto peptídico que responde a la fórmula siguiente:
-Xab3.1-Xab3.2-(SEQ ID NO.4), en la que estos Xab3.1
y Xab3.2 presentes, idénticos o diferentes, se eligen del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares cargados
negativamente, aminoácidos polares pequeños no cargados, aminoácidos
polares grandes no cargados y aminoácidos hidrófobos o
apolares;
\bullet Xac representa un resto peptídico que
comprende 4 aminoácidos Xac responde a la fórmula siguiente:
-Xac1-Xac2-Xac3-Xac4-
(SEQ ID NO.5), en la que estos Xac1, Xac3 y Xac4 presentes,
idénticos o diferentes, se eligen del grupo que comprende
aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no cargados,
aminoácidos hidrófobos o apolares y aminoácidos polares grandes no
cargados y Xac_{2} es His o Arg
\bullet Xad representa un resto peptídico que
comprende 9 aminoácidos, Xad responde a la secuencia siguiente:
-Xad1-Xad2-Xad3-Xad4-Xad5-Xad6-Xad7-Xad8-Xad9-
(SEQ ID NO.6), en la que estos Xad1, Xad4, Xad5, Xad6, Xad7, Xad8 y
Xad9 presentes, idénticos o diferentes, se eligen del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares
grandes no cargados y aminoácidos polares cargados negativamente; en
la que Xad_{2} es Pro o Phe y Xad_{3} es Pro
\bullet Xae representa un resto peptídico que
comprende 5 aminoácidos, ventajosamente Xae responde a la secuencia
siguiente:
-Xae1-Xae2-Xae3-Xae4-Xae5-
(SEQ ID NO.7), en la que estos Xae1, Xae3, Xae4 y presentes,
idénticos o diferentes, se eligen del grupo que comprende
aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no cargados,
aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares grandes no
cargados y aminoácidos polares cargados negativamente; en la que
Xac2 es Gln o Arg y Xaes es Gln,
\bullet Xaf representa un resto peptídico de 4
aminoácidos, ventajosamente Xaf responde a la secuencia siguiente:
-Xaf1-Xaf2-Xaf3-Xaf4-
(SEQ ID NO.8), en la que estos Xaf1, y Xaf4 presentes, idénticos o
diferentes, se eligen del grupo que comprende aminoácidos básicos,
aminoácidos polares pequeños no cargados, aminoácidos hidrófobos o
apolares, aminoácidos polares grandes no cargados y aminoácidos
polares cargados negativamente; y Xaf2 y/o Xaf3 es Val
\bullet Ca1, Ca2, Ca3, Ca4, Ca5 y Ca6,
idénticos o diferentes, Ca1, Ca2, Ca3, Ca4, Ca5 y Ca6 son
aminoácidos azufrados y preferentemente cisteínas.
\bullet Ca1 y -Ca5 están unidos por
covalencia. Preferentemente:- Xab1 se elige del grupo que comprende
aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos
polares grandes no cargados, preferentemente Xab1 es un aminoácido
básico y muy preferentemente arginina (Arg).
\bullet Xab2 se elige del grupo que comprende
aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos básicos, aminoácidos polares grandes no
cargados, preferentemente Xab2 es un aminoácido hidrófobo o apolar
y muy preferentemente leucina (Leu).
\bullet Xab3.2 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados y aminoácidos hidrófobos o apolares y muy preferentemente
arginina (Arg).
\bullet Xab4 se elige del grupo que comprende
aminoácidos hidrófobos o apolares, y muy preferentemente Xab4 es
glicina (Gly).
\bullet rabs se elige del grupo que comprende
aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares grandes no
cargados, aminoácidos básicos, aminoácidos polares cargados
negativamente, aminoácidos polares pequeños no cargados,
preferentemente Xab5 es un aminoácido hidrófobo o apolar y muy
preferentemente fenilalanina (Phe).
\bullet Ca2 y Ca4 están unidos por
covalencia.
\bullet Xac1 se elige del grupo que comprende
aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos
polares grandes no cargados, preferentemente Xac1 es un aminoácido
hidrófobo o apolar y muy preferentemente alanina (Ala).
\bullet Xac2 se elige del grupo que comprende
aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos
polares grandes no cargados, preferentemente Xac2 es un aminoácido
básico y muy preferentemente arginina (Arg) o histidina (His).
\bullet Xac3 se elige del grupo que comprende
aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos
polares pequeños no cargados, aminoácidos polares grandes no
cargados, preferentemente Xac3 es un aminoácido hidrófobo o apolar
y muy preferentemente glicina (Gly).
\bullet Xac4 se elige del grupo que comprende
aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos
polares pequeños no cargados, preferentemente Xac4 es un aminoácido
básico y muy preferentemente arginina (Arg).
\bullet Ca3 y Ca6 están unidos por
covalencia.
\bullet Xad1 se elige del grupo que comprende
aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos
polares grandes no cargados, preferentemente Xad1 es un aminoácido
básico y muy preferentemente arginina (Arg).
\bullet Xad2 se elige del grupo que comprende
aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos básicos, preferentemente Xad2 es un
aminoácido hidrófobo o apolar y muy preferentemente fenilalanina
(Phe).
\bullet Xad3 se elige del grupo que comprende
aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos básicos, aminoácidos polares grandes no
cargados, preferentemente un aminoácido hidrófobo o apolar,
preferentemente Xad3 es prolina o hidroxiprolina y muy
preferentemente prolina (Pro).
\bullet Xad4 se elige del grupo que comprende
aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos básicos, aminoácidos polares grandes no
cargados, aminoácidos polares cargados negativamente,
preferentemente Xad4 es un aminoácido polar pequeño no cargado y muy
preferentemente serina (Ser).
\bullet Xad5 se elige del grupo que comprende
aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos básicos, aminoácidos
polares cargados negativamente, preferentemente Xad5 es un
aminoácido hidrófobo o apolar y muy preferentemente isoleucina
(Ile).
\bullet Xad6 se elige del grupo que comprende
aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos básicos, aminoácidos
polares grandes no cargados, preferentemente un aminoácido hidrófobo
o apolar, preferentemente Xad6 es prolina o hidroxiprolina y muy
preferentemente prolina (Pro).
\bullet Xad7 se elige del grupo que comprende
aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares grandes no
cargados, preferentemente Xad7 es un aminoácido hidrófobo o apolar
y muy preferentemente isoleucina (Ile).
\bullet Xad8 se elige del grupo que comprende
aminoácidos hidrófobos o apolares, muy preferentemente Xad8 es
glicina (Gly).
\bullet Xad9 se elige del grupo que comprende
aminoácidos básicos, aminoácidos polares grandes no cargados,
aminoácidos polares pequeños no cargados, preferentemente Xad9 es
un aminoácido básico y muy preferentemente arginina (Arg).
\bullet Xae1 se elige del grupo que comprende
aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos
polares grandes no cargados, aminoácidos polares pequeños no
cargados, preferentemente Xae1 es un aminoácido polar pequeño no
cargado y muy preferentemente serina (Ser).
\bullet Xae2 se elige del grupo que comprende
aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos
polares grandes no cargados, aminoácidos polares pequeños no
cargados, preferentemente Xae2 es un aminoácido básico y muy
preferentemente arginina (Arg).
\bullet Xae3 se elige del grupo que comprende
aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos
polares grandes no cargados, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos polares cargados negativamente,
preferentemente un aminoácido hidrófobo o apolar y muy
preferentemente fenilalanina (Phe).
\bullet Xae4 se elige del grupo que comprende
aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos
polares grandes no cargados, aminoácidos polares pequeños no
cargados, preferentemente Xae4 es un aminoácido hidrófobo o apolar
y muy preferentemente valina (Val).
\bullet Xae5 se elige del grupo que comprende
aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos
polares grandes no cargados, aminoácidos polares pequeños no
cargados, preferentemente Xae5 es un aminoácido polar grande no
cargado y muy preferentemente glutamina (Gln).
\bullet Xaf1 se elige del grupo que comprende
aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares,
preferentemente Xaf1 es un aminoácido básico y muy preferentemente
ariginina (Arg).
\bullet Xaf2 se elige del grupo que comprende
aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos
polares pequeños no cargados, preferentemente Xaf2 es un aminoácido
básico y muy preferentemente arginina (Arg).
\bullet Xaf3 se elige del grupo que comprende
aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos
polares grandes no cargados, preferentemente Xaf3 es un aminoácido
hidrófobo o apolar y muy preferentemente valina (Val).
\bullet Xaf4 se elige del grupo que comprende
aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares,
preferentemente Xaf4 es un aminoácido hidrófobo o apolar y muy
preferentemente triptófano (Trp).
\newpage
Se entiende muy especialmente por:
\bullet aminoácidos básicos, lisina (Lys),
arginina (Arg), histidina (His) u homoarginina;
\bullet aminoácidos polares cargados
negativamente, ácido aspártico (Asp) o aspartato y ácido glutámico
(Glu) o glutamato;
\bullet aminoácidos polares pequeños no
cargados, serina (Ser) o treonina (Thr),
\bullet aminoácidos polares grandes no
cargados, asparagina (Asn), glutamina (Gln) o metionina (Met),
\bullet aminoácidos hidrófobos o apolares,
isoleucina (Ile), leucina (Leu), fenilalanina (Phe), triptófano
(Trp), tirosina (Tyr), valina (Val), alanina (Ala), glicina (Gly),
prolina (Pro) o hidroxiprolina.
\vskip1.000000\baselineskip
La invención se refiere específicamente a un
péptido o un análogo de esfeniscina que presenta una actividad
antimicrobiana y que comprende tres enlaces
intra-moleculares, y que responde a la fórmula (II)
siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
Xaa es
Ser-Phe-Gly-Leu,
Xab es
Arg-Leu-Arg-Arg-Gly-Phe,
Xac es Ala-Xac2
-Gly-Arg,
Xad es
Arg-Phe-Pro-Ser-Ile-Pro-Ile-Gly-Arg,
Xae es
Ser-Arg-Phe-Val-Gln,
Xaf es
Arg-Arg-Val-Trp,
y
xac2 es His o Arg.
de fórmula (II) siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
A título de ejemplo particular de péptidos de
fórmula (II) se puede citar:
\bullet la esfeniscina-1 cuya
secuencia primaria es la siguiente:
- SFGLCRLRRGFCAHGRCRFPSIPIGRCSRFVQCCRRVW
- (SEQ ID NO. 14)
\vskip1.000000\baselineskip
\bullet la esfeniscina-2 cuya
secuencia primaria es la siguiente:
- SFGLCRLRRGFCARGRCRFPSTPIGRCSRFVQCCRRVW
- (SEQ ID NO. 15)
\newpage
Los aminoácidos se representan generalmente por
su código de una letra, pero también pueden representarse por su
código de tres letras según la nomenclatura siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Los péptidos de la invención pueden presentar a
nivel de determinados aminoácidos modificaciones posteriores a la
traducción naturales o químicas, por ejemplo, el resto
NH-terminal puede presentar por ejemplo una
acilación, o el resto C-terminal puede presentar
una modificación posterior a la traducción o química, por ejemplo
una amidación, una oxidación o una esterificación. La invención
también se refiere por lo tanto a derivados de los péptidos de
fórmulas (II), como aquellos en los que uno o varios aminoácidos son
aminoácidos de conformación D, la invención abarca igualmente los
retro-péptidos y los
retro-inverso-péptidos, ya que
conservan la actividad antimicrobiana.
La invención también tiene por objeto la
utilización de dichos péptidos en el campo agroalimentario para
proteger los alimentos contra los microbios (bacterias y
hongos).
La invención también tiene por objeto la
utilización de dichos péptidos en el ser humano, el animal o las
plantas para prevenir y/o tratar una infección microbiana,
bacteriana y/o fúngica.
La presente invención se refiere por lo tanto a
una composición farmacéutica agronómica o agroalimentaria que
comprende como agente activo al menos un péptido de la invención tal
como se ha definido anteriormente, ventajosamente asociado en dicha
composición con uno o varios vehículos, diluyente o excipiente
farmacéuticamente aceptables.
Los vehículos, diluyentes y excipientes se
eligen en función del tipo de aplicación de la composición a título
farmacéutico, agronómico o agroalimentario.
Así, la invención también tiene por objeto la
utilización de un péptido de la invención tal como se ha definido
anteriormente para la preparación de una composición farmacéutica,
agronómica o agroalimentaria antibacteriana, antibacteriana y/o
antifúngica.
Las composiciones de la invención son útiles
tanto a título preventivo como curativo.
Para la utilización relativa a la conservación
de los alimentos, los péptidos de la invención y las composiciones
que los contienen pueden presentarse en la forma de polvo o de
gránulos. Pueden estar fijados a soportes que contienen los
alimentos, o incorporarse directamente en los alimentos
principalmente en forma de microorganismos, como las levaduras, que
producen dichos péptidos.
La administración de la composición farmacéutica
según la invención puede realizarse por uno cualquiera de los modos
de administración aceptables para los agentes terapéuticos,
agronómicos o agroalimentarios. A título farmacéutico, en el ser
humano o el animal, se puede citar la administración sistémica,
tópica o incluso central. La administración oral puede hacerse
mediante comprimidos, cápsulas duras, cápsulas blandas, incluyendo
las formulaciones de liberación diferida o prolongada, píldoras,
polvos, gránulos, elixires, tinturas, suspensiones, jarabes y
emulsiones. La administración parenteral de compuestos
antibacterianos y/o antifúngicos se hace generalmente por inyección
intramuscular o intravenosa por perfusión. Las composiciones
inyectables pueden prepararse en formas clásicas, bien en
suspensión o disolución líquida bien en forma sólida que conviene
para una disolución extemporánea en un líquido adecuado, incluyendo
las formulaciones de liberación diferida o prolongada como la
inclusión de los péptidos en micropartículas biodegradables de
formulación lipídica, como los liposomas. Otras preparaciones
tópicas habituales comprenden cremas, ungüentos, lociones, geles y
los pulverizadores en aerosol.
La utilización de los péptidos a título
esencialmente preventivo consiste en incluir dichos péptidos en
productos de higiene, apósitos, o incluso lechos para animales.
En función del modo de administración, los
compuestos pueden estar en forma sólida, semi-sólida
o líquida.
Para las composiciones sólidas, tales como
comprimidos, píldoras, polvos o gránulos en estado libre o incluidos
en cápsulas, o micropartículas biodegradables de formulación
lipídica, como los liposomas, el principio activo puede combinarse
con diluyentes, lubricantes, aglutinantes, absorbentes, colorantes,
aromatizantes y edulcorantes.
Las composiciones según la invención pueden
contener igualmente otras sustancias que presentan un interés
terapéutico.
Los péptidos de la invención pueden
administrarse en forma de dosis diarias únicas, o la posología
diaria total puede administrarse en dos, tres o cuatro dosis por
día.
La invención pretende no solamente los péptidos
descritos anteriormente sino igualmente la utilización de las
secuencias polinucleotídicas que codifican estos péptidos para
transformar anfitriones, y principalmente células animales,
vegetales o procariotas. Estas secuencias se utilizan según técnicas
de ingeniería genética descritas en la bibliografía.
Consecuentemente, la invención tiene igualmente
por objeto un polinucleótido que codifica un péptido descrito
anteriormente, una molécula de ácido nucleico, ADN o ARN, como un
vector, que comprende dicho polinucleótido, y un anfitrión, por
ejemplo una célula animal o vegetal o también un procariota que
comprende dicha molécula de ácido nucleico, así como las
composiciones principalmente farmacéuticas que los contienen.
La invención se interesa también por las
aplicaciones agronómicas de los péptidos descritos anteriormente
para obtener plantas resistentes a las bacterias y hongos
fito-patógenos y reducir así la utilización de
plaguicidas químicos tóxicos para el medio ambiente. La aplicación
directa sobre la planta de una cantidad eficaz de péptidos
antibacterianos y/o antifúngicos o de una composición que los
contiene representa una primera forma de emplear la aplicación
agronómica. Una segunda forma de emplear esta aplicación está basada
en técnicas de transgénesis que consisten en incorporar de forma
estable en el ADN de una célula vegetal, una secuencia
polinucleotídica que codifica uno o varios péptidos anteriores. Las
células vegetales así transformadas permiten regenerar una planta
que transmite el carácter de resistencia a las infecciones
bacterianas y/o fúngicas a su descendencia. A título de ejemplos de
plantas, se pueden citar arroz, maíz, colza, remolacha, trigo,
tabaco, tomate, patata, etc.
Otras ventajas y características de la invención
aparecerán a partir de los ejemplos siguientes que se refieren a la
puesta de manifiesto, aislamiento y caracterización de péptidos
antimicrobianos a partir de muestras de contenido estomacal de
machos de Pingüinos Reales así como la forma sintética de la
esfeniscina-2, su espectro de actividad
antimicrobiana y el estudio del efecto del pH sobre su
funcionalidad, y en los que se hará referencia a los dibujos y
tablas adjuntos en los que
\bullet La figura 1 representa la evolución
del pH gástrico y de la temperatura estomacal en dos Pingüinos
Reales machos durante la primera semana de su ayuno de incubación.
En un caso, el contenido estomacal se conserva (A), en el otro
caso, se digiere (B).
\bullet La figura 2 representa la evolución de
la motilidad gástrica y de la temperatura estomacal en dos Pingüinos
Reales machos durante la primera semana de su ayuno de incubación.
En un caso, el contenido estomacal se conserva (A), en el otro
caso, se digiere (B).
\bullet La figura 3 representa la evolución de
las actividades antimicrobianas en el contenido estomacal de
Pingüinos Reales en ayuno, incubando su huevo. Las actividades
antimicrobianas se ensayaron depositando fracciones procedentes de
una primera purificación por cromatografía de péptidos catiónicos.
Se utilizaron tres cepas de microorganismos, representativas de
bacterias Gram - (Escherichia coli), Gram + (Micrococcus
luteus) y hongos filamentosos (Neurospora crassa). La
actividad antimicrobiana corresponde a una disminución o ausencia de
crecimiento de los microorganismos para una fracción ensayada. El
porcentaje indicado para las actividades antimicrobianas
corresponde a la proporción de fracciones que tiene estas
actividades. Se constituyeron dos grupos de Pingüinos, según las
aves que conservan (histogramas oscuros a la izquierda) o digieren
(histogramas más claros a la derecha) su contenido estomacal
durante el ayuno. Letras: diferencia durante el ayuno, para un mismo
grupo; P < 0,05. Estrella: diferencia para una misma etapa
de ayuno, entre los grupos; P < 0,05.
\bullet La figura 4 representa la evolución de
las actividades antimicrobianas totales (histogramas llenos) o
parciales (histogramas rayados) en el contenido estomacal de
Pingüinos Reales en ayuno, incubando su huevo. Las actividades
antimicrobianas se ensayaron depositando fracciones procedentes de
una primera purificación por cromatografía de péptidos catiónicos.
Se utilizaron tres cepas de microorganismos, representativas de
bacterias Gram - (Escherichia coli), Gram + (Micrococcus
luteus) y hongos filamentosos (Neurospora crassa). Si no
hay crecimiento de los microorganismos para una fracción ensayada,
se caracteriza la actividad antimicrobiana como total. Si sólo hay
un crecimiento ralentizado, se trata de una inhibición parcial. El
porcentaje indicado para las actividades antimicrobianas, ya sean
totales o parciales, corresponde a la proporción de fracciones que
tiene estas actividades. Se constituyeron dos grupos de Pingüinos,
según las aves que conservan (histogramas de la izquierda) o
digieren (histogramas de la derecha) su contenido estomacal durante
el ayuno.
\bullet La figura 5 representa la evolución de
las actividades antimicrobianas contra tres tipos de
microorganismos, en el contenido estomacal de Pingüinos Reales en
ayuno, incubando su huevo (Véase la figura 4 para las leyendas).
\bullet La figura 6 representa la evolución
cuantitativa de las esfeniscinas durante el ayuno en el contenido
estomacal de Pingüinos Reales en ayuno, incubando su huevo. Se
constituyeron dos grupos de Pingüinos, según las aves que conservan
(círculos negros y trazos llenos) o digieren (círculos blancos y
línea de puntos grandes) su contenido estomacal durante el ayuno.
Se representan los valores individuales (A) o promediados \pm ESM
(B). En (A) los valores para un individuo que ha conservado su
contenido estomacal entre el inicio y la mitad del ayuno (cuadrados
negros), y que después lo ha digerido entre la mitad y el fin del
ayuno (cuadrados blancos) también se representan (línea de puntos
pequeños).
\bullet La figura 7 representa el espectro de
masa de las esfeniscinas, en forma nativa (A) o después de la
reducción y piridiletilación de los restos cisteína (B).
\bullet La figura 8 representa las
\beta-defensinas implicadas en la respuesta
inmunitaria epitelial en los Vertebrados. L = lengua; T = tráquea;
MB = mucosa bucal; GS = glándulas salivares; P = piel; Mu mucosas
pulmonares; y GI = tracto gastro-intestinal; E =
Estómago; I = intestino; 0 = esófago; TG = tracto genital.
Referencias: (1) Zhao et al. 2001; (2) Harder et al.
1997; (3) Hiratsuka et al. 1998) (4) Mathews et al.,
1999; (5) Harder et al. 2001; (6) García et al.
2001a; (7) García et al. 2001b; (8) Bals et al. 2001;
(9) Duits et al. 2000; (10) Duits et al. sitio AMSDb;
(11) Diamond et al. 1993; (12) Schonwetter et al.
1995; (13) Tarver et al.1998; (14) Bals et al. 1998;
(15) Huttner et al.1997; (16) Morrison et al. 1999;
(17) Bals et al. 1999; (18) Jia et al. 2000; (19)
Yamaguchi et al. 2001; (20) Conejo-García
et al. sitio AMSDb; (21) Zhao et al. 1999; (22)
Huttner et al. 1998; (23) Zhang et al. 1998.
\bullet La figura 9 ilustra el efecto
perjudicial de la esfeniscina-2 de síntesis sobre el
crecimiento de Aspergillus fumigatus, un hongo filamentoso
patógeno (observación al microscopio electrónico (Philips XL30
LaB6)). (Figura 9A) Crecimiento control: las cabezas aspergilares
terminadas por las esporas son bien visibles (x400). (Figura 9B) La
incubación con 6 \muM de esfeniscina-2 implica la
desaparición de las cabezas aspergilares. El efecto observado de la
esfeniscina-2 sobre A. fumigatus no es,
consecuentemente, de tipo fungicida directo sobre las esporas, si
no que se traduce en una parada del crecimiento por inhibición de la
reproducción del hongo ya que no hay formación de cabezas
aspergilares, estructuras implicadas en los procesos de
reproducción/proliferación de este hongo.
\newpage
Ejemplo
1
Como la mayoría de las aves pelágicas, los
Pingüinos Reales se alimentan únicamente en el mar. Alternan su
estancia en el mar para alimentarse con periodos de ayuno en tierra
para reproducirse y mudar. La duración de los viajes alimentarios
en el mar tiene sin embargo una duración y una distancia recorrida
muy variable, debido a una variabilidad a la vez de la distancia a
la que se encuentran sus presas, pero también de la disponibilidad
de estas presas en la zona de prospección alimentaria. Esto resulta
en que a veces la duración de estos viajes alimentarios puede
duplicarse (Bost et al., 1997).
Durante el periodo de reproducción, los dos
miembros de la pareja se relevan para asegurar la incubación del
huevo único (54 días), asegurando el macho normalmente el último
periodo de la incubación. Dada la variabilidad de la duración de
los viajes en el mar, existe una incertidumbre sobre el sexo del
miembro de la pareja que estará sobre el huevo en el momento de la
eclosión. En la mayor parte de los casos, la hembra vuelve a tiempo
para la eclosión, pero su retorno puede aplazarse más de nueve días
(Gauthier-Clerc et al., 2000), mientras que
las reservas endógenas del polluelo recién eclosionado no le
aseguran más que dos o tres días de autonomía.
Se comprueba que el macho de Pingüino Real ha
puesto a punto una adaptación notable que le permite asegurar la
supervivencia del polluelo en caso de retraso de la hembra. Se ha
mostrado en efecto que el macho de Pingüino Real es capaz, durante
su estancia en tierra para asegurar la última parte de la
incubación, de guardar el alimento en su estómago durante más de
dos semanas (Gauthier-Clerc et al., 2000). Él
mismo ayuna y vive de sus reservas corporales. El estado de
conservación de este alimento es notable, no modificándose su masa
ni su valor energético (Gauthier-Clerc et
al., 2002).
Durante la conservación de este alimento, la
temperatura estomacal se mantiene en un valor elevado, de media
38ºC, y el pH gástrico permanece entre 5 y 6 (Figura 1). Por otra
parte, la motricidad gástrica se disminuye fuertemente en caso de
conservación del alimento en comparación con la que se observa en un
ave que digiere su contenido estomacal durante el ayuno de
incubación (Figura 2). Mientras que estos diferentes parámetros son
favorables para la degradación del alimento por las bacterias
presentes en el contenido, el análisis cualitativo y cuantitativo
de este alimento ha mostrado que esto no se produce.
Un estudio bacteriológico ha permitido mostrar
que existe una proporción muy grande de bacterias viables en el
contenido estomacal de Pingüinos que la conservan eficazmente
durante el ayuno, pero aparentemente no pueden desarrollarse. Estas
bacterias presentan en efecto las características morfológicas de
bacterias situadas en condición de estrés medioambiental. Por otra
parte, las bacterias cultivables son principalmente bacterias
medioambientales tales como Corynebacterium, Moraxella,
Staphylococcus, Micrococcus y Streptococcus spp. así
como bacterias muy probablemente procedentes de las presas, a saber
Clostridium spp. Por el contrario, varias bacterias de tipo
Pseudomonas y Vibrio spp. presentes en el medio marino
(Mac Cormack & Fraile, 1990) no se han detectado. Asimismo no
se ha puesto de manifiesto ninguna bacteria entérica aunque dichas
bacterias se hayan observado en el Pingüino Real (Soucek &
Mushin, 1970). Los resultados del análisis de la flora bacteriana
también están a favor de una protección del alimento almacenado
contra la degradación por las bacterias. Un control de la flora
bacteriana por sustancias antimicrobianas, producidas por las aves,
podría explicar esta conservación.
\vskip1.000000\baselineskip
La presencia de péptidos antimicrobianos se ha
investigado en el contenido estomacal de los Pingüinos Reales
durante el ayuno de incubación. Se ha realizado así:
\bullet un seguimiento individual durante el
ayuno de los péptidos antimicrobianos presentes en el contenido
estomacal. Se realizaron varias tomas para un mismo individuo
durante el ayuno,
\bullet una comparación entre dos grupos de
aves, según si estas últimas conservaban (grupo "conservación")
o digerían (grupo "digestión") su contenido estomacal durante
el ayuno (véase el ejemplo 2.1. para el protocolo detallado).
\vskip1.000000\baselineskip
Se seleccionaron cuatro cepas de microorganismos
de ensayo para cribar la presencia de péptidos antimicrobianos en
extractos de contenido estomacal: Micrococcus luteus (Gram
positiva), Escherichia coli SBS 363 (Gram negativa),
Neurospora crassa (hongo filamentoso), y la levadura
Candida albicans. Estas cepas se seleccionaron debido a su
elevada sensibilidad para los péptidos antimicrobianos (véanse los
ejemplos 2.2, 2.3 y 2.4. para el detalle del protocolo).
Restringimos nuestra descripción a las actividades dirigidas contra
las cepas de bacterias E. coli, M. luteus, y N.
crassa.
\vskip1.000000\baselineskip
Se sacan tres resultados principales:
\bullet Existen moléculas con actividad
antimicrobiana en las muestras de contenido estomacal de macho de
Pingüinos Reales.
\bullet Estas actividades antimicrobianas se
expresan diferentemente en los individuos del grupo
"conservación", comparativamente con los individuos del grupo
"digestión". Estas diferencias se sitúan a nivel cuantitativo
y cualitativo.
\vskip1.000000\baselineskip
A nivel cuantitativo:
\bullet Las actividades inhibidoras de los
microorganismos son más importantes en el grupo "conservación"
comparativamente con el grupo "digestión", en el inicio y mitad
del ayuno (Figura 3). La distinción entre las actividades
inhibidoras totales y parciales muestra que la diferencia entre los
dos grupos está asociada a una mayor proporción de actividades
inhibidoras totales en el grupo "conservación"
comparativamente con el grupo "digestión", esto es a lo largo
de todo el ayuno (Figura 4).
\bullet Las actividades inhibidoras (totales y
parciales) se mantienen a lo largo de todo el ayuno en el grupo
"conservación". Se observa una disminución muy grande en la
mitad del ayuno en el grupo "digestión".
\vskip1.000000\baselineskip
A nivel cualitativo (Figura 5):
\bullet Para los tres tipos de microorganismos
ensayados, las actividades inhibidoras son más importantes en el
grupo "conservación" comparativamente con el grupo
"digestión", esto es a lo largo de todo el ayuno. Estas
actividades están dirigidas esencialmente contra la bacteria Gram +
ensayada (M. luteus).
\bullet Con una excepción, sólo las muestras
de los individuos del grupo "conservación" presentan
actividades inhibidoras dirigidas contra la bacteria Gram -
ensayada (E. coli).
\vskip1.000000\baselineskip
En conclusión, estos resultados están muy a
favor de la implicación de sustancias con actividad antimicrobiana
en el fenómeno de conservación del bolo alimenticio durante el ayuno
de incubación en el macho de Pingüino Real.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
2
Todas las muestras de contenido estomacal se
tomaron de Pingüinos Reales machos, en su medio natural. La colonia
de Pingüinos se encuentra en la Isla de la Posesión (46º25'S -
51º45'E), en el Archipiélago de las Islas Crozet. Las tomas se
efectuaron durante el periodo de incubación, mediante una sonda
gástrica. Este estudio, realizado en una zona protegida, y en una
especie protegida, se realizó con la autorización del Territoire des
Terres Australes et Antarctiques Françaises (Decisión
nº2000-59 del 16 Octubre 2000) y la autorización del
Ministère de l'Aménagement du Territoire et de l'Environnement
(autorización 00/240/AUT del 30 Agosto 2000).
a) Aves: Los machos de Pingüino Real se
identificaron al inicio del periodo de incubación, justo después de
la puesta y el paso del huevo entre la hembra y el macho, con un
anillo de plástico puesto temporalmente a nivel del ala.
Las tomas de contenido estomacal se realizaron
durante el último periodo de la incubación, asegurada por el macho.
Con el fin de realizar un seguimiento individual del contenido
estomacal, las tomas se efectuaron, para una misma ave, en tres
etapas diferentes del ayuno: el inicio, la mitad del ayuno
(aproximadamente 7 días) y el fin del ayuno. Para las tomas del
inicio y de la mitad del ayuno, el ave se estudió mientras estaba
sobre su huevo. Para la etapa del fin del ayuno, el macho se capturó
justo después del relevo por la hembra, fuera de la colonia.
Las tomas se efectuaron en calma, fuera de la
colonia. Con el fin de limitar el estrés del ave, ésta se puso en
oscuridad mediante un capuchón. Asimismo, el ave se reemplazó
provisionalmente por un ave de yeso, previamente calentada. El ave
natural se puso en una incubadora el tiempo de la manipulación.
Después de la manipulación, las aves se volvieron a poner en el
sitio exacto de la captura. Todas las aves estudiadas acabaron la
incubación.
Se constituyeron dos grupos de aves, según si
las aves conservaban (grupo "conservación", n = 3), o
digerían (grupo "digestión", n = 3) su contenido estomacal
durante el ayuno de incubación.
b) Toma de las muestras y
condicionamiento: Las muestras de contenido estomacal se tomaron
por un método no destructivo y no invasivo de intubación y de
aspiración. Con el fin de obtener una muestra homogénea se tomó una
cantidad superior a la necesaria en varias veces y se homogeneizó
inmediatamente en un recipiente mantenido en hielo. El muestreo se
realizó solamente después de esta homogeneización. Las muestras se
conservaron a -80ºC. Durante la repatriación de las muestras hacia
la Francia metropolitana, éstas se mantuvieron congeladas
sucesivamente a -80ºC y en nieve carbónica según la técnica de
transporte (barco y avión), antes de ponerlas de nuevo a -80ºC
hasta su análisis con un estricto respeto de la cadena de frío.
\vskip1.000000\baselineskip
La extracción de los péptidos catiónicos
hidrófobos se realizó a partir de las muestras de contenido
estomacal congeladas. El contenido estomacal se trituró mediante un
ultraturax y una sonda de ultrasonidos, en medio de extracción
compuesto por ácido trifluoroacético (TFA, 0,2%) que contiene
aprotinina (22,5 \mug/ml concentración final) como inhibidor de
proteasa. Las muestras se mantuvieron en frío, en hielo, durante
toda la etapa de trituración. La relación volumen de
muestra/volumen de medio de extracción se seleccionó 1/10 al final
de la trituración. Los péptidos se extrajeron a pH
2,5-3 con agitación durante una noche en cámara
fría. Después de centrifugar (10.000 rpm durante 10 min a 6ºC), el
sobrenadante se prepurificó por extracción en fase sólida sobre
cartuchos de fase inversa Sep-Pak C_{18}. Vac (5 g
de fase, Waters^{TM}). El cartucho se solvató con metanol y se
equilibró con agua acidificada (0,05% TFA). La elución de los
péptidos/polipéptidos y proteínas se realizó con una disolución de
80% de acetonitrilo en agua acidificada. La fracción eluida se
liofilizó antes de purificarla por cromatografía líquida de alta
resolución (CLHP).
\vskip1.000000\baselineskip
La fracción 80% Sep-Pak se
sometió a una cromatografía sobre soporte de fase inversa sobre una
columna semi-preparativa Aquapore
RP-300 C_{18} (250 x 7 mm, Brownlee^{TM}),
equilibrada con una disolución de acetonitrilo al 2% en agua
acidificada. Las fracciones se separaron mediante un gradiente
lineal de 2% a 72% de acetonitrilo en agua acidificada en 70 min
con un caudal de 1,3 ml/min.
Esta etapa de purificación se realizó bajo
temperatura controlada (20-22ºC) sobre un sistema
Beckman Gold HPLC equipado con un detector Beckman 168 de
fotodiodo. Las moléculas eluidas de la columna se detectaron por su
absorbancia a 225 nm.
Las diferentes fracciones se recogieron
manualmente, se secaron en vacío (Speed-Vac, Savant)
y se reconstituyeron en 150 \mul de agua ultrapura
(Millipore^{TM}) previamente filtrada (Millipore^{TM}), antes
del análisis de la actividad antimicrobiana.
\vskip1.000000\baselineskip
La purificación de las moléculas con actividad
antimicrobiana (actividad total dirigida contra las dos cepas de
bacterias y la cepa de hongos filamentosos) se realizó a partir de
una fracción procedente del contenido estomacal tomado de un ave
que pertenece al grupo "conservación" al final del ayuno.
La segunda etapa de purificación se realizó
sobre una columna analítica Aquapore OD-300 (220 x
4,6 mm, Brownlee^{TM}). La elución se realizó mediante un
gradiente bifásico de acetonitrilo en agua acidificada, de 2 a 23%
en 10 min y de 23 a 38% en 45 min con un caudal de 0,8 ml/min. Las
diferentes fracciones se recogieron manualmente, se secaron en
vacío (Speed-Vac, Savant) y se reconstituyeron en 70
\mul de agua MilliQ (Millipore^{TM}). Con el fin de limitar la
utilización del producto activo para los ensayos biológicos, sólo se
ensayó la cepa Gram negativa E. coli. Las fracciones
inactivas se ensayaron en N. crassa. No se detectó
ninguna actividad, lo que sugiere que la actividad dirigida contra
el hongo filamentoso N. crassa, registrada durante la
etapa de purificación anterior, está asociada a la fracción que
presenta la actividad dirigida contra la bacteria Gram negativa
E. coli.
\vskip1.000000\baselineskip
La tercera etapa de purificación se realizó
sobre la misma columna analítica que en la etapa 2 utilizando como
condiciones de elución un gradiente bifásico de acetonitrilo en agua
acidificada, de 2 a 20% en 10 min y de 20 a 30% en 50 min con un
caudal de 0,8 ml/min. Las fracciones se recogieron, se secaron en
vacío, se recogieron en 40 \mul de agua y se analizaron para su
actividad antibacteriana contra E. coli.
Estas dos últimas etapas de purificación se
realizaron bajo temperatura controlada, sobre un sistema CLHP
biocompatible (all PEEK Waters, Modelo Waters 626) conectado a un
detector de absorbancia variable (Waters 486). Las moléculas
eluidas de la columna se detectaron por su absorbancia a 225 nm, y
la actividad antimicrobiana se midió según el procedimiento
descrito en el Ejemplo 2.4 siguiente.
\vskip1.000000\baselineskip
La actividad antimicrobiana se midió en cuatro
cepas de microorganismos: Micrococcus luteus (Gram positiva;
colección del Instituto Pasteur, París), Escherichia coli SBS
363 (Gram negativa; donación de M. Boquet del Centre d'Etudes
Nucléaires de Saclay), Neurospora crassa (hongo filamentoso;
micoteca de la Société Clause, París) y Candida albicans
(levadura; donación del Dr. Koenig, Hospital Civil, Estrasburgo).
Estas cuatro cepas se seleccionaron de las colecciones públicas o
privadas debido a su sensibilidad reconocida para péptidos
antimicrobianos naturales.
Las bacterias a ensayar se pusieron en
suspensión en un medio nutritivo apropiado de tipo "Poor
Broth", correspondiente a una disolución de bactotriptona a 10
g/l a la que se añadió NaCl 5 g/l preparada en agua ultrapura.
Las esporas del hongo N. crassa a ensayar
se pusieron en suspensión en medio de cultivo apropiado de tipo
"infusión de Patata - Glucosa". Preferentemente se utilizan 12
g de medio Potato Dextrose Broth (1/2PDB, Difco) para 1 1 de agua
desmineralizada. Se añadieron dos antibióticos al medio de cultivo:
cefotaxina (concentración final 100 \mug/ml) y tetraciclina
(concentración final 10 \mug/ml).
La cepa de levadura C. albicans a
ensayar se incubó en un medio de cultivo apropiado de tipo
"Sabouraud".
Las actividades antimicrobianas se detectaron
por un ensayo de inhibición de crecimiento en medio líquido en
placas de microtitulación (Hétru & Bulet, 1997). Se depositan 10
\mul de cada fracción recogida en las placas de microtitulación
en presencia de 90 \mul de medio de cultivo que contiene los
microorganismos (a una concentración final equivalente a 1 mDO a
600 nm).
Para las bacterias y la levadura, la incubación
se realizó a 30ºC durante 12-24 h con agitación. El
crecimiento de los microorganismos se midió siguiendo la
absorbancia a 600 nm mediante un espectrofotómetro lector de placas
de microtitulación.
Para los hongos filamentosos, la incubación se
realizó a 37ºC bajo atmósfera húmeda durante 48 horas. El
crecimiento fúngico se observó al microscopio fotónico después de
24 h y se cuantificó después de 48 h por medida de la absorbancia a
600 nm mediante un espectrofotómetro lector de placas de
microtitulación.
\vskip1.000000\baselineskip
La pureza y la determinación de la masa
molecular de las moléculas bioactivas se realizaron por
espectrometría de masa según la técnica denominada de tiempo de
vuelo después de ionización por desorción láser asistida por matriz
(Técnica MALDI-TOF). El material utilizado es un
espectrómetro de masa Brucker BIFLEX- III (Bremen, Alemania)
equipado con una óptica de alta resolución SCOUT^{TM} y con un
reflectrón. Este instrumento tiene un potencial máximo de
aceleración de 20kV y puede utilizarse en modo lineal o en modo
reflectrón. La ionización se realiza con un haz a 337 nm emitido
por un láser de nitrógeno con una frecuencia de 3Hz. Los espectros
de masa se calibraron de forma externa con una mezcla estándar de
péptidos de drosophila a saber drosocina, metchnikowina y
drosomicina de masa molecular conocida, respectivamente 2.199,5 Da,
3.046,4 Da y 4.890,5 Da (Bullet, 1999).
La muestra a analizar se preparó según la
técnica del sandwich (Kussmann et. al., 1997) expuesta como
sigue: 0,5\mul de muestra se depositaron sobre una fina capa de
cristales de ácido
\alpha-ciano-4-hidroxicinámico
(4-HCCA, Sigma) obtenidos por una evaporación
rápida de una disolución saturada en acetona. Se recubrió todo con
0,5 \mul de matriz 4-HCCA a saturación en una
disolución de acetonitrilo 50% en agua. Después de secar en un
vacío ligero, la muestra se lavó con 1,5 \mul de TFA 0,1% antes de
secarla de nuevo e introducirla en el espectrómetro de masa.
El espectro de masa obtenido para la fracción
aislada durante la etapa 3 del ejemplo 2.3 anterior se presenta en
la figura 7A. Esta fracción contenía dos moléculas de masa molecular
en MH^{+} 4.482,84 y 4.501,67. La etapa siguiente fue verificar
la presencia de retos de cisteína en las moléculas antimicrobianas
aisladas y opcionalmente modificar estos restos de cisteína para
favorecer la identificación de la secuencia durante la
secuenciación peptídica por degradación de Edman.
\vskip1.000000\baselineskip
La presencia de restos de cisteína se determinó
después de reducción y S-piridiletilación. Una
fracción alicuota de los péptidos purificados en la etapa 3 del
ejemplo 2.3 se sometió a una etapa de reducción química con 4
\mul de ditiotreitol (concentración final 2,2 M) en 40 \mul de
tampón Tris/HCl 0,5 M, pH 8,3 que contiene 2 mM de EDTA y 6 M de
cloruro de guanidinio. El medio de reacción se puso bajo atmósfera
de nitrógeno. Después de 60 min de incubación en oscuridad, se
añadieron a la reacción 2 \mul de 4-vinil
piridina (agente alquilante). El medio de reacción se puso bajo
atmósfera de nitrógeno y se incubó 10 min y a 45ºC en oscuridad. La
reacción se paró por acidificación con 50 \mul de TFA 10%.
\vskip1.000000\baselineskip
Los péptidos piridiletilados se purificaron del
medio de reacción por cromatografía de fase inversa utilizando una
columna narrow bore C_{18} (DeltaPak HPIC_{18}, 2 x 150 mm,
Waters^{TM}). La elución se realizó mediante un gradiente lineal
de acetonitrilo en agua acidificada de 2 a 60% en 90 min con un
caudal de 0,2 ml/min. Esta separación se realizó bajo temperatura
controlada, sobre un sistema CLHP biocompatible (all PEEK Waters,
Modelo Waters 626) conectado a un detector de absorbancia variable
(Waters 486). Las moléculas eluidas de la columna se detectaron por
su absorbancia a 225 nm.
\vskip1.000000\baselineskip
La medida de masa de los péptidos
piridiletilados se efectuó por un espectrómetro de masa
MALDI-TOF según el protocolo enunciado en el
ejemplo 2.5.1. Esta fracción contenía dos moléculas de masa
molecular en MH^{+} 5.120,69 y 5.141,54 (Figura 7B). La
diferencia de masa molecular medida antes y después de la reducción
para las dos moléculas corresponde a la adición de 6 restos de
4-vinil piridina (6 x 106 Da). Esto confirma la
presencia de 6 restos de cisteína en la molécula de 4.482.84 (m/z) y
en la de 4.501.67 (m/z) y su implicación en la formación de tres
puentes disulfuro intramoleculares.
\vskip1.000000\baselineskip
La secuenciación automática por degradación de
Edman de los péptidos S-piridiletilados se realizó
en un secuenciador ABI473A (Applied Biosystems Inc.). Se obtuvieron
dos secuencias primarias de 38 aminoácidos, que se diferenciaban
sólo en un aminoácido en posición 14 (histidina frente a arginina),
con una ambigüedad sobre los aminoácidos en posición 31 y 37. Con
el fin de hacer desaparecer esta ambigüedad, los dos péptidos se
trataron con quimotripsina.
\vskip1.000000\baselineskip
La fracción (4 \mul) que contiene los péptidos
S-piridiletilados se puso en disolución en 20 \mul
de tampón Tris 100 mM a pH 7,8, que contiene 10 mM de CaCl_{2},
en presencia de quimotripsina en la relación 1/20 (enzima/péptidos,
peso/peso). Se analizaron fracciones alicuotas (0,5 \mul) por
espectrometría de masa MALDI-TOF después de 30 min
y 55 min de incubación a 30ºC. Las muestras se analizaron por
espectrometría de masa MALDI-TOF según el protocolo
descrito en el ejemplo 1.5.1. Entre los fragmentos quimotrípsicos
observados después de 55 min, uno de los fragmentos con la masa
molecular medida a 1.261,05 (m/z) ha permitido confirmar y hacer
desaparecer las ambigüedades observadas después de la secuenciación
por degradación de Edman. Secuencias C-terminales
idénticas para los dos péptidos.
El conjunto de las técnicas utilizadas ha
permitido obtener así la estructura completa de la
esfeniscina-1 y de la
esfeniscina-2.
\vskip1.000000\baselineskip
La secuencia primaria de la
esfeniscina-1 es la siguiente:
- SFGLCRLRRGFCAHGRCRFPSIPIGRCSRFVQCCRRVW
- (SEQ ID NO. 14)
Masa molecular calculada 4.483,38 MH^{+}
Masa molecular medida: 4.482,84 MH^{+}
\vskip1.000000\baselineskip
La secuencia primaria de la
esfeniscina-2 es la siguiente:
- SFGLCRLRRGFCARGRCRFPSIPIGRCSRFVQCCRRVW
- (SEQ ID NO. 15)
Masa molecular calculada: 4.502,42 MH^{+}
Masa molecular medida: 4.501,67 MH^{+}
\vskip1.000000\baselineskip
El análisis de los bancos de datos proteicos y
nucleotídicos (FASTA Genome, NCBI-TBLASTN) ha
permitido mostrar que las esfeniscinas pertenecen a la familia de
las \beta-defensinas, péptidos antimicrobianos
ampliamente extendidos en el mundo animal. Se realizó una
comparación detallada de las secuencias de las esfeniscinas con las
secuencias de las \beta-defensinas conocidas
encontradas en los epitelios de los vertebrados y en este caso en
la gallina (Gallus gallus) y en la pintada (Meleagris
gallopavo). Las homologías observadas (Figura 8) muestran
claramente que las esfeniscinas, aisladas a partir de un contenido
estomacal de Pingüino Real, son producidas y secretadas por el ave
y no provienen de la alimentación en sí misma.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
3
Los análisis se realizan para cada muestra de
contenido estomacal, sobre las fracciones procedentes de la primera
etapa de purificación (véase el Ejemplo 2.3 Etapa 1). El
procedimiento de análisis por espectrometría de masa
MALDI-TOF es el descrito en el Ejemplo 2.5.1.
Se reagruparon todas las fracciones procedentes
de la primera etapa de purificación que proceden de un mismo
individuo en una etapa de ayuno dada y que contienen esfeniscina 1
o/y 2. Las esfeniscinas se purificaron por cromatografías sucesivas
sobre columnas de fase inversa apropiadas utilizando gradientes de
acetonitrilo adaptados según el modelo descrito anteriormente en el
Ejemplo 2.3.
Las etapas de purificación se realizaron bajo
temperatura controlada, sobre un sistema CLHP biocompatible (all
PEEK Waters, Modelo Waters 626) conectado a un detector de
absorbancia variable (Waters 486). Las moléculas eluidas de la
columna se detectaron por su absorbancia a 225 nm y la presencia de
las esfeniscinas 1 y 2 se confirmó por espectrometría de masa
MALDI-TOF.
\vskip1.000000\baselineskip
La primera etapa que permite la cuantificación
de las esfeniscinas consistió en realizar una electroforesis
capilar de zona sobre un modelo 270 A-HT (Applied
Biosystems Inc.). Cuatro nl de cada "pool" de fracciones (12
\mul) que contiene esfeniscina (determinado por espectrometría de
masa MALDI-TOF) se inyectaron con asistencia de
vacío en un capilar de sílice (72 cm x 50 \mum). El análisis se
realizó en tampón citrato 20 mM a pH 2,5. La electroforesis se
realizó a 20 kV del ánodo al cátodo durante 20 min a 30ºC. La
migración se registró a 200 nm. Para cada muestra, se determinó la
superficie del pico correspondiente a las esfeniscinas 1 y 2.
Con el fin de poder efectuar la cuantificación,
el área del pico obtenido por electroforesis capilar se comparó con
la de una disolución calibrada de esfeniscinas. Esta disolución
corresponde a la muestra analizada por degradación de Edman. La
cantidad precisa de esfeniscinas secuenciada se determinó por medida
del rendimiento repetitivo y del rendimiento inicial obtenido
durante la secuenciación por degradación de Edman.
Las cantidades observadas se refieren a las
concentraciones presentes en la muestra inicial del contenido
estomacal. Los datos obtenidos muestran claramente una fluctuación
importante del contenido de esfeniscinas del contenido estomacal
entre los dos grupos tratados: el grupo "conservación " y
"digestión" (Figura 6). Por otra parte, en el grupo
"conservación", se observa un aumento neto de la tasa de
esfeniscinas entre el inicio y el fin del ayuno.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
4
En el marco de la presente invención, se
realizaron nuevos estudios con el fin de evaluar las propiedades
antimicrobianas así como la estructura secundaria (tridimensional,
3D) de los péptidos (esfeniscinas) objeto de dicha invención. Con
el objetivo de efectuar estos estudios, se produjo químicamente un
péptido de síntesis de composición y estructura idénticos a una de
las variantes de los péptidos de la invención que es la
esfeniscina-2. Gracias a la
esfeniscina-2 sintética, se pudo emprender el
estudio:
\bullet del espectro de actividad de la
esfeniscina-2 sobre una amplia gama de
microorganismos, con cepas patógenas para el ser humano. Se
utilizaron cepas de bacterias Gram-positivas y
Gram-negativas, de levaduras y de hongos
filamentosos.
\bullet de la actividad de la
esfeniscina-2 en función del pH del medio. En
efecto, en el caso de la conservación del bolo alimenticio en el
Pingüino Real se ha mostrado que el pH oscilaba entre 4 y 6
(Thouzeau et al., 2003). Se trataba de ensayar, in
vitro, si dicho pH podía tener una incidencia sobre la actividad
de la esfeniscina in vivo. Este estudio era esencial en el
contexto de la utilización potencial de estas moléculas para la
conservación alimentaria o la lucha contra infecciones microbianas
en medio gastro-intestinal.
\vskip1.000000\baselineskip
De estos dos estudios se sacan cinco resultados
principales:
\bullet La esfeniscina-2
afecta fuertemente el crecimiento de un número importante de cepas
de bacterias Gram-positivas (Tabla 1). Este efecto
es principalmente de tipo bactericida (lisis de las células
bacterianas);
\bullet La esfeniscina-2 es
igualmente activa contra una gran variedad de cepas de bacterias
Gram-negativas (Tabla 1). Este efecto,
contrariamente al observado contra los gérmenes
Gram-positivos, es sobre todo de tipo
bacteriostático (parada de la multiplicación bacteriana);
\bullet La esfeniscina-2 posee
una actividad antifúngica tanto contra las levaduras como los hongos
filamentosos (Tabla 1). Este efecto puede ser fungicida (lisis de
las esporas) pero puede afectar igualmente a la fase de reproducción
de los hongos por bloqueo de la esporulación como hemos podido
observar en el hongo patógeno para el ser humano, Aspergillus
fumigatus. Este último efecto se ilustra por la figura 9
adjunta;
\bullet La existencia de modos de acción de la
esfeniscina diferentes según las cepas de microorganismos afectadas
por este péptido;
\bullet La esfeniscina-2 es
siempre funcional en la gama de pH observada en el contenido
estomacal de los Pingüinos, es decir de pH 4 a pH 6 (Tabla 2).
En conclusión, la evidencia del amplio espectro
de actividad de la esfeniscina-2, que afecta el
crecimiento de bacterias y de hongos patógenos de plantas y del ser
humano, y el mantenimiento de la funcionalidad de este péptido a
los pH observados in vivo en el estómago son argumentos
adicionales a favor de la implicación de sustancias con actividad
antimicrobiana en el fenómeno de conservación del bolo alimenticio
durante el ayuno de incubación en el Pingüino Real. Estas
propiedades biológicas están igualmente a favor de la utilización
de estas moléculas para la lucha antimicrobiana en un entorno en el
que el pH sería moderadamente ácido.
Los subpárrafos siguientes aportan
características adicionales que se refieren a la forma sintética de
la esfeniscina-2, su espectro de actividad
antimicrobiana y el estudio del efecto del pH sobre su
funcionalidad.
\vskip1.000000\baselineskip
El estudio de las propiedades de la
esfeniscina-2 necesitaba disponer de una cantidad
suficiente de péptido, que era difícil de obtener a partir de
extracto de contenido estomacal de Pingüino. Una forma sintética de
la esfeniscina-2 se obtuvo del laboratorio ALTERGEN
(Schiltigheim, Francia). La esfeniscina-2 se produjo
por síntesis química según un procedimiento conocido por el experto
en la técnica. Después de renaturalizar la molécula en condiciones
adaptadas conocidas por el experto en la técnica, se controlaron la
pureza de la molécula y su identidad con la molécula nativa
utilizando el procedimiento descrito a continuación:
a) Tratamiento del producto bruto de
síntesis. El polvo que constituye el producto bruto de síntesis
se lavó de restos de ácido trifluoroacético presentes con varios
lavados sucesivos mediante una disolución de ACN 50%; lavados
entrecortados por una etapa de secado en vacío
(Speed-Vac, Savant) seguida de una etapa de
liofilización.
b) Verificación de la masa molecular y de la
organización de los puentes disulfuro: La identidad del producto
sintético así lavado se verificó y comparó con la de la molécula
nativa, procedente del contenido estomacal. La masa molecular así
como la pureza de la esfeniscina de síntesis se verificaron por
espectrometría de masa según la técnica denominada de medida de
tiempo de vuelo después de ionización por desorción láser asistida
por matriz (Técnica MALDI-TOF, para los detalles de
la técnica véase el ejemplo 2.5.1.). La disposición de los puentes
disulfuro, característica de la molécula (Cys1-Cys5,
Cys2-Cys4, Cys3-Cys6), se verificó
por escisión enzimática con tripsina (Boehringer Mannheim,
Alemania) seguida de un marcaje másico por MALDI-TOF
de los fragmentos procedentes de esta digestión.
\vskip1.000000\baselineskip
El conjunto de los resultados obtenidos ha
mostrado que la esfeniscina de síntesis era totalmente idéntica a
la molécula esfeniscina-2 natural tanto a nivel de
su estructura primaria como de su disposición de los puentes
disulfuro:
Esfeniscina-2 natural
(Sphe-2N) y sintética (Sphe-2S):
Masa molecular calculada: 4.502,42 MH^{+}
Masa molecular medida (Sphe-2N):
4.501,67 MH^{+}
Masa molecular medida (Sphe-2S):
4.502,71 MH^{+}
Emparejamiento de las cisteínas:
Cys1-Cys5, Cys2-Cys4,
Cys3-Cys6
\vskip1.000000\baselineskip
Debido a esta identidad estricta, la
esfeniscina-2 sintética se utilizó para efectuar los
estudios de las propiedades biológicas de esta molécula y
considerar el estudio de la estructura tridimensional de este
péptido.
\vskip1.000000\baselineskip
Las actividades antimicrobianas expresadas en
concentración mínima de inhibición (CMI) de la
esfeniscina-2 (concentraciones comprendidas entre
0,2 \muM y 100 \muM) se determinaron contra bacterias,
levaduras y hongos utilizando un ensayo de inhibición de
crecimiento en medio líquido en placas de microtitulación (para los
protocolos detallados véase el ejemplo 2.4. así como Hétru y Bulet
1997).
El efecto bactericida o bacteriostático del
péptido se determinó por exposición en placas Petri y recuento de
las colonias presentes después de 24 h de incubación.
Las cepas de microorganismos utilizadas son las
mismas que determinadas descritas anteriormente en la bibliografía
(Lowenberger et al. 1995, 1999) a las que se añadieron las
cepas siguientes (donaciones de investigadores): Bacillus
cereus ATCC 11778 (Colección del Instituto Pasteur, París),
Alcaligenes faecalis, Staphylococcus saprophyticus, S.
haemolyticus y Nocardia astéroïdes (Pr. Monteil y
Piémont, Instituto de Bacteriología, Universidad de Estrasburgo,
Francia), Escherichia coli SBS 363 (Dr. Boquet, Centre
d'Etudes Nucléaires, Saclay, Francia), Vibrio metshnikovii y
V. anguillarum (Dr. Bachère, IFREMER, Montpellier,
Francia), Candida albicans IHEM 8060 (EntoMed, Estrasburgo,
Francia) y C. tropicalis (Dr. Koenig, Hospital Civil,
Estrasburgo, Francia).
El péptido control MSI-94 es una
donación del Dr. M.A. Zasloff (Magainin Scientific Institute,
Plymouth Meeting, Filadelfia); y el péptido tanatina es una
donación del Dr. Bulet (CNRS, UPR 9022, Estrasburgo).
La tabla 1 siguiente presenta el espectro de
actividad de la esfeniscina-2 de síntesis y de dos
péptidos control. La concentración mínima de inhibición de
crecimiento (CMI) corresponde al intervalo [a] - [b] en el que [a]
es la concentración más alta ensayada para la que el microorganismo
crece, y [b] la concentración más baja ensayada a partir de la que
hay 100% de inhibición de crecimiento del microorganismo (Casteels y
Tempst 1994). Los péptidos control son MSI-94 (un
péptido de la familia de las mangaininas, procedente de la piel del
batracio Xenopus laevis, y que presenta un amplio espectro
de actividad antimicrobiana (Maloy y Kari 1995) para ensayar contra
las bacterias y las levaduras; y la tanatina (un péptido antifúngico
que proviene del insecto Podisus maculiventris; Fehlbaum
et al. 1996) para ensayar contra los hongos filamentosos. ND
significa que la actividad del péptido no se ha detectado a las
concentraciones ensayadas, es decir hasta la concentración máxima
de 100 \muM.
Con el fin de determinar si la acidez moderada
del contenido estomacal bien conservada (pH 4-6,
Thouzeau et al. 2003) podía modificar la eficacia de la
esfeniscina in vivo, se ensayó la actividad de la esfeniscina
a pH comprendidos entre 4,2 y 6,1.
Se seleccionaron previamente cepas de
microorganismos capaces de crecer a dichos pH: se trata de
Pseudomonas aeruginosa y de Escherichia coli 1106
(bacterias Gram-negativas).
Los ensayos de actividad antimicrobiana se
realizaron en medio líquido en placas de microtitulación (para los
protocolos detallados véase el ejemplo 2.4. así como Hétru y Bulet
1997).
Para cada ensayo, el pH del medio líquido
utilizado se ajustó con ácido clorhídrico.
La tabla 2 siguiente presenta el efecto del pH
del medio sobre la actividad antimicrobiana de la
esfeniscina-2 de síntesis. Se seleccionaron dos
cepas de bacterias Gram-negativas (Pseudomonas
aeruginosa y Escherichia coli 1106) capaces de crecer en
la gama de pH a ensayar. La gama de pH ensayada abarca las
variaciones de pH observadas en el contenido estomacal bien
conservado del Pingüino Real que incuba (Thouzeau et al.
2003).
\vskip1.000000\baselineskip
Bals, R., Goldman, M.J., &
Wilson, J.M. (1998). Mouse
beta-defensin 1 is a salt-sensitive
antimicrobial peptide present in epithelia of the lung and
urogenital tract. Infect Immun, 66,
1225-32.
Bals, R., Lang, C., Weiner,
D.J., Vogelmeier, C., Welsch, U., & Wilson,
J.M. (2001). Rhesus monkey (Macaca mulatta) mucosal
antimicrobial peptides are close homologues of human molecules.
Clin Diagn Lab Immunol, 8, 370-5.
Bals, R., Wang, X.,
Meegalla, R.L., Wattler, S., Weiner, D.J.,
Nehls, M.C., & Wilson, J.M. (1999). Mouse
beta-defensin 3 is an inducible antimicrobial
peptide expressed in the epithelia of multiple organs. Infect
Immun, 67, 3542-7.
Bost, C.A., Georges, J.-Y.,
Guinet, C., Cherel, Y., Pütz, K.,
Charrassin, J.-B., Handrich, Y., Zorn, T.,
Lage, J., & Le Maho, Y. (1997). Foraging
habitat and food intake of satellite-tracked king
penguins during the autral summer at Crozet Archipelago. Marine
Ecology Progress Series, 150, 21-33.
Bulet, P. (1999). Les peptides
antimicrobiens de la drosophile. médecine/sciences, 15,
23-29.
Casteels, P., & Tempst, P.
(1994) Apidaecin-type peptide antibiotics
function through a non-poreforming mechanism
involving stereospecificity. Biochem Biophys Res Commun, 199,
339-345.
Conejo-Garcia J.R. et
al. Site internet Antimicrobial séquences databank (AMSDb)
http://www.bbcm.univ.
trieste.it/-tossi/pagl.htm
trieste.it/-tossi/pagl.htm
Diamond, G., Jones, D.E., &
Bevins, C.L. (1993). Airway epithelial cells are the
site of expression of a mammalian antimicrobial peptide gene.
Proc Natl Acad Sci U S A, 90, 4596-600.
Duits, L.A., Langermans, J.A.,
Paltansing, S., van der Straaten, T., Vervenne,
R.A., Frost, P.A., Hiemstra, P.S., Thomas,
A.W., & Nibbering, P.H. (2000). Expression of
beta-defensin-1 in chimpanzee (Pan
troglodytes) airways. J Med Primatol, 29,
318-23.
Duits, L.A, et al. Site internet
Antimicrobial séquences databank (AMSDb)
http://www.bbcm.univ.trieste.it/-tossi/pagl.htm
Fehlbaum, P., Bulet, P.,
Chernysh, S., Briand, J. P., Roussel, J. P.,
Letellier, L., Hetru, C., & Hoffmann, J.
A. (1996) Structure-activity analysis of
thanatin, a 21-residue inducible insect defense
peptide with sequence homology to frog skin antimicrobial peptides.
Proc Natl Acad Sci U S A, 96, 1221-1225.
Garcia, J.R., Jaumann, F.,
Schulz, S., Krause, A.,
Rodriguez-Jimenez, J., Forssmann, U.,
Adermann, K., Kluver, E., Vogelmeier, C.,
Becker, D., Hedrich, R., Forssmann, W.G., &
Bals, R. (2001). Identification of a novel,
multifunctional beta-defensin (human beta- defensin
3) with specific antimicrobial activity. Its interaction with
plasma membranes of Xenopus oocytes and the induction of macrophage
chemoattraction. Cell Tissue Res, 306,
257-64.
Garcia, J.R., Krause, A.,
Schulz, S., Rodriguez-Jimenez, F.J.,
Kluver, E., Adermann, K., Forssmann, U.,
Frimpong-Boateng, A., Bals, R., &
Forssmann, W.G. (2001). Human
beta-defensin 4: a novel inducible peptide with a
specific salt-sensitive spectrum of antimicrobial
activity. FASEB J, 15, 1819-21.
Gauthier-Clerc, M., Le
Maho, Y., Clerquin, Y., Bost, C.-A., &
Handrich, Y. (2002). Seabird reproduction in an
unpredictable environment: how king penguins provide their young
chicks with food. Marine Ecology Progress Series, in press,
Gauthier-Clerc, 1 M., Le
Maho, Y., Clerquin, Y., Drault, S., &
Handrich, Y. (2000). Penguin fathers preserve food
for their chicks. Nature, 408, 928-9.
Harder, J., Bartels, J.,
Christophers, E., & Schroder, J.M. (2001).
Isolation and characterization of human
beta-defensin-3, a novel human
inducible peptide antibiotic. J Biol Chem, 276,
5707-13.
Harder, J., Bartels, J.,
Christophers, E., & Schroder, J.M. (1997).
A peptide antibiotic from human skin. Nature, 387, 861
Hétru, C., & Bulet, P.
(1997). Strategies for the isolation and characterization of
antimicrobial peptides of invertebrates. From Methods in Molecular
Biology, vol. 78, W. M. Shafer (ed.) Humana Press Inc.,
Totowa, NJ
Hiratsuka, T., Nakazato, M.,
Date, Y., Ashitani, J., Minematsu, T.,
Chino, N., & Matsukura, S. (1998).
Identification of human
beta-defensin-2 in respiratory tract
and plasma and its increase in bacterial pneumonia. Biochem
Biophys Res Commun, 249, 943-7.
Huttner, K.M.,
Brezinski-Caliguri, D.J., Mahoney,
M.M., & Diamond, G. (1998). Antimicrobial peptide
expression is developmentally regulated in the ovine
gastrointestinal tract. J Nutr, 128,
297S-299S.
Huttner, K.M., Kozak, C.A., &
Bevins, C.L. (1997). The mouse genome encodes a single
homolog of the antimicrobial peptide human
beta-defensin 1. FEBS Lett, 413,
45-9.
Jia, H.P., Wowk, S.A.,
Schutte, B.C., Lee, S.K., Vivado, A.,
Tack, B.F., Bevins, C.L., & McCray, P.B.
Jr. (2000). A novel murine beta -defensin expressed in
tongue, esophagus, and trachea. J Biol Chem, 275,
33314-20.
Jones, D.E., & Bevins, C.L.
(1992). Paneth cells of the human small intestine express an
antimicrobial peptide gene. J Biol Chem, 267,
23216-25..
Kussmann, M., Nordhoff, E.,
Rahbek-Nielsen, H., Haebel, S.,
Rossel-Larsen, M., Jakobsen, L.,
Gobom, J., Mirgorodskaya, E.,
Kroll-Kristensen, A., Palm, L.,&
Roepstorff P. (1997). Matrix-assisted
Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry Sample Preparation
Techniques. Designed for Various Peptide and Protein Analytes. J
Mass Spectrom, 32, 593-601.
Lowenberger, C., Bulet, P.,
Charlet, M., Hetru, C., Hodgeman, B.,
Christensen, B. M., & Hoffmann, J. A.
(1995) Insect immunity: isolation of three novel inducible
antibacterial defensins from the vector mosquito, Aedes aegypti.
Insect Biochem Mol Biol, 25, 867-73.
Lowenberger, C., Charlet, M.,
Vizioli, J., Kamal, S., Richman, A.,
Christensen, B. M., & Bulet, P. (1999)
Antimicrobial activity spectrum, cDNA cloning, and mRNA expression
of a newly isolated member of the cecropin family from the mosquito
vector Aedes aegypti. J Biol Chem, 274,
20092-20097.
Mac Cormack, W.P., & Fraile,
E.R. (1990). Bacterial flora of newly caught antarctic fish
Notothenia neglecta. Polar Biology, 10,
413-417.
Maloy, W. L., & Kari, U. P.
(1995) Structure-activity studies on
magainins and other host defense peptides; Biopolymers, 37,
105-122.
Mathews, M., Jia, H.P.,
Guthmiller, J.M., Losh, G., Graham, S.,
Johnson, G.K., Tack, B.F., & McCray, P.B.J.
(1999). Production of beta-defensin
antimicrobial peptides by the oral mucosa and salivary glands.
Infect Immun, 67, 2740-5.
Minn, I., Kim, H.S., &
Kim, S.C. (1998). Antimicrobial peptides derived from
pepsinogens in the stomach of the bullfrog, Rana catesbeiana.
Biochim Biophys Acta, 1407, 31-9.
Moore, K.S., Bevins, C.L.,
Brasseur, M.M., Tomassini, N., Turner, K.,
Eck, H., & Zasloff, M. (1991). Antimicrobial
peptides in the stomach of Xenopus laevis. J Biol Chem, 266,
19851-7.
Morrison, G.M., Davidson, D.J.,
& Dorin, J.R. (1999). A novel mouse beta defensin,
Def\beta2, which is upregulated in the airways by
lipopolysaccharide. FEBS Lett, 442,
112-6.
O'Neil, D.A., Cole, S.P.,
Martin-Porter, E., Housley, M.P.,
Liu, L., Ganz, T., & Kagnoff, M.F.
(2000). Regulation of human beta-defensins
by gastric epithelial cells in response to infection with
Helicobacter pylori or stimulation with
interleukin-1. Infect Immun, 68,
5412-5.
Perregaux, D.G., Bhavsar, K.,
Contillo, L., Shi, J., & Gabel, C.A.
(2002). Antimicrobial Peptides Initiate
IL-lbeta Posttranslational Processing: A Novel Role
Beyond Innate Immunity. J Immunol, 168,
3024-32.
Schonwetter, B.S., & et al.
(1995). Epithelia antibiotics induced at sites of
inflammation. Sciences, 265, 1645-1648.
Schröder, J.M. (1999). Epithelial
antimicrobial peptides: innate local host response elements. Cell
Mol Life Sci, 56, 32-46.
Soucek, Z., & Mushin, R.
(1970). Gastrointestinal bacteria of certain antarctic birds
and mammals. Applied Microbiology, 20,
561-566.
Tarver, A.P., Clark, D.P.,
Diamond, G., Russell, J.P.,
Erdjument-Bromage, H., Tempst, P.,
Cohen, K.S., Jones, D.E., Sweeney, R.W.,
Wines, M., Hwang, S., & Bevins, C.L.
(1998). Enteric beta-defensin: molecular
cloning and characterization of a gene with inducible intestinal
epithelial cell expression associated with Cryptosporidium parvum
infection. Infect Immun, 66, 1045-56.
Thouzeau, C., Froget, G.,
Monteil, H., Le Maho, Y. &
Harf-Monteil, C. (2003) Evidence of
stress in bacteria associated with long-term
preservation of food in the stomach of incubating king penguins
(Aptenodytes patagonicus). Polar Biol, 26,
115-123.
Wang, Y., Knoop, F.C.,
Remy-Jouet, I., Delarue, C.,
Vaudry, H., & Conlon, J.M. (1998).
Antimicrobial peptides of the brevinin-2 family
isolated from gastric tissue of the frog, Rana esculenta. Biochem
Biophys Res Commun, 253, 600-3.
Yamaguchi, Y., Fukuhara, S.,
Nagase, T., Tomita, T., Hitomi, S.,
Kimura, S., Kurihara, H., & Ouchi, Y.
(2001). A novel mouse beta-defensin,
mBD-6, predominantly expressed in skeletal muscle.
J Biol Chem, 276, 31510-4.
Zhang, G., Wu, H., Shi, J.,
Ganz, T., Ross, C.R., & Blecha, F.
(1998). Molecular cloning and tissue expression of porcine
beta-defensin-1. FEBS Lett,
424, 37-40.
Zhao, C., Nguyen, T., Liu,
L., Shamova, O., Brogden, K., & Lehrer,
R.I. (1999). Differential expression of caprine
beta-defensins in digestive and respiratory tissues.
Infect Immun, 67, 6221-4.
Zhao, C., Nguyen, T., Liu,
L., Sacco, R.E., Brogden, K.A., & Lehrer,
R.I. (2001). Gallinacin-3, an inducible
epithelial beta-defensin in the chicken. Infect
Immun, 69, 2684-91.
<110> Centre National de la Recherche
Scientifique
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> PÉPTIDOS QUE TIENEN PROPIEDADES
ANTIMICROBIANAS Y LAS COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN PRINCIPALMENTE
PARA LA CONSERVACIÓN DE LOS ALIMENTOS
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> 27059FR CNRS 28 junio 2002
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<140> PCT/FR03/XXXXX
\vskip0.400000\baselineskip
<141>
01-07-03
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<150> FR02/08207
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
01-07-02
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 16
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> WORD® 2000
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Esfeniscidas
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa representa un grupo -NH_{2} o
un resto peptídico de 1 a 16 aminoácidos y preferentemente de 4
aminoácidos,
\hskip1cmXaa responde a la fórmula siguiente: -Xaa1-Xaa2- (SEQ ID NO.2)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xab representa un resto peptídico de
1 a 6 aminoácidos, preferentemente 6 aminoácidos
\hskip1cmXab responde a la fórmula siguiente: -Xab1-Xab2-Xab3-Xab4-Xab5- (SEQ ID NO.3)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xac representa un resto peptídico
que comprende de 1 a 4 aminoácidos, preferentemente 4
aminoácidos
\hskip1cmXac responde a la fórmula siguiente: Xac1-Xac2-Xac3-Xac4 (SEQ ID NO.5)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xad representa un resto peptídico
que comprende de 1 a 9 aminoácidos, preferentemente 9 aminoácidos,
ventajosamente Xad responde a la secuencia siguiente:
-Xad1-Xad2-Xad3-Xad4-Xad5-Xad6-Xad7-Xad8-Xad9-
(SEQ ID NO.6),
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xae representa un resto peptídico
que comprende de 1 a 6 aminoácidos, preferentemente 5 aminoácidos,
ventajosamente Xae responde a la secuencia siguiente:
-Xae1-Xae2-Xae3-Xae4-Xae5-
(SEQ ID NO.7)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaf representa un grupo -OH o
-CONH_{2} o también un resto peptídico de 1 a 14 aminoácidos,
preferentemente 4 aminoácidos, ventajosamente Xaf responde a la
secuencia siguiente:
-Xaf1-Xaf2-Xaf3-Xaf4-
(SEQ ID NO.8)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Ca1 representa un aminoácido unido a
uno cualquiera de otros Ca2, Ca3, Ca4, Ca5 y Ca6, ventajosamente Ca1
es un aminoácido azufrado de tipo cisteína y preferentemente una
cisteína.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Ca2 representa un aminoácido unido a
uno cualquiera de otros Ca1, Ca3, Ca4, Ca5 y Ca6, ventajosamente Ca2
es un aminoácido azufrado de tipo cisteína, preferentemente una
cisteína.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Ca3 representa un aminoácido unido a
uno cualquiera de otros Ca1, Ca2, Ca4, Ca5 y Ca6, ventajosamente Ca3
es un aminoácido azufrado de tipo cisteína y preferentemente una
cisteína.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Ca4 representa un aminoácido unido a
uno cualquiera de otros Ca1, Ca2, Ca3, Ca5 y Ca6, ventajosamente Ca4
es un aminoácido azufrado de tipo cisteína y preferentemente una
cisteína.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Ca5 representa un aminoácido unido a
uno cualquiera de otros Ca1, Ca2, Ca3, Ca4, y Ca6, ventajosamente
Ca5 es un aminoácido azufrado de tipo cisteína y preferentemente
una cisteína.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Ca6 representa un aminoácido unido a
uno cualquiera de otros Ca1, Ca2, Ca3, Ca4 y Ca5, ventajosamente Ca6
es un aminoácido azufrado de tipo cisteína y preferentemente una
cisteína.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cmXaa Ca1 Xab Ca2 Xac Ca3 Xad Ca4 Xae Ca5 Ca6 Xaf
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Esfeniscidas
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa1 representa un grupo -NH_{2} o
un resto peptídico de 1 a 13 aminoácidos
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa2 representa un resto peptídico
de 3 aminoácidos elegidos entre aminoácidos hidrófobos o
apolares;
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cmXaa1 Xaa2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Esfeniscidas
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xab1 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares cargados
negativamente, aminoácidos polares pequeños no cargados,
aminoácidos polares grandes no cargados y aminoácidos hidrófobos o
apolares
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xab2 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares cargados
negativamente, aminoácidos polares pequeños no cargados,
aminoácidos polares grandes no cargados y aminoácidos hidrófobos o
apolares
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xab3 representa un resto peptídico
que responde a la fórmula siguiente -Xab3.1-Xab3.2-
(SEQ ID NO.4)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xab4 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares cargados
negativamente, aminoácidos polares pequeños no cargados,
aminoácidos polares grandes no cargados y aminoácidos hidrófobos o
apolares
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xab5 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares cargados
negativamente, aminoácidos polares pequeños no cargados,
aminoácidos polares grandes no cargados y aminoácidos hidrófobos o
apolares
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cmXab1 Xab2 Xab3 Xab4 Xab5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Esfeniscidas
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xab3.1 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares cargados
negativamente, aminoácidos polares pequeños no cargados,
aminoácidos polares grandes no cargados y aminoácidos hidrófobos o
apolares
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xab3.2 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares cargados
negativamente, aminoácidos polares pequeños no cargados,
aminoácidos polares grandes no cargados y aminoácidos hidrófobos o
apolares
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cmXab3.1 Xab3.2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Esfeniscidas
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xac1 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos hidrófobos o apolares y aminoácidos polares
grandes no cargados
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xac2 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos hidrófobos o apolares y aminoácidos polares
grandes no cargados
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xac3 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos hidrófobos o apolares y aminoácidos polares
grandes no cargados
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xac4 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos hidrófobos o apolares y aminoácidos polares
grandes no cargados
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cmXac1 Xac2 Xac3 Xac4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Esfeniscidas
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xad1 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares
grandes no cargados y aminoácidos polares cargados negativamente
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xad2 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares
grandes no cargados y aminoácidos polares cargados negativamente
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xad3 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares
grandes no cargados y aminoácidos polares cargados negativamente
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xad4 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares
grandes no cargados y aminoácidos polares cargados negativamente
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xad5 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares
grandes no cargados y aminoácidos polares cargados negativamente
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xad6 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares
grandes no cargados y aminoácidos polares cargados negativamente
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xad7 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares
grandes no cargados y aminoácidos polares cargados negativamente
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xad8 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares
grandes no cargados y aminoácidos polares cargados negativamente
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xad9 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares
grandes no cargados y aminoácidos polares cargados negativamente
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cmXad1 Xad2 Xad3 Xad4 Xad5 Xad6 Xad7 Xad8 Xad9
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Esfeniscidas
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xae1 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares
grandes no cargados y aminoácidos polares cargados negativamente
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xae2 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares
grandes no cargados y aminoácidos polares cargados negativamente
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xae3 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares
grandes no cargados y aminoácidos polares cargados negativamente
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xae4 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares
grandes no cargados y aminoácidos polares cargados negativamente
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xae5 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares
grandes no cargados y aminoácidos polares cargados negativamente
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cmXae1 Xae2 Xae3 Xae4 Xae5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Esfeniscidas
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaf1 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares
grandes no cargados y aminoácidos polares cargados negativamente
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaf2 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares
grandes no cargados y aminoácidos polares cargados negativamente
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaf3 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares
grandes no cargados y aminoácidos polares cargados negativamente
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaf4 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos polares pequeños no
cargados, aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares
grandes no cargados y aminoácidos polares cargados negativamente
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cmXaf1 Xaf2 Xaf3 Xaf4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Esfeniscidas
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xac1 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares,
aminoácidos polares grandes no cargados, preferentemente Xac1 es un
aminoácido hidrófobo o apolar y muy preferentemente alanina
(Ala).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xac3 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares,
aminoácidos polares pequeños no cargados, aminoácidos polares
grandes no cargados, preferentemente Xac3 es un aminoácido
hidrófobo o apolar y muy preferentemente glicina (Gly).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cmXac1 His Xac3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Esfeniscidas
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xac1 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares,
aminoácidos polares grandes no cargados, preferentemente Xac1 es un
aminoácido hidrófobo o apolar y muy preferentemente alanina
(Ala).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xac3 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares,
aminoácidos polares pequeños no cargados, aminoácidos polares
grandes no cargados, preferentemente Xac3 es un aminoácido
hidrófobo o apolar y muy preferentemente glicina (Gly).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 10
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cmXac1 Arg Xac3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Esfeniscidas
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xad1 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares,
aminoácidos polares grandes no cargados, preferentemente Xad1 es un
aminoácido básico y muy preferentemente arginina (Arg).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xad3 se elige del grupo que
comprende aminoácidos hidrófobos o apolares, aminoácidos polares
pequeños no cargados, aminoácidos básicos, aminoácidos polares
grandes no cargados, preferentemente un aminoácido hidrófobo o
apolar, preferentemente Xad3 es prolina o hidroxiprolina y muy
preferentemente prolina (Pro).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 11
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cmXad1 Pro Xad3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Esfeniscidas
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xae1 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares,
aminoácidos polares grandes no cargados, aminoácidos polares
pequeños no cargados, preferentemente Xae1 es un aminoácido polar
pequeño no cargado y muy preferentemente serina (Ser).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xae3 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares,
aminoácidos polares grandes no cargados, aminoácidos polares
pequeños no cargados, aminoácidos polares cargados negativamente,
preferentemente un aminoácido hidrófobo o apolar y muy
preferentemente fenilalanina (Phe).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 12
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cmXae1 Gln Xae3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Esfeniscidas
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaf1 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares,
preferentemente Xaf1 es un aminoácido básico y muy preferentemente
ariginina (Arg).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221>
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaf3 se elige del grupo que
comprende aminoácidos básicos, aminoácidos hidrófobos o apolares,
aminoácidos polares grandes no cargados, preferentemente Xaf3 es un
aminoácido hidrófobo o apolar y muy preferentemente valina
(Val).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 13
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cmXaf1 Val Xaf3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 38
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Esfeniscidas
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> DISULFURO
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (5)..(33)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Puente disulfuro entre las cisteínas
en posiciones 5 y 33.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> DISULFURO
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (12)..(27)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Puente disulfuro entre las cisteínas
en posiciones 12 y 27.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> DISULFURO
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (17)..(34)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Puente disulfuro entre las cisteínas
en posiciones 17 y 34.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 38
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Esfeniscidas
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> DISULFURO
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (5)..(33)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Puente disulfuro entre los restos en
posiciones 5 y 33.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> DISULFURO
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (12)..(27)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Puente disulfuro entre los restos en
posiciones 12 y 27.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> DISULFURO
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (17)..(34)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Puente disulfuro entre los restos en
posiciones 17 y 34.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 15
Claims (8)
1. Péptido o un análogo de esfeniscina que
presenta una actividad antimicrobiana y que comprende tres enlaces
intramoleculares, y que responde a la fórmula (II) siguiente:
En la
que:
- Xaa responde a la fórmula siguiente:
-Xaa1-Xaa2-(SEQ ID NO.2), en la que Xaa1 representa
un grupo -NH_{2} o un resto peptídico de 1 a 13 aminoácidos, y
Xaa2 es
Ser-Phe-Gly-Leu;
- Xab responde a la fórmula siguiente:
-Xab1-Xab2-Xab3-Xab4-Xab5-
(SEQ ID NO.3), y Xab3 representa un resto peptídico que responde a
la fórmula siguiente: -Xab3.1-Xab3.2-(SEQ ID
NO.4),
- Xac responde a la fórmula siguiente:
-Xac1-Xac2-Xac3-Xac4-
(SEQ ID NO.5), en la que Xac2 es His o Arg
- Xad con la secuencia siguiente:
-Xad1-Xad2-Xad3-xad4-xad5-xad6-Xad7-Xad8-Xad9-
(SEQ ID NO.6), en la que Xad2 es Pro o Phe y Xad3 es Pro
- Xae responde a la secuencia siguiente:
-Xae1-Xae2-Xae3-Xae4-Xae5-
(SEQ ID NO.7), en la que Xae2 es Gln o Arg y Xae5 es Gln;
- Xaf responde a la secuencia siguiente:
-Xaf1-Xaf2-Xaf3-Xaf4-
(SEQ ID NO.8) y Xaf2 y/o Xaf3 es Val; y - Ca1, Ca2, Ca3, Ca4, Ca5 y
Ca6, son aminoácidos azufrados.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Péptido según la reivindicación 1, en el
que:
- Xaa es
Ser-Phe-Gly-Leu,
- Xab es
Arg-Leu-Arg-Arg-Gly-Phe,
- Xac es Ala-Xac2
-Gly-Arg,
- Xad es
Arg-Phe-Pro-Ser-Ile-Pro-Ile-Gly-Arg,
- Xae es
Ser-Arg-Phe-Val-Gln,
- Xaf es
Arg-Arg-Val-Trp,
y
- Xac2 es His o Arg.
\vskip1.000000\baselineskip
3. Composición farmacéutica, agroalimentaria o
agronómica que comprende como agente activo al menos un péptido
según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2.
4. Composición según la reivindicación 3,
caracterizada porque es útil para la conservación de los
alimentos.
5. Composición según la reivindicación 4,
caracterizada porque es útil para prevenir y/o tratar una
infección bacteriana y/o fúngica, en el ser humano, el animal o las
plantas.
6. Polinucleótido caracterizado porque
codifica un péptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1
a 2.
7. Molécula de ácido nucleico, como un vector,
que comprende al menos un polinucleótido según la reivindicación
6.
8. Anfitrión, como una célula animal o vegetal o
también un procariota, que comprende una molécula de ácido nucleico
según la reivindicación 7.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR0208207A FR2841556B1 (fr) | 2002-07-01 | 2002-07-01 | Peptides ayant des proprietes antimicrobiennes et les compositions les contenant notamment pour la conservation des aliments |
| FR0208207 | 2002-07-01 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2337999T3 true ES2337999T3 (es) | 2010-05-03 |
Family
ID=29725047
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES03761672T Expired - Lifetime ES2337999T3 (es) | 2002-07-01 | 2003-07-01 | Esfeniscinas y peptidos analogos antimicrobianos para la conservacion de los alimentos. |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7384911B2 (es) |
| EP (1) | EP1517916B1 (es) |
| JP (1) | JP4410100B2 (es) |
| AT (1) | ATE451114T1 (es) |
| AU (1) | AU2003264679A1 (es) |
| CA (1) | CA2492053C (es) |
| DE (1) | DE60330454D1 (es) |
| ES (1) | ES2337999T3 (es) |
| FR (1) | FR2841556B1 (es) |
| WO (1) | WO2004003006A2 (es) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1309703C (zh) * | 2002-06-19 | 2007-04-11 | 纽若泰克有限公司 | 四氟苄基衍生物及含有其成分的用于治疗和预防中枢神经系统的急慢性神经变性疾病的药物组合物 |
| JP2009535027A (ja) * | 2006-04-27 | 2009-10-01 | シンガポール ヘルス サービシーズ ピーティーイー リミテッド | 抗菌ペプチド |
| CN102159233A (zh) | 2008-07-18 | 2011-08-17 | 诺维信阿德宁生物技术公司 | 使用哺乳动物β防御素的炎性肠病的治疗 |
| KR101329774B1 (ko) | 2010-06-16 | 2013-11-15 | 주식회사 나이벡 | 항균 또는 항염증 활성을 가지는 펩타이드 및 이를 유효성분으로 함유하는 약제학적 조성물 |
| CN102229666B (zh) * | 2011-05-27 | 2013-04-17 | 山东迅达康兽药有限公司 | 动物源型阳离子抗菌肽的制备方法及其应用 |
| JP6219277B2 (ja) | 2011-07-08 | 2017-10-25 | ディフェンシン セラピューティクス アンパルトセルスカブＤｅｆｅｎｓｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ａｐｓ | 炎症性腸疾患の経口治療 |
| WO2013026794A1 (en) * | 2011-08-19 | 2013-02-28 | Novozymes | Novel immunomodulatory peptide |
| AR089615A1 (es) * | 2012-12-28 | 2014-09-03 | Consejo Nac Invest Cient Tec | Peptidos antimicrobianos, composiciones que los comprenden y usos |
| CN103554244B (zh) | 2013-05-09 | 2016-09-07 | 香雪集团(香港)有限公司 | 具有抑制呼吸道病毒感染的活性的肽及其应用和制备方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5635594A (en) * | 1994-03-11 | 1997-06-03 | University Of California, Los Angeles | Gallinacins - antibiotic peptides |
| CA2264203A1 (en) * | 1996-08-22 | 1998-02-26 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for use of defensin |
| AU2001279073B2 (en) * | 2000-07-28 | 2006-08-24 | Christopher J. Murphy | Transplant media |
-
2002
- 2002-07-01 FR FR0208207A patent/FR2841556B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
2003
- 2003-07-01 EP EP03761672A patent/EP1517916B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 2003-07-01 JP JP2004516904A patent/JP4410100B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2003-07-01 DE DE60330454T patent/DE60330454D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2003-07-01 AU AU2003264679A patent/AU2003264679A1/en not_active Abandoned
- 2003-07-01 AT AT03761672T patent/ATE451114T1/de not_active IP Right Cessation
- 2003-07-01 ES ES03761672T patent/ES2337999T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-07-01 CA CA2492053A patent/CA2492053C/fr not_active Expired - Lifetime
- 2003-07-01 WO PCT/FR2003/002041 patent/WO2004003006A2/fr active Application Filing
-
2004
- 2004-12-30 US US11/027,111 patent/US7384911B2/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1517916B1 (fr) | 2009-12-09 |
| WO2004003006A3 (fr) | 2004-04-08 |
| US7384911B2 (en) | 2008-06-10 |
| JP4410100B2 (ja) | 2010-02-03 |
| DE60330454D1 (de) | 2010-01-21 |
| US20050245437A1 (en) | 2005-11-03 |
| CA2492053C (fr) | 2014-04-08 |
| AU2003264679A8 (en) | 2004-01-19 |
| CA2492053A1 (fr) | 2004-01-08 |
| JP2006513136A (ja) | 2006-04-20 |
| AU2003264679A1 (en) | 2004-01-19 |
| FR2841556B1 (fr) | 2007-07-20 |
| FR2841556A1 (fr) | 2004-01-02 |
| WO2004003006A2 (fr) | 2004-01-08 |
| EP1517916A2 (fr) | 2005-03-30 |
| ATE451114T1 (de) | 2009-12-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2429108T3 (es) | Péptidos antibióticos | |
| Romanelli et al. | Peptides from Royal Jelly: studies on the antimicrobial activity of jelleins, jelleins analogs and synergy with temporins | |
| Noga et al. | Piscidin 4, a novel member of the piscidin family of antimicrobial peptides | |
| Schröder | Epithelial peptide antibiotics | |
| Harris et al. | Anionic antimicrobial peptides from eukaryotic organisms | |
| Takahashi et al. | Structural determinants of host defense peptides for antimicrobial activity and target cell selectivity | |
| Birkemo et al. | Hipposin, a histone-derived antimicrobial peptide in Atlantic halibut (Hippoglossus hippoglossus L.) | |
| JP4310107B2 (ja) | 生物活性を有する短ペプチド及び該ペプチドの使用方法 | |
| Konno et al. | Eumenitin, a novel antimicrobial peptide from the venom of the solitary eumenine wasp Eumenes rubronotatus | |
| Kim et al. | Correlation between the activities of α-helical antimicrobial peptides and hydrophobicities represented as RP HPLC retention times | |
| Rollins-Smith et al. | An antimicrobial peptide from the skin secretions of the mountain chicken frog Leptodactylus fallax (Anura: Leptodactylidae) | |
| US20040229808A1 (en) | Cosmetic compositions containing short bioactive peptides | |
| ES2337999T3 (es) | Esfeniscinas y peptidos analogos antimicrobianos para la conservacion de los alimentos. | |
| Chen et al. | Antimicrobial peptides from the venoms of Vespa bicolor Fabricius | |
| CN101775068A (zh) | 新的天然抗菌肽、其编码序列及用途 | |
| US9556228B2 (en) | Modified apidaecin derivatives as antibiotic peptides | |
| Shabir et al. | Isolation and characterization of β-defensin-like protein 1 from epidermal mucus of fungal infected fish (Cyprinus carpio) and assessment of its antimicrobial potencies | |
| ES2710785T3 (es) | Péptidos antimicrobianos basados en CMAP27 | |
| King et al. | Purification and characterization of antimicrobial peptides from the Caribbean frog, Leptodactylus validus (Anura: Leptodactylidae) | |
| US20100093642A1 (en) | Novel polypeptides | |
| ES2691323T3 (es) | Análogos de temporina-SHa y usos de los mismos | |
| KR102496847B1 (ko) | 흰점박이꽃무지 유충으로부터 분리한 프로테티아마이신-5 펩타이드 및 이의 용도 | |
| KR102492397B1 (ko) | 흰점박이꽃무지 유충으로부터 분리한 프로테티아마이신-4 펩타이드 및 이의 용도 | |
| Ying | Exploring the Pharmacological Potential of Bioactive Peptides in Amphibians and Plants: From Identification to Rational Design | |
| Kalita et al. | Molecular cloning and characterization of lingual antimicrobial peptide cDNA of Bubalus bubalis |