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ES2366973T3 - Compuestos y procedimiento para modular la expresión génica. - Google Patents

Compuestos y procedimiento para modular la expresión génica. Download PDF

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ES2366973T3
ES2366973T3 ES07811872T ES07811872T ES2366973T3 ES 2366973 T3 ES2366973 T3 ES 2366973T3 ES 07811872 T ES07811872 T ES 07811872T ES 07811872 T ES07811872 T ES 07811872T ES 2366973 T3 ES2366973 T3 ES 2366973T3
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nucleotides
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ES07811872T
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Sanjay Bhanot
Richard S. Geary
Robert Mckay
Brett P. Monia
Punit P. Seth
Andrew M. Siwkowski
Eric E. Swayze
Edward Wancewicz
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Isis Pharmaceuticals Inc
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Abstract

Un compuesto antisentido corto de 10 a 14 monómeros de longitud, que comprende una región hueco de 2'desoxirribonucleótido flanqueada por cada lado por un ala, en la que cada ala consiste de forma independiente en 1 a 3 monómeros modificados de alta afinidad que son nucleótidos modificados con azúcar que comprenden un puente entre la posición 4' y 2' del azúcar, para uso en el tratamiento de un trastorno metabólico en un animal.

Description

Antecedentes
Utilizar las secuencias génicas causantes de enfermedad como diana fue sugerido por primera vez hace casi 40 años (Belikova y col., Tet.Lett., 1967, 37, 3557-3562) y, una década más tarde, se demostró la actividad antisentido en cultivos celulares (Zamecnik y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A, 1978, 75, 280-284). Una ventaja de la tecnología antisentido en el tratamiento de una enfermedad o afección producida por un gen causante de enfermedad es que es un enfoque genético directo que tiene la capacidad para modular la expresión de genes causantes de enfermedades específicas.
En general, el principio detrás de la tecnología antisentido es que un compuesto antisentido hibrida con un ácido nucleico diana y efectúa la modulación de la actividad de la expresión génica o su función, tal como la transcripción, la traducción o el corte y empalme. La modulación de la expresión génica se puede conseguir mediante, por ejemplo, degradación de la diana o inhibición basada en la ocupación. Un ejemplo de modulación de la función diana del ARN mediante degradación es la RNasa, degradación basada en H del ARN diana por hibridación con un compuesto antisentido similar a ADN. Otro ejemplo de modulación de la expresión génica mediante degradación diana es por el ARN de interferencia (ARNi). El ARNi es una forma de silenciamiento génico mediado por antisentido, que implica la introducción de ARNds, que conduce a la reducción específica de secuencia de los niveles de ARNm endógeno objetivo, La especificidad de secuencia convierte a los compuestos antisentido en herramientas extremadamente atractivas par la validación de dianas y la funcionalización génica, así como herramientas de investigación para identificar y caracterizar nucleasas y como agentes terapéuticos para modular de forma selectiva la expresión de genes implicados en la patogenia de una cualquiera de diversas enfermedades.
La tecnología antisentido es un medio eficaz para reducir la expresión de uno o más productos génicos específicos y, por tanto, se puede demostrar que son útiles unicamente en una serie de aplicaciones terapéuticas, diagnósticas y de investigación. De forma rutinaria se usan nucleósidos químicamente modificados para su incorporación en compuestos antisentido con el objetivo de potenciar una o más propiedades, tales como la resistencia a las nucleasas, la farmacocinética o la afinidad por un ARN diana.
A pesar de la expansión de la información desde el descubrimiento de la tecnología antisentido, sigue existiendo la necesidad no satisfecha de compuestos antisentido con mayor eficacia, menor toxicidad y menores costes. Hasta la presente revelación no se han empleado modificaciones de alta afinidad en el diseño de compuestos antisentido cortos para reducir el ARN diana in vivo. Esto es por los problemas con el grado de especificidad diana que habría empleado una secuencia de 15 nucleótidos o más corta para reducir la diana en un sistema vivo. En estudios previos se ha descrito que se consigue mayor especificidad y, por tanto, mayor potencial de potencia, con los compuestos antisentido de longitud entre 16 y 20 bases nucleotídicas.
El documento WO 2004/044181 (ISIS PHARMACEUTICALS, INC.) ISIS PHARMACEUTICALS, INC.) describe compuestos antisentido, composiciones y procedimientos para modular la expresión de la apolipoproteína B.
Frieden y col. (Nucleic Acids Res., 2003, 31(21), 6365-72) evaluaron oligonucleótidos que contienen ácidos nucleicos bloqueados (LNA) para la actividad antisentido, reclutamiento de RNasa H, estabilidad de la nucleasa y afinidad térmica.
Fluiter y col. (Chembiochem., 2005, 6(6), 1104-9) investigaron las propiedades in vitro e in vivo de cuatro LNA diferentes en un oligonucleótido antisentido.
El documento WO 2006/020676 (ISIS PHARMACEUTICALS, INC.) describe un procedimiento para reducir los niveles de colesterol en suero en un sujeto humano, que comprende administrar a dicho sujeto una pluralidad de dosis de un oligonucleótido dirigido a la apolipoproteína B.
El documento WO 2007/031081 (SANTARIS PHARMA) describe oligonucleótidos dirigidos contra el gen de la Apo-B100 par modular la expresión de Apo-B 100.
La presente revelación describe que la incorporación de nucleótidos de alta afinidad químicamente modificados en compuestos antisentido permite compuestos antisentido de una longitud de 8-16 bases nucleotídicas útiles par los ARN diana en animales con mayor potencia y mejor índice terapéutico. Por tanto, en el presente documento divulga compuestos antisentido que comprenden modificaciones en nucleótidos de alta afinidad útiles para reducir un ARN diana in vivo. Dichos compuestos antisentido cortos son eficaces a dosis menores que los compuestos antisentido descritos anteriormente, lo que permite una reducción de la toxicidad y los costes de tratamiento.
Sumario de la invención
La invención proporciona un compuesto antisentido corto de 10 a 14 monómeros de longitud, que comprende una región hueco en 2'-desoxirribonucleótido flanqueada por cada lado por un ala, en la que cada ala consiste en una forma independiente de 1 a 3 monómeros modificados de alta afinidad que son nucleótidos modificados con azúcar que comprenden un puente entre la posición 4' y 2' del azúcar, para uso en el tratamiento de un trastorno metabólico en un animal.
La invención también proporciona el uso de un compuesto antisentido corto de 10 a 14 monómeros de longitud, que comprende una región hueco en 2'-desoxirribonucleótido flanqueada por cada lado por un ala, en la que cada ala consiste en una forma independiente de 1 a 3 monómeros modificados de alta afinidad que son nucleótidos modificados con azúcar que comprenden un puente entre la posición 4' y 2' del azúcar, para la preparación de un medicamento para tratar un trastorno metabólico en un animal.
La invención también proporciona un compuesto antisentido corto de 10 a 14 monómeros de longitud, que comprende una región hueco en 2'-desoxirribonucleótido flanqueada por cada lado por un ala, en la que cada ala consiste en una forma independiente de 1 a 3 monómeros modificados de alta afinidad que son nucleótidos modificados con azúcar que comprenden un puente entre la posición 4' y 2' del azúcar, para uso en el tratamiento de un trastorno cardiovascular en un animal. La invención también proporciona el uso de un compuesto antisentido corto de 10 a 14 monómeros de longitud, que comprende una región hueco en 2'-desoxirribonucleótido flanqueada por cada lado por un ala, en la que cada ala consiste en una forma independiente de 1 a 3 monómeros modificados de alta afinidad que son nucleótidos modificados con azúcar que comprenden un puente entre la posición 4' y 2' del azúcar, para la preparación de un medicamento para tratar un trastorno cardiovascular en un animal.
Otros aspectos de la invención se exponen en las reivindicaciones adjuntas.
Sumario de la divulgación
En el presente documento se divulgan compuestos antisentido cortos y procedimientos de uso de dichos compuestos para reducir la expresión del ARN diana en células o tejidos. En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulga un procedimiento de reducir la expresión de una diana en un animal, que comprende administrar al animal y compuesto antisentido corto dirigido al ácido nucleico de dicha diana. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos son compuestos oligonucleotídicos. En ciertas realizaciones, los oligonucleótidos antisentido cortos tienen una longitud de aproximadamente 8 a 16, preferentemente de 9 a 15, más preferentemente de 9 a 14, más preferentemente de 10 a 14, y comprenden una región hueco flanqueada por cada lado por un ala, en la que cada ala consiste en una forma independiente de 1 a 3 nucleótidos. Entre los motivos preferidos se incluyen motivos ala-hueco desoxi-ala seleccionados de 3-10-3, 2-10-3, 2-10-2, 1-10-1, 24-2, 14-1, 3-6-3 o 1-6-1. En una realización preferida, el oligonucleótido antisentido corto comprende al menos una modificación de alta afinidad. En una realización adicional, la modificación de alta afinidad incluye nucleótidos de alta afinidad químicamente modificados. En una realización preferida, cada ala consiste en una forma independiente de 1 a 3 nucleótidos modificados de alta afinidad. En una realidad, los nucleótidos modificados de alta afinidad son nucleótidos modificados con azúcar.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos exhiben mayor captación en el intestino en comparación con los compuestos antisentido de mayor longitud. Por tanto, en el presente documento también se divulgan procedimientos de reducir una diana en un animal, que comprende administrar por vía oral los compuestos antisentido cortos de la presente divulgación.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos están dirigidos a un ácido nucleico que codifica una proteína seleccionada de ApoB, SGLT2, PCSK9, SOD1, CRP, GCCR, GCGR, DGAT22, PTP1B y PTEN.
También se divulgan procedimientos de tratamiento de un trastorno metabólico en un animal, que comprende administrar a un animal que necesite dicha terapia un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico implicado en la regulación del metabolismo o aclaramiento de la glucosa, el metabolismo de los lípidos, el metabolismo del colesterol o la señalización de la insulina.
También se divulgan procedimientos de incremento de la sensibilidad a la insulina, disminución de la glucosa en sangre o disminución de HbAic en un animal, que comprende administrar a dicho animal un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico que codifica una diana implicada en la regulación del metabolismo o aclaramiento de la glucosa, el metabolismo de los lípidos, el metabolismo del colesterol o la señalización de la insulina.
Se divulgan procedimientos adicionales de disminución del colesterol total en suero, LDL sérica, VLDL sérica, HDL sérica, triglicéridos séricos, apolipoproteína(s) sérica(s) o ácidos grasos libres en un animal, que comprende administrar a dicho animal un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico que codifica una diana implicada en la regulación del metabolismo o aclaramiento de la glucosa, el metabolismo de los lípidos, el metabolismo del colesterol o la señalización de la insulina, en el que dicho compuesto antisentido corto tiene una longitud de 8 a 16 nucleótidos y comprende una región hueco flanqueada por cada lado por un anal, en la que cada ala consiste en una forma independiente de 1 a 3 nucleótidos modificados de alta afinidad.
Ciertas dianas implicadas en la regulación del metabolismo o aclaramiento de la glucosa, el metabolismo de los lípidos, el metabolismo del colesterol o la señalización de la insulina incluyen, entre otras, GCGR y ApoB-100. Por tanto, se divulgan compuestos antisentido cortos dirigidos a ácidos nucleicos que codifican GCGR y ApoB-100 y reducen la expresión de dichas dianas y/o ácidos nucleicos diana en animales. Además, se divulga el uso de compuestos antisentido cortos dirigidos a ácidos nucleicos que codifican CGCR y ApoB-100 para el tratamiento de una enfermedad o afección metabólica o cardiovascular.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos comprenden además un grupo conjugado. Entre los grupos conjugados se incluyen, C16 y colesterol.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos comprenden al menos una base nucleotídica modificada, enlace internucleosídico o resto de azúcar. En ciertas realizaciones, dicho enlace internucleosídico modificado es un enlace internucleosídico fosforotioato. En ciertas realizaciones, cada enlace internucleosídico es un enlace internucleosídico fosforotioato.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos comprenden al menos una modificación de alta afinidad. En ciertas de dichas realizaciones, la modificación de alta afinidad es un nucleótido de alta afinidad químicamente modificado. En ciertas realizaciones, los nucleótidos de alta afinidad químicamente modificados son nucleótidos modificados con azúcar. En ciertas realizaciones, al menos uno de los nucleótidos modificados con azúcar comprende un puente entre la posición 4’ y la posición 2’ del azúcar. Cada uno de los nucleótidos modificados con azúcar está, de forma independiente, en la conformación del azúcar ß-D o α-L En ciertas realizaciones, cada uno de dichos nucleótidos modificados confiere una Tm de al menos 1 a 4 grados por nucleótido. En ciertas realizaciones, cada uno de dichos nucleótidos modificados con azúcar comprende un grupo sustituyente en 2’ que es distinto a H o a OH. Dichos nucleótidos modificados con azúcar incluyen aquéllos que tienen un resto de azúcar bicíclico con puente en las posiciones 4' a 2’. En ciertas realizaciones, cada uno de los grupos sustituyentes en 2’ es, de forma independiente, alcoxi, alcoxi sustituido o halógeno. En ciertas realizaciones, cada uno de los grupos sustituyentes en 2’ es OCH2CH2OCH3 (2’-MOE).
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen uno o más nucleótidos modificados con azúcar, que comprenden un puente entre la posición 4’ y 2’ del azúcar, en los que cada uno de dichos puentes comprende de forma independiente de 2 a 4 grupos de unión seleccionados de forma independiente de -[C(R1)(R2)]n-, -C(R1)=C(R2)-, C(R1)=N-, -C(=NR1)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O-, n-Si(R1)2, -S(=O)x- y -N(R1)-;
en los que
x es 0, 1, o 2;
n es 0, 1, 2, 3 o 4;
cada R1 and R2 es, de forma independiente, H, un grupo protector, hidroxilo, alquilo C1-C12, alquilo C1-C12 sustituido, alquenilo C2-C12, alquenilo C2-C12 sustituido, alquinilo C2-C12, alquinilo C2-C12 sustituido, arilo C5-C20, arilo C5-C20 sustituido, radical heterociclo, radical heterociclo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, radical alicíclico C5-C7, radical alicíclico C5-C7 sustituido, halógeno, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3 , COOJ1, acilo (C(=O)-H), acilo sustituido, CN, sulfonilo (S(=O)2-J1 o sulfoxilo (S(=O)-J1); y
y cada J1 y J2 es, de forma independiente, H, alquilo C1-C12, alquilo C1-C12 sustituido, alquenilo C2-C12, alquenilo C2-C12 sustituido, alquinilo C2-C12, alquinilo C2-C12 sustituido, arilo C5-C20, arilo C5-C20 sustituido, acilo (C(=O)-H), acilo sustituido, un radical heterociclo, un radical heterociclo sustituido, aminoalquilo C1-C12, aminoalquilo C1-C12 sustituido o un grupo protector.
En un aspecto, cada uno de dichos puentes es, de forma independiente, -[C(R1)(R2)]n-, -[C(R1)(R2)]n-O-, -C(R1R2)-N(R1)O- o nn-C(R1R2)-O-N(R1)-. En otro aspecto, cada uno de dichos puentes es, de forma independiente, 4’-(CH2)3-2’, 4’(CH2)2-2’, 4’-CH2O-2’, 4’-(CH2)2-O-2’, 4’-CH2-O-N(R1)-2’ y 4’-CH2-N(R1)-O-2’-, en el que cada R1 es, de forma independiente, H, un grupo protector o alquilo C1-C12.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan compuestos antisentido cortos útiles en la reducción de dianas y/o ARN dianas asociados con estados de enfermedad en animales. En ciertas realizaciones se divulgan procedimientos de uso de compuestos antisentido cortos para reducir la expresión de un ARN diana en un animal. En ciertas realizaciones en el presente documento se divulga el uso de un compuesto antisentido corto en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno metabólico en un animal. En ciertas realizaciones en el presente documento se divulga el uso de un compuesto antisentido corto en la preparación de un medicamento para incrementar la sensibilidad a la insulina, disminuir la glucosa en sangre o disminuir el HbA1c en un animal. También se divulga el uso de un compuesto antisentido corto en la preparación de un medicamento para disminuir el colesterol sérico total, los niveles de LDL en suero, los niveles de VLDL en suero, los niveles de HDL en suero, triglicéridos en suero, una poliproteína(a) en suero o ácidos grasos libres en un animal.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos del presente documento exhiben una potencia igual o mayor con respecto al defectivo de ARN diana en comparación con el oligonucleótido antisentido parental más largo, de al menos 20 nucleótidos de longitud. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos exhiben un inicio de la acción más rápido (reducción del ARN diana) en comparación con el oligonucleótido antisentido parental. En ciertas realizaciones, el incremento de la potencia se produce en el riñón. En ciertas realizaciones, el ARN diana se expresa predominantemente en los riñones. En ciertas realizaciones, el incremento de la potencia se produce en el hígado. En ciertas realizaciones, el ARN diana se expresa predominantemente en el hígado.
Descripción detallada
Debe entenderse que tanto la descripción general anterior como la descripción detallada siguiente son ejemplos y explicaciones únicamente y no son restrictivas de la invención reivindicada. En el presente documento, el uso del singular incluye el plural a menos que específicamente se indique lo contrario. Como se usa en el presente documento, “o” significa “y/o”, a menos que se indique lo contrario. Además, el uso del término “que incluye”, así como otras formas, tales como "incluye" e "incluido" no es limitante. Asimismo, términos tales como “elemento” o “componente” abarcan tanto elementos como componentes que comprenden una unidad y elementos y componentes que comprenden más de una subunidad, menos que específicamente se indique lo contrario.
Los encabezados de sección usados en el presente documento son únicamente con motivos organizativos y no deben interpretarse como limitantes de la materia objeto descrita.
A. Definiciones
A menos que se proporcionen definiciones específicas, la nomenclatura usada en relación con la química analítica, la química orgánica sintética y la química medicinal y farmacéutica descritas en el presente documento y los procedimientos y técnicas de las mismas descritos en el presente documento son los bien conocidos y usados habitualmente en la técnica. Se pueden usar técnicas estándar para síntesis química, análisis químico, preparación farmacéutica, formulación y liberación, y tratamiento de sujetos. Algunas de estas técnicas y procedimientos se pueden encontrar en, por ejemplo, "Carbohydrate Modifications in Antisense Research" Editado por Sangvi y Cook, American Chemical Society, Washington D.C., 1994; y "Remington’s Pharmaceutical Sciences," Mack Publishing Co., Easton, Pa., 18th edition, 1990
A menos que se especifique lo contrario, los siguientes términos tienen los significados siguientes:
Como se usa en el presente documento, el término “nucleósido” quiere decir una glicosilamina que comprende una base nucleotídica y un azúcar. Nucleósidos incluyen, entre otros, nucleósidos naturales, nucleósidos abásicos, nucleósidos modificados y nucleósidos que tienen bases miméticas y/o grupos de azúcar.
Como se usa en el presente documento, el término “nucleótido” se refiere a una glicosilamina que comprende una base nucleotídica y un azúcar que tiene un grupo fosfato unido covalentemente al azúcar. Los nucleótidos pueden estar modificados con cualquiera de diversos sustituyentes.
Como se usa en el presente documento, el término “base nucleotídica” se refiere a una parte de base de un nucleósido o nucleótido. Una base nucleotídica puede comprender cualquier átomo o grupo de átomos capaces de unir el hidrógeno con una base de otro ácido nucleico.
Como se usa en el presente documento, la expresión “resto de base heterocíclica” se refiere a una base nucleotídica que comprende un heterociclo.
Como se usa en el presente documento, el término “desoxirribonucleótido” quiere decir un nucleótido que tiene un hidrógeno en la posición 2’ de la porción azúcar del nucleótido. Los desoxirribonucleótidos pueden estar modificados con cualquiera de diversos sustituyentes.
Como se usa en el presente documento, el término “ribonucleótido” quiere decir un nucleótido que tiene un hidroxi en la posición 2’ de la porción azúcar del nucleótido. Los ribonucleótidos pueden estar modificados con cualquiera de diversos sustituyentes.
Como se usa en el presente documento, la expresión “compuesto oligomérico” se refiere a una estructura polimérica que comprende dos o más subestructuras y que es capaz de hibridar con una región de una molécula de ácido nucleico. En ciertas realizaciones, los compuestos oligoméricos son oligonucleósidos. En ciertas realizaciones, los compuestos oligoméricos son oligonucleótidos. En ciertas realizaciones, los compuestos oligoméricos son compuestos antisentido. En ciertas realizaciones, los compuestos oligoméricos son oligonucleótidos antisentido. En ciertas realizaciones, los compuestos oligoméricos son compuestos antisentido cortos. En ciertas realizaciones, los compuestos oligoméricos son oligonucleótidos antisentido cortos. En ciertas realizaciones, los compuestos oligoméricos son oligonucleótidos quiméricos.
Como se usa en el presente documento, el término “monómero” se refiere a una única unidad de un oligómero. Monómeros incluyen, entre otros, nucleósidos y nucleótidos, naturales o modificados.
Como se usa en el presente documento, “oligonucleósido” se refiere a un oligonucleótido en el que los enlaces internucleosídicos no contienen un átomo de fósforo.
Como se usa en el presente documento, el término “oligonucleótido” se refiere a una compuesto oligomérico que comprende una pluralidad de nucleótidos unidos. En cierta realización se modifica uno o más nucleótidos de un oligonucleótido. En ciertas realizaciones, un oligonucleótido comprende ácido ribonucleico (ARN) o ácido desoxirribonucleico (ADN). En ciertas realizaciones, los oligonucleótidos están compuestos por bases nucleotídicas naturales y/o no naturales, azúcares y enlaces internucleotídicos covalentes y pueden además incluir conjugados de ácidos no nucleicos.
Como se usa en el presente documento, “enlace internucleotídico” se refiere a un enlace covalente entre nucleótidos adyacentes.
Como se usa en el presente documento, “enlace monomérico” se refiere a un enlace covalente entre dos monómeros. Enlaces monoméricos incluyen, entre otros, enlaces internucleotídicos y enlaces internucleosídicos.
Como se usa en el presente documento, “enlace internucleotídico natural” se refiere a un enlace fosfodiéster 3’ a 5’.
Como se usa en el presente documento, el término “compuesto antisentido” se refiere a un compuesto oligomérico que es, al menos parcialmente, complementario a una molécula de ácido nucleico diana con la que hibrida. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido modula (incrementa o disminuye) la expresión de un ácido nucleico diana. Los compuestos antisentido incluyen, entre otros, compuestos que son oligonucleótidos, oligonucleósidos, análogos de oligonucleótidos, miméticos de oligonucleótidos y combinaciones quiméricas de estos. En consecuencia, aunque todos los compuestos antisentido son compuestos oligoméricos, no todos los compuestos oligoméricos son compuestos antisentido.
Como se usa en el presente documento, la expresión “oligonucleótido antisentido” se refiere a un compuesto antisentido que es un oligonucleótido.
Como se usa en el presente documento, la expresión oligonucleótido antisentido parental” se refiere a un oligonucleótido de 20 nucleótidos de longitud que tiene una región hueco desoxi que tiene diez 2'-desoxirribonucleótidos, flanqueadas por una primera y una segunda región ala, teniendo cada una de ellas cinco 2’-O-(2-metoxietil)ribonucleótidos (un gápmero 510-5 MOE) y que comprende la secuencia del correspondiente compuesto antisentido corto de que es padre,
Como se usa en el presente documento, “compuesto antisentido corto” se refiere a un compuesto antisentido de aproximadamente 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16 monómeros de longitud. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido tiene al menos una modificación de alta afinidad.
Como se usa en el presente documento, el término “oligonucleótido antisentido corto” se refiere a un oligonucleótido antisentido de aproximadamente 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16 nucleótidos de longitud. En ciertas realizaciones, un oligonucleótido antisentido corto tiene al menos una modificación de alta afinidad.
Como se usa en el presente documento, la expresión “gápmero corto” se refiere a un oligonucleótido antisentido corto que tiene una primera y una segunda región ala, teniendo cada una de ellas de forma independiente de 1 a 3 nucleótidos de longitud y una región hueco de 2 a 14 bases nucleotídicas de longitud.
Como se usa en el presente documento, el término “motivo” se refiere a un patrón de nucleótidos no modificados y modificados en un compuesto antisentido corto.
Como se usa en el presente documento, el término “oligómero antisentido quimérico” se refiere a un compuesto oligomérico antisentido que tiene al menos un azúcar, una base nucleotídica o un enlace internucleosídico que está modificado diferencialmente en comparación con al menos otro azúcar, base nucleotídica o enlace internucleosídico dentro del mismo compuesto oligomérico antisentido. El resto de los azúcares, bases nucleotídicas y enlaces internucleosídicos pueden estar modificados de forma independiente o no modificados, ser iguales o diferentes.
Como se usa en el presente documento, la expresión “oligonucleótido antisentido quimérico” se refiere a un oligonucleótido antisentido que tiene al menos un azúcar, una base nucleotídica o un enlace internucleosídico que está modificado diferencialmente en comparación con al menos otro azúcar, base nucleotídica o enlace internucleosídico dentro del mismo oligonucleótido antisentido. El resto de los azúcares, bases nucleotídicas y enlaces internucleosídicos pueden estar modificados de forma independiente o no modificados, ser iguales o diferentes.
Como se usa en el presente documento, la expresión “oligonucleótido antisentido de estructura mixta” se refiere a un oligonucleótido antisentido en el que al menos un enlace internucleosídico del oligonucleótido antisentido es diferente de al menos otro enlace internucleotídico del oligonucleótido antisentido.
Como se usa en el presente documento, el término “diana” se refiere a una proteína cuya modulación se desea.
Como se usa en el presente documento, “gen diana” se refiere a un gen que codifica una diana.
Como se usa en el presente documento, las expresiones “ácido nucleico diana” y “molécula de ácido nucleico que codifica una diana” se refieren a cualquier molécula de ácido nucleico cuya expresión o actividad puede ser modulada por un compuesto antisentido. Ácidos nucleicos diana incluyen, entre otros, ARN (incluidos, entre otros, pre-ARNm y ARNm o porciones de los mismos) transcritos a partir de ADN que codifica una diana, y, también, ADNc derivado de dicho ARN, y ARNmi. Por ejemplo, el ácido nucleico diana puede ser un gen celular (o ARNm tránscrito a partir del gen), cuya expresión se asocia con un trastorno o estado de enfermedad concreto, o una molécula de ácido nucleico de un agente infeccioso.
Como se usa en el presente documento, el término “dirigido” o “dirigido a” se refiere a la asociación de un compuesto antisentido con una molécula de ácido nucleico diana concreta o una región concreta de nucleótidos dentro de una molécula de ácido nucleico diana.
Como se usa en el presente documento, la expresión “sitio diana en 5’" se refiere al nucleótido de un ácido nucleico diana que es complementario al nucleótido más en 5' de un compuesto antisentido concreto.
Como se usa en el presente documento, la expresión “sitio diana en 3’" se refiere al nucleótido de un ácido nucleico diana que es complementario al nucleótido más en 3' de un compuesto antisentido concreto.
Como se usa en el presente documento, la expresión “región diana” se refiere a una porción de un ácido nucleico diana con la que uno o más compuestos antisentido son complementarios.
Como se usa en el presente documento, la expresión “segmento diana” se refiere una parte más pequeña o subporciones de una región dentro de un ácido nucleico diana.
Como se usa en el presente documento, la expresión “complementariedad con la base nucleotídica” se refiere a una base nucleotídica que puede aparearse con otra base nucleotídica. Por ejemplo, en el ADN, la adenina (A) es complementaria de la timina (T). Por ejemplo, en el ARN, la adenina (A) es complementaria del uracilo (U). En ciertas realizaciones, base nucleotídica complementaria se refiere a una base nucleotídica de un compuesto antisentido que puede aparearse con bases con una base nucleotídica de su ácido nucleico diana. Por ejemplo, si una base nucleotídica en una posición determinada de un compuesto antisentido puede unirse por puentes de hidrógeno a una base nucleotídica en cierta posición de un ácido nucleico diana, la posición del enlace de hidrógeno entre el nucleótido y el ácido nucleico diana se considera complementaria en dicho par de bases nucleotídicas.
Como se usa en el presente documento, la expresión “base nucleotídica no complementaria” se refiere a un par de bases nucleotídicas que no forman enlaces de hidrógeno entre sí o, de otro modo, soportar hibridación.
Como se usa en el presente documento, el término “complementariedad” se refiere a la capacidad de un compuesto oligomérico para hibridar con otro compuesto oligomérico o ácido nucleico a través de complementariedad de base nucleotídica. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido y su diana son complementarios entre sí cuando un número suficiente de posiciones correspondientes en cada molécula están ocupadas por bases nucleotídicas que se pueden unir entre sí para permitir una asociación estable entre el compuesto antisentido y la diana. Un experto en la técnica reconoce que la inclusión de faltas de coincidencia es posible sin eliminar la capacidad de los compuestos oligoméricos para permanecer en asociación. Por tanto, en el presente documento se describen compuestos antisentido que pueden comprender hasta aproximadamente 20% de nucleótidos que están desapareados (es decir, no son bases nucleotídicas complementarias a los correspondientes nucleótidos de la diana). Preferentemente, los compuestos antisentido no contienen más de aproximadamente 15%, más preferentemente no más de aproximadamente 10%, más preferentemente no más de aproximadamente o ningún desapareamiento. Los nucleótidos restantes son bases nucleotídicas complementarias o, por otro lado, no alteran la hibridación (p. ej., bases universales). Un experto en la técnica reconocería que los compuestos proporcionados en el presente documento son al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% complementarios a un ácido nucleico diana.
Como se usa en el presente documento, el término “desapareamiento” se refiere a una base nucleotídica no complementaria en un compuesto oligomérico complementario.
Como se usa en el presente documento, “hibridación” quiere decir el apareamiento de compuestos oligoméricos complementarios (p. ej., compuesto antisentido y su ácido nucleico diana). Aunque no está limitado a un mecanismo concreto, el mecanismo más habitual de apareamiento implica enlaces de hidrógeno que pueden ser enlaces de hidrógeno de Watson-Crick, de Hoogsteen o de Hoogsteen inverso, entre nucleósidos o bases nucleotídicas complementarias. Por ejemplo, la base natural adenina es una base nucleotídica complementaria a las bases nucleotídicas naturales timidina y uracilo, que se aparean a través de la formación de enlaces de hidrógeno. La base natural guanina es una base nucleotídica complementaria de las bases naturales citosina y 5-metil-citosina. La hibridación se puede producir en varias circunstancias.
Como se usa en el presente documento, la expresión “hibrida específicamente” se refiere a la capacidad de un compuesto oligomérico para hibridar con un sitio en el ácido nucleico con mayor afinidad que con la que hibrida con otro sitio en el ácido nucleico. En ciertas realizaciones, un oligonucleótido antisentido hibrida específicamente con más de un sitio diana.
Como se usa en el presente documento, "diseñar" o "diseñado" se refieren al procedimiento de diseñar un compuesto oligomérico que hibrida específicamente con una molécula de ácido nucleico seleccionado.
Como se usa en el presente documento, el término “modulación” se refiere a una perturbación de la función o actividad cuando se compara con el nivel de la función o actividad antes de la modulación. Por ejemplo, modulación incluye el cambio, un incremento (estimulación o inducción) o una disminución (inhibición o reducción) de la expresión génica. Como ejemplo adicional, la modulación de la expresión puede incluir perturbar la selección de un sitio de corte y empalme del procesamiento de pre-ARNm.
Como se usa en el presente documento, el término “expresión” se refiere a todas las funciones y etapas por las cuales la información codificada en un gen se convierte en estructuras presentes y funcionando en una célula. Dichas estructuras incluyen, entre otras, los productos de la transcripción y la traducción.
Como se usa en el presente documento, “variante” se refiere a un tránscrito de ARN alternativo que se puede producir a partir de la misma región genómica del ADN. Variantes incluyen, entre otras, “variantes pre-ARNm” que son transcritos producidos a partir del mismo ADN genómico que difieren de otros transcritos producidos a partir del mismo ADN genómico en su posición de iniciación o de terminación y contienen secuencias intrónicas y exónicas- Variantes también incluyen, entre otras, aquéllas con aquéllas con uniones de corte y empalme alternativas o codones de iniciación y terminación alternativos.
Como se usa en el presente documento, “monómero modificado de alta afinidad” se refiere a un monómero que tiene al menos una base nucleotídica modificada, un enlace internucleosídico o un resto de azúcar, cuando se compara con monómeros naturales, de modo que la modificación aumenta la afinidad de un compuesto antisentido que comprende en monómero de alta afinidad por su ácido nucleico diana. Las modificaciones de alta afinidad incluyen, entre otras, monómeros (p. ej., nucleósidos y nucleótidos), que comprenden azúcares modificados en 2’.
Como se usa en el presente documento, la expresión “modificado en 2’” o “sustituido en 2’” quiere decir un azúcar que comprende un sustituyente en la posición 2’ distinto a H u OH. Los monómeros modificados en 2’ incluyen, entre otros, BNA y monómeros (p. ej., nucleósidos y nucleótidos) con sustituyentes en 2’, tal como alilo, amino, azido, tio, O-alilo, O-alquilo C1-C10, -OCF3 , O-(CH2)2-O-CH3, 2’-O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), o O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), en las que cada Rm y Rn es, de forma independiente, H o alquilo C1-C10 sustituido o insustituido. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos comprenden un monómero modificado en 2’ que no tiene la fórmula 2’-O(CH2)nH, en la que n es de uno a seis. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos comprenden un monómero modificado en 2’ que no tiene la fórmula 2’-OCH3. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos comprenden un monómero modificado en 2’ que no tiene la fórmula o, en la alternativa, 2’-O (CH2)2OCH3.
Como se usa en el presente documento, la expresión “ácido nucleico bicíclico” o “BNA” o “nucleósido bicíclico” o “nucleótido bicíclico” se refiere a un nucleósido o nucleótido en el que la porción furanosa del nucleósido incluye un puente que conecta dos átomos de carbono sobre el anillo de furanosa, formando de este modo un sistema de anillo bicíclico.
Como se usa en el presente documento, a menos que se indique lo contrario, la expresión “metilenoxi BNA” solo se refiere a ß-D-metilenoxi BNA.
Como se usa en el presente documento, el término “MOE” se refiere al sustituyente 2’-metoxietilo.
Como se usa en el presente documento, el término “gápmero” se refiere a un compuesto oligomérico quimérico que comprende una región central (un “hueco”) y una región en cualquiera de los lados de la región central (las “alas”), en la que el hueco comprende al menos una modificación que es diferente de la de cada ala. Dichas modificaciones incluyen modificaciones en la base nucleotídica, el enlace monomérico y el azúcar, así como la ausencia de modificación (sin modificar). Por tanto, en ciertas realizaciones, los enlaces nucleotídicos en cada una de las alas son diferentes de los enlaces nucleotídicos en el hueco. En ciertas realizaciones, cada ala comprende nucleótidos con modificaciones de alta afinidad y el hueco comprende nucleótidos que no comprenden dicha modificación. En ciertas realizaciones, los nucleótidos en el hueco y los nucleótidos en las alas comprenden todos ellos modificaciones de alta afinidad, pero las modificaciones de alta afinidad en el hueco son diferentes de las modificaciones de alta afinidad en las alas. En ciertas realizaciones, las modificaciones en las alas son las mismas entre sí, En ciertas realizaciones, las modificaciones en las alas son diferentes entre sí, En ciertas realizaciones, los nucleótidos en el hueco no están modificados y los nucleótidos en las alas están modificados. En ciertas realizaciones, la(s) modificación(es) en cada ala son las mismas, En ciertas realizaciones, la(s) modificación(es) en un ala son diferentes de la(s) modificación(es) en las otras alas. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos son gápmeros que tienen 2'-desoxinucleótidos en el hueco y nucleótidos con modificaciones de alta afinidad en el ala.
Como se usa en el presente documento, el término “profármaco” se refiere a un agente terapéutico que se preparar en forma inactiva que se convierte en una forma activa (es decir, el fármaco) dentro del cuerpo o las células del mismo por acción de enzimas endógenas u otros productos químicos y/o condiciones.
Como se usa en el presente documento, el término "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a sales de compuestos activos que conservan la actividad biológica deseada del compuesto activo y que no producen efectos toxicológicos indeseados.
Como se usa en el presente documento, la expresión “estructuras caperuza” o “resto caperuza terminal” se refiere a modificaciones químicas que se han incorporado en cualquier extremo de un compuesto antisentido.
Como se usa en el presente documento, el término “prevención” se refiere a retrasar o impedir el inicio o desarrollo de una afección o enfermedad durante un periodo de tiempo que va desde horas a días, preferentemente de semanas a meses.
Como se usa en el presente documento, el término “mejora” se refiere a una disminución de al menos un indicador de la gravedad de una afección o enfermedad. La gravedad de los indicadores se puede determinar mediante medidas subjetivas u objetivas que son conocidas para los expertos en la técnica.
Como se usa en el presente documento, el término “tratamiento” se refiere a administrar una composición de la divulgación para efectuar una alteración o mejora de la afección o enfermedad. La prevención, mejora y/o tratamiento puede requerir la administración de múltiples dosis a intervalos regulares o antes del inicio de la afección o enfermedad para alterar el curso de la enfermedad o afección. Además, se puede usar un único agente en un único individuo para cada prevención, mejora y tratamiento de una afección o enfermedad de forma secuencial o concurrente.
Como se usa en el presente documento, la expresión “agente farmacéutico” se refiere a una sustancia que proporciona un beneficio terapéutico cuando se administra a un sujeto.
Como se usa en el presente documento, la expresión “cantidad terapéuticamente eficaz” se refiere a una cantidad de un agente farmacéutico que proporciona un beneficio terapéutico a un animal.
Como se usa en el presente documento, “administrar" significa proporcionar un agente farmacéutico a un animal e incluye, entre otros, la administración por un profesional médico y la autoadministración.
Como se usa en el presente documento, el término “co-administración” se refiere a la administración de dos o más agentes farmacéuticos a un animal. Los dos o más agentes farmacéuticos pueden estar en una única composición farmacéutica o pueden estar en composiciones farmacéuticas distintas. Cada uno de los dos o más agentes farmacéuticos puede administrarse por la misma vía de administración o por vías diferentes. La co-administración abarca la administración en paralelo o secuencial.
Como se usa en el presente documento, la expresión ”composición farmacéutica” se refiere a una mezcla de sustancias adecuadas para administrar a un individuo. Por ejemplo, una composición farmacéutica puede comprender un oligonucleótido antisentido y una solución acuosa estéril.
Como se usa en el presente documento, el término “individuo” se refiere a un ser humano o a un animal no humano seleccionado para el tratamiento o terapia.
Como se usa en el presente documento, el término “animal” se refiere a un animal humano o no humano, incluidos, entre otros, ratones, ratas, conejos, perros, gatos, cerdos y primates no humanos, incluidos, entre otros, monos y chimpancés.
Como se usa en el presente documento, el término “sujeto” se refiere a un animal, incluido, entre otros, el ser humano, al que se administra una composición farmacéutica.
Como se usa en el presente documento, el término “duración” se refiere al periodo de tiempo durante el cual continua una actividad o acontecimiento. En ciertas realizaciones, la duración del tratamiento es el periodo de tiempo durante el cual se administran las dosis de una composición farmacéutica.
Como se usa en el presente documento, la expresión “administración parenteral” se refiere a la administración mediante inyección o infusión. La administración parenteral incluye, entre otras, administración subcutánea, administración intravenosa o administración intramuscular.
Como se usa en el presente documento, la expresión “administración subcutánea” se refiere a la administración justo debajo de la piel. “Administración intravenosa” significa administración en una vena.
Como se usa en el presente documento, el término “dosis” se refiere a una cantidad especificada de un agente farmacéutico proporcionada en una única administración. En ciertas realizaciones, una dosis se puede administrar en dos
o más bolos, comprimidos o inyecciones. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, en las que se desea la administración subcutánea, la dosis deseada requiere un volumen que no se acomoda fácilmente mediante una única inyección. En dichas realizaciones, se pueden usar dos o más inyecciones para alcanzar la dosis deseada. En ciertas realizaciones, una dosis se puede administrar en dos o más inyecciones para minimizar la reacción en el punto de inyección en un individuo.
Como se usa en el presente documento, la expresión “unidad de dosificación” se refiere a una forma en la que se proporciona un agente farmacéutico. En ciertas realizaciones, una unidad de dosificación es un vial que comprende oligonucleótido antisentido liofilizado. En ciertas realizaciones, una unidad de dosificación es un vial que comprende oligonucleótido antisentido reconstituido.
Como se usa en el presente documento, la expresión “agente farmacéutico” se refiere a una sustancia que proporciona un beneficio terapéutico cuando se administra a un individuo. Por ejemplo, en ciertas realizaciones un oligonucleótido antisentido es un agente farmacéutico.
Como se usa en el presente documento, la expresión “ingrediente farmacéutico activo” se refiere a la sustancia en una composición farmacéutica que proporciona un efecto deseado.
Como se usa en el presente documento, la expresión “cantidad terapéuticamente eficaz” se refiere a una cantidad de un agente farmacéutico que proporciona un beneficio terapéutico a un individuo. En ciertas realizaciones, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto antisentido es la cantidad que necesita administrarse para tener como resultado un beneficio observable.
Como se usa en el presente documento, el término “hipercolesterolemia” se refiere a una condición caracterizada por niveles elevados de colesterol en suero.
Como se usa en el presente documento, el término “hiperlipidemia” se refiere a una afección caracterizada por niveles elevados de lípidos en suero.
Como se usa en el presente documento, el término “hipertrigliceridemia” se refiere a una afección caracterizada por niveles elevados de triglicéridos en suero.
Como se usa en el presente documento, el término “hipercolesterolemia no familiar” se refiere a una afección caracterizada por niveles elevados de colesterol que no es el resultado de una única mutación génica hereditaria.
Como se usa el presente documento, la expresión “hipercolesterolemia poligénica” se refiere a una afección caracterizada por niveles elevados de colesterol que es el resultado de la influencia de diversos factores genéticos. En ciertas realizaciones, la hipercolesterolemia poligénica se puede exacerbar por la ingesta de lípidos en la dieta.
Como se usa el presente documento, la expresión “hipercolesterolemia familiar (HF)" se refiere a un trastorno metabólico dominante autosómico caracterizado por una mutación en el gen del receptor de LDL (LDL-R), niveles marcadamente elevados de LDL-C e inicio prematuro de aterosclerosis. Un diagnóstico de hipercolesterolemia familiar se realiza cuando un individuo cumple uno o más de los criterios siguientes: pruebas genéticas que confirman 2 genes mutados del receptor de LDL; pruebas genéticas que confirman un genes mutado del receptor de LDL; historial documentado de LDL-colesterol en suero sin tratar superior a 500 mg/dl; xantoma tendinoso y/o cutáneo antes de los 10 años de edad: o ambos padres presentan niveles elevados de LDL-colesterol en suero documentados antes de la terapia hipolipemiante consistente con hipercolesterolemia familiar heterocigótica.
Como se usa en el presente documento, la expresión “hipercolesterolemia familiar homocigótica” o “HFHo” se refiere a una afección caracterizada por una mutación en los genes de LDL-R tanto maternos como paternos.
Como se usa en el presente documento, la expresión “hipercolesterolemia familiar heterocigótica” o “HFHe” se refiere a una afección caracterizada por una mutación en los genes de LDL-R o maternos o paternos.
Como se usa en el presente documento, la expresión “dislipidemia mixta” se refiere a una afección caracterizada por niveles elevados de colesterol en suero y niveles elevados de triglicéridos en suero.
Como se usa en el presente documento, la expresión “dislipidemia diabética” o “diabetes de tipo II con dislipidemia" se refiere a una afección caracterizada por diabetes de tipo II, niveles reducidos de HDL-C, niveles elevados de triglicéridos en suero y niveles elevados de partículas de LDL pequeñas densas.
Como se usa en el presente documento, la expresión “equivalentes de riesgo de CPC” se refiere a indicadores de enfermedad aterosclerótica clínica que confieren un riesgo elevado de cardiopatía coronaria. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, los equivalentes de riesgo de CPC incluyen, sin limitaciones, cardiopatía coronaria clínica, enfermedad de las arterias carótidas sintomática, enfermedad arterial periférica y/o aneurisma aórtico abdominal.
Como se usa en el presente documento, la expresión “enfermedad del ácido graso no alcohólico (EAGNA”) se refiere a una afección caracterizada por la inflamación grasa del hígado que no se debe a un abuso del consumo de alcohol (por ejemplo, consumo de alcohol de más d 20 g/días). En ciertas realizaciones, la EAGNA está relacionada con la resistencia a la insulina y el síndrome metabólico.
Como se usa en el presente documento, la expresión “esteatohepatitis no alcohólica (EHNA)” se refiere a una afección caracterizada por la inflamación y la acumulación de grasa y tejido fibroso en el hígado que no se debe a un abuso del consumo de alcohol. EHNA es una forma extrema de la EAGNA.
Como se usa en el presente documento, la expresión “factores principales de riesgo” se refiere a factores que contribuyen a un alto riesgo de una enfermedad o afección concreta. En ciertas realizaciones, los factores principales de riesgo de cardiopatía coronaria incluyen, entre otros, tabaquismo, hipertensión, niveles bajos de HDL-C, antecedentes familiares de cardiopatía coronaria y la edad.
Como se usa en el presente documento, el término “factores de riesgo de CPC” se refiere a equivalentes de riesgo de CPC y factores de riesgo principales.
Como se usa en el presente documento, la expresión “cardiopatía coronaria (CPC)” se refiere a un estrechamiento de los vasos sanguíneos pequeños que suministran sangre y oxígeno al corazón, que a menudo da como resultado aterosclerosis.
Como se usa en el presente documento, la expresión “riesgo reducido de cardiopatía coronaria” se refiere a una reducción de la probabilidad de que un individuo desarrolle cardiopatía coronaria. En ciertas realizaciones, una reducción del riesgo de cardiopatía coronaria se mide por una mejora en uno o más factores de riesgo de CPC, por ejemplo una disminución de los niveles de LDL-C.
Como se usa en el presente documento, el término “aterosclerosis” se refiere a un endurecimiento de las arterias que afecta a las arterias de tamaño grande y medio y que se caracteriza por la presencia de depósitos de grasa. Los depósitos de grasa se denominan “ateromas” o “placas”, que consisten principalmente en colesterol y otras grasas, calcio y tejido cicatricial, y daños en el revestimiento de las arterias.
Como se usa en el presente documento, la expresión “historial de cardiopatía coronaria” se refiere a la aparición de cardiopatía coronaria clínicamente evidente en el historial médico de un individuo o un miembro de la familia del individuo.
Como se usa en el presente documento, la expresión “cardiopatía coronaria de inicio precoz” se refiere a un diagnóstico de cardiopatía coronaria antes de los 50 años de edad.
Como se usa en el presente documento, la expresión “individuo intolerante a estatinas” se refiere a un individuo que, como resultado de la terapia con estatinas, experimenta uno o más incrementos de la creatinina quinasa, anomalías en las pruebas de función hepática, dolores musculares o efectos secundarios en el sistema nervioso central.
Como se usa en el presente documento, el término “eficacia” se refiere a la capacidad para producir un efecto deseado. Por ejemplo, la eficacia de una terapia hipolipemiante puede ser la reducción en la concentración de uno o más de LDL-C, VLDL-C, IDL-C, no-HDL-C, ApoB, lipoproteína(a), o triglicéridos.
Como se usa en el presente documento, la expresión “perfil de seguridad aceptable” se refiere a un patrón de efectos secundarios que está dentro de los límites clínicamente aceptables.
Como se usa en el presente documento, la expresión “efectos secundarios” se refiere a respuestas fisiológicas atribuibles a un tratamiento aparte de los efectos deseados. En ciertas realizaciones, los efectos secundarios incluyen, sin limitaciones, reacciones en el sitio de la inyección, anomalías en las pruebas de función hepática, anomalías en la función renal, toxicidad hepática, toxicidad renal, anomalías en el sistema nervioso central y miopatías. Por ejemplo, incrementos en los niveles de aminotransferasas en suero pueden indicar toxicidad hepática o anomalías en la función hepática. Por ejemplo, incrementos en los niveles de bilirrubina pueden indicar toxicidad hepática o anomalías en la función hepática.
Como se usa en el presente documento, la expresión “reacción en el sitio de la inyección” se refiere a inflamación o enrojecimiento anormal de la piel en el punto de inyección en un individuo.
Como se usa en el presente documento, la expresión “cumplimiento del individuo” se refiere a la adhesión a una terapia recomendada o prescrita por un individuo.
Como se usa en el presente documento, la expresión “terapia hipolipemiante” se refiere a un régimen terapéutico proporcionado a un individuo para reducir uno o más lípidos en un individuo. En ciertas realizaciones, se proporciona una terapia hipolipemiante para reducir uno o más de ApoB, colesterol total, LDL-C, VLDL-C, IDL-C, no-HDL-C, triglicéridos, partículas de LDL pequeñas densas y Lp (a) en un individuo.
Como se usa en el presente documento, la expresión “agente hipolipemiante” se refiere a un agente farmacéutico proporcionado a un individuo para alcanzar una disminución de los niveles de lípidos en el individuo. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, se proporciona a un individuo un agente hipolipemiante para reducir uno o más de ApoB, LDL-C, colesterol total y triglicéridos.
Como se usa en el presente documento, la expresión “LDL-C diana” se refiere a un nivel de LDL-C que se desea tras la terapia hipolipemiante.
Como se usa en el presente documento, el término “cumplimiento” se refiere a la adhesión a una terapia recomendada por parte de un individuo.
Como se usa en el presente documento, la expresión “terapia recomendada” se refiere a un régimen terapéutico recomendado por un profesional médico para el tratamiento, mejora o prevención de una enfermedad.
Como se usa en el presente documento, la expresión “actividad baja del receptor de LDL” se refiere a la actividad del receptor de LDL que no es lo suficientemente alta como para mantener niveles clínicamente aceptables de LDL-C en la corriente sanguínea.
Como se usa en el presente documento, la expresión “desenlace cardiovascular” se refiere a la aparición de acontecimientos cardiovasculares adversos principales.
Como se usa en el presente documento, la expresión “desenlace cardiovascular mejorado” se refiere a una reducción de la aparición de acontecimientos cardiovasculares adversos principales o del riesgo de los mismos. Ejemplos de acontecimientos cardiovasculares adversos principales incluyen, sin limitaciones, muerte, reinfarto, ictus, shock cardiogénico, edema pulmonar, parada cardíaca y disrritmia auricular.
Como se usa en el presente documento, la expresión “marcadores sustitutos del desenlace cardiovascular” se refiere a los indicadores indirectos de acontecimientos cardiovasculares adversos o del riesgo de los mismos. Por ejemplo, marcadores sustitutos del desenlace cardiovascular incluyen el espesor de la media íntima de la carótida (CIMT). Otro ejemplo de un marcador sustituto del desenlace cardiovascular incluye el tamaño del ateroma. El tamaño del ateroma puede determinarse mediante ultrasonidos intravasculares (USIV).
Como se usa en el presente documento, la expresión “incremento de los niveles de HDL-C” se refiere a un incremento de los niveles de HDL-C en suero en un individuo a lo largo del tiempo.
Como se usa en el presente documento, el término “hipolipemiante” se refiere a una reducción de uno o más lípidos en suero en un individuo a lo largo del tiempo.
Como se usa en el presente documento, la expresión “trastorno metabólico” se refiere a una afección caracterizada por una alteración o interrupción de la función metabólica. “Metabólica/o” y “metabolismo” son términos bien conocidos en la técnica y generalmente incluyen toda la gama de procesos bioquímicos que se producen dentro de un organismo vivo. Trastornos metabólicos incluyen, entre otros, hiperglucemia, prediabetes, diabetes (de tipo I y de tipo II), obesidad, resistencia a la insulina y síndrome metabólico.
Como se usa en el presente documento, la expresión “síndrome metabólico” se refiere a una combinación de factores de riesgo cardiovascular lipídicos y no lipídicos de origen metabólico Se ha vinculado estrechamente con el trastorno metabólico generalizado conocido como resistencia a la insulina. El Panel de Tratamiento de adultos III (ATP III) del Programa Nacional educativo sobre colesterol de EE.UU. (NCEP) estableció criterios para el diagnóstico del síndrome metabólico cuando están presentes tres o más de cinco determinantes de riesgo. Los cinco determinantes de riesgo son obesidad abdominal, definida como una circunferencia de la cintura superior a 102 cm para varones o superior a 88 cm para mujeres, niveles de triglicéridos superiores o iguales a 150 mg/dl, niveles de HDL-colesterol inferiores a 40 mg/dl para varones e inferiores a 50 mg/dl para mujeres, presión arterial superior o igual a 130/85 mmHg y niveles de glucosa en ayunas superiores o iguales a 110 mg/dl. Estos determinantes se pueden medir fácilmente en la práctica clínica (JAMA, 2001, 285: 2486-2497).
El término “alquilo” tal como se usa en el presente documento, se refiere a un radical de hidrocarburo saturado lineal o ramificado que contiene hasta veinticuatro átomos de carbono. Ejemplos de grupos alquilo incluyen, entre otros, metilo, etilo, propilo, butilo, isopropilo, n-hexilo, octilo, decilo, dodecilo y similares. Normalmente, los grupos alquilo incluyen de 1 a aproximadamente 24 átomos de carbono, más habitualmente de 1 a aproximadamente 12 átomos de carbono (alquilo C1C12) siendo más preferidos con de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono. La expresión “alquilo menor” como se usa en el presente documento incluye de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono. Los grupos alquilo, como se usan en el presente documento. pueden incluir, opcionalmente, uno o más sustituyentes adicionales.
El término “alquenilo”, como se usa en el presente documento, se refiere a un radical hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que contiene hasta veinticuatro átomos de carbono y que tiene al menos un doble enlace carbono-carbono. Ejemplos de grupos alquenilo incluyen, entre otros, etenilo, propenilo, butenilo, 1-metil-2-buten-1-ilo, dienos tales como 1,3-butadieno y similares. Normalmente, los grupos alquenilo incluyen de 2 a aproximadamente 24 átomos de carbono, más habitualmente de 2 a aproximadamente 12 átomos de carbono, siendo más preferidos de 2 a aproximadamente 6 átomos de carbono. Los grupos alquenilo, como se usan en el presente documento, pueden incluir, opcionalmente, uno o más sustituyentes adicionales.
El término “alquinilo”, como se usa en el presente documento, se refiere a un radical hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que contiene hasta veinticuatro átomos de carbono y que tiene al menos un triple enlace carbono-carbono. Ejemplos de grupos alquinilo incluyen, entre otros, etinilo, 1-propinilo, 1-butinilo y similares. Normalmente, los grupos alquinilo incluyen de 2 a aproximadamente 24 átomos de carbono, más habitualmente de 2 a aproximadamente 12 átomos de carbono, siendo más preferidos de 2 a aproximadamente 6 átomos de carbono. Los grupos alquinilo, como se usan en el presente documento, pueden incluir, opcionalmente, uno o más sustituyentes adicionales.
El término “aminoalquilo”, como se usa en el presente documento, se refiere a un radical alquilo amino sustituido. Con este término se quiere incluir grupos alquilo C1-C12 que tienen un sustituyente amino en cualquier posición y en el que el grupo alquilo une el grupo aminoalquilo a la molécula parental. Las porciones alquilo y/o amino del grupo aminoalquilo puede estar sustituido además con grupos sustituyentes.
El término “alifático”, como se usa en el presente documento, se refiere a un radical hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que contiene hasta veinticuatro átomos de carbono, en el que la saturación entre dos cualesquiera átomos de carbono es un enlace sencillo, doble o triple. Preferentemente, un grupo alifático contiene de 1 a aproximadamente 24 átomos de carbono, más habitualmente de 1 a aproximadamente 12 átomos de carbono, siendo más preferidos de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono. La cadena lineal o ramificada de un grupo alifático puede interrumpirse con uno o más heteroátomos que incluyen nitrógeno, oxígeno, azufre o fósforo. Dichos grupos alifáticos interrumpidos por heteroátomos incluyen, sin limitaciones, polialcoxis, tales como polialquilenglicoles, poliaminas y poliiminas. Los grupos alifáticos como se usan en el presente documento pueden incluir, opcionalmente, grupos sustituyentes adicionales.
El término “alicíclico” o “aliciclilo” se refiere a un sistema de anillo cíclico en el que el anillo es alifático. El sistema de anillo puede comprender uno o más anillos de los que al menos un anillo es alifático. Alicíclicos preferidos incluyen anillos que tienen de aproximadamente 5 a aproximadamente 9 átomos en el anillo. Los grupos alicíclicos, como se usan en el presente documento, pueden incluir, opcionalmente, grupos sustituyentes adicionales.
El término “alcoxi”, como se usa en el presente documento, se refiere a un radical formado entre un grupo alquilo y un átomo de oxígeno, en el que el átomo de oxígeno se usa para unir el grupo alcoxi a una molécula parental. Ejemplos de grupos alcoxi incluyen, entre otros, metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, n-butoxi, sec-butoxi, terc—butoxi, n-pentoxi, neopentoxi, n-hexoxi y similares. Los grupos alcoxi como se usan en el presente documento pueden incluir, opcionalmente, grupos sustituyentes adicionales.
Los términos “halo” y “halógeno”, como se usan en el presente documento, se refieren a un átomo seleccionado de flúor, cloro, bromo y yodo.
Los términos “arilo” y “aromático”, como se usan en el presente documento, se refieren a un sistema de anillo carbocíclico mono o policíclico que tiene de uno o más anillos aromáticos. Ejemplos de grupos arilo incluyen, entre otros, fenilo, naftilo, tetrahidronaftilo, indanilo, indenilo y similares. Sistemas de anillo de arilo preferidos tienen de aproximadamente 5 a aproximadamente 20 átomos en uno o más anillos. Los grupos arilo, como se usan en el presente documento, pueden incluir, opcionalmente, grupos sustituyentes adicionales.
Los términos “aralquilo” y "arilalquilo”, como se usan en el presente documento, se refiere a un radical formado entre un grupo alquilo y un grupo arilo, en el que el grupo alquilo se usa para unir el grupo aralquilo a una molécula parental. Ejemplos incluyen, entre otros, bencilo, fenetilo y similares. Grupos aralquilo, como se usan en el presente documento, pueden incluir, opcionalmente, grupos sustituyentes adicionales unidos a los grupos alquilo, arilo o ambos, que forman el grupo radical.
La expresión “radical heterocíclico”, se usa en el presente documento, Se refiere a un radical de sistema del anillo mono o policíclico que incluye al menos un heteroátomo y está insaturado, parcialmente saturado o completamente saturad, de modo que incluye grupos heteroarilo. Con heterocíclico también se quiere incluir sistemas de anillo condensados, en los que uno o más de los anillos condensados contienen al menos un heteroátomo y los otros anillos pueden contener uno o más heteroátomos o contener, opcionalmente, ningún heteroátomo. Normalmente, un grupo heterocíclico incluye al menos un átomo seleccionado de azufre, nitrógeno u oxígeno. Ejemplos de grupos heterocíclicos incluyen [1,3]dioxolano, pirrolidinilo, pirazolinilo, pirazolidinilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, morfolinilo, tiazolidinilo, isotiazolidinilo, quinoxalinilo, piridazinonilo, tetrahidrofurilo y similares. Grupos heterocíclicos, como se usan en el presente documento, pueden incluir, opcionalmente, grupos sustituyentes adicionales.
La expresión “heteroarilo” y “heteroaromático”, como se usa en el presente documento, se refiere a un radical que comprende un anillo, sistema del anillo o sistema de anillo condensado mono o policíclico, en el que al menos uno de los anillos es aromático e incluye uno o más heteroátomos. Con heteroarilo también se quiere incluir sistemas de anillo condensado que incluyen sistemas en los que uno o más de los anillos condensados no contienen heteroátomos. Normalmente, grupos heteroarilo incluyen un átomo de anillo seleccionado de azufre, nitrógeno u oxígeno. Ejemplos de grupos heteroarilo incluyen, entre otros, piridinilo, pirazinilo, pirimidinilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiadiazolilo, oxadiazolilo, tiofenilo, furanilo, quinolinilo, isoquinolinilo, bencimidazolilo, benzoxazolilo, quinoxalinilo y similares. Los radicales heteroarilo pueden estar unidos a una molécula parental directamente o a través de un resto ligador, tal como un grupo alifático o heteroátomo. Grupos heteroarilo, como se usan en el presente documento, pueden incluir, opcionalmente, grupos sustituyentes adicionales.
El término “heteroarilalquilo” tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo heteroarilo como se ha definido anteriormente que tiene un radical alquilo que puede unir el grupo heteroarilalquilo a una molécula parental. Ejemplos incluyen, entre otros, piridinilmetilo, pirimidiniletilo, naftiridinilpropilo y similares. Grupos heteroarilalquilo, como se usan en el presente documento, pueden incluir, opcionalmente, grupos sustituyentes adicionales en uno o ambas porciones de heteroarilo o alquilo.
La expresión “estructura mono o policíclica”, como se usa en el presente documento, incluye todos los sistemas de anillo que son sencillos o policíclicos que tienen anillos que están condensados o unidos, y se pretende que incluya sistemas de anillo sencillo y mixto seleccionados de forma individual de alifáticos, alicíclicos, arilo, heteroarilo, aralquilo, arilalquilo, heterocíclicos, heteroarilo, heteroaromáticos, heteroarilalquilo. Dichas estructuras mono y policíclicas pueden contener anillos que son uniformes o que tienen varios grados de saturación, incluidos completamente saturados, parcialmente saturados o completamente insaturados. Cada anillo puede comprender átomos de anillo seleccionados de C, N, O y S, para dar anillos heterocíclicos, así como anillos que sólo comprenden átomos de anillo de C que pueden estar presentes en un motivo mixto, tal como, por ejemplo bencimidazol, en el que un anillo tiene sólo átomos de anillo de C y el anillo condensado tiene dos átomos de nitrógeno. Las estructuras mono y policíclicas pueden además estar sustituidas con grupos sustituyentes, tal como, por ejemplo, ftalimida, que tiene dos grupos =O unidos a uno de los anillos. En otro aspecto, las estructuras mono y policíclicas pueden estar unidas a una molécula parental directamente a través de un átomo de anillo, a través de un grupo sustituyente o de un resto ligador bifuncional.
El término “acilo”, como se usa en el presente documento, se refiere a un radical formado mediante eliminación de un grupo hidroxilo de un ácido orgánico y d tiene la fórmula general -C(O)-X, en la que X normalmente es alifático, alicíclico o aromático. Ejemplos incluyen carbonilos alifáticos, carbonilos aromáticos, sulfonilos alifáticos, sulfinilos aromáticos, sulfinilos alifáticos, fosfatos aromáticos, fosfatos alifáticos y similares. Los grupos acilo, como se usan en el presente documento, pueden incluir, opcionalmente, grupos sustituyentes adicionales.
El término “hidrocarbilo” incluye grupos que comprenden C, O and H. Se incluyen grupos lineales, ramificados y cíclicos que tienen cualquier grado de saturación. Dichos grupos hidrocarbilo pueden incluir uno o más heteroátomos seleccionados de N, O y S, y pueden además estar mono o polisustituidos con uno o más grupos sustituyentes.
Los términos “sustituyente” y “grupo sustituyente”, como se usan en el presente documento, incluyen grupos que normalmente se añaden a otros grupos o compuestos parentales para potenciar las propiedades deseadas o dar efectos deseados. Los grupos sustituyentes pueden estar protegidos o sin proteger y se pueden añadir a un sitio disponible o a muchos sitios disponibles en un compuesto parental. Los grupos sustituyentes pueden también estar sustituidos con otros grupos sustituyentes y pueden estar unidos directamente o a través de un grupo ligador, tal como un grupo alquilo o hidrocarbilo, a un compuesto parental. Dichos subgrupos incluyen, sin limitaciones, halógeno, hidroxilo, alquilo, alquenilo, alquinilo, acil(-C(O)Raa), carboxil(-C(O)O-Raa), grupos alifáticos, grupos alicíclicos, alcoxi, oxo (-O-Raa) sustituido, arilo, aralquilo, heterocíclico, heteroarilo, heteroarilalquilo, amino(-NRbbRcc), imino(=NRbb),amido (-C(O)NRbbRcc o N(Rbb)C(O)Raa), azido (-N3 ), nitro (-NO2), ciano(-CN), carbamido(-OC(O)NRbbRcc o -N (Rbb)C(O)OR), ureido (N(Rbb)C(O)NRbbRcc), tioureido (-N(Rbb)C(S)NRbbRcc), guanidinil (-N(Rbb)C(=NRbb)Rbb-Rcc), amidinil (C(=NRbb)NRbbRcc o (-C(=NRbb)NRbbR), tiol (-SRbb), sulfinil (-S(O)Rbb), sulfonil (-S(O)2Rbb), sulfonamidil (S(O)2NRbbRccor -N(Rbb)S(O)2Rbb) y grupos conjugados. En los que cada Raa, Rbb y Rcc es, de forma independiente, H, un grupo funcional químico opcionalmente unido o un grupo sustituyente adicional con una lista preferida, incluidos, sin limitaciones, alquilo, alquenilo, alquinillo, alifático, alcoxi, acilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, alicíclico, heterocíclico y heteroaril-alquilo.
B. Ciertos compuestos oligoméricos
En ciertas realizaciones es deseable modificar químicamente compuestos oligoméricos, comparados con los oligómeros naturales, tales como ADN o ARN. Ciertas de estas modificaciones alteran la actividad del compuesto oligomérico. Ciertas de estas modificaciones pueden alterar la actividad mediante, por ejemplo: incremento de la afinidad de un compuesto antisentido por su ácido nucleico diana, incremento de su resistencia a una o más nucleasas y/o alteración de la farmacocinética o distribución tisular del compuesto oligomérico. En ciertos casos, el uso de sustancias químicas que incrementan la afinidad de un compuesto oligomérico por su diana puede permitir el uso de compuestos oligoméricos más cortos.
1. Ciertos monómeros
En cierta realización, los compuestos oligoméricos comprenden uno o más monómeros modificados. En ciertas de estas realizaciones, los compuestos oligoméricos comprenden uno o más monómeros de alta afinidad. En ciertas realizaciones, dicho monómero de alta afinidad se selecciona de monómeros (p. ej., nucleósidos y nucleótidos), que comprenden azúcares modificados en 2, incluidos, entre otros: BNA y monómeros (ej., nucleósidos y nucleótidos) con sustituyentes en 2’, tales como alilo, amino, azido, tio, O-alilo, O-alquilo C1-C10, -OCF3 . O-(CH2)-O-CH3, 2’-O(CH2)2SCH3. O-(CH2)2-ON(Rm)(Rn), o O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), en las que Rm y Rn son, de forma independiente, H o alquilo C1-C10 sustituido o insustituido.
En ciertas realizaciones, los compuestos oligoméricos que incluyen, entre otros, compuestos antisentido cortos de la presente divulgación, comprenden uno o más monómeros de afinidad, siempre que el compuesto oligomérico no comprende un nucleótido que comprende 2’-O(CH2)nH, en la que n es de uno a seis.
En ciertas realizaciones, los compuestos oligoméricos que incluyen, entre otros, compuestos antisentido cortos de la presente divulgación, comprenden uno o más monómeros de afinidad, siempre que el compuesto oligomérico no comprende un nucleótido que comprende 2’-OCH3 o un 2’-O(CH2)2OH3.
En ciertas realizaciones, los compuestos oligoméricos que incluyen, entre otros, compuestos antisentido cortos de la presente divulgación, comprenden uno o más monómeros de afinidad, siempre que el compuesto oligomérico no comprenda un nucleótido que comprende un α-L-Metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA.
En ciertas realizaciones, los compuestos oligoméricos que incluyen, entre otros, compuestos antisentido cortos de la presente divulgación, comprenden uno o más monómeros de afinidad, siempre que el compuesto oligomérico no comprenda un nucleótido que comprende un ß-D-Metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA.
En ciertas realizaciones, los compuestos oligoméricos que incluyen, entre otros, compuestos antisentido cortos de la presente divulgación, comprenden uno o más monómeros de afinidad, siempre que el compuesto oligomérico no comprenda un α-L-Metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA o un ß-D-Metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA.
a. Ciertas bases nucleotídicas
La porción de base natural de un nucleósido es, normalmente una base heterocíclica. Las dos clases más habituales de dichas bases heterocíclicas son las purinas y las pirimidinas. Para los nucleósidos que incluyen un azúcar de pentofuranosilo, un grupo fosfato se puede unir al resto hidroxilo en 2’, 3’ o 5’ del azúcar. Al formar oligonucleótidos, los grupos fosfato unen covalentemente a los nucleósidos adyacentes entre sí para formar un compuesto polimérico lineal dentro de los oligonucleótidos, normalmente se hace referencia a los grupos fosfato como formadores de la estructura internucleotídica del oligonucleótido. El enlace natural o estructura de ARN y de ADN es un enlace fosfodiéster 3' a 5'.
Además de las bases nucleotídicas “no modificadas” o “naturales”, tal como las bases nucleotídicas de purina adenina (A) y guanina (G), y las bases nucleotídicas de pirimidina timina (T), citosina (C) y uracilo (U), muchas bases nucleotídicas modificadas o miméticos de bases nucleotídicas conocidas para los expertos en la técnica son susceptibles con los compuestos descritos en el presente documento. En ciertas realizaciones, una base nucleotídica modificada es una base nucleotídica que es bastante similar en estructura a la base nucleotídica parental, tal como, por ejemplo, 7-deaza purina, una 5-metilcitosina o una pinza G. En ciertas realizaciones, los miméticos de las bases nucleotídicas incluyen estructuras más complicadas, tales como, por ejemplo, un mimético de una base nucleotídica de fenozacina tricíclica. Los procedimientos para la preparación de las bases nucleotídicas modificadas indicadas anteriormente son bien conocidos para los expertos en la técnica.
b. Ciertos azúcares
Los compuestos oligoméricos descritos en el presente documento pueden comprender uno o más monómeros, incluido un nucleósido o nucleótido, que tiene un resto de azúcar no modificado. Por ejemplo, el anillo de azúcar de furanosilo de un nucleósido se puede modificar de diversos modos, incluidos, entre otros, la adición de un grupo sustituyente, en puente don dos átomos de anillo no germinales, para formar un ácido bicíclico-nucleico (BNA) no germinal.
En ciertas realizaciones, los compuestos oligoméricos comprenden uno o más monómeros que es un BNA. En ciertas realizaciones, los BNA incluyen, entre otros, (A) -L-metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA, (B) ß-D-metilenoxi(4’-CH2-O-2’) BNA,
(C) Etilenoxi (4’-(CH2)2-O-2’)BNA, (D) aminooxi(4’-CH2-O-N(R)-2’) BNA y (E) oxiamino (4’-CH2-N(R)-O-2’) BNA, como se representa en la Figura 1.
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Figura 1 Ciertas estructuras BNA
En ciertas realizaciones, los BNA incluyen, entre otros, compuestos que tienen al menos un puente entre la posición 4’ y la posición 2’ del azúcar, en los que cada uno de los puentes comprende de forma independiente de 1 o de 2 a 4 grupos de unión seleccionados de forma independiente de -[C(R1)(R2)]n-, -C(R1)=C(R2)-, -C(R1)=N-, -C(=NR1)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O, n-Si(R1)2, -S(=O)x- y -N(R1)-;
en las que:
x es 0, 1,o 2;
n es 1, 2, 3 o 4,
cada R1 y R2 es, de forma independiente, H, un grupo protector, hidroxilo, alquilo C1-C11, alquilo C1-C12 sustituido, alquenilo C2-C11, alquenilo C2-C12 sustituido, alquinilo C2-C12, alquinilo C2-C12 sustituido, arilo C5-C20, arilo C5-C20 sustituido, radical heterociclo, radical heterociclo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, radical alicíclico C5C7, radical alicíclico C5-C7 sustituido, halógeno, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3 , COOJ1, acilo (C(=O)-H), acilo sustituido, CN, sulfonilo (S(=O)2-J1 o sulfoxilo (S(=O)-J1); y
cada J1 y J2 es, de forma independiente, H, alquilo C1-C12, alquilo C1-C12 sustituido, alquenilo C1-C12, alquenilo C1C12 sustituido, alquinilo C2-C12, alquinilo C2-C12 sustituido, arilo C5-C20, arilo C3-C20 sustituido, acilo (C(=O)-H), acilo sustituido, un radical heterociclo, un radical heterociclo sustituido, aminoalquilo C1-C12, aminoalquilo C1-C12 sustituido o un grupo protector.
En una realización, cada uno de los puentes o los compuestos de BNA es, de forma independiente, -[C(R1)(R2)]n-, [C(R1)(R2)]n-Q-, -C(R1R2)-N(R1)-O- o -C(R1R2)-ON(R1)-. En otra realización, cada uno de dichos puentes es, de forma independiente, 4’-(CH2)-2’, 4’-(CH2)2-2’, 4’-CH2O-2’, 4’-(CH2)2-O-2’, 4’-CH2-O-N(R1)-2’ y 4’-CH2-N(R1)-O-2’-, en el que cada R1 es, de forma independiente, H, un grupo protector o alquilo C1-C12.
Ciertos BNA se han preparado y divulgado en la literatura de patentes, así como en la literatura científica (Singh y col., Chem. Commun., 1998, 4, 455-456; Koshkin y col., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Wahlestedt y col., Proc.Natl. Acad. Sci. U. S. A., 2000, 97, 5633-5638; Kumar y col., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222; documento WO 94/14226; documento WO 2005/021570; Singh y col., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039; Ejemplos de patentes de EE.UU. presentadas y solicitudes publicadas que divulgan BNA incluyen, por ejemplo, las patentes de EE.UU. nº 7.053.207; 6.268.490; 6.770.748; 6.794.499; 7.034.133; y 6.525.191; y las publicaciones pre-concensión de EE.UU. nº 2004-0171570; 2004-0219565; 2004-0014959; 2003-0207841; 2004-0143114; y 20030082807.
En el presente documento también se divulgan BNA en los que el grupo 2’-hidroxilo del anillo de azúcar ribosilo está unido al átomo de carbono en 4’ del anillo de azúcar, formando de este modo un enlace metilenoxi (4’-CH2-O-2’) para formar el resto azúcar bicílico (Revisado en in Elayadi y col., Curr. Opinion Invens. Drugs, 2001, 2, 558-561; Braasch y col., Chem. Biol., 2001, 81-7; and Orum y col., Curr. Opinion Mol. Ther., 2001, 3, 239-243; véase también las patentes de EE.UU.:
6.268.490 y 6.670.461). El enlace puede ser un grupo metilen(CH2-) que forma un puente entre el átomo de oxígeno en 2’ y el átomo de carbono en 4’, para los que el término metilenoxi(4’-CH2-O-2’) BNA se usa para el resto bicíclico; en el caso de que haya un grupo etileno en esta posición se usa el término etilenoxi(4’-CH2CH2-O-2’) BNA (Singh y col., Chem. Commun., 1998, 4, 55-456: Morita y col., Bioorganic Medicinal Chemistry, 2003, 11, 2211-2226). El metilenoxi(4’-CH2-O2’) BNA y otros análogos del azúcar bicíclico muestran estabilidades térmicas del dúplex muy altas con complementariedad de ADN y ARN (Tm = +3 a +10° C), estabilidad frente a la degradación 3’-exonucleolítica y buenas propiedades de solubilidad. Se han descrito potentes oligonucleótidos antisentido no tóxicos que comprenden BNA (Wahlestedt y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 2000, 97, 5633-5638).
Un isómero de metilenoxi(4’-CH2-O-2’) BNA que también se ha tratado es alfa-L-metilenoxi(4’-CH2-O-2’) BNA, que se ha demostrado que tiene una estabilidad superior contra una 3'-exonucleasa. Los alfa-L-metilenoxi(4’-CH2-O-2’) BNA se incorporaron en gápmeros y quimeras antisentido, que mostraron una potente actividad antisentido (Frieden y col., Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372).
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Se han descrito la síntesis y preparación de los monómeros de metilenoxi(4’-CH2-O-2’) BNA adenina, citosina, guanina, 5metilcitosina, timina y uracilo, junto con su oligomerización y las propiedades de reconocimiento de ácidos nucleicos (Koshkin y col., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630). También se han descrito BNA y su preparación en los documentos WO 98/39352 y WO 99/14226.
También se han preparado análogos de metilenoxi(4’-CH2-O-2’) BNA, fosforotioato-metilenoxi(4’-CH2-O-2’) BNA y 2’-tio-BNA (Kumar y col., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222). También se ha descrito la preparación de análogos nucleosídicos bloqueados que comprenden dúplex de oligodesoxirribonucleótidos como sustratos para las ácido nucleico polimerasas (Wengel y col., WO 99/14226). Además, en la técnica se ha descrito la síntesis de 2'-amino-BNA, un nuevo análogo oligonucleotídico de alta afinidad restringido por conformación (Singh y col., J. Org. Chem., 1998, 63, 1003510039). Además, se han preparado 2’-amino y 2’-metilamino-BNA y anteriormente se ha comunidad la estabilidad térmica de otros dúplex con hebras de ARN y ADN complementarias.
Se conocen bien restos de azúcar modificado y se pueden usar para alterar, normalmente incrementar, la afinidad del compuesto antisentido por su diana y/o incrementar la resistencia a nucleasas. Una lista representativa de azúcares modificados preferidos incluye, entre otros, azúcares modificados bicíclicos (BNA), incluidos metilenoxi(4’-CH2-O-2’) BNA y etilenoxi (CH2)2-O-2’-puente) BNA; azúcares sustituidos, especialmente azúcares sustituidos en 2’ que tienen un grupo sustituyente 2’-F, 2’-OCH3 o 2’-O (CH2)2-OCH3; y azúcares modificados en 4’-tio. Los azúcares también pueden reemplazarse con grupos miméticos de azúcar, entre otros. Los expertos en la técnica conocen bien procedimientos para las preparaciones de azúcares modificados. Algunas patentes y publicaciones representativas que instruyen sobre la preparación de dichos azúcares modificados incluyen, entre otros, las patentes de EE.UU. nº: 4.981.957; 5.118.800; 5.319.080; 5.359.044; 5.393.878; 5.446.137; 5.466.786; 5.514.785; 5.519.134; 5.567.811; 5.576.427; 5.591.722; 5.597.909; 5.610.300; 5.627.053; 5.639.873; 5.646.265; 5.658.873; 5.670.633; 5.792.747; 5.700.920; 6.531.584; y 6.600.032; y WO 2005/121371.
En ciertas realizaciones, BNA incluyen nucleósidos bicíclicos que tienen la fórmula:
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en la que:
Bx es un resto base heterocíclica;
T1 es H o un grupo protector de hidroxilo;
T2 es H, un grupo protector de hidroxilo o un grupo de fósforo reactivo;
Z es alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6, alquilo C1-C6 sustituido, alquenilo C2-C6 sustituido, alquinilo C2C6 sustituido, acilo, acilo sustituido o amida sustituida.
En una realización, cada uno de los grupos sustituidos está, de forma independiente, mono o polisustituido con grupos sustituyentes opcionalmente protegidos seleccionados de forma independiente de halógeno, oxo, hidroxilo, OJ1,NJ1J2, SJ1, N3, OC(=X)J1,OC (=X)NJ1J2, NJ3C(=X)NJ1J2 y CN, en los que cada J1,J2 y J3 es, de forma independiente, H o alquilo C1-C6 y X es O, S o NJ1.
En ciertas de estas realizaciones, cada uno de los grupos sustituidos está, de forma independiente, mono o polisustituido con grupos sustituyentes seleccionados de forma independiente de halógeno, oxo, hidroxilo, OJ1,NJ1J2, SJ1, N3, OC (=X)NJ1 y NJ3C(=X)NJ1J2, en los que cada J1,J2 y J3 es, de forma independiente, H, alquilo C1-C6 o alquilo C1-C6 sustituido y X es O o NJ1.
En ciertas realizaciones, el grupo Z es alquilo C1-C6 sustituido con uno o más Xx, en la que cada Xx es, de forma independiente, OJ1,NJ1J2 ,SJ1,N3 , OC(=X)J1, OC(=X)NJ1J2 ,NJ3 C(=X)NJ1J2 o CN; en los que cada J1,J2 y J3 es, de forma independiente, H o alquilo C1-C6 y X es O, S o NJ1. En otra realización, grupo Z es alquilo C1-C6 sustituido con uno o más Xx, en la que cada Xx es, de forma independiente halo (p. ej., flúor), hidroxilo, alcoxi (p. ej., CH3O-), alcoxi o azido sustituido.
En ciertas realizaciones, el grupo Z es -CH2Xx, en la que Xx es OJ1,NJ1J2 ,SJ1,N3 , OC(=X)J1, OC(=X)NJ1J2 , NJ3 C(=X)NJ1J2 o CN; en los que cada J1,J2 y J3 es, de forma independiente, H o alquilo C1-C6 y X es O, S o NJ1. En otra
realización, el grupo Z es CH2Xx, en la que Xx es halo (p. ej., flúor), hidroxilo, alcoxi (p. ej., CH3O-) o azido. En ciertas de estas realizaciones, el grupo Z está en la configuración (R).
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En ciertas de estas realizaciones, el grupo Z está en la configuración (S).
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En ciertas realizaciones, cada T1 y T2 es un grupo protector de hidroxilo. Una lista preferida de grupos protectores de hidroxilo incluye bencilo, benzoílo, 2,6-diclorobencilo, t-butildimetilsililo, t-butildifenilsililo, mesilato, tosilato, dimetoxitritilo (DMT), 9-fenilxantina-9-ilo (Pixilo) y 9-(p-metoxifenilo)xantina-9-ilo (MOX). En ciertas realizaciones, T1 es un grupo protector de hidroxilo seleccionado de acetilo, bencilo, t-butildimetilsililo, t-butildifenilsililo y dimetoxitritilo, en los que un grupo protector de hidroxilo más preferido es T1 es 4,4’-dimetoxitritilo.
En ciertas realizaciones, T2 es un grupo de fósforo reactivo en el que los grupos de fósforo reactivos preferidos incluyen diisipropilcianoetoxi fosforoamidita y H-fosfonato. En ciertas realizaciones, T1 es 4,4’-dimetoxitritilo y T2 es diisipropilcianoetoxi fosforoamidita.
En ciertas realizaciones, los compuestos oligoméricos tienen al menos un monómero de la fórmula:
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o de la fórmula:
o de la fórmula:
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en las que
Bx es un resto base heterocíclica;
T3 es H, un grupo protector de hidroxilo, un grupo conjugado unido o un grupo de unión internucleosídica unido a un nucleósido, un nucleótido, un oligonucleósido, un oligonucleótido, una subunidad monomérica o un compuesto oligomérico; T4 es H, un grupo protector de hidroxilo, un grupo conjugado unido o un grupo de unión internucleosídica unido a un nucleósido, un nucleótido, un oligonucleósido, un oligonucleótido, una subunidad monomérica o un compuesto oligomérico; en las que al menos uno de T3 y T4 es un grupo de unión internucleosídica unido a un nucleósido, un nucleótido, un oligonucleósido, un oligonucleótido, una subunidad monomérica o un compuesto oligomérico; y
Z es alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6, alquilo C1-C6 sustituido, alquenilo C2-C6 sustituido, alquinilo C2C6 sustituido, acilo, acilo sustituido o amida sustituida.
En una realización, cada uno de los grupos sustituidos está, de forma independiente, mono o polisustituido con grupos sustituyentes opcionalmente protegidos seleccionados de forma independiente de halógeno, oxo, hidroxilo, OJ1,NJ1J2, SJ1, N3, OC(=X)J1,OC (=X)NJ1J2, NJ3C(=X)NJ1J2 y CN, en los que cada J1,J2 y J3 es, de forma independiente, H o alquilo C1-C6 y X es O, S o NJ1.
En una realización, cada uno de los grupos sustituidos está, de forma independiente, mono o polisustituido con grupos sustituyentes seleccionados de forma independiente de halógeno, oxo, hidroxilo, OJ1,NJ1J2, SJ1, N3, OC (=X)NJ1 y NJ3C(=X)NJ1J2, en los que cada J1,J2 y J3 es, de forma independiente, H o alquilo C1-C6 y X es O o NJ1.
En ciertas de estas realizaciones, al menos un Z es alquilo C1-C6 o alquilo C1-C6 sustituido. En ciertas realizaciones, cada Z es, de forma independiente, alquilo C1-C6 o alquilo C1-C6 sustituido. En ciertas realizaciones, al menos un Z es alquilo C1-C6. En ciertas realizaciones, cada Z es, de forma independiente, alquilo C1-C6. En ciertas realizaciones, al menos un Z es metilo. En ciertas realizaciones, cada Z es metilo. En ciertas realizaciones, al menos un Z es etilo. En ciertas realizaciones, cada Z es etilo. En ciertas realizaciones, al menos un Z es alquilo C1-C6 sustituido. En ciertas realizaciones, cada Z es, de forma independiente, alquilo C1-C6 sustituido. En ciertas realizaciones, al menos un Z es metilo sustituido. En ciertas realizaciones, cada Z es metilo sustituido. En ciertas realizaciones, al menos un Z es etilo sustituido. En ciertas realizaciones, cada Z es etilo sustituido.
En ciertas realizaciones, al menos un grupo sustituyente es alcoxi C1-C6 (p. ej., al menos un Z es alquilo C1-C6 sustituido con uno o más alcoxi C1-C6). En otra realización, cada grupo sustituyente es, de forma independiente, alcoxi C1-C6 (p. ej., cada Z es, de forma independiente, alquilo C1-C6 sustituido con uno o más alcoxi C1-C6).
En ciertas realizaciones, al menos un grupo sustituyente alcoxi C1-C6 es CH3O- (p. ej., al menos un Z es CH3OCH2-). En otra realización, cada grupo sustituyente alcoxi C1-C6 es CH3O- (p. ej., cada Z es CH3OCH2-).
En ciertas realizaciones, al menos un grupo sustituyente es halógeno (p. ej., al menos un Z es alquilo C1-C6 sustituido con uno o más halógenos). En ciertas realizaciones, cada grupo sustituyente es, de forma independiente, halógeno (p. ej., cada Z es, de forma independiente, alquilo C1-C6 sustituido con uno o más halógenos). En ciertas realizaciones, al menos un grupo sustituyente halógeno es flúor (p. ej., al menos un Z es CH2FCH2-, CHF2 CH2- o CF3CH2-). En ciertas realizaciones, cada grupo sustituyente halógeno es flúor (p. ej., cada Z es, de forma independiente, CH2FCH2-, CHF2 CH2-
o CF3CH2-).
En ciertas realizaciones, al menos un grupo sustituyente es hidroxilo (p. ej., al menos un Z es alquilo C1-C6 sustituido con uno o más hidroxilos). En ciertas realizaciones, cada grupo sustituyente es, de forma independiente, hidroxilo (p. ej., cada Z es, de forma independiente, alquilo C1-C6 sustituido con uno o más hidroxilos). En ciertas realizaciones, al menos un Z es HOCH2-. En otra realización, cada Z es HOCH2.
En ciertas realizaciones, al menos un Z es CH3-, CH3CH2-, CH2OCH3-, CH2F- o HOCH2-. En ciertas realizaciones, cada Z es, de forma independiente, CH3-, CH3CH2-, CH2OCH3-, CH2F- o HOCH2-.
En ciertas realizaciones, al menos un grupo Z es alquilo C1-C6 sustituido con uno o más Xx, en el que cada Xx es, de forma independiente, OJ1,NJ1J2 ,SJ1,N3 , OC(=X)J1, OC(=X)NJ1J2, NJ3 C(=X)NJ1J2 o CN; en los que cada J1,J2 y J3 es, de forma independiente, H o alquilo C1-C6 y X es O, S o NJ1. En otra realización, al menos un grupo Z es alquilo C1-C6 sustituido con uno o más Xx, en el que cada Xx es, de forma independiente, halo (p. ej., flúor, alcoxi (p. ej., CH3O-) o azido.
En ciertas realizaciones, cada grupo Z es, de forma independiente, alquilo C1-C6 sustituido con uno o más Xx, en la que cada Xx es, de forma independiente, OJ1,NJ1J2 ,SJ1,N3 , OC(=X)J1, OC(=X)NJ1J2 ,NJ3 C(=X)NJ1J2 o CN; en los que cada J1,J2 y J3 es, de forma independiente, H o alquilo C1-C6 y X es O, S o NJ1. En otra realización, cada grupo Z es, de forma independiente, alquilo C1-C6 sustituido con uno o más Xx, en los que cada Xx es, de forma independiente halo (p. ej., flúor), hidroxilo, alcoxi (p. ej., CH3O-) o azido.
En ciertas realizaciones, al menos un grupo Z es -CH2Xx, en la que Xx es OJ1,NJ1J2 ,SJ1,N3 , OC(=X)J1, OC(=X)NJ1J2 , NJ3 C(=X)NJ1J2 o CN; en los que cada J1,J2 y J3 es, de forma independiente, H o alquilo C1-C6 y X es O, S o NJ1.
En ciertas realizaciones, al menos un grupo Z es CH2Xx, en la que Xx es halo (p. ej., flúor), hidroxilo, alcoxi (p. ej., CH3O-) o azido.
En ciertas realizaciones, cada grupo Z es, de forma independiente, -CH2Xx, en la que Xx es, de forma independiente, OJ1, NJ1J2, SJ1,N3, OC(=X)J1, OC(=X)NJ1J2, NJ3 C(=X)NJ1J2 o CN; en los que cada J1,J2 y J3 es, de forma independiente, H o alquilo C1-C6 y X es O, S o NJ1. En otra realización, cada grupo Z es, de forma independiente, CH2Xx, en la que Xx es, de forma independiente, halo (p. ej., flúor), hidroxilo, alcoxi (p. ej., CH3O-) o azido.
En ciertas realizaciones, al menos un Z es CH3-. En otra realización, cada Z es CH3-..
En ciertas realizaciones, el grupo Z de al menos un monómero está en la configuración (R) representada por la fórmula:
o la fórmula:
o la fórmula:
imagen1
En ciertas realizaciones, el grupo Z de cada monómero de la fórmula está en la configuración (R). En ciertas realizaciones, el grupo Z de al menos un monómero está en la configuración (S) representada por la fórmula:
o la fórmula:
o la fórmula:
imagen1
En ciertas realizaciones, el grupo Z de cada monómero de la fórmula está en la configuración (S).
En ciertas realizaciones, cada T3 es H o un grupo protector de hidroxilo. En ciertas realizaciones, cada T4 es H o un grupo protector de hidroxilo. En una realización adicional, T3 es un grupo de unión internucleosídica unido a un nucleósido, nucleótido o una subunidad monomérica. En ciertas realizaciones, T4 es un grupo de unión internucleosídica unido a un nucleósido, nucleótido o una subunidad monomérica. En ciertas realizaciones, T3 es un grupo de unión internucleosídica unido a un oligonucleósido o a un oligonucleótido. En ciertas realizaciones, T4 es un grupo de unión internucleosídica unido a un oligonucleósido o a un oligonucleótido. En ciertas realizaciones, T3 es un grupo de unión internucleosídica unido a un compuesto oligomérico. En ciertas realizaciones, T4 es un grupo de unión internucleosídica unido a un compuesto oligomérico. En ciertas realizaciones, al menos uno de T3 y T4 comprende un grupo de unión internucleosídica seleccionado de fosfodiéster o fosforotioato.
En ciertas realizaciones, los compuestos oligoméricos tienen al menos una región de al menos dos monómeros contiguos de la fórmula:
o de la fórmula:
o de la fórmula:
imagen1
imagen1
En ciertas realizaciones, el compuesto oligomérico comprende al menos dos regiones de al menos dos monómeros contiguos de la fórmula anterior. En ciertas realizaciones, el compuesto oligomérico comprende un el compuesto oligomérico con hueco. En ciertas realizaciones, el compuesto oligomérico comprende al menos una región de aproximadamente 8 a aproximadamente 14 nucleósidos ß-D-2’-desoxirribofuranosilo contiguos. En ciertas realizaciones, el compuesto oligomérico comprende al menos una región de aproximadamente 9 a aproximadamente 12 nucleósidos ß-D-2’-desoxirribofuranosilo contiguos.
En ciertas realizaciones, los monómeros incluyen miméticos de azúcar. En ciertas de estas realizaciones, se usa un mimético en lugar del azúcar o de la combinación azúcar-unión internucleosídica, y la base nucleotídica se mantiene por hibridación a una diana seleccionada. Ejemplos representativos de miméticos de azúcar incluyen, entre otros, ciclohexenilo o morfolino. Ejemplos representativos de un mimético para una combinación de azúcar-unión internucleosídica incluyen, entre otros, ácidos nucleicos peptídicos (PNA) o grupos morfolino unidos por enlaces aquirales sin carga. En algunos casos se usa un mimético en lugar de la base nucleotídica. Miméticos de bases nucleotídicas representativos son bien conocidos en la técnica e incluyen, entre otros, análogos de fenoxacina tricíclica y bases universales (Berger y col., Nuc Acid Res. 2000, 28:2911-14). Los procedimientos para la síntesis de azúcar, nucleósidos y miméticos de bases nucleotídicas son bien conocidos para los expertos en la técnica.
3. Enlaces monoméricos
En el presente documento se describen grupos ligadores que unen monómeros (incluidos, entre otros, nucleósidos y nucleótidos modificados y no modificados), formando de este modo un compuesto oligomérico. Las dos clases principales de grupos de unión se definen por la presencia o ausencia de un átomo de fósforo. Enlaces representativos que contienen fósforo incluyen, entre otros, fosforodiésteres (P=O), fosforotriésteres, metilfosfonatos, fosforoamidato y fosforotioatos (P=S). Grupos de unión sin fósforo representativos incluyen, entre otros, metilenmetilimino (-CH2-N(CH3)O-CH2-), tiodiéster (-O-C(O)-S-), tionocarbamato (-O-C(O)(NH)-S-); siloxano (-O-Si(H) 2-O-); y N,N’-dimetilhidrazina (-CH2-N(CH3)N(CH3)-). Los compuestos oligoméricos que tienen grupos de unión sin fósforo se denominan oligonucleósidos. Se pueden usar enlaces modificados, en comparación con los enlaces fosfodiéster naturales, para alterar, normalmente aumentar, la resistencia a la nucleasa del compuesto oligomérico. En ciertas realizaciones, se pueden preparar enlaces que tienen un átomo quiral, como mezclas racémicas en forma de enantiómeros separados. Enlaces quirales representativos incluyen, entre otros, alquilfosfonatos y fosforotioatos. Los procedimientos para la preparación de enlaces
5 que contienen fósforo y que no contienen fósforo son bien conocidos para los expertos en la técnica.
Los compuestos oligoméricos descritos en el presente documento contienen uno o más centros asimétricos y pueden, por tanto, dar lugar a enantiómeros, diastereómeros y otras formas estereoisoméricas que pueden definirse en términos de estereoquímica como (R) o (S),  o , tal como para anómeros de azúcar, o como (D) o (L), tal como para aminoácidos. Incluidos en los compuestos antisentido divulgados en el presente documento están todos estos posibles isómeros, así como sus formas racémicas y óptimamente puras.
4. Compuestos oligoméricos
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan compuestos oligoméricos que tienen grupos de fósforo reactivos útiles para formar enlaces, incluidos, por ejemplo, enlaces internucleosídicos fosfodiéster y fosforotioato. Procedimientos de preparación y/o purificación de precursores o compuestos oligoméricos no son una limitación de las
15 composiciones o procedimientos descritos en el presente documento. Los procedimientos para la síntesis y purificación de compuestos oligoméricos, incluidos ADN, ARN, oligonucleótidos, oligonucleósidos y compuestos antisentido son bien conocidos para los expertos en la técnica.
En general, los compuestos oligoméricos comprenden una pluralidad de subunidades monoméricas unidas mediante grupos de unión. Ejemplos no limitantes de compuestos oligoméricos incluyen cebadores, sondas, compuestos antisentido, oligonucleótidos antisentido, oligonucleótidos de secuencias de guía externas (SGE), empalmadotes alternativos y ARNsi. Como tales, estos compuestos se pueden introducir en forma de monocatenaria, bicatenaria, circular, ramificada o en horquilla y pueden contener elementos estructurales tales como protuberancias o bucles. Compuestos oligoméricos bicatenarios pueden ser dos hebras hibridadas para formar compuestos bicatenarios o una sola hebra con suficiente autocomplementariedad para permitir la hibridación y la formación de un compuesto completamente o
25 parcialmente bicatenario.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan compuestos oligoméricos quiméricos. En ciertas de estas realizaciones, los compuestos oligoméricos quiméricos son oligonucleótidos quiméricos. En ciertas de estas realizaciones, los oligonucleótidos quiméricos comprenden nucleótidos modificados de forma diferente. En ciertas realizaciones, los oligonucleótidos quiméricos son oligonucleótidos antisentido de estructura mixta.
En general, un compuesto oligomérico quimérico tendrá nucleósidos modificados que pueden estar en posiciones aisladas
o agrupados en regiones que definirán un motivo concreto. Cualquier combinación de modificaciones y/o grupos miméticos puede comprender un compuesto oligomérico quimérico, tal como se describe en el presente documento.
En ciertas realizaciones, los compuestos oligoméricos quiméricos normalmente comprenden al menos una región modificada de modo que confieren un incremento de la resistencia a la degradación por nucleasas, incremento de la
35 captación celular y/o incremento de la afinidad de unión por el ácido nucleico diana. En ciertas realizaciones, una región adicional del compuesto oligomérico puede servir como sustrato para las enzimas capaces de escindir ARN:ADN o híbridos ARN:ARN. A modo de ejemplo, la RNasa H es una endonucleasa celular que escinde la hebra de ARN de un dúplex ARN:ADN. Por tanto, la activación de la RNasa H da lugar a la escisión del ARN diana, de modo que se potencia considerablemente la eficiencia de la inhibición de la expresión génica. En consecuencia, a menudo se pueden obtener resultados comparables con compuestos oligoméricos más cortos cuando se usan quimeras, en comparación con, por ejemplo, fosforotioato desoxioligonucleótidos que hibridan con la misma región diana. La escisión del ARN diana se puede detectar de forma rutinaria mediante electroforesis en gel y, en caso necesario, técnicas asociadas de hibridación de ácidos nucleicos conocidas en la técnica.
En ciertas realizaciones, los compuestos oligoméricos quiméricos son gápmeros. En ciertas realizaciones, los compuestos
45 quiméricos son compuestos antisentido cortos. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos son gápmeros. En ciertas de estas realizaciones, un oligómero antisentido de estructura mixta tiene un tipo de enlace internucleotídico en una o ambas alas y un tipo diferente de enlaces internucleotídicos en el hueco. En ciertas de estas realizaciones, el oligómero antisentido de estructura mixta tiene enlaces fosfodiéster en las alas y enlaces fosforotioato en el hueco. En ciertas realizaciones en las que el enlace internucleotídico en un ala es diferente del enlace internucleotídico en el hueco, el enlace internucleotídico que une dicha ala y el hueco es el mismo que el enlace internucleotídico del ala. En ciertas realizaciones en las que el enlace internucleotídico en un ala es diferente del enlace internucleotídico en el hueco, el enlace internucleotídico que une dicha ala y el hueco es el mismo que el enlace internucleotídico del hueco.
C. Ciertos compuestos antisentido cortos
En el presente documento se divulgan compuestos antisentido de 8 a 16, preferentemente de 9 a 15, más preferentemente de 9 a 14, más preferentemente de 10 a 14 nucleótidos de longitud. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen una longitud de 9 a 14 nucleótidos. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen una longitud de 10 a 14 nucleótidos. En ciertas realizaciones, dichos compuestos antisentido cortos son oligonucleotídicos antisentido cortos.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos comprenden una o más modificaciones químicas. En ciertas de estas realizaciones, los compuestos antisentido cortos comprenden al menos un nucleótido modificado. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos comprenden al menos dos o más nucleótidos modificados. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos comprenden al menos un enlace internucleotídico modificado. En ciertas realizaciones, los oligonucleótidos quiméricos son oligonucleótidos de estructura mixta. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos son oligonucleótidos quiméricos. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos se modifican de forma uniforme. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos comprenden modificaciones seleccionadas de forma independiente en cada base nucleotídica y en cada enlace.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos son gápmeros cortos. En ciertas de estas realizaciones, los gápmeros cortos comprenden al menos una modificación de alta afinidad en una o más alas del compuesto. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos comprenden de 1 a 3 modificaciones de alta afinidad en cada ala. En ciertas realizaciones, las modificaciones de alta afinidad de los compuestos antisentido cortos permiten una afinidad por la diana similar, o incluso mayor, a la afinidad por la diana de compuestos antisentido más largos. En ciertas realizaciones, los nucleótidos modificados de alta afinidad son nucleótidos modificados con azúcar. Dichos nucleótidos modificados con azúcar incluyen aquéllos que comprenden un puente entre las posiciones 4' y 2’ del azúcar. Las modificaciones de alta afinidad de ejemplo incluyen, entre otras, BNA y otras modificaciones en 2’, tal como 2’-MOE. En una realización alternativa de la divulgación, la modificación de alta afinidad no es un nucleótido modificado con azúcar 2’-O-(CH2)nH (n=16). En una realización alternativa adicional, el nucleótido modificado de alta afinidad no es un nucleótido 2’-OCH3 o un 2’OCH2CH2OCH3 . En ciertas realizaciones, los nucleótidos modificados de alta afinidad confieren un T de al menos 1, al menos 1,5, al menos 2, al menos 2,5, al menos 3,0, al menos 3,5 o al menos 4,0 grados por nucleótido. En la técnica se sabe que algunas modificaciones nucleotídicas de alta afinidad aumentan la toxicidad. Como se muestra en el presente documento, los c que tienen un número limitado (en general de 2 a 6) de modificaciones de alta afinidad exhiben poco o ninguna toxicidad, pero conservan o aumentan la afinidad por el ARN diana, al tiempo que también reducen significativamente la expresión del ARN diana. Los compuestos antisentido cortos de la divulgación pueden comprender, opcionalmente, un grupo conjugado, tal como, por ejemplo, colesterol o C16.
1. Ciertas alas
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos comprenden un ala en 5’ y/o un ala en 3’. En dichas realizaciones, las características del ala en 3’ y las características del ala en 5’ se seleccionan de forma independiente. Por tanto, en dichas realizaciones, el número de monómeros en el ala 5’ y el número de monómeros (longitud) en el ala 5’ pueden ser iguales o pueden ser diferentes; las modificaciones, si las hubiera, en el ala 5’ pueden ser las mismas que las modificaciones, si las hubiera, en el ala 3', o dichas modificaciones, si las hubiera, pueden ser diferentes; y los enlaces monoméricos en el ala 5’ y los enlaces monoméricos en el ala 3’ pueden ser iguales o pueden ser diferentes.
En ciertas realizaciones, un ala comprende uno, dos o tres monómeros (es decir, tiene una longitud de 1, 2 o 3). En ciertas realizaciones, los monómeros de un ala están modificados. En ciertas de dichas realizaciones, los monómeros del ala están modificados para incrementar la afinidad del compuesto antisentido por su ácido nucleico diana. En ciertas realizaciones, los monómeros de un ala son nucleósidos o nucleótidos. En ciertas de dichas realizaciones, los nucleósidos
o nucleótidos del ala comprenden una modificación en 2’. En ciertas de dichas realizaciones, los monómeros (nucleósidos
o nucleótidos) del ala son BNA. En ciertas de dichas realizaciones, los monómeros del ala se seleccionan de -Lmetilenoxi (4’-CH2O-2’) BNA, ß-D-metilenoxi (4’-CH2O-2’) BNA -2’, etilenoxi 4’-(CH2)2-O-2’) BNA, aminooxi (4’-CH2-O-N(R)2’) BNA y oxiamino (4’-CH2-N(R)-O-2’) BNA. En ciertas realizaciones, los monómeros de un ala comprenden un sustituyente en la posición 2’ seleccionado de alilo, amino, azido, tio, O-alilo, O-alquilo C1-C10, -OCF3 , O-(CH2)2-O-CH3, 2’-O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn) y O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), en las que cada Rm y Rn es, de forma independiente, H o alquilo C1-C10 sustituido o insustituido. En ciertas realizaciones, los monómeros de un ala son nucleótidos 2’MOE.
En ciertas realizaciones, los enlaces monoméricos en un ala son enlaces internucleotídicos naturales. En ciertas realizaciones, los enlaces monoméricos en un ala son enlaces internucleotídicos no naturales o enlaces internucleotídicos. En ciertas de dichas realizaciones, los enlaces monoméricos en el ala son más resistentes a una o más nucleasas que los enlaces internucleotídicos naturales. En ciertas de dichas realizaciones, los enlaces monoméricos en el ala son enlaces fosforotioato (P=S). En ciertas realizaciones en las que un ala tiene más de un enlace monomérico, los enlaces monoméricos son iguales entre sí. En ciertas realizaciones en las que un ala tiene más de un enlace monomérico, los enlaces monoméricos son diferentes entre sí.
Un experto en la técnica reconocerá que las características y modificaciones tratadas anteriormente pueden usarse en cualquier combinación para preparar un ala. La siguiente tabla proporciona ejemplos no limitantes que muestran cómo se podría preparar un ala seleccionando un cierto número de monómero, modificaciones monoméricas (si las hubiera) y enlaces monoméricos dentro del ala.
Longitud
Tipo de monómero/modificaciones Enlaces monoméricos dentro del ala
1
2’MOE Ninguno
1
BNA Ninguno
1
Metilenoxi BNA Ninguno
1
ENA Ninguno
2
2’MOE P=S
2
BNA P=S
2
Metilenoxi BNA P=S
2
ENA P=S
2
2’ MOE P=O
2
BNA P=O
2
Metilenoxi BNA P=O
2
ENA F=O
3
2’ MOE P=S
3
BNA P=S
3
Metilenoxi BNA P=S
3
ENA P=S
3
2’ MOE P=O
3
BNA P=O
3
Metilenoxi BNA P=O
3
ENA P=O
En ciertas realizaciones en las que un ala comprende dos, tres o cuatro monómeros, dichos dos, tres o cuatro monómeros comprenden todos ellos las mismas modificaciones, si las hubiera. En ciertas realizaciones en las que un ala comprende dos, tres o cuatro monómeros, uno o más de dichos dos, tres o cuatro bases nucleotídicas comprende una o más
5 modificaciones que son diferentes de una o más de las modificaciones de uno o más del resto de los monómeros.
2. Ciertos huecos
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos comprenden un hueco entre el ala en 5’ y el ala en 3’. En ciertas realizaciones, el hueco comprende cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece o catorce monómeros. En ciertas realizaciones, los monómeros del hueco son desoxirribonucleótidos no modificados. En ciertas realizaciones,
10 los monómeros del hueco son ribonucleótidos no modificados. En ciertas realizaciones, las modificaciones del hueco (si las hubiera) tienen como resultado un compuesto antisentido que, cuando se une a su ácido nucleico diana, soporta la escisión por una RNasa, incluida, entre otras, la RNasa H.
En ciertas realizaciones, los enlaces monoméricos en el hueco son enlaces internucleotídicos naturales. En ciertas realizaciones, los enlaces monoméricos en el hueco son enlaces internucleotídicos no naturales. En ciertas de dichas
15 realizaciones, los enlaces monoméricos en el hueco son más resistentes a una o más nucleasas que los enlaces internucleotídicos naturales. En ciertas de dichas realizaciones, los enlaces monoméricos en el hueco son enlaces fosforotioato (P=S). En ciertas realizaciones, los enlaces monoméricos en el hueco son iguales entre sí. En ciertas realizaciones, los enlaces monoméricos en el hueco no son todos iguales.
Un experto en la técnica reconocerá que las características y modificaciones tratadas anteriormente pueden usarse en cualquier combinación para preparar un hueco. La siguiente tabla proporciona ejemplos no limitantes que muestran cómo se podría preparar un hueco seleccionando un cierto número de monómeros, modificaciones monoméricas (si las hubiera) y enlaces monoméricos dentro del hueco.
Longitud
Tipo de monómero/modificaciones Enlaces monoméricos dentro del hueco
5
ADN P=S
6
ADN P=S
7
ADN P=S
8
ADN P=S
9
ADN P=S
10
ADN P=S
11
ADN P=S
12
ADN P=S
13
ADN P=S
14
ADN P=S
6
ADN P=O
7
ADN P=O
8
ADN P=O
9
ADN P=O
10
ADN P=O
11
ADN P=O
12
ADN P=O
8
ARN P=S
9
ARN P=S
10
ARN P=S
11
ARN P=S
12
ARN P=S
5 3. Ciertos compuestos oligoméricos antisentido con huecos
Un experto en la técnica reconocerá que se pueden seleccionar las alas y los huecos tratados anteriormente y después combinar en diversas combinaciones para generar compuestos oligoméricos con huecos, incluidos, entre otros, compuestos oligoméricos antisentido con huecos y oligonucleótidos antisentido con huecos. Las características (longitud, modificaciones, enlaces) del ala en 5’ y del ala en 3’ pueden seleccionarse de forma independiente entre sí. Las
10 características del hueco incluyen al menos una diferencia en la modificación en comparación con las características del ala en 5’ y al menos una diferencia en comparación con las características del ala en 3’ (es decir, debe haber al menos una diferencia en la modificación entre regiones adyacentes para distinguir dichas regiones adyacentes entre sí). Las características del hueco pueden, por otro lado, seleccionarse de forma independiente.
En ciertas realizaciones, los enlaces monoméricos en un ala son enlaces monoméricos dentro del hueco son iguales. En
15 ciertas realizaciones, los enlaces monoméricos en un ala son enlaces monoméricos dentro del hueco son diferentes. En ciertas de dichas realizaciones, el enlace monomérico que une el ala y el hueco es igual que los enlaces monoméricos dentro del ala. En ciertas realizaciones, el enlace monomérico que une el ala y el hueco es igual que los enlaces monoméricos dentro del hueco. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen enlaces uniformes a lo largo del compuesto. En ciertas de dichas realizaciones, todos los enlaces son enlaces fosforotioato (P=S).
Un experto en la técnica reconocerá que las alas en 3’, las alas en 5’, los huecos y los enlaces tratados anteriormente pueden usarse en cualquier combinación para preparar un gápmero. La siguiente tabla proporciona ejemplos no limitantes que muestran cómo se podría preparar un gápmero seleccionando un cierto número de ala en 5’, un hueco, un ala en 3’ y ciertos enlaces que unen el hueco y cada ala.
Ala en 5’
Puente en 5’ Hueco Puente en 3’ Ala en 3’
Longitud
Monómero Enlace Enlace Longitud Monómero Enlace Enlace Longitud Monómero Enlace
2
MOE P=S P=S 6 ADN P=S P=S 2 MOE P=S
2
BNA P=S P=O 8 ADN P=O P=S 3 BNA P=S
1
MOE Ninguno P=S 10 ADN P=S P=S 1 MOE P=S
2
MOE P=S P=S 8 ARN P=S P=S 2 MOE P=S
3
Metilenoxi BNA P=S P=S 8 ARN P=S P=S 3 MOE P=S
3
ADN P=O P=O 10 ARN P=S P=O 3 2’OH P=O
2
2-F P=S P=S 5 ARN P=S P=S 2 2’-F P=S
1
MOE P=O P=S 5 ADN P=O P=S 4 MOE P=S
En ciertas realizaciones, los compuestos oligoméricos descritos en el presente documento pueden comprender de
10 aproximadamente 8 a aproximadamente 16, preferentemente de 9 a 15, más preferentemente de 9 a 14, más preferentemente de 10 a 14 monómeros (es decir, de aproximadamente 8 a aproximadamente 16 monómeros unidos). Un experto en la técnica apreciará que esto comprende compuestos antisentido de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16 bases nucleotídicas. En ciertas realizaciones, los compuestos oligoméricos son compuestos antisentido.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen una longitud de 8 bases nucleotídicas.
15 En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen una longitud de 9 bases nucleotídicas.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen una longitud de 10 bases nucleotídicas.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen una longitud de 11 bases nucleotídicas.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen una longitud de 12 bases nucleotídicas.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen una longitud de 13 bases nucleotídicas.
20 En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen una longitud de 14 bases nucleotídicas.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen una longitud de 15 bases nucleotídicas.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen una longitud de 16 bases nucleotídicas.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen una longitud de 8 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen una longitud de 9 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos 25 antisentido cortos tienen una longitud de 10 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen una longitud de 11 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen una longitud de monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen una longitud de 13 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen una longitud de 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen una longitud de 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos
30 antisentido cortos tienen una longitud de 16 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos comprenden de 9 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos comprenden de 10 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos comprenden de 12 a 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos comprenden de 12 a 14 nucleótidos o nucleósidos.
Un experto en la técnica e informado por los compuestos antisentido cortos ilustrados en el presente documento podrá, sin experimentación indebida, identificar otros compuestos antisentido cortos.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos comprenden un hueco flanqueado por más de un ala por ambos lados. Por tanto, en ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto comprende dos o más alas en 5’ y dos o más alas en 3’. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto comprende un alas en 5’ y dos o más alas en 3’. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto comprende un ala en 3’ y dos o más alas en 5’. Ciertas de dichas realizaciones comprende, por ejemplo, las regiones siguientes: una primera ala en 5’- un puente- una segunda ala en 5’- un puente – un hueco – un puente – una segunda ala en 3’ – un puente – una primera ala en 3’. En dichas realizaciones, cada región tiene al menos una diferencia en la modificación cuando se compara con su región adyacente. Por tanto, en dichas realizaciones, la segunda ala en 5’ y la segunda ala en 3’, cada una de forma independiente, comprenden una o más diferencias en la modificación cuando se compara con el hueco y cuando se compara con la primera ala en 5’ y con la primera ala en 3’- En dichas realizaciones, las modificaciones de la primera ala en 3’ y con la primera ala en 5’ pueden ser cada una o ambas iguales o diferentes de las modificaciones del hueco, si las hubiera.
4. Ciertos grupos conjugados
En un aspecto, los compuestos oligoméricos están modificados mediante unión covalente de uno o más grupos conjugados. En general, los grupos conjugados modifican una o más propiedades del compuesto oligomérico unido incluidas, entre otras, farmacodinámica, farmacocinética, unión, absorción, distribución celular, captación celular, carga y aclaramiento. Los grupos conjugados se usan rutinariamente en las técnicas químicas y están unidos directamente o mediante un resto de unión o grupo de unión opcional a un compuesto parental, tal como un compuesto oligomérico. Una lista preferida de grupos conjugados incluye, sin limitaciones, intercalantes, moléculas indicadoras, poliaminas, poliamidas, polietilenglicoles, tioéteres, poliésteres, colesteroles, tiocolesteroles, restos ácido cólico, folato, lípidos, fosfolípidos, biotina, fenazina, fenantridina, antraquinona, adamantano, acridina, fluoresceínas, rodaminas, cumarinas y pigmentos.
Grupos conjugados preferidos en la presente divulgación incluyen restos lipídicos, tales como resto colesterol ((Letsinger y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553); ácido cólico (Manoharan y col., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1994, 4, 1053); un tioéter, por ejemplo hexil-S-tritiltiol (Manoharan y col., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660, 306; Manoharan y col., Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3, 2765); un tiocolesterol (Oberhauser y col., Nucl. Acids Res., 1992, 20, 533); una cadena alifática, por ejemplo residuos de dodecandiol o undeciloyl (Saison-Hehmoaras y col., EMBO J., 1991, 10, 111; Kabanov y col., FEBS Lett., 1990, 259, 327; Svinarchuk y col., Biochimie, 1993, 75, 49); un fosfolípdo, por ejemplo, dihexadecil-racglicerol o trietilamonio-1,2-di-O-hexadecil-rac-glicero-3-H-fosfonato (Manoharan y col., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651; Shea y col., Nucl. Acids Res., 1990, 18, 3777); una poliamina o una cadena de polietilenglicol (Manoharan y col., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14, 969); ácido adamantano acético (Manoharan y col., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651); un resto palmitilo (Mishra y col., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264, 229); o u resto octadecilamina o hexilaminocarboniloxicolesterol (Crooke y col., J. Pharmacol: Exp. Ther., 1996, 277, 923).
Grupos de unión o restos de unión bifuncionales, tales como los conocidos en la técnica, son adecuados para los compuestos divulgados en el presente documento. Los grupos de unión son útiles para la unión de grupos químicos funcionales, grupos conjugados, grupos indicadores y otros grupos para sitios selectivos en un compuesto parental, tal como, por ejemplo, un compuesto oligomérico. En general, un resto de unión bifuncional comprende un resto hidrocarbilo que tiene dos grupos funcionales. Uno de los grupos funcionales se selecciona de modo que se una a una molécula parental o compuesto de interés y el otro se selecciona de modo que se una esencialmente a cualquier grupo seleccionado, tal como un grupo químico funcional o un grupos conjugado. En algunas realizaciones, el ligador comprende una estructura de cadena o un oligómero de unidades repetidas, tales como unidades de etilenglicol o aminoácido. Ejemplos de grupos funcionales que se usan de forma rutinaria en un resto de unión bifuncional incluyen, entre otros, electrófilos para reaccionar con grupos nucleófilos y nucleófilos para reaccionar con grupos electrófilos. En algunas realizaciones, restos de unión bifuncionales incluyen amino, hidroxilo, ácido carboxílico, tiol, insaturaciones (p. ej., dobles o triples enlaces) y similares. Algunos ejemplos no limitantes de restos de unión bifuncionales incluyen ácido 8-amino-3,6dioxaoctanoico (ADO), 4-(N-maleimidometil) ciclohexan-1-carboxilato de succinimidilo (SMCC) y ácido 6-aminohexanoico (AHEX o AHA). Otros grupos de unión incluyen, entre otros, alquilo C1-C10 sustituido, alquenilo C2-C10 sustituido o insustituido o alquinilo C2-C10 sustituido o insustituido, en los que una lista no limitante de grupos sustituyentes preferidos incluyen hidroxilo, amino, alcoxi, carboxi, bencilo, fenilo, nitro, tiol, tioalcoxi, halógeno, alquilo, arilo, alquenilo y alquinilo.
5. Síntesis, purificación y análisis
La oligomerización de nucleósidos y nucleótidos modificados y no modificados se puede realizar de forma rutinaria de acuerdo con los procedimientos de la bibliografía (Protocols for Oligonucleotides and Analogs, Ed. Agrawal (1993), Humana Press) y/o ARN (Scaringe, Methods (2001), 23, 206-217. Gait y col., Applications of Chemically synthesized RNA in RNA: Protein Interactions, Ed. Smith (1998), 1-36. Gallo y col., Tetrahedron (2001), 57, 5707-5713).
Los compuestos oligoméricos divulgados en el presente documento pueden fabricarse de forma conveniente y rutinaria a través de la técnica bien conocida de la síntesis en fase sólida. El equipo para dicha síntesis se comercializa en diferentes proveedores incluidos, por ejemplo, Applied Biosystems (Foster City, CA). También se puede emplear adicionalmente o como alternativa cualquier otro medio para dicha síntesis. Es bien conocido el uso de técnicas similares para preparar oligonucleótidos tales como fosforotioatos y derivados alquilados. La divulgación no está limitada por el procedimiento de la síntesis de compuestos antisentido.
5 Los expertos en la técnica conocen procedimientos de purificación y análisis de compuestos oligoméricos. Los procedimientos de análisis incluyen electroforesis capilar (EC) y espectroscopia de masas por electronebulización. Dichos procedimientos de síntesis y análisis pueden realizarse en placas de múltiples pocillos. El procedimiento de la divulgación no está limitado por el procedimiento de la purificación de oligómeros.
D. Antisentido
10 Los mecanismos antisentido son todos aquéllos que implican la hibridación de un compuesto con un ácido nucleico diana, en los que el resultado o efecto de la hibridación es la degradación de la diana o la ocupación de la diana con la detención de la maquinaria celular que implica, por ejemplo, transcripción o corte y empalme.
U tipo de mecanismo antisentido que implica la degradación diana incluye una RNasa H. La RNasa H es una endonucleasa celular que escinde la hebra de ARN de un dúplex ARN:ADN. En la técnica se sabe que los compuestos
15 antisentido monocatenarios que son "similares a ADN" provocan actividad de RNasa H en células de mamífero. Por tanto, la activación de la RNasa H da lugar a la escisión del ARN diana, de modo que se potencia considerablemente la eficiencia de la inhibición de la expresión génica mediada por oligonucleótidos similares a ADN.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido modificados químicamente tienen una afinidad mayor por los ARN diana que los ADN no modificados. En ciertas de dichas realizaciones, dicha afinidad mayor proporciona a su vez mayor
20 potencia, lo que permite la administración de dosis menores de dichos compuestos, menor potencial de toxicidad y mejora del índice terapéutico y menor costes globales de la terapia.
La presente revelación demuestra que la incorporación de nucleótidos y nucleósidos de alta afinidad químicamente modificados en compuestos antisentido permite el diseño de compuestos antisentido cortos de una longitud de 8-16 bases nucleotídicas útiles para la reducción de los ARN diana y/o las proteínas diana en células, tejidos y animales, incluidos,
25 entre otros, seres humanos con mayor potencia y mejor índice terapéutico. Por tanto, en ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan compuestos antisentido que comprenden modificaciones en nucleótidos de alta afinidad útiles para reducir un ARN diana in vivo. Ciertos de dichos compuestos antisentido cortos son eficaces a dosis menores que los compuestos antisentido descritos anteriormente, lo que permite una reducción de la toxicidad y los costes de tratamiento. Además, ciertos compuestos antisentido cortos tienen mayor potencial para dosificación oral.
30 Para abordar la necesidad de compuestos antisentido más potentes, en el presente documento se divulgan compuestos antisentido cortos (de 8 a 16, preferentemente de 9 a 15, más preferentemente de 9 a 14, más preferentemente de 10 a 14 nucleótidos de longitud) con mayor actividad in vivo respecto a los compuestos más largos. Ciertos compuestos antisentido cortos son compuestos gápmeros que comprenden nucleósidos químicamente modificados de alta afinidad en los extremos 3' y 5' (alas) del compuesto. En ciertas realizaciones, la adición de nucleótidos modificados de alta afinidad
35 permite que los compuestos antisentido sean activos, o específicos, contra, de, su ARN diana objetivo in vivo a pesar de tener una longitud más corta. En el presente documento se contemplan compuestos antisentido en los que cada una de las alas comprende de forma independiente de 1 a 3 nucleótidos modificados de alta afinidad. En ciertas realizaciones, las modificaciones de alta afinidad son modificaciones de azúcar. Los nucleótidos modificados de alta afinidad incluyen, entre otros, BNA u otros nucleótidos modificados en 2’, tales como nucleótidos 2’-MOE. También se contemplan compuestos
40 antisentido cortos que tienen al menos un enlace internucleotídico modificado, tal como un enlace internucleotídico fosforotioato. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos de la presente divulgación pueden tener todos los enlaces internucleotídicos de fosforotioato. Los compuestos antisentido cortos comprenden, opcionalmente, un grupo conjugado. Como se muestra en el presente documento, los compuestos tienen mayor afinidad por ADN diana que por ADN y son significativamente más potentes in vivo, como se demuestra mediante la reducción del ARNm diana así como
45 la mejora de una diversidad de indicaciones de enfermedad.
Como se usa en el presente documento, un ARN que está implicado en la regulación del metabolismo o aclaramiento de la glucosa, el metabolismo de los lípidos, el metabolismo del colesterol o el metabolismo de la insulina es cualquier ARN implicado en las vías bioquímicas que regulan estos procesos. Dichos ARN son bien conocidos en la técnica. Ejemplos de genes diana incluyen, entre otros, ApoB-100 (también conocida como APOB; antígeno Ag(x); apoB-48; apolipoproteína B;
50 apolipoproteína B-100; apolipoproteína B-48) y GCGR (también conocido como el receptor del glucagón, GR), CRP, DGAT2, GCCR, PCSK9, PTEN, PTP1B, SGLT2, y SOD1
1. Modulación de la expresión diana
En ciertas realizaciones, se identifica una diana y se diseñan oligonucleótidos antisentido para modular dicha diana o su expresión. En ciertas realizaciones, el diseño de un compuesto oligomérico para una molécula de ácido nucleico diana puede ser un procedimiento de múltiples etapas. Normalmente el procedimiento comienza con la identificación de una proteína diana cuya actividad se tiene que modular y, después, la identificación del ácido nucleico cuya expresión produce la proteína diana. En ciertas realizaciones, el diseño de un compuesto antisentido da lugar a un compuesto antisentido que puede hibridar con la molécula de ácido nucleico diana. En ciertas realizaciones, el compuesto antisentido es un oligonucleótido antisentido o un oligonucleósido antisentido. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido y un ácido nucleico diana son complementarios entre sí. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido es perfectamente complementario de un ácido nucleico diana. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido incluye un apareamiento erróneo. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido incluye dos apareamientos erróneos. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido incluye tres o más apareamientos erróneos.
La modulación de la expresión de un ácido nucleico diana se puede conseguir mediante la alteración de cualquier número de funciones del ácido nucleico. En ciertas realizaciones, las funciones del ARN que se van a modular incluyen, entre otras, funciones de translocación, que incluyen, entre otras, translocación del BNA a un sitio de traducción de proteínas, translocación del ARN a sitios dentro de la célula que están lejos del sitio de la síntesis de ARN, y traducción de proteínas a partir del ARN, Las funciones de procesamiento de ARN que se pueden modular incluye, entre otras, corte y empalme del ARN para dar una o más especies de ARN, tapar los extremos del ARN, maduración en 3’ del ARN y actividad catalítica o formación de complejos que implican al ARN que se pueden unirse o ser facilitados por el ARN, La modulación de la expresión puede tener como resultado el incremento de los niveles de una o más especies de ácido nucleico o la disminución de los niveles de una o más especies de ácido nucleico, bien temporalmente o a un nivel neto en equilibrio. Por tanto, en una realización, modulación de la expresión puede significar aumentar o disminuir los niveles de ARN o de proteínas dianas. En otra realización, modulación de la expresión puede significar aumentar o disminuir uno o más productos de corte y empalme del ARN o un cambio en la proporción de dos o más productos de corte y empalme.
En ciertas realizaciones, la expresión de un gen diana se modula usando un compuesto oligomérico que comprende de aproximadamente 8 a aproximadamente 16, preferentemente de 9 a 15, más preferentemente de 9 a 14, más preferentemente de 10 a 14 monómeros (es decir, de aproximadamente 8 a aproximadamente 16 monómeros unidos). Un experto en la técnica apreciará que esto comprende procedimientos de modulación de la expresión de un gen diana usando uno o más compuestos antisentido de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16 bases nucleotídicas.
En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de un gen diana comprende usar un compuesto antisentido corto que tiene 8 bases nucleotídicas de longitud. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de un gen diana comprende usar un compuesto antisentido corto que tiene 9 bases nucleotídicas de longitud. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de un gen diana comprende usar un compuesto antisentido corto que tiene 8 bases nucleotídicas de longitud. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de un gen diana comprende usar un compuesto antisentido corto que tiene 10 bases nucleotídicas de longitud. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de un gen diana comprende usar un compuesto antisentido corto que tiene 10 bases nucleotídicas de longitud. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de un gen diana comprende usar un compuesto antisentido corto que tiene 11 bases nucleotídicas de longitud. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de un gen diana comprende usar un compuesto antisentido corto que tiene 12 bases nucleotídicas de longitud. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de un gen diana comprende usar un compuesto antisentido corto que tiene 13 bases nucleotídicas de longitud. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de un gen diana comprende usar un compuesto antisentido corto que tiene 14 bases nucleotídicas de longitud. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de un gen diana comprende usar un compuesto antisentido corto que tiene 15 bases nucleotídicas de longitud. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de un gen diana comprende usar un compuesto antisentido corto que tiene 16 bases nucleotídicas de longitud.
En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión un gen diana comprenden el uso de un compuesto antisentido corto que comprende de 9 a1 5 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión un gen diana comprenden el uso de un compuesto antisentido corto que comprende de 10 a1 5 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión un gen diana comprenden el uso de un compuesto antisentido corto que comprende de 12 a14 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión un gen diana comprenden el uso de un compuesto antisentido corto que comprende 12 o14 nucleótidos o nucleósidos.
2. Hibridación
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido hibridan específicamente cuando hay un grado suficiente de complementariedad para evitar la unión inespecífica del compuesto antisentido con secuencias de un ácido nucleico no diana en condiciones en las que se desea unión específica, es decir en condiciones fisiológicas en el caso de los ensayos in vivo o tratamiento terapéutico, y en las condiciones en las que se realizan los ensayos en el caso de los ensayos in vitro.
Como se usa en el presente documento, “condiciones rigurosas de hibridación” o “condiciones rigurosas” se refiere a condiciones en las cuales un compuesto antisentido hibrida con su secuencia diana pero con un número mínimo de otras secuencias. Las condiciones rigurosas son dependientes de la secuencia y serán diferentes en circunstancias diferentes y “condiciones rigurosas” en las que los compuestos antisentido hibridan con una secuencia diana vienen determinadas por la naturaleza y la composición de los compuestos antisentido y de los ensayos en los que se están investigando.
3.
Complementariedad
En la técnica se entiende que la incorporación de modificaciones de afinidad en el nucleótido puede hacer que se produzca un mayor número de apareamientos erróneos en comparación con un compuesto no modificado. De forma similar, ciertas secuencias oligonucleotídicas pueden ser más tolerantes a los apareamientos erróneos que otras secuencias oligonucleotídicas. Un experto en la técnica es capaz de determinar un número adecuado de apareamientos erróneos entre oligonucleótidos o entre un oligonucleótido y un ácido nucleico diana, tal como mediante la determinación de la temperatura de fusión (Tf). Tf o Tf se pueden calcular mediante técnicas familiares para un experto en la técnica. Por ejemplo, las técnicas descritas en Freier y col. (Nucleic Acids Research, 1997, 25, 22: 4429-4443) permiten a un experto en la técnica evaluar en las modificaciones nucleotídicas su capacidad para incrementar la temperatura de fusión de un dúplex ARN:ADN.
4.
Identidad
Los compuestos antisentido, o una porción de los mismos, pueden tener un porcentaje definido de identidad con una SEC ID Nº o un compuesto que tenga un número Isis específico. Como se usa en el presente documento, una secuencia es idéntica a la secuencia divulgada en el presente documento si tiene la misma capacidad de apareamiento de bases nucleotídicas. Por ejemplo, un ARN que contiene uracilo en lugar de timidina en las secuencias divulgadas de los compuestos descritos en el presente documento se consideraría idéntico, ya que ambos se aparearían con adenina. Esta identidad puede estar a lo largo de toda la longitud del compuesto oligomérico o en una porción del compuesto antisentido
(p. ej., las bases nucleotídicas 1-20 de un compuesto de 27 unidades pueden compararse con un compuesto de 20 unidades para determinar el porcentaje de identidad del compuesto oligomérico con la SEC ID Nº. Los expertos en la técnica entienden que un compuesto antisentido no tiene que tener una secuencia idéntica a la de los descritos en el presente documento para funcionar de un modo similar al compuesto antisentido descrito en el presente documento. En el presente documento también se divulgan versiones más cortas de los compuestos antisentido enseñados en el presente documento o versiones no idénticas de los compuestos antisentido enseñados en el presente documento. Las versiones no idénticas son aquéllas en las que cada base no tiene la misma actividad de apareamiento que los compuestos antisentido enseñados en el presente documento. Las bases no tienen la misma actividad de apareamiento por ser más cortas o por tener al menos un sitio abásico. Como alternativa, una versión no idéntica puede incluir al menos una base sustituida con una base diferente con distinta actividad de apareamiento (p. ej., G puede estar sustituida por C, A o T). El porcentaje de identidad se calcula de acuerdo con el número de bases que tienen idéntico apareamiento de bases correspondiente a la SEC ID Nº o al compuesto antisentido con el que se está comparando. Las bases no idénticas pueden estar adyacentes, dispersas por el oligonucleótido o ambas cosas.
Por ejemplo, un compuesto de 16 unidades que tiene la misma secuencia que las bases nucleotídicas 2-17 es un 80% idéntico al compuesto de 20 unidades. Como alternativa, un compuesto de 20 unidades que contiene cuatro bases nucleotídicas no idénticas al compuesto de 20 unidades es también un 80% idéntico al compuesto de 20 unidades. Un compuesto de 14 unidades que tiene la misma secuencia que las bases nucleotídicas 1-14 de un compuesto de 18 unidades es un 78% idéntico al compuesto de 18 unidades. Dichos cálculos entran dentro de la capacidad de los expertos en la técnica.
El porcentaje de identidad se basa en el porcentaje de bases nucleotídicas en la secuencia original presentes en una porción de la secuencia modificada. Por tanto, un compuesto antisentido de 30 bases nucleotídicas que comprende la secuencia completa de la complementaria de un segmento diana activo de 20 bases nucleotídicas tendría una porción de identidad del 100% con el complementario del segmento diana activo de 20 bases nucleotídicas, al tiempo que además comprende una porción adicional de 10 bases nucleotídicas. En el contexto de la presente descripción, el complementario de un segmento diana activo puede constituir una única porción. En realizaciones preferidas, los oligonucleótidos divulgados en el presente documento son al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% o 100% idénticos a al menos una porción del complementario de los segmentos diana activos presentados en el presente documento.
E. Ácidos nucleicos, regiones y segmentos diana
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos pueden diseñarse de modo que estén dirigidos a cualquier ácido nucleico diana. En ciertas realizaciones, el ácido nucleico diana codifica una diana que es clínicamente relevante. En dichas realizaciones, la modulación del ácido nucleico diana tiene como resultado un beneficio clínico. Ciertos ácidos nucleicos diana incluyen, entre otros, los ácidos nucleicos diana ilustrados en la Tabla 1.
En ciertas realizaciones, un ácido nucleico es una molécula de ácido nucleico que codifica ApoB. Moléculas de ácido nucleico que codifican ApoB incluyen, sin limitaciones, la SEC ID Nº 1 y SEC ID NO: 2.
En ciertas realizaciones, un ácido nucleico es una molécula de ácido nucleico que codifica SGLT2. Moléculas de ácido nucleico que codifican SGLT2 incluyen, sin limitaciones, la SEC ID Nº 3.
En ciertas realizaciones, un ácido nucleico es una molécula de ácido nucleico que codifica PCSK9. Moléculas de ácido nucleico que codifican PCSK9 incluyen, sin limitaciones, la SEC ID Nº 4.
5 En ciertas realizaciones, un ácido nucleico es una molécula de ácido nucleico que codifica SOD1. Moléculas de ácido nucleico que codifican SOD1 incluyen, sin limitaciones, la SEC ID Nº 5.
En ciertas realizaciones, un ácido nucleico es una molécula de ácido nucleico que codifica CRP. Moléculas de ácido nucleico que codifican CRP incluyen, sin limitaciones, la SEC ID Nº 6.
En ciertas realizaciones, un ácido nucleico es una molécula de ácido nucleico que codifica GCCR. Moléculas de ácido 10 nucleico que codifican GCCR incluyen, sin limitaciones, la SEC ID Nº 7 y SEC ID NO: 8.
En ciertas realizaciones, un ácido nucleico es una molécula de ácido nucleico que codifica GCGR. Moléculas de ácido nucleico que codifican GCGR incluyen, sin limitaciones, la SEC ID Nº 9.
En ciertas realizaciones, un ácido nucleico es una molécula de ácido nucleico que codifica DGAT2. Moléculas de ácido nucleico que codifican DGAT2 incluyen, sin limitaciones, la SEC ID Nº 10.
15 En ciertas realizaciones, un ácido nucleico es una molécula de ácido nucleico que codifica PTP1B. Moléculas de ácido nucleico que codifican PTP1B incluyen, sin limitaciones, la SEC ID Nº 11 y SEC ID NO: 12.
En ciertas realizaciones, un ácido nucleico es una molécula de ácido nucleico que codifica PTEN. Moléculas de ácido nucleico que codifican PTEN incluyen, sin limitaciones, la SEC ID Nº 14 o SEC ID Nº: 15.
Tabla 1: Ciertos ácidos nucleicos diana
Diana
Especie Número de registro en GENBANK® SEC ID Nº
ApoB
Ser humano NM_000384.1 1
ApoB
Ratón XM_137955.5 2
SGLT2
Ser humano NM_003041.1 3
PCSK9
Ser humano NM_174936.2 4
SOD1
Ser humano X02317.1 5
CRP
Ser humano NM_000567.1 6
GCCR
Ratón BC031885.1 7
GCCR
Ser humano Nucleótidos 1 a 10600 de AC012634 8
GCGR
Ser humano NM_000160.1 9
DGAT2
Ser humano NM_032564.2 10
PTP1B
Ser humano NM_002827.2 11
PTP1B
Ser humano Nucleótidos 1417800 a 1425600 de NT 011362.9 12
PTEN
Ratón U92437.1 13
PTEN
Ser humano NM_000314.4 14
PTEN
Ser humano Nucleótidos 8063255 a 8167140 de NT_033890.3 15
El procedimiento de apuntar a una diana incluye la determinación de al menos una región, segmento o sito diana dentro del ácido nucleico diana para que se produzca la interacción antisentido de modo que tenga lugar el efecto deseado.
En ciertas realizaciones, el nucleótido más en 5’ de una región diana es el sitio diana en 5' de un compuesto antisentido corto y el nucleótido más en 3’ de una región diana es el sitio diana en 3’ del mismo compuesto antisentido corto. En ciertas realizaciones, el nucleótido más en 5’ de una región diana es el sitio diana en 5' de un compuesto antisentido corto y el nucleótido más en 3’ de una región diana es el sitio diana en 3’ de un compuesto antisentido corto diferente. En ciertas realizaciones, una región diana comprende una secuencia nucleotídica dentro de 10, 15 o 20 nucleótidos de un sitio diana en 5’ o un sitio diana en 3’.
En ciertas realizaciones, una región diana es una región estructuralmente definida del ácido nucleico. Por ejemplo, en ciertas de dichas realizaciones, una región diana puede abarcar una 3’ UTR, una 5’ UTR, un exón, un intrón, una región codificadora, una región de inicio de la traducción, una región de terminación de la traducción u otra región de ácido nucleico definida.
Las localizaciones sobre el ácido nucleico diana definido por tener uno o más compuestos antisentido cortos activos diana se denominan ”segmentos diana activos”. En ciertas realizaciones, el ácido nucleico diana que tiene uno o más compuestos antisentido cortos activos diana es ARN diana. Cuando un segmento diana activo se define por múltiples compuestos antisentido cortos, los compuestos están separados preferentemente por no más de aproximadamente 10 nucleótidos sobre la secuencia diana, más preferentemente no más de aproximadamente 5 nucleótidos sobre la secuencia diana, incluso más preferentemente los compuestos antisentido cortos son contiguos, más preferentemente los compuestos antisentido cortos se solapan. Puede haber una considerable variación de la actividad (p. ej., definida por el porcentaje de inhibición) de los compuestos antisentido cortos dentro de un segmento diana activo. Los compuestos antisentido cortos activos son aquéllos que modulan la expresión de su ácido nucleico diana, incluidos, entre otros, un ARN diana. Los compuestos antisentido cortos activos inhiben la expresión de su ARN diana al menos un 10%, preferentemente un 20%. En una realización preferida, al menos aproximadamente el 50%, preferentemente aproximadamente el 70% de los compuestos antisentido cortos dirigidos al segmento diana activo modulan la expresión de su ARN diana al menos un 40%. En una realización más preferida, el nivel de inhibición requerido para definir un compuesto antisentido corto activo se define en base a los resultados del cribado usado para definir los segmentos diana activos.
Un segmento diana adecuado es una porción de al menos aproximadamente 8 bases nucleotídicas de una región diana a la que está dirigido un compuesto antisentido corto activo. Los segmentos diana pueden incluir secuencias de ADN o ARN que comprenden al menos las 8 bases nucleotídicas consecutivas desde el extremo 5’ de uno de los segmentos diana ilustrativos (siendo las bases nucleotídicas restantes una tira consecutiva del mismo ADN o ARN comenzando inmediatamente antes del extremo 5' del segmento diana y continuando hasta que el ADN o ARN comprende de aproximadamente 8 a aproximadamente 16 bases nucleotídicas). Los segmentos diana también están representados por secuencias de ADN o ARN que comprenden al menos las 8 bases nucleotídicas consecutivas desde el extremo 3’ de uno de los segmentos diana ilustrativos (siendo las bases nucleotídicas restantes una tira consecutiva del mismo ADN o ARN comenzando inmediatamente después del extremo 3' del segmento diana y continuando hasta que el ADN o ARN comprende de aproximadamente 8 a aproximadamente 16 bases nucleotídicas). Se entiende que los segmentos diana antisentido pueden representados por secuencias de ADN o ARN que comprenden al menos 8 bases nucleotídicas consecutivas de una porción interna de la secuencia de un segmento diana ilustrativo y pueden extenderse en una o ambas direcciones hasta que el compuesto antisentido corto comprende de aproximadamente 8 a aproximadamente 16 bases nucleotídicas. Un experto en la técnica armado con los segmentos diana ilustrados en el presente documento podrá, sin experimentación indebida, identificar otros segmentos diana.
Una vez que se han identificado una o más regiones, segmentos o sitios diana, se escogen los compuestos antisentido cortos que son suficientemente complementarios a la diana, es decir hibridan suficientemente bien y con suficiente especificidad, para dar el efecto deseado.
Los compuestos antisentido cortos también pueden estar dirigidos a regiones de la secuencia de bases nucleotídicas diana que comprende cualquier base nucleotídica consecutiva de 8 a 16 bases nucleotídicas de longitud a lo largo de la molécula de ácido nucleico diana.
Los segmentos diana de 8 a 16 bases nucleotídicas de longitud que comprenden una tira de al menos ocho (8) bases nucleotídicas consecutivas seleccionadas del interior de los segmentos diana ilustrativos también se consideran adecuados como diana. Por tanto, los compuestos antisentido cortos también pueden abarcar 8-16 bases nucleotídicas con los segmentos identificados en el presente documento comenzando en un sitio diana en 5’ concreto. Cualquier segmento de , 9, 10, 11, o, más preferentemente, de 12, 13, 14, 15 o 16 bases nucleotídicas contiguas en un perímetro de 50, preferentemente 25, más preferentemente 16 bases nucleotídicas alrededor de estas regiones también se consideran adecuados como diana.
En otra realización, los “segmentos diana adecuados” identificados en el presente documento se pueden emplear en una criba para compuestos antisentido cortos adicionales que modulan la expresión de un ácido nucleico diana. “Moduladores” son los compuestos que disminuyen o incrementan la expresión de un ácido nucleico diana y que comprenden al menos una porción de 8 bases nucleotídicas que es complementaria a un segmento diana. El procedimiento de criba comprende las etapas de poner en contacto un segmento diana de un ácido nucleico con uno o más moduladores candidatos y seleccionar uno o más moduladores candidatos que disminuya o incremente la expresión de un ácido nucleico diana. Una vez que se ha demostrado que el modulador o moduladores candidatos diana son capaces de modular (p. ej., disminuir o aumentar) la expresión de un ácido nucleico diana, el modulador puede emplearse en estudios de investigación adicionales de la función o par usar como agente de investigación, diagnóstico o terapéutico de acuerdo con la presente divulgación.
5 Para todos los compuestos antisentido cortos tratados en el presente documento, secuencia, monómero, modificación monomérica y enlace monomérico pueden, cada uno, seleccionarse de forma independiente. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos están descritos con un motivo. En dichas realizaciones, cualquier motivo puede usarse con cualquier secuencia, la secuencia y/o el motivo se divulguen específicamente en el presente documento o no. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos comprenden modificaciones que no son adecuados para describir con un motivo (por ejemplo, los compuestos antisentido cortos que comprenden varias modificaciones y/o enlaces diferentes en varias posiciones a lo largo del compuesto). Dichas combinaciones se pueden incorporar para cualquier secuencia, se divulgue o no en el presente documento. El listado de secuencias que acompaña a esta presentación proporciona ciertas secuencias de ácido nucleico independientes de la modificación química. Aunque dicho listado identifica cada secuencia como “ARN” o “ADN”, según se requiera, en realidad dichas secuencias pueden modificarse con cualquier combinación de
15 modificaciones químicas y/o motivos.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos comprenden al menos un monómero modificado de alta afinidad. En ciertas realizaciones se divulgan compuestos antisentido cortos dirigidos a moléculas de ácido nucleico que codifican dianas, incluidas, entre otras, ApoB-100 (también conocida como APOB; antígeno Ag(x); apoB-48; apolipoproteína B; apolipoproteína B-100; apolipoproteína B-48). GCGR (también conocido como receptor de glucagón, GR), CRP, DGAT2, GCCR, PCSK9, PTEN, PTP1B, SGLT2, y SOD1. En ciertas de dichas realizaciones, dichos compuestos antisentido cortos están dirigidos a una molécula de ácido nucleico que codifica cualquiera de dichas dianas.
F. Ciertas dianas
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos pueden diseñarse de modo que modulen cualquier diana. En ciertas realizaciones, la diana es clínicamente relevante. En dichas realizaciones, la modulación de la diana tiene como 25 resultado un beneficio clínico. Ciertas dianas se expresan, preferentemente, en el riñón. Ciertas dianas se expresan, preferentemente, en el hígado. Ciertas dianas se asocian con un trastorno metabólico. Ciertas dianas se asocian con un trastorno cardiovascular. En ciertas realizaciones, una diana se selecciona de: ApoB, SGLT2, PCSK9, SOD1, CRP, GCCR, GCGR, DGAT2, PTP1B y PTEN. En ciertas realizaciones, una diana se selecciona de: ApoB, SGLT2, PCSK9, SOD1, CRP, GCCR, GCGR, DGAT2 y PTP1B. En ciertas realizaciones, una diana es cualquier proteína distinta a SGLT2.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos exhiben in vivo una reducción del ARN diana específico del riñón y del hígado. Dicha propiedad convierte a dichos compuestos antisentido cortos en particularmente útiles para la inhibición de muchos ARN diana implicados en enfermedades metabólicas y cardiovasculares. Por tanto, en el presente documento se divulgan procedimientos de tratar trastornos metabólicos y cardiovasculares poniendo en contacto dichos tejidos renales o hepáticos con compuestos antisentido cortos dirigidos a ARN asociados con dichos trastornos. Por tanto,
35 en el presente documento también se divulgan procedimientos de mejorar cualquiera de diversas indicaciones de enfermedad metabólica o cardiovascular con los compuestos antisentido cortos de la presente divulgación.
1. ApoB
La ApoB (también conocida como apolipoproteína B-100; ApoB-100, apolipoproteína B-48; ApoB-48 y antígeno Ag(x)) es una glicoproteína grande que desempeña un papel indispensable en el ensamblaje y secreción de lípidos y en el transporte y captación mediada por receptor y liberación de distintas clases de lipoproteínas. La ApoB realiza diversas actividades, desde la absorción y procesamiento de lípidos de la dieta hasta la regulación de los niveles circulantes de lipoproteína (Davidson y Shelness, Annu. Rev Nutr.. 2000, 20, 169-193). Esta última propiedad destaca su relevancia en términos de susceptibilidad a la aterosclerosis, que se correlaciona considerablemente con la concentración ambiental de lipoproteínas que contienen ApoB (Davidson y Shelness, Annu. Rev. Nutr., 2000,20,169-193). La ApoB-100 es el principal
45 componente proteico de LDL-C y contiene el dominio requerido para la interacción de esta especie de lipoproteína con el receptor de LDL. Los niveles elevados de LDL-C son un factor de riesgo de enfermedad cardiovascular, incluida la aterosclerosis.
Definiciones
La “ApoB” es el producto génico o proteína cuya expresión se va a modular mediante la administración de un compuesto antisentido corto.
“Ácido nucleico de ApoB” significa cualquier ácido nucleico que codifica la ApoB. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, un ácido nucleico de ApoB incluye, sin limitaciones, una secuencia de ADN que codifica ApoB, una secuencia de ARN transcrita a partir de ADN que codifica ApoB, y una secuencia de ARNm que codifica la ApoB.
“ARNm de ApoB” significa un ARNm que codifica la ApoB.
Indicaciones terapéuticas de ApoB
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos de modular la expresión de ApoB en un individuo, que comprende administrar un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB. En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos de tratar a un individuo, que comprende administrar una o más composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB. En ciertas realizaciones, el individuo tiene hipercolesterolemia, hipercolesterolemia no familiar, hipercolesterolemia familiar, hipercolesterolemia familiar heterocigótica, hipercolesterolemia familiar homocigótica, dislipidemia mixta, aterosclerosis, un riesgo de desarrollar aterosclerosis, cardiopatía coronaria, antecedentes de cardiopatía coronaria, cardiopatía coronaria de inicio precoz, uno o más factores de riesgo de cardiopatía coronaria, diabetes de tipo II, diabetes de tipo II con dislipidemia, dislipidemia, hipertrigliceridemia, hiperlipidemia, hiperacidemia grasa, esteatosis hepática, esteatohepatitis no alcohólica o enfermedad de hígado graso no alcohólica.
Las guías para terapias hipolipemiantes se establecieron en el 2001, en el Panel de Tratamiento de adultos III (ATP III) del Programa Nacional educativo sobre colesterol de EE.UU. (NCEP) y se actualizaron en 2004 (Grundy y col., Circulation, 2004, 110, 227-239). Las guías incluyen obtener un perfil lipoproteico completo, normalmente después de ayunar durante de 9 a 12 horas, para la determinación de los niveles de LDL-C, colesterol total y HDL-C. De acuerdo con las guías más recientemente establecidas, los niveles de LDL-C de 130-159 mg/dl, 160-189 mg/dl y mayores o iguales a 190 mg/dl se consideran en el límite alto, alto y muy alto, respectivamente. Niveles de colesterol de 200-239 y mayores o iguales a 240 mg/dl se consideran límite alto y altos, respectivamente. Niveles de HCL-C inferiores a 40 mg/dl se considera bajos.
En ciertas realizaciones, se ha identificado que los individuos necesitan terapia hipolipemiante. En ciertas de dichas realizaciones, se ha identificado que los individuos necesitan terapia hipolipemiante de acuerdo con las guías establecidas en 2001 por Panel de Tratamiento de adultos III (ATP III) del Programa Nacional educativo sobre colesterol de EE.UU. (NCEP) y actualizadas en 2004 (Grundy y col., Circulation, 2004, 110, 227-239). En ciertas de dichas realizaciones, el individuo que necesita terapia hipolipemiante tiene un nivel de LDL-C superior a 190 mg/dl. En ciertas de dichas realizaciones, el individuo que necesita terapia hipolipemiante tiene un nivel de LDL-C superior a 160 mg/dl. En ciertas de dichas realizaciones, el individuo que necesita terapia hipolipemiante tiene un nivel de LDL-C superior a 130 mg/dl. En ciertas de dichas realizaciones, el individuo que necesita terapia hipolipemiante tiene un nivel de LDL-C superior a 100 mg/dl. En ciertas de dichas realizaciones, el individuo que necesita terapia hipolipemiante debe mantener el nivel de LDLC por debajo de 160 mg/dl. En ciertas de dichas realizaciones, el individuo que necesita terapia hipolipemiante debe mantener el nivel de LDL-C por debajo de 130 mg/dl. En ciertas de dichas realizaciones, el individuo que necesita terapia hipolipemiante debe mantener el nivel de LDL-C por debajo de 100 mg/dl. En ciertas de dichas realizaciones, el individuo debe mantener el nivel de LDL-C por debajo de 70 mg/dl.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir la ApoB en un individuo, En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir en un individuo los niveles de lipoproteínas que contienen ApoB. En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir el nivel de LDL-C en un individuo, En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir el nivel de VLDL-C en un individuo, En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir el nivel de IDL-C en un individuo. En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir el nivel de no HDL-C en un individuo. En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir Lp(a) en un individuo, En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir los triglicéridos en suero en un individuo. En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir los triglicéridos hepáticos en un individuo. En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir el nivel de Ox-LDL-C en un individuo. En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir las partículas pequeñas de LDL en un individuo. En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir las partículas pequeñas de VLDL en un individuo. En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir los fosfolípidos en un individuo. En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir los fosfolípidos oxidados en un individuo.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir la concentración de Ox-LDL-C en un sujeto. En ciertas de dichas realizaciones, la reducción de ApoB, LDL-C, VLDL-C, IDL-C, colesterol total, no-HDL-C, Lp(a), triglicéridos u Ox-LDL-C se selecciona de forma independiente de al menos 10%, al menos 15%, al menos 20%, al menos 25%, al menos 30%, al menos 35%, al menos 40%, al menos 45%, al menos 50%, al menos 55%, al menos 60%, al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95% y al menos 100%. En ciertas de dichas realizaciones, la reducción de ApoB, LDL-C, VLDL-C, IDL-C, colesterol total, no-HDL-C, Lp(a), triglicéridos u Ox-LDL-C se selecciona de forma independiente de al menos 20%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 50%, al menos 60% y al menos 70%. En ciertas de dichas realizaciones, la reducción de ApoB, LDL-C, VLDL-C, IDL-C, colesterol total, no-HDL-C, Lp(a), triglicéridos u Ox-LDL-C se selecciona de forma independiente de al menos 40%, al menos 50%, al menos 60%, y al menos 70%.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para elevar la concentración de HDL-C en un sujeto.
En ciertas realizaciones, los procedimientos divulgados en el presente documento no reducen los niveles de HDL-C. En ciertas realizaciones, los procedimientos divulgados en el presente documento no dan lugar a la acumulación de lípidos en el hígado. En ciertas realizaciones, los procedimientos divulgados en el presente documento no `producen esteatosis hepática.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir la concentración de ApoB en un sujeto al tiempo que reducen los efectos secundarios asociados con el tratamiento. En ciertas realizaciones, un efecto secundario es toxicidad hepática. En ciertas realizaciones, un efecto secundario es una función hepática anómala. En ciertas realizaciones, un efecto secundario es elevación de los niveles de alanina aminotransferasa (ALT). En ciertas realizaciones, un efecto secundario es elevación de los niveles de aspartato aminotransferasa (AST).
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir la concentración de ApoB en un sujeto que no alcanza los niveles diana de LDL-C como resultado de la terapia hipolipemiante. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB es el único agente hipolipemiante administrado al sujeto. En ciertas de dichas realizaciones, el sujeto no ha cumplido la terapia hipolipemiante recomendada. En ciertas de dichas realizaciones, una composición farmacéutica de la divulgación se administra junto con una terapia hipolipemiante adicional diferente. En ciertas de dichas realizaciones, una terapia hipolipemiante adicional es aféresis de LDL. En ciertas de dichas realizaciones, una terapia hipolipemiante adicional es una estatina. En ciertas de dichas realizaciones, una terapia hipolipemiante adicional es ezetimiba.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para disminuir la concentración de ApoB en un sujeto intolerante a estatinas. En ciertas de dichas realizaciones, el sujeto presenta incrementos de la concentración de creatina quinasa como resultado de la administración de estatinas. En ciertas de dichas realizaciones, el sujeto presenta anomalías en la función hepática como resultado de la administración de estatinas. En ciertas de dichas realizaciones, el sujeto presenta dolores musculares como resultado de la administración de estatinas. En ciertas de dichas realizaciones, el sujeto tiene efectos secundarios sobre el sistema nervioso central como resultado de la administración de estatinas. En ciertas realizaciones, el sujeto no ha cumplido la terapia de estatinas recomendada.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para disminuir los niveles de triglicéridos en hígado en un sujeto. En ciertas de dichas realizaciones, el sujeto tiene niveles elevados de triglicéridos en el hígado. En ciertas de dichas realizaciones, el sujeto tiene esteatohepatitis. En ciertas de dichas realizaciones, el sujeto tiene esteatosis. En ciertas de dichas realizaciones, los niveles de triglicéridos en hígado se miden mediante pruebas de imagen de resonancia magnética.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir el riesgo de cardiopatía coronaria en un sujeto. En ciertas realizaciones, los procedimientos son para ralentizar la progresión de la aterosclerosis en un sujeto. En ciertas de dichas realizaciones, los procedimientos son para detener la progresión de la aterosclerosis en un sujeto. En ciertas de dichas realizaciones, los procedimientos son para reducir el tamaño y/o la prevalencia de las placas ateroscleróticas en un sujeto. En ciertas realizaciones, los procedimientos reducen el riesgo de un sujeto de desarrollar aterosclerosis.
En ciertas realizaciones, los procedimientos divulgados mejoran el resultado cardiovascular en un sujeto. En ciertas de dichas realizaciones, el resultado cardiovascular mejorado es la reducción del riesgo de desarrollar cardiopatía coronaria. En ciertas de dichas realizaciones, el resultado cardiovascular mejorado es una reducción en la aparición de uno o más acontecimientos cardiovasculares importantes, que incluyen, entre otros, muerte, infarto de miocardio, reinfarto, ictus, shock cardiogénico, edema pulmonar, parada cardíaca y disrritmia auricular. En ciertas de dichas realizaciones, el resultado cardiovascular mejorado se pone de manifiesto por la mejora del espesor de la media íntima de la carótida. En ciertas de dichas realizaciones, la mejora del espesor de la media íntima de la carótida es una disminución del espesor. En ciertas de dichas realizaciones, la mejora del espesor de la media íntima de la carótida es una prevención de un incremento del espesor de la media íntima.
En ciertas de dichas realizaciones, una composición farmacéutica que comprende un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB es para usar en terapia. En ciertas realizaciones, la terapia es la reducción de LDL-C, ApoB, VLDL-C, IDL-C, no-HDL-C, Lp(a), triglicéridos en suero, triglicéridos en hígado, Ox-LDL-C, partículas pequeñas de LDL, VLDL pequeñas, fosfolípidos o fosfolípidos oxidados en un individuo. En ciertas realizaciones, la terapia es el tratamiento de hipercolesterolemia, hipercolesterolemia no familiar, hipercolesterolemia familiar, hipercolesterolemia familiar heterocigótica, hipercolesterolemia familiar homocigótica, dislipidemia mixta, aterosclerosis, un riesgo de desarrollar aterosclerosis, cardiopatía coronaria, antecedentes de cardiopatía coronaria, cardiopatía coronaria de inicio precoz, uno o más factores de riesgo de cardiopatía coronaria, diabetes de tipo II, diabetes de tipo II con dislipidemia, dislipidemia, hipertrigliceridemia, hiperlipidemia, hiperacidemia grasa, esteatosis hepática, esteatohepatitis no alcohólica o enfermedad de hígado graso no alcohólica. En realizaciones adicionales, la terapia es la reducción del riesgo de CPC. En ciertas, la terapia es la prevención de la aterosclerosis. En ciertas realizaciones, la terapia es la prevención de cardiopatía coronaria.
En ciertas realizaciones, una composición farmacéutica que comprende un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB se usa para la preparación de un medicamento para reducir los niveles de LDL-C, ApoB, VLDL-C, IDLC, no-HDL-C, Lp(a), triglicéridos en suero, triglicéridos en hígado, Ox-LDL-C, partículas pequeñas de LDL, VLDL pequeñas, fosfolípidos o fosfolípidos oxidados en un individuo. En ciertas realizaciones, una composición farmacéutica que comprende un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB se usa para la preparación de un medicamento para reducir el riesgo de cardiopatía coronaria. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB se usa para la preparación de un medicamento para el tratamiento de hipercolesterolemia, hipercolesterolemia no familiar, hipercolesterolemia familiar, hipercolesterolemia familiar heterocigótica, hipercolesterolemia familiar homocigótica, dislipidemia mixta, aterosclerosis, un riesgo de desarrollar aterosclerosis, cardiopatía coronaria, antecedentes de cardiopatía coronaria, cardiopatía coronaria de inicio precoz, uno o más factores de riesgo de cardiopatía coronaria, diabetes de tipo II, diabetes de tipo II con dislipidemia, dislipidemia, hipertrigliceridemia, hiperlipidemia, hiperacidemia grasa, esteatosis hepática, esteatohepatitis no alcohólica o enfermedad de hígado graso no alcohólica.
Terapias de combinación con ApoB
En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB se administran conjuntamente con uno más agentes farmacéuticos distintos. En ciertas realizaciones, dichos uno más agentes farmacéuticos distintos están diseñados para tratar la misma enfermedad o afección que las una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación. En ciertas de dichas realizaciones, los uno más agentes farmacéuticos son agentes hipolipemiantes. En ciertas realizaciones, dichos uno más agentes farmacéuticos distintos están diseñados para tratar otra enfermedad o afección distinta a la de las una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación. En ciertas realizaciones, dichos uno más agentes farmacéuticos distintos están diseñados para tratar un efecto indeseado de las una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación se administran conjuntamente con otro agente farmacéutico para tratar un efecto indeseado de dicho otro agente farmacéutico. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación y uno o más agentes farmacéuticos distintos se administran al mismo tiempo. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación y uno o más agentes farmacéuticos distintos se administran en momentos diferentes. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación y uno o más agentes farmacéuticos distintos preparan juntos en una única formulación. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación y uno o más agentes farmacéuticos distintos se preparan por separado.
En ciertas realizaciones, los agentes farmacéuticos que se pueden administrar de forma conjunta con una composición farmacéutica que comprende un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB incluyen agentes hipolipemiantes. En ciertas de dichas realizaciones, los agentes farmacéuticos que se pueden administrar de forma conjunta con una composición farmacéutica de la presente divulgación incluyen, entre otros, atorvastatina, simvastatina, rosuvastatina y ezetimiba. En ciertas de dichas realizaciones, el agente hipolipemiante se administra antes de la administración de una composición farmacéutica de la presente divulgación. En ciertas de dichas realizaciones, el agente hipolipemiante se administra después de la administración de una composición farmacéutica de la presente divulgación. En ciertas de dichas realizaciones, el agente hipolipemiante se administra al mismo tiempo que la composición farmacéutica de la presente divulgación. En ciertas de dichas realizaciones, la dosis de un agente hipolipemiante coadministrado es la misma que la dosis que se administraría si el agente hipolipemiante se administrara solo. En ciertas de dichas realizaciones, la dosis de un agente hipolipemiante coadministrado es menor que la dosis que se administraría si el agente hipolipemiante se administrara solo. En ciertas de dichas realizaciones, la dosis de un agente hipolipemiante coadministrado es mayor que la dosis que se administraría si el agente hipolipemiante se administrara solo.
En ciertas realizaciones, un agente hipolipemiante coadministrado es un inhibidor de la HMG-CoA reductasa. En ciertas de dichas realizaciones, el inhibidor de la HMG-CoA reductasa es una estatina. En ciertas de dichas realizaciones, la estatina se selecciona de atorvastatina, simvastatina, pravastatina, fluvastatina y rosuvastatina.
En ciertas realizaciones, un agente hipolipemiante coadministrado es un inhibidor de la absorción de colesterol. En ciertas de dichas realizaciones, el inhibidor de la absorción de colesterol es ezetimiba.
En ciertas realizaciones, un agente hipolipemiante coadministrado es un inhibidor de la HMG-CoA reductasa formulado conjuntamente con un inhibidor de la absorción de colesterol. En ciertas de dichas realizaciones, el agente hipolipemiante formulado conjuntamente es ezetimiba/simvastatina.
En ciertas realizaciones, un agente hipolipemiante coadministrado es un inhibidor de la proteína de transferencia de triglicéridos microsomal.
En ciertas realizaciones, un agente farmacéutico coadministrado es un secuestrante de ácidos biliares. En ciertas de dichas realizaciones, el secuestrante de ácidos biliares se selecciona de colestiramina, colestipol y colesevelam.
En ciertas realizaciones, un agente farmacéutico coadministrado es un ácido nicotínico. En ciertas de dichas realizaciones, el ácido nicotínico se selecciona de ácido nicotínico de liberación inmediata, ácido nicotínico de liberación extendida y ácido nicotínico de liberación sostenida.
En ciertas realizaciones, un agente farmacéutico coadministrado es un ácido fíbrico. En ciertas de dichas realizaciones, el ácido fíbrico se selecciona de gemfibrozilo, fenofibrato, clofibrato, bezafibrato y ciprofibrato.
Otros ejemplos de agentes farmacéuticos que se pueden administrar de forma conjunta con una composición farmacéutica que comprende un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB incluyen, entre otros, corticosteroides, incluidos, entre otros, prednisona; inmunoglobulinas, incluidas, entre otras inmunoglobulina intravenosa (IgIV); analgésicos (p. ej., acetaminófeno); agentes antiinflamatorios, incluidos, entre otros, fármacos antiinflamatorios no esteroideos (p. ej., ibuprofeno, inhibidores de la COX-1 e inhibidores de la COX-2); salicilatos; antibióticos; antivirales; agentes antifúngicos; agentes antidiabéticos (p. ej., biguanidas, inhibidores de la glucosidasa, insulinas, sulfonilureas y tiazolidendionas); modificadores adrenérgicos; diuréticos; hormonas (p. ej., esteroides anabólicos, andrógenos, estrógenos, calcitonina, progestina, somatostatina y hormonas tiroideas); inmunomoduladores; relajantes musculares; antihistamínicos, agentes antiosteoporosis (p. ej., bisfosfonatos, calcitonina y estrógenos); prostaglandinas, agentes antineoplásicos; agentes psicoterapéuticos; sedantes; roble venenoso atlántico o zumaque veneoso; anticuerpos; y vacunas.
En ciertas de dichas realizaciones, una composición farmacéutica que comprende un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB se puede administrar junto con una terapia hipolipemiante. En ciertas de dichas realizaciones, una terapia hipolipemiante es un cambio terapéutico del estilo de vida. En ciertas de dichas realizaciones, una terapia hipolipemiante es aféresis de LDL.
En una realización, los compuestos antisentido divulgados en el presente documento se pueden usar para disminuir el nivel de lipoproteínas que contienen apolipoproteína B en un sujeto humano. Como se usa en el presente documento, “lipoproteína que contiene apolipoproteína B” se refiere a cualquier lipoproteína que tiene apolipoproteína B como su componente proteico y se entiende que incluye LDL, VLDL, IDL, y lipoproteína(a). Cada uno de LDL, VLDL, IDL, y lipoproteína(a) contienen una molécula de apolipoproteína B, por tanto la medida de la apolipoproteína B en suero refleja el número total de estas lipoproteínas. Como se conoce en la técnica, cada una de las lipoproteínas mencionadas en lo que antecede es aterogénica. Por tanto, la reducción de una o más lipoproteínas que contienen apolipoproteína B en suero puede proporcionar un beneficio terapéutico a un sujeto humano. Las partículas pequeñas de LDL se consideran particularmente aterogénicas con respecto a las partículas grandes de LDL. Por lo que la reducción de las partículas pequeñas de LDL puede proporcionar un beneficio terapéutico a un sujeto humano. También se pueden determinar parámetros lipídicos adicionales en un sujeto. La reducción de la proporción colesterol total:HDL o de la proporción LDL:HDL es una mejora clínicamente deseable en la proporción del colesterol. De forma similar, es clínicamente deseable reducir los triglicéridos en suero en seres humanos que exhiben niveles elevados de lípidos.
Otras indicaciones de enfermedad cardiovascular que se pueden medir en un sujeto incluyen el tamaño de la partícula de LDL; la concentración en suero de LDL éster de colesterilo; la composición en suero de LDL éster de colesterilo; la extensión de la poliinsaturación de LDL ésteres de colesterilo en suero; y los niveles en suero de HDL colesterol. Como se usa en el presente documento, “el tamaño de partícula de LDL en suero” se refiere a la clasificación del tamaño de partícula de LDL en suero, que puede ser muy pequeña, pequeña, medio o grande, y normalmente se expresa en g/µmol.
En el contexto de la presente invención, “concentración en suero de LDL éster de colesterilo” quiere decir la cantidad de éster de colesterilo presente en las partículas de LDL y normalmente se mide en mg/dl. En el contexto de la presente invención, “composición en suero de LDL éster de colesterilo” es una medida del porcentaje de ésteres de colesterilo de ácidos grasos saturados, monoinsaturados y poliinsaturados presentes en las partículas de LDL en suero. “Poliinsaturación de ésteres de colesterilo en LDL en suero” quiere decir el porcentaje de ésteres de colesterilo de ácidos grasos poliinsaturados en las partículas de LDL en suero.
Los expertos en la técnica conocen bien procedimientos para obtener muestras de suero o plasma para análisis y procedimientos de preparación de las muestras de suero para análisis. Con respecto a las determinaciones de lipoproteínas, colesterol, triglicéridos y ésteres de colesterilo, los términos “suero” y “plasma” se usan en el presente documento de forma intercambiable.
En otra realización, los compuestos antisentido divulgados en el presente documento se pueden usar para tratar trastornos metabólicos. Se puede emplear una diversidad de biomarcadores para evaluar la enfermedad metabólica. Por ejemplo, un médico, o incluso el paciente, puede determinar los niveles de glucosa en sangre usando un kit de análisis disponible habitualmente o un glucosímetro (por ejemplo, el kit Ascensia ELITE™, Ascensia (Bayer), Tarrytown NY, o Accucheck, Roche Diagnostics). También se pueden medir los niveles de hemoglobina glicada (HbA1c). La HbA1c es una variante de hemoglobina minoritaria estable formada in vivo mediante la modificación postraduccional de la glucosa y contiene, principalmente, cadena ß glicada en NH2-terminal. Existe una fuerte correlación entre los niveles de HbA1c y los niveles medios de glucosa en sangre durante los 3 meses previos. Por tanto, la HbA1c a menudo se ve como “la referencia” para medir el control sostenido de la glucosa en sangre (Bunn, H.F. y col., 1978, Science. 200, 21-7). La HbA1c se puede medir mediante HPLC de intercambio iónico o mediante inmunoensayo, actualmente se dispone de gran cantidad de kit para recolección domiciliara de sangre y su envío para la determinación de HbA1c. La fructosamina en
5 suero es otra medida del control estable de la glucosa y se puede medir mediante un procedimiento colorimétrico (Cobas Integra, Roche Diagnostics).
Ciertos compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos están dirigidos a un ácido nucleico de ApoB que tiene la secuencia de número de registro en GENBANK® . NM_000384.1, incorporada en el presente documento como SEC ID 10 Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 1 es al menos un 90% complementario a la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 1 es al menos un 95% complementario a la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 1 ES 100% complementario a la SEC ID Nº 1. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia nucleotídica seleccionada de las secuencias
15 nucleotídicas indicadas en la Tabla 2 y la Tabla 3.
La secuencia nucleotídica indicada en cada SEC ID Nº en las Tablas 2 y 3 es independiente de cualquier modificación de un resto azúcar, un enlace monomérico o una base nucleotídica. Como tales, los compuestos antisentido cortos definidos por una SEC ID Nº pueden comprender, de forma independiente, una o más modificaciones en un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica. Los compuestos antisentido descritos por el Número Isis (Nº Isis) indican una
20 combinación de secuencia de bases nucleotídicas y una o más modificaciones en un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica.
Las Tablas 2 y 3 ilustran ejemplos de compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 1. La Tabla 2 ilustra compuestos antisentido cortos que son 100% complementarios a la SEC ID Nº 1. La Tabla 3 ilustra compuestos antisentido cortos que tienen uno o dos apareamientos erróneos con respecto a la SEC ID Nº 1. La columna denominada 25 "motivo gápmero" indica el motivo ala-hueco-ala de cada compuesto antisentido corto. El segmento hueco comprende 2'desoxinucleótidos y cada nucleótido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado en 2'. El azúcar modificado en 2' concreto también está indicado en la columna “motivo gápmero”. Por ejemplo, ‘2-10-2 MOE’ significa un motivo gápmero 2-10-2, en el que un segmento de hueco de diez 2’-desoxinucleótidos está flanqueado por segmentos ala de dos nucleótidos, en los que los nucleótidos de los segmentos ala son nucleótidos 2’-MOE. Los enlaces
30 internucleosídicos son fosforotioato. Los compuestos antisentido cortos comprenden 5-metil-citidina en lugar de citosina no modificada, a menos que “citosina no modificada” esté en la lista en la columna del motivo gápmero, en cuyo caso las citosinas indicadas son citosinas no modificadas. Por ejemplo, “5-mC sólo en hueco” indica que el segmento de hueco tiene 5-metilcitosinas, mientras que los segmentos ala tienen citosinas no modificadas.
Tabla 2: Compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 1
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
372816
263 278 CCGGAGGTGCTTGAAT 3-10-3 MOE 16
372894
264 277 CGGAGGTGCTTGAA 2-10-2 MOE 17
372817
428 443 GAAGCCATACACCTCT 3-10-3 MOE 18
372895
429 442 AAGCCATACACCTC 2-10-2 MOE 19
372818
431 446 GTTGAAGCCATACACC 3-10-3 MOE 20
372896
432 445 TTGAAGCCATACAC 2-10-2 MOE 21
372819
438 453 CCTCAGGGTTGAAGCC 3-10-3 MOE 22
372897
439 452 CTCAGGGTTGAAGC 2-10-2 MOE 23
372820
443 458 TTTGCCCTCAGGGTTG 3-10-3 MOE 24
372898
444 457 TTGCCCTCAGGGTT 2-10-2 MOE 25
372821
468 483 AGTTCTTGGTTTTCTT 3-10-3 MOE 26
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
372899
469 482 GTTCTTGGTTTTCT 2-10-2 MOE 27
372822
587 602 CCTCTTGATGTTCAGG 3-10-3 MOE 28
372900
588 601 CTCTTGATGTTCAG 2-10-2 MOE 29
372823
592 607 ATGCCCCTCTTGATGT 3-10-3 MOE 30
372901
593 606 TGCCCCTCTTGATG 2-10-2 MOE 31
346583
715 728 TGCCACATTGCCCT 3-8-3 MOE 32
346584
716 729 TTGCCACATTGCCC 3-8-3 MOE 33
346585
717 730 GTTGCCACATTGCC 3-8-3 MOE 34
346586
718 731 TGTTGCCACATTGC 3-8-3 MOE 35
346587
719 732 CTGTTGCCACATTG 3-8-3 MOE 36
346588
720 733 TCTGTTGCCACATT 3-8-3 MOE 37
346589
721 734 TTCTGTTGCCACAT 3-8-3 MOE 38
346590
722 735 TTTCTGTTGCCACA 3-8-3 MOE 39
346591
723 736 ATTTCTGTTGCCAC 3-8-3 MOE 40
372824
929 944 GTAGGAGAAAGGCAGG 3-10-3 MOE 41
372902
930 943 TAGGAGAAAGGCAG 2-10-2 MOE 42
372825
1256 1271 GGCTTGTAAAGTGATG 3-10-3 MOE 43
372903
1257 1270 GCTTGTAAAGTGAT 2-10-2 MOE 44
372826
1304 1319 CCACTGGAGGATGTGA 3-10-3 MOE 45
372904
1305 1318 CACTGGAGGATGTG 2-10-2 MOE 46
372829
2135 2150 TTTCAGCATGCTTTCT 3-10-3 MOE 47
372907
2136 2149 TTCAGCATGCTTTC 2-10-2 MOE 48
372832
2774 2789 CATATTTGTCACAAAC 3-10-3 MOE 49
372910
2775 2788 ATATTTGTCACAAA 2-10-2 MOE 50
372833
2779 2794 ATGCCCATATTTGTCA 3-10-3 MOE 51
37291
2780 2793 TGCCCATATTTGTC 2-10-2 MOE 52
372835
2961 2976 TTTTGGTGGTAGAGAC 3-10-3 MOE 53
372913
2962 2975 TTTGGTGGTAGAGA 2-10-2 MOE 54
346592
3248 3261 TCTGCTTCGCACCT 3-8-3 MOE 55
346593
3249 3262 GTCTGCTTCGCACC 3-8-3 MOE 56
346594
3250 3263 AGTCTGCTTCGCAC 3-8-3 MOE 57
346595
3251 3264 CAGTCTGCTTCGCA 3-8-3 MOE 58
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
346596
3252 3265 TCAGTCTGCTTCGC 3-8-3 MOE 59
346597
3253 3266 CTCAGTCTGCTTCG 3-8-3 MOE 60
346598
3254 3267 CCTCAGTCTGCTTC 3-8-3 MOE 61
346599
3255 3268 GCCTCAGTCTGCTT 3-8-3 MOE 62
346600
3256 3269 AGCCTCAGTCTGCT 3-8-3 MOE 63
372836
3350 3365 AACTCTGAGGATTGTT 3-10-3 MOE 64
372914
3351 3364 ACTCTGAGGATTGT 2-10-2 MOE 65
372837
3355 3370 TCATTAACTCTGAGGA 3-10-3 MOE 66
372915
3356 3369 CATTAACTCTGAGG 2-10-2 MOE 67
372838
3360 3375 ATTCATCATTAACTCT 3-10-3 MOE 68
372916
3361 3374 TTCATCATTAACTC 2-10-2 MOE 69
372839
3409 3424 TTGTTCTGAATGTCCA 3-10-3 MOE 70
387461
3409 3424 TTGTTCTGAATGTCCA 3-10-3 Metilenoxi BNA citosinas no modificadas en el hueco 70
380147
3409 3424 TTGTTCTGAATGTCCA 3-10-3 Metilenoxi BNA 70
372917
3410 3423 TGTTCTGAATGTCC 2-10-2 MOE 73
372840
3573 3588 CAGATGAGTCCATTTG 3-10-3 MOE 74
372918
3574 3587 AGATGAGTCCATTT 2-10-2 MOE 75
372841
3701 3716 ATCCACAGGGAAATTG 3-10-3 MOE 76
372919
3702 3715 TCCACAGGGAAATT 2-10-2 MOE 77
372843
4219 4234 CAGTTGTACAAGTTGC 3-10-3 MOE 78
372921
4220 4233 AGTTGTACAAGTTG 2-10-2 MOE 79
372844
4301 4316 CACAGAGTCAGCCTTC 3-10-3 MOE 80
372922
4302 4315 ACAGAGTCAGCCTT 2-10-2 MOE 81
372845
4308 4323 GGTCAACCACAGAGTC 3-10-3 MOE 82
372923
4309 4322 GTCAACCACAGAGT 2-10-2 MOE 83
346601
5588 5601 CAGCCACATGCAGC 3-8-3 MOE 84
346602
5589 5602 CCAGCCACATGCAG 3-8-3 MOE 85
346603
5590 5603 ACCAGCCACATGCA 3-8-3 MOE 86
346604
5591 5604 TACCAGCCACATGC 3-8-3 MOE 87
346605
5592 5605 TTACCAGCCACATG 3-8-3 MOE 88
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
346606
5593 5606 GTTACCAGCCACAT 3-8-3 MOE 89
346607
5594 5607 GGTTACCAGCCACA 3-8-3 MOE 90
346608
5595 5608 AGGTTACCAGCCAC 3-8-3 MOE 91
346609
5596 5609 TAGGTTACCAGCCA 3-8-3 MOE 92
372851
5924 5939 AGGTTCTGCTTTCAAC 3-10-3 MOE 93
372929
5925 5938 GGTTCTGCTTTCAA 2-10-2 MOE 94
372854
6664 6679 TACTGATCAAATTGTA 3-10-3 MOE 95
372932
6665 6678 ACTGATCAAATTGT 2-10-2 MOE 96
372855
6908 6923 TTTTTCTTGTATCTGG 3-10-3 MOE 97
372933
6909 6922 TTTTCTTGTATCTG 2-10-2 MOE 98
372856
7190 7205 ATCCATTAAAACCTGG 3-10-3 MOE 99
372934
7191 7204 TCCATTAAAACCTG 2-10-2 MOE 100
372858
7817 7832 ATATTGCTCTGCAAAG 3-10-3 MOE 101
372936
7818 7831 TATTGCTCTGCAAA 2-10-2 MOE 102
346610
7818 7831 TATTGCTCTGCAAA 3-8-3 MOE 102
346611
7819 7832 ATATTGCTCTGCAA 3-8-3 MOE 104
346612
7820 7833 AATATTGCTCTGCA 3-8-3 MOE 105
346613
7821 7834 GAATATTGCTCTGC 3-8-3 MOE 106
346614
7822 7835 AGAATATTGCTCTG 3-8-3 MOE 107
346615
7823 7836 TAGAATATTGCTCT 3-8-3 MOE 108
346616
7824 7837 ATAGAATATTGCTC 3-8-3 MOE 109
346617
7825 7838 GATAGAATATTGCT 3-8-3 MOE 110
346618
7826 7839 GGATAGAATATTGC 3-8-3 MOE 111
372859
7995 8010 ATGGAATCCTCAAATC 3-10-3 MOE 112
372937
7996 8009 TGGAATCCTCAAAT 2-10-2 MOE 113
372861
8336 8351 GAATTCTGGTATGTGA 3-10-3 MOE 114
372939
8337 8350 AATTCTGGTATGTG 2-10-2 MOE 115
372862
8341 8356 AGCTGGAATTCTGGTA 3-10-3 MOE 116
372940
8342 8355 GCTGGAATTCTGGT 2-10-2 MOE 117
372863
8539 8554 TGAAAATCAAAATTGA 3-10-3 MOE 118
372941
8540 8553 GAAAATCAAAATTG 2-10-2 MOE 119
372871
9344 9359 AAACAGTGCATAGTTA 3-10-3 MOE 120
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
372949
9345 9358 AACAGTGCATAGTT 2-10-2 MOE 121
372872
9515 9530 TTCAGGAATTGTTAAA 3-10-3 MOE 122
372950
9516 9529 TCAGGAATTGTTAA 2-10-2 MOE 123
372875
9794 9809 TTTTGTTTCATTATAG 3-10-3 MOE 124
372953
9795 9808 TTTGTTTCATTATA 2-10-2 MOE 125
372877
10157 10172 GATGACACTTGATTTA 3-10-3 MOE 126
372955
10158 10171 ATGACACTTGATTT 2-10-2 MOE 127
372878
10161 10176 GTGTGATGACACTTGA 3-10-3- MOE 128
372956
10162 10175 TGTGATGACACTTG 2-10-2 MOE 129
372879
10167 10182 TATTCAGTGTGATGAC 3-10-3 MOE 130
372957
10168 10181 ATTCAGTGTGATGA 2-10-2 MOE 131
372880
10172 10187 ATTGGTATTCAGTGTG 3-10-3 MOE 132
372958
10173 10186 TTGGTATTCAGTGT 2-10-2 MOE 133
346619
10838 10851 CCTCTAGCTGTAAG 3-8-3 MOE 134
346620
10839 10852 CCCTCTAGCTGTAA 3-8-3 MOE 135
346621
10840 10853 GCCCTCTAGCTGTA 3-8-3 MOE 136
346622
10841 10854 GGCCCTCTAGCTGT 3-8-3 MOE 137
346623
10842 10855 AGGCCCTCTAGCTG 3-8-3 MOE 138
346624
10843 10856 GAGGCCCTCTAGCT 3-8-3 MOE 139
346625
10844 10857 AGAGGCCCTCTAGC 3-8-3 MOE 140
346626
10845 10858 AAGAGGCCCTCTAG 3-8-3 MOE 141
346627
10846 10859 AAAGAGGCCCTCTA 3-8-3 MOE 142
372890
13689 13704 GAATGGACAGGTCAAT 3-10-3 MOE 143
372968
13690 13703 AATGGACAGGTCAA 2-10-2 MOE 144
372891
13694 13709 GTTTTGAATGGACAGG 3-10-3 MOE 145
372969
13695 13708 TTTTGAATGGACAG 2-10-2 MOE 146
372892
13699 13714 TGGTAGTTTTGAATGG 3-10-3 MOE 147
372970
13700 13713 GGTAGTTTTGAATG 2-10-2 MOE 148
346628
13907 13920 TCACTGTATGGTTT 3-8-3 MOE 149
346629
13908 13921 CTCACTGTATGGTT 3-8-3 MOE 150
346630
13909 13922 GCTCACTGTATGGT 3-8-3 MOE 151
346631
13910 13923 GGCTCACTGTATGG 3-8-3 MOE 152
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
346632
13911 13924 TGGCTCACTGTATG 3-8-3 MOE 153
346633
13912 13925 CTGGCTCACTGTAT 3-8-3 MOE 154
346634
13913 13926 GCTGGCTCACTGTA 3-8-3 MOE 155
346635
13914 13927 GGCTGGCTCACTGT 3-8-3 MOE 156
346636
13915 13928 AGGCTGGCTCACTG 3-8-3 MOE 157
346637
13963 13976 CAGGTCCAGTTCAT 3-8-3 MOE 158
346638
13964 13977 GCAGGTCCAGTTCA 3-8-3 MOE 159
346639
13965 13978 TGCAGGTCCAGTTC 3-8-3 MOE 160
346640
13966 13979 GTGCAGGTCCAGTT 3-8-3 MOE 161
346641
13967 13980 GGTGCAGGTCCAGT 3-8-3 MOE 162
346642
13968 13981 TGGTGCAGGTCCAG 3-8-3 MOE 163
346643
13969 13982 TTGGTGCAGGTCCA 3-8-3 MOE 164
346644
13970 13983 TTTGGTGCAGGTCC 3-8-3 MOE 165
346645
13971 13984 CTTTGGTGCAGGTC 3-8-3 MOE 166
346646
14051 14064 TAACTCAGATCCTG 3-8-3 MOE 167
346647
14052 14065 ATAACTCAGATCCT 3-8-3 MOE 168
346648
14053 14066 AATAACTCAGATCC 3-8-3 MOE 169
346649
14054 14067 AAATAACTCAGATC 3-8-3 MOE 170
346650
14055 14068 AAAATAACTCAGAT 3-8-3 MOE 171
346651
14056 14069 CAAAATAACTCAGA 3-8-3 MOE 172
346652
14057 14070 GCAAAATAACTCAG 3-8-3 MOE 173
346653
14058 14071 AGCAAAATAACTCA 3-8-3 MOE 174
346654
14059 14072 TAGCAAAATAACTC 3-8-3 MOE 175
Tabla 3: Compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 1 y que tienen 1 o 2 apareamientos erróneos
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
372894
771 784 CGGAGGTGCTTGAA 2-10-2 MOE 17
372905
1111 1124 CAGGGCCTGGAGAG 2-10-2 MOE 176
346628
1493 1506 TCACTGTATGGTTT 3-8-3 MOE 149
372828
2006 2021 TCTGAAGTCCATGATC 3-10-3 MOE 177
372906
2007 2020 CTGAAGTCCATGAT 2-10-2 MOE 178
372830
2382 2397 TGGGCATGATTCCATT 3-10-3 MOE 179
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
372908
2383 2396 GGGCATGATTCCAT 2-10-2 MOE 180
346616
3162 3175 ATAGAATATTGCTC 3-8-3 MOE 109
346617
3163 3176 GATAGAATATTGCT 3-8-3 MOE 110
372929
3513 3526 GGTTCTGCTTTCAA 2-10-2 MOE 94
372946
3800 3813 TGGAGCCCACGTGC 2-10-2 MOE 181
372904
4040 4053 CACTGGAGGATGTG 2-10-2 MOE 46
372842
4084 4099 TTGAAGTTGAGGGCTG 3-10-3 MOE 182
372920
4085 4098 TGAAGTTGAGGGCT 2-10-2 MOE 183
346586
4778 4791 TGTTGCCACATTGC 3-8-3 MOE 35
372847
5030 5045 ACCAGTATTAATTTTG 3-10-3 MOE 184
372925
5031 5044 CCAGTATTAATTTT 2-10-2 MOE 185
372848
5192 5207 GTGTTCTTTGAAGCGG 3-10-3 MOE 186
372926
5193 5206 TGTTCTTTGAAGCG 2-10-2 MOE 187
372953
5625 5638 TTTGTTTCATTATA 2-10-2 MOE 125
372935
7585 7598 AGTTACTTTGGTGT 2-10-2 MOE 188
372860
8255 8270 TGGTACATGGAAGTCT 3-10-3 MOE 189
372938
8256 8269 GGTACATGGAAGTC 2-10-2 MOE 190
391260
8256 8269 GGTACATGGAAGTC 2-10-2 MOE 190
392068
8256 8269 GGTACATGGAAGTC 2-10-2 MOE 190
387462
8256 8269 GGTACATGGAAGTC 2-10-2 Metilenoxi BNA 190
391872
8256 8269 GGTACATGGAAGTC 1-1-10-2 2’-(butilacetomido)-palmitamida Metilenoxi BNA/Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas en el hueco 190
380148
8256 8269 GGTACATGGAAGTC 2-10-2 Metilenoxi BNA 190
391871
8256 8269 GGTACATGGAAGTC 1-1-10-2 2’-(butilacetomido)-palmitamida/MOE/MOE Citosinas no modificadas en el hueco 190
391755
8256 8269 GGTACATGGAAGTC 2-10-2 ENA mC solo en el ala 190
398296
8256 8269 GGTACATGGAAGTC 2-10-2 (6’S)-6’-metil-metilenoxi BNA Citosinas no modificadas 190
372942
8455 8468 TCCATGCCATATGT 2-10-2 MOE 200
372865
8888 8903 CCCTGAAGAAGTCCAT 3-10-3 MOE 201
372943
8889 8902 CCTGAAGAAGTCCA 2-10-2 MOE 202
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
372866
8908 8923 GCCCAGTTCCATGACC 3-10-3 MOE 203
372944
8909 8922 CCCAGTTCCATGAC 2-10-2 MOE 204
372867
9058 9073 TTGAGGAAGCCAGATT 3-10-3 MOE 205
372945
9059 9072 TGAGGAAGCCAGAT 2-10-2 MOE 206
372870
9261 9276 TGGATGCAGTAATCTC 3-10-3 MOE 207
372948
9262 9275 GGATGCAGTAATCT 2-10-2 MOE 208
372881
10185 10200 TATAAAGTCCAGCATT 3-10-3 MOE 209
372959
10186 10199 ATAAAGTCCAGCAT 2-10-2 MOE 210
372882
10445 10460 AAGTTCCTGCTTGAAG 3-10-3 MOE 211
372960
10446 10459 AGTTCCTGCTTGAA 2-10-2 MOE 212
372964
11451 11464 AATGGTGAAGTACT 2-10-2 MOE 213
346612
13459 13472 AATATTGCTCTGCA 3-8-3 MOE 105
346613
13460 13473 GAATATTGCTCTGC 3-8-3 MOE 106
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 263-278 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a los nucleótidos 263-278 de la SEC ID Nº 1 comprenden una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 16 o 17. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto
5 antisentido corto dirigido a los nucleótidos 263-278 de la SEC ID Nº 1 se selecciona del Nº Isis 372816 o 372894.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 428-483 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 428-483 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, o 27. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 428-483 de la SEC ID Nº 1 se selecciona de los Nº
10 Isis 372817, 372895, 372818, 372896, 372819, 372897, 372820, 372898, 372821, o 372899.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 428-458 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 428-458 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 o 25. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 428-458 de la SEC ID Nº 1 se selecciona de los Nº
15 Isis 372817, 372895, 372818, 372896, 372819, 372897, 372820 o 372898.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 468-483 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 468-483 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 26 o 27. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 468-483 de la SEC ID Nº 1 se selecciona del Nº Isis 372821 o 372899.
20 En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 587-607 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 587-607 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 28 29, 30, o 31. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 587-607 de la SEC ID Nº 1 se selecciona de los Nº Isis 372822, 372900, 372823 o 372901.
25 En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 715-736 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 715-736 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 o 40. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 715-736 de la SEC ID Nº 1 se selecciona de los Nº Isis 346583, 346584, 346585, 346586, 346587, 346588, 346589, 346590 o 346591.
30 En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 929-944 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 929-944 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 41 o 42. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 929-944 de la SEC ID Nº 1 se selecciona del Nº Isis 372824 o 372902.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1256-1319 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1256-1319 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 43 44, 45, o 46. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1256-1319 de la SEC ID Nº 1 se selecciona de los Nº Isis 372825, 372903, 372826 o 372904.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1256-1271 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1256-1271 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 43 o 44. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1256-1271 de la SEC ID Nº 1 se selecciona del Nº Isis 372825 o 372903.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1304-1319 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1304-1319 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 45 o 46. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1304-1319 de la SEC ID Nº 1 se selecciona del Nº Isis 372826 o 372904.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 2135-2150 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 2135-2150 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 47 o 48. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 2135-2150 de la SEC ID Nº 1 se selecciona del Nº Isis 372829 o 372907.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 2774-2794 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 2774-2794 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 49 50, 51, o 52. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 2774-2794 de la SEC ID Nº 1 se selecciona de los Nº Isis 372832, 372910, 372833 o 372911.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 2961-2976 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 2961-2976 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 53 o 54. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 2961-2976 de la SEC ID Nº 1 se selecciona del Nº Isis 372835 o 372913.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 3248-3269 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 3248-3269 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62 o 63. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 3248-3269 de la SEC ID Nº 1 se selecciona de los Nº Isis 346592, 346593, 346594, 346595, 346596, 346597, 346598, 346599 o 346600.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 3350-3375 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 3350-3375 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 64 65, 66, 67, 68 o 69. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 3350-3375 de la SEC ID Nº 1 se selecciona de los Nº Isis 372836, 372914, 372837, 372915, 372838, o 372916.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 3409-3424 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 3409-3424 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 70 o 73. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 3409-3424 de la SEC ID Nº 1 se selecciona de los Nº Isis 372839, 387461, 380147 o 372917.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 3573-3588 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 3573-3588 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 74 o 75. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 3573-3588 de la SEC ID Nº 1 se selecciona del Nº Isis 372840 o 372918.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 3701-3716 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 3701-3716 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 76 o 77. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 3701-3716 de la SEC ID Nº 1 se selecciona del Nº Isis 372841 o 372919.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 4219-4234 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 4219-4234 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 78 o 79. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 4219-4234 de la SEC ID Nº 1 se selecciona del Nº Isis 372843 o 372921.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 4301-4323 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 4301-4323 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 80 81, 82, o 83. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 4301-4323 de la SEC ID Nº 1 se selecciona de los Nº Isis 372844, 372922, 372845 o 372923.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 5588-5609 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 5588-5609 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91 o 92. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 5588-5609 de la SEC ID Nº 1 se selecciona de los Nº Isis 346601, 346602, 346603, 346604, 346605, 346606, 346607, 346608 o 346609.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 5924-5939 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 5924-5939 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 93 o 94. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 5924-5939 de la SEC ID Nº 1 se selecciona del Nº Isis 372851 o 372929.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 6664-6679 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 6664-6679 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 95 o 96. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 6664-6679 de la SEC ID Nº 1 se selecciona del Nº Isis 372854 o 372932.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 6908-6923 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 6908-6923 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 97 o 98. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 6908-6923 de la SEC ID Nº 1 se selecciona del Nº Isis 372855 o 372933.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 7190-7205 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 7190-7205 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 99 o 100. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 7190-7205 de la SEC ID Nº 1 se selecciona del Nº Isis 372856 o 372934.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 7817-7839 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 7817-7839 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 101, 102, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, o 111. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 7817-7839 de la SEC ID Nº 1 se selecciona de los Nº Isis 372858, 372936, 346610, 346611, 346612, 346613, 346614, 346615, 346616, 346617 o 346618.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 7995-8010 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 7995-8010 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 112 o 113. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 7995-8010 de la SEC ID Nº 1 se selecciona del Nº Isis 372859 o 372937.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 8336-8356 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 8336-8356 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 114 115, 116, o 117. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 8336-8356 de la SEC ID Nº 1 se selecciona de los Nº Isis 372861, 372939, 372862 o 372940.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 8539-8554 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 8539-8554 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 118 o 119. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 8539-8554 de la SEC ID Nº 1 se selecciona del Nº Isis 372863 o 372941.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 9344-9359 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 9344-9359 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 120 o 121. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 9344-9359 de la SEC ID Nº 1 se selecciona del Nº Isis 372871 o 372949.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 9515-9530 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 9515-9530 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 122 o 123. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 9515-9530 de la SEC ID Nº 1 se selecciona del Nº Isis 372872 o 372950.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 9794-9809 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 9794-9809 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 124 o 125. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 9794-9809 de la SEC ID Nº 1 se selecciona del Nº Isis 372875 o 372953.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 10157-10187 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 10157-10187 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132 o 133. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 10157-10187 de la SEC ID Nº 1 se selecciona de los Nº Isis 372877, 372955, 372878, 372956, 372879, 372957, 372880 o 372958.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 10838-10859 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 10838-10859 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141 o 142. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 10838-10859 de la SEC ID Nº 1 se selecciona de los Nº Isis 346619, 346620, 346621, 346622, 346623, 346624, 346625, 346626 o 346627.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 13689-13714 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 13689-13714 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 143 144, 145, 146, 147 o 148. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 13689-13714 de la SEC ID Nº 1 se selecciona de los Nº Isis 372890, 372968, 372891, 372969, 372892, o 372970.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 13907-13928 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 13907-13928 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156 o 157. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 13907-13928 de la SEC ID Nº 1 se selecciona de los Nº Isis 346628, 346629, 346630, 346631, 346632, 346633, 346634, 346635 o 346636.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 13963-13984 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 13963-13984 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165 o 166. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 13963-13984 de la SEC ID Nº 1 se selecciona de los Nº Isis 346637, 346638, 346639, 346640, 346641, 346642, 346643, 346644 o 346645.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 14051-14072 de la SEC ID Nº 1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 14051-14072 de la SEC ID Nº 1 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174 o 175. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 14051-14072 de la SEC ID Nº 1 se selecciona de los Nº Isis 346646, 346647, 346648, 346649, 346650, 346651, 346652, 346653 o 346654.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB tienen una longitud de 8 a 16, preferentemente de 9 a 15, más preferentemente de 9 a 14, más preferentemente de 10 a 14 nucleótidos de longitud. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB tienen una longitud de 9 a 14 nucleótidos. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB tienen una longitud de 10 a 14 nucleótidos. En ciertas realizaciones, dichos compuestos antisentido cortos son oligonucleotídicos antisentido cortos.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB son gápmeros cortos. En ciertas de dichas realizaciones, los gápmeros cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB comprenden al menos una modificación de alta afinidad en una o más alas del compuesto. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB comprenden de 1 a 3 modificaciones de alta afinidad en cada ala. En ciertas de dichas realizaciones, los nucleósidos o nucleótidos del ala comprenden una modificación en 2’. En ciertas realizaciones, los monómeros del ala son BNA. En ciertas de dichas realizaciones, los monómeros del ala se seleccionan de -L-metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA, ß-D-metilenoxi(4’-CH2-O-2’) BNA, etilenoxi (4’-(CH2)2-O-2’)BNA, aminooxi(4’-CH2-ON(R)-2’) BNA y oxiamino (4’-CH2-N(R)-O-2’) BNA. En ciertas realizaciones, los monómeros de un ala comprenden un sustituyente en la posición 2’ seleccionado de alilo, amino, azido, tio, O-alilo, O-alquilo C1-C10, -OCF3 , O-(CH2)2-O-CH3, 2’-O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), y O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), en las que cada Rm y Rn es, de forma independiente, H o alquilo C1-C10 sustituido o insustituido. En ciertas realizaciones, los monómeros de un ala son nucleótidos 2’MOE.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB comprenden un hueco entre el ala en 5’ y el ala en 3’. En ciertas realizaciones, el hueco comprende cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece o catorce monómeros. En ciertas realizaciones, los monómeros del hueco son desoxirribonucleótidos no modificados. En ciertas realizaciones, los monómeros del hueco son ribonucleótidos no modificados. En ciertas realizaciones, las modificaciones del hueco (si las hubiera) tienen como resultado un compuesto antisentido que, cuando se une a su ácido nucleico diana, soporta la escisión por una RNasa, incluida, entre otras, la RNasa H.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB tienen enlaces monoméricos. En ciertas de dichas realizaciones, dichos enlaces son todos enlaces fosforotioato. En ciertas realizaciones, los enlaces son todos enlaces fosfodiéster. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB tienen esqueletos mixtos.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB tienen una longitud de 8 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB tienen una longitud de 9 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB tienen una longitud de 10 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB tienen una longitud de 11 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB tienen una longitud de monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB tienen una longitud de 13 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB tienen una longitud de 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB tienen una longitud de 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB tienen una longitud de 16 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB comprenden de 9 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB comprenden de 10 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB comprenden de 12 a 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB comprenden de 12 a 14 nucleótidos o nucleósidos.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos de modulación de la expresión de ApoB. En ciertas realizaciones, dichos procedimientos comprenden el uso de uno o más compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB, en el que el compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB tiene una longitud de aproximadamente 8 a aproximadamente 16, preferentemente de 9 a 15, más preferentemente de 9 a 14, más preferentemente de 10 a 14 monómeros (es decir, de aproximadamente 8 a aproximadamente 16 monómeros unidos). Un experto en la técnica apreciará que esto comprende procedimientos de modulación de la expresión de ApoB usando uno o más compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB de de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16 monómeros.
En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de ApoB comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB que tiene una longitud de 8 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de ApoB comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB que tiene una longitud de 9 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de ApoB comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB que tiene una longitud de 10 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de ApoB comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB que tiene una longitud de 11 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de ApoB comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB que tiene una longitud de 12 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de ApoB comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB que tiene una longitud de 13 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de ApoB comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB que tiene una longitud de 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de ApoB comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB que tiene una longitud de 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de ApoB comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB que tiene una longitud de 16 monómeros.
En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de ApoB comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB que comprende de 9 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de ApoB comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB que comprende de 10 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de ApoB comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB que comprende de 12 a 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de ApoB comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB que comprende de 12 o 14 nucleótidos o nucleósidos.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB pueden tener una cualquiera o más propiedades o características de los compuestos antisentido cortos en general descritos en el presente documento. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB tienen un motivo (ala-hueco desoxi-ala) seleccionado de 1-12-1, 1-1-10-2, 2-10-1-1, 3-10-3, 2-10-3, 2-10-2, 1-10-1,1-10-2, 3-8-3, 28-2, 1-8-1, 3-6-3 o 1-6-1, más preferentemente 1-10-1, 2-10-2, 3-10-3 y 1-9-2
2. SGLT-2
El transportador 2 de glucosa dependiente de sodio (SGLT-2) se expresa en las células epiteliales de los túbulos proximales del riñón y funciona reabsorbiendo la glucosa y evitando la pérdida de glucosa en la orina. Para el genoma humano, el SGLT-2 es un miembro de una familia de 11 miembros de cotransportadores de sustrato de sodio. Muchas de estos miembros de la familia comparten homología de secuencia, por ejemplo SGLT-1 comparte aproximadamente un 59% de identidad de secuencia con SGLT-2 y aproximadamente un 70% de identidad de secuencia con SGLT-3. El SGLT-1 es un transportador de glucosa que se encuentra en el corazón y el SNC. El SGLT-3 es un canal de sodio sensible a glucosa en el intestino delgado. Los patrones de seguridad separados para estos SGLT es un punto de distinción entre los miembros homólogos de la familia. (Handlon, A.L., Expert Opin. Ther. Patents (2005) 15(11):15321540; Kanai y col., J. Clin. Invest., 1994, 93, 397-404; Wells y col., Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab., 1992, 263, F459465).
En estudios de SGLT2 humano inyectado en oocitos de xenopus se demostró que esta proteína participa en el transporte dependiente de sodio de D-glucosa y alfa-metil-D-glucopiranósido (alfa-MeGlc; un análogo de la glucosa) con un valor de Km de 1.6 mM para alfa-MeGlc y una proporción de acoplamiento entre sodio y glucosa de 1:1 (Kanai y col., J. Clin. Invest., 1994, 93, 397-404; You y col., J. Biol. Chem., 1995, 270, 29365-29371). Esta actividad de transporte fue suprimida por floricina, un glicósido vegetal que se une al sitio de la glucosa de los SGLT, pero no es transportado y, por tanto, inhibe la acción de SGLT (You y col., J. Biol. Chem., 1995, 270, 29365-29371).
La diabetes es un trastorno que se caracteriza por hiperglucemia debido a una deficiente acción de la insulina. La hiperglucemia crónica es un factor de riesgo importante de complicaciones asociadas con la diabetes, incluidas cardiopatía, retinopatía, nefropatía y neuropatía. Dado que los riñones desempeñan un papel fundamental en la regulación de los niveles de glucosa en plasma, los transportadores de glucosa renal se están convirtiendo en atractivas dianas farmacológicas (Wright, Am. J. Physiol. Renal Physiol., 2001, 280, F10-18). La nefropatía diabética es la causa más frecuente de la nefropatía terminal que se desarrolla en muchos pacientes con diabetes. La glucotoxicidad, que es el resultado de la hiperglucemia a largo plazo, induce la resistencia a la insulina dependiente de tejido en pacientes diabéticos (Nawano et aL, Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab., 2000, 278, E535-543).
Definiciones
“Transportador 2 de glucosa dependiente de sodio” es el producto génico o proteína cuya expresión se va a modular mediante la administración de un compuesto antisentido corto. En general, el transportador 2 de glucosa dependiente de sodio se denomina SGLT2, pero también puede denominarse SLC5A2; transportador 2 de sodio-glucosa; cotransportador de sodio-glucosa, renal de baja afinidad; cotransportador de sodio-glucosa, renal; familia 5 transportadora de solutos (cotransportador de sodio/glucosa), miembro 2; SL52.
“Ácido nucleico de SGLT2 ” significa cualquier ácido nucleico que codifica el SGLT2. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, un ácido nucleico de SGLT2 incluye, sin limitaciones, una secuencia de ADN que codifica SGLT2, una secuencia de ARN transcrita a partir de ADN que codifica SGLT2, y una secuencia de ARNm que codifica el SGLT2. “ARNm de SGLT2” significa un ARNm que codifica una proteína SGLT2.
Indicaciones terapéuticas
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos se usan para modular la expresión de SGLT-2 y proteínas relacionadas. En ciertas realizaciones, dicha modulación se consigue proporcionando compuestos antisentido cortos que hibridan con una o más moléculas de ácido nucleico diana que codifican SGLT-2, incluidos, entre otros, SGLT2, SL52, SLCSA2, cotransportador de sodio-glucosa, cotransportador de sodio-glucosa renal de baja afinidad, cotransportador 2 de sodio-glucosa y miembro co transportador 2 de sodio/glucosa de la familia 5 de transportadores de solutos. También se divulgan procedimientos de tratamiento de enfermedades y trastornos metabólicos y/o cardiovasculares tal como se describe en el presente documento. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos que inhiben la expresión de SOLT2 se usan en procedimientos de reducción de los niveles de glucosa en sangre en un animal y procedimientos de retraso o prevención del inicio de la diabetes de tipo 2. Dichos procedimientos comprenden administrar una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz de uno o más de los compuestos de la divulgación al animal que pueda necesitar el tratamiento. El uno o más de los compuestos puede ser un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico que codifica el SGLT2. En el presente documento se divulgan procedimientos de potenciar la inhibición de la expresión de SGLT2 en células renales o tejidos renales, que comprende poner en contacto las células o tejidos con uno o más de los compuestos de la divulgación, tal como compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico que codifica el SGLT2.
Aunque se han descrito ciertos compuestos, composiciones y procedimientos con especificidad de acuerdo con ciertas realizaciones, los ejemplos siguientes sólo sirven para ilustrar los compuestos de la divulgación y no se pretende que limiten la misma.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos son compuestos oligoméricos quiméricos que tienen esqueletos mixtos de fosforotioato y fosfodiéster. Ciertos compuestos antisentido cortos de esqueleto mixto tienen un hueco central que comprende al menos 5 nucleósidos 2’-desoxi contiguos flanqueados por dos alas, cada una de los cuales comprende al menos un 2’-O-metoxietil nucleósido. En ciertas realizaciones, los enlaces internucleosídicos de los compuestos de esqueleto mixto son enlaces fosforotioato en el hueco y enlaces fosfodiéster en las dos alas. En ciertas realizaciones, los compuestos de esqueleto mixto tienen enlaces fosforotioato en las alas, a excepción de un enlace fosfodiéster en uno o ambos extremos 5’ y 3’ del oligonucleótido. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a SGLT2 tienen un motivo (ala-hueco desoxi-ala) seleccionado de 3-10-3, 2-10-3, 2-10-2, 1-10-1,1-10-2, 28-2, 1-9-2, 1-8-1, 3-6-3 o 1-6-1. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a SGLT2 tienen un motivo (ala-hueco desoxi-ala) seleccionado de 1-10-1, 1-10-2, 2-8-2, 1-9-2, 1-8-1, 3-6-3 o 1-6-1.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 y que tienen un esqueleto mixto se liberan eficientemente en el riñón. En ciertas realizaciones, la administración de los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 y que tienen un esqueleto mixto tiene como resultado la modulación de la expresión del gen diana en el riñón. En ciertas de dichas realizaciones, hay poca o ninguna toxicidad renal. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 y que tienen un esqueleto mixto son más potentes en la reducción del ARNm de SGLT-2 y tienen un inicio más rápido en comparación con un compuesto antisentido corto que no tenga un esqueleto mixto pero que, por lo demás, sea idéntico. En ciertas de dichas realizaciones, dicho incremento de la potencia y/o menor toxicidad es en ratón y/o rata. En ciertas de dichas realizaciones, dicho incremento de la potencia y/o menor toxicidad es en un ser humano.
A modo de ejemplo, y sólo con fines ilustrativos, el ISIS 145733, que comprende enlaces fosforotioato uniformes, e ISIS 257016, que comprende enlace fosfodiéster en las alas y enlaces fosforotioato en el hueco son, por lo demás, idénticos. Ambos comprenden la secuencia GAAGTAGCCACCAACTGTGC (SEC ID Nº 1572). Ambos oligonucleótidos comprenden además un hueco que consiste en diez 2’-desoxinucleótidos, flanqueado por cada lado por nucleótidos “2’metoxietil (2’-MOE) de cinco nucleótidos. Todos los residuos de citidina son 5-metilcitidinas. El compuesto de esqueleto mixto ISIS 257016 era aproximadamente 50 veces más potente en la reducción del ARNm de SGLT-2 en comparación con el compuesto parental no mixto, ISIS 145733 (véase el EJEMPLO 9)
Los estudios farmacocinéticos de cierto compuesto de esqueleto mixto ISIS 257016 indican que, en ciertas realizaciones, el compuesto actúa como profármaco que es metabolizado a un farmacóforo de 12 bases nucleotídicas. Los estudios con ISIS 370717, un compuesto antisentido corto de 12 bases nucleotídicas correspondiente al ISIS 257016, muestran que el compuesto tiene un perfil farmacológico similar al ISIS 257016, pero con un inicio de acción más rápido. El ISIS 370717 es un oligonucleótido antisentido de 12 bases nucleotídicas dirigido a SGLT-2, que comprende la secuencia TAGCCACCAACT (SEC ID Nº 1554), que además comprende un hueco que consiste en una diez 2'-desoxinucleótidos, flanqueados en ambos extremos por alas de un nucleótido. Las alas están compuestas por nucleótidos 2’-metoxietilo (2’MOE). Todos los residuos de citidina son 5-metilcitidinas. Los enlaces internucleosídicos son fosforotioato (P=S) a lo largo del oligonucleótido. La similitud de la actividad farmacológica de ISIS 257016 e ISIS 370717 avala los estudios farmacocinéticos que indican que ISIS 257016 era un profármaco que tiene un farmacóforo de 12 nucleótidos (véase el EJEMPLO 10). Además, estudios con versiones estabilizadas (con caperuzas en los extremos) de ISIS 257016 muestran una espectacular pérdida de actividad.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos que comprenden monómeros 2’ MOE en las alas se liberan de forma eficiente en el riñón y el tratamiento con dichos compuestos tiene como resultado una modulación eficiente de la expresión de un gen diana en el riñón sin toxicidad hepática o renal. En el presente documento, también se muestra que, en ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos son más potentes en la reducción del ARNm de SGLT-2 y tienen un inicio más rápido en comparación con los oligonucleótidos parentales dirigidos a ARNm de SGLT-2 en ratón y rata. En el presente documento se muestra shortmeros 2’MOE en el hueco para mejorar la potencia y la biodisponibilidad por encima de los compuestos parentales.
A modo de ejemplo, y sólo con fines ilustrativos, los estudios con ISIS 370717 revelan una acumulación significativamente mayor del compuesto antisentido corto en el tejido renal (aproximadamente 500 microgramos por gramo de tejido) en comparación con el padre más largo. Además, el ARNm de SGLT-2 se redujo en más del 80% sobre los controles (véase el EJEMPLO 11). El gápmero 1-10-1 ISIS 370717 se usó como molde para elaborar oligos relacionados con la secuencia con diversos motivos. Los estudios en los que se evalúan las variaciones en el ala, el hueco y la longitud total alrededor del oligonucleótido de 12 unidades ISIS 370717 se pueden ver en el EJEMPLO 12. Ciertos motivos evaluados incluyó 110-1, 2-8-2, 1-8-1, 3-6-3, y 1-6-1 (véase la Tabla 60 en el EJEMPLO 12). Los compuestos se analizaron según su efecto sobre los niveles de RNM de SGLT2. Todos los motivos inhibían la expresión de SGLT2 in vivo de un modo dependiente de la dosis. Se descubrió que los gápmeros 1-10-1, 2-8-2 y 1-8-1 eran particularmente potentes. El ARNm de SGLT-2 se redujo en más del 80% sobre los controles usando estos motivos.
En ciertas realizaciones, la divulgación proporciona compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 y que tienen un motivo seleccionado de: gápmero 1-10-1 y 1-10-2 MOE. (Véase la Tabla 62 en el EJEMPLO 13). Ciertos de dichos compuestos se analizaron según su efecto sobre los niveles de ARNm de SGLT2 en rata. Los resultados de la Tabla 63 ilustran que los gápmeros 1-10-1 y 1-10-2 MOE inhiben la expresión de SGLT2 in vivo de un modo dependiente de la dosis y se pudo alcanzar una reducción de más del 80% de ARNm de SGLT-2.
Ciertos gápmeros 1-10-1 y 2-8-2 MOE adicionales se evaluaron en modelos in vivo de ratón y de rata (véase, por ejemplo, el EJEMPLO 14 y 15). Con muchos de los gápmeros 1-10-1 y 2-8-2 MOE se consiguió una reducción mayor del 80% del ARNm de SGLT-2 a concentraciones de oligos relativamente bajas y en ausencia de efectos tóxicos.
En otro ejemplo no limitante, también se analizó el efecto de ISIS 388625 sobre los niveles de ARNm de SGLT2 en perros. Los estudios en perros ilustran que se puede conseguir una inhibición superior al 80% de la expresión de SGLT2 a una dosis de 1 mg/kg/semana. Se puede conseguir una inhibición todavía mayor a dosis ligeramente mayores. También se mostró que la administración de ISIS 388625 mejoraba la tolerancia a la glucosa. Los niveles máximos de glucosa en plasma disminuyeron en más del 50% de media y el posterior descenso de la glucosa se redujo en comparación con los controles salinos en una prueba convencional de tolerancia a la glucosa (véase el EJEMPLO 17). Asimismo, en un modelo de diabetes en ratas, se demostró que los compuestos antisentido cortos disminuían significativamente los niveles plasmáticos de glucosa y de HbA1C en el tiempo, en comparación con animales tratados con PBS y con control (véase el Ejemplo 16).
En los animales de todos los estudios se evaluó también la toxicidad. Por ejemplo, se evaluaron el peso corporal total, el peso del hígado, bazo y riñón. Cambios significativos en el peso del hígado, del bazo o corporal pueden indicar que un compuesto concreto produce efectos tóxicos. Se encontró que todos los cambios estaban dentro del margen de error. No se observaron cambios significativos en el peso corporal durante el tratamiento o al final del estudio. Tampoco se observaron cambios significativos en el peso del hígado ni del bazo.
Ciertos compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos están dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 que tiene la secuencia de número de registro en GENBANK® NM_003041.1, incorporada en el presente documento como SEC ID Nº
2.
En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 3 es al menos un 90% complementario a la SEC ID Nº 3. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 3 es al menos un 95% complementario a la SEC ID Nº
3.
En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 3 ES 100% complementario a la SEC ID Nº 1. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 3 comprende una secuencia nucleotídica seleccionada de las secuencias nucleotídicas indicadas en las Tablas 4 y 5.
La secuencia nucleotídica indicada en cada SEC ID Nº en las Tablas 4 y 5 es independiente de cualquier modificación de un resto azúcar, un enlace monomérico o una base nucleotídica. Como tales, los compuestos antisentido cortos definidos por una SEC ID Nº pueden comprender, de forma independiente, una o más modificaciones en un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica. Los compuestos antisentido descritos por el Número Isis (Nº Isis) indican una combinación de secuencia de bases nucleotídicas y una o más modificaciones en un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica.
Las Tablas 4 y 5 ilustran ejemplos de compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 3. La Tabla 4 ilustra compuestos antisentido cortos que son 100% complementarios a la SEC ID Nº 3. La Tabla 5 ilustra compuestos antisentido cortos que tienen uno o dos apareamientos erróneos con respecto a la SEC ID Nº 3. La columna denominada "motivo gápmero" indica el motivo ala-hueco-ala de cada compuesto antisentido corto. El segmento hueco comprende 2'desoxinucleótidos y cada nucleótido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado en 2'. El azúcar modificado en 2' concreto también está indicado en la columna “motivo gápmero”. Por ejemplo, ‘2-10-2 MOE’ significa un motivo gápmero 2-10-2, en el que un segmento de hueco de diez 2’-desoxinucleótidos está flanqueado por segmentos ala de dos nucleótidos, en los que los nucleótidos de los segmentos ala son nucleótidos 2’-MOE. Los enlaces internucleosídicos son fosforotioato. Los compuestos antisentido cortos comprenden 5-metil-citidina en lugar de citosina no modificada, a menos que “citosina no modificada” esté en la lista en la columna del motivo gápmero, en cuyo caso las citosinas indicadas son citosinas no modificadas. Por ejemplo, “5-mC sólo en hueco” indica que el segmento de hueco tiene 5-metilcitosinas, mientras que los segmentos ala tienen citosinas no modificadas.
Tabla 4: Compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 3
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
379684
84 95 TGTCAGCAGGAT 1-10-1 MOE 214
405193
113 124 CAGCAGGAAATA 2-8-2 MOE 215
405194
114 125 CCAGCAGGAAAT 2-8-2 MOE 216
405195
115 126 ACCAGCAGGAAA 2-8-2 MOE 217
405196
116 127 GACCAGCAGGAA 2-8-2 MOE 218
405197
117 128 TGACCAGCAGGA 2-8-2 MOE 219
3796855
117 128 TGACCAGCAGGA 1-10-1 MOE 219
405198
118 129 ATGACCAGCAGG 2-8-2 MOE 221
405199
119 130 AATGACCAGCAG 2-8-2 MOE 222
405200
120 131 CAATGACCAGCA 2-8-2 MOE 223
405201
121 132 CCAATGACCAGC 2-8-2 MOE 224
379686
135 146 ACCACAAGCCAA 1-10-1 MOE 225
379711
172 183 TAGCCGCCCACA 1-10-1 MOE 226
388628
172 183 TAGCCGCCCACA 2-8-2 MOE 226
405202
207 218 CCGGCCACCACA 2-8-2 MOE 228
405203
208 219 ACCGGCCACCAC 2-8-2 MOE 229
405204
236 247 GATGTTGCTGGC 2-8-2 MOE 230
379687
236 247 GATGTTGCTGGC 1-10-1 MOE 230
405205
237 248 CGATGTTGCTGG 2-8-2 MOE 232
405206
238 249 CCGATGTTGCTG 2-8-2 MOE 233
405207
239 250 GCCGATGTTGCT 2-8-2 MOE 234
405208
240 251 TGCCGATGTTGC 2-8-2 MOE 235
405209
241 252 CTGCCGATGTTG 2-8-2 MOE 236
405210
260 271 CAGGCCCACAAA 2-8-2 MOE 237
405211
261 272 CCAGGCCCACAA 2-8-2 MOE 238
405212
262 273 GCCAGGCCCACA 2-8-2 MOE 239
379688
288 299 CCAAGCCACTTG 1-10-1 MOE 240
379689
318 329 AGAGCGCATTCC 1-10-1 MOE 241
379690
435 446 ACAGGTAGAGGC 1-10-1 MOE 242
405248
474 485 AGATCTTGGTGA 2-8-2 MOE 243
379691
474 485 AGATCTTGGTGA 1-10-1 MOE 243
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
382676
527 539 TGTTCCAGCCCAG 1-10-2 MOE 245
388625
528 539 TGTTCCAGCCCA 2-8-2 MOE 246
389780
528 539 TGTTCCAGCCCA 1-9-2 MOE 246
379692
528 539 TGTTCCAGCCCA 1-10-1 MOE 246
392170
528 539 TGTTCCAGCCCA 1-10-1 Metilenoxi BNA 246
392173
528 539 TGTTCCAGCCCA 2-8-2 Metilenoxi BNA 246
405213
529 540 ATGTTCCAGCCC 2-8-2 MOE 251
405214
564 575 TGGTGATGCCCA 2-8-2 MOE 252
405215
565 576 ATGGTGATGCCC 2-8-2 MOE 253
405216
566 577 CATGGTGATGCC 2-8-2 MOE 254
379693
566 577 CATGGTGATGCC 1-10-1 MOE 254
405217
567 578 TCATGGTGATGC 2-8-2 MOE 256
405218
568 579 ATCATGGTGATG 2-8-2.MOE 257
405219
587 598 CCCTCCTGTCAC 2-8-2 MOE 258
405220
588 599 GCCCTCCTGTCA 2-8-2 MOE 259
405221
589 600 AGCCCTCCTGTC 2-8-2 MOE 260
405222
590 601 CAGCCCTCCTGT 2-8-2 MOE 261
405223
591 602 CCAGCCCTCCTG 2-8-2 MOE 262
405224
592 603 GCCAGCCCTCCT 2-8-2 MOE 263
379694
629 640 GACGAAGGTCTG 1-10-1 MOE 264
405225
707 718 GTATTTGTCGAA 2-8-2 MOE 265
379695
737 748 GGACACCGTCAG 1-10-1 MOE 266
379696
974 985 CAGCTTCAGGTA 1-10-1 MOE 267
405226
998 1009 CATGACCATGAG 2-8-2 MOE 268
405227
999 1010 GCATGACCATGA 2-8-2 MOE 269
405228
1000 1011 GGCATGACCATG 2-8-2 MOE 270
405229
1001 1012 TGGCATGACCAT 2-8-2 MOE 271
405230
1002 1013 CTGGCATGACCA 2-8-2 MOE 272
379697
1002 1013 CTGGCATGACCA 1-10-1 MOE 272
405231
1003 1014 CCTGGCATGACC 2-8-2 MOE 274
379698
1091 1102 GCAGCCCACCTC 1-10-1 MOE 275
405232
1092 1103 AGCAGCCCACCT 2-8-2 MOE 276
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
405233
1093 1104 GAGCAGCCCACC 2-8-2 MOE 277
405234
1130 1141 CATGAGCTTCAC 2-8-2 MOE 278
405235
1131 1142 GCATGAGCTTCA 2-8-2 MOE 279
382677
1131 1143 GGCATGAGCTTCA 1-10-2 MOE 280
388626
1132 1143 GGCATGAGCTTC 2-8-2 MOE 281
379699
1132 1143 GGCATGAGCTTC 1-10-1 MOE 281
405236
1133 1144 GGGCATGAGCTT 2-8-2 MOE 283
405237
1157 1168 CAGCATGAGTCC 2-8-2 MOE 284
405238
1158 1169 CCAGCATGAGTC 2-8-2 MOE 285
379700
1158 1169 CCAGCATGAGTC 1-10-1 MOE 285
405239
1159 1170 GCCAGCATGAGT 2-8-2 MOE 287
379701
1230 1241 CCATGGTGAAGA 1-10-1 MOE 288
405240
1542 1553 CACAGCTGCCCG 2-8-2 MOE 289
405241
1543 1554 ACACAGCTGCCC 2-8-2 MOE 290
405242
1544 1555 CACACAGCTGCC 2-8-2 MOE 291
382678
1544 1556 GCACACAGCTGCC 1-10-2 MOE 292
388627
1545 1556 GCACACAGCTGC 2-8-2 MOE 293
379702
1545 1556 GCACACAGCTGC 1-10-1 MOE 293
379703
1701 1712 GCCGGAGACTGA 1-10-1 MOE 295
405243
1976 1987 ATTGAGGTTGAC 2-8-2 MOE 296
405244
1977 1988 CATTGAGGTTGA 2-8-2 MOE 297
405245
1978 1989 GCATTGAGGTTG 2-8-2 MOE 298
405246
1979 1990 GGCATTGAGGTT 2-8-2 MOE 299
405247
1980 1991 GGGCATTGAGGT 2-8-2 MOE 300
Tabla 5: Compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 3 y que tienen 1 o 2 apareamientos erróneos
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
405200
96 107 CAATGACCAGCA 2-8-2 MOE 223
405215
382 393 ATGGTGATGCCC 2-8-2 MOE 253
405216
383 394 CATGGTGATGCC 2-8-2 MOE 254
379693
383 394 CATGGTGATGCC 1-10-1 MOE 254
379701
471 482 CCATGGTGAAGA 1-10-1 MOE 288
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
405218
472 483 ATCATGGTGATG 2-8-2 MOE 257
405246
536 547 GGCATTGAGGTT 2-8-2 MOE 299
405248
570 581 AGATCTTGGTGA 2-8-2 MOE 243
379691
570 581 AGATCTTGGTGA 1-10-1 MOE 243
379698
683 694 GCAGCCCACCTC 1-10-1 MOE 275
405232
684 695 AGCAGCCCACCT 2-8-2 MOE 276
379711
685 696 TAGCCGCCCACA 1-10-1 MOE 226
388628
685 696 TAGCCGCCCACA 2-8-2 MOE 226
379698
950 961 GCAGCCCACCTC 1-10-1 MOE 275
405232
95l 962 AGCAGCCCACCT 2-8-2 MOE 276
405235
978 989 GCATGAGCTTCA 2-8-2 MOE 279
382677
978 990 GGCATGAGCTTCA 1-10-2 MOE 280
388626
979 990 GGCATGAGCTTC 2-8-2 MOE 281
379699
979 990 GGCATGAGCTTC 1-10-1 MOE 281
405236
980 991 GGGCATGAGCTT 2-8-2 MOE 283
379698
1043 1054 GCAGCCCACCTC 1-10-1 MOE 275
405239
1171 1182 GCCAGCATGAGT 2-8-2 MOE 287
405209
1213 1224 CTGCCGATGTTG 2-8-2 MOE 236
405233
1364 1375 GAGCAGCCCACC 2-8-2 MOE 277
405240
1366 1377 CACAGCTGCCCG 2-8-2 MOE 289
405211
1500 1511 CCAGGCCCACAA 2-8-2 MOE 238
405212
1501 1512 GCCAGGCCCACA 2-8-2 MOE 239
379695
1643 1654 GGACACCGTCAG 1-10-1 MOE 266
379698
1875 1886 GCAGCCCACCTC 1-10-1 MOE 275
405239
1993 2004 GCCAGCATGAGT 2-8-2 MOE 287
405211
2210 2221 CCAGGCCCACAA 2-8-2 MOE 238
405212
2211 2222 GCCAGGCCCACA 2-8-2 MOE 239
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 85-184 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 85-184 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 85-184 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 214, 215, 216, 217, 218, 219, 221, 222, 223, 224, 225 o 227. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 85-184 de la SEC ID Nº 3 se selecciona de los Nº Isis 379684, 405193, 405194, 405195, 405196, 405197, 379685, 405198, 405199, 405200 o 405201, 379686, 379711 o 388628.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 113-132 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 113-132 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 113-132 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 215, 216, 217, 218, 219, 221, 222, 223 o 224. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 113-132 de la SEC ID Nº 3 se selecciona de los Nº Isis 405193, 405194, 405195, 405196, 405197, 379685, 405198, 405199, 405200 o 405201.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 207-329 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 207-329 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 207-329 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 228, 229, 230, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240 o 241. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 207-329 de la SEC ID Nº 3 se selecciona de los Nº Isis 405202, 405203, 405204, 379687, 405205, 405206, 405207, 405208, 405209, 405210, 405211, 405212, 379688 o 379689.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 207-273 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 207-273 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 207-273 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 228, 229, 230, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238 o 239. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 207-273 de la SEC ID Nº 3 se selecciona de los Nº Isis 405202, 405203, 405204, 379687, 405205, 405206, 405207, 405208, 405209, 405210, 405211 o 405212.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 207-219 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 207-219 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 207-219 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 228 o 229. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 207-219 de la SEC ID Nº 3 se selecciona de los Nº Isis 405202 o 405203.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 236-252 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 236-252 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 236-252 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 230, 232, 233, 234, 235 o 236. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 236-252 de la SEC ID Nº 3 se selecciona de los Nº Isis 405204, 379687, 405205, 405206, 405207, 405208 o 405209.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 260-273 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 260-273 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 260-273 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 237, 238 o 239. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 260-273 de la SEC ID Nº 3 se selecciona de los Nº Isis 405210, 405211 o 405212.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 435-640 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 435-640 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 435-640 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 242, 243, 245, 246, 251, 252, 253, 254, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263 o 264. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 435-640 de la SEC ID Nº 3 se selecciona de los Nº Isis 379690, 405248, 379691, 389780, 379692, 382676, 388625, 392170, 392173, 405213, 405214, 405215, 405216, 379693, 405217, 405218, 405219, 405220, 405221, 405222, 405223, 405224 o 379694.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 527-540 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 527-540 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 527-540 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 245, 246 o 251. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 527-540 de la SEC ID Nº 3 se selecciona de los Nº Isis 389780, 379692, 382676, 388626, 392170, 392173 o 405213.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 564-603 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 564-603 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 564-603 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 252, 253, 254, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262 o 263. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 564-603 de la SEC ID Nº 3 se selecciona de los Nº Isis 405214, 405215, 405216, 379693, 405217, 405218, 405219, 405220, 405221, 405222, 405223 o 405224.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 564-579 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 564-579 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 564-579 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 252, 253, 254, 256 o 257. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 564-579 de la SEC ID Nº 3 se selecciona de los Nº Isis 405214, 405215, 405216, 379693, 405217 o 405218.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 587-603 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 587-603 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 587-603 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 258, 259, 260, 261, 262 o 263. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 587-603 de la SEC ID Nº 3 se selecciona de los Nº Isis 405219, 405220, 05221, 405222, 405223 o 405224.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 974-1014 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 974-1014 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 974-1014 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 267, 268, 269, 270, 271, 272 o 274. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 974-1014 de la SEC ID Nº 3 se selecciona de los Nº Isis 379696, 405226, 405227, 405228, 405229, 405230, 379697 o 405231.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 998-1014 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 998-1014 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 998-1014 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 268, 269, 270, 271, 272 o 274. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 998-1014 de la SEC ID Nº 3 se selecciona de los Nº Isis 405226, 405227, 405228, 405229, 405230, 379697 o 405231.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1091-1170 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1091-1170 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1091-1170 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 283, 284, 285, 286 o 287. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1091-1170 de la SEC ID Nº 3 se selecciona de los Nº Isis 379698, 405232, 405233, 405234, 405235, 388626, 379699, 382677, 405236, 405237, 405238, 379700, o 405239.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1091-1104 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1091-1104 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1091-1104 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 275, 276 o 277. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1091-1104 de la SEC ID Nº 3 se selecciona de los Nº Isis 379698, 405232 o 405233.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1130-1144 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1130-1144 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1130-1144 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 278, 279, 280, 281 o 283. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1130-1144 de la SEC ID Nº 3 se selecciona de los Nº Isis 405234, 405235, 388626,379699,382677 o 405236.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1157-1170 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1157-1170 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1157-1170 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 284, 285 o 287. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1157-1170 de la SEC ID Nº 3 se selecciona de los Nº Isis 405237, 405238, 379700 o 405239.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1542-1556 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1542-1556 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1542-1556 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 289, 290, 291, 292 o 293. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1542-1556 de la SEC ID Nº 3 se selecciona de los Nº Isis 405240, 405241, 405242, 388629, 379702 o 382678. En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1976-1991 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1976-1991 de la SEC ID Nº 3. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1976-1991 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 296, 297, 298, 299 o 300. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1976-1991 de la SEC ID Nº 3 se selecciona de los Nº Isis 405243, 405244, 405245, 405246 o 405247.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 tienen una longitud de 8 a 16, preferentemente de 9 a 15, más preferentemente de 9 a 14, más preferentemente de 10 a 14 nucleótidos de longitud. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 tienen una longitud de 9 a 14 nucleótidos. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 tienen una longitud de 10 a 14 nucleótidos. En ciertas realizaciones, dichos compuestos antisentido cortos son oligonucleotídicos antisentido cortos.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 son gápmeros cortos. En ciertas de dichas realizaciones, los gápmeros cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 comprenden al menos una modificación de alta afinidad en una o más alas del compuesto. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de comprenden de 1 a 3 modificaciones de alta afinidad en cada ala. En ciertas de dichas realizaciones, los nucleósidos o nucleótidos del ala comprenden una modificación en 2’. En ciertas realizaciones, los monómeros del ala son BNA. En ciertas de dichas realizaciones, los monómeros del ala se seleccionan de -Lmetilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA, ß-D-metilenoxi(4’-CH2-O-2’) BNA, etilenoxi (4’-(CH2)2-O-2’)BNA, aminooxi(4’-CH2-O-N(R)-2’) BNA y oxiamino (4’-CH2-N(R)-O-2’) BNA. En ciertas realizaciones, los monómeros de un ala comprenden un sustituyente en la posición 2’ seleccionado de alilo, amino, azido, tio, O-alilo, O-alquilo C1-C10, -OCF3 , O-(CH2)2-O-CH3, 2’-O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), y O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), en las que cada Rm y Rn es, de forma independiente, H o alquilo C1-C10 sustituido o insustituido.
En ciertas realizaciones, los monómeros de un ala son nucleótidos 2’MOE.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 comprenden un hueco entre el ala en 5’ y el ala en 3’. En ciertas realizaciones, el hueco comprende cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece o catorce monómeros. En ciertas realizaciones, los monómeros del hueco son desoxirribonucleótidos no modificados. En ciertas realizaciones, los monómeros del hueco son ribonucleótidos no modificados. En ciertas realizaciones, las modificaciones del hueco (si las hubiera) tienen como resultado un compuesto antisentido que, cuando se une a su ácido nucleico diana, soporta la escisión por una RNasa, incluida, entre otras, la RNasa H.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 tienen enlaces monoméricos. En ciertas de dichas realizaciones, dichos enlaces son todos enlaces fosforotioato. En ciertas realizaciones, los enlaces son todos enlaces fosfodiéster. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de tienen esqueletos mixtos.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 tienen una longitud de 8 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 tienen una longitud de 9 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 tienen una longitud de 10 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 tienen una longitud de 11 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 tienen una longitud de monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 tienen una longitud de 13 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 tienen una longitud de 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 tienen una longitud de 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 tienen una longitud de 16 6 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 comprenden de 9 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 comprenden de 10 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 comprenden de 12 a 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 comprenden de 12 a 14 nucleótidos o nucleósidos.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos de modulación de la expresión de SGLT2. En ciertas realizaciones, dichos procedimientos comprenden el uso de uno o más compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2, en el que el compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SGLT2 tiene una longitud de aproximadamente 8 a aproximadamente 16, preferentemente de 9 a 15, más preferentemente de 9 a 14, más preferentemente de 10 a 14 monómeros (es decir, de aproximadamente 8 a aproximadamente 16 monómeros unidos). Un experto en la técnica apreciará que esto comprende procedimientos de modulación de la expresión de ApoB usando uno o más compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SGLT2 de de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16 monómeros.
En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de SGLT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SGLT2 que tiene una longitud de 8 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de SGLT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SGLT2 que tiene una longitud de 9 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de SGLT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SGLT2 que tiene una longitud de 10 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de SGLT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SGLT2 que tiene una longitud de 11 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de SGLT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SGLT2 que tiene una longitud de 12 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de SGLT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SGLT2 que tiene una longitud de 13 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de SGLT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SGLT2 que tiene una longitud de 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de SGLT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SGLT2 que tiene una longitud de 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de SGLT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SGLT2 que tiene una longitud de 16 monómeros.
En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de SGLT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SGLT2 que comprende de 9 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de SGLT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SGLT2 que comprende de 10 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de SGLT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SGLT2 que comprende de 12 a 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de SGLT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SGLT2 que comprende de 12 o 14 nucleótidos o nucleósidos.
3. PCSK9
En individuos con hipercolesterolemia autosómica dominante (HAD), los niveles elevados de LDL-C se han vinculado con mutaciones en los genes que codifican el receptor de LDL (LDL-R), la apolipoproteína B (apon) o la proproteína convertasa subtilisina/quexina tipo 9 (PCSK9) (Abifadel y col., Nat. Genet., 2003, 34:154-156). La PCSK9 se identificó como un tercer locus asociado con la HAD cuando se encontró que las mutaciones de ganancia de función en PCSK9 estaban ligadas a niveles elevados de LDL-C. La ApoB participa en el ensamblaje intracelular y la secreción de lipoproteínas ricas en triglicéridos y es un ligando para el LDL-R. Se ha propuesto que la PCSK9 reduce los niveles de expresión de LDL-R en el hígado. La expresión de LDL-R reducida tiene como resultado la reducción de la captación hepática de las lipoproteínas que contienen ApoB circulantes, que, a su vez, conduce a niveles elevados de colesterol.
Definiciones
La “PCSK9” es el producto génico o proteína cuya expresión se va a modular mediante la administración de un compuesto antisentido corto.
“Ácido nucleico de PCSK9 ” significa cualquier ácido nucleico que codifica el PCSK9. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, un ácido nucleico de PCSK9 incluye, sin limitaciones, una secuencia de ADN que codifica PCSK9, una secuencia de ARN transcrita a partir de ADN que codifica PCSK9, y una secuencia de ARNm que codifica el PCSK9.
“ARNm de PCSK9” significa un ARNm que codifica la PCSK9.
Indicaciones terapéuticas de PCSK9
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos de modular la expresión de PCSK9 en un individuo, que comprende administrar un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PCSK9. En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos de tratar a un individuo, que comprende administrar una o más composiciones farmacéuticas que de la presente invención. En ciertas realizaciones, el individuo tiene hipercolesterolemia, dislipidemia mixta, aterosclerosis, un riesgo de desarrollar aterosclerosis, cardiopatía coronaria, antecedentes de cardiopatía coronaria, cardiopatía coronaria de inicio precoz, uno o más factores de riesgo de cardiopatía coronaria, diabetes de tipo II, diabetes de tipo II con dislipidemia, dislipidemia, hipertrigliceridemia, hiperlipidemia, hiperacidemia grasa, esteatosis hepática, esteatohepatitis no alcohólica o enfermedad de hígado graso no alcohólica.
Las guías para terapias hipolipemiantes se establecieron en el 2001, en el Panel de Tratamiento de adultos III (ATP III) del Programa Nacional educativo sobre colesterol de EE.UU. (NCEP) y se actualizaron en 2004 (Grundy y col., Circulation, 2004, 110, 227-239). Las guías incluyen obtener un perfil lipoproteico completo, normalmente después de ayunar durante de 9 a 12 horas, para la determinación de los niveles de LDL-C, colesterol total y HDL-C. De acuerdo con las guías más recientemente establecidas, los niveles de LDL-C de 134-159 mg/dl, 160-189 mg/dl y mayores o iguales a 190 mg/dl se consideran en el límite alto, alto y muy alto, respectivamente. Niveles de colesterol de 200-239 y mayores o iguales a 240 mg/dl se consideran límite alto y altos, respectivamente. Niveles de HCL-C inferiores a 40 mg/dl se considera bajos.
En ciertas realizaciones, se han identificado que los individuos necesitan terapia hipolipemiante. En ciertas de dichas realizaciones, se ha identificado que los individuos necesitan terapia hipolipemiante de acuerdo con las guías establecidas en 2001 por Panel de Tratamiento de adultos III (ATP III) del Programa Nacional educativo sobre colesterol de EE.UU. (NCEP) y actualizadas en 2004 (Grundy y col., Circulation, 2004, 110, 227-239). En ciertas de dichas realizaciones, el individuo que necesita terapia hipolipemiante tiene un nivel de LDL-C superior a 190 mg/dl. En ciertas de dichas realizaciones, el individuo que necesita terapia hipolipemiante tiene un nivel de LDL-C superior a 160 mg/dl. En ciertas de dichas realizaciones, el individuo que necesita terapia hipolipemiante tiene un nivel de LDL-C superior a 130 mg/dl. En ciertas de dichas realizaciones, el individuo que necesita terapia hipolipemiante tiene un nivel de LDL-C superior a 100 mg/dl. En ciertas de dichas realizaciones, el individuo que necesita terapia hipolipemiante debe mantener el nivel de LDLC por debajo de 160 mg/dl. En ciertas de dichas realizaciones, el individuo que necesita terapia hipolipemiante debe mantener el nivel de LDL-C por debajo de 130 mg/dl. En ciertas de dichas realizaciones, el individuo que necesita terapia hipolipemiante debe mantener el nivel de LDL-C por debajo de 100 mg/dl. En ciertas de dichas realizaciones, el individuo debe mantener el nivel de LDL-C por debajo de 70 mg/dl.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir la ApoB en un individuo, En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir en un individuo los niveles de lipoproteínas que contienen ApoB. En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir el nivel de LDL-C en un individuo, En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir el nivel de VLDL-C en un individuo, En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir el nivel de IDL-C en un individuo. En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir el nivel de no HDL-C en un individuo. En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir Lp(a) en un individuo, En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir los triglicéridos en suero en un individuo. En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir los triglicéridos hepáticos en un individuo. En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir el nivel de Ox-LDL-C en un individuo, En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir el nivel de partículas pequeñas de LDL en un individuo. En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir el nivel de partículas pequeñas de VLDL en un individuo. En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir los fosfolípidos en un individuo. En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir los fosfolípidos oxidados en un individuo.
En ciertas realizaciones, los procedimientos divulgados en el presente documento no reducen los niveles de HDL-C. En ciertas realizaciones, los procedimientos divulgados en el presente documento no dan lugar a la acumulación de lípidos en el hígado.
En ciertas de dichas realizaciones, una composición farmacéutica que comprende un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PCSK9 es para usar en terapia. En ciertas realizaciones, la terapia es la reducción de LDL-C, ApoB, VLDL-C, IDL-C, no-HDL-C, Lp(a), triglicéridos en suero, triglicéridos en hígado, Ox-LDL-C, partículas pequeñas de LDL, VLDL pequeñas, fosfolípidos o fosfolípidos oxidados en un individuo. En ciertas realizaciones, la terapia es el tratamiento de hipercolesterolemia, dislipidemia mixta, aterosclerosis, un riesgo de desarrollar aterosclerosis, cardiopatía coronaria, antecedentes de cardiopatía coronaria, cardiopatía coronaria de inicio precoz, uno o más factores de riesgo de cardiopatía coronaria, diabetes de tipo II, diabetes de tipo II con dislipidemia, dislipidemia, hipertrigliceridemia, hiperlipidemia, hiperacidemia grasa, esteatosis hepática, esteatohepatitis no alcohólica o enfermedad de hígado graso no alcohólica. En realizaciones adicionales, la terapia es la reducción del riesgo de CPC. En ciertas, la terapia es la prevención de la aterosclerosis. En ciertas realizaciones, la terapia es la prevención de cardiopatía coronaria.
En ciertas realizaciones, una composición farmacéutica que comprende un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PCSK9 se usa para la preparación de un medicamento para reducir los niveles de LDL-C, ApoB, VLDL-C, IDL-C, no-HDL-C, Lp(a), triglicéridos en suero, triglicéridos en hígado, Ox-LDL-C, partículas pequeñas de LDL, VLDL pequeñas, fosfolípidos o fosfolípidos oxidados en un individuo. En ciertas realizaciones, una composición farmacéutica que comprende un compuesto antisentido corto dirigido a una PCKS9 se usa para la preparación de un medicamento para reducir el riesgo de cardiopatía coronaria. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PCSK9 se usa para la preparación de un medicamento para el tratamiento de hipercolesterolemia, dislipidemia mixta, aterosclerosis, un riesgo de desarrollar aterosclerosis, cardiopatía coronaria, antecedentes de cardiopatía coronaria, cardiopatía coronaria de inicio precoz, uno o más factores de riesgo de cardiopatía coronaria, diabetes de tipo II, diabetes de tipo II con dislipidemia, dislipidemia, hipertrigliceridemia, hiperlipidemia, hiperacidemia grasa, esteatosis hepática, esteatohepatitis no alcohólica o enfermedad de hígado graso no alcohólica.
Terapias de combinación con PCSK9
En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación se administran conjuntamente con uno o más agentes farmacéuticos distintos. En ciertas realizaciones, dichos uno más agentes farmacéuticos distintos están diseñados para tratar la misma enfermedad o afección distinta a la de las una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación. En ciertas realizaciones, dichos uno más agentes farmacéuticos distintos están diseñados para tratar otra enfermedad o afección distinta a la de las una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación. En ciertas realizaciones, dichos uno más agentes farmacéuticos distintos están diseñados para tratar un efecto indeseado de las una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación se administran conjuntamente con otro agente farmacéutico para tratar un efecto indeseado de dicho otro agente farmacéutico. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente y uno o más agentes farmacéuticos distintos se administran al mismo tiempo. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación y uno o más agentes farmacéuticos distintos se administran en momentos diferentes. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación y uno o más agentes farmacéuticos distintos preparan juntos en una única formulación. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación y uno
o más agentes farmacéuticos distintos se preparan por separado.
En ciertas realizaciones, los agentes farmacéuticos que se pueden administrar de forma conjunta con una composición farmacéutica de la presente divulgación incluyen agentes hipolipemiantes. En ciertas de dichas realizaciones, los agentes farmacéuticos que se pueden administrar de forma conjunta con una composición farmacéutica de la presente divulgación incluyen, entre otros, atorvastatina, simvastatina, rosuvastatina y ezetimiba. En ciertas de dichas realizaciones, el agente hipolipemiante se administra antes de la administración de una composición farmacéutica de la presente divulgación. En ciertas de dichas realizaciones, el agente hipolipemiante se administra después de la administración de una composición farmacéutica de la presente divulgación. En ciertas de dichas realizaciones, el agente hipolipemiante se administra al mismo tiempo que la composición farmacéutica de la presente divulgación. En ciertas de dichas realizaciones, la dosis de un agente hipolipemiante coadministrado es la misma que la dosis que se administraría si el agente hipolipemiante se administrara solo. En ciertas de dichas realizaciones, la dosis de un agente hipolipemiante coadministrado es menor que la dosis que se administraría si el agente hipolipemiante se administrara solo. En ciertas de dichas realizaciones, la dosis de un agente hipolipemiante coadministrado es mayor que la dosis que se administraría si el agente hipolipemiante se administrara solo.
En ciertas realizaciones, un agente hipolipemiante coadministrado es un inhibidor de la HMG-CoA reductasa. En ciertas de dichas realizaciones, el inhibidor de la HMG-CoA reductasa es una estatina. En ciertas de dichas realizaciones, la estatina se selecciona de atorvastatina, simvastatina, pravastatina, fluvastatina y rosuvastatina.
En ciertas realizaciones, un agente hipolipemiante coadministrado es un inhibidor de la absorción de colesterol. En ciertas de dichas realizaciones, el inhibidor de la absorción de colesterol es ezetimiba.
En ciertas realizaciones, un agente hipolipemiante coadministrado es un inhibidor de la HMG-CoA reductasa formulado conjuntamente con un inhibidor de la absorción de colesterol. En ciertas de dichas realizaciones, el agente hipolipemiante formulado conjuntamente es ezetimiba/simvastatina.
En ciertas realizaciones, un agente hipolipemiante coadministrado es un inhibidor de la proteína de transferencia de triglicéridos microsomal.
En ciertas realizaciones, un agente hipolipemiante coadministrado es un oligonucleótido dirigido a un ácido nucleico de ApoB.
En ciertas realizaciones, un agente farmacéutico coadministrado es un secuestrante de ácidos biliares. En ciertas de dichas realizaciones, el secuestrante de ácidos biliares se selecciona de colestiramina, colestipol y colesevelam.
En ciertas realizaciones, un agente farmacéutico coadministrado es un ácido nicotínico. En ciertas de dichas realizaciones, el ácido nicotínico se selecciona de ácido nicotínico de liberación inmediata, ácido nicotínico de liberación extendida y ácido nicotínico de liberación sostenida.
En ciertas realizaciones, un agente farmacéutico coadministrado es un ácido fíbrico. En ciertas de dichas realizaciones, el ácido fíbrico se selecciona de gemfibrozilo, fenofibrato, clofibrato, bezafibrato y ciprofibrato.
Otros ejemplos de agentes farmacéuticos que se pueden administrar de forma conjunta con una composición farmacéutica de la presente divulgación incluyen, entre otros, corticosteroides, incluidos, entre otros, prednisona; inmunoglobulinas, incluidas, entre otras inmunoglobulina intravenosa (IgIV); analgésicos (p. ej., acetaminófeno); agentes antiinflamatorios, incluidos, entre otros, fármacos antiinflamatorios no esteroideos (p. ej., ibuprofeno, inhibidores de la COX-1 e inhibidores de la COX-2); salicilatos; antibióticos; antivirales; agentes antifúngicos; agentes antidiabéticos (p. ej., biguanidas, inhibidores de la glucosidasa, insulinas, sulfonilureas y tiazolidendionas); modificadores adrenérgicos; diuréticos; hormonas (p. ej., esteroides anabólicos, andrógenos, estrógenos, calcitonina, progestina, somatostatina y hormonas tiroideas); inmunomoduladores; relajantes musculares; antihistamínicos, agentes antiosteoporosis (p. ej., bisfosfonatos, calcitonina y estrógenos); prostaglandinas, agentes antineoplásicos; agentes psicoterapéuticos; sedantes; productos de roble venenoso del atlántico y de zumaque veneoso; anticuerpos; y vacunas.
En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas de la presente divulgación se pueden administrar de forma conjunta con una terapia hipolipemiante. En ciertas de dichas realizaciones, una terapia hipolipemiante es un cambio terapéutico del estilo de vida. En ciertas de dichas realizaciones, una terapia hipolipemiante es aféresis de LDL.
Ciertos compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos están dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 que tiene la secuencia de número de registro en GENBANK® NM_174936.2, incorporada en el presente documento como SEC ID Nº
4. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 4 es al menos un 90% complementario a la SEC ID Nº 4. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 4 es al menos un 95% complementario a la SEC ID Nº 4. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 4 ES 100% complementario a la SEC ID Nº 4. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 4 comprende una secuencia nucleotídica seleccionada de las secuencias
5 nucleotídicas indicadas en la Tabla 6 o la Tabla 7.
La secuencia nucleotídica indicada en cada SEC ID Nº en las Tablas 6 y 7 es independiente de cualquier modificación de un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica. Como tales, los compuestos antisentido cortos definidos por una SEC ID Nº pueden comprender, de forma independiente, una o más modificaciones en un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica. Los compuestos antisentido cortos descritos por el Número Isis (Nº
10 Isis) indican una combinación de secuencia de bases nucleotídicas y una o más modificaciones en un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica.
Las Tablas 6 y 7 ilustran ejemplos de compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 4. La Tabla 6 ilustra compuestos antisentido cortos que son 100% complementarios a la SEC ID Nº 4. La Tabla 7 ilustra compuestos antisentido cortos que tienen uno o dos apareamientos erróneos con respecto a la SEC ID Nº 4. La columna denominada 15 "motivo gápmero" indica el motivo ala-hueco-ala de cada compuesto antisentido corto. El segmento hueco comprende 2'desoxinucleótidos y cada nucleótido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado en 2'. El azúcar modificado en 2' concreto también está indicado en la columna “motivo gápmero”. Por ejemplo, ‘2-10-2 MOE’ significa un motivo gápmero 2-10-2, en el que un segmento de hueco de diez 2’-desoxinucleótidos está flanqueado por segmentos ala de dos nucleótidos, en los que los nucleótidos de los segmentos ala son nucleótidos 2’-MOE. Los enlaces
20 internucleosídicos son fosforotioato. Los compuestos antisentido cortos comprenden 5-metil-citidina en lugar de citosina no modificada, a menos que “citosina no modificada” esté en la lista en la columna del motivo gápmero, en cuyo caso las citosinas indicadas son citosinas no modificadas. Por ejemplo, “5-mC sólo en hueco” indica que el segmento de hueco tiene 5-metilcitosinas, mientras que los segmentos ala tienen citosinas no modificadas.
Tabla 6: Compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 4
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
400297
695 708 ATGGGGCAACTTCA 2-10-2 MOE 329
400298
696 709 CATGGGGCAACTTC 2-10-2 MOE 330
400299
697 710 ACATGGGGCAACTT 2-10-2 MOE 331
400300
742 755 GGGATGCTCTGGGC 2-10-2 MOE 332
400301
757 770 CGCTCCAGGTTCCA 2-10-2 MOE 333
400302
828 841 GATACACCTCCACC 2-10-2 MOE 334
400303
829 842 AGATACACCTCCAC 2-10-2 MOE 335
400304
830 843 GAGATACACCTCCA 2-10-2 MOE 336
400305
937 950 GCCTGTCTGTGGAA 2-10-2 MOE 337
400306
952 965 CTGTCACACTTGCT 2-10-2 MOE 338
400307
988 1001 CGGCCGCTGACCAC 2-10-2 MOE 339
400308
989 1002 CCGGCCGCTGACCA 2-10-2 MOE 340
400309
990 1003 CCCGGCCGCTGACC 2-10-2 MOE 341
400310
991 1004 TCCCGGCCGCTGAC 2-10-2 MOE 342
400311
992 1005 ATCCCGGCCGCTGA 2-10-2 MOE 343
400312
993 1006 CATCCCGGCCGCTG 2-10-2 MOE 344
400313
994 1007 GCATCCCGGCCGCT 2-10-2 MOE 345
400314
1057 1070 GTGCCCTTCCCTTG 2-10-2 MOE 346
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
400315
1075 1088 ATGAGGGTGCCGCT 2-10-2 MOE 347
400316
1076 1089 TATGAGGGTGCCGC 2-10-2 MOE 348
400317
1077 1090 CTATGAGGGTGCCG 2-10-2 MOE 349
400318
1078 1091 CCTATGAGGGTGCC 2-10-2 MOE 350
400319
1093 1106 CGAATAAACTCCAG 2-10-2 MOE 351
400320
1094 1107 CCGAATAAACTCCA 2-10-2 MOE 352
400321
1095 1108 TCCGAATAAACTCC 2-10-2 MOE 353
400322
1096 1109 TTCCGAATAAACTC 2-10-2 MOE 354
400323
1147 1160 GCCAGGGGCAGCAG 2-10-2 MOE 355
400324
1255 1268 GAGTAGAGGCAGGC 2-10-2 MOE 356
400325
1334 1347 CCCCAAAGTCCCCA 2-10-2 MOE 357
400326
1335 1348 TCCCCAAAGTCCCC 2-10-2 MOE 358
400327
1336 1349 GTCCCCAAAGTCCC 2-10-2 MOE 359
400328
1453 1466 ACGTGGGCAGCAGC 2-10-2 MOE 360
400329
1454 1467 CACGTGGGCAGCAG 2-10-2 MOE 361
400330
1455 1468 CCACGTGGGCAGCA 2-10-2 MOE 362
400331
1456 1469 GCCACGTGGGCAGC 2-10-2 MOE 363
400332
1569 1582 CAGGGAACCAGGCC 2-10-2 MOE 364
400333
1570 1583 TCAGGGAACCAGGC 2-10-2 MOE 365
400334
1571 1584 CTCAGGGAACCAGG 2-10-2 MOE 366
400335
1572 1585 CCTCAGGGAACCAG 2-10-2 MOE 367
400336
1573 1586 TCCTCAGGGAACCA 2-10-2 MOE 368
400337
1574 1587 GTCCTCAGGGAACC 2-10-2 MOE 369
400338
1575 1588 GGTCCTCAGGGAAC 2-10-2 MOE 370
400339
1576 1589 TGGTCCTCAGGGAA 2-10-2 MOE 371
400340
1577 1590 CTGGTCCTCAGGGA 2-10-2 MOE 372
400341
1578 1591 GCTGGTCCTCAGGG 2-10-2 MOE 373
400342
1621 1634 GTGCTGGGGGGCAG 2-10-2 MOE 374
400343
1622 1635 GGTGCTGGGGGGCA 2-10-2 MOE 375
400344
1623 1636 GGGTGCTGGGGGGC 2-10-2 MOE 376
400345
1624 1637 TGGGTGCTGGGGGG 2-10-2 MOE 377
400346
1738 1751 GAGCAGCTCAGCAG 2-10-2 MOE 378
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
400347
1739 1752 GGAGCAGCTCAGCA 2-10-2 MOE 379
400348
1740 1753 TGGAGCAGCTCAGC 2-10-2 MOE 380
400349
1741 1754 CTGGAGCAGCTCAG 2-10-2 MOE 381
400350
1834 1847 CCCTCACCCCCAAA 2-10-2 MOE 382
400351
1835 1848 ACCCTCACCCCCAA 2-10-2 MOE 383
400352
1836 1849 CACCCTCACCCCCA 2-10-2 MOE 384
400353
1837 1850 ACACCCTCACCCCC 2-10-2 MOE 385
400354
1838 1851 GACACCCTCACCCC 2-10-2 MOE 386
400355
1839 1852 AGACACCCTCACCC 2-10-2 MOE 387
400356
1840 1853 TAGACACCCTCACC 2-10-2 MOE 388
400357
2083 2096 TGGCAGCAGGAAGC 2-10-2 MOE 389
400358
2084 2097 ATGGCAGCAGGAAG 2-10-2 MOE 390
400359
2085 2098 CATGGCAGCAGGAA 2-10-2 MOE 391
400360
2086 2099 GCATGGCAGCAGGA 2-10-2 MOE 392
400361
2316 2329 GGCAGCAGATGGCA 2-10-2 MOE 393
400362
2317 2330 CGGCAGCAGATGGC 2-10-2 MOE 394
400363
2318 2331 CCGGCAGCAGATGG 2-10-2 MOE 395
400364
2319 2332 TCCGGCAGCAGATG 2-10-2 MOE 396
400365
2320 2333 CTCCGGCAGCAGAT 2-10-2 MOE 397
400366
2321 2334 GCTCCGGCAGCAGA 2-10-2 MOE 398
400367
2322 2335 GGCTCCGGCAGCAG 2-10-2 MOE 399
400368
2323 2336 CGGCTCCGGCAGCA 2-10-2 MOE 400
400369
2324 2337 CCGGCTCCGGCAGC 2-10-2 MOE 401
400370
2325 2338 GCCGGCTCCGGCAG 2-10-2 MOE 402
400371
3543 3556 AGTTACAAAAGCAA 2-10-2 MOE 403
403739
988 1001 CGGCCGCTGACCAC 2-10-2 (6’S)-6’-metil-Metilenoxi BNA 339
403740
1455 1468 CCACGTGGGCAGCA 2-10-2 (6’S)-6’-metil-Metilenoxi BNA 362
Tabla 7: Compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 4 y que tienen 1 o 2 apareamientos erróneos
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
400323
349 362 GCCAGGGGCAGCAG 2-10-2 MOE 355
400370
679 692 GCCGGCTCCGGCAG 2-10-2 MOE 402
400361
1860 1873 GGCAGCAGATGGCA 2-10-2 MOE 393
400323
1873 1886 GCCAGGGGCAGCAG 2-10-2 MOE 355
400310
2257 2270 TCCCGGCCGCTGAC 2-10-2 MOE 342
400361
2653 2666 GGCAGCAGATGGCA 2-10-2 MOE 393
400350
2811 2824 CCCTCACCCCCAAA 2-10-2 MOE 382
400351
2812 2825 ACCCTCACCCCCAA 2-10-2 MOE 383
400352
2813 2826 CACCCTCACCCCCA 2-10-2 MOE 384
400353
2814 2827 ACACCCTCACCCCC 2-10-2 MOE 385
400334
2966 2979 CTCAGGGAACCAGG 2-10-2 MOE 366
400332
3379 3392 CAGGGAACCAGGCC 2-10-2 MOE 364
400340
3448 3461 CTGGTCCTCAGGGA 2-10-2 MOE 372
400341
3449 3462 GCTGGTCCTCAGGG 2-10-2 MOE 373
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 695-710 de la SEC ID Nº 4. En ciertas de dichas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a los nucleótidos 695-710 de la SEC ID Nº 4 comprenden una
5 secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 329, 330 o 331. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 695-710 de la SEC ID Nº 4 se selecciona de los Nº Isis 400297, 400298 o 400299.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 742-770 de la SEC ID Nº 4. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 742-770 de la SEC ID Nº 4 comprende una
10 secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 332 o 333. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 742-770 de la SEC ID Nº 4 se selecciona del Nº Isis 400300 o 400301.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 828-843 de la SEC ID Nº 4. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 828-843 de la SEC ID Nº 4 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 334, 335 o 336. En ciertas de dichas realizaciones, un
15 compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 828-843 de la SEC ID Nº 4 se selecciona del Nº Isis 400302, 400303 o 400304.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 937-1007 de la SEC ID Nº 4. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 937-1007 de la SEC ID Nº 4 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344 o 345. En ciertas de
20 dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 937-1007 de la SEC ID Nº 4 se selecciona de los Nº Isis 400305, 400306, 400307, 400308, 400309, 400310, 400311, 400312, 400313, o 403739.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 937-965 de la SEC ID Nº 4. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 937-965 de la SEC ID Nº 4 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 337 o 338. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto
25 antisentido corto dirigido a los nucleótidos 937-965 de la SEC ID Nº 4 se selecciona del Nº Isis 400305 o 400306.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 988-1007 de la SEC ID Nº 4. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 988-1007 de la SEC ID Nº 4 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 339 340, 341, 342, 343, 344 o 345. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 937-1007 de la SEC ID Nº 4 se selecciona de los Nº Isis 400307, 400308, 400309, 400310, 400311, 400312, 4003313 o 403739.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1057-1160 de la SEC ID Nº 4. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1057-1160 de la SEC ID Nº 4 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, o 355. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1057-1160 de la SEC ID Nº 4 se selecciona de los Nº Isis 400314, 400315, 400316, 400317, 400318, 400319, 400320, 400321, 400322, o 400323.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1057-1109 de la SEC ID Nº 4. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1057-1109 de la SEC ID Nº 4 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353 o 354. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1057-1109 de la SEC ID Nº 4 se selecciona de los Nº Isis 400314, 400315, 400316, 400317, 400318, 400319, 400320, 400321 o 400322.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1057-1091 de la SEC ID Nº 4. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1057-1091 de la SEC ID Nº 4 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 346 347, 348, 349 o 350. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1057-1091 de la SEC ID Nº 4 se selecciona de los Nº Isis 400314, 400315, 400316 o 400317 o 400318.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1093-1109 de la SEC ID Nº 4. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1093-1109 de la SEC ID Nº 4 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 351 352, 353, o 354. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1057-1109 de la SEC ID Nº 4 se selecciona de los Nº Isis 400319, 400320, 400321 o 400322.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1334-1349 de la SEC ID Nº 4. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1334-1349 de la SEC ID Nº 4 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 357, 358 o 359. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1334-1349 de la SEC ID Nº 4 se selecciona del Nº Isis 400325, 400326 o 400327.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1453-1469 de la SEC ID Nº 4. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1453-1469 de la SEC ID Nº 4 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 360 361, 362, o 363. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1453-1469 de la SEC ID Nº 4 se selecciona de los Nº Isis 400328, 400329, 400330 , 400331 o 403470.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1569-1591 de la SEC ID Nº 4. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1569-1591 de la SEC ID Nº 4 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, o 373. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1569-1591 de la SEC ID Nº 4 se selecciona de los Nº Isis 400332, 400333, 400334, 400335, 400336, 400337, 400338, 400339, 400340, o 400341.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1621-1637 de la SEC ID Nº 4. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1621-1637 de la SEC ID Nº 4 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 374 375, 376, o 377. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1621-1637 de la SEC ID Nº 4 se selecciona de los Nº Isis 400342, 400343, 400344 o 400345.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1738-1754 de la SEC ID Nº 4. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1738-1754 de la SEC ID Nº 4 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 378 379, 380, o 381. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1738-1754 de la SEC ID Nº 4 se selecciona de los Nº Isis 400346, 400347, 400348 o 400349.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1834-1853 de la SEC ID Nº 4. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1834-1853 de la SEC ID Nº 4 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 382 383, 384, 385, 386 , 387 o 388. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1834-1853 de la SEC ID Nº 4 se selecciona de los Nº Isis 400350, 400351, 400352, 400353, 400354, 400355 o 400356.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 2083-2099 de la SEC ID Nº 4. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 2083-2099 de la SEC ID Nº 4 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 389 390, 391, o 392. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 2083-2099 de la SEC ID Nº 4 se selecciona de los Nº Isis 400357, 400358, 400359 o 400360.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 2316-2338 de la SEC ID Nº 4. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 2316-2338 de la SEC ID Nº 4 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, o 402. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 2316-2338 de la SEC ID Nº 4 se selecciona de los Nº Isis 400361, 400362, 400363, 400364, 400365, 400366, 400367, 400368, 400369, o 400370.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 tienen una longitud de 8 a 16, preferentemente de 9 a 15, más preferentemente de 9 a 14, más preferentemente de 10 a 14 nucleótidos de longitud. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 tienen una longitud de 9 a 14 nucleótidos. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 tienen una longitud de 10 a 14 nucleótidos. En ciertas realizaciones, dichos compuestos antisentido cortos son oligonucleotídicos antisentido cortos.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 son gápmeros cortos. En ciertas de dichas realizaciones, los gápmeros cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 comprenden al menos una modificación de alta afinidad en una o más alas del compuesto. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 comprenden de 1 a 3 modificaciones de alta afinidad en cada ala. En ciertas de dichas realizaciones, los nucleósidos o nucleótidos del ala comprenden una modificación en 2’. En ciertas realizaciones, los monómeros del ala son BNA. En ciertas de dichas realizaciones, los monómeros del ala se seleccionan de -L-metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA, ß-D-metilenoxi(4’-CH2-O-2’) BNA, etilenoxi (4’-(CH2)2-O-2’)BNA, aminooxi(4’-CH2-ON(R)-2’) BNA y oxiamino (4’-CH2-N(R)-O-2’) BNA. En ciertas realizaciones, los monómeros de un ala comprenden un sustituyente en la posición 2’ seleccionado de alilo, amino, azido, tio, O-alilo, O-alquilo C1-C10, -OCF3 , O-(CH2)2-O-CH3, 2’-O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), y O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), en las que cada Rm y Rn es, de forma independiente, H o alquilo C1-C10 sustituido o insustituido. En ciertas realizaciones, los monómeros de un ala son nucleótidos 2’MOE.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 comprenden un hueco entre el ala en 5’ y el ala en 3’. En ciertas realizaciones, el hueco comprende cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece o catorce monómeros. En ciertas realizaciones, los monómeros del hueco son desoxirribonucleótidos no modificados.
En ciertas realizaciones, los monómeros del hueco son ribonucleótidos no modificados. En ciertas realizaciones, las modificaciones del hueco (si las hubiera) tienen como resultado un compuesto antisentido que, cuando se une a su ácido nucleico diana, soporta la escisión por una RNasa, incluida, entre otras, la RNasa H.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 pueden tener una cualquiera o más propiedades o características de los compuestos antisentido cortos en general descritos en el presente documento. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 tienen un motivo (ala-hueco desoxi-ala) seleccionado de 1-12-1, 1-1-10-2, 2-10-1-1, 3-10-3, 2-10-3, 2-10-2, 1-10-1,1-10-2, 3-8-3,2-82, 1-8-1,3-6-3 o 1-6-1, más preferentemente 1-10-1, 2-10-2,3-10-3 y 1-9-2.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 tienen enlaces monoméricos. En ciertas de dichas realizaciones, dichos enlaces son todos enlaces fosforotioato. En ciertas realizaciones, los enlaces son todos enlaces fosfodiéster. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 tienen esqueletos mixtos.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 tienen una longitud de 8 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 tienen una longitud de 9 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 tienen una longitud de 10 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 tienen una longitud de 11 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 tienen una longitud de monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 tienen una longitud de 13 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 tienen una longitud de 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 tienen una longitud de 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 tienen una longitud de 16 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 comprenden de 9 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 comprenden de 10 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 comprenden de 12 a 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 comprenden de 12 a 14 nucleótidos o nucleósidos.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos de modulación de la expresión de PCSK9. En ciertas realizaciones, dichos procedimientos comprenden el uso de uno o más compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9, en el que el compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PCSK9 tiene una
5 longitud de aproximadamente 8 a aproximadamente 16, preferentemente de 9 a 15, más preferentemente de 9 a 14, más preferentemente de 10 a 14 monómeros (es decir, de aproximadamente 8 a aproximadamente 16 monómeros unidos). Un experto en la técnica apreciará que esto comprende procedimientos de modulación de la expresión de ApoB usando uno o más compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 de de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16 monómeros.
En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de PCSK9 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PCSK9 que tiene una longitud de 8 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de PCSK9 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PCSK9 que tiene una longitud de 9 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de PCSK9 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PCSK9 que tiene una 15 longitud de 10 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de PCSK9 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PCSK9 que tiene una longitud de 11 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de PCSK9 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PCSK9 que tiene una longitud de 12 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de PCSK9 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PCSK9 que tiene una longitud de 13 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de PCSK9 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PCSK9 que tiene una longitud de 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de PCSK9 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PCSK9 que tiene una longitud de 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de PCSK9 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto
25 dirigido a un ácido nucleico de PCSK9 que tiene una longitud de 16 monómeros.
En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de PCSK9 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PCSK9 que comprende de 9 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de PCSK9 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PCSK9 que comprende de 10 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de PCSK9 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PCSK9 que comprende de 12 a 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de PCSK9 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PCSK9 que comprende de 12 o 14 nucleótidos o nucleósidos.
4. Enzima superóxido dismutasa 1 (SOD1)
35 Las enzimas conocidas como superóxido dismutasas (SOD) proporcionan defensa contra el daño oxidativo de las biomoléculas catalizando la dismutación de superóxido en peróxido de hidrógeno (H2O2) (Fridovich, Annu. Rev. Biochem., 1995, 64, 97-112). Existen dos clases principales de superóxido dismutasas. Una consiste en una un grupo de enzimas con sitios activos que contienen cobre y cinc, mientras que la otra clase tiene manganeso o hierro en el sitio activo (Fridovich, Annu. Rev. Biochem., 1995, 64, 97-112).
Las mutaciones en el gen de la superóxido dismutasa I están asociadas con una forma de herencia dominante de esclerosis lateral amiotrófica (ELA, también conocida como enfermedad de Lou Gehrig), un trastorno que se caracteriza por una degeneración selectiva de las neuronas motoras superiores e inferiores (Cleveland y Liu, Nat. Med., 2000, 6, 1320-1321). Los efectos perjudiciales de varias mutaciones en la superóxido dismutasa I están, muy probablemente, mediadas por una ganancia de función tóxica en lugar de por una pérdida de actividad de la superóxido dismutasa I, ya
45 que la completa ausencia de superóxido dismutasa I en ratones ni disminuye la vida no provoca la enfermedad sintomática (Al-Chalabi y Leigh, Curr. Opin. Neurol., 2000, 13, 397-405; Alisky and Davidson, Hum. Gene Ther., 2000, 11, 2315-2329).
Se han identificado más de 100 mutaciones del gen de la SDO1 humana y, en conjunto, representan aproximadamente el 20% de los casos de esclerosis lateral amiotrófica familiar (ELA). Algunas mutaciones, tales como la mutación A4V más habitual en EE.UU., son muy letales y tienen como resultado una supervivencia de sólo nueve meses desde el inicio de los síntomas de la enfermedad- Otras mutaciones de la SOD1 se manifiestan en un curso más lento de la enfermedad.
Definiciones
“SOD1” quiere decir el producto génico o proteína cuya expresión se va a modular mediante la administración de un compuesto antisentido corto.
“Ácido nucleico de SOD1” significa cualquier ácido nucleico que codifica la SOD1. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, un ácido nucleico de SOD1 incluye, sin limitaciones, una secuencia de ADN que codifica SOD1, una secuencia de ARN transcrita a partir de ADN que codifica SOD1, y una secuencia de ARNm que codifica la SOD1.
“ARNm de SOD1” significa un ARNm que codifica la SOD1.
Indicaciones terapéuticas de SOD1
Se ha descubierto que la inhibición antisentido de la superóxido dismutasa 1 (SOD1) en un modelo animal de ELA familiar reduce los niveles de ARNm y de proteína de SOD1, y además tiene como resultado una ralentización de la progresión de la enfermedad y, un hecho importante, un incremento del tiempo de supervivencia. De acuerdo con esto, en ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para ralentizar la progresión de la enfermedad en un individuo que sufre ELA familiar, administrando a dicho individuo un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SOD1. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a SOD1 se liberan directamente en el líquido cefalorraquídeo del individuo. En ciertas de dichas realizaciones, los procedimientos comprenden además aumentar el tiempo de supervivencia de un individuo que sufre ELA familiar. La ralentización de la progresión de la enfermedad se indica por una mejora en uno o más indicadores de la progresión de la enfermedad ELA, que incluye, entre otras, la escala revisada de puntuación funcional de ELA, pruebas de función pulmonar y mediciones de la fuerza muscular.
Terapias de combinación con SOD1
En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SOD1 se administran conjuntamente con uno más agentes farmacéuticos distintos. En ciertas realizaciones, dichos uno más agentes farmacéuticos distintos están diseñados para tratar la misma enfermedad o afección que las una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación. En ciertas realizaciones, dichos uno más agentes farmacéuticos distintos están diseñados para tratar otra enfermedad o afección distinta a la de las una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación. En ciertas realizaciones, dichos uno más agentes farmacéuticos distintos están diseñados para tratar un efecto indeseado de las una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación se administran conjuntamente con otro agente farmacéutico para tratar un efecto indeseado de dicho otro agente farmacéutico. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación y uno o más agentes farmacéuticos distintos se administran al mismo tiempo. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación y uno o más agentes farmacéuticos distintos se administran en momentos diferentes. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación y uno o más agentes farmacéuticos distintos preparan juntos en una única formulación. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación y uno o más agentes farmacéuticos distintos se preparan por separado.
En ciertas realizaciones, un agente farmacéutico coadministrado es un ácido nicotínico. En ciertas de dichas realizaciones, el ácido nicotínico se selecciona de ácido nicotínico de liberación inmediata, ácido nicotínico de liberación extendida y ácido nicotínico de liberación sostenida.
En ciertas realizaciones, un agente farmacéutico coadministrado es un ácido fíbrico. En ciertas de dichas realizaciones, el ácido fíbrico se selecciona de gemfibrozilo, fenofibrato, clofibrato, bezafibrato y ciprofibrato.
Otros ejemplos de agentes farmacéuticos que se pueden administrar de forma conjunta con una composición farmacéutica que comprende un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de ApoB incluyen, entre otros, corticosteroides, incluidos, entre otros, prednisona; inmunoglobulinas, incluidas, entre otras inmunoglobulina intravenosa (IgIV); analgésicos (p. ej., acetaminófeno); agentes antiinflamatorios, incluidos, entre otros, fármacos antiinflamatorios no esteroideos (p. ej., ibuprofeno, inhibidores de la COX-1 e inhibidores de la COX-2); salicilatos; antibióticos; antivirales; agentes antifúngicos; agentes antidiabéticos (p. ej., biguanidas, inhibidores de la glucosidasa, insulinas, sulfonilureas y tiazolidendionas); modificadores adrenérgicos; diuréticos; hormonas (p. ej., esteroides anabólicos, andrógenos, estrógenos, calcitonina, progestina, somatostatina y hormonas tiroideas); inmunomoduladores; relajantes musculares; antihistamínicos, agentes antiosteoporosis (p. ej., bisfosfonatos, calcitonina y estrógenos); prostaglandinas, agentes antineoplásicos; agentes psicoterapéuticos; sedantes; productos de roble venenoso atlántico o zumaque veneoso; anticuerpos; y vacunas.
Ciertos compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos están dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 que tiene la secuencia de número de registro en GENBANK® NM_X02317.1, incorporada en el presente documento como SEC ID Nº
5. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 5 es al menos un 90% complementario a la SEC ID Nº 5. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 5 es al menos un 95% complementario a la SEC ID Nº 5. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 5 ES 100% complementario a la SEC ID Nº 5. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 5 comprende una secuencia nucleotídica seleccionada de las secuencias nucleotídicas indicadas en la Tabla 8 o la Tabla 9.
La secuencia nucleotídica indicada en cada SEC ID Nº en las Tablas 8 y 9 es independiente de cualquier modificación de
5 un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica. Como tales, los compuestos antisentido cortos definidos por una SEC ID Nº pueden comprender, de forma independiente, una o más modificaciones en un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica. Los compuestos antisentido cortos descritos por el Número Isis (Nº Isis) indican una combinación de secuencia de bases nucleotídicas y una o más modificaciones en un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica.
10 La Tablas 8 ilustra ejemplos de compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 5. La Tabla 8 ilustra compuestos antisentido cortos que son 100% complementarios a la SEC ID Nº 5. La columna denominada "motivo gápmero" indica el motivo ala-hueco-ala de cada compuesto antisentido corto. El segmento hueco comprende 2'-desoxinucleótidos y cada nucleótido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado en 2'. El azúcar modificado en 2' concreto también está indicado en la columna “motivo gápmero”. Por ejemplo, ‘2-10-2 MOE’ significa un motivo gápmero 2-10-2, en el que
15 un segmento de hueco de diez 2’-desoxinucleótidos está flanqueado por segmentos ala de dos nucleótidos, en los que los nucleótidos de los segmentos ala son nucleótidos 2’-MOE. Los enlaces internucleosídicos son fosforotioato. Los compuestos antisentido cortos comprenden 5-metil-citidina en lugar de citosina no modificada, a menos que “citosina no modificada” esté en la lista en la columna del motivo gápmero, en cuyo caso las citosinas indicadas son citosinas no modificadas. Por ejemplo, “5-mC sólo en hueco” indica que el segmento de hueco tiene 5-metilcitosinas, mientras que los
20 segmentos ala tienen citosinas no modificadas.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 pueden tener una cualquiera o más propiedades o características de los compuestos antisentido cortos en general descritos en el presente documento. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 tienen un motivo (ala-hueco desoxi-ala) seleccionado de 1-12-1, 1-1-10-2,2-10-1-1, 3-10-3, 2-10-3, 2-10-2, 1-10-1,1-10-2, 3-8-3, 2-8
25 2, 1-8-1, 3-6-3 o 1-6-1, más preferentemente 1-10-1, 2-10-2, 3-10-3 y 1-9-2.
Tabla 8: Compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 5
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
387541
85 100 GTCGCCCTTCAGCACG 3-10-3 MOE 406
387540
86 99 TCGCCCTTCAGCAC 2-10-2 MOE 407
387539
87 98 CGCCCTTCAGCA 1-10-1 MOE 408
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 85-100 de la SEC ID Nº 5. En ciertas de dichas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a los nucleótidos 85-100 de la SEC ID Nº 5 comprenden una secuencia de
30 nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 406, 407 o 408. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 85-100 de la SEC ID Nº 5 se selecciona del Nº Isis 387541, 387540 o 387539.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 tienen una longitud de 8 a 16, preferentemente de 9 a 15, más preferentemente de 9 a 14, más preferentemente de 10 a 14 nucleótidos de longitud. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 tienen una
35 longitud de 9 a 14 nucleótidos. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 tienen una longitud de 10 a 14 nucleótidos. En ciertas realizaciones, dichos compuestos antisentido cortos son oligonucleotídicos antisentido cortos.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 son gápmeros cortos. En ciertas de dichas realizaciones, los gápmeros cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 comprenden al menos una 40 modificación de alta afinidad en una o más alas del compuesto. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 comprenden de 1 a 3 modificaciones de alta afinidad en cada ala. En ciertas de dichas realizaciones, los nucleósidos o nucleótidos del ala comprenden una modificación en 2’. En ciertas realizaciones, los monómeros del ala son BNA. En ciertas de dichas realizaciones, los monómeros del ala se seleccionan de α-L-metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA, ß-D-metilenoxi(4’-CH2-O-2’) BNA, etilenoxi (4’-(CH2)2-O-2’)BNA, aminooxi(4’-CH2-O
45 N(R)-2’) BNA y oxiamino (4’-CH2-N(R)-O-2’) BNA. En ciertas realizaciones, los monómeros de un ala comprenden un sustituyente en la posición 2’ seleccionado de alilo, amino, azido, tio, O-alilo, O-alquilo C1-C10, -OCF3 , O-(CH2)2-O-CH3, 2’-O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), y O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), en las que cada Rm y Rn es, de forma independiente, H o alquilo C1-C10 sustituido o insustituido. En ciertas realizaciones, los monómeros de un ala son nucleótidos 2’MOE.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 comprenden un hueco entre el ala en 5’ y el ala en 3’. En ciertas realizaciones, el hueco comprende cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece o catorce monómeros. En ciertas realizaciones, los monómeros del hueco son desoxirribonucleótidos no modificados. En ciertas realizaciones, los monómeros del hueco son ribonucleótidos no modificados. En ciertas realizaciones, las modificaciones del hueco (si las hubiera) tienen como resultado un compuesto antisentido que, cuando se une a su ácido nucleico diana, soporta la escisión por una RNasa, incluida, entre otras, la RNasa H.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 tienen enlaces monoméricos. En ciertas de dichas realizaciones, dichos enlaces son todos enlaces fosforotioato. En ciertas realizaciones, los enlaces son todos enlaces fosfodiéster. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 tienen esqueletos mixtos.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 tienen una longitud de 8 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 tienen una longitud de 9 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 tienen una longitud de 10 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 tienen una longitud de 11 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 tienen una longitud de monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 tienen una longitud de 13 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 tienen una longitud de 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 tienen una longitud de 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 tienen una longitud de 16 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 comprenden de 9 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 comprenden de 10 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 comprenden de 12 a 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 comprenden de 12 a 14 nucleótidos o nucleósidos.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos de modulación de la expresión de SOD1. En ciertas realizaciones, dichos procedimientos comprenden el uso de uno o más compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1, en el que el compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SOD1 tiene una longitud de aproximadamente 8 a aproximadamente 16, preferentemente de 9 a 15, de 9 a 14, de 10 a 14 monómeros (es decir, de aproximadamente 8 a aproximadamente 16 monómeros unidos). Un experto en la técnica apreciará que esto comprende procedimientos de modulación de la expresión de SOD1 usando uno o más compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de SOD1 de de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16 monómeros.
En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de SOD1 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SOD1 que tiene una longitud de 8 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de SOD1 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SOD1 que tiene una longitud de 9 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de SOD1 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SOD1 que tiene una longitud de 10 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de SOD1 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SOD1 que tiene una longitud de 11 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de SOD1 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SOD1 que tiene una longitud de 12 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de SOD1 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SOD1 que tiene una longitud de 13 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de SOD1 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SOD1 que tiene una longitud de 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de SOD1 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SOD1 que tiene una longitud de 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de SOD1 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SOD1 que tiene una longitud de 16 monómeros.
En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de SOD1 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SOD1 que comprende de 9 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de SOD1 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SOD1 que comprende de 10 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de SOD1 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SOD1 que comprende de 12 a 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de SOD1 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de SOD1 que comprende de 12 o 14 nucleótidos o nucleósidos.
5. CRP
La CRP (también conocida como proteína C reactiva y PTX1) es un reactante de fase aguda humano esencial producido en el hígado en respuesta a diversas citocinas inflamatorias. La proteína, identificada por primera vez en 1930, está muy conservada y se considera que es un indicador precoz de afecciones infecciosas o inflamatorias. Los niveles de CRP en plasma se multiplican por 1000 en respuesta a infección, isquemia, traumatismo, quemaduras y afecciones inflamatorias. En ensayos clínicos en los que los pacientes reciben terapia hipolipemiante, tal como terapia con estatinas, se ha demostrado que los pacientes con reducciones en los niveles de LDL-C y CRP tienen menor riesgo de sufrir acontecimientos coronarios futuros respecto a pacientes que experimentan sólo reducciones en los niveles de LDL-C.
Definiciones
“CRP” quiere decir el producto génico o proteína cuya expresión se va a modular mediante un compuesto antisentido corto.
“Ácido nucleico de CRP” significa cualquier ácido nucleico que codifica la CRP. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, un ácido nucleico de CRP incluye, sin limitaciones, una secuencia de ADN que codifica CRP, una secuencia de ARN transcrita a partir de ADN que codifica CRP, y una secuencia de ARNm que codifica la CRP.
“ARNm de CRP” significa un ARNm que codifica la CRP.
Indicaciones terapéuticas de CRP
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos de modular la expresión de CRP en un individuo, que comprende administrar un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP. En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos de tratar a un individuo, que comprende administrar una o más composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP. En ciertas realizaciones, el individuo tiene hipercolesterolemia, hipercolesterolemia no familiar, hipercolesterolemia familiar, hipercolesterolemia familiar heterocigótica, hipercolesterolemia familiar homocigótica, dislipidemia mixta, aterosclerosis, un riesgo de desarrollar aterosclerosis, cardiopatía coronaria, antecedentes de cardiopatía coronaria, cardiopatía coronaria de inicio precoz, uno o más factores de riesgo de cardiopatía coronaria. En ciertas realizaciones, el individuo tiene síndrome coronario agudo, lesión vascular, oclusión arterial, angina inestable, enfermedad vascular posperiférica, infarto de miocardio (IM), trombosis, trombosis venosa profunda, nefropatía terminal (NPT), insuficiencia renal crónica, activación del complemento, insuficiencia cardíaca congestiva o vasculitis sistémica. En ciertas realizaciones, el individuo ha sufrido un ictus.
En ciertas realizaciones, el individuo ha sido sometido a un procedimiento seleccionado de colocación programada de endoprótesis, angioplastia, angioplastia transluminal percutánea (PTCA), transplante cardíaca diálisis renal o derivación cardiopulmonar.
En ciertas realizaciones, el individuo tiene una enfermedad inflamatoria. En ciertas de dichas realizaciones, la enfermedad inflamatoria se selecciona de enfermedad intestinal inflamatoria, colitis ulcerosa, artritis reumatoide u osteoartritis.
Las guías para terapias hipolipemiantes se establecieron en el 2001, en el Panel de Tratamiento de adultos III (ATP III) del Programa Nacional educativo sobre colesterol de EE.UU. (NCEP) y se actualizaron en 2004 (Grundy y col., Circulation, 2004, 110, 227-239). Las guías incluyen obtener un perfil lipoproteico completo, normalmente después de ayunar durante de 9 a 12 horas, para la determinación de los niveles de LDL-C, colesterol total y HDL-C. De acuerdo con las guías más recientemente establecidas, los niveles de LDL-C de 130-159 mg/dl, 160-189 mg/dl y mayores o iguales a 190 mg/dl se consideran en el límite alto, alto y muy alto, respectivamente. Niveles de colesterol de 200-239 y mayores o iguales a 240 mg/dl se consideran límite alto y altos, respectivamente. Niveles de HCL-C inferiores a 40 mg/dl se considera bajos.
En ciertas realizaciones, se han identificado que los individuos necesitan terapia hipolipemiante. En ciertas de dichas realizaciones, se ha identificado que los individuos necesitan terapia hipolipemiante de acuerdo con las guías establecidas en 2001 por Panel de Tratamiento de adultos III (ATP III) del Programa Nacional educativo sobre colesterol de EE.UU. (NCEP) y actualizadas en 2004 (Grundy y col., Circulation, 2004, 110, 227-239). En ciertas de dichas realizaciones, el individuo que necesita terapia hipolipemiante tiene un nivel de LDL-C superior a 190 mg/dl. En ciertas de dichas realizaciones, el individuo que necesita terapia hipolipemiante tiene un nivel de LDL-C superior a 160 mg/dl. En ciertas de dichas realizaciones, el individuo que necesita terapia hipolipemiante tiene un nivel de LDL-C superior a 130 mg/dl. En ciertas de dichas realizaciones, el individuo que necesita terapia hipolipemiante tiene un nivel de LDL-C superior a 100 mg/dl. En ciertas de dichas realizaciones, el individuo que necesita terapia hipolipemiante debe mantener el nivel de LDLC por debajo de 160 mg/dl. En ciertas de dichas realizaciones, el individuo que necesita terapia hipolipemiante debe mantener el nivel de LDL-C por debajo de 130 mg/dl. En ciertas de dichas realizaciones, el individuo que necesita terapia hipolipemiante debe mantener el nivel de LDL-C por debajo de 100 mg/dl. En ciertas de dichas realizaciones, el individuo debe mantener el nivel de LDL-C por debajo de 70 mg/dl.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir la CRP en un individuo. En ciertas realizaciones, la reducción de CRP es de al menos un 10%, de al menos un 15%, de al menos un 20%, de al menos un 25%, de al menos un 30%, de al menos un 35%, de al menos un 40%, de al menos un 45%, de al menos un 50%, de al menos un 55%, de al menos un 60%, de al menos un 65%, de al menos un 70%, de al menos un 75%, de al menos un 80%, de al menos un 85%, de al menos un 90%, de al menos un 95% y de al menos un 100%.
En ciertas realizaciones, los procedimientos divulgados en el presente documento no reducen los niveles de HDL-C. En ciertas realizaciones, los procedimientos divulgados en el presente documento no dan lugar a la acumulación de lípidos en el hígado. En ciertas realizaciones, los procedimientos divulgados en el presente documento no `producen esteatosis hepática.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir la concentración de CRP en un sujeto al tiempo que reducen los efectos secundarios asociados con el tratamiento. En ciertas realizaciones, un efecto secundario es toxicidad hepática. En ciertas realizaciones, un efecto secundario es una función hepática anómala. En ciertas realizaciones, un efecto secundario es elevación de los niveles de alanina aminotransferasa (ALT). En ciertas realizaciones, un efecto secundario es elevación de los niveles de aspartato aminotransferasa (AST).
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir la concentración de CRP en un sujeto que no alcanza los niveles diana de LDL-C como resultado de la terapia hipolipemiante. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP es el único agente farmacéutico administrado al sujeto. En ciertas de dichas realizaciones, el sujeto no ha cumplido la terapia hipolipemiante recomendada. En ciertas de dichas realizaciones, una composición farmacéutica de la divulgación se administra junto con una terapia hipolipemiante adicional diferente. En ciertas de dichas realizaciones, una terapia hipolipemiante adicional es aféresis de LDL. En ciertas de dichas realizaciones, una terapia hipolipemiante adicional es una estatina. En ciertas de dichas realizaciones, una terapia hipolipemiante adicional es ezetimiba.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para disminuir la concentración de CRP en un sujeto intolerante a estatinas. En ciertas de dichas realizaciones, el sujeto presenta incrementos de la concentración de creatina quinasa como resultado de la administración de estatinas. En ciertas de dichas realizaciones, el sujeto presenta anomalías en la función hepática como resultado de la administración de estatinas. En ciertas de dichas realizaciones, el sujeto presenta dolores musculares como resultado de la administración de estatinas. En ciertas de dichas realizaciones, el sujeto tiene efectos secundarios sobre el sistema nervioso central como resultado de la administración de estatinas. En ciertas realizaciones, el sujeto no ha cumplido la terapia de estatinas recomendada.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir el riesgo de cardiopatía coronaria en un sujeto. En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para ralentizar la progresión de la aterosclerosis en un sujeto. En ciertas de dichas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para detener la progresión de la aterosclerosis en un sujeto. En ciertas de dichas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos para reducir el tamaño y/o la prevalencia de las placas ateroscleróticas en un sujeto. En ciertas realizaciones, los procedimientos reducen el riesgo de un sujeto de desarrollar aterosclerosis.
En ciertas realizaciones, los procedimientos mejoran el resultado cardiovascular en un sujeto. En ciertas de dichas realizaciones, el resultado cardiovascular mejorado es la reducción del riesgo de desarrollar cardiopatía coronaria. En ciertas de dichas realizaciones, el resultado cardiovascular mejorado es una reducción en la aparición de uno o más acontecimientos cardiovasculares importantes, que incluyen, entre otros, muerte, infarto de miocardio, reinfarto, ictus, shock cardiogénico, edema pulmonar, parada cardíaca y disrritmia auricular. En ciertas de dichas realizaciones, el resultado cardiovascular mejorado se pone de manifiesto por la mejora del espesor de la media íntima de la carótida. En ciertas de dichas realizaciones, la mejora del espesor de la media íntima de la carótida es una disminución del espesor. En ciertas de dichas realizaciones, la mejora del espesor de la media íntima de la carótida es una prevención de un incremento del espesor de la media íntima.
En ciertas de dichas realizaciones, una composición farmacéutica que comprende un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP es para usar en terapia. En ciertas realizaciones, la terapia es la reducción de CRP en un individuo. En ciertas realizaciones, la terapia es el tratamiento de hipercolesterolemia, hipercolesterolemia no familiar, hipercolesterolemia familiar, hipercolesterolemia familiar heterocigótica, hipercolesterolemia familiar homocigótica, dislipidemia mixta, aterosclerosis, un riesgo de desarrollar aterosclerosis, cardiopatía coronaria, antecedentes de cardiopatía coronaria, cardiopatía coronaria de inicio precoz. En realizaciones adicionales, la terapia es la reducción del riesgo de CPC. En ciertas, la terapia es la prevención de la aterosclerosis. En ciertas realizaciones, la terapia es la prevención de cardiopatía coronaria. En ciertas realizaciones, la terapia es el tratamiento del síndrome coronario agudo, insuficiencia renal crónica, lesión vascular, oclusión arterial, aterotrombosis, angina inestable, enfermedad vascular posperiférica, postinfarto de miocardio (IM), trombosis, trombosis venosa profunda, nefropatía terminal (NPT), activación del complemento, insuficiencia cardíaca congestiva o vasculitis sistémica. En ciertas realizaciones, la terapia es el tratamiento de un individuo ha sido sometido a un procedimiento seleccionado de colocación programada de endoprótesis, angioplastia, angioplastia transluminal percutánea (PTCA), transplante cardíaca diálisis renal o derivación cardiopulmonar.
En ciertas realizaciones, la terapia es el tratamiento de un trastorno inflamatorio.
En ciertas realizaciones, una composición farmacéutica que comprende un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP se usa para la preparación de un medicamento para reducir los niveles de CRP en un individuo. En ciertas realizaciones, una composición farmacéutica que comprende un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP se usa para la preparación de un medicamento para reducir el riesgo de cardiopatía coronaria. En ciertas realizaciones, el compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP se usa para la preparación de un medicamento para el tratamiento de hipercolesterolemia, hipercolesterolemia no familiar, hipercolesterolemia familiar, hipercolesterolemia familiar heterocigótica, hipercolesterolemia familiar homocigótica, dislipidemia mixta, aterosclerosis, un riesgo de desarrollar aterosclerosis, cardiopatía coronaria, antecedentes de cardiopatía coronaria, cardiopatía coronaria de inicio precoz, uno o más factores de riesgo de cardiopatía coronaria.
En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP se usa para la preparación de un medicamento para el tratamiento del síndrome coronario agudo, insuficiencia renal crónica, lesión vascular, oclusión arterial, aterotrombosis, angina inestable, enfermedad vascular posperiférica, postinfarto de miocardio (IM), trombosis, trombosis venosa profunda, nefropatía terminal (NPT), activación del complemento, insuficiencia cardíaca congestiva o vasculitis sistémica. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP se usa para la preparación de un medicamento para el tratamiento de un individuo que ha sufrido un ictus.
En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP se usa para la preparación de un medicamento para el tratamiento de un individuo que ha sido sometido a un procedimiento seleccionado de colocación programada de endoprótesis, angioplastia, angioplastia transluminal percutánea (PTCA), transplante cardíaca diálisis renal o derivación cardiopulmonar.
En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP se usa para la preparación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP se usa para la preparación de un medicamento para el tratamiento de la enfermedad intestinal inflamatoria, colitis ulcerosa, artritis reumatoide u osteoartritis.
Terapias de combinación con CRP
En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP se administran conjuntamente con uno más agentes farmacéuticos distintos. En ciertas de dichas realizaciones, los uno más agentes farmacéuticos son agentes hipolipemiantes. En ciertas realizaciones, dichos uno más agentes farmacéuticos distintos están diseñados para tratar la misma enfermedad o afección distinta a la de las una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación. En ciertas realizaciones, dichos uno más agentes farmacéuticos distintos están diseñados para tratar otra enfermedad o afección distinta a la de las una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación. En ciertas realizaciones, dichos uno más agentes farmacéuticos distintos están diseñados para tratar un efecto indeseado de las una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación se administran conjuntamente con otro agente farmacéutico para tratar un efecto indeseado de dicho otro agente farmacéutico. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación y uno o más agentes farmacéuticos distintos se administran al mismo tiempo. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación y uno o más agentes farmacéuticos distintos se administran en momentos diferentes. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación y uno o más agentes farmacéuticos distintos preparan juntos en una única formulación. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación y uno o más agentes farmacéuticos distintos se preparan por separado.
En ciertas realizaciones, los agentes farmacéuticos que se pueden administrar de forma conjunta con una composición farmacéutica que comprende un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP incluyen agentes hipolipemiantes. En ciertas de dichas realizaciones, los agentes farmacéuticos que se pueden administrar de forma conjunta con una composición farmacéutica de la presente divulgación incluyen, entre otros, atorvastatina, simvastatina, rosuvastatina y ezetimiba. En ciertas de dichas realizaciones, el agente hipolipemiante se administra antes de la administración de una composición farmacéutica de la presente divulgación. En ciertas de dichas realizaciones, el agente hipolipemiante se administra después de la administración de una composición farmacéutica de la presente divulgación. En ciertas de dichas realizaciones, el agente hipolipemiante se administra al mismo tiempo que la composición farmacéutica de la presente divulgación. En ciertas de dichas realizaciones, la dosis de un agente hipolipemiante coadministrado es la misma que la dosis que se administraría si el agente hipolipemiante se administrara solo. En ciertas de dichas realizaciones, la dosis de un agente hipolipemiante coadministrado es menor que la dosis que se administraría si el agente hipolipemiante se administrara solo. En ciertas de dichas realizaciones, la dosis de un agente hipolipemiante coadministrado es mayor que la dosis que se administraría si el agente hipolipemiante se administrara solo.
En ciertas realizaciones, un agente hipolipemiante coadministrado es un inhibidor de la HMG-CoA reductasa. En ciertas de dichas realizaciones, el inhibidor de la HMG-CoA reductasa es una estatina. En ciertas de dichas realizaciones, la estatina se selecciona de atorvastatina, simvastatina, pravastatina, fluvastatina y rosuvastatina.
En ciertas realizaciones, un agente hipolipemiante coadministrado es ISIS 301012.
En ciertas realizaciones, un agente hipolipemiante coadministrado es un inhibidor de la absorción de colesterol. En ciertas de dichas realizaciones, el inhibidor de la absorción de colesterol es ezetimiba.
En ciertas realizaciones, un agente hipolipemiante coadministrado es un inhibidor de la HMG-CoA reductasa formulado conjuntamente con un inhibidor de la absorción de colesterol. En ciertas de dichas realizaciones, el agente hipolipemiante formulado conjuntamente es ezetimiba/simvastatina.
En ciertas realizaciones, un agente hipolipemiante coadministrado es un inhibidor de la proteína de transferencia de triglicéridos microsomal.
En ciertas realizaciones, un agente farmacéutico coadministrado es un secuestrante de ácidos biliares. En ciertas de dichas realizaciones, el secuestrante de ácidos biliares se selecciona de colestiramina, colestipol y colesevelam.
En ciertas realizaciones, un agente farmacéutico coadministrado es un ácido nicotínico. En ciertas de dichas realizaciones, el ácido nicotínico se selecciona de ácido nicotínico de liberación inmediata, ácido nicotínico de liberación extendida y ácido nicotínico de liberación sostenida.
En ciertas realizaciones, un agente farmacéutico coadministrado es un ácido fíbrico. En ciertas de dichas realizaciones, el ácido fíbrico se selecciona de gemfibrozilo, fenofibrato, clofibrato, bezafibrato y ciprofibrato.
Otros ejemplos de agentes farmacéuticos que se pueden administrar de forma conjunta con una composición farmacéutica que comprende un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP incluyen, entre otros, corticosteroides, incluidos, entre otros, prednisona; inmunoglobulinas, incluidas, entre otras inmunoglobulina intravenosa (IgIV); analgésicos (p. ej., acetaminófeno); agentes antiinflamatorios, incluidos, entre otros, fármacos antiinflamatorios no esteroideos (p. ej., ibuprofeno, inhibidores de la COX-1 e inhibidores de la COX-2); salicilatos; antibióticos; antivirales; agentes antifúngicos; agentes antidiabéticos (p. ej., biguanidas, inhibidores de la glucosidasa, insulinas, sulfonilureas y tiazolidendionas); modificadores adrenérgicos; diuréticos; hormonas (p. ej., esteroides anabólicos, andrógenos, estrógenos, calcitonina, progestina, somatostatina y hormonas tiroideas); inmunomoduladores; relajantes musculares; antihistamínicos, agentes antiosteoporosis (p. ej., bisfosfonatos, calcitonina y estrógenos); prostaglandinas, agentes antineoplásicos; agentes psicoterapéuticos; sedantes; productos de roble venenoso atlántico o zumaque veneoso; anticuerpos; y vacunas.
En ciertas de dichas realizaciones, una composición farmacéutica que comprende un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP se puede administrar junto con una terapia hipolipemiante. En ciertas de dichas realizaciones, una terapia hipolipemiante es un cambio terapéutico del estilo de vida. En ciertas de dichas realizaciones, una terapia hipolipemiante es aféresis de LDL.
Ciertos compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos están dirigidos a un ácido nucleico de CRP que tiene la secuencia de número de registro en GENBANK® NM_000567.1, incorporada en el presente documento como SEC ID Nº
6. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 6 es al menos un 90% complementario a la SEC ID Nº 6. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 6 es al menos un 95% complementario a la SEC ID Nº 6. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 6 ES 100% complementario a la SEC ID Nº 6. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 6 comprende una secuencia nucleotídica seleccionada de las secuencias nucleotídicas indicadas en la Tabla 9.
La secuencia nucleotídica indicada en cada SEC ID Nº en la Tabla 9 es independiente de cualquier modificación de un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica. Como tales, los compuestos antisentido cortos definidos por una SEC ID Nº pueden comprender, de forma independiente, una o más modificaciones en un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica. Los compuestos antisentido cortos descritos por el Número Isis (Nº Isis) indican una combinación de secuencia de bases nucleotídicas y una o más modificaciones en un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica.
La Tablas 9 ilustra ejemplos de compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 6. La Tabla 9 ilustra compuestos antisentido cortos que son 100% complementarios a la SEC ID Nº 6. La columna denominada "motivo gápmero" indica el motivo ala-hueco-ala de cada compuesto antisentido corto. El segmento hueco comprende 2'-desoxinucleótidos y cada nucleótido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado en 2'. El azúcar modificado en 2' concreto también está indicado en la columna “motivo gápmero”. Por ejemplo, ‘2-10-2 MOE’ significa un motivo gápmero 2-10-2, en el que un segmento de hueco de diez 2’-desoxinucleótidos está flanqueado por segmentos ala de dos nucleótidos, en los que los nucleótidos de los segmentos ala son nucleótidos 2’-MOE. Los enlaces internucleosídicos son fosforotioato. Los compuestos antisentido cortos comprenden 5-metil-citidina en lugar de citosina no modificada, a menos que “citosina no modificada” esté en la lista en la columna del motivo gápmero, en cuyo caso las citosinas indicadas son citosinas no modificadas. Por ejemplo, “5-mC sólo en hueco” indica que el segmento de hueco tiene 5-metilcitosinas, mientras que los
5 segmentos ala tienen citosinas no modificadas.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP pueden tener una cualquiera o más propiedades o características de los compuestos antisentido cortos en general descritos en el presente documento. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP tienen un motivo (ala-hueco desoxi-ala) seleccionado de 1-12-1, 1-1-10-2, 2-10-1-1, 3-10-3, 2-10-3, 2-10-2, 1-10-1,1-10-2, 3-8-3, 2
10 8-2, 1-8-1, 3-6-3 o 1-6-1, más preferentemente 1-10-1, 2-10-2, 3-10-3 y 1-9-2
Tabla 9: Compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 6
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
353506
1257 1272 ACTCTGGACCCAAACC 3-10-3 MOE 409
353507
1258 1271 CTCTGGACCCAAAC 2-10-2 MOE 410
353484
1305 1320 CCATTTCAGGAGACCT 3-10-3 MOE 411
353485
1306 1319 CATTTCAGGAGACC 2-10-2 MOE 412
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1305-1320 de NM_000567. En ciertas de dichas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a los nucleótidos 1305-1320 de NM_000567.1 comprenden una
15 secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 1305 o 1306. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 263-278 de NM_000567.1 se selecciona de los Nº Isis 353484 o 353485.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1257-1272 de NM_000567. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1257-1272 de NM_000567 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 1257 o 1258. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido
20 corto dirigido a los nucleótidos 428-483 de NM_000567.1 se selecciona de los Nº Isis 353506 o 353507.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP tienen una longitud de 8 a 16, preferentemente de 9 a 15, más preferentemente de 9 a 14, más preferentemente de 10 a 14 nucleótidos de longitud. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP tienen una longitud de 9 a 14 nucleótidos. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de
25 CRP tienen una longitud de 10 a 14 nucleótidos. En ciertas realizaciones, dichos compuestos antisentido cortos son oligonucleotídicos antisentido cortos.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP son gápmeros cortos. En ciertas de dichas realizaciones, los gápmeros cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP comprenden al menos una modificación de alta afinidad en una o más alas del compuesto. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido 30 cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP comprenden de 1 a 3 modificaciones de alta afinidad en cada ala. En ciertas de dichas realizaciones, los nucleósidos o nucleótidos del ala comprenden una modificación en 2’. En ciertas realizaciones, los monómeros del ala son BNA. En ciertas de dichas realizaciones, los monómeros del ala se seleccionan de -L-metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA, ß-D-metilenoxi(4’-CH2-O-2’) BNA, etilenoxi (4’-(CH2)2-O-2’)BNA, aminooxi(4’-CH2-ON(R)-2’) BNA y oxiamino (4’-CH2-N(R)-O-2’) BNA. En ciertas realizaciones, los monómeros de un ala comprenden un
35 sustituyente en la posición 2’ seleccionado de alilo, amino, azido, tio, O-alilo, O-alquilo C1-C10, -OCF3 , O-(CH2)2-O-CH3, 2’-O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), y O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), en las que cada Rm y Rn es, de forma independiente, H o alquilo C1-C10 sustituido o insustituido. En ciertas realizaciones, los monómeros de un ala son nucleótidos 2’MOE.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP comprenden un hueco entre el ala en 5’ y el ala en 3’. En ciertas realizaciones, el hueco comprende cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once,
40 doce, trece o catorce monómeros. En ciertas realizaciones, los monómeros del hueco son desoxirribonucleótidos no modificados. En ciertas realizaciones, los monómeros del hueco son ribonucleótidos no modificados. En ciertas realizaciones, las modificaciones del hueco (si las hubiera) tienen como resultado un compuesto antisentido que, cuando se une a su ácido nucleico diana, soporta la escisión por una RNasa, incluida, entre otras, la RNasa H.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP tienen enlaces 45 monoméricos. En ciertas de dichas realizaciones, dichos enlaces son todos enlaces fosforotioato. En ciertas realizaciones, los enlaces son todos enlaces fosfodiéster. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP tienen esqueletos mixtos.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP tienen una longitud de 8 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP tienen una longitud de 9 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP tienen una longitud de 10 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP tienen una longitud de 11 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP tienen una longitud de 11 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP tienen una longitud de 13 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP tienen una longitud de 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP tienen una longitud de 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP tienen una longitud de 16 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP comprenden de 9 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP comprenden de 10 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP comprenden de 12 a 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP comprenden de 12 a 14 nucleótidos o nucleósidos.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos de modulación de la expresión de CRP. En ciertas realizaciones, dichos procedimientos comprenden el uso de uno o más compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP, en el que el compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP tiene una longitud de aproximadamente 8 a aproximadamente 16, preferentemente de 9 a 15, más preferentemente de 9 a 14, más preferentemente de 10 a 14 monómeros (es decir, de aproximadamente 8 a aproximadamente 16 monómeros unidos). Un experto en la técnica apreciará que esto comprende procedimientos de modulación de la expresión de CRP usando uno o más compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de CRP de de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16 monómeros.
En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de CRP comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP que tiene una longitud de 8 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de CRP comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP que tiene una longitud de 9 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de CRP comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP que tiene una longitud de 10 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de CRP comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP que tiene una longitud de 11 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de CRP comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP que tiene una longitud de 12 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de CRP comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP que tiene una longitud de 13 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de CRP comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP que tiene una longitud de 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de CRP comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP que tiene una longitud de 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de CRP comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP que tiene una longitud de 16 monómeros.
En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de CRP comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP que comprende de 9 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de CRP comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP que comprende de 10 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de CRP comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP que comprende de 12 a 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de CRP comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de CRP que comprende de 12
o 14 nucleótidos o nucleósidos.
6. Receptor de glucocorticoide s(GCCR)
Los glucocorticoides estaban entre las primeras hormonas esteroides que se identificaron y son responsables de una multitud de funciones fisiológicas, incluidas la estimulación de la gluconeogénesis, la disminución de la captación de glucosa y la utilización en tejidos periféricos, el incremento del depósito de glucógeno, la supresión de las respuestas inmunitarias e inflamatorias, la inhibición de la síntesis de citocinas y la aceleración de varios acontecimientos del desarrollo. Los glucocorticoides son también especialmente importantes para combatir el estrés. La elevación de la síntesis y liberación de glucocorticoides inducidas por estrés conduce a, entre otras respuestas, incremento de la carga de trabajo ventricular, inhibición de los mediadores inflamatorios, inhibición de la síntesis de citocinas e incremento de la producción de glucosa (Karin, Cell, 1998, 93,487-490).
Los glucocorticoides naturales y sus derivados sintéticos ejercen su acción a través del receptor de glucocorticoides, un miembro citoplásmico expresado de forma ubicua de la superfamilia de receptores de hormonas nucleares. El receptor de glucocorticoides humanos también se conoce como subfamilia 3 del receptor nuclear, grupo C, miembro 1; NR3C1; GCCR; GCR; GRL; receptor de glucocorticoides, linfocito. El gen se localiza en el cromosoma humano 5q11-q13 y consiste en una 9 exones (Encio y Detera-Wadleigh, J Biol Chem, 1991, 266, 7182-7188; Gehring y col., Proc Natl Acad Sci USA, 1985, 82, 3751-3755). Existen múltiples formas de ARNm del receptor de glucocorticoides humanos: un ADNc que contiene los exones 1-8 y el exón 9a del receptor de glucocorticoides humano de 5,5 kb; un ADNc que contiene los exones 1-8 y el exón 9ß del receptor ß de glucocorticoides humano de 4,3 kb; y un ADNc que contiene los exones 1-8 y todo el exón 9, que incluye el exón 9a, el exón 9ß y la “región J”, que está flanqueada por los exones 9a y 9ß del receptor de glucocorticoides humano de 7,0 kb (Hollenberg y col., Nature, 1985, 318, 635-641; Oakley y col., J Biol Chem, 1996, 271, 9550-9559). El receptor de glucocorticoides humano es la isoforma predominante del receptor y la que exhibe actividad de unión a esteroides (Hollenberg y col., Nature, 1985, 318, 635-641). Adicionalmente, mediante el uso de tres promotores diferentes se pueden transcribir tres variantes diferentes del exón 1 y el corte y empalme alternativo de una variante del exón 1 puede dar como resultado tres versiones diferentes de este exón. Por tanto, el ARNm del receptor de glucocorticoides humano puede contener 5 variantes diferentes del exón 1 (Breslin y col., Mol Endocrinol, 2001, 15, 13811395).
El análisis de los patrones de expresión de las isoformas a y ß del ARNm del receptor de glucocorticoides humano revela que la isoforma es se expresa de forma más abundante. Ambas isoformas se expresan en tejidos y tipos celulares similares, incluidos pulmón, riñón, corazón, hígado, músculo esquelético, macrófagos, neutrófilos y células mononucleares de sangre periférica.
Sólo el receptor de glucocorticoides humano a se expresa en el colon. A nivel proteico, mientras que la isoforma a se detecta en todos los tejidos analizados, la isoforma ß es indetectable, lo que sugiere que, en condiciones fisiológicas, la vía del corte y empalme por defecto es una que produce la isoforma a (Pujols y col., Am J Physiol Cell Physiol, 2002, 283, C1324-1331). La isoforma ß del receptor de glucocorticoides no se une a un agonista de glucocorticoides ni tampoco a un antagonista. Además, la isoforma ß se localiza principalmente en el núcleo de células transfeccionadas, independiente de la estimulación hormonal. Cuando ambas isoformas se expresan en la misma célula, el receptor ß de glucocorticoides inhibe la estimulación mediada por el receptor  de glucocorticoides inducida por hormonas de la expresión génica, lo que sugiere que la isoforma ß funciona como inhibidor de la actividad del receptor a de glucocorticoides (Oakley y col., J Biol Chem, 1996, 271, 9550-9559). A menos que se indique lo contrario, el receptor de glucocorticoides humano descrito en el presente documento se define como el(los) producto(s) ubicuo(s) del gen localizado en el cromosoma 5q11-q13.
Las líneas celulares transfeccionadas con una hebra de ARN antisentido complementaria del receptor de glucocorticoides exhibían una reducción de los niveles de ARNm del receptor de glucocorticoides y una disminución de la respuesta al agonista del receptor de glucocorticoides dexametasona (Pepin and Barden, Mol Cell Biol, 1991, 11, 1647-1653). Ratones transgénicos portadores de un constructo génico del receptor de glucocorticoides antisentido se usaron para estudiar el efecto de retroalimentación de glucocorticoides sobre el eje hipotálamo-hipófiso-adrenal (Pepin y col., Nature, 1992, 355, 725-728). En otro estudio de ratones sometidos a ingeniería genética de forma similar, la ingesta y el gasto de energía, la actividad lipoproteína lipasa en el músculo vastus lateralis y la norepinefrina del tejido adiposo marrón y cardíaco fueron menores que en los animales control. Por el contrario, el contenido en grasa y la energía total del cuerpo fueron significativamente mayores que en los animales control. Estos resultados sugieren que un sistema de receptores de glucocorticoides defectuoso puede afectar al equilibrio energético mediante el incremento de la eficiencia energética y hacen hincapié en los efectos moduladores de los cambios en el eje hipotálamo-hipófiso-adrenal sobre la actividad de la lipoproteína lipasa muscular (Richard y col., Am J Physiol. 1993, 265, R146-150).
Los efectos conductuales de los antagonistas del receptor de glucocorticoides se han medido en modelos animales diseñados para evaluar la ansiedad, el aprendizaje y la memoria. La reducción de la expresión del receptor de glucocorticoides en ratas a las que se infundió por vía intracerebro-ventricular a largo plazo oligodesoxinucleótidos antisentido dirigidos al ARNm del receptor de glucocorticoides no interfirió en la navegación espacial en el test del laberinto de agua de Morris (Engelmann y col., Eur J Pharmacol, 1998, 361, 17-26). La infusión bilateral de un oligodesoxinucleótido antisentido dirigido al ARNm del receptor de glucocorticoides en la circunvolución dentada del hipocampo de rata redujo la inmovilidad de las ratas el en test de la natación forzada de Porsolt (Korte y col., Eur J Pharmacol. 1996, 301, 19-25).
Los glucocorticoides se usan con frecuencia por sus efectos inmunosupresores, antiinflamatorios e el tratamiento de enfermedades tales como alergias, asma, artritis reumatoide, SIDA, lupus eritematoso sistémico y osteoartrtis degenerativa. Se ha propuesto que la regulación negativa de la expresión génica, tal como la causada por la interacción del receptor de glucocorticoides con NF-kB, es, al menos en parte, responsable de la acción antiinflamatoria de los glucocorticoides in vivo. La interleucina 6, el factor de necrosis tumoral y la interleucina 1 son las tres citocinas responsables de la mayor parte de la estimulación del eje hipotálamo-hipófiso-adrenal (HPA) durante el estrés de la inflamación. El eje HPA y el sistema simpático y supramedular sistémico son los componentes periféricos del sistema de estrés, responsable de mantener la homeostasis basal y relacionada con el estrés. Los glucocorticoides, los productos finales del eje HPA, inhiben la producción de las tres citocinas inflamatorias y también inhiben sus efectos sobre tejidos diana, con la excepción de la interleucina 6, que actúa de forma sinérgica con los glucocorticoides para estimular la producción de reactantes de fase aguda. El tratamiento con glucocorticoides disminuye la actividad del eje HPA (Chrousos, N Engl J Med, 1995, 332, 1351-1362).
En algunos casos, los pacientes son resistentes al tratamiento con glucocorticoides. Una razón de esta resistencia a esteroides reside en las mutaciones o polimorfismos presentes en el gen del receptor de glucocorticoides. Se han comunicado un total de 15 mutaciones de sentido erróneo, tres sin sentido, tres de desplazamiento de marco, un sitio de corte y empalme y dos de corte y empalme alternativos, así como 16 polimorfismos, en el gen NR3C1 en asociación con la resistencia a glucocorticoides (Bray y Cotton, Hum Mutat, 2003, 21, 557-568). Estudios adicionales en seres humanos han sugerido una posible asociación entre la incidencia y la progresión del síndrome metabólico con los alelaos en el gen del receptor de glucocorticoides (GR) (Rosmond, Obes Res, 2002, 10, 1078-1086).
Otros casos de insensibilidad a los glucocorticoides se asocian con la alteración de la expresión de las isoformas del receptor de glucocorticoides. Un estudio de la expresión del ARNm de la isoforma ß del receptor de glucocorticoides humano en pacientes de colitis ulcerosa resistentes a glucocorticoides reveló que la presencia de este ARNm era significativamente mayor que en los pacientes sensibles a glucocorticoides, lo que sugiere que la expresión del ARNm de la isoforma ß del receptor de glucocorticoides humano en células mononucleares de sangre periférica puede servir como predictor de la respuesta a los glucocorticoides en pacientes de colitis ulcerosa (Honda y col., Gastroenterology, 2000, 118, 859-866). También se observa un incremento e la expresión del receptor ß de glucocorticoides en un número significativamente alto de asmáticos insensibles a glucocorticoides. Adicionalmente, las anomalías inducidas por citocinas en la capacidad de unión al ADN del receptor de glucocorticoides se encontraron en células mononucleares de sangre periférica de transfección de pacientes asmáticos insensibles a glucocorticoides y las células HepG2 con el gen del receptor ß de glucocorticoides tuvo como resultado una reducción significativa de la capacidad de unión al ADN del receptor  de glucocorticoides (Leung y col., J Exp Med, 1997, 186, 1567-1574). Los estudios de unión de dexametasona demuestran que el receptor ß de glucocorticoides humano no altera la afinidad del receptor  para ligandos hormonales, sino que es su capacidad para unirse al GRE (Bamberger y col., J Clin Invest, 1995, 95, 2435-2441). En conjunto, estos resultados ilustran que el receptor ß de glucocorticoides, a través de la competición con el receptor a de glucocorticoides por los sitios diana GRE pueden funcionar como inhibidor endógeno fisiológica y patofisiológicamente relevante de la acción de los glucocorticoides.
En el hígado, los agonistas de glucocorticoides incrementan la producción de glucosa hepática activando el receptor de glucocorticoides, que posteriormente conduce al incremento de la expresión de las enzimas gluconeogénicas fosfoenolpiruvato carboxiquinasa (PEPCK) y glucosa-6-fosfatasa. A través de la gluconeogénesis se forma glucosa mediante precursores no hexosa, tales como lactato, piruvato y alanina (Link, Curr Opin Investig Drugs, 2003, 4, 421-429). Los antagonistas del receptor de glucocorticoides esteroideos, tal como RU 486, se han analizado en modelos de diabetes en roedores. Los ratones deficientes en el gen del receptor de leptina, denominados ratones db/db, son genéticamente obesos, diabéticos e hiperinsulinémicos. El tratamiento de ratones db/db hiperglucémicos con RU 486 disminuyó los niveles de glucosa en aproximadamente un 49%, sin afectar a los niveles de insulina en plasma. Adicionalmente, el tratamiento con RU 486 redujo la expresión de los genes respondedores al receptor de glucocorticoides PEPCK, glucosa-6-fosfatasa, transportador de la glucosa de tipo 2 y tirosina aminotransferasa en ratones db/db en comparación con animales no tratados (Friedman y col., J Biol Chem, 1997, 272, 31475-31481). RU 486 también mejora la diabetes en modelo de ratones ob/ob con diabetes, obesidad e hiperinsulinemia, a través de una reducción de los niveles de insulina en suero y de glucosa en sangre (Gettys y col., Int J Obes Relat Metab Disord, 1997, 21,865-873).
Dado que el incremento de la gluconeogénesis se considera la fuente principal de incremento de la producción de glucosa en la diabetes se han investigado numerosas dianas terapéuticas para la inhibición de la producción de glucosa hepática. Debido a la capacidad de los antagonistas de los receptores de glucocorticoides para mejorar la diabetes en modelos animales, dichos compuestos están entre las posibles terapias que se están explorando. No obstante hay efectos sistémicos perjudiciales de los antagonistas de los receptores de glucocorticoides, incluida la activación del eje HPA (Link, Curr Opin Investig Drugs, 2003, 4, 421-429). El incremento de la actividad del eje HPA se asocia con la supresión de la acción inflamatoria relacionada con el sistema inmunitario, que puede incrementar la susceptibilidad a agentes infecciosos y neoplasias. Las afecciones asociadas con la supresión de la inflamación mediada por el sistema inmunitario a través de defectos en el eje HPA, o sus tejidos diana, incluyen síndrome de Cushing, estrés crónico, alcoholismo crónico y depresión melancólica ((Chrousos, N Engl J Med, 1995, 332, 1351-1362). Por tanto, es de gran valor el desarrollo de antagonistas de los receptores de glucocorticoides específicos del hígado. Los antagonistas de los receptores de glucocorticoides esteroideos se han conjugado con ácidos biliares con el fin de dirigirlos al hígado (Apelqvist y col., 2000). Actualmente, no se conocen agentes terapéuticos dirigidos a los receptores de glucocorticoides son efectos periféricos no deseados (Link, Curr Opin Investig Drugs, 2003, 4, 421-429). En consecuencia, sigue existiendo la necesidad de agentes capaces de inhibir de forma eficaz el receptor de glucocorticoides hepáticos.
Definiciones
“Receptor de glucocorticoides” es el producto génico o proteína cuya expresión se va a modular mediante la administración de un compuesto antisentido corto. En general, el receptor de glucocorticoides se denomina GCCR.
“Ácido nucleico de GCCR” significa cualquier ácido nucleico que codifica el GCCR. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, un ácido nucleico de GCCR incluye, sin limitaciones, una secuencia de ADN que codifica GCCR, una secuencia de ARN transcrita a partir de ADN que codifica GCCR y una secuencia de ARNm que codifica el GCCR. “ARNm de GCCR” significa un ARNm que codifica el GCCR.
Indicaciones terapéuticas
La tecnología antisentido es un medio eficaz para reducir la expresión de uno o más productos génicos específicos y, por tanto, es útil en una serie de aplicaciones terapéuticas, diagnósticas y de investigación para la modulación de la expresión de los receptores glucocorticoides. Además, en ciertas realizaciones, el hígado es uno de los tejidos en los que se encuentran las concentraciones más altas de oligonucleótidos antisentido tras la administración (Geary y col., Curr. Opin. Investig. Drugs, 2001, 2, 562-573). Por tanto, en ciertas realizaciones, la tecnología antisentido representa un procedimiento atractivo para la inhibición específica del hígado de los receptores de glucocorticoides.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico que codifica el receptor de glucocorticoides se distribuyen, preferentemente, en el hígado. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen mayor potencia en el hígado cuando se comparan con un compuesto parental más largo. En ciertas realizaciones, el ARN diana se expresa predominantemente en el hígado.
Para las terapéuticas, un sujeto del que se sospecha que presenta una enfermedad o trastorno, que se puede tratar mediante modulación de la expresión de GCCR es tratado mediante la administración de uno o más compuestos antisentido cortos. En un ejemplo no limitante, los procedimientos comprenden la etapa de administrar a un animal una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto antisentido corto. Ciertos compuestos antisentido cortos inhiben la actividad de GCCR y/o inhiben la expresión de GCCR. En ciertas realizaciones, la actividad o expresión de GCCR en un sujeto es inhibida en al menos un 10%, en al menos un 20%, en al menos un 25%, en al menos un 30%, en al menos un 40%, en al menos un 50%, en al menos un 60%, en al menos un 70%, en al menos un 75%, en al menos un 80%, en al menos un 85%, en al menos un 90%, en al menos un 95%, en al menos un 98%, en al menos un 99%, o en un 100%. En ciertas realizaciones, la actividad o expresión de GCCR en un sujeto es inhibida en al menos un 30%. En ciertas realizaciones, la actividad o expresión de GCCR en un sujeto es inhibida en al menos un 50% o más.
La reducción de la expresión de GCCR se puede medir en, por ejemplo sangre, plasma, suero, tejido adiposo, hígado o cualquier otro fluido corporal, tejido u órgano del animal. En ciertas realizaciones, las células contenidas dentro de dichos fluidos, tejidos u órganos que se están analizando comprenden ácidos nucleicos que codifican GCCR y/o contienen la propia proteína GCCR.
En el presente documento también se divulgan ciertas composiciones farmacéuticas y de otro tipo que comprenden compuestos antisentido cortos. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos se usan en composiciones farmacéuticas añadiéndoles una cantidad eficaz de un compuesto a un diluyente o transportador adecuado farmacéuticamente aceptable.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR tienen una cualquiera o más propiedades o características de los compuestos antisentido cortos en general descritos en el presente documento. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR tienen un motivo (alahueco desoxi-ala) seleccionado de 1-12-1, 1-1-10-2, 2-10-1-1, 3-10-3, 2-10-3, 2-10-2, 1-10-1,1-10-2, 3-8-3, 2-8-2, 1-8-1, 36-3 o 1-6-1. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR tienen un motivo (ala-hueco desoxi-ala) seleccionado de 1-10-1, 2-10-2, 3-10-3 y 1-9-2. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR tienen un motivo (ala-hueco desoxi-ala) seleccionado de 3-10-3, 2-10-3, 2-10-2, 1-10-1, 1-10-2, 2-8-2, 1-8-1, 3-6-3 o 1-6-1, más preferentemente 2-10-2 y 2-8-2.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos de tratar a un individuo administrando uno
o compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR o una composición farmacéutica que comprende dicho compuesto. También se divulgan procedimientos de tratar a un individuo que sufra una enfermedad o afección asociada con la actividad de GCCR administrando un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCCR. Además de la diabetes, particularmente la diabetes de tipo 2, enfermedades y afecciones asociadas con GCCR incluyen, entre otras, obsedida, síndrome metabólico X, síndrome de Cushing, enfermedad de Addison, enfermedades inflamatorias como asma, rinitis y artritis, alergia, enfermedad autoinmunitaria, inmunodeficiencia, anorexia, caquexia, pérdida ósea o fragilidad ósea y cicatrización de heridas. El síndrome metabólico, síndrome metabólico X o simplemente síndrome X se refiere a un grupo de factores de riesgo que incluyen obesidad, dislipidemia, particularmente niveles elevados de triglicéridos en sangre, intolerancia a la glucosa, niveles elevados de azúcar en sangre e hipertensión. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a GCCR se usan para mejorar la hiperglucemia inducida por la terapia sistémica con esteroides. Además, la tecnología antisentido proporciona un medio de inhibir la expresión de la isoforma ß del receptor de glucocorticoides, que se ha demostrado que está sobreexpresada en pacientes resistentes al
tratamiento con glucocorticoides.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico que codifica GCCR y que modula la expresión del receptor de glucocorticoides. También se divulgan composiciones farmacéuticas y de otro tipo que comprenden los compuestos de la divulgación. También se divulgan 5 procedimientos de detección selectiva de moduladores de receptores de glucocorticoides y procedimientos de modulación de la expresión de receptores de glucocorticoides en células, tejidos o animales, que comprenden poner en contacto dichas células, tejidos o animales con uno o más de los compuestos o composiciones de la divulgación. En el presente documento también se indican procedimientos de tratamiento de un animal, particularmente un ser humano, del que se sospecha que presenta, o es susceptible, una enfermedad o afección asociada con la expresión de receptores de
10 glucocorticoides. Dichos procedimientos comprenden administrar una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz de uno o más de los compuestos o composiciones de la divulgación a la persona que necesite el tratamiento.
Ciertos compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos están dirigidos a un ácido nucleico de GCCR que tiene la secuencia de nucleótidos 1 a 106000 de número de registro en GENBANK® AC012634, incorporada en el presente 15 documento como SEC ID Nº 8. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 8 es al menos un 90% complementario a la SEC ID Nº 8. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 8 es al menos un 95% complementario a la SEC ID Nº 8. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 8 ES 100% complementario a la SEC ID Nº 8. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 8 incluye una secuencia nucleotídica seleccionada
20 de las secuencias nucleotídicas indicadas en las Tablas 10 y 11.
La secuencia nucleotídica indicada en cada SEC ID Nº en las Tablas 10 y 11 es independiente de cualquier modificación de un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica. Como tales, los compuestos antisentido cortos definidos por una SEC ID Nº pueden comprender, de forma independiente, una o más modificaciones en un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica. Los compuestos antisentido cortos descritos por el Número Isis (Nº
25 Isis) indican una combinación de secuencia de bases nucleotídicas y una o más modificaciones en un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR comprenden un motivo gápmero. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR comprenden un motivo gápmero 2-10-2.
30 Las Tablas 10 y 11 ilustran ejemplos de compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 8. La Tabla 10 ilustra compuestos antisentido cortos que son 100% complementarios a la SEC ID Nº 8. La Tabla 11 ilustra compuestos antisentido cortos que tienen uno o dos apareamientos erróneos con respecto a la SEC ID Nº 8. La columna denominada "motivo gápmero" indica el motivo ala-hueco-ala de cada compuesto antisentido corto. El segmento hueco comprende 2'desoxinucleótidos y cada nucleótido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado en 2'. El azúcar
35 modificado en 2' concreto también está indicado en la columna “motivo gápmero”. Por ejemplo, ‘2-10-2 MOE’ significa un motivo gápmero 2-10-2, en el que un segmento de hueco de diez 2’-desoxinucleótidos está flanqueado por segmentos ala de dos nucleótidos, en los que los nucléotidos de los segmentos ala son nucleótidos 2’-MOE. Los enlaces internucleosídicos son fosforotioato. Los compuestos antisentido cortos comprenden 5-metil-citidina en lugar de citosina no modificada, a menos que “citosina no modificada” esté en la lista en la columna del motivo gápmero, en cuyo caso las
40 citosinas indicadas son citosinas no modificadas. Por ejemplo, “5-mC sólo en hueco” indica que el segmento de hueco tiene 5-metilcitosinas, mientras que los segmentos ala tienen citosinas no modificadas.

Tabla 10: Compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 8
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
371644
88142 88155 TTTGGGAGGTGGTC 2-10-2 MOE 413
371645
88156 88169 CACACCAGGCAGAG 2-10-2 MOE 414
371649
88212 88225 CTITACAGCTTCCA 2-10-2 MOE 415
371651
88242 88255 CACTACCTTCCACT 2-10-2 MOE 416
371652
88248 88261 AACACACACTACCT 2-10-2 MOE 417
371653
88256 88269 CTCTTCAAAACACA 2-10-2 MOE 418
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
371665
92037 92050 GTAATTGTGCTGTC 2-10-2 MOE 419
371669
92086 92099 OTTTTTCTTCGAATT 2-10-2 MOE 420
371671
92114 92127 CATTTTCGATAGCG 2-10-2 MOE 421
371673
92142 92155 ACCTTCCAGGTTCA 2-10-2 MOE 422

Tabla 11: Compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 8 y que tienen 1 o 2 apareamientos erróneos
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
371638
2039 2052 ATAGGAAGCATAAA 2-10-2 MOE 423
371650
4949 4962 TCTTTTAAAGAAGA 2-10-2 MOE 424
371673
10187 10200 ACCTTCCAGGTTCA 2-10-2 MOE 422
371660
13465 13478 AAGGATATTTTAAA 2-10-2 MOE 425
371660
14428 14441 AAGGATATTTTAAA 2-10-2 MOE 425
371654
15486 15499 GAACAAAAATTAAA 2-10-2 MOE 427
371661
16638 16651 TTCCACAGATCTGT 2-10-2 MOE 428
371653
17892 17905 CTCTTCAAAACACA 2-10-2 MOE 418
371679
18444 18457 TTTATAAAGTAAAG 2-10-2 MOE 429
371645
19816 19829 CACACCAGGCAGAG 2-10-2 MOE 414
371638
21555 21568 ATAGGAAGCATAAA 2-10-2 MOE 423
371650
21775 21788 TCTTTTAAAGAAGA 2-10-2 MOE 424
371679
21902 21915 TTTATAAAGTAAAG 2-10-2 MOE 429
371655
22507 22520 TACTGTGAGAAATA 2-10-2 MOE 433
371655
22722 22735 TACTGTGAGAAATA 2-10-2 MOE 433
371672
25662 25675 TTCCAGCTTGAAGA 2-10-2 MOE 435
371678
25926 25939 GATCAGTTCTCATG 2-10-2 MOE 436
371655
26041 26054 TACTGTGAGAAATA 2-10-2 MOE 433
371638
29770 29783 ATAGGAAGCATAAA 2-10-2 MOE 423
371668
30551 30564 TTATCAATGATGCA 2-10-2 MOE 439
371670
40584 40597 GCATGCTGGACAGT 2-10-2 MOE 440
371654
43331 43344 GAACAAAAATTAAA 2-10-2 MOE 427
371650
46024 46037 TCTTTTAAAGAAGA 2-10-2 MOE 424
371659
50372 50385 TTGCACCTGAACTA 2-10-2 MOE 443
371634
50565 50578 CAGAATATATTTCT 2-10-2 MOE 444
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
371673
56942 56955 ACCTTCCAGGTTCA 2-10-2 MOE 422
371654
62372 62385 GAACAAAAATTAAA 2-10-2 MOE 427
371679
63537 63550 TTTATAAAGTAAAG 2-10-2 MOE 429
371654
64908 64921 GAACAAAAATTAAA 2-10-2 MOE 427
371661
65795 65808 TTCCACAGATCTGT 2-10-2 MOE 428
371645
70997 71010 CACACCAGGCAGAG 2-10-2 MOE 414
371661
77400 77413 TTCCACAGATCTGT 2-10-2 MOE 428
371663
82329 82342 ATAAGAGATTAAAA 2-10-2 MOE 450
371633
83426 83439 TCCCCCTTCTCATT 2-10-2 MOE 451
371662
85873 85886 GGGCATTGTTAAAA 2-10-2 MOE 452
371654
86476 86489 GAACAAAAATTAAA 2-10-2 MOE 427
371679
86516 86529 TTTATAAAGTAAAG 2-10-2 MOE 429
371641
88097 88110 AGAACTCACATCTG 2-10-2 MOE 455
371642
88111 88124 GAGCTGGACGGAGG 2-10-2 MOE 456
371646
88170 88183 AAGCTTCATCGGAG 2-10-2 MOE 457
371647
88184 88197 ATAATGGCATCCCG 2-10-2 MOE 458
371650
88226 88239 TCTTTTAAAGAAGA 2-10-2 MOE 424
371673
91493 91506 ACCTTCCAGGTTCA 2-10-2 MOE 422
371664
92030 92043 TGCTGTCCTATAAG 2-10-2 MOE 460
371666
92044 92057 CACAAAGGTAATTG 2-10-2 MOE 461
371667
92058 92071 ATCATTTCTTCCAG 2-10-2 MOE 462
371668
92072 92085 TTATCAATGATGCA 2-10-2 MOE 463
371670
92100 92113 GCATGCTGGACAGT 2-10-2 MOE 440
371672
92128 92141 TTCCAGCTTGAAGA 2-10-2 MOE 435
371674
92147 92160 CCATTACCTTCCAG 2-10-2 MOE 466
371637
92983 92996 GCATAAACAGGGTT 2-10-2 MOE 467
371654
93928 93941 GAACAAAAATTAAA 2-10-2 MOE 427
371641
99772 99785 AGAACTCACATCTG 2-10-2 MOE 455
371679
99883 99896 TTTATAAAGTAAAG 2-10-2 MOE 429
371660
99933 99946 AAGGATATTTTAAA 2-10-2 MOE 425
371635
105004 105017 TATGAAAGGAATGT 2-10-2 MOE 472
371654
105028 105041 GAACAAAAATTAAA 2-10-2 MOE 427
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
371676
106482 106495 TTCCTTAAGCTTCC 2-10-2 MOE 474
371650
107838 107851 TCTTTTAAAGAAGA 2-10-2 MOE 424
371673
110922 110935 ACCTTCCAGGTTCA 2-10-2 MOE 422
371673
111580 111593 ACCTTCCAGGTTCA 2-10-2 MOE 422
371634
114608 114621 CAGAATATATTTCT 2-10-2 MOE 444
371638
115040 115053 ATAGGAAGCATAAA 2-10-2 MOE 423
371660
116244 116257 AAGGATATTTTAAA 2-10-2 MOE 425
371663
116657 116670 ATAAGAGATTAAAA 2-10-2 MOE 450
371673
118068 118081 ACCTTCCAGGTTCA 2-10-2 MOE 422
371666
118834 118847 CACAAAGGTAATTG 2-10-2 MOE 461
371660
119858 119871 AAGGATATTTTAAA 2-10-2 MOE 425
371660
120210 120223 AAGGATATTTTAAA 2-10-2 MOE 425
371662
120876 120889 GGGCATTGTTAAAA 2-10-2 MOE 452
371655
124004 124017 TACTGTGAGAAATA 2-10-2 MOE 433
371656
124170 124183 GAACAGTTAAACAT 2-10-2 MOE 485
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 88142-88269 de la SEC ID Nº 8. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 88142-88269 de la SEC ID Nº 8. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 88142-88269 comprende una secuencia de nucleótidos
5 seleccionada de las SEC ID Nº 413, 414, 415, 416, 417 o 418. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido dirigido a los nucleótidos 88142-88269 de la SEC ID Nº 8 se selecciona de los Nº Isis 371644, 371645, 371649, 371651, 371652 o 371653.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 88142-88169 de la SEC ID Nº 8. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 88142-88169 de la SEC ID Nº 8. En ciertas realizaciones, un
10 compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 88142-88169 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 413 o 414. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido dirigido a los nucleótidos 88142-88169 de la SEC ID Nº 8 se selecciona del Nº Isis 371644 o 371645.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 88242-88269 de la SEC ID Nº 8. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 88242-88269 de la SEC ID Nº 8. En ciertas realizaciones, un
15 compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 88242-88269 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 416, 417 o 418. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido dirigido a los nucleótidos 88242-88269 de la SEC ID Nº 8 se selecciona de los Nº Isis 371651, 371652 o 371653.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 92037-92155 de la SEC ID Nº 8. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 92037-92155 de la SEC ID Nº 8. En ciertas realizaciones, un
20 compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 92037-92155 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 419, 420, 421 o 422. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido dirigido a los nucleótidos 92037-92155 de la SEC ID Nº 8 se selecciona de los Nº Isis 371665, 371669, 371671 o 171673.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 92114-92155 de la SEC ID Nº 8. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 92114-92155 de la SEC ID Nº 8. En ciertas realizaciones, un
25 compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 92114-92155 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 421 o 422. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido dirigido a los nucleótidos 92114-92155 de la SEC ID Nº 8 se selecciona del Nº Isis 371671 o 171673.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR tienen una longitud de 8 a 16, preferentemente de 9 a 15, más preferentemente de 9 a 14, más preferentemente de 10 a 14 nucleótidos de longitud. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR tienen una longitud de 9 a 14 nucleótidos. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR tienen una longitud de 10 a 14 nucleótidos. En ciertas realizaciones, dichos compuestos antisentido cortos son oligonucleotídicos antisentido cortos.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR son gápmeros cortos. En ciertas de dichas realizaciones, los gápmeros cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR comprenden al menos una modificación de alta afinidad en una o más alas del compuesto. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR comprenden de 1 a 3 modificaciones de alta afinidad en cada ala. En ciertas de dichas realizaciones, los nucleósidos o nucleótidos del ala comprenden una modificación en 2’. En ciertas realizaciones, los monómeros del ala son BNA. En ciertas de dichas realizaciones, los monómeros del ala se seleccionan de α-L-metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA, ß-D-metilenoxi(4’-CH2-O-2’) BNA, etilenoxi (4’-(CH2)2-O-2’)BNA, aminooxi(4’-CH2-ON(R)-2’) BNA y oxiamino (4’-CH2-N(R)-O-2’) BNA. En ciertas realizaciones, los monómeros de un ala comprenden un sustituyente en la posición 2’ seleccionado de alilo, amino, azido, tio, O-alilo, O-alquilo C1-C10, -OCF3 , O-(CH2)2-O-CH3, 2’-O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), y O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), en las que cada Rm y Rn es, de forma independiente, H o alquilo C1-C10 sustituido o insustituido. En ciertas realizaciones, los monómeros de un ala son nucleótidos 2’MOE.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR comprenden un hueco entre el ala en 5’ y el ala en 3’. En ciertas realizaciones, el hueco comprende cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece o catorce monómeros. En ciertas realizaciones, los monómeros del hueco son desoxirribonucleótidos no modificados. En ciertas realizaciones, los monómeros del hueco son ribonucleótidos no modificados. En ciertas realizaciones, las modificaciones del hueco (si las hubiera) tienen como resultado un compuesto antisentido que, cuando se une a su ácido nucleico diana, soporta la escisión por una RNasa, incluida, entre otras, la RNasa H.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR tienen enlaces monoméricos. En ciertas de dichas realizaciones, dichos enlaces son todos enlaces fosforotioato. En ciertas realizaciones, los enlaces son todos enlaces fosfodiéster. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR tienen esqueletos mixtos.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR tienen una longitud de 8 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR tienen una longitud de 9 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR tienen una longitud de 10 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR tienen una longitud de 11 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR tienen una longitud de monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR tienen una longitud de 13 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR tienen una longitud de 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR tienen una longitud de 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR tienen una longitud de 16 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR comprenden de 9 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR comprenden de 10 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR comprenden de 12 a 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR comprenden de 12 a 14 nucleótidos o nucleósidos.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos de modulación de la expresión de GCCR. En ciertas realizaciones, dichos procedimientos comprenden el uso de uno o más compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR, en el que el compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCCR tiene una longitud de aproximadamente 8 a aproximadamente 16, preferentemente de 9 a 15, más preferentemente de 9 a 14, más preferentemente de 10 a 14 monómeros (es decir, de aproximadamente 8 a aproximadamente 16 monómeros unidos). Un experto en la técnica apreciará que esto comprende procedimientos de modulación de la expresión de GCCR usando uno
o más compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR de de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16 monómeros.
En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de GCCR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCCR que tiene una longitud de 8 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de GCCR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCCR que tiene una longitud de 9 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de GCCR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCCR que tiene una longitud de 10 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de GCCR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCCR que tiene una longitud de 11 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de GCCR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCCR que tiene una longitud de 12 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de GCCR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCCR que tiene una longitud de 13 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de GCCR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCCR que tiene una longitud de 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de GCCR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCCR que tiene una longitud de 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de GCCR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCCR que tiene una longitud de 16 monómeros.
En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de GCCR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCCR que comprende de 9 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de GCCR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCCR que comprende de 10 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de GCCR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCCR que comprende de 12 a 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de GCCR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCCR que comprende de 12 o 14 nucleótidos o nucleósidos.
7. Receptor de glucagón (GCGR)
El mantenimiento de la glucemia normal es un acontecimiento metabólico cuidadosamente regulado. El glucagón, péptido de29 aminoácidos responsable del mantenimiento de los niveles de glucosa en sangre en el estado postabsorción, incrementa la liberación de glucosa desde el hígado activando la glucogenolisis hepática, la gluconeogénesis, estimulando la lipólisis en el tejido adiposo y estimulando la secreción de insulina. Durante los niveles elevados de glucosa en sangre, la insulina invierte la potenciación de la glucogenolisis y la glucogenolisis mediada por glucagón. En pacientes con diabetes, la insulina o no está disponible o no es completamente eficaz. Aunque el tratamiento de la diabetes tradicionalmente se ha centrado en aumentar los niveles de insulina, el antagonismo de la función del glucagón se ha considerado una terapia alternativa. Dado que el glucagón ejerce sus efectos fisiológicos mediante la señalización a través del receptor de glucagón, se ha propuesto al receptor de glucagón como posible diana terapéutica para la diabetes (Madsen y col., Curr. Pharm. Des., 1999, 5, 683-691).
El receptor de glucagón pertenece a la superfamilia de los receptores acoplados a proteína G que tiene siete dominios transmembranales. También es un miembro de la subfamilia más pequeña de receptores homólogos que unen péptidos que son estructuralmente similares al glucagón. El gen que codifica el receptor del glucagón humano se clonó en 1994 y el análisis de la secuencia genómica reveló múltiples intrones y una identidad del 82% con el gen del receptor del glucagón de rata ((Lok y col., Gene, 1994, 140, 203-209.; MacNeil y col., Biochem. Biophys. Res. Commun., 1994, 198, 328-334). La clonación del gen del receptor del glucagón de rata también ha conducido a la descripción de múltiples variantes alternativas de corte y empalme (Maget y col., FEBS Lett., 1994, 351, 271-275). El gen del receptor del glucagón humano está localizado en el cromosoma 17q25 (Menzel y col., Genomics, 1994, 20, 327-328). Una mutación de sentido erróneo de Gly a Ser en el codón 40 del gen del receptor del glucagón conduce a una afinidad 3 veces menor por el glucagón (Fujisawa y col., Diabetologia, 1995, 38, 983-985) y esta mutación se ha relacionado con varios estados de enfermedad, incluyendo diabetes mellitus no dependiente de insulina (Fujisawa y col., Diabetologia, 1995, 38, 983-985), hipertensión (Chambers y Morris, Nat. Genet., 1996, 12, 122) y adiposidad central (Siani y col., Obes. Res., 2001, 9, 722-726).
Definiciones
“Receptor de glucagón” es el producto génico o proteína cuya expresión se va a modular mediante la administración de un compuesto antisentido corto.
EN general, el receptor de glucagón se denomina GCGR, pero también se puede denominar GR, GGR, MGC138246, MGC93090.
“Ácido nucleico de GCGR” significa cualquier ácido nucleico que codifica el GCGR. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, un ácido nucleico de GCGR incluye, sin limitaciones, una secuencia que codifica GCGR, una secuencia de ARN transcrita a partir de ADN que codifica GCGR y una secuencia de ARNm que codifica GCGR. “ARNm de GCGR” significa un ARNm que codifica una proteína GCGR.
Indicaciones terapéuticas
La tecnología antisentido es un medio eficaz para reducir la expresión del receptor de glucagón (GCGR) y se ha demostrado que son únicos en su utilidad en una serie de aplicaciones terapéuticas, diagnósticas y de investigación. Como tal, en ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico que codifica el receptor de glucagón y que modula la expresión del receptor de glucagón. En el presente documento se divulgan además compuestos antisentido cortos capaces de inhibir la expresión de GCGR. En el presente documento se divulgan también procedimientos de tratar a un individuo, que comprende administrar una o más composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCGR. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR inhiben la expresión de GCGR. En el presente documento se divulgan procedimientos de tratar a un individuo que sufra una enfermedad o afección asociada con la actividad de GCGR administrando una o más composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCGR. Por ejemplo, en el presente documento se divulgan procedimientos de tratar a un sujeto que tiene niveles elevados de glucosa en sangre, hiperglucemia, prediabetes, diabetes, diabetes de tipo 2, síndrome metabólico, obesidad y/o resistencia a la insulina.
En el presente documento también se contemplan composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más compuestos antisentido cortos dirigidos a GCGR y, opcionalmente, un transportador, diluyente, potenciador o excipiente farmacéuticamente aceptable. Ciertos compuestos de la divulgación también se pueden usar en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades y trastornos relacionados con los efectos del glucagón mediado por GCGR.
Ciertas realizaciones de la presente divulgación incluyen procedimientos de reducir la expresión de GCGR en tejidos o células, que comprenden poner en contacto dichas células o tejidos con un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico que codifica GCGR o la composición farmacéutica que comprende dicho compuesto antisentido corto. En ciertas de dichas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos de disminuir los niveles de glucosa en sangre, los niveles de triglicéridos en sangre o los niveles de colesterol en sangre, en un sujeto, que comprenden administrar al sujeto un compuesto antisentido corto o una composición farmacéutica. Los niveles en sangre pueden ser niveles en plasma o niveles en suero. También se contemplan procedimientos de mejorar la sensibilidad a la insulina, procedimientos de incrementar los niveles de GLP-1 y procedimientos de inhibir el gasto de glucosa hepática en un animal que comprende administrar a dicho animal un oligonucleótido antisentido o una composición farmacéutica de la divulgación. Una mejora de la sensibilidad a la insulina puede indicarse mediante una reducción de los niveles de insulina en circulación.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos de tratar un sujeto que tiene una enfermedad o afección asociada con la actividad del glucagón mediante GCGR que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz de uno compuesto antisentido corto o una composición farmacéutica. En ciertas realizaciones, dicha enfermedad o afección puede ser una enfermedad o afección metabólica. En ciertas realizaciones, la enfermedad o afección metabólica es diabetes, hiperglucemia, hiperlipidemia, síndrome metabólico X, obesidad, hiperglucagonemia primaria, deficiencia de insulina o resistencia a la insulina. En algunas realizaciones, la diabetes es diabetes de tipo 2. En algunas realizaciones, la obesidad está inducida por la dieta. En algunas realizaciones, la hiperlipidemia está asociada con niveles elevados de lípidos en sangre. Los lípidos incluyen colesterol y triglicéridos. En una realización, la afección es esteatosis hepática.. En algunas realizaciones, la esteatosis es esteatohepatitis o esteatohepatitis no alcohólica.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos de prevenir o retrasar el inicio de niveles elevados de glucosa en sangre en un animal, así como procedimientos de preservar la función de las células beta en un animal usado los compuestos oligoméricos indicados en el presente documento.
Ciertos compuestos antisentido cortos dirigidos a GCGR se pueden usar para modular la expresión de GCGR en un sujeto que lo necesite, tal como un animal, incluido, entre otros, un ser humano. En ciertas realizaciones, dichos procedimientos comprenden la etapa de administrar a dicho animal una cantidad eficaz de un compuesto antisentido corto que reduce la expresión de ARN de GCGR. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos reducen de forma eficaz los niveles o la función de ARN de GCGR. Dado que la reducción de los niveles de ARNm de GCGR pueden conducir a la alteración de los productos proteicos de expresión de GCGR también, dichas alteraciones resultantes también se pueden medir. Ciertos compuestos antisentido cortos que reducen de forma eficaz los niveles o la función del ARN de GCGR o los productos proteicos de la expresión se consideran un compuesto antisentido activo. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos reducen la expresión de GCGR, produciendo una reducción del ARN en al menos un 10%, en al menos un 20%, en al menos un 25%, en al menos un 30%, en al menos un 40%, en al menos un 50%, en al menos un 60%, en al menos un 70%, en al menos un 75%, en al menos un 80%, en al menos un 85%, en al menos un 90%, en al menos un 95%, en al menos un 98%, en al menos un 99%, o en un 100%.
También se divulgan procedimientos de detección selectiva de moduladores de receptores de glucagón y procedimientos de modulación de la expresión de receptores de glucagón en células, tejidos o animales, que comprenden poner en contacto dichas células, tejidos o animales con uno o más de los compuestos antisentido cortos dirigidos a GCGR o con composiciones que comprenden dichos compuestos. En el presente documento también se indican procedimientos de tratamiento de un animal, particularmente un ser humano, del que se sospecha que presenta, o es susceptible, una enfermedad o afección asociada con la expresión de receptores de glucagón. Ciertos procedimientos comprenden administrar una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz de uno o más de los compuestos o composiciones de la divulgación a la persona que necesite el tratamiento.
La reducción de la expresión del receptor de glucagón se puede medir en, por ejemplo sangre, plasma, suero, tejido adiposo, hígado o cualquier otro fluido corporal, tejido u órgano del animal. Preferentemente, las células contenidas dentro de dichos fluidos, tejidos u órganos que se están analizando contienen una molécula de ácido nucleico que codifica la proteína receptora de glucagón y/o la propia proteína receptora de glucagón.
También se divulgan composiciones farmacéuticas y de otro tipo que comprenden compuestos antisentido cortos. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico que codifica GCGR se usan en composiciones farmacéuticas añadiéndoles una cantidad eficaz de un compuesto a un diluyente o transportador adecuado farmacéuticamente aceptable.
Los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR pueden tener una cualquiera o más propiedades o características de los compuestos antisentido cortos en general descritos en el presente documento. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR tienen un motivo (alahueco desoxi-ala) seleccionado de 1-12-1, 1-1-10-2, 2-10-1-1, 3-10-3, 2-10-3, 2-10-2,1-10-1,1-10-2, 3-8-3, 2-8-2, 1-8-1, 36-3 o 1-6-1. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR tienen un motivo (ala-hueco desoxi-ala) seleccionado de 1-12-1,2-10-2, 3-10-3,3-8-3, 1-1-10-2.
Ciertos compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos están dirigidos a un ácido nucleico de GCGR que tiene la secuencia de número de registro en GENBANK® NM_000160.1, incorporada en el presente documento como SEC ID Nº
9. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 9 es al menos un 90% complementario a la SEC ID Nº 9. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 9 es al menos un 95% complementario a la SEC ID Nº 9. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 9 ES 100% complementario a la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 9 incluye una secuencia nucleotídica seleccionada de las secuencias nucleotídicas indicadas en las Tablas 12 y 13.
Las secuencias nucleotídicas indicadas en cada SEC ID Nº en las Tablas 12 y 13 son independientes de cualquier modificación de un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica. Como tales, los compuestos antisentido cortos definidos por una SEC ID Nº pueden comprender, de forma independiente, una o más modificaciones en un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica. Los compuestos antisentido cortos descritos por el Número Isis (Nº Isis) indican una combinación de secuencia de bases nucleotídicas y una o más modificaciones en un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR comprenden un motivo gápmero. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR comprenden un motivo gápmero 3-10-3. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR comprenden un motivo gápmero. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR comprenden un motivo gápmero 3-8-3. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR comprenden un motivo gápmero. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCCR comprenden un motivo gápmero 2-10-2.
Las Tablas 12 y 13 ilustran ejemplos de compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 9. La Tabla 12 ilustra compuestos antisentido cortos que son 100% complementarios a la SEC ID Nº 9. La Tabla 13 ilustra compuestos antisentido cortos que tienen uno o dos apareamientos erróneos con respecto a la SEC ID Nº 9. La columna denominada "motivo gápmero" indica el motivo ala-hueco-ala de cada compuesto antisentido corto. El segmento hueco comprende 2'desoxinucleótidos y cada nucleótido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado en 2'. El azúcar modificado en 2' concreto también está indicado en la columna “motivo gápmero”. Por ejemplo, ‘2-10-2 MOE’ significa un motivo gápmero 2-10-2, en el que un segmento de hueco de diez 2’-desoxinucleótidos está flanqueado por segmentos ala de dos nucleótidos, en los que los nucléotidos de los segmentos ala son nucleótidos 2’-MOE. Los enlaces internucleosídicos son fosforotioato. Los compuestos antisentido cortos comprenden 5-metil-citidina en lugar de citosina no modificada, a menos que “citosina no modificada” esté en la lista en la columna del motivo gápmero, en cuyo caso las citosinas indicadas son citosinas no modificadas. Por ejemplo, “5-mC sólo en hueco” indica que el segmento de hueco tiene 5-metilcitosinas, mientras que los segmentos ala tienen citosinas no modificadas.

Tabla 12: Compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 9
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
338463
378 393 TAGAGCTTCCACTTCT 3-10-3 MOE 486
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
338534
378 391 GAGCTTCCACTTCT 3-8-3 MOE 487
327130
499 512 TGTTGGCCGTGGTA 3-8-3 MOE 488
327131
500 513 ATGTTGGCCGTGGT 3-8-3 MOE 489
327132
501 514 GATGTTGGCCGTGG 3-8-3 MOE 490
327133
502 515 AGATGTTGGCCGTG 3-8-3 MOE 491
327134
503 516 GAGATGTTGGCCGT 3-8-3 MOE 492
327135
504 517 GGAGATGTTGGCCG 3-8-3 MOE 493
327136
505 518 AGGAGATGTTGGCC 3-8-3 MOE 494
327137
506 519 CAGGAGATGTTGGC 3-8-3 MOE 495
327138
507 520 GCAGGAGATGTTGG 3-8-3 MOE 496
327139
508 521 GGCAGGAGATGTTG 3-8-3 MOE 497
327140
531 544 GTGGTGCCAAGGCA 3-8-3 MOE 498
327141
532 545 TGTGGTGCCAAGGC 3-8-3 MOE 499
327142
533 546 TTGTGGTGCCAAGG 3-8-3 MOE 500
327143
534 547 TTTGTGGTGCCAAG 3-8-3 MOE 501
327144
535 548 CTTTGTGGTGCCAA 3-8-3 MOE 502
327145
536 549 ACTTTGTGGTGCCA 3-8-3 MOE 503
327146
537 550 CACTTTGTGGTGCC 3-8-3 MOE 504
327147
538 551 GCACTTTGTGGTGC 3-8-3 MOE 505
327148
539 552 TGCACTTTGTGGTG 3-8-3 MOE 506
327149
540 553 TTGCACTTTGTGGT 3-8-3 MOE 507
327150
545 558 CGGTGTTGCACTTT 3-8-3 MOE 508
327151
546 559 GCGGTGTTGCACTT 3-8-3 MOE 509
327152
547 560 AGCGGTGTTGCACT 3-8-3 MOE 510
327153
548 561 AAGCGGTGTTGCAC 3-8-3 MOE 511
327154
549 562 GAAGCGGTGTTGCA 3-8-3 MOE 512
327155
550 563 CGAAGCGGTGTTGC 3-8-3 MOE 513
327156
551 564 ACGAAGCGGTGTTG 3-8-3 MOE 514
327157
552 565 CACGAAGCGGTGTT 3-8-3 MOE 515
327158
553 566 ACACGAAGCGGTGT 3-8-3 MOE 516
327159
554 567 AACACGAAGCGGTG 3-8-3 MOE 517
345897
684 697 GCTGCTGTACATCT 2-10-2 MOE 518
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
327160
684 697 GCTGCTGTACATCT 3-8-3 MOE 518
327161
685 698 AGCTGCTGTACATC 3-8-3 MOE 520
327162
686 699 AAGCTGCTGTACAT 3-8-3 MOE 521
327163
687 700 GAAGCTGCTGTACA 3-8-3 MOE 522
327164
688 701 GGAAGCTGCTGTAC 3-8-3 MOE 523
327165
689 702 TGGAAGCTGCTGTA 3-8-3 MOE 524
327166
690 703 CTGGAAGCTGCTGT 3-8-3 MOE 525
327167
691 704 CCTGGAAGCTGCTG 3-8-3 MOE 526
327168
692 705 ACCTGGAAGCTGCT 3-8-3 MOE 527
327169
693 706 CACCTGGAAGCTGC 3-8-3 MOE 528
327170
694 707 TCACCTGGAAGCTG 3-8-3 MOE 529
327171
695 708 ATCACCTGGAAGCT 3-8-3 MOE 530
327172
696 709 CATCACCTGGAAGC 3-8-3 MOE 531
327173
697 710 ACATCACCTGGAAG 3-8-3 MOE 532
327174
698 711 TACATCACCTGGAA 3-8-3 MOE 533
327175
699 712 GTACATCACCTGGA 3-8-3 MOE 534
327176
700 713 TGTACATCACCTGG 3-8-3 MOE 535
327177
701 714 GTGTACATCACCTG 3-8-3 MOE 536
327178
869 882 TAGCGGGTCCTGAG 3-8-3 MOE 537
327179
870 883 GTAGCGGGTCCTGA 3-8-3 MOE 538
327180
871 884 TGTAGCGGGTCCTG 3-8-3 MOE 539
327181
872 885 CTGTAGCGGGTCCT 3-8-3 MOE 540
327182
873 886 GCTGTAGCGGGTCC 3-8-3 MOE 541
327183
874 887 GGCTGTAGCGGGTC 3-8-3 MOE 542
327184
875 888 TGGCTGTAGCGGGT 3-8-3 MOE 543
327185
876 889 CTGGCTGTAGCGGG 3-8-3 MOE 544
327186
877 890 TCTGGCTGTAGCGG 3-8-3 MOE 545
327187
878 891 TTCTGGCTGTAGCG 3-8-3 MOE 546
327188
955 968 TGAACACCGCGGCC 3-8-3 MOE 547
327189
956 969 ATGAACACCGCGGC 3-8-3 MOE 548
327190
957 970 CATGAACACCGCGG 3-8-3 MOE 549
327191
958 971 GCATGAACACCGCG 3-8-3 MOE 550
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
327192
959 972 TGCATGAACACCGC 3-8-3 MOE 551
327193
960 973 TTGCATGAACACCG 3-8-3 MOE 552
327194
961 974 ATTGCATGAACACC 3-8-3 MOE 553
327195
962 975 TATTGCATGAACAC 3-8-3 MOE 554
327196
963 976 ATATTGCATGAACA 3-8-3 MOE 555
327197
964 977 CATATTGCATGAAC 3-8-3 MOE 556
327198
1019 1032 AGGTTGTGCAGGTA 3-8-3 MOE 557
327199
1020 1033 CAGGTTGTGCAGGT 3-8-3 MOE 558
327200
1021 1034 GCAGGTTGTGCAGG 3-8-3 MOE 559
327201
1022 1035 AGCAGGTTGTGCAG 3-8-3 MOE 560
327202
1023 1036 CAGCAGGTTGTGCA 3-8-3 MOE 561
327203
1024 1037 CCAGCAGGTTGTGC 3-8-3 MOE 562
327204
1025 1038 CCCAGCAGGTTGTG 3-8-3 MOE 563
327205
1026 1039 GCCCAGCAGGTTGT 3-8-3 MOE 564
327206
1027 1040 GGCCCAGCAGGTTG 3-8-3 MOE 565
327207
1028 1041 AGGCCCAGCAGGTT 3-8-3 MOE 566
338491
1160 1175 TGTCATTGCTGGTCCA 3-10-3 MOE 567
338562
1160 1173 TCATTGCTGGTCCA 3-8-3 MOE 568
338498
1307 1322 TGGCCAGCCGGAACTT 3-10-3 MOE 569
338569
1307 1320 GCCAGCCGGAACTT 3-8-3 MOE 570
338499
1329 1344 GGGATGAGGGTCAGCG 3-10-3 MOE 571
338570
1329 1342 GATGAGGGTCAGCG 3-8-3 MOE 572
385067
1364 1377 AAGGCAAAGACCAC 3-8-3 MOE 573
338573
1401 1414 GGAGCGCAGGGTGC 3-8-3 MOE 574
338580
1487 1500 TGCACCTCCTTGTT 3-8-3 MOE 575

Tabla 13: Compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 1 y que tienen 1 o 2 apareamientos erróneos
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
338577
158 171 CAGCAGACCCTGGA 3-8-3 MOE 576
338458
237 252 ACATCTGGCAGAGGTT 3-10-3 MOE 577
338529
237 250 ATCTGGCAGAGGTT 3-8-3 MOE 578
338466
318 333 CAGGCCAGCAGGAGTA 3-10-3 MOE 579
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
338537
318 331 GGCCAGCAGGAGTA 3-8-3 MOE 580
338533
364 377 CAAACAAAAAGTCC 3-8-3 MOE 582
338462
364 379 CTCAAACAAAAAGTCC 3-10-3 MOE 581
338535
397 410 GGTGACATTGGTCA 3-8-3 MOE 584
338464
397 412 GTGGTGACATTGGTCA 3-10-3 MOE 583
338466
470 485 CAGGCCAGCAGGAGTA 3-10-3 MOE 579
338537
470 483 GGCCAGCAGGAGTA 3-8-3 MOE 580
385048
497 510 TTGGCAGTGGTGTT 3-8-3 MOE 587
385049
500 513 ATGTTGGCAGTGGT 3-8-3 MOE 588
338467
503 518 AGGAAATGTTGGCAGT 3-10-3 MOE 589
338538
503 516 GAAATGTTGGCAGT 3-8-3 MOE 590
385050
506 519 CAGGAAATGTTGGC 3-8-3 MOE 591
385051
509 522 GGGCAGGAAATGTT 3-8-3 MOE 592
385052
523 536 AAGGTAGGTACCAG 3-8-3 MOE 593
385053
526 539 ACCAAGGTAGGTAC 3-8-3 MOE 594
385056
535 548 CTTTGTGGCACCAA 3-8-3 MOE 595
385057
538 551 GCACTTTGTGGCAC 3-8-3 MOE 596
338539
539 552 TGCACTTTGTGGCA 3-8-3 MOE 597
385058
541 554 GCTGCACTTTGTGG 3-8-3 MOE 598
385059
544 557 GGTGCTGCACTTTG 3-8-3 MOE 599
385060
547 560 GGCGGTGCTGCACT 3-8-3 MOE 600
385063
556 569 TGAACACTAGGCGG 3-8-3 MOE 601
385064
559 572 TCTTGAACACTAGG 3-8-3 MOE 602
338469
561 576 CACCTCTTGAACACTA 3-10-3 MOE 603
338540
561 574 CCTCTTGAACACTA 3-8-3 MOE 604
385065
562 575 ACCTCTTGAACACT 3-8-3 MOE 605
385066
565 578 CACACCTCTTGAAC 3-8-3 MOE 606
338541
590 603 CCTCGAACCCACTG 3-8-3 MOE 607
338473
658 673 CTTCTGGACCTCGATC 3-10-3 MOE 608
338544
658 671 TCTGGACCTCGATC 3-8-3 MOE 609
338474
681 696 CTGCTATACATCTTGG 3-10-3 MOE 610
338545
681 694 GCTATACATCTTGG 3-8-3 MOE 611
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
338475
703 718 CACGGTGTACATCACC 3-10-3 MOE 612
338546
703 716 CGGTGTACATCACC 3-8-3 MOE 613
338547
718 731 ACAGACTGTAGCCC 3-8-3 MOE 615
338476
718 733 GGACAGACTGTAGCCC 3-10-3 MOE 614
338550
889 902 CATCGCCAATCTTC 3-8-3 MOE 617
338479
889 904 GTCATCGCCAATCTTC 3-10-3 MOE 616
338551
899 912 ACACTGAGGTCATC 3-8-3 MOE 619
338480
899 914 TCACACTGAGGTCATC 3-10-3 MOE 618
338552
924 937 CGCCCCGTCACTGA 3-8-3 MOE 620
338555
992 1005 AGCAACCAGCAATA 3-8-3 MOE 622
338484
992 1007 CCAGCAACCAGCAATA 3-10-3 MOE 621
338485
1018 1033 CAGGCTGTACAGGTAC 3-10-3 MOE 623
338556
1018 1031 GGCTGTACAGGTAC 3-8-3 MOE 624
338558
1051 1064 AGCTCCTCTCAGAG 3-8-3 MOE 626
338487
1051 1066 GAAGCTCCTCTCAGAG 3-10-3 MOE 625
338559
1079 1092 CAGCCAATGCCCAG 3-8-3 MOE 628
338488
1079 1094 CCCAGCCAATGCCCAG 3-10-3 MOE 627
338560
1131 1144 AAACAGACACTTGA 3-8-3 MOE 630
338489
1131 1146 TCAAACAGACACTTGA 3-10-3 MOE 629
338490
1145 1160 AGCACTGAACATTCTC 3-10-3 MOE 631
338561
1145 1158 CACTGAACATTCTC 3-8-3 MOE 632
338563
1181 1194 ATCCACCAGAATCC 3-8-3 MOE 634
338492
1181 1196 GGATCCACCAGAATCC 3-10-3 MOE 633
338564
1216 1229 TGATCAGTAAGGCC 3-8-3 MOE 635
338565
1232 1245 ACAAAGATGAAAAA 3-8-3 MOE 637
338494
1232 1247 GGACAAAGATGAAAAA 3-10-3 MOE 636
338566
1267 1280 CACGCAGCTTGGCC 3-8-3 MOE 639
338495
1267 1282 GGCACGCAGCTTGGCC 3-10-3 MOE 638
338571
1344 1357 GACCCCCAGCAGAG 3-8-3 MOE 641
338500
1344 1359 TGGACCCCCAGCAGAG 3-10-3 MOE 640
385068
1366 1379 CAAAGGCAAAGACC 3-8-3 MOE 642
385069
1369 1382 TCACAAAGGCAAAG 3-8-3 MOE 643
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
385070
1372 1385 CAGTCACAAAGGCA 3-8-3 MOE 644
385071
1375 1388 CGTCAGTCACAAAG 3-8-3 MOE 645
385072
1378 1391 GCTCGTCAGTCACA 3-8-3 MOE 646
385073
1381 1394 CATGCTCGTCAGTC 3-8-3 MOE 647
386608
1384 1397 GGGCATGCTCGTCA 1-12-1 MOE 648
386593
1384 1397 GGGCATGCTCGTCA 2-10-2 MOE 648
396146
1384 1397 GGGCATGCTCGTCA 2-10-2 MOE 648
338572
1384 1397 GGGCATGCTCGTCA 3-8-3 MOE 648
396149
1384 1397 GGGCATGCTCGTCA 1-1-10-2 2’-(butilacetamido)- palmitamida/ OMe/OMe 648
386627
1384 1397 GGGCATGCTCGTCA 2-10-2 Metilenoxi BNA 648
386610
1387 1400 CTTGGGCATGCTCG 1-12-1 MOE 654
386595
1387 1400 CTTGGGCATGCTCG 2-10-2 MOE 654
385074
1387 1400 CTTGGGCATGCTCG 3-8-3 MOE 654
385075
1390 1403 TGCGTTGGGCATGC 3-8-3 MOE 657
385076
1393 1406 GGGTGCCTTGGGCA 3-8-3 MOE 648
385077
1396 1409 GCAGGGTGCCTTGG 3-8-3 MOE 659
385078
1399 1412 AGCGCAGGGTGCCT 3-8-3 MOE 660
338502
1401 1416 GTGGAGCGCAGGGTG C 3-10-3 MOE 661
385079
1402 1415 TGGAGCGCAGGGTG 3-8-3 MOE 662
385080
1405 1418 TGGTGGAGCGCAGG 3-8-3 MOE 663
385081
1408 1421 GCTTGGTGGAGCGC 3-8-3 MOE 664
385082
1411 1424 AGAGCTTGGTGGAG 3-8-3 MOE 665
338503
1412 1427 AAAAGAGCTTGGTGGA 3-10-3 MOE 666
338574
1412 1425 AAGAGCTTGGTGGA 3-8-3 MOE 667
385083
1414 1427 AAAAGAGCTTGGTG 3-8-3 MOE 668
385084
1417 1430 CAAAAAAGAGCTTG 3-8-3 MOE 669
338504
1434 1449 AAGGAGCTGAGGAACA 3-10-3 MOE 670
338575
1434 1447 GGAGCTGAGGAACA 3-8-3 MOE 671
327167
1441 1454 CCTGGAAGCTGCTG 3-8-3 MOE 526
338576
1445 1458 AGACCCTGGAAGGA 3-8-3 MOE 673
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
338505
1445 1460 GCAGACCCTGGAAGGA 3-10-3 MOE 672
338506
1449 1464 ACCAGCAGACCCTGGA 3-10-3 MOE 674
338577
1449 1462 CAGCAGACCCTGGA 3-8-3 MOE 576
338507
1464 1479 CAGTAGAGAACAGCCA 3-10-3 MOE 676
338578
1464 1477 GTAGAGAACAGCCA 3-8-3 MOE 677
338508
1475 1490 TGTTGAGGAAACAGTA 3-10-3 MOE 678
338579
1475 1488 TTGAGGAAACAGTA 3-8-3 MOE 679
338509
1487 1502 CCTGCACCTCCTTGTT 3-10-3 MOE 680
338580
1610 1623 TGCACCTCCTTGTT 3-8-3 MOE 575
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 378-391 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 378-391 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 378-391 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID
5 Nº 486 o 487. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 378-391 de la SEC ID Nº 9 se selecciona del Nº Isis 338463 o 338534.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 499-521 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 499-521 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 499-521 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID
10 Nº 488, 489, 490, 491, 492, 493, 494, 495, 496 o 497. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 499-521 de la SEC ID Nº 9 se selecciona de los Nº Isis 327130, 327131, 327132, 327133, 327134, 327135, 327136, 327137, 327138 o 327139.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 531-553 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 531-553 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto
15 antisentido corto dirigido a los nucleótidos 531-553 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 498, 499, 500, 501, 502, 503, 504, 505, 506 o 507. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 531-553 de la SEC ID Nº 9 se selecciona de los Nº Isis 327140, 327141, 327142, 327143, 327144, 327145, 327146, 327147, 327148 o 327149.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 545-567 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un
20 compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 545-567 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 545-567 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 508, 509, 510, 511, 512, 513, 514, 515, 516 o 517. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 545-567 de la SEC ID Nº 9 se selecciona de los Nº Isis 327150, 327151, 327152, 327153, 327154, 327155, 327156, 327157, 327158 o 327159.
25 En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 531-567 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 531-567 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 531-567 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 498, 499, 500, 501, 502, 503, 504, 505, 506, 507, 508, 509, 510, 511, 512, 513, 514, 515, 516, o 517. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 531-567 de la SEC ID Nº 9 se selecciona
30 de los Nº Isis 327140, 327141, 327142, 327143, 327144, 327145, 327146, 327147, 327148, 327149, 327150, 327151, 327152, 327153, 327154, 327155, 327156, 327157, 327158 o 327159.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 684-714 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 684-714 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 684-714 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID
35 Nº 518, 520, 521, 522, 523, 524, 525, 526, 527, 528, 529, 530, 531, 532, 533, 534, 535, o 536. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 684-714 de la SEC ID Nº 9 se selecciona de los Nº Isis 345897, 327160, 327161, 327162, 327163, 327164, 327165, 327166, 327167, 327168, 327169, 327170, 327171, 327172, 327173, 327174, 327175, 327176 o 327177.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 869-891 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 869-891 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 869-891 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 537, 538, 539, 540, 541, 542, 543, 544, 545 o 546. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 869-891 de la SEC ID Nº 9 se selecciona de los Nº Isis 327178, 327179, 327180, 327181, 327182, 327183, 327184, 327185, 327186 o 327187.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 955-977 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 955-977 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 955-977 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 547, 548, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555 o 556. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 955-977 de la SEC ID Nº 9 se selecciona de los Nº Isis 327188, 327189, 327190, 327191, 327192, 327193, 327194, 327195, 327196 o 327197.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1019-1041 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1019-1041 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1019-1041 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 557, 558, 559, 560, 561, 562, 563, 564, 565 o 566. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1019-1041 de la SEC ID Nº 9 se selecciona de los Nº Isis 327198, 327199, 327200, 327201, 327202, 327203, 327204, 327205, 327206 o 327207.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1160-1175 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1160-1175 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1160-1175 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 567 o 568. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1160-1175 de la SEC ID Nº 9 se selecciona del Nº Isis 338491 o 338562.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1307-1377 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1307-1377 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1307-1377 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 569, 570, 571, 572 o 573. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1307-1377 de la SEC ID Nº 9 se selecciona de los Nº Isis 338498, 338569, 338499, 338570 o 385067.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1307-1414 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1307-1414 de la SEC ID Nº 9. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1307-1414 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 569, 570, 571, 572, 573 o 574. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1307-1414 de la SEC ID Nº 9 se selecciona de los Nº Isis 338498, 338569, 338499, 338570, 385067, o 338573.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR tienen una longitud de 8 a 16, preferentemente de 9 a 15, más preferentemente de 9 a 14, más preferentemente de 10 a 14 nucleótidos de longitud. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR tienen una longitud de 9 a 14 nucleótidos. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR tienen una longitud de 10 a 14 nucleótidos. En ciertas realizaciones, dichos compuestos antisentido cortos son oligonucleotídicos antisentido cortos.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR son gápmeros cortos. En ciertas de dichas realizaciones, los gápmeros cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR comprenden al menos una modificación de alta afinidad en una o más alas del compuesto. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR comprenden de 1 a 3 modificaciones de alta afinidad en cada ala. En ciertas de dichas realizaciones, los nucleósidos o nucleótidos del ala comprenden una modificación en 2’. En ciertas realizaciones, los monómeros del ala son BNA. En ciertas de dichas realizaciones, los monómeros del ala se seleccionan de α-L-metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA, ß-D-metilenoxi(4’-CH2-O-2’) BNA, etilenoxi (4’-(CH2)2-O-2’)BNA, aminooxi(4’-CH2-ON(R)-2’) BNA y oxiamino (4’-CH2-N(R)-O-2’) BNA. En ciertas realizaciones, los monómeros de un ala comprenden un sustituyente en la posición 2’ seleccionado de alilo, amino, azido, tio, O-alilo, O-alquilo C1-C10, -OCF3 , O-(CH2)2-O-CH3, 2’-O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), y O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), en las que cada Rm y Rn es, de forma independiente, H o alquilo C1-C10 sustituido o insustituido. En ciertas realizaciones, los monómeros de un ala son nucleótidos 2’MOE.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR comprenden un hueco entre el ala en 5’ y el ala en 3’. En ciertas realizaciones, el hueco comprende cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece o catorce monómeros. En ciertas realizaciones, los monómeros del hueco son desoxirribonucleótidos no modificados. En ciertas realizaciones, los monómeros del hueco son ribonucleótidos no modificados. En ciertas realizaciones, las modificaciones del hueco (si las hubiera) tienen como resultado un compuesto antisentido que, cuando se une a su ácido nucleico diana, soporta la escisión por una RNasa, incluida, entre otras, la RNasa H.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR tienen enlaces monoméricos. En ciertas de dichas realizaciones, dichos enlaces son todos enlaces fosforotioato. En ciertas realizaciones, los enlaces son todos enlaces fosfodiéster. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR tienen esqueletos mixtos.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR tienen una longitud de 8 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR tienen una longitud de 9 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR tienen una longitud de 10 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR tienen una longitud de 11 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR tienen una longitud de monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR tienen una longitud de 13 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR tienen una longitud de 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR tienen una longitud de 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR tienen una longitud de 16 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR comprenden de 9 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR comprenden de 10 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR comprenden de 12 a 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR comprenden de 12 a 14 nucleótidos o nucleósidos.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos de modulación de la expresión de GCGR. En ciertas realizaciones, dichos procedimientos comprenden el uso de uno o más compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR, en el que el compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCGR tiene una longitud de aproximadamente 8 a aproximadamente 16, preferentemente de 9 a 15, más preferentemente de 9 a 14, más preferentemente de 10 a 14 monómeros (es decir, de aproximadamente 8 a aproximadamente 16 monómeros unidos). Un experto en la técnica apreciará que esto comprende procedimientos de modulación de la expresión de GCGR usando uno
o más compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR de de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16 monómeros.
En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de GCGR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCGR que tiene una longitud de 8 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de GCGR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCGR que tiene una longitud de 9 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de GCGR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCGR que tiene una longitud de 10 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de GCGR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCGR que tiene una longitud de 11 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de GCGR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCGR que tiene una longitud de 12 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de GCGR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCGR que tiene una longitud de 13 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de GCGR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCGR que tiene una longitud de 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de GCGR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCGR que tiene una longitud de 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de GCGR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCGR que tiene una longitud de 16 monómeros.
En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de GCGR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCGR que comprende de 9 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de GCGR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCGR que comprende de 10 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de GCGR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCGR que comprende de 12 a 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de GCGR comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de GCGR que comprende de 12 o 14 nucleótidos o nucleósidos.
8. DGAT2
Diacilglicerol transferasa 2 (también conocida como DGAT2, diacilglicerol-O-transferasa 2, acil-CoA:diacilglicerol aciltransferasa 2). Se ha demostrado que la diacilglicerol transferasa 2 está implicada en el proceso de absorción de los triglicéridos (también denominados triacilgliceroles) de los alimentos.
La absorción de triglicéridos a partir de los alimentos es un proceso muy eficiente que se produce en una serie de etapas, en las que los triacilgliceroles de la dieta se hidrolizan en la luz intestinal y, después, se vuelven a sintetizar en el interior de los enterocitos. La nueva síntesis de los triacilgliceroles se puede producir a través de la vía del monoacilglicerol, que comienza cuando la monoacilglicerol acil-transferasa (MGAT) cataliza la síntesis de diacilglicerol a partir de monoacilglicerol y acil-CoA grasos. Una síntesis alternativa de diacilgligeroles se proporciona mediante la vía del glicerolfosfato, que describe el acoplamiento de dos moléculas de acil-CoA grasos a glicerol-3-fosfato. En cualquier caso, el diacilglicerol se acila después con otra molécula de acil-CoA graso en una reacción catalizada por una de dos enzimas diacilglicerol aciltransferasa para formar el triglicérido (Farese y col., Curr. Opin. Lipidol., 2000, 11, 229-234).
La reacción catalizada por la diacilglicerol aciltransferasa es la última etapa y la única comprometida en la síntesis de triglicéridos. Como tal, la diacilglicerol aciltransferasa está implicada en la absorción de grasas en el intestino, el ensamblaje de lipoproteínas, la regulación de las concentraciones de triglicéridos en plasma y el almacenamiento de grasas en los adipocitos. La primera diacilglicerol aciltransferasa, la diacilglicerol transferasa 1, se identificó en 1960 y los genes humanos y de ratón que codifican esta proteína se aislaron en 1988 (Cases y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 1998, 95, 13018-13023; Oelkers y col., J. Biol. Chem., 1998, 273, 26765-26771). Los ratones que carecen de diacilglicerol aciltransferasa 1 son viables y pueden seguir sintetizando triglicéridos a través de otras vías biológicas, lo que sugiere la existencia de múltiples mecanismos para la síntesis de triglicéridos (Smith y col., Nat. Genet., 2000, 25, 87-90).
Posteriormente se identificó una segunda diacilglicerol transferasa, la diacilglicerol transferasa 2 (también conocida como DGAT2, diacilglicerol-O-transferasa 2, acil-CoA:diacilglicerol aciltransferasa 2) en el hongo Mortierella, en seres humanos y ratones (Cases y col., J. Biol. Chem., 2001, 276, 38870-38876; Lardizabal y col., J. Biol. Chem., 2001, 276, 3886238869). Los ensayos enzimáticos indican que esta proteína recientemente identificada sí posee actividad diacilglicerol transferasa que usa una amplia gama de sustratos de acil-CoA grasos de cadena larga (Cases y col., J. Biol. Chem., 2001, 276, 38870-38876).
La diacilglicerol transferasa 2 es un miembro de una familia de genes cuyas secuencias no están relacionadas con la diacilglicerol transferasa 1. Además de diferir en secuencia en comparación con la diacilglicerol transferasa 1, los ensayos in vitro ilustran que la diacilglicerol transferasa 2 tiene mayor actividad a concentraciones menores de cloruro de magnesio y oleoil-CoA (Cases y col., J. Biol. Chem., 2001, 276, 38870-38876). La secuencia proteica predicha de la diacilglicerol transferasa 2 contiene al menos un supuesto dominio transmembranal, tres sitios de potencial glicosilación ligada a N, seis potenciales sitios consenso de fosforilación de proteína quinasa C, además de secuencias en común con un supuesto sitio de fosforilación de glicerol encontrado en las enzimas aciltransferasas (Cases y col., J. Biol. Chem., 2001, 276, 3887038876). El Consorcio Internacional de Mapeo de Híbridos por Radiación (International Radiation Hybrid Mapping Consortium) ha descifrado el mapa de la diacilglicerol transferasa humana 2 en el cromosoma 11q13.3.
En tejidos humanos, los niveles más altos de diacilglicerol transferasa 2 se detectan en el hígado y en el tejido adiposo blanco, y los niveles más bajos se encuentran en la glándula mamaria, los testículos y los leucocitos de sangre periférica (Cases y col., J. Biol. Chem., 2001, 276, 38870-38876). En tejidos humanos se detectan dos especies de ARNm de 2,4 y 1,8 kilobases, mientras que la especie principal de ARNm de diacilglicerol transferasa 2 en tejidos de ratón tiene 2,4 kilobases. Además de en el hígado y en el tejido adiposo blanco, la diacilglicerol transferasa 2 se expresa en todos los segmentos del intestino delgado en ratones, siendo mayor su expresión en la zona proximal del intestino y menor en la zona distal del intestino (Cases y col., J. Biol. Chem., 2001, 276, 38870-38876).
La actividad diacilglicerol transferasa exhibe patrones distintos durante el desarrollo postnatal del hígado de rata. Dado que no existe correlación alguna entre la expresión de ARNm y los patrones de actividad, las modificaciones postraduccionales pueden participar en la regulación de la actividad de diacilglicerol transferasa 2 durante el desarrollo de la rata (Waterman y col., J. Lipid. Res., 2002, 43, 1555-1562).
Preferentemente, el ARNm de la diacilglicerol transferasa 2 se regula por incremento mediante tratamiento con insulina, como se muestra en los ensayos in vitro en los que se mide la actividad de diacilglicerol en la fracción de membrana de los adipocitos de ratón cultivados (Meegalla y col., Biochem. Biophys. Res. Commun., 2002, 298, 317-323). En ratones en ayunas, la expresión de diacilglicerol transferasa 2 se reduce considerablemente y aumenta espectacularmente una vez se les reintroducen los alimentos. Los patrones de expresión de dos enzimas que participan en la síntesis de ácidos grasos, la acetil-CoA carboxilasa y la ácido graso sintasa, responden a situaciones de ayunas y de realimentación de un modo similar. Estos resultados, combinados con la observación de que la diacilglicerol transferasa 2 se expresa abundantemente en el hígado, sugieren que la diacilglicerol transferasa 2 está estrechamente ligada a la vía de síntesis de ácidos grasos endógena (Meegalla y col., Biochem. Biophys. Res. Commun., 2002, 298, 317-323).
Estudios de ratones que albergan una alteración en el gen de la diacilglicerol aciltransferasa 1 proporciona pruebas de que la diacilglicerol aciltransferasa 2 contribuye a la síntesis de triglicéridos. Los niveles de expresión de ARNm de diacilglicerol transferasa 2 son similares en los segmentos intestinales de ratones silvestres y deficientes en diacilglicerol transferasa 1 (Buhman y col., J. Biol. Chem., 2002, 277, 25474-25479). Usando cloruro de magnesio para distinguir entre actividad diacilglicerol transferasa 1 y 2, Buhman, y col. Observaron que, en ratones deficientes en diacilglicerol transferasa 1, la actividad de diacilglicerol transferasa se reduce en un 50% en la zona proximal del intestino y en un 10-15 % en la zona distal del intestino (Buhman y col., J. Biol. Chem., 2002, 277, 25474-25479).
Adicionalmente, los niveles de ARNm de diacilglicerol transferasa 2 no están regulados por aumento en el hígado o los tejidos adiposos de ratones deficientes en diacilglicerol transferasa 1, incluso tras semanas de dieta rica en grasas (Cases y col., J. Biol. Chem., 2001,276,38870-38876; Chen y col., J. Clin. Invest., 2002, 109, 1049-1055). No obstante, en ratones ob/ob, que tienen una mutación en el gen de la leptina que tiene como resultado obesidad, la diacilglicerol transferasa 2 se expresa mucho más que en ratones de tipo silvestre, lo que sugiere que la diacilglicerol transferasa 2 puede ser en parte responsable de la masa grasa acumulada abundantemente que se observa en estos ratones. Además, las mutaciones combinadas de leptina y diacilglicerol transferasa 2 conducen a una multiplicación por tres de la expresión de diacilglicerol transferasa 2 en el tejido adiposo blanco, en comparación con los niveles en el mismo tejido de ratones deficientes en diacilglicerol transferasa 1 (Chen y col., J. Clin. Invest., 2002, 109, 1049-1055). El ARNm del diacilglicerol transferasa 2 también está regulado por aumento en la piel de estos ratones (Chen y col., J. Clin. Invest., 2002, 109, 175-181). Estos datos sugieren que la leptina normalmente regula por disminución la expresión de diacilglicerol transferasa 2 y que la regulación por aumento de la diacilglicerol transferasa 2 en el tejido adiposo blanco en estos ratones puede proporcionar una vía alternativa para la síntesis de triglicéridos que se sigue produciendo en ratones deficientes en leptina/deficientes en diacilglicerol transferasa 1 (Chen y col., J. Clin. Invest., 2002, 109, 1049-1055).
Los ratones defectivos en diacilglicerol transferasa 1 exhiben fenotipos interesantes en cuanto a que tienen poca masa, son resistentes a la obesidad inducida por la dieta, tienes niveles menores de triglicéridos tisulares y mayor sensibilidad a leptina e insulina ((Chen y col., J. Clin. Invest., 2002, 109, 1049-1055; Smith y col., Nat. Genet., 2000, 25, 87-90) Dado que la diacilglicerol transferasa 2 también participa en la síntesis de triglicéridos, de modo que las interferencias con la diacilglicerol transferasa 2 puede conducir de modo similar a la reducción del contenido de grasas en el organismo.
Definiciones
“DGAT2” quiere decir el producto génico o proteína cuya expresión se va a modular mediante la administración de un compuesto antisentido corto.
“Ácido nucleico de DGAT2” significa cualquier ácido nucleico que codifica DGAT2. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, un ácido nucleico de DGAT2 incluye, sin limitaciones, una secuencia de ADN que codifica DGAT2, una secuencia de ARN transcrita a partir de ADN que codifica DGAT2, y una secuencia de ARNm que codifica el DGAT2.
“ARNm de DGAT2” significa un ARNm que codifica DGAT2.
Indicaciones terapéuticas
La tecnología antisentido es un medio eficaz para reducir la expresión de DGAT2 y se ha demostrado que son únicos en su utilidad en una serie de aplicaciones terapéuticas, diagnósticas y de investigación. Como tal, en ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan compuestos dirigidos a un ácido nucleico que codifica DGAT2 y que modula la expresión de DGAT2. En el presente documento se divulgan además compuestos antisentido cortos capaces de inhibir de forma eficaz la expresión de .
En ciertas realizaciones, se trata a un sujeto del que se sospecha que tiene una enfermedad asociada con DGAT2 administrando uno o más compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico que codifica DGAT2. Por ejemplo, en una realización no limitante, dichos procedimientos comprenden la etapa de administrar a un animal una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto antisentido corto. En ciertas de dichas realizaciones, los compuestos antisentido cortos inhiben de forma eficaz la actividad de DGAT2 o inhiben la expresión de DGAT2. En una realización, la actividad o expresión de DGAT2 en un sujeto es inhibida en al menos un 10%, en al menos un 20%, en al menos un 25%, en al menos un 30%, en al menos un 40%, en al menos un 50%, en al menos un 60%, en al menos un 70%, en al menos un 75%, en al menos un 80%, en al menos un 85%, en al menos un 90%, en al menos un 95%, en al menos un 98%, en al menos un 99%, o en un 100%. En ciertas realizaciones, la actividad o expresión de DGAT2 en un sujeto es inhibida en aproximadamente un 30%. Más preferentemente, la actividad o expresión de DGAT2 en un sujeto es inhibida en un 50%
o más.
La reducción de la expresión de DGAT2 se puede medir en, por ejemplo sangre, plasma, suero, tejido adiposo, hígado o cualquier otro fluido corporal, tejido u órgano del animal. Preferentemente, las células contenidas dentro de dichos fluidos, tejidos u órganos que se están analizando contienen una molécula de ácido nucleico que codifica DGAT2 y/o la propia proteína DGAT2.
En ciertas realizaciones, también se divulgan composiciones farmacéuticas y de otro tipo que comprenden los compuestos de la divulgación. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DRAT2 se pueden usar en composiciones farmacéuticas añadiéndoles una cantidad eficaz de un compuesto a un diluyente o transportador adecuado farmacéuticamente aceptable.
Ciertos compuestos antisentido cortos dirigidos a DGAT2 pueden tener una cualquiera o más propiedades o características de los compuestos antisentido cortos en general descritos en el presente documento. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 tienen un motivo (ala-hueco desoxi-ala) seleccionado de 1-12-1, 1-1-10-2, 2-10-l-1, 3-10-3, 2-10-3, 2-10-2, 1-10-1,1-10-2, 3-8-3, 2-8-2, 1-8-1, 3-6-3 o 16-1. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 tienen un motivo
5 (ala-hueco desoxi-ala) seleccionado de 1-10-1, 2-10-2 y 3-10-3.
En el presente documento se divulgan procedimientos de tratar a un individuo administrando uno o compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 o una composición farmacéutica que comprende dicho compuesto. También se divulgan procedimientos de tratar a un individuo que sufra una enfermedad o afección asociada con la actividad de DGAT2 administrando un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de DGAT2.
10 Enfermedades y afecciones asociadas con DGAT2 incluyen, entre otros, trastornos cardiovasculares, obesidad, diabetes, colesterolemia y esteatosis hepática.
Ciertos compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos están dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 que tiene la secuencia de número de acceso en GENBANK® NM_032564.2, incorporada en el presente documento como SEC ID Nº 15 10. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 10 es al menos un 90% complementario a la SEC ID Nº 10. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 10 es al menos un 95% complementario a la SEC ID Nº 10. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 10 ES 100% complementario a la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 10 incluye una secuencia nucleotídica seleccionada de las secuencias
20 nucleotídicas indicadas en las Tablas 14 y 15.
La secuencia nucleotídica indicada en cada una de las Tablas 14 y 15 es independiente de cualquier modificación de un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica. Como tales, los compuestos antisentido cortos que comprenden una secuencia de nucleótidos tal como se indica en las Tablas 14 y 15 pueden comprender, de forma independiente, una o más modificaciones en un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica. Los 25 compuestos antisentido descritos por el Número Isis (Nº Isis) indican una combinación de secuencia de bases nucleotídicas y una o más modificaciones en un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica. Las Tablas 14 y 15 ilustran ejemplos de compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 10. La Tabla 14 ilustra compuestos antisentido cortos que son 100% complementarios a la SEC ID Nº 10. La Tabla 15 ilustra compuestos antisentido cortos que tienen uno o dos apareamientos erróneos con respecto a la SEC ID Nº 10. La columna denominada 30 "motivo gápmero" indica el motivo ala-hueco-ala de cada compuesto antisentido corto. El segmento hueco comprende 2'desoxinucleótidos y cada nucleótido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado en 2'. El azúcar modificado en 2' concreto también está indicado en la columna “motivo gápmero”. Por ejemplo, ‘2-10-2 MOE’ significa un motivo gápmero 2-10-2, en el que un segmento de hueco de diez 2’-desoxinucleótidos está flanqueado por segmentos ala de dos nucleótidos, en los que los nucleótidos de los segmentos ala son nucleótidos 2’-MOE. Los enlaces
35 internucleosídicos son fosforotioato. Los compuestos antisentido cortos comprenden 5-metilcitidina en lugar de citosina no modificada, a menos que “citosina no modificada” esté en la lista en la columna del motivo gápmero, en cuyo caso las citosinas indicadas son citosinas no modificadas. Por ejemplo, “5-mC sólo en hueco” indica que el segmento de hueco tiene 5-metilcitosinas, mientras que los segmentos ala tienen citosinas no modificadas.

Tabla 14: Compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 10
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
372556
231 244 ATGAGGGTCTTCAT 2-10-2 MOE 681
372557
249 262 ACCCCGGAGTAGGC 2-10-2 MOE 682
382601
249 260 CCCGGAGTAGGC 1-10-1 MOE 683
372480
251 266 CAGGACCCCGGAGTAG 3-10-3 MOE 684
372481
252 267 GCAGGACCCCGGAGTA 3-10-3 MOE 685
372558
252 265 AGGACCCCGGAGTA 2-10-2 MOE 686
372559
253 266 CAGGACCCCGGAGT 2-10-2 MOE 687
382603
331 342 CAGACCCCTCGC 1-10-1 MOE 688
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
382604
361 372 AGAGGATGCTGG 1-10-1 MOE 689
372485
392 407 GAGCCAGGTGACAGAG 3-10-3 MOE 690
372563
393 406 AGCCAGGTGACAGA 2-10-2 MOE 691
382605
397 408 TGAGCCAGGTGA 1-10-1 MOE 692
372565
414 427 TTTTCCACCTTGGA 2-10-2 MOE 693
382606
482 493 CTGCAGGCCACT 1-10-1 MOE 694
372497
651 666 TCACCAGCTGGATGGG 3-10-3 MOE 695
372498
652 667 TTCACCAGCTGGATGG 3-10-3 MOE 696
372575
652 665 CACCAGCTGGATGG 2-10-2 MOE 697
372576
653 666 TCACCAGCTGGATG 2-10-2 MOE 698
382607
655 666 TCACCAGCTGGA 1-10-1 MOE 699
372499
656 671 TGTCTTCACCAGCTGG 3-10-3 MOE 700
372577
657 670 GTCTTCACCAGCTG 2-10-2 MOE 701
372500
659 674 GTGTGTCTTCACCAGC 3-10-3 MOE 702
372578
660 673 TGTGTCTTCACCAG 2-10-2 MOE 703
372501
661 676 TTGTGTGTCTTCACCA 3-10-3 MOE 704
372579
662 675 TGTGTGTCTTCACC 2-10-2 MOE 705
372502
664 679 AGGTTGTGTGTCTTCA 3-10-3 MOE 706
372580
665 678 GGTTGTGTGTCTTC 2-10-2 MOE 707
372503
666 681 GCAGGTTGTGTGTCTT 3-10-3 MOE 708
372581
667 680 CAGGTTGTGTGTCT 2-10-2 MOE 709
372504
669 684 TCAGCAGGTTGTGTGT 3-10-3 MOE 710
372582
670 683 CAGCAGGTTGTGTG 2-10-2 MOE 711
372505
671 686 GGTCAGCAGGTTGTGT 3-10-3 MOE 712
372506
672 687 TGGTCAGCAGGTTGTG 3-10-3 MOE 713
372583
672 685 GTCAGCAGGTTGTG 2-10-2 MOE 714
372584
673 686 GGTCAGCAGGTTGT 2-10-2 MOE 715
372507
676 691 CTGGTGGTCAGCAGGT 3-10-3 MOE 716
372585
677 690 TGGTGGTCAGCAGG 2-10-2 MOE 717
382608
680 691 CTGGTGGTCAGC 1-10-1 MOE 718
372508
681 696 AGTTCCTGGTGGTCAG 3-10-3 MOE 719
372586
682 695 GTTCCTGGTGGTCA 2-10-2 MOE 720
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
372509
684 699 TATAGTTCCTGGTGGT 3-10-3 MOE 721
372587
685 698 ATAGTTCCTGGTGG 2-10-2 MOE 722
372510
686 701 GATATAGTTCCTGGTG 3-10-3 MOE 723
372588
687 700 ATATAGTTCCTGGT 2-10-2 MOE 724
372511
691 706 CCAAAGATATAGTTCC 3-10-3 MOE 725
372512
692 707 TCCAAAGATATAGTTC 3-10-3 MOE 726
372589
692 705 CAAAGATATAGTTC 2-10-2 MOE 727
372590
693 706 CCAAAGATATAGTT 2-10-2 MOE 728
382609
724 735 CCAGGCCCATGA 1-10-1 MOE 729
372514
725 740 GGCACCCAGGCCCATG 3-10-3 MOE 730
372592
726 739 GCACCCAGGCCCAT 2-10-2 MOE 731
372515
730 745 CAGAAGGCACCCAGGC 3-10-3 MOE 732
372593
731 744 AGAAGGCACCCAGG 2-10-2 MOE 733
382610
851 862 CCAGACATCAGG 1-10-1 MOE 734
382611
867 878 GACAGGGCAGAT 1-10-1 MOE 735
382602
868 879 TGACAGGGCAGA 1-10-1 MOE 736
382612
911 922 CCACTCCCATTC 1-10-1 MOE 737
372524
965 980 GCCAGGCATGGAGCTC 3-10-3 MOE 738
372602
966 979 CCAGGCATGGAGCT 2-10-2 MOE 739
382613
968 979 CCAGGCATGGAG 1-10-1 MOE 740
382614
987 998 CAGGGTGACTGC 1-10-1 MOE 741
372525
989 1004 GTTCCGCAGGGTGACT 3-10-3 MOE 742
372603
990 1003 TTCCGCAGGGTGAC 2-10-2 MOE 743
372526
992 1007 GCGGTTCCGCAGGGTG 3-10-3 MOE 744
372604
993 1006 CGGTTCCGCAGGGT 2-10-2 MOE 745
372530
1106 1121 TCGGCCCCAGGAGCCC 3-10-3 MOE 746
372608
1107 1120 CGGCCCCAGGAGCC 2-10-2 MOE 747
372531
1109 1124 CCATCGGCCCCAGGAG 3-10-3 MOE 748
372609
1110 1123 CATCGGCCCCAGGA 2-10-2 MOE 749
372532
1112 1127 GACCCATCGGCCCCAG 3-10-3 MOE 750
372610
1113 1126 ACCCATCGGCCCCA 2-10-2 MOE 751
372533
1117 1132 TTCTGGACCCATCGGC 3-10-3 MOE 752
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
382615
1117 1128 GGACCCATCGGC 1-10-1 MOE 753
372611
1118 1131 TCTGGACCCATCGG 2-10-2 MOE 754
372536
1199 1214 CACCAGCCCCCAGGTG 3-10-3 MOE 755
372614
1200 1213 ACCAGCCCCCAGGT 2-10-2 MOE 756
372537
1204 1219 TAGGGCACCAGCCCCC 3-10-3 MOE 757
372615
1205 1218 AGGGCACCAGCCCC 2-10-2 MOE 758
372538
1209 1224 TGGAGTAGGGCACCAG 3-10-3 MOE 759
372616
1210 1223 GGAGTAGGGCACCA 2-10-2 MOE 760
382616
1215 1226 CTTGGAGTAGGG 1-10-1 MOE 761
372539
1218 1233 TGATGGGCTTGGAGTA 3-10-3 MOE 762
372617
1219 1232 GATGGGCTTGGAGT 2-10-2 MOE 763
372540
1293 1308 TGTGGTACAGGTCGAT 3-10-3 MOE 764
372618
1294 1307 GTGGTACAGGTCGA 2-10-2 MOE 765
382617
1294 1305 GGTACAGGTCGA 1-10-1 MOE 766
372541
1295 1310 GGTGTGGTACAGGTCG 3-10-3 MOE 767
372619
1296 1309 GTGTGGTACAGGTC 2-10-2 MOE 768
372542
1298 1313 CATGGTGTGGTACAGG 3-10-3 MOE 769
372620
1299 1312 ATGGTGTGGTACAG 2-10-2 MOE 770
372543
1300 1315 TACATGGTGTGGTACA 3-10-3 MOE 771
372621
1301 1314 ACATGGTGTGGTAC 2-10-2 MOE 772
372544
1303 1318 ATGTACATGGTGTGGT 3-10-3 MOE 773
372622
1304 1317 TGTACATGGTGTGG 2-10-2 MOE 774
382618
1313 1324 GCCTCCATGTAC 1-10-1 MOE 775
382619
1325 1336 AGCTTCACCAGG 1-10-1 MOE 776
382620
1383 1394 GTTCACCTCCAG 1-10-1 MOE 777

Tabla 15: Compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 10 y que tienen 1 o 2 apareamientos erróneos
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
372608
151 164 CGGCCCCAGGAGCC 2-10-2 MOE 747
372474
156 171 CATGCCCCAGCCGCCG 3-10-3 MOE 778
372552
157 170 ATGCCCCAGCCGCC 2-10-2 MOE 779
382609
167 178 CCAGGCCCATGA 1-10-1 MOE 729
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
372478
230 245 GATGAGGGTCTTCATG 3-10-3 MOE 780
372479
248 263 GACCCCGGAGTAGGCA 3-10-3 MOE 781
382611
317 328 GACAGGGCAGAT 1-10-1 MOE 735
372483
352 367 ATGCTGGAGCCAGTGC 3-10-3 MOE 782
372561
353 366 TGCTGGAGCCAGTG 2-10-2 MOE 783
372562
373 386 GTCTTGGAGGGCCG 2-10-2 MOE 784
382602
388 399 TGACAGGGCAGA 1-10-1 MOE 736
372613
392 405 CCCAGGTGTCAGAG 2-10-2 MOE 785
372486
412 427 TTTTCCACCTTGGATC 3-10-3 MOE 786
372564
413 426 TTTCCACCTTGGAT 2-10-2 MOE 787
372487
413 428 TTTTTCCACCTTGGAT 3-10-3 MOE 788
372488
418 433 AGGTGTTTTTCCACCT 3-10-3 MOE 789
372566
419 432 GGTGTTTTTCCACC 2-10-2 MOE 790
372489
459 474 CCAGGAAGGATAGGAC 3-10-3 MOE 791
372567
460 473 CAGGAAGGATAGGA 2-10-2 MOE 792
382612
475 486 CCACTCCCATTC 1-10-1 MOE 737
372490
483 498 TGACACTGCAGGCCAC 3-10-3 MOE 793
372568
484 497 GACACTGCAGGCCA 2-10-2 MOE 794
372491
492 507 ACATGAGGATGACACT 3-10-3 MOE 795
372569
493 506 CATGAGGATGACAC 2-10-2 MOE 796
372492
503 518 GCAGAAGGTGTACATG 3-10-3 MOE 797
372570
504 517 CAGAAGGTGTACAT 2-10-2 MOE 798
372493
512 527 GCAGTCAGTGCAGAAG 3-10-3 MOE 799
372571
513 526 CAGTCAGTGCAGAA 2-10-2 MOE 800
372496
612 627 ACACGGCCCAGTTTCG 3-10-3 MOE 801
372574
613 626 CACGGCCCAGTTTC 2-10-2 MOE 802
372513
717 732 GGCCCATGATGCCATG 3-10-3 MOE 803
372591
718 731 GCCCATGATGCCAT 2-10-2 MOE 804
372516
732 747 TACAGAAGGCACCCAG 3-10-3 MOE 805
372594
733 746 ACAGAAGGCACCCA 2-10-2 MOE 806
372518
812 827 GAAGTTGCCAGCCAAT 3-10-3 MOE 807
372596
813 826 AAGTTGCCAGCCAA 2-10-2 MOE 808
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
372560
863 876 CAGGGCAGATCCTT 2-10-2 MOE 809
372519
887 902 CAAGTAGTCTATGGTG 3-10-3 MOE 810
372597
888 901 AAGTAGTCTATGGT 2-10-2 MOE 811
372520
894 909 TGGAAAGCAAGTAGTC 3-10-3 MOE 812
372598
895 908 GGAAAGCAAGTAGT 2-10-2 MOE 813
372527
1013 1028 GGCCAGCTTTACAAAG 3-10-3 MOE 814
372605
1014 1027 GCCAGCTTTACAAA 2-10-2 MOE 815
372606
1020 1033 CGCAGGGCCAGCTT 2-10-2 MOE 816
372529
1052 1067 AAAGGAATAGGTGGGA 3-10-3 MOE 817
372607
1053 1066 AAGGAATAGGTGGG 2-10-2 MOE 818
372534
1144 1159 GCGAAACCAATATACT 3-10-3 MOE 819
372612
1145 1158 CGAAACCAATATAC 2-10-2 MOE 820
372535
1192 1207 CCCCAGGTGTCAGAGG 3-10-3 MOE 821
372613
1193 1206 CCCAGGTGTCAGAG 2-10-2 MOE 822
372545
1332 1347 GATTGTCAAAGAGCTT 3-10-3 MOE 823
372623
1333 1346 ATTGTCAAAGAGCT 2-10-2 MOE 824
372546
1342 1357 TTGGTCTTGTGATTGT 3-10-3 MOE 825
372624
1343 1356 TGGTCTTGTGATTG 2-10-2 MOE 826
372547
1352 1367 AAGGCCGAATTTGGTC 3-10-3 MOE 827
372625
1353 1366 AGGCCGAATTTGGT 2-10-2 MOE 828
382601
1617 1628 CCCGGAGTAGGC 1-10-1 MOE 683
382606
1971 1982 CTGCAGGCCACT 1-10-1 MOE 694
382612
1988 1999 CCACTCCCATTC 1-10-1 MOE 737
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 231-267 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 231-267 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 231-267 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID 5 Nº 681, 682, 683, 684, 685, 686 o 687. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 231-267 de la SEC ID Nº 10 se selecciona de los Nº Isis 372556, 372557, 382601, 372480, 372481, 372558 o 372559.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 249-267 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 249-267 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto
10 antisentido corto dirigido a los nucleótidos 249-267 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 683, 684, 685, 686 o 687. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 249-267 de la SEC ID Nº 10 se selecciona de los Nº Isis 382601, 372480, 372481, 372558 o 372559.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 331-493 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 331-493 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto 15 antisentido corto dirigido a los nucleótidos 331-493 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID
Nº 688, 689, 690, 691, 692, 693 o 694. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 331-493 de la SEC ID Nº 10 se selecciona de los Nº Isis 382603, 382604, 372485, 372563, 382605, 372565 o 382606.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 331-427 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 331-427 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 331-427 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 688, 689, 690, 691, 692 o 693. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 331-427 de la SEC ID Nº 10 se selecciona de los Nº Isis 382603, 382604, 372485, 372563, 382605, o 372565.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 392-408 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 392-408 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 392-408 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 690, 691 o 692. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 392-408 de la SEC ID Nº 10 se selecciona del Nº Isis 372485, 372563 o 382605.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 651-707 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 651-707 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 651-707 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 695, 696, 697, 698, 699, 700, 701, 702, 703, 704, 705, 706, 707, 708, 709, 710, 711, 712, 713, 714, 715, 716, 717, 718, 719, 720, 721, 722, 723, 724, 725, 726, 727 o 728. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 651-707 de la SEC ID Nº 10 se selecciona de los Nº Isis 372497, 372498, 372575, 372576, 382607, 372499, 372577, 372500, 372578, 372501, 372579, 372502, 372580, 372503, 372581, 372504, 372582, 372505, 372506, 372583, 372584, 372507, 372585, 382608, 372508, 372586, 372509, 372587, 372510, 372588, 372511, 372512, 372589 o 372590.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 724-745 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 724-745 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 724-745 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 729, 730, 731, 732 o 733. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 724-745 de la SEC ID Nº 10 se selecciona de los Nº Isis 382609, 372514, 372592, 372515 o 372593.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 651-745 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 651-745 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 651-745 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 695, 696, 697, 698, 699, 700, 701, 702, 703, 704, 705, 706, 707, 708, 709, 710, 711, 712, 713, 714, 715, 716, 717, 718, 719, 720, 721, 722, 723, 724, 725, 726, 727, 728, 729, 730, 731, 732 o 733. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 651-745 de la SEC ID Nº 10 se selecciona de los Nº Isis 372497, 372498, 372575, 372576, 382607, 372499, 372577, 372500, 372578, 372501, 372579, 372502, 372580, 372503, 372581, 372504, 372582, 372505, 372506, 372583, 372584, 372507, 372585, 382608, 372508, 372586, 372509, 372587, 372510, 372588, 372511, 372512, 372589, 372590, 382609, 372514, 372592, 372515 o 372593.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 851-922 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 851-922 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 851-922 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 734, 735, 736 o 737. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 851922 de la SEC ID Nº 10 se selecciona de los Nº Isis 382610, 382611, 382602 o 382612.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 851-879 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 851-879 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 851-879 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 734, 735 o 736. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 851-879 de la SEC ID Nº 10 se selecciona del Nº Isis 382610, 382611 o 382602.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 965-1007 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 965-1007 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 965-1007 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 738, 739, 740, 741, 742, 743, 744 o 745. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 965-1007 de la SEC ID Nº 10 se selecciona de los Nº Isis 372524, 372602, 382613, 382614, 372525, 372603, 372526 o 372604.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 965-979 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 965-979 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 965-979 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 738, 739 o 740. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 965-979 de la SEC ID Nº 10 se selecciona del Nº Isis 372524, 372602 o 382613.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 987-1007 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 987-1007 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 987-1007 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 741, 742, 743, 744 o 745. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 987-1007 de la SEC ID Nº 10 se selecciona de los Nº Isis 382614, 372525, 372603, 372526 o 372604.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1106-1132 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1106-1132 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1106-1132 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 746, 747, 748, 749, 750, 751, 752, 753 o 754. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1106-1132 de la SEC ID Nº 10 se selecciona de los Nº Isis 372530, 372608, 372531, 372609, 372532, 372610, 372533, 382615 o 372611.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1199-1233 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1199-1233 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1199-1233 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 755, 756, 757, 758, 759, 760, 761, 762 o 763. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1199-1233 de la SEC ID Nº 10 se selecciona de los Nº Isis 372536, 372614, 372537, 372615, 372538, 372616, 382616, 372539 o 372617.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1293-1394 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1293-1394 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1293-1394 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 764, 765, 766, 767, 768, 769, 770, 771, 772, 773, 774 o 775. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1293-1394 de la SEC ID Nº 10 se selecciona de los Nº Isis 372540, 372618, 382617, 372541, 372619, 372542, 372620, 372543, 372621, 372544, 372622, 382618, 382619 o 382620.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1293-1336 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1293-1336 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1293-1336 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 764, 765, 766, 767, 768, 769, 770, 771, 772, 773, 774, 775 o 776. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1293-1336 de la SEC ID Nº 10 se selecciona de los Nº Isis 372540, 372618, 382617, 372541, 372619, 372542, 372620, 372543, 372621, 372544, 372622, 382618 o 382619.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1293-1324 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1293-1324 de la SEC ID Nº 10. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1293-1324 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 764, 765, 766, 767, 768, 769, 770, 771, 772, 773, 774 o 775. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1293-1324 de la SEC ID Nº 10 se selecciona de los Nº Isis 372540, 372618, 382617, 372541, 372619, 372542, 372620, 372543, 372621, 372544, 372622 o 382618.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 tienen una longitud de 8 a 16, preferentemente de 9 a 15, más preferentemente de 9 a 14, más preferentemente de 10 a 14 nucleótidos de longitud. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 tienen una longitud de 9 a 14 nucleótidos. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 tienen una longitud de 10 a 14 nucleótidos. En ciertas realizaciones, dichos compuestos antisentido cortos son oligonucleotídicos antisentido cortos.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 son gápmeros cortos. En ciertas de dichas realizaciones, los gápmeros cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 comprenden al menos una modificación de alta afinidad en una o más alas del compuesto. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 comprenden de 1 a 3 modificaciones de alta afinidad en cada ala. En ciertas de dichas realizaciones, los nucleósidos o nucleótidos del ala comprenden una modificación en 2’. En ciertas realizaciones, los monómeros del ala son BNA. En ciertas de dichas realizaciones, los monómeros del ala se seleccionan de α-L-metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA, ß-D-metilenoxi(4’-CH2-O-2’) BNA, etilenoxi (4’-(CH2)2-O-2’)BNA, aminooxi(4’-CH2-ON(R)-2’) BNA y oxiamino (4’-CH2-N(R)-O-2’) BNA. En ciertas realizaciones, los monómeros de un ala comprenden un sustituyente en la posición 2’ seleccionado de alilo, amino, azido, tio, O-alilo, O-alquilo C1-C10, -OCF3 , O-(CH2)2-O-CH3, 2’-O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), y O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), en las que cada Rm y Rn es, de forma independiente, H o alquilo C1-C10 sustituido o insustituido. En ciertas realizaciones, los monómeros de un ala son nucleótidos 2’MOE.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 comprenden un hueco entre el ala en 5’ y el ala en 3’. En ciertas realizaciones, el hueco comprende cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece o catorce monómeros. En ciertas realizaciones, los monómeros del hueco son desoxirribonucleótidos no modificados. En ciertas realizaciones, los monómeros del hueco son ribonucleótidos no modificados. En ciertas realizaciones, las modificaciones del hueco (si las hubiera) tienen como resultado un compuesto antisentido corto que, cuando se une a su ácido nucleico diana, soporta la escisión por una RNasa, incluida, entre otras, la RNasa H.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 tienen enlaces monoméricos. En ciertas de dichas realizaciones, dichos enlaces son todos enlaces fosforotioato. En ciertas realizaciones, los enlaces son todos enlaces fosfodiéster. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 tienen esqueletos mixtos.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 tienen una longitud de 8 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 tienen una longitud de 9 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 tienen una longitud de 10 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 tienen una longitud de 11 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 tienen una longitud de monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 tienen una longitud de 13 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 tienen una longitud de 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 tienen una longitud de 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 tienen una longitud de 16 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 comprenden de 9 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 comprenden de 10 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 comprenden de 12 a 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 comprenden de 12 a 14 nucleótidos o nucleósidos.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos de modulación de la expresión de DGAT2. En ciertas realizaciones, dichos procedimientos comprenden el uso de uno o más compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2, en el que el compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de DGAT2 tiene una longitud de aproximadamente 8 a aproximadamente 16, preferentemente de 9 a 15, más preferentemente de 9 a 14, más preferentemente de 10 a 14 monómeros (es decir, de aproximadamente 8 a aproximadamente 16 monómeros unidos). Un experto en la técnica apreciará que esto comprende procedimientos de modulación de la expresión de DGAT2 usando uno o más compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 de de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16 monómeros.
En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de DGAT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de DGAT2 que tiene una longitud de 8 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de DGAT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de DGAT2 que tiene una longitud de 9 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de DGAT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de DGAT2 que tiene una longitud de 10 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de DGAT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de DGAT2 que tiene una longitud de 11 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de DGAT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de DGAT2 que tiene una longitud de 12 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de DGAT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de DGAT2 que tiene una longitud de 13 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de DGAT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de DGAT2 que tiene una longitud de 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de DGAT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de DGAT2 que tiene una longitud de 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de DGAT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de DGAT2 que tiene una longitud de 16 monómeros.
En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de DGAT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de DGAT2 que comprende de 9 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de DGAT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de DGAT2 que comprende de 10 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de DGAT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de DGAT2 que comprende de 12 a 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de DGAT2 comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de DGAT2 que comprende de 12 o 14 nucleótidos o nucleósidos.
9. PTP1B
PTP1B (también conocida como proteína fosfatasa 1B y PTPN1) es una enzima asociada al retículo endoplásmico (RE) aislada inicialmente como la principal proteína tirosina fosfatasa de la placenta humana (Tonks y col., J. Biol. Chem., 1988, 263, 6731-6737; Tonks y col., J. Biol. Chem., 1988, 263, 6722-6730).
Se ha establecido un papel regulador esencial en la señalización mediada por el receptor de la insulina para PTP1B. En ciertos casos, la PTP1B interacciona y desfosforila el receptor de la insulina activada tanto in vitro como en células intactas, que da lugar a la regulación por disminución de la vía de señalización (Goldstein y col., Mol. Cell. Biochem., 1998, 182, 91-99; Seely y col., Diabetes. 1996, 45, 1379-1385). Además, la PTP1B modula las acciones mitogénicas de la insulina (Goldstein y col., Mol. Cell. Biochem., 1998, 182, 91-99). En células adiposas de rata que sobreexpresan PTP1B, la translocación del transportador de glucosa GLUT4 estaba inhibido, lo que implica que la PTP1B es un regulador negativo del transporte de glucosa también (Chen y col., J. Biol. Chem., 1997, 272, 8026-8031).
Los modelos de ratones defectivos que carecen del gen PTP1B también apuntan hacia una regulación negativa de la señalización de la insulina por la PTP1B. Los ratones que albergan un gen alterado de PTP1B mostraron un incremento de la sensibilidad a la insulina y un incremento de la fosforilación del receptor de la insulina. Cuando se les alimenta con una dieta rica en grasas, los ratones PTP1B -/- eran resistentes a la ganancia de peso y permanecía sensibles a la insulina (Elchebly y col., Science, 1999, 283, 1544-1548). Estos estudios claramente establecen que la PTP1B es una diana terapéutica en el tratamiento de la diabetes y la obesidad.
La diabetes y la obesidad (en ocasiones denominadas en conjunto “diabesidad”) están interrelacionadas. La mayor parte de la obesidad humana está asociada con la resistencia a la insulina y la resistencia a la leptina. De hecho, la obesidad pueden tener un impacto sobre la acción de la insulina incluso mayor que la diabetes en sí (Sindelka y col., Physiol Res., 2002, 51, 85-91). El síndrome X o síndrome metabólico es un término nuevo acuñado para un grupo de afecciones que, cuando se producen juntas, puede indicar una predisposición a diabetes y a enfermedades cardiovasculares. Estos síntomas, incluidos hipertensión, niveles altos de triglicéridos, niveles bajos de HDL y obesidad, tienden a aparecer juntos en algunos individuos. Dada su función en la diabetes y la obesidad, se cree que la PTP1B es una diana terapéutica para una serie de afecciones metabólicas, incluidas diabetes, obesidad y síndrome metabólico. Mejorando el control de la glucosa en sangre, los inhibidores de la PTP1B pueden también ser útiles en la ralentización, prevención retraso o mejora de las secuelas de la diabetes, que incluyen retinopatía, neuropatía, complicaciones cardiovasculares y nefropatía.
La PTP1B, que se regula de forma diferenciada durante el ciclo celular (Schievella y col., Cell. Growth Differ., 1993, 4, 239246), se expresa en tejidos sensibles a insulina como dos isoformas diferentes que surgen del corte y empalme alternativo del pre-ARNm (Shifrin y Neel, J. Biol. Chem., 1993, 268, 25376-25384). La proporción de los productos de corte y empalme alternativos se ve afectada por factores de crecimiento, tal como la insulina, y difiere en varios tejidos analizados (Sell y Reese, Mol. Genet. Metab., 1999, 66, 189-192). En estos estudios, los niveles de las variantes se correlacionaron con la concentración de insulina en plasma y el porcentaje de gras corporal. Por tanto, estas variantes pueden usarse como biomarcador para pacientes con hiperinsulinemia crónica o diabetes de tipo 2.
Definiciones
La “proteína tirosina fosfatasa 1B” es el producto génico o proteína cuya expresión se va a modular mediante la administración de un compuesto antisentido corto. En general, se hace referencia a la proteína tirosina fosfatasa 1B como PTP1B, pero también puede denominarse proteína tirosina fosfatasa; PTPN1; RKPTP; proteína tirosina fosfatasa no receptor de tipo 1.
“Ácido nucleico de PTP1B” significa cualquier ácido nucleico que codifica la PTP1B. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, un ácido nucleico de PTP1B incluye, sin limitaciones, una secuencia de ADN que codifica PTP1B, una secuencia de ARN transcrita a partir de ADN que codifica PTP1B, y una secuencia de ARNm que codifica el PTP1B.
“ARNm de PTP1B” significa un ARNm que codifica una proteína PTP1B.
Indicaciones terapéuticas
La tecnología antisentido es un medio eficaz para reducir la expresión de PTP1B y se ha demostrado que son únicos en su utilidad en una serie de aplicaciones terapéuticas, diagnósticas y de investigación. Como tal, en ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan compuestos dirigidos a un ácido nucleico que codifica PTP1B y que modula la expresión de PTP1B. En el presente documento se divulgan además compuestos antisentido cortos capaces de inhibir de forma eficaz la expresión de .
Para ciertas terapéuticas, un sujeto del que se sospecha que presenta una enfermedad o trastorno, que se puede tratar mediante modulación de la expresión de PTP1B es tratado mediante la administración de uno o más compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico que codifica PTP1B. Por ejemplo, en una realización no limitante, los procedimientos comprenden la etapa de administrar a un animal una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto antisentido corto. Los compuestos antisentido cortos de la presente divulgación inhiben de forma eficaz la actividad de PTP1B o inhiben la expresión de PTP1B. En una realización, la actividad o expresión de PTP1B en un sujeto es inhibida en al menos un 10%, en al menos un 20%, en al menos un 25%, en al menos un 30%, en al menos un 40%, en al menos un 50%, en al menos un 60%, en al menos un 70%, en al menos un 75%, en al menos un 80%, en al menos un 85%, en al menos un 90%, en al menos un 95%, en al menos un 98%, en al menos un 99%, o en un 100%. En ciertas realizaciones, la actividad o expresión de PTP1B en un sujeto es inhibida en aproximadamente un 30%. En ciertas realizaciones, la actividad o expresión de PTP1B en un sujeto es inhibida en un 50% o más.
La reducción de la expresión de PTP1B se puede medir en, por ejemplo sangre, plasma, suero, tejido adiposo, hígado o cualquier otro fluido corporal, tejido u órgano del animal. Preferentemente, las células contenidas dentro de dichos fluidos, tejidos u órganos que se están analizando contienen una molécula de ácido nucleico que codifica PTP1B y/o la propia proteína PTP1B.
También se divulgan ciertas composiciones farmacéuticas y de otro tipo que comprenden los compuestos de la divulgación. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTPQB se usan en composiciones farmacéuticas añadiéndoles una cantidad eficaz de un compuesto a un diluyente o transportador adecuado farmacéuticamente aceptable.
Los compuestos antisentido cortos dirigidos a PTP1B pueden tener una cualquiera o más propiedades o características de los compuestos antisentido cortos en general descritos en el presente documento. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B tienen un motivo (ala-hueco desoxi-ala) seleccionado de 1-12-1, 1-1-10-2, 2-10-1-1, 3-10-3, 2-10-3, 2-10-2, 1-10-1, 1-10-2, 3-8-3, 2-8-2, 1-8-1, 3-6-3 o 1-6-1, más preferentemente 1-10-1, 2-10-2, 3-10-3 y 1-9-2.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos de tratar a un individuo administrando uno
o compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B o una composición farmacéutica que comprende dicho compuesto. También se divulgan procedimientos de tratar a un individuo que sufra una enfermedad o afección asociada con la actividad de PTP1B administrando un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B. Enfermedades y afecciones asociadas con PTP1B incluyen, entre otras, niveles elevados de glucosa en sangre o hiperglucemia, prediabetes, diabetes, diabetes de tipo 2, síndrome metabólico, obesidad y resistencia a la insulina. Por tanto, en el presente documento se divulgan procedimientos de tratar los niveles elevados de glucosa en sangre o hiperglucemia, la prediabetes, la diabetes, la diabetes de tipo 2, el síndrome metabólico, la obesidad y la resistencia a la insulina, administrando un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B.
En ciertas realizaciones en el presente documento se divulgan composiciones y procedimientos para disminuir los niveles de glucosa en sangre en un sujeto o para prevenir o retrasar el inicio de un incremento de los niveles de glucosa en sangre en un sujeto, administrando al sujeto un inhibidor antisentido corto de la expresión de PTP1B.
En ciertas realizaciones en el presente documento se divulgan composiciones y procedimientos para mejorar la sensibilidad a la insulina en un sujeto o para prevenir o retrasar el inicio de la resistencia a la insulina en un sujeto, administrando al sujeto un inhibidor antisentido corto de la expresión de PTP1B.
En ciertas realizaciones en el presente documento se divulgan composiciones y procedimientos para tratar una afección metabólica en un sujeto o para prevenir o retrasar el inicio de una afección metabólica en un sujeto, administrando al sujeto un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B. Dicha afección metabólica puede ser cualquier afección metabólica asociada con la expresión de PTP1B, incluidas, entre otras, diabetes y obesidad. También se divulgan procedimientos de reducir la adiposidad. También se divulga un procedimiento de tratar la obesidad en el que se incrementa la tasa metabólica.
En ciertas realizaciones, el sujeto tiene diabetes de tipo 2. En ciertas de dichas realizaciones, el sujeto exhibe niveles elevados de HbAlc. En ciertas de dichas realizaciones, los niveles de HbAlc son al menos aproximadamente 6%, al menos aproximadamente 7%, al menos aproximadamente 8%, al menos aproximadamente 9%, al menos aproximadamente 10%
o al menos aproximadamente 11%. En realizaciones preferidas, los niveles de HbAlc se reducen en aproximadamente un 7% o menos de un 7%. En ciertas de dichas realizaciones, el sujeto exhibe un índice de masa corporal elevado. En ciertas de dichas realizaciones, el índice de masa corporal elevado es superior a 25 kg/m2. En ciertas realizaciones, el sujeto exhibe hiperglucemia o niveles elevados de glucosa en sangre. En una realización concreta, los niveles de glucosa en sangre son niveles de glucosa en sangre en ayunas. En ciertas realizaciones, los niveles de glucosa en sangre en ayunas son al menos 130 mg/dl. En ciertas realizaciones, el sujeto exhibe hiperglucemia antes del inicio del tratamiento o exhibe niveles de glucosa en sangre en ayunas superiores a aproximadamente 130 mg/dl, niveles de HbAlc basales de al menos aproximadamente 7% o un índice de masa corporal superior a 25 kg/m2 o cualquier combinación de los mismos.
En ciertas realizaciones, se divulga un procedimiento de reducir uno o más de dichos niveles administrando un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B. Por ejemplo, se divulga un procedimiento de reducir los niveles de glucosa en ayunas, los niveles de HbAlc o los niveles del índice de masa corporal ó cualquier combinación de los mismos en un sujeto, administrando a un sujeto un compuesto antisentido corto dirigido a PTP1B. Niveles de glucosa en ayunas puede ser niveles de glucosa en sangre en ayunas, niveles de glucosa en suero en ayunas o niveles de glucosa en plasma en ayunas. En algunas realizaciones, los niveles de glucosa en plasma en ayunas se reducen en al menos aproximadamente 25 mg/do o en al menos aproximadamente 10 mg/dl. En ciertas realizaciones, dicho sujeto no alcanza
5 los niveles de glucosa normales en un régimen terapéutico de un agente hipoglucemiante, tal como insulina, sulfonilurea o metformina.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos de alteración de los niveles de lípidos. Ciertos de dichos procedimientos reducen los niveles de colesterol, LDL y/o VLDL, o cualquier combinación de los mismos, en un sujeto administrando al sujeto un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B. En ciertas realizaciones, los niveles de HDL en un sujeto se incrementan administrando al sujeto un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B. En ciertas realizaciones, se reduce la proporción LDL:HDL y la proporción colesterol total:HDL en un sujeto administrando al sujeto un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B. En ciertas realizaciones, se incrementa la proporción HDL:LDL y/o la proporción HDL:colesterol total en un sujeto administrando al sujeto un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B. En ciertas realizaciones, se
15 mejora el perfil lipídico en un sujeto incrementando los niveles de HDL, disminuyendo los niveles de LDL, disminuyendo los niveles de VLDL, , disminuyendo los niveles de triglicéridos, disminuyendo los niveles de apolipoproteína B o disminuyendo los niveles de colesterol total, o una combinación de los mismos, administrando al sujeto un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B. En dichas realizaciones, el sujeto es un animal, incluido un ser humano.
Terapia de combinación
En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B se administran conjuntamente con uno más agentes farmacéuticos distintos. En ciertas realizaciones, dichos uno más agentes farmacéuticos distintos están diseñados para tratar la misma enfermedad o afección que las una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación. En ciertas realizaciones, dichos uno 25 más agentes farmacéuticos distintos están diseñados para tratar otra enfermedad o afección distinta a la de las una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación. En ciertas realizaciones, dichos uno más agentes farmacéuticos distintos están diseñados para tratar un efecto indeseado de las una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación se administran conjuntamente con otro agente farmacéutico para tratar un efecto indeseado de dicho otro agente farmacéutico. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación y uno o más agentes farmacéuticos distintos se administran al mismo tiempo. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación y uno o más agentes farmacéuticos distintos se administran en momentos diferentes. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación y uno o más agentes farmacéuticos distintos preparan juntos en una única formulación. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente
35 divulgación y uno o más agentes farmacéuticos distintos se preparan por separado.
En ciertas realizaciones, los agentes farmacéuticos que se pueden administrar de forma conjunta con una composición farmacéutica que comprende un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B incluyen agentes y terapias hipoglucemiantes. En algunas realizaciones, el agente hipoglucemiante es un agonista de PPAR (gamma, doble
o pan), un inhibidor de la dipeptidil peptidasa (IV), un análogo de GLP-1, insulina o un análogo de la insulina, un secretagogo de la insulina, un inhibidor de SGLT2, un análogo de amilina humana, una biguanida, un inhibidor de la alfaglucosidasa, una meglitinida, una tiazolidindiona o una sulfonilurea.
En algunas realizaciones, la terapéutica hipoglucemiante es un análogo de GLP-1. En algunas realizaciones, el análogo de GLP-1 es exendina-4 o liraglutida.
En algunas realizaciones, la terapéutica hipoglucemiante es una sulfonilurea. En algunas realizaciones, la sulfonilurea es 45 acetohexamida, clorpropamida, tolbutamida, tolazamida, glimepirida, una glipizida, una gliburida o una gliclazida.
En algunas realizaciones, el fármaco hipoglucemiante es una biguanida. En algunas realizaciones, la biguanida es metformina y en algunas realizaciones los niveles de glucosa se disminuyen sin incremento de la acidosis láctica en comparación con la acidosis láctica observada tras el tratamiento con metformina sola.
En algunas realizaciones, el fármaco hipoglucemiante es una meglitinida. En algunas realizaciones, la meglitinida es nateglinida o repaglinida.
En algunas realizaciones, el fármaco hipoglucemiante es tiazolidindiona. En algunas realizaciones, la tiazolidindiona es pioglitazona, rosiglitazona o troglitazona. En algunas realizaciones, los niveles de glucosa en sangre se disminuyen sin mayor ganancia de peso que la observada con el tratamiento con rosiglitazona sola.
En algunas realizaciones, el fármaco hipoglucemiante es un inhibidor de la alfa-glucosidasa. En algunas realizaciones, el inhibidor de la alfa-glucosidasa es acarbosa o miglitol.
En una cierta realización, un agente hipoglucemiante coadministrado es ISIS 113715.
En una cierta realización, la terapia hipoglucemiante es un cambio terapéutico del estilo de vida.
En ciertas de dichas realizaciones, el agente hipoglucemiante se administra antes de la administración de una composición farmacéutica de la presente divulgación. En ciertas de dichas realizaciones, el agente hipoglucemiante se administra después de la administración de una composición farmacéutica de la presente divulgación. En ciertas de dichas realizaciones, el agente hipoglucemiante se administra al mismo tiempo que la composición farmacéutica de la presente divulgación. En ciertas de dichas realizaciones, la dosis de un agente hipoglucemiante coadministrado es la misma que la dosis que se administraría si el agente hipoglucemiante se administrara solo. En ciertas de dichas realizaciones, la dosis de un agente hipoglucemiante coadministrado es menor que la dosis que se administraría si el agente hipoglucemiante se administrara solo. En ciertas de dichas realizaciones, la dosis de un agente hipoglucemiante coadministrado es mayor que la dosis que se administraría si el agente hipoglucemiante se administrara solo.
En ciertas realizaciones, los agentes farmacéuticos que se pueden administrar de forma conjunta con una composición farmacéutica que comprende un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B incluyen agentes hipolipemiantes. Dichos agentes hipolipemiantes se tratan en otro punto de la solicitud y se incluyen ahora con respecto a PTP1B. Dichos agentes hipolipemiantes se pueden administrar tal como se ha descrito anteriormente para los agentes hipoglucemiantes.
En ciertas realizaciones, los agentes farmacéuticos que se pueden administrar de forma conjunta con una composición farmacéutica que comprende un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B incluyen terapéuticas con agentes anti-obesidad. Dichas terapéuticas con agentes anti-obesidad se pueden administrar tal como se ha descrito anteriormente para los agentes hipoglucemiantes.
Adicionalmente se divulga un procedimiento de administrar un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTPB1 mediante inyección y además incluye administrar un esteroide tópico en el lugar de la inyección.
Medicamentos
En el presente documento también se divulgan usos de un compuesto antisentido corto que está dirigido a un ácido nucleico de PTP1B para la preparación de un medicamento para reducir los niveles de glucosa en sangre, incluidos los niveles de glucosa en ayunas, y los niveles de HbAIc, los niveles del índice de masa corporal o cualquier combinación de los mismos. El medicamento se puede administrar durante un periodo de carga y un periodo de mantenimiento. En algunas realizaciones, el medicamento se administra por vía subcutánea o intravenosa. En otras realizaciones, la administración de dicho medicamento se produce al menos una vez al día, al menos una vez o al menos una vez al mes. Enana realización concreta, el compuesto antisentido corto presente en el medicamento se administra a una dosis inferior a la de un compuesto antisentido corto con una secuencia más larga y, particularmente, una secuencia de 20 o más bases nucleotídicas. El medicamento se puede administrar a un sujeto que exhibe niveles elevados de glucosa en sangre o hiperglucemia, prediabetes, diabetes, diabetes de tipo 2, síndrome metabólico, obesidad y resistencia a la insulina.
En el presente documento se divulgan otros aspectos y ventajas de los compuestos antisentido cortos. Todos los aspectos y ventajas divulgados en el presente documento, y específicamente con respecto a otras dianas, se aplican con respecto a las composiciones que incluyen compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B y procedimientos de su uso.
Ciertos compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos están dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B que tiene la secuencia de número de registro en GENBANK® NM_002827.2, incorporada en el presente documento como SEC ID Nº 11 o los nucleótidos 14178000 a 1425600 de la secuencia de GENBANK® con número de registro NT_011362.9, incorporados en el presente documento como SEC ID Nº 12. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 11 es al menos un 90% complementario a la SEC ID Nº 11. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 11 es al menos un 95% complementario a la SEC ID Nº 11. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 12 ES 100% complementario a la SEC ID Nº 12. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 12 es al menos un 90% complementario a la SEC ID Nº 12. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 12 es al menos un 95% complementario a la SEC ID Nº 12. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 12 ES 100% complementario a la SEC ID Nº 12.
En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 11 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las secuencias de nucleótidos indicadas en las Tablas 16 y 17. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 12 comprende una secuencia nucleotídica seleccionada de las secuencias nucleotídicas indicadas en las Tablas 18 y 19.
Cada secuencia nucleotídica indicada en cada una de las Tablas 16, 17 y 18 es independiente de cualquier modificación de un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica. Como tales, los compuestos antisentido cortos que comprenden una secuencia de nucleótidos tal como se indica en las Tablas 16, 17, 18 y 19 pueden comprender, de
5 forma independiente, una o más modificaciones en un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica.
Los compuestos antisentido descritos por el Número Isis (Nº Isis) indican una combinación de secuencia de bases nucleotídicas y una o más modificaciones en un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica.
Las Tablas 16 y 17 ilustran ejemplos de compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 11. La Tabla 16 ilustra compuestos antisentido cortos que son 100% complementarios a la SEC ID Nº 11. La Tabla 17 ilustra compuestos 10 antisentido cortos que tienen uno o dos apareamientos erróneos con respecto a la SEC ID Nº 11. La Tabla 18 ilustra compuestos antisentido cortos que son 100% complementarios a la SEC ID Nº 12. La Tabla 19 ilustra compuestos antisentido cortos que tienen 1 o 2 apareamientos erróneos con respecto a la SEC ID Nº 12. La columna denominada "motivo gápmero" indica el motivo ala-hueco-ala de cada compuesto antisentido corto. El segmento hueco comprende 2'desoxinucleótidos y cada nucleótido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado en 2'. El azúcar 15 modificado en 2' concreto también está indicado en la columna “motivo gápmero”. Por ejemplo, ‘2-10-2 MOE’ significa un motivo gápmero 2-10-2, en el que un segmento de hueco de diez 2’-desoxinucleótidos está flanqueado por segmentos ala de dos nucleótidos, en los que los nucleótidos de los segmentos ala son nucleótidos 2’-MOE. Los enlaces internucleosídicos son fosforotioato. Los compuestos antisentido cortos comprenden 5-metilcitidina en lugar de citosina no modificada, a menos que “citosina no modificada” esté en la lista en la columna del motivo gápmero, en cuyo caso las
20 citosinas indicadas son citosinas no modificadas. Por ejemplo, “5-mC sólo en hueco” indica que el segmento de hueco tiene 5-metilcitosinas, mientras que los segmentos ala tienen citosinas no modificadas.

Tabla 16: Compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 11
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147022
177 188 TTGTCGATCTCC 1-10-1 MOE 886
147023
178 189 CTTGTCGATCTC 1-10-1 MOE 859
147024
179 190 CCTTGTCGATCT 1-10-1 MOE 853
147019
195 206 TCGATCTCCTCG 1-10-1 MOE 877
147020
196 207 GTCGATCTCCTC 1-10-1 MOE 868
147021
197 208 TGTCGATCTCCT 1-10-1 MOE 882
147022
198 209 TTGTCGATCTCC 1-10-1 MOE 886
147023
199 210 CTTGTCGATCTC 1-10-1 MOE 859
147024
200 211 CCTTGTCGATCT 1-10-1 MOE 853
147025
201 212 GCCTTGTCGATC 1-10-1 MOE 865
147026
202 213 AGCCTTGTCGAT 1-10-1 MOE 835
147027
203 214 CAGCCTTGTCGA 1-10-1 MOE 843
147028
204 215 CCAGCCTTGTCG 1-10-1 MOE 846
147073
204 215 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
147029
205 216 CCCAGCCTTGTC 1-10-1 MOE 848
147030
206 217 TCCCAGCCTTGT 1-10-1 MOE 874
147036
212 223 CCCAGTTCCCAG 1-10-1 MOE 849
147037
213 224 GCCCAGTTCCCA 1-10-1 MOE 863
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147038
214 225 CGCCCAGTTCCC 1-10-1 MOE 855
147039
215 226 CCGCCCAGTTCC 1-10-1 MOE 850
147040
216 227 GCCGCCCAGTTC 1-10-1 MOE 864
147041
217 228 AGCCGCCCAGTT 1-10-1 MOE 834
147073
311 322 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
147042
323 334 GGTCAAAAGGGC 1-10-1 MOE 866
147043
324 335 TGGTCAAAAGGG 1-10-1 MOE 881
147044
325 336 GTGGTCAAAAGG 1-10-1 MOE 869
147045
326 337 TGTGGTCAAAAG 1-10-1 MOE 883
147046
327 338 CTGTGGTCAAAA 1-10-1 MOE 858
147047
328 339 ACTGTGGTCAAA 1-10-1 MOE 833
147051
332 343 TCCGACTGTGGT 1-10-1 MOE 875
147052
333 344 ATCCGACTGTGG 1-10-1 MOE 837
147053
334 345 AATCCGACTGTG 1-10-1 MOE 829
147054
335 346 TAATCCGACTGT 1-10-1 MOE 871
147055
336 347 TTAATCCGACTG 1-10-1 MOE 884
147056
337 348 TTTAATCCGACT 1-10-1 MOE 887
147057
338 349 ATTTAATCCGAC 1-10-1 MOE 839
147058
339 350 AATTTAATCCGA 1-10-1 MOE 830
147059
340 351 CAATTTAATCCG 1-10-1 MOE 840
147060
341 352 GCAATTTAATCC 1-10-1 MOE 861
147061
342 353 TGCAATTTAATC 1-10-1 MOE 879
147045
679 690 TGTGGTCAAAAG 1-10-1 MOE 883
147046
680 691 CTGTGGTCAAAA 1-10-1 MOE 858
147045
787 798 TGTGGTCAAAAG 1-10-1 MOE 883
147046
788 799 CTGTGGTCAAAA 1-10-1 MOE 858
147066
816 827 CCTGCACTGACG 1-10-1 MOE 851
404131
992 1005 ACCTTCGATCACAG 2-10-2 MOE 831
147062
1024 1035 CACTGACGAGTC 1-10-1 MOE 841
147063
1025 1036 GCACTGACGAGT 1-10-1 MOE 862
147064
1026 1037 TGCACTGACGAG 1-10-1 MOE 880
147065
1027 1038 CTGCACTGACGA 1-10-1 MOE 857
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147066
1028 1039 CCTGCACTGACG 1-10-1 MOE 851
147067
1029 1040 TCCTGCACTGAC 1-10-1 MOE 876
147068
1030 1041 ATCCTGCACTGA 1-10-1 MOE 838
147069
1031 1042 GATCCTGCACTG 1-10-1 MOE 860
147070
1032 1043 TGATCCTGCACT 1-10-1 MOE 878
147071
1033 1044 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147072
1034 1045 ACTGATCCTGCA 1-10-1 MOE 832
147073
1035 1046 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
147067
1199 1210 TCCTGCACTGAC 1-10-1 MOE 876
147040
1288 1299 GCCGCCCAGTTC 1-10-1 MOE 864
147040
1396 1407 GCCGCCCAGTTC 1-10-1 MOE 864
147022
1868 1879 TTGTCGATCTCC 1-10-1 MOE 886
147023
1869 1880 CTTGTCGATCTC 1-10-1 MOE 859
147024
1870 1881 CCTTGTCGATCT 1-10-1 MOE 853
147019
1886 1897 TCGATCTCCTCG 1-10-1 MOE 877
147020
1887 1898 GTCGATCTCCTC 1-10-1 MOE 868
147021
1888 1899 TGTCGATCTCCT 1-10-1 MOE 882
147022
1889 1900 TTGTCGATCTCC 1-10-1 MOE 886
147023
1890 1901 CTTGTCGATCTC 1-10-1 MOE 859
147025
1892 1903 GCCTTGTCGATC 1-10-1 MOE 865
147027
1894 1905 CAGCCTTGTCGA 1-10-1 MOE 843
147028
1895 1906 CCAGCCTTGTCG 1-10-1 MOE 846
147030
1897 1908 TCCCAGCCTTGT 1-10-1 MOE 874
147037
1904 1915 GCCCAGTTCCCA 1-10-1 MOE 863
147038
1905 1916 CGCCCAGTTCCC 1-10-1 MOE 855
147040
1907 1918 GCCGCCCAGTTC 1-10-1 MOE 864
147041
1908 1919 AGCCGCCCAGTT 1-10-1 MOE 834
147022
1976 1987 TTGTCGATCTCC 1-10-1 MOE 886
147023
1977 1988 CTTGTCGATCTC 1-10-1 MOE 859
147024
1978 1989 CCTTGTCGATCT 1-10-1 MOE 853
147020
1995 2006 GTCGATCTCCTC 1-10-1 MOE 868
147021
1996 2007 TGTCGATCTCCT 1-10-1 MOE 882
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147022
1997 2008 TTGTCGATCTCC 1-10-1 MOE 886
147023
1998 2009 CTTGTCGATCTC 1-10-1 MOE 859
147024
1999 2010 CCTTGTCGATCT 1-10-1 MOE 853
147025
2000 2011 GCCTTGTCGATC 1-10-1 MOE 865
147026
2001 2012 AGCCTTGTCGAT 1-10-1 MOE 835
147027
2002 2013 CAGCCTTGTCGA 1-10-1 MOE 843
147028
2003 2014 CCAGCCTTGTCG 1-10-1 MOE 846
147029
2004 2015 CCCAGCCTTGTC 1-10-1 MOE 848
147030
2005 2016 TCCCAGCCTTGT 1-10-1 MOE 874
147036
2011 2022 CCCAGTTCCCAG 1-10-1 MOE 849
147037
2012 2023 GCCCAGTTCCCA 1-10-1 MOE 863
147038
2013 2024 CGCCCAGTTCCC 1-10-1 MOE 855
147039
2014 2025 CCGCCCAGTTCC 1-10-1 MOE 850
147040
2015 2026 GCCGCCCAGTTC 1-10-1 MOE 864
147041
2016 2027 AGCCGCCCAGTT 1-10-1 MOE 834
404199
2366 2379 GGTCATGCACAGGC 2-10-2 MOE 867
404134
2369 2382 TCAGGTCATGCACA 2-10-2 MOE 873
404132
2548 2561 CCTTGGAATGTCTG 2-10-2 MOE 852
147020
2613 2624 GTCGATCTCCTC 1-10-1 MOE 868
147020
2721 2732 GTCGATCTCCTC 1-10-1 MOE 868
404133
3289 3302 TATTCCATGGCCAT 2-10-2 MOE 872
147032
6220 6231 GTTCCCAGCCTT 1-10-1 MOE 870
147033
6221 6232 AGTTCCCAGCCT 1-10-1 MOE 836
147034
6222 6233 CAGTTCCCAGCC 1-10-1 MOE 844
147044
6288 6299 GTGGTCAAAAGG 1-10-1 MOE 869
147045
6289 6300 TGTGGTCAAAAG 1-10-1 MOE 883
147032
6329 6340 GTTCCCAGCCTT 1-10-1 MOE 870
147033
6330 6341 AGTTCCCAGCCT 1-10-1 MOE 836
147034
6331 6342 CAGTTCCCAGCC 1-10-1 MOE 844
147044
6397 6408 GTGGTCAAAAGG 1-10-1 MOE 869
147045
6398 6409 TGTGGTCAAAAG 1-10-1 MOE 883
147058
7057 7068 AATTTAATCCGA 1-10-1 MOE 830
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147059
7058 7069 CAATTTAATCCG 1-10-1 MOE 840
147060
7059 7070 GCAATTTAATCC 1-10-1 MOE 861
147058
7166 7177 AATTTAATCCGA 1-10-1 MOE 830
147059
7167 7178 CAATTTAATCCG 1-10-1 MOE 840
147041
8084 8095 AGCCGCCCAGTT 1-10-1 MOE 834
147041
8192 8203 AGCCGCCCAGTT 1-10-1 MOE 834
147027
8630 8641 CAGCCTTGTCGA 1-10-1 MOE 843
147028
8631 8642 CCAGCCTTGTCG 1-10-1 MOE 846
147027
8738 8749 CAGCCTTGTCGA 1-10-1 MOE 843
147028
8739 8750 CCAGCCTTGTCG 1-10-1 MOE 846
147043
10957 10968 TGGTCAAAAGGG 1-10-1 MOE 881
147044
10958 10969 GTGGTCAAAAGG 1-10-1 MOE 869
147043
11065 11076 TGGTCAAAAGGG 1-10-1 MOE 881
147044
11066 11077 GTGGTCAAAAGG 1-10-1 MOE 869
147071
11605 11616 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147070
11611 11622 TGATCCTGCACT 1-10-1 MOE 878
147071
11612 11623 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147072
12294 12305 ACTGATCCTGCA 1-10-1 MOE 832
147072
12299 12310 ACTGATCCTGCA 1-10-1 MOE 832
147030
12805 12816 TCCCAGCCTTGT 1-10-1 MOE 874
147031
12806 12817 TTCCCAGCCTTG 1-10-1 MOE 885
147053
12939 12950 AATCCGACTGTG 1-10-1 MOE 829
147030
12986 12997 TCCCAGCCTTGT 1-10-1 MOE 874
147031
12987 12998 TTCCCAGCCTTG 1-10-1 MOE 885
147053
13120 13131 AATCCGACTGTG 1-10-1 MOE 829
147051
13162 13173 TCCGACTGTGGT 1-10-1 MOE 875
147061
13316 13327 TGCAATTTAATC 1-10-1 MOE 879
147047
13339 13350 ACTGTGGTCAAA 1-10-1 MOE 833
147029
14058 14069 CCCAGCCTTGTC 1-10-1 MOE 848
147029
14239 14250 CCCAGCCTTGTC 1-10-1 MOE 848
147067
15560 15571 TCCTGCACTGAC 1-10-1 MOE 876
147068
15561 15572 ATCCTGCACTGA 1-10-1 MOE 838
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147067
15742 15753 TCCTGCACTGAC 1-10-1 MOE 876
147069
15744 15755 GATCCTGCACTG 1-10-1 MOE 860
147042
16561 16572 GGTCAAAAGGGC 1-10-1 MOE 866
147042
16727 16738 GGTCAAAAGGGC 1-10-1 MOE 866
147030
17619 17630 TCCCAGCCTTGT 1-10-1 MOE 874
147064
17762 17773 TGCACTGACGAG 1-10-1 MOE 880
147030
17787 17798 TCCCAGCCTTGT 1-10-1 MOE 874
147064
17930 17941 TGCACTGACGAG 1-10-1 MOE 880
147042
19201 19212 GGTCAAAAGGGC 1-10-1 MOE 866
147042
19369 19380 GGTCAAAAGGGC 1-10-1 MOE 866
147027
21190 21201 CAGCCTTGTCGA 1-10-1 MOE 843
147028
21191 21202 CCAGCCTTGTCG 1-10-1 MOE 846
147027
21358 21369 CAGCCTTGTCGA 1-10-1 MOE 843
147028
21359 21370 CCAGCCTTGTCG 1-10-1 MOE 846
147070
22021 22032 TGATCCTGCACT 1-10-1 MOE 878
147070
22189 22200 TGATCCTGCACT 1-10-1 MOE 878
147047
22606 22617 ACTGTGGTCAAA 1-10-1 MOE 833
147043
24318 24329 TGGTCAAAAGGG 1-10-1 MOE 881
147044
24319 24330 GTGGTCAAAAGG 1-10-1 MOE 869
147045
24320 24331 TGTGGTCAAAAG 1-10-1 MOE 883
147046
24321 24332 CTGTGGTCAAAA 1-10-1 MOE 858
147043
24486 24497 TGGTCAAAAGGG 1-10-1 MOE 881
147044
24487 24498 GTGGTCAAAAGG 1-10-1 MOE 869
147046
24489 24500 CTGTGGTCAAAA 1-10-1 MOE 858
147047
24490 24501 ACTGTGGTCAAA 1-10-1 MOE 833
147040
25065 25076 GCCGCCCAGTTC 1-10-1 MOE 864
147041
25066 25077 AGCCGCCCAGTT 1-10-1 MOE 834
147046
25160 25171 CTGTGGTCAAAA 1-10-1 MOE 858
147039
25232 25243 CCGCCCAGTTCC 1-10-1 MOE 850
147040
25233 25244 GCCGCCCAGTTC 1-10-1 MOE 864
147041
25234 25245 AGCCGCCCAGTT 1-10-1 MOE 834
147046
25328 25339 CTGTGGTCAAAA 1-10-1 MOE 858
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147057
25508 25519 ATTTAATCCGAC 1-10-1 MOE 839
147061
25512 25523 TGCAATTTAATC 1-10-1 MOE 879
147057
25676 25687 ATTTAATCCGAC 1-10-1 MOE 839
147069
28878 28889 GATCCTGCACTG 1-10-1 MOE 860
147070
28879 28890 TGATCCTGCACT 1-10-1 MOE 878
147053
30133 30144 AATCCGACTGTG 1-10-1 MOE 829
147053
30278 30289 AATCCGACTGTG 1-10-1 MOE 829
147054
30864 30875 TAATCCGACTGT 1-10-1 MOE 871
147043
30985 30996 TGGTCAAAAGGG 1-10-1 MOE 881
147054
31011 31022 TAATCCGACTGT 1-10-1 MOE 871
147043
31133 31144 TGGTCAAAAGGG 1-10-1 MOE 881
147036
32233 32244 CCCAGTTCCCAG 1-10-1 MOE 849
147072
32372 32383 ACTGATCCTGCA 1-10-1 MOE 832
147072
32520 32531 ACTGATCCTGCA 1-10-1 MOE 832
147069
33056 33067 GATCCTGCACTG 1-10-1 MOE 860
147070
33057 33068 TGATCCTGCACT 1-10-1 MOE 878
147071
33058 33069 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147051
33126 33137 TCCGACTGTGGT 1-10-1 MOE 875
147070
33205 33216 TGATCCTGCACT 1-10-1 MOE 878
147071
33206 33217 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147051
33274 33285 TCCGACTGTGGT 1-10-1 MOE 875
147046
33318 33329 CTGTGGTCAAAA 1-10-1 MOE 858
147049
33321 33332 CGACTGTGGTCA 1-10-1 MOE 854
147051
33323 33334 TCCGACTGTGGT 1-10-1 MOE 875
147046
33466 33477 CTGTGGTCAAAA 1-10-1 MOE 858
147047
33467 33478 ACTGTGGTCAAA 1-10-1 MOE 833
147051
33471 33482 TCCGACTGTGGT 1-10-1 MOE 875
147046
33640 33651 CTGTGGTCAAAA 1-10-1 MOE 858
147051
33645 33656 TCCGACTGTGGT 1-10-1 MOE 875
147046
33788 33799 CTGTGGTCAAAA 1-10-1 MOE 858
147051
33793 33804 TCCGACTGTGGT 1-10-1 MOE 875
147059
35437 35448 CAATTTAATCCG 1-10-1 MOE 840
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147060
35438 35449 GCAATTTAATCC 1-10-1 MOE 861
147060
35586 35597 GCAATTTAATCC 1-10-1 MOE 861
147021
36093 36104 TGTCGATCTCCT 1-10-1 MOE 882
147061
36250 36261 TGCAATTTAATC 1-10-1 MOE 879
147061
36398 36409 TGCAATTTAATC 1-10-1 MOE 879
147073
37485 37496 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
147073
37633 37644 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
147043
40214 40225 TGGTCAAAAGGG 1-10-1 MOE 881
147061
40353 40364 TGCAATTTAATC 1-10-1 MOE 879
147043
40362 40373 TGGTCAAAAGGG 1-10-1 MOE 881
147061
40501 40512 TGCAATTTAATC 1-10-1 MOE 879
147031
42527 42538 TTCCCAGCCTTG 1-10-1 MOE 885
147032
42528 42539 GTTCCCAGCCTT 1-10-1 MOE 870
147034
42530 42541 CAGTTCCCAGCC 1-10-1 MOE 844
147031
42675 42686 TTCCCAGCCTTG 1-10-1 MOE 885
147032
42676 42687 GTTCCCAGCCTT 1-10-1 MOE 870
147033
42677 42688 AGTTCCCAGCCT 1-10-1 MOE 836
147034
42678 42689 CAGTTCCCAGCC 1-10-1 MOE 844
147074
43848 43859 CCACTGATCCTG 1-10-1 MOE 845
147074
43996 44007 CCACTGATCCTG 1-10-1 MOE 845
147051
45402 45413 TCCGACTGTGGT 1-10-1 MOE 875
147051
45550 45561 TCCGACTGTGGT 1-10-1 MOE 875
147074
46125 46136 CCACTGATCCTG 1-10-1 MOE 845
147057
46313 46324 ATTTAATCCGAC 1-10-1 MOE 839
147058
46314 46325 AATTTAATCCGA 1-10-1 MOE 830
147059
46315 46326 CAATTTAATCCG 1-10-1 MOE 840
147061
46317 46328 TGCAATTTAATC 1-10-1 MOE 879
147057
46461 46472 ATTTAATCCGAC 1-10-1 MOE 839
147059
46463 46474 CAATTTAATCCG 1-10-1 MOE 840
147061
46465 46476 TGCAATTTAATC 1-10-1 MOE 879
147058
47413 47424 AATTTAATCCGA 1-10-1 MOE 830
147073
48221 48232 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147073
48369 48380 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
147074
48370 48381 CCACTGATCCTG 1-10-1 MOE 845
147027
48566 48577 CAGCCTTGTCGA 1-10-1 MOE 843
147027
48714 48725 CAGCCTTGTCGA 1-10-1 MOE 843
147028
48715 48726 CCAGCCTTGTCG 1-10-1 MOE 846
147067
49050 49061 TCCTGCACTGAC 1-10-1 MOE 876
147068
49051 49062 ATCCTGCACTGA 1-10-1 MOE 838
147067
49198 49209 TCCTGCACTGAC 1-10-1 MOE 876
147073
49524 49535 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
147073
49672 49683 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
147074
49673 49684 CCACTGATCCTG 1-10-1 MOE 845
147036
50421 50432 CCCAGTTCCCAG 1-10-1 MOE 849
147036
52292 52303 CCCAGTTCCCAG 1-10-1 MOE 849
147037
52293 52304 GCCCAGTTCCCA 1-10-1 MOE 863
147036
52438 52449 CCCAGTTCCCAG 1-10-1 MOE 849
147037
52439 52450 GCCCAGTTCCCA 1-10-1 MOE 863
147034
53148 53159 CAGTTCCCAGCC 1-10-1 MOE 844
147034
53294 53305 CAGTTCCCAGCC 1-10-1 MOE 844
147042
53445 53456 GGTCAAAAGGGC 1-10-1 MOE 866
147043
53446 53457 TGGTCAAAAGGG 1-10-1 MOE 881
147044
53447 53458 GTGGTCAAAAGG 1-10-1 MOE 869
147042
53591 53602 GGTCAAAAGGGC 1-10-1 MOE 866
147030
53592 53603 TCCCAGCCTTGT 1-10-1 MOE 874
147043
53592 53603 TGGTCAAAAGGG 1-10-1 MOE 881
147031
53593 53604 TTCCCAGCCTTG 1-10-1 MOE 885
147044
53593 53604 GTGGTCAAAAGG 1-10-1 MOE 869
147030
53738 53749 TCCCAGCCTTGT 1-10-1 MOE 874
147031
53739 53750 TTCCCAGCCTTG 1-10-1 MOE 885
147040
53783 53794 GCCGCCCAGTTC 1-10-1 MOE 864
147041
53784 53795 AGCCGCCCAGTT 1-10-1 MOE 834
147041
53930 53941 AGCCGCCCAGTT 1-10-1 MOE 834
147042
55008 55019 GGTCAAAAGGGC 1-10-1 MOE 866
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147043
55009 55020 TGGTCAAAAGGG 1-10-1 MOE 881
147042
55154 55165 GGTCAAAAGGGC 1-10-1 MOE 866
147043
55155 55166 TGGTCAAAAGGG 1-10-1 MOE 881
147058
55281 55292 AATTTAATCCGA 1-10-1 MOE 830
147058
55427 55438 AATTTAATCCGA 1-10-1 MOE 830
147019
55682 55693 TCGATCTCCTCG 1-10-1 MOE 877
147021
55684 55695 TGTCGATCTCCT 1-10-1 MOE 882
147021
55830 55841 TGTCGATCTCCT 1-10-1 MOE 882
147054
56275 56286 TAATCCGACTGT 1-10-1 MOE 871
147055
56276 56287 TTAATCCGACTG 1-10-1 MOE 884
147056
56277 56288 TTTAATCCGACT 1-10-1 MOE 887
147058
56279 56290 AATTTAATCCGA 1-10-1 MOE 830
147059
56280 56291 CAATTTAATCCG 1-10-1 MOE 840
147060
56281 56292 GCAATTTAATCC 1-10-1 MOE 861
147061
56282 56293 TGCAATTTAATC 1-10-1 MOE 879
147051
56418 56429 TCCGACTGTGGT 1-10-1 MOE 875
147053
56420 56431 AATCCGACTGTG 1-10-1 MOE 829
147054
56421 56432 TAATCCGACTGT 1-10-1 MOE 871
147055
56422 56433 TTAATCCGACTG 1-10-1 MOE 884
147056
56423 56434 TTTAATCCGACT 1-10-1 MOE 887
147057
56424 56435 ATTTAATCCGAC 1-10-1 MOE 839
147058
56425 56436 AATTTAATCCGA 1-10-1 MOE 830
147061
56428 56439 TGCAATTTAATC 1-10-1 MOE 879
147045
57118 57129 TGTGGTCAAAAG 1-10-1 MOE 883
147045
57264 57275 TGTGGTCAAAAG 1-10-1 MOE 883
147046
57265 57276 CTGTGGTCAAAA 1-10-1 MOE 858
147071
58028 58039 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147071
58174 58185 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147043
61111 61122 TGGTCAAAAGGG 1-10-1 MOE 881
147071
61130 61141 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147020
61226 61237 GTCGATCTCCTC 1-10-1 MOE 868
147043
61257 61268 TGGTCAAAAGGG 1-10-1 MOE 881
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147071
61276 61287 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147035
61277 61288 CCAGTTCCCAGC 1-10-1 MOE 847
147036
61278 61289 CCCAGTTCCCAG 1-10-1 MOE 849
147037
61279 61290 GCCCAGTTCCCA 1-10-1 MOE 863
147038
61280 61291 CGCCCAGTTCCC 1-10-1 MOE 855
147039
61281 61292 CCGCCCAGTTCC 1-10-1 MOE 850
147040
61282 61293 GCCGCCCAGTTC 1-10-1 MOE 864
147071
61309 61320 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147020
61372 61383 GTCGATCTCCTC 1-10-1 MOE 868
147034
61422 61433 CAGTTCCCAGCC 1-10-1 MOE 844
147035
61423 61434 CCAGTTCCCAGC 1-10-1 MOE 847
147036
61424 61435 CCCAGTTCCCAG 1-10-1 MOE 849
147037
61425 61436 GCCCAGTTCCCA 1-10-1 MOE 863
147038
61426 61437 CGCCCAGTTCCC 1-10-1 MOE 855
147040
61428 61439 GCCGCCCAGTTC 1-10-1 MOE 864
147071
61455 61466 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147073
62003 62014 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
147073
62149 62160 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
147066
63065 63076 CCTGCACTGACG 1-10-1 MOE 851
147068
63067 63078 ATCCTGCACTGA 1-10-1 MOE 838
147069
63146 63157 GATCCTGCACTG 1-10-1 MOE 860
147062
63207 63218 CACTGACGAGTC 1-10-1 MOE 841
147066
63211 63222 CCTGCACTGACG 1-10-1 MOE 851
147057
64054 64065 ATTTAATCCGAC 1-10-1 MOE 839
147036
64538 64549 CCCAGTTCCCAG 1-10-1 MOE 849
147037
64539 64550 GCCCAGTTCCCA 1-10-1 MOE 863
147037
64685 64696 GCCCAGTTCCCA 1-10-1 MOE 863
147066
64864 64875 CCTGCACTGACG 1-10-1 MOE 851
147067
64865 64876 TCCTGCACTGAC 1-10-1 MOE 876
147066
65010 65021 CCTGCACTGACG 1-10-1 MOE 851
147067
65011 65022 TCCTGCACTGAC 1-10-1 MOE 876
147045
65017 65028 TGTGGTCAAAAG 1-10-1 MOE 883
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147045
65163 65174 TGTGGTCAAAAG 1-10-1 MOE 883
147046
65164 65175 CTGTGGTCAAAA 1-10-1 MOE 858
147068
65408 65419 ATCCTGCACTGA 1-10-1 MOE 838
147071
65411 65422 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147069
65549 65560 GATCCTGCACTG 1-10-1 MOE 860
147068
65554 65565 ATCCTGCACTGA 1-10-1 MOE 838
147071
65557 65568 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147029
67741 67752 CCCAGCCTTGTC 1-10-1 MOE 848
147030
67742 67753 TCCCAGCCTTGT 1-10-1 MOE 874
147031
67743 67754 TTCCCAGCCTTG 1-10-1 MOE 885
147028
67886 67897 CCAGCCTTGTCG 1-10-1 MOE 846
147029
67887 67898 CCCAGCCTTGTC 1-10-1 MOE 848
147030
67888 67899 TCCCAGCCTTGT 1-10-1 MOE 874
147031
67889 67900 TTCCCAGCCTTG 1-10-1 MOE 885
147043
68867 68878 TGGTCAAAAGGG 1-10-1 MOE 881
147044
68868 68879 GTGGTCAAAAGG 1-10-1 MOE 869
147045
68869 68880 TGTGGTCAAAAG 1-10-1 MOE 883
147043
69013 69024 TGGTCAAAAGGG 1-10-1 MOE 881
147044
69014 69025 GTGGTCAAAAGG 1-10-1 MOE 869
147045
69015 69026 TGTGGTCAAAAG 1-10-1 MOE 883
147046
69016 69027 CTGTGGTCAAAA 1-10-1 MOE 858
147071
69519 69530 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147072
69520 69531 ACTGATCCTGCA 1-10-1 MOE 832
147073
69521 69532 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
147071
69665 69676 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147072
69666 69677 ACTGATCCTGCA 1-10-1 MOE 832
147073
69667 69678 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
147074
69668 69679 CCACTGATCCTG 1-10-1 MOE 845
147066
69869 69880 CCTGCACTGACG 1-10-1 MOE 851
147066
70015 70026 CCTGCACTGACG 1-10-1 MOE 851
147023
70465 70476 CTTGTCGATCTC 1-10-1 MOE 859
147023
70611 70622 CTTGTCGATCTC 1-10-1 MOE 859
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147062
70615 70626 CACTGACGAGTC 1-10-1 MOE 841
147063
70616 70627 GCACTGACGAGT 1-10-1 MOE 862
147064
70617 70628 TGCACTGACGAG 1-10-1 MOE 880
147065
70618 70629 CTGCACTGACGA 1-10-1 MOE 857
147066
70619 70630 CCTGCACTGACG 1-10-1 MOE 851
147063
70762 70773 GCACTGACGAGT 1-10-1 MOE 862
147064
70763 70774 TGCACTGACGAG 1-10-1 MOE 880
147065
70764 70775 CTGCACTGACGA 1-10-1 MOE 857
147066
70765 70776 CCTGCACTGACG 1-10-1 MOE 851
147072
70998 71009 ACTGATCCTGCA 1-10-1 MOE 832
147073
70999 71010 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
147072
71144 71155 ACTGATCCTGCA 1-10-1 MOE 832
147073
71145 71156 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
147074
71146 71157 CCACTGATCCTG 1-10-1 MOE 845
147037
71351 71362 GCCCAGTTCCCA 1-10-1 MOE 863
147038
71352 71363 CGCCCAGTTCCC 1-10-1 MOE 855
147039
71353 71364 CCGCCCAGTTCC 1-10-1 MOE 850
147037
71497 71508 GCCCAGTTCCCA 1-10-1 MOE 863
147038
71498 71509 CGCCCAGTTCCC 1-10-1 MOE. 855
147039
71499 71510 CCGCCCAGTTCC 1-10-1 MOE 850
147061
71641 71652 TGCAATTTAATC 1-10-1 MOE 879
147061
71787 71798 TGCAATTTAATC 1-10-1 MOE 879

Tabla 17: Compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 11 y que tiene 1 o 2 apareamientos erróneos
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147022
177 188 TTGTCGATCTCC 1-10-1 MOE 886
147023
178 189 CTTGTCGATCTC 1-10-1 MOE 859
147020
196 207 GTCGATCTCCTC 1-10-1 MOE 868
147022
198 209 TTGTCGATCTCC 1-10-1 MOE 886
147024
200 211 CCTTGTCGATCT 1-10-1 MOE 853
147026
202 213 AGCCTTGTCGAT 1-10-1 MOE 835
147028
204 215 CCAGCCTTGTCG 1-10-1 MOE 846
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147029
205 216 CCCAGCCTTGTC 1-10-1 MOE 848
147030
206 217 TCCCAGCCTTGT 1-10-1 MOE 874
147036
212 223 CCCAGTTCCCAG 1-10-1 MOE 849
147073
311 322 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
147046
327 338 CTGTGGTCAAAA 1-10-1 MOE 858
147047
328 339 ACTGTGGTCAAA 1-10-1 MOE 833
147048
329 340 GACTGTGGTCAA 1-10-1 MOE 888
147049
330 341 CGACTGTGGTCA 1-10-1 MOE 854
147050
331 342 CCGACTGTGGTC 1-10-1 MOE 889
147051
332 343 TCCGACTGTGGT 1-10-1 MOE 875
147052
333 344 ATCCGACTGTGG 1-10-1 MOE 837
147053
334 345 AATCCGACTGTG 1-10-1 MOE 829
147054
335 346 TAATCCGACTGT 1-10-1 MOE 871
147055
336 347 TTAATCCGACTG 1-10-1 MOE 884
147056
337 348 TTTAATCCGACT 1-10-1 MOE 887
147057
338 349 ATTTAATCCGAC 1-10-1 MOE 839
147058
339 350 AATTTAATCCGA 1-10-1 MOE 830
147060
341 352 GCAATTTAATCC 1-10-1 MOE 861
147061
342 353 TGCAATTTAATC 1-10-1 MOE 879
147062
1024 1035 CACTGACGAGTC 1-10-1 MOE 841
147063
1025 1036 GCACTGACGAGT 1-10-1 MOE 862
147068
1030 1041 ATCCTGCACTGA 1-10-1 MOE 838
147071
1033 1044 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147073
1035 1046 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
147074
1036 1047 CCACTGATCCTG 1-10-1 MOE 845
147067
1091 1102 TCCTGCACTGAC 1-10-1 MOE 876
147024
1891 1902 CCTTGTCGATCT 1-10-1 MOE 853
147026
1893 1904 AGCCTTGTCGAT 1-10-1 MOE 835
147029
1896 1907 CCCAGCCTTGTC 1-10-1 MOE 848
147036
1903 1914 CCCAGTTCCCAG 1-10-1 MOE 849
147039
1906 1917 CCGCCCAGTTCC 1-10-1 MOE 850
147019
1994 2005 TCGATCTCCTCG 1-10-1 MOE 877
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
401385
2815 2828 CCCAGTGGGTTTGA 2-10-2 MOE 890
147033
5265 5276 AGTTCCCAGCCT 1-10-1 MOE 836
147033
5373 5384 AGTTCCCAGCCT 1-10-1 MOE 836
147060
7168 7179 GCAATTTAATCC 1-10-1 MOE 861
147053
10527 10538 AATCCGACTGTG 1-10-1 MOE 829
147053
10635 10646 AATCCGACTGTG 1-10-1 MOE 829
147070
11604 11615 TGATCCTGCACT 1-10-1 MOE 878
147071
11612 11623 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147072
12294 12305 ACTGATCCTGCA 1-10-1 MOE 832
147072
12299 12310 ACTGATCCTGCA 1-10-1 MOE 832
147052
12938 12949 ATCCGACTGTGG 1-10-1 MOE 837
147052
13119 13130 ATCCGACTGTGG 1-10-1 MOE 837
147047
13158 13169 ACTGTGGTCAAA 1-10-1 MOE 833
147048
13159 13170 GACTGTGGTCAA 1-10-1 MOE 888
147049
13160 13171 CGACTGTGGTCA 1-10-1 MOE 854
147048
13340 13351 GACTGTGGTCAA 1-10-1 MOE 888
147049
13341 13352 CGACTGTGGTCA 1-10-1 MOE 854
147051
13343 13354 TCCGACTGTGGT 1-10-1 MOE 875
147061
13497 13508 TGCAATTTAATC 1-10-1 MOE 879
147069
15562 15573 GATCCTGCACTG 1-10-1 MOE 860
147068
15743 15754 ATCCTGCACTGA 1-10-1 MOE 838
147049
17181 17192 CGACTGTGGTCA 1-10-1 MOE 854
147049
17349 17360 CGACTGTGGTCA 1-10-1 MOE 854
147047
22438 22449 ACTGTGGTCAAA 1-10-1 MOE 833
147047
24322 24333 ACTGTGGTCAAA 1-10-1 MOE 833
147045
24488 24499 TGTGGTCAAAAG 1-10-1 MOE 883
147039
25064 25075 CCGCCCAGTTCC 1-10-1 MOE 850
147057
25508 25519 ATTTAATCCGAC 1-10-1 MOE 839
147057
25676 25687 ATTTAATCCGAC 1-10-1 MOE 839
147061
25680 25691 TGCAATTTAATC 1-10-1 MOE 879
147069
28731 28742 GATCCTGCACTG 1-10-1 MOE 860
147052
30132 30143 ATCCGACTGTGG 1-10-1 MOE 837
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147052
30277 30288 ATCCGACTGTGG 1-10-1 MOE 837
147036
32085 32096 CCCAGTTCCCAG 1-10-1 MOE 849
147072
32520 32531 ACTGATCCTGCA 1-10-1 MOE 832
147071
33058 33069 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147050
33125 33136 CCGACTGTGGTC 1-10-1 MOE 889
147069
33204 33215 GATCCTGCACTG 1-10-1 MOE 860
147050
33273 33284 CCGACTGTGGTC 1-10-1 MOE 889
147047
33319 33330 ACTGTGGTCAAA 1-10-1 MOE 833
147050
33322 33333 CCGACTGTGGTC 1-10-1 MOE 889
147052
33324 33335 ATCCGACTGTGG 1-10-1 MOE 837
147049
33469 33480 CGACTGTGGTCA 1-10-1 MOE 854
147050
33470 33481 CCGACTGTGGTC 1-10-1 MOE 889
147052
33472 33483 ATCCGACTGTGG 1-10-1 MOE 837
147047
33641 33652 ACTGTGGTCAAA 1-10-1 MOE 833
147047
33789 33800 ACTGTGGTCAAA 1-10-1 MOE 833
147059
35585 35596 CAATTTAATCCG 1-10-1 MOE 840
147021
36241 36252 TGTCGATCTCCT 1-10-1 MOE 882
147073
37633 37644 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
147033
42529 42540 AGTTCCCAGCCT 1-10-1 MOE 836
147050
45401 45412 CCGACTGTGGTC 1-10-1 MOE 889
147050
45549 45560 CCGACTGTGGTC 1-10-1 MOE 889
147074
46125 46136 CCACTGATCCTG 1-10-1 MOE 845
147057
46313 46324 ATTTAATCCGAC 1-10-1 MOE 839
147058
46462 46473 AATTTAATCCGA 1-10-1 MOE 830
147058
47413 47424 AATTTAATCCGA 1-10-1 MOE 830
147058
47561 47572 AATTTAATCCGA 1-10-1 MOE 830
147073
48221 48232 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
147073
48369 48380 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
147028
48567 48578 CCAGCCTTGTCG 1-10-1 MOE 846
147068
49199 49210 ATCCTGCACTGA 1-10-1 MOE 838
147036
50273 50284 CCCAGTTCCCAG 1-10-1 MOE 849
147040
53929 53940 GCCGCCCAGTTC 1-10-1 MOE 864
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147047
54769 54780 ACTGTGGTCAAA 1-10-1 MOE 833
147048
54770 54781 GACTGTGGTCAA 1-10-1 MOE 888
147047
54915 54926 ACTGTGGTCAAA 1-10-1 MOE 833
147048
54916 54927 GACTGTGGTCAA 1-10-1 MOE 888
147019
55828 55839 TCGATCTCCTCG 1-10-1 MOE 877
147047
56268 56279 ACTGTGGTCAAA 1-10-1 MOE 833
147048
56269 56280 GACTGTGGTCAA 1-10-1 MOE 888
147049
56270 56281 CGACTGTGGTCA 1-10-1 MOE 854
147050
56271 56282 CCGACTGTGGTC 1-10-1 MOE 889
147051
56272 56283 TCCGACTGTGGT 1-10-1 MOE 875
147052
56273 56284 ATCCGACTGTGG 1-10-1 MOE 837
147053
56274 56285 AATCCGACTGTG 1-10-1 MOE 829
147056
56277 56288 TTTAATCCGACT 1-10-1 MOE 887
147057
56278 56289 ATTTAATCCGAC 1-10-1 MOE 839
147047
56414 56425 ACTGTGGTCAAA 1-10-1 MOE 833
147048
56415 56426 GACTGTGGTCAA 1-10-1 MOE 888
147049
56416 56427 CGACTGTGGTCA 1-10-1 MOE 854
147050
56417 56428 CCGACTGTGGTC 1-10-1 MOE 889
147052
56419 56430 ATCCGACTGTGG 1-10-1 MOE 837
147057
56424 56435 ATTTAATCCGAC 1-10-1 MOE 839
147058
56425 56436 AATTTAATCCGA 1-10-1 MOE 830
147059
56426 56437 CAATTTAATCCG 1-10-1 MOE 840
147060
56427 56438 GCAATTTAATCC 1-10-1 MOE 861
147046
57119 57130 CTGTGGTCAAAA 1-10-1 MOE 858
147071
58174 58185 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147071
61130 61141 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147034
61276 61287 CAGTTCCCAGCC 1-10-1 MOE 844
147071
61309 61320 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147039
61427 61438 CCGCCCAGTTCC 1-10-1 MOE 850
147071
61455 61466 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147073
62003 62014 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
147062
63061 63072 CACTGACGAGTC 1-10-1 MOE 841
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147068
63213 63224 ATCCTGCACTGA 1-10-1 MOE 838
147069
63292 63303 GATCCTGCACTG 1-10-1 MOE 860
147057
64054 64065 ATTTAATCCGAC 1-10-1 MOE 839
147057
64200 64211 ATTTAATCCGAC 1-10-1 MOE 839
147070
64427 64438 TGATCCTGCACT 1-10-1 MOE 878
147070
64573 64584 TGATCCTGCACT 1-10-1 MOE 878
147036
64684 64695 CCCAGTTCCCAG 1-10-1 MOE 849
147046
65018 65029 CTGTGGTCAAAA 1-10-1 MOE 858
147071
65557 65568 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147069
65695 65706 GATCCTGCACTG 1-10-1 MOE 860
147047
66163 66174 ACTGTGGTCAAA 1-10-1 MOE 833
147047
66309 66320 ACTGTGGTCAAA 1-10-1 MOE 833
147028
67740 67751 CCAGCCTTGTCG 1-10-1 MOE 846
147046
68870 68881 CTGTGGTCAAAA 1-10-1 MOE 858
147047
68871 68882 ACTGTGGTCAAA 1-10-1 MOE 833
147048
68872 68883 GACTGTGGTCAA 1-10-1 MOE 888
147049
68873 68884 CGACTGTGGTCA 1-10-1 MOE 854
147047
69017 69028 ACTGTGGTCAAA 1-10-1 MOE 833
147048
69018 69029 GACTGTGGTCAA 1-10-1 MOE 888
147049
69019 69030 CGACTGTGGTCA 1-10-1 MOE 854
147071
69519 69530 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147073
69521 69532 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
147071
69665 69676 CTGATCCTGCAC 1-10-1 MOE 856
147072
69666 69677 ACTGATCCTGCA 1-10-1 MOE 832
147024
70466 70477 CCTTGTCGATCT 1-10-1 MOE 853
147024
70612 70623 CCTTGTCGATCT 1-10-1 MOE 853
147062
70761 70772 CACTGACGAGTC 1-10-1 MOE 841
147072
70998 71009 ACTGATCCTGCA 1-10-1 MOE 832
147073
70999 71010 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
147072
71144 71155 ACTGATCCTGCA 1-10-1 MOE 832
147073
71145 71156 CACTGATCCTGC 1-10-1 MOE 842
147048
71366 71377 GACTGTGGTCAA 1-10-1 MOE 888
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147048
71512 71523 GACTGTGGTCAA 1-10-1 MOE 888

Tabla 18: Compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 12
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
398163
20 31 ATGTCAACCGGC 1-10-1 MOE 908
384545
23 34 CAAGTAGGATGT 1-10-1 MOE 951
147705
159 170 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
147703
245 256 TGGCTTCATGTC 1-10-1 MOE 971
398090
283 296 TTGTTCTTAGGAAG 2-10-2 MOE 972
147704
285 296 TTGTTCTTAGGA 1-10-1 MOE 1012
147705
291 302 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
147709
311 322 CCATTTTTATCA 1-10-1 MOE 978
147733
349 360 TTCTTGATGTCC 1-10-1 MOE 891
147707
360 371 TAGTCATTATCT 1-10-1 MOE 977
147708
366 377 TTGATATAGTCA 1-10-1 MOE 997
390030
381 392 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147709
386 397 CCATTTTTATCA 1-10-1 MOE 978
147081
393 404 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
398091
393 406 GGGCTTCTTCCATT 2-10-2 MOE 979
398166
395 406 GGGCTTCTTCCA 1-10-1 MOE 1070
147709
418 429 CCATTTTTATCA 1-10-1 MOE 978
147711
425 436 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
147712
461 472 ACACCATCTCCC 1-10-1 MOE 1005
147713
466 477 CTCCCACACCAT 1-10-1 MOE 985
147714
471 482 TTCTGCTCCCAC 1-10-1 MOE 986
147715
496 507 GTTGAGCATGAC 1-10-1 MOE 1077
147716
521 532 TTAACGAGCCTT 1-10-1 MOE 949
147717
574 585 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
147717
607 618 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
147708
612 623 TTGATATAGTCA 1-10-1 MOE 997
147718
621 632 TAATATGACTTG 1-10-1 MOE 998
147746
625 636 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
398167
704 715 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
398092
705 718 AGTCAGGCCATGTG 2-10-2 MOE 1060
147723
715 726 GACTCCAAAGTC 1-10-1 MOE 892
398093
758 771 TCGGACTTTGAAAA 2-10-2 MOE 1009
398168
760 771 TCGGACTTTGAA 1-10-1 MOE 1008
147738
780 791 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
398094
848 861 ATCAGCCAGACAGA 2-10-2 MOE 1010
398169
849 860 TCAGCCAGACAG 1-10-1 MOE 909
398164
873 884 TTGTCGATCTGC 1-10-1 MOE 1014
147735
973 984 GGAGAAGCGCAG 1-10-1 MOE 1016
147737
984 995 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
368369
1025 1040 TCCTGCACTGACGAGT 3-10-3 MOE 893
368372
1031 1046 CACTGATCCTGCACTG 3-10-3 MOE 894
368353
1033 1046 CACTGATCCTGCAC 2-10-2 MOE 1007
368354
1035 1048 TCCACTGATCCTGC 2-10-2 MOE 1024
368388
1035 1050 CTTCCACTGATCCTTA 3-10-3 MOE 895
368355
1036 1049 TTCCACTGATCCTG 2-10-2 MOE 1025
368356
1037 1050 CTTCCACTGATCCT 2-10-2 MOE 1027
368376
1037 1052 TCCTTCCACTGATCCT 3-10-3 MOE 1028
147076
1038 1049 TTCCACTGATCC 1-10-1 MOE 1029
368357
1038 1051 CCTTCCACTGATCC 2-10-2 MOE 1046
147077
1039 1050 CTTCCACTGATC 1-10-1 MOE 1047
368358
1039 1052 TCCTTCCACTGATC 2-10-2 MOE 1031
368378
1039 1054 GCTCCTTCCACTGATC 3-10-3 MOE 1032
368359
1041 1054 GCTCCTTCCACTGA 2-10-2 MOE 1033
147080
1042 1053 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
147081
1043 1054 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
368360
1043 1056 AAGCTCCTTCCACT 2-10-2 MOE 1035
368380
1043 1058 GAAAGCTCCTTCCACT 3-10-3 MOE 896
147082
1044 1055 AGCTCCTTCCAC 1-10-1 MOE 1036
368381
1045 1060 GGGAAAGCTCCTTCCA 3-10-3 MOE 1037
147739
1107 1118 CGTTTGGGTGGC 1-10-1 MOE 1023
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147741
1165 1176 CACCCACTGGTG 1-10-1 MOE 1055
398097
1194 1207 GGCAGTCTTTATCC 2-10-2 MOE 897
147742
1273 1284 AACTTCAGTGTC 1-10-1 MOE 1041
147743
1388 1399 AGGGCTTCCAGT 1-10-1 MOE 1042
147744
1392 1403 AGGAAGGGCTTC 1-10-1 MOE 1043
147745
1398 1409 TTGACCAGGAAG 1-10-1 MOE 1058
398157
1455 1468 GGAAACATACCCTG 2-10-2 MOE 1045
398167
1475 1486 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
398092
1476 1489 AGTCAGGCCATGTG 2-10-2 MOE 1060
368357
1596 1609 CCTTCCACTGATCC 2-10-2 MOE 1046
398160
1691 1704 GAATAGGTTAAGGC 2-10-2 MOE 1048
398163
1711 1722 ATGTCAACCGGC 1-10-1 MOE 908
147746
1750 1761 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
389949
1777 1788 GCGCGAGCCCGA 1-10-1 MOE 1061
398161
1790 1803 AACAATGTGTTGTA 2-10-2 MOE 1049
147746
1799 1810 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398163
1819 1830 ATGTCAACCGGC 1-10-1 MOE 908
389950
1848 1859 CCCTGAAGGTTC 1-10-1 MOE 1063
398164
1889 1900 TTGTCGATCTGC 1-10-1 MOE 1014
147702
1917 1928 CTGGTAAATAGC 1-10-1 MOE 898
147088
1971 1982 CCCTCTACACCA 1-10-1 MOE 1050
398102
2003 2016 CTACCTGAGGATTT 2-10-2 MOE 899
398103
2010 2023 CCCAGTACTACCTG 2-10-2 MOE 900
147737
2386 2397 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
398095
2407 2420 CATCAGCAAGAGGC 2-10-2 MOE 1011
398106
2441 2454 TGGAAAACTGCACC 2-10-2 MOE 1068
147745
2497 2508 TTGACCAGGAAG 1-10-1 MOE 1058
147712
2499 2510 ACACCATCTCCC 1-10-1 MOE 1005
147712
2607 2618 ACACCATCTCCC 1-10-1 MOE 1005
147745
2689 2700 TTGACCAGGAAG 1-10-1 MOE 1058
398167
2706 2717 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
398092
2707 2720 AGTCAGGCCATGTG 2-10-2 MOE 1060
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
398166
2966 2977 GGGCTTCTTCCA 1-10-1 MOE 1070
147091
2992 3003 GTTCCCTCTACA 1-10-1 MOE 1004
147092
2993 3004 TGTTCCCTCTAC 1-10-1 MOE 901
389949
3008 3019 GCGCGAGCCCGA 1-10-1 MOE 1061
147087
3149 3160 CCTCTACACCAG 1-10-1 MOE 982
147088
3150 3161 CCCTCTACACCA 1-10-1 MOE 1050
398113
3160 3173 AGGAGGTTAAACCA 2-10-2 MOE 905
147087
3257 3268 CCTCTACACCAG 1-10-1 MOE 982
147088
3258 3269 CCCTCTACACCA 1-10-1 MOE 1050
147737
3591 3602 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
147737
3617 3628 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
147079
3637 3648 TCCTTCCACTGA 1-10-1 MOE 1001
147080
3638 3649 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
398095
3638 3651 CATCAGCAAGAGGC 2-10-2 MOE 1011
398106
3672 3685 TGGAAAACTGCACC 2-10-2 MOE 1068
398107
3678 3691 TATTCCTGGAAAAC 2-10-2 MOE 902
147691
3806 3817 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
147683
3848 3859 GCTTACGATTGT 1-10-1 MOE 922
147738
3853 3864 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
398167
3926 3937 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
398109
3945 3958 CAAGAAGTGTGGTT 2-10-2 MOE 903
398167
4034 4045 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
398110
4083 4096 GTTCCCTTTGCAGG 2-10-2 MOE 952
398111
4168 4181 GTGAAAATGCTGGC 2-10-2 MOE 904
147706
4238 4249 GCTGACATCTCG 1-10-1 MOE 1071
398112
4282 4295 CAGCCTGGCACCTA 2-10-2 MOE 1072
147746
4315 4326 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398113
4391 4404 AGGAGGTTAAACCA 2-10-2 MOE 905
398115
4484 4497 AGTAAATATTGGCT 2-10-2 MOE 1076
390030
4491 4502 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
390030
4537 4548 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147703
5034 5045 TGGCTTCATGTC 1-10-1 MOE 971
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147684
5035 5046 ACCCAGTCAGGG 1-10-1 MOE 964
398125
5075 5088 CAGTAAGGAATTTT 2-10-2 MOE 913
147696
5083 5094 TGGATGATTGGC 1-10-1 MOE 906
147684
5143 5154 ACCCAGTCAGGG 1-10-1 MOE 964
147712
5366 5377 ACACCATCTCCC 1-10-1 MOE 1005
147714
5416 5427 TTCTGCTCCCAC 1-10-1 MOE 986
398128
5443 5456 CTAAATTTAGTTCA 2-10-2 MOE 911
147712
5474 5485 ACACCATCTCCC 1-10-1 MOE 1005
147746
5498 5509 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147714
5524 5535 TTCTGCTCCCAC 1-10-1 MOE 986
147736
5600 5611 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147085
5762 5773 TCTACACCAGGT 1-10-1 MOE 961
147679
5825 5836 CAAAAGGATCCC 1-10-1 MOE 907
390030
6803 6814 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
398142
6885 6898 CCAGCACACTGGAA 2-10-2 MOE 923
398142
6994 7007 CCAGCACACTGGAA 2-10-2 MOE 923
398166
7306 7317 GGGCTTCTTCCA 1-10-1 MOE 1070
147684
7551 7562 ACCCAGTCAGGG 1-10-1 MOE 964
147085
8308 8319 TCTACACCAGGT 1-10-1 MOE 961
147085
8416 8427 TCTACACCAGGT 1-10-1 MOE 961
398163
8473 8484 ATGTCAACCGGC 1-10-1 MOE 908
147718
8523 8534 TAATATGACTTG 1-10-1 MOE 998
147718
8631 8642 TAATATGACTTG 1-10-1 MOE 998
147691
8806 8817 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
147728
8835 8846 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
147728
8943 8954 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
398169
8946 8957 TCAGCCAGACAG 1-10-1 MOE 909
147742
9060 9071 AACTTCAGTGTC 1-10-1 MOE 1041
404136
9162 9175 TAAGTGTCCCTTTG 2-10-2 MOE 910
147746
9963 9974 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
9966 9977 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
9969 9980 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147746
9991 10002 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
10071 10082 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
10074 10085 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
10077 10088 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
390030
10170 10181 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147084
10220 10231 CTACACCAGGTC 1-10-1 MOE 993
390030
10278 10289 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147085
10329 10340 TCTACACCAGGT 1-10-1 MOE 961
147711
10684 10695 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
147711
10792 10803 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
398128
11333 11346 CTAAATTTAGTTCA 2-10-2 MOE 911
147707
11960 11971 TAGTCATTATCT 1-10-1 MOE 977
147707
11965 11976 TAGTCATTATCT 1-10-1 MOE 977
147090
12013 12024 TTCCCTCTACAC 1-10-1 MOE 955
398096
12146 12159 GGAGAAGCGCAGCT 2-10-2 MOE 1015
398166
12214 12225 GGGCTTCTTCCA 1-10-1 MOE 1070
398135
12308 12321 GACTACATTTTACA 2-10-2 MOE 912
147741
12389 12400 CACCCACTGGTG 1-10-1 MOE 1055
398125
12431 12444 CAGTAAGGAATTTT 2-10-2 MOE 913
147714
12585 12596 TTGTGCTCCCAC 1-10-1 MOE 986
147718
12594 12605 TAATATGACTTG 1-10-1 MOE 998
398125
12612 12625 CAGTAAGGAATTTT 2-10-2 MOE 913
147737
12803 12814 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
147746
12876 12887 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147691
12900 12911 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
398137
13111 13124 TGTGTCCCTCAGTC 2-10-2 MOE 914
398138
13254 13267 AACATCAAGCTTGA 2-10-2 MOE 931
398137
13292 13305 TGTGTCCCTCAGTC 2-10-2 MOE 914
398138
13435 13448 AACATCAAGCTTGA 2-10-2 MOE 931
389764
14020 14031 CTGCAACATGAT 1-9-2 MOE 1018
389948
14067 14078 CCGTTGGACCCC 1-10-1 MOE 915
389948
14248 14259 CCGTTGGACCCC 1-10-1 MOE 915
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147738
14279 14290 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
147698
14572 14583 CCCGCCACCACC 1-10-1 MOE 928
147717
14750 14761 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
147717
14932 14943 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
398167
15374 15385 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
147736
16444 16455 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147746
16510 16521 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147738
16590 16601 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
147746
16676 16687 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398167
16797 16808 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
398144
16911 16924 GACAGCTTCTATAA 2-10-2 MOE 916
389764
17096 17107 CTGCAACATGAT 1-9-2 MOE 1018
147709
17238 17249 CCATTTTTATCA 1-10-1 MOE 978
147709
17406 17417 CCATTTTTATCA 1-10-1 MOE 978
147695
17466 17477 TCATTCCCCACT 1-10-1 MOE 984
147746
17497 17508 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147088
17539 17550 CCCTCTACACCA 1-10-1 MOE 1050
147711
17808 17819 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
147711
17976 17987 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
398139
18049 18062 AGTGACTGACCACA 2-10-2 MOE 917
398139
18217 18230 AGTGACTGACCACA 2-10-2 MOE 917
398140
18596 18609 GTAGCATAGAGCCT 2-10-2 MOE 918
398140
18764 18777 GTAGCATAGAGCCT 2-10-2 MOE 918
398167
18927 18938 CAGGCCATGTGG 1-14-1 MOE 1059
398141
18947 18960 CAGATCTTGTCAAG 2-10-2 MOE 919
398167
19095 19106 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
398141
19115 19128 CAGATCTTGTCAAG 2-10-2 MOE 919
147746
19207 19218 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147711
19508 19519 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
147729
19554 19565 GTAAGAGGCAGG 1-10-1 MOE 920
147718
19617 19628 TAATATGACTTG 1-10-1 MOE 998
390030
19618 19629 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147701
19671 19682 CCATGGCGGGAC 1-10-1 MOE 921
147711
19676 19687 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
147718
19785 19796 TAATATGACTTG 1-10-1 MOE 998
147079
20515 20526 TCCTTCCACTGA 1-10-1 MOE 1001
389764
20620 20631 CTGCAACATGAT 1-9-2 MOE 1018
398142
20653 20666 CCAGCACACTGGAA 2-10-2 MOE 923
147078
20682 20693 CCTTCCACTGAT 1-10-1 MOE 1044
147079
20683 20694 TCCTTCCACTGA 1-10-1 MOE 1001
147080
20704 20715 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
147081
20705 20716 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
389965
20788 20799 CTGCAACATGAT 1-10-1 MOE 1018
147746
20870 20881 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
21038 21049 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147717
21080 21091 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
147076
21222 21233 TTCCACTGATCC 1-10-1 MOE 1029
398094
21441 21454 ATCAGCCAGACAGA 2-10-2 MOE 1010
147746
21633 21644 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147738
21884 21895 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
147683
21939 21950 GCTTACGATTGT 1-10-1 MOE 922
147743
22213 22224 AGGGCTTCCAGT 1-10-1 MOE 1042
147736
22759 22770 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147736
22927 22938 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
398142
23008 23021 CCAGCACACTGGAA 2-10-2 MOE 923
398147
23784 23797 CTACAGGACAATAC 2-10-2 MOE 957
398147
23952 23965 CTACAGGACAATAC 2-10-2 MOE 957
147713
24434 24445 CTCCCACACCAT 1-10-1 MOE 985
389965
24543 24554 CTGCAACATGAT 1-10-1 MOE 1018
147713
24602 24613 CTCCCACACCAT 1-10-1 MOE 985
389965
24711 24722 CTGCAACATGAT 1-10-1 MOE 1018
147746
25384 25395 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398143
25505 25518 GTCAGTCCCAGCTA 2-10-2 MOE 924
147691
25610 25621 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
398130
25672 25685 TTAGTATGACAGCT 2-10-2 MOE 925
147746
25810 25821 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
25978 25989 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
26172 26183 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398151
26718 26731 TCAGTGTAGGAAGA 2-10-2 MOE 926
147728
26917 26928 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
398152
27708 27721 TGAATATACAGATG 2-10-2 MOE 927
147698
28629 28640 CCCGCCACCACC 1-10-1 MOE 928
389965
28714 28725 CTGCAACATGAT 1-10-1 MOE 1018
389764
28714 28725 CTGCAACATGAT 1-9-2 MOE 1018
389764
28861 28872 CTGCAACATGAT 1-9-2 MOE 1018
390030
29945 29956 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147744
30654 30665 AGGAAGGGCTTC 1-10-1 MOE 1043
147093
30836 30847 TTGTTCCCTCTA 1-10-1 MOE 929
147746
30957 30968 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
31105 31116 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
390030
31477 31488 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
384545
31829 31840 CAAGTAGGATGT 1-10-1 MOE 951
384545
31977 31988 CAAGTAGGATGT 1-10-1 MOE 951
401382
32094 32107 TCTACCTGAGTCCA 2-10-2 MOE 930
147089
32387 32398 TCCCTCTACACC 1-10-1 MOE 956
389950
32949 32960 CCCTGAAGGTTC 1-10-1 MOE 1063
398165
33002 33013 GTTCTTAGGAAG 1-10-1 MOE 968
147081
33073 33084 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
147082
33074 33085 AGCTCCTTCCAC 1-10-1 MOE 1036
389950
33097 33108 CCCTGAAGGTTC 1-10-1 MOE 1063
147736
33160 33171 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147081
33221 33232 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
368360
33221 33234 AAGCTCCTTCCACT 2-10-2 MOE 1035
147082
33222 33233 AGCTCCTTCCAC 1-10-1 MOE 1036
398138
33244 33257 AACATCAAGCTTGA 2-10-2 MOE 931
147746
33250 33261 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
398138
33392 33405 AACATCAAGCTTGA 2-10-2 MOE 931
401383
33588 33601 GATCACCTTCAGAG 2-10-2 MOE 932
147746
33886 33897 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
34606 34617 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398165
34704 34715 GTTCTTAGGAAG 1-10-1 MOE 968
147717
34745 34756 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
147746
34754 34765 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398165
34852 34863 GTTCTTAGGAAG 1-10-1 MOE 968
147717
34893 34904 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
401384
34905 34918 TGAACACATCACTA 2-10-2 MOE 933
147738
35391 35402 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
147736
35396 35407 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147738
35539 35550 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
147691
35554 35565 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
147691
35702 35713 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
147746
35814 35825 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
401385
36109 36122 CCCAGTGGGTTTGA 2-10-2 MOE 890
147691
36360 36371 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
147746
36416 36427 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147731
36620 36631 TTTCCTCTTGTC 1-10-1 MOE 934
147714
37881 37892 TTCTGCTCCCAC 1-10-1 MOE 986
147714
38029 38040 TTCTGCTCCCAC 1-10-1 MOE 986
147681
38512 38523 ATGTCATTAAAC 1-10-1 MOE 965
401386
38516 38529 TAATTGATGTCAAT 2-10-2 MOE 935
401387
38518 38531 AGTAATTGATGTCA 2-10-2 MOE 936
401388
38520 38533 ACAGTAATTGATGT 2-10-2 MOE 937
401389
38522 38535 TTACAGTAATTGAT 2-10-2 MOE 938
401390
38524 38537 ACTTACAGTAATTG 2-10-2 MOE 939
401391
38526 38539 AGACTTACAGTAAT 2-10-2 MOE 940
401392
38528 38541 TCAGACTTACAGTA 2-10-2 MOE 941
401393
38530 38543 AATCAGACTTACAG 2-10-2 MOE 942
401394
38532 38545 TGAATCAGACTTAC 2-10-2 MOE 943
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
401395
38534 38547 AATGAATCAGACTT 2-10-2 MOE 944
147738
38909 38920 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
147738
39057 39068 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
390030
39249 39260 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
390030
39397 39408 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
401396
39488 39501 TGCAGGATGTTGAG 2-10-2 MOE 945
147717
39545 39556 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
147746
39641 39652 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147717
39693 39704 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
147746
39729 39740 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
39877 39888 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
40185 40196 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
40478 40489 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398166
40589 40600 GGGCTTCTTCCA 1-10-1 MOE 1070
147735
40662 40673 GGAGAAGCGCAG 1-10-1 MOE 1016
147746
40706 40717 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398166
40737 40748 GGGCTTCTTCCA 1-10-1 MOE 1070
147746
40854 40865 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
401397
41012 41025 CTGGTCAGCATTGA 2-10-2 MOE 946
147718
41070 41081 TAATATGACTTG 1-10-1 MOE 998
147718
41218 41229 TAATATGACTTG 1-10-1 MOE 998
147717
41221 41232 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
147717
41369 41380 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
147717
41599 41610 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
147717
41747 41758 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
401398
41768 41781 CAAAGTCCCTTAGC 2-10-2 MOE 947
390030
42056 42067 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
398153
42157 42170 ATTTCTCTTACAGG 2-10-2 MOE 948
398153
42305 42318 ATTTCTCTTACAGG 2-10-2 MOE 948
147710
42691 42702 TATAGCTCCTCT 1-10-1 MOE 994
147079
43322 43333 TCCTTCCACTGA 1-10-1 MOE 1001
147080
43323 43334 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147716
43477 43488 TTAACGAGCCTT 1-10-1 MOE 949
147746
43992 44003 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147736
44137 44148 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
384545
44242 44253 CAAGTAGGATGT 1-10-1 MOE 951
147687
44354 44365 CGACACGGGAAC 1-10-1 MOE 950
384545
44390 44401 CAAGTAGGATGT 1-10-1 MOE 951
398110
44713 44726 GTTCCCTTTGCAGG 2-10-2 MOE 952
147705
45092 45103 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
147705
45240 45251 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
147074
45977 45988 CCACTGATCCTG 1-10-1 MOE 845
147075
45978 45989 TCCACTGATCCT 1-10-1 MOE 1026
147076
45979 45990 TTCCACTGATCC 1-10-1 MOE 1029
147076
46127 46138 TTCCACTGATCC 1-10-1 MOE 1029
401399
46247 46260 ATTAGCCATATCTC 2-10-2 MOE 953
147705
46555 46566 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
147714
46685 46696 TTCTGCTCCCAC 1-10-1 MOE 986
147705
46703 46714 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
390030
46859 46870 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
390030
46933 46944 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147681
46984 46995 ATGTCATTAAAC 1-10-1 MOE 965
390030
47007 47018 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147746
47023 47034 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
390030
47081 47092 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147681
47132 47143 ATGTCATTAAAC 1-10-1 MOE 965
147746
47171 47182 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
401400
47411 47424 AGCATTCAGCAGTG 2-10-2 MOE 954
147746
47461 47472 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147086
47608 47619 CTCTACACCAGG 1-10-1 MOE 969
147087
47609 47620 CCTCTACACCAG 1-10-1 MOE 982
147088
47610 47621 CCCTCTACACCA 1-10-1 MOE 1050
147090
47612 47623 TTCCCTCTACAC 1-10-1 MOE 955
147691
47729 47740 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147086
47756 47767 CTCTACACCAGG 1-10-1 MOE 969
147088
47758 47769 CCCTCTACACCA 1-10-1 MOE 1050
147089
47759 47770 TCCCTCTACACC 1-10-1 MOE 956
390030
47847 47858 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
390030
47995 48006 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147691
48393 48404 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
398147
48887 48900 CTACAGGACAATAC 2-10-2 MOE 957
147706
49133 49144 GCTGACATCTCG 1-10-1 MOE 1071
147706
49281 49292 GCTGACATCTCG 1-10-1 MOE 1071
398168
49742 49753 TCGGACTTTGAA 1-10-1 MOE 1008
401401
49791 49804 AACTGGGTTAAGTA 2-10-2 MOE 958
147689
49936 49947 CAGAGAAGGTCT 1-10-1 MOE 987
401402
50192 50205 TGAACACGCTATCC 2-10-2 MOE 959
398117
50241 50254 TTTCCACTTGGGTG 2-10-2 MOE 960
147736
50582 50593 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
398168
50703 50714 TCGGACTTTGAA 1-10-1 MOE 1008
398168
50849 50860 TCGGACTTTGAA 1-10-1 MOE 1008
147746
51019 51030 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147708
51101 51112 TTGATATAGTCA 1-10-1 MOE 997
147746
51178 51189 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147708
51247 51258 TTGATATAGTCA 1-10-1 MOE 997
147083
51281 51292 TACACCAGGTCA 1-10-1 MOE 973
147081
51287 51298 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
147082
51288 51299 AGCTCCTTCCAC 1-10-1 MOE 1036
147746
51331 51342 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147085
51416 51427 TCTACACCAGGT 1-10-1 MOE 961
147083
51427 51438 TACACCAGGTCA 1-10-1 MOE 973
147081
51433 51444 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
147082
51434 51445 AGCTCCTTCCAC 1-10-1 MOE 1036
147728
51522 51533 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
147085
51562 51573 TCTACACCAGGT 1-10-1 MOE 961
147081
51633 51644 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
368360
51633 51646 AAGCTCCTTCCACT 2-10-2 MOE 1035
147082
51634 51645 AGCTCCTTCCAC 1-10-1 MOE 1036
368361
51635 51648 GAAAGCTCCTTCCA 2-10-2 MOE 962
368360
51779 51792 AAGCTCCTTCCACT 2-10-2 MOE 1035
147082
51780 51791 AGCTCCTTCCAC 1-10-1 MOE 1036
147736
51859 51870 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147684
51867 51878 ACCCAGTCAGGG 1-10-1 MOE 964
147746
51918 51929 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147077
51988 51999 CTTCCACTGATC 1-10-1 MOE 1047
147746
52064 52075 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147084
52125 52136 CTACACCAGGTC 1-10-1 MOE 993
147079
52136 52147 TCCTTCCACTGA 1-10-1 MOE 1001
147681
52231 52242 ATGTCATTAAAC 1-10-1 MOE 965
147084
52271 52282 CTACACCAGGTC 1-10-1 MOE 993
147691
52312 52323 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
401403
52318 52331 TTTCCTAGGAGGTG 2-10-2 MOE 967
398167
52527 52538 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
147703
52670 52681 TGGCTTCATGTC 1-10-1 MOE 971
398167
52673 52684 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
398165
52708 52719 GTTCTTAGGAAG 1-10-1 MOE 968
398090
52708 52721 TTGTTCTTAGGAAG 2-10-2 MOE 972
147705
52716 52727 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
147682
52717 52728 CGGGTACTATGG 1-10-1 MOE 992
398167
52762 52773 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
147703
52816 52827 TGGCTTCATGTC 1-10-1 MOE 971
398090
52854 52867 TTGTTCTTAGGAAG 2-10-2 MOE 972
147704
52856 52867 TTGTTCTTAGGA 1-10-1 MOE 1012
147705
52862 52873 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
398167
52908 52919 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
147084
53704 53715 CTACACCAGGTC 1-10-1 MOE 993
147088
53708 53719 CCCTCTACACCA 1-10-1 MOE 1050
147083
53849 53860 TACACCAGGTCA 1-10-1 MOE 973
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147084
53850 53861 CTACACCAGGTC 1-10-1 MOE 993
147086
53852 53863 CTCTACACCAGG 1-10-1 MOE 969
147088
53854 53865 CCCTCTACACCA 1-10-1 MOE 1050
398167
53870 53881 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
147703
54137 54148 TGGCTTCATGTC 1-10-1 MOE 971
398155
54172 54185 TGTTTTTACACAGA 2-10-2 MOE 970
390030
54263 54274 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147705
54275 54286 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
147703
54283 54294 TGGCTTCATGTC 1-10-1 MOE 971
390030
54409 54420 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147704
54965 54976 TTGTTCTTAGGA 1-10-1 MOE 1012
147705
54971 54982 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
398090
55109 55122 TTGTTCTTAGGAAG 2-10-2 MOE 972
147705
55117 55128 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
147083
55206 55217 TACACCAGGTCA 1-10-1 MOE 973
147084
55207 55218 CTACACCAGGTC 1-10-1 MOE 993
147084
55353 55364 CTACACCAGGTC 1-10-1 MOE 993
147705
55524 55535 CGGTTMGTTC 1-10-1 MOE 1002
147685
55602 55613 GGCTGACATTCA 1-10-1 MOE 975
401404
55638 55651 TGAGCTACAGTAGG 2-10-2 MOE 974
147685
55748 55759 GGCTGACATTCA 1-10-1 MOE 975
147712
55819 55830 ACACCATCTCCC 1-10-1 MOE 1005
147712
55965 55976 ACACCATCTCCC 1-10-1 MOE 1005
147707
56300 56311 TAGTCATTATCT 1-10-1 MOE 977
147708
56306 56317 TTGATATAGTCA 1-10-1 MOE 997
390030
56321 56332 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147709
56326 56337 CCATTTTTATCA 1-10-1 MOE 978
398091
56333 56346 GGGCTTCTTCCATT 2-10-2 MOE 979
401405
56408 56421 TGGTCAACTGAAAG 2-10-2 MOE 976
147707
56446 56457 TAGTCATTATCT 1-10-1 MOE 977
147708
56452 56463 TTGATATAGTCA 1-10-1 MOE 997
147709
56472 56483 CCATTTTTATCA 1-10-1 MOE 978
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
398091
56479 56492 GGGCTTCTTCCATT 2-10-2 MOE 979
401406
56570 56583 GGTGTGGATAACAG 2-10-2 MOE 980
368366
56664 56677 CTGATCCTTAGAAG 2-10-2 MOE 1019
398148
57157 57170 TCATAACTATTAAG 2-10-2 MOE 981
147082
57220 57231 AGCTCCTTCCAC 1-10-1 MOE 1036
398148
57303 57316 TCATAACTATTAAG 2-10-2 MOE 981
147082
57366 57377 AGCTCCTTCCAC 1-10-1 MOE 1036
147743
57758 57769 AGGGCTTCCAGT 1-10-1 MOE 1042
398093
57963 57976 TCGGACTTTGAAAA 2-10-2 MOE 1009
398093
58109 58122 TCGGACTTTGAAAA 2-10-2 MOE 1009
147735
58279 58290 GGAGAAGCGCAG 1-10-1 MOE 1016
147087
58821 58832 CCTCTACACCAG 1-10-1 MOE 982
147087
58967 58978 CCTCTACACCAG 1-10-1 MOE 982
390030
59180 59191 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
390030
59326 59337 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147711
59357 59368 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
147743
59382 59393 AGGGCTTCCAGT 1-10-1 MOE 1042
147711
59503 59514 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
147711
59675 59686 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
401407
59710 59723 CAGCTTAGGCAGAG 2-10-2 MOE 983
147712
59711 59722 ACACCATCTCCC 1-10-1 MOE 1005
147713
59716 59727 CTCCCACACCAT 1-10-1 MOE 985
147714
59721 59732 TTCTGCTCCCAC 1-10-1 MOE 986
147695
59722 59733 TCATTCCCCACT 1-10-1 MOE 984
147715
59746 59757 GTTGAGCATGAC 1-10-1 MOE 1077
147711
59821 59832 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
390030
59847 59858 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147712
59857 59868 ACACCATCTCCC 1-10-1 MOE 1005
147713
59862 59873 CTCCCACACCAT 1-10-1 MOE 985
147714
59867 59878 TTCTGCTCCCAC 1-10-1 MOE 986
390030
59993 60004 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
389949
60471 60482 GCGCGAGCCCGA 1-10-1 MOE 1061
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147746
60619 60630 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147689
61113 61124 CAGAGAAGGTCT 1-10-1 MOE 987
398105
61267 61280 TGCACAGGCAGGTT 2-10-2 MOE 1066
147680
61473 61484 GTATGCACTGCT 1-10-1 MOE 988
147080
61757 61768 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
147078
61901 61912 CCTTCCACTGAT 1-10-1 MOE 1044
147079
61902 61913 TCCTTCCACTGA 1-10-1 MOE 1001
147088
62215 62226 CCCTCTACACCA 1-10-1 MOE 1050
401408
62600 62613 CAATGAAGCACAGG 2-10-2 MOE 989
147688
62843 62854 TCCCAAACAAAT 1-10-1 MOE 990
147746
63102 63113 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
63248 63259 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
401409
63430 63443 ATTCTTAACACAGA 2-10-2 MOE 991
147682
63483 63494 CGGGTACTATGG 1-10-1 MOE 992
147084
63677 63688 CTACACCAGGTC 1-10-1 MOE 993
147710
64847 64858 TATAGCTCCTCT 1-10-1 MOE 994
147710
64993 65004 TATAGCTCCTCT 1-10-1 MOE 994
147746
65151 65162 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
401410
65263 65276 CATTTAGGGTCTAA 2-10-2 MOE 995
147717
65862 65873 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
147717
65895 65906 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
147708
65900 65911 TTGATATAGTCA 1-10-1 MOE 997
147718
65909 65920 TAATATGACTTG 1-10-1 MOE 998
147717
66008 66019 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
147717
66041 66052 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
147708
66046 66057 TTGATATAGTCA 1-10-1 MOE 997
147718
66055 66066 TAATATGACTTG 1-10-1 MOE 998
401411
66123 66136 AGCCGCCTGAAGTG 2-10-2 MOE 999
147697
66497 66508 CCCCAGCAGCGG 1-10-1 MOE 1000
368377
66562 66577 CTCCTTCCACTGATCC 3-10-3 MOE 1030
147077
66563 66574 CTTCCACTGATC 1-10-1 MOE 1047
368358
66563 66576 TCCTTCCACTGATC 2-10-2 MOE 1031
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147078
66564 66575 CCTTCCACTGAT 1-10-1 MOE 1044
147079
66565 66576 TCCTTCCACTGA 1-10-1 MOE 1001
147080
66566 66577 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
147697
66643 66654 CCCCAGCAGCGG 1-10-1 MOE 1000
368358
66709 66722 TCCTTCCACTGATC 2-10-2 MOE 1031
147078
66710 66721 CCTTCCACTGAT 1-10-1 MOE 1044
147079
66711 66722 TCCTTCCACTGA 1-10-1 MOE 1001
147075
66999 67010 TCCACTGATCCT 1-10-1 MOE 1026
147705
67067 67078 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
147088
67409 67420 CCCTCTACACCA 1-10-1 MOE 1050
147080
67430 67441 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
147082
67432 67443 AGCTCCTTCCAC 1-10-1 MOE 1036
147737
67455 67466 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
147088
67555 67566 CCCTCTACACCA 1-10-1 MOE 1050
147082
67578 67589 AGCTCCTTCCAC 1-10-1 MOE 1036
401412
67637 67650 TAAATCCTCTAGCA 2-10-2 MOE 1003
147091
67729 67740 GTTCCCTCTACA 1-10-1 MOE 1004
147742
67737 67748 AACTTCAGTGTC 1-10-1 MOE 1041
147712
68527 68538 ACACCATCTCCC 1-10-1 MOE 1005
147712
68673 68684 ACACCATCTCCC 1-10-1 MOE 1005
147711
68760 68771 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
147711
68906 68917 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
389965
69271 69282 CTGCAACATGAT 1-10-1 MOE 1018
389965
69417 69428 CTGCAACATGAT 1-10-1 MOE 1018
368353
69519 69532 CACTGATCCTGCAC 2-10-2 MOE 1007
147080
69630 69641 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
147081
69631 69642 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
368353
69665 69678 CACTGATCCTGCAC 2-10-2 MOE 1007
398167
69757 69768 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
398092
69758 69771 AGTCAGGCCATGTG 2-10-2 MOE 1060
398093
69811 69824 TCGGACTTTGAAAA 2-10-2 MOE 1009
398168
69813 69824 TCGGACTTTGAA 1-10-1 MOE 1008
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
398167
69903 69914 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
398093
69957 69970 TCGGACTTTGAAAA 2-10-2 MOE 1009
398094
70047 70060 ATCAGCCAGACAGA 2-10-2 MOE 1010
398095
70065 70078 CATCAGCAAGAGGC 2-10-2 MOE 1011
147704
70137 70148 TTGTTCTTAGGA 1-10-1 MOE 1012
147728
70450 70461 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
398164
70464 70475 TTGTCGATCTGC 1-10-1 MOE 1014
398096
70562 70575 GGAGAAGCGCAGCT 2-10-2 MOE 1015
147735
70564 70575 GGAGAAGCGCAG 1-10-1 MOE 1016
147737
70575 70586 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
147735
70710 70721 GGAGAAGCGCAG 1-10-1 MOE 1016
147737
70721 70732 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
404131
70729 70742 ACCTTCGATCACAG 2-10-2 MOE 831
368349
70762 70775 CTGCACTGACGAGT 2-10-2 MOE 1017
389965
70930 70941 CTGCAACATGAT 1-10-1 MOE 1018
368366
70995 71008 CTGATCCTTAGAAG 2-10-2 MOE 1019
368354
70999 71012 TCCACTGATCCTGC 2-10-2 MOE 1024
368375
71000 71015 CCTTCCACTGATCCTG 3-10-3 MOE 1020
368356
71001 71014 CTTCCACTGATCCT 2-10-2 MOE 1027
368376
71001 71016 TCCTTCCACTGATCCT 3-10-3 MOE 1028
368357
71002 71015 CCTTCCACTGATCC 2-10-2 MOE 1046
368377
71002 71017 CTCCTTCCACTGATCC 3-10-3 MOE 1030
147077
71003 71014 CTTCCACTGATC 1-10-1 MOE 1047
368358
71003 71016 TCCTTCCACTGATC 2-10-2 MOE 1031
368378
71003 71018 GCTCCTTCCACTGATC 3-10-3 MOE 1032
147078
71004 71015 CCTTCCACTGAT 1-10-1 MOE 1044
368359
71005 71018 GCTCCTTCCACTGA 2-10-2 MOE 1033
368379
71005 71020 AAGCTCCTTCCACTGA 3-10-3 MOE 1034
147080
71006 71017 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
147082
71008 71019 AGCTCCTTCCAC 1-10-1 MOE 1036
401413
71019 71032 TGCAGCCATGTACT 2-10-2 MOE 1022
147738
71067 71078 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147739
71071 71082 CGTTTGGGTGGC 1-10-1 MOE 1023
147741
71129 71140 CACCCACTGGTG 1-10-1 MOE 1055
368354
71145 71158 TCCACTGATCCTGC 2-10-2 MOE 1024
368355
71146 71159 TTCCACTGATCCTG 2-10-2 MOE 1025
147075
71147 71158 TCCACTGATCCT 1-10-1 MOE 1026
368356
71147 71160 CTTCCACTGATCCT 2-10-2 MOE 1027
368376
71147 71162 TCCTTCCACTGATCCT 3-10-3 MOE 1028
147076
71148 71159 TTCCACTGATCC 1-10-1 MOE 1029
368357
71148 71161 CCTTCCACTGATCC 2-10-2 MOE 1046
368377
71148 71163 CTCCTTCCACTGATCC 3-10-3 MOE 1030
147077
71149 71160 CTTCCACTGATC 1-10-1 MOE 1047
368358
71149 71162 TCCTTCCACTGATC 2-10-2 MOE 1031
368378
71149 71164 GCTCCTTCCACTGATC 3-10-3 MOE 1032
147078
71150 71161 CCTTCCACTGAT 1-10-1 MOE 1044
368359
71151 71164 GCTCCTTCCACTGA 2-10-2 MOE 1033
368379
71151 71166 AAGCTCCTTCCACTGA 3-10-3 MOE 1034
368360
71153 71166 AAGCTCCTTCCACT 2-10-2 MOE 1035
147082
71154 71165 AGCTCCTTCCAC 1-10-1 MOE 1036
368381
71155 71170 GGGAAAGCTCCTTCCA 3-10-3 MOE 1037
390030
71986 71997 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
390030
72132 72143 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147711
72300 72311 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
401414
72347 72360 TTGCAATGTCTGGC 2-10-2 MOE 1038
147741
72400 72411 CACCCACTGGTG 1-10-1 MOE 1055
401415
72415 72428 GATTTATCTGGCTG 2-10-2 MOE 1039
147711
72446 72457 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
147742
72575 72586 AACTTCAGTGTC 1-10-1 MOE 1041
147743
72690 72701 AGGGCTTCCAGT 1-10-1 MOE 1042
147744
72694 72705 AGGAAGGGCTTC 1-10-1 MOE 1043
147745
72700 72711 TTGACCAGGAAG 1-10-1 MOE 1058
147742
72721 72732 AACTTCAGTGTC 1-10-1 MOE 1041
147743
72836 72847 AGGGCTTCCAGT 1-10-1 MOE 1042
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147744
72840 72851 AGGAAGGGCTTC 1-10-1 MOE 1043
368357
72898 72911 CCTTCCACTGATCC 2-10-2 MOE 1046
147078
72900 72911 CCTTCCACTGAT 1-10-1 MOE 1044
398157
72903 72916 GGAAACATACCCTG 2-10-2 MOE 1045
368357
73044 73057 CCTTCCACTGATCC 2-10-2 MOE 1046
147077
73045 73056 CTTCCACTGATC 1-10-1 MOE 1047
147746
73052 73063 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
73101 73112 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398160
73139 73152 GAATAGGTTAAGGC 2-10-2 MOE 1048
147746
73198 73209 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398161
73238 73251 AACAATGTGTTGTA 2-10-2 MOE 1049
147088
73419 73430 CCCTCTACACCA 1-10-1 MOE 1050
404140
73457 73470 GCACACAGCTGAGG 2-10-2 MOE 1051
404139
73459 73472 GTGCACACAGCTGA 2-10-2 MOE 1052
399301
73461 73474 GTGTGCACACAGCT 2-10-2 MOE 1542
404137
73463 73476 CAGTGTGCACACAG 2-10-2 MOE 1053
404138
73465 73478 CTCAGTGTGCACAC 2-10-2 MOE 1054
147741
73705 73716 CACCCACTGGTG 1-10-1 MOE 1055
404135
73858 73871 CATTTCCATGGCCA 2-10-2 MOE 1056
398167
74008 74019 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
398092
74009 74022 AGTCAGGCCATGTG 2-10-2 MOE 1060
398162
74114 74127 ACCAAACAGTTCAG 2-10-2 MOE 1057
147745
74137 74148 TTGACCAGGAAG 1-10-1 MOE 1058
398167
74154 74165 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
398092
74155 74168 AGTCAGGCCATGTG 2-10-2 MOE 1060
389949
74310 74321 GCGCGAGCCCGA 1-10-1 MOE 1061
147740
74485 74496 TGTGAGGCTCCA 1-10-1 MOE 1062
389950
74527 74538 CCCTGAAGGTTC 1-10-1 MOE 1063
398101
74656 74669 TTTGATAAAGCCCT 2-10-2 MOE 1064
398104
74805 74818 CAAGAAGACCTTAC 2-10-2 MOE 1065
147737
74893 74904 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
398105
74894 74907 TGCACAGGCAGGTT 2-10-2 MOE 1066
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147737
74919 74930 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
398106
74974 74987 TGGAAAACTGCACC 2-10-2 MOE 1068
404199
75045 75058 GGTCATGCACAGGC 2-10-2 MOE 867
404134
75048 75061 TCAGGTCATGCACA 2-10-2 MOE 873
398106
75120 75133 TGGAAAACTGCACC 2-10-2 MOE 1068
147738
75155 75166 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
404132
75227 75240 CCTTGGAATGTCTG 2-10-2 MOE 852
147738
75301 75312 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
398166
75499 75510 GGGCTTCTTCCA 1-10-1 MOE 1070
147746
75617 75628 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147706
75686 75697 GCTGACATCTCG 1-10-1 MOE 1071
398112
75730 75743 CAGCCTGGCACCTA 2-10-2 MOE 1072
147746
75763 75774 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398115
75786 75799 AGTAAATATTGGCT 2-10-2 MOE 1076
390030
75839 75850 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
398114
75916 75929 AGGCATATAGCAGA 2-10-2 MOE 1075
398115
75932 75945 AGTAAATATTGGCT 2-10-2 MOE 1076
404133
75968 75981 TATTCCATGGCCAT 2-10-2 MOE 872
147715
77045 77056 GTTGAGCATGAC 1-10-1 MOE 1077
147715
77190 77201 GTTGAGCATGAC 1-10-1 MOE 1077
147693
77385 77396 GTGCGCTCCCAT 1-10-1 MOE 1078
398173
40201 40212 CAGCCTGGGCAC 1-10-1 MOE 1543
398173
72764 72775 CAGCCTGGGCAC 1-10-1 MOE 1543
399096
1986 1999 TGCTCGAACTCCTT 2-10-2 MOE 1544
399102
52822 52835 GAAGTCACTGGCTT 2-10-2 MOE 1545
399103
52824 52837 GGGAAGTCACTGGC 2-10-2 MOE 1546
399113
59827 59840 GTTAGGCAAAGGGC 2-10-2 MOE 1547
399132
69977 69990 GGGCTGAGTGACCC 2-10-2 MOE 1548
399173
74592 74605 ATGCTAGTGCACTA 2-10-2 MOE 1549
399208
75900 75913 AGCTCGCTACCTCT 2-10-2 MOE 1550
399276
27559 27572 GAGGTATCCCATCT 2-10-2 MOE 1551
399315
74039 74052 GGCAACTTCAACCT 2-10-2 MOE 1552
Tabla 19: Compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 12 y que tienen 1 o 2 apareamientos erróneos
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
398163
20 31 ATGTCAACCGGC 1-10-1 MOE 908
384545
23 34 CAAGTAGGATGT 1-10-1 MOE 951
147733
26 37 TTCTTGATGTCC 1-10-1 MOE 891
147721
59 70 AATGCAGGATCT 1-10-1 MOE 1118
147700
110 121 GCGCTAGGCCGC 1-10-1 MOE 1110
384545
130 141 CAAGTAGGATGT 1-10-1 MOE 951
147705
159 170 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
147701
167 178 CCATGGCGGGAC 1-10-1 MOE 921
398164
198 209 TTGTCGATCTGC 1-10-1 MOE 1014
147730
199 210 CTTGTCCATCAG 1-10-1 MOE 1121
147702
226 237 CTGGTAAATAGC 1-10-1 MOE 898
147703
245 256 TGGCTTCATGTC 1-10-1 MOE 971
147705
266 277 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
398165
283 294 GTTCTTAGGAAG 1-10-1 MOE 968
147704
285 296 TTGTTCTTAGGA 1-10-1 MOE 1012
147705
291 302 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
147709
311 322 CCATTTTTATCA 1-10-1 MOE 978
147733
349 360 TTCTTGATGTCC 1-10-1 MOE 891
147707
360 371 TAGTCATTATCT 1-10-1 MOE 977
147708
366 377 TTGATATAGTCA 1-10-1 MOE 997
390030
381 392 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147709
386 397 CCATTTTTATCA 1-10-1 MOE 978
147081
393 404 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
398091
393 406 GGGCTTCTTCCATT 2-10-2 MOE 979
398166
395 406 GGGCTTCTTCCA 1-10-1 MOE 1070
147712
461 472 ACACCATCTCCC 1-10-1 MOE 1005
147713
466 477 CTCCCACACCAT 1-10-1 MOE 985
147714
471 482 TTCTGCTCCCAC 1-10-1 MOE 986
147710
502 513 TATAGCTCCTCT 1-10-1 MOE 994
147736
551 562 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147717
574 585 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147717
607 618 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
147710
609 620 TATAGCTCCTCT 1-10-1 MOE 994
147708
612 623 TTGATATAGTCA 1-10-1 MOE 997
147718
621 632 TAATATGACTTG 1-10-1 MOE 998
147746
625 636 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147736
658 669 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147720
676 687 GATCTCTCGAGT 1-10-1 MOE 1117
147721
683 694 AATGCAGGATCT 1-10-1 MOE 1118
398167
704 715 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
398092
705 718 AGTCAGGCCATGTG 2-10-2 MOE 1060
147722
709 720 AAAGTCAGGCCA 1-10-1 MOE 1130
147723
715 726 GACTCCAAAGTC 1-10-1 MOE 892
147746
733 744 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398093
758 771 TCGGACTTTGAAAA 2-10-2 MOE 1009
398168
760 771 TCGGACTTTGAA 1-10-1 MOE 1008
147725
761 772 CTCGGACTTTGA 1-10-1 MOE 1119
147726
766 777 TGACTCTCGGAC 1-10-1 MOE 1120
147738
780 791 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
147727
807 818 CAGTGGACCACA 1-10-1 MOE 1128
147728
846 857 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
398094
848 861 ATCAGCCAGACAGA 2-10-2 MOE 1010
398169
849 860 TCAGCCAGACAG 1-10-1 MOE 909
147729
863 874 GTAAGAGGCAGG 1-10-1 MOE 920
398095
866 879 CATCAGCAAGAGGC 2-10-2 MOE 1011
398164
873 884 TTGTCGATCTGC 1-10-1 MOE 1014
147730
874 885 CTTGTCCATCAG 1-10-1 MOE 1121
147731
880 891 TTTCCTCTTGTC 1-10-1 MOE 934
147732
885 896 GGGTCTTTCCTC 1-10-1 MOE 1122
147738
888 899 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
147733
906 917 TTCTTGATGTCC 1-10-1 MOE 891
398096
971 984 GGAGAAGCGCAGCT 2-10-2 MOE 1015
147735
973 984 GGAGAAGCGCAG 1-10-1 MOE 1016
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147736
978 989 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147729
979 990 GTAAGAGGCAGG 1-10-1 MOE 920
147737
984 995 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
368349
1025 1038 CTGCACTGACGAGT 2-10-2 MOE 1017
368369
1025 1040 TCCTGCACTGACGAGT 3-10-3 MOE 893
368350
1027 1040 TCCTGCACTGACGA 2-10-2 MOE 1079
368370
1027 1042 GATCCTGCACTGACGA 3-10-3 MOE 1080
368351
1029 1042 GATCCTGCACTGAC 2-10-2 MOE 1081
368371
1029 1044 CTGATCCTGCACTGAC 3-10-3 MOE 1082
368352
1031 1044 CTGATCCTGCACTG 2-10-2 MOE 1105
368372
1031 1046 CACTGATCCTGCACTG 3-10-3 MOE 894
368353
1033 1046 CACTGATCCTGCAC 2-10-2 MOE 1007
368373
1033 1048 TCCACTGATCCTGCAC 3-10-3 MOE 1083
368354
1035 1048 TCCACTGATCCTGC 2-10-2 MOE 1024
368368
1035 1048 TCCACTGATCCTTA 2-10-2 MOE 1127
368374
1035 1050 CTTCCACTGATCCTGC 3-10-3 MOE 1126
368388
1035 1050 CTTCCACTGATCCTTA 3-10-3 MOE 895
147074
1036 1047 CCACTGATCCTG 1-10-1 MOE 845
368355
1036 1049 TTCCACTGATCCTG 2-10-2 MOE 1025
368375
1036 1051 CCTTCCACTGATCCTG 3-10-3 MOE 1020
147075
1037 1048 TCCACTGATCCT 1-10-1 MOE 1026
368356
1037 1050 CTTCCACTGATCCT 2-10-2 MOE 1027
368376
1037 1052 TCCTTCCACTGATCCT 3-10-3 MOE 1028
147076
1038 1049 TTCCACTGATCC 1-10-1 MOE 1029
368357
1038 1051 CCTTCCACTGATCC 2-10-2 MOE 1046
368377
1038 1053 CTCCTTCCACTGATCC 3-10-3 MOE 1030
147077
1039 1050 CTTCCACTGATC 1-10-1 MOE 1047
368358
1039 1052 TCCTTCCACTGATC 2-10-2 MOE 1031
368378
1039 1054 GCTCCTTCCACTGATC 3-10-3 MOE 1032
147078
1040 1051 CCTTCCACTGAT 1-10-1 MOE 1044
147079
1041 1052 TCCTTCCACTGA 1-10-1 MOE 1001
368359
1041 1054 GCTCCTTCCACTGA 2-10-2 MOE 1033
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
368379
1041 1056 AAGCTCCTTCCACTGA 3-10-3 MOE 1034
147080
1042 1053 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
147081
1043 1054 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
368360
1043 1056 AAGCTCCTTCCACT 2-10-2 MOE 1035
368380
1043 1058 GAAAGCTCCTTCCACT 3-10-3 MOE 896
147082
1044 1055 AGCTCCTTCCAC 1-10-1 MOE 1036
368361
1045 1058 GAAAGCTCCTTCCA 2-10-2 MOE 962
368381
1045 1060 GGGAAAGCTCCTTCCA 3-10-3 MOE 1037
147729
1087 1098 GTAAGAGGCAGG 1-10-1 MOE 920
147738
1103 1114 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
147739
1107 1118 CGTTTGGGTGGC 1-10-1 MOE 1023
147740
1124 1135 TGTGAGGCTCCA 1-10-1 MOE 1062
398117
1164 1177 TTTCCACTTGGGTG 2-10-2 MOE 960
147741
1165 1176 CACCCACTGGTG 1-10-1 MOE 1055
398097
1194 1207 GGCAGTCTTTATCC 2-10-2 MOE 897
398098
1272 1285 TAACTTCAGTGTCT 2-10-2 MOE 1131
398117
1272 1285 TTTCCACTTGGGTG 2-10-2 MOE 960
147742
1273 1284 AACTTCAGTGTC 1-10-1 MOE 1041
147698
1293 1304 CCCGCCACCACC 1-10-1 MOE 928
147743
1388 1399 AGGGCTTCCAGT 1-10-1 MOE 1042
398099
1388 1401 GAAGGGCTTCCAGT 2-10-2 MOE 1132
147744
1392 1403 AGGAAGGGCTTC 1-10-1 MOE 1043
398100
1395 1408 TGACCAGGAAGGGC 2-10-2 MOE 1133
147745
1398 1409 TTGACCAGGAAG 1-10-1 MOE 1058
398157
1455 1468 GGAAACATACCCTG 2-10-2 MOE 1045
147745
1458 1469 TTGACCAGGAAG 1-10-1 MOE 1058
398167
1475 1486 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
398118
1564 1577 CGCGAGATATCTAA 2-10-2 MOE 1084
147697
1575 1586 CCCCAGCAGCGG 1-10-1 MOE 1000
147076
1596 1607 TTCCACTGATCC 1-10-1 MOE 1029
368357
1596 1609 CCTTCCACTGATCC 2-10-2 MOE 1046
147077
1597 1608 CTTCCACTGATC 1-10-1 MOE 1047
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147078
1598 1609 CCTTCCACTGAT 1-10-1 MOE 1044
398118
1672 1685 CGCGAGATATCTAA 2-10-2 MOE 1084
398158
1681 1694 AGGCCCTGAGATTA 2-10-2 MOE 1134
147697
1683 1694 CCCCAGCAGCGG 1-10-1 MOE 1000
398159
1686 1699 GGTTAAGGCCCTGA 2-10-2 MOE 1135
398160
1691 1704 GAATAGGTTAAGGC 2-10-2 MOE 1048
398163
1711 1722 ATGTCAACCGGC 1-10-1 MOE 908
147733
1717 1728 TTCTTGATGTCC 1-10-1 MOE 891
147089
1747 1758 TCCCTCTACACC 1-10-1 MOE 956
147090
1748 1759 TTCCCTCTACAC 1-10-1 MOE 955
147746
1750 1761 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
389949
1777 1788 GCGCGAGCCCGA 1-10-1 MOE 1061
398161
1790 1803 AACAATGTGTTGTA 2-10-2 MOE 1049
147746
1799 1810 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147700
1801 1812 GCGCTAGGCCGC 1-10-1 MOE 1110
147740
1806 1817 TGTGAGGCTCCA 1-10-1 MOE 1062
398163
1819 1830 ATGTCAACCGGC 1-10-1 MOE 908
147733
1825 1836 TTCTTGATGTCC 1-10-1 MOE 891
389950
1848 1859 CCCTGAAGGTTC 1-10-1 MOE 1063
147701
1858 1869 CCATGGCGGGAC 1-10-1 MOE 921
398164
1889 1900 TTGTCGATCTGC 1-10-1 MOE 1014
147730
1890 1901 CTTGTCCATCAG 1-10-1 MOE 1121
147700
1909 1920 GCGCTAGGCCGC 1-10-1 MOE 1110
398119
1920 1933 CGCACCTGGTAAAT 2-10-2 MOE 1085
147685
1957 1968 GGCTGACATTCA 1-10-1 MOE 975
147701
1966 1977 CCATGGCGGGAC 1-10-1 MOE 921
398120
1966 1979 GTTCAAGCGGCCTA 2-10-2 MOE 1086
398101
1977 1990 TTTGATAAAGCCCT 2-10-2 MOE 1064
398164
1997 2008 TTGTCGATCTGC 1-10-1 MOE 1014
147730
1998 2009 CTTGTCCATCAG 1-10-1 MOE 1121
147702
2025 2036 CTGGTAAATAGC 1-10-1 MOE 898
398119
2028 2041 CGCACCTGGTAAAT 2-10-2 MOE 1085
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
398120
2074 2087 GTTCAAGCGGCCTA 2-10-2 MOE 1086
398105
2099 2112 TGCACAGGCAGGTT 2-10-2 MOE 1066
147736
2204 2215 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147741
2257 2268 CACCCACTGGTG 1-10-1 MOE 1055
398104
2272 2285 CAAGAAGACCTTAC 2-10-2 MOE 1065
147737
2360 2371 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
398105
2361 2374 TGCACAGGCAGGTT 2-10-2 MOE 1066
147737
2386 2397 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
398095
2407 2420 CATCAGCAAGAGGC 2-10-2 MOE 1011
398106
2441 2454 TGGAAAACTGCACC 2-10-2 MOE 1068
398107
2447 2460 TATTCCTGGAAAAC 2-10-2 MOE 902
398121
2474 2487 GTGCCTAGCACAGA 2-10-2 MOE 1097
147745
2497 2508 TTGACCAGGAAG 1-10-1 MOE 1058
147712
2499 2510 ACACCATCTCCC 1-10-1 MOE 1005
398108
2544 2557 GGAATGTCTGAGTT 2-10-2 MOE 1136
147691
2575 2586 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
398121
2582 2595 GTGCCTAGCACAGA 2-10-2 MOE 1097
147738
2622 2633 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
398162
2666 2679 ACCAAACAGTTCAG 2-10-2 MOE 1057
147745
2689 2700 TTGACCAGGAAG 1-10-1 MOE 1058
398167
2706 2717 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
398092
2707 2720 AGTCAGGCCATGTG 2-10-2 MOE 1060
398109
2714 2727 CAAGAAGTGTGGTT 2-10-2 MOE 903
398110
2852 2865 GTTCCCTTTGCAGG 2-10-2 MOE 952
147091
2854 2865 GTTCCCTCTACA 1-10-1 MOE 1004
147723
2924 2935 GACTCCAAAGTC 1-10-1 MOE 892
398111
2937 2950 GTGAAAATGCTGGC 2-10-2 MOE 904
398166
2966 2977 GGGCTTCTTCCA 1-10-1 MOE 1070
147089
2978 2989 TCCCTCTACACC 1-10-1 MOE 956
147090
2979 2990 TTCCCTCTACAC 1-10-1 MOE 955
147706
3007 3018 GCTGACATCTCG 1-10-1 MOE 1071
389949
3008 3019 GCGCGAGCCCGA 1-10-1 MOE 1061
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147723
3032 3043 GACTCCAAAGTC 1-10-1 MOE 892
147740
3037 3048 TGTGAGGCTCCA 1-10-1 MOE 1062
398112
3051 3064 CAGCCTGGCACCTA 2-10-2 MOE 1072
389950
3079 3090 CCCTGAAGGTTC 1-10-1 MOE 1063
147746
3084 3095 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398122
3148 3161 CCCTTTACACAAGT 2-10-2 MOE 1087
147089
3151 3162 TCCCTCTACACC 1-10-1 MOE 956
147090
3152 3163 TTCCCTCTACAC 1-10-1 MOE 955
398113
3160 3173 AGGAGGTTAAACCA 2-10-2 MOE 905
147685
3188 3199 GGCTGACATTCA 1-10-1 MOE 975
398101
3208 3221 TTTGATAAAGCCCT 2-10-2 MOE 1064
398102
3234 3247 CTACCTGAGGATTT 2-10-2 MOE 899
398123
3235 3248 CTCAAAATAGATTT 2-10-2 MOE 1088
398114
3237 3250 AGGCATATAGCAGA 2-10-2 MOE 1075
398103
3241 3254 CCCAGTACTACCTG 2-10-2 MOE 900
398115
3253 3266 AGTAAATATTGGCT 2-10-2 MOE 1076
398122
3256 3269 CCCTTTACACAAGT 2-10-2 MOE 1087
147089
3259 3270 TCCCTCTACACC 1-10-1 MOE 956
147090
3260 3271 TTCCCTCTACAC 1-10-1 MOE 955
398116
3266 3279 TAATGACCTGATGA 2-10-2 MOE 1137
390030
3306 3317 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
398123
3343 3356 CTCAAAATAGATTT 2-10-2 MOE 1088
147736
3435 3446 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
398104
3503 3516 CAAGAAGACCTTAC 2-10-2 MOE 1065
147737
3591 3602 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
398105
3592 3605 TGCACAGGCAGGTT 2-10-2 MOE 1066
147719
3608 3619 CCAACTCCAACT 1-10-1 MOE 1116
147737
3617 3628 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
401398
3621 3634 CAAAGTCCCTTAGC 2-10-2 MOE 947
147079
3637 3648 TCCTTCCACTGA 1-10-1 MOE 1001
147080
3638 3649 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
398095
3638 3651 CATCAGCAAGAGGC 2-10-2 MOE 1011
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
398106
3672 3685 TGGAAAACTGCACC 2-10-2 MOE 1068
147733
3687 3698 TTCTTGATGTCC 1-10-1 MOE 891
147731
3688 3699 TTTCCTCTTGTC 1-10-1 MOE 934
147719
3716 3727 CCAACTCCAACT 1-10-1 MOE 1116
147745
3728 3739 TTGACCAGGAAG 1-10-1 MOE 1058
147683
3740 3751 GCTTACGATTGT 1-10-1 MOE 922
147079
3745 3756 TCCTTCCACTGA 1-10-1 MOE 1001
147080
3746 3757 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
398108
3775 3788 GGAATGTCTGAGTT 2-10-2 MOE 1136
147733
3795 3806 TTCTTGATGTCC 1-10-1 MOE 891
147731
3796 3807 TTTCCTCTTGTC 1-10-1 MOE 934
147691
3806 3817 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
147738
3853 3864 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
398167
3926 3937 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
147691
3978 3989 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
398167
4034 4045 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
147091
4085 4096 GTTCCCTCTACA 1-10-1 MOE 1004
147691
4086 4097 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
398111
4168 4181 GTGAAAATGCTGGC 2-10-2 MOE 904
398166
4197 4208 GGGCTTCTTCCA 1-10-1 MOE 1070
147091
4223 4234 GTTCCCTCTACA 1-10-1 MOE 1004
147092
4224 4235 TGTTCCCTCTAC 1-10-1 MOE 901
398112
4282 4295 CAGCCTGGCACCTA 2-10-2 MOE 1072
147746
4315 4326 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398113
4391 4404 AGGAGGTTAAACCA 2-10-2 MOE 905
147723
4422 4433 GACTCCAAAGTC 1-10-1 MOE 892
398114
4468 4481 AGGCATATAGCAGA 2-10-2 MOE 1075
398115
4484 4497 AGTAAATATTGGCT 2-10-2 MOE 1076
390030
4491 4502 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
398116
4497 4510 TAATGACCTGATGA 2-10-2 MOE 1137
147723
4530 4541 GACTCCAAAGTC 1-10-1 MOE 892
390030
4599 4610 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
398124
4761 4774 CACATGAGCTATTC 2-10-2 MOE 1089
398124
4869 4882 CACATGAGCTATTC 2-10-2 MOE 1089
147703
4926 4937 TGGCTTCATGTC 1-10-1 MOE 971
147692
4928 4939 CTCACCTTCATG 1-10-1 MOE 1113
147696
4975 4986 TGGATGATTGGC 1-10-1 MOE 906
147703
5034 5045 TGGCTTCATGTC 1-10-1 MOE 971
147692
5036 5047 CTCACCTTCATG 1-10-1 MOE 1113
147098
5173 5184 AGTTGTTGTTCC 1-10-1 MOE 1112
398125
5183 5196 CAGTAAGGAATTTT 2-10-2 MOE 913
398126
5216 5229 GTGAAGTGAGTCAT 2-10-2 MOE 1090
147098
5281 5292 AGTTGTTGTTCC 1-10-1 MOE 1112
398127
5283 5296 GGTCACTCAAGATG 2-10-2 MOE 1091
398126
5324 5337 GTGAAGTGAGTCAT 2-10-2 MOE 1090
398128
5335 5348 CTAAATTTAGTTCA 2-10-2 MOE 911
398127
5391 5404 GGTCACTCAAGATG 2-10-2 MOE 1091
398128
5443 5456 CTAAATTTAGTTCA 2-10-2 MOE 911
147712
5474 5485 ACACCATCTCCC 1-10-1 MOE 1005
147736
5600 5611 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147746
5606 5617 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398129
5628 5641 TTTGAGGAGCTATT 2-10-2 MOE 1106
147085
5654 5665 TCTACACCAGGT 1-10-1 MOE 961
147736
5708 5719 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
398129
5736 5749 TTTGAGGAGCTATT 2-10-2 MOE 1106
147679
5934 5945 CAAAAGGATCCC 1-10-1 MOE 907
147723
6229 6240 GACTCCAAAGTC 1-10-1 MOE 892
147723
6338 6349 GACTCCAAAGTC 1-10-1 MOE 892
390030
6803 6814 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
398142
6885 6898 CCAGCACACTGGAA 2-10-2 MOE 923
390030
6912 6923 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
398142
6994 7007 CCAGCACACTGGAA 2-10-2 MOE 923
147695
7054 7065 TCATTCCCCACT 1-10-1 MOE 984
147695
7163 7174 TCATTCCCCACT 1-10-1 MOE 984
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
398166
7197 7208 GGGCTTCTTCCA 1-10-1 MOE 1070
398166
7306 7317 GGGCTTCTTCCA 1-10-1 MOE 1070
147684
7442 7453 ACCCAGTCAGGG 1-10-1 MOE 964
398130
7694 7707 TTAGTATGACAGCT 2-10-2 MOE 925
398131
7711 7724 GGACTCACTCAGCA 2-10-2 MOE 1092
398130
7802 7815 TTAGTATGACAGCT 2-10-2 MOE 925
398125
7804 7817 CAGTAAGGAATTTT 2-10-2 MOE 913
398131
7819 7832 GGACTCACTCAGCA 2-10-2 MOE 1092
390030
7877 7888 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
398125
7912 7925 CAGTAAGGAATTTT 2-10-2 MOE 913
390030
7985 7996 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
398132
8031 8044 TCAGGGCTACTCAT 2-10-2 MOE 1093
398132
8139 8152 TCAGGGCTACTCAT 2-10-2 MOE 1093
147684
8148 8159 ACCCAGTCAGGG 1-10-1 MOE 964
147684
8256 8267 ACCCAGTCAGGG 1-10-1 MOE 964
398163
8365 8376 ATGTCAACCGGC 1-10-1 MOE 908
398166
8447 8458 GGGCTTCTTCCA 1-10-1 MOE 1070
398163
8473 8484 ATGTCAACCGGC 1-10-1 MOE 908
398166
8555 8566 GGGCTTCTTCCA 1-10-1 MOE 1070
147718
8631 8642 TAATATGACTTG 1-10-1 MOE 998
147691
8698 8709 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
147691
8806 8817 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
147728
8835 8846 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
147727
8876 8887 CAGTGGACCACA 1-10-1 MOE 1128
147728
8943 8954 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
398169
8946 8957 TCAGCCAGACAG 1-10-1 MOE 909
147727
8984 8995 CAGTGGACCACA 1-10-1 MOE 1128
147742
9060 9071 AACTTCAGTGTC 1-10-1 MOE 1041
398133
9112 9125 CAGCACTAGATTCA 2-10-2 MOE 1094
384545
9135 9146 CAAGTAGGATGT 1-10-1 MOE 951
147742
9168 9179 AACTTCAGTGTC 1-10-1 MOE 1041
398133
9220 9233 CAGCACTAGATTCA 2-10-2 MOE 1094
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
384545
9243 9254 CAAGTAGGATGT 1-10-1 MOE 951
398125
9368 9381 CAGTAAGGAATTTT 2-10-2 MOE 913
398125
9476 9489 CAGTAAGGAATTTT 2-10-2 MOE 913
401409
9516 9529 ATTCTTAACACAGA 2-10-2 MOE 991
147096
9594 9605 TTGTTGTTCCCT 1-10-1 MOE 1107
147733
9597 9608 TTCTTGATGTCC 1-10-1 MOE 891
147720
9689 9700 GATCTCTCGAGT 1-10-1 MOE 1117
147096
9702 9713 TTGTTGTTCCCT 1-10-1 MOE 1107
147733
9705 9716 TTCTTGATGTCC 1-10-1 MOE 891
147720
9797 9808 GATCTCTCGAGT 1-10-1 MOE 1117
147746
9963 9974 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
9966 9977 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
9969 9980 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
9991 10002 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
10071 10082 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
10074 10085 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
10077 10088 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
10099 10110 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398134
10153 10166 TAGCTTAATGTAAC 2-10-2 MOE 1095
147085
10221 10232 TCTACACCAGGT 1-10-1 MOE 961
398134
10261 10274 TAGCTTAATGTAAC 2-10-2 MOE 1095
390030
10278 10289 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147084
10328 10339 CTACACCAGGTC 1-10-1 MOE 993
147711
10684 10695 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
398128
11333 11346 CTAAATTTAGTTCA 2-10-2 MOE 911
398128
11340 11353 CTAAATTTAGTTCA 2-10-2 MOE 911
147730
11783 11794 CTTGTCCATCAG 1-10-1 MOE 1121
147731
11789 11800 TTTCCTCTTGTC 1-10-1 MOE 934
147730
11790 11801 CTTGTCCATCAG 1-10-1 MOE 1121
147731
11796 11807 TTTCCTCTTGTC 1-10-1 MOE 934
147707
11960 11971 TAGTCATTATCT 1-10-1 MOE 977
147090
12008 12019 TTCCCTCTACAC 1-10-1 MOE 955
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147091
12009 12020 GTTCCCTCTACA 1-10-1 MOE 1004
147091
12014 12025 GTTCCCTCTACA 1-10-1 MOE 1004
398096
12141 12154 GGAGAAGCGCAGCT 2-10-2 MOE 1015
147735
12143 12154 GGAGAAGCGCAG 1-10-1 MOE 1016
398096
12146 12159 GGAGAAGCGCAGCT 2-10-2 MOE 1015
147735
12148 12159 GGAGAAGCGCAG 1-10-1 MOE 1016
398166
12209 12220 GGGCTTCTTCCA 1-10-1 MOE 1070
398166
12214 12225 GGGCTTCTTCCA 1-10-1 MOE 1070
398135
12303 12316 GACTACATTTTACA 2-10-2 MOE 912
147741
12389 12400 CACCCACTGGTG 1-10-1 MOE 1055
147741
12394 12405 CACCCACTGGTG 1-10-1 MOE 1055
398125
12431 12444 CAGTAAGGAATTTT 2-10-2 MOE 913
147714
12585 12596 TTCTGCTCCCAC 1-10-1 MOE 986
147718
12594 12605 TAATATGACTTG 1-10-1 MOE 998
398125
12612 12625 CAGTAAGGAATTTT 2-10-2 MOE 913
147737
12803 12814 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
147746
12876 12887 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147691
12900 12911 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
398136
12915 12928 TTGTGACATCTAGG 2-10-2 MOE 1096
147737
12984 12995 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
147746
13057 13068 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147691
13081 13092 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
398136
13096 13109 TTGTGACATCTAGG 2-10-2 MOE 1096
398138
13254 13267 AACATCAAGCTTGA 2-10-2 MOE 931
398138
13435 13448 AACATCAAGCTTGA 2-10-2 MOE 931
147691
13488 13499 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
147681
13659 13670 ATGTCATTAAAC 1-10-1 MOE 965
147691
13669 13680 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
389965
13839 13850 CTGCAACATGAT 1-10-1 MOE 1018
389764
13839 13850 CTGCAACATGAT 1-9-2 MOE 1018
147681
13840 13851 ATGTCATTAAAC 1-10-1 MOE 965
389965
14020 14031 CTGCAACATGAT 1-10-1 MOE 1018
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
389764
14020 14031 CTGCAACATGAT 1-9-2 MOE 1018
389948
14067 14078 CCGTTGGACCCC 1-10-1 MOE 915
147736
14123 14134 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
389948
14248 14259 CCGTTGGACCCC 1-10-1 MOE 915
147738
14279 14290 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
147736
14304 14315 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147731
14411 14422 TTTCCTCTTGTC 1-10-1 MOE 934
147738
14461 14472 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
147692
14475 14486 CTCACCTTCATG 1-10-1 MOE 1113
147731
14593 14604 TTTCCTCTTGTC 1-10-1 MOE 934
389950
14614 14625 CCCTGAAGGTTC 1-10-1 MOE 1063
147692
14657 14668 CTCACCTTCATG 1-10-1 MOE 1113
147717
14750 14761 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
147698
14754 14765 CCCGCCACCACC 1-10-1 MOE 928
389950
14796 14807 CCCTGAAGGTTC 1-10-1 MOE 1063
398112
14863 14876 CAGCCTGGCACCTA 2-10-2 MOE 1072
398121
14875 14888 GTGCCTAGCACAGA 2-10-2 MOE 1097
147717
14932 14943 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
398112
15045 15058 CAGCCTGGCACCTA 2-10-2 MOE 1072
398121
15057 15070 GTGCCTAGCACAGA 2-10-2 MOE 1097
147730
15117 15128 CTTGTCCATCAG 1-10-1 MOE 1121
147730
15299 15310 CTTGTCCATCAG 1-10-1 MOE 1121
401407
15339 15352 CAGCTTAGGCAGAG 2-10-2 MOE 983
398167
15556 15567 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
147736
16444 16455 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147746
16510 16521 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147738
16590 16601 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
147736
16610 16621 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
398167
16631 16642 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
401411
16657 16670 AGCCGCCTGAAGTG 2-10-2 MOE 999
147746
16676 16687 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398144
16745 16758 GACAGCTTCTATAA 2-10-2 MOE 916
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147738
16756 16767 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
398167
16797 16808 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
398144
16911 16924 GACAGCTTCTATAA 2-10-2 MOE 916
389965
17096 17107 CTGCAACATGAT 1-10-1 MOE 1018
389764
17096 17107 CTGCAACATGAT 1-9-2 MOE 1018
389965
17264 17275 CTGCAACATGAT 1-10-1 MOE 1018
389764
17264 17275 CTGCAACATGAT 1-9-2 MOE 1018
147709
17406 17417 CCATTTTTATCA 1-10-1 MOE 978
147745
17443 17454 TTGACCAGGAAG 1-10-1 MOE 1058
147746
17497 17508 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147720
17589 17600 GATCTCTCGAGT 1-10-1 MOE 1117
147745
17611 17622 TTGACCAGGAAG 1-10-1 MOE 1058
147695
17634 17645 TCATTCCCCACT 1-10-1 MOE 984
147746
17665 17676 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147088
17707 17718 CCCTCTACACCA 1-10-1 MOE 1050
147720
17757 17768 GATCTCTCGAGT 1-10-1 MOE 1117
147711
17808 17819 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
147711
17976 17987 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
398139
18049 18062 AGTGACTGACCACA 2-10-2 MOE 917
398139
18217 18230 AGTGACTGACCACA 2-10-2 MOE 917
398140
18596 18609 GTAGCATAGAGCCT 2-10-2 MOE 918
398140
18764 18777 GTAGCATAGAGCCT 2-10-2 MOE 918
398167
18927 18938 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
398167
19095 19106 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
147724
19147 19158 GAAATTGAGGAA 1-10-1 MOE 1139
147746
19207 19218 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147724
19315 19326 GAAATTGAGGAA 1-10-1 MOE 1139
147740
19348 19359 TGTGAGGCTCCA 1-10-1 MOE 1062
147746
19375 19386 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147729
19386 19397 GTAAGAGGCAGG 1-10-1 MOE 920
147701
19503 19514 CCATGGCGGGAC 1-10-1 MOE 921
147711
19508 19519 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147740
19516 19527 TGTGAGGCTCCA 1-10-1 MOE 1062
147718
19617 19628 TAATATGACTTG 1-10-1 MOE 998
390030
19618 19629 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147679
19635 19646 CAAAAGGATCCC 1-10-1 MOE 907
147711
19676 19687 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
147694
19747 19758 CAGCCTACCAGT 1-10-1 MOE 1098
147718
19785 19796 TAATATGACTTG 1-10-1 MOE 998
390030
19786 19797 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147679
19803 19814 CAAAAGGATCCC 1-10-1 MOE 907
147698
19852 19863 CCCGCCACCACC 1-10-1 MOE 928
147694
19915 19926 CAGCCTACCAGT 1-10-1 MOE 1098
147704
20011 20022 TTGTTCTTAGGA 1-10-1 MOE 1012
147698
20020 20031 CCCGCCACCACC 1-10-1 MOE 928
398142
20485 20498 CCAGCACACTGGAA 2-10-2 MOE 923
147078
20514 20525 CCTTCCACTGAT 1-10-1 MOE 1044
147079
20515 20526 TCCTTCCACTGA 1-10-1 MOE 1001
147080
20516 20527 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
398143
20561 20574 GTCAGTCCCAGCTA 2-10-2 MOE 924
389965
20620 20631 CTGCAACATGAT 1-10-1 MOE 1018
389764
20620 20631 CTGCAACATGAT 1-9-2 MOE 1018
398142
20653 20666 CCAGCACACTGGAA 2-10-2 MOE 923
147078
20682 20693 CCTTCCACTGAT 1-10-1 MOE 1044
147079
20683 20694 TCCTTCCACTGA 1-10-1 MOE 1001
147080
20684 20695 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
147080
20704 20715 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
147081
20705 20716 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
398143
20729 20742 GTCAGTCCCAGCTA 2-10-2 MOE 924
389965
20788 20799 CTGCAACATGAT 1-10-1 MOE 1018
389764
20788 20799 CTGCAACATGAT 1-9-2 MOE 1018
147746
20870 20881 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147080
20872 20883 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
147081
20873 20884 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147746
21038 21049 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147717
21080 21091 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
147076
21222 21233 TTCCACTGATCC 1-10-1 MOE 1029
147076
21390 21401 TTCCACTGATCC 1-10-1 MOE 1029
398094
21441 21454 ATCAGCCAGACAGA 2-10-2 MOE 1010
147746
21465 21476 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398094
21609 21622 ATCAGCCAGACAGA 2-10-2 MOE 1010
398169
21610 21621 TCAGCCAGACAG 1-10-1 MOE 909
147746
21633 21644 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147738
21884 21895 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
147743
22045 22056 AGGGCTTCCAGT 1-10-1 MOE 1042
147738
22052 22063 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
147683
22107 22118 GCTTACGATTGT 1-10-1 MOE 922
147743
22213 22224 AGGGCTTCCAGT 1-10-1 MOE 1042
147681
22566 22577 ATGTCATTAAAC 1-10-1 MOE 965
389950
22619 22630 CCCTGAAGGTTC 1-10-1 MOE 1063
147681
22734 22745 ATGTCATTAAAC 1-10-1 MOE 965
147736
22759 22770 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
389950
22787 22798 CCCTGAAGGTTC 1-10-1 MOE 1063
389949
22794 22805 GCGCGAGCCCGA 1-10-1 MOE 1061
147736
22927 22938 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
389949
22962 22973 GCGCGAGCCCGA 1-10-1 MOE 1061
398144
22962 22975 GACAGCTTCTATAA 2-10-2 MOE 916
398142
23008 23021 CCAGCACACTGGAA 2-10-2 MOE 923
147727
23019 23030 CAGTGGACCACA 1-10-1 MOE 1128
398169
23064 23075 TCAGCCAGACAG 1-10-1 MOE 909
398144
23130 23143 GACAGCTTCTATAA 2-10-2 MOE 916
398145
23154 23167 ACATGTCAGTAATT 2-10-2 MOE 1099
398142
23176 23189 CCAGCACACTGGAA 2-10-2 MOE 923
147727
23187 23198 CAGTGGACCACA 1-10-1 MOE 1128
147735
23243 23254 GGAGAAGCGCAG 1-10-1 MOE 1016
398145
23322 23335 ACATGTCAGTAATT 2-10-2 MOE 1099
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147735
23411 23422 GGAGAAGCGCAG 1-10-1 MOE 1016
398146
23478 23491 CTCATGGACACAAA 2-10-2 MOE 1100
398146
23646 23659 CTCATGGACACAAA 2-10-2 MOE 1100
398147
23784 23797 CTACAGGACAATAC 2-10-2 MOE 957
398114
23853 23866 AGGCATATAGCAGA 2-10-2 MOE 1075
398147
23952 23965 CTACAGGACAATAC 2-10-2 MOE 957
398114
24021 24034 AGGCATATAGCAGA 2-10-2 MOE 1075
147702
24319 24330 CTGGTAAATAGC 1-10-1 MOE 898
147702
24487 24498 CTGGTAAATAGC 1-10-1 MOE 898
389965
24543 24554 CTGCAACATGAT 1-10-1 MOE 1018
389764
24543 24554 CTGCAACATGAT 1-9-2 MOE 1018
147713
24602 24613 CTCCCACACCAT 1-10-1 MOE 985
389965
24711 24722 CTGCAACATGAT 1-10-1 MOE 1018
389764
24711 24722 CTGCAACATGAT 1-9-2 MOE 1018
147684
24918 24929 ACCCAGTCAGGG 1-10-1 MOE 964
147684
25086 25097 ACCCAGTCAGGG 1-10-1 MOE 964
398148
25152 25165 TCATAACTATTAAG 2-10-2 MOE 981
398144
25192 25205 GACAGCTTCTATAA 2-10-2 MOE 916
147746
25216 25227 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147736
25313 25324 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
398148
25320 25333 TCATAACTATTAAG 2-10-2 MOE 981
398143
25337 25350 GTCAGTCCCAGCTA 2-10-2 MOE 924
398144
25360 25373 GACAGCTTCTATAA 2-10-2 MOE 916
147746
25384 25395 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147691
25442 25453 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
147736
25481 25492 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
398130
25504 25517 TTAGTATGACAGCT 2-10-2 MOE 925
147691
25610 25621 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
147721
25662 25673 AATGCAGGATCT 1-10-1 MOE 1118
398130
25672 25685 TTAGTATGACAGCT 2-10-2 MOE 925
147688
25750 25761 TCCCAAACAAAT 1-10-1 MOE 990
147746
25810 25821 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147721
25830 25841 AATGCAGGATCT 1-10-1 MOE 1118
147688
25918 25929 TCCCAAACAAAT 1-10-1 MOE 990
147746
25978 25989 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
26172 26183 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
26340 26351 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398149
26492 26505 GGAAGTTTTCAAGT 2-10-2 MOE 1101
398150
26526 26539 GAAT-CTGGAGGTAA 2-10-2 MOE 1102
398149
26641 26654 GGAAGTTTTCAAGT 2-10-2 MOE 1101
398150
26675 26688 GAATCTGGAGGTAA 2-10-2 MOE 1102
147729
26712 26723 GTAAGAGGCAGG 1-10-1 MOE 920
398151
26718 26731 TCAGTGTAGGAAGA 2-10-2 MOE 926
147729
26861 26872 GTAAGAGGCAGG 1-10-1 MOE 920
398151
26867 26880 TCAGTGTAGGAAGA 2-10-2 MOE 926
147728
26917 26928 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
147728
27066 27077 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
147076
27258 27269 TTCCACTGATCC 1-10-1 MOE 1029
147731
27267 27278 TTTCCTCTTGTC 1-10-1 MOE 934
147076
27407 27418 TTCCACTGATCC 1-10-1 MOE 1029
147731
27416 27427 TTTCCTCTTGTC 1-10-1 MOE 934
398152
27559 27572 TGAATATACAGATG 2-10-2 MOE 927
398152
27708 27721 TGAATATACAGATG 2-10-2 MOE 927
147696
28265 28276 TGGATGATTGGC 1-10-1 MOE 906
147696
28414 28425 TGGATGATTGGC 1-10-1 MOE 906
147698
28481 28492 CCCGCCACCACC 1-10-1 MOE 928
147720
28662 28673 GATCTCTCGAGT 1-10-1 MOE 1117
389965
28714 28725 CTGCAACATGAT 1-10-1 MOE 1018
389764
28714 28725 CTGCAACATGAT 1-9-2 MOE 1018
389965
28861 28872 CTGCAACATGAT 1-10-1 MOE 1018
389764
28861 28872 CTGCAACATGAT 1-9-2 MOE 1018
398153
28980 28993 ATTTCTCTTACAGG 2-10-2 MOE 948
398153
29126 29139 ATTTCTCTTACAGG 2-10-2 MOE 948
147719
29570 29581 CCAACTCCAACT 1-10-1 MOE 1116
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
398154
29692 29705 AGCCCCTTGGCCGT 2-10-2 MOE 1103
147719
29715 29726 CCAACTCCAACT 1-10-1 MOE 1116
398155
29785 29798 TGTTTTTACACAGA 2-10-2 MOE 970
398154
29837 29850 AGCCCCTTGGCCGT 2-10-2 MOE 1103
401384
29905 29918 TGAACACATCACTA 2-10-2 MOE 933
398155
29930 29943 TGTTTTTACACAGA 2-10-2 MOE 970
390030
29945 29956 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
390030
30090 30101 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
398156
30141 30154 GAATACTTCAAATC 2-10-2 MOE 1104
398156
30286 30299 GAATACTTCAAATC 2-10-2 MOE 1104
389948
30384 30395 CCGTTGGACCCC 1-10-1 MOE 915
389948
30530 30541 CCGTTGGACCCC 1-10-1 MOE 915
398142
30591 30604 CCAGCACACTGGAA 2-10-2 MOE 923
147744
30654 30665 AGGAAGGGCTTC 1-10-1 MOE 1043
147093
30689 30700 TTGTTCCCTCTA 1-10-1 MOE 929
398142
30738 30751 CCAGCACACTGGAA 2-10-2 MOE 923
147744
30801 30812 AGGAAGGGCTTC 1-10-1 MOE 1043
398168
31082 31093 TCGGACTTTGAA 1-10-1 MOE 1008
147746
31105 31116 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398168
31230 31241 TCGGACTTTGAA 1-10-1 MOE 1008
390030
31329 31340 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147736
31458 31469 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
390030
31477 31488 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147736
31606 31617 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147698
31713 31724 CCCGCCACCACC 1-10-1 MOE 928
384545
31829 31840 CAAGTAGGATGT 1-10-1 MOE 951
147698
31861 31872 CCCGCCACCACC 1-10-1 MOE 928
147723
31941 31952 GACTCCAAAGTC 1-10-1 MOE 892
384545
31977 31988 CAAGTAGGATGT 1-10-1 MOE 951
147692
32061 32072 CTCACCTTCATG 1-10-1 MOE 1113
147723
32089 32100 GACTCCAAAGTC 1-10-1 MOE 892
147692
32209 32220 CTCACCTTCATG 1-10-1 MOE 1113
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147089
32535 32546 TCCCTCTACACC 1-10-1 MOE 956
401396
32569 32582 TGCAGGATGTTGAG 2-10-2 MOE 945
147730
32714 32725 CTTGTCCATCAG 1-10-1 MOE 1121
398165
32854 32865 GTTCTTAGGAAG 1-10-1 MOE 968
147730
32862 32873 CTTGTCCATCAG 1-10-1 MOE 1121
389950
32949 32960 CCCTGAAGGTTC 1-10-1 MOE 1063
398165
33002 33013 GTTCTTAGGAAG 1-10-1 MOE 968
147736
33012 33023 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
368352
33056 33069 CTGATCCTGCACTG 2-10-2 MOE 1105
147081
33073 33084 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
368360
33073 33086 AAGCTCCTTCCACT 2-10-2 MOE 1035
147082
33074 33085 AGCTCCTTCCAC 1-10-1 MOE 1036
389950
33097 33108 CCCTGAAGGTTC 1-10-1 MOE 1063
147736
33160 33171 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
368352
33204 33217 CTGATCCTGCACTG 2-10-2 MOE 1105
147081
33221 33232 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
147082
33222 33233 AGCTCCTTCCAC 1-10-1 MOE 1036
398138
33244 33257 AACATCAAGCTTGA 2-10-2 MOE 931
147746
33250 33261 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398138
33392 33405 AACATCAAGCTTGA 2-10-2 MOE 931
147746
33398 33409 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147732
33652 33663 GGGTCTTTCCTC 1-10-1 MOE 1122
147724
33733 33744 GAAATTGAGGAA 1-10-1 MOE 1139
147732
33800 33811 GGGTCTTTCCTC 1-10-1 MOE 1122
147724
33881 33892 GAAATTGAGGAA 1-10-1 MOE 1139
147719
33976 33987 CCAACTCCAACT 1-10-1 MOE 1116
147746
34034 34045 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398129
34045 34058 TTTGAGGAGCTATT 2-10-2 MOE 1106
147719
34124 34135 CCAACTCCAACT 1-10-1 MOE 1116
147721
34156 34167 AATGCAGGATCT 1-10-1 MOE 1118
398129
34193 34206 TTTGAGGAGCTATT 2-10-2 MOE 1106
147721
34304 34315 AATGCAGGATCT 1-10-1 MOE 1118
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147746
34606 34617 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398165
34704 34715 GTTCTTAGGAAG 1-10-1 MOE 968
147746
34754 34765 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398165
34852 34863 GTTCTTAGGAAG 1-10-1 MOE 968
147717
34893 34904 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
147719
34976 34987 CCAACTCCAACT 1-10-1 MOE 1116
147092
34987 34998 TGTTCCCTCTAC 1-10-1 MOE 901
147719
35124 35135 CCAACTCCAACT 1-10-1 MOE 1116
147092
35135 35146 TGTTCCCTCTAC 1-10-1 MOE 901
147736
35248 35259 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147738
35391 35402 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
147736
35396 35407 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147738
35539 35550 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
147691
35554 35565 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
147691
35702 35713 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
147746
35814 35825 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147733
35889 35900 TTCTTGATGTCC 1-10-1 MOE 891
147733
35923 35934 TTCTTGATGTCC 1-10-1 MOE 891
147746
35962 35973 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147726
35978 35989 TGACTCTCGGAC 1-10-1 MOE 1120
147733
36037 36048 TTCTTGATGTCC 1-10-1 MOE 891
147733
36071 36082 TTCTTGATGTCC 1-10-1 MOE 891
147726
36126 36137 TGACTCTCGGAC 1-10-1 MOE 1120
147736
36359 36370 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147691
36360 36371 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
147736
36507 36518 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147691
36508 36519 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
147746
36564 36575 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147723
36575 36586 GACTCCAAAGTC 1-10-1 MOE 892
147731
36620 36631 TTTCCTCTTGTC 1-10-1 MOE 934
147723
36723 36734 GACTCCAAAGTC 1-10-1 MOE 892
147731
36768 36779 TTTCCTCTTGTC 1-10-1 MOE 934
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
398169
37174 37185 TCAGCCAGACAG 1-10-1 MOE 909
147688
37380 37391 TCCCAAACAAAT 1-10-1 MOE 990
147688
37528 37539 TCCCAAACAAAT 1-10-1 MOE 990
147714
37881 37892 TTCTGCTCCCAC 1-10-1 MOE 986
147714
38029 38040 TTGTGCTCCCAC 1-10-1 MOE 986
147681
38364 38375 ATGTCATTAAAC 1-10-1 MOE 965
147736
38766 38777 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147738
38909 38920 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
147736
38914 38925 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147738
39057 39068 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
390030
39249 39260 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
390030
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147717
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147746
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147746
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147691
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147727
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147746
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147679
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147746
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147741
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147719
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147679
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147746
40626 40637 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147735
40662 40673 GGAGAAGCGCAG 1-10-1 MOE 1016
147746
40706 40717 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147741
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147735
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147746
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147718
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147717
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147723
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147717
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147723
41775 41786 GACTCCAAAGTC 1-10-1 MOE 892
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390030
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398153
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147710
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147690
42571 42582 TGAAGTTAATTC 1-10-1 MOE 1138
147695
42669 42680 TCATTCCCCACT 1-10-1 MOE 984
147078
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147079
43322 43333 TCCTTCCACTGA 1-10-1 MOE 1001
147716
43329 43340 TTAACGAGCCTT 1-10-1 MOE 949
147078
43469 43480 CCTTCCACTGAT 1-10-1 MOE 1044
147079
43470 43481 TCCTTCCACTGA 1-10-1 MOE 1001
147080
43471 43482 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
398102
43837 43850 CTACCRGAGGATTT 2-10-2 MOE 899
147074
43848 43859 CCACTGATCCTG 1-10-1 MOE 845
401408
43871 43884 CAATGAAGCACAGG 2-10-2 MOE 989
398102
43985 43998 CTACCTGAGGATTT 2-10-2 MOE 899
147736
44137 44148 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147746
44140 44151 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147687
44206 44217 CGACACGGGAAC 1-10-1 MOE 950
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147743
44223 44234 AGGGCTTCCAGT 1-10-1 MOE 1042
384545
44242 44253 CAAGTAGGATGT 1-10-1 MOE 951
147736
44285 44296 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147743
44371 44382 AGGGCTTCCAGT 1-10-1 MOE 1042
384545
44390 44401 CAAGTAGGATGT 1-10-1 MOE 951
147728
44589 44600 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
389948
44628 44639 CCGTTGGACCCC 1-10-1 MOE 915
147720
44703 44714 GATCTCTCGAGT 1-10-1 MOE 1117
147728
44729 44740 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
147728
44737 44748 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
389948
44776 44787 CCGTTGGACCCC 1-10-1 MOE 915
147720
44851 44862 GATCTCTCGAGT 1-10-1 MOE 1117
398110
44861 44874 GTTCCCTTTGCAGG 2-10-2 MOE 952
147728
44877 44888 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
147705
45092 45103 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
147705
45240 45251 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
147681
45337 45348 ATGTCATTAAAC 1-10-1 MOE 965
147681
45485 45496 ATGTCATTAAAC 1-10-1 MOE 965
147096
45660 45671 TTGTTGTTCCCT 1-10-1 MOE 1107
147096
45808 45819 TTGTTGTTCCCT 1-10-1 MOE 1107
368368
45976 45989 TCCACTGATCCTTA 2-10-2 MOE 1127
147074
45977 45988 CCACTGATCCTG 1-10-1 MOE 845
147075
45978 45989 TCCACTGATCCT 1-10-1 MOE 1026
147076
45979 45990 TTCCACTGATCC 1-10-1 MOE 1029
368368
46124 46137 TCCACTGATCCTTA 2-10-2 MOE 1127
147075
46126 46137 TCCACTGATCCT 1-10-1 MOE 1026
147076
46127 46138 TTCCACTGATCC 1-10-1 MOE 1029
147705
46555 46566 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
147714
46685 46696 TTCTGCTCCCAC 1-10-1 MOE 986
147705
46703 46714 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
147714
46833 46844 TTCTGCTCCCAC 1-10-1 MOE 986
390030
47007 47018 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147746
47023 47034 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
47171 47182 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147085
47607 47618 TCTACACCAGGT 1-10-1 MOE 961
147746
47609 47620 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147089
47611 47622 TCCCTCTACACC 1-10-1 MOE 956
147091
47613 47624 GTTCCCTCTACA 1-10-1 MOE 1004
401384
47689 47702 TGAACACATCACTA 2-10-2 MOE 933
147691
47729 47740 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
147085
47755 47766 TCTACACCAGGT 1-10-1 MOE 961
147087
47757 47768 CCTCTACACCAG 1-10-1 MOE 982
147090
47760 47771 TTCCCTCTACAC 1-10-1 MOE 955
147091
47761 47772 GTTCCCTCTACA 1-10-1 MOE 1004
147099
47770 47781 GAGTTGTTGTTC 1-10-1 MOE 1108
147100
47771 47782 CGAGTTGTTGTT 1-10-1 MOE 1109
390030
47847 47858 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147691
47877 47888 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
147099
47918 47929 GAGTTGTTGTTC 1-10-1 MOE 1108
147100
47919 47930 CGAGTTGTTGTT 1-10-1 MOE 1109
390030
47995 48006 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147074
48222 48233 CCACTGATCCTG 1-10-1 MOE 845
147731
48340 48351 TTTCCTCTTGTC 1-10-1 MOE 934
147691
48393 48404 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
147731
48488 48499 TTTCCTCTTGTC 1-10-1 MOE 934
147691
43541 48552 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
398147
48887 48900 CTACAGGACAATAC 2-10-2 MOE 957
398147
49035 49048 CTACAGGACAATAC 2-10-2 MOE 957
147074
49525 49536 CCACTGATCCTG 1-10-1 MOE 845
398168
49742 49753 TCGGACTTTGAA 1-10-1 MOE 1008
384545
49858 49869 CAAGTAGGATGT 1-10-1 MOE 951
398168
49890 49901 TCGGACTTTGAA 1-10-1 MOE 1008
147724
49974 49985 GAAATTGAGGAA 1-10-1 MOE 1139
384545
50006 50017 CAAGTAGGATGT 1-10-1 MOE 951
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147689
50084 50095 CAGAGAAGGTCT 1-10-1 MOE 987
147687
50102 50113 CGACACGGGAAC 1-10-1 MOE 950
147724
50122 50133 GAAATTGAGGAA 1-10-1 MOE 1139
147687
50250 50261 CGACACGGGAAC 1-10-1 MOE 950
398117
50389 50402 TTTCCACTTGGGTG 2-10-2 MOE 960
147736
50436 50447 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147736
50582 50593 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
398168
50703 50714 TCGGACTTTGAA 1-10-1 MOE 1008
401397
50822 50835 CTGGTCAGCATTGA 2-10-2 MOE 946
147746
51019 51030 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147708
51101 51112 TTGATATAGTCA 1-10-1 MOE 997
147746
51165 51176 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
51185 51196 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147708
51247 51258 TTGATATAGTCA 1-10-1 MOE 997
147081
51287 51298 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
147082
51288 51299 AGCTCCTTCCAC 1-10-1 MOE 1036
147746
51324 51335 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
51331 51342 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147728
51376 51387 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
147729
51406 51417 GTAAGAGGCAGG 1-10-1 MOE 920
147081
51433 51444 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
147082
51434 51445 AGCTCCTTCCAC 1-10-1 MOE 1036
147728
51492 51503 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
147728
51522 51533 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
147729
51552 51563 GTAAGAGGCAGG 1-10-1 MOE 920
368360
51633 51646 AAGCTCCTTCCACT 2-10-2 MOE 1035
147082
51634 51645 AGCTCCTTCCAC 1-10-1 MOE 1036
368361
51635 51648 GAAAGCTCCTTCCA 2-10-2 MOE 962
147728
51638 51649 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
147695
51644 51655 TCATTCCCCACT 1-10-1 MOE 984
147736
51713 51724 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147684
51721 51732 ACCCAGTCAGGG 1-10-1 MOE 964
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147081
51779 51790 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
368360
51779 51792 AAGCTCCTTCCACT 2-10-2 MOE 1035
147082
51780 51791 AGCTCCTTCCAC 1-10-1 MOE 1036
368361
51781 51794 GAAAGCTCCTTCCA 2-10-2 MOE 962
147695
51790 51801 TCATTCCCCACT 1-10-1 MOE 984
147736
51859 51870 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147077
51988 51999 CTTCCACTGATC 1-10-1 MOE 1047
147079
51990 52001 TCCTTCCACTGA 1-10-1 MOE 1001
147746
52064 52075 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147681
52085 52096 ATGTCATTAAAC 1-10-1 MOE 965
147077
52134 52145 CTTCCACTGATC 1-10-1 MOE 1047
147079
52136 52147 TCCTTCCACTGA 1-10-1 MOE 1001
147691
52166 52177 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
147719
52252 52263 CCAACTCCAACT 1-10-1 MOE 1116
147691
52312 52323 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
147719
52398 52409 CCAACTCCAACT 1-10-1 MOE 1116
147728
52428 52439 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
147729
52483 52494 GTAAGAGGCAGG 1-10-1 MOE 920
398167
52527 52538 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
147682
52571 52582 CGGGTACTATGG 1-10-1 MOE 992
147728
52574 52585 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
147724
52615 52626 GAAATTGAGGAA 1-10-1 MOE 1139
147729
52629 52640 GTAAGAGGCAGG 1-10-1 MOE 920
147703
52670 52681 TGGCTTCATGTC 1-10-1 MOE 971
398167
52673 52684 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
398165
52708 52719 GTTCTTAGGAAG 1-10-1 MOE 968
147704
52710 52721 TTGTTCTTAGGA 1-10-1 MOE 1012
147705
52716 52727 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
147724
52761 52772 GAAATTGAGGAA 1-10-1 MOE 1139
398167
52762 52773 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
147703
52816 52827 TGGCTTCATGTC 1-10-1 MOE 971
398165
52854 52865 GTTCTTAGGAAG 1-10-1 MOE 968
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147704
52856 52867 TTGTTCTTAGGA 1-10-1 MOE 1012
147705
52862 52873 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
398167
52908 52919 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
147689
53063 53074 CAGAGAAGGTCT 1-10-1 MOE 987
147727
53111 53122 CAGTGGACCACA 1-10-1 MOE 1128
147727
53158 53169 CAGTGGACCACA 1-10-1 MOE 1128
147689
53209 53220 CAGAGAAGGTCT 1-10-1 MOE 987
147727
53257 53268 CAGTGGACCACA 1-10-1 MOE 1128
147727
53304 53315 CAGTGGACCACA 1-10-1 MOE 1128
147680
53638 53649 GTATGCACTGCT 1-10-1 MOE 988
147722
53650 53661 AAAGTCAGGCCA 1-10-1 MOE 1130
147083
53703 53714 TACACCAGGTCA 1-10-1 MOE 973
147085
53705 53716 TCTACACCAGGT 1-10-1 MOE 961
147086
53706 53717 CTCTACACCAGG 1-10-1 MOE 969
398167
53724 53735 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
147684
53747 53758 ACCCAGTCAGGG 1-10-1 MOE 964
147680
53784 53795 GTATGCACTGCT 1-10-1 MOE 988
147722
53796 53807 AAAGTCAGGCCA 1-10-1 MOE 1130
147085
53851 53862 TCTACACCAGGT 1-10-1 MOE 961
398167
53870 53881 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
147684
53893 53904 ACCCAGTCAGGG 1-10-1 MOE 964
398155
54026 54039 TGTTTTTACACAGA 2-10-2 MOE 970
147703
54137 54148 TGGCTTCATGTC 1-10-1 MOE 971
398155
54172 54185 TGIIII1ACACAGA 2-10-2 MOE 970
147705
54275 54286 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
147703
54283 54294 TGGCTTCATGTC 1-10-1 MOE 971
147705
54421 54432 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
147727
54853 54864 CAGTGGACCACA 1-10-1 MOE 1128
398165
54963 54974 GTTCTTAGGAAG 1-10-1 MOE 968
398090
54963 54976 TTGTTCTTAGGAAG 2-10-2 MOE 972
147704
54965 54976 TTGTTCTTAGGA 1-10-1 MOE 1012
147705
54971 54982 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147727
54999 55010 CAGTGGACCACA 1-10-1 MOE 1128
398165
55109 55120 GTTCTTAGGAAG 1-10-1 MOE 968
147704
55111 55122 TTGTTCTTAGGA 1-10-1 MOE 1012
147705
55117 55128 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
147083
55352 55363 TACACCAGGTCA 1-10-1 MOE 973
147705
55378 55389 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
147705
55524 55535 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
147712
55819 55830 ACACCATCTCCC 1-10-1 MOE 1005
147712
55965 55976 ACACCATCTCCC 1-10-1 MOE 1005
147733
56289 56300 TTCTTGATGTCC 1-10-1 MOE 891
147707
56300 56311 TAGTCATTATCT 1-10-1 MOE 977
147708
56306 56317 TTGATATAGTCA 1-10-1 MOE 997
390030
56321 56332 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147081
56333 56344 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
398166
56335 56346 GGGCTTCTTCCA 1-10-1 MOE 1070
147733
56435 56446 TTCTTGATGTCC 1-10-1 MOE 891
147707
56446 56457 TAGTCATTATCT 1-10-1 MOE 977
147708
56452 56463 TTGATATAGTCA 1-10-1 MOE 997
390030
56467 56478 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147081
56479 56490 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
398091
56479 56492 GGGCTTCTTCCATT 2-10-2 MOE 979
398166
56481 56492 GGGCTTCTTCCA 1-10-1 MOE 1070
368366
56518 56531 CTGATCCTTAGAAG 2-10-2 MOE 1019
147743
57612 57623 AGGGCTTCCAGT 1-10-1 MOE 1042
147700
57709 57720 GCGCTAGGCCGC 1-10-1 MOE 1110
147743
57758 57769 AGGGCTTCCAGT 1-10-1 MOE 1042
147700
57855 57866 GCGCTAGGCCGC 1-10-1 MOE 1110
398093
57963 57976 TCGGACTTTGAAAA 2-10-2 MOE 1009
398168
57965 57976 TCGGACTTTGAA 1-10-1 MOE 1008
147698
58105 58116 CCCGCCACCACC 1-10-1 MOE 928
398093
58109 58122 TCGGACTTTGAAAA 2-10-2 MOE 1009
398168
58111 58122 TCGGACTTTGAA 1-10-1 MOE 1008
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147698
58251 58262 CCCGCCACCACC 1-10-1 MOE 928
147735
58279 58290 GGAGAAGCGCAG 1-10-1 MOE 1016
147735
58425 58436 GGAGAAGCGCAG 1-10-1 MOE 1016
404135
58946 58959 CATTTCCATGGCCA 2-10-2 MOE 1056
390030
59326 59337 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147711
59357 59368 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
147743
59382 59393 AGGGCTTCCAGT 1-10-1 MOE 1042
147711
59503 59514 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
147743
59528 59539 AGGGCTTCCAGT 1-10-1 MOE 1042
147695
59576 59587 TCATTCCCCACT 1-10-1 MOE 984
147713
59716 59727 CTCCCACACCAT 1-10-1 MOE 985
147714
59721 59732 TTCTGCTCCCAC 1-10-1 MOE 986
147715
59746 59757 GTTGAGCATGAC 1-10-1 MOE 1077
147716
59771 59782 TTAACGAGCCTT 1-10-1 MOE 949
147712
59857 59868 ACACCATCTCCC 1-10-1 MOE 1005
147714
59867 59878 TTCTGCTCCCAC 1-10-1 MOE 986
147715
59892 59903 GTTGAGCATGAC 1-10-1 MOE 1077
147716
59917 59928 TTAACGAGCCTT 1-10-1 MOE 949
390030
59993 60004 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147690
60270 60281 TGAAGTTAATTC 1-10-1 MOE 1138
389949
60325 60336 GCGCGAGCCCGA 1-10-1 MOE 1061
147690
60416 60427 TGAAGTTAATTC 1-10-1 MOE 1138
389949
60471 60482 GCGCGAGCCCGA 1-10-1 MOE 1061
147746
60619 60630 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
384545
60676 60687 CAAGTAGGATGT 1-10-1 MOE 951
147746
60765 60776 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
384545
60822 60833 CAAGTAGGATGT 1-10-1 MOE 951
147689
60967 60978 CAGAGAAGGTCT 1-10-1 MOE 987
147689
61008 61019 CAGAGAAGGTCT 1-10-1 MOE 987
147689
61049 61060 CAGAGAAGGTCT 1-10-1 MOE 987
398105
61121 61134 TGCACAGGCAGGTT 2-10-2 MOE 1066
147689
61154 61165 CAGAGAAGGTCT 1-10-1 MOE 987
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147689
61195 61206 CAGAGAAGGTCT 1-10-1 MOE 987
398105
61267 61280 TGCACAGGCAGGTT 2-10-2 MOE 1066
147692
61365 61376 CTCACCTTCATG 1-10-1 MOE 1113
147692
61511 61522 CTCACCTTCATG 1-10-1 MOE 1113
147680
61619 61630 GTATGCACTGCT 1-10-1 MOE 988
147078
61755 61766 CCTTCCACTGAT 1-10-1 MOE 1044
147079
61756 61767 TCCTTCCACTGA 1-10-1 MOE 1001
147080
61757 61768 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
147078
61901 61912 CCTTCCACTGAT 1-10-1 MOE 1044
147079
61902 61913 TCCTTCCACTGA 1-10-1 MOE 1001
147080
61903 61914 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
147088
62361 62372 CCCTCTACACCA 1-10-1 MOE 1050
401384
62573 62586 TGAACACATCACTA 2-10-2 MOE 933
147688
62697 62708 TCCCAAACAAAT 1-10-1 MOE 990
147746
63102 63113 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147721
63225 63236 AATGCAGGATCT 1-10-1 MOE 1118
147742
63226 63237 AACTTCAGTGTC 1-10-1 MOE 1041
147746
63248 63259 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147682
63337 63348 CGGGTACTATGG 1-10-1 MOE 992
147721
63371 63382 AATGCAGGATCT 1-10-1 MOE 1118
147742
63372 63383 AACTTCAGTGTC 1-10-1 MOE 1041
147688
63401 63412 TCCCAAACAAAT 1-10-1 MOE 990
147097
63449 63460 GTTGTTGTTCCC 1-10-1 MOE 1111
147098
63450 63461 AGTTGTTGTTCC 1-10-1 MOE 1112
401409
63458 63471 ATTCTTAACACAGA 2-10-2 MOE 991
147084
63531 63542 CTACACCAGGTC 1-10-1 MOE 993
147688
63547 63558 TCCCAAACAAAT 1-10-1 MOE 990
147097
63595 63606 GTTGTTGTTCCC 1-10-1 MOE 1111
147098
63596 63607 AGTTGTTGTTCC 1-10-1 MOE 1112
147721
64086 64097 AATGCAGGATCT 1-10-1 MOE 1118
147721
64232 64243 AATGCAGGATCT 1-10-1 MOE 1118
147692
64233 64244 CTCACCTTCATG 1-10-1 MOE 1113
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147692
64379 64390 CTCACCTTCATG 1-10-1 MOE 1113
147729
64633 64644 GTAAGAGGCAGG 1-10-1 MOE 920
401403
64746 64759 TTTCCTAGGAGGTG 2-10-2 MOE 967
147729
64779 64790 GTAAGAGGCAGG 1-10-1 MOE 920
147746
65151 65162 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147746
65297 65308 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147689
65302 65313 CAGAGAAGGTCT 1-10-1 MOE 987
147689
65448 65459 CAGAGAAGGTCT 1-10-1 MOE 987
147717
65862 65873 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
147717
65895 65906 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
147729
66000 66011 GTAAGAGGCAGG 1-10-1 MOE 920
147717
66008 66019 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
147717
66041 66052 ATCTTCAGAGAT 1-10-1 MOE 996
147708
66046 66057 TTGATATAGTCA 1-10-1 MOE 997
147718
66055 66066 TAATATGACTTG 1-10-1 MOE 998
147729
66146 66157 GTAAGAGGCAGG 1-10-1 MOE 920
147089
66236 66247 TCCCTCTACACC 1-10-1 MOE 956
368363
66281 66294 CTTAGAAGGCAGCA 2-10-2 MOE 1114
147727
66293 66304 CAGTGGACCACA 1-10-1 MOE 1128
147093
66319 66330 TTGTTCCCTCTA 1-10-1 MOE 929
147094
66320 66331 GTTGTTCCCTCT 1-10-1 MOE 1115
147089
66382 66393 TCCCTCTACACC 1-10-1 MOE 956
368363
66427 66440 CTTAGAAGGCAGCA 2-10-2 MOE 1114
147727
66439 66450 CAGTGGACCACA 1-10-1 MOE 1128
147719
66441 66452 CCAACTCCAACT 1-10-1 MOE 1116
147093
66465 66476 TTGTTCCCTCTA 1-10-1 MOE 929
147094
66466 66477 GTTGTTCCCTCT 1-10-1 MOE 1115
147075
66561 66572 TCCACTGATCCT 1-10-1 MOE 1026
368357
66562 66575 CCTTCCACTGATCC 2-10-2 MOE 1046
147076
66562 66573 TTCCACTGATCC 1-10-1 MOE 1029
368377
66562 66577 CTCCTTCCACTGATCC 3-10-3 MOE 1030
147077
66563 66574 CTTCCACTGATC 1-10-1 MOE 1047
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
368358
66563 66576 TCCTTCCACTGATC 2-10-2 MOE 1031
147078
66564 66575 CCTTCCACTGAT 1-10-1 MOE 1044
147079
66565 66576 TCCTTCCACTGA 1-10-1 MOE 1001
147080
66566 66577 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
147081
66567 66578 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
147719
66587 66598 CCAACTCCAACT 1-10-1 MOE 1116
147075
66707 66718 TCCACTGATCCT 1-10-1 MOE 1026
368377
66708 66723 CTCCTTCCACTGATCC 3-10-3 MOE 1030
147076
66708 66719 TTCCACTGATCC 1-10-1 MOE 1029
368357
66708 66721 CCTTCCACTGATCC 2-10-2 MOE 1046
147077
66709 66720 CTTCCACTGATC 1-10-1 MOE 1047
147078
66710 66721 CCTTCCACTGAT 1-10-1 MOE 1044
147079
66711 66722 TCCTTCCACTGA 1-10-1 MOE 1001
147080
66712 66723 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
147081
66713 66724 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
147089
66842 66853 TCCCTCTACACC 1-10-1 MOE 956
147089
66988 66999 TCCCTCTACACC 1-10-1 MOE 956
147075
66999 67010 TCCACTGATCCT 1-10-1 MOE 1026
147075
67145 67156 TCCACTGATCCT 1-10-1 MOE 1026
147705
67213 67224 CGGTTTTTGTTC 1-10-1 MOE 1002
401413
67301 67314 TGCAGCCATGTACT 2-10-2 MOE 1022
147737
67309 67320 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
147080
67430 67441 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
147737
67455 67466 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
147080
67576 67587 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
147082
67578 67589 AGCTCCTTCCAC 1-10-1 MOE 1036
147090
67582 67593 TTCCCTCTACAC 1-10-1 MOE 955
147091
67583 67594 GTTCCCTCTACA 1-10-1 MOE 1004
147742
67591 67602 AACTTCAGTGTC 1-10-1 MOE 1041
147090
67728 67739 TTCCCTCTACAC 1-10-1 MOE 955
147698
68036 68047 CCCGCCACCACC 1-10-1 MOE 928
147698
68182 68193 CCCGCCACCACC 1-10-1 MOE 928
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147681
68267 68278 ATGTCATTAAAC 1-10-1 MOE 965
147721
68386 68397 AATGCAGGATCT 1-10-1 MOE 1118
147681
68413 68424 ATGTCATTAAAC 1-10-1 MOE 965
147712
68527 68538 ACACCATCTCCC 1-10-1 MOE 1005
147721
68532 68543 AATGCAGGATCT 1-10-1 MOE 1118
147711
68760 68771 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
147711
68906 68917 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
147696
69045 69056 TGGATGATTGGC 1-10-1 MOE 906
147696
69191 69202 TGGATGATTGGC 1-10-1 MOE 906
147723
69194 69205 GACTCCAAAGTC 1-10-1 MOE 892
147723
69210 69221 GACTCCAAAGTC 1-10-1 MOE 892
389965
69271 69282 CTGCAACATGAT 1-10-1 MOE 1018
389764
69271 69282 CTGCAACATGAT 1-9-2 MOE 1018
147723
69340 69351 GACTCCAAAGTC 1-10-1 MOE 892
147723
69356 69367 GACTCCAAAGTC 1-10-1 MOE 892
398101
69357 69370 TTTGATAAAGCCCT 2-10-2 MOE 1064
389965
69417 69428 CTGCAACATGAT 1-10-1 MOE 1018
389764
69417 69428 CTGCAACATGAT 1-9-2 MOE 1018
398101
69503 69516 TTTGATAAAGCCCT 2-10-2 MOE 1064
368353
69519 69532 CACTGATCCTGCAC 2-10-2 MOE 1007
147074
69522 69533 CCACTGATCCTG 1-10-1 MOE 845
147081
69631 69642 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
368353
69665 69678 CACTGATCCTGCAC 2-10-2 MOE 1007
147720
69729 69740 GATCTCTCGAGT 1-10-1 MOE 1117
147721
69736 69747 AATGCAGGATCT 1-10-1 MOE 1118
398167
69757 69768 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
147722
69762 69773 AAAGTCAGGCCA 1-10-1 MOE 1130
147723
69768 69779 GACTCCAAAGTC 1-10-1 MOE 892
147080
69776 z69787 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
147081
69777 69788 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
398093
69811 69824 TCGGACTTTGAAAA 2-10-2 MOE 1009
398168
69813 69824 TCGGACTTTGAA 1-10-1 MOE 1008
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147725
69814 69825 CTCGGACTTTGA 1-10-1 MOE 1119
147726
69819 69830 TGACTCTCGGAC 1-10-1 MOE 1120
147727
69860 69871 CAGTGGACCACA 1-10-1 MOE 1128
147720
69875 69886 GATCTCTCGAGT 1-10-1 MOE 1117
147721
69882 69893 AATGCAGGATCT 1-10-1 MOE 1118
147728
69899 69910 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
398094
69901 69914 ATCAGCCAGACAGA 2-10-2 MOE 1010
398167
69903 69914 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
398092
69904 69917 AGTCAGGCCATGTG 2-10-2 MOE 1060
147722
69908 69919 AAAGTCAGGCCA 1-10-1 MOE 1130
147723
69914 69925 GACTCCAAAGTC 1-10-1 MOE 892
147729
69916 69927 GTAAGAGGCAGG 1-10-1 MOE 920
398095
69919 69932 CATCAGCAAGAGGC 2-10-2 MOE 1011
398093
69957 69970 TCGGACTTTGAAAA 2-10-2 MOE 1009
398168
69959 69970 TCGGACTTTGAA 1-10-1 MOE 1008
147725
69960 69971 CTCGGACTTTGA 1-10-1 MOE 1119
147726
69965 69976 TGACTCTCGGAC 1-10-1 MOE 1120
147704
69991 70002 TTGTTCTTAGGA 1-10-1 MOE 1012
147727
70006 70017 CAGTGGACCACA 1-10-1 MOE 1128
147728
70045 70056 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
398094
70047 70060 ATCAGCCAGACAGA 2-10-2 MOE 1010
398169
70048 70059 TCAGCCAGACAG 1-10-1 MOE 909
147729
70062 70073 GTAAGAGGCAGG 1-10-1 MOE 920
398095
70065 70078 CATCAGCAAGAGGC 2-10-2 MOE 1011
147704
70137 70148 TTGTTCTTAGGA 1-10-1 MOE 1012
147697
70161 70172 CCCCAGCAGCGG 1-10-1 MOE 1000
147697
70307 70318 CCCCAGCAGCGG 1-10-1 MOE 1000
147728
70450 70461 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
398164
70464 70475 TTGTCGATCTGC 1-10-1 MOE 1014
147730
70465 70476 CTTGTCCATCAG 1-10-1 MOE 1121
147731
70471 70482 TTTCCTCTTGTC 1-10-1 MOE 934
147732
70476 70487 GGGTCTTTCCTC 1-10-1 MOE 1122
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147733
70497 70508 TTCTTGATGTCC 1-10-1 MOE 891
398096
70562 70575 GGAGAAGCGCAGCT 2-10-2 MOE 1015
147735
70564 70575 GGAGAAGCGCAG 1-10-1 MOE 1016
147736
70569 70580 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147737
70575 70586 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
147728
70596 70607 GCCAGACAGAAG 1-10-1 MOE 1013
398164
70610 70621 TTGTCGATCTGC 1-10-1 MOE 1014
147730
70611 70622 CTTGTCCATCAG 1-10-1 MOE 1121
368349
70616 70629 CTGCACTGACGAGT 2-10-2 MOE 1017
147731
70617 70628 TTTCCTCTTGTC 1-10-1 MOE 934
147732
70622 70633 GGGTCTTTCCTC 1-10-1 MOE 1122
147733
70643 70654 TTCTTGATGTCC 1-10-1 MOE 891
398096
70708 70721 GGAGAAGCGCAGCT 2-10-2 MOE 1015
147735
70710 70721 GGAGAAGCGCAG 1-10-1 MOE 1016
147736
70715 70726 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147737
70721 70732 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
389764
70784 70795 CTGCAACATGAT 1-9-2 MOE 1018
389965
70784 70795 CTGCAACATGAT 1-10-1 MOE 1018
389965
70930 70941 CTGCAACATGAT 1-10-1 MOE 1018
389764
70930 70941 CTGCAACATGAT 1-9-2 MOE 1018
368386
70995 71010 CACTGATCCTTAGAAG 3-10-3 MOE 1123
368367
70997 71010 CACTGATCCTTAGA 2-10-2 MOE 1124
368387
70997 71012 TCCACTGATCCTTAGA 3-10-3 MOE 1125
368354
70999 71012 TCCACTGATCCTGC 2-10-2 MOE 1024
368374
70999 71014 CTTCCACTGATCCTGC 3-10-3 MOE 1126
368368
70999 71012 TCCACTGATCCTTA 2-10-2 MOE 1127
368388
70999 71014 CTTCCACTGATCCTTA 3-10-3 MOE 895
368355
71000 71013 TTCCACTGATCCTG 2-10-2 MOE 1025
147074
71000 71011 CCACTGATCCTG 1-10-1 MOE 845
368375
71000 71015 CCTTCCACTGATCCTG 3-10-3 MOE 1020
147075
71001 71012 TCCACTGATCCT 1-10-1 MOE 1026
368376
71001 71016 TCCTTCCACTGATCCT 3-10-3 MOE 1028
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147076
71002 71013 TTCCACTGATCC 1-10-1 MOE 1029
368357
71002 71015 CCTTCCACTGATCC 2-10-2 MOE 1046
368377
71002 71017 CTCCTTCCACTGATCC 3-10-3 MOE 1030
147077
71003 71014 CTTCCACTGATC 1-10-1 MOE 1047
368378
71003 71018 GCTCCTTCCACTGATC 3-10-3 MOE 1032
147078
71004 71015 CCTTCCACTGAT 1-10-1 MOE 1044
368359
71005 71018 GCTCCTTCCACTGA 2-10-2 MOE 1033
368379
71005 71020 AAGCTCCTTCCACTGA 3-10-3 MOE 1034
147079
71005 71016 TCCTTCCACTGA 1-10-1 MOE 1001
147080
71006 71017 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
368360
71007 71020 AAGCTCCTTCCACT 2-10-2 MOE 1035
368380
71007 71022 GAAAGCTCCTTCCACT 3-10-3 MOE 896
147081
71007 71018 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
147082
71008 71019 AGCTCCTTCCAC 1-10-1 MOE 1036
368361
71009 71022 GAAAGCTCCTTCCA 2-10-2 MOE 962
368381
71009 71024 GGGAAAGCTCCTTCCA 3-10-3 MOE 1037
147738
71067 71078 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
147739
71071 71082 CGTTTGGGTGGC 1-10-1 MOE 1023
147740
71088 71099 TGTGAGGCTCCA 1-10-1 MOE 1062
147741
71129 71140 CACCCACTGGTG 1-10-1 MOE 1055
368366
71141 71154 CTGATCCTTAGAAG 2-10-2 MOE 1019
368386
71141 71156 CACTGATCCTTAGAAG 3-10-3 MOE 1123
368367
71143 71156 CACTGATCCTTAGA 2-10-2 MOE 1124
368387
71143 71158 TCCACTGATCCTTAGA 3-10-3 MOE 1125
368374
71145 71160 CTTCCACTGATCCTGC 3-10-3 MOE 1126
368354
71145 71158 TCCACTGATCCTGC 2-10-2 MOE 1024
368368
71145 71158 TCCACTGATCCTTA 2-10-2 MOE 1127
368388
71145 71160 CTTCCACTGATCCTTA 3-10-3 MOE 895
368355
71146 71159 TTCCACTGATCCTG 2-10-2 MOE 1025
368375
71146 71161 CCTTCCACTGATCCTG 3-10-3 MOE 1020
147075
71147 71158 TCCACTGATCCT 1-10-1 MOE 1026
368356
71147 71160 CTTCCACTGATCCT 2-10-2 MOE 1027
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
368376
71147 71162 TCCTTCCACTGATCCT 3-10-3 MOE 1028
147076
71148 71159 TTCCACTGATCC 1-10-1 MOE 1029
368357
71148 71161 CCTTCCACTGATCC 2-10-2 MOE 1046
368377
71148 71163 CTCCTTCCACTGATCC 3-10-3 MOE 1030
147077
71149 71160 CTTCCACTGATC 1-10-1 MOE 1047
368358
71149 71162 TCCTTCCACTGATC 2-10-2 MOE 1031
368378
71149 71164 GCTCCTTCCACTGATC 3-10-3 MOE 1032
147078
71150 71161 CCTTCCACTGAT 1-10-1 MOE 1044
368359
71151 71164 GCTCCTTCCACTGA 2-10-2 MOE 1033
147079
71151 71162 TCCTTCCACTGA 1-10-1 MOE 1001
368379
71151 71166 AAGCTCCTTCCACTGA 3-10-3 MOE 1034
147080
71152 71163 CTCCTTCCACTG 1-10-1 MOE 1021
368380
71153 71168 GAAAGCTCCTTCCACT 3-10-3 MOE 896
147081
71153 71164 GCTCCTTCCACT 1-10-1 MOE 1006
368360
71153 71166 AAGCTCCTTCCACT 2-10-2 MOE 1035
147082
71154 71165 AGCTCCTTCCAC 1-10-1 MOE 1036
368381
71155 71170 GGGAAAGCTCCTTCCA 3-10-3 MOE 1037
368361
71155 71168 GAAAGCTCCTTCCA 2-10-2 MOE 962
398097
71158 71171 GGCAGTCTTTATCC 2-10-2 MOE 897
147738
71213 71224 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
147739
71217 71228 CGTTTGGGTGGC 1-10-1 MOE 1023
147740
71234 71245 TGTGAGGCTCCA 1-10-1 MOE 1062
147741
71275 71286 CACCCACTGGTG 1-10-1 MOE 1055
398097
71304 71317 GGCAGTCTTTATCC 2-10-2 MOE 897
147727
71702 71713 CAGTGGACCACA 1-10-1 MOE 1128
147727
71848 71859 CAGTGGACCACA 1-10-1 MOE 1128
390030
71986 71997 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147102
72015 72026 TGCGAGTTGTTG 1-10-1 MOE 1129
390030
72132 72143 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
147102
72161 72172 TGCGAGTTGTTG 1-10-1 MOE 1129
147722
72199 72210 AAAGTCAGGCCA 1-10-1 MOE 1130
147696
72232 72243 TGGATGATTGGC 1-10-1 MOE 906
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147741
72254 72265 CACCCACTGGTG 1-10-1 MOE 1055
147722
72345 72356 AAAGTCAGGCCA 1-10-1 MOE 1130
147696
72378 72389 TGGATGATTGGC 1-10-1 MOE 906
147741
72400 72411 CACCCACTGGTG 1-10-1 MOE 1055
147711
72446 72457 AAGGGCCCTGGG 1-10-1 MOE 1040
398098
72574 72587 TAACTTCAGTGTCT 2-10-2 MOE 1131
147742
72575 72586 AACTTCAGTGTC 1-10-1 MOE 1041
147698
72595 72606 CCCGCCACCACC 1-10-1 MOE 928
147743
72690 72701 AGGGCTTCCAGT 1-10-1 MOE 1042
398099
72690 72703 GAAGGGCTTCCAGT 2-10-2 MOE 1132
147744
72694 72705 AGGAAGGGCTTC 1-10-1 MOE 1043
398100
72697 72710 TGACCAGGAAGGGC 2-10-2 MOE 1133
147745
72700 72711 TTGACCAGGAAG 1-10-1 MOE 1058
398098
72720 72733 TAACTTCAGTGTCT 2-10-2 MOE 1131
147742
72721 72732 AACTTCAGTGTC 1-10-1 MOE 1041
147698
72741 72752 CCCGCCACCACC 1-10-1 MOE 928
398157
72757 72770 GGAAACATACCCTG 2-10-2 MOE 1045
147743
72836 72847 AGGGCTTCCAGT 1-10-1 MOE 1042
398099
72836 72849 GAAGGGCTTCCAGT 2-10-2 MOE 1132
147744
72840 72851 AGGAAGGGCTTC 1-10-1 MOE 1043
398100
72843 72856 TGACCAGGAAGGGC 2-10-2 MOE 1133
147745
72846 72857 TTGACCAGGAAG 1-10-1 MOE 1058
147076
72898 72909 TTCCACTGATCC 1-10-1 MOE 1029
368357
72898 72911 CCTTCCACTGATCC 2-10-2 MOE 1046
147077
72899 72910 CTTCCACTGATC 1-10-1 MOE 1047
147078
72900 72911 CCTTCCACTGAT 1-10-1 MOE 1044
398157
72903 72916 GGAAACATACCCTG 2-10-2 MOE 1045
398158
72983 72996 AGGCCCTGAGATTA 2-10-2 MOE 1134
398159
72988 73001 GGTTAAGGCCCTGA 2-10-2 MOE 1135
398160
72993 73006 GAATAGGTTAAGGC 2-10-2 MOE 1048
147076
73044 73055 TTCCACTGATCC 1-10-1 MOE 1029
368357
73044 73057 CCTTCCACTGATCC 2-10-2 MOE 1046
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147077
73045 73056 CTTCCACTGATC 1-10-1 MOE 1047
147078
73046 73057 CCTTCCACTGAT 1-10-1 MOE 1044
147746
73052 73063 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398161
73092 73105 AACAATGTGTTGTA 2-10-2 MOE 1049
147746
73101 73112 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398158
73129 73142 AGGCCCTGAGATTA 2-10-2 MOE 1134
398159
73134 73147 GGTTAAGGCCCTGA 2-10-2 MOE 1135
398160
73139 73152 GAATAGGTTAAGGC 2-10-2 MOE 1048
147746
73198 73209 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398161
73238 73251 AACAATGTGTTGTA 2-10-2 MOE 1049
147746
73247 73258 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
147088
73273 73284 CCCTCTACACCA 1-10-1 MOE 1050
398105
73401 73414 TGCACAGGCAGGTT 2-10-2 MOE 1066
398105
73547 73560 TGCACAGGCAGGTT 2-10-2 MOE 1066
147741
73559 73570 CACCCACTGGTG 1-10-1 MOE 1055
147741
73705 73716 CACCCACTGGTG 1-10-1 MOE 1055
398162
73968 73981 ACCAAACAGTTCAG 2-10-2 MOE 1057
147745
73991 74002 TTGACCAGGAAG 1-10-1 MOE 1058
398167
74008 74019 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
398092
74009 74022 AGTCAGGCCATGTG 2-10-2 MOE 1060
398162
74114 74127 ACCAAACAGTTCAG 2-10-2 MOE 1057
147745
74137 74148 TTGACCAGGAAG 1-10-1 MOE 1058
398167
74154 74165 CAGGCCATGTGG 1-10-1 MOE 1059
147089
74280 74291 TCCCTCTACACC 1-10-1 MOE 956
147090
74281 74292 TTCCCTCTACAC 1-10-1 MOE 955
389949
74310 74321 GCGCGAGCCCGA 1-10-1 MOE 1061
147740
74339 74350 TGTGAGGCTCCA 1-10-1 MOE 1062
389950
74381 74392 CCCTGAAGGTTC 1-10-1 MOE 1063
147089
74426 74437 TCCCTCTACACC 1-10-1 MOE 956
147090
74427 74438 TTCCCTCTACAC 1-10-1 MOE 955
389949
74456 74467 GCGCGAGCCCGA 1-10-1 MOE 1061
147685
74490 74501 GGCTGACATTCA 1-10-1 MOE 975
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
398101
74510 74523 TTTGATAAAGCCCT 2-10-2 MOE 1064
398102
74536 74549 CTACCTGAGGATTT 2-10-2 MOE 899
398103
74543 74556 CCCAGTACTACCTG 2-10-2 MOE 900
147685
74636 74647 GGCTGACATTCA 1-10-1 MOE 975
398102
74682 74695 CTACCTGAGGATTT 2-10-2 MOE 899
398103
74689 74702 CCCAGTACTACCTG 2-10-2 MOE 900
147736
74737 74748 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
398104
74805 74818 CAAGAAGACCTTAC 2-10-2 MOE 1065
147736
74883 74894 AGGTAGGAGAAG 1-10-1 MOE 963
147737
74893 74904 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
398105
74894 74907 TGCACAGGCAGGTT 2-10-2 MOE 1066
147737
74919 74930 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
398095
74940 74953 CATCAGCAAGAGGC 2-10-2 MOE 1011
398104
74951 74964 CAAGAAGACCTTAC 2-10-2 MOE 1065
398106
74974 74987 TGGAAAACTGCACC 2-10-2 MOE 1068
398107
74980 74993 TATTCCTGGAAAAC 2-10-2 MOE 902
147745
75030 75041 TTGACCAGGAAG 1-10-1 MOE 1058
147737
75039 75050 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
398105
75040 75053 TGCACAGGCAGGTT 2-10-2 MOE 1066
147737
75065 75076 ACAGCCAGGTAG 1-10-1 MOE 1067
398108
75077 75090 GGAATGTCTGAGTT 2-10-2 MOE 1136
398095
75086 75099 CATCAGCAAGAGGC 2-10-2 MOE 1011
147691
75108 75119 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
398106
75120 75133 TGGAAAACTGCACC 2-10-2 MOE 1068
398107
75126 75139 TATTCCTGGAAAAC 2-10-2 MOE 902
147738
75155 75166 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
147745
75176 75187 TTGACCAGGAAG 1-10-1 MOE 1058
398108
75223 75236 GGAATGTCTGAGTT 2-10-2 MOE 1136
398109
75247 75260 CAAGAAGTGTGGTT 2-10-2 MOE 903
147691
75254 75265 GAGGTGGGAAAA 1-10-1 MOE 966
147738
75301 75312 TGGGTGGCCGGG 1-10-1 MOE 1069
398110
75385 75398 GTTCCCTTTGCAGG 2-10-2 MOE 952
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147091
75387 75398 GTTCCCTCTACA 1-10-1 MOE 1004
398109
75393 75406 CAAGAAGTGTGGTT 2-10-2 MOE 903
398111
75470 75483 GTGAAAATGCTGGC 2-10-2 MOE 904
401385
75494 75507 CCCAGTGGGTTTGA 2-10-2 MOE 890
398166
75499 75510 GGGCTTCTTCCA 1-10-1 MOE 1070
147091
75525 75536 GTTCCCTCTACA 1-10-1 MOE 1004
147092
75526 75537 TGTTCCCTCTAC 1-10-1 MOE 901
398110
75531 75544 GTTCCCTTTGCAGG 2-10-2 MOE 952
147091
75533 75544 GTTCCCTCTACA 1-10-1 MOE 1004
147706
75540 75551 GCTGACATCTCG 1-10-1 MOE 1071
398112
75584 75597 CAGCCTGGCACCTA 2-10-2 MOE 1072
398111
75616 75629 GTGAAAATGCTGGC 2-10-2 MOE 904
147746
75617 75628 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398166
75645 75656 GGGCTTCTTCCA 1-10-1 MOE 1070
147091
75671 75682 GTTCCCTCTACA 1-10-1 MOE 1004
147092
75672 75683 TGTTCCCTCTAC 1-10-1 MOE 901
398113
75693 75706 AGGAGGTTAAACCA 2-10-2 MOE 905
398112
75730 75743 CAGCCTGGCACCTA 2-10-2 MOE 1072
147746
75763 75774 TAAAAACAACAA 1-10-1 MOE 1073
398114
75770 75783 AGGCATATAGCAGA 2-10-2 MOE 1075
398115
75786 75799 AGTAAATATTGGCT 2-10-2 MOE 1076
398116
75799 75812 TAATGACCTGATGA 2-10-2 MOE 1137
398113
75839 75852 AGGAGGTTAAACCA 2-10-2 MOE 905
390030
75839 75850 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
398115
75932 75945 AGTAAATATTGGCT 2-10-2 MOE 1076
398116
75945 75958 TAATGACCTGATGA 2-10-2 MOE 1137
398106
75982 75995 TGGAAAACTGCACC 2-10-2 MOE 1068
390030
75985 75996 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
398106
76127 76140 TGGAAAACTGCACC 2-10-2 MOE 1068
147690
76196 76207 TGAAGTTAATTC 1-10-1 MOE 1138
147690
76341 76352 TGAAGTTAATTC 1-10-1 MOE 1138
147724
76740 76751 GAAATTGAGGAA 1-10-1 MOE 1139
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147089
76873 76884 TCCCTCTACACC 1-10-1 MOE 956
147679
76881 76892 CAAAAGGATCCC 1-10-1 MOE 907
147724
76885 76896 GAAATTGAGGAA 1-10-1 MOE 1139
147089
77018 77029 TCCCTCTACACC 1-10-1 MOE 956
147679
77026 77037 CAAAAGGATCCC 1-10-1 MOE 907
147693
77240 77251 GTGCGCTCCCAT 1-10-1 MOE 1078
147697
77759 77770 CCCCAGCAGCGG 1-10-1 MOE 1000
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 177-190 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 177-190 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 177-190 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID
5 Nº 886, 859 o 853. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 177-190 de la SEC ID Nº 1 se selecciona de los Nº Isis 147022, 147023 o147024.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 195-228 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 195-228 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 195-228 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID
10 Nº 877, 868, 882, 886, 859, 853, 865, 835, 843, 846, 842, 848, 874, 849, 863, 855, 850, 864 u 834. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 195-228 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147019, 147020, 147021, 147022, 147023, 147024, 147025, 147026, 147027, 147028, 147073, 147029, 147030, 147036, 147037, 147038, 147039, 147040 o 147041.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 323-353 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un
15 compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 323-353 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 323-353 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 866, 881, 869, 883, 858, 833, 875, 837, 829, 871, 884, 887, 839, 830, 840, 861 o 879. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 323-353 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147042, 147043, 147044, 147045, 147046, 147047, 147051, 147052, 147053, 147054, 147055, 147056, 147057,
20 147058, 147059, 147060 o 147061.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 322-353 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 322-353 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 322-353 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 842, 866, 881, 869, 883, 858, 833, 875, 837, 829, 871, 884, 887, 839, 830, 840, 861, o 879. En ciertas de dichas 25 realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 322-353 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147073, 147042, 147043, 147044, 147045, 147046, 147047, 147051, 147052, 147053, 147054, 147055, 147056, 147057, 147058, 147059, 147060 o 147061. En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 679-799 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 679-799 de la SEC ID Nº
11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 679-799 comprende una secuencia
30 de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 883, 858, 883 o 858. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 679-799 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147045, 147046, 147045 o 147046.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 679-827 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 679-827 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto
35 antisentido corto dirigido a los nucleótidos 679-827 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 883, 858, 883, 858 o 851. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 679-827 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147045, 147046, 147045, 147046 o 147066.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1024-1046 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1024-1046 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un 40 compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1024-1046 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 841, 862, 880, 857, 851, 876, 838, 860, 878, 856, 832 o 842. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1024-1046 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147062,
147063, 147064, 147065, 147066, 147067, 147068, 147069, 147070, 147071, 147072 o 147073.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 992-1046 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 992-1046 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 992-1046 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 831, 841, 862, 880, 857, 851, 876, 838, 860, 878, 856, 832 o 842. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 992-1046 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 404131, 147062, 147063, 147064, 147065, 147066, 147067, 147068, 147069, 147070, 147071, 147072 o 147073.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1868-1881 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1868-1881 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1868-1881 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 886, 859 o 853. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1868-1881 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147022, 147023 o 147024.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1886-1919 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1886-1919 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1886-1919 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 877, 868, 882, 886, 859, 865, 843, 846, 874, 863, 855, 864 o 834. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1886-1919 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147019, 147020, 147021, 147022, 147023, 147025, 147027, 147028, 147030, 147037, 147038, 147040 o 147041.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1869-1919 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1869-1919 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1869-1919 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 859, 853, 877, 868, 882, 886, 859, 865, 843, 846, 874, 863, 855, 864 o 834. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1869-1919 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147023, 147024, 147019, 147020, 147021, 147022, 147023, 147025, 147027, 147028, 147030, 147037, 147038, 147040 o 147041.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1976-1989 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1976-1989 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1976-1989 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 886, 859 o 853. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1976-1989 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147022, 147023 o 147024.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 1995-2027 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1995-2027 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1995-2027 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 868, 882, 886, 859, 853, 865, 835, 843, 846, 848, 874, 849, 863, 855, 850, 864 o 834. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 1995-2027 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147020, 147021, 147022, 147023, 147024, 147025, 147026, 147027, 147028, 147029, 147030, 147036, 147037, 147038, 147039, 147040 o 147041.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 2366-2382 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 2366-2382 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 2366-2382 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 867 o 873. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 2366-2382 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 404199 o 404134.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 6220-6233 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 6220-6233 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 6220-6233 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 870, 836 o 844. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 6220-6233 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147032, 147033 o 147034.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 6288-6300 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 6288-6300 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 6288-6300 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 869 o 883. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 6288-6300 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147044 o 147045.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 6329-6342 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 6329-6342 de la SEC ID Nº 11. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 6329-6342 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de la SEC ID Nº 870, 836 o 844. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 6329-6342 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147032, 147033 o 147034.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 6397-6409 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 6397-6409 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 6397-6409 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 869 o 883. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 6397-6409 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147044 o 147045.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 7057-7178 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 7057-7178 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 7057-7178 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 830, 840, 861, 830 u 840. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 7057-7178 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147058, 147059, 147060, 147058 o 147059.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 8630-8750 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 8630-8750 de la SEC ID Nº 11. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 8630-8750 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 843, 846, 843 u 846. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 8630-8750 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147027, 147028, 147027 o 147028.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 10957-11077 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 10957-11077 de la SEC ID Nº 11. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 10957-11077 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 881, 869, 881 u 869. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 10957-11077 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147043, 147044, 147043 o 147044.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 11605-11623 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 11605-11623 de la SEC ID Nº 11. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 11605-11623 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 856, 878 u 856. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 11605-11623 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147071, 147070 o 147071.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 12805-12817 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 12805-12817 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 12805-12817 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 874 u 885. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 12805-12817 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147030 o 147031.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 12986-12998 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 12986-12998 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 12986-12998 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 874 u 885. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 12986-12998 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147030 o 147031.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 15560-15572 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 15560-15572 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 15560-15572 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 876 u 838. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 15560-15572 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147067 o 147068.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 17787-17941 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 17787-17941 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 17787-17941 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 874 u 880. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 17787-17941 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147030 o 147064.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 21190-21202 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 21190-21202 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 21190-21202 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 843 u 846. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 21190-21202 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147027 o 147028.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 21358-21370 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 21358-21370 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 21358-21370 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 843 u 846. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 21358-21370 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 017027 o 147028.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 24318-24332 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 24318-24332 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 24318-24332 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 881, 869, 883 u 858. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 24318-24332 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147043, 147044, 147045 o 147046.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 24486-24501 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 24486-24501 de la SEC ID Nº 11. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 24486-24501 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 881, 869, 858 u 833. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 24486-24501 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147043, 147044, 147046 o 147047.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 25065-25077 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 25065-25077 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 25065-25077 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 864 u 834. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 25065-25077 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147040 o 147041.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 25232-25245 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 25232-25245 de la SEC ID Nº 11. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 25232-25245 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 850, 864 u 834. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 25232-25245 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147039, 147040 o 147041.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 25508-25523 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 25508-25523 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 25508-25523 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 839 u 879. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 25508-25523 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147057 o 147061.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 25676-28890 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 25676-28890 de la SEC ID Nº 11. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 25676-28890 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 839, 860 u 878. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 25676-28890 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147057, 147069 o 147070.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 33056-33069 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 33056-33069 de la SEC ID Nº 11. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 33056-33069 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 860, 878 u 856. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 33056-33069 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147069, 147070 o 147071.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 33205-33217 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 33205-33217 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 33205-33217 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 878 u 856. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 33205-33217 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 14707 o 147071.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 33318-33334 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 33318-33334 de la SEC ID Nº 11. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 33318-33334 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 858, 854 u 875. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 33318-33334 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147046, 147049 o 147051.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 33466-33482 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 33466-33482 de la SEC ID Nº 11. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 33466-33482 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 858, 833 u 875. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 33466-33482 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147046, 147047 o 147051.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 33640-33656 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 33640-33656 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 33640-33656 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 858 u 875. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 33640-33656 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147046 o 147051.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 33788-33804 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 33788-33804 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 33788-33804 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 858 u 875. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 33788-33804 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147046 o 147051.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 35437-35449 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 35437-35449 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 35437-35449 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 840 u 861. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 35437-35449 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147059 o 147060.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 40353-40373 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 40353-40373 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 40353-40373 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 879 u 881. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 40353-40373 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147061 o 147043.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 42527-42541 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 42527-42541 de la SEC ID Nº 11. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 42527-42541 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 885, 870 u 844. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 42527-42541 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147031, 147032 o 147034.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 42675-42689 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 42675-42689 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 42675-42689 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 885, 870, 836 u 844. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 42675-42689 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147031, 147032, 147033 o 147034.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 46313-46328 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 46313-46328 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 46313-46328 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 839, 830, 840 u 879. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 46313-46328 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147057, 147058, 147059 o 147061.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 46461-46476 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 46461-46476 de la SEC ID Nº 11. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 46461-46476 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 839, 840 u 879. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 46461-46476 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147057, 147059 o 147061.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 48369-48381 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 48369-48381 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 48369-48381 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 842 u 845. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 48369-48381 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147073 o 147074.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 48714-48726 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 48714-48726 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 48714-48726 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 843 u 846. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 48714-48726 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147027 o 147028.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 49050-49062 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 49050-49062 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 49050-49062 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 876 u 838. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 49050-49062 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147067 o 147068.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 49672-49684 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 49672-49684 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 49672-49684 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 842 u 845. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 49672-49684 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147073 o 147074.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 52292-52304 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 52292-52304 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 52292-52304 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 849 u 863. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 52292-52304 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147036 o 147037.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 52438-52450 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 52438-52450 de la SEC ID Nº 11. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a 52438-53450 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 849 u 863. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 52438-52450 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147036 o 147037.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 53445-53458 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 53445-53458 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 53445-53458 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 866, 881 u 869. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 53445-53458 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147042, 147043 o 147044.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 53591-53604 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 53591-53604 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 53591-53604 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 866, 874, 881, 885 u 869. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 53591-53604 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147042, 147030, 147043, 147031 o 147044.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 53738-53750 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 53738-53750 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 53738-53750 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 874 u 885. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 53738-53750 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147030 o 147031.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 53783-53795 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 53783-53795 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 53783-53795 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 864 u 834. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 53783-53795 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147040 o 147041.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 55008-55020 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 55008-55020 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 55008-55020 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 866 u 881. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 55008-55020 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147042 o 147043.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 55154-55166 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 55154-55166 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 55154-55166 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 866 u 881. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 55154-55166 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147042 o 147043.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 55682-55695 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 55682-55695 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 55682-55695 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 877 u 882. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 55682-55695 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147019 o 147021.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 56275-56293 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 56275-56293 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 56275-56293 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 871, 884, 887, 830, 840.861 u 879. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 56275-56293 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147054, 147055, 147056, 147058, 147059, 147060 o 147061.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 56418-56439 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 56418-56439 de la SEC ID Nº 11. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 56418-56439 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 875, 829, 871, 884, 887, 839, 830 u 879. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 56418-56439 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147051, 147053, 147054, 147055, 147056, 147057, 147058 o 147061.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 57264-57276 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 57264-57276 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 57264-57276 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 883 u 858. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 57264-57276 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147045 o 147046.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 61276-61293 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 61276-61293 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 61276-61293 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 856, 847, 849, 863, 855, 850 u 864. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 61276-61293 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147071, 147035, 147036, 147037, 147038, 147039 o 147040.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 61257-61320 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 61257-61320 de la SEC ID Nº 11. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 61257-61320 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 881, 856, 847, 849, 863, 855, 850, 864 u 886. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 61257-61320 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147043, 147071, 147035, 147036, 147037, 147038, 147039, 147040 o 147071.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 61422-61439 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 61422-61439 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 61422-61439 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 844, 847, 849, 863, 855 u 864. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 61422-61439 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147034, 147035, 147036, 147037, 147038, o 147040.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 61422-61466 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 61422-61466 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 61422-61466 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 844, 847, 849, 863, 855, 864 u 856. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 61422-61466 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147034, 147035, 147036, 147037, 147038, 147040 o 147071.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 63065-63078 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 63065-63078 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 63065-63078 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 851 u 838. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 63065-63078 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147066 o 147068.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 63207-63222 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 63207-63222 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 63207-63222 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 841 u 851. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 63207-63222 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147062 o 147066.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 64538-64550 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 64538-64550 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 64538-64550 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 849 u 863. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 64538-64550 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147036 o 147037.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 64864-64876 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 64864-64876 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 64864-64876 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 851 u 876. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 64864-64876 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147066 o 147067.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 65010-65028 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 65010-65028 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 65010-65028 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 851, 876 u 883. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 65010-65028 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147066, 147067 o 147045.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 65163-65175 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 65163-65175 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 65163-65175 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 883 u 858. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 65163-65175 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147045 o 147046.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 65408-65422 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 65408-65422 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 65408-65422 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 883 u 856. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 65408-65422 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147068 o 147071.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 65549-65568 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 65549-65568 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 65549-65568 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 860, 838 u 856. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 65549-65568 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147069, 147068 o 147071.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 67741-67754 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 67741-67754 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 67741-67754 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 848, 874 u 885. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 67741-67754 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147029, 147030 o 147031.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 67886-67900 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 67886-67900 de la SEC ID Nº 11. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 67886-67900 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 846, 848, 874 u 885. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 67886-67900 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147028, 147029, 147030 o 147031.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 68867-68880 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 68867-68880 de la SEC ID Nº 11. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 68867-68880 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 881, 869 u 883. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 68867-68880 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147043, 147044 o 147045.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 69013-69532 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 69013-69532 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 69013-69532 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 881, 869, 883, 858, 856, 832 o 842. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 69013-69532 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147043, 147044, 147045, 147046, 147071, 147072 o 147073.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 69665-69880 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 69665-69880 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 69665-69880 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 856, 832, 842, 845 u 851. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 69665-69880 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147071, 147072, 147073, 147074 o 147066.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 70611-70630 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 70611-70630 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 70611-70630 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 859, 841, 862, 880, 857 u 851. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 70611-70630 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147023, 147062, 147063, 147064, 147065, o 147066.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 70762-70776 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 70762-70776 de la SEC ID Nº 11. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 70762-70776 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 862, 880, 857 u 851. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 70762-70776 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147063, 147064, 147065 o 147066.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 70998-71010 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 70998-71010 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 70998-71010 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 832 u 842. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 70998-71010 de la SEC ID Nº 11 se selecciona del Nº Isis 147072 o 147073.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 71144-714364 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 71144-714364 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 71144-714364 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 832, 842, 845, 863, 855 u 850. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 71144-714364 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147072, 147073, 147074, 147037, 147038, o 147039.
En ciertas realizaciones, una región diana es los nucleótidos 71497-71652 de la SEC ID Nº 11. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 71497-71652 de la SEC ID Nº 11. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 71497-71652 comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada de las SEC ID Nº 863, 855, 850 u 879. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a los nucleótidos 71497-71652 de la SEC ID Nº 11 se selecciona de los Nº Isis 147037, 147038, 147039 o 147061.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B tienen una longitud de 8 a 16, preferentemente de 9 a 15, más preferentemente de 9 a 14, más preferentemente de 10 a 14 nucleótidos de longitud. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B tienen una longitud de 9 a 14 nucleótidos. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B tienen una longitud de 10 a 14 nucleótidos. En ciertas realizaciones, dichos compuestos antisentido cortos son oligonucleotídicos antisentido cortos.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B son gápmeros cortos. En ciertas de dichas realizaciones, los gápmeros cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B comprenden al menos una modificación de alta afinidad en una o más alas del compuesto. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B comprenden de 1 a 3 modificaciones de alta afinidad en cada ala. En ciertas de dichas realizaciones, los nucleósidos o nucleótidos del ala comprenden una modificación en 2’. En ciertas realizaciones, los monómeros del ala son BNA. En ciertas de dichas realizaciones, los monómeros del ala se seleccionan de α-L-metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA, ß-D-metilenoxi(4’-CH2-O-2’) BNA, etilenoxi (4’-(CH2)2-O-2’)BNA, aminooxi(4’-CH2-ON(R)-2’) BNA y oxiamino (4’-CH2-N(R)-O-2’) BNA. En ciertas realizaciones, los monómeros de un ala comprenden un sustituyente en la posición 2’ seleccionado de alilo, amino, azido, tio, O-alilo, O-alquilo C1-C10, -OCF3 , O-(CH2)2-O-CH3, 2’-O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), y O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), en las que cada Rm y Rn es, de forma independiente, H o alquilo C1-C10 sustituido o insustituido. En ciertas realizaciones, los monómeros de un ala son nucleótidos 2’MOE.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B comprenden un hueco entre el ala en 5’ y el ala en 3’. En ciertas realizaciones, el hueco comprende cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece o catorce monómeros. En ciertas realizaciones, los monómeros del hueco son desoxirribonucleótidos no modificados. En ciertas realizaciones, los monómeros del hueco son ribonucleótidos no modificados. En ciertas realizaciones, las modificaciones del hueco (si las hubiera) tienen como resultado un compuesto antisentido que, cuando se une a su ácido nucleico diana, soporta la escisión por una RNasa, incluida, entre otras, la RNasa H.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B tienen enlaces monoméricos. En ciertas de dichas realizaciones, dichos enlaces son todos enlaces fosforotioato. En ciertas realizaciones, los enlaces son todos enlaces fosfodiéster. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B tienen esqueletos mixtos.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B tienen una longitud de 8 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B tienen una longitud de 9 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B tienen una longitud de 10 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B tienen una longitud de 11 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B tienen una longitud de monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B tienen una longitud de 13 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B tienen una longitud de 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B tienen una longitud de 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B tienen una longitud de 16 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B comprenden de 9 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B comprenden de 10 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B comprenden de 12 a 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B comprenden de 12 a 14 nucleótidos o nucleósidos.
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan procedimientos de modulación de la expresión de PTP1B. En ciertas realizaciones, dichos procedimientos comprenden el uso de uno o más compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B, en el que el compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B tiene una longitud de aproximadamente 8 a aproximadamente 16, preferentemente de 9 a 15, más preferentemente de 9 a 14, más preferentemente de 10 a 14 monómeros (es decir, de aproximadamente 8 a aproximadamente 16 monómeros unidos). Un experto en la técnica apreciará que esto comprende procedimientos de modulación de la expresión de PTP1B usando uno
o más compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B de de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16 monómeros.
En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de PTP1B comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B que tiene una longitud de 8 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de PTP1B comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B que tiene una longitud de 9 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de PTP1B comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B que tiene una longitud de 10 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de PTP1B comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B que tiene una longitud de 11 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de PTP1B comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B que tiene una longitud de 12 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de PTP1B comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B que tiene una longitud de 13 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de PTP1B comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B que tiene una longitud de 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de PTP1B comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B que tiene una longitud de 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de PTP1B comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B que tiene una longitud de 16 monómeros.
En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de PTP1B comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B que comprende de 9 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de PTP1B comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B que comprende de 10 a 15 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de PTP1B comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTP1B que comprende de 12 a 14 monómeros. En ciertas realizaciones, los procedimientos de modulación de la expresión de PTP1B comprenden el uso de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTB1B que comprende de 12 o 14 nucleótidos o nucleósidos.
10. PTEN
En ciertas realizaciones, en el presente documento se divulgan compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico que codifica PTEN. En ciertas realizaciones, dichos compuestos se usan para modular la expresión de PTEN en las células. En ciertas de dichas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTEN se administran a un animal. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTEN son útiles para estudiar PTEN, para estudiar ciertas nucleasas y/o para evaluar la actividad antisentido. En ciertas de dichas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a ácidos nucleicos de PTEN son útiles para evaluar ciertos motivos y/o modificaciones químicas. En ciertas realizaciones, la administración de un compuesto antisentido corto dirigido a un ácido nucleico de PTEN a un animal tiene como resultado un cambio fenotípico mensurable.
Los compuestos antisentido cortos dirigidos a PTEN pueden tener una cualquiera o más propiedades o características de los compuestos antisentido cortos en general descritos en el presente documento. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTEN tienen un motivo (ala-hueco desoxi-ala) seleccionado de 1-12-1, 1-1-10-2, 2-10-1-1, 3-10-3, 2-10-3, 2-10-2, 1-10-1,1-10-2, 3-8-3, 2-8-2, 1-8-1, 3-6-3 o 1-6-1, más
5 preferentemente 1-10-1, 2-10-2, 3-10-3 y 1-9-2
Ciertos compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTEN
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos están dirigidos a un ácido nucleico de PTEN que tiene la secuencia de número de registro en GENBANK® NM 000314.4, incorporada en el presente documento como SEC ID Nº
14. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos están dirigidos a un ácido nucleico de PTEN que tiene la
10 secuencia de nucleótidos 8063255 a 8167140 de número de registro en GENBANK® NT 033890.3, incorporada en el presente documento como SEC ID Nº 15. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 14 es al menos un 90% complementario a la SEC ID Nº 14. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 14 es al menos un 95% complementario a la SEC ID Nº 14. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 15 ES 100% complementario a la SEC ID Nº 15. En
15 ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 15 es al menos un 90% complementario a la SEC ID Nº 15. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 15 es al menos un 95% complementario a la SEC ID Nº 15. En ciertas de dichas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 15 ES 100% complementario a la SEC ID Nº 15.
En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 14 comprende una secuencia de
20 nucleótidos seleccionada de las secuencias de nucleótidos indicadas en las Tablas 20 y 21. En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido corto dirigido a la SEC ID Nº 15 comprende una secuencia nucleotídica seleccionada de las secuencias nucleotídicas indicadas en las Tablas 22 y 23.
Cada secuencia nucleotídica indicada en las Tablas 20, 21, 22 y 23 es independiente de cualquier modificación de un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica. Como tales, los compuestos antisentido cortos que
25 comprenden una secuencia de nucleótidos tal como se indica en las Tablas 20, 21, 22 y 23 pueden comprender, de forma independiente, una o más modificaciones en un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica. Los compuestos antisentido descritos por el Número Isis (Nº Isis) indican una combinación de secuencia de bases nucleotídicas y una o más modificaciones en un resto azúcar, un enlace internucleosídico o una base nucleotídica.
La Tabla 20 ilustra compuestos antisentido cortos que son 100% complementarios a la SEC ID Nº 14. La Tabla 22 ilustra
30 compuestos antisentido cortos que son 100% complementarios a la SEC ID Nº 15. La columna denominada "motivo gápmero" indica el motivo ala-hueco-ala de cada compuesto antisentido corto. El segmento hueco comprende 2'desoxinucleótidos y cada nucleótido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado en 2'. El azúcar modificado en 2' concreto también está indicado en la columna “motivo gápmero”. Por ejemplo, ‘2-10-2 MOE’ significa un motivo gápmero 2-10-2, en el que un segmento de hueco de diez 2’-desoxinucleótidos está flanqueado por segmentos ala
35 de dos nucleótidos, en los que los nucleótidos de los segmentos ala son nucleótidos 2’-MOE. Los enlaces internucleosídicos son fosforotioato. Los compuestos antisentido cortos comprenden 5-metilcitidina en lugar de citosina no modificada, a menos que “citosina no modificada” esté en la lista en la columna del motivo gápmero, en cuyo caso las citosinas indicadas son citosinas no modificadas. Por ejemplo, “5-mC sólo en hueco” indica que el segmento de hueco tiene 5-metilcitosinas, mientras que los segmentos ala tienen citosinas no modificadas.
40 Los nucleótidos modificados en 2’ y sus abreviaturas incluyen: 2’-O-metoxietilo (MOE); 2’-O-metilo (OMe); 2’-O-(2,2,3,3,3pentafluoropropilo) (PentaF); 2’-O-[(2-metoxi)etilo]-4’-tio(2’-MOE-4’-tio); (R)-CMOE-BNA. Como se ilustra en las Tablas 20 y 22, un ala puede comprender monómeros que comprenden más de un tipo de sustituyente en 2’. Por ejemplo, -2-10-2 MOE/PentaF/MOE indica un nucleótido modificado con MOE, seguido por dos nucleótidos modificados por PentaF, seguido de un hueco de diez desoxinucleótidos, seguido de dos nucleótidos modificados con PentaF. Por ejemplo, -1-10
45 22’-(butil-acetomido)-palmitamida Metilenoxi BNA/Metilenoxi BNA indica que el nucleótido más en 5’ es 2’(butilacetomida)-palmitamida, el segundo nucleótido es nucleótido metilenoxi BNA y el ala en 3' es metilenoxi BNA. A menos que se indique lo contrario, las citosinas son 5-metilcitosinas y los enlaces internucleosídicos son fosforotioato.

Tabla 20: Compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 14
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
390092
5530 5541 AGAATGAGACTT 1-10-1 MOE 1514
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
390091
5435 5446 TGAGGCATTATC 1-10-1 MOE 1522
390090
5346 5357 AGAGTATCTGAA 1-10-1 MOE 1227
390088
5162 5173 CACATTAACAGT 1-10-1 MOE 1511
390087
5126 5137 GTGGCAACCACA 1-10-1 MOE 1501
390085
5031 5042 ATTTGATGCTGC 1-10-1 MOE 1505
390084
4982 4993 CAAAGAATGGTG 1-10-1 MOE 1215
390082
4910 4921 AGGACTTGGGAT 1-10-1 MOE 1503
390080
4833 4844 TGCTGCACATCC 1-10-1 MOE 1150
392067
4832 4845 CTGCTGCACATCCA 2-10-2 Metilenoxi BNA citosinas no modificadas en el hueco 1510
390078
4714 4725 CTTTCAGTCATA 1-10-1 MOE 1520
390077
4693 4704 GTCAAATTCTAT 1-10-1 MOE 1252
390076
4599 4610 TTCCAATGACTA 1-10-1 MOE 1506
390075
4576 4587 GTAAGCAAGGCT 1-10-1 MOE #N/A
390074
4533 4544 ACCCTCATTCAG 1-10-1 MOE 1513
390068
4191 4202 GTAAATCCTAAG 1-10-1 MOE 1515
390064
4001 4012 ACCACAGCTAGT 1-10-1 MOE 1498
390063
3977 3988 CACCAATAAGTT 1-10-1 MOE 1219
390058
3828 3839 AGTAGTTGTACT 1-10-1 MOE 1192
390056
3793 3804 GGGCATATCAAA 1-10-1 MOE 1521
390054
3705 3716 AACACTGCACAT 1-10-1 MOE 1493
390052
3623 3634 GACAATTTCTAC 1-10-1 MOE 1492
390050
3503 3514 GTATTCAAGTAA 1-10-1 MOE 1140
390049
3479 3490 GTTAATGACATT 1-10-1 MOE 1491
390047
3428 3439 TGTGTAAGGTCA 1-10-1 MOE 1490
390041
3175 3186 TTAGCACTGGCC 1-10-1 MOE 1489
398076
3171 3182 CACTGGCCTTGA 1-10-1 MOE 1488
398009
3170 3183 GCACTGGCCTTGAT 2-10-2 MOE 1487
398075
3111 3122 AAATCATTGTCA 1-10-1 MOE 1233
398008
3110 3123 TAAATCATTGTCAA 2-10-2 MOE 1486
398074
2913 2924 GCACCAATATGC 1-10-1 MOE 1248
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
398007
2912 2925 AGCACCAATATGCT 2-10-2 MOE 1247
398073
2681 2692 TTAGCCAACTGC 1-10-1 MOE 1485
398006
2680 2693 CTTAGCCAACTGCA 2-10-2 MOE 1484
390033
2679 2690 AGCCAACTGCAA 1-10-1 MOE 1483
398072
2671 2682 GCAAACTTATCT 1-10-1 MOE 1482
398005
2670 2683 TGCAAACTTATCTG 2-10-2 MOE 1481
390030
2534 2545 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
398071
2533 2544 TTATAAAACTGG 1-10-1 MOE 1480
398004
2532 2545 TTTATAAAACTGGA 2-10-2 MOE 1479
390029
2510 2521 AAAGTGCCATCT 1-10-1 MOE 1478
390028
2491 2502 TCCTAATTGAAT 1-10-1 MOE 1477
398070
2481 2492 ATTTTAAATGTC 1-10-1 MOE 1476
398003
2480 2493 AATTTTAAATGTCC 2-10-2 MOE 1475
390027
2455 2466 AGGTATATACAT 1-10-1 MOE 1206
398069
2451 2462 ATATACATGACA 1-10-1 MOE 1474
398002
2450 2463 TATATACATGACAC 2-10-2 MOE 1473
398068
2440 2451 ACAGCTACACAA 1-10-1 MOE 1472
398001
2439 2452 CACAGCTACACAAC 2-10-2 MOE 1471
390026
2438 2449 AGCTACACAACC 1-10-1 MOE 1470
390025
2406 2417 GTGTCAAAACCC 1-10-1 MOE 1211
398067
2405 2416 TGTCAAAACCCT 1-10-1 MOE 1210
398000
2404 2417 GTGTCAAAACCCTG 2-10-2 MOE 1469
398066
2372 2383 AGATTGGTCAGG 1-10-1 MOE 1468
397999
2371 2384 AAGATTGGTCAGGA 2-10-2 MOE 1467
398065
2349 2360 GTTCCTATAACT 1-10-1 MOE 1466
397998
2348 2361 TGTTCCTATAACTG 2-10-2 MOE 1465
398064
2331 2342 CTGACACAATGT 1-10-1 MOE 1464
397997
2330 2343 TCTGACACAATGTC 2-10-2 MOE 1463
398063
2321 2332 GTCCTATTGCCA 1-10-1 MOE 1205
397996
2320 2333 TGTCCTATTGCCAT 2-10-2 MOE 1462
390022
2286 2297 CAGTTTATTCAA 1-10-1 MOE 1142
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
336221
2230 2243 TCAGACTTTTGTAA 3-8-3 MOE 1461
336220
2224 2237 TTTTGTAATTTGTG 3-8-3 MOE 1460
336219
2209 2222 ATGCTGATCTTCAT 3-8-3 MOE 1459
390021
2203 2214 CTTCATCAAAAG 1-10-1 MOE 1458
336218
2201 2214 CTTCATCAAAAGGT 3-8-3 MOE 1457
389779
2201 2212 TCATCAAAAGGT 1-9-2 MOE 1176
389979
2201 2212 TCATCAAAAGGT 1-10-1 MOE 1176
397995
2200 2213 TTCATCAAAAGGTT 2-10-2 MOE 1456
336217
2192 2205 AAGGTTCATTCTCT 3-8-3 MOE 1455
390020
2183 2194 TCTGGATCAGAG 1-10-1 MOE 1149
336216
2182 2195 CTCTGGATCAGAGT 3-8-3 MOE 1454
336215
2169 2182 TCAGTGGTGTCAGA 3-8-3 MOE 1453
398062
2166 2177 GGTGTCAGAATA 1-10-1 MOE 1255
397994
2165 2178 TGGTGTCAGAATAT 2-10-2 MOE 1452
390019
2163 2174 GTCAGAATATCT 1-10-1 MOE 1173
336214
2157 2170 GAATATCTATAATG 3-8-3 MOE 1573
398061
2151 2162 ATAATGATCAGG 1-10-1 MOE 1451
397993
2150 2163 TATAATGATCAGGT 2-10-2 MOE 1450
336213
2146 2159 ATGATCAGGTTCAT 3-8-3 MOE 1449
389778
2144 2155 TCAGGTTCATTG 1-9-2 MOE 1448
389978
2144 2155 TCAGGTTCATTG 1-10-1 MOE 1448
398060
2137 2148 CATTGTCACTAA 1-10-1 MOE 1447
336212
2136 2149 TCATTGTCACTAAC 3-8-3 MOE 1446
397992
2136 2149 TCATTGTCACTAAC 2-10-2 MOE 1446
336211
2112 2125 ACAGAAGTTGAACT 3-8-3 MOE 1445
390017
2111 2122 GAAGTTGAACTG 1-10-1 MOE 1444
398059
2108 2119 GTTGAACTGCTA 1-10-1 MOE 1443
397991
2107 2120 AGTTGAACTGCTAG 2-10-2 MOE 1442
336210
2104 2117 TGAACTGCTAGCCT 3-8-3 MOE 1441
335340
2104 2118 TTGAACTGCTAGCCT 1-10-4 MOE 1440
335339
2103 2117 TGAACTGCTAGCCTC 1-10-4 MOE 1439
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
335338
2102 2116 GAACTGCTAGCCTCT 1-10-4 MOE 1438
335337
2101 2115 AACTGCTAGCCTCTG 1-10-4 MOE 1437
335336
2100 2114 ACTGCTAGCCTCTGG 1-10-4 MOE 1436
390430
2099 2111 GCTAGCCTCTGGA 1-10-2 MOE Citosinas no modificadas 1163
390431
2099 2111 GCTAGCCTCTGGA 1-10-2 MOE Citosinas no modificadas C en el ala 9-(aminoetoxi)fenoxazina 1163
390432
2099 2111 GCTAGCCTCTGGA 1-10-2 MOE 1163
390433
2099 2111 GCTAGCCTCTGGA 1-10-2 MOE Citosinas no modificadas Nt 6 es 9-(aminoetoxi)fenoxazina 1163
390434
2099 2111 GCTAGCCTCTGGA 1-10-2 MOE Citosinas no modificadas Nt 7 es 9-(aminoetoxi)fenoxazina 1163
390435
2099 2111 GCTAGCCTCTGGA 1-10-2 MOE Citosinas no modificadas Nt 9 es 9-(aminoetoxi)fenoxazina 1163
335335
2099 2113 CTGCTAGCCTCTGGA 1-10-4 MOE 1435
389777
2098 2109 TAGCCTCTGGAT 1-9-2 MOE 1434
389954
2098 2109 TAGCCTCTGGAT 1-10-1 MOE 1434
335334
2098 2112 TGCTAGCCTCTGGAT 1-10-4 MOE 1433
331429
2097 2110 CTAGCCTCTGGATT 2-10-2 MOE 1431
335349
2097 2110 CTAGCCTCTGGATT 2-10-2 MOE 1431
335367
2097 2110 CTAGCCTCTGGATT 2-10-2 Metilenoxi BNA 1431
335378
2097 2110 CTAGCCTCTGGATT 2-10-2 Metilenoxi BNA 1431
392061
2097 2110 CTAGCCTCTGGATT 2-10-2 Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas en el hueco 1431
383991
2097 2109 TAGCCTCTGGATT 1-10-2 2’-(acetilamino-butil-acetamido)colesterol/MOE 1432
383992
2097 2109 TAGCCTCTGGATT 1-10-2 2’-(acetilamino-butil-acetamido)ácido cólico/MOE 1432
386970
2097 2109 TAGCCTCTGGATT 1-10-2 MOE 1432
390578
2097 2109 TAGCCTCTGGATT 1-10-2 MOE Citosinas no modificadas Las T en las alas son 2-tiotiminas 1432
390614
2097 2109 TAGCCTCTGGATT 1-10-2 PentaF 1432
335333
2097 2111 GCTAGCCTCTGGATT 1-10-4 MOE 1430
386683
2097 2109 TAGCCTCTGGATT 1-10-2 2’-(butilacetamido)-palmitamida/MOE 1432
371975
2096 2110 CTAGCCTCTGGATTT 3-10-2 MOE 1429
335341
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 MOE 1428
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
335350
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 MOE 1428
335368
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 Metilenoxi BNA Enlaces Fosfodiéster en las alas 1428
335379
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 Metilenoxi BNA 1428
383739
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 MOE 5-metilcitosina en el hueco 1428
384071
2096 2,111 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 OMe 5-metilcitosina en el hueco 1428
384073
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 Metilenoxi BNA 5-metilcitosina en el hueco 1428
390576
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 MOE 5-metilcitosina en el hueco T en las alas son 2-tiotiminas 1428
390580
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 MOE Pirimidinas en las alas son 5tiazol Citosinas no modificadas en el hueco 1428
390581
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 MOE Citosinas no modificadas en el hueco 1428
391863
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 MOE Citosinas no modificadas 1428
391864
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas en el hueco 1428
391865
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas 1428
375560
2096 2110 CTAGCCTCTGGATTT 2-10-3 MOE 1429
391172
2096 2110 CTAGCCTCTGGATTT 2-10-2 Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas 1429
391175
2096 2110 CTAGCCTCTGGATTT 2-10-3 Metilenoxi BNA 1429
391449
2096 2110 CTAGCCTCTGGATTT 2-10-3 MOE Citosinas no modificadas 1429
392054
2096 2110 CTAGCCTCTGGATTT 2-10-Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas en el hueco 1429
392055
2096 2110 CTAGCCTCTGGATTT 2-10-3 MOE Citosinas no modificadas en el hueco 1429
362977
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 2-12-2 MOE 1428
386770
2096 2109 TAGCCTCTGGATTT 1-11-2 MOE 1427
390577
2096 2109 TAGCCTCTGGATTT 1-10-3 MOE Citosinas no modificadas T en las alas son 2-tiotiminas 1427
335332
2096 2110 CTAGCCTCTGGATTT 1-10-4 MOE 1429
390579
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 1-1-1-10-3 MOE/4’-tio/2’-O-[(2-metoxi)etil]4’-tio/2’-O-[(2-metoxi)etil]-4’-tio Citosinas no modificadas en las alas Enlaces fosforodiéster en las alas 1428
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
391173
2096 2110 CTAGCCTCTGGATTT 2-10-3 (5’R)-5’-metil-Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas 1429
391174
2096 2110 CTAGCCTCTGGATTT 2-10-3 (5’S)-5’-metil-Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas 1429
390607
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 MOE/pentaF Citosinas no modificadas en el ala 1428
390609
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-2-1 MOE/MOE/pentaF Citosinas no modificadas en el ala 1428
384072
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 1-2-10-3 MOE/pentaF/pentaF Citosinas no modificadas en las alas 1428
390606
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 1-2-10-3 MOE/pentaF/pentaF Citosinas no modificadas en el ala 1428
390608
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 1-2-10-3 MOE/pentaF/pentaF Citosinas no modificadas en el ala 1428
391869
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 1-2-10-3 Metilenoxi BNA / (5’S)-5’-metil-Metilenoxi BNA /(5’S)-5’-metil-Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas 1428
385036
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 1-2-10-3 OMe/2’-O-metil-4’tio/2’-O-metil-4’tio Citosinas no modificadas en el ala 1428
385871
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 1-2-10-3 OMe/ 2’-O-[(2metoxi)etil]-4’-tio/ 2’O-[(2-metoxi)etil]-4’-tio Citosinas no modificadas en el ala 1428
386682
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 1-2-10-3 2’-(butilacetamido)-palmitamida /MOE/MOE 1428
390582
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 1-2-10-3 MOE/2’-O-[(2-metoxi) etil]-4’-tio / 2’-O-[(2-metoxi)etil]-4’-tio Citosinas no modificadas en las alas Enlaces fosfodiéster en las alas 1428
391868
2096 2111 GCTAGCCTCTGGATTT 1-2-10-3(5’R)-5’-meti-Metilenoxi BNA / Metilenoxi BNA/(5’R)-5’-metil-Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas 1428
336209
2095 2108 AGCCTCTGGATTTG 3-8-3 MOE 1425
335331
2095 2109 TAGCCTCTGGATTTG 1-10-4 MOE 1426
335376
2095 2109 TAGCCTCTGGATTTG 1-10-4 Metilenoxi BNA 1426
335377
2095 2109 TAGCCTCTGGATTTG 1-10-4 Metilenoxi BNA Fosfodiéster en el ala en 3’ 1426
335330
2094 2108 AGCCTCTGGATTTGA 1-10-4 MOE 1424
336208
2079 2092 GGCTCCTCTACTGT 3-8-3 MOE 1423
336207
2073 2086 TCTACTGTTTTTGT 3-8-3 MOE 1422
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
336206
2047 2060 CACCTTAAAATTTG 3-8-3 MOE 1518
389776
2046 2057 CTTAAAATTTGG 1-9-2 MOE 1421
389977
2046 2057 CTTAAAATTTGG 1-10-1 MOE 1421
397990
2045 2058 CCTTAAAATTTGGA 2-10-2 MOE 1420
336205
2043 2056 TTAAAATTTGGAGA 3-8-3 MOE 1419
398058
2029 2040 AGTATCGGTTGG 1-10-1 MOE 1418
336204
2028 2041 AAGTATCGGTTGGC 3-8-3 MOE 1417
397989
2028 2041 AAGTATCGGTTGGC 2-10-2 MOE 1417
336203
2002 2015 TGCTTTGTCAAGAT 3-8-3 MOE 1416
389775
2002 2013 CTTTGTCAAGAT 1-9-2 MOE 1177
389976
2002 2013 CTTTGTCAAGAT 1-10-1 MOE 1177
397988
2001 2014 GCTTTGTCAAGATC 2-10-2 MOE 1415
336202
1959 1972 TCCTTGTCATTATC 3-8-3 MOE 1414
389774
1945 1956 CACGCTCTATAC 1-9-2 MOE 1413
389975
1945 1956 CACGCTCTATAC 1-10-1 MOE 1413
336201
1944 1957 GCACGCTCTATACT 3-8-3 MOE 1412
336200
1929 1942 CAAATGCTATCGAT 3-8-3 MOE 1411
389773
1904 1915 AGACTTCCATTT 1-9-2 MOE 1410
389974
1904 1915 AGACTTCCATTT 1-10-1 MOE 1410
336199
1902 1915 AGACTTCCATTTTC 3-8-3 MOE 1409
336198
1884 1897 TTTTCTGAGGTTTC 3-8-3 MOE 1408
398057
1878 1889 GGTTTCCTCTGG 1-10-1 MOE 1407
397987
1877 1890 AGGTTTCCTCTGGT 2-10-2 MOE 1406
336197
1873 1886 TTCCTCTGGTCCTG 3-8-3 MOE 1405
390015
1868 1879 GGTCCTGGTATG 1-10-1 MOE 1404
398056
1865 1876 CCTGGTATGAAG 1-10-1 MOE 1403
336196
1864 1877 TCCTGGTATGAAGA 3-8-3 MOE 1402
397986
1864 1877 TCCTGGTATGAAGA 2-10-2 MOE 1402
398055
1849 1860 TATTTACCCAAA 1-10-1 MOE 1401
397985
1848 1861 GTATTTACCCAAAA 2-10-2 MOE 1400
336195
1847 1860 TATTTACCCAAAAG 3-8-3 MOE 1399
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
389772
1846 1857 TTACCCAAAAGT 1-9-2 MOE 1398
389973
1846 1857 TTACCCAAAAGT 1-10-1 MOE 1398
336194
1838 1851 AAAAGTGAAACATT 3-8-3 MOE 1145
398054
1836 1847 GTGAAACATTTT 1-10-1 MOE 1144
397984
1835 1848 AGTGAAACATTTTG 2-10-2 MOE 1397
336193
1828 1841 CATTTTGTCCTTTT 3-8-3 MOE 1182
336192
1810 1823 CATCTTGTTCTGTT 3-8-3 MOE 1396
336191
1800 1813 TGTTTGTGGAAGAA 3-8-3 MOE 1395
398053
1796 1807 TGGAAGAACTCT 1-10-1 MOE 1394
397983
1795 1808 GTGGAAGAACTCTA 2-10-2 MOE 1393
389771
1794 1805 GAAGAACTCTAC 1-9-2 MOE 1392
389972
1794 1805 GAAGAACTCTAC 1-10-1 MOE 1392
336190
1789 1802 GAACTCTACTTTGA 3-8-3 MOE 1391
336189
1773 1786 TCACCACACACAGG 3-8-3 MOE 1390
336188
1754 1767 GCTGAGGGAACTCA 3-8-3 MOE 1389
398052
1751 1762 GGGAACTCAAAG 1-10-1 MOE 1388
389770
1750 1761 GGAACTCAAAGT 1-9-2 MOE 1386
389971
1750 1761 GGAACTCAAAGT 1-10-1 MOE 1386
397982
1750 1763 AGGGAACTCAAAGT 2-10-2 MOE 1387
336187
1747 1760 GAACTCAAAGTACA 3-8-3 MOE 1385
390012
1745 1756 TCAAAGTACATG 1-10-1 MOE 1384
336186
1688 1701 TCTTCACCTTTAGC 3-8-3 MOE 1383
398051
1684 1695 CCTTTAGCTGGC 1-10-1 MOE 1220
397981
1683 1696 ACCTTTAGCTGGCA 2-10-2 MOE 1382
336185
1677 1690 AGCTGGCAGACCAC 3-8-3 MOE 1381
389769
1676 1687 TGGCAGACCACA 1-9-2 MOE 1249
389970
1676 1687 TGGCAGACCACA 1-10-1 MOE 1249
392060
1675 1688 CTGGCAGACCACAA 2-10-2 Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas en el hueco 1380
398050
1672 1683 AGACCACAAACT 1-10-1 MOE 1379
397980
1671 1684 CAGACCACAAACTG 2-10-2 MOE 1378
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
390011
1658 1669 GGATTGCAAGTT 1-10-1 MOE 1238
336184
1655 1668 GATTGCAAGTTCCG 3-8-3 MOE 1508
336183
1644 1657 CCGCCACTGAACAT 3-8-3 MOE 1377
390010
1643 1654 CCACTGAACATT 1-10-1 MOE 1240
398049
1641 1652 ACTGAACATTGG 1-10-1 MOE 1376
397979
1640 1653 CACTGAACATTGGA 2-10-2 MOE 1375
336182
1633 1646 CATTGGAATAGTTT 3-8-3 MOE 1374
389768
1630 1641 GAATAGTTTCAA 1-9-2 MOE 1373
389969
1630 1641 GAATAGTTTCAA 1-10-1 MOE 1373
398048
1626 1637 AGTTTCAAACAT 1-10-1 MOE 1372
397978
1625 1638 TAGTTTCAAACATC 2-10-2 MOE 1371
336181
1623 1636 GTTTCAAACATCAT 3-8-3 MOE 1370
398047
1614 1625 CATCTTGTGAAA 1-10-1 MOE 1369
336180
1613 1626 TCATCTTGTGAAAC 3-8-3 MOE 1368
390009
1613 1624 ATCTTGTGAAAC 1-10-1 MOE 1175
397977
1613 1626 TCATCTTGTGAAAC 2-10-2 MOE 1368
390007
1563 1574 CAGGTAGCTATA 1-10-1 MOE 1367
336179
1561 1574 CAGGTAGCTATAAT 3-8-3 MOE 1366
336178
1541 1554 CATAGCGCCTCTGA 3-8-3 MOE 1365
336177
1534 1547 CCTCTGACTGGGAA 3-8-3 MOE 1364
389767
1534 1545 TCTGACTGGGAA 1-9-2 MOE 1151
389968
1534 1545 TCTGACTGGGAA 1-10-1 MOE 1151
335344
1503 1516 TCTCTGGTCCTTAC 2-10-2 MOE 1363
335355
1503 1516 TCTCTGGTCCTTAC 2-10-2 MOE Enlace fosfodiéster en las alas 1363
335370
1503 1516 TCTCTGGTCCTTAC 2-10-2 Metilenoxi BNA Enlace fosfodiéster en las alas 1363
335381
1503 1516 TCTCTGGTCCTTAC 2-10-2 Metilenoxi BNA 1363
335411
1503 1516 TCTCTGGTCCTTAC 2-10-2 MOE 3’ C is 9-(aminoetoxi) fenoxazina 1363
335412
1503 1516 TCTCTGGTCCTTAC 2-10-2 MOE C en el ala en 5’ es 9(aminoetoxi)fenoxazina 1363
335413
1503 1516 TCTCTGGTCCTTAC 2-10-2 MOE C en las alas son 9(aminoetoxi)fenoxazina 1363
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
336176
1502 1515 CTCTGGTCCTTACT 3-8-3 MOE 1361
335345
1502 1517 GTCTCTGGTCCTTACT 3-10-3 MOE 1362
335356
1502 1517 GTCTCTGGTCCTTACT 3-10-3 MOE Enlace fosfodiéster en las alas 1362
335371
1502 1517 GTCTCTGGTCCTTACT 3-10-3 Metilenoxi BNA Enlace fosfodiéster en las alas 1362
335382
1502 1517 GTCTCTGGTCCTTACT 3-10-3 Metilenoxi BNA 1362
335414
1502 1517 GTCTCTGGTCCTTACT 3-10-3 MOE C en el ala en 3’ es 9(aminoetoxi)fenoxazina 1362
335415
1502 1517 GTCTCTGGTCCTTACT 3-10-3 MOE C en 5’ el ala es 9(aminoetoxi)fenoxazina 1362
335416
1502 1517 GTCTCTGGTCCTTACT 3-10-3 MOE C en las alas son 9(aminoetoxi)fenoxazina 1362
336175
1495 1508 CCTTACTTCCCCAT 3-8-3 MOE 1360
336174
1472 1485 GGGCCTCTTGTGCC 3-8-3 MOE 1359
336173
1465 1478 TTGTGCCTTTAAAA 3-8-3 MOE 1358
398046
1465 1476 GTGCCTTTAAAA 1-10-1 MOE 1199
389766
1464 1475 TGCCTTTAAAAA 1-9-2 MOE 1217
389967
1464 1475 TGCCTTTAAAAA 1-10-1 MOE 1217
397976
1464 1477 TGTGCCTTTAAAAA 2-10-2 MOE 1357
336172
1437 1450 AATAAATATGCACA 3-8-3 MOE 1356
398045
1423 1434 TCATTACACCAG 1-10-1 MOE 1355
336171
1422 1435 ATCATTACACCAGT 3-8-3 MOE 1354
389765
1422 1433 CATTACACCAGT 1-9-2 MOE 1353
389966
1422 1433 CATTACACCAGT 1-10-1 MOE 1353
397975
1422 1435 ATCATTACACCAGT 2-10-2 MOE 1354
390005
1400 1411 CCAGCTTTACAG 1-10-1 MOE 1352
336170
1392 1405 TTACAGTGAATTGC 3-8-3 MOE 1351
398044
1382 1393 GCTGCAACATGA 1-10-1 MOE 1350
336169
1381 1394 TGCTGCAACATGAT 3-8-3 MOE 1349
389764
1381 1392 CTGCAACATGAT 1-9-2 MOE 1018
389965
1381 1392 CTGCAACATGAT 1-10-1 MOE 1018
397974
1381 1394 TGCTGCAACATGAT 2-10-2 MOE 1349
336168
1362 1375 TCTTCACTTAGCCA 3-8-3 MOE 1348
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
390004
1362 1373 TTCACTTAGCCA 1-10-1 MOE 1208
336167
1353 1366 AGCCATTGGTCAAG 3-8-3 MOE 1347
398043
1345 1356 CAAGATCTTCAC 1-10-1 MOE 1244
336166
1344 1357 TCAAGATCTTCACA 3-8-3 MOE 1346
390003
1344 1355 AAGATCTTCACA 1-10-1 MOE 1243
397973
1344 1357 TCAAGATCTTCACA 2-10-2 MOE 1346
336165
1329 1342 AAGGGTTTGATAAG 3-8-3 MOE 1345
390002
1322 1333 ATAAGTTCTAGC 1-10-1 MOE 1344
336164
1318 1331 AAGTTCTAGCTGTG 3-8-3 MOE 1343
398042
1305 1316 TGGGTTATGGTC 1-10-1 MOE 1214
336163
1304 1317 GTGGGTTATGGTCT 3-8-3 MOE 1342
397972
1304 1317 GTGGGTTATGGTCT 2-10-2 MOE 1342
398089
1298 1309 TGGTCTTCAAAA 1-10-1 MOE 1341
389763
1296 1307 GTCTTCAAAAGG 1-9-2 MOE 1197
389964
1296 1307 GTCTTCAAAAGG 1-10-1 MOE 1197
398041
1294 1305 CTTCAAAAGGAT 1-10-1 MOE 1196
336162
1293 1306 TCTTCAAAAGGATA 3-8-3 MOE 1340
397971
1293 1306 TCTTCAAAAGGATA 2-10-2 MOE 1340
398040
1279 1290 GTGCAACTCTGC 1-10-1 MOE 1236
336161
1278 1291 TGTGCAACTCTGCA 3-8-3 MOE 1235
397970
1278 1291 TGTGCAACTCTGCA 2-10-2 MOE 1235
398039
1264 1275 TAAATTTGGCGG 1-10-1 MOE 1339
397969
1263 1276 TTAAATTTGGCGGT 2-10-2 MOE 1338
336160
1261 1274 AAATTTGGCGGTGT 3-8-3 MOE 1337
336159
1253 1266 CGGTGTCATAATGT 3-8-3 MOE 1336
398038
1252 1263 TGTCATAATGTC 1-10-1 MOE 1200
390000
1251 1262 GTCATAATGTCT 1-10-1 MOE 1194
397968
1251 1264 GTGTCATAATGTCT 2-10-2 MOE 1195
336158
1227 1240 AGATTGTATATCTT 3-8-3 MOE 1335
389762
1220 1231 ATCTTGTAATGG 1-9-2 MOE 1334
389963
1220 1231 ATCTTGTAATGG 1-10-1 MOE 1334
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
336157
1215 1228 TTGTAATGGTTTTT 3-8-3 MOE 1333
336156
1202 1215 TATGCTTTGAATCC 3-8-3 MOE 1332
389998
1199 1210 TTTGAATCCAAA 1-10-1 MOE 1331
397967
1198 1211 CTTTGAATCCAAAA 2-10-2 MOE 1330
336155
1190 1203 CCAAAAACCTTACT 3-8-3 MOE 1500
336154
1176 1189 ACATCATCAATATT 3-8-3 MOE 1329
389761
1171 1182 CAATATTGTTCC 1-9-2 MOE 1328
389962
1171 1182 CAATATTGTTCC 1-10-1 MOE 1328
398037
1170 1181 AATATTGTTCCT 1-10-1 MOE 1202
397966
1169 1182 CAATATTGTTCCTG 2-10-2 MOE 1327
336153
1164 1177 TTGTTCCTGTATAC 3-8-3 MOE 1326
336152
1149 1162 CCTTCAAGTCTTTC 3-8-3 MOE 1325
389996
1141 1152 TTTCTGCAGGAA 1-10-1 MOE 1165
336151
1138 1151 TTCTGCAGGAAATC 3-8-3 MOE 1324
398036
1138 1149 CTGCAGGAAATC 1-10-1 MOE 1323
397965
1137 1150 TCTGCAGGAAATCC 2-10-2 MOE 1322
389760
1129 1140 ATCCCATAGCAA 1-9-2 MOE 1321
389961
1129 1140 ATCCCATAGCAA 1-10-1 MOE 1321
398035
1126 1137 CCATAGCAATAA 1-10-1 MOE 1320
336150
1125 1138 CCCATAGCAATAAT 3-8-3 MOE 1319
397964
1125 1138 CCCATAGCAATAAT 2-10-2 MOE 1319
336149
1110 1123 TTTGGATAAATATA 3-8-3 MOE 1496
389995
1106 1117 TAAATATAGGTC 1-10-1 MOE 1516
336148
1100 1113 TATAGGTCAAGTCT 3-8-3 MOE 1495
398034
1099 1110 AGGTCAAGTCTA 1-10-1 MOE 1300
397963
1098 1111 TAGGTCAAGTCTAA 2-10-2 MOE 1494
389994
1095 1106 CAAGTCTAAGTC 1-10-1 MOE 1299
336147
1090 1103 GTCTAAGTCGAATC 3-8-3 MOE 1298
389993
1083 1094 GAATCCATCCTC 1-10-1 MOE 1297
336146
1080 1093 AATCCATCCTCTTG 3-8-3 MOE 1296
398033
1077 1088 ATCCTCTTGATA 1-10-1 MOE 1198
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
397962
1076 1089 CATCCTCTTGATAT 2-10-2 MOE 1295
336145
1070 1083 CTTGATATCTCCTT 3-8-3 MOE 1294
336144
1057 1070 TTTGTTTCTGCTAA 3-8-3 MOE 1293
389759
1056 1067 GTTTCTGCTAAC 1-9-2 MOE 1292
389960
1056 1067 GTTTCTGCTAAC 1-10-1 MOE 1292
392059
1055 1068 TGTTTCTGCTAACG 2-10-2 Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas en el hueco 1291
336143
1044 1057 ACGATCTCTTTGAT 3-8-3 MOE 1290
398032
1038 1049 TTTGATGATGGC 1-10-1 MOE 1222
397961
1037 1050 CTTTGATGATGGCT 2-10-2 MOE 1289
389992
1036 1047 TGATGATGGCTG 1-10-1 MOE 1288
336142
1032 1045 ATGATGGCTGTCAT 3-8-3 MOE 1287
389991
1021 1032 TGTCTGGGAGCC 1-10-1 MOE 1286
392058
1020 1033 ATGTCTGGGAGCCT 2-10-2 Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas en el hueco 1285
397960
1020 1033 ATGTCTGGGAGCCT 2-10-2 MOE 1285
389990
1007 1018 TGGCTGAAGAAA 1-10-1 MOE 1284
397959
1006 1019 GTGGCTGAAGAAAA 2-10-2 MOE 1283
398031
987 998 GAGAGATGGCAG 1-10-1 MOE 1282
397958
986 999 AGAGAGATGGCAGA 2-10-2 MOE 1281
389758
983 994 GATGGCAGAAGC 1-9-2 MOE 1280
389959
983 994 GATGGCAGAAGC 1-10-1 MOE 1280
398030
976 987 GAAGCTGCTGGT 1-10-1 MOE 1143
397957
975 988 AGAAGCTGCTGGTG 2-10-2 MOE 1279
389989
953 964 TTCTGCAGGATG 1-10-1 MOE 1170
389757
941 952 GAAATGGCTCTG 1-9-2 MOE 1278
389958
941 952 GAAATGGCTCTG 1-10-1 MOE 1278
397956
940 953 GGAAATGGCTCTGG 2-10-2 MOE 1277
398029
931 942 TGGACTTGGCGG 1-10-1 MOE 1186
397955
930 943 CTGGACTTGGCGGT 2-10-2 MOE 1276
398028
914 925 GATGCCCCTCGC 1-10-1 MOE 1275
397954
913 926 TGATGCCCCTCGCT 2-10-2 MOE 1274
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
398027
883 894 GGACCGCAGCCG 1-10-1 MOE 1155
397953
882 895 TGGACCGCAGCCGG 2-10-2 MOE 1273
389756
874 885 CCGGGTAATGGC 1-9-2 MOE 1272
389957
874 885 CCGGGTAATGGC 1-10-1 MOE 1272
398026
867 878 ATGGCTGCTGCG 1-10-1 MOE 1160
397952
866 879 AATGGCTGCTGCGG 2-10-2 MOE 1271
389987
848 859 CTGGATGGTTGC 1-10-1 MOE 1270
389755
806 817 AGAGGCCTGGCA 1-9-2 MOE 1269
389956
806 817 AGAGGCCTGGCA 1-10-1 MOE 1269
389985
584 595 ATGGTGACAGGC 1-10-1 MOE 1268
398025
581 592 GTGACAGGCGAC 1-10-1 MOE 1267
397951
580 593 GGTGACAGGCGACT 2-10-2 MOE 1266
389754
312 323 TGCTCACAGGCG 1-9-2 MOE 1158
389955
312 323 TGCTCACAGGCG 1-10-1 MOE 1158
398024
231 242 CAGCGGCTCAAC 1-10-1 MOE 1265
397950
230 243 ACAGCGGCTCAACT 2-10-2 MOE 1264
389982
205 216 CATGGCTGCAGC 1-10-1 MOE 1161
392056
204 217 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 Metilenoxi BNA 1263
394424
204 217 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 MOE 1263
396007
204 217 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 (R)-CMOE BNA Citosinas no modificadas 1263
396008
204 217 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 (S)-CMOE BNA Citosinas no modificadas 1263
396009
204 217 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 α-L-metilenoxi BNA Citosinas no modificadas 1263
396566
204 217 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 Oxiamino BNA Citosinas no modificadas 1263
396567
204 217 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 N-Metil-Oxiamino BNA Citosinas no modificadas 1263
396568
204 217 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 (6R)-6-Metil Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas 1263
397913
204 217 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 OMe Citosinas no modificadas en el hueco 1263
401974
204 217 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 OMe Citosinas no modificadas 1263
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
403737
204 217 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 Metilenoxi BNA 5-tiazolo bases nucleotídicas en las alas 1263
404121
204 217 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 Metilenoxi BNA 5-metilcitosina en los huecos en 3’ Terminal THF fosforotioato 1263
404228
204 217 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 Metilenoxi BNA 5-metilcitosina en los huecos en 5’-terminal inverso abásico 1263
396024
204 217 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 (6’S)-6’-metil-Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas 1263
396569
204 217 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 (5’S)-5’-metil-Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas 1263
396577
204 217 TCATGGCTGCAGCT 2-10-1-1 Metilenoxi BNA/ Metilenoxi BNA /2’-(butilacetamido)-palmitamida/ Citosinas no modificadas en el hueco 1263
396576
204 217 TCATGGCTGCAGCT 1-1-10-2 2’-(butilacetamido)-palmitamida/ Metilenoxi BNA / Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas en el hueco 1263
398023
191 202 CCGAGAGGAGAG 1-10-1 MOE 1262
397949
190 203 TCCGAGAGGAGAGA 2-10-2 MOE 1261
398022
126 137 AAGAGTCCCGCC 1-10-1 MOE 1260
397948
125 138 AAAGAGTCCCGCCA 2-10-2 MOE 1259

Tabla 22: Compuestos antisentido cortos dirigidos a la SEC ID Nº 15
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
397948
525 538 AAAGAGTCCCGCCA 2-10-2 MOE 1259
398022
526 537 AAGAGTCCCGCC 1-10-1 MOE 1260
397949
590 603 TCCGAGAGGAGAGA 2-10-2 MOE 1261
398023
591 602 CCGAGAGGAGAG 1-10-1 MOE 1262
394424
604 617 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 MOE 1263
397913
604 617 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 OMe Citosinas no modificadas en el hueco 1263
401974
604 617 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 Ome Citosinas no modificadas 1263
403737
604 617 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 Metilenoxi BNA 5-tiazol bases nucleotídicas en las alas 1263
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
392056
604 617 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas en el hueco 1263
396576
604 617 TCATGGCTGCAGCT 1-1-10-2 2’-(butilacetamido)-palmitamida / Metilenoxi BNA / Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas en el hueco 1263
396577
604 617 TCATGGCTGCAGCT 2-10-1-2 Metilenoxi BNA / Metilenoxi BNA /2’-(butilacetamido)-palmitamida/ Citosinas no modificadas en el hueco 1263
404121
604 617 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 Metilenoxi BNA 5-metilcitosina en los huecos 3’ Terminal THF fosforotioato 1263
404228
604 617 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 Metilenoxi BNA 5-metilcitosina en los huecos 5’-terminal inverso abásico 1263
396007
604 617 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 (R)-CMOE BNA Citosinas no modificadas 1263
396008
604 617 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 (S)-CMOE BNA Citosinas no modificadas 1263
396009
604 617 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 α-L-Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas 1263
396024
604 617 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 (6’S)-6’-metil-Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas 1263
396566
604 617 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 Oxiamino BNA Citosinas no modificadas 1263
396567
604 617 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 N-Metil-Oxiamino BNA Citosinas no modificadas 1263
396568
604 617 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 (6R)-6-Metil Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas 1263
396569
604 617 TCATGGCTGCAGCT 2-10-2 (5’S)-5’-metil-Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas 1263
389982
605 616 CATGGCTGCAGC 1-10-1 MOE 1161
397950
630 643 ACAGCGGCTCAACT 2-10-2 MOE 1264
398024
631 642 CAGCGGCTCAAC 1-10-1 MOE 1265
389955
712 723 TGCTCACAGGCG 1-10-1 MOE 1158
389754
712 723 TGCTCACAGGCG 1-9-2 MOE 1158
397951
980 993 GGTGACAGGCGACT 2-10-2 MOE 1266
398025
981 992 GTGACAGGCGAC 1-10-1 MOE 1267
389985
984 995 ATGGTGACAGGC 1-10-1 MOE 1268
389956
1206 1217 AGAGGCCTGGCA 1-10-1 MOE 1269
389755
1206 1217 AGAGGCCTGGCA 1-9-2 MOE 1269
389987
1248 1259 CTGGATGGTTGC 1-10-1 MOE 1270
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
397952
1266 1279 AATGGCTGCTGCGG 2-10-2 MOE 1271
398026
1267 1278 ATGGCTGCTGCG 1-10-1 MOE 1160
389957
1274 1285 CCGGGTAATGGC 1-10-1 MOE 1272
389756
1274 1285 CCGGGTAATGGC 1-9-2 MOE 1272
397953
1282 1295 TGGACCGCAGCCGG 2-10-2 MOE 1273
398027
1283 1294 GGACCGCAGCCG 1-10-1 MOE 1155
397954
1313 1326 TGATGCCCCTCGCT 2-10-2 MOE 1274
398028
1314 1325 GATGCCCCTCGC 1-10-1 MOE 1275
397955
1330 1343 CTGGACTTGGCGGT 2-10-2 MOE 1276
398029
1331 1342 TGGACTTGGCGG 1-10-1 MOE 1186
397956
1340 1353 GGAAATGGCTCTGG 2-10-2 MOE 1277
389958
1341 1352 GAAATGGCTCTG 1-10-1 MOE 1278
389757
1341 1352 GAAATGGCTCTG 1-9-2 MOE 1278
389989
1353 1364 TTCTGCAGGATG 1-10-1 MOE 1170
397957
1375 1388 AGAAGCTGCTGGTG 2-10-2 MOE 1279
398030
1376 1387 GAAGCTGCTGGT 1-10-1 MOE 1143
389959
1383 1394 GATGGCAGAAGC 1-10-1 MOE 1280
389758
1383 1394 GATGGCAGAAGC 1-9-2 MOE 1280
397958
1386 1399 AGAGAGATGGCAGA 2-10-2 MOE 1281
398031
1387 1398 GAGAGATGGCAG 1-10-1 MOE 1282
397959
1406 1419 GTGGCTGAAGAAAA 2-10-2 MOE 1283
389990
1407 1418 TGGCTGAAGAAA 1-10-1 MOE 1284
397960
1420 1433 ATGTCTGGGAGCCT 2-10-2 MOE 1285
392058
1420 1433 ATGTCTGGGAGCCT 2-10-2 Metilenoxi BNA 5-metilcitosina en el ala 1285
389991
1421 1432 TGTCTGGGAGCC 1-10-1 MOE 1286
336142
1432 1445 ATGATGGCTGTCAT 3-8-3 MOE 1287
389992
1436 1447 TGATGATGGCTG 1-10-1 MOE 1288
397961
1437 1450 CTTTGATGATGGCT 2-10-2 MOE 1289
398032
1438 1449 TTTGATGATGGC 1-10-1 MOE 1222
336143
1444 1457 ACGATCTCTTTGAT 3-8-3 MOE 1290
392059
1455 1468 TGTTTCTGCTAACG 2-10-2 Metilenoxi BNA 5-metilcitosina en el ala 1291
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
389960
1456 1467 GTTTCTGCTAAC 1-10-1 MOE 1292
389759
1456 1467 GTTTCTGCTAAC 1-9-2 MOE 1292
336144
1457 1470 TTTGTTTCTGCTAA 3-8-3 MOE 1293
336145
1470 1483 CTTGATATCTCCTT 3-8-3 MOE 1294
397962
1476 1489 CATCCTCTTGATAT 2-10-2 MOE 1295
398033
1477 1488 ATCCTCTTGATA 1-10-1 MOE 1198
336146
1480 1493 AATCCATCCTCTTG 3-8-3 MOE 1296
389993
1483 1494 GAATCCATCCTC 1-10-1 MOE 1297
336147
1490 1503 GTCTAAGTCGAATC 3-8-3 MOE 1298
389994
1495 1506 CAAGTCTAAGTC 1-10-1 MOE 1299
398034
1499 1510 AGGTCAAGTCTA 1-10-1 MOE 1300
398010
1500 1513 TACAGGTCAAGTCT 2-10-2 MOE 1166
398077
1501 1512 ACAGGTCAAGTC 1-10-1 MOE 1167
398011
1512 1525 CGCAGAAATGGATA 2-10-2 MOE 1301
398078
1513 1524 GCAGAAATGGAT 1-10-1 MOE 1302
398012
1570 1583 TTCGCATCCGTCTA 2-10-2 MOE 1303
398079
1571 1582 TCGCATCCGTCT 1-10-1 MOE 1304
398013
1663 1676 CCCTAGGTTGAATA 2-10-2 MOE 1305
398080
1664 1675 CCTAGGTTGAAT 1-10-1 MOE 1306
398014
2025 2038 GTTATGCAAATCAG 2-10-2 MOE 1307
398081
2026 2037 TTATGCAAATCA 1-10-1 MOE 1308
398015
2620 2633 TGACTCAGTAAATT 2-10-2 MOE 1309
398082
2621 2632 GACTCAGTAAAT 1-10-1 MOE 1310
398016
2655 2668 TTAAAATTCTTGGG 2-10-2 MOE 1311
398083
2656 2667 TAAAATTCTTGG 1-10-1 MOE 1312
398017
2687 2700 CCTAACTTTTAGAC 2-10-2 MOE 1313
398084
2688 2699 CTAACTTTTAGA 1-10-1 MOE 1314
398018
2745 2758 ACCTGAAACTGCAA 2-10-2 MOE 1315
398085
2746 2757 CCTGAAACTGCA 1-10-1 MOE 1157
398019
13166 13179 GTGTCAAAACCACT 2-10-2 MOE 1316
398086
13167 13178 TGTCAAAACCAC 1-10-1 MOE 1204
398020
14675 14688 CCTATTCCCACTGA 2-10-2 MOE 1317
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
398087
14676 14687 CTATTCCCACTG 1-10-1 MOE 1318
390033
15351 15362 AGCCAACTGCAA 1-10-1 MOE 1483
398021
30985 30998 TTGGATAAATATCT 2-10-2 MOE 1168
398088
30986 30997 TGGATAAATATC 1-10-1 MOE 1169
397964
31001 31014 CCCATAGCAATAAT 2-10-2 MOE 1319
336150
31001 31014 CCCATAGCAATAAT 3-8-3 MOE 1319
398035
31002 31013 CCATAGCAATAA 1-10-1 MOE 1320
389961
31005 31016 ATCCCATAGCAA 1-10-1 MOE 1321
389760
31005 31016 ATCCCATAGCAA 1-9-2 MOE 1321
397965
31013 31026 TCTGCAGGAAATCC 2-10-2 MOE 1322
398036
31014 31025 CTGCAGGAAATC 1-10-1 MOE 1323
336151
31014 31027 TTCTGCAGGAAATC 3-8-3 MOE 1324
389996
31017 31028 TTTCTGCAGGAA 1-10-1 MOE 1165
336152
31025 31038 CCTTCAAGTCTTTC 3-8-3 MOE 1325
336153
31040 31053 TTGTTCCTGTATAC 3-8-3 MOE 1326
397966
31045 31058 CAATATTGTTCCTG 2-10-2 MOE 1327
398037
31046 31057 AATATTGTTCCT 1-10-1 MOE 1202
389962
31047 31058 CAATATTGTTCC 1-10-1 MOE 1328
389761
31047 31058 CAATATTGTTCC 1-9-2 MOE 1328
336154
31052 31065 ACATCATCAATATT 3-8-3 MOE 1329
389977
31480 31491 CTTAAAATTTGG 1-10-1 MOE 1421
389776
31480 31491 CTTAAAATTTGG 1-9-2 MOE 1421
397967
62446 62459 CTTTGAATCCAAAA 2-10-2 MOE 1330
389998
62447 62458 TTTGAATCCAAA 1-10-1 MOE 1331
336156
62450 62463 TATGCTTTGAATCC 3-8-3 MOE 1332
336157
62463 62476 TTGTAATGGTTTTT 3-8-3 MOE 1333
389963
62468 62479 ATCTTGTAATGG 1-10-1 MOE 1334
389762
62468 62479 ATCTTGTAATGG 1-9-2 MOE 1334
336158
62475 62488 AGATTGTATATCTT 3-8-3 MOE 1335
390000
67987 67998 GTCATAATGTCT 1-10-1 MOE 1194
397968
67987 68000 GTGTCATAATGTCT 2-10-2 MOE 1195
398038
67988 67999 TGTCATAATGTC 1-10-1 MOE 1200
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
336159
67989 68002 CGGTGTCATAATGT 3-8-3 MOE 1336
336160
67997 68010 AAATTTGGCGGTGT 3-8-3 MOE 1337
397969
67999 68012 TTAAATTTGGCGGT 2-10-2 MOE 1338
398039
68000 68011 TAAATTTGGCGG 1-10-1 MOE 1339
397971
69952 69965 TCTTCAAAAGGATA 2-10-2 MOE 1340
336162
69952 69965 TCTTCAAAAGGATA 3-8-3 MOE 1340
398041
69953 69964 CTTCAAAAGGAT 1-10-1 MOE 1196
389964
69955 69966 GTCTTCAAAAGG 1-10-1 MOE 1197
389763
69955 69966 GTCTTCAAAAGG 1-9-2 MOE 1197
398089
69957 69968 TGGTCTTCAAAA 1-10-1 MOE 1341
397972
69963 69976 GTGGGTTATGGTCT 2-10-2 MOE 1342
336163
69963 69976 GTGGGTTATGGTCT 3-8-3 MOE 1342
398042
69964 69975 TGGGTTATGGTC 1-10-1 MOE 1214
336164
69977 69990 AAGTTCTAGCTGTG 3-8-3 MOE 1343
390002
69981 69992 ATAAGTTCTAGC 1-10-1 MOE 1344
336165
69988 70001 AAGGGTTTGATAAG 3-8-3 MOE 1345
390003
70003 70014 AAGATCTTCACA 1-10-1 MOE 1243
397973
70003 70016 TCAAGATCTTCACA 2-10-2 MOE 1346
336166
70003 70016 TCAAGATCTTCACA 3-8-3 MOE 1346
398043
70004 70015 CAAGATCTTCAC 1-10-1 MOE 1244
336167
70012 70025 AGCCATTGGTCAAG 3-8-3 MOE 1347
390004
70021 70032 TTCACTTAGCCA 1-10-1 MOE 1208
336168
70021 70034 TCTTCACTTAGCCA 3-8-3 MOE 1348
389965
70040 70051 CTGCAACATGAT 1-10-1 MOE 1018
389764
70040 70051 CTGCAACATGAT 1-9-2 MOE 1018
397974
70040 70053 TGCTGCAACATGAT 2-10-2 MOE 1349
336169
70040 70053 TGCTGCAACATGAT 3-8-3 MOE 1349
398044
70041 70052 GCTGCAACATGA 1-10-1 MOE 1350
336170
70051 70064 TTACAGTGAATTGC 3-8-3 MOE 1351
390005
70059 70070 CCAGCTTTACAG 1-10-1 MOE 1352
389966
70081 70092 CATTACACCAGT 1-10-1 MOE 1353
389765
70081 70092 CATTACACCAGT 1-9-2 MOE 1353
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
397975
70081 70094 ATCATTACACCAGT 2-10-2 MOE 1354
336171
70081 70094 ATCATTACACCAGT 3-8-3 MOE 1354
398045
70082 70093 TCATTACACCAG 1-10-1 MOE 1355
336172
70096 70109 AATAAATATGCACA 3-8-3 MOE 1356
389967
70123 70134 TGCCTTTAAAAA 1-10-1 MOE 1217
389766
70123 70134 TGCCTTTAAAAA 1-9-2 MOE 1217
397976
70123 70136 TGTGCCTTTAAAAA 2-10-2 MOE 1357
398046
70124 70135 GTGCCTTTAAAA 1-10-1 MOE 1199
336173
70124 70137 TTGTGCCTTTAAAA 3-8-3 MOE 1358
336174
70131 70144 GGGCCTCTTGTGCC 3-8-3 MOE 1359
336175
70154 70167 CCTTACTTCCCCAT 3-8-3 MOE 1360
335345
70161 70176 GTCTCTGGTCCTTACT 3-10-3 MOE 1362
335356
70161 70176 GTCTCTGGTCCTTACT 3-10-3 MOE Enlace fosfodiéster en las alas 1362
335414
70161 70176 GTCTCTGGTCCTTACT 3-10-3 MOE C en el ala en 3’ es 9(aminoetoxi)fenoxazina 1362
335415
70161 70176 GTCTCTGGTCCTTACT 3-10-3 MOE C en el ala en 5’ es 9(aminoetoxi)fenoxazina 1362
335416
70161 70176 GTCTCTGGTCCTTACT 3-10-3 MOE Las C en las alas son 9(aminoetoxi)fenoxazina 1362
336176
70161 70174 CTCTGGTCCTTACT 3-8-3 MOE 1361
335371
70161 70176 GTCTCTGGTCCTTACT 3-10-3 Metilenoxi BNA Enlace fosfodiéster en las alas 1362
335382
70161 70176 GTCTCTGGTCCTTACT 3-10-3 Metilenoxi BNA 1362
335344
70162 70175 TCTCTGGTCCTTAC 2-10-2 MOE 1363
335355
70162 70175 TCTCTGGTCCTTAC 2-10-2 MOE Enlace fosfodiéster en las alas 1363
335411
70162 70175 TCTCTGGTCCTTAC 2-10-2 MOE 3’ C es 9(aminoetoxi)fenoxazina 1363
335412
70162 70175 TCTCTGGTCCTTAC 2-10-2 MOE 2º C es 9(aminoetoxi)fenoxazina 1363
335413
70162 70175 TCTCTGGTCCTTAC 2-10-2 MOE 21 y 3’ terminal C son 9(aminoetoxi)fenoxazina 1363
335370
70162 70175 TCTCTGGTCCTTAC 2-10-2 Metilenoxi BNA Enlace fosfodiéster en las alas 1363
335381
70162 70175 TCTCTGGTCCTTAC 2-10-2 Metilenoxi BNA 1363
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
398068
79799 79810 ACAGCTACACAA 1-10-1 MOE 1472
389968
89056 89067 TCTGACTGGGAA 1-10-1 MOE 1151
389767
89056 89067 TCTGACTGGGAA 1-9-2 MOE 1151
336177
89056 89069 CCTCTGACTGGGAA 3-8-3 MOE 1364
336178
89063 89076 CATAGCGCCTCTGA 3-8-3 MOE 1365
336179
89083 89096 CAGGTAGCTATAAT 3-8-3 MOE 1366
390007
89085 89096 CAGGTAGCTATA 1-10-1 MOE 1367
390009
89135 89146 ATCTTGTGAAAC 1-10-1 MOE 1175
397977
89135 89148 TCATCTTGTGAAAC 2-10-2 MOE 1368
336180
89135 89148 TCATCTTGTGAAAC 3-8-3 MOE 1368
398047
89136 89147 CATCTTGTGAAA 1-10-1 MOE 1369
336181
89145 89158 GTTTCAAACATCAT 3-8-3 MOE 1370
397978
89147 89160 TAGTTTCAAACATC 2-10-2 MOE 1371
398048
89148 89159 AGTTTCAAACAT 1-10-1 MOE 1372
389969
89152 89163 GAATAGTTTCAA 1-10-1 MOE 1373
389768
89152 89163 GAATAGTTTCAA 1-9-2 MOE 1373
336182
89155 89168 CATTGGAATAGTTT 3-8-3 MOE 1374
397979
89162 89175 CACTGAACATTGGA 2-10-2 MOE 1375
398049
89163 89174 ACTGAACATTGG 1-10-1 MOE 1376
390010
89165 89176 CCACTGAACATT 1-10-1 MOE 1240
336183
89166 89179 CCGCCACTGAACAT 3-8-3 MOE 1377
397980
94786 94799 CAGACCACAAACTG 2-10-2 MOE 1378
398050
94787 94798 AGACCACAAACT 1-10-1 MOE 1379
392060
94790 94803 CTGGCAGACCACAA 2-10-2 Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas en el hueco 1380
389970
94791 94802 TGGCAGACCACA 1-10-1 MOE 1249
389769
94791 94802 TGGCAGACCACA 1-9-2 MOE 1249
336185
94792 94805 AGCTGGCAGACCAC 3-8-3 MOE 1381
397981
94798 94811 ACCTTTAGCTGGCA 2-10-2 MOE 1382
398051
94799 94810 CCTTTAGCTGGC 1-10-1 MOE 1220
336186
94803 94816 TCTTCACCTTTAGC 3-8-3 MOE 1383
390012
94860 94871 TCAAAGTACATG 1-10-1 MOE 1384
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
336187
94862 94875 GAACTCAAAGTACA 3-8-3 MOE 1385
389971
94865 94876 GGAACTCAAAGT 1-10-1 MOE 1386
389770
94865 94876 GGAACTCAAAGT 1-9-2 MOE 1386
397982
94865 94878 AGGGAACTCAAAGT 2-10-2 MOE 1387
398052
94866 94877 GGGAACTCAAAG 1-10-1 MOE 1388
336188
94869 94882 GCTGAGGGAACTCA 3-8-3 MOE 1389
336189
94888 94901 TCACCACACACAGG 3-8-3 MOE 1390
336190
94904 94917 GAACTCTACTTTGA 3-8-3 MOE 1391
389972
94909 94920 GAAGAACTCTAC 1-10-1 MOE 1392
389771
94909 94920 GAAGAACTCTAC 1-9-2 MOE 1392
397983
94910 94923 GTGGAAGAACTCTA 2-10-2 MOE 1393
398053
94911 94922 TGGAAGAACTCT 1-10-1 MOE 1394
336191
94915 94928 TGTTTGTGGAAGAA 3-8-3 MOE 1395
336192
94925 94938 CATCTTGTTCTGTT 3-8-3 MOE 1396
397984
97824 97837 AGTGAAACATTTTG 2-10-2 MOE 1397
398054
97825 97836 GTGAAACATTTT 1-10-1 MOE 1144
336194
97827 97840 AAAAGTGAAACATT 3-8-3 MOE 1145
389973
97835 97846 TTACCCAAAAGT 1-10-1 MOE 1398
389772
97835 97846 TTACCCAAAAGT 1-9-2 MOE 1398
336195
97836 97849 TATTTACCCAAAAG 3-8-3 MOE 1399
397985
97837 97850 GTATTTACCCAAAA 2-10-2 MOE 1400
398055
97838 97849 TATTTACCCAAA 1-10-1 MOE 1401
397986
97853 97866 TCCTGGTATGAAGA 2-10-2 MOE 1402
336196
97853 97866 TCCTGGTATGAAGA 3-8-3 MOE 1402
398056
97854 97865 CCTGGTATGAAG 1-10-1 MOE 1403
390015
97857 97868 GGTCCTGGTATG 1-10-1 MOE 1404
336197
97862 97875 TTCCTCTGGTCCTG 3-8-3 MOE 1405
397987
97866 97879 AGGTTTCCTCTGGT 2-10-2 MOE 1406
398057
97867 97878 GGTTTCCTCTGG 1-10-1 MOE 1407
336198
97873 97886 TTTTCTGAGGTTTC 3-8-3 MOE 1408
336199
97891 97904 AGACTTCCATTTTC 3-8-3 MOE 1409
389974
97893 97904 AGACTTCCATTT 1-10-1 MOE 1410
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
389773
97893 97904 AGACTTCCATTT 1-9-2 MOE 1410
336200
97918 97931 CAAATGCTATCGAT 3-8-3 MOE 1411
336201
97933 97946 GCACGCTCTATACT 3-8-3 MOE 1412
389975
97934 97945 CACGCTCTATAC 1-10-1 MOE 1413
389774
97934 97945 CACGCTCTATAC 1-9-2 MOE 1413
336202
97948 97961 TCCTTGTCATTATC 3-8-3 MOE 1414
397988
97990 98003 GCTTTGTCAAGATC 2-10-2 MOE 1415
389976
97991 98002 CTTTGTCAAGAT 1-10-1 MOE 1177
389775
97991 98002 CTTTGTCAAGAT 1-9-2 MOE 1177
336203
97991 98004 TGCTTTGTCAAGAT 3-8-3 MOE 1416
397989
98017 98030 AAGTATCGGTTGGC 2-10-2 MOE 1417
336204
98017 98030 AAGTATCGGTTGGC 3-8-3 MOE 1417
398058
98018 98029 AGTATCGGTTGG 1-10-1 MOE 1418
336205
98032 98045 TTAAAATTTGGAGA 3-8-3 MOE 1419
397990
98034 98047 CCTTAAAATTTGGA 2-10-2 MOE 1420
389977
98035 98046 CTTAAAATTTGG 1-10-1 MOE 1421
389776
98035 98046 CTTAAAATTTGG 1-9-2 MOE 1421
336207
102230 102243 TCTACTGTTTTTGT 3-8-3 MOE 1422
336208
102236 102249 GGCTCCTCTACTGT 3-8-3 MOE 1423
335330
102251 102265 AGCCTCTGGATTTGA 1-10-4 MOE 1424
335331
102252 102266 TAGCCTCTGGATTTG 1-10-4 MOE 1426
336209
102252 102265 AGCCTCTGGATTTG 3-8-3 MOE 1425
335377
102252 102266 TAGCCTCTGGATTTG 1-10-4 Metilenoxi BNA Fosfodiéster en el ala en 3’ 1426
335376
102252 102266 TAGCCTCTGGATTTG 1-10-4 Metilenoxi BNA 1426
390577
102253 102266 TAGCCTCTGGATTT 1-10-3 MOE Citosinas no modificadas T en las alas son 2-tiotiminas 1427
335332
102253 102267 CTAGCCTCTGGATTT 1-10-4 MOE 1429
386770
102253 102266 TAGCCTCTGGATTT 1-11-2 MOE 1427
375560
102253 102267 CTAGCCTCTGGATTT 2-10-3 MOE 1429
391449
102253 102267 CTAGCCTCTGGATTT 2-10-3 MOE Citosinas no modificadas 1429
392055
102253 102267 CTAGCCTCTGGATTT 2-10-3 MOE Citosinas no modificadas en el hueco 1429
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
362977
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 2-12-2 MOE 1428
371975
102253 102267 CTAGCCTCTGGATTT 3-10-2 MOE 1429
386556
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 MOE 1428
335341
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 MOE 1428
335350
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 MOE 1428
383739
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 MOE 5-metilcitosina en el hueco 1428
390576
102253 102268 GCTAGCCTCTGGA 3-10-3 MOE 5-metilcitosina en el hueco T en las alas son 2-tiotiminas 1428
390580
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 MOE Pirimidinas en las alas son 5tiazol Citosinas no modificadas en el hueco 1428
390581
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 MOE Citosinas no modificadas en el hueco 1428
391096
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 MOE 1428
391098
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 MOE 1428
391863
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 MOE Citosinas no modificadas 1428
384071
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 OMe 5-metilcitosina en el hueco 1428
385036
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 1-2-10-3 OMe/2’-O-metil-4’-tio/2’-O-metil4’-tio Citosinas no modificadas en el ala 1428
335368
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 Metilenoxi BNA Enlace fosfodiéster en las alas 1428
391864
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas en el hueco 1428
392054
102253 102267 CTAGCCTCTGGATTT 2-10-3 Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas en el hueco 1429
391172
102253 102267 CTAGCCTCTGGATTT 2-10-3 Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas 1429
391865
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas 1428
391868
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 1-2-10-3 (SR)-5’-metil-Metilenoxi BNA / Metilenoxi BNA /(5’R)-5’-metil-Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas 1428
391869
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 1-2-10-3 Metilenoxi BNA /(5’S)-5’-metil-Metilenoxi BNA /(5’S)-5’-metil-Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas 1428
384073
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 Metilenoxi BNA 5-metilcitosina en el hueco 1428
335379
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 Metilenoxi BNA 1428
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
390579
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 1-1-1-10-3 MOE/4’tio/2’-O-[(2-metoxi)etil]4’-tio/2’-O-[(2-metoxi)etIl]-4’-tio Citosinas no modificadas en las alas Enlace fosforodiéster en las alas 1428
390582
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 1-2-10-3 MOE/4’tio/2’-O-[(2-metoxi)etil]-4’tio Citosinas no modificadas en las alas Enlace fosforodiéster en las alas 1428
390606
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 1-2-10-3 MOE/pentaF/pentaF Citosinas no modificadas en las alas Enlace fosfodiéster en las alas 1428
384072
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 1-2-10-3 MOE/pentaF/pentaF Citosinas no modificadas en las alas 1428
385871
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 1-2-10-3 OMe/ 2’-O-[(2-metoxi) etil]-4’-tio/ 2’-O-[(2-metoxi)etil]-4’-tio Citosinas no modificadas en el ala 1428
390607
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-3 MOE/pentaF Citosinas no modificadas en el ala 1428
390608
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 1-2-10-3 MOE/pentaF/pentaF Citosinas no modificadas en el ala 1428
390609
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 3-10-2-1 MOE/MOE/pentaF Citosinas no modificadas en el ala 1428
386682
102253 102268 GCTAGCCTCTGGATTT 1-2-10-3 2’-(butilacetamido)-palmitamida /MOE/MOE 1428
391173
102253 102267 CTAGCCTCTGGATTT 2-10-3 (5’R)-S’-metil-Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas 1429
391174
102253 102267 CTAGCCTCTGGATTT 2-10-3 (5’S)-5’-metil-Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas 1429
386970
102254 102266 TAGCCTCTGGATT 1-10-2 MOE 1432
390578
102254 102266 TAGCCTCTGGATT 1-10-2 MOE Citosinas no modificadas T en las alas son 2-tiotiminas 1432
335333
102254 102268 GCTAGCCTCTGGATT 1-10-4 MOE 1430
331429
102254 102267 CTAGCCTCTGGATT 2-10-2 MOE 1431
335349
102254 102267 CTAGCCTCTGGATT 2-10-2 MOE 1431
335367
102254 102267 CTAGCCTCTGGATT 2-10-2 Metilenoxi BNA Enlaces fosfodiéster en las alas 1431
392061
102254 102267 CTAGCCTCTGGATT 2-10-2 Metilenoxi BNA Citosinas no modificadas en el hueco 1431
335378
102254 102267 CTAGCCTCTGGATT 2-10-2 Metilenoxi BNA 1431
383991
102254 102266 TAGCCTCTGGATT 1-10-2 2’-(acetilamino-butil-acetamido)colesterol /MOE 1432
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
383992
102254 102266 TAGCCTCTGGATT 1-10-2 2’-(acetilamino-butil-acetamido)ácido cólico/MOE 1432
386683
102254 102266 TAGCCTCTGGATT 1-10-2 5’ terminal 2’-(butilacetamido)palmitamida/MOE 1432
390614
102254 102266 TAGCCTCTGGATT 1-10-2 PentaF 1432
389954
102255 102266 TAGCCTCTGGAT 1-10-1 MOE 1434
335334
102255 102269 TGCTAGCCTCTGGAT 1-10-4 MOE 1433
389777
102255 102266 TAGCCTCTGGAT 1-9-2 MOE 1434
390430
102256 102268 GCTAGCCTCTGGA 1-10-2 MOE Citosinas no modificadas 1163
390431
102256 102268 GCTAGCCTCTGGA 1-10-2 MOE Citosinas no modificadas C en el ala 9-(aminoetoxi)fenoxazina 1163
390432
102256 102268 GCTAGCCTCTGGA 1-10-2 MOE 1163
390433
102256 102268 GCTAGCCTCTGGA 1-10-2 MOE Citosinas no modificadas Nt 6 es 9-(aminoetoxi)fenoxazina 1163
390434
102256 102268 GCTAGCCTCTGGA 1-10-2 MOE Citosinas no modificadas Nt 7 es 9-(aminoetoxi)fenoxazina 1163
390435
102256 102268 GCTAGCCTCTGGA 1-10-2 MOE Citosinas no modificadas Nt 9 es 9-(aminoetoxi)fenoxazina 1163
335335
102256 102270 CTGCTAGCCTCTGGA 1-10-4 MOE 1435
335336
102257 102271 ACTGCTAGCCTCTGG 1-10-4 MOE 1436
335337
102258 102272 AACTGCTAGCCTCTG 1-10-4 MOE 1437
335338
102259 102273 GAACTGCTAGCCTCT 1-10-4 MOE 1438
335339
102260 102274 TGAACTGCTAGCCTC 1-10-4 MOE 1439
335340
102261 102275 TTGAACTGCTAGCCT 1-10-4 MOE 1440
336210
102261 102274 TGAACTGCTAGCCT 3-8-3 MOE 1441
397991
102264 102277 AGTTGAACTGCTAG 2-10-2 MOE 1442
398059
102265 102276 GTTGAACTGCTA 1-10-1 MOE 1443
390017
102268 102279 GAAGTTGAACTG 1-10-1 MOE 1444
336211
102269 102282 ACAGAAGTTGAACT 3-8-3 MOE 1445
397992
102293 102306 TCATTGTCACTAAC 2-10-2 MOE 1446
336212
102293 102306 TCATTGTCACTAAC 3-8-3 MOE 1446
398060
102294 102305 CATTGTCACTAA 1-10-1 MOE 1447
389978
102301 102312 TCAGGTTCATTG 1-10-1 MOE 1448
389778
102301 102312 TCAGGTTCATTG 1-9-2 MOE 1448
336213
102303 102316 ATGATCAGGTTCAT 3-8-3 MOE 1449
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
397993
102307 102320 TATAATGATCAGGT 2-10-2 MOE 1450
398061
102308 102319 ATAATGATCAGG 1-10-1 MOE 1451
336214
102314 102327 GAATATCTATAATG 3-8-3 MOE 1139
390019
102320 102331 GTCAGAATATCT 1-10-1 MOE 1173
397994
102322 102335 TGGTGTCAGAATAT 2-10-2 MOE 1452
398062
102323 102334 GGTGTCAGAATA 1-10-1 MOE 1255
336215
102326 102339 TCAGTGGTGTCAGA 3-8-3 MOE 1453
336216
102339 102352 CTCTGGATCAGAGT 3-8-3 MOE 1454
390020
102340 102351 TCTGGATCAGAG 1-10-1 MOE 1149
336217
102349 102362 AAGGTTCATTCTCT 3-8-3 MOE 1455
397995
102357 102370 TTCATCAAAAGGTT 2-10-2 MOE 1456
389979
102358 102369 TCATCAAAAGGT 1-10-1 MOE 1176
389779
102358 102369 TCATCAAAAGGT 1-9-2 MOE 1176
336218
102358 102371 CTTCATCAAAAGGT 3-8-3 MOE 1457
390021
102360 102371 CTTCATCAAAAG 1-10-1 MOE 1458
336219
102366 102379 ATGCTGATCITCAT 3-8-3 MOE 1459
336220
102381 102394 TTTTGTAATTTGTG 3-8-3 MOE 1460
336221
102387 102400 TCAGACTTTTGTAA 3-8-3 MOE 1461
390022
102443 102454 CAGTTTATTCAA 1-10-1 MOE 1142
397996
102477 102490 TGTCCTATTGCCAT 2-10-2 MOE 1462
398063
102478 102489 GTCCTATTGCCA 1-10-1 MOE 1205
397997
102487 102500 TCTGACACAATGTC 2-10-2 MOE 1463
398064
102488 102499 CTGACACAATGT 1-10-1 MOE 1464
397998
102505 102518 TGTTCCTATAACTG 2-10-2 MOE 1465
398065
102506 102517 GTTCCTATAACT 1-10-1 MOE 1466
397999
102528 102541 AAGATTGGTCAGGA 2-10-2 MOE 1467
398066
102529 102540 AGATTGGTCAGG 1-10-1 MOE 1468
398000
102561 102574 GTGTCAAAACCCTG 2-10-2 MOE 1469
398067
102562 102573 TGTCAAAACCCT 1-10-1 MOE 1210
390025
102563 102574 GTGTCAAAACCC 1-10-1 MOE 1211
390026
102595 102606 AGCTACACAACC 1-10-1 MOE 1470
398001
102596 102609 CACAGCTACACAAC 2-10-2 MOE 1471
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ Sitio diana en 3’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
398068
102597 102608 ACAGCTACACAA 1-10-1 MOE 1472
398002
102607 102620 TATATACATGACAC 2-10-2 MOE 1473
398069
102608 102619 ATATACATGACA 1-10-1 MOE 1474
390027
102612 102623 AGGTATATACAT 1-10-1 MOE 1206
398003
102637 102650 AATTTTAAATGTCC 2-10-2 MOE 1475
398070
102638 102649 ATTTTAAATGTC 1-10-1 MOE 1476
390028
102648 102659 TCCTAATTGAAT 1-10-1 MOE 1477
390029
102667 102678 AAAGTGCCATCT 1-10-1 MOE 1478
398004
102689 102702 TTTATAAAACTGGA 2-10-2 MOE 1479
398071
102690 102701 TTATAAAACTGG 1-10-1 MOE 1480
390030
102691 102702 TTTATAAAACTG 1-10-1 MOE 1074
398005
102827 102840 TGCAAACTTATCTG 2-10-2 MOE 1481
398072
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390033
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398006
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103660 103671 GTATTCAAGTAA 1-10-1 MOE 1140
390052
103780 103791 GACAATTTCTAC 1-10-1 MOE 1492
390054
103862 103873 AACACTGCACAT 1-10-1 MOE 1493
Sales, profármacos y bioequivalentes
Los compuestos antisentido divulgados en el presente documento comprenden cualquier sal, éster o sales de dichos ésteres farmacéuticamente aceptables, o cualquier otro equivalente funcional que, tras la administración a un animal, incluido un ser humano, puede proporcionar (directa o indirectamente) el metabolito biológicamente activo o un residuo del mismo. De acuerdo con esto, por ejemplo, la divulgación también se extiende a profármacos y sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos antisentido, sales farmacéuticamente aceptables de dichos profármacos, y otros bioequivalentes.
El término “profármaco” indica un agente terapéutico que se prepara en una forma inactiva o menos activa que se convierte en una forma activa (es decir, el fármaco) dentro del cuerpo o las células del mismo por acción de enzimas endógenas u otros productos químicos y/o condiciones. En particular, las versiones profármaco de los oligonucleótidos se preparan como derivados SATE ((S-actil-2-tioetil)fosfato de acuerdo con los procedimientos divulgados en el documento WO 93/24510 o el documento WO 94/26764. Los profármacos también pueden incluir compuestos antisentido en los que uno o ambos extremos comprenden bases nucleotídicas que se escinden (p. ej., incorporando enlaces fosfodiéster en el esqueleto en los extremos) para producir el compuesto activo. En ciertas realizaciones, uno o más restos que no son fármacos se escinden de un profármaco, dando la forma activa. En ciertas de dichas realizaciones, dichos restos que no son fármacos no son un nucleótido o un oligonucleótido.
La expresión “sales farmacéuticamente aceptables” se refiere a sales fisiológica y farmacéuticamente aceptables de los compuestos descritos en el presente documento, es decir, sales que conservan la actividad biológica deseada del compuesto parental y que no producen efectos toxicológicos indeseados en el mismo. Las sales de sodio de los oligonucleótidos antisentido son útiles y bien aceptadas para administración terapéutica a seres humanos.
En ciertas realizaciones, se divulgan sales, incluidas, entre otras, las sales de ácidos nucleicos bicatenarios (incluidos, entre otros, compuestos de ARD bicatenario).
G. Ciertas composiciones farmacéuticas
En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas de la presente divulgación comprenden uno o más compuestos antisentido cortos y uno o más excipientes. En ciertas de dichas realizaciones, se seleccionan excipientes de agua, soluciones salinas, alcohol, polietilenglicoles, gelatina, lactosa, amilasa, estearato de magnesio, talco, ácido silícico, parafina viscosa, hidroximetilcelulosa y polivinilpirrolidona.
En ciertas realizaciones, se prepara una composición farmacéutica de la presente divulgación usando técnicas conocidas, incluidas, entre otras procedimientos mezclado, disolución, granulación, formación de pastillas, trituración, emulsión, encapsulación, atrapamiento o de formación de comprimidos.
En ciertas realizaciones, una composición farmacéutica de la presente divulgación es un líquido (p. ej., una suspensión, elixir y/o solución). En ciertas de dichas realizaciones, se prepara una composición farmacéutica líquida usando ingredientes conocidos en la técnica, incluidos, entre otros, agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes aromatizantes, conservantes y agentes colorantes.
En ciertas realizaciones, una composición farmacéutica de la presente divulgación es un sólido (p. ej., un polco, comprimido y/o cápsula). En ciertas de dichas realizaciones, se prepara una composición farmacéutica sólida que comprende uno o más oligonucleótidos usando ingredientes conocidos en la técnica, incluidos, entre otros, almidones, azúcares, diluyentes, agentes de granulación, lubricantes, aglutinantes y agentes disgregantes.
En ciertas realizaciones, se formula una composición farmacéutica de la presente divulgación como una preparación depot. Ciertas preparaciones depot normalmente son de acción más prolongada que las preparaciones que no son depot. En ciertas realizaciones, dichas preparaciones se administran mediante implantación (por ejemplo subcutánea o intramuscular) o mediante inyección intramuscular. En ciertas realizaciones, las preparaciones depot se preparan usando materiales poliméricos o hidrófobos adecuados (por ejemplo una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio iónico, o en forma de derivados escasamente solubles, por ejemplo en forma de una sal escasamente soluble.
En ciertas realizaciones, una composición farmacéutica de la presente divulgación comprende un sistema de liberación. Ejemplos de sistemas de liberación incluyen, entre otros, liposomas y emulsiones. Ciertos sistemas de liberación son útiles para preparar ciertas composiciones farmacéuticas, incluidas las que comprenden compuestos hidrófobos. En ciertas realizaciones, se usan ciertos disolventes orgánicos, tales como dimetilsulfóxido.
En ciertas realizaciones, una composición farmacéutica de la presente divulgación comprende una o más moléculas de liberación específicas de tejido diseñadas para liberar el uno o más agentes farmacéuticos de la presente divulgación en tejidos o tipos de células específicos. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas incluyen liposomas recubiertos con un anticuerpo específico de tejido.
En ciertas realizaciones, una composición farmacéutica de la presente divulgación comprende un sistema de codisolvente. Ciertos de dichos sistemas de co-disolvente comprende, por ejemplo, alcohol bencílico, un tensioactivo apolar, un polímero orgánico miscible en agua y una fase acuosa. En ciertas realizaciones, dichos sistemas de co-disolvente se usan para compuestos hidrófobos. Un ejemplo no limitante de dicho sistema de co-disolvente es el sistema de codisolvente de VPD, que es una solución de etanol absoluto que comprende 3% p/v de alcohol bencílico, 8% p/v del tensioactivo apolar, polisorbato 80.TN y 65% p/v de polietilenglicol 300. Las proporciones de dichos sistemas de codisolvente se pueden variar considerablemente sin alterar de forma significativa sus características de solubilidad y de toxicidad. Además, la identidad de los componentes del co-disolvente se puede variar: por ejemplo, se pueden usar otros tensioactivos en lugar de Polisorbato 80.TM; el tamaño de la fracción de polietilenglicol puede variarse; otros polímeros biocompatibles pueden sustituir al polietilenglicol, por ejemplo polivinilpirrolidona; y otros azúcares o polisacáridos pueden sustituir a la dextrosa.
En ciertas realizaciones, una composición farmacéutica de la presente divulgación comprende un sistema de liberación sostenida. Un ejemplo no limitante de dicho sistema de liberación sostenida es una matriz semipermeable de polímeros hidrófobos sólidos. En ciertas realizaciones, los sistemas de liberación sostenida pueden, en función de su naturaleza química, liberar agentes farmacéuticos durante un periodo de horas, días, semanas o meses.
En ciertas realizaciones, se prepara una composición farmacéutica de la presente divulgación para administración oral. En ciertas de dichas realizaciones, se formula una composición farmacéutica combinando uno o más oligonucleótidos con uno o más transportadores farmacéuticamente aceptables. Ciertos de dichos transportadores permiten formular las composiciones farmacéuticas en forma de comprimidos, píldoras, grageas, cápsulas, líquidos, geles, jarabes, suspensiones espesas, suspensiones y similares, para ingestión por un sujeto. En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas para uso oral se obtienen mezclando oligonucleótidos y uno o más excipientes sólidos. Excipientes adecuados incluyen, entre otros, cargas, tales como azúcares, incluidas lactosa, sacarosa, manitol o sorbitol; preparaciones de celulosa, tales como, por ejemplo, almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de patata, gelatina, goma tragacanto, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica y/o polivinilpirrolidona (PVP). En ciertas realizaciones, dicha mezcla opcionalmente se tritura y opcionalmente se añaden adyuvantes. En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas se forman para obtener comprimidos o núcleos de pastillas. En ciertas realizaciones se añaden agentes disgregantes (p. ej., polivinilpirrolidona reticulada, agar o ácido algínico o una sal de los mismos, tal como alginato de sodio).
En ciertas realizaciones, los núcleos de pastillas se proporcionan con recubrimientos. En ciertas de dichas realizaciones se pueden usar soluciones de azúcar concentradas, que opcionalmente pueden comprender goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol, polietilenglicol y/o dióxido de titanio, soluciones de laca y disolventes orgánicos adecuados o mezclas de disolventes. A los recubrimientos de pastillas o comprimidos se pueden añadir colorantes o pigmentos.
En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas para administración oral son cápsulas duras hechas de gelatina. Ciertas de dichas cápsulas duras comprenden uno o más agentes farmacéuticos de la presente divulgación mezclados con una o más cargas, tales como lactosa, aglutinantes, tales como almidones y/o lubricantes, tales como talco
o estearato de magnesio, y, opcionalmente estabilizantes. En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas para administración oral son cápsulas blandas selladas hechas de gelatina y un plastificante, tal como glicerol o sorbitol. En ciertas cápsulas blandas, uno o más agentes farmacéuticos de la presente divulgación se disuelven o suspenden en líquidos adecuados, tales como aceites grasos, parafina líquida o polietilenglicol líquido. Además, se pueden añadir estabilizantes.
En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas se preparan para administración bucal. Ciertas de dichas composiciones farmacéuticas son comprimidos o píldoras formuladas de un modo convencional.
En ciertas realizaciones, se prepara una composición farmacéutica para administración mediante inyección (p. ej., intravenosa, subcutánea, intramuscular, etc.). En ciertas de dichas realizaciones, una composición farmacéutica comprende un transportador y se formula en solución acuosa, tal como agua o tampones fisiológicamente compatibles, tales como solución de Hank, solución de Ringer o solución salina tamponada fisiológicamente. En ciertas realizaciones se incluyen otros ingredientes (p. ej., ingredientes que ayudan a la solubilidad o sirven como conservantes). En ciertas realizaciones se preparan suspensiones inyectables usando transportadores líquidos adecuados, agentes de suspensión y similares. Ciertas composiciones farmacéuticas para inyección se presentan en forma de monodosis, por ejemplo en ampollas, o en envases con múltiples dosis. Ciertas composiciones farmacéuticas para inyección son suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos y pueden contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilizantes y/o dispersantes. Ciertos disolventes para uso en composiciones farmacéuticas para inyección incluyen, entre otros, disolventes lipófilos y aceites grasos tales como aceite de sésamo, o ésteres de ácidos grasos sintéticos, tales como oleato de etilo o triglicéridos, y liposomas. Las suspensiones inyectables acuosas pueden comprender sustancias que aumentan la viscosidad de la suspensión, tales como carboximetilcelulosa sódica, sorbitol, o dextrano. Opcionalmente, dichas suspensiones también pueden comprender estabilizantes o agentes adecuados que aumentan la solubilidad de los agentes farmacéuticos para permitir la preparación de soluciones muy concentradas.
En ciertas realizaciones, se prepara una composición farmacéutica para administración transmucosa. En ciertas de dichas realizaciones se usan penetrantes adecuados para atravesar la barrera. Tales penetrantes se conocen generalmente en la técnica.
En ciertas realizaciones, se prepara una composición farmacéutica para administración por inhalación. Ciertas de dichas composiciones farmacéuticas se preparan en forma de un nebulizador de aerosol en un envase presurizado o nebulizador. Ciertas de dichas composiciones farmacéuticas comprenden un propelente, por ejemplo diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En ciertas realizaciones usando un aerosol presurizado, la unidad de dosificación puede determinarse proporcionando una válvula que libera una cantidad medida. En ciertas realizaciones se pueden formular cápsulas y cartuchos para usar en un inhalador o insuflador. Ciertas de dichas formulaciones comprenden una mezcla en polvo de un agente farmacéutico de la divulgación y una base en polvo adecuada, tal como lactosa o almidón.
En ciertas realizaciones, se prepara una composición farmacéutica para administración rectal, tal como supositorios o enema de retención. Ciertas de dichas composiciones farmacéuticas comprenden ingredientes conocidos, tales como manteca de cacao y/u otros glicéridos.
En ciertas realizaciones, se prepara una composición farmacéutica para administración tópica. Ciertas de dichas composiciones farmacéuticas comprenden bases blandas de hidratación, tales como ungüentos o cremas. Ejemplos de bases adecuadas para ungüentos incluyen, entre otros, vaselina, vaselina más siliconas volátiles, lanolina y agua en emulsiones de aceite, tal como Eucerin. TM., disponible en Beiersdorf (Cincinnati, Ohio). Ejemplos de bases de crema adecuados incluyen, entre otros, Nivea.TM. Crema, disponible en Beiersdorf (Cincinnati, Ohio), crema fría (USP), Purpose Cream.TM, disponible en Johnson & Johnson (New Brunswick, N.J.), pomada hidrófila (USP) y Lubriderm.TM., disponible en Pfizer (Morris Plains, NJ.).
En ciertas realizaciones, una composición farmacéutica de la presente divulgación comprende un oligonucleótido en una cantidad terapéuticamente eficaz. En ciertas realizaciones, la cantidad terapéuticamente eficaz es suficiente para prevenir, aliviar o mejorar los síntomas de una enfermedad o para prolongar la supervivencia del sujeto que se esté tratando. La determinación de una cantidad terapéuticamente eficaz entra bien en de la capacidad de los expertos en la técnica.
En ciertas realizaciones, se formulan uno o más compuestos antisentido cortos de la presente divulgación como un profármaco. En ciertas realizaciones, tras la administración in vivo, un profármaco se convierte químicamente en la forma biológica, farmacéutica o terapéuticamente más activa del compuesto antisentido corto. En ciertas realizaciones, los profármacos son útiles porque son más fáciles de administrar que la correspondiente forma activa. Por ejemplo, en ciertos casos, un profármaco puede estar más biodisponible (p. ej., mediante administración oral) que su correspondiente forma activa. En ciertos casos, un profármaco puede temer mejor solubilidad en comparación con la correspondiente forma activa. En ciertas realizaciones, los profármacos son menos hidrosolubles que la correspondiente forma activa. En ciertos casos, dichos profármacos poseen superior transmisión a través de las membranas celulares, en los que la solubilidad en agua es perjudicial para la movilidad. En ciertas realizaciones, un profármaco es un éster. En ciertas de dichas realizaciones, el éster se hidroliza metabólicamente en ácido carboxílico tras la administración. En ciertos casos, el compuesto que contiene ácido carboxílico es la correspondiente forma activa. En ciertas realizaciones, un profármaco comprende un péptido corto (poliaminoácido) unido a un grupo ácido. En ciertas de dichas realizaciones, el péptido se escinde tras la administración para formar la correspondiente forma activa.
En ciertas realizaciones, se produce un profármaco modificando un compuesto farmacéuticamente activo de modo que el compuesto activo se regenerará tras la administración in vivo. El profármaco se puede diseñar para alterar la estabilidad metabólica o las características de transporte de un fármaco, para enmascarar los efectos secundarios o la toxicidad, para mejorar el sabor de un fármaco o para alterar otras características o propiedades de un fármaco. En virtud de los conocimientos sobre los procesos farmacodinámicos y el metabolismo de los fármacos in vivo, los expertos en la técnica, una vez que se conoce el compuesto farmacéuticamente activo, pueden diseñar profármacos del compuesto (véase, por ejemplo, Nogrady (1985) Medicinal Chemistry A Biochemical Approach, Oxford University Press, New York, páginas 388392).
En ciertas realizaciones, una composición farmacéutica que comprende uno o más agentes farmacéuticos de la presente divulgación es útil para tratar afecciones o trastornos en un mamífero, y, particularmente, en un sujeto humano. Las vías de administración adecuadas incluyen, entre otras, las vías oral, rectal, transmucosa, intestinal, enteral, tópica, supositorios, mediante inhalación, intratecal, intraventricular, intraperitoneal, intranasal, intraocular y parenteral (p. ej., intravenosa, intramuscular, intramedular y subcutánea). En ciertas realizaciones se administran agentes farmacéuticos intratecales para alcanzar exposiciones locales en lugar de sistémicas. Por ejemplo, las composiciones farmacéuticas se pueden inyectar directamente en el área del efecto deseado (p. ej., en el área renal o cardíaca).
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos, en comparación con sus oligonucleótidos parentales, sin particularmente adecuados para administración oral. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos están mejor adaptados para administración oral que sus oligonucleótidos parentales, porque tienen mayor potencia en comparación con dichos oligonucleótidos parentales. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos están mejor adaptados para administración oral que sus oligonucleótidos parentales, porque tienen mejores propiedades de estabilidad, disponibilidad o solubilidad en comparación con los oligonucleótidos parentales.
En un aspecto adicional, un agente farmacéutico es un oligonucleótido liofilizado estéril que se reconstituye con un diluyente adecuado, por ejemplo agua estéril para inyectables. El producto reconstituido se administra como una inyección subcutánea o como una infusión intravenosa tras la dilución en solución salina. El producto farmacológico liofilizado consiste en unal oligonucleótido que se ha preparado en agua para inyectables, ajustado a un pH 7,0-9,0 con ácido o base durante la preparación y, después, se liofiliza. El oligonucleótido liofilizado puede ser 25-800 mg del oligonucleótido. Se entiende que esto abarca 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575, 600, 625, 650, 675, 700, 725, 750, 775 y 800 mg de oligonucleótido liofilizado. El producto farmacológico liofilizado puede envasarse en un vial de cristal transparente de tipo 1 de 2 ml (tratado con sulfato amónico), tapado con un cierre de caucho de bromobutilo y sellado con un OVERSEAL de aluminio FLIP-OFF® .
Las composiciones de la presente divulgación pueden comprender, adicionalmente, otros componentes adyuvantes encontrados convencionalmente en composiciones farmacéuticas a sus niveles de uso establecidos en la técnica. Por tanto, por ejemplo, las composiciones pueden comprender materiales adicionales, compatibles farmacéuticamente activos, tales como, por ejemplo, antipruríticos, astringentes, anestésicos locales o agentes antiinflamatorios, o pueden comprender materiales adicionales útiles en la formulación física de varias formas de dosificación de las composiciones de la presente divulgación, tales como colorantes, agentes aromatizantes, conservantes, antioxidantes, opacificantes, agentes espesantes y estabilizantes. No obstante, dichos materiales, cuando se añaden, no deberían interferir indebidamente con las actividades biológicas de los componentes de las composiciones de la presente divulgación. Las formulaciones se pueden esterilizar y, si se desea, mezclar con agentes adyuvantes, por ejemplo lubricantes, conservantes, estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes, sales de influencia sobre la presión osmótica, tampones, colorantes, aromatizantes y/o sustancias aromáticas y similares, que no interaccionan de forma perjudicial con el(los) oligonucleótidos de la formulación.
Los compuestos antisentido divulgados en el presente documento se pueden mezclar, encapsular, conjugar o, de otro modo, asociar con otras moléculas, estructuras moleculares o mezclas de compuestos.
En el presente documento también se describen composiciones farmacéuticas y formulaciones que incluyen los compuestos antisentido divulgados en el presente documento. Las composiciones farmacéuticas se pueden administrar de diversos modos dependiendo de si se desea tratamiento local o sistémico y del área que se va a tratar. En una realización preferida, la administración es tópica en la superficie del tracto respiratorio, particularmente pulmonar, por ejemplo mediante nebulización, inhalación o insuflación de polvos o aerosoles, por boca y/o nariz.
Las formulaciones farmacéuticas descritas en la presente invención, que se pueden presentar de forma conveniente en forma de monodosis, se pueden preparar de acuerdo con técnicas convencionales bien conocidas en la industria farmacéutica. Dichas técnicas incluyen la etapa de poner en contacto los ingredientes activos con el(los) transportador(es) farmacéutico(s) o excipiente(s). En general, las formulaciones se preparan poniendo en contacto de forma uniforme y estrecha los ingredientes activos con transportadores líquidos o transportadores sólidos finamente divididos o con ambos y, después, en caso necesario, dando forma al producto en la formulación deseada (p. ej., en un tamaño de partícula específico para liberación). En una realización preferida, las formulaciones farmacéuticas se preparan para administración pulmonar en un disolvente adecuado, por ejemplo agua o solución salina normal, posiblemente en una formulación estéril, con transportadores u otros agentes para permitir la formación de gotas del diámetro deseado para liberación usando inhaladores, dispositivos de liberación nasal, nebulizadores y otros dispositivos para liberación pulmonar. Como alternativa, las formulaciones farmacéuticas se pueden formular como polvos secos para usar en inhaladores de polvo seco.
Un “transportador farmacéutico” o “excipiente” puede ser un disolvente farmacéuticamente aceptable, agente de suspensión o cualquier otro vehículo farmacológicamente inerte para liberar uno o más ácidos nucleicos a un individuo y se conocen en la técnica. El excipiente puede ser líquido o sólido y se selecciona, con el modo de administración previsto en mente, de modo que proporcione el volumen y la consistencia etc. deseados cuando se combina con un ácido nucleico y los otros componentes de una composición farmacéutica dada.
H. Ciertos usos terapéuticos
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido se usan para modular la expresión de un gen diana en un animal, tal como un ser humano. En ciertas realizaciones, dichos compuestos se pueden usar para tratar trastornos metabólicos o modular una o más indicaciones de enfermedad. Por ejemplo, los procedimientos comprenden la etapa de administrar a dicho animal que necesite terapia por una enfermedad o afección asociada con un gen diana una cantidad eficaz de un compuesto antisentido que module la expresión del gen. Los compuestos antisentido divulgados en el presente documento que modulan de forma eficaz la expresión de un ARN diana o productos proteicos de la expresión se consideran compuestos antisentido activos. Los compuestos antisentido activos también pueden incluir compuestos que modulan de forma eficaz una o más de una serie de indicaciones de enfermedad, incluidas indicaciones de enfermedad metabólica y cardiovascular, ejemplos de los cuales se describen más adelante.
La modulación de la expresión de un gen diana se puede medir en un fluido corporal, que puede o no contener células, tejido u órgano del animal. Procedimientos de obtener muestras para análisis, tales como fluidos corporales (p. ej., esputo, suero, orina), tejidos (p. ej., biopsia) u órganos y procedimientos de preparación de las muestras para permitir el análisis son bien conocidos para los expertos en la técnica. Procedimientos para el análisis de ARN y los niveles de proteínas se tratan anteriormente y son bien conocidos para los expertos en la técnica. Los efectos del tratamiento se pueden evaluar midiendo biomarcadores, o indicaciones de enfermedad, asociados con la expresión del gen diana en los fluidos, tejidos u órganos mencionados anteriormente, recogidos de un animal en contacto con uno o más compuestos descritos en el presente documento, mediante procedimientos clínicos rutinarios conocidos en la técnica. Estos biomarcadores incluyen, entre otros: transaminasas hepáticas, bilirrubina albúmina, nitrógeno ureico en sangre, creatinina y otros marcadores de función renal y hepática; interleucinas, factores de necrosis tumoral, moléculas de adhesión intracelular, proteína C reactiva, quimiocinas, citocinas y otros marcadores de inflamación. Los compuestos antisentido divulgados en el presente documento se pueden usar en composiciones farmacéuticas añadiendo una cantidad eficaz de un compuesto a un diluyente o transportador adecuado farmacéuticamente aceptable. Transportadores y diluyentes aceptables son bien conocidos para los expertos en la técnica. La selección de un diluyente o transportador se basa en una serie de factores, incluidos, entre otros, la solubilidad del compuesto y la vía de administración. Dichas consideraciones son bien conocidas poros expertos en la técnica. En un aspecto, los compuestos antisentido descritos en el presente documento inhiben la expresión de un gen diana. Los compuestos también se pueden usar en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades y trastornos relacionados con un gen diana.
También se contemplan procedimientos mediante los que fluidos corporales, órganos o tejidos se ponen en contacto con una cantidad eficaz de uno o más de los compuestos antisentido o las composiciones divulgadas en el presente documento. Los fluidos corporales, órganos o tejidos se pueden poner en contacto con uno o más de los compuestos, dando como resultado la modulación de la expresión de un gen diana en las células de los fluidos corporales, órganos o tejidos. Una cantidad eficaz se puede determinar monitorizando el efecto modulador del compuesto antisentido o compuestos o composiciones sobre los ácidos nucleicos diana o sus productos mediante procedimientos de rutina para el experto en la técnica.
En ciertas realizaciones, dos o más compuestos antisentido se administran de forma conjunta. En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas incluyen uno o más compuestos antisentido, particularmente oligonucleótidos, dirigidos a un primer ácido nucleico y uno o más compuestos antisentido dirigidos a un segundo ácido nucleico diana. Uno o más de dichos compuestos antisentido pueden ser un compuesto antisentido corto. En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas incluyen dos o más compuestos antisentido dirigidos a diferentes regiones del mismo ácido nucleico diana. Uno o más de dichos compuestos antisentido pueden ser un compuesto antisentido corto. Dos o más compuestos combinados se pueden usar juntos o de forma secuencial.
Administracón conjunta
En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas se administran conjuntamente con uno o más agentes farmacéuticos distintos. En ciertas realizaciones, dichos uno más agentes farmacéuticos distintos están diseñados para tratar la misma enfermedad o afección distinta a la de las una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación. En ciertas realizaciones, dichos uno más agentes farmacéuticos distintos están diseñados para tratar otra enfermedad o afección distinta a la de las una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación. En ciertas realizaciones, dichos uno más agentes farmacéuticos distintos están diseñados para tratar un efecto indeseado de las una
o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación se administran conjuntamente con otro agente farmacéutico para tratar un efecto indeseado de dicho otro agente farmacéutico. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación y uno o más agentes farmacéuticos distintos se administran al mismo tiempo. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación y uno o más agentes farmacéuticos distintos se administran en momentos diferentes. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación y uno o más agentes farmacéuticos distintos preparan juntos en una única formulación. En ciertas realizaciones, una o más composiciones farmacéuticas de la presente divulgación y uno o más agentes farmacéuticos distintos se preparan por separado.
En ciertas realizaciones, los agentes farmacéuticos que se pueden administrar de forma conjunta con una composición farmacéutica de la presente divulgación incluyen agentes hipolipemiantes. En ciertas de dichas realizaciones, los agentes farmacéuticos que se pueden administrar de forma conjunta con una composición farmacéutica de la presente divulgación incluyen, entre otros, atorvastatina, simvastatina, rosuvastatina y ezetimiba. En ciertas de dichas realizaciones, el agente hipolipemiante se administra antes de la administración de una composición farmacéutica de la presente divulgación. En ciertas de dichas realizaciones, el agente hipolipemiante se administra después de la administración de una composición farmacéutica de la presente divulgación. En ciertas de dichas realizaciones, el agente hipolipemiante se administra al mismo tiempo que la composición farmacéutica de la presente divulgación. En ciertas de dichas realizaciones, la dosis de un agente hipolipemiante coadministrado es la misma que la dosis que se administraría si el agente hipolipemiante se administrara solo. En ciertas de dichas realizaciones, la dosis de un agente hipolipemiante coadministrado es menor que la dosis que se administraría si el agente hipolipemiante se administrara solo. En ciertas de dichas realizaciones, la dosis de un agente hipolipemiante coadministrado es mayor que la dosis que se administraría si el agente hipolipemiante se administrara solo.
En ciertas realizaciones, un agente hipolipemiante coadministrado es un inhibidor de la HMG-CoA reductasa. En ciertas de dichas realizaciones, el inhibidor de la HMG-CoA reductasa es una estatina. En ciertas de dichas realizaciones, la estatina se selecciona de atorvastatina, simvastatina, pravastatina, fluvastatina y rosuvastatina. En ciertas realizaciones, un agente hipolipemiante coadministrado es un inhibidor de la absorción de colesterol. En ciertas de dichas realizaciones, el inhibidor de la absorción de colesterol es ezetimiba. En ciertas realizaciones, un agente hipolipemiante coadministrado es un inhibidor de la HMG-CoA reductasa formulado conjuntamente con un inhibidor de la absorción de colesterol. En ciertas de dichas realizaciones, el agente hipolipemiante formulado conjuntamente es ezetimiba/simvastatina. En ciertas realizaciones, un agente hipolipemiante coadministrado es un inhibidor de la proteína de transferencia de triglicéridos microsomal.
En ciertas realizaciones, un agente farmacéutico coadministrado es un secuestrante de ácidos biliares. En ciertas de dichas realizaciones, el secuestrante de ácidos biliares se selecciona de colestiramina, colestipol y colesevelam.
En ciertas realizaciones, un agente farmacéutico coadministrado es un ácido nicotínico. En ciertas de dichas realizaciones, el ácido nicotínico se selecciona de ácido nicotínico de liberación inmediata, ácido nicotínico de liberación extendida y ácido nicotínico de liberación sostenida.
En ciertas realizaciones, un agente farmacéutico coadministrado es un ácido fíbrico. En ciertas de dichas realizaciones, el ácido fíbrico se selecciona de gemfibrozilo, fenofibrato, clofibrato, bezafibrato y ciprofibrato.
Otros ejemplos de agentes farmacéuticos que se pueden administrar de forma conjunta con una composición farmacéutica de la presente divulgación incluyen, entre otros, corticosteroides, incluidos, entre otros, prednisona; inmunoglobulinas, incluidas, entre otras inmunoglobulina intravenosa (IgIV); analgésicos (p. ej., acetaminófeno); agentes antiinflamatorios, incluidos, entre otros, fármacos antiinflamatorios no esteroideos (p. ej., ibuprofeno, inhibidores de la COX-1 e inhibidores de la COX-2); salicilatos; antibióticos; antivirales; agentes antifúngicos; agentes antidiabéticos (p. ej., biguanidas, inhibidores de la glucosidasa, insulinas, sulfonilureas y tiazolidendionas); modificadores adrenérgicos; diuréticos; hormonas (p. ej., esteroides anabólicos, andrógenos, estrógenos, calcitonina, progestina, somatostatina y hormonas tiroideas); inmunomoduladores; relajantes musculares; antihistamínicos, agentes antiosteoporosis (p. ej., bisfosfonatos, calcitonina y estrógenos); prostaglandinas, agentes antineoplásicos; agentes psicoterapéuticos; sedantes; productos del roble venenoso del atlántico o de zumaque venenoso; anticuerpos; y vacunas.
En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas de la presente divulgación se pueden administrar de forma conjunta con una terapia hipolipemiante. En ciertas de dichas realizaciones, una terapia hipolipemiante es un cambio terapéutico del estilo de vida. En ciertas de dichas realizaciones, una terapia hipolipemiante es aféresis de LDL.
I. Kit, reactivos de investigación y diagnósticos
Los compuestos antisentido divulgados en el presente documento se pueden utilizar para diagnóstico y como reactivos y kit de investigación. Además, los compuestos antisentido que pueden inhibir la expresión génica o modular la expresión génica con especificidad, a menudo son usados por los expertos en la técnica para aclarar la función de genes concretos
o distinguir entre funciones de varios miembros de una vía biológica.
Para usar en kit y diagnóstico, los compuestos antisentido descritos en el presente documento, bien solos o en combinación con otros compuestos o terapéuticas, se pueden usar como herramientas en análisis diferencial y/o de combinación para aclarar los patrones de expresión de una porción o todo el complemento de genes expresados dentro de las células o tejidos. Los procedimientos de análisis de la expresión génica son bien conocidos para los expertos en la técnica.
J. Ciertas ventajas de los compuestos antisentido cortos
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen ventajas cuando se comparan con su oligonucleótido parental. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen mayor afinidad por un ácido nucleico diana que su oligonucleótido parental. En ciertas realizaciones, compuestos antisentido cortos tienen mayor potencia in vitro que su oligonucleótido parental. En ciertas de dichas realizaciones, la mayor potencia in vitro no está completamente explicada por su mayor afinidad. En ciertas de dichas realizaciones, dicha mayor potencia in vitro se puede atribuir a un incremento de la capacidad de los compuestos antisentido cortos para penetrar en las células y/o a la mayor capacidad par acceder a los ácidos nucleicos diana en una célula. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen mayor potencia in vivo que sus oligonucleótidos parentales. En ciertas realizaciones, dicha mayor potencia in vivo no se puede atribuir al incremento de la potencia in vitro o al incremento de la afinidad. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido cortos tienen incluso mayor potencia in vivo en comparación con sus oligonucleótidos parentales de lo que se predeciría en base a sus potencias in vitro o en las afinidades. En ciertas realizaciones, dicho incremento de la potencia in vivo puede atribuirse al incremento de la biodisponibilidad, menor penetración en la célula, mejor acceso al ácido nucleico diana une vez que está en la célula o a otros factores.
En ciertas realizaciones, cabría esperar que los compuestos antisentido cortos fueran menos específicos de su ácido nucleico diana en comparación con sus oligonucleótidos parentales. En ciertas de dichas realizaciones, cabría esperar un incremento de los efectos secundarios, incluido el potencial de efectos tóxicos, de los compuestos antisentido cortos. En ciertas realizaciones, dichos efectos secundarios adicionales no se observan. En ciertas realizaciones, los ácidos nucleicos no diana a los que se puede unir un compuesto antisentido corto no están disponibles para el compuesto antisentido corto. En dichas realizaciones, los efectos secundarios, incluida la toxicidad, son menos problemáticos de lo que cabría esperar.
En ciertas realizaciones, porque son más pequeños, es menos probable que los compuesto antisentido corto se unan a proteínas. En ciertas de dichas realizaciones, dicha menor unión de proteínas tiene como resultado menor toxicidad, ya que la unión a proteínas puede tener consecuencias no deseadas. En ciertas de dichas realizaciones, dicha menor unión de proteínas tiene como resultado mayor potencia, ya que deja más compuesto antisentido disponible para el efecto terapéutico. En ciertas realizaciones, la menor unión de proteínas tiene como resultado una menor toxicidad por interacción farmacológica.
Ejemplo 1: Cultivo celular y tratamiento con compuestos antisentido cortos
El efecto de los compuestos antisentido cortos sobre la expresión del ácido nucleido diana se puede analizar en una cualquiera de una serie de líneas celulares cultivadas o primarias. Las líneas celulares se pueden obtener de fuentes disponibles para el público, tal como la Colección Americana de Cultivos Tipo ((Manassas, VA). Las células se cultivan de acuerdo con procedimientos bien conocidos para los expertos en la técnica.
Cuando las células alcanzaron la confluencia adecuada, fueron tratadas con oligonucleótido usando LIPOFECTIN®, tal como se ha descrito. Cuando las células alcanzaron una confluencia del 65-75 % fueron tratadas con oligonucleótido. El oligonucleótido se mezcló con LIPOFECTIN® Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA) en medio Opti-MEM® con reducción de suero (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA) para alcanzar la concentración deseada del oligonucleótido y una concentración de LIPOFECTIN® de 2,5 o 3 g/ml por oligonucleótido 100 nM. Esta mezcla de transfección se incubó a temperatura ambiente durante aproximadamente 0,5 horas. Para las células cultivadas en placas de 96 pocillos, las células se lavaron una vez con 100 l de OPTI-MEM®-1 y después se trataron con 130 l de la mezcla de transfección. Las células cultivadas en placas de 24 pocillos u otras placas de cultivo tisular estándar se trataron de forma similar, usando volúmenes adecuados de medio y de oligonucleótido. Las células fueron tratadas y los datos se obtuvieron por duplicado o por triplicado. Tras aproximadamente 4-7 horas de tratamiento a 37 ºC, el medio que contenía la mezcla de transfección se reemplazó con medio de cultivo fresco. Las células se recogieron 16-24 horas después del tratamiento con oligonucleótido.
Se usan oligonucleótidos control para determinar la concentración óptima del compuesto oligomérico para una línea celular concreta. Además, cuando los compuestos oligoméricos se analizan en experimentos de detección selectiva de compuestos oligoméricos o ensayos fenotípicos, los oligonucleótidos control se analizan en paralelo.
La concentración del oligonucleótido usado varía de una línea celular a otra línea celular. Para determinar la concentración óptima del oligonucleótido para una línea celular concreta, se trata a las células con un oligonucleótido control positivo con una serie de concentraciones. La concentración del oligonucleótido control positivo que tiene como resultado un 80% de inhibición del ARNm diana se usa después como concentración de detección selectiva para nuevos oligonucleótidos en experimentos posteriores para dicha línea celular. Si no se alcanza un 80% de inhibición, la concentración menor del oligonucleótido control positivo que tiene como resultado un 60% de inhibición del ARNm diana se usa después como concentración de detección selectiva del oligonucleótido en experimentos posteriores para dicha línea celular. Si no se alcanza 60% de inhibición, se estima que dicha línea celular concreta es inadecuada para los experimentos de transfección de oligonucleótidos. Las concentraciones de los oligonucleótidos antisentido usadas en el presente documento son de 50 nM A 300 nM cuando el oligonucleótido antisentido se transfecciona usando un reactivo de liposoma y 1 nM a 40 nM cuando el oligonucleótido antisentido se transfecciona mediante electroporación.
Ejemplo 2: Análisis con PCR cuantitativa en tiempo real de los niveles de ARNm diana
La cuantificación de los niveles de ARNm diana se realizó mediante PCR cuantitativa en tiempo real usando el sistema de detección de secuencias ABI PRISM® 7600, 7700, o 7900 (PE-Applied Biosystems, Foster City, CA) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Antes del análisis de PCR cuantitativa, los equipos cebador-sonda específicos del gen diana que se está midiendo se evaluaron según su capacidad de "multiplexar” con una reacción de amplificación por GAPDH. Tras el aislamiento, el ARN se somete a reacción secuencia de transcriptasa inversa (TI) y PCR en tiempo real, ambas realizadas en el mismo pocillo. Los reactivos para TI y PCR se obtuvieron en Invitrogen Life Technologies (Carlsbad, CA). La PCR con TI en tiempo real se llevó a cabo en el mismo añadiendo 20 l de cóctel de PCR (2,5 X tampón de PCR menos MgCl2, MgCl2 6,6 mM, 375 mM cada uno de dATP, dCTP, dCTP y dGTP, 375 nM de cada uno de cebador directo y cebador inverso, 125 nM de sonda, 4 Unidades de inhibidor de RNasa, 1,25 unidades de PLATINUM® Taq, 5 Unidades de transcriptasa inversa MuLV y 2,5 x pigmento de Rox) a placas de 96 pocillos que contienen 30 l de solución de ARN total (20-200 ng). La reacción de TI se llevó a cabo mediante incubación durante 30 minutos a 48 ºC. Tras una incubación de 10 minutos a 95 ºC para activar la PLATINUM® Taq, se llevaron a cabo 40 ciclos de un protocolo de PCR de dos etapas: 95 ºC durante 15 segundos (desnaturalización), seguido de 60 ºC durante 1,5 minutos (hibridación/extensión)
5 Las cantidades del gen diana obtenidos mediante PCR en tiempo real con TI se normalizaron usando el nivel de expresión de GAPDH, un gen cuya expresión es constante, o cuantificando el ARN total usando RiboGreen® (Molecular Probes, Inc. Eugene, OR). La expresión de GAPDH se cuantificó mediante PCR en tiempo real con TI realizada simultáneamente con la diana, multiplexando o por separado. El ARN total se cuantificó usando reactivo de cuantificación RiboGreen® (Molecular Probes, Inc. Eugene, OR)
10 En una placa de 96 pocillos que contenía 30 l de ARN celular purificado se pipetearon 170 l de reactivo de trabajo RiboGreen® (reactivo RiboGreen® diluido a 1:350 en Tris-Hcl 10 mM, EDTA 1 mM, pH 7,5). La placa se leyó en un lector CytoFluor® 4000 (PE Applied Biosystems) con excitación de 485 nm y emisión a 530 nm.
Las sondas para PCR de GAPDH tiene JOE unido covalentemente en el extremo 5’ y TAMRA o MGB unidos covalentemente al extremo 3’, donde JOE es el colorante indicador fluorescente y TAMRA o MGB es el colorante
15 inactivador. En algunos tipos de celular se usan cebadores y sondas diseñados para una secuencia de GAPDH de una especie diferente, para medir los gastos de expresión de GAPDH. Por ejemplo, un equipo de sonda y cebador para GAPDH se usa para medir la expresión de GAPDH en células y líneas celulares derivadas de mono.
Las sondas y cebadores para uso en PCR en tiempo real se diseñaron para hibridar con los ácidos nucleicos diana a través de procedimientos de rutina. Por ejemplo, el software PrimerExpress® (Applied Biosystems, Foster City, CA) se usa
20 de forma rutinaria para diseñar sondas y cebadores para uso en PCR en tiempo real. Ejemplos de secuencias de cebadores y sondas y de los ácidos nucleicos con los que hibridan se presentan en la Tabla 24. Las sondas para PCR específicas de la diana tienen FAM unido covalentemente al extremo 5’ y TAMRA o MGB unidos covalentemente al extremo 3’, donde FAM es el colorante fluorescente y TAMRA o MGB es el colorante inactivador.
Tabla 24
Cebadores y sondas específicos de diana para uso en PCR en tiempo real
Nombre de la diana
Especie Descripción de la secuencia Secuencia (5’ a 3’) SEC ID Nº
ApoB
Ratón Cebador directo CGTGGGCTCCAGCATTCTA 1524
ApoB
Ratón Cebador inverso AGTCATTTCTGCCTTTGCGTC 1525
ApoB
Ratón Sonda CCAATGGTCGGGCACTGCTCAA 1526
ApoB
Ratón Cebador directo GAAAATAGACTTCCTGAATAACTATGCATT 1527
ApoB
Ratón Cebador inverso ACTCGCTTGCCAGCTTGC 1528
ApoB
Ratón Sonda TTTCTGAGTCCCCGTGCCCAACA 1529
GCGR
Ratón Cebador directo TGAGCCTTGCCACCTTCTCT 1530
GCGR
Ratón Cebador inverso GCGCACCCCAGCCAA 1531
GCGR
Ratón Sonda AGAGGAGCTTCTTTTCCCTCTACCTGGGC 1532
GCGR
Ratón Cebador directo ATTTCCTGCCCCTGGTACCT 1533
GCGR
Ratón Cebador inverso CGGGCCCACACCTCTTG 1534
GCGR
Ratón Sonda CCACAAAGTGCAGCACCGCCTAGTGT 1535
PTEN
Ratón Cebador directo GCCACAGGCTCCCAGACAT 1536
PTEN
Ratón Cebador inverso TCCATCCTCTTGATATCTCCTTTTG 1537
PTEN
Ratón Sonda ACAGCCATCATCAAAGAGATCGTTAGCAGAA 1538
PTEN
Ratón Cebador directo ATGACAATCATGTTGCAGCAATTC 1539
Cebadores y sondas específicos de diana para uso en PCR en tiempo real
Nombre de la diana
Especie Descripción de la secuencia Secuencia (5’ a 3’) SEC ID Nº
PTEN
Ratón Cebador inverso CGATGCAATAAATATGCACAAATCA 1540
PTEN
Ratón Sonda CTGTAAAGCTGGAAAGGGACGGACTGGT 1541
Ejemplo 3: Compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de ApoB y que tiene modificaciones 2’MOE o metilenoxi(4’-CH2O-2’) BNA
En ratones Balb/c macho de seis semanas de edad (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) se inyectó por vía
5 intraperitoneal (i.p.) compuestos antisentido dirigidos a ApoB a una frecuencia de dos veces a la semana durante tres semanas. Las dosis de compuestos antisentido incluyeron 2,4, 1,2, 0,6, 0,3 y 0,15 mol/kg. Para los compuestos antisentido de 14 nucleótidos de longitud, estas dosis corresponden a aproximadamente 12, 6, 3, 1,5 o 0,75 mg/kg, respectivamente. En la Tabla 25 se muestran las secuencias y motivos de los compuestos antisentido usados en este estudio. Los compuestos antisentido tienen una longitud de 20 0 14 nucleótidos y tienen una región “hueco” central que
10 consiste en diez 2’-desoxinucleótidos flanqueados por alas que tienen “alas” modificadas con 2’-O-metoxietilo (2'-MOE) o BNA. Por ejemplo, el motivo del gápmero 2-10-2 MOE indica un compuesto antisentido con un hueco de diez nucleótidos flanqueado por alas de 2 nucleótidos con modificaciones 2’-MOE. Los residuos en negrita indican restos 2’-O-metoxietilo y los residuos en cursiva indican metilenoxi (4’-CH2O-2’) BNA. Los enlaces internucleosídicos de cada compuesto son, en todos, fosforotioato. Todos los residuos de citosina de ISIS 147764 e ISIS 372938 se reemplazan con 5-metilcitosinas.
15 Para ISIS 387462, sólo el residuo de citosina en el ala del compuesto está sustituido por 5-metilcitosinas. Los compuestos antisentido para ApoB están dirigidos a las secuencias de ApoB-100 disponibles, incluido el número de registro en Genbank XM_137955.5 (SEC ID Nº: 2).

Tabla 25: Compuestos antisentido dirigidos a un ácido nucleico de ApoB
Nº ISIS
SEC ID Nº de la diana Sitio diana en 5’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
147764
2 8865 GTCCCTGAAGATGTCAATG C 5-10-5 MOE 1561
372938
2 8235 GGTACATGGAAGTC 2-10-2 MOE 190
387462
2 8235 GGTACATGGAAGTC 2-10-2 metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA 190
20 Cuarenta y ocho horas después de la inyección final, se sacrificó a los ratones para evaluar las transaminasas (Tabla 26); el peso del hígado y los riñones (Tabla 27); los niveles de triglicéridos, LDL, HDL y ácidos grasos libres (Tabla 28); niveles de ARNm diana en el hígado (Tabla 29); niveles de proteína diana en plasma; y concentración de oligonucleótidos en tejido (Tabla 30). Estos criterios de valoración se determinaron usando procedimientos descritos en el presente documento y muy conocidos para los expertos en la técnica.
25 Tabla 26: Niveles de ALT y AST (UI/l)
Nº ISIS
Dosis mol/kg ALT AST
Solución salina
N/A 27,8 46,3
147764
2,4 29,5 64,0
372938
2,4 26,0 49,0
372938
1,2 24,8 49,5
372938
0,6 28,0 79,3
Nº ISIS
Dosis mol/kg ALT AST
372938
0,3 28,3 60,0
372938
0,15 28,3 50,3
387462
2,4 41,3 84,0
387462
1,2 35,3 63,5
387462
0,6 32,0 77,3
387462
0,3 27,8 55,0
387462
0,15 29,3 68,3

Tabla 27: Peso del hígado y los riñones (% de solución salina control)
Nº ISIS
Dosis mol/kg Hígado Riñón
Solución salina
N/A 100 100
147764
2,4 102 105
372938
2,4 100 100
372938
1,2 90 101
372938
0,6 96 112
372938
0,3 91 107
372938
0,15 96 98
387462
2,4 116 90
387462
1,2 113 90
387462
0,6 106 97
387462
0,3 101 126
387462
0,15 95 100

Tabla 28: Niveles de triglicéridos (TRIG), colesterol total (COL), HDL, LDL y ácidos grasos libres (AGL)
El peso corporal total y el consumo de alimentos no difirió significativamente entre los animales tratados con solución salina o con oligonucleótidos. Los niveles de glucosa fueron similares en todos los grupos de tratamiento.
Nº ISIS
Dosis mol/kg TRIG (mg/dl) COL (mg/dl) HDL (mg/dl) LDL (mg/dl) AGL (mg/dl)
Solución salina
N/A 167 107 81,8 11,0 1,76
147764
2,4 167 107 81,3 10,3 1,29
372938
2,4 153 104 79 10,3 1,28
372938
1,2 136 101 77,8 9,5 1,7
372938
0,6 184 110 83,3 10,8 1,66
Nº ISIS
Dosis mol/kg TRIG (mg/dl) COL (mg/dl) HDL (mg/dl) LDL (mg/dl) AGL (mg/dl)
372938
0,3 138 109 84,3 11,0 1,53
372938
0,15 151 106 82,8 10,8 1,57
387462
2,4 49 14 9,0 1,5 0,74
387462
1,2 71 23 16,5 2,0 0,76
387462
0,6 150 55 39,3 3,7 1,43
387462
0,3 136 92 72,8 7,5 1,14
387462
0,15 163 104 81,5 9,3 1,47

Tabla 29: % Niveles de ARNm de ApoB (respecto a la solución salina control)
Nº ISIS
2,4 μmol/kg 1,2 μmol/kg 0,6 μmol/kg 0,3 μmol/kg 0,15 μmol/kg
147764
57,7 ND ND ND ND
372938
77 90,0 87,3 92,6 93,1
387462
1,5 8,5 27,4 58,9 75,8
El tratamiento con ISIS 387462 tuvo como resultado una significativa reducción dependiente de la dosis de los niveles de
5 triglicéridos, colesterol total, HDL, LDL y ácidos grasos libres. De acuerdo con estos hallazgos fenotípicos, el tratamiento con ISIS 387462 también condujo a una reducción dependiente de la dosis de los niveles de ARNm de ApoB (Tabla 29) y de proteínas (no mostrado) en plasma de ratón. Para determinar si el incremento observado en la eficiencia con el gápmero metilenoxi (4’-CH2O-2’) BNA se debe a un incremento de la acumulación de oligonucleótidos, se determinó la concentración de los oligonucleótidos de longitud completa y totales en hígado y riñón.
10 Tabla 30: Concentración tisular de compuestos antisentido de longitud completa y total (M) respecto al nivel de ARNm de ApoB (% de solución salina control)
Nº ISIS
Dosis mol/kg Longitud completa en riñón Longitud completa en hígado Total en riñones Total en hígado ARNm de ApoB
147764
2,4 28,6 22,9 33,5 31,3 58
372938
2,4 32 5,49 34 7,76 77
387462
2,4 37,2 5,69 38,9 7,31 1,5
387462
1,2 29,8 3,71 31,3 4,91 8,5
387462
0,6 18,9 1,97 20 2,57 27
387462
0,3 9,11 0,73 9,49 0,78 59
387462
0,15 6,97 0,19 7,43 0,24 76
Los niveles del gápmero -10-2 metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA fueron similares a los de los gápmeros 5-10-5 y 2-10-2 MOE en los riñones, pero se redujeron significativamente en el hígado. La CE50 para ISIS 387462 en el hígado se determinó
15 comparando la concentración del oligonucleótido en el hígado con la inhibición de ARNm de ApoB. La CE50 aproximada para ISIS 387462 es 1 M. En contraste con ello, un compuesto gápmero eficaz 5-10-5 MOE normalmente tiene una CE50 de aproximadamente 15 M en el hígado.
En conjunto, estos resultados demuestran que el gápmero corto de ApoB que tiene metilenoxi (4’-CH2-O-2’) en las alas es un potente inhibidor de la expresión de ARNm diana y puede reducir de forma eficaz los niveles de triglicéridos, colesterol y ácidos grasos libres. La potencia del compuesto antisentido corto no parece ser el resultado del incremento de la acumulación en tejido, ya que se han observado niveles similares del compuesto en el riñón y en el hígado se encontraron
5 niveles reducidos en relación con el gápmero 5-10-5 MOE. Además, el gápmero (4’-CH2-O-2’) BNA exhibió pocos o ningún efecto secundario adverso.
Ejemplo 4: Compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR y que tiene modificaciones 2’MOE
En ratones C57/BL6 macho de ocho semanas de edad (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) se administró una dosis
10 única de oligonucleótido GCGR mediante inyección intraperitoneal a una concentración de 6,25, 12,5, 25 o 50 mg. Cada grupo de dosis estaba constituido por cuatro animales. En la Tabla 31 se muestran las secuencias, motivos y conjugados de los compuestos antisentido de GCGR usados en este estudio. Los residuos en negrita indican restos 2’-O-metoxietilo (2’-MOE). Todos los compuestos comprenden enlaces internucleosídicos fosforotioato y cada citosina está sustituida por 5-metilcitosina. Los compuestos ISIS 386626, ISIS 386627 y ISIS 386628 comprenden además un grupo C16 conjugado
15 unido en la posición 2’-O del azúcar mediante un enlace diamida (2’-OCH2C(=O)N(H)(CH2)4N(H)C(=O)-(CH2)15CH3). Los compuestos antisentido para GCGR están dirigidos a las secuencias de GCGR publicadas, incluida el número de registro en Genbank BC031885.1 (SEC ID Nº: 7).

Tabla 31: Compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR
Nº ISIS
SEC ID Nº de la diana Sitio diana en 5’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero Conjugado SEC ID Nº
148364
7 393 TGCACTTTGTGGTACCAAGG 5-10-5 MOE Ninguno 1562
386626
7 1768 GC16CTTCTCCATCATA 2-10-2 MOE C16 1563
386627
7 1244 GC16GGCATGCTCGTCA 2-10-2 MOE C16 653
386593
7 1244 GGGCATGCTCGTCA 2-10-2 MOE Ninguno 649
386628
7 1680 TC16GTCTTGCTGCTTT 2-10-2 MOE C16 1564
386594
7 1680 TGTCTTGCTGCTTT 2-10-2 MOE Ninguno 1565
20 Se sacrificó a los ratones 48 horas después de la inyección para determinar los niveles de transaminasa (Tabla 32); el peso del hígado, tejido adiposo blanco (TAB), bazo y riñón (Tabla 33); los niveles de colesterol, triglicéridos y glucosa (Tabla 34); los niveles de ARNm de GCGR (Tablas 35-41) y la concentración de oligonucleótidos de longitud completa y totales en hígado y riñón (Tabla 42). Los criterios de valoración se evaluaron usando procedimientos descritos en el presente documento y bien conocidos para los expertos en la técnica. Se incluyen datos de una extracción de sangre
25 pretratamiento (preextracción) y una extracción de sangre postratamiento (postextracción)

Tabla 32: Niveles de ALT y AST (UI/l)
Nº ISIS
Dosis (mg/kg) ALT Preextracción ALT Postextracción AST Preextracción AST Postextracción
Solución salina
N/A 36 51 55 85
Nº ISIS
Dosis (mg/kg) ALT Preextracción ALT Postextracción AST Preextracción AST Postextracción
148364
50 24 40 40 115
148364
25 26 35 42 87
148364
12,5 23 32 44 69
148364
6,25 28 34 47 76
386626
50 28 40 48 120
386626
25 30 36 44 92
386626
12,5 28 34 44 90
386626
6,25 26 42 46 69
386627
50 27 457 42 451
386627
25 29 97 45 142
386627
12,5 29 62 46 81
386627
6,25 23 87 38 96
386593
50 23 33 46 58
386593
25 25 32 41 95
386593
12,5 26 33 43 74
386593
6,25 28 31 43 53
386628
50 28 68 44 76
386628
25 24 32 40 57
386628
12,5 28 35 42 75
386628
6,25 22 29 40 59
386594
50 29 34 46 92
386594
25 27 31 47 82
386594
12,5 28 33 45 74
386594
6,25 23 48 42 67

Tabla 33: Pesos de los órganos (% solución salina control)
Nº ISIS
Dosis (mg/kg) Hígado TAB Riñón Bazo
Solución salina
N/A 100 100 100 100
148364
50 103 80 108 123
148364
25 103 75 112 115
148364
12,5 100 84 108 96
148364
6,25 101 89 104 113
Nº ISIS
Dosis (mg/kg) Hígado TAB Riñón Bazo
386626
50 112 77 104 130
386626
25 109 97 103 120
386626
12,5 96 73 97 114
386626
6,25 100 90 100 95
386627
50 90 113 102 165
386627
25 99 87 99 143
386627
12,5 109 93 102 136
386627
6,25 103 96 102 131
386593
50 96 98 102 118
386593
25 83 94 100 104
386593
12,5 99 82 101 129
386593
6,25 96 77 98 144
386628
50 104 100 99 126
386628
25 102 97 109 113
386628
12,5 101 111 99 114
386628
6,25 98 106 102 151
386594
50 90 80 99 131
386594
25 93 76 99 128
386594
12,5 94 98 100 113
386594
6,25 102 85 101 119

Tabla 34: Niveles de triglicéridos (TRIG), colesterol (COL) y glucosa (UI/l)
En general, los compuestos antisentido para GCGR exhibieron pocos o ningún efecto secundario adverso.
Nº ISIS
Dosis (mg/kg) TRIG Preextracción TRIG Postextracción COL Preextracción COL Postextracción
Solución salina
N/A 132 181 91 96
148364
50 110 177 81 94
148364
25 115 200 83 96
148364
12,5 106 179 85 89
148364
6,25 86 162 86 89
386626
50 87 163 79 57
386626
25 100 187 87 72
386626
12,5 100 148 82 76
386626
6,25 86 162 85 90
Nº ISIS
Dosis (mg/kg) TRIG Preextracción TRIG Postextracción COL Preextracción COL Postextracción
386627
50 106 120 83 126
386627
25 101 148 90 115
386627
12,5 99 203 86 98
386627
6,25 111 165 88 104
386593
50 130 128 100 95
386593
25 119 135 83 77
386593
12,5 122 128 83 79
386593
6,25 120 138 84 78
386628
50 102 98 88 95
386628
25 102 129 84 85
386628
12,5 90 123 90 94
386628
6,25 117 121 83 85
386594
50 93 99 84 85
386594
25 106 94 90 86
386594
12,5 118 133 85 95
386594
6,25 112 146 78 94
Los gápmeros de GCGR 2-10-2 MOE exhibían una tendencia hacia menores niveles de triglicéridos postextracción respecto al gápmero 5-10-5 MOE, teniendo los compuestos ISIS 386628 y ISIS 386594 el mayor efecto dependiente de la dosis. Los niveles de glucosa también disminuyeron de un modo dependiente de la dosis tras el tratamiento con ISIS
5 386626 e ISIS 386627. El tratamiento con ISIS 386628, ISIS 386593 e ISIS 386594 también condujo, en general, a una disminución de los niveles de glucosa postextracción. Los niveles de colesterol no parecían diferir significativamente entre los grupos de tratamiento.
Para determinar si los cambios fenotípicos mostrados con anterioridad se correlacionaban con una disminución del ARNm de GCGR, los animales tratados se evaluaron para determinar los niveles del ARNm diana en hígado mediante PCR en
10 tiempo real conforme a los procedimientos descritos en el presente documento. Las Tablas 35 a 41 muestran los resultados de comparaciones directas de los compuestos antisentido dirigidos al ácido nucleico de GCGR en cuanto a su efecto sobre la expresión diana. Los resultados se expresan en forma de porcentaje de la solución salina control.
Tabla 35: Niveles de ARNm de GCGR tras el tratamiento con ISIS 148364 e ISIS 386626
ISIS NO
50 mg/kg 25 mg/kg 12,5 mg/kg 6,25 mg/kg
148364
36 79 87 62
386626
0 8 3 7
Tabla 36: Niveles de ARNm de GCGR tras el tratamiento con ISIS 148364 e ISIS 386627
Nº ISIS
50 mg/kg 25 mg/kg 12,5 mg/kg 6,25 mg/kg
148364
63 87 105 86
386627
3 30 57 74
Tabla 37: Niveles de ARNm de GCGR tras el tratamiento con ISIS 148364 e ISIS 386593
Nº ISIS
50 mg/kg 25 mg/kg 12,5 mg/kg 6,25 mg/kg
148364
56 74 105 86
386593
9 38 74 90
Tabla 38: Niveles de ARNm de GCGR tras el tratamiento con ISIS 148364 e ISIS 386628
Nº ISIS
50 mg/kg 25 mg/kg 12,5 mg/kg 6,25 mg/kg
148364
42 77 98 101
386628
2 18 53 77
Tabla 39: Niveles de ARNm de GCGR tras el tratamiento con ISIS 148364 e ISIS 386594
Nº ISIS
50 mg/kg 25 mg/kg 12,5 mg/kg 6,25 mg/kg
148364
59 98 102 96
386594
25 47 50 96
Tabla 40: Niveles de ARNm de GCGR tras el tratamiento con ISIS 386627 e ISIS 386593
Nº ISIS
50 mg/kg 25 mg/kg 12,5 mg/kg 6,25 mg/kg
386627
5 40 58 42
386593
10 29 34 71
Tabla 41: Niveles de ARNm de GCGR tras el tratamiento con ISIS 386628 e ISIS 386594
Nº ISIS
50 mg/kg 25 mg/kg 12,5 mg/kg 6,25 mg/kg
386628
4 13 38 97
386594
19 50 56 99
10
El tratamiento con los gápmeros 2-10-2 MOE condujo a una disminución significativa dependiente de la dosis de la expresión de ARNm de GCGR. El compuesto ISIS 386626 exhibió la mayor disminución de los niveles de ARNm diana. Para determinar si el incremento observado en la eficiencia con los compuestos antisentido cortos se debe a un incremento de la acumulación del compuesto antisentido, se determinó la concentración del compuesto antisentido total
15 en hígado y riñón.
Tabla 42: Concentraciones del compuesto antisentido totales y de longitud completa en hígado y riñón (g/g)
Nº ISIS
Total en riñones Total en hígado De longitud completa en riñón De longitud completa en hígado
148364
90 54 58 46
386626
757 274 355 125
386593
91 12 77 12
Nº ISIS
Total en riñones Total en hígado De longitud completa en riñón De longitud completa en hígado
386628
496 286 305 202
Los resultados mostrados en la Tabla 42 demuestran que los compuestos antisentido cortos que comprenden un conjugado C16 exhiben un incremento significativo de la acumulación del compuesto antisentido tanto en hígado como en riñones. No obstante, el compuesto ISIS 386593, que fue eficaz en la reducción de los niveles de ARNm diana,
5 triglicéridos y glucosa, se acumula a un nivel similar al gápmero 5-10-5 MOE en hígado y en un menor nivel en riñones. Estos resultados sugieren que, aunque la conjugación con C16 puede incrementar la concentración del compuesto antisentido en hígado y riñón, no justifica del todo la eficacia de los compuestos antisentido cortos.
En conjunto, estos resultados demuestran que los compuestos antisentido cortos de GCGR son capaces de inhibir de forma significativa la expresión del ARNm diana al tiempo que reduce los niveles de triglicéridos y glucosa. Además, con la
10 excepción de ISIS 386627, los gápmeros cortos MOE exhibían pocos o ningún efecto tóxico.
Ejemplo 5: Compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR y que tienen modificaciones 2’-MOE o metilenoxi(4’-CH2O-2’) BNA
En ratones C57/BL6 macho de ocho semanas de edad (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) se administró una dosis única de compuesto antisentido de GCGR mediante inyección intraperitoneal (i.p.) a una concentración de 10, 3,2, 1 y 15 0,32 mmol/kg. Cada grupo de dosis estaba constituido por cuatro animales. En la Tabla 43 se muestran las secuencias, motivos y conjugados de los compuestos antisentido de GCGR usados en este estudio. Los residuos en negrita indican modificaciones 2’-O-metoxietilo (2’-MOE) y los residuos en cursiva indican modificaciones metilenoxi (4’-CH2O-2’) BNA. Todos los compuestos antisentido comprenden enlaces internucleosídicos fosforotioato y cada citosina está sustituida por 5-metilcitosina. Los compuestos antisentido para GCGR están dirigidos a los ácidos nucleicos de GCGR publicados,
20 incluida el número de registro en Genbank BC031885.1 (SEC ID Nº: 7).

Tabla 43: Compuestos antisentido dirigidos a un ácido nucleico de GCGR
Nº ISIS
SEC ID Nº de la diana Sitio diana en 5’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
148364
7 393 TGCACTTTGTGGTACCAAGG 5-10-5 MOE 1562
396144
7 1768 GCTTCTCCATCATA 2-10-2 MOE 1566
396148
7 1768 GCTTCTCCATCATA 2-10-2 Metilenoxi (4’CH2-O-2’) BNA 1567
396145
7 1765 ATGGCTTCTCCATCATATCC 5-10-5 MOE 1568
396146
7 1244 GGGCATGCTCGTCA 2-10-2 MOE 650
396149
7 1244 GGGCATGCTCGTCA 2-10-2 Metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA 652
396147
7 1241 CTTGGGCATGCTCGTCAGTC 5-10-5 MOE 1569
Para determinar si los cambios fenotípicos mostrados con anterioridad se correlacionaban con una disminución del ARNm de GCGR, los animales tratados se evaluaron para determinar los niveles del ARNm diana en hígado mediante PCR en
25 tiempo real con TI conforme a los procedimientos descritos en el presente documento. La Tabla 44 muestra los resultados de comparaciones directas de los compuestos antisentido dirigidos al ácido nucleico de GCGR en cuanto a su efecto sobre la expresión diana. Los resultados se expresan en forma de porcentaje de la solución salina control.

TABLA 44: Niveles de ARNm de GCGR
Nº ISIS
0,32 μmol/kg 1 μmol/kg 3,2 μmol/kg 10 μmol/kg
148364
105 106 73 38
396144
122 117 40 35
396148
20 6 2 1
396145
nd Nd 33 8
396146
98 135 95 35
396149
91 41 30 7
396147
nd Nd 68 28
Como se muestra en la Tabla 44, cada compuesto antisentido corto que tiene modificaciones metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA demostró una reducción dependiente de la dosis de los niveles de ARNm de GCGR. Además, los compuestos
5 antisentido cortos eran más eficaces en la reducción de la diana que el gápmero 5-10-5 MOE. Cada compuesto antisentido corto que comprende metilenoxi 4’-CH2-O-2’) BNA en las alas tuvo como resultado una reducción significativa de la proteína CGCGR respecto tanto a la solución salina control como al tratamiento con ISIS 148364. Después, las concentraciones DE50 estimadas para cada antisentido se calcularon usando Graphpad Prism; la DE50 es la dosis a la que se observa una reducción del ARNm del 50%. Los resultados se muestran a continuación en la tabla 45.
10 Tabla 45: Concentración DE50 estimada
Motivo gápmero
Nº ISIS DE50 (μmol/kg) DE50 (mg/kg)
5-10-5 MOE
148364 7 50,6
2-10-2 MOE
396144 4 18,1
2-10-2 metilenoxi BNA
396148 0,1 0,4
5-10-5 MOE
396145 2,1 9,3
2-10-2 MOE
396146 8,3 40
2-10-2 metilenoxi BNA
396149 1,1 5
5-10-5 MOE
396147 5,2 37,5
Ejemplo 6: Compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTEN y que tienen modificaciones (4’-CH2-O-2’) BNA
En ratones Balb/c macho de seis semanas de edad (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) se administró una única
15 inyección i.p. del compuesto antisentido de PETN a una dosis de 8 mol/kg. Cada grupo de dosis estaba constituido por cuatro animales. En la Tabla 46 se muestran las secuencias y motivos de los compuestos antisentido de PTEN usados en este estudio. Los residuos en negrita indican restos 2’-O-metoxietilo (2’-MOE) y los residuos en cursiva indican nucleótidos metilenoxi BNA. Cada compuesto antisentido comprende enlaces fosforotioato. Además, los residuos de citosina en el hueco de ISIS 384073 y en las alas de ISIS 392056, ISIS 392057, ISIS 392061 e ISIS 392063 están sustituidas por 5
20 metilcitosinas. Los compuestos antisentido están dirigidos a los ácidos nucleicos de PTEN publicados, incluida el número de registro en Genbank U92437.1 (SEC ID Nº: 13).

Tabla 46: Compuestos antisentido dirigidos a un ácido nucleico de PTEN
Nº ISIS
SEC ID Nº de la diana Sitio diana en 5’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
141923
Control N/A CCTTCCCTGAAGGTTCCTCC 5-10-5 MOE 1570
116847
29 2011 TCAAATCCAGAGGCTAGCAG 5-10-5 MOE 1571
384073
29 2013 AAATCCAGAGGCTAGC 3-10-3 metilenoxi (4 -CH2O-2’)BNA 1428
391172
29 2013 AAATCCAGAGGCTAG 2-10-3 metilenoxi (4’-CH2-O-2’)BNA 1429
392056
29 140 AGCTGCAGCCATGA 2-10-2 metilenoxi (4-CH2O-2’) BNA 1263
392057
29 807 GGTCCAGGGCCAAG 2-10-2 metilenoxi (BNA 1162
392061
29 2014 AATCCAGAGGCTAG 2-10-2 metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA 1431
392063
29 3099 AGGCCAGTGCTAAG 2-10-2 metilenoxi (4’-CH2O-2’) BNA 1226
Se sacrificó a los ratones 72 horas después de la inyección para determinar los niveles de transaminasa en suero (Tabla 47); los pesos del hígado y el bazo (Tabla 47); y los niveles del ARNm de PTEN en hígado, riñón y grasa (Tabla 48), de acuerdo con los procedimientos descritos en el presente documento y muy conocidos por el experto en la técnica.
Tabla 47: Niveles de transaminasa y pesos de los órganos
Nº ISIS
ALT (UI/l) ALT (UI/l) % solución salina en el peso del hígado % solución salina en el peso del bazo
Solución salina
98,5 37,5 100 100
141923
89,5 34,8 101 108
116847
59,8 29,5 109 108
384073
57,8 29,3 115 111
391172
48,5 32,8 120 112
392056
516 892 125 167
392057
63,8 34,5 125 101
392061
189 42 123 111
392063
67,3 21,8 127 134
En general, los compuestos antisentido cortos con modificaciones metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA exhibieron pocos o ningún efecto secundario adverso. Además, el peso corporal total no difería significativamente entre los grupos de tratamiento.

Tabla 48: % Niveles de ARN de PTEN en hígado, riñón y grasas
Nº ISIS
Hígado Riñón Grasa
Solución salina
100 100 100
141923
102 133 118
116847
37 96 85
384073
24 74 77
391172
18 63 101
392056
27 88 74
392057
33 79 96
392061
24 61 85
392063
6,5 52 72
Como se muestra en la Tabla 48, cada compuesto antisentido dirigido a un ácido nucleico de PTEN condujo a una reducción significativa de los niveles de ARNm diana en hígado en comparación con los animales tratados con solución salina y tratados con control. Los compuestos antisentido produjeron varios efectos sobre los niveles de ARNm diana en
5 riñones y grasas.
Ejemplo 7: Compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTEN y que tiene modificaciones BNA
En ratones Balb/c macho de seis semanas de edad (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) se administró una única inyección intraperitoneal (i.p.) del compuesto antisentido dirigido a un ácido nucleico de PETN a una dosis de 8, 4, 2 o 1 10 mol/kg. Cada grupo de dosis estaba constituido por cuatro animales. En la Tabla 49 se muestran la secuencia, la química del ala y los motivos de cada compuesto antisentido usados en este estudio. Los residuos en negrita indican los nucleótidos modificados con 2’-MOE, las letras en cursiva indican las modificaciones metilenoxi (4’-CH2O2’) BNA. Todos los compuestos antisentido comprenden enlaces fosforotioato en cada posición. Cada citosina de ISIS 116847 y los residuos de citosina en las alas con metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA de ISIS 392063 están sustituidas con 5-metilcitosinas,
15 mientras que los residuos de timidina en las alas con metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA de ISIS 392745 están sustituidas con 5-metiltimidinas. Los compuestos antisentido están dirigidos a los ácidos nucleicos de PTEN publicados, incluida el número de registro en Genbank U92437.1 (SEC ID Nº: 13).

Tabla 49: Compuestos antisentido dirigidos a un ácido nucleico de PTEN
Nº ISIS
SEC ID Nº de la diana Sitio diana Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
116847
13 2011 TCAAATCCAGAGGCTAGCAG 5-10-5 MOE 1571
392063
13 3099 CTTAGCACTGGCCT 2-10-2 BNA Metilenoxi BNA 1226
392745
13 3099 CTTAGCACTGGCCT 2-10-2 metilenoxi BNA 1226
20 Se sacrificó a los ratones 72 horas después de la inyección para determinar los niveles de transaminasa en suero (Tabla 50); los pesos del hígado, los riñones y el bazo (Tabla 50); los niveles del ARNm de PTEN en el hígado (Tabla 51), y la concentración DE50 estimada del oligonucleótido (Tabla 52). Estos criterios de valoración se midieron usando procedimientos descritos en el presente documento y muy conocidos para los expertos en la técnica.

Tabla 50: Niveles de AST, ALT y bilirrubina y pesos de los órganos
Nº ISIS
Dosis ### mol/kg AST (UI/l) ALT (UI/l) Bilirrubina (mg/dl) % solución salina en el peso del hígado % solución salina en el peso del riñón % solución salina en el peso del bazo
Solución salina
N/A 64,0 31,8 0,15 100 100 100
116847
8 73,0 32,0 0,1 114 92 106
392063
8 50,3 17,3 0,1 115 98 115
392063
4 100,8 31,3 0,15 122 94 116
392063
2 60,5 32,8 0,1 112 99 106
392063
1 57,5 29,3 0,1 104 95 107
392745
8 75,5 23,5 0,13 125 99 100
392745
4 77,0 29,3 0,13 121 100 96
392745
2 69,0 32,0 0,13 110 98 103
392745
1 52,0 27,3 0,1 109 97 104
En general, los compuestos antisentido de PTEN no mostraron signos significativos de toxicidad. Los pesos de los riñones, el hígado y el bazo estaban todos dentro de los límites normales. El peso corporal total no difería significativamente entre los grupos de tratamiento.
Tabla 51: % Niveles de ARNm de PTEN en hígado (respecto a la solución salina control)
Nº ISIS
8 μmol/kg 4 μmol/kg 2 μmol/kg 1 μmol/kg
116847
36 ND ND ND
392063
7,4 16 32 60
392745
5,2 11 31 60
Como se muestra en la Tabla 51, cada compuesto antisentido corto que tiene modificaciones metilenoxi (4’-CH2-O-2’)
10 BNA demostró una reducción dependiente de la dosis de los niveles de ARNm de PTEN. Además, los compuestos antisentido cortos eran más eficaces en la reducción de la diana que el gápmero 5-10-5 MOE. Los niveles de la proteína PTEN en hígado también se determinaron tras la administración de cada compuesto antisentido a una dosis de 8 μmol/kg. Cada compuesto antisentido corto que comprende metilenoxi 4’-CH2-O-2’) BNA en las alas tuvo como resultado una reducción significativa de la proteína PTEN respecto tanto a la solución salina control como al tratamiento con ISIS
15 116847. Después se calcularon las concentraciones DE50 estimadas para cada oligonucleótido usando Graphpad Prism. Los resultados se muestran a continuación en la tabla 52.

Tabla 52: Concentración DE50 estimada
Química del ala
Nº ISIS DE50 (μmol/kg) DE50 (mg/kg)
MOE (con 5-MeC)
116847 6,3 45,2
metilenoxi BNA (con 5-MeC)
392063 1,3 5,8
metilenoxi BNA
392745 1,2 5,6
Para investigar adicionalmente diferentes tipos de compuestos bicíclicos de ácido nucleico se diseñó y analizó un grupo adicional de compuestos antisentido cortos dirigidos al ácido nucleico de PTEN. En ratones Balb/c macho de seis semanas de edad (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) se administró una única inyección intraperitoneal (i.p.) del compuesto antisentido a una dosis de 8, 4, 2 o 1 mol/kg. Cada grupo de dosis estaba constituido por cuatro animales. En
5 la Tabla 53 se muestran la secuencia, la química del ala y los motivos de cada compuesto antisentido usados en este estudio. Todos los compuestos antisentido comprenden enlaces fosforotioato en cada posición. Los residuos de citosina en las alas metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA de ISIS 392063 están sustituidos por 5-metilcitosinas. El compuesto antisentido estaba dirigido a los ácidos nucleicos de PTEN publicados, incluida el número de registro en Genbank U92437.1 (SEC ID Nº: 13).
10 Tabla 53: Compuestos antisentido dirigidos a un ácido nucleico de PTEN
Nº ISIS
SEC ID Nº de la diana Sitio diana en 5’ Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
392063
29 3099 CTTAGCACTGGCC T 2-10-2 Metilenoxi BNA 1226
396564
29 3099 CTTAGCACTGGCC T 2-10-2 (4’-CH2N(R)-O- 2’) (4’-CH2-N(R)-O-2’) BNA 1226
396006
29 3099 CTTAGCACTGGCC T 2-10-2 α-L-Metilenoxi BNA 1226
Se sacrificó a los ratones 72 horas después de la inyección para determinar los niveles de transaminasa en suero (Tabla 54); los pesos del hígado y el bazo (Tabla 54); y los niveles del ARNm de PTEN en hígado, riñón y grasa (Tabla 55), de acuerdo con los procedimientos descritos en el presente documento y muy conocidos por el experto en la técnica.

Tabla 54: Niveles de AST y ALT y pesos de los órganos
Nº ISIS
Dosis mol/kg AST (UI/L) ALT (UI/L) Peso del hígado Peso del bazo
Solución salina
N/A 71 33 100 100
392063
8 97 38 118 103
392063
4 179 36 115 107
392063
2 67 32 109 116
392063
1 68 27 102 105
396564
8 67 25 100 104
396564
4 96 30 102 106
396564
2 68 27 100 119
396564
1 79 39 97 109
396006
8 56 28 110 104
396006
2 139 36 97 105
Tabla 55: % Niveles de ARNm de PTEN en hígado (respecto a la solución salina control)
Nº ISIS
8 μmol/kg 4 μmol/kg 2 μmol/kg 1 μmol/kg
392063
6,9 18 39 71
396564
86 97 100 96
396006
6,5 ND ND 70
Como se muestra anteriormente, los compuestos antisentido cortos que tienen modificaciones -L-metilenoxi (4’-CH2-O2’) BNA condujeron a una reducción dependiente de la dosis de los niveles de ARNm de diana. El tratamiento con el 5 compuesto antisentido corto que tiene modificaciones oxiamino BNA condujo a una modesta reducción de la expresión de la diana.
Ejemplo 8. Estudio de respuesta a la dosis de administración de una sola dosis con compuestos antisentido
cortos dirigidos a ácidos nucleicos de ApoB y de PTEN
En ratones Balb/c macho de seis semanas de edad (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) se administró una única
10 inyección intraperitoneal (i.p.) del compuesto antisentido a una dosis de 8, 4, 2 o 1 mol/kg. Cada grupo de dosis estaba constituido por cuatro animales. En la Tabla 56 se muestran la secuencia, la química del ala y los motivos de cada compuesto antisentido usados en este estudio. Los residuos en cursiva indican las modificaciones metilenoxi(4’-CH2-O-2’) BNA, los residuos subrayados indican las modificaciones N-metil-oxiamino (4’-CH2-N(CH3)-O-2’) BNA y los residuos en recuadros indican las modificaciones alfa-L-metilenoxi(4’-CH2-O-2’) BNA. Todos los compuestos antisentido comprenden
15 enlaces fosforotioato en cada posición. Cada citosina de ISIS 116847 y los residuos de citosina en las alas con metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA de ISIS 392063 están sustituidas con 5-metilcitosinas, mientras que los residuos de timidina en las alas con metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA de ISIS 392745 están sustituidas con 5-metiltimidinas. Los compuestos antisentido de PTEN están dirigidos a los ácidos nucleicos de PTEN publicados, incluida el número de registro en Genbank U92437.1 (SEC ID Nº: 13). Los compuestos antisentido de ApoB están dirigidos a los ácidos nucleicos de ApoB publicados, incluida
20 el número de registro en Genbank XM_137955.5 (SEC ID Nº: 2).

Tabla 56: Compuestos antisentido cortos dirigidos a ácidos nucleicos de ApoB y de PTEN
Nº ISIS
Diana SEC ID de la diana Sitio diana en 5’ SECUENCIA Gápmero SEC ID Nº
387462
ApoB 19 8235 GGTACATGGAAGTC 2-10-2 Metilenoxi BNA 193
392063
PTEN 29 3099 CTTAGCACTGGCCT 2-10-2 Metilenoxi BNA 1226
396565
PTEN 29 3099 CUTAGCACTGGCC U 2-10-2 N-Me-oxiamino 1126
396006
PTEN 29 3099 2-10-2 -L-metilenoxi BNA 1226
Tabla 57: % Reducción de ARNm de ApoB y PTEN (respecto a la solución salina control)
Nº ISIS
Dosis (μmol/kg) % Reducción de ARNm de ApoB (respecto a la solución salina) % Reducción de ARNm de PTEN (respecto a la solución salina)
387462
8 0,62 92,8
4
6,55 103
2
18,6 105
1
42 98
392063
8 126 6,79
Nº ISIS
Dosis (μmol/kg) % Reducción de ARNm de ApoB (respecto a la solución salina) % Reducción de ARNm de PTEN (respecto a la solución salina)
4
111 18,1
2
112 42,4
1
114 62,3
396565
8 116 23,8
4
1,04 46,6
2
94,4 76,1
1
115 89,5
396006
8 94,3 62,9
4
101 18,2
2
79,7 52,4
1
111 82,4
Como se muestra en la Tabla 57, cada compuesto antisentido corto que tiene modificaciones metilenoxi BNA demostró una reducción dependiente de los niveles de ARNm de la diana. Cabe destacar que el compuesto antisentido corto con las alas N-metil-oxiamino BNA (ISIS 396565) también demostró una reducción dependiente de la dosis de la expresión de PTEN similar a la de los compuestos antisentido cortos con ß-D-metilenoxi BNA y -L-metilenoxi BNA. Después se calcularon las concentraciones DE50 estimadas para cada antisentido usando Graphpad Prism. Los resultados se muestran a continuación en la Tabla 58.

Tabla 58: Concentraciones DE50 estimadas
Química del ala
Nº ISIS DE50 (μmol/kg) DE50 (mg/kg)
Metilenoxi BNA
387462 0,8 3,9
Metilenoxi BNA
392063 1,5 7
N-Me-oxiamino BNA
396565 3,8 17,4
-L-metilenoxi BNA
396006 2,1 9,3
10 EJEMPLO 9: Administración de un compuesto antisentido parental y parental de esqueleto mixto dirigido al ARNm de SGLT-2
En ratones db/db (Charles River Laboratories, Wilmington, MA) se administró ISIS 257016 por vía intraperitoneal a una dosis de 1, 7.5, 14 o 17 mg/kg dos veces a la semana. Los grupos control incluyeron un grupo que recibió solución salina según el mismo calendario de dosificación y un grupo que recibió ISIS 145733. Tanto ISIS 257016 como ISIS 145733 15 comprenden la secuencia GAAG-TAGCCACCAACTGTGC (SEC ID Nº 1572), que además comprende una región “hueco” central constituida por diez 2’-desoxinucleótidos, que está flanqueada por ambos lados (direcciones 5’ y 3’) por "alas" de cinco nucleótidos. Las alas están compuestas por nucleótidos 2’-metoxietilo (2’-MOE). Todos los residuos de citidina son 5-metilcitidinas. Los enlaces internucleosídicos (esqueleto) son fosforotioato (P=S) a lo largo del oligonucleótido para ISIS 145733; no obstante, ISIS 257016 tiene un esqueleto mixto. Los enlaces internucleosídicos para
20 ISIS 257016 son fosfodiéster (P=O) en las alas y fosforotioato en el hueco. Cuarenta y ocho horas después de la administración de la última dosis, se sacrificó a los ratones y el tejido renal se analizó para determinar los niveles de ARNm de SGLT-2. Los resultados se muestran a continuación en la Tabla 59.
Tabla 59: Inhibición antisentido de la expresión de ARNm de SGLT2 in vivo por gápmeros 5-10-5 MOE
% Cambio en la expresión de SGLT2 respecto a la solución salina
Dosis de oligonucleótido nmol/kg
ISIS 145733 ISIS 257016
17
-37,5 -76
14
-31,25 -74
7,5
-12,5 -62,5
1
+3 -44
Tanto ISIS 257016 como ISIS 145733 redujeron marcadamente los niveles de SGLT-2 en comparación con la solución salina control. (Los niveles de ARNm se determinaron usando PCR en tiempo real con TI, tal como se ha descrito anteriormente). No obstante, se ha demostrado que ISIS 257016 era aproximadamente 20-50 veces más potente en la 5 reducción de ARNm de SGLT-2 en comparación con ISIS 145733. Se observó una reducción asociada de los niveles de glucosa en plasma en los grupos de tratamiento (661  14 para el grupo de solución salina en comparación con 470  23 para el grupo que recibe ISIS 257016). La acumulación de ISIS 257016 e ISIS 145733 en el riñón fue similar para todo el intervalo de dosis, no obstante se detectó poco del antisentido 257016 de longitud completa en el riñón, lo que avala la teoría de que un producto de degradación es responsable del incremento de actividad. Asimismo, el inicio de la acción tras
10 una única dosis de 25 mg/kg se correlacionó con un punto de tiempo en el que quedaba poco compuesto antisentido 257016 intacto.
Se realizaron estudios similares con ratones ob/ob de poca masa y en ratas ZDF ((Charles Rivers Laboratories) usando ISIS 257016, ISIS 145733 o solución salina según un calendario de dosificación similar tal como se ha descrito anteriormente. La secuencia del sitio de unión para ISIS 145733 e ISIS 257016 está conservada entre ratones y ratas 15 (véase la Tabla 60). La reducción de ARNm de SGLT-2 en el riñón fue similar a la observada anteriormente. En un estudio con ratas, a una dosis de 10 mg/kg administrada dos veces a la semana durante dos semanas, se demostró que ISIS 145733 reducía los niveles de ARNm de SGLT-2 en aproximadamente un 40%, mientras que la reducción conseguida con ISIS 257016 era superior al 80%. ISIS 257016 reduce la expresión de SGT2 máximamente a una dosis baja de 12,5 mg/kg. Estudios adicionales con intervalos de dosis menores muestran una reducción significativa de los niveles de ARNm
20 de SGLT2 con el compuesto antisentido de esqueleto mixto a dosis inferiores a 1 mg/kg/semana.
EJEMPLO 10: Administración de un compuesto antisentido parental y corto dirigido al ARNm de SGLT-2
Los estudios farmacocinéticos indicaron que ISIS 257016 actuaba como profármaco que se metabolizaba a un farmacóforo de 12 bases nucleotídicas. En un estudio posterior, se administró a ratas ZDF dosis intraperitoneales dos veces a la semana de 1,5 mg/kg de ISIS 257016 o ISIS 370717 o solución salina según un calendario de dosificación
25 similar. ISIS 370717 es un compuesto antisentido de 12 bases nucleotídicas dirigido al ácido nucleico de SGLT-2, que comprende la secuencia TAGCCACCAACT (SEC ID Nº 154) y que además comprende una región “hueco” central constituida por diez 2’-desoxinucleótidos, que está flanqueada por ambos lados (direcciones 5’ y 3’) por "alas" de un nucleótido. Las alas están compuestas por nucleótidos 2’-metoxietilo (2’-MOE). Todos los residuos de citidina son 5metilcitidinas. Los enlaces internucleosídicos (esqueleto) son fosforotioato (P=S) a lo largo del oligonucleótido.
30 Tras cinco semanas de administración de dosis se sacrificó a los animales y el tejido renal se analizó para determinar los niveles de ARNm de SGLT-2. La actividad farmacológica de ISIS 257016 e ISIS 370717 fue similar, no obstante el compuesto antisentido de 12 nucleótidos mostró un inicio de acción más rápido. ISIS 370717 mostró casi un 80% de inhibición de la expresión de SGLT2 en riñones el día dos después de una única dosis de 2,8 umoles/kg, mientras que ISIS 257016 mostró únicamente una inhibición del 25% el día 2 después de la misma administración de una sola dosis.
35 Los datos apoyan que ISIS 257016 es un profármaco que tiene un farmacóforo de 12 nucleótidos.
EJEMPLO 11: Potencia y biodisponibilidad de un compuesto antisentido corto
La potencia mejorada mostrada por ISIS 370717 y la mejor biodisponibilidad oral para estos compuestos antisentido cortos convierte a estos compuestos en útiles para administración oral. Ratas normales recibieron ISIS 370717, ISIS 145733 o solución salina a 100 mg/kg dos veces a la semana mediante administración intrayeyunal. Aproximadamente 48
40 después de la última dosis, se sacrificó a los animales y el tejido renal se analizó para determinar la concentración del compuesto antisentido y los niveles de ARNm de SGLT-2. Se produjo una acumulación significativamente mayor de ISIS 370717 en el tejido renal (aproximadamente 500 microgramos por gramo de tejido) en comparación con los controles. Además, el ARNm de SGLT-2 se redujo en más del 80% sobre los controles.
EJEMPLO 12: Variaciones en el ala, el hueco y la longitud total alrededor de un compuesto antisentido corto de 12 nucleótidos
El gápmero ISIS 370717 1-10-1 MOE se usó como molde para elaborar oligos relacionados con la secuencia con diversos motivos. Estas variaciones se proporcionan en la Tabla 60. Los compuestos antisentido se diseñaron para dirigirlos a diferentes regiones del ácido nucleico de SGLT2 de ratón o de rata, usando las secuencias publicadas (número de registro en GenBank U29881.1, que se incorpora en el presente documento como SEC ID Nº 1575 y el número de registro en GenBank AJ292928.1, que se incorpora en el presente documento como SEC ID Nº 1576, respectivamente).

Tabla 60: Compuestos antisentido cortos dirigidos a ácidos nucleicos de SGLT2
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ en la SEC ID Nº 1575 en ratón Sitio diana en 5’ en la SEC ID Nº 1576 en rata 1576 Motivo gápmero Secuencia (5’-3’) SEC ID Nº
257016
2680 148 5-10-5 GAAGTAGCCACCAACTGTGC 1553
370717
2684 152 1-10-1 MOE TAGCCACCAACT 1554
386169
2684 152 2-8-2 MOE TAGCCACCAACT 1555
386176
2685 153 1-8-1 MOE AGCCACCAAC 1556
386196
2684 152 3-6-3 MOE TAGCCACCAACT 1557
Los compuestos antisentido se analizaron según su efecto sobre los niveles de ARNM de SGLT22. Los datos son
10 intervalos tomados de tres experimentos en los que se administró a los ratones las dosis dos veces a la semana durante tres semanas con 2,5, 0,5 o 0,1 umol/kg de los gápmeros MOE anteriores administrados por inyección intraperitoneal. Se sacrificó a los ratones 48 horas tras la última administración y se evaluaron los niveles de SGLT2 en riñones.
Los niveles de ARNm de SGLT2 se determinaron mediante PCR en tiempo real con TI tal como se ha descrio en otros ejemplos en el presente documento.Los resultados de la PCR se normalizaron según un control interno ISIS. Los
15 resultados se muestran a continuación en la Tabla 61.

Tabla 61: Inhibición antisentido de SGLT2 in vivo por gápmeros 1-10-1 y 1-10-2 MOE
% Cambio en la expresión de SGLT2 respecto a la solución salina
Dosis de oligonucleótido umol/kg
ISIS 370717 ISIS 386169 ISIS 386176 ISIS 386196 ISIS 386197
2,5
-82 -85 -80 -50 -20
0,5
-70 -80 -68 -30 -15
0,1
-55 -70 -65 -35 -20
Estos resultados ilustran que los diversos motivos analizados inhiben la expresión de SGLT2 in vivo de un modo dependiente de la dosis. Se descubrió que los gápmeros 1-10-1, 2-8-2 y 1-8-1 eran particularmente potentes.
20 EJEMPLO 13: Inhibición antisentido de SGLT2 de rata por los gápmeros 1-10-1 y 1-10-2 MOE
Los compuestos antisentido de los gápmeros 1-10-1 y 1-10-2 MOE, proporcionados en la Tabla 62, se diseñaron para dirigirse a diferentes regiones del ARN de SGLT2 de ratón o de rata. Todos los compuestos antisentido cortos de la Tabla 62 eran oligonucleótidos quiméricos (“gápmeros” de 12 0 13 nucleótidos de longitud, compuestos por un segmento “hueco” central constituido por diez 2’-desoxinucleótidos, que está flanqueado en el extremo 5' por un "ala" de un
25 nucleósido y por el extremo 3' por un "ala" de dos o un nucleótido. Las alas están compuestas por nucleótidos 2’metoxietilo (2’-MOE). Los enlaces internucleosídicos (esqueleto) son fosforotioato (P=S) a lo largo del oligonucleótido. Todos los residuos de citidina son 5-metilcitidinas.

Tabla 62: Compuestos antisentido dirigidos a ácidos nucleicos de SGLT2
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ en la SEC ID Nº XXX (ratón) Sitio diana en 5’ en la SEC ID Nº XXX (rata) Motivo gápmero Secuencia (5’-3’) SEC ID Nº
370717
2684 152 1-10-1 MOE TAGCCACCAACT 1554
382675
2683 151 1-10-1 MOE TAGCCACCAACTG 1559
379692
508 1-10-1 MOE TGTTCCAGCCCA 246
382676
507 1-10-2 MOE TGTTCCAGCCCAG 246
379699
1112 1-10-2 MOE GGCATGAGCTTC 281
382677
1111 1-10-2 MOE GGCATGAGCTTCA 281
382677
958 1-10-2 MOE GGCATGAGCTTCA 281
Los compuestos antisentido cortos se analizaron según su efecto sobre los niveles de ARNM de SGLT2 en ratas. Los datos son intervalos tomados de tres experimentos con ratas macho Male Sprague-Dawley (170-200 g) en los que se
5 administraron las dosis dos veces a la semana durante tres semanas con 450, 150 o 50 umol/kg del gápmero 1-10-1 o 110-2 MOE administrado por inyección intraperitoneal. Se sacrificó a las ratas 48 horas después de la última administración y se evaluaron los niveles de ARNm de SGLT2 en riñones. Los niveles diana se determinaron mediante PCR en tiempo real con TI tal como se ha descrito en otros ejemplos en el presente documento. Los resultados de la PCR se normalizaron según un control interno ISIS. Los resultados se muestran a continuación en la Tabla 63.
10 Tabla 63: Inhibición antisentido del ARNm de SGLT2 in vivo por los gápmeros 1-10-1 y 1-10-2 MOE
% Cambio en la expresión de SGLT2 respecto a la solución salina
Dosis de oligonucleótido nmol/kg
ISIS 370717 1-10-1 ISIS 382675 1-10-2 ISIS 379692 1-10-1 ISIS 382676 1-10-2 ISIS 379699 1-10-1 ISIS 382677 1-10-2
450
-70 -80 -90 -85 -83 -75
150
-70 -65 -85 -80 -75 -60
50
-55 -50 -80 -65 -60 -40
Estos resultados ilustran que ambos gápmeros, 1-10-1 y 1-10-2, reducen el ARNm de SGLT2 in vivo de un modo dependiente de la dosis.
En las ratas se evaluó después el peso corporal total, el peso del hígado, del bazo y del riñón. Cambios significativos en el
15 peso del hígado, del bazo o corporal pueden indicar que un compuesto concreto produce efectos tóxicos. Todos los cambios estaban dentro del margen de error del experimento. No se observaron cambios significativos en el peso corporal durante el tratamiento o al final del estudio. Tampoco se observaron cambios significativos en el peso del hígado ni del bazo.
Los efectos tóxicos de los compuestos antisentido cortos administrados in vivo se pueden evaluar midiendo los niveles de
20 enzimas y proteínas asociados con enfermedad o lesión hepática o renal. A menudo, las elevaciones de los niveles de las transaminasas séricas, aspartato aminotransferasa (AST) y alanina aminotransferasa (ALT) son indicadores de enfermedad o lesión hepática. La bilirrubina total en suero es un indicador de la función hepática y biliar, y la albúmina y el nitrógeno ureico en sangre (BUN) son indicadores de la función renal. En ocasiones, los niveles de glucosa y triglicéridos se ven alterados debido a la toxicidad de un tratamiento. La glucosa en suero también depende en parte de la actividad de
25 SGLT2. Los niveles de ALT, AST, bilirrubina total, albúmina, BUN, glucosa y triglicéridos se midieron en ratas tratadas con los compuestos antisentido cortos. Los niveles de indicadores clínicos de rutina de lesión y enfermedad hepática y renal estaban dentro de los intervalos normales y no cambiaron significativamente respecto a los animales tratados con solución salina, lo que demuestra que los compuestos antisentido cortos no afectan de forma significativa a la función renal o hepática. Los niveles de triglicéridos y glucosa no se elevaron significativamente con respecto a los animales tratados con solución salina.
EJEMPLO 14: Inhibición antisentido de SGLT2 de ratón y de rata por los gápmeros 1-10-1 MOE
Los compuestos antisentido con el gápmero 1-10-1 MOE diseñados para dirigirse hacia diferentes regiones del ARNm de SGLT2 de ratón se muestran en la Tabla 64.

Tabla 64: Composición de los compuestos antisentido dirigidos al ARNm de SLGT-2
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ en la SEC ID Nº XXX (ratón) Sitio diana en 5’ en la SEC ID Nº XXX (rata) Motivo Secuencia (5’-3’) SEC ID Nº
370717
2684 152 1-10-1 MOE TAGCCACCAACT 1554
379692
508 1-10-1 MOE TGTTCCAGCCCA 246
379699
1112 1-10-1 MOE GGCATGAGCTTC 281
379702
1525 1-10-1 MOE GCACACAGCTGC 293
381408
3034** 1-10-1 MOE TACCGAACACCT 1560
**indica 3 apareamientos erróneos con una secuencia diana
Los compuestos antisentido cortos se analizaron según su efecto sobre los niveles de ARNm de SGLT2 de ratón. Los datos son intervalos tomados de tres experimentos en los que se administró a ratones Balb/c macho de semanas de edad las dosis dos veces a la semana durante dos semanas con 450, 150 o 50 nmol/kg de uno de los gápmeros 1-10-1 MOE
10 anteriores administrados por inyección intraperitoneal. Se sacrificó a los ratones 48 horas después de la última administración y se evaluaron los niveles de ARNm de SGLT2 en los riñones. Los niveles diana se determinaron mediante PCR en tiempo real con TI tal como se ha descrito en otros ejemplos en el presente documento. Los resultados de la PCR se normalizaron según un control interno ISIS. Los resultados se muestran a continuación en la Tabla 65.
15 Tabla 65:Inhibición antisentido del ARNm de SGLT2 in vivo por gápmeros 1-10-1 MOE
% Cambio en la expresión de SGLT2 respecto a la solución salina
Dosis de oligonucleótido nmol/kg
ISIS 370717 ISIS 379692 ISIS 379699 ISIS 379702 ISIS 381408
450
-65 -80 -80 -75 -
150
-55 -70 -62,5 -72,5 -
50
-47,5 -52,5 -42,5 -52,5 -
Estos resultados ilustran que todos los gápmeros 1-10-1 MOE excepto ISIS 381408 inhiben la expresión de SGLT2 in vivo de un modo dependiente de la dosis. La actividad de ISIS 381408 se ha demostrado en estudios con ratas (véase la Tabla 65).
20 Evaluación de los gápmeros 1-10-1 en ratas
El efecto de los gápmeros 1-10-1 anteriores (véase la Tabla 64 anterior) sobre los niveles de ARNm de SGLT2 de rata. Los datos se toman de cuatro experimentos en los que se administró a ratas macho Male Sprague-Dawley (170-200 g) dosis dos veces a la semana durante tres semanas con 250 nmol/kg administrados por inyección intraperitoneal. Se sacrificó a las ratas 48 horas después de la última administración y se evaluaron los niveles de ARNm de SGLT2 en
25 riñones. Los niveles diana se determinaron mediante PCR en tiempo real con TI tal como se ha descrito en otros ejemplos en el presente documento. Los resultados de la PCR se normalizaron según un control interno ISIS. Los resultados se muestran a continuación en la Tabla 66.

Tabla 66: Inhibición antisentido del ARNm de SGLT2 in vivo por gápmeros 1-10-1 MOE
% Cambio en la expresión de SGLT2 respecto a la solución salina
Dosis de oligonucleótido nmol/kg
ISIS 370717 ISIS 379692 ISIS 379699 ISIS 379702 ISIS 381408
250
-70 -85 -75 -25 -5
Estos resultados ilustran que todos los gápmeros 1-10-1 MOE inhiben la expresión de SGLT2 in vivo en los estudios con ratas.
5 EJEMPLO 15: Inhibición antisentido de la expresión de SGLT2 de ratón y de rata por los gápmeros 1-10-1 y 2-8-2 MOE adicionales
Los compuestos antisentido cortos de los gápmeros 1-10-1 y 2-8-2 MOE se diseñaron para dirigirse a diferentes regiones del ARN de SGLT2 de ratón pero tienen complementariedad entre especies. Los compuestos antisentido cortos se muestran en la Tabla 67. Todos los compuestos antisentido cortos de la Tabla 67 son gápmeros de 12 nucleótidos de
10 longitud, compuestos por un segmento “hueco” central constituido por 2’-desoxinucleótidos, que está por ambos lados (direcciones 5’ y 3’) por segmentos de ala que tienen modificaciones en 2’. Las alas están compuestas por nucleótidos 2’metoxietilo (2’-MOE). Los enlaces internucleosídicos (esqueleto) son fosforotioato (P=S) a lo largo del oligonucleótido. Todos los residuos de citidina son 5-metilcitidinas.

Tabla 67: Compuestos antisentido cortos dirigidos a ácido nucleico de SGLT2
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ (rata) SEC ID diana (rata) Motivo gápmero Secuencia (5’-3’) SEC ID Nº
379692
508 1-10-1 MOE TGTTCCAGCCCA 246
388625
508 1-10-1 MOE TGTTCCAGCCCA 246
379699
1112 1-10-1 more GGCATGAGCTTC 281
388626
1112 2-8-2 MOE GGCATGAGCTTC 281
379702
1525 2-8-2 MOE GCACACAGCTGC 293
388627
1525 2-8-2 MOE GCACACAGCTGC 293
15
Los compuestos antisentido cortos se analizaron según su efecto sobre los niveles de ARNm de SGLT2 de ratón in vivo. Los datos se tomaron de tres experimentos en los que a ratas macho Balb/c de 6 semanas de edad se administraron las dosis dos veces a la semana durante tres semanas con 0,5, 0,1 o 0,02 umol/kg del gápmero 1-10-1 o 2-8-2 MOE administrado por inyección intraperitoneal. Se sacrificó a los ratones 48 horas tras la última administración y se evaluaron
20 los niveles de SGLT2 en riñones. Los niveles diana se determinaron mediante PCR en tiempo real con TI tal como se ha descrito en otros ejemplos en el presente documento. Los resultados de la PCR se normalizaron según un control interno ISIS. Los resultados se muestran a continuación en la Tabla 68.

Tabla 68: Inhibición antisentido del ARNm de SGLT2 in vivo por los gápmeros 1-10-1 y 2-8-2 MOE
% Cambio en la expresión de SGLT2 respecto a la solución salina
Dosis de oligonucleótido umol/kg
ISIS 379692 1-10-1 ISIS 388625 2-8-2 ISIS 379699 1-10-1 ISIS 388626 2-8-2 ISIS 379702 1-10-1 ISIS 388627 2-8-2
0,5
-85 -90 -75 -80 -70 -65
0,1
-75 -88 -60 -60 -65 -50
0,02
-55 -65 -30 -45 -40 -38
5
10
15
20
25
30
35
40
Estos resultados ilustran que ambos gápmeros, 1-10-1 y 2-8-2, inhiben la expresión de SGLT2 in vivo de un modo dependiente de la dosis.
En los ratones se evaluó después el peso corporal total, el peso del hígado, del bazo y del riñón. Todos los cambios estaban dentro del margen de error del experimento. No se observaron cambios significativos en el peso corporal durante el tratamiento o al final del estudio. Tampoco se observaron cambios significativos en el peso del hígado ni del bazo.
Los niveles de ALT, AST, BUN, transaminasas, creatinina en plasma, glucosa y triglicéridos se midieron en ratones tratados con los compuestos antisentido cortos. Los niveles de indicadores clínicos de rutina de lesión y enfermedad hepática y renal estaban dentro de los intervalos normales y no cambiaron significativamente respecto a los animales tratados con solución salina, lo que demuestra que los compuestos antisentido cortos no afectan de forma significativa a la función renal o hepática. Los niveles de triglicéridos y glucosa no se elevaron significativamente con respecto a los animales tratados con solución salina.
Evaluación del gápmero ISIS 379692 1-10-1 MOE, el gápmero ISIS 3921701-101 Metilenoxi BNA, el gápmero ISIS 388625 2-8-2 MOE y el gápmero ISIS 392173 2-8-2 Metilenoxi BNA en ratones
El efecto del gápmero ISIS 379692 1-10-1 MOE y el gápmero ISIS 388625 2-8-2 MOE se comparan con el efecto del gápmero ISIS 392170 1-10-1 Metilenoxi BNA y del gápmero ISIS 392173 2-8-2 Metilenoxi BNA (véase la Tabla 69) sobre los niveles de ARNm de SGLT2 de ratón in vivo. Los datos se toman de tres experimentos en los que a ratones macho Balb/c de 6 semanas de edad se administraron las dosis dos veces a la semana durante tres semanas con 5, 25 y 125 mmol/kg del gápmero ISIS 379692 1-10-1 MOE o del gápmero ISIS 388625 2-8-2 MOE administrado por inyección intraperitoneal. Se sacrificó a los ratones 48 horas después de la última administración y se evaluaron los niveles de ARNm de SGLT2 en los riñones. Los niveles diana se determinaron mediante PCR en tiempo real con TI tal como se ha descrito en otros ejemplos en el presente documento. Los resultados de la PCR se normalizaron según un control interno ISIS. Los datos se expresan en forma de cambio porcentual ("+" indica un incremento, "-" indica una disminución) respecto a los animales tratados con solución salina y se ilustran en la Tabla 69.

Tabla 69: Inhibición antisentido del ARNm de SGLT2 in vivo por los gápmeros 1-10-1 y 2-8-2 MOE
Dosis de oligonucleótido nmol/kg
ISIS 379692 1-10-1 MOE ISIS 392170 1-10-1 Metilenoxi BNA ISIS 388625 2-8-2 MOE ISIS 392173 2-8-2 Metilenoxi BNA
125
-58 -69 -70 -75
25
-46 -54 -47 -57
5
-7 -23 -18 -44
Estos resultados ilustran que ambos gápmeros, 1-10-1 y 2-8-2, inhiben la expresión de SGLT2 in vivo a los tres intervalos de dosificación más altos de un modo dependiente de la dosis. Los resultados también ilustran que los constructos de metilenoxi BNA son más potentes que los constructos MOE. No se observaron cambios significativos en el peso corporal durante el tratamiento o al final del estudio. Tampoco se observaron cambios significativos en el peso del hígado ni del bazo. Los parámetros de toxicidad, incluidos los niveles de ALT, AST, BUN y creatinina, estaban dentro de los límites normales y no habían cambiado respecto a los animales tratados con solución salina, lo que demuestra que los compuestos no afectan de forma significativa a la función renal o hepática.
Evaluación del gápmero ISIS 3796921-10-1 MOE y el gápmero ISIS 3886252-8-2 MOE en ratas
El efecto del gápmero ISIS 379692 1-10-1 MOE y del gápmero ISIS 388625 MOE 2-8-2 (véase la Tabla 70) sobre los niveles de ARNm de SGLT2 de rata in vivo. Los datos se toman de cuatro experimentos en los que a ratas macho Sprague-Dawley (170-200 g) se administraron las dosis dos veces a la semana durante tres semanas con 200, 50, 12,5 o 3,125 nmol/kg del gápmero ISIS 379692 1-10-1 MOE o del gápmero ISIS 388625 2-8-2 MOE administrado por inyección intraperitoneal. Se sacrificó a las ratas 48 horas tras la última administración y se evaluaron los niveles de SGLT2 en riñones. Los niveles diana se determinaron mediante PCR en tiempo real con TI tal como se ha descrito en otros ejemplos en el presente documento. Los resultados de la PCR se normalizaron según un control interno ISIS. Los resultados se muestran a continuación en la Tabla 70.

Tabla 70: Inhibición antisentido del ARNm de SGLT2 in vivo por los gápmeros 1-10-1 y 2-8-2 MOE
% Cambio en la expresión de SGLT2 respecto a la solución salina
Dosis de oligonucleótido umol/kg
ISIS 379692 1-10-1 ISIS 388625 2-8-2
200
-80 -80
50
-65 -65
12,5
-15 -15
3,125
+ 30 + 25
Estos resultados ilustran que ambos gápmeros, 1-10-1 y 2-8-2, inhiben la expresión de SGLT2 in vivo a los tres intervalos de dosificación más altos de un modo dependiente de la dosis.
5 En las ratas se evaluó después el peso corporal total, el peso del hígado, del bazo y del riñón. Todos los cambios estaban dentro del margen de error del experimento. No se observaron cambios significativos en el peso corporal durante el tratamiento o al final del estudio. Tampoco se observaron cambios significativos en el peso del hígado ni del bazo.
Los niveles de ALT, AST, BUN, colesterol, creatinina en plasma y triglicéridos se midieron en ratas tratadas con los compuestos antisentido cortos. Los niveles de indicadores clínicos de rutina de lesión y enfermedad hepática y renal
10 estaban dentro de los intervalos normales y no cambiaron significativamente respecto a los animales tratados con solución salina, lo que demuestra que los compuestos antisentido cortos no afectan de forma significativa a la función renal o hepática.
EJEMPLO 16: Inhibición antisentido de la expresión de SGLT2 en ratas ZDF
Se analizó el efecto de ISIS 388625, 388626 y el oligo control ISIS 388628 sobre los niveles de glucosa en plasma en
15 ratas ZDF y de HbA1c. La rata diabética gras Zucker (ZDF) deficiente en leptina es un modelo útil para la investigación de la diabetes de tipo 2. La diabetes se desarrolla espontáneamente en estas ratas macho a las 8-10 semanas de edad y se asocia con hiperfagia, poliuria, polidipsia y alteración de la ganancia de peso, síntomas que aparecen en paralelo a los síntomas clínicos de la diabetes (Phillips MS, y col., 1996, Nat Genet 13, 18-19). En ratas ZDF de seis semanas de edad se inyectó por vía intraperitoneal el compuesto antisentido corto a una dosis de 40 OnM/kg una vez a la semana durante
20 doce semanas. Los datos se ilustran en las tablas 71 y 72.

Tabla 71: Glucosa en plasma
ISIS NO.
SEC ID Nº Secuencia (5’-3’) Motivo Niveles de glucosa en plasma registrados en fechas específicas (mg/dl)
Día 10
Día 40 Día 55 Día 66
PBS
n/a n/a 450,7 478,5 392,8 526,2
388625
246 TGTTCCAGCCCA 2-8-2 MOE 435,5 278,7 213,8 325,5
388626
281 GGCATGAGCTTC 2-8-2 MOE 434,7 300,5 219,8 379,8
388628
226 TAGCCGCCCACA 2-8-2 MOE 436 502 411,2 668,8

Tabla 72: Estado HbA1c
Nº ISIS
SEC ID Nº Secuencia (5’-3’) Motivo Porcentaje de HbA1c en fechas específicas (%) p < 0,001
Día 40
Día 55 Día 68
PBS
n/a n/a 8 8,9 10
388625
246 TGTTCCAGCCCA 2-8-2 MOE 6,5 5,8 4,3
388626
281 GGCATGAGCTTC 2-8-2 MOE 6,6 5,9 4
388628
226 TAGCCGCCCACA 2-8-2 MOE 8 9,1 7,8
ISIS 388625 and 388626 redujeron de forma significativa los niveles de glucosa en plasma y HbAIC en comparación con los animales tratados con PBS y control.
5 EJEMPLO 17: Inhibición antisentido de la expresión de SGLT2 en riñón de perro (ISIS 388625)
ISIS 388625 es un gápmero 2-8-2 MOE con la secuencia TGTTCCAGCCCA (SEC ID Nº 246) (p. ej., véase la Tabla 71). El efecto de ISIS 388625 sobre los niveles de ARNm de SGLT2 de perro. Los datos se toman de dos grupos de dosificación en los que un total de nueve perros sabueso macho recibieron dosis con uno o diez mg/kg/semana de ISIS 388625 o solución salina administrados mediante inyección subcutánea dos veces a la semana. El día 46 del estudio se
10 sacrificó a todos los perros y se evaluaron los niveles de SGLT2 en riñones. Los niveles diana se determinaron mediante PCR cuantitativa en tiempo real con TI tal como se ha descrito en otros ejemplos en el presente documento. Los resultados de la PCR se normalizaron según un control interno ISIS. Los resultados se muestran a continuación en la Tabla 73.

Tabla 73: Inhibición antisentido del ARNm de SGLT2 in vivo por ISIS 388625
% Cambio en la expresión de SGLT2 respecto a la solución salina
Dosis de oligonucleótido mg/kg/semana
ISIS 388625
1
-85
10
-95
15
Estos resultados ilustran que se puede conseguir una reducción superior al 80% del ARNm de SGLT2 a una dosis de 1 mg/kg/semana de ISIS 388625. Se puede alcanzar una reducción incluso mayor a dosis ligeramente mayores. También se mostró que la administración de ISIS 388625 mejoraba la tolerancia a la glucosa. Los niveles máximos de glucosa en plasma disminuyeron en más del 50% de media y el posterior descenso de la glucosa se redujo en comparación con los
20 controles salinos en una prueba convencional de tolerancia a la glucosa. También aumento la excreción de glucosa en orina.
EJEMPLO 18: Análisis in vivo de los compuestos antisentido cortos dirigidos al ácido nucleico SGLT2
Se diseñaron veinte gápmeros 1-10-1 MOE complementarios a SGLT2 humano/de mono/de ratón/de rata, se sintetizaron y se analizaron in vivo para determinar la supresión de los niveles de ARNm de SGLT2 en riñón. Los sitios diana para 25 ratón y rata se indican en la Tabla 74. Los sitios diana para seres humano se indican en las Tablas 4 y 5. Los datos son las medias de dos experimentos en los que ratones Baln7c macho de 6 semanas de edad recibieron inyecciones intraperitoneales de 350 nmol/kg de oligonucleótido, dos veces a la semana, durante un periodo de dos semanas (un total de cuatro inyecciones). Se sacrificó a los ratones 48 horas después de la última administración y se evaluaron los niveles de ARNm de SGLT2 en los riñones. Los niveles de ARNm de SGLT2 se determinaron mediante análisis PCR cuantitativa 30 en tiempo real de acuerdo con procedimientos estándar, usando dos grupos de cebador-sonda para PCR diferentes, el grupo cebador-sonda (PPS) 534 y PPS 553. Los niveles de ARNm de SGLT2 se normalizaron a niveles de ARNm de ciclofilina, que también se midieron mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Los resultados se muestran a continuación
en la Tabla 74.

Tabla 74: Inhibición antisentido de SGLT22 in vivo
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ en la SEC ID Nº XXX (ratón) Sitio diana en 5’ en la SEC ID Nº XXX (rata) Secuencia (5’-3’) Motivo PPS 534 % S. salina PPS 553 % S. salina SEC ID Nº
PBS
N/A -- --
370717
2684 152 TAGCCACCAACT 1-10-1 MOE -84,4 -84,3 1554
379684
2070 64 TGTCAGCAGGAT 1-10-1 MOE -45 -43,2 214
379685
2103 97 TGACCAGCAGGA 1-10-1 MOE -10,3 -20,5 219
379686
2121* 115 ACCACAAGCCAA 1-10-1 MOE -71,9 -75,1 225
379687
2824 216 GATGTTGCTGGC 1-10-1 MOE -47,1 -52,1 230
379688
2876 268 CCAAGCCACTTG 1-10-1 MOE -62,6 -70,4 240
379689
298 AGAGCGCATTCC 1-10-1 MOE -17,5 -30,4 241
379690
415 ACAGGTAGAGGC 1-10-1 MOE -18,9 -22,5 242
379691
454 AGATCTTGGTGA 1-10-1 MOE -35 -48,6 243
379692
508 TGTTCCAGCCCA 1-10-1 MOE -88,1 -88,5 246
379693
546 CATGGTGATGCC 1-10-1 MOE -51,6 -59,9 254
379694
609 GACGAAGGTCTG 1-10-1 MOE -42,1 -54,4 264
379695
717 GGACACCGTCAG 1-10-1 MOE -52,5 -64,1 266
379696
954 CAGCTTCAGGTA 1-10-1 MOE -24,6 -36,2 267
Nº ISIS
Sitio diana en 5’ en la SEC ID Nº XXX (ratón) Sitio diana en 5’ en la SEC ID Nº XXX (rata) Secuencia (5’-3’) Motivo PPS 534 % S. salina PPS 553 % S. salina SEC ID Nº
379697
982 CTGGCATGACCA 1-10-1 MOE -32 -46,3 272
379698
1071 GCAGCCCACCTC 1-10-1 MOE -11,8 -27 275
379699
1112 GGCATGAGCTTC 1-10-1 MOE -83,5 -85,8 281
379700
1138 CCAGCATGAGTC 1-10-1 MOE -2,8 -16,4 285
379701
1210 CCATGGTGAAGA 1-10-1 MOE -0,3 -11,9 288
379702
1525 GCACACAGCTGC 1-10-1 MOE -87,8 -89,5 293
379703
1681 GCCGGAGACTGA 1-10-1 MOE -44,2 -45,9 295
*indica 1 o 2 apareamientos erróneos con una secuencia diana

Ejemplo 19: Inhibición antisentido de PCSK9 humano en células Hep3B
En los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 se analizaron sus efectos sobre el ARNm de PCSK9 in vitro. Los compuestos antisentido cortos se presentan en la Tabla 6. El nº Isis, el motivo del gápmero y la SEC 5 ID Nº de cada compuesto antisentido corto se muestran de nuevo en la Tabla 75. Las células Hep3B cultivadas fueron tratadas con 100 nM de compuesto antisentido corto. Los gápmeros 5-10-5 MOE dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 se usaron como controles positivos. Tras el periodo de tratamiento se aisló el ARN de las células y se midieron los niveles de ARNm de PCSK9 mediante PCR cuantitativa en tiempo real, como se describe en el presente documento. Los niveles de ARNm de PCSK9 se ajustaron de acuerdo con un contenido de ARN total medido mediante RIBOGREEN®. Los
10 resultados se presentan en la Tabla 75 en forma del porcentaje de inhibición de PCSK9 (%Inhib) respecto a las células control sin tratar. En la columna "% Inhib", un “0” indica que no se observó reducción del ARNm de PCSK9 con dicho compuesto antisentido corto concreto.

Tabla 75: Inhibición antisentido de PCSK9 por compuestos antisentido cortos
Nº ISIS
SEC ID Nº Sitio diana en 5’ en la SEC ID Nº 4 Sitio diana en 3’ en la SEC ID Nº 4 Motivo gápmero Intervalo de los % de inhibición % Inhib
400297
329 695 708 2-10-2 MOE 0
400298
330 696 709 2-10-2 MOE 0
400299
331 697 710 2-10-2 MOE 0
400300
332 742 755 2-10-2 MOE 9
400301
333 757 770 2-10-2 MOE 20-30% 27
400302
334 828 841 2-10-2 MOE 0
Nº ISIS
SEC ID Nº Sitio diana en 5’ en la SEC ID Nº 4 Sitio diana en 3’ en la SEC ID Nº 4 Motivo gápmero Intervalo de los % de inhibición % Inhib
400303
335 829 842 2-10-2 MOE 0
400304
336 830 843 2-10-2 MOE 10-20% 11
400305
337 937 950 2-10-2 MOE 30-40% 38
400306
338 952 965 2-10-2 MOE 40-50% 40
400307
339 988 1001 2-10-2 MOE 70-80% 76
400308
340 989 1002 2-10-2 MOE 50-60% 55
400309
341 990 1003 2-10-2 MOE 40-50% 44
400310
342 991 1004 2-10-2 MOE 8
400311
343 992 1005 2-10-2 MOE 10-20% 18
400312
344 993 1006 2-10-2 MOE 20-30% 28
400313
345 994 1007 2-10-2 MOE 10-20% 10
400314
346 1057 1070 2-10-2 MOE 20-30% 26
400315
347 1075 1088 2-10-2 MOE 0
400316
348 1076 1089 2-10-2 MOE 8
400317
349 1077 1090 2-10-2 MOE 7
400318
350 1078 1091 2-10-2 MOE 20-30% 26
400319
351 1093 1106 2-10-2 MOE 0
400320
352 1094 1107 2-10-2 MOE 0
400321
353 1095 1108 2-10-2 MOE 0
400322
354 1096 1109 2-10-2 MOE 0
400323
355 1147 1160 2-10-2 MOE 0
400324
356 1255 1268 2-10-2 MOE 7
400325
357 1334 1347 2-10-2 MOE 4
400326
358 1335 1348 2-10-2 MOE 0
400327
359 1336 1349 2-10-2 MOE 30-40% 36
400328
360 1453 1466 2-10-2 MOE 10-20% 13
400329
361 1454 1467 2-10-2 MOE 10-20% 14
400330
362 1455 1468 2-10-2 MOE 40-50% 43
400331
363 1456 1469 2-10-2 MOE 30-40% 35
400332
364 1569 1582 2-10-2 MOE 0
400333
365 1570 1583 2-10-2 MOE 0
400334
366 1571 1584 2-10-2 MOE 0
Nº ISIS
SEC ID Nº Sitio diana en 5’ en la SEC ID Nº 4 Sitio diana en 3’ en la SEC ID Nº 4 Motivo gápmero Intervalo de los % de inhibición % Inhib
400335
367 1572 1585 2-10-2 more 0
400336
368 1573 1586 2-10-2 MOE 4
400337
369 1574 1587 2-10-2 MOE 0
400338
370 1575 1588 2-10-2 MOE 9
400339
371 1576 1589 2-10-2 MOE 0
400340
372 1577 1590 2-10-2 MOE 0
400341
373 1578 1591 2-10-2 MOE 0
400342
374 1621 1634 2-10-2 MOE 0
400343
375 1622 1635 2-10-2 MOE 0
400344
376 1623 1636 2-10-2 MOE 0
400345
377 1624 1637 2-10-2 MOE 0
400346
378 1738 1751 2-10-2 MOE 5
400347
379 1739 1752 2-10-2 MOE 0
400348
380 1740 1753 2-10-2 MOE 0
400349
381 1741 1754 2-10-2 MOE 10-20% 13
400350
382 1834 1847 2-10-2 MOE 10-20% 15
400351
383 1835 1848 2-10-2 MOE 10-20% 14
400352
384 1836 1849 2-10-2 MOE 20-30% 29
400353
385 1837 1850 2-10-2 MOE 10-20% 19
400354
386 1838 1851 2-10-2 MOE 10-20% 19
400355
387 1839 1852 2-10-2 MOE 0
400356
388 1840 1853 2-10-2 MOE 0
400357
389 2083 2096 2-10-2 MOE 0
400358
390 2084 2097 2-10-2 MOE 10-20% 12
400359
391 2085 2098 2-10-2 MOE 0
400360
392 2086 2099 2-10-2 MOE 30-40% 38
400361
393 2316 2329 2-10-2 MOE 2
400362
394 2317 2330 2-10-2 MOE 10-20% 16
400363
395 2318 2331 2-10-2 MOE 8
400364
396 2319 2332 2-10-2 MOE 0
400365
397 2320 2333 2-10-2 MOE 20-30% 25
400366
398 2321 2334 2-10-2 MOE 10-20% 15
Nº ISIS
SEC ID Nº Sitio diana en 5’ en la SEC ID Nº 4 Sitio diana en 3’ en la SEC ID Nº 4 Motivo gápmero Intervalo de los % de inhibición % Inhib
400367
399 2322 2335 2-10-2 MOE 10-20% 12
400368
400 2323 2336 2-10-2 MOE 10-20% 11
400369
401 2324 2337 2-10-2 MOE 0
400370
402 2325 2338 2-10-2 MOE 10-20% 13
400371
403 3543 3556 2-10-2 MOE 0
Como se ilustra en la Tabla 75, los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 que tienen un motivo de gápmero 2-10-2 reducían los niveles de ARNm de PCSK9 en células cultivadas.
Los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 se analizaron en un experimento de respuesta
5 a la dosis en células Hep3B. Las células se trataron como se ha descrito en el presente documento con concentraciones nM del compuesto antisentido corto tal como se india en la Tabla 76. Tras el periodo de tratamiento se aisló el ARN de las células y se midieron los niveles de ARNm de PCSK9 mediante PCR cuantitativa en tiempo real, como se describe en el presente documento. Los niveles de ARNm de PCSK9 se normalizaron con los niveles de ARNm de ciclofilina, medidos mediante PCR en tiempo real usando un grupo de cebador-sonda específico de la ciclofilina. Los resultados se presentan
10 en forma del porcentaje de inhibición de PCSK9 respecto a las células control sin tratar. También se muestra la CE50 (concentración a la cual se observa una reducción del 50% del ARNm) para cada compuesto antisentido corto analizado en el experimento de respuesta a la dosis, calculado usando Graphpad Prism. Como se ilustra en la tabla siguiente, los niveles de ARNm se reducían de un modo dependiente de la dosis.
Tabla 76: Inhibición antisentido dependiente de la dosis de PCSK9 por compuestos antisentido cortos
% de inhibición
160 nM
80 nM 40 nM 20 nM 10 nM 5 nM
5-10-5
95 96 85 78 58 38
400307
93 92 56 45 39 35
400308
86 77 40 26 10 31
400309
78 72 12 38 23 49
400327
55 43 49 23 37 5
400330
71 82 69 40 32 8
400331
82 75 63 47 40 29
400352
64 63 44 40 16 7
400353
48 54 43 23 27 15

Ejemplo 20: Inhibición antisentido de PCSK9 por compuestos antisentido cortos que comprenden BNA
15
Los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PCSK9 se analizaron en experimentos de respuesta a la dosis en células cultivadas tanto humanas como de ratón. Los compuestos analizados incluyeron ISIS 403739 e ISIS 403740. ISIS 403739 es un compuesto antisentido cortos que consiste en la secuencia de nucleótidos SEC ID Nº 404 y
20 que tiene un motivo de gápmero 2-10-2, en el que los nucleótidos den las alas comprenden 6’5)-6’metil BNA. ISIS 403740 es un compuesto antisentido corto dirigido a la secuencia de nucleótidos SEC ID Nº 405 y que tiene un motivo de gápmero 2-10-2, en el que los nucleótidos den las alas comprenden 6’S)-6’metil BNA. También se analizó el gápmero 5-10-5 MOE dirigido a un ácido nucleico PCSK9.
Hepatocitos de ratón se sembraron y se trataron como se ha descrito en el presente documento con concentraciones nM del compuesto antisentido corto tal como se india en la Tabla 77. Tras el periodo de tratamiento se aisló el ARN de las células y se midieron los niveles de ARNm de PCSK9 mediante PCR cuantitativa en tiempo real, como se describe en el presente documento. Los niveles de ARNm de PCSK9 se normalizaron con los niveles de ARNm de ciclofilina, medidos mediante PCR en tiempo real usando un grupo de cebador-sonda específico de la ciclofilina. Los resultados se presentan en forma del porcentaje de inhibición de PCSK9 respecto a las células control sin tratar. Cuando está, “0” indica que no se observó reducción en el ARNm de PCSK9. ISIS 403739 exhibió una reducción dependiente de la dosis del ARNm de PCSK9 de ratón a las dosis de 30 nM y mayores. ISIS 403740 exhibió una reducción del ARNm de PCSK9 de ratón a las dos dosis más elevadas del compuesto antisentido corto.
Tabla 77: Inhibición antisentido de PCSK9 de ratón por compuestos antisentido cortos que comprenden BNA
% de inhibición
3,75 nM
7,5 nM 15 nM 30 nM 60 nM 120 nM 240 nM
5-10-5
10 15 21 18 44 43 77
403739
40 19 29 29 32 49 57
403740
3 0 29 13 0 40 33
10
Células Hep3B humanas se trataron con concentraciones nM del compuesto antisentido corto tal como se ha descrito en el presente documento. Tras el periodo de tratamiento se aisló el ARN de las células y se midieron los niveles de ARNm de PCSK9 mediante PCR cuantitativa en tiempo real, como se describe en el presente documento. Los niveles de ARNm de PCSK9 se normalizaron con los niveles de ARNm de ciclofilina, medidos mediante PCR en tiempo real usando
15 un grupo de cebador-sonda específico de la ciclofilina. Los resultados se presentan en forma del porcentaje de inhibición de PCSK9 respecto a las células control sin tratar. Los datos se muestran en la Tabla 78 y demuestran una reducción dependiente de la dosis del ARNm de PCSK9 humano tras tratamiento con ISIS 403740. ISIS 403739 exhibió una reducción dependiente de la dosis a dosis más elevadas.
Tabla 78: Inhibición antisentido de PCSK9 de ratón por compuestos antisentido cortos que comprenden BNA
% de inhibición
2,5 nM
5 nM 10 nM 20 nM 40 nM 80 nM 160 nM
5-10-5
7 2 21 33 30 59 71
4037399
10 5 7 6 25 52 65
403740
6 12 16 29 45 48 59

Ejemplo 21: Inhibición antisentido de GCGR en células HepG2
20
En los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de GCGR se analizaron sus efectos sobre el ARNm de GCGR in vitro.
Células HepG2
25 Células HepG2 cultivadas a una densidad de 10.000 células por pocillo en una placa de 96 pocillos se trataron tal como se ha descrito en el presente documento con 25, 50, 100 o 200 nM de oligonucleótido antisentido. Tras el periodo de tratamiento se aisló el ARN de las células y se midieron los niveles de ARNm de PCSK9 mediante PCR cuantitativa en tiempo real, como se describe en el presente documento. Los niveles de ARNm de GCGR se ajustaron de acuerdo con un contenido de ARN total medido mediante RIBOGREEN®. Los resultados se presentan en forma del porcentaje de
30 inhibición del ARNm de GCGR respecto a las células control sin tratar.
La Tabla 79 presenta datos tras el tratamiento con las dosis indicadas de ISIS 327161, un gápmero 3-10-3 MOE. ISIS 327161 redujo los niveles de ARNm de GCGR de un modo dependiente de la dosis.

Tabla 79: Inhibición antisentido de GCGR en células HepG2 por un compuesto antisentido corto
Nº ISIS
SEC ID Nº Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero 25 nM 50 nM 100 nM 200 nM
327161
520 AGCTGCTGTACATC 3-8-3 MOE -36 -30 -33 -64
Hepatocitos de mono
En los compuestos antisentido cortos adicionales dirigidos a un ácido nucleico de GCGR se analizaron sus efectos sobre
5 el ARNm de GCGR de mono in vitro. Los hepatocitos primarios de mono cultivados se trataron como se ha descrito en el presente documento con 25, 50, 100 o 200 nM del compuestos antisentido corto. Tras el periodo de tratamiento se aisló el ARN de las células y se midieron los niveles de ARNm de PCSK9 mediante PCR cuantitativa en tiempo real, como se describe en el presente documento. Los niveles de ARN de GCGR se ajustaron de acuerdo con un contenido de ARN total medido mediante RIBOGREEN®. Los resultados se presentan en la Tabla 80 forma del porcentaje de inhibición del
10 ARNm de GCGR respecto a las células control sin tratar.
Tabla 80: Inhibición antisentido de GCGR en hepatocitos primarios de mono por compuestos antisentido cortos
Nº ISIS
SEC ID Nº Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero 25 nM 50 nM 100 nM 200 nM
327131
489 ATGTTGGCCGTGGT 3-8-3 MOE 0 -8 -36 -36
327161
520 AGCTGCTGTACATC 3-8-3 MOE -19 -33 -55 -54
Ejemplo 22: Inhibición antisentido de DGAT2 por compuestos antisentido cortos
En los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de DGAT2 se analizaron sus efectos sobre el ARNm de
15 DGAT2 in vitro. Células A10 cultivadas en una placa de 96 pocillos se trataron con 75 nM del compuesto antisentido corto. Tras un periodo de tratamiento de aproximadamente 24 horas se aisló el ARN de las células y se midieron los niveles de ARNm de DGAT2 mediante PCR cuantitativa en tiempo real, como se describe en el presente documento. Los niveles de ARNm de DGAT2 se ajustaron de acuerdo con un contenido de ARN total medido mediante RIBOGREEN®. Los resultados se presentan en la TABLA 81 en forma del porcentaje de inhibición de DGAT2 respecto a las células control sin
20 tratar.

Tabla 81: Inhibición antisentido de DGAT2 en células A10
Nº ISIS
SEC ID Nº Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero % Control
372491
795 ACATGAGGATGACACT 3-10-3 MOE 80
372500
702 GTGTGTCTTCACCAGC 3-10-3 MOE 16
372501
704 TTGTGTGTCTTCACCA 3-10-3 MOE 28
372503
708 GCAGGTTGTGTGTCTT 3-10-3 MOE 35
372508
719 AGTTCCTGGTGGTCAG 3-10-3 MOE 35
372516
805 TACAGAAGGCACCCAG 3-10-3 MOE 27
372524
738 GCCAGGCATGGAGCTC 3-10-3 MOE 21
372530
746 TCGGCCCCAGGAGCCC 3-10-3 MOE 35
372546
825 TTGGTCTTGTGATTGT 3-10-3 MOE 34
372563
691 AGCCAGGTGACAGA 2-10-2 MOE 48
372569
796 CATGAGGATGACAC 2-10-2 MOE 104
Nº ISIS
SEC ID Nº Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero % Control
372578
703 TGTGTCTTCACCAG 2-10-2 MOE 59
372580
707 GGTTGTGTGTCTTC 2-10-2 MOE 48
372586
720 GTTCCTGGTGGTCA 2-10-2 MOE 40
372594
806 ACAGAAGGCACCCA 2-10-2 MOE 77
372602
739 CCAGGCATGGAGCT 2-10-2 MOE 39
372618
765 GTGGTACAGGTCGA 2-10-2 MOE 29
372624
826 TGGTCTTGTGATTG 2-10-2 MOE 56
Compuestos antisentido cortos adicionales dirigidos al ARNm de DGAT2 se analizaron in vitro en un experimento de respuesta a la dosis. Se prepararon células A10 tal como se ha descrito anteriormente y se trataron con compuestos antisentido cortos 6.25, 12,5, 25,0, 50,0, 100,0 y 200.0 nM para determinar si se produce inhibición de DGAT2 de un modo dependiente de la dosis. Los datos demuestran que cada uno de los con compuestos antisentido cortos de la Tabla 82 reduce el ARNm de DGAT2 de rata de un modo dependiente de la dosis. Los resultados se presentan en forma del porcentaje de inhibición a las células control sin tratar. Un “0” indica que el ARNm de DGAT2 no se había reducido.

Tabla 82: Inhibición dependiente de la dosis de DGAT2 en células A10
Nº ISIS
SEC ID Nº Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero 6,25 nM 12,5 nM 25,0 nM 50,0 nM 100,0 nM 200,0 nM
372,562
784 GTCTTGGAGGGCCG 2-10-2 MOE 0 0 0 36 48 75
372568
794 GACACTGCAGGCCA 2-10-2 MOE 0 0 15 26 72 69
372586
720 GTTCCTGGTGGTCA 2-10-2 MOE 19 0 7 22 45 77
372602
739 CCAGGCATGGAGCT 2-10-2 MOE 0 0 0 18 47 76
372618
765 GTGGTACAGGTCGA 2-10-2 MOE 0 5 0 27 65 80
10 Compuestos antisentido cortos adicionales dirigidos al ARNm de DGAT2 se analizaron in vitro. Se prepararon células A10 tal como se ha descrito anteriormente y se trataron con compuestos antisentido cortos 0,62, 1,85, 5,56, 50,0, 16,67, 50,0 y 150,0 nM para determinar si se produce inhibición de DGAT2 de un modo dependiente de la dosis. El ARNm de DGAT2 se midió usando PCR cuantitativa en tiempo real, tal como se ha descrito en el presente documento. Los datos demuestran que cada uno de los con compuestos antisentido cortos de la Tabla 83 que figura a continuación inhiben el
15 ARNm de DGAT2 de rata de un modo dependiente de la dosis. Los resultados se presentan en forma del porcentaje de inhibición de DGAT2 respecto a las células control sin tratar. Cuando está, “0” indica que no se observó reducción en el ARNm de DGAT2.

Tabla 83: Inhibición dependiente de la dosis de DGAT2 en células A10
Nº ISIS
SEC ID Nº Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero 0,62 nM 1,85 nM 5,56 nM 16,67 nM 50 nM 150 nM
372500
702 GTGTGTCTTCACCAGC 310-3 MOE 0 0 0 18 64 88
372501
704 TTGTGTGTCTTCACCA 3-10-3 MOE 1 5 10 11 25 68
372503
708 GCAGGTTGTGTGTCTT 3-10-3 MOE 7 10 4 25 54 80
372508
719 AGTTCCTGGTGGTCAG 3-10-3 MOE 0 0 6 14 39 71
372516
805 TACAGAAGGCACCCAG 3-10-3 MOE 1 10 0 4 35 81
372524
738 GCCAGGCATGGAGCTC 3-10-3 MOE 7 0 5 30 68 91
372530
746 TCGGCCCCAGGAGCCC 3-10-3 MOE 0 2 0 10 38 78
372546
825 TTGGTCTTGTGATTGT 3-10-3 MOE 0 2 11 4 48 78
372563
691 AGCCAGGTGACAGA 2-10-2 MOE 0 0 0 1 4 46
372578
703 TGTGTCTTCACCAG 2-10-2 MOE 0 0 0 2 7 42
372580
707 GGTTGTGTGTCTTC 2-10-2 MOE 0 5 5 3 16 42
372586
720 GTTCCTGGTGGTCA 2-10-2 MOE 0 0 0 0 7 55
372594
806 ACAGAAGGCACCCA 2-10-2 MOE 0 0 0 0 2 15
372602
739 CCAGGCATGGAGCT 2-10-2 MOE 0 0 10 0 19 51
372618
765 GTGGTACAGGTCGA 2-10-2 MOE 0 0 0 0 30 60
372624
826 TGGTCTTGTGATTG 2-10-2 0 0 0 1 16 38
Nº ISIS
SEC ID Nº Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero 0,62 nM 1,85 nM 5,56 nM 16,67 nM 50 nM 150 nM
MOE

Ejemplo 23: Inhibición antisentido de PTPIB humano en células HuVEC
En los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B se analizaron sus efectos sobre el ARNm de PTP1B in vitro. Células HuVEC cultivadas a una densidad de 5000 células por pocillo en una placa de 96 pocillos se trataron tal como se ha descrito en el presente documento con 3 nM del compuesto antisentido corto. Tras el periodo de 5 tratamiento se aisló el ARN de las células y se midieron los niveles de ARNm de PTPIB mediante PCR cuantitativa en tiempo real, como se describe en el presente documento. Los niveles de ARNm de PTP1B se ajustaron de acuerdo con un contenido de ARN total medido mediante RIBOGREEN®. Los resultados se presentan en forma del porcentaje de inhibición de PTP1B (% Inhib) respecto a las células control sin tratar. Los datos demostraron que los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1H que tienen un motivo de gápmero 2-10-2 pueden reducir los
10 niveles de PTP1B en células HuVEC en la Tabla 84.
Tabla 84: Inhibición antisentido de PTP1B en células HuVEC por compuestos antisentido cortos
Nº ISIS
SEC ID Nº Motivo gápmero % Inhib
399301
1542 2-10-2 OMe 55
404137
1053 2-10-2 MOE 76
404138
1054 2-10-2 MOE 76
404139
1052 2-10-2 MOE 80
404140
1051 2-10-2 MOE 73

Ejemplo 24: Inhibición antisentido de PTP1B humano en células HepG2
En los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B se analizaron sus efectos sobre el ARNm de
15 PTP1B in vitro. Células HepG2 cultivadas a una densidad de 10000 células por pocillo en una placa de 96 pocillos se trataron con 25 nM del oligonucleótido antisentido. Tras el periodo de tratamiento se aisló el ARN de las células y se midieron los niveles de ARNm de PTP1B mediante PCR cuantitativa en tiempo real, como se describe en el presente documento. Los niveles de ARNm de PTP1B se ajustaron de acuerdo con un contenido de ARN total medido mediante RIBOGREEN®. Los resultados se presentan en forma del porcentaje de inhibición de PTP1B (% Inhib) respecto a las
20 células control sin tratar. Los datos demostraron que los compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTP1B que tienen un motivo de gápmero 2-10-2 pueden reducir los niveles de PTP1B en células HepG2 en la Tabla 85.
Tabla 85: Inhibición antisentido de PTP1B en células HepG2 por compuestos antisentido cortos
Nº ISIS
SEC ID Nº Motivo gápmero % Inhib
399301
1542 2-10-2 OMe 43
404137
1053 2-10-2 MOE 71
404138
1054 2-10-2 MOE 86
404139
1052 2-10-2 MOE 45
404140
1051 2-10-2 MOE 93

Ejemplo 25: Inhibición antisentido de PTP1B en células HuVEC: Experimento de respuesta a la dosis
25 Células endoteliales vasculares humanas (HuVEC) se sembraron a una densidad de 5.000 células por pocillo y se trataron como se ha descrito en el presente documento con concentraciones nM del compuesto antisentido corto tal como se india en la Tabla 86. Tras el periodo de tratamiento se aisló el ARN de las células y se midieron los niveles de ARNm de PTP1B mediante PCR cuantitativa en tiempo real, como se describe en el presente documento. Los niveles de ARNm de PTP1B se ajustaron de acuerdo con un contenido de ARN total medido mediante RIBOGREEN®. Se usaron dos grupos diferentes de cebador-sonda para PTP1B humano para medir los niveles de ARNm. Los resultados con el grupo cebador sonda (PPS) 198 se muestran en la Tabla 86 y los resultados con el grupo cebador sonda (PPS) 3000 se muestran en la Tabla 87. Los resultados se presentan en forma de porcentaje de inhibición de la expresión del ARNm de PTP1B con respecto a las células control sin tratar. Cuando está, “0” indica que no se observó reducción en el ARNm de PTP1B. Como se ilustra en las Tablas 86 y 87, los niveles de ARNm de PTP1B se reducían de un modo dependiente de la dosis.

Tabla 86: Respuesta a la dosis para PTP1B humano en células HuVEC usando PPS 198
Nº ISIS
SEC ID Nº Motivo % de inhibición
gápmero
1,11 nM 3,33 nM 10,0 nM 30,0 nM
398105
1066 2-10-2 MOE 0 25 79 90
398112
1072 2-10-2 MOE 1 10 73 93
398120
1086 2-10-2 MOE 0 31 80 96
399096
1544 2-10-2 MOE 3 30 78 96
399102
1545 2-10-2 MOE 0 15 62 88
399113
1547 2-10-2 MOE 0 31 72 90
399132
1548 2-10-2 MOE 0 32 75 95
399173
1549 2-10-2 MOE 0 24 63 89
399208
1550 2-10-2 MOE 0 37 86 93
399276
1551 2-10-2 MOE 0 8 61 89
399301
1542 2-10-2 MOE 8 63 91 97
399315
1552 2-10-2 MOE 0 20 68 88
398173
1543 1-10-1 MOE 0 4 80 97
Tabla 87: Respuesta a la dosis para PTP1B humano en células HuVEC usando PPS 3000
Nº ISIS
SEC ID Nº Motivo % de inhibición
gápmero
1,11 nM 3,33 nM 10,0 nM 30,0 nM
398105
1066 2-10-2 MOE 0 35 79 93
398112
1072 2-10-2 MOE 0 26 77 94
398120
1086 2-10-2 MOE 0 35 79 93
399096
1544 2-10-2 MOE 0 23 75 94
399102
1545 2-10-2 MOE 0 9 60 87
399113
1547 2-10-2 MOE 0 9 65 90
399132
1548 2-10-2 MOE 0 26 76 91
399173
1549 2-10-2 MOE 0 11 59 92
399208
1550 2-10-2 MOE 0 47 85 96
Nº ISIS
SEC ID Nº Motivo % de inhibición
gápmero
1,11 nM 3,33 nM 10,0 nM 30,0 nM
399276
1551 2-10-2 MOE 0 14 64 86
399301
1542 2-10-2 MOE 16 65 93 99
399315
1552 2-10-2 MOE 0 25 71 93
398173
1543 1-10-1 MOE 0 18 80 90

Ejemplo 26: Inhibición antisentido de ApoB por compuestos antisentido cortos
En los compuestos antisentido corto mostrados en la Tabla88 se analizaron sus efectos in vivo. En ratones Balb/c macho de seis semanas de edad (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) se administraron dosis intraperitoneales de 3.2, 1, 0,32, o 5 0,1 umol/kg dos veces a la semana durante tres semanas. Se usó un gápmero 5-10-5 MOE como tratamiento control. Se sacrificó a los ratones aproximadamente 48 horas después de la última dosis. Se recogió tejido hepático para aislar el ARN y se extrajo sangre para análisis de química en suero. Los niveles de ARNm de ApoB se midieron usando PCR cuantitativa en tiempo real, tal como se ha descrito en el presente documento. Los niveles de ARNm de ApoB se normalizaron con los niveles de ARN determinado mediante RIBOGREEN y se presentan en la Tabla 89 como el
10 porcentaje de inhibición respecto a los niveles de ARNm de ApoB en animales control tratados con solución salina.

Tabla 88: Compuestos antisentido dirigidos a un ácido nucleico de ApoB
Nº ISIS
Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
387462
GGTACATGGAAGTC 2-10-2 Metilenoxi BNA 190
398296
GGTACATGGAAGTC 2-10-2 6’-(S)-metil Metilenoxi BNA 190
Tabla 89: Inhibición antisentido de ApoB por compuestos antisentido cortos que comprenden BNA
Nº ISIS
Dosis (μmol/kg) % Inhib
379818
1 56
387462
0,1 33
0,32
57
1
93
3,2
99
398296
0,1 17
0,32
35
1
80
3,2
98
15 La Tabla 89 muestra que los niveles de ARNm de ApoB se reducían de un modo dependiente de la dosis tras tratamiento con compuestos antisentido cortos que tienen un motivo de gápmero 2-10-2 y modificaciones de BNA en las alas. A la dosis de 1 umol/kg, la inhibición de ApoB por los compuestos antisentido cortos fue mayor de lo observado con un gápmero 5-10-5 MOE a una dosis equivalente. El colesterol se redujo a las dosis de 1 y 3,2 umol/kg de compuesto antisentido corto.
20 Los compuestos antisentido cortos exhibían pocos o ningún efecto secundario adverso, juzgado por los pesos de los órganos y de cuerpo, los niveles de transaminasas en suero, de bilirrubina, nitrógeno ureico en sangre y creatinina.
Ejemplo 27: Inhibición antisentido de PTEN por compuestos antisentido cortos
En los compuestos antisentido corto mostrados en la Tabla 90 se analizaron sus efectos in vivo. En ratones Balb/c macho de seis semanas de edad (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) se administraron dosis intraperitoneales de 3.2, 1, 0,32, o 0,1 umol/kg dos veces a la semana durante tres semanas. Se usó un gápmero 5-10-5 MOE como tratamiento control. Se 5 sacrificó a los ratones aproximadamente 48 horas después de la última dosis. Se recogió tejido hepático para aislar el ARN y se extrajo sangre para análisis de química en suero. Los niveles de ARNm de PTEN se midieron usando PCR en tiempo real, tal como se ha descrito en el presente documento. Los niveles de ARNm de PTEN se normalizaron con los niveles de ARN determinado mediante RIBOGREEN y se presentaron en la Tabla 91 como el porcentaje de inhibición respecto a los niveles de ARNm de PTEN en animales control tratados con solución salina.
10 Tabla 90: Compuestos antisentido cortos dirigidos a un ácido nucleico de PTEN
Nº ISIS
Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
392063
AGGCCAGTGCTAAG 2-10-2 Metilenoxi BNA 1226
392749
AGGCCAGTGCTAAG 2-10-2 (6’S)-6’-metil Metilenoxi BNA 1226
396006
AGGCCAGTGCTAAG 2-10-2 alfa-L-Metilenoxi BNA 1226
Tabla 91: Inhibición antisentido de PTEN por compuestos antisentido cortos que comprenden modificaciones BNA
Nº ISIS
Dosis (μmol/kg) % Inhib
116847
1 47
392063
0,1 26
0,32
43
1
74
3,2
96
392749
0,1 17
0,32
34
1
64
3,2
96
396006
0,1 20
0,32
32
1
67
3,2
88
15 La Tabla 91 muestra que los niveles de ARNm de PTEN se reducían de un modo dependiente de la dosis tras tratamiento con compuestos antisentido cortos que tienen un motivo de gápmero 2-10-2 y modificaciones de BNA en las alas. A la dosis de 1 umol/kg, la inhibición de PTEN por los compuestos antisentido cortos fue mayor de lo observado con un gápmero 5-10-5 MOE a una dosis equivalente.
Con la excepción de la dosis más elevada de ISIS 392063, no se observaron incrementos significativos de las 20 transaminasas séricas. En general, los compuestos antisentido cortos exhibieron pocos o ningún efecto secundario adverso.
Ejemplo 28: Administración de una sola dosis de compuestos antisentido cortos que comprenden modificaciones BNA
En ratones Balb/c macho de seis semanas de edad (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) se administró una única inyección intraperitoneal (i.p.) del compuesto antisentido a una dosis de 8, 4, 2 o 1 μmol/kg. Los compuestos antisentido cortos analizados fueron ISIS 387462 e ISIS 398296. Cada grupo de dosis estaba constituido por cuatro animales. Se usó un gápmero 5-10-5 MOE como tratamiento control. Se sacrificó a los ratones aproximadamente 48 horas después de la
5 última dosis. Se recogió tejido hepático para aislar el ARN y se extrajo sangre para análisis de química en suero. Los niveles de ARNm de ApoB se midieron usando PCR cuantitativa en tiempo real, tal como se ha descrito en el presente documento. Los niveles de ARNm de ApoB se normalizaron con los niveles de ARN determinado mediante RIBOGREEN y se presentan en la Tabla 92 como el porcentaje de inhibición respecto a los niveles de ARNm de ApoB en animales control tratados con solución salina.
10 Tabla 92: Inhibición antisentido de ApoB por compuestos antisentido cortos que comprenden BNA
Nº ISIS
Dosis (μmol/kg) % Inhib
379818
8 77
387462
8 99
4
93
2
81
1
58
398296
8 97
4
81
2
54
1
19
La Tabla 92 muestra que los niveles de ARNm de ApoB se reducían de un modo dependiente de la dosis tras una única administración de compuestos antisentido cortos que tienen un motivo de gápmero 2-10-2 y modificaciones de BNA en las alas. A la dosis de 8 umol/kg, la inhibición de ApoB por los compuestos antisentido cortos fue mayor de lo observado con
15 un gápmero 5-10-5 MOE a una dosis equivalente. La DE50 de ISIS 387462 fue 3,9 mg/kg y la DE50 DE ISIS 398296 fue 8,7 mg/kg. El colesterol también se redujo de un modo dependiente de la dosis. Los triglicéridos se redujeron a la dosis más elevada.
Los compuestos antisentido cortos exhibían pocos o ningún efecto secundario adverso, juzgado por los pesos de los órganos y de cuerpo, los niveles de transaminasas en suero, de bilirrubina, nitrógeno ureico en sangre y creatinina.
20 En un estudio similar de administración de una única dosis, ISIS 392748, que tiene la SEC ID Nº 1226, un motivo de gápmero 2-10-2, en el que los nucleótidos den las alas comprenden modificaciones (6’R)-6’metil metilenoxi BNA, reducía el ARNm de PTEN de un modo dependiente de la dosis. Adicionalmente, ISIS 392749, que tiene la SEC ID Nº 1226, un motivo de gápmero 2-10-2, en el que los nucleótidos den las alas comprenden modificaciones (6’S)-6’metil metilenoxi BNA, reducía el ARNm de PTEN de un modo dependiente de la dosis. Un compuesto antisentido corto que tiene motivos
25 de gápmero 2-2-10, la secuencia de SEC ID Nº 1226 y modificaciones 6-(S)-CH2-O-CH3-BNA también reducía el ARNm de PTEN en un estudio similar in vivo. Un compuesto antisentido corto que tiene motivos de gápmero 2-2-10, la secuencia de SEC ID Nº 1226 y modificaciones 66-(R)-CH2-O-CH3-BNA también reducía el ARNm de PTEN en un estudio similar in vivo.
Ejemplo 29: Administración de una sola dosis de compuestos antisentido cortos que comprenden 30 modificaciones BNA
En ratones Balb/c macho de seis semanas de edad (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) se administró una única inyección intraperitoneal del compuesto antisentido a una dosis de 8, 4, 2 o 1 mol/kg. Cada grupo de dosis estaba constituido por cuatro animales. Los compuestos analizados fueron ISIS 392063, ISIS 392749 e ISIS 366006. Se usó un gápmero 5-10-5 MOE como tratamiento control. Se sacrificó a los ratones aproximadamente 48 horas después de la 35 última dosis. Se recogió tejido hepático para aislar el ARN y se extrajo sangre para análisis de química en suero. Los niveles de ARNm de ApoB se midieron usando PCR cuantitativa en tiempo real, tal como se ha descrito en el presente documento. Los niveles de ARNm de ApoB se normalizaron con los niveles de ARN determinado mediante RIBOGREEN y se presentan en la Tabla 93 como el porcentaje de inhibición respecto a los niveles de ARNm de ApoB en animales
control tratados con solución salina.
Tabla 93: Inhibición antisentido de PTEN por compuestos antisentido cortos que comprenden modificaciones BNA
Nº ISIS
Dosis (μmol/kg) % Inhib
116847
8 62
392063
8 92
4
82
2
58
1
38
396565
8 76
4
38
2
24
1
11
396006
8 94
4
82
2
48
1
18
5 La Tabla 93 muestra que los niveles de ARNm de PTEN se reducían de un modo dependiente de la dosis tras tratamiento con compuestos antisentido cortos que tienen un motivo de gápmero 2-10-2 y modificaciones de BNA en las alas. A la dosis de 8 umol/kg, la inhibición de PTEN por los compuestos antisentido cortos fue mayor de lo observado con un gápmero 5-10-5 MOE a una dosis equivalente. Las DE50 estimadas fueron 7 mg/kg para ISIS 392063, 17,4 mg/kg para ISIS 396565 y 9,3 mg/kg para ISIS 396006
10 Con la excepción de la dosis más elevada de ISIS 392063, no se observaron incrementos significativos de las transaminasas sérica. En general, los compuestos antisentido cortos exhibieron pocos o ningún efecto secundario adverso.
Ejemplo 30: Inhibición antisentido de ApoB por compuestos antisentido cortos que comprenden conjugados de ácido palmítico
15 En ratones Balb/c macho de seis semanas de edad (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) se administró una única inyección intraperitoneal del compuesto antisentido a una dosis de 2,5, 1,0, 0,4 y 0,16 umol/kg. Cada grupo de dosis estaba constituido por cuatro animales. Los compuestos analizados se muestran en la Tabla 94. Se usó un gápmero 5-105 MOE como tratamiento control. Se sacrificó a los ratones aproximadamente 48 horas después de la última dosis. Se recogió tejido hepático para aislar el ARN y se extrajo sangre para análisis de química en suero. Los niveles de ARNm de
20 ApoB se midieron usando PCR cuantitativa en tiempo real, tal como se ha descrito en el presente documento. Los niveles de ARNm de ApoB se normalizaron con los niveles de ARN determinado mediante RIBOGREEN y se presentan en la Tabla 95 como el porcentaje de inhibición respecto a los niveles de ARNm de ApoB en animales control tratados con solución salina.

Tabla 94: Compuestos antisentido cortos que comprenden conjugados de palmítico
Nº ISIS
Secuencia (5’-3’) Motivo gápmero SEC ID Nº
387462
GGTACATGGAAGTC 2-10-2 Metilenoxi BNA 190
391871
GGTACATGGAAGTC 1-1-10-2 2’-(butilacetomido)-palmitamida/MOE/MOE Citosinas no modificadas en el hueco (es decir, 2-10-2 MOE con 2’-(butilacetomido)-palmitamida substituida en el nucleótido en 5’ 190
391872
GGTACATGGAAGTC 1-1-10-2 2’-(butilacetomido)-palmitamida Metilenoxi BNA/ Metilenoxi BNA GGTACATGGAAGTC Citosinas no modificadas en el hueco (es decir, 2-10-2 metilenoxi BNA con 2’-(butilacetomido)-palmitamida substituida en el nucleótido en 5’) 190
Tabla 95: Inhibición antisentido por los compuestos antisentido cortos que comprenden conjugados de ácido palmítico
Nº ISIS
Dosis (μmol/kg) % Inhib
5-10-5
2,5 54
387462
2,5 99
1
91
0,4
65
0,16
16
391871
2,5 49
1
18
0,4
5
0,16
0
391872
2,5 99
1
92
0,4
50
0,16
18
5
La Tabla 95 muestra que los niveles de ARNm de ApoB se reducían de un modo dependiente de la dosis tras tratamiento con compuestos antisentido cortos que tienen un conjugado de ácido palmítico (C16). A la dosis de 2,5 umol/kg, la inhibición de ApoB por los compuestos antisentido cortos fue mayor de lo observado con un gápmero 5-10-5 MOE a una dosis equivalente. En este estudio, las DE50 estimadas fueron 1,5 mg/kg para ISIS 387462, 13,1 mg/kg para ISIS 391871 y
10 1,9 mg/kg para ISIS 391872. Las DE50 estimada para el gápmero 5-10-5 MOE fue 17,4 mg/kg. Los triglicéridos se redujeron a las dosis de 2,5 y 1,0 mg/kg de ISIS 387462 e ISIS 391872. ISIS 387462 e ISIS 391872 redujeron marcadamente el colesterol total, HDL-C y LDL-C de un modo dependiente de la dosis; la reducción de LDL-C era tan marcada que estaba por debajo del límite de detección. En general, los compuestos antisentido cortos exhibieron pocos o ningún efecto secundario adverso.
15
Ejemplo 31: Inhibición antisentido de PCSK9 in vivo por compuestos antisentido cortos que comprenden modificaciones de BNA
En ratones Balb/c macho de seis semanas de edad (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) se administró una única inyección intraperitoneal del compuesto antisentido a una dosis de 15, 4,7, 1,5 y 0,47 mol/kg de ISIS 403739 o 403740. Cada grupo de dosis estaba constituido por cuatro animales. Se usó un gápmero 5-10-5 MOE como tratamiento control. Se sacrificó a los ratones aproximadamente 72 horas después de la última dosis. Se recogió tejido hepático para aislar el ARN y se extrajo sangre para análisis de química en suero. Los niveles de ARNm de PCSK9 se midieron usando PCR cuantitativa en tiempo real, tal como se ha descrito en el presente documento. Los niveles de ARNm de PCSK9 se normalizaron con los niveles de ARNm de ciclofilina determinados mediante PCR en tiempo real. ISIS 403739 redujo el ARNm de PCSK9 en aproximadamente un 70% respecto a los controles de solución salina. ISIS 403740 redujo PCSK9 en aproximadamente un 13% respecto a los controles de solución salina, no obstante ka reducción no fue estadísticamente significativa. Las dosis menores no redujeron de forma significativa el ARNm de PCSK9. En general, los compuestos antisentido cortos exhibieron pocos o ningún efecto secundario adverso.
LISTADO DE SECUENCIAS
<110> Isis Pharmaceuticals, Inc. Sanjay Bhanot Richard S. Geary Robert McKay Brett P. Monia Punit P. Seth Andrew M. Siwkowski Eric E. Swayze Edward Wancewitz
<120> COMPUESTOS Y PROCEDIMIENTOS PARA MODULAR LA EXPRESIÓN GÉNICA
<130> CORE0061US7
<150> PCT/US2007/061183
<151> 2007-01-27
<150> 60/746,631
<151> 2006-05-05
<150> 60/747,059
<151> 2006-05-11
<150> 60/805,660
<151> 2006-06-23
<150> 60/864,554
<151> 2006-11-06
<160> 1576
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 14121
<212> ADN
<213> H. sapiens
<400> 1
imagen1
imagen1
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<210> 2
<211> 13928
<212> ADN
<213> Mus musculus
<400> 2
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<210> 3
<211> 2273
<212> ADN
<213> H. sapiens
<400> 3
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<210> 4
<211> 3636
<212> ADN
<213> H. sapiens
<400> 4
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<210> 5
<211> 874
<212> ADN
<213> H. sapiens
<400> 5
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5 <210> 6
<211> 1631
<212> ADN
<213> H. sapiens
10 <400> 6
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15 <210> 7
<211> 1898
<212> ADN
<213> Mus musculus
20 <400> 7 imagen1
<210> 8
<211> 106000
<212> ADN
<213> H. sapiens
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<210> 9
<211> 2034
<212> ADN
<213> H. sapiens
<400> 9 imagen1 imagen1
<210> 10
<211> 2439
<212> ADN
<213> H. sapiens
<400> 10 <210> 11 imagen1 imagen1
<211> 3318
<212> ADN
<213> H. sapiens
<400> 11 <210> 12 imagen1
<211> 78001
<212> ADN
<213> H. sapiens
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<210> 13
<211> 2160
<212> ADN
<213> Mus musculus imagen2
<210> 14
<211> 5572
<212> ADN
<213> H. sapiens
<400> 14 <210> 15 imagen1 imagen1
<211> 103886
<212> ADN
<213> H. sapiens
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<210> 16
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 16 ccggaggtgc ttgaat
<210> 17
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 17 cggaggtgct tgaa
<210> 18
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 18 gaagccatac acctct
<210> 19
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 19 aagccataca cctc
<210> 20
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 20
16
14
16
14
gttgaagcca tacacc
<210> 21
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 21 ttgaagccat acac
<210> 22
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 22 cctcagggtt gaagcc
<210> 23
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 23 ctcagggttg aagc
<210> 24
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 24 tttgccctca gggttg
<210> 25
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 25 ttgccctcag ggtt
<210> 26
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
16
14
16
14
16
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<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 26 agttcttggt tttctt
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 28
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 28 cctcttgatg ttcagg
<210> 29
<211> 14
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<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 29 ctcttgatgt tcag
<210> 30
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 30 atgcccctct tgatgt
<210> 31
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 31 tgcccctctt gatg
<210> 32
16
14
16
14
16
14
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 32 tgccacattg ccct
<210> 33
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 33 ttgccacatt gccc
<210> 34
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 34 gttgccacat tgcc
<210> 35
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 35 tgttgccaca ttgc
<210> 36
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 36 ctgttgccac attg
<210> 37
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
14
14
14
14
14
<400> 37 tctgttgcca catt
<210> 38
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 38 ttctgttgcc acat
<210> 39
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 39 tttctgttgc caca
<210> 40
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 40 atttctgttg ccac
<210> 41
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 41 gtaggagaaa ggcagg
<210> 42
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 42 taggagaaag gcag
<210> 43
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
14
14
14
14
16
14
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 43 ggcttgtaaa gtgatg
<210> 44
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 44 gcttgtaaag tgat
<210> 45
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 45 ccactggagg atgtga
<210> 46
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 46 cactggagga tgtg
<210> 47
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 47 tttcagcatg ctttct
<210> 48
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 48 ttcagcatgc tttc
16
14
16
14
16
14
<210> 49
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 49 catatttgtc acaaac
<210> 50
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 50 atatttgtca caaa
<210> 51
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 51 atgcccatat ttgtca
<210> 52
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 52 tgcccatatt tgtc
<210> 53
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 53 ttttggtggt agagac
<210> 54
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
16
14
16
14
16
<400> 54 tttggtggta gaga
<210> 55
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 55 tctgcttcgc acct
<210> 56
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 56 gtctgcttcg cacc
<210> 57
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 57 agtctgcttc gcac
<210> 58
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 58 cagtctgctt cgca
<210> 59
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 59 tcagtctgct tcgc
<210> 60
<211> 14
<212> ADN
14
14
14
14
14
14
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 60 ctcagtctgc ttcg
<210> 61
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 61 cctcagtctg cttc
<210> 62
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 62 gcctcagtct gctt
<210> 63
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 63 agcctcagtc tgct
<210> 64
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 64 aactctgagg attgtt
<210> 65
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 65 actctgagga ttgt
14
14
14
14
16
14
<210> 66
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 66 tcattaactc tgagga
<210> 67
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 67 cattaactct gagg
<210> 68
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 68 attcatcatt aactct
<210> 69
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 69 ttcatcatta actc
<210> 70
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 70 ttgttctgaa tgtcca
<210> 71
<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
16
14
16
14
16
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 71 actg
<210> 72
<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 72 actg
<210> 73
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 73 tgttctgaat gtcc
<210> 74
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 74 cagatgagtc catttg
<210> 75
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 75 agatgagtcc attt
<210> 76
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 76 atccacaggg aaattg
<210> 77
<211> 14
4
4
14
16
14
16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 77 tccacaggga aatt
<210> 78
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 78 cagttgtaca agttgc
<210> 79
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 79 agttgtacaa gttg
<210> 80
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 80 cacagagtca gccttc
<210> 81
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 81 acagagtcag cctt
<210> 82
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 82
14
16
14
16
14
ggtcaaccac agagtc
16
<210> 83 <211> 14 <212> ADN <213> Secuencia Artificial
<220> <223> Oligonucleótido Sintético
<400> 83 gtcaaccaca gagt
14
<210> 84 <211> 14 <212> ADN <213> Secuencia Artificial
<220> <223> Oligonucleótido Sintético
<400> 84 cagccacatg cagc
14
<210> 85 <211> 14 <212> ADN <213> Secuencia Artificial
<220> <223> Oligonucleótido Sintético
<400> 85 ccagccacat gcag
14
<210> 86 <211> 14 <212> ADN <213> Secuencia Artificial
<220> <223> Oligonucleótido Sintético
<400> 86 accagccaca tgca
14
<210> 87 <211> 14 <212> ADN <213> Secuencia Artificial
<220> <223> Oligonucleótido Sintético
<400> 87 taccagccac atgc
14
<210> 88 <211> 14 <212> ADN <213> Secuencia Artificial

<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 88 ttaccagcca catg
<210> 89
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 89 gttaccagcc acat
<210> 90
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 90 ggttaccagc caca
<210> 91
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 91 aggttaccag ccac
<210> 92
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 92 taggttacca gcca
<210> 93
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 93 aggttctgct ttcaac
<210> 94
14
14
14
14
14
16
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 94 ggttctgctt tcaa
<210> 95
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 95 tactgatcaa attgta
<210> 96
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 96 actgatcaaa ttgt
<210> 97
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 97 tttttcttgt atctgg
<210> 98
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 98 ttttcttgta tctg
<210> 99
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
14
16
14
16
14
<400> 99 atccattaaa acctgg
<210> 100
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 100 tccattaaaa cctg
<210> 101
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 101 atattgctct gcaaag
<210> 102
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 102 tattgctctg caaa
<210> 103
<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 103 actg
<210> 104
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 104 atattgctct gcaa
<210> 105
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
16
14
16
14
4
14
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 105 aatattgctc tgca
<210> 106
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 106 gaatattgct ctgc
<210> 107
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 107 agaatattgc tctg
<210> 108
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 108 tagaatattg ctct
<210> 109
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 109 atagaatatt gctc
<210> 110
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 110 gatagaatat tgct
14
14
14
14
14
14
<210> 111
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 111 ggatagaata ttgc
<210> 112
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 112 atggaatcct caaatc
<210> 113
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 113 tggaatcctc aaat
<210> 114
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 114 gaattctggt atgtga
<210> 115
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 115 aattctggta tgtg
<210> 116
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
14
16
14
16
14
<400> 116 agctggaatt ctggta
<210> 117
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 117 gctggaattc tggt
<210> 118
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 118 tgaaaatcaa aattga
<210> 119
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 119 gaaaatcaaa attg
<210> 120
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 120 aaacagtgca tagtta
<210> 121
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 121 aacagtgcat agtt
<210> 122
<211> 16
<212> ADN
16
14
16
14
16

14
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 122 ttcaggaatt gttaaa
<210> 123
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 123 tcaggaattg ttaa
<210> 124
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 124 ttttgtttca ttatag
<210> 125
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 125 tttgtttcat tata
<210> 126
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 126 gatgacactt gattta
<210> 127
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 127 atgacacttg attt
16
14
16
14
16
14
<210> 128
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 128 gtgtgatgac acttga
<210> 129
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 129 tgtgatgaca cttg
<210> 130
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 130 tattcagtgt gatgac
<210> 131
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 131 attcagtgtg atga
<210> 132
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 132 attggtattc agtgtg
<210> 133
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
16
14
16
14
16
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 133 ttggtattca gtgt
<210> 134
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 138
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<213> Secuencia Artificial
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<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
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14
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16
14
16
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14
<220>
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14
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14
14
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<220>
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<212> ADN
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<220>
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14
14
14
14
14
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<211> 14
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<220>
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<211> 14
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<220>
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14
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<220>
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14
14
14
14
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<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
<212> ADN
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<220>
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14
14
14
14
16
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<213> Secuencia Artificial
<220>
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<220>
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<220>
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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14
16
14
14
16
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<212> ADN
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<220>
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
14
4
4
4
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 16
4
4
4
4
4 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 202
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 204
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 204 cccagttcca tgac
<210> 205
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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16
14
16
14
16
tgaggaagcc agat
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<210> 208
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 209
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 210
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 210 ataaagtcca gcat
<210> 211
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 211 aagttcctgc ttgaag
<210> 212
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
14
16
14
16
14
16
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 212 agttcctgct tgaa
<210> 213
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 213 aatggtgaag tact
<210> 214
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 214 tgtcagcagg at
<210> 215
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 215 cagcaggaaa ta
<210> 216
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 216 ccagcaggaa at
<210> 217
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 217 accagcagga aa
<210> 218
14
14
12
12
12
12
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 218 gaccagcagg aa
<210> 219
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 219 tgaccagcag ga
<210> 220
<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 220 actg
<210> 221
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 221 atgaccagca gg
<210> 222
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 222 aatgaccagc ag
<210> 223
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
12
12
4
12
12
<400> 223 caatgaccag ca
<210> 224
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 224 ccaatgacca gc
<210> 225
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 225 accacaagcc aa
<210> 226
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 226 tagccgccca ca
<210> 227
<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 228
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 228 ccggccacca ca
<210> 229
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
12
12
12
12
4
12
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 229 accggccacc ac
<210> 230
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 230 gatgttgctg gc
<210> 231
<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 231 actg
<210> 232
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 232 cgatgttgct gg
<210> 233
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 233 ccgatgttgc tg
<210> 234
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 234 gccgatgttg ct
12
12
4
12
12
12
<210> 235
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 235 tgccgatgtt gc
<210> 236
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 237
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 238
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 239
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
12
12
12
12
12
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<210> 241
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 242
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<220>
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<220>
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12
12
12
12
4
13
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<220>
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<220>
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<212> ADN
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<220>
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<211> 12
<212> ADN
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<220>
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12
4
4
4
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
12
12
12
4
12
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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12
12
12
12
12
12
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<213> Secuencia Artificial
<220>
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<220>
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<213> Secuencia Artificial
<220>
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
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12
12
12
12
12
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<213> Secuencia Artificial
12
12
12
12
12
4
<220>
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
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12
12
12
12
12
12
<211> 13
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 12
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<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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13
12
4
12
12
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<213> Secuencia Artificial
<220>
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<213> Secuencia Artificial
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 12
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<213> Secuencia Artificial
12
4
12
12
12
12
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 13
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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12
13
12
4
12
12
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 298
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 299
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 300 gggcattgag gt
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
12
12
12
12
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 303 actg
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 304 actg
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 305 actg
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 306 actg
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<400> 307 actg
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<211> 4
<212> ADN
4
4
4
4
4
4
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 309 actg
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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4
4
4
4
4
4
<210> 314
<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 314 actg
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 315 actg
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 316 actg
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 317 actg
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 318 actg
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
4
4
4
4
4
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 319 actg
<210> 320
<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 320 actg
<210> 321
<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 321 actg
<210> 322
<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 322 actg
<210> 323
<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 323 actg
<210> 324
<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 324 actg
<210> 325
<211> 4
4
4
4
4
4
4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 325 actg
<210> 326
<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 326 actg
<210> 327
<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 327 actg
<210> 328
<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 328 actg
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 330
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 330 4
4
4
4
14
catggggcaa cttc
<210> 331
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 331 acatggggca actt
<210> 332
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 332 gggatgctct gggc
<210> 333
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 333 cgctccaggt tcca
<210> 334
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 334 gatacacctc cacc
<210> 335
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 335 agatacacct ccac
<210> 336
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
14
14
14
14
14
14
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 337 gcctgtctgt ggaa
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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14
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14
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14
14
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14
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14
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14
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4
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16
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14
14
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<220>
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<211> 14
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14
14
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<211> 4
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<212> ADN
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<220>
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<212> ADN
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<220>
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4
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
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<223> Oligonucleótido Sintético
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<213> Secuencia Artificial
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<223> Oligonucleótido Sintético
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<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
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14
14
4
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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14
14
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4
14
16
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<220>
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<211> 14
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14
14
14
14
14
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<220>
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<213> Secuencia Artificial
<220>
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
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<212> ADN
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<220>
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<212> ADN
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14
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14
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 520 agctgctgta catc
<210> 521
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
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<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
14
14
14
4
14
14
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 524
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 524 tggaagctgc tgta
<210> 525
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 526
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 526 cctggaagct gctg
<210> 527
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 527 acctggaagc tgct
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14
14
14
14
14

14
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 529
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 529 tcacctggaa gctg
<210> 530
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 530 atcacctgga agct
<210> 531
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 531 catcacctgg aagc
<210> 532
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 532 acatcacctg gaag
<210> 533
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
14
14
14
14
14
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<210> 534
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 535
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 535 tgtacatcac ctgg
<210> 536
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 536 gtgtacatca cctg
<210> 537
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 537 tagcgggtcc tgag
<210> 538
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 538 gtagcgggtc ctga
<210> 539
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
14
14
14
14
14
14
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 539 tgtagcgggt cctg
<210> 540
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 540 ctgtagcggg tcct
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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14
14
14
14
14
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
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<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
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<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
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14
14
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14
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<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
<212> ADN
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<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
<212> ADN
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<212> ADN
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<220>
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14
14
14
14
14
14
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<211> 14
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<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<212> ADN
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<220>
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<211> 16
<212> ADN
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<220>
14
14
14
14
14
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
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<220>
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<220>
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<212> ADN
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<212> ADN
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<220>
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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14
14
14
14
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atctggcaga ggtt
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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14
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14
16
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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14
14
14
14
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14
14
14
14
14
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
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<220>
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<211> 14
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<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
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14
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<213> Secuencia Artificial
<220>
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<220>
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<213> Secuencia Artificial
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14
16
14
16
14
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<220>
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 14
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<213> Secuencia Artificial
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<213> Secuencia Artificial
<220>
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16
14
16
14
16
14
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 622 agcaaccagc aata
<210> 623
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 623 caggctgtac aggtac
16
14
14
16
14
16
<210> 624
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 626 agctcctctc agag
<210> 627
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 627 cccagccaat gcccag
<210> 628
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 628 cagccaatgc ccag
<210> 629
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
14
16
14
16
14
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 629 tcaaacagac acttga
<210> 630
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 630 aaacagacac ttga
<210> 631
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 631 agcactgaac attctc
<210> 632
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 632 cactgaacat tctc
<210> 633
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 633 ggatccacca gaatcc
<210> 634
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 634 atccaccaga atcc
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<211> 14
16
14
16
14
16
14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 635 tgatcagtaa ggcc
<210> 636
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 636 ggacaaagat gaaaaa
<210> 637
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 637 acaaagatga aaaa
<210> 638
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 638 ggcacgcagc ttggcc
<210> 639
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 639 cacgcagctt ggcc
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<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 640
14
16
14
16
14
tggaccccca gcagag
16
<210> 641 <211> 14 <212> ADN <213> Secuencia Artificial
<220> <223> Oligonucleótido Sintético
<400> 641 gacccccagc agag
14
<210> 642 <211> 14 <212> ADN <213> Secuencia Artificial
<220> <223> Oligonucleótido Sintético
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14
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14
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<220> <223> Oligonucleótido Sintético
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14
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<220> <223> Oligonucleótido Sintético
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14
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<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<223> Oligonucleótido Sintético
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<220>
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14
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4
14
4
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<211> 16
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<220>
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14
14
14
16
14
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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14
14
14
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14
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14
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16
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14
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14
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<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 14
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<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 14
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<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<220>
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<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<220>
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16
14
14
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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12
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<211> 16
<212> ADN
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<220>
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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14
14
12
16
14
gtgtgtcttc accagc
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<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
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<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 16
<212> ADN
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<220>
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<212> ADN
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<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
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16
14
16
14
16
14
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<212> ADN
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<220>
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16
14
16
14
16
16
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<213> Secuencia Artificial
<220>
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<220>
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
14
14
16
14
12
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<210> 720
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 720 gttcctggtg gtca
<210> 721
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 721 tatagttcct ggtggt
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 722 atagttcctg gtgg
<210> 723
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<210> 724
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 724 atatagttcc tggt
<210> 725
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
16
14
16
14
16
14
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 726
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 727
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 727 caaagatata gttc
<210> 728
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 728 ccaaagatat agtt
<210> 729
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 729 ccaggcccat ga
<210> 730
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 730 ggcacccagg cccatg
16
16
14
14
12
16
<210> 731
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 731 gcacccaggc ccat
<210> 732
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 732 cagaaggcac ccaggc
<210> 733
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 733 agaaggcacc cagg
<210> 734
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 734 ccagacatca gg
<210> 735
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 735 gacagggcag at
<210> 736
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
14
16
14
12
12
<400> 736 tgacagggca ga
<210> 737
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 737 ccactcccat tc
<210> 738
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 738 gccaggcatg gagctc
<210> 739
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 740
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 740 ccaggcatgg ag
<210> 741
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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12
12
16
14
12
12
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<213> Secuencia Artificial
<220>
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
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<223> Oligonucleótido Sintético
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16
14
16
14
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14
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14
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14
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16
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12
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14
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<223> Oligonucleótido Sintético
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16
14
12
16
14
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<220>
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14
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
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12
12
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14
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<220>
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16
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14
14
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16
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<211> 14
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<220>
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<220>
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16
14
16
14
14
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<220>
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16
14
16
14
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 16
14
14
16
14
16
14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<210> 825
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 826
16
4
16
14
16
tggtcttgtg attg
<210> 827
<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<210> 828
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 12
<212> ADN
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14 16
14
12
12
14
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 835 agccttgtcg at
<210> 836
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 836 agttcccagc ct
<210> 837
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 837 atccgactgt gg
<210> 838
12
12
12
12
12
12
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 839
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12
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16
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14
14
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12
12
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 935
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 936
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 938
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<213> Secuencia Artificial
<220>
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<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<213> Secuencia Artificial
<220>
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<220>
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<213> Secuencia Artificial
<220>
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<220>
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<211> 12
<212> ADN
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<220>
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14
12
14
16
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<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 1033
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 16
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
12
16
14
16
14
16
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1036 agctccttcc ac
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<211> 16
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12
12
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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16
16
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12
12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 1132
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1132 gaagggcttc cagt
<210> 1133
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
12
12
12
14
12
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<210> 1233
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 1234
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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12
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14
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<212> ADN
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<212> ADN
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14
12
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<212> ADN
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<220>
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<211> 14
<212> ADN
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<220>
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<220>
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14
14
14
12
14
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<212> ADN
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<212> ADN
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<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
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<212> ADN
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<220>
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14
14
12
14
12
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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14
12
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<210> 1310
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1310 gactcagtaa at
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<211> 14
<212> ADN
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12
14
12
14
12
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<210> 1315
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
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<210> 1317
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14
12
14
12
14
14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1317 cctattccca ctga
<210> 1318
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1318 ctattcccac tg
<210> 1319
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1319 cccatagcaa taat
<210> 1320
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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14
12
14
12
12
tctgcaggaa atcc
<210> 1323
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1323 ctgcaggaaa tc
<210> 1324
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1324 ttctgcagga aatc
<210> 1325
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1325 ccttcaagtc tttc
<210> 1326
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1326 ttgttcctgt atac
<210> 1327
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1327 caatattgtt cctg
<210> 1328
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
14
12
14
14
14
14
<220>
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<213> Secuencia Artificial
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<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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gattgcaagt tccg
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
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12
12
12
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1520 ctttcagtca ta
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
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<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1522 tgaggcatta tc
<210> 1523
<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1523 actg
<210> 1524
<211> 19
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Cebador
<400> 1524 cgtgggctcc agcattcta
<210> 1525
<211> 21
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Cebador
12
12
12
4
19
<400> 1525 agtcatttct gcctttgcgt c
21
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<220> <223> Sonda
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22
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<220> <223> Cebador
<400> 1527 gaaaatagac ttcctgaata actatgcatt
30
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<220> <223> Cebador
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18
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<220> <223> Sonda
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23
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<220> <223> Cebador
<400> 1530 tgagccttgc caccttctct
20
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15
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<220> <223> Sonda
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29
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<220> <223> Cebador
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20
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<400> 1534 cgggcccaca cctcttg
17
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<220> <223> Sonda
<400> 1535 ccacaaagtg cagcaccgcc tagtgt
26
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<220> <223> Cebador
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19
<210> 1537 <211> 25 <212> ADN <213> Secuencia Artificial
<220> <223> Cebador
<400> 1537 tccatcctct tgatatctcc ttttg
25
<210> 1538 <211> 31 <212> ADN <213> Secuencia Artificial
<220> <223> Sonda
<400> 1538 acagccatca tcaaagagat cgttagcaga a
31
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<220> <223> Cebador
<400> 1539 atgacaatca tgttgcagca attc
24
<210> 1540 <211> 25 <212> ADN <213> Secuencia Artificial
<220> <223> Cebador
<400> 1540 cgatgcaata aatatgcaca aatca
25
<210> 1541 <211> 28 <212> ADN <213> Secuencia Artificial
<220> <223> Sonda
<400> 1541 ctgtaaagct ggaaagggac ggactggt
28
<210> 1542 <211> 14 <212> ADN <213> Secuencia Artificial
<220> <223> Oligonucleótido Sintético

<400> 1542 gtgtgcacac agct
<210> 1543
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1543 cagcctgggc ac
<210> 1544
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1544 tgctcgaact cctt
<210> 1545
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1545 gaagtcactg gctt
<210> 1546
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1546 gggaagtcac tggc
<210> 1547
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1547 gttaggcaaa gggc
<210> 1548
<211> 14
<212> ADN
14
12
14
14
14
14
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1548 gggctgagtg accc
<210> 1549
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1549 atgctagtgc acta
<210> 1550
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1550 agctcgctac ctct
<210> 1551
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1551 gaggtatccc atct
<210> 1552
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1552 ggcaacttca acct
<210> 1553
<211> 20
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1553 gaagtagcca ccaactgtgc
14
14
14
14
14 20
<210> 1554
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1554 tagccaccaa ct
<210> 1555
<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1555 actg
<210> 1556
<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1556 actg
<210> 1557
<211> 10
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1557 agccaccaac
<210> 1558
<211> 8
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1558 gccaccaa
<210> 1559
<211> 13
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
12
4
4
10
8
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1559 tagccaccaa ctg
<210> 1560
<211> 12
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1560 taccgaacac ct
<210> 1561
<211> 20
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1561 gtccctgaag atgtcaatgc
<210> 1562
<211> 20
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1562 tgcactttgt ggtaccaagg
<210> 1563
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<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1563 gcttctccat cata
<210> 1564
<211> 14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1564 tgtcttgctg cttt
<210> 1565
<211> 4
13
12
20
20
14
14
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1565 actg
<210> 1566
<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1566 actg
<210> 1567
<211> 4
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1567 actg
<210> 1568
<211> 20
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1568 atggcttctc catcatatcc
<210> 1569
<211> 20
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1569 cttgggcatg ctcgtcagtc
<210> 1570
<211> 20
<212> ADN
<213> Secuencia Artificial
<220>
<223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1570 4
4
4
20
20
ccttccctga aggttcctcc
20
<210> 1571 <211> 20 <212> ADN <213> Secuencia Artificial
<220> <223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1571 ctgctagcct ctggatttga
20
<210> 1572 <211> 4 <212> ADN <213> Secuencia Artificial
<220> <223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1572 actg
4
<210> 1573 <211> 14 <212> ADN <213> Secuencia Artificial
<220> <223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1573 gaatatctat aatg
14
<210> 1574 <211> 12 <212> ADN <213> Secuencia Artificial
<220> <223> Oligonucleótido Sintético
<400> 1574 gtaagcaagg ct
12
<210> 1575 <211> 2254 <212> ADN <213> Rattus norvegicus
<400> 1575
imagen1
<210> 1576
<211> 3300
<212> ADN
<213> Mus musculus
<400> 1576 imagen1

Claims (13)

  1. REIVINDICACIONES
    1.
    Un compuesto antisentido corto de 10 a 14 monómeros de longitud, que comprende una región hueco de 2'desoxirribonucleótido flanqueada por cada lado por un ala, en la que cada ala consiste de forma independiente en 1 a 3 monómeros modificados de alta afinidad que son nucleótidos modificados con azúcar que comprenden un puente entre la posición 4' y 2' del azúcar, para uso en el tratamiento de un trastorno metabólico en un animal.
  2. 2.
    Uso de un compuesto antisentido corto de 10 a 14 monómeros de longitud, que comprende una región hueco de 2'desoxirribonucleótido flanqueada por cada lado por un ala, en la que cada ala consiste de forma independiente en 1 a 3 monómeros modificados de alta afinidad que son nucleótidos modificados con azúcar que comprenden un puente entre la posición 4' y 2' del azúcar, para la preparación de un medicamento para tratar un trastorno metabólico en un animal.
  3. 3.
    Un compuesto antisentido corto de 10 a 14 monómeros de longitud, que comprende una región hueco de 2'desoxirribonucleótido flanqueada por cada lado por un ala, en la que cada ala consiste de forma independiente en 1 a 3 monómeros modificados de alta afinidad que son nucleótidos modificados con azúcar que comprenden un puente entre la posición 4' y 2' del azúcar, para uso en el tratamiento de un trastorno cardiovascular en un animal.
  4. 4.
    Uso de un compuesto antisentido corto de 10 a 14 monómeros de longitud, que comprende una región hueco de 2'desoxirribonucleótido flanqueada por cada lado por un ala, en la que cada ala consiste de forma independiente en 1 a 3 monómeros modificados de alta afinidad que son nucleótidos modificados con azúcar que comprenden un puente entre la posición 4' y 2' del azúcar, para la preparación de un medicamento para tratar un trastorno cardiovascular en un animal.
  5. 5.
    El compuesto antisentido corto o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que la conformación de cada uno de dichos nucleótidos modificados con azúcar es, de forma independiente, β-D o α-L.
  6. 6.
    El compuesto antisentido corto o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que cada uno de dichos puentes comprende independientemente 1 o de 2 a 4 grupos unidos seleccionados de forma independiente de -[C(R1)(R2)]n-, -C(R1)=C(R2)-, -C(R1)=N-, -C(=NR1)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O-, -Si(R1)2-, -S(=C)x- y -N(R1)-;
    en los que
    x es 0, 1 o 2;
    n es 1, 2, 3 o 4;
    cada uno de R1 y R2 es, de forma independiente, H, un grupo protector, hidroxilo, alquilo C1-C12, alquilo C1-C12 sustituido, alquenilo C2-C12, alquenilo C2-C12 sustituido, alquinilo C2-C12, alquinilo C2-C12 sustituido, arilo C5-C20, arilo C5C20 sustituido, radical heterociclo, radical heterociclo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, radical alicíclico C5C7, radical alicíclico C5-C7 sustituido, halógeno, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, acilo (C(=O)-H), acilo sustituido, CN, sulfonilo (S(=O)2-J1) o sulfoxilo (S(=O)-J1); y
    cada uno de J1 y J2 es, de forma independiente, H, alquilo C1-C12, alquilo C1-C12 sustituido, alquenilo C2-C12, alquenilo C2-C12 sustituido, alquinilo C2-C12, alquinilo C2-C12 sustituido, arilo C5-C20, arilo C5-C20 sustituido, acilo (C(=O)-H), acilo sustituido, un radical heterociclo, un radical heterociclo sustituido, aminoalquilo C1-C12, aminoalquilo C1-C12 sustituido o un grupo protector.
  7. 7.
    El compuesto antisentido corto o uso de la reivindicación 6, en el que cada uno de dichos puentes es, de forma independiente, 4’-CH2-2’, 4’-(CH2)2-2’, 4’-CH2-O-2’, 4’-(CH2)2-O-2’ 4’-CH2-O-N(R1)-2’ o 4’-CH2-N(R1)-O-2’- en los que cada R1 es, de forma independiente, H, un grupo protector o alquilo C1-C12.
  8. 8.
    El compuesto antisentido corto o uso de la reivindicación 6, en el que cada uno de dichos puentes es 4’-CH(CH3)-O2’.
  9. 9.
    El compuesto antisentido corto o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que al menos un enlace monomérico es un enlace monomérico modificado tal como un enlace fosforotioato.
  10. 10.
    El compuesto antisentido corto o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que cada enlace monomérico es un enlace internucleosídico fosforotioato.
  11. 11.
    El compuesto antisentido corto o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en el que el compuesto antisentido tiene 10-13 monómeros de longitud, 10-12 monómeros de longitud, 10-11 monómeros de longitud, 10 monómeros de longitud, 11 monómeros de longitud, 12 monómeros de longitud, 13 monómeros de longitud o 14 monómeros de longitud.
  12. 12.
    El compuesto antisentido corto o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-11, que tiene un motifo seleccionado de:
    1-12-1; 2-10-2; 1-10-1; 1-10-2; 3-8-3; 2-8-2; 1-8-1; y 3-6-3 en el que el primer número representa el número de monómeros en el ala 5’, el segundo número representa el número de monómeros en el hueco y el tercer número representa el número de monómeros en el ala 3’.
  13. 13.
    El compuesto antisentido corto o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en el que el animal es un ser humano.
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