+

ES2276708T3 - Agentes citotoxicos que comprenden taxanos y su uso terapeutico. - Google Patents

Agentes citotoxicos que comprenden taxanos y su uso terapeutico. Download PDF

Info

Publication number
ES2276708T3
ES2276708T3 ES00982077T ES00982077T ES2276708T3 ES 2276708 T3 ES2276708 T3 ES 2276708T3 ES 00982077 T ES00982077 T ES 00982077T ES 00982077 T ES00982077 T ES 00982077T ES 2276708 T3 ES2276708 T3 ES 2276708T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
branched
linear
cyclic
group
carbon atoms
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES00982077T
Other languages
English (en)
Inventor
Ravi V. Chari
Walter A. Blattler
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Immunogen Inc
Original Assignee
Immunogen Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Immunogen Inc filed Critical Immunogen Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2276708T3 publication Critical patent/ES2276708T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D305/00—Heterocyclic compounds containing four-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atoms
    • C07D305/14—Heterocyclic compounds containing four-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atoms condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6881—Cluster-antibody conjugates, i.e. the modifying agent consists of a plurality of antibodies covalently linked to each other or of different antigen-binding fragments covalently linked to each other
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Epoxy Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Un compuesto citotóxico representado por la fórmula (I): (Ver fórmula) en la que: R1 es H, un grupo aceptor de electrones o un grupo donador de electrones, y R1¿ y R1¿ son iguales o diferentes y son H, un grupo aceptor de electrones o un grupo donador de electrones; R2O es un éster o éter heterocíclico, lineal, ramificado o cíclico que tiene de 1 a 10 átomos de carbono o un carbamato de fórmula -OCONR10R11, en la que R10 y R11 son iguales o diferentes y son H, alquilo lineal, ramificado o cíclico que tiene 1 a 10 átomos de carbono o arilo; R3 es arilo o un alquilo lineal, ramificado o cíclico que tiene de 1 a 10 átomos de carbono; R4 es -OC(CH3)3 o fenilo; R5 es un grupo de enlace que contiene tiol o disulfuro para unirse covalentemente a un agente de unión a células mediante los restos tiol o disulfuro; y R6 es H o R6O es un éster o éter heterocíclico, lineal, ramificado o cíclico que tiene de 1 a 10 átomos de carbono o un carbamato de fórmula -OCONR10R11, en la que R10 y R11 son iguales odiferentes y son H, alquilo lineal, ramificado o cíclico que tiene 1 a 10 átomos de carbono o arilo.

Description

Agentes citotóxicos que comprenden taxanos y su uso terapéutico.
Este documento es una continuación de la solicitud provisional de los EE.UU. número 60/167.228 presentada el 24 de noviembre de 1999.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a nuevos agentes citotóxicos y su uso terapéutico. Más específicamente, la invención se refiere a nuevos agentes citotóxicos que comprenden taxanos y su uso terapéutico. Estos nuevos agentes citotóxicos tienen uso terapéutico como resultado de administrar los taxanos a una población celular específica de un modo dirigido ligando químicamente el taxano a un agente de unión a células.
Antecedentes de la invención
Se han publicado muchos informes acerca del intento de elegir dianas específicas de células tumorales con conjugados anticuerpo monoclonal- fármaco (Sela y col., en Immunoconjugates 189-216 (C. Vogel, ed. 1987); Ghose y col., en Targeted Drugs 1-22 (E. Goldberg, ed. 1983); Diener y col., en Antibody mediated delivery systems 1-23 (J. Rodwell, ed. 1988); Pietersz y col., en Antibody mediated delivery systems 25-53 (J. Rodwell, ed. 1988); Bumol y col., en Antibody mediated delivery systems 55-79 (J. Rodwell, ed. 1988). Todos los antecedentes y patentes citados en este documento se incorporan mediante referencia.
Se han conjugado fármacos citotóxicos tales como metotrexato, daunorrubicina, doxorrubicina, vincristina, vinblastina, melfalano, mitomicina C y clorambucilo con una variedad de anticuerpos monoclonales murinos. En algunos casos, las moléculas de fármaco se ligaron a las moléculas de anticuerpo a través de una molécula vehículo intermedia tal como albúmina de suero (Garnett y col., 46 Cancer Res. 2407-2412 (1986); Ohkawa y col. 23 Cancer Immunol. Immunother. 81-86 (1986); Endo y col., 47 Cancer Res. 1076-1080 (1980)), dextrano (Hurwitz y col., 2 Appl. Biochem. 25-35 (1980); Manabi y col., 34 Biochem. Pharmacol. 289-291 (1985); Dillman y col., 46 Cancer Res. 4886-4891 (1986); Shoval y col., 85 Proc. Natl. Acad Sci. 8276-8280 (1988)) o ácido poliglutámico (Tsukada y col., 73 J. Natl. Canc. Inst. 721-729 (1984); Kato y col. 27 J. Med. Chem. 1602-1607 (1984); Tsukada y col., 52 Br. J. Cancer 111-116 (1985)).
Se ha empleado un amplio conjunto de tecnologías de conectores para la preparación de tales inmunoconjugados y se han investigado tanto conectores escindibles como no escindibles. Sin embargo, en la mayoría de los casos, el potencial citotóxico completo de los fármacos sólo podría observarse si las moléculas de fármaco pudieran liberarse de los conjugados en forma no modificada en el sitio diana.
El documento WO9819705 describe procedimientos para conjugar fármacos, que incluyen taxoles entre otros ejemplos, con agentes de unión a células, incluyendo anticuerpos entre otros ejemplos, mediante un conector peptídico ramificado. En los ejemplos dados para taxanos, dos moléculas de paclitaxel se ligan mediante un enlace de carbonato en C-7 a un péptido conector simétrico largo que contiene un grupo maleimido para acoplarse a un agente de unión a células. El péptido conector contiene dos restos de lisina para la liberación final de paclitaxel. El documento EP-A-0624377 comprende la misma descripción que el documento WO9819705 y describe fármacos ligados a agentes de unión a células mediante péptidos conectores que pueden escindirse mediante enzimas lisosomales.
J. Med. Chem., vol. 42, 1999, páginas 4919-4924 describe conjugados de paclitaxel que comprenden un ligamiento a través de C-2' mediante un conector de succinato simple. Lo mismo se aplica para los documentos EP-A-1033372 y WO9925729, que declaran el uso de taxanos públicamente conocidos.
El documento WO8912624 describe agentes de acoplamiento heterobifuncionales que pueden proporcionar enlaces disulfuro estéricamente impedidos entre el material que contiene amina, tal como proteínas o péptidos, por ejemplo anticuerpos o fragmentos de anticuerpos, en particular un anticuerpo antitumoral, proteínas portadoras, soportes cromatográficos aminados y membranas aminadas, y el material que contiene tiol tal como toxinas, fragmentos Fab, citocinas con grupos tiol no necesarios para su actividad biológica tales como las interleucinas, interferonas, etc., y otras proteínas tales como TPA, materiales cromatográficos, polisacáridos y materiales inertes, preferentemente toxinas enzimáticamente activas de origen bacteriano, fúngico o vegetal.
El documento WO9852614 describe el ligamiento de moléculas de fármaco a polímeros de transporte que pueden transportar los fármacos a través de membranas celulares. Las moléculas de fármaco previstas incluyen quelatos metálicos, moléculas orgánicas pequeñas tales como taxano y macromoléculas. El ligamiento se realiza de tal manera que el fármaco inalterado se libera del polímero.
Uno de los conectores escindibles que se ha empleado para la preparación de conjugados anticuerpo-fármaco es un conector lábil ácido basado en ácido cis-aconítico que se aprovecha del entorno ácido de diferentes compartimentos intracelulares tales como los endosomas encontrados durante la endocitosis mediada por receptor y los lisosomas. Shen y Ryser introdujeron este procedimiento para la preparación de conjugados de daunorrubicina con vehículos macromoleculares (102 Biochem. Biophys. Res. Commun. 1048-1054 (1981)). Yang y Reisfeld usaron la misma técnica para conjugar daunorrubicina con un anticuerpo anti-melanoma (80 J. Natl. Canc. Inst. 1154-1159 (1988)). Dillman y col. también usaron un conector lábil ácido de un modo similar para preparar conjugados de daunorrubicina con un anticuerpo anti-células T (48 Cancer Res. 6097-6102 (1988)).
Un enfoque alternativo, examinado por Trouet y col., implicaba ligar daunorrubicina a un anticuerpo mediante un brazo espaciador de péptido (79 Proc. Natl. Acad. Sci. 626-629 (1982)). Esto se realizó bajo la premisa de que el fármaco libre podría liberarse de un conjugado tal mediante la acción de peptidasas lisosomales.
Sin embargo, las pruebas de citotoxicidad in vitro han revelado que los conjugados anticuerpo-fármaco raramente logran la misma potencia citotóxica que los fármacos libres no conjugados. Esto sugirió que los mecanismos por los que las moléculas de fármaco se liberan de los anticuerpos son muy ineficaces. En el área de las inmunotoxinas, los conjugados formados mediante puentes disulfuro entre anticuerpos monoclonales y toxinas de proteínas catalíticamente activas mostraron ser más citotóxicos que los conjugados que contenían otros conectores. Véase Lambert y col., 260 J. Biol. Chem. 12035-12041 (1985); Lambert y col., en Immunotoxins 175-209 (A. Frankei, ed. 1988); Ghetie y col. 48 Cancer Res. 2610-2617 (1988). Esto se atribuyó a la alta concentración intracelular de glutatión que contribuye a la escisión eficaz del enlace disulfuro entre una molécula de anticuerpo y una toxina. A pesar de esto, sólo hay unos pocos ejemplos informados del uso de puentes disulfuro para la preparación de conjugados entre fármacos y macromoléculas. Shen y col. (260 J. Biol. Chem. 10905-10908 (1985)) describieron la conversión de metotrexato en un derivado de mercaptoetilamida seguido por conjugación con poli-D-lisina mediante un enlace disulfuro. Otro informe describió la preparación de un conjugado del fármaco tóxico que contiene trisulfuro caliqueamicina con un anticuerpo (Hinman y col., 53 Cancer Res. 3336-3342 (1993)).
Una razón para la falta de conjugados anticuerpo-fármaco ligados mediante disulfuro es la no disponibilidad de fármacos citotóxicos que posean un resto que contenga átomos de azufre que puedan usarse fácilmente para ligar el fármaco a un anticuerpo mediante un puente disulfuro. Además, es difícil la modificación química de los fármacos existentes sin disminuir su potencial citotóxico.
Otro inconveniente principal de los conjugados anticuerpo-fármaco existentes es su incapacidad para administrar una concentración suficiente de fármaco al sitio diana debido al número limitado de antígenos elegidos como diana y la citotoxicidad relativamente moderada de fármacos cancerostáticos como metotrexato, daunorrubicina y vincristina. Con el fin de lograr citotoxicidad significativa se hace necesario el ligamiento de un gran número de moléculas de fármaco, bien directamente al anticuerpo o a través de una molécula portadora polimérica. Sin embargo, tales anticuerpos modificados en exceso muestran frecuentemente una unión dañada al antígeno diana y rápido aclaramiento in vivo del flujo sanguíneo.
A pesar de las dificultades anteriormente descritas se ha informado de agentes citotóxicos útiles que comprenden restos de unión de células y el grupo de fármacos citotóxicos conocidos como maitansinoides (documentos USP5.208.020, USP5.416.064 y R. V. J. Chari, 31 Advanced Drug Delivery Reviews 89-104 (1998)). Similarmente también se ha informado de agentes citotóxicos útiles que comprenden restos de unión de células y análogos y derivados del potente antibiótico antitumoral CC-1065 (documentos USP5.475.092 y USP 5.585.499).
Paclitaxel (Taxol), un producto natural citotóxico, y docetaxel (Taxotero), un derivado semisintético (véase la figura 1), se usan ampliamente en el tratamiento del cáncer. Estos compuestos pertenecen a la familia de los compuestos llamados taxanos. Los taxanos son venenos del huso mitótico que inhiben la despolimerización de tubulina dando como resultado un aumento en la velocidad de ensamblaje de microtúbulos y muerte celular. Aunque docetaxel y paclitaxel son agentes útiles en el tratamiento del cáncer, su actividad antitumoral es limitada debido a su toxicidad no específica hacia células normales.
Además, los compuestos como los mismos paclitaxel y docetaxel no son suficientemente potentes para ser Además, los compuestos como los mismos paclitaxel y docetaxel no son suficientemente potentes para ser usados en conjugados de agentes de unión a células. Recientemente se han descrito unos cuantos análogos de docetaxel nuevos con mayor potencia que docetaxel o paclitaxel (Tao Wang y col., Synthesis and Biological Activity of Advanced 2^{nd} Generation Taxoids, Departamento de Química, Universidad Estatal de NY en Stony Brook, NY 11794-3400; Departamento de Experimentos Terapéuticos, Roswell Park Cancer Inst., Elm y Carlton Streets, Buffalo, NY 14263, páginas 1-12; y figura 1). Sin embargo, estos compuestos carecen de una funcionalidad adecuada que permita el ligamiento mediante un enlace escindible a agentes de unión a células.
Por consiguiente, hay una gran necesidad de un procedimiento para tratar enfermedades con taxanos en el que sus efectos secundarios se reduzcan sin comprometer su citotoxicidad.
Resumen de la invención
Un objeto de la presente invención es proporcionar taxanos que sean sumamente tóxicos y que todavía puedan usarse eficazmente en el tratamiento de muchas enfermedades.
Otro objeto de la presente invención es proporcionar nuevos taxanos.
\newpage
Estos y otros objetos se han logrado proporcionando un agente citotóxico que comprende uno o más taxanos ligados a un agente de unión a células.
En una segunda realización, la presente invención proporciona una composición terapéutica que comprende:
(A) una cantidad eficaz de uno o más taxanos ligados a un agente de unión a células, y
(B) un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
En una tercera realización, la presente invención proporciona un procedimiento para destruir poblaciones celulares seleccionadas que comprende poner en contacto células diana o tejido que contiene células diana con una cantidad citotóxica de un agente citotóxico que comprende uno o más taxanos ligados a un agente de unión a células.
En una cuarta realización, la presente invención proporciona taxanos que comprenden un grupo de enlace que puede ligar dichos taxanos a un agente de unión a células u otros restos químicos.
Breve descripción de los dibujos
La fig. 1 es una fórmula química que representa estructuras de diversos taxanos, incluyendo alguno de los taxanos más potentes descritos por Ojima y col., arriba;
la fig. 2 es una fórmula química que representa estructuras de algunos de los taxanos que contienen disulfuro según la presente invención;
la fig. 3 muestra la estructura de 10-desacetilbacatina III, que es el material de partida para preparar taxanos;
la fig. 4 muestra el efecto antitumoral del conjugado anticuerpo anti-receptor EGF-taxano en xenoinjertos de cáncer escamoso humano (A431) en ratones SCID;
la fig. 5 muestra el cambio del peso corporal de los ratones SCID usados en el experimento descrito en el ejemplo 10;
la fig. 6 muestra los resultados de una determinación de citotoxicidad para el conjugado anti-receptor EGF-taxano en la línea celular A431 positiva para el antígeno diana y para el conjugado N901-taxano para el que la línea celular A431 no expresa el antígeno diana;
la fig. 7 muestra la potencia y selectividad citotóxica del conjugado TA 1-taxano en la línea celular SK-BR-3 positiva para el antígeno diana y la línea celular A431 negativa para el antígeno diana.
Descripción detallada de la invención
Esta invención se basa en la síntesis de nuevos taxanos que retienen alta citotoxicidad y que pueden ligarse eficazmente a agentes de unión a células. Previamente se ha mostrado que el ligamiento de fármacos sumamente citotóxicos a anticuerpos usando un enlace escindible, tal como un enlace disulfuro, garantiza la liberación de fármaco completamente activo dentro de la célula, y tales conjugados son citotóxicos de manera específica en un antígeno (R.V.J. Chari y col., 52 Cancer Res. 127-131 (1992); documentos USP5.475.092; y USP5.416.064). Sin embargo, la técnica revela que es extremadamente difícil modificar fármacos existentes sin disminuir su potencial citotóxico. La invención descrita vence este problema mediante la modificación de los taxanos descritos con restos químicos, y especialmente aquellos que contienen grupos tiol o disulfuro, a los que pueden ligarse agentes de unión a células apropiados. Como resultado, los taxanos novedosos descritos conservan, y en algunos casos incluso podrían mejorar, la potencia citotóxica de los taxanos conocidos. Los complejos agente de unión a células-taxano permiten la medida completa de la acción citotóxica de los taxanos que van a aplicarse en un modo dirigido frente a sólo células no deseadas, evitándose así efectos secundarios debido a la lesión a células sanas no dirigidas. Esta invención permite que los taxanos sean dirigidos contra sitios diana, lo cual previamente había sido imposible. Por tanto, la invención proporciona agentes útiles para la eliminación de células enfermas o anómalas que van a destruirse o lisarse, tales como células tumorales (particularmente células de tumores sólidos), células infectadas con virus, células infectadas con microorganismos, células infectadas con parásitos, células autoinmunes (células que producen autoanticuerpos), células activadas (aquellas que participan en el rechazo de injertos o enfermedad injerto frente a huésped) o cualquier otro tipo de células enfermas o anómalas, mientras presenten un mínimo de efectos secundarios.
El agente citotóxico según la presente invención comprende uno o más taxanos ligados a un agente de unión a células mediante un grupo de enlace. El grupo de enlace es parte de un resto químico que está unido covalentemente a un taxano mediante procedimientos convencionales. En una realización preferida, el resto químico puede estar unido covalentemente al taxano mediante un ligamiento éter.
\newpage
Los taxanos útiles en la presente invención tienen la fórmula (I) mostrada a continuación:
1
Estos taxanos novedosos pueden dividirse en cuatro realizaciones, (1), (2), (3) y (4), respectivamente. En la figura 2 se muestran ejemplos de las cuatro realizaciones.
En las realizaciones (1) a (4), R_{1} es un grupo aceptor de electrones, tal como F, NO_{2}, CN, Cl, CHF_{2} o CF_{3} o un grupo donador de electrones tal como -OCH_{3}, -OCH_{2}CH_{3}, -NR_{7}R_{8}, -OR_{9}, y R_{1}' y R_{1}'' son iguales o diferentes y son H, un grupo aceptor de electrones o un grupo donador de electrones. R_{1} también puede ser H.
R_{7} y R_{8} son iguales o diferentes y son grupos alquilo lineales, ramificados o cíclicos que tienen 1 a 10 átomos de carbono o arilo simple o sustituido que tiene 1 a 10 átomos de carbono. Preferentemente, el número de átomos de carbono para R_{7} y R_{8} es 1 a 4. Por tanto, preferentemente R_{7} y R_{8} son iguales. Ejemplos de grupos -NR_{7}R_{8} preferidos incluyen dimetilamino, dietilamino, dipropilamino y dibutilamino, en los que el resto butilo es cualquiera de primario, secundario, terciario o isobutilo. R_{9} es alquilo lineal, ramificado o cíclico que tiene 1 a 10 átomos de carbono. R_{1} es preferentemente F, NO_{2} o CF_{3}.
Preferentemente, R_{1} está en la posición meta y R_{1}' y R_{1}'' son H.
En las realizaciones (1), (2) y (4), R_{2}O es un éster o éter heterocíclico, lineal, ramificado o cíclico que tiene de 1 a 10 átomos de carbono o un carbamato de fórmula -OCONR_{10}R_{11}, en la que R_{10} y R_{11} son iguales o diferentes y son H, alquilo lineal, ramificado o cíclico que tiene 1 a 10 átomos o arilo simple o sustituido que tiene 1 a 10 átomos de carbono. Para ésteres, ejemplos preferidos para R_{2} incluyen -COCH_{2}CH_{3} y -COCH_{2}CH_{2}CH_{3}. Para carbamatos, ejemplos preferidos para R_{2} incluyen -CONHCH_{2}CH_{3}, -CONHCH_{2}CH_{2}CH_{3}, -CO-morfolino, -CO-piperazino, -CO-piperidino o -CO-N-metilpiperazino.
En la realización (3), R_{2} es el grupo de enlace.
En las realizaciones (1), (3) y (4), R_{3} es arilo o es alquilo lineal, ramificado o cíclico que tiene 1 a 10 átomos de carbono, preferentemente -CH_{2}CH(CH_{3})_{2}.
En la realización (2), R_{3} es -CH=C(CH_{3})_{2}.
En todas las realizaciones, R_{4} es -OC(CH_{3})_{3} o -C_{6}H_{5}.
En las realizaciones (1) y (2), R_{5} es el grupo de enlace y R_{6} es H o R_{6}O tiene la misma definición que antes para R_{2}O para las realizaciones (1), (2) y (4).
En la realización (3), R_{5} es H o R_{5}O tiene la misma definición que antes para R_{2}O para las realizaciones (1), (2) y (4).
En la realización (3), R_{6} es H o R_{6}O tiene la misma definición que antes para R_{2}O para las realizaciones (1), (2) y (4).
En la realización (4), R_{5} es H o R_{5}O tiene la misma definición que antes para R_{2}O para las realizaciones (1), (2) y (4) y R_{6} es un grupo de enlace.
Las posiciones preferidas para introducir el grupo de enlace son R_{2} y R_{5}, siendo R_{2} la más preferida. Grupos de enlace adecuados son bien conocidos en la técnica e incluyen grupos disulfuro y grupos tioéter.
Si el grupo de enlace es un grupo que contiene tiol o disulfuro, la cadena lateral que lleva el grupo tiol o disulfuro puede ser lineal o ramificada, aromática o heterocíclica. Un experto en la materia puede identificar fácilmente cadenas laterales adecuadas. Ejemplos específicos de sustituyentes que contiene tiol o dísulfuro incluyen -(CH_{2})_{n}SZ,
-CO(CH_{2})_{n}SZ, -(CH_{2})_{n}CH(CH_{3})SZ, -CO(CH_{2})_{n}CH(CH_{3})SZ, -(CH_{2})_{n}C(CH_{3})_{2}SZ, -CO(CH_{2})_{n}C(CH_{3})_{2}SZ, -CONR_{12}(CH_{2})_{n}SZ, -CONR_{12}(CH_{2})_{n}CH(CH_{3})SZ o -CONR_{12}(CH_{2})_{n}C(CH_{3})_{2}SZ, -CO-morfolino XSZ, -CO-piperazino-XSZ,
-CO-piperidino-XSZ y -CO-N-metilpiperazino-XSZ, en los que
Z es H o SR,
X es un alquilo lineal o alquilo ramificado que tiene 1-10 átomos de carbono.
R y R_{12} son iguales o diferentes y son alquilo lineal, alquilo ramificado o alquilo cíclico que tiene 1 a 10 átomos de carbono, o arilo simple o sustituido que tiene de 1 a 10 átomos de carbono o heterocíclico, y R_{12} puede ser además H, y
n es un número entero de 1 a 10.
Ejemplos de alquilos lineales incluyen metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo y hexilo.
Ejemplos de alquilos ramificados incluyen isopropilo, isobutilo, sec.-butilo, terc.-butilo, isopentilo y 1-etil-propilo.
Ejemplos de alquilos cíclicos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentílo y ciclohexilo.
Ejemplos de arilos simples incluyen fenilo y naftilo.
Ejemplos de arilos sustituidos incluyen arilos tales como aquellos descritos anteriormente sustituidos con grupos alquilo, con halógenos, tales como Cl, Br, F, grupos nitro, grupos amino, grupos ácido sulfónico, grupos ácido carboxílico, grupos hidroxi o grupos alcoxi.
Ejemplos de heterocíclicos son compuestos en los que los heteroátomos se seleccionan de O, N y S e incluyen morfolino, piperidino, piperazino, N-metilpiperazino, pirrolilo, piridilo, furilo y tiofeno.
Los taxanos de la presente invención que tienen un sustituyente que contiene tiol o disulfuro son novedosos en sí mismos.
Los taxanos que tienen un sustituyente que contiene tiol o disulfuro pueden sintetizarse según procedimientos conocidos. El material de partida para la síntesis es el 10-desacetilbacatina III comercialmente disponible, mostrado en la figura 3. En varias publicaciones se describe la química para introducir diversos sustituyentes (Ojima y col., J. Med. Chem. 39, 3889-3896, (1996), Ojima y col., 40 J. Med. Chem. 267-278 (1997); 1. Ojima y col., 96 Proc. Natl. Acad. Sci., 4256-4261 (1999); 1. Ojima y col., documentos USP5.475.011 y USP5.811.452.).
Puede variarse el sustituyente R_{1} en el anillo fenilo y la posición del sustituyente R_{1} hasta que se obtenga un compuesto de la toxicidad deseada. Además, el grado de sustitución en el anillo fenilo puede variarse para lograr una toxicidad deseada. Es decir, el anillo fenilo puede tener uno o más sustituyentes (por ejemplo, mono, di o trisustitución del anillo fenilo) que proporcionan otro medio para lograr una toxicidad deseada. Se define alta citotoxicidad como la manifestación de una toxicidad que tiene una CI_{50} en el intervalo de 1 x 10^{-12} a 3 x 10^{-9} M, cuando se mide in vitro con células cancerígenas cultivadas con una exposición de 72 horas al fármaco. Un experto en la materia puede determinar el resto químico apropiado para R_{1} y la posición apropiada para R_{1} usando sólo experimentación rutinaria.
Por ejemplo, se espera que los grupos aceptores de electrones en la posición meta aumenten la potencia citotóxica, aunque no se espera que la sustitución en la posición para aumente la potencia con respecto al taxano original. Normalmente, inicialmente se prepararán unos pocos taxanos representativos con sustituyentes en las diferentes posiciones (orto, meta y para) y se evaluarán para la citotoxicidad in vitro.
El sustituyente que contiene disulfuro o tiol puede introducirse en una de las posiciones en las que ya exista un grupo hidroxilo. Previamente se ha descrito la química para proteger los diversos grupos hidroxilo mientras reacciona el deseado (véase, por ejemplo, las referencias citadas arriba). El sustituyente se introduce convirtiendo simplemente el grupo hidroxilo libre en un éter que contiene disulfuro, un éster que contiene disulfuro o un carbamato que contiene disulfuro. Esta transformación se logra del siguiente modo. El grupo hidroxilo deseado se desprotona mediante tratamiento con el reactivo comercialmente disponible hexametildisilazano de litio (1,2 equivalentes) en tetrahidrofurano a -40ºC como se describe en I. Ojima y col., arriba. Entonces, el anión alcóxido resultante se hace reaccionar con un exceso de un compuesto de dihalógeno, tal como dibromoetano, para dar un éter de halógeno. El desplazamiento del halógeno con un tiol (mediante reacción con tioacetato de potasio y tratamiento con base suave o hidroxilamina) proporcionará el taxano que contiene tiol deseado. El grupo tiol puede convertirse en un disulfuro de metilo o piridilo mediante reacción con metil-metano-tiolsulfonato o ditiodipiridina, respectivamente. Este procedimiento se describe en el documento USP5.416.064.
\newpage
Alternativamente, el grupo hidroxilo deseado puede esterificarse directamente mediante reacción con un haluro de acilo, tal como cloruro de 3-bromopropionilo, para dar un éster de bromo. El desplazamiento del grupo bromo mediante tratamiento con tioacetato de potasio y posterior elaboración como se describe anteriormente proporcionará el éster de taxano que contiene tiol o disulfuro. Con el fin de preparar carbamatos que contienen disulfuro, el grupo hidroxilo puede hacerse reaccionar con un cloroformiato comercialmente disponible, tal como cloroformiato de para-nitrofenilo seguido por reacción con un disulfuro de aminoalquilo (por ejemplo, metilditiocisteamina).
Los fármacos de taxano que contienen disulfuro y que contienen tiol de la invención pueden evaluarse in vitro respecto a su capacidad para suprimir la proliferación de diversas líneas celulares no deseadas. Por ejemplo, líneas celulares tales como la línea A431 de carcinoma epidermoide humano, la línea SKBR3 de tumor de mama humano y la línea Namalwa de linfoma de Burkitt pueden usarse fácilmente para valorar la citotoxicidad de estos compuestos. Las células que van a evaluarse pueden exponerse a los compuestos durante 72 horas y medirse las fracciones de células supervivientes en ensayos directos mediante procedimientos conocidos. Entonces, los valores de CI_{50} pueden calcularse a partir de los resultados de los ensayos.
La eficacia de los compuestos de la invención como agentes terapéuticos depende de la selección cuidadosa de un agente de unión a células apropiado. Los agentes de unión a células pueden ser de cualquier tipo actualmente conocido o que se haga conocido e incluyen péptidos y no péptidos. Generalmente, éstos pueden ser anticuerpos o fragmentos de los mismos (especialmente anticuerpos monoclonales), linfocinas, hormonas, factores de crecimiento, vitaminas, moléculas para el transporte de nutrientes (tales como transferrina) o cualquier otra molécula o sustancia de unión de células.
Ejemplos más específicos de agentes de unión a células que pueden usarse incluyen:
-
fragmentos de anticuerpos tales como sFv, Fab, Fab' y F(ab')_{2} (Parham, 131 J. lmmunol. 2895-2902 (1983); Spring y col., 113 J. Immunol. 470-478 (1974); Nisonoff y col., 89 Arch. Biochem. Biophys. 230-244 (1960));
-
interferones (por ejemplo \alpha, \beta, \gamma);
-
linfocinas tales como IL-2, IL-3, IL-4, IL-6;
-
hormonas tales como insulina, TRH (hormonas liberadoras de tirotropina), MSH (hormona estimulante de los melanocitos), hormonas esteroideas tales como andrógenos y estrógenos;
-
vitaminas tales como ácido fólico;
-
factores de crecimiento y factores estimulantes de colonias tales como EGF, TGF-\alpha, G-CSF, M-CSF y GM-CSF (Burgess, 5 Immunology Today 155-158 (1984)); y
-
transferrina (O'Keefe y col., 260 J. Biol. Chem. 932-937 (1985)).
Las técnicas de anticuerpos monoclonales permiten la producción de agentes de unión a células extremadamente específicos en forma de anticuerpos monoclonales específicos o fragmentos de los mismos. En la técnica son particularmente bien conocidas técnicas para crear anticuerpos monoclonales o fragmentos de los mismos mediante inmunización de ratones, ratas, hámsteres o cualquier otro mamífero con el antígeno de interés tal como la célula diana intacta, antígenos aislados de la célula diana, virus enteros, virus enteros atenuados y proteínas virales tales como proteínas con recubrimiento viral. También pueden usarse células humanas sensibilizadas. Otro procedimiento para crear anticuerpos monoclonales o fragmentos de los mismos es el uso de genotecas de fagos de sFv (región variable de cadena sencilla), específicamente sFv humano. (Véase por ejemplo, Griffiths y col., documento USP5.885.793; McCafferty y col., documento WO92/01047; Liming y col., documento WO99/06587).
La selección del agente de unión a células apropiado es una cuestión de elección que depende de la población celular particular que va a elegirse como diana, pero en general se prefieren anticuerpos monoclonales si está disponible uno apropiado.
Por ejemplo, el anticuerpo monoclonal J5 es un anticuerpo IgG_{2a} murino que es específico para el antígeno de la leucemia linfoblástica aguda común (CALLA) (Ritz y col., 283 Nature 583-585 (1980)) y puede usarse si las células diana expresan CALLA tal como en la enfermedad de leucemia linfoblástica aguda. Similarmente, el anticuerpo monoclonal anti-B4 es una IgG_{1} murina que se une al antígeno CD19 en células B (Nadler y col., 131 J. lmmunol. 244-250 (1983)) y puede usarse si las células diana son células B o células enfermas que expresan este antígeno tal como en el linfoma no de Hodgkin o leucemia linfoblástica crónica.
Adicionalmente, el GM-CSF que se une a células mieloides puede usarse como un agente de unión a células para células enfermas de leucemia mielógena aguda. La IL-2 que se une a células T activadas puede usarse para evitar el rechazo de injerto en el trasplante, para el tratamiento y la prevención de enfermedad injerto frente a huésped y para el tratamiento de leucemia aguda de células T. La MSH que se une a melanocitos puede usarse para el tratamiento de melanoma. El ácido fólico, que elige como diana el receptor folato expresado en cánceres ováricos y otros, también es un agente de unión a células adecuado.
Los cánceres de mama y de testículos pueden elegirse satisfactoriamente como diana con estrógeno (o análogos de estrógeno) o andrógeno (o análogos de andrógeno), respectivamente, como agentes de unión a células.
Los conjugados de los taxanos de la invención y un agente de unión a células pueden formarse usando cualquier técnica actualmente conocida o desarrollada posteriormente. En los documentos USP5.416.064 y USP5.475.092 aparecen numerosos procedimientos de conjugación. El éster de taxano puede modificarse para dar un grupo amino libre y entonces se liga a un anticuerpo u otro agente de unión a células mediante un conector lábil ácido o un conector fotolábil. El éster de taxano puede condensarse con un péptido y ligarse posteriormente a un agente de unión a células para producir un conector lábil de peptidasa. El grupo hidroxilo en el éster de taxano puede estar succinilado y ligarse a un agente de unión a células para producir un conjugado que puede escindirse mediante esterasas intracelulares para liberar fármaco libre. Más preferentemente, los éteres, ésteres o carbamatos de taxano se tratan para crear un grupo tiol libre o protegido y luego los taxanos que contienen disulfuro o tiol se ligan al agente de unión a células mediante enlaces disulfuro.
Conjugados representativos de la invención son anticuerpo-taxano, fragmento de anticuerpo-taxano, factor de crecimiento epidérmico (EGF)-taxano, hormona estimulante de los melanocitos (MSH)-taxano, hormona estimulante de la tiroides (TSH)-taxano, estrógeno-taxano, análogo de estrógeno-taxano, andrógeno-taxano, análogo de andrógeno-taxano y folato-taxano.
Los conjugados de taxano de anticuerpos, fragmentos de anticuerpos, hormonas proteicas o peptídicas, factores de crecimiento proteicos o peptídicos y otras proteínas se preparan del mismo modo mediante procedimientos conocidos. Por ejemplo, los péptidos y anticuerpos pueden modificarse mediante procedimientos conocidos con reactivos de reticulación tales como 3-(2-piridilditio)propionato de N-succinimidilo, 4-(2-piridilditio)pentanoato de N-succinimidilo (SPP), 4-succinimidil-oxicarbonil-\alpha-metil-\alpha-(2-piridil-ditio)-tolueno (SMPT), 3-(2-piridilditio)butirato de N-succinimidilo (SDPB), 2-iminotiolano o anhídrido S-acetilsuccínico. Véase Carlsson y col., 173 Biochem. J. 723-737 (1978); Blattler y col., 24 Biochem. 1517-1524 (1985); Lambert y col., 22 Biochem. 3913-3920 (1983); Klotz y col., 96 Arch. Biochem. Biophys. 605 (1962); y Liu y col., 18 Biochem. 690 (1979), Blakey y Thorpe, 1 Antibody, Immunoconjugates & Radiopharmaceuticals, 1-16 (1988), Worrell y col. 1 Anti-Cancer Drug Design 179-184 (1986). Entonces, el agente de unión a células que contiene tiol libre o protegido así derivado se hace reaccionar con un taxano que contiene disulfuro o tiol para producir conjugados. Los conjugados pueden purificarse mediante HPLC o mediante filtración en gel.
Similarmente, por ejemplo, agentes de unión a células de estrógeno y andrógeno tales como estradiol y androstendiol pueden esterificarse en el grupo hidroxi C-17 con un ácido carboxílico que contiene disulfuro apropiado usando, por ejemplo, diciclohexilcarbodiimida como agente de condensación. Ejemplos de tales ácidos carboxílicos que pueden emplearse son ácido 3-(2-piridilditio)propanoico, ácido 3-metilditiopropanoico, ácido 4-(2-piridilditio) pentanoico y ácido 3-fenilditiopropanoico. La esterificación del grupo hidroxi C-17 también puede lograrse mediante reacción con un cloruro de ácido carboxílico que contiene grupo tiol apropiadamente protegido tal como cloruro de 3-S-acetilpropanoílo. También pueden emplearse otros procedimientos de esterificación como se describen en la bibliografía (Haslam, 36 Tetrahedron 2409-2433 (1980)). Entonces, el andrógeno o estrógeno que contiene tiol protegido o libre puede hacerse reaccionar con un taxano que contiene disulfuro o tiol para producir conjugados. Los conjugados pueden purificarse mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice o mediante HPLC. El ácido fólico puede condensarse con una hidrazida adecuada tal como hidrazida del ácido 4-(2-piridilditio) pentanoico en presencia de un agente de condensación tal como diciclohexilcarbodiimida para dar una hidrazona que contiene un disulfuro activo. Entonces, el folato que contiene disulfuro puede hacerse reaccionar con un taxano que contiene tiol para producir un conjugado que puede purificarse mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice o mediante HPLC.
Preferentemente, los conjugados anticuerpo monoclonal o agente de unión a células-taxano son aquellos que están unidos mediante un enlace disulfuro, como se trata anteriormente, que pueden administrar moléculas de taxano. Tales conjugados de unión de células se preparan mediante procedimientos conocidos tales como mediante la modificación de anticuerpos monoclonales con piridilditiopropionato de succinimidilo (SPDP) (Carlsson y col., 173 Biochem. J. 723-737 (1978)). El grupo tiopiridilo resultante se desplaza entonces mediante tratamiento con taxanos que contienen tiol para producir conjugados ligados con disulfuro. Alternativamente, en el caso de los arilditio-taxanos, la formación del conjugado de unión de células se efectúa mediante desplazamiento directo del aril-tiol del taxano mediante grupos sulfhidrilo previamente introducidos en moléculas de anticuerpo. Los conjugados que contienen 1 a 10 fármacos de taxano ligados mediante un puente disulfuro se preparan fácilmente mediante cualquier procedimiento.
Más específicamente, una disolución del anticuerpo modificado de ditiopiridilo a una concentración de 1 mg/ml en tampón fosfato potásico 0,1 M, a pH 6,5, que contiene EDTA 1 mM, se trata con el taxano que contiene tiol (1,25 eq molar/grupo ditiopiridilo). La liberación de tiopiridina del anticuerpo modificado se monitoriza espectrofotométricamente a 343 nm y se completa en aproximadamente 20 horas. El conjugado anticuerpo-taxano se purifica y se libera del fármaco no reaccionado y otro material de bajo peso molecular mediante filtración en gel a través de una columna de Sephadex G-25 o Sephacryl S300. El número de restos de taxano unidos por molécula de anticuerpo puede determinarse midiendo la relación de la absorbancia a 230 nm y 275 nm. Mediante este procedimiento pueden ligarse mediante enlaces disulfuro una media de 1-10 moléculas de taxano/molécula de anticuerpo.
También pueden prepararse conjugados anticuerpo-taxano con enlaces no escindibles. El anticuerpo puede modificarse con reactivos de reticulación tales como 4-(maleimidometil)ciclohexan-1-carboxilato de succinimidilo (SMCC), sulfo-SMCC, éster de m-maleimidobenzoil-N-hidroxisuccinimida (MBS), sulfo-MBS o yodoacetato de succinimidilo, como se describe en la bibliografía, para introducir 1-10 grupos reactivos. Véase Yoshitake y col., 101 Eur. J. Biochem. 395-399 (1979); Hashida y col., J. Applied Biochem. 56-63 (1984); y Liu y col., 18 Biochem. 690-697 (1979). Entonces, el anticuerpo modificado se hace reaccionar con el derivado de taxano que contiene tiol para producir un conjugado. El conjugado puede purificarse mediante filtración en gel a través de una columna Sephadex G-25.
Los anticuerpos modificados o fragmentos de los mismos se tratan con los taxanos que contienen tiol (1,25 equivalentes molares/grupo maleimido). Las mezclas se incuban durante la noche a aproximadamente 4ºC. Los conjugados anticuerpo-taxano se purifican mediante filtración en gel a través de una columna Sephadex G-25. Normalmente se ligan una media de 1 a 10 taxanos por anticuerpo.
Un procedimiento preferido es modificar anticuerpos o fragmentos de los mismos con 4-(maleimidometil)-ciclohexan-1-carboxilato de succinimidilo (SMCC) para introducir grupos maleimido seguido por reacción del anticuerpo modificado o fragmento con los taxanos que contienen tiol para dar un conjugado ligado por tioéter. De nuevo resultan conjugados con 1 a 10 moléculas de fármaco por molécula de anticuerpo.
La citotoxicidad de los taxanos y sus conjugados de anticuerpo para líneas celulares no adherentes tales como Namalwa y HL-60 puede medirse mediante extrapolación retrógrada de curvas de proliferación celular como se describe en Goldmacher y col., 135 J. Immunol. 3648-3651 (1985). La citotoxicidad de estos compuestos para líneas celulares adherentes tales como SKBR3 y A431 puede determinarse mediante ensayos clonogénicos como se describe en Goldmacher y col., 102 J. Cell Biol. 1312-1319 (1986).
La presente invención también proporciona una composición terapéutica que comprende:
(A) una cantidad eficaz de uno o más taxanos ligados a un agente de unión a células, y
(B) un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
Similarmente, la presente invención proporciona un procedimiento para destruir poblaciones celulares seleccionadas que comprende poner en contacto células diana o tejido que contiene células diana con una cantidad eficaz de un agente citotóxico que comprende uno o más taxanos ligados a un agente de unión a células.
El agente citotóxico se prepara como se describe anteriormente.
Vehículos, diluyentes y excipientes farmacéuticamente aceptables adecuados son bien conocidos y pueden determinarse por aquellos expertos en la materia como garantiza la situación clínica.
Ejemplos de vehículos, diluyentes y/o excipientes adecuados incluyen:
(1) solución salina tamponada de fosfato Dulbecco, pH aproximadamente 7,4, que contiene o que no contiene aproximadamente de 1 mg/ml a 25 mg/ml de albúmina de suero humano, (2) solución salina al 0,9% (0,9% p/v de NaCl), y (3) 5% (p/v) de dextrosa; y también puede contener un antioxidante tal como triptamina y un estabilizante tal como Tween 20.
El procedimiento para destruir poblaciones celulares seleccionadas puede practicarse in vitro, in vivo o ex vivo.
Ejemplos de usos in vitro incluyen tratamientos de médula ósea autóloga antes de su trasplante en el mismo paciente con el fin de destruir células enfermas o malignas: tratamientos de médula ósea antes de su trasplante con el fin de destruir células T competentes y evitar la enfermedad injerto frente a huésped (GVHD); tratamientos de cultivos celulares con el fin de destruir todas las células, excepto variantes deseadas que no expresan el antígeno diana; o para destruir variantes que expresan antígeno no deseado.
Las condiciones del uso in vitro no clínico se determinan fácilmente por un experto en la materia.
Ejemplos de uso ex vivo clínico son para eliminar células tumorales o células linfoides de la médula ósea antes del trasplante autólogo en el tratamiento de cáncer o en el tratamiento de enfermedad autoinmune, o para eliminar células T y otras células linfoides de médula ósea autóloga o alogénica o tejido antes del trasplante con el fin de evitar GVHD. El tratamiento puede llevarse a cabo del siguiente modo. Se recoge médula ósea del paciente u otro individuo y entonces se incuba en medio que contiene suero al que se añade el agente citotóxico de la invención, las concentraciones oscilan de aproximadamente 10 \muM a 1 \muM, durante aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 48 horas a aproximadamente 37ºC. Las condiciones exactas de concentración y tiempo de incubación, es decir, la dosis, se determinan fácilmente por un experto en la materia. Después de la incubación, las células de la médula ósea se lavan con medio que contiene suero y se devuelven al paciente por vía intravenosa según procedimientos conocidos. En circunstancias en las que el paciente reciba otro tratamiento tal como un tratamiento de quimioterapia ablativa o irradiación total del cuerpo, entre el tiempo de recogida de la médula y la reinfusión de las células tratadas, las células de la médula tratada se almacenan congeladas en nitrógeno líquido usando equipo médico habitual.
Para uso in vivo clínico, el agente citotóxico de la invención se suministrará como una disolución o un polvo liofilizado que se prueban para esterilidad y para niveles de endotoxinas. Ejemplos de protocolos adecuados de administración de conjugados son del siguiente modo. Los conjugados se administran semanalmente durante 4 semanas como un bolo intravenoso cada semana. Las dosis de bolo se administran en de 50 a 100 ml de solución salina normal a la que puede añadirse de 5 a 10 ml de albúmina de suero humano. Las dosificaciones serán de 10 \mug a 2000 mg por administración, por vía intravenosa (intervalo de 100 ng a 20 mg/kg por día). Después de cuatro semanas de tratamiento, el paciente puede continuar recibiendo el tratamiento semanalmente. Los protocolos clínicos específicos con respecto a la vía de administración, excipientes, diluyentes, dosificaciones, horas, etc., pueden determinarse por un experto en la materia como garantiza la situación clínica.
Ejemplos de estados médicos que pueden tratarse según los procedimientos in vivo o ex vivo para destruir poblaciones celulares seleccionadas incluyen tumor maligno de cualquier tipo que incluye, por ejemplo, cáncer de pulmón, mama, colon, próstata, riñón, páncreas, ovario y órganos linfáticos; enfermedades autoinmunes tales como lupus sistémico, artritis reumatoide y esclerosis múltiple; rechazos de injertos tales como rechazo de trasplante renal, rechazo de trasplante de hígado, rechazo de trasplante de pulmón, rechazo de trasplante cardiaco y rechazo de trasplante de médula ósea; enfermedad injerto frente a huésped; infecciones virales tales como infección por CMV, infección por VIH, SIDA, etc.; e infecciones parásitas tales como giardiasis, amoebiasis, esquistosomiasis y otras como determina un experto en la materia.
Ejemplos
La invención se ilustrará ahora mediante referencia a ejemplos no limitantes. A menos que se indique lo contrario, todos los porcentajes, relaciones, partes, etc. son en peso.
Ejemplo 1 Ensayos de citotoxicidad in vitro
Los fármacos de taxano que contienen sulfuro, disulfuro y sulfhidrilo de la invención pueden evaluarse para su capacidad para suprimir la proliferación de diversas líneas celulares tumorales humanas in vitro. Para la valoración de la citotoxicidad de estos compuestos se usan dos líneas celulares adherentes A431 (carcinoma epidermoide humano) y SKBR3 (tumor de mama humano) y la línea celular no adherente Namalwa (linfoma de Burkitt). Las células se exponen a los compuestos durante 24 horas y las fracciones supervivientes de células se miden en ensayos directos. (A431 y SKBR3 se ensayan para eficiencia de cultivo en placa (Goldmacher y col., 102 J. Cell Biol. 1312-1319 (1986) y Namalwa se ensayan mediante extrapolación retrógrada del crecimiento (Goldmacher y col., 135 J. Immunol, 3648-3651 (1985)). Los valores de CI_{50} se calculan entonces a partir de estos datos.
Ejemplo 2 Conjugación con anticuerpos
Conjugación de taxano que contiene tiol con anticuerpos mediante enlaces disulfuro: la conjugación de taxanos que contienen tiol con anticuerpos o fragmentos de los mismos mediante enlaces disulfuro se realiza en dos etapas. En la primera etapa se introducen grupos ditiopiridilo en anticuerpos o fragmentos de anticuerpos usando piridilditiopentanoato de succinimidilo (SPP) como se describe por Carlsson y col. Los grupos tiopiridilo se desplazan entonces mediante reacción con el taxano que contiene tiol para producir un conjugado.
Preparación de conjugados anticuerpo-SS-taxano. Los anticuerpos anti-B4, anti-receptor EGF y N901, o fragmentos de los mismos, se modifican con SPDP o SPP como se describe en la bibliografía. Como media se introducen entre 1 a 10 grupos ditiopiridilo por molécula de anticuerpo.
Una disolución del anticuerpo modificado con ditiopiridilo a una concentración de 1 mg/ml en tampón fosfato potásico 0,1 M, pH 6,5, que contiene EDTA 1 mM a 25ºC se trata con un taxano que contiene tiol (1,25 equivalente molar/grupo ditiopiridilo). La liberación de tiopiridina del anticuerpo modificado o fragmento del mismo se monitoriza espectrofotométricamente a 343 nm y se encuentra que se completa en aproximadamente 20 horas. El conjugado anticuerpo-taxano se purifica y se libera del fármaco no reaccionado y otro material de bajo peso molecular mediante filtración en gel a través de una columna de Sephadex G-25. El número de moléculas de taxano unidas por molécula de anticuerpo se determina midiendo la relación entre las absorbancias a 230 nm y 275 nm. Mediante este procedimiento pueden ligarse mediante enlaces disulfuro una media de 1-10 moléculas de taxano por molécula de anticuerpo.
Conjugación de taxano que contiene tiol con anticuerpos mediante un enlace tioéter no escindible: la conjugación de un taxano que contiene tiol se realiza en dos etapas. El anticuerpo o fragmento del mismo se hace reaccionar en primer lugar con maleimidometilciclohexan-carboxilato de succinimidilo (SMCC) para introducir grupos maleimido. El anticuerpo modificado se hace reaccionar entonces con el taxano que contiene tiol formando enlaces tioéter.
Preparación de conjugados anticuerpo-taxano (no escindibles). Los anticuerpos anti-B4, anti-receptor EGF y N901, o fragmentos de los mismos, se modifican con SMCC como se describe en la bibliografía.
Los anticuerpos modificados o fragmentos de anticuerpos se tratan con taxano que contiene tiol (1,25 equivalente molar/grupo maleimido). Las mezclas se incuban durante la noche a 4ºC. Los conjugados anticuerpo-taxano se purifican como se describe anteriormente. Normalmente se ligan una media de 1-10 moléculas de taxano por molécula de anticuerpo.
Preparación específica de conjugados anticuerpo-taxano
Se desarrollaron anticuerpos monoclonales murinos dirigidos contra el receptor EGF humano (EGFR). El receptor EGF se conoce por estar sobreexpresado en varios cánceres de células escamosas humanas, tales como cabeza y cuello, pulmón y mama. Se ligaron cuatro anticuerpos diferentes, KS-61 (IgG2a), KS-77 (IgG1), KS-78 (Ig2a) y KS-62 (IgG2a), a taxanos mediante enlace disulfuros. El anticuerpo monoclonal murino TA1, dirigido contra el oncógeno neu sobreexpresado en cánceres de mama y ováricos humanos, se usó para la preparación de conjugados TA1-taxano. La preparación de estos conjugados particulares se describe en los ejemplos 3 a 7.
Ejemplo 3 Preparación del conjugado anticuerpo KS-61 anti-EGFR-taxano
El anticuerpo KS-61 anti-EGFR se modificó en primer lugar con 4-[2-piridilditio]pentanoato de N-succinimidilo (SPP) para introducir grupos ditiopiridilo. El anticuerpo (2,3 mg/ml) en tampón fosfato potásico 50 mM, pH 6,5, que contenía NaCl (50 mM) y EDTA (2 mM), se trató con SPP (11 equivalentes molares en etanol). La concentración final de etanol era del 1,4% (v/v). Después de 90 minutos a temperatura ambiente se añadió lisina (50 mM) para ayudar en la eliminación de cualquier SPP unido no covalentemente. Se dejo que la reacción continuara durante dos horas y luego se purificó mediante filtración en gel a través de una columna Sephadex G25 equilibrada en el tampón anterior. Se reunieron las fracciones que contenían anticuerpo y el grado de modificación se determinó tratando una muestra con ditiotreitol y midiendo el cambio en la absorbancia a 343 nm (liberación de piridina-2-tiona con \varepsilon_{343} = 8,080 M^{-1} cm^{-1}). La recuperación del anticuerpo fue de aproximadamente el 90%, con 5,0 grupos piridilditio ligados por molécula de anticuerpo.
El anticuerpo modificado se diluyó con tampón fosfato potásico 50 mM, pH 6,5, que contenía NaCl (50 mM) y EDTA (2 mM), hasta una concentración final de 1,28 mg/ml. Entonces se añadió taxano-SH (1,7 eq por grupo ditiopiridilo) en etanol (10% v/v en la mezcla final de reacción) a la disolución de anticuerpo modificado. La reacción continuó a temperatura ambiente bajo argón durante 24 horas. El progreso de la reacción se monitorizó espectrofotométricamente a 343 nm para la liberación de piridina-2-tiona, producido por el intercambio de disulfuro entre el taxano-SH y los grupos ditiopiridilo en el anticuerpo. El aumento en la absorbancia a 343 nm indicó que el taxano se había ligado al anticuerpo. La mezcla de reacción se cargó entonces en una columna de filtración en gel Sephadex G25 SF equilibrada con solución salina tamponada con fosfato (PBS, pH 6,5) que contenía propilenglicol al 20%. El pico principal comprendía KS-61 monomérico-taxano. La concentración del conjugado se determinó midiendo la absorbancia a 280 nm. El conjugado se formuló con Tween 80 (0,05%) y albúmina de suero humano (HSA, 1 mg/ml).
Ejemplo 4 Preparación del conjugado anticuerpo KS-77 anti-EGFR-taxano
El anticuerpo KS-77 anti-EGFR se modificó con 4-[2-piridilditio]pentanoato de N-succinimidilo (SPP) para introducir grupos ditiopiridilo. El anticuerpo (5,0 mg/mi) en tampón fosfato potásico 50 mM, pH 6,5, se trató con SPP (11 equivalentes molares en etanol). La concentración final de etanol era del 2% (v/v). Después de 90 minutos a temperatura ambiente se añadió lisina (50 mM) para ayudar en la eliminación de cualquier SPP unido no covalentemente. La mezcla de reacción se dejó incubar durante dos horas y luego se purificó mediante filtración en gel a través de una columna Sephadex G25 equilibrada en el tampón anterior. Se reunieron las fracciones que contenían anticuerpo y el grado de modificación se determinó tratando una muestra con ditiotreitol y midiendo el cambio en la absorbancia a 343 nm (liberación de 2-mercaptopiridina con \varepsilon_{343} = 8,080 M^{-1} cm^{-1}). La recuperación del anticuerpo fue de aproximadamente el 90%, con 4,24 grupos piridilditio ligados por molécula de anticuerpo.
El anticuerpo modificado se diluyó con tampón fosfato potásico 50 mM, pH 6,5, que contenía NaCl (50 mM) y EDTA (2 mM), hasta una concentración final de 1,4 mg/ml. Entonces se añadió taxano-SH (1,7 equivalentes por grupo ditiopiridilo) en etanol (10% v/v en la mezcla final de reacción) a la disolución de anticuerpo modificado. La reacción continuó a temperatura ambiente bajo argón durante 24 horas. Se observó un aumento en la absorbancia a 343 nm, que indica que se había liberado piridina-2-tiona y que el taxano se había ligado al anticuerpo. La mezcla de reacción se cargó entonces en una columna de filtración en gel Sephacryl S300HR equilibrada con solución salina tamponada con fosfato (PBS, pH 6,5). El pico principal comprendía KS-77 monomérico-taxano. La concentración de anticuerpo KS-77 se determinó midiendo la absorbancia a 280 nm. El conjugado se formuló con Tween 80 (0,06%) y HSA (1 mg/ml).
Ejemplo 5 Preparación del conjugado anticuerpo KS-62 anti-EGF-taxano
El conjugado anticuerpo anti-EGF-taxano (KS-62-taxano) se preparó de una manera similar a la descrita en el ejemplo 4. El anticuerpo modificado se diluyó con tampón fosfato potásico 50 mM, pH 6,5, que contenía NaCl (50 mM) y EDTA (2 mM), hasta una concentración final de 2,5 mg/ml. El anticuerpo se modificó con SPP para introducir 5,25 grupos piridilditio por molécula de anticuerpo. Entonces se añadió taxano-SH (1,7 eq) en etanol (10% v/v en la mezcla final de reacción) a la disolución de anticuerpo modificado. La reacción continuó a temperatura ambiente bajo argón durante 24 horas. El conjugado se purificó pasando a través de una columna de filtración en gel Sephacryl S300HR equilibrada con solución salina tamponada con fosfato (PBS, pH 6,5). El pico principal comprendía KS-62 monomérico-taxano. El conjugado se formuló en PBS que contenía Tween 80 (0,01%, p/v) y HSA (1 mg/ml).
Ejemplo 6 Preparación del conjugado anticuerpo KS-78 anti-EGFR-taxano
El conjugado anticuerpo anti-EGFR-taxano, KS-78-taxano, se preparó de una manera similar a la descrita en el ejemplo 4. El anticuerpo modificado se diluyó con tampón fosfato potásico 50 mM, pH 6,5, que contenía NaCl (50 mM) y EDTA (2 mM), hasta una concentración final de 1,6 mg/ml. El anticuerpo se modificó con SPP para introducir 4,0 grupos piridilditio por molécula de anticuerpo. Entonces se añadió taxano-SH (1,7 eq) en etanol (15% v/v en la mezcla final de reacción) a la disolución de anticuerpo modificado. La reacción continuó a temperatura ambiente bajo argón durante 24 horas. Entonces, la disolución se dividió en dos lotes, lote A y lote B, que se trataron por separado. El lote A se dializó contra PBS, pH 6,5, que contenía CHAPS 2 mM (3-[(colamidopropil)dimetilamonio]-1-propanosulfonato) y propilenglicol al 20% (v/v). El pH de la disolución final era 6,0. El lote B se dializó en PBS, pH 6,5, que contenía propilenglicol al 20% (v/v). Después de la diálisis se añadió HSA (1 mg/ml) a ambos lotes. El lote B se trató adicionalmente con Tween 80 (0,05%, p/v).
Ejemplo 7 Preparación del conjugado TA 1-taxano
El anticuerpo monoclonal murino TA1, que se une al oncógeno neu expresado en tumores de mama y ováricos, se usó en la preparación de un conjugado de taxano. Se trató TA1 (3,2 mg/ml) en tampón fosfato potásico 50 mM, pH 6,5, que contenía NaCl (50 mM) y EDTA (2 mM), con SPP (8,0 equivalentes molares en etanol). La concentración final de etanol era del 5% (v/v). Después de 90 minutos a temperatura ambiente se añadió lisina (50 mM) para ayudar en la eliminación de cualquier SPP unido no covalentemente. La mezcla de reacción se incubó durante 2 horas y luego se filtró en gel a través de una columna Sephadex G25 equilibrada en el tampón anterior. Se reunieron las fracciones que contenían anticuerpo y el grado de modificación se determinó tratando una muestra con ditiotreitol y midiendo el cambio en la absorbancia a 343 nm (liberación de piridina-2-tiona con \varepsilon_{343} = 8,080 M^{-1} cm^{-1}). La recuperación del anticuerpo fue de aproximadamente el 90%, con 4,9 grupos piridilditio ligados por molécula de anticuerpo.
El anticuerpo modificado se diluyó con tampón fosfato potásico 50 mM, pH 6,5, que contenía NaCl (50 mM) y EDTA (2 mM), hasta una concentración final de 1,0 mg/ml. Entonces se añadió taxano-SH (1,7 eq por grupo piridilditio incorporado) en etanol (10% v/v en la mezcla final de reacción) a la disolución de anticuerpo modificado. La reacción continuó a temperatura ambiente bajo argón durante 24 horas. La liberación de piridina-2-tiona (monitorizada a 343 nm) indicó que se había completado el intercambio de disulfuro entre el taxano-SH y el sustituyente piridilditio en el anticuerpo. Una parte de la mezcla de reacción (4,0 mg) se cargó entonces en una columna de filtración en gel Sephacryl S300HR equilibrada con solución salina tamponada con fosfato (PBS, pH 6,5). El pico principal comprendía TA1 monomérico-taxano. El conjugado restante se diluyó hasta 0,5 mg/mi y se dializó en tampón fosfato potásico 50 mM, pH 6,5, que contenía NaCl (50 mM), EDTA (2 mM) y propilenglicol al 20%. La concentración de anticuerpo TA1 se determinó en ambas especies midiendo la absorbancia a 280 nm. Los conjugados se formularon en PBS que contenía Tween 80 (0,01%) y HSA (1 mg/ml).
Ejemplo 8 Otros procedimientos para ligar taxanos Conectores lábiles ácidos
Los taxanos pueden esterificarse con aminoácidos N-protegidos, tales como N-tboc-L-alanina en presencia de diciclohexil-carbodiimida y dimetilaminopiridina (DMAP), mediante procedimientos habituales descritos en la bibliografía química. La escisión del grupo protector t-boc con ácido trifluoroacético dará un éster de taxano que contiene un grupo amino terminal. Este taxano que contiene grupo amino puede ligarse a anticuerpos o fragmentos de los mismos y otros agentes de unión a células mediante un conector lábil ácido como se describe previamente (Bláttler y col., 24 Biochemistry, 1517-1524 (1985), patentes de los EE.UU. números 4.542.225, 4.569.789 y 4.764.368).
Conector fotolábil
El derivado de taxano que contiene grupo amino descrito anteriormente pude ligarse a agentes de unión a células mediante un conector fotolábil como se describe previamente. (Senter y col., 42 Photochemistry and Photobiology, 231-237 (1985), patente de los EE.UU. 4.625.014).
Conector lábil de peptidasa
El taxano que contiene grupo amino descrito anteriormente también puede ligarse a agentes de unión a células mediante conectores espaciadores de péptidos. Previamente se ha mostrado que los espaciadores de péptidos cortos entre fármacos y vehículos de proteínas macromoleculares son estables en suero, pero se hidrolizan rápidamente mediante peptidasas lisosomales intracelulares (Trouet y col., 79 Proc. Nat'l. Acad. Sci., 626-629 (1982)). El taxano que contiene grupo amino puede condensarse con péptidos tales como Ala-Leu, Leu-Ala-Leu o un dímero de Ala-Leu usando agentes de condensación tales como 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etil-carbodiimida-HCI para dar un derivado de péptido del taxano que entonces puede ligarse a agentes de unión a células.
Conector lábil de esterasa
Los taxanos pueden esterificarse haciendo reaccionar el grupo hidroxilo con anhídrido succínico y entonces ligarse a un agente de unión a células para producir un conjugado que puede escindirse mediante esterasas intracelulares para liberar fármaco libre. (Para ejemplos véase: Aboud-Pirak , y col., 38 Biochem. Pharmacol., 641-648 (1989), Laguzza y col., 32 J. Med. Chem., 549-555 (1989)).
Ejemplo 9 Actividad antitumoral in vivo
El efecto antitumoral del conjugado anticuerpo anti-receptor EGF-taxano en xenoinjertos de cáncer escamoso humano (A431) en ratones SCID se estableció del siguiente modo. El efecto antitumoral de dos conjugados anti-receptor del factor de crecimiento epidérmico humano-taxano diferentes (conjugados anti-EGFR-taxano), KS-61-taxano y KS-77-taxano se evaluó en un modelo de xenoinjerto de tumor humano en ratones SCID.
Se inocularon subcutáneamente células de cancerosas escamosas humanas A-431 (1,5 x 10^{6} células/ratón) en 0,1 ml de medio sin suero a ratones SCID hembra de cinco semanas (25 animales) en el costado. Los tumores se hicieron crecer durante 11 días hasta un tamaño medio de 100,0 mm^{3} (intervalo de 54 - 145 mm^{3}). Entonces, los animales se dividieron al azar en cuatro grupos (3 a 5 animales por grupo) según el tamaño de su tumor. El primer grupo recibió conjugado KS-61-taxano (10 mg/kg, qd x 5) administrado por vía intravenosa. El segundo grupo recibió el conjugado KS-77-taxano (10 mg/kg, qd x 5) administrado por vía intravenosa. El tercer grupo recibió taxano libre (no conjugado) (0,24 mg/kg, qd x 5, por vía intravenosa) a la misma dosis a la que está presente en el conjugado. El cuarto grupo, un grupo de control, de animales recibió PBS usando el mismo programa de tratamiento que en los grupos 1-3.
Los tamaños de los tumores se midieron dos veces a la semana y los volúmenes de los tumores se calcularon con la fórmula: ½ (longitud x anchura x altura). El peso de los animales también se midió dos veces por semana. Los resultados se muestran en las figuras 4 y 5. Los tumores en el grupo de control de ratones crecieron hasta un tamaño de casi 1000 mm^{3} en 31 días. El tratamiento con taxano libre no mostró efecto terapéutico y los tumores en este grupo crecieron a esencialmente la misma velocidad que en el grupo de control de animales que recibieron PBS.
A diferencia, ambos conjugados anti-EGFR-taxano mostraron una notable actividad tumoral dando como resultado la completa inhibición del crecimiento tumoral en todos los animales tratados durante la duración del experimento -34 días para el conjugado KS-61-taxano y 27 días para el conjugado KS-77-taxano. Los datos también muestran que la administración dirigida del taxano usando un anticuerpo específico para el tumor es esencial para la actividad tumoral ya que una dosis equivalente de taxano no conjugado mostró efecto no antitumoral en este modelo. Y lo que es más importante, las dosis de conjugado anticuerpo-taxano usadas no eran tóxicas para los animales, como se demostró por la ausencia de pérdida de peso (véase la figura 5).
Ejemplo 10 Citotoxicidad in vitro de conjugados anticuerpo-taxano
La citotoxicidad del conjugado anti-EGFR-taxano, KS-78-taxano, se midió en un ensayo clonogénico usando la línea celular A431 humana positiva para el receptor EGF (ATCC CRL 1555). El conjugado N901-taxano, un conjugado similar preparado con el anticuerpo monoclonal de ratón N901 contra CD56 humano, se probó como un control de especificidad ya que las células A431 no expresan su antígeno diana, CD56. La citotoxicidad del conjugado TA1-taxano, un conjugado preparado con el anticuerpo monoclonal de ratón TA1 contra el antígeno Neu humano, se midió en la línea celular SK-BR-3 humana positiva para el antígeno (ATCC HTB 30) y la línea celular A431 negativa para el antígeno. Las células se sembraron en placa a diferentes densidades en placas de cultivo de tejido de 6 pocillos en medio DMEM complementado con suero bovino fetal al 10%. Se añadieron inmunoconjugados a concentraciones variables y las células se mantuvieron en una atmósfera humidificada a 37ºC y 6% de CO_{2} hasta que se formaron colonias de aproximadamente 20 células o más (6 a 10 días). Las placas de control no contenían inmunoconjugado. Entonces, las células se fijaron con formaldehído, se tiñeron con violeta cristal y se contaron bajo un microscopio de bajo aumento. Entonces se determinaron las eficiencias del sembrado en placa a partir de los números de colonias y las fracciones supervivientes de células se calcularon como la relación de la eficiencia del sembrado en placa de la muestra tratada y la eficiencia del sembrado en placa del control.
La figura 6 muestra los resultados de la determinación de citotoxicidad para los dos lotes de conjugado KS-78-taxano en la línea celular A431 positiva para el antígeno diana. Los conjugados de ambos lotes muestran toxicidad similar respecto a las células diana; el tratamiento durante 6 días a concentraciones de 10^{-8} M logró fracciones de supervivencia inferiores a 10^{-2} (sobreviven menos del 1% de las células). Un conjugado de control, N901-taxano, para el que no hay antígenos presentes en la superficie de las células A431, no muestra toxicidad para las células a concentraciones de hasta 3 x 10^{-8} M. El anticuerpo KS-78 no conjugado también muestra muy poco efecto citotóxico. Estos resultados demuestran la citotoxidad específica para el antígeno diana del conjugado KS-78-taxano.
La potencia y selectividad citotóxica del conjugado TA1-taxano se ensayó con la línea celular SK-BR-3 positiva para el antígeno diana y la línea celular A431 negativa para el antígeno diana. Los resultados se muestran en la figura 7. A una concentración de conjugado de 10^{-9} M se destruyeron más del 90% de las células de SK-BR-3 diana (fracción de supervivencia inferior a 0,1), mientras que no se observó toxicidad hacia las células A431 no diana. Estos resultados demuestran la destrucción selectiva de las células positivas para el antígeno y que el efecto citotóxico del conjugado depende de la unión específica a través de su componente de anticuerpo.
Aunque la invención se ha descrito en detalle y con referencia a realizaciones específicas de la misma, será aparente para un experto en la materia que en este documento pueden hacerse diversos cambios y modificaciones sin apartarse del espíritu y el alcance de la invención.

Claims (22)

1. Un compuesto citotóxico representado por la fórmula (I):
2
en la que:
R_{1} es H, un grupo aceptor de electrones o un grupo donador de electrones, y R_{1}' y R_{1}'' son iguales o diferentes y son H, un grupo aceptor de electrones o un grupo donador de electrones;
R_{2}O es un éster o éter heterocíclico, lineal, ramificado o cíclico que tiene de 1 a 10 átomos de carbono o un carbamato de fórmula -OCONR_{10}R_{11}, en la que R_{10} y R_{11} son iguales o diferentes y son H, alquilo lineal, ramificado o cíclico que tiene 1 a 10 átomos de carbono o arilo;
R_{3} es arilo o un alquilo lineal, ramificado o cíclico que tiene de 1 a 10 átomos de carbono;
R_{4} es -OC(CH_{3})_{3} o fenilo;
R_{5} es un grupo de enlace que contiene tiol o disulfuro para unirse covalentemente a un agente de unión a células mediante los restos tiol o disulfuro; y
R_{6} es H o R_{6}O es un éster o éter heterocíclico, lineal, ramificado o cíclico que tiene de 1 a 10 átomos de carbono o un carbamato de fórmula -OCONR_{10}R_{11}, en la que R_{10} y R_{11} son iguales o diferentes y son H, alquilo lineal, ramificado o cíclico que tiene 1 a 10 átomos de carbono o arilo.
2. Un compuesto citotóxico representado por la fórmula (I):
3
en la que:
R_{1} es H, un grupo aceptor de electrones o un grupo donador de electrones, y R_{1}' y R_{1}'' son iguales o diferentes y son H, un grupo aceptor de electrones o un grupo donador de electrones;
R_{2}O es un éster o éter heterocíclico, lineal, ramificado o cíclico que tiene de 1 a 10 átomos de carbono o un carbamato de fórmula -OCONR_{10}R_{11}, en la que R_{10} y R_{11} son iguales o diferentes y son H, alquilo lineal, ramificado o cíclico que tiene 1 a 10 átomos de carbono o arilo;
R_{3} es -CH=C(CH_{3})_{2};
R_{4} es -OC(CH_{3})_{3} o fenilo;
R_{5} es un grupo de enlace que contiene tiol o disulfuro para unirse covalentemente a un agente de unión a células mediante los restos tiol o disulfuro; y
R_{6} es H o R_{6}O es un éster o éter heterocíclico, lineal, ramificado o cíclico que tiene de 1 a 10 átomos de carbono o un carbamato de fórmula -OCONR_{10}R_{11}, en la que R_{10} y R_{11}, son iguales o diferentes y son H, alquilo lineal, ramificado o cíclico que tiene 1 a 10 átomos de carbono o arilo.
3. Un compuesto citotóxico representado por la fórmula (I):
\vskip1.000000\baselineskip
4 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que:
R_{1} es H, un grupo aceptor de electrones o un grupo donador de electrones, y R_{1}' y R_{1}'' son iguales o diferentes y son H, un grupo aceptor de electrones o un grupo donador de electrones;
R_{2} es un grupo de enlace que contiene tiol o disulfuro para unirse covalentemente a un agente de unión a células mediante los restos tiol o disulfuro;
R_{3} es arilo o es un alquilo lineal, ramificado o cíclico que tiene de 1 a 10 átomos de carbono;
R_{4} es -OC(CH_{3})_{3} o fenilo;
R_{5} es H o R_{5}O es un éster o éter heterocíclico, lineal, ramificado o cíclico que tiene de 1 a 10 átomos de carbono o un carbamato de fórmula -OCONR_{10}R_{11}, en la que R_{10} y R_{11} son iguales o diferentes y son H, alquilo lineal, ramificado o cíclico que tiene 1 a 10 átomos de carbono o arilo; y
R_{6} es H o R_{6}O es un éster o éter heterocíclico, lineal, ramificado o cíclico que tiene de 1 a 10 átomos de carbono o un carbamato de fórmula -OCONR_{10}R_{11}, en la que R_{10} y R_{11} son iguales o diferentes y son H, alquilo lineal, ramificado o cíclico que tiene 1 a 10 átomos de carbono o arilo.
\newpage
4. Un compuesto citotóxico representado por la fórmula (I):
5
en la que:
R_{1} es H, un grupo aceptor de electrones o un grupo donador de electrones, y R_{1}' y R_{1}'' son iguales o diferentes y son H, un grupo aceptor de electrones o un grupo donador de electrones;
R_{2} es H o R_{2}O es un éster o éter heterocíclico, lineal, ramificado o cíclico que tiene de 1 a 10 átomos de carbono o un carbamato de fórmula -OCONR_{10}R_{11}, en la que R_{10} y R_{11} son iguales o diferentes y son H, alquilo lineal, ramificado o cíclico que tiene 1 a 10 átomos de carbono o arilo;
R_{3} es arilo o es un alquilo lineal, ramificado o cíclico que tiene de 1 a 10 átomos de carbono;
R_{4} es -OC(CH_{3})_{3} o fenilo;
R_{5} es H o R_{5}O es un éster o éter heterocíclico, lineal, ramificado o cíclico que tiene de 1 a 10 átomos de carbono o un carbamato de fórmula -OCONR_{10}R_{11}, en la que R_{10} y R_{11} son iguales o diferentes y son H, alquilo lineal, ramificado o cíclico que tiene 1 a 10 átomos de carbono o arilo;
R_{6} es un grupo de enlace que contiene tiol o disulfuro para unirse covalentemente a un agente de unión a células mediante los restos tiol o disulfuro.
5. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que R_{1} es F, NO_{2}, CN, Cl, CHF_{2}, CF_{3}, -OR_{9} o -NR_{7}R_{8}, en el que:
R_{7} y R_{8} son iguales o diferentes y son alquilo lineal, ramificado o cíclico que tiene 1 a 10 átomos de carbono o arilo simple o sustituido que tiene 1 a 10 átomos de carbono y R_{9} es alquilo lineal, ramificado o cíclico que tiene 1 a 10 átomos de carbono.
6. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que R_{1} es -OCH_{3} o -OCH_{2}CH_{3}.
7. El compuesto de la reivindicación 5, en el que R_{7} y R_{8} tiene cada uno 1 a 4 átomos de carbono.
8. El compuesto de la reivindicación 5 ó 7, en el que R_{7} y R_{8} son iguales.
9. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 4 a 8, en el que R_{2} es -COCH_{2}CH_{3}, -COCH_{2}CH_{2}CH_{3}, -CONHCH_{2}CH_{3}, -CONHCH_{2}CH_{2}CH_{3}, -CO-morfolino, -CO-piperidino, -CO-piperazino o -CO-N-metilpiperazino.
10. El compuesto de la reivindicación 3, en el que R_{5} es -COCH_{2}CH_{3}, -COCH_{2}CH_{2}CH_{3}, -CONHCH_{2}CH_{3},
-CONHCH_{2}CH_{2}CH_{3}, -CO-morfolino, -CO-piperidino, -CO-piperazino o -CO-N-metilpiperazino.
11. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que el grupo de enlace que contiene tiol o disulfuro R_{6}, R_{5} o R_{2} es -(CH_{2})_{n}SZ, -CO(CH_{2})_{n}SZ, -(CH_{2})_{n}CH(CH_{3})SZ,-CO(CH_{2})_{n}CH(CH_{3})SZ, -(CH_{2})_{n}C(CH_{3})_{2}SZ, -CO(CH_{2})_{n}C(CH_{3})2SZ, -CONR_{12}(CH_{2})_{n}SZ, CONR_{12}(CH_{2})_{n}CH(CH_{3})SZ, -CONR_{12}(CH_{2})_{n}C(CH_{3})_{2}SZ, -CO-morfolino-XSZ, -CO-piperidino-XSZ, -CO-piperazino-XSZ o -CO-N-metilpiperazino-XSZ, en los que Z es H o SR, en los que R y R_{12} son iguales o diferentes y son alquilo lineal, alquilo ramificado o alquilo cíclico que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, o arilo simple o sustituido que tiene de 1 a 10 átomos de carbono o heterocíclico, y R_{12} puede ser además H, X es un alquilo lineal o alquilo ramificado que tiene 1-10 átomos de carbono y n es un número entero de 1 a 10.
12. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que R_{1} está en la posición meta y R_{1}' y R_{1}'' son H.
13. Un procedimiento para la síntesis del compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, que comprende introducir un sustituyente que contiene disulfuro o tiol en el compuesto de fórmula 1 que carece de tal sustituyente, en una de las posiciones OR_{2}, OR_{5} o OR_{6} que es un hidroxilo y convertir en un éter, éster o carbamato que contiene tiol o disulfuro.
14. Un agente citotóxico que comprende uno o más taxanos unidos covalentemente a un agente de unión a células a través de un grupo de enlace, en el que al menos uno de dichos taxanos es un compuesto representado por la fórmula (I) como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12.
15. Una composición terapéutica que comprende:
(A)
una cantidad terapéuticamente eficaz del agente citotóxico de la reivindicación 14; y
(B)
un vehículo farmacéuticamente aceptable.
16. El agente citotóxico de la reivindicación 14 en el que el agente de unión a células se selecciona del grupo que está constituido por anticuerpos, un fragmento de anticuerpo, interferones, linfocinas, hormonas, vitaminas, factores de crecimiento, factores estimulantes de colonias y transferrina.
17. El agente citotóxico de la reivindicación 14 ó 16 en el que el agente de unión a células es un anticuerpo.
18. El agente citotóxico de cualquiera de las reivindicaciones 14, 16 ó 17 en el que el agente de unión a células es un anticuerpo monoclonal.
19. El agente citotóxico de cualquiera de las reivindicaciones 14 ó 16 a 18 en el que el agente de unión a células es un fragmento de anticuerpo específico para antígeno.
20. El agente citotóxico de cualquiera de las reivindicaciones 14 ó 16 a 19 en el que el fragmento de anticuerpo es sFV, Fab, Fab' o F(ab')_{2}.
21. El agente citotóxico de cualquiera de las reivindicaciones 14 ó 16 a 20 en el que el agente de unión a células es un factor de crecimiento o factor estimulante de colonias.
22. El agente citotóxico de cualquiera de las reivindicaciones 14 ó 16 a 20 para uso en un procedimiento para destruir poblaciones celulares seleccionadas que comprende poner en contacto células diana o tejido que contiene células diana con una cantidad eficaz del agente citotóxico.
ES00982077T 1999-11-24 2000-11-21 Agentes citotoxicos que comprenden taxanos y su uso terapeutico. Expired - Lifetime ES2276708T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US16722899P 1999-11-24 1999-11-24
US167228P 1999-11-24

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2276708T3 true ES2276708T3 (es) 2007-07-01

Family

ID=22606479

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES00982077T Expired - Lifetime ES2276708T3 (es) 1999-11-24 2000-11-21 Agentes citotoxicos que comprenden taxanos y su uso terapeutico.

Country Status (13)

Country Link
US (11) US6340701B1 (es)
EP (1) EP1242401B1 (es)
JP (1) JP2003514903A (es)
AT (1) ATE349438T1 (es)
AU (1) AU765588C (es)
CA (1) CA2388063C (es)
DE (1) DE60032633T2 (es)
DK (1) DK1242401T3 (es)
ES (1) ES2276708T3 (es)
HK (1) HK1049997B (es)
NZ (1) NZ517772A (es)
PT (1) PT1242401E (es)
WO (1) WO2001038318A1 (es)

Families Citing this family (171)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6136311A (en) 1996-05-06 2000-10-24 Cornell Research Foundation, Inc. Treatment and diagnosis of cancer
US6191290B1 (en) * 1999-02-24 2001-02-20 Uab Research Foundation Taxane derivatives for targeted therapy of cancer
EP2289549A3 (en) 1999-10-01 2011-06-15 Immunogen, Inc. Immunoconjugates for treating cancer
ES2276708T3 (es) * 1999-11-24 2007-07-01 Immunogen, Inc. Agentes citotoxicos que comprenden taxanos y su uso terapeutico.
US7097840B2 (en) 2000-03-16 2006-08-29 Genentech, Inc. Methods of treatment using anti-ErbB antibody-maytansinoid conjugates
CZ2003837A3 (cs) * 2000-09-22 2004-12-15 Bristol-Myers Squibb Company Způsob pro snížení toxicity při kombinovaných chemoterapiích
WO2002049672A2 (en) * 2000-12-21 2002-06-27 Mcgill University Conjugates of antibodies and anticancer drugs
AU2002306821A1 (en) * 2001-03-22 2002-10-08 The Ohio State University Research Foundation Enzyme-based anti-cancer compositions and methods
US20100056762A1 (en) 2001-05-11 2010-03-04 Old Lloyd J Specific binding proteins and uses thereof
JP4414142B2 (ja) 2001-05-11 2010-02-10 ルードヴィッヒ インスティテュート フォー キャンサー リサーチ 特異的結合タンパク質およびその使用
US7666414B2 (en) * 2001-06-01 2010-02-23 Cornell Research Foundation, Inc. Methods for treating prostate cancer using modified antibodies to prostate-specific membrane antigen
US7514078B2 (en) * 2001-06-01 2009-04-07 Cornell Research Foundation, Inc. Methods of treating prostate cancer with anti-prostate specific membrane antigen antibodies
JP4619651B2 (ja) * 2001-06-01 2011-01-26 コーネル・リサーチ・ファンデーション・インコーポレイテッド 前立腺特異的膜抗原に対する修飾抗体およびその使用
US6596757B1 (en) * 2002-05-14 2003-07-22 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising polyethylene glycol-containing taxanes and their therapeutic use
CA2487809A1 (en) * 2002-06-18 2003-12-24 Archemix Corp. Aptamer-toxin molecules and methods for using same
CA2491017A1 (en) * 2002-07-03 2004-01-15 Immunogen, Inc. Antibodies to non-shed muc1 and muc16, and uses thereof
US7390898B2 (en) 2002-08-02 2008-06-24 Immunogen Inc. Cytotoxic agents containing novel potent taxanes and their therapeutic use
WO2004013093A2 (en) 2002-08-02 2004-02-12 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents containing novel potent taxanes and their therapeutic use
WO2004016801A2 (en) * 2002-08-16 2004-02-26 Immunogen, Inc. Cross-linkers with high reactivity and solubility and their use in the preparation of conjugates for targeted delivery of small molecule drugs
US8853376B2 (en) 2002-11-21 2014-10-07 Archemix Llc Stabilized aptamers to platelet derived growth factor and their use as oncology therapeutics
JP4703566B2 (ja) 2003-05-14 2011-06-15 イムノゲン インコーポレーティッド 薬剤複合体組成物
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
US7834155B2 (en) * 2003-07-21 2010-11-16 Immunogen Inc. CA6 antigen-specific cytotoxic conjugate and methods of using the same
PL1660513T3 (pl) * 2003-07-21 2011-08-31 Immunogen Inc Koniugat antygenu CA6 o swoistej cytotoksyczności i sposoby jego wykorzystania
US7282590B2 (en) * 2004-02-12 2007-10-16 The Research Foundation Of State University Of New York Drug conjugates
WO2005094882A1 (en) * 2004-03-03 2005-10-13 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Modified antibodies to prostate-specific membrane antigen and uses thereof
US7541330B2 (en) * 2004-06-15 2009-06-02 Kosan Biosciences Incorporated Conjugates with reduced adverse systemic effects
CN101098854B (zh) 2004-07-23 2012-12-05 恩多塞特公司 二价连接体及其轭合物
AU2004224925C1 (en) * 2004-08-30 2011-07-21 Biotest Ag Immunoconjugates targeting syndecan-1 expressing cells and use thereof
EP1688415A1 (en) 2004-12-07 2006-08-09 Aventis Pharma S.A. Cytotoxic agents comprising new C-2 modified taxanes
EP1669358A1 (en) 2004-12-07 2006-06-14 Aventis Pharma S.A. Cytotoxic agents comprising new taxanes
EP1853322B1 (en) * 2005-02-11 2014-06-25 ImmunoGen, Inc. Process for preparing maytansinoid antibody conjugates
US20110166319A1 (en) * 2005-02-11 2011-07-07 Immunogen, Inc. Process for preparing purified drug conjugates
EP3058955B1 (en) 2005-03-24 2019-05-29 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Antibodies that bind ov064 and methods of use therefor
CA2615122A1 (en) 2005-08-03 2007-02-15 Immunogen, Inc. Immunoconjugate formulations
AU2006279304A1 (en) * 2005-08-19 2007-02-22 Endocyte, Inc. Multi-drug ligand conjugates
NZ716641A (en) 2005-08-24 2017-06-30 Immunogen Inc Process for preparing maytansinoid antibody conjugates
EP1806365A1 (en) 2006-01-05 2007-07-11 Boehringer Ingelheim International GmbH Antibody molecules specific for fibroblast activation protein and immunoconjugates containing them
SI1813614T1 (sl) 2006-01-25 2012-01-31 Sanofi 174 Citotoksična sredstva, ki obsegajo nove tomajmicinske derivate
WO2008010101A2 (en) * 2006-07-18 2008-01-24 Sanofi-Aventis Antagonist antibody against epha2 for the treatment of cancer
EP1914242A1 (en) 2006-10-19 2008-04-23 Sanofi-Aventis Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
AU2007325838B2 (en) 2006-11-22 2013-09-19 Bristol-Myers Squibb Company Targeted therapeutics based on engineered proteins for tyrosine kinases receptors, including IGF-IR
CA2676244C (en) * 2007-01-25 2017-01-17 Kwok-Kin Wong Use of anti-egfr antibodies in treatment of egfr mutant mediated disease
ATE516814T1 (de) 2007-02-02 2011-08-15 Bristol Myers Squibb Co 10fn3 domain zur behandlung von krankheiten begleitet von unerwünschter angiogenese
US20080184892A1 (en) 2007-02-06 2008-08-07 Ctp Hydrogen Corporation Architectures for electrochemical systems
WO2008101231A2 (en) 2007-02-16 2008-08-21 Endocyte, Inc. Methods and compositions for treating and diagnosing kidney disease
EP2139523B1 (en) 2007-03-14 2014-10-22 Endocyte, Inc. Conjugates of folate and tubulysin for targeted drug delivery
AU2008227123B2 (en) * 2007-03-15 2014-03-27 Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. Treatment method using EGFR antibodies and src inhibitors and related formulations
WO2008115805A2 (en) * 2007-03-19 2008-09-25 Inflabloc Pharmaceuticals, Inc. Cobalamin taxane bioconjugates
AU2008268432B2 (en) 2007-06-25 2015-01-15 Endocyte, Inc. Conjugates containing hydrophilic spacer linkers
US9877965B2 (en) 2007-06-25 2018-01-30 Endocyte, Inc. Vitamin receptor drug delivery conjugates for treating inflammation
EP2019104B1 (en) * 2007-07-19 2013-09-04 Sanofi Cytotoxic agents comprising new tomaymycin derivatives and their therapeutic use
PE20090499A1 (es) 2007-08-09 2009-05-18 Boehringer Ingelheim Int Anticuerpos anti-cd37
EP2188311B1 (en) 2007-08-14 2016-10-05 Ludwig Institute for Cancer Research Ltd. Monoclonal antibody 175 targeting the egf receptor and derivatives and uses thereof
WO2009046294A2 (en) * 2007-10-03 2009-04-09 Cornell University Treatment of proliferative disorders using antibodies to psma
RU2537265C2 (ru) * 2007-12-26 2014-12-27 Биотест Аг Агенты против клетки-мишени, нацеленные на cd138, и их применение
KR101654822B1 (ko) * 2007-12-26 2016-09-06 바이오테스트 아게 Ｃｄ138 표적성 면역접합체 및 이의 용도
WO2009080832A1 (en) * 2007-12-26 2009-07-02 Biotest Ag Methods and agents for improving targeting of cd138 expressing tumor cells
WO2009080831A1 (en) * 2007-12-26 2009-07-02 Biotest Ag Method of decreasing cytotoxic side-effects and improving efficacy of immunoconjugates
EP2278963A4 (en) * 2008-01-16 2014-09-17 Anwar Rayan TAXOL DERIVATIVES AND CLOSELY RELATED COMPOUNDS
ES2629405T3 (es) 2008-03-18 2017-08-09 Genentech, Inc. Combinaciones de un conjugado de fármaco-anticuerpo anti-HER2 y docetaxel
RU2503687C2 (ru) 2008-04-30 2014-01-10 Иммьюноджен, Инк. Сшивающие реагенты и их применение
PE20091931A1 (es) 2008-05-22 2009-12-31 Bristol Myers Squibb Co Proteinas de dominio de armazon basadas en fibronectina multivalentes
ES2604668T3 (es) 2009-02-05 2017-03-08 Immunogen, Inc. Nuevos derivados de benzodiacepina
EP3495000A1 (en) * 2009-02-17 2019-06-12 Cornell Research Foundation, Inc. Methods and kits for diagnosis of cancer and prediction of therapeutic value
TWI529247B (zh) 2009-05-13 2016-04-11 建新公司 抗人類ｃｄ５２免疫球蛋白
RS58810B1 (sr) 2009-06-03 2019-07-31 Immunogen Inc Metodi konjugacije
US20110076232A1 (en) * 2009-09-29 2011-03-31 Ludwig Institute For Cancer Research Specific binding proteins and uses thereof
UY32914A (es) 2009-10-02 2011-04-29 Sanofi Aventis Anticuerpos que se usan específicamente al receptor epha2
JP2013506709A (ja) 2009-10-06 2013-02-28 イミュノジェン・インコーポレーテッド 有効なコンジュゲートおよび親水性リンカー
EA201792376A3 (ru) 2009-10-23 2018-08-31 Милленниум Фармасьютикалз, Инк. Молекулы анти-gcc антитела и соответствующие композиции и способы
WO2011100403A1 (en) 2010-02-10 2011-08-18 Immunogen, Inc Cd20 antibodies and uses thereof
BR122016002916B8 (pt) 2010-03-04 2021-05-25 Macrogenics Inc diacorpo, molécula de ácido nucleico, composição farmacêutica e usos do diacorpo
WO2011119979A2 (en) 2010-03-26 2011-09-29 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Antibodies to muc16 and methods of use thereof
US9133239B2 (en) 2010-04-20 2015-09-15 The Research Foundation For The State University Of New York Compositions and methods for inhibiting matrix metalloproteinase (MMP)-mediated cell migration
CN103328505B (zh) 2010-10-29 2015-12-02 伊缪诺金公司 非拮抗性egfr结合分子及其免疫偶联物
EP2632490A4 (en) 2010-10-29 2014-10-22 Immunogen Inc NOVEL MOLECULES BINDING TO THE EGF RECEPTOR AND IMMUNOCONJUGATES THEREOF
US20120148559A1 (en) 2010-12-01 2012-06-14 Board Of Regents The University Of Texas System Compositions and method for deimmunization of proteins
TR201819440T4 (tr) 2010-12-09 2019-01-21 Immunogen Inc Yüklü çapraz bağlayıcıların hazırlanmasına yönelik yöntemler.
US9433686B2 (en) 2011-01-31 2016-09-06 The Regents Of The University Of California Methods for treating castration resistant prostate cancer and metastasis by reducing B-cell number and/or function
CN113896731A (zh) 2011-02-15 2022-01-07 伊缪诺金公司 细胞毒性苯并二氮杂䓬衍生物
SG193996A1 (en) 2011-03-29 2013-11-29 Immunogen Inc Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
MX369659B (es) 2011-03-29 2019-11-15 Immunogen Inc Preparacion de conjugados de maitansinoides y anticuerpos mediante un proceso de una etapa.
NZ703939A (en) 2011-05-21 2016-01-29 Macrogenics Inc Cd3-binding molecules capable of binding to human and non-human cd3
US8685383B2 (en) 2011-06-10 2014-04-01 Mersana Therapeautics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
BR112013032928A2 (pt) 2011-06-21 2017-01-24 Immunogen Inc "derivados de maitansinoide com ligante de peptídeo e conjugados dos mesmos, composição farmacêutica que os compreende e uso dos mesmos"
JP6251678B2 (ja) 2011-09-22 2017-12-20 アムジエン・インコーポレーテツド Ｃｄ２７ｌ抗原結合タンパク質
CA2856411A1 (en) 2011-11-21 2013-05-30 Immunogen, Inc. Method of treatment of tumors that are resistant to egfr therapies by egfr antibody cytotoxic agent conjugate
BR112014013694A2 (pt) 2011-12-08 2017-06-13 Biotest Ag método para tratar uma doença, e, kit
WO2013126797A1 (en) 2012-02-24 2013-08-29 Purdue Research Foundation Cholecystokinin b receptor targeting for imaging and therapy
US20140080175A1 (en) 2012-03-29 2014-03-20 Endocyte, Inc. Processes for preparing tubulysin derivatives and conjugates thereof
JP2015516980A (ja) 2012-04-26 2015-06-18 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｃｄ３７抗体とベンダムスチンとの併用
JP2015517511A (ja) 2012-05-16 2015-06-22 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｃｄ３７抗体とｉｃｅ（イフォスファミド、カルボプラチン、エトポシド）の併用
JP2015517512A (ja) 2012-05-16 2015-06-22 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｃｄ３７抗体の更なる薬剤との併用
AR091069A1 (es) 2012-05-18 2014-12-30 Amgen Inc Proteinas de union a antigeno dirigidas contra el receptor st2
JP6321633B2 (ja) 2012-06-04 2018-05-09 ノバルティス アーゲー 部位特異的標識法およびそれによって生成される分子
EP2904089A4 (en) 2012-10-04 2016-05-25 Immunogen Inc USE OF A PVDF MEMBRANE FOR PURIFYING CELL BINDING AGENT-CYTOTOXIC AGENT CONJUGATES
MX2015004757A (es) 2012-10-16 2015-07-17 Endocyte Inc Conjugados de suministro de farmacos que contienen aminoacidos no naturales y metodo para usarlos.
ES2701076T3 (es) 2012-11-24 2019-02-20 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Enlazadores hidrofílicos y sus usos para la conjugación de fármacos a las moléculas que se unen a las células
TW201425336A (zh) 2012-12-07 2014-07-01 Amgen Inc Ｂｃｍａ抗原結合蛋白質
CA2892863C (en) 2012-12-10 2022-03-15 Mersana Therapeutics, Inc. Polymeric scaffold based on phf for targeted drug delivery
WO2014093379A1 (en) 2012-12-10 2014-06-19 Mersana Therapeutics, Inc. Auristatin compounds and conjugates thereof
EP2931316B1 (en) 2012-12-12 2019-02-20 Mersana Therapeutics, Inc. Hydroxyl-polymer-drug-protein conjugates
EP2948478B1 (en) 2013-01-25 2019-04-03 Amgen Inc. Antibodies targeting cdh19 for melanoma
WO2014124258A2 (en) 2013-02-08 2014-08-14 Irm Llc Specific sites for modifying antibodies to make immunoconjugates
SG10201706468RA (en) 2013-02-08 2017-09-28 Novartis Ag Specific sites for modifying antibodies to make immunoconjugates
US9498532B2 (en) 2013-03-13 2016-11-22 Novartis Ag Antibody drug conjugates
CN105007950B (zh) 2013-03-15 2019-01-15 诺华股份有限公司 抗体药物缀合物
AR095199A1 (es) 2013-03-15 2015-09-30 Genzyme Corp Anticuerpos anti-cd52
ES2895824T3 (es) 2013-05-30 2022-02-22 Kiniksa Pharmaceuticals Ltd Proteínas de enlace al antígeno del receptor de oncastatina M
TW201605896A (zh) 2013-08-30 2016-02-16 安美基股份有限公司 Gitr抗原結合蛋白
CA2926586C (en) 2013-10-11 2020-04-07 Mersana Therapeutics, Inc. Polymeric scaffold based on phf for targeted drug delivery
RU2016117810A (ru) 2013-10-11 2017-11-17 Асана Биосайенсис, Ллк Конъюгаты белок-полимер-лекарственное средство
US9943606B2 (en) 2014-01-15 2018-04-17 Rutgers, The State University Of New Jersey Dendritic polypeptide-based nanocarriers for the delivery of therapeutic agents
CN103804472B (zh) * 2014-01-23 2016-06-08 浙江大学 一种紫杉烷类药物前体
BR112016018754A2 (pt) 2014-02-14 2017-10-10 S Chi Andrew método de tratamento de um câncer com vascularização
CA2938919C (en) 2014-02-28 2020-12-29 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd Charged linkers and their uses for conjugation
EP3960767A3 (en) 2014-03-12 2022-06-01 Novartis AG Specific sites for modifying antibodies to make immunoconjugates
WO2016020791A1 (en) 2014-08-05 2016-02-11 Novartis Ag Ckit antibody drug conjugates
CA2954599A1 (en) 2014-08-12 2016-02-18 Novartis Ag Anti-cdh6 antibody drug conjugates
TW201613930A (en) 2014-09-03 2016-04-16 Immunogen Inc Cytotoxic benzodiazepine derivatives
TWI697493B (zh) 2014-09-03 2020-07-01 美商免疫原公司 細胞毒性苯并二氮呯衍生物
GB201416960D0 (en) 2014-09-25 2014-11-12 Antikor Biopharma Ltd Biological materials and uses thereof
ES2987508T3 (es) 2014-11-14 2024-11-15 Novartis Ag Conjugados de anticuerpos y fármacos
CA3184805A1 (en) 2014-12-04 2016-06-09 Celgene Corporation Biomolecule conjugates
US10722523B2 (en) 2015-03-17 2020-07-28 The Regents Of The University Of California Chemoimmunotherapy for epithelial cancer
RU2758113C2 (ru) 2015-03-17 2021-10-26 Мемориал Слоан-Кеттеринг Кэнсер Сентер Антитела к muc16 и их применение
US10548989B2 (en) 2015-04-07 2020-02-04 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Nanoparticle immunoconjugates
WO2016203432A1 (en) 2015-06-17 2016-12-22 Novartis Ag Antibody drug conjugates
DK3313845T3 (da) 2015-06-29 2020-11-16 Immunogen Inc Konjugater af cysteinmanipulerede antistoffer
CN108449940B (zh) 2015-07-12 2021-06-08 杭州多禧生物科技有限公司 与细胞结合分子的共轭偶联的桥连接体
US9839687B2 (en) 2015-07-15 2017-12-12 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule
KR102660070B1 (ko) 2015-07-21 2024-04-24 이뮤노젠 아이엔씨 세포독성 벤조다이아제핀 유도체의 제조 방법
EP3331569A1 (en) 2015-08-07 2018-06-13 Gamamabs Pharma Antibodies, antibody drug conjugates and methods of use
EP4435105A3 (en) 2015-09-29 2025-05-14 Amgen Inc. Asgr inhibitors for reduzing cholesterol levels
EP3380525B1 (en) 2015-11-25 2023-11-08 Immunogen, Inc. Pharmaceutical formulations and methods of use thereof
WO2017194568A1 (en) 2016-05-11 2017-11-16 Sanofi Treatment regimen using anti-muc1 maytansinoid immunoconjugate antibody for the treatment of tumors
CA3042442C (en) 2016-11-14 2024-01-02 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd Conjugation linkers, cell binding molecule-drug conjugates containing the linkers, methods of making and uses of such conjugates with the linkers
EP3544983A2 (en) 2016-11-23 2019-10-02 Immunogen, Inc. Selective sulfonation of benzodiazepine derivatives
US11135307B2 (en) 2016-11-23 2021-10-05 Mersana Therapeutics, Inc. Peptide-containing linkers for antibody-drug conjugates
JOP20190187A1 (ar) 2017-02-03 2019-08-01 Novartis Ag مترافقات عقار جسم مضاد لـ ccr7
KR102681168B1 (ko) 2017-02-28 2024-07-04 이뮤노젠 아이엔씨 자기희생적 펩티드 링커 및 이들의 접합체를 갖는 메이탄시노이드 유도체
WO2018185618A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 Novartis Ag Anti-cdh6 antibody drug conjugates and anti-gitr antibody combinations and methods of treatment
TW201839001A (zh) 2017-04-20 2018-11-01 美商伊繆諾金公司 細胞毒性苯并二氮平衍生物及其綴合物
EP3615068A1 (en) 2017-04-28 2020-03-04 Novartis AG Bcma-targeting agent, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor
CN111315414A (zh) 2017-06-22 2020-06-19 梅尔莎纳医疗公司 产生载药聚合物支架和蛋白-聚合物-药物缀合物的方法
EP3655004A2 (en) 2017-07-21 2020-05-27 Novartis AG Compositions and methods to treat cancer
WO2019133652A1 (en) 2017-12-28 2019-07-04 Immunogen, Inc. Benzodiazepine derivatives
AU2019223076A1 (en) 2018-02-21 2020-10-08 Celgene Corporation BCMA-binding antibodies and uses thereof
CN112839676B (zh) 2018-10-10 2024-10-25 武田药品工业株式会社 制造抗体药物偶联物的方法
BR112021008012A2 (pt) 2018-10-29 2021-11-03 Mersana Therapeutics Inc Conjugados de anticorpo de cisteína engenheirada-fármaco com ligantes contendo peptídeo
US20230053449A1 (en) 2018-10-31 2023-02-23 Novartis Ag Dc-sign antibody drug conjugates
CN113260653B (zh) 2018-12-04 2022-11-04 田德扬 用于递送抗癌剂的立体复合物
EP4406555A3 (en) 2018-12-21 2024-11-06 Novartis AG Antibodies to pmel17 and conjugates thereof
PL3941946T3 (pl) 2019-03-20 2025-05-26 The Regents Of The University Of California Przeciwciała klaudyny-6 i koniugat lekowy
EP3941944A4 (en) 2019-03-20 2022-11-30 The Regents of the University of California Claudin-6 bispecific antibodies
CN113661172A (zh) 2019-03-29 2021-11-16 伊缪诺金公司 用于抑制异常细胞生长或治疗增生性疾病的细胞毒性双苯并二氮杂䓬衍生物及其与细胞结合剂的缀合物
SG11202110922QA (en) 2019-04-26 2021-10-28 Immunogen Inc Camptothecin derivatives
CN115884793A (zh) 2020-01-09 2023-03-31 梅尔莎纳医疗公司 具有含肽接头的位点特异性抗体-药物缀合物
EP4110402A1 (en) 2020-02-25 2023-01-04 Mediboston, Inc. Camptothecin derivatives and conjugates thereof
US20230181756A1 (en) 2020-04-30 2023-06-15 Novartis Ag Ccr7 antibody drug conjugates for treating cancer
US20230256114A1 (en) 2020-07-07 2023-08-17 Bionecure Therapeutics, Inc. Novel maytansinoids as adc payloads and their use for the treatment of cancer
EP3970752A1 (en) 2020-09-17 2022-03-23 Merck Patent GmbH Molecules with solubility tag and related methods
KR20230112128A (ko) 2020-11-24 2023-07-26 노파르티스 아게 항-cd48 항체, 항체 약물 접합체 및 이의 용도
US20220378929A1 (en) 2021-02-25 2022-12-01 MediBoston Limted Anti-her2 antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2022221720A1 (en) 2021-04-16 2022-10-20 Novartis Ag Antibody drug conjugates and methods for making thereof
EP4426727A2 (en) 2021-11-03 2024-09-11 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Specific conjugation of an antibody
EP4480498A1 (en) 2022-02-17 2024-12-25 NOVELTY NOBILITY Inc. Antibody-drug conjugate
WO2024023735A1 (en) 2022-07-27 2024-02-01 Mediboston Limited Auristatin derivatives and conjugates thereof
WO2025027529A1 (en) 2023-07-31 2025-02-06 Advesya Anti-il-1rap antibody drug conjugates and methods of use thereof
WO2025126157A1 (en) 2023-12-15 2025-06-19 Advesya Anti-il-1rap binding domains and antibody-drug conjugates thereof

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE68921982T4 (de) * 1988-06-14 1996-04-25 Cetus Oncology Corp Kupplungsmittel und sterisch gehinderte, mit disulfid gebundene konjugate daraus.
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5399726A (en) * 1993-01-29 1995-03-21 Florida State University Process for the preparation of baccatin III analogs bearing new C2 and C4 functional groups
ES2149768T3 (es) 1992-03-25 2000-11-16 Immunogen Inc Conjugados de agentes enlazantes de celulas derivados de cc-1065.
US5646176A (en) * 1992-12-24 1997-07-08 Bristol-Myers Squibb Company Phosphonooxymethyl ethers of taxane derivatives
US5475011A (en) 1993-03-26 1995-12-12 The Research Foundation Of State University Of New York Anti-tumor compounds, pharmaceutical compositions, methods for preparation thereof and for treatment
US6214345B1 (en) * 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US5824701A (en) * 1993-10-20 1998-10-20 Enzon, Inc. Taxane-based prodrugs
US5663199A (en) * 1994-11-30 1997-09-02 Uniroyal Chemical Ltd./Ltee Anti-viral aromatic O-alkylated oximes, ethers and thioethers
CA2255615C (en) * 1996-05-22 2006-08-29 Neuromedica, Inc. Compositions comprising conjugates of cis-docosahexaenoic acid and docetaxel
WO1998019705A1 (en) * 1996-11-05 1998-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Branched peptide linkers
US5811452A (en) 1997-01-08 1998-09-22 The Research Foundation Of State University Of New York Taxoid reversal agents for drug-resistance in cancer chemotherapy and pharmaceutical compositions thereof
ATE251913T1 (de) * 1997-05-21 2003-11-15 Univ Leland Stanford Junior Zusammensetzung und verfahren zur verzögerung des transports durch biologische membranen
AU1172599A (en) * 1997-11-18 1999-06-07 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Compounds with antitumor activity
US6191290B1 (en) 1999-02-24 2001-02-20 Uab Research Foundation Taxane derivatives for targeted therapy of cancer
ES2276708T3 (es) * 1999-11-24 2007-07-01 Immunogen, Inc. Agentes citotoxicos que comprenden taxanos y su uso terapeutico.
US6175023B1 (en) * 2000-01-31 2001-01-16 Jian Liu Synthesis of water soluble 9-dihydro-paclitaxel derivatives from 9-dihydro-13-acetylbaccatin III

Also Published As

Publication number Publication date
US20080027130A1 (en) 2008-01-31
EP1242401B1 (en) 2006-12-27
HK1049997A1 (en) 2003-06-06
US7008942B2 (en) 2006-03-07
US20020013485A1 (en) 2002-01-31
US6340701B1 (en) 2002-01-22
US7528130B2 (en) 2009-05-05
NZ517772A (en) 2004-03-26
US20060106090A1 (en) 2006-05-18
JP2003514903A (ja) 2003-04-22
US20020086897A1 (en) 2002-07-04
US20070196332A1 (en) 2007-08-23
US20040087649A1 (en) 2004-05-06
AU765588C (en) 2004-12-16
DE60032633D1 (de) 2007-02-08
US6706708B2 (en) 2004-03-16
US20050272729A1 (en) 2005-12-08
US6436931B1 (en) 2002-08-20
US7276499B2 (en) 2007-10-02
CA2388063C (en) 2010-06-08
US7217819B2 (en) 2007-05-15
AU1914901A (en) 2001-06-04
US20030004210A1 (en) 2003-01-02
US20070197775A1 (en) 2007-08-23
US20060122259A1 (en) 2006-06-08
US7585857B2 (en) 2009-09-08
ATE349438T1 (de) 2007-01-15
WO2001038318A1 (en) 2001-05-31
PT1242401E (pt) 2007-03-30
DK1242401T3 (da) 2007-05-07
US7550609B2 (en) 2009-06-23
US6372738B2 (en) 2002-04-16
HK1049997B (en) 2007-02-23
US7476669B2 (en) 2009-01-13
EP1242401A1 (en) 2002-09-25
CA2388063A1 (en) 2001-05-31
AU765588B2 (en) 2003-09-25
DE60032633T2 (de) 2007-10-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2276708T3 (es) Agentes citotoxicos que comprenden taxanos y su uso terapeutico.
US6596757B1 (en) Cytotoxic agents comprising polyethylene glycol-containing taxanes and their therapeutic use
US7414073B2 (en) Cytotoxic agents containing novel potent taxanes and their therapeutic use
US7390898B2 (en) Cytotoxic agents containing novel potent taxanes and their therapeutic use
点击 这是indexloc提供的php浏览器服务，不要输入任何密码和下载